(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-04-11
(45)【発行日】2023-04-19
(54)【発明の名称】膝の痛み改善剤
(51)【国際特許分類】
A61K 35/20 20060101AFI20230412BHJP
A23J 7/00 20060101ALI20230412BHJP
A23L 33/12 20160101ALI20230412BHJP
A61K 9/20 20060101ALI20230412BHJP
A61K 31/685 20060101ALI20230412BHJP
A61K 31/688 20060101ALI20230412BHJP
A61K 31/7008 20060101ALI20230412BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230412BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230412BHJP
【ＦＩ】
A61K35/20
A23J7/00
A23L33/12
A61K9/20
A61K31/685
A61K31/688
A61K31/7008
A61P19/02
A61P43/00 121
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2016146130
(22)【出願日】2016-07-26
(65)【公開番号】P2018016559
(43)【公開日】2018-02-01
【審査請求日】2019-06-12
【審判番号】
【審判請求日】2021-04-26
(73)【特許権者】
【識別番号】000000918
【氏名又は名称】花王株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000084
【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】播 さや香
(72)【発明者】
【氏名】杉浦 陽子
【合議体】
【審判長】冨永 みどり
【審判官】岡崎 美穂
【審判官】井上 典之
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１４－５１６５６５（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００１－１５８７３６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００６－２９０８１２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００６－１７６４６０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００７－１１６９３８（ＪＰ，Ａ）
【文献】ミルクサイエンス（２００９）ｖｏｌ．５８，ｎｏ．３，ｐ．１３５－１４１
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
A61K35
A61K31
A23L
ＰｕｂＭｅｄ
ＣＡｐｌｕｓ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤＳ／ＷＰＩＸ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＤＷＰＩ（Ｄｅｒｗｅｎｔ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ）乳脂肪球皮膜を有効成分とする経口膝の痛み改善剤（但し、骨関節疾患による膝の痛みの改善剤としての使用を除く）。
【請求項2】
（Ａ）乳脂肪球皮膜が、リン脂質を５～１００質量％含有する請求項１記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項3】
（Ａ）乳脂肪球皮膜が、スフィンゴミエリンを１～５０質量％含有する請求項１記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項4】
成人１人あたり１日にスフィンゴミエリンを１０～１５００ｍｇ経口投与又は経口摂取するものである請求項１～３のいずれか１項記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項5】
更に、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を有効成分として含有する請求項１～４のいずれか１項記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項6】
成人１人あたり１日にグルコサミンを１０～２００００ｍｇ経口投与又は経口摂取するものである請求項５記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項7】
剤型が固形製剤である請求項１～６のいずれか１項記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項8】
固形製剤が錠剤である請求項７記載の経口膝の痛み改善剤。
【請求項9】
（Ａ）乳脂肪球皮膜を有効成分とする膝の痛み改善用食品（但し、骨関節疾患による膝の痛みの改善用食品としての使用を除く）。
【請求項10】
（Ａ）乳脂肪球皮膜が、リン脂質を５～１００質量％含有する請求項９記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項11】
（Ａ）乳脂肪球皮膜が、スフィンゴミエリンを１～５０質量％含有する請求項９記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項12】
更に、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を有効成分として含有する請求項９～１１のいずれか１項記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項13】
成分（Ｂ）のグルコサミン換算量に対する成分（Ａ）の含有量の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］が０．１５～１０である請求項１２記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項14】
成人１人あたり１日にグルコサミンを１０～２００００ｍｇ経口投与又は経口摂取するものである請求項１２又は１３記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項15】
剤型が固形製剤である請求項９～１４のいずれか１項記載の膝の痛み改善用食品。
【請求項16】
固形製剤が錠剤である請求項１５記載の膝の痛み改善用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、膝の痛みを改善する膝の痛み改善剤に関する。
【背景技術】
【0002】
膝には脛骨大腿関節と膝蓋大腿関節とがあり、脛骨大腿関節は大腿骨と脛骨から構成され、膝蓋大腿関節は大腿骨と膝蓋骨（お皿）から構成される。膝関節は全身の関節のなかで最も体重による負担が大きく、歩行や階段昇降等の日常生活活動やスポーツ活動において常に負担を強いられている。こうした負担に加えて、加齢による大腿四頭筋の萎縮や関節軟骨の磨耗、変性、肥満等の要因により、特に中年以降、膝の痛みが生じるようになる。
【0003】
従来、膝の痛みを改善又は治療する方法として、生活指導、薬物療法、装具療法、物理療法、運動療法等の保存療法、人工関節置換術等の手術療法が適用される。膝痛を改善又は治療する薬剤としては、主に非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）が用いられる。その他、ヒアルロン酸注射や神経ブロック注射、グルコサミンやコンドロイチン等を配合したサプリメント、消炎鎮痛成分等を配合した湿布、ローション、クリーム、軟膏等の外用薬も用いられる（例えば、特許文献１）。しかしながら、効果は未だ不十分であったり、また、保存療法又は手術療法を実施するには医師及びその他の医療関係者の指導が必要であったりして、誰にでも起こりうる膝痛をより簡便な方法で改善する方法が望まれている。
【0004】
一方、乳脂肪球皮膜（Ｍｉｌｋ－ｆａｔ Ｇｌｏｂｕｌｅ Ｍｅｍｂｒａｎｅ：ＭＦＧＭ）は、乳腺より分泌される乳脂肪球を被覆している膜成分で、バターミルクやバターセーラム等の乳複合脂質高含有画分に多く含まれることが知られている（非特許文献１）。乳脂肪球皮膜は、脂肪を乳汁中に分散させる機能を有するのみならず、マウスにおける運動機能向上作用や筋力向上作用等の生理機能を有することが報告されている（特許文献２）。
しかしながら、乳脂肪球皮膜が膝の痛みへ与える影響に関しては報告がない。
しかしながら、乳脂肪球皮膜が膝の痛みへ与える影響に関しては報告がない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】特開２０１４－１３３７６９号公報
【文献】特開２０１０－５９１５５号公報
【非特許文献】
【0006】
【文献】三浦晋、ＦＯＯＤ ＳＴＹＬＥ２１、２００９年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、膝の痛みの改善に有用な医薬品、医薬部外品又は食品、或いはこれらに配合可能な素材又は製剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者は、上記課題に鑑み鋭意検討したところ、乳脂肪球皮膜が膝の痛みの改善に有用であることを見出した。
【0009】
すなわち、本発明は、（Ａ）乳脂肪球皮膜を有効成分とする膝の痛み改善剤を提供するものである。
また、本発明は、（Ａ）乳脂肪球皮膜を有効成分とする膝の痛み改善用食品を提供するものである。
また、本発明は、（Ａ）乳脂肪球皮膜を有効成分とする膝の痛み改善用食品を提供するものである。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、膝の痛みを軽減し、膝の痛みの改善を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】ＶＡＳ評価の結果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本発明で用いられる（Ａ）乳脂肪球皮膜は、乳脂肪球を被覆している膜、及び膜を構成する成分の混合物と定義される。乳脂肪球皮膜は、食経験が豊富で安全性が高い。
乳脂肪球皮膜は、一般的に、乾燥重量の約半分が脂質で構成され、当該脂質としては、トリグリセライドやリン脂質、スフィンゴ糖脂質が含まれることが知られている（三浦晋、ＦＯＯＤ ＳＴＹＬＥ２１、２００９及びＫｅｅｎａｎ ＴＷ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８３、ｐｐ８９－ｐｐ１３０）。リン脂質としては、スフィンゴミエリン（ＳＭ）等のスフィンゴリン脂質、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）やホスファチジルセリン（ＰＳ）等のグリセロリン脂質が含まれることが知られている。
また、脂質以外の成分としては、ミルクムチンと呼ばれる糖タンパク質が含まれることが知られている（Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、１９７８）。
乳脂肪球皮膜は、一般的に、乾燥重量の約半分が脂質で構成され、当該脂質としては、トリグリセライドやリン脂質、スフィンゴ糖脂質が含まれることが知られている（三浦晋、ＦＯＯＤ ＳＴＹＬＥ２１、２００９及びＫｅｅｎａｎ ＴＷ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８３、ｐｐ８９－ｐｐ１３０）。リン脂質としては、スフィンゴミエリン（ＳＭ）等のスフィンゴリン脂質、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）やホスファチジルセリン（ＰＳ）等のグリセロリン脂質が含まれることが知られている。
また、脂質以外の成分としては、ミルクムチンと呼ばれる糖タンパク質が含まれることが知られている（Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、１９７８）。
【0013】
本発明で用いられる（Ａ）乳脂肪球皮膜は、生理効果の点から、乳脂肪球皮膜中の脂質の含有量が、１０質量％以上、更に２０質量％以上、更に３０質量％以上であるのが好ましく、また、風味・ハンドリングの点から、１００質量％以下、更に９０質量％以下、更に６０質量％以下であるのが好ましい。
【0014】
（Ａ）乳脂肪球皮膜は、生理効果の点から、乳脂肪球皮膜中のリン脂質の含有量が５質量％以上、更に８質量％以上、更に１０質量％以上、更に１５質量％以上であるのが好ましく、また、風味・ハンドリングの点から、１００質量％以下、更に８５質量％以下、更に７０質量％以下、更に６０質量％以下であるのが好ましい。
【0015】
（Ａ）乳脂肪球皮膜は、生理効果の点から、乳脂肪球皮膜中のスフィンゴミエリン（ＳＭ）の含有量が、１質量％以上、更に２質量％以上、更に３質量％以上であるのが好ましく、また、風味・ハンドリングの点から、５０質量％以下、更に３０質量％以下、更に２５質量％以下、更に２０質量％以下であるのが好ましい。
同様の点から、（Ａ）乳脂肪球皮膜の全リン脂質中のスフィンゴミエリン含有量は、３質量％以上、更に５質量％以上、更に１０質量％以上、更に１５質量％以上であるのが好ましく、また、５０質量％以下、更に４０質量％以下、更に３５質量％以下、更に３０質量％以下であるのが好ましい。
尚、本明細書において、乳脂肪球皮膜中の脂質、リン脂質の含有量、並びに乳脂肪球皮膜の全リン脂質中のスフィンゴミエリンの含有量は、乳脂肪球皮膜の乾燥物に対する質量割合とする。
同様の点から、（Ａ）乳脂肪球皮膜の全リン脂質中のスフィンゴミエリン含有量は、３質量％以上、更に５質量％以上、更に１０質量％以上、更に１５質量％以上であるのが好ましく、また、５０質量％以下、更に４０質量％以下、更に３５質量％以下、更に３０質量％以下であるのが好ましい。
尚、本明細書において、乳脂肪球皮膜中の脂質、リン脂質の含有量、並びに乳脂肪球皮膜の全リン脂質中のスフィンゴミエリンの含有量は、乳脂肪球皮膜の乾燥物に対する質量割合とする。
【0016】
（Ａ）乳脂肪球皮膜は、原料乳から遠心分離法や有機溶剤抽出法等の公知の方法により得ることができる。例えば、特開平３－４７１９２号公報に記載の乳脂肪球皮膜の調製方法を用いることができる。また、特許第３１０３２１８号公報、特開２００７－８９５３５号公報に記載の方法等を用いることができる。
さらに、透析、硫安分画、ゲルろ過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画等の手法により精製することにより純度を高めたものを用いてもよい。
（Ａ）乳脂肪球皮膜の形態は、特に限定されず、室温（１５～２５℃）で液状、半固体状（ペースト等）、固体状（粉末、固形、顆粒等）等のいずれでもよく、これらを単独で又は２種以上組み合わせて用いてもよいが、好ましくは固体状（粉末）である。
さらに、透析、硫安分画、ゲルろ過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画等の手法により精製することにより純度を高めたものを用いてもよい。
（Ａ）乳脂肪球皮膜の形態は、特に限定されず、室温（１５～２５℃）で液状、半固体状（ペースト等）、固体状（粉末、固形、顆粒等）等のいずれでもよく、これらを単独で又は２種以上組み合わせて用いてもよいが、好ましくは固体状（粉末）である。
【0017】
（Ａ）乳脂肪球皮膜の原料乳としては、牛乳やヤギ乳等が挙げられる。なかでも、食経験が豊富であり、安価な点から、牛乳が好ましい。また、原料乳には、生乳、全粉乳や加工乳等の乳の他、乳製品も含まれ、乳製品としては、バターミルク、バターオイル、バターセーラム、ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）等が挙げられる。
バターミルクは、牛乳等を遠心分離して得られるクリームからバター粒を製造する際に得られ、当該バターミルク中に乳脂肪球皮膜が多く含まれているので、乳脂肪球皮膜としてバターミルクをそのまま使用してもよい。同様に、バターオイルを製造する際に生じるバターセーラム中にも乳脂肪球皮膜が多く含まれているので、乳脂肪球皮膜としてバターセーラムをそのまま使用してもよい。
バターミルクは、牛乳等を遠心分離して得られるクリームからバター粒を製造する際に得られ、当該バターミルク中に乳脂肪球皮膜が多く含まれているので、乳脂肪球皮膜としてバターミルクをそのまま使用してもよい。同様に、バターオイルを製造する際に生じるバターセーラム中にも乳脂肪球皮膜が多く含まれているので、乳脂肪球皮膜としてバターセーラムをそのまま使用してもよい。
【0018】
（Ａ）乳脂肪球皮膜は、市販品を用いることもできる。斯かる市販品としては、メグレジャパン（株）「ＢＳＣＰ」、雪印乳業（株）「ミルクセラミドＭＣ－５」、（株）ニュージーランドミルクプロダクツ「Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ シリーズ（５００，７００）」等が挙げられる。
【0019】
本発明の膝の痛み改善剤は、乳脂肪球皮膜による膝の痛み改善効果向上の点から、更に（Ｂ）グルコサミン又はその塩を含有することが好ましい。
グルコサミンは、従来、変形性膝関節症や関節痛の症状改善等の生理機能を有することが多く報告されているものの（例えば、特開２０１４－１３３７６９号公報、特開２０１３－９５７２３号公報等）、乳脂肪球皮膜とグルコサミンの組み合わせが、膝の痛みへ与える影響に関しては報告がない。
本発明で用いられる（Ｂ）グルコサミンは、分子式Ｃ6Ｈ13ＮＯ5で表される化合物である。グルコサミンは、Ｄ体であってもＬ体であってもよく、両異性体が混在するＤＬ体であってもよいが、Ｄ体が好ましい。また、α型とβ型いずれであってもよい。
グルコサミンの塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等の有機酸塩が挙げられ、好ましくは塩酸塩である。
これらのグルコサミン又はその塩は、単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
（Ｂ）グルコサミン又はその塩は、カニやエビ等の甲殻等から得られるキチンの酵素処理、加水分解、微生物発酵、化学合成等の公知の方法により製造してもよいし、市販のものを用いることもできる。
グルコサミンは、従来、変形性膝関節症や関節痛の症状改善等の生理機能を有することが多く報告されているものの（例えば、特開２０１４－１３３７６９号公報、特開２０１３－９５７２３号公報等）、乳脂肪球皮膜とグルコサミンの組み合わせが、膝の痛みへ与える影響に関しては報告がない。
本発明で用いられる（Ｂ）グルコサミンは、分子式Ｃ6Ｈ13ＮＯ5で表される化合物である。グルコサミンは、Ｄ体であってもＬ体であってもよく、両異性体が混在するＤＬ体であってもよいが、Ｄ体が好ましい。また、α型とβ型いずれであってもよい。
グルコサミンの塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等の有機酸塩が挙げられ、好ましくは塩酸塩である。
これらのグルコサミン又はその塩は、単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
（Ｂ）グルコサミン又はその塩は、カニやエビ等の甲殻等から得られるキチンの酵素処理、加水分解、微生物発酵、化学合成等の公知の方法により製造してもよいし、市販のものを用いることもできる。
【0020】
本発明において、（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩を組み合わせて用いる場合、その比率は、生理効果の点から、成分（Ｂ）のグルコサミン換算量に対する成分（Ａ）の含有量（乾燥物換算）の質量比［（Ａ）／（Ｂ）］で、好ましくは０．１５以上、より好ましくは０．３以上、更に好ましくは０．５以上であり、また、好ましくは１０以下、より好ましくは５以下、より好ましくは１以下である。
【0021】
後記実施例に示すように、（Ａ）乳脂肪球皮膜は、膝の痛みを有意に改善する作用を有する。しかも、その作用はグルコサミン単独の場合よりも優れている。また、同様に、（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩の組み合わせは、膝の痛みを有意に改善する作用を有する。
従って、（Ａ）乳脂肪球皮膜、並びに（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩の組み合わせは、膝の痛みの改善に有用な膝の痛み改善剤となり得、また、膝の痛み改善剤を製造するために使用することができる。すなわち、（Ａ）乳脂肪球皮膜、並びに（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩の組み合わせは、膝の痛みが気になるヒトに適用して、膝の痛みの改善のために使用することができる。
ここで、「膝の痛み」とは、膝部（大腿から下腿への移行部）の疼痛であり、膝関節の疼痛を包含する。膝関節は、大腿骨と脛骨から構成される脛骨大腿関節と、大腿骨と膝蓋骨（お皿）から構成される膝蓋大腿関節がある。
「改善」とは、症状又は状態の好転、症状又は状態の悪化の防止、抑制又は遅延、あるいは症状又は状態の進行の逆転、防止、抑制又は遅延をいう。
「使用」は、ヒトへの投与又は摂取であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
従って、（Ａ）乳脂肪球皮膜、並びに（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩の組み合わせは、膝の痛みの改善に有用な膝の痛み改善剤となり得、また、膝の痛み改善剤を製造するために使用することができる。すなわち、（Ａ）乳脂肪球皮膜、並びに（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩の組み合わせは、膝の痛みが気になるヒトに適用して、膝の痛みの改善のために使用することができる。
ここで、「膝の痛み」とは、膝部（大腿から下腿への移行部）の疼痛であり、膝関節の疼痛を包含する。膝関節は、大腿骨と脛骨から構成される脛骨大腿関節と、大腿骨と膝蓋骨（お皿）から構成される膝蓋大腿関節がある。
「改善」とは、症状又は状態の好転、症状又は状態の悪化の防止、抑制又は遅延、あるいは症状又は状態の進行の逆転、防止、抑制又は遅延をいう。
「使用」は、ヒトへの投与又は摂取であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【0022】
本発明において、（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩を組み合わせて用いる場合、本発明の膝の痛み改善剤は、（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩を配合剤として一の剤型に製剤化したものでも、また単独に製剤化したものを同時に又は間隔を空けて別々に使用できるようにしたキットであってもよい。好ましくは、（Ａ）乳脂肪球皮膜と（Ｂ）グルコサミン又はその塩を一緒に含む１剤型形態である。
【0023】
本発明の膝の痛み改善剤は、ヒトを含む動物に摂取又は投与した場合に膝の痛み改善効果を発揮する医薬品、医薬部外品又は食品となり、また当該膝の痛み改善剤は、当該医薬品、医薬部外品又は食品に配合して使用される素材又は製剤となり得る。
【0024】
当該食品には、膝の痛みの改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨の表示が許可された食品（特定保健用食品、機能性表示食品）が含まれる。これらの食品は機能表示が許可された食品であるため、一般の食品と区別することができる。
【0025】
上記医薬品（医薬部外品も含む、以下同じ）の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤等による経口投与が挙げられる。
このような種々の剤型の製剤は、本発明の（Ａ）乳脂肪球皮膜、さらに（Ｂ）グルコサミン又はその塩を組み合わせて、又は他の薬学的に許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等や、グルコサミン又はその塩と乳脂肪球皮膜以外の薬効成分を適宜組み合わせて調製することができる。
なかでも、好ましい剤型は経口投与用の固形製剤であり、錠剤が好ましい。
このような種々の剤型の製剤は、本発明の（Ａ）乳脂肪球皮膜、さらに（Ｂ）グルコサミン又はその塩を組み合わせて、又は他の薬学的に許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等や、グルコサミン又はその塩と乳脂肪球皮膜以外の薬効成分を適宜組み合わせて調製することができる。
なかでも、好ましい剤型は経口投与用の固形製剤であり、錠剤が好ましい。
【0026】
医薬品中の（Ａ）乳脂肪球皮膜の含有量（乾燥物換算）は、一般的に０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上、より好ましくは０．２質量％以上であり、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは９０質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下、更に好ましくは６０質量％以下である。
【0027】
（Ａ）乳脂肪球皮膜に加えて、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を含む場合、医薬品中の（Ｂ）グルコサミン又はその塩の含有量は、一般的にグルコサミン換算で０．８質量％以上、好ましくは８質量％以上、より好ましくは２５質量％、更に好ましくは３３質量％以上であり、また、好ましくは質量７５％以下、より好ましくは６６質量％以下、更に好ましくは５８質量％以下である。
【0028】
上記食品の形態としては、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品組成物の他、さらには、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、トローチ剤等の固形製剤）の栄養補給用組成物が挙げられる。なかでも、固形製剤が好ましく、錠剤がより好ましい。
【0029】
種々の形態の食品は、（Ａ）乳脂肪球皮膜、さらに（Ｂ）グルコサミン又はその塩を組み合わせて、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、酸味料、甘味料、苦味料、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、乳脂肪球皮膜とグルコサミン又はその塩以外の有効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。
【0030】
食品中の（Ａ）乳脂肪球皮膜の含有量（乾燥物換算）は、その使用形態により異なるが、飲料の形態では、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上、更に好ましくは０．１質量％以上であり、また、好ましくは３質量％以下、より好ましくは２質量％以下、更に好ましくは１質量％以下である。
【0031】
（Ａ）乳脂肪球皮膜に加えて、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を含む場合、食品中の（Ｂ）グルコサミン又はその塩の含有量は、その使用形態により異なるが、飲料の形態では、グルコサミン換算で好ましくは０．０８質量％以上、より好ましくは０．８質量％以上、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは２５質量％以下、より好ましくは８質量％以下、更に好ましくは４質量％以下である。
【0032】
錠剤や加工食品等の固形食品の形態では、（Ａ）乳脂肪球皮膜の含有量（乾燥物換算）は、好ましくは０．０５質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは０．２質量％以上であり、また、好ましくは９０質量％以下、より好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下、更に好ましくは６０質量％以下である。
【0033】
（Ａ）乳脂肪球皮膜に加えて、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を含む場合、錠剤や加工食品等の固形食品の形態では、（Ｂ）グルコサミン又はその塩の含有量は、グルコサミン換算で０．８質量％以上、好ましくは８質量％以上、より好ましくは２５質量％、更に好ましくは３３質量％以上であり、また、好ましくは７５質量％以下、より好ましくは６６質量％以下、更に好ましくは５８質量％以下である。
【0034】
本発明の膝の痛み改善剤の投与量又は摂取量は、投与又は摂取対象者の体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得るが、通常、成人１人（６０ｋｇ）に対して１日あたり、乳脂肪球皮膜（乾燥物換算）として、好ましくは０．１ｇ以上、より好ましくは０．３ｇ以上、更に好ましくは１ｇ以上であり、また、好ましくは３０ｇ以下、より好ましくは２０ｇ以下、更に好ましくは１０ｇ以下である。
また、通常、成人１人（６０ｋｇ）に対して１日あたり、スフィンゴミエリンとして、好ましくは１０ｍｇ以上、より好ましくは２０ｍｇ以上、更に好ましくは４０ｍｇ以上であり、また、好ましくは１５００ｍｇ以下、より好ましくは１０００ｍｇ以下、更に好ましくは５００ｍｇ以下、更に好ましくは２５０ｍｇ以下である。
また、通常、成人１人（６０ｋｇ）に対して１日あたり、スフィンゴミエリンとして、好ましくは１０ｍｇ以上、より好ましくは２０ｍｇ以上、更に好ましくは４０ｍｇ以上であり、また、好ましくは１５００ｍｇ以下、より好ましくは１０００ｍｇ以下、更に好ましくは５００ｍｇ以下、更に好ましくは２５０ｍｇ以下である。
【0035】
また、（Ｂ）グルコサミン又はその塩を投与又は摂取する場合、通常、成人１人（６０ｋｇ）に対して１日あたり、グルコサミンとして、好ましくは１０ｍｇ以上、より好ましくは４００ｍｇ以上、更に好ましくは１２００ｍｇ以上であり、また、好ましくは２０ｇ以下、より好ましくは１０ｇ以下、更に好ましくは５ｇ以下である。
【0036】
本発明では斯かる量を１日に１回～複数回で投与又は摂取するのが好ましい。
【0037】
上記製剤は、任意の計画に従って投与又は摂取され得る。
投与又は摂取期間は特に限定されないが、反復・連続して投与又は摂取することが好ましく、５日間以上連続して投与又は摂取することがより好ましく、１５日間以上連続して投与又は摂取することが更に好ましい。
投与又は摂取期間は特に限定されないが、反復・連続して投与又は摂取することが好ましく、５日間以上連続して投与又は摂取することがより好ましく、１５日間以上連続して投与又は摂取することが更に好ましい。
【0038】
投与又は摂取対象者としては、膝の痛みを抱え、膝の痛みの改善を必要とする若しくは希望するヒトであれば特に限定されないが、膝痛の自覚があるヒトにおける投与又は摂取が有効である。
【実施例】
【0039】
〔錠剤の調製〕
日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて、下記表１に示す組成の錠剤（実施例１：３５３ｍｇ／錠、実施例２：３５０ｍｇ／錠、比較例１：３３０ｍｇ／錠、比較例２：４５０ｍｇ／錠）を調製した。
日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて、下記表１に示す組成の錠剤（実施例１：３５３ｍｇ／錠、実施例２：３５０ｍｇ／錠、比較例１：３３０ｍｇ／錠、比較例２：４５０ｍｇ／錠）を調製した。
【0040】
【表1】
【0041】
乳脂肪球皮膜（ＭＦＧＭ）は牛乳から調製したものを使用した。
ＭＦＧＭの含水量は３．６質量％であった。ＭＦＧＭの組成は、乾燥物換算で、炭水化物：１１．３質量％、脂質：２５．１質量％、タンパク質：５３．６質量％であった。また、ＭＦＧＭ中、リン脂質の含有量は乾燥物換算で１６．６質量％であり、スフィンゴミエリンの含有量は３．６質量％であった。
ＭＦＧＭの含水量は３．６質量％であった。ＭＦＧＭの組成は、乾燥物換算で、炭水化物：１１．３質量％、脂質：２５．１質量％、タンパク質：５３．６質量％であった。また、ＭＦＧＭ中、リン脂質の含有量は乾燥物換算で１６．６質量％であり、スフィンゴミエリンの含有量は３．６質量％であった。
【0042】
上記ＭＦＧＭ、及びグルコサミンの分析は次のとおり行った。
（１）タンパク質の分析
タンパク質量はケルダール法を用いて、窒素・タンパク質換算係数６．３８として求めた。
（１）タンパク質の分析
タンパク質量はケルダール法を用いて、窒素・タンパク質換算係数６．３８として求めた。
【0043】
（２）脂質の分析
脂質量は酸分解法で求めた。試料を１ｇ量りとり、塩酸を加え分解した後、ジエチルエーテル及び石油エーテルを加え、攪拌混和した。エーテル混合液層を取り出し、水洗した。溶媒を留去させ、乾燥させた後、重量を秤量することで脂質量を求めた。
脂質量は酸分解法で求めた。試料を１ｇ量りとり、塩酸を加え分解した後、ジエチルエーテル及び石油エーテルを加え、攪拌混和した。エーテル混合液層を取り出し、水洗した。溶媒を留去させ、乾燥させた後、重量を秤量することで脂質量を求めた。
【0044】
（３）炭水化物の分析
炭水化物量は試料の質量から試料中のタンパク質量、脂質質量、灰分量、及び水分量を除くことにより求めた。なお、灰分量は直接灰化法(５５０℃で試料を灰化させ重量測定)、水分量は常圧加熱乾燥法(１０５℃４時間乾燥させ重量測定)により求めた。
炭水化物量は試料の質量から試料中のタンパク質量、脂質質量、灰分量、及び水分量を除くことにより求めた。なお、灰分量は直接灰化法(５５０℃で試料を灰化させ重量測定)、水分量は常圧加熱乾燥法(１０５℃４時間乾燥させ重量測定)により求めた。
【0045】
（４）リン脂質の分析
試料１ｇを量りとり、クロロホルム及びメタノールの２：１（Ｖ／Ｖ）混液１５０ｍＬ、１００ｍＬ、及び２０ｍＬ中でホモジナイズ後、０．８８質量％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウム水溶液９３ｍＬを添加し、一晩室温で放置した。脱水ろ過、溶媒留去後、クロロホルムを添加し総量を５０ｍＬとした。そのうち２ｍＬを分取し、溶媒留去後、５５０℃１６時間加熱処理により灰化した。灰分を６Ｍ塩酸水溶液５ｍＬに溶解後、蒸留水を添加し、総量を５０ｍＬとした。３ｍＬを分取し、モリブデンブルー発色試薬５ｍＬ、５質量％（Ｗ／Ｖ）アスコルビン酸水溶液１ｍＬ及び蒸留水を添加し総量を５０ｍＬとし、７１０ｎｍの吸光度を測定した。リン酸２水素カリウムを用いた検量線からリン量を求め、リン量に２５．４をかけた値をリン脂質量とした。
試料１ｇを量りとり、クロロホルム及びメタノールの２：１（Ｖ／Ｖ）混液１５０ｍＬ、１００ｍＬ、及び２０ｍＬ中でホモジナイズ後、０．８８質量％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウム水溶液９３ｍＬを添加し、一晩室温で放置した。脱水ろ過、溶媒留去後、クロロホルムを添加し総量を５０ｍＬとした。そのうち２ｍＬを分取し、溶媒留去後、５５０℃１６時間加熱処理により灰化した。灰分を６Ｍ塩酸水溶液５ｍＬに溶解後、蒸留水を添加し、総量を５０ｍＬとした。３ｍＬを分取し、モリブデンブルー発色試薬５ｍＬ、５質量％（Ｗ／Ｖ）アスコルビン酸水溶液１ｍＬ及び蒸留水を添加し総量を５０ｍＬとし、７１０ｎｍの吸光度を測定した。リン酸２水素カリウムを用いた検量線からリン量を求め、リン量に２５．４をかけた値をリン脂質量とした。
【0046】
（５）スフィンゴミエリンの分析
試料１ｇを量りとり、クロロホルム及びメタノールの２：１（Ｖ／Ｖ）混液１５０ｍＬ、１００ｍＬ、及び２０ｍＬ中でホモジナイズ後、０．８８質量％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウム水溶液９３ｍＬを添加し、一晩室温で放置した。脱水ろ過、溶媒留去後、クロロホルムを添加し総量を５０ｍＬとした。そのうち１０ｍＬを分取し、シリカカートリッジカラムに添加した。カラムをクロロホルム２０ｍＬで洗浄後、メタノール３０ｍＬでリン脂質を溶出し、溶媒留去後クロロホルム１．８８ｍＬに溶解した。シリカゲル薄層プレートに２０μＬを負荷し、１次元展開溶媒としてテトラヒドロフラン：アセトン：メタノール：水＝５０：２０：４０：８（Ｖ／Ｖ）、２次元展開溶媒としてクロロホルム:アセトン：メタノール：酢酸：水＝５０：２０：１０：１５：５（Ｖ／Ｖ）を用いて２次元展開を行った。展開後の薄層プレートにディトマー試薬を噴霧し、スフィンゴミエリンのスポットをかきとり、３質量％（Ｖ／Ｖ）硝酸含有過塩素酸溶液２ｍＬ添加後、１７０℃３時間の加熱処理を行った。蒸留水５ｍＬ添加後モリブデンブルー発色試薬５ｍＬ、５質量％（Ｗ／Ｖ）アスコルビン酸水溶液１ｍＬ及び蒸留水を添加し総量を５０ｍＬとし、７１０ｎｍの吸光度を測定した。リン酸２水素カリウムを用いた検量線からリン量を求め、リン量に２５．４をかけた値をスフィンゴミエリン量とした。
試料１ｇを量りとり、クロロホルム及びメタノールの２：１（Ｖ／Ｖ）混液１５０ｍＬ、１００ｍＬ、及び２０ｍＬ中でホモジナイズ後、０．８８質量％（Ｗ／Ｖ）塩化カリウム水溶液９３ｍＬを添加し、一晩室温で放置した。脱水ろ過、溶媒留去後、クロロホルムを添加し総量を５０ｍＬとした。そのうち１０ｍＬを分取し、シリカカートリッジカラムに添加した。カラムをクロロホルム２０ｍＬで洗浄後、メタノール３０ｍＬでリン脂質を溶出し、溶媒留去後クロロホルム１．８８ｍＬに溶解した。シリカゲル薄層プレートに２０μＬを負荷し、１次元展開溶媒としてテトラヒドロフラン：アセトン：メタノール：水＝５０：２０：４０：８（Ｖ／Ｖ）、２次元展開溶媒としてクロロホルム:アセトン：メタノール：酢酸：水＝５０：２０：１０：１５：５（Ｖ／Ｖ）を用いて２次元展開を行った。展開後の薄層プレートにディトマー試薬を噴霧し、スフィンゴミエリンのスポットをかきとり、３質量％（Ｖ／Ｖ）硝酸含有過塩素酸溶液２ｍＬ添加後、１７０℃３時間の加熱処理を行った。蒸留水５ｍＬ添加後モリブデンブルー発色試薬５ｍＬ、５質量％（Ｗ／Ｖ）アスコルビン酸水溶液１ｍＬ及び蒸留水を添加し総量を５０ｍＬとし、７１０ｎｍの吸光度を測定した。リン酸２水素カリウムを用いた検量線からリン量を求め、リン量に２５．４をかけた値をスフィンゴミエリン量とした。
【0047】
（６）グルコサミンの分析
試料１ｇを量りとり、水を加えた後、３０分間超音波抽出した。２００ｍLに定容後、ろ紙、次いでメンブランフィルターでろ過し、そのろ液を高速液体クロマトグラフィーの試料とした。高速液体クロマトグラフ操作の条件は下記のとおりである。
機種：ＬＣ‐１０ＡＤｖｐ（株式会社 島津製作所）
検出器：示差屈折計 ＲＩＤ－１０Ａ（株式会社 島津製作所）
カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＯＤＳ Ａ, φ６．０ｍｍ×１５０ｍｍ（株式会社 ワイエムシイ）
カラム温度：４５℃
移動相：０．００５ｍｏｌ／Ｌオクタンスルホン酸Ｎａを含む２３ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）
流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μＬ
試料１ｇを量りとり、水を加えた後、３０分間超音波抽出した。２００ｍLに定容後、ろ紙、次いでメンブランフィルターでろ過し、そのろ液を高速液体クロマトグラフィーの試料とした。高速液体クロマトグラフ操作の条件は下記のとおりである。
機種：ＬＣ‐１０ＡＤｖｐ（株式会社 島津製作所）
検出器：示差屈折計 ＲＩＤ－１０Ａ（株式会社 島津製作所）
カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ ＯＤＳ Ａ, φ６．０ｍｍ×１５０ｍｍ（株式会社 ワイエムシイ）
カラム温度：４５℃
移動相：０．００５ｍｏｌ／Ｌオクタンスルホン酸Ｎａを含む２３ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）
流量：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２０μＬ
【0048】
〔二重盲検無作為割付パラレルデザインによる比較検証試験〕
（１）対象者及び試験方法
５０～７０歳代の健常男女８８名を、ＭＦＧＭ群、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群、グルコサミン群、プラセボ群の４つに群分けし（各群２２名）、ＭＦＧＭ群にはＭＦＧＭを含む実施例１の錠剤（計１０粒）を、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群にはＭＦＧＭとグルコサミンを含む実施例２の錠剤（計１０粒）を、グルコサミン群にはグルコサミンを含む比較例１の錠剤（計６粒）を、プラセボ群にはＭＦＧＭとグルコサミンを含まない比較例２の錠剤（計７粒）を、４週間、毎日好きなタイミングで摂取させた。
（１）対象者及び試験方法
５０～７０歳代の健常男女８８名を、ＭＦＧＭ群、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群、グルコサミン群、プラセボ群の４つに群分けし（各群２２名）、ＭＦＧＭ群にはＭＦＧＭを含む実施例１の錠剤（計１０粒）を、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群にはＭＦＧＭとグルコサミンを含む実施例２の錠剤（計１０粒）を、グルコサミン群にはグルコサミンを含む比較例１の錠剤（計６粒）を、プラセボ群にはＭＦＧＭとグルコサミンを含まない比較例２の錠剤（計７粒）を、４週間、毎日好きなタイミングで摂取させた。
【0049】
（２）膝の痛み改善効果の評価
膝の痛み改善効果の評価は、変形性膝関節症患者機能評価尺度（ＪＫＯＭ：Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｋｎｅｅ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｍｅａｓｕｒｅ、日本整形外科学会他）のＩ 膝の痛みの程度を尋ねる視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）により評価した。具体的には、試験開始前（０週目）と試験開始から４週間後に、１００ｍｍの直線の左端０ｍｍを「痛みなし」（数値０）、右端１００ｍｍを「これまでに経験した最も激しい痛み」（数値１００）の感覚として、それぞれ数日間の両膝の痛みの程度を、直線の左右両端に示した感覚を参考に１００ｍｍの直線上にマーキングさせた。
膝の痛み改善効果の評価は、変形性膝関節症患者機能評価尺度（ＪＫＯＭ：Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｋｎｅｅ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｍｅａｓｕｒｅ、日本整形外科学会他）のＩ 膝の痛みの程度を尋ねる視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）により評価した。具体的には、試験開始前（０週目）と試験開始から４週間後に、１００ｍｍの直線の左端０ｍｍを「痛みなし」（数値０）、右端１００ｍｍを「これまでに経験した最も激しい痛み」（数値１００）の感覚として、それぞれ数日間の両膝の痛みの程度を、直線の左右両端に示した感覚を参考に１００ｍｍの直線上にマーキングさせた。
【0050】
（３）結果
試験開始前（０週目）の数値（ＶＡＳ値）が１１以上であったＭＦＧＭ群の１３名、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群の１２名、グルコサミン群の１５名、プラセボ群の１３名を最終解析対象者とした。
最終解析対象者５３名の４週間後の数値（ＶＡＳ値）について、各群、初期値との差（Δ値）を算出し図１に示した。図１中、Ｍ＋ＧはＭＦＧＭ＋グルコサミン群を示す。
得られた数値は平均値±標準誤差で示した。
図１より、試験開始前に対する試験終了後の膝の痛みの程度は、ＭＦＧＭ群でプラセボ群、グルコサミン群に比して改善した。また、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群でプラセボ群、グルコサミン群、ＭＦＧＭ群に比して改善した（プラセボ＜グルコサミン＜ＭＦＧＭ＜Ｍ＋Ｇ）。このことから、ＭＦＧＭによって、また、ＭＦＧＭとグルコサミンの組み合わせによって、膝の痛みが顕著に改善されることが確認された。
試験開始前（０週目）の数値（ＶＡＳ値）が１１以上であったＭＦＧＭ群の１３名、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群の１２名、グルコサミン群の１５名、プラセボ群の１３名を最終解析対象者とした。
最終解析対象者５３名の４週間後の数値（ＶＡＳ値）について、各群、初期値との差（Δ値）を算出し図１に示した。図１中、Ｍ＋ＧはＭＦＧＭ＋グルコサミン群を示す。
得られた数値は平均値±標準誤差で示した。
図１より、試験開始前に対する試験終了後の膝の痛みの程度は、ＭＦＧＭ群でプラセボ群、グルコサミン群に比して改善した。また、ＭＦＧＭ＋グルコサミン群でプラセボ群、グルコサミン群、ＭＦＧＭ群に比して改善した（プラセボ＜グルコサミン＜ＭＦＧＭ＜Ｍ＋Ｇ）。このことから、ＭＦＧＭによって、また、ＭＦＧＭとグルコサミンの組み合わせによって、膝の痛みが顕著に改善されることが確認された。
【図1】
