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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-03-08
(45)【発行日】2023-03-16
(54)【発明の名称】γヒドロキシ酪酸受容体結合剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/201 20060101AFI20230309BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20230309BHJP
A61K 31/20 20060101ALI20230309BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20230309BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20230309BHJP
A61P 25/32 20060101ALI20230309BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230309BHJP
【ＦＩ】
A61K31/201
A23L33/10
A61K31/20
A61P25/18
A61P25/24
A61P25/32
A61P43/00 111
【請求項の数】
4
(21)【出願番号】P 2019010125
(22)【出願日】2019-01-24
(65)【公開番号】P2020117464
(43)【公開日】2020-08-06
【審査請求日】2021-11-17
(73)【特許権者】
【識別番号】598162665
【氏名又は名称】株式会社山田養蜂場本社
(74)【代理人】
【識別番号】100088155
【弁理士】
【氏名又は名称】長谷川 芳樹
(74)【代理人】
【識別番号】100128381
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 義憲
(74)【代理人】
【識別番号】100206944
【弁理士】
【氏名又は名称】吉川 絵美
(72)【発明者】
【氏名】山家 雅之
(72)【発明者】
【氏名】谷 央子
【審査官】篭島 福太郎
(56)【参考文献】
【文献】特開２００１－２６１５７１（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１７／２２１８４５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５１４８７４（ＪＰ，Ａ）
【文献】日本栄養・食糧学会誌，2010年，第63巻, 第6号，p.271-278
【文献】J. Neurochem.，2004年，Vol.89，p.1462-1470
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／２０１
Ａ２３Ｌ ３３／１０
Ａ６１Ｋ ３１／２０
Ａ６１Ｐ ２５／１８
Ａ６１Ｐ ２５／２４
Ａ６１Ｐ ２５／３２
Ａ６１Ｐ ４３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記一般式（１）又は（２）で表される化合物からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含む、γヒドロキシ酪酸受容体結合剤。【化1】
［式（１）中、Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ２はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｍは４～８の整数を示す。ただし、ｍが６のときＲ２はメチロール基を示す。］
【化2】
［式（２）中、Ｒ３は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ４はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｎは５～７の整数を示す。ただし、Ｒ３が水酸基のときＲ４はメチロール基を示し、Ｒ３が水素原子でありかつＲ４がメチロール基のとき、ｎは６又は７を示す。］
【請求項2】
請求項１に記載のγヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含む、抗うつ剤、統合失調症改善剤、又はアルコール依存症改善剤。
【請求項3】
請求項１に記載のγヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含み、γヒドロキシ酪酸受容体結合用である、医薬組成物又は食品組成物。
【請求項4】
請求項１に記載のγヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含み、抗うつ用、統合失調症改善用、又はアルコール依存症改善用である、医薬品組成物又は食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、γヒドロキシ酪酸受容体結合剤に関する。
【背景技術】
【0002】
γヒドロキシ酪酸（ＧＨＢ）は、哺乳類の脳内に存在しており、神経伝達物質として機能していると考えられている。ＧＨＢは、中枢神経系に発現しているＧＨＢ受容体に結合し、アルコール依存症の治療に用いられることが知られている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【文献】Castelli, Mini-Reviews inMedical Chemistry, 2008, Vol. 8, No. 12, p1188-1202
【文献】Hu et al., Neuropharmacology,2000, Vol. 39, p427-439
【文献】Carai et al., European Journal ofPharmacology, 2001, Vol. 428, p315-321
【文献】Frankowska, et al.,Pharmacological Reports, 2007, Vol. 59, p645-655
【文献】Pilc, et al, Drugs of today,2005, Vol. 41, No. 11, p755-766
【文献】Kantrowitz, et al., CNS Drugs,2009, Vol. 23, No. 8, p681-691
【文献】Leggio et al., CNS &Neurological Disorders - Drug Targets, 2010, Vol . 9, p33-44
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明は、新たなγヒドロキシ酪酸受容体結合剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明者らは、特定の構造を有する飽和脂肪酸及び一価の不飽和脂肪酸が、ＧＨＢ受容体結合性を有することを見出した。
【0006】
本発明のγヒドロキシ酪酸受容体結合剤は、下記一般式（１）又は（２）で表される化合物及びその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含む。
【0007】
【化1】
［式（１）中、Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ２はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｍは４～８の整数を示す。ただし、ｍが６のときＲ２はメチロール基を示す。］
【化2】
［式（２）中、Ｒ３は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ４はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｎは５～７の整数を示す。ただし、Ｒ３が水酸基のときＲ４はメチロール基を示し、Ｒ３が水素原子でありかつＲ４がメチロール基のとき、ｎは６又は７を示す。］
【0008】
本発明はまた、上記γヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含む、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤及びアルコール依存症改善剤を提供する。
【0009】
本発明はまた、上記γヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含み、γヒドロキシ酪酸受容体結合用である、医薬組成物又は食品組成物を提供する。
【0010】
本発明はまた、上記γヒドロキシ酪酸受容体結合剤を含み、抗うつ用、抗不安用、睡眠の質改善用、統合失調症改善用、認知機能改善用又はアルコール依存症改善用である、医薬品組成物又は食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【0011】
本発明により、新たなγヒドロキシ酪酸受容体結合剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【0013】
本発明のγヒドロキシ酪酸（以下、「ＧＨＢ」ともいう。）受容体結合剤は、下記一般式（１）又は（２）で表される化合物及びその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含む。
【0014】
【化3】
［式（１）中、Ｒ１は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ２はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｍは４～８の整数を示す。ただし、ｍが６のときＲ２はメチロール基を示す。］
【化4】
［式（２）中、Ｒ３は水素原子又は水酸基を示し、Ｒ４はメチロール基又はカルボキシ基を示し、ｎは５～７の整数を示す。ただし、Ｒ３が水酸基のときＲ４はメチロール基を示し、Ｒ３が水素原子でありかつＲ４がメチロール基のとき、ｎは６又は７を示す。］
【0015】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、後述の実施例に示されているように、ＧＨＢ受容体に結合する性質を有している。具体的には、本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、ＧＨＢ受容体アンタゴニストであるＮＣＳ３８２との共存下において、ＧＨＢ受容体の結合部位を競合する。そのため、本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、ＧＨＢ受容体アンタゴニストとしての性質を有すると考えられる。
【0016】
ＧＨＢ受容体は、ＧＨＢが結合することにより、ＧＡＢＡの細胞外への放出を抑制する作用を有することが知られている。ＧＨＢ前駆体がＧＨＢ受容体に結合した場合も、ＧＨＢが結合した場合と同じ作用を有する。例えば非特許文献２には、ＧＨＢ受容体アンタゴニストであるＮＣＳ３８２によって、ＧＨＢ受容体によるＧＡＢＡ放出能が正常に回復することが記載されている。また、ＧＨＢ受容体アンタゴニストであるＮＣＳ３８２により、睡眠鎮静効果が増強することが知られており（非特許文献３）、睡眠鎮静効果はＧＡＢＡＢ受容体の働きであることが知られている。したがって、ＧＨＢ受容体の働きを阻害することによって、ＧＡＢＡＢ受容体の働きを活性化すると考えられている。そのため、ＧＨＢ受容体へのＧＨＢの結合を阻害することにより、ＧＡＢＡ放出を活性化することができるといえる。したがって、本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、ＧＨＢ受容体のＧＡＢＡ放出能活性化剤ということもできる。
【0017】
ＧＡＢＡは、ＧＡＢＡＢ受容体に結合する性質を有する。ＧＡＢＡＢ受容体は種々の作用を有する。例えば非特許文献４に記載されているように、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニストであるバクロフェンは、抗うつ薬の特徴である効果を生じることが知られている。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、抗うつ作用を有し、抗うつ剤として用いることができる。抗うつとは、例えば、うつ病症状の改善、うつ病症状の軽減、うつ病症状の発生の抑制、うつ病の予防を含む。
【0018】
例えば非特許文献５に記載されているように、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニストであるバクロフェンは、抗不安作用があることが知られている。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、抗不安作用を有し、抗不安剤として用いることができる。抗不安とは、例えば、不安感の改善、不安感の軽減、不安感の発生の抑制、不安感発生の予防を含む。
【0019】
例えば非特許文献６に記載されているように、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニストは、レム睡眠に及ぼす影響は最小限でありながら、徐波睡眠を増加させること、徐波睡眠産生及び概日リズム機能に関連する遺伝子の発現の増加をもたらすことが知られている。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、睡眠の質を改善する作用を有し、睡眠の質改善剤として用いることができる。睡眠の質改善とは、具体的には例えば、睡眠障害の改善、睡眠鎮静を含む。
【0020】
例えば非特許文献６に記載されているように、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニストであるバクロフェンの投与は、統合失調症の治療に有益とされている。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、統合失調症改善作用を有し、統合失調症改善剤として用いることができる。統合失調症改善とは、例えば、統合失調症の症状の軽減、統合失調症の症状発生の抑制、統合失調症の予防を含む。
【0021】
また、例えば非特許文献６に記載されているように、統合失調症の改善に伴い、記憶が改善することが知られている。また、ＧＡＢＡＢ受容体アゴニストが、認知障害の改善作用があると考えられている。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、認知機能改善作用を有し、認知機能改善剤として用いることができる。認知機能改善とは、例えば、認知障害の改善、認知障害の予防、記憶力の向上を含む。
【0022】
非特許文献７には、ＧＡＢＡＢ受容体のアゴニストであるバクロフェンの投与により、アルコール依存症の重篤度が改善したことが記載されている。このことから、ＧＨＢ受容体によるＧＡＢＡ放出を活性化することで、アルコール依存症を改善できると考えられる。したがって、ＧＡＢＡ放出能活性化作用を有する本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤は、アルコール依存症改善剤として使用することができる。アルコール依存症改善とは、例えば、アルコール依存症の症状の軽減、アルコール依存症の症状の発生抑制、アルコール依存症の予防を含む。
【0023】
一般式（１）で表される化合物としては、例えば、８－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシドデカン酸、２－ドデカン二酸、３，１０－ジヒドロキシデカン酸等が挙げられる。
【0024】
一般式（２）で表される化合物としては、例えば、２－デセン二酸、９，１０－ジヒドロキシ－２－デセン酸、トラウマチン酸、１１，１２－ジヒドロキシ－２－ドデセン酸等が挙げられる。
【0025】
一般式（１）又は（２）で表される化合物の誘導体としては、例えば、塩化物、エステル、アミド、酸無水物、配糖体、塩（ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩（トリエタノールアミンなど）、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ブロカイン塩等の脂肪族アミン塩；Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチレンジアミン等のアラルキルアミン塩；ピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソキノリン塩等の複素環芳香族アミン塩；テトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩等の第４級アンモニウム塩；アルギニン塩、リジン塩、ヒスチジン塩、アルギニン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸塩；塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩；メタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩等）等が挙げられる。
【0026】
一般式（１）又は（２）で表される化合物及びその誘導体は、合成品であってよく、天然物由来であってもよい。上記化合物及びその誘導体は、公知の方法で合成することができる。
【0027】
従来からアルコール依存症改善剤として知られているＧＨＢは、ＧＨＢ受容体だけでなく、ＧＡＢＡＢ受容体にも強力に結合する性質を有する。ＧＨＢは、ＧＡＢＡＢ受容体と結合し、激的に活性化することで、依存性をもたらすと考えられている。一方、本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤における有効成分は、それ自体が直接ＧＡＢＡＢ受容体とより結合しにくい点で、ＧＨＢより好ましい性質を有する。
【0028】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤中の、一般式（１）又は（２）で表される化合物及びその誘導体の含有量は、合計で、ＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤の固形分全量に対して、例えば、０．０００１質量％以上、０．００１質量％以上、０．０１質量％以上、０．１質量％以上、０．５質量％以上、１質量％以上、３質量％以上、５質量％以上、７質量％以上、１０質量％以上、２０質量％以上、３０質量％以上、４０質量％以上、５０質量％以上、６０質量％以上、７０質量％以上、８０質量％以上、９０質量％以上、９５質量％以上、９８質量％以上、９９質量％以上、９９．５質量％以上であってよく、１００質量％以下、９９．５質量％以下、９９質量％以下、９８質量％以下、９５質量％以下、９０質量％以下、８０質量％以下、７０質量％以下、６０質量％以下、５０質量％以下、４０質量％以下、３０質量％以下、２０質量％以下、１０質量％以下、７質量％以下、５質量％以下、３質量％以下、１質量％以下、０．５質量％以下、０．１質量％以下、０．０１質量％以下、０．００１質量％以下であってよい。
【0029】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、有効成分換算で、例えば、体重６０ｋｇの成人に一日当たり０．００１～１０００ｍｇの用量で用いることができ、０．００２～５００ｍｇの用量で用いることが好ましく、０．００５～２００ｍｇの用量で用いることがより好ましく、０．００８～５０ｍｇの用量で用いることが更に好ましく、０．０１～２０ｍｇの用量で用いることが更により好ましく、０．１～５ｍｇの用量で用いることが特に好ましい。用量は、摂取する人の健康状態、投与方法及び他の剤との組み合わせ等の因子に応じて、上記範囲内で適宜設定することができる。
【0030】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤を適用する対象は、例えば、ヒト等の哺乳類であってよい。適用対象は、例えば、うつ患者、不安症患者、睡眠障害患者、統合失調症患者、認知症患者、アルコール依存症患者、又はこれらの症状のリスクがあるものであってよい。対象は健常者であってもよい。
【0031】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、経口投与（摂取）又は経口投与以外の方法で経腸投与されてもよく、骨髄等に直接投与されてもよい。本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、一日当たりの有効成分量が上述した範囲内にあれば、一日一回投与されてもよいし、一日二回、一日三回等、複数回に分けて投与されてもよい。
【0032】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、有効成分である一般式（１）又は（２）で表される化合物およびその誘導体からなる群から選ばれる少なくとも１種のみを含有するものであってもよく、本発明による効果を妨げない限り、他の成分を更に含有していてもよい。他の成分としては、例えば、薬学的に許容される成分（例えば、賦形剤、結合材、滑沢剤、崩壊剤、乳化剤、界面活性剤、基剤、溶解補助剤、懸濁化剤）、食品として許容される成分（例えば、ミネラル類、ビタミン類、フラボノイド類、キノン類、ポリフェノール類、アミノ酸、核酸、必須脂肪酸、清涼剤、結合剤、甘味料、崩壊剤、滑沢剤、着色料、香料、安定化剤、防腐剤、徐放調整剤、界面活性剤、溶解剤、湿潤剤）を挙げることができる。
【0033】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、固体、液体、ペースト等のいずれの形状であってもよく、タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠、トローチ剤等を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末剤（散剤）、細粒剤、顆粒剤、液剤、懸濁液、乳濁液、シロップ、ペースト、注射剤（使用時に、蒸留水又はアミノ酸輸液若しくは電解質輸液等の輸液に配合して液剤として調製する場合を含む）等の剤形であってもよい。これらの各種製剤は、例えば、有効成分と、必要に応じて他の成分とを混合して上記剤形に成形することによって調製することができる。
【0034】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤は、医薬組成物又は食品組成物そのものとして使用することができ、医薬組成物及び食品組成物中の成分として使用することもできる。食品組成物としては、食品の３次機能、すなわち体調調節機能が強調されたものであることが好ましい。食品の３次機能が強調された製品としては、例えば、健康食品、機能性表示食品、栄養機能食品、栄養補助食品、サプリメント及び特定保健用食品を挙げることができる。
【0035】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤若しくはアルコール依存症改善剤からなる医薬組成物若しくは食品組成物、又は本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤若しくはアルコール依存症改善剤を含む医薬組成物若しくは食品組成物は、ＧＨＢ受容体結合用、抗うつ用、抗不安用、睡眠の質改善用、統合失調症改善用、認知機能改善用又はアルコール依存症改善用であってよい。これらの製品には、例えば、ＧＡＢＡ放出を高める旨、うつを改善する旨、不安を改善する旨、睡眠の質を改善する旨、統合失調症を改善する旨、認知機能を改善する旨、アルコール依存症を改善する旨、等の表示がされていてもよい。
【0036】
本実施形態に係るＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤を食品組成物そのものとして、又は食品組成物に添加して使用する場合、食品組成物の形態は特に限定されない。食品組成物の製造工程中の中間製品又は最終製品に上記ＧＨＢ受容体結合剤、抗うつ剤、抗不安剤、睡眠の質改善剤、統合失調症改善剤、認知機能改善剤又はアルコール依存症改善剤を混合して、上記の目的に用いられる食品組成物を得ることができる。食品組成物としては例えば、コーヒー、ジュース及び茶飲料等の清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、並びに、日本酒、洋酒、果実酒及びハチミツ酒等の酒などの飲料；カスタードクリーム等のスプレッド；フルーツペースト等のペースト；チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、ガム、ゼリー、キャンデー、クッキー、ケーキ及びプリン等の洋菓子；大福、餅、饅頭、カステラ、あんみつ及び羊羹等の和菓子；アイスクリーム、アイスキャンデー及びシャーベット等の氷菓；カレー、牛丼、雑炊、味噌汁、スープ、ミートソース、パスタ、漬物、ジャム等の調理済みの食品；ドレッシング、ふりかけ、旨味調味料及びスープの素等の調味料などが挙げられる。
【実施例】
【0037】
以下、本発明を実施例に基づいてより具体的に説明する。ただし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0038】
［ＧＨＢ受容体結合アッセイ］
１７５±２５ｇのＷｉｓｔａｒラットの大脳皮質から、５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ６．０）を用いてＧＨＢ受容体を調製した。１％ジメチルスルホキシドを含む５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ６．０）内で、ＧＨＢ受容体を含む１ｍｇのアリコートを、［３Ｈ］ＮＣＳ３８２（２０ｎＭ）及び試験物質とともに、１２０分間４℃でインキュベートした。コントロールとして、試験物質を含まない条件で同様に試験を行った。なお、１ｍＭのＮＣＳ３８２を添加し、非特異的結合を推定した。インキュベート後、メンブレンを用いてＧＨＢ受容体をろ過した。ろ過して得られたＧＨＢ受容体を、ＫＨ２ＰＯ４バッファーで洗浄した後、放射線量を測定した。放射線量測定値から、ＮＣＳ３８２に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）及び阻害率を算出した。ＧＨＢ受容体のＢｍａｘは３９．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。
１７５±２５ｇのＷｉｓｔａｒラットの大脳皮質から、５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ６．０）を用いてＧＨＢ受容体を調製した。１％ジメチルスルホキシドを含む５０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４バッファー（ｐＨ６．０）内で、ＧＨＢ受容体を含む１ｍｇのアリコートを、［３Ｈ］ＮＣＳ３８２（２０ｎＭ）及び試験物質とともに、１２０分間４℃でインキュベートした。コントロールとして、試験物質を含まない条件で同様に試験を行った。なお、１ｍＭのＮＣＳ３８２を添加し、非特異的結合を推定した。インキュベート後、メンブレンを用いてＧＨＢ受容体をろ過した。ろ過して得られたＧＨＢ受容体を、ＫＨ２ＰＯ４バッファーで洗浄した後、放射線量を測定した。放射線量測定値から、ＮＣＳ３８２に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）及び阻害率を算出した。ＧＨＢ受容体のＢｍａｘは３９．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。
【0039】
被験物質としては、８－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシドデカン酸、２－ドデカン二酸、３，１０－ジヒドロキシデカン酸、２－デセン二酸、９，１０－ジヒドロキシ－２－デセン酸、トラウマチン酸、１１，１２－ジヒドロキシ－２－ドデセン酸、及びセバシン酸を用いた。結果を表１に示す。
【0040】
［ＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体結合アッセイ］
２．５ｍＭ ＣａＣｌ２及び０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）を用いて、ＣＨＯ－Ｋ１細胞で発現させたヒト組み替えＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体を調製した。１％ジメチルスルホキシドを含み、かつ２．５ｍＭ ＣａＣｌ２及び０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー内で、ＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体を含む１μｇのアリコートを、４．０ｎＭの［３Ｈ］ＣＧＰ－５４６２６及び被験物質とともに２５℃で３時間インキュベートした。コントロールとして、試験物質を含まない条件で同様に試験を行った。ＣＧＰ－５４６２６は、ＧＡＢＡＢ受容体アンタゴニストである。なお、３．０ｍＭのＧＡＢＡを添加し、非特異的結合を推定した。
２．５ｍＭ ＣａＣｌ２及び０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）を用いて、ＣＨＯ－Ｋ１細胞で発現させたヒト組み替えＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体を調製した。１％ジメチルスルホキシドを含み、かつ２．５ｍＭ ＣａＣｌ２及び０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー内で、ＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体を含む１μｇのアリコートを、４．０ｎＭの［３Ｈ］ＣＧＰ－５４６２６及び被験物質とともに２５℃で３時間インキュベートした。コントロールとして、試験物質を含まない条件で同様に試験を行った。ＣＧＰ－５４６２６は、ＧＡＢＡＢ受容体アンタゴニストである。なお、３．０ｍＭのＧＡＢＡを添加し、非特異的結合を推定した。
【0041】
インキュベート後、メンブレンを用いてＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体をろ過した。ろ過して得られたＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体を、トリスＨＣｌバッファーで洗浄した後、放射線量を測定した。放射線量測定値から、ＣＧＰ－５４６２６に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。ＧＡＢＡＢ（１ａ）受容体のＢｍａｘは４８．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。被験物質としては、上記ＧＨＢ受容体結合アッセイと同じものを用いた。結果を表１に示す。
【0042】
【表1】
【0043】
表１に示すとおり、８－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシドデカン酸、２－ドデカン二酸、３，１０－ジヒドロキシデカン酸、２－デセン二酸、９，１０－ジヒドロキシ－２－デセン酸、トラウマチン酸、及び１１，１２－ジヒドロキシ－２－ドデセン酸は、ＧＨＢ受容体アンタゴニストであるＮＣＳ３８２に対するＩＣ５０が高く、ＧＨＢ受容体に結合する性質を有することが示された。一方、セバシン酸は、ＧＨＢ受容体に対する結合性を示さず、ＩＣ５０を求めることができなかった。１０－ヒドロキシデカン酸及び２－デセン二酸は、ＧＡＢＡＢ受容体アンタゴニストであるＣＧＰ－５４６２６に対する阻害作用を示さず、ＧＡＢＡＢ受容体に対する結合性を示さないことが示された。