(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-01-26
(45)【発行日】2023-02-03
(54)【発明の名称】眼疾患の治療のための過リン酸化タウに特異的な抗体
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20230127BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20230127BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20230127BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230127BHJP
C07K 16/18 20060101ALN20230127BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P27/02
A61P27/06
C12N15/13
C07K16/18 ZNA
【請求項の数】
1
(21)【出願番号】P 2019556742
(86)(22)【出願日】2018-01-03
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2020-03-05
(86)【国際出願番号】 EP2018050149
(87)【国際公開番号】W WO2018127519
(87)【国際公開日】2018-07-12
【審査請求日】2020-12-09
(31)【優先権主張番号】PA201700006
(32)【優先日】2017-01-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】DK
(73)【特許権者】
【識別番号】591143065
【氏名又は名称】ハー・ルンドベック・アクチエゼルスカベット
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100141195
【弁理士】
【氏名又は名称】西澤 恵美子
(74)【代理人】
【識別番号】100104282
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 康仁
(72)【発明者】
【氏名】ペデルセン，ヤン，トーレイフ
(72)【発明者】
【氏名】ペデルセン，ラーズ，エステゴー
(72)【発明者】
【氏名】デクセル，ユストゥス，クラウス，アルフレッド
(72)【発明者】
【氏名】アブドゥル－ラシード アズーニ，アヨデジ
(72)【発明者】
【氏名】ローゼンクヴィスト，ニーナ，ヘレン
【審査官】小金井 悟
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１４－５０２１４１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１４－５３１２１６（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１６／００７４１４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特許第６８７８３９５（ＪＰ，Ｂ２）
【文献】特表２０１９－５２９３３６（ＪＰ，Ａ）
【文献】Phospho-Tau (Ser396) Monoclonal Antibody (PHF13.6)，INVITROGEN CATALOG，2008年10月，#35-5300，pp.1-3
【文献】J. Biol. Chem. ，2015年02月13日，Vol.290, No.7，pp.4059-4074
【文献】J. Neurosci.，2016年05月25日，Vol.36, No.21，pp.5785-5798
【文献】Can. J. Ophthalmol.，2008年02月，Vol.43, No.1，pp.53-60
【文献】Med. Hypotheses.，2010年06月，Vol.74, No.6，pp.973-977
【文献】Exp. Eye Res.，2016年06月，Vol.147，pp.138-143
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、モノクローナル抗体を含む医薬組成物であって、前記モノクローナル抗体が、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であり、
前記モノクローナル抗体が、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み、
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、並びに緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性からなる群から選択される、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、病的過リン酸化（ＰＨＦ）タウにおけるリン酸化セリン３９６残基（ｐＳ３９６）に特異的に結合するモノクローナル抗体の新規な種類、ならびに網膜アミロイドーシス（ｒｅｔｉｎｏｉｄ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、および緑内障の治療にこれらの分子およびそれらのタウ結合フラグメントを使用する方法に関する。
【0002】
配列表の参照
本出願は、米国特許法施行規則（３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１．８２１条に従う１つまたは複数の配列表（以下参照）を含み、これは、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１０４７－ＤＫｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１７年１２月１２日に作成され、８６ｋＢのサイズを有する）で開示され、このファイルは、全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、米国特許法施行規則（３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１．８２１条に従う１つまたは複数の配列表（以下参照）を含み、これは、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１０４７－ＤＫｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１７年１２月１２日に作成され、８６ｋＢのサイズを有する）で開示され、このファイルは、全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【0003】
アミロイドβ（Ａｂ）を含む細胞外沈着は、網膜の老化の特徴である。世界的に不可逆的失明の主な原因である緑内障は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の選択的死によって特徴付けられる。Ａβを遮断することにより、緑内障モデルにおいて網膜神経節細胞が保護される（Ｓａｌｔ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。軸索に富んだ、微小管関連タンパク質タウが、アルツハイマー病および他のタウオパチーにおいて神経毒性の主なメディエータであるが、緑内障の患者が、眼および脳脊髄液中に変化したレベルのＡβおよびタウを有することが示された（Ｎｕｃｃｉ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。いくつかのエビデンスは、タウも網膜を損傷し得ることを示唆している。Ｃｈｉａｓｓｅｕ（Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１６ Ｍａｙ ２５；３６（２１）：５７８５－９８）は、緑内障が、タウ蓄積、変化したリン酸化、およびミスソーティング（ｍｉｓｓｏｒｔｉｎｇ）を含む、タウオパチーの特徴的な病理学的特徴を示すことを明らかにした。
【0004】
タウは、微小管動態において重要な役割を果たし、そのリン酸化は、細胞エネルギーの維持および細胞死シグナル伝達にとって重要なミトコンドリア動態の脱制御（ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）を含む細胞機能障害を生じる（Ｊｅｆｆｅｒｙ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４７（２０１６）１３８－１４３）。
【0005】
緑内障は、レーザー手術または従来の手術または点眼剤によって処置される。点眼剤は、眼からの流体の流出を増加させることによって作用し、かつ全身性の副作用が少なく、眼自体への変化に関連するプロスタグランジン類似体；流体の生成を減少させることによって作用し、全身性の副作用を有するβ遮断薬；流体の生成を減少させ、かつ排出を増加させるように作用するαアゴニスト；および眼内液の生成を減少させることによって眼圧を低下させるように作用する炭酸脱水酵素阻害剤（ＣＡＩ）のいずれかである。有効な治療のためにこれらの薬剤の組合せが使用されることは珍しいことではない。別の作用機序によって作用する新たな治療選択肢が必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、ヒト（２Ｎ４Ｒアイソフォーム）タウ（配列番号１）のリン酸化残基セリン３９６に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントに関する。抗体は、それらがリン酸化４０４残基に実質的に結合しないように、リン酸化残基３９６および４０４を区別することができるそれらの能力によってさらに特徴付けられる（配列番号２）。
【0007】
特定の理論によって制約されるものではないが、本発明者らによるエビデンスは、３９６ではなく残基４０４においてリン酸化されたタウタンパク質の存在下における、残基３９６においてリン酸化されたヒトタウタンパク質に対する本発明の抗体の区別および選択性が、病理学的および治療学的観点から顕著であることを実証している。本発明の抗体は、非病的であるが、リン酸化されたタウの存在下で、病的タウに対して選択的である。本発明の抗体は、正常なタウの存在下で、病的タウのタウもつれ（ｔａｕ ｔａｎｇｌｅ）を除去することができる。特定の理論によって制約されるものではないが、タウ位置３９６においてリン酸化されたタウタンパク質を含むタウのもつれを除去することは、タウもつれへの病的タウのシーディングを防ぐものと考えられる。したがって、本発明の一態様は、分子がタウ位置４０４においてリン酸化されたタウタンパク質の存在下にある場合でも、３９６－リン酸化タウに選択的に結合することが可能な抗体に関する。本発明の関連する態様は、分子が非病原性タウの存在下にある場合でも、３９６－リン酸化タウに選択的に結合することが可能な抗体に関する。さらに定義される、本発明は、病的タウに対して選択的な抗体に関し、前記病的タウは、タウのヒト２Ｎ４Ｒアイソフォームを過剰発現するトランスジェニックマウスにおいて（ウエスタンブロット分析によって）６４ｋＤａバンドとして現われる過リン酸化タウである。
【0008】
本発明の一態様は、以下の試験基準を満たす抗タウ抗体に関する：ｉ）抗体は、非リン酸化タウに結合しない；ｉｉ）抗体は、４０４においてリン酸化され、および３９６においてリン酸化されないタウに結合しない；ｉｉｉ）抗体は、３９６においてリン酸化されたタウに結合する；ｉｖ）抗体は、３９６および４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する。本発明者らは、試験基準ｉｉｉ）およびｉｖ）下の結合が、同じ程度であることを発見し、位置４０４におけるリン酸化が、結合過程を阻害も促進もしないことを主張する。本発明者らは、試験基準ｉｉ）に反して、３９６においてリン酸化されず、４０４においてリン酸化されたタウタンパク質への結合が、試験モデルにおいて、もつれを除去せず、または病的タウも除去しないことをさらに発見した。
【0009】
本発明の一態様は、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇ｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４および７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％以下だけ減少させる抗タウ抗体に関する。本発明のさらなる態様は、過リン酸化タウ６４および７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％以下だけ減少させる抗タウ抗体；または、本明細書に記載されるようにヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、リン酸化Ｓ３９６過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力を持つ抗タウ抗体に関する。
【0010】
本発明の別の態様は、脈絡膜および網膜の疾患に関連するタウオパチーに罹患した患者を治療する方法であって、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減する工程を含み、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、もつれが除去され、過リン酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む方法に関する。
【0011】
別に定義される、本発明は、脈絡膜および網膜の疾患に関連するタウオパチーに罹患した患者を治療する方法であって、もつれから過リン酸化タウが取り除かれるように、リン酸化残基３９６を有するタウに対して選択的な抗体ともつれを接触させる工程を含む方法に関する。
【0012】
より詳細には、本発明の一実施形態は、Ｃ１０－２抗体およびＣ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体から選択される抗体を用いて、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患からなる群から選択されるタウオパチーを治療することに関する。同様に、本発明は、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の治療に使用するための、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体から選択される化合物に関する。別に記載される、本発明は、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の治療のための薬剤の調製に使用するための、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体から選択される化合物に関する。
【0013】
一実施形態によれば、以下の抗体は、タウオパチー、特に、上に定義される脈絡膜および網膜の疾患を治療するのに使用され得る：
【0014】
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ１０－２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ１０－２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0015】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0016】
ＩＭＧＴ定義を用いて別に定義される、本発明の一態様は、
（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0017】
Ｃｈｏｔｉａ定義を用いて別に定義される、本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0018】
本発明の一態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｅに関する。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0019】
抗体Ｄ５５Ｅに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0020】
抗体Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0021】
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｑに関する。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0022】
抗体Ｄ５５Ｑに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0023】
抗体Ｄ５５Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0024】
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｓに関する。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0025】
抗体Ｄ５５Ｓに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0026】
抗体Ｄ５５Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、抗体Ｄ５５Ｑ、抗体Ｄ５５Ｅを用いた試験は、この残基の突然変異が、室温で長期間にわたる低ｐＨでの処理の前および後に前記抗体を比較した際に、改変されていない結合特性を有する抗体をもたらすことを示し、これは、低ｐＨで異性化が行われないこと、または任意の異性化タンパク質が、処理前と比較して改変されていない結合特性を有することを示す。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、抗体Ｄ５５Ｑ、抗体Ｄ５５Ｅを用いた試験は、この残基の突然変異が、室温で長期間にわたる低ｐＨでの処理の前および後に前記抗体を比較した際に、改変されていない結合特性を有する抗体をもたらすことを示し、これは、低ｐＨで異性化が行われないこと、または任意の異性化タンパク質が、処理前と比較して改変されていない結合特性を有することを示す。
【0027】
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓに関する。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0028】
抗体Ｎ３２Ｓに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0029】
抗体Ｎ３２Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0030】
ＩＭＧＴ定義を用いた抗体Ｎ３２Ｓの別の定義は、
（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
【0031】
Ｃｈｏｔｉａ定義を用いた抗体Ｎ３２Ｓのさらに別の定義は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
【0032】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ５．２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ５．２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0033】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0034】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ８．３、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｃ８．３、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0035】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0036】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｄ１．２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体Ｄ１．２、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0037】
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0038】
本明細書において上述される抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントは、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜のタウオパチー疾患を治療するのに使用され得る。
【0039】
本発明のさらなる態様は、対象の眼内の前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用するための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物であって、抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物に関する。
【0040】
本発明のさらなる態様は、患者における、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の進行を遅らせる方法であって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体を投与することによって、前記患者における病的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0041】
【図1】ヒト化Ｃ１０－２およびＣ１０－２変異体（Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ）を用いたＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイ。ｈＣ１０－２（四角形）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）を用いたＰ３９６特異的抗体によるＡＤ－Ｐ３捕捉の濃度に応じた阻害。ＡＤ－Ｐ３抗原を、２００ｎｇ／ｍｌのマウスＣ１０－２で被覆されたウェルにおけるインキュベーションの前に、増加する濃度の抗体（０～１０００ｎＭ）とともに、室温（ｒ／ｔ）で６０分間インキュベートした。捕捉されたＡＤ－Ｐ３抗原を、スルホタグ化抗総タウ（ＭＳＤ）を用いて検出した。■＝ｃ１０－２、〇＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、●＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）Ｃ１０－２変異体のＩＣ５０を計算すると、それぞれ４４ｎＭおよび１４ｎＭである。これは、図１の曲線を比較した際に分かるように、Ｃ１０－２と比べて著しい改善である。したがって、本発明の一態様において、本明細書に記載される流体相阻害アッセイにおいて、１００ｎＭ以下の抗体の濃度で、例えば５０ｎＭ以下の濃度で、シグナルが５０％減少されるように、抗体は、ＡＤ－Ｐ３を阻害する。
【図2】ｈＣ１０－２および関連するＣ１０－２変異体の見かけの親和性を示すペプチド阻害アッセイ。Ｐタウ（Ｐ３９６）３８６～４０８による、流体相溶液中での、抗体結合の濃度に応じた阻害。ヒト化Ｃ１０－２（四角形）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）および１ｎｇ／ｍｌのｈＣ１０－２＿Ｎ３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）を、１００ｎｇ／ｍｌのＰタウ３８６～４０８（Ｐ３９６／Ｐ４０４）で被覆されたウェルにおけるインキュベーションの前に、増加する濃度（０～１００００ｎＭ）のＰタウ３８６～４０８（Ｐ３９６）とともに、室温（ｒ／ｔ）で６０分間インキュベートした。十分に結合された抗体が、スルホタグ化抗ヒトＩｇＧ（ＭＳＤ）で検出された。■＝ｃ１０－２（ＩＣ５０＝２４ｎＭ）、〇＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（ＩＣ５０＝５０ｎＭ）、●＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（ＩＣ５０＝３４ｎＭ）。
【図3-1】アルツハイマー脳およびｒＴｇ４５１０マウス脳における病的タウの免疫組織化学的検出。３つの異なるＡＤドナーに由来する前頭前皮質において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、神経原線維変化、神経絨毛糸（ｎｅｕｒｏｐｉｌ ｔｈｒｅａｄ）およびジストロフィー性神経突起を標識した。最も強い染色強度が、最も高い濃度の抗体で検出された。対照脳切片には、免疫活性がない。全ての３つの抗体が、進行した病変を有するｒＴｇ４５１０脳においてリン酸化タウを標識した。染色は、ｈＣ１０－２からｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓへと、およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔへと増加した。最も強い染色強度が、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、次に、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、次に、ｈＣ１０－２で検出された。１００ｎｇ／ｍＬ程度のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１ＴおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓの濃度で、アルツハイマー病の脳における病的タウの免疫組織化学的検出があった。
【図4】ｈＣ１０－２の静脈内（ｉ．ｖ．）注射後の、ｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾（左側のパネルは、ｒＴｇ４５１０を表し；右側のパネルは、ｔＴＡを表す）。ｈＣ１０－２は、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。
【図5】ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓの静脈内（ｉ．ｖ．）注射後の、ｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾（左側のパネルは、ｒＴｇ４５１０を表し；右側のパネルは、ｔＴＡを表す）。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓは、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。
【図6】ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの静脈内（ｉ．ｖ．）注射後の、ｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾（左側のパネルは、ｒＴｇ４５１０を表し；右側のパネルは、ｔＴＡを表す）。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。図４～６の比較により、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、静脈注射後に血液脳関門を通過することが示される。この図は、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、ｈＣ１０－２と比較して、改善された結果を有して海馬および皮質における標的構造（もつれに対して免疫活性である）を標識することをさらに示す。
【図7】アルツハイマー病（ＡＤ）の脳においてＰ－Ｓ３９６抗体に対して免疫活性であるタウ種。ＡＤ脳の切片において、タウもつれが、Ｅ１およびｐ３９６抗体によって共標識されるか（ｃｏ－ｌａｂｅｌｌｅｄ）またはＰ－Ｓ３９６抗体のみに対して陽性であった（矢印）。
【図8A】ウエスタンブロットによる病的タウの検出（図８Ａ～Ｃ）。ウエスタンブロットによる、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを用いた病的タウの検出。３２週齢で安楽死させた３匹のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳および４匹のＡＤマウスおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片をそれぞれ、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分へと分画し、１μｇ／ｍｌのｈＣ１０．２（Ａ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（Ｂ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（Ｃ）を用いて、Ｐ－Ｓ３９６エピトープにおけるリン酸化タウについてウエスタンブロットによって分析した。ｒＴｇ４５１０では、正常なヒト４Ｒ０Ｎタウが、５５ｋＤａにおいて示される一方、過リン酸化タウ種が、６４および７０ｋＤａにおいて示される。ＡＤでは、可変量のＡＤの典型的塗抹標本（ｓｍｅａｒ）を用いて、過リン酸化タウ種が、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、非トランスジェニックマウスよりｒＴｇ４５１０マウスのタウタンパク質に対して、および健常対照ドナーよりＡＤドナーに対して選択的である。さらに、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、ｒＴｇ４５１０マウスの正常タウ５５ｋＤａタンパク質よりｒＴｇ４５１０マウスの病原性タウ６４ｋＤａタンパク質に対して選択的である。
【図9】ＡＤ脳からのタウの免疫沈降。ＡＤ脳からのｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔによるタウの免疫沈降。４つのＡＤおよび健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質脳ホモジネートの５００μｇのプレクリアされた溶解物からの、１０μｇのｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、ヒトＩｇＧ１対照（ｈＩｇＧ１）によるタウの免疫沈降を、ポリクローナルウサギ抗ｐＳ３９６タウ（ｐＳ３９６タウ）抗体を用いて、ウエスタンブロットによって分析した。ＡＤでは、過リン酸化タウ種が、可変量のＡＤの典型的塗抹標本を用いて、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。
【図10】Ｃｉｓｂｉｏアッセイによるタウ凝集の定量化。Ｗｔ（野生型）シーディング材料（ＷＷ）は、シーディングを示さず、バックグラウンドシグナルを、全ての播種された試料から差し引いた。対照的に、ｔｇ４５１０ホモジネート（ＣＣ）を効率的に播種した。このシーディング効果は、Ｂ１２による処理によって影響されなかったが、タウ抗体（ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ＞ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＞ｈＣ１０－２）による処理によって部分的に改善された。グラフは、４つの独立した組の試料のプールされた結果を表し、相対タウ凝集としてプロットされ（総タンパク質に対して正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数（ｆｏｌｄ ｓｉｇｎａｌ））、相対不溶性ｐ３９６タウを、ｔｒｉｔｏｎ Ｘ不溶性画分のウエスタンブロットの濃度測定によって定量化した（正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数）。全ての試料を、アイソタイプ対照抗体Ｂ１２に対して正規化した。
【図11】異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたアルツハイマー病の脳抽出物の免疫枯渇後のタウ５ウエスタンブロットシグナルの定量化。抗体は両方とも、アルツハイマー病の脳抽出物からの総タウのごく一部を除去した。▲＝２．１０．３免疫枯渇；◆＝ｈＣ１０－２免疫枯渇。
【図12】異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたアルツハイマー病の脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ４２２タウウエスタンブロットシグナルの定量化。この図は、セリン４２２においてリン酸化されたタウが、ｈＣ１０－２または２．１０．３のいずれかを用いた免疫枯渇によって、アルツハイマー病の脳抽出物から効率的に除去され得ることを示す。抗体は両方とも、９０％超のＰ－Ｓ４２２タウを除去したが、さらに多くの２．１０．３抗体が、同じ効果に達するのに必要とされた。
【図13】異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたアルツハイマー病の脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ３９６タウウエスタンブロットシグナルの定量化。ｈＣ１０－２免疫枯渇は、セリン３９６においてリン酸化された８８％のタウを除去した一方、２．１０．３は、アルツハイマー病の脳抽出物から５５％のＰ－Ｓ３９６タウを除去したに過ぎなかった。▲＝２．１０．３免疫枯渇；◆＝ｈＣ１０－２免疫枯渇。
【図14】異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたアルツハイマー病の脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ１９９／２０２タウウエスタンブロットシグナルの定量化。ｈＣ１０－２免疫枯渇は、セリン１９９／２０２においてリン酸化された６９％のタウを取り除いた。２．１０．３抗体は、同じ用量依存的減少を示さなかった。▲＝２．１０．３免疫枯渇；◆＝ｈＣ１０－２免疫枯渇。
【図15】免疫枯渇の前後のウエスタンブロットにおけるアルツハイマー病の脳抽出物。セリン３９６においてリン酸化された２５ｋＤａのタウフラグメントがある。ｈＣ１０－２を用いた免疫枯渇により、２５ｋＤａのタウバンドの減少が生じた。２つの他のリン酸化特異的抗体２．１０．３およびＡＴ８は、この２５ｋＤａ種を除去しなかった。
【図16】異なる量のｈＣ１０－２変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３２Ｑ、Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、Ｎ３２Ｑ＿Ｄ５５ＥおよびＮ３２Ｓ＿Ｄ５５Ｅを用いたアルツハイマー病の脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ３９６タウウエスタンブロットシグナルの定量化。アルツハイマー病の脳ホモジネートからセリン３９６においてリン酸化されたタウを除去する能力は相当であった。０．１μｇ未満の抗体（７５ｎｇにおけるデータ点）において、Ｃ１０－２変異体が、（１６％であったＮ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅを除いて）少なくとも２８％だけＳ－Ｐ３９６シグナルを減少させた一方、Ｃ１０．２は、Ｓ－Ｐ３９６シグナルを６％未満減少させた。■＝ｃ１０－２、□＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、◆＝Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｄ５５Ｅ、
【数1】
【図17A】アルツハイマー病脳抽出物を注射することによって引き起こされる、海馬におけるタウもつれのシーディング。ｍＣ１０－２処理は、播種された海馬におけるもつれ病変を、５７％だけかなり減少させた（Ｐ＜０．０５）。ｈＣ１０－２も病変を減少させたことを示す明白な傾向があった。比較によると、２．１０．３は、効果を示すことができなかった。
【図18】残基Ｐ－Ｓｅｒ３９６およびＴｙｒ３９４は、抗原結合部位の中心にある。Ｉｌｅ（３９２）－Ｖａｌ（３９３）－Ｔｙｒ（３９４）－Ｌｙｓ（３９５）－Ｐ－Ｓｅｒ（３９６）－Ｐｒｏ（３９７）－Ｖａｌ（３９８）の構造が示される。本発明の抗体との主な相互作用は、タウペプチドの疎水性ポケット、Ｐ－Ｓｅｒ３９６およびＹ３９４を必要とする。Ｙ（３９４）側鎖および骨格の間に、形成された広範囲の水素結合ネットワークおよびＰ－Ｓｅｒ３９６のホスフェートとの電荷／極性相互作用がある。本発明の抗体のＨＣ ＣＤＲ１は、パリンドローム（ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ）８－残基モチーフ極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡ－極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ（Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ）を含む。荷電残基は、抗体およびタウタンパク質の間の、水素結合、電荷／電荷、および電荷／極性相互作用によって形成される広範囲の結合ネットワークを介して相互作用する。
【図19-1】（パネルＡ～Ｄ）ＭＳＤにおける病理学的Ｐ３材料への結合 パネルは、ヒトＡＤおよび非罹患対照脳から単離されるタウに対する、Ｄ１．２（パネルＡ）、Ｃ５－２（パネルＢ）、Ｃ１０－２（パネルＣ）およびＣ８－３（パネルＤ）のＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ＥＬＩＳＡ結合の結果を示す（実施例９）。ＥＬＩＳＡプレートにおいて罹患した脳（ＡＤ）および健常対照脳から単離されるタウの固定化を用いて、本明細書における抗体が、病的タウ種に特異的に結合することを実証することができる。増加する濃度の抗体は、飽和結合をもたらす。結合された抗体の量は、二次抗マウス抗体で検出される。
【発明を実施するための形態】
【0042】
参照により援用される配列
配列番号１：ヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）
配列番号２：タウ残基３８６～４０８（ｐＳ３９６、ｐＳ４０４）
配列番号３：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号５：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号７：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号８：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号９：マウスＣ１０－２軽鎖
配列番号１０：マウスＣ１０－２重鎖
配列番号１１：ヒト化Ｃ１０－２重鎖
配列番号１２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖
配列番号１３：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号１４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号１５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号１６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号１７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号１８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号１９：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号２０：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号２５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２６：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２７：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２８：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号２９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号３０：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号３１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号３２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号３３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号３４：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号３５：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号４０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号４２：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号４３：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号４４：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号４５：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号４６：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４７：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４８：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４９：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５２：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号５３：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号５４：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号５５：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５６：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５７：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５８：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号５９：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６０：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６１：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ１
配列番号６２：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ２
配列番号６３：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ３
配列番号６４：Ｄ１．２軽鎖
配列番号６５：Ｄ１．２重鎖
配列番号６６：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号６７：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６８：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６９：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ１
配列番号７０：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ２
配列番号７１：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ３
配列番号７２：Ｃ５．２軽鎖
配列番号７３：Ｃ５．２重鎖
配列番号７４：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ１
配列番号７５：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ２
配列番号７６：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ３
配列番号７７：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ１
配列番号７８：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ２
配列番号７９：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ３
配列番号８０：Ｃ８．３軽鎖
配列番号８１：Ｃ８．３重鎖
配列番号１：ヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）
配列番号２：タウ残基３８６～４０８（ｐＳ３９６、ｐＳ４０４）
配列番号３：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号５：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号７：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号８：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号９：マウスＣ１０－２軽鎖
配列番号１０：マウスＣ１０－２重鎖
配列番号１１：ヒト化Ｃ１０－２重鎖
配列番号１２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖
配列番号１３：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号１４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号１５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号１６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号１７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号１８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号１９：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号２０：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号２５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２６：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２７：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２８：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号２９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号３０：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号３１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号３２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号３３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号３４：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号３５：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号４０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号４２：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号４３：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号４４：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号４５：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号４６：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４７：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４８：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４９：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５２：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号５３：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号５４：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号５５：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５６：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５７：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５８：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号５９：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６０：Ｄ１．２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６１：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ１
配列番号６２：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ２
配列番号６３：Ｄ１．２重鎖ＣＤＲ３
配列番号６４：Ｄ１．２軽鎖
配列番号６５：Ｄ１．２重鎖
配列番号６６：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号６７：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６８：Ｃ５．２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６９：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ１
配列番号７０：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ２
配列番号７１：Ｃ５．２重鎖ＣＤＲ３
配列番号７２：Ｃ５．２軽鎖
配列番号７３：Ｃ５．２重鎖
配列番号７４：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ１
配列番号７５：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ２
配列番号７６：Ｃ８．３軽鎖ＣＤＲ３
配列番号７７：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ１
配列番号７８：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ２
配列番号７９：Ｃ８．３重鎖ＣＤＲ３
配列番号８０：Ｃ８．３軽鎖
配列番号８１：Ｃ８．３重鎖
【0043】
発明の詳細な説明
本発明は、過リン酸化病原性Ｐ－Ｓ３９６タウに対して高度に選択的であり、Ｔｇ４５１０マウスのタウおよびヒトの眼内の両方において網膜に結合するタウ抗体の開発に基づいている。本発明は、本発明の抗体が、１μｇ／ｍＬ程度の濃度で、過リン酸化病原性Ｐ－Ｓ３９６タウに対して高度に特異的であり、かつヒト網膜の標識部分に対して高度に特異的であるという意外な発見に基づいている。本発明は、緑内障および加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を含む眼疾患の治療に関する。眼疾患は、アルツハイマー病（ＡＤ）の初期段階、および前駆段階ＡＤの兆候に起因することがあり、またはＡＤに関連していないことがある。本発明は、本発明の抗体を用いた、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の治療に関する。
本発明は、過リン酸化病原性Ｐ－Ｓ３９６タウに対して高度に選択的であり、Ｔｇ４５１０マウスのタウおよびヒトの眼内の両方において網膜に結合するタウ抗体の開発に基づいている。本発明は、本発明の抗体が、１μｇ／ｍＬ程度の濃度で、過リン酸化病原性Ｐ－Ｓ３９６タウに対して高度に特異的であり、かつヒト網膜の標識部分に対して高度に特異的であるという意外な発見に基づいている。本発明は、緑内障および加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を含む眼疾患の治療に関する。眼疾患は、アルツハイマー病（ＡＤ）の初期段階、および前駆段階ＡＤの兆候に起因することがあり、またはＡＤに関連していないことがある。本発明は、本発明の抗体を用いた、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の治療に関する。
【0044】
本明細書において使用される際、「タウ」という用語は、「タウタンパク質」と同義であり、タウタンパク質アイソフォーム（例えば、Ｐ１０６３６、１－９としてＵｎｉＰｒｏｔにおいて同定される）のいずれかを指す。本明細書において使用されるタウのアミノ酸の番号付けは、以下に示されるようにアイソフォーム２（配列番号１）に対して示され、メチオニン（Ｍ）は、アミノ酸残基１である：
配列番号１：
配列番号１：
【化1】
【0045】
本発明は、タウ、特に、ヒトタウに特異的に結合することが可能であり、一実施形態において、ヒトタウのリン酸化Ｓ３９６残基（ｐＳ３９６）に特異的に結合する能力を示す抗体およびそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、例えば抗体制限または非飽和条件下で、ヒトタウにおけるリン酸化４０４（ｐＳ４０４）残基に特異的に結合することができないかまたは実質的にできないことによってさらに特徴付けられる。さらに、ｐＳ４０４におけるリン酸化は、ｐＳ３９６への特異的結合を妨げない。本明細書において使用される際、「ｐＳ」および「｛ｐ｝Ｓ」という表記は、アミノ酸残基ホスホセリンを示す。本明細書において使用される際、抗体は、別のエピトープと比べて、このような結合が、このような他のエピトープで観察される結合の２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、より好ましくは、１％未満である場合、エピトープに結合することが「実質的に」できない。
【0046】
タウのリン酸化状態は、その固有の機能および微小管への結合親和性を変化させる。過リン酸化タウタンパク質は、凝集してオリゴマーおよび原線維になり、次に、ニューロンの細胞体樹状突起区画において神経原線維変化を形成する。
【0047】
本発明の文脈における「抗体」（Ａｂ）という用語は、分子（「抗原」）のエピトープに特異的に結合する能力を有する、免疫グロブリン分子、または本発明のある実施形態によれば、免疫グロブリン分子のフラグメントを指す。天然抗体は、典型的に、通常、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および少なくとも２つの軽（Ｌ）鎖から構成される四量体を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）および、３つの領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される重鎖定常領域から構成される。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４サブタイプ）を含む任意のアイソタイプのものであり得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。軽鎖は、κ鎖およびλ鎖を含む。重鎖および軽鎖可変領域が、典型的に、抗原認識に関与する一方、重鎖および軽鎖定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または宿主因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存される配列の領域が散在する「相補性決定領域」と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域から構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含有する。特に関連があるのは、自然界に存在し得るものと異なる物理的環境中で存在するように「単離され」ているか、またはアミノ酸配列中の天然抗体と異なるように修飾された抗体およびそれらのエピトープ結合フラグメントである。
【0048】
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能な抗原決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面基（ｓｕｒｆａｃｅ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）からなり、通常、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。立体配座エピトープおよび線状エピトープは、後者ではなく、前者への結合が、変性溶媒の存在下で常に失われる点で区別される。エピトープは、特異的エピトープ結合ペプチドによって有効に遮断されるアミノ酸残基（言い換えると、アミノ酸残基は、特異的エピトープ結合ペプチドのフットプリント内にある）などの、結合に直接関与するアミノ酸残基および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。
【0049】
本明細書において使用される際、「抗体のエピトープ結合フラグメント」という用語は、エピトープに特異的に結合することが可能な抗体のフラグメント、部分、領域（ｒｅｇｉｏｎ）または領域（ｄｏｍａｉｎ）（それがどのように産生されるかにかかわらず（例えば、切断により、組み換えにより、合成的になど））を意味する。エピトープ結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の１、２、３、４、５または６つ全てを含有してもよく、このようなエピトープに特異的に結合することが可能であるが、このような抗体のものと異なるこのようなエピトープに対して特異性、親和性または選択性を示し得る。しかしながら、好ましくは、エピトープ結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の６つ全てを含有するであろう。抗体のエピトープ結合フラグメントは、単一のポリペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ）の一部であるか、もしくはそれを含んでもよく、またはアミノ末端およびカルボキシル末端（例えば、二重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメントなど）をそれぞれ有する２つ以上のポリペプチド鎖の一部であるか、もしくはそれを含んでもよい。エピトープ結合能力を示す抗体のフラグメントは、例えば、無傷の抗体のプロテアーゼ切断によって得られる。より好ましくは、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によって天然にコードされるが、このような遺伝子配列をコードするポリヌクレオチド（例えば、それらのコードｃＤＮＡ）が、ＶＬおよびＶＨ領域が結合して一価エピトープ結合分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：５８７９－５８８３を参照）としてそれらが作製されるのを可能にするフレキシブルリンカーによって、組み換え方法を用いて結合され得る。あるいは、単一のポリペプチド鎖のＶＬおよびＶＨ領域が一緒に結合するのを可能にするには短すぎるフレキシブルリンカー（例えば、約９個未満の残基）を用いることによって、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、または同様の分子（２つのこのようなポリペプチド鎖が一緒に結合して、二価エピトープ結合分子を形成する）を形成することができる（二重特異性抗体の説明については、例えばＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１４），６４４４－８（１９９３）を参照）。本発明の範囲内に包含されるエピトープ結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂ’またはＦａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１領域からなる一価フラグメント、または国際公開第２００７０５９７８２号パンフレットに記載されている一価抗体；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１領域から本質的になるＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＬおよびＶＨ領域から本質的になるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨ領域から本質的になり、ドメイン抗体（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ；２ｉ（ｌｌ）：４８４－９０）とも呼ばれるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４－５４６（１９８９））；（ｖｉ）ラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）またはナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ；５＿（ｌ）：ｌ ｌｌ－２４）および（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が組み合わされて、一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖抗体または単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている、例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８）を参照）としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、組み換え方法を用いて結合され得る。本発明の文脈におけるこれらのおよび他の有用な抗体フラグメントは、本明細書においてさらに説明される。抗体という用語は、特に規定されない限り、キメラ抗体およびヒト化抗体などの抗体様ポリペプチド、ならびに酵素的切断、ペプチド合成、および組み換え技術などの任意の公知の技術によって提供される、抗原（エピトープ結合フラグメント）に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメントも含むことも理解されるべきである。生成される抗体は、任意のアイソタイプを有し得る。本明細書において使用される際、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を指す。このような抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ；所望のエピトープに結合することが可能な好適なフラグメントは、無傷の抗体と同じように有用性について容易にスクリーニングされ得る。
【0050】
「二重特異性抗体」という用語は、それぞれ独立した標的を標的にする２つの独立したエピトープ結合フラグメントを含有する抗体を指す。これらの標的は、異なるタンパク質上に存在するエピトープ、または同じ標的上に存在する異なるエピトープであり得る。二重特異性抗体分子は、親単一特異性二価抗体分子のＨＣの定常領域における補償的アミノ酸改変を用いて作製され得る。得られるヘテロ二量体抗体は、２つの異なる親単一特異性抗体から与えられる１つのＦａｂを含有する。Ｆｃ領域におけるアミノ酸改変は、時間を経ても安定した二重特異性を有するヘテロ二量体抗体の向上した安定性をもたらす（Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２８５，１９６３７－１（２０１０）、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ３：６ ５４６－５５７（２０１１）、Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ ４２０，２０４－２１９（２０１２）、Ｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２５：１０ ５７１－５８０（２０１２）、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０：１１３，５１４５－５１５０（２０１３）、Ｓｐｒｅｔｅｒ Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ５：５ ６４６－６５４（２０１３））。二重特異性抗体は、ＳｃＦｖ融合を用いて生成される分子も含み得る。次に、２つの単一特異性ｓｃｆｖは、独立して、単一の二重特異性分子を生成するために安定したヘテロ二量体を形成することが可能なＦｃ領域に結合される（Ｍａｂｒｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＥＤＳ ２３：３ １１５－１２７（２０１０）。二重特異性分子は、二重の結合能を有する。例えば、ＣＮＳ疾患を治療するために血液脳関門を横切って治療用抗体を送達するために、治療標的および経細胞輸送表面受容体の両方を標的にする。
【0051】
本明細書および図において使用される際のＣ１０－２、ヒトＣ１０－２、ｈＣ１０－２、ＨＣ１０－２、ｈＣ１０．２、ヒト化Ｃ１０－２およびヒト化Ｃ１０－２という用語は、同義であることが意図され、抗体Ｃ１０－２として定義される。この用語は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ４；および
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ５
を有する抗体軽鎖可変領域；
ならびに
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ６；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ７；および
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ８
を有する抗体軽鎖可変ドメインを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを示すことが意図される。
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ４；および
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ５
を有する抗体軽鎖可変領域；
ならびに
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ６；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ７；および
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ８
を有する抗体軽鎖可変ドメインを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを示すことが意図される。
【0052】
抗体Ｃ１０－２は、配列番号１１の重鎖、配列番号１２の軽鎖、または両方を含むものとして定義され得るヒト化抗体である。本発明の一実施形態は、配列番号１１の重鎖および配列番号１２の軽鎖を含む抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0053】
本明細書および図において使用される際のｍＣ１０－２という用語は、マウス抗体Ｃ１０－２を意味することが意図され、配列番号９および１０によって定義される。マウス抗体Ｃ１０．２は、対照抗体として使用され、本発明の一部でない。
【0054】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑとして定義される。
【0055】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３４ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３４Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３４Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにアミノ酸残基３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３４Ｑとして定義される。
【0056】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにおよびＮからＳにそれぞれアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにおよびＮからＱにそれぞれアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑとして定義される。
【0057】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｄ５５ＥおよびＣ１０－２＿Ｄ５５Ｅという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＤからＥにアミノ酸残基５５の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｄ５５Ｅとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｄ５５Ｑ、Ｃ１０－２＿Ｄ５５Ｑという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＤからＱにアミノ酸残基５５の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｄ５５Ｑとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｄ５５Ｓ、Ｃ１０－２＿Ｄ５５Ｓという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＤからＳにアミノ酸残基５５の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｄ５５Ｓとして定義される。
【0058】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ａ１０１ＴおよびＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにアミノ酸残基１０１の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ａ１０１Ｔとして定義される。
【0059】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、ｈＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにアミノ酸残基１０１の突然変異を少なくとも含むように変異されており、かつ軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔとして定義される。
【0060】
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、ｈＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２ＱおよびＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｑという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにアミノ酸残基１０１の突然変異を少なくとも含むように変異されており、かつ軽鎖がＮからＱにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔとして定義される。
【0061】
本明細書において使用される際の「ヒト抗体」（「ｈｕｍＡｂ」と略記され得る）という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたは遺伝子再構成中にまたはインビボでの体細胞変異によって導入される突然変異）。
【0062】
本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。従来のモノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、２つ以上のＦａｂ領域から構成され得、それによって、２つ以上の標的に対する特異性を高める。「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、任意の特定の産生方法（例えば、組み換え、トランスジェニック、ハイブリドーマなど）によって限定されることは意図されていない。
【0063】
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、特に治療目的に用いられる場合、好ましくは、「ヒト化」される。「ヒト化」という用語は、一般に組み換え技術を用いて調製される、非ヒト種に由来する免疫グロブリンから得られるエピトープ結合部位、およびヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた残りの免疫グロブリン構造を有する分子を指す。エピトープ結合部位は、ヒト定常領域に融合された完全な非ヒト抗体可変領域、またはヒト可変領域の適切なヒトフレームワーク領域に移植されたこのような可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはその部分のみのいずれかを含み得る。このようなヒト化分子のフレームワーク残基は、野生型（例えば、完全ヒト）であってもよく、またはそれらは、配列がヒト化のための基盤として機能したヒト抗体に見られない１つまたは複数のアミノ酸置換を含むように修飾され得る。ヒト化は、分子の定常領域がヒト個体における免疫原として働く可能性を低下させるかまたはなくすが、外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）“Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｍａｎ：Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８６：４２２０－４２２４）。別の手法は、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領域を改変して、それらをヒト型にできる限り近くなるように再形成することにも焦点を当てている。重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、該当する抗原に対する応答が異なり、結合能を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの相補性決定領域（ＣＤＲ）には、所与の種において比較的保存され、かつＣＤＲの足場を提供すると考えられる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接することが知られている。非ヒト抗体が、特定の抗原に対して調製される場合、可変領域は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを、改変されるヒト抗体中に存在するＦＲに移植することによって、「再形成」または「ヒト化」され得る。様々な抗体に対するこの手法の適用は、Ｓａｔｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：８５１－８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｇｒａｆｔｉｎｇ Ａｎ Ａｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｙ ＣＤＲ－Ｇｒａｆｔｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ Ｏｆ Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ Ｏｎ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３－３７８３；Ｍａｅｄａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ｒｅｓｈａｐｅｄ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ ＨＩＶ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：１２４－１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＣＤ４ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：４１８１－４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｏ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ”，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６－２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：２８６９－２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎ Ａｎｔｉ－ｐ１８５ｈｅｒ２ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８９：４２８５－４２８９；およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅ ＣＤ３３ Ａｎｔｉｇｅｎ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９－１１５４によって報告されている。ある実施形態において、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体に由来する全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存する。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対して改変された１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有し、これらは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。抗原をヒト化する能力は周知である（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，８５９，２０５号明細書；同第６，４０７，２１３号明細書；同第６，８８１，５５７号明細書を参照）。
【0064】
抗体ＸＸという用語は、軽鎖、軽鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインＣＤＲ１～３、およびそのそれぞれの配列番号によって定義される重鎖、重鎖可変ドメイン、または重鎖可変ドメインＣＤＲ１～３のいずれかを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結合フラグメント（例えば抗体「Ｃ１０－２」）を示すことが意図される。特定の実施形態において、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、それらの配列番号によって定義されるように含むそれらの全重鎖可変ドメインおよびそれらの配列番号によって定義されるそれらの軽鎖可変ドメインによって定義される。
【0065】
本明細書において特に規定されない限り、抗体のＦｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．米国保健福祉省の国立衛生研究所（Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているように、ＥＵ ｉｎｄｅｘとも呼ばれるＥＵ番号付与体系にしたがって行われる。
【0066】
本明細書において使用される際、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、別のエピトープと比べてそのエピトープと、より高頻度で、より迅速に、より長い期間および／またはより高い親和性または結合活性で反応または会合する場合、別の分子（すなわち、エピトープ）の領域に「特異的に」結合するといわれる。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的に結合する抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合しなくてもまたは結合しなくてもよいことも理解される。本明細書において使用される際、所定の抗原への抗体の結合の文脈における「結合」という用語は、典型的に、抗原をリガンドとしておよび抗体を検体として用いてＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００機器において例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定した際の約１０－７Ｍ以下、例えば約１０－８Ｍ以下、例えば約１０－９Ｍ以下のＫＤに対応する親和性での結合を指し、所定の抗原または密接に関連している抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するその親和性より少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１，０００倍低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫＤに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性がより低くなる量は、抗体のＫＤに依存するため、抗体のＫＤが非常に低い（すなわち、抗体が非常に特異的である）場合、抗原に対する親和性が、非特異的抗原に対する親和性より低くなる量は、少なくとも１０，０００倍であり得る。
【0067】
本明細書において使用される際の「ｋｄ」（秒－１または１／秒）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指す。前記値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
【0068】
本明細書において使用される際の「ｋａ」（Ｍ－１×秒－１または１／Ｍ秒）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の結合速度定数を指す。
【0069】
本明細書において使用される際の「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数を指し、ｋｄをｋａで除算することによって得られる。
【0070】
本明細書において使用される際の「ＫＡ」（Ｍ－１または１／Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の結合平衡定数を指し、ｋａをｋｄで除算することによって得られる。
【0071】
一実施形態において、抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、以下の特性：
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基（ｐＳ４０４）に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
の１つまたは複数を示す。
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基（ｐＳ４０４）に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
の１つまたは複数を示す。
【0072】
さらなる実施形態において、抗体は、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患のための、リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに対して免疫特異的な高特異性、高親和性抗体を生成するための方法によって生成され、前記方法は、
（Ａ）２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む、１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能であるが、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む。
（Ａ）２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む、１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能であるが、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む。
【0073】
本明細書において使用される際、タウ分子に結合することが「実質的にできないこと」は、対照抗体によって仲介される検出可能な結合と比べて、機能性の２０％超の相違、４０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、１５０％超の相違、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違、または１０倍超の相違を示す。
【0074】
「選択的」および「免疫選択的」という用語は、２つのエピトープに対する抗タウ抗体の結合能力に言及する場合、飽和条件下で観察される結合が、少なくとも８０％の相違、少なくとも９５％の相違、最も好ましくは、１００％の相違（すなわち、１つのエピトープへの検出可能な結合なし）を示すことが意図される。「選択的」および「免疫選択的」という用語は、タウ抗体に言及する場合、抗体が、ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合し、病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別することができることを意味することがさらに意図される。
【0075】
ＴＢＳ－抽出可能（Ｓ１）、高塩／サルコシル－抽出可能（Ｓ３）、およびサルコシル－不溶性（Ｐ３）画分という用語は、本明細書に記載されるタウ生化学的分画によって得られる画分である。
【0076】
いくつかの抗体において、ＣＤＲのごく一部、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必要とされるＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体において結合を保持するのに必要とされる。関連するエピトープに接触せず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基が、過去の研究に基づいて（例えばＣＤＲ Ｈ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５は、必要とされないことが多い）、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７を参照）、分子モデリングによっておよび／または実験により、またはＧｏｎｚａｌｅｓ，Ｎ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００４）“ＳＤＲ Ｇｒａｆｔｉｎｇ Ｏｆ Ａ Ｍｕｒｉｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｒｍｌｉｎｅ Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ Ｔｏ Ｍｉｎｉｍｉｚｅ Ｉｔｓ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３－８７２に記載されるように特定され得る。１つまたは複数のドナーＣＤＲ残基が存在しないかまたは全ドナーＣＤＲが省略される位置におけるこのようなヒト化抗体において、この位置を占めるアミノ酸は、受容体抗体配列において（Ｋａｂａｔ番号付けによって）対応する位置を占めるアミノ酸であり得る。含まれるＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対する受容体のこのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、結果として、潜在的な免疫原性を低下させるのに潜在的に有利である。しかしながら、置換は、親和性の変化も引き起こすことがあり、親和性の著しい低下は回避されるのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸も、実験により選択され得る。
【0077】
ＣＤＲ残基の単一のアミノ酸改変が、機能的結合の喪失をもたらし得るということ（Ｒｕｄｉｋｏｆｆ，Ｓ．ｅｔｃ．（１９８２）“Ｓｉｎｇｌｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ａｌｔｅｒｉｎｇ Ａｎｔｉｇｅｎ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９（６）：１９７９－１９８３）は、別の機能的ＣＤＲ配列を系統的に同定するための手段を提供する。このような変異体ＣＤＲを得るための１つの好ましい方法において、ＣＤＲをコードするポリヌクレオチドが突然変異を起こされて（例えばランダム突然変異によって、または部位特異的方法（例えば、突然変異遺伝子座をコードするプライマーによるポリメラーゼ連鎖媒介性増幅）によって）、置換アミノ酸残基を有するＣＤＲを生成する。元の（機能的）ＣＤＲ配列中の関連する残基の同一性を、置換される（非機能的）変異体ＣＤＲ配列の同一性と比較することによって、その置換についてのＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアが特定され得る。ＢＬＯＳＵＭシステムは、信頼できるアラインメントについて配列のデータベースを分析することによって作成されるアミノ酸置換のマトリックスを提供する（Ｅｄｄｙ，Ｓ．Ｒ．（２００４）“Ｗｈｅｒｅ Ｄｉｄ Ｔｈｅ ＢＬＯＳＵＭ６２ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｏｍｅ Ｆｒｏｍ？”，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（８）：１０３５－１０３６；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２）“Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｒｏｍ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｌｏｃｋｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８９：１０９１５－１０９１９；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ Ｔｈｅ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ Ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｆｅａｔｕｒｅｓ Ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８７：２２６４－２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１）“Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｍａｔｒｉｃｅｓ Ｆｒｏｍ Ａｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９，５５５－５６５。現在、最先端のＢＬＯＳＵＭデータベースは、ＢＬＯＳＵＭ６２データベース（ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ）である。表１は、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを示す（スコアが高くなるほど、置換がより保存的になり、ひいては置換が機能に影響を与えない可能性が高くなる）。得られるＣＤＲを含むエピトープ結合フラグメントが、タウに結合できない場合、例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは、不十分に保存的であると見なされ、より高い置換スコアを有する新たな置換候補が選択され、生成される。したがって、例えば、元の残基がグルタミン酸塩（Ｅ）であり、非機能的置換残基がヒスチジン（Ｈ）である場合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは０であり、より保存的な変化（アスパラギン酸塩、アスパラギン、グルタミン、またはリジンなどへの）が好ましい。
【0078】
【表1】
【0079】
したがって、本発明は、改良されたＣＤＲを同定するためのランダム突然変異誘発の使用を想定している。本発明の文脈において、保存的置換は、表２、３、または４の１つまたは複数に反映されているアミノ酸の種類の範囲内の置換によって定義され得る。
【0080】
【表2】
【0081】
【表3】
【0082】
【表4】
【0083】
より保存的な置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）としては、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、およびアスパラギン－グルタミンが挙げられる。
【0084】
アミノ酸のさらなる基はまた、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｄ Ｅｄ．１９９３），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている原理を用いて配合され得る。
【0085】
ファージディスプレイ技術が、ＣＤＲ親和性を増加させる（または低下させる）のに代わりに使用され得る。親和性成熟と呼ばれるこの技術は、突然変異誘発または「ＣＤＲウォーキング（ｗａｌｋｉｎｇ）」を用い、再選択（ｒｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）は、標的抗原またはその抗原性のエピトープ結合フラグメントを使用して、初期抗体または親抗体と比較した際に、抗原に対するより高い（またはより低い）親和性で結合するＣＤＲを有する抗体を同定する（例えばＧｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９：３９０３を参照）。単一のヌクレオチドではなくコドン全体の突然変異誘発は、アミノ酸突然変異の半ランダム化レパートリーをもたらす。変異体クローンのプールからなるライブラリーが構築され得、変異体クローンのそれぞれが、単一のＣＤＲ中の単一のアミノ酸改変により異なり、各ＣＤＲ残基に対して各可能なアミノ酸置換を提示する変異体を含む。抗原に対する増加した（または低下した）結合親和性を有する突然変異体は、固定化突然変異体を標識抗原と接触させることによってスクリーニングされ得る。当該技術分野において公知の任意のスクリーニング方法が、抗原に対する増加したまたは低下した親和性を有する突然変異体抗体を同定するのに使用され得る（例えば、ＥＬＩＳＡ）（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）９５：６０３７；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１９９４を参照）。軽鎖をランダム化するＣＤＲウォーキングが、使用可能であり得る（Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２６３：５５１を参照）。
【0086】
このような親和性成熟を達成するための方法は、例えば：Ｋｒａｕｓｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）“Ａｎ Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｔｈａｔ Ｄｉｓｔｏｒｔｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，ＭＢｉｏ．２（１）ｐｉｉ：ｅ００３４５－１０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００３４５－１０；Ｋｕａｎ，Ｃ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ－Ｍａｔｕｒｅｄ Ａｎｔｉ－Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＭＢ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｇｌｉｏｍａｓ Ａｎｄ Ｍｅｌａｎｏｍａｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０．１００２／ｉｊｃ．２５６４５；Ｈａｃｋｅｌ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ａｎｄ ＣＤＲ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｂｉａｓｅｓ Ｅｎｒｉｃｈ Ｂｉｎｄｅｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ Ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０１（１）：８４－９６；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ－１ ｇｐ４１”，ＭＡｂｓ １（５）：４６２－４７４；Ｇｕｓｔｃｈｉｎａ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ ＣＤＲ－Ｈ２ Ｌｏｏｐ Ｏｆ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｆａｂ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆｒｏｍ Ａ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｎａｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｙ Ａｎｄ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ａｇａｉｎｓｔ Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｔｒｉｍｅｒｉｃ Ｃｏｉｌｅｄ－Ｃｏｉｌ Ｏｆ Ｇｐ４１ Ｙｉｅｌｄｓ Ａ Ｓｅｔ Ｏｆ Ｆａｂｓ Ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＨＩＶ－１ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｐｏｔｅｎｃｙ Ａｎｄ Ｂｒｅａｄｔｈ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９３（１）：１１２－１１９；最後に、Ｗ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｒａｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ａｎｔｉ－ＲＡＧＥ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｒｅｖｅａｌｓ Ａ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｏｆ Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ Ｂｏｔｈ Ｉｎｓｉｄｅ Ａｎｄ Ｏｕｔｓｉｄｅ Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８８（３）：５４１－５５８；Ｂｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５２５：３５３－３７６；Ｓｔｅｉｄｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＧＭ－ＣＳＦ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ＣＤＲ－Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１）：１３５－１４４；およびＢａｒｄｅｒａｓ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｂｙ Ｉｎ Ｓｉｌｉｃｏ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０５（２６）：９０２９－９０３４に記載されている。
【0087】
したがって、包含される抗体またはそれらのエピトープ結合フラグメントのＣＤＲ変異体の配列は、置換によって；例えば置換される４つのアミノ酸残基、３つのアミノ酸残基、２つのアミノ酸残基または１つのアミノ酸残基によって、親抗体、Ｄ１．２、Ｃ１０－２、Ｃ５．２またはＣ８．３のＣＤＲの配列と異なり得る。本発明の一実施形態によれば、ＣＤＲ領域中のアミノ酸が、上記の３つの表において定義されるように、保存的置換で置換され得ることがさらに想定される。例えば、酸性残基Ａｓｐは、抗体の結合特性に実質的に影響を与えずにＧｌｕで置換され得る。
【0088】
「正常なタウ」という用語は、タンパク質のモル当たり２～３モルのホスフェートを含有する正常な脳タウを指す。
【0089】
「過リン酸化タウ」という用語は、ウエスタンブロットにおけるポリ－アニオン種に誘発される移動度シフトと一致するタウのポリリン酸化種またはリン酸化された５つ、６つまたは７つ超のセリン、トレオニンまたはチロシン部位を有するタウ種を指す。
【0090】
「リン酸化残基３９６を有するタウ」という用語は、残基３９６がリン酸化された、残基４０４がリン酸化されたまたはリン酸化されない過リン酸化タウに関連する。
【0091】
「トランスジェニック非ヒト動物」という用語は、１つまたは複数のヒト重鎖および／または軽鎖導入遺伝子または導入染色体（ｔｒａｎｓ－ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）（動物の天然ゲノムＤＮＡへと統合されるかまたは非統合のいずれか）を含み、完全ヒト抗体を発現することが可能なゲノムを有する非ヒト動物を指す。例えば、トランスジェニックマウスは、マウスが、タウ抗原および／またはタウを発現する細胞で免疫されるときにヒト抗タウ抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子およびヒト重鎖導入遺伝子またはヒト重鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニックマウス、例えばＨｕＭＡｂマウス（ＨＣｏ７またはＨＣｏｌ２マウスなど）の場合と同様に、マウスの染色体ＤＮＡへと統合され得、またはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されるように、導入染色体ＫＭマウスの場合と同様に、染色体過剰に（ｅｘｔｒａ－ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｌｙ）維持され得る。このようなトランスジェニックおよび導入染色体マウス（本明細書においてまとめて「トランスジェニックマウス」と呼ばれる）は、Ｖ－Ｄ－Ｊ組み換えおよびアイソタイプスイッチングを行うことによって、所与の抗原（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよび／またはＩｇＥなど）に対するヒトモノクローナル抗体の複数のアイソタイプを産生することが可能である。
【0092】
トランスジェニック、非ヒト動物も、特定の抗体をコードする遺伝子を誘導することによって、例えば動物の乳汁中で発現される遺伝子間を作動可能に連結することによって、特定の抗原に対する抗体の産生に使用され得る。
【0093】
本明細書において使用される際の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患または障害の進行または重症度を改善し、遅らせ、軽減し、または抑制すること、またはこのような疾患または障害の１つまたは複数の症状または副作用を改善し、遅らせ、軽減し、または抑制することを意味する。本発明の趣旨では、「治療」または「治療すること」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法をさらに意味し、ここで、「有益なまたは所望の臨床結果」としては、限定はされないが、部分的であるかまたは全体的であるか、検出可能か不可能かにかかわらず、症状の軽減、障害または疾患の程度の減少、安定した（すなわち、悪化していない）疾患または障害状態、疾患または障害状態の進行の遅延または緩徐化、疾患または障害状態の改善または緩和、および疾患または障害の寛解が挙げられる。
【0094】
「有効量」は、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに適用される場合、意図される生物学的効果または所望の治療結果（限定はされないが臨床結果を含む）を達成するのに、必要な投与量および期間にわたる、十分な量を指す。「治療的に有効な量」という語句は、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに適用される場合、障害もしくは疾患の状態の進行、または障害もしくは疾患の症状の進行を改善し、緩和し、安定させ、抑制し、遅らせ、軽減し、または遅延させるのに十分な、抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントの量を表すことが意図される。一実施形態において、本発明の方法は、他の化合物と組み合わせた、抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントの投与を提供する。このような場合、「有効量」は、意図される生物学的効果を引き起こすのに十分な組合せの量である。
【0095】
本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの治療的に有効な量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが個体における所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変化し得る。治療的に有効な量はまた、抗体または抗体部分の何らかの毒性または有害作用を、治療的に有益な効果が上回る量である。
【0096】
上に示されるように、本発明は、特に、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、およびこのような分子（ひいてはそのこのようなエピトープ結合フラグメント）を産生するための完全に新規な方法に関する。この方法は図９にて概要が示されている。モノクローナル抗体を単離する新規な方法のこの能力は、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基セリン３９６（｛ｐ｝Ｓ３９６）に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体を単離するその使用によって本明細書において例示される。これらの抗体は、タウが残基３９６においてもリン酸化されない限り、リン酸化セリン４０４でタウタンパク質に結合しないように、リン酸化残基セリン３９６およびセリン４０４（ｐＳ４０４）を区別するそれらの能力によってさらに特徴付けられる。
【0097】
本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、｛ｐ｝Ｓ３９６特異的抗体（図９）の選択に好ましい方法（図９）の使用によって生成および単離された。さらに、この非常に厳密な抗体クローン選択手順を適用することによって、Ｓ３９６に対して高度に特異的であるだけでなく、リン酸化｛ｐ｝Ｓ３９６エピトープに対しても高度に選択的である抗体が得られた。これらの抗体は、アルツハイマー病の脳に由来するタウを独自に認識する。図９にて概要が示されているスクリーニング手順が、機能的および治療的有用性を有する抗体の同定を確実にすることも実証することも説明する。
【0098】
抗体を、２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４０８をカバーする二リン酸化ペプチド：ＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）に対して誘導した（実施例１）。マウスをリン酸化ペプチドで免疫した。十分な抗体価が得られたら、マウスを殺処分し、ハイブリドーマを生成した(実施例２）。ハイブリドーマを、ドットブロット（実施例３）および免疫化されたヒト病的および非病的タウを用いたＭＳＤ ＥＬＩＳＡ（実施例４）を用いてスクリーニングした。ドットブロットおよびウエスタンブロットにおいて病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力を、ハイブリドーマの選択に使用した。１６のクローンを選択し、そのうちの４つのハイブリドーマクローンを回収し、それにより、ヒト病的タウ材料に結合する目立った能力を示す抗体を産生した。
【0099】
また、病的および非病的タウへの特異的結合を、罹患および非罹患ヒトＡＤ脳に由来するタウの単離およびＭＳＤ ＥＬＩＳＡプレートにおけるこの材料の固定化によって決定した（実施例４）。
【0100】
本発明のさらなる態様は、２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）内の少なくとも１８、例えば少なくとも２０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導されるモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明のこの態様において、モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導される。
【0101】
本発明は、リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに対して免疫特異的な高特異性、高親和性抗体を生成するための方法によって生成される抗体であって、前記方法が、
（Ａ）２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む、１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能であるが、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む抗体にさらに関する。
（Ａ）２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む、１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）リン酸化残基Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能であるが、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む抗体にさらに関する。
【0102】
さらに詳細には、工程Ａは、Ｃ１０－２抗体、典型的に、コーティング緩衝液中の０．５μｇ／ｍｌ（捕捉抗体）によるＭＳＤプレート（典型的に、４℃で一晩）コーティング、ブロッキング（典型的に、室温で１時間）および典型的に、３回の洗浄を含む。工程Ｂは、ＡＤ（３人の患者からプールされる）に由来するＰ３溶解物（典型的に、１：１０００＝２～４μｇ／ｍｌの総タンパク質）および／またはＳ１（ｐ）（典型的に、１：３００＝２０～４０ｎｇ／ｍｌの総タンパク質）の試料を、段階的な濃度のｐＳ３９６ペプチドエピトープ特異的抗体と混合し、（典型的に、室温で１時間）インキュベートすることを含む。続いて、反応物を、工程Ａにおいて準備されたプレート上で２時間インキュベートする。工程Ｃは、スルホタグ化ヒトタウを用いてＣ１０－２で捕捉されたタウを検出することを含む。製造業者の指示にしたがって、ＭＳＤからのタウ抗体（典型的に、１：５０）。プレートを、ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｓ６００において分析する。ＡＤ Ｐ３およびＡＤ Ｓ１（ｐ）を、同様の設備において試験する。
【0103】
さらなる実施形態は、ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母または細菌細胞株などの細胞株において生産または製造された、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
【0104】
ＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ－２１細胞株、マウス細胞株（骨髄腫細胞株など）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ－１１細胞株、ＣＡＰ細胞株およびＨｕＨ－７ヒト細胞株において生産される、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメント。
【0105】
疾患病変に関連するタウを認識するこれらの抗体の独自の能力は、本明細書の実施例７において実証される。本発明者らは、実施例３に記載されているアッセイにおいて病的対非病的タウの結合を比較している。比較は、５つの公開されたタウ抗体：ｈＡＣＩ－２Ｂ６、ＩＰＮ００２、ＨＪ８．５、２．１０．３、および４Ｅ４に対して行われる。図６は、健常および罹患した脳に由来するタウに対する対照抗体のそれぞれの結合、および１０月齢のＴｇ４５１０タウトランスジェニックマウスから単離されたＰ３０１Ｌヒト突然変異体タウへの結合を示す。これは、単離された抗体が、ヒト病的タウに対する非常に高度な特異性および選択性を示すことを実証している。この選択性は、表５に示されるように比較用抗体のいずれよりも優れている。
【0106】
【表5】
【0107】
飽和において、結合抗体Ｄ１．２およびＣ１０－２は、ヒトＡＤ脳から単離されたＰ３タウに対する１００倍超の選択性を示す。
【0108】
選択された抗体が、機能的および治療的有用性を有することを実証するために、抗体を、インビトロおよび細胞内のタウ凝集アッセイにおいて試験した。これらのアッセイは、抗体が、タウの病的凝集過程を妨げることができることを実証する機能アッセイである。ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトタウ－Ｐ３０１Ｌ－ＦＬＡＧ（４Ｒ０Ｎ）で一過性にトランスフェクトする。続いて、細胞を、ヒトＡＤ脳またはトランスジェニックＴｇ４５１０脳に由来するタウ抽出物に曝露する。病的タウへのこの曝露は、細胞へのタウの取り込みおよび細胞内凝集を促進する。抗体Ｄ１．２およびＣ１０－２を用いたタウ標本の免疫枯渇、およびこれらの抗体による細胞の直接の処理は両方とも、タウ凝集体の形成を劇的に減少させることができる。
【0109】
抗体Ｄ１．２およびＣ１０－２の治療的有用性も、ヒトタウ／ＰＳ１マウスにおいて評価された。このマウスモデルは、高齢期（１２～１８月齢）にのみＡＤ病変を生じるさらなるＡＤ疾患関連動物モデルである。しかしながら、マウスは、固体もつれ病変の発生前にタウ過リン酸化を示す。マウスに、１５ｍｇ／ｋｇの用量を週に２回、１３週間にわたって長期的に注入した。抗体で処理されたマウスは、リン酸化タウの劇的な減少を示し、これは、抗体Ｄ１．２およびＣ１０－２による長期治療が、もつれ病変、ひいてはその後のインビボの神経変性を減少させることを示す。
【0110】
本発明の抗体は、免疫枯渇方法によってｒＴｇ４５１０マウス脳抽出物から過リン酸化タウを特異的に除去する。さらに、本発明の抗体は、ホモジネートから正常なタウを除去しない一方、市販のタウ５抗体は正常なタウを除去する。残基４０４または残基４０４および３９６の両方においてリン酸化されたタウタンパク質に結合する市販の抗体と対照的に、本発明の抗体は、セリン３９６においてリン酸化された過リン酸化タウを９５％だけ特異的に除去する。実験は、本発明の抗体が、脳ホモジネート中の総タウのごくわずかな部分（８％）のみを除去するにもかかわらず、抗体は、過リン酸化タウを（９０％だけ）特異的に除去することを実証する。したがって、本発明の一態様は、病原性過リン酸化タウに免疫特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。さらに、過リン酸化タウを、本発明の抗体を用いて除去した実験において、シーディング活性がなくされた。ホモジネートから過リン酸化タウを除去することによって、ホモジネートは、タウ病変のシーディングをもはや誘発しない。
【0111】
より詳細には、上に詳述されるように、本発明は、Ｐ－Ｓ３９６に対して選択的な任意のタウモノクローナル抗体を用いて、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患を治療することに関する。
【0112】
全体で、実施例は、Ｃ１０－２を含む本発明の抗体が、ＡＤ－Ｐ３抗原被覆ＭＳＤプレートに効率的に結合することを示す。比較すると、ＰＨＦ－１３などの市販の抗体は、低い結合活性を有する。さらに、ＰＨＦ－１３は、本発明の抗体と比較してかなり高い程度の非特異的結合を示した。Ｃ１０－２被覆プレートにおけるＰタウ抗原捕捉のｍＣ１０－２流体相阻害が有効である一方（ＩＣ５０＝１０～２０ｎＭ）、ＰＨＦ－１３は有効でない（ＩＣ５０＝５００～１０００ｎＭ）ことをデータは示す。
【0113】
本発明のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、１００ｎＭ以下の抗体の濃度、例えば５０ｎＭ以下の抗体の濃度で、シグナルが５０％だけ減少されるように、流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻害する。本発明のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、アルツハイマー病の脳抽出物における免疫枯渇試験後のＰ－Ｓ３９６タウのウエスタンブロットシグナルによれば、７５ｎｇの抗体で、アルツハイマー脳ホモジネートからセリン３９６においてリン酸化された少なくとも１５％のタウを除去することが可能である。
【0114】
抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、好ましくは、ヒトまたはヒト化抗体である。
【0115】
本発明は、患者におけるタウもつれ形成を減少させる方法であって、このような治療を必要とする患者に、治療的に有効な量の本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを投与する工程を含む方法も提供する。
【0116】
本発明のさらなる態様は、薬学的に許容できる担体、希釈剤、補助剤および／または安定剤と一緒に組成物中の、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、タウオパチーの治療のための療法に使用され得る。典型的に、タウオパチーは、からなる群から選択され、本発明によって想定される治療は、長期であってもよく、患者は、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上治療され得る。
【0117】
本発明の抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５（１９７５）によって最初に記載されているハイブリドーマ方法によって産生されるモノクローナル抗体であってもよく、または組み換えＤＮＡもしくは他の方法によって産生されるモノクローナル抗体であってもよく、またはより好ましくは、本明細書に開示される新規な方法によって産生され得る（図９）。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２，５８１－５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。モノクローナル抗体は、任意の好適な源から得られる。したがって、例えば、モノクローナル抗体は、例えば、表面において抗原を発現する細胞、または該当する抗原をコードする核酸の形態で、該当する抗原で免疫されたマウスから得られるマウス脾臓Ｂリンパ球細胞から調製されるハイブリドーマから得られる。モノクローナル抗体はまた、免疫されたヒトまたは非ヒト哺乳動物（ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、霊長類など）の抗体発現細胞に由来するハイブリドーマから得られる。
【0118】
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体である。タウに対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を有するトランスジェニックまたは導入染色体マウスを用いて生成され得る。このようなトランスジェニックおよび染色体導入マウスは、本明細書においてそれぞれＨｕＭＡｂ（ヒトモノクローナル抗体）マウスおよびＫＭマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書においてまとめて「トランスジェニックマウス」と呼ばれる。
【0119】
ＨｕＭＡｂマウスは、内因性μおよびＫ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異と一緒に、再配列されていないヒト重鎖可変および定常（μおよびＹ）ならびに軽鎖可変および定常（κ）鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）を含む（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８５６－８５９（１９９４））。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはＩｇＫの減少した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子が、クラススイッチおよび体細胞突然変異を起こして、高親和性ヒトＩｇＧ、κモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）、上記参照；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３，４９－１０１（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３ ６５－９３（１９９５）およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４ ５３６－５４６（１９９５）に概説されている）。ＨｕＭＡｂマウスの作製は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０，６２８７－６２９５（１９９２）、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５，６４７－６５６（１９９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９１２－２９２０（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６，５７９－５９１（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に詳細に記載されている。米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，８７７，３９７号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、米国特許第５，５４５，８０７号明細書、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９３／１２２７号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／０３９１８号パンフレットおよび国際公開第０１／０９１８７号パンフレットも参照されたい。
【0120】
ＨＣｏ７、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０マウスは、それらの内因性軽鎖（κ）遺伝子におけるＪＫＤ破壊（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１－８２０（１９９３）に記載されているように）、それらの内因性重鎖遺伝子におけるＣＭＤ破壊（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例１に記載されているように）、およびＫＣｏ５ヒトκ軽鎖導入遺伝子（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に記載されているように）を有する。さらに、ＨＣｏ７マウスは、ＨＣｏ７ヒト重鎖導入遺伝子（米国特許第５，７７０，４２９号明細書に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１２マウスは、ＨＣｏ１２ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１７マウスは、ＨＣｏ１７ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ２０マウスは、ＨＣｏ２０ヒト重鎖導入遺伝子を有する。得られるマウスは、内因性マウス重鎖およびκ軽鎖遺伝子座の破壊のためにバックグラウンドのホモ接合体においてヒト免疫グロブリン重鎖およびκ軽鎖導入遺伝子を発現する。
【0121】
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１－８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。ＨＣｏ１２－Ｂａｌｂ／ｃ、ＨＣｏ１７－Ｂａｌｂ／ｃおよびＨＣｏ２０－Ｂａｌｂ／ｃマウスは、国際公開第０９／０９７００６号パンフレットに記載されているように、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０を、ＫＣｏ５［Ｊ／Ｋ］（Ｂａｌｂ）に交差させることによって生成され得る。
【0122】
ｒＴｇ４５１０マウスは、突然変異体タウ導入遺伝子発現に対する時間的および空間的制御を提供する公知のタウオパチーモデルである。ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１－８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４エピトープ結合フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。
【0123】
これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞は、周知の技術にしたがって、ヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成するのに使用され得る。本発明のヒトモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、または他の種に由来する本発明の抗体はまた、該当する免疫グロブリン重鎖および軽鎖配列についてトランスジェニックな別の非ヒト哺乳動物または植物の生成、および回収可能な形態での抗体の産生によって遺伝子導入的に生成され得る。哺乳動物におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳汁中で産生され、それから回収され得る。例えば米国特許第５，８２７，６９０号明細書、米国特許第５，７５６，６８７号明細書、米国特許第５，７５０，１７２号明細書および米国特許第５，７４１，９５７号明細書を参照されたい。
【0124】
本発明の抗体は、任意のアイソタイプのものであり得る。アイソタイプの選択は、典型的に、ＡＤＣＣ誘導などの所望のエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域、κまたはλのいずれかが使用され得る。必要に応じて、本発明の抗タウ抗体のクラスは、公知の方法によってスイッチされ得る。例えば、元はＩｇＭであった本発明の抗体は、本発明のＩｇＧ抗体にクラススイッチされ得る。さらに、クラススイッチ技術は、あるＩｇＧサブクラスを別のＩｇＧサブクラスに、例えばＩｇＧＩからＩｇＧ２に変換するのに使用され得る。したがって、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療的使用のために、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体へのアイソタイプスイッチによって変更され得る。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体、例えばＩｇＧ１、κである。抗体は、そのアミノ酸配列が、他のアイソタイプと比べてそのアイソタイプに最も相同性が高い場合、特定のアイソタイプのものであるといわれる。
【0125】
一実施形態において、本発明の抗体は、完全長抗体、好ましくは、ＩｇＧ抗体、特に、ＩｇＧ１、κ抗体である。別の実施形態において、本発明の抗体は、抗体エピトープ結合フラグメントまたは一本鎖抗体である。
【0126】
抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、例えば従来の技術を用いたエピトープ結合断片化によって得られ、エピトープ結合フラグメントは、全抗体について本明細書に記載されるのと同じように有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって生成され得る。得られるＦ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元するように処理されて、Ｆａｂ’エピトープ結合フラグメントを生成し得る。Ｆａｂエピトープ結合フラグメントはＩｇＧ抗体をパパインで処理することによって得られ；Ｆａｂ’エピトープ結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体のペプシン消化により得られる。Ｆ（ａｂ’）エピトープ結合フラグメントはまた、チオエーテル結合またはジスルフィド結合により、以下に記載されるＦａｂ’を結合することによって生成され得る。Ｆａｂ’エピトープ結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体エピトープ結合フラグメントである。Ｆａｂ’－エピトープ結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントを、ジチオスレイトールなどの還元剤で処理することによって得られる。抗体エピトープ結合フラグメントはまた、組み換え細胞におけるこのようなエピトープ結合フラグメントをコードする核酸の発現によって生成され得る（例えばＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１８４、１２３－３８（１９９５）を参照）。例えば、Ｆ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、このような切断された抗体エピトープ結合フラグメント分子を生成するために、Ｈ鎖のＣＨ１領域およびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いて翻訳停止コドンを含み得る。
【0127】
一実施形態において、抗タウ抗体は、一価抗体、好ましくは、ヒンジ領域の欠失を有する国際公開第２００７０５９７８２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されている一価抗体である。したがって、一実施形態において、抗体は、一価抗体であり、前記抗タウ抗体は、ｉ）前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗タウ抗体のＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列およびＩｇの定常ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、選択された抗原特異的抗体のＶＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列およびＩｇのＣＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結され、ＩｇＧ１サブタイプの場合、ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列は、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物もしくはヒトに投与されるとき、ＣＬ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともにジスルフィド結合または共有結合を形成することが可能なアミノ酸をＣＬ領域が含まないように修飾されている工程と；ｉｉ）前記一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列およびヒトＩｇの定常ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列は、ヒンジ領域に対応する領域および、Ｉｇサブタイプによって必要とされるように、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物ヒトに投与されるとき、ヒトＩｇのＣＨ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともに、ジスルフィド結合または共有結合または安定した非共有重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように修飾されており、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列および前記ＩｇのＣＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結される工程と；ｉｉｉ）前記一価抗体を生成するために細胞発現系を提供する工程と；ｉｖ）（ｉｉｉ）の細胞発現系の細胞内で（ｉ）および（ｉｉ）の核酸構築物を共発現することによって、前記一価抗体を生成する工程とを含む方法によって構築される。
【0128】
同様に、一実施形態において、本発明の抗タウ抗体は、
（ｉ）本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域または前記領域のエピトープ結合部分、および
（ｉｉ）免疫グロブリンのＣＨ領域またはＣＨ２およびＣＨ３領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、ＣＨ領域またはその領域は、ヒンジ領域に対応する領域および、免疫グロブリンがＩｇＧ４サブタイプでない場合、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で、同一のＣＨ領域とともにジスルフィド結合を形成するか、または同一のＣＨ領域とともに他の共有結合または安定した非共有重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
（ｉ）本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域または前記領域のエピトープ結合部分、および
（ｉｉ）免疫グロブリンのＣＨ領域またはＣＨ２およびＣＨ３領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、ＣＨ領域またはその領域は、ヒンジ領域に対応する領域および、免疫グロブリンがＩｇＧ４サブタイプでない場合、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で、同一のＣＨ領域とともにジスルフィド結合を形成するか、または同一のＣＨ領域とともに他の共有結合または安定した非共有重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
【0129】
さらなる実施形態において、本発明の一価抗体の重鎖は、ヒンジ領域全体が欠失しているように修飾されている。
【0130】
別のさらなる実施形態において、前記一価抗体の配列は、それがＮ結合型グリコシル化のための受容体部位を含まないように修飾されている。
【0131】
本発明は、抗タウ結合領域（例えば、抗タウモノクローナル抗体のタウ結合領域）が、２つ以上のエピトープを標的にする二価または多価二重特異性骨格の一部である「二重特異性抗体」も含む（例えば、第２のエピトープは、二重特異性抗体が、血液脳関門などの生物学的障壁を越える改良されたトランスサイトーシスを示し得るように、活性な輸送受容体のエピトープを含み得る）。したがって、別のさらなる実施形態において、抗タウ抗体の一価Ｆａｂは、異なるタンパク質を標的にするさらなるＦａｂまたはｓｃｆｖに結合されて、二重特異性抗体を生成し得る。二重特異性抗体は、二重機能、例えば抗タウ結合領域によって与えられる治療機能、および血液脳関門などの生物学的障壁を越える輸送を促進するために受容体分子に結合し得る輸送機能を有し得る。
【0132】
本発明の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントは、一本鎖抗体も含む。一本鎖抗体は、重鎖および軽鎖Ｆｖ領域が結合されたペプチドである。一実施形態において、本発明は、本発明の抗タウ抗体のＦｖにおける重鎖および軽鎖が、ペプチド一本鎖において（典型的に、約１０、１２、１５つまたはそれ以上のアミノ酸残基の）フレキシブルペプチドリンカーと結合される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供する。このような抗体を産生する方法が、例えば米国特許第４，９４６，７７８号明細書、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８）およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８，５５２－５５４（１９９０）に記載されている。一本鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される場合、一価であり、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価であり、または３つ以上のＶＨおよびＶＬが使用される場合、多価であり得る。
【0133】
本明細書に記載される抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、任意の好適な数の修飾アミノ酸の包含によって修飾され得るおよび／またはこのような共役置換基との結合によって修飾され得る。これに関連する適合性は、一般に、非誘導体化親抗タウ抗体に関連するタウ選択性および／または抗タウ特異性を少なくとも実質的に保持する能力によって決定される。１つまたは複数の修飾アミノ酸の包含は、例えば、ポリペプチド血清半減期を増加させ、ポリペプチド抗原性を低下させ、またはポリペプチド貯蔵安定性を増加させるのに有利であり得る。アミノ酸は、例えば、組み換え産生の際に翻訳と同時に（ｃｏ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）もしくは翻訳後に（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）修飾されるか（例えば、哺乳類細胞における発現の際のＮ－Ｘ－Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ結合型グリコシル化）または合成手段によって修飾される。修飾アミノ酸の非限定的な例としては、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレニル化（例えば、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化）アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸などが挙げられる。アミノ酸の修飾の当業者の指針となるのに十分な言及は、文献全体を通して十分にある。例のプロトコルが、Ｗａｌｋｅｒ（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｏｎ ＣＤ－Ｒｏｍ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに見られる。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸、または有機誘導化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から選択され得る。
【0134】
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントはまた、例えばそれらの血中半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。例示的なポリマー、およびそれらをペプチドに結合するための方法が、例えば米国特許第４，７６６，１０６号明細書、米国特許第４，１７９，３３７号明細書、米国特許第４，４９５，２８５号明細書および米国特許第４，６０９，５４６号明細書に示されている。さらなる例示的なポリマーとしては、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、約１，０００～約４０，０００、例えば約２，０００～約２０，０００、例えば、約３，０００～１２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧ）が挙げられる。
【0135】
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、診断法においてまたは画像診断用リガンドとしてさらに使用され得る。
【0136】
一実施形態において、１つまたは複数の放射性標識アミノ酸を含む本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントが提供される。放射性標識抗タウ抗体は、診断および治療目的の両方に使用され得る（放射性標識分子への結合は、別の考えられる特徴である）。このような標識の非限定的な例としては、限定はされないが、ビスマス（２１３Ｂｉ）、炭素（１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ、６０Ｃｏ）、銅（６４Ｃｕ）、ジスプロシウム（１６５Ｄｙ）、エルビウム（１６９Ｅｒ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、金（１９８Ａｕ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、水素（３Ｈ）、インジウム（１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１５Ｉｎ）、ヨウ素（１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、イリジウム（１９２Ｉｒ）、鉄（５９Ｆｅ）、クリプトン（８１ｍＫｒ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、窒素（１３Ｎ、１５Ｎ）、酸素（１５Ｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、カリウム（４２Ｋ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルビジウム（８１Ｒｂ、８２Ｒｂ）、ルテニウム（８２Ｒｕ、９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、ナトリウム（２４Ｎａ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ、８９Ｓｒ、９２Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｌ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、亜鉛（６５Ｚｎ）およびジルコニウム（８９Ｚｒ）が挙げられる。ジルコニウム（８９Ｚｒ）が特に興味深い。放射性標識アミノ酸および関連するペプチド誘導体を調製するための方法は、当該技術分野において公知である（例えばＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６５５－６８６（２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｒａｖｅｎ（１９９６））ならびに米国特許第４，６８１，５８１号明細書、米国特許第４，７３５，２１０号明細書、米国特許第５，１０１，８２７号明細書、米国特許第５，１０２，９９０号明細書（米国再発行特許第３５，５００号明細書）、米国特許第５，６４８，４７１号明細書および米国特許第５，６９７，９０２号明細書を参照）。例えば、放射性同位体が、クロラミンＴ法によって結合され得る（Ｌｉｎｄｅｇｒｅｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）“Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ－Ｔ Ｉｎ Ｈｉｇｈ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ－Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｎ－Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ－３－（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｔａｎｎｙｌ）Ｂｅｎｚｏａｔｅ Ａｓ Ａｎ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ”，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５（７）：６５９－６６５；Ｋｕｒｔｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）“Ｓｉｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ Ｐｈｅｎｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ Ｔｏ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｔｕｍｏｒ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６（９）：１２５５－１２６１；Ｒｅａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（３ Ｓｕｐｐｌ）：８５７ｓ－８６１ｓ）。
【0137】
本発明は、蛍光標識（希土類キレート（例えば、ユウロピウムキレート）など）、フルオレセイン型標識（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、５－カルボキシフルオレセイン、６－カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン）、ローダミン型標識（例えば、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）５６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＴＡＭＲＡ（登録商標）またはダンシルクロリド）、ＶＩＶＯＴＡＧ ６８０ ＸＬ ＦＬＵＯＲＯＣＨＲＯＭＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）、フィコエリトリン；ウンベリフェロン、Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ；シアニン；フィコエリトリン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ－ＳＥ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはそれらの類似体（これらは全て、光学的検出に好適である）を用いて検出可能に標識される抗タウ抗体およびそのエピトープ結合フラグメントも提供する。化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。
【0138】
化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。常磁性標識も用いられ得、好ましくは、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）または単一光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される。このような常磁性標識としては、限定はされないが、アルミニウム（Ａｌ）、バリウム（Ｂａ）、カルシウム（Ｃａ）、セリウム（Ｃｅ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、エルビウム（Ｅｒ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、ホルミウム（Ｈｏ）、イリジウム（Ｉｒ）、リチウム（Ｌｉ）、マグネシウム（Ｍｇ）、マンガン（Ｍｎ）、モリブデン（Ｍ）、ネオジム（Ｎｄ）、オスミウム（Ｏｓ）、酸素（Ｏ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）、ロジウム（Ｒｈ）、ルテニウム（Ｒｕ）、サマリウム（Ｓｍ）、ナトリウム（Ｎａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、テルビウム（Ｔｂ）、ツリウム（Ｔｍ）、スズ（Ｓｎ）、チタン（Ｔｉ）、タングステン（Ｗ）、およびジルコニウム（Ｚｉ）、特に、Ｃｏ＋２、ＣＲ＋２、Ｃｒ＋３、Ｃｕ＋２、Ｆｅ＋２、Ｆｅ＋３、Ｇａ＋３、Ｍｎ＋３、Ｎｉ＋２、Ｔｉ＋３、Ｖ＋３、およびＶ＋４の常磁性イオン、様々なポジトロン放出型断層撮影法を用いたポジトロン放出金属、および非放射性常磁性金属イオンを含有する化合物が挙げられる。
【0139】
したがって、一実施形態において、本発明の抗タウ抗体またはそのタウ結合フラグメントは、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識または酵素標識で標識され得る。フラグメントの標識抗体は、対象の脳における前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用され得る。この方法は、前記タウに結合された抗タウ抗体またはタウ結合フラグメントのインビボイメージングの検出または測定を含んでもよく、前記タウに結合された前記抗タウ抗体またはタウ結合フラグメントのエクスビボイメージングを含み得る。
【0140】
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体またはそのタウ結合フラグメントの１つまたは複数のポリペプチド鎖をコードする発現ベクターに関する。このような発現ベクターは、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの組み換え産生に使用され得る。
【0141】
本発明の文脈における発現ベクターは、染色体ベクター、非染色体ベクター、および合成核酸ベクター（好適な組の発現制御要素を含む核酸配列）を含む、任意の好適なＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。このようなベクターの例としては、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドおよびファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、およびウイルス核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）ベクターが挙げられる。一実施形態において、抗タウ抗体コード核酸は、例えば、線形発現要素（ｌｉｎｅａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）（例えば、Ｓｙｋｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １２，３５５－５９（１９９７）に記載されているように）、圧縮（ｃｏｍｐａｃｔｅｄ）核酸ベクター（例えば米国特許第６，０７７，８３５号明細書および／または国際公開第００／７００８７号パンフレットに記載されているように）、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ １９／１８、またはｐＵＣ １１８／１１９、「ミッジ（ｍｉｄｇｅ）」最小サイズ核酸ベクターなどのプラスミドベクター（例えば、Ｓｃｈａｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＭｏＩ Ｔｈｅｒ ３，７９３－８００（２００１）に記載されているように）を含む裸のＤＮＡまたはＲＮＡベクターにおいて、またはＣａＰＯ４沈殿構築物などの沈殿核酸ベクター構築物（例えば、国際公開第００／４６１４７号パンフレット、Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｈｅｆ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８３，９５５１－５５（１９８６）、Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １４，７２５（１９７８）、およびＣｏｒａｒｏ ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２，６０３（１９８１）に記載されているように）として含まれる。このような核酸ベクターおよびその使用法は、当該技術分野において周知である（例えば米国特許第５，５８９，４６６号明細書および米国特許第５，９７３，９７２号明細書を参照）。
【0142】
一実施形態において、ベクターは、細菌細胞における本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの発現に好適である。このようなベクターの例としては、ＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＩＮベクター（Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６４，５５０３－５５０９（１９８９））、ｐＥＴベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）など）などの発現ベクターが挙げられる。
【0143】
発現ベクターは、さらにまたは代わりに、酵母系における発現に好適なベクターであり得る。酵母系における発現に好適な任意のベクターが用いられてもよい。好適なベクターとしては、例えば、α因子、アルコールオキシダーゼおよびＰＧＨなどの構成的または誘導性プロモータを含むベクターが挙げられる（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）、Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ １５３，５１６－５４４（１９８７）、Ｍａｔｔａｎｏｖｉｃｈ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８２４，３２９－３５８（２０１２）、Ｃｅｌｉｋ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．３０（５），１１０８－１１１８（２０１２）、Ｌｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４２（２），１０５－１２４（２００７）、Ｂｏｅｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（３），５１３－５２３（２００７）、ｖａｎ ｄｅｒ Ｖａａｒｔ，Ｊ．Ｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３５９－３６６（２００２）、およびＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３４９－３５７（２００２）に概説されている）。
【0144】
本発明の発現ベクターにおいて、抗タウ抗体コード核酸は、任意の好適なプロモータ、エンハンサー、および他の発現促進要素を含むかまたはそれらと結合され得る。このような要素の例としては、強力な発現プロモータ（例えば、ヒトＣＭＶ ＩＥプロモータ／エンハンサーならびにＲＳＶ、ＳＶ４０、ＳＬ３－３、ＭＭＴＶ、およびＨＩＶ ＬＴＲプロモータ）、有効なポリ（Ａ）終止配列、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるプラスミド産物の複製起点、選択可能なマーカーとしての抗生物質抵抗性遺伝子、および／または好都合なクローニング部位（例えば、ポリリンカー）が挙げられる。核酸は、ＣＭＶ ＩＥなどの構成的プロモータとは対照的に誘導性プロモータも含み得る（当業者は、このような用語が、実際に、特定の条件下における遺伝子発現の程度の記述語であることを認識するであろう）。
【0145】
さらに他の態様において、本発明は、本明細書に定義される本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントまたは本明細書に定義される本発明の二重特異性分子を産生するトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）などの、組み換え真核生物または原核生物宿主細胞に関する。宿主細胞の例としては、酵母、細菌、および哺乳類細胞（ＣＨＯまたはＨＥＫ細胞など）が挙げられる。例えば、一実施形態において、本発明は、本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの発現のための配列コードを含む細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸を含む細胞を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの発現のための配列コードを含む、プラスミド、コスミド、ファージミド、または線形発現要素などの、融合されていない核酸を含む細胞を提供する。
【0146】
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗タウ抗体を産生するための方法であって、ａ）本明細書において上述されるように本発明のハイブリドーマまたは宿主細胞を培養する工程と、ｂ）培地から本発明の抗体を精製する工程とを含む方法に関する。
【0147】
一実施形態において、本発明は、調製物であって、このような用語が本明細書において使用される際、本明細書に定義される抗タウ抗体を含み、タウに結合することが可能でないかまたは調製物の抗タウ機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含まない調製物に関する。したがって、このような調製物は、自然発生する血清、またはこのような血清の精製誘導体を包含せず、抗タウ抗体と、調製物の抗タウ抗体の機能性を変更しない別の抗体との混合物を含み、ここで、このような機能性は、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
である。
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
である。
【0148】
本発明は、特に、天然抗タウ抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を（そのＣＤＲ、可変領域、フレームワーク残基および／または定常領域のいずれかに）有するこのような抗タウ抗体の調製物であって、前記構造変化により、抗タウ抗体が、前記天然抗タウ抗体によって示される機能性と比べて著しく変化した機能性（すなわち、機能性の２０％超の相違、４０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、１５０％超の相違、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違、または１０倍超の相違）を示し；ここで、このような機能性は、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
であり、特に、このような変化した機能性は、構造変化の結果であり、したがってそれと切り離すことができない。
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されたタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病的および非病的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／または
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能力
であり、特に、このような変化した機能性は、構造変化の結果であり、したがってそれと切り離すことができない。
【0149】
自然発生する抗体を「実質的に含まない」という用語は、このような調製物におけるこのような自然発生する抗体の、または調製物のタウ結合特性を実質的に変更しないこのような調製物におけるある濃度のこのような自然発生する抗体の包含の完全な非存在を指す。抗体は、それが自然発生する対応物を有さないか、またはそれを自然に伴う成分から分離もしくは精製されている場合、「単離」されているといわれる。
【0150】
「自然発生する抗体」という用語は、それがこのような調製物に関する場合、生きたヒトまたは他の動物内で、それらの免疫系の機能の自然な結果として誘発される抗体（自然発生する自己抗体を含む）を指す。
【0151】
したがって、本発明の調製物は、抗タウ抗体およびタウによって保有されないエピトープに結合することが可能な意図的に加えられるさらなる抗体を含有するこのような調製物を除外せず、実際は明確にそれを包含する。
【0152】
本発明の主要な態様は、眼疾患を治療するための本明細書に定義されるタウ抗体の使用に関する。別に記載される、本発明の一態様は、患者の脈絡膜、視神経および／または網膜のタウオパチーの進行を遅らせる方法である。患者は、アルツハイマー病の初期段階にあり、または関連する診断がなくてもよい。
【0153】
本発明は、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
【0154】
本発明の一実施形態において、本明細書に定義されるタウ抗体は、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性を治療する方法のためのものである。関連する実施形態において、タウオパチーは、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）（乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）、および緑内障からなる群から選択される疾患である。この疾患は、ＡＤの初期段階の患者に、またはアルツハイマー病の前駆段階であるかもしくはアルツハイマー病と診断されていない患者における認知知覚変化を引き起こすことがあり、この疾患は、物体の読み取りおよび発見の困難、奥行き知覚の変化、動きからの構造の知覚の困難、色認識の困難、および空間対比感度の低下を含むことを含み得る。
【0155】
脈絡膜および網膜の疾患は、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）、網膜老化からなる群から選択され得る。
【0156】
治療は、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減することを含んでもよく、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、もつれが除去され、過リン酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む。
【0157】
一実施形態において、疾患は、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される。典型的に、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、本明細書に定義されるように、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される。
【0158】
本発明のさらなる態様は、脈絡膜および網膜の疾患の治療のための薬剤の調製のための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。疾患は、典型的に、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される。
【0159】
本発明のさらなる態様は、対象における脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法であって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、有効量で前記対象に投与する工程を含む方法に関する。疾患は、典型的に、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される。
【0160】
本発明の一態様は、患者における、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の進行を遅らせる方法であって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体を投与することによって、前記患者における病的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含む方法に関する。
【0161】
本発明の一態様は、対象の眼内の前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用するための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物であって、抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物に関する。
【0162】
さらに他の態様において、本発明は、
（ｉ）本明細書に定義されるタウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメント、または調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む調製物、および
（ｉｉ）薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
（ｉ）本明細書に定義されるタウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメント、または調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む調製物、および
（ｉｉ）薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
【0163】
医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されているものなどの従来の技術にしたがって、薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤とともに製剤化され得る。
【0164】
薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤は、本発明の選択された化合物および選択された投与方法に好適であるべきである。医薬組成物の担体および他の成分のための適合性は、本発明の選択された化合物または医薬組成物の所望の生物学的特性に対する大きな悪影響がないことに基づいて決定される（例えば、エピトープ結合に対するそれほど大きくない影響（１０％以下の相対的阻害、５％以下の相対的阻害など））。
【0165】
本発明の医薬組成物は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０またはＴｗｅｅｎ－８０などの非イオン性洗浄剤）、安定剤（例えば、糖またはタンパク質を含まないアミノ酸）、防腐剤、組織固定剤、可溶化剤、および／または医薬組成物に含めるのに好適な他の材料も含み得る。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。さらに、医薬組成物または製剤は、他の担体、または非毒性の、非治療的、非免疫原性安定剤なども含み得る。組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（例えば、ラテックス機能化（ｌａｔｅｘ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）セファロース、アガロース、セルロースなど）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）などの、大型のゆっくりと代謝される高分子も含み得る。
【0166】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物、および投与方法に対する所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化され得る。選択された投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性、またはそのアミド、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排せつ速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、病態、全体的な健康および過去の病歴、ならびに医療分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態学的要因に応じて決まる。
【0167】
医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のための非経口、局所、経口または経鼻手段を含む、任意の好適な経路および方法によって投与され得る。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、非経口的に投与される。本明細書において使用される際の「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、通常、注射による、腸内および局所投与以外の投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、および注入を含む。
【0168】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、溶液中で投与される。投与は、硝子体内投与または眼周囲投与、例えば結膜下投与、テノン嚢下投与、または注射などの眼球後方投与によって、または眼内注入もしくは点眼剤によって、または眼の周りの皮膚もしくは眼瞼への軟膏、クリーム、または他の流体もしくはゲル製剤として行われ得る。
【0169】
インビボおよびインビトロで本発明の化合物を投与するさらなる好適な経路が、当該技術分野において周知であり、当業者によって選択され得る。
【0170】
一実施形態において、その医薬組成物は、静脈内または皮下注射または注入によって投与される。
【0171】
薬学的に許容できる担体としては、本発明の化合物と生理学的に適合性の、あらゆる好適な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤および吸収遅延剤などが挙げられる。
【0172】
本発明の医薬組成物に用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、およびゴマ油などの植物油、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントガムおよび注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）、および／または様々な緩衝液が挙げられる。他の担体が、医薬品分野において周知である。
【0173】
薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散体の即時調製用の滅菌水溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。
【0174】
適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散体の場合、所要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
【0175】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる酸化防止剤、例えば（１）水溶性酸化防止剤（アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性酸化防止剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなど）；および（３）金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）も含み得る。
【0176】
本発明の医薬組成物は、組成物中に糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール、グリセロールなど）または塩化ナトリウムなどの等張剤も含み得る。
【0177】
本発明の医薬組成物は、医薬組成物の保存可能期間または有効性を向上させ得る、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤または緩衝液などの、選択された投与経路に適切な１つまたは複数の補助剤も含有し得る。本発明の化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの速放性から化合物を保護する担体とともに調製され得る。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、生分解性、生体適合性ポリマー（エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸など）を単独でまたはワックスまたは当該技術分野において周知の他の材料とともに含み得る。このような製剤の調製のための方法は、一般に、当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【0178】
一実施形態において、本発明の化合物は、インビボでの適切な分配を確実にするように製剤化され得る。非経口投与用の薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散体の即時調製用の滅菌水溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。補助的な活性化合物も、組成物に組み込まれ得る。
【0179】
注射用の医薬組成物は、典型的に、製造および貯蔵の条件下で、滅菌性かつ安定性でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤濃度に好適な他の規則構造として製剤化され得る。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、および注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）を含有する、水性または非水性溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合、所要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール（グリセロール、マンニトール、ソルビトールなど）、または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収が、抗体の吸収を遅らせる物質、例えば、一ステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされ得る。滅菌注射用溶液は、例えば上に列挙されるような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒および例えば上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【0180】
滅菌注射用溶液は、上に列挙されるような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒および上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【0181】
治療の上記の方法および本明細書に記載される使用における投与計画は、最適な望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割量が、時間をかけて投与されてもよく、または用量が、治療状況の要件によって示されるように比例的に減少または増加されてもよい。非経口組成物は、投与のしやすさおよび投与の均一性のために単位剤形で製剤化され得る。本明細書において使用される際の単位剤形は、治療される対象のための統一された投与量として適した物理的に別個の単位を指し；各単位は、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特性および得られる具体的な治療効果、ならびに（ｂ）個体における敏感性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の治療のためのこのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限に左右され、それらに直接依存する。
【0182】
本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの有効投与量および投与計画は、治療される疾患または病態に応じて決まり、当業者によって決定され得る。いずれの日も所定の投与量が投与され、投与量は、約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲であり得る。例えば、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重または１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であり得る。したがって、例示的な投与量としては、約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約５ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約２ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約１ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１５ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．２ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ／体重、約１ｍｇ／ｋｇ／体重、約１．５ｍｇ／ｋｇ／体重、約２ｍｇ／ｋｇ／体重、約５ｍｇ／ｋｇ／体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ／体重が挙げられる。
【0183】
当該技術分野において通常の技能を有する医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師は、医薬組成物に用いられる本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの用量を、所望の治療効果を得るために必要とされるより少ないレベルから開始し、所望の効果が得られるまで投与量を徐々に増加し得る。一般に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果を生じるのに有効な最低用量である化合物の量であろう。このような有効用量は、一般に、上述される要因に応じて決まる。投与は、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下投与であり得る。必要に応じて、医薬組成物の有効１日用量は、任意選択的に単位剤形で、１日を通して適切な間隔で、別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回またはそれ以上の分割用量として投与され得る。本発明の化合物は、単独で投与されることが可能であるが、上述されるように医薬組成物として化合物を投与するのが好ましい。
【0184】
本発明の標識抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、疾患または障害を検出、診断、または監視するために、診断目的で使用され得る。本発明は、目のタウオパチーの検出または診断を提供し、（ａ）タウに特異的に結合する１つまたは複数の抗体を用いて、対象の細胞または組織試料内のピログルタミル化Ａβフラグメントの存在を測定する工程と；（ｂ）抗原のレベルを、制御レベル、例えば正常な組織試料におけるレベルと比較し、それによって、抗原の制御レベルと比較した、抗原の測定レベルの増加が、疾患または障害を示すか、または疾患または障害の重症度を示す工程を含む。
【0185】
本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、当該技術分野において周知の免疫組織化学法を用いて、生物学的試料内のタウまたはタウのフラグメントを測定するのに使用され得る。タンパク質を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）およびメソスケールディスカバリープラットフォーム（ｍｅｓｏｓｃａｌｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｐｌａｔｆｏｒｍ）ベースのアッセイ（ＭＳＤ）などの免疫測定法が挙げられる。好適な抗体標識が、このようなキットおよび方法に使用され得、当該技術分野において公知の標識としては、酵素標識（アルカリホスファターゼおよびグルコースオキシダーゼなど）；放射性同位体標識（ヨウ素（１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）など）；および発光標識（ルミノールおよびルシフェラーゼなど）；および蛍光標識（フルオレセインおよびローダミンなど）が挙げられる。
【0186】
標識抗タウ抗体またはそれらのタウ結合フラグメントの存在は、診断目的で、インビボで検出され得る。一実施形態において、診断は、ａ）有効量のこのような標識分子を対象に投与する工程；ｂ）投与後、所定の時間間隔にわたって待機して、標識分子を、Ａβ堆積の部位（もしあれば）で濃縮させ、非結合標識分子が、バックグラウンドレベルになるまで除去されるのを可能にする工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；およびｄ）バックグラウンドレベルを超える標識分子の検出が、対象が疾患または障害に罹患していることを示すか、または疾患または障害の重症度を示すように、対象中の標識分子を検出する工程を含む。このような実施形態によれば、分子は、当業者に公知の特定のイメージングシステムを用いた検出に好適なイメージング部分で標識される。バックグラウンドレベルは、検出された標識抗体の量を、特定のイメージングシステムのために予め決定された標準値と比較することを含む、当該技術分野において公知の様々な方法によって決定され得る。本発明の診断法に使用され得る方法およびシステムとしては、限定はされないが、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波検査法が挙げられる。
【0187】
さらなる態様において、本発明は、治療に使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。
【0188】
さらなる態様において、本発明は、タウオパチーを治療、診断またはイメージングするのに使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。
【0189】
さらなる態様において、本発明は、タウオパチーを治療、診断またはイメージングするための薬剤の製造に使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。
【0190】
好ましい実施形態において、治療は、長期であり、好ましくは、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上にわたる。
【0191】
さらなる態様において、本発明は、治療に使用するための、本明細書に定義される抗体、またはそのフラグメントを含むキットを提供する。
【0192】
実施形態
１．脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
１．脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0193】
２．治療が、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減する工程を含み、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、もつれが除去され、過リン酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0194】
３．疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0195】
４．抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0196】
５．Ｃ５．２抗体が、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0197】
６．Ｃ５．２抗体が、
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態５に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態５に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0198】
７．Ｃ８．３抗体が、
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0199】
８．Ｃ８．３抗体が、
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態７に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態７に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0200】
９．Ｄ１．２抗体が、
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0201】
１０．Ｄ１．２抗体が、
（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態９に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態９に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0202】
１１．
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；および配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；および配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0203】
１２．
（ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0204】
１３．
（ａ）軽鎖が配列番号１２であり；
（ｂ）重鎖が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）軽鎖が配列番号１２であり；
（ｂ）重鎖が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0205】
１４．
（ａ）軽鎖が、配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択され；
（ｂ）重鎖が配列番号１１である、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）軽鎖が、配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択され；
（ｂ）重鎖が配列番号１１である、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0206】
１５．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0207】
１６．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0208】
１７．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0209】
１８．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0210】
１９．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0211】
２０．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0212】
２１．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0213】
２２．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0214】
２３．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0215】
２４．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0216】
２５．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0217】
２６．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0218】
２７．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0219】
２８．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0220】
２９．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0221】
３０．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0222】
３１．
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0223】
３２．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0224】
３３．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0225】
３４．
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0226】
３５．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0227】
３６．
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0228】
３７．
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0229】
３８．
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0230】
３９．
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0231】
４０．
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0232】
４１．
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0233】
４２．
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0234】
４３．
（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0235】
４４．
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0236】
４５．
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0237】
４６．
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0238】
４７．
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0239】
４８．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0240】
４９．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0241】
５０．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0242】
５１．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0243】
５２．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0244】
５３．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0245】
５４．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0246】
５５．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0247】
５６．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0248】
５７．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0249】
５８．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0250】
５９．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0251】
６０．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0252】
６１．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0253】
６２．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0254】
６３．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0255】
６４．
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0256】
６５．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0257】
６６．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0258】
６７．
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0259】
６８．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0260】
６９．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0261】
７０．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0262】
７１．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0263】
７２．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0264】
７３．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0265】
７４．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0266】
７５．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0267】
７６．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0268】
７７．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0269】
７８．脈絡膜および網膜の疾患の治療のための薬剤の調製のための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能であるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0270】
７９．疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、実施形態７８に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0271】
８０．Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント、例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ）２フラグメント；およびドメイン抗体、例えば単一のＶＨ可変領域またはＶＬ可変領域からなる群から選択されるエピトープ結合フラグメントを含むかまたはそれからなる、実施形態１に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0272】
８１．ヒトまたはヒト化抗体である、先行する実施形態のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0273】
８２．対象における脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法であって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。
【0274】
８３．疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、実施形態８２に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法。
【0275】
８４．対象の眼内の前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用するための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物であって、抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物。
【0276】
８５．患者における、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の進行を遅らせる方法であって、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体を投与することによって、前記患者における病的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含む方法。
【0277】
８６．無傷の抗体からなる、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体。
【0278】
８７．Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント（例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ）２フラグメント）；ミニボディ（Ｆｖ）２－ＣＨ３領域、およびドメイン抗体（例えば単一のＶＨ可変領域またはＶＬ可変領域）からなる群から選択される、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0279】
８８．抗体が、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の抗体からなる群から選択される、いずれかの先行する実施形態に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0280】
８９．ヒトまたはヒト化抗体である、先行する実施形態のいずれかに記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0281】
９０．抗体またはエピトープ結合フラグメントが、以下の特性
（ａ）ヒト病的タウに対する選択性および特異性；
（ｂ）０．５～１０ｎＭ、例えば１～５ｎＭまたは１～２ｎＭの、ｐ－タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）（配列番号１）に対する結合親和性（ＫＤ）
の１つまたは複数を示す、先行する実施形態のいずれか１つに記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ａ）ヒト病的タウに対する選択性および特異性；
（ｂ）０．５～１０ｎＭ、例えば１～５ｎＭまたは１～２ｎＭの、ｐ－タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）（配列番号１）に対する結合親和性（ＫＤ）
の１つまたは複数を示す、先行する実施形態のいずれか１つに記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0282】
９１．前記抗体が、タウ（配列番号１）におけるリン酸化４０４残基に実質的に結合しない、先行する実施形態のいずれか１つに記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0283】
９２．（ａ）配列番号３のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0284】
９３．前記抗体またはそのフラグメントが、ヒトタウへの結合について、実施形態４～７７に記載の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントと競合する、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、先行する実施形態の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
【0285】
９４．非経口、局所、経口または経鼻投与のために製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～８３の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0286】
９５．腸内または局所投与のために製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0287】
９６．表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外および胸骨内注射および注入などを含む、注射のために製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0288】
９７．溶液として製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0289】
９８．硝子体内投与または眼周囲投与、例えば結膜下投与、テノン嚢下投与、または注射などによる眼球後方投与のために製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0290】
９９．眼内注射のために製剤化される、または点眼剤としての投与のための、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0291】
１００．眼の周りの皮膚もしくは眼瞼などへの軟膏、クリーム、または他の流体もしくはゲルとして製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【0292】
１０１．静脈内または皮下注射または注入のために製剤化される、脈絡膜および網膜の疾患を治療するための、実施形態１～７７の１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物。
【実施例】
【0293】
実施例１：リン酸化ペプチド３９６／４０４によるマウスの免疫化
Ｃ５６／ＢＬ６およびＦＶＢマウスを、ＴｉｔｅｒＭａｘ補助剤中で製剤化された１０μｇのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）（配列番号２）で免疫した。
Ｃ５６／ＢＬ６およびＦＶＢマウスを、ＴｉｔｅｒＭａｘ補助剤中で製剤化された１０μｇのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）（配列番号２）で免疫した。
【0294】
マウス（Ｃ５６／ＢＬ６およびＦＶＢ株、雌および雄、２～３月齢のマウス）を、ペプチドエピトープＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８で免疫した。
【0295】
免疫原性Ｐ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）ペプチドを、ＴｉｔｅｒＭａｘ／供給業者のプロトコルにしたがって、ＴｉｔｅｒＭａｘ（１：１ｖｏｌ：ｖｏｌで混合される４００μｇ／ｍｌのペプチド）中で製剤化し、マウスに、２０μｇのペプチド（１００μｌ）の抗原を皮下注入した。対照マウスに、補助剤のみを注入した。全てのペプチド免疫化マウスを、１ヶ月間隔で、０．５μｇのペプチド／Ｔｉｔｅｒｍａｘ（上述されるように製剤化され、注入される１０μｇ／ｍｌのペプチド）で追加免疫した。最後に、マウスを、脾細胞とＳＰ－２細胞との融合の３日前にＴｉｔｅｒｍａｘなしのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で追加免疫した。１μｇ／ｍｌのリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたＥＬＩＳＡプレートへの陽性結合を示し、ＡＤおよびＴＧ４５１０脳溶解物（実施例３において後述される）に由来するＳ１およびＰ３抗原に対する優先的結合活性を示した後、ハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した。ドットブロットおよび脳溶解物で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートを用いて、このような結合を、対照に由来する脳溶解物へのこのような抗体の結合活性と比較した。
【0296】
実施例２：ハイブリドーマ生成
マウスを、脾細胞とＳＰ－２細胞との融合の３日前にＴｉｔｅｒｍａｘなしのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で追加免疫した。１μｇ／ｍｌのリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたＥＬＩＳＡプレートへの陽性結合、およびドットブロットおよび脳溶解物で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートを用いて、対照に由来する脳溶解物と比較した、ＡＤおよびＴＧ４５１０脳溶解物に由来するＳ１およびＰ３抗原に対する優先的結合活性の後、ハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した。
マウスを、脾細胞とＳＰ－２細胞との融合の３日前にＴｉｔｅｒｍａｘなしのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で追加免疫した。１μｇ／ｍｌのリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたＥＬＩＳＡプレートへの陽性結合、およびドットブロットおよび脳溶解物で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートを用いて、対照に由来する脳溶解物と比較した、ＡＤおよびＴＧ４５１０脳溶解物に由来するＳ１およびＰ３抗原に対する優先的結合活性の後、ハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した。
【0297】
実施例３．ＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイ
実施例３Ａの目的：マウスＣ１０－２で被覆したＭＳＤプレートのＡＤ－Ｐ３脳物質中のＰ（３９６）タウ抗原に結合するヒトＣ１０－２および突然変異体の阻害を定量化するため。阻害の程度が、抗原に結合する流体相抗体の見かけの親和性を反映するＩＣ５０値として示される。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて１または２部位結合モデルに適合させることによって、ＩＣ５０値を得た。Ｐ（４０４）タウと反応性の陰性対照抗体（マウスＣ１０－１）を、比較のために加えた（データは示されない）。
実施例３Ａの目的：マウスＣ１０－２で被覆したＭＳＤプレートのＡＤ－Ｐ３脳物質中のＰ（３９６）タウ抗原に結合するヒトＣ１０－２および突然変異体の阻害を定量化するため。阻害の程度が、抗原に結合する流体相抗体の見かけの親和性を反映するＩＣ５０値として示される。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて１または２部位結合モデルに適合させることによって、ＩＣ５０値を得た。Ｐ（４０４）タウと反応性の陰性対照抗体（マウスＣ１０－１）を、比較のために加えた（データは示されない）。
【0298】
方法：ＭＳＤプレートを、室温で一晩、捕捉抗体（炭酸緩衝液ｐＨ８．５中の７５０ｎｇ／ｍｌのＣ１０－２）で被覆した後、ブロッキングし（ＰＢＳ、３％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０中で３０分間）、５回洗浄した（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０）。段階的濃度（０～１０００ｎＭ）の抗体を、室温でＡＤ－Ｐ３材料とともに６０分間インキュベートし、続いて、上述されるようにマウスＣ１０－２で被覆されたＭＳＤプレートにおいて、室温で１時間インキュベートした。プレートを、（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０～．１％のＮＰ４０）中で５回洗浄し、抗ヒト総タウ（ＭＳＤスルホタグ化１：５０）を、阻害されていない遊離タウ抗原を反映する捕捉されたタウを検出するために加えた。
【0299】
結果：データは、ヒトＣ１０－２およびＣ１０－２変異体を用いたタウ捕捉の用量依存的阻害を示した（図１）。Ｃ１０－２変異体Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ：Ａ１０１Ｔは、より強く阻害するが（１部位結合モデルに適合された、それぞれＩＣ５０＝４４および１４ｎＭ）、Ｃ１０－２は、２部位結合モデルへの最良適合によって反映される不均一な阻害を示した（ＩＣ５０ １４ｎＭ／６３０ｎＭ）。高親和性抗体結合（ＩＣ５０＝１４ｎＭ）が全結合の２５％未満を占めていたため、低親和性結合（ＩＣ５０＝６３０）が優勢であった。結果が、図１に示される。
【0300】
実施例３Ｂの目的：流体相阻害アッセイにおいてＰ（３９６）タウ３８６～４０８ペプチドに結合するヒトＣ１０－２および突然変異変異体の阻害を定量化するため。阻害の程度が、抗体結合の見かけの親和性を反映するＩＣ５０値として示される。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、１または２部位結合モデルに適合させることによって、ＩＣ５０値を得た。Ｐ（４０４）タウと反応性の陰性対照抗体（マウスＣ１０－１）を、比較のために加えた（データは示されない）。
【0301】
方法：ＭＳＤプレートを、室温で一晩、炭酸緩衝液ｐＨ９．５中のＰ（３９６）タウ３８６～４０８ペプチドで被覆した後、ブロッキングし（ＰＢＳ、３％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０中で３０分間）、５回洗浄した（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０）。段階的濃度（０～１０００ｎＭ）のＰ（３９６）タウ３８６～４０８を、室温で１ｎｇ／ｍｌの抗体とともに６０分間インキュベートし、続いて、上述されるようにＰ（３９６）タウ３８６～４０８で被覆されたＭＳＤプレートにおいて室温で１時間インキュベートした。プレートを、（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０）中で５回洗浄し、抗ヒト総タウ（ＭＳＤスルホタグ化１：５０）を、阻害されていない遊離抗体を反映する結合抗体を検出するために加えた。結果が、図２に示される。
【0302】
実施例４．抗体の免疫組織化学的プロファイリング
組織
マウス：マウス脳組織を、８月齢のｒＴｇ４５１０マウスから採取した。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。非トランスジェニック同腹仔を対照として用いた。マウス脳を、４％のパラホルムアルデヒドへの浸漬によって固定し、パラフィンに包埋した。ヒト：ホルマリンで固定され、パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病（ＡＤ；Ｂｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）の３つのドナーに由来する組織を、月齢をマッチさせた、認知症でない対照ドナーと比較した。
組織
マウス：マウス脳組織を、８月齢のｒＴｇ４５１０マウスから採取した。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。非トランスジェニック同腹仔を対照として用いた。マウス脳を、４％のパラホルムアルデヒドへの浸漬によって固定し、パラフィンに包埋した。ヒト：ホルマリンで固定され、パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病（ＡＤ；Ｂｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）の３つのドナーに由来する組織を、月齢をマッチさせた、認知症でない対照ドナーと比較した。
【0303】
免疫組織化学：
マウスおよびヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、１０分間にわたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、１％の過酸化水素、続いて、ＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）中の５％の正常なブタ血清によりブロッキングした。切片を、図１に示される濃度の範囲で、ＰＢＳ－ＢＴ中で希釈されたｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、ＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄してから、１時間にわたって１：２００でビオチン化二次ブタ抗ヒト抗体（＃Ｂ１１４０；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）とともにインキュベートした。さらなる洗浄後、ストレプトアビジン－ビオチン複合体キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を適用し、最後に、免疫活性を、０．０５％のジアミノベンジジンで視覚化した。切片を、核の位置を示すためにヘマトキシリンで対比染色した。
マウスおよびヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、１０分間にわたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、１％の過酸化水素、続いて、ＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）中の５％の正常なブタ血清によりブロッキングした。切片を、図１に示される濃度の範囲で、ＰＢＳ－ＢＴ中で希釈されたｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、ＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄してから、１時間にわたって１：２００でビオチン化二次ブタ抗ヒト抗体（＃Ｂ１１４０；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）とともにインキュベートした。さらなる洗浄後、ストレプトアビジン－ビオチン複合体キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を適用し、最後に、免疫活性を、０．０５％のジアミノベンジジンで視覚化した。切片を、核の位置を示すためにヘマトキシリンで対比染色した。
【0304】
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、３つのＡＤ脳内の病的タウ（すなわち、もつれ、神経絨毛糸、ジストロフィー性神経突起）と一致する構造を標識した。免疫活性の強度は、濃度依存性であった。例えばグリア細胞または血管の明らかな標識は検出されなかった。対照脳に由来する切片で免疫活性は検出されなかった。同様に、全ての３つの抗体は、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質の両方においてリン酸化タウについて予測されるパターンを生じた。非トランスジェニックマウスに由来する脳切片では、免疫活性は検出されなかった。
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、３つのＡＤ脳内の病的タウ（すなわち、もつれ、神経絨毛糸、ジストロフィー性神経突起）と一致する構造を標識した。免疫活性の強度は、濃度依存性であった。例えばグリア細胞または血管の明らかな標識は検出されなかった。対照脳に由来する切片で免疫活性は検出されなかった。同様に、全ての３つの抗体は、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質の両方においてリン酸化タウについて予測されるパターンを生じた。非トランスジェニックマウスに由来する脳切片では、免疫活性は検出されなかった。
【0305】
実施例５．静脈内（ｉ．ｖ．）注射後のｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾
方法
１０月齢のｒＴｇ４５１０マウス。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変性が、強い病変を有する領域において、ｒＴｇ４５１０マウスの１０月齢の時点で存在する。単一トランスジェニックｔＴＡ同腹仔を対照として用いた。マウスに、８０ｍｇ／ｋｇの濃度で、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳまたはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかを、尾静脈を介して単回注射した。マウス１匹につき１５０μＬの体積を注射した。注射の３日後、マウスに、ＰＢＳを２分間灌流させた後、４％のパラホルムアルデヒドを１０分間灌流させた。脳を、３０％のスクロース中で凍結防止し、４０ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。切片を、２０分間にわたってＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、最後に、１：２００でＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（＃７０９－５４５－１４９；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳＡ）とともにインキュベートした。Ｈｏｅｃｈｓｔを核染色に使用した。切片を、ＰＢＳ中で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
方法
１０月齢のｒＴｇ４５１０マウス。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変性が、強い病変を有する領域において、ｒＴｇ４５１０マウスの１０月齢の時点で存在する。単一トランスジェニックｔＴＡ同腹仔を対照として用いた。マウスに、８０ｍｇ／ｋｇの濃度で、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳまたはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかを、尾静脈を介して単回注射した。マウス１匹につき１５０μＬの体積を注射した。注射の３日後、マウスに、ＰＢＳを２分間灌流させた後、４％のパラホルムアルデヒドを１０分間灌流させた。脳を、３０％のスクロース中で凍結防止し、４０ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。切片を、２０分間にわたってＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、最後に、１：２００でＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（＃７０９－５４５－１４９；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳＡ）とともにインキュベートした。Ｈｏｅｃｈｓｔを核染色に使用した。切片を、ＰＢＳ中で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
【0306】
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、老化したｒＴｇ４５１０マウス脳の海馬および皮質における標的構造へのインビボ結合が生じた（図４～７）。観察される陽性構造の数は、個々のｒＴｇ４５１０動物によって異なっていた。ｔＴＡ対照マウスでは、３つの抗体のいずれの注射の後も、特定の蛍光シグナルは検出されなかった（図４～７）。陰性対照として用いる、対照ヒトＩｇＧの注射は、ｒＴｇ４５１０マウスにおいてシグナルを生じなかった（データは示されない）。ｒＴｇ４５１０脳における陽性シグナルは、細胞内染色として容易に見えず、神経変性の過程で放出される細胞外のタウ物質を表し得る。まとめると、これらのデータは、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体が、脳実質中に浸透することができ、インビボでｒＴｇ４５１０マウスにおける標的を特異的に装飾することを示唆している。
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、老化したｒＴｇ４５１０マウス脳の海馬および皮質における標的構造へのインビボ結合が生じた（図４～７）。観察される陽性構造の数は、個々のｒＴｇ４５１０動物によって異なっていた。ｔＴＡ対照マウスでは、３つの抗体のいずれの注射の後も、特定の蛍光シグナルは検出されなかった（図４～７）。陰性対照として用いる、対照ヒトＩｇＧの注射は、ｒＴｇ４５１０マウスにおいてシグナルを生じなかった（データは示されない）。ｒＴｇ４５１０脳における陽性シグナルは、細胞内染色として容易に見えず、神経変性の過程で放出される細胞外のタウ物質を表し得る。まとめると、これらのデータは、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体が、脳実質中に浸透することができ、インビボでｒＴｇ４５１０マウスにおける標的を特異的に装飾することを示唆している。
【0307】
実施例６．アルツハイマー病の脳におけるタウ免疫活性の特性評価
組織：
パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病（ＡＤ；Ｂｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）のドナーに由来する組織が含まれていた。
組織：
パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病（ＡＤ；Ｂｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）のドナーに由来する組織が含まれていた。
【0308】
免疫組織化学
ヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、１０分間にわたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。切片を、ＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートした後、ＰＢＳ－ＢＴで希釈されたｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、ＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄した。免疫活性を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（１：２００；＃７０９－５４５－１４９，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳＡ）によって視覚化した。蛍光免疫二重染色のための、切片を、ＡＴ８（１：５００；＃ＭＮ１０２０，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ ＵＳＡ）またはＥ１総ヒトタウ抗体とともに共インキュベートし、特注のウサギ抗体が、Ｎ末端タウ１９－３３に対して産生された（Ｃｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，１９９１）。ＡＴ８およびＥ１の免疫活性をそれぞれ、抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００；＃Ａ１００３７，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）および抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００；＃Ａ１００４２，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で視覚化した。切片を、蛍光顕微鏡によって分析した。
ヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、１０分間にわたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。切片を、ＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートした後、ＰＢＳ－ＢＴで希釈されたｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、ＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄した。免疫活性を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（１：２００；＃７０９－５４５－１４９，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳＡ）によって視覚化した。蛍光免疫二重染色のための、切片を、ＡＴ８（１：５００；＃ＭＮ１０２０，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ ＵＳＡ）またはＥ１総ヒトタウ抗体とともに共インキュベートし、特注のウサギ抗体が、Ｎ末端タウ１９－３３に対して産生された（Ｃｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，１９９１）。ＡＴ８およびＥ１の免疫活性をそれぞれ、抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００；＃Ａ１００３７，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）および抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００；＃Ａ１００４２，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で視覚化した。切片を、蛍光顕微鏡によって分析した。
【0309】
結果
Ｎ末端総タウおよびｐ３９６タウについて二重染色されたＡＤ切片において、もつれを有するニューロンの集団を、Ｅ１ならびにｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかによって標識した（図７）。多くのタウもつれが、ｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかのみによって標識された（図７、矢印）。細胞外タウ（ゴーストもつれ）は、Ｎ末端タウ抗体によって染色されないことが以前に示されている（例えばＢｏｎｄａｒｅｆｆ ｅｔ ａｌ，１９９０；Ｂｒａａｋ ｅｔ ａｌ，１９９４；Ｆｌｏｒｅｓ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ，２０１５）。したがって、ｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のみによって標識されるタウ種は、細胞外のゴーストもつれを表す可能性が高い。
Ｎ末端総タウおよびｐ３９６タウについて二重染色されたＡＤ切片において、もつれを有するニューロンの集団を、Ｅ１ならびにｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかによって標識した（図７）。多くのタウもつれが、ｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかのみによって標識された（図７、矢印）。細胞外タウ（ゴーストもつれ）は、Ｎ末端タウ抗体によって染色されないことが以前に示されている（例えばＢｏｎｄａｒｅｆｆ ｅｔ ａｌ，１９９０；Ｂｒａａｋ ｅｔ ａｌ，１９９４；Ｆｌｏｒｅｓ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ，２０１５）。したがって、ｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のみによって標識されるタウ種は、細胞外のゴーストもつれを表す可能性が高い。
【0310】
ウエスタンブロットおよび免疫沈降
実験手順および実験の説明
トランスジェニックｒＴｇ４５１０マウスを使用した：Ｐ３０１Ｌ突然変異を有するヒトタウｃＤＮＡ（４Ｒ０ＮタウＰ３０１Ｌ）を、テトラサイクリン－オペロン－レスポンダー（ＴＲＥ）構築物の下流に配置した。導入遺伝子を活性化するために、レスポンダーは、テトラサイクリン調整遺伝子発現系（ｔＴＡ）からなるアクチベータ構築物と共発現される必要がある。ｔＴＡアクチベータ系を、ＣａＭＫＩＩαプロモータの下流に配置し、それによって、主に前脳構造に対するＴＲＥの発現を制限した。タウ導入遺伝子レスポンダーは、ＦＶＢ／Ｎ（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統で発現され、ｔＴＡアクチベータ系は、１２９Ｓ６（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統において維持された。それらのＦ１子孫は、非トランスジェニック（非ｔｇ）および単一トランスジェニック同腹仔マウスとともにレスポンダーおよびアクチベータ導入遺伝子（ｒＴｇ４５１０）を有していた。Ｆ１マウスのみを実験に使用した。全てのマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）で飼育し、ｔＴＡアクチベータ導入遺伝子についてはプライマー対の５’－ＧＡＴＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＴＴＡＧＡＧＣＴＧ－３’および５’－ＧＣＡＴＡＴＧＡＴＣＡＡＴＴＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＡＡＧ－３’、ならびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子については５’－ＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣ－３’および５’－ＴＴＧＴＣＡＴＣＧＣＴＴＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧ－３’を用いた尾部ＤＮＡの分析によって、遺伝子型を同定した。マウスを集団で飼育し、水および食物（Ｂｒｏｇａａｒｄｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を自由に与えるとともに栄養強化物質を与えた。明／暗サイクルは１２時間であり；室温は２１±２℃であり、５５％±５％の相対湿度であった。実験動物（登録番号２０１４－１５－０２０１－００３３９）についてのデンマークの法律にしたがって実験を行った。
実験手順および実験の説明
トランスジェニックｒＴｇ４５１０マウスを使用した：Ｐ３０１Ｌ突然変異を有するヒトタウｃＤＮＡ（４Ｒ０ＮタウＰ３０１Ｌ）を、テトラサイクリン－オペロン－レスポンダー（ＴＲＥ）構築物の下流に配置した。導入遺伝子を活性化するために、レスポンダーは、テトラサイクリン調整遺伝子発現系（ｔＴＡ）からなるアクチベータ構築物と共発現される必要がある。ｔＴＡアクチベータ系を、ＣａＭＫＩＩαプロモータの下流に配置し、それによって、主に前脳構造に対するＴＲＥの発現を制限した。タウ導入遺伝子レスポンダーは、ＦＶＢ／Ｎ（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統で発現され、ｔＴＡアクチベータ系は、１２９Ｓ６（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統において維持された。それらのＦ１子孫は、非トランスジェニック（非ｔｇ）および単一トランスジェニック同腹仔マウスとともにレスポンダーおよびアクチベータ導入遺伝子（ｒＴｇ４５１０）を有していた。Ｆ１マウスのみを実験に使用した。全てのマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）で飼育し、ｔＴＡアクチベータ導入遺伝子についてはプライマー対の５’－ＧＡＴＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＴＴＡＧＡＧＣＴＧ－３’および５’－ＧＣＡＴＡＴＧＡＴＣＡＡＴＴＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＡＡＧ－３’、ならびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子については５’－ＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣ－３’および５’－ＴＴＧＴＣＡＴＣＧＣＴＴＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧ－３’を用いた尾部ＤＮＡの分析によって、遺伝子型を同定した。マウスを集団で飼育し、水および食物（Ｂｒｏｇａａｒｄｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を自由に与えるとともに栄養強化物質を与えた。明／暗サイクルは１２時間であり；室温は２１±２℃であり、５５％±５％の相対湿度であった。実験動物（登録番号２０１４－１５－０２０１－００３３９）についてのデンマークの法律にしたがって実験を行った。
【0311】
脳の代謝環境を保存するため、およびタウの生化学的プロファイルを変化させ得る人為的な影響を防ぐために、頸椎脱臼によってマウスを安楽死させた。マウス脳を、正中線で矢状方向に２等分して、２つの脳半球を得た。各動物の右脳半球の皮質および海馬を、ドライアイス上で迅速に凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した。アルツハイマー病（ＡＤ）患者および老化した健常対照（ＨＣ）ドナーに由来する凍結されたヒト皮質を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から購入した。ヒト脳試験片は、６時間未満の同様の死後処理時間を有しており、それをアミロイドおよびタウ病変について特性評価し、選択されたＡＤ試験片をＢｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩとして分類した。
【0312】
脳溶解物からタウタンパク質を免疫沈降させるために、Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋ免疫沈降キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｐｉｅｒｃｅ ２６１４７）を、製造業者の指示にしたがって使用した。簡潔に述べると、抗体を、プロテインＡ／Ｇプラスアガロースに結合した後、結合抗体をＤＳＳ（スベリン酸ジスクシンイミジル）で架橋した。脳ホモジネートを、トリス緩衝液（２５ｍＭのトリス／ＨＣｌ ｐＨ７．６、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、および完全なプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤混合物）中で調製し、対照アガロース樹脂とともに４℃で一晩プレクリアした。プレクリアされた溶解物を、抗体－架橋樹脂とともに４℃で一晩インキュベートした後、５０μｌの溶出緩衝液（ｐＨ２．８）で抗原溶出を行い、５ μｌの１Ｍのトリス、ｐＨ９．５を含む収集チューブ中に直ぐに遠心分離した。免疫沈降したタウを、ジチオスレイトール（ＤＴＴ、１００ｍＭ）を含むＳＤＳ－試料緩衝液に溶解させ、熱処理し（９５℃で１０分間）、後述されるようにウエスタンブロット法に供した。
【0313】
ヒトタウ濃度を、製造業者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にしたがって総ヒトタウについてＥＬＩＳＡによって、脳ホモジネートおよびプレクリアされた溶解物中で測定した。
【0314】
組織を、以下のようにプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する１０体積のトリス－緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中で均質化した：５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）；２７４ｍＭのＮａＣｌ；５ｍＭのＫＣｌ；１％のプロテアーゼ阻害剤混合物（Ｒｏｃｈｅ）；１％のホスファターゼ阻害剤混合物ＩおよびＩＩ（Ｓｉｇｍａ）；および１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）。ホモジネートを、４℃で２０分間にわたって２７，０００×ｇで遠心分離して、上清（Ｓ１）およびペレット画分を得た。ペレットを、５体積の高塩／スクロース緩衝液（０．８ＭのＮａＣｌ、１０％のスクロース、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、［ｐＨ７．４］、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰＭＳＦ）中で再度均質化し、上記のように遠心分離した。上清を収集し、３７℃で１時間にわたってサルコシル（１％の最終濃度；Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートした後、４℃で１時間にわたって１５０，０００×ｇで遠心分離して、塩およびサルコシル抽出性（Ｓ３）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分を得た。Ｐ３ペレットを、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ［ｐＨ８．０］、１ｍＭのＥＤＴＡ）中で、脳ホモジネートに使用される元の体積の半分に等しい体積になるまで再度懸濁させた。過リン酸化タウ種についてＳ１画分を富化するために、Ｓ１画分の一部を、２０分間にわたる１５０，０００×ｇでのさらなる遠心分離によって、上清（Ｓ１ｓ）および沈殿物（Ｓ１ｐ）画分に分けた。Ｓ１ｐペレットを、ＴＢＳ緩衝液中で、使用される元のＳ１体積の５分の１に等しい体積になるまで再度懸濁させた。分画組織抽出物Ｓ１、Ｓ１ｐおよびＰ３を、ＤＴＴを含有するＳＤＳ－試料緩衝液（１００ｍＭ）に溶解させた。熱処理された試料（９５℃で１０分間）を、４～１２％のビス－トリスＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）におけるゲル電気泳動によって分離し、ＰＶＤＦ膜（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）上に移した。ＴＢＳ中の５％の無脂肪乳および０．１％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を含有するブロッキング溶液でブロッキングした後、膜を、１μｇ／ｍｌのｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔまたはウサギ抗ｐＳ３９６タウ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともにインキュベートした。膜を洗浄し、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗ウサギ抗体（１：５０００；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）とともにインキュベートした。結合抗体を、強化された化学発光システム（ＥＣＬ ＰＬＵＳキット；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて検出した。ウエスタンブロット免疫活性の定量化および視覚分析を、コンピュータに連結されたＬＡＳ－４０００ ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ、東京、日本）およびＭｕｌｔｉ Ｇａｕｇｅ ｖ３．１ソフトウェア（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いて行った。タウタンパク質を検出するために、マウスに由来する約２μｇのＳ１、ヒト脳に由来する２０μｇのＳ１および等体積の異なる画分（Ｓ１、Ｓ１ｐ、およびＰ３）を、ＳＤＳ ＰＡＧＥに充填した。
【0315】
ウエスタンブロットによる病的タウの検出
３匹の３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳ホモジネートならびに４匹のＡＤおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片を、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性画分（Ｐ３）中に単離した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを、ウエスタンブロットにおいて１μｇ／ｍｌで使用し、ｒＴｇ４５１０マウスおよびＡＤから病的タウを検出した。本発明者らは、３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスに由来するＳ１において５５および６４ｋＤａタウ、およびＰ３およびＳ１ｐ画分において６４および７０ｋＤａタウの検出を観察した。さらに、５０ｋＤａ未満の３つの切断された（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）タウバンドが、Ｐ３画分において観察された。ヒト導入遺伝子タウを発現しない非ｔｇ対照同腹仔に由来するＳ１ｐおよびＰ３においてシグナルは検出されなかった。５０ｋＤａ前後の弱いシグナルが、非ｔｇマウスに由来するＳ１画分において検出され、これは、Ｓ３９６残基においてリン酸化された内因性マウスタウを表す可能性が最も高い（図８）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、ｒＴｇ４５１０マウスにおいて、ｐＳ３９６タウ、ならびに正常なリン酸化５５ｋＤａおよび過リン酸化６４ｋＤａタウ種の両方を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで観察された。
３匹の３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳ホモジネートならびに４匹のＡＤおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片を、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性画分（Ｐ３）中に単離した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを、ウエスタンブロットにおいて１μｇ／ｍｌで使用し、ｒＴｇ４５１０マウスおよびＡＤから病的タウを検出した。本発明者らは、３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスに由来するＳ１において５５および６４ｋＤａタウ、およびＰ３およびＳ１ｐ画分において６４および７０ｋＤａタウの検出を観察した。さらに、５０ｋＤａ未満の３つの切断された（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）タウバンドが、Ｐ３画分において観察された。ヒト導入遺伝子タウを発現しない非ｔｇ対照同腹仔に由来するＳ１ｐおよびＰ３においてシグナルは検出されなかった。５０ｋＤａ前後の弱いシグナルが、非ｔｇマウスに由来するＳ１画分において検出され、これは、Ｓ３９６残基においてリン酸化された内因性マウスタウを表す可能性が最も高い（図８）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、ｒＴｇ４５１０マウスにおいて、ｐＳ３９６タウ、ならびに正常なリン酸化５５ｋＤａおよび過リン酸化６４ｋＤａタウ種の両方を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで観察された。
【0316】
ＡＤドナーに由来するＳ１、Ｓ１ｐおよびＰ３画分において、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、典型的なＡＤタウ塗抹標本および病的な４つのタウバンドパターン（５４、６４、６９および７４ｋＤａタウ）を検出した。予測されるように、Ｐ３画分から単離されたサルコシル不溶性過リン酸化タウ種が最も顕著であり、続いて、Ｓ１ｐ画分が富化された可溶性過リン酸化タウ種であった。健常対照（ＨＣ）に由来するＰ３画分においてシグナルは検出されなかった。ＨＣに由来するＳ１およびＳ１ｐ画分において、５５ｋＤａ前後の弱いシグナルが検出され、これは、Ｓ３９６残基における正常なリン酸化タウを表す可能性が高い（図８）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、過リン酸化タウを表すＡＤおよび病的な４つのタウバンドパターンに特徴的な典型的なタウ塗抹標本を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで観察された。
【0317】
病的タウの免疫沈降
非変性条件下でタウに結合するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの能力を決定するために、タウ抗体をプロテインＡ／Ｇ樹脂上へと共有結合的に架橋し、それによって、抗体汚染のないＩＰを得るタウ免疫沈降（ＩＰ）プロトコルを確立した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるタウ分析では、両方のタンパク質が５０ｋＤａ前後で検出されるため、ＩＰに使用される抗体の重鎖の存在は、シグナルを邪魔し得る。ヒト脳に由来する病的タウを破壊するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの有効性を調べた。抗原として、それぞれ０．１μｇおよび０．１５μｇのヒトタウ（ヒトタウＥＬＩＳＡによって決定される）を含有する４匹のプールされたＡＤおよびＨＣドナーに由来する脳ホモジネートからの５００μｇのプレクリアされた溶解物を使用した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（１０μｇ）は、ポリクローナルウサギ抗ｐＳ３９６タウ抗体によって視覚化されるプレクリアされたＡＤホモジネート（抗原／ａｂ１：１００の比率）からの５４、６４、６９および７４ｋＤａタウ種（４つの病的タウバンド）およびＡＤ塗抹標本を破壊した（図９）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで破壊されたＡＤ脳に由来するタウバンドの強度を、対照ヒトＩｇＧ抗体およびＨＣ脳と比較すると、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、ＡＤ脳のみに由来するｐＳ３９６部位において過リン酸化タウを免疫沈降し、１：１００の抗原／抗体比で有効であったことが要約され得る。
非変性条件下でタウに結合するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの能力を決定するために、タウ抗体をプロテインＡ／Ｇ樹脂上へと共有結合的に架橋し、それによって、抗体汚染のないＩＰを得るタウ免疫沈降（ＩＰ）プロトコルを確立した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるタウ分析では、両方のタンパク質が５０ｋＤａ前後で検出されるため、ＩＰに使用される抗体の重鎖の存在は、シグナルを邪魔し得る。ヒト脳に由来する病的タウを破壊するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの有効性を調べた。抗原として、それぞれ０．１μｇおよび０．１５μｇのヒトタウ（ヒトタウＥＬＩＳＡによって決定される）を含有する４匹のプールされたＡＤおよびＨＣドナーに由来する脳ホモジネートからの５００μｇのプレクリアされた溶解物を使用した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（１０μｇ）は、ポリクローナルウサギ抗ｐＳ３９６タウ抗体によって視覚化されるプレクリアされたＡＤホモジネート（抗原／ａｂ１：１００の比率）からの５４、６４、６９および７４ｋＤａタウ種（４つの病的タウバンド）およびＡＤ塗抹標本を破壊した（図９）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで破壊されたＡＤ脳に由来するタウバンドの強度を、対照ヒトＩｇＧ抗体およびＨＣ脳と比較すると、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、ＡＤ脳のみに由来するｐＳ３９６部位において過リン酸化タウを免疫沈降し、１：１００の抗原／抗体比で有効であったことが要約され得る。
【0318】
細胞および凝集アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、平板培養の２４時間後に、６ウェルプレートにおいてヒトタウ－Ｐ３０１Ｌ－ＦＬＡＧで一過性にトランスフェクトし、続いて、２４時間後に、２４時間にわたって脳ホモジネートとともにインキュベートした後、細胞を分割および再度平板培養し、さらに２４時間後に収集した。細胞を溶解させ、１％のｔｒｉｔｏｎ Ｘ、Ｐｈｏｓ－ｓｔｏｐおよび完全なホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）緩衝液が補充されたＰＢＳ中で超音波処理し、３０分間にわたって１００，０００×ｇで超遠心分離した。ペレットを、ＳＤＳ中で再懸濁させ、超音波処理し、３０分間にわたって１００，０００×ｇで超遠心分離した。上清を、ウエスタンブロット法によって分析した。ヒトタウ－Ｐ３０１Ｌを発現する細胞は、ｒＴｇ４５１０タウトランスジェニックマウスに由来する総脳ホモジネートをシーディングすると、不溶性（ＳＤＳ画分、Ｅ１／ＦＬＡＧ検出）、過リン酸化（Ｄ１．２／｛Ｐ｝Ｓ３９６検出）タウを示した。
ＨＥＫ２９３細胞を、平板培養の２４時間後に、６ウェルプレートにおいてヒトタウ－Ｐ３０１Ｌ－ＦＬＡＧで一過性にトランスフェクトし、続いて、２４時間後に、２４時間にわたって脳ホモジネートとともにインキュベートした後、細胞を分割および再度平板培養し、さらに２４時間後に収集した。細胞を溶解させ、１％のｔｒｉｔｏｎ Ｘ、Ｐｈｏｓ－ｓｔｏｐおよび完全なホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）緩衝液が補充されたＰＢＳ中で超音波処理し、３０分間にわたって１００，０００×ｇで超遠心分離した。ペレットを、ＳＤＳ中で再懸濁させ、超音波処理し、３０分間にわたって１００，０００×ｇで超遠心分離した。上清を、ウエスタンブロット法によって分析した。ヒトタウ－Ｐ３０１Ｌを発現する細胞は、ｒＴｇ４５１０タウトランスジェニックマウスに由来する総脳ホモジネートをシーディングすると、不溶性（ＳＤＳ画分、Ｅ１／ＦＬＡＧ検出）、過リン酸化（Ｄ１．２／｛Ｐ｝Ｓ３９６検出）タウを示した。
【0319】
ｔＴＡマウスに由来する対照脳ホモジネートで処理された細胞は、凝集過リン酸化ヒトタウが存在しないことを示した。さらに、ＨＥＫ２９３細胞の総細胞溶解物を、Ｃｉｓｂｉｏ製のタウ凝集アッセイを用いて分析した。このアッセイは、ＦＲＥＴにおいてドナー（Ｔｂ３＋コンジュゲート）およびアクセプタ（ｄ２コンジュゲート）Ａｂの両方に同じ抗体を用いた時間分解蛍光に基づくものである。１０μｌの試料を、１０μｌの抗体混合物と混合し、２０時間インキュベートした。プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒプレートリーダーで読み取って、時間分解蛍光（励起光のスイッチング後に測定／積分される（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ）ＦＲＥＴシグナル）を評価した。アッセイは、ヒト剖検材料、ｒＴｇ４５１０マウスにおいて、および高い特異性および感度を有する播種されたＨＥＫ細胞において凝集タウを測定する。結果が図１０に示される。
【0320】
実施例７．タウの免疫枯渇
アルツハイマー病の脳抽出物を、１０倍体積の滅菌冷ＰＢＳ中の凍結された死後前頭前皮質から作製した。組織を、ナイフホモジザイナー（ｋｎｉｆｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて均質化した後、超音波処理し、出力２で５×０．９秒パルス（Ｂｒａｎｓｏｎ ｓｏｎｉｆｉｅｒ）にかけた。次に、ホモジネートを、４℃で５分間にわたって３０００ｇで遠心分離した。上清を分割し、急速凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した。
アルツハイマー病の脳抽出物を、１０倍体積の滅菌冷ＰＢＳ中の凍結された死後前頭前皮質から作製した。組織を、ナイフホモジザイナー（ｋｎｉｆｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて均質化した後、超音波処理し、出力２で５×０．９秒パルス（Ｂｒａｎｓｏｎ ｓｏｎｉｆｉｅｒ）にかけた。次に、ホモジネートを、４℃で５分間にわたって３０００ｇで遠心分離した。上清を分割し、急速凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した。
【0321】
２５μｇの抗体（ヒト化Ｃ１０－２変異体および２．１０．３、マウスＡＴ８、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｍｎ １０２０）を、１２５μｌのＭａｇｎｅｔｉｃ ｄｙｎａｂｅａｄ懸濁液（免疫沈降キットＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｎｏｖｅｘ、Ｃａｔ ｎｏ １０００７Ｄ）に固定した。十分な洗浄の後、被覆ビーズを、可変量の非被覆洗浄ビーズと混合した。５μｇの抗体に対応する１００％のＡｂ被覆ビーズから開始して、１００％の非被覆ビーズに到るまで。ビーズの総量は、全ての試料において同じであった。ビーズを、２０μｌのＡＤ抽出物と混合し、室温で１０分間インキュベートした。電磁ビーズを、抽出物から分離し、抽出物を分割し、急速凍結させ、使用するまで－８０℃で保持した。
【0322】
ウエスタンブロットを用いた枯渇の分析
試料を、１×ＬＤＳローディングバッファーおよび１００ｍＭのＤＴＴ中で沸騰させた。３μｌの抽出物に対応する体積を、４～１２％のビス－トリスＮｕＰＡＧＥ Ｇｅｌ（ＬｉｆｅＴｅｃｈ Ｎｏｖｅｘ）上に充填した。電気泳動の後、タンパク質を、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ－ＦＬ ＰＶＤＦ膜（０．４５μｍ、ＩＰＦＬ１０１００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上にブロッティングした。膜を、ＳＥＡブロッキングバッファー（Ｐｒｏｄ＃３７５２７、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてブロッキングした。タウおよびＰ－タウレベルを、タウ５を用いて試料中で評価した。Ａｂｃａｍ ａｂ８０５７９、１：２０００）マウスＣ１０－２（１μｇ／ｍｌ）、Ｐ－Ｓ１９９／２０２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ４４７６８ Ｇ、１：１０００）、Ｐ－Ｓ４２２（Ａｂｃａｍ ａｂ７９４１５、１：７５０）、ヒトＩＰＮ（１μｇ／ｍｌ）。Ｇａｐｄｈおよびアクチンを、充填対照（Ａｂｃａｍ ａｂ９４８４、１：２０００、Ｓｉｇｍａ Ａ５４４１、１：２００００）として使用した。二次フルオロフォアコンジュゲートＩｇＧ抗体を使用し（ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷヤギ抗ヒト、ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ、ヤギ抗ウサギ、ＩＲＤｙｅ ６８０ヤギ抗マウス、ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘおよびＩｍａｇｅ ｓｔｕｄｉｏソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて定量化した。全レーンにおける個々のバンドならびにシグナルの定量化を行い、これから、Ｓ字形用量反応曲線をプロットし、可能であれば、最大効果およびＥＣ５０値を推定した。
試料を、１×ＬＤＳローディングバッファーおよび１００ｍＭのＤＴＴ中で沸騰させた。３μｌの抽出物に対応する体積を、４～１２％のビス－トリスＮｕＰＡＧＥ Ｇｅｌ（ＬｉｆｅＴｅｃｈ Ｎｏｖｅｘ）上に充填した。電気泳動の後、タンパク質を、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ－ＦＬ ＰＶＤＦ膜（０．４５μｍ、ＩＰＦＬ１０１００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上にブロッティングした。膜を、ＳＥＡブロッキングバッファー（Ｐｒｏｄ＃３７５２７、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてブロッキングした。タウおよびＰ－タウレベルを、タウ５を用いて試料中で評価した。Ａｂｃａｍ ａｂ８０５７９、１：２０００）マウスＣ１０－２（１μｇ／ｍｌ）、Ｐ－Ｓ１９９／２０２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ４４７６８ Ｇ、１：１０００）、Ｐ－Ｓ４２２（Ａｂｃａｍ ａｂ７９４１５、１：７５０）、ヒトＩＰＮ（１μｇ／ｍｌ）。Ｇａｐｄｈおよびアクチンを、充填対照（Ａｂｃａｍ ａｂ９４８４、１：２０００、Ｓｉｇｍａ Ａ５４４１、１：２００００）として使用した。二次フルオロフォアコンジュゲートＩｇＧ抗体を使用し（ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷヤギ抗ヒト、ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ、ヤギ抗ウサギ、ＩＲＤｙｅ ６８０ヤギ抗マウス、ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘおよびＩｍａｇｅ ｓｔｕｄｉｏソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて定量化した。全レーンにおける個々のバンドならびにシグナルの定量化を行い、これから、Ｓ字形用量反応曲線をプロットし、可能であれば、最大効果およびＥＣ５０値を推定した。
【0323】
結果
２．１０．３およびＣ１０－２抗体は両方とも、アルツハイマーの脳の調製物からタウのごく一部を除去する。これは、総タウタンパク質含量中のタウのサブセットに対する選択性を示す。Ｐ－Ｓ４２２タウに対する特異性を有するように設計された２．１０．３は、総タウ量の最大で２４％を除去する一方、Ｃ１０－２は、総タウの最大で１５％を除去する（図１１を参照）。これは、Ｐ－Ｓ３９６サブセットが、全ての他の因子が等しいタウのより小さいサブセットであると解釈され得る。あるいは、データは、２．１０．３抗体がｐＳ４２２に対して選択的であるより、Ｃ１０－２抗体がｐＳ３９６に対してより選択的よりＰ－Ｓ３９６であると解釈され得る。
２．１０．３およびＣ１０－２抗体は両方とも、アルツハイマーの脳の調製物からタウのごく一部を除去する。これは、総タウタンパク質含量中のタウのサブセットに対する選択性を示す。Ｐ－Ｓ４２２タウに対する特異性を有するように設計された２．１０．３は、総タウ量の最大で２４％を除去する一方、Ｃ１０－２は、総タウの最大で１５％を除去する（図１１を参照）。これは、Ｐ－Ｓ３９６サブセットが、全ての他の因子が等しいタウのより小さいサブセットであると解釈され得る。あるいは、データは、２．１０．３抗体がｐＳ４２２に対して選択的であるより、Ｃ１０－２抗体がｐＳ３９６に対してより選択的よりＰ－Ｓ３９６であると解釈され得る。
【0324】
２．１０．３およびＣ１０－２は両方とも、セリン４２２においてリン酸化されたタウの９０％超を除去するが、Ｐ－Ｓ４２２タウの５０％を除去するのに必要な抗体の量は異なり、２．１０．３については、０．４２μｇの抗体が必要とされ、およびＣ１０－２については、０．２７μｇが同じ効果のために必要とされた（図１２を参照）。本発明の一実施形態において、抗体は、３８６～４０４内のエピトープに対して免疫特異的であり、ここで、ヒトタウの残基３９６がリン酸化され、１μｇ未満の抗体を用いて、Ｐ－Ｓ４２２タウの８０％が除去される（ウエスタンブロット分析による免疫枯渇試験において）。
【0325】
Ｃ１０－２は、セリン３９６においてリン酸化されたタウを効率的に除去する（最大効果：効果の８８％および半分に、０．３０μｇの抗体を用いて達する）。２．１０．３は、セリン３９６においてリン酸化されたタウをより少ない割合で除去する（最大効果：その効果の６０％および半分に、０．６３μｇの抗体を用いたときに達する）（図１３を参照）。これは、セリン４２２においてリン酸化された全てのタウが、セリン３９６においてもリン酸化されたが、過リン酸化タウの一部は、セリン３９６においてリン酸化され、ここで、位置４２２におけるリン酸化セリンが存在しないことを示す。本発明の一実施形態において、抗体は、３８６～４０４内のエピトープに対して免疫特異的であり、ここで、ヒトタウの残基３９６がリン酸化され、１μｇ未満の抗体を用いて、Ｐ－Ｓ３９６タウの８０％が除去される（ウエスタンブロット分析による免疫枯渇試験において）。
【0326】
Ｃ１０－２によって除去されるタウの大部分は、セリン１９９／２０２においてもリン酸化され、これは、そのリン酸化を有するタウの６９％が免疫枯渇によって影響されるためである（０．３４μｇの抗体を用いたときの効果の５０％）。２．１０．３免疫枯渇は、Ｐ－Ｓ１９９／２０２タウにおいてＳ字形用量反応を示さないが、シグナルの低下が、増加する量の抗体で見られる（最大量の抗体（５μｇ）を用いたときに最大５２％の低下（図１４を参照）。本発明の一実施形態において、抗体は、３８６～４０４内のエピトープに対して免疫特異的であり、ここで、ヒトタウの残基３９６がリン酸化され、１μｇ未満の抗体を用いて、Ｐ－Ｓ１９９／２０２タウの８０％が除去される（ウエスタンブロット分析による免疫枯渇試験において）。
【0327】
これらの結果は、リン酸化セリン３９６を標的にするＣ１０－２抗体が、４２２位置におけるリン酸化セリンを標的にする２．１０．３抗体より大きいプールの過リン酸化タウに結合することを示す。
【0328】
免疫枯渇後のウエスタンブロットにおける個々のバンドを調べる際、２５ｋＤａバンドが、セリン３９６においてリン酸化されたものと同定された。このフラグメントは、Ｃ１０－２によって免疫枯渇されたが、２．１０．３およびＡＴ８は、このフラグメントを枯渇しなかった（図１５を参照）。したがって、Ｃ１０－２は、アルツハイマー病の脳抽出物に由来するこの切断型のタウを除去する独自の特徴を有する。
【0329】
実施例８．Ｃ１０－２変異体の比較
全てのＣ１０－２変異体は、免疫枯渇アッセイにおいて同じ高い効率を有していた（図１６を参照）。これらは、導入された突然変異が、アルツハイマー病の脳に特有のタウへの機能的結合を減少させていないことを示す。
全てのＣ１０－２変異体は、免疫枯渇アッセイにおいて同じ高い効率を有していた（図１６を参照）。これらは、導入された突然変異が、アルツハイマー病の脳に特有のタウへの機能的結合を減少させていないことを示す。
【0330】
８ａ．播種されたｒＴｇ４５１０マウスにおける抗体処理
ＣａｍＫ２陽性ニューロン（ｒＴｇ４５１０）中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト突然変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現するトランスジェニックマウスを使用した。このモデルは、通常、３月齢でタウ病変を発生し始めるが、妊娠中および子が生まれてから最初の３週間にわたって母親にドキシサイクリンを供給することによって、病変は、より遅い段階で発生する（６月齢後に開始する）。ドキシサイクリンで予め処理されたマウスを、２月齢から開始して、１５ｍｇ／ｋｇ／週で、ｍＣ１０－２、ｈＣ１０－２、２．１０．３または対照抗体で長期的に処理した。２．５ヶ月の時点で、アルツハイマー病の脳抽出物を、海馬に注入した。マウス２０匹に、吸入剤の吸入によって麻酔をかけ、定位フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで調整した。ブレグマの２ｍｍ側方（右）および２．４ｍｍ後方で、頭蓋骨に孔を空けた。１０μｌのシリンジのベベルチップ（ＳＧＥ）を用いて、シーディング材料を、上記の配置で、脳表面の１．４ｍｍ前面に注入した。２μｌの、実施例７に記載される抽出物を、その部位（１μｌ／分）にゆっくりと注入し、シリンジを５分間そのままにして置いてから、それを取り出した。創傷を縫うことによって閉じ、目を覚ますまでマウスを加熱した。マウスを３ヶ月間飼育してから殺処分し、かん流を４％で固定。マウスを、シーディングの３ヵ月後に殺処分するまで、抗体で処理した。
ＣａｍＫ２陽性ニューロン（ｒＴｇ４５１０）中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト突然変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現するトランスジェニックマウスを使用した。このモデルは、通常、３月齢でタウ病変を発生し始めるが、妊娠中および子が生まれてから最初の３週間にわたって母親にドキシサイクリンを供給することによって、病変は、より遅い段階で発生する（６月齢後に開始する）。ドキシサイクリンで予め処理されたマウスを、２月齢から開始して、１５ｍｇ／ｋｇ／週で、ｍＣ１０－２、ｈＣ１０－２、２．１０．３または対照抗体で長期的に処理した。２．５ヶ月の時点で、アルツハイマー病の脳抽出物を、海馬に注入した。マウス２０匹に、吸入剤の吸入によって麻酔をかけ、定位フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで調整した。ブレグマの２ｍｍ側方（右）および２．４ｍｍ後方で、頭蓋骨に孔を空けた。１０μｌのシリンジのベベルチップ（ＳＧＥ）を用いて、シーディング材料を、上記の配置で、脳表面の１．４ｍｍ前面に注入した。２μｌの、実施例７に記載される抽出物を、その部位（１μｌ／分）にゆっくりと注入し、シリンジを５分間そのままにして置いてから、それを取り出した。創傷を縫うことによって閉じ、目を覚ますまでマウスを加熱した。マウスを３ヶ月間飼育してから殺処分し、かん流を４％で固定。マウスを、シーディングの３ヵ月後に殺処分するまで、抗体で処理した。
【0331】
免疫組織化学
固定された脳を、ＮＳＡ３０において３５μｍの冠状断面へと切断し、６つ置きの切片を、タウもつれ（ガリアス銀染色）について染色した。陽性染色されたニューロン（細胞体）を、全ての脳の海馬の同側および反対側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれていた。脳当たり８つの切片を計数した。結果は、８つの切片からの陽性ニューロンの合計を反映する。
固定された脳を、ＮＳＡ３０において３５μｍの冠状断面へと切断し、６つ置きの切片を、タウもつれ（ガリアス銀染色）について染色した。陽性染色されたニューロン（細胞体）を、全ての脳の海馬の同側および反対側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれていた。脳当たり８つの切片を計数した。結果は、８つの切片からの陽性ニューロンの合計を反映する。
【0332】
統計分析：群を比較すると、差異は、有意に異なっている。ここでは、ノンパラメトリック検定、クラスカル・ウォリス検定およびダンの多重比較検定を使用した。
【0333】
結果
抽出物は、同側海馬におけるもつれ病変のシーディングをもたらした。ｍＣ１０－２処理は、播種された海馬のもつれ病変を５７％だけ有意に減少させた（Ｐ＜０．０５）。ｈＣ１０－２が病変を減少させたことを示す明らかな傾向があったが、２．１０．３は、効果を示すことができなかった（図１７を参照）。
抽出物は、同側海馬におけるもつれ病変のシーディングをもたらした。ｍＣ１０－２処理は、播種された海馬のもつれ病変を５７％だけ有意に減少させた（Ｐ＜０．０５）。ｈＣ１０－２が病変を減少させたことを示す明らかな傾向があったが、２．１０．３は、効果を示すことができなかった（図１７を参照）。
【0334】
実施例９ 固定化ヒト病的材料を用いた３９６／４０４抗体のスクリーニングおよび選択
ハイブリドーマ上清を、０．１Ｍの炭酸塩緩衝液ｐＨ９を用いて、１μｇ／ｍｌのペプチドリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたｎｕｎｃプレートにおける抗体結合についてスクリーニングした。続いて、陽性上清を、それぞれＡＤおよび健常対照（ＨＣ）に由来する脳（Ｐ３ペレット）溶解物抗原で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートにおける結合のために、ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡおよび０．１のＮＰ４０中で１：５０～１：８００に希釈した。脳溶解物抗原を、ＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートのインキュベーション／コーティングの前に、０．１Ｍの炭酸塩緩衝液ｐＨ９中で１５００倍に希釈した。続いて、ウェルを、室温で２時間にわたってブロックし（ＰＢＳ、３ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．１％のＮＰ－４０）、抗体結合活性を、供給業者のプロトコルにしたがって、ＨＲＰ（ＤＡＫＯ）およびスルホタグ（ＭＳＤ、ｐｒｏｄｕｃｔ ＃）コンジュゲート抗マウスＩｇＧを用いて検出した。０．１％のＢＳＡを含むＰＢＳ中で希釈された抗体（Ｄ１－２、Ｃ５－２、Ｃ８－３およびＣ１０－２）の選択が、用量反応によって特性評価され、ＡＤ－Ｐ３抗原で被覆されたプレートに対するサブナノモルないしナノモルの結合活性が、特異的および対照ペプチドの選択に対する結合活性についてさらに特性評価されたことを示した。結果が図１９に示される。
ハイブリドーマ上清を、０．１Ｍの炭酸塩緩衝液ｐＨ９を用いて、１μｇ／ｍｌのペプチドリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたｎｕｎｃプレートにおける抗体結合についてスクリーニングした。続いて、陽性上清を、それぞれＡＤおよび健常対照（ＨＣ）に由来する脳（Ｐ３ペレット）溶解物抗原で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートにおける結合のために、ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡおよび０．１のＮＰ４０中で１：５０～１：８００に希釈した。脳溶解物抗原を、ＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートのインキュベーション／コーティングの前に、０．１Ｍの炭酸塩緩衝液ｐＨ９中で１５００倍に希釈した。続いて、ウェルを、室温で２時間にわたってブロックし（ＰＢＳ、３ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、０．１％のＮＰ－４０）、抗体結合活性を、供給業者のプロトコルにしたがって、ＨＲＰ（ＤＡＫＯ）およびスルホタグ（ＭＳＤ、ｐｒｏｄｕｃｔ ＃）コンジュゲート抗マウスＩｇＧを用いて検出した。０．１％のＢＳＡを含むＰＢＳ中で希釈された抗体（Ｄ１－２、Ｃ５－２、Ｃ８－３およびＣ１０－２）の選択が、用量反応によって特性評価され、ＡＤ－Ｐ３抗原で被覆されたプレートに対するサブナノモルないしナノモルの結合活性が、特異的および対照ペプチドの選択に対する結合活性についてさらに特性評価されたことを示した。結果が図１９に示される。
【0335】
実施例１０ ヒト網膜におけるリン酸化タウの免疫組織化学的検出
方法
ヒト網膜（男性、５０歳）が、ヒトドナーに由来する１０の器官を含むパラフィン切片の組織アレイ（ＵＳ Ｂｉｏｍａｘ、ｃａｔ．ｎｏ．ＢＮ５０１）に含まれていた。切片を、脱パラフィンし、再水和し、５分間にわたって１０ｍＭのクエン酸緩衝液ｐＨ６中で沸騰させることによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、ＰＢＳ中１％のＨ２Ｏ２で１０分間クエンチした。次に、切片を、１％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、ＰＢＳ中５％の正常ブタ血清中で２０分間インキュベートした後、１μｇ／ｍＬの一次抗体とともに、４℃で加湿したチャンバ中で一晩インキュベートした。免疫反応性を視覚化するために、切片を、ビオチン化二次ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｂ１１４０）、ストレプトアビジン－ビオチン複合体（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃ＰＫ－６１００）および最後に０．０５％のジアミノベンジジンとともにインキュベートした。最後に、切片を、ヘマトキシリンで対比染色し、カバースリップをした。
方法
ヒト網膜（男性、５０歳）が、ヒトドナーに由来する１０の器官を含むパラフィン切片の組織アレイ（ＵＳ Ｂｉｏｍａｘ、ｃａｔ．ｎｏ．ＢＮ５０１）に含まれていた。切片を、脱パラフィンし、再水和し、５分間にわたって１０ｍＭのクエン酸緩衝液ｐＨ６中で沸騰させることによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、ＰＢＳ中１％のＨ２Ｏ２で１０分間クエンチした。次に、切片を、１％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、ＰＢＳ中５％の正常ブタ血清中で２０分間インキュベートした後、１μｇ／ｍＬの一次抗体とともに、４℃で加湿したチャンバ中で一晩インキュベートした。免疫反応性を視覚化するために、切片を、ビオチン化二次ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｂ１１４０）、ストレプトアビジン－ビオチン複合体（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃ＰＫ－６１００）および最後に０．０５％のジアミノベンジジンとともにインキュベートした。最後に、切片を、ヘマトキシリンで対比染色し、カバースリップをした。
【0336】
結果
１μｇ／ｍＬのＣ１０－２、Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体は、ヒト網膜の切片を特異的に標識した。最も強い免疫反応性が、Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体で得られた。一次抗体を省略すると、シグナルが完全に消失した。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能である、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［２］
前記治療が、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減する工程を含み、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、前記もつれが除去され、過リン酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［３］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［４］
前記抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［５］
前記抗体が、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［６］
前記抗体が、
（ａ）配列番号１１を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１２を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［７］
前記変異体が、
（ａ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１２を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［８］
前記抗体が、
（ａ）配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２および配列番号２３を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［９］
（ａ）配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；および
（ｄ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１０］
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群から選択される重鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１１］
前記抗体が、配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７のいずれか１つを含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１２］
前記抗体が、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
前記Ｃ８．３抗体が、
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
前記Ｄ１．２抗体が、
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１３］
脈絡膜および網膜の疾患の治療のための薬剤の調製のための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能である、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１４］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１３に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１５］
Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント、例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ） ２ フラグメント；およびドメイン抗体、例えば単一のＶ Ｈ 可変領域またはＶ Ｌ 可変領域からなる群から選択されるエピトープ結合フラグメントを含むかまたはそれからなる、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１６］
ヒトまたはヒト化抗体またはそのエピトープ結合フラグメントである、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１７］
対象における脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法であって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。
［１８］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１７に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法。
［１９］
対象の眼内の前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用するための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物であって、前記抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物。
［２０］
患者における、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の進行を遅らせる方法であって、前記方法が、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体を投与することによって、前記患者における病的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含む、方法。
１μｇ／ｍＬのＣ１０－２、Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体は、ヒト網膜の切片を特異的に標識した。最も強い免疫反応性が、Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体で得られた。一次抗体を省略すると、シグナルが完全に消失した。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能である、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［２］
前記治療が、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減する工程を含み、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、前記もつれが除去され、過リン酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［３］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［４］
前記抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［５］
前記抗体が、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［６］
前記抗体が、
（ａ）配列番号１１を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１２を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［７］
前記変異体が、
（ａ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１２を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［８］
前記抗体が、
（ａ）配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５を含む重鎖、および
（ｂ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２および配列番号２３を含む軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［９］
（ａ）配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；および
（ｄ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１０］
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５からなる群から選択される重鎖
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１１］
前記抗体が、配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７のいずれか１つを含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１２］
前記抗体が、
（ａ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
前記Ｃ８．３抗体が、
（ａ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
前記Ｄ１．２抗体が、
（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療するためのモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１３］
脈絡膜および網膜の疾患の治療のための薬剤の調製のための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントであって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、前記モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能である、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１４］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１３に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１５］
Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖおよびジスルフィド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント、例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ） ２ フラグメント；およびドメイン抗体、例えば単一のＶ Ｈ 可変領域またはＶ Ｌ 可変領域からなる群から選択されるエピトープ結合フラグメントを含むかまたはそれからなる、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１６］
ヒトまたはヒト化抗体またはそのエピトープ結合フラグメントである、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１７］
対象における脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法であって、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。
［１８］
前記疾患が、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される、請求項１７に記載の、脈絡膜および網膜の疾患を治療、診断またはイメージングする方法。
［１９］
対象の眼内の前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用するための、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物であって、前記抗体が、Ｃ１０－２抗体、Ｃ１０－２変異体、Ｃ５．２抗体、Ｃ８．３抗体、およびＤ１．２抗体からなる群から選択される、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、あるいは前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物。
［２０］
患者における、網膜アミロイドーシス、加齢黄斑変性症（ＡＲＭＤ）、視神経症に関連する網膜神経節細胞神経変性（緑内障、乾燥型ＡＲＭＤおよび滲出型ＡＲＭＤを含む）からなる群から選択される脈絡膜および網膜の疾患の進行を遅らせる方法であって、前記方法が、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されていない場合に残基４０４においてリン酸化された配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６に免疫特異的に結合することが可能な抗体を投与することによって、前記患者における病的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含む、方法。
【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19-1】
【図19-2】
【配列表】