特許 7235770 高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-02-28

(45)【発行日】2023-03-08

(54)【発明の名称】高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20230301BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20230301BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20230301BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20230301BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20230301BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20230301BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20230301BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230301BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17 ZNA

A61K9/08

A61K47/02

A61K47/10

A61K47/18

A61K47/22

A61K47/26

A61P27/02

【請求項の数】 19

(21)【出願番号】P 2020563409

(86)(22)【出願日】2019-05-10

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-09-02

(86)【国際出願番号】 US2019031879

(87)【国際公開番号】W WO2019217927

(87)【国際公開日】2019-11-14

【審査請求日】2022-05-02

(31)【優先権主張番号】62/669,506

(32)【優先日】2018-05-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/752,127

(32)【優先日】2018-10-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/769,876

(32)【優先日】2018-11-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/813,882

(32)【優先日】2019-03-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】ケネス・エス・グラハム

(72)【発明者】

【氏名】ソーラブ・ワダワ

【審査官】深草 亜子

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１６／０２４４５０４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／２０８９８９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００８－５３５８１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／０６８０１２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／１２９６８５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００９－５４０００１（ＪＰ，Ａ）

【文献】JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES，2017年11月，VOL:106, NR:11,，PAGE(S):3230 - 3241

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３８／００－３８／５８

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

水性医薬製剤であって：
少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌの濃度の、アフリベルセプト；
約５％のスクロース；
Ｌ－アルギニン；
ヒスチジン系緩衝液；および
約０．０３％の界面活性剤；
を含み、
該製剤が約５．０～約６．８のｐＨを有する、
上記製剤。

【請求項2】

硝子体内投与に適する、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

硫酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、グリシン、ＮａＣｌ、アスパラギン酸ナトリウム、および／またはグルタミン酸ナトリウムをさらに含む、請求項１に記載の製剤。

【請求項4】

アフリベルセプトが、以下の濃度：
・約１００ｍｇ／ｍｌ；
・約１１１．５ｍｇ／ｍｌ；
・約１１２．０ｍｇ／ｍｌ；
・約１１３．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１１４．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１１５．６ｍｇ／ｍｌ；
・約１１６．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１２０ｍｇ／ｍｌ；
・約１３３ｍｇ／ｍｌ；
・約１４０ｍｇ／ｍｌ；
・約１５０ｍｇ／ｍｌ；
・約２００ｍｇ／ｍｌ；または
・約２５０ｍｇ／ｍｌ；
である、請求項１に記載の製剤。

【請求項5】

（ｉ）重量オスモル濃度が、約２９９～約５０６ｍｍｏｌ／Ｋｇであり；および／または（ｉｉ）粘度が、２０℃において約６～１５ｃＰである、請求項１に記載の製剤。

【請求項6】

ｐＨが、５．８～６．５である、請求項１に記載の製剤。

【請求項7】

ｐＨが、約５．８である、請求項６に記載の製剤。

【請求項8】

界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項１に記載の製剤。

【請求項9】

非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、ポリエチレングリコール３３５０およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の製剤。

【請求項10】

ヒスチジン系緩衝液が、ヒスチジン塩酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。

【請求項11】

約１０ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液を含む、請求項１０に記載の製剤。

【請求項12】

Ｌ－アルギニンが、Ｌ－アルギニン一塩酸塩である、請求項１に記載の製剤。

【請求項13】

アフリベルセプトが、製造および精製直後に約３．５％未満の高分子量種および／または約２～８℃で約２４ヶ月間保存した後に約６％以下の高分子量種を有する、請求項１に記載の製剤。

【請求項14】

水性医薬製剤であって：
少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌの濃度の、アフリベルセプト；
約１０～１００ｍＭのＬ－アルギニン；
スクロース；
ヒスチジン系緩衝液；および
界面活性剤；
を含み、
該製剤が約５．０～約６．８のｐＨを有し；
該アフリベルセプトが、製造および精製直後に約３．５％未満の高分子量種および／または約２～８℃で約２４ヶ月間保存した後に約６％以下の高分子量種を有する、
上記製剤。

【請求項15】

容器または注射装置に装填されている、請求項１４に記載の製剤。

【請求項16】

注射装置が、プレフィルドシリンジである、請求項１５に記載の製剤。

【請求項17】

請求項１４に記載の製剤を調製するための方法であって、アフリベルセプト、Ｌ－アルギニン、スクロース、ヒスチジン系緩衝液、および界面活性剤を混合して単一の水性組成物とする工程を含む、上記方法。

【請求項18】

ある容量の製剤をシリンジに装填する工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

アフリベルセプトが、以下の濃度：
・約１００ｍｇ／ｍｌ；
・約１１１．５ｍｇ／ｍｌ；
・約１１２．０ｍｇ／ｍｌ；
・約１１３．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１１４．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１１５．６ｍｇ／ｍｌ；
・約１１６．３ｍｇ／ｍｌ；
・約１２０ｍｇ／ｍｌ；
・約１３３ｍｇ／ｍｌ；
・約１４０ｍｇ／ｍｌ；
・約１５０ｍｇ／ｍｌ；
・約２００ｍｇ／ｍｌ；または
・約２５０ｍｇ／ｍｌ；
である、請求項１４に記載の製剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

この出願は、２０１９年３月５日に出願された米国仮特許出願第ＵＳ６２／８１３，８８２号、２０１８年１１月２０日に出願された米国仮特許出願第ＵＳ６２／７６９，８７６号、２０１８年１０月２９日に出願された米国仮特許出願第ＵＳ６２／７５２，１２７号、および２０１８年５月１０日に出願された米国仮特許出願第ＵＳ６２／６６９，５０６号の利益を主張し、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本明細書の実施形態は、一般に、眼投与に適した高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤に関する。より具体的には、本明細書の実施形態は、硝子体内投与用の液体医薬製剤を提供し、製剤は４０ｍｇ／ｍｌを超えるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含み、薬学的に許容される効力、安定性、粘度、およびｐＨを示す。

【0003】

配列表
配列記載書の公式コピーは、明細書と同時にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して、ファイル名が「１０４３０Ｐ１－ＵＳ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、作成日が２０１８年５月９日、サイズが約７ＫＢのＡＳＣＩＩ形式のシーケンスリストとして電子的に提出される。このＡＳＣＩＩ形式の文書に含まれている配列記載書は明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0004】

治療上有用な液体製剤の開発には、関心対象の薬物用に機能的で安定した送達媒体を提供するために、異なる量の成分の組み合わせが必要である。これは、薬物がタンパク質であり、さらに抗体である場合に特に当てはまる。抗体の活性と投与には典型的に、薬学的に許容される効力、浸透圧、タンパク質の安定性、粘度、および適切なｐＨが必要であるため、薬物開発者および製造業者には長い間抗体製剤について課題が提示されてきた。これらの課題は、抗体が製剤中のより高い濃度である、例えば、ほとんどの薬剤として販売されている抗体の濃度である２０～４０ｍｇ／ｍｌを超える場合、悪化する。

【0005】

より高濃度の抗体製剤は、より短い注射時間、より少ない注射容量、より低い抗体投与頻度、およびより効率的な製造および保存ユーティリティを可能にする。しかしながら、上記のように、抗体またはタンパク質の濃度が高いほど、製剤の適切な活性および送達パラメータを維持することがより困難になる。特に、高濃度の抗体およびタンパク質製剤は、タンパク質の凝集および粘度の増加と競合することが多く、その結果、抗体またはタンパク質の全体的な効力が低下し、製造が低下し、保存安定性が低下する。高濃度のタンパク質または抗体製剤に関する問題のために、そのような薬学的に許容される製剤はほとんど開発されていない。適切な効力、安定性、粘度、浸透圧、およびｐＨを含む高濃度、高安定性、抗体およびタンパク質製剤を調製するための当該技術分野における必要性が存在する。

【0006】

高濃度製剤を必要とするそのようなタンパク質の１つは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ、Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）受容体融合タンパク質である。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、多くの眼科用製剤、例えば、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）におけるＶＥＧＦ機能をブロックするために使用される。高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質含有製剤は、より短い眼注射時間、より少ない注射容量、投与サイクルあたりのより少ない可能な注射、およびより効率的な製造および保存を可能にする可能性がある。

【0007】

本発明は、上記で論じた１つ以上の問題を克服することを目的としている。

【発明の概要】

【0008】

本明細書に記載の様々な実施形態は、高濃度のタンパク質含有製剤（例えば、硝子体内投与に適している）、特に、高濃度の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体融合タンパク質含有製剤を包含する。高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質含有製剤は、薬学的に許容される効力、長期の製造および保存安定性、ならびに眼球注射と対応した粘度およびｐＨを含む、多くの治療的および経済的利益を提供する。高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質含有製剤はまた、眼投与容量の減少、すなわち、限られた容量の眼に対する望ましくない影響を回避するための利点を可能にする。

【0009】

本明細書の実施形態は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、緩衝液、熱安定剤、粘度低下剤、および界面活性剤を有する製剤を提供する。他の実施形態では、製剤は、粘度低下剤を含まない。本発明の製剤は、注射、特に治療用眼注射に適したｐＨおよび粘度を有する。

【0010】

本発明の実施形態において、約１００μｌ未満、約５０μｌ未満、約５０μｌ、約５７μｌ、約６０μｌ、約７０μｌ、または約７５μｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、緩衝液、任意選択で、熱安定剤および／または粘度低下剤、製剤が約５．０～約６．８（例えば、５．８）のｐＨを有する界面活性剤の単回投与を含む少なくとも４１ｍｇ／ｍｌの濃度または濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（本明細書で論じられる）を有する本発明の医薬製剤が提供される。

【0011】

本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質濃度は、約３０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、１１４ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌまたは１４０ｍｇ／ｍｌである。

【0012】

本発明の一実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤（例えば、約０．０２％～約０．１％、または約０．０３％（ｗ／ｖ））であり得る。本発明の一実施形態では、界面活性剤は、ポリオキシエチレン部分、例えば、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポロキサマー１８８、ポリエチレングリコール３３５０またはそれらの混合物を有する非イオン性界面活性剤である。

【0013】

本発明の一実施形態では、緩衝液は、ヒスチジン、ヒスチジンＨＣｌまたはヒスチジン酢酸塩などのヒスチジン系緩衝液（例えば、１０ｍＭまたは２０ｍＭ）、リン酸ナトリウム（例えば、１０ｍＭ）などのリン酸系緩衝液、酢酸ナトリウムおよび酢酸などの酢酸塩系緩衝液、またはクエン酸ナトリウムおよびクエン酸などのクエン酸系緩衝液である。本発明の一実施形態では、緩衝液がリン酸緩衝液である場合、ｐＨは、約５．７～約８．０、約５．８～約８．０、約５．７～約７．０、約５．８～約７．０、約５．９～約７．０または約６．０～約７．０であり、緩衝液がヒスチジン緩衝液である場合、ｐＨは、約５．５～約６．５であり、緩衝液がクエン酸緩衝液である場合、ｐＨは、約３．０～約６．２または約５．０～約６．０であり、緩衝液が酢酸塩緩衝液である場合、ｐＨは約３．７～約５．６または約５．０～約６．０である。

【0014】

本発明の一実施形態では、熱安定剤は、スクロース（例えば、約２．５％、５％または８％、１０％または２０％（ｗ／ｖ）、例えば、約２～２０％）、マンニトール、ソルビトール、またはトレハロースなどの糖、Ｌ－プロリン（例えば、約２％、３％または４％（ｗ／ｖ））、グリシン（例えば、約５０ｍＭ）、グリセロール、タウリン（例えば、約５０ｍＭ）またはプロパンスルホン酸（例えば、約５０ｍＭ）、または上記の任意の組み合わせである。

【0015】

本発明のいくつかの実施形態では、本発明の医薬製剤は、粘度低下剤、例えば、アルギニン塩酸塩（例えば、Ｌ－アルギニン一塩酸塩）（例えば、５０ｍＭ）、リジン、塩化ナトリウム（例えば、４０ｍＭまたは５０ｍＭ）、または塩化マグネシウムを含む。代替的には、他の実施形態では、本発明の製剤は、粘度低下剤を、すべてではないにしても、実質的にすべて具体的に除外する。

【0016】

本発明の一実施形態では、本発明の医薬製剤は、本明細書に記載の製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか１つの成分を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。

【0017】

本明細書の態様では、本発明の医薬製剤は、約６０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１３．３ｍｇ／ｍｌ、約１１４．３ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１３３．３ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、または約２５０ｍｇ／ｍｌを含む、約４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ～約１５９または約１５０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）を含んでもよい。本発明の一実施形態では、製剤は、約４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む。

【0018】

本発明の医薬製剤のいくつかの態様は、熱安定剤がタウリンまたはプロパンスルホン酸の場合に、安定剤は約２５ｍＭ～約１００ｍＭの濃度であり、界面活性剤は約０．０２％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）（例えば、約０．０３％）の濃度であり、緩衝液は約５ｍＭ～約１５ｍＭであることを条件として、約２％（ｗ／ｖ）～約９％（ｗ／ｖ）または約４％（ｗ／ｖ）～約９％の濃度の熱安定剤を含む。

【0019】

ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、例えば、
・配列番号１の核酸配列または配列番号１のヌクレオチド７９～１３７４または７９～１３７１によってコードされ得、
・配列番号２のアミノ酸または配列番号２のアミノ酸２７～４５７または２７～４５８を含み得、
・
（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦＲ１成分、
（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦＲ２成分、
（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７または４５８（配列番号２のＣ末端アミノ酸、すなわちＫ４５８は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質に含まれる場合もあり、または含まれない場合もある）を含む多量体化成分（「ＦｃΔＣ１（ａ）」）を含み得る。配列番号２のアミノ酸１～２６は、
・第１のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１）の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２および第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン３を含み、任意選択で、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇドメイン４（例えば、ＶＥＧＦＲ２）および多量体化成分（例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン）を含み、
・コンバセプトであり、または
・アフリベルセプトである、シグナル配列であることに留意されたい。
VEGF Trap
atggtcagctactgggacaccggggtcctgctgtgcgcgctgctcagctgtctgcttctc
acaggatctagttccggaagtgataccggtagacctttcgtagagatgtacagtgaaatc
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catcgacaaaccaatacaatcatagatgtggttctgagtccgtctcatggaattgaacta
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gacttcaactgggaatacccttcttcgaagcatcagcataagaaacttgtaaaccgagac
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aagaacagcacatttgtcagggtccatgaaaaggacaaaactcacacatgcccaccgtgc
ccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggac
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caccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctccca
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accctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtc
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aactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaag
ctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcat
gaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga
（配列番号１）

MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号２）
ＡＡ１～２６＝シグナル配列
ＡＡ２７～１２９＝Ｆｌｔ１－Ｄ２（ＶＥＧＦＲ１－Ｄ２）
ＡＡ１３０～２３１＝Ｆｌｋ１－Ｄ３（ＶＥＧＦＲ２－Ｄ３）
ＡＡ２３２～４５８＝ＦｃΔＣ１

【0020】

本発明の別の実施形態では、約５ｍＭ～約２５ｍＭの薬学的に許容される緩衝液、約４％（ｗ／ｖ）～約９％（ｗ／ｖ）の薬学的に許容される熱安定剤、約０．０２％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）の薬学的に許容される界面活性剤、および約４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の水溶液を含む容器が提供される。熱安定剤がタウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかを含む場合、タウリンまたはプロパンスルホン酸は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭの濃度である。水溶液は、約５．０～約６．８のｐＨを有し、約５．５～約６．２（例えば、５．８）であり得る。いくつかの態様では、容器は、バイアルまたはシリンジである。他の態様では、水溶液は無機塩を含まない。熱安定剤が糖である場合、それは、スクロース、マンニトール、ソルビトール、またはトレハロースであり得、約４％（ｗ／ｖ）～９％（ｗ／ｖ）の間に存在し得、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり得、容量当たり約０．０２％～約０．１重量％（ｗ）、より典型的には、０．０２％～約０．０４％（ｗ／ｖ）の濃度で、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０などのポリオキシエチレン部分を含み得る。本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、配列番号１の核酸配列または配列番号１のヌクレオチド７９～１３７４または７９～１３７１によってコードされ、配列番号２のアミノ酸または配列番号２のアミノ酸２７～４５７または２７～４５８を含み、（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦＲ１成分、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦＲ２成分、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７（配列番号２のＣ末端アミノ酸、すなわちＫ４５８はＶＥＧＦ受容体融合タンパク質に含まれる場合もあり、または含まれない場合もある）を含む多量体化成分（「ＦｃΔＣ１（ａ）」）を含み、第１のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１）の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２および第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン３を含み、任意選択で、第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン４および多量体化成分（例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン）をさらに含み、コンベルセプトであり、またはアフリベルセプトである。

【0021】

さらに他の実施形態では、水性ビヒクル中にＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を有する本発明の医薬製剤が提供され、水性ビヒクルは、２０℃で約１０ｃＰ～約１５ｃＰ、より典型的には２０℃で約１０ｃＰ～約１３ｃＰ、最も典型的には２０℃で約１１ｃＰ～１２ｃＰ（例えば、２０℃で約６．０、７．３、１１．５、または１２．０ｃＰ）の粘度を有する。本発明の一実施形態では、粘度は、２０℃で約１２ｃＰ～約１５ｃＰである。製剤のｐＨは、約５．８～約６．５（例えば、約５．８）であり得る。場合によっては、製剤は粘度低下剤を含まず、例えば、アルギニン塩酸塩、リジン、塩化ナトリウム、または塩化マグネシウムを含まない。他の場合には、製剤は、１０ｍＭのヒスチジン塩酸塩または１０ｍＭのヒスチジン酢酸塩を含む。糖は、スクロース、マンニトール、ソルビトール、またはトレハロースであり得、約４％（ｗ／ｖ）～９％（ｗ／ｖ）（例えば、約５％）の間に存在し得、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり得、容量あたり約０．０２％～約０．１重量％（ｗ／ｖ）、より典型的には、０．０２％～約０．０４％（ｗ／ｖ）（例えば、０．０３％）の濃度で、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０などのポリオキシエチレン部分を含み得る。さらに、製剤は、タウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかから選択される熱安定剤を、約２５ｍＭ～約１００ｍＭの間、より典型的には約５０ｍＭ～約７０ｍＭの濃度でさらに含み得る。本発明の一実施形態では、製剤は、ｐＨ約５．８の、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、約４１～２７５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌまたは本明細書で論じられる「高」濃度のいずれか）、約１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、約５％（ｗ／ｖ）のスクロース、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０などの約０．０３％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤、および約５０ｍＭのアルギニン、Ｌ－アルギニンまたはＬ－アルギニン一塩酸塩を含む。本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、配列番号１の核酸配列または配列番号１のヌクレオチド７９～１３７４または７９～１３７１によってコードされ、配列番号２のアミノ酸または配列番号２のアミノ酸２７～４５７または２７～４５８を含み、（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦＲ１成分、（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦＲ２成分、および（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７（配列番号２のＣ末端アミノ酸、すなわちＫ４５８はＶＥＧＦ受容体融合タンパク質に含まれる場合もあり、または含まれない場合もある）を含む多量体化成分（「ＦｃΔＣ１（ａ）」）を含み、第１のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１）の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２および第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン３を含み、任意選択で、第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン４および多量体化成分（例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン）を含み、コンベルセプトであり、またはアフリベルセプトである。

【0022】

さらに別の実施形態では、薬学的に許容される緩衝液中に約８０ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌの濃度でＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む、本発明の医薬製剤が提供される。場合によっては、安定な医薬製剤はまた、タウリンまたはプロパンスルホン酸を含み得る。製剤は、約２℃～約８℃の温度で約２４～３６ヶ月間安定であり得る。場合によっては、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、これらの温度でこの時間保存される場合、高分子量種で約５％未満の増加を示し、より典型的には、高分子量種で約４．５％未満の増加、高分子量種で約４．０％未満の増加、高分子量種で約３．５％未満の増加、高分子量種で約３．０％未満の増加、高分子量種で約２．５％未満の増加、高分子量種で約２．０％未満の増加および／または高分子量種で約１．５％未満の増加を示す。他の場合では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、製剤がこれらの温度でこの時間保存される場合、高分子量種で２．０％～３．０％未満の増加を示す。

【0023】

本明細書の実施形態はまた、アフリベルセプト、ｐＨ緩衝液、糖および界面活性剤を含む本発明の医薬製剤を含み得、アフリベルセプトは、４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌの濃度である。代替的には、実施形態は、コンベルセプト、ｐＨ緩衝液、糖および界面活性剤を含む安定な液体医薬製剤であり得、コンベルセプトは、４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌの濃度である。安定な液体医薬製剤はまた、タウリンまたはプロパンスルホン酸を含み得る。いくつかの態様では、アフリベルセプトまたはコンベルセプトは、８０ｍｇ／ｍｌまたは１５０ｍｇ／ｍｌのいずれかの濃度である。他の態様では、製剤は、無機塩、例えば、塩化ナトリウムを含まない。

【0024】

いくつかの実施形態は、シリンジが、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、コンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩またはリン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、マンニトールソルビトールまたはトレハロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０、および４０ｍＭの塩化ナトリウムを有する水溶液入りのプレフィルド式であるような滅菌シリンジに関する。本明細書の態様は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、より典型的には約５０ｍＭ～約７０ｍＭのタウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかのさらなる添加を含む。いくつかの態様では、シリンジは、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、コンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジン酢酸塩またはリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、マンニトール、ソルビトールまたはトレハロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０を有する水溶液入りのプレフィルド式である。本明細書の態様は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、より典型的には約５０ｍＭ～約７０ｍＭのタウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかのさらなる添加を含む。さらに他の態様では、シリンジは、ｐＨ約６．２の、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、コンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩、またはリン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、マンニトール、ソルビトールまたはトレハロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０および４０ｍＭの塩化ナトリウムを有する水溶液入りのプレフィルド式である。本明細書の態様は、タウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかのさらなる添加を含み得る。さらに他の態様では、シリンジは、ｐＨ約６．２の、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、コンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩、またはリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、マンニトール、ソルビトールまたはトレハロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０を有する水溶液入りのプレフィルド式であり、水溶液は無機塩を含まない。態様は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、より典型的には、約５０ｍＭ～約７０ｍＭのタウリンまたはプロパンスルホン酸のいずれかをさらに含み得る。さらに他の態様では、シリンジは、ｐＨ約６．２の、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトまたはコンベルセプト、１０ｍＭの酢酸ナトリウムまたは酢酸、５％（ｗ／ｖ）のグリセロールおよび０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０および４０ｍＭの塩化ナトリウムを含む水溶液入りのプレフィルド式である。さらに他の態様では、シリンジは、ｐＨ約６．２の、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトまたはコンベルセプト、１０ｍＭの酢酸ナトリウムまたは酢酸、８％（ｗ／ｖ）のグリセロールおよび０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、またはポリエチレングリコール３３５０および４０ｍＭの塩化ナトリウムを含む水溶液入りのプレフィルド式である。

【0025】

本発明はまた、製剤の各成分を単一の組成物に組み合わせるステップを含む、本明細書に記載のいずれかの製剤を作製するための方法を提供する。そのような方法は、得られた製剤をバイアルまたは注射装置に加えるステップを含んでもよい。このような方法の生成物であるいずれかの組成物はまた、本発明の一部を形成する。例えば、本明細書の実施形態はまた、ヒスチジン系、クエン酸塩系、酢酸塩系またはリン酸塩系の緩衝液を、スクロース、ポリソルベート２０およびＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、および、任意選択で、例えば、本明細書で論じられるような、１つ以上の追加の構成要素と組み合わせることによって製剤を調製するための方法を含む。場合によっては、製剤は、タウリンまたはプロパンスルホン酸も含むように調製されるが、それがタウリンまたはプロパンスルホン酸を含まない場合、無機塩も含まない場合がある。本明細書の態様では、スクロースは、容量あたりの重量が約４％～約１０％であり、ポリソルベート２０は、容量あたりの重量が約０．０２％～約０．１％であり、受容体融合タンパク質は、濃度が約４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌである。製剤がタウリンまたはプロパンスルホン酸を含む場合、それは、例えば、約２５ｍＭ～約１００ｍＭで存在するが、５０ｍＭ～７０ｍＭで含まれることもある。この方法は、その容量が０．１ｍｇ～１０ｍｇの用量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を有するように、所定の容量の調製された製剤を無菌シリンジに装填することを含み得る。

【0026】

本発明はまた、対象の眼に製剤を眼内注射（例えば、硝子体内注射）することを含む、対象（例えば、ヒト）に本発明の製剤を投与するための方法を提供する。本発明はまた、本発明の製剤を含む硝子体内インプラントを対象の硝子体に移植することを含む、本発明の製剤を対象（例えば、ヒト）に投与するための方法を提供する。

【0027】

本明細書の実施形態はまた、少なくとも約２ｍｇ（例えば、４ｍｇ、６ｍｇまたは８ｍｇ）のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）、例えば、本明細書に記載のいずれかの製剤をそれを必要とする対象の眼に眼内注射することによってそれを必要とする対象における、眼内血管新生性障害、例えば、加齢性黄斑変性症（湿性）、網膜静脈閉塞後の黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、虹彩血管新生、血管新生緑内障、緑内障の術後線維症、増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、視板血管新生、角膜血管新生、網膜血管新生、硝子体血管新生、汎血管新生、血管網膜症または糖尿病性網膜症（例えば、非増殖性糖尿病性網膜症および／または増殖性糖尿病性網膜症）を治療するための方法を含む。本発明の一実施形態では、注射容量は１００マイクロリットル以下（例えば、１００マイクロリットル、５０マイクロリットル、または５７マイクロリットル）である。この方法は、４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、薬学的に許容される糖、薬学的に許容される緩衝液、および薬学的に許容される界面活性剤を有する予混合水溶液の硝子体内注射を含む。予混合水溶液を使用する治療方法では、希釈する必要はない。本明細書の態様では、予混合水溶液は、約６．０～約６．５のｐＨを有し、約１０ｃＰ～１３ｃＰの粘度を有する。

【0028】

治療法の態様では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、配列番号１の核酸配列、配列番号２のアミノ酸２７～１２９、配列番号２の１３０～２３１のアミノ酸を含むＶＥＧＦＲ２成分、または配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含む多量体化成分、またはそれらの任意の組み合わせによってコードされるＶＥＧＦＲ１Ｒ２－ＦｃΔＣ１（ａ）を含む。本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、アフリベルセプトまたはコンベルセプトである。

【0029】

本明細書における本開示による他の実施形態は、後述の詳細な説明の精査から明らかとなるであろう。

【0030】

本明細書に開示される実施形態の上記および他の態様、特徴、および利点は、添付の図面を参照することにより、当業者にはより明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1A】２℃～８℃で３６ヶ月間の過程にわたって、４つの異なる製剤（Ｂ、Ｈ、ＤおよびＧ）におけるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（アフリベルセプト）の安定性を判定するグラフである。サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）を使用して、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を試験して、高分子量（ＨＭＷ、Ｈｉｇｈ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ）種の形成（タンパク質分解の兆候）を特定した。

【図1B】２℃～８℃での３６ヶ月間の過程にわたって、４つの製剤（Ｂ、Ｈ、ＤおよびＧ）におけるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（アフリベルセプト）の安定性を判定するグラフである。ＳＥ－ＵＰＬＣを使用してＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を試験して、各製剤の主要な種の割合を特定した。

【図1C】２℃～８℃での３６ヶ月間の過程にわたって、４つの製剤（Ｂ、Ｈ、Ｄ、およびＧ）におけるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質電荷バリアントの形成を示す棒グラフである。酸性種のレベルは、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＩＥＦ、ｉｍａｇｅｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＩｓｏＥｌｅｃｔｒｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ）を使用して、製造時（０．０）、１２ヶ月、２４ヶ月、および３６ヶ月で試験された。

【図1D】２℃～８℃で３６ヶ月間の過程にわたって、４つの製剤（Ｂ、Ｈ、Ｄ、およびＧ）におけるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質電荷バリアントの形成を示す棒グラフである。主な種の特定については、ｉＣＩＥＦを使用して、製造時（０．０）、１２ヶ月目、２４ヶ月目、および３６ヶ月目に試験された。

【図2A】３７℃での２８日間の過程にわたるＬ－アルギニン一塩酸塩の有無による、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロースおよび０．０３％のポリソルベート２０（ｗ／ｖ）製剤ｐＨ６．２での１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（アフリベルセプト）の安定性を示すグラフである。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性をＳＥ－ＵＰＬＣを使用して試験して、ＨＭＷ種の形成を特定した。

【図2B】３７℃での２８日間の過程にわたるＬ－アルギニン一塩酸塩の有無による、ｐＨ６．２での、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％のポリソルベート２０（ｗ／ｖ）製剤における１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を示すグラフである。ＳＥ－ＵＰＬＣを使用してＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を試験して、各製剤の主要な種の割合を特定した。

【図3A】１５５ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を有し、塩を有しない、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝化製剤、１００ｍＭのアルギニン、２００ｍＭのアルギニン、５０ｍＭのリジン、２００ｍＭのリジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、または１００ｍＭの塩化ナトリウムの粘度を示す棒グラフである。粘度は２０℃においてｃＰで測定された。

【図3B】１５５ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を有し、塩を有しない、１０ｍＭのヒスチジン緩衝化製剤、１００ｍＭのアルギニン、２００ｍＭのアルギニン、５０ｍＭのリジン、２００ｍＭのリジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、または１００ｍＭの塩化ナトリウムの粘度を示す棒グラフである。粘度は２０℃においてｃＰで測定された。

【図3C】様々な製剤条件（５０ｍＭのアルギニン塩酸塩の有無）下での様々な濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の粘度を示すグラフである。粘度は２０℃においてｃＰで測定された。

【図4A】５℃での１２ヶ月間にわたる５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩の有無による、ｐＨ６．２での、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０における１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を示すグラフである。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は１５０ｍｇ／ｍｌであった。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性をＳＥ－ＵＰＬＣを使用して試験して、ＨＭＷ種の形成を特定した。

【図4B】５℃での１２ヶ月間にわたる５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩の有無による、ｐＨ６．２での、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０における１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を示すグラフである。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は１５０ｍｇ／ｍｌであった。ＳＥ－ＵＰＬＣを使用してＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を試験して、各製剤の主要な種の割合を特定した。

【図5】２０℃での、１０ｍＭのリン酸緩衝液または１０ｍＭのヒスチジン緩衝液の２つの緩衝液条件下での製剤の粘度を示すグラフである。ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌから１７０ｍｇ／ｍｌまで変化する。粘度はｍＰａ－Ｓで測定した。

【図6】各々２～１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質を有する、多くの様々な製剤条件についての動的光散乱スクリーンを示す。拡散相互作用パラメータは、タウリンおよびＰＳＡ（プロパンスルホン酸）がＫｄを改善することを示した。

【図7】５℃で６ヶ月間保存した後のサイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）で測定した製剤Ｆ１～Ｆ９（製剤ＷＷ～ＥＥＥ）中の高分子量（ＨＭＷ）種の割合を経時的にモニターするグラフである。製剤Ｆ１～Ｆ９は、本明細書の表７－１に記載されている。

【図8A】ＳＥ－ＵＰＬＣにより、５℃で３ヶ月間保存した後（Ａ）または３７℃で２８日間インキュベートした後（Ｂ）の高分子量種の割合を示す。製剤Ｆ１～Ｆ４（ＥＥＥ、ＳＳＳ、ＣＣＣ（１４０ｍｇ／ｍｌ）およびＴＴＴ）を以下の表８－１に示す。

【図8B】ＳＥ－ＵＰＬＣにより、５℃で３ヶ月間保存した後（Ａ）または３７℃で２８日間インキュベートした後（Ｂ）の高分子量種の割合を示す。製剤Ｆ１～Ｆ４（ＥＥＥ、ＳＳＳ、ＣＣＣ（１４０ｍｇ／ｍｌ）およびＴＴＴ）を以下の表８－１に示す。

【図9】初期時点での２０℃での製剤Ｆ１～Ｆ１２の粘度（ｃｐ）を示す。製剤Ｆ１～Ｆ１２を以下の表Ａに示す。

【表1】

【図10】製剤Ｆ１～Ｆ１２（本明細書の表Ａに記載）の浸透圧（ｍｍｏｌ／Ｋｇ）を示す。

【図11A】は、３７℃で最大２８日間（Ａ）または５℃で最大３ヶ月間（Ｂ）にわたって保存した後の、ＳＥ－ＵＰＬＣによる、製剤Ｆ１～Ｆ６（製剤ＧＧＧ、ＨＨＨ、ＩＩＩ、ＪＪＪ、ＬＬＬおよびＫＫＫ）の高分子量種の割合を経時的に示す。

【図11B】は、３７℃で最大２８日間（Ａ）または５℃で最大３ヶ月間（Ｂ）にわたって保存した後の、ＳＥ－ＵＰＬＣによる、製剤Ｆ１～Ｆ６（製剤ＧＧＧ、ＨＨＨ、ＩＩＩ、ＪＪＪ、ＬＬＬおよびＫＫＫ）の高分子量種の割合を経時的に示す。

【図12】表９－３（ＧＧＧ～ＲＲＲ）に示す製剤の初期時点での動的光散乱（拡散係数（ｃｍ^２／秒）、半径（ｎｍ）および％Ｐｄ）を示す。

【図13A】アフリベルセプト投与前の２つの異なるウサギ（３２６－ＯＳおよび３２９－ＯＤ）のベースラインＦＡ画像およびＯＣＴ（３０度レンズ）を示す（ＯＤ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｄｅｘｔｅｒ（右眼）、ＯＳ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｓｉｎｉｓｔｅｒ（左眼））。（Ａ）ウサギ３２６、左眼のＦＡ画像。（Ｂ）ウサギ３２６、左眼のＯＣＴ画像。（Ｃ）ウサギ３２９、右眼のＦＡ画像。（Ｄ）ウサギ３２９、右眼のＯＣＴ画像。

【図13B】アフリベルセプト投与前の２つの異なるウサギ（３２６－ＯＳおよび３２９－ＯＤ）のベースラインＦＡ画像およびＯＣＴ（３０度レンズ）を示す（ＯＤ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｄｅｘｔｅｒ（右眼）、ＯＳ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｓｉｎｉｓｔｅｒ（左眼））。（Ａ）ウサギ３２６、左眼のＦＡ画像。（Ｂ）ウサギ３２６、左眼のＯＣＴ画像。（Ｃ）ウサギ３２９、右眼のＦＡ画像。（Ｄ）ウサギ３２９、右眼のＯＣＴ画像。

【図13C】アフリベルセプト投与前の２つの異なるウサギ（３２６－ＯＳおよび３２９－ＯＤ）のベースラインＦＡ画像およびＯＣＴ（３０度レンズ）を示す（ＯＤ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｄｅｘｔｅｒ（右眼）、ＯＳ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｓｉｎｉｓｔｅｒ（左眼））。（Ａ）ウサギ３２６、左眼のＦＡ画像。（Ｂ）ウサギ３２６、左眼のＯＣＴ画像。（Ｃ）ウサギ３２９、右眼のＦＡ画像。（Ｄ）ウサギ３２９、右眼のＯＣＴ画像。

【図13D】アフリベルセプト投与前の２つの異なるウサギ（３２６－ＯＳおよび３２９－ＯＤ）のベースラインＦＡ画像およびＯＣＴ（３０度レンズ）を示す（ＯＤ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｄｅｘｔｅｒ（右眼）、ＯＳ＝Ｏｃｕｌｕｓ Ｓｉｎｉｓｔｅｒ（左眼））。（Ａ）ウサギ３２６、左眼のＦＡ画像。（Ｂ）ウサギ３２６、左眼のＯＣＴ画像。（Ｃ）ウサギ３２９、右眼のＦＡ画像。（Ｄ）ウサギ３２９、右眼のＯＣＴ画像。

【図14A】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図14B】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図14C】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図14D】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図14E】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図14F】ヒスチジン緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、７日目（Ｂ）、および１４日目（Ｃ）のウサギＦＡ画像と１日目（Ｄ）、７日目（Ｅ）、および１４日目（Ｆ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図15A】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15B】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15C】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15D】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15E】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15F】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15G】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図15H】ヒスチジン緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２６－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）でのウサギＦＡ画像、ならび３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16A】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16B】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16C】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16D】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16E】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図16F】リン酸緩衝液製剤（３０度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、１日目（Ａ）、１週目（Ｂ）、および２週目（Ｃ）のウサギＦＡ画像、ならびに１日目（Ｄ）、１週目（Ｅ）、および２週目（Ｆ）のＯＣＴの時間的経過を示す。

【図17A】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17B】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17C】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17D】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17E】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17F】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17G】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図17H】リン酸緩衝液製剤（５５度レンズ）（７ｍｇ／眼）が投与された１匹のウサギ（３２９－ＯＳ）についての、３週目（Ａ）、４週目（Ｂ）、７週目（Ｃ）、および８週目（Ｄ）のウサギＦＡ画像、ならびに３週目（Ｅ）、４週目（Ｆ）、７週目（Ｇ）、および８週目（Ｈ）のＯＣＴの時間経過を示す。

【図18A】ＳＥ－ＵＰＬＣにより分析された３７℃（最大１ヶ月間）での製剤ＵＵＵ～ＢＢＢＢの純度（在来種の割合）（Ａ）および高分子量（ＨＭＷ）種の割合（Ｂ）を経時的に示す（表１１－１を参照）。

【図18B】ＳＥ－ＵＰＬＣにより分析された３７℃（最大１ヶ月間）での製剤ＵＵＵ～ＢＢＢＢの純度（在来種の割合）（Ａ）および高分子量（ＨＭＷ）種の割合（Ｂ）を経時的に示す（表１１－１を参照）。

【図19A】（ｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）（Ａ）および（ｉｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の主要種（メインピーク）（Ｂ）の割合のサイズ排除クロマトグラフィー測定により、ならびに、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定するマイクロフローイメージング（Ｃ）により、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定する粒子光不明瞭化分析（Ｄ）、および３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の顕微鏡測定（Ｅ）により、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩で製剤化された１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を有する製剤の安定性および純度分析を示す。

【図19B】（ｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）（Ａ）および（ｉｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の主要種（メインピーク）（Ｂ）の割合のサイズ排除クロマトグラフィー測定により、ならびに、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定するマイクロフローイメージング（Ｃ）により、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定する粒子光不明瞭化分析（Ｄ）、および３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の顕微鏡測定（Ｅ）により、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩で製剤化された１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を有する製剤の安定性および純度分析を示す。

【図19C】（ｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）（Ａ）および（ｉｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の主要種（メインピーク）（Ｂ）の割合のサイズ排除クロマトグラフィー測定により、ならびに、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定するマイクロフローイメージング（Ｃ）により、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定する粒子光不明瞭化分析（Ｄ）、および３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の顕微鏡測定（Ｅ）により、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩で製剤化された１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を有する製剤の安定性および純度分析を示す。

【図19D】（ｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）（Ａ）および（ｉｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の主要種（メインピーク）（Ｂ）の割合のサイズ排除クロマトグラフィー測定により、ならびに、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定するマイクロフローイメージング（Ｃ）により、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定する粒子光不明瞭化分析（Ｄ）、および３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の顕微鏡測定（Ｅ）により、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩で製剤化された１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を有する製剤の安定性および純度分析を示す。

【図19E】（ｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）（Ａ）および（ｉｉ）５℃または３７℃で最大２ヶ月間のインキュベーション後の主要種（メインピーク）（Ｂ）の割合のサイズ排除クロマトグラフィー測定により、ならびに、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定するマイクロフローイメージング（Ｃ）により、３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の存在を判定する粒子光不明瞭化分析（Ｄ）、および３７℃で最大２８日間のインキュベーション後のサブビジブル微粒子状物質の顕微鏡測定（Ｅ）により、１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩で製剤化された１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を有する製剤の安定性および純度分析を示す。

【図20A】最大６ヶ月間の２～８℃（Ａ）または最大２８日間の３７℃（Ｂ）でのインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）の割合のＳＥ－ＵＰＬＣ測定による、８０、１００、１２０、または１４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトを有する製剤ＣＣＣの安定性および純度分析を示す。

【図20B】最大６ヶ月間の２～８℃（Ａ）または最大２８日間の３７℃（Ｂ）でのインキュベーション後の高分子量種（ＨＭＷ）の割合のＳＥ－ＵＰＬＣ測定による、８０、１００、１２０、または１４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトを有する製剤ＣＣＣの安定性および純度分析を示す。

【図21】５００マイクログラムまたは２ｍｇのアフリベルセプトを経時的に投与した場合に、完全な漏れ抑制を有する試験されたウサギの眼の割合を経時的に示す（Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験（Ｐ０．０４５３））。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本発明は、高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）を有する製剤を提供し、重大な技術的ハードルにもかかわらず開発された優れた機能的および保存特性を示す。例えば、（例えば、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質のような）ポリペプチド薬剤を含む製剤に適した賦形剤を特定するための一般的な方法は、高温（例えば、３７℃）などの加速ストレス条件下でのポリペプチドの安定性の評価によるものである。非ストレス条件（例えば、５℃などの低い温度）下では適さない賦形剤は、典型的には、ストレス下、例えば、タンパク質凝集下にある間、短時間で、不所望の影響を引き起こすであろう。このアプローチは、医薬品を安定化させる可能性が低い賦形剤の除去を促進する限り、バイオテクノロジーおよび製薬業界では一般的である。例えば、Ｍａｇａｒｉ，Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ Ｓｈｅｌｆ Ｌｉｆｅ Ｕｓｉｎｇ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ａｎｄ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ，Ｂｉｏｐｈａｒｍ Ｉｎｔｌ．１６（１１）：３６－４８（２００３）を参照されたい。場合によっては、加速安定性データに基づいて生成物が放出される場合もあるが、これはリアルタイムの貯蔵寿命分析（加速されていない）と並行して行われる必要がある。Ｍａｇａｒｉ（２００３）およびＦＤＡ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｓｕｂｍｉｔｔｉｎｇ Ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ（１９８７）。しかしながら、ここでは、５℃では、ヒスチジン製剤中のアルギニンの存在は安定していたが、アルギニンは、温度ストレス（３７℃）下で安定性を低下させる傾向にあるように見えた。図８（ＡおよびＢ）を参照されたい。本明細書に記載の製剤のこの特性は、開業医がアルギニンを選択するのを遠ざけるように導く技術的困難性を提示したであろう。したがって、開業医が賦形剤としてアルギニンを選択する可能性は低くなったであろう。それにもかかわらず、本明細書に記載の製剤は、このような技術的ハードルの克服から得られ、高い安定性を備えた製剤を達成した。ヒスチジン緩衝液中のＶＥＧＦトラップの製剤はまた、リン酸緩衝液製剤で観察されたものと比較して、粘度の有益な減少につながった。硝子体内注射を行うには小さな針穴が好ましいため（患者の不快感と眼の外傷を減少させるため）、比較的低い粘度が望ましい。粘度の低い製剤は、針を通して製剤を押すのに必要な力が少なくてすむため、治療を行う医師にとって針を通る製剤の注射がより容易になる。さらに、ヒスチジンおよびアルギニン含有製剤は、ウサギの眼において十分に許容された。

【0033】

ここで、代表的な実施形態を詳細に参照する。以下の説明が実施形態を１つの好ましい実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。それとは逆に、それらは、添付の特許請求の範囲に記載されているように、説明されている実施形態の精神および範囲に含まれ得るような代替、修正、および同等のものをカバーするように意図されている。

【0034】

別段定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、本開示が関連する当該技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」との用語は、特定の列挙された数値に関して使用されるとき、その値が列挙された値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、本発明で使用する場合、表現「約１００」は、９９および１０１、ならびにその間の全部の値（例えば、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％など）を含む。

【0035】

本発明の実施形態において、本発明の医薬製剤は、眼科用溶液の少容量注射（ＳＶＰ）のためのＵＳＰ＜７８９＞に適合し、例えば、１ｍｌ当たり直径が１０μｍを超える粒子が約５０固未満含まれ、１ｍｌ当たり直径が２５μｍを超える粒子が約５個未満含まれ、または１ｍｌ当たり直径が５０μｍを超える粒子が約２個未満含まれる。

【0036】

本明細書の目的のために、「硝子体内注射」は、眼の硝子体（眼の後ろの網膜の近く）への注射を指すことに留意されたい。「硝子体内投与に適している」、「硝子体内注射に適している」などの表現は、問題の製剤が、ＥＹＬＥＡの硝子体内注射に関連することが知られている以上の副作用を引き起こすことなく、対象の眼の硝子体に安全に注射できることを意味する。

【0037】

本明細書における「医薬製剤」という用語は、例えば、治療／医学的使用のために対象にＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）を投与するために使用される、薬学的に許容される担体を含む製剤を指す。

【0038】

「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、眼での投与に適している製剤を指す。

【0039】

本明細書における「対象」という用語は、任意の哺乳動物（例えば、ウサギ、マウス、ラットまたはサル）対象、特に、例えば、本明細書に記載の製剤で診断、予後または治療が望まれるヒトを指す。

【0040】

「水性」製剤という用語は、水を含む製剤を指す。

【0041】

「治療する」または「治療」という用語は、望ましくない疾患または障害（例えば、眼内血管新生性障害または癌）を逆転、安定化、または排除する治療手段を指し、それは、例えば、眼内血管新生性障害に関して、臨床的に測定可能な程度によるそのような疾患または障害の１つ以上の症状または徴候の退行、安定化、または除去を引き起こすことにより、糖尿病性網膜症重症度スコア（ＤＲＳＳ）の低下または維持を引き起こすことにより、視力（例えば、最良の矯正視力、例えば、ＥＴＤＲＳ文字の増加によって測定される）を改善または維持し、視野を増加または維持し、および／または網膜中心部の厚さを減少または維持することにより、ならびに、癌に関しては、対象の癌細胞の成長、生存および／または転移を停止または逆転させることによるのである。典型的には、治療手段は、疾患または障害を有する対象への治療有効量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の１つ以上の用量の投与である。

【0042】

「予防する」または「予防」は、望ましくない疾患または障害（例えば、眼内血管新生性障害）の発症を停止するための予防措置を指す。

【0043】

ＳＥ－ＵＰＬＣは、本発明において、製剤中の高分子量種の存在を定量化するために使用され得る。ＳＥは、サイズ排除クロマトグラフィーを指す。ＵＰＬＣは、超高速液体クロマトグラフィーを指す。製剤中のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）のそのようなＨＭＷ種を特徴づけるためにＵＰＬＣシステムで使用され得る適切なＳＥカラムは、約１０，０００～４５０，０００ダルトンの分子量範囲内の分子を分解することができる。例えば、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ２００Åカラムを参照されたい。本発明の実施形態では、製剤中のＨＭＷ種を定量化するときに、そのようなカラムのうちの２つがタンデムに接続される。ＵＰＬＣは、感度と分解能においてＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）よりも改善されている。ＵＰＬＣは、高圧で動作し、ＨＰＬＣで使用されるものよりも微細な粒子（典型的には、約２．５μｍ未満）を使用する機器を使用する。さらに、ＵＰＬＣ移動相は、ＨＰＬＣよりも高い線速度で動作する。

【0044】

本明細書の実施形態は、高濃度（例えば、約６０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１３．３ｍｇ／ｍｌ、約１１４．３ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１３３．３ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍ、ｌまたは約２５０ｍｇ／ｍｌ）のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）を含む製剤を含む。本明細書に含まれる適切な製剤は、高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、緩衝液、熱安定剤および界面活性剤を含む。いくつかの態様では、適切な製剤は、粘度低下剤をさらに含む。他の態様では、適切な製剤は、すべての粘度低下剤を実質的に除外している。典型的な製剤は、約５．０～約６．８（例えば、５．８）のｐＨを有するが、対象の眼へのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の投与に有用な任意のｐＨを含み得る。

【0045】

本発明は、１つ以上のさらなる治療薬（例えば、Ａｎｇ－２阻害剤（例えば、抗ＡＮＧ２抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはネスバクマブ）、Ｔｉｅ－２受容体活性化因子、抗ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ受容体またはＰＤＧＦ受容体ベータ抗体またはそれらの抗原結合フラグメント、および／またはベバシズマブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、もしくはＦｃ融合タンパク質として表される細胞外ドメイン１～３を含むヒト血管内皮増殖因子受容体－３（ＶＥＧＦＲ－３）の可溶性形態などの追加のＶＥＧＦアンタゴニスト）と関連するＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）を含む製剤、ならびに本明細書で論じられるような製剤の投与を含む予防または治療の方法を含む。本発明の実施形態では、本発明の製剤は、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含むが、さらなる治療薬（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントである）を除外する。

【0046】

「関連する」という用語は、製剤およびさらなる治療薬が、例えば、同時送達のために単一の組成物に製剤化され得るか、または２つ以上の組成物（例えば、キット）に別々に製剤化され得ることを示す。さらなる治療薬はそれ自体、それ自体の医薬製剤に製剤化されてもよい。各々は、他と同時にまたは他が投与されるときとは異なる時間に対象に投与すされ得、例えば、各投与は、所与の期間にわたって間隔を置いて非同時に（例えば、別個にまたは連続的に）与えられてもよい。さらに、製剤およびさらなる治療薬は、同じ経路または異なる経路によって対象に投与されてもよい。

【0047】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は、硫酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）、チオシアン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）、クエン酸ナトリウム（例えば、４０ｍＭ）、グリシン（例えば、５０ｍＭ）、塩化ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）、リシン（例えば、５０ｍＭ）、アスパラギン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）、および／またはグルタミン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）のうちの任意の１つ以上を含む。例えば、実施形態では、製剤は、クエン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）およびアルギニン塩酸塩（例えば、５０ｍＭ）、グリシン（例えば、５０ｍＭ）およびアルギニン塩酸塩（例えば、５０ｍＭ）、アスパラギン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）およびアルギニン塩酸塩（例えば、５０ｍＭ）、またはグルタミン酸ナトリウム（例えば、５０ｍＭ）およびアルギニン塩酸塩（例えば、５０ｍＭ）の組み合わせを含む。

【0048】

ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質および他のＶＥＧＦ阻害剤
本明細書の目的のために、「ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質」は、ＶＥＧＦと天然ＶＥＧＦ受容体との間の相互作用を妨害する、別のポリペプチドに融合された１つ以上のＶＥＧＦ受容体またはそのドメインを含む分子を指し、例えば、このような融合ポリペプチドのうちの２つが結合し、それによってホモ二量体または他の多量体を形成する。このようなＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、「ＶＥＧＦトラップ」または「ＶＥＧＦトラップ」と呼ばれる場合もある。この定義に含まれる本開示の文脈内のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質には、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ１としても知られる）および／またはＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ１またはＫＤＲとしても知られる）などのＶＥＧＦ受容体の２つ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインを含むキメラポリペプチドが含まれ、また、多量体化ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）を含む場合もある。

【0049】

例示的なＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、配列番号１の核酸配列またはそのヌクレオチド７９－１３７４または７９－１３７１によってコードされるＶＥＧＦ１Ｒ２－ＦｃΔＣ１（ａ）と呼ばれる分子である。

【0050】

ＶＥＧＦ１Ｒ２－ＦｃΔＣ１（ａ）は３つの成分、すなわち、
（１）配列番号２のアミノ酸２７～１２９を含むＶＥＧＦＲ１成分、
（２）配列番号２のアミノ酸１３０～２３１を含むＶＥＧＦＲ２成分、および
（３）配列番号２のアミノ酸２３２～４５７を含む多量体化成分（「ＦｃΔＣ１（ａ）」）（配列番号２のＣ末端アミノ酸、すなわち、Ｋ４５８は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質に含まれる場合と含まれない場合があり、あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる米国特許第７，３９６，６６４号または同第７，３５４，５７９号を参照されたい）、を含む。配列番号２のアミノ酸１～２６がシグナル配列であることに留意されたい。
本発明の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸２７～４５８または２７～４５７を含む。

【0051】

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、
（１）第１のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１）の免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン２、および
（２）第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン３、
（３）および、必要に応じて、第２のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ２）のＩｇドメイン４をさらに含み、
（４）多量体化成分（例えば、ＩｇＧのＦｃドメイン）、を含む。
例えば、本発明の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、前記ドメインの以下の配置を有する：
・［ＶＥＧＦＲ１ Ｉｇドメイン２］－［ＶＥＧＦＲ２ Ｉｇドメイン３］－［ＭＣ］（例えば、そのホモ二量体）または
・［ＶＥＧＦＲ１ Ｉｇドメイン２］－［ＶＥＧＦＲ２ Ｉｇドメイン３］－［ＶＥＧＦＲ２ Ｉｇドメイン４］－［ＭＣ］（例えば、そのホモ二量体）。

【0052】

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、例えば、短縮型多量体化成分（例えば、Ｆｃ）を有するＶＥＧＦトラップ分子であるＶＥＧＦミニトラップであり、例えば、ミニトラップは、依然としてＦｃヒンジ領域を含む。例えば、ＷＯ２００５／００８９５または米国特許第７，３９６，６６４号を参照されたい。

【0053】

本開示はまた、その範囲内に、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の代わりに、ＶＥＧＦ結合分子および抗ＶＥＧＦ抗体ならびにそれらの抗原結合フラグメント、すなわち、
・ベバシズマブ（例えば、約８０～９０または８８ｍｇ／ｍｌの濃度）、
・ラニビズマブ（例えば、約２０～４０ｍｇ／ｍｌの濃度、例えば、２１～３５、２１または３５ｍｇ／ｍｌ）、
・ペガプタニブ（例、ペガプタニブナトリウム）などの抗ＶＥＧＦアプタマー、
・ブロルシズマブなどの一本鎖（例えば、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、約２００～４００または２００、２１０、４００または４２０ｍｇ／ｍｌの－＊－－＊－－－－－－－－－濃度）、
・アビシパーペゴルＤＡＲＰｉｎ（例えば、約７０～１４０、７０または１４０ｍｇ／ｍｌの濃度で）などの抗ＶＥＧＦダーピン、または
・ＲＧ７７１６などのＡＮＧ２にも結合する二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、約１００～４００、１００、１０５、４００または４２０ｍｇ／ｍｌの濃度）、を含む高濃度製剤を含むことに留意されたい。
本明細書で論じられる実施形態の反復性を最小限にするために、本明細書で論じられる製剤のいずれかが、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の代わりに、抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗体フラグメントまたは本明細書で論じられる濃度のいずれかでの本明細書で論じられる（例えば、抗ＶＥＧＦ ＤＡＲＰｉｎで置換された）他のＶＥＧＦ結合分子を含む実施形態を、本発明の範囲が含むことが企図される。例えば、本発明は、３５または８０ｍｇ／ｍｌのラニビズマブ、緩衝液、熱安定剤、粘度低下剤および界面活性剤を有する製剤を含む。

【0054】

ＤＡＲＰｉｎは設計されたアンキリンリピートタンパク質である。ＤＡＲＰｉｎには、一般に、約３３個のアミノ酸残基の密に詰まったリピート３～４つが含まれ、各リピートにはβターンおよび２つの逆平行αヘリックスが含まれる。この堅固なフレームワークは、タンパク質の安定性を提供すると同時に、ターゲット認識のために、通常はリピート毎に６つのアミノ酸残基を含む可変領域の提示を可能にする。

【0055】

「抗ＶＥＧＦ」抗体または抗体の抗原結合フラグメントは、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体またはフラグメントを指す。

【0056】

例示的なＶＥＧＦ受容体融合タンパク質には、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標）、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）またはコンベルセプト（Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｋａｎｇｈｏｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．によって商業的に販売されている）が含まれる。国際特許出願公開番号ＷＯ２００５／１２１１７６またはＷＯ２００７／１１２６７５を参照されたい。「アフリベルセプト」および「コンベルセプト」という用語は、それらのバイオシミラーバージョンを含む。参照生成物（例えば、アフリベルセプト）のバイオシミラーバージョンは、一般に、同一のアミノ酸配列を含む生成物を指すが、米国生物製剤価格競争および革新法の下でバイオシミラーである生成物を含む。

【0057】

本発明の医薬製剤は「高濃度」である。本発明の高濃度医薬製剤は、少なくとも４１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも２７５ｍｇ／ｍｌの濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む。代替的には、「高濃度」は、約１４０ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌ、しかし１６０ｍｇ／ｍｌ未満、４１ｍｇ／ｍｌ～約２７５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ～約７５ｍｇ／ｍｌ、または約８０ｍｇ／ｍｌ～約２５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の濃度を含む製剤を指し得る。いくつかの態様では、製剤中のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の濃度は、４１ｍｇ／ｍｌ、４２ｍｇ／ｍｌ、４３ｍｇ／ｍｌ、４４ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、４６ｍｇ／ｍｌ、４７ｍｇ／ｍｌ、４８ｍｇ／ｍｌ、４９ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５１ｍｇ／ｍｌ、５２ｍｇ／ｍｌ、５３ｍｇ／ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、５６ｍｇ／ｍｌ、５７ｍｇ／ｍｌ、５８ｍｇ／ｍｌ、５９ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、６１ｍｇ／ｍｌ、６２ｍｇ／ｍｌ、６３ｍｇ／ｍｌ、６４ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、６６ｍｇ／ｍｌ、６７ｍｇ／ｍｌ、６８ｍｇ／ｍｌ、６９ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７１ｍｇ／ｍｌ、７２ｍｇ／ｍｌ、７３ｍｇ／ｍｌ、７４ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、７６ｍｇ／ｍｌ、７７ｍｇ／ｍｌ、７８ｍｇ／ｍｌ、７９ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８１ｍｇ／ｍｌ、８２ｍｇ／ｍｌ、８３ｍｇ／ｍｌ、８４ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、８６ｍｇ／ｍｌ、８７ｍｇ／ｍｌ、８８ｍｇ／ｍｌ、８９ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９１ｍｇ／ｍｌ、９２ｍｇ／ｍｌ、９３ｍｇ／ｍｌ、９４ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、９６ｍｇ／ｍｌ、９７ｍｇ／ｍｌ、９８ｍｇ／ｍｌ、９９ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１０１ｍｇ／ｍｌ、１０２ｍｇ／ｍｌ、１０３ｍｇ／ｍｌ、１０４ｍｇ／ｍｌ、１０５ｍｇ／ｍｌ、１０６ｍｇ／ｍｌ、１０７ｍｇ／ｍｌ、１０８ｍｇ／ｍｌ、１０９ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１１１ｍｇ／ｍｌ、１１２ｍｇ／ｍｌ、１１３ｍｇ／ｍｌ、１１３．３ｍｇ／ｍｌ、１１４ｍｇ／ｍｌ、１１４．１ｍｇ／ｍｌ、１１４．２ｍｇ／ｍｌ、１１４．３ｍｇ／ｍｌ、１１４．４ ｍｇ／ｍｌ、１１４．５ｍｇ／ｍｌ、１１４．６ｍｇ／ｍｌ、１１４．７ｍｇ／ｍｌ、１１４．８ｍｇ／ｍｌ、１１４．９ｍｇ／ｍｌ、１１５ｍｇ／ｍｌ、１１６ｍｇ／ｍｌ、１１７ｍｇ／ｍｌ、１１８ｍｇ／ｍｌ、１１９ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１２１ｍｇ／ｍｌ、１２２ｍｇ／ｍｌ、１２３ｍｇ／ｍｌ、１２４ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１２６ｍｇ／ｍｌ、１２７ｍｇ／ｍｌ、１２８ｍｇ／ｍｌ、１２９ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１３１ｍｇ／ｍｌ、１３２ｍｇ／ｍｌ、１３３ｍｇ／ｍｌ、１３３ｍｇ／ｍｌ、１３３．３ｍｇ／ｍｌ、１３３．４ｍｇ／ｍｌ、１３４ｍｇ／ｍｌ、１３５ｍｇ／ｍｌ、１３６ｍｇ／ｍｌ、１３７ｍｇ／ｍｌ、１３８ｍｇ／ｍｌ、１３９ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌ、１４１ｍｇ／ｍｌ、１４２ｍｇ／ｍｌ、１４３ｍｇ／ｍｌ、１４４ｍｇ／ｍｌ、１４５ｍｇ／ｍｌ、１４６ｍｇ／ｍｌ、１４７ｍｇ／ｍｌ、１４８ｍｇ／ｍｌ、１４９ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１５１ｍｇ／ｍｌ、１５２ｍｇ／ｍｌ、１５３ｍｇ／ｍｌ、１５４ｍｇ／ｍｌ、１５５ｍｇ／ｍｌ、１５６ｍｇ／ｍｌ、１５７ｍｇ／ｍｌ、１５８ｍｇ／ｍｌ、１５９ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ、１６１ｍｇ／ｍｌ、１６２ｍｇ／ｍｌ、１６３ｍｇ／ｍｌ、１６４ｍｇ／ｍｌ、１６５ｍｇ／ｍｌ、１６６ｍｇ／ｍｌ、１６７ｍｇ／ｍｌ、１６８ｍｇ／ｍｌ、１６９ｍｇ／ｍｌ、１７０ｍｇ／ｍｌ、１７１ｍｇ／ｍｌ、１７２ｍｇ／ｍｌ、１７３ｍｇ／ｍｌ、１７４ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、１７６ｍｇ／ｍｌ、１７７ｍｇ／ｍｌ、１７８ｍｇ／ｍｌ、１７９ｍｇ／ｍｌ、１８０ｍｇ／ｍｌ、１８１ｍｇ／ｍｌ、１８２ｍｇ／ｍｌ、１８３ｍｇ／ｍｌ、１８４ｍｇ／ｍｌ、１８５ｍｇ／ｍｌ、１８６ｍｇ／ｍｌ、１８７ｍｇ／ｍｌ、１８８ｍｇ／ｍｌ、１８９ｍｇ／ｍｌ、１９０ｍｇ／ｍｌ、１９１ｍｇ／ｍｌ、１９２ｍｇ／ｍｌ、１９３ｍｇ／ｍｌ、１９４ｍｇ／ｍｌ、１９５ｍｇ／ｍｌ、１９６ｍｇ／ｍｌ、１９７ｍｇ／ｍｌ、１９８ｍｇ／ｍｌ、１９９ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２０１ｍｇ／ｍｌ、２０２ｍｇ／ｍｌ、２０３ｍｇ／ｍｌ、２０４ｍｇ／ｍｌ、２０５ｍｇ／ｍｌ、２０６ｍｇ／ｍｌ、２０７ｍｇ／ｍｌ、２０８ｍｇ／ｍｌ、２０９ｍｇ／ｍｌ、２１０ｍｇ／ｍｌ、２１１ｍｇ／ｍｌ、２１２ｍｇ／ｍｌ、２１３ｍｇ／ｍｌ、２１４ｍｇ／ｍｌ、２１５ｍｇ／ｍｌ、２１６ｍｇ／ｍｌ、２１７ｍｇ／ｍｌ、２１８ｍｇ／ｍｌ、２１９ｍｇ／ｍｌ、２２０ｍｇ／ｍｌ、２２１ｍｇ／ｍｌ、２２２ｍｇ／ｍｌ、２２３ｍｇ／ｍｌ、２２４ｍｇ／ｍｌ、２２５ｍｇ／ｍｌ、２２６ｍｇ／ｍｌ、２２７ｍｇ／ｍｌ、２２８ｍｇ／ｍｌ、２２９ｍｇ／ｍｌ、２３０ｍｇ／ｍｌ、２３１ｍｇ／ｍｌ、２３２ｍｇ／ｍｌ、２３３ｍｇ／ｍｌ、２３４ｍｇ／ｍｌ、２３５ｍｇ／ｍｌ、２３６ｍｇ／ｍｌ、２３７ｍｇ／ｍｌ、２３８ｍｇ／ｍｌ、２３９ｍｇ／ｍｌ、２４０ｍｇ／ｍｌ、２４１ｍｇ／ｍｌ、２４２ｍｇ／ｍｌ、２４３ｍｇ／ｍｌ、２４４ｍｇ／ｍｌ、２４５ｍｇ／ｍｌ、２４６ｍｇ／ｍｌ、２４７ｍｇ／ｍｌ、２４８ｍｇ／ｍｌ、２４９ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、２５１ｍｇ／ｍｌ、２５２ｍｇ／ｍｌ、２５３ｍｇ／ｍｌ、２５４ｍｇ／ｍｌ、２５５ｍｇ／ｍｌ、２５６ｍｇ／ｍｌ、２５７ｍｇ／ｍｌ、２５８ｍｇ／ｍｌ、２５９ｍｇ／ｍｌ、２６０ｍｇ／ｍｌ、２６１ｍｇ／ｍｌ、２６２ｍｇ／ｍｌ、２６３ｍｇ／ｍｌ、２６４ｍｇ／ｍｌ、２６５ｍｇ／ｍｌ、２６６ｍｇ／ｍｌ、２６７ｍｇ／ｍｌ、２６８ｍｇ／ｍｌ、２６９ｍｇ／ｍｌ、２７０ｍｇ／ｍｌ、２７１ｍｇ／ｍｌ、２７２ｍｇ／ｍｌ、２７３ｍｇ／ｍｌ、２７４ｍｇ／ｍｌ、または２７５ｍｇ／ｍｌの濃度のいずれかについてである。濃度が本明細書の実施形態に従って機能する限り、他のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質濃度は本明細書において企図される。

【0058】

本発明の実施形態において、本発明の医薬製剤は、約４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、もしくは２０ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）を含むような濃度のものであり、または、約１００μｌ以下、約７５μｌ以下もしくは約７０μｌ以下、例えば、約５０μｌ、５１μｌ、５２μｌ、５３μｌ、５４μｌ、５５μｌ、５６μｌ、５７μｌ、５８μｌ、５９μｌ、６０μｌ、６１μｌ、６２μｌ、６３μｌ、６４μｌ、６５μｌ、６６μｌ、６７μｌ、６８μｌ、６９μｌ、７０μｌ、７１μｌ、７２μｌ、７３μｌ、７４μｌ、７５μｌ、７６μｌ、７７μｌ、７８μｌ、７９μｌ、８０μｌ、８１μｌ、８２μｌ、８３μｌ、８４μｌ、８５μｌ、８６μｌ、８７μｌ、８８μｌ、８９μｌ、９０μｌ、９１μｌ、９２μｌ、９３μｌ、９４μｌ、９５μｌ、９６μｌ、９７μｌ、９８μｌ、９９μｌ、または１００μｌの、本明細書で論じられるその許容可能な用量のいずれかにおけるそのようなタンパク質の量である。

【0059】

本発明は、本明細書の「例示的な製剤」に記載される製剤のいずれかを含むが、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）の濃度は、このセクションに記載されている濃度（「ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質および他のＶＥＧＦ阻害剤」）で置換される。

【0060】

緩衝液
本明細書で使用するための緩衝液は、酸塩基結合体の使用によるｐＨ変化に抵抗する溶液を指す。緩衝液は、約５．０～約６．８、より典型的には約５．８～約６．５、最も典型的には約６．０～約６．５の範囲でｐＨを維持することができる。場合によっては、本発明の製剤のｐＨは、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、または約６．８である。本明細書における製剤に含めるための例示的な緩衝液には、ヒスチジン系緩衝液、例えば、ヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、およびヒスチジン酢酸塩が含まれる。本明細書の製剤に含めるための緩衝液は、代替的には、リン酸系緩衝液、例えばリン酸ナトリウム、酢酸塩系緩衝液、例えば酢酸ナトリウムまたは酢酸であり得、またはクエン酸系、例えば、クエン酸ナトリウムまたはクエン酸であり得る。緩衝液が上記のｐＨ範囲で製剤を緩衝化するように機能する限り、緩衝液は上記の混合物であり得ることも認識される。場合によっては、緩衝液は約５ｍＭ～約２５ｍＭ、またはより典型的には約５ｍＭ～約１５ｍＭである。緩衝液は、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭであり得る。、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭであり得る。

【0061】

本発明の一実施形態では、ヒスチジン系緩衝液は、ヒスチジンおよびヒスチジン一塩酸塩を使用して調製される。

【0062】

界面活性剤
本明細書で使用するための界面活性剤は、様々な表面および界面によって誘発されるストレスから高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を保護する成分を指す。そのため、界面活性剤は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の凝集を制限または最小化し、タンパク質の溶解性を促進するように使用され得る。本明細書の適切な界面活性剤は、非イオン性であることが示されていて、ポリオキシエチレン部分を有する界面活性剤を含み得る。このカテゴリーにおける例示的な界面活性剤には、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８、ポリエチレングリコール３３５０、およびそれらの混合物が含まれる。製剤中の界面活性剤は、容量あたり約０．０２％～約０．１％の重量（ｗ／ｖ）、より典型的には、約０．０２％～約０．０４％（ｗ／ｖ）で存在し得る。場合によっては、界面活性剤は、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、または約０．１％（ｗ／ｖ）である。

【0063】

熱安定剤
本明細書で使用するための熱安定剤は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の熱変性に対して熱安定性を提供し、ならびにＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の効力または活性の喪失から保護する成分を指す。適切な熱安定剤には糖が含まれ、スクロース、トレハロース、ソルビトールまたはマンニトールであり得るか、またはアミノ酸、例えば、Ｌ－プロリン、Ｌ－アルギニン（例えば、Ｌ－アルギニン一塩酸塩）、またはタウリンであり得る。さらに、熱安定剤はまた、置換アクリルアミドまたはプロパンスルホン酸を含み得るか、またはグリセロールのような化合物であり得る。

【0064】

場合によっては、本明細書の製剤は、糖およびタウリン、糖およびアミノ酸、糖およびプロパンスルホン酸、糖およびタウリン、グリセロールおよびタウリン、グリセロールおよびプロパンスルホン酸、アミノ酸およびタウリン、またはアミノ酸およびプロパンスルホン酸の両方を含む。さらに、製剤には、糖、タウリンおよびプロパンスルホン酸、グリセロール、タウリンおよびプロパンスルホン酸、ならびにＬ－プロリン、タウリンおよびプロパンスルホン酸を含み得る。

【0065】

本明細書の実施形態は、典型的には、単独で存在する熱安定剤を有し、各々は独立して、約２％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）もしくは４％（ｗ／ｖ）～約１０％（ｗ／ｖ）、または約４％（ｗ／ｖ）～約９％（ｗ／ｖ）、または約５％（ｗ／ｖ）～約８％（ｗ／ｖ）で存在する。製剤中の熱安定剤は、約２％（ｗ／ｖ）、約２．５％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、または約２０％（ｗ／ｖ）の濃度であり得る。

【0066】

タウリンおよびプロパンスルホン酸に関して、本発明の一実施形態では、これらの熱安定剤は、製剤中に約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、より典型的には約５０ｍＭ～約７５ｍＭで存在し得る（他の熱安定剤と比較して）。

【0067】

粘度低下剤
粘度低下剤は、典型的には、タンパク質の凝集を低減または防止するために使用される。本明細書に含めるための粘度低下剤には、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、Ｄ－またはＬ－アルギニン（例えば、Ｌ－アルギニン一塩酸塩）、リジン、またはそれらの混合物が含まれる。本明細書に存在する場合、粘度低下剤は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、より典型的には約３０ｍＭ～約７５ｍＭ、さらにより典型的には約４０ｍＭ～約７０ｍＭで存在し得る。場合によっては、粘度低下剤は、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭで存在する。

【0068】

製剤の粘度
本明細書の実施形態による製剤はまた、眼内投与、例えば硝子体内注射のために薬学的に許容される粘度を有し得る。粘度は、一般に、剪断応力または引張応力のいずれかによって変形されている流体の抵抗の尺度（典型的には、例えば、当該技術分野で知られている技術、粘度計またはレオメーターによって測定される）を指す。本明細書の実施形態による製剤の典型的な粘度は、約５．０ｃＰ（センチポアズ）～約１５ｃＰ、約１１ｃＰ～約１４ｃＰ、約１２ｃＰ～約１５ｃＰ、または約１１ｃＰ～約１２ｃＰである。したがって、本明細書の製剤の粘度は、約５．０ｃＰ、約６．０、約７．１ｃＰ、約７．２ｃＰ、約７．３ｃＰ、約７．４ｃＰ、約７．５ｃＰ、約７．６ｃＰ、約１０ｃＰ、約１０．５ｃＰ、約１１．０ｃＰ、約１１．５ｃＰ、約１２．０、約１２．５ｃＰ、約１３．０ｃＰ、約１３．５ｃＰ、約１４．０ｃＰ、約１４．５ｃＰ、または約１５．０ｃＰ（例えば、２０℃で測定した場合）であり得る。

【0069】

本明細書の様々な実施形態は、これらの非常に有用な粘度を維持するために、無機塩または他の粘度低下剤を含めることを必要としない。典型的には、高濃度のタンパク質溶液は、タンパク質の凝集および高粘度を回避するために粘度低下剤を必要とし、硝子体内注射を困難にし、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の効力を低下させる。したがって、本明細書の実施形態には、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ_２）、Ｄ－またはＬ－アルギニン塩酸塩、リシンまたは他の粘度低下剤を実質的に全く有しないまたは全く添加していない製剤が含まれる。

【0070】

製剤の浸透圧
浸透圧は、注射可能な製剤の重要な属性である。生成物が生理学的浸透条件に一致することが望ましい。さらに、浸透圧は溶液中の可溶性含有量の確認を提供する。本発明の実施形態では、本発明の製剤の浸透圧は、約５０６ｍｍｏｌ／Ｋｇ以下または約２５０～約５０６ｍｍｏｌ／Ｋｇ、例えば、約２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、２９９、３００、３１０、３１４、３１５、３１６、３２４、３４３、３４６、３４９、３６９、３８４、４０３、４２６、４３０または５０６ｍｍｏｌ／Ｋｇである。本発明の一実施形態では、浸透圧は約２５０ｍｍｏｌ／Ｋｇよりも低い。

【0071】

製剤の純度と安定性
本明細書に記載の高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤は、製造および保存中に安定している。本明細書における「安定」という用語は、製剤の製造および保存の期間にわたって化学的および物理的安定性の両方を保持する、例えば、完全性を維持し、分解、変性（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）、または変性（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）を最小限に抑えるＶＥＧＦ受容体タンパク質を含む製剤を指す。ＶＥＧＦ受容体タンパク質の安定性は、異なる温度および異なる期間にわたって当該技術分野で利用可能な分析技術を使用して判定され得る。特に、ＶＥＧＦ受容体の化学的安定性（効力）は、様々なバイオアッセイ（例えば、本明細書のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質によるＶＥＧＦ_１６５結合を判定するために使用されるＢＡＦ／３ＶＥＧＦＲ１／ＥＰＯＲ細胞株）を使用して判定され得、物理的安定性は、サイズ排除（ＳＥ）クロマトグラフィー分析、ＵＰＬＣ（Ｕｌｔｒａ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、超高性能液体クロマトグラフィー）サイズ排除（ＳＥ、Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィー、外観、ＯＤ、ｐＨ、電荷バリアント形成、および高分子量（ＨＭＷ、Ｈｉｇｈ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ）種形成率によって判定され得る。安定したＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、そのＯＤ、ｐＨ、電荷バリアントの形成、およびＨＭＷ種の形成において限定的な変化を示すものである。

【0072】

本明細書で使用される「高分子量」（ＨＭＷ）種は、所与のＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（例えば、アフリベルセプト）を含む製剤に関して、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐポリペプチドおよび／またはそのホモ二量体より先の（例えば、より高い高分子量の）サイズ排除カラム（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣ）から溶出する製剤中の任意の種のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。ＨＭＷ種の割合は、例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣ分析による、製剤中のポリペプチドの総量に対するそのような種の割合を指す。

【0073】

本発明の実施形態では、以下の実施例においてより完全に論じられるように、安定な製剤は、約２℃～約８℃で保存される場合に、最大１２ヶ月、最大２４ヶ月、および／または最大３６ヶ月の期間にわたって、有意なＶＥＧＦ受容体融合タンパク質効力および物理的安定性を示す。

【0074】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は以下のようなものである：
・約３７℃で約２８日後、高分子量種において約３、５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、３０、３５、または３７％（または１０～１５％または１５～２０％または１０～２０％）の増加を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約２８日後、主要種において約５、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２％（または５～２０％または５～１０％または１０～１５％または１５％～２０％）の減少を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約２８日後、主要種として約８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６または８７％（または８０～８５％）以上のタンパク質を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約２８日後、低分子量種において約１または１．５または２％（または１～２％）の増加を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約１ヶ月後、高分子量種において約１６％の増加、および／もしくは主要種において約１７％の減少および／もしくは低分子量種において約０．５％または＜１％の増加、ならびに／または約５℃で約２ヶ月後、主要種において約１％の減少、および／もしくは高分子量種において約１％の増加および／もしくは低分子量（ＬＭＷ）種において有意なまたは検出可能な量はなく、ならびに／または約５℃で約２ヶ月後、約９７％の主要種を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約１２ヶ月後、高分子量種において約３～３．５％の増加を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約１２ヶ月後、主要種において約１％または１、２、３もしくは４％（例えば、１～４％または３～４％）の減少を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約１２ヶ月後、主要種として約９４または９５％以上のタンパク質を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約３ヶ月後、高分子量種において約１または２％の増加を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約６ヶ月後、高分子量種において約＜１、１または２％の増加を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約５℃で５^１／_２または６ヶ月後、約２．５、３．０もしくは３．５（または２．５～３．５％）の総高分子量種を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約６ヶ月後、主要種において約１％または１もしくは２％（または約０．５～２％もしくは１～２％）の減少を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約６ヶ月後、主要種として約９６もしくは９７％もしくは９８％（または９６～９８％）以上のタンパク質を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約２～８℃で約２４ヶ月または３６ヶ月後、高分子量種において約５もしくは６もしくは７％（例えば、約１．５、２、３、４もしくは５％）（または１．５～５％もしくは１．５～２．５％）の増加、および／または約３．０、３．２５、４．０、４．５もしくは５％の総高分子量種、および／または約２もしくは３％（または２～３％）の主要種の減少、および／または約９５もしくは９６％以上（または９５～９６％）の主要種の総量を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約１ヶ月後、ＲＰ－ＨＰＬＣによって回復可能である製剤中アフリベルセプトの約９７、９８、９９もしくは１００％（または９７～１００％）を有する
・製造および精製直後、約１．５、２、２．５、３．０または３．５％未満の高分子量種を有する（例えば、ＳＥ－ＵＰＬＣまたはＳＥＣによって測定する場合）
・約３７℃で約６ヶ月後、主要種／主ピークとしてアフリベルセプトの少なくとも約７０％または７５％（例えば、７０～７５％）を有する（例えば、キャピラリー等電点電気泳動（ｃｌＥＦ）または画像化キャピラリー等電点電気泳動によって測定する場合）（非酸性および非塩基性種）
・約２～８℃で約３６ヶ月後、酸性種において約１もしくは２％（または１～２％）の増加を有する（例えば、キャピラリー等電点電気泳動（ｃｌＥＦ）または画像化キャピラリー等電点電気泳動によって測定する場合）
・約２～８℃で約３６ヶ月後、主要種／主ピークにおいて約１％以下の減少を有する（例えば、キャピラリー等電点電気泳動（ｃｌＥＦ）または画像化キャピラリー等電点電気泳動によって測定する場合）
・約２～８℃で約３６ヶ月後、約７８～７９％の主要種／主ピークを有する（例えば、キャピラリー等電点電気泳動（ｃｌＥＦ）または画像化キャピラリー等電点電気泳動によって測定する場合）
ならびに／または
・ヒトまたはウサギまたはマウスなどの哺乳動物（例えば、湿性ＡＭＤなどの眼内血管新生性障害を有する）に硝子体内投与される場合、ＥＹＬＥＡについて観察されたものと臨床的に異なるいずれかの有害事象を引き起こさず（例えば、ＥＹＬＥＡが０．５または２．０ｍｇ、硝子体内投与される場合）、または、眼に臨床的に重大な炎症、眼圧（ＩＯＰ）の長期的上昇、血圧の長期的上昇または低下、および／または網膜剥離を引き起こさない。

【0075】

さらに、本発明の実施形態では、高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、製造および保存の過程にわたって酸性電荷バリアントの形成をほとんどまたは全く示さないので、例えば、画像化キャピラリー等電点電気泳動によって試験されるように電荷バリアントの形成をほとんどまたは全く示さないので、安定である。

【0076】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は、約８％以下の低分子量（ＬＭＷ）種を示す。

【0077】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は、約０．２、０．４または０．５ＥＵ（エンドトキシン単位）／ｍｌ未満のエンドトキシンを有する。

【0078】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は、粒子状物質またはサイズが約１、２、５、１０、２５、もしくは５０マイクロメートル（またはそれ以上）の粒子状物質を本質的に含まない。

【0079】

本発明の実施形態では、本発明の製剤を非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動）によって分析する場合、総ピーク面積の少なくとも９７％が主ピークである。

【0080】

本発明の実施形態では、本発明の製剤をサイズ排除ＵＰＬＣ（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって分析する場合、総ピーク面積の少なくとも９３、９４、または９５％が主ピークであり、３．５、４、５、または６％以下が集合体である。

【0081】

本発明の実施形態では、本発明の製剤は、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、または８℃、２～８℃（例えば、平均温度が５℃）、２３℃、２５℃、３０℃、または３７℃である。

【0082】

例示的な製剤
例示的な高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質含有製剤には、以下が含まれる：
製剤Ａ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｂ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｃ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｄ：ｐＨ６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｅ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｆ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｇ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｈ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｉ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｊ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｋ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｌ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｍ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｎ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｏ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｐ：ｐＨ６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｑ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｒ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｓ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｔ：ｐＨ５．８～６．２（例えば、６．２）を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｕ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｖ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｗ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｘ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤Ｙ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤Ｚ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＡＡ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＢＢ：ｐＨ６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＣＣ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＤＤ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＥＥ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＦＦ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＧＧ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＨＨ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＩＩ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＪＪ：ｐＨ５．８～６．２を有する、８０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＫＫ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＬＬ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＭＭ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＮＮ：ｐＨ６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＯＯ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＰＰ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、および４０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＱＱ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＲＲ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＳＳ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＴＴ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＵＵ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのリン酸塩系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＶＶ：ｐＨ５．８～６．２を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのコンベルセプト、１０ｍＭのクエン酸系緩衝液、８％（ｗ／ｖ）のスクロース、および０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０であり、必要に応じて、特に粘度低下剤を含まない、
製剤ＷＷ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのタウリン、
製剤ＸＸ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、４％（ｗ／ｖ）のプロリン、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＹＹ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、２．５％（ｗ／ｖ）のスクロース、２．０％（ｗ／ｖ）のプロリン、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのタウリン、
製剤ＺＺ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、２．５％（ｗ／ｖ）のスクロース、２．０％（ｗ／ｖ）のプロリン、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＡＡＡ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのＰＳＡ、
製剤ＢＢＢ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、２．５％（ｗ／ｖ）のスクロース、２．０％（ｗ／ｖ）のプロリン、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのＰＳＡ、
製剤ＣＣＣ：ｐＨ５．８を有する、８０、１００、１２０、または１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＤＤＤ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、４％（ｗ／ｖ）のプロリン、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのＰＳＡ、
製剤ＥＥＥ：ｐＨ５．８を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０であり、必要に応じて、熱安定剤なし、
製剤ＦＦＦ：ｐＨ６．２を有する、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のスクロースおよび０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＧＧＧ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭの硫酸ナトリウム、
製剤ＨＨＨ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのチオシアン酸ナトリウム、
製剤ＩＩＩ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、４０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
製剤ＪＪＪ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのグリシン、
製剤ＫＫＫ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭの塩化ナトリウム、
製剤ＬＬＬ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのリジン、
製剤ＭＭＭ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアスパラギン酸ナトリウム、
製剤ＮＮＮ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、
製剤ＯＯＯ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＰＰＰ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのグリシン、５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＱＱＱ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアスパラギン酸ナトリウム、５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＲＲＲ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのグルタミン酸ナトリウム、５０ｍＭのアルギニン塩酸塩、
製剤ＳＳＳ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのＨｉｓ、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、１０ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、
製剤ＴＴＴ：１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、ｐＨ５．８の２０ｍＭのＨｉｓ、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、１００ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、
製剤ＵＵＵ：ｐＨ６．２の、３０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＶＶＶ：ｐＨ６．２の、３０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＷＷＷ：ｐＨ６．２の、６０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＸＸＸ：ｐＨ６．２の、６０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＹＹＹ：ｐＨ６．２の、１２０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＺＺＺ：ｐＨ６．２の、１２０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、
製剤ＡＡＡＡ：ｐＨ６．２の、１２０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのＮａＣｌ、
製剤ＢＢＢＢ：ｐＨ６．２の、１２０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０％のスクロース、１０ｍＭのリン酸塩、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのＮａＣｌ、
製剤ＣＣＣＣ：ｐＨ６．２の、１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％のスクロース、４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０３％のＰＳ２０、
製剤ＤＤＤＤ：ｐＨ５．８を有する、８０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液、５％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩、
製剤ＥＥＥＥ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１２０．０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、＋１２ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋２ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
製剤ＦＦＦＦ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１１３．３ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、１０２～１２５ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋２ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
製剤ＧＧＧＧ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１１４．３ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、１０３～１２６ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋１ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
製剤ＨＨＨＨ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１００．０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、＋１０ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋２ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
製剤ＩＩＩＩ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１３３．３ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、＋１３ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋２ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
製剤ＪＪＪＪ：ｐＨ６．２（例えば、６．０～６．４または５．９～６．５）を有する、１５０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト（例えば、アフリベルセプト）（例えば、＋１５ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、８％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．８％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）および５０ｍＭのＬ－アルギニン塩酸塩、
製剤ＫＫＫＫ：ｐＨ５．８（例えば、５．６～６．０または５．５～６．１）を有する、１１４．３ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、＋１４ｍｇ／ｍｌ）、２０ｍＭのヒスチジン系緩衝液（例えば、＋２ｍＭ）、５％（ｗ／ｖ）のスクロース（例えば、＋０．５％）、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（例えば、０．０２～０．０４％）、および５０ｍＭのＬ－アルギニン一塩酸塩（例えば、＋５ｍＭ）、
または本明細書に記載されているいずれかの製剤。

【0083】

本発明の実施形態では、上記に列挙された、または本明細書で論じられた任意の製剤成分（例えば、すべての成分）（例えば、製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか１つ）の濃度は、特に言及された濃度の＋約３％、５％または約１０％である。

【0084】

製造方法
本明細書の実施形態は、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、本明細書に記載の製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか）を含む本発明の医薬製剤を製造する方法を含み、製剤の成分を単一の組成物に組み合わせ、必要に応じて、容器または装置、例えば、バイアル、または送達装置、例えば、プレフィルドシリンジ内に製剤を導入することを含む。そのような方法の生成物である製剤、バイアルまたは装置は、本発明の一部である。

【0085】

本発明の実施形態では、本発明の医薬製剤（例えば、本明細書に記載の製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか）を含むＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を製造する方法は、培養培地中およびタンパク質が発現される条件下で、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む宿主細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞）を培養するステップと、宿主細胞および／または培養培地からタンパク質を精製し、タンパク質の一部を本明細書に記載の医薬製剤の賦形剤と組み合わせるステップと、を含む。この場合も、そのような方法の生成物である製剤、バイアル、または装置は、本発明の一部である。

【0086】

本発明の実施形態では、それを高濃度にするために、かつその最終用途のために、製剤に必要とされるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の量および種類に関して判定がなされる。緩衝液の量および種類、界面活性剤の量および種類、熱安定剤の量および種類、ならびに粘度低下剤の含有または特定の除外に関して、同じ判定がなされる。これらの成分を組み合わせて混合し、製剤のｐＨが所望の値、例えば、約５．０～約６．８（例えば５．８）であること、および／または粘度が所望の値、例えば、２０℃で約６．０、７．３、１１．５または１２．０ｃＰであることを確認する。本発明の実施形態では、高濃度のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤を、安定した状態で、例えば、２～８℃（５℃）で最大２４または３６ヶ月間滅菌および保存し得る。

【0087】

例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙを参照されたい。

【0088】

眼内血管新生性障害と癌
ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む本発明の医薬製剤（例えば、医薬製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか）は、本発明の製剤中の治療有効量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を、それを必要とする対象に、例えば硝子体内注射により投与することによって、いずれかの眼内血管新生性障害の治療または予防に使用され得る。本明細書における眼内血管新生性障害は、血管の成長もしくは増殖によってまたはそれに関連して、および／または血管漏出によって引き起こされる眼の任意の疾患を指す。本明細書の製剤および方法を使用して治療可能または予防可能な眼内血管新生性障害の非限定的な例には、以下が含まれる：
・加齢性黄斑変性症（湿性）、
・黄斑浮腫、
・網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、
・網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、
・網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、
・網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、
・糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、
・脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、
・虹彩血管新生、
・血管新生緑内障、
・緑内障の術後線維症、
・増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）、
・視神経乳頭血管新生、
・角膜血管新生、
・網膜血管新生、
・硝子体血管新生、
・パンヌス、
・翼状片、
・血管性網膜症、
・糖尿病性網膜症（例えば、非増殖性糖尿病性網膜症（例えば、約４７または５３の糖尿病性網膜症重症度スケール（ＤＲＳＳ）レベルを特徴とする）または増殖性糖尿病性網膜症、例えば、ＤＭＥに罹患していない対象）、および
・糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）患者の糖尿病性網膜症。

【0089】

ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む本発明の医薬製剤（例えば、医薬製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか）は、本発明の製剤中の治療有効量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質のそれを必要とする対象への、例えば、筋肉内、腫瘍内、皮下または静脈内注射による投与によって任意の癌の治療または予防に使用され得る。癌には、その成長、増殖、生存および／または転移がある程度血管新生に依存している癌が含まれる。本発明の実施形態では、癌は、結腸直腸癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、脳癌、胃癌、腎癌、前立腺癌、肝臓癌または膵臓癌である。

【0090】

したがって、本発明は、治療有効量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）（例えば、約４、６、または８．０、８．１、８．４または８．５ｍｇ）を、例えば、本発明による医薬製剤において、眼内、例えば、対象の眼の硝子体に投与することを含む、それを必要とする対象における眼内血管新生性障害を治療または予防する方法を提供する。本発明の実施形態では、両眼にＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が投与される。本発明の実施形態では、治療有効用量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、約２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間、または２４週間毎に投与される。本発明の実施形態では、そのような治療または予防の方法は、血圧の著しい上昇（収縮期および／または拡張期）および／または高血圧（例えば、グレード１、グレード２、またはグレード３）の発生および／または対象における異常に高い眼圧がない状態で行われる。本発明の実施形態では、この方法は、前記投与に続いて、血圧の著しい上昇（収縮期および／または拡張期）および／または高血圧の発生（例えば、グレード１、グレード２、またはグレード３）および／または異常に高い眼圧について対象を監視するステップを含む。

【0091】

投与のモード
ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む本発明の医薬製剤は、既知の医学的に承認された送達システムに従って投与されてもよい。本明細書の実施形態では、これらの送達システムは、眼、眼内、脈絡膜内、硝子体内または結膜下の注射によって製剤を患者に投与することを含んでもよい。代替的には、本発明の医薬製剤はまた、局所経路、例えば、点眼薬、眼球ゲル、眼軟膏などによって患者に投与され得る。本明細書における製剤の他の可能な送達経路には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口が含まれる。

【0092】

本発明の実施形態では、本発明の医薬製剤の硝子体内注射は、製剤を含むシリンジおよび針（例えば、３０ゲージ注射針）で眼を刺し、製剤（例えば、約１００マイクロリットル（約４０、５０、５５、５６、５７、５７．１、５８、６０、７０または７５マイクロリットル）以下）を眼の硝子体内に注射する（例えば、治療上有効な量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、例えば、約４、５、６、７、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８または８．９、９、１０、１２、１４、１６、１８または２０ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を送達するのに十分な容量で）ステップを含む。任意選択で、この方法は、局所麻酔薬（例えば、プロパラカイン、リドカインまたはテトラカイン）、抗生物質（例えば、フルオロキノロン）、消毒剤（例えば、ポビドンヨード）および／または瞳孔拡張剤を注入される眼に投与するステップを含む。本発明の実施形態では、注射される眼の周りの無菌領域が、注射の前に確立される。本発明の実施形態では、硝子体内注射に続いて、対象は、眼圧および／または血圧の上昇について監視される。本発明の実施形態では、他の眼も同じ手順によって注射される。

【0093】

投与されるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の量
治療の過程にわたる対象への高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の各用量は、同じまたは実質的に同じ量の融合タンパク質を含んでもよい。代替的には、任意の１回の投与量は、治療過程にわたって異なってもよく、または変動してもよい。

【0094】

癌（例えば、少なくとも部分的に血管新生によって媒介される）または眼内血管新生性障害を治療または予防するための有効なまたは治療的に有効な量のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、例えば、臨床的に測定可能な任意の程度までの癌または眼内血管新生性障害の１つ以上の症状または徴候を退行、安定化または排除することにより、例えば、眼内血管新生性障害に関して、糖尿病性網膜症重症度スコア（ＤＲＳＳ）の低下または維持を引き起こすことにより、視力を改善または維持すること（例えば、ＥＴＤＲＳ文字の増加によって測定されるように、最良の矯正視力において）、視野を拡大または維持すること、および／または中心網膜の厚さを低下または維持すること、ならびに、癌に関して、対象の癌細胞の成長、生存および／または転移を停止または逆転させることによって、癌または眼内血管新生性障害の退行、安定化または排除を引き起こすのに十分なＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の量を指す。本発明の実施形態では、眼内血管新生性障害を治療または予防するためのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の有効なまたは治療的に有効な量は、用量あたり約０．５ｍｇ～約１０ｍｇまたは０．５ｍｇ～約２０ｍｇであり、以下を含む：約０．５ｍｇ以上、または約２ｍｇ以上、例えば、約２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ、３．０ｍｇ、３．１ｍｇ、３．２ｍｇ、３．３ｍｇ、３．４ｍｇ、３．５ｍｇ、３．６ｍｇ、３．７ｍｇ、３．８ｍｇ、３．９ｍｇ、４．０ｍｇ、４．１ｍｇ、４．２ｍｇ、４．３ｍｇ、４．４ｍｇ、４．５ｍｇ、４．６ｍｇ、４．７ｍｇ、４．８ｍｇ、４．９ｍｇ、５．０ｍｇ、５．１ｍｇ、５．２ｍｇ、５．３ｍｇ、５．４ｍｇ、５．５ｍｇ、５．６ｍｇ、５．７ｍｇ、５．８ｍｇ、５．９ｍｇ、６．０ｍｇ、６．１ｍｇ、６．２ｍｇ、６．３ｍｇ、６．４ｍｇ、６．５ｍｇ、６．６ｍｇ、６．７ｍｇ、６．８ｍｇ、６．９ｍｇ、７．０ｍｇ、７．１ｍｇ、７．２ｍｇ、７．３ｍｇ、７．４ｍｇ、７．５ｍｇ、７．６ｍｇ、７．７ｍｇ、７．８ｍｇ、７．９ｍｇ、８．０ｍｇ、８．１ｍｇ、８．２ｍｇ、８．３ｍｇ、８．４ｍｇ、８．５ｍｇ、８．６ｍｇ、８．７ｍｇ、８．８ｍｇ、８．９ｍｇ、９ｍｇ、９．１ｍｇ、９．２ｍｇ、９．３ｍｇ、９．４ｍｇ、９．５ｍｇ、９．６ｍｇ、９．７ｍｇ、９．８ｍｇ、９．９ｍｇ、１０．０ｍｇ、１０．１ｍｇ、１０．２ｍｇ、１０．３ｍｇ、１０．４ｍｇ、１０．５ｍｇ、１０．６ｍｇ、１０．７ｍｇ、１０．８ｍｇ、１０．９ｍｇ、１１ｍｇ、１１．１ｍｇ、１１．２ｍｇ、１１．３ｍｇ、１１．４ｍｇ、１１．５ｍｇ、１１．６ｍｇ、１１．７ｍｇ、１１．８ｍｇ、１１．９ｍｇ、１２ｍｇ、１２．１ｍｇ、１２．２ｍｇ、１２．３ｍｇ、１２．４ｍｇ、１２．５ｍｇ、１２．６ｍｇ、１２．７ｍｇ、１２．８ｍｇ、１２．９ｍｇ、１３ｍｇ、１３．１ｍｇ、１３．２ｍｇ、１３．３ｍｇ、１３．４ｍｇ、１３．５ｍｇ、１３．６ｍｇ、１３．７ｍｇ、１３．８ｍｇ、１３．９ｍｇ、１４ｍｇ、１４．１ｍｇ、１４．２ｍｇ、１４．３ｍｇ、１４．４ｍｇ、１４．５ｍｇ、１４．６ｍｇ、１４．７ｍｇ、１４．８ｍｇ、１４．９ｍｇ、１５ｍｇ、１５．１ｍｇ、１５．２ｍｇ、１５．３ｍｇ、１５．４ｍｇ、１５．５ｍｇ、１５．６ｍｇ、１５．７ｍｇ、１５．８ｍｇ、１５．９ｍｇ、１６ｍｇ、１６．１ｍｇ、１６．２ｍｇ、１６．３ｍｇ、１６．４ｍｇ、１６．５ｍｇ、１６．６ｍｇ、１６．７ｍｇ、１６．８ｍｇ、１６．９ｍｇ、１７ｍｇ、１７．１ｍｇ、１７．２ｍｇ、１７．３ｍｇ、１７．４ｍｇ、１７．５ｍｇ、１７．６ｍｇ、１７．７ｍｇ、１７．８ｍｇ、１７．９ｍｇ、１８ｍｇ、１８．１ｍｇ、１８．２ｍｇ、１８．３ｍｇ、１８．４ｍｇ、１８．５ｍｇ、１８．６ｍｇ、１８．７ｍｇ、１８．８ｍｇ、１８．９ｍｇ、１９ｍｇ、１９．１ｍｇ、１９．２ｍｇ、１９．３ｍｇ、１９．４ｍｇ、１９．５ｍｇ、１９．６ｍｇ、１９．７ｍｇ、１９．８ｍｇ、１９．９ｍｇ、または２０ｍｇ。本発明の実施形態では、癌を治療または予防するためのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の有効なまたは治療上有効な量は、約４ｍｇ／ｋｇ（例えば、静脈内）である。この用量は、例えば、２週間毎に投与されてもよい。

【0095】

本発明の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質は、例えば、上記のように、所望の用量の融合タンパク質を送達するのに十分な容量で投与される。本発明の実施形態では、送達される容量（例えば、硝子体内注射による眼内血管新生性障害の治療または予防のための）は、約１００マイクロリットル以下（例えば、およそいずれかの以下の容量：２５マイクロリットル、２６マイクロリットル、２７マイクロリットル、２８マイクロリットル、２９マイクロリットル、３０マイクロリットル、３１マイクロリットル、３２マイクロリットル、３３マイクロリットル、３４マイクロリットル、３５マイクロリットル、３６マイクロリットル、３７マイクロリットル、３８マイクロリットル、３９マイクロリットル、４０マイクロリットル、４１マイクロリットル、４２マイクロリットル、４３マイクロリットル、４４マイクロリットル、４５マイクロリットル、４６マイクロリットル、４７マイクロリットル、４８マイクロリットル、４９マイクロリットル、５０マイクロリットル、５１マイクロリットル、５２マイクロリットル、５３マイクロリットル、５４マイクロリットル、５５マイクロリットル、５６マイクロリットル、５７マイクロリットル、５８マイクロリットル、５９マイクロリットル、６０マイクロリットル、６１マイクロリットル、６２マイクロリットル、６３マイクロリットル、６４マイクロリットル、６５マイクロリットル、６６マイクロリットル、６７マイクロリットル、６８マイクロリットル、６９マイクロリットル、７０マイクロリットル、７１マイクロリットル、７２マイクロリットル、７３マイクロリットル、７４マイクロリットル、７５マイクロリットル、７６マイクロリットル、７７マイクロリットル、７８マイクロリットル、７９マイクロリットル、８０マイクロリットル、８１マイクロリットル、８２マイクロリットル、８３マイクロリットル、８４マイクロリットル、８５マイクロリットル、８６マイクロリットル、８７マイクロリットル、８８マイクロリットル、８９マイクロリットル、９０マイクロリットル、９１マイクロリットル、９２マイクロリットル、９３マイクロリットル、９４マイクロリットル、９５マイクロリットル、９６マイクロリットル、９７マイクロリットル、９８マイクロリットル、または９９マイクロリットル）である。

【0096】

本発明の実施形態では、製剤は、約６０マイクロリットル以下、約７０マイクロリットル以下、または約７５マイクロリットル以下または約１００マイクロリットル以下の容量で投与される（例えば、硝子体内注射による眼内血管新生性障害の治療または予防のために）。例えば、本発明の実施形態では、約２、４、６、８．０、８．１、８．０～８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８または８．９、９．０または１０ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質が、約５０、６０、７０または７５マイクロリットルで投与される。

【0097】

本発明の範囲はまた、５０μｌ未満など（例えば、約１、５、１０、１７、１７．５、１８、１８．５、２０、３０、４０、または４５μｌ）の低容量で本発明の医薬製剤において、０．５または２ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を（例えば、硝子体内注射によって、眼内血管新生性障害を治療または予防するために）送達するための方法を包含する。

【0098】

本発明はまた、本発明の医薬製剤の「単回投与容量」、すなわち、本発明の医薬製剤中の単回投与のＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）を含む容量（例えば、約５０μｌまたは６０μｌ、７０μｌまたは７５μｌ、または約４、６、８、または１０ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む任意の容量）を含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなる組成物を含む。以下に論じるように、単回投与容量を含み、必要に応じて少量の過剰充填容量の製剤を含む容器（例えば、バイアルまたは注射装置）もまた、本発明の一部である。

【0099】

容器および注射装置
本明細書の実施形態による高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質製剤（例えば、製剤Ａ～ＫＫＫＫのいずれか）は、様々な有用な容器および注射装置に事前にパッケージングまたは事前に装填され得る。したがって、本発明は、そのような製剤を含む容器および注射装置を含む。本明細書の一実施形態では、容器は、無菌であり得るバイアルである。本明細書の別の実施形態では、容器は、無菌であり得る試験管である。本発明の実施形態では、注射装置（無菌であり得る）は、シリンジ（例えば、プレフィルドシリンジまたは自動注射器）である。本発明の実施形態では、注射装置は、硝子体内インプラント、例えば、詰め替え可能な硝子体内インプラントである。

【0100】

「プレフィルド」シリンジは、医師または患者による販売または使用の前に、本発明の製剤が充填されたシリンジである。

【0101】

本明細書における「無菌」は、無菌であるか、または実質的にすべて、またはすべての生きている微生物およびそれらの胞子を含まないことを指す。

【0102】

本明細書で使用されるシリンジには、例えばガラスまたはポリマー、例えば、あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１７／０２３２１９９号に記載されるシクロオレフィンからなるバレル、プランジャーおよび針が含まれる。

【0103】

容器および注射装置は、シリコーン（例えば、シリコーンオイルまたは焼成シリコーン（例えば、＜４０μｇまたは＜１００μｇ））でコーティングされてもよい。

【0104】

本発明の実施形態では、容器または注射装置は、実質的に金属を含まないか、実質的にタングステンを含まないか、または低タングステンである。

【0105】

本発明の実施形態では、シリンジは、１つ以上の用量ライン目盛りを含み、および／または用量計量システムである。

【0106】

本明細書の実施形態による容器は、高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質製剤を保持し得る。いくつかの態様では、容器または注射装置は、使用の表示を記載するラベルを含み得る。場合によっては、本明細書の容器または注射装置は、本明細書全体に記載されている使用についての説明書を含む添付文書を含み得る。

【0107】

他の実施形態では、上記のように、高濃度ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、用量が２ｍｇ、４ｍｇ、６ｍｇ、８ｍｇ、または１０ｍｇのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質である場合）の単回用量または複数回用量（例えば、２つまたは２つ以上）を含む容量が、例えば、使用するまでの保存のために、容器または注射装置、例えば、滅菌シリンジに事前にパッケージングされ得る。一例では、容器内の容量は、必要に応じて、少量の過剰充填容量をさらに含むＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の単回投与を含む。無菌の事前に充填されたシリンジは、保存条件下（例えば、２℃～８℃）で、例えば、最大１２ヶ月、２４ヶ月または３６ヶ月間維持され得る。過剰充填は、適切な容量の回収および／または投与を可能にするのに十分であることを意味する過剰容量である。本発明の実施形態では、容器は、単回投与容量または複数回投与容量、および約５％～１０％の過充填容量を有する。

【0108】

シリンジのサイズは、例えば、０．３ｃｃ、０．５ｃｃ、または１ｃｃであり得る。無菌シリンジは、典型的には、長さが典型的に約１／２インチ、または１２．５ｍｍ～１６ｍｍである、眼注射に有用な針を含み、患者および医療専門家の好みに基づいて、２９ゲージ、３０ゲージ、３１ゲージ、３２ゲージ、または３３ゲージであり得る。針が硝子体内注射を達成するのに効果的である限り、他の針の長さおよびゲージが使用され得る。

【0109】

本発明については特に、複数の実施形態を参照して示され、説明されてきたが、形態および詳細の変更が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示されている様々な実施形態に対して行われ得ること、および本明細書に開示されている様々な実施形態が、特許請求の範囲に対する制限として機能することを意図していないことを当業者は理解するであろう。

【0110】

さらなる製剤
本発明には、４０ｍｇ／ｍｌを超えるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、アフリベルセプトまたはコンベルセプト）および以下を含む以下の製剤が含まれる：

【0111】

（ａ）ヒスチジン塩（例えば、ヒスチジン－ＨＣｌまたはヒスチジン酢酸塩、例えば、１０ｍＭ～５０ｍＭ）を含み、５．７～６．２の範囲のｐＨを有する緩衝液；スクロース、トレハロース、マンニトールまたはグルコースなどの糖（例えば、６％～１０％）；ポリソルベート２０およびポリソルベート８０からなる群から選択される界面活性剤（例えば、０％～０．１％）；

【0112】

（ｂ）Ｌ－ヒスチジン／ヒスチジン塩酸塩（例えば、１０ｍＭ）などのヒスチジン含有緩衝液；例えば、ｐＨ６．０～６．５（例えば、６．２または６．５）の、ポリソルベート２０などの非イオン性界面活性剤（例えば、０．０３％）、ＮａＣｌなどの無機塩（例えば、４０ｍＭ）、およびスクロースなどの炭水化物（例えば、５％）；

【0113】

（ｃ）クエン酸（例えば、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、または３０ｍＭ）、スクロース（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％）、アルギニン（例えば、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭまたは５０ｍＭまたは１００ｍＭ）、およびポリソルベート２０（例えば、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１０％）；

【0114】

（ｄ）リン酸塩、ヒスチジン、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、グルタメート、および／または乳酸塩などの緩衝液（例えば、５～２０または５～５０ｍＭ）；ポリソルベート（例えば、ＰＳ２０またはＰＳ８０）、ポリエチレングリコールドデシルエーテル、ポロキサマー、４－（ｌ，ｌ，３，３－テトラメチルブチル）フェニル－ポリエチレングリコール、アルキルサッカライドまたはアルキルグリコシド、ポリオールまたはアミノ酸などの等張化剤、例えば、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、プロリン、アルギニン、メチオニン、グリシン、またはリジン、ここで、非イオン性界面活性剤、などの強壮剤であり、製剤は、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの最終浸透圧を有し、塩化物アニオンの濃度は、約１０ｍＭ未満であり、ｐＨは５．０～６．５である；または

【0115】

（ｅ）ｐＨ６．２の、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０３％のポリソルベート２０、および５％のスクロース。

【実施例】

【0116】

以下の実施例は、例示目的のために提供されていて、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値に関して正確性を確保するための努力はなされたが、いくつかの実験上の誤差および偏差が考慮されるべきである。これらの実施例において記載されている任意の製剤は、本発明の一部である。

【0117】

これらの実施例では、実験が２～８℃で行われる場合、温度については、５℃を標的とし、公差は＋３℃変動である。

【0118】

実施例１：８０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質製剤は、３６ヶ月の期間にわたって効力、物理的安定性および電荷を維持する。
８０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（アフリベルセプト）を有する一連の４つの異なる製剤を、長期間の効力、物理的安定性、および電荷バリアントの発生について試験した。４つの製剤の各々の成分リストを表１－１に示す。各製剤について、２℃～８℃で３６ヶ月間保存する過程にわたるＶＥＧＦ受容体融合タンパク質ＨＭＷ種の形成、ならびにＳＥ－ＵＰＬＣによる主要種の割合を評価した。各ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質を含む製剤についても、同じ時間および温度の過程にわたって画像化キャピラリー等電点電気泳動を使用して評価した。最後に、各製剤の効力は、同じ時間および温度の過程にわたってバイオアッセイによって試験した。

【表2】

【表3】

【表4】

【表5】

【表6】

【0119】

データを図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、および図１Ｄに示す。図１Ａは、４つの製剤の各々について形成されたＶＥＧＦ受容体融合タンパク質のＨＭＷ種の割合を示す。ＶＥＧＦ ＴＲＡＰは、製剤がヒスチジン系である場合に、リン酸ナトリウムと比較して、ＨＭＷ種の形成速度がわずかに遅いことを示している。図１Ａに示すように、２～８℃で３６ヶ月間保存した後のＨＭＷ種の割合は、ヒスチジン緩衝液（製剤３および４）における１．６～１．９％の増加と比較して、リン酸ナトリウム製剤（製剤１および２）では２．６％だけ増加した。図１Ｂに示すように、データが確認され、ＳＥ－ＵＰＬＣを使用して、同じ時間枠および温度範囲にわたって存在するＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の主要種の割合が特定された。比較ポイントとして、１０ｍＭのリン酸ナトリウムを有する現在のＥＹＬＥＡ（登録商標）製剤（４０ｍｇ／ｍｌ）でアッセイを実行したところ、２～８℃で３６ヶ月間保存した後に、ＨＭＷ種の割合は１．２％増加したことが示されている。さらに、４つの８０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰ製剤の各々を効力について試験し、ＥＹＬＥＡ（登録商標）活性と比較した（図示せず）。効力は、４つの製剤すべておよびＥＹＬＥＡ（登録商標）についてのバイオアッセイによって維持された。これらのデータは、本明細書の製剤が、ＥＹＬＥＡ（登録商標）に匹敵するＶＥＧＦ受容体融合タンパク質の安定性を維持できることを示す。

【0120】

図１Ｃおよび図１Ｄを参照すると、２～８℃で３６ヶ月間保存した後に形成されたＶＥＧＦ ＴＲＡＰ電荷バリアントの割合も試験された。図１Ｃは、製剤１～４のＶＥＧＦ ＴＲＡＰが、３６ヶ月間の過程にわたって酸性種の割合において有意な変化が示されなかったことを示し、図１Ｄは、３６ヶ月間の経過で主要種の割合について同じ結果を示している。ＶＥＧＦ ＴＲＡＰが保存中に電荷バリアントを維持したとの結果は、ＶＥＧＦ ＴＲＡＰの品質が維持され、脱アミノ化、Ｎ末端ピログルタミン酸形成、異性化、凝集などのプロセスが保存パラメータの過程において起こらなかったことを示している。

【0121】

実施例１のデータは、ＥＹＬＥＡ（登録商標）に見られる２倍のＶＥＧＦ ＴＲＡＰ濃度を有する製剤が、２～８℃での３６ヶ月間の過程にわたって物理的安定性、品質および効力を維持し得ることを示している。さらに、４つの製剤すべてがこの期間にわたって同様の効力を示したが、ヒスチジン含有製剤はＨＭＷ種形成においてわずかに小さい増加（タンパク質分解の兆候）をもたらし、状況によってはヒスチジンが緩衝液の選択肢である場合があることを示している。しかしながら、ヒスチジンおよびリン酸塩系緩衝液の両方の結果は、試験の過程にわたって優れた安定性を示した。

【0122】

実施例２：リン酸ナトリウム緩衝液／スクロース製剤における１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰ安定性。
２つのリン酸ナトリウム製剤について、３７℃で２８日間、１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）の物理的安定性を試験した。２つの製剤の各々の成分リストを表２－１に示す。各製剤について、３７℃で２８日間の保存過程にわたってＨＭＷ種の形成、およびＳＥ－ＵＰＬＣによる主要種の割合を評価した。

【表7】

【表8】

【表9】

【0123】

図２Ａは、３７℃で２８日間の保存中に、２つの製剤間で形成されたＨＭＷ種(%)に有意差がなかったことを示し、これは、ＳＥ－ＵＰＬＣによる主要種の割合によって確認された（図２Ｂ）。２８日間の過程にわたって、２つの製剤の外観、濁度、またはｐＨに変化はなかった（図示せず）。

【0124】

次に、結果を、４０ｍｇ／ｍｌのＥＹＬＥＡ（登録商標）を含む製剤、および実施例１の製剤１（リン酸ナトリウム緩衝液中の８０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰ）と比較した。予想通り、１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰ製剤は、ＥＹＬＥＡ（登録商標）製剤と比較してＨＭＷ種形成の割合が高く、実施例１の製剤１と比較してＨＭＷ種形成の割合がやや高かった。

【0125】

高濃度のＶＥＧＦ ＴＲＡＰ含有製剤に関してさらなる試験を実施し、ヒスチジン含有製剤は、リン酸ナトリウムに基づく製剤よりもこれらの分子のより良い保護を示した。さらに、試験された製剤の各々に塩化ナトリウムを含めることで、実際には３７℃でＶＥＧＦ ＴＲＡＰの不安定化がもたらされた。実施例２のデータは、高濃度の１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ受容体融合タンパク質、およびかなり極端な温度での保存においてさえ、本明細書の製剤が物理的安定性に対して優れた保護を提供することを示す。

【0126】

実施例３：薬学的に許容される製剤粘度は、１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰで達成され得る。
複数のＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）を含む製剤について、それらの粘度挙動を試験した。１０ｍｇ／ｍｌ～１６０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐを有する製剤を、様々な粘度低下剤の存在下および非存在下で試験した。

【0127】

図３Ａは、粘度にほとんど差が見られない無機塩、アルギニン、リジン、塩化ナトリウム、塩化マグネシウムを有する組み合わせで、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中の１５５ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ、５％のスクロース、ｐＨ６．２を有する製剤を示す。各々の場合に、粘度は、２０℃においてｃＰで測定された。約１７ｃＰ（無機塩なし）～１５ｃＰ（１００ｍＭの塩化マグネシウム）の粘度の範囲が観察され、どちらの粘度低下剤が使用されたかではほとんど変化がなく、または粘度低下剤は全く存在しなかった。図３Ｂは、基本的な緩衝液が１０ｍＭのヒスチジンおよびｐＨ５．８であることを除いて、同様の一連の製剤を示す。ここでは、無機塩がないため、１１．５ｃＰの粘度を有し、する製剤、５０ｍＭのリジンが１４ｃＰの粘度である製剤が提供された。ヒスチジン含有緩衝液は、他の低濃度の生物学的注射剤と一致する優れた粘度を提供しました。

【0128】

図３Ｃは、１０ｍｇ／ｍｌ～１６０ｍｇ／ｍｌの濃度で、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％のスクロース、ｐＨ６．２、アルギニンなし、および５０ｍＭのアルギニン塩酸塩でのＶＥＧＦトラップの粘度を示しています。粘度低下剤を含めると、試験したすべてのＶＥＧＦトラップ濃度で同様の粘度が得られた。図３Ａおよび図３Ｂに示すように、粘度低下剤は、タンパク質濃度が高くても、製剤の粘度に対してほとんどプラスの効果を有しなかった。アルギニンおよび他の粘度低下剤が高濃度のタンパク質の粘度に対して有益な特性を有することが以前に示されているので、これは驚くべき結果である。

【表10】

【表11】

【0129】

実施例４：アルギニン塩酸塩は、リン酸ナトリウム緩衝液／スクロース製剤中の１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰの安定性を改善する。
２つのリン酸ナトリウム製剤について、２～８℃で１２日間、１５０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）の物理的安定性を試験した。２つの製剤の各々の成分リストを表４－１に示す。製剤２はさらに５０ｍＭのアルギニン塩酸塩を含む。各製剤について、３７℃で１２ヶ月間保存する過程にわたってＨＭＷ種の形成およびＳＥ－ＵＰＬＣによる主要種の割合を評価した。

【表12】

【0130】

図４Ａは、製剤に５０ｍＭのアルギニン塩酸塩を含めることにより、ＶＥＧＦ ＴＲＡＰの物理的安定性が改善されたことを示している。ＶＥＧＦ ＴＲＡＰのこの安定化属性は、図４Ｂで確認され、５０ｍＭのアルギニン塩酸塩の存在下ではＶＥＧＦ ＴＲＡＰの主要種の割合は高いままである。このデータは、アルギニン塩酸塩の添加が保存されたＶＥＧＦ ＴＲＡＰに安定化効果を提供する状況があることを示している。表形式のサイズ排除クロマトグラフィーデータを表４－２および表４－３に示す。

【表13】

【表14】

【0131】

実施例５：ヒスチジンおよびリン酸塩緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌ～１７０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ ＴＲＡＰの粘度
図５は、１０ｍＭのリン酸緩衝液および１０ｍＭのヒスチジン緩衝液の両方が、ＶＥＧＦ ＴＲＡＰ（アフリベルセプト）濃度の範囲に対して高い有用な粘度を有することを示している。より高いＶＥＧＦ ＴＲＡＰ濃度では、ヒスチジン緩衝液は粘度の改善を示した（リン酸塩と比較して）。粘度を２０℃で測定した。

【0132】

実施例６：タウリンおよびプロパンスルホン酸は、高濃度のＶＥＧＦ ＴＲＡＰ（アフリベルセプト）製剤に対して改善された安定性を提供する。
複数の製剤の組み合わせによるタンパク質の安定性への効果を判定するために実験を行った。図６は、２ｍｇ／ｍｌのタンパク質～１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質（アフリベルセプト）までのタンパク質のいずれかを有する製剤についての動的光散乱プロットを示す。７０ｍＭのタウリンまたは７０ｍＭのＰＳＡを含む製剤は、高濃度で自己相互作用の低下を示した。これらのデータは、タウリンおよびＰＳＡが、この場合に問題となっているもののように、高濃度のタンパク質製剤に有用な含有物であり得ることを示している。

【0133】

実施例７：様々なヒスチジン含有製剤の安定性の長期試験。
合計９つの異なるアフリベルセプト製剤を、様々な緩衝液濃度、熱安定剤、および疎水性塩を用いて試験した。９つの製剤Ｆ１～Ｆ９について、以下の表７－１に要約している。

【表15】

【0134】

各製剤の１４ｍＭを１５ｍＬのファルコンチューブに配合した。次に、０．２２μＭのシリンジフィルターを使用して製剤を滅菌濾過し、無菌の２ｍＬタイプ１ガラスバイアル内に充填した。層流フード内で、各製剤について８つのバイアルに０．４ｍＬの容量を充填した。

【0135】

ＳＥ－ＵＰＬＣ（分子量種）をすべてのサンプルで実行して、各製剤の化学的安定性を判定した。

【0136】

製剤Ｆ１～Ｆ９の各々についてのＨＭＷ種の割合を経時的に図７に示す（表７－２も参照）。製剤Ｆ４および製剤Ｆ７においては、５℃で４ヶ月後にＨＭＷ種の割合が最も低くなった。アルギニンおよびプロリンなどの賦形剤の添加がＶＥＧＦ Ｔｒａｐ製剤におけるＨＭＷ種(%)の形成速度を大幅に低下させる結果が示された。

【表16】

【表17】

【表18】

【0137】

実施例８：アルギニン濃度を変化させた１４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦ Ｔｒａｐプの安定性試験。
４つの１４０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）ｅｙｅ医薬品製剤の安定性に対するアルギニン－ＨＣｌの濃度の変化の影響について試験した。安定性の評価は２～８℃の保存条件で行った。医薬品（ＤＰ、Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ）もストレス（３７℃）条件下でインキュベートした。この安定性試験で評価している４つの製剤（Ｆ１～Ｆ４）について、以下の表８－１に記載する。

【表19】

【0138】

１８７ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦ Ｔｒａｐヒスチジン製剤の約１４５ｍＬを解凍した。Ｆ３を除く各製剤の３６ｍＬを配合し、３９ｍＬのバルクＦ３を配合した。各製剤を、充填前に０．２２μｍのＤｕｒａｐｏｒｅ ＰＶＤＦ滅菌フィルターを使用してＬＦＨ（Ｌａｍｉｎａｒ Ｆｌｏｗ Ｈｏｏｄ、層流フード）内でフィルター滅菌した。１３ｍｍ血清ストッパー（Ｓ２－Ｆ４５１ ４４３２／５０Ｂ２－４０）で栓をした清浄な脱パイロジェン２ｍＬタイプＩ Ｓｃｈｏｔｔガラスバイアルを使用して、安定性試験を行った。

【0139】

製剤のＳＥ－ＵＰＬＣ分析は上記のように行った。ＳＥ－ＵＰＬＣを使用して、各製剤におけるＨＭＷ測定値(%)を経時的に図８（ＡおよびＢ）に示す。表８－２および表８－３も参照されたい。

【0140】

５℃で保存された場合、これらの製剤は、アルギニン－ＨＣｌの濃度に比例したＨＭＷ種(%)の形成速度の低下を示した。しかしながら、ストレス下では、この影響は逆転した。製剤は、３７℃で、アルギニン－ＨＣｌの濃度に比例したＨＭＷ種(%)の明らかな増加を示した。この特性により、ヒスチジン緩衝液の存在下でのアフリベルセプトに対するアルギニンの有益な効果の発見はほとんどあり得なかった。典型的には、バイオテクノロジー業界での製剤開発では、薬剤に対する様々な賦形剤の影響が、最初にストレス（例えば、３７℃などの高温）下で短時間スクリーニングされる。このアプローチの目的は、ストレスがない（例えば、５℃などの低温）場合では長期間にわたってうまく機能しない可能性が高い賦形剤を迅速に排除することである。ここで、アルギニンは、３７℃での安定性に影響を与えるにもかかわらず、有用な賦形剤として特定された。製剤化された医薬品は、典型的に、製造後４～５℃で数か月間保存されるため、アルギニンおよびヒスチジン緩衝液中のアフリベルセプトは、長期間の安定した医薬品を保存するための価値の高い製剤である。

【表20】

【表21】

【表22】

【表23】

【0141】

実施例９：ホフマイスターシリーズおよび他の賦形剤からの対イオンの存在下でのＶＥＧＦ Ｔｒａｐの安定性。
いくつかの製剤の安定性に対する様々な対イオンおよび他の賦形剤の効果について判定した。

【0142】

Ａ．対イオンスクリーニング
対イオン（例えば、硫酸塩、チオシアン酸塩、およびクエン酸塩）を、高濃度のＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）製剤（１４０ｍｇ／ｍｌ）を有するナトリウム塩の形態で試験した。さらに、他のアミノ添加賦形剤（例えば、グリシンおよびリジン）も試験した。

【0143】

１８７ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ ｅｙｅ薬剤物質の約４２ｍｌを解凍した。１４０ｍｇ／ｍｌの製剤化薬剤物質の１１０％の濃度および標的賦形剤濃度（対イオン、グリシンおよびリジンを除く）を有する５０ｍｌの中間製剤化薬剤物質（１５５．５６ｍｇ／ｍｌ）を調製した。

【0144】

中間製剤化薬剤物質を、０．５Ｍの賦形剤源液（対イオン、グリシンまたはリジン）でさらに希釈して、以下の表９－１に列挙した１４０ｍｇ／ｍｌの薬剤物質製剤を製造した。各最終製剤を、層流フード内で０．２２μｍＰＶＤＦシリンジフィルターでフィルター滅菌した後、１３ｍｍの血清ストッパーＳ２－Ｆ４５１ ４４３２／５０ ８２－４０（ＥＬＮアイテム番号１９７００００４Ｗａｓｈ番号０００００７８９４９）で栓をした清浄な脱パイロジェン２ｍＬタイプＩＳｃｈｏｔｔガラスバイアルに充填した。６０個のバイアルを０．５ｍｌの各製剤で充填した。６個のバイアルに１．５ｍｌを充填した。

【表24】

【0145】

Ｂ．グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩のスクリーニング
アルギニン塩酸塩と組み合わせた有機対イオンの存在下でのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）高濃度製剤（１４０ｍｇ／ｍｌ）の安定性を試験した。さらに、２つの新しい対イオン（グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩）が、高濃度のＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アルギニン塩酸塩との組み合わせおよび非組み合わせ）との適合性について試験した。試験した製剤を以下の表９－２に要約する。

【0146】

１８７ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ薬剤物質の約５０ｍｌを解凍した。１４０ｍｇ／ｍｌの製剤化薬剤物質の１１０％および目標賦形剤濃度（対イオン、クエン酸塩、グリシン、グルタミン酸塩、およびアスパラギン酸塩以外）を有する６０ｍｌの中間製剤化薬剤物質（１５５．５６ｍｇ／ｍｌ）を調製した。
中間製剤化薬剤物質を１Ｍのストック賦形剤溶液（アルギニン塩酸塩、クエン酸ナトリウム、グリシン、グルタミン酸ナトリウム、およびアスパラギン酸ナトリウム）でさらに希釈して、以下の表に列挙する１４０ｍｇ／ｍｌの薬剤物質を製造した。各最終製剤を、層流フード内で０．２２μｍＰＶＤＦシリンジフィルターでフィルター滅菌した後、１３ｍｍ血清ストッパーＳ２－Ｆ４５１ ４４３２／５０ Ｂ２－４０（ＥＬＮアイテム番号１９７００００４Ｗａｓｈ番号０００００７８９４９）で栓をした清浄な脱パイロジェン２ｍＬタイプＩＳｃｈｏｔｔガラスバイアルに充填した。６０個のバイアルを０．５ｍｌの各製剤で充填した。６個のバイアルに１．５ｍｌを充填した。

【表25】

【0147】

粘度試験を、ＲＨＥＯＳＥＮＳＥｍ－ＶＲＯＣ（登録商標）粘度計を使用して行った。約０．５ｍＬの未希釈試料をガラスシリンジに充填した。試料を所望の温度に平衡化し、チップまたは測定セルにロードした。粘度は、チップの壁におけるせん断応力に相関する入口から出口への圧力降下を測定することによって計算された。結果はｍＰａｓ－１またはｃｐとして表される。図９および表９－３を参照されたい。

【0148】

浸透圧試験を、ＶＡＰＲＯ蒸気圧浸透圧計を使用して行った。約１０μＬの未希釈試料を紙のディスクに接種した。溶液の蒸気圧の関数である露点温度の低下は、高感度の熱電対を介して測定され、溶液の浸透圧として報告された。結果は、ｍｍｏｌ／ｋｇまたはｍＯｓｍとして表される。図１０および表９－３を参照されたい。

【0149】

３７℃または５℃で保存した後の特定の製剤中の高分子量種を経時的にＳＥ－ＵＰＬＣで評価した。図１１（ＡおよびＢ）および表９－４および表９－５を参照されたい。

【0150】

動的光散乱実験を、ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）プレートリーダーＩＩを使用して行った。約１００μＬの未希釈試料を９６ウェルプレートに充填した。２５℃で各ウェルについて３５回の取得を行った。正則化を使用した自己相関関数の分析を、ＤＹＮＡＭＩＣＳｖ７．１ソフトウェア上行った。半径（ｎｍ）対％強度プロットおよび％質量対半径（ｎｍ）プロットを生成して、各サンプルについての平均分子半径および％多分散値（％Ｐｄ）を導出した。図１２を参照されたい。

【表26】

【表27】

【表28】

【表29】

【0151】

実施例１０：正常ウサギにおける高用量ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（１４０ｍｇ／ｍｌ）のＩＶＴ送達の忍容性。
硝子体内注射を介して投与される抗ＶＥＧＦ治療薬は、現在、新生血管の加齢性黄斑変性症、糖尿病性黄斑浮腫、および網膜血管閉塞性疾患の治療のための標準治療である。しかしながら、毎月または隔月の硝子体内注射は、患者、介護者、および医師に重大な治療負担をもたらす。臨床診療において、より効果的で耐久性のある治療法が急務となっている。この試験は、正常なニュージーランドホワイトウサギの眼において、安定して製剤化された高用量ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（１４０ｍｇ／ｍｌ、臨床用量の１４倍に相当）の忍容性を調査することである。

【0152】

ヒスチジン緩衝液またはリン酸緩衝液中の高用量ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）の２つの製剤を試験した。コホートあたり３匹のウサギに、各製剤の片側硝子体内注射により、５０ｕＬで７ｍｇのＶＥＧＦ Ｔｒａｐが投与された。眼の炎症の兆候は、細隙灯、光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）、および眼底血管造影によって、硝子体内投与後１日目、４日目、１週目、その後毎週１２週目までモニターされた。眼圧は、硝子体内注射前ならびに１０分後および３０分後、その後はすべてのフォローアップ時点でトノペンを使用して測定した。動物は１２週目に安楽死させた。

【0153】

ウサギの目には次のいずれかを投与した：
（１）１４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、２０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、５０ｍＭのアルギニンＨＣｌ、０．０３％のＰＳ２０、ｐＨ５．８、
もしくは
（２）１４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプト、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％のスクロース、４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０３％のＰＳ２０、ｐＨ６．２。

【0154】

ヒスチジン緩衝液群の６眼のうち２眼において、ＩＶＴ後８週間まで硝子体に暗い影が示され、細隙灯検査により、後部水晶体損傷による局所白内障であることが確認された（手順関連）。リン酸緩衝液群の６眼のうちの１眼において、ＩＶＴ後８週間まで硝子体に暗い影が示され、細隙灯検査により、後部水晶体損傷による局所白内障であることが確認された（手順関連）。

【0155】

試験した高用量ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（１４０ｍｇ／ｍｌ）製剤は、単回硝子体内投与後１２週間以内に、正常なニュージーランドホワイトウサギの眼で十分に許容された。７ｍｇのＶＥＧＦ Ｔｒａｐの単回硝子体内注射後に、胃底に異常や炎症の兆候は見られなかった。硝子体は透明であり、網膜血管パターンは正常に見えた。網膜剥離、出血または視神経乳頭の変化は見られなかった。ベースラインと比較して眼圧の変化はなかった。ウサギの眼のベースライン蛍光眼底血管造影（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ、ＦＡ）およびＯＣＴ画像を図１３（Ａ～Ｄ）に示す。８週間にわたる各治療群のウサギの眼のＦＡおよびＯＣＴ画像の経時変化を図１４、図１５、図１６、および図１７に示す。ウサギ３２６および３２９の左眼（ＯＳ）または右眼（ＯＤ）からのデータが示されている。

【0156】

実施例１１：製剤ＵＵＵ～ＢＢＢＢの安定性の評価
この試験では、３７℃で最大６ヶ月間インキュベートした場合の１０ｍＭのリン酸塩、１０％または２０％のスクロース（Ｓｕｃ）、０または５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０３％のポリソルベート２０、ｐＨ６．２での６０ｍｇ／ｍｌおよび１２０ｍｇ／ｍｌのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）の安定性を調べた。この安定性試験の製剤を以下の表１１－１に示す。

【表30】

【0157】

製剤を、分注する前に、層流フード内でＰＶＤＦ０．２μｍフィルターを使用してフィルター滅菌した。

【0158】

各製剤を含有するバイアルを３７℃で１ヶ月間保存した。

【表31】

【表32】

【0159】

製剤のすべてが、目視検査および光学的密度測定によって本質的に粒子を含まなかった。３７℃で１ヶ月後のＲＰ－ＨＰＬＣによる回収では、タンパク質の著しい損失はなく（表１１－２）、この傾向は６ヶ月まで続いた。

【0160】

ＶＥＧＦ Ｔｒａｐの主な分解経路は、これらの条件下での凝集であった（図１８（ＡおよびＢ）、表１１－３）。ＶＥＧＦ Ｔｒａｐの安定性は、タンパク質およびスクロースの濃度に依存していた。より低い濃度のＶＥＧＦ Ｔｒａｐのおよびより高い濃度のスクロースを有する製剤は、より安定していた。同じタンパク質対スクロース比を維持しても、同じ分解速度は得られなかった。例えば、Ｆ１およびＦ４は同じタンパク質対スクロース比３：１を有するが、そのタンパク質濃度が高いためにＦ４はＦ１よりも安定性が低かった。同様の傾向が６か月まで観察された。

【0161】

実施例１２：異なるアフリベルセプト製剤を用いたサルにおける反復投与硝子体内毒性試験。
この実施例では、カニクイザルの様々な製剤の安全性を評価する。合計７回の硝子体内投与が、群１～３に対して略４週間に１回両眼に投与され、合計３回の硝子体内投与が、群４～９に対して略４週間に１回両眼に投与される。最終剖検は最終投与の約１週間後に行われ（Ｎ＝３／性別／群）、回復剖検（２／性別／群）は最週投与の約１２週間後に行われる。

【0162】

次の評価が行われる：
・臨床徴候、体重、バイタルサイン、心電図データ（投与前の治療終了および回復終了）、血圧測定（テールカフ経由）、臨床および解剖学的病理学に基づく安全性評価
・細隙灯顕微鏡検査、間接検眼鏡検査、眼圧測定を含む投与・回復期間中の定期的な総合眼科検査
・前処理時、試験の９週目（全群）、２６週目（群１～３のみ）、回復期終了時の眼底撮影、蛍光眼底血管造影、網膜電図
・生物分析、ＡＤＡ分析およびトキシコキネティクス評価のための血液および硝子体試料（終了時）

【表33】

【0163】

群１、２、３、４、５、６、７、８、および／または９のいずれか１つ以上で試験された製剤は、上記の評価において測定されたように、カニクイザルにおけるＥＹＬＥＡに匹敵する安全性プロファイルを有すると判定されると予想される。

【0164】

実施例１３：ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ生成物を用いた安定性試験。
１１４．３ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）および１０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．８、５％のスクロース、０．０３％のポリソルベート２０、５０ｍＭのアルギニン一塩酸塩を含む製剤を、充填前に０．２２μｍのＤｕｒａｐｏｒｅ ＰＶＤＦ無菌フィルターを使用してＬＦＨ（層流フード）内で調製した。清浄な脱パイロジェン３ｍＬタイプＩＳｃｈｏｔｔガラスバイアルに０．３ｍＬの医薬品を充填し、１３ｍｍの血清ストッパー（Ｓ２－Ｆ４５１４４３２／５０Ｂ２－４０）で栓をした。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって３７℃または５℃で保存した後の様々な時点で試料を分析して、高分子量種（ＨＭＷ）、低分子量種（ＬＭＷ）、および主ピーク（主）の存在を判定し、ならびに、マイクロフローイメージング、ＨＩＡＣ液体粒子カウント（光の隠蔽による）、および顕微鏡によって様々なサイズの粒子の存在を判定した。

【0165】

３７℃、２５℃、２～８℃で保存した後の安定性および純度のデータを図１９（Ａ～Ｅ）に示す。表１３－１～表１３－４も参照されたい。

【表34】

【表35】

【表36】

【表37】

【0166】

実施例１４：様々なＶＥＧＦ Ｔｒａｐの濃度を用いた安定性試験。
４つのＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）ｅｙｅ医薬品製剤の安定性に対するＶＥＧＦ Ｔｒａｐの濃度の変化の影響について試験した。濃度は８０～１４０ｍｇ／ｍＬの範囲であった。安定性の評価は２～８℃の保存条件で行った。医薬品（ＤＰ）もストレス（３７℃）条件下でインキュベートした。この安定性試験で評価されている４つの製剤（これらの各々が本明細書では「ＣＣＣ」と名付けられている）を、以下に示す表１４－１に記載している。

【0167】

約２７ｍＬの各製剤を、充填前に０．２２μｍのＤｕｒａｐｏｒｅ ＰＶＤＦ滅菌フィルターを使用してＬＦＨ（Ｌａｍｉｎａｒ Ｆｌｏｗ Ｈｏｏｄ、層流フード）内で調製した。清浄な脱パイロジェン２ｍＬタイプＩＳｃｈｏｔｔガラスバイアルに充填し、１３ｍｍの血清ストッパー（Ｓ２－Ｆ４５１４４３２／５０Ｂ２－４０）で栓をした。サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）により、３７℃または２～８℃で保存した後の様々な時点でサンプルを分析して、高分子量種（ＨＭＷ）の存在(%)および主ピーク（主）を判定した。

【0168】

２～８℃または３７℃で最大６ヶ月間インキュベートした後のＨＭＷの割合を示すデータを図２０（ＡおよびＢ）に示す。表１４－２および表１４－３も参照されたい。３７℃および５℃で保存した場合、これらの製剤は、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐの濃度に対するＨＭＷ形成率の正の相関を示した。１４０ｍｇ／ｍＬの製剤は、最高のＨＭＷ種形成率(%)を示した。

【表38】

【表39】

【表40】

【0169】

実施例１５：高用量のＥｙｌｅａについては、持続性新生血管漏出のＤ、Ｌ～ＡＡＡモデルにおける作用期間が延長された。
この実施例では、Ｄ、Ｌ～ＡＡＡモデルにおいて慢性網膜血管漏出を阻害するためのアフリベルセプトの作用の持続時間に対する用量において４倍の効果の増加があると判定された。

【0170】

使用した動物は、ＤＬ－ＡＡＡ（ＤＬ－α－アミノアジピン酸）疾患誘発の３ヶ月後のニュージーランド白ウサギであった。治療群は次の通りである。
・プラセボ（製剤緩衝液）５０ｍｃｌ／眼、ｎ＝６眼
・５０ｍｃｌにおいてアフリベルセプト５００ｍｃｇ、ｎ＝７眼
・５０ｍｃｌにおいてアフリベルセプト２ｍｇ、ｎ＝８眼

【0171】

各治療群で使用された製剤は、ｐＨ５．８の、１０ｍＭのヒスチジン、８％のスクロース、０．０３％のＰＳ２０であった。ベースラインならびに１、２、４、６、７、９、１０、１１、１３、および１８週目に実施された眼の検査は、眼圧（ＩＯＰ）、赤みのない（ＲＦ、ｒｅｄ－ｆｒｅｅ）イメージング（血管形態を判定するための）、蛍光眼底血管造影（ＦＡ；血管漏出を判定するための）、光コヒーレンストモグラフィー（Ｏｐｔｉｃａｌ Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，ＯＣＴ；硝子体炎症を特定するための）であった。血清（ＡＤＡ）および血漿（薬剤レベル）は、ベースラインおよび１、２、４、６、および９週目に収集された。

【0172】

各群のＦＡ試験のデータを図２１に示す。これらのデータは、高用量のアフリベルセプトを投与された動物の網膜における血管漏出抑制が、低用量を投与された動物のそれよりも長く続いたことを示した。血管透過性が完全に阻害された治療眼の数は、投与後１８週間までのすべてのサンプリング時間で、２ｍｇ投与群で有意に多かった。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図14F】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図15E】

【図15F】

【図15G】

【図15H】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図16D】

【図16E】

【図16F】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図17E】

【図17F】

【図17G】

【図17H】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図19D】

【図19E】

【図20A】

【図20B】

【図21】

【配列表】

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