特許 7247164 注入可能な油中水型エマルション及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-03-17

(45)【発行日】2023-03-28

(54)【発明の名称】注入可能な油中水型エマルション及びその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 9/107 20060101AFI20230320BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20230320BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20230320BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20230320BHJP

   A61K 47/06 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 31/704 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230320BHJP

   A61K 49/18 20060101ALI20230320BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230320BHJP

【ＦＩ】

A61K9/107

A61K47/34

A61K47/14

A61K47/44

A61K47/06

A61K45/00

A61K31/704

A61K31/4745

A61K31/282

A61K39/395 M

A61K39/395 N

A61K49/18

A61P35/00

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2020503016

(86)(22)【出願日】2018-07-16

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-09-03

(86)【国際出願番号】 EP2018069272

(87)【国際公開番号】W WO2019016138

(87)【国際公開日】2019-01-24

【審査請求日】2021-05-11

(31)【優先権主張番号】1756773

(32)【優先日】2017-07-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR

(73)【特許権者】

【識別番号】508061930

【氏名又は名称】アンスティテュ ギュスタブ ルシ

(73)【特許権者】

【識別番号】501089863

【氏名又は名称】サントル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシェ サイアンティフィク

(73)【特許権者】

【識別番号】520018392

【氏名又は名称】ユニベルシテ パリ－サクレー

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(72)【発明者】

【氏名】フレデリク デシャン

(72)【発明者】

【氏名】ティエリー ド バエール

(72)【発明者】

【氏名】ランブロス テリカス

(72)【発明者】

【氏名】トマ イゾアルド

(72)【発明者】

【氏名】ニコラ ホアン

(72)【発明者】

【氏名】ロランス モワンヌ

(72)【発明者】

【氏名】ニコラ ツァピス

(72)【発明者】

【氏名】エリアス ファタール

【審査官】高橋 樹理

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５０５３２６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００８－２０８０４５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００５－５０３３９８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開平１０－１５８１５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００１－０８９３１９（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１８－５３４３１０（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許第０６５９２８８３（ＵＳ，Ｂ１）

【文献】国際公開第２０１７／０８７５２０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第００／０７６５２５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１６－５１６８２４（ＪＰ，Ａ）

【文献】Journal of Materials Chemistry B，2014年，Vol.2，p.7605-7611

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ９／１０７

Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

連続油相と、液滴の形態で分散された水相とを含む油中水エマルションであって、前記水相がポリエステルベースのナノ粒子と少なくとも１つの治療薬とを含み、
前記ポリエステルベースのナノ粒子が、ポリ乳酸（ポリラクチド）、ポリグリコール酸（ポリグリコリド）、ラクチド－グリコリドコポリマー、ラクチド－グリコリド－ｃｏ－ポリエチレングリコールコポリマー、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリブチルアセトン、ポリバレロラクトン、ポリリンゴ酸、ポリラクトン、及びそれらの混合物に基づくナノ粒子からなる群から選択され、
油相が少なくとも１つの植物油を含むか、あるいは油相が、ケシ種子油からのヨウ素化脂肪酸のエチルエステル、８～１２個の炭素原子を含む中鎖長を有するトリグリセリド、又は主にスクアレンで構成される鉱油を含む、上記油中水エマルション。

【請求項2】

水相の液滴のサイズが１０μｍ～１００μｍである、請求項１に記載のエマルション。

【請求項3】

治療薬が、免疫調節剤、抗癌薬製品、抗血管新生薬製品、抗感染薬製品、及び抗炎症薬製品から選択される、請求項１又は２に記載のエマルション。

【請求項4】

抗癌性医薬品が、アルキル化剤、白金誘導体、細胞毒性抗生剤、抗微小管剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼＩ型及びＩＩ型阻害剤、フルオロピリミジン、シチジン類似体、アデノシン類似体、メトトレキサート、フォリン酸、酵素、抗血管剤、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、キナーゼ阻害剤、ホルモン、モノクローナル抗体、放射性元素、腫瘍溶解性ウイルス、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３に記載のエマルション。

【請求項5】

治療薬が、ドキソルビシン、イリノテカン、オキサリプラチン、及びそれらの混合物からなる群から選択される抗癌性医薬品である、請求項１～４のいずれか１項に記載のエマルション。

【請求項6】

治療薬が、抗血管新生モノクローナル抗体、抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３に記載のエマルション。

【請求項7】

前記ポリエステルベースのナノ粒子が酸化鉄粒子をさらに含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のエマルション。

【請求項8】

請求項１～７のいずれか１項に記載のエマルションを含むことを特徴とする医薬品。

【請求項9】

請求項１～７のいずれか１項に記載のエマルション、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。

【請求項10】

癌の治療に使用するための、請求項４～６のいずれか１項に記載のエマルション。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の目的は、安定で注射可能な油中水型の治療用エマルションに関する。また、特に癌の治療のための前記エマルションの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

肝動脈化学療法－塞栓術は、手術不能な肝細胞癌及び血管過剰転移などの特定の肝腫瘍の標準治療である。この治療は、腫瘍動脈に直接、化学療法薬（一般的にはドキソルビシン）の注射と虚血性動脈塞栓術を組み合わせたものである。化学療法薬は、化学療法薬が以前に「充填」されたベクターの使用により、腫瘍動脈でゆっくりと持続的に放出される。このベクターは、理想的には、診断特性（画像化の可視性）と治療特性（化学療法薬の制御された持続放出）を備えている必要がある。しかしながら、現在使用されているベクター（Ｌｉｐｉｏｄｏｌ（登録商標）又は充填されたビーズ）には、このセラノスティック特性（診断及び治療）はない。装填されたビーズは、化学療法薬（イオン交換機構）を装填できるポリビニルアルコールベースのミクロスフェアであり、７０～７００μｍの様々なサイズで入手できる。これらのビーズは、腫瘍の化学療法薬への曝露の著しい増加と全身毒性の減少をすでに実証しているが、造影剤は含まれていない。したがって、手技中の化学療法薬の投与を正確に観察し、手技後の腫瘍内の化学療法薬の濃度を定量化することは不可能である。さらに、現在、ビーズにドキソルビシンとイリノテカンを充填することが可能なだけある。

【0003】

リピオドールは、Ｘ線透視下で見える疎水性（油）放射線不透過性造影剤の特性と腫瘍動脈に対する選択性に使用される。したがって、リピオドールを含む化学療法エマルションの製造は、肝腫瘍における化学療法薬の選択的かつ可視的な送達への希望を高めるのに役立つ。しかしながら、これらのリピオドール化エマルションのセラノスティック特性は、安定性が低いために制限される。化学療法薬とリピオドールの相分離は数分以内に起こる。非常に急速に、エマルションの２つの相は互いに分離し、水に可溶な化学療法薬は腫瘍からほぼ完全に消失する。さらに、３方活栓による２本の注射器（化学療法薬１本とリピオドール１本）の反復ポンピングにより乳化が得られるため、術者間で技術を再現することはできない。この安定性の低さにより、腫瘍組織に化学療法薬がランダムに集中する。様々な手法（ミキサー、超音波、乳化剤）及び様々なタイプのリピオドールエマルション（水中油に対して油中水型、リピオドールと化学療法薬の異なる比率）を改善するために前臨床研究で使用されているが、エマルションの安定性と再現性、それらのどれも成功していない。

【0004】

現在まで、医薬品エマルションを安定化するために合成界面活性剤が使用されてきた。しかしながら、このタイプの乳化剤は、直接的又は間接的に毒性と環境関連の問題を引き起こす。特に、非経口投与中に、これらの薬剤の特定の細胞毒性及び溶血挙動が観察されている。

【発明の概要】

【0005】

したがって、本発明の目的は、経時的に、特に少なくとも２４時間にわたって安定である、新規の治療用油中水型エマルションを提供することである。

【0006】

本発明の目的はまた、好ましくはセラノスティック特性を有する新規の安定したエマルションを提供することである。

【0007】

本発明の目的は、少なくとも１つの抗癌剤を含み、従来のエマルションよりも高い程度の腫瘍選択性を有する新規の安定したエマルションを提供することでもある。

【0008】

本発明の目的はまた、種々の治療薬を充填することが可能であり、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により潜在的に視認可能な新規エマルションを提供することである。

【0009】

本発明の目的はまた、合成界面活性剤又は鉱物粒子で安定化された通常のエマルションよりも毒性が少なく、刺激性が低い、新規な生分解性、生体適合性エマルションを提供することである。

【0010】

したがって、本発明は、連続油相及び液滴の形態で分散された水相を含む油中水型エマルションに関し、前記水相はポリエステルベースのナノ粒子及び少なくとも１つの治療薬を含む。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、様々な濃度のポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子で得られたエマルションの光学顕微鏡画像である。

【図2】図２は、異なるリピオドール／生理食塩水比で得られたエマルションの光学顕微鏡画像を表す。

【図3】図３は、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎを使用した、１５ｍｇ／ｍＬのナノ粒子で安定化された３／１エマルションの２４時間にわたるクリーミングのモニタリングを表す。

【図4】図４は、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎを使用した、（エマルションの前と１５分後の）ナノ粒子によって安定化されていない３／１エマルションの１５分間にわたる相分離のモニタリングを示す。

【図5】図５は、エマルションの注入性に関するものである。図５Ａは、２ｍｍ／ｓの速度で異なる比率でＰｒｏｇｒｅａｔ ２．４Ｆカテーテルを介したエマルションの注入性に関するものである（曲線「ａ」は、油／水比が８：３であるエマルションに対応する；曲線「ｂ」は、油／水比が３：１であるエマルションに対応する；曲線「ｃ」は、油／水比が６：１であるエマルションに対応する；曲線「ｄ」は、リピオドール単独に対応する）。図５Ｂは、異なる注入速度（ａ：６ｍｍ／ｓ、ｂ：４ｍｍ／ｓ、ｃ：２ｍｍ／ｓ、ｄ：１ｍｍ／ｓ）での３／１エマルションの注入性に関するものである。図５ｃは、２ｍｍ／ｓの速度で異なる比率で１８Ｇ針を介したエマルションの注入可能性に関するものである（ａ：リピオドール単独；ｂ：３：２比率；ｃ：６：１比率、及びｄ：８：３比率）。

【図6】図６は、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎを使用した、２０ｍｇ／ｍｌドキソルビシンの濃度での１５ｍｇ／ｍＬのナノ粒子で安定化された３／１エマルションの２４時間にわたるクリーミングのモニタリングを表す。

【図7】図７は、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎを使用した、２０ｍｇ／ｍｌドキソルビシンの濃度でのナノ粒子によって安定化されていない４／１エマルションの４時間にわたる相分離のモニタリングを表す。

【図8】図８は、ナノ粒子を含まない（菱形の曲線）、１５ｍｇ／ｍｌ濃度のナノ粒子（三角形の曲線）、及び充填されたビーズ（四角の曲線）を伴う、２０ｍｇ／ｍｌ濃度のドキソルビシンが充填された３／１比のリピオドール化エマルションからのドキソルビシンのインビトロ放出に関する。

【図9】図９は、２０ｍｇ／ｍＬ濃度のイリノテカンを含むナノ粒子（ＮＰ）によって安定化されたエマルション（丸）、安定化されていないエマルションと比較して３／１比であるもの（三角）、イリノテカンが充填されたビーズを有するもの（菱形）及びイリノテカンを含まないもの（四角）を用いた、イリノテカンのインビトロ放出に関する。

【図10】図１０は、濃度１５ｍｇ／ｍＬ、比率３／１（三角形）、３／２（四角）、及び１／１（菱形）のＮＰで安定化されたエマルションによるイリノテカンのインビトロ放出に関する。

【図11】図１１は、ナノ粒子の安定化の有無にかかわらず、異なる比率のリピオドールとオキサリプラチンで調製されたエマルションでの白金のインビトロ放出の比率を示す。菱形の曲線は、ナノ粒子なしの３／１の比率に対応し、四角の曲線は、ナノ粒子の３／１の比率に対応し、三角形の曲線は、ナノ粒子の２／１の比率に対応し、十字の曲線は、ナノ粒子で１／１の比率に対応する。

【図12】図１２は、ナノ粒子の安定化の有無にかかわらず、異なるリピオドールとオキサリプラチンの比率で製造されたエマルションでインビトロ放出された白金の量を示す。菱形の曲線は、ナノ粒子なしの３／１の比率に対応し、四角の曲線は、ナノ粒子の３／１の比率に対応し、三角形の曲線は、ナノ粒子の２／１の比率に対応し、十字の曲線は、ナノ粒子で１／１の比率に対応する。

【図13】図１３は、１５ｍｇ／ｍＬ濃度を有するＮＰにより安定化された３／１比を有するリピオドール化エマルションからのイピリムマブのインビトロ放出に関する。

【図14】図１４は、左肝動脈へのピカリングリピオドール化エマルション（点線）又は従来のリピオドール化エマルション（実線）の注射後のオキサリプラチンの血漿薬物動態に関する。

【発明を実施するための形態】

【0012】

油相
本発明によるエマルションは、連続油相（又は脂肪相）を含む。

【0013】

一実施形態によれば、本発明による油相は、少なくとも１つの油を含む。油相は、単一の油又は複数の異なる油の混合物で構成されてもよい。

【0014】

油相を構成するために、任意の油又は任意の適切な医薬品油を使用してもよい。

【0015】

「油」という用語は、周囲温度（２５℃）及び大気圧（７６０ｍｍＨｇ）で水及び液体と非混和性の非水性化合物を指すと理解される。

【0016】

本発明に適した油のうち、特に脂肪酸、脂肪酸エステル、及び鉱油（特にスクアレンなど）を挙げることができる。

【0017】

海洋油、特に魚油、特にサケ油についても言及することができる。例えば、魚油に含まれる多価不飽和脂肪酸の１つであるエチルイコサペンテートを挙げることができる。

【0018】

本発明による油相は、好ましくは注射可能な油、好ましくは注射可能な植物油を含む。

【0019】

注射可能な油の中で、特にＨｉｐｐａｍｇａｏｎｋａｒら，（２０１０）ＡＡＰＳ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈ，１１（４），ｐ．１５２６－１５４０による論文に記載されているような、当業者に周知のものを挙げることができる。

【0020】

一実施形態によれば、本発明による油相は、長鎖トリグリセリド（ＬＣＴ）及び／又は中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含む。ＬＣＴの中では、トリオレイン、大豆油、ベニバナ油、ゴマ油、ヒマシ油が挙げられる。ＭＣＴの中では、分画されたココナッツ油、実際には、製品ＭＩＧＬＹＯＬ８１０（登録商標）又は８１２（登録商標）、Ｎｅｏｂｅｅ（登録商標）Ｍ－５又はＣａｐｔｅｘ（登録商標）３００などのカプリル酸／カプリン酸のトリグリセリドが挙げられる。

【0021】

カプリル酸／カプリン酸／リノール酸のトリグリセリド（ＭＩＧＬＹＯＬ８１８（登録商標））、カプリル酸／カプリン酸／コハク酸のトリグリセリド（ＭＩＧＬＹＯＬ８２９（登録商標））、又はＭＩＧＬＹＯＬ８４０（登録商標）（国際化粧品成分の命名法（ＩＮＣＩ）名：プロピレングリコールジカプリレート／ジカプレート）についても言及できる。

【0022】

一実施形態によれば、油相は、少なくとも１つの植物油、特にヒマシ油、ゴマ油、ケシ油、オリーブ油、大豆油、ヤシ油、トリオレイン及びそれらの混合物を含む。

【0023】

一実施形態によれば、油相は、放射線不透過性にするためにヨウ素で変性された少なくとも１つの油を含む。これらの油のうち、ケシの種子油、亜麻仁油（Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１０２：４１５０，２０１３を参照）、Ｌａｂｒａｆａｃ ＷＬ１３４９（Ａｔｔｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ Ｂｉｏｓｃｉ，２０１７）、ヒマシ油（ＡＣＳ Ｎａｎｏ，８（１０），１０５３７，２０１４）又はさらにビタミンＥについて言及することができる。

【0024】

一実施形態によれば、油相は、ケシの実油からのヨウ素化脂肪酸のエチルエステルを含み、特にリピオドールから構成される。

【0025】

リピオドールは、ケシの実油からのヨウ素化脂肪酸のエチルエステルで構成される。４３～５３％のヨウ素が含まれる。ケシの実油のケン化により調製され、脂肪酸が石鹸の形で放出され、その後、塩化ヨウ素によりヨウ素化され、最後にエタノールによりエステル化される。ケシの実の油は、黒いケシの実（Ｐａｐａｖｅｒ ｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ）から抽出される。この油に含まれる主な脂肪酸はリノール酸とリノレン酸である。リピオドールは、放射線検査との関連で造影剤としても使用される。

【0026】

一実施形態によれば、油相は、特に８～１２個の炭素原子を含む中鎖長を有するトリグリセリド、又は主にスクアレンで構成される鉱油を含む。

【0027】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションの油相は、化合物をさらに含み、その質量の１００％は、以下を含む１０％～９５％の鉱油を含む：
－炭素原子が１６個未満の０．０５％～１０％の炭化水素鎖；
－炭素原子が２８個を超える０．０５％～５％の炭化水素鎖；
－パラフィン（タイプ）炭化水素鎖の質量とナフテン（タイプ）炭化水素鎖の質量の比に対応する２～６のＰ／Ｎ比を有する。

【0028】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションの油相は、特許出願ＦＲ２９５５７７６に記載されているものなど、ＳＥＰＰＩＣによって市販されているＭＯＮＴＡＮＩＤＥ製品から選択される少なくとも１つの化合物を含むことができる。

【0029】

本発明によるエマルションの油相はまた、少なくとも１つの界面活性剤を含んでもよい。

【0030】

一実施形態によれば、油相の体積と水相の体積との比は４：１～３：３である。好ましくは、この比は４：１、３：１、２：１、３：２、又は３：３に等しく、好ましくは３：１である。

【0031】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションは、前記エマルションの総重量に対して４０重量％から８０重量％、好ましくは６０重量％から８０重量％の油相を含む。

【0032】

水相
本発明によるエマルションは、分散された水相を含む。本発明による水相は、少なくとも水を含む。

【0033】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションは、前記エマルションの総重量に対して２０重量％～６０重量％、好ましくは２０重量％～４０重量％の水相を含む。

【0034】

本発明による水相は、１ミクロンより大きいサイズの液滴の形態である。

【0035】

一実施形態によれば、水相の液滴のサイズは、１０μｍ～１００μｍ、好ましくは２０μｍ～５０μｍである。

【0036】

ナノ粒子
本発明の水相は、少なくとも１つのポリエステルベースのナノ粒子を含む。

【0037】

エマルションの製剤に固体粒子を使用すると、合成界面活性剤の使用を減らすか、さらには回避することができ、非常に安定した界面が得られる。固体粒子によって安定化されたこのようなエマルションは、ピカリングエマルションと呼ばれる。ピカリングエマルションは、ほとんどの用途で従来のエマルションをピカリングエマルションで置き換えることができるように、界面活性剤によって安定化された従来のエマルションの基本特性を保持する。それらの「界面活性剤を含まない」性質により、特に化学塞栓療法などの生物医学的応用にとって非常に魅力的である。

【0038】

一実施形態によれば、本発明によるナノ粒子は生分解性である。

【0039】

生分解性ポリエステルベースのナノ粒子は、エマルションの水／油界面を安定させるための固体粒子として使用される。これらのナノ粒子は毒性が低く、これらのナノ粒子の存在下では限られた炎症反応が観察される。したがって、本発明によるエマルションは、合成界面活性剤又は鉱物粒子で安定化された通常のエマルションよりも生分解性、生体適合性、潜在的に毒性が低い、又は刺激物が少ないという利点を示す。

【0040】

本発明によるナノ粒子は、当業者に周知のポリマーナノ粒子である。

【0041】

本発明によれば、これらのナノ粒子は、１μｍ未満の少なくとも２つの寸法を有する固体粒子である。好ましくは、これらのナノ粒子は、１μｍ未満のサイズ（それらが光散乱によって測定したる合）の平均を有するマトリックスコアを備えたナノスフェアである。

【0042】

好ましくは、ナノ粒子は２００ｎｍの平均サイズを有する。それらは通常、５０ｎｍ～４００ｎｍで構成され、より正確には１００ｎｍ～３００ｎｍで構成される。

【0043】

本発明の文脈において、「サイズ」という用語は直径を指す。

【0044】

一実施形態によれば、本発明のエマルションは、本明細書で上記に定義された５～２５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１５ｍｇ／ｍｌのナノ粒子を含む。

【0045】

本発明によるナノ粒子は、ポリエステルベースである。上述のように、それらは好ましくは固体であり、したがって少なくとも１つのポリエステルで構成される。

【0046】

一実施形態によれば、ポリエステルベースのナノ粒子は、ポリ乳酸（ポリラクチド）、ポリグリコール酸（ポリグリコリド）、ラクチド－グリコリドコポリマー（異なるラクチド／グリコール比を有する）、ラクチド－グリコリド－ｃｏ－ポリエチレングリコール共重合体、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリブチルアセトン、ポリバレロラクトン、ポリリンゴ酸、ポリラクトン、及びそれらの混合物に基づくナノ粒子からなる群から選択される。

【0047】

一実施形態によれば、ポリエステルベースのナノ粒子はさらに、酸化鉄粒子を含み、好ましくは５ｎｍ～３０ｎｍの間、好ましくは１０ｎｍに等しいサイズを有する。

【0048】

注入にピカリングエマルションを使用する利点は、ベクターの油性及び／又は酸化鉄粒子の取り込みにより、ＭＲＩで検出できる可能性があることである。現在、ＭＲＩは、ＣＴスキャンと比較して肝細胞癌の検出に有意に高い診断に関して、その精度及び感度のため、患者にますます使用されている。したがって、造影剤が、本発明に従って使用される安定化ナノ粒子に導入されている。酸化鉄粒子は、効果的なＴ２造影剤と考えられる。したがって、一実施形態によれば、治療薬は水滴の内部にカプセル化され、酸化鉄粒子はこれらの水滴を安定化するナノ粒子に組み込まれる。単一の注射可能な形態の酸化鉄ナノ粒子を含む治療薬を有することにより、投与後の薬物療法がどうなるかを監視することが可能になる。

【0049】

治療薬
本発明によるエマルションは、少なくとも１つの治療薬を含む。

【0050】

本発明によれば、前記治療薬は、水相の液滴内にカプセル化される。

【0051】

このカプセル化は、特定のタイプの治療薬、特にモノクローナル抗体などの壊れやすい分子を保護し、したがって安定化する手段を提供するという点で有利である。

【0052】

タンパク質構造に起因するモノクローナル抗体は、特定の金属及び油／有機溶媒の存在下で、熱、光、ｐＨにさらされたとき、又は強く撹拌されたときに劣化する場合がある。これらは壊れやすい分子であり、その取り扱いにより、凝集又は変性のリスクが生じる可能性がある。保護システムが提供されていない限り、ベクターに組み込まれている間、それらは変更及び変性される危険がある。現在入手可能なエマルションは、これらの活性成分の輸送及びその制御放出を可能にするのに役立たない。治療薬含む水滴と油の間に安定化ナノ粒子を介して物理的障壁を導入することにより、抗体は安定した状態になる。

【0053】

一実施形態によれば、治療薬は、免疫調節剤、抗癌薬製品、抗血管新生薬製品、抗感染薬製品、抗炎症薬製品、造影剤、放射性薬剤及び感染薬の中から選択される。

【0054】

本発明によれば、「免疫調節剤」という用語は、免疫応答を調節することができる化合物を指す。

【0055】

治療薬の中で、腫瘍抗原を標的とする抗体について言及することもできる。本発明によれば、「腫瘍抗原」という用語は、細胞の表面に特異的に存在する分子を指す（例えば、血管内皮成長因子、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１又はＰＤＬ－１）。

【0056】

本発明によれば、用語「抗血管新生薬製品」は、既存の血管（例えば、ベバシズマブ、スニチニブ又はソラフェニブ）からの新しい血管の成長（血管新生）のプロセスを阻害するように設計された薬剤を指す。

【0057】

本発明によれば、用語「抗感染薬製品」は、微生物起源の感染症の治療を目的とする医薬品を指す（例えば、抗生物質、抗ウイルス薬又は抗真菌薬）。抗生物質の中で、例えばアモキシシリン又はセファゾリンが言及され得る。

【0058】

本発明によれば、「抗炎症薬製品」という用語は、炎症の治療を目的とする薬剤を指す（ステロイド性及び非ステロイド性抗炎症薬）。例えば、メチルプレドニゾロン又はケトプロフェンが言及され得る。

【0059】

本発明によれば、「造影剤」という用語は、人為的にコントラストを増加させ、それにより解剖学的構造又は自然にわずか又はコントラストのない構造を見ることができる物質を指す。より具体的には、ヨウ素化造影剤、ＭＲＩ造影剤及び製品又はラジオ素子について言及することができる。

【0060】

本発明によれば、「放射性元素」という用語は、高エネルギー光子の放出をしばしば伴うα、β又はγ放射線を放出する化学元素を指す。これらの元素は、核医学で、低線量での診断目的、及び癌の治療のための高線量での治療目的で使用される（例えば、テクネチウム－９９ｍ、フッ素－１８、ヨウ素－１２３、イットリウム－９０、ヨウ素－１３１又はホルミウム－１６６）。

【0061】

本発明によれば、用語「感染性因子」は、感染性疾患（細菌、ウイルス、プリオン、酵母及び寄生虫など）を引き起こす原因となる生物学的因子を指す。

【0062】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションは、治療薬として、少なくとも１つの抗癌剤を含む。

【0063】

好ましくは、抗癌薬は、アルキル化剤、白金誘導体、細胞毒性抗生剤、抗微小管剤、アントラサイクリン、Ｉ型及びＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、フルオロピリミジン、シチジン類似体、アデノシン類似体、メトトレキサート、フォリン酸、酵素、抗血管剤、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、特に紡錘体毒剤、キナーゼ阻害剤、ホルモン、モノクローナル抗体、放射性元素、腫瘍溶解性ウイルス及びそれらの混合物からなる群から選択される。

【0064】

アルキル化剤のうち、例えば、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、プレドニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ステプトゾトシン、デカルバジン、テモゾロミド、プロカルバジン及びヘキサメチルメラミンについて言及することができる。

【0065】

白金誘導体の中で、特にシスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンについて言及することができる。

【0066】

細胞傷害性抗生物質の中で、例えば、ブレオマイシン、マイトマイシン及びダクチノマイシンについて言及することができる。

【0067】

抗微小管剤の中で、特にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン及びタキソイド（パクリタキセル及びドセタキセル）について言及することができる。

【0068】

アントラサイクリンの中で、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン及びロソキサントロンについて言及することができる。

【0069】

トポイソメラーゼＩ型及びＩＩ型阻害剤の中で、例えばエトポシド、テニポシド、アムサクリン、イリノテカン、トポテカン及びトムデックスについて言及することができる。

【0070】

代謝拮抗剤の中で、メトトレキサート又はヒドロキシ尿素に言及することができる。

【0071】

フルオロピリミジンの中で、５－フルオロウラシル、ＵＦＴ、又はフロクスウリジンを挙げることができる。

【0072】

シチジン類似体の中で、５－アザシチジン、シタラビン、ゲムシタビン、６－メルカプトムリン、及び６－チオグアニンを挙げることができる。

【0073】

アデノシン類似体の中で、例えばペントスタチン、シタラビン又はリン酸フルダラビンを挙げることができる。

【0074】

様々な酵素及び化合物の中で、Ｌ－アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、トランス－レチノイン酸、スラミン、デキスラゾキサン、アミフォスチン、ハーセプチン、ならびにエストロゲン及びアンドロゲンホルモンについても言及することができる。

【0075】

抗血管剤の中で、コンブレタスタチン誘導体、例えばＣＡ４Ｐ、カルコン又はコルヒチン、例えばＺＤ６１２６、及びそのプロドラッグを挙げることができる。

【0076】

抗血管新生剤の中で、ベバシズマブ、ソラフェニブ又はリンゴ酸スニチニブについて言及することができる。

【0077】

チロシンキナーゼ阻害剤治療薬の中で、イマチニブ、ゲフィチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ及びエルロチニブに言及することができる。

【0078】

紡錘体毒性剤の中で、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール及びタキソテールについて言及することができる。

【0079】

放射性元素のうち、テクネチウム－９９ｍ、フッ素－１８、ヨウ素－１２３、リン－３２、ストロンチウム－８９、イットリウム－９０、ヨウ素－１３１、ホルミウム－１６６、レニウム－１８６及びエルビウム－１６９について言及することができる。

【0080】

腫瘍溶解性ウイルスの中で、Ｔ－ＶＥＣに言及することができる。

【0081】

好ましくは、治療薬は、ドキソルビシン、イリノテカン、オキサリプラチン及びそれらの混合物からなる群から選択される抗癌薬である。

【0082】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションは、治療薬として、少なくとも１つの抗原標的化抗体、より具体的には少なくとも１つのモノクローナル抗体を含む。

【0083】

一実施形態によれば、抗体は、抗血管新生モノクローナル抗体、抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体、及びそれらの混合物からなる群から選択される腫瘍抗原標的化抗体である。

【0084】

抗血管新生モノクローナル抗体の中でも、特にベバシズマブに言及することができる。

【0085】

抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体のうち、特にイピリムマブ及びトレメリムマブについて言及することができる。

【0086】

抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の中でも、特にニボルマブ及びペンブロリズマブについて言及することができる。

【0087】

抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体の中でも、特にアテゾリズマブ及びアベルマブについて言及することができる。

【0088】

一実施形態によれば、本発明によるエマルションは、５～２５ｍｇ／ｍｌの治療薬を含む。

【0089】

好ましくは、エマルションが治療薬としてドキソルビシンを含む場合、治療薬の濃度は１０～２５ｍｇ／ｍｌであり、及び好ましくは２０ｍｇ／ｍｌに等しい。

【0090】

好ましくは、エマルションが治療薬としてイリノテカンを含む場合、治療薬の濃度は２０ｍｇ／ｍｌに等しい。

【0091】

好ましくは、エマルションが治療薬としてオキサリプラチンを含む場合、治療薬の濃度は５ｍｇ／ｍｌに等しい。

【0092】

好ましくは、エマルションが治療薬としてイピリムマブを含む場合、治療薬の濃度は５ｍｇ／ｍｌに等しい。

【0093】

本発明はまた、本明細書で上記に定義されたエマルションを含むことを特徴とする医薬品に関する。

【0094】

本発明はまた、本明細書で上記に定義されたエマルション、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。

【0095】

これらの医薬組成物は、本発明による少なくとも１つのエマルション（少なくとも１つの治療薬を含む）の有効用量、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む。

【0096】

前記賦形剤は、医薬形態及び所望の投与様式に従って、当業者に知られている通常の賦形剤から選択される。

【0097】

経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、局所、局所、気管内、鼻腔内、経皮、又は直腸投与用の本発明の医薬組成物では、エマルションは、単一の単位投与形態で投与され、上記の障害又は疾患の治療のための動物及びヒトへの従来の医薬賦形剤との混合物で投与され得る。

【0098】

通常の慣行に従って、各患者の適切な投与量は、投与方法、体重及び患者の反応に基づいて医師によって決定される。

【0099】

本発明はまた、医薬品として使用するための本明細書で上に定義されたエマルションに関する。

【0100】

本発明はまた、癌の治療におけるその使用のための本明細書で上記に定義されたエマルションに関する。

【0101】

本発明は、その態様の別の１つによれば、患者への本発明によるエマルションの有効用量の投与を含む、癌を治療するための治療方法にも関する。

【実施例】

【0102】

実施例１：生分解性ＰＬＧＡナノ粒子の調製
ＰＬＧＡナノ粒子は、すでに文献に開示されているエマルション蒸発法に従って調製された（Ａｓｔｅｔｅ，Ｃ Ｅ；Ｓａｂｌｉｏｖ，Ｃ Ｍ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＬＧＡ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄ．２００６，１７（３），２４７－２８９）。１００ｍｇのＰＬＧＡを５ｍｌのジクロロメタンに溶解し、２．５ｍｇ／ｍｌのＰＶＡを含む水溶液２０ ｍｌで１分間、４０％の力で超音波処理（ＶｉｂｒａＣｅｌｌ ｓｏｎｉｃａｔｏｒ， Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｆｒａｎｃｅ）により乳化した。次に、有機溶媒を周囲温度で、磁気撹拌しながら２時間蒸発させた。蒸発後、ＮＰを超遠心分離（ＬＥ－８０Ｋ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｏｐｔｉｍａ（商標））により４℃、３７，０００ｇで１時間精製した。上清を除去した後、ＮＰを５０ｍｇ／ｍｌのトレハロース（凍結防止剤）を含む水溶液に再び懸濁した。次に、ＮＰの懸濁液を凍結乾燥した。使用前に、凍結乾燥されたＮＰは、ＭｉｌｌｉＱ水に目的の濃度で再分散された。

【0103】

実施例２：異なる濃度のＰＬＧＡナノ粒子によって安定化された生理食塩水の油中水エマルションの取得
エマルションは、３ウェイストップコックを介して２つの１０ｍｌシリンジを７０秒間繰り返し、ポンピング（７０プッシュ－プルサイクル）することで、リピオドール（Ｇｕｅｒｂｅｔ，Ｆｒａｎｃｅ）／生理食塩水比３／１（ｖ／ｖ）で調合された。最初のシリンジにはリピオドールが含まれ、２番目のシリンジは空であり、３番目のシリンジに配置された生理食塩水は、シリンジポンプを介して流量１ｍＬ／分でシステムに徐々に導入される。水相は、生理食塩水中の様々な濃度のナノ粒子の懸濁液である（図１を参照）。

【0104】

実施例３：異なる油／水比でＰＬＧＡナノ粒子により安定化された生理食塩水の油中水エマルションの取得
エマルションは、可変リピオドール／生理食塩水比で１５ｍｇ／ｍｌナノ粒子の濃度で、実施例１と同じプロトコールに従って製剤化された（図２を参照）。

【0105】

実施例４：「落下試験」によるエマルションの配向の決定
各エマルションについて、エマルションの種類（油中水又は水中水）を、リピオドール（先にスーダン赤で着色）と生理食塩水（先にメチレンブルーで着色）を含む２つの溶液を使用した比色試験により決定した。溶液の１つの小さな液滴を、試験したエマルションの液滴に追加した。エマルションの連続相は、溶液の液滴とエマルションの液滴が最終的に混和する可能性を観察することで明らかになった。乳化直後に試験を実施した。

【0106】

得られたエマルションが油中水型であることを示す手段として、水相又はリピオドール相に染料を添加することにより、１５ｍｇ／ｍｌのナノ粒子で３／１比のエマルションの比色分析を行った。実際、エマルション滴の連続相は、水ではなくリピオドールで着色される。

【0107】

実施例５：ナノ粒子により安定化エマルション対非安定化エマルションの安定性の研究
エマルションは、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎ（登録商標）ＭＡ ２０００（Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｌ’Ｕｎｉｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して分析した。エマルションを含むチューブは、システムからの外乱を避けるために、デバイスから取り外したり、測定の終了まで触れたりしなかった。測定は、システムの進化に応じて所定の時間に実行された。この監視は、強度の変化が無視できるようになるまで行われた。Ｔｕｒｂｉｓｃａｎ装置を使用すると、希釈せずにサンプルの可逆的（クリーミングと沈降）及び不可逆的（コアレッセンスと偏析）の不安定化現象を測定できる（図３及び４）。

【0108】

実施例６：ナノ粒子により安定化された油中水型エマルションの注入性の研究
エマルションの注入性は、テクスチャアナライザー（ＴＡ－ＸＴ２、Ｔｅｘｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して調査した。測定は、血管マイクロカテーテル（直径：２．４ Ｆ）又は１８ゲージ針のいずれかに接続された１ｍｌの「Ｍｅｄａｌｌｉｏｎ」シリンジ（Ｍｅｒｉｔ（登録商標））を使用して実行された。様々な油／水の比率（８／３、３／１、及び６／１）が２ｍｍ／ｓの速度で研究され、３／１の比率については、様々な注入率が試験された。油のみ（リピオドール）をコントロールとして使用した（図５）。

【0109】

実施例７：ナノ粒子により安定化されたドキソルビシンが充填されたリピオドール化水中油型エマルションの取得
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。水相は、エマルションの製剤化のために生理食塩水（Ａｄｒｉｂｌａｓｔｉｎｅ，Ｐｆｉｚｅｒ，ＵＳＡ）で１０又は２０ｍｇ／ｍｌの濃度で再構成された塩酸ドキソルビシンからなる。エマルションは、異なるリピオドール／ドキソルビシン比、異なる濃度のドキソルビシン及び異なる濃度のナノ粒子を使用して製造された（以下の表１を参照）。

【0110】

【表1】

【0111】

得られた治療用エマルションはすべて、油中水配向、つまり使用条件に関係なく逆配向のものであった。

【0112】

実施例８：ナノ粒子により安定化されたドキソルビシンが充填された油中水型リピオドール化エマルションの安定性
分析は、実施例５で使用したプロトコールに従って実行された。様々なエマルションのクリーミングは、Ｔｕｒｂｉｓｃａｎで迅速に観察されたが、２４時間監視しても相分離はなかった（図６）。

【0113】

対照的に、ＰＬＧＡナノ粒子なしで製造されたドキソルビシンの治療用エマルションは、非常に迅速かつ完全な相分離を示した（５時間未満）（図７）。

【0114】

実施例９：ナノ粒子により安定化されたモノクローナル抗体を充填した油中水型リピオドール化エマルションの取得
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。水相は、抗体（５ｍｇ／ｍｌのＩｐｉｌｉｍｕｍａｂ、Ｙｅｒｖｏｙ、Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）から構成される。エマルションは、１５ｍｇ／ｍｌのナノ粒子濃度で３／１のリピオドール／イピリムマブ比で製造された。

【0115】

得られたエマルション得られたエマルションは、油中水型であり、数週間にわたって安定であった。ナノ粒子なしで調製されたエマルションとは異なり、抗体の凝集は観察されなかった。

【0116】

抗体の完全性は、変性状態のウエスタンブロット法によりチェック及び検証された。ポリアクリルアミドゲルで泳動を行い、２％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）でサンプルを調製した（当業者に既知の方法）。電気泳動は１２０Ｖで９０分間実施し、膜への転写は１００Ｖで４５分間実施した。膜をエタノールで洗浄し、ポンソーレッドで抗体の曝露を行った。

【0117】

ナノ粒子は実際、治療薬、この例ではイピリムマブの完全性を維持する上での有効性を実証した。

【0118】

実施例１０：ナノ粒子により安定化されたリピオドール化エマルションからのドキソルビシンのインビトロ放出の研究
３／１の比を有し、２０ｍｇ／ｍｌの濃度でドキソルビシンを充填したリピオドール化エマルションからのドキソルビシンの生体外放出（２種類：ナノ粒子なし、１５ｍｇ／ｍｌ濃度のナノ粒子あり）又はドキソルビシンを充填したビーズから２５ｍｇ／ｍｌ（ＤＣビーズ、生体適合性サイズ３００－５００μｍ）の濃度が評価された。０．８ｍＬのエマルション（４ｍｇのドキソルビシンに相当）又は０．１６ｍＬのビーズをＧｅＢＡｆｌｅｘチューブ（カットオフ：１２－１４ｋＤａ；ＧｅｎｅＢｉｏ－ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＬｔｄ）に導入した。これらのチューブを４０ｍｌの緩衝生理食塩水（ＴＲＩＳ、ｐＨ７．４）に浸し、３７℃、１５０ｒｐｍのインキュベーターに入れた。事前に決められた時間に、アリコート（８０μＬ）を収集し、同量のＴＲＩＳで置き換えた。

【0119】

放出されたドキソルビシンの量は、９６ウェルマイクロプレートで４９２ｎｍの光学密度を測定することで定量化された（図８）。

【0120】

実施例１１：ナノ粒子により安定化されたリピオドール化エマルションからのイリノテカンのインビトロ放出の研究
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。水相は、イリノテカン（塩酸イリノテカン三水和物、２０ｍｇ／ｍＬ；Ｃａｍｐｔｏ（登録商標）、ファイザー）で構成される。

【0121】

リピオドール化エマルション（４種類：ナノ粒子比３／１なし；ナノ粒子１５ｍｇ／ｍＬ濃度で、比率３／１；３／２；１／１）又は２０ｍｇ／ｍＬ濃度のイリノテカンで充填されたビーズ（ＤＣビーズ、生体適合性サイズ３００－５００μｍ）からのイリノテカンのインビトロ放出を評価した。０．８ｍＬのエマルション（比率３／１、３／２、及び１／１のエマルションの場合、それぞれ４ｍｇ、６．４ｍｇ、及び８ｍｇのイリノテカンに対応）又は０．０８ｍＬの充填ビーズをＧｅＢＡｆｌｅｘチューブ（カットオフ：１２－１４ｋＤａ；ＧｅｎｅＢｉｏ－ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＬｔｄ）に導入した。これらのチューブを４０ｍＬの緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に浸し、１５０ｒｐｍの速度で３７℃のインキュベーターに入れた。所定の時間に、アリコート（０．５ｍＬ）を収集し、等量のＰＢＳで置き換えた。

【0122】

放出されたイリノテカンの量は、３７０ｎｍのＵＶ分光法によって定量化された（図９及び１０）。

【0123】

実施例１２：ナノ粒子により安定化されたリピオドール化エマルションからのオキサリプラチンのインビトロ放出の研究
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。水相は、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）、５ｍｇ／ｍＬ、Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）から構成される。

【0124】

リピオドール化エマルション（４種類：ナノ粒子比３／１なし；ナノ粒子１５ｍｇ／ｍＬ濃度で、３／１；３／２；１／１の比率）からのインビトロでのオキサリプラチンの放出を評価した。エマルション０．８ｍｌ（それぞれ比率３／１、３／２、及び１／１のエマルションのオキサリプラチン１ｍｇ、１．３３ｍｇ、及び２ｍｇに対応）。これらのチューブを４０ｍｌの緩衝生理食塩水（２５ｍＭ酢酸、ｐＨ６．８）に浸し、３７ｒｐｍ、１５０ｒｐｍのインキュベーターに入れた。所定の時間に、アリコート（０．１ｍＬ）を収集した。

【0125】

放出された白金の量は、誘導的に結合されたプラズマ質量分析（ＩＣＰ－ＭＳ）によって定量化された（図１１及び１２）。

【0126】

実施例１３：異なる油に基づいて製剤化されたナノ粒子により安定化された油中水型エマルション
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って３／１の比率で製剤化された。水相は、２０ｍｇ／ｍＬの濃度の生理食塩水又はドキソルビシンのいずれかで構成される。油相は、オリーブ油、ゴマ油、ヒマシ油、ケシの実油又はミグリオールのいずれかで構成される。すべてのエマルションは、１５ｍｇ／ｍｌの濃度のナノ粒子で調合される。

【0127】

エマルションは比色試験による油中水型であり、１週間以上安定である。

【0128】

実施例１４：生分解性ＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子の調製
ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）－酸化鉄［ＰＬＧＡ－ＦｅＯ］ナノ粒子は、実施例１で説明したのと同じ方法に従って調製された。オレイン酸（２５ｍｇ／ｍＬ、サイズ１０ｎｍ、Ｏｃｅａｎ、ＵＳＡ）で装飾されたＦｅ_３Ｏ_４ナノ粒子の５００μＬ溶液を５ｍＬのジクロロメタンに事前に溶解した１００ｍｇのＰＬＧＡに加え、２．５ｍｇ／ｍＬのＰＶＡを含む２０ｍＬの水溶液で超音波処理（ＶｉｂｒａＣｅｌｌ ｓｏｎｉｃａｔｏｒ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、フランス）で４０％の力で１分間乳化した。次に、有機溶媒を周囲温度で、磁気撹拌しながら２時間蒸発させた。蒸発後、懸濁液を３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を除去し、ペレットを脱イオン水で濯いだ。遠心分離プロセスを２回繰り返した。次に、ＮＰを超遠心分離（ＬＥ－８０Ｋ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｏｐｔｉｍａ（商標））で４℃、３７，０００ｇで１時間精製した。上清を除去した後、ＮＰを５０ｍｇ／ｍｌのトレハロース（凍結防止剤）を含む水溶液に再び懸濁した。次に、ＮＰの懸濁液を凍結乾燥した。使用前に、凍結乾燥されたＮＰは、ＭｉｌｌｉＱ水に目的の濃度で再分散された。

【0129】

実施例１５：異なる濃度のＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子により安定化された生理食塩水のリピオドール化油中水型エマルションの取得
エマルションは、異なる濃度のＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子（２０、１５、又は１０ｍｇ／ｍＬ）で、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。エマルションは、比色試験による油中水型である。

【0130】

実施例１６：ＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子により安定化されたドキソルビシンのリピオドール化油中水型エマルションの取得
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って、ドキソルビシン２０ｍｇ／ｍｌ及びＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子１５ｇ／ｍＬの濃度で製剤化された。油中水型エマルションが得られた。

【0131】

実施例１７：エマルションの微細構造
エマルションの微視的構造は、ＷＬＬレーザー（４８８及び５６３ｎｍの励起波）及びＣＳ２６３ｘ／１．４０液浸対物レンズを備えた共焦点レーザー走査顕微鏡（ＬｅｉｃａＴＣＳＳＰ８－ＳＴＥＤ、ドイツ）によって観察された。エマルションの液滴の変形を防ぐために、サンプルを湾曲したスライドガラスに載せた。ＰＬＧＡ－ＦｅＯナノ粒子を使用して、エマルションを製剤化して、透過状態で見ることができるようにした（ドキソルビシンの発光スペクトルとの干渉効果を回避する）。ドキソルビシンの蛍光は、５９０ｎｍのレーザー照射下で６００～７１０ｎｍのフィルターで観察された。赤色蛍光発光は連続モードで収集された。

【0132】

実施例１８：エマルションのＭＲＩ定量化の評価
この画像診断法が腫瘍ファントムに含まれる油の比率を定量化する目的に効果的に機能することを確認するために、エマルションをＭＲＩで評価した。

【0133】

これを行うために、９つの腫瘍ファントムを作成し、それぞれに様々な割合のリピオドールを含むエマルションを充填した。次に、リピオドールのチューブ（収集ＩＰ－ＯＰ及びＩｄｅａｌ ＩＱ）の存在下で各ファントムに対して３Ｔ ＭＲＩを実行した。最後に、参考としてリピオドール＝１００％を使用して、各ファントムの脂肪の割合を計算した（以下の表２を参照）。

【0134】

【表2】

表２：ＭＲＩによる、リピオドールのレベルが低下しているエマルション中のリピオドールの割合の定量化

【0135】

実施例１９：活性成分を充填したリピオドール化水中油型エマルションの取得
エマルションは、実施例２と同じプロトコールに従って製剤化された。水相は、供給業者が推奨する治療濃度で以前に再構成された活性成分から構成されるか、又は市販形態の濃度の水溶液中の活性成分から直接構成される。エマルションは、ナノ粒子の濃度１５ｍｇ／ｍｌで、溶液比３／１のリピオドール／有効成分に基づいて製造された。

【0136】

水相は、ゲムシタビン（４０ｍｇ／ｍＬ）、フルダラビン（２５ｍｇ／ｍＬ）、クラモキシル（２００ｍｇ／ｍＬ）、セファゾリン（３３０ｍｇ／ｍＬ）、スニチニブ（０．５ｍｇ／ｍＬ）、メチルプレドニゾロン（１０ｍｇ／ｍＬ）又はケトプロフェン（２５ｍｇ／ｍＬ）のいずれかで構成される。

【0137】

得られた治療用乳剤はすべて、比色試験による油中水型のものであった。

【0138】

実施例２０：液滴のサイズ
液滴のサイズの測定は、画像解析技術（Ｆｌｏｗｃｅｌｌ ＦＣ２００Ｓ＋ＨＲ、Ｏｃｃｈｉｏ、ベルギー）を使用して粒子カウンターで行った。まずエマルションを油で２０倍に希釈し、次に分析用に０．５ｍＬの希釈エマルションを４００μｍのスペーサーを通して導入する。各サンプルは、生理食塩水とイピリムマブを含むサンプルについて、（日）Ｄ７と異なる日（Ｄ０、Ｄ７、Ｄ３５）に少なくとも４回測定された。計算は少なくとも５００ドロップで行われた。

【0139】

【表3】

表３：１５ｍｇ／ｍＬのナノ粒子を含む溶液中のリピオドール／有効成分のエマルションの液滴のサイズ

【0140】

実施例２１：ナノ粒子により安定化されたリピオドール化エマルションからのイピリムマブのインビトロ放出の研究
エマルションは、実施例９と同じプロトコールに従って製剤化された。リピオドール化エマルションからのイピリムマブのインビトロ放出（３／１比、ナノ粒子の濃度１５ｍｇ／ｍＬ）を評価した。１ｍｇのイピリムマブに対応する０．８ｍＬのエマルションを２０ ｍＬの緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を含むチューブに入れ、３７℃にて１５０ｒｐｍの速度でインキュベーターに入れた。所定の時間に、アリコート（３００μＬ）を収集し、等量のＰＢＳで置き換えた。放出されたイピリムマブの量は、ＢＣＡ（ビシンコニン酸）タンパク質アッセイ法：ビシンコン酸に基づく比色タンパク質アッセイにより定量された（図１３）。

【0141】

実施例２２：インビトロ研究：オキサリプラチンを充填した油中水型リピオドール化エマルションからの肝臓の化学塞栓形成
この研究のためのエマルションは、実施例１２と同じプロトコールに従って製剤化された。

【0142】

この研究の実験プロトコールは、動物実験倫理委員会によって検証されている。肝臓のＶＸ２腫瘍を全身麻酔下でニュージーランドの白いウサギに経皮的に移植した（手順に関して、ケタミン２０－４０ｍｇ／ｋｇ及びキシラジン３－５ｍｇ／ｋｇ、イソフルラン３－５％（誘導のため）、１．５－３％をＯ_２と混合して１Ｌ／分で筋肉注射する）。

【0143】

ＶＸ２腫瘍細胞の移植から２週間後、肝内動脈内注入がインターベンショナルラジオロジストによって行われた。これは、全身麻酔下で、Ｘ線血管造影テーブルを備えた部屋で透視下で行われた。まず、大腿動脈を外科的に露出させ、４Ｆ血管造影カテーテルでカテーテルを挿入した。次に、２．４Ｆマイクロカテーテルを使用して、肝動脈の左枝の選択的カテーテル挿入と０．５ｍＬのエマルション（０．６２５ｍｇのオキサリプラチン）の注入を行った。

【0144】

オキサリプラチンの血漿濃度を測定するために、静脈血のサンプル（２ｍＬ）を注射後５、１０、２０、３０、及び６０分で採取した。

【0145】

ウサギの４つのグループを準備した：
グループ１：ナノ粒子で安定化されていない従来のオキサリプラチンエマルションを投与されたウサギ。このグループは注射の１時間後に安楽死させた（ｎ＝４）
グループ２：ナノ粒子で安定化されたオキサリプラチンエマルションを投与されたウサギ。このグループは注射の１時間後に安楽死させた（ｎ＝５）
グループ３：ナノ粒子で安定化されていない従来のオキサリプラチンエマルションを投与されたウサギ。このグループは、注射の２４時間後に安楽死させた（ｎ＝４）
グループ４：ナノ粒子で安定化されたオキサリプラチンエマルションを投与されたウサギ。このグループは注射の２４時間後に安楽死させた（ｎ＝５）。

【0146】

安楽死の直後に、腫瘍を測定し、数えるためにＭＲＩを実施した。肝臓を摘出し、腫瘍と同様に左右の肝葉からの組織サンプルを別々に解剖し、白金の定量のためにミキサーで均質化した。白金は、プラズマ質量分析法（ＩＣＰ－ＭＳ）によって分析された。

【0147】

オキサリプラチンの薬物動態：
２種類のエマルションの注入後のオキサリプラチンの薬物動態を表４及び図１４にまとめる。ピカリングエマルションの注入後のオキサリプラチンの血漿ピーク（Ｃｍａｘ）は、従来のエマルション（０．４９±０．１４ｎｇ／ｍＬ対１．０８±０．４１ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０１）と比べて有意に低い、１時間での曲線下面積（ＡＵＣ）は、ピカリングエマルションの方が有意に低い（１９．８±５．９対３１．８±１４．９、ｐ＝０．０３）。

【0148】

【表4】

表４：注入されたエマルションの種類及び安楽死の時間による肝臓組織中のオキサリプラチンの平均濃度（ｎｇ／ｍｇ）

【0149】

肝臓及び組織中のオキサリプラチンの濃度：
組織中のオキサリプラチンの濃度を表４及び５に示す。２４時間では、ピカリングエマルションを使用した場合、腫瘍／左葉の比率は従来のエマルションと比較して有意に高い（４３．４±４２．９対１４．５±６．６、ｐ＝０．０４）。

【0150】

【表5】

表５：注入されたエマルションのタイプ及び安楽死の時間による肝臓腫瘍のオキサリプラチンの平均濃度（ｎｇ／ｍｇ）

【0151】

１時間で従来のエマルションを使用した場合の腫瘍及び左葉におけるオキサリプラチンの有意に高い濃度は、オキサリプラチンの急速な放出を誘発するエマルションの低い安定性レベルと一致する。逆に、ピカリングエマルションからのオキサリプラチンの徐放により、１時間での非標的臓器（右葉）の全身曝露が少なくなり、腫瘍への曝露が２４時間を超える傾向になる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】