特許 7203729 ベンゾジアゼピン誘導体の選択的スルホン化

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-01-04

(45)【発行日】2023-01-13

(54)【発明の名称】ベンゾジアゼピン誘導体の選択的スルホン化

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20230105BHJP

   C07K 5/06 20060101ALI20230105BHJP

   C07K 4/00 20060101ALI20230105BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230105BHJP

   A61K 31/5517 20060101ALI20230105BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230105BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00

C07K5/06

C07K4/00

A61P35/00 ZNA

A61K31/5517

A61K47/68

【請求項の数】 15

(21)【出願番号】P 2019527831

(86)(22)【出願日】2017-11-22

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-04-23

(86)【国際出願番号】 US2017062989

(87)【国際公開番号】W WO2018098258

(87)【国際公開日】2018-05-31

【審査請求日】2020-11-20

(31)【優先権主張番号】62/425,761

(32)【優先日】2016-11-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】504039155

【氏名又は名称】イミュノジェン・インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100120112

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100128750

【弁理士】

【氏名又は名称】廣瀬 しのぶ

(72)【発明者】

【氏名】ヒルダブランド，スコット・エイ

(72)【発明者】

【氏名】ハッチンズ，ベンジャミン・エム

【審査官】斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】特開２０１６－０４０２９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／０２８８５０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１４－５０６８９２（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ

Ａ６１Ｐ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製する方法であって、
（ａ）以下の式：

【化1】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を２．５～４．５のｐＨの有機溶媒及び水の混合物中で、緩衝液の存在下で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化2】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ、及び
（ｂ）前記修飾細胞傷害剤を細胞結合剤と反応させて、前記細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、
を含み、
Ｄが、イミン含有ベンゾジアゼピン化合物であり、Ｌが、リンカーであり
ここで、Ｄが、以下の式：

【化3】

またはその薬学的に許容される塩
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’及びＲ_４’は全て、－Ｈであり；
Ｒ_６は－ＯＭｅであり；
Ｘ_１’及びＹ_１’は双方ともに、－Ｈであり；
Ａ及びＡ’が、－Ｏ－であり；
Ｇが－ＣＨ又は－Ｎであり；
Ｌ’’及びＬ’’’が双方ともに、－Ｈであり；
Ｌ’が、以下の式で表される：
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ２’）、
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃｌ’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ２’）
（式中、
Ｒ_ａ及びＲ_ｂは、出現毎にそれぞれ独立して、－Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｓは、１～６の整数であり、
ｓ１’は、０または１～６の整数であり、
Ｃｙは、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシ、またはハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルで任意に置換されている５または６つの環炭素原子を有する環状アルキルであり、
Ｐ_１は、アミノ酸残基または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり；
Ｒ_５は、出現毎に独立して、－Ｈ、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状または分枝状アルキルである））で表され；
－Ｌ－が、以下の構造式：

【化4】

またはその薬学的に許容される塩
（式中、ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_２３及びＲ_２４は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ’は、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈ’は、Ｈまたは任意に置換されているアルキルである）で表される、前記方法。

【請求項2】

ステップ（ａ）の前記反応が、２．９～４．０のｐＨ、２．９～３．７のｐＨ、３．１～３．５のｐＨ、３．２～３．４のｐＨ、または３．３のｐＨで実施される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記緩衝液が、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、又はリン酸緩衝液である、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製する方法であって、
（ａ）以下の式：

【化5】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を、有機溶媒及び水の混合物中で、緩衝液の不存在下で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化6】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ、及び
（ｂ）前記修飾細胞傷害剤を細胞結合剤と反応させて、前記細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、
を含み、
Ｄが、イミン含有ベンゾジアゼピン化合物であり、Ｌが、リンカーであり
ここで、Ｄが、以下の式：

【化7】

またはその薬学的に許容される塩
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’及びＲ_４’は全て、－Ｈであり；
Ｒ_６は－ＯＭｅであり；
Ｘ_１’及びＹ_１’は双方ともに、－Ｈであり；
Ａ及びＡ’が、－Ｏ－であり；
Ｇが－ＣＨ又は－Ｎであり；
Ｌ’’及びＬ’’’が双方ともに、－Ｈであり；
Ｌ’が、以下の式で表される：
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ２’）、
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃｌ’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ２’）
（式中、
Ｒ_ａ及びＲ_ｂは、出現毎にそれぞれ独立して、－Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｓは、１～６の整数であり、
ｓ１’は、０または１～６の整数であり、
Ｃｙは、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシ、またはハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルで任意に置換されている５または６つの環炭素原子を有する環状アルキルであり、
Ｐ_１は、アミノ酸残基または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒ_５は、出現毎に独立して、－Ｈ、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状または分枝状アルキルである））で表され；
－Ｌ－が、以下の構造式：

【化8】

またはその薬学的に許容される塩
（式中、ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_２３及びＲ_２４は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ’は、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈ’は、Ｈまたは任意に置換されているアルキルである）で表される、前記方法。

【請求項5】

（ｉ）前記亜硫酸水素塩０．５～５当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．２５～２．５当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させるか；
（ｉｉ）前記亜硫酸水素塩０．８～２．０当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．４～１．０当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させるか；
（ｉｉｉ）前記亜硫酸水素塩１．１～１．６当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．５５～０．８当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させるか；または
（ｉｖ）前記亜硫酸水素塩１．４当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．７当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる、
請求項１～４に記載の方法。

【請求項6】

ステップ（ａ）の前記反応が、
（ｉ）２．９～３．７のｐＨで実施され、前記亜硫酸水素塩１．０～１．８当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．５～０．９当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させるか；
（ｉｉ）３．１～３．５のｐＨで実施され、前記亜硫酸水素塩１．１～１．６当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．５５～０．８当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させるか；または
（ｉｉｉ）３．３のｐＨで実施され、前記亜硫酸水素塩１．４当量または前記メタ亜硫酸水素塩０．７当量を、前記イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる、
請求項１に記載の方法。

【請求項7】

ステップ（ａ）の前記反応が、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）及び水の混合物中で実施される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

ステップ（ａ）において、前記イミン含有細胞傷害剤を、亜硫酸水素ナトリウムまたはメタ亜硫酸水素ナトリウムと反応させる、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記修飾細胞傷害剤が、ステップ（ｂ）における前記細胞結合剤との反応前に、精製されていない、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

ステップ（ｂ）の前記反応が、４～９のｐＨ、５～８．５のｐＨ、または５．５～６．５のｐＨで実施される、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

Ｄが、以下の構造式：

【化9】

またはその薬学的に許容される塩で表される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

Ｌが以下の構造式：

【化10】

またはその薬学的に許容される塩で表される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記イミン含有細胞傷害剤が、以下の式：

【化11】

またはその薬学的に許容される塩で表され、前記修飾細胞傷害剤が、以下の式：

【化12】

またはその薬学的に許容される塩で表される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記修飾細胞傷害剤が、以下の式：

【化13】

またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩で表される、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記修飾細胞傷害剤が、以下の式：

【化14】

で表される、請求項１４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、米国特許法に基づき、２０１６年１１月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／４２５，７６１号の出願日の利益を主張し、全ての図面、式、明細書、特許請求の範囲、及び配列表を含む、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

抗体－細胞傷害剤コンジュゲート（または「抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）」）及び細胞結合剤－薬物コンジュゲートは、広範囲の癌に対して有効性を有する強力なクラスの抗腫瘍剤として出現している。細胞結合剤－薬物コンジュゲート（例えば、ＡＤＣ）は一般に、３つの異なる要素：細胞結合剤（例えば、抗体）；リンカー；及び細胞傷害性部分、からなる。細胞傷害性薬物部分を抗体上のリシンに共有結合させて、抗体分子上の異なる位置に結合している様々な数の薬物を有するＡＤＣの不均質混合物であるコンジュゲートをもたらすことができる。あるいは、マレイミド基などのチオール反応性基を介して、細胞傷害性薬物部分を抗体上のシステインチオール基に共有結合させて、部位特異的ＡＤＣを形成し得る。抗体及び細胞傷害剤のコンジュゲーション反応は多くの場合、水または細胞傷害剤を可溶化するのに必要な少量の有機溶媒を含む水溶液中で実施される。

【0003】

ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）などの三環式ベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピンなどの四環式ベンゾジアゼピンを含むベンゾジアゼピン化合物は、有望な抗腫瘍活性を示しているＡＤＣを生成するために、抗体と連携する細胞傷害剤として用いられている。これらのベンゾジアゼピン化合物は、ＤＮＡの副溝に結合し、且つＤＮＡ機能を妨害して、細胞死をもたらし得るイミン結合を含有する。ベンゾジアゼピン化合物は一般に、水中で非常に低い溶解度を有する。抗体とのコンジュゲーション反応において、ベンゾジアゼピン化合物を可溶化するためには、抗体を不安定化させ得る比較的大量の有機溶媒が必要とされる。

【0004】

それ故、細胞結合剤及びイミン含有ベンゾジアゼピン薬物のコンジュゲートを調製するための新しい方法を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0005】

水溶性を改善するために、抗体とのコンジュゲーション反応の前に、イミン含有ベンゾジアゼピン化合物を、亜硫酸水素塩またはメタ亜硫酸水素塩などのイミン反応性試薬で処理して、抗体－ベンゾジアゼピンコンジュゲートを形成し得る。イミン基のスルホン化は、ベンゾジアゼピン化合物の水溶性を増加させて、抗体などのＣＢＡとのコンジュゲーション反応のための条件の改善をもたらし得る。しかし、求核剤及びα，β－不飽和カルボニルの間の求核付加は、有機合成化学で周知である。マレイミドの活性化オレフィンへの亜硫酸水素の求核付加は、この反応のこのような一例である。それ故、イミン含有ベンゾジアゼピン化合物が、抗体との共有結合のための反応性基であるマレイミドを有する場合、マレイミド部分及びイミン部分は双方ともに、亜硫酸水素塩またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、スルホン化マレイミド及び／またはスルホン化イミンを形成し得る。驚くべきことに、マレイミド基を有するイミン含有インドリノベンゾジアゼピン化合物を、亜硫酸水素塩またはメタ亜硫酸水素塩と低ｐＨで反応させることで、マレイミド基の有意なスルホン化なしに選択的且つ効果的にイミン基のスルホン化を生じさせ、それにより、インドリノベンゾジアゼピン化合物及び抗体のコンジュゲーション反応の反応収率を増加させ得ることが見出される。加えて、スルホン化インドリノベンゾジアゼピン化合物は、水中での溶解度が増加しており、その結果、著しく少ない量の有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）が、抗体とのコンジュゲーション反応に必要とされる。コンジュゲーション反応に大量の有機溶媒が存在すると、抗体を不安定化させる可能性がある。

【0006】

本発明は、細胞結合剤（ＣＢＡ）に共有結合しているマレイミド基を有するイミン含有細胞傷害剤を含む細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製するための新規方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製する方法を提供し、方法は、
（ａ）以下の式：

【化1】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を、１．９～５．０のｐＨの水溶液中で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化2】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ、及び
（ｂ）修飾細胞傷害剤を細胞結合剤と反応させて、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、
を含み、
Ｄは、イミン含有細胞傷害性化合物であり、Ｌは、リンカーである。

【0007】

一部の実施形態では、Ｄは、イミン含有三環式または四環式ベンゾジアゼピン化合物である。

【0008】

一部の実施形態では、Ｄは、イミン含有三環式ベンゾジアゼピン化合物である。

【0009】

一部の実施形態では、Ｄは、イミン含有四環式ベンゾジアゼピン化合物である。

【0010】

本明細書で使用される場合、イミン含有三環式ベンゾジアゼピン化合物は、ベンゾジアゼピンコアのジアゼピン部分に縮合した単環式環を有する化合物を指す。単環式環は、１つ以上のさらなるヘテロ原子、例えば、酸素、硫黄または窒素、及び置換基、例えば、単環式環または多環式環を含有してもよい。例示的な三環式ベンゾジアゼピン化合物として、ＷＯ２０１０／０４３８８０、ＷＯ２０１１／１３０６１６、Ｗ０２００９／０１６５１６、ＷＯ２０１３／１７７４８１、及びＷＯ２０１２／１１２７０８に記載されているようなピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0011】

本明細書で使用される場合、イミン含有四環式ベンゾジアゼピン化合物は、ベンゾジアゼピンコアのジアゼピン部分に縮合された二環式環を有する化合物を指す。二環式環は、１つ以上のさらなるヘテロ原子、例えば、酸素、硫黄、または窒素、を任意に含有する縮合二環式環である。例示的な四環式ベンゾジアゼピン化合物としては、ＷＯ／２０１０／０９１１５０及びＷＯ２０１２／１２８８６８に記載されているようなインドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0012】

一部の実施形態では、Ｄは、インドリノベンゾジアゼピンである。

【0013】

一部の実施形態では、Ｄは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。

【0014】

本明細書に記載の方法で調製された細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲート及び修飾細胞傷害剤も本発明により提供される。

【0015】

本発明の一態様にのみ記載され、他の態様には記載されていない実施形態を含み、且つ、実施例にのみ現れる実施形態を含む、本明細書に記載の任意の実施形態は、明示的に否定されるか、または不適切でない限り、任意の１つ以上の他の実施形態と組み合わせることができると理解すべきである。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】ｐＨ３．３での亜硫酸水素ナトリウムとのイミン含有細胞傷害剤Ｄ１の反応混合物のＵＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図2】ｐＨ４．７５での亜硫酸水素ナトリウムとのイミン含有細胞傷害剤Ｄ１の反応混合物のＵＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図3】亜硫酸水素ナトリウムとのＰＢＤイミン含有細胞傷害剤タリリンと反応混合物のＵＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図4A】亜硫酸水素ナトリウム２．０当量とのイミン含有細胞傷害剤Ｄ５の反応混合物のＵＰＬＣクロマトグラムを示す。

【図4B】亜硫酸水素ナトリウム２．５当量とのイミン含有細胞傷害剤Ｄ５の反応混合物のＵＰＬＣクロマトグラムを示す。

【発明を実施するための形態】

【0017】

ここで、本発明の特定の実施形態について詳細に言及することになり、これの例は、添付の構造及び式に示されている。本発明は、列挙された実施形態と共に説明されることになり、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないと理解されるであろう。これに対して、本発明は、特許請求の範囲により定義されている本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替物、修正物、及び均等物を包含するものである。当業者であれば、本明細書に記載されているものと類似または同等の多くの方法及び材料を認識することになり、これは、本発明の実施に使用することができる。

【0018】

本発明の異なる態様及び明細書の異なる部分（実施例にのみ記載された実施形態を含む）に記載されたものを含む本明細書に記載の実施形態のいずれかは、明示的に否定されるか、または不適切でない限り、本発明の他の１つ以上の実施形態と組み合わせることができると理解されるべきである。実施形態の組み合わせは、複数の従属請求項を介して、請求の範囲に記載されているそれらの具体的な組み合わせに限定されない。

【0019】

定義
本明細書で使用される「アルキル」または「直鎖状もしくは分枝状アルキル」は、飽和直鎖状または分枝状一価炭化水素ラジカルを指す。好ましい実施形態では、直鎖状または分枝状アルキルは、３０以下の炭素原子（例えば、直鎖状アルキル基の場合Ｃ_１－Ｃ_３０、分枝状アルキル場合Ｃ_３－Ｃ_３０）、より好ましくは、２０以下の炭素原子を有する。さらにより好ましくは、直鎖状または分枝状アルキルは、１０以下の炭素原子（すなわち、直鎖状アルキル基の場合Ｃ_１－Ｃ_１０、分枝状アルキルの場合Ｃ_３－Ｃ_１０）を有する。他の実施形態では、直鎖状または分枝状アルキルは、６つ以下の炭素原子（すなわち、直鎖状アルキル基の場合Ｃ_１－Ｃ_６または分枝状アルキルの場合Ｃ_３－Ｃ_６）を有する。アルキルの例としては、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、１－ブチル、２－メチル－１－プロピル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－ブチル、２－メチル－２－プロピル、１－ペンチル、２－ペンチル３－ペンチル、２－メチル－２－ブチル、３－メチル－２－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、１－ヘキシル）、２－ヘキシル、３－ヘキシル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、３－メチル－３－ペンチル、２－メチル－３－ペンチル、２，３－ジメチル－２－ブチル、３，３－ジメチル－２－ブチル、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、本明細書、実施例、及び特許請求の範囲を通して使用される「アルキル」という用語は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の双方を含むものであり、これらの後者は、炭化水素骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキル部分を指す。本明細書で使用される場合、（Ｃ_Ｘ－Ｃ_ＸＸ）アルキルまたはＣ_Ｘ－ＸＸアルキルは、ｘ－ｘｘの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルを意味する。

【0020】

「アルケニル」または「直鎖状または分枝状アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位を有する２～２０の炭素原子の直鎖状または分枝状一価炭化水素ラジカル、すなわち、炭素－炭素二重結合を指し、アルケニルラジカルは、「シス」及び「トランス」配向、あるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。例としては、エチレニルまたはビニル（－ＣＨ＝ＣＨ_２）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、アルケニルは、２～１０の炭素原子を有する。より好ましくは、アルキルは、２～４つの炭素原子を有する。

【0021】

「アルキニル」または「直鎖状もしくは分枝状アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素－炭素の三重結合、を有する２～２０の炭素原子の直鎖状または分枝状一価炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチニル、プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、ヘキシニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、アルキニルは、２～１０の炭素原子を有する。より好ましくは、アルキニルは、２～４つの炭素原子を有する。

【0022】

「環状アルキル」及び「シクロアルキル」という用語は、互換的に使用することができる。本明細書で使用される場合、用語は、飽和炭素環式環のラジカルを指す。好ましい実施形態では、シクロアルキルは、環構造中に３～１０の炭素原子を有し、より好ましくは、環構造中に５～７つの炭素原子を有する。一部の実施形態では、２つの環式環は、２つ以上の原子を共有することができ、例えば、環は、「縮合環」である。「好適なシクロアルキル」としては、シクロヘプチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチル、及びシクロプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、シクロアルキルは、単環式基である。一部の実施形態では、シクロアルキルは、二環式基である。一部の実施形態では、シクロアルキルは、三環式基である。

【0023】

「シクロアルキルアルキル」という用語は、シクロアルキル基で置換されている上記のアルキル基を指す。

【0024】

「環状アルケニル」という用語は、環構造中に少なくとも１つの二重結合を有する炭素環式環ラジカルを指す。

【0025】

「環状アルキニル」という用語は、環構造中に少なくとも１つの三重結合を有する炭素環式環ラジカルを指す。

【0026】

本明細書で使用される「アリール」という用語は、環の各原子が炭素である置換または非置換単環芳香族基を含む。好ましくは、環は、５～７員環、より好ましくは、６員環である。アリール基としては、フェニル、フェノール、アニリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。「アリール」という用語は、２つ以上の原子が２つの隣接環に共通する２つ以上の環を有する「ポリシクリル」、「多環」、及び「多環式」環系も含み、例えば、環は、「縮合環」である、環の少なくとも１つは、芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、または芳香環とし得る。いくつかの好ましい実施形態では、多環は、２～３つの環を有する。特定の好ましい実施形態では、多環式環系は、環の双方が芳香族である２つの環式環を有する。多環の環のそれぞれは、置換または非置換であり得る。特定の実施形態では、多環の各環は、環内に３～１０、好ましくは、５～７つの炭素原子、を含有する。例えば、アリール基としては、フェニル（ベンゼン）、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、及びナフチル、ならびに５，６，７，８－テトラヒドロナフチルなどのベンゾ縮合炭素環式部分が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、アリールは、単環式芳香族基である。一部の実施形態では、アリールは、二環式芳香族基である。一部の実施形態では、アリールは、三環式芳香族基である。

【0027】

本明細書で使用される「複素環」、「ヘテロシクリル」、及び「複素環式環」という用語は、３～１８員環、好ましくは、３～１０員環、より好ましくは、３～７員環の置換または非置換の非芳香族環構造を指し、この環構造は、少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは、１～４つのヘテロ原子、より好ましくは、１または２つのヘテロ原子を含む。特定の実施形態では、環構造は、２つの環式環を有し得る。一部の実施形態では、２つの環式環は、２つ以上の原子を共有することができ、例えば、環は、「縮合環」である。「ヘテロシクリル基」は、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなどを含む。複素環は、Ｌｅｏ Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に、１、３、４、６、７、及び９章；“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０ ｔｏ ｐｒｅｓｅｎｔ）、特に、１３、１４、１６、１９、及び２８巻；ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。複素環式環の例としては、テトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロチエン、テトラヒドロピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、チオモルホリン、チオキサン、ホモピペラジン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ホモピペリジン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、オキセパン、チエパン、オキサゼピン、ジアゼピン、チアゼピン、２－ピロリン、３－ピロリン、インドリン、２Ｈ－ピラン、４Ｈ－ピラン、ジオキサン、１，３－ジオキソラン、ピラゾリン、ジチアン、ジチオラン、ジヒドロピラン、ジヒドロチエン、ジヒドロフラン、ピラゾリジニルイミダゾリン、イミダゾリジン、３－アザビシコ［３．１．０］ヘキサン、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタン、及びアザビシクロ［２．２．２］ヘキサンが挙げられるが、これらに限定されない。スピロ部分も、この定義の範囲内に含まれる。環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環式基の例は、ピリミジノン及び１，１－ジオキソ－チオモルホリンである。

【0028】

本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、置換または非置換芳香族単環構造、好ましくは、５～７員環、より好ましくは、５～６員環を指し、この環構造は、少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、もしくはＳ）、好ましくは、１～４つもしくは１～３つのヘテロ原子、より好ましくは、１もしくは２つのヘテロ原子を含む。２つ以上のヘテロ原子がヘテロアリール環中に存在する場合、それらは、同じか、または異なっていてもよい。「ヘテロアリール」という用語は、２つ以上の環原子が２つの隣接環に共通する、例えば、環が「縮合環」である、２つ以上の環式環を有する「ポリシクリル」、「多環」、及び「多環式」環系も含み、環の少なくとも１つは、ヘテロ芳香族であり、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロ芳香族、及び／またはヘテロシクリルとし得る。いくつかの好ましい実施形態では、多環式ヘテロアリールは、２～３つの環を有する。特定の実施形態では、好ましい多環式ヘテロアリールは、環の双方が芳香族である２つの環式環を有する。特定の実施形態では、多環の各環は、環内に３～１０の原子、好ましくは、環内に５～７つの原子を含有する。例えば、ヘテロアリール基としては、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、キノリン、ピリミジン、インドリジン、インドール、インダゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、カルバゾール、フェノキサジン、キノリン、プリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、単環芳香族基である。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、二環芳香族基である。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、三環芳香族基である。

【0029】

複素環またはヘテロアリール基は、これが可能な場合、炭素（炭素結合している）または窒素（窒素結合している）結合させることができる。限定ではなく例として、炭素結合複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位で、ピリダジンの３、４、５、もしく６位で、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位で、ピラジンの２、３、５、もしくは６位で、フランテトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロフランピロールの２、３、４、もしくは５位で、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位で、イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位で、アジリジンの２もしくは３位で、アゼチジンの２、３、もしくは４位で、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位で、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で、結合する。

【0030】

限定ではなく例として、窒素結合複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位で、モルホリンの４位で、カルバゾールまたはＯ－カルボリンの９位で結合する。

【0031】

ヘテロアリールまたはヘテロシクリシル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｃｙｌ）に存在するヘテロ原子は、酸化形態、例えば、ＮＯ、ＳＯ、及びＳＯ_２を含む。

【0032】

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、またはヨウ素（Ｉ）を指す。

【0033】

本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、本明細書で定義されている１つ以上のハロ基で置換されている、本明細書で定義されているアルキルを指す。ハロアルキルは、モノハロアルキル、ジハロアルキル、またはポリハロアルキルとし得る。モノハロアルキルは、１つのフルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード置換基を有し得る。ジハロアルキルまたはポリハロアルキルは、同じハロ原子の２つ以上または異なるハロ基の組み合わせで置換することができる。ハロアルキルの例としては、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチル、ジフルオロエチル（ｄｉｆｌｕｏｒｏｅｈｔｈｙｌ）、ジフロソロプロピル、ジクロロエチル、及びジクロロプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0034】

本明細書で使用される「アルコキシ」は、アルキルが上の本明細書で定義されているアルキル－Ｏ－を指す。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２－プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0035】

上記のアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、環式アルキル、環式アルケニル、環式アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）の置換基で任意に置換することができる。

【0036】

「非置換」の具体的な記載のない限り、本明細書の化学部分への言及は、置換多様体も含むと理解される。例えば、「アルキル」基または部分への言及は双方ともに、置換及び非置換多様体を暗黙的に含む。化学部分上の置換基の例としては、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセタート、もしくはチオホルマート）、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、ホスホリル、ホスファート、ホスホナート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルファート、スルホナート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、またはアリールもしくはヘテロアリール部分が挙げられるが、これらに限定されない。

【0037】

「任意の」または「任意に」は、その後に記載される状況が起きても起きなくてもよいことを意味し、その結果、本願は、状況が起こる場合及び状況が起こらない場合を含む。例えば、「任意に置換されている」という語句は、非水素置換基が所与の原子上に存在しても存在しなくてもよいことを意味し、従って、本願は、非水素置換基が存在する構造及び非水素置換基が存在しない構造を含む。

【0038】

「置換されている」という用語は、１つ以上の炭素、窒素、酸素、または硫黄原子上の水素を置換する置換基を有する部分を指す。「置換」または「で置換されている」は、このような置換が置換原子及び置換基の許容原子価に従い、且つ置換が、例えば、転位、環化、脱離などによる、例えば、変換を自発的に受けない安定な化合物をもたらすという暗黙の条件を含むと理解されるであろう。本明細書で使用される場合、「置換されている」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むと考えられる。広い態様では、許容される置換基としては、有機化合物の非環式及び環式、分枝及び非分枝、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基が挙げられる。許容される置換基は、１つ以上であり、適切な有機化合物と同じか、または異なり得る。本発明の目的の場合、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載の有機化合物の水素置換基及び／または任意の許容される置換基を有してもよい。置換基は、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセタート、もしくはチオホルマート）、アルコキシル、アルキルチオ、アシルオキシ、ホスホリル、ホスファート、ホスホナート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルファート、スルホナート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含み得る。説明すると、モノフルオロアルキルは、フルオロ置換基で置換されているアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２つのフルオロ置換基で置換されているアルキルである。置換基上に複数の置換がある場合、各非水素置換基は、（別途明記しない限り）同一でも異なっていてもよいと認識すべきである。

【0039】

置換基の炭素が、置換基の表の１つ以上で任意に置換されているように記載されている場合、炭素上の水素のうちの１つ以上は（存在する限り）、独立して選択される任意の置換基で別々に且つ／または一緒に置換することができる。置換基の窒素が、置換基の表の１つ以上で任意に置換されているように記載されている場合、窒素上の水素のうちの１つ以上は（存在する限り）それぞれ、独立して選択される任意の置換基で置換することができる。１つの例示的な置換基は、－ＮＲ’Ｒ’’として示すことができ、Ｒ’及びＲ’’は、それらが結合している窒素原子と共に、複素環式環を形成し得る。Ｒ’及びＲ’’ならびにそれらが結合している窒素原子から形成される複素環式環は、部分的または完全に飽和であり得る。一部の実施形態では、複素環式環は、３～７つの原子からなる。他の実施形態では、複素環式環は、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、及びチアゾリルからなる群より選択される。

【0040】

本明細書は、「置換基」、「ラジカル」、及び「基」という用語を互換的に使用する。

【0041】

置換基の基が、置換基の表の１つ以上で任意に置換されているように一括して記載されている場合、その基は、（１）置換不可能な置換基、（２）任意の置換基により置換されてない置換可能な置換基、及び／または（３）任意の置換基のうちの１つ以上で置換されている置換可能な置換基を含み得る。

【0042】

置換基が、特定数までの非水素置換基で任意に置換されていると記載されている場合、その置換基は、（１）置換されていないか、または、（２）その特定数までの非水素置換基、もしくは、置換基上の最大数までの置換可能な位置のいずれか小さい方で置換されているかのいずれかとし得る。従って、例えば、置換基が、最大３つの非水素置換基で任意に置換されているヘテロアリールとして記載されている場合、次に、３つ未満の置換可能な位置を有する任意のヘテロアリールは、ヘテロアリールが置換可能な位置を有するのと同数までの非水素置換基のみで任意に置換されているであろう。非限定例におけるこのような置換基は、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシシクリル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｙｃｌｙｌ）、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－ＯＲ^１００、ＮＲ^１０１Ｒ^１０２、－ＮＯ_２、－ＮＲ^１０１ＣＯＲ^１０２、－ＳＲ^１００、－ＳＯＲ^１０１で表されるスルホキシド、－ＳＯ_２Ｒ^１０１で表されるスルホン、スルホナート－ＳＯ_３Ｍ、スルファート－ＯＳＯ_３Ｍ、－ＳＯ_２ＮＲ^１０１Ｒ^１０２で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、－ＣＯＲ^１０１、－ＯＣＯＲ^１０１、－ＯＣＯＮＲ^１０１Ｒ^１０２、及びポリエチレングリコール単位（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎでＲ^１０１から選択することができ、Ｍは、Ｈまたはカチオン（例えば、Ｎａ^＋またはＫ^＋）であり；Ｒ^１０１、Ｒ^１０２、及びＲ^１０３は、それぞれ独立して、Ｈ、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^１０４（式中、ｎは、１～２４の整数である）、６～１０の炭素原子を有するアリール、３～１０の炭素原子を有する複素環式環、及び５～１０の炭素原子を有するヘテロアリールであり；Ｒ^１０４は、Ｈ、または１～４つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキルであり、Ｒ^１００、Ｒ^１０１、Ｒ^１０２、Ｒ^１０３、及びＲ^１０４で表される基中のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリシル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｃｙｌ）は、独立してハロゲン、－ＯＨ、－ＣＮ、－ＮＯ_２、及び１～４つの炭素原子を有する非置換の直鎖状または分枝状アルキルから選択される１つ以上（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）の置換基で任意に置換されている。好ましくは、上記の任意に置換されているアルキル、アルケニル、アルキニル、環式アルキル、環式アルケニル、環式アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールに対する置換基は、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＲ^１０２Ｒ^１０３、－ＣＦ_３、－ＯＲ^１０１、アリール、ヘテロアリール、複素環、－ＳＲ^１０１、－ＳＯＲ^１０１、－ＳＯ_２Ｒ^１０１、及び－ＳＯ_３Ｍを含む。

【0043】

基中の炭素原子の数は、本明細書では、接頭辞「Ｃ_{Ｘ－ＸＸ」}または「Ｃ_Ｘ－Ｃ_ＸＸ」で明記することができ、ｘ及びｘｘは、整数である。例えば、「Ｃ_１－４アルキル」または「Ｃ１－Ｃ４アルキル」は、１～４つの炭素原子を有するアルキル基である。

【0044】

「化合物」または「細胞傷害性化合物」、「細胞傷害性二量体」、及び「細胞傷害性二量体化合物」という用語は、互換的に使用される。それらは、構造もしくは式またはその誘導体が、本発明あるいは参照により取り込まれている構造もしくは式またはその任意の誘導体に開示されている化合物を含むものである。用語は、本発明に開示の全ての式の化合物の立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、塩（例えば、薬学的に許容される塩）、及びプロドラッグ、ならびにプロドラッグ塩も含む。用語は、上述のいずれかの任意の溶媒和物、水和物、及び多形体も含む。本願に記載の本発明の特定の態様における「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒和物」、「代謝物」、「塩」、「プロドラッグ」、「プロドラッグ塩」、「コンジュゲート塩」、「コンジュゲート塩」、「溶媒和物」、「水和物」、または「多形体」の具体的な説明は、本発明の他の態様におけるこれらの形態の意図された省略と解釈されるべきではなく、「化合物」という用語は、これらの他の形態の説明なしに使用される。

【0045】

本明細書で使用される「コンジュゲート」という用語は、細胞結合剤に結合している本明細書に記載の化合物またはその誘導体を指す。

【0046】

本明細書で使用される「細胞結合剤に結合可能な」という用語は、これらの化合物またはその誘導体を細胞結合剤に結合させるのに好適な、少なくとも１つの連結基またはその前駆体を含む、本明細書に記載の化合物またはその誘導体を指す。

【0047】

所与の基の「前駆体」という用語は、任意の脱保護、化学修飾、またはカップリング反応により、その基をもたらし得る任意の基を指す。

【0048】

「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせることができない特性を有する分子を指すが、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。

【0049】

「立体異性体」という用語は、同一の化学構造及び結合性を有するが、単結合の周りの回転により相互変換することができない、空間内でのそれらの原子の異なる配向を有する化合物を指す。

【0050】

「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラリティー中心を有する立体異性体を指し、この分子は、互いに鏡像ではない。ジアステレオマーは、異なる物理的性質、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性、を有する。ジアステレオマーの混合物は、高分解能分析手順、例えば、結晶化、電気泳動、及びクロマトグラフィー、で分離し得る。

【0051】

「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。

【0052】

本明細書で使用される立体化学的定義及び規則は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，”Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉またはキラル中心を含有し得、従って、異なる立体異性形態で存在する。限定されないが、ジアステレオマー、エナンチオマー、及びアトロプ異性体、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物を含む、本発明の化合物の全ての立体異性形態は、本発明の一部を形成することが意図される。多くの有機化合物は、光学的に活性な形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を記載する際に、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳは、キラル中心（複数可）に関し分子の絶対配置を表すために使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（－）は、化合物による平面偏光の回転の符号を示すために用いられ、（－）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞が付された化合物は、右旋性である。所与の化学構造の場合、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であること以外は同一である。具体的な立体異性体は、エナンチオマーと呼ぶこともでき、このような異性体の混合物は多くの場合、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０の混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と呼ばれ、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択性または立体特異性がなかった場合に起こり得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く、２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。

【0053】

「互変異性体」または「互変異性型」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能な、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン互変異性体としても既知の）は、ケト－エノール及びイミン－エナミン異性化などの、プロトンの移動による相互交換を含む。原子価互変異性体は、結合電子のいくつかの再構成による相互変換を含む。

【0054】

本明細書で使用される場合、「ベンゾジアゼピン」化合物は、ベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。ベンゾジアゼピンコアは、置換もしくは非置換であり、且つ／または１つ以上の環構造に融合させることができる。それは、リンカーにより結合している２つのベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。ベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能基（－Ｃ＝Ｎ－）を還元させることができる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「ピロロベンゾジアゼピン」（ＰＢＤ）化合物は、ピロロベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。ピロロベンゾジアゼピンは、置換または非置換であり得る。それは、リンカーにより結合している２つのピロロベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能基（－Ｃ＝Ｎ－）は、還元させることができる。

【0056】

特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、

【化3】

で表されるコア構造を含み、これは、任意に置換することができる。

【0057】

特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、

【化4】

で表されるコア構造を含み、これは、任意に置換することができる。

【0058】

本明細書で使用される場合、「インドリノベンゾジアゼピン」（ＩＧＮ）化合物は、インドリノベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。インドリノベンゾジアゼピンは、置換または非置換であり得る。それは、リンカーにより結合している２つのインドリノベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能基（－Ｃ＝Ｎ－）は、還元させることができる。

【0059】

特定の実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は、

【化5】

で表されるコア構造を含み、これは、任意に置換することができる。

【0060】

一部の実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は、

【化6】

で表されるコア構造を含み、これは、任意に置換することができる。

【0061】

本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という語句は、本発明の化合物の薬学的に許容される有機または無機塩を指す。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩（ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩（ａｃｉｄ ｃｉｔｒａｔｅ）、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、メシル酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１'－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエ酸）塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、ならびにアンモニウム塩が挙げられる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンなどの別の分子の包含を含み得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分とし得る。さらに、薬学的に許容される塩は、構造中に複数の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。従って、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。

【0062】

本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に許容される塩は、当該技術分野で利用可能な任意の好適な方法、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸などで、または有機酸、例えば、酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル（ｐｙｒａｎｏｓｉｄｙｌ）酸、例えば、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸、αヒドロキシ酸、例えば、クエン酸もしくは酒石酸、アミノ酸、例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、芳香族酸、例えば、安息香酸もしくはケイ皮酸、スルホン酸、例えば、ｐ－トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸などでの遊離塩基の処理、で調製することができる。

【0063】

本発明の化合物が酸である場合、所望の薬学的に許容される塩は、任意の好適な方法、例えば、無機あるいは有機塩基、例えば、アミン（１級、２級、もしくは３級）、アルカリ金属水酸化物、またはアルカリ土類金属水酸化物などでの遊離酸の処理、で調製することができる。好適な塩の実例としては、アミノ酸、例えば、グリシン及びアルギニン、アンモニア、１級、２級、及び３級アミン、ならびに環状アミン、例えば、ピペリジン、モルホリン、及びピペラジンに由来する有機塩、ならびに、ナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、及びリチウムに由来する無機塩が挙げられるが、これらに限定されない。

【0064】

本明細書で使用される時、「溶媒和物」という用語は、非共有分子間力で結合している水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンジクロロメタン、２－プロパノールなどの化学量論的または非化学量論的量の溶媒をさらに含む化合物を意味する。化合物の溶媒和物または水和物は、イミン部分の溶媒和または水和を生じさせるために、化合物に、少なくとも１モル当量のヒドロキシル溶媒、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、または水を添加することにより容易に調製される。

【0065】

「薬学的に許容される」という語句は、物質または組成物が、製剤を含む他の成分及び／またはそれを用いて処置される哺乳動物と化学的及び／または毒物学的に適合がなければならないことを示す。

【0066】

「保護基」または「保護部分」という用語は、化合物、その誘導体、またはそれらのコンジュゲート上の他の官能基を反応させながら、特定の官能基をブロックまたは保護するために一般に用いられる置換基を指す。例えば、「アミン保護基」または「アミノ保護部分」は、化合物中のアミノ官能基をブロックまたは保護するアミノ基に結合している置換基である。このような基は、当該技術分野で周知であり（例えば、Ｐ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ，２００７，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ ７，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＪを参照のこと）、カルバマート、例えば、メチル及びエチルカルバマート、ＦＭＯＣ、置換エチルカルバマート、（「自己犠牲」とも呼ばれる）１，６－β－脱離で切断されたカルバマート、尿素、アミド、ペプチド、アルキル、及びアリール誘導体により例示される。好適なアミノ保護基としては、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、及び９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。保護基の一般的な説明及びその使用では、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ＆ Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００７を参照のこと。

【0067】

「脱離基」という用語は、置換または置き換え中に離脱する荷電または非荷電部分の基を指す。このような脱離基は、当該技術分野で周知であり、ハロゲン、エステル、アルコキシ、ヒドロキシル、トシラート、トリフラート、メシラート、ニトリル、アジド、カルバマート、ジスルフィド、チオエステル、チオエーテル、及びジアゾニウム化合物を含むが、これらに限定されない。

【0068】

「二官能性架橋剤」、「二官能性リンカー」、または「架橋剤」という用語は、２つの反応基を有する修飾剤を指し、これらの一方は、細胞結合剤と反応可能であるが、他方は、２つの部分を共に連結する細胞傷害性化合物と反応する。このような二官能性架橋剤は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｉｓａｌｍ ａｎｄ Ｄｅｎｔ ｉｎ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｃｈａｐｔｅｒ ５，ｐ２１８－３６３，Ｇｒｏｖｅｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９９を参照のこと）。例えば、チオエーテル結合を介した結合を可能にする二官能性架橋剤は、マレイミド基を導入するＮ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、またはヨードアセチル基を導入するＮ－スクシンイミジル－４－（ヨードアセチル）－アミノベンゾアート（ＳＩＡＢ）を含む。細胞結合剤上にマレイミド基またはハロアセチル基を導入する他の二官能性架橋剤は、当該技術分野で周知であり（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ ６１１０５，ＵＳＡから入手可能な米国特許出願第２００８／００５０３１０号、同第２００５０１６９９３３号を参照のこと）、ビス－マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）_２、ＢＭ（ＰＥＯ）_３、Ｎ－（β－マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、γ－マレイミド酪酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε－マレイミドカプロン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、５－マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、「長鎖」アナログのＳＭＣＣ（ＬＣ－ＳＭＣＣ）であるＮ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシ－（６－アミドカプロアート）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）－酪酸ヒドラジドまたはＨＣｌ塩（ＭＰＢＨ）、Ｎ－スクシンイミジル３－（ブロモアセトアミド）プロピオナート（ＳＢＡＰ）、Ｎ－スクシンイミジルヨードアセタート（ＳＩＡ）、κ－マレイミドウンデカン酸Ｎ－スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）－ブチラート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル－６－（β－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノアート（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジル－（４－ビニルスルホニル）ベンゾアート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス－マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４－ビス－マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４－ビスマレイミジル－２，３－ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス－マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス－マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミド－メチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（スルホ－ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾアート（スルホ－ＳＩＡＢ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢＳ）、Ｎ－（γ－マレイミドブトリロキシ（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｕｔｒｙｌｏｘｙ））スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢＳ）、Ｎ－（ε－）マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＥＭＣＳ）、Ｎ－（κ－マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＫＭＵＳ）、及びスルホスクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチラート（スルホ－ＳＭＰＢ）を含むが、これらに限定されない。

【0069】

ヘテロ二官能性架橋剤は、２つの異なる反応基を有する二官能性架橋剤である。アミン反応性Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）及びカルボニル反応性ヒドラジン基の双方を含有するヘテロ二官能性架橋剤は、本明細書に記載の細胞傷害性化合物を細胞結合剤（例えば、抗体）と連結するために、使用することもできる。このような市販のヘテロ二官能性架橋剤の例としては、スクシンイミジル６－ヒドラジノニコチンアミドアセトンヒドラゾン（ＳＡＮＨ）、スクシンイミジル４－ヒドラジドテレフタラートヒドロクロリド（ＳＨＴＨ）、及びスクシンイミジルヒドラジニウムニコチナートヒドロクロリド（ＳＨＮＨ）が挙げられる。酸に不安定な結合を有するコンジュゲートは、本発明のヒドラジンを有するベンゾジアゼピン誘導体を使用して調製することもできる。使用することができる二官能性架橋剤の例としては、スクシンイミジル－ｐ－ホルミルベンゾアート（ＳＦＢ）及びスクシンイミジル－ｐ－ホルミルフェノキシアセタート（ＳＦＰＡ）が挙げられる。

【0070】

ジスルフィド結合を介する細胞結合剤と細胞毒性化合物との結合を可能にする二官能性架橋剤は、当該技術分野で既知であり、ジチオピリジル基を導入するＮ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ））ペンタノアート（ＳＰＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）２－スルホブタノアート（スルホ－ＳＰＤＢ）を含む。ジスルフィド基を導入するために使用することができる他の二官能性架橋剤は、当該技術分野で既知であり、米国特許第６，９１３，７４８号、同第６，７１６，８２１号、ならびに米国特許公報第２００９０２７４７１３号、及び同第２０１００１２９３１４号に開示されており、この全ては、参照により本明細書に組み込まれている。あるいは、チオール基を導入する２－イミノチオラン、ホモシステインチオラクトン、またはＳ－アセチルコハク酸無水物などの架橋剤は、使用することもできる。

【0071】

本明細書で定義されている「リンカー」、「リンカー部分」、または「連結基」は、細胞結合剤及び細胞傷害性化合物などの２つの基を一緒に連結する部分を指す。通常は、リンカーは、それが連結している２つの基が結合している条件下では、実質的に不活性である。二官能性架橋剤は、リンカー部分の両端に１つずつ、２つの反応性基を含み得、その結果、１つの反応性基を最初に細胞傷害性化合物と反応させて、続いて細胞結合剤と反応し得る、リンカー部分及び第２の反応性基有する化合物を得ることができる。あるいは、二官能性架橋剤の一端は、最初に細胞結合剤と反応させて、続いて細胞傷害性化合物と反応し得る、リンカー部分及び第２の反応性基を有する細胞結合剤を得ることができる。連結部分は、特定の部位で細胞傷害性部分の放出を可能にする化学結合を含有し得る。好適な化学結合は、当該技術分野で周知であり、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定結合、光解離性結合、ペプチダーゼ不安定結合、及びエステラーゼ不安定結合を含む（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号；同第５，４７５，０９２号；同第６，４４１，１６３号；同第６，７１６，８２１号；同第６，９１３，７４８号；同第７，２７６，４９７号；同第７，２７６，４９９号；同第７，３６８，５６５号；同第７，３８８，０２６号、及び同第７，４１４，０７３号を参照のこと）。ジスルフィド結合、チオエーテル及びペプチダーゼ不安定結合が好ましい。本発明に使用することができる他のリンカーは、米国特許公報第２００５０１６９９３３号に記載されているような切断不可能なリンカー、または荷電リンカーもしくは親水性リンカーを含み、米国特許第２００９／０２７４７１３号、米国特許第２０１０／０１２９３１４０号、及びＷＯ２００９／１３４９７６に記載されており、これらのそれぞれは、明示的に参照により本明細書に組み込まれる。

【0072】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸または天然に存在しないアミノ酸を指す。一部の実施形態では、アミノ酸は、ＮＨ_２－Ｃ（Ｒ^ａａ’Ｒ^ａａ）－Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで表され、Ｒ^ａａ及びＲ^ａａ’は、それぞれ独立して、Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、アリール、ヘテロアリールもしくはヘテロシクリル、またはＲ^ａａ及びＮ末端窒素原子は共に、複素環（例えば、プロリンのような）を形成し得る。「アミノ酸残基」という用語は、１つの水素原子が、アミノ酸、例えば、－ＮＨ－Ｃ（Ｒ^ａａ’Ｒ^ａａ）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、のアミン及び／またはカルボキシ末端から除去されている場合、対応する残基を指す。

【0073】

「ペプチド」という用語は、ペプチド（アミド）結合で結合しているアミノ酸モノマーの短鎖を指す。一部の実施形態では、ペプチドは、２～２０のアミノ酸残基を含有する。他の実施形態では、ペプチドは、２～１０のアミノ酸残基を含有する。さらに他の実施形態では、ペプチドは、２～５つのアミノ酸残基を含有する。本明細書中で使用される場合、ペプチドが、アミノ酸の具体的な配列で表される本明細書中に記載の細胞傷害剤またはリンカーの一部である場合、ペプチドは、両方向で細胞傷害剤またはリンカーの残りに連結させることができる。例えば、ジペプチドＸ_１－Ｘ_２は、Ｘ_１－Ｘ_２及びＸ_２－Ｘ_１を含む。同様に、トリペプチドＸ_１－Ｘ_２－Ｘ_３は、Ｘ_１－Ｘ_２－Ｘ_３及びＸ_３－Ｘ_２－Ｘ_１を含み、テトラペプチドＸ_１－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｘ_４は、Ｘ_１－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｘ_４及びＸ_４－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｘ_１を含む。Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、及びＸ_４は、アミノ酸残基を表す。

【0074】

「カチオン」という用語は、正電荷を有するイオンを指す。カチオンは、一価（例えば、Ｎａ^＋、Ｋ^＋など）、二価（例えば、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋など）、または多価（例えば、Ａｌ^３＋など）とし得る。好ましくは、カチオンは、一価である。

【0075】

「システイン操作抗体」という用語は、抗体の軽鎖または重鎖の所与の残基に通常は存在しない少なくとも１つのシステイン（Ｃｙｓ）を有する抗体を含む。「操作Ｃｙｓ」とも呼ばれ得るこのようなＣｙｓは、例えば、標準的な組み換え技術により（例えば、標的残基の非Ｃｙｓ残基に対するコード配列を、Ｃｙｓに対するコード配列と置換することにより）導入することができる。特定の実施形態では、本発明のＣｙｓ操作抗体は、重鎖に操作Ｃｙｓを有する。特定の実施形態では、操作Ｃｙｓは、重鎖のＣＨ３ドメイン内またはその近くにある。特定の実施形態では、操作Ｃｙｓは、重鎖の残基４４２（ＥＵ／ＯＵナンバリング）にある。

【0076】

本明細書で使用される場合、本明細書に記載の全ての抗体アミノ酸残基は、ＥＵインデックス、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈＥｄ．，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，１９９１（ＥＵ／ＯＵナンバリング、参照により本明細書に取り込まれる全内容）に従い番号付けされる。一般的なアイソタイプは、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ４などと呼ばれる。

【0077】

Ｃ４４２残基は、Ｃ４４２残基の遊離チオール基を介して、例えば、細胞傷害性薬物のチオール反応剤（例えば、マレイミド基）と反応させることを介して、細胞傷害性薬物／薬剤とコンジュゲートすることができる。

【0078】

本明細書で使用される場合、「水溶液」は、溶媒が水または水及び１つ以上の有機溶媒の混合物である溶液を指す。

【0079】

本明細書で使用される場合、「処置すること」または「処置」という用語は、対象の状態を改善または安定化するように、症状、臨床徴候、及び基礎病理を後退させること、低減させること、または阻止することを含む。本明細書で使用される場合、同様に、当該技術分野でよく理解される場合、「処置」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。有益なまたは望ましい臨床結果としては、検出可能であれ検出不可能であれ、（部分的であれ全体であれ）状態、例えば、癌、と関連する１つ以上の症状または状態の軽減、改善、または進行の減速、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化ではない）、疾患増悪の遅延もしくは減速、疾患の状態の改善もしくは緩和、及び寛解が挙げられるが、これらに限定されない。「処置」は、処置を受けていない場合、予想される生存と比較した場合の生存を延長することも意味し得る。例示的な有益な臨床結果は、本明細書に記載されている。

【0080】

本発明の方法
本発明は、細胞結合剤（ＣＢＡ）に共有結合しているマレイミド基を有するイミン含有細胞傷害剤を含む細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製するための新規方法を提供する。

【0081】

一部の実施形態では、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製するための本発明の方法は、
（ａ）以下の式：

【化7】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を、１．９～５．０のｐＨの水溶液中で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化8】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ、及び
（ｂ）修飾細胞傷害剤を細胞結合剤と反応させて、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、を含む。一部の実施形態では、亜硫酸水素塩は、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムである。より具体的には、亜硫酸水素塩は、亜硫酸水素ナトリウムである。さらに他の実施形態では、メタ亜硫酸水素塩は、メタ亜硫酸水素ナトリウムまたはメタ亜硫酸水素カリウムである。より具体的には、メタ亜硫酸水素塩は、メタ亜硫酸水素ナトリウムである。

【0082】

本発明は、以下の式：

【化9】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を、１．９～５．０のｐＨの水溶液中で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化10】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ、を含む修飾細胞傷害剤を調製する方法も提供する。一部の実施形態では、反応は、以下の第１、第２、第３、第４、第５、第６、または第７の態様に記載の反応条件下で実施することができる。

【0083】

第一の態様では、上記の本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、１．９～５．０のｐＨで実施される。より具体的には、ｐＨは、２．５～４．９、１．９～４．８、２．０～４．８、２．５～４．５、２．９～４．５、２．９～４．０、２．９～３．７、３．１～３．５、または３．２～３．４である。別の具体的な実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５．０のｐＨで実施される。さらに別の具体的な実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、３．３のｐＨで実施される。

【0084】

本明細書で使用される場合、具体的なｐＨ値は、具体的な値±０．０５を意味する。

【0085】

一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、緩衝液の存在下で実施される。当該技術分野で既知の任意の好適な緩衝液は、本発明の方法に使用することができる。好適な緩衝液としては、例えば、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、リン酸緩衝液、グリシン含有緩衝液（例えば、グリシン－ＨＣｌ緩衝液）、フタル酸緩衝液（例えば、フタル酸水素ナトリウムまたはカリウムを含む緩衝液）、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、緩衝液は、コハク酸緩衝液である。一部の実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝液である。一部の実施形態では、緩衝剤は、クエン酸－リン酸緩衝剤である。一部の実施形態では、緩衝液は、クエン酸及びＮａ_２ＨＰＯ_４を含むクエン酸－リン酸緩衝液である。他の実施形態では、緩衝剤は、クエン酸及びＫ_２ＨＰＯ_４を含むクエン酸－リン酸緩衝剤である。一部の実施形態では、上記の緩衝液の濃度は、１０～２５０ｍＭ、１０～２００ｍＭ、１０～１５０ｍＭ、１０～１００ｍＭ、２５～１００ｍＭ、２５～７５ｍＭ、１０～５０ｍＭ、または２０～５０ｍＭの範囲内とし得る。

【0086】

第２の態様では、反応ステップ（ａ）は、緩衝液（例えば、第１の態様に記載の緩衝液）の非存在下で実施される。一部の実施形態では、本方法は、（ａ）式（Ａ）で表されるイミン含有細胞傷害剤もしくはその薬学的に許容される塩のイミン部分を、水溶液中で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、もしくはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化11】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤を形成するステップ（水溶液は、緩衝剤を含まない）、及び
（ｂ）修飾細胞傷害剤を細胞結合剤と反応させて、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、
を含む。一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、有機溶媒及び水の混合物中で実施される。より具体的には、ステップ（ａ）の反応は、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）及び水の混合物中で実施される。一部の実施形態では、ＤＭＡ及び水の混合物は、６０体積％未満のＤＭＡを含む。さらに具体的には、ＤＭＡ及び水の体積比は、１：１である。

【0087】

第３の態様では、上記または第１もしくは第２の態様に記載の方法の場合、亜硫酸水素塩０．５～５．０当量またはメタ亜硫酸水素塩０．２５もしくは２．５当量が、ステップ（ａ）の反応で、イミン含有細胞傷害剤１当量毎に使用される。一部の実施形態では、亜硫酸水素塩０．５～４．５、０．５～４．０、０．５～３．５、０．５～４．０、０．５～３．５、０．５～３．０、０．５～２．５、０．８～２．０、０．９～１．８、１．０～１．７、１．１～１．６、もしくは１．２～１．５当量、またはメタ亜硫酸水素塩０．２５～２．２５、０．２５～２．０、０．２５～１．７５、０．２５～２．０、０．２５～１．７５、０．２５～１．５、０．２５～１．２５、０．４～１．０、０．４５～０．９、０．５～０．８５、０．５５～０．８、もしくは０．６～０．７５当量が、イミン含有細胞傷害剤１当量毎に使用される。他の実施形態では、亜硫酸水素塩０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、４．０、４．５、もしくは５．０当量、またはメタ亜硫酸水素塩０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０、１．０５、１．１、１．１５、１．２、１．２５、１．３、１．３５、１．４、１．４５、１．５、１．５５、１．６、１．６５、１．７、１．７５、２．０、２．２５、もしく２．５当量が、イミン含有細胞傷害剤１当量毎に使用される。さらに他の実施形態では、亜硫酸水素塩１．４当量またはメタ亜硫酸水素塩０．７当量が、イミン含有細胞傷害剤１当量毎に使用される。他の実施形態では、亜硫酸水素塩１．２当量またはメタ亜硫酸水素塩０．６当量が、イミン含有細胞傷害剤１当量毎に使用される。

【0088】

本明細書で使用される場合、具体的な当量は、具体的な値±０．０５を意味する。

【0089】

第４の態様では、本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、２．９～３．７のｐＨで実施され、亜硫酸水素塩１．０～１．８当量またはメタ亜硫酸水素塩０．５～０．９当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と共に反応させる。一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、３．１～３．５のｐＨで実施され、亜硫酸水素塩１．１～１．６当量またはメタ亜硫酸水素塩０．５５～０．８当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、３．２～３．４のｐＨで実施され、亜硫酸水素塩１．３～１．５当量、またはメタ亜硫酸水素塩０．６５～０．７５当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、３．３のｐＨで実施され、亜硫酸水素塩１．４当量またはメタ亜硫酸水素塩０．７当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。さらに他の実施形態では、他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、３．３のｐＨで実施され、亜硫酸水素ナトリウム１．４当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。

【0090】

第５の態様では、本明細書または第１、第２、第３、または第４の態様に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、有機溶媒及び水の混合物中で実施される。任意の好適な有機溶媒を使用することができる。例示的な有機溶媒としては、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなど）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、アセトン、塩化メチレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、有機溶媒は、水と混和性である。他の実施形態では、有機溶媒は、水と混和しない、すなわち、ステップ（ａ）の反応は、二相溶液中で実施される。一部の実施形態では、有機溶媒は、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）である。有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）は、水及び有機溶媒の総体積の１体積％～９９体積％、１～９５体積％、１０～８０体積％、２０～７０体積％、３０～７０体積％、１～６０体積％、５～６０体積％、１０～６０体積％、２０～６０体積％、３０～６０体積％、４０～６０体積％、４５～５５体積％、１０～５０体積％、または２０～４０体積％の量で存在し得る。一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、ＤＭＡ及び水の混合物中で実施され、ＤＭＡ及び水の体積比は、１：１である。

【0091】

第６の態様では、本明細書または第１、第２、第３、第４、もしくは第５の態様に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、好適な任意の温度で実施することができる。一部の実施形態では、反応は、０℃～５０℃、１０℃～５０℃、１０℃～４０℃、または１０℃～３０℃の温度で実施される。他の実施形態では、反応は、１５℃～３０℃、２０℃～３０℃、１５℃～２５℃、１６℃～２４℃、１７℃～２３℃、１８℃～２２℃、または１９℃～２１℃の温度で実施される。さらに他の実施形態では、反応は、１５℃、１６℃、１７℃、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、または２５℃の温度で実施することができる。一部の実施形態では、反応は、０℃～１５℃、０℃～１０℃、１℃～１０℃、５℃～１５℃、または５℃～１０℃で実施することができる。

【0092】

第７の態様では、本明細書または第１、第２、第３、第４、第５、もしくは第６の態様に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、１分間～４８時間、５分間～３６時間、１０分間～２４時間、３０分間～２４時間、３０分間～２０時間、１時間～２０時間、１時間～１５時間、１時間～１０時間、２時間～１０時間、３時間～９時間、３時間～８時間、４時間～６時間、または１時間～４時間実施される。一部の実施形態では、反応は、４～６時間進行させる。他の実施形態では、反応は、１０分、１５分、２０分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間などにわたって進行させる。他の実施形態では、反応は、４時間進行させる。さらに他の実施形態では、反応は、２時間進行させる。

【0093】

第８の態様では、本明細書または第１、第２、第３、第４、第５、第６、もしくは第７の態様に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ｂ）の反応は、４～９のｐＨで実施される。一部の実施形態では、ステップ（ｂ）の反応は、４．５～８．５、５～８．５、５～８、５～７．５、５～７、５～６．５、または５．５～６．５のｐＨで実施される。他の実施形態では、ステップ（ｂ）の反応は、ｐＨ５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０で実施される。

【0094】

一部の実施形態では、本明細書または第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ｂ）の反応は、水及び有機溶媒の混合物を含む水溶液中で実施される。上記の任意の好適な有機溶媒を使用することができる。より具体的には、有機溶媒は、ＤＭＡである。一部の実施形態では、水溶液は、体積比で、有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、２％未満、または１％未満を含む。

【0095】

一部の実施形態では、本明細書または第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様に記載の本発明の方法の場合、修飾細胞傷害剤は、ステップ（ｂ）の細胞結合剤を用いる反応する前に精製されていない。あるいは、修飾細胞傷害剤は、ステップ（ｂ）において細胞結合剤と反応する前に精製される。本明細書に記載の任意の好適な方法は、修飾細胞傷害剤を精製するために使用することができる。特定の実施形態では、本発明は、本方法により調製された単離修飾細胞傷害剤を提供する。単離修飾細胞傷害剤は、細胞結合剤と反応する前に一定期間保存することができる。好ましくは、単離修飾細胞傷害剤は、例えば、精製固体もしくは凍結溶液として、修飾細胞傷害剤の分解を防止する、または低温（例えば、１０℃未満もしくは５℃未満）で維持される条件下で保存される。

【0096】

一部の実施形態では、本明細書または上記の実施形態のいずれか１つに記載の本発明の方法の場合、ステップ（ｂ）の細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、精製ステップにかける。この点に関しては、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、非吸着クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、選択的沈殿、または他の任意の好適な精製プロセス及びそれらの組み合わせを使用して、混合物の他の構成成分から精製することができる。

【0097】

本発明の一部の実施形態では、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、単一の精製ステップ（例えば、ＴＦＦ）を使用して精製される。好ましくは、コンジュゲートは、単一の精製ステップ（例えば、ＴＦＦ）を使用して精製されて、適切な製剤に交換される。本発明の他の実施形態では、細胞結合剤細胞傷害剤コンジュゲートは、２つの連続した精製ステップを使用して精製される。例えば、コンジュゲートは、最初に、選択的沈殿、吸着濾過、吸着クロマトグラフィー、または非吸着クロマトグラフィーで精製し、続いて、ＴＦＦで精製することができる。細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートの精製が、細胞傷害剤に化学的に結合した細胞結合剤を含む安定なコンジュゲートの単離を可能にすることを、当業者は理解するであろう。

【0098】

任意の好適なＴＦＦシステムは、Ｐｅｌｌｉｃｏｎ型システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、マサチューセッツ州ビルリカ）、Ｓａｒｔｏｃｏｎカセットシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ、ニューヨーク州エッジウッド）、及びＣｅｎｔｒａｓｅｔｔｅ型システム（ＰａｌｌＣｏｒｐ．、ニューヨーク州イーストヒルズ）を含む精製に利用されてもよい。

【0099】

任意の好適な吸着クロマトグラフィー樹脂は、精製に利用されてもよい。好ましい吸着クロマトグラフィー樹脂としては、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、染料リガンドクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適なヒドロキシアパタイト樹脂の例としては、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ Ｉ型及びＩＩ型、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）、ＨＡ Ｕｌｔｒｏｇｅｌヒドロキシアパタイト（ＰａｌｌＣｏｒｐ．、ニューヨーク州イーストヒルズ）、ならびにセラミックフルオロアパタイト（ＣＦＴ Ｉ型及び型ＩＩ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）が挙げられる。好適なＨＣＩＣ樹脂の例は、ＭＥＰ Ｈｙｐｅｒｃｅｌ樹脂（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．、ニューヨーク州イーストヒルズ）である。好適なＨＩＣ樹脂の例としては、ブチル－セファロース、ヘキシル－セファロース、フェニル－セファロース、及びオクチルセファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ製）、ならびにＭａｃｒｏ－ｐｒｅｐメチル及びＭａｃｒｏ－Ｐｒｅｐ ｔ－ブチル樹脂（Ｂｉｏｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）が挙げられる。好適なイオン交換樹脂の例としては、ＳＰ－セファロース、ＣＭ－セファロース、及びＱ－セファロース樹脂（全てＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ製）、ならびにＵｎｏｓｐｈｅｒｅ Ｓ樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）が挙げられる。好適な混合モードイオン交換装置の例としては、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢｘ樹脂（ＪＴ Ｂａｋｅｒ、ニュージャージー州フィリップスバーグ）が挙げられる。好適なＩＭＡＣ樹脂の例としては、キレート化セファロース樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）及びＰｒｏｆｉｎｉｔｙ ＩＭＡＣ樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）が挙げられる。好適な染料リガンド樹脂の例としては、Ｂｌｕｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）及びＡｆｆｉ－ｇｅｌ Ｂｌｕｅ樹脂（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）が挙げられる。好適なアフィニティー樹脂の例としては、細胞結合剤が抗体であるプロテインＡセファロース樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）、及びレクチンアフィニティー樹脂、例えば、Ｌｅｎｔｉｌ Ｌｅｃｔｉｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）が挙げられ、細胞結合剤は、適切なレクチン結合部位を有する。あるいは、細胞結合剤に特異的な抗体を使用してもよい。このような抗体は、例えば、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）に固定化することができる。好適な逆相樹脂の例としては、Ｃ４、Ｃ８、及びＣ１８樹脂（Ｇｒａｃｅ Ｖｙｄａｃ、カリフォルニア州エスペリア）が挙げられる。

【0100】

任意の好適な非吸着クロマトグラフィー樹脂を精製が利用されてもよい。好適な非吸着性クロマトグラフィー樹脂の例としては、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）Ｇ－２５、Ｇ－５０、Ｇ－１００、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂（例えば、Ｓ－２００及びＳ－３００）、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂（例えば、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）７５及びＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００）、ＢＩＯ－ＧＥＬ（登録商標）樹脂（例えば、Ｐ－６、Ｐ－１０、Ｐ－３０、Ｐ－６０、及びＰ－１００）、ならびに当業者らに既知の他のものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0101】

一部の実施形態では、精製細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、好適な製剤緩衝液に製剤化される。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムなどの亜硫酸水素塩を含む。より具体的には、製剤緩衝液は、亜硫酸水素ナトリウムを含む。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、５～２００μＭ、１０～２００μＭ、１０～１５０μＭ、２０～１００μＭ、３０～９０μＭ、４０～８０μＭ、５０～７０μＭ、４０～６０μＭ、４５～５５μＭ、または５５～６５μＭの亜硫酸水素塩（例えば、亜硫酸水素ナトリウム）を含む。他の実施形態では、製剤緩衝液は、２０、３０、４０、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、７０、８０、９０、または１００μＭの亜硫酸水素塩（例えば、亜硫酸水素ナトリウム）を含む。

【0102】

他の実施形態では、製剤緩衝液は、トレハロースをさらに含む。任意の好適な量のトレハロースを使用することができる。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、重量比で、トレハロースの２～１５％、５～１０％、６～１０％、または７～９％、または６～８％をさらに含む。

【0103】

別の実施形態では、製剤緩衝液は、４～６、４～５、または４～４．５のｐＨを有する。他の実施形態では、製剤緩衝液のｐＨは、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５．０である。

【0104】

さらに他の実施形態では、製剤緩衝液は、ｐＨ４．２で１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、８％のトレロース二水和物、及び０．０１％のポリソルバート２０を含む。

【0105】

一部の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法の場合、ステップ（ａ）の反応は、マレイミド基の実質的なスルホン化をもたらさない。一部の実施形態では、マレイミド基の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満が、スルホン化されている。マレイミドスルホン化の百分率は、亜硫酸水素塩またはメタ亜硫酸水素塩との反応前のイミン含有細胞傷害剤の開始量で除した、マレイミドスルホン化細胞傷害剤（マレイミドのみにスルホン化を有する細胞傷害剤）及びジスルホン化細胞傷害剤（マレイミド及びイミン部分の双方にスルホン化を有する細胞傷害剤）の合計量に等しい。

【0106】

第９の態様では、本発明は、以下の式：

【化12】

またはその薬学的に許容される塩で表される細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを調製する方法を提供し、方法は、
（ａ）以下の式：

【化13】

またはその薬学的に許容される塩で表されるイミン含有細胞傷害剤のイミン部分を、３．１～３．５のｐＨの水溶液中で、二酸化硫黄、亜硫酸水素塩、またはメタ亜硫酸水素塩と反応させて、以下の式：

【化14】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾細胞傷害剤を形成するステップ、及び
（ｂ）修飾細胞傷害剤またはその薬学的に許容される塩を、細胞結合剤Ａｂと反応させて、細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートを形成するステップ、
を含み、
Ａｂは、配列番号２５のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖を含む抗ＣＤ１２３抗体であり、
ｗは、１または２である。

【0107】

一部の実施形態では、第９の態様の方法は、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様及びそこに記載された任意の実施形態に記載の反応条件下で実施される。

【0108】

第１０の態様では、第９の態様の方法におけるステップ（ａ）の反応は、３．２～３．４のｐＨで実施される。より具体的には、ｐＨは、３．３である。

【0109】

一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、緩衝液の存在下で実施される。例示的な緩衝液としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、またはリン酸緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。より具体的には、緩衝剤は、コハク酸緩衝剤である。

【0110】

第１１の態様では、第９の態様の方法におけるステップ（ａ）の反応の場合、亜硫酸水素塩１．１～１．６当量またはメタ亜硫酸水素塩０．５５～０．８当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。残りの反応条件は、上記の、第１０の態様及びそこに記載の任意の実施形態に記載の通りである。一部の実施形態では、亜硫酸水素塩１．３～１．５当量またはメタ亜硫酸水素塩０．６５～０．７５当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。より具体的には、亜硫酸水素塩１．４当量またはメタ亜硫酸水素塩０．７当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。

【0111】

第１２の態様では、第９の態様の方法のステップ（ａ）の反応は、３．２～３．４のｐＨで実施され、亜硫酸水素ナトリウム塩１．３～１．５当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。一部の実施形態では、反応は、３．３のｐＨで実施され、亜硫酸水素ナトリウム塩１．４当量を、イミン含有細胞傷害剤１当量と反応させる。

【0112】

一部の実施形態では、第９、第１０、第１１、または第１２の態様の方法のステップ（ａ）の反応は、好適な溶媒または溶媒混合物中で実施される。一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、水及び有機溶媒の混合物を含む水溶液中で実施される。上記の任意の好適な有機溶媒を使用することができる。より具体的には、有機溶媒は、ＤＭＡである。一部の実施形態では、水溶液は、体積比で、有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、２％未満、または１％未満を含む。

【0113】

一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応は、好適な温度、例えば、室温または１５～２５℃で、十分な期間、例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、２０時間、２４時間、４８時間などで実施される。

【0114】

一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応から得られた修飾細胞傷害剤は、ステップ（ｂ）における細胞結合剤との反応前に精製されていない。

【0115】

一部の実施形態では、ステップ（ａ）の反応から得られた修飾細胞傷害剤は、ステップ（ｂ）における細胞結合剤との反応前に精製されている。本明細書に記載の任意の好適な精製方法を使用することができる。

【0116】

第１３の態様では、第９の態様の方法におけるステップ（ｂ）の反応は、５．５～６．５のｐＨで実施され、残りの反応条件は、第９、第１０、第１１、または第１２の態様に記載の通りである。一部の実施形態では、ｐＨは、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。一部の実施形態では、ｐＨは、６．０である。

【0117】

一部の実施形態では、第９、第１０、第１１、第１２、または第１３の態様の方法により調製されたコンジュゲートは、本明細書に記載の好適な方法により精製される。一実施形態では、コンジュゲートは、精製コンジュゲートを得るために、タンジェンシャルフロー濾過で精製される。

【0118】

一部の実施形態では、精製コンジュゲートは、４～５のｐＨを有する４０～８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含む製剤緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、４．２のｐＨを有する５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムを含む。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、ｐＨ４．２の、１０ｍＭのコハク酸ナトリウム、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、８％のトレロース二水和物、及び０．０１％のポリソルバート２０を含む。

【0119】

一部の実施形態では、本明細書（例えば、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様及びそこに記載された任意の実施形態）に記載の本発明の方法の場合、細胞結合剤は、抗ＣＤ１２３抗体ではない。

【0120】

一部の実施形態では、本明細書（例えば、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様及びそこに記載された任意の実施形態）に記載の本発明の方法の場合、細胞結合剤は、配列番号２５のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖を含む抗ＣＤ１２３抗体ではない。

【0121】

一部の実施形態では、本明細書（例えば、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様及びそこに記載された任意の実施形態）に記載の本発明の方法により調製された細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、下記の構造：

【化15】

またはその薬学的に許容される塩で表されるコンジュゲートではなく、Ａｂは、配列番号２５のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖及び配列番号２６のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖を含む抗ＣＤ１２３抗体であり、
ｗは、１または２である。

【0122】

本発明のイミン含有細胞傷害剤及びコンジュゲート
一部の実施形態では、本明細書に記載の本発明の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化16】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲートは、以下の式：

【化17】

で表され、
Ｄ^Ｍは、以下の式：

【化18】

またはその薬学的に許容される塩で表される修飾イミン部分を含む修飾細胞傷害剤であり、Ｌは、リンカーであり、

【化19】

は、チオール基を介して細胞傷害剤に結合している細胞結合剤を表し、ｗは、１～１０の整数である。

【0123】

一部の実施形態では、ＣＢＡは、抗体であり、抗体は、１つ以上のシステインチオール基を介して細胞傷害剤に結合している。一部の実施形態では、遊離チオール基は、抗体の重鎖ＣＨ３領域の重鎖の操作Ｃｙｓ残基上、ＥＵ／ＯＵナンバリング４４２位（または、略して、Ｃ４４２）にある。より具体的には、４４２位のシステイン残基が、抗体に組み換え導入される。

【0124】

他の実施形態では、ｗは、１または２である。より具体的には、ｗは、２である。

【0125】

以下は、特定の実施形態ならびに本明細書（例えば、上述の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の態様の方法及びそこに記載の実施形態）に記載の本発明の方法の具体的な実施形態について記載する。

【0126】

第１の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の構造式：

【化20】

【化21】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
Ｌ’、Ｌ’’、及びＬ’’’のうちの１つは、以下の式：
－Ｚ_１－Ｐ_１－Ｚ_２－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ａ’）、または
－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｄ’）、
で表され、
他の２つは、それぞれ独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＲ’ＣＯＲ’’、－ＳＲ、－ＳＯＲ’、－ＳＯ_２Ｒ’、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、及び－ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から選択され、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの一方は、－Ｃ（＝Ｏ）－であり、他方は、－ＮＲ_５－であり、
Ｐ_１は、アミノ酸残基または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒ_ｘ１は、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、２級アミノ（例えば、－ＮＨＲ^１０１）もしくは３級アミノ（－ＮＲ^１０１Ｒ^１０２）基を任意に有する、１～６つの炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、または５もしくは６員窒素含有複素環、例えば、ピペリジンもしくはモルホリン、であり、Ｒ^１０１及びＲ^１０２は、それぞれ独立して、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、
Ｒは、出現毎に独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、または独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を含有する任意に置換されている３～１８員複素環式環からなる群より選択され、
Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ、－ＮＨＲ、－ＮＲ_２、－ＣＯＲ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ならびに、独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ^ｃは、－Ｈ、または１～４つの炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状もしくは分枝状アルキルであり、
ｎは、１～２４の整数であり、
Ｘ_１’は、－Ｈ、アミン保護基、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、ならびに独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を含有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｙ_１’は、－Ｈ、オキソ基（すなわち、Ｙ_１’、及びＹ_１’が結合している炭素原子は、－Ｃ（＝Ｏ）－基を形成する）、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、任意に置換されている６～１８員アリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’、及びＲ_４’は、それぞれ独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＣＯ、－ＮＲ’ＣＯＲ’’、－ＳＲ、－ＳＯＲ’、－ＳＯ_２Ｒ’、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、及び－ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より選択され、
Ｒ_６は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、またはハロゲンであり、
Ｇは、－ＣＨ－または－Ｎ－であり、
Ａ及びＡ’は、同じか、または異なっており、独立して、－Ｏ－、オキソ（－Ｃ（＝Ｏ）－）、－ＣＲＲ’Ｏ－、－ＣＲＲ’－、－Ｓ－、－ＣＲＲ’Ｓ－、－ＮＲ_５、及び－ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ_５）－から選択され、
Ｒ_５は、出現毎に独立して、－Ｈ、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状または分枝状アルキルである。

【0127】

より具体的な実施形態では、Ｄは、式（ＩＧＮ１’）または（ＩＧＮ１）で表される。

【0128】

別のより具体的な実施形態では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｌ’、Ｌ’’、及びＬ’’’のうちの１つは、式（Ａ’）または（Ｄ’）で表され、残りのものは、－Ｈ、１～６つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキル、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、または－ＮＯ_２である。

【0129】

別のより具体的な実施形態では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｌ’は、式（Ａ’）で表され、Ｌ’’及びＬ’’’は双方ともに、－Ｈである。

【0130】

別のより具体的な実施形態では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｌ’は、式（Ｄ’）で表され、Ｌ’’及びＬ’’’は双方ともに、－Ｈである。

【0131】

別のより具体的な実施形態では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｒ_ｘ１は、ハロゲン、－ＯＨ、－ＳＯ_３Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシ、ハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化可能な基Ｑで任意に置換されている、１～６つの炭素原子を有する直鎖、分岐鎖または環状アルキルである。

【0132】

第２の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｌ’は、以下の式：
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ２’）、
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃｌ’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ２’）
で表され、
Ｒ_ａ及びＲ_ｂは、出現毎にそれぞれ独立して、－Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルまたは荷電置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｓは、１～６の整数であり、
ｓ１’は、０または１～６の整数であり、
Ｃｙは、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシ、またはハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルで任意に置換されている５または６つの環炭素原子を有する環状アルキルであり、
残りの変数は、第１の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、またはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0133】

より具体的な実施形態では、Ｒ_ａ及びＲ_ｂは双方ともに、Ｈであり、式（Ｂ２’）及び（Ｃ２’）中のＣｙは、シクロヘキサンであり、Ｒ_５は、ＨまたはＭｅである。さらに具体的には、ｓ１’は、０または１である。

【0134】

第３の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）－（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）－（ＩＧＮ４）の場合、Ｐ_１は、２～１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの変数は、第１もしくは第２の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的なもしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0135】

具体的な実施形態では、Ｐ_１は、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。

【0136】

別の具体的な実施形態では、Ｐ_１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、及びＧｌｎ－Ａｌａである。さらにより具体的には、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。

【0137】

第４の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｘ_１’は、－Ｈ、－ＯＨ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、及びフェニルからなる群より選択され；Ｙ_１’は、－Ｈ、オキソ基、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状のアルキル、アルケニル、またはアルキニルからなる群より選択され；残りの変数は、上記の、第１、第２、もしくは第３の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態で記載の通りである。より具体的には、Ｘ_１’は、－Ｈ、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、ハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、またはフェニルであり、Ｙ_１’は、－Ｈ、オキソ基、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、またはハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルである。別のより具体的な実施形態では、Ｘ_１’は、－Ｈ、－ＯＨ、または－Ｍｅであり、Ｙ_１’は、－Ｈまたはオキソである。さらにより具体的には、Ｘ_１’は、－Ｈであり、Ｙ_１’は、－Ｈである。

【0138】

第５の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ａ及びＡ’は、同じか、または異なっており、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＲ_５－、またはオキソ－（Ｃ＝Ｏ）－であり、残りの変数は、第１、第２、第３、もしくは第４の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ａ及びＡ’は、同じか、または異なっており、－Ｏ－または－Ｓ－である。さらに具体的には、Ａ及びＡ’は、－Ｏ－である。

【0139】

第６の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｒ_６は、－ＯＲであり、Ｒは、１～６つの炭素原子を有するアルキル基であり、残りの変数は、第１、第２、第３、第４、もしくは第５の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ｒ_６は、－ＯＭｅである。

【0140】

第７の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’及びＲ_４’は、それぞれ独立して、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ_２、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、ハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、または（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシであり、残りの変数は、第１、第２、第３、第４、第５、もしくは第６の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’及びＲ_４’は全て、－Ｈである。

【0141】

第８の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ_５は、それぞれ独立して、－Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、残りの変数は、第１、第２、第３、第４、第５、第６、もしくは第７の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0142】

第９の具体的な態様では、式（ＩＧＮ１’）～（ＩＧＮ４’）及び（ＩＧＮ１）～（ＩＧＮ４）の場合、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_１’、Ｒ_２’、Ｒ_３’及びＲ_４’は全て、－Ｈであり、
Ｒ_６は、－ＯＭｅであり、
Ｘ_１’及びＹ_１’は双方ともに、－Ｈであり、
Ａ及びＡ’は、－Ｏ－であり、
残りの変数は、上記第１、第２、または第３の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ_５は、それぞれ独立して、－Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルである。さらにより具体的には、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ_５は全て、－Ｈである。

【0143】

第１０の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の構造式：

【化22】

【化23】

【化24】

またはその薬学的に許容される塩で表され、残りの変数は、上記の式（Ａ）または（Ｂ）に記載されている。

【0144】

第１１の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化25】

で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_２３及びＲ_２４は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ’は、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈ’は、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
残りの変数は、式（Ａ）または式（Ｂ）の場合、上に、あるいは、第１～第１０の具体的な態様、またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0145】

具体的な実施形態では、ｍ’は、１～６の整数である。さらに具体的には、ｍ’は、１～３の整数である。

【0146】

別の具体的な実施形態では、Ｒ_２３及びＲ_２４は、出現毎に独立して、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルである。さらにより具体的には、Ｒ_２３及びＲ_２４は双方ともに、Ｈである。

【0147】

別の具体的な実施形態では、Ｒ^ｈ’は、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルである。より具体的には、Ｒ^ｈ’は、Ｈである。

【0148】

別の具体的な実施形態では、Ｒ_２３及びＲ_２４は双方ともに、Ｈであり、ｍ’は、１～６の整数である。さらに具体的には、ｍ’は、１～３の整数である。

【0149】

第１２の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化26】

で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、残りの変数は、式（Ａ）または式（Ｂ）の場合、上に、あるいは、第１～第１０の具体的な態様、またはそこに記載の任意の具体的な、もしくは具体的な実施形態に記載の通りである。

【0150】

第１３の具体的な態様では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化27】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化28】

またはその薬学的に許容される塩で表される。より具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化29】

またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩で表される。さらに具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化30】

で表される。

【0151】

一部の実施形態では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化31】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化32】

またはその薬学的に許容される塩で表される。より具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化33】

またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩で表される。さらに具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化34】

で表される。

【0152】

第１４の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の構造式：

【化35】

【化36】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
Ｘ’は、－Ｈ、－ＯＨ、１～１０の炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、フェニル、及びアミン保護基からなる群より選択され、
Ｙ’は、－Ｈ、オキソ基、１～１０の炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルからなる群より選択され、
Ａ及びＡ’は、－Ｏ－及び－Ｓ－であり、
Ｗ’は、存在しないか、または－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ｅ）－、－Ｓ－、もしくは－ＣＨ_２－Ｓ－、－ＣＨ_２ＮＲ^ｅ－から選択され、
Ｒ^ｘは、存在しないか、または１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキルから選択され、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、２級アミノ（例えば、－ＮＨＲ^１０１）もしくは３級アミノ（－ＮＲ^１０１Ｒ^１０２）基を任意に有する、１～６つの炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、または５もしくは６員窒素含有複素環であり、Ｒ^１０１及びＲ^１０２は、それぞれ独立して、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、
ｎは、１～２４の整数であり、
Ｇは、－ＣＨ－または－Ｎ－から選択され、
Ｒ_６は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、またはハロゲンであり、
Ｒは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、またはＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃであり、ｎは、１～２４の整数であり、Ｒ^ｃは、１～４つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルであり、
Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ、－ＮＲＲ^ｇ’、－ＣＯＲ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、Ｏ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環、ＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃから選択され、Ｒ^ｇ’は、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、またはＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃである。

【0153】

より具体的な実施形態では、Ｄは、上記の式（ＩＧＮ５’）もしくは（ＩＧＮ５）、またはそれらの薬学的に許容される塩で表される。

【0154】

別の具体的な実施形態では、式（ＩＧＮ５’）～（ＩＧＮ８’）及び（ＩＧＮ５）～（ＩＧＮ８）の場合、
Ｘ’及びＹ’は双方ともに、－Ｈであり、
Ａ及びＡ’は双方ともに、－Ｏ－であり、
Ｒ_６は、－ＯＭｅであり、
Ｗ’は、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－または－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～４つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、１～４つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルであり、ｎは、２～６の整数であり、
Ｒ^ｘは、１～６つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルである。

【0155】

第１５の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の構造式：

【化37】

【化38】

またはその薬学的に許容される塩で表され、残りの変数は、式（Ａ）または（Ｂ）の場合、上記の通りである。

【0156】

第１６の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化39】

で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基と共有結合している部位であり、
Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり、
Ｚは、存在しないか、－ＳＯ_２ＮＲ_９－、－ＮＲ_９ＳＯ_２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－、－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｐ－、－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｐ－、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_９－、または－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_Ｐ－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
ｐは、１～２４の整数であり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基、またはイオン化可能な基であり、
Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、及びＲ_１３は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｑ及びｒは、出現毎に独立して、０～１０の整数であり、残りの変数は、式（Ａ）もしくは式（Ｂ）の場合、上に、または第１４もしくは第１５の具体的な態様もしくはそこに記載の任意の具体的な、またはより具体的な実施形態で記載の通りである。

【0157】

より具体的な実施形態では、ｑ及びｒは独立して、１～６、より具体的には、１～３の整数である。

【0158】

別のより具体的な実施形態では、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、及びＲ_１３は、出現毎に独立して、ＨまたはＣ_１～３アルキルである。より具体的には、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、及びＲ_１３は全て、Ｈである。

【0159】

別のより具体的な実施形態では、ｐは、２～１４の整数である。より具体的には、ｐは、２～８、２～６、または２～４の整数である。

【0160】

より具体的な実施形態では、Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－であり、式（Ｌ２）の残りの変数は、上記の、第１６の具体的な態様に記載の通りである。

【0161】

別のより具体的な実施形態では、Ｅは、

【化40】

であり、式（Ｌ２）中の残りの変数は、上記の第１６の具体的な態様に記載の通りである。

【0162】

さらに別の具体的な実施形態では、Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－または－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－であり；式（Ｌ２）中の残りの変数は、上記の、第１６の具体的な態様または上記の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。さらにより具体的には、Ｒ_９は、ＨまたはＭｅである。あるいは、Ｒ_９は、Ｈである。

【0163】

さらに別のより具体的な実施形態では、Ｑは、ｉ）Ｈ；ｉｉ）－ＳＯ_３Ｈ、－Ｚ’－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＰＯ_３Ｈ_２、－Ｚ’－ＯＰＯ_３Ｈ_２、－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｚ’－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｚ’－ＣＯ_２Ｈ、－ＮＲ_１４Ｒ_１５、もしくは－Ｚ’－ＮＲ_１４Ｒ_１５、またはそれらの薬学的に許容される塩；あるいは、ｉｉｉ）－Ｎ^＋Ｒ_１４Ｒ_１５Ｒ_１６Ｘ^－または－Ｚ’－Ｎ^＋Ｒ_１４Ｒ_１５Ｒ_１６Ｘ^－であり、Ｚ’は、任意に置換されているアルキレン、任意に置換されているシクロアルキレン、または任意に置換されているフェニレン、Ｒ_１４～Ｒ_１６は、それぞれ独立して、任意に置換されているアルキルであり、Ｘ^－は、薬学的に許容されるアニオンであり、式（Ｌ２）の残りの変数は、上記の、第１６の具体的な実施形態または上記の任意のより具体的な実施形態に記載の通りである。一部の実施形態では、Ｚ’は、任意に置換されているアルキレンである。さらに他の実施形態では、Ｚ’は、Ｃ_１－３アルキレン（例えば、－ＣＨ_２）であり、Ｒ_１６～Ｒ_１４は、それぞれ独立して、Ｃ_１－４アルキルである。

【0164】

さらに別の具体的な実施形態では、Ｑは、Ｈ、もしくは－ＳＯ_３Ｈ、または薬学的に許容される陽イオン（例えば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩）であり、式（Ｌ２）の残りの変数は、上記の、第１６の具体的な態様または上記の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0165】

別のより具体的な実施形態では、式（Ｌ２）：の場合、
Ｒ_１２及びＲ_１３は、出現毎にそれぞれ独立して、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈまたは－ＳＯ_３Ｈもしくはその薬学的に許容される塩であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－または－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－であり、
Ｒ_１０及びＲ_１１は、出現毎に独立して、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
ｑ及びｒはそれぞれ、１～５の整数である。

【0166】

第１７の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化41】

またはその薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩）のうちのいずれか１つで表され、Ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、Ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、ｑ及びｒは、それぞれ独立して、１～６の整数であり、残りの変数は、式（Ａ）もしくは式（Ｂ）の場合、上に、あるいは第１４または第１５の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、ｑ及びｒは、それぞれ独立して、１～３の整数である。

【0167】

第１８の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化42】

またはその薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩）のうちのいずれか１つで表され、ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、残りの変数は、式（Ａ）または式（Ｂ）の場合、上に、あるいは、第１４もしくは第１５の具体的な態様、またはそこに記載の任意の具体的な、もしくは具体的な実施形態に記載の通りである。

【0168】

第１９の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化43】

で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈは、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
Ｐ_Ｌは、任意に置換されているアルキレン、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｊ－（式中、酸素原子は、Ｐに連結されている－（Ｃ＝Ｏ）－に連結されている）、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
ｊは、１～２４の整数であり、残りの変数は、式（Ａ）または式（Ｂ）の場合、上に、あるいは第１４または第１５の具体的な態様、またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。

【0169】

第２０の具体的な態様では、式（Ｌ３）の場合、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２はそれぞれ、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１～６の整数であり、残りの変数は、上記の、第１９の具体的な実施形態またはそこに記載の任意の具体的な、またはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２は全て、Ｈである。さらにより具体的には、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２は全て、Ｈであり、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１～３の整数である。

【0170】

第２１の具体的な態様では、式（Ｌ３）の場合、Ｐ_Ｌは、アミノ酸残基、または２～１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの変数は、上記の、第１９もしくは第２０の具体的な態様またはそこに記載の任意の具体的な、もしくはより具体的な実施形態に記載の通りである。より具体的には、Ｐ_Ｌは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。

【0171】

一部の実施形態では、各アミノ酸残基は、独立して、天然に存在するアミノ酸、合成アミノ酸、アミノ酸アナログ、及び天然に存在するアミノ酸と類似の方法で機能するアミノ酸模倣物から選択されるアミノ酸の残基である。

【0172】

他の実施形態では、各アミノ酸残基は、独立してヒスチジン、アラニン、イソロイシン、アルギニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、Ｎ－メチル－ヒスチジン、Ｎ－メチル－アラニン、Ｎ－メチル－イソロイシン、Ｎ－メチル－アルギニン、Ｎ－メチル－ロイシン、Ｎ－メチル－アスパラギン、Ｎ－メチル－リシン、Ｎ－メチル－アスパラギン酸、Ｎ－メチル－メチオニン、Ｎ－メチル－システイン、Ｎ－メチル－フェニルアラニン、Ｎ－メチル－グルタミン酸、Ｎ－メチル－トレオニン、Ｎ－メチル－グルタミン、Ｎ－メチル－トリプトファン、Ｎ－メチル－グリシン、Ｎ－メチル－バリン、Ｎ－メチル－プロリン、Ｎ－メチル－セリン、Ｎ－メチル－チロシン、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタマート、セリノシステイン、Ｏ－ホスホセリン、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、シトルリン、オルニチン、システインスルホン酸、システインスルフィン酸、３－アミノアラニン、３－ジメチルアミノアラニン、２－アミノ－４－（ジメチルアミノ）ブタン酸、２，４－ジアミノブタン酸、２－アミノ－６－（ジメチルアミノ）ヘキサン酸、２－アミノ－５－（ジメチルアミノ）ペンタン酸、及びβ－アラニンから選択されるアミノ酸の残基であり、それぞれは、独立して、ＬまたはＤ異性体である。より具体的には、各アミノ酸残基は、独立して選択されるグリシンまたはアラニンの残基である。

【0173】

他の実施形態では、Ｐ_Ｌは、プロテアーゼで切断可能なペプチドである。より具体的には、Ｐ_Ｌは、腫瘍組織で発現されるプロテアーゼで切断可能なペプチドである。あるいは、Ｐ_Ｌは、リソソームプロテアーゼで切断可能なペプチドである。

【0174】

さらに他の実施形態では、Ｐ_Ｌは、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｍｅｔ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ａｌａ、及びβ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙからなる群より選択される。より具体的には、Ｐ_Ｌは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ａｌａ、またはβ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙである。

【0175】

第２２の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化44】

またはその薬学的に許容される塩で表され、ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合した部位であり、残りの変数は、式（Ａ）もしくは式（Ｂ）の場合、上に、または、第１４もしくは第１５の具体的な態様に記載の通りである。

【0176】

第２３の具体的な態様では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化45】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化46】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0177】

より具体的な実施形態では、修飾細胞傷害剤は、以下の式：
またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩で表される。さらに具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化47】

またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩で表される。さらに具体的には、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化48】

で表される。

【0178】

一部の実施形態では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化49】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾細胞傷害剤は、以下の式：

【化50】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0179】

第２４の具体的な態様では、本発明の方法により調製することができるコンジュゲートは、以下の構造式：

【化51】

【化52】

【化53】

【化54】

【化55】

【化56】

またはその薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩）で表される。

【0180】

一態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、イミン含有ＰＢＤ化合物である。

【0181】

第２５の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の式：

【化57】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
Ｗは、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ_２、ＢＨ、ＳＯ、及びＳＯ_２から選択され、
Ｘ_１’は、－Ｈ、アミン保護基、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、ならびに独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を含有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｙ_１’は、－Ｈ、オキソ基、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、任意に置換されている６～１８員アリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ_６は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、またはハロゲンであり、
Ａ及びＡ’は、同じか、または異なっており、独立して－Ｏ－、オキソ（－Ｃ（＝Ｏ）－）、－ＣＲＲ’Ｏ－、－ＣＲＲ’－、－Ｓ－、－ＣＲＲ’Ｓ－、－ＮＲ_５、及び－ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ_５）－から選択され、
Ｒは、出現毎に独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、独立して窒素、酸素、及び硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、または独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を含有する任意に置換されている３～１８員複素環式環からなる群より選択され、
Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ、－ＮＨＲ、－ＮＲ_２、－ＣＯＲ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ならびに、独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ^ｃは、－Ｈ、または１～４つの炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状もしくは分枝状アルキル、またはそこに結合している反応性基を有する連結基であり、
ｎは、１～２４の整数であり、
Ｒ_５は、出現毎に独立して、－Ｈ、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状または分枝状アルキルであり、
Ｄ_０及びＤ_０’は、同じか、または異なっており、独立して、存在しないか、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、アミノ酸、２～６のアミノ酸を有するペプチド、及びポリエチレングリコール単位（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－であり、
Ｌは、存在しないか、リンカー、ポリエチレングリコール単位（－ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキルもしくはアルケニル、任意に置換されているフェニル基、任意に置換されている３～１８員複素環式環、または独立してＯ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する５～１８員ヘテロアリール環であり、
Ｒ_ａ、Ｒ_ａ’、Ｒ_ｂ、及びＲ_ｂ’は、同じか、または異なっており、独立して－Ｈ、ハロゲン、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている分枝状、直鎖状、または環状アルキル基から選択されるか、あるいは、Ｒ_ａ及びＲ_ａ’ならびに／またはＲ_ｂ及びＲ_ｂ’が共に、それぞれ＝Ｂ及び＝Ｂ’を含有する二重結合を形成し、
＝Ｂ及び＝Ｂ’は、同じか、または異なっており、独立して任意に置換されている分枝状または直鎖状アルケニルまたはカルボニル基から選択され、
Ｑは、Ｑ_１－Ａｒ－Ｑ_２であり、
Ｑ’は、Ｑ_１’－Ａｒ’－Ｑ_２’であり、
Ｑ_１及びＱ_１’は、それぞれ独立して、存在しないか、１～６つの炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、または－ＣＨ＝ＣＨ単位であり、
Ａｒ及びＡｒ’は、それぞれ独立して、存在しないか、またはアリール基を表し、
Ｑ_２及びＱ_２’は、それぞれ独立して、－Ｈ、リンカー、１～１０の炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－Ｒ^ｃ’－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－Ｒ^ｃ、または、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－Ｒ、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＣＯ、－ＮＲ’ＣＯＲ’’、ＮＲ’（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ’’－ＳＲ、－ＳＯＲ’で表されるスルホキシド、－ＳＯ_２Ｒ’で表されるスルホン、スルホナート－ＳＯ_３Ｍ、スルファート－ＯＳＯ_３Ｍ、ＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、もしくは－ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から選択される置換基であり、
Ｒ^ｃ’は、存在しないか、または１～５つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択される。

【0182】

第２６の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下のもの：

【化58】

【化59】

またはその薬学的に許容される塩のうちの１つから選択され、
式（ＰＢＤ５’）、（ＰＢＤ６’）、（ＰＢＤ７’）、（ＰＢＤ８’）、（ＰＢＤ５）、（ＰＢＤ６）、（ＰＢＤ７）、または（ＰＢＤ８）中のＬ’、Ｌ’’、及びＬ’’’の１つは、以下の式：
－Ｚ_１－Ｐ_１－Ｚ_２－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ａ’）、または
－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｄ’）
で表され、
他の２つは、それぞれ独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＲ’ＣＯＲ’’、－ＳＲ、－ＳＯＲ’、－ＳＯ_２Ｒ’、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、及び－ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から選択され、
式（ＰＢＤ９’）、（ＰＢＤ１０’）、（ＰＢＤ９）、または（ＰＢＤ１０）中のＱ_２及びＱ_２’の１つは、以下の式：
－Ｚ_１－Ｐ_１－Ｚ_２－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ａ’）、
－－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｒ_ｘ１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｄ’）、または
－Ｚ_１－Ｐ_１－Ｚ_２－ （Ｅ’）
で表され、
他の１つは、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＲ’（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ’’、－ＳＲ、または－ＮＯ_２から選択され、
Ｚ_１及びＺ_２のうちの一方は、－Ｃ（＝Ｏ）－であり、他方は、－ＮＲ_５－であり、
Ｐ_１は、アミノ酸残基または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒ_ｘ１は、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、２級アミノ（例えば、－ＮＨＲ^１０１）もしくは３級アミノ（－ＮＲ^１０１Ｒ^１０２）基を任意に有する、１～６つの炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、または５もしくは６員窒素含有複素環であり、Ｒ^１０１及びＲ^１０２は、それぞれ独立して、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、
Ｒ^ｃは、－Ｈ、または１～４つの炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状もしくは分枝状アルキルであり、
Ｒ_５は、出現毎に独立して、－Ｈ、または１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状または分枝状アルキルである。
Ｒ_ａ’’及びＲ_ｂ’’は、同じか、または異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択され、ｎ’は、０、１、２、及び３から選択され、残りの変数は、第２５の具体的な態様に記載の通りである。

【0183】

第２７の具体的な態様では、式（ＰＢＤ５’）、（ＰＢＤ６’）、（ＰＢＤ７’）、（ＰＢＤ８’）、（ＰＢＤ５）、（ＰＢＤ６）、（ＰＢＤ７）、または（ＰＢＤ８）中のＬ’、Ｌ’’、及びＬ’’’のうちの１つは、式（Ａ’）または（Ｄ’）で表され、他の２つは、－Ｈ、１～６つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキル、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、または－ＮＯ_２であるか、あるいは、式（ＰＢＤ９’）、（ＰＢＤ１０’）、（ＰＢＤ９）、または（ＰＢＤ１０）中のＱ_２及びＱ_２’のうちの一方は、式（Ａ’）、（Ｄ’）、または（Ｅ’）で表され、他方は、－Ｈ、１～６つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状アルキル、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、または－ＮＯ_２であり、残りの変数は、第２６の具体的な態様に記載の通りである。

【0184】

第２８の具体的な態様では、Ｌ’’及びＬ’’’は双方ともに、－Ｈであり、式（ＰＢＤ５’）、（ＰＢＤ６’）、（ＰＢＤ７’）、（ＰＢＤ８’）、（ＰＢＤ５）、（ＰＢＤ６）、（ＰＢＤ７）、または（ＰＢＤ８）中のＬ’は、以下の式：
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ２’）、
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ１’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ２’）
で表され、
式（ＰＢＤ９’）、（ＰＢＤ１０’）、（ＰＢＤ９）、または（ＰＢＤ１０）中のＱ_２及びＱ_２’の１つは、以下の式：
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ２’）、
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ１’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－Ｃｙ－（ＣＲ_ａＲ_ｂ）_ｓ１’－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｃ２’）、
－ＮＲ_５－Ｐ_１－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｅ１’）、または
－Ｃ（＝Ｏ）－Ｐ_１－ＮＲ_５－ （Ｅ２’）
で表され、
Ｒ_ａとＲ_ｂは、出現毎に、それぞれ独立して、－Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルまたは荷電置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｓは、１～６の整数であり、
ｓ１’は、０または１～６の整数であり、
Ｃｙは、ハロゲン、－ＯＨ、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_３）アルコキシ、またはハロ（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルで任意に置換されている、５または６の環炭素原子を有する環状アルキル、残りの変数は、第２７の具体的な態様に記載の通りである。一部の実施形態では、Ｒ_ａ及びＲ_ｂは双方ともに、Ｈであり、式（Ｂ２’）及び（Ｃ２’）中のＣｙは、シクロヘキサンであり、Ｒ_５は、ＨまたはＭｅであり、ｓ１’は、０または１である。

【0185】

第２９の具体的な態様では、Ｐ_１は、２～１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの変数は、第２８の具体的な態様に記載の通りである。一部の実施形態では、Ｐ_１は、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。いくつかの実施形態では、Ｐ_１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、及びＧｌｎ－Ａｌａである。一部の実施形態では、Ｐ_１は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。

【0186】

第３０の具体的な態様では、そこに記載の第２５、第２６、第２７、第２８、または第２９の具体的な態様及び実施形態のいずれか１つに記載の方法の場合、Ｒ_６は、－ＯＭｅであり；Ｘ_１’及びＹ_１’は双方ともに、－Ｈであり；Ａ及びＡ’は、－Ｏ－である。

【0187】

第３１の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の構造式：

【化60】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0188】

第３２の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、－Ｌ－は、以下の構造式：

【化61】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_２３及びＲ_２４は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ’は、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈ’は、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、残りの変数は、上記の、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、または第３２の具体的な態様に記載の通りである。

【0189】

一部の実施形態では、Ｒ_２３及びＲ_２４は双方ともに、Ｈであり、ｍ’は、１～６の整数である。

【0190】

一部の実施形態では、Ｒ^ｈ’は、Ｈである。

【0191】

一部の実施形態では、Ｌは、以下の構造式：

【化62】

で表される。

【0192】

第３４の具体的な態様では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化63】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0193】

一部の実施形態では、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化64】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化65】

またはその薬学的に許容される塩で表され、コンジュゲートは、以下の式：

【化66】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0194】

第３５の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｄは、以下の式：

【化67】

【化68】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
Ｘ_１’は、－Ｈ、－ＯＨ、１～１０の炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、フェニル、及びアミン保護基からなる群より選択され、
Ｙ_１’は、－Ｈ、オキソ基、１～１０の炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状、分枝状、もしくは環式アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルからなる群より選択され、
式（ＰＢＤ１５）または（ＰＢＤ１６）中のＱ_２及びＱ_２’の一方は、－Ｗ’－Ｒ^ｘ－Ｓ－であり、他方は、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃ、ハロゲン、グアニジニウム［－ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ_２］、－ＯＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、－ＮＲ’ＣＯＲ’’、－ＳＲ、－ＳＯＲ’、－ＳＯ_２Ｒ’、－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、及び－ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から選択され、
Ｗ’は、存在しないか、または－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ｅ）－、－Ｓ－、もしくは－ＣＨ_２－Ｓ－、－ＣＨ_２ＮＲ^ｅ－から選択され、
Ｒ^ｘは、存在しないか、または１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキルから選択され、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、２級アミノ（例えば、－ＮＨＲ^１０１）もしくは３級アミノ（－ＮＲ^１０１Ｒ^１０２）基を任意に有する、１～６つの炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、または５もしくは６員窒素含有複素環であり、Ｒ^１０１及びＲ^１０２は、それぞれ独立して、１～１０の炭素原子を有する直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであり、
ｎは、１～２４の整数であり、
Ｒ_６は、－Ｈ、－Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＯ_２、またはハロゲンであり、
Ｒは、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、またはＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃであり、ｎは、１～２４の整数であり、Ｒ^ｃは、１～４つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルであり、
Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ、－ＮＲＲ^ｇ’、－ＣＯＲ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、Ｏ、Ｓ、Ｎ、及びＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環、ＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃから選択され、Ｒ^ｇ’は、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、またはＰＥＧ基－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｃである。

【0195】

第３６の具体的な態様では、式（ＰＢＤ１１’）、（ＰＢＤ１２’）、（ＰＢＤ１３’）、（ＰＢＤ１４’）、（ＰＢＤ１５’）、（ＰＢＤ１６’）、（ＰＢＤ１１）、（ＰＢＤ１２）、（ＰＢＤ１３）、（ＰＢＤ１４）、（ＰＢＤ１５）、または（ＰＢＤ１６）の場合、Ｘ_１’及びＹ_１’は双方ともに、－Ｈであり、
Ｒ_６は、－ＯＭｅであり、
Ｗ’は、－Ｎ（Ｒ^ｅ）－または－Ｎ（Ｒ^ｅ）－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ^ｅは、－Ｈ、１～４つの炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝状のアルキル、または－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｋであり、Ｒ^ｋは、－Ｈ、１～４つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状のアルキルであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒ^ｘは、１～６つの炭素原子を有する直鎖状または分枝状アルキルであり、残りの変数は、第３５の具体的な態様に記載の通りである。

【0196】

第３７の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｌは、以下の構造式：

【化69】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルであり、
Ｚは、存在しないか、－ＳＯ_２ＮＲ_９－、－ＮＲ_９ＳＯ_２－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－、－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｐ－、－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｐ－、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_９－、または－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_Ｐ－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
ｐは、１～２４の整数であり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基、またはイオン化可能な基であり、
Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、及びＲ_１３は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現ごとに独立して、０～１０の整数であり、残りの変数は、第３５または第３６の具体的な態様に記載の通りである。

【0197】

一部の実施形態では、Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－である。一部の実施形態では、Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－または－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－である。一部の実施形態では、Ｒ_９は、－Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ_９、Ｒ_１０、Ｒ_１１、Ｒ_１２、及びＲ_１３は全て、Ｈであり、ｑ及びｒは、それぞれ独立して、１～６の整数である。

【0198】

一部の実施形態では、３７の具体的な態様に記載の－Ｌ－の場合、
Ｒ_１２及びＲ_１３は、出現毎にそれぞれ独立して、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈまたは－ＳＯ_３Ｈもしくはその薬学的に許容される塩であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ_９－または－ＮＲ_９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ_９は、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
Ｅは、－（ＣＲ_１０Ｒ_１１）_ｑ－であり、
Ｒ_１０及びＲ_１１は、出現毎に独立して、Ｈまたは（Ｃ_１－Ｃ_３）アルキルであり、
ｑ及びｒはそれぞれ、１～５の整数である。

【0199】

第３８の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｌは、下記構造式：

【化70】

またはその薬学的に許容される塩のうちのいずれか１つで表され、残りの変数は、第３５または第３６の具体的な態様に記載の通りである。

【0200】

第３９の具体的な態様では、式（Ａ）のイミン含有細胞傷害剤または式（Ｂ）のコンジュゲートの場合、Ｌは、以下の構造式：

【化71】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
ｓ１は、Ｄに共有結合している部位であり、ｓ２は、マレイミド基に共有結合している部位であり、
Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２は、出現毎に独立して、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、０～１０の整数であり、
Ｒ^ｈは、Ｈまたは任意に置換されているアルキルであり、
Ｐ_Ｌは、任意に置換されているアルキレン、－（ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ）_ｊ－（式中、酸素原子は、Ｐに連結されている－（Ｃ＝Ｏ）－に連結されている）、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
ｊは、１～２４の整数であり、残りの変数は、第３５または第３６の具体的な態様に記載の通りである。

【0201】

一部の実施形態では、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、及びＲ_２２はそれぞれ、Ｈであり、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１～６の整数である。

【0202】

一部の実施形態では、Ｐ_Ｌは、２～１０のアミノ酸残基を含有するペプチドである。より具体的には、Ｐ_Ｌは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。さらにより具体的には、Ｐ_Ｌは、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ^９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、Ｍｅｔ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ａｌａ、Ｇｌｎ－Ｐｈｅ、Ｇｌｎ－Ａｌａ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ａｌａ、及びβ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙからなる群より選択される。

【0203】

一部の実施形態では、Ｌは、以下の構造式：

【化72】

またはその薬学的に許容される塩で表される。

【0204】

第４０の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化73】

またはその薬学的に許容される塩で表され、
点線は、二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ^３“は、Ｃ_３－１２アルキレン基であり、
各Ｘ’は、出現毎に独立して、－Ｏ－、－Ｓ－、または－Ｎ（Ｈ）－であり、
各Ｒ^２は、独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｒ^１’、－ＯＲ^１’、－Ｏ－ＳＯ_２－Ｒ^１’、－ＣＯ_２Ｒ^１’、－ＣＯＲ^１’、もしくはハロから選択されるか、または、双方のＲ^２は、総合すると、＝Ｏ、＝ＣＨ_２、＝ＣＨ－Ｒ^ａ、もしくは＝Ｃ（Ｒ^ａ）_２であり、
各Ｒ^２’は、独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｒ^１’、－ＯＲ^１’、－Ｏ－ＳＯ_２－Ｒ^１’、－ＣＯ_２Ｒ^１’、－ＣＯＲ^１’、またはハロから選択され、
Ｒ^４ｂは、－ＯＲ^６’、－ＯＣＯＲ^４’、－ＯＣＯＯＲ^４’、－ＯＣＯＮＲ^４’Ｒ^５’、－ＮＲ^４’Ｒ^５’、－ＮＲ^４’ＣＯＲ^５’、－ＮＲ^４’ＮＲ^４’Ｒ^５’、任意に置換されている５または６員窒素含有複素環（例えば、ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリン）、－ＮＲ^４’（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ^４’Ｒ^５’で表されるグアニジニウム、アミノ酸、または－ＮＲ^６’ＣＯＰ’で表されるペプチドから選択される脱離基であり、Ｐ’は、アミノ酸または２～２０のアミノ酸単位を含有するポリペプチド、－ＳＲ^６’、－ＳＯＲ^４’、－ＳＯ_２Ｍ、－ＳＯ_３Ｍ、－ＯＳＯ_３Ｍ、ハロゲン、シアノ、及びアジドであり、
Ｒ^Ｌは、細胞結合剤（ＣＢＡ）と共に共有結合を形成し得るマレイミド部分を有するリンカーであり、
Ｒ^６及びＲ^９は独立して、－Ｈ、－Ｒ^１’、－ＯＨ、－ＯＲ^１’、－ＳＨ、－ＳＲ^１’、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ^１’、－ＮＲ^１’Ｒ^３’、－ＮＯ_２、Ｍｅ_３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ^１’及びＲ^３’は、それぞれ独立して、任意に置換されているＣ_１－１２アルキル、Ｃ_３－２０ヘテロシクリル、またはＣ_５－２０アリール基から選択され、任意に、基－ＮＲ^１’Ｒ^３’に関しては、Ｒ^１’及びＲ^３’は、それらが結合している窒素原子と共に、任意に置換されている４、５、６、もしくは７員複素環式環を形成するか、または、Ｒ^６～Ｒ^９の任意の対の隣接基は共に、基－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｐ－Ｏ－を形成し、ｐは、１もしくは２であり、
Ｒ^４’及びＲ^５’は、それぞれ独立して、－Ｈ、－ＯＨ、－ＯＲ^６’、－ＮＨＲ^６’、－ＮＲ^６’ _２、－ＣＯＲ^６’、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｂ、または独立してＯ、Ｓ、Ｎ、またはＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ^６’は、出現毎に独立して、－Ｈ、１～１０の炭素原子を有する任意に置換されている直鎖状、分枝状、または環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、ポリエチレングリコール単位－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－Ｒ^ｂ、６～１８の炭素原子を有する任意に置換されているアリール、独立して窒素、酸素、または硫黄から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する任意に置換されている５～１８員ヘテロアリール環、及び独立してＯ、Ｓ、ＮまたはＰから選択される１～６つのヘテロ原子を有する任意に置換されている３～１８員複素環式環から選択され、
Ｒ^ａは独立して、－Ｒ^１’、－ＣＯ_２Ｒ^１’、－ＣＯＲ^１’、－ＣＨＯ、－ＣＯ_２Ｈ、またはハロから選択され、
Ｒ^ｂは、－Ｈ、または１～４つの炭素原子を有する置換もしくは非置換の直鎖状もしくは分枝状アルキルであり、
Ｍは、Ｈまたは薬学的に許容されるカチオンであり、
ｎは、１～２４の整数である。

【0205】

第４１の具体的な態様では、本明細書に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化74】

またはその薬学的に許容される塩で表され、Ｒ^３’’は、Ｃ_３－５アルキレンであり、残りの変数は、上記の、第４０の具体的な態様に記載の通りである。

【0206】

第４２の具体的な態様では、式（ＰＢＤ１７’）、（ＰＢＤ１８’）、（ＰＢＤ１９’）、（ＰＢＤ２０’）、（ＰＢＤ１７）、（ＰＢＤ１８）、（ＰＢＤ１９）、または（ＰＢＤ２０）の場合、Ｒ^Ｌは、

【化75】

であり、Ｌ^１は、切断可能なリンカーであり、Ａは、Ｌ^１を細胞結合剤に連結可能なマレイミドを有する連結基であり、Ｌ^２は、共有結合であるか、または－ＯＣ（＝Ｏ）－と共に自己犠牲リンカーを形成し、残りの変数は、第４０または第４１の具体的な態様に記載の通りである。

【0207】

第４３の具体的な態様では、第４２の具体的な態様に記載のＲ^Ｌの場合、Ｌ^１は、２～１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの変数は、第４２の具体的な態様に記載の通りである。より具体的には、Ｌ^１は、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。さらにより具体的には、Ｌ^１は、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号１）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号２）、及びＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号３）からなる群より選択される。

【0208】

第４４の具体的な態様では、第４２の具体的な態様に記載のＲ^Ｌの場合、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－及びＬ^２は共に、基：

【化76】

を形成し、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線は、リンカーＬ^１への結合点を示し、Ｙ’は、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、ｎは、０～３であり、残りの変数は、第４２または第４３の具体的な態様に記載の通りである。

【0209】

第４５の具体的な態様では、第４２の具体的な態様に記載のＲ^Ｌの場合、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－及びＬ^２は共に、基：

【化77】

を形成し、残りの変数は、第４２または第４３の具体的な態様に記載の通りである。

【0210】

第４６の具体的な態様では、第４２の具体的な態様に記載のＲ^Ｌの場合、Ｌ^１及びＬ^２は、－ＯＣ（＝Ｏ）－と共に、

【化78】

から選択された基を含み、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線は、リンカーＬ^１の残りの部分の結合点またはＡへの結合点を示す。

【0211】

第４７の具体的な態様では、第４２の具体的な態様に記載のＲ^Ｌの場合、Ａは、以下の：

【化79】

（式中、アスタリスクは、Ｌ^１への結合点を示し、ｐは、１～６である）、または

【化80】

（式中、アスタリスクは、Ｌ^１への結合点を示し、ｒは、０または１であり、ｓは、０～３０である）で表され、残りの変数は、第４２、第４３、第４４、第４５、または第４６の具体的な態様に記載の通りである。

【0212】

一部の実施形態では、ｐは、４～６であり、ｒは、１であり、ｓは、１～１０である。

【0213】

第４８の具体的な態様では、本発明に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化81】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化82】

またはその薬学的に許容される塩で表され、コンジュゲートは、以下の式：

【化83】

で表され、ｓは、２～８であり、ｗは、１または２であり、ＣＢＡは、本明細書に記載の細胞結合剤である。一部の実施形態では、ｓは、７である。

【0214】

一部の実施形態では、本発明に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化84】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化85】

またはその薬学的に許容される塩で表され、コンジュゲートは、以下の式：

【化86】

で表され、ｓは、２～８であり、ｗは、１または２であり、ＣＢＡは、本明細書に記載の細胞結合剤である。一部の実施形態では、ｓは、７である。

【0215】

第４９の具体的な態様では、本発明に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化87】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化88】

またはその薬学的に許容される塩で表され、コンジュゲートは、以下の式：

【化89】

またはその薬学的に許容される塩で表され、ｓは、２～８であり、ｗは、１または２であり、ＣＢＡは、本明細書に記載の細胞結合剤である。一部の実施形態では、ｓは、７である。

【0216】

一部の実施形態では、本発明に記載の方法の場合、イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化90】

またはその薬学的に許容される塩で表され、修飾イミン含有細胞傷害剤は、以下の式：

【化91】

またはその薬学的に許容される塩で表され、コンジュゲートは、以下の式：

【化92】

またはその薬学的に許容される塩で表され、ｓは、２～８であり、ｗは、１または２であり、ＣＢＡは、本明細書に記載の細胞結合剤である。一部の実施形態では、ｓは、７である。

【0217】

一部の実施形態では、上記の任意の実施形態に記載の荷電置換基またはイオン化可能な基Ｑは、ｉ）－ＳＯ_３Ｈ、－Ｚ’－ＳＯ_３Ｈ、－ＯＰＯ_３Ｈ_２、－Ｚ’－ＯＰＯ_３Ｈ_２、－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｚ’－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｚ’－ＣＯ_２Ｈ、－ＮＲ_１１Ｒ_１２、もしくは－Ｚ’－ＮＲ_１１Ｒ_１２、またはそれらの薬学的に許容される塩、あるいは、ｉｉ）－Ｎ^＋Ｒ_１４Ｒ_１５Ｒ_１６Ｘ^－または－Ｚ’－Ｎ^＋Ｒ_１４Ｒ_１５Ｒ_１６Ｘ^－（Ｚ’は、任意に置換されているアルキレン、任意に置換されているシクロアルキレン、または任意に置換されているフェニレンであり、Ｒ_１４～Ｒ_１６は、それぞれ独立して、任意に置換されているアルキルであり、Ｘ^－は、薬学的に許容されるアニオンである）である。より具体的には、Ｑは、－ＳＯ_３Ｈまたはその薬学的に許容される塩である。さらにより具体的には、Ｑは、－ＳＯ_３Ｎａである。

【0218】

細胞結合剤
一部の実施形態では、細胞結合剤は、本方法において使用することができ、（例えば、重鎖（複数可）のＥＵ／ＯＵナンバリング４４２位で）操作されたシステイン残基を有する抗体である。操作Ｃｙｓ残基は、抗体の一方もしくは双方の重鎖、または抗体の一方もしくは双方の軽鎖、またはそれらの抗原結合部分、あるいはそれらの組み合わせに位置し得る。一部の実施形態では、Ｃｙｓ残基は、抗体重鎖（複数可）のＥＵ／ＯＵナンバリング４４２位に位置する。一部の実施形態では、抗体は、本明細書に記載のシステイン操作抗体である。

【0219】

一部の実施形態では、本発明の抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、再表面化抗体、またはヒト抗体である。

【0220】

他の実施形態では、細胞結合剤は、抗体、単鎖抗体、標的細胞に特異的に結合する抗体フラグメント、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、キメラ抗体、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ）、または標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体フラグメントである。

【0221】

さらに他の実施形態では、細胞結合剤は、ヒト化抗体、ヒト化一本鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）である。具体的な実施形態では、ヒト化抗体は、ｈｕＭｙ９－６または別の関連抗体であり、これは、米国特許第７，３４２，１１０号及び同第７，５５７，１８９号に記載されている。別の具体的な実施形態では、ヒト化抗体は、米国特許第８，５５７，９６６号に記載の抗葉酸受容体抗体である。さらに他の実施形態では、ヒト化抗体は、「抗ＣＤ１２３抗体及びコンジュゲート及びその誘導体」という名称の、２０１６年６月２８日に出願された米国特許出願第１５／１９５，４０１号に記載の抗ＣＤ１２３抗体である。これら全ての出願の教示は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0222】

一部の実施形態では、細胞結合剤は、再表面化抗体、再表面化一本鎖抗体、再表面化抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、または二重特異性抗体である。

【0223】

本発明のさらに別の態様は、本明細書に記載の主題の組み換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分のいずれか１つに由来する、重鎖、軽鎖、またはそれらの抗原結合部分の成熟プロセッシングされた配列を含む組み換え抗体を提供する。

【0224】

例えば、組み換え抗体は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小型モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ユニボディもしくはデュオボディ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ－Ｉｇ、プロボディ、イントラボディ、または多重特異性抗体であっても、それを含んでもよい。

【0225】

ＤＵＯＢＯＤＹ（登録商標）は、二重特異性修飾ＩｇＧ１抗体ヘテロ二量体である。ＩｇＧ１ヒンジ領域は一般に、（ｉ）ＣＰＰＣ配列を含有し、且つ、ｉｎ ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換が許容されない安定なヒンジ領域、ならびに、（ｉｉ）ｉｎ ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換が許容されるようにさせるＦ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ残基を含有するように修飾されるＩｇＧ４様ＣＨ３ドメインを含む（例えば、Ｗ０２００８１１９３５３及びＷＯ２０１１１３１７４６を参照のこと）。

【0226】

一部の実施形態では、組み換え抗体は、重鎖、軽鎖、またはその抗原結合部分の１、２、３、または４つの成熟プロセッシングされた配列を含んでもよく、それぞれは、本明細書に記載の主題の組み換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはその抗原結合部分のいずれか１つに由来する。

【0227】

他の実施形態では、組み換え抗体は、第１の重鎖ポリペプチド及び第２の重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体抗体であり得、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域及び第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域は、境界面に適合し、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域の境界面は、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域の境界面における空洞内に配置可能な突出部を含む。特定の実施形態では、二重特異性抗体における重鎖の特異的対合を促進するｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ技術は、例えば、ＣＨ１及びκ定常領域を交換して、軽鎖の誤対合をさらに低減または排除することにより、例えば、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＲｏｃｈｅのＣｒｏｓｓＭａｂ技術に基づいてさらに改善されてもよい。

【0228】

あるいは、類似の結果は、完全二重特異性抗体の開発において、共通の軽鎖、ドメイン抗体、及び一本鎖フォーマットを含む、ＬＣヘテロ二量体、例えば、他の複数の生物学的アプローチを完全に補完するＺｙｍｅｗｏｒｋｓ ＡＺＹＭＥＴＲＩＣ（商標）ヘテロ二量体ＩｇＧ１軽鎖プラットフォーム技術を使用して達成することもできる。

【0229】

一部の実施形態では、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域は、突出部をコードするように鋳型／元のポリペプチドから変更されているか、もしくは第１の重鎖ペプチドのＦｃ領域は、空洞をコードするように鋳型／元のポリペプチドから変更されているか、またはその双方である。

【0230】

他の実施形態では、突出部及び空洞はそれぞれ、天然に存在するアミノ酸残基を含む。

【0231】

他の実施形態では、突出部を含む第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域は、元の残基よりも大きい側鎖体積を有するインポート残基で、鋳型／元のポリペプチドの界面の元の残基を置換することにより生成される。

【0232】

さらに他の実施形態では、突出部を含む第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域は、該ポリペプチドの境界面の元の残基をコードする核酸が、元のものより大きな側鎖体積を有するインポート残基をコードする核酸で置換されるステップを含む方法により生成される。

【0233】

一部の実施形態では、抗体は、抗原結合領域及び重鎖定常ドメインを含む二重特異性、多重特異性、及び単一特異性抗体多様体を含み、重鎖定常ドメインは、ＥＵ／ＯＵナンバリングの４４２位にＣｙｓを含むように修飾される。

【0234】

他の実施形態では、抗体は、細胞表面受容体を含む細胞表面リガンドなどの、標的細胞上のリガンドに結合し得る。

【0235】

具体的な例示的な抗原またはリガンドは、レニン；成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン）；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；α１－アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；凝固因子（例えば、因子ｖｍｃ、第ＩＸ因子、組織因子、及びｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄｓ因子）；抗凝固因子（例えば、プロテインＣ）；心房性ナトリウム利尿因子；肺サーファクタント；プラスミノーゲンアクチベーター（例えば、ウロキナーゼ、ヒト尿、または組織型プラスミノーゲンアクチベーター）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－α及び腫瘍壊死因子－β；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（すなわち、活性化時に調節され、通常はＴ細胞で発現及び分泌される）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質１α；血清アルブミン（ヒト血清アルブミン）；Ｍｕｅｌｌｅｒｉａｎ阻害物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロレラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質（β－ラクタマーゼ）；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（例えば、ＣＴＬＡ－４）；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞成長因子；ホルモンまたは成長因子の受容体；プロテインＡまたはＤ；リウマチ因子；神経栄養因子（例えば、骨由来神経栄養因子、ニューロトロフィン３、４、５、または６）、神経成長因子（例えば、ＮＧＦ－β）；血小板由来成長因子；線維芽細胞成長因子（例えば、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ）；線維芽細胞成長因子受容体２；表皮成長因子。トランスフォーミング成長因子（例えば、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、及びＴＧＦ－β５）；インスリン様成長因子－Ｉ及びＩＩ；ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）；インスリン様成長因子結合タンパク質；メラノトランスフェリン；ＥｐＣＡＭ；ＧＤ３；ＦＬＴ３；ＰＳＭＡ；ＰＳＣＡ；ＭＵＣ１；ＭＵＣ１６；ＳＴＥＡＰ；ＣＥＡ；ＴＥＮＢ２；ＥｐｈＡ受容体；ＥｐｈＢ受容体；葉酸受容体；ＦＯＬＲ１；メソセリン；クリプト；α_ｖβ_６；インテグリン；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ；ＥＧＦＲ；トランスフェリン受容体；ＩＲＴＡ１；ＩＲＴＡ２；ＩＲＴＡ３；ＩＲＴＡ４；ＩＲＴＡ５；ＣＤタンパク質（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、及びＣＤ１５２）、１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体（全体が参照により組み込まれる米国特許公報第２００８／０１７１０４０号または米国特許公報第２００８／０３０５０４４号を参照のこと）；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質；インターフェロン（例えば、インターフェロンα、β、及びγ）；コロニー刺激因子（例えば、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＧ－ＣＳＦ）；インターロイキン（例えば：ＩＬ－１～ＩＬ－１０）；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原（例えば、ＨＩＶエンベロープの一部）；輸送タンパク質、ホーミング受容体；アドレシン；制御タンパク質；インテグリン（例えば、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４、及びＶＣＡＭ）；腫瘍関連抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、及びＨＥＲ４受容体）；エンドグリン；ｃ－Ｍｅｔ；ｃ－ｋｉｔ；１ＧＦ１Ｒ；ＰＳＧＲ；ＮＧＥＰ；ＰＳＭＡ；ＰＳＣＡ；ＴＭＥＦＦ２；ＬＧＲ５；Ｂ７Ｈ４；ならびに上記のポリペプチドのいずれかのフラグメントを含んでもよい。

【0236】

一部の実施形態では、細胞結合剤は、抗葉酸受容体抗体である。より具体的には、抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体であり、抗体は、（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号４）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ_１ＦＸａａ_２Ｘａａ_３（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ３、ならびに、（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号７）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号８）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号９）を含む軽鎖ＣＤＲ３、を含み；Ｘａａ_１は、Ｋ、Ｑ、Ｈ、及びＲから選択され；Ｘａａ_２は、Ｑ、Ｈ、Ｎ、及びＲから選択され；Ｘａａ_３は、Ｇ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ、及びＶから選択される。好ましくは、重鎖ＣＤＲ２配列は、ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号１０）を含む。

【0237】

他の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＣＬＳＰＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を有する重鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0238】

他の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＮＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２）；または
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0239】

他の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。好ましくは、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む（ｈｕＭｏｖ１９）。

【0240】

他の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、操作されたＣｙｓ残基（例えば、Ｃ４４２）、及び
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１４）と少なくとも約９０％、９５％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変ドメイン、ならびに、
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＮＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１５）；または
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１６）と少なくとも約９０％、９５％、９９％、または１００％同一の軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0241】

具体的な実施形態では、ヒト化抗体は、ｈｕＭｙ９－６または別の関連抗体であり、これは、米国特許第７，３４２，１１０号及び同第７，５５７，１８９号に記載されている。別の具体的な実施形態では、ヒト化抗体は、米国特許第８，５７７，９６６号に記載の抗葉酸受容体抗体（例えば、ｈｕＭｏｖ１９）である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、米国特許第８，７６５，９１７号に記載の抗ＣＤ３７抗体（例えば、抗ＣＤ３７－３）である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、米国特許第８，７９０，６４９号に記載の抗ＥＧＦＲ抗体である。他の実施形態では、抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体である。一部の実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２０５８５９２に記載の抗体を含む、非アンタゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体は、非機能的抗体、例えば、ヒト化ＭＬ６６、である。より具体的には、抗ＥＧＦＲ抗体は、ｈｕＭＬ６６である。

【0242】

一部の実施形態では、抗体は、抗ＣＤ１２３抗体、例えば、「抗ＣＤ１２３抗体ならびにそのコンジュゲート及び誘導体」という名称の、２０１６年６月２８日に出願された米国特許出願第１５／１９５，４０１号（全ての配列及び図面を含む全内容は、本明細書に組み込まれる）に記載のヒト化ｈｕＣＤ１２３抗体、である。具体的な実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ａ）３つの連続した相補性決定領域（ＣＤＲ）（それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域またはそのフラグメント（ＣＤＲ１は、ＳＳＩＭＨ（配列番号１７）の配列を有し、ＣＤＲ２は、ＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号１８）の配列を有し、ＣＤＲ３は、ＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹ（配列番号１９）の配列を有する）、ならびに、ｂ）３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）（それぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域またはそのフラグメント（ＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（配列番号２０）の配列を有し、ＣＤＲ２は、ＲＶＮＲＬＶＤ（配列番号２１）の配列を有し、ＣＤＲ３は、ＬＱＹＤＡＦＰＹＴ（配列番号２２）の配列を有する）、を含む。

【0243】

別の具体的な実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合フラグメントは、操作Ｃｙｓ残基（例えば、Ｃ４４２）を含み；
ＱＸＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）と少なくとも約９０％、９５％、９９％、または１００％同一の免疫グロブリン重鎖可変ドメイン；及び、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２４）と少なくとも約９０％、９５％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域、を含む。特定の実施形態では、配列番号２３のＮ末端から２番目の残基であるＸａａは、Ｐｈｅである。他の実施形態では、Ｘａａは、Ｖａｌである。

【0244】

特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＦＴＳＳＩＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＫＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＲＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＮＤＹＹＤＴＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＣＬＳＰＧ（配列番号２５）のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域；及び、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＴＬＩＹＲＶＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＮＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＤＡＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２６）のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域、を含んでもよい。

【0245】

組成物及び使用方法
本発明は、本発明の任意の方法で調製された細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲート、本発明の任意の方法で調製された細胞結合剤－細胞傷害剤コンジュゲート及び担体（薬学的に許容される担体）を含む組成物（例えば、医薬組成物）も含む。本コンジュゲート及び組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト）の異常な細胞成長を阻害すること、または増殖性障害を処置することに有用である。本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の異常な細胞成長を阻害するか、または増殖性障害を処置する方法を含み、方法は、該哺乳動物に、治療的有効量の上記の本発明の方法で調製されたコンジュゲート、またはその組成物を、単独で、または第２の治療薬と組み合わせて投与することを含む。

【0246】

一部の実施形態では、増殖性障害は、癌である。癌は、血液癌または固形腫瘍を含み得る。より具体的には、癌は、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、例えば、急性Ｂリンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ））またはリンパ腫、メラノーマ、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、卵巣癌、子宮内膜癌、腹膜癌、膵癌、乳癌、前立腺癌、及び子宮頸癌である。

【0247】

本発明は、処置を必要とする対象に、上記のコンジュゲートのうちのいずれかを有効量投与することを含む処置方法も提供する。

【0248】

同様に、本発明は、選択された細胞集団における細胞死を誘導するための方法を提供し、方法は、標的細胞または標的細胞を含有する組織を、上記のコンジュゲートのうちのいずれかを含む有効量の細胞傷害剤と接触させることを含む。標的細胞は、細胞結合剤が結合し得る細胞である。

【0249】

必要に応じて、他の抗腫瘍剤などの他の活性剤は、コンジュゲートと共に投与されてもよい。

【0250】

好適な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は、周知であり、臨床状況が保証するので、当業者らが決定することができる。好適な担体、希釈剤及び／または賦形剤の例は、（１）約１ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有するか、または含有しないダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ約７．４）、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖのＮａＣｌ）、及び（３）５％（ｗ／ｖ）のデキストロース、を含み、トリプタミンなどの抗酸化剤及びＴｗｅｅｎ２０などの安定化剤も含有してもよい。

【実施例】

【0251】

実施例１：アミン含有細胞傷害剤の調製
以下の溶媒、試薬、保護基、部分、及び他の名称は、括弧内のそれらの略語で呼ばれてもよい。

【表1-1】

【0252】

Ａ．Ｎ１－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）－Ｎ６－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］）インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アジパミド、化合物Ｄ１の合成

【化93】

ＮＨＳエステル１ａ（８．２ｍｇ、７．６μｍｏｌ）（参照により本明細書に組み入れられる米国特許第２０１６／００８２１１４号に記載の手順に従って調製された）及び１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（２．２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を、室温の無水ジクロロメタン（３０５μＬ）に溶解させた。ＤＩＰＥＡ（２．６６μＬ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、３．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ、勾配、３５％～５５％）で精製した。所望の生成物画分を凍結及び凍結乾燥して、マレイミド、化合物Ｄ１を固体白色粉末として得た（５．３ｍｇ、収率５８％）。ＬＣＭＳ＝５．１１分（８分法）、ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１００．６（Ｍ＋１）^＋。

【0253】

Ｂ．Ｎ－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）－１１－（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）－１３，１３－ジメチル－２，５，８－トリオキサ－１４，１５－ジチア－１１－アザノナデカン－１９－アミド、化合物Ｄ２の合成

【化94】

遊離チオール２ａ（４０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ４－（２－ピリジルジチオ）ブタナート（３５ｍｇ、純度８０％、０．０８５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（０．５ｍＬ）溶液に、無水ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ、０．０８５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、ジクロロメタンで希釈した。得られた混合物を分液漏斗で分離した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下でストリッピングした。残渣をセミ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）で精製した。純粋な生成物を含有した画分を合わせ、冷凍し、凍結乾燥させて、所望のＮＨＳエステル、２ｂ（２９．７ｍｇ、収率６０％）を得た。ＬＣＭＳ＝９．１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１５７．３（Ｍ＋１）^＋。

【0254】

【化95】

ＮＨＳエステル、２ｂ（１２．３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）及びＮ－（２－アミノエチル）マレイミド塩酸塩（２．０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（０．３ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．００２２ｍＬ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、次に、それを、減圧下でストリッピングした。残渣をセミ分取逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）で精製した。純粋な生成物を含有した画分を合わせ、冷凍し、凍結乾燥させて、所望のマレイミド、化合物Ｄ２（１０ｍｇ、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ＝８．３分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１８１．８（Ｍ＋１）^＋。

【0255】

Ｃ．１－（（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）アミノ）－４－（（５－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－２－メチル－５－オキソペンタン－２－イル）ジスルファニル）－１－オキソブタン－２－スルホン酸、化合物Ｄ３の合成

【化96】

遊離チオール、３ａ（８８ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）及び１－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－１－オキソ－４－（ピリジン－２－イルジスルファニル）ブタン－２－スルホン酸（６４．０ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２．１０ｍＬ）懸濁液に、窒素下室温でＤＩＰＥＡ（５５．０μＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１６時間撹拌し、次に、１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（５５．６ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）、無水ジクロロメタン（１．０ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（０．０５５ｍＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温でさらに５時間撹拌し、この直後に、反応物を真空濃縮した。得られた残渣を、ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）で精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結し、凍結乾燥させて、マレイミド、化合物Ｄ３（２０ｍｇ、収率１６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ＝４．９２分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１５８．６（Ｍ＋１）^＋。

【0256】

Ｄ．Ｎ－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）－１１－（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ、１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）－２，５，８－トリオキサ－１１－アザペンタデカン－１５－アミド、化合物Ｄ４の合成

【化97】

ＮＨＳエステル、４ａ（５ｍｇ、４．８２μｍｏｌ）及び１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（１．７ｍｇ、９．６４μｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２００μＬ）溶液に、窒素下でＤＩＰＥＡ（１．５１２μＬ、８．６８μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌し、次に、真空濃縮した。得られた残渣をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）で精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結し、凍結乾燥させて、マレイミド、化合物Ｄ４（３．５ｍｇ、収率６８％）を得た。ＬＣＭＳ＝４．６１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０６２．８（Ｍ＋１）^＋。

【0257】

実施例２．マレイミド基を有するイミン含有細胞傷害剤の選択的スルホン化
ｐＨ３．３のコハク酸ナトリウム５０ｍＭ（１１６．５ｍＬ）及びＤＭＡ（９８．５ｍＬ）の混合物に、２１．４ｍＬのＤＭＡに溶解させたＤ１（２６３．６ｍｇ）を加えた。続いて、１ｖ／ｖ％のＤＭＡを含有する１００ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液３．４ｍＬ（１．４当量）を反応物に導入した。均質混合物を２５℃で２時間反応させ、この時点で、反応の完了をＵＰＬＣ－ＭＳでアッセイした。反応混合物は、さらに精製せずともコンジュゲーションに適する。図１に示すように、反応混合物のＵＰＬＣ－ＭＳ分析は、９２．５％のイミン－スルホＤ１、１．９％の未反応Ｄ１、０．８％のマレイミド－スルホＤ１、及び４．８％のジスルホＤ１を示す。ＥＳＩ－ＭＳ 負イオンモード［Ｍ－Ｈ］^－イミン－スルホＤ１（Ｃ_６０Ｈ_６２Ｎ_９Ｏ_１５Ｓ^－）に対する計算値：１１８０．４１；実測値：１１８０．０３。

【化98】

【0258】

実施例３．選択的スルホン化に対する亜硫酸水素ナトリウムの効果
表１に示されるように、必要量の５０ｍＭのコハク酸ナトリウムｐＨ３．３緩衝液に、以下の試薬を以下の順序で添加した：ＤＭＡ（３８．８ｕＬ）、１ｖ／ｖ％のＤＭＡを含有する２０または４０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストックを必要量、及びＤＭＡ中８．９ｍＭのＤ１（１１．２ｕＬ）。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で２０時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたジスルホＤ１、マレイミド－スルホＤ１、イミン－スルホＤ１、及び非スルホン化Ｄ１生成物の相対存在量を表１に示す。

【表1-2】

【0259】

実施例４．選択的スルホン化に対するｐＨの影響
表２に詳述されるように、示されたｐＨを有する５０ｍＭのコハク酸ナトリウム緩衝液４４．０ｕＬに、以下の試薬を以下の順序で添加した：１％ｖ／ｖのＤＭＡを含有する２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストック（６．０ｕＬ）、ＤＭＡ（３８．８ｕＬ）、及びＤＭＡ中８．９ｍＭのＤ１（１１．２ｕＬ）。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で４時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたジスルホ、マレイミド－スルホ、イミン－スルホ、及び非スルホン化Ｄ１生成物の相対存在量を表２に示す。

【表2】

【0260】

実施例５．緩衝液を用いるか、または用いない選択的スルホン化
表３に詳述されるように、２１．６ｕＬのＤＭＡに、２２．０ｕＬの水または示されたｐＨを有する５０ｍＭのコハク酸ナトリウム緩衝液、１ｖ／ｖ％のＤＭＡを含有する２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストック（３．０ｕＬ）、及びＤＭＡ中１４．５ｍＭのＤ１（３．４ｕＬ）を添加した。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で６時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたジスルホ、マレイミド－スルホ、イミン－スルホ、及び非スルホン化Ｄ１生成物の相対存在量を表３に示す。

【表3】

【0261】

同様に、表４に詳述されるように、４７．６ｕＬのＤＭＡに、５５．６ｕＬの水またはｐＨ４．７５の５０ｍＭのコハク酸ナトリウム緩衝液、１ｖ／ｖ％のＤＭＡを含有する２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストック（６．９ｕＬ）、及びＤＭＡ（１４．９ｕＬ）中の８．４ｍＭのＤ１を添加した。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で２４時間反応させた。反応生成物を、ＵＰＬＣ－ＭＳで分析した（図２を参照のこと）。観察されたジスルホ、マレイミド－スルホ、イミン－スルホ、及び非スルホン化ＤＧＮ５４９－Ｃ生成物の相対存在量を表４に示す。

【表4】

【0262】

別の実験では、表５に詳述したように、２４．６ｕＬのＤＭＡに、示された体積の水、示された体積の２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストックを加えた。これらの溶液のｐＨは、表５に示す通りであった。これらの混合物にＤＭＡ（５．４ｕＬ）中１１．２ｍＭのＤ１を添加した。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を、２５℃で１～２時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたジスルホ、マレイミド－スルホ、イミン－スルホ、及び非スルホン化Ｄ１生成物の相対存在量を表５に示す。

【表5】

【0263】

実施例６．抗体－細胞傷害剤コンジュゲートの調製
続いて、実施例２に従って調製されたスルホン化反応混合物（２４０ｍＬ、３．５当量）を、還元Ｃ４４２操作システイン残基を有する１０ｇの抗ＣＤ１２３抗体を含有する５０ｍＭのリン酸カリウムｐＨ６．０溶液に導入した。２ｍｇ／ｍＬの抗体及び１５ｖ／ｖ％のＤＭＡの最終濃度で、コンジュゲーション反応を、２５℃で１８時間進行させた。反応生成物のＳＥＣ分析は、１．９のＤＡＲ（薬物対抗体比）及びコンジュゲーション前の、４．４％対３．７％の％ＨＭＷ（高分子量種の割合）を有するＡＤＣを与える。

【0264】

還元Ｃ４４２で操作されたシステイン残基を有する他の２つのヒト化モノクローナル抗体とのコンジュゲートも、上記の同様の手順に従って調製した。

【0265】

実施例７．マレイミド基を有するイミン含有ＰＢＤ二量体の選択的スルホン化
５０ｍＭのコハク酸ナトリウムｐＨ３．３緩衝液２１．２μＬに、以下の順序で：ＤＭＡ２０μＬ、２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストック３．８μＬ、及びＤＭＡ中１０．０ｍＭのタリリン５．０μＬを加えた。これは、タリリンに対して１．５当量の亜硫酸水素塩に相当する。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で４時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたイミンジスルホ、全イミンモノスルホ、非スルホン化、及び全マレイミド－スルホ生成物の相対存在量を表６に示すように決定した。ＥＳＩ－ＭＳタリリン（Ｃ_６０Ｈ_６５Ｎ_８Ｏ_１２ ^＋）［Ｍ＋Ｈ］^＋に対する計算値１０８９．４７１６，実測値１０８９．４７１６；イミンモノスルホン化タリリン（Ｃ_６０Ｈ_６５Ｎ_８Ｏ_１５Ｓ^－）［Ｍ－Ｈ］^－に対する計算値１１６９．４２９６，実測値１１６９．４３４５；イミンジスルホン化タリリン（Ｃ_６０Ｈ_６７Ｎ_８Ｏ_１８Ｓ_２ ^－）［Ｍ－Ｈ］^－に対する計算値１２５１．４０２０，実測値１２５１．４０５３。最終反応混合物の代表的なクロマトグラム（３３０ｎｍの吸光度）を図３に示す。同定された反応生成物の構造は、以下の通りである。

【表6】

【化99】

【0266】

実施例８．マレイミド基を有するイミン含有ＩＧＮ二量体の選択的スルホン化
表７に示されるように、必要量の５０ｍＭのコハク酸ナトリウムｐＨ３．３緩衝液に、以下の順序で：ＤＭＡ（２１．２ｕＬ）、必要量の２０ｍＭの亜硫酸水素ナトリウム水溶液ストック、及びＤＭＡ（３．８ｕＬ）中の１３．２ｍＭのＤ５を添加した。５０体積％のＤＭＡを含有する得られた反応混合物を２５℃で４時間反応させた。反応生成物をＵＰＬＣ－ＭＳで分析した。観察されたイミンジスルホ、イミンモノスルホ、非スルホン化、及び全マレイミドスルホン化生成物の相対存在量を表７に示されるように決定した。ＥＳＩ－ＭＳ Ｄ５（Ｃ_６０Ｈ_６０Ｎ_９Ｏ_１２ ^＋）［Ｍ＋Ｈ］^＋に対する計算値１０９８．４３５６，実測値１０９８．４３５１；イミンモノスルホン化Ｄ５（Ｃ_６０Ｈ_６０Ｎ_９Ｏ_１５Ｓ^－）［Ｍ－Ｈ］^－に対する計算値１１７８．３９３５、実測値１１７８．４００６；イミンジスルホン化Ｄ５（Ｃ_６０Ｈ_６２Ｎ_９Ｏ_１８Ｓ_２ ^－）［Ｍ－Ｈ］^－に対する計算値１２６０．３６６０，実測値１２６０．３７０４；イミンジスルホン化マレイミドスルホン化Ｄ５（Ｃ_６０Ｈ_６４Ｎ_９Ｏ_２１Ｓ_３ ^－）［Ｍ－２Ｈ］^２－に対する計算値ｚ＝２６７０．６６５３，実測値６７０．６６９３。２．０及び２．５当量の亜硫酸水素塩を含む最終反応混合物の代表的なクロマトグラム（３３０ｎｍでの吸光度）を図４Ａ及び４Ｂに示す。同定された反応生成物の構造を以下に示す。

【表7】

【化100】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】