特許 7204643 標的変異インターフェロン－ガンマおよびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-01-05

(45)【発行日】2023-01-16

(54)【発明の名称】標的変異インターフェロン－ガンマおよびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/23 20060101AFI20230106BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230106BHJP

   C07K 14/57 20060101ALI20230106BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230106BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 15/115 20100101ALI20230106BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230106BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230106BHJP

   A61K 38/21 20060101ALI20230106BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230106BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230106BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230106BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20230106BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230106BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20230106BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20230106BHJP

【ＦＩ】

C12N15/23 ZNA

C07K19/00

C07K14/57

C07K16/28

C07K16/30

C12N15/13

C12N15/115 Z

C12N15/62 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K38/21

A61K47/68

A61P35/00

A61P37/02

A61P33/00

A61P31/12

A61P31/10

A61P31/04

【請求項の数】 17

(21)【出願番号】P 2019521376

(86)(22)【出願日】2017-10-24

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-11-28

(86)【国際出願番号】 EP2017077193

(87)【国際公開番号】W WO2018077893

(87)【国際公開日】2018-05-03

【審査請求日】2020-10-16

(31)【優先権主張番号】62/411,823

(32)【優先日】2016-10-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】518268352

【氏名又は名称】オリオニス バイオサイエンシズ ビーブイ

(73)【特許権者】

【識別番号】516003687

【氏名又は名称】ヴィブ ブイゼットダブリュー

(73)【特許権者】

【識別番号】516003702

【氏名又は名称】ユニバーシテイト ヘント

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】クレイ，ニコライ

(72)【発明者】

【氏名】タヴェルニエル，ジャン

(72)【発明者】

【氏名】ピールマン，フランク

(72)【発明者】

【氏名】ザビュー，レンナート

【審査官】伊達 利奈

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２００３／０１３３９０７（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５１６１７０（ＪＰ，Ａ）

【文献】PLOS ONE，2014年02月24日，VOL:9, NR:2，PAGE(S):E89878(1 - 10)，http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0089878

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）野生型ヒトＩＦＮ－γと比べて１つ以上の突然変異を有する、改変ヒトＩＦＮ－γであって、前記突然変異は、
（ｉ）１４、１５、または１６アミノ酸残基のＣ末端でのトランケーション、および
（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７に関するＡ２３ＧおよびＤ２４Ｇの二重置換
から選択される、改変ヒトＩＦＮ－γ、および
（ｂ）関心のある抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含む、１つ以上のターゲティング部分
を含み、
前記改変ヒトＩＦＮ－γおよび前記１つ以上のターゲティング部分は、１つ以上のリンカーを用いて連結される、
キメラタンパク質。

【請求項2】

前記改変ヒトＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体に対して低減された親和性および／または生物活性を示す、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項3】

前記ＩＦＮ－γ受容体は、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットまたはＩＦＮ－γ受容体２サブユニットである、請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項4】

前記改変ヒトＩＦＮ－γは、単鎖ＩＦＮ－γであり、前記単鎖ＩＦＮ－γは、第２のＩＦＮ－γ鎖に連結される第１のＩＦＮ－γ鎖を含み、前記第１のＩＦＮ－γ鎖のＣ末端は、前記第２のＩＦＮ－γ鎖のＮ末端に連結されるか、前記第１または第２のＩＦＮ－γ鎖は、Ｎ末端および／またはＣ末端トランケーションを含むか、または前記第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は、１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項5】

前記ターゲティング部分は、腫瘍細胞に向けられる、請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項6】

前記ターゲティング部分は、免疫細胞に向けられ、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、Ｂ細胞、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、マクロファージ、およびＮＫ細胞から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項7】

前記ターゲティング部分は、全長抗体、シングルドメイン抗体、組換え重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみ抗体（ＶＮＡＲ）、微小タンパク質（例えば、システインノットタンパク質、ノッチン）、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である認識ドメインを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項8】

前記認識ドメインは、シングルドメイン抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項9】

前記認識ドメインは、Ｖ_ＨＨ、またはヒト化Ｖ_ＨＨである、請求項１～８のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項10】

前記認識ドメインは、関心のある抗原または受容体を機能的に調節する、請求項１～９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項11】

前記認識ドメインは、関心のある抗原または受容体を結合するが機能的に調節しない、請求項１～９のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項12】

２つ以上のターゲティング部分を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項13】

１つ以上の追加の改変シグナル伝達物質をさらに含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項14】

前記改変シグナル伝達物質は、その活性を作動性から拮抗性へ変換する１つ以上の突然変異を含む、請求項１３に記載のキメラタンパク質。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の１つ以上のキメラタンパク質をコードする組換え核酸。

【請求項16】

請求項１５の組換え核酸を含む宿主細胞。

【請求項17】

癌、自己免疫疾患もしくは自己免疫障害、または感染の治療に使用するための請求項１～１４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質であって、
前記癌は、基底細胞がん、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝がん；肝細胞腫；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺がん、および肺扁平上皮がん）；メラノーマ；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（口唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；唾液腺がん；肉腫；皮膚癌；扁平細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰部癌；ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症と関連する異常な血管増殖、およびメグズ症候群の１つ以上から選択され、
前記自己免疫疾患または自己免疫障害は、多発性硬化症、クローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチまたは若年性関節リウマチ、好酸球性筋膜炎のような潰瘍性大腸炎免疫不全、低免疫グロブリン血症、または胸腺腫／胸腺がん、移植片対宿主病、前白血病、フェルティ症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、夜間発作性ヘモグロビン尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球癆、およびシェーンライン・ヘノッホ紫斑病の１つ以上から選択され、
前記感染は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バーウイルスまたはパルボウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルス、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染から選択される、
キメラタンパク質。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

分野
本発明は、一部には、変異インターフェロン－γを含むキメラタンパク質およびその治療薬としての使用に関する。

【0002】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／４１１，８２３号（その内容は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる）の恩典を主張する。

【0003】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットでＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表を含み、これによりその全体が参照により組み込まれる。２０１７年１０月２１日頃に作成された前述のＡＳＣＩＩコピーは７６６ＫＢのサイズであり、ＯＲＮ－０２２ＰＣ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名される。

【背景技術】

【0004】

インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス、マイトジェン、および他の物質による刺激に応じて、哺乳類細胞において合成される、タンパク質のファミリーである。インターフェロンは抗ウイルス、抗増殖、および免疫調節性活性を有することが示されている。２０を超える別個のインターフェロンがヒトにおいて同定されており、それらはＩ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型インターフェロンに分類される。

【0005】

様々なインターフェロンの中で、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）はインターフェロンのＩＩ型クラスの唯一のメンバーである。ＩＦＮ－γはインターフェロン－αおよびインターフェロン－βなどのＩ型インターフェロンよりも低い抗ウイルス比活性を有するが、Ｉ型インターフェロンよりも多くの免疫調節特性を提示する。ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γ受容体（ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットとＩＦＮ－γ受容体２サブユニットの複合体である）との特異的相互作用を介してその生物学的効果を発揮する。ＩＦＮ－γは、二量体としてＩＦＮ－γ受容体に結合し、結合すると、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を活性化する。

【0006】

組換えヒト野生型ＩＦＮ－γを含む医薬組成物が開発されている（例えば、アクティミューン）。しかしながら、組換えヒトＩＦＮ－γの投与は、短い血漿内半減期のために頻繁な注射を伴う。加えて、組換えヒトＩＦＮ－γの使用は、発熱、悪寒、発汗、頭痛、筋肉痛、眠気、疼痛、紅斑、肝臓酵素の上昇、可逆顆粒球減少および血小板減少ならびに心毒性を含む副作用と関連する。

【0007】

したがって、引き起こされる毒性および副作用を最小に抑えつつ疾患および障害を治療するための改善されたＩＦＮ－γ組成物が依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0008】

いくつかの態様では、本発明は、シグナル伝達物質として改変インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）を含むキメラタンパク質に関する。一実施形態では、ＩＦＮ－γはヒトＩＦＮ－γである。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γはその生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を含む。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、治療的受容体に対するその親和性および／または生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を含む。一実施形態では、治療的受容体はＩＦＮ－γ受容体であり、これはＩＦＮ－γ受容体１サブユニットおよびＩＦＮ－γ受容体２サブユニットから構成される。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γ受容体１サブユニットに対するその親和性および／または生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を含む。別の実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γ受容体２サブユニットの活性を低減させる１つ以上の突然変異を含む。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γ受容体１サブユニットに対するその親和性および／または生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を含み、ＩＦＮ－γ受容体２サブユニットの活性を低減させる１つ以上の突然変異を含む。様々な実施形態では、突然変異は、アミノ酸置換またはタンパク質トランケーションであってよい。いくつかの実施形態では、突然変異は単鎖ＩＦＮ－γの形成を含み得る。

【0009】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、１つ以上の追加のシグナル伝達物質、例えば、限定はされないが、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子（改変され得る）を含む。様々な実施形態では、発明のキメラタンパク質は、未改変の、野生型ＩＦＮ－γと比べて改善された安全性を提供する。

【0010】

様々な実施形態では、キメラタンパク質は１つ以上のターゲティング部分を含み、それらは認識ドメイン（例えば、限定はされないが様々な抗体フォーマットを含み、シングルドメイン抗体を含む、抗原認識ドメイン）を有し、それらは、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。様々な実施形態では、ターゲティング部分は、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有し、１つ以上の免疫細胞上で見出されるものを含み、それは、限定はされないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、および樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、認識ドメインは関心のある標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合し、１つ以上の免疫細胞を効果的に動員する。いくつかの実施形態では、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）は１つ以上の腫瘍細胞上で見出すことができる。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞を、作用部位（例えば、非限定的例として、腫瘍微小環境）に動員できる。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、非細胞構造の一部である、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。

【0011】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、様々な疾患または障害、例えば癌、感染、免疫不全、自己免疫疾患、心血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および多くの他の疾患および障害の治療において利用され、本発明は治療の様々な方法を包含する。

【0012】

本明細書で開示される任意の態様または実施形態は、本明細書で開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。

【0013】

このように、ここで開示される対象物を一般論として記載してきたが、以下、添付の図面を参照する。図面は必ずしも縮尺通りに描かれていない。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】Ｎ末端シグナル配列を欠く野生型ＩＦＮ－γ（Ｐ－５２２；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７）および改変ＩＦＮ－γ（Ｐ－６６２～Ｐ－６７６、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４８～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６２）についてアライメントされた配列を示す。

【図2A】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2B】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2C】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2D】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2E】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2F】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2G】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2H】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2I】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2J】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2K】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2L】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2M】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2N】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2O】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図2P】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞におけるｐＧＡＳレポーター活性を示すグラフである。データは平均±ｓ．ｄ．として示される。

【図3A】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3B】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3C】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3D】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3E】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3F】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3G】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【図3H】ＣＤ２０プラスミドまたは空ベクターでトランスフェクトされ、本発明のキメラタンパク質で刺激された細胞についての免疫蛍光強度を示すグラフである。細胞をｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ１抗体で調べた。データは平均±ＳＴＤＥＶとして示される。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明は、一部には、１つ以上の受容体に対して低減された親和性および／または生物活性を有する改変ＩＦＮ－γを含む標的キメラタンパク質が、有益な治療特性および低減された副作用を示すという驚くべき発見に基づく。本発明は、キメラタンパク質を含む医薬組成物および様々な疾患の治療におけるそれらの使用を提供する。本発明のキメラタンパク質および医薬組成物の投与は、著しく低減された副作用を達成する。

【0016】

改変インターフェロン－ガンマ
１つの態様では、本発明は、１つ以上の受容体に対して低減された親和性および／または生物活性を有するインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）の改変バージョンであるシグナル伝達物質を含むキメラタンパク質を提供する。インターフェロン（ＩＦＮ）は、多種多様の真核生物細胞により分泌されるサイトカインのよく知られたファミリーである。インターフェロンは、抗ウイルス、免疫調節、免疫制御、および抗増殖特性を含む様々な生物活性を有し、様々な疾患の治療のための治療薬として使用されてきた。

【0017】

様々なインターフェロンの中で、ＩＦＮ－γはインターフェロンのＩＩ型クラスの唯一のメンバーである。ＩＦＮ－γは主にナチュラルキラー（ＮＫ）およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞により、自然免疫応答の一部として産生される。ＩＦＮ－γはまた、ＣＤ４ Ｔｈ１およびＣＤ８細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エフェクターＴ細胞、マクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞により産生される。活性化ＩＦＮ－γは二量体を形成し、これは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットおよびＩＦＮ－γ受容体２サブユニットから構成されるヘテロ二量体受容体（すなわち、ＩＦＮ－γ受容体またはＩＦＮ－γＲ）を介して作用する。ＩＦＮ－γ受容体１は主要リガンド結合サブユニットであり、一方のＩＦＮ－γ受容体２はシグナル伝達に必要であり、かつそのリガンドに対するＩＦＮ－γ受容体１の親和性を増加させる。ＩＦＮ－γ二量体の受容体への結合はＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル経路を活性化して様々な生物学的効果を誘発する。

【0018】

様々な実施形態では、発明のキメラタンパク質はシグナル伝達物質としてＩＦＮ－γの改変バージョンを含む。様々な実施形態では、ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γの機能的誘導体、類似体、前駆体、アイソフォーム、スプライスバリアント、または断片を包含する。様々な実施形態では、ＩＦＮ－γは任意の種に由来するＩＦＮ－γを包含する。一実施形態では、キメラタンパク質はマウスＩＦＮ－γの改変バージョンを含む。別の実施形態では、キメラタンパク質はヒトＩＦＮ－γの改変バージョンを含む。

【0019】

ヒトＩＦＮ－γは１６６のアミノ酸残基を含むポリペプチドである。一実施形態では、ヒトＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４６のアミノ酸配列を有し、ここでシグナルペプチドは最初の２３のアミノ酸を占める。

【0020】

本明細書では、ヒトＩＦＮ－γは、Ｎ末端シグナルペプチドのない成熟ヒトＩＦＮ－γを指し得る。この実施形態では、成熟ヒトＩＦＮ－γは１４３のアミノ酸を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を有する。

【0021】

いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－γはヒトＩＦＮ－γのグリコシル化形態である。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮ－γはヒトＩＦＮ－γの非グリコシル化形態である。

【0022】

ＩＦＮ－γの配列は当技術分野で知られている。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γの公知の野生型アミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４６のアミノ酸配列を有するヒトＩＦＮ－γと少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を有するヒトＩＦＮ－γと少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0025】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは１つ以上のアミノ酸突然変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸突然変異は置換、挿入、欠失、およびトランケーションから独立して選択され得る。

【0026】

いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異はアミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0027】

「保存的置換」は、例えば、関連するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性における類似性に基づいて実施され得る。２０の天然起源のアミノ酸は、下記の６つの標準アミノ酸群に分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0028】

本明細書では、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上で示される６つの標準アミノ酸群の同じ群内で列挙される別のアミノ酸による交換として規定される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１つの負電荷を維持する。加えて、グリシンおよびプロリンは、α－へリックスを破壊するそれらの能力に基づき、互いに置換され得る。

【0029】

本明細書では、「非保存的置換」は、上で示される６つの標準アミノ酸群（１）～（６）の異なる群で列挙される別のアミノ酸による交換として規定される。

【0030】

様々な実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的なアミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコスメ（ｓａｒｃｏｓｍｅ）、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロ－アミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えばβメチルアミノ酸、Ｃα－メチルアミノ酸、Ｎα－メチルアミノ酸、および一般にアミノ酸類似体）を含み得る。

【0031】

様々な実施形態では、ＩＦＮ－γは、１つ以上の突然変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、突然変異は、改変ＩＦＮ－γが、未変異の、例えば、ＩＦＮ－γの野生型形態と比べて、１つ以上の減弱された活性、例えば１つ以上の低減された結合親和性、低減された内在活性、および低減された特定の生理活性を有するようにさせる。例えば、未変異の、例えば、ＩＦＮ－γの野生型形態と比べて１つ以上の減弱された活性、例えば低減された結合親和性、低減された内在活性、および低減された特定の生理活性は、ＩＦＮ－γ受容体などの治療的受容体でのものであってよい。結果として、様々な実施形態では、突然変異は、改変された可溶性作用物質が、未変異の、例えば、ＩＦＮ－γの野生型形態と比べて、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有するようにさせる。

【0032】

様々な実施形態では、ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットおよびＩＦＮ－γ受容体２サブユニットを含むＩＦＮ－γ受容体などの治療的受容体で、その結合親和性および／または活性を低減させる突然変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型ＩＦＮ－γにより提供される活性は、治療的受容体での受容体活性化作用（例えば、治療部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型ＩＦＮ－γは治療的受容体を活性化できる。そのような実施形態では、突然変異は、治療的受容体で低減された活性化活性を有する改変ＩＦＮ－γをもたらす。

【0033】

いくつかの実施形態では、治療的受容体（例えば、ＩＦＮ－γ受容体）で低減された親和性および／または活性は、ターゲティング部分の付着により回復可能である。他の実施形態では、治療的受容体で低減された親和性および／または活性は、ターゲティング部分の付着により実質的に回復可能でない。様々な実施形態では、本発明の治療的キメラタンパク質はオフターゲット効果を低減させる。なぜならＩＦＮ－γは治療的受容体での結合親和性および／または活性を弱める突然変異を有するからである。様々な実施形態では、これは、例えば、野生型ＩＦＮ－γで観察される副作用を低減させる。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、治療活性部位への途中で実質的に不活性であり、特異的に標的にされる細胞型上で実質的にその効果を有し、これは望まれない副作用を大きく低減させる。

【0034】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γが、減弱または低減された親和性および／または活性、例えば、１つ以上の治療的受容体（例えば、ＩＦＮ－γ受容体）に対する結合（例えば、Ｋ_Ｄ）および／または活性化（例えば、Ｋ_Ａおよび／またはＥＣ_５０として測定可能）を有するようにさせる、１つ以上の突然変異を有する。様々な実施形態では、治療的受容体での低減された親和性および／または活性は、治療的受容体からの活性および／またはシグナル伝達の減弱を可能にする。

【0035】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットへのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を有する。１つの実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＩＦＮ－γ受容体１サブユニットで低減された親和性および／または活性を有する。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットへの結合に関与するアミノ酸残基での１つ以上の突然変異を有するヒトＩＦＮ－γである。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットとのインターフェースに位置するアミノ酸で１つ以上の突然変異を有するヒトＩＦＮ－γである。様々な実施形態では、１つ以上の突然変異は、限定はされないが、Ｑ１、Ｖ５、Ｅ９、Ｋ１２、Ｈ１９、Ｓ２０、Ｖ２２、Ａ２３、Ｄ２４、Ｎ２５、Ｇ２６、Ｔ２７、Ｌ３０、Ｋ１０８、Ｈ１１１、Ｅ１１２、Ｉ１１４、Ｑ１１５、Ａ１１８、Ｅ１１９、およびＫ１２５（野生型ヒトＩＦＮ－γであり、かつそのＮ末端シグナル配列を欠く、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７に各々関して）から選択されるアミノ酸においてである。いくつかの実施形態では、１つ以上の突然変異は、Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｆ、Ｄ２４Ｇ、Ｇ２６Ｑ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇ（各々ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７に関する）から選択される置換である。実施形態では、１つ以上の突然変異はＶ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ｄ２４Ｇ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される置換であり；これらの改変ＩＦＮ－γは、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５４、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５６～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６１のアミノ酸配列を有する）。

【0036】

一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは突然変異Ａ２３ＧおよびＤ２４Ｇを含み、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５５のアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、改変ＩＦＮ－γは突然変異Ｉ１１４ＡおよびＡ１１８Ｇを含み、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６２のアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態では、改変ＩＦＮ－γは突然変異Ｖ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ａ２３Ｆ、およびＧ２６Ｑを含む。

【0037】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは下記の突然変異の１つ以上を含む：残基Ａ２３の欠失、残基Ｄ２４の欠失、Ｓ２０Ｉ置換、Ａ２３Ｖ置換、Ｄ２１Ｋ置換およびＤ２４Ａ置換。

【0038】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体２サブユニットへのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を有する。

【0039】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットおよびＩＦＮ－γ受容体２サブユニットの両方へのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を有する。

【0040】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１へのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異、およびＩＦＮ－γ受容体２への結合またはその親和性および／またはこれに対する生物活性を実質的に低減または消失させる１つ以上の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、そのような改変ＩＦＮ－γを有するキメラタンパク質は標的－選択的ＩＦＮ－γ受容体１活性（例えば、ＩＦＮ－γ受容体１活性はターゲティング部分を介したターゲティングにより回復可能である）を提供できる。

【0041】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、ＩＦＮ－γ受容体１へのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異、およびＩＦＮ－γ受容体１へのその結合またはこれに対するその親和性および／またはこれに対する生物活性を低減させる１つ以上の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、そのような改変ＩＦＮ－γを有するキメラタンパク質は標的－選択的ＩＦＮ－γ受容体１および／またはＩＦＮ－γ受容体１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮ－γ受容体１およびＩＦＮ－γ受容体２活性はターゲティング部分によるターゲティングを介して回復可能である）。

【0042】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＣ末端でトランケートされる。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γはＣ末端の欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮ－γである。そのような実施形態では、成熟ＩＦＮ－γは、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端トランケーションを含み得る。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、５アミノ酸のＣ末端欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮ－γであり、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４８のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは７アミノ酸のＣ末端欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む、成熟ＩＦＮ－γであり、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４９のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、１４アミノ酸のＣ末端欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮ－γであり、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５０のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは１５アミノ酸のＣ末端欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮ－γであり、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５１のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは１６アミノ酸のＣ末端欠失を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７のアミノ酸配列を含む成熟ＩＦＮ－γであり、この改変ＩＦＮ－γはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２のアミノ酸配列を有する。本発明で使用され得るＣ末端トランケーションを有する追加の改変ＩＦＮ－γはＨａｅｌｅｗｙｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ． （１９９７）， ３２４：５９１－５９５およびＬｕｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． （１９９１） ４：３３５－３４１（全内容はこれにより参照により組み込まれる）において記載される。

【0043】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、例えば、Ｒａｎｄａｌ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ９：１５５－１６３およびＲａｎｄａｌ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ． ７：１０５７－１０６０（全内容はこれにより参照により組み込まれる）において記載される単鎖ＩＦＮ－γである。いくつかの実施形態では、単鎖ＩＦＮ－γは、そのＣ末端で第２のＩＦＮ－γ鎖のＮ末端に連結される第１のＩＦＮ－γ鎖を含む。様々な実施形態では、第１および第２のＩＦＮ－γ鎖は、本明細書における他の場所で記載されるように、リンカーにより連結される。

【0044】

いくつかの実施形態では、第１のＩＦＮ－γ鎖は、少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端トランケーションを含む。一実施形態では、第１のＩＦＮ－γ鎖は約２４アミノ酸残基のＣ末端トランケーションを含む。いくつかの実施形態では、第２のＩＦＮ－γ鎖は少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、または約５個のアミノ酸残基のＮ末端トランケーションを含む。一実施形態では、第２のＩＦＮ－γ鎖は約３アミノ酸残基のＮ末端トランケーションを含む。いくつかの実施形態では、第２のＩＦＮ－γ鎖は少なくとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１３個、約１４個、約１５個、約１６個、約１７個、約１８個、約１９個、約２０個、約２１個、約２２個、約２３個、約２４個、または約２５個のアミノ酸残基のＣ末端トランケーションを含む。様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は、本明細書における他の場所で記載されるように、Ｑ１、Ｖ５、Ｅ９、Ｋ１２、Ｈ１９、Ｓ２０、Ｖ２２、Ａ２３、Ｄ２４、Ｎ２５、Ｇ２６、Ｔ２７、Ｌ３０、Ｋ１０８、Ｈ１１１、Ｅ１１２、Ｉ１１４、Ｑ１１５、Ａ１１８、Ｅ１１９、およびＫ１２５での１つ以上のアミノ酸突然変異を含む。様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖はＶ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｆ、Ｄ２４Ｇ、Ｇ２６Ｑ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される１つ以上の置換を含む。様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は、Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ｄ２４Ｇ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、およびＡ１１８Ｇから選択される１つ以上の置換を含む。様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は、Ａ２３ＧおよびＤ２４Ｇ置換を含む。様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖はＩ１１４ＡおよびＡ１１８Ｇ置換を含む。別の実施形態では、突然変異はＶ５Ｅ、Ｓ２０Ｅ、Ａ２３Ｆ、およびＧ２６Ｑである。

【0045】

様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は本明細書で開示される１つ以上の置換を含み、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は本明細書で開示されるＣ末端トランケーションを含む。

【0046】

様々な実施形態では、第１および／または第２のＩＦＮ－γ鎖は本明細書で開示される１つ以上の置換、および本明細書で開示されるＣ末端トランケーションを含む。

【0047】

ヒトＩＦＮ－γの結晶構造は知られており、例えば、Ｅａｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．， （１９９１） Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２５２： ６９８－７０２において記載される。特定的には、ヒトＩＦＮ－γの構造は、６つのα－へリックスのコアおよびＣ末端領域における折り畳まれていない拡張配列を含むことが示されている。様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、１つ以上のへリックスにおいて１つ以上の突然変異を有し、これは、治療的受容体（例えば、ＩＦＮ－γ受容体）でのその結合親和性および／または生物活性を低減させる。

【0048】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、野生型ＩＦＮ－γと比べて、治療的受容体（例えば、ＩＦＮ－γ受容体またはそのＩＦＮ－γ受容体１サブユニットおよびＩＦＮ－γ受容体２サブユニットのいずれか一つ）に対し約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％－２０％、約２０％－４０％、約５０％、約４０％－６０％、約６０％－８０％、約８０％－１００％の親和性および／または生物活性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性および／または生物活性は、野生型ＩＦＮ－γと比べて、少なくとも約２倍低く、約３倍低く、約４倍低く、約５倍低く、約６倍低く、約７倍低く、約８倍低く、約９倍低く、少なくとも約１０倍低く、少なくとも約１５倍低く、少なくとも約２０倍低く、少なくとも約２５倍低く、少なくとも約３０倍低く、少なくとも約３５倍低く、少なくとも約４０倍低く、少なくとも約４５倍低く、少なくとも約５０倍低く、少なくとも約１００倍低く、少なくとも約１５０倍低く、または約１０～５０倍低く、約５０～１００倍低く、約１００～１５０倍低く、約１５０～２００倍低く、または２００超倍低い。

【0049】

様々な実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、例えば、野生型ＩＦＮ－γと比べて、ＩＦＮ－γの内在活性を約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減させる１つ以上の突然変異を含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、改変ＩＦＮ－γが、受容体に対して低減された親和性および／または生物活性を有するようにする１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、受容体に対する改変ＩＦＮ－γの結合親和性および／または生物活性は、その受容体に対するターゲティング部分の結合親和性および／または生物活性より低い。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性の差は、同じ細胞上での改変ＩＦＮ－γ／受容体とターゲティング部分／受容体の間のものである。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性の差は、改変ＩＦＮ－γが局所的な、的確な効果を有し、野生型ＩＦＮ－γで観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小に抑えることを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性および／または生物活性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低く、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低く、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。

【0051】

受容体結合活性は当技術分野で知られている方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、結合データのスキャッチャードプロット分析およびコンピュータ－フィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ， １９４９）により、またはＢｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．（１９９３）（その全ての全内容がこれにより参照により組み込まれる）により記載されるように、フロースルー条件下での反射干渉分光法により、評価され得る。

【0052】

様々な実施形態では、治療的受容体での減弱された活性、治療的受容体での弱められた親和性および／または生物活性は、治療活性部位で抗原に対する高親和性を有するターゲティング部分（例えば、本明細書で記載される抗体または抗体フォーマット）の付着により回復可能である。ターゲティングは、改変ＩＦＮ－γをターゲティング部分に連結させることにより実現される。一実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、そのアミノ末端を介してターゲティング部分に連結される。別の実施形態では、改変ＩＦＮ－γは、そのカルボキシ末端を介してターゲティング部分に連結される。このように、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、治療的受容体で、局所的な、的確な、および制御された治療作用を提供する。

【0053】

様々な実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書で開示される１つ以上の置換および／または本明細書で開示されるＣ末端トランケーションを含むＩＦＮ－γを含む。

【0054】

本改変インターフェロン－γを含む治療薬
ターゲティング部分の細胞動員
様々な実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する１つ以上のターゲティング部分を追加的に含む。例示的な実施形態では、キメラタンパク質は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多いターゲティング部分を含み得る。様々な実施形態では、関心の標的（例えば、抗原、受容体）は、１つ以上の免疫細胞上で見出すことができ、それらとしては、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはそれらのサブセットが挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの実施形態では、認識ドメインは関心の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合し、効果的に、直接的にまたは間接的に、１つ以上の免疫細胞を動員する。いくつかの実施形態では、関心の標的（例えば、抗原、受容体）は１つ以上の腫瘍細胞上で見出すことができる。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質は２つ以上のターゲティング部分を含む。そのような実施形態では、キメラタンパク質は２つの異なる細胞（例えば、シナプスを形成するため）または同じ細胞（例えば、より濃縮されたシグナル伝達物質効果を得るため）を標的にできる。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、直接的にまたは間接的に、免疫細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節される細胞）に動員できる。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は直接的にまたは間接的に免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制することができる免疫細胞を、作用部位（例えば、非限定的例として、腫瘍微小環境）に動員できる。

【0055】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、疾患細胞および／またはエフェクター細胞などの細胞を直接的にまたは間接的に動員できる。様々な実施形態では、シグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－γ）は、ターゲティング部分により標的にされる１つ以上の細胞（例えば、疾患細胞および／またはエフェクター細胞などの動員される細胞）を調節できる。例えば、シグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－γ）は、標的細胞がシグナル伝達物質に対する受容体を発現するかどうかによって、標的細胞（標的細胞はエフェクターおよび／または疾患細胞であってよい）の１つまたは両方を調節できる。

【0056】

いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、腫瘍の免疫攻撃に有利に免疫細胞の均衡をシフトさせることができ、またはこれを含む方法において用途を見出す。例えば、本キメラタンパク質は、臨床的に重要な部位で、腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはそれらのサブセット）に有利に、かつ腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはそれらのサブセット）に反して、免疫細胞の比率をシフトさせることができる。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質はエフェクターＴ細胞対制御性Ｔ細胞の比を増加させることができる。

【0057】

例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｔ細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｔ細胞を直接的にまたは間接的に動員する。一実施形態では、認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインはエフェクターＴ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。例示的なエフェクターＴ細胞としては、下記が挙げられる：細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＯ^＋）；ＣＤ４^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ８^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４^＋、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ^－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４^＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７^＋、ＩＬ－１５Ｒ^＋）；ＣＤ６２Ｌ^＋エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、例えば初期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^＋ＣＤ６２Ｌ^－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７^－ＣＤ６２Ｌ^－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）；ＣＤ１２７（^＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（^－）ＣＤ２５（^－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８^＋幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（^＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３^＋、ＣＸＣＲ６^＋およびＣＣＲ５^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－１２Ｒ^＋、ＩＦＮγＲ^＋、ＣＸＣＲ３^＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３^＋、ＣＣＲ４^＋およびＣＣＲ８^＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－４Ｒ^＋、ＩＬ－３３Ｒ^＋、ＣＣＲ４^＋、ＩＬ－１７ＲＢ^＋、ＣＲＴＨ２^＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＩＬ－２３Ｒ^＋、ＣＣＲ６^＋、ＩＬ－１Ｒ^＋）；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７^＋エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ^＋エフェクターＴ細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＯ^＋ＣＣＲ７（^－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ－２、ＩＬ－４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞。

【0058】

関心のある例示的なＴ細胞抗原としては、例えば下記が挙げられる（該当する場合、細胞外ドメインを含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ－２ Ｒ β、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ－４ Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ－６ Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ－７ Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－Ｓ ＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ－１０Ｒ α、ＣＣＲ ７、ＩＬ－１０ Ｒ β、ＣＣＲＳ、ＩＬ－１２ Ｒ β １、ＣＣＲ９、ＩＬ－１２ Ｒ β ２、ＣＤ２、ＩＬ－１３ Ｒ α １、ＩＬ－１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリン α Ｅ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリン α Ｍ／ＣＤ １１ ｂ、ＣＤＳ、インテグリン α Ｘ／ＣＤ１１ｃ、インテグリン β ２／ＣＤ１Ｓ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０ リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエン Ｂ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｃｏｍｍｏｎ γ鎖／ＩＬ－２ Ｒ γ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰ β １、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、Ｆｃγ ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦ ＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬ Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬ Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γ Ｒ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１ Ｒ１およびＴＳＬＰ Ｒ。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分はこれらの例示的なＴ細胞抗原の１つ以上を結合する。

【0059】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１つ以上に向けられるターゲティング部分を有する。

【0060】

例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。関心のある例示的なＢ細胞抗原としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的なＢ細胞抗原の１つ以上を結合する。

【0061】

さらなる例として、いくつかの実施形態では、認識ドメインはナチュラルキラー細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、ナチュラルキラー細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。関心のある例示的なナチュラルキラー細胞抗原としては、例えばＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－ε ＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γ ＲＩ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γ ＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γ ＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γ ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ネクチン－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γ ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１ α、Ｒａｅ－１ β、Ｒａｅ－１ δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１ γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的なＮＫ細胞抗原の１つ以上を結合する。

【0062】

また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。関心のある例示的なマクロファージ／単球抗原としては、例えばＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ｃｏｍｍｏｎ β鎖、インテグリン α ４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリン α Ｘ／ＣＤ１１ｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリン β ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリン β ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ラテキシン、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエン Ｂ４ Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γ ＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γ ＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γ ＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、シグレック－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γ ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γ ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒ α、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γ ＲＩ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ Ｒ２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－１ ＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ ４、ＩＬ－１０ Ｒ α、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ－１０ Ｒ β、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｃｏｍｍｏｎ β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、Ｃ１ｑ Ｒ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、インテグリン α ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリン α Ｍ／ＣＤ１１ ｂ、ＣＣＲ８、インテグリン α Ｘ／ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリン β ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリン β ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエン Ｂ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦ Ｒ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γ ＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γ ＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦ Ｒ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦ Ｒ α、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－６ Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－８ ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的なマクロファージ／単球抗原の１つ以上を結合する。

【0063】

また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは樹状細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、樹状細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。関心のある例示的な樹状細胞抗原としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢ リガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０、４－アミノ－１，８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α ４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリン β ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、ランゲリン、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエン Ｂ４ Ｒ１、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、Ｃ１ｑ Ｒ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ ＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／シグレック－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬ１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、オステオアクチビン ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、デクチン－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γ Ｒ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γ ＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γ ＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γ ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γ ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２およびバニロイド Ｒ１が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的なＤＣ抗原の１つ以上を結合する。

【0064】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは、限定はされないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはそれらのサブセットから選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはそれらのサブセットを、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１つ以上の疾患細胞を有する部位または治療効果のために調節されるべき細胞）に直接的にまたは間接的に動員する。

【0065】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球および／または血小板と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的な巨核球および／または血小板抗原としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的な巨核球および／または血小板抗原の１つ以上を結合する。

【0066】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは赤血球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的な赤血球抗原としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、およびアカゲザル抗原が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの例示的な赤血球抗原の１つ以上を結合する。

【0067】

いくつかの実施形態では、認識ドメインはマスト細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的なマスト細胞抗原としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢ１が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらのマスト細胞抗原の１つ以上を結合する。

【0068】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好塩基球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的な好塩基球抗原としては、例えば、Ｆｃ_εＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの好塩基球抗原の１つ以上を結合する。

【0069】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは好中球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的な好中球抗原としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの好中球抗原の１つ以上を結合する。

【0070】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好酸球と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。関心のある例示的な好酸球抗原としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの好酸球抗原の１つ以上を結合する。

【0071】

様々な実施形態では、認識ドメインは、当業者により知られている任意の適切な標的、抗原、受容体、または細胞表面マーカーに結合し得る。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。例示的な組織特異的マーカーとしては、内皮細胞表面マーカー、例えばＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭ１、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭ１、ＶＷＦ；平滑筋細胞表面マーカー、例えばＡＣＴＡ２、ＭＹＨ１０、ＭＹＨ１１、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤ；線維芽細胞（ストロマ）細胞表面マーカー、例えばＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４；上皮細胞表面マーカー、例えばＣＤ１Ｄ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣ１、ＴＡＣＳＴＤ１；血管新生マーカー、例えばＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（α_Ｖβ_３）、Ｅ－セレクチン；ならびに脂肪細胞表面マーカー、例えばＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮが挙げられるが、それらに限定されない。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの抗原の１つ以上を結合する。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの抗原を有する細胞の１つ以上を結合する。

【0072】

いくつかの実施形態では、認識ドメインは、腫瘍細胞と関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、腫瘍細胞を直接的にまたは間接的に動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の直接または間接の動員は、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制することができる１つ以上のエフェクター細胞（例えば、本明細書で記載される免疫細胞）に対してである。

【0073】

腫瘍細胞、または癌細胞は、身体器官および系統の正常機能を妨害する、細胞または組織のコントロール不良の増殖および／または細胞生存および／またはアポトーシスの阻止の異常な増加を指す。例えば、腫瘍細胞は良性および悪性癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含む。例示的な腫瘍細胞としては、下記の細胞が挙げられるが、それらに限定されない：基底細胞がん、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝がん；肝細胞腫；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺がん、および肺の扁平上皮がん）；メラノーマ；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（口唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；唾液腺癌腫；肉腫；皮膚癌；扁平細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰部癌；ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症と関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍と関連するもの）、およびメグズ症候群。

【0074】

腫瘍細胞、または癌細胞としてはまた、癌腫、例えば、様々なサブタイプ（例えば、腺がん、基底細胞がん、扁平上皮がん、および移行上皮がんを含む）、肉腫（例えば、骨および軟部組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫およびミエローマ（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖、非分泌性、ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫を含む）が挙げられるが、それらに限定されない。

【0075】

例示的な腫瘍抗原としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ－結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ζ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥ－ファミリー（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥ－ファミリー（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ウイルス産物、例えばヒト乳頭腫ウイルスタンパク質、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶがコードする核抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、およびＰＭＳＡ。様々な実施形態では、キメラタンパク質のターゲティング部分は、これらの腫瘍抗原の１つ以上を結合する。

【0076】

様々な実施形態では、発明のキメラタンパク質は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な成分ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は非タンパク質、非細胞マーカーであり、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されるＤＮＡなどの、ＤＮＡまたはＲＮＡを含む核酸、またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含むがそれらに限定されない。

【0077】

いくつかの実施形態では、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）は、間質または細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の非細胞成分あるいはこれらと関連するマーカーの一部である。本明細書では、間質は、組織または器官の結合および支持フレームワークを指す。間質は、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）および細胞外分子とともに線維芽細胞／筋線維芽細胞、グリア、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。様々な実施形態では、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリクスおよび細胞外分子などの間質の非細胞成分の一部である。本明細書では、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定はされないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖を含む生化学的に別個の成分の大きなコレクションから構成される。ＥＣＭのこれらの成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスを介してＥＣＭ中に分泌される。分泌されるとすぐに、ＥＣＭ成分はしばしば凝集して、巨大分子の複合ネットワークを形成する。様々な実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの例示的な成分としては、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖、線維、および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖、核酸および／または脂質）が挙げられるが、それらに限定されない。

【0078】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。基本のプロテオグリカン単位は、１つ以上の共有結合により付着されるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷を持つナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引きつける正味の負電荷を有し、これは浸透により水分子を引きつけ、ＥＣＭおよび常在細胞を水和状態に保つ。プロテオグリカンはまた、ＥＣＭ内に増殖因子をトラップし保存するのを助けることができる。本発明のキメラタンパク質により標的にされ得る例示的なプロテオグリカンとしては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、それらに限定されない。一実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。

【0079】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＥＣＭ線維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ線維としては、コラーゲン線維およびエラスチン線維が挙げられる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はコラーゲンまたはコラーゲン線維上の１つ以上のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンは、ＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在細胞に対し構造的支持を提供する。１つ以上の実施形態では、ターゲティング部分はＥＣＭ内に存在する様々な型のコラーゲンを認識し、それらに結合し、それらとしては下記が挙げられるが、それらに限定されない：線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ｆａｃｉｔコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲン。エラスチン線維は組織に弾性を与え、それらが必要な時に伸張しその後それらの元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、標的部分はエラスチンまたはエラスチン線維上の１つ以上のエピトープを認識する。

【0080】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、１つ以上のＥＣＭタンパク質、例えば、限定はされないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチン、を認識する。

【0081】

一実施形態では、ターゲティング部分はテネイシンを認識し、これに結合する。糖タンパク質のテネイシン（ＴＮ）ファミリーは、少なくとも４つのメンバー、テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシンＷを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列で順序付けられたいくつかの共通モチーフを含む：アミノ末端の７アミノ酸繰り返し、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様繰り返し、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン繰り返し、およびカルボキシル末端フィブリノゲン様球状ドメイン。各タンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型繰り返しの数および性質の典型的なバリエーションと関連する。特にテネイシン－Ｃに関しては、アイソフォームバリアントもまた存在する。テネイシン－Ｃの２７を超えるスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分はテネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒもまた、様々なスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、二量体または三量体として存在する。テネイシン－Ｘはテネイシンファミリーの最も大きなメンバーであり、三量体として存在することが知られている。テネイシン－Ｗは三量体として存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はテネイシンタンパク質上の１つ以上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はテネイシンタンパク質の単量体および／または二量体および／または三量体および／または六量体を認識する。

【0082】

一実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは細胞をＥＣＭ中のコラーゲン線維と連結させる糖タンパク質であり、細胞がＥＣＭ中を移動するのを可能にする。インテグリンに結合すると、フィブロネクチンはほどかれて、機能的二量体を形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンの単量体および／または二量体を認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はフィブロネクチン上の１つ以上のエピトープを認識する。例示的な実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。上昇したレベルのＥＤＡは、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む様々な疾患および障害と関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、キメラタンパク質を癌細胞を含む疾病細胞へ標的させるのに使用され得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。様々な実施形態では、そのようなターゲティング部分は、キメラタンパク質を、腫瘍血管新生を含む腫瘍細胞に標的させるために使用され得る。

【0083】

一実施形態では、ターゲティング部分はフィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリクスネットワークにおいてしばしば見出される別のタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリンを重合させるフィブリノゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成される。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１つ以上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンの単量体形態ならびに重合形態を認識する。

【0084】

一実施形態では、ターゲティング部分はラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは基底層の主要成分であり、それは細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、ａβ鎖、およびγ鎖を含むヘテロ三量体タンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１つ以上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンの単量体、二量体ならびに三量体形態を認識する。

【0085】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された、硫酸化糖タンパク質のファミリーである。それらは基底膜の主要構造成分を構成し、基底膜において、ラミニンおよびコラーゲンＩＶネットワークを連結させるように機能する。このファミリーのメンバーはナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。様々な実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。

【0086】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載される標的のいずれか（例えば、ＥＣＭタンパク質）上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。一実施形態では、抗原－認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つ以上の直鎖エピトープを認識する。本明細書では、直鎖エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原－認識ドメインは、タンパク質上に存在する１つ以上の立体構造エピトープを認識する。本明細書では、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を有する３次元表面を形成する、アミノ酸の１つ以上のセクション（不連続であり得る）を指す。

【0087】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載される標的のいずれか（例えば、ＥＣＭタンパク質）の全長および／または成熟形態および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／または断片および／または任意の他の天然起源もしくは合成類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。様々な実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載されるタンパク質の任意の形態、例えば、単量体、二量体、三量体の、四量体、ヘテロ二量体、多量体および関連の形態に結合し得る。様々な実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載されるタンパク質の任意の翻訳後修飾形態、例えばグリコシル化されたおよび／またはリン酸化形態に結合し得る。

【0088】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。一実施形態では、ＤＮＡは、壊死腫瘍細胞もしくはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾病細胞から細胞外空間中に排出される。

【0089】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、動脈硬化プラークと関連する１つ以上の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つの型の動脈硬化プラークが知られている。線維脂質（線維脂肪）プラークは、動脈の内膜の真下での脂質を多く含む細胞の蓄積により特徴付けられる。内皮の真下に、プラークのアテロームコアを覆う線維皮膜が存在する。コアは、上昇した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を多く含む細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、および細胞デブリを含む。進行プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外コレステロール沈着物（死細胞から放出される）を含み、これらは空の、針様間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周囲には、より若い泡沫細胞および毛細血管が存在する。線維プラークはまた、内膜下、動脈の壁内に局在し、壁の肥厚および拡大をもたらし、時として、筋肉層のいくらかの萎縮を伴う管腔の斑状の局所的な狭小化をもたらす。線維プラークは、コラーゲン線維（好酸球性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン親和性（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｏｐｈｉｌｉｃ））および脂質を多く含む細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はこれらのプラークの非細胞成分、例えば、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、細胞デブリ、およびカルシウムまたは他のミネラル沈着物もしくは沈殿物、の１つ以上を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、細胞デブリは、死細胞から放出される核酸、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡである。

【0090】

様々な実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラークにおいて見出される１つ以上の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病患者の脳で見出されるアミロイドプラーク中に位置する１つ以上の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、アミロイドプラークの主要成分であるペプチドアミロイドβを認識し、これに結合できる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病患者において見出される脳プラーク中に位置する１つ以上の非細胞構造を認識し、これに結合する。様々な実施形態では、ターゲティング部分は、他の神経変性または筋骨格疾患、例えばレビー小体認知症および封入体筋炎と関連するプラーク中で見出される１つ以上の非細胞構造を認識し、これに結合する。

【0091】

いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、２つ以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはそれらのサブセットから選択される免疫細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は（ｉ）Ｔ細胞（限定はされないが、エフェクターＴ細胞を含む）に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）Ｂ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）樹状細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）マクロファージに向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）ＮＫ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0092】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）、例えば、ＣＤ８、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ－２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ－４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ－６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ－７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－ＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ－１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ－１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ－１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ－１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤ１Ｓ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｃｏｍｍｏｎγ鎖／ＩＬ－２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１Ｒ１、またはＴＳＬＰＲへのターゲティングにより媒介される、Ｔ細胞に向けられるターゲティング部分；および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0093】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１つ以上に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0094】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、ＰＤ－１に向けられる１つ以上のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する１つ以上のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する、１つ以上の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質を含む。

【0095】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）の誘導体、またはその断片を含む。ペムブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ， ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９ （２）： １３４－４４、ＵＳ８，３５４，５０９号、およびＷＯ２００９／１１４３３５号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含む重鎖；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0096】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルマブ（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＯＰＤＩＶＯ）の誘導体、またはその断片を含む。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびＰＤ－１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ８，００８，４４９号およびＷＯ２００６／１２１１６８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される。例示的な実施形態では、ニボルマブまたはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0097】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）の誘導体、またはその断片を含む。ピディリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、ＵＳ２００８／００２５９８０号およびＷＯ２００９／１０１６１１号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５～１８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域：ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）；および／またはＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０～２４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）；ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）を含む。

【0098】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含む軽鎖の誘導体およびＵＳ２００８／００２５９８０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２を含む重鎖の誘導体を含む。

【0099】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）の誘導体を含む。

【0100】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１０／０２７８２７号およびＷＯ２０１１／０６６３４２号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される、ＰＤ－Ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４の誘導体を含む。そのような実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１０／０２７８２７号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）を含むターゲティングドメインおよび／またはＷＯ２０１０／０２７８２７号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質の誘導体を含み得る。

【0101】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２の誘導体またはＵＳ２０１１／０３１８３７３号または８，９０７，０５３号で開示される他のペプチドのいずれかを含む。例えば、ターゲティング部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を有するＡＵＮＰ１２の誘導体（すなわち、化合物８またはＵＳ２０１１／０３１８３７３号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）を含み得る：

【0102】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｅ３またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0103】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｅ８またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0104】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｈ３またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0105】

一実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、ＵＳ８，９０７，０６５号およびＷＯ２００８／０７１４４７号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示されるＰＤ－１に向けられるＶＨＨの誘導体を含む。例示的な実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４７～３５１：ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９）を含む。

【0106】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号およびＷＯ２０１０／０３６９５９号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－１抗体のいずれか一つの誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５～２９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖の誘導体：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４）；および／またはＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０～３３から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖の誘導体：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）を含む。

【0107】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ， Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択される、ＰＤ－１に向けられる１つ以上の抗体の誘導体、またはその抗体断片を含む。

【0108】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する１つ以上のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する、１つ以上の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質を含む。様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、低親和性でＰＤ－Ｌ１に結合する第１のターゲティング部分を含む。

【0109】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）の誘導体、またはその断片を含む。ＭＥＤＩ４７３６はＰＤ－Ｌ１に対して選択的であり、ＰＤ－１およびＣＤ８０受容体へのＰＤ－Ｌ１の結合をブロックする。本明細書で提供される方法において使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合断片は、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列はＷＯ／２０１６／０６２７２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含む重鎖；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0110】

例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ／２０１６／０６２７２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）および／またはＷＯ／２０１６／０６２７２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）を含む。

【0111】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0112】

一実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのアベルマブまたはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含む重鎖および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0113】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0114】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための、３Ｇ１０またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0115】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１０Ａ５またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0116】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための５Ｆ８またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0117】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0118】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0119】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための７Ｈ１またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0120】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0121】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0122】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１３／０３０９２５０号およびＷＯ２００７／００５８７４号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合性フラグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0123】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0124】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための１Ｆ４またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0125】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0126】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための３Ｂ６またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0127】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１４／００４４７３８号およびＷＯ２０１２／１４５４９３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合性フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0128】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号およびＷＯ２０１０／０３６９５９号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４～３８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８）；および／またはＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９～４２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２）を含む。

【0129】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４）を含む。

【0130】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６）を含む。

【0131】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７）を含む。

【0132】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９）を含む。

【0133】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０８）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０）を含む。

【0134】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１の誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）を含む。

【0135】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴの誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）を含む。

【0136】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、およびＵＳ２０１４／０３５６３５３号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴの誘導体、またはその断片を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）および／またはＷＯ２０１１／０６６３８９号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）を含む。

【0137】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１６／０６１１４２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖の誘導体：ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２：（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３）；および／またはＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖の誘導体：ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１）；ＷＯ２０１６／０６１１４２号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２）を含む。

【0138】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１６／０２２６３０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖の誘導体：ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４）；および／またはＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖の誘導体：ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９１）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５）；ＷＯ２０１６／０２２６３０号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６）を含む。

【0139】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１５／１１２９００号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、５０、８２、および８６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖の誘導体：ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９９）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００）；および／またはＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖の誘導体：ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０７）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０８）；ＷＯ２０１５／１１２９００号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９）を含む。

【0140】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＷＯ２０１０／０７７６３４号およびＵＳ８，２１７，１４９号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＷＯ２０１０／０７７６３４号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含む重鎖領域の誘導体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０）および／またはＷＯ２０１０／０７７６３４号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の誘導体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１）を含む。

【0141】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１２００３９９０６号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示される、ＣＮＣＭ寄託番号、ＣＮＣＭＩ－４１２２、ＣＮＣＭＩ－４０８０およびＣＮＣＭＩ－４０８１下でアクセス可能なハイブリドーマから入手可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか一つの誘導体を含む。

【0142】

一実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、ＵＳ８，９０７，０６５号およびＷＯ２００８／０７１４４７号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示されるＰＤ－Ｌ１に向けられるＶＨＨの誘導体を含む。例示的な実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９４～３９９を含む：ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１３）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１５）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１６）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１７）。

【0143】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２に向けられる１つ以上のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する１つ以上のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、１つ以上の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質を含む。様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、低親和性でＰＤ－Ｌ２に結合する第１のターゲティング部分を含む。

【0144】

一実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、ＵＳ８，９０７，０６５号およびＷＯ２００８／０７１４４７号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される、ＰＤ－Ｌ２に向けられるＶＨＨの誘導体を含む。例示的な実施形態では、ＰＤ－Ｌ２に対するＶＨＨは、ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４９～４５５：ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１８）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１９）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２０）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２１）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２３）；ＵＳ８，９０７，０６５号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４）を含む。

【0145】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号およびＷＯ２０１０／０３６９５９号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で開示される、抗ＰＤ－Ｌ２抗体のいずれか一つの誘導体を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される方法において使用するための抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３～４７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖の誘導体：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２７）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２８）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２９）；および／またはＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８～５１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖の誘導体：ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２）；ＵＳ２０１１／０２７１３５８号のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３）を含む。

【0146】

様々な実施形態では、発明のターゲティング部分は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的にする配列を含んでよく、これは、本明細書で開示される配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一である（例えば、本明細書で開示される配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）。

【0147】

様々な実施形態では、発明のターゲティング部分は、本明細書で開示されるＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的にする、重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列の任意の組み合わせを含み得る。

【0148】

ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するまたは標的にする、追加の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質は、ＷＯ２０１１／０６６３８９号、ＵＳ２００８／００２５９８０号、ＵＳ２０１３／００３４５５９号、ＵＳ８，７７９，１０８号、ＵＳ２０１４／０３５６３５３号、ＵＳ８，６０９，０８９号、ＵＳ２０１０／０２８３３０号、ＵＳ２０１２／０１１４６４９号、ＷＯ２０１０／０２７８２７号、ＷＯ２０１１／０６６３４２号、ＵＳ８，９０７，０６５号、ＷＯ２０１６／０６２７２２号、ＷＯ２００９／１０１６１１号、ＷＯ２０１０／０２７８２７号、ＷＯ２０１１／０６６３４２号、ＷＯ２００７／００５８７４号、ＷＯ２００１／０１４５５６号、ＵＳ２０１１／０２７１３５８号、ＷＯ２０１０／０３６９５９号、ＷＯ２０１０／０７７６３４号、ＵＳ８，２１７，１４９号、ＵＳ２０１２／００３９９０６号、ＷＯ２０１２／１４５４９３号、ＵＳ２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、ＵＳ２０１４００４４７３８号、ＷＯ２００９／０８９１４９号、ＷＯ２００７／００５８７号、ＷＯ２０１６０６１１４２号、ＷＯ２０１６，０２２６３号、ＷＯ２０１０／０７７６３４号、およびＷＯ２０１５／１１２９００号（その全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）において開示される。

【0149】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞上のチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞、例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１に向けられる第２のターゲティング部分を有する。別の実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0150】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＤ８へのターゲティングにより媒介される、Ｔ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ８に向けられるターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0151】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は（ｉ）例えば、ＣＤ４へのターゲティングにより媒介されるＴ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ４に向けられるターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0152】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＤ３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ９、ＣＤ７０、ＣＤ１０３、または１つ以上の免疫チェックポイントマーカーへのターゲティングにより媒介される、Ｔ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞上のＣＤ３に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0153】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＰＤ－１へのターゲティングにより媒介される、Ｔ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0154】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）へのターゲティングにより媒介される、Ｂ細胞に向けられるターゲティング部分；および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0155】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ７０へのターゲティングにより媒介される、Ｂ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0156】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＤ２０へのターゲティングにより媒介される、Ｂ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞上のＣＤ２０に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0157】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－εＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ネクチン－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄ、またはＵＬＢＰ－３へのターゲティングにより媒介される、ＮＫ細胞に向けられるターゲティング部分；および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0158】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、Ｋｉｒ１α、ＤＮＡＭ－１またはＣＤ６４へのターゲティングにより媒介される、ＮＫ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0159】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＫＩＲ１へのターゲティングにより媒介される、ＮＫ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞上のＫＩＲ１に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0160】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＴＩＧＩＴまたはＫＩＲ１へのターゲティングにより媒介される、ＮＫ細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞上のＴＩＧＩＴに向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0161】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ－９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－ＰＩ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０、４－アミノ－１，８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎα４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、ランゲリン、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ＲＩ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、Ｃ１ｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／シグレック－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬＩ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、オステオアクチビンＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、デクチン－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、またはバニロイドＲ１へのターゲティングにより媒介される、樹状細胞に向けられるターゲティング部分；および（ｉｉ）腫瘍細胞または免疫細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0162】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ－９Ａ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＣＤ６４、ＣＬＥＣ４Ａ、またはＤＥＣ２０５へのターゲティングにより媒介される、樹状細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＣＬＥＣ９Ａに向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0163】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ９Ａへのターゲティングにより媒介される、樹状細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＣＬＥＣ９Ａに向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0164】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＸＣＲ１へのターゲティングにより媒介される、樹状細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＸＣＲ１に向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0165】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＲＡＮＫへのターゲティングにより媒介される、樹状細胞に向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞上のＲＡＮＫに向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0166】

非限定的例として、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ｃｏｎｍｍｏｎβ鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ラテキシン、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、シグレック－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲＩ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－１ＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ－１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｃｏｍｍｏｎ β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、Ｃ１ｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦＲ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦＲ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－１、ＩＬ－６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲ１／ＩＬ－８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３、またはＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１へのターゲティングにより媒介される、単球／マクロファージに向けられるターゲティング部分；および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0167】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、Ｂ７－Ｈ１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、またはマクロファージマンノース受容体ＣＤ２０６へのターゲティングにより媒介される、単球／マクロファージに向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0168】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）例えば、ＳＩＲＰ１ａへのターゲティングにより媒介される、単球／マクロファージに向けられるターゲティング部分、および（ｉｉ）腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分を、本明細書で記載される改変された（例えば、変異体）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。一実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージ細胞上のＳＩＲＰ１ａに向けられるターゲティング部分、および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられる第２のターゲティング部分を有する。

【0169】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、およびＡ２ａＲの１つ以上に向けられる１つ以上のターゲティング部分を有する。

【0170】

いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、同じまたは異なる免疫細胞に向けられる２つ以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはそれらのサブセットから選択される免疫細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および（ｉｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはそれらのサブセットから選択される同じか別の免疫細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を、本明細書で記載される改変（例えば、変異）シグナル伝達物質のいずれか（例えば、改変ＩＦＮ－γ）と共に有する。

【0171】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および同じか別のＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質はＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＢ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびマクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｔ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。例えば、例示的な実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的な実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣＤ３に対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的な実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＰＤ－１に対するターゲティング部分を含み得る。

【0172】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および同じか別のＢ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびマクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、Ｂ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。

【0173】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および同じか別の樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＢ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびマクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、樹状細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。

【0174】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分、および同じか別のマクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＢ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージに対する１つ以上のターゲティング部分、および樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、マクロファージに対する１つ以上のターゲティング部分、およびＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。

【0175】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、および同じか別のＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＴ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分、およびＢ細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、およびマクロファージに向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、ＮＫ細胞に対する１つ以上のターゲティング部分、および樹状細胞に向けられる１つ以上のターゲティング部分を含む。

【0176】

１つの実施形態では、本キメラタンパク質は、腫瘍細胞に向けられるターゲティング部分、および同じかまたは異なる腫瘍細胞に向けられる第２のターゲティング部分を含む。そのような実施形態では、ターゲティング部分は本明細書で記載される腫瘍抗原のいずれかに結合し得る。

【0177】

様々な実施形態では、キメラコンストラクトは、ＷＯ２０１３／１０７７９１号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において記載されるように構築される。実施例材料＆方法および実施例１を参照されたい。

【0178】

様々な実施形態では、キメラコンストラクトの機能キャラクタリゼーションは、ＷＯ２０１３／１０７７９１号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）の実施例２～１０におけるように実施される。

【0179】

ターゲティング部分フォーマット
様々な実施形態では、本キメラタンパク質のターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的に結合できるタンパク質に基づく作用物質である。一実施形態では、ターゲティング部分は抗体を含む。様々な実施形態では、抗体は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む全長多量体タンパク質である。各重鎖は１つの可変領域（例えば、Ｖ_Ｈ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ_１、ＣＨ_２およびＣＨ_３）を含み、各軽鎖は１つの可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つの定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。可変領域は抗体の特異性を決定する。各可変領域は、４つの比較的保存されるフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接される相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる３つの超可変領域を含む。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれる、３つのＣＤＲは抗体結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。

【0180】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗体誘導体もしくはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質のターゲティング部分は、米国特許第または特許公開第ＵＳ７，４１７，１３０号、ＵＳ２００４／１３２０９４号、ＵＳ５，８３１，０１２号、ＵＳ２００４／０２３３３４号、ＵＳ７，２５０，２９７号、ＵＳ６，８１８，４１８号、ＵＳ２００４／２０９２４３号、ＵＳ７，８３８，６２９号、ＵＳ７，１８６，５２４号、ＵＳ６，００４，７４６号、ＵＳ５，４７５，０９６号、ＵＳ２００４／１４６９３８号、ＵＳ２００４／１５７２０９号、ＵＳ６，９９４，９８２号、ＵＳ６，７９４，１４４号、ＵＳ２０１０／２３９６３３号、ＵＳ７，８０３，９０７号、ＵＳ２０１０／１１９４４６号、および／またはＵＳ７，１６６，６９７号（その内容はこれにより、その全体が参照により組み込まれる）に記載される、シングルドメイン抗体、組換え重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみ抗体（ＶＮＡＲ）、微小タンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；アルテラーゼ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エヴィボディ；フィノマー、アルマジロリピートタンパク質、クニッツドメイン、アヴィマ、アトリマ、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ；ペプボディ；ワクチボディ、ユニボディ；アフィマー、デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ペプチド模倣分子、または合成分子である。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ． ２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ； ３（３）： ３１０－３１７もまた参照されたい。

【0181】

１つの実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、らくだ、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来のＶＨＨなどの、シングルドメイン抗体、または設計ＶＨＨを含む。ＶＨＨは、天然重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む抗体由来治療タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くらくだ由来の完全機能抗体に基づく。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＹまたはＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの商標で市販される。

【0182】

一実施形態では、ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨはヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。

【0183】

いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹは一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＹは、一特異性、二特異性、または三特異性などの一特異性または多特異性である。例示的な完全ヒトＶ_Ｈドメイン、例えばＨＵＭＡＢＯＤＩＥＳは、例えば、ＷＯ２０１６／１１３５５５号およびＷＯ２０１６／１１３５５７号（その全開示内容は参照により組み込まれる）において記載される。

【0184】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質のターゲティング部分は、細胞受容体に対する天然リガンドなどの、細胞受容体に特異的に結合できるタンパク質に基づく作用物質である。様々な実施形態では、細胞受容体は１つ以上の免疫細胞上で見出され、それらは、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはそれらのサブセットを含むが、限定されない。いくつかの実施形態では、細胞受容体は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはそれらのサブセット上で見出される。

【0185】

いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ケモカインなどの天然リガンドである。本発明のキメラタンパク質に含まれ得る例示的なケモカインとしては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＬＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１、ＨＣＣ－４、およびＬＤＧＦ－ＰＢＰが挙げられるが、それらに限定されない。例示的な実施形態では、ターゲティング部分は、樹状細胞受容体ＸＣＲ１を認識し、かつこれに結合するケモカインであるＸＣＬ１であってよい。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１であり、それは、ＣＣＲ８を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２であり、それは、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ３であり、それは、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ４であり、それは、ＣＣＲ１またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ５であり、それは、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３またはＣＣＲ４またはＣＣＲ５を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ６であり、それは、ＣＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ７であり、それは、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ８であり、それは、ＣＣＲ１またはＣＣＲ２またはＣＣＲ２ＢまたはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ９であり、それは、ＣＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１０であり、それは、ＣＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１１であり、それは、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１３であり、それは、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１４であり、それは、ＣＣＲ１またはＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１５であり、それは、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１６であり、それは、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、またはＣＣＲ８を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１７であり、それは、ＣＣＲ４を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ１９であり、それは、ＣＣＲ７を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２０であり、それは、ＣＣＲ６を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２１であり、それは、ＣＣＲ７を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２２であり、それは、ＣＣＲ４を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２３であり、それは、ＣＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２４であり、それは、ＣＣＲ３を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２５であり、それは、ＣＣＲ９を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２６であり、それは、ＣＣＲ３を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２７であり、それは、ＣＣＲ１０を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＣＬ２８であり、それは、ＣＣＲ３またはＣＣＲ１０を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１であり、それは、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ２であり、それは、ＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ３であり、それは、ＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ４であり、それは、ＣＸＣＲ３Ｂを認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ５であり、それは、ＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ６であり、それは、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ８であり、それは、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ９であり、それは、ＣＸＣＲ３を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１０であり、それは、ＣＸＣＲ３を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１１であり、それは、ＣＸＣＲ３またはＣＸＣＲ７を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１２であり、それは、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ７を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１３であり、それは、ＣＸＣＲ５を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸＣＬ１６であり、それは、ＣＸＣＲ６を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＬＤＧＦ－ＰＢＰであり、それは、ＣＸＣＲ２を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＸＣＬ２であり、それは、ＸＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。別の例示的な実施形態では、ターゲティング部分はＣＸ３ＣＬ１であり、それは、ＣＸ３ＣＲ１を認識し、これに結合するケモカインである。

【0186】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、ターゲティング部分を様々な組み合わせで含む。例示的な実施形態では、本キメラタンパク質は２つのターゲティング部分を含んでよく、ここで、両方のターゲティング部分は抗体またはその誘導体である。別の例示的な実施形態では、本キメラタンパク質は、２つのターゲティング部分を含んでよく、ここで、両方のターゲティング部分は細胞受容体に対する天然リガンドである。さらなる例示的な実施形態では、本キメラタンパク質は、２つのターゲティング部分を含んでよく、ここで、ターゲティング部分の１つは抗体またはその誘導体であり、他のターゲティング部分は細胞受容体に対する天然リガンドである。

【0187】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）を機能的に調節する（非制限的に、部分的にまたは完全に中和する）、例えば、抗原が有する生物学的効果を実質的に阻害し、低減し、または中和する。例えば、様々な認識ドメインは、例えば、腫瘍を有する患者の、免疫系を能動的に抑制する、または抑制する能力を有する１つ以上の腫瘍抗原に向けられ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、免疫阻害シグナル、例えば、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ４、ＧＩＴＲ、ガレクチン－９、ＨＶＥＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＳＩＲＰα、ＩＣＯＳ、ＣＤ１７２ａ、およびＴＭＩＧＤ２の１つ以上を機能的に調節する（例えば、チェックポイント阻害剤）。例えば、いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、免疫阻害シグナルの伝達、非限定的例として、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２とのＰＤ－１の結合および／またはＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１つ以上とのＣＴＬＡ－４の結合、を破壊する、ブロックする、低減する、および／または阻害するように操作される。

【0188】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは、関心のある標的（例えば、抗原、受容体）を結合するが機能的に調節せず、例えば、認識ドメインは、結合抗体であり、またはこれに類似する。例えば、様々な実施形態では、認識ドメインは、抗原または受容体を単に標的にするが、抗原または受容体が有する生物学的効果を実質的に阻害せず、低減せず、または機能的に調節しない。例えば、（例えば、例として、完全抗体と比べて）上記のより小さな抗体フォーマットのいくつかは、アクセスが困難なエピトープを標的にし、より大きな範囲の特異的結合位置を提供する能力を有する。様々な実施形態では、認識ドメインは、その生物活性に重要な抗原または受容体部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に分離されたエピトープを結合する。

【0189】

そのような非中和結合は、本発明の様々な実施形態において用途があり、本キメラタンパク質が、活性免疫細胞を必要部位にエフェクター抗原、例えば本明細書で記載されるもののいずれかを介して直接的にまたは間接的に動員するために使用される方法が挙げられる。例えば、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、腫瘍を低減または排除する方法において、ＣＤ８を介して細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍細胞に直接的にまたは間接的に動員するために使用され得る（例えば、キメラタンパク質は、抗ＣＤ８認識ドメインおよび腫瘍抗原に向けられる認識ドメインを含み得る）。そのような実施形態では、ＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を直接的にまたは間接的に動員するがＣＤ８活性を機能的に調節しないことが望ましい。それどころか、これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を低減するまたは排除する効果の重要な要素である。さらなる例として、腫瘍を低減するまたは排除する様々な方法において、本キメラタンパク質は、ＣＬＥＣ９Ａを介して樹状細胞（ＤＣ）を直接的にまたは間接的に動員するために使用される（例えば、キメラタンパク質は、抗ＣＬＥＣ９Ａ認識ドメインおよび腫瘍抗原に向けられる認識ドメインを含み得る）。そのような実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａ発現ＤＣを直接的にまたは間接的に動員するがＣＬＥＣ９Ａ活性を機能的に調節しないことが望ましい。それどころか、これらの実施形態では、ＣＬＥＣ９Ａシグナル伝達は腫瘍を低減するまたは排除する効果の重要な要素である。

【0190】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは、例えば、樹状細胞上の、ＸＣＲ１に結合する。例えば、認識ドメインは、いくつかの実施形態では、ＸＣＬ１の全てもしくは一部または非中和抗ＸＣＲ１剤を含む。

【0191】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは免疫調節抗原（例えば、免疫刺激または免疫阻害）に結合する。様々な実施形態では、免疫調節抗原は、４－１ＢＢ、ＯＸ－４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ－４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの１つ以上である。様々な実施形態では、そのような免疫刺激抗原は、腫瘍細胞上で発現される。様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは、そのような免疫刺激抗原を結合するが機能的に調節せず、そのため、それらの潜在的な腫瘍を低減するまたは排除する能力の低減または損失なしに、これらの抗原を発現する細胞の動員を可能にする。

【0192】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質の認識ドメインは、中和活性を有する２つの認識ドメインを含む、または非中和（例えば、結合）活性を有する２つの認識ドメインを含む、または中和活性を有する１つの認識ドメインおよび非中和（例えば、結合）活性を有する１つの認識ドメインを含むキメラタンパク質という状況下にあり得る。

【0193】

追加のシグナル伝達物質
１つの態様では、本発明は、本明細書で記載される改変ＩＦＮ－γに加えて、１つ以上のシグナル伝達物質（例えば、免疫調節剤）を含むキメラタンパク質を提供する。例示的な実施形態では、キメラタンパク質は、本明細書で記載される改変ＩＦＮ－γに加えて、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多いシグナル伝達物質を含み得る。様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、その受容体の１つ以上に対して低減された親和性および／または生物活性を有するように改変され、これは活性（受容体活性化作用または拮抗作用を含む）の減弱を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達またはキメラタンパク質の望ましくない隔離を防ぐ。

【0194】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、その野生型形態で拮抗的であり、その拮抗活性を減弱させる１つ以上の突然変異を有する。様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１つ以上の突然変異のため拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され、そのような変換されたシグナル伝達物質はまた、任意で、その拮抗活性を減弱させる１つ以上の突然変異を有する（例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において記載される）。

【0195】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンの改変バージョンから選択される。そのようなサイトカイン、増殖因子、およびホルモンの例示的な例としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：リンホカイン、モノカイン、伝統的なポリペプチドホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子－αおよび腫瘍壊死因子－β；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経増殖因子、例えばＮＧＦ－α；血小板－増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β；インスリン様増殖因子－Ｉおよび－ＩＩ；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、例として、インターフェロン－α、インターフェロン－βおよびインターフェロン－γ（およびＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型インターフェロン）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；および顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）例として、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、およびＩＬ－１８など；腫瘍壊死因子、例として、ＴＮＦ－αまたはＴＮＦ－βなど；および他のポリペプチド因子、例えば、ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む。本明細書では、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンは、天然源から得られたタンパク質、または組換え細菌、真核生物または哺乳類細胞培養系から産生されたタンパク質および天然配列サイトカインの生物的に活性な等価物を含む。

【0196】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定はされないが、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－β、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子、例えばインスリン様増殖因子－Ｉおよび－ＩＩ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ヘレグリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）から選択される増殖因子の改変バージョンである。

【0197】

一実施形態では、増殖因子は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）の改変バージョンである。例示的なＦＧＦとしては、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、マウスＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、およびＦＧＦ２３が挙げられるが、それらに限定されない。

【0198】

一実施形態では、増殖因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の改変バージョンである。例示的なＶＥＧＦとしては、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、およびＰＧＦならびにそれらのアイソフォーム（ＶＥＧＦ－Ａの様々なアイソフォーム、例えば、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１２１ｂ、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１６５ｂ、ＶＥＧＦ_１８９、およびＶＥＧＦ_２０６を含む）が挙げられるが、それらに限定されない。

【0199】

一実施形態では、増殖因子は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）の改変バージョンである。例示的なＴＧＦとしては、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－βならびにそのサブタイプ（ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３を含むＴＧＦ－βの様々なサブタイプを含む）が挙げられるが、それらに限定されない。

【0200】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定はされないが、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、アンドロゲン、エストロゲン、甲状腺－刺激ホルモン、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、オキシトシン、サイロトロピン－放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、コルチコトロピン－放出ホルモン、ソマトスタチン、ドパミン、メラトニン、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、アドレナリン、ノルアドレナリン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、アミリン、カルシトリオール、カルシフェロール、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、ニューロペプチドＹ、グレリン、ＰＹＹ３－３６、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、レプチン、トロンボポエチン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、およびアンジオテンシノーゲンから選択されるホルモンの改変バージョンである。

【0201】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、免疫調節剤、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１つ以上である。

【0202】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、インターロイキンであり、例えばＩＬ－１；ＩＬ－２；ＩＬ－３；ＩＬ－４；ＩＬ－５；ＩＬ－６；ＩＬ－７；ＩＬ－８；ＩＬ－９；ＩＬ－１０；ＩＬ－１１；ＩＬ－１２；ＩＬ－１３；ＩＬ－１４；ＩＬ－１５；ＩＬ－１６；ＩＬ－１７；ＩＬ－１８；ＩＬ－１９；ＩＬ－２０；ＩＬ－２１；ＩＬ－２２；ＩＬ－２３；ＩＬ－２４；ＩＬ－２５；ＩＬ－２６；ＩＬ－２７；ＩＬ－２８；ＩＬ－２９；ＩＬ－３０；ＩＬ－３１；ＩＬ－３２；ＩＬ－３３；ＩＬ－３５；ＩＬ－３６またはその断片、バリアント、類似体、もしくはファミリー－メンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能性サイトカインの群である。知られている機能としては、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖、好中球およびＴリンパ球の走化性、および／またはインターフェロンの阻害を刺激することが挙げられる。インターロイキン活性は、当技術分野で知られているアッセイを使用して決定できる：Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ． １９８７， ｐｐ． ２２１－２２５；およびＯｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ （１９８９） Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １， １４－２０。

【0203】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ型インターフェロンなどのインターフェロンの改変バージョンである。例示的なインターフェロンとしては、例えば、インターフェロン－α、インターフェロン－β、別のインターフェロン－γ、インターフェロンκ、インターフェロンε、インターフェロンτ、およびインターフェロンωが挙げられる。

【0204】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）またはＴＮＦファミリーにおけるタンパク質、例えば、限定はされないが、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＬＴ－β、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬ、の改変バージョンである。

【0205】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１つ以上の突然変異を有するシグナル伝達物質の改変された（例えば、変異体）型である。様々な実施形態では、突然変異は、シグナル伝達物質の未改変のまたは未変異の、すなわち、野生型の形態と比べて（例えば、野生型形態対改変（例えば、変異）形態で同じシグナル伝達物質を比較して）、１つ以上の減弱された活性、例えば１つ以上の低減された結合親和性、低減された内在活性、および低減された特定の生理活性、を有する改変シグナル伝達物質を可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を減弱または低減させる突然変異は、結合または活性を実質的に低減または消失させる突然変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を減弱または低減させる突然変異は、結合または活性を実質的に低減または消失させる突然変異とは異なる。その結果として、様々な実施形態では、突然変異は、未変異の、すなわち、野生型のシグナル伝達物質と比べて（例えば、野生型形態対改変（例えば、変異）形態で同じシグナル伝達物質を比較して）、より安全な、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有するシグナル伝達物質を可能にする。

【0206】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、その受容体の１つ以上に対するその結合親和性または活性を低減させる、１つ以上の突然変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または消失させる、１つ以上の突然変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により提供される活性は、受容体での受容体活性化作用（例えば、治療部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質はその受容体を活性化できる。そのような実施形態では、突然変異は、受容体で低減または消失された活性化活性を有する改変シグナル伝達物質をもたらす。例えば、突然変異は、低減された活性化シグナルを標的細胞に送達する改変シグナル伝達物質をもたらし得、または活性化シグナルが消失され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により提供される活性は、受容体での拮抗作用（例えば、治療部位での細胞効果のブロッキングまたは減衰）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズまたは阻害し得る。これらの実施形態では、突然変異は、受容体で低減または消失されたアンタゴナイズ活性を有する改変シグナル伝達物質をもたらす。例えば、突然変異は、低減された阻害シグナルを標的細胞に送達する改変シグナル伝達物質をもたらし得、または阻害シグナルが消失され得る。様々な実施形態では、シグナル伝達物質は、１つ以上の突然変異のため拮抗的であり、例えば、作動性シグナル伝達物質は拮抗的シグナル伝達物質に変換され（例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）に記載される）、そのように変換されたシグナル伝達物質はまた、任意で、その受容体の１つ以上に対するその結合親和性または活性を低減させる、またはその受容体の１つ以上に対する結合親和性または活性を実質的に低減または消失させる、１つ以上の突然変異を有する。

【0207】

いくつかの実施形態では、受容体で低減された親和性および／または生物活性は、ターゲティング部分の１つ以上の付着により回復可能である。他の実施形態では、受容体で低減された親和性および／または生物活性は、ターゲティング部分の１つ以上の活性により、実質的に回復可能でない。

【0208】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、標的細胞上で活性である。なぜならターゲティング部分（複数可）は、実質的な活性化に必要とされる損失した／不十分な結合（例えば、限定なしに、および／または結合活性）を補うからである。様々な実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療活性部位への途中で実質的に不活性であり、特異的に標的にされる細胞型上で実質的にその効果を有し、これは望まれない副作用を大きく低減する。

【0209】

いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１つの受容体（すなわち、治療的受容体）に対する結合または親和性を減弱または低減させる１つ以上の突然変異、および第２の受容体での結合または活性を実質的に低減または消失させる１つ以上の突然変異を含み得る。そのような実施形態では、これらの突然変異は、同じかまたは異なる位置に存在し得る（すなわち、同じ突然変異または複数の突然変異）。いくつかの実施形態では、１つの受容体での結合および／または活性を低減させる突然変異（複数可）は、別の受容体で実質的に低減または消失させる突然変異（複数可）とは異なる。いくつかの実施形態では、１つの受容体での結合および／または活性を低減させる突然変異（複数可）は、別の受容体で実質的に低減または消失させる突然変異（複数可）と同じである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、治療的受容体で結合および／または活性を減弱させそれによってより制御された、的確な治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べ）を可能にする突然変異および別の受容体で結合および／または活性を実質的に低減または消失させそれによって副作用を低減させる（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べ）突然変異の両方を有する、改変シグナル伝達物質を有する。

【0210】

いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または消失は、ターゲティング部分により実質的に回復可能でない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または消失は、ターゲティング部分により回復可能である。様々な実施形態では、第２の受容体で結合または活性を実質的に低減または消失させることはまた、他の受容体により媒介される有害効果を防止できる。その代わりに、または加えて、他の受容体での結合または活性を実質的に低減または消失させると、治療効果が改善される。なぜなら治療的キメラタンパク質の治療作用部位からの隔離が低減または排除されるからである。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補う本キメラタンパク質の高い用量の必要をなくす。用量を低減するそのような能力はさらに、副作用のより低い可能性を提供する。

【0211】

様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体の１つ以上に対し、低減された、実質的に低減された、または消失された親和性、例えば、結合（例えば、Ｋ_Ｄ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、Ｋ_Ａおよび／またはＥＣ_５０として測定可能）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、Ｋ_Ｉおよび／またはＩＣ_５０として測定可能）を有するようにする、１つ以上の突然変異を含む。様々な実施形態では、シグナル伝達物質の受容体での低減された親和性は、活性（受容体活性化作用または拮抗作用を含む）の減弱を可能にする。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質と比べて、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％－２０％、約２０％－４０％、約５０％、約４０％－６０％、約６０％－８０％、約８０％－１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質と比べて、少なくとも約２倍低く、約３倍低く、約４倍低く、約５倍低く、約６倍低く、約７倍低く、約８倍低く、約９倍低く、少なくとも約１０倍低く、少なくとも約１５倍低く、少なくとも約２０倍低く、少なくとも約２５倍低く、少なくとも約３０倍低く、少なくとも約３５倍低く、少なくとも約４０倍低く、少なくとも約４５倍低く、少なくとも約５０倍低く、少なくとも約１００倍低く、少なくとも約１５０倍低く、または約１０～５０倍低く、約５０～１００倍低く、約１００～１５０倍低く、約１５０～２００倍低く、または２００超倍低い。

【0212】

キメラタンパク質が１つの受容体での結合を低減させかつ第２の受容体での結合を実質的に低減または消失させる突然変異を有する実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または消失よりも小さい。いくつかの実施形態では、１つの受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的な低減または消失よりも約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。様々な実施形態では、実質的な低減または消失は、減弱または低減よりも大きな結合親和性および／または生物活性の低減を指す。

【0213】

様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質と比べて、シグナル伝達物質の内在活性を約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減させる１つ以上の突然変異を含む。

【0214】

様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が本明細書で記載されるサイトカイン、増殖因子、およびホルモンのいずれか一つの受容体に対して低減された親和性および／または生物活性を有するようにする、１つ以上の突然変異を含む。

【0215】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質がその（それらの）受容体（複数可）に対するターゲティング部分（複数可）の結合親和性よりも低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにする、１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性差は、同じ細胞上の、シグナル伝達物質／受容体とターゲティング部分／受容体の間である。いくつかの実施形態では、この結合親和性差は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が局所的な、的確な効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の基礎にあるオフターゲット効果を最小に抑えることを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低く、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低く、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍である。

【0216】

受容体結合活性は、当技術分野で知られている方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、結合データのスキャッチャードプロット分析およびコンピュータ－フィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ， １９４９）により、または、Ｂｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ． （１９９３）（その全ての全内容がこれにより参照により組み込まれる）により記載される流れ条件下での反射干渉分光法により評価され得る。

【0217】

本明細書で記載される野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当技術分野でよく知られている。したがって、様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、本明細書で記載されるシグナル伝達物質の公知の野生型アミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0218】

様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、本明細書で開示される配列のいずれかと少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。

【0219】

様々な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、１つ以上のアミノ酸突然変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸突然変異は、置換、挿入、欠失、およびトランケーションから独立して選択され得る。

【0220】

いくつかの実施形態では、アミノ酸突然変異はアミノ酸置換であり、本明細書で記載される保存的および／または非保存的置換を含み得る。

【0221】

本明細書では、追加の改変シグナル伝達物質は、１つ以上の受容体での親和性および／または活性に影響する突然変異を有する。様々な実施形態では、治療的受容体、例えば、これを通して所望の治療効果が媒介される（例えば、受容体活性化作用または拮抗作用）受容体での低減された親和性および／または活性が存在する。様々な実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、これを通して所望の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱の結果として）受容体での親和性および／または活性を実質的に低減または消失させる突然変異を有する。任意の改変シグナル伝達物質、例えば、本明細書で記載されるサイトカイン、増殖因子、およびホルモンの１つの受容体は、当技術分野で知られている。

【0222】

受容体での低減された親和性および／または活性（例えば、作動性）を提供する例示的な突然変異は、ＷＯ２０１３／１０７７９１号（例えば、インターフェロンに関して）、ＷＯ２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、およびＷＯ２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）（その各々の全内容はこれにより参照により組み込まれる）において見出される。治療的受容体で低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的）を提供する例示的な突然変異は、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において見出される。

【0223】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質がＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーにおける受容体、ＴＧＦ－β受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーにおける受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーにおける受容体に対して低減された親和性および／または活性を有するようにする、１つ以上の突然変異を含む。

【0224】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野で知られており、ＩＬ２（β－サブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、および、また、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体が挙げられるが、それらに限定されない。例示的なＩ型サイトカイン受容体としては、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられるが、それらに限定されない。

【0225】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は異種サブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。受容体のこのファミリーとしては、インターフェロン－α、インターフェロン－βおよびインターフェロン－γ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、ならびに組織因子に対する受容体が挙げられるが、それらに限定されない。例示的なＩＩ型サイトカイン受容体としては、ＩＦＮ－α受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮ－β受容体、ＩＦＮ－γ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられるが、それらに限定されない。

【0226】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通構造を有しシグナル伝達のためにＧ－タンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられるが、それらに限定されない。例示的なケモカイン受容体としては、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられるが、それらに限定されない。

【0227】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を生成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。例示的な腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーは、下記を含む：ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、オステオプロテゲリン（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経増殖因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。

【0228】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦ－β受容体である。ＴＧＦ－β受容体は、単回通過セリン／スレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦ－β受容体としては、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられるが、それらに限定されない。

【0229】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーにおける受容体は、免疫グロブリンと構造相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーにおける受容体としては、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられるが、それらに限定されない。

【0230】

様々な実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼスーパーファミリーにおける受容体は当技術分野でよく知られている。約５８の公知の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在し、２０のサブファミリーに分類される。チロシンキナーゼスーパーファミリーにおける受容体としては、ＦＧＦ受容体およびそれらの様々なアイソフォーム、例えばＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられるが、それらに限定されない。

【0231】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、インターフェロンβである。そのような実施形態では、改変インターフェロンβ作用物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンβ作用物質は、ＩＦＮ－α／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0232】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、別のインターフェロンγである。そのような実施形態では、改変インターフェロンγ作用物質もまた、インターフェロン－γ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、インターフェロン－γ受容体１および／またはインターフェロン－γ受容体２サブユニットに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ作用物質は、インターフェロン－γ受容体、すなわち、インターフェロン－γ受容体１および／またはインターフェロン－γ受容体２サブユニットに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0233】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理的だけでなく病理学的な血管新生においても主要な役割を果たす強力な増殖因子であり、血管透過性を制御し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞上で増殖因子として作用できる。追加の機能としては、とりわけ、マクロファージ系統における細胞移動および内皮細胞の刺激が挙げられる。増殖因子のＶＥＧＦファミリーのいくつかのメンバー、ならびに少なくとも３つの受容体（ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、およびＶＥＧＦＲ－３）が存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、１を超えるＶＥＧＦＲ型を結合し活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ－ＡはＶＥＧＦＲ－１および－２を結合し、一方、ＶＥＧＦ－ＣはＶＥＧＦＲ－２および－３を結合できる。ＶＥＧＦＲ－１および－２活性化は血管新生を制御し、一方ＶＥＧＦＲ－３活性化はリンパ脈管新生と関連する。主要血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ－２の活性化により生成される。ＶＥＧＦＲ－１活性化は、おそらく血管新生における負の役割と関連することが報告されている。ＶＥＧＦＲ－１シグナル伝達は、骨髄由来ＶＥＧＦＲ－１陽性細胞（骨における転移前微小環境の形成に寄与）を介するインビボでの腫瘍の進行に重要であることもまた報告されている。ＶＥＧＦ－Ａ指向／中和治療抗体に基づくいくつかの療法が、主として、血管新生に頼る様々なヒト腫瘍の治療において使用するために開発されている。しかし、これらは副作用がないわけではない。これらが一般的な、非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として動作することを考えると、これは驚きではない。よって、ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ）／ＶＥＧＦＲ－２阻害を特定の標的細胞（例えば、腫瘍脈管構造内皮細胞）に制限することは望ましいであろう。

【0234】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＦＧ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－Ｅおよび、ＶＥＧＦ_１２１、ＶＥＧＦ_１２１ｂ、ＶＥＧＦ_１４５、ＶＥＧＦ_１６５、ＶＥＧＦ_１６５ｂ、ＶＥＧＦ_１８９、およびＶＥＧＦ_２０６などのＶＥＧＦ－Ａの様々なアイソフォームを含む、そのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対して低減された親和性および／または活性、および／またはＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態は、例えば、創傷治癒法または虚血関連疾患の治療において用途を見出す（理論に縛られることは望まないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ－２の効果により媒介される）。様々な実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合（これは癌および炎症促進活性に関連する）が回避される。様々な実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）はデコイ受容体として作用し、そのため、この受容体での親和性および／または活性を実質的に低減または消失させ、治療薬の隔離を回避する。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性、および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦはＶＥＧＦ－ＣまたはＶＥＧＦ－Ｄである。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－３に対して低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－３に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0235】

血管新生促進療法はまた、様々な疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）において重要であり、ＶＥＧＦに基づく治療法を含む。ＶＥＧＦＲ－２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞に作用）。ＶＥＦＧＲ－１の活性化は炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を引き起こし、炎症関連血管過多透過性に至らしめ得る。ＶＥＦＧＲ－１の活性化はまた、骨髄関連腫瘍微小環境形成を促進し得る。よって、ＶＥＧＦＲ－２活性化に対し選択的なＶＥＧＦに基づく治療が、この場合望ましいであろう。加えて、例えば、内皮細胞への、細胞特異的ターゲティングが望ましいであろう。

【0236】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対して低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的）を有し、および／または、ＶＥＧＦＲ－１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合するターゲティング部分を介して腫瘍脈管構造内皮細胞へ標的化されると、そのようなコンストラクトは、そのようなマーカー－陽性細胞上で特異的にＶＥＧＦＲ－２活性化を阻害し、一方、途中で、および標的細胞上で（活性が消失された場合）はＶＥＧＦＲ－１を活性化せず、よって、例えば、炎症反応の誘導を排除する。これは、ＶＥＧＦ－Ａ中和療法と比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生療法を提供する。

【0237】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２に対して低減された親和性および／または活性を有し（例えば、作動性）および／または、ＶＥＧＦＲ－１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞へのターゲティングにより、そのようなコンストラクトは、いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１に関連する炎症応答の誘導を引き起こさずに血管新生を促進する。よって、そのようなコンストラクトは、ＶＥＧＦＲ－２ならびにＶＥＧＲ－１の全身活性化により引き起こされる副作用のリスクが実質的に低減された、標的血管新生促進効果を有する。

【0238】

例示的な実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦ_１６５であり、これはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７のアミノ酸配列を有する。

【0239】

別の例示的な実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦ_１６５ｂであり、これはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８８のアミノ酸配列を有する。

【0240】

これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸Ｉ８３での突然変異（例えば、Ｉ８３での置換変異、例えば、Ｉ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、またはＩ８３Ｈ）を有する。理論に縛られることは望まないが、そのような突然変異は、低減された受容体結合親和性をもたらし得ると考えられる。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0241】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦ－αである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、および敗血症性ショックの制御を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは標的細胞上の２つの別個の膜受容体：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広い発現パターンを示し、一方、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で優先的に発現される。非常に異なった生物学的経路が受容体活性化に応答して活性化されるが、いくらかの重なりも存在する。原則として、理論に縛られることは望まないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導と関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化（例えば、ＮＦｋＢ経路の活性化）と関連する。ＴＮＦの投与は全身的に毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかしながら、ＴＮＦＲ２の活性化もまた広範な活性と関連し、ＴＮＦＲ１でのように、ＴＮＦに基づく治療法の開発との関連で、ＴＮＦターゲティングおよび活性のコントロールが重要であることに注意すべきである。

【0242】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、細胞死シグナル伝達に関与するが、一方、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナル伝達に関与する。したがって、癌を治療する方法を対象とする実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対して低減された親和性および／または活性、および／またはＴＮＦＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質は、アポトーシスが望まれる細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍脈管構造内皮細胞に標的され得る。例えば、神経変性障害の治療のための神経発生において細胞生存を促進する方法を対象とする実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対して低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。別の言い方をすれば、本キメラタンパク質は、いくつかの実施形態では、死または生存シグナルのいずれかを優先させる改変ＴＮＦ－α作用物質を含む。

【0243】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ１に対して低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。そのようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対して低減された親和性および／または活性を引き起こす突然変異（複数可）のみを有するキメラと比べて、アポトーシスのより強力な誘導因子である。そのようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍脈管構造内皮細胞死の誘導において（例えば、癌の治療において）用途を見出す。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、ＴＮＦＲ２を介するＴ_ｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減させ、例えば、インビボでのＴＮＦＲ１媒介抗腫瘍活性をしたがってさらに支持する。

【0244】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＮＦＲ２に対して低減された親和性および／または活性、および／またはＴＮＦＲ１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。そのようなキメラは、いくつかの実施形態では、限定はされないが、神経発生の刺激を含む、様々な疾患状況における特定の治療対象となり得る、いくつかの細胞型における細胞生存のより強力な活性化因子である。加えて、そのようなＴＮＦＲ２に有利に働くキメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎などおよび本明細書で記載される多くの他のもの）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは、自己反応性Ｔ細胞に標的される。いくつかの実施形態では、キメラはＴ_ｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。

【0245】

いくつかの実施形態では、キメラは、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避（例えば、ＴＮＦＲ２に対して低減された親和性および／または活性、および／または、ＴＮＦＲ１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦ）により、自己反応性Ｔ細胞の死を引き起こす。理論に縛られることは望まないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えば、ＮＦｋＢ経路活性／シグナル伝達変更により変更されたそれらのアポトーシス／生存シグナルを有する。

【0246】

いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２に基づくキメラは、様々な自己免疫疾患、心疾患、脱髄および神経変性障害、ならびに感染性疾患、などを含む疾患において、追加の治療応用を有する。

【0247】

一実施形態では、野生型ＴＮＦ－αはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３９のアミノ酸配列を有する。

【0248】

そのような実施形態では、改変ＴＮＦ－α作用物質は、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦ－αを生成する１つ以上のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７で突然変異を有する。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0249】

いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦ－α部分は、例えば、ＷＯ／２０１５／００７９０３号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において記載されるように、１つ以上のアミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、およびＡ１４５で突然変異を有する（ヒトＴＮＦ配列、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ＧＩ：１９７６９２６８５に従う番号付け）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｒ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５ＧおよびＡ１４５Ｔから選択される置換変異を有する。一実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆから選択される突然変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される突然変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦ－α部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される突然変異を有する。

【0250】

いくつかの実施形態では、改変ＴＮＦ－α作用物質は、ＷＯ２００８／１２４０８６号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で記載されるように、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１つ以上の突然変異を有する。

【0251】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦ－βである。ＴＮＦ－βは、ホモ三量体またはＬＴ－β（ＬＴ－α１β２）とのヘテロ三量体を形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴ－βＲに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0252】

一実施形態では、野生型ＴＮＦ－βはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０のアミノ酸配列を有する。

【0253】

そのような実施形態では、改変ＴＮＦ－β作用物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦ－βを生成する、位置１０６－１１３での１つ以上のアミノ酸で突然変異を含み得る。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置１０６－１１３で１つ以上の置換変異を有する。例示的な実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、位置１０６－１１３での約１～約３のアミノ酸の挿入を有する。

【0254】

いくつかの実施形態では、追加の改変作用物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）であり、ＷＯ２０１５／００７９０３号（その全内容は参照により組み込まれる）で記載される単鎖三量体バージョンであり得る。

【0255】

いくつかの実施形態では、改変作用物質は、ＴＮＦＲ１で低減された親和性および／または活性、すなわち、拮抗活性（例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。これらの実施形態では、改変作用物質は、また、任意で、ＴＮＦＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。いくつかの実施形態では、改変作用物質は、ＴＮＦＲ２で低減された親和性および／または活性、すなわち、拮抗活性（例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。これらの実施形態では、改変作用物質は、また、任意で、ＴＮＦＲ１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有するＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）である。そのような実施形態のコンストラクトは、例えば、細胞特異的様式でＴＮＦ応答を減衰させる方法において用途を見出す。いくつかの実施形態では、拮抗的ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β）は、ＷＯ２０１５／００７９０３号で記載される単鎖三量体バージョンである。

【0256】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ作用物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ作用物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0257】

一実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を有する。

【0258】

そのような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ作用物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７－Ｒ１３２、Ｅ１４４－Ｒ１４９、Ｅ１５５－Ｈ１６１、Ｙ１８９－Ｙ２０９、Ｔ２１４－１２２０、Ｋ２２４－Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６－Ｌ２３９、Ｅ２４９－Ｋ２５１、Ｔ２６１－Ｈ２６４およびＨ２７０－Ｅ２７１で突然変異を含み得る（ヒト配列、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３に基づく番号付け；上記を参照のこと）。

【0259】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦαである。そのような実施形態では、改変ＴＧＦα作用物質は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα作用物質は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0260】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦβである。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は任意で、理論に縛られることは望まないが、ＴＧＦ－β受容体に対するリガンドのリザーバとして機能し得る、ＴＧＦＢＲ３に対して低減された、または実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりＴＧＦＢＲ１を、またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を優先し得る。同様に、ＬＡＰは、理論に縛られることは望まないが、ＴＧＦ－β受容体に対するリガンドのリザーバとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して低減された親和性および／または活性、および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、そのようなキメラは、カムラチ・エンゲルマン病、または不適当なＴＧＦβシグナル伝達と関連する他の疾患において用途を見出す。

【0261】

いくつかの実施形態では、追加の改変作用物質は、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の１つ以上で、低減された親和性および／または活性、すなわち、拮抗活性（例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）を有する、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。これらの実施形態では、改変作用物質は、また、任意で、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の１つ以上で実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。

【0262】

いくつかの実施形態では、追加の改変作用物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２で、低減された親和性および／または活性、すなわち、拮抗活性（例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）を有する、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。これらの実施形態では、改変作用物質は、また、任意で、ＴＧＦＢＲ３で実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）である。

【0263】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１である。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１αまたはＩＬ－１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ１および／またはＩＬ－１ＲＡｃＰに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ１および／またはＩＬ－１ＲＡｃＰに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１Ｒ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本改変ＩＬ－１作用物質は、ＩＬ－１Ｒ２での相互作用を回避し、そのため治療薬のためのデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。

【0264】

一実施形態では、野生型ＩＬ－１βはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を有する。

【0265】

ＩＬ１は炎症性サイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。これはＣＤ４Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の割合ならびにＩＦＮ－γおよびＩＬ－４産生細胞の拡大を増加させる。ＩＬ－１はまた、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖、分化、末梢への遊走およびメモリーを増強する。ＩＬ－１受容体はＩＬ－１Ｒ１およびＩＬ－１Ｒ２を含む。ＩＬ－１Ｒ１への結合およびこれを介するシグナル伝達は、それによりＩＬ－１がその生物学的（および病理学的）活性の多くを媒介するメカニズムを構築する。ＩＬ１－Ｒ２はデコイ受容体として機能でき、これによりＩＬ－１Ｒ１を介する相互作用およびシグナル伝達についてのＩＬ－１利用能を低減する。

【0266】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ１に対して低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態では、回復可能なＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達、およびＩＬ－Ｒ２での治療キメラの損失の防止が存在し、そのため必要とされるＩＬ－１の用量が低減される（例えば、野生型またはＩＬ－Ｒ１について減弱突然変異しか有さないキメラと比べて）。そのようなコンストラクトは、例えば、抗癌応答を開始させるために免疫系を刺激することを、例えば含む、癌を治療する方法において用途を見出す。

【0267】

いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ１に対して低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗活性、例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ－１は、ＩＬ－１Ｒ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態では、ＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒ１シグナル伝達は回復可能ではなく、ＩＬ－Ｒ２での治療用キメラの損失が防止され、よって必要とされるＩＬ－１の用量が低減される（例えば、野生型またはＩＬ－Ｒ１に対して減弱突然変異のみを有するキメラと比べて）。そのようなコンストラクトは、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法において用途を見出す。

【0268】

そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２－５４の欠失を有し、これはＩ型ＩＬ－１Ｒに対して低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ－１βを生成する。例えば、ＷＯ１９９４／０００４９１号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、例えば、ＷＯ２０１５／００７５４２号およびＷＯ／２０１５／００７５３６号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）に記載されるように、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑ（ここで、Ｘはアミノ酸における任意の変更、例えば、非保存的変更とすることができる）から選択される１つ以上の置換変異を有し、これはＩＬ－１Ｒへの低減された結合を示す（ヒトＩＬ－１β配列、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、ＧＩ：１０８３５１４５に基づく番号付け）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１つ以上の突然変異を有し得る。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。一実施形態では、改変ヒトＩＬ－１βは、突然変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。

【0269】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－２である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒαおよび／またはＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－２Ｒαに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態は、例えば改変ＩＬ－２がＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγで作動性である場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本コンストラクトは、ＩＬ２受容体βおよびγを有する、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（抗腫瘍効果を提供することができる）の減弱された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有する、Ｔ_ｒｅｇ（免疫抑制、腫瘍促進性効果を提供することができる）に不利に働き得る。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ＲαよりＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγの優先性は、肺浮腫などのＩＬ－２副作用を回避する。またＩＬ－２に基づくキメラは、例えば、改変ＩＬ－２がＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγで拮抗的である場合（例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）、自己免疫疾患の治療に有用である。例えば、本コンストラクトは、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８^＋Ｔ細胞の減弱された抑制を優先し（そのため、免疫反応を弱める）、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴ_ｒｅｇに不利に働き得る。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２を有するキメラはＴ_ｒｅｇの活性化、よって免疫抑制、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の冷遇の活性化に有利に働く。例えば、これらのコンストラクトは、疾患または免疫抑制から利益を得る疾患、例えば、自己免疫障害の治療において用途を見出す。

【0270】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞に向けられる、本明細書で記載されるターゲティング部分、ならびにＩＬ－２Ｒβおよび／またはＩＬ－２Ｒγに対して低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ－２Ｒαに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する改変ＩＬ－２作用物質を有する。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトは、標的ＣＤ８^＋Ｔ細胞活性を提供し、Ｔ_ｒｅｇ細胞に対して一般に不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、そのようなコンストラクトは、野生型ＩＬ－２と比べて増強された免疫刺激効果を有し（例えば、理論に縛られることは望まないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことによる）、一方、ＩＬ－２と関連する全身毒性を排除または低減する。

【0271】

一実施形態では、野生型ＩＬ－２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を有する。

【0272】

そのような実施形態では、改変ＩＬ－２作用物質は、アミノ酸Ｌ７２で１つ以上の突然変異（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、ｏｒＬ７２Ｋ）、Ｆ４２（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）を有する。理論に縛られることは望まないが、これらの改変ＩＬ－２作用物質は、野生型ＩＬ－２と比べて、高親和性ＩＬ－２受容体に対して低減された親和性を有し、中間－親和性ＩＬ－２受容体に対する親和性を保存すると考えられる。例えば、ＵＳ特許公開第２０１２／０２４４１１２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0273】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－３である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、共通のβ（β ｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対形成される特有のα鎖を有するヘテロ二量体である、ＩＬ－３受容体に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、共通のβ（β ｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対形成される特有のα鎖を有するヘテロ二量体である、ＩＬ－３受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0274】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－４である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ－４受容体に対して低減された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ－４受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ－４受容体は共通のγ鎖を有するＩＬ－４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ－４を特異的に結合する。２型ＩＬ－４受容体は、ＩＬ－１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合されるＩＬ－４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、２型ＩＬ－４受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0275】

一実施形態では、野生型ＩＬ－４はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を有する。

【0276】

そのような実施形態では、改変ＩＬ－４作用物質は、１つ以上の突然変異をアミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）で有する。理論に縛られることは望まないが、これらの改変ＩＬ－４作用物質はＩ型受容体により媒介される活性を維持するが、他の受容体により媒介される生物活性を特異的に低減させると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0277】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－６である。ＩＬ－６は、リガンド結合ＩＬ－６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）、およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞－表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介してシグナルを送る。ＩＬ－６はまた、ＩＬ－６Ｒの細胞外部分であるＩＬ－６Ｒの可溶性形態（ｓＩＬ－６Ｒ）に結合し得る。ｓＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－６複合体は神経突起伸長およびニューロンの生存に関与でき、よって、再ミエリン化を介する神経再生において重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ－６Ｒに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ－６Ｒに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0278】

一実施形態では、野生型ＩＬ－６はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を有する。

【0279】

そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７で、１つ以上の突然変異を有する。理論に縛られることは望まないが、これらの改変ＩＬ－６作用物質は、ＩＬ－６Ｒαに対して低減された結合親和性、および低減された生物活性を示すと考えられる。例えば、ＷＯ９７／１０３３８号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0280】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体－１およびＩＬ－１０受容体－２に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１０受容体－１およびＩＬ－１０受容体－２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0281】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１Ｒαおよび／またはＩＬ－１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対して低減された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１１Ｒαおよび／またはＩＬ－１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0282】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１および／またはＩＬ－１２Ｒβ２に対して低減された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１２Ｒβ１および／またはＩＬ－１２Ｒβ２に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0283】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１３である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒα）およびＩＬ－１３Ｒα１に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－４受容体（ＩＬ－４Ｒα）またはＩＬ－１３Ｒα１に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0284】

一実施形態では、野生型ＩＬ－１３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を有する。

【0285】

そのような実施形態では、改変ＩＬ－１３作用物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４で１つ以上の突然変異を有する。理論に縛られることは望まないが、これらの改変ＩＬ－１３作用物質は低減された生物活性を示すと考えられる。例えば、ＷＯ２００２／０１８４２２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0286】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒαおよび／またはＩＬ－１８Ｒβに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－１８Ｒαおよび／またはＩＬ－１８Ｒβに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要とされるＴＩＲドメインを欠くＩＬ－１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ－１８ＲαＩＩ型に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0287】

一実施形態では、野生型ＩＬ－１８はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７のアミノ酸配列を有する。

【0288】

そのような実施形態では、改変ＩＬ－１８作用物質は、ＷＯ／２０１５／００７５４２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で記載されるように、Ｙ３７－Ｋ４４、Ｒ４９－Ｑ５４、Ｄ５９－Ｒ６３、Ｅ６７－Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７－Ａ９７、Ｎ１２７－Ｋ１２９、Ｑ１３９－Ｍ１４９、Ｋ１６５－Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０－Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域において１つ以上の突然変異を含み得る（ヒトＩＬ－１８配列、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、ＧＩ：５４６９６６５０に基づく番号付け）。

【0289】

一実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ－３３である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ－２受容体およびＩＬ－１ＲＡｃＰに対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ－２受容体およびＩＬ－１ＲＡｃＰに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。

【0290】

一実施形態では、野生型ＩＬ－３３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８のアミノ酸配列を有する。

【0291】

そのような実施形態では、改変ＩＬ－３３作用物質は、ＷＯ／２０１５／００７５４２号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）で記載されるように、Ｉ１１３－Ｙ１２２、Ｓ１２７－Ｅ１３９、Ｅ１４４－Ｄ１５７、Ｙ１６３－Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０－Ｃ２２７およびＴ２６０－Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域において１つ以上の突然変異を含み得る（ヒト配列、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョンＮＰ＿２５４２７４．１、ＧＩ：１５５５９２０９に基づく番号付け）。

【0292】

一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、強力な増殖因子のファミリーのメンバーである。メンバーとしては、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものが挙げられる。ＥＧＦファミリー受容体としては、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４が挙げられる。これらは、ホモ二量体および／またはヘテロ二量体受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、様々な受容体サブタイプに対して異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロ二量体サブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは同様のパターンを有するが、これはＥｒｂＢ４／４とも結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負の調節は、かなりの治療的関心である。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、様々な癌の治療において興味深く、ここでＥＧＦＲシグナル伝達は、主な増殖促進シグナルを構成する。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒促進（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定はされないが、放射線療法を含む様々な癌療法の主副作用）において治療的関心である。

【0293】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対して低減された親和性および／または活性を有する。そのような実施形態は、例えば、創傷を治療する方法において用途を見出す。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１つ以上のＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対して低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性は、減弱された様式でアンタゴナイズされる。そのような実施形態は、例えば、癌の治療において用途を見出す。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対して低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であり－ほとんどが副作用を有し、なぜならそれらはあまり選択的ではないからである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、減弱された拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達はより的確であり、ＥＧＦに対する受容体を標的にする他の作用物質より少ない副作用を有する。

【0294】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対して低減された親和性および／または活性（例えば、拮抗的、例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）、および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。ターゲティング部分を介する特異的ターゲティングにより、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（拮抗作用、例えば、自然拮抗活性または１つ以上の突然変異の結果である拮抗活性、例えば、ＷＯ２０１５／００７５２０号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい）が達成され－一方、阻害関連副作用と潜在的に関連する他の受容体サブタイプに結合しない。よって、体内の全ての細胞型においてＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、そのようなコンストラクトは、細胞選択的な（例えば、受容体の増幅、過剰発現などによる、活性化されたＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物効果を、低減された副作用で提供するであろう。

【0295】

いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対して低減された親和性および／または活性（例えば、作動性）を有する。ターゲティング部分を介する特異的標的細胞へのターゲティングにより、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。そのようなコンストラクトは、いくつかの実施形態では、低減された副作用で、創傷の治療（創傷治癒促進）において、とりわけ、慢性病状の治療および治療薬の局所適用以外の適用（例えば、全身創傷治癒）のための用途を見出す。

【0296】

一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１もしくはＩＧＦ２受容体に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１もしくはＩＧＦ２受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体での減弱された応答は、糖尿病、肥満、代謝障害などのコントロールを可能にし、一方、ＩＧＦ１もしくはＩＧＦ２受容体からそらし癌促進効果を回避する。

【0297】

一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子－Ｉまたはインスリン様増殖因子－ＩＩ（ＩＧＦ－１またはＩＧＦ－２）である。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ－１である。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対して低減された親和性および／または活性を有する。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズできる。そのような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対して低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が減弱された様式でアンタゴナイズされる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対して低減された親和性および／または活性を有し、これにより受容体の活性が減弱された様式でアンタゴナイズされる。一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨害しない。様々な実施形態では、これは癌治療に適用される。様々な実施形態では、本作用物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療への耐性を引き起こすことを防止できる。

【0298】

一実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥＰＯである。様々な実施形態では、改変ＥＰＯ作用物質は、野生型ＥＰＯまたは本明細書で記載される他のＥＰＯに基づく作用物質と比べて、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体および／またはエフリン受容体（ＥｐｈＲ）に対して低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯ作用物質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）受容体および／またはＥｐｈ受容体（ＥｐｈＲ）に対して実質的に低減または消失された親和性および／または活性を有する。例示的なＥＰＯ受容体としては、ＥＰＯＲホモ二量体またはＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロ二量体が挙げられるが、それらに限定されない。ＥＰＯ受容体として、β－ｃｏｍｍｏｎ受容体（βｃＲ）もまた含まれる。例示的なＥｐｈ受容体としては、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、およびＥＰＨＢ６が挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯタンパク質が１つ以上の異なるＥＰＯ受容体またはＥｐｈ受容体（例えば、非制限的にＥＰＯＲ－ＥＰＨＢ４、ＥＰＯＲ－βｃＲ－ＥＰＯＲを含む、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体など）を含む受容体に対して低減された親和性を有するようにする１つ以上の突然変異を含む。ＥＰ特許公開第２４９２３５５号（その全内容はこれにより参照により組み込まれる）の受容体もまた提供され、非制限的にＮＥＰＯＲを含む。

【0299】

一実施形態では、ヒトＥＰＯはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４９のアミノ酸配列を有し、ここでシグナルペプチドは最初の２７アミノ酸を含む。

【0300】

一実施形態では、ヒトＥＰＯタンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５０の配列を有する１６６アミノ酸残基の糖タンパク質である、ＥＰＯの成熟型（シグナルペプチドは切断されている）である。

【0301】

ヒトＥＰＯタンパク質の構造は、へリックスＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤを含む４ヘリックスバンドルを含むと予測される。様々な実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生理活性に重要であるＥＰＯタンパク質の４つの領域、すなわち、アミノ酸残基１０－２０、４４－５１、９６－１０８、および１４２－１５６に位置する１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の突然変異は、残基１１－１５、４４－５１、１００－１０８、および１４７－１５１に位置する。これらの残基は、ヘリックスＡ（Ｖａｌ１１、Ａｒｇ１４、およびＴｙｒ１５）、ヘリックスＣ（Ｓｅｒ１００、Ａｒｇ１０３、Ｓｅｒ１０４、およびＬｅｕ１０８）、ヘリックスＤ（Ａｓｎ１４７、Ａｒｇ１５０、Ｇｌｙ１５１、およびＬｅｕ１５５）、およびＡ／Ｂ連結ループ（残基４２－５１）に局在する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、アミノ酸４１－５２の間とアミノ酸１４７、１５０、１５１、および１５５の残基において突然変異を含む。理論に縛られることは望まないが、これらの残基の突然変異は、受容体結合およびインビトロ生物活性の両方に実質的な効果を有すると考えられる。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基１１、１４、１５、１００、１０３、１０４、および１０８で突然変異を含む。理論に縛られることは望まないが、これらの残基の突然変異は、受容体結合活性に対し中程度の効果、およびインビトロ生物活性に対してずっと大きな効果を有すると考えられる。例示的な置換としては、Ｖａｌ１１Ｓｅｒ、Ａｒｇ１４Ａｌａ、Ａｒｇ１４Ｇｌｎ、Ｔｙｒ１５Ｉｌｅ、Ｐｒｏ４２Ａｓｎ、Ｔｈｒ４４Ｉｌｅ、Ｌｙｓ４５Ａｓｐ、Ｖａｌ４６Ａｌａ、Ｔｙｒ５１Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１００Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１００Ｔｈｒ、Ａｒｇ１０３Ａｌａ、Ｓｅｒ１０４Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１０４Ａｌａ、Ｌｅｕ１０８Ｌｙｓ、Ａｓｎ１４７Ｌｙｓ、Ａｒｇ１５０Ａｌａ、Ｇｌｙ１５１Ａｌａ、およびＬｅｕ１５５Ａｌａの１つ以上が挙げられるが、それらに限定されない。

【0302】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生理活性に影響するが結合に影響しない突然変異、例えば、Ｅｌｉｏｔ， ｅｔ ａｌ． Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｊａｎｕａｒｙ １５， １９９７； Ｂｌｏｏｄ： ８９ （２）（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において列挙されるものを含む。

【0303】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体接触に関与するＥＰＯタンパク質の表面残基に関する１つ以上の突然変異を含む。理論に縛られることは望まないが、これらの表面残基の突然変異は、タンパク質フォールディングに影響する可能性は低く、よって、いくらかの生物活性を保持すると考えられる。変異され得る例示的な表面残基としては、残基１４７および１５０が挙げられるが、それらに限定されない。例示的な実施形態では、突然変異は、Ｎ１４７Ａ、Ｎ１４７Ｋ、Ｒ１５０ＡおよびＲ１５０Ｅの１つ以上を含む置換である。

【0304】

いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基Ｎ５９、Ｅ６２、Ｌ６７、およびＬ７０での１つ以上の突然変異、ならびにジスルフィド結合形成に影響する１つ以上の突然変異を含む。理論に縛られることは望まないが、これらの突然変異はフォールディングに影響し、および／または埋没位置にあると予測され、よって生物活性に間接的に影響すると考えられる。

【0305】

一実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体結合を著しく低減させるＫ２０Ｅ置換を含む。Ｅｌｌｉｏｔｔ， ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｂｌｏｏｄ， ８９：４９３－５０２（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0306】

発明のキメラＥＰＯタンパク質に組み込まれる追加のＥＰＯ突然変異は、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ， ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｂｌｏｏｄ， ８９：４９３－５０２（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．， （２０１０） ＰＥＤＳ， ２３（４）： ２５１－２６０（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において開示される。

【0307】

様々な実施形態では、シグナル伝達物質は、毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌に由来する。例示的な毒素または毒性酵素としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽毒素、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、例えばリシンおよびサポリン、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、それらに限定されない。追加の毒素としては、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．， （２００９） Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）： １３５９－６５（全開示内容はこれにより参照により組み込まれる）で開示されるものが挙げられる。そのような実施形態では、発明のキメラタンパク質は、細胞死を細胞型特異様式で誘導するために使用され得る。そのような実施形態では、毒素は、本明細書で他のシグナル伝達物質で記載されるように、減弱された効果のために毒素の親和性および／または活性を低減させるように改変され、例えば、変異され得る。

【0308】

リンカー
いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は任意で、１つ以上のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－γ）を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、シグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－γ）内にリンカーを含む。

【0309】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるリンカーのいずれかに単一ヌクレオチド配列として連結される本キメラタンパク質をコードするベクターが提供され、そのようなキメラタンパク質を調製するために使用され得る。

【0310】

いくつかの実施形態では、リンカー長は、ターゲティング部分とシグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－γ）のそれらの受容体への効率的な結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカー長は、同じ細胞上の受容体へのターゲティング部分の１つとシグナル伝達物質の効率的な結合を可能にする。

【0311】

いくつかの実施形態では、リンカー長は、同じ細胞上の受容体に対するターゲティング部分の１つとシグナル伝達物質の結合部位の間の最小距離に少なくとも等しい。いくつかの実施形態では、リンカー長は、同じ細胞上の受容体に対するターゲティング部分の１つとシグナル伝達物質の結合部位の間の最小距離の少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍、あるいはそれより大きい。

【0312】

本明細書では、リンカー長は、同じ細胞上の受容体へのターゲティング部分の１つとシグナル伝達物質の効率的な結合を可能にし、結合は順次的であり、例えば、ターゲティング部分／受容体結合がシグナル伝達物質／受容体結合に先行する。

【0313】

いくつかの実施形態では、単一キメラ中に２つのリンカーが存在し、各々がシグナル伝達物質をターゲティング部分に連結する。様々な実施形態では、リンカーは、疾患細胞およびエフェクター細胞を有する部位の形成を可能にする長さを有し、いずれかの細胞の調節を防止するであろう立体障害を有しない。

【0314】

発明は、様々なリンカー配列の使用を企図する。様々な実施形態では、リンカーは天然起源の多ドメインタンパク質に由来してよく、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．， （２０１３）， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ． ２２（２）：１５３－１６７， Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， （２０１３）， Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ． ６５（１０）：１３５７－１３６９（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において記載される経験的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびコンピュータプログラム、例えばＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， （２０１３）， Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ． ６５（１０）：１３５７－１３６９およびＣｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．， （２０００）， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． １３（５）：３０９－３１２（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）に記載されるものを用いて設計され得る。様々な実施形態では、リンカーは機能的であり得る。例えば、限定はされないが、リンカーは、本キメラタンパク質のフォールディングおよび／または安定性を改善する、発現を改善する、薬物動態を改善する、および／または生理活性を改善するように機能し得る。

【0315】

いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２未満のアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長を超える。例えば、リンカーは約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２を超えるアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは柔軟である。別の実施形態では、リンカーは剛性である。

【0316】

２つ以上のターゲティング部分を有するキメラタンパク質を対象とするいくつかの実施形態では、リンカーは２つのターゲティング部分を互いに連結し、このリンカーは短い長さを有し、リンカーはターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２つのターゲティング部分を連結するリンカーよりも長い。例えば、２つのターゲティング部分を連結するリンカーと、ターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結するリンカーの間のアミノ酸長の差は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２個のアミノ酸であり得る。

【0317】

様々な実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンおよびセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、ここでｎは約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８である。一実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１）である。追加の例示的なリンカーとしては、配列ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１～４；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３）、ＧＧＧＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４）、ＧＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５５）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１～３；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５６）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５；；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５７）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５８）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）_４Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５９）、ＰＡＰＡＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６０）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６１）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６２）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６３）、および（ＸＰ）ｎを有するリンカーが挙げられるが、それらに限定されず、Ｘは任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを指定する。様々な実施形態では、リンカーはＧＧＳである。

【0318】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４２）、ＧＳＥＳＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４３）、ＧＳＥＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４４）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４５）、および４つのアミノ酸間隔毎にＧ、Ｓ、およびＥがランダムに置かれるリンカーの１つ以上である。

【0319】

いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体の（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥの）ヒンジ領域である。様々な実施形態では、リンカーは、抗体の（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥの）ヒンジ領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体において見出されるヒンジ領域は、可動性スペーサとして働き、Ｆａｂ部分が空間を自由に動くのを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは構造的に多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラスの間で配列および長さの両方が変動する。例えば、ヒンジ領域の長さおよび可動性は、ＩｇＧサブクラスの間で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ領域はアミノ酸２１６－２３１を包含し、それは自由に可動であるので、Ｆａｂフラグメントはそれらの対称軸周りに回転でき、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の第１を中心とする球内を動くことができる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２アミノ酸残基および４つのジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ領域はグリシン残基を欠き、比較的短く、余分な重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリ－プロリン二重らせんを含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可動性を制限する。ＩｇＧ３は、その特有の延長されたヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により他のサブクラスとは異なり、６２アミノ酸（２１個のプロリンおよび１１個のシステインを含む）を含み、不動ポリ－プロリン二重らせんを形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠く離れており、分子により大きな可動性を与える。ＩｇＧ３中の細長いヒンジはまた、他のサブクラスと比べて、そのより高い分子量の一因である。ＩｇＧ４のヒンジ領域は、ＩｇＧ１より短く、その可動性はＩｇＧ１とＩｇＧ２の間の中間である。ヒンジ領域の可動性は、報告によれば、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順に減少する。

【0320】

結晶学的研究によれば、免疫グロブリンヒンジ領域は機能的に、３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ領域、コア領域、および下部ヒンジ領域。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ領域は、Ｃ_Ｈ１のカルボキシル末端から、動きを制限するヒンジ中の第１の残基、一般に、２つの重鎖間で鎖間ジスルフィド結合を形成する第１のシステイン残基までのアミノ酸を含む。上部ヒンジ領域の長さは抗体のセグメント可動性と相関する。コアヒンジ領域は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ領域はＣ_Ｈ２ドメインのアミノ末端につながり、Ｃ_Ｈ２中の残基を含む。同上。野生型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域は、配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓを含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、回転軸として作用すると考えられる環状オクタペプチドをもたらし、よって、可動性を与える。様々な実施形態では、本リンカーは、任意の抗体の（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥの）上部ヒンジ領域、コア領域、および下部ヒンジ領域の１つ、または２つ、または３つを含む。ヒンジ領域はまた、１つ以上のグリコシル化部位を含んでもよく、それらは多くの構造的に別個の型の炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１はヒンジ領域の１７アミノ酸のセグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、分泌免疫グロブリンに対して有利な特性と考えられる、ヒンジ領域ポリペプチドの腸管プロテアーゼに対する抵抗性を与える。様々な実施形態では、本発明のリンカーは１つ以上のグリコシル化部位を含む。様々な実施形態では、リンカーはヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。

【0321】

所望であれば、本キメラタンパク質は、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメインの１つまたは両方、および任意でヒンジ領域を含む、抗体Ｆｃ領域に連結されてよい。例えば、Ｆｃ領域に単一ヌクレオチド配列として連結される本キメラタンパク質をコードするベクターを、そのようなポリペプチドを調製するために使用できる。

【0322】

いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧなどの合成リンカーである。

【0323】

様々な実施形態では、リンカーは機能的であってよい。例えば、限定はされないが、リンカーは、本キメラタンパク質のフォールディングおよび／または安定性を改善する、発現を改善する、薬物動態を改善する、および／または生理活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、キメラタンパク質を特定の細胞型または位置に標的化するように機能し得る。

【0324】

様々な実施形態では、キメラタンパク質の各々は、別の作用物質とコンジュゲートおよび／または融合されて半減期を延長し、またはそうでなければ、薬力学的および薬物動態特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリン、などの１つ以上と融合またはコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、抗体またはＦｃフラグメントなどの抗体断片と融合またはコンジュゲートされ得る。例えば、キメラタンパク質は、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ＧのＦｃドメインのＮ末端またはＣ末端のいずれかに融合され得る。様々な実施形態では、個々のキメラタンパク質の各々は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）に記載される作用物質の１つ以上に融合される。

【0325】

キメラタンパク質の生成
発明のキメラタンパク質を生成するための方法が本明細書で記載される。例えば、発明のキメラタンパク質をコードするＤＮＡ配列（例えば、改変シグナル伝達物質（例えば、改変ＩＦＮ－β）およびターゲティング部分およびリンカーをコードするＤＮＡ配列）は当技術分野で知られている方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列にライゲートされて、所望のキメラタンパク質をコードする遺伝子発現コンストラクトを生成できる。したがって、様々な実施形態では、本発明は、発明のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。

【0326】

発明のキメラタンパク質をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（ライゲートされる）てよく、これはトランスフェクション、形質転換、または形質導入技術を介して宿主細胞に導入できる。例えば、発明のキメラタンパク質をコードする核酸は、レトロウイルス形質導入により宿主細胞に導入できる。例示的な宿主細胞は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞がん細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換された宿主細胞は、発明のキメラタンパク質をコードする遺伝子を宿主細胞に発現させる条件下で増殖されてよい。したがって、様々な実施形態では、本発明は、発明のキメラタンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。様々な実施形態では、本発明はさらに、そのような発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0327】

特異的発現および精製条件は、採用される発現系によって変わるであろう。例えば、遺伝子が大腸菌で発現される場合、それは最初に、好適な細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列から下流に改変遺伝子を配置することにより、発現ベクター中にクローニングされる。別の例では、改変遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞で発現される場合、それは最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、エンハンサー、および様々なイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子コンストラクトは、トランスフェクション、形質転換、または形質導入技術を使用して、宿主細胞に導入できる。

【0328】

発明のキメラタンパク質は、キメラタンパク質をコードする発現ベクターでトランスフェクトさせた宿主細胞を、タンパク質の発現を可能にする条件下で増殖させることにより生成できる。発現後、タンパク質は、当技術分野でよく知られた技術、例えば、親和性タグ、例えばグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジンタグを使用して、またはクロマトグラフィーにより、収集および精製できる。

【0329】

したがって、様々な実施形態では、本発明は本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を提供する。様々な実施形態では、本発明は本発明のキメラタンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。

【0330】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質はインビボで、例えば、患者において発現され得る。例えば、様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、本キメラをコードする核酸の形態で投与され得る。様々な実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、改変ｍＲＮＡ、すなわち１つ以上の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、改変ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号（その全内容はこれにより、参照により組み込まれる）において見出される改変の１つを含む。いくつかの実施形態では、改変ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’－Ｏ－メチル－Ｕの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、本キメラタンパク質の１つ以上をコードする改変ｍＲＮＡを投与することに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、これを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、これを含む遺伝子治療法に関する。様々な実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、麻疹、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクチニアの形態である。

【0331】

薬学的に許容される塩および賦形剤
本明細書で記載されるキメラタンパク質は十分に塩基性の官能基（それは無機酸もしくは有機酸と反応できる）、またはカルボキシル基（それは無機塩基または有機塩基と反応できる）を有して、薬学的に許容される塩を形成できる。薬学的に許容される酸付加塩は、当技術分野でよく知られる、薬学的に許容される酸から形成される。そのような塩としては、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ６６， ２－１９ （１９７７）およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ； Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ａｎｄ Ｕｓｅ． Ｐ． Ｈ． Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ． Ｇ． Ｗｅｒｍｕｔｈ （ｅｄｓ．）， Ｖｅｒｌａｇ， Ｚｕｒｉｃｈ （Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ） ２００２（これにより、その全体が参照により組み込まれる）に列挙される薬学的に許容される塩が挙げられる。

【0332】

薬学的に許容される塩としては、非限定的例として、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、カンファスルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボン酸塩、ヘキシン－１，４－ジカルボン酸塩、カプリン酸エステル、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩（ｔｅｒａｐｈｔｈａｌａｔｅ）、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）が挙げられる。

【0333】

「薬学的に許容される塩」という用語はまた、酸性官能基、例えばカルボン酸官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。好適な塩基としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア、および有機アミン、例えば非置換またはヒドロキシ置換モノ、ジ、トリアルキルアミン、ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ、ビス、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、例えばモノ、ビス、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン、例えばＮ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアミノ酸、例えばアルギニン、リジン、など。

【0334】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載される組成物は、薬学的に許容される塩の形態である。

【0335】

医薬組成物および製剤
様々な実施形態では、本発明は、本明細書で記載されるキメラタンパク質および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。本明細書で記載される任意の医薬組成物は、薬学的に許容される担体またはビヒクルを含む組成物の成分として、被験体に投与できる。そのような組成物は任意で、適正な投与のための形態を提供するために、好適な量の薬学的に許容される賦形剤を含む。

【0336】

様々な実施形態では、医薬賦形剤は、水および油などの、液体であってよく、石油、動物、野菜、または合成起源のものを含み、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などである。医薬賦形剤は、例えば、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイダルシリカ、尿素などであってよい。加えて、助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤および着色剤が使用され得る。１つの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、被験体に投与される場合無菌である。水は、本明細書で記載される任意の作用物質が静脈内投与される場合に有用な賦形剤である。生理食塩水およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液もまた、特に注射用溶液のために、液体賦形剤として使用できる。好適な医薬賦形剤としてはまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。本明細書で記載される任意の作用物質は、所望であれば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含んでよい。好適な医薬賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．， 第１９版１９９５）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される。

【0337】

本発明は、様々な製剤での記載される医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載される任意の発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）は、溶液、懸濁液、エマルジョン、滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、液体を含むカプセル、ゼラチンカプセル、粉末、徐放製剤、坐薬、エマルジョン、エアロゾル、噴霧剤、懸濁液、凍結乾燥粉末、凍結懸濁液、乾燥粉末の形態、または使用に好適な任意の他の形態をとることができる。１つの実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物はソフトゲルカプセルの形態で製剤化される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態で製剤化される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は液体として製剤化される。

【0338】

必要であれば、発明の医薬組成物（および／または追加の作用物質）はまた、可溶化剤を含んでよい。また、作用物質は当技術分野で知られる好適なビヒクルまたは送達装置を用いて送達されてよい。本明細書で概略が示される併用療法は、単一の送達ビヒクルまたは送達装置で共送達されてよい。

【0339】

本発明の発明の医薬組成物（および／または追加の作用物質）を含む製剤は便宜上、単位剤形で提示され得、薬学の分野でよく知られた方法のいずれかにより調製され得る。そのような方法は一般に、治療薬を、１つ以上の副材料成分を構成する担体と組み合わせる工程を含む。典型的には、製剤は、均一にかつ密接に治療薬を、液体担体、微細化固体担体、または両方と組み合わせ、その後、必要に応じて、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式顆粒化、粉末ブレンド、など、続いて当技術分野で知られる従来の方法を使用する打錠）により調製される。

【0340】

様々な実施形態では、本明細書で記載される任意の医薬組成物（および／または追加の作用物質）は、ルーチン手順にしたがい、本明細書で記載される投与方法のために適合された組成物として製剤化される。

【0341】

投与経路としては、例えば下記が挙げられる：経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、腟内、経皮、直腸内、吸入、または局所。投与は局所または全身であってよい。いくつかの実施形態では、投与は経口的に実施される。別の実施形態では、投与は非経口注射による。投与方法は施術者の裁量に委ねることができ、一部には、医学的状態の部位に依存する。大抵の場合、投与は、本明細書で記載される任意の作用物質の血流中への放出をもたらす。

【0342】

１つの実施形態では、本明細書で記載されるキメラタンパク質は、ルーチン手順にしたがい、経口投与のために適合された組成物として製剤化される。経口送達のための組成物は、例えば、錠剤、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液、顆粒、粉末、エマルジョン、カプセル、シロップ、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりのよい調製物を提供するために、１つ以上の作用物質、例えば、甘味剤、例えば果糖、アスパルテームまたはサッカリン；香味剤、例えばペパーミント、ウィンターグリーン油、またはサクランボ；着色剤；および保存剤を含んでよい。その上、錠剤または丸薬形態では、組成物は胃腸管での崩壊および吸収を遅延させるためにコートされてよく、よって、長期間にわたって持続作用を提供する。浸透圧的に活性な駆動する本明細書で記載される任意のキメラタンパク質を取り囲む選択的透過性膜もまた、経口投与される組成物に好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルを取り囲む環境からの流体は駆動化合物により吸収され、これは膨潤して、作用物質または作用物質組成物を開口部を通して移動させる。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤のスパイクプロファイルとは対照的に、本質的にゼロ次の送達プロファイルを提供できる。モノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロールなどの時間遅延材料も有用であり得る。経口組成物は、標準賦形剤、例えばマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。１つの実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、トラガントなど、およびそれらの混合物などの懸濁剤を含み得る。

【0343】

非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形としては、例えば、溶液、懸濁液、分散物、エマルジョン、などが挙げられる。それらはまた、無菌固体組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造され得、それは使用直前に無菌注射用媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当技術分野で知られている懸濁または分散剤を含み得る。非経口投与に好適な製剤成分としては、無菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；緩衝液、例えば酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩；および張度の調整のための作用物質、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロースが挙げられる。

【0344】

静脈内投与のために、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物に対抗して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコール）、およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であってよい。

【0345】

本明細書で提供される組成物は、単独で、または他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエアロゾル製剤（すなわち、「噴霧される」）に製造できる。エアロゾル製剤は、加圧された許容される噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素、などの中に入れることができる。

【0346】

本明細書で記載される任意の発明の医薬組成物（および／または追加の作用物質）は、制御放出手段または徐放手段により、あるいは当業者によく知られている送達装置により投与できる。例としては、下に記載されるものが挙げられるが、それらに限定されない：米国特許第３，８４５，７７０号；３，９１６，８９９号；３，５３６，８０９号；３，５９８，１２３号；４，００８，７１９号；５，６７４，５３３号；５，０５９，５９５号；５，５９１，７６７号；５，１２０，５４８号；５，０７３，５４３号；５，６３９，４７６号；５，３５４，５５６号；および５，７３３，５５６号（その各々がその全体として参照により本明細書に組み込まれる）。そのような剤形は、例えば、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供するために、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、他のポリママトリクス、ゲル、透過膜、浸透圧系、多層コーティング、微小粒子、リポソーム、ミクロスフェア、またはそれらの組み合わせを使用する、１つ以上の活性材料成分の制御された放出または徐放を提供するのに有用であり得る。本明細書で記載されるものを含む、当業者に知られている好適な制御放出製剤または徐放製剤は、本明細書で記載される作用物質の活性材料成分と共に使用するために容易に選択できる。本発明はこのように経口投与に好適な単一単位剤形、例えば、限定はされないが、制御された放出または徐放のために適合された錠剤、カプセル、ジェルキャップ、およびカプレットを提供する。

【0347】

活性材料成分の制御された放出または徐放は、様々な条件、例えば、限定はされないが、ｐＨの変化、温度の変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度または利用能、水の濃度または利用能、または他の生理的条件もしくは化合物、により刺激できる。

【0348】

別の実施形態では、制御放出系は治療される標的エリアに近接して配置でき、そのため、全身用量のほんの一部だけが必要とされる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，上記， ｖｏｌ． ２， ｐｐ． １１５－１３８ （１９８４）を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒ， １９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３によるレビューにおいて記載される他の制御放出系が使用され得る。

【0349】

医薬製剤は好ましくは無菌である。滅菌は、例えば、無菌濾過膜を通す濾過により達成できる。組成物が凍結乾燥される場合、フィルタ滅菌を実施し、その後、またはその前に、凍結乾燥および再構成を実施できる。

【0350】

投与および投与量
本発明による投与されるキメラタンパク質の実際の用量は、特定の剤形、および投与方法により変動するであろうことが認識されるであろう。キメラタンパク質の作用を改変できる多くの因子（例えば、体重、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度、被験体の状態、合剤、遺伝的素因および反応感度）は、当業者により考慮できる。投与は連続して、または最大許容用量内の１つ以上の別々の用量で実施できる。所定の組の病状のための最適投与速度は、当業者により、従来の投与量投与試験を用いて確認できる。

【0351】

いくつかの実施形態では、キメラタンパク質の好適な投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｇ／ｋｇ被験体体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｇ／ｋｇ被験体体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ被験体体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ被験体体重の範囲であり、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｇ／ｋｇ体重、約１０ｇ／ｋｇ体重であり、それらの間の全ての値および範囲を含む。

【0352】

個々の用量のキメラタンパク質は、例えば、約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約５ｇ、約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、約０．０１ｍｇ～約１ｇ、約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ活性材料成分、約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、約０．１ｍｇ～約１ｍｇ／単位剤形、または約５ｍｇ～約８０ｍｇ／単位剤形を含む単位剤形（例えば、錠剤またはカプセル）で投与できる。例えば、単位剤形は約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇであってよく、それらの間の全ての値および範囲を含む。

【0353】

１つの実施形態では、キメラタンパク質は、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１０ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約７．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約２．５ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１ｇ、毎日約０．０１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１００ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約９０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約８０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約７０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約６０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約４０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約２０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１０ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約５ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約３ｍｇ、毎日約０．１ｍｇ～約１ｍｇ、または毎日約５ｍｇ～約８０ｍｇの量で投与される。様々な実施形態では、キメラタンパク質は、約０．０１ｍｇ、約０．０２ｍｇ、約０．０３ｍｇ、約０．０４ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約５００ｍｇ、約１ｇ、約２．５ｇ、約５ｇ、約７．５ｇ、約１０ｇ、約２５ｇ、約５０ｇ、約７５ｇ、約１００ｇの１日用量で投与され、それらの間の全ての値および範囲を含む。

【0354】

発明のある一定の実施形態にしたがい、キメラタンパク質を含む医薬組成物は、例えば、１日１回超（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、約１日１回、約１日おき、約３日おき、約１週間に１回、約２週間に１回、約１ヶ月に１回、約２ヶ月に１回、約３ヶ月に１回、約６ヶ月に１回、または約１年に１回投与され得る。

【0355】

併用療法および追加の治療薬
様々な実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬（複数可）と併用して共投与される。共投与は同時または順次であってよい。

【0356】

１つの実施形態では、追加の治療薬および本発明のキメラタンパク質は、同時に被験体に投与される。「同時に」という用語は本明細書では、追加の治療薬とキメラタンパク質が約６０分以下の、例えば約３０分以下、約２０分以下、約１０分以下、約５分以下、または約１分以下の時間分離で投与されることを意味する。追加の治療薬およびキメラタンパク質の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびキメラタンパク質を含む製剤）のまたは別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびキメラタンパク質を含む第２の製剤）の同時投与によってでよい。

【0357】

共投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬とキメラタンパク質の薬理学的活性が時間内で重なり、よって併用治療効果がもたらされるようである場合、治療薬が同時に投与されることを必要としない。例えば、追加の治療薬およびキメラタンパク質は順次投与できる。「順次」という用語は本明細書では、追加の治療薬およびキメラタンパク質が約６０分超の時間分離で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬およびキメラタンパク質の順次投与の間の時間は、約６０分超、約２時間超、約５時間超、約１０時間超、約１日超、約２日超、約３日超、約１週超離して、約２週超離して、または約１ヶ月超離してであってよい。最適投与時間は、投与されている追加の治療薬およびキメラタンパク質の代謝の速度、排泄、および／または薬力学的活性に依存する。追加の治療薬またはキメラタンパク質細胞のどちらかが、最初に投与され得る。

【0358】

共投与はまた、治療薬が被験体に同じ投与経路により投与されることを必要としない。むしろ、各治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口的にまたは非経口的でなく、投与できる。

【0359】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるキメラタンパク質は、別の治療薬と共投与されると相乗的に作用する。そのような実施形態では、キメラタンパク質および追加の治療薬は、作用物質が単独療法の状況で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。

【0360】

いくつかの実施形態では、本発明は追加の治療薬としての化学療法薬に関する。例えば、限定はされないが、本キメラタンパク質および化学療法薬のそのような併用は、本明細書における他の場所で記載されるように、癌の治療において用途を見出す。化学療法薬の例としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：アルキル化剤、例えばチオテパおよびシトキサンシクロスフォスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（例えば、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリースタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビセレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、とりわけカリチアマイシンγＩＩおよびカリチアマイシンωＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ， Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ．， ３３： １８３－１８６ （１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシン、例えばダイネマイシンＡ；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、アウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシンドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えばメトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌ）、例えばミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えばマイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫポリサッカライド複合体（ＪＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｅｕｇｅｎｅ， Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（例えば、Ｔ－２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン、パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒを含まない、アルブミン－操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ， Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ， １１１．）、およびタキソテールドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ， Ａｎｔｏｎｙ， Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ジェムザールゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えばシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン．ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（イリノテカンの５－ＦＵおよびロイコボリンとの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン、オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（タルセバ））および細胞増殖を低減させるＶＥＧＦ－Ａおよび、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体。加えて治療の方法は、放射線の使用をさらに含んでよい。加えて、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含んでよい。

【0361】

限定はされないが、感染性疾患適用を含むいくつかの実施形態では、本発明は追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、下記が挙げられるが、それらに限定されない：アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネット。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌薬であり、下記が挙げられるが、それらに限定されない：セファロスポリン抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン抗生物質（シプロ、レバキン、フロキシン、テキン、アベロックス、およびノルフロックス）；テトラサイクリン抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）。いくつかの実施形態では、抗感染薬としては、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバコン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールが挙げられる。

【0362】

限定はされないが、自己免疫適用を含むいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、抗炎症薬、例えばステロイド性抗炎症薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は、当技術分野でよく知られている。本発明において有用なコルチコステロイドの例としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルベタメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、安息香酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、二酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロン（ｆｌｕｏｓｉｎｏｌｏｎｅ）アセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルランドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルオロゾン、フルラドレノロン（ｆｌｕｒａｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）アセトニド、メドリゾン、アムシナフェル（ａｍｃｉｎａｆｅｌ）、アムシナフィド（ａｍｃｉｎａｆｉｄｅ）、ベタメタゾンおよびそのエステルの平衡、クロロプレドニゾン、クロコルテロン（ｃｌｏｃｏｒｔｅｌｏｎｅ）、クレスシノロン（ｃｌｅｓｃｉｎｏｌｏｎｅ）、ジクロリゾン、ジフルプレドナート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン（ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈａｌｏｎｅ）、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン。本発明において使用され得る（ＮＳＡＩＤ）としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、サリチル酸グリコール、サリチルミド（ｓａｌｉｃｙｌｍｉｄｅ）、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、フリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナマート、フェニルブタゾン、およびインドメタシン。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、細胞分裂阻害薬、例えばアルキル化剤、代謝拮抗薬（例えば、アザチオプリン、メトトレキサート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン（ｉｎｔｅｆｅｒｏｎ）、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノール酸、および小生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）であってよい。追加の抗炎症薬は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）において記載される。

【0363】

いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬として肥満を治療するために使用される様々な作用物質に関する。肥満を治療するために使用される例示的な作用物質としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：オルリスタット（例えば、ＡＬＬ１、ＸＥＮＩＣＡＬ）、ロラカセリン（ｌｏｒａｃａｓｅｒｉｎ）（例えば、ＢＥＬＶＩＱ）、フェンテルミン－トピラマート（例えば、ＱＳＹＭＩＡ）、シブトラメ（ｓｉｂｕｔｒａｍｍｅ）（例えば、ＲＥＤＵＣＴＩＬまたはＭＥＲＪＤＩＡ）、リモナバント（ＡＣＯＭＰＬＬＡ）、エキセナチド（例えば、バイエッタ）、プラムリンチド（例えば、ＳＹＭＬＩＮ）フェンテルミン、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラズメ（ｐｈｅｎｄｉｍｅｔｒａｚｍｅ）、ブプロピオン、およびメトホルミン。食品中の特定の栄養分を吸収する身体能力を妨害する作用物質は追加の作用物質であり、例えば、オルリスタット（例えば、ＡＬＵ、ＸＥＮＩＣＡＬ）、グルコマンナン、およびグアーガムである。食欲を抑える作用物質もまた、追加の作用物質であり、例えば、カテコールアミンおよびそれらの誘導体（例えば、フェンテミン（ｐｈｅｎｔｅｉｍｉｎｅ）および他のアンフェタミン系薬物）、様々な抗うつ薬および気分安定薬（例えば、ブプロピオンおよびトピラマート）、食欲低下薬（例えば、デキセドリン、ジゴキシン）である。身体の代謝を増加させる作用物質もまた、追加の作用物質である。

【0364】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、下記の中から選択され得る：食欲抑制剤、神経伝達物質再取り込み阻害剤、ドパミン作動薬、セロトニン作動薬、ＧＡＢＡ作動性シグナル伝達のモジュレーター、抗痙攣薬、抗うつ薬、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、サブスタンスＰ（ＮＫ１）受容体アンタゴニスト、メラノコルチン受容体アゴニストおよびアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、脂肪吸収の阻害剤、エネルギー摂取または代謝の調節剤、カンナビノイド受容体モジュレーター、嗜癖を治療するための作用物質、メタボリックシンドロームを治療するための作用物質、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）モジュレーター；ジペプチジルペプチダーゼ（ｄｉｐｃｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ４）（ＤＰＰ－４）アンタゴニスト、心血管疾患を治療するための作用物質、上昇したトリグリセリドレベルを治療するための作用物質、低ＨＤＬを治療するための作用物質、高コレステロール血症を治療するための作用物質、および高血圧を治療するための作用物質。心血管疾患のためのいくつかの作用物質としては、スタチン（例えば、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンおよびプラバスタチン）およびω３作用物質（例えば、ＬＯＶＡＺＡ、ＥＰＡＮＱＶＡ、ＶＡＳＣＥＰＡ、エステル化ω３、一般に、魚油、オキアミ油、藻類油）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加の作用物質は下記の中から選択され得る：アンフェタミン、ベンゾジアゼピン、スルホニル尿素（ｓｕｉｆｏｎｙｌ ｕｒｅａ）、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ビグアナイド、β遮断薬、ＸＣＥ阻害剤、利尿薬、ナイトレート、カルシウムチャネル遮断薬、フェンレルミン（ｐｈｅｎｌｅｒｍｉｎｅ）、シブトラミン、イオルカセリン（ｉｏｒｃａｓｅｒｉｎ）、セチリスタット、リモナバント、タラナバント（ｔａｒａｎａｂａｎｔ）、トピラマート、ガバペンチン、バルプロ酸、ビガバトリン、ブプロピオン、チアガビン、セルトラリン、フルオキセチン、トラゾドン、ゾニサミド、メチルフェニデート、バレニクリン、ナルトレキソン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、ルクパギリニ．デ（ｒｃｐａｇｌｉｎｉ．ｄｅ）、ナテグリニド、グリメピリド、メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、およびシタグリプチン。

【0365】

いくつかの実施形態では、本発明は、糖尿病を治療するために追加の治療薬として使用される作用物質に関する。例示的な抗糖尿病薬としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：スルホニル尿素（例えば、ＤＹＭＥＬＯＲ（アセトヘキサミド）、ＤＩＡＢＩＮＥＳＥ（クロルプロパミド）、ＯＲＩＮＡＳＥ（トルブタミド）、およびＴＯＬＩＮＡＳＥ（トラザミド）、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ（グリピジド）、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬＸＬ（持続放出）、ＤＩＡＢＥＴＡ（グリブリド）、ＭＩＣＲＯＮＡＳＥ（グリブリド）、ＧＬＹＮＡＳＥ ＰＲＥＳＴＡＢ（グリブリド）、およびアマリール（グリメピリド））；ビグアナイド（例えば、メトホルミン（ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥＸＲ、ＲＩＯＭＥＴ、ＦＯＲＴＡＭＥＴ、およびＧＬＵＭＥＴＺＡ））；チアゾリジンジオン（例えば、ＡＣＴＯＳ（ピオグリタゾン）およびＡＶＡＮＤＩＡ（ロシグリタゾン）；α－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、ＰＲＥＣＯＳＥ（アカルボース）およびＧＬＹＳＥＴ（ミグリトール）；メグリチニド（例えば、ＰＲＡＮＤＩＮ（レパグリニド）およびＳＴＡＲＬＩＸ（ナテグリニド））；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）阻害剤（例えば、ジャヌビア（シタグリプチン）、ＮＥＳＩＮＡ（アログリプチン）、オングリザ（サキサグリプチン）、およびトラゼンタ（リナグリプチン））；ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（カナグリフロジン（ｃａｎａｇｌｉｆｏｚｉｎ）））；および併用丸薬（例えば、グルコバンス、これはグリブリド（スルホニル尿素）とメトホルミンを組み合わせる、メタグリップ、これはグリピジド（スルホニル尿素）とメトホルミンを組み合わせる、およびアバンダメット、これはメトホルミンおよびロシグリタゾン（アバンディア）の両方を１つの丸薬中で使用する、ＫＡＺＡＮＯ（アログリプチンおよびメトホルミン）、ＯＳＥＮＩ（アログリプチン＋ピオグリタゾン）、メトホルミン経口、ＡＣＴＯＳ経口、バイエッタ皮下、ジャヌビア経口、ＷＥＬＣＨＯＬ経口、ＪＡＮＵＭＥＴ経口、グリピジド経口、グリメピリド経口、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ経口、ランタス皮下、グリブリド経口、オングリザ経口、アマリール経口、ランタス ＳＯＬＯＳＴＡＲ皮下、ビデュリオン皮下、レベミル ＦＬＥＸＰＥＮ皮下、アクトプラスメット経口、ＧＬＵＭＥＴＺＡ経口、トラゼンタ経口、ブロモクリプチン経口、ＫＯＭＢＩＧＬＹＺＥ ＸＲ経口、ＩＮＶＯＫＡＮＡ経口、ＰＲＡＮＤＩＮ経口、レベミル皮下、パーロデル経口、ピオグリタゾン経口、ＮＯＶＯＬＯＧ皮下、ＮＯＶＯＬＯＧ ＦＬＥＸＰＥＮ皮下、ビクトーザ２－ＰＡＫ皮下、ヒューマログ皮下、ＳＴＡＲＬＩＸ経口、ＦＯＲＴＡＭＥＴ経口、グルコバンス経口、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ ＸＲ経口、ＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ７０－３０ＦＬＥＸＰＥＮ皮下、グリブリド－メトホルミン経口、アカルボース経口、ＳＹＭＬＩＮＰＥＮ６０皮下、ＧＬＵＣＯＴＲＯｌＸＬ経口、ノボリンＲ ｉｎｊ、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ経口、ＤＵＥＴＡＣＴ経口、シタグリプチン経口、ＳＹＭＬＩＮＰＥＮ１２０皮下、ヒューマログ ＫＷＩＫＰＥＮ皮下、ＪＡＮＵＭＥＴ ＸＲ経口、グリピジド－メトホルミン経口、ＣＹＣＬＯＳＥＴ経口、ヒューマログ ＭＩＸ７５－２５皮下、ナテグリニド経口、ヒューマログ Ｍｉｘ７５－２５ＫＷＩＫＰＥＮ皮下、ヒューマリン７０／３０皮下、ＰＲＥＣＯＳＥ経口、アピドラ皮下、ヒューマリン Ｒ ｉｎｊ、Ｊｅｎｔａｄｕｅｔｏ経口、ビクトーザ３－Ｐａｋ皮下、ノボリン７０／３０皮下、ノボリンＮ皮下、インスリンデテミル皮下、グリブリド微粒子化経口、ＧＬＹＮＡＳＥ経口、ヒューマリン Ｎ皮下、インスリングラルギン皮下、ＲＩＯＭＥＴ経口、ピオグリタゾン－メトホルミン経口、アピドラＳＯＬＯＳＴＡＲ皮下、インスリンリスプロ皮下、ＧＬＹＳＥＴ経口、ヒューマリン７０／３０Ｐｅｎ皮下、コレセベラム経口、シタグリプチン－メトホルミン経口、ＤＩＡＢＥＴＡ経口、インスリンレギュラーヒトｉｎｊ、ヒューマリンＮ Ｐｅｎ皮下、エキセナチド皮下、ヒューマログＭｉｘ５０－５０ＫＷＩＫＰＥＮ皮下、リラグルチド皮下、ＫＡＺＡＮＯ経口、レパグリニド経口、クロルプロパミド経口、インスリンアスパルト皮下、ＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ７０－３０皮下、ヒューマログＭｉｘ５０－５０皮下、サキサグリプチン経口、アクトプラスメットＸＲ経口、ミグリトール経口、ＮＰＨインスリンヒトｒｅｃｏｍｂ皮下、インスリンＮＰＨおよびレギュラーヒト皮下、トラザミド経口、ミフェプリストン経口、インスリンアスパルトプロタム－インスリンアスパルト皮下、レパグリニド－メトホルミン経口、サキサグリプチン－メトホルミン経口、リナグリプチン－メトホルミン経口、ＮＥＳＩＮＡ経口、ＯＳＥＮＩ経口、トルブタミド経口、インスリンリスプロプロタミンおよびリスプロ皮下、プラムリンチド皮下、インスリングルリジン皮下、ピオグリタゾン－グリメピリド経口、ＰＲＡＮＤＩＭＥＴ経口、ＮＯＶＯＬＯＧ ＰｅｎＦｉｌｌ皮下、リナグリプチン経口、エキセナチドミクロスフェア皮下、ＫＯＲＬＹＭ経口、アログリプチン経口、アログリプチン－ピオグリタゾン経口、アログリプチン－メトホルミン経口、カナグリフロジン経口、リスプロ（ヒューマログ）；Ａｓｐａｒｔ（ＮＯＶＯＬＯＧ）；Ｇｌｕｌｉｓｉｎｅ（アピドラ）；レギュラー（ノボリンＲまたはヒューマリンＲ）；ＮＰＨ（ノボリンＮまたはヒューマリンＮ）；グラルギン（ランタス）；Ｄｅｔｅｍｉｒ（レベミル）；ヒューマリンまたはノボリン７０／３０；およびＮＯＶＯＬＯＧ Ｍｉｘ７０／３０ヒューマログＭｉｘ７５／２５または５０／５０。

【0366】

いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としてＭＳを治療するために使用される作用物質に関する。例示的なＭＳ作用物質としては様々な疾患修飾治療が挙げられるが、それらに限定されない：

【表1】

【0367】

いくつかの実施形態では、本発明は、輸血との併用療法に関する。例えば、本組成物は輸血を補うことができる。いくつかの実施形態では、本発明は、鉄サプリメントとの併用療法に関する。

【0368】

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＥＰＯに基づく作用物質を用いる併用療法に関する。例えば、本組成物は、他のＥＰＯに基づく作用物質に対するアジュバントとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本組成物は、他のＥＰＯに基づく作用物質に対する維持療法として使用される。他のＥＰＯに基づく作用物質としては下記が挙げられる：エポエチンアルファ、例えば、限定はされないが、ＤＡＲＢＥＰＯＥＴＩＮ（ＡＲＡＮＥＳＰ）、ＥＰＯＣＥＰＴ（ＬＵＰＩＮＰＨＡＲＭＡ）、ＮＡＮＯＫＩＮＥ（ＮＡＮＯＧＥＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ）、ＥＰＯＦＩＴ（ＩＮＴＡＳ ＰＨＡＲＭＡ）、ＥＰＯＧＥＮ（ＡＭＧＥＮ）、ＥＰＯＧＩＮ、ＥＰＲＥＸ、（ＪＡＮＳＳＥＮ－ＣＩＬＡＧ）、ＢＩＮＯＣＲＩＴ７（ＳＡＮＤＯＺ）、ＰＲＯＣＲＩＴ；エポエチンベータ、例えば、限定はされないが、ＮＥＯＲＥＣＯＲＭＯＮ（ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡＲＯＣＨＥ）、ＲＥＣＯＲＭＯＮ、メトキシポリエチレングリコール－エポエチンベータ（ＭＩＲＣＥＲＡ、ＲＯＣＨＥ）；エポエチンデルタ、例えば、限定はされないが、ＤＹＮＥＰＯ（赤血球生成刺激タンパク質、ＳＨＩＲＥ ＰＬＣ）；エポエチンオメガ、例えば、限定はされないが、ＥＰＯＭＡＸ；エポエチンゼータ、例えば、限定はされないが、ＳＩＬＡＰＯ（ＳＴＡＤＡ）およびＲＥＴＡＣＲＩＴ（ＨＯＳＰＩＲＡ）および他のＥＰＯ、例えば、限定はされないが、ＥＰＯＣＥＰＴ（ＬＵＰＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ）、ＥＰＯＴＲＵＳＴ（ＰＡＮＡＣＥＡＢＩＯＴＥＣＬＴＤ）、ＥＲＹＰＲＯＳＡＦＥ（ＢＩＯＣＯＮＬＴＤ．）、ＲＥＰＯＩＴＩＮ（ＳＥＲＵＭ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＩＮＤＩＡ ＬＩＭＩＴＥＤ）、ＶＩＮＴＯＲ（ＥＭＣＵＲＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ）、ＥＰＯＦＩＴ（ＩＮＴＡＳＰＨＡＲＭＡ）、ＥＲＹＫＩＮＥ（ＩＮＴＡＳＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ）、ＷＥＰＯＸ（ＷＯＣＫＨＡＲＤＴ ＢＩＯＴＥＣＨ）、ＥＳＰＯＧＥＮ（ＬＧ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）、ＲＥＬＩＰＯＩＥＴＩＮ（ＲＥＬＩＡＮＣＥ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）、ＳＨＡＮＰＯＩＥＴＩＮ（ＳＨＡＮＴＨＡ ＢＩＯＴＥＣＨＮＩＣＳ ＬＴＤ）、ＺＹＲＯＰ（ＣＡＤＩＬＡ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＬＴＤ．）、ＥＰＩＡＯ（ＲＨＵＥＰＯ）（ＳＨＥＮＹＡＮＧ ＳＵＮＳＨＩＮＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．ＬＴＤ）、ＣＩＮＮＡＰＯＩＥＴＩＮ（ＣＩＮＮＡＧＥＮ）。

【0369】

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上の免疫調節剤、例えば、限定はされないが、免疫チェックポイントを調節する作用物質を用いる併用療法に関する。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１つ以上を標的にする。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＰＤ－１阻害剤である。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１つ以上に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、抗体、例えば、制限なしに、ニボルマブ、（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１、ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）である。いくつかの実施形態では、免疫調節剤はＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つ以上を標的にする。様々な実施形態では、免疫調節剤はＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１つ以上に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節剤は抗体であり、例えば、制限なしに、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られている）である。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと（任意で、ニボルマブ、リリルマブ、およびウレルマブの１つ以上と）組み合わされる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１つ以上を標的にする作用物質である。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１つ以上に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、抗体であり、例えば、制限なしに、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、Ｙｅｒｖｏｙ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）である。いくつかの実施形態では、本キメラタンパク質は、メラノーマ、前立腺癌、および肺癌の１つ以上の治療のために、イピリムマブ（任意でバビツキシマブ）と組み合わされる。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＣＤ２０を標的にする。様々な実施形態では、免疫調節剤は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節剤は抗体であり、例えば、制限なしに、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ガザイバ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）である。

【0370】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＷＯ２０１３／１０７７９号、ＷＯ２０１５／００７５３６号、ＷＯ２０１５／００７５２０号、ＷＯ２０１５／００７５４２号、およびＷＯ２０１５／００７９０３号（その全内容はこれにより、その全体が参照により組み込まれる）に記載される１つ以上のキメラ作用物質を用いる併用療法に関する。

【0371】

いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるキメラタンパク質は、改変される、すなわち、共有結合により組成物の活性が防止されないように組成物への任意の型の分子の共有結合による、誘導体を含む。例えば、制限はしないが、誘導体は、とりわけ、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結、などにより修飾された組成物を含む。多くの化学修飾のいずれも、公知の技術、例えば、限定はされないが、特異的化学開裂、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などにより実施できる。

【0372】

さらに他の実施形態では、本明細書で記載されるキメラタンパク質は、細胞傷害性薬物をさらに含み、例示的な実施形態では、毒素、化学療法薬、放射性同位体、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす作用物質を含む。そのような作用物質は、本明細書で記載される組成物にコンジュゲートされ得る。

【0373】

本明細書で記載されるキメラタンパク質はこのように、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光色素などの検出可能部分、酵素、基質、生物発光材料、放射性材料、および化学発光部分、または例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬物、および放射性材料などの機能的部分を付加するように、翻訳後に修飾され得る。

【0374】

例示的な細胞傷害性薬物としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：メトトレキサート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン）；アントラサイクリン、例えばダウノルビシン（以前はダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む；抗生物質、例えばダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）；および有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）例えばビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン。他の細胞傷害性薬物としては、パクリタキセル（タキソール）、リシン、シュードモナス外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害性薬物の混合物が挙げられる。

【0375】

さらなる細胞傷害性薬物としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：化学療法薬、例えばカルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン（ｐｌａｔｉｎ）、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎｅ）、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ－１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１２またはＩＬ－２）、ＩＬ－１２Ｒアンタゴニスト、毒素コンジュゲートモノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはそれらの任意の組み合わせ。植物および細菌由来の毒性酵素、例えばリシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素が治療薬（例えば、抗体）にコンジュゲートされ得、細胞型特異的死滅試薬を生成する（Ｙｏｕｌｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：５４８３ （１９８０）； Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：４５３９ （１９８０）； Ｋｒｏｌｉｃｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：５４１９ （１９８０））。

【0376】

他の細胞傷害性薬物としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇにより米国特許第６，６５３，１０４号において記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、ここでαまたはβ粒子を放出する放射性核種は、複合体形成剤の使用ありまたはなしで、キメラタンパク質に安定に結合される。そのような放射性核種としては、β－エミッタ、例えばリン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８、およびα－エミッタ、例えばアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５が挙げられる。

【0377】

例示的な検出可能部分としてはさらに、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、それらに限定されない。さらに例示的な蛍光材料としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、それらに限定されない。さらに例示的な化学発光部分としては、ルミノールが挙げられるが、それに限定されない。さらに例示的な生物発光材料としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、それらに限定されない。さらに例示的な放射性材料としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、それらに限定されない。

【0378】

治療方法
本明細書で記載される方法および組成物は、様々な疾患および障害、例えば、限定はされないが癌、感染、免疫不全、貧血、自己免疫疾患、心血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患および多くの他の疾患および障害の治療に適用される。

【0379】

さらに、本作用物質のいずれも、様々な疾患および障害、例えば、限定はされないが癌、感染、免疫不全、炎症疾患もしくは状態、および自己免疫疾患の治療、またはこれらを治療するための薬物製造において使用され得る。

【0380】

いくつかの実施形態では、本発明は、下記の、またはその１つ以上を有する患者の治療に関する：慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、癌、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球症、地中海貧血症、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏、膠原病性脈管疾患、シュワックマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、内分泌欠乏状態、例えば甲状腺機能低下症またはアジソン病、自己免疫疾患、例えばクローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチもしくは若年性関節リウマチ、潰瘍性大腸炎免疫不全、例えば好酸球性筋膜炎、低免疫グロブリン血症、または胸腺腫／胸腺がん、移植片対宿主病、前白血病、非造血系症候群（例えば、ダウン、デュボヴィッツ、ゼッケル）、フェルティ症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、夜間発作性ヘモグロビン尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球癆、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、マラリア、タンパク質飢餓、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、低代謝状態、およびうっ血性心不全。

【0381】

いくつかの実施形態では、本発明は、下記の、またはその１つ以上を有する患者の治療に関する：慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ運動失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、マイコバクテリア感染症、癌、強皮症、肝炎、Ｃ型肝炎、敗血症性ショック、および関節リウマチ。

【0382】

いくつかの実施形態では、本発明は、癌の、またはそれを有する患者の治療に関する。本明細書では、癌は、身体器官および系統の正常機能を妨害し得る細胞の任意のコントロール不良の増殖を指し、原発性および転移性腫瘍の両方を含む。原発腫瘍またはそれらの元の位置から移動し重要臓器に播種する癌は最終的には、冒された器官の機能的悪化により被験体の死をもたらし得る。転移は、原発腫瘍位置とは異なる、癌細胞の原発腫瘍から身体の他の部分への播種に起因する、癌細胞または癌細胞の群である。転移は最終的には、被験体の死をもたらす。例えば、癌は、良性および悪性癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。

【0383】

治療され得る例示的な癌としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：癌腫、例えば、様々なサブタイプ、例えば、腺がん、基底細胞がん、扁平上皮がん、および移行上皮がんを含む）、肉腫（例えば、骨および軟部組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄、慢性リンパ球性、ヘアリー細胞を含む）、リンパ腫およびミエローマ（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖、非分泌性、ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫）。

【0384】

治療され得る例示的な癌としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：基底細胞がん、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝がん；肝細胞腫；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺がん、および肺扁平上皮がん）；メラノーマ；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（口唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；唾液腺がん；肉腫；皮膚癌；扁平細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰部癌；リンパ腫、例えばホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症と関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍と関連するもの）、およびメグズ症候群。

【0385】

いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染および／または慢性感染の、またはこれを有する患者の治療に関する。例示的な感染としては、シャーガス病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バーウイルスまたはパルボウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルス、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染が挙げられるが、それらに限定されない。

【0386】

様々な実施形態では、本組成物は、１つ以上の炎症疾患または状態、例えば炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血症性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、疼痛、眼性炎症疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠乏、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性痙性失調症、喉頭炎症疾患；結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他のじん肺症、を治療または防止するために使用される。

【0387】

様々な実施形態では、本組成物は、１つ以上の自己免疫疾患または状態、例えば多発性硬化症、真性糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍｓ）、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール病（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓｓｙｎｄｒｏｍｅ）；移植拒絶反応（例えば、同種移植片拒絶の防止）悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病（Ｇｒａｖｅ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、および他の自己免疫疾患、を治療または防止するために使用される。

【0388】

様々な実施形態では、本組成物は、心血管疾患、例えば心臓および脈管構造に影響を与える疾患または状態、を治療、コントロールまたは防止するために使用され、限定はされないが、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）、大動脈狭窄、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化、動脈硬化症、心筋梗塞（心臓発作）、脳血管疾患（脳卒中）、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、アンギナ（安定および不安定）、心房細動、不整脈、弁膜症（ｖａｖｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、および／またはうっ血性心不全を含む。

【0389】

様々な実施形態では、本組成物は、１つ以上の代謝関連障害を治療または防止するために使用される。様々な実施形態では、本発明は、１型および２型糖尿病を含む糖尿病および肥満と関連する糖尿病の治療、コントロールまたは防止に有用である。本発明の組成物および方法は、糖尿病関連障害の治療または防止に有用であり、限定はされないが、糖尿病性腎症、高血糖症、耐糖能障害、インスリン抵抗性、肥満、脂質障害、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベル、高ＬＤＬレベル、アテローム性動脈硬化およびその続発症、血管再狭窄、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、例えばクローン病および潰瘍性大腸炎、他の炎症状態、膵炎、腹部肥満、神経変性疾患、網膜症、新生物状態、脂肪細胞腫瘍、脂肪細胞がん、例えば脂肪肉腫、前立腺癌および他の癌、例えば胃、乳、膀胱および結腸癌、血管新生、アルツハイマー病、乾癬、高血圧、メタボリックシンドローム（例えば、下記障害の３つ以上を有する者：腹部肥満、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール、高血圧、および高い空腹時血糖値）、卵巣アンドロゲン過剰症（多嚢胞性卵巣症候群）、およびインスリン抵抗性が１つの要素である他の障害、例えば睡眠時無呼吸が挙げられる。本発明の組成物および方法は、遺伝的または環境的を含む肥満、および肥満関連障害の治療、コントロール、または防止に有用である。本明細書における肥満関連障害は、肥満と関連し、これにより引き起こされ、またはこれに起因する。肥満関連障害の例としては、肥満、糖尿病、過食、気晴らし食い、および大食症、高血圧、上昇した血漿インスリン濃度およびインスリン抵抗性、脂質異常症、高脂血症、子宮内膜、乳、前立腺、腎臓および結腸癌、変形性関節症、閉塞型睡眠時無呼吸、胆石、心疾患、異常な心拍リズムおよび不整脈（ａｒｒｙｔｈｍｉａ）、心筋梗塞、うっ血性心不全、冠動脈心疾患、突然死、脳卒中、多嚢胞性卵巣疾患、頭蓋咽頭腫、プラダー・ウィリー症候群、フレーリッヒ症候群（Ｆｒｏｈｌｉｃｈ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ＧＨ－欠乏被験体、正常変異低身長、ターナー症候群、および低減された代謝活性または総除脂肪体重のパーセンテージとしての安静時エネルギー消費の減少を示す他の病態、例えば、急性リンパ性白血病を有する子供が挙げられる。肥満関連障害のさらなる例は、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、生殖ホルモン異常、性的および生殖機能障害、例えば受精能障害、不妊症、男性における性腺機能低下症および女性における多毛症、母系肥満と関連する胎性欠陥、胃腸運動性障害、例えば肥満関連胃食道逆流、呼吸障害、例えば肥満－低換気症候群（ピックウィック症候群）、息切れ、心血管障害、炎症、例えば、脈管構造の全身性炎症、動脈硬化症、高コレステロール血症、腰痛、胆嚢疾患、高尿酸血症、痛風、および腎臓癌、および麻酔リスクの増加である。本発明の組成物および方法はまた、アルツハイマー病を治療するのに有用である。

【0390】

様々な実施形態では、本組成物は、１つ以上の呼吸器疾患、例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管収縮、炎症、アレルギー、呼吸妨害、呼吸促迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧、肺血管収縮、肺気腫、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、レフレル症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、間質性肺炎、肺浮腫、肺線維症、サルコイドーシス、呼吸器多核体ウイルス感染と関連する合併症、および他の呼吸器疾患を治療または防止するために使用される。

【0391】

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上の神経変性疾患を治療または防止するために使用される。例示的な神経変性疾患としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：フリードライヒ運動失調症、多発性硬化症（限定はされないが、良性多発性硬化症；再発性－緩解多発性硬化症（ＲＲＭＳ）；二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）；進行性再発性多発性硬化症（ＰＲＭＳ）；および一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）を含む）、アルツハイマー病（限定はされないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発型アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定はされないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤性パーキンソニズム、レビー小体型認知症、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定はされないが、孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、ヒラマヤ病（Ｈｉｒａｍａｙａ Ｄｉｓｅａｓｅ））。

【0392】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は、創傷、例えば、非治癒性創傷、潰瘍、熱傷、または凍傷、慢性または急性創傷、開放創または閉鎖創、内部または外部創傷（例示的な外部創傷は穿通創および非穿通創である）、の治療において用途を見出す。

【0393】

様々な実施形態では、本キメラタンパク質は虚血、非限定的例として、下記と関連する虚血の治療において用途を見出す：急性冠症候群、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞症、動脈硬化症、関節軟骨欠損、無菌全身性炎症、アテローム動脈硬化性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳低灌流、バージャー病、熱傷、癌、心血管疾患、軟骨損傷、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管疾患、化学療法誘発性ニューロパチー、慢性感染、慢性腸間膜虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、挫傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深創傷、遅延性潰瘍治癒、遅延性創傷－治癒、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、糖尿病性ニューロパチー、糖尿病誘発性虚血、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、凍傷、移植片対宿主病、遺伝性出血性末梢血管拡張虚血性血管疾患、過酸素症傷害、低酸素症、炎症、炎症性腸疾患、炎症疾患、損傷腱、間欠性跛行、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血性末梢血管疾患、虚血性胎盤、虚血性腎疾患、虚血性血管疾患、虚血性－再灌流傷害、裂傷、左冠動脈主幹部病変、虚血肢、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、器官虚血、変形性関節症、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢性ニューロパチー、末梢血管疾患、前癌、肺浮腫、肺塞栓症、リモデリング障害、腎虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、固形臓器移植、脊髄損傷、脳卒中、肋軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、外傷性脳損傷、潰瘍性大腸炎、腎臓の血管疾患、血管炎症状態、フォンヒッペル・リンダウ症候群、または組織もしくは器官に対する創傷。

【0394】

様々な実施形態では、本発明は、１つ以上の貧血の治療に関し、慢性腎臓疾患（例えば、透析から）および／または抗癌剤（例えば、化学療法および／またはＨＩＶ治療（例えば、ジドブジン（ＩＮＮ）またはアジドチミジン（ＡＺＴ））、炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍大腸炎）、炎症状態に関連する貧血（例えば、関節炎、ループス、ＩＢＤ）、糖尿病に関連する貧血、統合失調症、脳マラリア、再生不良性貧血として、および癌の治療（例えば、化学療法および／または放射線）由来の脊髄形成異常症、および様々な骨髄異形成症候群疾患（例えば、鎌状赤血球貧血、ヘモグロビンＳＣ症、ヘモグロビンＣ症、α－およびβ－サラセミア、早産後の新生児貧血、および同等の状態）に起因する貧血を含む。

【0395】

いくつかの実施形態では、本発明は、貧血の、すなわち、赤血球の数および／または赤血球中に見出されるヘモグロビンの量が正常未満である状態の、またはこれを有する患者の治療に関する。様々な実施形態では、貧血は急性または慢性であり得る。例えば、本貧血としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：鉄欠乏貧血、腎性貧血、慢性疾患／炎症の貧血、悪性貧血、例えば大球性無酸貧血、若年性悪性貧血および先天性悪性貧血、癌関連貧血、抗癌関連貧血（例えば、化学療法関連貧血、放射線療法関連貧血）、赤芽球癆、過剰の芽細胞を有する不応性貧血、再生不良性貧血、Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球貧血、ＥＳＡの産生障害により引き起こされる貧血、脊髄形成異常症候群、低色素性貧血、小球性貧血、鉄芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、クーリー貧血、地中海貧血症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニ貧血および薬剤性免疫溶血性貧血。貧血は重篤な症状を引き起こす可能性があり、低酸素症、慢性疲労、集中力欠如、蒼白、低血圧、眩暈および心不全を含む。

【0396】

いくつかの実施形態では、本発明は、慢性腎不全に起因する貧血の治療に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、透析、血液透析、腹膜透析、血液濾過、血液濾過透析、および腎臓移植を含む、１つ以上の腎代替療法の使用に起因する貧血の治療に関する。

【0397】

いくつかの実施形態では、本発明は、透析を受けていない、慢性腎臓疾患を有する患者における貧血の治療に関する。例えば、本発明は、ステージ１ＣＫＤ、またはステージ２ＣＫＤ、またはステージ３ＣＫＤ、またはステージ４ＣＫＤ、またはステージ５ＣＫＤの患者に関する。いくつかの実施形態では、本患者はステージ４ＣＫＤまたはステージ５ＣＫＤである。いくつかの実施形態では、本患者は腎臓移植を受けたことがある。いくつかの実施形態では、本発明は、急性腎障害（ＡＫＩ）を有する患者における貧血の治療に関する。

【0398】

いくつかの実施形態では、貧血は化学療法により誘発される。例えば、化学療法は任意の骨髄抑制性化学療法であり得る。いくつかの実施形態では、化学療法は、レブリミド、タロミド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ）、デキサメタゾン、アドリアマイシンおよびドキシルの１つ以上である。いくつかの実施形態では、化学療法は、シスプラチン（例えば、ＰＬＡＴＩＮＯＬ）およびカルボプラチン（例えば、パラプラチン）を含む１つ以上の白金系薬物である。いくつかの実施形態では、化学療法は、本明細書で記載される化学療法薬のいずれか一つである。いくつかの実施形態では、化学療法は、Ｇｒｏｏｐｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ （１９９９） ９１ （１９）： １６１６－１６３４（その内容はこれにより、その全体が参照により組み込まれる）に記載される任意の作用物質である。いくつかの実施形態では、本組成物および方法は、後期癌患者（例えば、ステージＩＶ、またはステージＩＩＩ、またはステージＩＩ癌）における化学療法関連貧血の治療において使用される。いくつかの実施形態では、本組成物および方法は、投与集中化学療法または他の積極的化学療法レジメンを受けている癌患者における化学療法関連貧血の治療において使用される。

【0399】

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上の血液に基づく癌、例えば白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫を有する患者における貧血の治療に関する。そのような癌は骨髄を直接冒し得る。さらに、本発明は、骨または骨髄に広がった転移性癌に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、放射線療法を受けている患者における貧血の治療に関する。そのような放射線療法は骨髄を損傷する可能性があり、赤血球を生成するその能力を低下させる。さらなる実施形態では、本発明は、鉄、ビタミンＢ１２、および葉酸の１つ以上の低減または欠乏を有する患者における貧血の治療に関する。さらなる実施形態では、本発明は、例えば、限定はされないが、外科手術後の、または内出血を引き起こしている腫瘍からの出血多量を有する患者における貧血の治療に関する。さらなる実施形態では、本発明は、慢性疾患の貧血を有する患者における貧血の治療に関する。

【0400】

いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、赤血球生成を刺激する。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、骨髄における関与する赤血球前駆細胞の分裂および分化を刺激する。

【0401】

本発明のある特定の実施形態は、癌患者において化学療法誘発性貧血を治療するのに特に有用である。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、癌患者の化学療法が終了した後のキメラタンパク質の連続投与を可能にする。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、非癌患者と比べて用量低減なしで、癌患者の治療を可能にする。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、化学療法を受けており治癒可能と考えられる癌患者の治療を可能にする。様々な実施形態では、癌患者は、血餅の病歴、最近の外科手術、長期間のベッド安静または活動制限、および化学療法薬による治療の１つ以上を有する。

【0402】

キット
発明はまた、本明細書で記載される任意の作用物質（例えば、様々な追加の治療薬ありまたはなしのキメラタンパク質）の投与のためのキットを提供する。キットは、本明細書で記載される発明の医薬組成物の少なくとも１つを含む、材料または構成要素の集合体である。よって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書で記載される医薬組成物の少なくとも１つを含む。

【0403】

キット中で構成される構成要素の正確な性質は、その意図された目的に依存する。１つの実施形態では、キットはヒト被験体を治療する目的で構成される。

【0404】

使用説明書がキットに含められ得る。使用説明書は典型的には、望ましい結果を達成するため、例えば癌を治療するためにキットの構成要素を使用する際に採用すべき技術を記載する具体的な言い回しを含む。任意で、キットはまた他の有用な構成要素、例えば、希釈剤、バッファー、薬学的に許容される担体、シリンジ、カテーテル、アプリケーター、ピペッティングまたは測定ツール、包帯材料または当業者により容易に認識される他の有用な道具を含む。

【0405】

キット中に集合させる材料および構成要素は、それらの操作性および有用性を保存する任意の好都合で好適な様式で保存され、施術者に提供され得る。例えば、構成要素は室温、冷蔵温度または凍結温度で提供できる。構成要素は典型的には、好適なパッケージング材料中に含められる。様々な実施形態では、パッケージング材料はよく知られた方法により構築されて、好ましくは、無菌の、汚染物質を含まない環境を提供する。パッケージング材料は外部ラベルを有してよく、これはキットおよび／またはその構成要素の内容および／または目的を示す。

【0406】

定義
本明細書では、「１つの（ａ、ａｎ）」または「その（ｔｈｅ）」は１つ以上を意味し得る。

【0407】

特定的に述べられておらず、文脈から明らかでない限り、本明細書では、「または」という用語は「または」および「および」の両方を含み、包含すると理解される。

【0408】

さらに、「約」という用語は、言及される数値表示と関連して使用される場合、言及される数値表示＋または－その言及される数値表示の最大で１０％、例えば、明言される値の（＋または－）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％内を意味する。例えば、「約５０」という言葉は、４５～５５の範囲に及ぶ。

【0409】

「有効量」は、医学的用途と関連して使用される場合、関心のある疾患の測定可能な治療、防止、または発病率の低減を提供するのに有効な量である。

【0410】

本明細書では、活性および／または効果の読み取りが、作用物質または刺激の存在下で、そのような調節なしと比べて、かなりの量、例えば少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれより多く、少なくとも約１００％を含むそれ以下、低減された場合、なにかが「減少される」。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は減少され、いくつかの下流読み取りは減少するが、増加し得るものもある。

【0411】

反対に、活性および／または効果の読み取りが、作用物質または刺激の存在下で、そのような作用物質または刺激なしと比べて、かなりの量、例えば少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれより多く、少なくとも約１００％を含むそれ以下またはそれより多く、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加される場合、活性は「増加される」。

【0412】

本明細書で言及されるように、全ての組成パーセンテージは、他に特に規定がなければ、総組成の重量による。本明細書では、「含む」という単語およびその変形は、非限定的であることが意図され、そのため、リスト中のアイテムの詳述は、この技術の組成物および方法において有用であり得る他の同様のアイテムを排除するものではない。同様に、「できる」および「し得る」という用語およびそれらの変形は、非限定的であることが意図され、そのため、一実施形態が、ある一定の要素または特徴を含んでよい、または含み得るという詳述は、それらの要素または特徴を含まない本技術の他の実施形態を排除しない。

【0413】

含んでいる、含有する、または有するなどの用語の同義語として、「含む」という制約のない用語が、発明を説明し、主張するために本明細書で使用されるが、本発明、またはその実施形態はその代わりに、「から構成される」または「から本質的に構成される」などの代替用語を使用して記載され得る。

【0414】

本明細書では、「好ましい」および「好ましくは」という単語は、ある特定の状況下で、ある一定の利点を提供する技術の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態もまた、同じまたは他の状況下で好ましい可能性がある。さらに、１つ以上の好ましい実施形態の詳述は、他の実施形態が有用でないことを暗示せず、他の実施形態を技術の範囲から排除することは意図されない。

【0415】

治療効果を達成するために必要とされる本明細書で記載される組成物の量は、特定の目的のための従来の手順に従い、経験的に決定され得る。一般に、治療薬を治療目的で投与するためには、治療薬は、薬理学的に有効な用量で与えられる。「薬理学的有効量」「薬理学的に有効な用量」「治療的有効量」または「有効量」は、特に障害または疾患を治療するための、所望の生理的効果を生成するのに十分な量、または所望の結果を達成できる量を示す。有効量は本明細書では、例えば、障害または疾患の症状の発症を遅延する、障害または疾患の症状の過程を変更する（例えば、疾患の症状の進行を減速させる）、障害または疾患の１つ以上の症状または徴候を低減または排除する、および障害または疾患の症状を逆転させるのに十分な量を含む。治療効果はまた、改善が実現するかどうかに関係なく、基礎疾患または障害の進行を停止または減速させることを含む。

【0416】

有効量、毒性、および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の約５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における、標準製薬手順により決定できる。投与量は、採用される剤形および使用される投与経路によって変動し得る。毒性効果と治療効果の間の用量比は治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療的に有効な用量は最初に、例えば、細胞培養アッセイを含むインビトロアッセイから推定できる。また、用量は、細胞培養において、または適切な動物モデルにおいて決定されるＩＣ５０を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて処方できる。血漿中の記載される組成物のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定できる。任意の特定の投与量の効果は好適なバイオアッセイによりモニタできる。投与量は医師により決定でき、必要に応じて、治療の観察される効果を適合させるように調整できる。

【0417】

ある特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量化可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、または実に約９０％またはそれ以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現するかどうかに関係なく、基礎疾患または障害の進行を停止または減速させることを含む。

【0418】

本明細書では、「治療方法」は、本明細書で記載される疾患または障害を治療するための組成物および／または本明細書で記載される疾患または障害を治療するための薬物の製造における使用および／または用途のための組成物の使用に、同じように適用可能である。この発明は、下記の非限定的な実施例によりさらに説明される。

【0419】

実施例
ＩＦＮγ受容体、例えば、ＩＦＮγ受容体１または２サブユニットとの相互作用の損失をもたらすことができ、ならびに、相互作用および受容体活性化がＡｃＴａｋｉｎｅ（すなわち、シグナル伝達物質およびターゲティング作用物質のキメラ）効果を介して回復できる、ヒトインターフェロンγにおける可能性のある突然変異を、関連するインターフェロン受容体複合体のホモロジーモデリングおよび構造分析に基づいて選択した。

【0420】

実施例１：ＩＦＮ－γ受容体１サブユニットとの相互作用のためのＩＦＮ－γ接触残基の同定
ヒトＩＦＮ－γとＩＦＮ－γ受容体１サブユニットの複合体の相同性モデルを構築した。

【0421】

ＩＦＮ－γとＩＦＮ－γ受容体１サブユニットの間の接触残基のリストを調査する。この分析に基づき、これらの残基の側鎖を、立体障害を導入せずに接触を除去するように変異させた。

【0422】

実施例２：ＩＦＮ－γ含有キメラタンパク質の構築およびキャラクタリゼーション
この実施例では、ヒトＣＤ２０を標的にする組換え重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）、可動性２０^＊Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、および改変ヒトＩＦＮガンマ（ｈＩＦＮ－γ）を含むキメラタンパク質を構築し、キャラクタリゼーションした。

【0423】

ｈＩＦＮ－γのインターフェロンガンマ受容体１（ＩＦＮＧＲ１）への結合に影響すると考えられるアミノ酸部位におけるｈＩＦＮ－γの変異体を、野生型（本明細書ではＰ－５５２と、かつアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７を有するものと呼ばれる）の標準の部位特異的突然変異誘発を用いて作製した。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７に関しては、点変異：Ｖ２２Ａ、Ａ２３Ｇ、Ａ２３Ｇ＋Ｄ２４Ｇ、Ｄ２４Ｇ、Ｈ１１１Ａ、Ｈ１１１Ｄ、Ｉ１１４Ａ、Ｑ１１５Ａ、Ａ１１８Ｇ、およびＩ１１４Ａ＋Ａ１１８Ｇを含んだ。９つの変異体は本明細書では、それぞれ、Ｐ－６６７～Ｐ－６７６と呼ばれ；改変ｈＩＦＮ－γは、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５３～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６２のアミノ酸配列を有する）。また、ｈＩＦＮ－γの５つのＣ末端欠失を作製した：５アミノ酸欠失（Δｃ５）、７アミノ酸欠失（Δｃ７）、１４アミノ酸欠失（Δｃ１４）、１５アミノ酸欠失（Δｃ１５）、および１６アミノ酸欠失（Δｃ１６）。５つのＣ末端欠失は本明細書では、それぞれ、Ｐ－６６２～Ｐ－６６６と呼ばれ；改変ｈＩＦＮ－γは、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４８～ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５２のアミノ酸配列を有する）。この実施例において使用される野生型ｈＩＦＮ－γおよび改変ｈＩＦＮ－γの各々は、ｈＩＦＮ－γのＮ末端シグナル配列を欠くことに注意されたい；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４６をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４７と比較する。例示的な改変ｈＩＦＮ－γが図１に示される。

【0424】

キメラタンパク質ｈＣＤ２０ＶＨＨ－（ＧＧＳ）_２０－野生型ｈＩＦＮ－γ－６ｘＨｉｓまたはキメラタンパク質ｈＣＤ２０ＶＨＨ－（ＧＧＳ）_２０－改変ｈＩＦＮ－γ－６ｘＨｉｓに対するコード配列を、哺乳類発現のためにｐＭＴＷベクターにクローニングした。得られたコンストラクトを、ポリエチレンイミンを使用してＨｅｋ２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。タンパク質を、Ｎｉセファロース（登録商標）エクセル（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して上清から精製し；イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して試料から除去した。

【0425】

各ＩＦＮ－γ突然変異の効果を最初に、ＧＡＳ－ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて試験し、それは細胞のＩＦＮＧＲ１がＩＦＮ－γにより結合されたことを報告した。ｐＧＡＳ－ＴＡ－ルシフェラーゼレポーターを使用して、野生型または改変ｈＩＦＮ－γを含むキメラタンパク質のＳＴＡＴ１シグナル伝達を誘導する能力を、ＣＤ２０陽性Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞およびＣＤ２０陰性（ｍｏｃｋ）Ｈｅｋ２９３Ｔ細胞において比較した。ここで、リン酸カルシウムを使用して、細胞を、ＣＤ２０発現プラスミドを用いて、または用いずに、ＧＡＳ－ルシフェラーゼレポーターでトランスフェクトした。トランスフェクション２日後に、細胞を再懸濁し、野生型または変異ＩＦＮ－γを含むキメラタンパク質の段階希釈（図２Ａ～図２Ｐに示される）で一晩、刺激した。ルシフェラーゼを、ＥｎＳｉｇｈｔ（商標）リーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定した。

【0426】

図２Ｄ～図２Ｈおよび図２Ｐに示されるように、１４アミノ酸欠失、１５アミノ酸欠失、および１６アミノ酸欠失バリアント（それぞれ、Ｐ－６６４、Ｐ－６６５、およびＰ－６６６）、Ｖ２２Ａ１点変異体（Ｐ－６６７）、Ａ２３Ｇ１点変異体（Ｐ－６６８）、２点変異体Ａ２３Ｇ－Ｄ２４Ｇ（Ｐ－６６９）、Ｄ２４Ｇ１点変異体（Ｐ－６７０）、および２点変異体Ｉ１１４Ａ－Ａ１１８Ｇ（Ｐ－６７６）は、モックトランスフェクトした細胞に対しＣＤ２０を発現する細胞において、増加したルシフェラーゼシグナルを有した。よって、ＣＤ２０ターゲティング部分を含むこれらのキメラタンパク質は、それらの表面でＣＤ２０を発現する細胞中で特異的にシグナル伝達を活性化する。

【0427】

ＩＦＮ－γ突然変異の効果をその後、ＳＴＡＴ１リン酸化を検出する第２のアッセイにおいて試験し、それは細胞のＩＦＮＧＲ１がＩＦＮ－γにより結合されたことを示す。ここで、Ｈｅｋ２９３Ｔを、ＣＤ２０－発現プラスミド（ＣＤ２０陽性）または空ベクター（ＣＤ２０陰性）でトランスフェクトした。トランスフェクション２日後に、細胞を、野生型または変異ＩＦＮ－γを含むキメラタンパク質の段階希釈（図３Ａ～図３Ｈに示される）で３７℃にて１５分間刺激した。その後、細胞を固定し（１０分、３７℃、ＦｉｘバッファーＩ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、透過処理し（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩバッファーＩ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、洗浄し、それから、抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。データを、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて獲得し、ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ， ＬＬＣ）を用いて分析した。

【0428】

図３Ｂ～図３Ｄおよび図３Ｆに示されるように、１４アミノ酸欠失、１５アミノ酸欠失、および１６アミノ酸欠失バリアント（それぞれ、Ｐ－６６４、Ｐ－６６５、およびＰ－６６６）および２点変異体Ａ２３Ｇ－Ｄ２４Ｇ（Ｐ－６６９）は、モックトランスフェクトした細胞（ＣＤ２０陰性）に対しＣＤ２０陽性である細胞においてＳＴＡＴ１リン酸化を誘導する。よって、これらの４つのキメラタンパク質は、それらの表面上でＣＤ２０を発現した細胞においてシグナル伝達を特異的に活性化する。

【0429】

反対に、Ａ２３Ｇ１点変異体（Ｐ－６６８；図３Ｅ）、Ｄ２４Ｇ１点変異体（Ｐ－６７０；図３Ｇ）、および２点変異体Ｉ１１４Ａ－Ａ１１８Ｇ（Ｐ－６７６；図３Ｈ）は、ＣＤ２０を発現する細胞およびモックトランスフェクトした細胞において、等しいＳＴＡＴ１リン酸化を誘導した。よって、これらの他の３つのキメラタンパク質は、それらが第１のアッセイにおいてシグナル伝達を特異的に活性化したとしても、第２のアッセイにおいてシグナル伝達を非特異的に活性化する。

【0430】

２つの異なる実験アッセイを使用して、抗ヒトＣＤ２０ＶＨＨおよび３つのＩＮＦ－γ欠失（Δｃ１４、Δｃ１５、およびΔｃ１６）の１つまたは２点－変異体（Ａ２３Ｇ－Ｄ２４Ｇ）を含むキメラタンパク質は、ＣＤ２０発現細胞上のＩＦＮＧＲ１に特異的に結合し、活性化する。

【0431】

等価物
発明をその特定の実施形態と関連させて記載してきたが、さらなる改変が可能であり、本出願は、一般に、発明の原理に従い、発明が属する分野内での公知の実行または慣行の範囲内にあり、以上で明記され、添付の特許請求の範囲において従う必須の特徴に適用され得る本開示からのそのような逸脱を含む、発明の全ての変更、使用、適合を包含することが意図されることが理解されるであろう。

【0432】

当業者であれば、単なるルーチン実験だけを用いて、特定的に本明細書で記載される特定の実施形態の多くの等価物を認識し、または確認できる。そのような等価物は、下記特許請求の範囲内に包含されることが意図される。

【0433】

参照による引用
本明細書で言及される全ての特許および刊行物はこれによりその全体が参照により組み込まれる。

【0434】

本明細書で記載される刊行物は本出願の出願日前のそれらの開示のためだけに提供される。本発明が、先行発明を理由に、そのような刊行物に先行しないということを容認すると解釈されるものは本明細書にはない。

【0435】

本明細書では、全ての表題は単なる組織化のためのものであり、本開示をいかなる意味でも制限することを意図しない。任意の個々のセクションの内容は、全てのセクションに同じように適用可能であり得る。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図2K】

【図2L】

【図2M】

【図2N】

【図2O】

【図2P】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図3G】

【図3H】

【配列表】

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