(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-03-30
(45)【発行日】2023-04-07
(54)【発明の名称】トリアジン誘導体を含有する経口投与する製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/53 20060101AFI20230331BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20230331BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20230331BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230331BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20230331BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20230331BHJP
C07D 403/14 20060101ALN20230331BHJP
【ＦＩ】
A61K31/53
A61K9/20
A61P31/14
A61P43/00 111
A61K47/38
A61K47/32
C07D403/14
【請求項の数】
7
(21)【出願番号】P 2022574839
(86)(22)【出願日】2022-11-22
(86)【国際出願番号】 JP2022043092
【審査請求日】2022-12-05
(31)【優先権主張番号】202211151791.9
(32)【優先日】2022-09-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】P 2021189932
(32)【優先日】2021-11-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2021191635
(32)【優先日】2021-11-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022006725
(32)【優先日】2022-01-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022012386
(32)【優先日】2022-01-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022017132
(32)【優先日】2022-02-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022027629
(32)【優先日】2022-02-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022046304
(32)【優先日】2022-03-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2022142767
(32)【優先日】2022-09-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】000001926
【氏名又は名称】塩野義製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100113789
【弁理士】
【氏名又は名称】杉田 健一
(74)【代理人】
【識別番号】100209598
【弁理士】
【氏名又は名称】渡部 秀昭
(74)【代理人】
【識別番号】100219841
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 綾子
(72)【発明者】
【氏名】五味 真人
(72)【発明者】
【氏名】堀内 健佑
(72)【発明者】
【氏名】森本 甫享
(72)【発明者】
【氏名】高垣 恵介
【審査官】高橋 樹理
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０２２／１３８９８７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２２／１３８９８８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２２／１５８５２８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０２２／２１２３１４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０８７８８４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００２－５０９１４０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特許第７１０５４３０（ＪＰ，Ｂ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（ＶＩＩ）：【化1】
で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分として含有する、経口投与する固形製剤。
【請求項2】
有効成分が、式（ＶＩＩ）で示される化合物の複合体であり、当該複合体がフマル酸を含む複合体である、請求項１記載の経口投与する固形製剤。
【請求項3】
当該複合体が、式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸が１：１のモル比の共結晶である、請求項２記載の経口投与する固形製剤。
【請求項4】
高分子を製剤中に含有する、請求項１～３のいずれかに記載の経口投与する固形製剤。
【請求項5】
高分子が、セルロース系高分子、アクリル酸系高分子、ビニル系高分子から選択される１以上である、請求項４記載の経口投与する固形製剤。
【請求項6】
有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が１２５ｍｇ含まれる、請求項１記載の経口投与する固形製剤。
【請求項7】
式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を１５２．３ｍｇ含む、請求項６記載の経口投与する固形製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、トリアジン誘導体を含有する、経口投与する製剤に関する。詳しくは、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を示すトリアジン誘導体、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分として含有する、経口投与する製剤に関する。
【背景技術】
【0002】
ニドウイルス目コロナウイルス科オルトコロナウイルス亜科に属するコロナウイルスは、約３０キロベースのゲノムサイズを有し、既知のＲＮＡウイルスでは最大級の一本鎖＋鎖ＲＮＡウイルスである。コロナウイルスはアルファコロナウイルス属、ベータコロナウイルス属、ガンマコロナウイルス属およびデルタコロナウイルス属の４つに分類され、ヒトに感染するコロナウイルスとして、アルファコロナウイルス属の２種類（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）およびベータコロナウイルス属の５種類（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の計７種類が知られている。この内、４種類（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）は風邪の病原体であるが、残りの３種類は重症肺炎を引き起こす重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）および新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。
【0003】
２０１９年１２月に中国武漢で発生した新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）は急速に国際社会に蔓延し、２０２０年３月１１日にＷＨＯよりパンデミックが表明された。２０２２年９月２１日時点で確認された感染者数は６．１億人以上、死者数は６５０万人以上に達する（非特許文献１）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の主な感染経路として飛沫感染、接触感染およびエアロゾル感染が報告されており、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は３時間程度エアロゾルと共に空気中を漂い続け、感染力を維持することが確認されている（非特許文献２）。潜伏期間は２～１４日程度であり、発熱（８７．９％）、空咳（６７．７％）、倦怠感（３８．１％）、痰（３３．４％）等の風邪様症状が典型的である（非特許文献３）。重症例では、急性呼吸窮迫症候群や急性肺障害、間質性肺炎等による呼吸器不全が起こる。また、腎不全や肝不全などの多臓器不全も報告されている。
【0004】
本邦においては、既存薬のドラッグリポジショニングから、抗ウイルス薬であるレムデシビル、抗炎症薬であるデキサメタゾン、リウマチ薬であるバリシチニブがＣＯＶＩＤ－１９に対する治療薬として承認され、２０２２年１月に抗ＩＬ－６受容体抗体であるトシリズマブが追加承認されている。また、２０２１年７月に、抗体カクテル療法であるロナプリーブ（カシリビマブ／イムデビマブ）が特例承認され、２０２１年９月にソトロビマブが特例承認され、２０２１年１２月にモルヌピラビルが特例承認された。これらの薬剤についての有効性や安全性については、十分なエビデンスが得られていない。したがって、ＣＯＶＩＤ－１９に対する治療薬の創製は急務である。
【0005】
コロナウイルスは、細胞に感染すると、２つのポリタンパク質を合成する。この２つのポリタンパク質中には、ウイルスゲノムを作る複製複合体、２つのプロテアーゼが含まれている。プロテアーゼは、ウイルスから合成されたポリタンパク質を切断し、それぞれのタンパク質を機能させるために不可欠な働きをする。２つのプロテアーゼのうち、ポリタンパク質の切断のほとんどを担うのが、３ＣＬプロテアーゼ（メインプロテアーゼ）である（非特許文献４）。
３ＣＬプロテアーゼを標的とした、ＣＯＶＩＤ－１９治療薬としては、２０２１年６月、Ｐｆｉｚｅｒ社によるＰＦ－００８３５２３１のプロドラッグであるＬｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒ（ＰＦ－０７３０４８１４）のＰｈａｓｅ１ｂ試験の完了がＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに掲載された（ＮＣＴ０４５３５１６７）。また、２０２１年３月、Ｐｆｉｚｅｒ社は新型コロナウイルス感染症に対する治療薬ＰＦ－０７３２１３３２のＰｈａｓｅ１試験を開始すると発表した。ＰＦ－００８３５２３１、ＬｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒおよびＰＦ－０７３２１３３２の構造式は以下に示す通りで、本発明化合物とは化学構造が異なる（非特許文献５、１２および１３、ならびに特許文献６および７）。
ＰＦ－００８３５２３１：
Ｌｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒ（ＰＦ－０７３０４８１４）：
ＰＦ－０７３２１３３２：
さらに２０２１年７月、ハイリスク因子を持つＣＯＶＩＤ－１９患者を対象とした、ＰＦ－０７３２１３３２およびリトナビル併用のＰｈａｓｅ２／３試験が開始されることがＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに掲載された（ＮＣＴ０４９６０２０２）。また、２０２１年１１月、Ｐｆｉｚｅｒ社のホームページにおいて、ＰＡＸＬＯＶＩＤ（ＴＭ）（ＰＦ－０７３２１３３２；リトナビル）は、成人のハイリスク患者において、プラセボと比較して入院または死亡のリスクを８９％減少させたことが報告された（非特許文献１４）。さらに、２０２１年１２月、ＰＡＸＬＯＶＩＤ（ＴＭ）は米国で緊急使用許可が承認され、２０２２年２月１０日にパキロビッド（登録商標）パックが日本で特例承認された。
３ＣＬプロテアーゼを標的とした、ＣＯＶＩＤ－１９治療薬としては、２０２１年６月、Ｐｆｉｚｅｒ社によるＰＦ－００８３５２３１のプロドラッグであるＬｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒ（ＰＦ－０７３０４８１４）のＰｈａｓｅ１ｂ試験の完了がＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに掲載された（ＮＣＴ０４５３５１６７）。また、２０２１年３月、Ｐｆｉｚｅｒ社は新型コロナウイルス感染症に対する治療薬ＰＦ－０７３２１３３２のＰｈａｓｅ１試験を開始すると発表した。ＰＦ－００８３５２３１、ＬｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒおよびＰＦ－０７３２１３３２の構造式は以下に示す通りで、本発明化合物とは化学構造が異なる（非特許文献５、１２および１３、ならびに特許文献６および７）。
ＰＦ－００８３５２３１：
【化1】
Ｌｕｆｏｔｒｅｌｖｉｒ（ＰＦ－０７３０４８１４）：
【化2】
ＰＦ－０７３２１３３２：
【化3】
さらに２０２１年７月、ハイリスク因子を持つＣＯＶＩＤ－１９患者を対象とした、ＰＦ－０７３２１３３２およびリトナビル併用のＰｈａｓｅ２／３試験が開始されることがＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖに掲載された（ＮＣＴ０４９６０２０２）。また、２０２１年１１月、Ｐｆｉｚｅｒ社のホームページにおいて、ＰＡＸＬＯＶＩＤ（ＴＭ）（ＰＦ－０７３２１３３２；リトナビル）は、成人のハイリスク患者において、プラセボと比較して入院または死亡のリスクを８９％減少させたことが報告された（非特許文献１４）。さらに、２０２１年１２月、ＰＡＸＬＯＶＩＤ（ＴＭ）は米国で緊急使用許可が承認され、２０２２年２月１０日にパキロビッド（登録商標）パックが日本で特例承認された。
【0006】
３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を有する化合物が非特許文献５～８に開示されているが、いずれの文献においても本発明に関連する化合物、製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
Ρ２Ｘ３および／またはΡ２Ｘ２／３受容体拮抗作用を有するトリアジン誘導体およびウラシル誘導体が特許文献１～４および８～１２に開示されているが、いずれの文献においても、３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載も示唆もされていない。また、本発明に係る製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
抗腫瘍効果を有するトリアジン誘導体が非特許文献９～１１に開示されているが、いずれの文献においても、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載されておらず、また、本発明に関連する化合物、製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
ガラニン受容体調節作用を有するトリアジン誘導体が特許文献５に開示されているが、いずれの文献においても、３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載も示唆もされていない。また、本発明に係る製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
Ρ２Ｘ３および／またはΡ２Ｘ２／３受容体拮抗作用を有するトリアジン誘導体およびウラシル誘導体が特許文献１～４および８～１２に開示されているが、いずれの文献においても、３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載も示唆もされていない。また、本発明に係る製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
抗腫瘍効果を有するトリアジン誘導体が非特許文献９～１１に開示されているが、いずれの文献においても、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載されておらず、また、本発明に関連する化合物、製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
ガラニン受容体調節作用を有するトリアジン誘導体が特許文献５に開示されているが、いずれの文献においても、３ＣＬプロテアーゼ阻害活性および抗ウイルス効果については記載も示唆もされていない。また、本発明に係る製造方法および合成中間体は記載も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】国際公開第２０１２／０２０７４９号
【文献】国際公開第２０１３／０８９２１２号
【文献】国際公開第２０１０／０９２９６６号
【文献】国際公開第２０１４／２０００７８号
【文献】国際公開第２０１２／００９２５８号
【文献】国際公開第２０２１／２０５２９８号
【文献】国際公開第２０２１／２５０６４８号
【文献】中国特許出願公開第１１３６２０８８８号明細書
【文献】中国特許出願公開第１１３６６６９１４号明細書
【文献】中国特許出願公開第１１３７３５８３８号明細書
【文献】中国特許出願公開第１１３７７３３００号明細書
【文献】中国特許出願公開第１１３８０１０９７号明細書
【非特許文献】
【0008】
【文献】“COVID-19 Dashboard by the Center for Systems Science and Engineering at Johns Hopkins University”、［online］、Johns Hopkins University、［２０２２年９月２１日検索］、インターネット<URL：https://coronavirus.jhu.edu/map.html>
【文献】The NEW ENGLAND JOURNAL of MEDICINE（２０２０年）、３８２巻、１５６４～１５６７頁
【文献】“Report of the WHO-China Joint Mission on Coronavirus Disease 2019 (COVID-19)”、［online］、２０２０年２月２８日、ＷＨＯ、［２０２１年２月８日検索］、インターネット<URL：https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/who-china-joint-mission-on-covid-19-final-report.pdf>
【文献】Science（２００３年）、３００巻、１７６３～１７６７頁
【文献】“A comparative analysis of SARS-CoV-2 antivirals characterizes 3CLpro inhibitor PF-00835231 as a potential new treatment for COVID-19”、Journal of Virology、２０２１年４月２６日、［２０２２年２月１５日検索］、インターネット<URL： https://journals.asm.org/doi/10.1128/JVI.01819-20><doi： 10.1128/JVI.01819-20>
【文献】Cell Research（２０２０年）、３０巻、６７８～６９２頁
【文献】Science（２０２０年）、３６８巻、４０９～４１２頁
【文献】ACS Central Science（２０２１年）、７巻、３号、４６７～４７５頁
【文献】Cancer Treatment Reviews（１９８４年）、１１巻、Supplement 1、９９～１１０頁
【文献】Contributions to Oncology（１９８４年）、１８巻、２２１～２３４頁
【文献】Arzneimittel-Forschung（１９８４年）、１１巻、６号、６６３～６６８頁
【文献】261st Am Chem Soc (ACS) Natl Meet ・ 2021-04-05 / 2021-04-16 ・ Virtual, N/A ・ Abst 243
【文献】Science（２０２１年）、３７４巻、１５８６～１５９３頁
【文献】"Pfizer’s Novel COVID-19 Oral Antiviral Treatment Candidate Reduced Risk Of Hospitalization Or Death By 89% In Interim Analysis Of Phase 2/3 EPIC-HR Study"、［online］、２０２１年１１月５日、 Pfizer Press Release、［２０２２年２月１５日検索］、インターネット＜URL：https://www.pfizer.com/news/press-release/press-release-detail/pfizers-novel-covid-19-oral-antiviral-treatment-candidate＞
【文献】AIMECS 2021（AFMC International Medicinal Chemistry Symposium 2021）、オンラインシンポジウム、２０２１年１１月２９日－１２月２日
【文献】bioRxiv preprint doi： https：//doi.org/10.1101/2022.01.26.477782、“Discovery of S-217622, a Non-Covalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19”
【文献】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０２２年）、６５巻、６４９９～６５１２頁、“Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19”
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明の目的は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を示すトリアジン誘導体、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体の製造方法を提供することにある。
また、本発明の目的は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を示すトリアジン誘導体、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分として含有する、経口投与する製剤を提供することにある。
また、本発明の目的は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を示すトリアジン誘導体、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分として含有する、経口投与する製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明は、以下に関する。
（１）式（Ｉ）：
（式中、Ｒ１は置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ４アルキル、Ｒ２はそれぞれ独立して、ハロゲン、シアノまたはメチル、ｎは１～５の整数である。）で示される化合物またはその塩と、式（ＩＩ）：
（式中、Ｒ３はそれぞれ独立して、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ４アルキル、ｍは０～５の整数である）で示される化合物またはその塩を、酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）：
で示される化合物またはその塩の製造方法。
（２）酸が、トリフルオロ酢酸である、上記（１）記載の製造方法。
（３）式（ＩＩＩ）で示される化合物が、式（ＩＩＩ－１）：
である、上記（１）または（２）記載の製造方法。
（４）式（ＩＶ）：
（式中、Ｒ４は置換もしくは非置換の芳香族複素環式基、または置換もしくは非置換の芳香族炭素環式基であり、ｐは０または１であり、その他の記号は上記（１）と同意義である。）で示される化合物またはその塩と、式（Ｖ）：
（式中、Ｒ５はそれぞれ独立して、ハロゲン、または置換もしくは非置換のアルキルであり、ｑは０～５の整数である。）またはその塩を、酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）：
（式中の記号は上記と同意義である。）で示される化合物またはその塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
（５）酸が酢酸である、上記（４）記載の製造方法。
（６）式（ＶＩ）で示される化合物が、
式（ＶＩＩ）：
である、上記（４）または（５）記載の製造方法。
（７）上記（１）～（３）のいずれかの製造方法より、式（ＩＩＩ）：
で示される化合物またその塩を得る工程を含む、式（ＶＩＩ）：
で示される化合物、またその塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
（８）式（ＶＩＩ）：
で示される化合物またはその塩を、フマル酸、アセトンおよび水存在下で結晶化することを特徴とする、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の製造方法。
（９）上記（１）～（７）のいずれかに記載の製造方法を使用することにより得られた式（ＶＩＩ）：
で示される化合物またはその塩を、結晶化させることを特徴とする、上記（８）記載の製造方法。
（１０）結晶化温度が４０～６０℃であり、結晶化時間が１２０分以上である、上記（８）または（９）記載の製造方法。
（１１）式（ＶＩＩＩ）：
で示される化合物、またはその塩。
（１２）式（ＩＸ）：
で示される化合物、またはその塩。
（１３）式（Ｘ）：
で示される化合物、またはその塩。
（１４）式（ＸＩ）：
で示される化合物、またはその塩。
（１５）式（ＶＩＩ）：
で示される化合物のトルエン和物。
（１６）実質的に、式（ＶＩＩ）：
で示される化合物のフリー体が含まれない、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形。
（１７）以下の式：
で示される化合物のメシル酸塩。
（１８）以下の式：
で示される化合物のメシル酸塩。
（１９）以下の式：
で示される化合物、またはその塩。
（２０）以下の式：
で示される化合物、またはその塩。
（２１）以下の式：
で示される化合物の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩である、上記項目（２０）記載の塩。
（２２）式（ＶＩＩ）：
で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分として含有する、経口投与する製剤（医薬組成物）。
（２３）有効成分が、式（ＶＩＩ）で示される化合物の複合体であり、当該複合体がフマル酸を含む複合体である、上記（２２）記載の製剤（医薬組成物）。
（２４）当該複合体が、式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸が１：１のモル比の共結晶である、上記（２３）記載の製剤（医薬組成物）。
（２５）高分子を製剤中に含有する、上記（２２）～（２４）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２６）高分子がセルロース系高分子、アクリル系高分子、ビニル系高分子から選択される１以上である、上記（２５）記載の製剤（医薬組成物）。
（２７）有効成分が、上記（４）～（１０）のいずれかに記載の方法により得られた化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体である、上記（２２）～（２６）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２８）コロナウイルス感染症を治療および／または予防するための、上記（２２）～（２７）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２９）コロナウイルス感染症が、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）である、上記（２８）記載の製剤（医薬組成物）。
（３０）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が１２５．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３１）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を１５２．３ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３２）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が２５０．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３３）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を３０４．６ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３４）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が２５．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３５）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を３０．４６ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３６）１２歳以上の小児及び成人に用いる、上記（２２）～（３５）のいずれかに記載の製剤。
（３７）６歳以上１２歳未満の小児に用いる、上記（２２）～（３５）のいずれかに記載の製剤。
（１）式（Ｉ）：
【化4】
（式中、Ｒ１は置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ４アルキル、Ｒ２はそれぞれ独立して、ハロゲン、シアノまたはメチル、ｎは１～５の整数である。）で示される化合物またはその塩と、式（ＩＩ）：
【化5】
（式中、Ｒ３はそれぞれ独立して、置換もしくは非置換のＣ１－Ｃ４アルキル、ｍは０～５の整数である）で示される化合物またはその塩を、酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）：
【化6】
で示される化合物またはその塩の製造方法。
（２）酸が、トリフルオロ酢酸である、上記（１）記載の製造方法。
（３）式（ＩＩＩ）で示される化合物が、式（ＩＩＩ－１）：
【化7】
である、上記（１）または（２）記載の製造方法。
（４）式（ＩＶ）：
【化8】
（式中、Ｒ４は置換もしくは非置換の芳香族複素環式基、または置換もしくは非置換の芳香族炭素環式基であり、ｐは０または１であり、その他の記号は上記（１）と同意義である。）で示される化合物またはその塩と、式（Ｖ）：
【化9】
（式中、Ｒ５はそれぞれ独立して、ハロゲン、または置換もしくは非置換のアルキルであり、ｑは０～５の整数である。）またはその塩を、酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）：
【化10】
（式中の記号は上記と同意義である。）で示される化合物またはその塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
（５）酸が酢酸である、上記（４）記載の製造方法。
（６）式（ＶＩ）で示される化合物が、
式（ＶＩＩ）：
【化11】
である、上記（４）または（５）記載の製造方法。
（７）上記（１）～（３）のいずれかの製造方法より、式（ＩＩＩ）：
【化12】
で示される化合物またその塩を得る工程を含む、式（ＶＩＩ）：
【化13】
で示される化合物、またその塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
（８）式（ＶＩＩ）：
【化14】
で示される化合物またはその塩を、フマル酸、アセトンおよび水存在下で結晶化することを特徴とする、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の製造方法。
（９）上記（１）～（７）のいずれかに記載の製造方法を使用することにより得られた式（ＶＩＩ）：
【化15】
で示される化合物またはその塩を、結晶化させることを特徴とする、上記（８）記載の製造方法。
（１０）結晶化温度が４０～６０℃であり、結晶化時間が１２０分以上である、上記（８）または（９）記載の製造方法。
（１１）式（ＶＩＩＩ）：
【化16】
で示される化合物、またはその塩。
（１２）式（ＩＸ）：
【化17】
で示される化合物、またはその塩。
（１３）式（Ｘ）：
【化18】
で示される化合物、またはその塩。
（１４）式（ＸＩ）：
【化19】
で示される化合物、またはその塩。
（１５）式（ＶＩＩ）：
【化20】
で示される化合物のトルエン和物。
（１６）実質的に、式（ＶＩＩ）：
【化21】
で示される化合物のフリー体が含まれない、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形。
（１７）以下の式：
【化22】
で示される化合物のメシル酸塩。
（１８）以下の式：
【化23】
で示される化合物のメシル酸塩。
（１９）以下の式：
【化24】
で示される化合物、またはその塩。
（２０）以下の式：
【化25】
で示される化合物、またはその塩。
（２１）以下の式：
【化26】
で示される化合物の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩である、上記項目（２０）記載の塩。
（２２）式（ＶＩＩ）：
【化27】
（２３）有効成分が、式（ＶＩＩ）で示される化合物の複合体であり、当該複合体がフマル酸を含む複合体である、上記（２２）記載の製剤（医薬組成物）。
（２４）当該複合体が、式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸が１：１のモル比の共結晶である、上記（２３）記載の製剤（医薬組成物）。
（２５）高分子を製剤中に含有する、上記（２２）～（２４）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２６）高分子がセルロース系高分子、アクリル系高分子、ビニル系高分子から選択される１以上である、上記（２５）記載の製剤（医薬組成物）。
（２７）有効成分が、上記（４）～（１０）のいずれかに記載の方法により得られた化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体である、上記（２２）～（２６）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２８）コロナウイルス感染症を治療および／または予防するための、上記（２２）～（２７）のいずれかに記載の製剤（医薬組成物）。
（２９）コロナウイルス感染症が、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）である、上記（２８）記載の製剤（医薬組成物）。
（３０）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が１２５．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３１）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を１５２．３ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３２）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が２５０．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３３）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を３０４．６ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３４）有効成分として式（ＶＩＩ）で示される化合物が２５．０ｍｇ含まれる、上記（２２）記載の製剤。
（３５）式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸のモル比が１：１である複合体を３０．４６ｍｇ含む、上記（２３）記載の製剤。
（３６）１２歳以上の小児及び成人に用いる、上記（２２）～（３５）のいずれかに記載の製剤。
（３７）６歳以上１２歳未満の小児に用いる、上記（２２）～（３５）のいずれかに記載の製剤。
【発明の効果】
【0011】
本発明に係る製造方法により製造された化合物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性を有し、コロナウイルス感染症の治療剤および／または予防剤として有用である。
また、本発明に係る製造方法により製造された化合物は、医薬原体として有用である。
さらに、本発明に係る製造方法により製造された化合物（Ｉ－０００５）のフマル酸共結晶を含有する医薬組成物は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療剤として非常に有用である。本発明に係る製造方法は、本発明に係る化合物を収率よく製造することが出来る方法である。
本発明に係る、経口投与する製剤（医薬組成物）は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性を有し、コロナウイルス感染症の治療剤および／または予防剤として有用である。
また、本発明に係る製造方法により製造された化合物は、医薬原体として有用である。
さらに、本発明に係る製造方法により製造された化合物（Ｉ－０００５）のフマル酸共結晶を含有する医薬組成物は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療剤として非常に有用である。本発明に係る製造方法は、本発明に係る化合物を収率よく製造することが出来る方法である。
本発明に係る、経口投与する製剤（医薬組成物）は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性を有し、コロナウイルス感染症の治療剤および／または予防剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】実施例ａにおける式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
【図3】式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の非対称単位中の構造を示す。
【図5】図１の粉末Ｘ線解析パターンを示した式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の、ＴＧ／ＤＴＡ分析結果を示す。縦軸は熱量（μＶ）又は重量変化（％）を示し、横軸は温度（℃）を示す。図中のＣｅｌは、セルシウス度（℃）を意味する。
【図6】図１の粉末Ｘ線解析パターンを示した式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の、ＤＶＳ分析結果を示す。湿度を変化させても実質的な重量変化はみられず、当該結晶は水分に対して安定であった。
【図7】実施例１ａの工程４で得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物（化合物Ｉ－００５）のｐａ％（ピーク面積％）は約９５ｐａ％であった。
【図8】工程４’で得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物（化合物Ｉ－００５）のｐａ％は約９９ｐａ％であった。
【図9】実施例ｂにおける、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
【図11】式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の非対称単位中の構造図を示す。
【図12】実施例１ｂの工程５－１で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物の未乾結晶のＨＰＬＣの結果を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のｐａ％は約９９ｐａ％であった。
【図14】実施例１ｂの工程５－２で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の、ＤＳＣ分析結果を示す。
【図15】実施例１ｂの工程５－２で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の、ＴＧ／ＤＴＡ分析結果を示す。１５０℃までの重量減少は０．２８％であった。
【図16】実施例１ｂの工程５－２で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の、ＨＰＬＣの結果を示す。
【図17】実施例１ｂの工程５－２で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粒度分布を示す。Ｄ５０は２５．３５μｍ、Ｄ９０は７３．５６μｍであった。
【図18】実施例１ｂの工程５－２で得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）のＤＶＳ分析結果を示す。湿度を変化させても実質的な重量変化はみられず、当該結晶は水分に対して安定であった。
【図20】式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の粉末Ｘ線回折パターンを示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
【図21】実施例６の溶出挙動を示す。横軸は時間（分）、縦軸は溶出率（％）を表す。
【図22】実施例６Ａおよび６Ｂの製剤に用いた有効成分（式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）の粒度分布を示す。
【図23】実施例６Ｃおよび６Ｄの製剤に用いた有効成分（式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）の粒度分布を示す。
【図24】Ｐｈａｓｅ ２ａ ＰａｒｔのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス力価のベースラインからの変化量を示す。縦軸はウイルス力価のベースラインからの変化量 （ｌｏｇ１０ （ＴＣＩＤ５０／ｍＬ））、横軸は評価時点を示す。
【図25】ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間を示す。縦軸はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス力価陰性者の割合（単位：％）を示す。横軸は治療開始からの時間（単位：時間）を示す。
【図26】各時点におけるＣＯＶＩＤ－１９の１２症状合計スコアのベースラインからの変化量を示す。縦軸はＣＯＶＩＤ－１９の１２症状合計スコアのベースラインからの変化量を示す。横軸は評価時点を示す。
【図27】実施例１０の溶出挙動を示す。横軸は時間（分）、縦軸は含量補正した溶出率（％）を表す。
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下に本明細書において用いられる各用語の意味を説明する。各用語は特に断りのない限り、単独で用いられる場合も、または他の用語と組み合わせて用いられる場合も、同一の意味で用いられる。
「からなる」という用語は、構成要件のみを有することを意味する。
「含む」または「含有する」という用語は、構成要件に限定されず、記載されていない要素を排除しないことを意味する。
また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。
また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当上記分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
「からなる」という用語は、構成要件のみを有することを意味する。
「含む」または「含有する」という用語は、構成要件に限定されず、記載されていない要素を排除しないことを意味する。
また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。
また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当上記分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【0014】
「ハロゲン」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、およびヨウ素原子を包含する。特にフッ素原子および塩素原子が好ましい。
【0015】
「アルキル」とは、炭素数１～１５、好ましくは炭素数１～１０、より好ましくは炭素数１～６、さらに好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－へプチル、イソヘプチル、ｎ－オクチル、イソオクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル等が挙げられる。
「アルキル」の好ましい態様として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチルが挙げられる。さらに好ましい態様として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチルが挙げられる。
「Ｃ１－Ｃ４アルキル」とは、炭素数１～４の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等が挙げられる。
「アルキル」の好ましい態様として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチルが挙げられる。さらに好ましい態様として、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチルが挙げられる。
「Ｃ１－Ｃ４アルキル」とは、炭素数１～４の直鎖又は分枝状の炭化水素基を包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等が挙げられる。
【0016】
「芳香族炭素環式基」とは、単環または２環以上の、環状芳香族炭化水素基を意味する。例えば、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル等が挙げられる。６員芳香族炭素環式基としては、例えば、フェニルが挙げられる。１０員芳香族炭素環式基としては、例えば、ナフチル等が挙げられる。１４員芳香族炭素環式基としては、例えば、アントリル、フェナントリル等が挙げられる。
「芳香族炭素環式基」の好ましい態様として、フェニルが挙げられる。
「芳香族炭素環式基」の好ましい態様として、フェニルが挙げられる。
【0017】
「芳香族炭素環」とは、上記「芳香族炭素環式基」から導かれる環を意味する。
【0018】
「芳香族複素環式基」とは、Ｏ、ＳおよびＮから任意に選択される同一または異なるヘテロ原子を環内に１以上有する、単環または２環以上の、芳香族環式基を意味する。
２環以上の芳香族複素環式基は、単環または２環以上の芳香族複素環式基に、上記「芳香族炭素環式基」における環が縮合したものも包含し、該結合手はいずれの環に有していても良い。
単環の芳香族複素環式基としては、５～８員が好ましく、より好ましくは５員または６員である。５員芳香族複素環式基としては、例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル等が挙げられる。６員芳香族複素環式基としては、例えば、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル等が挙げられる。
２環の芳香族複素環式基としては、８～１０員が好ましく、より好ましくは９員または１０員である。例えば、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジル、トリアゾロピリジル、イミダゾチアゾリル、ピラジノピリダジニル、オキサゾロピリジル、チアゾロピリジル等が挙げられる。９員芳香族複素環式基としては、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、プリニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾフラニル、イミダゾピリジル、トリアゾロピリジル、オキサゾロピリジル、チアゾロピリジル等が挙げられる。１０員芳香族複素環式基としては、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プテリジニル、ピラジノピリダジニル等が挙げられる。
３環以上の芳香族複素環式基としては、１３～１５員が好ましい。例えば、カルバゾリル、アクリジニル、キサンテニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、ジベンゾフリル等が挙げられる。
「芳香族複素環式基」の好ましい態様として、トリアゾリルが挙げられる。
２環以上の芳香族複素環式基は、単環または２環以上の芳香族複素環式基に、上記「芳香族炭素環式基」における環が縮合したものも包含し、該結合手はいずれの環に有していても良い。
単環の芳香族複素環式基としては、５～８員が好ましく、より好ましくは５員または６員である。５員芳香族複素環式基としては、例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル等が挙げられる。６員芳香族複素環式基としては、例えば、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル等が挙げられる。
２環の芳香族複素環式基としては、８～１０員が好ましく、より好ましくは９員または１０員である。例えば、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プリニル、プテリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジル、トリアゾロピリジル、イミダゾチアゾリル、ピラジノピリダジニル、オキサゾロピリジル、チアゾロピリジル等が挙げられる。９員芳香族複素環式基としては、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリジニル、プリニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾフラニル、イミダゾピリジル、トリアゾロピリジル、オキサゾロピリジル、チアゾロピリジル等が挙げられる。１０員芳香族複素環式基としては、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、プテリジニル、ピラジノピリダジニル等が挙げられる。
３環以上の芳香族複素環式基としては、１３～１５員が好ましい。例えば、カルバゾリル、アクリジニル、キサンテニル、フェノチアジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、ジベンゾフリル等が挙げられる。
「芳香族複素環式基」の好ましい態様として、トリアゾリルが挙げられる。
【0019】
「芳香族複素環」とは、上記「芳香族複素環式基」から導かれる環を意味する。
【0020】
「置換アルキル」の置換基としては、次の置換基群Ａが挙げられる。任意の位置の炭素原子が次の置換基群Ａから選択される１以上の基と結合していてもよい。
置換基群Ａ：ハロゲン、シアノおよびニトロ。
「置換Ｃ１－Ｃ４アルキル」の置換基としては、次の置換基群Ｂが挙げられる。任意の位置の炭素原子が次の置換基群Ｂから選択される１以上の基と結合していてもよい。
置換基群Ｂ：ハロゲン、シアノおよびニトロ。
置換基群Ａ：ハロゲン、シアノおよびニトロ。
「置換Ｃ１－Ｃ４アルキル」の置換基としては、次の置換基群Ｂが挙げられる。任意の位置の炭素原子が次の置換基群Ｂから選択される１以上の基と結合していてもよい。
置換基群Ｂ：ハロゲン、シアノおよびニトロ。
【0021】
「置換芳香族炭素環式基」および「置換芳香族複素環式基」等の「芳香族炭素環」および「芳香族複素環」の環上の置換基としては、次の置換基群Ｃが挙げられる。環上の任意の位置の原子が次の置換基群Ｂから選択される１以上の基と結合していてもよい。
置換基群Ｃ：ハロゲン、シアノ、ニトロおよびアルキル。
置換基群Ｃ：ハロゲン、シアノ、ニトロおよびアルキル。
【0022】
式（ＶＩ）および式（ＶＩＩ）で示される化合物は、特定の異性体に限定するものではなく、全ての可能な異性体（例えば、ケト－エノール異性体、イミン－エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体、回転異性体等）、ラセミ体またはそれらの混合物を含む。
例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物や化合物Ｉ－００５は、以下のような互変異性体を包含する。
【化28】
例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物や化合物Ｉ－００５は、以下のような互変異性体を包含する。
【化29】
【0023】
実質的に、式（ＶＩＩ）：
で示される化合物のフリー体が含まれない、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形とは、粉末Ｘ線回折測定等の測定機器で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフリー体由来のピークが検出されない（検出限界以下である）、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形を意味する。
【化30】
で示される化合物のフリー体が含まれない、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形とは、粉末Ｘ線回折測定等の測定機器で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフリー体由来のピークが検出されない（検出限界以下である）、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形を意味する。
【0024】
さらに、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）（以下、式（ＶＩＩ）等とする）で示される化合物の一つ以上の水素、炭素および／または他の原子は、それぞれ水素、炭素および／または他の原子の同位体で置換され得る。そのような同位体の例としては、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、123Ｉおよび３６Ｃｌのように、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素および塩素が包含される。式（ＶＩＩ）等で示される化合物は、そのような同位体で置換された化合物も包含する。該同位体で置換された化合物は、医薬品としても有用であり、式（ＶＩＩ）等で示される化合物のすべての放射性標識体を包含する。また該「放射性標識体」を製造するための「放射性標識化方法」も本発明に包含され、該「放射性標識体」は、代謝薬物動態研究、結合アッセイにおける研究および／または診断のツールとして有用である。
また、本発明の結晶は重水素変換体であってもよい。本発明の結晶は同位元素（例、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ等）で標識されていてもよい。
また、本発明の結晶は重水素変換体であってもよい。本発明の結晶は同位元素（例、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ等）で標識されていてもよい。
【0025】
式（ＶＩＩ）等で示される化合物の放射性標識体は、当該技術分野で周知の方法で調製できる。例えば、式（ＶＩＩ）等で示されるトリチウム標識化合物は、トリチウムを用いた触媒的脱ハロゲン化反応によって、式（ＶＩＩ）等で示される特定の化合物にトリチウムを導入することで調製できる。この方法は、適切な触媒、例えばＰｄ／Ｃの存在下、塩基の存在下または非存在下で、式（ＶＩＩ）等で示される化合物が適切にハロゲン置換された前駆体とトリチウムガスとを反応させることを包含する。トリチウム標識化合物を調製するための他の適切な方法は、“Ｉｓｏｔｏｐｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１，Ｌａｂｅｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ （Ｐａｒｔ Ａ），Ｃｈａｐｔｅｒ ６ （１９８７年）”を参照することができる。１４Ｃ－標識化合物は、１４Ｃ炭素を有する原料を用いることによって調製できる。
【0026】
本発明の製剤においては、式（ＶＩＩ）等で示される化合物の製薬上許容される塩を用いることができる。式（ＶＩＩ）等で示される化合物の製薬上許容される塩としては、例えば、式（ＶＩＩ）等で示される化合物と、アルカリ金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、バリウム等）、マグネシウム、遷移金属（例えば、亜鉛、鉄等）、アンモニア、有機塩基（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、メグルミン、エチレンジアミン、ピリジン、ピコリン、キノリン等）およびアミノ酸との塩、または無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、炭酸、臭化水素酸、リン酸、ヨウ化水素酸等）、および有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、マンデル酸、グルタル酸、リンゴ酸、安息香酸、フタル酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等）との塩が挙げられる。これらの塩は、通常行われる方法によって形成させることができる。
式（ＶＩＩ）で示される化合物の製薬上許容される塩としては、例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物とカウンター分子またはカウンターイオンからなり、任意の数のカウンター分子またはカウンターイオンを含んでいても良い。式（ＶＩＩ）で示される化合物の製薬上許容される塩は、化合物とカウンター分子またはカウンター原子との間でプロトン移動することにより、イオン結合を介するものをいう。
式（ＶＩＩ）で示される化合物の製薬上許容される塩としては、例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物とカウンター分子またはカウンターイオンからなり、任意の数のカウンター分子またはカウンターイオンを含んでいても良い。式（ＶＩＩ）で示される化合物の製薬上許容される塩は、化合物とカウンター分子またはカウンター原子との間でプロトン移動することにより、イオン結合を介するものをいう。
【0027】
本発明の製剤においては、式（ＶＩＩ）で示される化合物またはその製薬上許容される塩の複合体を用いることができる。式（ＶＩＩ）で示される化合物またはその製薬上許容される塩は、溶媒和物（例えば、水和物等）、共結晶および／または包接化合物を形成する場合があり、本明細書中ではそれらを「複合体」と記載する。
【0028】
本明細書中で用いる「溶媒和物」とは、例えば式（ＶＩＩ）等で示される化合物に対し、任意の数の溶媒分子（例えば、水分子等）と配位していてもよい。式（ＶＩＩ）等で示される化合物またはその製薬上許容される塩を、大気中に放置することにより、水分を吸収し、吸着水が付着する場合や、水和物を形成する場合がある。
【0029】
溶媒分子としては、例えば、アセトニトリル、クロロベンゼン、クロロホルム、シクロヘキサン、１，２‐ジクロロエテン、ジクロロメタン、１，２‐ジメトキシエタン、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド、１，４‐ジオキサン、２‐エトキシエタノール、エチレングリコール、ホルムアミド、ヘキサン、メタノール、２‐メトキシエタノール、メチルブチルケトン、メチルシクロヘキサン、Ｎ‐メチルピロリドン、ニトロメタン、ピリジン、スルホラン、テトラリン、トルエン、１，１，２‐トリクロロエテン、キシレン、酢酸、アニソール、１‐ブタノール、２‐ブタノール、酢酸ｎ‐ブチル、ｔ‐ブチルメチルエーテル、クメン、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ギ酸エチル、ギ酸、ヘプタン、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル、酢酸メチル、３‐メチル‐１‐ブタノール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、２‐メチル‐１‐プロパノール、ペンタン、１‐ペンタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、酢酸プロピル、テトラヒドロフラン、水（すなわち水和物）、エタノール、アセトン、１，１‐ジエトキシプロパン、１，１‐ジメトキシメタン、２，２‐ジメトキシプロパン、イソオクタン、イソプロピルエーテル、メチルイソプロピルケトン、メチルテトラヒドロフラン、石油エーテル、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸、好ましくは、酢酸、アニソール、１‐ブタノール、２‐ブタノール、酢酸ｎ‐ブチル、ｔ‐ブチルメチルエーテル、クメン、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ギ酸エチル、ギ酸、ヘプタン、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル、酢酸メチル、３‐メチル‐１‐ブタノール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、２‐メチル‐１‐プロパノール、ペンタン、１‐ペンタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、酢酸プロピル、テトラヒドロフラン、水（すなわち水和物）、エタノール、アセトン、１，１‐ジエトキシプロパン、１，１‐ジメトキシメタン、２，２‐ジメトキシプロパン、イソオクタン、イソプロピルエーテル、メチルイソプロピルケトン、メチルテトラヒドロフラン、石油エーテル、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸、より好ましくは、水（すなわち水和物）、エタノール、アセトン、１，１‐ジエトキシプロパン、１，１‐ジメトキシメタン、２，２‐ジメトキシプロパン、イソオクタン、イソプロピルエーテル、メチルイソプロピルケトン、メチルテトラヒドロフラン、石油エーテル、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸などが挙げられる。
【0030】
本明細書中で用いる「共結晶」とは、カウンター分子が同一結晶格子内に規則的に配列することを意味し、任意の数のカウンター分子を含んでいても良い。また、共結晶とは、化合物とカウンター分子との分子間相互作用が、水素結合、ファンデルワールス力などの、非共有結合性かつ非イオン性の化学的相互作用を介するものをいう。
例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物の共結晶としては、式（ＶＩＩ）で示される化合物とカウンター分子からなり、任意の数のカウンター分子を含んでいても良い。好ましくは、式（ＶＩＩ）で示される化合物とフマル酸からなり、任意の数のフマル酸を含んでいても良い。さらに好ましくは、式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸が１：１のモル比の共結晶である。
共結晶は、化合物が本質的に無電荷または中性のままであるという点で、塩と区別される。
共結晶は、カウンター分子が水もしくは溶媒ではないという点で水和物または溶媒和物と区別される。
例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物の共結晶としては、式（ＶＩＩ）で示される化合物とカウンター分子からなり、任意の数のカウンター分子を含んでいても良い。好ましくは、式（ＶＩＩ）で示される化合物とフマル酸からなり、任意の数のフマル酸を含んでいても良い。さらに好ましくは、式（ＶＩＩ）で示される化合物およびフマル酸が１：１のモル比の共結晶である。
共結晶は、化合物が本質的に無電荷または中性のままであるという点で、塩と区別される。
共結晶は、カウンター分子が水もしくは溶媒ではないという点で水和物または溶媒和物と区別される。
【0031】
本発明の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）で示される化合物またはその塩は、溶媒和物（例えば、水和物等）、共結晶および／または結晶多形を形成する場合があり、本発明はそのような各種の溶媒和物、共結晶および結晶多形も包含する。「溶媒和物」は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）で示される化合物に対し、任意の数の溶媒分子（例えば、水分子等）と配位していてもよい。また、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）で示される化合物またはその塩を、再結晶することで結晶多形を形成する場合がある。
【0032】
本明細書中で用いる「結晶」とは、構成する原子、イオン、分子などが三次元的に規則正しく配列した固体を意味し、そのような規則正しい内部構造を持たない非晶質固体とは区別される。本発明の結晶は、単結晶、双晶、多結晶などであってもよい。
さらに、「結晶」には、組成が同一でありながら結晶中の配列が異なる「結晶多形」が存在することがあり、それらを含めて「結晶形態」という。
加えて、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）で示される化合物は、これらの塩又はこれらの製薬上許容される溶媒和物に変換してもよい。本発明の結晶は、これらの塩、水和物、溶媒和物、結晶多形のいずれであってもよく、二つ以上の混合物であっても、発明の範囲内に包含されることが意図される。
結晶形態および結晶化度は、例えば、粉末Ｘ線回折測定、ラマン分光法、赤外吸収スペクトル測定法、水分吸脱着測定、示差走査熱量測定、溶解特性を含めた多くの技術によって測定することができる。
さらに、「結晶」には、組成が同一でありながら結晶中の配列が異なる「結晶多形」が存在することがあり、それらを含めて「結晶形態」という。
加えて、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）、式（ＶＩ）、式（ＶＩＩ）、式（ＶＩＩＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）および、式（ＸＩ）で示される化合物は、これらの塩又はこれらの製薬上許容される溶媒和物に変換してもよい。本発明の結晶は、これらの塩、水和物、溶媒和物、結晶多形のいずれであってもよく、二つ以上の混合物であっても、発明の範囲内に包含されることが意図される。
結晶形態および結晶化度は、例えば、粉末Ｘ線回折測定、ラマン分光法、赤外吸収スペクトル測定法、水分吸脱着測定、示差走査熱量測定、溶解特性を含めた多くの技術によって測定することができる。
【0033】
また、式（ＶＩＩ）等で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を、再結晶することで「結晶多形」を形成する場合がある。
本発明製剤においては、そのような各種の塩、複合体（水和物、溶媒和物、共結晶、包接化合物）、結晶多形を用いることができ、また、それらの二つ以上の混合物であっても用いることができる。
本発明製剤においては、そのような各種の塩、複合体（水和物、溶媒和物、共結晶、包接化合物）、結晶多形を用いることができ、また、それらの二つ以上の混合物であっても用いることができる。
【0034】
（粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ））
粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）は、固体の結晶形態および結晶性を測定するための最も感度の良い分析法の１つである。Ｘ線が結晶に照射されると、結晶格子面で反射し、互いに干渉しあい、構造の周期に対応した秩序だった回折線を示す。一方、非晶質固体については、通常、その構造の中に秩序だった繰返し周期をもたないため、回折現象は起こらず、特徴のないブロードなＸＲＰＤパターン（ハローパターンとも呼ばれる）を示す。
粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）は、固体の結晶形態および結晶性を測定するための最も感度の良い分析法の１つである。Ｘ線が結晶に照射されると、結晶格子面で反射し、互いに干渉しあい、構造の周期に対応した秩序だった回折線を示す。一方、非晶質固体については、通常、その構造の中に秩序だった繰返し周期をもたないため、回折現象は起こらず、特徴のないブロードなＸＲＰＤパターン（ハローパターンとも呼ばれる）を示す。
【0035】
式（ＶＩＩ）等で示される化合物の結晶形態は、粉末Ｘ線回折パターンおよび特徴的な回折ピークにより識別可能である。式（ＶＩＩ）等で示される化合物の結晶形態は、特徴的な回折ピークの存在によって他の結晶形態と区別することができる。
本明細書中で用いる特徴的な回折ピークは、観測された回折パターンから選択されるピークである。特徴的な回折ピークは、好ましくは回折パターンにおける約１０本、より好ましくは約５本、さらに好ましくは約３本から選択される。
複数の結晶を区別する上では、ピークの強度よりも、当該結晶で確認され、他の結晶では確認されないピークが、その結晶を特定する上で好ましい特徴的なピークとなる。そういった特徴的なピークであれば、一つまたは二つのピークでも、当該結晶を特徴付けることができる。測定して得られたチャートを比較し、これらの特徴的なピークが一致すれば、粉末Ｘ線回折パターンが実質的に一致するといえる。
本明細書中で用いる特徴的な回折ピークは、観測された回折パターンから選択されるピークである。特徴的な回折ピークは、好ましくは回折パターンにおける約１０本、より好ましくは約５本、さらに好ましくは約３本から選択される。
複数の結晶を区別する上では、ピークの強度よりも、当該結晶で確認され、他の結晶では確認されないピークが、その結晶を特定する上で好ましい特徴的なピークとなる。そういった特徴的なピークであれば、一つまたは二つのピークでも、当該結晶を特徴付けることができる。測定して得られたチャートを比較し、これらの特徴的なピークが一致すれば、粉末Ｘ線回折パターンが実質的に一致するといえる。
【0036】
一般に、粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）は±０．２°の範囲内で誤差が生じ得るため、粉末Ｘ線回折の回折角度の値は±０．２°程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要がある。したがって、粉末Ｘ線回折におけるピークの回折角度が完全に一致する結晶だけでなく、ピークの回折角度が±０．２°程度の誤差で一致する結晶も本発明に含まれる。
【0037】
以下の表および図において表示されるピークの強度は、一般に、多くの因子、例えばＸ線ビームに対する結晶の選択配向の効果、粗大粒子の影響、分析される物質の純度またはサンプルの結晶化度によって変動し得ることが知られている。また、ピーク位置についても、サンプル高の変動に基づいてシフトし得る。さらに、異なる波長を使用して測定するとブラッグ式（ｎλ＝２ｄｓｉｎθ）に従って異なるシフトが得られるが、このような別の波長の使用により得られる別のＸＲＰＤパターンも、本発明の範囲に含まれる。
【0038】
（単結晶構造解析）
結晶を特定する方法の一つで、当該結晶における結晶学的パラメーター、さらに、原子座標（各原子の空間的な位置関係を示す値）および３次元構造モデルを得ることができる。桜井敏雄著「Ｘ線構造解析の手引き」裳華房発行（１９８３年）、Stout & Jensen著 X-Ray Structure Determination： A Practical Guide, Macmillan Co., New York (1968)などを参照。本発明のような複合体、塩、光学異性体、互変異性体、幾何異性体の結晶の構造を同定する際には、単結晶構造解析が有用である。
結晶を特定する方法の一つで、当該結晶における結晶学的パラメーター、さらに、原子座標（各原子の空間的な位置関係を示す値）および３次元構造モデルを得ることができる。桜井敏雄著「Ｘ線構造解析の手引き」裳華房発行（１９８３年）、Stout & Jensen著 X-Ray Structure Determination： A Practical Guide, Macmillan Co., New York (1968)などを参照。本発明のような複合体、塩、光学異性体、互変異性体、幾何異性体の結晶の構造を同定する際には、単結晶構造解析が有用である。
【0039】
式（ＶＩＩ）等で示される化合物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を有するため、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼが関与する疾患の治療および／または予防剤として有用である。本発明において「治療剤および／または予防剤」という場合、症状改善剤も包含する。コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼが関与する疾患としては、ウイルス感染症が挙げられ、好ましくはコロナウイルス感染症が挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、ヒトに感染するコロナウイルスが挙げられる。ヒトに感染するコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、アルファコロナウイルスおよび／またはベータコロナウイルス、より好ましくはベータコロナウイルス、さらに好ましくはサルベコウイルスが挙げられる。
一つの態様として、アルファコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９ＥおよびＨＣｏＶ－ＮＬ６３が挙げられる。特に好ましくは、ＨＣｏＶ－２２９Ｅが挙げられる。
一つの態様として、ベータコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。好ましくはＨＣｏＶ－ＯＣ４３またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
一つの態様として、ベータコロナウイルスとしては、ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）、ベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）、およびベータコロナウイルスＣ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｃ）が挙げられる。より好ましくは、ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）、およびベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）、特に好ましくはベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）が挙げられる。
ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）としては、例えばＨＣｏＶ－ＨＫＵ１およびＨＣｏＶ－ＯＣ４３、好ましくは、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３が挙げられる。ベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）としては、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。ベータコロナウイルスＣ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）としては、好ましくはＭＥＲＳ－ＣｏＶが挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
コロナウイルス感染症としては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が挙げられる。好ましくは、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症、特に好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が挙げられる。
コロナウイルス感染症としては、特に好ましくは、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）が挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、ヒトに感染するコロナウイルスが挙げられる。ヒトに感染するコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、アルファコロナウイルスおよび／またはベータコロナウイルス、より好ましくはベータコロナウイルス、さらに好ましくはサルベコウイルスが挙げられる。
一つの態様として、アルファコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９ＥおよびＨＣｏＶ－ＮＬ６３が挙げられる。特に好ましくは、ＨＣｏＶ－２２９Ｅが挙げられる。
一つの態様として、ベータコロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。好ましくはＨＣｏＶ－ＯＣ４３またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
一つの態様として、ベータコロナウイルスとしては、ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）、ベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）、およびベータコロナウイルスＣ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｃ）が挙げられる。より好ましくは、ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）、およびベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）、特に好ましくはベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）が挙げられる。
ベータコロナウイルスＡ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ａ）としては、例えばＨＣｏＶ－ＨＫＵ１およびＨＣｏＶ－ＯＣ４３、好ましくは、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３が挙げられる。ベータコロナウイルスＢ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）としては、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。ベータコロナウイルスＣ系統（β－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｌｉｎｅａｇｅ Ｂ）としては、好ましくはＭＥＲＳ－ＣｏＶが挙げられる。
一つの態様として、コロナウイルスとしては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、特に好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が挙げられる。
コロナウイルス感染症としては、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が挙げられる。好ましくは、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、および／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症、特に好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が挙げられる。
コロナウイルス感染症としては、特に好ましくは、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）が挙げられる。
【0040】
以下に、本発明に係る製造方法について説明する。
工程１ 式（ＩＩＩ）で示される化合物の製造方法
式中の記号は上記と同意義である。
本工程は、式（Ｉ）で示される化合物と式（ＩＩ）で示される化合物を酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）で示される化合物の製造方法である。
式（Ｉ）で示される化合物に対して、式（ＩＩ）で示される化合物は、通常、１．０～５．０当量、例えば、１．０～３．０当量用いることができる。
溶媒としては、上記工程を効率よく進行させるものであれば特に制限されず、酸を溶媒として利用してもよい。酸、トルエン、塩化メチレン、ジクロロエタン等が挙げられ、単独または混合して用いることができる。好ましくは、酸が挙げられる。
酸としては、プロトン酸、ルイス酸が挙げられ、好ましくは、トリフルオロ酢酸が挙げられる。
式（Ｉ）で示される化合物に対して、酸の使用量は通常、１．０当量～大過剰、例えば、５．０当量～大過剰用いることができる。
反応温度は、特に制限されないが通常、約０℃～約５０℃、好ましくは、室温～４０℃で行うことができる。
反応時間は、特に制限されないが通常、０．１時間～１２時間、好ましくは、０．１～５時間である。
工程１ 式（ＩＩＩ）で示される化合物の製造方法
【化31】
式中の記号は上記と同意義である。
本工程は、式（Ｉ）で示される化合物と式（ＩＩ）で示される化合物を酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）で示される化合物の製造方法である。
式（Ｉ）で示される化合物に対して、式（ＩＩ）で示される化合物は、通常、１．０～５．０当量、例えば、１．０～３．０当量用いることができる。
溶媒としては、上記工程を効率よく進行させるものであれば特に制限されず、酸を溶媒として利用してもよい。酸、トルエン、塩化メチレン、ジクロロエタン等が挙げられ、単独または混合して用いることができる。好ましくは、酸が挙げられる。
酸としては、プロトン酸、ルイス酸が挙げられ、好ましくは、トリフルオロ酢酸が挙げられる。
式（Ｉ）で示される化合物に対して、酸の使用量は通常、１．０当量～大過剰、例えば、５．０当量～大過剰用いることができる。
反応温度は、特に制限されないが通常、約０℃～約５０℃、好ましくは、室温～４０℃で行うことができる。
反応時間は、特に制限されないが通常、０．１時間～１２時間、好ましくは、０．１～５時間である。
【0041】
工程２ 式（ＶＩ）で示される化合物の製造方法
式中の記号は上記と同意義である。
本工程は、式（ＩＶ）で示される化合物と式（Ｖ）で示される化合物を酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）で示される化合物の製造方法である。
式（ＩＶ）で示される化合物に対して、式（Ｖ）で示される化合物は、通常、１．０～５．０当量、例えば、１．０～１．５当量用いることができる。
溶媒としては、上記工程を効率よく進行させるものであれば特に制限されず、酸を溶媒として利用してもよい。トルエン、ｔブタノール、ｔアミルアルコール等が挙げられ、単独または混合して用いることができる。好ましくは、トルエン挙げられる。
酸としては、酢酸、２，２―ジメチルブタン酸等が挙げられる。好ましくは、酢酸が挙げられる。
式（ＩＶ）で示される化合物に対して、酸の使用量は通常、１．０当量～１０当量、例えば、３．０当量～１０当量用いることができる。
反応温度は、特に制限されないが通常、室温～約１５０℃またはマイクロウェーブ照射下、好ましくは、５０～１５０℃またはマイクロウェーブ照射下で行うことができる。
反応時間は、特に制限されないが通常、０．１時間～１２時間、好ましくは、３～１０時間である。
【化32】
式中の記号は上記と同意義である。
本工程は、式（ＩＶ）で示される化合物と式（Ｖ）で示される化合物を酸存在下で反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）で示される化合物の製造方法である。
式（ＩＶ）で示される化合物に対して、式（Ｖ）で示される化合物は、通常、１．０～５．０当量、例えば、１．０～１．５当量用いることができる。
溶媒としては、上記工程を効率よく進行させるものであれば特に制限されず、酸を溶媒として利用してもよい。トルエン、ｔブタノール、ｔアミルアルコール等が挙げられ、単独または混合して用いることができる。好ましくは、トルエン挙げられる。
酸としては、酢酸、２，２―ジメチルブタン酸等が挙げられる。好ましくは、酢酸が挙げられる。
式（ＩＶ）で示される化合物に対して、酸の使用量は通常、１．０当量～１０当量、例えば、３．０当量～１０当量用いることができる。
反応温度は、特に制限されないが通常、室温～約１５０℃またはマイクロウェーブ照射下、好ましくは、５０～１５０℃またはマイクロウェーブ照射下で行うことができる。
反応時間は、特に制限されないが通常、０．１時間～１２時間、好ましくは、３～１０時間である。
【0042】
工程３ 式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の製造方法
本工程は、式（ＶＩＩ）で示される化合物をフマル酸、アセトンおよび水存在下で結晶化することを特徴とする、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の製造方法である。
式（ＶＩＩ）で示される化合物に対して、フマル酸の使用量は通常、１．０当量～３．０、例えば、１．０当量～１．５当量用いることができる。
結晶化温度は、特に制限されないが通常、４０～８０℃、好ましくは、４０～６０℃で行うことができる。
結晶化時間は、特に制限されないが通常、１時間以上、好ましくは、２時間以上、さらに好ましくは２～１２時間である。
アセトンおよび水存在下であればよく、好ましくはアセトンおよび水の割合としては、８５：１５～５０：５０で行うことができる。
本工程は、式（ＶＩＩ）で示される化合物をフマル酸、アセトンおよび水存在下で結晶化することを特徴とする、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の製造方法である。
式（ＶＩＩ）で示される化合物に対して、フマル酸の使用量は通常、１．０当量～３．０、例えば、１．０当量～１．５当量用いることができる。
結晶化温度は、特に制限されないが通常、４０～８０℃、好ましくは、４０～６０℃で行うことができる。
結晶化時間は、特に制限されないが通常、１時間以上、好ましくは、２時間以上、さらに好ましくは２～１２時間である。
アセトンおよび水存在下であればよく、好ましくはアセトンおよび水の割合としては、８５：１５～５０：５０で行うことができる。
【0043】
式（ＶＩＩ）で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体（以下、式（ＶＩＩ）で示される化合物等とする）、および、本発明に係る製造方法により製造された化合物（式（ＶＩＩ）で示される化合物等）は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を有するため、ウイルス感染症の治療および／または予防剤として有用である。
さらに本発明に係る製造方法により製造された化合物は、医薬としての有用性を備えており、好ましくは、下記のいずれか、または複数の優れた特徴を有している。
ａ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４等）に対する阻害作用が弱い。
ｂ）高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス等良好な薬物動態を示す。
ｃ）代謝安定性が高い。
ｄ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ３Ａ４）に対し、本明細書に記載する測定条件の濃度範囲内で不可逆的阻害作用を示さない。
ｅ）変異原性を有さない。
ｆ）心血管系のリスクが低い。
ｇ）高い溶解性を示す。
ｈ）タンパク質非結合率（ｆｕ値）が高い。
ｉ）高いコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ選択性を有している。
ｊ）高いコロナウイルス増殖阻害活性を有している。例えば、ヒト血清（ＨＳ）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）添加下において、高いコロナウイルス増殖阻害活性を有している。
コロナウイルス増殖阻害剤としては、例えば後述のＣＰＥ抑制効果確認試験（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）において、例えばＥＣ５０が１０μＭ以下、好ましくは１μＭ以下、より好ましくは１００ｎＭ以下である態様が挙げられる。
また、本発明に係る化合物の塩・結晶・複合体・共結晶は、医薬としての有用性を備えており、好ましくは、下記のいずれか、または複数の優れた特徴を有している。
ｂｂ）高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス、高いＡＵＣ、高い最高血中濃度等、良好な薬物動態を示す。
ｇｇ）高い溶解性、高い化学安定性、低い吸湿性を示す。
さらに本発明に係る製造方法により製造された化合物は、医薬としての有用性を備えており、好ましくは、下記のいずれか、または複数の優れた特徴を有している。
ａ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４等）に対する阻害作用が弱い。
ｂ）高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス等良好な薬物動態を示す。
ｃ）代謝安定性が高い。
ｄ）ＣＹＰ酵素（例えば、ＣＹＰ３Ａ４）に対し、本明細書に記載する測定条件の濃度範囲内で不可逆的阻害作用を示さない。
ｅ）変異原性を有さない。
ｆ）心血管系のリスクが低い。
ｇ）高い溶解性を示す。
ｈ）タンパク質非結合率（ｆｕ値）が高い。
ｉ）高いコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ選択性を有している。
ｊ）高いコロナウイルス増殖阻害活性を有している。例えば、ヒト血清（ＨＳ）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）添加下において、高いコロナウイルス増殖阻害活性を有している。
コロナウイルス増殖阻害剤としては、例えば後述のＣＰＥ抑制効果確認試験（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）において、例えばＥＣ５０が１０μＭ以下、好ましくは１μＭ以下、より好ましくは１００ｎＭ以下である態様が挙げられる。
また、本発明に係る化合物の塩・結晶・複合体・共結晶は、医薬としての有用性を備えており、好ましくは、下記のいずれか、または複数の優れた特徴を有している。
ｂｂ）高いバイオアベイラビリティー、適度なクリアランス、高いＡＵＣ、高い最高血中濃度等、良好な薬物動態を示す。
ｇｇ）高い溶解性、高い化学安定性、低い吸湿性を示す。
【0044】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等（例えば、本発明に係る製造方法により製造された化合物）を含有する医薬組成物は、経口的、非経口的のいずれの方法でも投与することができる。非経口投与の方法としては、経皮、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、経粘膜、吸入、経鼻、点眼、点耳、膣内投与等が挙げられる。
【0045】
経口投与の場合は常法に従って、内用固形製剤（例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、フィルム剤等）、内用液剤（例えば、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、リモナーデ剤、酒精剤、芳香水剤、エキス剤、煎剤、チンキ剤等）等の通常用いられるいずれの剤型に調製して投与すればよい。錠剤は、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠、徐放錠、トローチ錠、舌下錠、バッカル錠、チュアブル錠または口腔内崩壊錠であってもよく、散剤および顆粒剤はドライシロップであってもよく、カプセル剤は、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤または徐放性カプセル剤であってもよい。
【0046】
非経口投与の場合は、注射剤、点滴剤、外用剤（例えば、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、エアゾール剤、吸入剤、ローション剤、注入剤、塗布剤、含嗽剤、浣腸剤、軟膏剤、硬膏剤、ゼリー剤、クリーム剤、貼付剤、パップ剤、外用散剤、坐剤等）等の通常用いられるいずれの剤型でも好適に投与することができる。注射剤は、Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ、Ｏ／Ｗ／Ｏ、Ｗ／Ｏ／Ｗ型等のエマルジョンであってもよい。
【0047】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等（例えば、本発明に係る製造方法により製造された化合物）の有効量にその剤型に適した賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合し、医薬組成物とすることができる。さらに、該医薬組成物は、本発明化合物の有効量、剤型および／または各種医薬用添加剤を適宜変更することにより、小児用、高齢者用、重症患者用または手術用の医薬組成物とすることもできる。例えば、小児用医薬組成物は、新生児（出生後４週未満）、乳児（出生後４週～１歳未満）幼児（１歳以上７歳未満）、小児（７歳以上１５歳未満）若しくは１５歳～１８歳の患者に投与されうる。例えば、高齢者用医薬組成物は、６５歳以上の患者に投与されうる。
【0048】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等（例えば、本発明に係る製造方法により製造された化合物）を含有する医薬組成物（例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形を含む医薬組成物）の投与量は、患者の年齢、体重、疾病の種類や程度、投与経路等を考慮した上で設定することが望ましいが、経口投与する場合、通常０．０５～２００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．１～１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。非経口投与の場合には投与経路により大きく異なるが、通常０．００５～２００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。これを１日１回～数回に分けて投与すれば良い。
【0049】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等（例えば、本発明に係る製造方法により製造された化合物））は、該化合物の作用の増強または該化合物の投与量の低減等を目的として、例えば、他の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療薬（該治療薬としては、承認を受けた薬剤、および開発中または今後開発される薬剤を含む）（以下、併用薬剤と称する）と組み合わせて用いてもよい。この際、本発明化合物と併用薬剤の投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。さらに、本発明化合物と併用薬剤とは、それぞれの活性成分を含む２種類以上の製剤として投与されてもよいし、それらの活性成分を含む単一の製剤として投与されてもよい。
【0050】
併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明化合物と併用薬剤の配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、投与対象がヒトである場合、本発明化合物１重量部に対し、併用薬剤を０．０１～１００重量部用いればよい。
【0051】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等の有効量にその剤型に適した賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合し、製剤とすることができる。
本発明製剤は、経口投与する製剤であればよい。経口投与の場合は常法に従って、内用固形製剤（例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、カプセル剤、丸剤、フィルム剤等）、内用液剤（例えば、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、リモナーデ剤、酒精剤、芳香水剤、エキス剤、煎剤、チンキ剤等）等の通常用いられるいずれの剤型に調製して投与すればよい。錠剤は、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠、徐放錠、トローチ錠、舌下錠、バッカル錠、チュアブル錠または口腔内崩壊錠であってもよく、散剤および顆粒剤はドライシロップであってもよく、カプセル剤は、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤または徐放性カプセル剤であってもよい。好ましくは経口投与する固形製剤または懸濁剤であり、より好ましくは経口投与する固形製剤であり、特に好ましくは、錠剤、顆粒剤である。
本発明製剤は、経口投与する製剤であればよい。経口投与の場合は常法に従って、内用固形製剤（例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、ドライシロップ剤、カプセル剤、丸剤、フィルム剤等）、内用液剤（例えば、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、シロップ剤、リモナーデ剤、酒精剤、芳香水剤、エキス剤、煎剤、チンキ剤等）等の通常用いられるいずれの剤型に調製して投与すればよい。錠剤は、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶性コーティング錠、徐放錠、トローチ錠、舌下錠、バッカル錠、チュアブル錠または口腔内崩壊錠であってもよく、散剤および顆粒剤はドライシロップであってもよく、カプセル剤は、ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤または徐放性カプセル剤であってもよい。好ましくは経口投与する固形製剤または懸濁剤であり、より好ましくは経口投与する固形製剤であり、特に好ましくは、錠剤、顆粒剤である。
【0052】
錠剤の形状としては、どのような形状も採用することができ、具体的には、丸形、楕円形、球形、棒状型、ドーナツ型の形状の錠剤とすることができる。また、積層錠、有核錠などであってもよいが、好ましくは製造法が簡便な単層錠が好ましい。さらには、識別性向上のためのマーク、文字などの刻印さらには分割用の割線を付けてもよい。
【0053】
さらに、本発明製剤は、式（ＶＩＩ）で示される化合物等の有効量、剤型および／または各種医薬用添加剤を適宜変更することにより、小児用、高齢者用、重症患者用または手術用の製剤とすることもできる。例えば、小児用医薬組成物は、新生児（出生後４週未満）、乳児（出生後４週～１歳未満）幼児（１歳以上７歳未満）、小児（７歳以上１５歳未満）若しくは１５歳～１８歳の患者に投与されうる。例えば、高齢者用製剤は、６５歳以上の患者に投与されうる。
【0054】
本発明製剤（例えば、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形を含む製剤）の投与量は、患者の年齢、体重、疾病の種類や程度、投与経路等を考慮した上で設定することが望ましいが、経口投与する場合、通常０．０５～２００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．１～１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。非経口投与の場合には投与経路により大きく異なるが、通常０．００５～２００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。これを１日１回～数回に分けて投与すれば良い。
【0055】
本発明製剤中に含有する、式（ＶＩＩ）で示される化合物等の重量は、患者が服用しやすく、製剤製造することができる含量であれば、特に制限されないが、１～４５０ｍｇ、好ましくは５～３５０ｍｇ、より好ましくは２５～２５０ｍｇである。
具体的には、１錠、1カプセルまたは１包あたりに含有する、式（ＶＩＩ）で示される化合物等の重量は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇまたは２５０ｍｇである。
この場合、２５ｍｇとは、２２．５ｍｇ～２７．５ｍｇ、好ましくは２３．７ｍｇ～２６．３ｍｇの範囲の範囲を示し、５０ｍｇとは、４５．０ｍｇ～５５．０ｍｇ、好ましくは４７．５ｍｇ～５２．５ｍｇの範囲を示し、７５ｍｇとは、６７．５ｍｇ～８２．５ｍｇの範囲を示し、好ましくは７１．２ｍｇ～７８．８ｍｇの範囲を示し、１００ｍｇとは、９０．０ｍｇ～１１０．０ｍｇ、好ましくは９５．０ｍｇ～１０５．０ｍｇの範囲を示し、１２５ｍｇとは、１１２．５ｍｇ～１３７．５ｍｇ、好ましくは１１８．７ｍｇ～１３１．３ｍｇの範囲を示し、１５０ｍｇとは、１３５．０ｍｇ～１６５．０ｍｇ、好ましくは１４２．５ｍｇ～１５７．５ｍｇの範囲を示し、１７５ｍｇとは、１５７．５ｍｇ～１９２．５ｍｇ、好ましくは１６６．２～１８３．８ｍｇの範囲を示し、２００ｍｇとは、１８０．０ｍｇ～２２０．０ｍｇ、好ましくは１９０．０ｍｇ～２１０．０ｍｇの範囲を示し、２２５ｍｇとは、２０２．５ｍｇ～２４７．５ｍｇ、好ましくは２１３．７ｍｇ～２３６．３ｍｇの範囲を示し、２５０ｍｇとは、２２５．０ｍｇ～２７５．０ｍｇ、好ましくは２３７．５ｍｇ～２６２．５ｍｇの範囲を示す。
具体的には、１錠、1カプセルまたは１包あたりに含有する、式（ＶＩＩ）で示される化合物等の重量は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇまたは２５０ｍｇである。
この場合、２５ｍｇとは、２２．５ｍｇ～２７．５ｍｇ、好ましくは２３．７ｍｇ～２６．３ｍｇの範囲の範囲を示し、５０ｍｇとは、４５．０ｍｇ～５５．０ｍｇ、好ましくは４７．５ｍｇ～５２．５ｍｇの範囲を示し、７５ｍｇとは、６７．５ｍｇ～８２．５ｍｇの範囲を示し、好ましくは７１．２ｍｇ～７８．８ｍｇの範囲を示し、１００ｍｇとは、９０．０ｍｇ～１１０．０ｍｇ、好ましくは９５．０ｍｇ～１０５．０ｍｇの範囲を示し、１２５ｍｇとは、１１２．５ｍｇ～１３７．５ｍｇ、好ましくは１１８．７ｍｇ～１３１．３ｍｇの範囲を示し、１５０ｍｇとは、１３５．０ｍｇ～１６５．０ｍｇ、好ましくは１４２．５ｍｇ～１５７．５ｍｇの範囲を示し、１７５ｍｇとは、１５７．５ｍｇ～１９２．５ｍｇ、好ましくは１６６．２～１８３．８ｍｇの範囲を示し、２００ｍｇとは、１８０．０ｍｇ～２２０．０ｍｇ、好ましくは１９０．０ｍｇ～２１０．０ｍｇの範囲を示し、２２５ｍｇとは、２０２．５ｍｇ～２４７．５ｍｇ、好ましくは２１３．７ｍｇ～２３６．３ｍｇの範囲を示し、２５０ｍｇとは、２２５．０ｍｇ～２７５．０ｍｇ、好ましくは２３７．５ｍｇ～２６２．５ｍｇの範囲を示す。
【0056】
式（ＶＩＩ）で示される化合物等は、該化合物の作用の増強または該化合物の投与量の低減等を目的として、例えば、他の新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療薬（該治療薬としては、承認を受けた薬剤、および開発中または今後開発される薬剤を含む）（以下、併用薬剤と称する）と組み合わせて用いてもよい。この際、式（ＶＩＩ）で示される化合物等と併用薬剤の投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。さらに、式（ＶＩＩ）で示される化合物等と併用薬剤とは、それぞれの活性成分を含む２種類以上の製剤として投与されてもよいし、それらの活性成分を含む単一の製剤として投与されてもよい。
【0057】
併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、式（ＶＩＩ）で示される化合物等で示される化合物と併用薬剤の配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、投与対象がヒトである場合、式（ＶＩＩ）で示される化合物等で示される化合物１重量部に対し、併用薬剤を０．０１～１００重量部用いればよい。
【0058】
本発明製剤は高分子を含有してもよく、高分子としては、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている高分子を使用することができる。
式（ＶＩＩ）で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体、および高分子を含有する製剤は、製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の溶解度を向上することができる。
式（ＶＩＩ）で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体、および高分子を含有する製剤は、製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の溶解度を向上することができる。
【0059】
高分子としては、例えば、セルロース系高分子、アクリル系高分子、ビニル系高分子、多糖類等が挙げられる。
セルロース系高分子としては、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒプロメロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタレート、メチルセルロース（ＭＣ）、メチルヒドロキシエチルセルロースカルボキシメチルエチルセルロース、エチルセルロース、結晶セルロース、微結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、カルメロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、粉末セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、フマル酸・ステアリン酸・ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート・ヒドロキシプロピルメチルセルロース混合物等が挙げられる。
アクリル系高分子としては、アミノアルキルアクリレートコポリマーＥ、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アクリル酸エチル・メタクリル酸メチルコポリマー分散液、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、メタクリル酸コポリマー、２－メチル－５－ビニルピリジンメチルアクリレート・メタクリル酸コポリマー、乾燥メタクリル酸コポリマー、ジメチルアミノエチルメタアクリレート・メチルメタアクリレートコポリマー等が挙げられる。
ビニル系高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコール・メチルメタクリレート・アクリル酸共重合体、クロスポビドン、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、およびポリビニルアルコールコポリマー等が挙げられる。
また、多糖類としてはプルラン等が挙げられる。
好ましくは、セルロース系高分子、アクリル系高分子および／またはビニル系高分子であり、より好ましくはセルロース系高分子であり、さらに好ましくはヒプロメロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）である。
セルロース系高分子としては、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒプロメロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタレート、メチルセルロース（ＭＣ）、メチルヒドロキシエチルセルロースカルボキシメチルエチルセルロース、エチルセルロース、結晶セルロース、微結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、カルメロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、粉末セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、フマル酸・ステアリン酸・ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート・ヒドロキシプロピルメチルセルロース混合物等が挙げられる。
アクリル系高分子としては、アミノアルキルアクリレートコポリマーＥ、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アクリル酸エチル・メタクリル酸メチルコポリマー分散液、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、メタクリル酸コポリマー、２－メチル－５－ビニルピリジンメチルアクリレート・メタクリル酸コポリマー、乾燥メタクリル酸コポリマー、ジメチルアミノエチルメタアクリレート・メチルメタアクリレートコポリマー等が挙げられる。
ビニル系高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコール・メチルメタクリレート・アクリル酸共重合体、クロスポビドン、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、およびポリビニルアルコールコポリマー等が挙げられる。
また、多糖類としてはプルラン等が挙げられる。
好ましくは、セルロース系高分子、アクリル系高分子および／またはビニル系高分子であり、より好ましくはセルロース系高分子であり、さらに好ましくはヒプロメロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）である。
【0060】
別の態様としては、式（ＶＩＩ）で示される化合物、その製薬上許容される塩またはそれらの複合体を有効成分、およびセルロース系高分子を含有する、経口投与する錠剤が好ましい。
【0061】
本発明製剤においては、賦形剤、結合剤、崩壊剤および滑沢剤からなる群から選択される、１以上の添加剤を用いてもよい。
【0062】
本発明製剤においては、賦形剤（充填剤ということもある。）を用いてもよい。賦形剤としては、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている賦形剤を使用することができる。例えば、賦形剤としては、糖誘導体、デンプン誘導体、セルロース誘導体、無機系賦形剤、βーシクロデキストリン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ショ糖脂肪酸エステル、クロスポビドン、大豆レシチン、トラガント末、アラビアゴム、デキストラン、プルラン等が挙げられる。
糖誘導体としては、糖類、糖アルコールがあり、糖類としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、ショ糖等が挙げられ、また、糖アルコールとしては、マンニトール、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、粉末麦芽糖水あめ、マルチトール等が挙げられる。
デンプン誘導体としては、デンプン、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン（コーンスターチ）、コメデンプン、部分アルファー化デンプン、アルファー化デンプン、有孔デンプン、カルボキシスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、低置換度カルボキシメチルスターチナトリウム等が挙げられる。
セルロース誘導体としては、結晶セルロース、粉末セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロース、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルエチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
無機系賦形剤としては、ケイ酸塩誘導体、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、酸化マグネシウム、酸化チタン、乳酸カルシウム、合成ヒドロタルサイト、タルク、カオリン、乾燥水酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、ベントナイト等が挙げられる。
ケイ酸塩誘導体としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等の二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム等が挙げられる。
リン酸塩としては、無水リン酸水素カルシウム、リン酸一水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素カルシウム、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
炭酸塩としては、沈降炭酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム等が挙げられる。硫酸塩としては、硫酸カルシウム等が挙げられる。
これら賦形剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
本発明製剤における賦形剤は、好ましくはマンニトールおよび／またはクロスカルメロースナトリウムである。
糖誘導体としては、糖類、糖アルコールがあり、糖類としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、果糖、ショ糖等が挙げられ、また、糖アルコールとしては、マンニトール、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、粉末麦芽糖水あめ、マルチトール等が挙げられる。
デンプン誘導体としては、デンプン、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン（コーンスターチ）、コメデンプン、部分アルファー化デンプン、アルファー化デンプン、有孔デンプン、カルボキシスターチナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、低置換度カルボキシメチルスターチナトリウム等が挙げられる。
セルロース誘導体としては、結晶セルロース、粉末セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロース、クロスカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルエチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
無機系賦形剤としては、ケイ酸塩誘導体、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、酸化マグネシウム、酸化チタン、乳酸カルシウム、合成ヒドロタルサイト、タルク、カオリン、乾燥水酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、ベントナイト等が挙げられる。
ケイ酸塩誘導体としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等の二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム等が挙げられる。
リン酸塩としては、無水リン酸水素カルシウム、リン酸一水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素カルシウム、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
炭酸塩としては、沈降炭酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム等が挙げられる。硫酸塩としては、硫酸カルシウム等が挙げられる。
これら賦形剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
本発明製剤における賦形剤は、好ましくはマンニトールおよび／またはクロスカルメロースナトリウムである。
【0063】
本発明製剤においては、結合剤を用いてもよく、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている結合剤を使用することができる。例えば、結合剤としては、セルロース系結合剤、デンプン系結合剤、ビニル系結合剤、ポリエーテル、アラビアゴム、アラビアゴム粉末、アラビアゴム末、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ショ糖、ゼラチン、デキストリン、プルラン、トラガント、トラガント末、キサンタンガム、ペクチン、ポリアクリル酸ナトリウム、寒天、オウバク末、グァーガム、軽質無水ケイ酸、硬化油等が挙げられる。
【0064】
セルロース系結合剤としては、カルボキシメチルセルロース（カルメロース、ＣＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロースナトリウム）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、結晶セルロース、微結晶セルロース、エチルセルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、粉末セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
【0065】
デンプン系結合剤としては、澱粉、α化デンプン、部分α化デンプン、バレイショデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、有孔デンプン、トウモロコシデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプングリコール酸ナトリウム(カルボキシメチルスターチナトリウム) 等が挙げられる。
【0066】
ビニル系結合剤としては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ポビドン）（ＰＶＰ）、カルボキシビニルポリマー、コポリビドン等が挙げられる。
【0067】
ポリエーテルとしては、マクロゴール（ポリエチレングリコール）２００、マクロゴール３００、マクロゴール４００、マクロゴール６００、マクロゴール１０００、マクロゴール１５００、マクロゴール１５４０、マクロゴール４０００、マクロゴール６０００、マクロゴール２００００、グリセリン、ポリオキシエチレン［１０５］ポリオキシプロピレン［５］グリコール、プロピレングリコール等が挙げられる。
【0068】
これら結合剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
本発明製剤における結合剤は、好ましくはヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）である。
本発明製剤における結合剤は、好ましくはヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）である。
【0069】
本発明製剤においては、崩壊剤を用いてもよく、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている崩壊剤を使用することができる。例えば、崩壊剤としては、セルロース系崩壊剤、デンプン系崩壊剤、ビニル系崩壊剤、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等が挙げられる。
【0070】
セルロース系崩壊剤としては、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム（Ａｃ―Ｄｉ―Ｓｏｌ）、結晶セルロース、粉末セルロース等が挙げられる。
【0071】
デンプン系崩壊剤としては、部分アルファー化デンプン、バレイショデンプン、コーンスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度カルボキシメチルスターチナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、アルファ化デンプン、デンプン等が挙げられる。
【0072】
ビニル系崩壊剤としては、クロスポビドン、ポリビニルアルコール等が挙げられる。
【0073】
これら崩壊剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
【0074】
崩壊剤の中でも、膨潤率が非常に大きい膨潤型崩壊剤は「スーパー崩壊剤」として知られている。スーパー崩壊剤としては、カルメロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム等が挙げられる。
【0075】
これらのスーパー崩壊剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。また、崩壊剤およびスーパー崩壊剤を組合せてもよい。
本発明製剤における崩壊剤は、好ましくはクロスカルメロースナトリウムである。
本発明製剤における崩壊剤は、好ましくはクロスカルメロースナトリウムである。
【0076】
本発明製剤においては、滑沢剤を含有してもよく、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている滑沢剤を使用することができる。例えば、滑沢剤としては、ステアリン酸およびステアリン酸金属塩、無機系滑沢剤、疎水性滑沢剤、親水性滑沢剤、フマル酸ステアリルナトリウム等が挙げられる。
【0077】
ステアリン酸およびステアリン酸金属塩としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ステアリン酸ポリオキシル４０等が挙げられる。
【0078】
無機系滑沢剤としては、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム等が挙げられる。
【0079】
疎水性滑沢剤としては、カカオ脂、カルナウバロウ、グリセリン脂肪酸エステル、硬化油、サラシミツロウ、ダイズ硬化油、ミツロウ、セタノール、ラウリル酸ナトリウム等が挙げられる。
【0080】
親水性滑沢剤としては、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール（マクロゴール）等が挙げられる。
【0081】
これら滑沢剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
本発明製剤における結合剤は、好ましくはステアリン酸マグネシウムである。
本発明製剤における結合剤は、好ましくはステアリン酸マグネシウムである。
【0082】
本発明製剤においては、流動化剤を含有してもよく、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格または食品添加物公定書等に収載されている流動化剤を使用することができる。例えば、流動化剤としては、二酸化ケイ素、ステアリン酸およびその金属塩、結晶セルロース、合成ケイ酸アルミニウム、酸化チタン、重質無水ケイ酸、水酸化アルミナマグネシウム、第三リン酸カルシウム、タルク、トウモロコシデンプン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム造粒物、ケイ酸カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、合成ヒドロタルサイト等が挙げられる。
【0083】
二酸化ケイ素としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸等が挙げられる。ステアリン酸およびその金属塩としては、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。
【0084】
これら流動化剤は、２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。
本発明製剤における結合剤は、好ましくは結晶セルロースである。
本発明製剤における結合剤は、好ましくは結晶セルロースである。
【0085】
本発明製剤のうち顆粒剤の製造方法は、特に制限されないが、具体的には、有効成分、崩壊剤、賦形剤等の添加剤を混合して、混合末を製造後、当該混合末を造粒する方法であり、好ましくは水や結合剤を含有する水や溶媒を添加して造粒する湿式造粒法や圧縮成形して水を使用しない乾式造粒法や溶融造粒法である。
【0086】
本発明製剤のうち、錠剤の製造方法は、特に制限されないが、具体的には、上記方法によって顆粒を製造し、さらに、この顆粒に対して、崩壊剤および滑沢剤を混合し、当該混合顆粒を打錠機で打錠する打錠法である。
本発明製剤は、上記の顆粒剤や錠剤を製造後、当該顆粒剤や錠剤を被覆層で被覆することがある。顆粒剤に被覆層を形成する際、流動層造粒コーティング機、流動層転動コーティング機等を用いることができる。錠剤に被覆層を形成する際、パンコーティング機、通気式コーティング機等を用いることができる。コーティング機の中で、顆粒剤や錠剤を流動させながら、この顆粒剤や錠剤に当該コーティング液を噴霧、乾燥し、被覆層を形成する。
（実施例）
本発明製剤は、上記の顆粒剤や錠剤を製造後、当該顆粒剤や錠剤を被覆層で被覆することがある。顆粒剤に被覆層を形成する際、流動層造粒コーティング機、流動層転動コーティング機等を用いることができる。錠剤に被覆層を形成する際、パンコーティング機、通気式コーティング機等を用いることができる。コーティング機の中で、顆粒剤や錠剤を流動させながら、この顆粒剤や錠剤に当該コーティング液を噴霧、乾燥し、被覆層を形成する。
（実施例）
【0087】
以下に実施例および参考例、ならびに試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【0088】
また、本明細書中で用いる略語は以下の意味を表す。
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＥＤＣ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴ：１，２－エタンジチオール
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
ＨＯＢＴ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＬＨＭＤＳ：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＭＥＭ：イーグル最小必須培地
ＮＭＰ：Ｎ－メチルピロリドン
Ｐｄ（ＯＡｃ）２：酢酸パラジウム
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＭＳＣｌ：クロロトリメチルシラン
Ｘａｎｔｐｈｏｓ：４，５’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９’－ジメチルキサンテン
ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ
μＭ：μｍｏｌ／Ｌ
ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＥＤＣ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥＤＴ：１，２－エタンジチオール
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
ＨＯＢＴ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＬＨＭＤＳ：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＭＥＭ：イーグル最小必須培地
ＮＭＰ：Ｎ－メチルピロリドン
Ｐｄ（ＯＡｃ）２：酢酸パラジウム
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＭＳＣｌ：クロロトリメチルシラン
Ｘａｎｔｐｈｏｓ：４，５’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９’－ジメチルキサンテン
ｍＭ：ｍｍｏｌ／Ｌ
μＭ：μｍｏｌ／Ｌ
ｎＭ：ｎｍｏｌ／Ｌ
【0089】
（実施例ａ）
【0090】
（化合物の同定方法）
各実施例で得られたＮＭＲ分析は４００ＭＨｚで行い、ＤＭＳＯ－ｄ６、ＣＤＣｌ３、Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ4を用いて測定した。また、ＮＭＲデータを示す場合は、測定した全てのピークを記載していない場合が存在する。
ＲＴは、ＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析でのリテンションタイムを表し、以下の条件で測定した。
（測定条件１’）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件２’）
カラム：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＸＲ－ＯＤＳ （２．２μｍ、ｉ．ｄ．３．０ｘ５０ｍｍ） （Ｓｈｉｍａｄｚｕ）
流速：１．６ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３分間で１０％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
なお、明細書中、ＭＳ（ｍ／ｚ）との記載は、質量分析で観測された値を示す。
各実施例で得られたＮＭＲ分析は４００ＭＨｚで行い、ＤＭＳＯ－ｄ６、ＣＤＣｌ３、Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ4を用いて測定した。また、ＮＭＲデータを示す場合は、測定した全てのピークを記載していない場合が存在する。
ＲＴは、ＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析でのリテンションタイムを表し、以下の条件で測定した。
（測定条件１’）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件２’）
カラム：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＸＲ－ＯＤＳ （２．２μｍ、ｉ．ｄ．３．０ｘ５０ｍｍ） （Ｓｈｉｍａｄｚｕ）
流速：１．６ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３分間で１０％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
なお、明細書中、ＭＳ（ｍ／ｚ）との記載は、質量分析で観測された値を示す。
【0091】
（ＨＰＬＣ測定条件）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：２分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，６分間で２０％－３７％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、１０分間で３７％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、２分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：２分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，６分間で２０％－３７％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、１０分間で３７％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、２分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
【0092】
（粉末Ｘ線回折パターンの測定）
日本薬局方の一般試験法に記載された粉末Ｘ線回折測定法に従い、各実施例で得られた結晶の粉末Ｘ線回折測定を行った。測定条件を以下に示す。
（装置）
リガク社製ＳｍａｒｔＬａｂ
（操作方法）
測定法：反射法
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：２００ｍＡ
管電圧：４５ｋＶ
試料プレート：アルミニウム
Ｘ線の入射角：２．５°
サンプリング幅：０．０２°
検出器：ＨｙＰｉｘ－３０００（２次元検出モード）
日本薬局方の一般試験法に記載された粉末Ｘ線回折測定法に従い、各実施例で得られた結晶の粉末Ｘ線回折測定を行った。測定条件を以下に示す。
（装置）
リガク社製ＳｍａｒｔＬａｂ
（操作方法）
測定法：反射法
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：２００ｍＡ
管電圧：４５ｋＶ
試料プレート：アルミニウム
Ｘ線の入射角：２．５°
サンプリング幅：０．０２°
検出器：ＨｙＰｉｘ－３０００（２次元検出モード）
【0093】
（示差走査熱量（ＤＳＣ）の測定）
実施例で得られた結晶のＤＳＣの測定を行った。アルミニウムパンに試料約３ｍｇを量り、クリンプして測定した。測定条件を以下に示す。なお、示差走査熱量（ＤＳＣ）による測定は±２℃の範囲内で誤差が生じうる。
装置：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｑ１０００／ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
測定温度範囲：０℃－２９５℃
昇温速度：１０℃／分
雰囲気：Ｎ２ ５０ｍＬ／分
実施例で得られた結晶のＤＳＣの測定を行った。アルミニウムパンに試料約３ｍｇを量り、クリンプして測定した。測定条件を以下に示す。なお、示差走査熱量（ＤＳＣ）による測定は±２℃の範囲内で誤差が生じうる。
装置：ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｑ１０００／ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
測定温度範囲：０℃－２９５℃
昇温速度：１０℃／分
雰囲気：Ｎ２ ５０ｍＬ／分
【0094】
（ＴＧ／ＤＴＡデータの測定）
実施例で得られた結晶約３ｍｇを量り、アルミニウムパンにつめ、開放系にて測定した。測定条件は以下のとおりである。
装置：日立ハイテクノロジーズ ＴＧ／ＤＴＡ ＳＴＡ７２００ＲＶ
測定温度範囲：室温－３５０℃
昇温速度：１０℃／分
実施例で得られた結晶約３ｍｇを量り、アルミニウムパンにつめ、開放系にて測定した。測定条件は以下のとおりである。
装置：日立ハイテクノロジーズ ＴＧ／ＤＴＡ ＳＴＡ７２００ＲＶ
測定温度範囲：室温－３５０℃
昇温速度：１０℃／分
【0095】
（水分吸脱着等温線測定）
サンプルパンに試料約１５～２５ｍｇを測り取り測定を行った。測定条件を以下に示す。
装置：Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．社製 ＤＶＳ Ａｄｖｅｎｔｕｒｅ
測定ポイント：０％から５％ごとに９５％ＲＨ， および９５％ＲＨから５％ごとに０％まで
温度：２５℃
サンプルパンに試料約１５～２５ｍｇを測り取り測定を行った。測定条件を以下に示す。
装置：Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．社製 ＤＶＳ Ａｄｖｅｎｔｕｒｅ
測定ポイント：０％から５％ごとに９５％ＲＨ， および９５％ＲＨから５％ごとに０％まで
温度：２５℃
【0096】
（単結晶構造解析の測定と解析方法）
単結晶構造解析の測定条件および解析方法を以下に示す。
（装置）
リガク社製 ＸｔａＬＡＢ Ｐ２００ ＭＭ００７
（測定条件）
測定温度：２５℃
使用波長：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）
ソフト：ＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏ １．１７１．３９．４６ｅ (Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ， ２０１８)
（データ処理）
ソフト：ＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏ １．１７１．３９．４６ｅ (Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ， ２０１８)
データはローレンツおよび偏光補正、吸収補正を行った。
（結晶構造解析）
直接法プログラムＳｈｅｌＸＴ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて位相決定を行い、精密化はＳｈｅｌＸＬ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて、ｆｕｌｌ－ｍａｔｒｉｘ最小二乗法を実施した。非水素原子の温度因子はすべて異方性で精密化を行った。水素原子はＳｈｅｌＸＬのデフォルトパラメータを用いて計算により導入し、ｒｉｄｉｎｇ ａｔｏｍとして取り扱った。全ての水素原子は、等方性パラメーターで精密化を行った。
作図にはＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ，１９９１）／ＯＲＴＥＰ（Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９７６）を使用した。
（実施例１ａ）
単結晶構造解析の測定条件および解析方法を以下に示す。
（装置）
リガク社製 ＸｔａＬＡＢ Ｐ２００ ＭＭ００７
（測定条件）
測定温度：２５℃
使用波長：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）
ソフト：ＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏ １．１７１．３９．４６ｅ (Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ， ２０１８)
（データ処理）
ソフト：ＣｒｙｓＡｌｉｓＰｒｏ １．１７１．３９．４６ｅ (Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ， ２０１８)
データはローレンツおよび偏光補正、吸収補正を行った。
（結晶構造解析）
直接法プログラムＳｈｅｌＸＴ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて位相決定を行い、精密化はＳｈｅｌＸＬ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて、ｆｕｌｌ－ｍａｔｒｉｘ最小二乗法を実施した。非水素原子の温度因子はすべて異方性で精密化を行った。水素原子はＳｈｅｌＸＬのデフォルトパラメータを用いて計算により導入し、ｒｉｄｉｎｇ ａｔｏｍとして取り扱った。全ての水素原子は、等方性パラメーターで精密化を行った。
作図にはＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ，１９９１）／ＯＲＴＥＰ（Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９７６）を使用した。
（実施例１ａ）
【0097】
化合物（Ｉ－００５）の合成
工程１ 化合物１８の合成
化合物４ａ（９２６ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（７．４１ｍＬ）、炭酸カリウム（７２６ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）および２，４，５－トリフルオロベンジルブロミド（１０００ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を８０℃で４０分間攪拌し、放冷後、酢酸エチルで希釈した。不溶物を濾別後、ろ液を濃縮し、化合物１８の粗生成物（１．５１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、収率：定量）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７４、ＲＴ＝２．５４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
【化33】
工程１ 化合物１８の合成
化合物４ａ（９２６ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（７．４１ｍＬ）、炭酸カリウム（７２６ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）および２，４，５－トリフルオロベンジルブロミド（１０００ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を８０℃で４０分間攪拌し、放冷後、酢酸エチルで希釈した。不溶物を濾別後、ろ液を濃縮し、化合物１８の粗生成物（１．５１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、収率：定量）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７４、ＲＴ＝２．５４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
【0098】
工程２ 化合物１９の合成
化合物１８（１．５１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（３．０２ｍＬ）を混合した。反応溶液を室温で４時間攪拌し、一晩静置した。ＴＦＡを減圧留去し、残渣にトルエンを加え共沸した。残渣にイソプロピルエーテルを加え懸濁後、ろ取し、化合物１９（１．２２ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１８、ＲＴ＝１．６８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
化合物１８（１．５１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（３．０２ｍＬ）を混合した。反応溶液を室温で４時間攪拌し、一晩静置した。ＴＦＡを減圧留去し、残渣にトルエンを加え共沸した。残渣にイソプロピルエーテルを加え懸濁後、ろ取し、化合物１９（１．２２ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１８、ＲＴ＝１．６８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
【0099】
工程３ 化合物２０の合成
化合物１９（２００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１．８ｍＬ）、炭酸カリウム（２６１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）および３－（クロロメチル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール 塩酸塩（１５９ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を６０℃で２時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をイソプロピルエーテル、ヘキサン、酢酸エチルおよびクロロホルムの混合溶媒で懸濁し、ろ取した。残渣、ＤＭＦ（１．８ｍＬ）、炭酸カリウム（２６１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）および３－（クロロメチル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール 塩酸塩（１５９ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を６０℃で６時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をイソプロピルエーテル、ヘキサン、酢酸エチルおよびクロロホルムの混合溶媒で懸濁してろ取し、化合物２０（１１６ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ、収率４５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４１３、ＲＴ＝１．８４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
化合物１９（２００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１．８ｍＬ）、炭酸カリウム（２６１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）および３－（クロロメチル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール 塩酸塩（１５９ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を６０℃で２時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をイソプロピルエーテル、ヘキサン、酢酸エチルおよびクロロホルムの混合溶媒で懸濁し、ろ取した。残渣、ＤＭＦ（１．８ｍＬ）、炭酸カリウム（２６１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）および３－（クロロメチル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール 塩酸塩（１５９ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液を６０℃で６時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をイソプロピルエーテル、ヘキサン、酢酸エチルおよびクロロホルムの混合溶媒で懸濁してろ取し、化合物２０（１１６ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ、収率４５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４１３、ＲＴ＝１．８４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
【0100】
工程４ 化合物（Ｉ－００５）の合成
化合物２０（１１５ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．３０ｍＬ）および６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（６０．８ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液に、ＬＨＭＤＳ（５５８μＬ、０．５５８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応溶液を０℃で２時間半、室温で４０分間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。クロロホルムで抽出し、有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）で精製し、化合物（Ｉ－００５）（６１．８ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ、収率４２％）を得た。得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を図７に示す。
1H-NMR(CDCl3)δ：7.96 (s, 1H), 7.82 (d, J = 2.5Hz, 2H), 7.48 (br s, 1H), 7.45-7.37 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.97-6.88 (m, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５３２、ＲＴ＝１．７０ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
（実施例２ａ）
化合物２０（１１５ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．３０ｍＬ）および６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（６０．８ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を混合した。反応溶液に、ＬＨＭＤＳ（５５８μＬ、０．５５８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応溶液を０℃で２時間半、室温で４０分間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。クロロホルムで抽出し、有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）で精製し、化合物（Ｉ－００５）（６１．８ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ、収率４２％）を得た。得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を図７に示す。
1H-NMR(CDCl3)δ：7.96 (s, 1H), 7.82 (d, J = 2.5Hz, 2H), 7.48 (br s, 1H), 7.45-7.37 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.97-6.88 (m, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５３２、ＲＴ＝１．７０ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１’
（実施例２ａ）
【0101】
化合物（Ｉ－００５）１１７０ｍｇにフマル酸 ２７８ｍｇ（１．１ｅｑ）および酢酸エチル ５．８５ｍＬを加え、室温下で４５分間攪拌した。固体をろ取し、乾燥することで、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶（１３６９．４ｍｇ、９４．６％）を得た。
【0102】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の単結晶構造解析の結果を以下に示す。
Ｒ１ （Ｉ＞２．００ｓ（Ｉ））は０．０４７０であり、最終の差フーリエから電子密度の欠如も誤置もないことを確認した。
結晶学的データを表１に示す。
ここで、Ｖｏｌｕｍｅは単位格子体積、Ｚは単位格子中の分子数を意味する。
Ｒ１ （Ｉ＞２．００ｓ（Ｉ））は０．０４７０であり、最終の差フーリエから電子密度の欠如も誤置もないことを確認した。
結晶学的データを表１に示す。
【表1】
ここで、Ｖｏｌｕｍｅは単位格子体積、Ｚは単位格子中の分子数を意味する。
【0103】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の、非対称単位中の構造を図３に示す。
【0104】
非対称単位中に、式（ＶＩＩ）で示される化合物、フマル酸がそれぞれ１分子存在していた。イオン性の化学的相互作用は確認されず、１：１のモル比の共結晶であることを確認した。
Ｎ１０－Ｃ９の結合距離は約１．２６Åであり、Ｎ１６－Ｃ９の結合距離は約１．３７Åであった。この結合距離より、フマル酸共結晶Ｉ形の式（ＶＩＩ）で示される化合物は、イミノ構造：
であると同定した。
また、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶の粉末Ｘ線回折の結果を示す。
図１に、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図１の粉末Ｘ線回折パターンのピークテーブルを図２に示す。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７．８±０．２°、９．５±０．２°、１０．１±０．２°、１０．９±０．２°、１３．８±０．２°、１４．７±０．２°、１８．６±０．２°、２２．６±０．２°、２３．５±０．２°および２４．６±０．２°にピークが認められた。
上記粉末Ｘ線回折ピークにおいて、回折角度（２θ）：９．５±０．２°、１０．９±０．２°、１８．６±０．２°、２３．５±０．２°および２４．６±０．２°のピークが式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶として特に特徴的である。
Ｎ１０－Ｃ９の結合距離は約１．２６Åであり、Ｎ１６－Ｃ９の結合距離は約１．３７Åであった。この結合距離より、フマル酸共結晶Ｉ形の式（ＶＩＩ）で示される化合物は、イミノ構造：
【化34】
であると同定した。
また、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶の粉末Ｘ線回折の結果を示す。
図１に、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図１の粉末Ｘ線回折パターンのピークテーブルを図２に示す。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７．８±０．２°、９．５±０．２°、１０．１±０．２°、１０．９±０．２°、１３．８±０．２°、１４．７±０．２°、１８．６±０．２°、２２．６±０．２°、２３．５±０．２°および２４．６±０．２°にピークが認められた。
上記粉末Ｘ線回折ピークにおいて、回折角度（２θ）：９．５±０．２°、１０．９±０．２°、１８．６±０．２°、２３．５±０．２°および２４．６±０．２°のピークが式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶として特に特徴的である。
【0105】
【0106】
【0107】
【0108】
なお、式（ＶＩＩ）で示される化合物（Ｉ－００５）の合成は、以下のようにも行うことができる。
工程４’
ＴＨＦ（６ｍＬ）中、化合物２０（３００ｍｇ、０．７２７ｍｍｏｌ）、６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（１７２ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）に、ＬＨＭＤＳ（１Ｍ ｉｎ ＴＨＦ；１．４６ｍＬ、１．４６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応液を０℃で２時間半、室温で４０分間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ、グラジエント ０－２０％ ＭｅＯＨ）で精製した。得られた固体をアセトン／Ｈ２Ｏから固化させ、化合物Ｉ－００５（９５．３ｍｇ、収率２５％、茶色固体）を得た。得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を図８に示す（約９９ｐａ％）。
工程４’
ＴＨＦ（６ｍＬ）中、化合物２０（３００ｍｇ、０．７２７ｍｍｏｌ）、６－クロロ－２－メチル－２Ｈ－インダゾール－５－アミン（１７２ｍｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）に、ＬＨＭＤＳ（１Ｍ ｉｎ ＴＨＦ；１．４６ｍＬ、１．４６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応液を０℃で２時間半、室温で４０分間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ、グラジエント ０－２０％ ＭｅＯＨ）で精製した。得られた固体をアセトン／Ｈ２Ｏから固化させ、化合物Ｉ－００５（９５．３ｍｇ、収率２５％、茶色固体）を得た。得られた化合物Ｉ－００５のＨＰＬＣ測定結果を図８に示す（約９９ｐａ％）。
【0109】
また、本明細書中で用いる略語は以下の意味を表す。
ＢＩＮＡＰ：２,２'－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１'－ビナフチル
ＣＰＭＥ：シクロペンチルメチルエーテル
ＣｂｚＣｌ：クロロぎ酸ベンジル
ＤＭＥ：ジメチルエーテル
ＭＥＫ：メチルエチルケトン
（実施例ｂ）
ＢＩＮＡＰ：２,２'－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１'－ビナフチル
ＣＰＭＥ：シクロペンチルメチルエーテル
ＣｂｚＣｌ：クロロぎ酸ベンジル
ＤＭＥ：ジメチルエーテル
ＭＥＫ：メチルエチルケトン
（実施例ｂ）
【0110】
（化合物の同定方法）
各実施例および参考例で得られたＮＭＲ分析は４００ＭＨｚで行い、ＤＭＳＯ－ｄ６、ＣＤＣｌ３を用いて測定した。また、ＮＭＲデータを示す場合は、測定した全てのピークを記載していない場合が存在する。
「ＲＴ」または「保持時間」とあるのは、ＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析または液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でのリテンションタイムを表し、以下の条件で測定した。
なお、ＭＳ（ｍ／ｚ）との記載は、質量分析で観測された値を示す。
（測定条件１）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件２）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭ炭酸アンモニウム含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件４）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持した。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：５μＬ
（測定条件５）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持した。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件７）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：６分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，２１分間で２０％－４２％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、４分間で４２％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い，最後に３分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件８）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：２分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，６分間で２０％－３７％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、１０分間で３７％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、２分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件９）
カラム：ＹＭＣ Ｊｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ－Ｈ８０（４μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ２５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５０ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．２％トリフルオロ酢酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエント：６分間で１０％－７０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、７０％溶媒［Ｂ］を維持，その後，３分間で７０％－９０％のリニアグラジエント，その後，５分間，９０％溶媒［Ｂ］を維持，その後，１分間で９０％－９５％のリニアグラジエント，その後５分間，９５％溶媒［Ｂ］を維持
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：５μＬ
（測定条件１０）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件１１）
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８（３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２１０ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭアンモニア含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエント：５分間で５％溶媒［Ｂ］を維持し、１０分間で５％－３８％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、５分間で３８％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：０．８ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件１２）
カラム：Ｃ１８カラム
カラム温度：４０℃
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭギ酸アンモニア含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエントは、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、２８分間で測定を行った。
流量：０．３ｍＬ／分
注入量：４μＬ
各実施例および参考例で得られたＮＭＲ分析は４００ＭＨｚで行い、ＤＭＳＯ－ｄ６、ＣＤＣｌ３を用いて測定した。また、ＮＭＲデータを示す場合は、測定した全てのピークを記載していない場合が存在する。
「ＲＴ」または「保持時間」とあるのは、ＬＣ／ＭＳ：液体クロマトグラフィー／質量分析または液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でのリテンションタイムを表し、以下の条件で測定した。
なお、ＭＳ（ｍ／ｚ）との記載は、質量分析で観測された値を示す。
（測定条件１）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件２）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ （１．７μｍ ｉ．ｄ．２．１ｘ５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
流速：０．８ｍＬ／分
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭ炭酸アンモニウム含有水溶液、［Ｂ］は０．１％ギ酸含有アセトニトリル溶液
グラジエント：３．５分間で５％－１００％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、０．５分間、１００％溶媒［Ｂ］を維持した。
（測定条件４）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持した。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：５μＬ
（測定条件５）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持した。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件７）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：６分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，２１分間で２０％－４２％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、４分間で４２％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い，最後に３分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件８）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆｌｕｏｒｏ－Ｐｈｅｎｙｌ （３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ） （Ｗａｔｅｒｓ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：２分間、２０％溶媒［Ｂ］を維持し，６分間で２０％－３７％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、１０分間で３７％－５０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、２分間で５０％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件９）
カラム：ＹＭＣ Ｊｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ－Ｈ８０（４μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ２５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５０ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．２％トリフルオロ酢酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエント：６分間で１０％－７０％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、７０％溶媒［Ｂ］を維持，その後，３分間で７０％－９０％のリニアグラジエント，その後，５分間，９０％溶媒［Ｂ］を維持，その後，１分間で９０％－９５％のリニアグラジエント，その後５分間，９５％溶媒［Ｂ］を維持
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：５μＬ
（測定条件１０）
カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２５４ｎｍ
移動相：［Ａ］は０．１％ギ酸含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
グラジエント：１７分間で５％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った後、３分間、９５％溶媒［Ｂ］を維持
流量：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件１１）
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８（３．５μｍ ｉ．ｄ．４．６ｘ１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃付近の一定温度
ＵＶ検出波長：２１０ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭアンモニア含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエント：５分間で５％溶媒［Ｂ］を維持し、１０分間で５％－３８％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行い、５分間で３８％－９５％溶媒［Ｂ］のリニアグラジエントを行った。
流量：０．８ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
（測定条件１２）
カラム：Ｃ１８カラム
カラム温度：４０℃
ＵＶ検出波長：２５５ｎｍ
移動相：［Ａ］は１０ｍＭギ酸アンモニア含有水溶液、［Ｂ］は液体クロマトグラフィー用メタノール
グラジエントは、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、２８分間で測定を行った。
流量：０．３ｍＬ／分
注入量：４μＬ
【0111】
（粉末Ｘ線回折パターンの測定）
日本薬局方の一般試験法に記載された粉末Ｘ線回折測定法に従い、各実施例で得られた結晶の粉末Ｘ線回折測定を行った。測定条件を以下に示す。（装置）
リガク社製ＭｉｎｉＦｌｅｘ６００
（操作方法）
検出器：高速一次元検出器（Ｄ／ＴｅｃＵｌｔｒａ２）
光源の種類：Ｃｕ管球
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：１５ｍＡ
管電圧：４０Ｋｖ
試料プレート：無反射試料板
日本薬局方の一般試験法に記載された粉末Ｘ線回折測定法に従い、各実施例で得られた結晶の粉末Ｘ線回折測定を行った。測定条件を以下に示す。（装置）
リガク社製ＭｉｎｉＦｌｅｘ６００
（操作方法）
検出器：高速一次元検出器（Ｄ／ＴｅｃＵｌｔｒａ２）
光源の種類：Ｃｕ管球
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：１５ｍＡ
管電圧：４０Ｋｖ
試料プレート：無反射試料板
【0112】
（単結晶構造解析の測定と解析方法）
単結晶構造解析の測定条件および解析方法を以下に示す。
（装置）
リガク社製 ＸｔａＬＡＢ Ｐ２００ ＭＭ００７
（測定条件）
測定温度：２５℃
使用波長：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）
ソフト：CrysAlisPro 1.171.39.46e (Rigaku Oxford Diffraction, 2018)
（データ処理）
ソフト：CrysAlisPro 1.171.39.46e (Rigaku Oxford Diffraction, 2018)
データはローレンツ及び偏光補正、吸収補正を行った。
（結晶構造解析）
直接法プログラムＳｈｅｌＸＴ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて位相決定を行い、精密化はＳｈｅｌＸＬ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて、ｆｕｌｌ－ｍａｔｒｉｘ最小二乗法を実施した。非水素原子の温度因子はすべて異方性で精密化を行った。水素原子はＳｈｅｌＸＬのデフォルトパラメータを用いて計算により導入し、ｒｉｄｉｎｇ ａｔｏｍとして取り扱った。全ての水素原子は、等方性パラメーターで精密化を行った。
作図にはＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ，１９９１）／ＯＲＴＥＰ（Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９７６）を使用した。
単結晶構造解析の測定条件および解析方法を以下に示す。
（装置）
リガク社製 ＸｔａＬＡＢ Ｐ２００ ＭＭ００７
（測定条件）
測定温度：２５℃
使用波長：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）
ソフト：CrysAlisPro 1.171.39.46e (Rigaku Oxford Diffraction, 2018)
（データ処理）
ソフト：CrysAlisPro 1.171.39.46e (Rigaku Oxford Diffraction, 2018)
データはローレンツ及び偏光補正、吸収補正を行った。
（結晶構造解析）
直接法プログラムＳｈｅｌＸＴ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて位相決定を行い、精密化はＳｈｅｌＸＬ（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ, Ｇ.Ｍ.，２０１５）を用いて、ｆｕｌｌ－ｍａｔｒｉｘ最小二乗法を実施した。非水素原子の温度因子はすべて異方性で精密化を行った。水素原子はＳｈｅｌＸＬのデフォルトパラメータを用いて計算により導入し、ｒｉｄｉｎｇ ａｔｏｍとして取り扱った。全ての水素原子は、等方性パラメーターで精密化を行った。
作図にはＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ，１９９１）／ＯＲＴＥＰ（Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９７６）を使用した。
【0113】
（示差走査熱量（ＤＳＣ）の測定）
実施例で得られた結晶のＤＳＣの測定を行った。ＳＵＳ製パンに試料約２ｍｇを量り、クリンプして測定した。測定条件を以下に示す。なお、示差走査熱量（ＤＳＣ）による測定は±２℃の範囲内で誤差が生じうる。
装置：ＤＳＣ ３＋
測定温度範囲：３０℃－３００℃
昇温速度：１０℃／分
雰囲気：Ｎ２ ４０ｍＬ／分
実施例で得られた結晶のＤＳＣの測定を行った。ＳＵＳ製パンに試料約２ｍｇを量り、クリンプして測定した。測定条件を以下に示す。なお、示差走査熱量（ＤＳＣ）による測定は±２℃の範囲内で誤差が生じうる。
装置：ＤＳＣ ３＋
測定温度範囲：３０℃－３００℃
昇温速度：１０℃／分
雰囲気：Ｎ２ ４０ｍＬ／分
【0114】
（ＴＧ／ＤＴＡデータの測定）
実施例で得られた結晶約３ｍｇを量り、アルミニウムパンにつめ、開放系にて測定した。測定条件は以下のとおりである。
装置：日立ハイテクサイエンス ＴＧ／ＤＴＡ７２００
測定温度範囲：３０－３５０℃
昇温速度：１０℃／分
実施例で得られた結晶約３ｍｇを量り、アルミニウムパンにつめ、開放系にて測定した。測定条件は以下のとおりである。
装置：日立ハイテクサイエンス ＴＧ／ＤＴＡ７２００
測定温度範囲：３０－３５０℃
昇温速度：１０℃／分
【0115】
（水分吸脱着等温線測定）
サンプルパンに試料約１５～２５ｍｇを測り取り測定を行った。測定条件を以下に示す。
装置：Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．社製 ＤＶＳ Ａｄｖｅｎｔｕｒｅ
測定ポイント：０％から５％ごとに９５％ＲＨ， および９５％ＲＨから５％ごとに０％まで
温度：２５℃
なお、ＤＶＳ測定の前後での粉末Ｘ線解析パターンの比較は以下の方法により測定した。
（装置）
リガク社製ＳｍａｒｔＬａｂ
（操作方法）
測定法：反射法
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：２００ｍＡ
管電圧：４５ｋＶ
試料プレート：アルミニウム
Ｘ線の入射角：２．５°
サンプリング幅：０．０２°
検出器：ＨｙＰｉｘ－３０００（２次元検出モード）
サンプルパンに試料約１５～２５ｍｇを測り取り測定を行った。測定条件を以下に示す。
装置：Ｓｕｒｆａｃｅ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｌｔｄ．社製 ＤＶＳ Ａｄｖｅｎｔｕｒｅ
測定ポイント：０％から５％ごとに９５％ＲＨ， および９５％ＲＨから５％ごとに０％まで
温度：２５℃
なお、ＤＶＳ測定の前後での粉末Ｘ線解析パターンの比較は以下の方法により測定した。
（装置）
リガク社製ＳｍａｒｔＬａｂ
（操作方法）
測定法：反射法
使用波長：ＣｕＫα線
管電流：２００ｍＡ
管電圧：４５ｋＶ
試料プレート：アルミニウム
Ｘ線の入射角：２．５°
サンプリング幅：０．０２°
検出器：ＨｙＰｉｘ－３０００（２次元検出モード）
【0116】
（粒度分布の測定）
測定条件は以下のとおりである。
メーカー：シンパテック
装置：レーザー回折式ＨＥＬＯＳ＆ＲＯＤＯＳ粒度分布測定装置
レンジ：Ｒ４
分散圧：３ｂａｒ
トリガー条件：ストップ２ｓ測定濃度≦１％か１０ｓ実時間
（実施例１ｂ）
測定条件は以下のとおりである。
メーカー：シンパテック
装置：レーザー回折式ＨＥＬＯＳ＆ＲＯＤＯＳ粒度分布測定装置
レンジ：Ｒ４
分散圧：３ｂａｒ
トリガー条件：ストップ２ｓ測定濃度≦１％か１０ｓ実時間
（実施例１ｂ）
【0117】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の合成
【化35】
【0118】
工程１：化合物３の合成
化合物１（３５．０ｋｇ、２３８．８ｍｏｌ、塩酸塩）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２７３Ｌ）、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（８７．２ｋｇ、５７３．１ｍｏｌ）および化合物２（２６．０ｋｇ、２６２．７ｍｏｌ）を混合し、２５℃で１０分間攪拌した。反応溶液にＮ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（５０．３ｋｇ、３１０．４ｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（７Ｌ）を混合し、５０℃で９０分間攪拌した。反応溶液にメタノール（１８．４ｋｇ、５７３．１ｍｏｌ）を加え、２５℃に冷却し、１０％硫酸でｐＨを２．５に調整した。スラリーを５℃に冷却し、固体をろ取し、２０％メタノール水で洗浄後、乾燥することで化合物３（３８．１２ｋｇ、１６２．０ｍｏｌ、収率：６７．９％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝８．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件４
化合物１（３５．０ｋｇ、２３８．８ｍｏｌ、塩酸塩）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（２７３Ｌ）、１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（８７．２ｋｇ、５７３．１ｍｏｌ）および化合物２（２６．０ｋｇ、２６２．７ｍｏｌ）を混合し、２５℃で１０分間攪拌した。反応溶液にＮ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（５０．３ｋｇ、３１０．４ｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（７Ｌ）を混合し、５０℃で９０分間攪拌した。反応溶液にメタノール（１８．４ｋｇ、５７３．１ｍｏｌ）を加え、２５℃に冷却し、１０％硫酸でｐＨを２．５に調整した。スラリーを５℃に冷却し、固体をろ取し、２０％メタノール水で洗浄後、乾燥することで化合物３（３８．１２ｋｇ、１６２．０ｍｏｌ、収率：６７．９％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝８．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件４
【0119】
工程２：化合物５の合成
化合物３（３４．５ｋｇ、１４６．７ｍｏｌ）、アセトニトリル（３４５Ｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２６．５ｋｇ、２０５．４ｍｏｌ）および化合物４（３９．６ｋｇ、１７６．０ｍｏｌ）を混合し、６０℃で３００分間攪拌した。反応溶液を２５℃に冷却し、水（１７２．５Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、６６％アセトニトリル水で洗浄後、乾燥することで化合物５（４６．１０ｋｇ、１２１．５ｍｏｌ、収率：８２．９％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１４．７ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件４
化合物３（３４．５ｋｇ、１４６．７ｍｏｌ）、アセトニトリル（３４５Ｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２６．５ｋｇ、２０５．４ｍｏｌ）および化合物４（３９．６ｋｇ、１７６．０ｍｏｌ）を混合し、６０℃で３００分間攪拌した。反応溶液を２５℃に冷却し、水（１７２．５Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、６６％アセトニトリル水で洗浄後、乾燥することで化合物５（４６．１０ｋｇ、１２１．５ｍｏｌ、収率：８２．９％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１４．７ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件４
【0120】
工程３：化合物７の合成
化合物５（２９．０ｋｇ、７６．４ｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（７２．５Ｌ）、化合物６（１６．５ｋｇ、１５２．９ｍｏｌ）を混合し、３５℃で１８０分間攪拌した。反応溶液を冷却し、酢酸エチル（３４８Ｌ）を加え、３８％リン酸三カリウム水溶液、２．３％食塩水、水で洗浄した。酢酸エチル溶液を２０３Ｌまで濃縮し、ヘプタン（２６１Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、酢酸エチルとヘプタンの混合溶媒で洗浄後、乾燥することで化合物７（２３．６０ｋｇ、６５．０ｍｏｌ、収率：８５．０％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１２．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
化合物５（２９．０ｋｇ、７６．４ｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（７２．５Ｌ）、化合物６（１６．５ｋｇ、１５２．９ｍｏｌ）を混合し、３５℃で１８０分間攪拌した。反応溶液を冷却し、酢酸エチル（３４８Ｌ）を加え、３８％リン酸三カリウム水溶液、２．３％食塩水、水で洗浄した。酢酸エチル溶液を２０３Ｌまで濃縮し、ヘプタン（２６１Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、酢酸エチルとヘプタンの混合溶媒で洗浄後、乾燥することで化合物７（２３．６０ｋｇ、６５．０ｍｏｌ、収率：８５．０％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１２．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
【0121】
工程４：化合物９の合成
化合物７（２３．３ｋｇ、６４．１ｍｏｌ）、化合物８（１４．０ｋｇ、８３．４ｍｏｌ、塩酸塩）、ヨウ化カリウム（６．４ｋｇ、３８．５ｍｏｌ）、炭酸セシウム（３１．３ｋｇ、９６．２ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１３９．８Ｌ）を混合し、４０℃で３６０分間攪拌した。反応溶液を２５℃に冷却し、酢酸（３４．６ｋｇ、５７７．２ｍｏｌ）を加えた。不溶物をろ別し、ろ液にアセトニトリル（９３．２Ｌ）、水（３２６．２Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、２０％アセトニトリル水溶液で洗浄後、乾燥することで化合物９（２０．３５ｋｇ、４４．４ｍｏｌ、収率：６９．２％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝２５．１ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件７
工程１～４について、同様の操作を２回行った。
化合物７（２３．３ｋｇ、６４．１ｍｏｌ）、化合物８（１４．０ｋｇ、８３．４ｍｏｌ、塩酸塩）、ヨウ化カリウム（６．４ｋｇ、３８．５ｍｏｌ）、炭酸セシウム（３１．３ｋｇ、９６．２ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（１３９．８Ｌ）を混合し、４０℃で３６０分間攪拌した。反応溶液を２５℃に冷却し、酢酸（３４．６ｋｇ、５７７．２ｍｏｌ）を加えた。不溶物をろ別し、ろ液にアセトニトリル（９３．２Ｌ）、水（３２６．２Ｌ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、２０％アセトニトリル水溶液で洗浄後、乾燥することで化合物９（２０．３５ｋｇ、４４．４ｍｏｌ、収率：６９．２％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝２５．１ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件７
工程１～４について、同様の操作を２回行った。
【0122】
工程５－１：式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の合成
工程１～４で得られた化合物９（３９．０ｋｇ、８０．７ｍｏｌ）、化合物１０（１６．２ｋｇ、８４．８ｍｏｌ）、酢酸（３０．７ｋｇ、４８４．３ｍｏｌ）およびトルエン（２３４Ｌ）を混合し、１００℃で３６０分間攪拌した。トルエン（３９０Ｌ）を加え、得られたスラリーを２５℃に冷却した。固体をろ取し、アセトンで洗浄し、式（ＶＩＩ）で示される化合物の未乾結晶を得た（ここで得られた未乾結晶を、ＨＰＬＣ測定条件８により測定した結果を図１２および図１３に示す。ＲＴ＝９．８ｍｉｎのピークはトルエンである）。
工程５－２：得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物の半量の未乾結晶にアセトン（６１３．５Ｌ）と水（１０９．２Ｌ）を加え、５０℃で溶解した。得られた溶解液を活性炭処理し、処理液にアセトン（１５０．２Ｌ）と水（５．９Ｌ）を加え、７０２Ｌまで濃縮した。濃縮液を５０℃に温度調節し、フマル酸（４．６ｋｇ、７２．６ｍｏｌ）、アセトン（１５０．２Ｌ）、水（５．９Ｌ）を加え、４６４Ｌまで濃縮した。濃縮液にアセトン（７８Ｌ）を加え、２６５Ｌまで濃縮し、アセトン（１９．５Ｌ）を加えた。スラリーを５５℃に温度調節し、１２０分間以上攪拌した。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、アセトンで洗浄後、乾燥した（ここで得られた乾燥結晶の、ＤＳＣ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＨＰＬＣ、粒度分布、ＤＶＳ測定の結果を図１４～１８に示す。ＨＰＬＣは測定条件１２により測定した。図１９は、当該ＤＶＳ測定の前後での粉末Ｘ線解析パターンの比較を示す。）。
同様の操作を残りの半量についても繰り返すことで、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（４１．６８ｋｇ、６４．３ｍｏｌ、収率：７５．６％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝１２．８ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件８
（実施例２ｂ）
工程１～４で得られた化合物９（３９．０ｋｇ、８０．７ｍｏｌ）、化合物１０（１６．２ｋｇ、８４．８ｍｏｌ）、酢酸（３０．７ｋｇ、４８４．３ｍｏｌ）およびトルエン（２３４Ｌ）を混合し、１００℃で３６０分間攪拌した。トルエン（３９０Ｌ）を加え、得られたスラリーを２５℃に冷却した。固体をろ取し、アセトンで洗浄し、式（ＶＩＩ）で示される化合物の未乾結晶を得た（ここで得られた未乾結晶を、ＨＰＬＣ測定条件８により測定した結果を図１２および図１３に示す。ＲＴ＝９．８ｍｉｎのピークはトルエンである）。
工程５－２：得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物の半量の未乾結晶にアセトン（６１３．５Ｌ）と水（１０９．２Ｌ）を加え、５０℃で溶解した。得られた溶解液を活性炭処理し、処理液にアセトン（１５０．２Ｌ）と水（５．９Ｌ）を加え、７０２Ｌまで濃縮した。濃縮液を５０℃に温度調節し、フマル酸（４．６ｋｇ、７２．６ｍｏｌ）、アセトン（１５０．２Ｌ）、水（５．９Ｌ）を加え、４６４Ｌまで濃縮した。濃縮液にアセトン（７８Ｌ）を加え、２６５Ｌまで濃縮し、アセトン（１９．５Ｌ）を加えた。スラリーを５５℃に温度調節し、１２０分間以上攪拌した。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、アセトンで洗浄後、乾燥した（ここで得られた乾燥結晶の、ＤＳＣ、ＴＧ／ＤＴＡ、ＨＰＬＣ、粒度分布、ＤＶＳ測定の結果を図１４～１８に示す。ＨＰＬＣは測定条件１２により測定した。図１９は、当該ＤＶＳ測定の前後での粉末Ｘ線解析パターンの比較を示す。）。
同様の操作を残りの半量についても繰り返すことで、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（４１．６８ｋｇ、６４．３ｍｏｌ、収率：７５．６％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝１２．８ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件８
（実施例２ｂ）
【0123】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の合成
工程１
化合物９（１５０ｍｇ，０．３２７ｍｍｏｌ）と化合物１０（６５．４ｍｇ，０．３６０ｍｍｏｌ）をトルエン（１．５ｍＬ）および酢酸（０．１８７ｍｌ，３．２７ｍｍｏｌ）と混合し、１００℃で９時間撹拌した。室温に冷却後、ヘプタン（１．５ｍＬ，１０Ｖ）を加えろ過し、得られた結晶をヘプタン（０．７ｍＬ）で3回洗浄した。減圧乾燥を行い、式（ＶＩＩ）で示される化合物の結晶（１６８ｍｇ、収率８７％）を得た。得られた結晶にはトルエンが溶媒和物として０．５から０．６分子相当が含まれており、通常操作範囲の減圧乾燥下では、トルエンは除去されなかった。品質的に良好な式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の取得を確認した。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：７．９３（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝２．５７Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３５－７，４５（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），６．９２－６．９７（ｔｄ，Ｊ＝９．６３，６．４２，１Ｈ），５．３４（ｓ，２Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ）．
７．１４－７．２７ｐｐｍ，２．３５ｐｐｍに、トルエン０．５分子から０．６分子に相当するピークを確認した。
工程１
化合物９（１５０ｍｇ，０．３２７ｍｍｏｌ）と化合物１０（６５．４ｍｇ，０．３６０ｍｍｏｌ）をトルエン（１．５ｍＬ）および酢酸（０．１８７ｍｌ，３．２７ｍｍｏｌ）と混合し、１００℃で９時間撹拌した。室温に冷却後、ヘプタン（１．５ｍＬ，１０Ｖ）を加えろ過し、得られた結晶をヘプタン（０．７ｍＬ）で3回洗浄した。減圧乾燥を行い、式（ＶＩＩ）で示される化合物の結晶（１６８ｍｇ、収率８７％）を得た。得られた結晶にはトルエンが溶媒和物として０．５から０．６分子相当が含まれており、通常操作範囲の減圧乾燥下では、トルエンは除去されなかった。品質的に良好な式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の取得を確認した。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：７．９３（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝２．５７Ｈｚ，２Ｈ），７．６２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３５－７，４５（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），６．９２－６．９７（ｔｄ，Ｊ＝９．６３，６．４２，１Ｈ），５．３４（ｓ，２Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ）．
７．１４－７．２７ｐｐｍ，２．３５ｐｐｍに、トルエン０．５分子から０．６分子に相当するピークを確認した。
【0124】
参考例１ 化合物Ｓ－４の合成
【化36】
【0125】
工程１：化合物Ｓ－２の合成
化合物Ｓ－１（５．５０ｋｇ、２９．５ｍｏｌ）、アセトニトリル（２１．７ｋｇ）および氷酢酸（１１５．００ｋｇ）を混合し、５℃に冷却した。１７％亜硝酸ナトリウム水溶液（１３．０３ｋｇ）を加え１時間撹拌し、２５℃に昇温後１．５時間撹拌した。不溶物をろ別し、アセトニトリル（２１．７ｋｇ）、テトラヒドロフラン（４９．０ｋｇ）で不溶物を洗浄した。集めたろ液に水（４６０L）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－２（３．７５ｋｇ、１９．０ｍｏｌ、収率：６４．４％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１９６（Ｍ－Ｈ）、ＲＴ＝１１．８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
化合物Ｓ－１（５．５０ｋｇ、２９．５ｍｏｌ）、アセトニトリル（２１．７ｋｇ）および氷酢酸（１１５．００ｋｇ）を混合し、５℃に冷却した。１７％亜硝酸ナトリウム水溶液（１３．０３ｋｇ）を加え１時間撹拌し、２５℃に昇温後１．５時間撹拌した。不溶物をろ別し、アセトニトリル（２１．７ｋｇ）、テトラヒドロフラン（４９．０ｋｇ）で不溶物を洗浄した。集めたろ液に水（４６０L）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－２（３．７５ｋｇ、１９．０ｍｏｌ、収率：６４．４％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１９６（Ｍ－Ｈ）、ＲＴ＝１１．８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
【0126】
工程２：化合物Ｓ－３の合成
化合物Ｓ－２（３．２５ｋｇ、１６．４ｍｏｌ）と酢酸エチル（５８．７ｋｇ）を混合し、トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（２．０９ｋｇ、１４．１ｍｏｌ）を加え、２５℃で７時間撹拌した。この反応液に酢酸エチル（２９．５ｋｇ）、メタノール（１０．３ｋｇ）の混合液を加えた。この混合液を５％炭酸ナトリウム水溶液（６６．３ｋｇ）に加え、有機層と水層に分離した。有機層を５％塩化ナトリウム水溶液（６５．８ｋｇ）で２回洗浄し、活性炭処理し、４２ｋｇまで濃縮した。テトラヒドロフラン（８７．０ｋｇ）を加え、２３ｋｇまで濃縮する操作を２回繰り返し、さらにテトラヒドロフラン（８７．０ｋｇ）を加え、１８．９ｋｇまで濃縮し、３３℃に昇温した。この混合液にヘプタン（４７．０ｋｇ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、テトラヒドロフラン、ヘプタンの混合液で洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－３（１．６８ｋｇ、７．９ｍｏｌ，収率：４８．２％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２１２（Ｍ＋Ｈ）、２５３（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ）ＲＴ＝１２．４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
化合物Ｓ－２（３．２５ｋｇ、１６．４ｍｏｌ）と酢酸エチル（５８．７ｋｇ）を混合し、トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（２．０９ｋｇ、１４．１ｍｏｌ）を加え、２５℃で７時間撹拌した。この反応液に酢酸エチル（２９．５ｋｇ）、メタノール（１０．３ｋｇ）の混合液を加えた。この混合液を５％炭酸ナトリウム水溶液（６６．３ｋｇ）に加え、有機層と水層に分離した。有機層を５％塩化ナトリウム水溶液（６５．８ｋｇ）で２回洗浄し、活性炭処理し、４２ｋｇまで濃縮した。テトラヒドロフラン（８７．０ｋｇ）を加え、２３ｋｇまで濃縮する操作を２回繰り返し、さらにテトラヒドロフラン（８７．０ｋｇ）を加え、１８．９ｋｇまで濃縮し、３３℃に昇温した。この混合液にヘプタン（４７．０ｋｇ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、テトラヒドロフラン、ヘプタンの混合液で洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－３（１．６８ｋｇ、７．９ｍｏｌ，収率：４８．２％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２１２（Ｍ＋Ｈ）、２５３（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ）ＲＴ＝１２．４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
【0127】
工程３：化合物Ｓ－４の合成
化合物Ｓ－３（１０４０ｇ、４．９ｍｏｌ）、１０％パラジウム炭素（ＰＥタイプ、含水）（５２３ｇ、０．２５ｍｏｌ）および酢酸エチル（８．９９ｋｇ）を混合し、ヒドラジン一水和物（５０４ｇ、１０．１ｍｏｌ）を加え、３５℃で３時間撹拌した。１０％パラジウム炭素をろ別し、水（１５６０ｇ）、酢酸エチル（９．００ｋｇ）で１０％パラジウム炭素を洗浄した。集めたろ液に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（７５０ｇ）を加え、有機層と水層に分離した。得られた水層を酢酸エチル（４．６９ｋｇ）で抽出した。有機層を併せて活性炭処理し、１１．０９ｋｇまで濃縮した。この濃縮液に４ｍｏｌ／Ｌ塩化水素・酢酸エチル溶液（１１２４ｇ）を加えた。固体をろ取し、酢酸エチルで洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－４（０．８４ｋｇ、３．９ｍｏｌ、収率：７８．５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１８２（Ｍ＋Ｈ）、２２３（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ）ＲＴ＝６．６ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
塩素濃度（イオンクロマトグラフィー）：１６．７４％
化合物Ｓ－３（１０４０ｇ、４．９ｍｏｌ）、１０％パラジウム炭素（ＰＥタイプ、含水）（５２３ｇ、０．２５ｍｏｌ）および酢酸エチル（８．９９ｋｇ）を混合し、ヒドラジン一水和物（５０４ｇ、１０．１ｍｏｌ）を加え、３５℃で３時間撹拌した。１０％パラジウム炭素をろ別し、水（１５６０ｇ）、酢酸エチル（９．００ｋｇ）で１０％パラジウム炭素を洗浄した。集めたろ液に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（７５０ｇ）を加え、有機層と水層に分離した。得られた水層を酢酸エチル（４．６９ｋｇ）で抽出した。有機層を併せて活性炭処理し、１１．０９ｋｇまで濃縮した。この濃縮液に４ｍｏｌ／Ｌ塩化水素・酢酸エチル溶液（１１２４ｇ）を加えた。固体をろ取し、酢酸エチルで洗浄後、乾燥することで化合物Ｓ－４（０．８４ｋｇ、３．９ｍｏｌ、収率：７８．５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１８２（Ｍ＋Ｈ）、２２３（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ）ＲＴ＝６．６ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件４
塩素濃度（イオンクロマトグラフィー）：１６．７４％
【0128】
参考例２ 化合物Ａ－３の合成
【化37】
【0129】
工程１：化合物Ａ－２のジクロロメタン溶液の合成
化合物Ａ－１（９．２ｋｇ，６５．１ｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（６４Ｌ）を混合し、０℃に冷却し、スラリーとした。ここに、水素化ビス（２－メトキシ）アルミニウムナトリウム（Ｒｅｄ－ＡＬ）/トルエン溶液（６５ｗｔ％）（２６．４ｋｇ，８４．９ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（２８Ｌ）を混合したＲｅｄ－ＡＬ／テトラヒドロフラン溶液を内温８℃以下に保ちながら６０分間かけて滴下した。その後、０℃～５℃で３０分間撹拌した。本反応液に対してアセトン（４．９ｋｇ，８４．３ｍｏｌ）を30分間かけて滴下し、２５℃に昇温した。別の反応器に酒石酸カリウムナトリウム・４水和物（４６ｋｇ，１６３ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（１３８Ｌ）を混合したスラリーを準備し、先のＲｅｄ－ＡＬ還元をアセトンでクエンチした反応液を30分間かけて滴下した（この間に内温は４０℃付近になった）。２時間、４０℃で撹拌を継続したのち、２５℃に冷却した。水（２．５ｋｇ）を加えて撹拌したのち、ブフナーろ過を行い、得られたろ液を３５ｋｇ（２８Ｌ）まで減圧濃縮した。ろ液（２８Ｌ）を３等分し、1つ目についてトルエン（２．６ｋｇ）を加え、減圧濃縮を行う操作を８回繰り返したのち、最終的に濃縮乾固した。濃縮乾固した生成物にジクロロメタン（１３．５ｋｇ）を加えて生成物Ａ－２のジクロロメタン溶液とした。同じ操作を２つ目、３つ目にも実施し、Ａ－２（５．５３ｋｇ）とジクロロメタン（４２．７ｋｇ）で構成されるＡ－２／ジクロロメタン溶液を調整した（収率：７４．８％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃）δ ｐｐｍ：８．００（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）．
化合物Ａ－１（９．２ｋｇ，６５．１ｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（６４Ｌ）を混合し、０℃に冷却し、スラリーとした。ここに、水素化ビス（２－メトキシ）アルミニウムナトリウム（Ｒｅｄ－ＡＬ）/トルエン溶液（６５ｗｔ％）（２６．４ｋｇ，８４．９ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（２８Ｌ）を混合したＲｅｄ－ＡＬ／テトラヒドロフラン溶液を内温８℃以下に保ちながら６０分間かけて滴下した。その後、０℃～５℃で３０分間撹拌した。本反応液に対してアセトン（４．９ｋｇ，８４．３ｍｏｌ）を30分間かけて滴下し、２５℃に昇温した。別の反応器に酒石酸カリウムナトリウム・４水和物（４６ｋｇ，１６３ｍｏｌ）とテトラヒドロフラン（１３８Ｌ）を混合したスラリーを準備し、先のＲｅｄ－ＡＬ還元をアセトンでクエンチした反応液を30分間かけて滴下した（この間に内温は４０℃付近になった）。２時間、４０℃で撹拌を継続したのち、２５℃に冷却した。水（２．５ｋｇ）を加えて撹拌したのち、ブフナーろ過を行い、得られたろ液を３５ｋｇ（２８Ｌ）まで減圧濃縮した。ろ液（２８Ｌ）を３等分し、1つ目についてトルエン（２．６ｋｇ）を加え、減圧濃縮を行う操作を８回繰り返したのち、最終的に濃縮乾固した。濃縮乾固した生成物にジクロロメタン（１３．５ｋｇ）を加えて生成物Ａ－２のジクロロメタン溶液とした。同じ操作を２つ目、３つ目にも実施し、Ａ－２（５．５３ｋｇ）とジクロロメタン（４２．７ｋｇ）で構成されるＡ－２／ジクロロメタン溶液を調整した（収率：７４．８％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃）δ ｐｐｍ：８．００（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ）．
【0130】
工程２：化合物８の合成
工程１で製造したＡ－２／ジクロロメタン溶液（５．５３ｋｇのＡ－２（４８．８ｍｏｌ）を含むジクロロメタン溶液４９．８ｋｇ）にジクロロメタン（４４Ｌ）を加え、２５℃に温度調整した。塩化チオニル（７．８ｋｇ，６５．５ｍｏｌ）とジクロロメタン（２７Ｌ）の混合溶液を３０分間かけて滴下し、ジクロロメタン（８．２Ｌ）を用いてライン洗浄し洗液として流入後、室温で７時間撹拌した。別途、酢酸ナトリウム（３６．２ｋｇ，４３６ｍｏｌ）と水道水（１４３Ｌ）から２０％酢酸ナトリウム水溶液（１７９ｋｇ）を調整した。２０％酢酸ナトリウム（１１９ｋｇ）を先の反応液に滴下した。滴下終了時点のｐＨは４．６付近であった。本操作で得られた有機層を塩化ナトリウム（５．５ｋｇ）と水道水（４９Ｌ）から調整した１０％塩化ナトリウム水溶液で洗浄、水層についてもジクロロメタン（５５Ｌ）で抽出した。合併有機層（ジクロロメタン溶液）を３３Ｌまで濃縮したのち、酢酸エチル（２７．５Ｌ）を加え、濃縮した。３３Ｌまで濃縮後、あらためて酢酸エチル（４７．５Ｌ）を加え、ジャケット温度６０℃のもとで常圧濃縮し、生じた無機塩をろ過後した。ろ液に塩酸・酢酸エチル溶液（４ｍｏｌ／Ｌ，１２．６ｋｇ）を加えて塩酸塩化し、２５℃で３０分間撹拌した後、５℃付近に冷却した。30分間撹拌し、晶析熟成の後、得られた晶析スラリーをろ過、冷却した酢酸エチル（５５Ｌ）で洗浄、減圧乾燥し、化合物８（５．２５ｋｇ）を得た（淡黄色粉末，収率：６４．８％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６，３０℃）δ ｐｐｍ：８．５４（ｓ，１Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）．
工程１で製造したＡ－２／ジクロロメタン溶液（５．５３ｋｇのＡ－２（４８．８ｍｏｌ）を含むジクロロメタン溶液４９．８ｋｇ）にジクロロメタン（４４Ｌ）を加え、２５℃に温度調整した。塩化チオニル（７．８ｋｇ，６５．５ｍｏｌ）とジクロロメタン（２７Ｌ）の混合溶液を３０分間かけて滴下し、ジクロロメタン（８．２Ｌ）を用いてライン洗浄し洗液として流入後、室温で７時間撹拌した。別途、酢酸ナトリウム（３６．２ｋｇ，４３６ｍｏｌ）と水道水（１４３Ｌ）から２０％酢酸ナトリウム水溶液（１７９ｋｇ）を調整した。２０％酢酸ナトリウム（１１９ｋｇ）を先の反応液に滴下した。滴下終了時点のｐＨは４．６付近であった。本操作で得られた有機層を塩化ナトリウム（５．５ｋｇ）と水道水（４９Ｌ）から調整した１０％塩化ナトリウム水溶液で洗浄、水層についてもジクロロメタン（５５Ｌ）で抽出した。合併有機層（ジクロロメタン溶液）を３３Ｌまで濃縮したのち、酢酸エチル（２７．５Ｌ）を加え、濃縮した。３３Ｌまで濃縮後、あらためて酢酸エチル（４７．５Ｌ）を加え、ジャケット温度６０℃のもとで常圧濃縮し、生じた無機塩をろ過後した。ろ液に塩酸・酢酸エチル溶液（４ｍｏｌ／Ｌ，１２．６ｋｇ）を加えて塩酸塩化し、２５℃で３０分間撹拌した後、５℃付近に冷却した。30分間撹拌し、晶析熟成の後、得られた晶析スラリーをろ過、冷却した酢酸エチル（５５Ｌ）で洗浄、減圧乾燥し、化合物８（５．２５ｋｇ）を得た（淡黄色粉末，収率：６４．８％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－Ｄ６，３０℃）δ ｐｐｍ：８．５４（ｓ，１Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）．
【0131】
参考例３ 化合物１０の合成
【化38】
【0132】
工程１：化合物Ｂ－２の合成
窒素雰囲気下で、０℃～５℃下に冷却した９８％硫酸（３９５．７Ｌ）に対して化合物Ｂ－１（７９．１ｋｇ，４９９ｍｏｌ）を分割して加えた（内温を０℃～5℃に保つ）。硝酸カリウム（５５．５ｋｇ）を内温０℃～１２℃に保ち、１５回に分けて（２０分以上の間隔を空けて）分割投入した。内温０℃～5℃で５時間撹拌した。０℃～5℃に冷却した水（７９１Ｌ）に内温０℃～5℃に保ちながら、先の反応液をゆっくり流入し、９８％硫酸（３９．６Ｌ）で洗いこみを行なったのち、内温０℃で５時間撹拌した。スラリーを遠心分離機によりろ過し、水（７９１Ｌ）で洗浄した。得られた粗固体を水（７９１Ｌ）に懸濁させ、２０℃～３０℃で３０分間撹拌したのち、固体をろ過、水（７９１Ｌ）で３回洗浄した後、減圧乾燥し、化合物Ｂ－２（９９．６１ｋｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，CDCl3）δ ｐｐｍ：１０．３１（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝９．１７Ｈｚ，１Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５０ｎｍ）：ＲＴ＝１０．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件９
窒素雰囲気下で、０℃～５℃下に冷却した９８％硫酸（３９５．７Ｌ）に対して化合物Ｂ－１（７９．１ｋｇ，４９９ｍｏｌ）を分割して加えた（内温を０℃～5℃に保つ）。硝酸カリウム（５５．５ｋｇ）を内温０℃～１２℃に保ち、１５回に分けて（２０分以上の間隔を空けて）分割投入した。内温０℃～5℃で５時間撹拌した。０℃～5℃に冷却した水（７９１Ｌ）に内温０℃～5℃に保ちながら、先の反応液をゆっくり流入し、９８％硫酸（３９．６Ｌ）で洗いこみを行なったのち、内温０℃で５時間撹拌した。スラリーを遠心分離機によりろ過し、水（７９１Ｌ）で洗浄した。得られた粗固体を水（７９１Ｌ）に懸濁させ、２０℃～３０℃で３０分間撹拌したのち、固体をろ過、水（７９１Ｌ）で３回洗浄した後、減圧乾燥し、化合物Ｂ－２（９９．６１ｋｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，CDCl3）δ ｐｐｍ：１０．３１（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝９．１７Ｈｚ，１Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５０ｎｍ）：ＲＴ＝１０．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件９
【0133】
工程２：化合物Ｓ－２の合成
エタノール（６９７Ｌ）、水（６９７Ｌ）およびヒドラジン１水和物（７３．５ｋｇ，１４６８ｍｏｌ）を混合し、４５℃に加熱した。ここに、化合物Ｂ－２（９９．６ｋｇ，４８９ｍｏｌ）とエタノール（２９９Ｌ）の混合溶液を６０分かけて滴下し、さらに８時間、４５℃から５０℃で９時間撹拌した。内温を４０℃～５０℃に保ちながら、炭酸水素カリウム（５３．９ｋｇ，５３８ｍｏｌ）と水（１２９５Ｌ）から調整した水溶液を３０分間以上かけて滴下した。０℃～５℃に冷却し、１時間撹拌したのち、ろ過を行なった。水（１３３５Ｌ）とエタノール（６５７Ｌ）を混合し、０℃～５℃に冷却させたエタノール水溶液を用いて先の固体を洗浄した。減圧乾燥を行って、化合物Ｓ－２（８３．２５ｋｇ）を得た（収率：８６．９％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：１３．５６－１３．９８（ｍ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝０．９８Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝０．６１，１Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５０ｎｍ）：ＲＴ＝１０．４ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件９
エタノール（６９７Ｌ）、水（６９７Ｌ）およびヒドラジン１水和物（７３．５ｋｇ，１４６８ｍｏｌ）を混合し、４５℃に加熱した。ここに、化合物Ｂ－２（９９．６ｋｇ，４８９ｍｏｌ）とエタノール（２９９Ｌ）の混合溶液を６０分かけて滴下し、さらに８時間、４５℃から５０℃で９時間撹拌した。内温を４０℃～５０℃に保ちながら、炭酸水素カリウム（５３．９ｋｇ，５３８ｍｏｌ）と水（１２９５Ｌ）から調整した水溶液を３０分間以上かけて滴下した。０℃～５℃に冷却し、１時間撹拌したのち、ろ過を行なった。水（１３３５Ｌ）とエタノール（６５７Ｌ）を混合し、０℃～５℃に冷却させたエタノール水溶液を用いて先の固体を洗浄した。減圧乾燥を行って、化合物Ｓ－２（８３．２５ｋｇ）を得た（収率：８６．９％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ｐｐｍ：１３．５６－１３．９８（ｍ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝０．９８Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝０．６１，１Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５０ｎｍ）：ＲＴ＝１０．４ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件９
【0134】
工程３：化合物Ｓ－３の合成
化合物Ｓ－２（８４ｋｇ，４３０ｍｏｌ）と酢酸エチル（１５９６Ｌ）を混合し、２０℃～３０℃で撹拌した。トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（７７．６ｋｇ，５２５ｍｏｌ）を数回に分けて投入し、酢酸エチル（８４Ｌ）を加え、２５℃で６時間撹拌した。メタノール（２５２Ｌ）と酢酸エチル（４２０Ｌ）の混合溶液を２時間かけて先の反応液に滴下し、過剰のトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレートのクエンチを行った。炭酸ナトリウム（８４ｋｇ）と水（１５９６Ｌ）を混合した炭酸ナトリウム水溶液に、先のクエンチ後の反応液を１時間かけて滴下し、酢酸エチル（４２０Ｌ）とメタノール（８４Ｌ）を加えた。分液操作により得られた有機層を飽和食塩水（１６８０ｋｇ）で２回洗浄し、得られた有機層に対して活性炭ろ過処理を行った。その後、有機層を減圧濃縮したのち、テトラヒドロフラン（２５２０Ｌ）を流入し、さらに減圧濃縮を行った。テトラヒドロフランの追加流入と減圧濃縮の操作を再度実施したのち、ヘプタン（２１３９Ｌ）を滴下し、－５℃～５℃に冷却した後、０℃付近で１時間撹拌、晶析熟成した。晶析スラリーをろ過し、冷却したテトラヒドロフラン（２２４Ｌ）とへプタン（９１２Ｌ）の混合溶液で洗浄した。減圧乾燥を行って、化合物Ｓ－３（６５．７３ｋｇ）を得た（収率：７４．１％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｓ，３Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１０．３ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１０
化合物Ｓ－２（８４ｋｇ，４３０ｍｏｌ）と酢酸エチル（１５９６Ｌ）を混合し、２０℃～３０℃で撹拌した。トリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（７７．６ｋｇ，５２５ｍｏｌ）を数回に分けて投入し、酢酸エチル（８４Ｌ）を加え、２５℃で６時間撹拌した。メタノール（２５２Ｌ）と酢酸エチル（４２０Ｌ）の混合溶液を２時間かけて先の反応液に滴下し、過剰のトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレートのクエンチを行った。炭酸ナトリウム（８４ｋｇ）と水（１５９６Ｌ）を混合した炭酸ナトリウム水溶液に、先のクエンチ後の反応液を１時間かけて滴下し、酢酸エチル（４２０Ｌ）とメタノール（８４Ｌ）を加えた。分液操作により得られた有機層を飽和食塩水（１６８０ｋｇ）で２回洗浄し、得られた有機層に対して活性炭ろ過処理を行った。その後、有機層を減圧濃縮したのち、テトラヒドロフラン（２５２０Ｌ）を流入し、さらに減圧濃縮を行った。テトラヒドロフランの追加流入と減圧濃縮の操作を再度実施したのち、ヘプタン（２１３９Ｌ）を滴下し、－５℃～５℃に冷却した後、０℃付近で１時間撹拌、晶析熟成した。晶析スラリーをろ過し、冷却したテトラヒドロフラン（２２４Ｌ）とへプタン（９１２Ｌ）の混合溶液で洗浄した。減圧乾燥を行って、化合物Ｓ－３（６５．７３ｋｇ）を得た（収率：７４．１％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｓ，３Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝１０．３ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１０
【0135】
工程４：化合物１０の合成
化合物Ｓ－３（６５．７ｋｇ，３１０ｍｏｌ）と酢酸エチル（６５７Ｌ）を混合し、室温で撹拌した後、１０℃付近に冷却し、窒素置換を行った。５％の白金－炭素（５７．７ｋｇ，５３％水分含有）を加えた。水素置換後、内温を２５℃付近に調節しながら４時間撹拌した。原料消失を確認後に窒素置換、ろ過操作を実施し白金-炭素触媒を除去した。分液操作を実施後、有機層を濃縮、酢酸エチル溶液にヘプタンを滴下し、晶析スラリーを形成させた。ろ過、ヘプタン／酢酸エチルで洗浄後、減圧乾燥を実施し、化合物１０（３７．２４ｋｇ）を得た（収率：６６．２％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：７．７０（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），４．１５（ｓ，３Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝４．８ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１０
化合物Ｓ－３（６５．７ｋｇ，３１０ｍｏｌ）と酢酸エチル（６５７Ｌ）を混合し、室温で撹拌した後、１０℃付近に冷却し、窒素置換を行った。５％の白金－炭素（５７．７ｋｇ，５３％水分含有）を加えた。水素置換後、内温を２５℃付近に調節しながら４時間撹拌した。原料消失を確認後に窒素置換、ろ過操作を実施し白金-炭素触媒を除去した。分液操作を実施後、有機層を濃縮、酢酸エチル溶液にヘプタンを滴下し、晶析スラリーを形成させた。ろ過、ヘプタン／酢酸エチルで洗浄後、減圧乾燥を実施し、化合物１０（３７．２４ｋｇ）を得た（収率：６６．２％）。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：７．７０（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），４．１５（ｓ，３Ｈ）．
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝４．８ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１０
【0136】
参考例４ 化合物９の合成
【化39】
【0137】
工程１：化合物Ｃ－２の合成
化合物Ｃ－１（１０．００ｇ、４８．０ｍｍｏｌ、メシル酸塩）、Ｎ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（８．１８ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６０．００ｍＬ）、およびジイソプロピルエチルアミン（６．８３ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）を混合し、１０℃で６０分間攪拌した。反応液に化合物１（８．０９ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、塩酸塩）、ジイソプロピルエチルアミン（７．１４ｇ、５５．２ｍｍｏｌ）を混合し、５０℃で２１０分間攪拌した。反応液を冷却し、４５ｇまで濃縮した。２－プロパノール（１００ｍＬ）を加え、６０ｇまで濃縮した後、２－プロパノール（１００ｍＬ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、２－プロパノールで洗浄後、乾燥することで化合物Ｃ－２（１０．４８ｇ、４２．２ｍｍｏｌ、収率：８８％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２１０ｎｍ）：ＲＴ＝１４．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
化合物Ｃ－１（１０．００ｇ、４８．０ｍｍｏｌ、メシル酸塩）、Ｎ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（８．１８ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６０．００ｍＬ）、およびジイソプロピルエチルアミン（６．８３ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）を混合し、１０℃で６０分間攪拌した。反応液に化合物１（８．０９ｇ、５５．２ｍｍｏｌ、塩酸塩）、ジイソプロピルエチルアミン（７．１４ｇ、５５．２ｍｍｏｌ）を混合し、５０℃で２１０分間攪拌した。反応液を冷却し、４５ｇまで濃縮した。２－プロパノール（１００ｍＬ）を加え、６０ｇまで濃縮した後、２－プロパノール（１００ｍＬ）を加えた。スラリーを０℃に冷却し、固体をろ取し、２－プロパノールで洗浄後、乾燥することで化合物Ｃ－２（１０．４８ｇ、４２．２ｍｍｏｌ、収率：８８％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２１０ｎｍ）：ＲＴ＝１４．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
【0138】
工程２：化合物Ｃ－３の合成
化合物Ｃ－２（８．００ｇ、３２．２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（６．７９ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（８０．０ｍＬ）、および１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（５．４０ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）を混合し、２５℃で１２０分間攪拌した。テトラヒドロフラン（８０．０ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃に冷却し、晶析スラリーを形成させた。固体をろ取し、テトラヒドロフランで洗浄後、加熱乾燥することで化合物Ｃ－３の結晶（１２．６ｇ、２９．６ｍｍｏｌ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩、収率：９２％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２１０ｎｍ）：ＲＴ＝１．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
化合物Ｃ－２（８．００ｇ、３２．２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ'－カルボニルジイミダゾール（６．７９ｇ、４１．９ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（８０．０ｍＬ）、および１，８－ジアザビシクロ［５，４，０］－７－ウンデセン（５．４０ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）を混合し、２５℃で１２０分間攪拌した。テトラヒドロフラン（８０．０ｍＬ）を滴下し、反応液を０℃に冷却し、晶析スラリーを形成させた。固体をろ取し、テトラヒドロフランで洗浄後、加熱乾燥することで化合物Ｃ－３の結晶（１２．６ｇ、２９．６ｍｍｏｌ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩、収率：９２％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２１０ｎｍ）：ＲＴ＝１．９ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
【0139】
工程３：化合物９の合成
化合物Ｃ－３（１．００ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（５．０ｍＬ）、および化合物４（５７９．２ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を混合し、７０℃で３００分間攪拌した。反応液を冷却し、アセトニトリル（１０ｍＬ）を加え、９．４ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。濃縮液に化合物６（４６１ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（４５６ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１６０分間攪拌した。反応液を２５℃に冷却し、酢酸（７０３ｍｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、水（８．０ｍＬ）および種晶を加え、得られた晶析スラリーを０℃に冷却した。スラリーに水（１２．０ｍＬ）を加え、固体をろ取し、２０％アセトニトリル水溶液で洗浄後、乾燥することで化合物９（０．８６ｇ、１．９ｍｍｏｌ，収率：７９．５％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝１４．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件８
化合物Ｃ－３（１．００ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン塩）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（５．０ｍＬ）、および化合物４（５７９．２ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を混合し、７０℃で３００分間攪拌した。反応液を冷却し、アセトニトリル（１０ｍＬ）を加え、９．４ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。濃縮液に化合物６（４６１ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（４５６ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１６０分間攪拌した。反応液を２５℃に冷却し、酢酸（７０３ｍｇ、１１．７ｍｍｏｌ）、水（８．０ｍＬ）および種晶を加え、得られた晶析スラリーを０℃に冷却した。スラリーに水（１２．０ｍＬ）を加え、固体をろ取し、２０％アセトニトリル水溶液で洗浄後、乾燥することで化合物９（０．８６ｇ、１．９ｍｍｏｌ，収率：７９．５％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５５ｎｍ）：ＲＴ＝１４．５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件８
【0140】
参考例５ 化合物Ｓ－３の合成
【化40】
【0141】
工程１：化合物Ｓ－３の合成
参考例３の工程１と同様にして、化合物Ｂ－２を得た。続いて、化合物Ｂ－２（３０ｇ、１４７ｍｍｏｌ）とＮＭＰ（１２０ｍＬ）を混合し、氷冷下でＢｏｃ－カルボキシレート（５６ｇ、３８３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応液にジイソプロピルエチルアミン（３８．６ｍＬ、２２１ｍｍｏｌ）を加え、９０℃にて２０時間攪拌した。反応液を８０℃にして水（２４０ｍＬ）を加えた後、室温に冷却し、析出した不溶物をろ別した。得られた固体をＮＭＰ／水＝１／２（１５ｍＬ）の混合液で３回洗浄し、さらに水（３０ｍＬ）で３回洗浄した。得られた固体を酢酸イソプロピル（６０ｍＬ）、ヘプタン（２４０ｍＬ）に懸濁させ室温で攪拌後、酢酸イソプロピル／ヘプタン＝１／４（３０ｍＬ）で３回洗浄することで化合物Ｄ－３を得た。得られた固体を酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）に懸濁させた。得られた懸濁液をメシル酸（９６ｍＬ、１４７４ｍｍｏｌ）と酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）の混液に５５℃にて加え、酢酸イソプロピル（６０ｍＬ）で洗いこみ、同温にて２５分間攪拌した。氷冷下、水（２４０ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（２３９ｍＬ、１９１６ｍｍｏｌ）および酢酸イソプロピル（１５０ｍＬ）を反応液に加え、４０℃にて攪拌した。得られた反応液に酢酸イソプロピル（１５０ｍＬ）を加えた。得られた有機層を水（９０ｍＬ）で３回洗浄し、４５ｇまで濃縮した。酢酸イソプロピル（１２ｇ）、ヘプタン（２１０ｍＬ）を加え、得られた不溶物をろ別し、固体を酢酸イソプロピル／ヘプタン＝１／７（３０ｍｌ）で３回洗浄、乾燥することで、化合物Ｓ－３（２５．３ｇ、１２０ｍｍｏｌ、収率：８１．１％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：８．３４（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｓ，３Ｈ）．
参考例３の工程１と同様にして、化合物Ｂ－２を得た。続いて、化合物Ｂ－２（３０ｇ、１４７ｍｍｏｌ）とＮＭＰ（１２０ｍＬ）を混合し、氷冷下でＢｏｃ－カルボキシレート（５６ｇ、３８３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応液にジイソプロピルエチルアミン（３８．６ｍＬ、２２１ｍｍｏｌ）を加え、９０℃にて２０時間攪拌した。反応液を８０℃にして水（２４０ｍＬ）を加えた後、室温に冷却し、析出した不溶物をろ別した。得られた固体をＮＭＰ／水＝１／２（１５ｍＬ）の混合液で３回洗浄し、さらに水（３０ｍＬ）で３回洗浄した。得られた固体を酢酸イソプロピル（６０ｍＬ）、ヘプタン（２４０ｍＬ）に懸濁させ室温で攪拌後、酢酸イソプロピル／ヘプタン＝１／４（３０ｍＬ）で３回洗浄することで化合物Ｄ－３を得た。得られた固体を酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）に懸濁させた。得られた懸濁液をメシル酸（９６ｍＬ、１４７４ｍｍｏｌ）と酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）の混液に５５℃にて加え、酢酸イソプロピル（６０ｍＬ）で洗いこみ、同温にて２５分間攪拌した。氷冷下、水（２４０ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（２３９ｍＬ、１９１６ｍｍｏｌ）および酢酸イソプロピル（１５０ｍＬ）を反応液に加え、４０℃にて攪拌した。得られた反応液に酢酸イソプロピル（１５０ｍＬ）を加えた。得られた有機層を水（９０ｍＬ）で３回洗浄し、４５ｇまで濃縮した。酢酸イソプロピル（１２ｇ）、ヘプタン（２１０ｍＬ）を加え、得られた不溶物をろ別し、固体を酢酸イソプロピル／ヘプタン＝１／７（３０ｍｌ）で３回洗浄、乾燥することで、化合物Ｓ－３（２５．３ｇ、１２０ｍｍｏｌ、収率：８１．１％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ：８．３４（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｓ，３Ｈ）．
【0142】
参考例６ 化合物１０の合成
【化41】
【0143】
工程１：化合物Ｔ－２、Ｔ－３の合成
氷冷下、化合物Ｔ－１（４０ｇ、１８２ｍｍｏｌ）、濃硫酸（２００ｍＬ、３６７７ｍｍｏｌ）および６９％硝酸（２３．３ｇ、２５５ｍｍｏｌ）を混合し、氷冷から室温にて３時間攪拌し、その後終夜静置した。氷水５２０ｍＬにその混合液を注入し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、分液操作を行った。得られたジクロロメタン溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）で２回洗浄し、濃縮乾固した。得られた固体にメタノール（１２０ｍＬ）を加えたのち、内容量が１１６ｇになるまで濃縮した。得られたスラリーに内容量が３３３ｇになるまでメタノールを加えたのち、水（２４０ｍＬ）を加え、得られた不溶物をろ別し、固体をメタノール／水＝１／１（２００ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－２／Ｔ－３＝１／２．７８の混合物（３０．６７ｇ、収率：５８．５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚとしてＭＳ検出されず、ＲＴ＝２．０４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
氷冷下、化合物Ｔ－１（４０ｇ、１８２ｍｍｏｌ）、濃硫酸（２００ｍＬ、３６７７ｍｍｏｌ）および６９％硝酸（２３．３ｇ、２５５ｍｍｏｌ）を混合し、氷冷から室温にて３時間攪拌し、その後終夜静置した。氷水５２０ｍＬにその混合液を注入し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、分液操作を行った。得られたジクロロメタン溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）で２回洗浄し、濃縮乾固した。得られた固体にメタノール（１２０ｍＬ）を加えたのち、内容量が１１６ｇになるまで濃縮した。得られたスラリーに内容量が３３３ｇになるまでメタノールを加えたのち、水（２４０ｍＬ）を加え、得られた不溶物をろ別し、固体をメタノール／水＝１／１（２００ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－２／Ｔ－３＝１／２．７８の混合物（３０．６７ｇ、収率：５８．５％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚとしてＭＳ検出されず、ＲＴ＝２．０４ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
【0144】
工程２：化合物Ｔ－４の合成
窒素気流下、Ｔ－２／Ｔ－３＝１／２．７８の混合物（２００ｍｇ）に２－プロパノール（１．４ｍＬ）を加え、６０℃まで昇温し、トリエチルアミン（０．２８９ｍＬ、２．０７ｍｍｏｌ）を加え、１．５時間攪拌した。その後、メチルアミン塩酸塩（９４ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を水（０．４ｍＬ）に溶かした溶液を６０℃で反応液に加え、３時間攪拌した。得られた反応液に６０℃で水（８ｍＬ）を加えた後、室温に冷却し３０分間攪拌した。析出した不溶物をろ別し、得られた固体を水（５ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－４（１９４ｍｇ、０．６９９ｍｍｏｌ、収率：１００％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２７７（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝２．４６ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件２
窒素気流下、Ｔ－２／Ｔ－３＝１／２．７８の混合物（２００ｍｇ）に２－プロパノール（１．４ｍＬ）を加え、６０℃まで昇温し、トリエチルアミン（０．２８９ｍＬ、２．０７ｍｍｏｌ）を加え、１．５時間攪拌した。その後、メチルアミン塩酸塩（９４ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）を水（０．４ｍＬ）に溶かした溶液を６０℃で反応液に加え、３時間攪拌した。得られた反応液に６０℃で水（８ｍＬ）を加えた後、室温に冷却し３０分間攪拌した。析出した不溶物をろ別し、得られた固体を水（５ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－４（１９４ｍｇ、０．６９９ｍｍｏｌ、収率：１００％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２７７（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝２．４６ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件２
【0145】
工程３：化合物Ｔ－５の合成
窒素気流下、化合物Ｔ－４（５００ｍｇ，１．８０ｍｍｏｌ）と２－プロパノール（２．５ｍＬ）およびトリブチルホスフィン（８０２ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を混合し、８０℃にて１．５時間撹拌した。室温へ冷却した後、トルエン（３ｍＬ）にて３回溶媒置換を行い、濃縮後の残渣が５ｇになるまで濃縮を行った。その後、反応液を４℃まで氷冷し、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸－酢酸エチル溶液（１．５ｍＬ）を加え２０分間攪拌した。得られた晶析スラリーをろ別し、トルエン（２．５ｍＬ）で洗浄、乾燥することで固体を得た。水（４．３ｍＬ）と炭酸水素ナトリウム（０．１９２ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）の混液に、得られた固体を少しずつ加え、ｐＨを７～８に調整し３０分間攪拌して、晶析スラリーを得た。ろ別し、水（８．６ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－５（３５１ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、収率：７９．４％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２４５（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝１．９０ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
窒素気流下、化合物Ｔ－４（５００ｍｇ，１．８０ｍｍｏｌ）と２－プロパノール（２．５ｍＬ）およびトリブチルホスフィン（８０２ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を混合し、８０℃にて１．５時間撹拌した。室温へ冷却した後、トルエン（３ｍＬ）にて３回溶媒置換を行い、濃縮後の残渣が５ｇになるまで濃縮を行った。その後、反応液を４℃まで氷冷し、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸－酢酸エチル溶液（１．５ｍＬ）を加え２０分間攪拌した。得られた晶析スラリーをろ別し、トルエン（２．５ｍＬ）で洗浄、乾燥することで固体を得た。水（４．３ｍＬ）と炭酸水素ナトリウム（０．１９２ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）の混液に、得られた固体を少しずつ加え、ｐＨを７～８に調整し３０分間攪拌して、晶析スラリーを得た。ろ別し、水（８．６ｍＬ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｔ－５（３５１ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、収率：７９．４％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２４５（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝１．９０ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
【0146】
工程４：化合物１０の合成
窒素気流下、化合物Ｔ－５（２．０１５ｇ、８．２１ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（２０ｍＬ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．１０４ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンイミン（１．６４５ｍL、９．８０ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．１５３ｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）、およびジアセトキシパラジウム（０．０３６ｇ、０．１６０ｍｍｏｌ）を混合し、８０℃にて９時間攪拌して、終夜静置した。得られた懸濁液にエタノール（１０ｍＬ）を加え、５℃に冷却した。懸濁液に３０％硫酸（２０ｍＬ）を少しずつ加え、室温にて終夜攪拌した。得られた反応液に酢酸エチル（４０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、分液操作を実施した。得られた水層を酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄し、有機層を１０％硫酸（１０ｍＬ）で洗浄した。得られた水層を合わせ、氷冷後、４８％水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨが８になるまで中和した。酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、析出した硫酸ナトリウムをろ別し、分液操作を実施した。得られた水層に酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、分液操作を実施した。得られた有機層を合わせ、濃縮し、さらに酢酸エチル（１０ｍＬ）にて溶媒置換を４回繰り返した。ヘプタン（１２ｍＬ）を加え、得られた晶析スラリーを氷冷下１時間攪拌した。ろ別し、酢酸エチル／ヘプタン＝１／３（６ｍＬ）にて洗浄、乾燥することで、化合物１０（１．１８ｇ、６．５ｍｍｏｌ、収率：７９．２％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１８２（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝０．８８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
窒素気流下、化合物Ｔ－５（２．０１５ｇ、８．２１ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（２０ｍＬ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．１０４ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンイミン（１．６４５ｍL、９．８０ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（０．１５３ｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）、およびジアセトキシパラジウム（０．０３６ｇ、０．１６０ｍｍｏｌ）を混合し、８０℃にて９時間攪拌して、終夜静置した。得られた懸濁液にエタノール（１０ｍＬ）を加え、５℃に冷却した。懸濁液に３０％硫酸（２０ｍＬ）を少しずつ加え、室温にて終夜攪拌した。得られた反応液に酢酸エチル（４０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）を加え、分液操作を実施した。得られた水層を酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄し、有機層を１０％硫酸（１０ｍＬ）で洗浄した。得られた水層を合わせ、氷冷後、４８％水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨが８になるまで中和した。酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、析出した硫酸ナトリウムをろ別し、分液操作を実施した。得られた水層に酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、分液操作を実施した。得られた有機層を合わせ、濃縮し、さらに酢酸エチル（１０ｍＬ）にて溶媒置換を４回繰り返した。ヘプタン（１２ｍＬ）を加え、得られた晶析スラリーを氷冷下１時間攪拌した。ろ別し、酢酸エチル／ヘプタン＝１／３（６ｍＬ）にて洗浄、乾燥することで、化合物１０（１．１８ｇ、６．５ｍｍｏｌ、収率：７９．２％）を得た。
ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１８２（Ｍ＋Ｈ）、ＲＴ＝０．８８ｍｉｎ、ＬＣ／ＭＳ測定条件１
【0147】
参考例７ 化合物Ｕ－４の合成
【化42】
【0148】
工程１：化合物Ｕ－２の合成
化合物Ｕ－１（２．０９ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、塩酸塩）とＣＰＭＥ（１２．０４ｇ）および水（７ｇ）を混合し、炭酸カリウム（４．２５ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）を水（７ｇ）に溶解させた溶液を、反応液の温度が２０～３０℃になるようにゆっくり加えた。得られた混合溶液を激しく攪拌し、ＣｂｚＣｌ（３．５０ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）を反応液の温度が２０～３０℃になるようにゆっくり加え、室温にて１時間攪拌した。得られた溶液に分液操作を施し、有機層を水（１４ｇ）で洗浄後、濃縮した。残渣にＣＰＭＥ（１５．０５ｇ）を加え、さらに残渣が１０．５ｇになるまで濃縮した。得られた溶液を４５℃まで昇温し、ヘプタン（９．５８ｇ）を温度を維持したまま３０分間かけて加え、その後さらに３０分間攪拌した。ヘプタン（１９．１５ｇ）を加えた後、得られた晶析スラリーを氷冷下で３０分間攪拌した。ろ別し、得られた固体をＣＰＭＥ－ヘプタン（３ｇ－９．５８ｇ）の混液で洗浄、乾燥することで、化合物Ｕ－２（３．４１ｇ、１７．９３ｍｍｏｌ、収率：８６％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝９．５１ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
化合物Ｕ－１（２．０９ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、塩酸塩）とＣＰＭＥ（１２．０４ｇ）および水（７ｇ）を混合し、炭酸カリウム（４．２５ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）を水（７ｇ）に溶解させた溶液を、反応液の温度が２０～３０℃になるようにゆっくり加えた。得られた混合溶液を激しく攪拌し、ＣｂｚＣｌ（３．５０ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）を反応液の温度が２０～３０℃になるようにゆっくり加え、室温にて１時間攪拌した。得られた溶液に分液操作を施し、有機層を水（１４ｇ）で洗浄後、濃縮した。残渣にＣＰＭＥ（１５．０５ｇ）を加え、さらに残渣が１０．５ｇになるまで濃縮した。得られた溶液を４５℃まで昇温し、ヘプタン（９．５８ｇ）を温度を維持したまま３０分間かけて加え、その後さらに３０分間攪拌した。ヘプタン（１９．１５ｇ）を加えた後、得られた晶析スラリーを氷冷下で３０分間攪拌した。ろ別し、得られた固体をＣＰＭＥ－ヘプタン（３ｇ－９．５８ｇ）の混液で洗浄、乾燥することで、化合物Ｕ－２（３．４１ｇ、１７．９３ｍｍｏｌ、収率：８６％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝９．５１ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
【0149】
工程２：化合物Ｕ－３の合成
化合物Ｕ－２（８．００ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）にメタノール（３１．６６ｇ）を加え、０℃まで冷却後、ナトリウムメトキシドの２８％メタノール溶液（２．４３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、同温度にて４時間攪拌した。得られた溶液に、Ｎ－メチルホルモヒドラジド（３．７４ｇ、５０．５ｍｍｏｌ）をメタノール（１９ｇ）に溶かした溶液を０～５℃で加え、さらに酢酸（２．５３ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）を同温度にて加え、０℃にて２時間攪拌した。得られた溶液を６０℃まで昇温し、同温度にて４時間攪拌した。反応液を３２ｇまで濃縮した後、酢酸エチル（５７．７３ｇ）、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（６７．５３ｇ）を加えた。得られた混合溶液を１０分間攪拌し、分液操作を行った。得られた水層についても酢酸エチル（５７．７３ｇ）で抽出した。合わせた有機層を４０ｇまで濃縮した。ＭＥＫ（６４．４ｇ）を加え、さらに４０ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。得られた濃縮液にメシル酸（４．０４ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）をＭＥＫ（３２．２ｇ）に溶かした溶液を２０～３０℃で加え、室温にて３０分間攪拌した。析出した晶析スラリーをろ別し、得られた固体をＭＥＫ（２５．７６ｇ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｕ－３（１０．１ｇ、２９．５ｍｍｏｌ、メシル酸塩、収率：７０％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝７．９０ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
化合物Ｕ－２（８．００ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）にメタノール（３１．６６ｇ）を加え、０℃まで冷却後、ナトリウムメトキシドの２８％メタノール溶液（２．４３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、同温度にて４時間攪拌した。得られた溶液に、Ｎ－メチルホルモヒドラジド（３．７４ｇ、５０．５ｍｍｏｌ）をメタノール（１９ｇ）に溶かした溶液を０～５℃で加え、さらに酢酸（２．５３ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）を同温度にて加え、０℃にて２時間攪拌した。得られた溶液を６０℃まで昇温し、同温度にて４時間攪拌した。反応液を３２ｇまで濃縮した後、酢酸エチル（５７．７３ｇ）、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（６７．５３ｇ）を加えた。得られた混合溶液を１０分間攪拌し、分液操作を行った。得られた水層についても酢酸エチル（５７．７３ｇ）で抽出した。合わせた有機層を４０ｇまで濃縮した。ＭＥＫ（６４．４ｇ）を加え、さらに４０ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。得られた濃縮液にメシル酸（４．０４ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）をＭＥＫ（３２．２ｇ）に溶かした溶液を２０～３０℃で加え、室温にて３０分間攪拌した。析出した晶析スラリーをろ別し、得られた固体をＭＥＫ（２５．７６ｇ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｕ－３（１０．１ｇ、２９．５ｍｍｏｌ、メシル酸塩、収率：７０％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝７．９０ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件５
【0150】
工程３：化合物Ｃ－１の合成
化合物Ｕ－３（１０ｇ、２９．２ｍｏｌ、メシル酸塩）とメタノール（７９．１５ｇ）を混合し、室温で撹拌した後、窒素置換を行った。パラジウム－炭素（パラジウム１０％）（０．５ｇ、５重量％）を加え、水素置換後、室温にて７時間撹拌した。窒素置換後、セライト（登録商標）ろ過操作にてパラジウム－炭素触媒を除去した。得られたろ液を５０ｇまで濃縮した。ＭＥＫ（４０．２５ｇ）を加え、４０ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。得られた晶析スラリーをろ別し、ＭＥＫ（２５．７６ｇ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｃ－１（５．３ｇ、２５．５ｍｍｏｌ、メシル酸塩、収率：８７％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝２．７５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
化合物Ｕ－３（１０ｇ、２９．２ｍｏｌ、メシル酸塩）とメタノール（７９．１５ｇ）を混合し、室温で撹拌した後、窒素置換を行った。パラジウム－炭素（パラジウム１０％）（０．５ｇ、５重量％）を加え、水素置換後、室温にて７時間撹拌した。窒素置換後、セライト（登録商標）ろ過操作にてパラジウム－炭素触媒を除去した。得られたろ液を５０ｇまで濃縮した。ＭＥＫ（４０．２５ｇ）を加え、４０ｇまで濃縮する操作を２回繰り返した。得られた晶析スラリーをろ別し、ＭＥＫ（２５．７６ｇ）で洗浄、乾燥することで、化合物Ｃ－１（５．３ｇ、２５．５ｍｍｏｌ、メシル酸塩、収率：８７％）を得た。
ＨＰＬＣ（ＵＶ＝２５４ｎｍ）：ＲＴ＝２．７５ｍｉｎ、ＨＰＬＣ測定条件１１
【0151】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の単結晶構造解析の結果を以下に示す。
Ｒ１ （Ｉ＞２．００ｓ（Ｉ））は０．０４７０であり、最終の差フーリエから電子密度の欠如も誤置もないことを確認した。
結晶学的データを表２に示す。
ここで、Ｖｏｌｕｍｅは単位格子体積、Ｚは単位格子中の分子数を意味する。
Ｒ１ （Ｉ＞２．００ｓ（Ｉ））は０．０４７０であり、最終の差フーリエから電子密度の欠如も誤置もないことを確認した。
結晶学的データを表２に示す。
【表2】
ここで、Ｖｏｌｕｍｅは単位格子体積、Ｚは単位格子中の分子数を意味する。
【0152】
また、非水素原子の原子座標を表３～表４に示す。ここで、Ｕ（ｅｑ）とは、等価等方性温度因子を意味する。
【表3】
【表4】
【0153】
次に、水素原子の原子座標を表５に示す。ここで、Ｕ（ｉｓｏ）とは、等方性温度因子を意味する。また、表５の水素原子の番号は、結合している非水素原子の番号に関連して付けた。
【表5】
【0154】
さらに、原子間結合距離（単位：オングストローム）を表６に示す。
【表6】
【0155】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形は、非対称単位中に、式（ＶＩＩ）で示される化合物が１分子存在していた。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の非対称単位中の構造を、図１１に示す。
なお、表３～表４および表６における非水素原子の番号は、それぞれ図１１に記載された番号に対応している。
なお、表３～表４および表６における非水素原子の番号は、それぞれ図１１に記載された番号に対応している。
【0156】
表６に記載の通り、Ｎ１０－Ｃ９の結合距離は約１．２６Åを示し、Ｎ１６－Ｃ９の結合距離は約１．３７Åを示した。
Ｎ１０－Ｃ９の結合距離（約１．２６Å）は、Ｎ１６－Ｃ９の結合距離（約１．３７Å）よりも短いため、フマル酸共結晶Ｉ形の式（ＶＩＩ）で示される化合物は、イミノ構造：
であると同定した。
Ｎ１０－Ｃ９の結合距離（約１．２６Å）は、Ｎ１６－Ｃ９の結合距離（約１．３７Å）よりも短いため、フマル酸共結晶Ｉ形の式（ＶＩＩ）で示される化合物は、イミノ構造：
【化43】
であると同定した。
【0157】
すなわち、同一の化合物でも、結晶化条件等により、イミノ構造を取る場合とアミノ構造を取る場合が存在し、塩や複合体を形成している場合においても、その塩や複合体のカウンター分子の種類により、イミノ構造を取る場合とアミノ構造を取る場合が存在し、同一カウンター分子であっても、結晶化条件等により、イミノ構造を取る場合とアミノ構造を取る場合が存在する。また、イミノ構造を取る化合物、その塩またはそれらの複合体と、アミノ構造を取る化合物、その塩またはそれらの複合体の混合物であることもある。
【0158】
実施例１ｂの工程５－２と同様の製造方法により得られた式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形の粉末Ｘ線回折の結果を示す。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７.７±０．２°、９．５±０．２°、１０．０±０．２°、１０．９±０．２°、１３．８±０．２°、１４．６±０．２°、１８．６±０．２°、２２．６±０．２°、２３．４±０．２°および２４．６±０．２°にピークが認められた。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを図９に示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
図９の粉末Ｘ線回折パターンにおけるピークテーブルを図１０に示す。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７.７±０．２°、９．５±０．２°、１０．０±０．２°、１０．９±０．２°、１３．８±０．２°、１４．６±０．２°、１８．６±０．２°、２２．６±０．２°、２３．４±０．２°および２４．６±０．２°にピークが認められた。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形（Ｆｏｒｍ Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンを図９に示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
図９の粉末Ｘ線回折パターンにおけるピークテーブルを図１０に示す。
【0159】
また、式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の粉末Ｘ線回折の結果を示す。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７．４±０．２°、８．１±０．２°、１３．７±０．２°、１５．１±０．２°、１６．３±０．２°、１９．３±０．２°、２１．４±０．２°、２２．６±０．２°、２４．６±０．２°、２６．６±０．２°、２７．８±０．２°および２９．５±０．２°にピークが認められた。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の粉末Ｘ線回折パターンを図２０に示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物については、分子構造（アミノ体／イミノ体）は同定していない。
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、回折角度（２θ）：７．４±０．２°、８．１±０．２°、１３．７±０．２°、１５．１±０．２°、１６．３±０．２°、１９．３±０．２°、２１．４±０．２°、２２．６±０．２°、２４．６±０．２°、２６．６±０．２°、２７．８±０．２°および２９．５±０．２°にピークが認められた。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物の粉末Ｘ線回折パターンを図２０に示す。横軸は２θ（°）で、縦軸は強度（Ｃｏｕｎｔ）を表す。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のトルエン和物については、分子構造（アミノ体／イミノ体）は同定していない。
【0160】
以下に、本発明化合物の生物試験例を記載する。
本発明に係る式（ＶＩＩ）で示される化合物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害作用を有し、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを阻害するものであればよい。
具体的には、以下に記載する評価方法において、ＩＣ５０は５０μＭ以下が好ましく、より好ましくは、１μＭ以下、さらにより好ましくは１００ｎＭ以下である。
本発明に係る式（ＶＩＩ）で示される化合物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害作用を有し、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを阻害するものであればよい。
具体的には、以下に記載する評価方法において、ＩＣ５０は５０μＭ以下が好ましく、より好ましくは、１μＭ以下、さらにより好ましくは１００ｎＭ以下である。
【0161】
試験例１：ｈｕｍａｎ ＴＭＰＲＳＳ２発現Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞（Ｖｅｒｏ Ｅ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞）を用いたＣｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ（ＣＰＥ）抑制効果確認試験
＜操作手順＞
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、２～５倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の希釈、分注
ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞（ＪＣＲＢ１８１９、５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（１００ＴＣＩＤ５０／ｗｅｌｌ）を培地（ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、ペニシリン－ストレプトマイシン）で混合し、被験試料が入ったウェルに分注した後、ＣＯ２インキュベーターで３日間培養する。
・ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０の分注および発光シグナルの測定
３日間培養したプレートを室温に戻した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０を各ウェルに分注し、プレートミキサーで混和する。一定時間置いた後、プレートリーダーで発光シグナル（Ｌｕｍ）を測定する。
＜操作手順＞
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、２～５倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の希釈、分注
ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞（ＪＣＲＢ１８１９、５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（１００ＴＣＩＤ５０／ｗｅｌｌ）を培地（ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、ペニシリン－ストレプトマイシン）で混合し、被験試料が入ったウェルに分注した後、ＣＯ２インキュベーターで３日間培養する。
・ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０の分注および発光シグナルの測定
３日間培養したプレートを室温に戻した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０を各ウェルに分注し、プレートミキサーで混和する。一定時間置いた後、プレートリーダーで発光シグナル（Ｌｕｍ）を測定する。
【0162】
＜各測定項目値の算出＞
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞死阻害濃度（ＥＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｅｆｆｉｃａｃｙとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＥＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Efficacy = {(Sample - virus control) / (cell control - virus control)} * 100%
cell control： the average of Lum of cell control wells
virus control： the average of Lum of virus control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞死阻害濃度（ＥＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｅｆｆｉｃａｃｙとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＥＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Efficacy = {(Sample - virus control) / (cell control - virus control)} * 100%
cell control： the average of Lum of cell control wells
virus control： the average of Lum of virus control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
【0163】
本発明化合物を本質的に上記のとおり試験した。結果を以下に示す。
化合物Ｉ－００５：０．３２８μＭ
化合物Ｉ－００５：０．３２８μＭ
【0164】
試験例２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性試験
＜材料＞
・市販のＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
・市販の基質ペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ（Ｅｄａｎｓ）－ＮＨ２（配列番号：１）
・Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎ（配列番号：２）
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎは、文献（Atherton, E.; Sheppard, R. C.、“In Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach”、IRL Press at Oxford University Pres、1989.およびBioorg. Med. Chem.、５巻、９号、１９９７年、１８８３－１８９１頁、等）を参考に合成できる。以下に一例を示す。
Ｒｉｎｋアミド樹脂を用いて、Ｆｍｏｃ固相合成によって、Ｈ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｕ（ｒｅｓｉｎ）－ＯαＯｔＢｕ（Ｌｙｓ側鎖はＢｏｃ保護、Ｔｈｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、Ｓｅｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、ＧｌｕのＣ末端ＯＨはｔｅｒｔ－ブチル基で保護されており、Ｇｌｕ側鎖のカルボン酸を樹脂に縮合）を合成する。Ｎ末端Ｄａｂｃｙｌ基の修飾は４－ジメチルアミノアゾベンゼン－４’－カルボン酸（Ｄａｂｃｙｌ－ＯＨ）をＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いて樹脂上で縮合する。最終脱保護、および樹脂からの切り出しはＴＦＡ／ＥＤＴ＝９５：５で処理することで行う。その後、逆相ＨＰＬＣによって精製する。
・ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｃ４ ｔｙｐｅＡ
＜操作手順＞
・アッセイバッファーの調製
本試験では、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１００ｍＭ 塩化ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。ＩＣ５０値が１０ｎＭ以下の化合物については、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、２～５倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・酵素と基質の添加、酵素反応
準備した化合物プレートに、８μＭの基質、および６または０．６ｎＭの酵素溶液を添加し、室温で３～５時間インキュベーションを行う。その後、反応停止液（０．０６７μＭ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ、０．１％ ギ酸、１０または２５％ アセトニトリル）を加え酵素反応を停止させる。
・反応産物の測定
反応完了したプレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６０および質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、６５５０ ｉＦｕｎｎｅｌ Ｑ－ＴＯＦ）、またはＲａｐｉｄ Ｆｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６５および質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、 ６４９５Ｃ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）を用いて測定する。測定時の移動相としてＡ溶液（７５％ イソプロパノール、１５％ アセトニトリル、５ｍＭ ギ酸アンモニウム）とＢ溶液（０．０１％ トリフルオロ酢酸、０．０９％ ギ酸）を用いる。
質量分析器によって検出された反応産物は、ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒまたは同等の解析が可能なプログラムを用いて算出しＰｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値とする。また、同時に検出されたＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄも算出しＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値とする。
＜各測定項目値の算出＞
・Ｐ／ＩＳの算出
前項目で得られたａｒｅａ値を下記の式によって計算し、Ｐ／ＩＳを算出する。
Ｐ／ＩＳ＝ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値／ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼ阻害濃度（ＩＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＩＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Inhibition = {1-(Sample - Control(-)) / Control(+)-Control(-))} * 100
Control(-)：the average of P/IS of enzyme inhibited condition wells
Control(+)：the average of P/IS of DMSO control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
＜材料＞
・市販のＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
・市販の基質ペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ（Ｅｄａｎｓ）－ＮＨ２（配列番号：１）
・Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎ（配列番号：２）
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎは、文献（Atherton, E.; Sheppard, R. C.、“In Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach”、IRL Press at Oxford University Pres、1989.およびBioorg. Med. Chem.、５巻、９号、１９９７年、１８８３－１８９１頁、等）を参考に合成できる。以下に一例を示す。
Ｒｉｎｋアミド樹脂を用いて、Ｆｍｏｃ固相合成によって、Ｈ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｕ（ｒｅｓｉｎ）－ＯαＯｔＢｕ（Ｌｙｓ側鎖はＢｏｃ保護、Ｔｈｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、Ｓｅｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、ＧｌｕのＣ末端ＯＨはｔｅｒｔ－ブチル基で保護されており、Ｇｌｕ側鎖のカルボン酸を樹脂に縮合）を合成する。Ｎ末端Ｄａｂｃｙｌ基の修飾は４－ジメチルアミノアゾベンゼン－４’－カルボン酸（Ｄａｂｃｙｌ－ＯＨ）をＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いて樹脂上で縮合する。最終脱保護、および樹脂からの切り出しはＴＦＡ／ＥＤＴ＝９５：５で処理することで行う。その後、逆相ＨＰＬＣによって精製する。
・ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｃ４ ｔｙｐｅＡ
＜操作手順＞
・アッセイバッファーの調製
本試験では、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１００ｍＭ 塩化ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。ＩＣ５０値が１０ｎＭ以下の化合物については、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、２～５倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・酵素と基質の添加、酵素反応
準備した化合物プレートに、８μＭの基質、および６または０．６ｎＭの酵素溶液を添加し、室温で３～５時間インキュベーションを行う。その後、反応停止液（０．０６７μＭ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ、０．１％ ギ酸、１０または２５％ アセトニトリル）を加え酵素反応を停止させる。
・反応産物の測定
反応完了したプレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６０および質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、６５５０ ｉＦｕｎｎｅｌ Ｑ－ＴＯＦ）、またはＲａｐｉｄ Ｆｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６５および質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、 ６４９５Ｃ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）を用いて測定する。測定時の移動相としてＡ溶液（７５％ イソプロパノール、１５％ アセトニトリル、５ｍＭ ギ酸アンモニウム）とＢ溶液（０．０１％ トリフルオロ酢酸、０．０９％ ギ酸）を用いる。
質量分析器によって検出された反応産物は、ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒまたは同等の解析が可能なプログラムを用いて算出しＰｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値とする。また、同時に検出されたＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄも算出しＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値とする。
＜各測定項目値の算出＞
・Ｐ／ＩＳの算出
前項目で得られたａｒｅａ値を下記の式によって計算し、Ｐ／ＩＳを算出する。
Ｐ／ＩＳ＝ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値／ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼ阻害濃度（ＩＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＩＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Inhibition = {1-(Sample - Control(-)) / Control(+)-Control(-))} * 100
Control(-)：the average of P/IS of enzyme inhibited condition wells
Control(+)：the average of P/IS of DMSO control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
【0165】
本発明化合物を本質的に上記のとおり試験した。結果を以下に示す。
化合物Ｉ－００５：０．０１０μＭ
化合物Ｉ－００５：０．０１０μＭ
【0166】
試験例１－２：ｈｕｍａｎ ＴＭＰＲＳＳ２発現Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞（Ｖｅｒｏ Ｅ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞）を用いたＣｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ（ＣＰＥ）抑制効果確認試験
＜操作手順＞
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、３倍段階希釈系列を作製後、９６ウェルプレートに分注する。
・細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の希釈、分注
ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞（ＪＣＲＢ１８１９、１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ／ＷＫ－５２１／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＫ００２／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００１／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００２／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０１／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０３／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ８－６１２／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ１１－９２７－Ｐ１／２０２１（３０－１０００ＴＣＩＤ５０／ｗｅｌｌ）を培地（ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、ペニシリン－ストレプトマイシン）で混合し、被験試料が入ったウェルに分注した後、ＣＯ２インキュベーターで３日間培養する。
・ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０の分注および発光シグナルの測定
３日間培養したプレートを室温に戻した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０を各ウェルに分注し、プレートミキサーで混和する。一定時間置いた後、プレートリーダーで発光シグナル（Ｌｕｍ）を測定する。
＜操作手順＞
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、３倍段階希釈系列を作製後、９６ウェルプレートに分注する。
・細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の希釈、分注
ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞（ＪＣＲＢ１８１９、１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ／ＷＫ－５２１／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＫ００２／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００１／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＨＮ００２／２０２０、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０１／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０３／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ８－６１２／２０２１、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ１１－９２７－Ｐ１／２０２１（３０－１０００ＴＣＩＤ５０／ｗｅｌｌ）を培地（ＭＥＭ、２％ＦＢＳ、ペニシリン－ストレプトマイシン）で混合し、被験試料が入ったウェルに分注した後、ＣＯ２インキュベーターで３日間培養する。
・ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０の分注および発光シグナルの測定
３日間培養したプレートを室温に戻した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）２．０を各ウェルに分注し、プレートミキサーで混和する。一定時間置いた後、プレートリーダーで発光シグナル（Ｌｕｍ）を測定する。
【0167】
＜各測定項目値の算出＞
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞死阻害濃度（ＥＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｅｆｆｉｃａｃｙとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＥＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Efficacy = {(Sample - virus control) / (cell control - virus control)} * 100%
cell control： the average of Lum of cell control wells
virus control： the average of Lum of virus control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞死阻害濃度（ＥＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｅｆｆｉｃａｃｙとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＥＣ５０として算出する。
y = min + (max - min)/{1 + (X50/x) ^Hill}
%Efficacy = {(Sample - virus control) / (cell control - virus control)} * 100%
cell control： the average of Lum of cell control wells
virus control： the average of Lum of virus control wells
min：y軸下限値、max：y軸上限値、X50：変曲点のx座標、Hill：minとmaxの中間点でのカーブの傾き
【0168】
本発明化合物を本質的に上記のとおり試験した。結果を以下に示す。
（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ／ＷＫ－５２１／２０２０）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形：０．３７μＭ
（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ／ＷＫ－５２１／２０２０）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形：０．３７μＭ
【0169】
試験例２－２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性試験
＜材料＞
・市販のＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
・市販の基質ペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ（Ｅｄａｎｓ）－ＮＨ２（配列番号：１）
・Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎ（配列番号：２）
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎは、文献（Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ．； Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ．、“Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓ、１９８９．およびＢｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、５巻、９号、１９９７年、１８８３－１８９１頁、等）を参考に合成できる。以下に一例を示す。
Ｒｉｎｋアミド樹脂を用いて、Ｆｍｏｃ固相合成によって、Ｈ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｕ（ｒｅｓｉｎ）－ＯαＯｔＢｕ（Ｌｙｓ側鎖はＢｏｃ保護、Ｔｈｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、Ｓｅｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、ＧｌｕのＣ末端ＯＨはｔｅｒｔ－ブチル基で保護されており、Ｇｌｕ側鎖のカルボン酸を樹脂に縮合）を合成する。Ｎ末端Ｄａｂｃｙｌ基の修飾は４－ジメチルアミノアゾベンゼン－４’－カルボン酸（Ｄａｂｃｙｌ－ＯＨ）をＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いて樹脂上で縮合する。最終脱保護、および樹脂からの切り出しはＴＦＡ／ＥＤＴ＝９５：５で処理することで行う。その後、逆相ＨＰＬＣによって精製する。
・ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｃ４ ｔｙｐｅＡ
＜操作手順＞
・アッセイバッファーの調製
本試験では、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、３倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・酵素と基質の添加、酵素反応
準備した化合物プレートに、８μＭの基質、及び６ｎＭの酵素溶液を添加し、室温で３時間インキュベーションを行う。その後、反応停止液（０．０７２μＭ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ、０．１％ ギ酸、１０％ アセトニトリル）を加え酵素反応を停止させる。
・反応産物の測定
反応完了したプレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６０及び質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、６５５０ ｉＦｕｎｎｅｌ Ｑ－ＴＯＦ）を用いて測定する。測定時の移動相としてＡ溶液（７５％ イソプロパノール、１５％ アセトニトリル、５ｍＭ ギ酸アンモニウム）とＢ溶液（０．０１％ トリフルオロ酢酸、０．０９％ ギ酸）を用いる。
質量分析器によって検出された反応産物は、ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒを用いて算出しＰｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値とする。また、同時に検出されたＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄも算出しＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値とする。
＜各測定項目値の算出＞
・Ｐ／ＩＳの算出
前項目で得られたａｒｅａ値を下記の式によって計算し、Ｐ／ＩＳを算出する。
Ｐ／ＩＳ＝ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値／ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼ阻害濃度（ＩＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＩＣ５０として算出する。
ｙ ＝ ｍｉｎ ＋ （ｍａｘ － ｍｉｎ）／｛１ ＋ （Ｘ５０／ｘ） ＾Ｈｉｌｌ｝
％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ＝ ｛１－（Ｓａｍｐｌｅ － Ｃｏｎｔｒｏｌ（－）） ／ Ｃｏｎｔｒｏｌ（＋）－Ｃｏｎｔｒｏｌ（－））｝ ＊ １００
Ｃｏｎｔｒｏｌ（－）：ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ Ｐ／ＩＳ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｔｈｅ ｗｅｌｌｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌ（＋）：ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ Ｐ／ＩＳ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｔｈｅ ｗｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｅｓｔ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
ｍｉｎ：ｙ軸下限値、ｍａｘ：ｙ軸上限値、Ｘ５０：変曲点のｘ座標、Ｈｉｌｌ：ｍｉｎとｍａｘの中間点でのカーブの傾き
＜材料＞
・市販のＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
・市販の基質ペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｍｅｔ－Ｇｌｕ（Ｅｄａｎｓ）－ＮＨ２（配列番号：１）
・Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄペプチド
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎ（配列番号：２）
Ｄａｂｃｙｌ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｎは、文献（Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ．； Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ．、“Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓ、１９８９．およびＢｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、５巻、９号、１９９７年、１８８３－１８９１頁、等）を参考に合成できる。以下に一例を示す。
Ｒｉｎｋアミド樹脂を用いて、Ｆｍｏｃ固相合成によって、Ｈ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ（１３Ｃ６，１５Ｎ）－Ｇｌｕ（ｒｅｓｉｎ）－ＯαＯｔＢｕ（Ｌｙｓ側鎖はＢｏｃ保護、Ｔｈｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、Ｓｅｒ側鎖はｔｅｒｔ－ブチル基で保護、ＧｌｕのＣ末端ＯＨはｔｅｒｔ－ブチル基で保護されており、Ｇｌｕ側鎖のカルボン酸を樹脂に縮合）を合成する。Ｎ末端Ｄａｂｃｙｌ基の修飾は４－ジメチルアミノアゾベンゼン－４’－カルボン酸（Ｄａｂｃｙｌ－ＯＨ）をＥＤＣ／ＨＯＢＴを用いて樹脂上で縮合する。最終脱保護、および樹脂からの切り出しはＴＦＡ／ＥＤＴ＝９５：５で処理することで行う。その後、逆相ＨＰＬＣによって精製する。
・ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｃ４ ｔｙｐｅＡ
＜操作手順＞
・アッセイバッファーの調製
本試験では、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ ＢＳＡからなるアッセイバッファーを使用する。
・被験試料の希釈、分注
予め被験試料をＤＭＳＯで適度な濃度に希釈し、３倍段階希釈系列を作製後、３８４ウェルプレートに分注する。
・酵素と基質の添加、酵素反応
準備した化合物プレートに、８μＭの基質、及び６ｎＭの酵素溶液を添加し、室温で３時間インキュベーションを行う。その後、反応停止液（０．０７２μＭ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ、０．１％ ギ酸、１０％ アセトニトリル）を加え酵素反応を停止させる。
・反応産物の測定
反応完了したプレートはＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ ３６０及び質量分析器（Ａｇｉｌｅｎｔ、６５５０ ｉＦｕｎｎｅｌ Ｑ－ＴＯＦ）を用いて測定する。測定時の移動相としてＡ溶液（７５％ イソプロパノール、１５％ アセトニトリル、５ｍＭ ギ酸アンモニウム）とＢ溶液（０．０１％ トリフルオロ酢酸、０．０９％ ギ酸）を用いる。
質量分析器によって検出された反応産物は、ＲａｐｉｄＦｉｒｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒを用いて算出しＰｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値とする。また、同時に検出されたＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄも算出しＩｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値とする。
＜各測定項目値の算出＞
・Ｐ／ＩＳの算出
前項目で得られたａｒｅａ値を下記の式によって計算し、Ｐ／ＩＳを算出する。
Ｐ／ＩＳ＝ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｒｅａ値／ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ａｒｅａ値
・５０％ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬプロテアーゼ阻害濃度（ＩＣ５０）算出
ｘを化合物濃度の対数値、ｙを％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎとしたとき、以下のＬｏｇｉｓｔｉｃ回帰式で阻害曲線を近似し、ｙ＝５０（％）を代入したときのｘの値をＩＣ５０として算出する。
ｙ ＝ ｍｉｎ ＋ （ｍａｘ － ｍｉｎ）／｛１ ＋ （Ｘ５０／ｘ） ＾Ｈｉｌｌ｝
％Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ＝ ｛１－（Ｓａｍｐｌｅ － Ｃｏｎｔｒｏｌ（－）） ／ Ｃｏｎｔｒｏｌ（＋）－Ｃｏｎｔｒｏｌ（－））｝ ＊ １００
Ｃｏｎｔｒｏｌ（－）：ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ Ｐ／ＩＳ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｔｈｅ ｗｅｌｌｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌ（＋）：ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ Ｐ／ＩＳ ｒａｔｉｏ ｉｎ ｔｈｅ ｗｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬ ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｅｓｔ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
ｍｉｎ：ｙ軸下限値、ｍａｘ：ｙ軸上限値、Ｘ５０：変曲点のｘ座標、Ｈｉｌｌ：ｍｉｎとｍａｘの中間点でのカーブの傾き
【0170】
本発明化合物を本質的に上記のとおり試験した。結果を以下に示す。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形：０．０１３２μＭ
（実施例５）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形：０．０１３２μＭ
（実施例５）
【0171】
式（ＶＩＩ）で示される化合物の量が約１．８（ｗ／ｖ）％となるように、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を量り、０．３（ｗ／ｖ）％の高分子を溶解した水溶液に添加して分散させた。
添加剤としては、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（Ｅｖｏｎｉｋ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、ヒプロメロース（信越化学工業社製）、ポリビニルアルコール（Ｍｅｒｃｋ社製）、ポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製）、ポリビニルアルコール・メチルメタクリレート・アクリル酸共重合体（日新化成社製）を使用した。
添加剤としては、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ（Ｅｖｏｎｉｋ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、ヒプロメロース（信越化学工業社製）、ポリビニルアルコール（Ｍｅｒｃｋ社製）、ポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ社製）、ポリビニルアルコール・メチルメタクリレート・アクリル酸共重合体（日新化成社製）を使用した。
【表7】
【0172】
試験例３：溶解度評価
実施例５の各分散液１ｍＬを、空腹時模擬人工腸液（ＦａＳＳＩＦ）１４ｍＬに加え、恒温スターラーにて３７℃、４００ｒｐｍで１時間攪拌した。１時間攪拌後、検体を０．４５μｍフィルターでろ過し、ろ液中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の濃度を液体クロマトグラフィー法により測定した。
実施例５の各分散液１ｍＬを、空腹時模擬人工腸液（ＦａＳＳＩＦ）１４ｍＬに加え、恒温スターラーにて３７℃、４００ｒｐｍで１時間攪拌した。１時間攪拌後、検体を０．４５μｍフィルターでろ過し、ろ液中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の濃度を液体クロマトグラフィー法により測定した。
【0173】
（測定法）
・検出器：紫外吸光光度計 （測定波長２２２ｎｍ）
・カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．１Ｍギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相の送液：移動相Ａおよび移動相Ｂの混合比を７：３または以下の表のように変えて濃度勾配制御した。
・流量：約０．６ｍＬ／ｍｉｎ
・注入量：１μＬまたは１．５μＬ
・サンプルクーラー温度：約１０℃
・オートインジェクター洗浄液：水／メタノール混液 (７：３)
・面積測定範囲：試料溶液注入後４分間または７．５分間
・式（ＶＩＩ）で示される化合物の量の計算式
式（ＶＩＩ）で示される化合物の量（％）＝ＡＴＩＩ／ΣＡＴ×１００
ＡＴＩＩ：試料溶液の式（ＶＩＩ）で示される化合物のピーク面積
ΣＡＴ：試料溶液のピーク面積の合計 (ブランクおよびシステムピークは除く)
・検出器：紫外吸光光度計 （測定波長２２２ｎｍ）
・カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ ２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．１Ｍギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相の送液：移動相Ａおよび移動相Ｂの混合比を７：３または以下の表のように変えて濃度勾配制御した。
【表8】
・流量：約０．６ｍＬ／ｍｉｎ
・注入量：１μＬまたは１．５μＬ
・サンプルクーラー温度：約１０℃
・オートインジェクター洗浄液：水／メタノール混液 (７：３)
・面積測定範囲：試料溶液注入後４分間または７．５分間
・式（ＶＩＩ）で示される化合物の量の計算式
式（ＶＩＩ）で示される化合物の量（％）＝ＡＴＩＩ／ΣＡＴ×１００
ＡＴＩＩ：試料溶液の式（ＶＩＩ）で示される化合物のピーク面積
ΣＡＴ：試料溶液のピーク面積の合計 (ブランクおよびシステムピークは除く)
【0174】
（結果）
式（ＶＩＩ）で示される化合物の溶解度試験結果を以下の表に示す。その結果、式（ＶＩＩ）で示される化合物は、高分子を添加することで溶解度が大幅に向上した。
本実験で用いた、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶の粒子径は、Ｄ５０が３．４４μｍ、Ｄ９０が８．３３μｍであった。
（実施例６）
式（ＶＩＩ）で示される化合物の溶解度試験結果を以下の表に示す。その結果、式（ＶＩＩ）で示される化合物は、高分子を添加することで溶解度が大幅に向上した。
【表9】
本実験で用いた、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶の粒子径は、Ｄ５０が３．４４μｍ、Ｄ９０が８．３３μｍであった。
（実施例６）
【0175】
（錠剤の製造方法）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造した。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒した。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で直径９．０ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得た。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造した。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒した。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で直径９．０ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得た。
【表10】
【0176】
試験例４：錠剤の溶出試験
（溶出試験法）
溶出試験は、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によっておこなった。
（溶出試験法）
溶出試験は、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によっておこなった。
【0177】
【0178】
試験例４に用いた実施例６Ａおよび６Ｂの製剤に用いた、有効成分（式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）の粒度分布を図２２に示す。１０％粒子径が０．６９μｍ、５０％粒子径が４．００μｍ、９０％粒子径が１０．８０μｍであった。
試験例４に用いた、実施例６Ｃおよび６Ｄの製剤に用いた有効成分（式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）の粒度分布を図２３に示す。１０％粒子径が０．６７μｍ、５０％粒子径が３．６３μｍ、９０％粒子径が１０．９８μｍであった。
粒度分布の測定条件を以下に示す。
メーカー：シンパテック
装置：レーザー回折式HELOS&RODOS粒度分布測定装置
レンジ：R2
分散圧：3bar
トリガー条件：ストップ2s測定濃度≦1%か10s実時間
試験例４に用いた、実施例６Ｃおよび６Ｄの製剤に用いた有効成分（式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）の粒度分布を図２３に示す。１０％粒子径が０．６７μｍ、５０％粒子径が３．６３μｍ、９０％粒子径が１０．９８μｍであった。
粒度分布の測定条件を以下に示す。
メーカー：シンパテック
装置：レーザー回折式HELOS&RODOS粒度分布測定装置
レンジ：R2
分散圧：3bar
トリガー条件：ストップ2s測定濃度≦1%か10s実時間
【0179】
試験例５：経時安定性試験における製剤中の安定化剤の影響
試験例４で用いたものと同一ロットの実施例６Ａの製剤の経時安定性を確認した結果を示す。
a．安定性試験法
実施例６Ａの製剤を、１）褐色ガラス瓶閉栓状態で６０℃、二週間、または、２）褐色ガラス瓶開栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月保管した。その後、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
（試料液調製方法）
(測定方法）
以下の方法、条件によって、液体クロマトグラフで、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
・検出器：紫外吸光光度計 (測定波長：２２２ｎｍ)
・カラム：Ｃ１８カラム
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．０１ ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比は、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、３２分間で測定を行った。
・流量：０．６ｍＬ／分
類縁物質量は、ＨＰＬＣチャートのクロマトグラムのピーク面積の合計を１００％とし、その量に対する割合（％）を算出した。
b．結果
安定性試験の結果を以下の表に示す。実施例６Ａの製剤の総類縁物質量は、１）褐色ガラス瓶閉栓状態で６０℃、二週間、および、２）褐色ガラス瓶開栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月保管後も増加しておらず、安定であった。
以上より、本発明製剤は、湿度および温度に対して安定性が高い。
（実施例７）
試験例４で用いたものと同一ロットの実施例６Ａの製剤の経時安定性を確認した結果を示す。
a．安定性試験法
実施例６Ａの製剤を、１）褐色ガラス瓶閉栓状態で６０℃、二週間、または、２）褐色ガラス瓶開栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月保管した。その後、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
（試料液調製方法）
(測定方法）
以下の方法、条件によって、液体クロマトグラフで、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
・検出器：紫外吸光光度計 (測定波長：２２２ｎｍ)
・カラム：Ｃ１８カラム
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．０１ ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比は、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、３２分間で測定を行った。
・流量：０．６ｍＬ／分
類縁物質量は、ＨＰＬＣチャートのクロマトグラムのピーク面積の合計を１００％とし、その量に対する割合（％）を算出した。
b．結果
安定性試験の結果を以下の表に示す。実施例６Ａの製剤の総類縁物質量は、１）褐色ガラス瓶閉栓状態で６０℃、二週間、および、２）褐色ガラス瓶開栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月保管後も増加しておらず、安定であった。
【表11】
以上より、本発明製剤は、湿度および温度に対して安定性が高い。
（実施例７）
【0180】
試験例６ 臨床試験（Ph2a）
軽症／中等症及び無症候／軽度症状のみ有するSARS-CoV-2感染者へ被検薬（有効成分：式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）を反復経口投与したときの有効性及び安全性の評価を、プラセボを比較対象とした無作為割り付けによる二重盲検比較試験により実施した。
Phase 2a Partの主要評価項目は、軽症／中等症及び無症候のSARS-CoV-2感染者共通で、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量であり、被検薬の抗ウイルス効果を確認した。
軽症／中等症及び無症候／軽度症状のみ有するSARS-CoV-2感染者へ被検薬（有効成分：式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶）を反復経口投与したときの有効性及び安全性の評価を、プラセボを比較対象とした無作為割り付けによる二重盲検比較試験により実施した。
Phase 2a Partの主要評価項目は、軽症／中等症及び無症候のSARS-CoV-2感染者共通で、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量であり、被検薬の抗ウイルス効果を確認した。
【0181】
軽症／中等症のSARS-CoV-2感染者は下記の基準全てに該当する患者を選択した。
（ａ）12歳以上70歳未満の男性又は女性患者。
（ｂ）登録前120時間以内にSARS-CoV-2陽性と診断された者。
（ｃ）COVID-19発症から登録までの時間が120時間以内の者。
（ｄ）登録時にCOVID-19による以下の症状（COVID-19の12症状）のうちいずれかで、中等度（COVID-19症状スコア：2）以上の症状を1項目以上（COVID-19発症前から存在した症状を除く）有する者。
全身症状：疲労感、筋肉又は体の痛み、頭痛、悪寒、熱っぽさ
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり、喉の痛み、咳、息切れ
消化器症状：吐き気、嘔吐、下痢
（ａ）12歳以上70歳未満の男性又は女性患者。
（ｂ）登録前120時間以内にSARS-CoV-2陽性と診断された者。
（ｃ）COVID-19発症から登録までの時間が120時間以内の者。
（ｄ）登録時にCOVID-19による以下の症状（COVID-19の12症状）のうちいずれかで、中等度（COVID-19症状スコア：2）以上の症状を1項目以上（COVID-19発症前から存在した症状を除く）有する者。
全身症状：疲労感、筋肉又は体の痛み、頭痛、悪寒、熱っぽさ
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり、喉の痛み、咳、息切れ
消化器症状：吐き気、嘔吐、下痢
【0182】
無症候のSARS-CoV-2感染者は下記の基準全てに該当する患者を選択した。
（ａ）12歳以上70歳未満の男性又は女性患者。
（ｂ）登録前120時間以内にSARS-CoV-2陽性と診断された者。
（ｃ）無症候：登録前2週間以内に、以下のCOVID-19症状（SARS-CoV-2感染前から存在した症状を除く）が認められていない者。
全身症状：疲労感、筋肉又は体の痛み、頭痛、悪寒、熱っぽさ、味覚異常、嗅覚異常
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり、喉の痛み、咳、息切れ
消化器症状：吐き気、嘔吐、下痢
無症候／軽度症状のみ：無作為割付前2週間以内に，COVID-19による以下の症状 (COVID-19の12症状) のいずれにおいても，中等度 (COVID-19症状スコア：2) 以上の症状を有さない者 (COVID-19発症前から存在した症状を除く)．
全身症状：けん怠感 (疲労感)，筋肉痛又は体の痛み，頭痛，悪寒/発汗，熱っぽさ又は発熱
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり，喉の痛み，咳，息切れ (呼吸困難)
消化器症状：吐き気，嘔吐，下痢
（ａ）12歳以上70歳未満の男性又は女性患者。
（ｂ）登録前120時間以内にSARS-CoV-2陽性と診断された者。
（ｃ）無症候：登録前2週間以内に、以下のCOVID-19症状（SARS-CoV-2感染前から存在した症状を除く）が認められていない者。
全身症状：疲労感、筋肉又は体の痛み、頭痛、悪寒、熱っぽさ、味覚異常、嗅覚異常
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり、喉の痛み、咳、息切れ
消化器症状：吐き気、嘔吐、下痢
無症候／軽度症状のみ：無作為割付前2週間以内に，COVID-19による以下の症状 (COVID-19の12症状) のいずれにおいても，中等度 (COVID-19症状スコア：2) 以上の症状を有さない者 (COVID-19発症前から存在した症状を除く)．
全身症状：けん怠感 (疲労感)，筋肉痛又は体の痛み，頭痛，悪寒/発汗，熱っぽさ又は発熱
呼吸器症状：鼻水又は鼻づまり，喉の痛み，咳，息切れ (呼吸困難)
消化器症状：吐き気，嘔吐，下痢
【0183】
治験薬の投与方法
（ｉ）被験薬
250 mg錠：錠剤中に式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含み、式（ＶＩＩ）で示される化合物として250 mgを含む。本250ｍｇ錠は、実施例６Ｃと同様の各組成を２倍して製した錠剤である。
125 mg錠：錠剤中に式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含み、式（ＶＩＩ）で示される化合物として125 mgを含む。本125ｍｇ錠は、実施例６Ｃと同様の組成の錠剤である。
（ｉｉ）プラセボ
Placebo-D錠：上記250 mg錠と外観が識別不能の錠剤で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含まない。
Placebo-B錠：上記125 mg錠と外観が識別不能の錠剤で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含まない。
（ｉ）被験薬
250 mg錠：錠剤中に式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含み、式（ＶＩＩ）で示される化合物として250 mgを含む。本250ｍｇ錠は、実施例６Ｃと同様の各組成を２倍して製した錠剤である。
125 mg錠：錠剤中に式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含み、式（ＶＩＩ）で示される化合物として125 mgを含む。本125ｍｇ錠は、実施例６Ｃと同様の組成の錠剤である。
（ｉｉ）プラセボ
Placebo-D錠：上記250 mg錠と外観が識別不能の錠剤で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含まない。
Placebo-B錠：上記125 mg錠と外観が識別不能の錠剤で、式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含まない。
【0184】
投与量および投与方法
Phase 2a Partでは、軽症／中等症又は無症候のSARS-CoV-2感染者として適格と判断された被験者を、1：1：1の比率で、被検薬の375/125 mg群、被検薬の750/250 mg群、プラセボ群のいずれかに無作為に割付けた。
Phase 2a Partでは、軽症／中等症又は無症候のSARS-CoV-2感染者として適格と判断された被験者を、1：1：1の比率で、被検薬の375/125 mg群、被検薬の750/250 mg群、プラセボ群のいずれかに無作為に割付けた。
【0185】
投与群ごとの治験薬
375/125 mg群
Day 1に125 mg錠及びPlacebo-D錠をそれぞれ3錠、Day 2～5に125 mg錠及びPlacebo-D錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
750/250 mg群
Day 1に250 mg錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ 3錠、Day 2～5に250 mg錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
プラセボ群
Day 1にPlacebo-D錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ3錠、Day 2～5にPlacebo-D錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
375/125 mg群
Day 1に125 mg錠及びPlacebo-D錠をそれぞれ3錠、Day 2～5に125 mg錠及びPlacebo-D錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
750/250 mg群
Day 1に250 mg錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ 3錠、Day 2～5に250 mg錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
プラセボ群
Day 1にPlacebo-D錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ3錠、Day 2～5にPlacebo-D錠及びPlacebo-B錠をそれぞれ1日あたり1錠投与する。
【0186】
なお、「Day 1」は投与初日を表し、「Day 2～Day 5」は投与初日から数えて、２日目～５日目を表す。
【0187】
有効性の主要評価項目（Phase 2a Part）
Phase 2a Partの有効性の主要評価項目は、軽症／中等症及び無症候のSARS-CoV-2感染者共通で、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量である。各時点におけるSARS-CoV-2ウイルス力価の観測値のベースラインからの絶対変化量と定義する。
Phase 2a Partの有効性の主要評価項目は、軽症／中等症及び無症候のSARS-CoV-2感染者共通で、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量である。各時点におけるSARS-CoV-2ウイルス力価の観測値のベースラインからの絶対変化量と定義する。
【0188】
主要評価項目の解析（Phase 2a Part）
軽症／中等症のSARS-CoV-2感染者集団、無症候のSARS-CoV-2感染者集団、及びこれらの併合集団それぞれについて、mITT集団を対象に、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量の要約統計量を算出した。更に、軽症／中等症と無症候のSARS-CoV-2感染者を併合した集団に対してvan Elteren検定を適用し、両側有意水準5%で各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価について被検薬の各用量群とプラセボ群の間で対比較を行った。van Elteren検定で使用する層には、軽症／中等症のSARS-CoV-2感染者集団、及び無症候のSARS-CoV-2感染者集団を用いた。
軽症／中等症のSARS-CoV-2感染者集団、無症候のSARS-CoV-2感染者集団、及びこれらの併合集団それぞれについて、mITT集団を対象に、各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量の要約統計量を算出した。更に、軽症／中等症と無症候のSARS-CoV-2感染者を併合した集団に対してvan Elteren検定を適用し、両側有意水準5%で各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価について被検薬の各用量群とプラセボ群の間で対比較を行った。van Elteren検定で使用する層には、軽症／中等症のSARS-CoV-2感染者集団、及び無症候のSARS-CoV-2感染者集団を用いた。
【0189】
主要評価項目の結果
（１）各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量（Phase 2a Part）
Phase 2a Partには69例が無作為化され、375/125 mg群には22例（うち1例未投与例）、750/250 mg群には23例、プラセボ群には24例が割付けられた。69例のうち、ベースラインのRT-PCRが陽性であった症例数は44例であり、そのうちベースラインのウイルス力価が検出された症例数は40例であった。この40例の構成は、375/125 mg群で14例、750/250 mg 群で13例、プラセボ群で13例であった。なお、これら集団の例数及びその内訳は、2022年1月17日時点までに入手できたRT-PCR測定結果、及びウイルス力価測定結果に基づいて算出されたものである。
Phase 2a Partの最終結果として、69例のうち、ベースラインのRT-PCRが陽性であった症例数は47例であり、そのうちベースラインのウイルス力価が検出された症例数は43例であった。この43例の構成は、375/125 mg群で15例、750/250 mg 群で14例、プラセボ群で14例であった。
（１）各時点におけるSARS-CoV-2のウイルス力価のベースラインからの変化量（Phase 2a Part）
Phase 2a Partには69例が無作為化され、375/125 mg群には22例（うち1例未投与例）、750/250 mg群には23例、プラセボ群には24例が割付けられた。69例のうち、ベースラインのRT-PCRが陽性であった症例数は44例であり、そのうちベースラインのウイルス力価が検出された症例数は40例であった。この40例の構成は、375/125 mg群で14例、750/250 mg 群で13例、プラセボ群で13例であった。なお、これら集団の例数及びその内訳は、2022年1月17日時点までに入手できたRT-PCR測定結果、及びウイルス力価測定結果に基づいて算出されたものである。
Phase 2a Partの最終結果として、69例のうち、ベースラインのRT-PCRが陽性であった症例数は47例であり、そのうちベースラインのウイルス力価が検出された症例数は43例であった。この43例の構成は、375/125 mg群で15例、750/250 mg 群で14例、プラセボ群で14例であった。
【0190】
治験プロトコルで定められた来院日をVisitで表記し、投薬日（Day）との対応関係および許容幅は以下の通りである。Op VはOptional Visitを意味し、任意来院日を示す。
【表12】
【0191】
Modified intention-to-treat population（無作為化され、かつベースラインのRT-PCRとウイルス力価が共に陽性であった全ての被験者）を対象に、SARS-CoV-2ウイルス力価のベースラインからの変化量の群ごとの平均値の推移を図２４に示す。本解析は軽症/中等症のSARS-CoV-2感染者、及び無症候のSARS-CoV-2感染者を解析に含み、必須来院日とされたVisitのみを表示した。また、ウイルス力価が検出下限 (0.8 log10(TCID50/mL)) 未満である場合、そのウイルス力価の値は0.8 log10(TCID50/mL) として取り扱った。375/125 mg群ではVisit 3（投薬開始後4日目）、750/250 mg群ではVisit 2（投薬開始後2日目）及びVisit 3（投薬開始後4日目）の時点において、有意水準0.05でプラセボ群に比べてウイルス力価が統計的に有意に減少していた。なお、2022年1月17日時点までに入手できたRT-PCR測定結果、及びウイルス力価測定結果においても、375/125mg群ではVisit 3（投薬開始後4日目）以降、750/250mg群ではVisit2（投薬開始後2日目）以降の全ての時点において、プラセボ群に比べてウイルス力価が減少している傾向が伺えていた。
【0192】
また、各時点におけるウイルス力価の陽性患者の割合について以下に示す。
Ｄａｙ４の時点において、プラセボ群におけるウイルス力価が０．８以上の陽性者の割合に対して、750/250mg群では８０％減少しており、375/125mg群では６３％減少していた。Ｄａｙ６の時点において、プラセボ群におけるウイルス力価が０．８以上の陽性者の割合に対して、750/250mg群では５４％減少しており、375/125mg群では１００％減少していた。
Ｄａｙ４およびＤａｙ６の時点において、750/250mg群および375/125mg群の両方において、プラセボ群と比較して、ウイルス力価が陽性である患者割合が低い傾向が見られた。よって、本発明の医薬組成物を服薬することにより、感染性を有するウイルスを排出する患者を速やかに減少させることができることが示唆された。
Ｄａｙ４の時点において、プラセボ群におけるウイルス力価が０．８以上の陽性者の割合に対して、750/250mg群では８０％減少しており、375/125mg群では６３％減少していた。Ｄａｙ６の時点において、プラセボ群におけるウイルス力価が０．８以上の陽性者の割合に対して、750/250mg群では５４％減少しており、375/125mg群では１００％減少していた。
Ｄａｙ４およびＤａｙ６の時点において、750/250mg群および375/125mg群の両方において、プラセボ群と比較して、ウイルス力価が陽性である患者割合が低い傾向が見られた。よって、本発明の医薬組成物を服薬することにより、感染性を有するウイルスを排出する患者を速やかに減少させることができることが示唆された。
【0193】
副次評価項目の結果
（１）ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間（Phase 2a Part）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間を以下の表１３および図２５に示す。
Phase 2a Partの69例のうち、375/125 mg群で15例、750/250 mg 群で13例、プラセボ群で14例における結果を示す。
［層別ログランク検定では，被験者層 (軽症/中等症，無症候/軽度のみ) を層別因子とする］
表１３に示される通り、375/125mg群では、プラセボ群と比して中央値が４９．８時間短く、ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間について有意な違いが認められた（p＝0.0159）。750/250mg群では、プラセボ群と比して中央値が４８．４時間短く、ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間について有意な違いが認められた（p＝0.0205）。
また、図２５に示される通り、プラセボ群においては、５０％の患者のウイルス力価が陰性になるまでの時間は、治療開始からおよそ４．６日経過後であった。それに対し、750/250mg群および375/125mg群においては、５０％の患者のウイルス力価が陰性になるまでの時間は、治療開始からおよそ２．６日経過後であった。よって、５０％の患者のウイルス力価が最初に陰性になるまでの時間を約２日短縮することが確認された。
（１）ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間（Phase 2a Part）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間を以下の表１３および図２５に示す。
Phase 2a Partの69例のうち、375/125 mg群で15例、750/250 mg 群で13例、プラセボ群で14例における結果を示す。
【表13】
［層別ログランク検定では，被験者層 (軽症/中等症，無症候/軽度のみ) を層別因子とする］
表１３に示される通り、375/125mg群では、プラセボ群と比して中央値が４９．８時間短く、ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間について有意な違いが認められた（p＝0.0159）。750/250mg群では、プラセボ群と比して中央値が４８．４時間短く、ウイルス力価陰性が最初に確認されるまでの時間について有意な違いが認められた（p＝0.0205）。
また、図２５に示される通り、プラセボ群においては、５０％の患者のウイルス力価が陰性になるまでの時間は、治療開始からおよそ４．６日経過後であった。それに対し、750/250mg群および375/125mg群においては、５０％の患者のウイルス力価が陰性になるまでの時間は、治療開始からおよそ２．６日経過後であった。よって、５０％の患者のウイルス力価が最初に陰性になるまでの時間を約２日短縮することが確認された。
【0194】
（２）各時点におけるCOVID-19の12症状合計スコアのベースラインからの変化量（Phase 2a Part）
各時点におけるCOVID-19の12症状合計スコアのベースラインからの変化量を図６に示す。
Phase 2a Partの69例のうち、軽症／中等症の被験者を対象とした375/125 mg群で13例、750/250 mg 群で12例、プラセボ群で14例における結果を示す。
図２６に示される通り、375/125 mg群および750/250 mg群において、Day 2（１回投与後）以降の全ての時点において、プラセボ群に比べてCOVID-19の12症状合計スコアが数値的に改善している傾向が伺えた。
各時点におけるCOVID-19の12症状合計スコアのベースラインからの変化量を図６に示す。
Phase 2a Partの69例のうち、軽症／中等症の被験者を対象とした375/125 mg群で13例、750/250 mg 群で12例、プラセボ群で14例における結果を示す。
図２６に示される通り、375/125 mg群および750/250 mg群において、Day 2（１回投与後）以降の全ての時点において、プラセボ群に比べてCOVID-19の12症状合計スコアが数値的に改善している傾向が伺えた。
【0195】
（３）重症化抑制効果（Phase 2a Part）
Phase 2a Partの69例のうち、軽症／中等症の被験者を対象として、投与開始後のいずれかの時点で初めてOrdinal scale（８段階に臨床的重症度を分類する順序尺度、表１４）のスコアが３以上に悪化した被験者の割合を表１５に示す。
表１５に示される通り、375/125 mg群および750/250 mg群において、投与開始後に初めてOrdinal scaleが３以上へ悪化する症例は確認されなかった。
Phase 2a Partの69例のうち、軽症／中等症の被験者を対象として、投与開始後のいずれかの時点で初めてOrdinal scale（８段階に臨床的重症度を分類する順序尺度、表１４）のスコアが３以上に悪化した被験者の割合を表１５に示す。
【表14】
【表15】
表１５に示される通り、375/125 mg群および750/250 mg群において、投与開始後に初めてOrdinal scaleが３以上へ悪化する症例は確認されなかった。
【0196】
有害事象の発現頻度
Phase 2a Partにおいて、死亡、重篤な有害事象および投与中止に至った有害事象はなかった。
本発明の製剤は、１２歳以上の小児及び成人に用いることができる。
（実施例８）
Phase 2a Partにおいて、死亡、重篤な有害事象および投与中止に至った有害事象はなかった。
本発明の製剤は、１２歳以上の小児及び成人に用いることができる。
（実施例８）
【0197】
（錠剤の製造方法）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造した。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒した。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で長径１５．４ｍｍ×短径８ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得た。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造した。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒した。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で長径１５．４ｍｍ×短径８ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得た。
【表16】
【0198】
試験例７：錠剤の溶出試験
（溶出試験法）
実施例８Ａ、８Ｂ、８Ｃおよび８Ｄについて、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によって溶出試験をおこなった。
（溶出試験法）
実施例８Ａ、８Ｂ、８Ｃおよび８Ｄについて、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によって溶出試験をおこなった。
【0199】
（実験結果）
いずれの実施例においても速やかな溶出性を示した。
（実施例９）
いずれの実施例においても速やかな溶出性を示した。
（実施例９）
【0200】
（錠剤の製造方法）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造する。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒する。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で直径５．０ｍｍまたは５．５ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得る。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する錠剤を製造する。
以下の表に、１錠剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒する。
造粒および整粒した顆粒、結晶セルロース（旭化成社製）およびステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）、または、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）を添加して混合した後、静的圧縮機またはロータリー式打錠機で直径５．０ｍｍまたは５．５ｍｍに圧縮成形し、下記組成の錠剤を得る。
【表17】
【0201】
試験例８：錠剤の溶出試験
（溶出試験法）
実施例９のうち２処方について、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によって溶出試験をおこなった。
（溶出試験法）
実施例９のうち２処方について、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２錠の平均値）によって溶出試験をおこなった。
【0202】
（実験結果）
いずれの実施例においても速やかな溶出性を示した。
本発明の製剤は、６歳以上１２歳未満の小児にも用いることができる。
（実施例１０）
いずれの実施例においても速やかな溶出性を示した。
本発明の製剤は、６歳以上１２歳未満の小児にも用いることができる。
（実施例１０）
【0203】
（顆粒剤の製造方法）
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する顆粒剤を製造する。
以下の表に、１顆粒剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、粉末還元麦芽糖水アメ（マルチトール、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）、ステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）及びスクラロース（三栄源エフ・エフ・アイ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒する。
造粒および整粒した顆粒、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）及びスクラロース（三栄源エフ・エフ・アイ社製）を添加して混合し、下記組成の顆粒剤を得る。
式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶を含有する顆粒剤を製造する。
以下の表に、１顆粒剤あたりの処方を示す。式（ＶＩＩ）で示される化合物のフマル酸共結晶Ｉ形結晶、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、粉末還元麦芽糖水アメ（マルチトール、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ社製）、クロスカルメロースナトリウム（ＤｕＰｏｎｔ社製）、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達社製）、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）、ステアリン酸マグネシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社製）及びスクラロース（三栄源エフ・エフ・アイ社製）を３０メッシュふるいで篩過して混合した後、造粒する。
造粒および整粒した顆粒、軽質無水ケイ酸（Ｃａｂｏｔ社製）及びスクラロース（三栄源エフ・エフ・アイ社製）を添加して混合し、下記組成の顆粒剤を得る。
【表18】
【0204】
試験例９：顆粒剤の溶出試験
（溶出試験法）
実施例１０のうち２処方について、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２顆粒剤の平均値）によって溶出試験をおこなった。
（溶出試験法）
実施例１０のうち２処方について、第１８改正日本薬局方溶出試験法第２法（界面活性剤を含有した溶出試験第１液、パドル法、パドル回転数：５０ｒｐｍ、結果：２顆粒剤の平均値）によって溶出試験をおこなった。
【0205】
【0206】
試験例１０：顆粒剤の経時安定性試験
実施例１０のうち２処方について、経時安定性を確認した結果を示す。
a．安定性試験法
実施例１０の製剤を、１）ＤＵＭＡボトル（プラスチック容器、ＧＥＲＲＥＳＨＥＩＭＥＲ）閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、三週間、若しくは、２）シリカゲルを入れたＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、三週間、または、３）ＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月、若しくは、４）シリカゲルを入れたＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月、保存した。その後、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
（試料液調製方法）
(測定方法）
以下の方法、条件によって、液体クロマトグラフで、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
・検出器：紫外吸光光度計 (測定波長：２２２ｎｍ)
・カラム：Ｃ１８カラム
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．０１ ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比は、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、３２分間で測定を行った。
・流量：０．３ｍＬ／分
類縁物質量は、ＨＰＬＣチャートのクロマトグラムのピーク面積の合計を１００％とし、その量に対する割合（％）を算出した。
b．結果
安定性試験の結果を以下の表１９および２０に示す。実施例１０の製剤の総類縁物質量は、いずれの条件においても増加しておらず、安定であった。
以上より、本発明製剤は、湿度および温度に対して安定性が高い。
実施例１０のうち２処方について、経時安定性を確認した結果を示す。
a．安定性試験法
実施例１０の製剤を、１）ＤＵＭＡボトル（プラスチック容器、ＧＥＲＲＥＳＨＥＩＭＥＲ）閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、三週間、若しくは、２）シリカゲルを入れたＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、三週間、または、３）ＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月、若しくは、４）シリカゲルを入れたＤＵＭＡボトル閉栓状態で４０℃、７５％相対湿度下、一ヶ月、保存した。その後、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
（試料液調製方法）
(測定方法）
以下の方法、条件によって、液体クロマトグラフで、本発明製剤中の式（ＶＩＩ）で示される化合物の類縁物質量を測定した。
・検出器：紫外吸光光度計 (測定波長：２２２ｎｍ)
・カラム：Ｃ１８カラム
・カラム温度：４０℃付近の一定温度
・移動相Ａ：０．０１ ｍｏｌ／Ｌギ酸アンモニウム溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル
・移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比は、９：１から１：９まで徐々に移動相Ｂの混合比を高め、３２分間で測定を行った。
・流量：０．３ｍＬ／分
類縁物質量は、ＨＰＬＣチャートのクロマトグラムのピーク面積の合計を１００％とし、その量に対する割合（％）を算出した。
b．結果
安定性試験の結果を以下の表１９および２０に示す。実施例１０の製剤の総類縁物質量は、いずれの条件においても増加しておらず、安定であった。
【表19】
【表20】
以上より、本発明製剤は、湿度および温度に対して安定性が高い。
【0207】
以下に示す製剤例は例示にすぎないものであり、発明の範囲を何ら限定することを意図するものではない。
本発明の化合物は、任意の従来の経路により、特に、経腸、例えば、経口で、例えば、錠剤、顆粒剤またはカプセル剤の形態で、または非経口で、例えば注射液剤または懸濁剤の形態で、局所で、例えば、ローション剤、ゲル剤、軟膏剤またはクリーム剤の形態で、または経鼻形態または座剤形態で医薬組成物として投与することができる。少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒にして、遊離形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物を含む医薬組成物は、従来の方法で、混合、造粒またはコーティング法によって製造することができる。例えば、経口用組成物としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等および有効成分等を含有する錠剤、顆粒剤、カプセル剤とすることができる。また、注射用組成物としては、溶液剤または懸濁剤とすることができ、滅菌されていてもよく、また、保存剤、安定化剤、緩衝化剤等を含有してもよい。
（製剤例１）懸濁剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、例えば、注射用水を加え、懸濁剤とした。
（製剤例２）錠剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、添加剤として例えば、Ｄ－マンニトール、ステアリン酸マグネシウムを加え、錠剤とした。
（製剤例３）顆粒剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、添加剤として例えば、Ｄ－マンニトール、ステアリン酸マグネシウムを加え、顆粒剤とした。
本発明の化合物は、任意の従来の経路により、特に、経腸、例えば、経口で、例えば、錠剤、顆粒剤またはカプセル剤の形態で、または非経口で、例えば注射液剤または懸濁剤の形態で、局所で、例えば、ローション剤、ゲル剤、軟膏剤またはクリーム剤の形態で、または経鼻形態または座剤形態で医薬組成物として投与することができる。少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と一緒にして、遊離形態または薬学的に許容される塩の形態の本発明の化合物を含む医薬組成物は、従来の方法で、混合、造粒またはコーティング法によって製造することができる。例えば、経口用組成物としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等および有効成分等を含有する錠剤、顆粒剤、カプセル剤とすることができる。また、注射用組成物としては、溶液剤または懸濁剤とすることができ、滅菌されていてもよく、また、保存剤、安定化剤、緩衝化剤等を含有してもよい。
（製剤例１）懸濁剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、例えば、注射用水を加え、懸濁剤とした。
（製剤例２）錠剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、添加剤として例えば、Ｄ－マンニトール、ステアリン酸マグネシウムを加え、錠剤とした。
（製剤例３）顆粒剤
式（ＶＩＩ）で示される化合物の原薬に、添加剤として例えば、Ｄ－マンニトール、ステアリン酸マグネシウムを加え、顆粒剤とした。
【産業上の利用可能性】
【0208】
本発明に係る製造方法により製造された化合物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害作用を有し、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼが関与する疾患または状態の治療剤および／または予防剤として有用であると考えられる。本発明に係る新規合成中間体またはそれらの塩、および本発明に係る製造方法は医薬品製造に有用である。
本発明製剤は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害作用を有し、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼが関与する疾患または状態の治療剤および／または予防剤として有用であると考えられる。
本発明製剤は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害作用を有し、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼが関与する疾患または状態の治療剤および／または予防剤として有用であると考えられる。
【要約】
本発明は、ウイルス増殖阻害作用を有するトリアジン誘導体を含有する経口投与する製剤を提供する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【配列表】