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特許7211703抗ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-01-16

(45)【発行日】2023-01-24

(54)【発明の名称】抗ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

C12N 15/13 20060101AFI20230117BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20230117BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20230117BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20230117BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20230117BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20230117BHJP

C07K 16/40 20060101ALI20230117BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20230117BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20230117BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20230117BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20230117BHJP

C12P 21/08 20060101ALI20230117BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K45/00

A61P35/00

A61P37/04

A61P43/00 111

C07K16/40 ZNA

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

【請求項の数】 19

(21)【出願番号】P 2017533597

(86)(22)【出願日】2015-12-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2018-02-15

(86)【国際出願番号】 US2015067118

(87)【国際公開番号】W WO2016106221

(87)【国際公開日】2016-06-30

【審査請求日】2018-12-18

【審判番号】

【審判請求日】2021-02-04

(31)【優先権主張番号】62/095,325

(32)【優先日】2014-12-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】592054292

【氏名又は名称】ザロックフェラーユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】110000671

【氏名又は名称】八田国際特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】タヴァゾイ，ソハイル

(72)【発明者】

【氏名】ハルバーグ，ニルス

(72)【発明者】

【氏名】タヴァゾイ，マスード

【合議体】

【審判長】上條肇

【審判官】牧野晃久

【審判官】高堀栄二

(56)【参考文献】

【文献】ＡＸＥＬＲＯＤ，Ｈ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，（１１Ｎｏｖ．２０１４），Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．１９，ｐｐ．８８１８－８８５２

【文献】ＧＡＬＬＩＣＣＨＩＯ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，（２００５），Ｖｏｌ．１０５，Ｎｏ．５，ｐｐ．１９７０－１９７６

【文献】特表２０１１－５１４８８１号公報

【文献】ＣＨＥＮ，Ｊ．ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，（１９９７），Ｖｏｌ．１４，ｐｐ．２０３３－２０３９

【文献】ＬＩＮＧＥＲ，Ｒ．Ｍ．Ａ．ｅｔａｌ．，Ａｄｖ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，（２００８），Ｖｏｌ．１００，ｐｐ．３５－８３

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

C12N 15/00- 15/90

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＭＥＤＬＩＮＥ／ＣＡＰｌｕｓ／ＢＩＯＳＩＳ／ＥＭＢＡＳＥ／ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、この際
（ｉ）前記ＶＨは、配列番号１の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１５のＣＤＲ１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２３のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１５のＣＤＲ１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む；
（ｉｖ）前記ＶＨは、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号９のＣＤＲ２、及び配列番号１３のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、及び配列番号２４のＣＤＲ３を含む；
（ｖ）前記ＶＨは、配列番号５のＣＤＲ１、配列番号１０のＣＤＲ２、及び配列番号１４のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む；
（ｖｉ）前記ＶＨは、配列番号２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｖｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、及び配列番号３６のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４７のＣＤＲ３を含む；
（ｖｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｉｘ）前記ＶＨは、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、及び配列番号３７のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、及び配列番号４８のＣＤＲ３を含む；または
（ｘ）前記ＶＨは、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、及び配列番号３８のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項2】

（ｉ）前記ＶＨは、配列番号１の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１５のＣＤＲ１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２３のＣＤＲ３を含む；
（ｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１５のＣＤＲ１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む；
（ｉｖ）前記ＶＨは、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号９のＣＤＲ２、及び配列番号１３のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、及び配列番号２４のＣＤＲ３を含む；または
（ｖ）前記ＶＨは、配列番号５のＣＤＲ１、配列番号１０のＣＤＲ２、及び配列番号１４のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

（ｖｉ）前記ＶＨは、配列番号２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｖｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、及び配列番号３６のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４７のＣＤＲ３を含む；
（ｖｉｉｉ）前記ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む；
（ｉｘ）前記ＶＨは、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、及び配列番号３７のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、及び配列番号４８のＣＤＲ３を含む；または
（ｘ）前記ＶＨは、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、及び配列番号３８のＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

（Ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（Ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

ヒト由来定常領域を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項6】

ヒト化されている、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項7】

モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項8】

精製されている、請求項１～７のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

請求項１～８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む、単離核酸。

【請求項10】

請求項１～８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、培養宿主細胞。

【請求項11】

前記１つ以上のポリヌクレオチドが前記培養宿主細胞によって発現して、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するような条件下で、請求項１０に記載の培養宿主細胞を培養することを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法。

【請求項12】

治療有効量の請求項１～８のいずれかに記載の抗体と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項13】

請求項１～８のいずれかに記載の抗体を含む、ヘテロ共役抗体。

【請求項14】

治療有効量の請求項１３に記載のヘテロ共役抗体と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項15】

請求項１～８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの抱合体を含む、キット。

【請求項16】

請求項１～８のいずれかに記載の抗体または請求項１３に記載のヘテロ共役抗体を含む、癌治療用医薬組成物。

【請求項17】

前記癌は、肺、胸、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、頸、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺、または甲状腺の癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

前記癌は、乳癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項19】

前記癌は、トリプルネガティブ乳癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

１．関連出願の相互参照
本願は、２０１４年１２月２２日出願の米国仮特許出願第６２／０９５，３２５号の利益を主張し、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

２．分野
本開示は、Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合する抗体、及びそのような抗体を含む組成物を提供し、該抗体は、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。本開示はまた、ＭＥＲＴＫに特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体を投与することによって、癌を治療するための方法を提供する。

【背景技術】

【0003】

３．背景
ｃ－ｍｅｒ、ＭＥＲ、癌原遺伝子ｃ－Ｍｅｒ、受容体型チロシンキナーゼＭｅｒＴＫ、チロシンプロテインキナーゼＭｅｒ、ＳＴＫキナーゼ、ＲＰ３８、またはＭＧＣ１３３３４９とも称されるＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）は、ＡＸＬ及びＴＹＲＯ３キナーゼも含む受容体型チロシンキナーゼのＴＡＭファミリーのメンバーである。ＭＥＲＴＫは、リガンド、最も注目すべきは、可溶性タンパク質であるＧａｓ－６の結合による活性化を介して、細胞外間隙からのシグナルを変換する。ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６結合は、その細胞内ドメイン上のＭＥＲＴＫの自己リン酸化反応を誘発し、下流シグナル活性化をもたらす（ＣｕｍｍｉｎｇｓＣＴｅｔａｌ．，（２０１３）ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１９：５２７５－５２８０、ＶｅｒｍａＡｅｔａｌ．，（２０１１）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ１０：１７６３－１７７３）。

【0004】

ＭＥＲＴＫ受容体は、膜結合性及び可溶性の両方の形態で存在する。細胞外ドメインは、可溶性Ｇａｓ－６リガンドが膜結合性ＭＥＲＴＫと結合する能力及び／または有用性を低減することによって、細胞上のＭＥＲＴＫ受容体活性化を負に制御するためにデコイ受容体として作用すると仮定される、可溶性細胞外ドメインを生成するために開裂され得る（ＳａｔｈｅｒＳｅｔａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ１０９：１０２６－１０３３）。結果として、ＭＥＲＴＫは、癌の進行、血管新生、及び転移に関連した二重の役割を有する。一方で、内皮細胞上のＭＥＲＴＫのＧａｓ－６活性化は、共培養系における癌細胞による内皮細胞動員の阻害をもたらす。内皮動員は、腫瘍血管新生、腫瘍増殖、及び転移を可能にする癌細胞の主要な特徴である。しかしながら、一方で、ＭＥＲＴＫは、癌細胞において反対の役割を果たし、その過剰発現は、恐らく、デコイ受容体として可溶性ＭＥＲＴＫ細胞外ドメインタンパク質を生成するために、開裂されたＭＥＲＴＫを放出することによって、転移の増加をもたらす。したがって、腫瘍細胞は、内皮細胞上でＭＥＲＴＫを活性化させ、最終的に内皮動員、血管新生、及び癌の進行をもたらす、可溶性Ｇａｓ－６リガンドの能力（及び／または有用性）を低減するために、デコイ受容体として作用する、細胞外ＭＥＲＴＫ受容体の可溶性形態を分泌する（ＰｎｇＫＪｅｔａｌ．，（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ４８１：１９０－１９４）。

【0005】

歴史的に、ＭＥＲＴＫが単に癌遺伝子としての役割を果たすと考えられたため、癌の治療のために、ＭＥＲＴＫの活性剤ではなく阻害剤を生成しようとする試みがあった（例えば、抗癌化合物として開発された強力な小分子ＭＥＲＴＫ阻害剤である、化合物ＵＮＣ１０６２）（ＬｉｕＪｅｔａｌ．，（２０１３）ＥｕｒＪＭｅｄＣｈｅｍ６５：８３－９３、ＣｕｍｍｉｎｇｓＣＴｅｔａｌ．，（２０１３）ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ１９：５２７５－５２８０、ＶｅｒｍａＡｅｔａｌ．，（２０１１）ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ１０：１７６３－１７７３）。癌細胞及び内皮細胞におけるＭＥＲＴＫの二重の役割を所与として、概してＭＥＲＴＫ活性化（例えば、内皮細胞及び癌細胞の両方の上での）をもたらす分子を用いた処置は、内皮細胞動員及び転移の増加をもたらす可能性がある。しかしながら、癌細胞ではなく内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を活性化させる化合物は、潜在的に、腫瘍血管新生及び転移に対して魅力的な治療薬である。

【0006】

したがって、ＭＥＲＴＫに特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる抗体の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0007】

４．概要
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体及びその抗原結合フラグメントが本明細書に開示される。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＭＥＲＴＫの細胞外部分を特異的に認識する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウスＭＥＲＴＫの細胞外部分を特異的に認識する。別の特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）と結合するために、Ｇａｓ－６と競合する。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体または抗原結合フラグメントは、モノクローナルである。別の特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである。

【0008】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0009】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0010】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0011】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤのＶＨＣＤＲ３（配列番号１３）、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0012】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0013】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0014】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0015】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0016】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0017】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0018】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0019】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0020】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0021】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0022】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0023】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0024】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0025】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0026】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹ（配列番号４５）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0027】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

【0028】

具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記のＶＨＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。

【0029】

具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記のＶＬＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。

【0030】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0031】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0032】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0033】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１３）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0034】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0035】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0036】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0037】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0038】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0039】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹ（配列番号４５）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0040】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0041】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0042】

具体的な実施形態では、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。別の具体的な実施形態では、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。

【0043】

別の実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。別の具体的な実施形態では、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。

【0044】

別の実施形態では、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。別の具体的な実施形態では、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体またはそのフラグメントが本明細書で提供される。

【0045】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書で提供される抗体は、重鎖及び／または軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２からなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、ＩｇＧκ及びＩｇＧλからなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上のヒトＦｃガンマ受容体（複数可）に対する増加した結合親和性を有する定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上のヒトＦｃガンマ受容体（複数可）に対する減少した結合親和性を有する定常領域を含む。

【0046】

別の実施形態では、本明細書に記載される抗体と同じＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）のエピトープに結合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、競合は、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの存在下で、８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、もしくは９８％、または８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％、もしくは８５％～９５％）減少した、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの結合として示される。

【0047】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体である。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書で提供される抗体は、約３ｐＭ～４００ｐＭの範囲内のＫ_Ｄで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗体は、単離される。具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗体は、モノクローナル抗体である。

【0048】

別の実施形態では、重鎖可変領域及び／もしくは軽鎖可変領域、または本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖をコードする核酸分子が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、核酸分子は、配列番号５３または配列番号５５の核酸配列を含む、重鎖可変領域をコードする。別の具体的な実施形態では、核酸分子は、配列番号５４または配列番号５６の核酸配列を含む、軽鎖可変領域をコードする。具体的な実施形態では、核酸分子は、単離される。

【0049】

ある特定の実施形態では、ベクター（例えば、単離ベクター）は、重鎖可変領域及び／もしくは軽鎖可変領域、または本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチドまたはベクターを含む。宿主細胞の例としては、組織培養中のＥ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞が挙げられる。具体的な実施形態では、ポリヌクレオチドが発現し、抗体が産生されるように、宿主細胞を培養することを含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法が本明細書で提供される。

【0050】

別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物が本明細書で提供される。医薬組成物は、癌を治療するために使用され得る。

【0051】

ある特定の実施形態では、有効量の本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法が本明細書で提供される。別の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における癌を治療するための方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、癌を治療する方法は、内皮細胞の遊走の阻害、血管新生の阻害、及び／または腫瘍進行の阻害をもたらす。

【0052】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法によって治療される癌は、肺、胸、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、頸、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺、または甲状腺の癌である。いくつかの実施形態では、治療される癌は、肉腫、扁平上皮細胞癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、またはカポジ肉腫である。

【0053】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法によって治療される癌は、乳癌である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される方法によって治療される癌は、トリプルネガティブ乳癌である。

【0054】

ある特定の実施形態では、癌を治療する方法はさらに、追加の治療薬を対象に投与することを含む。本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書に記載される医薬組成物と組み合わせて対象に投与され得る、追加の治療薬の例は、以下の第５．３節及び第５．４節に記載される。

【0055】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて対象に投与される追加の治療薬は、乳癌を治療するために使用される薬剤、黒色腫を治療するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。

【0056】

具体的な実施形態では、追加の治療薬は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブ、及びラパチニブジトシラートからなる群から選択される、乳癌を治療するために使用される薬剤である。

【0057】

具体的な実施形態では、追加の治療薬は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、及びダカルバジンからなる群から選択される、黒色腫を治療するために使用される薬剤である。

【0058】

具体的な実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。

【0059】

具体的な実施形態では、追加の治療薬は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブ、及びソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である。

【0060】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される方法によって治療される対象は、ヒトである。

【0061】

一態様では、ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、抗体は、内皮細胞のヒトＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。

【0062】

前述の態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、マウスＭＥＲＴＫに特異的に結合する。

【0063】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、ヒトＭＥＲＴＫの細胞外ドメインを特異的に認識し、細胞外ドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。

【0064】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、ヒトＭＥＲＴＫに結合するために、Ｇａｓ－６と競合する。

【0065】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0066】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである。

【0067】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む、可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む、可変領域（ＶＬ）を含む。

【0068】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２３のＣＤＲ３を含む。

【0069】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む、可変領域（ＶＬ）を含む。

【0070】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号９のＣＤＲ２、及び配列番号１３のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、及び配列番号２４のＣＤＲ３を含む。

【0071】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号５のＣＤＲ１、配列番号１０のＣＤＲ２、及び配列番号１４のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0072】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む、可変領域（ＶＬ）を含む。

【0073】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0074】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、及び配列番号３６のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４７のＣＤＲ３を含む。

【0075】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0076】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、及び配列番号３７のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、及び配列番号４８のＣＤＲ３を含む。

【0077】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、及び配列番号３８のＣＤＲ３を含む。

【0078】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＨ）を含み、ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0079】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む、可変領域（ＶＬ）を含む。

【0080】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２３のＣＤＲ３を含む。

【0081】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、及び配列番号２４のＣＤＲ３を含む。

【0082】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0083】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0084】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４７のＣＤＲ３を含む。

【0085】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、及び配列番号４８のＣＤＲ３を含む。

【0086】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖のそれぞれは、可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0087】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号４９を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖は、配列番号５０を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0088】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号５０を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0089】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号５１を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、軽鎖は、配列番号５２を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0090】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号５２を含む可変領域（ＶＬ）を含む。

【0091】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである前述の実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト由来定常領域を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、重鎖定常領域は、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３、及びガンマ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する。

【0092】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化される。

【0093】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、約３ピコモル（ｐＭ）～４００ｐＭの範囲内の解離定数（Ｋ_Ｄ）でヒトＭＥＲＴＫと結合する。

【0094】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、約３ｐＭ～４００ｐＭの範囲内のＫ_ＤでマウスＭＥＲＴＫと結合する。

【0095】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、乳癌細胞の存在下で、インビトロでの内皮細胞の遊走を阻害し、遊走は、対照抗体で処置された内皮細胞と比較して３０％超阻害される。

【0096】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、インビトロでのヒト血管内皮細胞のＭＥＲＴＫのリン酸化反応を促進する。

【0097】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、インビトロでの癌細胞上のＭＥＲＴＫのリン酸化反応を促進しない。

【0098】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、インビボでの腫瘍血管新生を阻害する。

【0099】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、内皮細胞の非存在下でのインビトロトランスウェル遊走アッセイにおいて、多形膠芽腫細胞株Ａ１７２の遊走を阻害しない。

【0100】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、多形膠芽腫細胞株Ａ１７２上のＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させない。

【0101】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号１の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0102】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２のＣＤＲ１、配列番号７のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号１６のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２３のＣＤＲ３を含む。

【0103】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0104】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号４のＣＤＲ１、配列番号９のＣＤＲ２、及び配列番号１３のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号１７のＣＤＲ１、配列番号２１のＣＤＲ２、及び配列番号２４のＣＤＲ３を含む。

【0105】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号５のＣＤＲ１、配列番号１０のＣＤＲ２、及び配列番号１４のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号１８のＣＤＲ１、配列番号２０のＣＤＲ２、及び配列番号２２のＣＤＲ３を含む。

【0106】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号３のＣＤＲ１、配列番号６のＣＤＲ２、及び配列番号１１のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＬは、配列番号１５の相補的決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0107】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２５のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0108】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２６のＣＤＲ１、配列番号３１のＣＤＲ２、及び配列番号３６のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号４０のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４７のＣＤＲ３を含む。

【0109】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３２のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0110】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２８のＣＤＲ１、配列番号３３のＣＤＲ２、及び配列番号３７のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号４１のＣＤＲ１、配列番号４５のＣＤＲ２、及び配列番号４８のＣＤＲ３を含む。

【0111】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２９のＣＤＲ１、配列番号３４のＣＤＲ２、及び配列番号３８のＣＤＲ３を含む。

【0112】

別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供され、ＶＨは、配列番号２７のＣＤＲ１、配列番号３０のＣＤＲ２、及び配列番号３５のＣＤＲ３を含む。そのような態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号３９のＣＤＲ１、配列番号４３のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。そのような態様の別の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに、軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含み、ＶＬは、配列番号４２のＣＤＲ１、配列番号４４のＣＤＲ２、及び配列番号４６のＣＤＲ３を含む。

【0113】

前述の態様の具体的な実施形態では、抗体は、免疫グロブリンであり、抗原結合フラグメントは、免疫グロブリンの一部分である。

【0114】

前述の態様の具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、免疫グロブリンである。

【0115】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化される。

【0116】

前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト由来定常領域を含む。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化免疫グロブリンである。

【0117】

抗体が２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含むモノクローナル抗体または免疫グロブリンではない前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体である。

【0118】

別の態様では、（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンが本明細書で提供される。

【0119】

別の態様では、（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンが本明細書で提供される。

【0120】

別の態様では、
（Ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（Ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する免疫グロブリンが本明細書で提供される。

【0121】

別の態様では、ＭＥＲＴＫに結合するために、
（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第１の免疫グロブリン、ならびに
（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第２の免疫グロブリン、からなる群から選択される参照抗体と競合する、抗体が本明細書で提供される。

【0122】

別の態様では、配列番号１のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0123】

別の態様では、配列番号２のＶＨＣＤＲ１、配列番号７のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１２のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0124】

別の態様では、配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号８のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0125】

別の態様では、配列番号４のＶＨＣＤＲ１、配列番号９のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１３のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0126】

別の態様では、配列番号５のＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0127】

別の態様では、配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0128】

別の態様では、配列番号２５のＶＨＣＤＲ１、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0129】

別の態様では、配列番号２６のＶＨＣＤＲ１、配列番号３１のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３６のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0130】

別の態様では、配列番号２７のＶＨＣＤＲ１、配列番号３２のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0131】

別の態様では、配列番号２８のＶＨＣＤＲ１、配列番号３３のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３７のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0132】

別の態様では、配列番号２９のＶＨＣＤＲ１、配列番号３４のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0133】

別の態様では、配列番号２７のＶＨＣＤＲ１、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0134】

別の態様では、
（Ａ）配列番号１のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３、
（Ｂ）配列番号２のＶＨＣＤＲ１、配列番号７のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１２のＶＨＣＤＲ３、
（Ｃ）配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号８のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３、
（Ｄ）配列番号４のＶＨＣＤＲ１、配列番号９のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１３のＶＨＣＤＲ３、
（Ｅ）配列番号５のＶＨＣＤＲ１、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＶＨＣＤＲ３、
（Ｆ）配列番号３のＶＨＣＤＲ１、配列番号６のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＶＨＣＤＲ３、
（Ｇ）配列番号２５のＶＨＣＤＲ１、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３、
（Ｈ）配列番号２６のＶＨＣＤＲ１、配列番号３１のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３６のＶＨＣＤＲ３、
（Ｉ）配列番号２７のＶＨＣＤＲ１、配列番号３２のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３、
（Ｊ）配列番号２８のＶＨＣＤＲ１、配列番号３３のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３７のＶＨＣＤＲ３、
（Ｋ）配列番号２９のＶＨＣＤＲ１、配列番号３４のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＶＨＣＤＲ３、または
（Ｌ）配列番号２７のＶＨＣＤＲ１、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２、及び配列番号３５のＶＨＣＤＲ３、を含む、抗体重鎖が本明細書で提供される。

【0135】

別の態様では、配列番号１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、配列番号１９のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２２のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0136】

別の態様では、配列番号１６のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２３のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0137】

別の態様では、配列番号１７のＶＬＣＤＲ１、配列番号２１のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２４のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0138】

別の態様では、配列番号１８のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２２のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0139】

別の態様では、配列番号３９のＶＬＣＤＲ１、配列番号４３のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４６のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0140】

別の態様では、配列番号４０のＶＬＣＤＲ１、配列番号４４のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４７のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0141】

別の態様では、配列番号４１のＶＬＣＤＲ１、配列番号４５のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４８のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0142】

別の態様では、配列番号４２のＶＬＣＤＲ１、配列番号４４のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４６のＶＬＣＤＲ３を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0143】

別の態様では、
（Ａ）配列番号１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、配列番号１９のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２２のＶＬＣＤＲ３、
（Ｂ）配列番号１６のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２３のＶＬＣＤＲ３、
（Ｃ）配列番号１７のＶＬＣＤＲ１、配列番号２１のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２４のＶＬＣＤＲ３、
（Ｄ）配列番号１８のＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号２２のＶＬＣＤＲ３、
（Ｅ）配列番号３９のＶＬＣＤＲ１、配列番号４３のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４６のＶＬＣＤＲ３、
（Ｆ）配列番号４０のＶＬＣＤＲ１、配列番号４４のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４７のＶＬＣＤＲ３、
（Ｇ）配列番号４１のＶＬＣＤＲ１、配列番号４５のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４８のＶＬＣＤＲ３、または
（Ｈ）配列番号４２のＶＬＣＤＲ１、配列番号４４のＶＬＣＤＲ２、及び配列番号４６のＶＬＣＤＲ３、を含む、抗体軽鎖が本明細書で提供される。

【0144】

別の態様では、前述の態様のいずれかに記載される抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、単離核酸が本明細書で提供される。

【0145】

別の態様では、前述の態様のいずれかに記載される抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、単離核酸が本明細書で提供される。

【0146】

別の態様では、前述の態様／実施形態のいずれかに記載される抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前述の態様のいずれかに記載される免疫グロブリン、またはＭＥＲＴＫと結合するために、
（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第１の免疫グロブリン、ならびに
（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第２の免疫グロブリン、からなる群から選択される参照抗体と競合する抗体、をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞が本明細書で提供される。

【0147】

別の態様では、前述の態様のいずれかに記載される抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞が本明細書で提供される。

【0148】

別の態様では、前述の態様のいずれかに記載される抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞が本明細書で提供される。

【0149】

別の態様では、抗体または抗原結合フラグメントを産生する方法が本明細書で提供され、１つ以上のポリヌクレオチドが細胞によって発現して、ポリヌクレオチドによってコードされた抗体、抗原結合フラグメント、または免疫グロブリンを産生するような条件下で、前述の態様／実施形態のいずれかに記載される抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前述の態様のいずれかに記載される免疫グロブリン、またはＭＥＲＴＫと結合するために、
（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第１の免疫グロブリン、ならびに
（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第２の免疫グロブリン、からなる群から選択される参照抗体と競合する抗体、
をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞を培養することを含む。

【0150】

別の態様では、抗体重鎖を産生する方法が本明細書で提供され、ポリヌクレオチドが細胞によって発現して、ポリヌクレオチドによってコードされた抗体、抗原結合フラグメント、または免疫グロブリンを産生するような条件下で、前述の態様のいずれかに記載される抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞を培養することを含む。

【0151】

別の態様では、抗体軽鎖を産生する方法が本明細書で提供され、ポリヌクレオチドが細胞によって発現して、ポリヌクレオチドによってコードされた抗体、抗原結合フラグメント、または免疫グロブリンを産生するような条件下で、前述の態様のいずれかに記載される抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含有する、エクスビボ細胞を培養することを含む。

【0152】

別の態様では、治療有効量の前述の態様／実施形態のいずれかに記載される抗体もしくは抗原結合フラグメント、または前述の態様のいずれかに記載される免疫グロブリン、またはＭＥＲＴＫと結合するために、
（ａ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第１の免疫グロブリン、ならびに
（ｂ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、第２の免疫グロブリン、からなる群から選択される参照抗体と競合する抗体、
ならびに医薬的に許容される担体と含む、医薬組成物が本明細書で提供される。

【0153】

別の態様では、癌の治療を必要としている対象にそれを行う方法が本明細書で提供され、前述の態様に記載される医薬組成物を該対象に投与することを含む。

【0154】

癌を治療する方法の前述の態様の具体的な実施形態では、癌は、肺、胸、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、頸、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺、または甲状腺の癌である。そのような具体的な実施形態のある特定の実施形態では、癌は、乳癌である。そのようなある特定の実施形態のさらなる実施形態では、癌は、トリプルネガティブ乳癌である。

【0155】

癌を治療する方法の前述の態様の具体的な実施形態では、癌は、肉腫、扁平上皮細胞癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、またはカポジ肉腫である。

【0156】

癌を治療する方法の前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、本方法はさらに、追加の治療薬を対象に投与することを含む。

【0157】

本方法がさらに追加の治療薬を対象に投与することを含む実施形態の具体的な実施形態では、追加の治療薬は、癌を治療するためのものである。

【0158】

追加の治療薬が癌を治療するためのものである実施形態の具体的な実施形態では、追加の治療薬は、乳癌を治療するために使用される薬剤、黒色腫を治療するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。そのような具体的な実施形態の１つのさらなる実施形態では、追加の治療薬は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブ、及びラパチニブジトシラートからなる群から選択される、乳癌を治療するために使用される薬剤である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、及びダカルバジンからなる群から選択される、黒色腫を治療するために使用される薬剤である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療薬は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブ、及びソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である。

【0159】

癌を治療する方法の前述の態様／実施形態のいずれかの具体的な実施形態では、対象は、ヒトである。

【0160】

５．図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0161】

【図1A】図１Ａ及び図１Ｂ：ＭＥＲＴＫ配列。Ａ）抗体の産生のためにマウスを免疫化するために使用される、組み換えＭＥＲＴＫペプチドの概略図。ペプチドは、ＭＥＲＴＫの細胞外ドメイン（図１Ｂを参照されたい）、短鎖リンカー、及びヒトＩｇＧ_１の一部分からなる。

【図1B】図１Ａ及び図１Ｂ：ＭＥＲＴＫ配列。Ｂ）図１Ａに記載される組み換えＭＥＲＴＫペプチドで使用されるＭＥＲＴＫの一部分（太字及び下線のある配列、配列番号５８）を示す、完全長ヒトＭＥＲＴＫの配列（配列番号５７）。

【図2】図２：ＭＥＲＴＫモノクローナル抗体スクリーン。単一ハイブリドーマクローンから回収されたＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体の結合特性を特徴付けるために使用される、抗体捕捉ＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す図。抗体クローンは、第１の縦列においてＭ１～Ｍ２０に任意に指定される。ＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体のうちのいくつかは、第２の縦列において大きい（＞３．５）Ｏ．Ｄ．値によって示されるように、ＭＥＲＴＫに対して高親和性結合を示した。これらの抗体のうちのいくつかはまた、第３の縦列において小さい（＜２．５）遮断Ｏ．Ｄ．値によって示されるように、Ｇａｓ－６に対するＭＥＲＴＫの結合を中和させた。

【図3】図３：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９及びＭ６は、内皮動員を阻害する。モノクローナル抗体Ｍ６またはＭ１９のいずれかの生理学的濃度が、転移性乳癌細胞による内皮動員を有意に阻害することが可能であることを示す図。２．５×１０^４個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を４連で播種した。癌細胞に向かう５×１０^４個のＨＵＶＥＣ細胞のトランスウェル遊走を、スクリーンから単離した２００ｎｇ／ｍＬの対照抗体（ＩｇＧ）またはＭＥＲＴＫ結合抗体の存在下で評価した。トランスウェル挿入物を通じて遊走した細胞の画像を取得し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して細胞を数えた。Ｎ＝４。内皮細胞動員を有意に阻害したモノクローナル抗体（Ｍ６及びＭ１９）はそれぞれ、赤色及び緑色で表示される。エラーバーは、標本平均の標準誤差を表す。

【図4】図４Ａ－Ｃ：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９は、内皮細胞上でＭＥＲＴＫを活性化する。Ａ）活性化（リン酸化）ＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）ならびに合計レベルのＭＥＲＴＫ及びＡＫＴのウェスタンブロット解析の前に１６時間にわたって、ＨＵＶＥＣ細胞を、ＦＢＳなし＋Ｍ１９なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ１９なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９のいずれかで処置した。示されるように、Ｍ１９抗体を用いた処置は、活性化ＭＥＲＴＫのレベルを増加させた。Ｂ）図４ＡからのウェスタンブロットデータからのＭ１９で処置された、及び未処置のＨＵＶＥＣ細胞から単離された、Ｐ－ＭＥＲＴＫ対ＭＥＲＴＫのタンパク質発現レベルの比として計算された、Ｍ１９抗体処置によるＭＥＲＴＫ活性化の定量化。Ｃ）Ｐ－ＭＥＲＴＫのウェスタンブロット解析の前に３０分間にわたって、示されるように、ＨＵＶＥＣ細胞を、増加する濃度のＭ１９抗体で処置した。Ｍ１９処置の用量の増加と共に、ＭＥＲＴＫの活性化の増加が見られたことに留意されたい。

【図5】図５Ａ及び図５Ｂ：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ６は、内皮細胞上でＭＥＲＴＫを活性化する。Ａ）活性化（リン酸化）ＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）ならびに合計レベルのＭＥＲＴＫのウェスタンブロット解析の前に１６時間にわたって、ＨＵＶＥＣ細胞を、ＦＢＳなし＋Ｍ６なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ６なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ６、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬのＭ６のいずれかで処置した。示されるように、Ｍ６抗体を用いた処置は、活性化ＭＥＲＴＫのレベルを増加させた。Ｂ）図５ＡからのウェスタンブロットデータからのＭ６で処置された、及び未処置のＨＵＶＥＣ細胞から単離された、Ｐ－ＭＥＲＴＫ対ＭＥＲＴＫのタンパク質発現レベルの比として計算された、Ｍ６抗体処置によるＭＥＲＴＫ活性化の定量化。

【図6】図６：ＭＥＲＴＫ結合抗体Ｍ１９は、癌細胞上でＭＥＲＴＫを活性化しない。活性化ＭＥＲＴＫ（Ｐ－ＭＥＲＴＫ）ならびに合計レベルのＭＥＲＴＫのウェスタンブロット解析の前に１６時間にわたって、ＬＭ２乳癌細胞を、ＦＢＳなし＋Ｍ１９抗体なし、１０％ＦＢＳ＋Ｍ１９抗体なし、１０％ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍＬのＭ１９抗体、またはＦＢＳなし＋２５μｇ／ｍＬＭ１９抗体のいずれかで処置した。示されるように、Ｍ１９抗体で処置された癌細胞において、検出可能なレベルのＰ－ＭＥＲＴＫは誘発されなかった。

【図7】図７：Ｍ１９は、高親和性でヒトＭＥＲＴＫに結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、ヒトＭＥＲＴＫ（ｈＭｅｒ）に対するＭ１９（Ｍｅｒ－Ｍ１９）に関する抗体結合反応速度を示す図。溶液中の分析物に対する結合を試験するために、精製されたＭ１９を、１マイクログラム／ｍＬの濃度でＡＭＱセンサ上に搭載した。全ての分析物を、合計で７つの濃度のために、２倍希釈系列を用いて５ｎＭで調製した。各濃度に対するローカルフィット、ならびに全体的なグローバルフィットを用いて、１：１モデルを使用して、反応速度論的適合を計算した。ヒトＭＥＲＴＫへのＭ１９結合に関する、全体的なグローバルフィットで計算された結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、３２６ピコモルであった。

【図8】図８：Ｍ１９は、高親和性でマウスＭＥＲＴＫに結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、マウスＭＥＲＴＫ（ｍｓＭｅｒ）に対するＭ１９（Ｍｅｒ－Ｍ１９）に関する抗体結合反応速度を示す図。溶液中の分析物に対する結合を試験するために、精製されたＭ１９を、１マイクログラム／ｍＬの濃度でＡＭＱセンサ上に搭載した。全ての分析物を、合計で７つの濃度のために、２倍希釈系列を用いて５ｎＭで調製した。各濃度に対するローカルフィット、ならびに全体的なグローバルフィットを用いて、１：１モデルを使用して、反応速度論的適合を計算した。マウスＭＥＲＴＫへのＭ１９結合に関する、全体的な計算されたグローバルフィット結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、３０５ピコモルであった。

【図9】図９：Ｍ１９を用いた処理は、インビボでのトリプルネガティブ乳癌の原発腫瘍増殖及び転移を阻害する。Ａ）２５０μｇの対照抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体のいずれかで隔週処置された、マウスにおける２０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１または５０００個のＬｍ１ａ１乳癌細胞の乳房脂肪体腫瘍増殖。Ｂ）２５０μｇの対照抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体のいずれかで隔週処理された、マウスにおける乳房脂肪体に、Ｌｍ１ａ１乳癌細胞を両側に注射した。９８日後、肺を除去し、Ｈ＆Ｅ染色のために処置し、転移性小節の数を数えた。Ｎ＝４。エラーバーは、標本平均の標準誤差を表す。スチューデントのｔ検定を使用して、Ｐ値を得た（＊ｐ＜０．０５）。

【図10】図１０：Ｍ１９を用いた処置は、インビボでの血管新生を阻害する。５８日間増殖し、２５０μｇの対照抗体（ＩｇＧ）またはＭ１９抗体のいずれかで週２回処置された乳房脂肪体異種移植腫瘍を、ＤＡＰＩ及びＣＤ３１に対して二重染色した。閾値ＣＤ３１シグナルを使用することによって、血管密度を定量化した。Ｎ＝４。エラーバーは、標本平均の標準誤差を表す。スチューデントのｔ検定を使用して、Ｐ値を得た（＊ｐ＜０．０５）。

【図11】図１１：Ｍ６は、高親和性でＭＥＲＴＫに結合する。Ｍ６は、高親和性でヒトＭＥＲＴＫに結合する。バイオレイヤー干渉法を使用した、ヒトＭＥＲＴＫ（ｈＭｅｒ）に対するＭ６（Ｍｅｒ－Ｍ６）に関する抗体結合反応速度を示す図。溶液中の分析物に対する結合を試験するために、精製されたＭ６を、１マイクログラム／ｍＬの濃度でＡＭＱセンサ上に搭載した。全ての分析物を、合計で７つの濃度のために、２倍希釈系列を用いて５ｎＭで調製した。各濃度に対するローカルフィット、ならびに全体的なグローバルフィットを用いて、１：１モデルを使用して、反応速度論的適合を計算した。ヒトＭＥＲＴＫへのＭ６結合に関する、全体的な計算された結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、４．６ピコモルであった。

【図12】図１２：Ｍ６を用いた処理は、インビボでのトリプルネガティブ乳癌の原発腫瘍増殖を阻害する。２５０μｇの対照抗体またはＭ６抗体のいずれかで２１日間にわたって隔週処置された、マウスにおける２０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１による乳房脂肪体腫瘍増殖。Ｎ＝４。エラーバーは、標本平均の標準誤差を表す。

【発明を実施するための形態】

【0162】

６．詳細な説明
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）の細胞外ドメインを特異的に認識する。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｊｕｒｋａｔ細胞内で発現する１８５キロダルトン（ｋＤ）ＭＥＲＴＫ糖型、単球細胞系Ｕ９３７内の２０５ｋＤＭＥＲＴＫ糖型、ヒト白血病細胞（例えば、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病）内で発現する１３５～１４０ｋＤＭＥＲＴＫ糖型、またはヒト白血病細胞（例えば、ヒトＴ細胞急性リンパ芽球性白血病）内で発現する１７０～１９０ｋＤＭＥＲＴＫ糖型と結合しない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、癌細胞上のＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させない。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、多形膠芽腫細胞株Ａ１７２上のＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させない。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離される。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５７のアミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫタンパク質に特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５８のアミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫの細胞外領域に特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５８に特異的に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫに結合する２つの抗原結合部位を含み、特定の実施形態では、２つの抗原結合部位は、ＭＥＲＴＫ上の同じエピトープに結合し、特定の実施形態では、２つの抗原結合部位は、同一のＣＤＲを含む。

【0163】

抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換えで産生された抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖及び２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖モノマー、抗体重鎖モノマー、抗体軽鎖ダイマー、抗体重鎖ダイマー、抗体軽鎖－抗体重鎖の対、イントラボディ、ヘテロ共役抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）が挙げられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体集団を指す。抗体は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、もしくはＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａもしくはＩｇＧ_２ｂ）の免疫グロブリン分子を有してもよい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラスもしくはサブクラスである。具体的な実施形態では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の具体的な実施形態では、抗体は、好ましくは免疫グロブリンである、ヒトモノクローナル抗体である。

【0164】

本明細書で使用される場合、「抗原結合フラグメント」、「抗原結合領域」という用語、及び同様の用語は、抗体分子に、抗原に対するその特異性を与えるアミノ酸残基を含む、抗体分子の一部分を指す（例えば、相補的決定領域（ＣＤＲ））。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトなどの任意の動物種に由来し得る。一例として、抗原結合フラグメントとしては、上記の抗体のいずれかのＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、及び抗原結合フラグメントが挙げられる。

【0165】

本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部分、概して、抗体間で配列が広範囲に異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性で使用される、軽鎖または重鎖の一部分を指す。配列の変動性が相補的決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中される一方で、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論にも束縛されるものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが、抗原との抗体の相互作用及び特異性に主に関与すると考えられる。ある特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

【0166】

ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＥｘｅｍｐｌａｒｙ定義を含む、当該技術分野における様々な方法で定義される。Ｋａｂａｔ定義は、配列変動性に基づき、ＣＤＲ領域を予測するために最も一般的に使用される定義である（Ｋａｂａｔ，ＥｌｖｉｎＡ．ｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ：ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，１９８３）。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づく（Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，（１９８７）ＪＭｏｌＢｉｏｌ１９６：９０１－９１７）。Ｋａｂａｔ定義とＣｈｏｔｈｉａ定義との間の妥協案であるＡｂＭ定義は、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｒｏｕｐによって作製された抗体構造モデリングのための統合プログラムスイートである（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）（ＭａｒｔｉｎＡＣＲｅｔａｌ．，（１９８９）ＰＮＡＳ８６：９２６８－９２７２）。ｃｏｎｔａｃｔ定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）（ＭａｃＣａｌｌｕｍＲＭｅｔａｌ．，（１９９６）ＪＭｏｌＢｉｏｌ５：７３２－７４５を参照されたい）。ＩＭＧＴ定義は、ＩＭＧＴからのものである（”ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）ウェブサイトｉｍｇｔ．ｏｒｇ、設立者及びディレクター：Ｍａｒｉｅ－ＰａｕｌｅＬｅｆｒａｎｃ（Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ））。Ｅｘｅｍｐｌａｒｙ定義は、ＡｂＭ及びＫａｂａｔの組み合わせである（Ｐｒｅｓｔａｅｔａｌ．，（１９９７）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５７：４５９３－４５９９）。

【0167】

また、そのような抗ＭＥＲＴＫ抗体及びその抗原結合フラグメントをコードする、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離核酸（ポリヌクレオチド）が提供される。さらに、そのような抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含む、ベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）が提供される。また、そのような抗体を作製する方法が提供される。他の態様では、有効量の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法が本明細書で提供される。関連組成物（例えば、医薬組成物）及びキットもまた提供される。

【0168】

６．１．抗体
６．１．１．配列及び変異体
具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表１または３の抗体のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表１または３の抗体のＶＨＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表１または３の抗体のＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または３の抗体のＶＨＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む（例えば、表１の１列のＶＨＣＤＲ、例えば、抗体Ｍ６に対してＫａｂａｔＶＨＣＤＲのうちの全部）。

【0169】

具体的な実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表２または４の抗体のＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表２または４の抗体のＶＬＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、またはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義されるような、表２または４の抗体のＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または４の抗体のＶＬＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む（例えば、表１の１列のＶＨＣＤＲ、例えば、抗体Ｍ６に対してＫａｂａｔＶＨＣＤＲのうちの全部）。

【0170】

【表1】

【0171】

【表2】

【0172】

【表3】

【0173】

【表4】

【0174】

【表5】

【0175】

【表6】

【0176】

【表7】

【0177】

【表8】

【0178】

【表9】

【0179】

【0180】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0181】

【0182】

【0183】

【0184】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0185】

【0186】

【0187】

【0188】

【0189】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0190】

【0191】

【0192】

【0193】

【0194】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

【0195】

【0196】

【0197】

【0198】

【0199】

具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記のＶＨＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。

【0200】

具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記のＶＬＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全部を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。

【0201】

【0202】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0203】

【0204】

【0205】

【0206】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0207】

【0208】

【0209】

【0210】

【0211】

【0212】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0213】

具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全部を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１または表３のＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表２または表４のＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１及び２）を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３及び４）を含む。

【0214】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＤＹＳＭＨ（配列番号２５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0215】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹ（配列番号２６）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＤＴＧ（配列番号３１）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＦＧＡＭＤ（配列番号３６）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＳＱＤＶＴＮＶ（配列番号４０）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＹＹＲＴＰＲ（配列番号４７）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0216】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＮＹＧＭＮ（配列番号１）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0217】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号２）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＴＹＴＧ（配列番号７）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１２）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＳＱＤＶＧＤＡ（配列番号１６）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＹＲＳＹＰＬ（配列番号２３）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0218】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号８）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0219】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＴＮＹＧＭＮ（配列番号４）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴ（配列番号９）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤ（配列番号１３）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＧＤＡＶＴＷＣ（配列番号１７）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨ（配列番号２１）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬ（配列番号２４）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0220】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号５）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号１０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１４）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＱＤＶＧＤＡ（配列番号１８）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳ（配列番号２０）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0221】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号６）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＫＳＴＶＶＳＲＹＦＤＶ（配列番号１１）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＧＤＡＶＴ（配列番号１５）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＡＳＴＲＨＴ（配列番号１９）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＲＳＹＰＬＴ（配列番号２２）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0222】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３２）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0223】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＴＤＹＳＭＨ（配列番号２８）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＶＧＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴ（配列番号３３）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤ（配列番号３７）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＴＮＶＶＡＷＹ（配列番号４１）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹ（配列番号４５）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲ（配列番号４８）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0224】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳ（配列番号２９）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＩＮＴＤＴＧＥＰ（配列番号３４）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＡＲＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３８）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＱＤＶＴＮＶ（配列番号４２）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳ（配列番号４４）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0225】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、
（ｉ）ＶＨは、
（ａ）ＮＹＴＦＴＤＹＳＭＨ（配列番号２７）のＶＨＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＷＩＮＴＤＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号３０）のＶＨＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＷＦＧＡＭＤＹ（配列番号３５）のＶＨＣＤＲ３、を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、
（ａ）ＫＡＳＱＤＶＴＮＶＶＡ（配列番号３９）のＶＬＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）ＳＡＳＹＲＹＴ（配列番号４３）のＶＬＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）ＱＱＹＹＲＴＰＲＴ（配列番号４６）のＶＬＣＤＲ３、を含む。

【0226】

具体的な実施形態では、ＶＨは、上記のＶＨＣＤＲのうちの２つまたは３つ全部を含み、かつ／またはＶＬは、上記のＶＬＣＤＲのうちの２つまたは３つ全部を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、表１または表３の抗体のうちの１つのＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、表１または表３の抗体のうちの１つのＶＨＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、表１または表３の抗体のうちの１つのＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、表２または表４の抗体のうちの１つのＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、表２または表４の抗体のうちの１つのＶＬＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、表２または表４の抗体のうちの１つのＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１）を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３）を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。ある特定の実施形態では、ＶＬは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨとＶＬとを含み、ＶＨは、抗体Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表３）を含み、ＶＬは、抗体Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表４）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨとＶＬとを含み、ＶＨは、抗体Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（表１）を含み、ＶＬは、抗体Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（表２）を含む。

【0227】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列（表５）（例えば、抗体Ｍ６のＶＨ）を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列（表６）（例えば、抗体Ｍ１９のＶＨ）を含む。

【0228】

別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列（表５）（例えば、抗体Ｍ６のＶＬ）を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列（表６）（例えば、抗体Ｍ１９のＶＬ）を含む。

【0229】

１つの具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む（例えば、抗体Ｍ６のＶＨ及びＶＬ）。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む（例えば、抗体Ｍ１９のＶＨ及びＶＬ）。

【0230】

ある特定の態様では、本明細書に記載される抗体は、そのＶＨドメイン単独もしくはそのＶＬドメイン単独によって、またはその３つのＶＨＣＤＲ単独もしくはその３つのＶＬＣＤＲ単独によって記載されてもよい。例えば、元の抗体の親和性と同じくらい高いか、またはそれよりも高い親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらす、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリから相補的軽鎖または重鎖のそれぞれを識別することによるマウス抗αｖβ３抗体のヒト化を記載する、ＲａｄｅｒＣｅｔａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ９５：８９１０－８９１５を参照されたく、それは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。また、特異ＶＨドメイン（またはＶＬドメイン）を使用し、相補的可変ドメインに関してライブラリをスクリーニングすることによって、特異抗原と結合する抗体を産生する方法を記載する、ＣｌａｃｋｓｏｎＴｅｔａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４－６２８も参照されたく、それは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。また、特異ＶＨドメインを使用し、相補的ＶＬドメインに関してライブラリ（例えば、ヒトＶＬライブラリ）をスクリーニングすることによって、特異抗原と結合する抗体を産生し、選択されたＶＬが追加の相補的（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を誘導するために使用され得る、方法を記載する、ＫｉｍＳＪ＆ＨｏｎｇＨＪ，（２００７）ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌ４５：５７２－５７７も参照されたく、それは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0231】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）及び／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域に沿った１つ以上のＣＤＲの位置は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への免疫特異的結合が維持される（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持される）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのアミノ酸位置によって異なってもよい。別の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）及び／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域に沿った１つ以上のＣＤＲの長さは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への免疫特異的結合が維持される（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持される）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上のアミノ酸によって異なってもよい（例えば、より短いか、またはより長い）。別の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及び／またはＶＬＣＤＲ３のアミノ末端及び／またはカルボキシ末端は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への免疫特異的結合が維持される（例えば、実質的に、例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％維持される）限り、本明細書に記載されるＣＤＲのうちの１つ以上と比較して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸によって延長または短縮されてもよい。本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体との関連で類似の用語であり、当業者によって理解されるように、抗原結合部位を介して抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを指し、他の抗原との抗体または抗原結合フラグメントの交差反応性を除外しない。ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への免疫特異的結合が維持されるかどうかを確実にするために、当該技術分野において既知の任意の方法、例えば、本明細書で以下に提供される実施例４及び実施例７（第６節）に記載される結合アッセイ及び条件が使用され得る。

【0232】

具体的な態様では、抗体重鎖及び／または軽鎖、例えば、重鎖単独、軽鎖単独、または重鎖及び軽鎖の両方を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書で提供される。軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖は、カッパ軽鎖である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖は、ラムダ軽鎖である。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。

【0233】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９ＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２及び表４に列挙されるもの）を含み、軽鎖の定常領域は、カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換性があり、当該技術分野において一般的なその意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクタ機能を示し得る、軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、概して、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。

【0234】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９ＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２及び表４に列挙されるもの）を含み、軽鎖の定常領域は、ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。

【0235】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９ＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２及び表４に列挙されるもの）を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸は、配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野において記載されており、例えば、ＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）を参照されたい。

【0236】

重鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖であってもよい。別の具体的な実施形態では、記載される抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖を含むことができる。

【0237】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖を含み、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９ＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、表１及び表３に列挙されるもの）を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖を含み、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。

【0238】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖を含み、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、抗体Ｍ６または抗体Ｍ１９ＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、表１及び表３に列挙されるもの）を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載される、または当該技術分野において既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖を含み、重鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載される、または当該技術分野において既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野において記載されており、例えば、上記のＫａｂａｔＥＡｅｔａｌ．，（１９９１）を参照されたい。

【0239】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列を含む、ＶＨとＶＬとを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａ及びＩｇＧ_２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａ及びＩｇＧ_２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0240】

ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の突然変異（例えば、アミノ酸置換）が、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ領域に導入されて、抗体の１つ以上の機能特性を変化させる。

【0241】

いくつかの実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の突然変異（例えば、アミノ酸置換）が、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵインデックス）に従った番号付けを用いた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基２３１～３４０）、及び／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ_１の残基３４１～４４７）、及び／またはヒンジ領域）に導入されて、エフェクタ細胞上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体またはその抗原結合フラグメントの親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を減少または増加させる抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ領域における突然変異、及びＦｃ受容体またはそのフラグメントにそのような突然変異を導入するための技術は、当業者に既知である。Ｆｃ受容体に対する抗体またはその抗原結合フラグメントの親和性を変化させるために行われ得る、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ受容体における突然変異の例は、例えば、ＳｍｉｔｈＰｅｔａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ１０９：６１８１－６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、及び同第ＷＯ９７／３４６３１号に記載され、それらは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0242】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、グリコシル化定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、非グリコシル化定常領域を含む。フコース含量が低減した抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａなどのＦｃ受容体に対する増加した親和性を有することが報告されている。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコース含量が低減しているか、またはフコース含量がない。そのような抗体またはその抗原結合フラグメントは、当業者に既知の技術を使用して産生され得る。例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコシル化の能力が不十分であるか、または欠いている細胞内で発現し得る。具体的な例において、フコース含量が低減した抗体を産生するために、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株が使用され得る。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低減した抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するために使用され得るようなシステムの一例である。あるいは、フコース含量が低減した、またはフコース含量がない抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、（ｉ）フコシル化を防止もしくは低減する条件下で、細胞を培養すること、（ｉｉ）フコースの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素を用いた）、（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組み換え発現後の、所望の炭水化物の翻訳後付加、または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するための糖タンパク質の精製、によって産生され得る。例えば、フコース含量がない、またはフコース含量が低減した抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための方法に関して、ＬｏｎｇｍｏｒｅＧＤ＆ＳｃｈａｃｈｔｅｒＨ（１９８２）ＣａｒｂｏｈｙｄｒＲｅｓ１００：３６５－９２及びＩｍａｉ－ＮｉｓｈｉｙａＨｅｔａｌ．，（２００７）ＢＭＣＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４を参照されたい。

【0243】

別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖及び／または軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）抗体Ｍ６もしくは抗体Ｍ１９ＶＨＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、表１及び表３に列挙されるもの）を含む可変領域を含み、（ｂ）ヒトＩｇＧ重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み、かつ／または軽鎖は、（ａ）抗体Ｍ６もしくは抗体Ｍ１９ＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（すなわち、表２及び表４に列挙されるもの）を含む可変領域、及び（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメイン、を含む。

【0244】

ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖及び／または軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）配列番号４９もしくは配列番号５１のアミノ酸配列を含む可変領域、及び（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメイン、を含み、かつ／または（ｉｉ）軽鎖は、配列番号５０もしくは配列番号５２のアミノ酸配列を含む可変領域、（ｂ）ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメイン、を含む。

【0245】

２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性パーセントの決定もまた、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの具体的な非限定的な例は、ＫａｒｌｉｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ９０：５８７３－５８７７にあるように修正された、ＫａｒｌｉｎＳ＆ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ８７：２２６４－２２６８のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９９０）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書に記載される核酸分子に相同のヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、語長＝１２に設定されたＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータを用いて実施され得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に記載されるタンパク質分子に相同のアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア５０、語長＝３に設定されたＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータを用いて実施され得る。比較の目的でギャップ付きアライメントを得るために、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴが、ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦｅｔａｌ．，（１９９７）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ２５：３３８９３４０２に記載されるように利用され得る。あるいは、ＰＳＩＢＬＡＳＴは、分子間の距離関係を検出する反復検索を実施するために使用され得る（同文献）。ＢＬＡＳＴ、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩＢｌａｓｔプログラムを利用するとき、対応するプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータが使用され得る（例えば、ワールドワイドウェブ上のＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の具体的な非限定的な例は、ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ４：１１１７のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティが使用され得る。

【0246】

２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを可能にするか、またはしないで、上記の技術と同様の技術を使用して決定され得る。同一性パーセントの計算において、典型的には、１つの正確な一致のみが計算される。

【0247】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９または配列番号５１のＶＨのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９または配列番号５１のＶＨのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＨドメインを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、表１～４に記載されるＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）に同一である、ＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）を含む。

【0248】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５０または配列番号５２のＶＬのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５０または配列番号５２のＶＬのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＬを含み、抗体または抗原結合フラグメントは、表１～４に記載されるＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）に同一である、ＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）を含む。

【0249】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号４９または配列番号５１のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＨドメイン、及び（ｉｉ）配列番号５０または配列番号５２のＶＬドメインのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＬドメイン、を含む。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号４９または配列番号５１のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＨドメイン、及び（ｉｉ）配列番号５０または配列番号５２のＶＬドメインのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％配列同一性を有するＶＬドメイン、を含み、抗体または抗原結合フラグメントは、表１～４に記載されるＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）に同一である、ＣＤＲ（例えば、ＶＨＣＤＲ及び／またはＶＬＣＤＲ）を含む。

【0250】

別の態様では、本明細書に記載される抗体（例えば、抗体Ｍ６またはＭ１９）として、ＭＥＲＴＫの同じまたは重複するエピトープ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方のエピトープ）と結合する抗体が本明細書で提供される。本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合し得る抗体の局所領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（直線状もしくは連続エピトープ）であってもよく、またはエピトープは、例えば、ポリペプチドもしくは複数のポリペプチドの２つまたはそれ以上の非連続領域から集合し得る（立体配座、非線形、不連続、または非連続エピトープ）。ある特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析法を伴った水素／重水素交換（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析法）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学に関して、結晶化は、当該技術分野において既知の方法のいずれかを使用して達成され得る（例えば、ＧｉｅｇｅＲｅｔａｌ．，（１９９４）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９９０）ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ１８９：１－２３、ＣｈａｙｅｎＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２６９－１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎＡ（１９７６）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５１：６３００－６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究されてもよく、Ｘ－ＰＬＯＲ（ＹａｌｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって流通されている。例えば、ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ１１４＆１１５，ｅｄｓＷｙｃｋｏｆｆＨＷｅｔａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９３）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：３７－６０、ＢｒｉｃｏｇｎｅＧ（１９９７）ＭｅｔｈＥｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄＣａｒｔｅｒＣＷ、ＲｏｖｅｒｓｉＰｅｔａｌ．，（２０００）ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５６（Ｐｔ１０）：１３１６－１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精製されてもよい。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成され得る。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む、突然変異誘発技術の記載に関して、ＣｈａｍｐｅＭｅｔａｌ．，（１９９５）及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＢＣ＆ＷｅｌｌｓＪＡ（１９８９）を参照されたい。加えて、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）の同じまたは重複するエピトープを認識し、かつそれに結合する抗体は、免疫学的検定などの常用技術を使用して、例えば、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示すこと、すなわち、競合結合アッセイによって、識別され得る。競合結合アッセイはまた、２つの抗体がエピトープに対して同様の結合特異性を有するかどうかを決定するために使用され得る。競合結合は、試験下の免疫グロブリンが、ＭＥＲＴＫなどの共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定され得る。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（ＳｔａｈｌｉＣｅｔａｌ．，（１９８３）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ９：２４２－２５３を参照されたい）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（ＫｉｒｋｌａｎｄＴＮｅｔａｌ．，（１９８６）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３７：３６１４－９を参照されたい）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓを参照されたい）、Ｉ－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（ＭｏｒｅｌＧＡｅｔａｌ．，（１９８８）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２５（１）：７－１５を参照されたい）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（ＣｈｅｕｎｇＲＣｅｔａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６－５２）、及び直接標識化ＲＩＡ（ＭｏｌｄｅｎｈａｕｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９０）ＳｃａｎｄＪＩｍｍｕｎｏｌ３２：７７－８２）が既知である。典型的には、そのようなアッセイは、これらの非標識化試験免疫グロブリン及び標識化参照免疫グロブリンのうちのいずれかを有する固体表面または細胞に結合した精製抗原（例えば、ヒトＭＥＲＴＫなどのＭＥＲＴＫ）の使用を伴う。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定され得る。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合している抗体が過剰に存在するとき、それは、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％７０～７５％、またはそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成され得る。このアッセイの共通のバージョンにおいて、抗原は、９６ウェルプレート上で固定化される。次いで、抗原への標識化抗体の結合を遮断する非標識化抗体の能力は、放射能または酵素標識を使用して測定される。さらなる詳細に関しては、例えば、ＷａｇｅｎｅｒＣｅｔａｌ．，（１９８３）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１３０：２３０８－２３１５、ＷａｇｅｎｅｒＣｅｔａｌ．，（１９８４）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ６８：２６９－２７４、ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９０）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５０：４８７２－４８７９、ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９２）ＩｍｍｕｎｏｌＩｎｖｅｓｔ２１：５２３－５３８、ＫｕｒｏｋｉＭｅｔａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１１：３９１－４０７、及びＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＥｄＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤｅｄｉｔｏｒｓ（上記を参照），ｐｐ．３８６－３８９を参照されたい。

【0251】

ある特定の態様では、競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体のいずれかを使用して、全ての数の異なる形式で構成され得る、競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイにおいて、２つの抗体が同一のまたは立体的に重複するエピトープを認識するとき、抗体が、例えば、用量依存的な様式で、別の抗体によって競合的に遮断されるかどうか、例えば、抗体が参照抗体として本質的に同じエピトープまたは重複するエピトープと結合するかどうかを決定するために使用され得る。特定の実施形態では、抗体は、本明細書に記載される抗体（例えば、抗体Ｍ６またはＭ１９）を用いた競合結合アッセイにおいて試験され得る。

【0252】

別の態様では、当業者に既知の、または本明細書に記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイまたは表面プラズモン共鳴）を使用して決定されるように、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために、本明細書に記載される抗体（例えば、抗体Ｍ６またはＭ１９）と競合し（例えば、用量依存的な様式で）、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体が本明細書で提供される。別の態様では、当業者に既知の、または本明細書に記載されるアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、またはサスペンションアレイ、または表面プラズモン共鳴）を使用して決定されるように、本明細書に記載される抗体（例えば、抗体Ｍ６またはＭ１９）がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合することを競合的に阻害する（例えば、用量依存的な様式で）、抗体が本明細書で提供される。

【0253】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために自己競合するのと同じ程度まで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために、本明細書に記載される抗体と競合する、抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合するために、本明細書に記載される抗体と競合する、第１の抗体が本明細書で提供され、競合は、８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、もしくは９８％、または８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％、もしくは８５％～９５％）低減した、ＭＥＲＴＫへの第１の抗体の結合として示される。

【0254】

具体的な態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への特異的結合のために、配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号５０または配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体と競合する（例えば、用量依存的な様式で）、抗体が本明細書で提供される。

【0255】

具体的な態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への特異的結合のために、（ｉ）表１または表３に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、ならびに（ｉｉ）表２または表４に列挙される抗体のＶＬＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬドメイン、を含む抗体と競合する（例えば、用量依存的な様式で）、抗体が本明細書で提供される。

【0256】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への特異的結合のために、抗体Ｍ６のＶＨ及びＶＬＣＤＲ（表１及び表２）を含む抗体と競合する（例えば、用量依存的な様式で）、抗体が本明細書で提供される。

【0257】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）への特異的結合のために、抗体Ｍ１９のＶＨ及びＶＬＣＤＲ（表３及び表４）を含む抗体と競合する（例えば、用量依存的な様式で）、抗体が本明細書で提供される。

【0258】

別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、（ｉ）表１または表３に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含むＶＨドメイン、ならびに（ｉｉ）表２または表４に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含むＶＬドメイン、を含む抗体の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。

【0259】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む、抗体Ｍ６の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む、抗体Ｍ１９の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。２つの抗体が同じエピトープに結合するかを決定するために、当業者に既知の、または本明細書に記載されるアッセイ（例えば、Ｘ線結晶学、ＥＬＩＳＡアッセイなど）が使用され得る。

【0260】

親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）が挙げられるがこれらに限定されない、当該技術分野において既知の多くの方法で測定及び／または表現され得る。Ｋ_Ｄは、バイオレイヤー干渉法などの当業者に既知の技術によって決定され得る。具体的な実施形態では、Ｋ_Ｄは、以下の第６節の実施例４または実施例７に記載されるように決定される。

【0261】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ＭＥＲＴＫに結合するために本明細書に記載される抗体と競合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載される抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００５ｎＭ未満のＫ_Ｄで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ＭＥＲＴＫに結合するために本明細書に記載される抗体と競合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載される抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、約７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００５ｎＭのＫ_Ｄで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、ＭＥＲＴＫに結合するために本明細書に記載される抗体と競合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載される抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、約３ｐＭ～４００ｐＭのＫ_Ｄで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約０．３ｎＭのＫ_ＤでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４．６ｐＭのＫ_ＤでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合する。本明細書で使用される場合、数値または数値範囲を修正するために使用されるときの「約」という用語は、その値または範囲の５％～１０％を超えるか、または５％～１０％下回る偏差が、列挙された値または範囲の意図した意味の範囲内にとどまることを示す。

【0262】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のエピトープは、抗体を産生するための免疫原として使用される。例えば、抗体を産生するための方法に関して、以下の第５．２節を参照されたい。

【0263】

６．１．２．機能特性
いくつかの態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、内皮細胞上のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）活性を、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。ＭＥＲＴＫ活性は、本明細書に記載される、または当業者に既知の方法によって、例えば、ＭＥＲＴＫリン酸化反応の量を測定することによって評価され得る。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫのリン酸化反応の増加によって測定されるようなＭＥＲＴＫ活性の増加は、いかなる抗体も用いない、または関係のない抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）を用いた、内皮細胞上のＭＥＲＴＫ活性（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方活性）と比較して、少なくとも３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、または３０倍である。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ活性の増加は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％である。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ活性の増加は、以下の実施例３に記載されるように評価される。

【0264】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＭＥＲＴＫに結合するために、Ｇａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）と競合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｇａｓ－６がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合することを阻害する（例えば、完全に阻害または一部分のみ阻害する）。いくつかの実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、当業者に既知の、または本明細書に記載されるアッセイによって評価されるように、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％超、内皮細胞上でのＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）へのＧａｓ－６（例えば、ヒトまたはマウスＧａｓ－６）の結合を阻害する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントの存在下での、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）へのＧａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）の結合の阻害を評価するために使用されるアッセイは、以下の実施例１に記載される抗体捕捉ＥＬＩＳＡである。

【0265】

具体的な実施形態では、内皮細胞内のＭＥＲＴＫリン酸化反応のレベルは、以下の実施例３に記載されるホスホ－ＭＥＲＴＫ特異的ウェスタンブロット法によって測定される。

【0266】

具体的な実施形態では、内皮細胞上でＭＥＲＴＫリン酸化反応のレベルを促進する（すなわち、増加させる）、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、インビトロで、癌細胞（例えば、乳癌細胞）上でのＭＥＲＴＫリン酸化反応を促進しない（すなわち、増加させない）。具体的な実施形態では、癌細胞内のＭＥＲＴＫリン酸化反応のレベルは、以下の実施例３に記載されるホスホ－ＭＥＲＴＫ特異的ウェスタンブロット法によって測定される。

【0267】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、癌細胞（例えば、乳癌細胞）の存在下で、インビトロで、ＭＥＲＴＫ発現内皮細胞の遊走を阻害する。いくつかの具体的な実施形態では、内皮細胞の遊走は、本明細書に記載される、かつ／または当業者に既知の方法によって評価されるように、少なくとも１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、５０％、または６０％阻害される。いくつかの具体的な実施形態では、内皮細胞の遊走は、本明細書に記載される、かつ／または当業者に既知の方法によって評価されるように、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％阻害される。遊走の程度は、本明細書に記載される、かつ／または当業者に既知の方法によって評価され得る。阻害は、いかなる抗体も用いない、または関係のない抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）を用いた、ＭＥＲＴＫ発現内皮細胞の遊走の程度と比較され得る。具体的な実施形態では、内皮細胞遊走を評価するために使用されるアッセイは、以下の実施例２に記載されるようなトランスウェル遊走アッセイである。

【0268】

特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、内皮細胞の非存在下で、インビトロのトランスウェル遊走アッセイにおいて、多形膠芽腫細胞株Ａ１７２の遊走を阻害しない。

【0269】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、腫瘍内の血管新生を阻害する。いくつかの実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、または７５％である。具体的な実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、または７０％である。血管新生の阻害は、本明細書に記載される、かつまたは当業者に既知の方法によって評価され得る。阻害は、いかなる抗体も用いない、または関係のない抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）を用いた、血管新生のレベルと比較され得る。具体的な実施形態では、インビボで血管新生を評価するために使用されるアッセイは、以下の実施例６に記載されるようなアッセイである。

【0270】

ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、腫瘍（例えば、ヒト乳癌腫瘍）進行を阻害する。腫瘍進行の阻害は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％である。腫瘍進行は、本明細書に記載される、かつまたは当業者に既知の方法によって評価され得る。腫瘍進行は、いかなる抗体も用いない、または関係のない抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）を用いた、癌の状態と比較され得る。具体的な実施形態では、腫瘍進行を評価するために使用されるアッセイは、以下の実施例５及び８に記載されるようなマウス腫瘍移植モデルである。

【0271】

６．２．抗体産生
６．２．１．抗体の産生及びスクリーニング
別の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法が本明細書で提供される。

【0272】

本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体の合成のための技術分野において既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によって、または組み換え発現技術によって産生され得る。本明細書に記載される方法は、別途記載のない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当業者が備えている技能の範囲内の関連分野における指示された、従来の技術を用いる。これらの技術は、例えば、本明細書に挙げられる参照文献に記載され、文献内で十分に説明される。例えば、ＭａｎｉａｔｉｓＴｅｔａｌ．，（１９８２）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＳａｍｂｒｏｏｋＪｅｔａｌ．，（１９８９），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＳａｍｂｒｏｏｋＪｅｔａｌ．，（２００１）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７ａｎｄａｎｎｕａｌｕｐｄａｔｅｓ）、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７ａｎｄａｎｎｕａｌｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ、ＢｉｒｒｅｎＢｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）ＧｅｎｏｍｅＡｎａｌｙｓｉｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓを参照されたい。

【0273】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、例えば、ＤＮＡ配列の合成、遺伝子工学を介した作製を伴う任意の手段によって調製、作製、または単離される抗体（例えば、組み換え抗体）である。ある特定の実施形態では、そのような抗体は、インビボで、動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖細胞系列レパートリー内に自然に存在しないＤＮＡ配列によってコードされる、配列を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、免疫原としてヒトＭＥＲＴＫ（配列番号５７）またはその細胞外ドメイン（配列番号５８）を使用することを含む方法によって作製される。

【0274】

ある特定の態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞を培養することを含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法が本明細書で提供される。ある特定の態様では、本明細書に記載される細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞を使用して、抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる（例えば、組み換え的に発現させる）ことを含む、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法が本明細書で提供される。特定の実施形態では、細胞は、単離細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。特定の実施形態では、本方法はさらに、細胞または宿主細胞から得られた抗体またはその抗原結合フラグメントを精製するステップを含む。

【0275】

ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である（例えば、ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈＥｄ．，ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋのＣｈａｐｔｅｒ１１を参照されたい）。

【0276】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通じて産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換え、及びファージディスプレイ技術、またはこれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野において既知の幅広い技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載される抗体またはそのフラグメント、例えば、そのような抗体の軽鎖及び／または重鎖を外因的に発現させる宿主細胞から、組み換え的に産生され得る。クローン細胞株及びそれによって発現したモノクローナル抗体の調製のための方法は、当該技術分野において周知である（例えば、上記のＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈＥｄ．，ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．のＣｈａｐｔｅｒ１１を参照されたい）。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野において既知であり、かつ例えば、ＨａｒｌｏｗＥ＆ＬａｎｅＤ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，２ｎｄｅｄ．１９８８）、ＨａｍｍｅｒｌｉｎｇＧＪｅｔａｌ．，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＴ－ＣｅｌｌＨｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）、及びＫｏｈｌｅｒＧ＆ＭｉｌｓｔｅｉｎＣ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５で教示されるものを含む、ハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。ハイブリドーマ技術を使用して特異性抗体を産生及びスクリーニングするための方法は、常用されており、当該技術分野において周知である。いくつかの実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）が、抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方））で免疫化され、いったん免疫反応が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中で検出されると、マウス脾臓は採取され、脾細胞が単離される。次いで、脾細胞は、周囲の技術によって任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞と融合されて、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは選択され、限界希釈によってクローン化される。

【0277】

そのような調製されたハイブリドーマ細胞は、融合していない親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含有する、好適な培養培地中に播種され、増殖される。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に対するモノクローナル抗体の産生に関して分析される。所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が識別された後、クローンが標準的な方法によってサブクローン化、増殖、及び培養培地から単離されてもよい（ＧｏｄｉｎｇＪＷ（Ｅｄ），ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ（上記を参照））。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野において既知の方法、例えば、免疫沈降によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定される。

【0278】

具体的な実施形態では、単一細胞（例えば、組み換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生されるモノクローナル抗体が本明細書に開示され、抗体は、例えば、当該技術分野において既知の、または本明細書で提供される実施例１に記載される、ＥＬＩＳＡまたは他の抗原結合もしくは競合結合アッセイによって決定されるように、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であってもよい。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異性または多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。

【0279】

本明細書に記載される抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）を認識し、当業者に既知の任意の技術によって生成され得る、抗体フラグメントを含む。例えば、本明細書に記載されるＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するための）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントを産生するための）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解開裂によって産生され得る。Ｆａｂフラグメントは、抗体分子の２つの同一のアームのうちの１つに対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対になった完全軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって結合した抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。

【0280】

さらに、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、当該技術分野において既知の様々なファージディスプレイ法を使用して生成され得る。ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上に提示される。具体的に、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、影響を受けた組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組み換えられ、ファージミドベクターにクローン化される。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ内で電気穿孔され、Ｅ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージに感染させられる。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかと組み換え的に融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現させるファージは、抗原で、例えば、標識化抗原、または固体表面もしくはビーズに結合したか、もしくは補捉された抗原を使用して選択または識別され得る。本明細書に記載される抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ方法の例としては、ＢｒｉｎｋｍａｎＵｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１８２：４１－５０、ＡｍｅｓＲＳｅｔａｌ．，（１９９５）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１８４：１７７－１８６、ＫｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈＣＡｅｔａｌ．，（１９９４）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ２４：９５２－９５８、ＰｅｒｓｉｃＬｅｔａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ１８７：９－１８、ＢｕｒｔｏｎＤＲ＆ＢａｒｂａｓＣＦ（１９９４）ＡｄｖａｎＩｍｍｕｎｏｌ５７：１９１－２８０、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、及び、同第ＷＯ９７／１３８４４、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号に開示される方法が挙げられる。

【0281】

上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージからの領域をコードする抗体は単離され、ヒト抗体または任意の他の所望の抗原結合フラグメントを含む、全抗体を生成するために使用され、かつ例えば、以下に記載されるような哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む、任意の所望の宿主内で発現し得る。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２フラグメントなどの抗体フラグメントを組み換え的に産生するための技術もまた、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、ＭｕｌｌｉｎａｘＲＬｅｔａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１２（６）：８６４－９、ＳａｗａｉＨｅｔａｌ．，（１９９５）ＡｍＪＲｅｐｒｏｄＩｍｍｕｎｏｌ３４：２６－３４、及びＢｅｔｔｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１－１０４３に開示される方法など、当該技術分野において既知の方法を使用して用いられ得る。

【0282】

一態様では、全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーが、テンプレート、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅させるために使用され得る。当業者に既知のクローン化技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、ＶＨ定常領域を発現させるベクターにクローン化され得、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現させるベクターにクローン化され得る。ＶＨ及びＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現させる１つのベクターにクローン化され得る。次いで、重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技術を使用して、細胞株に共トランスフェクトされて、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現させる安定したまたは一過性の細胞株を生成する。

【0283】

キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域と融合したマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１２０２－７、ＯｉＶＴ＆ＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４：２１４－２２１、ＧｉｌｌｉｅｓＳＤｅｔａｌ．，（１９８９）ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１－２０２、及び米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照されたい。

【0284】

ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、それは、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有するフレームワーク領域と、実質的に非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を有するＣＤＲとを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、ＣＤＲ－グラフト化（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェイシング（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号及び同第ＥＰ５１９５９６号、ＰａｄｌａｎＥＡ（１９９１）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２８（４／５）：４８９－４９８、ＳｔｕｄｎｉｃｋａＧＭｅｔａｌ．，（１９９４）ＰｒｏｔＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５－８１４、及びＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、ＴａｎＰｅｔａｌ．，（２００２）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６９：１１１９－２５、ＣａｌｄａｓＣｅｔａｌ．，（２０００）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１３（５）：３５３－６０、ＭｏｒｅａＶｅｔａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ２０（３）：２６７－７９、ＢａｃａＭｅｔａｌ．，（１９９７）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７２（１６）：１０６７８－８４、ＲｏｇｕｓｋａＭＡｅｔａｌ．，（１９９６）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ９（１０）：８９５９０４、ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａｌ．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ、ＣｏｕｔｏＪＲｅｔａｌ．，（１９９５）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ５５（８）：１７１７－２２、ＳａｎｄｈｕＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ１５０（２）：４０９－１０、及びＰｅｄｅｒｓｅｎＪＴｅｔａｌ．，（１９９４）ＪＭｏｌＢｉｏｌ２３５（３）：９５９－７３に開示される技術を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において既知の様々な技術を使用して産生され得る。また、米国出願公開第２００５／００４２６６４Ａ１号（２００５年２月２４日）も参照されたく、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0285】

多特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法が記載されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、及び同第８，５８６，７１３号を参照されたい。

【0286】

単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当該技術分野において周知の方法によって産生され得る。ＲｉｅｃｈｍａｎｎＬ＆ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓＳ（１９９９）ＪＩｍｍｕｎｏｌ２３１：２５－３８、ＮｕｔｔａｌｌＳＤｅｔａｌ．，（２０００）ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１（３）：２５３－２６３、ＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓＳ，（２００１）ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４（４）：２７７－３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、及び同第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたい。

【0287】

さらに、当業者に周知の技術を使用して、抗原を「模倣」する抗イディオタイプ抗体を生成するために、ＭＥＲＴＫ抗原に免疫特異的に結合する抗体が利用され得る。（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎＮＳ＆ＢｏｎａＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢＪ７（５）：４３７－４４４、及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆＡ（１９９１）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４７（８）：２４２９－２４３８を参照されたい）。

【0288】

特定の実施形態では、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体として、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）の同じまたは重複するエピトープに結合する、本明細書に記載される抗体は、ヒト抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントである。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のうちのいずれか１つ（例えば、Ｍ６またはＭ１９）が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に結合することを競合的に遮断する（例えば、用量依存的な様式で）、本明細書に記載される抗体は、ヒト抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントである。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して産生され得る。例えば、機能的内因性免疫グロブリンを発現させることが不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させることができる、トランスジェニックマウスが使用され得る。具体的に、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、またはマウス胚性幹細胞への相同組み換えによって導入され得る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域が、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えてマウス胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組み換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別にまたは同時に、非機能性な状態にされ得る。具体的に、Ｊ_Ｈ領域のホモ接合欠失は、内因性抗体産生を阻止する。改変胚性幹細胞は拡大され、胚盤胞に微量注射されて、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスは交配されて、ヒト抗体を発現させるホモ接合性子孫を産生する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ）の全てまたは一部分で、通常の方法で免疫化される。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化されたトランスジェニックマウスから得られ得る。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配置され、続いて、クラススイッチング及び体細胞突然変異を受ける。したがって、そのような技術を使用して、治療的に有効なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要に関して、例えば、ＬｏｎｂｅｒｇＮ＆ＨｕｓｚａｒＤ（１９９５）ＩｎｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ１３：６５－９３を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術の詳細な考察、ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコルに関して、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、及び同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することが可能なマウスの例としては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／ＧｅｎＰｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５号）、ＴｒａｎｓＣｈｒｏｍｏＭｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）、ならびにＫＭＭｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。

【0289】

ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリを使用して、上記のファージディスプレイ方法を含む当該技術分野において既知の様々な方法によって作製され得る。また、米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、及び同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、及び同第ＷＯ９１／１０７４１号を参照されたい。

【0290】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、マウス－ヒトハイブリドーマを使用して産生され得る。例えば、エプスタイン－バーウイスル（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球は、マウス骨髄腫細胞と融合されて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス－ヒトハイブリドーマは、標的抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方））に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定するために、スクリーニングされ得る。そのような方法は、当該技術分野において既知であり、かつ記載され、例えば、ＳｈｉｎｍｏｔｏＨｅｔａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４６：１９－２３、ＮａｇａｎａｗａＹｅｔａｌ．，（２００５）ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１４：２７－３１を参照されたい。

【0291】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法は、以下の実施例１に記載されるような方法である。

【0292】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗体またはその抗原結合フラグメントを選択する方法は、以下の実施例１に記載されるような方法である。

【0293】

いったん本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントが産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野において既知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａの後の特異抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィ）、遠心分離、溶解度差によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術によって精製され得る。さらに、本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される、または別様に精製を促進することが当該技術分野において既知の、異種ポリペプチド配列と融合され得る。

【0294】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離または精製される。概して、単離抗体は、単離抗体とは異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体である。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体の調製物は、細胞物質及び／または化学前駆体を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という用語は、抗体が、それが単離されるか、または組み換え的に産生される細胞の細胞成分から分離される、抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、もしくは０．１％（乾燥重量で）の異種タンパク質（本明細書において「混在タンパク質」とも称される）を有する抗体の調製物、及び／または抗体の変異体、例えば、異なる翻訳後の改変形態の抗体、もしくは他の異なる抗体の型（例えば、抗体フラグメント）を含む。抗体が組み換え的に産生されるとき、それはまた概して、培養培地を実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の体積を表す。抗体が化学合成によって産生されるとき、それは概して、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それは、タンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、そのような抗体の調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％未満（乾燥重量で）の、対象となる抗体以外の化学前駆体または化合物を有する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、単離または精製される。

【0295】

６．２．２．ポリヌクレオチド
ある特定の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）抗原に免疫特異的に結合する、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及び哺乳類細胞）内のそれらの効率的な発現のためにそのようなポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離または精製される。

【0296】

本明細書で使用される場合、「単離」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源（例えば、マウスまたはヒト）中に存在する他の核酸分子から分離されるものである。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離」核酸分子は、組み換え技術によって産生されたとき、他の細胞物質もしくは培養培地を実質的に含まなくてもよく、または化学的に合成されたとき、化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まなくてもよい。例えば、「実質的に含まない」という用語は、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の他の物質、例えば、細胞物質、培養培地、他の核酸分子、化学前駆体、及び／または他の化学物質を有する、ポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。

【0297】

特定の態様では、ＭＥＲＴＫポリペプチド（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合し、本明細書に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびにＭＥＲＴＫポリペプチドに結合するために、そのような抗体と競合するか（例えば、用量依存的な様式で）、またはそのような抗体のものと同じまたは重複するエピトープに結合する抗体、をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。

【0298】

ある特定の態様では、本明細書に記載される抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＶＨＣＤＲを含む重鎖をコードする、ヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表１及び３を参照されたい）。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるＶＬＣＤＲを含む軽鎖をコードする、ヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表２び４を参照されたい）。

【0299】

特定の実施形態では、例えば、表１または表３に記載されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含有する、３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。具体的な実施形態では、例えば、表２または表４に記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含有する、３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含む、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。具体的な実施形態では、例えば、表１または表３に記載されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含有する、３つのＶＨ鎖ＣＤＲ、ならびに例えば、表２または表４に記載されるＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含有する、３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含む、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、配列番号１、６、及び１１、配列番号２、７、及び１２、配列番号３、８、及び１１、配列番号４、９、及び１３、配列番号５、１０、及び１４、または配列番号３、６、及び１１）をコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ６のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（すなわち、配列番号１５、１９、及び２２、配列番号１６、２０、及び２３、配列番号１７、２１、及び２４、または配列番号１８、２０、及び２２）をコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、配列番号１、６、及び１１、配列番号２、７、及び１２、配列番号３、８、及び１１、配列番号４、９、及び１３、配列番号５、１０、もしくは１４、または配列番号３、６、及び１１）、ならびにＭ６の３つのＶＬＣＤＲ（すなわち、配列番号１５、１９、及び２２、配列番号１６、２０、及び２３、配列番号１７、２１、及び２４、または配列番号１８、２０、及び２２）をコードする。

【0300】

具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ１９のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３（すなわち、配列番号２５、３０、及び３５、配列番号２６、３１、及び３６、配列番号２７、３２、及び３５、配列番号２８、３３、及び３７、配列番号２９、３４、及び３８、または配列番号２７、３０、及び３５）をコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ１９のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３（例えば、配列番号３９、４３、及び４６、配列番号４０、４４、及び４７、配列番号４１、４５、及び４８、または配列番号４２、４４、及び４６）をコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、Ｍ１９の３つのＶＨＣＤＲ（すなわち、配列番号２５、３０、及び３５、配列番号２６、３１、及び３６、配列番号２７、３２、及び３５、配列番号２８、３３、もしくは３７、配列番号２９、３４、及び３８、または配列番号２７、３０、及び３５）、ならびにＭ１９の３つのＶＬＣＤＲ（すなわち、配列番号３９、４３、及び４６、配列番号４０、４４、及び４７、配列番号４１、４５、及び４８、または配列番号４２、４４、及び４６）をコードする。

【0301】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列（配列番号４９または５１）を含む重鎖可変領域を含む、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるアミノ酸配列（配列番号５０または５２）を含む軽鎖可変領域を含む、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合する。

【0302】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号５３または配列番号５５の核酸配列を含むＶＨをコードする。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号５４または配列番号５６の核酸配列を含むＶＬをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号５３の核酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５４の核酸配列を含むＶＬ（例えば、Ｍ６）をコードする。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、配列番号５５の核酸配列を含むＶＨ、及び配列番号５６の核酸配列を含むＶＬ（例えば、Ｍ１９）をコードする。

【0303】

具体的な態様では、軽鎖及び重鎖、例えば、別個の軽鎖及び重鎖を含む抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチドが本明細書で提供される。軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、カッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、ラムダ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む、本明細書に記載される抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、抗体は、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２の任意のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体をコードする、ヌクレオチド配列を含み、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５０または配列番号５２の任意のアミノ酸配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0304】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ＶＨドメイン及び／もしくはＶＬドメイン）をコードする、最適化されたポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ＶＨドメイン及び／もしくはＶＬドメイン）をコードする、最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的）ポリヌクレオチドにハイブリダイズし得る。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体または抗原結合フラグメントをコードする、最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに、高厳密性条件下でハイブリダイズする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに、高厳密性、中程度またはより低い厳密性のハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、コドン最適化される。ハイブリダイゼーション条件に関する情報は記載されており、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８５４９（例えば、段落７２及び７３）を参照されたく、それは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0305】

ポリヌクレオチドが得られ得、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、当該技術分野において既知の任意の方法によって決定され得る。本明細書に記載される抗体及びこれらの抗体の改変型をコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野において周知の方法を使用して決定され得、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが既知のヌクレオチドコドンは、抗体をコードする核酸を生成するような方法で収集される。抗体をコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから収集され得（例えば、ＫｕｔｍｅｉｅｒＧｅｔａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１７：２４２－６に記載されるように）、それは、簡潔に、抗体をコードする配列の部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリング及びライゲーション、ならびに次いで、ＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅を伴う。

【0306】

あるいは、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローン化方法）を使用して、好適な源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成され得る。例えば、既知の配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、対象となる抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して、実施され得る。そのようなＰＣＲ増幅方法は、抗体の軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得るために使用され得る。そのようなＰＣＲ増幅方法は、抗体の可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得るために使用され得る。増幅核酸は、宿主細胞内の発現のために、かつ例えば、キメラ及びヒト化抗体を生成するためのさらなるクローン化のために、ベクターにクローン化され得る。

【0307】

特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手可能ではないが、抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸が、配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅によって、または例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリからのｃＤＮＡクローンを識別するために特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用したクローン化によって、好適な源（例えば、本明細書に記載される抗体を発現させるために選択されたハイブリドーマ細胞など、抗体を発現させる任意の組織または細胞から生成された抗体ｃＤＮＡライブラリもしくはｃＤＮＡライブラリ、またはそれから単離された核酸、好ましくは、ポリＡ＋ＲＮＡ）から化学的に合成され得るか、または得られ得る。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当該技術分野において周知の任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクローン化され得る。

【0308】

本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して容易に単離及び配列され得る（例えば、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの源としての役割を果たし得る。いったん単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに配置され得、それは次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯＧＳＳｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞）、または別様に免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組み換え宿主細胞内のＭＥＲＴＫアゴニスト抗体の合成を得る。

【0309】

全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーが、ｓｃＦｖクローン中のＶＨまたはＶＬ配列を増幅させるために使用され得る。当業者に既知のクローン化技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現させるベクターにクローン化され得、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現させるベクターにクローン化され得る。ある特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現させるためのベクターは、プロモーター、分泌シグナル、可変ドメインのためのクローン化部位、定常ドメイン、及び選択マーカーを含む。ＶＨ及びＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現させる１つのベクターにクローン化され得る。次いで、重鎖変換ベクター及び軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技術を使用して、細胞株に共トランスフェクトされて、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現させる安定したまたは一過性の細胞株を生成する。

【0310】

ＤＮＡはまた、例えば、マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのためのコード配列を置換することによって、または非免疫グロブリンポリペプチドのための免疫グロブリンコード配列の全部もしくは一部に共有結合することによって、改変され得る。

【0311】

また、高厳密性、中程度またはより低い厳密性のハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする、ポリヌクレオチドが提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、高厳密性、中程度またはより低い厳密性のハイブリダイゼーション条件下で、本明細書で提供されるＶＨ（配列番号４９または５１）及び／またはＶＬ（配列番号５０または５２）をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。

【0312】

ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野において記載されており、かつ当業者に既知である。例えば、厳密な条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中のフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、続いて、約５０～６５℃での０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を伴うことができ、高度に厳密な条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃での６×ＳＳＣ中のフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーション、続いて、約６８℃での０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を伴うことができる。他の厳密なハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に既知であり、記載されており、例えば、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、ならびにＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ（ページ６．３．１～６．３．６及び２．１０．３）を参照されたい。

【0313】

６．２．３．細胞及びベクター
ある特定の態様では、宿主細胞内、好ましくは哺乳類細胞内の組み換え発現のために、ＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、ベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書で提供される。また、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組み換え的に発現させるためのそのようなベクターを含む、宿主細胞が本明細書で提供される。

【0314】

ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体（例えば、本明細書に記載される完全長抗体、抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖、または一本鎖抗体）の組み換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。いったん本明細書に記載される抗体分子、抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖、またはその抗原結合フラグメント（例えば、重鎖及び／もしくは軽鎖可変領域）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該技術分野において周知の技術を使用して、組み換えＤＮＡ技術によって産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードする、抗体または抗体フラグメント（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによって、タンパク質を調製するための方法が本明細書に記載される。当業者に周知である方法は、抗体または抗体フラグメント（例えば、軽鎖または重鎖）コード配列、ならびに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築するために使用され得る。これらの方法としては、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組み換えが挙げられる。また、プロモーターに作動可能に結合した、本明細書に記載される抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントの重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲ、をコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターが提供される。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号）、抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖及び軽鎖全体の両方の発現のためのそのようなベクターにクローン化され得る。

【0315】

発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に移され得、次いで、得られる細胞は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するために、従来の技術によって培養され得る。したがって、宿主細胞内のそのような配列の発現のためにプロモーターに作動可能に結合した、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはそのフラグメント、または本明細書に記載される一本鎖抗体をコードする、ポリヌクレオチドを含有する、宿主細胞が本明細書で提供される。本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培地中の細胞、または細胞株由来の細胞であってもよい。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、ならびにそのような細胞の子孫または潜在的子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、継代において生じ得る突然変異もしくは環境の影響、または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞に同一でない場合がある。

【0316】

様々な宿主発現ベクター系が、本明細書に記載される抗体分子を発現させるために利用され得る。そのような宿主発現系は、対象となるコード配列が産生され、続いて精製され得るビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされたときに、原位置で本明細書に記載される抗体分子を発現させることができる細胞も表す。これらとしては、抗体コード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、抗体コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓＰｉｃｈｉａ）、抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したか、もしくは抗体コード配列を含有する組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された、植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）、または哺乳類細胞のゲノム由来（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳類ウイルス由来（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）のプロモーターを含有する、組み換え発現構築物を有する、哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、及びＢＭＴ１０細胞）が挙げられるがこれらに限定されない。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯＧＳＳｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な実施形態では、哺乳類発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に全組み換え抗体分子の発現のための、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞または真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が、組み換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併せた、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞は、抗体のための有効な発現系である（ＦｏｅｃｋｉｎｇＭＫ＆ＨｏｆｓｔｅｔｔｅｒＨ（１９８６）Ｇｅｎｅ４５：１０１－５、及びＣｏｃｋｅｔｔＭＩｅｔａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ８（７）：６６２－７）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に免疫特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターによって調節される。

【0317】

細菌系において、発現している抗体分子を対象とした使用に応じて、多くの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のために、大量のそのような抗体が産生される予定であるとき、容易に精製される融合タンパク質生成物の高レベルの発現を誘導するベクターが、望ましくあり得る。そのようなベクターとしては、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（ＲｕｅｔｈｅｒＵ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ－ＨｉｌｌＢ（１９８３）ＥＭＢＯＪ２：１７９１－１７９４）（融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列がｌａｃＺコード領域を有するフレーム内のベクターに個々にライゲーションされ得る）、ｐＩＮベクター（ＩｎｏｕｙｅＳ＆ＩｎｏｕｙｅＭ（１９８５）ＮｕｃＡｃｉｄｓＲｅｓ１３：３１０１－３１０９、ＶａｎＨｅｅｋｅＧ＆ＳｃｈｕｓｔｅｒＳＭ（１９８９）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２４：５５０３－５５０９）などが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターはまた、グルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を用いて、融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させるために使用され得る。概して、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリクスグルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合、続く遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解細胞から容易に精製され得る。ｐＧＥＸベクターは、クローン化標的遺伝子生成物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたは因子Ｘａプロテアーゼ開裂部位を含むように設計される。

【0318】

昆虫系において、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして使用され得る。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞内で増殖する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々にクローン化され、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置され得る。

【0319】

哺乳類宿主細胞において、多くのウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、対象となる抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び三部分リーダー配列にライゲーションされ得る。させることができる。次いで、次いでこのキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組み換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）内の挿入は、生存能力があり、感染した宿主内で抗体分子を発現させることが可能である、組み換えウイルスをもたらす（例えば、ＬｏｇａｎＪ＆ＳｈｅｎｋＴ（１９８４）ＰＮＡＳ８１（１２）：３６５５－９を参照されたい）。特異的な開始シグナルもまた、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。さらに、開始コドンは、全挿入物の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと一致していなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の種々の起源を有し得る。発現の効率性は、適切な翻訳エンハンサー因子、転写ターミネーターなどを含むことによって強化され得る（例えば、ＢｉｔｔｅｒＧｅｔａｌ．，（１９８７）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４を参照されたい）。

【0320】

加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特異的な様式で遺伝子生成物を改変及び処理する、宿主細胞株が選択され得る。タンパク質生成物のそのような改変（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、開裂）は、タンパク質の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子生成物の翻訳後処理及び改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。発現した外来タンパク質の正確な改変及び処理を確実にするために、適切な細胞株または宿主系が選択され得る。この目的で、遺伝子生成物の一次転写産物の適切な処理、グリコシル化、及びリン酸化反応のための細胞機構を処理する、真核宿主細胞が使用され得る。そのような哺乳類宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ、及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞内で産生される。

【0321】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコース含量が低減しているか、またはフコース含量がない。そのような抗体は、当業者に既知の技術を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が不十分であるか、または欠いている細胞内で発現し得る。具体的な例において、フコース含量が低減した抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するために、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株が使用され得る。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低減した抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するために使用され得るようなシステムの一例である。

【0322】

組み換えタンパク質の長期高収率産生のために、安定した発現細胞が生成され得る。例えば、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントを安定的に発現させる細胞株は、遺伝子操作され得る。具体的な実施形態では、本明細書で提供される細胞は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを形成するように会合する、軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定的に発現させる。

【0323】

ある特定の態様では、ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用するよりもむしろ、宿主細胞は、適切な発現制御因子（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）、及び選択可能なマーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、遺伝子操作された細胞は、強化培地中で１～２日間増殖することができ、次いで、選択培地に切り替えられる。組み換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がそれらの染色体にプラスミドを安定的に組み込み、増殖して病巣を形成することを可能にし、それは次いで、クローン化され、細胞株へと拡大され得る。この方法は、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫアゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる細胞株を遺伝子操作するために有利に使用され得る。そのような遺伝子操作された細胞株は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価において特に有用であり得る。

【0324】

単純ヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼ（ＷｉｇｌｅｒＭｅｔａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ１１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａＥＨ＆ＳｚｙｂａｌｓｋｉＷ（１９６２）ＰＮＡＳ４８（１２）：２０２６－２０３４）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＬｏｗｙＩｅｔａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ２２（３）：８１７－２３）が挙げられるがこれらに限定されない、多くの選択系が使用され得、遺伝子はそれぞれ、ｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－、またはａｐｒｔ－細胞内で用いられ得る。また、代謝拮抗薬耐性が、以下の遺伝子の選択の基準として使用され得る。ｄｈｆｒ（メトトレキサートに対する耐性を付与する）（ＷｉｇｌｅｒＭｅｔａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ７７（６）：３５６７－７０、Ｏ’ＨａｒｅＫｅｔａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ７８：１５２７－３１）、ｇｐｔ（マイコフェノール酸に対する耐性を付与する）（ＭｕｌｌｉｇａｎＲＣ＆ＢｅｒｇＰ（１９８１）ＰＮＡＳ７８（４）：２０７２－６）、ｎｅｏ（アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与する）（ＷｕＧＹ＆ＷｕＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ３：８７－９５、ＴｏｌｓｔｏｓｈｅｖＰ（１９９３）ＡｎｎＲｅｖＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ３２：５７３－５９６、ＭｕｌｌｉｇａｎＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９２６－９３２、及びＭｏｒｇａｎＲＡ＆ＡｎｄｅｒｓｏｎＷＦ（１９９３）ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ６２：１９１－２１７、ＮａｂｅｌＧＪ＆ＦｅｌｇｎｅｒＰＬ（１９９３）ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１１（５）：２１１－５）、ならびにｈｙｇｒｏ（ヒグロマイシンに対する耐性を付与する）（ＳａｎｔｅｒｒｅＲＦｅｔａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ３０（１－３）：１４７－５６）。組み換えＤＮＡ技術の分野において一般的に知られている方法が、所望の組み換えクローンを選択するために日常的に適用され得、そのような方法は、例えば、ＡｕｓｕｂｅｌＦＭｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．），ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、ＫｒｉｅｇｌｅｒＭ，ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、及びＤｒａｃｏｐｏｌｉＮＣｅｔａｌ．，（ｅｄｓ．），ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）のＣｈａｐｔｅｒｓ１２及び１３、Ｃｏｌｂｅｒｅ－ＧａｒａｐｉｎＦｅｔａｌ．，（１９８１）ＪＭｏｌＢｉｏｌ１５０：１－１４に記載され、それらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0325】

抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加し得る（再考察のために、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎＣＲ＆ＨｅｎｔｓｃｈｅｌＣＣＧ，ＴｈｅｕｓｅｏｆｖｅｃｔｏｒｓｂａｓｅｄｏｎｇｅｎｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｏｎｅｄｇｅｎｅｓｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓｉｎＤＮＡｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）。抗体を発現させるベクター系中のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞の培養物中の存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域が抗体遺伝子と関連付けられるため、抗体の産生もまた増加する（ＣｒｏｕｓｅＧＦｅｔａｌ．，（１９８３）ＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ３：２５７－６６）。

【0326】

宿主細胞は、本明細書に記載される２つまたはそれ以上の発現ベクター、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターで共トランスフェクトされ得る。２つのベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする、同一の選択可能なマーカーを含有することができる。宿主細胞は、異なる量の２つまたはそれ以上の発現ベクターで共トランスフェクトされ得る。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターの以下の比のうちのいずれか１つでトランスフェクトされ得る。１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０。

【0327】

あるいは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつそれらを発現させることが可能である、単一ベクターが使用され得る。そのような発現ベクターにおいて、両方の遺伝子の転写が共通のプロモーターによって引き起こされ得る一方で、第１の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、ｃａｐ依存的スキャニング機構によるものであり得、第２の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、ｃａｐ非依存的スキャニング機構によるもの、例えば、ＩＲＥＳによるものであり得る。

【0328】

６．３．医薬組成物
本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物が本明細書で提供される。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、精製される。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、治療有効量で医薬組成物中に存在する。賦形剤または安定剤であり得る許容できるキャリアは、用いられる投与量及び濃度において受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；モノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が挙げられるがこれらに限定されない。

【0329】

具体的な実施形態では、医薬組成物は、医薬的に許容される担体中に、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び任意に１つ以上の追加の予防薬または治療薬を含む。具体的な実施形態では、医薬組成物は、医薬的に許容される担体中に、有効量の本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び任意に１つ以上の追加の予防薬または治療薬を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物及び／または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、治療有効量の本明細書に記載される追加の治療薬のうちのいずれかと組み合わされ得る（以下の第５．４．２節を参照されたい）。

【0330】

いくつかの実施形態では、抗体は、医薬組成物中に含まれる唯一の活性成分である。

【0331】

本明細書に記載される医薬組成物は、癌を治療するために使用され得る。

【0332】

非経口調製物で使用される医薬的に許容される担体としては、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張剤、緩衝液、酸化防止剤、局部麻酔剤、懸濁化剤及び分散剤、乳化剤、封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の医薬的に許容される物質が挙げられる。水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース、及び乳酸加リンガー注射液が挙げられる。非水性非経口ビヒクルとしては、植物由来の凝固油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、及びピーナッツ油が挙げられる。静菌性または静真菌性濃度の抗菌薬は、多用量容器に充填される非経口調製物に添加され得、それは、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、ならびに塩化ベンゼトニウムを含む。等張剤としては、塩化ナトリウム及びデキストロースが挙げられる。緩衝液としては、リン酸塩及びクエン酸塩が挙げられる。酸化防止剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局部麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁剤及び分散剤としては、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が挙げられる。金属イオンの封鎖剤またはキレート化剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。薬学的担体としてはまた、水混和性ビヒクルのためのエチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコール、ならびにｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸も挙げられる。

【0333】

医薬組成物は、対象への任意の投与経路のために製剤化され得る。投与経路の具体的な例としては、鼻腔内、経口、経肺、経皮、内皮、及び非経口が挙げられる。皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与もまた、本明細書において企図される。注射剤は、液体溶液もしくは懸濁液、注射前の液体中の溶液もしくは懸濁液に好適な固体形態として、または乳剤としてのいずれかの従来の形態で調製され得る。注射剤、溶液、及び乳剤はまた、１つ以上の賦形剤を含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。加えて、必要に応じて、投与される医薬組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解促進剤、ならびに例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、トリエタノールアミン、オレイン酸塩、及びシクロデキストリンなどの他の薬剤などの少量の非毒性補助物質を含有することができる。

【0334】

抗体の非経口投与のための調製物としては、注射できる状態の滅菌溶液、滅菌乾燥可溶性生成物、皮下注射用錠剤を含む、使用直前に溶媒と混合される状態の凍結乾燥粉末、注射できる状態の滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと混合される状態の滅菌乾燥不溶性生成物、及び滅菌乳剤が挙げられる。溶液は水性または非水性のいずれかであってもよい。

【0335】

静脈内に投与される場合、好適な担体としては、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ならびにグルコース、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールなどの増粘剤及び可溶化剤を含有する溶液、ならびにこれらの混合物が挙げられる。

【0336】

抗体を含む局所混合物は、局所及び全身投与に関して記載されるように調製される。得られる混合物は、溶液、懸濁液、乳剤などであってもよく、クリーム、ゲル、軟膏、乳剤、溶液、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、発泡体、エアロゾル、洗浄液、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ、または局所投与に好適な任意の他の製剤として製剤化され得る。

【0337】

本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、吸入などによる局所適用のためのエアロゾルとして製剤化され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有効なステロイドの送達のためのエアロゾルを記載する、米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、及び同第４，３６４，９２３号を参照されたい）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独で、またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせて、ネブライザー用のエアロゾルもしくは溶液の形態、または送気のための超微細粉末としての形態であってもよい。そのような場合、製剤の粒子は、一実施形態では５０ミクロン未満の、一実施形態では１０ミクロン未満の直径を有する。

【0338】

本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、ゲル、クリーム、及びローションの形態で、皮膚及び眼などの粘膜への局所適用など、局部または局所適用のために、かつ眼への適用のために、または嚢内もしくは髄腔内適用のために製剤化され得る。局所投与は、経皮送達のために、かつ眼もしくは粘膜への投与のために、または吸入療法のために企図される。単独での、または他の医薬的に許容される賦形剤と組み合わせた点鼻液もまた投与され得る。

【0339】

イオン泳動及び電気泳動装置を含む経皮パッチは、当業者に周知であり、抗体を投与するために使用され得る。例えば、そのようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、及び同第５，８６０，９５７号に開示される。

【0340】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、溶液、乳剤、及び他の混合物としての投与のために再構成され得る、凍結乾燥粉末である。それはまた、固体またはゲルとしても再構成及び製剤化され得る。凍結乾燥粉末は、好適な溶媒中で、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬的に許容される誘導体を溶解することによって調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥粉末は無菌である。溶媒は、粉末または粉末から調製された再構成溶液の安定性または他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有してもよい。使用され得る賦形剤としては、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が挙げられるがこれらに限定されない。溶媒はまた、一実施形態ではほぼ中性のｐＨの、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウム、または当業者に既知の他のそのような緩衝液などの緩衝液を含有してもよい。当業者に既知の標準的な条件下での溶液の後続の除菌濾過、続く凍結乾燥は、所望の製剤を提供する。一実施形態では、得られる溶液は、凍結乾燥のためのバイアル瓶に分配される。各バイアル瓶は、単回投与量または複数回投与量の化合物を含有する。凍結乾燥粉末は、約４℃～室温などの適切な条件下で保管され得る。

【0341】

注射のための水を用いたこの凍結乾燥粉末の再構成は、非経口投与で使用するための製剤を提供する。再構成のために、凍結乾燥粉末は、滅菌水または他の好適な担体に添加される。正確な量は、選択された化合物によって決まる。そのような量は、経験的に決定される。

【0342】

本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメント及び本明細書で提供される他の組成物はまた、治療される対象の身体の特定の組織、受容体、または他の範囲に標的化されるように製剤化され得る。多くのそのような標的化方法は、当業者に周知である。全てのそのような標的化方法は、本組成物で使用するために本明細書において企図される。標的化方法の非限定的な例に関して、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、及び同第５，７０９，８７４号を参照されたい。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、腫瘍に標的化される。

【0343】

インビボ投与のために使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、除菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。

【0344】

６．４．使用及び方法
６．４．１．治療上の使用及び方法
６．４．１．１．癌
一態様では、対象における癌を治療するための方法が本明細書に示され、それを必要としている対象に、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む。具体的な実施形態では、対象における癌を治療するための方法が本明細書に示され、それを必要としている対象に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させること、例えば、血管新生を阻害することが望ましい癌を治療するための方法が本明細書に示され、それを必要としている対象に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞上でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む。

【0345】

具体的な実施形態では、癌を患う対象への本明細書に記載される抗体もしくは抗原結合フラグメントまたは本明細書に記載される医薬組成物の投与は、以下の効果のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上を達成する。（ｉ）癌の１つ以上の症状の重症度の低減もしくは改善、（ｉｉ）癌と関連した１つ以上の症状の持続時間の低減、（ｉｉｉ）癌と関連した症状の再発の防止、（ｉｖ）対象の入院の低減、（ｖ）入院の長さの低減、（ｖｉ）対象の生存率の増加、（ｖｉｉ）別の療法の治療効果の強化もしくは改善、（ｖｉｉｉ）癌と関連した１つ以上の症状の進行もしくは発症の阻害、（ｉｘ）癌と関連した症状の数の低減、（ｘ）当該技術分野において周知の方法によって評価される生活の質の改善、（ｘ）腫瘍の再発の阻害、（ｘｉ）腫瘍及び／もしくはそれと関連した１つ以上の症状の回帰、（ｘｉｉ）腫瘍及び／もしくはそれと関連した１つ以上の症状の進行の阻害、（ｘｉｉｉ）腫瘍の増殖の低減、（ｘｉｖ）腫瘍サイズ（例えば、体積もしくは直径）の減少、（ｘｖ）新しく形成された腫瘍の形成の低減、（ｘｖｉ）原発、局所性、及び／もしくは転移性腫瘍の防止、根絶、除去、もしくは制御、（ｘｖｉｉ）転移の数及びサイズの減少、（ｘｖｉｉｉ）死亡率の低減、（ｘｉｘ）無再発生存率の増加、（ｘｘ）腫瘍のサイズが維持され、増加しないか、もしくは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ダイナミックコントラスト増強ＭＲＩ（ＤＣＥ－ＭＲＩ）、Ｘ線、及びコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、もしくは陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）スキャンなど、当業者に利用可能な従来の方法によって測定されるように、標準的な療法の投与後の腫瘍の増加よりも小さく増加する、ならびに／または患者における寛解の長さの増加。

【0346】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法に従って治療される癌は、肺、胸、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆道、結腸、直腸、頸、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺、または甲状腺の癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肉腫、扁平上皮細胞癌、黒色腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、またはカポジ肉腫である。いくつかの実施形態では、本発明に従って治療される癌は、転移性である。

【0347】

具体的な実施形態では、本明細書に記載される方法に従って治療される癌は、乳癌である。特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って治療される癌は、トリプルネガティブ乳癌である。トリプルネガティブ乳癌は、遺伝子Ｈｅｒ２（Ｎｅｕとしても既知）、エストロゲン受容体（ＥＲとしても既知）、またはプロゲステロン受容体（ＰＲとしても既知）を発現させない乳房組織由来の、またはそこで増殖している任意の腫瘍または細胞を指す。

【0348】

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換的に使用される。いくつかの実施形態では、対象は、霊長類（例えば、サルまたはヒト）、最も好ましくはヒトなどの哺乳動物である。

【0349】

具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合する、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、Ｍ６及びＭ１９抗体）が、対象に投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ、またはヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方）に特異的に結合し、内皮細胞でＭＥＲＴＫシグナル伝達を作動させる、２つまたはそれ以上の異なる抗体またはその抗原結合フラグメントが、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つ以上の他の療法と組み合わせて対象に投与される（以下の第５．４．２節を参照されたい）。

【0350】

６．４．１．２．投与経路及び投与量
本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または組成物は、様々な経路で対象に送達され得る。これらとしては、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局部、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、及び皮下経路が挙げられるがこれらに限定されない。経肺投与もまた、例えば、吸入器またはネブライザー、及びスプレーとしての使用のためのエアロゾル剤を有する製剤の使用によって用いられ得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または組成物は、対象に非経口的に投与される。具体的な実施形態では、該非経口投与は、静脈内、筋肉内、または皮下である。

【0351】

状態の治療及び／または予防に有効になる抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または組成物の量は、疾病の性質によって決まり、標準的な臨床技術によって決定され得る。

【0352】

組成物中で用いられる正確な用量はまた、投与経路及び癌のタイプによって決まり、医師の判断及び各対象の状況に従って判断されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、及び健康を含む）、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬品、または処置が予防的であるか治療的であるかによって異なり得る。治療投与量は、安全性及び有効性を最適化するために、最適に滴定される。

【0353】

ある特定の実施形態では、最適な投与量の範囲を識別することを補助するために、インビトロアッセイが用いられる。有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から外挿され得る。

【0354】

抗体（またはその抗原結合フラグメント）に対して、投与量は、患者の体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．０１～１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、もしくは１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、換言すれば、７０ｋｇの患者に対してそれぞれ、７０ｍｇ、もしくは７００ｍｇ、または７０～７００ｍｇの範囲内であってもよい。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、患者の体重の約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇである。概して、ヒト抗体は、外来ポリペプチドへの免疫応答によって、ヒトの体内で、他の種からの抗体よりも長い半減期を有する。したがって、より低い投与量のヒト抗体及びあまり頻繁ではない投与が、多くの場合可能である。

【0355】

例示的な治療法は、１年の期間の、もしくは数年にわたる、または数年の間隔にわたる週間に１回、または１か月に１回、または３～６か月に１回の投与を伴う。いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つまたはそれ以上の抗体またはその抗原結合フラグメントが、対象に同時に投与される。抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは通常、複数の場合に投与される。単回投与間の間隔は、週毎、月毎、３か月毎、６か月毎、または年毎であってもよい。

【0356】

６．４．２．併用療法
具体的な実施形態では、癌の治療を必要としている対象に、本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む、対象における癌を治療するための本明細書で提供される方法はさらに、対象に１つ以上の追加の治療薬を投与することを含む。具体的な実施形態では、追加の治療薬は、癌を治療するためのものである。具体的な実施形態では、追加の治療薬は、本明細書に記載されるＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントを用いた治療のいかなる副作用も治療するためのものである。

【0357】

具体的な実施形態では、追加の薬剤は、乳癌を治療するために使用される薬剤、黒色腫を治療するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。

【0358】

【0359】

【0360】

具体的な実施形態では、追加の治療薬は、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＰＤ－１阻害剤、またはＰＤ－Ｌ１阻害剤である抗体である。

【0361】

【0362】

他の実施形態では、追加の治療薬は、表１０に列挙される薬剤である。

【0363】

【表10-1】

【0364】

【表10-2】

【0365】

【表10-3】

【0366】

【表10-4】

【0367】

【表10-5】

【0368】

【表10-6】

【0369】

本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントは、同時に、または順次に（前及び／もしくは後に）追加の治療薬と投与され得る。抗体またはその抗原結合フラグメント及び追加の治療薬は、同じまたは異なる組成物中で、かつ同じまたは異なる投与経路によって投与され得る。第１の療法（本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または追加の治療薬である）は、癌を患う対象への第２の療法（本明細書に記載される抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または追加の治療薬）の投与の前に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間前に）、同時に、または後に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間後に）投与され得る。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて対象に投与される追加の治療薬は、同じ組成物（医薬組成物）中で投与される。他の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて投与される追加の治療薬は、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合フラグメントとは異なる組成物中で対象に投与される（例えば、２つまたはそれ以上の医薬組成物が使用される）。

【0370】

６．５．キット
また、本明細書に記載される１つ以上の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその抱合体を含むキットが本明細書で提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の抗体またはその抗原結合フラグメントなど、本明細書に記載される医薬組成物の成分のうちの１つ以上で充填された、１つ以上の容器を備える、薬学的パックまたはキットが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される医薬組成物及び予防薬または治療薬を含む。

【0371】

医薬品もしくは生物学的生成物の製造、使用、もしくは販売を規制する政府機関によって規定された形態の通知、剤形、及び／またはその使用のための説明書が、そのような容器（複数可）と任意に関連付けられる。ある特定の実施形態では、キットと共に含まれる説明書は、医薬組成物（複数可）の投与のための投与量及び／または投与レジメンに関する指導を提供する。

【0372】

薬学的包装材料の例としては、選択された医薬組成物、ならびに投与及び治療の意図する形式に好適なブリスターパック、瓶、パケット、小袋、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル瓶、容器、注射器、及び任意の包装材料が挙げられるがこれらに限定されない。

【0373】

本明細書で提供されるキットはさらに、活性成分を投与するために使用されるデバイスを含むことができる。そのようなデバイスの例としては、注射器、無針注射器、ドリップバッグ、パチ、及び吸入器が挙げられるがこれらに限定されない。

【0374】

本明細書で提供されるキットはさらに、成分を投与するために使用され得る、医薬的に許容されるビヒクルを含むことができる。例えば、成分が非経口投与のために再構成されなければならない固体形態で提供される場合、キットは、成分が、非経口投与に好適であるか、または経口投与のために懸濁液として再構成され得る、微粒子を含まない滅菌溶液を形成するために溶解され得る、好適なビヒクルの密閉容器を備えることができる。医薬的に許容されるビヒクルの例としては、注射用水ＵＳＰ、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロース及び塩化ナトリウム注射液、及び乳酸加リンガー注射液が挙げられるがこれらに限定されない、水性ビヒクル、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールが挙げられるがこれらに限定されない、水混和性ビヒクル、ならびにトウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルが挙げられるがこれらに限定されない、非水性ビヒクルが挙げられるがこれらに限定されない。

【実施例】

【0375】

以下の例は、制限目的ではなく例示目的で提供される。

【0376】

７．実施例
７．１．実施例１：高親和性ＭＥＲＴＫ結合モノクローナル抗体の生成
本実施例は、ＭＥＲＴＫに結合し、かつそのリン酸化反応を活性化することによって、転移性乳癌細胞による内皮動員を阻害する、モノクローナル抗体を記載する。本実施例に記載される抗体を生成するためにマウスを免疫化するために使用されるペプチド抗原を、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ（ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＭｅｒＦｃＣｈｉｍｅｒａ，＃ＣＦ８９１－ＭＲ－１００）から購入した。これは、間の小型リンカー（ＩＥＧＲＭＤ）を用いて、ヒトＩｇＧ_１タンパク質（Ｐｒｏ１００－Ｌｙｓ３３０）のＦｃ領域の一部分と融合した、ＭＥＲＴＫの細胞外ドメインの大きな部分（Ａｒｇ２６～Ａｌａ４９９、配列番号５８）からなるキメラペプチドである。キメラペプチドの概略図に関して図１Ａを参照されたい。マウスをキメラペプチドで免疫化した後、骨髄腫細胞株への免疫化マウスから単離したＢ細胞の融合によって、ハイブリドーマライブラリを生成した。次いで、これらのハイブリドーマからの上清を単離して、以下の第６．１．１節に記載されるように、抗体捕捉競合ＥＬＩＳＡアッセイ（図２）を使用して、ＭＥＲＴＫと結合する抗体を生成するハイブリドーマ細胞を識別した。いったん識別されると、ＭＥＲＴＫに対して高親和性を有する抗体を生成するハイブリドーマをスクリーニングして、以下の第６．１．２節に記載されるように、抗体捕捉競合ＥＬＩＳＡアッセイ（図２）を使用して、ＭＥＲＴＫがＧａｓ－６と結合することを阻害することが可能な抗体を生成したハイブリドーマを識別した。単一クローン（モノクローナル）ハイブリドーマ細胞を単離するために、ハイブリドーマライブラリに分離及びスクリーニングを実施した。９６０個の単一ハイブリドーマクローン（モノクローナル）をこのライブラリからスクリーニングして、Ｇａｓ－６結合を中和するために、高親和性でＭＥＲＴＫに結合したモノクローナル抗体を生成したハイブリドーマクローンを識別した。

【0377】

７．１．１．ＭＥＲＴＫ結合に対するＥＬＩＳＡ捕捉アッセイ
ＭＥＲＴＫに結合するモノクローナル抗体を識別するために、ＥＬＩＳＡ抗体捕捉アッセイを使用して、組み換えＭＥＲＴＫタンパク質で免疫化したマウスから生成した各ハイブリドーマクローンから生成した分泌抗体をスクリーニングした。第一に、ポリスチレンプレートをコーティング抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）、ロット番号Ｊａｃｋｓｏｎ９８９５９、１０ｕｇ／ｍＬの抗体濃度）でコーティングした。次いで、各モノクローナルハイブリドーマクローンからの一次抗体を含有する上清をプレート内の各ウェルに添加した。次に、標識抗原（組み換えヒトＭｅｒ－Ｆｃ、ＲｎＤｓｙｓｔｅｍｓ＃８９１－ＭＲ、ロット番号ＣＸＫ０２１１０５１、濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加した。次いで、検出抗体（西洋ワサビペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）、ロット番号Ｊａｃｋｓｏｎ８６９５４、希釈：１／５０００）を各ウェルに添加した。これに続いて、ＨＲＰ基質を添加し、続いて、停止液を添加して反応を完了した。分光光度計を使用して、各ウェルからのシグナル（Ｏ．Ｄ．）を読み取った。試験した９６０個の全てのハイブリドーマクローンのうち、２０個が、＞１のＯ．Ｄ．値を示し、ヒトＭＥＲＴＫに対する有意な結合親和性を示した。１のＯ．Ｄ．読み取り値は、０．２２のＯ．Ｄ．値を有した陰性対照（抗体なしの空の培地）で観察されたシグナルの少なくとも４倍を示す。これらの２０個のクローンを任意にＭ１～Ｍ２０と名付け、図２に列挙した。図２の第２の縦列（「Ｍｅｒ」という見出し付き）は、各クローンに対するＯ．Ｄ．読み取り値（結合親和性を示す）を示す。

【0378】

７．１．２．競合Ｇａｓ－６結合ＥＬＩＳＡアッセイ
次いで、ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６結合を阻害する抗体を識別するために、２０個のＭＥＲＴＫ結合抗体（Ｍ１～Ｍ２０）に、Ｇａｓ－６競合結合ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。第一に、ポリスチレンプレートを組み換えヒトＧＡＳ－６（ＲｎＤｓｙｓｔｅｍｓｒｈＧａｓ６＃８８５－ＧＳ－０５０、濃度７ｕｇ／ｍＬ）でコーティングした。次に、各モノクローナルハイブリドーマクローンからの一次抗体を含有する上清をプレート内の各ウェルに添加した。同時に、組み換えヒトＭＥＲＴＫ（Ｍｅｒ－ＦｃＲｎＤｓｙｓｔｅｍｓ＃８９１－ＭＲ、ロット番号ＣＸＫ０２１１０５１、濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加した。次いで、検出抗体（西洋ワサビペルオキシダーゼ［ＨＲＰ］共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）、ロット番号Ｊａｃｋｓｏｎ８６９５４、希釈：１／５０００）を各ウェルに添加した。これに続いて、ＨＲＰ基質及び停止液を添加して反応を完了した。分光光度計を使用して、シグナル（Ｏ．Ｄ．）を各プレートから測定した。このアッセイにおいて試験した全てのハイブリドーマクローンのうち、１１個が＜２．４のＯ．Ｄ．値を示し、それは、それらがＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６結合を阻害したことを示した。陰性対照（抗体なしの空の培地）で観察されたシグナルが２．４３であったため、２．４のＯ．Ｄ．読み取り値は、ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６結合の阻害を示す。これらの２０個のクローンは、図２に列挙される。図２の第３の縦列（「（Ｍｅｒ＋クローン）」という見出し付き）は、各クローンに対するＯ．Ｄ．読み取り値（Ｇａｓ－６結合の阻害の量を示す）を示す。

【0379】

２つのモノクローナル抗体Ｍ６及びＭ１９をさらなる研究（トランスウェル内皮遊走アッセイを使用して、それらが転移細胞による内皮動員を阻害し得るかどうかを含む）のために選択した。

【0380】

７．２．実施例２：Ｍ１９及びＭ６抗体は、インビトロでのトリプルネガティブ乳癌細胞による内皮細胞動員を阻害することが可能である。

【0381】

ＭＥＲＴＫの活性化による内皮動員を阻害し得るモノクローナル抗体を識別するために、上記の実施例１に記載されるスクリーンで生成した、高親和性Ｇａｓ－６競合モノクローナル抗体を、トランスウェルを使用したインビトロ内皮動員アッセイで試験した。転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞をボイデンチャンバの底部に配置し、多孔質トランスウェル挿入物を通じてＨＵＶＥＣＳを動員するそれらの能力が分析され得た。我々のスクリーンからのＭＥＲＴＫ結合抗体（高親和性及び低親和性抗体の両方を含む）を、生理学的濃度で個々にトランスウェルに添加した。試験した全ての抗体のうち、Ｍ１９及びＭ６は、陰性対照抗体ＩｇＧと比較して、ＨＵＶＥＣ細胞の動員（移動した細胞／領域）を有意に阻害することが最も可能であった（移動した細胞の５０％の低減）（図３）。これは、ヒト転移性癌細胞によるヒト内皮細胞動員を阻害するモノクローナル抗体Ｍ１９及びＭ６の能力を示す（図３）。

【0382】

７．３．実施例３：Ｍ１９及びＭ６抗体は、内皮細胞でＭＥＲＴＫリン酸化反応を活性化する。

【0383】

Ｍ１９及びＭ６が実際にＭＥＲＴＫ活性化抗体であることを確実にするために、ウェスタンブロット解析を実施して、Ｍ１９またはＭ６抗体処置の存在または非存在下で、内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）によって発現したリン酸化（活性化）ＭＥＲＴＫのレベルを定量化した。（図４、図５）。

【0384】

ウェスタンブロット解析を実施するために、ＨＵＶＥＣ細胞（またはＬＭ２乳癌細胞）を、１０％ＦＢＳを含有するＥＧＭ－２培地（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号ＣＣ－３１６２）内で８０％コンフルエンスまで増殖させた。所与の条件下での１６時間のインキュベーションの後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ、それぞれ、カタログ番号１１８３６１７０００１及び０４９０６８４５００１）を含有する１ｍＬＲＩＰＡ緩衝液（Ｇ－Ｂｉｏｓｃｅｉｎｃｅ、カタログ番号７８６－４９０）で洗い流した。次いで、細胞溶解液からのタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で分離し、ＰＶＤＦ膜に移した。タンパク質の検出のために、以下の一次抗体を使用した。リン酸化ＭＥＲＴＫ（ＦａｂＧｅｎｎｉｘ、カタログ番号ＰＭＫＴ－１４０ＡＰ）、ＭＥＲＴＫ（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ５２９６８）、リン酸化Ａｋｔ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ－７９８５Ｒ）、及びＡｋｔ（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ－１６１８）。適切なＨＲＰ共役二次抗体（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、一次抗体を検出した。

【0385】

指定された抗体で処置した培養細胞は、慢性（１６時間）及び急性（３０分間）の抗体処置の両方の最中に、用量依存的な様式で、内皮細胞上でのＭＥＲＴＫの活性化の増加をもたらした（図４、図５）。興味深いことに、Ｍ１９抗体処置は、ＬＭ２乳癌細胞上でＭＥＲＴＫの活性化を増加させなかった（図６）。

【0386】

７．４．実施例４：Ｍ１９は、ヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方に高親和性で結合する。

【0387】

本実施例は、Ｍ１９抗体がヒト及びマウスＭＥＲＴＫの両方に高親和性（約０．３ｎＭのＫ_Ｄ）で結合することを示す。組み換えヒト及びマウスＭＥＲＴＫに対するＭ１９抗体の結合親和性を特徴付けるために、バイオレイヤー干渉法を使用して、生体分子間相互作用解析を実施した（図７及び図８）。Ｍ１９とマウス及びヒトＭＥＲＴＫの両方との間で結合を観察した。ヒト及びマウスＭＥＲＴＫへのＭ１９結合に関する、全体的なグローバルフィットで計算された結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、同様であった（Ｋ_Ｄ＝約０．３ｎＭ）（図７、図８）。

【0388】

７．５．実施例５：Ｍ１９の治療的投与は、インビボでヒト乳癌の腫瘍進行を阻害する。

【0389】

本実施例は、ＭＥＲＴＫ活性化抗体Ｍ１９がヒト乳癌のマウスモデルにおいて、インビボで腫瘍進行及び腫瘍転移を阻害することが可能であることを示す。モノクローナル抗体Ｍ１９がインビボで腫瘍負荷を低減し、腫瘍進行を阻害することが可能であったかどうかを試験するために、２０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１または５０００個のＬｍ１ａ１細胞を、増殖因子低減マトリゲルと１：１の比で混合し、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの乳房脂肪体に、両側に注射した。Ｍ１９抗体または対照ＩｇＧ抗体のいずれかの２５０μｇの腹腔内注射を、手術後及び続いて１週間に２回注射した。触知可能な腫瘍の腫瘍サイズを、キャリバーを使用して週毎に測定した。Ｍ１９抗体での処置は、インビボで、トリプルネガティブ乳癌の原発腫瘍増殖（図９Ａ）及び転移（図９Ｂ）の両方の有意な治療的阻害を示した。

【0390】

７．６．実施例６：Ｍ１９は、インビボで腫瘍血管新生を阻害する。

【0391】

Ｍ１９抗体での治療的処置がインビボで血管新生をもたらすかどうかを調査するために、Ｍ１９で処置されたマウス及び処置されていないマウスの腫瘍内の血管密度を定量化した。２０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの乳房脂肪体に、両側に注射した。２５０μｇのＭ１９抗体または対照ＩｇＧ抗体のいずれかでの５８日間の処置の後、腫瘍を切除し、血管密度を定量化した（図１０）。実際に、Ｍ１９抗体での治療的処置は、インビボで血管新生の有意な阻害（＞５０％）をもたらした（図１０）。

【0392】

７．７．実施例７：Ｍ６は、ヒトＭＥＲＴＫの両方に高親和性で結合する。

【0393】

本実施例は、Ｍ６抗体が組み換えヒトＭＥＲＴＫに高親和性（約４．６ピコモルのＫ_Ｄ）で結合することを示す。Ｍ６抗体の結合親和性を特徴付けるために、バイオレイヤー干渉法を使用して、生体分子間相互作用解析を実施した（図１１）。Ｍ６とヒトＭＥＲＴＫとの間で結合を観察した。ヒトＭＥＲＴＫへのＭ６結合に関する、全体的なグローバルフィットで計算された結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、約４．６ピコモルであった（図１１）。

【0394】

７．８．実施例８：Ｍ６の治療的投与は、インビボでヒト乳癌の腫瘍進行を阻害する。

【0395】

本実施例は、ＭＥＲＴＫ活性化抗体Ｍ６がヒト乳癌のマウスモデルにおいて、インビボで腫瘍進行を阻害することが可能であることを示す。モノクローナル抗体Ｍ６がインビボで腫瘍負荷を低減し、腫瘍進行を阻害することが可能であったかどうかを試験するために、２０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌細胞を、増殖因子低減マトリゲル（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と１：１の比で混合し、ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの乳房脂肪体に、両側に注射した。Ｍ６抗体または対照ＩｇＧ抗体のいずれかの２５０μｇの腹腔内注射を、手術後及び続いて１週間に２回注射した。触知可能な腫瘍の腫瘍サイズを、キャリバーを使用して週毎に測定した。実際に、１週間に２回のＭ６抗体での処置は、腫瘍サイズの有意な低減をもたらした（図１２）。

【0396】

７．９．実施例９：Ｍ６及びＭ１９に対する抗体配列
Ｍ１９及びＭ６をさらに特徴付けるために、これらの抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を配列した。Ｍ６の重鎖及び軽鎖可変領域の両方のアミノ酸配列は、表５に示される。Ｍ６の重鎖及び軽鎖可変領域の両方の核酸酸配列は、表７に示される。Ｍ６のＣＤＲのアミノ酸配列は、表１（ＶＨに関して）及び表２（ＶＬに関して）に示される。

【0397】

Ｍ１９の重鎖及び軽鎖可変領域の両方のアミノ酸配列は、表６に示される。Ｍ６の重鎖及び軽鎖可変領域の両方の核酸配列は、表８に示される。Ｍ１９のＣＤＲのアミノ酸配列は、
表３（ＶＨに関して）及び表４（ＶＬに関して）に示される。

【0398】

本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が制限されないものとする。実際に、記載されるものに加えて、本発明の様々な修正形態が、上記の記載及び添付の図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような修正形態は、添付の請求項の範囲内に入るよう意図される。

【0399】

本明細書に列挙される全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれるように具体的かつ個々に示された場合と同じ程度まで、それらの全体が、かつあらゆる目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】