特許 7223477 ＴＲＰＶ４活性抑制剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-02-08

(45)【発行日】2023-02-16

(54)【発明の名称】ＴＲＰＶ４活性抑制剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/216 20060101AFI20230209BHJP

   A23L 33/10 20160101ALI20230209BHJP

   C07C 69/732 20060101ALI20230209BHJP

   C07C 69/736 20060101ALI20230209BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20230209BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20230209BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230209BHJP

【ＦＩ】

A61K31/216 ZNA

A23L33/10

C07C69/732 Z

C07C69/736

A61P1/00

A61P13/10

A61P43/00 111

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2018191980

(22)【出願日】2018-10-10

(65)【公開番号】P2020059675

(43)【公開日】2020-04-16

【審査請求日】2021-09-15

(73)【特許権者】

【識別番号】000000918

【氏名又は名称】花王株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】岩下 真純

(72)【発明者】

【氏名】北村 尚也

【審査官】鶴見 秀紀

(56)【参考文献】

【文献】特開２００５－２７２３６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００５－５２６０４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００３－５２１５１１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０

Ｃ０７Ｃ ６９／７３２

Ｃ０７Ｃ ６９／７３６

Ａ６１Ｐ １／００

Ａ６１Ｐ １３／１０

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ２３Ｌ ３３／１０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制剤。

【化1】

【請求項2】

過活動膀胱の予防又は改善のために使用される、請求項１記載の剤。

【請求項3】

過敏性腸症候群の予防又は改善のために使用される、請求項１記載の剤。

【請求項4】

下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制用食品。

【化2】

【請求項5】

過活動膀胱の予防又は改善のために使用される、請求項４記載の食品。

【請求項6】

過敏性腸症候群の予防又は改善のために使用される、請求項４記載の食品。

【請求項7】

下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表されるロズマリン酸誘導体又はその塩。

【化3】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、過活動膀胱や過敏性腸症候群等の予防又は改善に有用な、ロズマリン酸誘導体又はその塩に関する。

【背景技術】

【0002】

ＴＲＰＶ４（Transient receptor potential cation channel subfamily V member 4）は、温度感受性ＴＲＰチャネルを構成するタンパク質の１つである。ＴＲＰＶ４は、腎、肺、膀胱、心臓、皮膚、脳、消化管など幅広い組織で発現しており、異なった幅広い生理的役割を果たしていると考えられている。

【0003】

腎の遠位尿細管上皮細胞には特に強くＴＲＰＶ４が発現しており、ＴＲＰＶ４の作用により尿の浸透圧や流量が感知されることが示唆されている（非特許文献１）。また、ＴＲＰＶ４は膀胱の機能に関与することが報告されている（非特許文献２）。すなわち、膀胱内側の膀胱上皮細胞にはＴＲＰＶ４が存在し、尿が溜まって膀胱上皮細胞が伸展した場合に、ＴＲＰＶ４などにより構成されるＴＲＰＶチャネルを介して、細胞内にカルシウムが流入する。このカルシウムの流入によってＡＴＰが細胞から放出され、膀胱の膨らみが神経に伝わる。また、ＴＲＰＶ４が排尿間隔に及ぼす影響は、ＴＲＰチャネルを構成する他のタンパク質よりも大きいことが報告されている（非特許文献３）。

【0004】

また、過敏性腸症候群（Irritable Bowel Syndrome：ＩＢＳ）は、細菌やウイルスの感染による腸炎や、潰瘍性大腸炎・大腸がん等の病気とは異なり、検査を行っても炎症や潰瘍といった器質的疾患が認められないにもかかわらず、下痢や便秘、腹痛、ガス過多による下腹部の張りなどの腹部不快感が生じる疾患である。ＩＢＳ患者ではＴＲＰＶ４アゴニストである多価不飽和脂肪酸の代謝産物（５，６－エポキシエイコサトリエン酸；５，６－ＥＥＴ）量が結腸で多いこと、当該５，６－ＥＥＴを含む結腸の破砕液をマウス結腸へ投与した場合に腸運動反応が増加して腸が過剰反応するが、この場合においてＴＲＰＶ４の発現を抑制すると当該過剰反応が抑制されることが報告されている（非特許文献４）。

【0005】

したがって、ＴＲＰＶ４活性を阻害することにより、過活動膀胱や過敏性腸症候群を予防又は改善することが期待される。

【0006】

一方、下記構造式で表される３’－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（ｉ）、４’－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（ｉｉ）、または３，３’－Ｏ－ジメチル－ロズマリン酸（ｉｉｉ）等の特定のロズマリン酸誘導体がシクロオキシゲナーゼ２の誘導抑制活性を有し、抗炎症作用があることが報告されている（特許文献２）。

【0007】

【化1】

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【文献】特開２０１４－２４８０９号公報

【文献】特開２００５－２７２３６２号公報

【非特許文献】

【0009】

【文献】Tian W.，Am．J．Physiol．Renal．Physiol.，2004，287，p．F17-F24

【文献】Nilius B.，Physiol．Rev.，2007，87，p．165-217

【文献】Gevaert T.，J．Clin．Invest.，2007，117，p．3453-3462

【文献】Nicolas Cenac et al., Gastroenterology 2015 149, 433-444

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

本発明は、ＴＲＰＶ４の活性を抑制し、過活動膀胱や過敏性腸症候群等の予防又は改善に有用な化合物を提供することに関する。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明者等は、ロズマリン酸誘導体について検討を行った結果、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）で示されるロズマリン酸誘導体が、優れたＴＲＰＶ４活性抑制作用を有し、過活動膀胱や過敏性腸症候群等の予防又は改善のために有用であることを見出した。

【0012】

すなわち、本発明は、以下の１）～７）に係るものである。
１）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制剤。
２）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。
３）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過敏性腸症候群の予防又は改善剤。
４）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制用食品。
５）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善用食品。
６）下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過敏性腸症候群の予防又は改善用食品。
７）下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表されるロズマリン酸誘導体又はその塩。

【0013】

【化2】

【発明の効果】

【0014】

本発明のロズマリン酸誘導又はその塩は、ＴＲＰＶ４活性を効果的に抑制することができ、ＴＲＰＶ４チャネルが活性化されることによって生じる疾患、例えば過活動膀胱や過敏性腸症候群の予防又は改善に有用である。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明のロズマリン酸誘導体は、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）で示されるものであり、（Ｉａ）で示される化合物は４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、（Ｉｂ）で示される化合物は４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、（Ｉｃ）で示される化合物は３、４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、（Ｉｄ）で示される化合物は３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸である。このうち、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で示される化合物は、これまでに単離又は合成されたことがない、新規化合物である。
なお、化合物（Ｉａ）は（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－｛［３－（４－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル）アクリロイル］オキシ｝プロピオン酸、（Ｉｂ）は（Ｅ）－３－（３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）－２－｛［３－（３－ヒドロキシ－４－メトキシフェニル）アクリロイル］オキシ｝プロピオン酸、（Ｉｃ）は（Ｅ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）－２－｛［３－（３、４－ジヒドロキシフェニル）アクリロイル］オキシ｝プロピオン酸、（Ｉｄ）は（Ｅ）－３－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－２－｛［３－（３、４－ジメトキシフェニル）アクリロイル］オキシ｝プロピオン酸と表記することもできる。

【0016】

【化3】

【0017】

本発明のロズマリン酸誘導体には光学異性体が存在するが、いずれかの光学異性体であっても、光学異性体の混合物であってもよい。本発明ではＲ体又は光学異性体混合物が好ましい。

【0018】

本発明のロズマリン酸誘導体の塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン等のアミン類との塩等を挙げることができる。

【0019】

本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩は、未溶媒和型のみならず、水和物又は溶媒和物としても存在することができる。従って、本発明においては、その全ての結晶型及び水和若しくは溶媒和物を含むものである。溶媒和物の好ましい例としては、水和物、アルコール和物、アセトン和物などが挙げられる。

【0020】

本発明のロズマリン酸誘導体は、例えば後記製造例に示す方法により製造できる。以下に、（Ｉａ）～（Ｉｄ）の合成スキームを例示する。

【0021】

１． ４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉａ）の合成例

【0022】

【化4】

【0023】

２． ４，４’－ジ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｂ）の合成例

【0024】

【化5】

【0025】

３． ３、４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｃ）の合成例

【0026】

【化6】

【0027】

４． ３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｄ）の合成例

【0028】

【化7】

【0029】

後記実施例で示すように、本発明のロズマリン酸誘導体は、ＴＲＰＶ４活性を抑制する。すなわち、ＴＲＰＶ４刺激物質（ＴＲＰＶ４作動薬、アゴニスト）の存在下で、ＴＲＰＶ４遺伝子導入により、ＴＲＰＶ４が機能的に発現している形質転換細胞（ＴＲＰＶ４発現細胞）と当該ロズマリン酸誘導体とを接触させた場合、ＴＲＰＶ４刺激物質による細胞内の陽イオン量の流入を抑制するという、ＴＲＰＶ４活性抑制作用を有する。
したがって、本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩は、ＴＲＰＶ４活性抑制剤となり、ＴＲＰＶ４活性抑制のため、或いはＴＲＰＶ４活性抑制剤を製造するために使用できる。

【0030】

前述のとおり、ＴＲＰＶ４は、膀胱内側の膀胱上皮細胞に存在する。尿が溜まって膀胱上皮細胞が伸展した場合、ＴＲＰＶ４チャネルを介して細胞内にカルシウムが取り込まれ、これによってＡＴＰが細胞表面から放出され、膀胱の膨らみが神経に伝達される。したがって、ＴＲＰＶ４の活性を抑制することにより、過活動膀胱を予防又は改善することができる。また、過敏性腸症候群患者の結腸においては、多価不飽和脂肪酸の代謝産物である５，６－ＥＥＴ（ＴＲＰＶ４アゴニスト）の量が多いこと、また当該５，６－ＥＥＴを含む結腸の破砕液をマウス結腸へ投与した場合に腸が過剰反応し、当該過剰反応はＴＲＰＶ４の発現を抑制することにより抑制されることが報告されている（前記非特許文献１）ことから、ＴＲＰＶ４活性を抑制することにより、過敏性腸症候群を予防又は改善することができる。
したがって、本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩は、過活動膀胱の予防又は改善剤、過敏性腸症候群の予防又は改善剤となり、過活動膀胱や過敏性腸症候群の予防又は改善のため、或いは過活動膀胱や過敏性腸症候群の予防又は改善剤を製造するために使用できる。

【0031】

本発明において「ＴＲＰＶ４」とは、「Transient receptor potential cation channel subfamily V member 4」を意味する。ＴＲＰＶ４は、ヒトにおいてＴＲＰＶ４遺伝子によってコードされているタンパク質である。
また、「ＴＲＰＶ４の活性抑制」とは、受容体であるＴＲＰＶ４の活性を抑制することを指す。具体的には、ＴＲＰＶ４刺激物質がＴＲＰＶ４に結合することによって発現する活性、例えばイオン流束の調節能（例えば、細胞外から細胞内へのカルシウムイオン、ナトリウムイオンなどの陽イオンの輸送能など）、膜電位の調節能（例えば、電流の発生能など）を抑制又は阻害することを意味する。

【0032】

本発明において、「過活動膀胱」とは尿意切迫感を必須とした症状症候群であり、通常頻尿や切迫性尿失禁を伴うものを指す。また、「過敏性腸症候群」とは、主として大腸の運動および分泌機能の異常で起こる疾患の総称であり、細菌やウイルスの感染による腸炎や、潰瘍性大腸炎・大腸がん等の病気とは異なり、検査では異常が見当たらないが下痢や便秘を繰り返す症状が続く場合に診断される疾患を意味する。

【0033】

本発明において、ＴＲＰＶ４活性抑制のため、過活動膀胱或いは過敏性腸症候群の予防又は改善のための「使用」は、ヒトを含む動物への投与又は摂取であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。

【0034】

なお、本明細書において「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止若しくは遅延、又は個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。また、「改善」とは、疾患、症状若しくは状態の好転、疾患、症状若しくは状態の悪化の防止若しくは遅延、又は疾患、症状若しくは状態の進行の逆転、防止若しくは遅延をいう。

【0035】

本発明のＴＲＰＶ４活性抑制剤、過活動膀胱若しくは過敏性腸症候群の予防又は改善剤は、ヒトを含む動物に摂取又は投与した場合に、ＴＲＰＶ４活性抑制効果、過活動膀胱或いは過敏性腸症候群の予防又は改善効果を発揮する医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品となり、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤となり得る。
また、本発明の食品には、一般飲食品のほか、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示食品、サプリメントが包含される。

【0036】

本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩を含む上記医薬品（医薬部外品を含む）は、任意の投与形態で投与され得るが、経口投与が好ましい。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態で投与することができる。

【0037】

このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。

【0038】

また、本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩を配合した上記食品の形態は、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、さらには、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、トローチ剤等の固形製剤）の栄養補給用組成物が挙げられる。なかでも、錠剤が好ましく、チュアブル錠がより好ましい。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。

【0039】

上記の医薬品（医薬部外品を含む）や食品中の本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩の含有量は、その使用形態により異なるが、通常、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下である。また、好ましくは０．０１～１００質量％、より好ましくは０．１～９０質量％、更に好ましくは１～７０質量％である。

【0040】

本発明のロズマリン酸誘導体又はその塩を医薬品や食品として、或いは医薬品や食品に配合して使用する場合のヒトへの投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、通常、当該ロズマリン酸誘導体又はその塩として、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上、更に好ましくは１０ｍｇ以上であり、また、好ましくは２０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下、更に好ましくは２００ｍｇ以下である。また、好ましくは０．１～２０００ｍｇ、より好ましくは１～５００ｍｇ、更に好ましくは１０～２００ｍｇである。
また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回～数回に分け、数週間～数ヶ月間継続して投与することが好ましい。

【0041】

投与又は摂取対象としては、ＴＲＰＶ４活性抑制、過活動膀胱、過敏性腸症候群の予防又は改善を必要とする若しくは希望するヒトを含む動物であれば特に限定されないが、過活動膀胱又は尿意切迫感及び切迫性尿失禁等の排尿障害などの症状を呈するヒト、ストレス等により下痢や便秘、腹痛、ガス過多による下腹部の張りなどの症状を呈するヒトへの投与又は摂取が有効である。

【0042】

上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制剤。
＜２＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。
＜３＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過敏性腸症候群の予防又は改善剤。
＜４＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とするＴＲＰＶ４活性抑制用食品。
＜５＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善用食品。
＜６＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を有効成分とする過敏性腸症候群の予防又は改善用食品。
＜７＞下記式（Ｉａ）又は（Ｉｂ）で表されるロズマリン酸誘導体又はその塩。

【0043】

＜８＞ＴＲＰＶ４活性抑制剤を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。
＜９＞過活動膀胱の予防又は改善剤を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。
＜１０＞過敏性腸症候群の予防又は改善剤を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。
＜１１＞ＴＲＰＶ４活性抑制用食品を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。
＜１２＞過活動膀胱の予防又は改善用食品を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。
＜１３＞過敏性腸症候群の予防又は改善用食品を製造するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の使用。

【0044】

＜１４＞ＴＲＰＶ４活性抑制に使用するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩。
＜１５＞過活動膀胱の予防又は改善に使用するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩。
＜１６＞過敏性腸症候群の予防又は改善に使用するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるで表されるロズマリン酸誘導体又はその塩。

【0045】

＜１７＞ＴＲＰＶ４活性を抑制するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の非治療的使用。
＜１８＞過活動膀胱を予防又は改善するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の非治療的使用。
＜１９＞過敏性腸症候群を予防又は改善するための、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩の非治療的使用。

【0046】

＜２０＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取するＴＲＰＶ４活性抑制方法。
＜２２＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する過活動膀胱の予防又は改善方法。
＜２３＞下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）から選ばれるロズマリン酸誘導体又はその塩を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する過敏性腸症候群の予防又は改善方法。

【0047】

＜２４＞＜１＞及び＜８＞のＴＲＰＶ４活性抑制剤、＜２＞及び＜９＞の過活動膀胱の予防又は改善剤、＜３＞及び＜１０＞の過敏性腸症候群の予防又は改善剤、＜４＞及び＜１１＞のＴＲＰＶ４活性抑制用食品、＜５＞及び＜１２＞の過活動膀胱の予防又は改善用食品、＜６＞及び＜１３＞の過敏性腸症候群の予防又は改善用食品における、前記有効成分の含有量は、総量中好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下であるか、又は好ましくは０．０１～１００質量％、より好ましくは０．１～９０質量％、更に好ましくは１～７０質量％である。

【0048】

＜２５＞＜１４＞～＜２３＞において、成人１人当たりの１日の投与量は、下記式（Ｉａ）～（Ｉｄ）で表されるロズマリン酸誘導体又はその塩として、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上、更に好ましくは１０ｍｇ以上であり、また、好ましくは２０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下、更に好ましくは２００ｍｇ以下であるか、又は好ましくは０．１～２０００ｍｇ、より好ましくは１～５００ｍｇ、更に好ましくは１０～２００ｍｇである。

【0049】

【化8】

【実施例】

【0050】

以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
＜試薬＞
フェルラ酸、イソフェルラ酸、イソバニリン、Ｎ－アセチルグリシン、３，４－ジメトキシベンズアルデヒド、３，４－ジメトキシけい皮酸、カフェ酸は東京化成工業株式会社より購入して用いた。臭化アリル（Ａｌｌｙｌ－Ｂｒ）、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、テトラブチルアンモニウムヨージド（ＴＢＡＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（[Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４]）、モルホリン、３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、炭酸カリウム（Ｋ_２ＣＯ_３）、１，４－ジオキサン、ジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は富士フィルム和光純薬株式会社より購入して用いた。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）は株式会社同仁化学研究所より購入して用いた。酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）はシグマアルドリッチジャパン合同会社より購入して用いた。無水酢酸（Ａｃ_２Ｏ）、塩酸、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ_４）、ぎ酸、メタノール（ＭｅＯＨ）、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、クロロホルム（ＣＨＣｌ_３）は関東化学株式会社より購入して用いた。

【0051】

製造例１ ４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉａ）の合成
１）化合物１の合成

【0052】

【化9】

【0053】

３００ｍＬナスフラスコにイソバニリン（１５．２２ｇ、１００ｍｍｏｌ）とＮ－アセチルグリシン（１５．２２ｇ、１３０ｍｍｏｌ）、無水酢酸（５０ｍＬ）を加えた後、酢酸ナトリウム（１０．６６ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を加え、１２０℃加熱下２日間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチル（３００ｍＬ）にて希釈、不溶物をろ紙を用いてろ過した。得られた溶液を、イオン交換水、飽和食塩水（各２００ｍＬ）にて２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（２：１、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１（１４．５４ｇ、５２．８ｍｍｏｌ、５３％）を得た。

【0054】

^１Ｈ－ＮＭＲ （６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．８１（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｓ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ)、２．３９（ｓ、３Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）.
^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６８．８４、１６７．９６、１６５．３８、１５３．６７、１３９．９２、１３２．２２、１３１．２０、１３０．４１、１２６．４０、１２６．１７、１１２．１４、５６．０６、２０．７０、１５．６７．

【0055】

２）化合物２の合成

【0056】

【化10】

【0057】

３００ｍＬナスフラスコに化合物１（３．８５ｇ、１３．９９ｍｍｏｌ）を加えた後、１，４－ジオキサン（７０ｍＬ）、３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（７０ｍＬ）を順次加え、９０℃加熱下、６時間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチルで希釈、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和食塩水（各２００ｍＬ）で２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム－メタノール（９０：１０→６０：４０、ｖ／ｖ））により精製した。得られた目的物（３．１２ｇ）は、粗精製物として、次の反応に用いた。

【0058】

３）化合物３の合成

【0059】

【化11】

【0060】

２００ｍＬナスフラスコに化合物２（１．５８ｇ、７．５ｍｍｏｌ）と２５体積％メタノール／イオン交換水（８０ｍＬ）を加え懸濁させた後、氷浴で冷却した。続いて１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（８ｍＬ）を加え、澄明な溶液を得た。この時、溶液のｐＨは１２．０であった。水素化ホウ素ナトリウム（０．４３ｇ、１１．２５ｍｍｏｌ）を加えた後、氷浴を除去し、室温にて１７時間攪拌した。攪拌後、氷浴での冷却下３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（３０ｍＬ）を加え、反応溶液を酸性化することで反応を停止した。引き続き、酢酸エチル（１００ｍＬ）にて３回抽出、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各１００ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（９５：５→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製した。得られた目的物（１．０５ｇ）は、粗精製物として、次の反応に用いた。

【0061】

４）化合物４の合成

【0062】

【化12】

【0063】

２００ｍＬナスフラスコに、化合物３（９７２．２ｍｇ、４．５８ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨージド（５０６．０ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加えた後、アセトン（５０ｍＬ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、炭酸カリウム（１．９０ｇ、１３．７４ｍｍｏｌ）と臭化アリル（１．６６ｇ、１３．７４ｍｍｏｌ）を順次加え、５０℃加熱下１６時間攪拌した。その後室温まで冷却し、アセトン（１００ｍＬ）により希釈し、不溶物をろ過した後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去し反応残渣（１．７８ｇ）を得た。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（８０：２０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物４（９５２．３ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ、５０％（３工程））を得た。

【0064】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ６．８０（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．７５（ｍ、２Ｈ）、６．０７（ｍ、１Ｈ）、５．９０（ｍ、１Ｈ）、５．３９（ｄｄ,Ｊ＝１７．２、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．３４（ｄｄ、Ｊ＝１７．２、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．２９（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、１．３Hz、１Ｈ）、４．６５（ｍ、２Ｈ）、４．５９（ｍ、２Ｈ）、４．４４(ｄｔ、Ｊ＝６．４、４．４Ｈｚ、１Ｈ)、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．０７（ｄｄ,Ｊ＝１４．０、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．９２（ｄｄ、Ｊ＝１４.１、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）.
^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １７３．８３、１４８．４７、１４７．７４、１３３．３０、１３１．４１、１２８．５０、１２２．０１、１１９．２５、１１８．０３、１１４．８６、１１１．５２、７１．３２、６９．８２、６６．２５、５５．９４、４０．０１.

【0065】

５）化合物５の合成

【0066】

【化13】

【0067】

２００ｍＬナスフラスコに、フェルラ酸（０．９７ｇ、５．００ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムヨージド（０．５９ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を加えた後、アセトン（５０ｍＬ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、炭酸カリウム（２．１３ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）、臭化アリル（３．０８ｇ、２５．４１ｍｍｏｌ）を加え、５０℃加熱下で７時間攪拌した。攪拌後吸引ろ過を行い、不要物を除去した。得られた溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各１００ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９５：５→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物５（１．１０ｇ、４．０１ｍｍｏｌ、８０％）を得た。

【0068】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７.６５（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０７（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．３４（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．０８（ｍ、１Ｈ）、６．００（ｍ、１Ｈ）、５．４２（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、１.４Ｈｚ、１Ｈ）、５．３８（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．３１（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｄｄ、Ｊ＝１１．５、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｍ、２Ｈ）、４．６５（ｍ、２Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）．

【0069】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６６．８６、１５０．１２、１４９．５０、１４４．９９、１３２．７３、１３２．３９、１２７．５１、１２２．４７、１１８．４８、１１８．２３、１１５．５７、１１２．７６、１０９.９３、６９．７３、６５．１２、５５．１２.

【0070】

６）化合物６の合成

【0071】

【化14】

【0072】

１００ｍＬナスフラスコに化合物５（８２９．５ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を入れた後、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）、１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）を加え、室温で１５時間攪拌した。その後酢酸エチルを加えた後、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（２０ｍＬ）で２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物６（６７８．５ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ、９７％）を得た。

【0073】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．２５（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ ＝１．９ Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｄｄ、Ｊ ＝８．３、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．４５（ｄ、Ｊ ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｍ、１Ｈ）、５．４０（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｄｄ、Ｊ＝１０．４、１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．６０（ｄ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２（ｓ、３H).

【0074】

^１３Ｃ－ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ, ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １６８．３９、１５０．００、１４９．６０、１４４．５６、１３３．９８、１２７．７２、１２２．９７、１１８．３０、１１７．３０、１１３．３６、１１０．９８、６９．２６、５６．０８.

【0075】

７）化合物７の合成

【0076】

【化15】

【0077】

５０ｍＬナスフラスコに、化合物４（２１７．２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、４－ジメチルアミノピリジン（１８７．１ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、化合物６（２３４．３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加した後、氷浴を用いて冷却しつつ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２８７．６ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１８時間攪拌した。攪拌後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各５０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９０：１０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物７（３０８．４ｍｇ、０．６０６ｍｍｏｌ、８１％）を得た。

【0078】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６４（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｍ、３Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．０６（ｍ、２Ｈ）、５．８６（ｍ、１Ｈ）、５．４２（ｄｄ、Ｊ＝１７．２、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．３４（ｍ、４Ｈ）、５．２５（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５（ｍ、４Ｈ）、４．５８（ｍ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．１３（ｄｄ,Ｊ＝１４．４、８．４Ｈｚ、１Ｈ）.

【0079】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６９．６４、１６６．３６、１５０．３４、１４９．５２、１４８．５１、１４７．７６、１４６．０２、１３３．２２、１３２．６７、１３１．４８、１２８．２６、１２７．３１、１２２．７９、１２１．８９、１１８．８３、１１８.５３、１１８．０５、１１４．７１、１１４．６６、１１２．７１、１１１．５５、１０９．９２、７３．０２、６９．８８、６９．７３、６５．９６、５５．９５、５５．９４、３７．０８.

【0080】

８）４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉａ）の合成

【0081】

【化16】

【0082】

３０ｍＬナスフラスコに化合物７（９０．２ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、モルホリン（５４２．３ｍｇ、６．２３ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて冷却しつつ攪拌し、澄明な溶液を得た。続いて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４８．５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。その後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４７．６ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。更にその後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４５．８ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。続いて、氷浴下酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した後に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉａ、９０．２ｍｇ、０．２４１ｍｍｏｌ、５７％）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．６４（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝８．２、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．３８（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．２３（ｄｄ、Ｊ＝８．５、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．１５（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．０６（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、８．５Ｈｚ、１Ｈ）.

【0083】

製造例２ ４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｂ）の合成
１）化合物８の合成

【0084】

【化17】

【0085】

アルゴン雰囲気下、イソフェルラ酸（１．５０ｇ、７．７２ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン７ｍＬを加えた。さらに、５５％水素化ナトリウム（１．０１ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）、臭化アリル（１６．８ｍＬ、１３９ｍｍｏｌ）、ＴＢＡＩ（２８５ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を順次加え、７０℃加熱環流条件下、２４時間撹拌した。その後、反応系に８ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１６ｍＬおよびイオン交換水１００ｍＬを加え、クロロホルム １００ｍＬで３回抽出した。無水硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥させた後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（８５：１５，ｖ/ｖ））、化合物８ １．８８ｇ（８９％）を得た。

【0086】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６４（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ），７．０６（ｄ、Ｊ＝１．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝２２．６、１０．８、５．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｄｄｄ，Ｊ＝２２．７、１０．８、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．４０（ｄｄｄｄ、Ｊ＝３１．２、１７．１、２．８、１．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．３０（ｄｄｄｄ、Ｊ＝２７．０、１０．３、２．５、１．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．７１（ｄｔ、Ｊ＝５．５、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｄｔ、Ｊ＝５．３、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）.

【0087】

２）化合物９の合成

【0088】

【化18】

【0089】

アルゴン雰囲気下、化合物８（１．８８ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）に１，４－ジオキサン３４ｍＬおよび０．４ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液３４ｍＬを加え、５０℃、７時間撹拌した。その後、反応系にイオン交換水１００ｍＬを加え、クロロホルム１００ｍＬで２回洗浄した。さらに、水層に１．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液を１０ｍＬ加えた後、クロロホルム１００ｍＬで３回抽出した。無水硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥させた後、溶媒を減圧留去し、化合物９ １．４０ｇ（８４％）を得た。

【0090】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．７１（ｄ，Ｊ＝１５.８Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝２２．６，１０．５，５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．３，３．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．５，２．６，１．１Ｈｚ，１Ｈ），４.６５（ｄｔ，Ｊ＝５．７，１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ）.

【0091】

３）化合物１０の合成

【0092】

【化19】

【0093】

５０ｍＬナスフラスコに、化合物４（１６１．９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、４－ジメチルアミノピリジン（１８４．８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、化合物９（２３４．３ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加した後、氷浴を用いて冷却しつつ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２８７．６ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１８時間攪拌した。攪拌後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各５０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９０：１０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１０（２８２．５ｍｇ、０．５５５ｍｍｏｌ、７４％）を得た。

【0094】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｍ、３Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０８（ｍ、２Ｈ）、５．８６（ｍ、１Ｈ）、５．４２（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．３５（ｍ、３Ｈ）、５．３０（ｄｄ、Ｊ＝１０．７、１．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．２５（ｄｄ、Ｊ＝１０．５、１.３Ｈｚ、１Ｈ）、５．２４（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６４（ｍ、４Ｈ）、４．５９（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．１３（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、８．４Ｈｚ、１Ｈ）.

【0095】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６９．６４、１６６．３８、１５１．７８、１４８．５０、１４８．１４、１４７．７６、１４６．０３、１３３．２１、１３２．８３、１３１．４８、１２８．２８、１２７．０１、１２３．１８、１２１．８９、１１８．８２、１１８.４３、１１８．０６、１１４．７１、１１４．５６、１１１．７９、１１１．５５、１１１．２９、７３．０３、６９．８７、６５．９５、５６．０１、５５．９４、３７．０７.

【0096】

４）４、４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｂ）の合成

【0097】

【化20】

【0098】

３０ｍＬナスフラスコに化合物１０（１０１．７ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、モルホリン（５４２．３ｍｇ、６．２３ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて冷却しつつ攪拌し、澄明な溶液を得た。続いて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（５０．１ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。その後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４５．７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温下２時間攪拌した。更にその後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４５．８ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。続いて、氷浴下酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した後に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、４、４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（化合物Ｉｂ、７３．９ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．５９（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｍ、２Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｄｄ、Ｊ＝７．９、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、５.２２（ｄｄ、Ｊ＝８．５、４．４ Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．１５（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、８．４Ｈｚ、１Ｈ）.

【0099】

製造例３ ３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｃ）の合成
１）化合物１１の合成

【0100】

【化21】

【0101】

３００ｍＬナスフラスコにイソバニリン（１６．６２ｇ、１００ｍｍｏｌ）とＮ－アセチルグリシン（２２．２５ｇ、１９０ｍｍｏｌ）、無水酢酸（７０ｍＬ）を加えた後、酢酸ナトリウム（１０．６６ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を加え、１２０℃加熱下２日間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチル（３００ｍＬ）にて希釈、不溶物をろ紙を用いてろ過した。得られた溶液を、イオン交換水、飽和食塩水（各２００ｍＬ）にて２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（２：１、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１１（７．７３ｇ、３１．３ｍｍｏｌ、３１％）を得た。

【0102】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．９４（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７.５１（ｄｄ、Ｊ＝８．５、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１２（ｓ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、
Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９６（ｓ、３Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）.

【0103】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６８．１８、１６４．９０、１５１．９１、１４９．１０、１３１．７０、１３０．５０、１２７．３６、１２６．４４、１１３．７８、１１０．８３、５６．０１、５５．９５、１５．７４.
２）化合物１２の合成

【0104】

【化22】

【0105】

３００ｍＬナスフラスコに化合物１１（３．９２ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ）を加えた後、１，４－ジオキサン（５０ｍＬ）、３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（５０ｍＬ）を順次加え、９０℃加熱下、６時間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチルで希釈、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和食塩水（各２００ｍＬ）で２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：クロロホルム－メタノール（９０：１０→６０：４０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１２（３．５９ｇ）を定量的に得た。

【0106】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．５９（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．４６（ｓ、１Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）.

【0107】

^１３Ｃ－ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ, ＣＤ_３ＯＤ） δ １６７．２３、１４８．６１、１４８．５８、１３９．６０、１２８．３７、１２２．９９、１１２．８２、１１１．０６、１１０．２５、５４．９２、５４．９０.

【0108】

３）化合物１３の合成

【0109】

【化23】

【0110】

２００ｍＬナスフラスコに化合物１２（１．５７ｇ、７．０ｍｍｏｌ）と２５体積％メタノール／イオン交換水（６０ｍＬ）を加え懸濁させた後、氷浴で冷却した。続いて１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（６ｍＬ）を加え、澄明な溶液を得た。この時、溶液のｐＨは１２．０であった。水素化ホウ素ナトリウム（０．４０ｇ、１０．５０ｍｍｏｌ）を加えた後、氷浴を除去し、室温にて１７時間攪拌した。攪拌後、氷浴での冷却下３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（３０ｍＬ）を加え、反応溶液を酸性化することで反応を停止した。引き続き、酢酸エチル（１００ｍＬ）にて３回抽出、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各１００ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（９５：５→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１３（１．１０ｇ、６９％）を得た。

【0111】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９０（ｄ、Ｊ＝１．９ Ｈｚ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８２（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｄｄ、Ｊ＝７．４、４．７ Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、３Ｈ）、３．０５（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、４．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．８７（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、７．８ Ｈｚ、１Ｈ）．

【0112】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ １７５．７７、１４８．７２、１４７．８０、１３０．３０、１２１．５８、１１３．１２、１１１．４６、７１．４６、５５．０７、５４.９３、３９．７６.

【0113】

４）化合物１４の合成

【0114】

【化24】

【0115】

２００ｍＬナスフラスコに、化合物１３（７６６．５ｍｇ、３．３９ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨージド（３７３．１ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加えた後、アセトン（４０ｍＬ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、炭酸カリウム（１．４０ｇ、１０．１６ｍｍｏｌ）と臭化アリル（２．０５ｇ、１６．９４ｍｍｏｌ）を順次加え、５０℃加熱下１６時間攪拌した。その後室温まで冷却し、アセトン（１００ｍＬ）により希釈し、不溶物をろ過した後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去し反応残渣（１．７８ｇ）を得た。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（８０：２０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１４（９４６．６ｍｇ、３．５５ｍｍｏｌ）を定量的に得た。

【0116】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ６．７９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｍ、２Ｈ）、５．９１（ｍ、１Ｈ）、５．３６（ｄｄ、Ｊ＝１７．２Ｈｚ、１．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．２９（ｄｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ、１．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．６６（ｍ、２Ｈ）、４．４５（ｍ、１Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．０９（ｄｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、４．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．９４（ｄｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）．

【0117】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １７３．８６、１４８．７６、１４８．００、１３１．４０、１２８．６５、１２１．５８、１１９．２６、１１２．６８、１１１．０８、７１．３４、６６．２５、５５．８７、５５．８２、４０．０８.

【0118】

５）化合物１５の合成

【0119】

【化25】

【0120】

２００ｍＬナスフラスコに、カフェ酸（１．８０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムヨージド（０．７４ｇ、２．００ｍｍｏｌ）を加えた後、アセトン（１００ｍＬ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、炭酸カリウム（６．９１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）、臭化アリル（６．０６ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を加え、５０℃加熱下で１６時間攪拌した。攪拌後吸引ろ過を行い、不要物を除去した。得られた溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各１００ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９５：５→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１５（１．７７ｇ、５８．９ｍｍｏｌ、５９％）を得た。

【0121】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６３（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｍ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．０７（ｍ、２Ｈ）、５．９８（ｍ、１Ｈ）、５．４３（ｍ、２Ｈ）、５．３７（ｄｄ、Ｊ＝１７．３、１．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｍ、２Ｈ）、５．２７（ｄｄ、Ｊ＝１０．３、１.２Ｈｚ、１Ｈ）、４．７０（ｍ、２Ｈ）、４．６３（ｍ、４Ｈ）.

【0122】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６６．８５、１５０．６２、１４８．４９、１４４．９４、１３３．０４、１３２．８５、１３２．３７、１２７．４６、１２２．７２、１１８．２２、１１８．０３、１１７．９６、１１５．５４、１１３．３０、１１２．５０、６９.９０、６９．６９、６５．１０.

【0123】

６）化合物１６の合成

【0124】

【化26】

【0125】

１００ｍＬナスフラスコに化合物１５（１．２１ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を入れた後、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、メタノール（１０ｍＬ）と１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）を加え、室温で１５時間攪拌した。その後酢酸エチルを加えた後、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各２０ｍＬ）で２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１６（１．１０ｇ）を定量的に得た。

【0126】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １２．２５（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝１．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０（ｄｄ、Ｊ＝８．４、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０５（ｍ、２Ｈ）、５．４２（ｍ、２Ｈ）、５．２７（ｍ、２Ｈ）、４．６２（ｍ、４Ｈ）.

【0127】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ,ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １６８．３６、１５０．２８、１４８．４０、１４４．５１、１３４．２６、１３４．０１、１２７．６８、１２３．２１、１１８．００、１１７．８９、１１７．３２、１１３．７４、１１２．６９、６９．３３、６９．２１.

【0128】

７）化合物１７の合成

【0129】

【化27】

【0130】

５０ｍＬナスフラスコに、化合物１４（２０２．１ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、４－ジメチルアミノピリジン（１８４．４ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、化合物１６（２３４．９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加した後、氷浴を用いて冷却しつつ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２９０．９ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、室温にて１８時間攪拌した。攪拌後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各５０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９０：１０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１７（３８４．４ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、１００％）を得た。

【0131】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６２（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｍ、３Ｈ）、６．３０（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０７（ｍ、２Ｈ）、５．８８（ｍ、１Ｈ）、５．４２（ｍ、２Ｈ）、５．３４（ｍ、１Ｈ）、５．３０（ｍ、３Ｈ）、５．２４（ｍ、１Ｈ）、４．６４（ｍ、６Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．２０（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．１５（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、８．４Ｈｚ、１Ｈ）.

【0132】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６９．６５、１６６．３７、１５０．８７、１４８．７７、１４８.５１、１４８．０５、１４６．００、１３３．０２、１３２．８２、１３１．４７、１２８．３６、１２７．２７、１２３．０２、１２１．４９、１１８．８４、１１８．０９、１１８．００、１１４．６４、１１３．２６、１１２．５７、１１２．４８、１１１．１２、７３．０４、６９．９５、６９．７０、６５．９５、５５．８７、５５．８６、３７．１５.

【0133】

８）３、４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｃ）の合成

【0134】

【化28】

【0135】

３０ｍＬナスフラスコに化合物１７（９９．９ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、モルホリン（５２２．６ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて冷却しつつ攪拌し、澄明な溶液を得た。続いて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４６．８ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。その後、氷浴下酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した後に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、３、４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（化合物Ｉｃ、５６．５ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ、７７％）を得た。

【0136】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．４５（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．８３（ｍ、２Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．７４（ｄｄ、Ｊ＝８．１、２．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．６８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．１４（ｄｄ、Ｊ＝８．５、４．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｓ、３Ｈ）、３．１０（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．０１（ｄｄ、Ｊ＝１４．３、８．７Ｈｚ、１Ｈ）．

【0137】

製造例４ ３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｄ）の合成
１）化合物１８の合成

【0138】

【化29】

【0139】

２００ｍＬナスフラスコに３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（６．９１ｇ、５０ｍｍｏｌ）とＮ－アセチルグリシン（７．６１ｇ、６５ｍｍｏｌ）、無水酢酸（５０ｍＬ）を加えた後、酢酸ナトリウム（５．３３ｇ、６５ｍｍｏｌ）を加え、１２０℃加熱下１６時間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチル（３００ｍＬ）にて希釈、不溶物をろ紙を用いてろ過した。得られた溶液を、イオン交換水、飽和食塩水（各２００ｍＬ）にて２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（２：１、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１８（９．７８ｇ、３７．４ｍｍｏｌ、７５％）を得た。

【0140】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ８．０６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ， １Ｈ）、７．８８（ｄ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｓ、１Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）．

【0141】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６８．０５、１６７．８０、１６７．４６、１６６．７１、１４４．１６、１４２．３３、１３３．２４、１３１．８４、１３０．７１、１２９．１２、１２６．７０、１２３．８１、２０．６８、２０．６２、１５．６８．

【0142】

２）化合物１９の合成

【0143】

【化30】

【0144】

３００ｍＬナスフラスコに化合物１８（１．４２ｇ、７．２ｍｍｏｌ）とメタノール（５０ｍＬ）とテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）を添加し、室温で攪拌し、澄明な溶液を得た。本溶液に炭酸カリウム（２．９０ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）を入れ、１時間攪拌した。続いて、臭化アリル（３．３９ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムヨージド（０．７７ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）をいれ、９０℃加熱下で４時間攪拌した。その後、得られた溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各１００ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（７０：３０→３０：７０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物１９（７０８．２ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ、３４％）を得た。

【0145】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．０７（ｍ、２Ｈ）、６．９０（ｍ、２Ｈ）、６．０７（ｍ、２Ｈ）、５．４０（ｍ、２Ｈ）、５．３１（ｍ、２Ｈ）、４．６２（ｍ、４Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）．

【0146】

３）化合物２０の合成

【0147】

【化31】

【0148】

１００ｍＬナスフラスコに化合物１９（６８０．０ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）を加えた後、１，４－ジオキサン（２５ｍＬ）、３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（２５ｍＬ）を順次加え、９０℃加熱下、６時間攪拌した。室温まで冷やした後、酢酸エチルで希釈、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸、飽和食塩水（各１００ｍＬ）で２回ずつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（９０：１０→８０：２０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物２０（４６６．５ｍｇ）を得た。得られた化合物２０は、粗精製物として、次の反応に用いた。

【0149】

４）化合物２１の合成

【0150】

【化32】

【0151】

１００ｍＬナスフラスコに化合物２０（３６６．５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）と２５％メタノール／イオン交換水（２０ｍＬ）を加え懸濁させた後、氷浴で冷却した。続いて１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加え、澄明な溶液を得た。この時、溶液のｐＨは１２．０であった。水素化ホウ素ナトリウム（７５．７ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を加えた後、氷浴を除去し、室温にて１７時間攪拌した。攪拌後、氷浴での冷却下３ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１０ｍＬ）を加え、反応溶液を酸性化することで反応を停止した。引き続き、酢酸エチル（３０ｍＬ）にて３回抽出、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→７０：３０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物２４（２５０．４ｍｇ）を得た。得られた化合物２１は、粗精製物として、次の反応に用いた。

【0152】

５）化合物２２の合成

【0153】

【化33】

【0154】

２００ｍＬナスフラスコに、化合物２１（２４２．４ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムヨージド（６２．８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた後、アセトン（３０ｍＬ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、炭酸カリウム（３６０．７ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）と臭化アリル（３１５．８ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を順次加え、５０℃加熱下２時間攪拌した。その後室温まで冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、得られた有機層を１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去し、反応残渣（３８９．５ｍｇ）を得た。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（８０：２０→５０：５０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物２２（２０３．６ｍｇ、３７％（３工程））を得た。

【0155】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ６．８１（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．７３（ｄｄ、Ｊ＝８．２、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．０７（ｍ、２Ｈ）、５．９０（ｍ、１Ｈ）、５．３９（ｍ、２Ｈ）、５．２９（ｍ、４Ｈ）、４．６５（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．５８（ｍ、４Ｈ）、４．４３（ｄｄ、Ｊ＝１０．８、６．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ、Ｊ＝１４．１、６．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、１Ｈ）．

【0156】

６）化合物２３の合成

【0157】

【化34】

【0158】

５０ｍＬナスフラスコに、化合物２２（１９２．４ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１５ｍＬ）、４－ジメチルアミノピリジン（２２６．５ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を加え攪拌し、澄明な溶液を得た。引き続き、３，４－ジメトキシけい皮酸（２４９．８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を添加した後、氷浴を用いて冷却しつつ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３４７．６ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を加え、室温にて３時間攪拌した。攪拌後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各５０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ－ヘキサン－酢酸エチル（９０：１０→６０：４０、ｖ／ｖ））により精製し、化合物２３（２８８．２ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、９４％）を得た。

【0159】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ ７．６４（ｄ、Ｊ＝１５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝８．３、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８４（ｍ、２Ｈ）、６．７９（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．０６（ｍ、２Ｈ）、５．８６（ｍ、１Ｈ）、５．３１（ｍ、７Ｈ）、４．６４（ｍ、２Ｈ）、４．５７（ｍ、４Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．１７（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．１２（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、８．５Ｈｚ、１Ｈ）．

【0160】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ １６９．６１、１６６．３３、１５１．４３、１４９．２９、１４８．４４、１４７．７３、１４５．９９、１３３．５６、１３３．４４、１３１．５１、１２８．９０、１２７．２２、１２２．９６、１２２．０３、１１８．７６、１１７．５６、１１７．５１、１１５．６９、１１４．６９、１１４．２９、１１１．０７、１０９．７２、７２．９９、７０．０８、７０．０５、６５．９１、５６．００、５５．９４、３７．０９.

【0161】

７）３’、４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸Ｉｄ）の合成

【0162】

【化35】

【0163】

５０ｍＬナスフラスコに化合物２３（１０１．７ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、モルホリン（５２２．６ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて冷却しつつ攪拌し、澄明な溶液を得た。続いて、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（４６．６ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温下２４時間攪拌した。その後、氷浴下酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した後に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和食塩水（各３０ｍＬ）により洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：０．１体積％ぎ酸／クロロホルム－メタノール（１００：０→９０：１０、ｖ／ｖ））により精製し、３’、４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（化合物Ｉｄ、８７．２ｍｇ、０．２３３ｍｍｏｌ）を得た。

【0164】

^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．５２（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｄｄ、Ｊ＝８．３、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．６７（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．５３（ｄｄ、Ｊ＝８．０、２．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．３１（ｄ、Ｊ＝１５．９Ｈｚ、１Ｈ）、５．０９（ｄｄ、Ｊ＝８．７、４．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）、３．０１（ｄｄ、Ｊ＝１４．４、４．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．９１（ｄｄ，Ｊ＝１４．４、８．８Ｈｚ、１Ｈ）．

【0165】

試験例１ ＴＲＰＶ４活性抑制作用の評価
（１）試薬
ヒト十二指腸由来細胞（Ｈｕｔｕ－８０細胞）、ヒト子宮頸癌由来細胞株（ＨｅＬａ細胞）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより、Ｈｉｇｈ Ｐｕｒｅ ＰＣＲ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔはロッシュより、ｐｃＤＮＡ３．１ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ＴＯＰＯ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔ、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地はインビトロジェンより、ＴｒａｎｓＩＴ－ＨｅＬａＭＯＮＳＴＥＲ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ＫｉｔはＭｉｒｕｓより、ＤｅｔａｃｈｉｎはＧｅｎｌａｎｔｉｓより、９６ｗｅｌｌ Ｏｐｔｉｃａｌ ｂｏｔｔｏｍ ｐｌａｔｅはＮｕｎｃより、Ｃａｌｃｉｕｍ Ｋｉｔ ＩＩ － ｆｌｕｏ ４はＤＯＪＩＮＤＯより、Ｈａｎｋｓ’ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ、牛胎児血清はＧｉｂｃｏより、ＧＳＫ１０１６７９０ａはＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈより、５ｘ ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ Ｂｕｆｆｅｒ、ｄＮＴＰｓ ｍｉｘｔｕｒｅ、ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅはタカラバイオより、それぞれ購入して用いた。

【0166】

（２）ヒトＴＲＰＶ４遺伝子発現ベクターの作製
Ｈｕｔｕ－８０細胞から抽出したｔｏｔａｌＲＮＡを逆転写して得られたｃＤＮＡを鋳型にして、公開されているヒトＴＲＰＶ４遺伝子配列を参考に合成した、下記に示す塩基配列で表されるオリゴヌクレオチドからなるプライマーセットを用いて、下記の条件下でポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行った。

【0167】

＜プライマーセット＞
フォワードプライマー；５’－ＣＡＣＣＡＴＧＧＣＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＧＡＡＧＧＣＣＣ－３’（配列番号１）
リバースプライマー；５’－ＣＴＡＧＡＧＣＧＧＧＧＣＧＴＣＡＴＣＡＧＴＣＣ－３’（配列番号２）

【0168】

＜ＰＣＲ条件＞
ａ）ＰＣＲ溶液組成
ｃＤＮＡ（Ｔｅｍｐｌａｔｅ） １５μＬ
５ｘ ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ Ｂｕｆｆｅｒ １０μＬ
ｄＮＴＰｓ ｍｉｘｔｕｒｅ（２．５ｍＭ） ４μＬ
ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ １μＬ
Ｆｏｒｗａｒｄ Ｐｒｉｍｅｒ（１０μＭ） １μＬ
Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐｒｉｍｅｒ（１０μＭ） １μＬ
Ｗａｔｅｒ １８μＬ
ｂ）温度とサイクル条件
９５℃ ２ｍｉｎ
↓
９８℃ １０ｓｅｃ, ７０℃ ２ｍｉｎ, ３３ｃｙｃｌｅｓ

【0169】

得られたＰＣＲ産物を、Ｈｉｇｈ Ｐｕｒｅ ＰＣＲ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて精製した。精製したＰＣＲ産物と、ｐｃＤＮＡ３．１ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ＴＯＰＯ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｋｉｔを用いて、ヒトＴＲＰＶ４遺伝子発現ベクターを作製した。

【0170】

（３）ヒトＴＲＰＶ４発現細胞の作製
１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地を用いて、ＨｅＬａ細胞の培養を行った。ＨｅＬａ細胞をＴ－７５細胞培養用フラスコに５×１０^５ｃｅｌｌｓ／Ｆｌａｓｋで播種した。培養３日後、前記（２）で作製したヒトＴＲＰＶ４遺伝子発現用ベクター（８μｇ）をＴｒａｎｓＩＴ－ＨｅＬａＭＯＮＳＴＥＲ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて細胞にトランスフェクションし、１日培養した。
Ｄｅｔａｃｈｉｎで細胞をはがし９６ｗｅｌｌ Ｏｐｔｉｃａｌ ｂｏｔｔｏｍ ｐｌａｔｅに１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で１．５×１０^４ｃｅｌｌｓ／９０μＬ／ｗｅｌｌの細胞密度で播き、さらに１日培養した。

【0171】

（４）細胞内カルシウムイオン流入活性の測定
細胞内カルシウムイオン流入活性の測定は、Ｃａｌｃｉｕｍ Ｋｉｔ ＩＩ － ｆｌｕｏ ４を用いて行った。Ｆｌｕｏ４－ＡＭを含有したＬｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ及びＨａｎｋｓ’ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎを１：１で混合した後、前記（３）で作製したヒトＴＲＰＶ４発現細胞に１８０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３７℃で蛍光プレートリーダーＦＤＳＳ３０００（浜松ホトニクス）を用いて蛍光強度（励起波長：４８８ｎｍ、蛍光波長：５２４ｎｍ）を２秒毎に測定した。測定開始３０秒後にＴＲＰＶ４作動薬であるＧＳＫ１０１６７９０ａと検体として前記製造例で調製した４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸溶液をそれぞれＨａｎｋｓ’ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎで希釈し、それらの混合溶液（添加直前に混合）を２０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３００秒まで２秒毎に蛍光強度変化を測定した。なお、ＧＳＫ１０１６７９０ａは終濃度３ｎＭとなるように添加した。
また、ＴＲＰＶ４活性抑制の陽性対照として、ＴＲＰＶ４の拮抗薬であるＨＣ０６７０４７を終濃度１０μＭで添加した。
検体のＴＲＰＶ４活性は、ＴＲＰＶ４作動薬であるＧＳＫ１０１６７９０ａの処理によるカルシウムイオン流入率を１００％として、次式により算出した。

【0172】

（数１）
カルシウムイオン流入率（％）＝［（Ｆｍａｘ／Ｆ０）－（ＦｍａｘＣ２／Ｆ０Ｃ２）］／［（ＦｍａｘＣ１／Ｆ０Ｃ１）－（ＦｍａｘＣ２／Ｆ０Ｃ２）］×１００

【0173】

Ｆｍａｘ：測定開始０～３００秒のＧＳＫ１０１６７９０ａと検体を添加したウェルの最高蛍光強度
ＦｍａｘＣ１：測定開始０～３００秒のＧＳＫ１０１６７９０ａと溶媒を添加したウェルの最高蛍光強度
ＦｍａｘＣ２：測定開始０～３００秒の溶媒のみを添加したウェルの最高蛍光強度
Ｆ０：測定開始直後のＦｍａｘと同じウェルの蛍光強度
Ｆ０Ｃ１：測定開始直後のＦｍａｘＣ１と同じウェルの蛍光強度
Ｆ０Ｃ２：測定開始直後の溶媒のみを添加したウェルの蛍光強度

【0174】

検体を添加した場合のカルシウムイオン流入率（各群ｎ＝３）を、ＧＳＫ１０１６７９０ａ＋溶媒添加時と比較しＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔを用いて検定した。４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉａ）、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｄ）、４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｂ）、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸（Ｉｃ）を添加した場合の結果を表１に示す（表中、ＧＳＫ１０１６７９０ａ、４,３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、４，４’ －ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸は、それぞれＧＳＫ、４，３’－ＤｉＭｅ－ＲＡ、３’，４’－ＤｉＭｅ－ＲＡ、４，４’－ＤｉＭｅ－ＲＡ、３，４－ＤｉＭｅ－ＲＡと略記）。尚、結果は平均値（Ｍｅａｎ）±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表記した。

【0175】

【表1】

【0176】

表１より、陽性対照であるＴＲＰＶ４の拮抗薬と同様、４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸はＴＲＰＶ４作動薬によるカルシウムイオン流入を有意に低下させた。

【0177】

以上の結果から、４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸は、ＴＲＰＶ４の活性を抑制することを示している。さらに、ＴＲＰＶ４活性を抑制する作用を有する４，３’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３’，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、４，４’－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸、３，４－ジ－Ｏ－メチル－ロズマリン酸は、過敏性腸症候群又は過活動膀胱の予防又は改善に有効であることを示している。

【配列表】

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