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Ｎｋｘ３．２及びその断片を有効成分として含む網膜疾患の予防又は治療用の医薬組成物

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

そこで、本発明者らは、黄斑変性（ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の治療剤を研究したところ、Ｎｋｘ３．２及び／又はその断片が酸化ストレスによる網膜色素上皮細胞の死滅及び網膜変性の抑制、視覚機能の保存、脈絡膜新生血管及び網膜浮腫の抑制などの網膜疾患の予防又は治療に優れた効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

前記の目的を達成するために、本発明は、Ｎｋｘ３．２又はその断片を有効成分として含む網膜疾患の予防又は治療用の医薬組成物を提供する。

発明の効果[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明に係るＮｋｘ３．２及び／又はその断片は、酸化ストレスによる網膜変性を抑制し、視覚機能を保存する。また、前記Ｎｋｘ３．２及び／又はその断片は、網膜色素上皮細胞の酸化ストレスによる細胞死滅を抑制し、脈絡膜新生血管及び網膜浮腫を抑制する。したがって、前記Ｎｋｘ３．２及び／又はその断片を有効成分として含む組成物は、網膜疾患の予防又は治療に有利に活用され得る。

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 図１は、免疫組織化学染色によりＣ５７ＢＬ／６マウスの網膜色素上皮細胞におけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。このとき、ＯＳは、外節 (OuterSegment)の略語である。
【図2】 図２は、免疫組織化学染色によりヒト網膜色素上皮細胞におけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。
【図3】 図３は、ウエスタンブロット分析法を用いてヒト網膜色素上皮細胞におけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。このとき、ＷＢ ａｂｓは、ウエスタンブロット抗体（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）の略語である。
【図4】 図４は、酸化ストレスによる網膜変性マウスモデルにおける網膜色素上皮の病変を示す図である。
【図5】 図５は、免疫組織化学染色により網膜変性マウスモデルにおけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。
【図6】 図６は、ウエスタンブロット分析法を用いて網膜変性マウスモデルにおけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。
【図7】 図７は、網膜色素上皮細胞に特異的なＮｋｘ３．２過剰発現マウスを作製するための方法を図式化して示す図である。図７に示す略語の意味は、以下の通りである：ｃｉ－Ｎｋｘ３．２，Ｃｒｅ誘導Ｎｋｘ３．２（Ｃｒｅ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｎｋｘ３．２）；ｃｉＴｇ－Ｎｋｘ３．２、Ｃｒｅ誘導Ｎｋｘ３．２トランスジェニック（Ｃｒｅ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｎｋｘ３．２ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）；ｔｐＡ、転写の停止（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｓｔｏｐ）。
【図8】 図８は、免疫組織化学染色により網膜色素上皮細胞に特異的なＮｋｘ３．２過剰発現マウスの網膜色素上皮におけるＮｋｘ３．２タンパク質の発現を示す図である。
【図9】 図９は、網膜フラットマウント（Ｆｌａｔ ｍｏｕｎｔ）によってＮｋｘ３．２タンパク質の発現レベルによる網膜変性の程度を示す図である。
【図10】 図１０は、眼底画像（Ｆｕｎｄｕｓ ｉｍａｇｅ）撮影方法によってＮｋｘ３．２の発現レベルによるマウスの網膜変性の程度を示す図である。
【図11】 図１１は、光干渉断層撮影方法（ｏｐｔｉｃａｌ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，ＯＣＴ）によってＮｋｘ３．２の発現レベルによるマウスの網膜変性の程度を示す図である。
【図12】 図１２は、組職病理分析法によってＮｋｘ３．２タンパク質の発現レベルによるマウスの網膜変性の程度を示す図である。
【図13】 図１３は、網膜電図検査（ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｐｈｙ，ＥＲＧ）によってＮｋｘ３．２タンパク質の発現レベルによるマウスの視覚機能の保存効果を示す図である。
【図14】 図１４は、ヒト網膜色素上皮細胞で酸化ストレスを誘導するＨ２Ｏ２濃度による細胞生存率を示す図である。
【図15】 図１５は、ヒト網膜色素上皮細胞で酸化ストレスを誘導するＨ２Ｏ２濃度による細胞死滅率を示す図である。
【図16】 図１６は、ウエスタンブロット分析法によってヒト網膜色素上皮細胞で酸化ストレスを誘導するＨ２Ｏ２濃度による細胞死滅のマーカーであるＣｌｅａｖｅｄ ＰＡＲＰタンパク質の発現レベル及びＮｋｘ３．２タンパク質の発現レベルを示す図である。
【図17】 図１７は、ヒト網膜色素上皮細胞でＮｋｘ３．２発現ウイルス（Ｌｅｎｔｉ－Ｎｋｘ３．２）の処理時に酸化ストレスによる細胞死滅の程度を示す図である。
【図18】 図１８は、ヒト網膜色素上皮細胞でＮｋｘ３．２発現抑制ウイルス（ｓｈ－Ｎｋｘ３．２）の処理時に酸化ストレスによる細胞死滅の程度を示す図である。
【図19】 図１９は、マイクロプレートリーダー装置を用いてＮｋｘ３．２全長及びその断片の酸化ストレスによる網膜色素上皮細胞の死滅抑制能を示す図である。
【図20a】 図２０ａは、免疫化学技術を用いてＮｋｘ３．２全長及びその断片に対する形質導入の効率を示す図である。
【図20b】 図２０ｂは、形質導入されたＮｋｘ３．２タンパク質の個数／ＤＡＰＩ染色された核の個数を計算して平均値を求めた後、その結果を示す表ある。
【図20c】 図２０ｃは、形質導入されたＮｋｘ３．２タンパク質の個数／ＤＡＰＩ染色された核の個数を計算して平均値を求めた後、その結果を示すグラフである。
【図21a】 図２１ａは、Ｎｋｘ３．２過剰発現マウスにレーザーを照射して脈絡膜新生血管を誘導した後、網膜血管を眼底造影法により撮影した図である。
【図21b】 図２１ｂは、眼底造影法により撮影した画像に基づいてｗｉｌｄ ｔｙｐｅマウスとＮｋｘ３．２過剰発現マウスとの間の脈絡膜新生血管の病変の大きさの差を比較した図である。
【図22a】 図２２ａは、Ｎｋｘ３．２過剰発現マウスにレーザーを照射して脈絡膜新生血管を誘導した後、網膜領域を光干渉断層撮影方法により撮影した図である。
【図22b】 図２２ｂは、光干渉断層撮影画像に基づいてｗｉｌｄ ｔｙｐｅマウスとＮｋｘ３．２過剰発現マウスとの間の網膜浮腫の差を比較した図である。

代表図 図1本件の代表的な図

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