▶ ウスタフ オルガニッケ ヘミエ アー ビオヘミエ アカデミエ ヴェド ツェーエル，ヴェー．ヴェー．イーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-04-10
(45)【発行日】2023-04-18
(54)【発明の名称】核酸トランスフェクションのためのリピドイドおよびその使用
(51)【国際特許分類】
C07C 233/62 20060101AFI20230411BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20230411BHJP
C12N 15/88 20060101ALI20230411BHJP
A61K 47/69 20170101ALI20230411BHJP
A61K 8/42 20060101ALI20230411BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230411BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230411BHJP
【ＦＩ】
C07C233/62 CSP
A61K48/00
C12N15/88 Z ZNA
A61K47/69
A61K8/42
A61P35/00
A61P43/00 105
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2022530325
(86)(22)【出願日】2021-07-23
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-27
(86)【国際出願番号】 CZ2021050079
(87)【国際公開番号】W WO2022063350
(87)【国際公開日】2022-03-31
【審査請求日】2022-05-24
(31)【優先権主張番号】PV2020-529
(32)【優先日】2020-09-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CZ
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】516213013
【氏名又は名称】ウスタフ オルガニッケ ヘミエ アー ビオヘミエ アカデミエ ヴェド ツェーエル，ヴェー．ヴェー．イー
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】シグラー，ペトル
(72)【発明者】
【氏名】グランツ サスコワ，クララ
(72)【発明者】
【氏名】ヴァネク，ヴァーツラフ
(72)【発明者】
【氏名】クルジコヴァ，ズザナ
(72)【発明者】
【氏名】セドラック，フランチシェック
【審査官】神谷 昌克
(56)【参考文献】
【文献】NANO LETTERS，2015年，Vol.15，pp.8099-8107，DOI 10.1021/acs.nanolett.5b03528
【文献】Journal of the American Chemical Society，2014年，Vol.136，pp.810-819，DOI 10.1021/ja411987g
【文献】Tetrahedron，2013年，Vol.69，pp.6810-6820，DOI 10.1016/j.tet.2013.06.024
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｃ
Ｃ１２Ｎ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式Ｉのリピドイド【化1】
ここで、Ｘは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－ＣＨ２－、－Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｓ－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－、－ＮＨＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－Ｎ＝ＣＨ－、および－ＣＨ＝Ｎ－からなる群から選択され；
ＹはＣ ２ －Ｃ １０ アルキレン鎖からなる群から独立して選択され、前記アルキレン鎖において、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に１つ以上のＯまたはＳ原子と置き換えられていてもよく；
Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３ －、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｎ＋（ＣＨ３）３、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【化2】
から選択され、ｎは２～５の範囲内の整数であり；
かつ、Ｒは同じまたは互いに異なっていて、Ｒはそれぞれ独立してＣ ８ －Ｃ ２０ アルキル、Ｃ ８ －Ｃ ２０ アルケニル、およびＣ ８ －Ｃ ２０ アルキニルからなる群から選択され、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択される１つ以上の基と置き換えられていてもよい；
およびその薬学的に許容される塩、付加塩および溶媒和物。
【請求項2】
Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３
－、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【化3】
から選択され、ｎは２～５の範囲内の整数である、請求項１に記載のリピドイド。
【請求項3】
Ｘは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－から選択される、請求項１または２に記載のリピドイド。
【請求項4】
ＲはＣ８－Ｃ２０アルキル、Ｃ８－Ｃ２０アルケニル、およびＣ８－Ｃ２０アルキニルからなる群から独立して選択され、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に、－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－から選択される１つ以上の基によって置き換えられていてもよい、請求項１～３のいずれか１項に記載のリピドイド。
【請求項5】
分子中の全てのＲが同じであるか、または分子中の全ての窒素原子が、２つの同一のＲもしくは２つの異なるＲによって同一に置換されている、請求項１～４のいずれか１項に記載のリピドイド。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか１項に記載の一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１０～５０モル％の量で、かつ少なくとも１種のヘルパー脂質を５０～９０モル％の総量で含む、トランスフェクション剤。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか１項に記載の一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１５～３０モル％の量で、コレステロールを３０～５５モル％の量で、かつ少なくとも１種のさらなるヘルパー脂質を２０～５０モル％の量で含む、請求項６に記載のトランスフェクション剤。
【請求項8】
請求項１～５のいずれか１項に記載の一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドと、少なくとも１種の核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体とを含む、トランスフェクション粒子。
【請求項9】
さらに、少なくとも１種のヘルパー脂質を含む、請求項８に記載のトランスフェクション粒子。
【請求項10】
核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体による細胞または組織のインビトロトランスフェクションのための、請求項１～５のいずれか１項に記載の一般式Ｉのリピドイド、または請求項６もしくは７に記載のトランスフェクション剤、または請求項８もしくは９に記載のトランスフェクション粒子の使用。
【請求項11】
染色体遺伝子をサイレンシングもしくは活性化するため、免疫原をサイレンシングもしくは活性化するため、シグナル伝達経路を阻害もしくは活性化するため、ゲノムもしくはトランスクリプトームを編集するため、または核酸によってコードされるタンパク質の発現を可能にするための、インビトロにおける、請求項１０に記載の使用。
【請求項12】
核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体を用いてインビボで細胞または組織をトランスフェクションする際に使用するための（工業的または商業的目的で使用するためのヒト胚のトランスフェクションを除き、かつヒト生殖系列の改変を除く使用のための）、請求項１～５のいずれか１項に記載の式Ｉのリピドイド、または請求項６もしくは７に記載のトランスフェクション剤、または請求項８もしくは９に記載のトランスフェクション粒子を含む調製物。
【請求項13】
染色体遺伝子をサイレンシングもしくは活性化するため、免疫原をサイレンシングもしくは活性化するため、シグナル伝達経路を阻害もしくは活性化するため、ゲノムもしくはトランスクリプトームを編集するため、または核酸によってコードされるタンパク質の発現を可能にするための請求項１２に記載の調製物。
【請求項14】
請求項１～５のいずれか１項に記載の式Ｉのリピドイド、または請求項６もしくは７に記載のトランスフェクション剤、または請求項８もしくは９に記載のトランスフェクション粒子を含む薬剤。
【請求項15】
遺伝子治療、悪性腫瘍の治療および／または遺伝子障害の治療のための、請求項１４に記載の薬剤。
【請求項16】
請求項１～５のいずれか１項に記載の一般式Ｉのリピドイド、または請求項６もしくは７に記載のトランスフェクション剤、または請求項８もしくは９に記載のトランスフェクション粒子を含む、活性成分を作用部位に送達するための化粧用調製物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
〔技術分野〕
本発明は、新規でありイオン化可能なリピドイド、ならびにヌクレオチドおよび核酸ならびにそれらの合成アナログの細胞および組織へのトランスフェクションおよび投与のためのこれらの化合物の使用に関する。
本発明は、新規でありイオン化可能なリピドイド、ならびにヌクレオチドおよび核酸ならびにそれらの合成アナログの細胞および組織へのトランスフェクションおよび投与のためのこれらの化合物の使用に関する。
【0002】
〔背景技術〕
核酸（ＮＡ）に基づく治療法の開発は、近年、前例のない復興を経験している。以前に試験された治療用デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）と比較して効力が高く、同時に有害な副作用のリスクが低いため、リボ核酸（ＲＮＡ）療法が現在、勢いを得ている。例えば遺伝性トランスサイレチンアミロイドーシスに対するパチシラン、ある種のデュシェンヌ型筋ジストロフィーに対するエテプリルセン、または脊髄性筋萎縮症の治療に対するヌシネルセンのように、いくつかの薬物は既に臨床使用に達している。これらの疾患はどれも命にかかわるもので、それに代わる治療法はない。リボ核酸（ＲＮＡ）を標的とする潜在的な薬物またはその使用は、それらがＮＡもしくはタンパク質を標的とするか、またはタンパク質をコードするかによって３つのカテゴリーに分けることができる。第１のカテゴリーは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳またはＲＮＡスプライシングをブロックする１３～２５ヌクレオチド（ｎｔ）の一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド（ヌシネルセン、エテプリルセン）；およびｍＲＮＡを分解する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、２１～２３ｎｔ）（パチシラン）を含む。タンパク質を標的とする治療用ＲＮＡ分子は、ＲＮＡアプタマーとして知られるタイプの分子を使用する。これは、特定のタンパク質の機能を調節するように設計される。このような薬剤の例として、新生血管を伴う加齢黄斑変性症の治療に使用されるペガプタニブがあり、２００４年に初めてその種の薬物として承認された。ｍＲＮＡを用いた治療法は主に、癌に対するいわゆる個別化ワクチンまたは感染症（例えばジカウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンの調製に用いられる。狂犬病および新型インフルエンザに対するｍＲＮＡに基づく予防ワクチンの候補が健常ボランティアにおいて安全な抗体産生を誘導することが示されているのは、ウイルス性疾患におけるものである。ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの原因となったウイルスである重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチン開発には多大な努力が払われている。これらの努力により、現在配布されて広く使用されている安全で有効性の高いｍＲＮＡワクチン候補がもたらされた。タンパク質補充ｍＲＮＡ療法はまた、例えば血友病治療のための開発の前臨床段階にある。
核酸（ＮＡ）に基づく治療法の開発は、近年、前例のない復興を経験している。以前に試験された治療用デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）と比較して効力が高く、同時に有害な副作用のリスクが低いため、リボ核酸（ＲＮＡ）療法が現在、勢いを得ている。例えば遺伝性トランスサイレチンアミロイドーシスに対するパチシラン、ある種のデュシェンヌ型筋ジストロフィーに対するエテプリルセン、または脊髄性筋萎縮症の治療に対するヌシネルセンのように、いくつかの薬物は既に臨床使用に達している。これらの疾患はどれも命にかかわるもので、それに代わる治療法はない。リボ核酸（ＲＮＡ）を標的とする潜在的な薬物またはその使用は、それらがＮＡもしくはタンパク質を標的とするか、またはタンパク質をコードするかによって３つのカテゴリーに分けることができる。第１のカテゴリーは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳またはＲＮＡスプライシングをブロックする１３～２５ヌクレオチド（ｎｔ）の一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド（ヌシネルセン、エテプリルセン）；およびｍＲＮＡを分解する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、２１～２３ｎｔ）（パチシラン）を含む。タンパク質を標的とする治療用ＲＮＡ分子は、ＲＮＡアプタマーとして知られるタイプの分子を使用する。これは、特定のタンパク質の機能を調節するように設計される。このような薬剤の例として、新生血管を伴う加齢黄斑変性症の治療に使用されるペガプタニブがあり、２００４年に初めてその種の薬物として承認された。ｍＲＮＡを用いた治療法は主に、癌に対するいわゆる個別化ワクチンまたは感染症（例えばジカウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンの調製に用いられる。狂犬病および新型インフルエンザに対するｍＲＮＡに基づく予防ワクチンの候補が健常ボランティアにおいて安全な抗体産生を誘導することが示されているのは、ウイルス性疾患におけるものである。ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの原因となったウイルスである重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチン開発には多大な努力が払われている。これらの努力により、現在配布されて広く使用されている安全で有効性の高いｍＲＮＡワクチン候補がもたらされた。タンパク質補充ｍＲＮＡ療法はまた、例えば血友病治療のための開発の前臨床段階にある。
【0003】
直接的なゲノム編集を可能にする分子技術、特にＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムに基づくものは、現在ブームになっている。ＣＲＩＳＰＲ技術はＤＮＡ配列を変更し、遺伝子機能を改変することを可能にするツールである。潜在的応用には、遺伝的欠陥の修復、疾患の蔓延の治療および予防、または農作物の改良が含まれる。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムは、ＨＩＶ治療、造血器悪性腫瘍の治療、鎌状赤血球症およびβサラセミアを含む遺伝性疾患を含む多くの前臨床および臨床研究で試験されている。その後、ＲＮＡ編集はＡＤＡＲ（ＲＮＡに作用するアデノシンデアミナーゼ）のシステムによって可能となり、これまでのところ、臨床的観点からはより安全であると思われる。直接ゲノム編集のための分子技術は、編集を担う適切な酵素をコードするｍＲＮＡの形で作用部位に送達されることができる。
【0004】
上記の全ての技術（またはＮＡに基づく他の技術）の安全な使用を可能にする重要な要因は、作用部位へのそれらの安全かつ効率的な輸送である。重要な工程は、細胞のリン脂質膜を介した負に荷電したＮＡの通過であり、ＮＡを真核細胞に意図的に導入するプロセスは、トランスフェクションと呼ばれる。近年、ＮＡをインビボでの劣化から保護しながら、細胞膜を横切ってＮＡを効率的に運搬するための担体（いわゆるベクター）の集中的な開発があった（Stewart, M. P.: Chem. Rev. 2018, 118, 7409-7531）。
【0005】
ウイルスベクターおよび非ウイルス（物理的、化学的）ベクターの両方が、ＮＡトランスフェクションのために使用される。これまで遺伝子治療分野の臨床試験の約７０％はウイルスベクターを用いて行われてきたが、このアプローチには多数のリスク（発がん性、免疫応答の誘導、組織非特異性、ＮＡ組み込み能力の制限および製造の複雑性）がある。物理的方法（例えばエレクトロポレーション）は、ヒトの医学において全身的に使用することが困難である。
【0006】
対照的に、合成化学ベクターは通常、より低い免疫原性を有し、より多量の遺伝物質を輸送することができ、そしてそれらは明確な分子から構成されるので、それらの構造は、それらの効率を増加させ、そして毒性を抑制するために必要に応じて影響され得る。カチオン性ポリマーまたはカチオン性脂質は、負に荷電したＮＡと複合体を形成する化学ベクターとして使用される。この複合体は細胞膜を通過することができ、同時に、ＮＡを細胞外環境における劣化から保護する。
【0007】
構造的観点から、いわゆる脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、現在、これらの複合体の最も有望で臨床的に進歩した形態である。それらにおいて、カチオン性脂質は通常、凝集を防止し、粒径およびトランスフェクション効率に影響を及ぼすＰＥＧ化脂質とともに、ヘルパー脂質およびコレステロールとともに製剤化され、これらは、例えばｓｉＲＮＡトランスフェクションシステムにおいて示されるように、安定したＮＫカプセル化に必須である（Kulkarni, J.: Nanoscale, 2019, 11, 21733-21739）。ＬＮＰは、数ヌクレオチド単位から数百万までのサイズの範囲のＮＡ分子を収容することができる。
【0008】
合成カチオン性脂質およびリピドイド（脂質に類似するが多数の疎水性鎖の点で異なる合成分子）は、カチオン性ドメインおよび疎水性ドメインによって形成される。今日まで、これらの物質の多数が、標的設計および組み合わせて生成されたライブラリーの試験の両方によって、両方のドメインにおいて高い構造的変動性を伴って開発されてきた。
【0009】
Ｄ－Ｌｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ、Ｃ１２－２００、ｃＫＫ－Ｅ１２、ＳＡ２－ＳＣ８などの脂質およびリピドイドは、ｓｉＲＮＡトランスフェクションのために特別に開発されている（Dong, Y.: Adv. Drug Deliv. Rev. 2019, 144, 133-147）。Ｄ－Ｌｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡを含む製剤は、近年（２０１８年８月）、オンパットロ（旧パチシラン）の名称で臨床実践に導入され、歴史的に初めて承認されたｓｉＲＮＡ薬となった（Zhang, X.: J. Clin. Pharmacol. 2020, 60 (1), 37-49）。しかしながら、ｓｉＲＮＡのために開発された製剤はｍＲＮＡに有効ではないかもしれず、従って、的を絞った最適化が必要である（Cullis, P.: Mol. Ther. 2017, 25 (7), 1467-1475）。
【0010】
イオン化可能な脂質およびリピドイド、例えばＤ－Ｌｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ、Ｃ１２－２００、ｃＫＫ－Ｅ１２、およびＴＴ３が、ｍＲＮＡをトランスフェクションするために使用される（Zhong, Z.: Nano Today 2018, 23, 16-39; Kowalski, P.: Mol. Ther. 2019, 27 (4), 1-19; Li, B.: Nano Lett. 2015, 15, 8099-8107）。イオン化可能な脂質はまた、ＤＮＡトランスフェクションのために使用される。この場合も、小分子（ｓｉＲＮＡ）トランスフェクションのために最適化されたトランスフェクションシステムは、ＤＮＡトランスフェクションに必ずしも適しているわけではなく、ｍＲＮＡのために開発された製剤でさえも、ＤＮＡに効果的でないことがあることを強調すべきである（Buck, J.: ACS Nano 2019, 13, 3754-3782）。
【0011】
それらの多大な治療可能性にもかかわらず、これまで臨床使用の段階にもたらされてきたイオン化可能な脂質に基づく合成ベクターはごく少数であったという事実に起因して、より高い効率を有する新規なシステム（これはまた、非常に低いインビボ毒性を有する）を開発することが必要である。
【0012】
〔発明の開示〕
本発明は、イオン化可能な（カチオン性）脂質を使用するヌクレオチドおよび核酸ならびにそれらの合成アナログのトランスフェクションおよび標的送達の効率の問題、ならびに標的生物または細胞に対するこれらの脂質の毒性の問題に対する解決策を提供する。本発明者らは驚くべきことに、アダマンタンがイオン化リピドイドの中心コアとして使用される場合、このようなリピドイドのトランスフェクション効率が、特にｍＲＮＡ、環状ジヌクレオチド、ｓｉＲＮＡおよびＤＮＡのトランスフェクションにおいて、以前に公知の解決策と比較して有意に増加することを見出した。同時に、これらのアダマンタン含有リピドイドは、関連する用量で極めて低い細胞毒性を示す。それらは、マウスで静脈内または腹膜内投与後、毒性の徴候を示さない。新しいイオン化可能なリピドイドの中心構造モチーフとして使用されるアダマンタンコアの特定の性質は、これまでに知られているイオン化可能な脂質およびリピドイドと比較して、その近傍での立体配置の複雑さおよび高い剛性にある。アダマンタンから構造的に誘導される生体活性物質のさらなる利点は一般に良好な生体適合性であり、従って、医薬での使用、特にヒト医薬に適している。
本発明は、イオン化可能な（カチオン性）脂質を使用するヌクレオチドおよび核酸ならびにそれらの合成アナログのトランスフェクションおよび標的送達の効率の問題、ならびに標的生物または細胞に対するこれらの脂質の毒性の問題に対する解決策を提供する。本発明者らは驚くべきことに、アダマンタンがイオン化リピドイドの中心コアとして使用される場合、このようなリピドイドのトランスフェクション効率が、特にｍＲＮＡ、環状ジヌクレオチド、ｓｉＲＮＡおよびＤＮＡのトランスフェクションにおいて、以前に公知の解決策と比較して有意に増加することを見出した。同時に、これらのアダマンタン含有リピドイドは、関連する用量で極めて低い細胞毒性を示す。それらは、マウスで静脈内または腹膜内投与後、毒性の徴候を示さない。新しいイオン化可能なリピドイドの中心構造モチーフとして使用されるアダマンタンコアの特定の性質は、これまでに知られているイオン化可能な脂質およびリピドイドと比較して、その近傍での立体配置の複雑さおよび高い剛性にある。アダマンタンから構造的に誘導される生体活性物質のさらなる利点は一般に良好な生体適合性であり、従って、医薬での使用、特にヒト医薬に適している。
【0013】
本発明は、一般式Ｉのイオン化可能なリピドイド、
【0014】
【化1】
【0015】
ここで、Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－ＣＨ２－、－Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｓ－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－、－ＮＨＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－Ｎ＝ＣＨ－、および－ＣＨ＝Ｎ－からなる群から選択され；
Ｙはアルキレン鎖Ｃ２－Ｃ１０からなる群から独立して選択され、前記アルキレン鎖において、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に１つ以上のＯまたはＳ原子と置き換えられていてもよく；
Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３ －、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｎ＋（ＣＨ３）３、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
Ｙはアルキレン鎖Ｃ２－Ｃ１０からなる群から独立して選択され、前記アルキレン鎖において、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に１つ以上のＯまたはＳ原子と置き換えられていてもよく；
Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３ －、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｎ＋（ＣＨ３）３、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【0016】
【化2】
【0017】
から選択され、ｎは２～５の範囲内の整数であり；
かつ、Ｒは同じまたは互いに異なっていて、Ｒはそれぞれ独立してアルキルＣ８－Ｃ２０、アルケニルＣ８－Ｃ２０、およびアルキニルＣ８－Ｃ２０からなる群から選択され、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択される１つ以上の基と置き換えられていてもよい；
およびその薬学的に許容される塩、付加塩および溶媒和物に関する。
かつ、Ｒは同じまたは互いに異なっていて、Ｒはそれぞれ独立してアルキルＣ８－Ｃ２０、アルケニルＣ８－Ｃ２０、およびアルキニルＣ８－Ｃ２０からなる群から選択され、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択される１つ以上の基と置き換えられていてもよい；
およびその薬学的に許容される塩、付加塩および溶媒和物に関する。
【0018】
いくつかの実施形態ではＸは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－ＣＨ２－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、－ＮＨＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－からなる群から選択される。
【0019】
いくつかの実施形態において、Ｙは、アルキレン鎖Ｃ２－Ｃ１０からなる群から選択される。
【0020】
いくつかの実施形態において、Ｚは、水素原子、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｎ＋（ＣＨ３）３、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３
－、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－からなる群から選択される。
【0021】
いくつかの実施形態において、Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３
－、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、
Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【0022】
【化3】
【0023】
から選択され、ｎは２～５の範囲内の整数である。
【0024】
いくつかの実施形態において、Ｚは水素、－ＯＨ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）３－ＳＯ３
－、－Ｎ＋（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）２－ＣＯＯ－、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１からなる群から選択され、
Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）２ＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）２ＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【0025】
【化4】
【0026】
から選択される。
【0027】
用語「アルキル」は飽和炭化水素鎖を意味し、これは、直鎖、分枝鎖、または環状もしくは環含有であってもよい。
【0028】
用語「アルケニル」は、炭素原子間に少なくとも１つの二重結合を含む炭化水素鎖を意味する。炭化水素鎖は、直鎖、分岐鎖、または環状もしくは環含有であってもよい。
【0029】
用語「アルキニル」は、炭素原子間に少なくとも１つの三重結合、および任意で炭素原子間に１つ以上の二重結合をさらに含む炭化水素鎖を意味する。炭化水素鎖は、直鎖、分岐鎖、または環状もしくは環含有であってもよい。
【0030】
用語「アルキレン鎖」は飽和炭化水素鎖を意味し、これは直鎖、分岐鎖、または環状もしくは環含有であってもよいが、好ましくは直鎖である。この鎖は２の原子価を有し、すなわち、２つの結合を介してリンカーまたは架橋として結合する。
【0031】
一般式Ｉの分子が正電荷を有する場合、化合物は薬学的に許容される塩を形成するために、有機酸または無機酸の薬学的に許容されるアニオンであり得る対イオンを含む。このようなアニオンは、例えばアセタート、アスパルタート、ベンゼンスルホナート、ベンゾアート、ベシラート、ビカルボナート、ビタルトラート、ブロミド、カンシラート、カルボナート、クロリド、シトラート、デカノアート、エデタート、エシラート、フマラート、グルセプタート、グルコナート、グルタマート、グリコラート、ヘキサノアート、ヨージド、ラクタート、マラート、マレアート、マンデラート、メシラート、メタンスルファート、ナプシラート、ニトラート、オクタノアート、オレアート、パモアート、パントテナート、ホスファート、ポリガラクツロナート、プロピオナート、サリチラート、ステアラート、スクシナート、スルファート、タルトラートおよびトシラートからなる群から選択されてもよい。
【0032】
式Ｉの化合物がキラル中心を含む場合、式Ｉは、純粋なエナンチオマー、ならびにラセミ体を含むエナンチオマーの混合物を含む。
【0033】
式Ｉは、遊離形態の式Ｉの化合物、ならびに塩、付加塩（酸または塩基を有する）および／または溶媒和物（水和物またはアルコール溶媒和物を含む）の形態の化合物を含む。
【0034】
式ＩのリンカーＸは、分子のアミン部分が中心アダマンタンコアへ付着する反応によって形成される。従ってこれらは、選択される反応、例えばエステル、アミドおよびそれらの類似体の生成、クリック反応（例えばアジド－アルキン環化付加）などに応じて異なるリンカーであり得る。Ｘは従って、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－ＣＨ２－、－Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｓ－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－、－ＮＨＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－ＮＨＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ≡Ｃ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｏ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｓ）Ｓ－、－ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ－、－Ｎ＝ＣＨ－および－ＣＨ＝Ｎ－からなる群から選択される。好ましくは、Ｘは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、少なくとも２つの窒素原子を含む５員複素環、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－から選択される。
【0035】
リンカーＹは、リンカーＸおよびアダマンタンコアからアミンの少なくとも最小限の距離を提供するアルキレン鎖である。ＹはＣ２－Ｃ１０アルキレン鎖、好ましくはＣ２－Ｃ８アルキレン鎖であり、前記アルキレン鎖において、１つ以上の－ＣＨ２－基は、任意に１つ以上のＯまたはＳ原子と置き換えられていてもよい。
【0036】
置換基Ｚは、式Ｉの化合物の特性をさらに少しだけ改変することができる。
【0037】
好ましくは、Ｚは水素原子または－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１である。部分－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１は、典型的にはアミン末端分子と、カルボン酸基を有する中心アダマンタンコアとの反応によって形成される。Ｒ１は従って、－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＨ、－Ｎ［（ＣＨ２）ｎＯＨ］２、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２、－ＮＨＣＨ２ＣＨ（－ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｎ［ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨＣＨ［Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２］２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、
【0038】
【化5】
【0039】
から選択され、ｎは２～５の範囲内の整数である。
【0040】
好ましくは、Ｒ１は－ＮＨ２、－ＮＨ（ＣＨ２）２ＯＨ、－ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２から選択される。
【0041】
Ｒ鎖は、互いに同じであっても異なっていてもよく、合成を単純にするために好ましくは、それらは同じであるか、または全ての窒素原子が同一に（２つの同一のＲまたは２つの異なるＲで）置換されている。Ｒ置換基は脂肪鎖であり、それらはＣ８－Ｃ２０アルキル、Ｃ８－Ｃ２０アルケニル、およびＣ８－Ｃ２０アルキニルからなる群から選択され、ここで、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に、－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＳＳ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、および－Ｓ－から選択された１つ以上の基によって置き換えられていてもよい。好ましくは置換基ＲがＣ８－Ｃ２０アルキル、Ｃ８－Ｃ２０アルケニル、およびＣ８－Ｃ２０アルキニルからなる群から選択され、前記アルキル、アルケニルまたはアルキニルにおいて、１つ以上の－ＣＨ２－基は任意に、－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、および－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－から選択される１つ以上の基によって置き換えられていてもよい。
【0042】
好ましくは、ＲはＣ１０－Ｃ１６アルキル、－ＣＨ２－基が－ＣＨ（ＯＨ）－または－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－と置き換えられているＣ１０－Ｃ１６アルキル、１つまたは２つまたは３つの二重結合を有するＣ１４－Ｃ２０アルケニル、－ＣＨ２－基が－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－または－ＣＨ（ＯＨ）－によって置き換えられている１つまたは２つまたは３つの二重結合を有するＣ１４－Ｃ２０アルケニルから選択される。
【0043】
式Ｉの化合物は、７位のＺ基および１、３、５位のリンカーＸの前駆体基で置換されたアダマンタン前駆体と、一般式Ｘ’－Ｙ－ＮＲ２（式中、Ｘ’はリンカーＸの前駆体基である）のアミンとの対応する反応によって調製される。アミンは当業者に公知の反応および手順によって調製することができ、適切なアミンも市販されている。
【0044】
より具体的な例では、式Ｉの化合物が好ましくは
式ＩＩの化合物
式ＩＩの化合物
【0045】
【化6】
【0046】
（式中、Ａは水素である）を式ＩＩＩのジアミン
【0047】
【化7】
【0048】
と縮合剤および塩基の存在下で反応させることにより、または、
Ａがハロゲンである一般式ＩＩの化合物を、塩基の存在下で一般式ＩＩＩのジアミンと反応させることによって調製される。
Ａがハロゲンである一般式ＩＩの化合物を、塩基の存在下で一般式ＩＩＩのジアミンと反応させることによって調製される。
【0049】
式ＩＩおよびＩＩＩにおいて、Ｚ、ＹおよびＲは上述の通りである。
【0050】
本発明はまた、一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドおよび少なくとも１種のヘルパー脂質を含むトランスフェクション剤に関する。トランスフェクション剤は、成分を組み合わせることによって調製することができる。溶液の形態のトランスフェクション剤は、成分を溶解および混合することによって調製され得る。固体形態（粒子形態、好ましくはナノ粒子形態）のトランスフェクション剤は、従来のナノ粒子技術で使用される技術によって、例えばマイクロ流体混合によって調製することができる。トランスフェクション剤の粒子は通常、ナノ粒子であり、これは、一般に、１～５００ｎｍの範囲の寸法を有する粒子を意味すると理解される。典型的には、ナノ粒子の寸法は３０～２５０ｎｍ、より好ましくは４０～１５０ｎｍの範囲である。
【0051】
好ましくは、トランスフェクション剤は一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１０～５０モル％の量で、かつ少なくとも１種のヘルパー脂質を５０～９０モル％の量で含む。好ましくは、トランスフェクション剤は一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１５～３０モル％の量で、かつ少なくとも１種のヘルパー脂質を７０～８５モル％の量で含む。いくつかの好ましい実施形態では、トランスフェクション剤は一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１５～３０モル％の量で、コレステロールを３０～５５モル％の量で、かつ少なくとも１種の他のヘルパー脂質を２０～５０モル％の量で含む。
【0052】
特に好適な実施形態では、トランスフェクション剤は一般式Ｉの少なくとも１種のリピドイドを１５～３０モル％の量で、コレステロールを３０～５５モル％の量で、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンを２０～４５モル％の量で、かつ１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００を０．５～５モル％の量で含む。
【0053】
本発明はまた、式Ｉの少なくとも１種のリピドイド、少なくとも１種の核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体、および好ましくはまた少なくとも１種のヘルパー脂質を含むトランスフェクション粒子に関する。トランスフェクション粒子は、例えば、ヘルパー脂質を任意に含む一般式Ｉのリピドイドの溶液を、核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体の溶液と混合することによって調製することができる。混合は従来のナノ粒子技術において使用される技術によって、例えば、マイクロ流体混合によって実施され得る。
【0054】
トランスフェクション粒子中の核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体の総量の、一般式Ｉの脂質およびヘルパー脂質の総量に対する重量比は、好ましくは１：２～１：５００、より好ましくは１：５～１：１００である。具体的に説明すると、以下の実施例で調製される粒子では、この比率がｍＲＮＡでは約１：９であり、ｓｉＲＮＡでは約１：６８であった。
【0055】
トランスフェクション粒子は通常、ナノ粒子であり、これは、一般に、１～５００ｎｍの範囲の寸法を有する粒子を意味すると理解される。典型的には、トランスフェクションナノ粒子の寸法が３０～２５０ｎｍ、好ましくは４０～２００ｎｍ、より好ましくは４０～１５０ｎｍの範囲である。
【0056】
トランスフェクション粒子の構造を極低温透過型電子顕微鏡で観察したところ、トランスフェクション粒子は内部に核酸（またはその一部もしくは誘導体）を含む緻密な層状脂質ナノ粒子であることが観察された。
【0057】
トランスフェクション試薬およびトランスフェクション粒子におけるヘルパー脂質は主に、中性脂質、ステロールまたは親水性ポリマーとの脂質コンジュゲートである。
【0058】
中性脂質は生理学的ｐＨでゼロの正味電荷を持ち、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（シアニン５）などの生理学的ｐＨで非荷電型または電気的に中性な双性イオン型で存在し得る。
【0059】
ステロールは、例えば、コレステロール、β－シトステロール、スチグマスタノール、カンペステロール、フコステロール、アベナステロール、フェコステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、および９，１１－デヒドロエルゴステロールから選択されてもよい。好ましくは、ステロールはコレステロールである。
【0060】
親水性ポリマーとの脂質コンジュゲートは、脂質部分と、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）、ポリ（グリセロール）、ポリ（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）、ポリ（サルコシン）またはグリコールキトサンなどのポリマー部分とを含む。好ましくは、ポリマー部分が約５００～約１０，０００Ｄａ、より好ましくは約１，０００～約５，０００Ｄａの範囲であり得る分子量のポリ（エチレングリコール）からなる。親水性ポリマーとの脂質コンジュゲートは例えば、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリ（エチレングリコール）－２０００、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリ（エチレングリコール）－２０００、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリ（エチレングリコール）－２０００、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ポリ（エチレングリコール）－２０００などから選択されてもよい。親水性ポリマーとの脂質コンジュゲートは、好ましくは１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリ（エチレングリコール）－２０００であってもよい。
【0061】
核酸またはその一部は、１つ以上のヌクレオチドおよび／またはデオキシヌクレオチドを含む部分である。核酸またはその一部は、治療剤、診断剤または予防剤であってもよく、またはそれらがトランスフェクションされる細胞または組織の標識を提供してもよい。従って、式Ｉの化合物は、主に治療的または生物工学的用途を有する。
【0062】
用語「核酸またはその一部」は、好ましくはオリゴヌクレオチド（１～１００ヌクレオチド、例えばアプタマー）、環状ジヌクレオチド（例えば２’，３’－ｃＧＡＭＰ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デオキシリボ核酸（一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、１つの遺伝子または複数の遺伝子をコードするプラスミドＤＮＡ）、リボ核酸、典型的にはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｐｉｗｉ－ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲシステムのためのガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）およびそれらの組み合わせ（典型的には例えばＣａｓ９ヌクレアーゼ、Ｃａｓ１３ａ／Ｃ２ｃ２およびＣａｓ１３ｂ、またはＣＲＩＳＰＲ、ＣＲＩＳＰＲｉおよび他の変異、ならびに宿主細胞もしくは組織ゲノムのその後の修飾、または宿主細胞もしくは組織トランスクリプトームの修飾における使用に適した類似のヌクレアーゼをコードするｇＲＮＡおよびｍＲＮＡ）から選択される核酸またはそれらのセグメントを意味すると理解される。さらに、本明細書中に開示される全ての核酸（ＮＡ）は例えば生物学的システムにおけるそれらの安定性を増大させるために、合成塩基アナログで形成または修飾され得る。合成ＮＡアナログは特に、以下の置換を含む：鎖の５’および／または３’末端でのリン酸化、５－メチルシチジン－５’－三リン酸、Ｎ１－メチルシュードウリジン－５’－三リン酸、Ｐ１－（５’－（３’－Ｏ－メチル）－７－メチル－グアノシル）－Ｐ３－（５’－（グアノシル））三リン酸、Ｐ１－（グアノシル）Ｐ３－（５’－（グアノシル））三リン酸、Ｐ１－（５’－７－メチル－グアノシル）Ｐ３－（５’－（グアノシル））三リン酸、Ｐ１－（５’－２，２，７－トリメチル－グアノシル）Ｐ３－（５’－（グアノシル））三リン酸、Ｎ６－メチルアデノシン－５’－三リン酸、２－チオウリジン－５’－三リン酸、シュードウリジン－５’－三リン酸、５－メトキシウリジン－５’－三リン酸、Ｎ１－メチルアデノシン－５’－三リン酸、Ｎ４－アセチルシチジン－５’－三リン酸、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、２’－フルオロ、ペントース環の２’－酸素と４’－炭素との間のメチレン架橋（いわゆるロック核酸）、ボラノホスホネート、またはホスホロチオアート。
【0063】
本発明はさらに、インビトロで核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体を用いて細胞または組織をトランスフェクションするための、式Ｉのリピドイドまたはトランスフェクション剤またはトランスフェクション粒子の使用を含む。さらに、本発明はインビボで核酸および／またはその一部および／または核酸誘導体を用いて細胞または組織をトランスフェクションする際に使用するための式Ｉのリピドイドまたはトランスフェクション粒子を含む（工業的または商業的使用のためのヒト胚のトランスフェクションを除き、ヒト生殖系列の改変を除く）。
【0064】
一般式Ｉのリピドイドを含むトランスフェクション粒子は基礎研究における多くの生物学的応用において有用であり、とりわけ、活性な核酸を送達するための細胞培養物または動物のトランスフェクションおよびそれに続く１つの染色体遺伝子または複数の染色体遺伝子のサイレンシングまたは活性化、ゲノム編集（遺伝子除去、遺伝子挿入または突然変異導入）またはトランスクリプトーム編集、またはトランスフェクション粒子によって挿入された核酸によってコードされる所定のタンパク質の発現、いわゆる「ｉｎ ｔｒａｎｓ」を可能にする。
【0065】
獣医学およびヒト医学において、一般式Ｉのリピドイドを含有するトランスフェクション粒子は、好ましくは治療または予防目的のために使用され得る。治療用核酸を含む粒子は動物またはヒトに投与されて、染色体遺伝子をサイレンシングもしくは活性化し、免疫原をサイレンシングもしくは活性化し、シグナル伝達経路を阻害もしくは活性化し、ゲノムを編集（遺伝子切除、遺伝子挿入または突然変異導入）もしくはトランスクリプトームを編集し、または核酸によってコードされるタンパク質の発現を可能にすることができる。
【0066】
本発明はまた、薬剤としての使用のため、特に遺伝子治療のための、一般式Ｉのリピドイドまたはトランスフェクション剤またはトランスフェクション粒子を提供する。特に、それらは、悪性腫瘍および／または遺伝的障害の治療における使用に適している。
【0067】
一般式Ｉのリピドイドまたはトランスフェクション粒子は、薬学的に許容される賦形剤を含む調製物の形態で、治療的用途、化粧用途または生物工学的用途のために製剤化され得る。製剤は、液体または固体の形態、またはエアロゾルなどの他の形態であってもよい。液体の形態としては、例えば注射または経口投与のために適合した溶液、懸濁液、分散液が挙げられる。固体の形態としては、例えば、カプセル剤、錠剤、コーティング錠、粉末剤、坐剤、および他の形態が挙げられる。
【0068】
液体製剤は噴霧することができる。噴霧された懸濁液は噴霧装置から直接吸い込まれてもよく、または噴霧装置はフェイスマスクテント、または間欠的陽圧呼吸器に取り付けられてもよい。
【0069】
固体剤形はまた、ドライパウダー吸入器を用いて吸入により投与されてもよい。懸濁液または乾燥粉末製剤は、薬学的組成物を適切な様式で送達するデバイスから経口または経鼻投与され得る。
【0070】
皮膚または粘膜上に活性物質を送達するために、活性物質を有するトランスフェクション粒子はまた、クリーム、ゲル、軟膏、ペースト、バーム、液体の形態で調製され得る。これらの局所形態は、作用部位に直接適用されてもよい。
【0071】
薬学的に許容される賦形剤としては、溶媒、溶解度制御剤、ｐＨ調整剤、担体、充填剤、結合剤、滑剤、崩壊剤、防腐剤、収着剤、粘度制御剤、味、臭気または製剤の色などの知覚特性に影響を及ぼす薬剤が挙げられる。
【0072】
さらに、一般式Ｉのリピドイドまたはトランスフェクション剤またはトランスフェクション粒子は好ましくは活性物質を作用部位に送達するために、化粧品産業の目的のために使用することができる。活性物質を有するトランスフェクション粒子はクリーム、ゲル、軟膏、ペースト、バーム、液体などの形態で調製することができ、化粧品、毛髪化粧品または個人向け衛生用品として使用することができる。
【0073】
〔図面の簡単な説明〕
図１．リピドイド４ａ～ｇの合成スキーム。
図１．リピドイド４ａ～ｇの合成スキーム。
【0074】
図２．リピドイド９の合成スキーム。
【0075】
図３．リピドイド１３の合成スキーム。
【0076】
図４．化合物１９、リピドイド２１の前駆体の合成スキーム。
【0077】
図５．リピドイド２１の合成スキーム。
【0078】
図６．化合物２２およびそのアシルクロリド、リピドイド２３～２５の前駆体の合成スキーム。
【0079】
図７．リピドイド２３～２５の合成スキーム。
【0080】
【0081】
図１０．ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３９）のマウス肝臓への機能的送達の試験。
【0082】
〔実施例〕
略語一覧：
ｅｑ． 当量
Ｒｆ 保持係数
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＲＶＥ 回転式真空蒸発器
ｒｔ 室温
ｂｒ ｓ ブロードな信号
ｓ シングレット
ｄ ダブレット
ｍ マルチプレット
ｄｄ ダブレットのダブレット
Ｊ 相互作用定数
δ 化学シフト
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析法
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化
ＭＡＬＤＩ マトリックス支援レーザー脱離／イオン化
ＩＲ 赤外分光法
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＣＥ５ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物９５：５（ｖ／ｖ）
ＣＥ２０ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物８０：２０（ｖ／ｖ）
ＣＥ５０ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物５０：５０（ｖ／ｖ）
Ｄ１ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物７５：：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ２ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物１７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ３ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物２７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ４ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物３７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＨＣＴＵ Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＡＣＮ アセトニトリル
ＴＢＤＰＳＣｌ ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＬＮＰ 脂質ナノ粒子
ＮＡ 核酸
ＤＮＡ デオキシリボ核酸
ＲＮＡ リボ核酸
ｍＲＮＡ メッセンジャーＲＮＡ
ｓｉＲＮＡ 低分子干渉ＲＮＡ
ｔＲＮＡ トランスファーＲＮＡ
ｍｉＲＮＡ マイクロＲＮＡ
ｓｓＤＮＡ／ＲＮＡ 一本鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ
ｄｓＤＮＡ／ＲＮＡ 二本鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ
ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００ １，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００
ＤＯＰＥ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン
ＤＯＰＣ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＤＳＰＣ １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＤＯＰＥ－Ｃｙ５ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（シアニン５）
Ｌｉｐ２０００ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
〔実施例１〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルエタン－１，２－ジアミン３ａ
クロロカルシウムキャップおよびマグネチックスターラーを備えた５００ｍｌ丸底フラスコに、アミン１ａ（５．００ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液を充填し、氷浴中で０℃に冷却した。激しく撹拌しながら、ｎ－ドデシルアルデヒド（２０．８ｍｌ、９３．６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を加え、続いてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１９．８ｇ、９３．６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を１０分かけて３回に分けて加えた。冷却浴を除去し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の進行を、アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の８０：２０（ｖ／ｖ）ヘキサン－酢酸エチル移動相を使用するＴＬＣによってモニターした（ニンヒドリンでの検出）。反応終了後、ＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、２００ｍｌ）を加え、反応混合物を１５分間撹拌し、次いで分液漏斗に注ぎ、水（３００ｍｌ）で希釈した。生成物をＤＣＭ（３００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。暗色の油状残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（１０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アミン２ａ（５．１２ｇ、３３．０％）を黄色がかった油として得た。
略語一覧：
ｅｑ． 当量
Ｒｆ 保持係数
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
ＲＶＥ 回転式真空蒸発器
ｒｔ 室温
ｂｒ ｓ ブロードな信号
ｓ シングレット
ｄ ダブレット
ｍ マルチプレット
ｄｄ ダブレットのダブレット
Ｊ 相互作用定数
δ 化学シフト
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析法
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化
ＭＡＬＤＩ マトリックス支援レーザー脱離／イオン化
ＩＲ 赤外分光法
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＣＥ５ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物９５：５（ｖ／ｖ）
ＣＥ２０ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物８０：２０（ｖ／ｖ）
ＣＥ５０ シクロヘキサン－酢酸エチル混合物５０：５０（ｖ／ｖ）
Ｄ１ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物７５：：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ２ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物１７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ３ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物２７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
Ｄ４ ジクロロメタン－メタノール－２５％ＮＨ３水溶液混合物３７５：２２：３（ｖ／ｖ／ｖ）
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＨＣＴＵ Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＡＣＮ アセトニトリル
ＴＢＤＰＳＣｌ ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＬＮＰ 脂質ナノ粒子
ＮＡ 核酸
ＤＮＡ デオキシリボ核酸
ＲＮＡ リボ核酸
ｍＲＮＡ メッセンジャーＲＮＡ
ｓｉＲＮＡ 低分子干渉ＲＮＡ
ｔＲＮＡ トランスファーＲＮＡ
ｍｉＲＮＡ マイクロＲＮＡ
ｓｓＤＮＡ／ＲＮＡ 一本鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ
ｄｓＤＮＡ／ＲＮＡ 二本鎖ＤＮＡ／ＲＮＡ
ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００ １，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００
ＤＯＰＥ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン
ＤＯＰＣ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＤＳＰＣ １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＤＯＰＥ－Ｃｙ５ １，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（シアニン５）
Ｌｉｐ２０００ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
〔実施例１〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルエタン－１，２－ジアミン３ａ
クロロカルシウムキャップおよびマグネチックスターラーを備えた５００ｍｌ丸底フラスコに、アミン１ａ（５．００ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液を充填し、氷浴中で０℃に冷却した。激しく撹拌しながら、ｎ－ドデシルアルデヒド（２０．８ｍｌ、９３．６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を加え、続いてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１９．８ｇ、９３．６ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を１０分かけて３回に分けて加えた。冷却浴を除去し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の進行を、アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の８０：２０（ｖ／ｖ）ヘキサン－酢酸エチル移動相を使用するＴＬＣによってモニターした（ニンヒドリンでの検出）。反応終了後、ＮａＯＨ水溶液（１Ｍ、２００ｍｌ）を加え、反応混合物を１５分間撹拌し、次いで分液漏斗に注ぎ、水（３００ｍｌ）で希釈した。生成物をＤＣＭ（３００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。暗色の油状残渣を、ヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（１０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アミン２ａ（５．１２ｇ、３３．０％）を黄色がかった油として得た。
【0083】
トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を化合物２ａ（５．１２ｇ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で撹拌しながら０℃に冷却し、反応混合物を０℃で３時間放置した。次に、溶液を１リットルの分液フラスコに注ぎ、２０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（３００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２５０ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（０～７０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。ジアミン３ａ（２．５５ｇ、６２．４％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４６、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．８９５、２．６４、２．４８、１．４５、１．２８、１．２６、１．２４－１．２８、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５４．３１、５３．８５、３８．３３、３１．９０、２９．６５、２９．６２、２９．６１、２９．５２、２９．３４、２６．３６、２３．８８、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（フィルム）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３７１ｗおよび３３１５ｗ（ν ＮＨ２）、２８０１ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）、２９５３ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２４ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５３ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗおよび１３６７ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｍ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２６Ｈ５７Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値３９７．４５１６３；実測値３９７．４５０９３。
【0084】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（２－（ジドデシルアミノ）エチル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ａ
Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ、２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、０．４１５ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１．５ｍｌ）溶液に加え、溶液を室温で１５分間撹拌した。次に、Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルエタン－１，２－ジアミン３ａ（２３７ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）のＤＣＭ（１．０ｍｌ）溶液を加え、反応混合物を１２時間撹拌した。溶液を２５０ｍｌの分液フラスコに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（５０ｍｌ、２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（２０～５０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。リピドイド４ａ（７１ｍｇ、３３．９％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＤ２中のＲｆ ０．７３、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３３、３．５６、３．３２、３．１２５、３．０７５、２．３４、２．０１、１．９１、１．７９、１．６７、１．３６、１．２８５、１．２６－１．３２、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１８０，４８、５６．７２、５３．７８、４１．３８、３９．０４、３６．８６、３６．２９、３１．９０、２９．６４、２９．６２、２９．５０、２９．４０、２９．３５、２９．０４、２７．７９、２６．３６、２３．８８、２２．６８、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４４０ｗおよび３３２２ｗ（ν ＮＨ）、１６５３ｗ（アミドＩ）および１６２３ｗ（アミドＩ結合）、１５３５ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｗおよび１４５７ｗ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９１Ｈ１７９Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４０４．４０３３；実測値１４０４．４０１２。
Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ、２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、０．４１５ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１．５ｍｌ）溶液に加え、溶液を室温で１５分間撹拌した。次に、Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルエタン－１，２－ジアミン３ａ（２３７ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）のＤＣＭ（１．０ｍｌ）溶液を加え、反応混合物を１２時間撹拌した。溶液を２５０ｍｌの分液フラスコに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（５０ｍｌ、２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（２０～５０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。リピドイド４ａ（７１ｍｇ、３３．９％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＤ２中のＲｆ ０．７３、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３３、３．５６、３．３２、３．１２５、３．０７５、２．３４、２．０１、１．９１、１．７９、１．６７、１．３６、１．２８５、１．２６－１．３２、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１８０，４８、５６．７２、５３．７８、４１．３８、３９．０４、３６．８６、３６．２９、３１．９０、２９．６４、２９．６２、２９．５０、２９．４０、２９．３５、２９．０４、２７．７９、２６．３６、２３．８８、２２．６８、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４４０ｗおよび３３２２ｗ（ν ＮＨ）、１６５３ｗ（アミドＩ）および１６２３ｗ（アミドＩ結合）、１５３５ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｗおよび１４５７ｗ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９１Ｈ１７９Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４０４．４０３３；実測値１４０４．４０１２。
【0085】
〔実施例２〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルプロパン－１，３－ジアミン３ｂ
アミン２ｂを、アミン１ｂ（６．０ｇ、３４．４３ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（２２．９１ｍｌ、１０３．３０ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２１．８９ｇ、１０３．３０ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｂを黄色がかった油として得た（７．７２ｇ、４３．９％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルプロパン－１，３－ジアミン３ｂ
アミン２ｂを、アミン１ｂ（６．０ｇ、３４．４３ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（２２．９１ｍｌ、１０３．３０ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２１．８９ｇ、１０３．３０ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｂを黄色がかった油として得た（７．７２ｇ、４３．９％）。
【0086】
アミン２ｂの脱保護は、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って実施した；ジアミン３ｂ（４．２６ｇ、６８．６％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．３５、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝３．０７、２．７０、２．５０、１．８１、１．４６、１．２８、１．２６、１．２５－１．２９、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．７０、５３．３０、４１．１８、３１．９０、２９．６４、２９．６２、２９．６０、２９．５８、２９．４８、２９．３３、２７．４２、２５．７１、２３．８７、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（フィルム）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３６１ｗおよび３２７４ｗ（ν ＮＨ２）、２８０３ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）、２９５４ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２４ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５３ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５６ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗおよび１３６４ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２０ｍ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２７Ｈ５９Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４１１．４６７２８；実測値４１１．４６６５２。
【0087】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（３－（ジドデシルアミノ）プロピル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｂ
リピドイド４ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（２０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１２８ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．２０８ｍｌ、１．１９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｂ（１２３ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｂ（６４ｍｇ、５９．３％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色い油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．５９、３．３６、２．９９、２．８８、２．３１、２．１３、２．００、１．９６、１．８１、１．６７、１．３１、１．２８、１．２５－１．３０、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．３９、５５．２２、５０．７０、４１．７８、４０．３８、３７．２０、３５．６７、３１．８９、２９．６０、２９．５１、２９．４８、２９．３２、２９．１９、２８．３９、２６．９４、２４．１０、２３．６８、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４６６ｗおよび３２８７ｗ（ν ＮＨ）、１６５６ｍ（アミドＩ）および１５１１ｍ（アミドＩＩ）、２８１４ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）、２９５４ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８７１ｍ（νｓ ＣＨ３）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６８ｍおよび１４５６ｍ（βｓ ＣＨ２およびδ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｗ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９４Ｈ１８５Ｏ３Ｎ６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４４６．４５０２７；実測値１４４６．４４８９６。
リピドイド４ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（２０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１２８ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．２０８ｍｌ、１．１９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｂ（１２３ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｂ（６４ｍｇ、５９．３％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色い油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．５９、３．３６、２．９９、２．８８、２．３１、２．１３、２．００、１．９６、１．８１、１．６７、１．３１、１．２８、１．２５－１．３０、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．３９、５５．２２、５０．７０、４１．７８、４０．３８、３７．２０、３５．６７、３１．８９、２９．６０、２９．５１、２９．４８、２９．３２、２９．１９、２８．３９、２６．９４、２４．１０、２３．６８、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４６６ｗおよび３２８７ｗ（ν ＮＨ）、１６５６ｍ（アミドＩ）および１５１１ｍ（アミドＩＩ）、２８１４ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）、２９５４ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８７１ｍ（νｓ ＣＨ３）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６８ｍおよび１４５６ｍ（βｓ ＣＨ２およびδ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｗ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９４Ｈ１８５Ｏ３Ｎ６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４４６．４５０２７；実測値１４４６．４４８９６。
【0088】
〔実施例３〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルブタン－１，４－ジアミン３ｃ
アミン２ｃを、アミン１ｃ（５．０ｇ、２６．５６ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１７．６７ｍｌ、７９．６７ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１６．８９ｇ、７９．６７ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｃを黄色がかった油として得た（４．１５ｇ、２９．８％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルブタン－１，４－ジアミン３ｃ
アミン２ｃを、アミン１ｃ（５．０ｇ、２６．５６ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１７．６７ｍｌ、７９．６７ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１６．８９ｇ、７９．６７ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｃを黄色がかった油として得た（４．１５ｇ、２９．８％）。
【0089】
アミン２ｃの脱保護は、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って実施した；ジアミン３ｃ（２．３６ｇ、７０．３％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２９、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．８５、２．８１、２．５９、１．７２５、１．６８、１．５１、１．２８、１．２６５、１．２５－１．３０、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．３３、５２．７４、４０．４４、３１．９０、２９．６４、２９．６０、２９．６０、２９．４０、２９．３３、２８．６５、２７．４６、２４．８３、２４．４０、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（フィルム）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３７０ｗおよび３２７４ｗ（ν ＮＨ２）、２７９８ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）、２９５７ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２４ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５３ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５６ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗおよび１３６７ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２０ｍ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２８Ｈ６１Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４２５．４８２９３；実測値４２５．４８２２７。
【0090】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（４－（ジドデシルアミノ）ブチル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｃ
リピドイド４ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｃ（２５３ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｃ（６４ｍｇ、２８．８％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．２７、３．３３５、３．０３、２．９８、２．２８、２．１２、２．０６、１．８７５、１．８１、１．７４、１．６４、１．３３、１．２８、１．２５－１．２９、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２７、５２．７８、５２．２７、４１．８３、４０．２６、３７．３６、３７．２０、３１．８８、２９．５８、２９．４９、２９．４３、２９．３１、２９．１０、２８．３７、２６．８２、２６．５６、２２．９４、２２．６６、２０．７９、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４４１ｗおよび３３２９ｗ（ν ＮＨ）、１６４１ｍ（アミドＩ）、１５３４ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６６ｍおよび１４５８ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１９１Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４８８．４９７２；実測値１４８８．４９５６。
リピドイド４ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｃ（２５３ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｃ（６４ｍｇ、２８．８％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．２７、３．３３５、３．０３、２．９８、２．２８、２．１２、２．０６、１．８７５、１．８１、１．７４、１．６４、１．３３、１．２８、１．２５－１．２９、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２７、５２．７８、５２．２７、４１．８３、４０．２６、３７．３６、３７．２０、３１．８８、２９．５８、２９．４９、２９．４３、２９．３１、２９．１０、２８．３７、２６．８２、２６．５６、２２．９４、２２．６６、２０．７９、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４４１ｗおよび３３２９ｗ（ν ＮＨ）、１６４１ｍ（アミドＩ）、１５３４ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６６ｍおよび１４５８ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１９１Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１４８８．４９７２；実測値１４８８．４９５６。
【0091】
〔実施例４〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルペンタン－１，５－ジアミン３ｄ
アミン２ｄを、アミン１ｄ（５．０ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１６．４５ｍｌ、７４．１５ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１５．７１ｇ、７４．１５ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｄを黄色がかった油として得た（６．０１ｇ、４５．１％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルペンタン－１，５－ジアミン３ｄ
アミン２ｄを、アミン１ｄ（５．０ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１６．４５ｍｌ、７４．１５ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１５．７１ｇ、７４．１５ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｄを黄色がかった油として得た（６．０１ｇ、４５．１％）。
【0092】
アミン２ｄの脱保護は、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン３ｄ（４．３２ｇ、８８．３％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２８、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．７５、２．６８、２．５５、１．５６５、１．５３、１．５０、１．３５、１．２８、１．２７、１．２４－１．２８、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．６１、５３．５５、４１．４８、３２．１０、３１．８９、２９．６３、２９．６１、２９．５８、２９．４５、２９．３２、２７．４１、２５．７４、２４．９０、２４．５５、２２．６６、１４．０９ｐｐｍ。ＩＲ（フィルム）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３６７ｗおよび３２８４ｗ（ν ＮＨ２）、２７９７ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）、２９５６ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２４ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５３ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５６ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗおよび１３６７ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２０ｍ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２９Ｈ６３Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４３９．４９８５８；実測値４３９．４９７８３。
【0093】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（５－（ジドデシルアミノ）ペンチル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｄ
リピドイド４ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｄ（２６２ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｄ（７４ｍｇ、３２．４％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４９、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．９１、３．２７、２．９９、２．２９、２．０９、１．９７、１．８２、１．８１、１．７６、１．５９、１．４５、１．３４、１．２８、１．２５－１．３０、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．０１、５２．７７、４１．８２、４０．１０、３８．３３、３７．５９、３１．８８、２９．５８、２９．４８、２９．４３、２９．３０、２９．０９、２８．５３、２８．３９、２６．８４、２３．８３、２３．０９、２３．０２、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２２ｗ（ν ＮＨ）、１６４０ｍ（アミドＩ）、１５３５ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２２ｍ（β）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１００Ｈ１９７Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１５３０．５４４２；実測値１５３０．５４７８。
リピドイド４ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｄ（２６２ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｄ（７４ｍｇ、３２．４％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４９、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．９１、３．２７、２．９９、２．２９、２．０９、１．９７、１．８２、１．８１、１．７６、１．５９、１．４５、１．３４、１．２８、１．２５－１．３０、１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．０１、５２．７７、４１．８２、４０．１０、３８．３３、３７．５９、３１．８８、２９．５８、２９．４８、２９．４３、２９．３０、２９．０９、２８．５３、２８．３９、２６．８４、２３．８３、２３．０９、２３．０２、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２２ｗ（ν ＮＨ）、１６４０ｍ（アミドＩ）、１５３５ｗ（アミドＩＩ）、２９５６ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｍ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２２ｍ（β）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１００Ｈ１９７Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１５３０．５４４２；実測値１５３０．５４７８。
【0094】
〔実施例５〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘキサン－１，６－ジアミン３ｅ
アミン２ｅを、アミン１ｅ（５．０ｇ、２３．１１ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１５．３８ｍｌ、６９．３４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１４．７０ｇ、６９．３４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｅを黄色がかった油として得た（３．６７ｇ、２８．７％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘキサン－１，６－ジアミン３ｅ
アミン２ｅを、アミン１ｅ（５．０ｇ、２３．１１ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（１５．３８ｍｌ、６９．３４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１４．７０ｇ、６９．３４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｅを黄色がかった油として得た（３．６７ｇ、２８．７％）。
【0095】
アミン２ｅの脱保護は、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って実施した；ジアミン３ｅ（２．１７ｇ、７２．２％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．３１、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．７３、２．６５、２．５７、１．５６、１．５２、１．５１、１．３６、１．３１、１．２８、１．２５－１．２９、１．２４、０．８７ ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．５１、５３．２０、４１．６２、３２．４０、３１．８９、２９．６３、２９．６１、２９．５７、２９．４４、２９．３２、２７．３９、２７．０９、２６．５３、２５．６５、２５．０２、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（フィルム）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３７４ｗおよび３２９４ｗ（ν ＮＨ２）、２７９７ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）、２９５６ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２４ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５３ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍおよび１４５５ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗおよび１３６７ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｍ（βａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３０Ｈ６５Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４５３．５１４２３；実測値４５３．５１３４０。
【0096】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｅ
リピドイド４ｅを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｅ（２７０ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｅ（９１ｍｇ、３８．８％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５２、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．８０、３．３３、３．０３、２．９９、２．３７、２．２７、２．０２、１．９２、１．８１、１．７６、１．６２、１．４３、１．４１、１．３４、１．２８５、１．２６－１．３０、１．２４、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．８７、５２．８７、５２．２６、４１．７４、３９．３１、３６．８６、３１．９０、２９．６０、２９．５０、２９．４４、２９．３２、２９．１０、２８．２６、２６．８２、２５．７７、２５．５２、２３．４４、２３．１４、２２．６８、１４．１２ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４６３ｗおよび３３２７ｗ（ν ＮＨ）、１６４１ｍ（アミドＩ）、１５３５ｍ（アミドＩＩ）、２９５８ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２８７１ｓ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、２９２７ｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｗ（βａｓ ＣＨ２）、２７９９ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０３Ｈ２０３Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１５７２．５９１１；実測値１５７２．５８８１。
リピドイド４ｅを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｅ（２７０ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｅ（９１ｍｇ、３８．８％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５２、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．８０、３．３３、３．０３、２．９９、２．３７、２．２７、２．０２、１．９２、１．８１、１．７６、１．６２、１．４３、１．４１、１．３４、１．２８５、１．２６－１．３０、１．２４、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．８７、５２．８７、５２．２６、４１．７４、３９．３１、３６．８６、３１．９０、２９．６０、２９．５０、２９．４４、２９．３２、２９．１０、２８．２６、２６．８２、２５．７７、２５．５２、２３．４４、２３．１４、２２．６８、１４．１２ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４６３ｗおよび３３２７ｗ（ν ＮＨ）、１６４１ｍ（アミドＩ）、１５３５ｍ（アミドＩＩ）、２９５８ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２８７１ｓ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、２９２７ｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、７２１ｗ（βａｓ ＣＨ２）、２７９９ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０３Ｈ２０３Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１５７２．５９１１；実測値１５７２．５８８１。
【0097】
〔実施例６〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘプタン－１，７－ジアミン３ｆ
アミン２ｆを、アミン１ｆ（１．０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（３．１４ｍｌ、１３．０２ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．７６ｇ、１３．０２ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｆを黄色がかった油として得た（１．７４ｇ、７０．６％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘプタン－１，７－ジアミン３ｆ
アミン２ｆを、アミン１ｆ（１．０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（３．１４ｍｌ、１３．０２ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．７６ｇ、１３．０２ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｆを黄色がかった油として得た（１．７４ｇ、７０．６％）。
【0098】
アミン２ｆの脱保護はＴＦＡ（４ｍｌ）およびＤＣＭ（４ｍｌ）の混合物中で、実施例１で２ａについて記載した手順に従って実施した；ジアミン３ｆ（０．８４２ｇ、５９．１％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．３８、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．７３、２．６９、２．６４、１．５６、１．５０、１．３０、１．２８、１．２５－１．３１、１．２５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．３７、５３．２０、４１．６２、３２．２２、３１．８９、２７．１０－２９．６０、２６．５７、２５．１４、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３９１ｖｗ（νａｓ ＮＨ２）；２９６０ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８７２ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；２８５５ｖｓ（νｓ ＣＨ２）；２７９８ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）；１４６７ｓおよび１４５８ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；１３０２ｗ（γｓ ＣＨ２）；７２１ｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３１Ｈ６７Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４６７．５２９８８；実測値４６７．５２９７４。
【0099】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（７－（ジドデシルアミノ）ヘプチル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｆ
リピドイド４ｆを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｆ（２７８ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｆ（１９９ｍｇ、８２．６％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５５、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．９７、３．２２、３．０９、２．３４、１．９２、１．８３、１．８２、１．７０、１．５８、１．５２、１．３６、１．３０、１．２８５、１．２８、１．２５－１．３２、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２７、５４．００、５３．１４、４１．５９、３９．４８、３９．３０、３６．９２、３１．８９、２９．６０、２９．４８、２９．３９、２９．３２、２９．０６、２８．２２、２６．５０、２５．５８、２３．６３、２３．３８、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４３８ｗ（自由）および３３３９、３１９６ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６２７ｍ（アミドＩ）；１５３５ｍ（アミドＩＩ）；２９５６ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６８ｍおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；７２２ｗ（βａｓ ＣＨ２）；２８０５ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０６Ｈ２０９Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１４．６３８１；実測値１６１４．６４１４。
リピドイド４ｆを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｆ（２７８ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｆ（１９９ｍｇ、８２．６％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．５５、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．９７、３．２２、３．０９、２．３４、１．９２、１．８３、１．８２、１．７０、１．５８、１．５２、１．３６、１．３０、１．２８５、１．２８、１．２５－１．３２、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２７、５４．００、５３．１４、４１．５９、３９．４８、３９．３０、３６．９２、３１．８９、２９．６０、２９．４８、２９．３９、２９．３２、２９．０６、２８．２２、２６．５０、２５．５８、２３．６３、２３．３８、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４３８ｗ（自由）および３３３９、３１９６ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６２７ｍ（アミドＩ）；１５３５ｍ（アミドＩＩ）；２９５６ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６８ｍおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；７２２ｗ（βａｓ ＣＨ２）；２８０５ｗ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０６Ｈ２０９Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１４．６３８１；実測値１６１４．６４１４。
【0100】
〔実施例７〕
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルオクタン－１，８－ジアミン３ｇ
アミン２ｇを、アミン１ｇ（１．０ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（２．９６ｍＬ、１２．２８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．６０ｇ、１２．２８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｇを黄色がかった油として得た（１．９８ｇ、８３．１％）。
Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルオクタン－１，８－ジアミン３ｇ
アミン２ｇを、アミン１ｇ（１．０ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）、ｎ－ドデシルアルデヒド（２．９６ｍＬ、１２．２８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．６０ｇ、１２．２８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン２ｇを黄色がかった油として得た（１．９８ｇ、８３．１％）。
【0101】
アミン２ｇの脱保護はＴＦＡ（４ｍｌ）およびＤＣＭ（４ｍｌ）の混合物中で、実施例１で２ａについて記載した手順に従って実施した；ジアミン３ｇ（０．８４８ｇ、５２．０％；アンモニアで予め飽和させたＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．３５、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝２．７０、２．６３、２．５３、１．５１、１．４７、１．３２、１．２８、１．２５－１．３２、１．２５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５３．６１、５３．２０、４１．９２、３３．００、３１．９０、２７．３０－２９．６０、２６．７０、２５．８３、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３９１ｖｗ（νａｓ ＮＨ２）；２９６０ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８７２ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；２８５５ｖｓ（νｓ ＣＨ２）；２７９９ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）；１４６７ｓおよび１４５８ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；１３０２ｗ（γｓ ＣＨ２）；７２１ｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３２Ｈ６９Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４８１．５４５５３；実測値４８１．５４５０７。
【0102】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（８－（ジドデシルアミノ）オクチル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド４ｇ
リピドイド４ｇを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｇ（２８６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｇ（２１１ｍｇ、８５．４％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．６０、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．０３、３．２１、３．０９、３．０７、２．３５、１．９８５、１．８２、１．８１５、１．７１、１．５１、１．３３５、１．３３、１．２９、１．２８、１．２５－１．３３、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２２、５４．０４、５３．０７、４１．５６、４０．０１、３９．０８、３６．９５、３１．８９、２９．６０、２９．４９、２９．４０、２９．３２、２９．０６、２８．４５、２８．４２、２８．３０、２６．５３、２６．１３、２６．０１、２３．８８、２３．４５、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４３９ｗ（自由）および３３４１、３１９６ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６３５、１６２７ｗ（アミドＩ）；１５３３ｗ（アミドＩＩ）；２９５４ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６７ｍおよび１４５７ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびβａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；２８１０ｖｗ、ｓｈ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２１５Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６５６．６８５６；実測値１６５６．６８８２。
リピドイド４ｇを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン３ｇ（２８６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド４ｇ（２１１ｍｇ、８５．４％；アンモニアで予め飽和したＴＬＣプレート上の移動相Ｄ２中のＲｆ ０．６０、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．０３、３．２１、３．０９、３．０７、２．３５、１．９８５、１．８２、１．８１５、１．７１、１．５１、１．３３５、１．３３、１．２９、１．２８、１．２５－１．３３、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２２、５４．０４、５３．０７、４１．５６、４０．０１、３９．０８、３６．９５、３１．８９、２９．６０、２９．４９、２９．４０、２９．３２、２９．０６、２８．４５、２８．４２、２８．３０、２６．５３、２６．１３、２６．０１、２３．８８、２３．４５、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４３９ｗ（自由）および３３４１、３１９６ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６３５、１６２７ｗ（アミドＩ）；１５３３ｗ（アミドＩＩ）；２９５４ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６７ｍおよび１４５７ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびβａｓ ＣＨ３）；２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；２８１０ｖｗ、ｓｈ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）。ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２１５Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６５６．６８５６；実測値１６５６．６８８２。
【0103】
〔実施例８〕
１，２－エポキシドデカン６
Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ、３．４４ｇ、２５．７７ｍｍｏｌ、０．９５ｅｑ．）およびＬ－プロリン（０．９３７ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、０．３０ｅｑ．）を、ｎ－ドデシルアルデヒド（６．０ｍｌ、２７．１３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で２時間撹拌した。次にエタノール（４０ｍｌ）で希釈し、ＮａＢＨ４（２．５７ｇ、６７．８２ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）を加え、反応混合物を０℃で３．５時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で希釈し、生成物を酢酸エチル（３００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～２０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。クロロアルコール５（２．７９ｇ、４６．６％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．４２、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。
１，２－エポキシドデカン６
Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ、３．４４ｇ、２５．７７ｍｍｏｌ、０．９５ｅｑ．）およびＬ－プロリン（０．９３７ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、０．３０ｅｑ．）を、ｎ－ドデシルアルデヒド（６．０ｍｌ、２７．１３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で２時間撹拌した。次にエタノール（４０ｍｌ）で希釈し、ＮａＢＨ４（２．５７ｇ、６７．８２ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）を加え、反応混合物を０℃で３．５時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で希釈し、生成物を酢酸エチル（３００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～２０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。クロロアルコール５（２．７９ｇ、４６．６％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．４２、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。
【0104】
ＮａＯＨ（１１．３７ｇ、０．２８４ｍｍｏｌ、２２．５ｅｑ．）の水（４９ｍｌ）溶液を、クロロアルコール５（２．７９ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ）のジオキサン（３８ｍｌ）溶液に加え、混合物を３５℃で３０時間撹拌した。次いで、この溶液を５００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（１００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～５％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。エポキシド６（１．７９７ｇ、７７．２％；移動相ＣＥ５中のＲｆ ０．３８、ホスホモリブデン酸／Ｃｅ４＋での検出）を無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝０．９２（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、３Ｈ）、１．２９－１．６０（ｍ、１８Ｈ）、２．４７－２．４９（ｍ、１Ｈ）、２．７６－２．７８（ｍ、１Ｈ）、２．９０－２．９５（ｍ、１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ＝１４．１１、２２．６８、２５．９７、２９．３３、２９．４５、２９．５６、２９．５９、３１．９０、３２．５０、４７．１４、５２．４２ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝エポキシド：２９９７ｗ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ２）；１４８２ｗ、１４１０ｗ、１１３０ｗ（δｓ Ｏ－ＣＨ２）；１２５９ｗ（νｓ 骨格、呼吸）；９１７ｗ（δａｓ 円）；８９６ｖｗ（δａｓ ＣＯＣ）；ａｌｉｆ．鎖：２９５７ｓ（νａｓ ＣＨ３）；２９２８ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８７２ｍ（νｓ ＣＨ３）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１４６７ｍおよび１４５８ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７９ｗ（δｓ ＣＨ３）、ＨＲＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１２Ｈ２４Ｏ［Ｍ］＋に対する計算値１８４．１８２７；実測値１８４．１８３２。
【0105】
Ｎ１，Ｎ１－ビス（２－ヒドロキシドデシル）ヘキサン－１，６－ジアミン８
アミン１ｅ（０．８６ｇ、３．９８ｍｍｏｌ）およびエポキシド６（１．７６ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、２．４ｅｑ．）を４ｍｌガラスバイアル中で混合し、混合物を溶媒の非存在下、アルゴン雰囲気下で８０℃に２４時間加熱した。得られた黄色がかった液体を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アミン７（１．９８ｇ、８５．１％；移動相Ｄ３中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油として得た。
アミン１ｅ（０．８６ｇ、３．９８ｍｍｏｌ）およびエポキシド６（１．７６ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、２．４ｅｑ．）を４ｍｌガラスバイアル中で混合し、混合物を溶媒の非存在下、アルゴン雰囲気下で８０℃に２４時間加熱した。得られた黄色がかった液体を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アミン７（１．９８ｇ、８５．１％；移動相Ｄ３中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油として得た。
【0106】
アミン７の脱保護はＴＦＡ（４ｍｌ）およびＤＣＭ（６ｍｌ）の混合物中で、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って実施し、ジアミン８（１．２７１ｇ、７７．４％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２０、ニンヒドリンでの検出）を粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝３．６５、３．６３、２．８４、２．８２、２．５６５、２．５５、２．４１、２．３２５、１．６０、１．５９、１．４１、１．３８、１．３５、１．３０－１．４８、１．２８、１．２５－１．２９、１．２５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６９．３９、６７．７１、６２．７２、６１．０５、５５．７８、５４．７７、４０．８６、４０．５６、３５．２２、３５．０８、３１．９０、３０．４５、２９．６－２９．９、２９．３３、２５．６５－２６．７７、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４１２ｗ、ｖｂｒ（ν ＯＨ）；１０７７ｗ、ｖｂｒ（ν Ｃ－ＯＨ）；１６２１ｖｗ、ｖｂｒ（βｓ ＮＨ２）；１０９０ｗ（ν Ｃ－ＮＨ２）；２９５６ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９２８ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８７１ｍ（νｓ ＣＨ３）；２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８１０ｗ、ｓｈ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）；１４６７ｗおよび１４５７ｗ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｖｗ（δｓ ＣＨ３）；７２２ｖｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３０Ｈ６５Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４８５．５０４０６；実測値４８５．５０４６１。
【0107】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド９
リピドイド９を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン８（２８９ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド９（１８８ｍｇ、７５．５％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４３、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．９７、４．１０、４．０７５、４．０４、４．００、３．３８、３．３１、３．２８、３．２４、３．２１、３．１９、３．１６、３．１１、２．３４、２．１４、１．９３、１．８７、１．２８、１．２５－１．３１、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．５０、６６．３８、６５．９２、６５．１０、６４．７３、６１．４３、６１．２３、６０．５５、５９．６４、５７．６３、５４．４８、５３．３８、４１．７０、３９．４２、３９．２３、３７．１６、３１．９０、２９．６３、２９．５６、２９．５２、２９．３４、２８．３９、２２．６８、１４．１１ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３００－３５００ｍ、ｂｒ（ν ＯＨ）、１０９０ｗ（ν Ｃ－ＯＨ）；３４３９ｗ（自由）および３３４４ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６３５ｍ（アミドＩ）；１５３６ｍ（アミドＩＩ）；２９５６ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；２８０８ｗ、ｓｈ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）；７２１ｗ（β ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０３Ｈ２０３Ｎ６Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．５６１２；実測値１６６８．５６２８。
リピドイド９を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（２５６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．４１６ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン８（２８９ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド９（１８８ｍｇ、７５．５％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４３、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．９７、４．１０、４．０７５、４．０４、４．００、３．３８、３．３１、３．２８、３．２４、３．２１、３．１９、３．１６、３．１１、２．３４、２．１４、１．９３、１．８７、１．２８、１．２５－１．３１、１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．５０、６６．３８、６５．９２、６５．１０、６４．７３、６１．４３、６１．２３、６０．５５、５９．６４、５７．６３、５４．４８、５３．３８、４１．７０、３９．４２、３９．２３、３７．１６、３１．９０、２９．６３、２９．５６、２９．５２、２９．３４、２８．３９、２２．６８、１４．１１ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３００－３５００ｍ、ｂｒ（ν ＯＨ）、１０９０ｗ（ν Ｃ－ＯＨ）；３４３９ｗ（自由）および３３４４ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６３５ｍ（アミドＩ）；１５３６ｍ（アミドＩＩ）；２９５６ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；２８０８ｗ、ｓｈ（νｓ ＣＨ２ＮＲ２）；７２１ｗ（β ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０３Ｈ２０３Ｎ６Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．５６１２；実測値１６６８．５６２８。
【0108】
〔実施例９〕
リノレイルアルデヒド１０
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（４．４５ｇ、１０．４９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）をリノレイルアルコール（２．５０ｍｌ、８．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次いで、この反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（２０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／１００ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１５０ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（１５０ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アイソクラティック条件、シクロヘキサン中５％酢酸エチル）により精製した。アルデヒド１０（１．２７１ｇ、５９．６％；移動相ＣＥ５中のＲｆ ０．３６、ＫＭｎＯ４での検出）を無色油として得た。
リノレイルアルデヒド１０
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（４．４５ｇ、１０．４９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）をリノレイルアルコール（２．５０ｍｌ、８．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次いで、この反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（２０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／１００ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１５０ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（１５０ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アイソクラティック条件、シクロヘキサン中５％酢酸エチル）により精製した。アルデヒド１０（１．２７１ｇ、５９．６％；移動相ＣＥ５中のＲｆ ０．３６、ＫＭｎＯ４での検出）を無色油として得た。
【0109】
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）ヘキサン－１，６－ジアミン１２
アミン１１を、アミン１ｅ（０．３４５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、アルデヒド１０（１．２７ｇ、４．７８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．０１ｇ、４．７８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン１１を黄色がかった油として得た（１．０８ｇ、９４．９％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．１８、ニンヒドリンでの検出）。
アミン１１を、アミン１ｅ（０．３４５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、アルデヒド１０（１．２７ｇ、４．７８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．０１ｇ、４．７８ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って調製した。アミン１１を黄色がかった油として得た（１．０８ｇ、９４．９％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．１８、ニンヒドリンでの検出）。
【0110】
アミン１１の脱保護はＴＦＡ（４ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｍｌ）の混合物中で、実施例１で２ａについて記載した手順に従って実施し、ジアミン１２（０．５９４ｇ、６４．０％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．１３、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．３０－５．４０、２．７６５、２．７３、２．６７、２．５９、２．０４、１．５１、１．３８５、１．３７、１．３４、１．２９５、１．２９、１．２８－１．３４、１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１３０．１９、１３０．０６、１２７．９９、１２７．８９、５３．４９、５３．４５、４１．６７、３２．５２、３１．５０、２９．６２、２９．４６、２９．２０－２９．４８、２７．３７、２７．２０、２７．１８、２６．５２、２５．６１、２２．５６、１４．０６ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３０１１ｓ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６４６－１６７３ｍ（ν Ｃ＝Ｃ）；３４５５ｗ（νａｓ ＮＨ２）；３３９４（νｓ ＮＨ２）；１６２０ｗ（βｓ ＮＨ２）；１０８７ｍ（ν Ｃ－ＮＨ２）；２９５７ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９２８ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８７３ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；２８５６ｖｓ（νｓ ＣＨ２）；２８０１ｍ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）；１４６７ｍおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓおよびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｍ（δｓ ＣＨ３）；７２１ｍ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ Ｃ４２Ｈ８１Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値６１３．６３９４３；実測値６１３．６３８９９。
【0111】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド１３
リピドイド１３を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（３０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１９２ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．３１２ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン１２（２７４ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド１３（１５４ｍｇ、６７．１％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．３２、５．３７、５．３２、３．２３、２．７６、２．３１、２．０４、１．９０、１．８１、１．５２、１．３５、１．３０５、１．２９５、１．２９、１．２８－１．３５、１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．４２、１３０．２１、１２９．９９、１２８．０４、１２７．８７、５２．９４、４１．７２、３９．９８、３８．９９、３７．７７、３１．５０、２９．６０、２９．１８、２９．０８、２９．０－２９．７、２８．５７、２７．１８、２６．２６、２５．６１、２２．５５、１４．０７ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３０１１ｍ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６６１ｍ（ν Ｃ＝Ｃ）；３４６４ｗ（自由）および３３４７ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６４５ｍ、ｓｈ（アミドＩ）；１５３４ｗ（アミドＩＩ）；２９５７ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；２９２９ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８および１３６６ｗ（δｓ ＣＨ３）；１０８６ｗ、ｓｈ（ν Ｃ－Ｎ）；７２２ｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１３９Ｈ２５１Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２０５２．９６６７；実測値２０５２．９６７２。
リピドイド１３を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（３０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１９２ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．３１２ｍｌ、２．３９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン１２（２７４ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド１３（１５４ｍｇ、６７．１％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．３２、５．３７、５．３２、３．２３、２．７６、２．３１、２．０４、１．９０、１．８１、１．５２、１．３５、１．３０５、１．２９５、１．２９、１．２８－１．３５、１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．４２、１３０．２１、１２９．９９、１２８．０４、１２７．８７、５２．９４、４１．７２、３９．９８、３８．９９、３７．７７、３１．５０、２９．６０、２９．１８、２９．０８、２９．０－２９．７、２８．５７、２７．１８、２６．２６、２５．６１、２２．５５、１４．０７ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３０１１ｍ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６６１ｍ（ν Ｃ＝Ｃ）；３４６４ｗ（自由）および３３４７ｗ（結合）（ν ＮＨ）；１６４５ｍ、ｓｈ（アミドＩ）；１５３４ｗ（アミドＩＩ）；２９５７ｍ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；２９２９ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５６ｓ（νｓ ＣＨ２）；１３７８および１３６６ｗ（δｓ ＣＨ３）；１０８６ｗ、ｓｈ（ν Ｃ－Ｎ）；７２２ｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１３９Ｈ２５１Ｎ６Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２０５２．９６６７；実測値２０５２．９６７２。
【0112】
〔実施例１０〕
８－（ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル）オキシ）オクタン－１－オール１４
Ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（１７．５０ｍｌ、６８．３９ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を、１，８－オクタンジオール（１０．０ｇ、６８．３９ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（５．５９ｇ、８２．０６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）のＤＣＭ（２５０ｍｌ）溶液に加え、反応混合物を２４時間ｒｔで撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（４００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アルコール１４（１３．６５ｇ、５１．９％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．３５、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１．０８（ｓ、９Ｈ）、１．３１－１．４１（ｍ、８Ｈ）、１．５５－１．６２（ｍ、４Ｈ）、３．６４－３．７０（ｍ、４Ｈ）、７．３８－７．４７（ｍ、６Ｈ）、７．６９－７．７１（ｍ、４Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１９．２４、２５．６８、２５．７２、２６．８９、２９．３３、２９．３８、３２．５６、３２．７９、６３．０９、６３．９９、１２７．５７、１２９．４８、１３４．１９、１３５．５８ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３０７２ｍ（２０ａ）；３０５３ｍ（２０ｂ）；２５２９ｓ、ｓｈ（ｔＢｕ、νａｓ ＣＨ３）；２８９８ｓ、ｓｈ（ｔＢｕ、νｓ ＣＨ３）；１５９０、１５６８（８ａ、８ｂ）；１４８７ｍ（１９ａ）；１４６３ｍ、１４７３ｓ（ｔＢｕ、δａｓ ＣＨ３）；１４２８ｓ（１９ｂ）；１３９０ｍ、１３６２ｍ（ｔＢｕ、δｓ ＣＨ３）；１１８９ｍ；１１１２ｖｓ、１０９４ｖｓ（νａｓ Ｓｉ－Ｐｈ）；１０３０ｍ（１８ａ）；１００８ｍ（δ Ｐｈ－Ｓｉ）；９３９ｍ（ｒ ＣＨ３）；７０１ｖｓ（νｓ ＣＯＳｉ）；６８８ｍ（４）；６２２ｍ（６ｂ）；６１４ｓ（６ａ）；５０５ｓ（１６ｂ）；４８９ｍ（δ Ｓｉ－Ｐｈ）；２９３２ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｖｓ（νｓ ＣＨ２）；３６３６ｍ、３３４１ｍ、ｂｒ（νｓ ＯＨ）；１０５７ｍ（νｓ Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２４Ｈ３６Ｏ２ＮａＳｉ［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値４０７．２３７６８；実測値４０７．２３７４２。
８－（ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル）オキシ）オクタン－１－オール１４
Ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルクロロシラン（１７．５０ｍｌ、６８．３９ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）を、１，８－オクタンジオール（１０．０ｇ、６８．３９ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（５．５９ｇ、８２．０６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）のＤＣＭ（２５０ｍｌ）溶液に加え、反応混合物を２４時間ｒｔで撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（４００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アルコール１４（１３．６５ｇ、５１．９％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．３５、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１．０８（ｓ、９Ｈ）、１．３１－１．４１（ｍ、８Ｈ）、１．５５－１．６２（ｍ、４Ｈ）、３．６４－３．７０（ｍ、４Ｈ）、７．３８－７．４７（ｍ、６Ｈ）、７．６９－７．７１（ｍ、４Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１９．２４、２５．６８、２５．７２、２６．８９、２９．３３、２９．３８、３２．５６、３２．７９、６３．０９、６３．９９、１２７．５７、１２９．４８、１３４．１９、１３５．５８ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３０７２ｍ（２０ａ）；３０５３ｍ（２０ｂ）；２５２９ｓ、ｓｈ（ｔＢｕ、νａｓ ＣＨ３）；２８９８ｓ、ｓｈ（ｔＢｕ、νｓ ＣＨ３）；１５９０、１５６８（８ａ、８ｂ）；１４８７ｍ（１９ａ）；１４６３ｍ、１４７３ｓ（ｔＢｕ、δａｓ ＣＨ３）；１４２８ｓ（１９ｂ）；１３９０ｍ、１３６２ｍ（ｔＢｕ、δｓ ＣＨ３）；１１８９ｍ；１１１２ｖｓ、１０９４ｖｓ（νａｓ Ｓｉ－Ｐｈ）；１０３０ｍ（１８ａ）；１００８ｍ（δ Ｐｈ－Ｓｉ）；９３９ｍ（ｒ ＣＨ３）；７０１ｖｓ（νｓ ＣＯＳｉ）；６８８ｍ（４）；６２２ｍ（６ｂ）；６１４ｓ（６ａ）；５０５ｓ（１６ｂ）；４８９ｍ（δ Ｓｉ－Ｐｈ）；２９３２ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｖｓ（νｓ ＣＨ２）；３６３６ｍ、３３４１ｍ、ｂｒ（νｓ ＯＨ）；１０５７ｍ（νｓ Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２４Ｈ３６Ｏ２ＮａＳｉ［Ｍ＋Ｎａ］＋に対する計算値４０７．２３７６８；実測値４０７．２３７４２。
【0113】
８－（（ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル）オキシ）オクタン酸１５
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（１９．５４ｇ、４６．０７ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を、アルコール１４（１３．６３ｇ、３５．４４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次いで、この反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（５０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／１５０ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（２００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。１３．５６ｇの無色の油が得られた。
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（１９．５４ｇ、４６．０７ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を、アルコール１４（１３．６３ｇ、３５．４４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５０ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次いで、この反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（５０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／１５０ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（２００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（２００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。１３．５６ｇの無色の油が得られた。
【0114】
得られた残渣を、２リットルフラスコ中でアセトン（４５０ｍｌ）と水（９０ｍｌ）との混合物に溶解し；２－メチル－２－ブテン（１５．０２ｍｌ、１４１．８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＮａＨ２ＰＯ４．２Ｈ２Ｏ（１１．０６ｇ、７０．８８ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を溶液に加え、懸濁液を氷浴中で０℃に冷却した。次に、亜塩素酸ナトリウム（９．６２ｇ、１０６．３２ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）の水（６０ｍｌ）溶液を滴下漏斗から３０分間かけて徐々に加え、反応混合物を冷却浴から取り出し、ｒｔで１２時間激しく撹拌した。溶液を１０００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、クエン酸（７０ｇ）の水（３００ｍｌ）溶液で希釈し、生成物をジエチルエーテル（３００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アイソクラティック条件、クロロホルム中５％メタノール）により精製した。酸１５（１２．９２ｇ、９１．５％；移動相ＭｅＯＨ－ＣＨＣｌ３ ５：９５（ｖ／ｖ）中のＲｆ ０．３５、ＫＭｎＯ４での検出）を、粘性の無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１．０５（ｓ、９Ｈ）、１．２７－１．３９（ｍ、６Ｈ）、１．５１－１．６６（ｍ、４Ｈ）、２．３４（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．６５（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．３６－７．４４（ｍ、６Ｈ）、７．６６－７．６８（ｍ、４Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１９．２３、２４．６３、２５．５９、２６．８９、２８．９７、２９．０２、３２．４８、３３．９５、６３．９１、１２７．５７、１２９．４９、１３４．１５、１３５．５８、１７９．６０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３５３４ｗ（ν ＯＨ、モノマー）；３１００ｗ、２７４０ｗ、２６７４ｗ（ν ＯＨ、ダイマー）；１７１１ｖｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１４１３ｗ、１２８９ｗ（ν ＣＯおよびδ ＣＯＨ）；２５６１ｍ、ｓｈ（ｔＢｕ、νａｓ ＣＨ３）；２８９８ｍ、ｓｈ（ｔＢｕ、νｓ ＣＨ３）；１５９０ｗ；１４８７ｗ（１９ａ）；１４６３ｍ、１４７２ｍ（ｔＢｕ、δａｓ ＣＨ３）；１４２９ｍ（１９ｂ）；１３９０ｗ、１３６２ｗ（ｔＢｕ、δｓ ＣＨ３）；１１１２ｓ、（νａｓ ＣＯＳｉ）；１０９３ｍ（１８ｂ）；１０３０ｗ；１００８ｗ（δ Ｐｈ－Ｓｉ）；９４０ｗ（ｒ ＣＨ３）；７０１ｓ（４）；６８８ｗ（ＳｉＯＣ）；６２２ｗ（６ｂ）；６１４ｍ（６ａ）；５０５ｗ（１６ｂ）；２９３２ｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｍ（νｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２４Ｈ３３Ｏ３Ｓｉ［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値３９７．２２０４４；実測値３９７．２２０１８。
【0115】
（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル－８－ヒドロキシオクタノアート１７
ジイソプロピルカルボジイミド（１．０８ｍｌ、６．９０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）および４－ジメチルアミノピリジン（２３．０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）を、酸１５（２．５０ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で３０分間撹拌した。次に、ｔｒａｎｓ－２－ノネン－１－オール（１．３７ｍｌ、８．１５ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を加え、反応混合物をｒｔで１２時間撹拌した。溶媒をＲＶＥ中で蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アイソクラティック条件、シクロヘキサン中５％酢酸エチル）によって精製した。エステル１６（２．７８４ｇ、８４．９％；移動相ＣＥ５中のＲｆ ０．６１、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。
ジイソプロピルカルボジイミド（１．０８ｍｌ、６．９０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）および４－ジメチルアミノピリジン（２３．０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）を、酸１５（２．５０ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で３０分間撹拌した。次に、ｔｒａｎｓ－２－ノネン－１－オール（１．３７ｍｌ、８．１５ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を加え、反応混合物をｒｔで１２時間撹拌した。溶媒をＲＶＥ中で蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（アイソクラティック条件、シクロヘキサン中５％酢酸エチル）によって精製した。エステル１６（２．７８４ｇ、８４．９％；移動相ＣＥ５中のＲｆ ０．６１、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。
【0116】
フッ化テトラブチルアンモニウム一水和物（２．９５ｇ、１０．５６ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を、エステル１６（２．７６ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）溶液に加え、反応混合物をｒｔで２０時間撹拌した。溶液を５００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、１０％塩化アンモニウム水溶液（１５０ｍｌ）で希釈し、生成物をジエチルエーテル（１５０ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～４５％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アルコール１７（１．３１１ｇ、８７．３％；移動相ＣＥ５０中のＲｆ ０．６１、ＫＭｎＯ４での検出）を、やや黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８７（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、３Ｈ）、１．２６－１．３８（ｍ、１４Ｈ）、１．５１－１．６６（ｍ、４Ｈ）、２．０７－２．１２（ｍ、２Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．６１－４．６２（ｍ、２Ｈ）、５．４８－５．５５（ｍ、１Ｈ）、５．６０－５．６７（ｍ、１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１４．０７、２２．６０、２４．８８、２５．５４、２７．５４、２８．８６、２９．０２、２９．０７、２９．３９、３１．６８、３２．６８、３４．３０、６０．２２、６２．９７、１２３．３４、１３５．４５、１７３．７５ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３６３７ｗ、３４５３ｗ（ν ＯＨ）；１０５６ｍ（ν Ｃ－ＯＨ）；１７３６ｖｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２３８ｍ、１１７０ｓ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２５ｗ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６５９ｗ（ν Ｃ＝Ｃ）；１４１９ｗ（ρ ＝Ｃ－Ｈ）；２９５５ｓ（νａｓ ＣＨ３）；２９３１ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７２ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６６ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｍ（δｓ ＣＨ３）；７２２ｍ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１７Ｈ３２Ｏ３［Ｍ］＋に対する計算値２８４．２３５１；実測値２８４．２３５５。
【0117】
（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル－８－オキソオクタノアート１８
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（２．４６ｇ、５．８０ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を、アルコール１７（１．２７ｍｌ、４．４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次に、反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（１０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／５０ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を５００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（１００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アルデヒド１８（０．５７３ｇ、４５．４％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．４９、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８８（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）、１．２６－１．３８（ｍ、１４Ｈ）、１．５９－１．６７（ｍ、４Ｈ）、２．０７－２．１２（ｍ、２Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．４０－２．４４（ｍ、２Ｈ）、４．６１－４．６３（ｍ、２Ｈ）、５．４８－５．５５（ｍ、１Ｈ）、５．６１－５．６８（ｍ、１Ｈ）、９．７６（ｔ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１４．０７、２１．８６、２２．６０、２４．７１、２７．５４、２８．７７、２８．８３、２８．８６、２９．３９、３１．６８、３４．１９、４３．７９、６０．２５、１２３．３１、１３５．４９、１７３．５９、２０２．６２ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝２８１８ｍ、２７１６ｍ（ａｌｄｅｈ、ν ＣＨ）；１７３３ ｖｓ（ａｌｄｅｈ、ν Ｃ＝Ｏ）；１３９５ｍ、ｓｈ（ａｌｄｅｈ、δ ＯＣＨ）；１７３３ｖｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２４４ｍ、１１７２ｓ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２６ｍ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６５９ｗ（ν Ｃ＝Ｃ）；２９５６ｓ（νａｓ ＣＨ３）；２９３０ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７３ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６６ｍ ａ １４６２ｍ（βｓ ＣＨ２ ａ δａｓ ＣＨ３）；１３７８ｍ ａ １３７３ｍ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１７Ｈ２９Ｏ４［Ｍ－Ｈ］－に対する計算値２９７．２０７１３；実測値２９７．２０７２２。
Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（２．４６ｇ、５．８０ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）を、アルコール１７（１．２７ｍｌ、４．４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に加え、氷浴中で０℃に冷却し、混合物を０℃で４時間撹拌した。次に、反応を、チオ硫酸ナトリウム溶液（１０ｇ Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ／５０ｍｌ Ｈ２Ｏ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を加えることによってクエンチし、最初は乳白色であった溶液が透明になるまでｒｔで１時間撹拌した。溶液を５００ｍｌの分液フラスコに注ぎ、水（１００ｍｌ）で希釈し、生成物をＤＣＭ（１００ｍｌ、５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配（０～３０％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。アルデヒド１８（０．５７３ｇ、４５．４％；移動相ＣＥ２０中のＲｆ ０．４９、ＫＭｎＯ４での検出）を、無色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝０．８８（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）、１．２６－１．３８（ｍ、１４Ｈ）、１．５９－１．６７（ｍ、４Ｈ）、２．０７－２．１２（ｍ、２Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．４０－２．４４（ｍ、２Ｈ）、４．６１－４．６３（ｍ、２Ｈ）、５．４８－５．５５（ｍ、１Ｈ）、５．６１－５．６８（ｍ、１Ｈ）、９．７６（ｔ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１４．０７、２１．８６、２２．６０、２４．７１、２７．５４、２８．７７、２８．８３、２８．８６、２９．３９、３１．６８、３４．１９、４３．７９、６０．２５、１２３．３１、１３５．４９、１７３．５９、２０２．６２ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝２８１８ｍ、２７１６ｍ（ａｌｄｅｈ、ν ＣＨ）；１７３３ ｖｓ（ａｌｄｅｈ、ν Ｃ＝Ｏ）；１３９５ｍ、ｓｈ（ａｌｄｅｈ、δ ＯＣＨ）；１７３３ｖｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２４４ｍ、１１７２ｓ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２６ｍ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６５９ｗ（ν Ｃ＝Ｃ）；２９５６ｓ（νａｓ ＣＨ３）；２９３０ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７３ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６６ｍ ａ １４６２ｍ（βｓ ＣＨ２ ａ δａｓ ＣＨ３）；１３７８ｍ ａ １３７３ｍ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１７Ｈ２９Ｏ４［Ｍ－Ｈ］－に対する計算値２９７．２０７１３；実測値２９７．２０７２２。
【0118】
Ｎ１，Ｎ１－ビス（８－（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）オキシ－８－オキソオクチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２０
アミン１９を、アミン１ｅ（１４０ｍｇ、０．６４７ｍｍｏｌ）、アルデヒド１８（０．５４８ｇ、１．９４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．４１１ｇ、１．９４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で２ａについて記載した手順に従って調製したが、ただし、反応混合物を事前に抽出せずに蒸発させ、残渣をクロマトグラフィーによって直接的に精製した。アミン１９をわずかに黄色がかった油として得た（０．４４６ｇ、９２．０％）。
アミン１９を、アミン１ｅ（１４０ｍｇ、０．６４７ｍｍｏｌ）、アルデヒド１８（０．５４８ｇ、１．９４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．４１１ｇ、１．９４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）から、実施例１で２ａについて記載した手順に従って調製したが、ただし、反応混合物を事前に抽出せずに蒸発させ、残渣をクロマトグラフィーによって直接的に精製した。アミン１９をわずかに黄色がかった油として得た（０．４４６ｇ、９２．０％）。
【0119】
アミン１９の脱保護はＴＦＡ（４ｍｌ）とＤＣＭ（４ｍｌ）との混合物中で、実施例１で２ａについて記載した手順に従って実施し、ジアミン２０（０．３３３ｇ、８６．２％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．１６、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．６３、５．５０、４．６１、３．０６、３．０２、２．９９、２．２９、２．０８、１．８２、１．７４、１．６０、１．５７、１．４２、１．３４、１．２８、１．２７、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．５９、１３５．３９、１２９．２９、６０．２４、５２．６４、５２．１９、３９．５０、３４．１２、３１．６４、２９．３４、２８．８４、２８．８２、２８．７３、２７．５１、２６．６０、２５．７６、２５．３６、２４．６９、２３．１１、２２．５７、１４．０５ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３４４６ｗ（νａｓ ＮＨ２）；１６１２ｗ（β ＮＨ２）；２８００ｍ、ｓｈ（νｓ Ｎ－ＣＨ２）；１７３６ｖｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２３６ｍ、１１６８ｓ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２４ｍ（νａｓ ＝ＣＨ）；１６７９ｗ（ν Ｃ＝Ｃ）；１４１９ｗ（ρ ＝ＣＨ）；２９５７ｓ（νａｓ ＣＨ３）；２９３１ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７３ｓ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｍ（δｓ ＣＨ３）；７２１ｗ（βａｓおよびγａｓ ＣＨ２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ４０Ｈ７７Ｏ４Ｎ２［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値６４９．５８７７９；実測値６４９．５８７６７。
【0120】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（８－（（Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル）オキシ－８－オキソオクチル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２１
リピドイド２１を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（３０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１９２ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．３１２ｍｌ、１．７９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン２０（２９０ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド２１（１８１ｍｇ、７４．９％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２９、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．５４、５．６３、５．５０、４．６１、３．２９、３．００、２．９８、２．３４、２．２９、２．２３、２．０８、１．９８、１．８９、１．７６、１．６０、１．５８５、１．４２、１．３８、１．３５、１．２８、１．２６、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２９、１７３．５３、１３５．４１、１２３．２７、６０．２５、５２．６２、５２．２７、４１．７２、３９．５７、３９．２０、３７．１２、３４．０９、３１．６４、２９．３４、２８．８５、２８．８２、２８．７４、２８．４４、２８．３７、２７．５１、２６．６３、２５．８３、２５．５６、２４．６７、２３．１１、２２．５７、１４．０６ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２１ｗ（ν ＮＨ）；１６４４ｍ（アミドＩ）；１５３５ｗ－ｍ（アミドＩＩ）；１７３６ｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２７６ｗ－ｍ、１１６６ｍ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２５ｗ（νａｓ ＝ＣＨ）；１４１９ｗ（ρ ＝ＣＨ）；２９５６ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９３０ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｗ－ｍ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１３３Ｈ２３９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２１６０．８１１８；実測値２１６０．８１６４。
リピドイド２１を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（３０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ＨＣＴＵ（１９２ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．３１２ｍｌ、１．７９ｍｍｏｌ、１６ｅｑ．）およびジアミン２０（２９０ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例１で化合物４ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド２１（１８１ｍｇ、７４．９％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２９、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．５４、５．６３、５．５０、４．６１、３．２９、３．００、２．９８、２．３４、２．２９、２．２３、２．０８、１．９８、１．８９、１．７６、１．６０、１．５８５、１．４２、１．３８、１．３５、１．２８、１．２６、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７７．２９、１７３．５３、１３５．４１、１２３．２７、６０．２５、５２．６２、５２．２７、４１．７２、３９．５７、３９．２０、３７．１２、３４．０９、３１．６４、２９．３４、２８．８５、２８．８２、２８．７４、２８．４４、２８．３７、２７．５１、２６．６３、２５．８３、２５．５６、２４．６７、２３．１１、２２．５７、１４．０６ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２１ｗ（ν ＮＨ）；１６４４ｍ（アミドＩ）；１５３５ｗ－ｍ（アミドＩＩ）；１７３６ｓ（ν Ｃ＝Ｏ）；１２７６ｗ－ｍ、１１６６ｍ（ν Ｃ－Ｏ）；３０２５ｗ（νａｓ ＝ＣＨ）；１４１９ｗ（ρ ＝ＣＨ）；２９５６ｓ、ｓｈ（νａｓ ＣＨ３）；２９３０ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）；２８５８ｓ（νｓ ＣＨ２）；２８７３ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）；１４６７ｍおよび１４５７ｍ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）；１３７８ｗ－ｍ（δｓ ＣＨ３）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１３３Ｈ２３９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２１６０．８１１８；実測値２１６０．８１６４。
【0121】
〔実施例１１〕
３，５，７－トリス（（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）カルバモイル）アダマンタン－１－カルボン酸２２
塩化チオニル（３００μｌ）およびＤＭＦ（２μｌ）をアダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボン酸（２１ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）に加え、懸濁液を密閉バイアル中、７０℃で２時間撹拌した；この間に懸濁液は透明な均一溶液になった。過剰のＳＯＣｌ２を乾燥窒素流で吹き飛ばし、残渣を真空中で乾燥し（１０分間）、ｒｔまで冷却した後、０．５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解して透明な溶液を形成した。次に、Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘキサン－１，６－ジアミン（７６ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（１１７μｌ、０．６７２ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）のＤＣＭ（１．５ｍｌ）およびＤＭＦ（０．５ｍｌ）混合溶液、ならびに反応混合物をｒｔで１０分間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３５～８５％で溶離）により精製して、標的化合物２２（４５ｍｇ、４１．４％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５０、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３２、３．２４、３．０５－２．９５、２．１６、１．９７、１．９２、１．８０－１．７２、１．５５、１．３８－１．２３、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．５２、５２．８９、５２．２０、４２．２８、３９．３９、３８．９６、３１．８９、２９．６０、２９．５０、２９．４４、２９．３２、２９．１０、２８．７２、２６．８３、２６．２３、２５．９９、２３．４７、２３．１４、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３１４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４３ｍ（アミドＩ）および１６３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５４ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍ、ｓｈおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；－ＣＯＯＨダイマー：２５９１ｗ、ｖｂｒ（ν ＯＨ）、１７１５ｗ（ν Ｃ＝Ｏ）、１４１１ｖｗおよび１２８３ｗ、ｂｒ（δ ＣＯＨおよびν ＣＣＯ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０４Ｈ２０３Ｎ６Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１６．５８１０；実測値１６１６．５８０１４。
３，５，７－トリス（（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）カルバモイル）アダマンタン－１－カルボン酸２２
塩化チオニル（３００μｌ）およびＤＭＦ（２μｌ）をアダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボン酸（２１ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）に加え、懸濁液を密閉バイアル中、７０℃で２時間撹拌した；この間に懸濁液は透明な均一溶液になった。過剰のＳＯＣｌ２を乾燥窒素流で吹き飛ばし、残渣を真空中で乾燥し（１０分間）、ｒｔまで冷却した後、０．５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解して透明な溶液を形成した。次に、Ｎ１，Ｎ１－ジドデシルヘキサン－１，６－ジアミン（７６ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（１１７μｌ、０．６７２ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）のＤＣＭ（１．５ｍｌ）およびＤＭＦ（０．５ｍｌ）混合溶液、ならびに反応混合物をｒｔで１０分間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３５～８５％で溶離）により精製して、標的化合物２２（４５ｍｇ、４１．４％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５０、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３２、３．２４、３．０５－２．９５、２．１６、１．９７、１．９２、１．８０－１．７２、１．５５、１．３８－１．２３、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．５２、５２．８９、５２．２０、４２．２８、３９．３９、３８．９６、３１．８９、２９．６０、２９．５０、２９．４４、２９．３２、２９．１０、２８．７２、２６．８３、２６．２３、２５．９９、２３．４７、２３．１４、２２．６６、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３１４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４３ｍ（アミドＩ）および１６３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５４ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍ、ｓｈおよび１４５７ｍ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）；－ＣＯＯＨダイマー：２５９１ｗ、ｖｂｒ（ν ＯＨ）、１７１５ｗ（ν Ｃ＝Ｏ）、１４１１ｖｗおよび１２８３ｗ、ｂｒ（δ ＣＯＨおよびν ＣＣＯ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０４Ｈ２０３Ｎ６Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１６．５８１０；実測値１６１６．５８０１４。
【0122】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボキサミド２３
ＤＭＦ（２μｌ）および塩化チオニル（２４μｌ、０．３４９ｍｍｏｌ、１４ｅｑ．）を、酸２２（２７ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．５ｍｌ）溶液に加え、懸濁液を密閉バイアル中、ｒｔで２時間撹拌した。次いで、溶液を無水ＮＨ３の穏やかな流れで５分間バブリングしたところ、白色沈殿が直ちに形成された。１０分後、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３０～７０％で溶離）により精製して、標的化合物２３（１５ｍｇ、５５．６％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５７、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．６９、６．４９、３．２１、２．６７、１．９９、１．９６、１．５７、１．５１、１．３３、１．２８５、１．２４５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７８．４１、１７５．７１、５３．４２、５３．０７、４２．３８、３９．５２、３９．４０、３９．１８、３１．８８、２９．６２、２９．６０、２９．５８、２９．５５、２９．３７、２９．３２、２９．０２、２７．２４、２６．５６、２６．２１、２２．６６、１４．０９ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３３０ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４９ｍ（アミドＩ）および１５３６ｗ（アミドＩＩ）、２９５３ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８７５ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、２８５５ｓおよび２８０５ｖｗ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍ、および１４５７ｗ、１４３８ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ２）；ｐｒｉｍ．アミド：３１９９ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ２ ｖａｚ．）、１６９７ｖｗ、ｓｈ（ν Ｃ＝Ｏ）、１６０５ｗ、ｓｈ（βｓ ＮＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０４Ｈ２０４Ｎ７Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１５．５９６９；実測値１６１５．５９９８。
ＤＭＦ（２μｌ）および塩化チオニル（２４μｌ、０．３４９ｍｍｏｌ、１４ｅｑ．）を、酸２２（２７ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．５ｍｌ）溶液に加え、懸濁液を密閉バイアル中、ｒｔで２時間撹拌した。次いで、溶液を無水ＮＨ３の穏やかな流れで５分間バブリングしたところ、白色沈殿が直ちに形成された。１０分後、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３０～７０％で溶離）により精製して、標的化合物２３（１５ｍｇ、５５．６％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５７、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．６９、６．４９、３．２１、２．６７、１．９９、１．９６、１．５７、１．５１、１．３３、１．２８５、１．２４５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７８．４１、１７５．７１、５３．４２、５３．０７、４２．３８、３９．５２、３９．４０、３９．１８、３１．８８、２９．６２、２９．６０、２９．５８、２９．５５、２９．３７、２９．３２、２９．０２、２７．２４、２６．５６、２６．２１、２２．６６、１４．０９ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３３０ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４９ｍ（アミドＩ）および１５３６ｗ（アミドＩＩ）、２９５３ｍ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８７５ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、２８５５ｓおよび２８０５ｖｗ（νｓ ＣＨ２）、１４６７ｍ、および１４５７ｗ、１４３８ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ２）；ｐｒｉｍ．アミド：３１９９ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ２ ｖａｚ．）、１６９７ｖｗ、ｓｈ（ν Ｃ＝Ｏ）、１６０５ｗ、ｓｈ（βｓ ＮＨ２）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０４Ｈ２０４Ｎ７Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６１５．５９６９；実測値１６１５．５９９８。
【0123】
〔実施例１２〕
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）－Ｎ７－（２－ヒドロキシエチル）アダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボキサミド２４
ＤＭＦ（２μｌ）および塩化チオニル（２０μｌ、０．２８６ｍｍｏｌ、１４ｅｑ．）を、酸２２（３３ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍｌ）溶液に加え、懸濁液を密閉バイアル中、ｒｔで１時間撹拌した。次いで、エタノールアミン（５０μｌ、０．８１６ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）を加えると、白色沈殿が直ちに形成された。２０分後、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３５～８５％で溶離）により精製して、標的化合物２４（３１ｍｇ、９１．５％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５９、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３９、６．９２、３．６９、３．３７、３．２２、３．００、２．０２、１．９６、１．７６、１．５３、１．４０－１．２２、０．８６ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．７６、１７６．１６、６１．７３、６１．３８、５２．７３、５２．１６、４３．１３、４２．５５、４２．４１、３９．５４、３９．４３、３８．７４、３１．８６、２９．５６、２９．４５、２９．４０、２９．２８、２９．０６、２８．６４、２６．７８、２５．９２、２５．６４、２３．３８、２３．０８、２２．６４、１４．０７ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４６ｍ（アミドＩ）および１５３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５５ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓおよび２８７６ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍ、１４５７ｍおよび１４３５ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、１０６０ｗ、ｖｂｒ、１０３６ｗ、ｂｒ（ν Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０６Ｈ２０８Ｎ７Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６５９．６２３１；実測値１６５９．６２７１８。
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）－Ｎ７－（２－ヒドロキシエチル）アダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボキサミド２４
ＤＭＦ（２μｌ）および塩化チオニル（２０μｌ、０．２８６ｍｍｏｌ、１４ｅｑ．）を、酸２２（３３ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍｌ）溶液に加え、懸濁液を密閉バイアル中、ｒｔで１時間撹拌した。次いで、エタノールアミン（５０μｌ、０．８１６ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）を加えると、白色沈殿が直ちに形成された。２０分後、反応混合物をセライトパッドで濾過し、濾液をシリカ（１０ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、３５～８５％で溶離）により精製して、標的化合物２４（３１ｍｇ、９１．５％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５９、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３９、６．９２、３．６９、３．３７、３．２２、３．００、２．０２、１．９６、１．７６、１．５３、１．４０－１．２２、０．８６ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．７６、１７６．１６、６１．７３、６１．３８、５２．７３、５２．１６、４３．１３、４２．５５、４２．４１、３９．５４、３９．４３、３８．７４、３１．８６、２９．５６、２９．４５、２９．４０、２９．２８、２９．０６、２８．６４、２６．７８、２５．９２、２５．６４、２３．３８、２３．０８、２２．６４、１４．０７ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４６ｍ（アミドＩ）および１５３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５５ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓおよび２８７６ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍ、１４５７ｍおよび１４３５ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、１０６０ｗ、ｖｂｒ、１０３６ｗ、ｂｒ（ν Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０６Ｈ２０８Ｎ７Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６５９．６２３１；実測値１６５９．６２７１８。
【0124】
〔実施例１３〕
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）－Ｎ７－（１．３－ジヒドロキシプロパン－２－イル）アダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボキサミド２５
２４について概説した手順に従って、標的化合物２５を、酸２２（５１ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）およびセリノール（１１５ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）から調製して、リピドイド２５を濃い淡黄色の油として得た（１９ｍｇ、３５．６％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５９）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．７９、７．２１、７．１７、７．０８、３．２６、３．０１、２．０３、１．９２、１．７７５、１．５７、１．３８５、１．３３、１．２８－１．２４ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．１４、１７５．０４、５２．７４、５２．６６、５２．３２、５２．１７、３９．２８－３８．６５、３１．８９、２９．６８、２９．５９、２９．４９、２９．４３、２９．３２、２９．０９、２８．４７、２６．８３、２６．８０、２５．９８－２５．４０、２３．０５、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４６ｍ（アミドＩ）および１５３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５５ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓおよび２８７６ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍ、１４５７ｍおよび１４３５ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、１０６０ｗ、ｖｂｒ、１０３６ｗ、ｂｒ（ν Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０７Ｈ２１０Ｎ７Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６８９．６３３７；実測値１６１６．６３２３５。
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ジドデシルアミノ）ヘキシル）－Ｎ７－（１．３－ジヒドロキシプロパン－２－イル）アダマンタン－１，３，５，７－テトラカルボキサミド２５
２４について概説した手順に従って、標的化合物２５を、酸２２（５１ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）およびセリノール（１１５ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、４０ｅｑ．）から調製して、リピドイド２５を濃い淡黄色の油として得た（１９ｍｇ、３５．６％；Ｄ２／３中のＲｆ ０．５９）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝７．７９、７．２１、７．１７、７．０８、３．２６、３．０１、２．０３、１．９２、１．７７５、１．５７、１．３８５、１．３３、１．２８－１．２４ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．１４、１７５．０４、５２．７４、５２．６６、５２．３２、５２．１７、３９．２８－３８．６５、３１．８９、２９．６８、２９．５９、２９．４９、２９．４３、２９．３２、２９．０９、２８．４７、２６．８３、２６．８０、２５．９８－２５．４０、２３．０５、２２．６７、１４．１０ｐｐｍ。ＩＲ（ＣＣｌ４）：νｍａｘ／ｃｍ－１＝３３２４ｗ、ｂｒ（ν ＮＨ）、１６４６ｍ（アミドＩ）および１５３８ｗ（アミドＩＩ）、２９５５ｓ（νａｓ ＣＨ３）、２９２７ｖｓ（νａｓ ＣＨ２）、２８５５ｓおよび２８７６ｍ、ｓｈ（νｓ ＣＨ３）、１４６７ｍ、１４５７ｍおよび１４３５ｗ、ｓｈ（βｓ ＣＨ２およびδａｓ ＣＨ３）、１３７８ｗ（δｓ ＣＨ３）、１０６０ｗ、ｖｂｒ、１０３６ｗ、ｂｒ（ν Ｃ－ＯＨ）。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０７Ｈ２１０Ｎ７Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６８９．６３３７；実測値１６１６．６３２３５。
【0125】
〔実施例１４〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ａ
ジイソプロピルカルボジイミド（３．１７ｍｌ、２０．２４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５７．１ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）を、４－ブロモ酪酸（２．６０ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）および１－ヘプタノール（２．６４ｍｌ、１８．６８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）のＤＣＭ（６０ｍｌ）溶液に加え、混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（８０ｇ、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配、０～１０％で溶離）によって精製して、標的化合物２６ａ（３．９１６ｇ、９４．８％；ＣＥ５中のＲｆ ０．３６、ＫＭｎＯ４による可視化）を無色の油として得た。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ａ
ジイソプロピルカルボジイミド（３．１７ｍｌ、２０．２４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５７．１ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）を、４－ブロモ酪酸（２．６０ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）および１－ヘプタノール（２．６４ｍｌ、１８．６８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）のＤＣＭ（６０ｍｌ）溶液に加え、混合物をｒｔで１時間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（８０ｇ、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配、０～１０％で溶離）によって精製して、標的化合物２６ａ（３．９１６ｇ、９４．８％；ＣＥ５中のＲｆ ０．３６、ＫＭｎＯ４による可視化）を無色の油として得た。
【0126】
ブロモエステル２６ａ（１．５３ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）および炭酸カリウム（３．１９ｇ、２３．１１ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）を、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．５０ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１０ｍｌ）溶液に加え、混合物を３５℃で３日間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ、シクロヘキサン中の酢酸エチルの直線勾配、０～１００％で溶離）により精製して、標的化合物２７ａ（１．０９３ｇ、８０．９％；ＮＨ３で前処理したＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．３５、ニンヒドリンによる可視化）を淡黄色の油として得た。
【0127】
アミン２７ａの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ａ（０．８１７ｇ、９０．２％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２７、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、３．６３、３．２１、３．１５、２．９１、２．８５、２．６７、２．５３－２．４１、２．３２、１．８６、１．７６、１．６１、１．４６、１．３５－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．６６、６４．５８、５３．６６、５２．９８、５２．８７、４０．７８、４０．３４、３１．８７、３１．７０、３０．１０、２８．９０、２８．６２、２６．８５、２６．４５、２５．８７、２２．５６、２２．０２、１４．０４ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２８Ｈ５７Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４８５．４３１２８；実測値４８５．４３０３９。
【0128】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ａ
塩化チオニル（３００μｌ）およびＤＭＦ（２μｌ）をアダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（６０ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）に加え、懸濁液を密閉バイアル中、７０℃で１時間撹拌した；この間、懸濁液は透明な均一溶液に変化した。過剰のＳＯＣｌ２を乾燥窒素流で吹き飛ばし、残渣を真空中で乾燥し（１０分間）、ｒｔまで冷却した後、０．５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解して透明な溶液を形成した。次いで、アミン２８ａ（４３４ｍｇ、０．８９５ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３９０μｌ、２．２４ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）の、ＤＣＭ（１．５ｍｌ）およびＤＭＦ（０．５ｍｌ）混合溶液を、ｒｔで１０分間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、２０～６０％で溶離）により精製して、標的化合物２９ａ（１１５ｍｇ、３０．８％；Ｄ２中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７６、４．０５、３．２１、２．４２、２．３２、２．０１、１．８４、１．８０、１．７４、１．６１、１．４７、１．４１、１．３４－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０１、１７３．７３、６４．５３、５３．７２、５３．００、４１．６５、３９．７７、３９．４８、３７．８８、３１．９６、３１．７０、２９．５１、２８．９０、２８．６３、２７．０２、２６．７６、２５．８７、２２．５６、１４．０５ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．３４２３；実測値１６６８．３３９８。
塩化チオニル（３００μｌ）およびＤＭＦ（２μｌ）をアダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（６０ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）に加え、懸濁液を密閉バイアル中、７０℃で１時間撹拌した；この間、懸濁液は透明な均一溶液に変化した。過剰のＳＯＣｌ２を乾燥窒素流で吹き飛ばし、残渣を真空中で乾燥し（１０分間）、ｒｔまで冷却した後、０．５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解して透明な溶液を形成した。次いで、アミン２８ａ（４３４ｍｇ、０．８９５ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３９０μｌ、２．２４ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）の、ＤＣＭ（１．５ｍｌ）およびＤＭＦ（０．５ｍｌ）混合溶液を、ｒｔで１０分間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、２０～６０％で溶離）により精製して、標的化合物２９ａ（１１５ｍｇ、３０．８％；Ｄ２中のＲｆ ０．５１、ニンヒドリンによる可視化）を濃い淡黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７６、４．０５、３．２１、２．４２、２．３２、２．０１、１．８４、１．８０、１．７４、１．６１、１．４７、１．４１、１．３４－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０１、１７３．７３、６４．５３、５３．７２、５３．００、４１．６５、３９．７７、３９．４８、３７．８８、３１．９６、３１．７０、２９．５１、２８．９０、２８．６３、２７．０２、２６．７６、２５．８７、２２．５６、１４．０５ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．３４２３；実測値１６６８．３３９８。
【0129】
〔実施例１５〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｂ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｂを、５－ブロモペンタン酸（３．０ｇ、１６．５７ｍｍｏｌ）、１－ヘキサノール（２．４８ｍｌ、１９．８９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．３７ｍｌ、２１．５４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６１ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｂを無色の油として得た（３．９３８ｇ、８９．６％、ＣＥ５中のＲｆ ０．２８、ＫＭｎＯ４による可視化）。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｂ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｂを、５－ブロモペンタン酸（３．０ｇ、１６．５７ｍｍｏｌ）、１－ヘキサノール（２．４８ｍｌ、１９．８９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．３７ｍｌ、２１．５４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６１ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｂを無色の油として得た（３．９３８ｇ、８９．６％、ＣＥ５中のＲｆ ０．２８、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0130】
２７ａについて概説した手順に従って、Ｂｏｃ誘導体２７ｂを、ブロモエステル２６ｂ（１．５３ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．５０ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．１９ｇ、２３．１１ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２７ｂを淡黄色の油として得た（１．０８０ｇ、７９．９％、ＮＨ３で前処理したＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．３０、ニンヒドリンによる可視化）。
【0131】
アミン２７ｂの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ｂ（０．７８８ｇ、８６．９％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．１３、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、３．６３、３．２１、３．１５、２．７９、２．６８、２．６０、２．５１、２．４２、２．３２、１．６１、１．５０、１．３６－１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ １７３．６２、６４．５２、５３．６８、５３．２９、４１．２２、４０．２６、３４．０３、３１．４１、２８．５８、２５．７５、２５．５７、２２．８０、２２．５１、１３．９８ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２８Ｈ５７Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４８５．４３１２８；実測値４８５．４３０５２。
【0132】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ｂ
実施例１４の２９ａについて概説した手順に従い、リピドイド２９ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５３ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）、アミン２８ｂ（３８３ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３４４μｌ、１．９８ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｂを濃い淡黄色の油として得た（１９１ｍｇ、５７．９％、Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．３８、２．３５、２．３０、２．０１、１．８３、１．８０、１．６１、１．４４、１．４０、１．３５－１．２７、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９６、１７３．７７、６４．４４、５３．９８、５３．６３、４１．６４、３９．７３、３９．５５、３７．９２、３４．２７、３１．４２、２９．５９、２８．６０、２７．２２、２６．８９、２６．６３、２５．５８、２３．０１、２２．５２、１３．９９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．３４２８；実測値１６６８．３４１８。
実施例１４の２９ａについて概説した手順に従い、リピドイド２９ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５３ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）、アミン２８ｂ（３８３ｍｇ、０．７９０ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３４４μｌ、１．９８ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｂを濃い淡黄色の油として得た（１９１ｍｇ、５７．９％、Ｄ２中のＲｆ ０．４８、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．３８、２．３５、２．３０、２．０１、１．８３、１．８０、１．６１、１．４４、１．４０、１．３５－１．２７、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９６、１７３．７７、６４．４４、５３．９８、５３．６３、４１．６４、３９．７３、３９．５５、３７．９２、３４．２７、３１．４２、２９．５９、２８．６０、２７．２２、２６．８９、２６．６３、２５．５８、２３．０１、２２．５２、１３．９９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７９Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６６８．３４２８；実測値１６６８．３４１８。
【0133】
〔実施例１６〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ノニルオキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｃ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｃを、４－ブロモ酪酸（２．６０ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）、１－ノナノール（３．２６ｍｌ、１８．６８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．１７ｍｌ、２０．２４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５７ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｃを無色の油として得た（４．０２５ｇ、８８．２％、ＣＥ５中のＲｆ ０．３２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ノニルオキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｃ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｃを、４－ブロモ酪酸（２．６０ｇ、１５．５７ｍｍｏｌ）、１－ノナノール（３．２６ｍｌ、１８．６８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．１７ｍｌ、２０．２４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５７ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｃを無色の油として得た（４．０２５ｇ、８８．２％、ＣＥ５中のＲｆ ０．３２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0134】
２７ａについて概説した手順に従って、Ｂｏｃ誘導体２７ｃを、ブロモエステル２６ｃ（１．２５ｇ、４．２８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．３７０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２．３６ｇ、１７．１０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２７ｃを淡黄色の油として得た（０．８４８ｇ、７７．３％、ＮＨ３で前処理されたＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．４５、ニンヒドリンによる可視化）。
【0135】
アミン２７ｃの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ｃ（０．６３１ｇ、８８．２％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２９、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．６６、４．０５、３．１６、２．９１、２．６３、２．５９、２．５３、２．４８、２．３４、１．８１、１．７０、１．６１、１．５４、１．４７、１．４２、１．３５－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．３９、６４．７２、６４．６６、５２．５３、３１．８４、３１．５９、２９．４６、２９．２５、２９．２２、２８．６１、２８．６０、２５．９１、２５．９０、２２．６４、１４．０８ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３２Ｈ６５Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値５４１．４９３８８；実測値５４１．４９３０３。
【0136】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（ノニルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ｃ
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４２ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）、アミン２８ｃ（３３９ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（２７３μｌ、１．５７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｃを濃い淡黄色の油として得た（１３４ｍｇ、４６．６％、Ｄ２中のＲｆ ０．５６、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．４０、２．３６、２．３１、２．０１、１．８３、１．８０、１．７２、１．６１、１．４７、１．３８、１．３３－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９６、１７３．８４、６４．４８、５３．８０、５３．１２、４１．６５、３９．７４、３９．５４、３７．９２、３２．０６、３１．８４、２９．４７、２９．２６、２９．２２、２８．６４、２５．９２、２２．６４、１４．０９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０６；実測値８３６．５３１９。
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（４２ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）、アミン２８ｃ（３３９ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（２７３μｌ、１．５７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｃを濃い淡黄色の油として得た（１３４ｍｇ、４６．６％、Ｄ２中のＲｆ ０．５６、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．４０、２．３６、２．３１、２．０１、１．８３、１．８０、１．７２、１．６１、１．４７、１．３８、１．３３－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９６、１７３．８４、６４．４８、５３．８０、５３．１２、４１．６５、３９．７４、３９．５４、３７．９２、３２．０６、３１．８４、２９．４７、２９．２６、２９．２２、２８．６４、２５．９２、２２．６４、１４．０９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０６；実測値８３６．５３１９。
【0137】
〔実施例１７〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｄ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｄを、５－ブロモペンタン酸（３．０ｇ、１６．５７ｍｍｏｌ）、１－オクタノール（３．１３ｍｌ、１９．８９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．３７ｍｌ、２１．５４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６１ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｄを無色の油として得た（４．３２７ｇ、８９．０％、ＣＥ５中のＲｆ ０．３２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｄ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｄを、５－ブロモペンタン酸（３．０ｇ、１６．５７ｍｍｏｌ）、１－オクタノール（３．１３ｍｌ、１９．８９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．３７ｍｌ、２１．５４ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６１ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｄを無色の油として得た（４．３２７ｇ、８９．０％、ＣＥ５中のＲｆ ０．３２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0138】
２７ａについて概説した手順に従い、Ｂｏｃ誘導体２７ｄを、ブロモエステル２６ｄ（１．７３ｇ、５．８９ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．５１０ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．２６ｇ、２３．５８ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２７ｄを淡黄色の油として得た（１．２４１ｇ、８２．１％、ＮＨ３で前処理されたＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．１８、ニンヒドリンによる可視化）。
【0139】
アミン２７ｄの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ｄ（１．０９ｇ、定量的；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２２、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．２２、４．８６、４．０５、３．０４、２．３７、１．７５、１．６７、１．６１、１．４８、１．４０、１．３２－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７２．９９、６４．８５、５２．４４、５１．９０、３９．４１、３３．１３、３１．７５、２９．１８、２９．１４、２８．５４、２６．５４、２５．８６、２５．４９、２４．８８、２２．６０、２１．８３、１４．０５ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３２Ｈ６５Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値５４１．４９３８８；実測値５４１．４９２９７。
【0140】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ｄ
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従い、リピドイド２９ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（７０ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）、アミン２８ｄ（５６５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（４５５μｌ、２．６１ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２９ｄを濃い淡黄色の油として得た（２２９ｍｇ、４７．８％、Ｄ２中のＲｆ ０．５８、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７９、４．０５、３．２１、２．４４、２．３１、２．０１、１．８４、１．８０、１．６１、１．４７、１．３４－１．２４、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０３、１７３．６３、６４．５０、５３．５４、４１．６５、３９．７７、３９．４５、３７．８８、３４．１２、３１．７６、２９．４８、２９．２０、２９．１６、２８．６３、２５．９１、２２．８７、２２．６１、１４．０７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０１０；実測値１８３６．５２９５９。
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従い、リピドイド２９ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（７０ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）、アミン２８ｄ（５６５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（４５５μｌ、２．６１ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２９ｄを濃い淡黄色の油として得た（２２９ｍｇ、４７．８％、Ｄ２中のＲｆ ０．５８、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７９、４．０５、３．２１、２．４４、２．３１、２．０１、１．８４、１．８０、１．６１、１．４７、１．３４－１．２４、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０３、１７３．６３、６４．５０、５３．５４、４１．６５、３９．７７、３９．４５、３７．８８、３４．１２、３１．７６、２９．４８、２９．２０、２９．１６、２８．６３、２５．９１、２２．８７、２２．６１、１４．０７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０１０；実測値１８３６．５２９５９。
【0141】
〔実施例１８〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）ペンチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｅ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｅを、６－ブロモヘキサン酸（３．０ｇ、１５．３８ｍｍｏｌ）、１－ヘプタノール（２．６１ｍｌ、１８．４６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．１３ｍｌ、１９．９９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５６ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｅを無色の油として得た（４．１７７ｇ、９２．６％、ＣＥ５中のＲｆ ０．２７、ＫＭｎＯ４による可視化）。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）ペンチル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｅ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｅを、６－ブロモヘキサン酸（３．０ｇ、１５．３８ｍｍｏｌ）、１－ヘプタノール（２．６１ｍｌ、１８．４６ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．１３ｍｌ、１９．９９ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（５６ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製して、２６ｅを無色の油として得た（４．１７７ｇ、９２．６％、ＣＥ５中のＲｆ ０．２７、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0142】
２７ａについて概説した手順に従って、Ｂｏｃ誘導体２７ｅを、ブロモエステル２６ｅ（１．４９ｇ、５．０８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．４４０ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２．８１ｇ、２０．３４ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２７ｅを淡黄色の油として得た（１．０７６ｇ、８２．５％、ＮＨ３で前処理されたＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．１５、ニンヒドリンによる可視化）。
【0143】
アミン２７ｅの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ｅ（０．８９５ｇ、９８．６％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．１７、ニンヒドリンでの検出）を黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．４０、４．０４、３．０４、２．９９、２．３１、２．０５、１．７２、１．６６、１．６１、１．４８、１．３９、１．３３－１．２６、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．３８、６４．６４、５２．０２、３３．７８、３１．６８、２８．８８、２８．５８、２６．７０、２６．２５、２６．１３、２５．８３、２５．６８、２４．９３、２４．２０、２２．９９、２２．５５、２２．４８、１４．０３ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３２Ｈ６５Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値５４１．４９３８８；実測値５４１．４９３０３。
【0144】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（ヘプチルオキシカルボニル）ペンチル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ｅ
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｅを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５５ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）、アミン２８ｅ（４４４ｍｇ、０．８２０ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３５７μｌ、２．０５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２９ｅを濃い淡黄色の油として得た（１５０ｍｇ、３９．８％、Ｄ２中のＲｆ ０．３７、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．３７、２．２９、２．０１、１．８３、１．８０、１．６２、１．４７、１．４２、１．３３－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９７、１７３．８４、６４．４２、５３．９６、４１．６４、３９．７４、３９．５３、３７．９１、３４．３５、３１．７０、２９．５９、２８．８９、２８．６３、２７．１４、２５．８７、２４．９７、２２．５６、１４．０５ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０１０；実測値１８３６．５２９３０。
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｅを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５５ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）、アミン２８ｅ（４４４ｍｇ、０．８２０ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３５７μｌ、２．０５ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２９ｅを濃い淡黄色の油として得た（１５０ｍｇ、３９．８％、Ｄ２中のＲｆ ０．３７、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝５．７２、４．０５、３．２１、２．３７、２．２９、２．０１、１．８３、１．８０、１．６２、１．４７、１．４２、１．３３－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７５．９７、１７３．８４、６４．４２、５３．９６、４１．６４、３９．７４、３９．５３、３７．９１、３４．３５、３１．７０、２９．５９、２８．８９、２８．６３、２７．１４、２５．８７、２４．９７、２２．５６、１４．０５ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２０３Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１８３６．５３０１０；実測値１８３６．５２９３０。
【0145】
〔実施例１９〕
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（（ノナン－３－イル）オキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｆ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｆを、６－ブロモヘキサン酸（３．２ｇ、１６．４１ｍｍｏｌ）、３－ノナノール（２．６０ｇ、１８．０５ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．２７ｍｌ、２１．３３ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６０ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製し、２６ｆを無色の油として得た（２．８８ｇ、５４．５％、ＣＥ５中のＲｆ ０．４２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
Ｎ１，Ｎ１－ジ（（（ノナン－３－イル）オキシカルボニル）プロピル）ヘキサン－１，６－ジアミン２８ｆ
２６ａについて概説した手順に従って、ブロモエステル２６ｆを、６－ブロモヘキサン酸（３．２ｇ、１６．４１ｍｍｏｌ）、３－ノナノール（２．６０ｇ、１８．０５ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）、ＤＩＣ（３．２７ｍｌ、２１．３３ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（６０ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、０．０３ｅｑ．）から調製し、２６ｆを無色の油として得た（２．８８ｇ、５４．５％、ＣＥ５中のＲｆ ０．４２、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0146】
２７ａについて概説した手順に従って、Ｂｏｃ誘導体２７ｆを、ブロモエステル２６ｆ（２．８２ｇ、８．７８ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）、Ｎ－Ｂｏｃ－１，６－ジアミノヘキサン（０．７６０ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４．８６ｇ、３５．１３ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、２７ｆを淡黄色の油として得た（１．７２ｇ、７０．１９％、ＮＨ３で前処理されたＴＬＣプレート上のＣＥ５０中のＲｆ ０．５６、ニンヒドリンによる可視化）。
【0147】
アミン２７ｆの脱保護を、実施例１で化合物２ａについて記載した手順に従って行った；ジアミン２８ｆ（１．８４ｇ、定量的；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．２５、ニンヒドリンでの検出）を、黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝８．２９、４．８０、２．９９、２．３０５、１．６９－１．６６、１．５５－１．５１、１．４４５、１．３８、１．２８－１．２４、０．８７、０．８６ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．１４、７５．６１、５２．１０、３９．２７、３４．０８、３３．５６、３１．７１、２９．１５、２６．９０、２６．７４、２６．１４、２５．６９、２５．２７、２４．８６、２４．３３、２２．９７、２２．５６、２２．５１、１４．０３、９．５７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ３６Ｈ７３Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値５９７．５５６４９；実測値５９７．５５６３１。
【0148】
Ｎ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（６－（ビス（（（ノナン－３イル）オキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキサミド２９ｆ
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｆを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）、アミン２８ｆ（３３４ｍｇ、７４６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３２５μｌ、１．８６ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｆを濃い淡黄色の油として得た（２３７ｍｇ、６３．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．４４、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．３８５、４．７９、３．２１、２．９９、２．３０５、２．０１５、１．８８、１．８０、１．７３、１．６６、１．５５－１．５０、１．３８－１．３５、１．２７－１．２４、０．８６５、０．８５５ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．５７、１７３．０２、７６．５８、５２．４３、５１．９８、４１．６９、３９．８９、３８．８９、３７．６４、３４．０９、３３．５５、３１．７０、２９．１４、２８．８４、２６．９０、２６．２８、２６．０１、２５．７８、２４．３９、２３．１３、２２．９６、２２．５５、１４．０４、９．５９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１２１Ｈ２２７Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２００４．７１７９；実測値２００４．７１８７。
実施例１４で２９ａについて概説した手順に従って、リピドイド２９ｆを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）、アミン２８ｆ（３３４ｍｇ、７４６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（３２５μｌ、１．８６ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、２９ｆを濃い淡黄色の油として得た（２３７ｍｇ、６３．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．４４、ニンヒドリンによる可視化）。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝６．３８５、４．７９、３．２１、２．９９、２．３０５、２．０１５、１．８８、１．８０、１．７３、１．６６、１．５５－１．５０、１．３８－１．３５、１．２７－１．２４、０．８６５、０．８５５ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．５７、１７３．０２、７６．５８、５２．４３、５１．９８、４１．６９、３９．８９、３８．８９、３７．６４、３４．０９、３３．５５、３１．７０、２９．１４、２８．８４、２６．９０、２６．２８、２６．０１、２５．７８、２４．３９、２３．１３、２２．９６、２２．５５、１４．０４、９．５９ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１２１Ｈ２２７Ｎ６Ｏ１５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値２００４．７１７９；実測値２００４．７１８７。
【0149】
〔実施例２０〕
６－（ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ａ
ブロモエステル２６ａ（１．１３ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）および炭酸カリウム（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）を、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１０ｍｌ）溶液に加え、混合物を５０℃で２０時間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、０～５０％で溶離）により精製して、標的化合物３０ａ（０．５５２ｇ、６３．０％；Ｄ２中のＲｆ ０．５６、ＫＭｎＯ４による可視化）を淡黄色の油として得た。
６－（ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ａ
ブロモエステル２６ａ（１．１３ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）および炭酸カリウム（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）を、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（１０ｍｌ）溶液に加え、混合物を５０℃で２０時間撹拌した。次いで、反応混合物をシリカ（１６ｇ）に吸着させ、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇ、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配、０～５０％で溶離）により精製して、標的化合物３０ａ（０．５５２ｇ、６３．０％；Ｄ２中のＲｆ ０．５６、ＫＭｎＯ４による可視化）を淡黄色の油として得た。
【0150】
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、３．６３、２．５２、２．３３、１．８０、１．６１、１．５６５、１．５０、１．３７５、１．３２－１．２７、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．５４、６４．６３、５３．４５、５２．８２、３２．５９、３１．７８、３１．６９、２８．８９、２８．６０、２６．９５、２５．８６、２５．４５、２２．５５、２１．７８、１４．０３ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃ２８Ｈ５６ＮＯ５［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値４８６．４１５３０；実測値４８６．４１４６７。
【0151】
トリス（６－（ジ（（ヘプチルオキシカルボニル）プロピル）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキシラート３１ａ
テトラメチルフルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスファート（ＴＦＦＨ、１６９ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（０．５０６ｍｌ、２．９１ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５２ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液に加え、溶液を０℃で３０分間撹拌した。次に、アルコール３０ａ（３１１ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（７ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）のＤＭＦ（２．０ｍｌ）溶液を加え、反応混合物をｒｔで１２時間撹拌した。溶液を２５０ｍｌの分液フラスコに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）で希釈し、生成物をジエチルエーテル（１００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（０～６５％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。リピドイド３１ａ（３３ｍｇ、１０．３％；移動相Ｄ４中のＲｆ ０．５７、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．４０、２．０５－１．９４、１．８３、１．６１、１．３５－１．２５、０．８８６ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０２、６４．９５、６４．４５、４１．３５、３９．１４、３７．１４、３１．６７、２８．８７、２８．５５、２５．８３、２２．５４、１４．０３ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７６Ｎ３Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６７１．２９４３；実測値１６７１．２９７３。
テトラメチルフルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスファート（ＴＦＦＨ、１６９ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）およびＤＩＰＥＡ（０．５０６ｍｌ、２．９１ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）を、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（５２ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液に加え、溶液を０℃で３０分間撹拌した。次に、アルコール３０ａ（３１１ｍｇ、０．６４０ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）およびＤＭＡＰ（７ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）のＤＭＦ（２．０ｍｌ）溶液を加え、反応混合物をｒｔで１２時間撹拌した。溶液を２５０ｍｌの分液フラスコに注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍｌ）で希釈し、生成物をジエチルエーテル（１００ｍｌ、２×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、Ｓ２フリットを通して濾過し、溶媒をＲＶＥ中で蒸発させた。粗生成物を、ＤＣＭ中のＤ１の直線勾配（０～６５％）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。リピドイド３１ａ（３３ｍｇ、１０．３％；移動相Ｄ４中のＲｆ ０．５７、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色がかった油の形態で得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．４０、２．０５－１．９４、１．８３、１．６１、１．３５－１．２５、０．８８６ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０２、６４．９５、６４．４５、４１．３５、３９．１４、３７．１４、３１．６７、２８．８７、２８．５５、２５．８３、２２．５４、１４．０３ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７６Ｎ３Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６７１．２９４３；実測値１６７１．２９７３。
【0152】
〔実施例２１〕
６－（ジ（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｂ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｂを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｂ（１．１３ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、３０ｂを淡黄色の油として得た（０．５９９ｇ、７２．３％、Ｄ２中のＲｆ ０．５５、ＫＭｎＯ４による可視化）。
６－（ジ（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｂ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｂを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｂ（１．１３ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、３０ｂを淡黄色の油として得た（０．５９９ｇ、７２．３％、Ｄ２中のＲｆ ０．５５、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0153】
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０４、３．６３、２．４６、２．３２、１．７６、１．６０、１．５６、１．４５、１．３７－１．２５、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．６９、６４．５６、６２．７９、５３．５７、５２．９６、３２．６４、３１．９０、３１．８２、２９．４５、２９．２４、２９．２１、２８．６１、２７．０２、２５．９１、２５．５１、２２．６３、１４．０７ｐｐｍ。
【0154】
トリス（６－（ジ（（ヘキシルオキシカルボニル）ブチル）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキシラート３１ｂ
リピドイド３１ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８４ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７３ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８１８ｍｌ、４．１７９ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｂ（６０８ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｂ（５５ｍｇ、１０．４％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．７４、ニンヒドリンでの検出）を粘性の黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．９６、２．３７、２．３３、２．０１、１．９４、１．８５－１．７８、１．６６、１．６０、１．３８、１．３４－１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０１、１７２．９０、６４．７６－６４．３４、５２．１６、４７．８１、４６．６１、４１．３５、３９．１４、３７．１２、３３．２２、３１．３８、２８．５３、２５．５４、２２．５０、２２．０９、１３．９７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７６Ｎ３Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６７１．２９４３；実測値１６７１．２９１０。
リピドイド３１ｂを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８４ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７３ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８１８ｍｌ、４．１７９ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｂ（６０８ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｂ（５５ｍｇ、１０．４％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．７４、ニンヒドリンでの検出）を粘性の黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．９６、２．３７、２．３３、２．０１、１．９４、１．８５－１．７８、１．６６、１．６０、１．３８、１．３４－１．２８、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０１、１７２．９０、６４．７６－６４．３４、５２．１６、４７．８１、４６．６１、４１．３５、３９．１４、３７．１２、３３．２２、３１．３８、２８．５３、２５．５４、２２．５０、２２．０９、１３．９７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ９７Ｈ１７６Ｎ３Ｏ１８［Ｍ＋Ｈ］＋に対する計算値１６７１．２９４３；実測値１６７１．２９１０。
【0155】
〔実施例２２〕
６－（ジ（（ノニルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｃ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｃを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｃ（１．２５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、３０ｃを淡黄色の油として得た（０．６５１ｇ、７０．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．５９、ＫＭｎＯ４による可視化）。
６－（ジ（（ノニルオキシカルボニル）プロピル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｃ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｃを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｃ（１．２５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製し、３０ｃを淡黄色の油として得た（０．６５１ｇ、７０．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．５９、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0156】
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０７、３．６５、３．０９、３．０３、２．４５、２．１６、１．８９、１．６１、１．５６、１．４５、１．３４－１．２５、０．８８ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７２．２４、６５．２５、６２．３９、５２．４１、５１．５５、３２．１１、３１．８４、３０．６５、２９．４５、２９．２２、２８．５４、２６．２９、２５．８７、２２．６５、１８．３９、１４．０９ｐｐｍ。
【0157】
トリス（６－（ジ（（ノニルオキシカルボニル）プロピル））ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキシラート３１ｃ
リピドイド３１ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８６ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７９ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８３８ｍｌ、４．８１ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１２ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｃ（６９５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｃ（２３ｍｇ、３．９％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．９１、ニンヒドリンでの検出）を粘性の黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．３７、２．０１、１．９５、１．８３、１．６１、１．３５－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０２、６４．７０、４１．３５、３９．１５、３７．１５、３１．８２、２９．４４、２９．２３、２９．２０、２８．５８、２８．４７、２５．８８、２２．６３、１４．０７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２００Ｎ３Ｏ１８［Ｍ］＋に対する計算値１８３９．４８２１；実測値１８３９．４７９９。
リピドイド３１ｃを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８６ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７９ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８３８ｍｌ、４．８１ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１２ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｃ（６９５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｃ（２３ｍｇ、３．９％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．９１、ニンヒドリンでの検出）を粘性の黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．３７、２．０１、１．９５、１．８３、１．６１、１．３５－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０２、６４．７０、４１．３５、３９．１５、３７．１５、３１．８２、２９．４４、２９．２３、２９．２０、２８．５８、２８．４７、２５．８８、２２．６３、１４．０７ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２００Ｎ３Ｏ１８［Ｍ］＋に対する計算値１８３９．４８２１；実測値１８３９．４７９９。
【0158】
〔実施例２３〕
６－（ジ（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｄ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｄを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｄ（１．２５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、３０ｄを淡黄色の油として得た（０．６２３ｇ、６７．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．５０、ＫＭｎＯ４による可視化）。
６－（ジ（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）アミノ）ヘキサン－１－オール３０ｄ
３０ａについて概説した手順に従って、アルコール３０ｄを、６－アミノヘキサン－１－オール（０．２０ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ブロモエステル２６ｄ（１．２５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ．）およびＫ２ＣＯ３（２．３６ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ、１０ｅｑ．）から調製して、３０ｄを淡黄色の油として得た（０．６２３ｇ、６７．４％、Ｄ２中のＲｆ ０．５０、ＫＭｎＯ４による可視化）。
【0159】
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、３．６３、２．４７、２．３１、１．６１、１．５６、１．５０、１．３７－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７３．６５、６４．５２、６２．７８、５３．６９、５３．４２、３４．０７、３２．６０、３１．７５、２９．１９、２９．１５、２８．６１、２７．０５、２５．９０、２５．４９、２２．８５、２２．６１、１４．０６ｐｐｍ。
【0160】
トリス（６－（ジ（（オクチルオキシカルボニル）ブチル）ヘキシル）アダマンタン－１，３，５－トリカルボキシラート３１ｄ
リピドイド３１ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８３ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８０８ｍｌ、４．６４ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｄ（６７１ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｄ（１４７ｍｇ、２５．８％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．８２、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．３４、２．０１、１．９５、１．８３、１．７８－１．５６、１．３６－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０４、６４．７６－６４．４６、４１．３６、３９．１６、３７．１５、３１．７５、２９．１９、２９．１５、２８．６０、２５．９０、２２．６１、１４．０６ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２００Ｎ３Ｏ１８［Ｍ］＋に対する計算値１８３９．４８２１；実測値１８３９．４７９２。
リピドイド３１ｄを、アダマンタン－１，３，５－トリカルボン酸（８３ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（２７０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、３．３ｅｑ．）、ＤＩＰＥＡ（０．８０８ｍｌ、４．６４ｍｍｏｌ、１５ｅｑ．）、ＤＭＡＰ（１１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ．）およびアルコール３０ｄ（６７１ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）から、実施例２０で化合物３１ａについて記載した手順に従って調製した；リピドイド３１ｄ（１４７ｍｇ、２５．８％；移動相Ｄ２中のＲｆ ０．８２、ニンヒドリンでの検出）を、粘性の黄色の油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝４．０５、２．３４、２．０１、１．９５、１．８３、１．７８－１．５６、１．３６－１．２４、０．８７ｐｐｍ。１３Ｃ ＮＭＲ（１５０．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ＝１７６．０４、６４．７６－６４．４６、４１．３６、３９．１６、３７．１５、３１．７５、２９．１９、２９．１５、２８．６０、２５．９０、２２．６１、１４．０６ｐｐｍ。ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ Ｃ１０９Ｈ２００Ｎ３Ｏ１８［Ｍ］＋に対する計算値１８３９．４８２１；実測値１８３９．４７９２。
【0161】
〔実施例２４〕
トランスフェクション試薬の調製
試薬を、表１～表４に列挙した個々の成分を混合することによって生成した。全ての表は、トランスフェクション試薬中の最終モル濃度を含む。９９．７％エタノール中の個々の成分のストック５ｍＭ溶液を調製に使用した。ＤＯＰＥ－Ｃｙ５ストック溶液のみが０．７９ｍＭの濃度を有し、クロロホルム中で調製された。
トランスフェクション試薬の調製
試薬を、表１～表４に列挙した個々の成分を混合することによって生成した。全ての表は、トランスフェクション試薬中の最終モル濃度を含む。９９．７％エタノール中の個々の成分のストック５ｍＭ溶液を調製に使用した。ＤＯＰＥ－Ｃｙ５ストック溶液のみが０．７９ｍＭの濃度を有し、クロロホルム中で調製された。
【0162】
【表1】
【0163】
【表2】
【0164】
【表3】
【0165】
【表4】
【0166】
〔実施例２５〕
ｍＲＮＡを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の調製
プライマー（５’－ＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＴＧ－３’（配列番号１）；５’－ＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＣＣＣＣＡＧ－３’（配列番号２））を用いてプラスミドｐｍＫａｔｅ２－Ｃ（Ｅｖｒｏｇｅｎ）から蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするＤＮＡを増幅し、Ｔ７プロモーター下でｐＥＴ２４ａベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。ｍＫａｔｅ２をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、製造者のプロトコルに従ってＡｍｐｌｉｓｃｒｉｂｅ Ｔ７－Ｆｌａｓｈ転写キット（Ｌｕｃｉｇｅｎ）を用いてインビトロで転写した。ＲＮＡキャップアナログＡＲＣＡ（Ｊｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）をインビトロ転写反応に加え、ポリ（Ａ）末端を、標準プロトコルに従ってポリ（Ａ）ポリメラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて合成した。
ｍＲＮＡを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の調製
プライマー（５’－ＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＴＧ－３’（配列番号１）；５’－ＣＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＣＣＣＣＡＧ－３’（配列番号２））を用いてプラスミドｐｍＫａｔｅ２－Ｃ（Ｅｖｒｏｇｅｎ）から蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするＤＮＡを増幅し、Ｔ７プロモーター下でｐＥＴ２４ａベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングした。ｍＫａｔｅ２をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、製造者のプロトコルに従ってＡｍｐｌｉｓｃｒｉｂｅ Ｔ７－Ｆｌａｓｈ転写キット（Ｌｕｃｉｇｅｎ）を用いてインビトロで転写した。ＲＮＡキャップアナログＡＲＣＡ（Ｊｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）をインビトロ転写反応に加え、ポリ（Ａ）末端を、標準プロトコルに従ってポリ（Ａ）ポリメラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて合成した。
【0167】
ｍＲＮＡ含有ＬＮＰ（ｍＲＮＡ－ＬＮＰ）を以下のように調製した：実施例２４で調製したＡ０１～Ａ２７トランスフェクション試薬の各々の３００μｌの溶液を、２つの入口および１つの出口を有する「Ｙ」マイクロ流体装置を使用して、３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡの溶液と混合した。脂質混合物とｍＲＮＡ溶液とを、３００μｌ／分の一定流速でリニアポンプにより各取り込み口に別々に注入した。得られた６００μｌのナノ粒子溶液を回収し、６００μｌのＰＢＳを加えることによって直ちに希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ０１～Ａ２７から、Ｂ０１～Ｂ２７と呼ばれる、対応するナノ粒子試料が形成された。ｍＲＮＡ－ＬＮＰ試料（Ｂ０１～Ｂ２７）の各々を３反復で調製した。新たに形成されたｍＲＮＡ－ＬＮＰの流体力学的直径は、２５℃で１７３°の散乱角で動的光散乱（ＮａｎｏＺＳ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を用いて測定された。ｍＲＮＡ－ＬＮＰの流体力学的直径は、２６５ｎｍの直径を有するＢ１８を除いて７２～１３５ｎｍの範囲であった（表５）。この形態において、粒子をその後の生物学的試験に使用した。
【0168】
【表5】
【0169】
〔実施例２６〕
脂質混合物中の種々のヘルパー脂質を用いたインビトロでの新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡトランスフェクションの比較
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３の細胞を用いて、実施例２５中で３反復調製した蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰ Ｂ０５、Ｂ２４およびＢ２５を試験した。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で１０％ＦＢＳを補充したＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復で行った。細胞へのＬＮＰの侵入を示すＣｙ５蛍光の強度、および細胞トランスフェクション後にＬＮＰから放出されたｍＲＮＡの翻訳を示すｍＫａｔｅ２蛍光を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
脂質混合物中の種々のヘルパー脂質を用いたインビトロでの新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡトランスフェクションの比較
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３の細胞を用いて、実施例２５中で３反復調製した蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰ Ｂ０５、Ｂ２４およびＢ２５を試験した。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で１０％ＦＢＳを補充したＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復で行った。細胞へのＬＮＰの侵入を示すＣｙ５蛍光の強度、および細胞トランスフェクション後にＬＮＰから放出されたｍＲＮＡの翻訳を示すｍＫａｔｅ２蛍光を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0170】
脂質混合物がＤＯＰＥ、ＤＯＰＣまたはＤＳＰＣヘルパー脂質を含む新規ｍＲＮＡ－ＬＮＰは、ｍＲＮＡをＨＥＫ２９３細胞株に効率的にトランスフェクションでき、ＤＯＰＥヘルパー脂質を含むｍＲＮＡ－ＬＮＰで最も効率的なトランスフェクションが達成された（表６）。
【0171】
【表6】
【0172】
〔実施例２７〕
新しいＬＮＰと既知のトランスフェクション試薬によって形成されたｍＲＮＡ－ＬＮＰとを用いたｍＲＮＡトランスフェクションの比較
ｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５のトランスフェクション効率を、選択された公知の高効率トランスフェクション試薬、すなわち、Ｂ２６～Ｂ２７として実施例２５で製剤化されたＤ－Ｌｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ Ｅｕｒｏｐｅ）およびイオン化可能なリピドイドＴＴ３（Li, B.: Nano Lett. 2015, 15, 8099-8107）、ならびにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、製造者によって提供される標準プロトコルに従って使用され、Ｌｉｐ２０００と呼ばれる）と比較した。ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔの細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４）中、５％ＣＯ２、３７℃で１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復行った。ｍＫａｔｅ２の蛍光強度およびｍＫａｔｅ２を発現する細胞の割合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
新しいＬＮＰと既知のトランスフェクション試薬によって形成されたｍＲＮＡ－ＬＮＰとを用いたｍＲＮＡトランスフェクションの比較
ｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５のトランスフェクション効率を、選択された公知の高効率トランスフェクション試薬、すなわち、Ｂ２６～Ｂ２７として実施例２５で製剤化されたＤ－Ｌｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ Ｅｕｒｏｐｅ）およびイオン化可能なリピドイドＴＴ３（Li, B.: Nano Lett. 2015, 15, 8099-8107）、ならびにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、製造者によって提供される標準プロトコルに従って使用され、Ｌｉｐ２０００と呼ばれる）と比較した。ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔの細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４）中、５％ＣＯ２、３７℃で１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復行った。ｍＫａｔｅ２の蛍光強度およびｍＫａｔｅ２を発現する細胞の割合を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0173】
新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ０５と命名された）は、既知のトランスフェクション試薬よりも有意に高いトランスフェクション効率を示した（表７）。
【0174】
【表7】
【0175】
〔実施例２８〕
脂質ナノ粒子へのｍＲＮＡ組み込みの効率
ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質をコードするｍＲＮＡの、実施例２５で調製したｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０１～Ｂ２７へのパッケージング効率を、Ｑｕｂｉｔ ４ ＲＮＡ ＨＳ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、製造者のプロトコルに従って決定した。組み込みの効率は、ナノ粒子溶液中で自由に利用可能なｍＲＮＡの濃度と、ナノ粒子の分解後にナノ粒子から放出されたｍＲＮＡの濃度とを比較することによって決定した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰは、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０；０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）を含有する緩衝液を用いて分解された。４３～９３％の範囲のｍＲＮＡパッケージング効率が実証された（表８）。
脂質ナノ粒子へのｍＲＮＡ組み込みの効率
ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質をコードするｍＲＮＡの、実施例２５で調製したｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０１～Ｂ２７へのパッケージング効率を、Ｑｕｂｉｔ ４ ＲＮＡ ＨＳ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、製造者のプロトコルに従って決定した。組み込みの効率は、ナノ粒子溶液中で自由に利用可能なｍＲＮＡの濃度と、ナノ粒子の分解後にナノ粒子から放出されたｍＲＮＡの濃度とを比較することによって決定した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰは、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０；０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）を含有する緩衝液を用いて分解された。４３～９３％の範囲のｍＲＮＡパッケージング効率が実証された（表８）。
【0176】
【表8】
【0177】
〔実施例２９〕
ｍＲＮＡ－ＬＮＰの細胞毒性
胎児腎細胞由来のヒト細胞株（ＨＥＫ２９３）、ＳＶ４０ラージＴ抗原を発現する同じ株（ＨＥＫ２９３Ｔ）、ヒト骨肉腫由来細胞株（Ｕ２ＯＳ）、およびヒト肝細胞癌細胞株（ＨｅｐＧ２）を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中、５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変培地（ＤＭＥＭ）またはＩＭＤＭ培地（イスコフ改変ダルベッコ培地）で培養した。細胞を、実施例２５で３反復生成された２μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）または１０μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は１００μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。ＬＮＰの細胞毒性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ ２．０細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）で分析した。細胞生存率を、トランスフェクションされていない細胞（対照）に対して正規化した。結果を表９Ａ、Ｂおよび１０Ａ、Ｂに要約する。
ｍＲＮＡ－ＬＮＰの細胞毒性
胎児腎細胞由来のヒト細胞株（ＨＥＫ２９３）、ＳＶ４０ラージＴ抗原を発現する同じ株（ＨＥＫ２９３Ｔ）、ヒト骨肉腫由来細胞株（Ｕ２ＯＳ）、およびヒト肝細胞癌細胞株（ＨｅｐＧ２）を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中、５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変培地（ＤＭＥＭ）またはＩＭＤＭ培地（イスコフ改変ダルベッコ培地）で培養した。細胞を、実施例２５で３反復生成された２μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）または１０μＬのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は１００μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。ＬＮＰの細胞毒性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ ２．０細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）で分析した。細胞生存率を、トランスフェクションされていない細胞（対照）に対して正規化した。結果を表９Ａ、Ｂおよび１０Ａ、Ｂに要約する。
【0178】
全脂質成分の総濃度が２０μＭであるｍＲＮＡ－ＬＮＰを使用した場合、ＨＥＫ２９３細胞株において測定された最大細胞毒性は、Ｂ０２およびＢ０３について測定された１６％であった。粒子Ｂ０１およびＢ０５～Ｂ２３について有意な毒性は示されなかった。１００μＭという５倍高い全脂質成分の総濃度では、傾向は類似しており、Ｂ０３において３８％の最も高い毒性を有し、粒子Ｂ０４～Ｂ０８は約２０％の細胞毒性を示し、Ｂ０９およびＢ１０は毒性を示さなかった。粒子Ｂ１１～Ｂ２３も毒性を示さなかった。ＨＥＫ２９３Ｔ株では、Ｂ０２およびＢ０３で最高の細胞毒性が再び測定され、他の粒子では毒性は非常に低かった。全脂質成分の総濃度が２０μＭの粒子は、Ｕ２ＯＳ細胞株に対してほとんど毒性を示さず、１００μＭの濃度で、最も高い毒性はＢ１０粒子について３５％であった。リピドイド４ａ、４ｂ、４ｄおよび４ｅによって形成された粒子は非毒性であり、リピドイド４ｆ、４ｇ、９および１３によって形成された粒子はごくわずかに毒性であった（表９Ａ、表１０Ｂ）。
【0179】
【表9】
【0180】
【表10】
【0181】
〔実施例３０〕
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
胎児腎細胞由来のヒト細胞株（ＨＥＫ２９３）、ＳＶ４０ラージＴ抗原を発現する同じ株（ＨＥＫ２９３Ｔ）、肝臓癌細胞（ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７）およびヒト骨肉腫由来細胞株（Ｕ２ＯＳ）を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中、５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変培地（ＤＭＥＭ）またはＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするｍＲＮＡを担持している実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０１～Ｂ０５（ウェル中の全ての脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。蛍光強度については、市販のトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００に対してデータを正規化する。
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
胎児腎細胞由来のヒト細胞株（ＨＥＫ２９３）、ＳＶ４０ラージＴ抗原を発現する同じ株（ＨＥＫ２９３Ｔ）、肝臓癌細胞（ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７）およびヒト骨肉腫由来細胞株（Ｕ２ＯＳ）を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中、５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したダルベッコ改変培地（ＤＭＥＭ）またはＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２をコードするｍＲＮＡを担持している実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０１～Ｂ０５（ウェル中の全ての脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。蛍光強度については、市販のトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００に対してデータを正規化する。
【0182】
ＨＥＫ２９３株については、ｍＫａｔｅ２タンパク質を発現する細胞の割合が、市販のトランスフェクション試薬よりも使用された全てのリピドイドについて２倍を超えて高かった。蛍光強度は使用した全てのリピドイドについて２倍を超えて高く、リピドイド４ｄによって形成されたＢ０２粒子は市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００よりも３倍高かった。新しいリピドイドを用いて形成されたｍＲＮＡ－ＬＮＰが全てのケースにおいて、市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００よりも少なくとも２．５倍良好にＨｅｐＧ２細胞株をトランスフェクションし、リピドイド４ｃを用いて形成されたｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０３についての蛍光強度はＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００についての蛍光強度の４．５倍であった。市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００と比較して、新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰによるトランスフェクションにおける同様の改良が、他の細胞株において達成された（表１１、表１２）。
【0183】
【表11】
【0184】
【表12】
【0185】
〔実施例３１〕
「Ｚ」に修飾されたリピドイドによって形成された新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
ヒト細胞株ＨｅｐＧ２を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ１１～Ｂ１３（１ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。リピドイドのＺ修飾置換基を有する新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰは全てのケースにおいて、対照トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００よりも良好に、ｍＲＮＡをＨｅｐＧ２細胞株へ効率的にトランスフェクションすることができた（表１３）。
「Ｚ」に修飾されたリピドイドによって形成された新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
ヒト細胞株ＨｅｐＧ２を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ１１～Ｂ１３（１ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。リピドイドのＺ修飾置換基を有する新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰは全てのケースにおいて、対照トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００よりも良好に、ｍＲＮＡをＨｅｐＧ２細胞株へ効率的にトランスフェクションすることができた（表１３）。
【0186】
【表13】
【0187】
〔実施例３２〕
生分解性リピドイドによって形成される新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３ＴおよびＵ２ＯＳを、９６ウェルプレート（ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭまたはＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５、Ｂ０８～Ｂ１０およびＢ１４～Ｂ２３（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
生分解性リピドイドによって形成される新しいＬＮＰを用いたｍＲＮＡのトランスフェクション
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３ＴおよびＵ２ＯＳを、９６ウェルプレート（ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭまたはＩＭＤＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５、Ｂ０８～Ｂ１０およびＢ１４～Ｂ２３（ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0188】
市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００と比較して、新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰを用いて、細胞株を有意に良好にトランスフェクションした。リピドイド４ｅ、９、１３および２１は、トランスフェクションされた細胞の割合に対して同等の効果を有した。次いで、ｍＫａｔｅ２タンパク質をコードする翻訳されたｍＲＮＡの蛍光強度は、市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００と比較して、ＨＥＫ２９３およびＨＥＫ２９３Ｔ株において常に有意に増加した。Ｕ２ＯＳ株では、リピドイド１３はリピドイド４ｅと同様にトランスフェクションした（表１４、表１５）。
【0189】
【表14】
【0190】
【表15】
【0191】
〔実施例３３〕
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたｓｉＲＮＡのトランスフェクション
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こす低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、カタログ番号ＡＭ４６２６、Ａｍｂｉｏｎ）を含むＬＮＰを以下のように調製した：実施例２４で調製した３００μｌのＡ２８トランスフェクション試薬溶液を、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用して、３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１．２０ｎｍｏｌのｓｉＲＮＡの溶液と混合した。得られたｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ２８と命名される対応するナノ粒子を形成した。内因的に細胞転写ｍＲＮＡを標的としない対照（スクランブル；４３９０８４３、Ａｍｂｉｏｎ）ｓｉＲＮＡを担持するＬＮＰ（Ｂ２９）を同様に調製した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造者の標準プロトコルに従ってｓｉＲＮＡトランスフェクションに特異的な対照トランスフェクション試薬として使用した。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を安定的に発現するヒト細胞株Ｕ２ＯＳをｓｉＲＮＡ－ＬＮＰノックダウンに使用した。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを用いてトランスフェクションし、ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであり；最終ｓｉＲＮＡ濃度は１６ｎＭであった）、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションは、３つの生物学的反復で行った。緑色蛍光タンパク質ＧＦＰを発現する細胞の割合およびＧＦＰの蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたｓｉＲＮＡのトランスフェクション
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こす低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、カタログ番号ＡＭ４６２６、Ａｍｂｉｏｎ）を含むＬＮＰを以下のように調製した：実施例２４で調製した３００μｌのＡ２８トランスフェクション試薬溶液を、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用して、３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１．２０ｎｍｏｌのｓｉＲＮＡの溶液と混合した。得られたｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ２８と命名される対応するナノ粒子を形成した。内因的に細胞転写ｍＲＮＡを標的としない対照（スクランブル；４３９０８４３、Ａｍｂｉｏｎ）ｓｉＲＮＡを担持するＬＮＰ（Ｂ２９）を同様に調製した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造者の標準プロトコルに従ってｓｉＲＮＡトランスフェクションに特異的な対照トランスフェクション試薬として使用した。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を安定的に発現するヒト細胞株Ｕ２ＯＳをｓｉＲＮＡ－ＬＮＰノックダウンに使用した。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを用いてトランスフェクションし、ウェル中の全脂質成分の最終総濃度は２０μＭであり；最終ｓｉＲＮＡ濃度は１６ｎＭであった）、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションは、３つの生物学的反復で行った。緑色蛍光タンパク質ＧＦＰを発現する細胞の割合およびＧＦＰの蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0192】
新しいｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ２８）では、ＧＦＰ発現の低下がＧＦＰ発現細胞の１％まで観察された；市販のＲＮＡｉＭａｘではＧＦＰ発現は依然として細胞の１３．６％で検出された。新しいｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ２８）を使用した場合のＧＦＰの蛍光強度は、市販のＲＮＡｉＭａｘ試薬と比較して１．２５倍減少した（表１６）。
【0193】
【表16】
【0194】
チロシルＤＮＡホスホジエステラーゼ２（ＴＤＰ２）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こす低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、カタログ番号４３９２４２０、Ａｍｂｉｏｎ）を含むｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを、本実施例におけるＢ２８粒子と同じ様式で調製した。このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ３０と呼ばれる、対応するナノ粒子が形成された。内因的に細胞転写されたｍＲＮＡを標的としない対照（スクランブル；４３９０８４３、Ａｍｂｉｏｎ）ｓｉＲＮＡを担持するＬＮＰ（Ｂ２９）も対照として用いた。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、ｓｉＲＮＡトランスフェクションに特異的な対照トランスフェクション試薬として使用した。ヒト細胞株ＨＥＫ２９３およびヒト多発性骨髄腫由来の２つの株（これらは、利用可能なトランスフェクション試薬を用いてトランスフェクションすることが非常に困難である）を、ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰノックダウンに使用した（Brito J.L.R., Brown N., Morgan G.J. (2010) Transfection of siRNAs in Multiple Myeloma Cell Lines. In: Min WP., Ichim T. (eds) RNA Interference. Methods in Molecular Biology (Methods and Protocols), vol 623. Humana Press）。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭおよびｓｉＲＮＡの最終濃度１６ｎＭを有する）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションは、３つの生物学的反復で行った。ＲＮＡｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＲＮＡを単離した。ｃＤＮＡは、製造者の推奨に従ってＴＡＴＡＡ ＧｒａｎｄＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＴＡＴＡＡｂｉｏｃｅｎｔｅｒ）を用いて調製した。定量的ＲＴ－ＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０（Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）で行った。ＴＤＰ２をコードするｍＲＮＡを増幅するためのプライマーは、以下の通りであった：５‘－ＣＧＡＧＡＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＡＡＡＧＡＧ－３‘（配列番号３）および５‘－ＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣ－３‘（配列番号４）。ＧＡＰＤＨをコードするｍＲＮＡを用いてデータを正規化した（プライマー：５‘－ＡＡＴＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡ－３‘（配列番号５）および５‘－ＴＧＧＡＣＴＣＣＡＣＧＡＣＧＴＡＣＴＣＡ－３‘（配列番号６））。
【0195】
これらの全てのケースにおいて、新しいｓｉＲＮＡ－ＬＮＰは、市販のトランスフェクション試薬ＲＮＡｉＭａｘと比較して、細胞中のＴＤＰ２ ｍＲＮＡのレベルを有意に低下させた。ｓｉＲＮＡトランスフェクション用の市販の試薬と比較して、ＨＥＫ２９３細胞株では２．８６倍、ＯＰＭ－２骨髄腫株では４．３倍、ＲＰＭＩ８２２６骨髄腫株では６．７倍であった（表１７）。
【0196】
【表17】
【0197】
〔実施例３４〕
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたプラスミドＤＮＡのトランスフェクション
ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質をコードする４７０６ｂｐのプラスミドＤＮＡ（Ｅｖｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＦＰ１８１）を含むＬＮＰを以下のように調製した：実施例２４で調製した３００μｌのＡ２８トランスフェクション試薬溶液を、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を用いて、３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのプラスミドＤＮＡの溶液と混合した。得られたＤＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ３１と呼ばれる、対応するナノ粒子を形成した。ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔにおいてトランスフェクションを行った。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのＤＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（Ｌｉｐ２０００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
インビトロでの新しいＬＮＰを用いたプラスミドＤＮＡのトランスフェクション
ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質をコードする４７０６ｂｐのプラスミドＤＮＡ（Ｅｖｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＦＰ１８１）を含むＬＮＰを以下のように調製した：実施例２４で調製した３００μｌのＡ２８トランスフェクション試薬溶液を、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を用いて、３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのプラスミドＤＮＡの溶液と混合した。得られたＤＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ３１と呼ばれる、対応するナノ粒子を形成した。ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔにおいてトランスフェクションを行った。細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μｌの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのＤＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（Ｌｉｐ２０００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を対照トランスフェクション試薬として使用した。トランスフェクションは３つの生物学的反復で行い、各生物学的反復は３つの技術的反復を有する。ｍＫａｔｅ２蛍光タンパク質を発現する細胞の割合およびｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0198】
蛍光タンパク質ｍＫａｔｅ２を発現する細胞の割合は、市販のトランスフェクション試薬と比較して、新しいＤＮＡ－ＬＮＰで３．８倍高かった。蛍光強度は市販の試薬よりも２．９倍高かった（表１８）。
【0199】
【表18】
【0200】
〔実施例３５〕
新しいＬＮＰによるｍＲＮＡのヒト初代肝細胞へのトランスフェクション
ＮａｎｏＬｕｃ生物発光タンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＥＴ５１ｂ（＋）＿Ｓ－Ｌｕｃ＿ＣＬＩＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１１３９２３；Ｋａｉ Ｊｏｈｎｓｓｏｎからギフトとして入手）から、プライマー（５’－ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ－‘３（配列番号７）；５‘－ＧＣＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧＣＧＧ－３‘（配列番号８））を用いて増幅した。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、実施例２５と同様にインビトロで調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用してＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ３２と命名される、対応するナノ粒子を形成した。公開されたプロトコル（LeCluyse, E.L.: Methods in Molecular Biology 2005; 290, 207-230）に従って、ヒトドナーから初代肝細胞を単離した。細胞を２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００トランスフェクション試薬を対照として使用した。次いで、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）中の基質を細胞に添加し、そして発光強度を、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ：Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）Ｍ１０００ ＰＲＯ（Ｔｅｃａｎ）で分析した。
新しいＬＮＰによるｍＲＮＡのヒト初代肝細胞へのトランスフェクション
ＮａｎｏＬｕｃ生物発光タンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＥＴ５１ｂ（＋）＿Ｓ－Ｌｕｃ＿ＣＬＩＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１１３９２３；Ｋａｉ Ｊｏｈｎｓｓｏｎからギフトとして入手）から、プライマー（５’－ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ－‘３（配列番号７）；５‘－ＧＣＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧＣＧＧ－３‘（配列番号８））を用いて増幅した。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、実施例２５と同様にインビトロで調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用してＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳで希釈した；このようにして、トランスフェクション試薬Ａ２８から、Ｂ３２と命名される、対応するナノ粒子を形成した。公開されたプロトコル（LeCluyse, E.L.: Methods in Molecular Biology 2005; 290, 207-230）に従って、ヒトドナーから初代肝細胞を単離した。細胞を２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭ）を用いてトランスフェクションし、２４時間インキュベートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００トランスフェクション試薬を対照として使用した。次いで、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）中の基質を細胞に添加し、そして発光強度を、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ：Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）Ｍ１０００ ＰＲＯ（Ｔｅｃａｎ）で分析した。
【0201】
新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰはヒト初代肝細胞を効率よくトランスフェクションし、トランスフェクションされていない対照と比較して発光が有意に２．０倍増加した（表１９）。
【0202】
【表19】
【0203】
〔実施例３６〕
インビトロでの新しいＬＮＰによる環状ジヌクレオチドのトランスフェクション
環状ジヌクレオチド（２’，３’－ｃＧＡＭＰ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＳＭＬ１２２９－５ＵＭＯ）を以下のようにＬＮＰ中にパッケージした：Ａ０１～Ａ０６トランスフェクション試薬の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０ｎｍｏｌのｃＧＡＭＰを、実施例２５と同様のマイクロ流体装置を用いてＬＮＰに添加した。得られたｃＧＡＭＰ－ＬＮＰを直ちに６００μＬのＰＢＳで希釈した；このようにして、Ｂ３３～Ｂ３８と呼ばれるナノ粒子の試料を、対応するトランスフェクション試薬Ａ０１～Ａ０６から形成した。ＳＴＩＮＧ経路に依存する環状ジヌクレオチドｃＧＡＭＰによるインターフェロン応答の誘導の程度を示すレポーターアッセイを用いて、ｃＧＡＭＰ－ＬＮＰ粒子トランスフェクションの効率を分析した。この目的のために、ＩＲＦ３インターフェロン刺激（ＩＳＲＥ）プロモーター下で一般的なタイプのＳＴＩＮＧタンパク質およびルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する細胞レポーター株ＨＥＫ２９３Ｔを、Ｎｏｖｏｔｎａら（Novotna, B.: J. Med. Chem. 2019, 62 (23), 10676-10690）に従って使用した。細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｃａｐｒｉｃｏｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を補充したグルコース（Ｌ－グルタミンを含む；Ｂｉｏｗｅｓｔ）を含むＤＭＥＭ培地中、２．５×１０４の濃度で、ポリ－Ｄ－リシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）に移した。５％ＣＯ２、３７℃で一晩インキュベートした後、連続希釈した化合物を細胞に７時間添加した。並行して、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を試験化合物単独と共に３０分間インキュベートし、新鮮な培地で２回洗浄し、次いでさらに６．５時間培養した。最後に、５０μｌの細胞培養培地を、白色９６ウェルプレート中で３０μｌのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と混合し、発光をＳｐａｒｋ（登録商標）分光光度計（ＴＥＣＡＮ、Ｇｒｏｄｉｇ）で読み取った。５０％効果濃度（ＥＣ５０）の値はＮｏｖｏｔｎａら（Novotna, B.: J. Med. Chem. 2019, 62 (23), 10676-10690）に記載されているように、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ）を用いて計算した（表２０）。
インビトロでの新しいＬＮＰによる環状ジヌクレオチドのトランスフェクション
環状ジヌクレオチド（２’，３’－ｃＧＡＭＰ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＳＭＬ１２２９－５ＵＭＯ）を以下のようにＬＮＰ中にパッケージした：Ａ０１～Ａ０６トランスフェクション試薬の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０ｎｍｏｌのｃＧＡＭＰを、実施例２５と同様のマイクロ流体装置を用いてＬＮＰに添加した。得られたｃＧＡＭＰ－ＬＮＰを直ちに６００μＬのＰＢＳで希釈した；このようにして、Ｂ３３～Ｂ３８と呼ばれるナノ粒子の試料を、対応するトランスフェクション試薬Ａ０１～Ａ０６から形成した。ＳＴＩＮＧ経路に依存する環状ジヌクレオチドｃＧＡＭＰによるインターフェロン応答の誘導の程度を示すレポーターアッセイを用いて、ｃＧＡＭＰ－ＬＮＰ粒子トランスフェクションの効率を分析した。この目的のために、ＩＲＦ３インターフェロン刺激（ＩＳＲＥ）プロモーター下で一般的なタイプのＳＴＩＮＧタンパク質およびルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する細胞レポーター株ＨＥＫ２９３Ｔを、Ｎｏｖｏｔｎａら（Novotna, B.: J. Med. Chem. 2019, 62 (23), 10676-10690）に従って使用した。細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｃａｐｒｉｃｏｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を補充したグルコース（Ｌ－グルタミンを含む；Ｂｉｏｗｅｓｔ）を含むＤＭＥＭ培地中、２．５×１０４の濃度で、ポリ－Ｄ－リシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ）に移した。５％ＣＯ２、３７℃で一晩インキュベートした後、連続希釈した化合物を細胞に７時間添加した。並行して、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を試験化合物単独と共に３０分間インキュベートし、新鮮な培地で２回洗浄し、次いでさらに６．５時間培養した。最後に、５０μｌの細胞培養培地を、白色９６ウェルプレート中で３０μｌのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と混合し、発光をＳｐａｒｋ（登録商標）分光光度計（ＴＥＣＡＮ、Ｇｒｏｄｉｇ）で読み取った。５０％効果濃度（ＥＣ５０）の値はＮｏｖｏｔｎａら（Novotna, B.: J. Med. Chem. 2019, 62 (23), 10676-10690）に記載されているように、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ）を用いて計算した（表２０）。
【0204】
環状ジヌクレオチド２’，３’ｃＧＡＭＰはＳＴＩＮＧ活性化のＥＣ５０値±３０μＭを示した。イオン化可能なリピドイド４ａ～４ｆによって形成された全ての新しいｃＧＡＭＰ－ＬＮＰはＨＥＫ２９３Ｔ細胞を効率的にトランスフェクションし、ナノモル領域でＳＴＩＮＧを活性化し、トランスフェクション効率を約２０００～１５０００倍増加させた。最も有効なのはリピドイド４ｄであり、２．００±０．３６ｎＭのＥＣ５０を示した。
【0205】
【表20】
【0206】
〔実施例３７〕
インビボにおける新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰの毒性
ＮａｎｏＬｕｃタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を調製し、実施例３５と同様にして粒子にパッケージした。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３２）を、３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で腹膜内投与し、３匹の対照Ｃ５７Ｂ１／６マウスにＰＢＳを腹膜内投与した。別の３匹のＣ５７Ｂ１／６マウスにｍＲＮＡ－ＬＮＰを５倍高い濃度（２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）で同様に投与した。同様に、同一用量のｍＲＮＡ－ＬＮＰを３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）と３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）に再度静脈内投与し、かつ投与前に動物を麻酔した（２．５ｍｇ／マウスのケタミン、０．４ｍｇ／マウスのキシラジナム、Ｂｉｏｖｅｔａ）。その後、マウスを４８時間観察したが、いずれも対照動物と比較して毒性の徴候または表現型の変化を示さなかった。
インビボにおける新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰの毒性
ＮａｎｏＬｕｃタンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を調製し、実施例３５と同様にして粒子にパッケージした。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３２）を、３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で腹膜内投与し、３匹の対照Ｃ５７Ｂ１／６マウスにＰＢＳを腹膜内投与した。別の３匹のＣ５７Ｂ１／６マウスにｍＲＮＡ－ＬＮＰを５倍高い濃度（２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）で同様に投与した。同様に、同一用量のｍＲＮＡ－ＬＮＰを３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）と３匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ）に再度静脈内投与し、かつ投与前に動物を麻酔した（２．５ｍｇ／マウスのケタミン、０．４ｍｇ／マウスのキシラジナム、Ｂｉｏｖｅｔａ）。その後、マウスを４８時間観察したが、いずれも対照動物と比較して毒性の徴候または表現型の変化を示さなかった。
【0207】
〔実施例３８〕
インビボでの新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰの生体内分布
ＣＲＥリコンビナーゼタンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＩＲＥＳ２－ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号２６６４６、Ａｎｊｅｎ Ｃｈｅｎｎによって供与された）から、プライマー（５’ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴ－‘３（配列番号９）；５‘－ＣＴＡＡＴＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡ－３‘（配列番号１０））を用いて増幅した。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、実施例２５と同様にインビトロで調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用してＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳ中に希釈した；Ｂ３９と命名される、対応するナノ粒子をトランスフェクション試薬Ａ２８から形成した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３９）を、各場合に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ～２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で、３匹のマウスに、組換えの成功の分析を可能にするグローバルデュアルＣｒｅレポーター（Mazumdar, M.D.: Genesis 2007, 45:593-605）とともに静脈内投与した（飼育 ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）。ＣｒｅリコンビナーゼｍＲＮＡを担持するｍＲＮＡ－ＬＮＰが首尾よく送達された細胞では、染色体組換とそれに続く膜赤色タンパク質遺伝子（いわゆるレッドトマト）の切り出しと膜緑色タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子の転写の「オン」が起こった。非微粒子対照マウスを含むマウスを微粒子適用の３日後に屠殺し、全ての器官を標準化されたプロトコルに従って組織学的分析に供した。組織学的画像は肝臓への粒子の完全な分布を示し、これは、適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への３０～５０％の変換を導いた（図７）。図７において、肝臓の組織学的画像はＣｒｅリコンビナーゼをコードするｍＲＮＡ－ＬＮＰ［２．５ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡ］（「３ ｄｐｉ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ」と命名される）の適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への変換を示す。「ＰＢＳ対照」－ＰＢＳ緩衝液のみの注入。
インビボでの新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰの生体内分布
ＣＲＥリコンビナーゼタンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＩＲＥＳ２－ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号２６６４６、Ａｎｊｅｎ Ｃｈｅｎｎによって供与された）から、プライマー（５’ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴ－‘３（配列番号９）；５‘－ＣＴＡＡＴＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡ－３‘（配列番号１０））を用いて増幅した。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、実施例２５と同様にインビトロで調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を使用してＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳ中に希釈した；Ｂ３９と命名される、対応するナノ粒子をトランスフェクション試薬Ａ２８から形成した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３９）を、各場合に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ～２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で、３匹のマウスに、組換えの成功の分析を可能にするグローバルデュアルＣｒｅレポーター（Mazumdar, M.D.: Genesis 2007, 45:593-605）とともに静脈内投与した（飼育 ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）。ＣｒｅリコンビナーゼｍＲＮＡを担持するｍＲＮＡ－ＬＮＰが首尾よく送達された細胞では、染色体組換とそれに続く膜赤色タンパク質遺伝子（いわゆるレッドトマト）の切り出しと膜緑色タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子の転写の「オン」が起こった。非微粒子対照マウスを含むマウスを微粒子適用の３日後に屠殺し、全ての器官を標準化されたプロトコルに従って組織学的分析に供した。組織学的画像は肝臓への粒子の完全な分布を示し、これは、適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への３０～５０％の変換を導いた（図７）。図７において、肝臓の組織学的画像はＣｒｅリコンビナーゼをコードするｍＲＮＡ－ＬＮＰ［２．５ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡ］（「３ ｄｐｉ ｍＲＮＡ－ＬＮＰ」と命名される）の適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への変換を示す。「ＰＢＳ対照」－ＰＢＳ緩衝液のみの注入。
【0208】
〔実施例３９〕
新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰおよびｓｉＲＮＡ－ＬＮＰの４℃での安定性
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔを、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５（ウェル中の全ての脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｂ０５ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを４℃で保存し、トランスフェクションを、組み立ての１、３および５週間後に同様に繰り返した。トランスフェクションを３反復で行った。ｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰおよびｓｉＲＮＡ－ＬＮＰの４℃での安定性
ヒト細胞株ＨＥＫ２９３Ｔを、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を、実施例２５で調製した２μｌのｍＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ０５（ウェル中の全ての脂質成分の最終総濃度は２０μＭであった）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。Ｂ０５ ｍＲＮＡ－ＬＮＰを４℃で保存し、トランスフェクションを、組み立ての１、３および５週間後に同様に繰り返した。トランスフェクションを３反復で行った。ｍＫａｔｅ２の蛍光強度を、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａサイトメーターで分析した。
【0209】
新しいｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ０５と命名された）のトランスフェクション効率は少なくとも３週間は変化せず、４℃で保存されている間に１日目と比較して８１％まで低下した（表２１）。
【0210】
【表21】
【0211】
チロシル－ＤＮＡホスホジエステラーゼ２（ＴＤＰ２）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こす低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、カタログ番号４３９２４２０、Ａｍｂｉｏｎ）を含むｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３０およびＢ４０と命名された）を、実施例３３に記載したのと同じ様式で調製し、４℃で保存した。ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ Ｂ４０は、実施例２４で調製されたトランスフェクション試薬Ａ２９から形成された。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、９６ウェルプレート（１ウェル当たり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）中、５％ＣＯ２、３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を２μｌのｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（全脂質成分の最終総濃度２０μＭおよびｓｉＲＮＡの最終濃度１６ｎＭを有する）を用いてトランスフェクションし、続いて２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復で行った。ＲＮＡ単離、ｃＤＮＡ調製およびｑＲＴ－ＰＣＲを、実施例３３に記載のように行った。ＬＮＰ組み立ての１、２および３か月後に、全手順を繰り返した。
【0212】
細胞中のＴＤＰ２ ｍＲＮＡのレベルを減少させるそれらの能力として表される、新しいｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３０およびＢ４０と命名された）のトランスフェクション効力は、４℃で３か月間保存された間、実質的に変化しないままであった（表２２）。
【0213】
【表22】
【0214】
〔実施例４０〕
予め形成された空のＬＮＰによるｓｉＲＮＡのトランスフェクション
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２８およびＡ２９を用いて、実施例２５と同様に、核酸を除くクエン酸緩衝液中で空のナノ粒子Ｂ４１およびＢ４２を組み立て、後希釈を行わなかった。１μｌのＬＮＰを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘについて推奨されるのと同様に、トランスフェクションの１０分前にＴＤＰ２を標的とする１ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡと混合し、室温でインキュベートした。ＨＥＫ２９３ＴおよびＨｅｐＧ２細胞（１ウェルあたり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）を、予め組み立てたＬＮＰおよびｓｉＲＮＡの混合物を用いてトランスフェクションし、２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復で行った。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘを対照トランスフェクション試薬として使用した。予め組み立てられ、続いて１ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡと混合されたＬＮＰは、ＴＤＰ２ ｍＲＮＡ発現を９０～９７％ノックダウンすることができ、両方とも市販のトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘよりも有意に良好であった（表２３）。
予め形成された空のＬＮＰによるｓｉＲＮＡのトランスフェクション
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２８およびＡ２９を用いて、実施例２５と同様に、核酸を除くクエン酸緩衝液中で空のナノ粒子Ｂ４１およびＢ４２を組み立て、後希釈を行わなかった。１μｌのＬＮＰを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘについて推奨されるのと同様に、トランスフェクションの１０分前にＴＤＰ２を標的とする１ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡと混合し、室温でインキュベートした。ＨＥＫ２９３ＴおよびＨｅｐＧ２細胞（１ウェルあたり１００μＬの培養培地中５×１０４細胞）を、予め組み立てたＬＮＰおよびｓｉＲＮＡの混合物を用いてトランスフェクションし、２４時間インキュベートした。トランスフェクションを３反復で行った。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘを対照トランスフェクション試薬として使用した。予め組み立てられ、続いて１ｐｍｏｌのｓｉＲＮＡと混合されたＬＮＰは、ＴＤＰ２ ｍＲＮＡ発現を９０～９７％ノックダウンすることができ、両方とも市販のトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＲＮＡｉＭａｘよりも有意に良好であった（表２３）。
【0215】
【表23】
【0216】
〔実施例４１〕
ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰによる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のトランスフェクションおよびサイトカイン応答の評価
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２８を用いて、Ｐｏｌｙ（Ｕ）結合スプライシング因子（ＰＵＦ６０）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こすｓｉＲＮＡを含む、Ｂ４３と呼ばれるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを形成した。ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰは、実施例３３と同様に調製した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｎｉｍｅ ＲＮＡｉＭａｘを対照トランスフェクション試薬として用いた。３人の匿名の血液ドナー（チェコ共和国プラハの血液学および輸血研究所の倫理委員会の同意番号１３／０６／２０１２）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ（Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ、１７－１４４０－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）勾配によって単離し、１０％のＦＢＳおよび５０Ｕ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。細胞を９６ウェルプレートに１０５細胞／１００ｕｌ（総量２００ｕｌ）で播種し、３７℃でインキュベートした。ＰＵＦ６０を標的とするＯＮ－ｔａｒｇｅｔ ｐｌｕｓ ＳＭＡＲＴｐｏｏｌ ｓｉＲＮＡをＤｈａｒｍａｃｏｎ（カタログ番号Ｌ－０１２５０５－０１－０００５；フランス、ｌｌｋｉｒｃｈ）から購入し、２０ｐｍｏｌ／ｕｌで水中に再懸濁した。１ｐｍｏｌまたは１０ｐｍｏｌの最終濃度を使用した。各条件を３反復で行った。トランスフェクションの２４時間後、上清を含めて細胞を回収した。全ＲＮＡを、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ ＲＮＡ抽出キット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ）を使用して、製造者の指示に従って抽出した。逆転写は５００ｎｇのＲＮＡで行った。定量的ＲＴ－ＰＣＲを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０（Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）で、ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ ｍｉｘを用いて２反復で行った。ＰＵＦ６０を増幅するためのプライマーは、以下の通りであった：５－ＣＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＡＴＣＴＡＣＧＴＧ－３（配列番号７）および５－ＣＴＧＧＧＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＴＣＡＡ－３（配列番号８）。ＲＰＬＰ０を用いてデータを正規化した（プライマー：５－ＣＡＣＣＡＴＴＧＡＡＡＴＣＣＴＧＡＧＴＧＡＴＧ－３（配列番号９）および５－ＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＧ－３（配列番号１０））。トランスフェクション後にＰＢＭＣによって産生された総ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－γの量を、ヒトＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ－α ＥＬＩＳＡＢＡＳＩＣキット（ＨＲＰ）、３４２５－１Ｈ－２０、ＭａｂｔｅｃｈおよびＨｕｍａｎ ＩＦＮ－λ１ ＥＬＩＳＡＢＡＳＩＣキット、３５７０－１Ｈ－２０、Ｍａｂｔｅｃｈ）を用いて無細胞上清中で測定した。１μＭ ＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６クラスＡ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）でのＰＢＭＣの２４時間処理を陽性対照として使用した。
ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰによる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のトランスフェクションおよびサイトカイン応答の評価
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２８を用いて、Ｐｏｌｙ（Ｕ）結合スプライシング因子（ＰＵＦ６０）をコードするｍＲＮＡの分解を引き起こすｓｉＲＮＡを含む、Ｂ４３と呼ばれるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを形成した。ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰは、実施例３３と同様に調製した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｎｉｍｅ ＲＮＡｉＭａｘを対照トランスフェクション試薬として用いた。３人の匿名の血液ドナー（チェコ共和国プラハの血液学および輸血研究所の倫理委員会の同意番号１３／０６／２０１２）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ（Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ、１７－１４４０－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）勾配によって単離し、１０％のＦＢＳおよび５０Ｕ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。細胞を９６ウェルプレートに１０５細胞／１００ｕｌ（総量２００ｕｌ）で播種し、３７℃でインキュベートした。ＰＵＦ６０を標的とするＯＮ－ｔａｒｇｅｔ ｐｌｕｓ ＳＭＡＲＴｐｏｏｌ ｓｉＲＮＡをＤｈａｒｍａｃｏｎ（カタログ番号Ｌ－０１２５０５－０１－０００５；フランス、ｌｌｋｉｒｃｈ）から購入し、２０ｐｍｏｌ／ｕｌで水中に再懸濁した。１ｐｍｏｌまたは１０ｐｍｏｌの最終濃度を使用した。各条件を３反復で行った。トランスフェクションの２４時間後、上清を含めて細胞を回収した。全ＲＮＡを、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ ＲＮＡ抽出キット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ）を使用して、製造者の指示に従って抽出した。逆転写は５００ｎｇのＲＮＡで行った。定量的ＲＴ－ＰＣＲを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０（Ｒｏｃｈｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）で、ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ ｍｉｘを用いて２反復で行った。ＰＵＦ６０を増幅するためのプライマーは、以下の通りであった：５－ＣＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＡＴＣＴＡＣＧＴＧ－３（配列番号７）および５－ＣＴＧＧＧＣＣＴＴＣＴＣＧＴＡＣＴＣＡＡ－３（配列番号８）。ＲＰＬＰ０を用いてデータを正規化した（プライマー：５－ＣＡＣＣＡＴＴＧＡＡＡＴＣＣＴＧＡＧＴＧＡＴＧ－３（配列番号９）および５－ＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＧ－３（配列番号１０））。トランスフェクション後にＰＢＭＣによって産生された総ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－γの量を、ヒトＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ－α ＥＬＩＳＡＢＡＳＩＣキット（ＨＲＰ）、３４２５－１Ｈ－２０、ＭａｂｔｅｃｈおよびＨｕｍａｎ ＩＦＮ－λ１ ＥＬＩＳＡＢＡＳＩＣキット、３５７０－１Ｈ－２０、Ｍａｂｔｅｃｈ）を用いて無細胞上清中で測定した。１μＭ ＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６クラスＡ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）でのＰＢＭＣの２４時間処理を陽性対照として使用した。
【0217】
全てのケースにおいて、ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰは、ＲＮＡｉＭａｘと対照的に（表２５および表２６）、サイトカイン応答を上方制御することなく、ＰＢＭＣ細胞中のＰＵＦ６０ ｍＲＮＡのレベルを減少させた（表２４）。
【0218】
【表24】
【0219】
【表25】
【0220】
【表26】
【0221】
〔実施例４２〕
インビボにおけるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰの有効性
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２９を用いて、マウスアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子、コレステロール輸送に関与する肝細胞発現遺伝子（ＡｐｏＢ）（カタログ番号２３８０５５ ＡｐｏｂマウスｓｉＰＯＯＬ－４０キット、ｓｉＴＯＯＬｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を標的とするｓｉＲＮＡを有する、Ｂ４４と呼ばれるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ、および代わりに対照非標的ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（２３８０５５ ＡｐｏｂマウスｓｉＰＯＯＬ－４０キット、ｓｉＴＯＯＬｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨに封入）を有するｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ４５）を、実施例３３に記載されているように組み立て、形成した。ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰをＰＢＳに透析した。エンドトキシンレベルは２ＥＵ／ｍｌ未満であった。マウスを４時間絶食させた後、眼窩後出血による血漿採取を行った。ＡｐｏＢを標的とするｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを、５匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（ＢＩＯＣＥＶ、Ｃｚｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｇｅｎｏｍｉｃｓ、Ｖｅｓｔｅｃ）に、それぞれ、３２μｇのｓｉＲＮＡおよび１６μｇのｓｉＲＮＡの濃度で静脈内投与し、対照の５匹のマウスには３２μｇの非標的ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを投与し、別の５匹のマウスにはＰＢＳ対照を投与した。全てのマウスを、ＬＮＰ適用の２日後に屠殺した。コレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬ－Ｃの血漿レベルを、標準化されたプロトコルに従って、Ｃｚｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｇｅｎｏｍｉｃｓで自動化されたシステムを使用することによって測定した。
インビボにおけるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰの有効性
実施例２４からのトランスフェクション試薬Ａ２９を用いて、マウスアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子、コレステロール輸送に関与する肝細胞発現遺伝子（ＡｐｏＢ）（カタログ番号２３８０５５ ＡｐｏｂマウスｓｉＰＯＯＬ－４０キット、ｓｉＴＯＯＬｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を標的とするｓｉＲＮＡを有する、Ｂ４４と呼ばれるｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ、および代わりに対照非標的ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（２３８０５５ ＡｐｏｂマウスｓｉＰＯＯＬ－４０キット、ｓｉＴＯＯＬｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨに封入）を有するｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ４５）を、実施例３３に記載されているように組み立て、形成した。ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰをＰＢＳに透析した。エンドトキシンレベルは２ＥＵ／ｍｌ未満であった。マウスを４時間絶食させた後、眼窩後出血による血漿採取を行った。ＡｐｏＢを標的とするｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを、５匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（ＢＩＯＣＥＶ、Ｃｚｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｇｅｎｏｍｉｃｓ、Ｖｅｓｔｅｃ）に、それぞれ、３２μｇのｓｉＲＮＡおよび１６μｇのｓｉＲＮＡの濃度で静脈内投与し、対照の５匹のマウスには３２μｇの非標的ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを投与し、別の５匹のマウスにはＰＢＳ対照を投与した。全てのマウスを、ＬＮＰ適用の２日後に屠殺した。コレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬ－Ｃの血漿レベルを、標準化されたプロトコルに従って、Ｃｚｅｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｇｅｎｏｍｉｃｓで自動化されたシステムを使用することによって測定した。
【0222】
ＡｐｏＢノックダウンの影響を受ける総コレステロール、トリグリセリドおよびＬＤＬ－Ｃなどの血漿マーカーの臨床生化学は対照動物と比較して有意に減少したことから、新規ＬＮＰによるＡｐｏＢ ｓｉＲＮＡの肝臓への効率的な送達が実証された（表２７）。
【0223】
【表27】
【0224】
〔実施例４３〕
インビボにおけるヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰの有効性
ＣＲＥリコンビナーゼタンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＩＲＥＳ２－ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号２６６４６、Ａｎｊｅｎ Ｃｈｅｎｎによって供与された）から、プライマー（５’ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴ－‘３（配列番号９）；５‘－ＣＴＡＡＴＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡ－３‘（配列番号１０））を用いて増幅した。ＣＴＰが５－メチル－ＣＴＰ（ＮＵ－１１３８Ｌ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｐｒａｈａ ｓ．ｒ．ｏ．）と１００％交換され、ＵＴＰがＮ１－メチルシュードＵＴＰ（ＮＵ－８９０Ｌ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｐｒａｈａ ｓ．ｒ．ｏ．）と１００％交換されたことを除いて、実施例２５と同様にインビトロでメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を用いてＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳ中に希釈した；Ｂ４６と命名される、対応するナノ粒子をトランスフェクション試薬Ａ２８から形成した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ４６）を、各場合に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ～２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で、３匹のマウスに、組換えの成功の分析を可能にするグローバルデュアルＣｒｅレポーター（Ｍａｚｕｍｄａｒ、Ｍ．Ｄ．： Ｇｅｎｅｓｉｓ ２００７、４５：５９３－６０５）とともに静脈内投与した（飼育 ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）。ＣｒｅリコンビナーゼｍＲＮＡを担持するｍＲＮＡ－ＬＮＰが首尾よく送達された細胞では、染色体組換とそれに続く膜赤色タンパク質遺伝子（いわゆるレッドトマト）の切り出しと膜緑色タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子の転写の「オン」が起こった。非微粒子対照マウスを含むマウスを微粒子の適用の３日後に屠殺し、全ての器官を標準化プロトコルに従って組織学的分析に供した。組織学的画像は肝臓への粒子の完全な分布を示し、これは、適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への３５～７５％の変換を導いた。
インビボにおけるヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ－ＬＮＰの有効性
ＣＲＥリコンビナーゼタンパク質をコードする遺伝子を、プラスミドｐＣＡＧ－Ｃｒｅ－ＩＲＥＳ２－ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号２６６４６、Ａｎｊｅｎ Ｃｈｅｎｎによって供与された）から、プライマー（５’ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＡＡＴＴＴＡＣＴ－‘３（配列番号９）；５‘－ＣＴＡＡＴＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡ－３‘（配列番号１０））を用いて増幅した。ＣＴＰが５－メチル－ＣＴＰ（ＮＵ－１１３８Ｌ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｐｒａｈａ ｓ．ｒ．ｏ．）と１００％交換され、ＵＴＰがＮ１－メチルシュードＵＴＰ（ＮＵ－８９０Ｌ、Ｂｉｏｇｅｎ Ｐｒａｈａ ｓ．ｒ．ｏ．）と１００％交換されたことを除いて、実施例２５と同様にインビトロでメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を調製し、以下のようにＬＮＰにパッケージした：トランスフェクション試薬Ａ２８の３００μｌの試料、および３００μｌの１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）中の１２０μｇのｍＲＮＡを、実施例２５と同様にマイクロ流体装置を用いてＬＮＰへと組み立てた。得られたｍＲＮＡ－ＬＮＰを直ちに６００μｌのＰＢＳ中に希釈した；Ｂ４６と命名される、対応するナノ粒子をトランスフェクション試薬Ａ２８から形成した。ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ４６）を、各場合に０．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇ～２．５ｍｇ ｍＲＮＡ／ｋｇの濃度で、３匹のマウスに、組換えの成功の分析を可能にするグローバルデュアルＣｒｅレポーター（Ｍａｚｕｍｄａｒ、Ｍ．Ｄ．： Ｇｅｎｅｓｉｓ ２００７、４５：５９３－６０５）とともに静脈内投与した（飼育 ＢＩＯＣＥＶ、Ｖｅｓｔｅｃ）。ＣｒｅリコンビナーゼｍＲＮＡを担持するｍＲＮＡ－ＬＮＰが首尾よく送達された細胞では、染色体組換とそれに続く膜赤色タンパク質遺伝子（いわゆるレッドトマト）の切り出しと膜緑色タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子の転写の「オン」が起こった。非微粒子対照マウスを含むマウスを微粒子の適用の３日後に屠殺し、全ての器官を標準化プロトコルに従って組織学的分析に供した。組織学的画像は肝臓への粒子の完全な分布を示し、これは、適用の３日後に、赤色膜タンパク質を発現する細胞の、緑色膜タンパク質を発現する細胞への３５～７５％の変換を導いた。
【図面の簡単な説明】
【0225】
【図1】リピドイド４ａ～ｇの合成スキーム。
【図2】リピドイド９の合成スキーム。
【図3】リピドイド１３の合成スキーム。
【図4】化合物１９、リピドイド２１の前駆体の合成スキーム。
【図5】リピドイド２１の合成スキーム。
【図6】化合物２２およびそのアシルクロリド、リピドイド２３～２５の前駆体の合成スキーム。
【図7】リピドイド２３～２５の合成スキーム。
【図8】リピドイド２９ａ～ｆの合成スキーム
【図9】リピドイド３１ａ～ｄの合成スキーム。
【図10】ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（Ｂ３９）のマウス肝臓への機能的送達の試験。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】