特許 7200437 ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン系化合物の結晶形Ｄ及びその製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-12-23

(45)【発行日】2023-01-06

(54)【発明の名称】ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン系化合物の結晶形Ｄ及びその製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 403/14 20060101AFI20221226BHJP

   A61K 31/497 20060101ALI20221226BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221226BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20221226BHJP

【ＦＩ】

C07D403/14 CSP

A61K31/497

A61P43/00 111

A61P35/00

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2022507756

(86)(22)【出願日】2020-08-04

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-08-09

(86)【国際出願番号】 CN2020106901

(87)【国際公開番号】W WO2021023195

(87)【国際公開日】2021-02-11

【審査請求日】2022-03-14

(31)【優先権主張番号】201910731106.1

(32)【優先日】2019-08-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】201911059942.6

(32)【優先日】2019-11-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】520089004

【氏名又は名称】▲ザン▼州片仔▲ファン▼薬業股▲フン▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＺＨＡＮＧＺＨＯＵ ＰＩＥＮ ＴＺＥ ＨＵＡＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110001519

【氏名又は名称】弁理士法人太陽国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チェン、チーリャン

(72)【発明者】

【氏名】ルオ、チーイー

(72)【発明者】

【氏名】チョアン、イーチャオ

(72)【発明者】

【氏名】リン、チンシア

(72)【発明者】

【氏名】カオ、ロンホイ

(72)【発明者】

【氏名】フー、チーフェイ

(72)【発明者】

【氏名】ルオ、ミャオロン

(72)【発明者】

【氏名】チャン、ヤン

(72)【発明者】

【氏名】リー、チエン

(72)【発明者】

【氏名】チェン、シューホイ

【審査官】三須 大樹

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／０７０７０８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１９／１５４３６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２１／０２３１９２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２１／０２３１９３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０２１／０２３１９４（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、式（II）で表される化合物の結晶形Ｄ。

【化1】

【請求項2】

粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ｄ。

【請求項3】

粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、１９．３１±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．０８±０．２０°、２７．７２±０．２０°、２９．２９±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項２に記載の結晶形Ｄ。

【請求項4】

粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２°、１０．９２°、１４．６０°、１６．６１°、１９．３１°、２０．０８°、２３．１９°、２４．１１°、２４．９２°、２６．２８°、２７．０８°、２７．７２°、２９．２９°、３０．３９°、３３．９２°、３８．３３°において特徴的な回折ピークを有する、請求項３に記載の結晶形Ｄ。

【請求項5】

示差走査熱量曲線は１７９．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２４７．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。

【請求項6】

熱重量分析曲線は１９０．０℃±３．０℃の際に重量が７．１１％減少し、２５０．０℃±３．０℃の際に重量が１２．１０％減少し、２９０．０℃±３．０℃の際に重量が１４．１２％減少する、請求項１～４のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。

【請求項7】

ＦＧＦＲに関連する疾患を治療する医薬の製造における請求項１～６のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は以下の優先権を主張する：
ＣＮ２０１９１０７３１１０６．１、２０１９年８月８日；
ＣＮ２０１９１１０５９９４２．６、２０１９年１１月１日。

【0002】

本発明は、ピラジン－２（１Ｈ）－ケトン系化合物の結晶形及びその製造方法に関し、具体的には、式（ＩＩ）で表される化合物及びその結晶形の製造方法に関する。

【背景技術】

【0003】

線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）は、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）シグナル伝達の受容体であり、そのファミリーは４つのメンバー（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４）から構成され、細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、疎水性膜貫通領域及びチロシンキナーゼドメインを含む細胞内部分で構成される糖タンパク質である。線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、それらの受容体（ＦＧＦＲ）を介して、細胞増殖、細胞分化、細胞移動、血管新生など多くの生理学的調節プロセスにおいて重要な役割を果たしている。ＦＧＦシグナル伝達経路の異常（高発現、遺伝子増幅、遺伝子突然変異、染色体再配列など）を、腫瘍細胞の増殖、移動、侵入及び血管新生などの多くの病理学的プロセスと直接結び付ける多くの証拠がある。そのため、ＦＧＦＲは治療標的の重要な一類として浮上し、広範な研究開発の関心を集めている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有することを特徴とする、式（II）で表される化合物の結晶形Ｄを提供する。

【0005】

【化1】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する。

【0007】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、１９．３１±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．０８±０．２０°、２７．７２±０．２０°、２９．２９±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する。

【0008】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄは、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２°、１０．９２°、１４．６０°、１６．６１°、１９．３１°、２０．０８°、２３．１９°、２４．１１°、２４．９２°、２６．２８°、２７．０８°、２７．７２°、２９．２９°、３０．３９°、３３．９２°、３８．３３°において特徴的な回折ピークを有する。

【0009】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＸＲＰＤスペクトルは図１に示された通りである。

【0010】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＸＲＰＤスペクトルの解析データは表１に示された通りである。

【0011】

【表1】

【0012】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄの示差走査熱量曲線は１７９．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２４７．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する。

【0013】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＤＳＣスペクトルが図２に示された通りである。

【0014】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄの熱重量分析曲線は１９０．０℃±３．０℃の際に重量が７．１１％減少し、２５０．０℃±３．０℃の際に重量が１２．１０％減少し、２９０．０℃±３．０℃の際に重量が１４．１２％減少する。

【0015】

本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＴＧＡスペクトルが図３に示された通りである。

【0016】

本発明は、更にＦＧＦＲに関連する疾患を治療するための医薬の製造における前記式（II）で表される化合物の結晶形Ｄの使用を提供する。

【発明の効果】

【0017】

式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄは良好な安定性を有し、薬になりやすい、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩の実験例から分かるように、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄは、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、且つＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄのマウス薬物動態パラメータは良好である。

【0018】

式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩は、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、更にＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩のマウス薬物動態パラメータは良好である。

【0019】

＜定義及び説明＞
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。

【0020】

本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法により製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と結合した実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好ましい実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。

【0021】

本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒で完成され、前記の溶媒は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を得るため、当業者が既存の実施形態に基づいて合成工程又は反応スキームを修正又は選択することが必要であることもある。

【0022】

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の何らの制限にもならない。

【0023】

本発明に使用されたすべての溶媒は市販品で、更に精製せずにそのままで使用してもよい。

【0024】

本発明では、下記略語を使用する：ｅｑは当量、等量を表し；ＰＥは石油エーテルを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表す。

【0025】

本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができ、市販の化合物はサプライヤーカタログ名を使用する。混合溶媒を反応溶液に添加する場合、各溶媒を先に混合してから反応溶液に添加する；又は各単一溶媒を順番に反応溶液に添加し反応系で混合する。

【0026】

化合物は、本技術分野の従来の命名原則、又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアを使用して命名され、市販の化合物は、サプライヤーのカタログ名を使用して命名される。

【0027】

本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下通りである：
光管：Ｃｕ、ｋ２、（λ＝１．５４０５６Å）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
試料パン回転数：１５ｒｐｍ

【0028】

本発明の示差走査熱量分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
試料（０．５～１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に取って測定を行い、方法は：２５℃～３００又は３５０℃、１０℃／ｍｉｎで測定する。

【0029】

本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ_２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３００度まで又は重量が２０％減少するまで加熱する。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＣｕ－Ｋα放射のＸＲＰＤスペクトルである。

【図2】式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＤＳＣスペクトルである。

【図3】式（II）で表される化合物の結晶形ＤのＴＧＡスペクトルである。

【発明を実施するための形態】

【0031】

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本発明は本明細書で詳細に説明されており、その特定の実施形態も開示されており、当業者にとって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。

【0032】

実施例１：式（Ｉ）で表される化合物及びトリフルオロ酢酸塩の製造の合成

【0033】

【化2】

【0034】

工程１：化合物ＢＢ－１－３の合成
化合物ＢＢ－１－２（２．０ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物ＢＢ－１－１（２．６ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を水（６．０ｍＬ）及びジオキサン（２５．０ｍＬ）に溶解した後、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（８４１ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）及び炭酸カリウム（４．８ｇ、３４．４８ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を添加し、窒素ガスの保護下で１００°Ｃに加熱し１６時間反応させた。得られた反応溶液を吸引濾過し、スピン乾燥させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）で精製して、化合物ＢＢ－１－３を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１９０．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

【0035】

工程２：化合物ＢＢ－１の合成
化合物ＢＢ－１－３（０．５ｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びピリジン（２０９ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、２１３．２８μＬ、１ｅｑ）をクロロホルム（２０．０ｍＬ）に添加し、０℃に冷却した後更に臭素（４２２ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１３６．２２μＬ、１ｅｑ）を添加した。２８℃の室温で１８時間反応させた。反応物をチオ硫酸ナトリウム（１．０ｍＬ）でクエンチングした後、吸引濾過し、濾液を濃縮し、粗生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）で精製した。化合物ＢＢ－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２６７．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ：８．１２（ｓ，１Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）３．８６（ｓ，３Ｈ）２．４３（ｓ，３Ｈ）。

【0036】

工程３：化合物２の合成
窒素ガスの保護下で、化合物ＢＢ－２－１（２．０ｇ、１８．７７ｍｍｏｌ、２．１７ｍＬ、１ｅｑ、ＨＣｌ）をクロロベンゼン（１５．０ｍＬ）に溶解し、２５℃で化合物ＢＢ－２－２（８．３ｇ、６５．６９ｍｍｏｌ、５．８ｍＬ、３．５ｅｑ）を滴下し、混合物を９０℃にゆっくりと昇温させ１６時間撹拌した。反応系に水（３０．０ｍＬ）及び酢酸エチル（３０．０ｍＬ）を添加し、静置して分層し、同時に水相を酢酸エチル（２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ、２０．０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合併し、飽和塩化ナトリウム溶液（３０．０ｍＬ）で１回洗浄し、最後に無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～２：１）で分離し精製して、化合物２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７８．７［Ｍ＋１］^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．２６（ｓ，１Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。

【0037】

工程４：化合物４の合成
マイクロ波管において、窒素ガスの保護下で、化合物２（０．２ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及び化合物３（２１３ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）を、ジオキサン（１．５ｍＬ）及び水（１．５ｍＬ）の混合溶液に溶解し、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（６５ｍｇ、５５．８６μｍｏｌ、０．０５ｅｑ）、炭酸ナトリウム（１３０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を添加し、混合物を１２０℃でマイクロ波で３０分間撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）（ＴＬＣ検出 石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２８１．０［Ｍ＋１］^＋。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．６４（ｄ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｔ，１Ｈ），３．８６（ｓ，６Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）。

【0038】

工程５：化合物００２７－１の合成
窒素ガスの保護下で、化合物４（２５０ｍｇ、８９０．６１μｍｏｌ、１ｅｑ）をアセトニトリル（２０．０ｍＬ）及びジクロロメタン（５．０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、０℃で塩化スルホニル（８４ｍｇ、６２３．４３μｍｏｌ、６２．３３μＬ、０．７ｅｑ）のアセトニトリル（２．５ｍＬ）溶液をゆっくりと滴下し、混合物を０℃で１０分間撹拌した。反応溶液にメタノール（５．０ｍＬ）を添加してクエンチングし、減圧濃縮して乾燥させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）（ＴＬＣ検出 石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）で分離して、化合物００２７－１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１４．９［Ｍ＋Ｈ］＋。

【0039】

工程６：式（Ｉ）の化合物の合成
三口フラスコに、化合物００２７－１（５９ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５２ｍｇ、２０５．１４μｍｏｌ、１．１ｅｑ）、酢酸パラジウム（５ｍｇ、２０．５１μｍｏｌ、０．１１ｅｑ）及び２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２，４，６－トリイソプロピルビフェニル（２０ｍｇ、４１．０３μｍｏｌ、０．２２ｅｑ）、酢酸カリウム（６０ｍｇ、６１５．４２μｍｏｌ、３．３ｅｑ）をジオキサン（４．０ｍＬ）溶液に添加し、窒素で反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００°Ｃに昇温し、３０分間還流して撹拌し、２５°Ｃに下げ、化合物ＢＢ－１（５０ｍｇ、１８６．４９μｍｏｌ、１ｅｑ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウムジクロリド（１５ｍｇ、１８．６５μｍｏｌ、０．１ｅｑ）、炭酸カリウム（７７ｍｇ、５５９．４７μｍｏｌ、３ｅｑ）、ジオキサン（４．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）を添加し、窒素ガスで反応系中の空気を置換し、窒素ガスの飽和下で、１００°Ｃに昇温し、８時間還流して撹拌した。反応溶液を直接に濃縮した。得られた粗生成物を高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ１５０×３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．１％のＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％～６０％、８分）で精製して、式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４６８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ：８．７９（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ）。前記塩をジクロロメタンに溶解し、飽和炭酸ナトリウムを添加して洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液をスピン乾燥して、式（Ｉ）で表される化合物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：８．５１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｂｒｓ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ）。

【0040】

実施例２：式（II）で表される化合物の製造

【0041】

【化3】

【0042】

式（Ｉ）で表される化合物（４４．４ｇ、９４．８９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をテトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）に溶解した後、塩化水素（４Ｍ、９４．８９ｍＬ、４ｅｑ）の酢酸エチル溶液を滴下し、２５℃で３時間撹拌した。反応溶液を濾過して黄色の固体を得、オイルポンプで乾燥させた。式（ＩＩ）で表される化合物を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：８．７１（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｓ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）３．９１（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）．

【0043】

実施例３：式（II）で表される化合物の結晶形Ｄの製造
式（ＩＩ）で表される化合物（０．４ｇ、７９３．０７ｕｍｏｌ、１ｅｑ）をアセトニトリル（６ｍＬ）に添加し、５０℃で６０時間撹拌して、濾過した。ケーキを５０℃の真空乾燥オーブンで３．５時間乾燥させ、式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄを得た。

【0044】

実験例１：野生型キナーゼの体外阻害活性評価
^３３Ｐ同位体標識キナーゼ活性試験（Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ）を使用して、ＩＣ_５０値を測定し、ヒトＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ４に対する試験化合物の阻害能を評価した。

【0045】

緩衝液条件：２０ｍＭの４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（Ｈｅｐｅｓ）（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのエチレングリコール－ビス－（２－アミノエチルエーテル）テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）、０．０２％のポリオキシエチレンラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３５）、０．０２ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．１ｍＭのバナジン酸ナトリウム（Ｎａ_３ＶＯ_４）、２ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、１％のＤＭＳＯ。

【0046】

実験手順：室温で、試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの溶液に調製して、準備した。基質を新たに調製した緩衝液に溶解し、それに試験キナーゼを添加し、均一に混合した。音響技術（Ｅｃｈｏ５５０）を使用し、試験化合物が溶解されたＤＭＳＯ溶液を上記の均一に混合した反応溶液に添加した。反応溶液中の化合物の濃度は、１０μＭ、３．３３μＭ、１．１１μＭ、０．３７０μＭ、０．１２３μＭ、４１．２ｎＭ、１３．７ｎＭ、４．５７ｎＭ、１．５２ｎＭ、０．５０８ｎＭ、または、１０μＭ、２．５０μＭ、０．６２μＭ、０．１５６μＭ、３９．１ｎＭ、９．８ｎＭ、２．４ｎＭ、０．６１ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．０３８ｎＭであった。１５分間のインキュベーションした後、^３３Ｐ－ＡＴＰ（活性０．０１μＣｉ／μＬ、対応する濃度は表２に示された）を添加し、反応を開始した。ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ４、及び基質のサプライヤーの製品番号、ロット番号及び反応溶液中の濃度情報は表２に示した。室温で１２０分間反応させた後、反応溶液をＰ８１イオン交換濾紙（Ｗｈａｔｍａｎ＃３６９８－９１５）にスポットした。０．７５％のリン酸溶液で濾紙を繰り返し洗浄した後、濾紙上に残ったリン酸化基質の放射能を測定した。キナーゼ活性データは、試験化合物を含むキナーゼ活性とブランク群（ＤＭＳＯのみを含む）のキナーゼ活性の比により表され、Ｐｒｉｓｍ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いたカーブフィッティングによりＩＣ_５０値を得、実験結果は表３に示された通りである。

【0047】

【表2】

【0048】

【表3】

【0049】

結論：式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩は、野生型ＦＧＦＲに対して良好な阻害活性を示し、更にＦＧＦＲ１、４に対するＦＧＦＲ２、３の選択性が高い。

【0050】

実験例２：化合物の薬物動態評価
実験目的：マウスにおける化合物の薬物動態を試験する。
実験材料：
ＣＤ－１マウス（オス）、溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース ０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）、化合物００２７のトリフルオロ酢酸塩。
１、投与製剤の調製：
溶媒は、０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液であり、以下の手順に従って調製した：
ａ．適切な容器に約５０％体積の精製水を添加し、約６０℃～７０℃に加熱した。
ｂ．水温が規定範囲に達した後、ヒーターを切った。上記の容器に必要な量のメチルセルロースをゆっくりと添加し、攪拌を続けた。
ｃ．４℃で目視で透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｄ．必要な量のトウェイン８０を上記の溶液に添加した。トウェイン８０が目視で均一に分散し、且つ透明な溶液になるまで撹拌を続けた。
ｅ．適切な量の精製水で上記の溶液を最終体積に希釈した。
ｆ．均一な溶液が形成されるまで攪拌を続けた。
胃内投与用製剤の調製：
ａ．適切な量の供試品を秤量しガラス瓶に入れた；
ｂ．７０％体積の溶媒（０．５％（ｗ／ｖ）のメチルセルロース０．５％（ｖ／ｖ）のトウェイン８０水溶液）を添加した；
ｃ．目視で均一になるまで製剤を攪拌し、必要に応じて水浴超音波処理をした；
ｅ．残りの体積の０．５％のメチルセルロース＋０．５％のトウェイン８０を補充し、均一に攪拌した。
２、投与
１、２群の動物に、それぞれ５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬの化合物を１回胃内投与し、投与体積は１０ｍＬ／ｋｇであった。
投与前に動物の体重を測定し、体重により投与量を計算した。
３、試料の収集と処理
伏在静脈採血により指定された時間（０．２５、０．５、１、２、４、６、８、２４時間）に全血試料（３０μＬ）を収集し、試験記録に実際の採血時間を記録した。収集時点の許容誤差は、投与後１時間以内の時点±１分で、その他の時点では理論時間±５％である。
すべての血液‘は、直ちにラベル付き市販のＫ２－ＥＤＴＡを含む遠心分離管に移した。血液サンプルを採取した後、４℃、３２００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清血漿を吸引し、速やかにドライアイスに置き、－２０℃又は更に低い温度に保存してＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。又、薬物動態パラメータを計算し、実験結果：表４をに示された通りである。

【0051】

【表4】

【0052】

結論：式（Ｉ）で表される化合物のトリフルオロ酢酸塩のマウス薬物動態パラメータは良好である。
（付記）
本開示に係る態様は以下の態様も含む。
＜１＞
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、式（II）で表される化合物の結晶形Ｄ。

【化4】

＜２＞
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．７２±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、＜１＞に記載の結晶形Ｄ。
＜３＞
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２±０．２０°、１０．９２±０．２０°、１４．６０±０．２０°、１９．３１±０．２０°、２０．０８±０．２０°、２３．１９±０．２０°、２４．１１±０．２０°、２４．９２±０．２０°、２６．２８±０．２０°、２７．０８±０．２０°、２７．７２±０．２０°、２９．２９±０．２０°において特徴的な回折ピークを有する、＜２＞に記載の結晶形Ｄ。
＜４＞
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．４２°、１０．９２°、１４．６０°、１６．６１°、１９．３１°、２０．０８°、２３．１９°、２４．１１°、２４．９２°、２６．２８°、２７．０８°、２７．７２°、２９．２９°、３０．３９°、３３．９２°、３８．３３°において特徴的な回折ピークを有する、＜３＞に記載の結晶形Ｄ。
＜５＞
ＸＲＰＤスペクトルが図１に示された通りである、＜４＞に記載の結晶形Ｄ。
＜６＞
示差走査熱量曲線は１７９．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有し、２４７．１℃±２．０℃において吸熱ピークの開始点を有する、＜１＞～＜５＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。
＜７＞
ＤＳＣ曲線スペクトルは図２に示された通りである、＜６＞に記載の結晶形Ｄ。
＜８＞
熱重量分析曲線は１９０．０℃±３．０℃の際に重量が７．１１％減少し、２５０．０℃±３．０℃の際に重量が１２．１０％減少し、２９０．０℃±３．０℃の際に重量が１４．１２％減少する、＜１＞～＜５＞のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。
＜９＞
ＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである、＜８＞に記載の結晶形Ｄ。
＜１０＞
ＦＧＦＲに関連する疾患を治療する医薬の製造における＜１＞～＜９＞のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）で表される化合物の結晶形Ｄの使用。

【図1】

【図2】

【図3】