特許 7221691 Ｔ細胞媒介性同種移植片血管障害の増悪を抑制する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-02-06

(45)【発行日】2023-02-14

(54)【発明の名称】Ｔ細胞媒介性同種移植片血管障害の増悪を抑制する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230207BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20230207BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230207BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230207BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 39/095 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/56 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/52 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/5377 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 38/13 20060101ALI20230207BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20230207BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20230207BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61K39/395 D

A61P9/10

A61P9/00

A61P37/06

A61P43/00 105

A61P43/00 121

A61K39/095

A61K45/00

A61K31/56

A61K31/52

A61K31/5377

A61K31/519

A61K31/436

A61K38/13

A61K31/675

C07K16/18

【請求項の数】 20

(21)【出願番号】P 2018542983

(86)(22)【出願日】2016-10-28

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-01-17

(86)【国際出願番号】 US2016059279

(87)【国際公開番号】W WO2017075325

(87)【国際公開日】2017-05-04

【審査請求日】2019-10-24

(31)【優先権主張番号】62/248,873

(32)【優先日】2015-10-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/321,632

(32)【優先日】2016-04-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】503102674

【氏名又は名称】アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド

(73)【特許権者】

【識別番号】515183023

【氏名又は名称】イェール ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ポバー、ヨルダン

(72)【発明者】

【氏名】ジェーン － ウイット、ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】シン、リンフェン

(72)【発明者】

【氏名】ワン、イー

【審査官】池上 文緒

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１２－５０８２６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／０２３９７２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１５／１３４８９４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００９－５２８３６９（ＪＰ，Ａ）

【文献】Am. J. Transplant. (2011) vol.11, issue7, p.1397-1406

【文献】Nat. Rev. Immunol. (2012) vol.12, no.6, p.431-442

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｐ ９／００

Ａ６１Ｐ ９／１０

Ａ６１Ｐ ３７／０６

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性新生内膜病変を治療するための医薬組成物であって、
該医薬組成物は、Ｃ５に結合しＣ５が断片Ｃ５ａおよびＣ５ｂに切断されるのを阻害する抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を含み、
該医薬組成物は、ドナーからの同種移植片を移植されたレシピエントに投与され、
前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の投与は、
同種移植片の微小血管および大口径血管においてＩＲ障害によって誘導される膜侵襲複合体の集合、
ＩＲによって誘導される同種移植片における非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化、
ＩＲ障害によって誘導されるＮＩＫ発現、および／または
同種移植片の血管にＴ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を形成すること、
のうちの一つまたは複数の減少を達成し、それによって哺乳動物移植レシピエントにおけるＴ細胞媒介性新生内膜病変を治療する、上記医薬組成物。

【請求項2】

前記医薬組成物の投与前に、抗髄膜炎菌ワクチンおよび／または抗生物質が前記レシピエントに投与される、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

副腎皮質ステロイド、アザチオプリン（ＡＺＡ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、メトトレキサート、タクロリムス、シクロスポリン、およびシクロホスファミドからなる群から選択される１種以上の免疫抑制剤を併用する、請求項１～２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記医薬組成物が、静脈内投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記哺乳動物移植レシピエントは、ヒトレシピエントである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記抗Ｃ５抗体は、エクリズマブまたはラブリズマブである、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記抗Ｃ５抗体は、ＢＮＪ４２１である、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載される配列を有するＶ_Ｈドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶ_Ｌドメインをそれぞれ含む、請求項１～５及び８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、１８、および３にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む、請求項１～５及び１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項17】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、および２３にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号２４、２５、および２６にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項18】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号２８に記載される配列を有するＶＬドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項19】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、および３１にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号３２、３３、および３４にそれぞれ記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号３６に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１６年１０月２８日に作成され、ＡＬＸＮ３４５ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、４０，６３８バイトの大きさである。

【0002】

本発明は、固形臓器移植の分野に関し、より具体的には、同種移植片血管障害を治療および予防する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

固形臓器同種移植片の寿命は、移植血管の至るところに不可逆的狭窄を形成する状態である同種移植片血管障害（ＡＶ）によってたびたび制限される。ＡＶ病変は、心臓（Ｂｅｙｇｕｉ Ｆ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１０；２９：３１６－３２２、Ｌｅｅ ＭＳ ｅｔ ａｌ．Ｃａｒｄｉａｃ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ ２０１１；１２：１４３－１５２、Ｃｏｓｔｅｌｌｏ ＪＰ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｘ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｓｔ Ｊ ２０１３；４０：３９５－３９９、Ｈｏｌｌｉｓ ＩＢ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ２０１５；３５：４８９－５０１）、腎臓（Ｂａｇｎａｓｃｏ ＳＭ，Ｋｒａｕｓ ＥＳ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１５；２０：３４３－３４７、Ｇｕｐｔａ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２０１４；９７：１２４０－１２４６）、および複合同種移植片（Ｍｕｎｄｉｎｇｅｒ ＧＳ，Ｄｒａｃｈｅｎｂｅｒｇ ＣＢ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１４；１９：３０９－１４、Ｕｎａｄｋａｔ ＪＶ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２００９；１０：２５１－２６１、Ｕｎａｄｋａｔ ＪＶ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ ２００９；４１：５４２－５４５）に観察されており、それらは後期移植片喪失に実質的に寄与する。ＡＶ病変は、２つの異なる形態で生じる。第１の最もよく特徴づけられた形態において、罹患血管は、Ｔ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を含む。Ｐｏｂｅｒ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．２０１４；３４：１６０９－１６１４。同様の外観の新生内膜病変は、ヒトＩＦＮ－γ（Ｔｅｌｌｉｄｅｓ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０３：２０７－１１）またはＩＦＮ－γ産生ヒトＴ細胞（Ｓｈｉａｏ ＳＬ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７；１７９：４３９７－４０４）に応答してヒト動脈セグメントに誘導することができる。より最近認識されたＡＶの形態では、内腔上皮細胞（ＥＣ）が凝固カスケードを局所的に活性化し（Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１３；１２８：２５０４－２５１６）、閉塞性血栓を引き起こす（Ｙｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０１２；３２：３５３－３６０、Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１５；１１２：９６８６－９６９１）。微小血管および大口径血管に影響を及ぼす血栓性ＡＶ病変（Ｍｉｗａ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；１９０：３５５２－３５５９）は、長期移植片転帰の悪化と関連している（Ｅｌｖｉｎｇｔｏｎ Ａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；１８９：４６４０－４６４７）。

【0004】

ＡＶの治療または予防を適応とする承認された治療薬が存在しない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本開示は、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植することと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与することとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法を提供する。

【0006】

本開示はまた、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、哺乳動物同種移植片ドナーおよび同種移植片レシピエントを選択するステップと、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植するステップと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与するステップとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法を提供する。

【0007】

別の実施形態において、同種移植片を移植するステップの前に、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片で同種移植片を前処置するステップを含む、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法が提供される。

【0008】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に対する虚血再灌流（ＩＲ）障害の可能性を低減する。

【0009】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）によって誘導される同種移植損傷の可能性を低減する。

【0010】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、移植関連ＩＲ障害の血栓性合併症の可能性を低減する。

【0011】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の微小血管および大口径血管においてＩＲ障害によって誘導される膜侵襲複合体の集合の可能性を低減する。

【0012】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲによって誘導される同種移植片における非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化の可能性を低減する。

【0013】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲ障害によって誘導されるＮＩＫ発現の可能性を低減する。

【0014】

別の実施形態において、レシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管にＴ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を形成する可能性を低減する。

【0015】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片でレシピエントを処置すること、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片で同種移植片を処置することは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管に塞栓性血栓を形成する可能性を低減する。

【0016】

別の実施形態において、本開示は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を投与する前に、抗髄膜炎菌ワクチンおよび／または抗生物質をレシピエントに投与するステップを含む、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法を提供する。

【0017】

別の実施形態において、本開示は、レシピエントに免疫抑制剤を投与するステップを含み、免疫抑制剤は、併用療法においてまたは単剤療法として、副腎皮質ステロイド、アザチオプリン（ＡＺＡ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、メトトレキサート、タクロリムス、シクロスポリン、またはシクロホスファミドからなる群から選択される、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法を提供する。

【0018】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、静脈内投与される。

【0019】

別の実施形態において、哺乳動物移植レシピエントは、ヒトレシピエントである。

【0020】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、エクリズマブである。

【0021】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ＢＮＪ４４１である。

【0022】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ＢＮＪ４２１である。

【0023】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む。

【0024】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む。

【0025】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。

【0026】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む。

【0027】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、１８、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む。

【0028】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む。

【0029】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。

【0030】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む。

【0031】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む。

【0032】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、および２３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号２４、２５、および２６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む。

【0033】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号２８に記載される配列を有するＶＬドメインを含む。

【0034】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、および３１にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号３２、３３、および３４にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む。

【0035】

別の実施形態において、本開示は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３５に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号３６に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含むことを提供する。

【0036】

別の実施形態において、本開示は、哺乳動物移植レシピエントの同種移植片における同種移植片血管障害病変の形成を予防するためのキットであって、キットは、ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片と、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法において抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を使用するための指示と、注射器とを含む、キットを提供する。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】図１は、終末補体活性化が起こらない場合、抗Ｃ５ｍＡｂはＴ細胞媒介性ＡＶに対して免疫調節作用を発揮しないことを示している。

【図2】図２は、ＭＡＣ集合の阻止、および抗Ｃ５ｍＡｂによってＣ５ａが産生されないことが、ＤＳＡに応答するＥＣの活性化を減弱させることを示している。

【図3】図３は、抗Ｃ５抗体が、同種抗体誘導性の補体活性化後の新生内膜病変を縮小させることを示している。

【図4】図４は、ＩＲＩが補体を活性化し、標的細胞を顕著に喪失することなく動脈壁におけるＭＡＣの形成を誘導することを示している。

【図5】図５は、終末補体の阻害が、ＩＲＩによって誘導されるＭＡＣの形成、非標準的ＮＦ－κＢ、およびＥＣの活性化を抑制することを示している。

【図6】図６は、抗Ｃ５抗体がＩＲＩ後の新生内膜病変および血栓性ＡＶ病変を軽減することを示す実験の結果を示している。

【図7】図７は、下行大動脈に移植された冠動脈介在移植片を有するナイーブＳＣＩＤ／ｂｇマウスが、１８時間後の移植片採取および免疫蛍光法による分析の前にＰＲＡ血清の静脈内注射を受けたことを示す（ｎ＝３の処置対）。Ｃ５ａ活性レベルは、抗Ｃ５ａ ｍＡｂ ＣＬＳ０２６またはアイソタイプ対照ｍＡｂ ＭＯＰＣ１をブロックすることによる処置後、図２ｇに示すように移植片採取時のマウス血漿において評価した（ｎ＝３の処置対）。

【図8】図８は、外植され、無酸素条件下で図示される期間臓器培養され、低酸素プローブのために染色された冠動脈移植片を示している（各時点でｎ＝５のマウス）。スケールバーは６３μｍを示す。

【図9】図９は、外植され、無酸素条件下で１２時間臓器培養され、次いで、第２のセットのナイーブＳＣＩＤ／ｂｇ宿主に再移植された冠動脈移植片を示している。再移植の１８時間後に移植片を採取し、ヒト動脈移植片とマウス下行大動脈組織との境界を示す遠位縫合線に隣接する一連の切片を免疫蛍光分析のために採取した。

【発明を実施するための形態】

【0038】

定義

【0039】

本明細書で使用される場合、名詞の前の「１つの（ａ）」または「複数の（ｐｌｕｒａｌｉｔｙ）」という語は、１つ以上の特定の名詞を表す。例えば、「１つの哺乳動物細胞（ａ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ）」という表現は、「１つ以上の哺乳動物細胞」を表す。

【0040】

本明細書で使用される場合、「補体媒介性損傷」という用語は、補体活性化が観察可能または測定可能な形で疾患の病理に寄与する病態を指す。例えば、補体媒介性損傷は、補体活性化による細胞の破壊によって特徴づけることができる。

【0041】

本明細書で使用される場合、「リスクを減少させる」または「可能性を向上させる」という用語は、ある事象の発生率における統計的に有意な量の変化を指す。例えば、一実施形態において、減少させるは、ある事象を部分的にまたは完全に予防することを指す。一実施形態において、「減少させる」は、基準レベルと比較して少なくとも１０％の減少、例えば、少なくとも約１５％、もしくは少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約２５％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約３５％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約４５％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約５５％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約６５％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約７５％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約８５％、もしくは少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％の減少、または基準試料と比較して１００％以下の減少、または基準レベルと比較して１０～１００％の任意の減少を意味する。

【0042】

本明細書で使用される場合、「血管障害」という用語は、血管に影響を及ぼす任意の疾患を指す。「血栓」または「血栓性」という用語は、循環器系を通る血液の流れを妨げる、血管内における血液の凝集またはその形成を指す。「狭窄」または「狭窄の」という用語は、循環器系を通る血液の流れを妨げる、血管内における血液の凝集またはその形成を指す。

【0043】

本明細書で使用される場合、「罹患率を減少させる」および「機能を改善する」という用語は、有益な効果、例えば、ベースラインを上回る寛解または改善を指す。しばしば、ベースラインを上回る改善は、統計的に有意である。例えば、「罹患率を減少させる」および「機能を改善する」は、基準レベルと比較して少なくとも１０％の寛解、例えば、少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の改善、または基準レベルと比較して１００％以下の改善、または基準レベルと比較して１０～１００％の任意の改善、あるいは、少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約６倍、もしくは少なくとも約７倍、もしくは少なくとも約８倍、もしくは少なくとも約９倍、もしくは少なくとも約１０倍の改善、または基準レベルと比較して２倍～１０倍もしくはそれ以上の任意の改善を指してもよい。

【0044】

本明細書で使用される場合、「移植」という用語は、ヒトまたは非ヒト動物レシピエントにおける臓器、例えば、腎臓の交換を指す。交換の目的は、宿主の罹患臓器または組織を除去し、ドナーからの健康な臓器または組織と交換することである。ドナーとレシピエントが同じ種である場合、その移植は「同種移植」として知られる。ドナーとレシピエントが異なる種である場合、その移植は「異種移植」として知られる。移植に必要な技術は様々であり、移植される臓器の性質に大きく左右される。治療形態としての移植の成功は、多くの考えられる生理学的帰結に依存する。例えば、宿主は、抗体依存性超急性拒絶反応機構、細胞媒介性急性拒絶反応、または慢性変性過程を介して新しい臓器を拒絶する場合がある。

【0045】

本明細書で使用される場合、「再灌流」という用語は、臓器または組織（例えば、腎臓）に血流を回復させる行為を指す。再灌流障害または虚血再灌流障害（「ＩＲ障害」）は、虚血または酸素欠乏の期間後に血液供給が組織に戻るときに引き起こされる組織損傷である。虚血期間中に血液からの酸素および栄養が不足することにより、循環の回復が、正常な機能の回復よりもむしろ酸化ストレスの誘導を通して炎症および酸化的損傷をもたらす状態が作り出される。死亡ドナーからの腎臓は、回収前に生体ドナーと比較してはるかに大きな虚血損傷を受けており、適切な初期機能および長期機能の可能性低減を示す。Ｋｏｓｉｅｒａｄｚｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．２００８ Ｄｅｃ；４０（１０）：３２７９－８８。臓器および組織の再灌流のための技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１１／００２９２６号、ならびに米国特許第５，７２３，２８２号および同第５，６９９，７９３号に開示されている。

【0046】

レシピエントに関連して使用される「感作させた」という用語は、提供臓器等の異組織に対して反応する例外的に高い抗体レベルを有するレシピエントを指す。

【0047】

本明細書で使用される「拒絶反応」という用語は、臓器移植レシピエントの免疫応答が、移植された臓器、細胞、または組織に対して、臓器の正常な機能を損なうまたは破壊するのに十分な反応を開始する単数または複数のプロセスを指す。免疫系の応答は、特異的（抗体およびＴ細胞依存性）または非特異的（食作用性、補体依存性等）機構、またはその両方に関与し得る。

【0048】

「有効量」という用語は、所望の生物学的、治療的、および／または予防的結果を提供する薬剤の量を指す。その結果は、ＩＲ障害の徴候もしくは症状のうちの１つ以上の軽減、寛解、緩和、低下、遅延、および／または生物系の任意の他の所望の変化であり得る。

【0049】

「抗体」という用語は、当該技術分野で既知である。端的に述べると、それは、２つの軽鎖ポリペプチドおよび２つの重鎖ポリペプチドを含む全抗体を指す。全抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体を含む異なる抗体アイソタイプを含む。「抗体」という用語は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化またはキメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化抗体、および完全ヒト抗体を含む。抗体は、様々な種、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、オランウータン、ヒヒ、またはチンパンジー）、ウマ、ラマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラット、およびマウス等の哺乳動物のいずれかにおいて作製され得るか、またはそれらに由来し得る。抗体は、精製抗体および／または組換え抗体であってもよい。

【0050】

「ドナー」という用語は、全脳機能を不可逆的に喪失した死亡した個体を指す。これは、落下、交通事故、または脳卒中等の損傷後に起こり得る。不可逆性の確認、および全脳機能が失われたことの確認は、長期間にわたって繰り返し行われる確認試験の後にのみなされる。

【0051】

「ドナー特異的抗体」、ＤＳＡ、または「同種抗体」という用語は、ドナー細胞に対して特異的に産生される、抗ＨＬＡ抗体である抗体を指す。

【0052】

「虚血再灌流障害」という用語は、虚血または酸素欠乏（無酸素、低酸素）の期間後に血液供給が組織に戻るときに引き起こされる組織損傷を指す。

【0053】

「例えば」および「等」という用語、ならびにそれらの文法的等価物について、別途明確に記載されない限り、「それらに限定されない」という句が後に続くものと理解されたい。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、実験誤差による変動を説明することが意図される。本明細書において報告される全ての測定値は、別途明示的に記載されない限り、その用語が明示的に用いられているかどうかにかかわらず、「約」という用語によって修飾されていると理解されたい。本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。

【0054】

別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。方法および材料が本明細書において使用するために本明細書に記載されるが、当該技術分野で既知の他の好適な方法および材料も使用され得る。材料、方法、および例は、例示に過ぎず、限定的であることを意図するものではない。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、および他の参考文献は、その全体が参照によって組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先する。

【0055】

補体系

【0056】

補体系は、細胞病原体およびウイルス病原体の侵入に対して防御するために、体の他の免疫系と併せて作用する。少なくとも２５の補体タンパク質が存在し、それらは血漿タンパク質および膜補因子の複合体の集合として見出される。血漿タンパク質は、脊椎動物血清中のグロブリンの約１０％を構成する。補体成分は、一連の複雑であるが正確な酵素的切断および膜結合事象において相互作用することにより、それらの免疫防御機能を達成する。その結果得られた補体カスケードは、オプソニン機能、免疫調節機能、および溶解機能を有する生成物の生成をもたらす。補体活性化に関連する生物活性の簡潔な概要は、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，１６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎに提供される。

【0057】

補体カスケードは、古典的経路（ＣＰ）、レクチン経路、または代替経路（ＡＰ）を介して進行することができる。レクチン経路は、典型的には、マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）の高マンノース基質への結合によって開始される。ＡＰは、抗体非依存性であり得、病原体表面上の特定の分子によって開始され得る。ＣＰは、典型的には、標的細胞上の抗原部位の抗体認識および抗原部位への結合によって開始される。これらの経路は、補体成分Ｃ３が活性プロテアーゼによって切断されてＣ３ａおよびＣ３ｂを生じる点であるＣ３転換酵素で合流する。

【0058】

ＡＰ Ｃ３転換酵素は、血液の血漿分画中に豊富な補体成分Ｃ３の自然加水分解によって開始される。「チックオーバー」としても知られるこのプロセスは、Ｃ３中のチオエステル結合の自然切断によって起こり、Ｃ３ｉまたはＣ３（Ｈ２Ｏ）を形成する。チックオーバーは、活性化されたＣ３の結合を支持する、および／または中性もしくは陽性電荷特性を有する表面（例えば、細菌細胞表面）の存在によって促進される。このＣ３（Ｈ２Ｏ）の形成は、血漿タンパク質Ｂ因子の結合を可能にし、それによって今度はＤ因子がＢ因子をＢａおよびＢｂに切断することが可能となる。Ｂｂ断片は、Ｃ３に結合した状態に留まり、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）Ｂｂを含有する複合体である「流体相」または「開始」Ｃ３転換酵素を形成する。流体相Ｃ３転換酵素は、少量しか生成されないが、複数のＣ３タンパク質をＣ３ａおよびＣ３ｂに切断することができ、Ｃ３ｂの産生およびそれに続く表面（例えば、細菌表面）へのＣ３ｂの共有結合をもたらす。表面に結合したＣ３ｂに結合したＢ因子はＤ因子によって切断され、それによってＣ３ｂ，Ｂｂを含有する表面結合したＡＰ Ｃ３転換酵素複合体を形成する。（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｅｂｅｒｈａｒｄ（１９８８）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５７：３２１－３４７を参照されたい。）

【0059】

ＡＰ Ｃ５転換酵素（Ｃ３ｂ）２，Ｂｂは、第２のＣ３ｂモノマーがＡＰ Ｃ３転換酵素に付加されるときに形成される。（例えば、Ｍｅｄｉｃｕｓ ｅｔ ａｌ．（１９７６）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １４４：１０７６－１０９３およびＦｅａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １４２：８５６－８６３を参照されたい。）第２のＣ３ｂ分子の役割は、Ｃ５に結合し、Ｂｂによる切断のためにそれを提示することである。（例えば、Ｉｓｅｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２４：３２６－３３１を参照されたい。）ＡＰ Ｃ３およびＣ５転換酵素は、例えば、上記Ｍｅｄｉｃｕｓ ｅｔ ａｌ．（１９７６）に記載されるように三量体タンパク質プロパージンの付加によって安定化される。しかしながら、プロパージンの結合は、機能的な代替経路Ｃ３またはＣ５転換酵素を形成するために必要ではない。（例えば、Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７５：３９４８－３９５２およびＳｉｓｓｏｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：５５９－５６２を参照されたい）。

【0060】

ＣＰ Ｃ３転換酵素は、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、およびＣ１ｓの複合体である補体成分Ｃ１と、標的抗原（例えば、微生物抗原）に結合した抗体とが相互作用するときに形成される。Ｃ１のＣ１ｑ部分の抗体－抗原複合体への結合は、Ｃ１ｒを活性化するＣ１における立体構造変化を引き起こす。活性なＣ１ｒは、次いで、Ｃ１に関連するＣ１ｓを切断し、それによって活性なセリンプロテアーゼを産生する。活性なＣ１ｓは、補体成分Ｃ４をＣ４ｂおよびＣ４ａに切断する。Ｃ３ｂと同様に、新しく産生されたＣ４ｂ断片は、標的表面（例えば、微生物細胞表面）上の好適な分子とアミド結合またはエステル結合を容易に形成する高反応性のチオールを含有する。Ｃ１ｓはまた、補体成分Ｃ２をＣ２ｂおよびＣ２ａに切断する。Ｃ４ｂおよびＣ２ａによって形成された複合体は、ＣＰ Ｃ３転換酵素であり、Ｃ３をＣ３ａおよびＣ３ｂにプロセシングすることができる。ＣＰ Ｃ５転換酵素であるＣ４ｂ、Ｃ２ａ、Ｃ３ｂは、Ｃ３ｂモノマーがＣＰ Ｃ３転換酵素に付加されるときに形成される。（例えば、上記Ｍｕｌｌｅｒ－Ｅｂｅｒｈａｒｄ（１９８８）およびＣｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：７７５－７９３を参照されたい。）

【0061】

Ｃ３およびＣ５転換酵素におけるその役割に加えて、Ｃ３ｂはまた、マクロファージおよび樹状細胞等の抗原提示細胞の表面上に存在する補体受容体との相互作用によってオプソニンとしても機能する。Ｃ３ｂのオプソニン機能は、一般に、補体系の最も重要な抗感染機能のうちの１つであると考えられる。Ｃ３ｂ機能を抑制する遺伝子病変を有する患者は、幅広い病原体に易感染性を示すが、補体カスケードシーケンスのより後の方に病変を有する患者、すなわち、Ｃ５機能を抑制する病変を有する患者は、ナイセリア感染症にのみ易感染性を示し、その場合も若干感染しやすいだけであることが分かっている。

【0062】

ＡＰおよびＣＰ Ｃ５転換酵素は、Ｃ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。Ｃ５の切断は、強力なアナフィラトキシンおよび走化性因子であるＣ５ａ、ならびに溶解終末補体複合体Ｃ５ｂ－９の形成を可能にするＣ５ｂを放出する。Ｃ５ｂは、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８と組み合わさって、標的細胞の表面にＣ５ｂ－８複合体を形成する。いくつかのＣ９分子が結合すると、膜侵襲複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ－９、終末補体複合体ＴＣＣ）が形成される。十分な数のＭＡＣが標的細胞膜に挿入すると、それらが作り出す開口部（ＭＡＣ孔）が標的細胞の急速な浸透圧溶解を媒介する。

【0063】

抗Ｃ５抗体

【0064】

本明細書に記載される抗Ｃ５抗体は、補体成分Ｃ５（例えば、ヒトＣ５）に結合し、Ｃ５が断片Ｃ５ａおよびＣ５ｂに切断されるのを阻害する。本発明における使用に適した抗Ｃ５抗体（またはそれに由来するＶＨ／ＶＬドメイン）は、当該技術分野で周知の方法を用いて産生することができる。代替として、当該技術分野において承認されている抗Ｃ５抗体が使用されてもよい。これらの当該技術分野において承認されている抗体のいずれかとＣ５への結合について競合する抗体もまた、使用され得る。

【0065】

例示的な抗Ｃ５抗体は、配列番号１０および１１にそれぞれ示される配列を有する重鎖および軽鎖を含むエクリズマブ、またはその抗原結合断片および変異体である。エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）としても知られる）は、米国特許第６，３５５，２４５号に記載されている。エクリズマブは、終末補体阻害剤であるヒト化モノクローナル抗体である。

【0066】

他の実施形態において、抗体は、エクリズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。したがって、一実施形態において、抗体は、配列番号７に記載される配列を有するエクリズマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号８に記載される配列を有するエクリズマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号７および配列番号８にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む。

【0067】

別の例示的な抗Ｃ５抗体は、配列番号１４および１１にそれぞれ示される配列番号を有する重鎖および軽鎖を含む抗体ＢＮＪ４４１、またはその抗原結合断片および変異体である。ＢＮＪ４４１（ＡＬＸＮ１２１０としても知られる）は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１９２２５および米国特許第９，０７９，９４９号に記載されている。ＢＮＪ４４１は、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））に構造的に関連するヒト化モノクローナル抗体である。ＢＮＪ４４１は、ヒト補体タンパク質Ｃ５に選択的に結合し、補体活性化中にそれがＣ５ａおよびＣ５ｂに切断されるのを阻害する。この阻害は、炎症誘発性メディエーターＣ５ａの放出、および細胞溶解性孔を形成する膜侵襲複合体Ｃ５ｂ－９の形成を防止する一方で、微生物のオプソニン作用および免疫複合体のクリアランスに必要不可欠な補体活性化の近位または初期成分（例えば、Ｃ３およびＣ３ｂ）を保存する。

【0068】

他の実施形態において、抗体は、ＢＮＪ４４１の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。したがって、一実施形態において、抗体は、配列番号１２に記載される配列を有するＢＮＪ４４１のＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号８に記載される配列を有するＢＮＪ４４１のＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１９、１８、および３にそれぞれ記載される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１２および配列番号８にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有するＢＮＪ４４１の重鎖定常領域を含んでもよい。

【0069】

別の例示的な抗Ｃ５抗体は、配列番号２０および１１にそれぞれ示される配列を有する重鎖および軽鎖を含む抗体ＢＮＪ４２１、またはその抗原結合断片および変異体である。ＢＮＪ４２１（ＡＬＸＮ１２１１としても知られる）は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１９２２５および米国特許第９，０７９，９４９号に記載されており、その教示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0070】

他の実施形態において、抗体は、ＢＮＪ４２１の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。したがって、一実施形態において、抗体は、配列番号１２に記載される配列を有するＢＮＪ４２１のＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号８に記載される配列を有するＢＮＪ４２１のＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１９、１８、および３にそれぞれ記載される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号１２および配列番号８にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を有するＢＮＪ４２１の重鎖定常領域を含んでもよい。

【0071】

別の例示的な抗Ｃ５抗体は、米国特許第８，２４１，６２８号および同第８，８８３，１５８号に記載される７０８６抗体である。一実施形態において、抗体は、７０８６抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含んでもよい。米国特許第８，２４１，６２８号および同第８，８８３，１５８号を参照されたい。別の実施形態において、抗体またはその断片は、配列番号２１、２２、および２３にそれぞれ記載される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号２４、２５、および２６にそれぞれ記載される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７に記載される配列を有する７０８６抗体のＶＨ領域と、配列番号２８に記載される配列を有する７０８６抗体のＶＬ領域とを含んでもよい。

【0072】

別の例示的な抗Ｃ５抗体は、同様に米国特許第８，２４１，６２８号および同第８，８８３，１５８号に記載される８１１０抗体である。一実施形態において、抗体は、８１１０抗体の重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、および３１にそれぞれ記載される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号３２、３３、および３４にそれぞれ記載される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含んでもよい。別の実施形態において、抗体は、配列番号３５に記載される配列を有する８１１０抗体のＶＨ領域と、配列番号３６に記載される配列を有する８１１０抗体のＶＬ領域とを含む。

【0073】

ＣＤＲの正確な境界は、異なる方法に応じて異なって定義されてきた。いくつかの実施形態において、軽鎖または重鎖可変ドメイン内のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．［（１９９１）“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．”ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ］によって定義される通りであり得る。そのような場合、ＣＤＲは「Ｋａｂａｔ ＣＤＲ」（例えば、「Ｋａｂａｔ ＬＣＤＲ２」または「Ｋａｂａｔ ＨＣＤＲ１」）と称されてもよい。いくつかの実施形態において、軽鎖および重鎖可変領域のＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３によって定義される通りであり得る。したがって、これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」（例えば、「Ｃｈｏｔｈｉａ ＬＣＤＲ２」または「Ｃｈｏｔｈｉａ ＨＣＤＲ３」）と称されてもよい。いくつかの実施形態において、軽鎖および重鎖可変領域のＣＤＲの位置は、Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａを組み合わせた定義に定義される通りであり得る。そのような実施形態において、これらの領域は、「Ｋａｂａｔ－Ｃｈｏｔｈｉａの組み合わせＣＤＲ」と称されてもよい。Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．［（１９９６）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３３（１７／１８）：１３８９－１４０１］は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義によるＣＤＲ境界の特定を例示している。

【0074】

抗体がタンパク質抗原に結合するかどうか、および／または抗体のタンパク質抗原に対する親和性を決定するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、抗体のタンパク質抗原への結合は、限定されないが、ウェスタンブロット、ドットブロット、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、または酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等の様々な技術を用いて検出および／または定量化することができる。例えば、Ｂｅｎｎｙ Ｋ．Ｃ．Ｌｏ（２００４）“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（ＩＳＢＮ：１５８８２９０９２１）、Ｊｏｈｎｅ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ １６０：１９１－１９８、Ｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ Ｂｉｏｌ Ｃｌｉｎ ５１：１９－２６、およびＪｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０－６２７を参照されたい。

【0075】

一実施形態において、抗体は、本明細書に記載される抗体と同じＣ５上のエピトープとの結合について競合する、かつ／または該エピトープに結合する。２つ以上の抗体に関連して「同じエピトープに結合する」という用語は、所与の方法によって決定されるように、抗体がアミノ酸残基の同じセグメントに結合することを意味する。抗体が本明細書に記載される抗体と「Ｃ５上の同じエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術は、例えば、エピトープマッピング法、例えば、エピトープの原子分解を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析、および水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。他の方法は、ペプチド抗原フラグメントまたは抗原の突然変異した異形への抗体の結合を監視し、その場合、抗原配列中のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失が、しばしばエピトープ成分の指標であると見なされる。さらに、エピトープマッピングのための計算コンビナトリアル法も使用することができる。これらの方法は、対象となる抗体が、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特異的短ペプチドを親和性単離する能力に依存する。同じＶＨおよびＶＬまたは同じＣＤＲ１、２、および３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合すると予測される。

【0076】

「標的への結合について別の抗体と競合する」抗体は、他の抗体の標的への結合を（部分的にまたは完全に）阻害する抗体を指す。２つの抗体が標的への結合について互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が他方の抗体の標的への結合を阻害するかどうか、およびどの程度阻害するかは、既知の競合実験を用いて決定され得る。特定の実施形態において、抗体は、別の抗体の標的への結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％競合し、かつ阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、最初に標的とともにインキュベートされる冷抗体）であるかに応じて異なり得る。競合する抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、または隣接するエピトープに結合する（例えば、立体障害によって明らかになるように）。本明細書に記載される方法に使用される、本明細書に記載される抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、様々な当該技術分野において承認されている技術を用いて産生することができる。

【0077】

モノクローナル抗体は、当業者によく知られる種々の技術によって得ることができる。端的に述べると、所望の抗原で免疫した動物の脾臓細胞が、一般的には骨髄腫細胞との融合によって不死化される（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１－５１９（１９７６）を参照されたい）。代替の不死化方法は、エプスタイン・バーウイルス、癌遺伝子、もしくはレトロウイルスによる形質転換、または当該技術分野で周知の他の方法を含む。単一の不死化細胞から生じるコロニーが、抗原に対する所望の特異性および親和性の抗体の産生についてスクリーニングされ、そのような細胞によって産生されるモノクローナル抗体の収率は、脊椎動物宿主の腹膜腔内への注射を含む種々の技術によって高めることができる。代替として、Ｈｕｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１（１９８９）によって概説される一般的なプロトコルに従ってヒトＢ細胞からのＤＮＡライブラリをスクリーニングすることにより、モノクローナル抗体またはその結合断片をコードするＤＮＡ配列を単離してもよい。

【0078】

組成物および製剤

【0079】

抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を含む組成物もまた、開示される方法に使用するために本明細書に提供される。

【0080】

一般に、抗Ｃ５抗体は、薬学的組成物として配合され得る。組成物は、一般に、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を指し、また含む。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照されたい）。

【0081】

組成物は、標準的な方法に従って配合され得る。薬学的配合は、十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，”７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、およびＫｉｂｂｅ（２０００）“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，”３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載されている。

【0082】

組成物は、例えば、補体関連疾患の治療または予防のために対象に投与するための、薬学的溶液として配合され得る。薬学的組成物は、一般に、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を指し、かつ含む。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩、糖、炭水化物、ポリオール、および／または浸透圧調整剤を含むことができる。

【0083】

いくつかの実施形態において、組成物は、例えば、好適な濃度の、２～８℃（例えば、４℃）での保存に適した緩衝溶液として配合され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、０℃未満の温度（例えば、－２０℃または－８０℃）での保存のために配合され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、２～８℃（例えば、４℃）で最長２年間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１年半、または２年）の保存のために配合され得る。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、２～８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間の保存において安定である。

【0084】

薬学的組成物は、様々な形態であり得る。これらの形態は、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば液体溶液（例えば、注射溶液および注入溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、散剤、リポソーム、および坐剤を含む。好ましい形態は、意図される投与様式および治療用途に一部依存する。例えば、全身または局所送達を目的とした組成物を含有する組成物は、注射溶液または注入溶液の形態であり得る。したがって、組成物は、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）による投与のために配合され得る。「非経口投与」、「非経口的に投与される」、および他の文法的に等価な表現は、本明細書で使用される場合、通常、注射による経腸および局所投与以外の投与様式を指し、限定されないが、静脈内、鼻腔内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、ならびに胸骨内注射および注入を含む。

【0085】

治療方法

【0086】

本開示は、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植することと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与することとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法を提供する。

【0087】

別の実施形態において、本開示は、哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、哺乳動物同種移植片ドナーおよび同種移植片レシピエントを選択するステップと、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植するステップと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与するステップとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法を提供する。

【0088】

方法は、同種移植片がＩＲ障害を受けている場合の治療を含む。方法はまた、同種移植片がＤＳＡによる障害に供されている場合の治療も含む。

【0089】

一実施形態において、方法は、同種移植片を移植するステップの前に、ドナー同種移植片を抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片で前処置するステップを含む。ＷＯ２０１５／０２３９７２を参照されたい。

【0090】

一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、移植の前（例えば、ドナー哺乳動物から臓器を除去した後、およびレシピエント哺乳動物に臓器を移植する前）に臓器に投与される。一実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、臓器調達センターで投与される。別の実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、移植の直前に、例えば、移植前の数時間または数分以内の「バックテーブル」での手技において投与される。一実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、ドナー哺乳動物からの採取または除去後ではあるが、臓器保存の前に投与される。別の実施形態において、抗体または抗原結合断片は、保存中に臓器に投与される。別の実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、保存後ではあるが、移植前に投与される。

【0091】

抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、任意の好適な技術によって臓器に投与され得る。一実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片を含有する溶液で臓器を灌流することによって臓器に投与されてもよい。別の実施形態において、臓器は、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片を含有する溶液に含浸される。一実施形態において、臓器は、０．５時間～６０時間または１時間～３０時間（例えば、３０分間、３５分間、４０分間、４５分間、５０分間、５５分間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１０．５時間、１１時間、１１．５時間、１２時間、１２．５時間、１３時間、１３．５時間、１４時間、１４．５時間、１５時間、１５．５時間、１６時間、１６．５時間、１７時間、１７．５時間、１８時間、１８．５時間、１９時間、１９．５時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、または３０時間）、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片を含有する溶液で灌流されるか、または該溶液に浸漬される。投与は、２回以上の灌流または浸漬を含み得る。

【0092】

いくつかの実施形態において、溶液中の抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、１リットル当たり約１０μｇ～約５００ｍｇ、例えば、１リットル当たり約１０μｇ～約５０μｇ、約５０μｇ～約１００μｇ、約１００μｇ～約２００μｇ、約２００μｇ～約３００μｇ、約３００μｇ～約５００μｇ、約５００μｇ～約１ｍｇ、約１ｍｇ～約１０ｍｇ、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ、約５０ｍｇ～約１００ｍｇ、約１００ｍｇ～約２００ｍｇ、約２００ｍｇ～約３００ｍｇ、約３００ｍｇ～約４００ｍｇ、約４００ｍｇ～約５００ｍｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１００００、１５０００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１０００００μｇ／ｍＬまたはそれを上回る濃度である。いくつかの実施形態において、抗Ｃ５抗体または抗原結合断片の量は、約１３０μｇ／ｍＬの濃度である。

【0093】

別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、静脈内注入によって哺乳動物レシピエントに投与される。抗体またはその抗原結合断片は、しばしば、約２５～約４５分にわたる静脈内注入によってレシピエントに投与される。

【0094】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の用量は、哺乳動物レシピエントの体重とは関係なく一定の固定容量としてレシピエントに投与される。特定の実施形態において、投与計画は、最適な所望の反応（例えば、有効な反応）を提供するように調整される。

【0095】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、レシピエントの体重に基づいて１キログラム当たり１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与され得る。決して限定的であることを意図するものではないが、例示的な投与範囲は、例えば、１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、および１～１０ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、および１～１０ｍｇ／ｋｇを含む。抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の例示的な投与量は、限定されないが、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、および８ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、および８ｍｇ／ｋｇを含む。

【0096】

しばしば、方法は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の血漿レベルがレシピエントへの投与後に約５０～約１００μｇ／ｍＬであることを提供する。

【0097】

特定の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、多段階投与計画において投与される。しばしば、投与計画は２つ以上の用量を含む。第１の用量は、移植の前に投与され得る。第２の用量は、移植の約０．５～約４８時間後またはそれよりも後に投与され得る。しばしば、第２の用量は、移植の約１２～約３６時間後に投与される。第２の用量は、移植の約１８～約２４時間後に投与され得る。特定の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の第３の用量は、第２の用量の後に投与され得る。第３の用量は、第２の用量の約０．５～約４８時間後またはそれよりも後に投与され得る。

【0098】

特定の実施形態において、レシピエントは、移植後に血漿交換を受けてもよい。血漿交換は、移植の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、または３０日以内に行われ得る。しばしば、血漿交換は、移植の約５～約１０日以内に行われる。通常、血漿交換は、移植後約１０日以内に行われる。

【0099】

抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、任意の好適な手段によって哺乳動物レシピエントに投与することができる。一実施形態において、抗体は、灌流または注射等の静脈内投与によって投与される。

【0100】

抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片はまた、ＤＧＦの治療に有用な１つ以上の追加の薬物または治療薬とともに投与されてもよく、追加の薬剤は、その意図する目的のために当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本明細書に提供される抗体によって治療される疾患または状態を治療するのに有用であることが当該技術分野で認識されている治療薬であってもよい。その組み合わせは、１つより多くの追加の薬剤、例えば、２つまたは３つの追加の薬剤も含み得る。

【0101】

抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、種々の実施形態において、タンパク質、ペプチド、炭水化物、薬物、小分子、および遺伝子材料（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）である薬剤とともに投与されてもよい。種々の実施形態において、薬剤は、１つ以上のコリンエステラーゼ阻害剤、１つ以上の副腎皮質ステロイド、および／または１つ以上の免疫抑制薬（最も一般的には、アザチオプリン［ＡＺＡ］、シクロスポリン、および／またはミコフェノール酸モフェチル［ＭＭＦ］であってもよい。

【0102】

加えて、レシピエントは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片の投与前に、１つ以上の好適な治療薬を投与されてもよい。例えば、一実施形態において、レシピエントは、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置の前に、抗髄膜炎菌ワクチンを投与されてもよい。別の実施形態において、患者は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置の前に、１つ以上の抗生物質を投与されてもよい。

【0103】

方法は、哺乳動物移植レシピエントがヒトレシピエントであり得ることを提供する。

【0104】

転帰

【0105】

一般に、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、哺乳動物ドナーから哺乳動物レシピエントに移植された同種移植片における同種移植片血管障害病変の可能性の低減またはその形成の予防を提供する。

【0106】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に対する虚血再灌流（ＩＲ）障害の可能性の低減を提供する。

【0107】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）によって誘導される同種移植損傷の可能性の低減を提供する。

【0108】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、移植関連ＩＲ障害の血栓性合併症の可能性の低減を提供する。

【0109】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の微小血管および大口径血管においてＩＲ障害によって誘導される膜侵襲複合体の集合の可能性の低減を提供する。

【0110】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲによって誘導される同種移植片における非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化の可能性の低減を提供する。

【0111】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲ障害によって誘導されるＮＩＫ発現の可能性の低減を提供する。

【0112】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管にＴ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を形成する可能性の低減を提供する。

【0113】

別の実施形態において、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管に塞栓性血栓を形成する可能性の低減を提供する。

【0114】

キットおよび単位剤形

【0115】

エクリズマブ等の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを、前述の方法における使用に適した治療有効量で含有する薬学的組成物を含むキットも本明細書に提供される。キットは、任意選択的に、施術者（例えば、医師、看護師、または患者）が、その中に含まれる組成物を投与して同種移植片血管障害の症状を有する患者に組成物を投与することができるように、例えば、投与スケジュールを含む指示も含むことができる。キットはまた、注射器を含んでもよい。

【0116】

任意選択的に、キットは、上記に提供される方法による単回投与のために、各々が有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を含有する単回用量の薬学的組成物の複数の包装を含む。薬学的組成物（複数可）を投与するために必要な機器またはデバイスも、キット内に含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を含む１つ以上の事前充填注射器を提供し得る。

【0117】

一実施形態において、本発明は、レシピエントにおいて同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減するためのキットであって、キットは、（ａ）ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１２に記載される配列を有する重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号８に記載される配列を有する軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片と、（ｂ）本明細書に記載される方法のいずれかに従って抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を使用するための指示とを含む、キットを提供する。任意選択的に、用量は事前充填注射器内に含まれる。

【0118】

本開示を限定することなく、本開示の多数の実施形態が説明のために以下に記載される。

【0119】

項目１：哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植することと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与することとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法。

【0120】

項目２：哺乳動物移植レシピエントにおいてＴ細胞媒介性同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する方法であって、哺乳動物同種移植片ドナーおよび同種移植片レシピエントを選択するステップと、ドナーからの同種移植片をレシピエントに移植するステップと、治療有効量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片をレシピエントに投与するステップとを含み、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に同種移植片血管障害病変を形成する可能性を低減する、方法。

【0121】

項目３：同種移植片を移植するステップの前に、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片で同種移植片を前処置するステップをさらに含む、項目１または２の方法。

【0122】

項目４：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片に対する虚血再灌流（ＩＲ）障害の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0123】

項目５：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）によって誘導される同種移植損傷の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0124】

項目６：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、移植関連ＩＲ障害の血栓性合併症の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0125】

項目７：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の微小血管および大口径血管においてＩＲ障害によって誘導される膜侵襲複合体の集合の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0126】

項目８：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲによって誘導される同種移植片における非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0127】

項目９：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、ＩＲ障害によって誘導されるＮＩＫ発現の可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0128】

項目１０：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管にＴ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を形成する可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0129】

項目１１：抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いたレシピエントの処置、および／または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合断片を用いた同種移植片の処置は、抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を用いた処置を行わない場合と比較して、同種移植片の血管に塞栓性血栓を形成する可能性を低減する、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0130】

項目１２：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を投与する前に、抗髄膜炎菌ワクチンおよび／または抗生物質をレシピエントに投与するステップをさらに含む、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0131】

項目１３：レシピエントに免疫抑制剤を投与するステップをさらに含み、免疫抑制療法は、併用療法においてまたは単剤療法として、副腎皮質ステロイド、アザチオプリン（ＡＺＡ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、メトトレキサート、タクロリムス、シクロスポリン、またはシクロホスファミドからなる群から選択される、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0132】

項目１４：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、静脈内投与される、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0133】

項目１５：哺乳動物移植レシピエントは、ヒトレシピエントである、先行する項目のいずれか１つに記載の方法。

【0134】

項目１６：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、エクリズマブである、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0135】

項目１７：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ＢＮＪ４４１である、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0136】

項目１８：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、ＢＮＪ４２１である、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0137】

項目１９：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0138】

項目２０：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0139】

項目２１：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0140】

項目２２：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0141】

項目２３：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、１８、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0142】

項目２４：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号８に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0143】

項目２５：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0144】

項目２６：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0145】

項目２７：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０および配列番号１１にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖全体を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0146】

項目２８：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、および２３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号２４、２５、および２６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0147】

項目２９：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号２８に記載される配列を有するＶＬドメインを含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0148】

項目３０：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、および３１にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号３２、３３、および３４にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0149】

項目３１：抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５に記載される配列を有するＶＨドメイン、および配列番号３６に記載される配列を有するＶＬドメインをそれぞれ含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0150】

項目３２：哺乳動物移植レシピエントの同種移植片における同種移植片血管障害病変の形成を予防するためのキットであって、キットは、ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１、２、および３にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３重鎖配列、ならびに配列番号４、５、および６にそれぞれ記載されるようなＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３軽鎖配列を含む、ある用量の抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片と、項目１または２に記載の方法において抗Ｃ５抗体またはその抗原結合断片を使用するための指示と、注射器と、を含む、キット。

【0151】

【実施例】

【0152】

例１

【0153】

心臓（Ｂｅｙｇｕｉ Ｆ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１０；２９：３１６－３２２、Ｌｅｅ ＭＳ ｅｔ ａｌ．Ｃａｒｄｉａｃ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ ２０１１；１２：１４３－１５２、Ｃｏｓｔｅｌｌｏ ＪＰ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｘ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｓｔ Ｊ ２０１３；４０：３９５－３９９、Ｈｏｌｌｉｓ ＩＢ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ２０１５；３５：４８９－５０１）、腎臓（Ｂａｇｎａｓｃｏ ＳＭ，Ｋｒａｕｓ ＥＳ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１５；２０：３４３－３４７、Ｇｕｐｔａ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２０１４；９７：１２４０－１２４６）、および複合同種移植片（Ｍｕｎｄｉｎｇｅｒ ＧＳ，Ｄｒａｃｈｅｎｂｅｒｇ ＣＢ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１４；１９：３０９－１４、Ｕｎａｄｋａｔ ＪＶ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２００９；１０：２５１－２６１、Ｕｎａｄｋａｔ ＪＶ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ ２００９；４１：５４２－５４５）の寿命は、移植血管の至るところに発生する不可逆的狭窄および血栓によって特徴づけられる状態である同種移植片血管障害（ＡＶ）によってたびたび制限される。最もよく認識されているＡＶの形態において、罹患血管は、Ｔ細胞およびマクロファージの内皮下浸潤を伴う平滑筋様細胞から構成されるびまん性に広がった新生内膜を含む。同様の外観の新生内膜病変は、ヒトＩＦＮ－γ（Ｔｅｌｌｉｄｅｓ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００；４０３：２０７－１１）またはＩＦＮ－γ産生ヒトＴ細胞（Ｓｈｉａｏ ＳＬ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７；１７９：４３９７－４０４）に応答してヒト動脈セグメントに誘導することができる。第２のより最近認識されたＡＶの形態は、特に同種移植片の微小血管系における、血栓の形成を含む。

【0154】

ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）および移植片機能の遅延［虚血再灌流障害（ＩＲＩ）の兆候］は、ＡＶの危険因子である。我々は、これらの因子が、アロ反応性Ｔ細胞によるＩＦＮ－γの産生を刺激するＥＣの能力を増加させることによってＡＶを媒介することを提案する。同種感作させた移植候補からプールした高力価のパネル反応性抗体（ＰＲＡ）血清を使用して、我々は、同種抗体を結合させて補体を活性化し、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の沈着および非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達に応答して媒介されるＥＣ免疫原性の増加をもたらすプロトコルを開発した。ｉｎ ｖｉｖｏでのＰＲＡを用いたヒト動脈セグメントの処置は、内膜ＥＣへのヒトＩｇＧ結合、マウスＭＡＣの沈着、および非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化をもたらした。Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３；１２８：２５０４－２５１６。これらの作用は、Ｔ細胞媒介性ＡＶ様病変の形成の増悪を引き起こした。また我々は、同じヒト化マウスモデルにおいて、ＩＲＩ様病変もＴ細胞媒介性ＡＶを増悪させることを示した１４。我々のより最近の研究は、エンドサイトーシスの阻害がＰＲＡ治療の効果を妨げたことを示したが（Ｙｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０１２；３２：３５３－３６０）、これは臨床的に許容されない可能性が高く、炎症に関連する誘導可能なプロセスである補体活性化の防止がより魅力的な代替手段であると考えられた。補体活性化はＩＲＩと関連づけられていたが（Ｍｉｗａ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；１９０：３５５２－３５５９、Ｅｌｖｉｎｇｔｏｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；１８９：４６４０－４６４７、Ａｔｋｉｎｓｏｎ Ｃ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０；１８５：７００７－７０１３）、我々のＩＲＩのヒト化モデルにおいて終末補体活性化が起こるかどうかは確認されていなかった。エクリズマブは、液相アナフィラトキシンであるＣ５ａ、ならびにＣ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９のポリマーとともに集合して固相ＭＡＣを形成する終末補体成分であるＣ５ｂを含む下流の炎症性メディエーターの産生を抑制するモノクローナル抗ヒトＣ５抗体である。この報告書では、我々の同種抗体媒介性ＡＶおよびＩＲＩ媒介性ＡＶのヒト化マウスモデルを使用して、抗マウスＣ５ｍＡｂ（その作用はエクリズマブの作用に匹敵し得る）がＥＣにおける非標準的ＮＦ－κＢシグナル活性化、およびＡＶ病変の発生に及ぼす影響について調査した。

【0155】

材料および方法

【0156】

ＰＲＡがヒト血管移植片に及ぼす影響の調査

【0157】

全てのヒト材料は、Ｙａｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ＣｏｍｍｉｔｔｅｅまたはＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｂａｎｋの治験審査委員会によって承認されたプロトコルの下に得られた。全ての動物実験は、Ｙａｌｅ ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルの下に実行された。

【0158】

廃棄された高力価のパネル反応性抗体（ＰＲＡ）血清を、Ｙａｌｅ－Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌの組織適合検査室からの非特定化試料として心臓および腎臓移植の候補者から得た。パネル反応性抗体（ＰＲＡ）の血液検査を受け、ＨＬＡクラスＩおよび／またはクラスＩＩ抗原のいずれかに対して＞８０％の反応性を有することが分かった患者の血清をプールし、試験を行い、使用前にエンドトキシン活性が陰性であることを明らかにした（Ｓｉｇｍａ）。ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、健常な成人のボランティアドナーから採取した。

【0159】

ＰＲＡ媒介性ＡＶのために、マウス大動脈の径に近似した長さ３～５ｍｍの隣接する三次または四次ヒト冠動脈セグメントを、対になったＳＣＩＤ／ｂｇ免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）の下行大動脈の腎動脈下位に両端間の介在移植片として外科的に移植した。移植した血管は、２００μＬの未希釈ＰＲＡ血清（マウス１匹に）またはｍＡｂ Ｔｒａｐ血清分画キット（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ）を使用してＩｇＧを枯渇させたＰＲＡ血清を対になったマウスに尾静脈内注射する前に、約３０日間静止状態に維持した。１８時間後、移植片を採取し、免疫染色した。他の実験では、対になったヒト動脈異種移植片の各々を両端のマウス大動脈のカフを用いて外植し、次いで、ヒト末梢血単核球（動脈ドナーと同種の１００～２００×１０６個の細胞）を接種した第２の対のナイーブＳＣＩＤ／ｂｇ宿主の一方のメンバーの腎動脈下大動脈内に介在させた。これらのマウスにおいて、１週間の間隔で試料採取した末梢血のフローサイトメトリーによりＴ細胞生着の効率を評価したところ、全マウスＣＤ４５＋細胞に対するＣＤ３＋生着のパーセンテージは、動脈異種移植片の移植前の５～１５％の範囲であった。再移植した移植片は、移植後１４日で採取した。採取した組織をＯＣＴ培地ブロック中で凍結させ、５μｍの厚さに切片化し、以前に記載されたように、形態学的分析、免疫組織化学的分析、および免疫蛍光分析に供した。Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３；１２８：２５０４－２５１６。

【0160】

虚血－再灌流障害（ＩＲＩ）の誘導 前述のように、マウス大動脈の径に近似した長さ３～５ｍｍの隣接する三次または四次ヒト冠動脈セグメントを、ＳＣＩＤ／ｂｇ免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）の下行大動脈の腎動脈下位に両端間の介在移植片として外科的に移植した。約１ヶ月の静止期間後、両端のマウス大動脈のカフとともに動脈異種移植片を外植し、第２の対のＳＣＩＤ／ｂｇレシピエントに外科的に再移植する前に、無酸素条件下で１２時間ｅｘ ｖｉｖｏでインキュベートし、１８時間後に分析した。代替として、指示のある場合、無酸素状態に供した動脈異種移植片を、１００～２００×１０６個のヒト末梢血単核球を接種したＳＣＩＤ／ｂｇ宿主に再移植し、再移植の２１日後に、または血栓を示唆する苦痛もしくは後肢麻痺の証拠が認められた場合はそれよりも早く、移植片を採取した。

【0161】

抗Ｃ５および抗Ｃ５ａ遮断抗体 抗マウスＣ５遮断抗体（ＢＢ５．１）、対照アイソタイプ抗体（１２Ｂ４）、抗ヒトＣ５ａ遮断抗体（ＣＬＳ０２６）、および対照マウスアイソタイプ抗体（ＭＯＰＣ１）は、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって提供された。文中および図の凡例中に指定されるように、外科的移植の前に、マウスに０．８ｍｇの各抗体を皮下注射するか、または０．８ｍｇの各抗体を低酸素培地に加えた。

【0162】

統計分析 全ての実験は、異なる操作に供された同じドナー血管の隣接する部分からのヒト動脈セグメントを受容する対になった動物間の比較を含んでいた。統計分析はコンピュータソフトウェア（Ｏｒｉｇｉｎ）を使用して行い、データは両側スチューデントｔ検定により分析し、Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。

【0163】

フローサイトメトリー ０．１％ゼラチンで予めコーティングした２４ウェルマイクロタイタープレート内でヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を培養した。加温したゼラチンベロナール緩衝液（Ｓｉｇｍａ）を用いた洗浄、およびＢＢ５．１または１２Ｂ４ ｍＡｂｓ（２５μｇ）の添加前に、ＥＧＭ２培地（Ｌｏｎｚａ）中のＩＦＮ－γ（５０ｎｇ／ｍＬ）でＨＵＶＥＣを７２時間処理した。３０分後、ＦＡＣＳ分析前に、１：１０希釈（ｖ／ｖ）のマウス補体（Ｓｉｇｍａ）またはヒト補体（Ｓｉｇｍａ）のいずれかとともに、ＰＲＡ血清のＩｇＧ＋画分を１：４希釈（ｖ／ｖ）で４時間かけて加えた。全てのウェルの最終体積は２００μＬであった。ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して細胞を分析した。

【0164】

補体のｉｎ ｖｉｔｒｏ活性化のための血清分画 ＰＲＡ血清のＩｇＧ＋およびＩｇＧ－成分への分画を以前に記載されたように行った。Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３；１２８：２５０４－２５１６。端的に述べると、ＥＬＩＳＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による分画の前に、インタクトな血清中で全ＩｇＧ濃度を最初に決定した。次いで、製造者の指示に従ってＭＡｂＴｒａｐ Ｋｉｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、５００μＬの未希釈血清を結合緩衝液中に１：１希釈し、結合緩衝液で事前に平衡化した提供されたカラムに通過させた。次いで、ＩｇＧ－画分を回収した。続いて、カラムを洗浄し、ＩｇＧ＋画分をカラムから溶出させた。２０ｋＤａｌカットオフでＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した複数回の遠心分離（×５）により、溶出緩衝液から滅菌リン酸緩衝生理食塩水（Ｇｉｂｃｏ）への緩衝液交換を行った。全てのＩｇＧ＋画分を血清分画前の全ＩｇＧ濃度に等しい最終濃度にした。次いで、単離した全ての画分をゼラチンベロナール緩衝液中１：４希釈（ｖ／ｖ）で使用した。

【0165】

血漿Ｃ５ａの定量化 ヒト動脈移植片を担持するＰＲＡで処置した動物からの移植片採取時に、ヘパリン処理した試験管にマウス血漿試料を採取し、循環する免疫複合体に結合したＣ５ａをプロテインＡアガロースとともにインキュベーションすることにより分離した。ヘパリン処理したマウス血漿を、１．５ｍＬ微量遠心管内で、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に、２０ｍＭ ＥＤＴＡ二ナトリウムを含有する１％Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ（Ｍｅｓｏ－Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｒ９３ＡＡ－１）、および広域スペクトル補体阻害剤である１００μｇ／ｍＬのＦＵＴ－１７５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５２０３５）を含有する溶液に加えた。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｐｌｕｓ Ａｇａｒｏｓｅビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２８１２）を加えて約５０％のスラリーを得た。混合物を７０００ｇで１０秒間、４℃で遠心分離した。上清（約５０μＬ）を除去し、１％Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ、２０ｍＭ ＥＤＴＡ、および１００μｇ／ｍＬ ＦＵＴ－１７５を含有する１２０μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）溶液を、３０μＬのマウスヘパリンとともに加えた。混合物を４℃で１時間徐々に回転させた。４℃で遠心分離する前に、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｐｌｕｓ Ａｇａｒｏｓｅビーズを用いたインキュベーションを含む上記ステップを２回目に繰り返し、下記のＣ５ａの免疫測定法に使用する前に免疫複合体の完全な除去を確実にした。

【0166】

免疫複合体の除去後、免疫測定法によりマウス血漿Ｃ５ａレベルを評価した。このアッセイのために、Ｍｅｓｏ－Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プレート（カタログ番号Ｌ１５ＸＢ）を、４℃で一晩、ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬの抗マウスＣ５ａ ｍＡｂ（クローンｐ５ａＮ１９５）でコーティングした。プレートをＰＢＳで洗浄し、３％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａを用いて３０分間室温でブロックし、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳで洗浄した。２０ｍＭ ＥＤＴＡおよび１００μｇ／ｍＬ ＦＵＴ－１７５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５２０３５）を含有する１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ中で、２５μＬのＣ５ａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号０７－２０２－５０３）を７５μＬのＣ５欠損マウス血漿に加え、次いで、１０，０００ｐｇ／ｍＬから２．４ｐｇ／ｍＬまで段階希釈することにより標準物質を３通り作製した。次いで、試料を２０ｍＭ ＥＤＴＡおよび１００μｇ／ｍＬ ＦＵＴ－１７５を含有する１％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ中に１：１００希釈し、室温で１時間、２５μＬ／ウェルで加えた。次いで、プレートをＰＢＳで洗浄し、２５μＬの２μｇ／ｍＬビオチン化ラット抗マウスＣ５ａ（カタログ番号５５８０２８）および１μｇ／ｍＬストレプトアビジン－ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（Ｍｅｓｏ－Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、カタログ番号Ｒ３２ＡＤ－５）を、１％ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａに室温で１時間、穏やかに振盪しながら加えた。プレートを洗浄し、１Ｘ ＭＳＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（カタログ番号Ｒ９２ＴＣ－２）を１５０μＬ／ウェルで加えた。Ｍｅｓｏ－Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｃｔｏｒ ６００ Ｉｍａｇｅｒを使用してプレートを読み取り、Ｍｅｓｏ－Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ ４．０ソフトウェアを使用して分析した。

【0167】

同種抗体誘導性ＡＶのヒト化モデル

【0168】

ｉｎ ｖｉｖｏでのＰＲＡの影響を調べるために、マウス大動脈の径に近似した長さ３～５ｍｍの隣接する三次または四次ヒト冠動脈セグメントを、対になった８～１２週齢の雌Ｃ．Ｂ－１７ ＳＣＩＤ／ｂｇ免疫不全マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）の下行大動脈の腎動脈下位に両端間の介在移植片として外科的に移植した。移植した血管は、２００μＬの無希釈ＰＲＡ血清の尾静脈内注射の前に約３０日間静止状態に維持した。短期間の影響を含む実験において、１８時間後に移植片を採取し、免疫染色した。ＰＲＡがＡＶの発生に及ぼす影響を評価する実験のために、対になったヒト動脈異種移植片の各々を両端のマウス大動脈のカフを用いて外植し、次いで、動脈ドナーと同種の１００～２００×１０６個のヒトＰＢＭＣを接種した第２の対のナイーブＳＣＩＤ／ｂｇ宿主の一方のメンバーの腎動脈下大動脈内に介在させた。これらのマウスにおいて、１週間の間隔で試料採取した末梢血のフローサイトメトリーによりＴ細胞生着の効率を評価したところ、全マウスＣＤ４５＋細胞に対するＣＤ３＋生着のパーセンテージは、動脈異種移植片の移植前の５～１５％の範囲であった。再移植した移植片は、移植後１４日で採取した。

【0169】

移植血管の分析 採取したヒト動脈移植片をＯＣＴ培地ブロック中で瞬間凍結させ、５μｍの厚さに切片化し、４℃で１５分間、氷冷メタノールで固定および透過処理した。以下の抗体の１：１００希釈液を使用して４℃で一晩染色する前に、０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０および５％ウシ胎仔血清を含有するＰＢＳを用いて２時間室温で切片をブロックした：ビオチン化Ｕｌｅｘ Ｅｕｒｏｐｅｕｓ Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ Ｉ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＶＴ）、抗ヒトＣＤ３１（Ｄａｋｏ）、抗平滑筋アクチン（Ｓｉｇｍａ、クローン１Ａ４）、抗ヒトＣＤ４５ＲＯ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローンＵＣＨＬ１）、抗マウス抗Ｇｒ－１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５０２９１）、抗Ｃ５ Ａｂ（ａｂｃａｍ）、抗Ｃ５ｂ－９（Ｄａｋｏ）、抗ヒトＶＣＡＭ－１（Ｎｏｖｕｓ、クローン６Ｇ９）。ポリクローナルウサギ抗マウスＣ４ｄ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ ＣｌｉｎｉｃのＤｒ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｂａｌｄｗｉｎ ＩＩＩから贈与された）を１：５０希釈で使用し、ストレプトアビジンコンジュゲートＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、ヤギ抗マウスＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、ロバ抗マウスＡｌｅｘ Ｆｌｕｏｒ ５４６、またはロバ抗ウサギＡｌｅｘ Ｆｌｕｏｒ ５９４二次抗体（１：２００希釈）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を室温で１時間使用して検出した。低酸素プローブは、製造者の仕様に従って１：２００希釈で使用した。新生内膜面積、内腔サイズ、および中膜の厚さを以前に記載されたように計算した。Ｙｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０１２；３２：３５３－３６０。

【0170】

結果

【0171】

図１は、終末補体活性化が起こらない場合、抗Ｃ５ｍＡｂはＴ細胞媒介性ＡＶに対して免疫調節作用を発揮しないことを示す実験の結果を示している。ＰＲＡのＩｇＧ＋画分およびマウス補体（Ｃ’）またはヒト補体を４時間かけて加える前に、１２Ｂ４対照ｍＡｂまたはＢＢ５．１抗Ｃ５ｍＡｂ（２５μｇ）でＨＵＶＥＣを３０分間前処置した。次いで、ＦＡＣＳにより細胞をＣ５ｂ－９について分析した（ａ）。免疫不全マウス内で静止状態にあるヒト冠動脈移植片を、０．８ｍｇの１２Ｂ４またはＢＢ５．１抗体に事前に暴露し、移植片採取時に１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂをＰＢＳ培地浴に加え、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂで前処置した、動脈ドナーと同種のＰＢＭＣの前回の養子移入からの循環するヒトＴ細胞を含有する第２の宿主に直ちに再移植した。第２の宿主は、図示されるように、継続的な１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂによる処置を０．８ｍｇ／注射／マウスで１４日間受けた（ｂ）。動脈移植片をＣ５ｂ－９（ｃ、上段）の染色およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞浸潤（ｃ、下段）について分析した。ＥＶＧおよびＭｏｖａｔ染色後に処置群間で新生内膜病変の形成を評価した（ｄ）。全ての実験はｎ＝５の処置対で行った。終末補体活性化刺激が起こらない場合、対照と特異的抗Ｃ５抗体との間に有意差は見られなかった（Ｎ．Ｓ．）。スケールバーは６３μｍを示す。

【0172】

図２は、ＭＡＣ集合の阻止、および抗Ｃ５ｍＡｂによってＣ５ａが産生されないことが、ＤＳＡに応答するＥＣの活性化を減弱させることを示す結果を示している。抗Ｃ５による処置が同種抗体誘導性の補体活性化に及ぼす影響を評価するために、ＰＲＡの尾静脈内注射前に、ＳＣＩＤ／ｂｇ免疫不全宿主をアイソタイプ対照１２Ｂ４ ｍＡｂまたは抗Ｃ５ ＢＢ５．１ ｍＡｂで処置し、１８時間後に移植片を採取した（ａ）。１２Ｂ４ Ａｂで処置した宿主と比較して、ＢＢ５．１ Ａｂで処置した動物は、等しいＣ４ｄの染色を示したが、Ｃ５ｂ－９の染色減少を示した（ｂ）。冠動脈異種移植片のＢＢ５．１ ｍＡｂによる処置は、１２Ｂ４ Ａｂで処置した対照と比較して、内膜ＮＩＫの染色（ｃ）およびＶＣＡＭ－１の発現（ｄ）の減少を示した。Ｃ４ｄ、Ｃ５ｂ－９、ＮＩＫ、およびＶＣＡＭ－１の染色の結果を定量化した（ｅ）。ＣＣＬ５およびＶＣＡＭ－１の移植片内転写を定量化し、ＣＤ３１の転写レベルに対して正規化した（ｆ）。上記実験はｎ＝５の処置対で行った。ＰＲＡの尾静脈内注射および１８時間後の移植片採取の前に、図示されるようにアイソタイプ対照ＭＯＰＣ１または抗Ｃ５ａ ＣＬＳ０２６ ｍＡｂでＳＣＩＤ／ｂｇ宿主を処置した（ｇ）。対照ＭＯＰＣ１ ｍＡｂで処置した宿主と比較して、ＣＬＳ０２６ ｍＡｂで処置した宿主は、同等レベルのＣ５ｂ－９沈着（ｈ、上段）、ＮＩＫの上方制御（ｈ、２段目）、ＶＣＡＭ－１の発現（ｈ、３段目）、およびＧｒ－１＋細胞の新生内膜への動員（ｈ、下段の矢印）を呈した。上記実験はｎ＝３の処置対で行った。Ｎ．Ｓ．は、群間に統計的な差が見られなかったことを示す。アスタリスクはｐ＜０．０５を示す。スケールバーは１３５μｍを示す。

【0173】

図３は、抗Ｃ５抗体が、同種抗体誘導性の補体活性化後の新生内膜病変を縮小させることを示す実験の結果を示している。１２Ｂ４アイソタイプ対照またはＢＢ５．１抗Ｃ５Ａｂを、同種抗体誘導性の補体活性化および新生内膜形成に及ぼすそれらの影響について調べた。ＰＲＡの静脈内注射、およびヒトＴ細胞を生着させ、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂで同様に前処置した第２の免疫不全宿主への再移植の前に、動脈移植片を１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂで前処置した。これらの宿主はさらに、移植片採取の前に継続的な抗体処置を１４日間受けた（ａ）。１２Ｂ４ Ａｂで処置した対照と比較して、ＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主は、内膜ＮＩＫの染色（ｂ、上段）およびＣＤ４５ＲＯ＋同種免疫Ｔ細胞の内膜浸潤（ｂ、下段）の減弱を示した。新生内膜および内腔の面積を１２Ｂ４－およびＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主において定量化した（ｃ）。全ての実験はｎ＝６の処置対で行った。ＩＥＬは内弾性板を示す。アスタリスクはｐ＜０．０５を示す。スケールバーは６３μｍを示す。

【0174】

図４は、ＩＲＩが補体を活性化し、標的細胞を顕著に喪失することなく動脈壁におけるＭＡＣの形成を誘導することを示す実験の結果を示している。ＩＲＩによって誘導される補体活性化のために、免疫不全宿主内に置かれた冠動脈異種移植片を外植し、直ちに第２の免疫不全宿主に外科的に再移植するか［（－）低酸素］、または再移植の前に低酸素条件下で１２時間臓器培養した［（＋）低酸素］（ａ）。ｅｘ ｖｉｖｏで１２時間の低酸素状態に供された外植した冠動脈を、免疫蛍光法によりＣＤ３１およびＣ４ｄ（ｂ、上段）またはＣ５ｂ－９（ｂ、下段）のいずれかについて調べ、染色の結果を図示されるように定量化した。ＣＤ３１およびＳＭＡの染色は、低酸素状態に供されなかった対照移植片、または１２時間の低酸素状態に供された移植片の間で定量化した（ｃ）。ＮＩＫ（ｄ、上段）、ＶＣＡＭ－１（ｄ、真ん中の段）、およびＧｒ－１＋（ｄ、下段）の染色を冠動脈移植片において行い、その結果を図示されるように定量化した。全ての実験はｎ＝６の処置対で行った。Ｎ．Ｓ．は、群間に統計的な差が見られなかったことを示す。アスタリスクはｐ＜０．０５を示す。ダブルアスタリスクはｐ＜０．００１を示す。スケールバーは６３μｍを示す。

【0175】

図５は、終末補体の阻害が、ＩＲＩによって誘導されるＭＡＣの形成、非標準的ＮＦ－κＢ、およびＥＣの活性化を抑制することを示す実験の結果を示している。冠動脈セグメントを１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂに暴露し、１８時間後の移植片採取の前に、図示されるようにｅｘ ｖｉｖｏで低酸素状態に供した（ａ）。Ｃ４ｄ（ｂ、上段）およびＣ５ｂ－９（ｂ、下段）それぞれを用いて、外植した冠動脈異種移植片を初期および終末補体活性化について分析した。ＮＩＫ（ｃ、上段）、ＶＣＡＭ－１（ｃ、真ん中の段）、およびＧｒ－１（ｃ、下段）を用いて、ＥＣの活性化について移植片をさらに分析した。全ての実験はｎ＝４の処置対で行った。Ｎ．Ｓ．は、群間に統計的な差が見られなかったことを示す。アスタリスクはｐ＜０．０５を示す。ダブルアスタリスクはｐ＜０．００１を示す。スケールバーは６３μｍを示す。

【0176】

図６は、抗Ｃ５抗体がＩＲＩ後の新生内膜病変および血栓性ＡＶ病変を軽減することを示す実験の結果を示している。抗Ｃ５治療がＩＲＩによって誘導される補体活性化およびＡＶ病変の発生に及ぼす影響について調べた。移植片の外植前に、ヒト動脈異種移植片を１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂのいずれかで前処置し、低酸素状態に１２時間暴露し、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂで前処置した、ヒトＴ細胞を生着させた第２の免疫不全宿主に再移植した。これらの宿主は、図示されるようにｍＡｂ処置を受けた（ａ）。抗Ｃ５Ａｂの影響をＩＲ障害に暴露した冠動脈異種移植片において評価した。１２Ｂ４ Ａｂで処置した対照と比較して、ＢＢ５．１ Ａｂを与えられた宿主は、有意に減少したＣ５ｂ－９の内膜および中膜の染色（ｂ、上段）、ＮＩＫの染色（ｂ、２段目）、ならびにＣＤ４５ＲＯ＋浸潤Ｔ細胞の数の有意な減少（ｂ、３段目）を示した。内膜および中膜に浸潤するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂによる処置後に定量化した（ｂ、下段）。新生内膜の厚さ、内腔面積、および中膜の厚さを、１２Ｂ４またはＢＢ５．１による処置を受けている宿主において定量化した（ｃ）。１２Ｂ４ Ａｂで処置した８匹の宿主のうち３匹（ｄ、上段）、およびＢＢ５．１ Ａｂで処置した８匹の宿主のうち０匹（ｄ、下段）において腔内血栓を可視化した。全ての実験はｎ＝８の処置対で行った。Ｎ．Ｓ．は、群間に統計的な差が見られなかったことを示す。アスタリスクはｐ＜０．０５を示す。ダブルアスタリスクはｐ＜０．００１を示す。スケールバーは６３μｍを示す。

【0177】

図７は、下行大動脈に移植された冠動脈介在移植片を有するナイーブＳＣＩＤ／ｂｇマウスが、１８時間後の移植片採取および免疫蛍光法による分析の前にＰＲＡ血清の静脈内注射を受けた結果を示す（ｎ＝３の処置対）。Ｃ５ａ活性レベルは、抗Ｃ５ａ ｍＡｂ ＣＬＳ０２６またはアイソタイプ対照ｍＡｂ ＭＯＰＣ１をブロックすることによる処置後、図２ｇに示すように移植片採取時のマウス血漿において評価した（ｎ＝３の処置対）。

【0178】

図８は、冠動脈移植片が、外植され、無酸素条件下で図示される期間臓器培養され、低酸素プローブのために染色されたことを示す（各時点でｎ＝５のマウス）。スケールバーは６３μｍを示す。

【0179】

図９は、冠動脈移植片が、外植され、無酸素条件下で１２時間臓器培養され、次いで、第２のセットのナイーブＳＣＩＤ／ｂｇ宿主に再移植されたことを示す。再移植の１８時間後に移植片を採取し、ヒト動脈移植片とマウス下行大動脈組織との境界を示す遠位縫合線に隣接する一連の切片を免疫蛍光分析のために採取した。

【0180】

終末補体活性化が起こらない場合、抗Ｃ５ｍＡｂはＴ細胞媒介性ＡＶに対して免疫調節作用を発揮しない。ｉｎ ｖｉｖｏでの使用前に、ＢＢ５．１ ｍＡｂが終末補体活性化を阻害する有効性、およびマウス補体を選択的に阻害するためのその意図される特異性をｉｎ ｖｉｔｒｏで確認した。これを行うために、我々は、同種感作させた移植候補からのパネル反応性抗体（ＰＲＡ）血清のＩｇＧ＋画分が、マウスまたはヒト補体の終末活性化を誘発し得るプロセスであるＥＣへのＩｇＧ結合を引き起こしたという事実を利用した。Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３；１２８：２５０４－２５１６。したがって、我々は、外因性ヒトまたはマウス補体の存在下でヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）をＰＲＡ血清のＩｇＧ＋画分で処理し、フローサイトメトリーによりＣ５ｂ－９の表面沈着について評価した。我々は、１２Ｂ４ ｍＡｂで処置したＥＣと比較して、ＢＢ５．１ ｍＡｂが、ヒト補体ではなく（図１ａ、右側）マウス補体の存在下（図１ａ、左側）で、ＰＲＡ血清のＩｇＧ＋画分がＣ５ｂ－９の沈着を誘発する能力を妨げたことを発見した。対照的に、Ｃ４ｄの染色は、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂによって変化しなかった（データは図示せず）。これらのデータは、ＢＢ５．１ ｍＡｂがマウス補体の終末活性化を効率的かつ選択的に阻害できたことを示している。

【0181】

次に、増悪因子、すなわち、補体活性化を引き起こすＤＳＡまたはＩＲＩが存在しない我々のヒト化マウスモデルにおいて、抗マウスＣ５ｍＡｂ ＢＢ５．１がＴ細胞媒介性のＡＶ病変の形成に及ぼす影響を評価した。図１ｂに図示されるように、ヒトＴ細胞を生着させたマウス宿主に対照１２Ｂ４または抗Ｃ５ ＢＢ５．１ ｍＡｂｓを投与した。このプロトコルでは、ＭＡＣの主要成分であるＣ５ｂ－９の染色が見られないことによって示されるように、いずれの処置群においても補体活性化は観察されなかった（図１ｃ、上段）。さらに、抗Ｃ５ｍＡｂまたはアイソタイプ対照ｍＡｂで処置した宿主間に、ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞浸潤（図１ｃ、下段）または新生内膜病変面積（図１ｄ）の有意な差は認められなかった。

【0182】

これらのデータを併せると、補体活性化が起こらない場合、抗Ｃ５ ＢＢ５．１ ｍＡｂは、移植片の炎症または新生内膜病変の形成を非特異的に減弱させないことが示唆される。

【0183】

ＭＡＣ集合の阻止、および抗Ｃ５ｍＡｂによってＣ５ａが産生されないことは、同種抗体に応答するＥＣの活性化を減弱させる。ヒト動脈移植片をｉｎ ｖｉｖｏでＰＲＡに暴露することは、ＥＣへのヒトＩｇＧ結合をもたらし、結果としてＤＳＡの効果をモデル化する。ＥＣへのＩｇＧ結合の後にはマウス補体活性化が続き、ＳＣＩＤ／ｂｇ宿主のＥＣ１３上におけるＭＡＣ集合を引き起こす（この系統は、免疫適格性マウス系統に匹敵する補体活性を有する）。Ｃｒａｇｇ ＭＳ，Ｇｌｅｎｎｉｅ ＭＪ．Ｂｌｏｏｄ．２００４；１０３：２７３８－２７４３。ＰＲＡによる処置は、ＥＣの活性化を引き起こすＭＡＣ依存性エフェクター経路である、ＮＩＫの安定化によって検出される非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達を誘導した。Ｊａｎｅ－Ｗｉｔ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１３；１２８：２５０４－２５１６。そのため、我々は、初期補体活性化ではなく、抗Ｃ５ｍＡｂによる終末補体活性化の阻害が、非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達を通して媒介されるＥＣにおける炎症促進性の変化を反転させるという仮説を立てた。これを調べるために、ＰＲＡの静脈内注射の前に、動脈異種移植片を担持する宿主を１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂで前処置した。注射後、移植片を１８時間後に採取した（図２ａ）。ＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した動物は、Ｃ９の染色によって示されるように、終末ではなく初期の補体活性化（Ｃ４ｄ）、すなわちＭＡＣ集合を示したが、それは内膜に限定されていた（図２ｂ）。ＭＡＣ集合を確認するために、ＰＲＡで処置した移植片をＣ６と共染色したところ、予想通りに新生内膜におけるＣ９との高度な共局在を示した（図７ａ）。これ以降、検出された複合体をＣ５ｂ－９と称する。ＢＢ５．１で処置した動物とは対照的に、１２Ｂ４対照ｍＡｂで処置した動物においてＣ４ｄおよびＣ５ｂ－９の両方の沈着が検出された。ＢＢ５．１－ｍＡｂで処置した宿主におけるＣ５ｂ－９染色の減少は、それぞれ、非標準的ＮＦ－κＢ活性化および炎症遺伝子発現のマーカーである、有意に減弱したＮＩＫのＥＣ発現（図２ｃ、図２ｅ）およびＶＣＡＭ－１（図２ｄ、図２ｅ）と相関している。移植片溶解物のリアルタイムＰＣＲは、ＮＩＫ依存性の炎症遺伝子ＣＣＬ５およびＶＣＡＭ－１の有意な減少を示した（図２ｆ）。

【0184】

これらのデータは、ＰＲＡによる終末補体活性化、および非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達およびＥＣの活性化を含むそれに付随する炎症作用を抑制することにおける抗Ｃ５ｍＡｂの有効性を示している。

【0185】

ＢＢ５．１は、Ｃ５ａおよびＣ５ｂの両方の産生を防止する。我々の以前のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験により、Ｃ５ａではなくＭＡＣ（Ｃ５ｂ－９）が、ＥＣの活性化および免疫原性の増加をもたらしたことが示されたが、Ｃ５ａがｉｎ ｖｉｖｏで何らかの役割を果たしたことも考えられる。これらの因子のうちのどれが抗Ｃ５ｍＡｂの機能的に関連する標的であったのかを判定するために、我々は、ＰＲＡを注射する前に、図２ｇに示されるように、Ｃ５ａを特異的に抑制するｍＡｂ（ＣＬＳ０２６）またはアイソタイプ対照ｍＡｂ（ＭＯＰＣ１）でヒト動脈移植片を担持する宿主を処置した。Ｃ５ａの活性を移植片採取時に採取されたマウス血清において評価した。ＰＲＡによる処置は、循環するマウスＣ５ａをもたらし、これはＣＬＳ０２６で処置した宿主において、歴史的対照マウス系統に観察されたレベル（データは図示せず）まで有意に阻害された（図７ｂ）。重要なことに、抗Ｃ５ａの阻害は、対照と比較して壁内ＭＡＣ集合の程度を減少させず（図２ｈ、上段）、抗Ｃ５ａ ｍＡｂで処置した宿主におけるＮＩＫの上方制御、ＥＣの活性化、およびＧｒ－１＋好中球のＥＣ媒介性動員の程度を対照ｍＡｂと比べて変化させなかった（図２ｈ）。

【0186】

Ｃ５ａの抑制がＥＣ活性化のパラメータに影響を及ぼさなかったため、我々は、これらのデータから、ＰＲＡ誘導性のＥＣの活性化にはＭＡＣが主に寄与しており、したがって、抗Ｃ５ｍＡｂがＥＣの活性化を減弱させる能力は、Ｃ５ａの産生よりもむしろこのｍＡｂがＭＡＣの集合を阻止する能力によるものであると結論付けた。

【0187】

抗Ｃ５抗体は、ＤＳＡ誘導性補体活性化後の新生内膜病変を減少させる。ＰＲＡで処置した動物において抗Ｃ５ｍＡｂの補体抑制効果を確立し、次いで、抗Ｃ５ｍＡｂが新生内膜ＡＶ病変における同種抗体媒介性の増加に及ぼす影響を評価した。１２Ｂ４またはＢＢ５．１のいずれかで前処置した移植片をＰＲＡ血清に暴露し、次いで、以前にヒトＴ細胞を生着させ、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ Ａｂで前処置した第２のセットの免疫不全宿主に再移植した。これらの第２のセットの宿主は、次いで、図３ａに示されるように移植片採取の前に継続的な抗体処置を１４日間受けた。１２Ｂ４ ｍＡｂを受けた対照宿主と比較して、ＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主は、内膜ＮＩＫの染色の有意な減少（図３ｂ、上段）およびＣＤ４５ＲＯ＋同種免疫Ｔ細胞の浸潤の減少（図３ｂ、下段）を示した。これらの変化は、１２Ｂ４ ｍＡｂで処置した対照と比較してＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主における有意に減少した新生内膜面積および増加した内腔面積と関連していた（図３ｃ）。ＢＢ５．１処置群または１２Ｂ４処置群のいずれの宿主も、血栓性ＡＶ病変を発生しなかった。これらのデータは、同種抗体誘導性ＡＶの補体依存性モデルにおいて、抗Ｃ５遮断抗体が終末補体活性化、ＥＣの活性化、および非標準的ＮＦ－κＢを阻害したこと、また、これらの変化は、有意に減少した新生内膜ＡＶ病変形成と相関していたことを示した。

【0188】

ＩＲＩは、補体を活性化し、標的細胞を顕著に喪失することなく動脈壁におけるＭＡＣの形成を誘導する。終末補体の活性化がＩＲＩに寄与することは、他のモデルにおいて示されている。Ｍｉｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１３；１９０：３５５２－３５５９、Ｅｌｖｉｎｇｔｏｎ Ａ，Ａｔｋｉｎｓｏｎ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；１８９：４６４０－４６４７、Ａｔｋｉｎｓｏｎ Ｃ，Ｈｅ Ｓ，Ｍｏｒｒｉｓ Ｋ，Ｑｉａｏ Ｆ，Ｃａｓｅｙ Ｓ，Ｇｏｄｄａｒｄ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０；１８５：７００７－７０１３。我々は、抗Ｃ５ｍＡｂ治療を用いて、終末補体および非標準的ＮＦ－κＢの役割が以前に確立されていない我々のＩＲＩ１４モデルにおける終末補体活性化の寄与について調べた。この実験に着手する前に、ヒト動脈セグメントを用いて低酸素状態に最適な時間を再評価したところ、１２時間で低酸素プローブのより顕著な染色が見られ、再移植時に細胞壊死または動脈瘤発症の所見が認められないことを発見した（図８）。後続の全ての実験は、ＩＲＩを誘発するために１２時間のｅｘ ｖｉｖｏ低酸素状態を用いた。図４ａに示されるように、この適合プロトコルを使用して、第２のレシピエント宿主に直ちに再移植された対照移植片と比較して、１２時間のｅｘ ｖｉｖｏ低酸素状態後に動脈異種移植片において初期（Ｃ４ｄ）または終末（Ｃ５ｂ－９）補体活性化が起こるかどうかを調べた。補体の染色がＥＣに限定されていた我々のＰＲＡ誘導性冠動脈ＡＶモデル（図２ｂ）とは対照的に、低酸素状態に暴露された冠動脈異種移植片は、血管壁の内膜および中膜領域の両方において有意に増加したＣ４ｄおよびＣ５ｂ－９の沈着を示し（図４ｂ）、これは、ＩＲＩがマウスの平滑筋細胞および内腔ＥＣに影響を及ぼしたという以前の観察と一致していた。１４ 次いで、遠位外科縫合線まで続く一連の区間においてＣ５ｂ－９の染色を評価することにより、ＩＲＩがヒト動脈異種移植片の外側のマウスＥＣに対して非特異的補体活性化を引き起こしたかどうかを評価した。ＩＲＩ処理した移植片において、Ｃ５ｂ－９の染色は、縫合線に近位のヒト内膜および中膜では多く見られたのに対して、縫合線に遠位のマウスＥＣには完全に見られないことから、補体活性化は、ヒトＩＲＩ処理した組織に対して特異的に起こったことが示唆される（図Ｓ３）。ＭＡＣ集合の領域にさらなるＥＣ（ＣＤ３１）またはＳＭＣ（平滑筋αアクチン）の損失（図４ｃ）は観察されず、非致死性の損傷と一致していた。終末補体活性化の下流作用についても評価した。ＭＡＣと共局在化し、もはやＥＣに限定されないＮＩＫタンパク質発現の有意な増加が、血管壁の至るところに観察された（図４ｄ、上段）。ＮＩＫの発現は、ＶＣＡＭ－１の有意な増加（図４ｄ、２段目）およびマウスＧｒ１＋好中球の動員（図４ｄ、下段）と相関していた。

【0189】

これらのデータは、ＩＲＩが、ＥＣおよびＳＭＣの両方において、ＥＣの活性化および急性血管壁炎症と相関するプロセスである非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達を活性化したことを示唆している。我々の以前の研究により、ヒトＴ細胞を持たないレシピエント動物において、この周術期の急性炎症のエピソードが長期の後遺症なしに回復することが示された。Ｙｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０１２；３２：３５３－３６０。

【0190】

終末補体の阻害は、ＩＲＩによって誘導されるＭＡＣの形成、非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達、およびＥＣの活性化を抑制する。我々は、ＩＲＩによって増悪されるＡＶのヒト化モデルにおいてＢＢ５．１ ｍＡｂの影響を調べた。最初に、図５ａに示されるように、このモデルにおいてＢＢ５．１が終末補体活性化を抑制することができるかどうかを調べた。１２Ｂ４対照ｍＡｂで処置した宿主と比較して、ＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主は、ＩＲＩの誘導後に初期補体活性化（Ｃ４ｄ、図５ｂ、上段）を示したが、終末補体活性化は示さなかった（Ｃ５ｂ－９、図５ｂ、下段）。終末補体の抑制は、ＩＲＩへの暴露後１８時間に見られた有意に減少したＮＩＫ（図５ｃ、上段）、ＶＣＡＭ－１の発現（図５ｃ、真ん中の段）、およびマウスＧｒ－１＋好中球浸潤の減少（図５ｃ、下段）と関連していた。

【0191】

抗Ｃ５ｍＡｂは、ＩＲＩ後のＴ細胞媒介性の新生内膜病変および血栓性ＡＶ病変を軽減する。最終セットの実験において、ＩＲＩに供され、次いで以前に動脈ドナーと同種のヒトＰＢＭＣを投与された宿主に再移植された動脈におけるＡＶ病変の発生に、抗Ｃ５抗体または対照抗体が及ぼす影響を評価した（図６ａ）。移植片採取の直前に第１の宿主に抗体を導入し、移植片採取および分析の前に、第２の宿主において１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂを用いた処置をさらに２週間継続した。免疫蛍光顕微鏡法によると、ＢＢ５．１ 抗Ｃ５ｍＡｂで処置した冠動脈移植片は、ＭＡＣ（Ｃ５ｂ－９）形成（図６ｂ、上段）、ＮＩＫの発現（図６ｂ、２段目）における有意な減少、および同種免疫ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞の壁浸潤における約５０％の減少を示した（図６ｂ、３段目）。興味深いことに、１２Ｂ４またはＢＢ５．１ ｍＡｂのいずれかで処置した宿主において、内膜に有意により多数のＣＤ４＋Ｔ細胞（図６ｂ、下段、左側のグラフ）、および中膜に有意により多数のＣＤ８＋Ｔ細胞（右側のグラフ）が観察された。１２Ｂ４ ｍＡｂで処置した宿主と比較して、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の全体的な数は有意に減少されたが（アスタリスクおよびダブルアスタリスク）、ＢＢ５．１ ｍＡｂは、内膜（ｐ＝０．７６）または中膜（ｐ＝０．２１）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞対ＣＤ８＋Ｔ細胞の比を大幅に変更しなかったことから、抗Ｃ５ｍＡｂがＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤を同程度まで減少させたことが示唆される。上記の変化は、対照と比較してＢＢ５．１ ｍＡｂで処置した宿主の内腔面積を有意に変化させることなく、有意に減少した新生内膜面積と関連しており、ＡＶ病変形成中の同種移植片血管の初期外側リモデリングが示唆される（図６ｃ）。これらのデータは、抗Ｃ５抗体を用いた終末補体の抑制がＩＲＩ後の新生内膜ＡＶ病変の形成を減弱させたことを示す。

【0192】

ＩＲＩ処理した移植片を受け、１２Ｂ４ ｍＡｂで処置された８匹の宿主のうち３匹が瀕死となり、実験プロトコルの間に両側性後肢虚血を発症したため、移植後４日、７日、および１０日目に早期に屠殺した。採取した移植の壊死から、３匹全ての宿主において流れを制限する血栓の存在が明らかになり（図６ｄ、上段）、それをフィブリノゲン染色により確認した（図６ｄ、上段）。低酸素状態に暴露しなかった移植片を移植され、１２Ｂ４ ｍＡｂで処置された宿主が同様の病変を発生しなかったため、血栓は、１２Ｂ４ ｍＡｂ処置の二次的影響によるものではなかった（図１ｄ）。注目すべきなのは、ＢＢ５．１で処置した全ての宿主が、処置期間中に血栓性病変を発生しなかったことである（０／８、図６ｄ、下段）。我々は、抗Ｃ５抗体が、ＩＲＩによって誘導される補体媒介性の新生内膜病変および血栓性ＡＶ病変の両方を予防すると結論付けた。

【0193】

考察

【0194】

我々は、抗Ｃ５治療が、同種抗体またはＩＲＩへの暴露後に発生する実験的ＡＶ病変に及ぼす好ましい影響を実証する。抗Ｃ５の反復投与は、ヒト冠動脈組織において初期ではなく終末の補体活性化を抑制し、非標準的ＮＦ－κＢシグナル伝達の活性化の減弱、ならびにｉｎ ｖｉｖｏでの狭窄性ＡＶ病変および血栓性ＡＶ病変の両方の形成の減少をもたらした。我々の研究は、非標準的ＮＦ－κＢの活性化を伴う終末補体活性化とＩＲＩとの間の因果関係を証明する。抗Ｃ５ｍＡｂで処置した宿主は、対照と比較して減弱なＮＩＫ発現およびＡＶ病変を示した（図６）。ＤＳＡと比較して、ＩＲＩは、内膜の内皮細胞（ＥＣ）および中膜の平滑筋細胞（ＳＭＣ）を含む広い分布領域において血管壁の至るところにＭＡＣ集合を誘導した。ＭＡＣおよび／または非標準的ＮＦ－κＢがこれらの細胞型において異なる機能的影響を誘発するかどうかは分かっておらず、内膜に対する中膜の免疫特権機構を考慮すると（Ｔｅｌｌｉｄｅｓ Ｇ，Ｐｏｂｅｒ ＪＳ Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ ２０１５；１１６：３１２－３２２）、またＩＲＩ後の浸潤性ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の観察された差次的な空間的局在化（図６ｃ）を考慮すると、特に関連性がある。

【0195】

新生内膜の発現に加えて、より最近認識されたＡＶの形態は、塞栓性血栓凝固を引き起こすカスケードの活性化によって特徴づけられる（Ａｔｋｉｎｓｏｎ Ｃ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０；１８５：７００７－７０１３）。Ｔｅｄｅｓｃｏ Ｆ，Ｐａｕｓａ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９７；１８５：１６１９－１６２７、Ｊｉａｎｇ Ｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１４；９２：７９７－８１０。微小血管（Ｊｉａｎｇ Ｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１４；９２：７９７－８１０、Ｌａｂａｒｒｅｒｅ ＣＡ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００６；２５：１２１３－１２２２）および大口径血管（Ｆｉｓｈｂｅｉｎ ＧＡ，Ｆｉｓｈｂｅｉｎ ＭＣ．Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；７３：１２１３－１２１７）に影響を及ぼす血栓性ＡＶ病変は、長期移植片転帰の悪化と関連している。Ｔｏｒｒｅｓ ＳＡ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ Ｄｅｂａｋｅｙ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｊ．２０１２；８：４６－４８。予想外に、我々は、ＩＲＩに供され、次いで循環ヒトＴ細胞を有する動物に移植された我々の血管のうちのいくつかが血栓を発生したのを観察した（図６ｄ）。抗Ｃ５ｍＡｂもまた、移植に関連する関連ＩＲＩの結果としての血栓性合併症を予防した。

【0196】

本試験は、ヒト動脈、同種抗体、およびＰＢＭＣを使用して、げっ歯類におけるモデル化が不十分な疾患であるＣＡＶをモデル化している。Ｐｏｂｅｒ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．２０１４；３４：１６０９－１６１４。しかしながら、活性化される補体成分および凝固因子は、マウス起源である。

【0197】

【配列表フリーテキスト】

【0198】

配列番号１～６＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
配列番号７～１６＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列番号１７～１９＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
配列番号２０＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列番号２１～２６＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
配列番号２７～２８＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列番号２９～３４＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
配列番号３５～３６＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9】

【配列表】

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