特許 7252888 ジカウイルスエピトープに特異的に結合する新規抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-03-28

(45)【発行日】2023-04-05

(54)【発明の名称】ジカウイルスエピトープに特異的に結合する新規抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230329BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230329BHJP

   C07K 16/10 20060101ALI20230329BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230329BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230329BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230329BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230329BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230329BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230329BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230329BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20230329BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230329BHJP

   G01N 33/569 20060101ALI20230329BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20230329BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230329BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C07K16/10

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P31/14

A61K39/395 S

A61K48/00

A61K31/713

A61K35/12

G01N33/569 L

G01N33/53 D

C12P21/08

【請求項の数】 16

(21)【出願番号】P 2019501482

(86)(22)【出願日】2017-07-12

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2019-11-21

(86)【国際出願番号】 EP2017067581

(87)【国際公開番号】W WO2018011283

(87)【国際公開日】2018-01-18

【審査請求日】2020-06-11

(31)【優先権主張番号】PCT/EP2016/066684

(32)【優先日】2016-07-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】516097907

【氏名又は名称】ヒューマブス バイオメド エスエー

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100107515

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠彦

(72)【発明者】

【氏名】ダヴィデ・コルティ

【審査官】伊達 利奈

(56)【参考文献】

【文献】Cell Host & Microbe,2016.05.11, Vol.19, pp.696-704

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００

Ｃ０７Ｋ １６／００

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＰｕｂＭｅｄ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ジカウイルスエピトープに特異的に結合し、ジカウイルス感染を中和する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むことを特徴とする単離された抗体又はその抗原結合断片：
（ｉ）配列番号１で表されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２で表されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号３で表されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号４で表されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号５で表されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号７で表されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列；又は
（ｉｉ）配列番号１で表されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２で表されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号３で表されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号４で表されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号６で表されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号７で表されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列。

【請求項2】

Ｆｃ部分を含む請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

前記Ｆｃ部分に突然変異を含み、前記突然変異がＦｃ受容体に対する前記抗体の結合を低減する請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

野生型ＩｇＧ１又はＩｇＧ３のＣＨ２における、４位のアミノ酸ロイシンがアラニンである突然変異、５位のアミノ酸ロイシンがアラニンである突然変異、又はその両方を含む請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

以下を含む請求項１から４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片：
（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその配列変異体。

【請求項6】

医薬としての使用のための請求項１から５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

ジカウイルス感染の予防及び／又は治療における使用のための請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

請求項１から７のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含むことを特徴とする核酸分子。

【請求項9】

請求項８に記載の核酸分子を含むことを特徴とするベクター。

【請求項10】

請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片を発現するか、又は請求項９に記載のベクターを含むことを特徴とする細胞。

【請求項11】

請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項８に記載の核酸分子、請求項９に記載のベクター、及び／又は請求項１０に記載の細胞を含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項12】

更に薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤、又は担体を含む請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

（ｉ）ジカウイルス感染の予防又は治療；又は（ｉｉ）ジカウイルス感染の診断における使用のための、請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項８に記載の核酸分子、請求項９に記載のベクター、請求項１０に記載の細胞、又は請求項１１から１２のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項14】

チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される、請求項１３に記載の使用のための、抗体又はその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、細胞、又は医薬組成物。

【請求項15】

抗ジカワクチンの抗原が正確な立体構造の特異的エピトープを含有していることを確認することによって前記ワクチンの品質をモニタリングするための、請求項１から６のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項８に記載の核酸分子、請求項９に記載のベクター、請求項１０に記載の細胞、又は請求項１１から１２のいずれかに記載の医薬組成物の使用。

【請求項16】

（ｉ）ジカウイルス感染の予防又は治療；又は（ｉｉ）ジカウイルス感染の診断における使用のためのキットであって、
請求項１から６のいずれかに記載の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片、請求項８に記載の少なくとも１つの核酸分子、請求項９に記載の少なくとも１つのベクター、請求項１０に記載の少なくとも１つの細胞、又は請求項１１から１２のいずれかに記載の少なくとも１つの医薬組成物を含むことを特徴とするキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）エピトープに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片に関する。このような抗体は、（ｉ）ジカウイルス（ＺＩＫＶ）の感染を強力に中和する、又は（ｉｉ）ＮＳ１ ＺＩＫＶに指向し、診断薬として使用することができる。本発明はまた、抗体及び抗原結合断片が結合する抗原性部位、並びに抗体をコードする核酸及びそのような抗体及び抗体断片を産生する不死化Ｂ細胞に関する。更に、本発明は、スクリーニング方法並びにＺＩＫＶ感染の診断、予防、及び治療における本発明の抗体及び抗体断片の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、蚊が媒介するフラビウイルスであり、公衆衛生上の緊急事態である。ＺＩＫＶは、ウガンダのジカ森林で１９４７年にマカクから最初に単離され（非特許文献１）、１９５４年にナイジェリアで最初のヒト感染が報告された（非特許文献２）。それ以来、アフリカや東南アジアでは、ＺＩＫＶ感染が散発的に報告されている（非特許文献３）が、２００７年にミクロネシアで（非特許文献４）、２０１３～１４年にフランス領ポリネシアで流行が報告され、その後、大西洋大陸の他の国々にも広がっている（非特許文献５及び非特許文献６）。２０１５年にブラジルに入った後、ＺＩＫＶは急速に広がり、２０１６年２月に世界保健機関（ＷＨＯ）は国際問題の公衆衛生緊急事態を宣言した（非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９）。ＺＩＫＶ感染の主な経路は、ヤブカ（Ａｅｄｅｓ ｍｏｓｑｕｉｔｏｓ）による刺咬であるが、このウイルスはまた、性的に感染する（非特許文献１０）、垂直感染する（非特許文献１１）場合もある。ＺＩＫＶ感染の大部分は、無症候性であるか軽度の症状しか引き起こさないが、ＺＩＫＶ感染が成人のギラン・バレー症候群などの神経疾患合併症（非特許文献１２）及び及び発達中の胎児における小頭症を含む先天性欠陥（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）に至ることがあるというエビデンスがある。これは、ヒト神経前駆細胞に感染させる能力が高いことが原因である考えられる（非特許文献１６）。

【0003】

ＺＩＫＶはフラビウイルス属に属し、これは、西ナイルウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、及び脳炎を引き起こす可能性のある他のウイルスも含む。フラビウイルスはエンベロープウイルスであり、正２０面体及び球形のジオメトリを有する。直径は約５０ｎｍである。ゲノムは線状のプラスセンスＲＮＡであり、非セグメントであり、長さは約１０～１１ｋｂのである。フラビウイルスのゲノムは、３つの構造タンパク質（カプシド、ｐｒＭ、及びエンベロープ）及び８つの非構造タンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５、及びＮＳ５Ｂ）をコードする。

【0004】

フラビウイルスエンベロープ（Ｅ）タンパク質は融合を媒介し、中和抗体の主な標的であるが、非構造タンパク質１（ＮＳ１）は感染細胞によって分泌され、免疫回避及び病因に関与する（非特許文献１７）。２つの最近の構造研究は、ＺＩＫＶのＥタンパク質と、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）及び西ナイルウイルス（ＷＮＶ）などの他のフラビウイルスのそれとの間の高い構造的類似性を示したが、ＺＩＫＶ神経栄養と関連している可能性があるユニークな特徴も示した（非特許文献１８；非特許文献１９）。同様に、ＺＩＫＶ ＮＳ１の構造解析は、異なる静電特性を示すものの、他のフラビウイルスのＮＳ１とで保存された特性を示した（非特許文献２０）。

【0005】

特定のフラビウイルスの特徴である現象は、異種ウイルスによる過去の感染によって惹起された交差反応性抗体の疾患増強活性である。４つの血清型が知られているデングウイルス（ＤＥＮＶ）の場合、一次感染が同じ血清型による再感染から防御するが、異なる血清型による再感染時に重症疾患の発症の危険因子であるという疫学的証拠がある（非特許文献２１）。疾患の悪化が、侵入するウイルスを中和することができないが、その代わりにＦｃ受容体発現（ＦｃＲ＋）細胞によるその捕捉を高め、ウイルス複製及び交差反応性記憶Ｔ細胞の活性化をもたらすＥ及びｐｒＭ特異的抗体によって引き起こされる。その結果として生じるサイトカインストームが、デング出血熱／デングショック症候群として知られる最も重篤な形態の疾患の基礎であると考えられる（非特許文献２２；非特許文献２３）。重度のデング熱における抗体の役割は、乳児における母体抗体の減少レベルが重度のデング熱の発生のリスクが高いことを示す研究によって裏付けられている（非特許文献２４；非特許文献２５；非特許文献２６；非特許文献２７）。

【0006】

最近、ＤＥＮＶエンベロープタンパク質に反応する大部分の抗体がＺＩＫＶに結合するが、主要線状融合ループエピトープ（ＦＬＥ）を認識する抗体はＺＩＫＶを中和せず、代わりにＺＩＫＶ感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）を促進することが示された（非特許文献２８）。

【0007】

更に、ＷＨＯによれば、小頭症及びジカウイルス感染に潜在的に関連する他の神経学的障害の症例数の最近の増加は、ジカウイルス感染を検出するための実験室での検査の需要の高まりを後押ししている。この文脈において、ＺＩＫＶ感染を他のフラビウイルスの感染と区別するためには、抗体の高い特異性が必要である。しかし、知られた抗ジカ抗体は、典型的には、他のフラビウイルスに対して交差反応性であり、したがって、ＺＩＫＶ感染を他のフラビウイルスの感染と区別するのに有用ではない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【文献】Ｇ． Ｗ． Ａ． Ｄｉｃｋ， Ｓ． Ｆ． Ｋｉｔｃｈｅｎ， Ａ． Ｊ． Ｈａｄｄｏｗ， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ． Ｉ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｔｒａｎｓ． Ｒ． Ｓｏｃ． Ｔｒｏｐ． Ｍｅｄ． Ｈｙｇ． ４６， ５０９－５２０ （１９５２）

【文献】Ｆ． Ｎ． Ｍａｃｎａｍａｒａ， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ： ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｎ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ ｊａｕｎｄｉｃｅ ｉｎ Ｎｉｇｅｒｉａ． Ｔｒａｎｓ． Ｒ． Ｓｏｃ． Ｔｒｏｐ． Ｍｅｄ． Ｈｙｇ． ４８， １３９－１４５ （１９５４）

【文献】Ｄ． Ｍｕｓｓｏ， Ｖａｎ Ｍａｉ Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ， Ｄ． Ｊ． Ｇｕｂｌｅｒ， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ： ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｐａｔｈ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ａｎｄ ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ？ Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ． ３８６， ２４３－２４４ （２０１５）

【文献】Ｍ． Ｒ． Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｎ Ｙａｐ Ｉｓｌａｎｄ， Ｆｅｄｅｒａｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｎｅｓｉａ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ３６０， ２５３６－２５４３ （２００９）

【文献】Ｖ．－Ｍ． Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ， Ｄ． Ｍｕｓｓｏ， Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ． Ｌａｎｃｅｔ． ３８４， １５７１－１５７２ （２０１４）

【文献】Ｄ． Ｍｕｓｓｏ， Ｅ． Ｊ． Ｎｉｌｌｅｓ， Ｖ．－Ｍ． Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ， Ｒａｐｉｄ ｓｐｒｅａｄ ｏｆ ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ ａｒｅａ． Ｃｌｉｎ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｉｎｆｅｃｔ． ２０， Ｏ５９５－６ （２０１４）

【文献】Ｌ． Ｒ． Ｂａｄｅｎ， Ｌ． Ｒ． Ｐｅｔｅｒｓｅｎ， Ｄ． Ｊ． Ｊａｍｉｅｓｏｎ， Ａ． Ｍ． Ｐｏｗｅｒｓ， Ｍ． Ａ． Ｈｏｎｅｉｎ， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ． Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３７４， １５５２－１５６３ （２０１６）

【文献】Ａ． Ｓ． Ｆａｕｃｉ， Ｄ． Ｍ． Ｍｏｒｅｎｓ， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｓ － Ｙｅｔ Ａｎｏｔｈｅｒ Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ Ｔｈｒｅａｔ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， １６０１１３１４２１０１００９ （２０１６）

【文献】Ｄ． Ｌ． Ｈｅｙｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ： ｗｈｙ ｉｓ ｔｈｉｓ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ａ ＰＨＥＩＣ？ Ｌａｎｃｅｔ． ３８７， ７１９－７２１ （２０１６）

【文献】Ｄ． Ｍｕｓｓｏ ｅｔ ａｌ．， Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｅｘｕａｌ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ． Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． ２１， ３５９－３６１ （２０１５）

【文献】Ｊ． Ｍｌａｋａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ３７４， ９５１－９５８ （２０１６）

【文献】Ｖ．－Ｍ． Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ ｅｔ ａｌ．， Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒｅ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｏｕｔｂｒｅａｋ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ： ａ ｃａｓｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ． Ｌａｎｃｅｔ． ０ （２０１６）， ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（１６）００５６２－６

【文献】Ｇ． Ｃａｌｖｅｔ， Ｒ． Ｓ． Ａｇｕｉａｒ， Ａ． Ｍｅｌｏ， Ｓ． Ａ． Ｓａｍｐａｉｏ， Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｆｅｔｕｓｅｓ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ ｉｎ Ｂｒａｚｉｌ： ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ． Ｌａｎｃｅｔ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ （２０１６）， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｓ１４７３－３０９９（１６）０００９５－５

【文献】Ｊ． Ｍｌａｋａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ３７４， ９５１－９５８ （２０１６）

【文献】Ｅ． Ｊ． Ｒｕｂｉｎ， Ｍ． Ｆ． Ｇｒｅｅｎｅ， Ｌ． Ｒ． Ｂａｄｅｎ， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ （２０１６）， ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｅ１６０１８６２

【文献】Ｈ． Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｓ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ｎｅｕｒａｌ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ａｎｄ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ Ｔｈｅｉｒ Ｇｒｏｗｔｈ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ， １－５ （２０１６）

【文献】Ｄ． Ａ． Ｍｕｌｌｅｒ， Ｐ． Ｒ． Ｙｏｕｎｇ， Ｔｈｅ ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ ＮＳ１ ｐｒｏｔｅｉｎ： ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂｉｏｌｏｇｙ， ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｒｏｌｅ ｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ． Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ． ９８， １９２－２０８ （２０１３）

【文献】Ｌ． Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ａ Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ Ｂｒｏａｄｌｙ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ （２０１６）， ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｏｍ．２０１６．０４．０１３

【文献】Ｄ． Ｓｉｒｏｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ ３．８ Å ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｒｙｏ－ＥＭ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ａａｆ５３１６ （２０１６）

【文献】Ｊ． Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ＮＳ１ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｒｅｖｅａｌｓ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｕｒｆａｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｅｓ， １－６ （２０１６）

【文献】Ｓ． Ｂ． Ｈａｌｓｔｅａｄ， Ｄｅｎｇｕｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ： Ｋｎｏｗｎｓ ａｎｄ Ｕｎｋｎｏｗｎｓ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｐｅｃｔｒ． ２， ２４９－２７１ （２０１４）

【文献】Ｓ． Ｂ． Ｈａｌｓｔｅａｄ， Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ． ６０， ４２１－４６７ （２００３）

【文献】Ｇ． Ｓｃｒｅａｔｏｎ， Ｊ． Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ， Ｓ． Ｙａｃｏｕｂ， Ｃ． Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５， ７４５－７５９ （２０１５）

【文献】Ｓ． Ｂ． Ｈａｌｓｔｅａｄ， Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ． ６０， ４２１－４６７ （２００３）

【文献】Ｓ． Ｂ． Ｈａｌｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ： ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｉｇｎｏｒｅｄ． Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． ８， １４７４－１４７９ （２００２）

【文献】Ｔ． Ｈ． Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ： ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ． Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． １８９， ２２１－２３２ （２００４）

【文献】Ａ． Ｌ． Ｒｏｔｈｍａｎ， Ｄｅｎｇｕｅ： ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｖｅｒｓｕｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． １１３， ９４６－９５１ （２００４）

【文献】Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ Ｗ， Ｓｕｐａｓａ Ｐ， Ｗｏｎｇｗｉｗａｔ Ｗ， Ｒｏｕｖｉｎｓｋｉ Ａ， Ｂａｒｂａ－Ｓｐａｅｔｈ Ｇ， Ｄｕａｎｇｃｈｉｎｄａ Ｔ， Ｓａｋｕｎｔａｂｈａｉ Ａ， Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ ＶＭ， Ｍａｌａｓｉｔ Ｐ， Ｒｅｙ ＦＡ， Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ Ｊ， Ｓｃｒｅａｔｏｎ ＧＲ： Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｓｅｒｏ－ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｒｉｖｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ． Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１６ Ｊｕｎ ２３． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｎｉ．３５１５． ［Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ］

【0009】

前記に鑑みて、本発明の目的は、ＺＩＫＶエピトープに特異的に結合する新規抗体を提供することである。本発明の目的は、また、強力に中和する抗ＺＩＫＶ抗体を提供することである。そのような抗体は、好ましくは、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない。また、本発明の目的は、ＺＩＫＶ感染の診断及び検査に有用な高度に特異的な抗ＺＩＫＶ抗体及びそのような抗体を用いる診断方法を提供することである。

【0010】

本発明の根底にある目的は、特許請求される主題によって解決される。

【0011】

以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。

【0012】

以下に、本発明の要素について説明する。これら要素は、具体的な実施形態と共に列挙されるが、これらを任意の方式で任意の数組み合わせて更なる実施形態を生み出すことができることを理解すべきである。様々に記載される実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に記載される実施形態に限定することを意図するものではない。この記載は、明示的に記載された実施形態を任意の数の開示された及び／又は好ましい要素と組み合わせる実施形態をサポート及び包含すると理解すべきである。更に、特に指定しない限り、本願における全ての記載された要素の任意の入れ換え及び組合せが本願の記載によって開示されるとみなすべきである。

【0013】

本明細書及びその後に続く特許請求の範囲全体を通して、特に必要としない限り、用語「含む」並びに「含み」及び「含んでいる」等の変形は、指定されている部材、整数、又は工程を含むが、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程を除外するものではないことを意味すると理解される。用語「からなる」は、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程が除外される、用語「含む」の具体的な実施形態である。本発明において、用語「含む」は、用語「からなる」を包含する。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなっていてもよく、追加の何かを含んでいてもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。

【0014】

用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに本発明の説明（特に、特許請求の範囲）において使用される同様の参照は、本明細書に指定されているか又は文脈上明示的に否定されていない限り、単数及び複数の両方を網羅すると解釈すべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内の各別個の値を個別に参照する簡易的な方法として機能することを意図する。本明細書において特に指定しない限り、各個別の値は、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。明細書中のいずれの言語も、本発明の実施に必須の任意の請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。

【0015】

用語「実質的に」は、「完全に」を除外するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。必要な場合、用語「実質的に」は、本発明の定義から省略されることもある。

【0016】

数値ｘに関連する用語「約」は、ｘ±１０％を意味する。

【0017】

用語「疾患」は、本明細書で使用するとき、ヒト若しくは動物の身体又は正常な機能が損なわれているその部分のうちの１つの異常な状態を全て反映し、典型的には、識別可能な徴候及び症状によって顕在化し、且つヒト又は動物の寿命又は生活の質を低減するという点で、用語「疾病」及び（健康状態のような）「状態」と略同義であることを意図し、互換的に使用される。

【0018】

本明細書で使用するとき、被験体又は患者の「治療」に対する言及は、防止、予防、軽減、寛解、及び療法を含むことを意図する。用語「被験体」又は「患者」は、本明細書では互換的に使用されて、ヒトを含む全ての哺乳類を意味する。被験体の例としては、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、及びウサギが挙げられる。一実施形態では、患者はヒトである。

【0019】

本明細書で使用するとき、用語「抗原結合断片」、「断片」、及び「抗体断片」は、抗体の抗原結合活性を保持している本発明の抗体の任意の断片を指すために互換的に使用される。抗体断片の例としては、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖが挙げられるが、これらに限定されない。更に、用語「抗体」は、本明細書で使用するとき、抗体及びその抗原結合断片の両方を含む。

【0020】

本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、本発明に係る特徴的な性質が保持されている限り、抗体全体、抗体断片、具体的には、抗原結合断片、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、組み換え抗体、及び遺伝子操作された抗体（変異体又は突然変異抗体）を含むがこれらに限定されない様々な形態の抗体を包含する。ヒト抗体及びモノクローナル抗体が好ましく、ヒトモノクローナル抗体、具体的には、組み換えヒトモノクローナル抗体が特に好ましい。

【0021】

ヒト抗体は、当技術分野において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体は、免疫時に、内因性免疫グロブリンが産生されていなくてもヒト抗体の完全レパートリー又はセレクションを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）においても産生され得る。かかる生殖系列突然変異体マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移植すると、抗原チャレンジ時にヒト抗体が産生される（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３４０を参照）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリでも産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。Ｃｏｌｅ等及びＢｏｅｒｎｅｒ等の技術も、ヒトモノクローナル抗体を調製するために利用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）。好ましくは、ヒトモノクローナル抗体は、Ｔｒａｇｇｉａｉ Ｅ，Ｂｅｃｋｅｒ Ｓ，Ｓｕｂｂａｒａｏ Ｋ，Ｋｏｌｅｓｎｉｋｏｖａ Ｌ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｙ，Ｇｉｓｍｏｎｄｏ ＭＲ，Ｍｕｒｐｈｙ ＢＲ，Ｒａｐｐｕｏｌｉ Ｒ，Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ．（２００４）：Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌｓ：ｐｏｔｅｎｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．１０（８）：８７１－５に記載の通り、改善されたＥＢＶ－Ｂ細胞の不死化を使用することによって調製される。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用するとき、本明細書に記載されている本発明に係る性質を生じさせるために、例えば可変領域が改変されたかかる抗体も含む。本明細書で使用するとき、用語「可変領域」（軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域、重鎖（Ｖ_Ｈ）の可変領域）は、抗体の抗原に対する結合に直接関与する軽鎖及び重鎖の各対を意味する。

【0022】

本発明の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、即ち、α、γ、又はμ重鎖）であってよいが、好ましくは、ＩｇＧである。ＩｇＧアイソタイプの中でも、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のサブクラスであってよく、ＩｇＧ１が好ましい。本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖を有していてよい。

【0023】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、精製抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖである。

【0024】

したがって、本発明の抗体は、好ましくは、ヒト抗体、モノクローナル抗体、ヒトモノクローナル抗体、組み換え抗体、又は精製抗体であってよい。また、本発明は、本発明の抗体の断片、特に、前記抗体の抗原結合活性を保持している断片を提供する。かかる断片としては、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖを含むが、これらに限定されない。特許請求の範囲を含む明細書は、一部の箇所では、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び／又は誘導体に明示的に言及するが、用語「抗体」又は「本発明の抗体」は、抗体の全てのカテゴリー、即ち、抗体の抗原結合断片、抗体断片、変異体、及び誘導体を含むことが理解される。

【0025】

本発明の抗体の断片は、酵素、例えばペプシン若しくはパパインによる切断を含む方法によって、及び／又は化学還元によりジスルフィド結合を切断することによって前記抗体から得ることができる。或いは、抗体の断片は、重鎖又は軽鎖の配列の一部のクローニング及び発現によって得ることができる。抗体「断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片を含む。また、本発明は、本発明の抗体の重鎖及び軽鎖に由来する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を包含する。例えば、本発明は、本発明の抗体由来のＣＤＲを含むｓｃＦｖを含む。また、重鎖又は軽鎖の単量体及び二量体、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体に加えて、単鎖抗体、例えば、重鎖及び軽鎖の可変ドメインがペプチドリンカーによって結合している単鎖Ｆｖも含まれる。

【0026】

本発明の抗体断片は、一価又は多価相互作用を付与し得、上記様々な構造に含有され得る。例えば、ｓｃＦｖ分子を合成して、三価「トリアボディ」又は四価「テトラボディ」を作製することができる。ｓｃＦｖ分子は、Ｆｃ領域のドメインを含んでいてよく、その結果、二価ミニボディが生じる。更に、本発明の配列は、本発明の配列が本発明のエピトープを標的とし、分子の他の領域が他の標的に結合する多重特異的分子の成分であってよい。例示的な分子としては、二重特異的Ｆａｂ２、三重特異的Ｆａｂ３、二重特異的ｓｃＦｖ、及びダイアボディが挙げられるが、これらに限定されない（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１１２６－１１３６）。

【0027】

本発明に係る抗体は、精製形態で提供されてもよい。典型的には、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物、例えば、前記組成物の９０（重量）％未満、通常６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される組成物中に存在する。

【0028】

本発明に係る抗体は、ヒト及び／又は非ヒト（又は異種）宿主、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。例えば、前記抗体は、非ヒト宿主では免疫原性であるが、ヒト宿主では免疫原性でないイディオトープを有し得る。ヒトで使用するための本発明の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳類等の宿主から容易には単離することができず、且つ一般的にヒト化によって又はゼノマウスから入手することができないものを含む。

【0029】

本明細書で使用するとき、「中和抗体」は、宿主において感染を開始及び／又永続化させる病原体の能力を中和する、即ち、予防、阻害、低減、妨害、又は干渉することができるものである。用語「中和抗体」及び「中和する抗体」は、本明細書では互換的に使用される。これら抗体は、単独で使用してもよく、適切な製剤化に際して予防剤又は治療剤として、能動的ワクチン接種に関連して、診断ツールとして、又は本明細書に記載される生産ツールとして組み合わせて使用してもよい。

【0030】

用量は、多くの場合、体重に関連して表される。したがって、［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］／ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）として表される用量は、たとえ用語「体重」が明示的に言及されていないとしても、通常「体重１ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）当たりの」［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］を指す。

【0031】

用語「特異的結合」及び類似の参照は、非特異的固着を包含しない。

【0032】

用語「ワクチン」とは、本明細書で使用するとき、典型的には、少なくとも１つの抗原、好ましくは免疫原を提供する予防又は治療的物質であると理解される。抗原又は免疫原は、ワクチン接種に好適な任意の物質に由来し得る。例えば、抗原又は免疫原は、細菌若しくはウイルス粒子等の病原体、又は腫瘍若しくは癌性組織に由来し得る。抗原又は免疫原は、身体の適応免疫系を刺激して適応免疫応答を提供する。具体的には、「抗原」又は「免疫原」は、典型的には、免疫系、好ましくは適応免疫系によって認識され得、且つ例えば、適応免疫応答の一部として抗体及び／又は抗原特異的Ｔ細胞を形成することによって、抗原特異的免疫応答を誘発することができる物質を指す。典型的には、抗原は、ＭＨＣ又はＴ細胞によって提示され得るペプチド又はタンパク質であってもよく、これらを含んでいてもよい。

【0033】

本明細書で使用するとき、「配列変異体」（「変異体」とも称する）は、レファレンス配列における任意の変化を指し、レファレンス配列は、「配列の表及び配列番号」（配列表）に列挙されている配列、即ち、配列番号１～配列番号４０７のいずれかである。したがって、用語「配列変異体」は、ヌクレオチド配列変異体及びアミノ酸配列変異体を含む。注目すべきは、本明細書に記載される配列変異体は、特に、機能的配列変異体、即ち、例えば抗体の生物学的機能を維持する配列変異体である。本発明の文脈において、そのような維持された生物学的機能は、好ましくは、ＺＩＫＶ感染の中和、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質への抗体の結合、及び／又はＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質への抗体の結合である。したがって、好ましい配列変異体は、参照配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体である。本明細書に使用される表現「少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体」という表現は、（ｉ）配列変異体が本明細書に記載されるように機能的であり、かつ（ｉｉ）％配列同一性が高いほど、より好ましい配列変異体であることを意味する。換言すれば、表現「少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する機能的配列変異体」は、特に、機能的配列改変体がそれぞれの参照配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは少なくとも７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも８８％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、、更により好ましくは少なくとも９２％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９６％の配列同一性、特に好ましくは少なくとも９７％の配列同一性、特に好ましくは少なくとも９８％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有することを意味する。

【0034】

用語「配列変異体」は、特に、参照配列と比較して突然変異及び／又は置換を含むそのような変異体を含む。Ｆｃ部分配列の例示的な変異体には、ＣＨ２ ４、ＣＨ２ ５、又はその両方の位置でＬからＡへの置換を有するものが含まれるが、これらに限定されない。

【0035】

配列同一性は、通常、レファレンス配列（即ち、本願に列挙される配列）の完全長に対して計算される。本明細書において言及するとき、同一性パーセントは、例えば、ＮＣＢＩ（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって指定されたデフォルトパラメータ［Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリクス；ギャップオープンペナルティ＝１１、及びギャップエクステンションペナルティ＝１］を用いるＢＬＡＳＴを使用して決定することができる。

【0036】

本明細書で使用するとき、「ヌクレオチド配列変異体」は、レファレンス配列におけるヌクレオチドのうちの１以上が欠失若しくは置換されているか、又は１以上のヌクレオチドがレファレンスヌクレオチド配列の配列に挿入されている、変化した配列を有する。ヌクレオチドは、標準的な一文字表記（Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＴ）によって本明細書に言及される。遺伝子コードの縮重に起因して、「ヌクレオチド配列変異体」は、それぞれのレファレンスアミノ酸配列を変化させる、即ち、「アミノ酸配列変異体」を生じさせる場合もあり、そうではない場合もある。好ましい配列変異体は、アミノ酸配列変異体を生じさせない（サイレント突然変異）ヌクレオチド配列変異体である。しかし、他の非サイレント突然変異も範囲内であり、具体的には、レファレンスアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を生じさせる、突然変異ヌクレオチド配列も範囲内である。

【0037】

「アミノ酸配列変異体」は、レファレンスアミノ酸におけるアミノ酸のうちの１以上が欠失、置換、又は１以上のアミノ酸がレファレンスアミノ酸配列の配列に挿入されている、変化した配列を有する。変化の結果、アミノ酸配列変異体は、レファレンス配列と少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一、最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する。少なくとも９０％同一の変異体配列は、レファレンス配列の１００アミノ酸当たり１０以下の変化、即ち、欠失、挿入、又は置換の任意の組合せを有する。

【0038】

非保存的アミノ酸置換を有することが可能であるが、置換は、置換されたアミノ酸がレファレンス配列における対応するアミノ酸と類似の構造的又は化学的性質を有する保存的アミノ酸置換であることが好ましい。一例として、保存的アミノ酸置換は、ある脂肪族又は疎水性のアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、及びイソロイシン）の別の脂肪族又は疎水性のアミノ酸による置換；あるヒドロキシル含有アミノ酸（例えば、セリン及びトレオニン）の別のヒドロキシル含有アミノ酸による置換；ある酸性残基（例えば、グルタミン酸又はアスパラギン酸）の別の酸性残基による置換；あるアミド含有残基（例えば、アスパラギン及びグルタミン）の別のアミド含有残基による置換；ある芳香族残基（例えば、フェニルアラニン及びチロシン）の別の芳香族残基による置換；ある塩基性残基（例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジン）の別の塩基性残基による置換；並びにある小アミノ酸（例えば、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン、及びグリシン）の別の小アミノ酸による置換を含む。

【0039】

アミノ酸配列の挿入は、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さの範囲のアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、アミノ酸配列のＮ又はＣ末端のレポーター分子又は酵素への融合が挙げられる。

【0040】

重要なことに、配列変異体における変化は、それぞれのレファレンス配列の機能、本願の場合、例えば、抗体又はその抗原結合断片の配列が同じエピトープに結合する及び／又はＺＩＫＶの感染を十分に中和する機能を消失させるものではない。かかる機能を消失させることなしにそれぞれどのヌクレオチド及びアミノ酸残基を置換、挿入、又は欠失させることができるかを決定するための指針は、当技術分野において周知のコンピュータプログラムを使用することによって見出される。

【0041】

本明細書で使用するとき、指定の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に「由来する」核酸配列又はアミノ酸配列は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の起源を指す。好ましくは、特定の配列に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、これらが由来する配列又はその一部と本質的に同一のアミノ酸配列を有し、「本質的に同一」とは、上に定義した配列変異体を含む。好ましくは、特定のペプチド又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、特定のペプチド又はタンパク質における対応するドメインに由来する。それに関して、「対応する」とは、特に、同じ機能に言及する。例えば、「細胞外ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「細胞外ドメイン」に対応する、又は「膜貫通ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「膜貫通ドメイン」に対応する。したがって、ペプチド、タンパク質、及び核酸の「対応する」部分は、当業者によって容易に同定可能である。同様に、他の配列に「由来する」配列は、通常、前記配列中にその起源を有することが当業者によって容易に同定可能である。

【0042】

好ましくは、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質と同一であり得る。しかし、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に対して１以上の突然変異を有していてもよく、具体的には、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の上記機能性配列変異体であってよい。例えば、ペプチド／タンパク質において、１以上のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基で置換してもよく、１以上のアミノ酸残基の挿入又は欠失が生じていてもよい。

【0043】

本明細書で使用するとき、用語「突然変異」は、レファレンス配列、例えば、対応するゲノム配列と比較した、核酸配列及び／又はアミノ酸配列の変化に関する。例えばゲノム配列と比較した突然変異は、（自然界に存在する）体細胞突然変異、自然突然変異、例えば、酵素、化学物質、若しくは放射線によって誘導される誘導突然変異、又は部位特異的突然変異誘発（核酸配列及び／又はアミノ酸配列を特異的且つ故意に変化させるための分子生物学的方法）によって得られる突然変異であってよい。したがって、用語「突然変異」又は「突然変異する」とは、例えば、核酸配列及び／又はアミノ酸配列において突然変異を物理的に作製することも含むと理解されるものとする。突然変異は、１以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、欠失、及び挿入に加えて、幾つかの連続するヌクレオチド又はアミノ酸の逆位も含む。アミノ酸配列に突然変異を生じさせるために、好ましくは、（組み換え）突然変異型ポリペプチドを発現させるために、前記アミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列に突然変異を導入してよい。突然変異は、例えば、あるアミノ酸をコードしている核酸分子のコドンを、例えば部位特異的突然変異誘発によって、変化させて異なるアミノ酸をコードしているコドンを生じさせることにより、又は核酸分子の１以上のヌクレオチドを突然変異させる必要無しに、ポリペプチドをコードしている核酸分子のヌクレオチド配列を理解し、ポリペプチドの変異体をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子の合成を設計することによって、配列変異体を合成することにより行ってよい。

【0044】

本明細書の本文中には幾つかの文献が引用されている。本明細書中に引用した各文献（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造者の明細書、指示書などを含む）は、上記又は下記のいずれかにかかわらず、参照によりその全体を本明細書に援用する。本明細書中のいかなるものも、本発明が、先行する発明によってそのような開示よりも先行する資格がないと認めるものとして解釈されるものではない。

【0045】

本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明するためにのみ用いられるのであって、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。

【0046】

ジカウイルス感染を強力に中和する抗体
本発明は、他の知見の中でも特に、ジカウイルスエピトープに特異的に結合する抗体の発見及び単離に基づく。このような抗体は、（ｉ）ジカウイルスエンベロープ（Ｅ）タンパク質又はＺＩＫＶ四次エピトープの抗原性部位に指向する場合、ジカウイルスを非常に強力に中和するか、又は（ｉｉ）ジカウイルスＮＳ１タンパク質に指向する場合、ジカウイルス感染の診断に有用である。このような抗体は、ジカウイルスを中和するために少量の抗体しか必要としないので望ましい。特に、現在のところ、ジカウイルス感染に対して利用可能な予防／治療はない。本発明に係る抗体は、ジカウイルス感染の予防及び治療又は減弱において非常に有効である。更に、ジカウイルスに対する抗体の特異性のために、それらはＡＤＥを誘発せず、むしろＡＤＥを遮断する。診断において、Ｚｉｋａ特異的抗体は、ジカウイルス感染を、デングウイルスなどの他のフラビウイルスによる感染から区別するための重要なツールを提供する。

【0047】

第１の態様において、本発明は、ジカウイルスエピトープに特異的に結合し、ジカウイルス感染を中和する、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスのウイルス感染性を低下させる。

【0048】

実験室でウイルス感染性（又は「中和」）を研究及び定量するために、当業者は様々な標準的な「中和アッセイ」を知っている。中和アッセイのために、動物ウイルスを、典型的には、細胞及び／又は細胞系において増殖させる。本発明の文脈では、試験される抗体の存在下（又は非存在下）で培養細胞を一定量のジカウイルス（ＺＩＫＶ）と共にインキュベートする中和アッセイが好ましい。例えば、リードアウトとして、フローサイトメトリを使用することができる。或いは、他のリードアウトも考えられ、例えば、培養上清中に分泌されるＺＩＫＶ非構造タンパク質（例えば、ＺＩＫＶ ＮＳ１）の量を測定するなどがある。例えば、ＺＩＫＶ非構造タンパク質１（ＮＳ１）抗原捕捉酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）に基づく組織培養感染用量５０（ＴＣＩＤ５０）試験（ＴＣＩＤ５０－ＥＬＩＳＡ）を、ジカウイルスを滴定するために、標準プラークアッセイに代えて使用することができる。これは、デングウイルス（ＤＥＮＶ）の場合について次の文献に記載されているのと同様にして行われる：Ｌｉ Ｊ， Ｈｕ Ｄ－Ｍ， Ｄｉｎｇ Ｘ－Ｘ， Ｃｈｅｎ Ｙ， Ｐａｎ Ｙ－Ｘ， Ｑｉｕ Ｌ－Ｗ， Ｃｈｅ Ｘ－Ｙ： Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ－ｆｏｒｍａｔ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｏｓｅ－５０ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｔｉｔｒａｔｉｎｇ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２０１１， ６：ｅ２２５５３。このようなアッセイには、例えば、本願に記載のＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体を有利に使用することができる。

【0049】

ＺＩＫＶ中和アッセイの好ましい実施形態では、培養細胞、例えばＶｅｒｏ細胞を、試験すべき抗体の存在下又は非存在下で、例えば約４日間、一定量のＺＩＫＶと共にインキュベートする。インキュベート後、細胞を洗浄し、更に培養することができる。ウイルスの感染性を測定するために、フローサイトメトリを使用することができる。この目的のために、例えば２％ホルムアルデヒドで細胞を固定し、例えばＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）中１％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）０．５％サポニンを透過させ、例えばマウス抗体４Ｇ２で染色することができる。次いで、細胞を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８などの染料にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧとインキュベートし、フローサイトメトリで分析することができる。或いは、生細胞を、例えばＷＳＴ－１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を用いるフローサイトメトリによって検出することができる。そのような中和アッセイに使用される好ましいＺＩＫＶ株は、ＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３である。

【0050】

本発明の抗体及び抗原結合断片は、高い中和力を有する。無抗体対照と比較して、ジカウイルスの５０％中和に必要な抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、例えば、最大約３μｇ／ｍｌ又は最大約１μｇ／ｍｌである。好ましくは、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、最大約５００ｎｇ／ｍｌであり、より好ましくはＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、最大約２５０ｎｇ／ｍｌであり、更により好ましくはＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、最大約１５０ｎｇ／ｍｌである。最も好ましくは、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、約１００ｎｇ／ｍｌ以下、例えば約９０ｎｇ／ｍｌ以下、約８０ｎｇ／ｍｌ以下、約７０ｎｇ／ｍｌ以下、約６０ｎｇ／ｍｌ以下、約５０ｎｇ／ｍｌ以下、約４５ｎｇ／ｍｌ以下、約４０ｎｇ／ｍｌ以下、約３５ｎｇ／ｍｌ以下、約３０ｎｇ／ｍｌ以下、約２５ｎｇ／ｍｌ以下、約２０ｎｇ／ｍｌ以下、又は特に好ましくは約１５ｎｇ／ｍｌ以下である。特に、ＺＩＫＶの５０％中和に必要な本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、好ましくは約５０ｎｇ／ｍｌ以下である。これは、ＺＩＫＶの５０％中和には、ごく低濃度の抗体しか必要とさらないことを意味する。ＺＩＫＶの５０％中和に必要とされる本発明の抗体の濃度（ＩＣ_５０）は、当業者に知られている標準中和アッセイを用いて、又は特に上述のようにして測定することができる。

【0051】

一般に、抗体の結合は、当業者によく知られた標準的なＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）の使用によって評価することができる。例示的な標準的ＥＬＩＳＡは、以下のように行うことができる。ＥＬＩＳＡプレートを、それに対する抗体の結合が試験される例えばＰＢＳ中のタンパク質／複合体／粒子（例えば、以下に説明するＤＥＮＶ結合の場合、ＤＥＮＶ Ｅタンパク質及び／又はＤＥＮＶ ＶＬＰを使用する）の十分量（例えば、１μｇ／ｍｌ）でコーティングする（例えば、４℃で一晩）。次いで、プレートを、ＰＢＳ中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の１％ｗ／ｖ溶液でブロッキングし、試験する抗体と共にインキュベートする（例えば、室温で約１．５時間）。洗浄後、例えば、アルカリホスファターゼと結合されたヤギ抗ヒトＩｇＧを使用して抗体の結合を調べることができる。その後、プレートを洗浄し、必要な基質（例えば、ｐ－ＮＰＰ）を加え、プレートを、例えば４０５ｎｍで読み取ることができる。抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要なｍＡｂ（ＥＣ_５０）の濃度を測定することによって決定することができる。ＥＣ_５０値は、可変スロープを有する４パラメータ非線形回帰を適用した結合曲線の補間によって計算することができる。

【0052】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、デングウイルス様粒子及び／又はデングエンベロープタンパク質に本質的に結合しない。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、デングウイルス様粒子及び／又は４つのＤＥＮＶ血清型ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、及びＤＥＮＶ４のいずれかのデングエンベロープタンパク質に本質的に結合しない。「本質的に結合しない」とは、抗体又はその抗原結合性フラグメントについて、デングウイルス様粒子（ＤＥＮＶ ＶＬＰ）及び／又はデングエンベロープタンパク質（ＤＥＮＶ Ｅタンパク質）に対する標準的ＥＬＩＳＡにおいて、１０^２ｎｇ／ｍｌまで、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌまで、ＥＣ_５０値を測定できないことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡにおけるデングウイルス様粒子（ＤＥＮＶ ＶＬＰ）及び／又はデングエンベロープタンパク質（ＤＥＮＶ Ｅタンパク質）に対する飽和時の最大結合の５０％（ＥＣ_５０）を達成するために必要な抗体又はその抗原結合断片の濃度は、典型的には１０^２ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌ超、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、更により好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌ超である。

【0053】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合フラグメントは、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）をブロックする。

【0054】

ＡＤＥは、例えば培養細胞又はＫ５６２細胞などの細胞株を用いるフローサイトメトリに基づくアッセイによって評価することができる。例えば、試験すべき抗体及びＺＩＫＶを３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに加えることができる。４日間後、細胞を固定し、透過させ、ｍ４Ｇ２で染色する。これは、例えば、中和アッセイについて前述した通りである。感染細胞数は、中和アッセイについて前述したように、フローサイトメトリによって測定した。

【0055】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体である。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、好ましくはヒトモノクローナル抗体である。更に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、組換え抗体であることも好ましい。

【0056】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分を含む。より好ましくは、Ｆｃ部分は、ヒト起源、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／又はＩｇＧ４に由来し、ヒトＩｇＧ１が特に好ましい。

【0057】

本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ部分」とは、パパイン切断部位の直ぐ上流のヒンジ領域（例えば、重鎖定常領域の最初の残基が１１４であるとすると、ネイティブＩｇＧにおける残基２１６）で始まり、免疫グロブリン重鎖のＣ末端で終わる免疫グロブリン重鎖の部分に由来する配列を指す。したがって、Ｆｃ部分は、完全Ｆｃ部分又はその一部（例えば、ドメイン）であってよい。完全Ｆｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメイン（例えば、ＥＵアミノ酸位置２１６～４４６）を少なくとも含む。時に、追加のリジン残基（Ｋ）がＦｃ部分のＣ末端に存在するが、多くの場合、成熟抗体から切断される。Ｆｃ部分内のアミノ酸位置には、それぞれ、当技術分野において認識されているＫａｂａｔのＥＵ付番システムに従って番号が振られている。例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３ ａｎｄ １９８７を参照。

【0058】

好ましくは、本発明において、Ｆｃ部分は、ヒンジ（例えば、上方、中央、及び／又は下方ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はこれらの変異体、一部、若しくは断片のうちの少なくとも１つを含む。好ましい実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン又はＣＨ３ドメインを少なくとも含む。より好ましくは、Ｆｃ部分は、完全Ｆｃ部分である。また、Ｆｃ部分は、天然Ｆｃ部分に対して１以上のアミノ酸挿入、欠失、又は置換を含んでいてもよい。例えば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、又はＣＨ３ドメイン（又はこれらの一部）のうちの少なくとも１つが欠失していてもよい。例えば、Ｆｃ部分は、（ｉ）ＣＨ２ドメイン（又はその一部）に融合しているヒンジドメイン（又はその一部）、（ｉｉ）ＣＨ３ドメイン（又はその一部）に融合しているヒンジドメイン（又はその一部）、（ｉｉｉ）ＣＨ３ドメイン（又はその一部）に融合しているＣＨ２ドメイン（又はその一部）、（ｉｖ）ヒンジドメイン（又はその一部）、（ｖ）ＣＨ２ドメイン（又はその一部）、又は（ｖｉ）ＣＨ３ドメイン又はその一部を含んでいてもよく、これらからなっていてもよい。

【0059】

天然Ｆｃ部分によって付与される少なくとも１つの望ましい機能を保持しながら、天然免疫グロブリン分子の完全Ｆｃ部分とアミノ酸配列が異なるようにＦｃ部分を改変し得ることを当業者であれば理解するであろう。かかる機能としては、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）の結合、抗体の半減期の変更、ＡＤＣＣ機能、プロテインＡの結合、プロテインＧの結合、及び補体の結合が挙げられる。天然Ｆｃ部分のどこがかかる機能に関与する及び／又は必須であるかは、当業者に周知である。

【0060】

例えば、補体カスケードを活性化するために、Ｃ１ｑは、抗原性標的に結合している少なくとも２分子のＩｇＧ１又は１分子のＩｇＭに結合する（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．，ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，Ｔｈｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（１９９５）７７－９４）。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．は、アミノ酸残基３１８～３３７を含む重鎖領域が補体結合に関与していると記載している（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１９８５）１６１－２０６）。Ｄｕｎｃａｎ，Ａ．Ｒ．及びＷｉｎｔｅｒ，Ｇ．（Ｎａｔｕｒｅ ３３２（１９８８）７３８－７４０）は、部位特異的突然変異誘発を使用して、Ｇｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、及びＬｙｓ３２２がＣ１ｑに対する結合部位を形成すると報告した。Ｃ１ｑの結合におけるＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、及びＬｙｓ３２２残基の役割は、これら残基を含有する短い合成ペプチドが補体媒介性溶解を阻害する能力によって確認された。

【0061】

例えば、ＦｃＲ結合は、造血細胞における特殊な細胞表面受容体であるＦｃ受容体（ＦｃＲ）と（抗体の）Ｆｃ部分との相互作用によって媒介され得る。Ｆｃ受容体は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、抗体でコーティングされた病原体の免疫複合体の食作用による除去と、抗体依存性細胞媒介細胞傷害作用（ＡＤＣＣ；Ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．４９（１９９１）５１１－５２４）を介する、対応する抗体でコーティングされた赤血球及び様々な他の細胞標的（例えば、腫瘍細胞）の溶解とを両方媒介することが示されている。ＦｃＲは、免疫グロブリンクラスに対する特異性によって定義される；ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体はＦｃγＲと称され、ＩｇＥの場合はＦｃεＲと称され、ＩｇＡの場合はＦｃαＲと称され、新生児Ｆｃ受容体はＦｃＲｎと称される。Ｆｃ受容体結合は、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ｊ．Ｐ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（１９９１）４５７－４９２；Ｃａｐｅｌ，Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４（１９９４）２５－３４；ｄｅ Ｈａａｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６（１９９５）３３０－３４１；及びＧｅｓｓｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７６（１９９８）２３１－２４８に記載されている。

【0062】

ネイティブＩｇＧ抗体のＦｃドメイン（ＦｃγＲ）による受容体の架橋は、食作用、抗体依存性細胞傷害作用、及び炎症メディエータの放出を含む広範なエフェクタ機能に加えて、免疫複合体のクリアランス及び抗体産生の調節も誘発する。したがって、受容体の架橋を提供するＦｃ部分（ＦｃγＲ）が好ましい。ヒトでは、３つのクラスのＦｃγＲが特徴付けられている。即ち、（ｉ）高い親和性で単量体ＩｇＧに結合し、マクロファージ、単球、好中球、及び好酸球で発現するＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；（ｉｉ）中～低親和性で複合体化ＩｇＧに結合し、広く、特に白血球で発現し、抗体媒介性免疫において中心的な役割を果たすことが知られており、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、及びＦｃγＲＩＩＣに分類することができ、免疫系において様々な機能を発揮するが、同様の低親和性でＩｇＧ－Ｆｃに結合し、これら受容体のエクトドメインが高度に相同であるＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びに（ｉｉｉ）中～低親和性でＩｇＧに結合し、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、及び幾つかの単球、並びにＴ細胞でみられ、ＡＤＣＣを媒介するＦｃγＲＩＩＩＡ及び好中球で高度に発現するＦｃγＲＩＩＩＢの２つのタイプとして存在するＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）である。ＦｃγＲＩＩＡは、殺傷に関与する多くの細胞（例えば、マクロファージ、単球、好中球）でみられ、殺傷プロセスを活性化することができると考えられる。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害プロセスにおいて役割を果たすと考えられ、Ｂ細胞、マクロファージ、並びに肥満細胞及び好酸球でみられる。重要なことに、全てのＦｃγＲＩＩＢのうちの７５％が肝臓でみられる（Ｇａｎｅｓａｎ，Ｌ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，２０１２：ＦｃγＲＩＩｂ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｃｌｅａｒｓ ｓｍａｌｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９：４９８１－４９８８）。ＦｃγＲＩＩＢは、ＬＳＥＣと呼ばれる肝臓洞様血管内皮及び肝臓のクッパー細胞で多量に発現し、ＬＳＥＣは、小免疫複合体のクリアランスの主な部位である（Ｇａｎｅｓａｎ，Ｌ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，２０１２：ＦｃγＲＩＩｂ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｃｌｅａｒｓ ｓｍａｌｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９：４９８１－４９８８）。

【0063】

したがって、本発明では、ＦｃγＲＩＩｂに結合することができるかかる抗体及びその抗原結合断片、例えば、ＦｃγＲＩＩｂに結合するためのＦｃ部分、特にＦｃ領域を含む抗体、例えば、ＩｇＧ型抗体が好ましい。更に、Ｃｈｕ，Ｓ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２００８：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１９ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ ｗｉｔｈ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５，３９２６－３９３３によって記載されている通り、突然変異Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを導入することによってＦｃ部分を改変してＦｃγＲＩＩＢの結合を強化することが可能である。それによって、免疫複合体のクリアランスを強化することができる（Ｃｈｕ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０１４：Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ＩｇＥ Ｉｎ Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ Ｉｓ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｂｙ Ｘｍａｂ７１９５，Ａｎ Ｆｃ－Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｗｉｔｈ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｆｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＦｃγＲＩＩｂ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）。したがって、本発明では、特にＣｈｕ，Ｓ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２００８：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１９ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ ｗｉｔｈ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５，３９２６－３９３３に記載されている通り、突然変異Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを有する改変されたＦｃ部分を含む係る抗体又はその抗原結合断片が好ましい。

【0064】

Ｂ細胞では、更なる免疫グロブリン産生及び例えばＩｇＥクラスへのアイソタイプスイッチを抑制する機能を有すると考えられる。マクロファージでは、ＦｃγＲＩＩＢは、ＦｃγＲＩＩＡを介して媒介されたとき食作用を阻害する作用を有する。好酸球及び肥満細胞では、ｂ形態は、ＩｇＥのその別個の受容体への結合を通してこれら細胞の活性化を抑制するのに役立ち得る。

【0065】

ＦｃγＲＩ結合に関しては、ネイティブＩｇＧにおけるＥ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、及びＰ３２９のうちの少なくとも１つを改変すると、ＦｃγＲＩへの結合が減少する。２３３位～２３６位におけるＩｇＧ２残基をＩｇＧ１及びＩｇＧ４に置換すると、ＦｃγＲＩへの結合が１０^３倍減少し、抗体感作赤血球に対するヒト単球応答が排除された（Ａｒｍｏｕｒ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２６１３－２６２４）。ＦｃγＲＩＩ結合に関しては、例えば、Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｒ２９２、及びＫ４１４のうちの少なくとも１つのＩｇＧ突然変異について、ＦｃγＲＩＩＡの結合減少がみられる。ＦｃγＲＩＩＩ結合に関しては、例えば、Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｓ２３９、Ｅ２６９、Ｅ２９３、Ｙ２９６、Ｖ３０３、Ａ３２７、Ｋ３３８、及びＤ３７６のうちの少なくとも１つの突然変異について、ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合減少がみられる。Ｆｃ受容体についてのヒトＩｇＧ１における結合部位のマッピング、上述の突然変異部位、並びにＦｃγＩＲ及びＦｃγＲＩＩＡに対する結合を測定する方法は、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４に記載されている。

【0066】

重要なＦｃγＲＩＩに対する結合に関しては、ネイティブＩｇＧ Ｆｃの２つの領域、即ち、（ｉ）ＩｇＧ Ｆｃの下方ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４～２３７、ＥＵ付番）、及び（ｉｉ）ＩｇＧ ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接領域、特に、下方ヒンジ領域に隣接する上方ＣＨ２ドメイン、例えば、Ｐ３３１の領域におけるループ及び鎖は、ＦｃγＲＩＩ及びＩｇＧの相互作用にとって重要であると考えられる（Ｗｉｎｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１６４：５３１３－５３１８）。更に、ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ Ｆｃにおける同じ部位に結合すると考えられ、一方、ＦｃＲｎ及びプロテインＡは、ＩｇＧ Ｆｃにおける異なる部位（ＣＨ２－ＣＨ３界面であると考えられる）に結合する（Ｗｉｎｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１６４：５３１３－５３１８）。

【0067】

例えば、Ｆｃ部分は、ＦｃＲｎの結合又は半減期の延長に必要であることが当技術分野において公知であるＦｃ部分の部分を少なくとも含んでいてもよく、又はからなっていてもよい。それに代えて又はそれに加えて、本発明の抗体のＦｃ部分は、プロテインＡの結合に必要であることが当技術分野において公知である部分を少なくとも含む、及び／又は本発明の抗体のＦｃ部分は、プロテインＧの結合に必要であることが当技術分野において公知であるＦｃｃ分子の一部を少なくとも含む。好ましくは、保持される機能は、ジカウイルス感染の中和であり、これはＦｃγＲの結合によって媒介されると考えられる。したがって、好ましいＦｃ部分は、ＦｃγＲの結合に必要であることが当技術分野において公知である部分を少なくとも含む。したがって、上に概説した通り、好ましいＦｃ部分は、（ｉ）ネイティブＩｇＧ Ｆｃの下方ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４～２３７、ＥＵ付番）、及び（ｉｉ）ネイティブＩｇＧ ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接領域、特に、下方ヒンジ領域に隣接する上方ＣＨ２ドメイン、例えばＰ３３１の領域、例えば、ネイティブＩｇＧ Ｆｃのアミノ酸３２０～３４０（ＥＵ付番）等のＰ３３１周辺のネイティブＩｇＧ Ｆｃの上方ＣＨ２ドメインにおける少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個の連続するアミノ酸の領域におけるループ及び鎖を少なくとも含み得る。

【0068】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を含む。本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ領域」とは、抗体重鎖の２以上のＦｃ部分によって形成される免疫グロブリンの部分を指す。例えば、Ｆｃ領域は、単量体又は「単鎖」Ｆｃ領域（即ち、ｓｃＦｃ領域）であってよい。単鎖Ｆｃ領域は、（例えば、単一の連続する核酸配列にコードされている）単一のポリペプチド鎖内で結合しているＦｃ部分で構成される。例示的なｓｃＦｃ領域は、国際公開第２００８／１４３９５４ Ａ２号に開示されている。好ましくは、Ｆｃ領域は、二量体Ｆｃ領域である。「二量体Ｆｃ領域」又は「ｄｃＦｃ」は、２つの別個の免疫グロブリン重鎖のＦｃ部分によって形成される二量体を指す。二量体Ｆｃ領域は、２つの同一のＦｃ部分のホモ二量体（例えば、天然免疫グロブリンのＦｃ領域）又は２つの非同一のＦｃ部分のヘテロ二量体であってよい。

【0069】

Ｆｃ領域のＦｃ部分は、同じ又は異なるクラス及び／又はサブクラスであってよい。例えば、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラスの免疫グロブリン（例えば、ヒト免疫グロブリン）に由来していてよい。好ましくは、Ｆｃ領域のＦｃ部分は、同じクラス及びサブクラスである。しかし、Ｆｃ領域（又はＦｃ領域の１以上のＦｃ部分）はキメラであってもよく、キメラＦｃ領域は、異なる免疫グロブリンクラス及び／又はサブクラスに由来するＦｃ部分を含み得る。例えば、二量体又は単鎖Ｆｃ領域のＦｃ部分のうちの少なくとも２つは、異なる免疫グロブリンクラス及び／又はサブクラスに由来していてよい。それに加えて又はそれに代えて、キメラＦｃ領域は、１以上のキメラＦｃ部分を含み得る。例えば、キメラＦｃ領域又は部分は、第１のサブクラスの免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来する１以上の部分を含み得るが、一方、Ｆｃ領域又は部分の残りは、異なるサブクラスである。例えば、ＦｃポリペプチドのＦｃ領域又は部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するヒンジ領域とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するヒンジ及び／又はＣＨ２ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、キメラＦｃ領域は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＦｃ部分（例えば、完全Ｆｃ部分）と、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＦｃ部分とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４免疫グロブリンに由来するＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１免疫グロブリンに由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４分子に由来するＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、抗体の特定のサブクラスに由来するＣＨ２ドメインの一部、例えば、ＣＨ２ドメインのＥＵ２９２位～３４０位を含み得る。例えば、Ｆｃ領域又は部分は、ＩｇＧ４部分に由来するＣＨ２の２９２位～３４０位のアミノ酸とＩｇＧ１部分に由来するＣＨ２の残りとを含み得る（或いは、ＣＨ２の２９２～３４０は、ＩｇＧ１部分に由来し、ＣＨ２の残りはＩｇＧ４部分に由来していてもよい）。

【0070】

更に、Ｆｃ領域又は部分は、（それに加えて又はそれに代えて）例えば、キメラヒンジ領域を含み得る。例えば、キメラヒンジは、例えば、一部はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４分子（例えば、上方及び下方の中央ヒンジ配列）に由来し得、一部はＩｇＧ３分子（例えば、中央ヒンジ配列）に由来し得る。別の例では、Ｆｃ領域又は部分は、一部がＩｇＧ１分子に由来し、一部がＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。別の例では、キメラヒンジは、ＩｇＧ４分子由来の上方及び下方ヒンジドメインと、ＩｇＧ１分子由来の中央ヒンジドメインとを含み得る。かかるキメラヒンジは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域の中央ヒンジドメインにおけるＥＵ２２８位にプロリン置換（Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ）を導入することによって作製され得る。別の実施形態では、キメラヒンジは、ＩｇＧ２抗体に由来するＥＵ２３３位～２３６位のアミノ酸及び／又はＳｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を含み得、この場合、ヒンジの残りのアミノ酸は、ＩｇＧ４抗体由来である（例えば、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰのキメラヒンジ）。更に、本発明に係る抗体のＦｃ部分において用いることができるキメラヒンジは、米国特許出願第２００５／０１６３７８３ Ａ１号に記載されている。

【0071】

本発明では、Ｆｃ部分又はＦｃ領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来するアミノ酸配列（例えば、ヒトＩｇＧ分子由来のＦｃ領域又はＦｃ部分）を含むか又はからなることが好ましい。しかし、ポリペプチドは、別の哺乳類種由来の１以上のアミノ酸を含み得る。例えば、霊長類Ｆｃ部分又は霊長類結合部位が被験体ポリペプチドに含まれていてもよい。或いは、１以上のマウスアミノ酸がＦｃ部分又はＦｃ領域に存在していてもよい。

【0072】

好ましくは、本発明に係る抗体は、特に上記Ｆｃ部分に加えて、定常領域、特にＩｇＧの定常領域、好ましくはＩｇＧ１の定常領域、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域に由来する他の部分を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、特に上記Ｆｃ部分に加えて、定常領域の他の部分全て、特にＩｇＧの定常領域の他の部分全て、好ましくはＩｇＧ１の定常領域の他の部分全て、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域の他の部分全てを含む。

【0073】

定常領域の特に好ましい配列は、配列番号１４５～１４８のアミノ酸配列（配列番号１４９～１５２の核酸配列）である。好ましくは、ＩｇＧ１ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３のアミノ酸配列は、本明細書に記載の配列番号１４５又はその機能的配列変異体である。更により好ましくは、ＩｇＧ１ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３のアミノ酸配列は、「ＬＡＬＡ」変異が維持されている本明細書に記載の配列番号１４６又はその機能的配列変異体である。

【0074】

上に概説した通り、本発明に係る特に好ましい抗体は、ヒトＩｇＧ１に由来する（完全）Ｆｃ領域を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、特にヒトＩｇＧ１に由来する（完全）Ｆｃ領域に加えて、ＩｇＧの定常領域の他の部分全て、好ましくは、ＩｇＧ１の定常領域の他の部分全て、より好ましくはヒトＩｇＧ１の定常領域の他の部分全ても含む。

【0075】

いかなる理論にも拘束されるものではないが、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）は、抗体のＦｃ部分、特にＩｇＧ分子の重鎖のＦｃ部分のＦｃ受容体、例えば、宿主細胞上のＦｃγ受容体への結合によってもたらされると考えられる。したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分に１以上の突然変異を含むことが好ましい。突然変異は、抗体のＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合を低減する、特にＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する抗体の結合を低減する任意の突然変異であることができる。一方、本発明に係る抗体は、（完全な）Ｆｃ部分／Ｆｃ領域を含み、ＦｃＲｎとの相互作用／結合が損なわれないことが好ましい。したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）Ｆｃγ受容体に対する抗体の結合を低減するが、ＦｃＲｎとの相互作用を損なわせない１以上の突然変異を含むことが特に好ましい。そのような突然変異の一例は、以下に記載される「ＬＡＬＡ」突然変異である。

【0076】

一般に、抗体のＦｃ受容体への結合は、当業者に公知の様々な方法、例えばＥＬＩＳＡ（Ｈｅｓｓｅｌｌ ＡＪ， Ｈａｎｇａｒｔｎｅｒ Ｌ， Ｈｕｎｔｅｒ Ｍ， Ｈａｖｅｎｉｔｈ ＣＥＧ， Ｂｅｕｒｓｋｅｎｓ ＦＪ， Ｂａｋｋｅｒ ＪＭ， Ｌａｎｉｇａｎ ＣＭＳ， Ｌａｎｄｕｃｃｉ Ｇ， Ｆｏｒｔｈａｌ ＤＮ， Ｐａｒｒｅｎ ＰＷＨＩ， ｅｔ ａｌ．： Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｕｔ ｎｏｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ． Ｎａｔｕｒｅ ２００７， ４４９：１０１－１０４； Ｇｒｅｖｙｓ Ａ， Ｂｅｒｎ Ｍ， Ｆｏｓｓ Ｓ， Ｂｒａｔｌｉｅ ＤＢ， Ｍｏｅｎ Ａ， Ｇｕｎｎａｒｓｅｎ ＫＳ， Ａａｓｅ Ａ， Ｍｉｃｈａｅｌｓｅｎ ＴＥ， Ｓａｎｄｌｉｅ Ｉ， Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＪＴ： Ｆｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ Ａｌｔｅｒｅｄ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｆｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｆｆｅｃｔｓ Ｆｃ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ． ２０１５， １９４：５４９７－５５０８）又はフローサイトメトリ（Ｐｅｒｅｚ ＬＧ， Ｃｏｓｔａ ＭＲ， Ｔｏｄｄ ＣＡ， Ｈａｙｎｅｓ ＢＦ， Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｉ ＤＣ： Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １： ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｒｏｘｉｍａｌ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｇｐ４１． Ｊ Ｖｉｒｏｌ ２００９， ８３：７３９７－７４１０； Ｐｉｃｃｏｌｉ Ｌ， Ｃａｍｐｏ Ｉ， Ｆｒｅｇｎｉ ＣＳ， Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＢＭＦ， Ｍｉｎｏｌａ Ａ， Ｓａｌｌｕｓｔｏ Ｆ， Ｌｕｉｓｅｔｔｉ Ｍ， Ｃｏｒｔｉ Ｄ， Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ： Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ＧＭ－ＣＳＦ ｂｙ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｌｖｅｏｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ． Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１５， ６：１－９）により評価することができる、

【0077】

一般に、本発明に係る抗体はグリコシル化されていてもよい。重鎖のＣＨ２ドメインに結合したＮ－結合型グリカンは、例えば、Ｃ１ｑ及びＦｃＲの結合に影響を及ぼすことがあり、アグリコシル化抗体はこれらの受容体に対してより低い親和性を有する。したがって、本発明に係る抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインは、グリコシル化残基が非グリコシル化残基で置換された１以上の突然変異を含み得る。グリカン構造はまた、活性に影響を及ぼし得る。例えば、補体媒介性細胞死の差は、グリカンの二分岐鎖の末端におけるガラクトース糖の数（０、１、又は２）に依存して見られることがある。好ましくは、抗体のグリカンは、投与後にヒト免疫原性応答を引き起こさない。

【0078】

更に、本発明に係る抗体は、ＦｃＲに対するそれらの結合親和性及び／又はそれらの血清半減期を非修飾抗体に比較して変化させるために、重鎖のＣＨ２又はＣＨ３ドメインの特定の領域にランダムなアミノ酸突然変異を導入することによって改変することができる。そのような修飾の例としては、アミノ酸残基２５０、３１４、及び４２８からなる群から選択される重鎖定常領域由来の少なくとも１つのアミノ酸の置換が挙げられるが、これらに限定されない。

【0079】

特に好ましくは、本発明の抗体のＦｃ部分は、ＣＨ２ ４、ＣＨ２ ５、又はその両方の位置に置換を含む。一般に、野生型ＩｇＧ１及びＩｇＧ３のＣＨ２の４位及び５位のアミノ酸はロイシン（「Ｌ」）である。好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２ ４、ＣＨ２ ５、又はその両方の位置に、Ｌではないアミノ酸を含む。より好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２ ４、ＣＨ２ ５、又はその両方の位置にアラニン（「Ａ」）を含む。最も好ましくは、本発明に係る抗体は、ＣＨ２ Ｌ４Ａ及びＣＨ２ Ｌ５Ａ置換の両方を含む。このような抗体は、本明細書では「ＬＡＬＡ」変異体と称する。興味深いことに、Ｆｃ部分におけるそのような「ＬＡＬＡ」突然変異は、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）におけるそれぞれの抗体の寄与の欠如をもたらすだけでなく、ジカウイルス感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）をブロックする。「ＬＡＬＡ」突然変異を含むＩｇＧ１ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３の例示的なアミノ酸配列は、配列番号１４６で表される。したがって、ＩｇＧ１ ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３のアミノ酸配列は、好ましくは、配列番号１４６又は「ＬＡＬＡ」突然変異が維持された本明細書に記載のその機能的変異体である。

【0080】

好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ、「ＤＩＩＩ」とも称される）に結合する。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。ＺＩＫＶは、コアタンパク質によって包まれた一本鎖ＲＮＡを含むヌクレオカプシドコアを含む。ヌクレオキャプシドコアは、「膜タンパク質」及び「エンベロープタンパク質」を有する脂質二重層膜によってカプセル化される。ＺＩＫＶエンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）はドミナント抗原である。エンベロープタンパク質の外部ドメインは、次の３つの異なるドメインを含む：Ｅタンパク質ドメインＩ（ＥＤＩ）、Ｅタンパク質ドメインＩＩ（ＥＤＩＩ）、及びＥタンパク質ドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）。ＥＤＩＩＩは、各種ＺＩＫＶ株間で高度に保存されている（各種ＺＩＫＶ株のＥＤＩＩＩのアミノ酸配列のアラインメントについては図１２を参照）。

【0081】

したがって、抗体又はその抗原結合断片は、より好ましくは、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは、以下のアミノ酸配列（配列番号４０１）を有する。

ここで、Ｘは任意の（天然に存在する）アミノ酸であってもよい。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４０１の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。

【0082】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは、以下のアミノ酸配列（配列番号４０７）を有することが好ましい。

ここで、Ｘ１は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＫ、Ａ、又はＥであり得る；
Ｘ２は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ、Ｆ、又はＬであり得る；
Ｘ３は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＳ又はＦであり得る；
Ｘ４は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＩ又はＶであり得る；
Ｘ５は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＴ又はＶであり得る；
Ｘ６は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＬ又はＤであり得る；
Ｘ７は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＧであり得る；
Ｘ８は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＡ又はＧであり得る；
Ｘ９は、Ｒを除く任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＴ又はＡあり得る；
Ｘ１０は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＩであり得る；
Ｘ１１は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＡ又はＶであり得る；
Ｘ１２は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＭ又はＴであり得る；
Ｘ１３は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＳ又はＧであり得る；
Ｘ１４は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ又はＫであり得る；
Ｘ１５は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＶ又はＩであり得る；
Ｘ１６は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ、Ａ、Ｋ、又はＤであり得る；
Ｘ１７は、任意の（天然に存在する）アミノ酸、好ましくはＥ、Ａ、又はＫ、より好ましくはＫ又はＡであり得る。

【0083】

換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４０７の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。

【0084】

例えば、ＥＤＩＩＩは、ＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３株（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＫＪ７７６７９１）のＺＩＫＶ Ｅタンパク質のアミノ酸３０９からアミノ酸４０３に亘る。したがって、抗体又はその抗原結合断片は、最も好ましくは、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合し、ＥＤＩＩＩは以下のアミノ酸配列（配列番号４０２）を有する。

【0085】

換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号４０２の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合することが好ましい。

【0086】

驚くべきことに、本発明者らは、ジカウイルスエンベロープタンパク質ドメインＩ／ＩＩ（ＥＤＩ／ＩＩ）に結合する抗体と比較して、ジカウイルスエンベロープタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合する抗体は、（ｉ）ＺＩＫＶの中和の増大及び（ｉｉ）ＤＥＮＶとの交差反応性の低下（特にＤＥＮＶとの交差反応性が本質的にない）を示すことを見出した。

【0087】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＥＤＩＩＩのラテラルリッジ（ＬＲ）の１以上のアミノ酸残基及び／又はＥＤＩ－ＥＤＩＩＩヒンジ領域の１以上のアミノ酸残基を含むジカウイルスエンベロープタンパク質のエピトープに結合する。ＥＤＩＩＩラテラルリッジ及びＥＤＩ－ＥＤＩＩＩヒンジ領域は当業者に知られており、例えば、次の文献に記載されている：Ｚｈａｏ， Ｈ．， Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ， Ｅ．， Ｄｏｗｄ， Ｋ．Ａ．， Ｓｐｅｅｒ， Ｓ．Ｄ．， Ｐｌａｔｔ， Ｄ．Ｊ．， Ｇｏｒｍａｎ， Ｍ．Ｊ．， Ｇｏｖｅｒｏ， Ｊ．， Ｎｅｌｓｏｎ， Ｃ．Ａ．， Ｐｉｅｒｓｏｎ， Ｔ．Ｃ．， Ｄｉａｍｏｎｄ， Ｍ．Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２０１６）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ． Ｃｅｌｌ １６６（４）：１０１６－２７ ａｎｄ ｉｎ Ｋｏｓｔｙｕｃｈｅｎｋｏ ＶＡ， Ｌｉｍ ＥＸ， Ｚｈａｎｇ Ｓ， Ｆｉｂｒｉａｎｓａｈ Ｇ， Ｎｇ ＴＳ， Ｏｏｉ ＪＳ， Ｓｈｉ Ｊ， Ｌｏｋ ＳＭ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅｒｍａｌｌｙ ｓｔａｂｌｅ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ． Ｎａｔｕｒｅ． ２０１６ Ｍａｙ １９；５３３（７６０３）：４２５－８。いかなる理論にも拘束されるものではないが、（ｉ）ＬＲへの結合が、ウイルスの融合遷移状態を捕捉することにより融合を阻害することができ、（ｉｉ）ＥＤＩ－ＥＤＩＩＩヒンジ及びＥＤＩＩＩへの結合が、ＥＤＩＩＩの動きを防ぎ、三量体の融合後構造を形成し、それによって膜融合を停止させると考えられる。

【0088】

したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶの付着後段階を阻害する（ことができる）ことが好ましい。「付着後」とは、典型的には、（ＺＩＫＶが標的とする細胞の）細胞膜にＺＩＫＶが付着した後のＺＩＫＶ感染の任意の段階を意味する。例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、膜融合を防止する（ことができる）。更に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＺＩＫＶ（粒子）の凝集を引き起こす（ことができる）ことも好ましい。最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ＺＩＫＶの付着後工程を阻害し、（ｉｉ）ＺＩＫＶ（粒子）の凝集を引き起こす（ことができる）。

【0089】

抗体又はその抗原結合断片が、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープ（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ｅｐｉｔｏｐｅ）に結合することもまた好ましい。かなりの中和活性にもかかわらず、そのような抗体は、典型的には、標準的な（前記のような）ＥＬＩＳＡ、即ち、インビトロで試験した場合、特に、精製された形態（即ち、ビリオン、ウイルス様粒子などの「外部／不含」ＺＩＫＶ Ｅタンパク質）において組換えＺＩＫＶ Ｅタンパク質又はＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩとの検出可能な結合を示さない。「検出可能な結合がない」とは、典型的には、標準的なＥＬＩＳＡにおいてＥＣ５０が１００００ｎｇ／ｍｌまで検出されなかったことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡで検出可能なＥＣ５０が１００００ｎｇ／ｍｌを超える場合、それは「検出可能な結合がない」と称される。

【0090】

したがって、このような抗体は、本明細書では「中和非Ｅ結合」（ＮＮＢ）抗体とも称される。ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示される四次エピトープは、典型的には、構造的エピトープである。例えば、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示された四次エピトープは、二量体を構成する２つのエンベロープタンパク質単量体の界面に形成され得るか（「エンベロープ二量体エピトープ」；ＥＤＥ）、又は隣接する二量体間に亘って形成され得る「ヘリンボーンエピトープ」）。

【0091】

一般に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、重鎖に（少なくとも）３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）及び軽鎖に（少なくとも）３個のＣＤＲを含む。一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在する超可変性領域である。典型的には、抗体の重鎖及び接続された軽鎖のＣＤＲは共に抗原受容体を形成する。通常、３個のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、可変ドメインに非連続的に配置される。抗原受容体は、典型的には、（２本の異なるポリペプチド鎖、即ち、重鎖及び軽鎖における）２つの可変ドメインで構成されるので、各抗原受容体につき６個のＣＤＲ（重鎖：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３；軽鎖：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）が存在する。単一の抗体分子は、通常、２個の抗原受容体を有するので、１２個のＣＤＲを含有する。重鎖及び／又は軽鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によって分離され得、フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲよりも「可変性」の低い可変ドメインにおける領域である。例えば、鎖（又はそれぞれの各鎖）は、３個のＣＤＲによって分離されている４個のフレームワーク領域で構成され得る。

【0092】

重鎖に３個の異なるＣＤＲ及び軽鎖に３個の異なるＣＤＲを含む本発明の例示的な抗体の重鎖及び軽鎖の配列を決定した。ＣＤＲアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ付番システムに従って定義される（ＩＭＧＴ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３７，Ｄ１００６－Ｄ１０１２を参照）。

【0093】

表１は、本発明に係る例示的な抗体の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）及び重鎖可変領域（「ＶＨ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。

【表1-1】

【表1-2】

【0094】

以下の表２は、本発明に係る例示的な抗体の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）及び軽鎖可変領域（「ＶＬ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。

【表2】

【0095】

したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、表１及び／又は表２に示すＣＤＲ配列、ＶＨ配列、及び／又はＶＬ配列のうちの少なくとも１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことが好ましい。

【0096】

本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、７５、３９、２１、５７、２３９、２４３、２４７、２５１、２５５、２５９、２６３、２６７、２７１、２７５、２７９、２８３、２８７、２９１、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１、３１５、３１９、３２３、３２７、３３１、３３５、３３９、３４３、３４７、３５１、３５５、３５９、３６３、３６７、３７１、３７５、３７９、３８３、３８７、３９１、３９５、及び３９９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなる。

【0097】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、２１、３９、５７、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３、２１、３９、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３又は配列番号７５で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号２１又は配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。

【0098】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、５５、７３、２３７、２４１、２４５、２４９、２５３、２５７、２６１、２６５、２６９、２７３、２７７、２８１、２８５、２８９、２９３、２９７、３０１、３０５、３０９、３１３、３１７、３２１、３２５、３２９、３３３、３３７、３４１、３４５、３４９、３５３、３５７、３６１、３６５、３６９、３７３、３７７、３８１、３８５、３８９、３９３、及び３９７のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、５６、７４、２３８、２４２、２４６、２５０、２５４、２５８、２６２、２６６、２７０、２７４、２７８、２８２、２８６、２９０、２９４、２９８、３０２、３０６、３１０、３１４、３１８、３２２、３２６、３３０、３３４、３３８、３４２、３４６、３５０、３５４、３５８、３６２、３６６、３７０、３７４、３７８、３８２、３８６、３９０、３９４、及び３９８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、５７、７５、２３９、２４３、２４７、２５１、２５５、２５９、２６３、２６７、２７１、２７５、２７９、２８３、２８７、２９１、２９５、２９９、３０３、３０７、３１１、３１５、３１９、３２３、３２７、３３１、３３５、３３９、３４３、３４７、３５１、３５５、３５９、３６３、３６７、３７１、３７５、３７９、３８３、３８７、３９１、３９５、及び３９９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0099】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、５５、及び７３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、５６、及び７４のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、５７、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0100】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１、１９、３７、及び７３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２、２０、３８、及び７４のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３、２１、３９、及び７５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0101】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１又は配列番号７３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２又は配列番号７４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３又は配列番号７５で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0102】

また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１９又は配列番号３７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号２０又は配列番号３８で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号２１又は配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0103】

特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＨ２は、配列番号２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0104】

また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４、２２、４０、５８、及び７６のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、２３、２４、４１、４２、５９、６０、７７、及び７８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３アミノは、配列番号７、２５、４３、６１、及び７９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0105】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４、２２、４０、及び７６のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、２３、２４、４１、４２、７７、及び７８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号７、２５、４３、及び７９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0106】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４又は配列番号７６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５、６、７７、及び７８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号７又は配列番号７９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0107】

また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号２２又は配列番号４０で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号２３、２４、４１、及び４２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号２５又は配列番号４３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0108】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号５又は６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３アミノは、配列番号７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0109】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１～３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１９～２１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号３７～３９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号５５～５７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号７３～７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号２３７～２３９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号２４１～２４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号２４５～２４７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号２４９～２５１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘ）配列番号２５３～２５５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉ）配列番号２５７～２５９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉ）配列番号２６１～２６３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉｉ）配列番号２６５～２６７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｖ）配列番号２６９～２７１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖ）配列番号２７３～２７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉ）配列番号２７７～２７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉ）配列番号２８１～２８３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉｉ）配列番号２８５～２８７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｘ）配列番号２８９～２９１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘ）配列番号２９３～２９５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉ）配列番号２９７～２９９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉ）配列番号３０１～３０３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉｉ）配列番号３０５～３０７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｖ）配列番号３０９～３１１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖ）配列番号３１３～３１５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉ）配列番号３１７～３１９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉ）配列番号３２１～３２３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３２５～３２７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｘ）配列番号３２９～３３１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘ）配列番号３３３～３３５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉ）配列番号３３７～３３９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉ）配列番号３４１～３４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号３４５～３４７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｖ）配列番号３４９～３５１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配
列変異体；（ｘｘｘｖ）配列番号３５３～３５５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉ）配列番号３５７～３５９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉ）配列番号３６１～３６３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｖｉｉｉ）配列番号３６５～３６７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｘｉｘ）配列番号３６９～３７１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌ）配列番号３７３～３７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉ）配列番号３７７～３７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉ）配列番号３８１～３８３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｉｉ）配列番号３８５～３８７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｉｖ）配列番号３８９～３９１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｌｖ）配列番号３９３～３９５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘｌｖｉ）配列番号３９７～３９９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0110】

したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号１～５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１～４及び６～７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１９～２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１９～２２及び２４～２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号３７～４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号３７～４０及び４２～４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号５５～５９及び６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号５５～５８及び６０～６１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号７３～７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘ）配列番号７３～７６及び７８～７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0111】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１～５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１～４及び６～７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１９～２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１９～２２及び２４～２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号３７～４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号３７～４０及び４２～４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号７３～７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖｉｉｉ）配列番号７３～７６及び７８～７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0112】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１～５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１～４及び６～７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号７３～７７及び７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号７３～７６及び７８～７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0113】

また、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１９～２３及び２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１９～２２及び２４～２５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号３７～４１及び４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号３７～４０及び４２～４３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0114】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片はまた、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号１～５及び７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１～４及び６～７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0115】

更に、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び任意に軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことが好ましく、重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号８、２６、４４、６２、８０、２４０、２４４、２４８、２５２、２５６、２６０、２６４、２６８、２７２、２７６、２８０、２８４、２８８、２９２、２９６、３００、３０４、３０８、３１２、３１６、３２０、３２４、３２８、３３２、３３６、３４０、３４４、３４８、３５２、３５６、３６０、３６４、３６８、３７２、３７６、３８０、３８４、３８８、３９２、３９６、及び４００のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなる。

【0116】

更に、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号６２で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号６３で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0117】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｖ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0118】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：（ｉ）配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号８０で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号８１で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0119】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号２６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号２７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号４４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号４５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0120】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含む：配列番号８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0121】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ１９０、ｇＺＫＡ６４、ｇＺＫＡ２３０、ｇＺＫＡ１８５、又はｇＺＫＡ７８であり、好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ１９０、ｇＺＫＡ６４、ｇＺＫＡ２３０、又はｇＺＫＡ１８５であり、より好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ１９０又はｇＺＫＡ６４であり、最も好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ１９０である。

【0122】

本発明者らは、本明細書においてＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ１８５、及びＺＫＡ７８と称するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を単離した（表１及び２の実施例１参照）。これらの抗体、これらの抗体、特にＶＨ及びＶＬ遺伝子に基づいて、本明細書で使用されるとき、用語「ｇＺＫＡ１９０」、「ｇＺＫＡ６４」、「ｇＺＫＡ２３０」、「ｇＺＫＡ１８５」、及び「ｇＺＫＡ７８」は、それぞれの「一般的な」抗体、又はその抗原結合断片を意味する。

【0123】

即ち、「ｇＺＫＡ１９０」は、配列番号１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号５又は６のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号７のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号８のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号９のアミノ酸配列を有する。

【0124】

「ｇＺＫＡ６４」は、配列番号７３のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号７４のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号７５のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号７６のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号７７又は７８のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号７９のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号８０のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号８１のアミノ酸配列を有する。

【0125】

「ｇＺＫＡ２３０」は、配列番号３７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号３９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号４０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４１又は４２のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号４３のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号４４のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号４５のアミノ酸配列を有する。

【0126】

「ｇＺＫＡ１８５」は、配列番号１９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号２１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号２２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２３又は２４のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号２５のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号２６のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号２７のアミノ酸配列を有する。

【0127】

「ｇＺＫＡ７８」は、配列番号５５のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号５６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号５７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号５８のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号５９又は６０のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号６１のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号６２のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号６３のアミノ酸配列を有する。

【0128】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、医薬としての使用のためのものである。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、医薬の調製に使用され得る。より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療に用いるためのものである。換言すれば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療における医薬の調製又は使用において使用され得る。この側面については、以下、より詳細に説明する。

【0129】

核酸分子
別の態様では、本発明は、また、上記本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしているポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。核酸分子及び／又はポリヌクレオチドの例としては、例えば、組み換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ分子（例えば、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡ）又はＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ）が挙げられる。本発明の抗体の軽鎖、重鎖、及びＣＤＲの一部又は全てをコードしている核酸配列が好ましい。したがって、好ましくは、本発明の例示的な抗体の軽鎖及び重鎖、特にＶＨ及びＶＬ配列並びにＣＤＲの一部又は全てをコードしている核酸配列が本明細書に提供される。表１及び２は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ及びＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列の配列番号を提供する。

【0130】

以下の表３は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ並びにＶＨ及びＶＬをコードしている例示的な核酸配列の配列番号を提供する。遺伝子コードの冗長性により、本発明は、これら核酸配列の配列変異体、特に、同じアミノ酸配列をコードしているかかる配列変異体も含む。

【0131】

核酸分子は、核酸成分を含む、好ましくはからなる分子である。核酸分子という用語は、好ましくは、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を指す。特に、用語「ポリヌクレオチド」と同義で用いられる。好ましくは、核酸分子は、糖／リン酸骨格のホスホジエステル結合によって互いに共有結合しているヌクレオチドモノマーを含むか又はからなるポリマーである。また、用語「核酸分子」は、修飾核酸分子、例えば、塩基修飾、糖修飾、又は骨格修飾されたＤＮＡ又はＲＮＡ分子も包含する。

【0132】

表３は、本発明に係る５つの例示的な抗体（「ＺＫＡ１９０」、「ＺＫＡ６４」、「ＺＫＡ２３０」、「ＺＫＡ１８５」、及び「ＺＫＡ７８」）のＣＤＲ並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の例示的な核酸配列を示す。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表3-5】

【0133】

好ましくは、本発明に係る核酸分子の配列は、配列番号１０～１８、２８～３６、４６～５４、６４～７２、及び８２～９０のいずれか１つに係る核酸配列又はその機能性配列変異体を含むか又はからなる。

【0134】

また、本発明に係る核酸配列は、本発明に係る（例示的な）抗体で使用されるＣＤＲ、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列をコードしている核酸配列、例えば、表３に示す配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むことも好ましい。

【0135】

一般に、核酸分子を操作して、特定の核酸配列を挿入、欠失、又は変更することができる。かかる操作による変化としては、制限酵素部位を導入する、コドン使用頻度を変更する、転写及び／又は翻訳調節配列を付加若しくは最適化する等の変化が挙げられるが、これらに限定されない。また、核酸を変化させて、コードされているアミノ酸を変更することも可能である。例えば、１以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０等）のアミノ酸置換、欠失、又は挿入を抗体のアミノ酸配列に導入することが有用であり得る。かかる点突然変異は、エフェクタ機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性等を変化させることができたり、共有結合基（例えば、標識）を結合させるためのアミノ酸を導入することができたり、（例えば、精製目的のための）タグを導入することができたりする。突然変異は、特異的部位に導入することもでき、ランダムに導入し、続いてセレクション（例えば、分子進化）することもできる。例えば、本発明の（例示的な）抗体のＣＤＲ領域、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列のいずれかをコードしている１以上の核酸をランダムに又は定向的に突然変異させて、コードされているアミノ酸に様々な性質を導入することができる。かかる変化は、初期変化が保持され、他のヌクレオチド位置に新たな変化が導入される反復プロセスの結果であり得る。更に、独立した工程で得られた変化を組み合わせてもよい。コードされているアミノ酸に導入される様々な性質としては、親和性の強化を挙げることができるが、これに限定されない。

【0136】

ベクター
本発明に係る核酸分子を含むベクター、例えば、発現ベクターも、本発明の範囲内に更に含まれる。好ましくは、ベクターは、上記核酸分子を含む。

【0137】

用語「ベクター」とは、核酸分子、好ましくは、組み換え核酸分子、即ち、自然界には存在しない核酸分子を指す。本発明におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込むか又は保有させるのに好適である。かかるベクターは、ストレージベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクター等であってよい。ストレージベクターは、核酸分子を便利に保管することができるベクターである。したがって、ベクターは、例えば、本発明にかかる所望の抗体又はその抗原断片に対応する配列を含み得る。発現ベクターは、例えばＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質等の発現産物を産生させるために使用することができる。例えば、発現ベクターは、プロモーター配列等のベクターの一続きの配列の転写に必要な配列を含んでいてよい。クローニングベクターは、典型的には、核酸配列をベクターに組み込むために用いることができるクローニングサイトを含むベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであってよい。トランスファーベクターは、細胞又は生物に核酸分子を移入するのに好適なベクター、例えば、ウイルスベクターであってよい。本発明におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクターであってもＤＮＡベクターであってもよい。好ましくは、ベクターは、ＤＮＡ分子である。例えば、本願におけるベクターは、クローニングサイト、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性因子）、及びベクターの増殖に好適な配列（例えば、複製起点）を含む。好ましくは、本願におけるベクターは、プラスミドベクターである。

【0138】

細胞
更なる態様では、本発明は、本発明にかかる抗体又はその抗原結合断片を発現する及び／又は本発明にかかるベクターを含む細胞も提供する。

【0139】

かかる細胞の例としては、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞、又は植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、細胞は、哺乳類細胞、より好ましくは、哺乳類細胞株である。好ましい例としては、ヒト細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、又はハイブリドーマ細胞が挙げられる。

【0140】

特に、前記細胞に、本発明にかかるベクター、好ましくは発現ベクターをトランスフェクトしてよい。用語「トランスフェクション」とは、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の分子等の核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞に導入することを指す。本発明において、用語「トランスフェクション」は、核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞、例えば哺乳類細胞に導入するための当業者に公知の任意の方法を含む。かかる方法は、例えば、エレクトロポレーション、（例えば、カチオン性脂質及び／又はリポソームに基づく）リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、又はカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン又はポリエチレンイミン等）に基づくトランスフェクションを含む。好ましくは、導入は、非ウイルス的である。

【0141】

更に、例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を発現させるために、本発明の細胞に本発明に係るベクターを安定的に又は一過的にトランスフェクトしてよい。好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしている本発明に係るベクターを細胞に安定的にトランスフェクトする。或いは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードしている本発明に係るベクターを細胞に一過的にトランスフェクトすることも好ましい。

【0142】

抗体の任意の追加の特徴
本発明の抗体は、例えば、治療部位に送達するために薬物に結合させてもよく、対象となる細胞を含む部位のイメージングを容易にするために検出可能な標識に結合させてもよい。薬物及び検出可能な標識に抗体を結合させる方法は、検出可能な標識を使用するイメージング方法等、当技術分野において周知である。標識された抗体は、広範な標識を使用する広範なアッセイで使用することができる。本発明の抗体とＨＢｓＡｇ、対象となるエピトープとの間の抗体－抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質を抗体に結合させることによって容易になり得る。好適な検出手段としては、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光物質、化学発光物質、色素原、酵素物質又は補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素等の標識の使用が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、又はフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例は、ルミノールであり；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ；好適な放射活性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、又は３Ｈが挙げられる。かかる標識された試薬は、例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイ等の様々な周知のアッセイで使用することができる。したがって、本発明に係る標識された抗体は、例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号、及び同第４，２３３，４０２号に記載の通り、かかるアッセイにおいて使用することができる。

【0143】

本発明に係る抗体は、細胞毒、療法剤、又は放射性金属イオン若しくは放射性同位体等の治療部分にコンジュゲートさせることができる。放射性同位体の例としては、Ｉ－１３１、Ｉ－１２３、Ｉ－１２５、Ｙ－９０、Ｒｅ－１８８、Ｒｅ－１８６、Ａｔ－２１１、Ｃｕ－６７、Ｂｉ－２１２、Ｂｉ－２１３、Ｐｄ－１０９、Ｔｃ－９９、Ｉｎ－１１１等が挙げられるが、これらに限定されない。かかる抗体コンジュゲートは、所与の生物学的応答を調節するために用いることができ、薬物部分は、古典的な化学療法剤に限定されると解釈すべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質又はポリペプチドであってよい。かかるタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、又はジフテリア毒素等の毒素を挙げることができる。

【0144】

かかる治療部分を抗体にコンジュゲートさせる技術は、周知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄ等編（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、ｐｐ．２４３－２５６におけるＡｒｎｏｎ等（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ等編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、ｐｐ．６２３－６５３におけるＨｅｌｌｓｔｒｏｍ等編（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａ等編、ｐｐ．４７５－５０６（Ｅｄｉｔｒｉｃｅ Ｋｕｒｔｉｓ，Ｍｉｌａｎｏ，Ｉｔａｌｙ，１９８５）におけるＴｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎ等編（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５）、ｐｐ．３０３－３１６における「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－１５８を参照。

【0145】

或いは、抗体又はその抗原結合断片は、二次抗体又はその抗体断片にコンジュゲートさせて、米国特許第４，６７６，９８０号に記載の通り抗体ヘテロコンジュゲートを形成することができる。更に、例えば米国特許第４，８３１，１７５号に記載の通り、標識と本発明の抗体との間にリンカーを使用してもよい。抗体又はその抗原結合断片は、放射性ヨウ素、インジウム、イットリウム、又は例えば米国特許第５，５９５，７２１号に記載の通り、当技術分野において公知の他の放射性粒子で直接標識し得る。治療は、例えば国際公開第００／５２０３１号、同第００／５２４７３号に記載の通り、同時に又は後で投与されるコンジュゲートした抗体及びコンジュゲートしていない抗体による治療との組合せからなっていてよい。

【0146】

また、本発明の抗体は、固体担持体に結合させてもよい。更に、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、その循環半減期を延長するために、共有結合によってポリマーにコンジュゲートさせることによって化学的に修飾してよい。ポリマー、及びそれをペプチドに結合させる方法の例は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号、及び同第４，６０９，５４６号に示されている。幾つかの実施形態では、ポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択され得る。ＰＥＧは、室温で水に可溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎＯ－Ｒ（式中、Ｒは、水素、又はアルキル基若しくはアルカノール基等の保護基であってよい）を有する。好ましくは、保護基は、１個～８個の炭素を有し得る。例えば、保護基は、メチルである。記号ｎは、正の整数である。一実施形態では、ｎは、１～１，０００である。別の実施形態では、ｎは、２～５００である。好ましくは、ＰＥＧは、１，０００～４０，０００の平均分子量を有し、より好ましくは、ＰＥＧは、２，０００～２０，０００の分子量を有し、更により好ましくは、ＰＥＧは、３，０００～１２，０００の分子量を有する。更に、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し得、例えば、ＰＥＧは、末端ヒドロキシ基を有し得る。例えば、それは、活性化されて阻害剤の遊離アミノ基と反応する末端ヒドロキシ基である。しかし、本発明の共有結合によってコンジュゲートされたＰＥＧ／抗体を得るために、反応性基の種類及び量を変更してもよい。

【0147】

水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明において有用である。例えば、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）等が挙げられる。一実施形態では、ＰＯＧが用いられる。任意の理論に縛られるものではないが、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、動物及びヒトにおいて、モノ－、ジ－、トリグリセリドに天然に存在するのと同じ骨格であるので、この分岐は、身体において必ずしも異物として認識される訳ではない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の分子量を有し得る。循環半減期を延長するために用いることができる別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は、当業者に公知である。他の薬物送達系は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（１９８０）及びＰｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）に記載されている。

【0148】

本発明の抗体は、精製形態で提供され得る。典型的には、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０（重量）％未満、通常は６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される。

【0149】

本発明の抗体は、非ヒト（又は異種）宿主、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。特に、抗体は、非ヒト宿主において免疫原性であるが、ヒト宿主においては免疫原性でないイディオトープを有し得る。特に、ヒトで使用するための本発明の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳類等の宿主から容易に単離することができず、且つ一般にヒト化によってもゼノマウスからも得ることができないものが挙げられる。

【0150】

抗体の産生
本発明に係る抗体は、当技術分野において公知の任意の方法によって作製することができる。例えば、ハイブリドーマ技術を使用してモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法論は、周知である（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ，．１９７５；Ｋｏｚｂａｒ ｅｔ ａｌ．１９８３）。一実施形態では、国際公開第２００４／０７６６７７号に記載されている別のＥＢＶ不死化法を使用する。

【0151】

好ましい方法は、国際公開第２００４／０７６６７７号に記載されている。この方法では、本発明の抗体を産生するＢ細胞を、ＥＢＶ及びポリクローナルＢ細胞活性化剤で形質転換する。任意で、効率を更に高めるために、細胞の成長及び分化の更なる刺激剤を形質転換工程中に添加してもよい。これら刺激剤は、ＩＬ－２及びＩＬ－１５等のサイトカインであってよい。一態様では、ＩＬ－２を不死化工程中に添加して、不死化効率を更に向上させるが、その使用は必須ではない。次いで、これら方法を用いて産生された不死化Ｂ細胞を、当技術分野において公知の方法及びそれから単離された抗体を用いて培養してよい。

【0152】

別の好ましい方法は、国際公開第２０１０／０４６７７５号に記載されている。この方法では、プラズマ細胞を限定数又は単一プラズマ細胞としてマイクロウェル培養皿で培養する。プラズマ細胞培養物から抗体を単離することができる。更に、プラズマ細胞培養物からＲＮＡを抽出することができ、当技術分野において公知の方法を使用してＰＣＲを実施することができる。抗体のＶＨ及びＶＬ領域をＲＴ－ＰＣＲ（逆転写酵素ＰＣＲ）によって増幅させ、配列を決定し、発現ベクターにクローニングし、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の宿主細胞にトランスフェクトすることができる。発現ベクターへの核酸のクローニング、宿主細胞のトランスフェクション、トランスフェクトされた宿主細胞の培養、及び産生された抗体の単離は、当業者に公知の任意の方法を使用して行うことができる。

【0153】

抗体は、必要に応じて、濾過、遠心分離、及び様々なクロマトグラフィー法、例えば、ＨＰＬＣ又はアフィニティクロマトグラフィーを用いて更に精製することができる。医薬品グレードの抗体を産生するための技術を含む抗体、例えば、モノクローナル抗体を精製する技術は、当技術分野において周知である。

【0154】

本発明の抗体の断片は、酵素、例えばペプシン又はパパインによる切断を含む方法によって、及び／又は化学還元によりジスルフィド結合を切断することによって前記抗体から得ることができる。或いは、抗体の断片は、重鎖又は軽鎖の配列の一部のクローニング及び発現によって得ることができる。抗体「断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片を含む。また、本発明は、本発明の抗体の重鎖及び軽鎖に由来する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を包含する。例えば、本発明は、本発明の抗体由来のＣＤＲを含むｓｃＦｖを含む。また、重鎖又は軽鎖の単量体及び二量体、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体に加えて、単鎖抗体、例えば、重鎖及び軽鎖の可変ドメインがペプチドリンカーによって結合されている単鎖Ｆｖも含まれる。

【0155】

本発明の抗体断片は、一価又は多価相互作用を付与し得、上記様々な構造に含有され得る。例えば、ｓｃＦｖ分子を合成して、三価「トリアボディ」又は四価「テトラボディ」を作製することができる。ｓｃＦｖ分子は、Ｆｃ領域のドメインを含んでいてよく、その結果、二価ミニボディが生じる。更に、本発明の配列は、本発明の配列が本発明のエピトープを標的とし、分子の他の領域が他の標的に結合する多重特異的分子の成分であってよい。例示的な分子としては、二重特異的Ｆａｂ２、三重特異的Ｆａｂ３、二重特異的ｓｃＦｖ、及びダイアボディが挙げられるが、これらに限定されない（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１１２６－１１３６）。

【0156】

分子生物学の標準的な技術を用いて、本発明の抗体又は抗原断片をコードしているＤＮＡ配列を調製することができる。オリゴヌクレオチド合成技術を用いて所望のＤＮＡ配列を完全に又は部分的に合成することができる。部位特異的突然変異誘発及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を適宜使用してよい。

【0157】

任意の好適な宿主細胞／ベクター系を、本発明の抗体分子又はその断片をコードしているＤＮＡ配列を発現させるために用いることができる。一部では、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片等の抗体断片、特にＦｖ断片及び単鎖抗体断片、例えば単鎖Ｆｖを発現させるために細菌、例えば大腸菌及び他の微生物系を使用してよい。完全抗体分子を含むより大きな抗体分子を産生させるために、真核生物、例えば哺乳類の宿主細胞発現系を使用してよい。好適な哺乳類宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＮＳ０、骨髄腫、又はハイブリドーマ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0158】

また、本発明は、本発明に係る抗体分子を産生させるプロセスであって、本発明の核酸をコードしているベクターを含む宿主細胞を、本発明の抗体分子をコードしているＤＮＡからタンパク質を発現させるのに好適な条件下で培養することと、前記抗体分子を単離することとを含むプロセスを提供する。

【0159】

抗体分子は、重鎖又は軽鎖ポリペプチドのみを含んでいてもよく、この場合、宿主細胞にトランスフェクトするために重鎖又は軽鎖ポリペプチドをコードしている配列のみを使用する必要がある。重鎖及び軽鎖の両方を含む産物を産生させる場合、第１のベクターが軽鎖ポリペプチドをコードしており、第２のベクターが重鎖ポリペプチドをコードしている２つのベクターを細胞株にトランスフェクトしてよい。或いは、軽鎖及び重鎖のポリペプチドをコードしている配列を含む単一のベクターを使用してもよい。或いは、本発明に係る抗体は、（ｉ）例えば、本発明に係るベクターを使用することによって、宿主細胞で本発明に係る核酸配列を発現させ、（ｉｉ）発現した抗体産物を単離することによって産生され得る。更に、前記方法は、（ｉｉｉ）単離抗体を精製することを含み得る。形質転換されたＢ細胞及び培養したプラズマ細胞を、所望の特異性又は機能の抗体を産生するものについてスクリーニングしてよい。

【0160】

スクリーニング工程は、任意のイムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡによって、組織若しくは細胞（トランスフェクトされた細胞を含む）を染色することによって、中和アッセイによって、又は所望の特異性若しくは機能を同定するための当技術分野において公知の多数の他の方法のうちの１つによって実施してよい。アッセイでは、１以上の抗原の単純な認識に基づいて選択することもでき、更に所望の機能に基づいて選択して、例えば、単なる抗原結合抗体ではなく中和抗体を選択したり、標的細胞の特徴（例えば、そのシグナル伝達カスケード、形状、成長速度、他の細胞に影響を与える能力、他の細胞又は他の試薬又は条件の変化による影響に対する応答、分化状態等）を変化させることができる抗体を選択したりすることもできる。

【0161】

次いで、陽性形質転換Ｂ細胞培養物から個々の形質転換Ｂ細胞クローンが産生され得る。陽性細胞の混合物から個々のクローンを分離するためのクローニング工程は、限界希釈、マイクロマニピュレーション、セルソーティングによる単一細胞沈着、又は当技術分野において公知の別の方法を使用して実施することができる。

【0162】

当技術分野において公知の方法を用いて、培養プラズマ細胞から核酸を単離し、クローニングし、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の公知の宿主細胞で発現させることができる。

【0163】

本発明の不死化Ｂ細胞クローン又はトランスフェクトされた宿主細胞は、例えば、モノクローナル抗体源として、対象となるモノクローナル抗体をコードしている核酸（ＤＮＡ又はｍＲＮＡ）源として、研究のため等、様々な方法で使用することができる。

【0164】

また、本発明は、本発明に係る抗体を産生する不死化記憶Ｂ細胞又はトランスフェクトされた宿主細胞を含む組成物を提供する。

【0165】

本発明の不死化Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞は、後で組み換え発現させるために抗体遺伝子をクローニングするための核酸源として使用することもできる。例えば、安定性、再現性、培養の容易さ等の理由から、Ｂ細胞又はハイブリドーマから発現させるよりも、組み換え源から発現させる方が医薬目的では一般的である。

【0166】

したがって、本発明は、また、組み換え細胞を調製する方法であって、（ｉ）対象となる抗体をコードしているＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から１以上の核酸（例えば、重鎖及び／又は軽鎖ｍＲＮＡ）を得る工程と、（ｉｉ）前記核酸を発現ベクターに挿入する工程と、（ｉｉｉ）宿主細胞において対象となる抗体を発現させるために、前記ベクターを宿主細胞にトランスフェクトする工程とを含む方法を提供する。

【0167】

同様に、本発明は、組み換え細胞を調製する方法であって、（ｉ）対象となる抗体をコードしているＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から核酸の配列を決定する工程と、（ｉｉ）工程（ｉ）で得られた配列情報を使用して、宿主細胞において対象となる抗体を発現させるために、前記宿主細胞に挿入するための核酸を調製する工程とを含む方法を提供する。工程（ｉ）と（ｉｉ）との間に、制限酵素部位を導入する、コドンの使用頻度を変更する、及び／又は転写及び／又は翻訳調節配列を最適化するために前記核酸を操作してもよいが、必須ではない。

【0168】

更に、本発明は、また、トランスフェクトされた宿主細胞を調製する方法であって、対象となる抗体をコードしている１以上の核酸を宿主細胞にトランスフェクトする工程を含み、前記核酸が、本発明の不死化Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞に由来する核酸である方法も提供する。したがって、まず核酸を調製し、次いで、それを使用して宿主細胞をトランスフェクトする手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。

【0169】

次いで、本発明のこれら組み換え細胞を発現及び培養目的のために使用することができる。前記組み換え細胞は、大規模に医薬品を生産するために抗体を発現させるのに特に有用である。また、前記組み換え細胞は、医薬組成物の活性成分として用いることもできる。静置培養、ローラーボトル培養、腹水液、中空繊維型バイオリアクタカートリッジ、モジュラーミニ発酵槽、撹拌槽、微粒子担体培養、セラミックコア灌流等が挙げられるがこれらに限定されない任意の好適な培養技術を使用することができる。

【0170】

Ｂ細胞又はプラズマ細胞から免疫グロブリン遺伝子を得、配列を決定する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、２０００年の第４章）。

【0171】

トランスフェクトされた宿主細胞は、酵母及び動物細胞を含む真核細胞、特に、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ヒト細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６又はＨＫＢ－１１細胞）、骨髄腫細胞、又はヒト肝細胞）に加えて、植物細胞であってよく、哺乳類細胞が好ましい。好ましい発現宿主は、特にそれ自体ヒトにおいて免疫原性ではない炭水化物構造で本発明の抗体をグリコシル価することができる。一実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、無血清培地において増殖することができる。更なる実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、動物由来の生成物が存在しなくても培養物中で増殖することができる。また、トランスフェクトされた宿主細胞を培養して、細胞株を得ることもできる。

【0172】

また、本発明は、対象となる抗体をコードしている１以上の核酸分子（例えば、重鎖及び軽鎖遺伝子）を調製する方法であって、（ｉ）不死化Ｂ細胞クローンを調製するか又は本発明に係るプラズマ細胞を培養する工程と、（ｉｉ）対象となる抗体をコードしている核酸を、Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から得る工程とを含む方法を提供する。更に、本発明は、対象となる抗体をコードしている核酸配列を得る方法であって、（ｉ）不死化Ｂ細胞クローンを調製するか又は本発明に係るプラズマ細胞を培養する工程と、（ｉｉ）対象となる抗体をコードしているＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から得られた核酸の配列を決定する工程とを含む方法を提供する。

【0173】

本発明は、更に、対象となる抗体をコードしている核酸分子を調製する方法であって、本発明の形質転換Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から得られた核酸を得る工程を含む方法を提供する。したがって、先ずＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞を得、次いで、前記Ｂ細胞クローン又は前記培養プラズマ細胞から核酸を得るための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。

【0174】

また、本発明は、本発明に係る（例えば、製薬に使用するための）抗体を調製する方法であって、（ｉ）対象となる抗体を発現する選択されたＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から１以上の核酸（例えば、重鎖及び軽鎖の遺伝子）を得る及び／又は配列を決定する工程と；（ｉｉ）前記核酸配列を発現ベクターに挿入するか又は前記核酸配列を使用して発現ベクターを調製する工程と；（ｉｉｉ）対象となる抗体を発現することができる宿主細胞にトランスフェクトする工程と；（ｉｖ）トランスフェクトされた宿主細胞を、前記対象となる抗体が発現する条件下で培養又は継代培養する工程と；任意で、（ｖ）前記対象となる抗体を精製する工程とを含む方法を含む。

【0175】

また、本発明は、トランスフェクトされた宿主細胞集団、例えば、安定的にトランスフェクトされた宿主細胞集団を、対象となる抗体が発現する条件下で培養又は継代培養する工程と；任意で、前記対象となる抗体を精製する工程とを含む、抗体を調製する方法であって、前記トランスフェクトされた宿主細胞集団が、（ｉ）上記の通り調製したＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞によって産生される、選択された対象となる抗体をコードしている核酸を提供し、（ｉｉ）前記核酸を発現ベクターに挿入し、（ｉｉｉ）前記対象となる抗体を発現することができる宿主細胞に前記ベクターをトランスフェクトし、（ｉｖ）挿入された核酸を含むトランスフェクトされた宿主細胞を培養又は継代培養して、前記対象となる抗体を産生させることによって調製される方法を提供する。したがって、先ず組み換え宿主細胞を調製し、次いで、それを培養して抗体を発現させるための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。

【0176】

医薬組成物
また、本発明は、
（ｉ）本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片；
（ｉｉ）本発明に係る抗体若しくは抗体断片をコードしている核酸；
（ｉｉｉ）本発明に係る核酸を含むベクター；及び／又は
（ｉｖ）本発明に係る抗体を発現するか若しくは本発明に係るベクターを含む細胞
のうちの１以上を含む医薬組成物を提供する。

【0177】

言い換えれば、本発明は、また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、及び／又は本発明に係る細胞を提供する。

【0178】

医薬組成物は、好ましくは、薬学的に許容し得る担体、希釈剤、及び／又は賦形剤を含有していてもよい。担体又は賦形剤は投与を容易にすることができるが、それ自体が、組成物を摂取する個体にとって有害な抗体の産生を誘導してはならない。また、毒性であってもならない。好適な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、及び不活性ウイルス粒子等の、大きく、ゆっくりと代謝される巨大分子であってよい。一般的に、本発明に係る医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、活性成分であっても不活性成分であってもよい。好ましくは、本発明に係る医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、ジカウイルス感染に関して活性成分ではない。

【0179】

薬学的に許容し得る塩、例えば、鉱酸塩（例えば、塩酸塩、臭化水素塩、リン酸塩、及び硫酸塩）又は有機酸の塩（例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、及び安息香酸塩）を用いてもよい。

【0180】

医薬組成物中の薬学的に許容し得る担体は、水、生理食塩水、グリセロール、及びエタノール等の液体を更に含有していてもよい。更に、湿潤剤若しくは乳化剤等の補助物質、又はｐＨ緩衝物質がかかる組成物中に存在していてもよい。かかる担体によって、被験体に服用させるために、医薬組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、及び懸濁剤として製剤化することができるようになる。

【0181】

本発明の医薬組成物は、様々な形態で調製することができる。例えば、前記組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかとして、注射液として調製してよい。注射する前に液体ビヒクルの溶液又は懸濁液にするのに好適な固体形態を調製してもよい（例えば、保存剤を含有する滅菌水で再構成するための、Ｓｙｎａｇｉｓ（商標）及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）と同様の凍結乾燥組成物）。前記組成物は、例えば軟膏剤、クリーム剤、又は粉剤として、局所投与用に調製してもよい。前記組成物は、例えば錠剤若しくはカプセル剤として、噴霧剤として、又はシロップ剤として（任意で、風味付けされる）経口投与用に調製してもよい。前記組成物は、例えば微粉末又はスプレーを用いる吸入器として、肺内投与用に調製してもよい。前記組成物は、坐剤又は膣坐剤として調製してもよい。前記組成物は、例えば点眼剤として、鼻腔内、耳内、又は眼内投与用に調製してもよい。前記組成物は、被験体に投与する直前に複合組成物が再構成されるように設計されたキット形態であってもよい。例えば、凍結乾燥した抗体を、滅菌水又は滅菌バッファと共にキット形態で提供してよい。

【0182】

前記組成物中の活性成分は、抗体分子、抗体断片、又はこれらの変異体及び誘導体であることが好ましく、特に、前記組成物中の活性成分は、本発明に係る抗体、抗体断片、又はこれらの変異体及び誘導体である。したがって、消化管において分解されやすい。したがって、前記組成物が消化管を使用する経路によって投与される場合、前記組成物は、前記抗体を分解から保護するが、一旦消化管から吸収されたら前記抗体を放出させる剤を含有していてよい。

【0183】

薬学的に許容し得る担体についての詳細な検討は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２から入手可能である。

【0184】

本発明の医薬組成物は、一般的に、５．５～８．５のｐＨを有し、幾つかの実施形態では、これは、６～８であり、他の実施形態では、約７である。ｐＨは、バッファを使用することによって維持することができる。前記組成物は、無菌及び／又はパイロジェンフリーであってよい。前記組成物は、ヒトに対して等張であってよい。一実施形態では、本発明の医薬組成物は、密封容器で提供される。

【0185】

幾つかの投与形態で存在する組成物が、本発明の範囲内であり、前記形態としては、例えば、ボーラス注射又は持続点滴等の注射又は点滴による非経口投与に好適な形態が挙げられるが、これらに限定されない。製品が注射又は注入用である場合、油性又は水性のビヒクルの懸濁液、溶液、又はエマルションの形態をとってもよく、懸濁化剤、保存剤、安定剤、及び／又は分散剤等の調合剤を含有していてもよい。或いは、抗体分子は、適切な無菌液体を用いて使用前に再構成するために乾燥形態であってもよい。ビヒクルは、典型的には、薬学的活性化合物等の化合物、特に、本発明に係る抗体を保存、輸送、及び投与するのに好適な物質であると理解される。例えば、ビヒクルは、薬学的活性化合物、特に、本発明に係る抗体を保存、輸送、及び／又は投与するのに好適な生理学的に許容し得る液体であってよい。製剤化すると、本発明の組成物を被験体に直接投与することができる。一実施形態では、前記組成物は、哺乳類、例えば、ヒト被験体への投与に適応する。

【0186】

本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮、局所、皮下、鼻腔内、経腸、舌下、膣内、又は直腸内経路が挙げられるがこれらに限定されない、任意の数の経路によって投与することができる。また、皮下噴射器を用いて、本発明の医薬組成物を投与してもよい。好ましくは、医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル剤等として経口投与用に、局所投与用に、又は例えば液体溶液又は懸濁液等の注射剤として調製することができ、前記医薬組成物は、注射剤であることが特に好ましい。注射前に液体ビヒクルの溶液又は懸濁液にするのに好適な固体形態も好ましく、例えば、医薬組成物は凍結乾燥形態である。

【0187】

静脈内、皮膚、若しくは皮下への注射、又は罹患部位への注射等の注射については、活性成分は、好ましくは、パイロジェンフリーであり且つ好適なｐＨ、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容し得る水溶液の形態である。当業者は、例えば、生食注射、リンゲル液、乳酸加リンゲル液等の等張ビヒクルを用いて好適な溶液をうまく調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤が含まれていてもよい。個体に投与されるのが本発明に係るポリペプチドであろうと、ペプチドであろうと、核酸分子であろうと、他の薬学的に有用な化合物であろうと、個体に対して効果を示すのに十分な「予防的に有効な量」又は「治療的に有効な量」（場合による）が投与されることが好ましい。実際に投与される量、並びに投与の速度及び時間推移は、処置されるものの性質及び重篤度に依存する。注射の場合、本発明に係る医薬組成物を、例えばプレフィルドシリンジで提供してよい。

【0188】

上に定義された本発明の医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤、又は液剤が挙げられるがこれらに限定されない任意の経口的に許容し得る剤形で経口投与してよい。経口使用するための錠剤の場合、一般的に使用される担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤も典型的に添加される。カプセル形態で経口投与する場合、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁剤が必要な場合、活性成分、即ち、上に定義された本発明のトランスポータ－カーゴコンジュゲート分子を乳化剤及び懸濁化剤と合わせる。必要に応じて、特定の甘味剤、着香剤、又は着色剤を添加してもよい。

【0189】

また、特に、治療の標的が、例えば皮膚又は任意の他のアクセス可能な上皮組織の疾患を含む、局所適用によって容易にアクセス可能な領域又は器官を含むとき、本発明の医薬組成物を局所的に投与してもよい。これら領域又は器官のそれぞれに好適な局所製剤が容易に調製される。局所適用の場合、本発明の医薬組成物は、１以上の担体に懸濁又は溶解している本発明の医薬組成物、特に、上に定義されたその成分を含有する好適な軟膏剤に製剤化してよい。局所投与用の担体としては、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水が挙げられるが、これらに限定されない。或いは、本発明の医薬組成物は、好適なローション又はクリームに製剤化することもできる。本発明において、好適な担体としては、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。

【0190】

投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールであり得る。特に、医薬組成物は、単回用量製品として提供することができる。好ましくは、医薬組成物中の抗体の量は、特に単回投与の製品として提供される場合、２００ｍｇを超えず、より好ましくは１００ｍｇを超えず、更により好ましくは５０ｍｇを超えない。

【0191】

例えば、本発明に係る医薬組成物は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、若しくは２１日間、又はそれ以上の期間に亘って毎日、例えば、１日間当たり１回又は数回、例えば、１日間当たり１回、２回、３回、又は４回、好ましくは、１日間当たり１回又は２回、より好ましくは、１日間当たり１回、例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間の期間に亘って毎日投与してよい。好ましくは、本発明に係る医薬組成物は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、若しくは２１週間、又はそれ以上の期間の期間に亘って毎週、例えば、１週間当たり１回又は２回、例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、若しくは１２ヶ月間の期間の期間に亘って毎週、又は２年間、３年間、４年間、若しくは５年間の期間の期間に亘って毎週投与してよい。更に、本発明に係る医薬組成物は、好ましくは、１年間、２年間、３年間、４年間、若しくは５年間、又はそれ以上の期間の期間に亘って毎月、例えば、１ヶ月間当たり１回、又はより好ましくは２ヶ月間毎に投与してよい。また、生涯投与を継続することも好ましい。更に、特に特定の適応症に関しては、例えば、非免疫被験体における偶発的曝露の場合にジカウイルス感染を予防するために１回だけ投与することも企図される。しかしながら、最も好ましい治療スケジュールは、１回以上の単回投与がジカ感染後できるだけ早く投与される、曝露後予防（ＰＥＰ）である。ジカ感染を予防する（即ち、ジカ感染前、特に非ジカ免疫化被験体において）ために１回以上の単回用量が投与される予防設定もまた好ましい。

【0192】

特に、単一用量、例えば、日用量、用量、又は月用量、好ましくは週用量については、本発明に係る医薬組成物中の抗体又はその抗原結合断片の量は、１ｇを超えない、好ましくは５００ｍｇを超えない、より好ましくは２００ｍｇを超えない、更により好ましくは、１００ｍｇを超えない、特に好ましくは５０ｍｇを超えないことが好ましい。

【0193】

医薬組成物は、典型的には、本発明の１以上の抗体を「有効」量、即ち、所望の疾患若しくは状態を治療、寛解、軽減、若しくは予防するか、又は検出可能な治療効果を呈するのに十分な量含む。治療効果は、病原性効力又は身体症状を低減又は軽減することも含む。任意の特定の被験体についての正確な有効量は、前記被験体の身長、体重、及び健康、状態の性質及び程度、並びに投与のために選択された治療法又は治療法の組合せに依存する。所与の状況についての有効量は、ルーチンな実験によって決定され、臨床医の判断の範囲内である。本発明の目的のために、本発明の抗体の有効量（例えば、医薬組成物中の抗体の量）は、一般的に、投与される個体の体重（例えば、ｋｇ）に関連して、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００７５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、更により好ましくは、約０．０２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである。

【0194】

更に、本発明に係る医薬組成物は、更なる抗体、又は抗体ではない成分であってもよい追加の活性成分を含んでもよい。追加の活性成分は、好ましくはチェックポイント阻害剤である。本明細書に記載のＺＩＫＶ中和抗体又はその抗原結合断片が、更なる活性成分（共薬剤）として本明細書に記載されるＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片と組み合わされることも好ましい。それにより、ＺＩＫＶの中和に加えて、ＮＳ１の病原性機能がブロックされ得る。本発明に係る医薬組成物は、追加の活性成分の１以上を含んでもよい。これは、例えば、併用療法の文脈で以下に共薬剤として記載されるものである。

【0195】

本発明に係る抗体又は抗原結合断片は、追加の活性成分と同じ医薬組成物中に存在していてもよく、又は好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片は、第１の医薬組成物に含まれ、追加の活性成分は、第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含まれる。したがって、１超の追加の活性成分が企図される場合、各追加の活性成分と本発明に係る抗体又は抗原結合断片とは、好ましくは、異なる医薬組成物に含まれる。かかる異なる医薬組成物は、合わせて／同時に、又は別々の時点で若しくは別々の箇所（例えば、身体の別々の部分）に投与してよい。

【0196】

好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片と追加の活性成分とは、相加的治療効果、又は好ましくは相乗的治療効果を提供する。用語「相乗作用」とは、２以上の活性剤の併用効果が、各活性剤の個々の効果の合計よりも大きいことを説明するために用いられる。したがって、２以上の剤の併用効果によって活性又はプロセスの「相乗的阻害」が生じる場合、前記活性又はプロセスの阻害が、各活性剤の阻害効果の合計よりも大きいことを意図する。用語「相乗的治療効果」とは、（多数のパラメータのうちのいずれかによって測定される）治療効果が、それぞれの個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２以上の治療の組合せで観察される治療効果を指す。

【0197】

ｇＺＫＡ１９０、ｇＺＫＡ６４、ｇＺＫＡ２３０、ｇＺＫＡ１８５、ｇＺＫＡ７８に係る抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物が好ましい。

【0198】

一実施形態では、本発明の組成物は、本発明の抗体を含んでいてよく、前記抗体は、前記組成物中の全タンパク質の少なくとも５０重量％（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）を構成し得る。かかる組成物では、抗体は、好ましくは、精製形態である。

【0199】

また、本発明は、医薬組成物を調製する方法であって、（ｉ）本発明の抗体を調製する工程と、（ｉｉ）精製抗体を１以上の薬学的に許容し得る担体と混合する工程とを含む方法を提供する。

【0200】

別の実施形態では、医薬組成物を調製する方法は、抗体を１以上の薬学的に許容し得る担体と混合する工程を含み、前記抗体は、本発明の形質転換Ｂ細胞又は培養プラズマ細胞から得られたモノクローナル抗体である。

【0201】

治療目的のために抗体又はＢ細胞を送達する代りに、Ｂ細胞又は培養プラズマ細胞に由来する対象となるモノクローナル抗体（又はその活性断片）をコードしている核酸（典型的には、ＤＮＡ）を被験体に送達することもでき、その結果、前記核酸は、被験体においてインサイチュで発現して所望の治療効果を提供することができる。好適な遺伝子療法及び核酸送達ベクターは、当技術分野において公知である。

【0202】

医薬組成物は、特に複数回投与フォーマットにパッケージ化されている場合、抗微生物剤を含んでいてよい。前記医薬組成物は、洗浄剤、例えばＴｗｅｅｎ８０等のＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）を含んでいてよい。洗浄剤は、一般的に、低濃度、例えば、０．０１％未満で存在する。また、組成物は、等張にするためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含んでいてもよい。例えば、１０±２ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ濃度が典型的である。

【0203】

更に、医薬組成物は、特に、凍結乾燥される場合又は凍結乾燥物質から再構成された物質を含む場合、例えば、約１５ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ（例えば、２５ｍｇ／ｍＬ）の糖アルコール（例えば、マンニトール）又は二糖（例えば、スクロース又はトレハロース）を含んでいてよい。凍結乾燥用組成物のｐＨは、凍結乾燥前に５～８、又は５．５～７、又は約６．１に調整してよい。

【0204】

また、本発明の組成物は、１以上の免疫調節剤を含んでいてもよい。一実施形態では、免疫調節剤のうちの１以上は、アジュバントを含む。

【0205】

医学的処置、キット、及び使用
医学的処置
更なる態様では、本発明は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の、（ｉ）ジカウイルス感染の予防及び／又は治療；又は（ｉｉ）ジカウイルス感染の診断における使用を提供する。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片（及び特にその前記好ましい実施形態）の使用は、（ｉ）本明細書に記載されるジカウイルス感染の予防及び／又は治療；又は（ｉｉ）本明細書に記載されるジカウイルス感染の診断に好ましい。

【0206】

診断方法は、抗体又は抗体断片をサンプルと接触させることを含んでいてよい。かかるサンプルは、被験体から単離することができ、例えば、鼻道、鼻腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、眼、耳、胎盤、消化管、心臓、卵巣、脳下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚、又は血液、好ましくは血漿又は血清から採取した単離組織サンプルであってよい。また、前記診断方法は、特に抗体又は抗体断片をサンプルと接触させた後に、抗原／抗体複合体を検出することを含んでいてよい。かかる検出工程は、典型的には、作業台で、即ち、ヒト又は動物の身体と全く接触することなしに実施される。検出方法の例は、当業者に周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）が挙げられる。

【0207】

ジカウイルス感染の予防とは、特に、予防的セッティングを意味し、ここで被験体は、ジカウイルス感染と診断されなかった（診断が行われなかったか、又は診断結果が陰性であった）及び／又は被験体は、ジカウイルス感染の症状を呈さない。したがって、ジカウイルス感染の予防は、「曝露後予防」（ＰＥＰ）、即ち、可能なジカウイルス感染後、例えばジカウイルス感染地域における蚊の咬刺の後の予防的処置を含む。ジカウイルス感染の予防は、妊娠している被験体及び／又はジカウイルス感染地域に滞在する被験体（例えば、ジカウイルス感染地域に住む被験体又はジカウイルス感染地域を旅行する被験体）などの高リスク被験体において特に有用である。

【0208】

対照的に、治療的セッティングでは、被験体は典型的にはジカウイルスに感染し、ジカウイルス感染と診断されている、及び／又はジカウイルス感染の症状を呈している。ここで、ＺＩＫＶ感染の「治療」及び「療法」／「治療的」という用語には、（完全な）治癒及びＺＩＫＶ感染の減弱が含まれる。

【0209】

ジカウイルス感染の診断の好ましい方法は、本明細書に記載の診断方法であり、例えば、本発明に係る中和抗体又はその抗原結合断片及び／又は本発明に係るＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片を用いる。

【0210】

したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染と診断された被験体又はジカ感染の症状を示す被験体におけるジカウイルス感染の治療に好ましく使用される。

【0211】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、無症候性被験体におけるジカウイルス感染の予防及び／又は治療に使用されることが好ましい。これらの被験体は、ジカウイルス感染と診断されていても、診断されていなくてもよい。

【0212】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、妊娠している被験体におけるジカウイルス感染の予防及び／又は治療、特に先天性感染の予防に使用される。例えば、これは、Ｎｉｇｒｏ Ｇ， Ａｄｌｅｒ ＳＰ， Ｌａ Ｔｏｒｒｅ Ｒ， Ｂｅｓｔ ＡＭ， Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ： Ｐａｓｓｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｆｏｒ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ； Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００５， ３５３：１３５０－１３６２に記載されているように、ＨＣＭＶ先天性感染の予防の場合と同様の方法で行うことができる。

【0213】

如何なる理論にも拘束されるものではないが、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、妊娠している被験体に投与されると、例えば、（ｉ．ｖ．）注射又は本明細書中に記載される他の投与経路で投与されると、ＦｃＲｎとの相互作用を介して胎盤を通過することができると考えられる。重要なことには、本明細書に記載の抗体の「ＬＡＬＡ」変異体とＦｃＲｎとの相互作用は損なわれない。ＦｃＲｎは、胎盤の第１期に既に発現していると考えられる。

【0214】

或いは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、羊水外腔（ｅｘｔｒａ－ａｍｎｉｏｔｉｃ ｓｐａｃｅ）に投与することもできる。

【0215】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療に使用され、前記抗体又はその抗原結合断片、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、（潜在的な）ジカウイルス感染後７日間まで、好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後５日間まで、より好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後４日間まで、更により好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後３日間まで、最も好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染後１日間まで投与される。そのような治療スケジュールは、治療的セッティング及び予防的セッティング、特に曝露後予防（ＰＥＰ）において有用であり得る。

【0216】

ＰＥＰにおいては、典型的には、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与は、潜在的なジカウイルス感染後、例えばＺＩＫＶ感染地地域での蚊の咬刺後、できる限り早く行う。したがって、ＰＥＰにおいて、本発明に係る抗体又はその抗原結合性断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物最初の投与は、典型的には、前記のように、（潜在的な）ＺＩＫＶ感染後１日間以上までである。

【0217】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、ジカウイルス感染の予防及び／又は治療のために使用され、前記抗体又はその抗原結合断片、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物が、（潜在的な）ジカウイルス感染前３ヶ月間まで、好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１ヶ月間まで、より好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前２週間まで、更により好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１週間まで、最も好ましくは（潜在的な）ジカウイルス感染前１日間までに投与することが好ましい。そのような治療スケジュールは、特に、予防的セッティングを意味する。

【0218】

一般に、特にＰＥＰにおいて、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１日間、１日ごと又は１日おきに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１週間、１週間当たり１回又は２回の一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１週間、２週間又は４週間ごとに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１ヶ月間、２ヶ月間又は４ヶ月間ごとに一回量の投与を行う。また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の最初の投与の後、１回以上の後続の投与を行うことができ、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年間、１年間当たり１回又は２回、一回量の投与を行う。

【0219】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、０．００５～１００ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、好ましくは０．００７５～５０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、より好ましくは０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、更に好ましくは０．０５～５ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、特に好ましくは０．１～１ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される。

【0220】

本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮、局所、皮下、鼻腔内、経腸、舌下、膣内、又は直腸内経路などの、任意の数の経路によって投与することができる。静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内が好ましく、静脈内投与又は皮下投与がより好ましい。

【0221】

妊娠している被験体においては、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、羊水内又は羊水外（例えば注射により）投与することもできる。

【0222】

したがって、本発明はまた、被験体におけるジカウイルス感染を予防及び／又は治療する方法を提供し、前記方法は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む。この方法の好ましい実施形態は、前述の（及び併用療法に関する以下の）医学的使用の好ましい実施形態に対応する。例えば、この方法における好ましい被験体は、ジカウイルス感染と診断された、又はジカウイルス感染の症状を呈する被験体である。この方法における別の好ましい被験体は、妊娠している被験体である。

【0223】

併用療法
本発明に係る方法及び使用における本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与は、単独で実施してもよく、特にＺＩＫＶ感染を予防及び／又は治療するのに有用な助剤（本明細書では「追加の活性成分」とも称される）と組み合わせて実施してもよい。

【0224】

本発明は、ＺＩＫＶ感染を治療及び／又は予防するのに有用な他の治療レジメン又は助剤の前、同時、又は後に被験体に投与される、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の投与を包含する。前記助剤と同時に投与される前記抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物は、同じ又は異なる組成物で、また、同じ又は異なる投与経路で投与してよい。

【0225】

前記他の治療レジメン又は助剤は、例えば、チェックポイント阻害剤であることができる。

【0226】

したがって、本発明の別の態様では、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物は、本明細書に記載の（医学的）使用のために、チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。

【0227】

好ましいチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１及び／又はＣＴＬＡ４のブロックを目的とし、したがって、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を含む。したがって、本発明に係る医薬組成物は、追加の活性成分のうちの１以上を含み得る。

【0228】

また、本明細書に記載のＺＩＫＶ中和抗体又はその抗原結合断片は、更なる活性成分（共薬剤）として本明細書に記載されるＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片と組み合わされることが好ましい。それにより、ＺＩＫＶの中和に加えて、ＮＳ１の病原性機能がブロックされ得る。したがって、本明細書に記載のＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体又はその抗原結合断片は、好ましい更なる活性成分（共薬剤）である。

【0229】

本発明に係る抗体若しくは抗原結合断片は、追加の活性成分（助剤）と同じ医薬組成物中に存在していてもよく、又は好ましくは、本発明に係る抗体若しくは抗原結合断片は、第１の医薬組成物に含まれ、追加の活性成分（助剤）は、第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含まれる。したがって、１超の追加の活性成分（助剤）が企図される場合、各追加の活性成分（助剤）及び本発明に係る抗体又は抗原結合断片は、好ましくは、異なる医薬組成物に含まれる。かかる異なる医薬組成物は、合わせて／同時に、又は別々の時点で若しくは別々の箇所（例えば、身体の別々の部分）に投与してよい。

【0230】

好ましくは、本発明に係る抗体又は抗原結合断片と追加の活性成分（助剤）とは、相加的治療効果、又は好ましくは相乗的治療効果を提供する。用語「相乗作用」とは、２以上の活性剤の併用効果が、各活性剤の個々の効果の合計よりも大きいことを説明するために用いられる。したがって、２以上の剤の併用効果によって活性又はプロセスの「相乗的阻害」を生じる場合、前記活性又はプロセスの阻害が、各活性剤の阻害効果の合計よりも大きいことを意図する。用語「相乗的治療効果」とは、（多数のパラメータのうちのいずれかによって測定される）治療効果が、それぞれの個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２以上の治療の組合せで観察される治療効果を指す。

【0231】

更なる使用及びキット
更なる態様では、本発明は、また、抗ジカワクチンの抗原が正確な立体構造の特異的エピトープを含有していることを確認することによって前記ワクチンの品質をモニタリングするための、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用を提供する。チェックすべき抗ジカワクチンなどに含まれる好ましい抗原としては、（ｉ）前記ＺＩＫＶ Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）又は（ｉｉ）四次ＺＩＫＶエピトープを含むか、又はそれからなるＺＩＫＶエンベロープタンパク質又は任意の他の分子／複合体が挙げられる。

【0232】

更に、本発明は、また、ジカウイルス感染の診断における、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用を提供する。

【0233】

更に、単離された血液サンプル（例えば、全血、血清、及び／又は血漿）がジカウイルスに感染しているかどうかの判定における、本発明に係る抗体若しくはその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物の使用も提供される。

【0234】

上記の通り、診断方法は、抗体又は抗体断片をサンプルと接触させることを含んでいてよい。かかるサンプルは、被験体から単離することができ、例えば、鼻道、鼻腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、耳、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、脳下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚、又は血液、好ましくは血清又は血漿から採取した単離組織サンプルであってよい。また、前記診断方法は、特に抗体又は抗体断片をサンプルと接触させた後に、抗原／抗体複合体を検出することを含んでいてもよい。かかる検出工程は、典型的には、作業台で、即ち、ヒト又は動物の身体と全く接触することなしに実施される。検出方法の例は、当業者に周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）が挙げられる。

【0235】

更なる態様では、本発明はまた、本発明に係る少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る少なくとも１つの核酸、本発明に係る少なくとも１つの細胞、及び／又は本発明に係る少なくとも１つの医薬組成物を含むキットオブパーツを提供する。更に、前記キットは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を投与するための手段、例えば注射器又は容器、リーフレット、及び／又は前記のように投与される共薬剤を含むことができる。

【0236】

ジカウイルスのＮＳ１タンパク質に特異的に結合する抗体
更なる態様では、本発明はまた、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0237】

ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質（非構造タンパク質１）は、細胞内に生じ、分泌され、細胞表面に会合し、特に分泌されたＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質は、典型的には、ＺＩＫＶに感染した被験体の血清、唾液、尿などの体液中に見出される。分泌及び細胞表面会合ＮＳ１は免疫原性が高く、抗体産生を誘発する。ＮＳ１は、ＺＩＫＶ感染の早期診断のための重要なバイオマーカーであることが知られている。したがって、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、例えばＺＩＫＶ感染の診断に有用である。

【0238】

一般に、結合は、当業者に知られた、前記した標準的ＥＬＩＳＡによって評価することができる。抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要な抗体の濃度（ＥＣ_５０）を測定することによって決定され得る。好ましくは、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に対する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片のＥＣ_５０は、５０ｎｇ／ｍｌ以下、好ましくは前記ＥＣ_５０が２５ｎｇ／ｍｌ以下、より好ましくは前記ＥＣ５０が１５ｎｇ／ｍｌ以下、更により好ましくは前記ＥＣ_５０が１０ｎｇ／ｍｌ以下、最も好ましくは前記ＥＣ_５０が５ｎｇ／ｍｌ以下、例えば約２又は３ｎｇ／ｍｌである。

【0239】

好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、デングウイルス（ＤＥＮＶ）ＮＳ１タンパク質に本質的に結合しない。「本質的に結合していない」とは、デングウイルス（ＤＥＮＶ）ＮＳ１タンパク質に対する標準的ＥＬＩＳＡにおいて、抗体又はその抗原結合性断片に関し、１０^２ｎｇ／ｍｌまで、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、更により好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌまで、ＥＣ_５０値が測定できないことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡにおいて、デングウイルス（ＤＥＮＶ）ＮＳ１タンパク質に対して飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要とする抗体又はその抗原結合断片の濃度（ＥＣ_５０）は、典型的には、１０^２ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌ超、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、更により好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌ超である。

【0240】

また、好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）ＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）ＮＳ１タンパク質、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）ＮＳ１タンパク質、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）ＮＳ１タンパク質、及び／又はダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）ＮＳ１タンパク質に本質的に結合しない。「本質的に結合しない」とは、抗体又はその抗原結合断片について、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）ＮＳ１タンパク質、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）ＮＳ１タンパク質、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）ＮＳ１タンパク質、及び／又はダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）ＮＳ１タンパク質に対する標準的ＥＬＩＳＡにおいて、抗体又はその抗原結合性断片に関し、１０^２ｎｇ／ｍｌまで、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、更により好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌまで、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌまで、ＥＣ_５０値が測定できないことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡにおいて、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）ＮＳ１タンパク質、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）ＮＳ１タンパク質、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）ＮＳ１タンパク質、及び／又はダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）ＮＳ１タンパク質に対して飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要とする抗体又はその抗原結合断片の濃度（ＥＣ_５０）は、典型的には、１０^２ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは１０^３ｎｇ／ｍｌ超、より好ましくは５×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、更により好ましくは８×１０^３ｎｇ／ｍｌ超、最も好ましくは１０^４ｎｇ／ｍｌ超である。

【0241】

好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体である。また、好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、好ましくはヒトモノクローナル抗体である。更に、また、好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、組換え抗体である。

【0242】

好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分を含む。より好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ＣＨ２Ｌ４Ａ突然変異、ＣＨ２Ｌ５Ａ突然変異、又はその両方を含む。Ｆｃ部分を含む及び／又はＣＨ２Ｌ４Ａ突然変異、ＣＨ２Ｌ５Ａ突然変異、又はその両方を含む本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の詳細な説明については、前記した本発明に係る中和抗体の文脈におけるＦｃ部分及びＣＨ２Ｌ４Ａ突然変異、ＣＨ２Ｌ５Ａ突然変異、又はその両方についての詳細な説明を参照する。したがって、対応する詳細な記載及び好ましい実施形態は、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片にも適用される。

【0243】

しかし、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ部分を含まないことも好ましい。特に、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、精製抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖであることが好ましい。更により好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に記載されるように標識されており、例えばビオチン化されており、例えば、ビオチン化されたＦａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２断片である。

【0244】

好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ１及び／又は抗原性部位Ｓ２に結合する。本発明者らは、驚くべきことに、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ１及び／又は抗原性部位Ｓ２に結合する抗ＺＩＫＶ ＮＳ１抗体は、デングウイルスＮＳ１タンパク質（ＤＥＮＶ ＮＳ１）と交差反応しないことを見出した。対照的に、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ１にも抗原性部位Ｓ２にも結合しない抗ＺＩＫＶ ＮＳ１抗体は、典型的にはＤＥＮＶ ＮＳ１と交差反応性である。この驚くべき知見は、ＺＩＫＶ ＮＳ１上の抗原性部位Ｓ１及びＳ２を用いて、ＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体をＤＥＮＶ ＮＳ１と交差反応する抗体から区別することができることを示す。

【0245】

最も好ましくは、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）のＮＳ１タンパク質に特異的に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ジカウイルスＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ２に結合する。抗原性部位Ｓ２は、複数のＺＩＫＶ系統において高度に保存されているが、他のフラビウイルスのＮＳ１上の対応する部位と配列及び構造において相同ではなく、それによってＺＩＫＶに対する固有の特異性を提供する。

【0246】

ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ１及びＳ２は、実施例３、図６に記載するように、本発明者らによって同定された。抗体が抗原性部位Ｓ１及び／又はＳ２に結合するかどうかは、例えば、以下に又は実施例３に記載されるように、交差競合試験を用いることによって当業者に容易に同定することができ、ｇＺＫＡ１５（配列番号９１～９９）で表されるＳ１特異的抗体及び／又はｇＺＫＡ３５（配列番号１２７～１３５）で表されるＳ２特異的抗体を、「二次抗体」として使用することができる。そのような競合アッセイにおいて、ｇＺＫＡ１５及び／又はｇＺＫＡ３５との任意の競合（完全又は部分）の存在は、試験される抗体がそれぞれ抗原性部位Ｓ１及び／又は抗原性部位Ｓ２に結合することを示す。

【0247】

一般に、競合アッセイのために、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって提供される例えば「Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６ Ｓｙｓｔｅｍ」などのタンパク質－タンパク質結合の特徴付けのための市販のシステムを、特にサプライヤの指示にしたがって使用することができる。

【0248】

例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって提供される「Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６システム」を使用する例示的な競合アッセイにおいて、ＺＩＫＶ－ＮＳ１タンパク質（例えば、ＰＢＳ中に２．５μｇ／ｍｌに希釈された）をＡＰＳ被覆センサーチップの表面上に固定することができる（例えば、７～９分間）。次いで、コーティングされたバイオセンサを、ブロッキング緩衝液（例えば、ＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ；例えば６分間）を含むウェルに入れ、遊離のバイオセンサ結合部位をブロックすることができる。次いで、コーティングされたバイオセンサーを、試験すべき抗体／複数の抗体（例えば、ブロッキング緩衝液中で１０μｇ／ｍｌに希釈された）とインキュベートすることができる（例えば、８分間）。試験すべき抗体の結合後（ステップ１）、バイオセンサーを「第２の抗体」、例えば、ｇＺＫＡ１５及び／又はｇＺＫＡ３５を含むウェルに移した（例えば、８分間）（ステップ２）。会合なし（競合）、低会合（部分的競合）、又は（強い）会合（競合なし）のいずれが検出されるかによって、競合、部分的競合、又は競合なしをステップ２で決定することができる。

【0249】

前記したように、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、重鎖上の（少なくとも）３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）と、軽鎖上の（少なくとも）３つのＣＤＲとを含む。一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在する超可変領域である。典型的には、重鎖のＣＤＲ及び抗体の連結軽鎖が一緒になって抗原受容体を形成する。通常、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、可変ドメイン中で不連続に配置される。抗原受容体は、典型的に２つの可変ドメイン（２つの異なるポリペプチド鎖、即ち、重鎖及び軽鎖）から構成されるので、各抗原受容体には、６個のＣＤＲが存在する（重鎖：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３；軽鎖：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）。単一の抗体分子は、通常、２つの抗原受容体を有し、したがって１２個のＣＤＲを含む。重鎖及び／又は軽鎖上のＣＤＲは、フレームワーク領域によって分離されてもよく、フレームワーク領域（ＦＲ）はＣＤＲよりも「可変」ではない可変ドメイン内の領域である。例えば、鎖（又はそれぞれの鎖）は、３つのＣＤＲによって分離された４つのフレームワーク領域から構成され得る。

【0250】

重鎖上の３つの異なるＣＤＲ及び軽鎖上の３つの異なるＣＤＲを含む、本発明の５つの例示的な抗体の重鎖及び軽鎖の配列を決定した。ＣＤＲアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴナンバリングシステム（ＩＭＧＴ： ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／； ｃｆ． Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｍ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ３７， Ｄ１００６－Ｄ１０１２）にしたがって定義される。

【0251】

表４は、本発明に係る例示的な抗体の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）及び重鎖可変領域（「ＶＨ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。

【表4】

【0252】

表５は、本発明に係る例示的な抗体の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）及び軽鎖可変領域（「ＶＬ」と称される）のアミノ酸配列の配列番号を示す。

【表5】

【0253】

したがって、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、表４及び／又は表５に示すＣＤＲ配列、ＶＨ配列、及び／又はＶＬ配列のうちの少なくとも１つに対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことが好ましい。

【0254】

本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号９３、１１１、１２９、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、２２７、２３１、及び２３５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなる。

【0255】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号９３、１１１、及び１２９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号９３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。また、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号１１１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。更に、また、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号１２９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。

【0256】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３が、配列番号１２９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなることが好ましい。

【0257】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つのＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号９１、１０９、１２７、１５３、１５７、１６１、１６５、１６９、１７３、１７７、１８１、１８５、１８９、１９３、１９７、２０１、２０５、２０９、２１３、２１７、２２１、２２５、２２９、及び２３３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号９２、１１０、１２８、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６、２３０、及び２３４のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号９３、１１１、１２９、１５５、１５９、１６３、１６７、１７１、１７５、１７９、１８３、１８７、１９１、１９５、１９９、２０３、２０７、２１１、２１５、２１９、２２３、２２７、２３１、及び２３５のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0258】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号９１、１０９、及び１２７のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号９２、１１０、及び１２８のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号９３、１１１、及び１２９のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0259】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号９１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号９２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号９３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0260】

また、更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１０９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ２は、配列番号１１０で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号１１１で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0261】

特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ１は、配列番号１２７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＨ２は、配列番号１２８で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つの重鎖ＣＤＲＨ３は、配列番号１２９で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0262】

より好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号９４、１１２、及び１３０のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号９５、９６、１１３、１１４、１３１、及び１３２のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号９７、１１５、及び１３３のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0263】

更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号９４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号９５又は９６で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号９７で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0264】

また、更により好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号１１２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号１１３又は１１４で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号１１５で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0265】

特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも１つのＣＤＲＨ１、少なくとも１つのＣＤＲＨ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖と、少なくとも１つのＣＤＲＬ１、少なくとも１つＣＤＲＬ２、及び少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖とを含み、
（ｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ１は、配列番号１３０で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；
（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ２は、配列番号１３１又は１３２で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含み；及び／又は
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＣＤＲＬ３は、配列番号１３３で表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む。

【0266】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む：（ｉ）配列番号９１～９３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１０９～１１１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１２７～１２９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１５３～１５５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号１５７～１５９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉ）配列番号１６１～１６３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉ）配列番号１６５～１６７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖｉｉｉ）配列番号１６９～１７１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｘ）配列番号１７３～１７５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘ）配列番号１７７～１７９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉ）配列番号１８１～１８３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉ）配列番号１８５～１８７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｉｉ）配列番号１８９～１９１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｖ）配列番号１９３～１９５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖ）配列番号１９７～１９９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉ）配列番号２０１～２０３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉ）配列番号２０５～２０７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｖｉｉｉ）配列番号２０９～２１１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｉｘ）配列番号２１３～２１５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘ）配列番号２１７～２１９、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉ）配列番号２２１～２２３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉ）配列番号２２５～２２７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｘｘｉｉｉ）配列番号２２９～２３１、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｘｘｉｖ）配列番号２３３～２３５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0267】

特に好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号９１～９５及び９７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号９１～９４及び９６～９７、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉｉ）配列番号１０９～１１３及び１１５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｖ）配列番号１０９～１１２及び１１４～１１５、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｖ）配列番号１２７～１３１及び１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｖｉ）配列番号１２７～１３０及び１３２～１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0268】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下に示すＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号１２７～１３１及び１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１２７～１３０及び１３２～１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0269】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び任意に軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことが好ましく、重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号９８、１１６、１３４、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８、２３２、及び２３６のいずれかで表されるアミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含むか又はからなる。

【0270】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：（ｉ）配列番号９８で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号９９で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；（ｉｉ）配列番号１１６で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号１１７で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉｉ）配列番号１３４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号１３５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0271】

最も好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、以下を含むことが好ましい：配列番号１３４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号１３５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。

【0272】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ１５、ｇＺＫＡ２５、又はｇＺＫＡ３５である、より好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ２５又はｇＺＫＡ３５である、更により好ましくは抗体又はその抗原結合断片は、ｇＺＫＡ３５である。

【0273】

本発明者らは、本明細書においてＺＫＡ１５、ＺＫＡ２５、又はＺＫＡ３５と称するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を単離した（表４及び５の実施例１参照）。これらの抗体、これらの抗体、特にＶＨ及びＶＬ遺伝子に基づいて、本明細書で使用されるとき、用語「ｇＺＫＡ１５」、「ｇＺＫＡ２５」、及び「ｇＺＫＡ３５」は、それぞれの「一般的な」抗体、又はその抗原結合断片を意味する。

【0274】

即ち、「ｇＺＫＡ１５」は、配列番号９１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号９２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号９３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号９４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９５又は９６のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号９７のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号９８のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号９９のアミノ酸配列を有する。

【0275】

「ｇＺＫＡ２５」は、配列番号１０９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１１０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号１１１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号１１２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１１３又は１１４のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号１１５のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号１１６のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号１１７のアミノ酸配列を有する。

【0276】

「ｇＺＫＡ３５」は、配列番号１２７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１２８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、配列番号１２９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列、配列番号１３０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１３１又は１３２のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、及び配列番号１３３のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する抗体又はその抗原結合断片を意味する。重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、好ましくは配列番号１３４のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、好ましくは配列番号１３５のアミノ酸配列を有する。

【0277】

「抗体の産生」（前記セクション「抗体の産生」）及び「抗体の任意の追加の特徴」（前記セクション「抗体の任意の追加の特徴」）に言及する前記詳細な説明は、全ての抗体及びその抗原結合断片に適用される。即ち、それらのセクションは、本発明に係る中和抗体及びその抗原結合断片だけではなく、本発明に係るＮＳ１タンパク質結合抗体及びその抗原結合断片にも適用される。

【0278】

特に、本発明に係る抗体又はその抗原結合性断片は、標識されている、例えばビオチン化されていることが好ましい。

【0279】

好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合性断片は、ビオチン化されている。

【0280】

また、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片が、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）などの酵素にコンジュゲートされていることが好ましい。抗体のＨＲＰへのコンジュゲーションは、例えば、Ｗｉｓｄｏｍ ＧＢ． Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． ２００５；２９５：１２７－３０又はＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ － ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ． Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｅｄｗａｒｄ Ａ． Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ ２０１２， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， ＩＳＢＮ： ９７８１９３６１１３８１１に記載されている。

【0281】

例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、例えば測定可能性を提供する（例えば、定量化又は画像化を容易にするなど）ために、検出可能な標識に結合され得る。標識された抗体は、各種標識を使用する各種アッセイ、特にイムノアッセイで使用することができる。好ましい標識としては、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化学発光体、色素、酵素基質又は補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、染料（例えば蛍光染料及びタンデム染料）などが挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド、又はフィコエリトリンが挙げられ；発光材料の例は、ルミノールであり、生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが挙げられ、適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、又は３Ｈが挙げられる。このような標識された試薬は、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）、蛍光イムノアッセイなどの各種知られたアッセイにおいて、好ましくはＥＬＩＳＡにおいて使用することができる。したがって、本発明に係る標識された抗体は、例えばＵＳ３，７６６，１６２、ＵＳ３，７９１，９３２、ＵＳ３，８１７，８３７、及びＵＳ４，２３３，４０２などに記載されているアッセイで使用することができる。

【0282】

好ましい標識としては、（ｉ）特に結合ブロックアッセイ（Ｂｌｏｃｋａｄｅ－ｏｆ－ｂｉｎｄｉｎｇ ａｓｓａｙ）、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、及び免疫組織化学における前記酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ；（ｉｉ）特にＥＬＩＳＡ及び免疫組織化学における前記補欠分子族複合体、例えば、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン；（ｉｉｉ）特に免疫蛍光及びフローサイトメトリにおける前記蛍光剤、例えば蛍光色素及び蛍光タンパク質（例えば、（強化）緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）；ＴａｇＢＦＰ、Ｔｕｒｑｕｏｉｓｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＫＯ２、Ｃｈｅｒｒｙ、Ａｐｐｌｅ、Ｋａｔｅ２）；及び（ｉｖ）フローサイトメトリにおけるタンデム色素が挙げられる。

【0283】

好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、ビオチン化されている。ビオチン化は迅速で特異的であり、ビオチンのサイズが小さい（ＭＷ＝２４４．３１ｇ／ｍｏｌ）ため、分子の自然な機能を混乱させる可能性は低い。ビオチンは、非常に高い親和性、速いオンレート、及び高い特異性でストレプトアビジン及びアビジンに結合する。ストレプトアビジン及びアビジンへのビオチン結合は、極端な熱、ｐＨ、及びタンパク質分解に対して耐性であり、様々な環境でビオチン化分子の捕捉を可能にする。本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、化学的又は酵素的にビオチン化することができる。化学的ビオチン化は、アミンの非特異的ビオチン化をもたらすために種々のコンジュゲーション化学を利用する（例えば、ＮＨＳ－カップリングは、抗体中の任意の１級アミンのビオチン化をもたらす、下記参照）。酵素的ビオチン化は、細菌ビオチンリガーゼの使用によって特定の配列内の特定のリジンのビオチン化をもたらす。

【0284】

更に、第２の抗体又はその抗体断片も、標識として使用することができる。この場合、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、第２の抗体又はその抗体断片にコンジュゲートされて、例えばＵＳ４，６７６，９８０に記載される抗体ヘテロコンジュゲートを形成する。この場合、第２の抗体は、本明細書に記載されるように任意に標識されていてもよい。

【0285】

抗体を標識に結合させるための方法は、当技術分野で周知である。例えば、抗体又はその抗原結合断片において、第１級アミン（－ＮＨ_２）で終結するリジンの側鎖を用いて、抗体又はその抗原結合断片に共有結合的に標識を連結することができる。多くの変異体標識手順が文献に記載されている。例えば、標識化アプローチは、ＮＨＳエステル、ヘテロ二官能性試薬、カルボジイミド、及び過ヨウ素酸ナトリウムからなる群から選択することができる。

【0286】

ＮＨＳエステルは、特に蛍光色素標識の場合に使用することができる。蛍光色素標識は、組み込まれたＮＨＳエステル（「スクシンイミジルエステル」とも称される）を用いて標識の活性化形態で購入することができる。活性化された色素は、適切な条件下で抗体又はその抗原結合断片（例えば、リジン基を介して）と反応させることができる。過剰の反応性色素は、標識された抗体又はその抗原結合断片をイムノアッセイに使用する前に（例えば、カラムクロマトグラフィーによって）除去することができる。

【0287】

異種二官能性試薬は、特に、標識がタンパク質分子（例えば、ＨＲＰ、アルカリホスファターゼ、又はフィコエリトリン）である場合に使用することができる。この場合、抗体又はその抗原結合断片及び標識は、複数のアミンを有していてもよい。この状況では、１つの分子上（例えば、抗体又はその抗原結合断片上の）のリジンの幾つかを修飾して、新たな反応基（Ｘ）生成する、標識上のリジンで、別の反応基（Ｙ）を生成する（又は逆も然り）。次いで、「ヘテロ二官能性試薬」を用いてＹ基を導入し、その後、抗体及び標識が混合されたときにＸ基と反応し、このようにしてヘテロ二量体コンジュゲートを生成する。

【0288】

ＥＤＣなどのカルボジイミドを用いて、特にアミン含有分子とカルボキシル含有分子との間の共有結合を形成することができる。カルボジイミドは、カルボキシル基を活性化し、次いで活性化された中間体は、（例えば、抗体又はその抗原結合断片上のリジン残基によって提供される）アミンによって攻撃される。カルボジイミドを用いて、抗体をカルボキシル化粒子（例えば、ラテックス粒子、磁性ビーズ）、及びマイクロウェルプレート又はチップ表面などの他のカルボキシル化表面にコンジュゲートさせることができる。カルボジイミドはまた、抗体又はその抗原結合断片に色素又はタンパク質標識を結合するために使用することができる。

【0289】

過ヨウ素酸ナトリウムを、特に西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識するために使用することができる。過ヨウ素酸塩は、ＨＲＰ分子上の炭水化物鎖を活性化して抗体又はその抗原結合断片上のリジンと反応することができるアルデヒド基を生成する。ＨＲＰそれ自体は非常に少ないリジンを有するので、高程度のＨＲＰ重合なしに抗体－ＨＲＰコンジュゲートを生成することが比較的容易である。

【0290】

任意に、例えばＵＳ４，８３１，１７５に記載されているように、標識と本発明の抗体との間にリンカーを使用してもよい。抗体又はその抗原結合断片は、例えばＵＳ５，５９５，７２１に記載されているように、放射性ヨウ素、インジウム、イットリウム、又は当技術分野で公知の他の放射性粒子で直接標識することができる。

【0291】

したがって、本発明はまた、
（ｉ）本発明に係る抗体又はその抗原結合断片；及び
（ｉｉ）前記した標識
を含む複合体を提供する。

【0292】

したがって、このような複合体は、好ましくは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片にコンジュゲートした標識である。好ましくは、標識と、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片とは、共有結合している。

【0293】

例えば、本発明に係る複合体は、（ｉ）本発明に係る抗体と、（ｉｉ）蛍光ペプチド又はタンパク質（例えば、ＥＧＦＰ）などのペプチド又はタンパク質である標識とを含む融合タンパク質であることができる。

【0294】

別の態様では、本発明はまた、前記した本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子、又は特に本発明に係る複合体が前記した融合タンパク質である場合には、前記した本発明に係る複合体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。

【0295】

核酸分子及び／又はポリヌクレオチドの例としては、例えば、組換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子、又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子が挙げられる。

【0296】

軽鎖及び重鎖の一部又は全部をコードする核酸配列及び本発明の抗体のＣＤＲが好ましい。したがって、本発明の例示的抗体の軽鎖及び重鎖、特にＶＨ及びＶＬ配列及びＣＤＲの一部又は全部をコードする核酸配列が好ましく提供される。表４及び表５は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ及びＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列の配列番号を示す。

【0297】

以下の表６は、本発明に係る例示的な抗体のＣＤＲ及びＶＨ及びＶＬをコードする例示的な核酸配列の配列番号を示す。遺伝子コードの重複により、本発明はまた、これらの核酸配列の配列変異体、特に同じアミノ酸配列をコードするそのような配列変異体をも包含する。

【0298】

核酸分子は、核酸成分を含む、好ましくは核酸成分からなる分子である。核酸分子という用語は、好ましくは、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を指す。特に、それは用語「ポリヌクレオチド」と同義に使用される。好ましくは、核酸分子は、糖／リン酸骨格のホスホジエステル結合によって互いに共有結合しているヌクレオチドモノマーを含むか又はそれらからなるポリマーである。「核酸分子」という用語は、塩基修飾、糖修飾、又は骨格修飾などされたＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子などの修飾核酸分子も包含する。

【0299】

表６は、本発明に係る３つの例示的な抗体（「ＺＫＡ１５」、「ＺＫＡ２５」、「ＺＫＡ３５」）のＣＤＲ及び重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の例示的な核酸配列を示す。

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【0300】

好ましくは、本発明に係る核酸分子の配列は、配列番号１００～１０８、１１８～１２６、及び１３６～１４４のいずれか１つで表される核酸配列を含むか又はからなる。

【0301】

また、好ましくは、本発明に係る核酸配列は、本発明に係る抗体における（例示的な）抗体におけるＣＤＲ、ＶＨ配列、及び／又はＶＬ配列をコードする核酸、例えば表６に示される配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。

【0302】

一般に、核酸分子は、特定の核酸配列を挿入、欠失、又は変更するよう操作することができる。そのような操作による変更には、制限部位の導入、コドン使用の修正、転写及び／又は翻訳調節配列の付加又は最適化などの変更が含まれるが、これに限定されない。核酸を変更してコードされているアミノ酸を変えることもできる。例えば、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０など）のアミノ酸置換、欠失、及び／又は挿入を抗体のアミノ酸配列に導入することが有用であり得る。このような点突然変異は、エフェクタ機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性などを改変することができ、共有結合基（例えば、標識）の結合のためにアミノ酸を導入したり、タグ（例えば、精製目的のために）を導入することができる。突然変異は、特定の部位に導入することができる、又はランダムに導入することができ、その後、選択（例えば、分子進化）を行うことができる。例えば、本発明に係る（例示的な）抗体のＣＤＲ領域、ＶＨ配列、及び／又はＶＬ配列のいずれかをコードする１以上の核酸は、コードされたアミノ酸に異なる性質を導入するように、ランダム又は指向的に突然変異させることができる。このような変化は、初期変化が保持され、他のヌクレオチド位置での新しい変化が導入される反復プロセスの結果であり得る。更に、独立したステップで達成される変化を組み合わせることができる。コードされたアミノ酸に導入される異なる特性は、増強された親和性を含み得るが、これに限定されない。

【0303】

更に、本発明に係る核酸分子を含むベクター、例えば発現ベクターも本発明の範囲内に含まれる。好ましくは、ベクターは、前記した核酸分子を含む。

【0304】

「ベクター」という用語は、核酸分子、好ましくは組換え核酸分子、即ち、天然には存在しない核酸分子を意味する。本発明の文脈におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込む又は含むことに適している。そのようなベクターは、保存ベクター、発現ベクター、クローニングベクター、移入ベクターなどであることができる。保存ベクターは、核酸分子の便利な保存を可能にするベクターである。したがって、ベクターは、例えば、本発明に係る所望の抗体又はその抗体断片に対応する配列を含み得る。発現ベクターは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質などの発現産物の産生に使用することができる。例えば、発現ベクターは、プロモーター配列などのベクターの配列範囲の転写に必要な配列を含むことができる。クローニングベクターは、典型的には、ベクターに核酸配列を組み込むために使用することができるクローニング部位を含むベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであることができる。移入ベクターは、核酸分子を細胞又は生物に移入するのに適したベクター、例えばウイルスベクターであることができる。本発明の文脈におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターであることができる。好ましくは、ベクターはＤＮＡ分子である。例えば、本願の意味におけるベクターは、クローニング部位、抗生物質耐性因子などの選択マーカー、及び複製起点などのベクターの増殖に適した配列を含む。好ましくは、本願の文脈におけるベクターはプラスミドベクターである。

【0305】

更なる態様では、本発明はまた、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を発現する、及び／又は本発明に係るベクターを含む細胞を提供する。

【0306】

そのような細胞の例としては、酵母細胞、動物細胞、又は植物細胞などの真核細胞が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、細胞は哺乳類細胞、より好ましくは哺乳動物細胞系である。好ましい例としては、ヒト細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、又はハイブリドーマ細胞が挙げられる。

【0307】

特に、細胞は、好ましくは発現ベクターを用いて、本発明に係るベクターでトランスフェクトすることができる。「トランスフェクション」という用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）分子などの核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞に導入することを意味する。本発明の文脈において、用語「トランスフェクション」は、核酸分子を細胞、好ましくは真核細胞、例えば哺乳動物細胞に導入するための当業者に公知の任意の方法を包含する。そのような方法には、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、例えば、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、又はＤＥＡＥ－デキストラン又はポリエチレンイミンなどのカチオン性ポリマーに基づくトランスフェクションを含む。好ましくは、導入は非ウイルス性である。

【0308】

更に、本発明の細胞は、例えば本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を発現させるために、本発明に係るベクターで安定的又は一過的にトランスフェクトすることができる。好ましくは、細胞は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードする本発明に係るベクターで安定にトランスフェクトされる。或いは、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をコードする本発明のベクターを、細胞に一過的にトランスフェクトすることも好ましい。

【0309】

更なる態様では、本発明はまた、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片；前記した本発明に係る複合体；前記した本発明に係る核酸分子；前記した本発明に係るベクター；又は前記した本発明に係る細胞を含む組成物を提供する。前記した本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、又は本発明に係る複合体を含む組成物が好ましい。

【0310】

そのような組成物は、中和抗体の文脈において前記した医薬組成物であってもよく、前記した医薬組成物の詳細な説明及び好ましい実施形態が、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片にも適用される。しかし、前記組成物は、診断（ＺＩＫＶ感染の）又は分析目的のような非医薬目的のために使用することもできる。

【0311】

好ましくは、前記組成物は液体形態であり、例えば診断アッセイにおいて直接使用するための液体中に、例えば抗体又はその抗原結合性断片を提供する。液体（ビヒクル）は、目的に応じて、例えばアッセイに応じて選択することができる。好ましくは、本発明に係る組成物は、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）又は他のバッファを含む。そのようなバッファは、好ましくは生物学的バッファであり、したがって、前記組成物は、ＭＥＳ、ＢＩＳ－ＴＲＩＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＩＳ－ＴＲＩＳプロパン、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、Ｔｒｉｚｍａ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＢＳ、ＴＡＰＳ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳＯ、ＡＭＰ、ＣＡＰＳ、及びＣＡＢＳのいずれかを含むことができる。前記組成物がリンゲル液を含むことも好ましい。更に、前記組成物はＴｒｉｓ、例えばＴｒｉｓ－ＨＣｌを含んでもよい。

【0312】

本発明に係る組成物はまた、Ｔｗｅｅｎ２０又はＴｗｅｅｎ８０などのＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）などの洗浄剤を含むことができる。洗浄剤は、好ましくは、例えば０．０１％未満の低濃度で存在する。組成物はまた、張性を与えるためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含むことができる。例えば、１０±２ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度が典型的である。

【0313】

更に、本発明に係る組成物は、任意にＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）又はＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）などのタンパク質安定化剤を含んでいてもよい。必要に応じて本発明に係る組成物に含有させることができるタンパク質安定剤の更なる例としては、例えば前記したバッファ；塩化ナトリウムなどの塩；ヒスチジン、グリシン、及びアルギニンなどのアミノ酸；トレハロース及びスクロース（二糖類）、マンニトール、及びソルビトール（糖アルコール）などのポリオール／二糖類／多糖類；ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などの界面活性剤、及びＨＳＡ又はＢＳＡのようなタンパク質；デキストラン及びポリエチレングリコールなどのポリマー；抗酸化剤が挙げられる。

【0314】

更に、本発明に係る組成物は、任意に、アジ化ナトリウムなどの防腐剤を含んでもよい。防腐剤は、典型的には、微生物汚染を防ぐために使用される。

【0315】

更なる態様では、本発明はまた、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、又は本発明に係る組成物を含むキットオブパーツを提供する。

【0316】

そのようなキットオブパーツは、任意に、以下の１以上を更に含むことができる：
（ｉ）１以上の溶液、例えば診断アッセイに使用される溶液、例えば、抗体又はその抗原結合断片を希釈するための溶液；
（ｉｉ）リーフレット、例えば使用説明書付きリーフレット；
（ｉｉｉ）前記した標識、及び任意に、標識に必要な溶液及び／又は更なる成分；及び／又は
（ｉｖ）容器又は装置、例えば診断アッセイに有用な容器又は装置、例えば１以上のＥＬＩＳＡプレート。

【0317】

好ましくは、前記した本発明に係るキットはまた、発色のための基質を含む。そのような基質の例としては、特にアルカリホスファターゼによる検出の場合には、ｐ－ＮＰＰ；特に西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の使用の場合には、ＡＢＴＳ、ＴＭＢ、又はＯＰＤのような酵素が挙げられる。任意に、基質は、適切なバッファ、例えば本発明に係る組成物の文脈において前記したバッファ中で希釈することができる。或いは、基質及びバッファは、キット中の別々の物として提供されてもよい。

【0318】

標識に関して、本発明に係るキットはまた、酵素コンジュゲートストレプトアビジン、又はプローブ抗体の結合を検出するための別の系を含むことができる。例えば、プローブ抗体はマウス化形態で作製することができ、この場合、ビオチン化を必要とせずに抗マウス二次抗体で結合を検出することができる。抗マウス二次抗体は、典型的には、ヒト抗体と反応しないためにポリクローナルである及び／又は交差吸着される。

【0319】

更に、本発明に係るキットは、好ましくは、１以上のＥＬＩＳＡプレートを含む。より好ましくは、これらのＥＬＩＳＡプレートは、ＺＩＫＶ－ＮＳ１タンパク質でプレコートされる。任意に、そのようなプレコートＥＬＩＳＡプレートは、予めブロックされていてもよい。

【0320】

ジカウイルス感染の診断
更なる態様では、本発明はまた、本発明のＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、又は本発明に係るキットオブパーツの、ジカジカウイルス（ＺＩＫＶ）感染の診断における使用を提供する。

【0321】

ジカウイルス（ＺＩＫＶ）感染の診断は、典型的には、インビトロで、例えば診断される被験体の単離試料中で行われる。被験体の好ましい単離試料には、体液の試料及び組織試料が含まれる。体液の試料がより好ましい。ＺＩＫＶ感染の診断に好ましい体液には、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿が含まれる。血液、特に血漿又は血清が最も好ましい。

【0322】

したがって、本発明はまた、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、又は本発明に係るキットオブパーツの、単離血液試料などの（体液の）単離試料がジカウイルスに感染しているかどうかの決定における使用を提供する。前記したように、ＺＩＫＶ感染を診断するための好ましい体液には、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿が含まれる。血液、特に血漿又は血清がより好ましい。

【0323】

ジカウイルス感染の診断のために、異なる診断アッセイを使用することができる。好ましい診断アッセイはイムノアッセイである。イムノアッセイの好ましい例としては、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光、免疫組織化学、及びフローサイトメトリが挙げられる。好ましくは、診断にはＥＬＩＳＡが含まれる。例えば、標準的ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、又は結合アッセイのブロックを使用することができる。

【0324】

好ましくは、診断アッセイは、診断される被験体の（単離）試料中における、
（ｉ）ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質それ自体（の存在）；及び／又は
（ｉｉ）抗ＺＩＫＶ ＮＳ１抗体（の存在）
を検出する。

【0325】

好ましくは、結合ブロックアッセイが使用される。このアッセイにおいて、診断される被験体からの単離試料（例えば、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿などの体液の試料）を、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに添加し、結合のためインキュベートした（例えば、少なくとも約３０分間又は少なくとも約１時間）。その後、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片を添加する（「プローブ抗体」として）。ここで、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、標識されていることが好ましく、例えばビオチン化又は西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされている。更なるインキュベーション時間（例えば、少なくとも約１分間、好ましくは少なくとも約３分間、より好ましくは少なくとも約５分間、更により好ましくは少なくとも約１０分間、最も好ましくは少なくとも約１５分間）の後、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の結合の阻害を決定することができる。

【0326】

一般に、結合の阻害は、被験体の試料中の抗ＺＩＫＶ ＮＳ１抗体が存在することを示し、したがって被験体のＺＩＫＶ感染を示す。対照的に、非感染被験体の試料では、典型的には、結合の阻害が想定されない。重要なことに、本発明のＺＩＫＶ ＮＳ１結合抗体を用いたこのようなアッセイは、既に他のフラビウイルスに感染している被験体においては陽性を示さない。フラビウイルスは、典型的には、ＺＩＫＶと交差反応する多数の抗体を誘導する。換言すれば、このアッセイは非常に特異的であり、交差反応性抗体によって影響されない。

【0327】

したがって、本発明はまた、以下の工程を含む、ジカウイルス感染のインビトロ診断のための結合ブロックアッセイを提供する：
（ｉ）ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質で被覆されたプレートに、診断される被験体の単離試料を添加し、前記試料を前記プレート上でインキュベートすること、
（ｉｉ）請求項４７～７５のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片、又は請求項７６に記載の複合体を添加すること、
（ｉｉｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の結合の結合の阻害を決定すること。

【0328】

好ましくは、診断される被験体由来の単離試料は、血液、唾液、及び尿から選択され、好ましくは、試料は、全血、血漿、又は血清などの血液試料である。

【0329】

また、工程（ｉｉ）で添加される抗体又はその抗原結合断片は、標識されている、好ましくはビオチン化されている、又は西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされていることが好ましい。

【0330】

更に、診断される被験体由来の単離試料は、好ましくは例えば１：５～１：５０、好ましくは１：５～１：２５、例えば１：１０で希釈される。

【0331】

好ましくは、工程（ｉ）におけるインキュベーション時間は、少なくとも５分間、好ましくは少なくとも１５分間、より好ましくは少なくとも３０分間、更により好ましくは少なくとも４５分間、最も好ましくは少なくとも６０分間である。

【0332】

更に、抗体又はその抗原結合断片を添加した後の工程（ｉｉ）において、抗体又はその抗原結合断片を少なくとも１分間、好ましくは少なくとも３分間、より好ましくは少なくとも５分間、更により好ましくは少なくとも１０分間、最も好ましくは少なくとも１５分間、インキュベートすることが好ましい。

【0333】

好ましくは、結合アッセイのブロックにおけるプローブ抗体として使用される、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片が、本発明に係る好ましい抗体又はその抗原結合断片である。例えば、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは、ジカウイルスＮＳ１タンパク質の抗原性部位Ｓ２に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片であることができる。最も好ましくは、結合アッセイのブロックにおいてプローブ抗体として使用される、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、以下で表されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３アミノ酸配列とＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列とを含む抗体又はその抗原結合断片である：（ｉ）配列番号１２７～１３１及び１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体；又は（ｉｉ）配列番号１２７～１３０及び１３２～１３３、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体。特に好ましくは、結合アッセイのブロックにおけるプローブ抗体として使用される、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１３４で表される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体、及び／又は配列番号１３５で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列、又は少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するその機能的配列変異体を含む抗体又はその抗原結合断片である。

【0334】

例えば、本発明に係る例示的なビオチン化抗体又はその抗原結合断片の結合の阻害は、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に対する７０％最大結合を達成するための、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の最適濃度を決定することによって評価することができる。例えば、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に対する７０％最大結合を達成するための、例示的抗体ｇＺＫＡ１５、ｇＺＫＡ２５、及びｇＺＫＡ３５の最適濃度は、それぞれ３８、１７、及び７ｎｇ／ｍｌであり得る。前記した結合ブロックアッセイを行った後、ｐ－ＮＰＰなどの基質を加え、ＥＬＩＳＡプレートを４０５ｎｍで読み取ることができ、結合の阻害率は以下の式（Ｉ）によって計算することができる。
（Ｉ）％阻害＝（１－［（ＯＤ試料－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）／（ＯＤ ｐｏｓ ｃｔｒ－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）］）×１００
式中、「％阻害」は、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片のＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質への結合の阻害のパーセンテージを意味し、「ＯＤ試料」は、試料の光学密度を意味し、「ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ」は、陰性対照の光学密度を意味し、「ＯＤ ｐｏｓ ｃｔｒ」は、陽性対照の光学密度を意味する。

【0335】

このアッセイは、ＤＥＮＶなどの他のフラビウイルス感染と区別できる、個体レベルでの臨床的、サブ臨床的、及び無症状のＺＩＫＶ感染を検出する能力などのいくつかの利点を提供する。特に、本発明に係る診断アッセイは、直接ＥＬＩＳＡ結合アッセイよりも高い精度を提供する。

【0336】

更に、本発明はまた、（単離試料における）ジカ感染の（インビトロでの）診断方法を提供し、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、又は本発明に係るキットオブパーツが、（体液の）単離試料（例えば、単離された血液試料）がジカに感染しているかどうかを判定するために使用される。

【0337】

診断における前記使用の好ましい実施形態が、診断方法にも適用される。例えば、（被験体の）好ましい単離された試料は、体液の試料及び組織試料を含む。体液の試料がより好ましい。ＺＩＫＶ感染の診断に好ましい体液には、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿が含まれる。血液、特に血漿又は血清が最も好ましい。更に、好ましい診断アッセイはイムノアッセイである。イムノアッセイの好ましい例には、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光、免疫組織化学、及びフローサイトメトリが含まれる。好ましくは、診断にはＥＬＩＳＡが含まれる。最も好ましくは、前記した結合ブロックアッセイが使用される。

【0338】

好ましくは、（単離試料中における）ジカ感染の（インビトロでの）診断のための方法は、
（ｉ）単離試料を、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、又は本発明に係る組成物と接触させる工程を含む。

【0339】

より好ましくは、（単離試料中における）ジカ感染の（インビトロでの）診断のための方法は、以下の工程を含む：
（０）診断される被験体からの単離試料（例えば、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿などの体液の試料）をＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに添加すること、
（ｉ’）更に、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片をＥＬＩＳＡプレートに添加すること（ここで、本発明に係る抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは標識されている（例えばビオチン化されている））、
（ｉｉ）任意に、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄すること、及び
（ｉｉｉ）本発明に係る抗体又はその抗原結合断片の結合の阻害を決定することを含む。

【0340】

更なる態様では、本発明はまた、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、本発明に係るキットオブパーツ、又は本発明に係るＺＩＫＶ診断方法を用いることにより、ジカウイルス感染と診断された被験体におけるＺＩＫＶ感染の治療又は予防に用いるための、本発明に係る中和抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を提供する。

【0341】

更なる態様では、本発明はまた、ジカウイルス感染を予防及び／又は治療する方法を提供し、前記方法は、以下の工程を含む：
（ｉ）ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、本発明に係るキットオブパーツ、又は本発明に係るＺＩＫＶ診断方法を用いることにより、被験体におけるジカウイルス感染を診断すること、及び
（ｉｉ）本発明に係る中和抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物を、前記被験体に投与すること。

【0342】

好ましくは、ジカウイルス感染を予防及び／又は治療するこの方法において、ジカウイルス感染を診断する工程（ｉ）は、（体液の）単離試料（例えば単離血液試料）についてのインビトロ診断として行われる。

【0343】

更なる態様では、本発明はまた、以下を含むキットオブパーツを提供する：
（ｉ）ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する本発明に係る抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る複合体、本発明に係る組成物、又は本発明に係るキットオブパーツ、及び
（ｉｉ）本発明に係る中和抗体又はその抗原結合断片、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、又は本発明に係る医薬組成物。

【0344】

そのようなキットオブパーツは、前記した方法において特に有用である。そのような方法及び／又はそのようなキットを使用することにより、ＺＩＫＶ感染を特異的に診断する、並びに予防及び／又は治療することができる。

【図面の簡単な説明】

【0345】

【図1】図１は、４つのＺＩＫＶ免疫ドナー（ＺＫＡ、ＺＫＢ、ＺＫＣ、及びＺＫＤ）由来の抗体の、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１－４のＥタンパク質及びＺＩＫＶ Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩドメイン；ＮＮＢ中和非Ｅタンパク質結合抗体に対する反応性（ＥＬＩＳＡ）及びＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１中和活性を示す。

【図2】図２は、４つのＺＩＫＶ免疫ドナー（ＺＫＡ、ＺＫＢ、ＺＫＣ、及びＺＫＤ）由来の抗体の、ＺＩＫＶ、ＤＥＮＶ１－４、及び他のフラビウイルスのＮＳ１タンパク質に対する反応性（ＥＬＩＳＡ）を示す。ＹＦＶ－黄熱病ウイルス；ＷＶＮ－西ナイルウイルス；ＪＥＶ－日本脳炎ウイルス；及びＴＢＥＶ－ダニ媒介性脳炎ウイルス（ｎｄ、測定されず）。

【図3】図３は、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１ Ｅ及びＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩタンパク質に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ７８、及びＺＫＡ６４抗体の結合を示す。

【図4】図４は、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＺＩＫＶ Ｅ、ＤＥＮＶ１ ＶＬＰ、及びＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩタンパク質に対するＺＫＡ１８５及びＺＫＡ１９０抗体の結合を示す。

【図5】図５は、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１－４ ＮＳ１タンパク質に対するＺＫＡ１５、ＺＫＡ２５、及びＺＫＡ３５抗体の結合を示す。

【図6】図６は、実施例３について、交差競合オクテット結合研究を用いたＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質抗原性部位マッピングを示す。（Ａ～Ｂ）ＺＩＫＶ ＮＳ１に特異的である（Ａ）、又はＤＥＮＶ ＮＳ１と交差反応性である（Ｂ）２４個のｍＡｂに対してオクテットによって行われた交差競合マトリックス。＋、二次Ａｂの結合の欠如；＋／－、二次ｍＡｂの結合の部分的損失；－、二次ｍＡｂの結合。取消線の施された細胞、試験されていない。（Ｃ）ＢＬＩ（オクテット）交差競合を用いて定義されたＺＩＫＶ ＮＳ１特異的ｍＡｂによって標的とされる抗原性部位の地図。

【図7】図７は、実施例４について、ＺＩＫＶ免疫（ｎ＝４）、ＤＥＮＶ免疫（ｎ＝５）、及び対照ドナー（ｎ＝４８）（１／１０希釈）に由来する血漿中のＺＩＫＶ ＮＳ１を検出するためのプローブとして、ｍＡｂ ＺＫＡ３５を用いる結合アッセイのブロックを示す。血漿試料を、ＮＳ１に結合する能力（白色ドット）及びビオチン化ｍＡｂ ＺＫＡ３５のＮＳ１への結合を阻害する能力（黒色ドット）について試験した。

【図8】図８は、実施例５について、フローサイトメトリで測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）及びＤＥＮＶ１に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の中和活性（感染細胞の％）を示す。

【図9】図９は、実施例５について、細胞生存率の読み出し（ｗｓｔ－１、Ｒｏｃｈｅ）で測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の中和活性を示す。

【図10】図１０は、実施例６について、フローサイトメトリで測定した、非許容性Ｋ５６２細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に対するＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ７８抗体の感染増強活性（ＡＤＥ、抗体依存性増強）（感染細胞の％）を示す。

【図11】図１１は、実施例６について、４つのＺＩＫＶ免疫血漿及び１つのＤＥＮＶ免疫血漿が、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を増強するのと同様の能力を示したことを示す（上のパネル）。このＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ抗体によって、５つの免疫血漿全てにおいて完全にブロックされた（下のパネル）。

【図12】図１２は、２０１３年以降のアジア系統由来の３９種のＺＩＫＶ株（１９４７年に単離されたアフリカ系統の原型株ＭＲ７６６を含む）のＥＤＩＩＩ領域のアミノ酸アラインメントを示す。

【図13】図１３は、実施例５について、フローサイトメトリで測定した、Ｖｅｒｏ細胞上のＺＩＫＶ（Ｈ／ＰＦ／２０１３、ＭＲ７６６及びＭＲＳ＿ＯＰＹ＿Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ＿ＰａＲｉ＿２０１５）の３種の株に対するＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ抗体の中和活性を示す（感染細胞の％）。

【図14】図１４は、実施例７について、欧州住民のＮＳ１結合ブロックを示す。イタリアとスイスで収集した試料のＢＯＢ値を示す。ＺＩＫＶ、一次及び二次ＤＥＮＶ－、ＷＮＶ－、及びＣＨＩＫＶ感染個体に由来する試料及びスイスの健常献血者の試料のＢＯＢ値がプロットされている。

【図15】図１５は、実施例８について、その量が増加するｍＡｂ（Ａ）の存在下での感染Ｖｅｒｏ細胞のパーセンテージで測定される、ＺＩＫＶの４株のパネルに対して試験したＺＫＡ１９０及びＣ８ ｍＡｂの中和を示す。また、ＩＣ５０値（Ｂ）及び統計値（Ｃ）も示す。データは、少なくとも２つの独立した実験を代表する。

【図16】図１６は、実施例９について、抗体ＺＫＡ１９０によるＺＩＫＶ感染の中和及び増強を示す。（Ａ）Ｖｅｒｏ細胞のプラークアッセイ（左パネル）及びフルオロフォア標識抗Ｅ抗体を用いた感染ｈＮＰＣの間接免疫蛍光（右パネル）によって測定される、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ、及び対照ｍＡｂによるｈＮＰＣのＺＩＫＶ ＰＲＶＡＢＣ５９株感染の中和。（Ｂ）ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡによる非許容性Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染のＡＤＥ。（Ｃ）異なるＺＩＫＶ陽性患者からの血漿血清の連続希釈物と共にプレインキュベートされたときにＫ５６２細胞に誘導されたＡＤＥ（左パネル）。ＺＫＡ１９０ ＬＡＬＡをＺＩＫＶ－血清複合体に添加すると、ＡＤＥが阻害される（右パネル）。（Ｄ）ＺＩＫＶが、ＤＥＮＶ免疫ドナー由来のｐｒＭ交差反応性ｍＡｂ（ＤＶ６２）の連続希釈液とプレインキュベートされたときにＫ５６２細胞に誘導されるＡＤＥ。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、ｐｒＭ反応性抗体ＤＶ６２と複合体化すると、ＺＩＫＶのＡＤＥを阻害する。（Ｅ）示されたｍＡｂの連続希釈によるＤＥＮＶ２血漿（左パネル）又は抗ｐｒＭ ＤＶ６２ ｍＡｂ（右パネル）のピーク増強希釈によって誘導されるＡＤＥに対する効果。

【図17】図１７は、実施例１０について、ＺＫＡ１９０エピトープの同定及びＺＩＫＶ株におけるその保存の分析を示す。（Ａ）非標識化ＺＫＡ１９０ Ｆａｂの非存在下（黒色）又は存在下（赤色）における１５Ｎ標識化ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩの［１５Ｎ、１Ｈ］－ＨＳＱＣスペクトルのオーバーレイ。相違から、抗体結合によって影響されるＥＤＩＩＩ残基を同定する。（Ｂ）ＺＫＶ ＥＤＩＩＩとの複合体中のＺＫＡ１９０ ＦａｂのＮＭＲエピトープマッピング。化学シフト摂動（ＣＳＰ、ｙ軸）は、ＥＤＩＩＩ残基番号に対してプロットされている。抗体結合によって影響される残基は赤色である。（Ｃ）ＮＭＲエピトープマッピングによって同定されたＦＧループ中の残基は、Ｅタンパク質のｍｏｌモルＡに一部隠れているが、ｍｏｌＢ及びｍｏｌＣでは、大部分が露出している。Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩは青色で着色した。ＮＭＲエピトープマッピングによって同定される残基は、ＦＧループ中のものが緑色で着色されていることを除いて、マゼンタで着色されている。隣接するＥタンパク質は灰色表面として示される。（Ｄ）２０１６年１１月２４日現在のＺＩＫＶ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＮＣＢＩ）データベースに見られる２１７種のＺＩＫＶ株由来の配列の分析によって計算されるＺＫＡ１９０エピトープにおけるアミノ酸残基保存レベル。（Ｅ）エピトープとドッキング結果のパラトープとの間の電荷相補性を示すオープンブック表現。エピトープ及びパラトープの境界は緑色で囲まれている。Ｆａｂの重鎖と軽鎖の境界及びＥＤＩＩＩ上の対応するフットプリントは、黄色の破線で示されている。

【図18】図１８は、実施例１０について、ＮＭＲ及びドッキングによって同定されたＺＫＡ１９０エピトープを示す。（Ａ）ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩの１２個の最も低いエネルギーのＮＭＲ構造のイラスト表示。ＺＫＡ１９０結合によって影響される残基は赤色で示される。コンストラクトのＮ末端における柔軟性は明らかである。（Ｂ）ＺＫＡ１９０のモデル：計算結果のドッキングと分子シミュレーションにより得られたＥＤＩＩＩ複合体の、ＮＭＲ結果による検証。ＥＤＩＩＩ（灰色）上のＮＭＲ同定されたエピトープは赤色である。ＺＫＡ１９０重鎖及び軽鎖は、それぞれ暗色及び薄緑色に着色されている。変異した場合に抗体結合に影響を及ぼす又は及ぼさないＥＤＩＩＩ残基は、それぞれ橙黄色及び青色のスティックとして示される。（Ｃ）ＮＭＲ同定されたＺＫＡ１９０エピトープ（赤色）は、ウイルス表面（白色）上で接近可能である。

【図19】図１９は、実施例１０について、ｗｔ又は変異したＥＤＩＩＩのＺＫＡ１９０ ＩｇＧへの結合を示す。ＳＰＲデータ及び結合動力学が示される。結合に影響を及ぼす（赤色のハイライト）又は影響を及ぼさないＥＤＩＩＩ変異体は、図に示される通りである。

【図20】図２０は、実施例１１について、共焦点顕微鏡検査実験の結果を示す。ＺＫＡ１９０ Ｆａｂ又は完全ＩｇＧのいずれかのＩＣ５０値の１００００倍を超える濃度でインキュベートしたＺＩＫＶをＶｅｒｏ細胞に添加した。ＺＩＫＶ：抗体複合体は細胞内で検出され（緑色）、エンドソームと共局在する（赤色、黄色のオーバーレイ）。エンドソーム及び酸性オルガネラは、Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ ｒｅｄでマークされている。Ａｌｅｘａ－４８８コンジュゲートＺＫＡ１９０は緑色である。核はＤＡＰＩ（青色）で染色されている。

【図21】図２１は、実施例１２について、ＺＫＡ１９０の予防的及び治療的有効性を示す。（Ａ）ＺＫＡ１９０は、致死量のＺＩＫＶ株ＭＰ１７４５１を投与するマウス（（Ａ）におけるＡ１２９及び（Ｂ）におけるＡＧ１２９）に予防的に投与したとき、ＺＩＫＶ感染に対して強力に防御的である。実験は、１群あたりＮ＝４～８頭のマウスを使用した。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を示す（Ａ）。Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定を用いて有意性を判定した。パネルＡ、左上：５、１、及び０．２ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ ｍＡｂ、Ｐ＝０．００３１；０．０４ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０対Ｃｔｒ ｍＡｂ、Ｐ＝０．０１１６；５、１、０．２、及び０．０４ｍｇ／ｋｇのＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ対Ｃｔｒ ｍＡｂ、Ｐ＝０．００３１。パネルＡ、右上：１４～１５日間に亘ってモニターしたマウスの罹患率スコア（２つの異なるスコアリング方法を用いた；以下を参照（Ｄｏｗａｌｌ， Ｓ．Ｄ．， Ｇｒａｈａｍ， Ｖ．Ａ．， Ｒａｙｎｅｒ， Ｅ．， Ａｔｋｉｎｓｏｎ， Ｂ．， Ｈａｌｌ， Ｇ．， Ｗａｔｓｏｎ， Ｒ．Ｊ．， Ｂｏｓｗｏｒｔｈ， Ａ．， Ｂｏｎｎｅｙ， Ｌ．Ｃ．， Ｋｉｔｃｈｅｎ， Ｓ．， ａｎｄ Ｈｅｗｓｏｎ， Ｒ． （２０１６）． Ａ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． ＰＬｏＳ Ｎｅｇｌ Ｔｒｏｐ Ｄｉｓ １０， ｅ０００４６５８－１３）。パネルＡ、下のパネル：マウスの体重。パネルＢ：ＺＫＡ１９０又はＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを、ＺＩＫＶ感染後の異なる時点で１５ｍｇ／ｋｇで投与した。パネルＢ、左上：Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を示す。実験は、１群あたりＮ＝５頭のマウスを使用した。Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定を用いて有意性を判定した。１日目、２日目、３日目、又は４日目のいずれかに与えたＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ対Ｃｔｒ、Ｐ＝０．００１６。パネルＢ、右上：（Ｄｏｗａｌｌ ｅｔ ａｌ。、２０１６）にしたがい、１４日間に亘ってモニターしたマウスの罹患率スコア。マウスの体重減少について１４日間に亘ってモニターした（パネルＢ、下のパネル）。対照抗体は、ＲＳＶ Ｆタンパク質に特異的なＭＰＥ８である（Ｃｏｒｔｉ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ． Ｃｒｏｓｓ－ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ａ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｎａｔｕｒｅ ５０１， ４３９－４４３ （２０１３））。

【図22】図２２は、実施例１２について、ＺＩＫＶ株ＭＰ１７４１に対する抗ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ ＺＫＡ１９０の予防的有効性を示す。（Ａ）全ての動物の血中において、５日目にＰＦＵ／ｍｌとして測定したウイルス血症を示す。（Ｂ）全ての動物の血中、及び試験終了時に動物を屠殺したとき、又は人道的エンドポイントが満たされたときの血液及び指定組織において、５日目にｑＰＣＲによってゲノムコピー数／ｍｌとしてウイルス量を測定した。（Ｃ）マウスの体重減少について１４日間に亘ってモニターした。（Ｄ）５つの血液試料中のヒト血清ＩｇＧ濃度。ノンパラメトリックな対応のないマンホイットニーＵ検定による対照抗体治療と比較して有意性を決定した。^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊ｐ＜０．００１。

【図23】図２３は、実施例１２について、抗ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ ＺＫＡ１９０の治療効果を示す。（Ａ）全ての動物の血中において、５日目にＰＦＵとしてウイルス量を測定した。（Ｂ）全ての動物の血中、及び試験終了時に動物を屠殺したとき、又は人道的エンドポイントが満たされたときに血液及び指定組織において、５日目にｑＰＣＲによってゲノムコピー数としてウイルス量を測定した。ノンパラメトリックな対応のないマンホイットニーＵ検定による対照抗体治療と比較して有意性を決定した。^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１。（Ｃ）５日目の血液サンプル中のヒト血清ＩｇＧ濃度。

【0346】

実施例
本発明の例示的な実施形態を、以下の実施例に提供する。以下の実施例は、説明のためにのみに示され、本発明の使用において当業者を助けるためのものである。これらの実施例は、本発明の範囲を何ら限定することを意図するものではない。

【0347】

実施例１：ＺＩＫＶ特異的抗体の単離及びモノクローナル抗体の産生
ＣＤ２２マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて４体のＺＩＫＶ感染ドナー（ＺＫＡ、ＺＫＢ、ＺＫＣ、及びＺＫＤ）の凍結保存末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＩｇＧ＋記憶Ｂ細胞を単離し、その後、セルソーティングにより、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡを有する細胞を枯渇させた。次いで、ＺＩＫＶ感染ドナー由来の記憶Ｂ細胞を、これまでに記載されているように（Ｔｒａｇｇｉａｉ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． １０， ８７１－８７５， ２００４）、多数の複製ウェル中でＥＢＶ（エプスタイン・バール・ウイルス）及びＣｐＧ（ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド２００６）で不死化し、次いで培養上清を、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質又はＺＩＫＶ Ｅタンパク質へのそれらの結合を試験するために、３８４ウェルベースのマイクロ中和アッセイ及び結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を並行して使用する一次スクリーニングで試験した。結合アッセイの結果を図１（ＺＩＫＶ Ｅタンパク質への結合）及び図２（ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質への結合）に示す。

【0348】

中和アッセイをＶｅｒｏ細胞で行った。３８４ウェルプレート中、感染率（ｍ．ｏ．ｉ、感染多重度）が０．３５となるＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３を、３７％（５％ＣＯ_２）で１時間、上清と共にインキュベートした後、予め播種した５，０００個のＶｅｒｏ細胞に添加した。これらを更に５日間インキュベートし、その後上清を除去し、ＷＳＴ－１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を添加した。陽性培養物を回収して増殖させた。陽性培養物から、ＶＨ及びＶＬ配列をＲＴ－ＰＣＲによって回収した。抗体を、ヒトＩｇＧ１とＩｇカッパ又はＩｇラムダ発現ベクター（Ｍｉｃｈｅｌ Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＵＳ）から厚意により提供）にクローニングした。これについては、本質的には、以下に記載されている（Ｔｉｌｌｅｒ Ｔ， Ｍｅｆｆｒｅ Ｅ， Ｙｕｒａｓｏｖ Ｓ， Ｔｓｕｉｊｉ Ｍ， Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ ＭＣ， Ｗａｒｄｅｍａｎｎ Ｈ （２００８） Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｓｉｎｇｌｅ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｃｌｏｎｉｎｇ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２９： １１２－１２４）。モノクローナル抗体は、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞から、又は２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって産生した。Ｂ細胞又はトランスフェクトされた細胞からの上清を回収し、ＩｇＧをプロテインＡ又はプロテインＧクロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってアフィニティー精製し、ＰＢＳに対して脱塩した。

【0349】

図１は、選択されたＺＩＫＶ中和抗体の概要を提供する（それらのＣＤＲ及び重鎖／軽鎖可変領域のアミノ酸配列についての表１及び２参照）。図１の最後の２列は、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１（試験した場合）の中和活性（ＩＣ_５０）を示す。他のカラムは、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質（ＺＩＫＶ Ｅ）、ＤＥＮＶ１ Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ１ Ｅ）、ＤＥＮＶ２ Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ２ Ｅ）、ＤＥＮＶ３ Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ３ Ｅ）、ＤＥＮＶ４ Ｅタンパク質（ＤＥＮＶ４ Ｅ）、ＤＥＮＶ１ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ１ ＶＬＰ）、ＤＥＮＶ２ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ２ ＶＬＰ）、ＤＥＮＶ３ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ３ ＶＬＰ）、及びＤＥＮＶ４ウイルス様粒子（ＤＥＮＶ４ ＶＬＰ）、並びにＺＩＫＶ Ｅタンパク質のＥＤＩＩＩ領域（ＤＩＩＩ ＺＫＡ）に対する抗体の結合活性（ＥＣ_５０）を提供する。

【0350】

追加の抗体を、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質に結合する能力単離した（図２参照）。陽性培養物を回収して増殖させた。陽性培養物から、ＶＨ及びＶＬ配列をＲＴ－ＰＣＲによって回収した。抗体を、ヒトＩｇＧ１とＩｇカッパ又はＩｇラムダ発現ベクター（Ｍｉｃｈｅｌ Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＵＳ）から厚意により提供）にクローニングした。これについては、本質的には、以下に記載されている（Ｔｉｌｌｅｒ Ｔ， Ｍｅｆｆｒｅ Ｅ， Ｙｕｒａｓｏｖ Ｓ， Ｔｓｕｉｊｉ Ｍ， Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ ＭＣ， Ｗａｒｄｅｍａｎｎ Ｈ （２００８） Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｓｉｎｇｌｅ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｃｌｏｎｉｎｇ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３２９： １１２－１２４）。モノクローナル抗体は、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞から、又は２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって産生した。Ｂ細胞又はトランスフェクトされた細胞からの上清を回収し、ＩｇＧをプロテインＡ又はプロテインＧクロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってアフィニティー精製し、ＰＢＳに対して脱塩した。

【0351】

図２は、選択されたＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質結合抗体の概要を提供する（それらのＣＤＲ及び重鎖／軽鎖可変領域のアミノ酸配列についての表４及び５を参照）。即ち、図２は、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質（ＺＩＫＶ ＮＳ１）、ＤＥＮＶ１ ＮＳ１タンパク質（ＤＥＮＶ１ ＮＳ１）、ＤＥＮＶ２ ＮＳ１タンパク質（ＤＥＮＶ２ ＮＳ１）、ＤＥＮＶ３ ＮＳ１タンパク質（ＤＥＮＶ３ ＮＳ１）、ＤＥＮＶ４ ＮＳ１タンパク質（ＤＥＮＶ４ ＮＳ１）、黄熱ウイルスＮＳ１タンパク質（ＹＦＶ ＮＳ１）、西ナイルウイルスＮＳ１タンパク質（ＷＮＶ ＮＳ１）、及び日本脳炎ウイルスＮＳ１タンパク質（ＪＥＶ ＮＳ１）、並びにダニ媒介性脳炎ウイルスＮＳ１タンパク質（ＴＢＥＶ ＮＳ１）に対する抗体の結合活性（ＥＣ_５０）を提供する。

【0352】

実施例２：抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８の特徴付け
実施例１において、多数のＺＩＫＶ中和抗体を同定し、ＺＩＫＶ、特にＺＩＫＶ Ｅタンパク質及びＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩに対する特異性並びにＤＥＮＶに対するそれらの交差反応性について特徴付けをした。次いで、実施例１に記載の抗体ＺＫＡ１９０（配列番号１～１８）、ＺＫＡ１８５（配列番号１９～３６）、ＺＫＡ２３０（配列番号３７～５４）、ＺＫＡ６４（配列番号７３～９０）、及びＺＫＡ７８（配列番号５５～７２）を選択し、ＥＬＩＳＡにより、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質（「ＺＩＫＶ」）、ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩ（「ＤＩＩＩＺＩ」）に対して更に試験し、またデングウイルス（ＤＥＮＶ、血清型番号１）のＥタンパク質に対しても試験した。この目的のために、標準ＥＬＩＳＡを使用した。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを１又は３μｇ／ｍｌのＺＩＫＶ Ｅタンパク質でコーティングし、ＰＢＳ中１０％ＦＣＳでブロッキングし、血清又はヒト抗体と共にインキュベートし、洗浄した。ＡＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とのインキュベーションにより、結合した抗体を検出した。次いで、プレートを洗浄し、基質（ｐ－ＮＰＰ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、プレートを４０５ｎｍで読み取った。モノクローナル抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要な抗体の濃度（ＥＣ_５０）を測定することによって決定した。

【0353】

結果を図３及び図４に示す。注目すべきことに、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０はＺＩＫＶ Ｅ及びＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩ（「ＤＩＩＩ ＺＩ」）と低いＥＣ_５０値で結合し、これは、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０がＺＩＫＶ Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ（ＥＤＩＩＩ）に結合していることを示す。ＺＫＡ７８は、ＺＩＫＶ Ｅに結合するがＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩには結合せず、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶ Ｅに結合しているがＥＤＩＩＩ領域を標的化しないことを示す。それらのかなりのＺＩＫＶ中和活性（図１参照）にもかかわらず、抗体ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０は、ＺＩＫＶ Ｅ及びＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩに対する検出可能な結合を示さなかった（図４）。したがって、ＺＫＡ１８５及びＺＫＡ２３０は、「中和非Ｅ結合」（ＮＮＢ）抗体と称した。これらのＮＮＢ抗体は、ＺＩＫＶ感染性ビリオン上に提示されるが、可溶性タンパク質上には提示されない四次エピトープを認識すると考えられる。

【0354】

更に、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ６４はいずれも、ＤＥＮＶ Ｅタンパク質（図１、ＤＥＮＶ１－４血清型、及び図３及び４）に対する検出可能な結合を示さず、これは、ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、及びＺＫＡ６４がＺＩＫＶに対して特異的であり、デング熱ウイルスと交差反応性ではないことを示す。対照的に、ＺＩＫＶ ＥＤＩ／ＩＩに結合するがＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩには結合しないと考えられるＺＫＡ７８（図３参照）は、ＤＥＮＶ Ｅタンパク質に結合し（図１及び３）、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶとＤＥＮＶの両方に結合する交差反応性抗体であることを示す。

【0355】

これらの結果を更に確認するために、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質結合抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８を、デングウイルスのＥタンパク質（ＤＥＮＶ、血清型番号１～４）に対して更に試験した。ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０はＤＥＮＶ１－４ Ｅタンパク質に結合せず、これは、ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０がＺＩＫＶに特異的であることを裏付ける。対照的に、ＺＫＡ７８はＤＥＮＶ１－４ Ｅに結合し、これは、ＺＫＡ７８がＺＩＫＶ及びＤＥＮＶの両方のＥタンパク質に結合する交差反応性抗体であることを裏付ける（図１参照）。

【0356】

実施例３：血清学的診断のためのＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体の特徴付け
実施例１において、多数のＮＳ１反応性抗体を同定し、ＺＩＫＶ ＮＳ１に対する特異性及び他のフラビウイルスＮＳ１タンパク質に対する交差反応性について特徴付けた（図２）。次いで、ＺＩＫＶ ＮＳ１及びＤＥＮＶ１ ＮＳ１、ＤＥＮＶ２ ＮＳ１、ＤＥＮＶ３ ＮＳ１、及びＤＥＮＶ４ ＮＳ１に対する結合について、抗体ＺＫＡ１５（配列番号９１～１０８）、ＺＫＡ２５（配列番号１０９～１２６）、及びＺＫＡ３５（配列番号１２７～１４４）を更に特徴付けた。この目的のために、標準ＥＬＩＳＡを使用した。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ｍｌのＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質でコーティングし、ＰＢＳ中１０％ＦＣＳでブロッキングし、血清又はヒト抗体と共にインキュベートし、洗浄した。ＡＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とのインキュベーションにより、結合した抗体を検出した。次いで、プレートを洗浄し、基質（ｐ－ＮＰＰ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、プレートを４０５ｎｍで読み取った。モノクローナル抗体結合の相対的親和性は、飽和時の最大結合の５０％を達成するために必要な抗体の濃度（ＥＣ_５０）を測定することによって決定した。

【0357】

結果を図５に示す。３つの抗体（ＺＫＡ１５、ＺＫＡ２５、及びＺＫＡ３５）はいずれもＺＩＫＶ ＮＳ１に高い親和性で結合するが、ＤＥＮＶ１－４ ＮＳ１抗原には結合しなかった（図５）。

【0358】

抗体のＺＩＫＶ ＮＳ１への結合を更に調べるために、バイオレイヤー干渉競合アッセイを用いた。ＺＩＫＶ ＮＳ１に特異的な１３種の抗体（即ち、ＤＥＮＶ ＮＳ１と交差反応性ではない）（即ち、抗体ＺＫＡ２４、ＺＫＡ１５、ＺＫＡ３２、ＺＫＡ１９、ＺＫＡ５０、ＺＫＡ３７、ＺＫＡ４６、ＺＫＡ１０、ＺＫＡ４８、ＺＫＡ３５、ＺＫＡ２５、ＺＫＡ４４、及びＺＫＡ３０）（図６Ａ参照）に対してバイオレイヤー干渉（ＢＬＩ；Ｏｃｔｅｔ）を用いて交差競合マトリックスを生成した。図２から理解することができるように、これらの１３種の抗体はいずれも、ＤＥＮＶ ＮＳ１に対する検出可能な結合を示さなかった。

【0359】

競合アッセイ及び抗原性部位決定は、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて３７℃で測定した。ＰＢＳ中で２．５μｇ／ｍｌに希釈したＺＩＫＶ－ＮＳ１タンパク質をＡＰＳ被覆センサーチップの表面に７～９分間固定化した。コーティングされたバイオセンサーを、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中０．１％ＢＳＡ）を含むウェルに６分間入れ、遊離のバイオセンサー結合部位をブロックした。次いで、コーティングされたバイオセンサーを、ブロッキングバッファ中１０μｇ／ｍｌに希釈したＺＩＫＶ－ＮＳ１に特異的な単一の精製ｍＡｂのセットと共に８分間インキュベートした。第１のセットのｍＡｂの結合後（ステップ１）、バイオセンサーを異なるｍＡｂを含むウェルに８分間移動させた（ステップ２）。第２のｍＡｂの会合は、第１のｍＡｂと比較して異なる抗原性部位の認識をもたらした（例えば、非競合）。会合が検出されないか、検出される会合が低いときに、ステップ２において競争又は部分競争がそれぞれ決定された。ＺＩＫＶ ＮＳ１上の抗原性部位マッピングを予測するために、競合を複数回実行して、交差競合マトリックスを作成した。

【0360】

結果を図６Ａ及び６Ｃに示す。まず、試験したＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体はいずれも、抗原性部位Ｓ１及び／又はＳ２に結合していた（図６Ａ）。しかし、いくつかの抗体は他のものと競合しなかった。例えば、ＺＫＡ１５はＺＫＡ２５及びＺＫＡ３５との結合に競合せず、その逆も同様であった（図６Ａ）。したがって、抗体ＺＫＡ１５は抗原性部位Ｓ１に割り当てられ、抗体ＺＫＡ２５及びＺＫＡ３５は抗原性部位Ｓ２に割り当てられた（図６Ｃ）。まとめると、使用された抗体に基づいて、ＺＩＫＶ ＮＳ１上の抗原性部位（Ｓ１及びＳ２）が同定された（図６Ｃ）。

【0361】

更に、ＺＩＫＶ ＮＳ１タンパク質及びＤＥＮＶ ＮＳ１タンパク質に交差反応する１０種の抗体（即ち、ＺＫＡ１８、ＺＫＡ２９、ＺＫＡ３９、ＺＫＡ５３、ＺＫＡ５４、ＺＫＢ１９、ＺＫＢ２３、ＺＫＣ２９、ＺＫＣ３３、及びＺＫＣ３４；図６Ｂ）のＺＩＫＶ ＮＳ１上の抗原性部位Ｓ１及び／又はＳ２への結合を調べた。図２から理解することができるように、これらの１０種の抗体はいずれも、ＤＥＮＶ ＮＳ１への結合を示した。これらの１０種の交差反応性抗体を、ＺＩＫＶ ＮＳ１ Ｓ１特異的抗体ＺＫＡ１５及びＺＩＫＶ ＮＳ１ Ｓ２特異的抗体ＺＫＡ３５に対して、（ＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体について）前記した交差競合アッセイで試験した。

【0362】

結果を図６Ｂに示す。興味深いことに、試験した１０種の交差反応性抗体はいずれも、ＺＩＫＶ ＮＳ１上の抗原性部位Ｓ１及び／又はＳ２への結合について、ＺＫＡ１５及び／又はＺＫＡ３５と競合しなかった（図６Ｂ）。これらの結果は、ＺＫＡ１５及びＺＫＡ３５抗原性部位がＮＳ１交差反応性抗体によって標的とされないことを示す。したがって、ＮＳ１抗原性部位Ｓ１及びＳ２は、ＺＩＫＶ特異的抗体の標的とされたが、交差反応性抗体の標的とはされなかった。

【0363】

実施例４：ＺＩＫＶ感染の診断におけるＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体の使用
本実施例において、ＺＩＫＶ感染の診断における本発明のＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体の有用性を調べた。より具体的には、ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ感染ドナーの血漿試料中のＺＩＫＶ ＮＳ１に対して誘発された抗体の存在又は非存在を特異的に検出するための、本発明のＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体の使用を決定した。

【0364】

この目的のために、「結合ブロック」アッセイを使用した。特に、ＺＩＫＶ ＮＳ１反応性血漿抗体の、ＺＩＫＶ ＮＳ１に対するビオチン化抗体ＺＫＡ３５の結合を阻害する能力を測定した。この目的のために、ＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体ＺＫＡ３５をＥＺ－Ｌｉｎｋ ＮＨＳ－ＰＥＯ固相ビオチン化キット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてビオチン化した。標識されたＺＫＡ３５をＺＩＫＶ ＮＳ１への結合について試験して、最大結合の７０％を達成するためのＺＫＡ３５の最適濃度を決定した。ＺＩＫＶ ＮＳ１でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに、ＺＩＫＶ（ｎ＝４）、ＤＥＮＶ免疫（ｎ＝５）ドナー、及び対照（ｎ＝４８）血漿（１／１０希釈）由来の血漿試料を添加した。１時間後、ビオチン化抗ＺＩＫＶ ＮＳ１抗体ＺＫＡ３５を最大結合の７０％を達成する濃度で添加し、混合物を室温で１５分間インキュベートした。プレートを洗浄し、基質（ｐ－ＮＰＰ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、プレートを４０５ｎｍで読み取った。阻害パーセントは以下のように計算した：（１－［（ＯＤ試料－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）／（ＯＤ ｐｏｓ ｃｔｒ－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）］））×１００。

【0365】

結果を図７に示す。注目すべきことに、ＮＳ１上の抗原性部位Ｓ２への抗体ＺＫＡ３５結合は、ＺＩＫＶ免疫ドナーからの血漿試料によってのみ阻害されたが、ＤＥＮＶ免疫ドナーでは阻害されず、その結合は、４８対照血漿試料によっても阻害されなかった（図７）。したがって、このアッセイは、集団レベルで臨床的及びサブ臨床的なＺＩＫＶ感染を特異的に検出するために使用することができる。

【0366】

実施例５：本発明に係る抗体は、ＺＩＫＶ感染を強力に中和する
単離した抗体ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１８５、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ６４、及びＺＫＡ７８を、インビトロでＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ１感染を中和する能力について試験した。

【0367】

抗体によるＤＥＮＶ及びＺＩＫＶ感染の中和は、マイクロ中和フローサイトメトリに基づくアッセイを用いて測定した。抗体の各種希釈物をＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．３５）又は弱毒化ＤＥＮＶ１（いずれもＭＯＩ０．０４）と３７℃で１時間混合し、９６ウェル平底プレート中の５０００個のＶｅｒｏ細胞／ウェルに添加した。ＺＩＫＶについては４日後、ＤＥＮＶについては５日後に、細胞を２％ホルムアルデヒドで固定し、ＰＢＳ１％ＦＣＳ０．５％サポニン中に透過し、マウスｍＡｂ４Ｇ２で染色した。細胞を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ－ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５４８５１６４）にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧとインキュベートし、フローサイトメトリで分析した。他の場合には、ＺＩＫＶ中和データは、また、ＷＳＴ－１試薬（Ｒｏｃｈｅ）を用いて細胞生存度を測定することによって決定される。中和力価（５０％阻害濃度［ＩＣ_５０］）は、細胞のみの対照ウェルと比較して感染を５０％低下させた抗体濃度として表した。

【0368】

結果を図８、９、及び１３に示す。ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０及びＮＮＢ ｍＡｂ ＺＫＡ２３０は、ＺＩＫＶ中和（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）において非常に強力であり、９及び１０ｎｇ／ｍｌでＩＣ_５０値が９３であった（図８、上のパネル）。対照的に、交差反応性抗体ＺＫＡ７８は、ＺＩＫＶ感染性及び交差中和化ＤＥＮＶ１感染性を部分的にしか中和しなかった（図８、下のパネル）。同様のデータが、ＷＳＴ－１試薬で測定したＺＩＫＶ誘発細胞変性効果を測定することによって得られた（図９）。この第２のアッセイにおいて、ＮＮＢ抗体ＺＫＡ１８５も試験抗体のパネルに含まれ、最も強力な抗体ＺＫＡ１９０（ＥＤＩＩＩ特異的）及びＺＫＡ２３０（ＮＮＢ）と同様のＩＣ５０を示した。

【0369】

ＺＩＫＶ Ｈ／ＰＨ／２０１３株を中和する能力（本実施例）に加えて、超強力なＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０抗体は、それぞれＺＩＫＶ株ＭＲ７６６及びＳＰＨ２０１５由来のＥタンパク質及びＥＤＩＩＩにも結合することに留意することが重要である（図１及び図３）。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、２つの更なるＺＩＫＶ株（ＭＲ７６６及びＭＲＳ＿ＯＰＹ＿Ｍａｒｔｉｎｉｑｕｅ＿ＰａＲｉ＿２０１５）を効果的に中和することも確認された（図１３）。まとめると、結果から、超強力ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０抗体は、異なる遺伝子型及び起源（ウガンダ、フランスポリネシア、マルティニーク、及びブラジルの東アフリカ及びアジア人）に属する複数のＺＩＫＶ株と交差反応することが示される。

【0370】

実施例６：「ＬＡＬＡ」突然変異は、血清抗体によるＺＩＫＶ感染の抗体依存性の増強を阻害する
また、中和抗体を、非許容性Ｋ５６２細胞におけるＺＩＫＶの感染を増強する能力について試験した（抗体依存性増強アッセイ、ＡＤＥアッセイ）。ＡＤＥは、Ｋ５６２細胞を用いたフローベースのアッセイによって測定した。抗体及びＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ０．１７５）を３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに添加した。４日後、細胞を固定し、透過処理し、ｍ４Ｇ２で染色した。フローサイトメトリにより感染細胞の数を決定した。

【0371】

結果を図１０に示す。抗体はいずれも、広い濃度範囲で、非許容性Ｋ５６２細胞におけるＺＩＫＶの感染を増強し、ある濃度では、Ｖｅｒｏ細胞に対するＺＩＫＶ感染を完全に中和した（図１０）。注目すべきことに、ＥＤＩＩＩ特異的抗体ＺＫＡ６４及びＺＫＡ１９０は、１μｇ／ｍｌを超えるＫ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を完全に中和したが、ＮＮＢ抗体ＺＫＡ２３０では中和できず、この結果は、Ｆｃ－ガンマ－受容体内在化ウイルスに対する遊離ウイルスの中和メカニズムが異なることによる可能性がある。対照的に、ＺＩＫＶ感染性を部分的にしか中和しない交差反応性ＺＫＡ７８は、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を効果的に増強した。これらの結果は、ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ感染のいずれかによって惹起される交差反応性抗体が異種ＡＤＥを媒介し得ることを示す。

【0372】

これに鑑み、ＡＤＥが免疫血清によっても誘導され得るかどうか、及びこれが「ＬＡＬＡ変異体」として送達される抗体を中和することによってブロックされ得るかどうかを調べた。ＬＡＬＡ変異体を得るために、部位特異的突然変異誘発を用いて天然ロイシンに代えてアラニンを置換することにより、重鎖の各々をＣＨ２ドメインのアミノ酸４及び５で突然変異させた。前記したように、（ヒトＩｇＧ１抗体の）ＬＡＬＡ変異体は、Ｆｃ－ガンマ－受容体及び補体に結合しない。

【0373】

ＺＩＫＶ ＡＤＥにおけるＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ抗体の効果を調べるために、ＡＤＥアッセイの阻害を用いた。ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ免疫血漿を用いてＺＩＫＶのＡＤＥが観察されたので、３７℃で３０分間、ＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．１７５）を一次ＺＩＫＶ又はＤＥＮＶ感染ドナー由来の血漿と混合した。ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ抗体を５０μｇ／ｍｌで添加し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルと混合し、３日間インキュベートした。次いで、細胞を４Ｇ２で染色し、フローサイトメトリで分析した。

【0374】

結果を図１１に示す。相同的なセッティングでは、回復期の患者から回収した４種のＺＩＫＶ免疫血漿及び１種のＤＥＮＶ免疫血漿は、Ｋ５６２細胞のＺＩＫＶ感染を増強する同様の能力を示した（図１１、上のパネル）。このＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ抗体によって完全にブロックされた（図１１、下のパネル）。

【0375】

注目すべきことに、ＺＩＫＶ及びＤＥＮＶ免疫血漿のＡＤＥ効果は、ＥＤＩＩＩ特異的ＺＫＡ６４－ＬＡＬＡ抗体によって完全にブロックされた。単一のＥＤＩＩＩ特異的ＬＡＬＡ抗体のＡＤＥブロッキング能は、血清増強抗体との競合において上回る（ｏｕｔ－ｃｏｍｐｅｔｅ）能力だけでなく、一旦エンドソームに内在化したウイルスを中和する能力にも関連し得る。

【0376】

これらの結果は、「ＬＡＬＡ」形態で発達したＺＫＡ１９０、ＺＫＡ２３０、ＺＫＡ１８５、又はＺＫＡ６４などの強力に中和する抗体が、先天性ＺＩＫＶ感染を予防するための予防的又は治療的設定（例えば、妊娠中の女性及び／又は高リスク領域に住む人々）で使用される有効性が高いことを示している。ＬＡＬＡ形態の使用は、ＺＩＫＶ ＡＤＥのリスクを回避し、前記のように、既にＤＥＮＶに対して免疫されている患者の場合など、既存の交差反応性抗体のＡＤＥもブロックする可能性がある。

【0377】

実施例７：ＺＩＫＶ感染の診断のためのＺＩＫＶ ＮＳ１特異的抗体を用いた欧州住民由来の試料の分析
本実施例は、実施例４に記載の結合ブロックアッセイの遮断に基づく。ＺＩＫＶ ＮＳ１ ＢＯＢアッセイの特異性を更に評価するために、ＤＥＮＶ、ＷＮＶ、又はチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）に感染した患者から得られた多数の試料を試験した。

【0378】

この目的のために、「結合ブロック」アッセイを使用した。ポリスチレンプレートを１μｇ／ｍｌのＺＩＫＶ ＮＳ１で一晩コーティングし、１％ＢＳＡを含むＰＢＳで１時間ブロッキングした。血漿又は血清（１：１０希釈）をＮＳ１コーティングＥＬＩＳＡプレートに添加した。その後、例えば、１時間後、等体積のビオチン化抗ＮＳ１ ＺＫＡ３５を加え、混合物を例えば、室温で１５分間インキュベートした。プレートを洗浄し、アルカリホスファターゼコンジュゲートストレプトアビジンを、例えば、３０分間添加した。プレートを再度洗浄し、基質を添加した。阻害パーセントは以下のように計算した：（１－［（ＯＤ試料－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）／（ＯＤ ｐｏｓ ｃｔｒ－ＯＤ ｎｅｇ ｃｔｒ）］））×１００。

【0379】

結果を図１４に示す。症状発症後１０日超で採取したＷＮＶ患者からの３２個の試料（９６．９％）のうち３１サンプルは、陰性であった。注目すべきことには、２０１６年に採取した試料が唯一陽性であった。症状発症後１０日超で採取したＤＥＮＶ患者由来の２７個の試料のうち２個は、陽性であり、２個の陽性試料は２次ＤＥＮＶ感染由来であった。更に、チクングニア患者由来の試料又はＹＦＶワクチンのいずれも陽性ではなかった。２０１０年から２０１６年までに採取されたスイスの血液ドナー（ｎ＝１１６）からの多数の血漿サンプルも試験した。これらのサンプルはいずれも陽性ではなかった。得られた結果は、ＮＳ１ ＢＯＢ ＥＬＩＳＡアッセイの高感度及び特異性を確認し、裏付けた。

【0380】

実施例８：本発明に係る抗体は、従来技術の抗体ＥＤＥ１ ｍＡｂ Ｃ８よりも強力にＺＩＫＶを中和する
従来技術の中和性が高い抗ＺＩＫＶ抗体と本発明に係る中和抗体を比較するために、ＺＫＡ１９０の中和性能を従来技術の高中和性ｍＡｂ ＥＤＥ１ Ｃ８（Ｂａｒｂａ－Ｓｐａｅｔｈ Ｇ， Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ Ｗ， Ｒｏｕｖｉｎｓｋｉ Ａ， Ｖａｎｅｙ ＭＣ， Ｍｅｄｉｔｓ Ｉ， Ｓｈａｒｍａ Ａ， Ｓｉｍｏｎ－Ｌｏｒｉｅｒｅ Ｅ， Ｓａｋｕｎｔａｂｈａｉ Ａ， Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ ＶＭ， Ｈａｏｕｚ Ａ， Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐ， Ｓｔｉａｓｎｙ Ｋ， Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ Ｊ， Ｈｅｉｎｚ ＦＸ， Ｓｃｒｅａｔｏｎ ＧＲ， Ｒｅｙ ＦＡ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ Ｚｉｋａ－ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｒｏｓｓ－ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ． ２０１６ Ａｕｇ ４；５３６（７６１４）：４８－５３）と比較した。両抗体の中和を、４種の異なるＺＩＫＶ株（Ｈ／ＰＦ／２０１３；ＭＲ７６６、ＭＲＳ－ＯＰＹ、及びＰＶ１０５５２）のパネルに対して試験した。

【0381】

簡潔には、ｍＡｂによるＺＩＫＶ感染の中和を、マイクロ中和フローサイトメトリに基づくアッセイを用いて測定した。ｍＡｂの各種希釈物をＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．３５）と３７℃で１時間混合し、９６ウェル平底プレート中の５０００個のＶｅｒｏ細胞／ウェルに添加した。ＺＩＫＶについては４日後に、細胞を２％ホルムアルデヒドで固定し、１％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び０．５％サポニンを含有するＰＢＳに透過させ、マウスｍＡｂ ４Ｇ２で染色した。細胞を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ－Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５４８５１６４）にコンジュゲートさせたヤギ抗マウスＩｇＧと共にインキュベートし、フローサイトメトリで分析した。中和力価（５０％阻害濃度［ＩＣ５０］）は、ウイルスのみの対照ウェルと比較して感染を５０％低下させた抗体濃度として表した。

【0382】

結果を図１５に示す。ＺＫＡ１９０ ｍＡｂは、０．６～８ｎｇ／ｍｌの範囲のＩＣ５０を有するアフリカ系、アジア系、及びアメリカ系株を強力に中和した。これと比較して、従来技術の抗体Ｃ８は約２４倍弱かった。

【0383】

実施例９：抗体ＺＫＡ１９０の更なる特徴付け
抗体ＺＫＡ１９０の効力をインビトロ及びインビボで更に調べた。この目的のために、ｍＡｂをＩｇＧ１野生型（ｗｔ）フォーマット及びＩｇＧ１ Ｆｃ－ＬＡＬＡフォーマットで合成した。簡潔には、ＶＨ及びＶＬ配列を、ヒトＩｇγ１とＩｇκ又はＩｇλ発現ベクター（Ｍｉｃｈｅｌ Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ（Ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＵＳ）から厚意により提供）にクローニングした。これについては、本質的には、以下に記載されている（Ｔｉｌｌｅｒ Ｔ， Ｍｅｆｆｒｅ Ｅ， Ｙｕｒａｓｏｖ Ｓ， Ｔｓｕｉｊｉ Ｍ， Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ ＭＣ， Ｗａｒｄｅｍａｎｎ Ｈ： Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｓｉｎｇｌｅ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｃｌｏｎｉｎｇ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００８， ３２９：１１２－１２４）。組換えｍＡｂは、ＥＸＰＩ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の一過性トランスフェクションによって産生し、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製し、ＰＢＳに対して脱塩した。ＬＡＬＡ変異体を得るために、部位特異的突然変異誘発を用いて天然ロイシンに代えてアラニンを置換することにより、重鎖の各々をＣＨ２ドメインのアミノ酸４及び５で突然変異させた。前記したように、（ヒトＩｇＧ１抗体の）ＬＡＬＡ変異体は、Ｆｃ－ガンマ－受容体及び補体に結合しない。

【0384】

図１５Ａに示し、実施例８に記載したように、ＺＫＡ１９０を４種のＺＩＫＶ株のパネルに対して試験した。ＺＫＡ１９０ ｍＡｂは、０．００４～０．０５ｎＭの範囲のＩＣ５０（図１５Ａ；０．６～８ｎｇ／ｍｌ）でアフリカ系、アジア系、及びアメリカ系株を強力に中和した。

【0385】

ＺＩＫＶは、ヒト神経前駆細胞（ｈＮＰＣ）に感染し、細胞毒性の増大、細胞周期の調節不全、及び細胞増殖の減少を示すので、ｈＮＰＣにおいてＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを試験した。この目的のために、Ｍｏｖｅｍｅｎｔ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ｂｉｏ－Ｂａｎｋ（Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｕｎｉｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ‘Ｃａｒｌｏ Ｂｅｓｔａ’， Ｍｉｌａｎ）から取得した成人男性線維芽細胞を、ＣｙｔｏＴｕｎｅ－ｉＰＳ ２．０ Ｓｅｎｄａｉキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて再プログラム化した。ｈｉＰＳＣは、ｍＴｅＳＲ１（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のフィーダーフリー条件で維持した。胚様体（ＥＢ）を生成するために、解離したｈｉＰＳＣを、Ｎ２（０．５×）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ヒトＮｏｇｇｉｎ（０．５ｍｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）、ＳＢ４３１５４２（５μＭ、Ｓｉｇｍａ）、Ｙ２７６３２（１０μＭ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、及びペニシリン／ストレプトマイシン（１％、Ｓｉｇｍａ）（以下に記載：Ｍａｒｃｈｅｔｔｏ ＭＣＮ， Ｃａｒｒｏｍｅｕ Ｃ， Ａｃａｂ Ａ， Ｙｕ Ｄ， Ｙｅｏ ＧＷ， Ｍｕ Ｙ， Ｃｈｅｎ Ｇ， Ｇａｇｅ ＦＨ， Ｍｕｏｔｒｉ ＡＲ： Ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｎｅｕｒａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｔｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｕｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ． Ｃｅｌｌ ２０１０， １４３：５２７－５３９）を添加したｍＴｅＳＲ１中の低接着プレートにプレーティングした。ロゼットを得るために、ＥＢを、１０日間後に、Ｎ２（１：１００）、非必須アミノ酸（１％、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｓｉｇｍａ）中のマトリゲル被覆プレート（１：１００、マトリゲル成長因子低下、Ｃｏｒｎｉｎｇ）にプレーティングした。１０日間後、細胞をＡｃｃｕｔａｓｅ（Ｓｉｇｍａ）で継代して、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、Ｎ２（０．２５％）、Ｂ２７（０．５％、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ペニシリン／ストレプトマイシン、及びＦＧＦ２（２０ｎｇ／ｍｌ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するＮＰＣ培地中で、マトリゲル被覆フラスコに播種した。ｈＮＰＣ（３×１０^４）を、ＰＲＶＡＢＣ５９株による感染の３日間前に、２４ウェルプレート中のカバースリップ上にプレーティングした。ウイルスストックをｈＮＰＣへの添加前にｍＡｂ １ｈと共にインキュベートして、０．５のＭＯＩを得た。ウイルス吸着の４時間後、培養上清を除去し、ｍＡｂを含む新鮮な培地を再添加した。感染後９６時間で上清を回収し、Ｖｅｒｏ細胞に対するプラークアッセイによってウイルス力価を測定した。間接免疫蛍光のために、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、Ｅｕｒｏｃｌｏｎｅ）中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ、Ｓｉｇｍａ）溶液中で細胞を３０分間固定した。固定した細胞を、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ）及び１０％ロバ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有するブロッキング溶液中で３０分間（ｍｉｎ）浸透させ、ブロッキング溶液中で一次抗体と４℃で一晩インキュベートした。以下の抗体を検出に使用した：抗エンベロープ（１：２００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡＢ１０２１６）。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、Ｈｏｅｃｈｓｔ及び抗マウスＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ－４８８二次抗体（ブロッキング溶液中１：１，０００、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共に１時間インキュベートした。ＰＢＳ洗浄後、細胞を再び洗浄し、マウントした。結果を図１６Ａに示す。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡのいずれも、ｈＮＰＣにおけるＺＩＫＶの感染及び複製を完全に停止させた。

【0386】

次に、ＡＤＥを引き起こすＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡの能力を、実施例６に記載したようにＫ５６２細胞株で試験した。簡潔には、ＡＤＥは、Ｋ５６２細胞を用いたフローベースのアッセイによって測定した。簡潔には、ＺＫＡ１９０については、ＺＫＡ１９０及びＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ０．１７５）を３７℃で１時間混合し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルに添加した。４日間後、細胞を固定し、透過処理し、ｍＡｂ ｍ４Ｇ２で染色した。フローサイトメトリにより感染細胞の数を決定した。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡについては、ＺＩＫＶ（ＭＯＩ０．１７５）を、一次ＺＩＫＶ感染ドナー由来の血漿と３７℃で３０分間混合した。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを５０μｇ／ｍｌ添加し、５０００個のＫ５６２細胞／ウェルと混合し、３日間インキュベートした。次いで、細胞を４Ｇ２で染色し、フローサイトメトリで分析した。結果を図１６Ｂに示す。ＺＫＡ１９０は、０．０００１～１ｎＭのＡＤＥを支持する。予想通り、ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡはＡＤＥ活性を示さなかった。Ｋ５６２細胞中の４種のＺＩＫＶ免疫ドナーからの血漿によって誘導されるＡＤＥを阻害するＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡの能力も試験した。結果を図１６Ｃに示す。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、血漿抗体によって誘導されるＡＤＥを完全に阻害することが分かった（図１６Ｃ）。

【0387】

抗ｐｒＭ抗体は、フラビウイルスに対するヒト免疫応答の間に誘発される主な抗体の一部を形成し、インビトロでウイルス感染を増強することが示されている（Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ， Ｗ．， Ｊｕｍｎａｉｎｓｏｎｇ， Ａ．， Ｏｎｓｉｒｉｓａｋｕｌ， Ｎ．， Ｆｉｔｔｏｎ， Ｐ．， Ｖａｓａｎａｗａｔｈａｎａ， Ｓ．， Ｌｉｍｐｉｔｉｋｕｌ， Ｗ．， Ｐｕｔｔｉｋｈｕｎｔ， Ｃ．， Ｅｄｗａｒｄｓ， Ｃ．， Ｄｕａｎｇｃｈｉｎｄａ， Ｔ．， Ｓｕｐａｓａ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０）． Ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｅｎｈａｎｃｅ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２８， ７４５－７４８）。Ｋ５６２細胞を、ＤＥＮＶ免疫ドナーに由来するｐｒＭ交差反応性抗体ＤＶ６２（Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ， Ｍ．， Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｋ．Ｌ．， Ｓｉｍｍｏｎｓ， Ｃ．Ｐ．， Ｍａｃａｇｎｏ， Ａ．， Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ， Ｌ．， Ｑｕｙｅｎ， Ｎ．Ｔ．Ｈ．， Ｓｕｋｕｐｏｌｖｉ－Ｐｅｔｔｙ， Ｓ．， Ｎａｖａｒｒｏ－Ｓａｎｃｈｅｚ， Ｅ．， Ｙｏｕｎｇ， Ｐ．Ｒ．， ｄｅ Ｓｉｌｖａ， Ａ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （２０１０）． Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ｄｏｍｉｎａｔｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈｌｙ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｅｎｄｏｗｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ ８， ２７１－２８３））の連続希釈液でプレインキュベートした。結果を図１６Ｄに示す。ＤＶ６２は、ＺＩＫＶ ｐｒＭタンパク質と交差反応し、広範囲の濃度でＡＤＥを引き起こした（図１６Ｄ）。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、未成熟又は部分的に未成熟のＺＩＫＶ粒子の抗ｐｒＭ ＤＶ６２ ｍＡｂ誘導ＡＤＥを完全にブロックすることができる（図１６Ｄ）。

【0388】

最後に、濃度が上昇したヒト抗ＤＥＮＶ２血漿又はＤＶ６２の存在下でＺＩＫＶのＡＤＥを引き起こす又はブロックする各種濃度のＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ、及びＺＫＡ１９０ Ｆａｂの能力を試験した。結果を図１６Ｅに示す。低濃度でのＺＫＡ１９０は、ＺＩＫＶ感染のｐｒＭ ＤＶ６２媒介ＡＤＥを上昇させたが、これは、未成熟及び成熟ビリオンの両方の侵入を促進するその能力と整合し、一方で、１．３ｎＭ（即ち、２００ｎｇ／ｍｌ）を超える濃度では、ＺＫＡ１９０は、ＤＥＮＶ血漿及びｍＡｂ ＤＶ６２の両方によって誘導されるＡＤＥをブロックした。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ並びにそのＦａｂ断片は、０．０６ｎＭを超える濃度ではＡＤＥを減少させ、これは、両者が、融合などの付着後工程でウイルス感染を阻害することを示している

【0389】

実施例１０：ＺＫＡ１９０は、ＥＤＩＩＩの保存された高度に接近可能な領域に結合する
残基レベルでのＺＫＡ１９０エピトープを決定するために、以下に記載されるように溶液ＮＭＲ分光法を用いた：Ｂａｒｄｅｌｌｉ， Ｍ．， Ｌｉｖｏｔｉ， Ｅ．， Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ， Ｌ．， Ｐｅｄｏｔｔｉ， Ｍ．， Ｍｏｒａｅｓ， Ａ．， Ｖａｌｅｎｔｅ， Ａ．Ｐ．， ａｎｄ Ｖａｒａｎｉ， Ｌ． （２０１５）． Ｅｐｉｔｏｐｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｂｙ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ． ２８， ３９３－４００； Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ， Ｌ．， Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ， Ｍ．， Ｙｕｄｉｎａ， Ｚ．， Ｍａｃａｇｎｏ， Ａ．， Ｃａｌｚｏｌａｉ， Ｌ．， ａｎｄ Ｖａｒａｎｉ， Ｌ． （２０１０）． Ｒａｐｉｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ ｖａｌｉｄａｔｅｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｏｃｋｉｎｇ． Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９６， １４９１－１５０７； ａｎｄ Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ， Ｌ．， Ｐｅｄｏｔｔｉ， Ｍ．， Ｂｅｌｔｒａｍｅｌｌｏ， Ｍ．， Ｌｉｖｏｔｉ， Ｅ．， Ｃａｌｚｏｌａｉ， Ｌ．， Ｓａｌｌｕｓｔｏ， Ｆ．， Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ， Ａ．， ａｎｄ Ｖａｒａｎｉ， Ｌ． （２０１３）． Ｒａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ－Ｄｅｎｇｕｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ Ｖａｌｉｄａｔｅｄ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｄｏｃｋｉｎｇ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８， ｅ５５５６１。

【0390】

簡潔には、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ７００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計を用いて３００Ｋでスペクトルを記録した。バックボーン共鳴の帰属については、標準的三重共鳴実験（ＨＮＣＯ、ＨＮ（ＣＡ）ＣＯ、ＨＮ（ＣＯ）ＣＡＣＢ、ＨＮＣＡＣＢ）を用い、一方、側鎖は、ＨＣＣＨ－ＴＯＣＳＹ及びＨＢＨＡ（ＣＯ）ＮＨ実験を用いてアノテートした。ＮＭＲ実験はいずれも、Ｔｏｐｓｐｉｎ ２．１（Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ）を用いて行い、ＣＡＲＡで分析した。ＮＯＥＳＹクロスピークは、手動で割り当てられた化学シフトに基づくＣＹＡＮＡ「ｎｏｅａｓｓｉｇｎ」マクロを用いて自動的に割り当てた。標準的シミュレーテッドアニーリングプロトコルを用いたＣＹＡＮＡの構造計算に使用された上方距離制限は、７０ｍｓ １５Ｎ及び１３Ｃ分解ＮＯＥＳＹスペクトルから誘導した。ＺＩＫＶ ＥＤＩＩＩのバックボーンダイナミクスは、６００及び７００ＭＨｚ分光計で記録された１５Ｎ緩和測定値から誘導した。プロトン検出バージョンのＣＰＭＧ（Ｒ２）、反転回復（Ｒ１）、及び１５Ｎ｛１Ｈ｝定常状態ＮＯＥを利用した。Ｔ２シリーズの遅延設定は０～０．２５秒間の範囲であり、Ｔ１シリーズの設定は０．０２～２秒間の範囲とした。^１５Ｎ｛^１Ｈ｝－ＮＯＥ実験は、５秒間の緩和遅延を用いた。Ｒ１緩和率とＲ２緩和率は、自宅で作成したスクリプトを使用して測定データに対応する指数関数の最小二乗適合から導いた。緩和データは、ソフトウェアパッケージＤＹＮＡＭＩＣＳを使用して、モデルフリーアプローチで分析した。プログラムＲＯＴＤＩＦを用いて、緩和データ（８．５ｎｓ）から全体の相関時間を計算した。ＮＭＲエピトープマッピングは、これまでに記載されたように実施した（Ｂａｒｄｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１０； ２０１３）。簡潔には、遊離又はＺＫＡ１９０ Ｆａｂに結合した標識化ＥＤＩＩＩの^１５ＮＨＳＱＣスペクトルのオーバーレイは、複合体形成時にＮＭＲシグナルが変化したＥＤＩＩＩ残基の同定を可能にし、それらがＺＫＡ１９０結合の影響を受けたことを示す。変化は、手動検査及び化学シフト摂動（ＣＳＰ）、ＣＳＰ＝（（Δσ_Ｈ）^２＋（Δσ_Ｎ／１０）^２）^１／２で確認した。ＮＭＲサンプルは、典型的には、２０ｍＭリン酸ナトリウム、５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０中の８００μＭの［１５Ｎ、１３Ｃ］標識化ＥＤＩＩＩであった。ＥＤＩＩＩ：ＺＫＡ１９０ Ｆａｂ比が１：１．１であるＮＭＲエピトープマッピングには、過重水素化（公称７０％）^２Ｈ、^１５Ｎ ＥＤＩＩＩ試料を使用した。ＥＤＩＩＩ濃度は、典型的には０．４ｍＭであった。

【0391】

ＮＭＲシグナルは局所的な化学的環境に強く依存するので、複合体形成時の変化は抗体結合の影響を受ける抗原残基を直接又はアロステリック効果によって同定する。遊離及び結合ＥＤＩＩＩのＮＭＲスペクトルを比較することにより（図１７Ａ）、ＺＫＡ１９０によって影響を受けた残基は、ＥＤＩＩＩのＬＲ、特にＢＣ、ＤＥ、及びＦＧループ並びにＥＤＩ－ＥＤＩＩＩヒンジの一部にマッピングした（図１８Ａ）。これらの残基は、ウガンダ１９４７単離株におけるＶ３４１Ｉ及びＥ３９３Ｄの置換を除いて、２１７種の既知のＺＩＫＶ株の間でほぼ同一である（図１７Ｄ）。これらの突然変異は、ＺＫＡ１９０によって効率的に中和されたＭＲ７６６株にも存在する（図１５Ａ）。複合体化していないＺＩＫＶ構造上のＺＫＡ１９０エピトープの分析は、５つ折頂点のＦＧループを除いて、エピトープが高度に接近可能であることを示した（図１８Ｂ及び１７Ｃ、分子Ａ）。

【0392】

計算ドッキングと、その後の、ＮＭＲに由来するエピトープ情報及びＥＤＩＩＩ突然変異誘発によって導かれ、検証された分子動力学シミュレーションにより、ＺＫＡ１９０は、形状及び電荷相補性によって特徴づけられる界面を介して結合することが示された（図１８Ｂ及び図１７Ｅ）。ドッキングは、ＺＫＡ１９０とＥＤＩＩＩ上のＦＧループとの間に直接の接触がないことを示し、抗体結合時のＮＭＲシグナルの変化がアロステリック効果に由来することを示唆している。この概念は、組換えＥＤＩＩＩ中（他のエピトープ領域中ではなく）のＦＧループ残基の突然変異が、ＥＤＩＩＩに対するＺＫＡ１９０の結合親和性に影響しないという事実によって支持される（図１８Ｂ及び図１９）。

【0393】

実施例１１：ＺＫＡ１９０中和のメカニズム
ウイルスを効率的に中和するＺＫＡ１９０の能力は、細胞接着又は膜融合のいずれかの阻害を伴い得る。更なるメカニズムは、ウイルス粒子の架橋を介したウイルスの不活性化を伴い得る。

【0394】

ＺＫＡ１９０ Ｆａｂは、対応するＩｇＧよりも効率は低いが、ＺＩＫＶを中和することができる。ＥＤＩ－ＥＤＩＩＩリンカーに結合することによって、ＺＫＡ１９０（Ｆａｂ及びＩｇＧの両方）は、宿主細胞膜へのウイルス融合に必要とされるＤＩＩＩの～７０度の回転を阻害し得る（Ｂｒｅｓｓａｎｅｌｌｉ， Ｓ．， Ｓｔｉａｓｎｙ， Ｋ．， Ａｌｌｉｓｏｎ， Ｓ．Ｌ．， Ｓｔｕｒａ， Ｅ．Ａ．， Ｄｕｑｕｅｒｒｏｙ， Ｓ．， Ｌｅｓｃａｒ， Ｊ．， Ｈｅｉｎｚ， Ｆ．Ｘ．， ａｎｄ Ｒｅｙ， Ｆ．Ａ． （２００４）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｉｔｓ ｌｏｗ－ｐＨ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｕｓｉｏｎ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｅｍｂｏ Ｊ ２３， ７２８－７３８； Ｍｏｄｉｓ， Ｙ．， Ｏｇａｔａ， Ｓ．， Ｃｌｅｍｅｎｔｓ， Ｄ．， ａｎｄ Ｈａｒｒｉｓｏｎ， Ｓ．Ｃ． （２００４）． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｆｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｕｓｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ ４２７， ３１３－３１９）。或いは、ＺＫＡ１９０は、標的細胞へのＺＩＫＶの結合を妨げ得る。

【0395】

膜融合を阻害するＺＫＡ１９０の能力は、共焦点顕微鏡分析によって支持される。この目的のために、Ｖｅｒｏ細胞を２４穴プレート中の直径１２ｍｍのカバースリップに７，５００細胞／ウェルで播種し、一晩インキュベートした。中和濃度のＡｌｅｘａ－４８８コンジュゲートｍＡｂ（０．７μＭ）の存在下又は非存在下、３７℃で３時間、細胞をＺＩＫＶ Ｈ／ＰＦ／２０１３（ＭＯＩ１００）で感染させ、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中の２％パラホルムアルデヒドで室温で３０分間インキュベートした。酸性化エンドソームは、固定前のインキュベーションの最後の３０分間、細胞に色素（５０ｎＭ）を添加することにより、Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で同定した。固定化に続いて、ＰＢＳ及び５０ｍＭグリシンで十分な洗浄を行い、最後に、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いた蛍光のためのＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティング培地を用いた顕微鏡分析のためのカバースリップを調製した。６３×／１．４Ｎ．Ａ．対物レンズを備えたライカＴＣＳ ＳＰ５顕微鏡を用いた共焦点顕微鏡法により試料を分析した。ＦＩＪＩソフトウェアを用いて画像解析及び処理を行った。

【0396】

結果を図２０に示す。共焦点顕微鏡分析は、ＩＣ５０を１０，０００倍超える中和濃度でＺＩＫＶと複合体化して初めて、ＺＫＡ１９０（Ｆａｂ又はＩｇＧ）がＶｅｒｏ細胞に入ることができることを示す（図２０）。

【0397】

実施例１２：ＥＤＩＩＩ特異的ｍＡｂ ＺＫＡ１９０のインビボでの特徴付け
それらの予防的及び治療的特性を評価するために、ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを、致死量のＺＩＫＶ株ＭＰ１７５１（アフリカ系統）を摂取したＡ１２９マウスで試験した。それらの予防的効力を試験するために、ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを、ウイルス摂取の１日前に投与した。

【0398】

５～８週齢の雌性Ａ１２９マウス（ＩＦＮ－アルファ／ベータ受容体－／－）及び野生型１２９Ｓｖ／Ｅｖマウスに、ＰＢＳ中に各種用量で希釈したｍＡｂ（ＺＫＡ１９０、ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ、及び対照抗体ＭＰＥ８（Ｃｏｒｔｉ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ． Ｃｒｏｓｓ－ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ａ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ． Ｎａｔｕｒｅ ５０１， ４３９－４４３ （２０１３））を、腹腔内（ｉ．ｐ．）経路で５００μｌ投与した。ウイルス摂取の１日前又は１日、２日、３日、又は４日後に、ｍＡｂを投与した。動物に、１０２ｐｆｕのＺＩＫＶ（ＭＰ１７５１株）を皮下接種し、１４日間追跡した。体重及び温度を毎日モニターし、臨床観察を少なくとも１日２回記録した。摂取後５日目に、各動物から５０μｌの血液を、ＲＮＡｐｒｏｔｅｃｔ ｔｕｂｅ（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に回収し、－８０℃で凍結した。試験終了後（摂取後１４日目）又は動物が人道的エンドポイントに達したとき、剖検を行い、脳、脾臓、肝臓、腎臓、及び卵巣の血液及び切片をウイルス学的分析のために回収した。

【0399】

Ａ１２９マウスからの組織試料をＰＢＳに秤量し、セラミックビーズ及び自動ホモジナイザー（Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ、ＵＫ）を用いて６５００ｒｐｍで３０秒間のギャップの５秒サイクルを６回行ってホモジナイズした。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）を用いるＲＮＡ抽出のために、２００μｌの組織ホモジネート又は血液溶液を６００μＬのＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に移した。試料を最初のステップとしてＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、ＵＫ）に通した。被験動物からのウイルスＲＮＡの検出のために、ＺＩＫＶ特異的リアルタイムＲＴ－ＰＣＲアッセイを利用した。プライマー及びプルーブ配列は、Ｑｕｉｃｋ ｅｔ ａｌ．、２０１７（Ｑｕｉｃｋ， Ｊ， Ｇｒｕｂａｕｇｈ ＮＤ， Ｐｕｌｌａｎ ＳＴ， Ｃｌａｒｏ ＩＭ， Ｓｍｉｔｈ ＡＤ， Ｇａｎｇａｖａｒａｐｕ Ｋ， Ｏｌｉｖｅｉｒａ Ｇ， Ｒｏｂｌｅｓ－Ｓｉｋｉｓａｋａ Ｒ， Ｒｏｇｅｒｓ ＴＦ， Ｂｅｕｔｌｅｒ ＮＡ， ｅｔ ａｌ．： Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ＭｉｎＩＯＮ ａｎｄ Ｉｌｌｕｍｉｎａ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ Ｚｉｋａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｆｒｏｍ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ ２０１７， １２：１２６１－１２７６）から採用し、インハウスでの最適化及び検証を、最適なマスターミックス及びサイクル条件を提供するために行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲは、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ ｑＲＴ－ＰＣＲキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）を用いて行った。最終的なマスターミックス（１５μｌ）は、１０μｌの２×反応ミックス、１．２μｌのＰＣＲグレード水、０．２μｌの５０ｍＭ ＭｇＳＯ４、１μｌの各プライマー（ＺＩＫＶ１０８６及びＺＩＫＶ１１６２ｃ、いずれも１８μＭワーキング濃度）、０．８μｌのプローブ（ＺＩＫＶ １１０７－ＦＡＭ、２５μＭワーキング濃度）、及び０．８μｌのＳＳＩＩＩ酵素ミックスを含む。５μｌの鋳型ＲＮＡをマスターミックスに加え、２０μｌの最終反応容積を得た。使用したサイクル条件は、５０℃で１０分間、９５℃で２分間、続いて９５℃で１０秒間及び６０℃で４０秒間を４５サイクル、最後に４０℃で３０秒間の冷却ステップである。蛍光を用いた定量分析は、各６０℃ステップの終わりに行った。７５００ソフトウェアバージョン２．０．６を使用して、７５００ Ｆａｓｔプラットフォーム（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）で反応を実施し、分析した。サンプル中のウイルス量の定量は、一連の定量ＲＮＡオリゴヌクレオチド（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて行った。このオリゴヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＹ６３２５３５．２に基づくアッセイによって標的化されたＺＩＫＶ ＲＮＡの７７塩基を含んでおり、ＨＰＬＣ精製で２５０ｎｍｏｌのスケールに合成された。

【0400】

結果を図２１、図２２、及び図２３に示す。ＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、５、１、又は０．２ｍｇ／ｋｇの濃度での死亡及び罹患からマウスを保護することが示された（図２１Ａ～Ｂ）。ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ、及びより低い程度でＺＫＡ１９０は、０．０４ｍｇ／ｋｇの対照群と比較して、罹患及び死亡を遅延させた。血液及び器官におけるウイルス力価は、存在する血清抗体レベルが１μｇ／ｍｌ未満であっても、対照抗体処置動物と比較して有意に減少した（図２２Ａ～Ｄ）。

【0401】

ＺＫＡ１９０の治療可能性を評価するために、ＺＩＫＶ感染後の異なる時点でＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡを投与した。１５ｍｇ／ｋｇの投与量では、８０％～１００％の生存率が達成され、感染後４日目に処置を行った場合でも罹患率は大幅に低下した（図２１Ｅ～Ｇ）。全ての感染後の時点でのＺＫＡ１９０及びＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡ処理は、対照抗体で処置した動物と比較して、ウイルス力価を有意に低下させ、処置が早いほど低下が大きいという明らかな傾向を示した（図２３Ａ～２１Ｃ）。注目すべきことに、ＺＫＡ１９０－ＬＡＬＡは、感染後４日目にｍＡｂを与えた場合のＺＫＡ１９０と比較して、血液５日目の血液試料において有意に低下した抗ウイルス活性を示した。この結果は、コーティングされたビリオンの迅速なクリアランスを促進するＬＡＬＡ変異体の能力の低下に関連し得る。

【表7-1】

【表7-2】

【表7-3】

【表7-4】

【表7-5】

【表7-6】

【表7-7】

【表7-8】

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【表7-12】

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【表7-14】

【表7-15】

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【表7-17】

【表7-18】

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【表7-20】

【表7-21】

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【表7-23】

【表7-24】

【表7-25】

【表7-26】

【表7-27】

【表7-28】

【表7-29】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

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