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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-04-03
(45)【発行日】2023-04-11
(54)【発明の名称】グルカゴン様ペプチド１受容体アゴニスト
(51)【国際特許分類】
C07D 405/14 20060101AFI20230404BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230404BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20230404BHJP
【ＦＩ】
C07D405/14 CSP
A61P3/10
A61K31/4439
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2021577551
(86)(22)【出願日】2020-06-19
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-09-14
(86)【国際出願番号】 US2020038617
(87)【国際公開番号】W WO2020263695
(87)【国際公開日】2020-12-30
【審査請求日】2021-12-27
(31)【優先権主張番号】62/868,117
(32)【優先日】2019-06-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/904,906
(32)【優先日】2019-09-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】コーツ，デヴィッド アンドリュー
(72)【発明者】
【氏名】フィールズ，トッド
(72)【発明者】
【氏名】ホー，ジョセフ ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】ク，フーチェン
【審査官】土橋 敬介
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１８／１０９６０７（ＷＯ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ４０５／１４
Ａ６１Ｐ ３／１０
Ａ６１Ｋ ３１／４４３９
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下：【化1】
【請求項2】
以下：【化2】
【請求項3】
前記化合物が、以下：【化3】
【請求項4】
以下：【化4】
【請求項5】
請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項6】
有効量の請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、哺乳動物におけるＩＩ型糖尿病の治療するための医薬組成物。
【請求項7】
有効量の請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、血糖値を低下させるための医薬組成物。
【請求項8】
有効量の請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、哺乳動物における高血糖を治療するための医薬組成物。
【請求項9】
前記化合物が、経口投与される、請求項６～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
ＩＩ型糖尿病の治療のための薬物の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項11】
血糖値を低下させるための薬物の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項12】
高血糖の治療のための薬物の製造における、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、グルカゴン様ペプチド１受容体アゴニストおよびＩＩ型糖尿病を治療するための化合物の治療的使用に関する。
【背景技術】
【0002】
グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）は、腸内分泌Ｌ細胞によって分泌されるペプチドホルモンのインクレチンファミリーのメンバーである。ＧＬＰ－１は、グルコース依存的にベータ細胞からのインスリンの放出を誘導する。しかし、ＧＬＰ－１は迅速に代謝され、ＧＬＰ－１の少しの割合のみがインスリン分泌を誘導するために利用されることができる。これを相殺するために、ＧＬＰ－１受容体（ＧＬＰ－１Ｒ）アゴニストが、ＩＩ型糖尿病のための治療としてインスリン分泌を増強するために開発されている。
【0003】
ＩＩ型糖尿病を治療するために承認されているＧＬＰ－１Ｒアゴニストの大部分は注射剤である。患者はしばしば、不便さ、痛み、および注射部位の刺激の可能性などの注射に関連する欠点のために、経口投与薬を好む。
【0004】
ＷＯ２０１８／１０９６０７は、特定のベンズイミダゾール誘導体を開示しており、これはＧＬＰ－１Ｒアゴニストとして記載されている。
【0005】
しかし、代替のＧＬＰ－１Ｒアゴニストの必要性が存在する。特に、経口投与することができるＧＬＰ－１Ｒアゴニストの必要性が存在する。改善された効力、好ましい毒性学プロファイルおよび／または１日１回の投薬をサポートする薬物動態プロファイルを有するＧＬＰ－１Ｒアゴニストの必要性が特に存在する。
【発明の概要】
【0006】
従って、本発明は、式：
（式中、
Ｒ１は、ＨまたはＦであり、
Ｒ２は、ＨまたはＦであり、
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化1】
（式中、
Ｒ１は、ＨまたはＦであり、
Ｒ２は、ＨまたはＦであり、
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３である）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0007】
式Ｉは、すべての個々のエナンチオマー、およびその混合物、ならびにラセミ体、およびその薬学的に許容される塩を含む。
【0008】
一実施形態では、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化2】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0009】
一実施形態では、式：
（式中、Ｒ１は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化3】
（式中、Ｒ１は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0010】
一実施形態では、式：
（式中、Ｒ１は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化4】
（式中、Ｒ１は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0011】
一実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【化5】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
【化6】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0012】
一実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。特に好ましい実施形態では、以下：
のｔｅｒｔ－ブチルアミン塩（エルブミン塩としても知られている）が提供される。
【化7】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
【化8】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。特に好ましい実施形態では、以下：
【化9】
のｔｅｒｔ－ブチルアミン塩（エルブミン塩としても知られている）が提供される。
【0013】
一実施形態では、式：
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化10】
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0014】
一実施形態では、式：
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化11】
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＦである）の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0015】
一実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【化12】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
【化13】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0016】
一実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【化14】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。好ましい実施形態では、化合物は、式：
【化15】
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【0017】
式Ｉは、式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩ、ＩＩＩａおよびＩＩＩｂを包含し、例えば、治療方法および治療的使用における以下での式Ｉへの言及はまた、これらの下位式（ｓｕｂ－ｆｏｒｍｕｌａｅ）の各々およびすべてへの言及として読み取られる。
【0018】
別の実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的に許容される組成物が提供される。好ましい実施形態では、薬学的に許容される組成物は、経口投与用に処方される。
【0019】
別の実施形態では、ＩＩ型真性糖尿病について哺乳動物を治療する方法が提供され、この方法は、治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む薬学的に許容される組成物を投与することを含む。一実施形態では、薬学的に許容される組成物は、経口投与用に処方される。好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
【0020】
別の実施形態では、ＩＩ型糖尿病について哺乳動物を治療する方法が提供され、この方法は、治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。好ましい実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【0021】
別の実施形態では、哺乳動物における血糖値を低下させる方法が提供され、この方法は、治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。好ましい実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【0022】
別の実施形態では、哺乳動物における高血糖を治療する方法が提供され、この方法は、治療を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。好ましい実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【0023】
一実施形態では、治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0024】
別の実施形態では、ＩＩ型糖尿病の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0025】
別の実施形態では、血糖値の低下における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0026】
別の実施形態では、高血糖の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もまた提供される。
【0027】
一実施形態では、ＩＩ型糖尿病の治療のための薬物を製造するための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【0028】
一実施形態では、血糖値を低下させるための薬物の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【0029】
一実施形態では、高血糖の治療のための薬物の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用が提供される。
【0030】
好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、経口投与される。好ましい実施形態では、式Ｉの化合物は、１日１回投与される。別の好ましい実施形態では、治療的使用は、ヒトにおけるものである。
【0031】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、臨床的および／または獣医学的使用のために許容されると見なされる本発明の化合物の塩を指す。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な方法論の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ ａｌ．，２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６（１），１－１９に見出され得る。
【0032】
薬学的組成物およびそれらの調製のためのプロセスの例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、Ｌｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．，２２ｎｄ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２０１２に見出され得る。一実施形態では、薬学的組成物は、経口投与用に処方することができる。好ましくは、薬学的組成物は、錠剤、カプセル、または溶液として処方される。錠剤、カプセル、または溶液は、治療を必要とする患者を治療するために有効な量で式Ｉの化合物を含むことができる。
【0033】
「有効量」という用語は、患者への単回または複数回の投与の際に、診断または治療中の患者において所望の効果を提供する、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の量または用量を指す。主治医は、当業者として、従来技術の使用によって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、有効量を容易に決定することができる。化合物の有効量または用量の決定において考慮される要因としては、化合物またはその塩のいずれが投与されるか；他の薬剤の同時投与（使用される場合）；治療される哺乳動物の種；その大きさ、年齢、および一般的な健康；障害の関与の程度または重症度；個々の哺乳動物の応答；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択される投与計画；ならびに他の関連する状況が挙げられる。本発明の化合物は、約０．０１～約１５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内に入る１日当たりの投薬量で有効である。
【0034】
本明細書で使用される場合、「治療している」、「治療する」、または「治療」という用語は、インスリン分泌の増加を含み得る高血糖などの既存の症状、障害、または状態の進行または重症度を低下、低減、または逆転させることを指す。
【0035】
式Ｉの化合物は、本化合物を生物学的に利用可能にする任意の経路によって投与される薬学的組成物として処方され得る。好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。そのような薬学的組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｐ．，「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。
【0036】
式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、本発明の治療的使用において有用であり、特定の立体配置が好ましい。
【0037】
本発明の化合物は、
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化16】
【化17】
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【0038】
本発明のさらなる化合物は、
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化18】
【化19】
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【0039】
本発明のさらなる化合物は、
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【化20】
【化21】
またはその薬学的に許容される塩を含む。
【0040】
本発明は、すべての個々のエナンチオマー、その混合物、およびラセミ体を意図するが、式Ｉａ、ＩＩａおよびＩＩＩａの化合物、およびその薬学的に許容される塩が特に好ましい。
【0041】
当業者は、個々のエナンチオマーを、本発明の化合物の合成における任意の好都合な時点で、選択的結晶化技術、キラルクロマトグラフィー（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）、または超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）（例えば、Ｔ．Ａ．Ｂｅｒｇｅｒ，「Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｐｒｉｍｅｒ」、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｊｕｌｙ ２０１５を参照されたい）のような方法によって分離または分割し得る。
【0042】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、当技術分野で周知の標準的条件下、適切な溶媒中での、式Ｉの化合物と適切な薬学的に許容される塩基との反応によって形成することができる（例えば、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．；Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，４，４２７－４３５，２０００およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１－１９，１９７７を参照されたい）。好ましい塩は、ｔｅｒｔ－ブチルアミン（またはエルブミン）塩である。
【0043】
本明細書で使用される特定の略語は、Ｄａｕｂ Ｇ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，「Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｃｒｏｎｙｍｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，１９８４，１７（１），６－２３に従って定義される。特定の略語は以下のように定義される：「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを指す；「ＡＴＰ」は、アデノシン三リン酸を指す；「ＢＳＡ」は、ウシ血清アルブミンを指す；「ｃＡＭＰ」は、サイクリックアデノシン－３’，５’－一リン酸を指す；「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンまたは塩化メチレンを指す；「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを指す；「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指す；「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを指す；「ＥＣ５０」は、事前に規定された陽性対照化合物と比較しての標的活性の５０％の応答をもたらす薬剤の濃度を指す（絶対的ＥＣ５０）；「ＥＳ／ＭＳ」は、エレクトロスプレー質量分析を指す；「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを指す；「ＨＡＴＵ」は、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指す；「ＨＥＫ」は、ヒト胎児腎臓を指す；「ＨＥＰＥＳ」は、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸を指す；「ｈ」は、複数の時間または１時間をそれぞれ指す；「ＭｅＯＨ」は、メタノールまたはメチルアルコールを指す；「ｍｉｎ」は、１分または複数の分を指す；「ＰＤ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２」は、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）を指す；「ＲＴ」は、室温を指す；「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを指す。
【0044】
本発明の化合物は、様々な手順によって調製され得、それらのいくつかを以下の調製および実施例において例証する。本発明の化合物またはその塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせてもよい。以下の各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収することできる。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。個々の異性体、エナンチオマー、およびジアステレオマーを、合成における任意の好都合な時点で、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィー（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）のような方法によって分離または分割し得る。本発明の範囲を限定することなく、本発明をさらに例証するために、以下の調製および実施例が提供される。
【化22】
【0045】
スキーム１は、式Ｉの化合物の調製において使用する中間体６の合成を示す。ステップ１において安息香酸１をまずボランジメチルスルフィド錯体を用いた還元に供して、アルコール２を得る。アルコールを脱離基（ＬＧ、中間体３）に変換する。例えば、中間体２におけるアルコールをステップ２において－１５℃でメタンスルホニルクロリドを使用してメシレート基に変換することができるか、または、それを０℃で三臭化リンを使用して臭化物に変換することができる。ステップ３において中間体３をＮａＣＮと反応させて、ニトリル４を得る。ステップ４においてニトリル４を高温でＫＯＨを用いて変換して、酸５を得、これを次にステップ５においてエステル化して、塩化オキサリル、ＤＭＦ、およびメタノールを使用して中間体６を得る。
【化23】
【0046】
スキーム２は、２つの経路を介した式Ｉの化合物の調製のための重要な中間体１２の調製を示す。第１の経路では、ハロゲン化アリール６をワンポットＭｉｙｕｒａホウ素化／鈴木カップリングに供する：ビス（ピナコラート）ジボロン、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、および酢酸カリウムを高温で使用し、ステップ１ａにおいてハロゲン化アリール６をボロン酸エステル７に変換し、その際、ブロモピリジン８およびＫ２ＣＯ３を反応物に加え（ステップ２ａ）、中間体１２を得る。第２の経路では、二段階プロセスを用いる：高温でＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２およびＫ２ＣＯ３を使用するハロゲン化アリール６の６－ヒドロキシピリジン－２－ボロン酸ピナコールエステル９との鈴木カップリング（ステップ１ｂ）によって中間体１０を得、これを次に高温でＡｇ２ＣＯ３を使用して４－（ブロモメチル）－３－フルオロベンゾニトリル６を用いてアルキル化して（ステップ２ｂ）、中間体１２を得る。ＬｉＯＨを使用するステップ３における中間体１２のエステル加水分解により、酸中間体１３を得る。
【化24】
【0047】
あるいは、重要な中間体１２および１３を、高温でＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２および炭酸カリウムを使用して、ブロモピリジン８をボロン酸エステル７またはボロン酸１４とカップリングさせて、スキーム３に従って調製することができる。
【化25】
【0048】
スキーム４は、重要な中間体１３の式Ｉの化合物への変換を示す。ＨＡＴＵおよびジアニリン１５を使用するステップ１におけるアミドカップリングにより、中間体１６を得る。環化（ステップ２）を、中間体１６を酢酸中で加熱することによって達成して、ベンズイミダゾール１７を得る。最後に、ステップ３において、式Ｉの化合物を、ＬｉＯＨを使用する１７の加水分解によって得る。
【実施例】
【0049】
調製および実施例
ＬＣ－ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１２００液体クロマトグラフィーシステムにおいて実施される。ＥＬＳＤを有していても有していなくてもよいＨＰＬＣに接続された質量選択性検出器四重極質量分析計において、エレクトロスプレー質量分析測定（正および／または負のモードで取得）が実施される。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ Ｃ１８ ２．０×５０ｍｍ ３．０μｍ、１１０Å、勾配：１．５分で５～９５％Ｂ、次に０．５分間９５％Ｂ、カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、注入量１μＬ、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨを含む脱イオン水、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸を含むＡＣＮ、波長２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ。ＨＰＬＣがＥＬＳＤを備えている場合、設定は、４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度、および１．６ＳＬＭのガス流速である。代替のＬＣ－ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ｘＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、勾配：１．５分で５～９５％Ｂ、次に０．５０分間９５％Ｂ、カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、注入量１μＬ、溶媒Ａ：１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３、ｐＨ９、溶媒Ｂ：ＡＣＮ、波長：２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ、ＥＬＳＤがある場合：４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度および１．６０のＳＬＭガス流速。
ＬＣ－ＥＳ／ＭＳは、ＡＧＩＬＥＮＴ（登録商標）ＨＰ１２００液体クロマトグラフィーシステムにおいて実施される。ＥＬＳＤを有していても有していなくてもよいＨＰＬＣに接続された質量選択性検出器四重極質量分析計において、エレクトロスプレー質量分析測定（正および／または負のモードで取得）が実施される。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ Ｃ１８ ２．０×５０ｍｍ ３．０μｍ、１１０Å、勾配：１．５分で５～９５％Ｂ、次に０．５分間９５％Ｂ、カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、注入量１μＬ、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨを含む脱イオン水、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸を含むＡＣＮ、波長２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ。ＨＰＬＣがＥＬＳＤを備えている場合、設定は、４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度、および１．６ＳＬＭのガス流速である。代替のＬＣ－ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ｘＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｃ１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、勾配：１．５分で５～９５％Ｂ、次に０．５０分間９５％Ｂ、カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流速：１．２ｍＬ／分、注入量１μＬ、溶媒Ａ：１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３、ｐＨ９、溶媒Ｂ：ＡＣＮ、波長：２００～４００ｎｍおよび２１２～２１６ｎｍ、ＥＬＳＤがある場合：４５℃の蒸発器温度、４０℃のネブライザ温度および１．６０のＳＬＭガス流速。
【0050】
結晶性固体のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、ＣｕＫα源およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えた、３５ｋＶおよび５０ｍＡで動作するＢｒｕｋｅｒ Ｄ４ Ｅｎｄｅａｖｏｒ Ｘ線粉末回折計で得られる。試料は、０．００８の２θ°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、１．０ｍｍの発散スリット、６．６ｍｍの固定散乱防止スリット、および１１．３ｍｍ検出スリットを用いて、４～４０の２θ°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダーに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。結晶形態の回折パターンを周囲温度および相対湿度で収集する。８．８５３および２６．７７４ ２θ°でピークを有する内部ＮＩＳＴ６７５標準に基づいて、パターン全体をシフトした後、ＭＤＩ－Ｊａｄｅにおいて結晶ピーク位置を決定する。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ ＃２３，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ＃１８，ｐａｇｅｓ １８４３－１８４４，１９９５を参照されたい。さらに、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度の変動、試料の変位、または内部標準の有無に起因して変動し得る。本発明の場合、±０．２の２θ°のピーク位置の変動は、示された結晶形態の明確な同定を妨げることなくこれらの潜在的な変動を考慮すると推定される。結晶形態の確認は、顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行うことができる。
【0051】
調製１
（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）メタノール
フラスコに以下を加える：４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル安息香酸（１００ｇ、４２１ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）およびボラン（硫化ジメチル錯体、ＴＨＦ中２ｍｏｌ／Ｌ溶液、２１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物をＨＣｌ（１．０Ｎ水溶液、５０ｍＬ）でクエンチし、混合物を濾過する。濾液を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（４００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を固体として得る（９３．５ｇ、９９％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．２９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）。
（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）メタノール
【化26】
フラスコに以下を加える：４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル安息香酸（１００ｇ、４２１ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）およびボラン（硫化ジメチル錯体、ＴＨＦ中２ｍｏｌ／Ｌ溶液、２１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）。この混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物をＨＣｌ（１．０Ｎ水溶液、５０ｍＬ）でクエンチし、混合物を濾過する。濾液を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（４００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を固体として得る（９３．５ｇ、９９％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．２９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）。
【0052】
調製２
（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）メタノール
４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル安息香酸を使用して、本質的に調製１に記載されているように表題化合物を調製する。ヘキサン中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．０１分。
（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）メタノール
【化27】
４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル安息香酸を使用して、本質的に調製１に記載されているように表題化合物を調製する。ヘキサン中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．０１分。
【0053】
調製３
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）アセトニトリル
（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）メタノール（９２ｇ、４２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１２０ｍＬ、８６１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を－１５℃に冷却し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のメタンスルホニルクロリド（４０ｍＬ、５１７ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に滴下する。混合物を室温で３０分間撹拌する。反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＤＭＦ（４００ｍＬ）に溶解し、混合物を氷浴で冷却する。ＮａＣＮ（２１．０ｇ、４２９ｍｍｏｌ）を反応混合物に一度に加え、室温で一晩撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ヘキサン中１０～３０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（４７．０ｇ、４８％）を油として得る。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ）。
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）アセトニトリル
【化28】
（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）メタノール（９２ｇ、４２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１２０ｍＬ、８６１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を－１５℃に冷却し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のメタンスルホニルクロリド（４０ｍＬ、５１７ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に滴下する。混合物を室温で３０分間撹拌する。反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＤＭＦ（４００ｍＬ）に溶解し、混合物を氷浴で冷却する。ＮａＣＮ（２１．０ｇ、４２９ｍｍｏｌ）を反応混合物に一度に加え、室温で一晩撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ヘキサン中１０～３０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（４７．０ｇ、４８％）を油として得る。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ）。
【0054】
調製４
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセトニトリル
（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）メタノール（１．９０ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（２０ｍＬ）とを一緒に混合する。混合物を０℃に冷却し、次に三臭化リン（１．０ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を０℃で１５分間撹拌し、次に混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で塩基性化する。混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で抽出する。有機物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、固体を得る。固体をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に溶解し、次にＮａＣＮ（０．６０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、生成物を固体として得る（１．３ｇ、６４％）。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．１７分
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセトニトリル
【化29】
（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）メタノール（１．９０ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（２０ｍＬ）とを一緒に混合する。混合物を０℃に冷却し、次に三臭化リン（１．０ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を０℃で１５分間撹拌し、次に混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で塩基性化する。混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で抽出する。有機物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、固体を得る。固体をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に溶解し、次にＮａＣＮ（０．６０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、生成物を固体として得る（１．３ｇ、６４％）。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．１７分
【0055】
調製５
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）アセテート
フラスコに以下を加える：２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）アセトニトリル（１．２０ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、水（３ｍＬ）、および水酸化カリウム（０．９０ｇ、１６ｍｍｏｌ）。混合物を９０℃で一晩加熱する。混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ４～５に酸性化し、次に混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）酢酸を固体として得る。これをＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次にＤＭＦ（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（０．５ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を室温で加える。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＭｅＯＨ（２ｍＬ、４９．４ｍｍｏｌ）を滴下する。３０分後、溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）と５％ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を油として得る（１．１ｇ、８０％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）２７８，２８０（Ｍ＋ＮＨ４ ＋）。
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）アセテート
【化30】
フラスコに以下を加える：２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチルフェニル）アセトニトリル（１．２０ｇ、５．１０ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、水（３ｍＬ）、および水酸化カリウム（０．９０ｇ、１６ｍｍｏｌ）。混合物を９０℃で一晩加熱する。混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ４～５に酸性化し、次に混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）酢酸を固体として得る。これをＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、次にＤＭＦ（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（０．５ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を室温で加える。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＭｅＯＨ（２ｍＬ、４９．４ｍｍｏｌ）を滴下する。３０分後、溶媒を真空中で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）と５％ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を油として得る（１．１ｇ、８０％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）２７８，２８０（Ｍ＋ＮＨ４ ＋）。
【0056】
調製６
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセテート
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセトニトリルを使用して、本質的に調製５に記載されているように表題化合物を調製する。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．２２分。
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセテート
【化31】
２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセトニトリルを使用して、本質的に調製５に記載されているように表題化合物を調製する。ＬＣ－ＥＳ／ＭＳピークリテンションタイム：１．２２分。
【0057】
調製７
メチル２－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）アセテート
４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル酢酸（３．３０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２０ｍＬ）、ＤＭＦ（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、および塩化オキサリル（１．３ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を混合する。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＭｅＯＨ（１．５ｍＬ、３７ｍｍｏｌ、１００質量％）を滴下する。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を油として得（３．４１ｇ、定量的収率）、これを調製１０でさらに精製することなく使用する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）２６５，２６７（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）アセテート
【化32】
４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル酢酸（３．３０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２０ｍＬ）、ＤＭＦ（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、および塩化オキサリル（１．３ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を混合する。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＭｅＯＨ（１．５ｍＬ、３７ｍｍｏｌ、１００質量％）を滴下する。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を油として得（３．４１ｇ、定量的収率）、これを調製１０でさらに精製することなく使用する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）２６５，２６７（Ｍ＋Ｈ）。
【0058】
調製８
４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル
２－ブロモ－６－フルオロピリジン（２．５０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）および３－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２．１５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（２５ｍＬ）に溶解し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの溶液（ＴＨＦ中２０重量％、１０．０ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）を室温で１２分かけて滴下する。反応混合物を４０℃で３０分間加熱する。混合物をＫ２ＣＯ３水溶液（１Ｍ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機物を水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物を５０℃の真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（４．２３ｇ、９５％）を淡黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）３０７，３０９（Ｍ＋Ｈ）。
４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル
【化33】
２－ブロモ－６－フルオロピリジン（２．５０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）および３－フルオロ－４－（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（２．１５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（２５ｍＬ）に溶解し、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの溶液（ＴＨＦ中２０重量％、１０．０ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ）を室温で１２分かけて滴下する。反応混合物を４０℃で３０分間加熱する。混合物をＫ２ＣＯ３水溶液（１Ｍ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機物を水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物を５０℃の真空オーブン中で乾燥させて、表題化合物（４．２３ｇ、９５％）を淡黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（７９Ｂｒ、８１Ｂｒ）３０７，３０９（Ｍ＋Ｈ）。
【0059】
調製９
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－５－メチル－フェニル］アセテート
フラスコに６－ヒドロキシピリジン－２－ボロン酸ピナコールエステル（１．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）アセテート（２．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、水（１ｍＬ）、および炭酸カリウム（２．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素で１０分間パージし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２６ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、７５℃で２時間加熱する。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．４ｇ、７４％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２７６（Ｍ＋Ｈ）、２７４（Ｍ－Ｈ）。
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－５－メチル－フェニル］アセテート
【化34】
フラスコに６－ヒドロキシピリジン－２－ボロン酸ピナコールエステル（１．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－５－メチル－フェニル）アセテート（２．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、水（１ｍＬ）、および炭酸カリウム（２．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素で１０分間パージし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２６ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、７５℃で２時間加熱する。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．４ｇ、７４％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２７６（Ｍ＋Ｈ）、２７４（Ｍ－Ｈ）。
【0060】
調製１０
メチル２－［２，６－ジフルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）フェニル］アセテート
メチル２－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）アセテートを使用し、反応物を７５℃で一晩加熱して、本質的に調製９に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２８０（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［２，６－ジフルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）フェニル］アセテート
【化35】
メチル２－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）アセテートを使用し、反応物を７５℃で一晩加熱して、本質的に調製９に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２８０（Ｍ＋Ｈ）。
【0061】
調製１１
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－３－メチル－フェニル］アセテート
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセテートを使用し、反応物を７５℃で一晩（１８時間）加熱して、本質的に調製９に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２７６（Ｍ＋Ｈ）、２７４（Ｍ－Ｈ）。
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－３－メチル－フェニル］アセテート
【化36】
メチル２－（４－ブロモ－２－フルオロ－３－メチル－フェニル）アセテートを使用し、反応物を７５℃で一晩（１８時間）加熱して、本質的に調製９に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２７６（Ｍ＋Ｈ）、２７４（Ｍ－Ｈ）。
【0062】
調製１２
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセテート
２－（４－ブロモ－３－メチルフェニル）酢酸（１０．７ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解する。混合物を氷／水浴で冷却し、次に塩化オキサリル（４．８ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．１ｍＬ）を加える。氷／水浴を取り除き、室温で２時間撹拌する。ＭｅＯＨ（６．０ｍＬ）を２分間かけて滴下し、室温で１時間撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解する。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次に濾過し、濃縮する。残留物にビス（ピナコラート）ジボロン（１２．８ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（１３．６ｇ、１３７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を通して窒素を１５分間バブリングし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（ＤＣＭとの錯体、１．１３ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加える。反応物を窒素下８５℃で１５時間油浴で加熱し、次に反応フラスコを油浴から取り出す。炭酸カリウム（９．４９ｇ、６８．７ｍｍｏｌ）を水（６０ｍＬ）に溶解し、溶液を通して窒素を１０分間バブリングし、次にこの溶液を反応混合物に加え、続いて４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（１４．１ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物全体を通して窒素を５分間バブリングし、窒素下８５℃で６時間加熱する。反応物を室温近くに冷却し、真空中で濃縮して、１，４－ジオキサンの大部分を除去する。この混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次に濾過し、濃縮する。ヘキサン中５～５０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、表題化合物（１３．３ｇ、７０％）を淡黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９１（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセテート
【化37】
２－（４－ブロモ－３－メチルフェニル）酢酸（１０．７ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解する。混合物を氷／水浴で冷却し、次に塩化オキサリル（４．８ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．１ｍＬ）を加える。氷／水浴を取り除き、室温で２時間撹拌する。ＭｅＯＨ（６．０ｍＬ）を２分間かけて滴下し、室温で１時間撹拌する。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解する。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次に濾過し、濃縮する。残留物にビス（ピナコラート）ジボロン（１２．８ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（１３．６ｇ、１３７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を通して窒素を１５分間バブリングし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（ＤＣＭとの錯体、１．１３ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加える。反応物を窒素下８５℃で１５時間油浴で加熱し、次に反応フラスコを油浴から取り出す。炭酸カリウム（９．４９ｇ、６８．７ｍｍｏｌ）を水（６０ｍＬ）に溶解し、溶液を通して窒素を１０分間バブリングし、次にこの溶液を反応混合物に加え、続いて４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（１４．１ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物全体を通して窒素を５分間バブリングし、窒素下８５℃で６時間加熱する。反応物を室温近くに冷却し、真空中で濃縮して、１，４－ジオキサンの大部分を除去する。この混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、次に濾過し、濃縮する。ヘキサン中５～５０％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、表題化合物（１３．３ｇ、７０％）を淡黄色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９１（Ｍ＋Ｈ）。
【0063】
調製１３
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセテート
フラスコにメチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－５－メチル－フェニル］アセテート（１．４０ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３５ｍＬ）、炭酸銀（１．７ｇ、６．２ｍｍｏｌ）、および４－（ブロモメチル）－３－フルオロベンゾニトリル（１．４ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を６０℃で一晩加熱する。固体を濾別し、濾液を濃縮する。ヘキサン中１２～５５％のＥｔＯＡｃを使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（１．６０ｇ、７７％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）、４０７（Ｍ－Ｈ）。
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセテート
【化38】
フラスコにメチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－５－メチル－フェニル］アセテート（１．４０ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３５ｍＬ）、炭酸銀（１．７ｇ、６．２ｍｍｏｌ）、および４－（ブロモメチル）－３－フルオロベンゾニトリル（１．４ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を６０℃で一晩加熱する。固体を濾別し、濾液を濃縮する。ヘキサン中１２～５５％のＥｔＯＡｃを使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（１．６０ｇ、７７％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）、４０７（Ｍ－Ｈ）。
【0064】
調製１４
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］アセテート
フラスコに４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（２．０２ｇ、６．５８ｍｍｏｌ）、メチル２－（２－フルオロ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）アセテート（２．９９ｇ、９．８８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．３０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）をチャージする。混合物を通して窒素を１０分間バブリングする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ＤＣＭ錯体（４９２ｍｇ、０．６５８ｍｍｏｌ）を混合物に加え、５時間窒素下で８０℃に加熱する。反応混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過する。濾液を水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られた残留物をヘキサン中５～９０％のＥｔＯＡｃの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２．６８ｇ、９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］アセテート
【化39】
フラスコに４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（２．０２ｇ、６．５８ｍｍｏｌ）、メチル２－（２－フルオロ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェニル）アセテート（２．９９ｇ、９．８８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．３０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（３０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）をチャージする。混合物を通して窒素を１０分間バブリングする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ＤＣＭ錯体（４９２ｍｇ、０．６５８ｍｍｏｌ）を混合物に加え、５時間窒素下で８０℃に加熱する。反応混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過する。濾液を水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られた残留物をヘキサン中５～９０％のＥｔＯＡｃの勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２．６８ｇ、９４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【0065】
調製１５
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセテート
メチル２－［２，６－ジフルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）フェニル］アセテートを使用し、反応物を８０℃で一晩加熱して、本質的に調製１３に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４１３（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセテート
【化40】
メチル２－［２，６－ジフルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）フェニル］アセテートを使用し、反応物を８０℃で一晩加熱して、本質的に調製１３に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４１３（Ｍ＋Ｈ）。
【0066】
調製１６
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセテート
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－３－メチル－フェニル］アセテートを使用し、反応物を８０℃で３時間加熱して、本質的に調製１３に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセテート
【化41】
メチル２－［２－フルオロ－４－（６－ヒドロキシ－２－ピリジル）－３－メチル－フェニル］アセテートを使用し、反応物を８０℃で３時間加熱して、本質的に調製１３に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）。
【0067】
調製１７
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］酢酸
フラスコにメチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセテート（１．２０ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、および水酸化リチウム（０．３５ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で３時間加熱する。混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．１ｇ、９５％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３７７（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］酢酸
【化42】
フラスコにメチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセテート（１．２０ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）、および水酸化リチウム（０．３５ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で３時間加熱する。混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．１ｇ、９５％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３７７（Ｍ＋Ｈ）。
【0068】
調製１８
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］酢酸
バイアルにメチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセテート（１．６ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、水（６ｍＬ）、および水酸化リチウム（０．４５ｇ、１９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で２時間加熱し、混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．５５ｇ、１００％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］酢酸
【化43】
バイアルにメチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセテート（１．６ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、水（６ｍＬ）、および水酸化リチウム（０．４５ｇ、１９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で２時間加熱し、混合物を氷浴で冷却し、１．０Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１．５５ｇ、１００％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【0069】
調製１９
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］酢酸
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］アセテート（２．６８ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、次に水酸化リチウム（７９７ｍｇ、３２．９ｍｍｏｌ）および水（２０ｍＬ）を加える。室温で５時間撹拌した後、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）で反応混合物のｐＨを５に調整する。揮発性溶媒を真空中で除去して、水性スラリーを得る。固形物を濾過し、乾燥させて、表題化合物（２．２４ｇ、８８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８１（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］酢酸
【化44】
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］アセテート（２．６８ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、次に水酸化リチウム（７９７ｍｇ、３２．９ｍｍｏｌ）および水（２０ｍＬ）を加える。室温で５時間撹拌した後、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）で反応混合物のｐＨを５に調整する。揮発性溶媒を真空中で除去して、水性スラリーを得る。固形物を濾過し、乾燥させて、表題化合物（２．２４ｇ、８８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８１（Ｍ＋Ｈ）。
【0070】
調製２０
２－［４－［６［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］酢酸
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセテートを使用して、本質的に調製１８に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９９（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］酢酸
【化45】
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセテートを使用して、本質的に調製１８に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９９（Ｍ＋Ｈ）。
【0071】
調製２１
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］酢酸
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセテートを使用して、本質的に調製１７に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］酢酸
【化46】
メチル２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセテートを使用して、本質的に調製１７に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９５（Ｍ＋Ｈ）。
【0072】
調製２２
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］酢酸
４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（０．７０ｇ、２．３ｍｍｏｌ）および２－（４－ボロノフェニル）酢酸（０．６４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、水（５ｍＬ）および炭酸カリウム（０．６３ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を一緒に混合する。混合物を窒素で１０分間パージし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．０８５ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７５℃で８時間加熱する。ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）で混合物をｐＨ４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、次に濾過し、濃縮する。ヘキサン中２５～６５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（８００ｍｇ、９７％収率）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６３．０（Ｍ＋Ｈ）。
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］酢酸
【化47】
４－［（６－ブロモ－２－ピリジル）オキシメチル］－３－フルオロ－ベンゾニトリル（０．７０ｇ、２．３ｍｍｏｌ）および２－（４－ボロノフェニル）酢酸（０．６４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、水（５ｍＬ）および炭酸カリウム（０．６３ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を一緒に混合する。混合物を窒素で１０分間パージし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．０８５ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７５℃で８時間加熱する。ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）で混合物をｐＨ４～５に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間で分配する。有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、次に濾過し、濃縮する。ヘキサン中２５～６５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（８００ｍｇ、９７％収率）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６３．０（Ｍ＋Ｈ）。
【0073】
調製２３
メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル３－フルオロ－４－ニトロ－ベンゾエート（２．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（３．１ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を室温で加える。わずかに黄色の溶液に［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メタンアミン（Ａｕｓｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、１．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加え、さび色の溶液を一晩攪拌する。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈する。有機層を分離し、次に水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で逆抽出する。有機物を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、残留物を高真空下で乾燥させる。これにより、粗メチル４－ニトロ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（２．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を黄色の固体として得る（ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２６７（Ｍ＋Ｈ））。
メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化48】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル３－フルオロ－４－ニトロ－ベンゾエート（２．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（３．１ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を室温で加える。わずかに黄色の溶液に［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メタンアミン（Ａｕｓｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、１．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加え、さび色の溶液を一晩攪拌する。反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈する。有機層を分離し、次に水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で逆抽出する。有機物を合わせ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、残留物を高真空下で乾燥させる。これにより、粗メチル４－ニトロ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（２．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を黄色の固体として得る（ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２６７（Ｍ＋Ｈ））。
【0074】
次に、メチル４－ニトロ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（２．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、パラジウム炭素（５％、水で事前湿潤化、０．５ｇ）を加える。反応混合物を水素で真空パージし、次に水素のバルーン下で室温で２時間撹拌し、その時間の間に黄色は消滅する。混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、濃縮して、表題化合物（２．４ｇ、９９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３７（Ｍ＋Ｈ）。
【0075】
調製２４
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
バイアルに２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］酢酸（１．１０ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１．４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（０．７６ｇ、３．２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（１．２ｇ、６９％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５９５（Ｍ＋１）、５９３（Ｍ－１）。
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化49】
バイアルに２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］酢酸（１．１０ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１．４ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（０．７６ｇ、３．２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（１．２ｇ、６９％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５９５（Ｍ＋１）、５９３（Ｍ－１）。
【0076】
調製２５
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
フラスコに以下を加える：２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］酢酸（１．２０ｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１．２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（０．８０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物を固体として得る（１．２０ｇ、６４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１３（Ｍ＋１）、６１１（Ｍ－Ｈ）。
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化50】
フラスコに以下を加える：２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］酢酸（１．２０ｇ、３．０４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１５ｍＬ）、ＨＡＴＵ（１．２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（０．８０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）。混合物を室温で３０分間撹拌し、次にＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中１０～３５％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物を固体として得る（１．２０ｇ、６４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１３（Ｍ＋１）、６１１（Ｍ－Ｈ）。
【0077】
調製２６
メチル２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート
丸底フラスコに２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］酢酸（２０５ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１１６ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５８９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（５ｍＬ）を加える。室温で３．５時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中０～１０％のＭｅＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、中間体アミド（３２６ｍｇ）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５９９（Ｍ＋Ｈ）。
メチル２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート
【化51】
丸底フラスコに２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］酢酸（２０５ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）、メチル４－アミノ－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１１６ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２２４ｍｇ、０．５８９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（５ｍＬ）を加える。室温で３．５時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。ＤＣＭ中０～１０％のＭｅＯＨの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製して、中間体アミド（３２６ｍｇ）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５９９（Ｍ＋Ｈ）。
【0078】
中間体アミドを酢酸（５ｍＬ）とともに５０℃で１５時間加熱する。反応混合物を真空中で濃縮し、残りの残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）に溶解する。有機物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄する。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。得られたものをヘキサン中２０～１００％のＥｔＯＡｃの勾配を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（１５２ｍｇ、５２％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１（Ｍ＋Ｈ）。
【0079】
調製２７
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２４に記載されているように表題化合物を調製する。水性ワークアップの間に沈殿する生成物を濾過により収集し、さらに精製することなく使用する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１７（Ｍ＋Ｈ）、６１５（Ｍ－Ｈ）。
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化52】
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２４に記載されているように表題化合物を調製する。水性ワークアップの間に沈殿する生成物を濾過により収集し、さらに精製することなく使用する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１７（Ｍ＋Ｈ）、６１５（Ｍ－Ｈ）。
【0080】
調製２８
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２４に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１３（Ｍ＋Ｈ）、６１１（Ｍ－Ｈ）。
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化53】
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２４に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ６１３（Ｍ＋Ｈ）、６１１（Ｍ－Ｈ）。
【0081】
調製２９
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２５に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１．０（Ｍ＋Ｈ）、５７９．０（Ｍ－Ｈ）。
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート
【化54】
２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］酢酸を使用して、本質的に調製２５に記載されているように表題化合物を調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１．０（Ｍ＋Ｈ）、５７９．０（Ｍ－Ｈ）。
【0082】
実施例１
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
バイアルにメチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１．２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）および酢酸（６ｍＬ）を加える。混合物を８０℃で２時間加熱し、次に溶媒を真空中で除去する。残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３水溶液（５％、２０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＡＣＮ（５ｍＬ）および水（３ｍＬ）に溶解し、次に混合物にＬｉＯＨ（０．２２ｇ、９．２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌する。溶媒を真空中で除去する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（９００ｍｇ、７９％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５６３（Ｍ＋Ｈ）、５６１（Ｍ－Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化55】
バイアルにメチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１．２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）および酢酸（６ｍＬ）を加える。混合物を８０℃で２時間加熱し、次に溶媒を真空中で除去する。残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３水溶液（５％、２０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＡＣＮ（５ｍＬ）および水（３ｍＬ）に溶解し、次に混合物にＬｉＯＨ（０．２２ｇ、９．２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌する。溶媒を真空中で除去する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（９００ｍｇ、７９％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５６３（Ｍ＋Ｈ）、５６１（Ｍ－Ｈ）。
【0083】
実施例２
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
バイアルにメチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１．２０ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）および酢酸（１５ｍＬ）を加え、次に混合物を８０℃で２時間加熱する。溶媒を真空中で除去する。残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３水溶液（５％、２０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＡＣＮ（１０ｍＬ）および水（４ｍＬ）に溶解し、次に混合物にＬｉＯＨ（０．２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌する。混合物を飽和クエン酸水溶液でｐＨ＝４～５に酸性化する。溶媒を真空中で除去する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（７４５ｍｇ、６６％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１（Ｍ＋Ｈ）、５７９（Ｍ－Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化56】
バイアルにメチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエート（１．２０ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）および酢酸（１５ｍＬ）を加え、次に混合物を８０℃で２時間加熱する。溶媒を真空中で除去する。残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３水溶液（５％、２０ｍＬ）との間で分配する。有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をＡＣＮ（１０ｍＬ）および水（４ｍＬ）に溶解し、次に混合物にＬｉＯＨ（０．２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌する。混合物を飽和クエン酸水溶液でｐＨ＝４～５に酸性化する。溶媒を真空中で除去する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して、表題化合物（７４５ｍｇ、６６％）を固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１（Ｍ＋Ｈ）、５７９（Ｍ－Ｈ）。
【0084】
実施例２ａ
ｔｅｒｔ－ブチルアンモニウム；２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート
方法１－種結晶を用いない調製
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸（５５５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）をアセトン（６ｍＬ）に８００ｒｐｍで５０℃で撹拌しながら懸濁し、白色固体のスラリーを得る。ｔｅｒｔ－ブチルアミン（１１５μＬ、１．０９ｍｍｏｌ、１．１４ｅｑ）を加え、混合物の短時間の清澄化とそれに続く白色固体の沈殿を観察する。このスラリーを５０℃で１時間攪拌し、次に加熱を止め、試料を攪拌して室温にする。固体を真空濾過により濾別し、窒素流下で１５分間適当に乾燥させ、次に真空中で５０℃で１時間乾燥させて、表題化合物（６１２ｍｇ、９８％）を得る。
ｔｅｒｔ－ブチルアンモニウム；２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート
【化57】
方法１－種結晶を用いない調製
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸（５５５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）をアセトン（６ｍＬ）に８００ｒｐｍで５０℃で撹拌しながら懸濁し、白色固体のスラリーを得る。ｔｅｒｔ－ブチルアミン（１１５μＬ、１．０９ｍｍｏｌ、１．１４ｅｑ）を加え、混合物の短時間の清澄化とそれに続く白色固体の沈殿を観察する。このスラリーを５０℃で１時間攪拌し、次に加熱を止め、試料を攪拌して室温にする。固体を真空濾過により濾別し、窒素流下で１５分間適当に乾燥させ、次に真空中で５０℃で１時間乾燥させて、表題化合物（６１２ｍｇ、９８％）を得る。
【0085】
方法２－種結晶を用いる調製
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸（５０ｇ、８６．１ｍｍｏｌ）、アセトン（６５８ｍＬ）、および水（４２ｍＬ）を一緒に混合し、混合物を５０℃で加熱する。混合物をＧＦ／Ｆペーパー上で濾過し、９４：６ｖ：ｖアセトン：水（２５ｍＬ）でリンスする。得られた溶液を５０℃で加熱する。ｔｅｒｔ－ブチルアミン（１０ｍＬ、９４．７ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）および９４：６ｖ：ｖアセトン：水（２５ｍＬ）の溶液を調製する。ｔｅｒｔ－ブチルアミン溶液（７ｍＬ）の一部を加え、続いてｔｅｒｔ－ブチルアンモニウム；２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート（５０ｍｇ）の種結晶を加える。残りのｔｅｒｔ－ブチルアミン溶液を０．４７ｍＬ／分の速度でシリンジポンプを介して約１時間かけて加える。得られた懸濁物を５０℃で２時間加熱し、次に混合物を周囲温度に一晩冷却する。スラリーを濾過し、アセトン（２×１００ｍＬ）でリンスする。湿潤ケーキを真空中で５０℃で一定重量になるまで乾燥させて、表題化合物（５１．８ｇ、９２％）を淡黄色の固体として得る。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸（５０ｇ、８６．１ｍｍｏｌ）、アセトン（６５８ｍＬ）、および水（４２ｍＬ）を一緒に混合し、混合物を５０℃で加熱する。混合物をＧＦ／Ｆペーパー上で濾過し、９４：６ｖ：ｖアセトン：水（２５ｍＬ）でリンスする。得られた溶液を５０℃で加熱する。ｔｅｒｔ－ブチルアミン（１０ｍＬ、９４．７ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）および９４：６ｖ：ｖアセトン：水（２５ｍＬ）の溶液を調製する。ｔｅｒｔ－ブチルアミン溶液（７ｍＬ）の一部を加え、続いてｔｅｒｔ－ブチルアンモニウム；２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－５－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート（５０ｍｇ）の種結晶を加える。残りのｔｅｒｔ－ブチルアミン溶液を０．４７ｍＬ／分の速度でシリンジポンプを介して約１時間かけて加える。得られた懸濁物を５０℃で２時間加熱し、次に混合物を周囲温度に一晩冷却する。スラリーを濾過し、アセトン（２×１００ｍＬ）でリンスする。湿潤ケーキを真空中で５０℃で一定重量になるまで乾燥させて、表題化合物（５１．８ｇ、９２％）を淡黄色の固体として得る。
【0086】
調製した表題化合物の試料は、ＣｕＫａ線を使用したＸＲＤパターンによって、以下の表１に記載する回折ピーク（２シータ値）を有するとして、特に１６．３および２２．５からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わせて６．９にピークを有するとして（０．２度の回折角の許容で）特徴付けられる。
【表1】
【0087】
実施例３
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
メチル２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート（１５２ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、次に水酸化リチウム（３１ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）および水（２ｍＬ）を加える。混合物を室温で１６時間撹拌し、次にＨＣｌ水溶液（１Ｎ）でｐＨを６に調整する。ＴＨＦを真空中で除去し、残りの固体を濾過によって収集する。ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液（１０ｍＭ、ｐＨ１０）中１０～４０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（６０ｍｇ、４１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５６７（Ｍ＋Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化58】
メチル２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボキシレート（１５２ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、次に水酸化リチウム（３１ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）および水（２ｍＬ）を加える。混合物を室温で１６時間撹拌し、次にＨＣｌ水溶液（１Ｎ）でｐＨを６に調整する。ＴＨＦを真空中で除去し、残りの固体を濾過によって収集する。ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液（１０ｍＭ、ｐＨ１０）中１０～４０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（６０ｍｇ、４１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５６７（Ｍ＋Ｈ）。
【0088】
実施例４
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］メチル］－３－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例１に記載されているように表題化合物を調製する。ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液（１０ｍＭ、ｐＨ１０）中３０～５０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８５（Ｍ＋Ｈ）、５８３（Ｍ－Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］メチル］－３－［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化59】
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２，６－ジフルオロ－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例１に記載されているように表題化合物を調製する。ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液（１０ｍＭ、ｐＨ１０）中３０～５０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８５（Ｍ＋Ｈ）、５８３（Ｍ－Ｈ）。
【0089】
実施例５
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例２に記載されているように表題化合物を調製する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中５～４０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１（Ｍ＋Ｈ）、５７９（Ｍ－Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化60】
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］－２－フルオロ－３－メチル－フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例２に記載されているように表題化合物を調製する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中５～４０％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５８１（Ｍ＋Ｈ）、５７９（Ｍ－Ｈ）。
【0090】
実施例６
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例１に記載されているように表題化合物を調製する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより粗生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５４９．０（Ｍ＋Ｈ）、５４７．１（Ｍ－Ｈ）。
２－［［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］メチル］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イル］メチル］ベンズイミダゾール－５－カルボン酸
【化61】
メチル４－［［２－［４－［６－［（４－シアノ－２－フルオロ－フェニル）メトキシ］－２－ピリジル］フェニル］アセチル］アミノ］－３－［［（２Ｓ）－オキセタン－２－イルメチル］アミノ］ベンゾエートを使用して、本質的に実施例１に記載されているように表題化合物を調製する。５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液中２０～３５％のＡＣＮの勾配を使用する逆相フラッシュクロマトグラフィーにより粗生成物を精製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ５４９．０（Ｍ＋Ｈ）、５４７．１（Ｍ－Ｈ）。
【0091】
生物学的アッセイ
ヒトＧＬＰ－１受容体ＨＥＫ２９３細胞ｃＡＭＰアッセイ
ＧＬＰ－１受容体機能活性を、５８１±９４（ｎ＝６）および１０４±１２（ｎ＝５）ｆｍｏｌ／ｍｇタンパク質の発現密度（［１２５Ｉ］ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２相同競合結合分析を使用して決定）でヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するＨＥＫ２９３クローン細胞株（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２０５３）におけるｃＡＭＰ形成を使用して決定する。ｈＧＬＰ－１Ｒ受容体発現細胞を、１Ｘ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５０）、０．１％ウシカゼイン（Ｓｉｇｍａ Ｃ４７６５－１０ＭＬ）、２５０μＭ ＩＢＭＸ（３－イソブチル－１－メチルキサンチン、Ａｃｒｏｓカタログ番号２２８４２００１０）および２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中の化合物（ＤＭＳＯ中２０点の濃度応答曲線、２．７５倍Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ直接希釈、３８４ウェルプレートＣｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５７０）で、２０μＬのアッセイ容積（最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％）で処理する。３７℃で３０分間のインキュベーションの後に、得られる細胞内ｃＡＭＰの増加を、ＣｉｓＢｉｏ ｃＡＭＰ Ｄｙｎａｍｉｃ ２ ＨＴＲＦ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（６２ＡＭ４ＰＥＪ）を使用して定量的に決定する。簡潔には、細胞溶解バッファー（１０μＬ）中のｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲート、続いてこれもまた細胞溶解バッファー（１０μＬ）中の抗体、抗ｃＡＭＰ－ｃＡＭＰ－Ｅｕ３＋－クリプテートを添加することによって、細胞内のｃＡＭＰレベルを検出する。得られる競合アッセイを室温で少なくとも６０分間インキュベートし、次にＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器を、３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍおよび６２０ｎｍでの発光で使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。各ウェルにおける生成ｃＡＭＰ量（ｎＭ）を、ヒトＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２について観察される最大応答の割合に変換する。相対的ＥＣ５０値および最大割合（％）（Ｅｍａｘ）を、４パラメータロジスティック方程式に適合させた、最大応答割合対添加化合物濃度を使用する非線形回帰分析によって導く。実施例１～６の化合物を、５８１および１０４ｆｍｏｌ／ｍｇのＧＬＰ－１Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞を使用する上記のｃＡＭＰアッセイにおいて試験したときのＥＣ５０およびＥｍａｘのデータをそれぞれ表２および３に示す。これらのデータは、実施例１～６の化合物がヒトＧＬＰ－１受容体のアゴニストであることを示す。
ヒトＧＬＰ－１受容体ＨＥＫ２９３細胞ｃＡＭＰアッセイ
ＧＬＰ－１受容体機能活性を、５８１±９４（ｎ＝６）および１０４±１２（ｎ＝５）ｆｍｏｌ／ｍｇタンパク質の発現密度（［１２５Ｉ］ＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２相同競合結合分析を使用して決定）でヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するＨＥＫ２９３クローン細胞株（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２０５３）におけるｃＡＭＰ形成を使用して決定する。ｈＧＬＰ－１Ｒ受容体発現細胞を、１Ｘ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３５０５０）、０．１％ウシカゼイン（Ｓｉｇｍａ Ｃ４７６５－１０ＭＬ）、２５０μＭ ＩＢＭＸ（３－イソブチル－１－メチルキサンチン、Ａｃｒｏｓカタログ番号２２８４２００１０）および２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１５６３０）を補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏカタログ番号３１０５３）中の化合物（ＤＭＳＯ中２０点の濃度応答曲線、２．７５倍Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ直接希釈、３８４ウェルプレートＣｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５７０）で、２０μＬのアッセイ容積（最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％）で処理する。３７℃で３０分間のインキュベーションの後に、得られる細胞内ｃＡＭＰの増加を、ＣｉｓＢｉｏ ｃＡＭＰ Ｄｙｎａｍｉｃ ２ ＨＴＲＦ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（６２ＡＭ４ＰＥＪ）を使用して定量的に決定する。簡潔には、細胞溶解バッファー（１０μＬ）中のｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲート、続いてこれもまた細胞溶解バッファー（１０μＬ）中の抗体、抗ｃＡＭＰ－ｃＡＭＰ－Ｅｕ３＋－クリプテートを添加することによって、細胞内のｃＡＭＰレベルを検出する。得られる競合アッセイを室温で少なくとも６０分間インキュベートし、次にＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）機器を、３２０ｎｍでの励起ならびに６６５ｎｍおよび６２０ｎｍでの発光で使用して検出する。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ単位（６６５ｎｍ／６２０ｎｍでの発光＊１０，０００）は存在するｃＡＭＰの量に反比例し、ｃＡＭＰ標準曲線を使用して、これを１ウェル当たりのｎＭ ｃＡＭＰに変換する。各ウェルにおける生成ｃＡＭＰ量（ｎＭ）を、ヒトＧＬＰ－１（７－３６）ＮＨ２について観察される最大応答の割合に変換する。相対的ＥＣ５０値および最大割合（％）（Ｅｍａｘ）を、４パラメータロジスティック方程式に適合させた、最大応答割合対添加化合物濃度を使用する非線形回帰分析によって導く。実施例１～６の化合物を、５８１および１０４ｆｍｏｌ／ｍｇのＧＬＰ－１Ｒを発現するＨＥＫ２９３細胞を使用する上記のｃＡＭＰアッセイにおいて試験したときのＥＣ５０およびＥｍａｘのデータをそれぞれ表２および３に示す。これらのデータは、実施例１～６の化合物がヒトＧＬＰ－１受容体のアゴニストであることを示す。
【表2】
【表3】
【0092】
ヒトＧＬＰ－１Ｒノックインマウスにおけるインビボ腹腔内糖負荷試験
インビボで血糖濃度を低下させる例示の化合物の効力を、マウスＧｌｐ－１ｒ遺伝子座からヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するマウス（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２０５３）を使用して決定する（Ｊｕｎ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４ ９：ｅ９３７４６）。一晩絶食させたマウスに、ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）中１０％Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）（ＨＳ１５）に可溶化した試験化合物を経口投与する。投与の１時間後に、動物に腹腔内注射によってグルコースを投与し（２ｇ／ｋｇ）、血糖値を血糖値計を使用して次の２時間にわたって断続的に測定する。一定用量範囲の試験化合物を送達し、各用量群についての曲線下面積の計算結果を決定し、これを、９５％信頼区間でのＥＤ５０としてインビボ効力を計算するために、４パラメータロジスティックモデルに適合させる。上記のインビボ腹腔内糖負荷試験において試験した場合、実施例１～３の化合物は、表４に示すＥＤ５０（および９５％信頼区間）値で、ヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するマウスにおいて血糖濃度を低下させる効力を示し、このことは、これらの化合物がマウスにおける経口利用可能で強力なＧＬＰ－１Ｒアゴニストであることを示す。
インビボで血糖濃度を低下させる例示の化合物の効力を、マウスＧｌｐ－１ｒ遺伝子座からヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するマウス（ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２０５３）を使用して決定する（Ｊｕｎ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４ ９：ｅ９３７４６）。一晩絶食させたマウスに、ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）中１０％Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）（ＨＳ１５）に可溶化した試験化合物を経口投与する。投与の１時間後に、動物に腹腔内注射によってグルコースを投与し（２ｇ／ｋｇ）、血糖値を血糖値計を使用して次の２時間にわたって断続的に測定する。一定用量範囲の試験化合物を送達し、各用量群についての曲線下面積の計算結果を決定し、これを、９５％信頼区間でのＥＤ５０としてインビボ効力を計算するために、４パラメータロジスティックモデルに適合させる。上記のインビボ腹腔内糖負荷試験において試験した場合、実施例１～３の化合物は、表４に示すＥＤ５０（および９５％信頼区間）値で、ヒトＧＬＰ－１Ｒを発現するマウスにおいて血糖濃度を低下させる効力を示し、このことは、これらの化合物がマウスにおける経口利用可能で強力なＧＬＰ－１Ｒアゴニストであることを示す。
【表4】
【0093】
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）薬物動態
試験化合物を、絶食させた雄性カニクイザルに０．５ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）投与する（１ｍＬ／ｋｇの投与容積を使用）。連続的な血液試料を、ＩＶボーラス投与の０．０８、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、および２４時間後に収集する。ＥＤＴＡ凝固剤で処理した後、血漿を遠心分離により取得し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析するまで－７０℃で保存する。試験物質濃度を血漿中で決定する。非コンパートメント解析を使用して、血漿クリアランスおよび定常状態の分布容積を計算する。表５は、このアッセイにおける実施例１～３の化合物に関する薬物動態データを示す。これらのデータは、部分的に、１日１回の投薬をサポートするためのヒト薬物動態プロファイルを示唆するヒトメカニズムＰＫ推定（ｈｕｍａｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ＰＫ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）の情報を与えるために使用される。
試験化合物を、絶食させた雄性カニクイザルに０．５ｍｇ／ｋｇで静脈内（ＩＶ）投与する（１ｍＬ／ｋｇの投与容積を使用）。連続的な血液試料を、ＩＶボーラス投与の０．０８、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、および２４時間後に収集する。ＥＤＴＡ凝固剤で処理した後、血漿を遠心分離により取得し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析するまで－７０℃で保存する。試験物質濃度を血漿中で決定する。非コンパートメント解析を使用して、血漿クリアランスおよび定常状態の分布容積を計算する。表５は、このアッセイにおける実施例１～３の化合物に関する薬物動態データを示す。これらのデータは、部分的に、１日１回の投薬をサポートするためのヒト薬物動態プロファイルを示唆するヒトメカニズムＰＫ推定（ｈｕｍａｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ＰＫ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ）の情報を与えるために使用される。
【表5】
【0094】
ホスホジエステラーゼ１０（ＰＤＥ１０）酵素活性アッセイ
ホスホジエステラーゼ１０Ａ１（ＰＤＥ１０Ａ１）タンパク質を生成するために、ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ ＡＡＤ３２５９５．１に対応する完全長ＰＤＥ１０Ａ１クローンを、ｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にクローン化する。Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有するＰＤＥ１０Ａ１タンパク質を、昆虫細胞のバキュロウイルス感染によって発現させ、抗ＦＬＡＧ Ｍ２－アガロース（Ｓｉｇｍａ）およびＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製し、－８０℃で小アリコートで保存する（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、Ｐｈ ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール）。
ホスホジエステラーゼ１０Ａ１（ＰＤＥ１０Ａ１）タンパク質を生成するために、ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ ＡＡＤ３２５９５．１に対応する完全長ＰＤＥ１０Ａ１クローンを、ｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にクローン化する。Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有するＰＤＥ１０Ａ１タンパク質を、昆虫細胞のバキュロウイルス感染によって発現させ、抗ＦＬＡＧ Ｍ２－アガロース（Ｓｉｇｍａ）およびＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製し、－８０℃で小アリコートで保存する（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、Ｐｈ ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール）。
【0095】
ＰＤＥ１０Ａ１酵素活性を、放射性ヌクレオチド一リン酸を検出するが環状一リン酸は検出しないケイ酸イットリウムベースのシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を用いて測定する。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、８ｍＭ ＭｇＣｌ２、３．４ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）で構成される。アッセイを、３８４ウェルプレート（３７０６、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、２４μｌのＰＤＥ１０Ａ１酵素、１μｌの試験化合物、および２５μｌの環状ヌクレオチドで構成される総容積５０μｌ中で実施する。試験化合物を、３倍希釈係数での１０点濃度応答曲線を使用して純粋ＤＭＳＯ中で希釈し、１μｌをＥｃｈｏ５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を使用してアッセイプレート中に音響的に分注する。反応を［８－３Ｈ］－ｃＧＭＰ基質（６．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）の添加によって開始する前に、２４μｌのＰＤＥ１０Ａ１タンパク質を１μｌの化合物とともに３０分間インキュベートする。成分の最終濃度は、アッセイバッファー中７０ｐＭ ＰＤＥ１０Ａ１、８０ｎＭ（３Ｈ－ｃＧＭＰ）、および２％ＤＭＳＯである。反応混合物中の最大化合物濃度は、１０μＭである。反応物を室温で６０分間インキュベートし、その後、クエンチし、４００ｍｇ／ウェルのＳＰＡビーズ（ＲＰＮＱ０１５０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加する。ビーズに結合した放射能（生成物）を、１２時間後にＭｉｃｒｏｂｅｔａカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて定量化する。データを％阻害に正規化し、ＩＣ５０値を記載されているように４パラメータロジスティック方程式を使用して計算する（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｒ．Ｍ．；Ｄｙｍｓｈｉｔｚ，Ｊ．；Ｅａｓｔｗｏｏｄ，Ｂ．Ｊ．；ｅｔ ａｌ．「Ｄａｔａ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．」Ｉｎ：Ｓｉｔｔａｍｐａｌａｍ，Ｇ．Ｓ．；Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ａ．；Ｂｒｉｍａｃｏｍｂｅ，Ｋ．；ｅｔ ａｌ．；ｅｄｓ．Ａｓｓａｙ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ（ＭＤ）：Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ＆Ｃｏｍｐａｎｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｉｎｇ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；２００４．）。表６は、このアッセイにおける実施例１～４の化合物の活性を示す。これらのデータは、実施例１～４の化合物がＰＤＥ１０Ａに対する弱い結合親和性を有することを示しており、これは低減された毒性リスクを示す。
【表6】
【0096】
ヒトｈＥＲＧ Ｋ＋チャネル親和性放射性リガンド結合アッセイ
トランスフェクトされたＨＥＫ－２９３細胞におけるヒトｈＥＲＧ Ｋ＋チャネルに対する化合物の親和性を、本明細書に記載の放射性リガンド結合アッセイにおいて評価する。細胞膜ホモジネート（約４０μｇタンパク質）を６０分間２２℃で３ｎＭの［３Ｈ］ドフェチリドとともに試験化合物の非存在下または存在下で５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ ＫＣｌおよび１ｍＭ ＭｇＣｌ２を含有するバッファー中でインキュベートする。アッセイを、試験化合物の最初の可溶化から最大１％のＤＭＳＯを含有する２００μＬの容積で９６ウェルプレートフォーマットで実施する。インキュベーション後に、９６サンプルセルハーベスター（Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、０．３％ＰＥＩで予浸し、氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１０ｍＭ ＫＣｌおよび１ｍＭ ＭｇＣｌ２で数回リンスしたガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を通して真空下で迅速に試料を濾過する。フィルターを乾燥させ、次にシンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用してシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で放射能をカウントする。表７は、対照放射性リガンド特異的結合のパーセント阻害として表される、このアッセイにおける実施例１～３の活性を示す。これらのデータは、実施例１～３の化合物が弱いｈＥＲＧ阻害活性を有することを示しており、これは低減された毒性リスクを示す。
トランスフェクトされたＨＥＫ－２９３細胞におけるヒトｈＥＲＧ Ｋ＋チャネルに対する化合物の親和性を、本明細書に記載の放射性リガンド結合アッセイにおいて評価する。細胞膜ホモジネート（約４０μｇタンパク質）を６０分間２２℃で３ｎＭの［３Ｈ］ドフェチリドとともに試験化合物の非存在下または存在下で５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ ＫＣｌおよび１ｍＭ ＭｇＣｌ２を含有するバッファー中でインキュベートする。アッセイを、試験化合物の最初の可溶化から最大１％のＤＭＳＯを含有する２００μＬの容積で９６ウェルプレートフォーマットで実施する。インキュベーション後に、９６サンプルセルハーベスター（Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、０．３％ＰＥＩで予浸し、氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１０ｍＭ ＫＣｌおよび１ｍＭ ＭｇＣｌ２で数回リンスしたガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を通して真空下で迅速に試料を濾過する。フィルターを乾燥させ、次にシンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用してシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で放射能をカウントする。表７は、対照放射性リガンド特異的結合のパーセント阻害として表される、このアッセイにおける実施例１～３の活性を示す。これらのデータは、実施例１～３の化合物が弱いｈＥＲＧ阻害活性を有することを示しており、これは低減された毒性リスクを示す。
【表7】