▶ アイ−マブ バイオファーマ ユーエス リミテッドの特許一覧
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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-04-07
(45)【発行日】2023-04-17
(54)【発明の名称】新規なＣＤ４７モノクローナル抗体およびこの使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20230410BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230410BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230410BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230410BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20230410BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230410BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230410BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230410BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20230410BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230410BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230410BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230410BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230410BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230410BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230410BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230410BHJP
C12P 21/08 20060101ALN20230410BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61P43/00 111
A61P43/00 105
A61P35/00
A61P35/02
A61P7/04
A61P9/00
A61P9/10
A61P11/00
A61P11/06
A61P19/02
A61K39/395 N
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/13
C12P21/08
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2022035942
(22)【出願日】2022-03-09
(62)【分割の表示】P 2018519859の分割
【原出願日】2017-10-20
(65)【公開番号】P2022078249
(43)【公開日】2022-05-24
【審査請求日】2022-04-06
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2016/102720
(32)【優先日】2016-10-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2017/076462
(32)【優先日】2017-03-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2017/000329
(32)【優先日】2017-04-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】519425729
【氏名又は名称】アイ－マブ バイオファーマ ユーエス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110001173
【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ワン，チェンギィ
(72)【発明者】
【氏名】ファン，レイ
(72)【発明者】
【氏名】グオ，ビンシィ
(72)【発明者】
【氏名】ツァン，ジンウ
【審査官】山本 晋也
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１５－５０８０７２（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
Ａ６１Ｋ
Ｃ１２Ｎ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
それぞれが配列番号：３１のアミノ酸配列を含む可変重（ＶＨ）鎖配列に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含む２個の重鎖；ならびにそれぞれが配列番号：３２のアミノ酸配列を含む可変軽（ＶＬ）鎖配列に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む２個の軽鎖を有し、
この際、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)の番号付けに従い、
前記２個の重鎖はそれぞれ配列番号：３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％一致するＶＨ鎖領域を有し、前記２個の軽鎖はそれぞれ配列番号：３２のアミノ酸配列と一致するＶＬ鎖領域を有する、ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体。
【請求項2】
前記抗体はヒトＩｇＧ４重鎖およびヒトカッパ軽鎖を有する、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項3】
前記単離されたモノクローナル抗体は、有意なレベルの赤血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさない、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項4】
前記単離されたモノクローナル抗体は、ヒトＣＤ４７がシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）と相互作用することを防止する、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項5】
前記単離されたモノクローナル抗体は、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージが介する食作用を促進する、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項7】
請求項６に記載の核酸を有する発現ベクター。
【請求項8】
請求項６に記載の核酸を有する単離された細胞。
【請求項9】
請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体、および製薬上許容できる担体を含む薬剤組成物。
【請求項10】
治療上有効な量の請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体、または請求項９に記載の薬剤組成物を患者に投与することを有する病気を処置する必要のあるヒト患者の病気の処置方法のために使用され、前記病気は、癌、線維症、食作用の阻害に関連する病気、または血小板凝集に関連する病気である、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体または請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項11】
前記癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、大型顆粒リンパ球白血病、成人Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、骨髄腫、単球性白血病、Ｂ細胞白血病、Ｔ細胞白血病、Ｂ細胞由来リンパ腫、Ｔ細胞由来リンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、黒色腫、前立腺癌、甲状腺癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、および固形腫瘍からなる群より選択され；前記線維症は、心筋梗塞、狭心症、変形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、気管支炎、および喘息からなる群より選択され；前記食作用の阻害に関連する病気は、心血管疾患であり；前記血小板凝集に関連する病気は、グランツマン血小板無力症(Glanzmann Thrombasthenia)、出血時間延長、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、フォン・ヴィレブランド病（ｖＷＤ）である、請求項１０に記載の単離されたモノクローナル抗体または薬剤組成物。
【請求項12】
前記癌は固形腫瘍である、請求項１０に記載の単離されたモノクローナル抗体または薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月２０日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１６／
１０２７２０、２０１７年３月１３日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／
０７６４６２、および２０１７年４月２７日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０
１７／０００３２９の優先権を主張し、これらの内容は全体が本明細書に組み入れられる
。
本出願は、２０１６年１０月２０日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１６／
１０２７２０、２０１７年３月１３日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／
０７６４６２、および２０１７年４月２７日に提出された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０
１７／０００３２９の優先権を主張し、これらの内容は全体が本明細書に組み入れられる
。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
ＣＤ４７(Cluster of Differentiation 47)は、１９８０年代にヒト卵巣癌で腫瘍抗原
として最初に同定された。それから、ＣＤ４７は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨
髄性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨
髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、や他の固形腫瘍などの複数のヒト腫瘍タイプで発現することが見
出された。高レベルのＣＤ４７により、癌細胞はより高レベルのカルレティキュリン－優
勢の前－食作用シグナル(dominant pro-phagocytic signal)を有するにもかかわらず食作
用がなくなる。
ＣＤ４７(Cluster of Differentiation 47)は、１９８０年代にヒト卵巣癌で腫瘍抗原
として最初に同定された。それから、ＣＤ４７は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨
髄性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨
髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、や他の固形腫瘍などの複数のヒト腫瘍タイプで発現することが見
出された。高レベルのＣＤ４７により、癌細胞はより高レベルのカルレティキュリン－優
勢の前－食作用シグナル(dominant pro-phagocytic signal)を有するにもかかわらず食作
用がなくなる。
【0003】
インテグリン結合タンパク質(integrin-associated protein)（ＩＡＰ）、卵巣癌抗原
ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６としても知られているが、ＣＤ４７は、免疫グロブリ
ンスーパーファミリーに属するマルチスパンニング膜貫通型受容体(multi-spanning tran
smembrane receptor)である。その発現および活性は、数多くの病気や疾患とかかわりが
ある。ＣＤ４７は、１つのＩｇ様ドメイン及び５つの膜貫通領域(membrane spanning reg
ion)を有する広範に発現する膜貫通型糖タンパク質であり、シグナル調節タンパク質α(s
ignal-regulatory-protein α)（ＳＩＲＰα）のＮＨ２－末端Ｖ様ドメインを介して結合
するＳＩＲＰαの細胞リガンドとして機能する。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、顆粒球
、骨髄樹状細胞（ＤＣ）、肥満細胞、及び造血幹細胞等のこれらの前駆細胞などの骨髄性
細胞で主に発現する。
ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６としても知られているが、ＣＤ４７は、免疫グロブリ
ンスーパーファミリーに属するマルチスパンニング膜貫通型受容体(multi-spanning tran
smembrane receptor)である。その発現および活性は、数多くの病気や疾患とかかわりが
ある。ＣＤ４７は、１つのＩｇ様ドメイン及び５つの膜貫通領域(membrane spanning reg
ion)を有する広範に発現する膜貫通型糖タンパク質であり、シグナル調節タンパク質α(s
ignal-regulatory-protein α)（ＳＩＲＰα）のＮＨ２－末端Ｖ様ドメインを介して結合
するＳＩＲＰαの細胞リガンドとして機能する。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、顆粒球
、骨髄樹状細胞（ＤＣ）、肥満細胞、及び造血幹細胞等のこれらの前駆細胞などの骨髄性
細胞で主に発現する。
【0004】
マクロファージは、食作用により病原体やダメージを受けたまたは老齢の血流の細胞を
取り除く。細胞表面のＣＤ４７は、マクロファージ上のレセプターである、ＳＩＲＰαと
相互作用して、正常な健常細胞の食作用を阻害する。ＳＩＲＰαは、マクロファージによ
って宿主細胞の食作用を阻害し、宿主標的細胞で発現するＣＤ４７によるマクロファージ
上のＳＩＲＰαのライゲーションにより、食作用をネガティブに調節するＳＨＰ－１によ
って仲介される阻害シグナルを生じさせる。
取り除く。細胞表面のＣＤ４７は、マクロファージ上のレセプターである、ＳＩＲＰαと
相互作用して、正常な健常細胞の食作用を阻害する。ＳＩＲＰαは、マクロファージによ
って宿主細胞の食作用を阻害し、宿主標的細胞で発現するＣＤ４７によるマクロファージ
上のＳＩＲＰαのライゲーションにより、食作用をネガティブに調節するＳＨＰ－１によ
って仲介される阻害シグナルを生じさせる。
【0005】
ＣＤ４７が正常細胞の食作用を阻害する役割を維持すると、その移行期の直前または移
行期中に造血幹細胞（ＨＳＣ）や前駆細胞で一時的にアップレギュレートされ、これらの
細胞でのＣＤ４７のレベルによりインビボで飲み込まれる可能性が決定されるという証拠
がある。
行期中に造血幹細胞（ＨＳＣ）や前駆細胞で一時的にアップレギュレートされ、これらの
細胞でのＣＤ４７のレベルによりインビボで飲み込まれる可能性が決定されるという証拠
がある。
【0006】
ＣＤ４７はまたその構造により、骨髄性白血病等の、数多くの癌でアップレギュレート
される。骨髄性白血病細胞系でのＣＤ４７の過剰発現は、食作用を避けさせることによっ
てその病原性を増加させる。ＣＤ４７のアップレギュレーションは炎症によるモビリゼー
ション(mobilization)中の正常なＨＳＣへの保護を提供するための重要なメカニズムであ
り、白血病前駆細胞(leukemic progenitor)がマクロファージを殺すことを避けるために
この能力を吸収する(co-opt)と結論つけた。
される。骨髄性白血病細胞系でのＣＤ４７の過剰発現は、食作用を避けさせることによっ
てその病原性を増加させる。ＣＤ４７のアップレギュレーションは炎症によるモビリゼー
ション(mobilization)中の正常なＨＳＣへの保護を提供するための重要なメカニズムであ
り、白血病前駆細胞(leukemic progenitor)がマクロファージを殺すことを避けるために
この能力を吸収する(co-opt)と結論つけた。
【0007】
特定のＣＤ４７抗体が食作用を回復させてアテローム性動脈硬化症を防止することが示
された。例えば、Kojima et al., Nature, Vol. 36, 86-90 (Aug. 4, 2016)を参照。本発
明は、ヒトでの免疫原性が低く、赤血球の枯渇(red blood cell depletion)のレベルが低
いまたはない新規なＣＤ４７抗体またはその免疫学的に活性のある断片を提供する。当業
者にはよく知られているように、このような抗体は、「抗ＣＤ４７抗体」とほとんど同じ
意味で呼ばれる。
された。例えば、Kojima et al., Nature, Vol. 36, 86-90 (Aug. 4, 2016)を参照。本発
明は、ヒトでの免疫原性が低く、赤血球の枯渇(red blood cell depletion)のレベルが低
いまたはない新規なＣＤ４７抗体またはその免疫学的に活性のある断片を提供する。当業
者にはよく知られているように、このような抗体は、「抗ＣＤ４７抗体」とほとんど同じ
意味で呼ばれる。
【発明の概要】
【0008】
発明の要約
一態様では、本発明は、ヒトＣＤ４７に結合する単離モノクローナル抗体およびその免
疫学的に活性のある断片を提供する。簡略して表現するために、上記ＣＤ４７に結合する
単離モノクローナル抗体およびその免疫学的に活性のある断片を、以降では「ＣＤ抗体」
と称する。本発明のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７の発現、活性および／またはシグナル伝達
、またはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を、調節する、例えば、遮断する、阻害する
、抑制する、拮抗する、中和する、または干渉することが可能である。非常に驚くべきこ
とに、本発明のＣＤ４７抗体は、通常、有意なレベルのヒト赤血球の枯渇または赤血球凝
集を引き起こさず、驚くべきことに、多くの場合において、ヒト赤血球の枯渇または赤血
球凝集を全く引き起こさない。さらに、本発明のＣＤ４７抗体は、強力な抗腫瘍活性を示
した。
一態様では、本発明は、ヒトＣＤ４７に結合する単離モノクローナル抗体およびその免
疫学的に活性のある断片を提供する。簡略して表現するために、上記ＣＤ４７に結合する
単離モノクローナル抗体およびその免疫学的に活性のある断片を、以降では「ＣＤ抗体」
と称する。本発明のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７の発現、活性および／またはシグナル伝達
、またはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を、調節する、例えば、遮断する、阻害する
、抑制する、拮抗する、中和する、または干渉することが可能である。非常に驚くべきこ
とに、本発明のＣＤ４７抗体は、通常、有意なレベルのヒト赤血球の枯渇または赤血球凝
集を引き起こさず、驚くべきことに、多くの場合において、ヒト赤血球の枯渇または赤血
球凝集を全く引き起こさない。さらに、本発明のＣＤ４７抗体は、強力な抗腫瘍活性を示
した。
【0009】
実施形態によっては、本発明のＣＤ４７抗体は、それぞれ、（ａ）配列番号：１、配列
番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１
３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２
３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３
３、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４
３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５
３、配列番号：５５、配列番号：５７、配列番号：５９、配列番号：６１、配列番号：６
３、配列番号：６５、配列番号：６７、配列番号：６９、配列番号：７１、配列番号：７
３、配列番号：７５、および配列番号：７７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変重（ＶＨ）鎖配列；ならびに
（ｂ）配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配
列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配
列番号：２２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配
列番号：３２、配列番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配
列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配
列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８、配列番号：６０、配
列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配
列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６、および配列番号：７８からなる群より
選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変
軽（ＶＬ）鎖配列を有する。
番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１
３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２
３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３
３、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４
３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５
３、配列番号：５５、配列番号：５７、配列番号：５９、配列番号：６１、配列番号：６
３、配列番号：６５、配列番号：６７、配列番号：６９、配列番号：７１、配列番号：７
３、配列番号：７５、および配列番号：７７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少
なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変重（ＶＨ）鎖配列；ならびに
（ｂ）配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配
列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配
列番号：２２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配
列番号：３２、配列番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配
列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配
列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８、配列番号：６０、配
列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配
列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６、および配列番号：７８からなる群より
選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変
軽（ＶＬ）鎖配列を有する。
【0010】
他の実施形態によっては、本発明のＣＤ４７抗体は、それぞれ、配列番号：１および配
列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち、１Ｆ８）、配列
番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および配列番号：８（即
ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、配列番号：１１お
よび配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号：１４（即ち、２
Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配列番号：１７およ
び配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：２０（即ち、５Ｆ
６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番号：２３および配
列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６（即ち、２Ｂ１２
）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列番号：２９および
配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：３２（即ち、１３
Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配列番号：３５およ
び配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号：３８（即ち、１
Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、配列番号：４１お
よび配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列番号：４４（即ち
、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、配列番号：４７お
よび配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号：５０（即ち、１
Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列番号：５３および
配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号：５６（即ち、１
Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、配列番号：５９お
よび配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号：６２（即ち、２
Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配列番号：６５およ
び配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：６８（即ち、２Ｃ
６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番号：７１および配
列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４（即ち、２Ｆ１）
、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、ならびに配列番号：７７およ
び配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）からなる群より選択される１対のＶＨおよびＶＬア
ミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９５％、９６、９７％、９
８％、９９％、または９９．５％）一致する１対のＶＨ／ＶＬ鎖配列を有する。
列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち、１Ｆ８）、配列
番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および配列番号：８（即
ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、配列番号：１１お
よび配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号：１４（即ち、２
Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配列番号：１７およ
び配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：２０（即ち、５Ｆ
６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番号：２３および配
列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６（即ち、２Ｂ１２
）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列番号：２９および
配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：３２（即ち、１３
Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配列番号：３５およ
び配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号：３８（即ち、１
Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、配列番号：４１お
よび配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列番号：４４（即ち
、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、配列番号：４７お
よび配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号：５０（即ち、１
Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列番号：５３および
配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号：５６（即ち、１
Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、配列番号：５９お
よび配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号：６２（即ち、２
Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配列番号：６５およ
び配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：６８（即ち、２Ｃ
６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番号：７１および配
列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４（即ち、２Ｆ１）
、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、ならびに配列番号：７７およ
び配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）からなる群より選択される１対のＶＨおよびＶＬア
ミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９５％、９６、９７％、９
８％、９９％、または９９．５％）一致する１対のＶＨ／ＶＬ鎖配列を有する。
【0011】
場合によっては、本発明のＣＤ４７抗体は、それぞれ、配列番号：１および配列番号：
２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち、１Ｆ８）、配列番号：５
および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および配列番号：８（即ち、２Ｃ
２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、配列番号：１１および配列
番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号：１４（即ち、２Ｇ１１）
、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配列番号：１７および配列番
号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：２０（即ち、５Ｆ６）、配
列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番号：２３および配列番号：
２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６（即ち、２Ｂ１２）、配列
番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列番号：２９および配列番号
：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：３２（即ち、１３Ｈ３）、
配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配列番号：３５および配列番
号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号：３８（即ち、１Ａ１）、
配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、配列番号：４１および配列
番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列番号：４４（即ち、１Ａ２
）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、配列番号：４７および配列
番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号：５０（即ち、１Ｂ２）、
配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列番号：５３および配列番号
：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ
）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、配列番号：５９および配列
番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号：６２（即ち、２Ａ６）、
配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配列番号：６５および配列番
号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：６８（即ち、２Ｃ６）、配
列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番号：７１および配列番号：
７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４（即ち、２Ｆ１）、配列番
号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、ならびに配列番号：７７および配列番
号：７８（即ち、３４Ｃ５）からなる群より選択される１対のＶＨおよびＶＬ鎖配列を有
する。
２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち、１Ｆ８）、配列番号：５
および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および配列番号：８（即ち、２Ｃ
２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、配列番号：１１および配列
番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号：１４（即ち、２Ｇ１１）
、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配列番号：１７および配列番
号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：２０（即ち、５Ｆ６）、配
列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番号：２３および配列番号：
２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６（即ち、２Ｂ１２）、配列
番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列番号：２９および配列番号
：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：３２（即ち、１３Ｈ３）、
配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配列番号：３５および配列番
号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号：３８（即ち、１Ａ１）、
配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、配列番号：４１および配列
番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列番号：４４（即ち、１Ａ２
）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、配列番号：４７および配列
番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号：５０（即ち、１Ｂ２）、
配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列番号：５３および配列番号
：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ
）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、配列番号：５９および配列
番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号：６２（即ち、２Ａ６）、
配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配列番号：６５および配列番
号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：６８（即ち、２Ｃ６）、配
列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番号：７１および配列番号：
７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４（即ち、２Ｆ１）、配列番
号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、ならびに配列番号：７７および配列番
号：７８（即ち、３４Ｃ５）からなる群より選択される１対のＶＨおよびＶＬ鎖配列を有
する。
【0012】
本発明のＣＤ４７抗体は、キメラまたはヒト化抗体であってもよい。これらは、ヒトＣ
Ｄ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを防止するまたは有意に抑制することができる、
またはＣＤ４７発現細胞のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediated phagocy
tosis)を促進する。
Ｄ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを防止するまたは有意に抑制することができる、
またはＣＤ４７発現細胞のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediated phagocy
tosis)を促進する。
【0013】
本発明のＣＤ４７抗体は、有意な(significant)または顕著な(noticeable)レベルの赤
血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさず、多くの場合、赤血球凝集または赤血球の枯
渇を引き起こさない。
血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさず、多くの場合、赤血球凝集または赤血球の枯
渇を引き起こさない。
【0014】
他の態様では、本発明は、単離された二重特異性モノクローナル抗体を提供する。この
ような単離された二重特異性モノクローナル抗体は、それぞれ、第１のアームおよび第２
のアームを有し、前記第１のアームはヒトＣＤ４７に結合する上記したような第１のモノ
クローナル抗体またはその免疫学的に活性のある断片を有し、さらに前記第２のアームは
ヒトＣＤ４７に結合しない第２のモノクローナル抗体を有する。
ような単離された二重特異性モノクローナル抗体は、それぞれ、第１のアームおよび第２
のアームを有し、前記第１のアームはヒトＣＤ４７に結合する上記したような第１のモノ
クローナル抗体またはその免疫学的に活性のある断片を有し、さらに前記第２のアームは
ヒトＣＤ４７に結合しない第２のモノクローナル抗体を有する。
【0015】
実施形態によっては、単離された二重特異性モノクローナル抗体の第２のアームは、癌
細胞に結合する。
細胞に結合する。
【0016】
他の実施形態によっては、単離された二重特異性モノクローナル抗体はヒトＣＤ４７と
ヒトＳＩＲＰαとの相互作用を阻害する。
ヒトＳＩＲＰαとの相互作用を阻害する。
【0017】
さらに他の態様では、本発明は、それぞれが本発明のＣＤ４７抗体または本発明の単離
された二重特異性モノクローナル抗体の一、および製薬上許容できる担体または賦形剤を
含む薬剤組成物を提供する。
された二重特異性モノクローナル抗体の一、および製薬上許容できる担体または賦形剤を
含む薬剤組成物を提供する。
【0018】
本明細書に使用される、「製薬上許容できる担体または賦形剤」ということばは、通常
、安全で、無毒であり、生物学的等の点で望ましくないものではない薬剤組成物または製
剤を調製するのに使用される担体または賦形剤を意味する。使用される担体または賦形剤
は、一般的に、ヒト患者または他の哺乳動物への投与に適するものである。組成物を作製
するにあたり、活性成分は、一般的に、担体または賦形剤と混合する、上記で希釈する、
または上記で包まれる。担体または賦形剤が希釈剤として機能する場合には、抗体の活性
成分のベヒクル、担体、または媒質として作用する、固体、半固体、または液体材料であ
ってもよい。
、安全で、無毒であり、生物学的等の点で望ましくないものではない薬剤組成物または製
剤を調製するのに使用される担体または賦形剤を意味する。使用される担体または賦形剤
は、一般的に、ヒト患者または他の哺乳動物への投与に適するものである。組成物を作製
するにあたり、活性成分は、一般的に、担体または賦形剤と混合する、上記で希釈する、
または上記で包まれる。担体または賦形剤が希釈剤として機能する場合には、抗体の活性
成分のベヒクル、担体、または媒質として作用する、固体、半固体、または液体材料であ
ってもよい。
【0019】
病気を処置する必要のあるヒト患者の病気の処置方法であって、前記方法は、治療上有
効な量の本発明のＣＤ４７抗体、本発明の二重特異性モノクローナル抗体、または本発明
の薬剤組成物を前記患者に投与することを有し、上記病気は、癌、線維症、または食作用
の阻害に関連する病気である方法もまた、本発明の範囲に含まれる。場合によっては、上
記癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、非ホジキン
リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白
血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、大型顆粒
リンパ球白血病、成人Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神
経膠腫、膠芽細胞腫、骨髄腫、単球性白血病、Ｂ細胞由来白血病(B-cell derived leukem
ia)、Ｔ細胞由来白血病(T-cell derived leukemia)、Ｂ細胞由来リンパ腫、Ｔ細胞由来リ
ンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、黒色腫、前立腺癌、甲状腺癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、
および固形腫瘍からなる群より選択されてもよく；上記線維症は、心筋梗塞、狭心症、変
形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、気管支炎、および喘息からなる群より選択
されてもよい。固形腫瘍の例としては、例えば、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、胃癌
、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、メラノーマ腫瘍、大腸腫瘍、肺
腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、および腎臓腫瘍、ならびに神経芽細
胞由来ＣＮＳ腫瘍(neuroblastic-derived CNS tumor)が挙げられる。上記食作用の阻害に
関連する病気は、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、発作、高血圧性心疾患
、リウマチ性心疾患、心筋症、心臓不整脈、先天性心疾患、心臓弁膜症、心臓炎、大動脈
瘤、末梢動脈疾患、または静脈血栓症）であってもよい。
効な量の本発明のＣＤ４７抗体、本発明の二重特異性モノクローナル抗体、または本発明
の薬剤組成物を前記患者に投与することを有し、上記病気は、癌、線維症、または食作用
の阻害に関連する病気である方法もまた、本発明の範囲に含まれる。場合によっては、上
記癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、非ホジキン
リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白
血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、大型顆粒
リンパ球白血病、成人Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神
経膠腫、膠芽細胞腫、骨髄腫、単球性白血病、Ｂ細胞由来白血病(B-cell derived leukem
ia)、Ｔ細胞由来白血病(T-cell derived leukemia)、Ｂ細胞由来リンパ腫、Ｔ細胞由来リ
ンパ腫、子宮内膜癌、腎臓癌、黒色腫、前立腺癌、甲状腺癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、
および固形腫瘍からなる群より選択されてもよく；上記線維症は、心筋梗塞、狭心症、変
形性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、気管支炎、および喘息からなる群より選択
されてもよい。固形腫瘍の例としては、例えば、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、胃癌
、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、メラノーマ腫瘍、大腸腫瘍、肺
腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、および腎臓腫瘍、ならびに神経芽細
胞由来ＣＮＳ腫瘍(neuroblastic-derived CNS tumor)が挙げられる。上記食作用の阻害に
関連する病気は、心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、発作、高血圧性心疾患
、リウマチ性心疾患、心筋症、心臓不整脈、先天性心疾患、心臓弁膜症、心臓炎、大動脈
瘤、末梢動脈疾患、または静脈血栓症）であってもよい。
【0020】
本明細書に使用される、「有効な量」ということばは、患者に投与されると、本明細書
に記載されるような、ＣＤ４７に依存するシグナル伝達に関連する病気の治療、予後また
は診断を行うのに十分なまたは必要であるＣＤ４７抗体の量を意味する。単独でまたは組
み合わせて使用される際の、本明細書で提供される抗体の治療上有効な量は、抗体の相対
活性（例えば、ＣＤ４７を発現する癌細胞のマクロファージが介する食作用の促進）によ
っておよび処置される患者や病気の状態、患者の体重や年齢、病状の重篤度、投与形態な
どによって異なり、当業者によって容易に決定できる。
に記載されるような、ＣＤ４７に依存するシグナル伝達に関連する病気の治療、予後また
は診断を行うのに十分なまたは必要であるＣＤ４７抗体の量を意味する。単独でまたは組
み合わせて使用される際の、本明細書で提供される抗体の治療上有効な量は、抗体の相対
活性（例えば、ＣＤ４７を発現する癌細胞のマクロファージが介する食作用の促進）によ
っておよび処置される患者や病気の状態、患者の体重や年齢、病状の重篤度、投与形態な
どによって異なり、当業者によって容易に決定できる。
【0021】
本明細書に使用される、本発明のＣＤ４７抗体に先行する「単離された」ということば
は、抗体が他の細胞材料を実質的に含まないことを意味する。一実施形態では、単離され
た抗体は、同種の他のタンパク質を実質的に含まない。他の実施形態では、単離された抗
体は、異なる種の細胞によって発現され、異なる種の他のタンパク質を実質的に含まない
。タンパク質は、当該分野において既知のタンパク質精製技術を用いて、単離によって天
然に関連する(naturally associated)成分（または抗体を製造するのに使用される細胞発
現システムと関連する成分）を実質的に含まないようにされてもよい。一実施形態では、
本発明の抗体、または抗原結合断片は、単離される。
は、抗体が他の細胞材料を実質的に含まないことを意味する。一実施形態では、単離され
た抗体は、同種の他のタンパク質を実質的に含まない。他の実施形態では、単離された抗
体は、異なる種の細胞によって発現され、異なる種の他のタンパク質を実質的に含まない
。タンパク質は、当該分野において既知のタンパク質精製技術を用いて、単離によって天
然に関連する(naturally associated)成分（または抗体を製造するのに使用される細胞発
現システムと関連する成分）を実質的に含まないようにされてもよい。一実施形態では、
本発明の抗体、または抗原結合断片は、単離される。
【0022】
さらに、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を有し、前記第１のアミノ酸配
列は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列
番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列
番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列
番号：３１、配列番号：３３、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列
番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列
番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５、配列番号：５７、配列番号：５９、配列
番号：６１、配列番号：６３、配列番号：６５、配列番号：６７、配列番号：６９、配列
番号：７１、配列番号：７３、配列番号：７５、もしくは配列番号：７７、またはこれと
少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致するアミノ酸配列であり；さらに、
前記第２のアミノ酸配列は、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８
、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８
、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８
、配列番号：３０、配列番号：３２、配列番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８
、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８
、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８
、配列番号：６０、配列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８
、配列番号：７０、配列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６、もしくは配列番
号：７８、またはこれと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致するアミノ
酸配列である、融合タンパク質も本発明の範囲に含まれる。
列は、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５、配列番号：７、配列番号：９、配列
番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：１９、配列
番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５、配列番号：２７、配列番号：２９、配列
番号：３１、配列番号：３３、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３９、配列
番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：４９、配列
番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５、配列番号：５７、配列番号：５９、配列
番号：６１、配列番号：６３、配列番号：６５、配列番号：６７、配列番号：６９、配列
番号：７１、配列番号：７３、配列番号：７５、もしくは配列番号：７７、またはこれと
少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致するアミノ酸配列であり；さらに、
前記第２のアミノ酸配列は、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８
、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８
、配列番号：２０、配列番号：２２、配列番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８
、配列番号：３０、配列番号：３２、配列番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８
、配列番号：４０、配列番号：４２、配列番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８
、配列番号：５０、配列番号：５２、配列番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８
、配列番号：６０、配列番号：６２、配列番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８
、配列番号：７０、配列番号：７２、配列番号：７４、配列番号：７６、もしくは配列番
号：７８、またはこれと少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致するアミノ
酸配列である、融合タンパク質も本発明の範囲に含まれる。
【0023】
実施形態によっては、本発明の融合タンパク質は、前記第１のアミノ酸配列および第２
のアミノ酸配列の組み合わせを有し、これらの２つのアミノ酸配列の組み合わせは、配列
番号：１および配列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち
、１Ｆ８）、配列番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および
配列番号：８（即ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、
配列番号：１１および配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号
：１４（即ち、２Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配
列番号：１７および配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：
２０（即ち、５Ｆ６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番
号：２３および配列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６
（即ち、２Ｂ１２）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列
番号：２９および配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：
３２（即ち、１３Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配
列番号：３５および配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号
：３８（即ち、１Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、
配列番号：４１および配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列
番号：４４（即ち、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、
配列番号：４７および配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号
：５０（即ち、１Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列
番号：５３および配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号
：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、
配列番号：５９および配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号
：６２（即ち、２Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配
列番号：６５および配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：
６８（即ち、２Ｃ６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番
号：７１および配列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４
（即ち、２Ｆ１）、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、配列番号：
７７および配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）、または各第１および第２のアミノ酸配列
について前記と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する組み合わせであ
る。
のアミノ酸配列の組み合わせを有し、これらの２つのアミノ酸配列の組み合わせは、配列
番号：１および配列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち
、１Ｆ８）、配列番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および
配列番号：８（即ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、
配列番号：１１および配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号
：１４（即ち、２Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配
列番号：１７および配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：
２０（即ち、５Ｆ６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番
号：２３および配列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６
（即ち、２Ｂ１２）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列
番号：２９および配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：
３２（即ち、１３Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配
列番号：３５および配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号
：３８（即ち、１Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、
配列番号：４１および配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列
番号：４４（即ち、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、
配列番号：４７および配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号
：５０（即ち、１Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列
番号：５３および配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号
：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、
配列番号：５９および配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号
：６２（即ち、２Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配
列番号：６５および配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：
６８（即ち、２Ｃ６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番
号：７１および配列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４
（即ち、２Ｆ１）、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、配列番号：
７７および配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）、または各第１および第２のアミノ酸配列
について前記と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する組み合わせであ
る。
【0024】
他の実施形態によっては、本発明の融合タンパク質は、第１のアミノ酸配列および第２
のアミノ酸配列の組み合わせを有し、これらの２つのアミノ酸配列の組み合わせは、配列
番号：１および配列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち
、１Ｆ８）、配列番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および
配列番号：８（即ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、
配列番号：１１および配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号
：１４（即ち、２Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配
列番号：１７および配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：
２０（即ち、５Ｆ６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番
号：２３および配列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６
（即ち、２Ｂ１２）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列
番号：２９および配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：
３２（即ち、１３Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配
列番号：３５および配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号
：３８（即ち、１Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、
配列番号：４１および配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列
番号：４４（即ち、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、
配列番号：４７および配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号
：５０（即ち、１Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列
番号：５３および配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号
：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、
配列番号：５９および配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号
：６２（即ち、２Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配
列番号：６５および配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：
６８（即ち、２Ｃ６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番
号：７１および配列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４
（即ち、２Ｆ１）、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、または配列
番号：７７および配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）である。
のアミノ酸配列の組み合わせを有し、これらの２つのアミノ酸配列の組み合わせは、配列
番号：１および配列番号：２（即ち、１Ａ１）、配列番号：３および配列番号：４（即ち
、１Ｆ８）、配列番号：５および配列番号：６（即ち、２Ａ１１）、配列番号：７および
配列番号：８（即ち、２Ｃ２）、配列番号：９および配列番号：１０（即ち、２Ｄ７）、
配列番号：１１および配列番号：１２（即ち、２Ｇ４）、配列番号：１３および配列番号
：１４（即ち、２Ｇ１１）、配列番号：１５および配列番号：１６（即ち、６Ｆ４）、配
列番号：１７および配列番号：１８（即ち、５Ｈ１）、配列番号：１９および配列番号：
２０（即ち、５Ｆ６）、配列番号：２１および配列番号：２２（即ち、１Ｆ３）、配列番
号：２３および配列番号：２４（即ち、２Ａ４）、配列番号：２５および配列番号：２６
（即ち、２Ｂ１２）、配列番号：２７および配列番号：２８（即ち、１３Ａ１１）、配列
番号：２９および配列番号：３０（即ち、１５Ｅ１）、配列番号：３１および配列番号：
３２（即ち、１３Ｈ３）、配列番号：３３および配列番号：３４（即ち、１４Ａ８）、配
列番号：３５および配列番号：３６（即ち、１６Ｈ３）、配列番号：３７および配列番号
：３８（即ち、１Ａ１）、配列番号：３９および配列番号：４０（即ち、１Ａ１－Ａ）、
配列番号：４１および配列番号：４２（即ち、１Ａ１－Ｑ）、配列番号：４３および配列
番号：４４（即ち、１Ａ２）、配列番号：４５および配列番号：４６（即ち、１Ａ８）、
配列番号：４７および配列番号：４８（即ち、１Ｂ１）、配列番号：４９および配列番号
：５０（即ち、１Ｂ２）、配列番号：５１および配列番号：５２（即ち、１Ｈ３）、配列
番号：５３および配列番号：５４（即ち、１Ｈ３－Ｑ）、配列番号：５５および配列番号
：５６（即ち、１Ｈ３－Ａ）、配列番号：５７および配列番号：５８（即ち、２Ａ２）、
配列番号：５９および配列番号：６０（即ち、２Ａ３）、配列番号：６１および配列番号
：６２（即ち、２Ａ６）、配列番号：６３および配列番号：６４（即ち、２Ａ１０）、配
列番号：６５および配列番号：６６（即ち、２Ｂ１）、配列番号：６７および配列番号：
６８（即ち、２Ｃ６）、配列番号：６９および配列番号：７０（即ち、２Ｅ７）、配列番
号：７１および配列番号：７２（即ち、２Ｅ９）、配列番号：７３および配列番号：７４
（即ち、２Ｆ１）、配列番号：７５および配列番号：７６（即ち、２Ｆ３）、または配列
番号：７７および配列番号：７８（即ち、３４Ｃ５）である。
【0025】
さらに他の実施形態によっては、本発明の融合タンパク質は、前記第１および第２のア
ミノ酸配列に加えて別のタンパク質をさらに有してもよい。上記別のタンパク質が抗体ま
たはサイトカインである。
ミノ酸配列に加えて別のタンパク質をさらに有してもよい。上記別のタンパク質が抗体ま
たはサイトカインである。
【0026】
さらに他の実施形態によっては、本発明の融合タンパク質は、小分子治療剤(small-mol
ecule therapeutic agent)（例えば、抗癌剤もしくは抗炎症剤）またはマーカー（例えば
、バイオマーカーもしくは蛍光マーカー）と結合して(conjugated with)いてもよい。
ecule therapeutic agent)（例えば、抗癌剤もしくは抗炎症剤）またはマーカー（例えば
、バイオマーカーもしくは蛍光マーカー）と結合して(conjugated with)いてもよい。
【0027】
さらに他の態様では、本発明は、ＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３１）、Ｔ３４、Ｅ
３５、Ｌ７４、およびＣＤ４７のＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を立体配座的に含
む組換タンパク質を有するＣＤ４７遺伝子によってコードされる免疫優勢エピトープを提
供する。
３５、Ｌ７４、およびＣＤ４７のＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を立体配座的に含
む組換タンパク質を有するＣＤ４７遺伝子によってコードされる免疫優勢エピトープを提
供する。
【0028】
さらに他の態様では、本発明は、ＣＤ４７のＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３１）、
Ｔ３４、Ｅ３５、Ｌ７４、およびＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を含むアミノ酸配
列を有する立体配座エピトープに特異的に結合する生物分子であって、前記抗体がＣＤ４
７に特異的に結合できる、生物分子を提供する。
Ｔ３４、Ｅ３５、Ｌ７４、およびＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を含むアミノ酸配
列を有する立体配座エピトープに特異的に結合する生物分子であって、前記抗体がＣＤ４
７に特異的に結合できる、生物分子を提供する。
【0029】
本明細書に使用される、「生物分子(biological molecule)」ということばは、合成抗
体（モノクローナルまたは二重特異性抗体）、ペプチド、および生体模倣分子(biomimeti
c molecule)を包含することを意味する。「生体模倣分子」ということばは、タンパク質
またはヌクレオチド等の天然の大きな化合物の構造または特性と同様のまたは似ている構
造または特性を有するように設計または開発され、例えば、少なくとも３，０００、少な
くとも５，０００、または少なくとも１０，０００の分子量を有する分子を意味する。
体（モノクローナルまたは二重特異性抗体）、ペプチド、および生体模倣分子(biomimeti
c molecule)を包含することを意味する。「生体模倣分子」ということばは、タンパク質
またはヌクレオチド等の天然の大きな化合物の構造または特性と同様のまたは似ている構
造または特性を有するように設計または開発され、例えば、少なくとも３，０００、少な
くとも５，０００、または少なくとも１０，０００の分子量を有する分子を意味する。
【0030】
本明細書で挙げられる参考文献はすべて、全体を参考で引用される。
【図面の簡単な説明】
【0031】
図面の簡単な説明
【図4a】図４ａおよび図４ｂは、ＣＤ４７＋Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応を示し；さらに、図４ｃ、図４ｄおよび図４ｅは、Ｂｉｏｃｏｒｅ分析によって測定される、ＣＤ４７抗体の結合キネティクスおよびデータを示す。
【図4b】図４ａおよび図４ｂは、ＣＤ４７＋Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応を示し；さらに、図４ｃ、図４ｄおよび図４ｅは、Ｂｉｏｃｏｒｅ分析によって測定される、ＣＤ４７抗体の結合キネティクスおよびデータを示す。
【図4c】図４ａおよび図４ｂは、ＣＤ４７＋Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応を示し；さらに、図４ｃ、図４ｄおよび図４ｅは、Ｂｉｏｃｏｒｅ分析によって測定される、ＣＤ４７抗体の結合キネティクスおよびデータを示す。
【図4d】図４ａおよび図４ｂは、ＣＤ４７＋Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応を示し；さらに、図４ｃ、図４ｄおよび図４ｅは、Ｂｉｏｃｏｒｅ分析によって測定される、ＣＤ４７抗体の結合キネティクスおよびデータを示す。
【図4e】図４ａおよび図４ｂは、ＣＤ４７＋Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応を示し；さらに、図４ｃ、図４ｄおよび図４ｅは、Ｂｉｏｃｏｒｅ分析によって測定される、ＣＤ４７抗体の結合キネティクスおよびデータを示す。
【図6a】図６ａ～６ｃは、ＣＤ４７抗体によって引き起こされる(triggered)様々なヒト血液癌細胞系のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediated phagocytosis)を示す。
【図6b】図６ａ～６ｃは、ＣＤ４７抗体によって引き起こされる(triggered)様々なヒト血液癌細胞系のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediated phagocytosis)を示す。
【図6c】図６ａ～６ｃは、ＣＤ４７抗体によって引き起こされる(triggered)様々なヒト血液癌細胞系のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediated phagocytosis)を示す。
【図18a】図１８は、異なるエピトープによる、抗体１Ｆ８および５Ｆ９ならびに抗体１Ｆ８および２Ａ１のＣＤ４７の結合での競合、ならびに５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックスおよび１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造を示す。
【図18b】図１８は、異なるエピトープによる、抗体１Ｆ８および５Ｆ９ならびに抗体１Ｆ８および２Ａ１のＣＤ４７の結合での競合、ならびに５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックスおよび１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造を示す。
【図18c】図１８は、異なるエピトープによる、抗体１Ｆ８および５Ｆ９ならびに抗体１Ｆ８および２Ａ１のＣＤ４７の結合での競合、ならびに５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックスおよび１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造を示す。
【図18d】図１８は、異なるエピトープによる、抗体１Ｆ８および５Ｆ９ならびに抗体１Ｆ８および２Ａ１のＣＤ４７の結合での競合、ならびに５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックスおよび１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造を示す。
【図18e】図１８は、異なるエピトープによる、抗体１Ｆ８および５Ｆ９ならびに抗体１Ｆ８および２Ａ１のＣＤ４７の結合での競合、ならびに５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックスおよび１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造を示す。
【図19a-b】図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、および図１９ｈは、それぞれ、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリンパ球に関するＣＤ４７抗体１３Ｈ３の効果を示す。
【図19c】図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、および図１９ｈは、それぞれ、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリンパ球に関するＣＤ４７抗体１３Ｈ３の効果を示す。
【図19d】図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、および図１９ｈは、それぞれ、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリンパ球に関するＣＤ４７抗体１３Ｈ３の効果を示す。
【図19e-f】図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、および図１９ｈは、それぞれ、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリンパ球に関するＣＤ４７抗体１３Ｈ３の効果を示す。
【図19g】図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、および図１９ｈは、それぞれ、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリンパ球に関するＣＤ４７抗体１３Ｈ３の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0032】
発明の詳細な説明
本発明は、ヒトＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを防止できる、またはＣＤ４
７発現細胞のマクロファージが介する食作用を促進できる新規な単離されたモノクローナ
ルＣＤ４７抗体を提供する。これらのＣＤ４７抗体は、有意な(significant)または顕著
な(noticeable)レベルの赤血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさず、多くの場合、赤
血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさない。
本発明は、ヒトＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを防止できる、またはＣＤ４
７発現細胞のマクロファージが介する食作用を促進できる新規な単離されたモノクローナ
ルＣＤ４７抗体を提供する。これらのＣＤ４７抗体は、有意な(significant)または顕著
な(noticeable)レベルの赤血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさず、多くの場合、赤
血球凝集または赤血球の枯渇を引き起こさない。
【0033】
例としては、本発明のＣＤ４７抗体は、（ａ）配列番号：１、配列番号：３、配列番号
：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５
、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５
、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３３、配列番号：３５
、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５
、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５
、配列番号：５７、配列番号：５９、配列番号：６１、配列番号：６３、配列番号：６５
、配列番号：６７、配列番号：６９、配列番号：７１、配列番号：７３、配列番号：７５
、および配列番号：７７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例
えば、少なくとも９５％）一致する可変重（ＶＨ）鎖配列；ならびに（ｂ）配列番号：２
、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列
番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：２２、配列
番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２、配列
番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列
番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列
番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８、配列番号：６０、配列番号：６２、配列
番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配列番号：７２、配列
番号：７４、配列番号：７６、および配列番号：７８からなる群より選択されるアミノ酸
配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変軽（ＶＬ）鎖配列を
有する。別の例としては、本発明のＣＤ４７抗体は、配列番号：１および配列番号：２、
配列番号：３および配列番号：４、配列番号：５および配列番号：６、配列番号：７およ
び配列番号：８、配列番号：９および配列番号：１０、配列番号：１１および配列番号：
１２、配列番号：１３および配列番号：１４、配列番号：１５および配列番号：１６、配
列番号：１７および配列番号：１８、配列番号：１９および配列番号：２０、配列番号：
２１および配列番号：２２、配列番号：２３および配列番号：２４、配列番号：２５およ
び配列番号：２６、配列番号：２７および配列番号：２８、配列番号：２９および配列番
号：３０、配列番号：３１および配列番号：３２、配列番号：３３および配列番号：３４
、配列番号：３５および配列番号：３６、配列番号：３７および配列番号：３８、配列番
号：３９および配列番号：４０、配列番号：４１および配列番号：４２、配列番号：４３
および配列番号：４４、配列番号：４５および配列番号：４６、配列番号：４７および配
列番号：４８、配列番号：４９および配列番号：５０、配列番号：５１および配列番号：
５２、配列番号：５３および配列番号：５４、配列番号：５５および配列番号：５６、配
列番号：５７および配列番号：５８、配列番号：５９および配列番号：６０、配列番号：
６１および配列番号：６２、配列番号：６３および配列番号：６４、配列番号：６５およ
び配列番号：６６、配列番号：６７および配列番号：６８、配列番号：６９および配列番
号：７０、配列番号：７１および配列番号：７２、配列番号：７３および配列番号：７４
、配列番号：７５および配列番号：７６、ならびに配列番号：７７および配列番号：７８
からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％
）一致するＶＨ／ＶＬ鎖配列の組み合わせを有する。
：５、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１５
、配列番号：１７、配列番号：１９、配列番号：２１、配列番号：２３、配列番号：２５
、配列番号：２７、配列番号：２９、配列番号：３１、配列番号：３３、配列番号：３５
、配列番号：３７、配列番号：３９、配列番号：４１、配列番号：４３、配列番号：４５
、配列番号：４７、配列番号：４９、配列番号：５１、配列番号：５３、配列番号：５５
、配列番号：５７、配列番号：５９、配列番号：６１、配列番号：６３、配列番号：６５
、配列番号：６７、配列番号：６９、配列番号：７１、配列番号：７３、配列番号：７５
、および配列番号：７７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例
えば、少なくとも９５％）一致する可変重（ＶＨ）鎖配列；ならびに（ｂ）配列番号：２
、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列
番号：１４、配列番号：１６、配列番号：１８、配列番号：２０、配列番号：２２、配列
番号：２４、配列番号：２６、配列番号：２８、配列番号：３０、配列番号：３２、配列
番号：３４、配列番号：３６、配列番号：３８、配列番号：４０、配列番号：４２、配列
番号：４４、配列番号：４６、配列番号：４８、配列番号：５０、配列番号：５２、配列
番号：５４、配列番号：５６、配列番号：５８、配列番号：６０、配列番号：６２、配列
番号：６４、配列番号：６６、配列番号：６８、配列番号：７０、配列番号：７２、配列
番号：７４、配列番号：７６、および配列番号：７８からなる群より選択されるアミノ酸
配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）一致する可変軽（ＶＬ）鎖配列を
有する。別の例としては、本発明のＣＤ４７抗体は、配列番号：１および配列番号：２、
配列番号：３および配列番号：４、配列番号：５および配列番号：６、配列番号：７およ
び配列番号：８、配列番号：９および配列番号：１０、配列番号：１１および配列番号：
１２、配列番号：１３および配列番号：１４、配列番号：１５および配列番号：１６、配
列番号：１７および配列番号：１８、配列番号：１９および配列番号：２０、配列番号：
２１および配列番号：２２、配列番号：２３および配列番号：２４、配列番号：２５およ
び配列番号：２６、配列番号：２７および配列番号：２８、配列番号：２９および配列番
号：３０、配列番号：３１および配列番号：３２、配列番号：３３および配列番号：３４
、配列番号：３５および配列番号：３６、配列番号：３７および配列番号：３８、配列番
号：３９および配列番号：４０、配列番号：４１および配列番号：４２、配列番号：４３
および配列番号：４４、配列番号：４５および配列番号：４６、配列番号：４７および配
列番号：４８、配列番号：４９および配列番号：５０、配列番号：５１および配列番号：
５２、配列番号：５３および配列番号：５４、配列番号：５５および配列番号：５６、配
列番号：５７および配列番号：５８、配列番号：５９および配列番号：６０、配列番号：
６１および配列番号：６２、配列番号：６３および配列番号：６４、配列番号：６５およ
び配列番号：６６、配列番号：６７および配列番号：６８、配列番号：６９および配列番
号：７０、配列番号：７１および配列番号：７２、配列番号：７３および配列番号：７４
、配列番号：７５および配列番号：７６、ならびに配列番号：７７および配列番号：７８
からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％
）一致するＶＨ／ＶＬ鎖配列の組み合わせを有する。
【0034】
本明細書に使用される、「抗体」ということばは、最も広い意味で使用され、具体的に
は、モノクローナル抗体（全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多
重特異性抗体(multi-specific antibody)（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生
物学的活性を示す限り抗体断片を包含する。「抗体」（または「Ａｂｓ」）および「免疫
グロブリン」（または「Ｉｇ」）は、同様の構造特性を有する糖タンパク質である。抗体
は特定の抗原への結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは抗原特異性を持たない抗体お
よび他の抗体様分子を包含する。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によっ
て低レベルでおよび骨髄腫によって高レベルで産生される。
は、モノクローナル抗体（全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多
重特異性抗体(multi-specific antibody)（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生
物学的活性を示す限り抗体断片を包含する。「抗体」（または「Ａｂｓ」）および「免疫
グロブリン」（または「Ｉｇ」）は、同様の構造特性を有する糖タンパク質である。抗体
は特定の抗原への結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは抗原特異性を持たない抗体お
よび他の抗体様分子を包含する。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によっ
て低レベルでおよび骨髄腫によって高レベルで産生される。
【0035】
本明細書に使用される、「エピトープ」ということばは、抗体のパラトープが結合する
抗原の抗原決定基を意味する。エピトープの決定基は、一般的に、アミノ酸または糖側鎖
(sugar side chain)等の分子の化学的に活性のある表面基(surface grouping)から構成さ
れ、一般的に、特定の３次元構造特性、さらには特定のチャージ特性を有する。
抗原の抗原決定基を意味する。エピトープの決定基は、一般的に、アミノ酸または糖側鎖
(sugar side chain)等の分子の化学的に活性のある表面基(surface grouping)から構成さ
れ、一般的に、特定の３次元構造特性、さらには特定のチャージ特性を有する。
【0036】
本明細書に使用される、「天然の抗体および免疫グロブリン」ということばは、一般的
に、２個の同じ軽（Ｌ）鎖および２個の同じ重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，００
０ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合に
よって重鎖に連結する（「ＶＨ／ＶＬ対」とも称する）一方、ジスルフィド結合の数は異
なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、鎖内ジス
ルフィド架橋が一定間隔で存在する(has regularly spaced intrachain disulfide bridg
es)。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン、さらには数多くの定常ドメインを有する。
各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）および他方の末端に定常ドメインを有する
；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと並列し(aligned with)、軽鎖の可変
ドメインは重鎖の可変ドメインと並列する。特定のアミノ酸残基が軽鎖及び重鎖の可変ド
メインのインターフェースを形成すると考えられる。例えば、Clothia et al., J. Mol.
Biol., 186:651 (1985); Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:4592
(1985)を参照。
に、２個の同じ軽（Ｌ）鎖および２個の同じ重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，００
０ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合に
よって重鎖に連結する（「ＶＨ／ＶＬ対」とも称する）一方、ジスルフィド結合の数は異
なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖および軽鎖はまた、鎖内ジス
ルフィド架橋が一定間隔で存在する(has regularly spaced intrachain disulfide bridg
es)。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン、さらには数多くの定常ドメインを有する。
各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）および他方の末端に定常ドメインを有する
；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと並列し(aligned with)、軽鎖の可変
ドメインは重鎖の可変ドメインと並列する。特定のアミノ酸残基が軽鎖及び重鎖の可変ド
メインのインターフェースを形成すると考えられる。例えば、Clothia et al., J. Mol.
Biol., 186:651 (1985); Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:4592
(1985)を参照。
【0037】
本明細書に使用される、「可変」ということばは、可変ドメインの特定の部分が抗体の
中で配列がかなり異なり、その特定の抗原に関して各特定の抗体の結合および特異性で使
用されるという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインで均一に分
布しない。可変性は、軽鎖および重鎖可変ドメイン双方において相補性決定領域（ＣＤＲ
）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に
保存される部分をフレームワーク（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン
はそれぞれ、ループの連結を形成し、場合によっては、β－シート構造の部分を形成する
、３つのＣＤＲによって連結される、β－シート構造をとる、４つのＦＲ領域を有する。
各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域によってごく接近して一緒に保持され、他の鎖のＣＤＲと共に
、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。例えば、Kabat et al., Sequences of Protein
s of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethes
da, Md. (1991)を参照。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体
に依存する細胞毒性への抗体の参加等の、様々なエフェクター機能を示す。興味のある可
変領域配列としては、ＣＤ４７抗体の提供されるヒト化可変領域配列がある。例えば、１
Ａ１は配列番号：１（重鎖）および配列番号：２（軽鎖）を含み、１Ｆ８は配列番号：３
（重鎖）および配列番号：４（軽鎖）を含み、さらに２Ａ１１は配列番号：５（重鎖）お
よび配列番号：６（軽鎖）を含む。
中で配列がかなり異なり、その特定の抗原に関して各特定の抗体の結合および特異性で使
用されるという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインで均一に分
布しない。可変性は、軽鎖および重鎖可変ドメイン双方において相補性決定領域（ＣＤＲ
）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に
保存される部分をフレームワーク（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン
はそれぞれ、ループの連結を形成し、場合によっては、β－シート構造の部分を形成する
、３つのＣＤＲによって連結される、β－シート構造をとる、４つのＦＲ領域を有する。
各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域によってごく接近して一緒に保持され、他の鎖のＣＤＲと共に
、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。例えば、Kabat et al., Sequences of Protein
s of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethes
da, Md. (1991)を参照。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体
に依存する細胞毒性への抗体の参加等の、様々なエフェクター機能を示す。興味のある可
変領域配列としては、ＣＤ４７抗体の提供されるヒト化可変領域配列がある。例えば、１
Ａ１は配列番号：１（重鎖）および配列番号：２（軽鎖）を含み、１Ｆ８は配列番号：３
（重鎖）および配列番号：４（軽鎖）を含み、さらに２Ａ１１は配列番号：５（重鎖）お
よび配列番号：６（軽鎖）を含む。
【0038】
抗体をパパイン消化することにより、それぞれが１つの抗原結合部位を有する、「Ｆａ
ｂ」と呼ばれる、２つの同じ抗原結合断片、およびその名前は容易に結晶化できることを
指す、残りの「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位(antig
en-combining sites)を有し、抗原を架橋することが可能であるＦ（ａｂ’）２断片が得
られる。「Ｆｖ」は、完全な抗原－認識及び結合部位を含む最小の抗体断片である。２本
鎖Ｆｖ種(two-chain Fv species)では、この領域は、緊密な非共有結合した(in tight, n
on-covalent association)１つの重鎖および１つの軽鎖の可変ドメインのダイマーから構
成される。１本鎖Ｆｖ種(single-chain Fv species)（ｓｃＦｖ）では、１つの重鎖及び
１つの軽鎖の可変ドメインが、軽鎖及び重鎖が２鎖Ｆｖ種(two-chain Fv species)に類似
する「ダイマー」構造で結合できるようにフレキシブルなペプチドリンカー(flexible pe
ptide linker)によって共有結合され得る。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し
て、ＶＨ－ＶＬダイマーの表面で抗原結合部位を規定することがこの構成に含まれる。一
括して、上記６個のＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、全結合部
位に比して低い親和性ではあるが、１つの可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣ
ＤＲだけを有する半分のＦｖ）が抗原を認識、結合できる。例えば、Pluckthun, in The
Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Sprin
ger-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照。
ｂ」と呼ばれる、２つの同じ抗原結合断片、およびその名前は容易に結晶化できることを
指す、残りの「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位(antig
en-combining sites)を有し、抗原を架橋することが可能であるＦ（ａｂ’）２断片が得
られる。「Ｆｖ」は、完全な抗原－認識及び結合部位を含む最小の抗体断片である。２本
鎖Ｆｖ種(two-chain Fv species)では、この領域は、緊密な非共有結合した(in tight, n
on-covalent association)１つの重鎖および１つの軽鎖の可変ドメインのダイマーから構
成される。１本鎖Ｆｖ種(single-chain Fv species)（ｓｃＦｖ）では、１つの重鎖及び
１つの軽鎖の可変ドメインが、軽鎖及び重鎖が２鎖Ｆｖ種(two-chain Fv species)に類似
する「ダイマー」構造で結合できるようにフレキシブルなペプチドリンカー(flexible pe
ptide linker)によって共有結合され得る。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し
て、ＶＨ－ＶＬダイマーの表面で抗原結合部位を規定することがこの構成に含まれる。一
括して、上記６個のＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、全結合部
位に比して低い親和性ではあるが、１つの可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣ
ＤＲだけを有する半分のＦｖ）が抗原を認識、結合できる。例えば、Pluckthun, in The
Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Sprin
ger-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照。
【0039】
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を
含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域の１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメイン
のカルボキシ末端に数個の残基を付加することによってＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’
－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’に関する本
明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、もともとは、間にヒンジシステイン
を有するＦａｂ’対として製造された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた知られ
ている。
含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域の１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメイン
のカルボキシ末端に数個の残基を付加することによってＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’
－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’に関する本
明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、もともとは、間にヒンジシステイン
を有するＦａｂ’対として製造された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた知られ
ている。
【0040】
ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの免疫グロブリンの５つの主要なクラ
スがあり、これらのうちいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、Ｉ
ｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２にさらに分類できる。免疫グロブリン
の異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと
呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元構造はよく知
られている。
スがあり、これらのうちいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、Ｉ
ｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２にさらに分類できる。免疫グロブリン
の異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと
呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元構造はよく知
られている。
【0041】
本明細書に使用される、「抗体断片」ということば、およびこのすべての文法上の異綴
語(grammatical variants)は、完全な(intact)抗体の抗原結合部位または可変領域を有す
る完全な抗体の一部として規定され、この際、上記一部は完全な抗体のＦｃ領域の定常重
鎖ドメイン（即ち、抗体のアイソタイプによって、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含ま
ない。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、及
びＦｖ断片；ダイアボディ(diabodies)；以下に制限されないが、（１）１本鎖Ｆｖ（ｓ
ｃＦｖ）分子、（２）１個の軽鎖可変ドメインのみを含む１本鎖ポリペプチド、または会
合する重鎖部分を含まない、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むこの断片、ならびに
（３）１個の重鎖可変領域のみを含む１本鎖ポリペプチド、または会合する軽鎖部分を含
まない、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むこの断片などの、隣接アミノ酸残基の１つの
連続配列から構成される１次構造を有するポリペプチドである抗体断片（本明細書では、
「１本鎖抗体断片」または「１本鎖ポリペプチド」と称する）；ならびに抗体断片から形
成される多重特異性または多価構造がある。１以上の重鎖を有する抗体断片では、重鎖は
、完全な抗体の非Ｆｃ領域で見出される定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプ
でのＣＨ１）を含んでいてもよい、および／または完全な抗体で見出されるヒンジ領域配
列を含んでいてもよい、および／または重鎖のヒンジ領域配列もしくは定常ドメイン配列
中で融合するもしくは中に位置するロイシンジッパー配列(leucine zipper sequence)を
含んでいてもよい。
語(grammatical variants)は、完全な(intact)抗体の抗原結合部位または可変領域を有す
る完全な抗体の一部として規定され、この際、上記一部は完全な抗体のＦｃ領域の定常重
鎖ドメイン（即ち、抗体のアイソタイプによって、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含ま
ない。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、及
びＦｖ断片；ダイアボディ(diabodies)；以下に制限されないが、（１）１本鎖Ｆｖ（ｓ
ｃＦｖ）分子、（２）１個の軽鎖可変ドメインのみを含む１本鎖ポリペプチド、または会
合する重鎖部分を含まない、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むこの断片、ならびに
（３）１個の重鎖可変領域のみを含む１本鎖ポリペプチド、または会合する軽鎖部分を含
まない、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むこの断片などの、隣接アミノ酸残基の１つの
連続配列から構成される１次構造を有するポリペプチドである抗体断片（本明細書では、
「１本鎖抗体断片」または「１本鎖ポリペプチド」と称する）；ならびに抗体断片から形
成される多重特異性または多価構造がある。１以上の重鎖を有する抗体断片では、重鎖は
、完全な抗体の非Ｆｃ領域で見出される定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプ
でのＣＨ１）を含んでいてもよい、および／または完全な抗体で見出されるヒンジ領域配
列を含んでいてもよい、および／または重鎖のヒンジ領域配列もしくは定常ドメイン配列
中で融合するもしくは中に位置するロイシンジッパー配列(leucine zipper sequence)を
含んでいてもよい。
【0042】
特記しない限り、本明細書で使用される「コンジュゲート(conjugate)」ということば
は、１以上の抗体断片が１以上のポリマー分子に共有結合することにより形成される異種
分子として規定され、この際、異種分子は水溶性であり、即ち、血液などの生理的な液体
に可溶であり、さらに、異種分子は構造化された凝集体(structured aggregate)を含まな
い。興味のあるコンジュゲートは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。前記規定
において、「構造化された凝集体(structured aggregate)」ということばは、（１）異種
分子がミセルまたは他のエマルジョン構造を持たず、脂質二重層、小胞もしくはリポソー
ムに固定されないように、球状もしくは球状シェル構造を有する水溶液での分子の凝集体
；および（２）水相と接触した際に異種分子を溶液中に放出しない、クロマトグラフィー
ビーズマトリックス等の、固体または不溶化形態の分子の凝集体を意味する。したがって
、本明細書で規定される「コンジュゲート(conjugate)」ということばは、沈殿物(precip
itate)、堆積物(sediment)、生体内分解性マトリックスまたは固体の水和時に水溶液中に
異種分子を放出できる他の固体を包含する。
は、１以上の抗体断片が１以上のポリマー分子に共有結合することにより形成される異種
分子として規定され、この際、異種分子は水溶性であり、即ち、血液などの生理的な液体
に可溶であり、さらに、異種分子は構造化された凝集体(structured aggregate)を含まな
い。興味のあるコンジュゲートは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。前記規定
において、「構造化された凝集体(structured aggregate)」ということばは、（１）異種
分子がミセルまたは他のエマルジョン構造を持たず、脂質二重層、小胞もしくはリポソー
ムに固定されないように、球状もしくは球状シェル構造を有する水溶液での分子の凝集体
；および（２）水相と接触した際に異種分子を溶液中に放出しない、クロマトグラフィー
ビーズマトリックス等の、固体または不溶化形態の分子の凝集体を意味する。したがって
、本明細書で規定される「コンジュゲート(conjugate)」ということばは、沈殿物(precip
itate)、堆積物(sediment)、生体内分解性マトリックスまたは固体の水和時に水溶液中に
異種分子を放出できる他の固体を包含する。
【0043】
本明細書に使用される、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）ということばは、実質的に
均質な抗体集団から得られる抗体を意味し、即ち、上記集団を含む個々の抗体が少量で存
在してもよい可能性のある天然の変異を除いて同じである。モノクローナル抗体は、かな
り特異的であり、単一の抗原部位に対する(directed against)ものである。各ｍＡｂは、
抗原の単一の決定基に対する(directed against)ものである。特異性に加えて、モノクロ
ーナル抗体は、ハイブリドーマ培養物によって合成でき、他の免疫グロブリンが混入しな
いという点で好ましい。修飾語句である「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団
から得られるという抗体の特徴を示すものであり、抗体の製造が特定の方法による必要が
あるとは解されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、固定化
Ｂ細胞もしくはそのハイブリドーマで作製されてもよい、または組換ＤＮＡ方法によって
作製されてもよい。
均質な抗体集団から得られる抗体を意味し、即ち、上記集団を含む個々の抗体が少量で存
在してもよい可能性のある天然の変異を除いて同じである。モノクローナル抗体は、かな
り特異的であり、単一の抗原部位に対する(directed against)ものである。各ｍＡｂは、
抗原の単一の決定基に対する(directed against)ものである。特異性に加えて、モノクロ
ーナル抗体は、ハイブリドーマ培養物によって合成でき、他の免疫グロブリンが混入しな
いという点で好ましい。修飾語句である「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団
から得られるという抗体の特徴を示すものであり、抗体の製造が特定の方法による必要が
あるとは解されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、固定化
Ｂ細胞もしくはそのハイブリドーマで作製されてもよい、または組換ＤＮＡ方法によって
作製されてもよい。
【0044】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、源となる種若しくは免疫グロブリンクラスも
しくはサブクラスという称号にかかわらず、ＣＤ４７抗体の可変（超可変を含む）ドメイ
ンを定常ドメインでスプライシングする（例えば、「ヒト化」抗体）、または軽鎖を重鎖
でスプライシングする、またはある種の鎖を他の種の鎖でスプライシングする、または異
種タンパク質との融合によって製造されるハイブリッド及び組換抗体、さらには所望の生
物学的活性を示す限り、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ）を包含
する。
しくはサブクラスという称号にかかわらず、ＣＤ４７抗体の可変（超可変を含む）ドメイ
ンを定常ドメインでスプライシングする（例えば、「ヒト化」抗体）、または軽鎖を重鎖
でスプライシングする、またはある種の鎖を他の種の鎖でスプライシングする、または異
種タンパク質との融合によって製造されるハイブリッド及び組換抗体、さらには所望の生
物学的活性を示す限り、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ）を包含
する。
【0045】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、詳細には、重鎖および／または軽鎖の一部が
特定の種由来のまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の相当する配列
と同じであるまたは上記配列と相同であるが、上記鎖の残りは他の種由来のまたは他の抗
体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の相当する配列と同じであるまたは上記配列と
相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、さらには所望の生物学的活性を示す限り
、このような抗体の断片を包含する。
特定の種由来のまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の相当する配列
と同じであるまたは上記配列と相同であるが、上記鎖の残りは他の種由来のまたは他の抗
体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の相当する配列と同じであるまたは上記配列と
相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、さらには所望の生物学的活性を示す限り
、このような抗体の断片を包含する。
【0046】
本明細書に使用される、「単離された」抗体は、自然環境の成分から同定および分離お
よび／または回収されたものである。自然環境の混入成分は、抗体の診断または治療用途
を妨げるような材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク様または非タンパク様溶
質がある。実施形態によっては、抗体は、（１）ローリー法(Lowry method)によって測定
される際に７５重量％を超える抗体となるように、および最も好ましくは８０重量％、９
０重量％または９９重量％を超えるように、または（２）クマシー・ブルー、もしくは好
ましくは銀染色を用いた還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質で
あるように、精製されるであろう。抗体の自然環境の少なくとも１成分は存在しないであ
ろうため、単離された抗体は組換細胞内にin situで存在する抗体を包含する。しかしな
がら、通常、単離された抗体は少なくとも１精製工程によって調製されるであろう。
よび／または回収されたものである。自然環境の混入成分は、抗体の診断または治療用途
を妨げるような材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク様または非タンパク様溶
質がある。実施形態によっては、抗体は、（１）ローリー法(Lowry method)によって測定
される際に７５重量％を超える抗体となるように、および最も好ましくは８０重量％、９
０重量％または９９重量％を超えるように、または（２）クマシー・ブルー、もしくは好
ましくは銀染色を用いた還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質で
あるように、精製されるであろう。抗体の自然環境の少なくとも１成分は存在しないであ
ろうため、単離された抗体は組換細胞内にin situで存在する抗体を包含する。しかしな
がら、通常、単離された抗体は少なくとも１精製工程によって調製されるであろう。
【0047】
本明細書に使用される、「標識されたエピトープ(epitope tagged)」ということばは、
「エピトープタグ(epitope tag)」に融合されたＣＤ４７抗体を意味する。上記エピトー
プタグポリペプチドは、これに対する抗体を作製できるエピトープを提供するのに十分な
残基を有するが、ＣＤ４７抗体の活性を妨げるように十分短い。好ましくは、エピトープ
タグは、エピトープに特異的な抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように十
分固有である(unique)。適当なタグポリペプチドは、通常、少なくとも６アミノ酸残基を
有し、一般的には約８～５０アミノ酸残基（好ましくは約９～３０残基）を有する。例と
しては、ｃ－ｍｙｃタグならびにこれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及
び９Ｅ１０抗体（例えば、Evan et al., Mol. Cell. Biol., 5(12):3610-3616 (1985)参
照）；ならびに単純ヘルペスウィルス(Herpes Simplex virus)糖タンパク質（ｇＤ）タグ
及びその抗体（例えば、Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)
）がある。
「エピトープタグ(epitope tag)」に融合されたＣＤ４７抗体を意味する。上記エピトー
プタグポリペプチドは、これに対する抗体を作製できるエピトープを提供するのに十分な
残基を有するが、ＣＤ４７抗体の活性を妨げるように十分短い。好ましくは、エピトープ
タグは、エピトープに特異的な抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように十
分固有である(unique)。適当なタグポリペプチドは、通常、少なくとも６アミノ酸残基を
有し、一般的には約８～５０アミノ酸残基（好ましくは約９～３０残基）を有する。例と
しては、ｃ－ｍｙｃタグならびにこれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及
び９Ｅ１０抗体（例えば、Evan et al., Mol. Cell. Biol., 5(12):3610-3616 (1985)参
照）；ならびに単純ヘルペスウィルス(Herpes Simplex virus)糖タンパク質（ｇＤ）タグ
及びその抗体（例えば、Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)
）がある。
【0048】
本明細書に使用される、「ラベル」ということばは、抗体に直接または間接的に結合す
る検出可能な化合物または組成物を意味する。ラベルは、それ自体検出可能であっても（
例えば、放射性同位元素標識若しくは蛍光標識）または、酵素ラベルの場合には、検出可
能な基質化合物若しくは組成物の化学的変化を触媒してもよい。
る検出可能な化合物または組成物を意味する。ラベルは、それ自体検出可能であっても（
例えば、放射性同位元素標識若しくは蛍光標識）または、酵素ラベルの場合には、検出可
能な基質化合物若しくは組成物の化学的変化を触媒してもよい。
【0049】
本明細書に使用される、「固相」ということばは、本発明の抗体が付着できる非水性マ
トリックスを意味する。本明細書に包含される固相の例としては、一部がもしくは全部が
ガラスで形成されるもの（例えば、多孔質ガラス(controlled pore glass)）、多糖（例
えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシ
リコーンが挙げられる。特定の実施形態では、内容に応じて、固相は、アッセイプレート
のウェルを有していてもよい；他の実施形態では、精製カラム（例えば、アフィニティク
ロマトグラフィーカラム）がある。このことばはまた、ばらばらの粒子の不連続固相を包
含する。例えば、米国特許第４，２７５，１４９号を参照。
トリックスを意味する。本明細書に包含される固相の例としては、一部がもしくは全部が
ガラスで形成されるもの（例えば、多孔質ガラス(controlled pore glass)）、多糖（例
えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシ
リコーンが挙げられる。特定の実施形態では、内容に応じて、固相は、アッセイプレート
のウェルを有していてもよい；他の実施形態では、精製カラム（例えば、アフィニティク
ロマトグラフィーカラム）がある。このことばはまた、ばらばらの粒子の不連続固相を包
含する。例えば、米国特許第４，２７５，１４９号を参照。
【0050】
本発明はまた、これらのＣＤ４７抗体を含む薬剤組成物および上記ＣＤ４７抗体または
薬剤組成物で患者の病気を処置する方法を提供する。
薬剤組成物で患者の病気を処置する方法を提供する。
【0051】
本明細書に使用される、「処置(treatment)」または「処置する(treating)」というこ
とばは、病気（癌または線維症等）の治療のための処置および予防のための(prophylacti
c)または防止のための(preventative)手段双方を意味する。処置の必要なものとしては、
すでにその病気にかかっているものおよびその病気を防ごうとするものがある。
とばは、病気（癌または線維症等）の治療のための処置および予防のための(prophylacti
c)または防止のための(preventative)手段双方を意味する。処置の必要なものとしては、
すでにその病気にかかっているものおよびその病気を防ごうとするものがある。
【0052】
癌の例としては、以下に制限されないが、卵巣癌、結腸癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、膀
胱癌、大腸癌、膵臓癌、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病
、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫
、神経膠腫、膠芽細胞腫、骨髄腫、単球性白血病、Ｂ細胞由来白血病(B-cell derived le
ukemia)、Ｔ細胞由来白血病(T-cell derived leukemia)、Ｂ細胞由来リンパ腫、Ｔ細胞由
来リンパ腫、および固形腫瘍が挙げられる。線維症は、例えば、心筋梗塞、狭心症、変形
性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、気管支炎、または喘息であってもよい。
胱癌、大腸癌、膵臓癌、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病
、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫
、神経膠腫、膠芽細胞腫、骨髄腫、単球性白血病、Ｂ細胞由来白血病(B-cell derived le
ukemia)、Ｔ細胞由来白血病(T-cell derived leukemia)、Ｂ細胞由来リンパ腫、Ｔ細胞由
来リンパ腫、および固形腫瘍が挙げられる。線維症は、例えば、心筋梗塞、狭心症、変形
性関節症、肺線維症、喘息、嚢胞性線維症、気管支炎、または喘息であってもよい。
【0053】
本明細書に使用される、処置を目的とした「患者(subject)」ということばは、哺乳動
物として分類される動物を指し、ヒト、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ等の、家畜動物、および
動物園、競技(sports)、またはペット動物を包含する。好ましくは、哺乳動物はヒトであ
る。
物として分類される動物を指し、ヒト、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ等の、家畜動物、および
動物園、競技(sports)、またはペット動物を包含する。好ましくは、哺乳動物はヒトであ
る。
【0054】
本発明のＣＤ４７抗体はまた、ＣＤ４７よる病気の治療の経過をモニターするのにイン
ビトロでまたはインビボで使用できる。ゆえに、例えば、ＣＤ４７を発現する細胞、特に
ＣＤ４７を発現する癌細胞の数の増加または減少を測定することによって、病気を改善す
ることを目的とする特定の治療レジメが有効であるかどうかを決定できる。
ビトロでまたはインビボで使用できる。ゆえに、例えば、ＣＤ４７を発現する細胞、特に
ＣＤ４７を発現する癌細胞の数の増加または減少を測定することによって、病気を改善す
ることを目的とする特定の治療レジメが有効であるかどうかを決定できる。
【0055】
本発明のＣＤ４７抗体は、液相で利用できるまたは固相担体に結合できるイムノアッセ
イにインビボで使用されてもよい。加えて、これらのイムノアッセイでのＣＤ４７抗体は
、様々な方法で検出可能なように標識されてもよい。本発明のモノクローナル抗体を利用
できるイムノアッセイのタイプの例としては、フローサイトメトリー、例えば、ＦＡＣＳ
、ＭＡＣＳ、免疫組織化学、直性または間接形式での競合及び非競合イムノアッセイがあ
る。本発明のＣＤ４７抗体を用いた抗原の検出は、生理学的試料の免疫組織化学アッセイ
などの、順形式(forward mode)、逆形式(reverse mode)、または同時形式(simultaneous
mode)のいずれかで操作されるイムノアッセイを用いて行うことができる。当業者は、過
度の実験をすることなく他のイムノアッセイ形式を知るであろう、または容易に認識でき
る。
イにインビボで使用されてもよい。加えて、これらのイムノアッセイでのＣＤ４７抗体は
、様々な方法で検出可能なように標識されてもよい。本発明のモノクローナル抗体を利用
できるイムノアッセイのタイプの例としては、フローサイトメトリー、例えば、ＦＡＣＳ
、ＭＡＣＳ、免疫組織化学、直性または間接形式での競合及び非競合イムノアッセイがあ
る。本発明のＣＤ４７抗体を用いた抗原の検出は、生理学的試料の免疫組織化学アッセイ
などの、順形式(forward mode)、逆形式(reverse mode)、または同時形式(simultaneous
mode)のいずれかで操作されるイムノアッセイを用いて行うことができる。当業者は、過
度の実験をすることなく他のイムノアッセイ形式を知るであろう、または容易に認識でき
る。
【0056】
本発明のＣＤ４７抗体は、多くの様々な担体に結合して、ＣＤ４７発現細胞の存在を検
出するのに使用できる。既知の担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレ
ン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポ
リアクリルアミド、アガロースならびに磁鉄鉱がある。上記担体の性質は、本発明の目的
に応じて可溶性または不溶性のいずれであってもよい。当業者は、モノクローナル抗体に
結合するための他の適当な担体を知っているであろう、または通常の実験を用いて、上記
を確かめることができるであろう。
出するのに使用できる。既知の担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレ
ン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポ
リアクリルアミド、アガロースならびに磁鉄鉱がある。上記担体の性質は、本発明の目的
に応じて可溶性または不溶性のいずれであってもよい。当業者は、モノクローナル抗体に
結合するための他の適当な担体を知っているであろう、または通常の実験を用いて、上記
を確かめることができるであろう。
【0057】
診断方法に使用される、治療方法におけるトレーサーとしての用途が見つかっているな
ど、当業者が知っている多くの様々な標識や標識方法が存在する。診断を目的として、標
識は、本発明の抗体または、ＣＤＲ配列から構成されるもしくはＣＤＲ配列を有する断片
などの、この断片に共有結合してもまたは非共有結合してもよい。本発明で使用できる標
識のタイプの例としては、酵素、ラジオアイソトープ、蛍光化合物、コロイド金属、化学
発光化合物、および生物発光化合物がある。当業者は、本発明のモノクローナル抗体に結
合する他の適当な標識を知っているであろう、または通常の実験を用いて、上記を確かめ
ることができるであろう。さらに、これらの標識の本発明のモノクローナル抗体への結合
は、当業者に共通の標準的な技術を用いて行うことができる。
ど、当業者が知っている多くの様々な標識や標識方法が存在する。診断を目的として、標
識は、本発明の抗体または、ＣＤＲ配列から構成されるもしくはＣＤＲ配列を有する断片
などの、この断片に共有結合してもまたは非共有結合してもよい。本発明で使用できる標
識のタイプの例としては、酵素、ラジオアイソトープ、蛍光化合物、コロイド金属、化学
発光化合物、および生物発光化合物がある。当業者は、本発明のモノクローナル抗体に結
合する他の適当な標識を知っているであろう、または通常の実験を用いて、上記を確かめ
ることができるであろう。さらに、これらの標識の本発明のモノクローナル抗体への結合
は、当業者に共通の標準的な技術を用いて行うことができる。
【0058】
実施形態によっては、本発明のＣＤ４７抗体は、例えば、イメージングに使用される、
ナノ粒子に結合する。使用できるナノ粒子としては、当該分野において既知のものがあり
、例えば、以下に制限されないが、ラマン－シリカ－金－ナノ粒子(Raman-silica-gold-n
anoparticle)（Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰ）がある。上記Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰは、狭いバン
ド分光特徴(narrow-band spectral signature)を有する、ラマン有機分子が金コアに吸着
することで構成される。ラマン有機分子は変更されてもよいため、各ナノ粒子は自身の特
徴を有することができ、これにより複数のナノ粒子がそれぞれ多量化によって同時に検出
できる。完全なナノ粒子はシリカシェルに封入されて、ラマン有機分子を金ナノコアに保
持する。Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰの任意のポリエチレングリコール（ＰＥ）化(polyethylen
e glycol (PEG)-ylation)によって、そのバイオアベイラビリティが上がり、標的分子に
結合する機能的「ハンドル(handle)」が提供される。例えば、Thakor et al (2011), Sci
. Transl. Med., 3(79):79ra33; Jokerst et al. (2011) Small., 7(5):625-33; Gao et
al. (2011) Biomaterials, 32(8):2141-8を参照。
ナノ粒子に結合する。使用できるナノ粒子としては、当該分野において既知のものがあり
、例えば、以下に制限されないが、ラマン－シリカ－金－ナノ粒子(Raman-silica-gold-n
anoparticle)（Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰ）がある。上記Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰは、狭いバン
ド分光特徴(narrow-band spectral signature)を有する、ラマン有機分子が金コアに吸着
することで構成される。ラマン有機分子は変更されてもよいため、各ナノ粒子は自身の特
徴を有することができ、これにより複数のナノ粒子がそれぞれ多量化によって同時に検出
できる。完全なナノ粒子はシリカシェルに封入されて、ラマン有機分子を金ナノコアに保
持する。Ｒ－Ｓｉ－Ａｕ－ＮＰの任意のポリエチレングリコール（ＰＥ）化(polyethylen
e glycol (PEG)-ylation)によって、そのバイオアベイラビリティが上がり、標的分子に
結合する機能的「ハンドル(handle)」が提供される。例えば、Thakor et al (2011), Sci
. Transl. Med., 3(79):79ra33; Jokerst et al. (2011) Small., 7(5):625-33; Gao et
al. (2011) Biomaterials, 32(8):2141-8を参照。
【0059】
本発明を目的として、インビボでまたはインビトロで、体液中にまたは組織に存在する
際に本発明のＣＤ４７抗体によってＣＤ４７を検出してもよい。検出可能な量のＣＤ４７
を含むサンプルであれば、使用できる。サンプルは、尿、唾液、脳脊髄液、血液、血清な
ど液体、または組織、便などの固体もしくは半固体、または組織学的診断に一般的に使用
されるもの等の固形組織であってもよい。
際に本発明のＣＤ４７抗体によってＣＤ４７を検出してもよい。検出可能な量のＣＤ４７
を含むサンプルであれば、使用できる。サンプルは、尿、唾液、脳脊髄液、血液、血清な
ど液体、または組織、便などの固体もしくは半固体、または組織学的診断に一般的に使用
されるもの等の固形組織であってもよい。
【0060】
より高い感度を生じる可能のある他の標識技術としては、抗体を低分子量ハプテンにカ
ップリングさせることからなるものがある。次に、これらのハプテンは、第２の反応によ
って特異的に検出できる。例えば、アビジンと反応する、ビオチン、または特異的な抗ハ
プテン抗体と反応できる、ジニトロフェノール、ピリドキサール、もしくはフルオレセイ
ンなどのハプテンを使用することが一般的である。
ップリングさせることからなるものがある。次に、これらのハプテンは、第２の反応によ
って特異的に検出できる。例えば、アビジンと反応する、ビオチン、または特異的な抗ハ
プテン抗体と反応できる、ジニトロフェノール、ピリドキサール、もしくはフルオレセイ
ンなどのハプテンを使用することが一般的である。
【0061】
便宜上、本発明のＣＤ４７は、キット、即ち、診断アッセイを行うための指示書と所定
量の試薬とのパッケージされた組み合わせ(packaged combination)中に提供されてもよい
。抗体を酵素で標識する際には、キットは、酵素で必要とされる基質および補因子（例え
ば、検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含むであろう。加
えて、安定化剤、バッファー（例えば、ブロックバッファー(block buffer)またはリシス
バッファー(lysis buffer)）等の、他の添加剤を含んでもよい。様々な試薬の相対量は、
アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液における濃度となるように広範に変化し
える。特に、試薬は、溶解すると適当な濃度の試薬溶液となる賦形剤などの、一般的には
凍結乾燥された、乾燥粉末として提供されてもよい。
量の試薬とのパッケージされた組み合わせ(packaged combination)中に提供されてもよい
。抗体を酵素で標識する際には、キットは、酵素で必要とされる基質および補因子（例え
ば、検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含むであろう。加
えて、安定化剤、バッファー（例えば、ブロックバッファー(block buffer)またはリシス
バッファー(lysis buffer)）等の、他の添加剤を含んでもよい。様々な試薬の相対量は、
アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液における濃度となるように広範に変化し
える。特に、試薬は、溶解すると適当な濃度の試薬溶液となる賦形剤などの、一般的には
凍結乾燥された、乾燥粉末として提供されてもよい。
【0062】
１以上の本発明の抗体を含む治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、任意の
生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定化剤と所望の純度を有する抗体を混合する
ことによって貯蔵用に調製される（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16t
h edition, Osol, A. Ed. (1980)を参照）。抗体組成物は、医療行為によく適合するよう
に処方、投薬(dosed)、および投与されるであろう。この際に考慮される因子としては、
処置される特定の疾患、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の病態、疾患の原因、薬
剤のデリバリー部位、投与方法、投与のスケジュール、および医療従事者が知る他の因子
がある。投与される抗体の「治療上有効な量」は、このような考えによって管理されるで
あろうし、ＣＤ４７関連病気を防ぐのに必要な最小量である。
生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定化剤と所望の純度を有する抗体を混合する
ことによって貯蔵用に調製される（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16t
h edition, Osol, A. Ed. (1980)を参照）。抗体組成物は、医療行為によく適合するよう
に処方、投薬(dosed)、および投与されるであろう。この際に考慮される因子としては、
処置される特定の疾患、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の病態、疾患の原因、薬
剤のデリバリー部位、投与方法、投与のスケジュール、および医療従事者が知る他の因子
がある。投与される抗体の「治療上有効な量」は、このような考えによって管理されるで
あろうし、ＣＤ４７関連病気を防ぐのに必要な最小量である。
【0063】
治療用量は、少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．０５μｇ／ｋｇ
体重；少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．５μｇ／ｋｇ体重、少なく
とも約１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２．５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５μｇ／ｋ
ｇ体重であり、および約１００μｇ／ｋｇ体重以下であろう。このようなガイドラインは
、例えば、抗体断片を使用する際、または抗体コンジュゲート(antibody conjugate)を使
用する際には、活性剤の分子量に関して調節されることは当業者が理解するであろう。用
量はまた、局所投与、例えば、鼻腔内、吸入などで、または全身投与、例えば、腹腔内（
Ｉ．Ｐ．）、静脈内（Ｉ．Ｖ．）、皮内（Ｉ．Ｄ．）、筋肉内（Ｉ．Ｍ．）などによって
異なってもよい。
体重；少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．５μｇ／ｋｇ体重、少なく
とも約１μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２．５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５μｇ／ｋ
ｇ体重であり、および約１００μｇ／ｋｇ体重以下であろう。このようなガイドラインは
、例えば、抗体断片を使用する際、または抗体コンジュゲート(antibody conjugate)を使
用する際には、活性剤の分子量に関して調節されることは当業者が理解するであろう。用
量はまた、局所投与、例えば、鼻腔内、吸入などで、または全身投与、例えば、腹腔内（
Ｉ．Ｐ．）、静脈内（Ｉ．Ｖ．）、皮内（Ｉ．Ｄ．）、筋肉内（Ｉ．Ｍ．）などによって
異なってもよい。
【0064】
本発明のＣＤ４７抗体は、活性を促進する、または治療効果を上げる１以上の薬剤と一
緒に処方される必要はないが、必要であれば上記のように所望されてもよい。これらは、
通常、前記で使用されるのと同様の用量および投与経路または従来使用される用量の約１
～９９％で使用される。
緒に処方される必要はないが、必要であれば上記のように所望されてもよい。これらは、
通常、前記で使用されるのと同様の用量および投与経路または従来使用される用量の約１
～９９％で使用される。
【0065】
許容できる担体、賦形剤、または安定化剤は使用される用量や濃度でレシピエントにと
って無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン
酸やメチオニン等の抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロ
リド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム；フェノール、ブチルアルコー
ルまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラ
ベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ
－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラ
チン、または免疫グロブリン等の、タンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマ
ー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン等の
アミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリン等の、単糖、二糖、及び他の炭
水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソル
ビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成カウンターイオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－
タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）
またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤がある。インビボ投
与に使用される製剤は、滅菌されている必要がある。これは、滅菌濾過膜による濾過によ
って容易にできる。
って無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン
酸やメチオニン等の抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロ
リド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム；フェノール、ブチルアルコー
ルまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラ
ベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ
－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラ
チン、または免疫グロブリン等の、タンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマ
ー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン等の
アミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリン等の、単糖、二糖、及び他の炭
水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソル
ビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成カウンターイオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－
タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）
またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤がある。インビボ投
与に使用される製剤は、滅菌されている必要がある。これは、滅菌濾過膜による濾過によ
って容易にできる。
【0066】
ＣＤ４７抗体を含む活性成分はまた、例えば、コロイドドラッグデリバリーシステム（
例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及
びナノカプセル）においてまたはマクロエマルジョンにおいて、それぞれ、コアセルベー
ション技術によってまたは界面重合によって、調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒ
ドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルやポリ（メチルメタクリレ
ート）マイクロカプセルに封入されて(entrapped)もよい。このような技術は、Remington
's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。
例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及
びナノカプセル）においてまたはマクロエマルジョンにおいて、それぞれ、コアセルベー
ション技術によってまたは界面重合によって、調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒ
ドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルやポリ（メチルメタクリレ
ート）マイクロカプセルに封入されて(entrapped)もよい。このような技術は、Remington
's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。
【0067】
本発明のＣＤ４７抗体または薬剤組成物は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内
等の、適当な手段によって投与されてもよい。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動
脈内、腹腔内、または皮下投与がある。加えて、抗ＣＤ４７抗体は、特に抗体の用量を減
らしながら、パルスインフィージョン(pulse infusion)によって適切に投与される。
等の、適当な手段によって投与されてもよい。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動
脈内、腹腔内、または皮下投与がある。加えて、抗ＣＤ４７抗体は、特に抗体の用量を減
らしながら、パルスインフィージョン(pulse infusion)によって適切に投与される。
【0068】
病気の予防または処置を目的として、抗体の適切な用量は、上記したような、処置され
る病気のタイプ、病気の重篤度や経過、抗体が予防目的で投与されるか否か、以前の治療
、患者の病歴や抗体に対する応答性、ならびに主治医の判断によって異なるであろう。抗
体は、１回または一連の処置にわたって患者に適切に投与される。
る病気のタイプ、病気の重篤度や経過、抗体が予防目的で投与されるか否か、以前の治療
、患者の病歴や抗体に対する応答性、ならびに主治医の判断によって異なるであろう。抗
体は、１回または一連の処置にわたって患者に適切に投与される。
【0069】
本発明の他の実施形態では、上記疾患の処置に使用できる材料を含む製造社の製品(art
icle of manufacture)が提供される。製造社の製品は、容器およびラベルを有する。適当
な容器としては、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、および試験管がある。容器は
、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料で形成されてもよい。容器は、症状を処置
するのに効果的である組成物を収容し、滅菌アクセスポート(sterile access port)を有
していてもよい（例えば、容器が、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能
なストッパーを有するバイアル瓶であってもよい）。組成物中の活性剤はＣＤ４７抗体で
ある。容器のラベルまたは容器に付着した(associated with)ラベルは、組成物が所定の
症状を処置するのに使用することを示す。製造社の製品は、リン酸緩衝食塩水、リンガー
溶液及びデキストロース溶液等の製薬上許容できるバッファーを含む第２の容器をさらに
有していてもよい。製造社の製品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリン
ジ、及び使用のインストラクションの入った添付文書などの、商業上および使用者の観点
から望ましい他の材料をさらに有していてもよい。
icle of manufacture)が提供される。製造社の製品は、容器およびラベルを有する。適当
な容器としては、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、および試験管がある。容器は
、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料で形成されてもよい。容器は、症状を処置
するのに効果的である組成物を収容し、滅菌アクセスポート(sterile access port)を有
していてもよい（例えば、容器が、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能
なストッパーを有するバイアル瓶であってもよい）。組成物中の活性剤はＣＤ４７抗体で
ある。容器のラベルまたは容器に付着した(associated with)ラベルは、組成物が所定の
症状を処置するのに使用することを示す。製造社の製品は、リン酸緩衝食塩水、リンガー
溶液及びデキストロース溶液等の製薬上許容できるバッファーを含む第２の容器をさらに
有していてもよい。製造社の製品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリン
ジ、及び使用のインストラクションの入った添付文書などの、商業上および使用者の観点
から望ましい他の材料をさらに有していてもよい。
【実施例】
【0070】
以下の実施例は、本発明のをどのように行い、使用するかの完全な開示、記載を当業者
に提供できるように、記載するものであり、発明者が発明とみなす範囲を制限するもので
はなく、また、以下の実験がすべてであるまたはその実験のみを行ったことを表わすもの
ではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関しては正確をきすために努力が
なされたが、実験誤差や偏差は考慮されるべきである。特記しない限り、部は重量部であ
り、分子量は重量平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧または大気圧
付近である。
に提供できるように、記載するものであり、発明者が発明とみなす範囲を制限するもので
はなく、また、以下の実験がすべてであるまたはその実験のみを行ったことを表わすもの
ではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関しては正確をきすために努力が
なされたが、実験誤差や偏差は考慮されるべきである。特記しない限り、部は重量部であ
り、分子量は重量平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧または大気圧
付近である。
【0071】
本明細書で挙げられるすべての出版物や特許出願は、各出版物や特許出願が詳細にかつ
個々に参考で組み込まれているように参考によって本明細書中に引用される。
個々に参考で組み込まれているように参考によって本明細書中に引用される。
【0072】
本発明は、本発明者によって見出されたまたは報告された特定の実施形態の観点から本
発明の実施に好ましい形態を含むよう記載される。本開示を照らして、本発明の範囲を逸
脱しない限り特定の具体的な実施形態において数多くの修飾や変更ができると、当業者は
理解するであろう。例えば、コドンのリダンダシー(codon redundancy)により、タンパク
質配列に影響を与えずに基本的なＤＮＡ配列に変更を行うことができる。さらに、生物学
的に機能が等価であるとの考えにより、種類または量において生物学的作用に影響を与え
ずにタンパク質の構造に変更を行うことができる。このような修飾はすべて添付の請求の
範囲に含まれるものと解される。
発明の実施に好ましい形態を含むよう記載される。本開示を照らして、本発明の範囲を逸
脱しない限り特定の具体的な実施形態において数多くの修飾や変更ができると、当業者は
理解するであろう。例えば、コドンのリダンダシー(codon redundancy)により、タンパク
質配列に影響を与えずに基本的なＤＮＡ配列に変更を行うことができる。さらに、生物学
的に機能が等価であるとの考えにより、種類または量において生物学的作用に影響を与え
ずにタンパク質の構造に変更を行うことができる。このような修飾はすべて添付の請求の
範囲に含まれるものと解される。
【0073】
ファージライブラリーの確立
ＣＤ４７は、細胞外Ｎ末端ＩｇＶドメイン、５つの膜貫通ドメイン(transmembrane dom
ain)、および短いＣ末端細胞内テールを有する５０ｋＤａの膜レセプターである。ヒトＦ
ｃまたはビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質(ACROBiosystems)と結合し
た(conjugated with)ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質を、ファージライブラリ
ーパンニング(phage library panning)用の抗原として使用した。
ＣＤ４７は、細胞外Ｎ末端ＩｇＶドメイン、５つの膜貫通ドメイン(transmembrane dom
ain)、および短いＣ末端細胞内テールを有する５０ｋＤａの膜レセプターである。ヒトＦ
ｃまたはビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質(ACROBiosystems)と結合し
た(conjugated with)ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質を、ファージライブラリ
ーパンニング(phage library panning)用の抗原として使用した。
【0074】
５０人を超える健常なヒト被験者の脾臓または骨髄から増幅した抗体遺伝子断片から構
成されるファージミドベクターを用いて、ファージライブラリーを構築した。抗体フォー
マットは、１本鎖可変断片（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ）である。ライブラリーサイズは１．
１×１０１０であり、配列多様性を以下のようにして分析した。ライブラリーから選択し
、さらに配列を決定した(sequenced)６２クローンについて、１６配列がトランケーショ
ン(truncation)、フレームシフトまたはアンバーコドン(amber codon)を有し；４６配列
が全ＨＣＤＲ３配列が固有である全長ｓｃＦｖを有する。４６の全長ｓｃＦｖにおいて、
１３配列がラムダ軽鎖を有し、３３配列がカッパ軽鎖を有する。
成されるファージミドベクターを用いて、ファージライブラリーを構築した。抗体フォー
マットは、１本鎖可変断片（ＶＨ＋リンカー＋ＶＬ）である。ライブラリーサイズは１．
１×１０１０であり、配列多様性を以下のようにして分析した。ライブラリーから選択し
、さらに配列を決定した(sequenced)６２クローンについて、１６配列がトランケーショ
ン(truncation)、フレームシフトまたはアンバーコドン(amber codon)を有し；４６配列
が全ＨＣＤＲ３配列が固有である全長ｓｃＦｖを有する。４６の全長ｓｃＦｖにおいて、
１３配列がラムダ軽鎖を有し、３３配列がカッパ軽鎖を有する。
【0075】
ファージパンニングおよびクローン選択
ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインに特異的に結合するファージクローンを得るために、２
つのファージパンニング方法を使用した。
ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインに特異的に結合するファージクローンを得るために、２
つのファージパンニング方法を使用した。
【0076】
１．ヒトＣＤ４７－ＩｇＶに対するファージライブラリーイムノチューブ(immunotube)
パンニング
本方法において、上記したのと同様にして開発したファージライブラリーを、まず、カ
ゼイン被覆イムノチューブ中で２時間インキュベートした。ヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ
融合タンパク質を第１のパンニングラウンドで使用した。ＰＢＳＴで５～２０回洗浄する
ことによって、非結合ファージを除去した。結合ファージを新たに調製した１００ｍＭト
リエチルアミン溶液で溶出させ、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを添加することによって中
和して、第１のアウトプットファージプールとした。この第１のアウトプットファージプ
ールを、増幅を目的として大腸菌ＴＧ－１(E. Coli TG-1)細胞に感染させることにより回
収した(rescue)後、抗原としてビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶを用いた第２のパンニン
グラウンドを行った。結合ファージを同様の方法で溶出させ、第２のアウトプットファー
ジプールとし、さらにこれを回収した後、抗原としてヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合タ
ンパク質を用いた第３のパンニングラウンドを行った。さらに、結合ファージを第３のア
ウトプットファージプールとし、ビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶを用いた第４のパンニ
ングラウンドを行った。
パンニング
本方法において、上記したのと同様にして開発したファージライブラリーを、まず、カ
ゼイン被覆イムノチューブ中で２時間インキュベートした。ヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ
融合タンパク質を第１のパンニングラウンドで使用した。ＰＢＳＴで５～２０回洗浄する
ことによって、非結合ファージを除去した。結合ファージを新たに調製した１００ｍＭト
リエチルアミン溶液で溶出させ、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを添加することによって中
和して、第１のアウトプットファージプールとした。この第１のアウトプットファージプ
ールを、増幅を目的として大腸菌ＴＧ－１(E. Coli TG-1)細胞に感染させることにより回
収した(rescue)後、抗原としてビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶを用いた第２のパンニン
グラウンドを行った。結合ファージを同様の方法で溶出させ、第２のアウトプットファー
ジプールとし、さらにこれを回収した後、抗原としてヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合タ
ンパク質を用いた第３のパンニングラウンドを行った。さらに、結合ファージを第３のア
ウトプットファージプールとし、ビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶを用いた第４のパンニ
ングラウンドを行った。
【0077】
２．ヒトＣＤ４７－ＩｇＶに対するファージライブラリー溶液パンニング
本第２の方法において、ファージライブラリーを、まず、カゼインブロック(casein-bl
ocked)１００μＬ ストレプトアビジン－磁気ビーズ(streptavdin-magnetic bead)中で
インキュベートして、ストレプトアビジンビーズバインダーを消耗させた。ストレプトア
ビジン－磁気ビーズ及びＡＧ００８４－ｈｕＩｇＧ１／ｋをネガティブ消耗(negative de
pletion)に使用した。消耗したライブラリーを回収した後、抗原としてビオチン化ヒトＣ
Ｄ４７－ＩｇＶを用いた第２のパンニングラウンドを行い、さらに、カゼインブロックス
トレプトアビジン－磁気ビーズを用いてネガティブ消耗を行った。ＰＢＳＴで５～２０回
洗浄することによって、非結合ファージを除去した。結合ファージを新たに調製した１０
０ｍＭトリエチルアミン溶液で溶出させ、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを添加することに
よって中和した後、回収し、さらにヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合タンパク質を用いた
第３のパンニングラウンドを行い、ＡＧ００８４－ｈｕＩｇＧ１／ｋを用いて消耗させた
。さらに、結合ファージを第３のアウトプットファージプールとし、ビオチン化ヒトＣＤ
４７－ＩｇＶを用いた第４のパンニングラウンドおよびカゼインブロックストレプトアビ
ジン－磁気ビーズを用いたネガティブ消耗を行った。
本第２の方法において、ファージライブラリーを、まず、カゼインブロック(casein-bl
ocked)１００μＬ ストレプトアビジン－磁気ビーズ(streptavdin-magnetic bead)中で
インキュベートして、ストレプトアビジンビーズバインダーを消耗させた。ストレプトア
ビジン－磁気ビーズ及びＡＧ００８４－ｈｕＩｇＧ１／ｋをネガティブ消耗(negative de
pletion)に使用した。消耗したライブラリーを回収した後、抗原としてビオチン化ヒトＣ
Ｄ４７－ＩｇＶを用いた第２のパンニングラウンドを行い、さらに、カゼインブロックス
トレプトアビジン－磁気ビーズを用いてネガティブ消耗を行った。ＰＢＳＴで５～２０回
洗浄することによって、非結合ファージを除去した。結合ファージを新たに調製した１０
０ｍＭトリエチルアミン溶液で溶出させ、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファーを添加することに
よって中和した後、回収し、さらにヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合タンパク質を用いた
第３のパンニングラウンドを行い、ＡＧ００８４－ｈｕＩｇＧ１／ｋを用いて消耗させた
。さらに、結合ファージを第３のアウトプットファージプールとし、ビオチン化ヒトＣＤ
４７－ＩｇＶを用いた第４のパンニングラウンドおよびカゼインブロックストレプトアビ
ジン－磁気ビーズを用いたネガティブ消耗を行った。
【0078】
このプロセス後、ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインに特異的に結合する複数のファージク
ローンが得られ、これらを濃縮した(enriched)。次に、これを希釈し、播種して、３７℃
で８時間生育させ、一晩抗カッパ抗体被覆フィルターに捕捉させた(capture)。ビオチン
化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶ（５０ｎＭ）及びＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ－ＡＰコンジュゲート
(NeutrAvidin-AP conjugate)（１：１０００希釈）をフィルターに塗布して、陽性に結合
したファージクローンを検出した。陽性のファージプラークを選択して、１００μＬのフ
ァージ溶出バッファーに溶出させた。約１０～１５μＬの溶出ファージを用いて、１ｍＬ
ＸＬ１ブルー細胞(XL1 blue cells)に感染させて、ファージシングルポイントＥＬＩＳ
Ａ(Phage single point ELISA)（ＳＰＥ）のための高力価ファージ（ＨＴ）と作製した。
フィルターリフトから選択した陽性シングルクローンをヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合
タンパク質およびビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質に結合させた。ま
た、これらの陽性シングルクローンのＶＨおよびＶＬ遺伝子について配列を決定した。特
有のＶＨ及びＶＬ遺伝子を有するすべての陽性ヒットを発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ－
ＣＬＩｇ－ｈｋ（軽鎖、InvivoGen, Cat No. pfuse2ss-hclk)およびｐＦＵＳＥｓｓ－Ｃ
ＨＩｇ－ｈＧ１（重鎖、InvivoGen, Cat No. pfusess-hchg1)にクローニングした。抗体
をＨＥＫ２９３細胞で発現させ、プロテインＡプラスアガロース(Protein A Plus Agaros
e)で精製した。
ローンが得られ、これらを濃縮した(enriched)。次に、これを希釈し、播種して、３７℃
で８時間生育させ、一晩抗カッパ抗体被覆フィルターに捕捉させた(capture)。ビオチン
化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶ（５０ｎＭ）及びＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ－ＡＰコンジュゲート
(NeutrAvidin-AP conjugate)（１：１０００希釈）をフィルターに塗布して、陽性に結合
したファージクローンを検出した。陽性のファージプラークを選択して、１００μＬのフ
ァージ溶出バッファーに溶出させた。約１０～１５μＬの溶出ファージを用いて、１ｍＬ
ＸＬ１ブルー細胞(XL1 blue cells)に感染させて、ファージシングルポイントＥＬＩＳ
Ａ(Phage single point ELISA)（ＳＰＥ）のための高力価ファージ（ＨＴ）と作製した。
フィルターリフトから選択した陽性シングルクローンをヒトＣＤ４７－ＩｇＶ－Ｆｃ融合
タンパク質およびビオチン化ヒトＣＤ４７－ＩｇＶドメインタンパク質に結合させた。ま
た、これらの陽性シングルクローンのＶＨおよびＶＬ遺伝子について配列を決定した。特
有のＶＨ及びＶＬ遺伝子を有するすべての陽性ヒットを発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ－
ＣＬＩｇ－ｈｋ（軽鎖、InvivoGen, Cat No. pfuse2ss-hclk)およびｐＦＵＳＥｓｓ－Ｃ
ＨＩｇ－ｈＧ１（重鎖、InvivoGen, Cat No. pfusess-hchg1)にクローニングした。抗体
をＨＥＫ２９３細胞で発現させ、プロテインＡプラスアガロース(Protein A Plus Agaros
e)で精製した。
【0079】
ＣＤ４７抗体のアフィニティ成熟(Affinity maturation)
本発明のＣＤ４７抗体の結合親和性は、インビトロアフィニティ成熟によって、例えば
、部位特異的ランダム突然変異(site-specific randomized mutation)によって、向上で
き、これにより、本発明の範囲に含まれる変異配列が得られる。
本発明のＣＤ４７抗体の結合親和性は、インビトロアフィニティ成熟によって、例えば
、部位特異的ランダム突然変異(site-specific randomized mutation)によって、向上で
き、これにより、本発明の範囲に含まれる変異配列が得られる。
【0080】
例えば、本発明のＣＤ４７抗体である１Ｆ８のＢｉａＣｏｒｅ分析から、１．０４Ｅ－
０３１／ｓの高い解離速度で２．８ｎＭの結合親和性（ＫＤ）が示され、これはインビト
ロアフィニティ成熟によって向上できた。１Ｆ８の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ配列をよく分析
することにより、ランダムに変異したＨＣＤＲ１およびＬＣＤＲ１領域内の数個の残基が
同定された。したがって、ランダム突然変異ライブラリーを構築し、特定の残基に導入す
ることにより、様々な新規な配列が得られる。このＣＤＲ突然変異ライブラリーを、平衡
条件下で液相でビオチン化可溶性ＣＤ４７ ＥＣＤを用いてパンニングした。低抗原濃度
での複数のパンニングラウンド後、濃縮したアウトプットバインダーを結合ＥＬＩＳＡ試
験用に選択した後、全ＩｇＧに変換し、これをＢｉａＣｏｒｅ分析にかけて、オフ－レイ
ト改良配列(off-rate improved sequence)用に特異的に選択する。このスクリーニングプ
ロセスにより、本発明の抗体分子が臨床用途に全体的に最良の特性で構築できる。
０３１／ｓの高い解離速度で２．８ｎＭの結合親和性（ＫＤ）が示され、これはインビト
ロアフィニティ成熟によって向上できた。１Ｆ８の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ配列をよく分析
することにより、ランダムに変異したＨＣＤＲ１およびＬＣＤＲ１領域内の数個の残基が
同定された。したがって、ランダム突然変異ライブラリーを構築し、特定の残基に導入す
ることにより、様々な新規な配列が得られる。このＣＤＲ突然変異ライブラリーを、平衡
条件下で液相でビオチン化可溶性ＣＤ４７ ＥＣＤを用いてパンニングした。低抗原濃度
での複数のパンニングラウンド後、濃縮したアウトプットバインダーを結合ＥＬＩＳＡ試
験用に選択した後、全ＩｇＧに変換し、これをＢｉａＣｏｒｅ分析にかけて、オフ－レイ
ト改良配列(off-rate improved sequence)用に特異的に選択する。このスクリーニングプ
ロセスにより、本発明の抗体分子が臨床用途に全体的に最良の特性で構築できる。
【0081】
実施例１ 組換ＣＤ４７－ＥＣＤタンパク質に結合するファージクローンのＥＬＩＳＡ
によるスクリーニング
組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、室温（ＲＴ）で２時間、
マイクロタイタープレートにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）における２μｇ／ｍＬで被覆し
た。抗原を被覆した後、ウェルを、室温（ＲＴ）で１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／
０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、
単一のクローンから精製したファージをウェルに加えて、ＲＴで１時間、インキュベート
した。結合ファージクローンを検出するために、Ｍ１３に対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP
conjugated secondary antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生
基質(Roche)を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰ
ＢＳＴで３回洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー
(TECAN Spectrafluor plate reader)で測定した。陽性のファージクローンを重鎖及び軽
鎖遺伝子の配列決定用に選択した。
によるスクリーニング
組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、室温（ＲＴ）で２時間、
マイクロタイタープレートにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）における２μｇ／ｍＬで被覆し
た。抗原を被覆した後、ウェルを、室温（ＲＴ）で１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／
０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、
単一のクローンから精製したファージをウェルに加えて、ＲＴで１時間、インキュベート
した。結合ファージクローンを検出するために、Ｍ１３に対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP
conjugated secondary antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生
基質(Roche)を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰ
ＢＳＴで３回洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー
(TECAN Spectrafluor plate reader)で測定した。陽性のファージクローンを重鎖及び軽
鎖遺伝子の配列決定用に選択した。
【0082】
本発明の試験を行ったＣＤ４７抗体はすべて、組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質
に対して良好な結合活性を示した。
に対して良好な結合活性を示した。
【0083】
実施例２ ＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の相互作用を遮断する抗体のＥＬＩＳＡによる
分析
組換ヒトＣＤ４７／マウスＦｃ融合タンパク質またはビオチン化ＣＤ４７タンパク質(A
crobiosystems)を、ＲＴで２時間、マイクロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／
ｍＬで被覆した。抗原を被覆した後、ウェルを、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した
後、ＰＢＳで希釈した抗体をウェルに加え（５μｇ／ｍＬ）、ＲＴで１時間、インキュベ
ートした。結合抗体を検出するために、ヒトＦｃに対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP conju
gated secondary antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(R
oche)を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴ
で３回洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー(TECAN
Spectrafluor plate reader)で測定した。
分析
組換ヒトＣＤ４７／マウスＦｃ融合タンパク質またはビオチン化ＣＤ４７タンパク質(A
crobiosystems)を、ＲＴで２時間、マイクロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／
ｍＬで被覆した。抗原を被覆した後、ウェルを、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した
後、ＰＢＳで希釈した抗体をウェルに加え（５μｇ／ｍＬ）、ＲＴで１時間、インキュベ
ートした。結合抗体を検出するために、ヒトＦｃに対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP conju
gated secondary antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(R
oche)を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴ
で３回洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー(TECAN
Spectrafluor plate reader)で測定した。
【0084】
本発明の試験を行ったＣＤ４７抗体はすべて、組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質
及びビオチン化ＣＤ４７タンパク質に対して良好な結合活性を示した。
及びビオチン化ＣＤ４７タンパク質に対して良好な結合活性を示した。
【0085】
実施例３ ＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の相互作用を遮断する抗体のＥＬＩＳＡによる
分析
組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、４℃で１６時間、マイク
ロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。ＲＴで１時間、ＰＢＳＴ
における１％ ＢＳＡでブロックした後、１μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα－Ｈｉｓタンパク質
を、ＲＴで１時間、ＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬ）の不存在下でまたは存在下で添加し
た。次に、プレートを３回洗浄し、ＲＴで１時間、ＨＲＰ標識抗Ｈｉｓ２次抗体(HRP-con
jugated anti-His secondary antibody)と共にインキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ溶液
を３０分間各ウェルに加え、反応を２．０Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停止し、ＯＤを４９０ｎｍで
測定した。
分析
組換ヒトＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、４℃で１６時間、マイク
ロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。ＲＴで１時間、ＰＢＳＴ
における１％ ＢＳＡでブロックした後、１μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα－Ｈｉｓタンパク質
を、ＲＴで１時間、ＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬ）の不存在下でまたは存在下で添加し
た。次に、プレートを３回洗浄し、ＲＴで１時間、ＨＲＰ標識抗Ｈｉｓ２次抗体(HRP-con
jugated anti-His secondary antibody)と共にインキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ溶液
を３０分間各ウェルに加え、反応を２．０Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停止し、ＯＤを４９０ｎｍで
測定した。
【0086】
本発明の試験を行ったＣＤ４７抗体はすべて、ＣＤ４７タンパク質－ＳＩＲＰα結合を
効果的に遮断した。
効果的に遮断した。
【0087】
実施例４ 単量体ＣＤ４７－ＥＣＤに結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応
直接結合および競合スクリーニング後、本発明のＣＤ４７抗体である１Ｆ８を、２つの
既存の参照抗体と比較して、本試験に選んだ。ビオチン化ＣＤ４７タンパク質(Acrobiosy
stems)を、ＲＴで２時間、マイクロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被
覆した。抗原を被覆した後、ウェルを、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．
０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、異な
る濃度のＣＤ４７抗体をウェルに添加して、ＲＴで１時間、インキュベートした。結合抗
体を検出するために、ヒトＦｃに対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP conjugated secondary
antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(Roche)を添加した
。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。
蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー(TECAN Spectrafluor pl
ate reader)で測定した。
直接結合および競合スクリーニング後、本発明のＣＤ４７抗体である１Ｆ８を、２つの
既存の参照抗体と比較して、本試験に選んだ。ビオチン化ＣＤ４７タンパク質(Acrobiosy
stems)を、ＲＴで２時間、マイクロタイタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被
覆した。抗原を被覆した後、ウェルを、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．
０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、異な
る濃度のＣＤ４７抗体をウェルに添加して、ＲＴで１時間、インキュベートした。結合抗
体を検出するために、ヒトＦｃに対するＨＲＰ標識２次抗体(HRP conjugated secondary
antibodies)(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(Roche)を添加した
。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。
蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダー(TECAN Spectrafluor pl
ate reader)で測定した。
【0088】
参照抗体である５Ｆ９及び２Ａ１を、Stanford University、Inhibrx LLC、およびCelg
ene Corp.の研究者によって開示される（例えば、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ． ９，０１７
，６７５ Ｂ２、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ． ９，３８２，３２０、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ
． ９，２２１，９０８、米国特許出願公開第Ｎｏ． ２０１４／０１４０９８９号及び
ＷＯ ２０１６／１０９４１５を参照）のと同様にして、Ｈｕ５Ｆ９およびＣＣ－９００
０２の配列に従って製造し、同じ研究に使用した。
ene Corp.の研究者によって開示される（例えば、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ． ９，０１７
，６７５ Ｂ２、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ． ９，３８２，３２０、ＵＳ Ｐａｔ． Ｎｏ
． ９，２２１，９０８、米国特許出願公開第Ｎｏ． ２０１４／０１４０９８９号及び
ＷＯ ２０１６／１０９４１５を参照）のと同様にして、Ｈｕ５Ｆ９およびＣＣ－９００
０２の配列に従って製造し、同じ研究に使用した。
【0089】
図１に示されるように、すべての３種の抗体（１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）は、単量
体ＣＤ４７－ＥＣＤに対して同様の結合活性を示した。
体ＣＤ４７－ＥＣＤに対して同様の結合活性を示した。
【0090】
実施例５ 二量体ＣＤ４７－ＥＣＤに結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応
実施例４で使用した３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研
究でも使用した。
実施例４で使用した３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研
究でも使用した。
【0091】
ＣＤ４７／マウスＦｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、ＲＴで２時間、マイクロタ
イタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。抗原を被覆した後、ウェルを
、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブ
ロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、異なる濃度の抗ＣＤ４７抗体をウェルに添
加して、ＲＴで１時間、インキュベートした。結合抗体を検出するために、ヒトＦｃに対
するＨＲＰ標識２次抗体(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(Roche)
を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回
洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。
イタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。抗原を被覆した後、ウェルを
、ＲＴで１時間、１％ ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でブ
ロックした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後、異なる濃度の抗ＣＤ４７抗体をウェルに添
加して、ＲＴで１時間、インキュベートした。結合抗体を検出するために、ヒトＦｃに対
するＨＲＰ標識２次抗体(Jackson Immuno Research)を添加した後、蛍光発生基質(Roche)
を添加した。すべてのインキュベーション工程間で、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回
洗浄した。蛍光をＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。
【0092】
【0093】
他の結合研究を行い、本発明の２種の抗体、即ち、１Ｆ８及び１３Ｈ３の組換ＣＤ４９
－ＥＣＤへの結合親和性を比較した。図２ｂに示されるように、これらの２種の抗体もま
た、容量に依存して同様の結合活性を示し、この際、ＥＣ５０は、１Ｆ８では０．０３８
ｎＭであり、１３Ｈ３では０．０４５ｎＭであった。
－ＥＣＤへの結合親和性を比較した。図２ｂに示されるように、これらの２種の抗体もま
た、容量に依存して同様の結合活性を示し、この際、ＥＣ５０は、１Ｆ８では０．０３８
ｎＭであり、１３Ｈ３では０．０４５ｎＭであった。
【0094】
実施例６ ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を遮断するＣＤ４７抗体の用量依存反応
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究でも使用した。
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究でも使用した。
【0095】
組換ＣＤ４７－Ｆｃ融合タンパク質(Acrobiosystems)を、４℃で１６時間、マイクロタ
イタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。ＲＴで１時間、ＰＢＳＴにお
ける１％ ＢＳＡでブロックした後、１μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα－Ｈｉｓタンパク質を、
ＲＴで１時間、異なる濃度の抗ＣＤ４７抗体の不存在下でまたは存在下で添加した。次に
、プレートを３回洗浄し、ＲＴで１時間、ＨＲＰ標識抗Ｈｉｓ２次抗体と共にインキュベ
ートした。洗浄後、ＴＭＢ溶液を３０分間各ウェルに加え、反応を２Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停
止し、ＯＤを４９０ｎｍで測定した。
イタープレートにＰＢＳにおける１μｇ／ｍＬで被覆した。ＲＴで１時間、ＰＢＳＴにお
ける１％ ＢＳＡでブロックした後、１μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα－Ｈｉｓタンパク質を、
ＲＴで１時間、異なる濃度の抗ＣＤ４７抗体の不存在下でまたは存在下で添加した。次に
、プレートを３回洗浄し、ＲＴで１時間、ＨＲＰ標識抗Ｈｉｓ２次抗体と共にインキュベ
ートした。洗浄後、ＴＭＢ溶液を３０分間各ウェルに加え、反応を２Ｍ Ｈ２ＳＯ４で停
止し、ＯＤを４９０ｎｍで測定した。
【0096】
再度、図３ａに示されるように、３種の抗体はすべて、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合
の遮断において同様の活性を示した。
の遮断において同様の活性を示した。
【0097】
他の結合研究を行い、本発明の２種のＣＤ４７抗体である１Ｆ８及び１３Ｈ３のＣＤ４
７のＳＩＲＰαへの結合の遮断能を比較した。図３ｂ及び図３ｃに示されるように、これ
らの２種の抗体もまた、容量に依存して同様の遮断活性を示し、この際、ＩＣ５０は、１
Ｆ８では０．７８ｎＭであり、１３Ｈ３では０．２０ｎＭであった。
７のＳＩＲＰαへの結合の遮断能を比較した。図３ｂ及び図３ｃに示されるように、これ
らの２種の抗体もまた、容量に依存して同様の遮断活性を示し、この際、ＩＣ５０は、１
Ｆ８では０．７８ｎＭであり、１３Ｈ３では０．２０ｎＭであった。
【0098】
実施例７ ＣＤ４７＋ Ｒａｊｉ細胞に結合するＣＤ４７抗体の用量依存反応
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究にも使用した。
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究にも使用した。
【0099】
表面でヒトＣＤ４７を内生的に発現するＲａｊｉ細胞を、４℃で３０分間、異なる濃度
の１Ｆ８、５Ｆ９及び２Ａ１抗体で染色した。次に、細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、４
℃で３０分間、ＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ特異抗体(APC-labeled anti-human Fc specific an
tibody)(Invitrogen)と共にインキュベートした。結合をＦＡＣＳＣａｎｔｏ(Becton-Dic
kinson)を用いて測定した。
の１Ｆ８、５Ｆ９及び２Ａ１抗体で染色した。次に、細胞をＰＢＳで３回洗浄した後、４
℃で３０分間、ＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ特異抗体(APC-labeled anti-human Fc specific an
tibody)(Invitrogen)と共にインキュベートした。結合をＦＡＣＳＣａｎｔｏ(Becton-Dic
kinson)を用いて測定した。
【0100】
図４ａに示されるように、３種の抗体すべてがＣＤ４７＋ Ｒａｊｉ細胞への結合にお
いて同様の活性を示し、さらに同様の用量依存パターンを示した。
いて同様の活性を示し、さらに同様の用量依存パターンを示した。
【0101】
別の研究を行い、本発明の２種の抗体である１Ｆ８および１３Ｈ３のＣＤ４７保有Ｒａ
ｊｉ細胞への結合能を比較した。図４ｂに示されるように、１３Ｈ３は、ＣＤ４７保有Ｒ
ａｊｉ細胞への結合において１Ｆ８より強い親和性を発揮し、この際、ＥＣ５０は、１Ｆ
８で２．９５ｎＭであり、１３Ｈ３で１．０６ｎＭであった。
ｊｉ細胞への結合能を比較した。図４ｂに示されるように、１３Ｈ３は、ＣＤ４７保有Ｒ
ａｊｉ細胞への結合において１Ｆ８より強い親和性を発揮し、この際、ＥＣ５０は、１Ｆ
８で２．９５ｎＭであり、１３Ｈ３で１．０６ｎＭであった。
【0102】
【0103】
実施例８ ヒトマクロファージ（ＭΦ）による腫瘍細胞の食作用の研究
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究でも使用した。
３種のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）を本研究でも使用した。
【0104】
ＰＢＭＣをヒト血液から単離し、単球を６日間マクロファージに分化させた。この単球
由来マクロファージ（ＭＤＭ）をかき集め、２４ウェルディッシュに再播種し、２４時間
接着させた。ＣＤ４７を内生的に発現するヒト腫瘍細胞系Ｒａｊｉを標的細胞として選択
し、１０分間、１μＭ ＣＦＳＥで標識した後、５：１の腫瘍細胞：食細胞の割合でＭＤ
Ｍに添加し、ＣＤ４７抗体を様々な用量で添加した。３時間インキュベートした後、取り
込まれなかった標的細胞をＰＢＳで洗浄除去し、残った食細胞をかき集め、マクロファー
ジマーカーＣＤ１４抗体で染色し、フローサイトメトリーで分析した。ＣＤ１４＋細胞へ
のゲーティング(gating)によって食作用を測定した後、ＣＦＳＥ＋細胞の割合（％）を評
価した。
由来マクロファージ（ＭＤＭ）をかき集め、２４ウェルディッシュに再播種し、２４時間
接着させた。ＣＤ４７を内生的に発現するヒト腫瘍細胞系Ｒａｊｉを標的細胞として選択
し、１０分間、１μＭ ＣＦＳＥで標識した後、５：１の腫瘍細胞：食細胞の割合でＭＤ
Ｍに添加し、ＣＤ４７抗体を様々な用量で添加した。３時間インキュベートした後、取り
込まれなかった標的細胞をＰＢＳで洗浄除去し、残った食細胞をかき集め、マクロファー
ジマーカーＣＤ１４抗体で染色し、フローサイトメトリーで分析した。ＣＤ１４＋細胞へ
のゲーティング(gating)によって食作用を測定した後、ＣＦＳＥ＋細胞の割合（％）を評
価した。
【0105】
図５ａに示されるように、これらの３種の試験抗体はすべて（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、
及び２Ａ１）は、ヒトＭΦによる腫瘍細胞の食作用の促進において同様の活性を示した。
図６ａ、図６ｂ、および６ｃは、３種のＣＤ４７抗体によって引き起こされる(triggered
)、３種の異なるヒト血液癌細胞系のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediate
d phagocytosis)を示す。
及び２Ａ１）は、ヒトＭΦによる腫瘍細胞の食作用の促進において同様の活性を示した。
図６ａ、図６ｂ、および６ｃは、３種のＣＤ４７抗体によって引き起こされる(triggered
)、３種の異なるヒト血液癌細胞系のマクロファージが介する食作用(macrophage-mediate
d phagocytosis)を示す。
【0106】
他の結合研究を行い、本発明の２種のＣＤ４７抗体である１Ｆ８及び１３Ｈ３のヒトＭ
Φによる腫瘍細胞の食作用の促進能を比較した。図５ｂに示されるように、１３Ｈ３およ
び１Ｆ８は、同様の能力を示し、この際、１３Ｈ３が濃度によっては若干より強い食作用
を示した。
Φによる腫瘍細胞の食作用の促進能を比較した。図５ｂに示されるように、１３Ｈ３およ
び１Ｆ８は、同様の能力を示し、この際、１３Ｈ３が濃度によっては若干より強い食作用
を示した。
【0107】
実施例９ ＲＢＣ凝集アッセイにおけるＲＢＣ－不足特性(RBC-sparing property)
ヒトＲＢＣをＰＢＳに１０％になるように希釈し、底の丸い９６ウェルプレートである
力価のＣＤ４７抗体と共に(with a titration of CD47 antibodies)３７℃で２時間、イ
ンキュベートした。赤血球凝集の兆候が、赤血球凝集しないＲＢＣの点状赤色ドットと比
較したヘーズとして現れる、沈降しないＲＢＣ(non-settled RBC)の存在によって示され
る（図７ａおよび図８ａ参照）。図７ｂ及び図８ｂのグラフは、ＩｇＧコントロールのも
のに対して正規化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を定量化することによ
って測定される「凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイ
の定量化結果を示す。
ヒトＲＢＣをＰＢＳに１０％になるように希釈し、底の丸い９６ウェルプレートである
力価のＣＤ４７抗体と共に(with a titration of CD47 antibodies)３７℃で２時間、イ
ンキュベートした。赤血球凝集の兆候が、赤血球凝集しないＲＢＣの点状赤色ドットと比
較したヘーズとして現れる、沈降しないＲＢＣ(non-settled RBC)の存在によって示され
る（図７ａおよび図８ａ参照）。図７ｂ及び図８ｂのグラフは、ＩｇＧコントロールのも
のに対して正規化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を定量化することによ
って測定される「凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイ
の定量化結果を示す。
【0108】
図７ａ、図７ｂ、図８ａ、および図８ｂに示されるように、ＣＤ４７抗体である５Ｆ９
では０．１μｇ／μＬ以上の濃度ですでに有意なＲＢＣ凝集が示されたものの、ＣＤ４７
抗体である１Ｆ８および２Ａ１では３０μｇ／μＬ以下（図７ａ及び図７ｂ）または１５
０μｇ／ｍＬ以下（図８ａ及び図８ｂ）での試験濃度でＲＢＣ凝集が実質的に生じなかっ
た。
では０．１μｇ／μＬ以上の濃度ですでに有意なＲＢＣ凝集が示されたものの、ＣＤ４７
抗体である１Ｆ８および２Ａ１では３０μｇ／μＬ以下（図７ａ及び図７ｂ）または１５
０μｇ／ｍＬ以下（図８ａ及び図８ｂ）での試験濃度でＲＢＣ凝集が実質的に生じなかっ
た。
【0109】
同様にして、図８ｃ及び図８ｄから、本発明のＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８及び１３Ｈ
３）では１５０μｇ／ｍＬ以下の試験濃度でＲＢＣ凝集が実質的に生じないことが示され
たが、ＣＤ４７抗体である５Ｆ９では０．１μｇ／μＬ以上の濃度ですでに有意なＲＢＣ
凝集が示された。
３）では１５０μｇ／ｍＬ以下の試験濃度でＲＢＣ凝集が実質的に生じないことが示され
たが、ＣＤ４７抗体である５Ｆ９では０．１μｇ／μＬ以上の濃度ですでに有意なＲＢＣ
凝集が示された。
【0110】
実施例１０ ＲＢＣ結合アッセイ
ヒトＲＢＣに対するＣＤ４７抗体の結合をフローサイトメトリーによって試験した。ヒ
トＲＢＣをＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬ）と共に４℃で１時間インキュベートした後、
ＡＰＣ標識２次抗体を４℃で３０分間添加した。
ヒトＲＢＣに対するＣＤ４７抗体の結合をフローサイトメトリーによって試験した。ヒ
トＲＢＣをＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬ）と共に４℃で１時間インキュベートした後、
ＡＰＣ標識２次抗体を４℃で３０分間添加した。
【0111】
【0112】
【0113】
実施例１１ ＲＢＣ凝集アッセイ
ＣＤ４７抗体の添加によるＲＢＣ凝集を分析するために、６人の男性及び６人の女性個
体からＲＢＣを集めた。図１０ａ及び図１０ｂは、ＩｇＧコントロールまたは参考抗体の
ものに対して正規化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を測定することによ
って測定される「凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイ
の滴定結果を示す。
ＣＤ４７抗体の添加によるＲＢＣ凝集を分析するために、６人の男性及び６人の女性個
体からＲＢＣを集めた。図１０ａ及び図１０ｂは、ＩｇＧコントロールまたは参考抗体の
ものに対して正規化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を測定することによ
って測定される「凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイ
の滴定結果を示す。
【0114】
実施例１２ 血小板結合アッセイ
ヒト血小板に対する本発明のＣＤ４７抗体の結合をフローサイトメトリーによって試験
した。ヒト末梢全血を本発明の試験ＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬで）またはＳＩＲＰα
－Ｉｇ融合タンパク質と共にインキュベートし、ＣＤ６１を血小板に対する表面マーカー
として染色した。ＣＤ６１陽性集団（血小板）でゲーティングし(gating)、さらにＣＤ４
７またはＳＩＲＰα－Ｉｇ融合タンパク質の結合の割合（％）を試験することによって、
ＣＤ４７抗体またはＳＩＲＰα－Ｉｇ融合タンパク質の結合を測定した。
ヒト血小板に対する本発明のＣＤ４７抗体の結合をフローサイトメトリーによって試験
した。ヒト末梢全血を本発明の試験ＣＤ４７抗体（１０μｇ／ｍＬで）またはＳＩＲＰα
－Ｉｇ融合タンパク質と共にインキュベートし、ＣＤ６１を血小板に対する表面マーカー
として染色した。ＣＤ６１陽性集団（血小板）でゲーティングし(gating)、さらにＣＤ４
７またはＳＩＲＰα－Ｉｇ融合タンパク質の結合の割合（％）を試験することによって、
ＣＤ４７抗体またはＳＩＲＰα－Ｉｇ融合タンパク質の結合を測定した。
【0115】
図１１に示されるように、本発明の試験ＣＤ４７抗体はヒト血小板に感知できるほどに
は結合しなかったが、ＳＩＲＰαタンパク質は結合した。
は結合しなかったが、ＳＩＲＰαタンパク質は結合した。
【0116】
実施例１３ カニクイザル(cyno)ＲＢＣ凝集アッセイ
オス及びメスのカニクイザル(cyno monkey)のＲＢＣをＰＢＳに１０％になるように希
釈し、底の丸い９６ウェルプレートで所定の濃度のＣＤ４７抗体と共に３７℃で２時間、
インキュベートした。図１２ａに示されるように、赤血球凝集の兆候が、赤血球凝集しな
いＲＢＣの点状赤色ドットと比較したヘーズとして現れる、沈降しないＲＢＣ(non-settl
ed RBC)の存在によって示された。図１２ｂは、ＩｇＧコントロールのものに対して正規
化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を測定することによって決定される「
凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイの滴定結果を示す
。
オス及びメスのカニクイザル(cyno monkey)のＲＢＣをＰＢＳに１０％になるように希
釈し、底の丸い９６ウェルプレートで所定の濃度のＣＤ４７抗体と共に３７℃で２時間、
インキュベートした。図１２ａに示されるように、赤血球凝集の兆候が、赤血球凝集しな
いＲＢＣの点状赤色ドットと比較したヘーズとして現れる、沈降しないＲＢＣ(non-settl
ed RBC)の存在によって示された。図１２ｂは、ＩｇＧコントロールのものに対して正規
化された、抗体の存在下でのＲＢＣペレットの領域を測定することによって決定される「
凝集係数(agglutination index)」で表わされる、赤血球凝集アッセイの滴定結果を示す
。
【0117】
データから、本発明の試験ＣＤ４７抗体はインビトロでカニクイザルのＲＢＣ凝集を感
知できるほどには誘導しなかったことが示される。
知できるほどには誘導しなかったことが示される。
【0118】
実施例１４ ＣＤ４７抗体による初期ヒトＡＭＬ細胞の食作用
ＡＭＬ患者(AML-PB003F)の初期ＰＢＭＣ(Primary PBMC)を１μＭ ＣＦＳＥで１０分間
標識した後、５：１の腫瘍細胞：食細胞の割合でＭＤＭに添加し、所定のＣＤ４７抗体を
様々な濃度で添加した。３時間インキュベート後、取り込まれない(non-phagocytosed)標
的細胞をＰＢＳで洗い流し、残った食細胞をかきおとし、ＣＤ４７抗体で染色し、フロー
サイトメトリーによって分析した。食作用は、ＣＤ１４＋細胞でゲーティングし(gating)
、さらにＣＦＳＥ＋細胞の割合（％）を評価することによって測定した。食作用を前記と
同様にして測定した。
ＡＭＬ患者(AML-PB003F)の初期ＰＢＭＣ(Primary PBMC)を１μＭ ＣＦＳＥで１０分間
標識した後、５：１の腫瘍細胞：食細胞の割合でＭＤＭに添加し、所定のＣＤ４７抗体を
様々な濃度で添加した。３時間インキュベート後、取り込まれない(non-phagocytosed)標
的細胞をＰＢＳで洗い流し、残った食細胞をかきおとし、ＣＤ４７抗体で染色し、フロー
サイトメトリーによって分析した。食作用は、ＣＤ１４＋細胞でゲーティングし(gating)
、さらにＣＦＳＥ＋細胞の割合（％）を評価することによって測定した。食作用を前記と
同様にして測定した。
【0119】
図１３ａ～１３ｈに示されるように、すべてが同様のアッセイで使用した参考ＣＤ４７
抗体よりかなり高く、本発明の試験ＣＤ４７抗体はすべて有意なＡＭＬ結合能（７５％を
超える）および食作用能(phagocytosis capabilities)（少なくとも３６％）を示した。
抗体よりかなり高く、本発明の試験ＣＤ４７抗体はすべて有意なＡＭＬ結合能（７５％を
超える）および食作用能(phagocytosis capabilities)（少なくとも３６％）を示した。
【0120】
実施例１５ ルシフェラーゼ－Ｒａｊｉ異種移植モデル（ＣＤＸ）を用いた１Ｆ８のイ
ンビボ有効性
ＮＳＧマウスに、尾静脈注射により１００万細胞／マウスの濃度でＲａｊｉ Ｌｕｃ－
ＥＧＦＰを移植した。マウスをインビボで撮像し、移植してから５日目に移植レベルを測
定した。ＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）の処置を、１０ｍｇ／ｋｇ
の用量で同日に開始した。すべてのマウスに腹腔内注射により１日おきに注射した。マウ
スを、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩイメージングシステム(IVIS Lumina III imaging
system)により以下の時点でインビボで撮像した：抗体処置の０日目、処置後２日目、処
置後６日目、及び処置後９日目。インビボライブイメージングシステム(in vivo live im
aging system)により生物発光輝度(bioluminescent radiance)を分析することによって、
マウスの腫瘍成長を測定した。
ンビボ有効性
ＮＳＧマウスに、尾静脈注射により１００万細胞／マウスの濃度でＲａｊｉ Ｌｕｃ－
ＥＧＦＰを移植した。マウスをインビボで撮像し、移植してから５日目に移植レベルを測
定した。ＣＤ４７抗体（即ち、１Ｆ８、５Ｆ９、及び２Ａ１）の処置を、１０ｍｇ／ｋｇ
の用量で同日に開始した。すべてのマウスに腹腔内注射により１日おきに注射した。マウ
スを、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩイメージングシステム(IVIS Lumina III imaging
system)により以下の時点でインビボで撮像した：抗体処置の０日目、処置後２日目、処
置後６日目、及び処置後９日目。インビボライブイメージングシステム(in vivo live im
aging system)により生物発光輝度(bioluminescent radiance)を分析することによって、
マウスの腫瘍成長を測定した。
【0121】
図１４ａに示されるように、生物発光輝度の分析から、本発明の試験ＣＤ４７抗体（即
ち、１Ｆ８）で処置してからはじめの３日以内はマウスの腫瘍はほとんど成長せず、処置
してから６日目から腫瘍は減少したことが示される。比較により、参考ＣＤ４７抗体で処
置されたマウスの腫瘍は同様の処置期間中成長し続けた。
ち、１Ｆ８）で処置してからはじめの３日以内はマウスの腫瘍はほとんど成長せず、処置
してから６日目から腫瘍は減少したことが示される。比較により、参考ＣＤ４７抗体で処
置されたマウスの腫瘍は同様の処置期間中成長し続けた。
【0122】
同様にして、図１４ｂから、ＣＤ４７抗体である１３Ｈ３もまた、異なる試験濃度でＲ
ａｊｉ異種移植モデルでインビボで有効であったことが示される。
ａｊｉ異種移植モデルでインビボで有効であったことが示される。
【0123】
Ｒａｊｉ－異種移植研究の最後に、すべてのマウスを齧歯動物の安楽死(rodent euthan
asia)を目的としてＣＯ２を使用することによって安楽死させた。４群のマウスの脾細胞
を単離し、フローサイトメトリー分析によってＭ１マクロファージの割合（％）（Ｆ４／
８０陽性マクロファージにおけるＣＤ８０陽性割合（％））およびＭ２マクロファージの
割合（％）（Ｆ４／８０陽性マクロファージにおけるＣＤ２０６陽性割合（％））を分析
した。
asia)を目的としてＣＯ２を使用することによって安楽死させた。４群のマウスの脾細胞
を単離し、フローサイトメトリー分析によってＭ１マクロファージの割合（％）（Ｆ４／
８０陽性マクロファージにおけるＣＤ８０陽性割合（％））およびＭ２マクロファージの
割合（％）（Ｆ４／８０陽性マクロファージにおけるＣＤ２０６陽性割合（％））を分析
した。
【0124】
図１５ａ～１５ｂに示されるように、すべての試験ＣＤ４７抗体（１Ｆ８を含む)は、
腫瘍を有するマウスのマクロファージの極性化を誘導できた。
腫瘍を有するマウスのマクロファージの極性化を誘導できた。
【0125】
実施例１６ 様々なヒト癌タイプのＰＤＸサンプルを用いたＣＤ４７発現プロフィール
５４個のＰＤＸサンプル（７種のヒト癌タイプ）を、免疫－組織学染色によってＣＤ４
７の発現について分析した。様々なＰＤＸサンプルにおけるＣＤ４７染色のレベルを形状
(geometry)および染色強度によって採点した(score)。図１６ａ、図１６ｂおよび図１６
ｃから、ＣＤ４７抗体による処置後に様々な発現レベルのＣＤ４７が示される。
５４個のＰＤＸサンプル（７種のヒト癌タイプ）を、免疫－組織学染色によってＣＤ４
７の発現について分析した。様々なＰＤＸサンプルにおけるＣＤ４７染色のレベルを形状
(geometry)および染色強度によって採点した(score)。図１６ａ、図１６ｂおよび図１６
ｃから、ＣＤ４７抗体による処置後に様々な発現レベルのＣＤ４７が示される。
【0126】
実施例１７ 安全製剤研究（インビボでのカニクイザル(cyno)ＰＫ研究）
投薬を受けていない(Naive)カニクイザル(cyno monkey)の静脈内にベヒクル（ｎ＝２）
、１Ｆ８（ｎ＝３、１５ｍｇ／ｋｇ）および５Ｆ９（ｎ＝３、１５ｍｇ／ｋｇ）を注入し
た。血液採取してから２４時間以内に、注射前に２回ならびに抗体投与してから３、６、
１０、１４及び２１日目に、血液学（ＣＢＣ）を分析した。赤血球数(Erythrocyte count
)（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、絶対網状赤血球数(Absolute Reticulocytes Cou
nts)及び血小板数を含むＣＢＣパラメーターを試験した。結果を図１７ａ～１７ｄに示す
が、これから、１Ｆ８処置はカニクイザルの血液パラメーターに影響を及ぼさなかったこ
とが示される。
投薬を受けていない(Naive)カニクイザル(cyno monkey)の静脈内にベヒクル（ｎ＝２）
、１Ｆ８（ｎ＝３、１５ｍｇ／ｋｇ）および５Ｆ９（ｎ＝３、１５ｍｇ／ｋｇ）を注入し
た。血液採取してから２４時間以内に、注射前に２回ならびに抗体投与してから３、６、
１０、１４及び２１日目に、血液学（ＣＢＣ）を分析した。赤血球数(Erythrocyte count
)（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、絶対網状赤血球数(Absolute Reticulocytes Cou
nts)及び血小板数を含むＣＢＣパラメーターを試験した。結果を図１７ａ～１７ｄに示す
が、これから、１Ｆ８処置はカニクイザルの血液パラメーターに影響を及ぼさなかったこ
とが示される。
【0127】
同様にして、投薬を受けていないカニクイザル（ｎ＝２）の静脈内に、２０ｍｇ／ｋｇ
の用量でＣＤ４７抗体である１３Ｈ３を注射した。様々な時点で、抗凝固剤を用いずに血
液を静脈穿刺によってチューブに集めた。コーティング試薬としてＣＤ４７タンパク質を
用いたＥＬＩＳＡによってＣＤ４７抗体である１３Ｈ３の血清レベルを測定した後、ＨＲ
Ｐ標識抗ヒトカッパ２次抗体(HRP-conjugated anti-human Kappa secondary antibody)を
用いて検出した。カニクイザルの薬物動態パラメーターをＷｉｎｏｌｉｎによって分析し
、図１７ｅ及び下記表に示す。
の用量でＣＤ４７抗体である１３Ｈ３を注射した。様々な時点で、抗凝固剤を用いずに血
液を静脈穿刺によってチューブに集めた。コーティング試薬としてＣＤ４７タンパク質を
用いたＥＬＩＳＡによってＣＤ４７抗体である１３Ｈ３の血清レベルを測定した後、ＨＲ
Ｐ標識抗ヒトカッパ２次抗体(HRP-conjugated anti-human Kappa secondary antibody)を
用いて検出した。カニクイザルの薬物動態パラメーターをＷｉｎｏｌｉｎによって分析し
、図１７ｅ及び下記表に示す。
【0128】
【表1】
【0129】
カニクイザルにおける抗体１３Ｈ３の安全製剤研究（血液学）
投薬を受けていない(Naive)カニクイザル(cyno monkey)の静脈内に抗体１３Ｈ３（２０
ｍｇ／ｋｇ）を単回投与および繰り返し投与（毎週投与）で注入した。抗体投与してから
所定の時期に、赤血球数(Erythrocyte count)（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、血
小板数及びリンパ球数を含む血液学（ＣＢＣ）パラメーターを試験した。
投薬を受けていない(Naive)カニクイザル(cyno monkey)の静脈内に抗体１３Ｈ３（２０
ｍｇ／ｋｇ）を単回投与および繰り返し投与（毎週投与）で注入した。抗体投与してから
所定の時期に、赤血球数(Erythrocyte count)（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、血
小板数及びリンパ球数を含む血液学（ＣＢＣ）パラメーターを試験した。
【0130】
図１９ａ、図１９ｂ、図１９ｃ、図１９ｄ、図１９ｅ、図１９ｆ、図１９ｇ、及び図１
９ｈに、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリン
パ球に対するＣＤ４７抗体である１３Ｈ３の効果を示す。
９ｈに、ＲＢＣコングリゲーション(congregation)、ヘモグロビン、血小板、およびリン
パ球に対するＣＤ４７抗体である１３Ｈ３の効果を示す。
【0131】
実施例１８ 抗体１Ｆ８の構造
ＣＤ４７抗体のエピトープビニングを、競合ＥＬＩＳＡによって評価した。ＣＤ４７
ＥＣＤタンパク質及び第１抗ＣＤ４７抗体を予めインキュベートして、ストレプトアビジ
ン－ＨＲＰ抗体によって検出されるビオチン化第２抗ＣＤ４７抗体に添加した。第１抗Ｃ
Ｄ４７抗体が第２抗体へのＣＤ４７ ＥＣＤの結合に対して競合した場合には、双方の抗
体を同じまたは重複するエピトープビン(epitope bins)に入れた。競合しない場合には、
非重複エピトープビン(non-overlapping epitope bin)に入れた。図１８ａ及び図１８ｂ
に示される結果から、本発明のＣＤ４７抗体である１Ｆ８は参考抗体５Ｆ９及び２Ａ１と
は異なるエピトープを有することが示される。
ＣＤ４７抗体のエピトープビニングを、競合ＥＬＩＳＡによって評価した。ＣＤ４７
ＥＣＤタンパク質及び第１抗ＣＤ４７抗体を予めインキュベートして、ストレプトアビジ
ン－ＨＲＰ抗体によって検出されるビオチン化第２抗ＣＤ４７抗体に添加した。第１抗Ｃ
Ｄ４７抗体が第２抗体へのＣＤ４７ ＥＣＤの結合に対して競合した場合には、双方の抗
体を同じまたは重複するエピトープビン(epitope bins)に入れた。競合しない場合には、
非重複エピトープビン(non-overlapping epitope bin)に入れた。図１８ａ及び図１８ｂ
に示される結果から、本発明のＣＤ４７抗体である１Ｆ８は参考抗体５Ｆ９及び２Ａ１と
は異なるエピトープを有することが示される。
【0132】
図１８ｃは、文献（例えば、J. Clin. Investigation, 126, 7: 2610-2620参照）で報
告されるヒトＣＤ４７－ＥＣＤ（緑色）とのコンプレックスにおける参考Ａｂ ５Ｆ９（
上部）の結晶構造を示す。
告されるヒトＣＤ４７－ＥＣＤ（緑色）とのコンプレックスにおける参考Ａｂ ５Ｆ９（
上部）の結晶構造を示す。
【0133】
図１８ｄは、ヒトＣＤ４７－ＥＣＤ（緑色）とのコンプレックスにおける１Ｆ８－Ｆａ
ｂ（上部）の結晶構造を示す。傾斜したヘッドツゥヘッド配向(tilted head to head ori
entation)を提示するＣＤ４７－ＳＩＲＰα及びＣＤ４７－５Ｆ９ダイアボディ(diabody)
のコンプレックス構造とは異なり、ＣＤ４７－１Ｆ８ Ｆａｂのコンプレックス構造はよ
りまっすぐのヘッドツゥヘッド配向(straighter head to head orientation)をとる。残
基Ｌ３、Ｖ２５、Ｔ２６、Ｎ２７、Ｍ２８、Ｅ２９、Ａ３０、Ｑ３１、Ｔ３４、Ｅ３５、
Ｙ３７、Ａ５３、Ｌ５４、Ｌ７４、Ｋ７５、Ｇ７６、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１
０２及びＲ１０３を含み、このうちＬ３、Ｎ２７、Ｅ２９、Ｑ３１、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｙ
３７、Ａ５３、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１０２及びＲ１０３はＳＩＲＰαとの相
互作用にかかわりのあるＣＤ４７の１Ｆ８エピトープは、不連続でかつ広範囲であり、１
Ｆ８のアンタゴニスト特性を説明する。また、このコンプレックス構造から、１Ｆ８のＶ
ＨドメインがＣＤ４７への８個の水素結合及び４個の塩架橋(salt bridge)を形成し、１
Ｆ８のＶＬドメインがＣＤ４７への８個の水素結合を形成することが明らかである。
ｂ（上部）の結晶構造を示す。傾斜したヘッドツゥヘッド配向(tilted head to head ori
entation)を提示するＣＤ４７－ＳＩＲＰα及びＣＤ４７－５Ｆ９ダイアボディ(diabody)
のコンプレックス構造とは異なり、ＣＤ４７－１Ｆ８ Ｆａｂのコンプレックス構造はよ
りまっすぐのヘッドツゥヘッド配向(straighter head to head orientation)をとる。残
基Ｌ３、Ｖ２５、Ｔ２６、Ｎ２７、Ｍ２８、Ｅ２９、Ａ３０、Ｑ３１、Ｔ３４、Ｅ３５、
Ｙ３７、Ａ５３、Ｌ５４、Ｌ７４、Ｋ７５、Ｇ７６、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１
０２及びＲ１０３を含み、このうちＬ３、Ｎ２７、Ｅ２９、Ｑ３１、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｙ
３７、Ａ５３、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１０２及びＲ１０３はＳＩＲＰαとの相
互作用にかかわりのあるＣＤ４７の１Ｆ８エピトープは、不連続でかつ広範囲であり、１
Ｆ８のアンタゴニスト特性を説明する。また、このコンプレックス構造から、１Ｆ８のＶ
ＨドメインがＣＤ４７への８個の水素結合及び４個の塩架橋(salt bridge)を形成し、１
Ｆ８のＶＬドメインがＣＤ４７への８個の水素結合を形成することが明らかである。
【0134】
公開されているＣＤ４７－ＩｇＶ／抗体またはＳＩＲＰαコンプレックス構造とは異な
り、すべてが同様のヘッドツゥヘッド配向(head-to-head orientation)で結合しているも
のの、１Ｆ８抗体はほとんどが標的の異なるエピトープに結合する。ＣＤ４７の１Ｆ８エ
ピトープは、立体配座的に不連続であり、ＣＤ４７のＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３
１）、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｌ７４、およびＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を有する。
多くの水素結合相互作用が抗体残基の側鎖とＣＤ４７の主鎖の酸素原子との間に形成され
る。また、塩架橋は、１Ｆ８のＲ１０３とＣＤ４７のＥ３５との間に形成される。また、
適切な配向を保持するのに重要であるいくつかのファン・デル・ワールス接触(Van der W
aals contacts)が観察される。抗体１Ｆ８のＶＨドメインがＣＤ４７のＴ３４、Ｅ３５お
よびＬＴＲ ヒンジ（残基１０１～１０３）への結合に主に関与する一方、ＶＫドメイン
がＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３１）及びＬ７４と相互作用する。ＣＤ４７のこれら
のエピトープは、５Ｆ９抗体及びＳＩＲＰαのものとは異なる。構造分析から、１Ｆ８抗
体の２つの長いループ（残基２６～３８および５２～５９）がほとんど垂直な配向でＣＤ
４７に結合するのを助け、これにより付近の細胞のＣＤ４７が抗体によって架橋されない
ように抗体を分離し、これによりほとんどの血液細胞の血球凝集を防止することが示唆さ
れる。
り、すべてが同様のヘッドツゥヘッド配向(head-to-head orientation)で結合しているも
のの、１Ｆ８抗体はほとんどが標的の異なるエピトープに結合する。ＣＤ４７の１Ｆ８エ
ピトープは、立体配座的に不連続であり、ＣＤ４７のＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３
１）、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｌ７４、およびＬＴＲヒンジ（残基１０１～１０３）を有する。
多くの水素結合相互作用が抗体残基の側鎖とＣＤ４７の主鎖の酸素原子との間に形成され
る。また、塩架橋は、１Ｆ８のＲ１０３とＣＤ４７のＥ３５との間に形成される。また、
適切な配向を保持するのに重要であるいくつかのファン・デル・ワールス接触(Van der W
aals contacts)が観察される。抗体１Ｆ８のＶＨドメインがＣＤ４７のＴ３４、Ｅ３５お
よびＬＴＲ ヒンジ（残基１０１～１０３）への結合に主に関与する一方、ＶＫドメイン
がＴＮＭＥＡＱループ（残基２６～３１）及びＬ７４と相互作用する。ＣＤ４７のこれら
のエピトープは、５Ｆ９抗体及びＳＩＲＰαのものとは異なる。構造分析から、１Ｆ８抗
体の２つの長いループ（残基２６～３８および５２～５９）がほとんど垂直な配向でＣＤ
４７に結合するのを助け、これにより付近の細胞のＣＤ４７が抗体によって架橋されない
ように抗体を分離し、これによりほとんどの血液細胞の血球凝集を防止することが示唆さ
れる。
【0135】
図１８ｅは、５Ｆ９及び１Ｆ８とＣＤ４７との相互作用の比較を示す。
【0136】
１Ｆ８／ＣＤ４７のコンプレックス構造への参考抗体５Ｆ９／ＣＤ４７コンプレックス
構造の重ね合わせから、ＣＤ４７の結合配向がこれらの２つのコンプレックスで非常に異
なることが明らかである。双方の抗体は共にｈｅａｄ－ｔｏ－ｈｅａｄ結合配向を有する
ものの、ＣＤ４７は約１８０°水平に回転する。１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造
は軽鎖ループ残基６１～６４付近にＣＤ４７ Ｎ－末端ピログルタメートを有するが、５
Ｆ９はＷ５２、Ｎ３２及びＷ１０１の３つの重鎖ループの中にＣＤ４７ Ｎ末端を有する
。抗体１Ｆ８では、重鎖残基Ｔｒｐ３３及びＡｒｇ１０３が、ファン・デル・ワールス接
触およびそれぞれ、ＣＤ４７のＬｅｕ１０１及びＧｌｕ３５との塩架橋を形成する。同じ
位置で、抗体５Ｆ９の残基Ｔｙｒ１０１はファン・デル・ワールス接触を介してＣＤ４７
のＮ－末端方向に向き、Ａｒｇ１０２はＣＤ４７のＧｌｕ１０４と水素結合を形成する。
抗体１Ｆ８のループ残基Ａｓｎ３１、Ｔｒｐ３３、ならびにヒンジ残基Ａｒｇ５３及びＡ
ｓｐ５６は、ドメイン間水素結合ネットワークを形成し、さらにＡｓｎ３１及びＡｒｇ５
３はＣＤ４７のＬｅｕ１０１及びＴｈｒ３４の主鎖と水素結合を形成する。同じ界面で、
５Ｆ９は、残基Ｔｙｒ５２がＣＤ４７のＬｅｕ３とのファン・デル・ワールス接触を形成
する以外は、相互作用を形成しないように見える。ヒンジ（残基５２～５６）は１Ｆ８（
残基５２～５９）より３残基短い。軽鎖では、Ｆａｂ １Ｆ８及び５Ｆ９は双方とも、ル
ープ（１Ｆ８ではＶ２９－Ｙ３８および５Ｆ９ではＶ１５２－Ｙ１５８）のＣＤ４７との
いくつかの重要な水素結合相互作用を有する。１Ｆ８の残基Ｙ９７及びＹ９８はループ（
残基２６～３８）を押しのけ(“push” away)、後者は１Ｆ８とＣＤ４７との間に、即ち
、１Ｆ８のＡｒｇ３４とＣＤ４７のＬｅｕ７４の主鎖との間に、および１Ｆ８のＡｒｇ３
６とＣＤ４７のＴｈｒ２６の主鎖との間に、２個の水素結合を形成する。しかしながら、
５Ｆ９の残基Ｇｌｙ２１８及びＳｅｒ２１９（１Ｆ８のＴｙｒ９７及びＴｙｒ９８に相当
する）により、５Ｆ９のループ（残基１４９～１５８）がＣＤ４７と３つの水素結合（Ａ
ｓｎ１５７－Ｌｙｓ３９、Ｔｙｒ１５９－Ｇｌｕ１０４及びＬｙｓ１７７－Ｔｈｒ９９で
）を形成する。また、重鎖も同様にして、５Ｆ９のループ（残基１４９～１５８）が１Ｆ
８（残基２６～３８）より３残基短い。１Ｆ８のこれらの関連するより長いループは、Ｃ
Ｄ４７の結合配向に主として寄与する。
構造の重ね合わせから、ＣＤ４７の結合配向がこれらの２つのコンプレックスで非常に異
なることが明らかである。双方の抗体は共にｈｅａｄ－ｔｏ－ｈｅａｄ結合配向を有する
ものの、ＣＤ４７は約１８０°水平に回転する。１Ｆ８／ＣＤ４７コンプレックスの構造
は軽鎖ループ残基６１～６４付近にＣＤ４７ Ｎ－末端ピログルタメートを有するが、５
Ｆ９はＷ５２、Ｎ３２及びＷ１０１の３つの重鎖ループの中にＣＤ４７ Ｎ末端を有する
。抗体１Ｆ８では、重鎖残基Ｔｒｐ３３及びＡｒｇ１０３が、ファン・デル・ワールス接
触およびそれぞれ、ＣＤ４７のＬｅｕ１０１及びＧｌｕ３５との塩架橋を形成する。同じ
位置で、抗体５Ｆ９の残基Ｔｙｒ１０１はファン・デル・ワールス接触を介してＣＤ４７
のＮ－末端方向に向き、Ａｒｇ１０２はＣＤ４７のＧｌｕ１０４と水素結合を形成する。
抗体１Ｆ８のループ残基Ａｓｎ３１、Ｔｒｐ３３、ならびにヒンジ残基Ａｒｇ５３及びＡ
ｓｐ５６は、ドメイン間水素結合ネットワークを形成し、さらにＡｓｎ３１及びＡｒｇ５
３はＣＤ４７のＬｅｕ１０１及びＴｈｒ３４の主鎖と水素結合を形成する。同じ界面で、
５Ｆ９は、残基Ｔｙｒ５２がＣＤ４７のＬｅｕ３とのファン・デル・ワールス接触を形成
する以外は、相互作用を形成しないように見える。ヒンジ（残基５２～５６）は１Ｆ８（
残基５２～５９）より３残基短い。軽鎖では、Ｆａｂ １Ｆ８及び５Ｆ９は双方とも、ル
ープ（１Ｆ８ではＶ２９－Ｙ３８および５Ｆ９ではＶ１５２－Ｙ１５８）のＣＤ４７との
いくつかの重要な水素結合相互作用を有する。１Ｆ８の残基Ｙ９７及びＹ９８はループ（
残基２６～３８）を押しのけ(“push” away)、後者は１Ｆ８とＣＤ４７との間に、即ち
、１Ｆ８のＡｒｇ３４とＣＤ４７のＬｅｕ７４の主鎖との間に、および１Ｆ８のＡｒｇ３
６とＣＤ４７のＴｈｒ２６の主鎖との間に、２個の水素結合を形成する。しかしながら、
５Ｆ９の残基Ｇｌｙ２１８及びＳｅｒ２１９（１Ｆ８のＴｙｒ９７及びＴｙｒ９８に相当
する）により、５Ｆ９のループ（残基１４９～１５８）がＣＤ４７と３つの水素結合（Ａ
ｓｎ１５７－Ｌｙｓ３９、Ｔｙｒ１５９－Ｇｌｕ１０４及びＬｙｓ１７７－Ｔｈｒ９９で
）を形成する。また、重鎖も同様にして、５Ｆ９のループ（残基１４９～１５８）が１Ｆ
８（残基２６～３８）より３残基短い。１Ｆ８のこれらの関連するより長いループは、Ｃ
Ｄ４７の結合配向に主として寄与する。
【0137】
実施例１９ ＣＤ４７抗体３４Ｃ５
抗ヒトＣＤ４７抗体を得るために、ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ５７／ＢＬ６またはＳＪＬマウス
を含む６～８週齢の異なる種を組換ヒトＣＤ４７細胞外ドメインタンパク質で数ラウンド
免疫処置した。免疫処置後、十分な力価の抗ＣＤ４７ ＩｇＧを有するマウスを、同じ抗
原で追加免疫した後、融合した(fusion)。ハイブリドーマ上清について、ＥＬＩＳＡスク
リーニングによってヒトＣＤ４７ ＥＣＤタンパク質との直接結合およびＣＤ４７へのＳ
ＩＲＰα結合の競合を試験した。一連のスクリーニングアッセイにより、３４Ｃ５が上記
したアッセイに従うヒト化およびさらにインビトロでの特性化(characterization)用に選
択された。
抗ヒトＣＤ４７抗体を得るために、ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ５７／ＢＬ６またはＳＪＬマウス
を含む６～８週齢の異なる種を組換ヒトＣＤ４７細胞外ドメインタンパク質で数ラウンド
免疫処置した。免疫処置後、十分な力価の抗ＣＤ４７ ＩｇＧを有するマウスを、同じ抗
原で追加免疫した後、融合した(fusion)。ハイブリドーマ上清について、ＥＬＩＳＡスク
リーニングによってヒトＣＤ４７ ＥＣＤタンパク質との直接結合およびＣＤ４７へのＳ
ＩＲＰα結合の競合を試験した。一連のスクリーニングアッセイにより、３４Ｃ５が上記
したアッセイに従うヒト化およびさらにインビトロでの特性化(characterization)用に選
択された。
【0138】
【0139】
図２２から、３４Ｃ５が、ＥＣ５０が０．３０ｎＭであり、ＳＩＲＰαへのＣＤ４７の
結合を効果的に遮断できたことが示される。
結合を効果的に遮断できたことが示される。
【0140】
図２３から、抗体３４Ｃ５がヒトＭΦによる腫瘍細胞の食作用を促進したことが示され
る。
る。
【0141】
図２４から、抗体３４Ｃ５がインビトロでのＲＢＣ凝集を引き起こさなかったことが示
される。
される。
【0142】
図２５から、抗体３４Ｃ５がこの抗体濃度の減少に従ってＲＢＣへの結合を減少させる
ことが示される。
ことが示される。
【図1】
【図2a】
【図2b】
【図3a】
【図3b】
【図3c】
【図4a】
【図4b】
【図4c】
【図4d】
【図4e】
【図5a】
【図5b】
【図6a】
【図6b】
【図6c】
【図7a】
【図7b】
【図8a】
【図8b】
【図8c】
【図8d】
【図9a】
【図9b】
【図9c】
【図9d】
【図10a】
【図10b】
【図11】
【図12a】
【図12b】
【図13】
【図14a】
【図14b】
【図15a】
【図15b】
【図16a】
【図16b】
【図16c】
【図17a】
【図17b】
【図17c】
【図17d】
【図17e】
【図18a】
【図18b】
【図18c】
【図18d】
【図18e】
【図19a-b】
【図19c】
【図19d】
【図19e-f】
【図19g】
【図19h】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26-1】
【図26-2】
【図26-3】
【図26-4】
【図26-5】
【図26-6】
【図26-7】
【図26-8】
【図26-9】
【図26-10】
【図26-11】
【図26-12】
【図26-13】
【図26-14】
【図26-15】
【図26-16】
【図26-17】
【図27】
【配列表】