▶ チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーションの特許一覧 ▶ パーデュー リサーチ ファウンデーションの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-04-13
(45)【発行日】2023-04-21
(54)【発明の名称】注射可能な長時間作用型ナルトレキソン微粒子組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 9/16 20060101AFI20230414BHJP
A61K 31/485 20060101ALI20230414BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20230414BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20230414BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20230414BHJP
A61K 47/44 20170101ALI20230414BHJP
A61P 25/36 20060101ALI20230414BHJP
A61P 25/32 20060101ALI20230414BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20230414BHJP
【ＦＩ】
A61K9/16
A61K31/485
A61K47/34
A61K47/02
A61K47/38
A61K47/44
A61P25/36
A61P25/32
A61P25/04
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2021521011
(86)(22)【出願日】2019-10-15
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-01
(86)【国際出願番号】 KR2019013535
(87)【国際公開番号】W WO2020080806
(87)【国際公開日】2020-04-23
【審査請求日】2021-04-15
(31)【優先権主張番号】62/745,805
(32)【優先日】2018-10-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】514052597
【氏名又は名称】チョン クン ダン ファーマシューティカル コーポレーション
(73)【特許権者】
【識別番号】517417773
【氏名又は名称】パーデュー リサーチ ファウンデーション
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユン，グワンハム
(72)【発明者】
【氏名】ソウ，バンカン
(72)【発明者】
【氏名】オッティ，アンドリュー デビッド
(72)【発明者】
【氏名】パク，キナン
【審査官】松本 淳
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１４１５２９４（ＣＮ，Ａ）
【文献】特開２０１１－２２５５９４（ＪＰ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０１０４９２８８（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０１６１２４３７（ＣＮ，Ａ）
【文献】特開２０１１－２２５６００（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１８／１１１８５１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００３－５３４３６６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表平０８－５１２２８８（ＪＰ，Ａ）
【文献】DINARVAND, R. et al，Preparation of Biodegradable Microspheres and Matrix Devices Containing Naltrexone，AAPS PharmSciTech，2003年，Vol.4(3) Article 34
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ９／００－ ９／７２
Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４
Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９
Ａ６１Ｐ １／００－４３／００
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ナルトレキソンと、乳酸：グリコール酸比が８５：１５であるポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）とを含む微粒子を含む注射可能な微粒子製剤であって、前記微粒子製剤の微粒子がマイクロ粒子であり、ナルトレキソンが４週間よりも長く、最大１００日間持続放出される、微粒子製剤。
【請求項2】
ナルトレキソンは８週間から１２週間持続放出される、請求項１に記載の微粒子製剤。
【請求項3】
前記ナルトレキソンが、遊離塩基、塩、溶媒和物、共結晶、又はこれらの組合せの形態である、請求項１又は２に記載の微粒子製剤。
【請求項4】
前記ナルトレキソンが、前記微粒子の２０～４０％（ｗ／ｗ）である、請求項１～３のいずれか一項に記載の微粒子製剤。
【請求項5】
前記ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）の数平均分子量が５０，０００～１５０，０００ダルトンである、請求項１～４のいずれか１項に記載の微粒子製剤。
【請求項6】
前記微粒子が、水性担体、油性担体、又はこれらの組合せを含む生体適合性担体中で投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の微粒子製剤。
【請求項7】
前記水性担体が、等張化剤、粘度向上剤、湿潤剤、又はこれらの組合せを含み、前記等張化剤が塩化ナトリウムであり、前記粘度向上剤がカルボキシメチルセルロースナトリウムであり、前記湿潤剤がポリソルベートである、請求項６に記載の微粒子製剤。
【請求項8】
前記油性担体が、落花生油、ゴマ油、綿実油、又はこれらの組合せを含む、請求項６に記載の微粒子製剤。
【請求項9】
前記微粒子の粒子径が、２５～１２５μｍの範囲にある、請求項１～８のいずれか一項に記載の微粒子製剤。
【請求項10】
オピオイド乱用若しくは過剰摂取、アルコール依存、又は疼痛に関連する疾患を治療又は予防するための、請求項１～９のいずれか一項に記載の微粒子製剤。
【請求項11】
請求項１～１０のいずれか一項に記載の注射可能な微粒子製剤を調製するための方法であって：（ａ）ポリビニルアルコール及び第１溶媒を含む第１相と、前記乳酸：グリコール酸比が８５：１５であるポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）、ナルトレキソン、及び第２溶媒を含む第２相とを混合することにより、混合物を調製することと；
（ｂ）前記混合物に水又は水溶液を用いて抽出処理を実施することにより、微粒子を得ることと；
を含む、方法。
【請求項12】
前記第１溶媒が、水、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記第２溶媒が、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種を含む、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項14】
前記水溶液が、ポリビニルアルコール、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種を含む、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
（ｂ）前記抽出処理、を実施した後に、（ｃ）前記微粒子にエタノール性水溶液を用いて更なる抽出処理を実施すること、を更に含む、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記微粒子を乾燥させることを更に含み、前記乾燥は、（ｂ）前記抽出処理を実施した後、（ｃ）前記更なる抽出処理を実施した後、又は（ｂ）及び（ｃ）のそれぞれの後に実施される、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
請求項１～９のいずれか一項に記載の微粒子製剤を医薬に調整することを含む、オピオイドの乱用や過剰摂取、アルコール依存症や疼痛に関連する疾患を治療または予防するための医薬の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下に、２０１８年１０月１５日に出願された米国仮出願第６２／７４５８０５号明細書の優先権を主張するものであり、その内容を参照により本明細書に援用する。
【0002】
本開示は、ナルトレキソンによって改善される疾患を治療するための、ナルトレキソンを持続放出する微粒子送達システムに関する。注射可能なこの微粒子送達システムは、医薬的に許容される担体中で投与される、生分解性を有する微粒子内に封入されたナルトレキソンを含む。
【背景技術】
【0003】
薬物乱用は病気であり、社会の至るところで依然として発生し続けている。１９６０年代及び１９７０年代のヘロイン流行時に薬物乱用が発生していたことから、薬物乱用は一般に都市中心部の問題と考えられていたが、オピオイド乱用問題は当時よりも広範囲に、都市中心部から農村部へと広がり、国内全体に蔓延するようになった。特にオピオイド系薬物の乱用者数は、医薬製剤及び違法薬物のどちらに関しても、ここ数十年で劇的に増加している。
【0004】
ナルトレキソンを毎日経口投与することは有効であるが、その主な問題は、服薬遵守率が低いこと又は服薬不遵守にある。月１回の投与を要求した場合、治療開始から６０日後の離脱率が高かった（２５～３６％）ことが分かっている［Ｇａｒｂｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｆｏｒ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ；ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．ＪＡＭＡ．２９３（１３）：１６１７－１６２５，２００５；Ｈｕｌｓｅ Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｆｏｒ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ａｓ ａ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｂｌｅｍ ａｌｃｏｈｏｌ ｕｓｅ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７６（５）６３２－６４１，２０１３］。したがって、より長い時間に亘り作用するナルトレキソン製剤は、患者の服薬遵守率を向上し、再依存を減らし、患者の転帰を長期間に亘りより安定させることが期待される。
【0005】
ナルトレキソンを内包する（ｌｏａｄｅｄ）様々な徐放性微粒子が特性評価されている。Ｅｈｒｉｃｈ（米国特許第７，９１９，４９９号明細書、Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｌｏｎｇ ａｃｔｉｎｇ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ）及びＢｒｉｔｔａｉｎら（米国特許第７，２７９，５７９（Ｂ２）号明細書、Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）は、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）中に約３１０ｍｇ～約４８０ｍｇのナルトレキソンを含み、ナルトレキソンを約４週間に亘り放出する長時間作用型製剤を教示している。Ｔｉｃｅら（米国特許第６，３０６，４２５（Ｂ１）号明細書、Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ ｉｎ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ）は、１週間当たり初期含有量の約１０～４０％のナルトレキソンを４週間に亘り放出する、ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸）（ＰＤＬＬ）マトリックス中の注射可能な徐放性ナルトレキソン製剤を教示している。Ｎｕｗａｙｓｅｒ（米国特許第７，１５７，１０２（Ｂ１）号明細書、Ｍｕｌｔｉ－ｌａｙｅｒｅｄ ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｓａｍｅ）は、１ヵ月間送達を行うための、ナルトレキソン内包率の高い（＞４０％ｗ／ｗ）、多層構造を有する複合カプセ
ル（ｍｕｌｔｉｃａｐｓｕｌｅ）を教示している。ここに開示されているナルトレキソンをベースとする微粒子製剤はいずれも、放出特性を示す期間は最大で約４週間又は１ヵ月間である。したがって、当該技術分野において、４週間又は１ヵ月間よりも長く送達を行うための長時間作用型微粒子製剤を調製することが求められている。
ル（ｍｕｌｔｉｃａｐｓｕｌｅ）を教示している。ここに開示されているナルトレキソンをベースとする微粒子製剤はいずれも、放出特性を示す期間は最大で約４週間又は１ヵ月間である。したがって、当該技術分野において、４週間又は１ヵ月間よりも長く送達を行うための長時間作用型微粒子製剤を調製することが求められている。
【0006】
４週間又は１ヵ月間よりも長く送達される徐放性ナルトレキソンを埋め込むことに基づく長時間作用型送達システムが開発されている。Ｋｕｏ及びＫｕｚｍａ（米国特許第８，３４３，５２８号明細書、Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｄｅｖｉｃｅｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ ｂａｓｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ)、Ｓａｘｅｎａ及びＳａｘｅｎａ（国際公開第２０１７／０３３２０８号パンフレット、Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｔａｂｌｅｔｓ）、並びにＯ’Ｎｅｉｌ及びＬｉｕ（米国特許第７，９１４，８０４号明細書、Ｓｌｏｗ ｒｅｌｅａｓｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ）は、いずれも、埋め込み型の長時間作用型ナルトレキソン送達システムを開示している。こうした埋め込み型製剤は、通常、埋め込み剤を留置するために外来外科手術を行う必要がある。このようなシステムは、ナルトレキソンの微粒子型製剤と比較して長時間の放出特性を示すことができる例もあるが、外科手術の必要性及び患者自身が抜去してしまう危険性がその利益を上回る場合もある。
ｔｈｅｉｒ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ)、Ｓａｘｅｎａ及びＳａｘｅｎａ（国際公開第２０１７／０３３２０８号パンフレット、Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｔａｂｌｅｔｓ）、並びにＯ’Ｎｅｉｌ及びＬｉｕ（米国特許第７，９１４，８０４号明細書、Ｓｌｏｗ ｒｅｌｅａｓｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ）は、いずれも、埋め込み型の長時間作用型ナルトレキソン送達システムを開示している。こうした埋め込み型製剤は、通常、埋め込み剤を留置するために外来外科手術を行う必要がある。このようなシステムは、ナルトレキソンの微粒子型製剤と比較して長時間の放出特性を示すことができる例もあるが、外科手術の必要性及び患者自身が抜去してしまう危険性がその利益を上回る場合もある。
【0007】
ビビトロール（Ｖｉｖｉｔｒｏｌ）（登録商標）（アルケルメス・インコーポレーテッド（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．））は、現在、約７～１０日間のオピオイド解毒後にオピオイド依存症の再発を防止する目的で処方されている。４週間おき又は月１回の筋肉内注射で３８０ｍｇの用量を送達することが推奨されている。この注射剤は、希釈剤（水性担体）中に懸濁しているポリマー微粒子から構成され、２０ゲージ（Ｇ）の針で注射される。２０Ｇの針が必要とされる理由は、臀部の筋肉内に注射すること、微粒子及び希釈剤の量、そして最終的には微粒子の粒子径（ｓｉｚｅ）及び粒子径分布（ｓｉｚｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）にある。微粒子のｄ５０，ｖｏｌｕｍｅは１０８．４９μｍであり、ｄ５０，ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎは５８．４６μｍと報告されている（Ａｎｄｈａｒｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｅｓｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｌｏａｄｅｄ ＰＬＧＡ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．５２０（１－２）７９－８５，２０１７）。ここでｄ５０，ｖｏｌｕｍｅは、粒子の５０体積％の直径が１０８．４９μｍよりも大きく、粒子の５０体積％の直径が１０８．４９μｍよりも小さくなる値である。ｄ５０，ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ値が５８．４６であるとは、粒子の個数の５０％の直径が５８．４６μｍよりも大きく、粒子の個数の５０％の直径が５８．４６μｍよりも小さいということである。したがって、患者に投与するために使用する針の径を小さく、即ち、針のゲージ数を大きくする試みにおいて、微粒子の粒子径が小さいナルトレキソン内包微粒子を調製することが必要とされている。
【0008】
純粋なジアモルフィンを５００ｍｇもの高量で投与しても、血清中ナルトレキソン濃度が２．８ｎｇ／ｍＬであれば、その作用を阻害するのに十分であることが２人の患者で示されており（Ｃ．Ｂｒｅｗｅｒ．Ｓｅｒｕｍ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ａｎｄ ６－ｂｅｔａ－ｎａｌｔｒｅｘｏｌ ｌｅｖｅｌｓ ｆｒｏｍ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ ｃａｎ ｂｌｏｃｋ ｖｅｒｙ ｌａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ：ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｗｏ ｃａｓｅｓ．Ａｄｄｉｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：３２１－３２３，２００２）、２５ｍｇのヘロインに対し２．４ｎｇ／ｍＬで完全な拮抗作用を示し（Ｖｅｒｅｂｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ：Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｄｏｓｉｎｇ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，
２０：３１５－３２８，１９７６）、オピオイドの致死的過量投与から保護するのに十分であるとして、１～２ｎｇ／ｍＬの濃度が目標とされている（Ｈｕｌｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｏｐｉｏｉｄ ｏｖｅｒｄｏｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ．Ｄｒｕｇ
Ａｌｃｏｈｏｌ Ｄｅｐｅｎｄ．，７９：３５１－３５７，２００５及びＣｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐｏｔ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ：Ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１５９：３５１－３６０，２００２）。ビビトレックス（Ｖｉｖｉｔｒｅｘ）（登録商標）のパイロット試験においては、２回目の注射を行う前の血漿中ナルトレキソンのトラフ濃度の平均値は１．２３ｎｇ／ｍＬ（±０．８３ｎｇ／ｍＬ）であり、これは残りの試験期間中比較的安定なままであり；ナルトレキソントラフ濃度平均値の平均（ａｖｅｒａｇｅ ｍｅａｎ）は１．３３ｎｇ／ｍＬ（±１．７４ｎｇ／ｍＬ）であった（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｐｉｌｏｔ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｐｅａｔ ｄｏｓｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ（Ｖｉｖｉｔｒｅｘ（登録商標））ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｅｓ．２８：１３５６－１３６１，２００４）。ラットモデルにおいては、約１～２ｎｇ／ｍＬの血漿中ナルトレキソン濃度が「モルヒネ誘発鎮痛ホットプレート試験（ｍｏｒｐｈｉｎｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎａｌｇｅｓｉａ ｈｏｔ－ｐｌａｔｅ ｔｅｓｔ」において有効であることが示された（Ｔｈｅ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｓｏｒｂ Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ，ａ ｏｎｃｅ ａ ｍｏｎｔｈ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １０：６４３－６５５，２００５）。したがって、先行技術において、ナルトレキソンを、初期バースト放出を最小限に抑えながら速やかに治療量に到達させ、最大濃度を最小限に抑え、それにより、治療用ナルトレキソンを１ヵ月間よりも長く、より安定な量で提供すると共に、注射可能な様式の剤形とすることが求められている。
２０：３１５－３２８，１９７６）、オピオイドの致死的過量投与から保護するのに十分であるとして、１～２ｎｇ／ｍＬの濃度が目標とされている（Ｈｕｌｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｏｐｉｏｉｄ ｏｖｅｒｄｏｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ．Ｄｒｕｇ
Ａｌｃｏｈｏｌ Ｄｅｐｅｎｄ．，７９：３５１－３５７，２００５及びＣｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐｏｔ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ：Ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１５９：３５１－３６０，２００２）。ビビトレックス（Ｖｉｖｉｔｒｅｘ）（登録商標）のパイロット試験においては、２回目の注射を行う前の血漿中ナルトレキソンのトラフ濃度の平均値は１．２３ｎｇ／ｍＬ（±０．８３ｎｇ／ｍＬ）であり、これは残りの試験期間中比較的安定なままであり；ナルトレキソントラフ濃度平均値の平均（ａｖｅｒａｇｅ ｍｅａｎ）は１．３３ｎｇ／ｍＬ（±１．７４ｎｇ／ｍＬ）であった（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｐｉｌｏｔ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｐｅａｔ ｄｏｓｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ（Ｖｉｖｉｔｒｅｘ（登録商標））ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｅｓ．２８：１３５６－１３６１，２００４）。ラットモデルにおいては、約１～２ｎｇ／ｍＬの血漿中ナルトレキソン濃度が「モルヒネ誘発鎮痛ホットプレート試験（ｍｏｒｐｈｉｎｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎａｌｇｅｓｉａ ｈｏｔ－ｐｌａｔｅ ｔｅｓｔ」において有効であることが示された（Ｔｈｅ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｓｏｒｂ Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ，ａ ｏｎｃｅ ａ ｍｏｎｔｈ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １０：６４３－６５５，２００５）。したがって、先行技術において、ナルトレキソンを、初期バースト放出を最小限に抑えながら速やかに治療量に到達させ、最大濃度を最小限に抑え、それにより、治療用ナルトレキソンを１ヵ月間よりも長く、より安定な量で提供すると共に、注射可能な様式の剤形とすることが求められている。
【0009】
低用量（ｌｏｗ－ｄｏｓｅ）ナルトレキソン（ＬＤＮ）（１～５ｍｇ／日、経口）、超低用量（ｖｅｒｙ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ）ナルトレキソン（ＶＬＤＮ）（１μｇ～１ｍｇ）、及び極低用量（ｕｌｔｒａ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ）ナルトレキソン（ＵＬＤＮ）（１μｇ未満）と称される、より低いナルトレキソン用量を用いた場合、従来処方されている経口用量である５０ｍｇ／日とは薬力学的応答が異なることが示された（Ｔｏｌｊａｎ ａｎｄ Ｖｒｏｏｍａｎ，Ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ（ＬＤＮ）－Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｍｅｄ Ｓｃｉ．６，８２，２０１８）。ＬＤＮは、グリア細胞のモジュレーター（ｇｌｉａｌ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として作用し、線維筋痛、クローン病、多発性硬化症、複合性局所疼痛症候群、がん等の状態に有益となる可能性がある。ＵＬＤＮの作用機序には、オピオイドに対する二峰性（ｂｉｍｏｄａｌ）の細胞応答が関係するようであり、これを術後鎮痛管理に使用することによりオピオイドの総量が低減される。したがって、低用量水準のナルトレキソン（例えば、ＬＤＮ、ＶＬＤＮ、ＵＬＤＮ等）の治療濃度を安定化させることが先行技術において必要とされている。
【0010】
所望の特性を有する製剤には多くの制約：薬物の放出は長期間に亘らなければならないこと、薬物の内包量は充分でなければならないこと、ポリマーマトリックスは生分解性及び生体適合性を有していなければならないこと、残留化学物質及び溶媒は最大許容水準を下回るべきであること、マイクロスフェアは十分に小さく、且つ患者に使いやすい針を通
過できなければならないこと等が課せられる。微粒子の物理化学的性質は、薬物の特性、ポリマーマトリックスの特性、放出調整物質の特性に加えて、微粒子を調製する処理工程により影響を受ける。
過できなければならないこと等が課せられる。微粒子の物理化学的性質は、薬物の特性、ポリマーマトリックスの特性、放出調整物質の特性に加えて、微粒子を調製する処理工程により影響を受ける。
【0011】
化合物をどのように封入して微粒子形態にするかについては様々な方法が開示されている。これらの方法においては、薬物または他の活性化合物を、一般に、溶媒、通常は有機溶媒中で、撹拌機、ホモジナイザー、又は他の動的混合素子を使用して、溶解、分散、又は乳化することにより、マトリックス材料を含む溶液を形成している。次いで有機溶媒を、抽出工程及び／又は追加の洗浄工程により薬物－マトリックス材料から除去した後、微粒子生成物が得られる。得られる微粒子の特性は、微粒子の調製に用いられる多くのパラメータの影響を受ける。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0012】
【文献】米国特許第７，９１９，４９９号
【文献】米国特許第７，２７９，５７９（Ｂ２）号
【文献】米国特許第６，３０６，４２５（Ｂ１）号
【文献】米国特許第７，１５７，１０２（Ｂ１）号
【文献】米国特許第８，３４３，５２８号
【文献】国際公開第２０１７／０３３２０８号パンフレット
【文献】米国特許第７，９１４，８０４号
【非特許文献】
【0013】
【文献】Ｇａｒｂｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｆｏｒ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ；ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．ＪＡＭＡ．２９３（１３）：１６１７－１６２５，２００５
【文献】Ｈｕｌｓｅ Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｆｏｒ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ａｓ ａ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｂｌｅｍ ａｌｃｏｈｏｌ ｕｓｅ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７６（５）６３２－６４１，２０１３
【文献】Ａｎｄｈａｒｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｅｓｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｌｏａｄｅｄ ＰＬＧＡ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．５２０（１－２）７９－８５，２０１７
【文献】Ｃ．Ｂｒｅｗｅｒ．Ｓｅｒｕｍ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ａｎｄ ６－ｂｅｔａ－ｎａｌｔｒｅｘｏｌ ｌｅｖｅｌｓ ｆｒｏｍ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ ｃａｎ ｂｌｏｃｋ ｖｅｒｙ ｌａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ：ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｗｏ ｃａｓｅｓ．Ａｄｄｉｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７：３２１－３２３，２００２
【文献】Ｖｅｒｅｂｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ：Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｄｏｓｉｎｇ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０：３１５－３２８，１９７６
【文献】Ｈｕｌｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｏｐｉｏｉｄ ｏｖｅｒｄｏｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ ｉｍｐｌａｎｔｓ．Ｄｒｕｇ Ａｌｃｏｈｏｌ Ｄｅｐｅｎｄ．，７９：３５１－３５７，２００５
【文献】Ｃｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐｏｔ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ：Ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｅｒｏｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１５９：３５１－３６０，２００２
【文献】Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｐｉｌｏｔ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｐｅａｔ ｄｏｓｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ（Ｖｉｖｉｔｒｅｘ（登録商標））ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ａｌｃｏｈｏｌ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｅｓ．２８：１３５６－１３６１，２００４
【文献】Ｔｈｅ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｓｏｒｂ Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ，ａ ｏｎｃｅ ａ ｍｏｎｔｈ ｌｏｎｇ－ａｃｔｉｎｇ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １０：６４３－６５５，２００５
【文献】Ｔｏｌｊａｎ ａｎｄ Ｖｒｏｏｍａｎ，Ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ（ＬＤＮ）－Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｍｅｄ Ｓｃｉ．６，８２，２０１８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
当該技術分野においては、ナルトレキソンを１ヵ月間よりも長く放出することができる微粒子を調製する方法が必要とされている。以下に充分に説明する本開示は、１ヵ月間よりも長くナルトレキソンを放出する製剤への要求を解決するものである。
【課題を解決するための手段】
【0015】
発明の形態
本開示は、ナルトレキソン及びポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）としても知られるポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）等の生分解性ポリマーを含む、１ヵ月間を超えて放出制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅ）（又は持続放出）される注射可能なナルトレキソン微粒子製剤に関する。この微粒子（マイクロスフェア）は、皮下又は筋肉内に容易に注射することができる。より詳細には、本開示は、４週間よりも長く、好ましくは約８週間～約１２週間、より好ましくは最大１００日間に亘り独自のナルトレキソン放出特性を示す注射可能な微粒子の調製方法に関する。この微粒子は、水中油型エマルジョンの溶媒を抽出／蒸発させることにより調製される。分散している油相は、有機溶媒を使用して生成された溶液であり、主としてナルトレキソンと生分解性及び生体適合性を有するポリマーとを含む。
本開示は、ナルトレキソン及びポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）としても知られるポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）等の生分解性ポリマーを含む、１ヵ月間を超えて放出制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ－ｒｅｌｅａｓｅ）（又は持続放出）される注射可能なナルトレキソン微粒子製剤に関する。この微粒子（マイクロスフェア）は、皮下又は筋肉内に容易に注射することができる。より詳細には、本開示は、４週間よりも長く、好ましくは約８週間～約１２週間、より好ましくは最大１００日間に亘り独自のナルトレキソン放出特性を示す注射可能な微粒子の調製方法に関する。この微粒子は、水中油型エマルジョンの溶媒を抽出／蒸発させることにより調製される。分散している油相は、有機溶媒を使用して生成された溶液であり、主としてナルトレキソンと生分解性及び生体適合性を有するポリマーとを含む。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】微粒子を調製するための方法の一実施形態を説明するフロー図である。
【図3】薬物内包率（ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ）が３７～４０％（ｗ／ｗ）の範囲にある実施例５の製剤からのナルトレキソンのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出を例示するものである。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本開示の実施形態を、その開示の様々な態様がより充分に理解及び評価されるように、特定の好ましい実施形態及び任意の実施形態を含めて詳細に説明する。本明細書においては、４週間よりも長く、特に約８週間～約１２週間（又は１００日間）に亘り活性剤を放出制御する注射可能なナルトレキソン微粒子製剤を開示する。
【0018】
長時間作用型製剤は、噴霧乾燥、エマルジョンに基づく技法、押出し、微細加工に基づく技法、コアセルベーション、及び他のプロセスを用いて放出制御特性を有する薬物－ポリマー微粒子を製造することにより調製することができる。
【0019】
一実施形態においては、放出制御送達システムとして使用するための微粒子の形成方法を提供する。注射可能な微粒子製剤を調製するためのこの方法は：（ａ）ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）及び第１溶媒を含む第１相と、生分解性ポリマー、ナルトレキソン、及び第２溶媒を含む第２相と、を混合することにより混合物を調製する工程と；（ｂ）この混合物を、水又は水溶液を用いる抽出処理に付すことにより微粒子を得る工程と；を含む。好ましくは、この方法は、抽出処理に付した後の微粒子に施す乾燥処理を含む。他の実施形態において、この方法は、（ｂ）抽出処理、を行った後に、任意選択的に、（ｃ）エタノール性水溶液を用いて微粒子を更なる抽出処理に付すこと、を含む。この方法が更なる抽出処理を含む場合、微粒子の乾燥処理は、該更なる抽出処理の前及び／又は後に行われる。例えば、粒子の乾燥は、（ｂ）抽出処理を行った後、（ｃ）更なる抽出処理を行った後、又は（ｂ）及び（ｃ）のそれぞれの後に行われる。
【0020】
図１を参照しながら本発明の実施形態による方法を詳細に説明する。本開示における「第１」又は「第２」という語は、本開示の説明をより簡潔に行うことのみを目的として使用するものであり、これらの語は、その間に特定の順序又は重要度があることを表したり示唆したりするものではない。更に、違いがあることが文脈から明らかである場合を除いて、本開示全体を通して、単数形による表現は複数の意味も包含する。
【0021】
第１相及び第２相の混合は任意の順序で行われる。一態様においては、これらに限定されるものではないが、第１相を第２相の上に加えた後、混合することにより混合物を調製してもよい。この処理は乳化であってもよく、混合物は、ポリマー、ナルトレキソン、及び１種又は複数種の溶媒の水中油型エマルジョンである。混合物（エマルジョン）中の油の粒子は、本開示の後続（ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ）処理を行うことにより微粒子となる。混合は、所望の範囲の粒子径を有する微粒子を形成するための処理とすることもでき、この範囲は、回転速度やパワー等の混合条件に依存し得る。
【0022】
本開示においては第１相を連続相と称することもできる。第１相は、ポリ（ビニルアルコール）及び第１溶媒を含み、第１溶媒は、水、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ベンジルアルコール（ＢＡ）、及び酢酸エチル（ＥＡ）からなる群から選択される少なくとも１種を
含む。一態様において、第１溶媒は水を含まなければならない。例えば、第１溶媒は水とすることができ、第１相は、水にＰＶＡを添加することにより形成することができる。
含む。一態様において、第１溶媒は水を含まなければならない。例えば、第１溶媒は水とすることができ、第１相は、水にＰＶＡを添加することにより形成することができる。
【0023】
他の態様において、第１溶媒は、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種である有機溶媒を更に含むことができる。第１溶媒が水及び１種以上の有機溶媒を含む場合、第１相を調製する際に有機溶媒をポリ（ビニルアルコール）及び水と一緒に混合してもよい。他の態様において、第１溶媒が水及び１種以上の有機溶媒を含む場合、第１相を調製する際に、ポリ（ビニルアルコール）及び水を混合した直後に、ポリ（ビニルアルコール）及び水を含む溶液を有機溶媒と混合してもよい。他の態様において、第１溶媒が水及び１種以上の有機溶媒を含む場合、第１相及び第２相を混合する直前に、ポリ（ビニルアルコール）及び水を含む溶液を有機溶媒と混合してもよい。好ましくは、第２相と混合する直前に、ポリ（ビニルアルコール）及び水を含む溶液を１種以上の有機溶媒と混合することができる。
【0024】
一態様において、連続相（第１相）は、水中にポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）を約０．１～５％（ｗ／ｖ）含む。他の態様において、連続相は、ジクロロメタン（ＤＣＭ）を０～１．８％（ｗ／ｖ）及び／又はベンジルアルコールを０～３．３％（ｗ／ｖ）を更に含むことができる。
【0025】
本開示においては、第２相を有機相と称することもできる。第２相は、生分解性ポリマー、ナルトレキソン、及び第２溶媒を含み、第２溶媒は、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種を含む。一態様において、第２溶媒は、ジクロロメタンと、ベンジルアルコール、酢酸エチル、又はこれらの組合せとを含む。他の態様においては、微粒子を調製するために、第２相は、塩化メチレンとしても知られるジクロロメタン（ＤＣＭ）等の有機溶媒に溶解させた約１～４０％（ｗ／ｗ）の生分解性ポリマーと、ベンジルアルコール等の他の有機溶媒に溶解させた１～５０％（ｗ／ｗ）のナルトレキソンと、を含む。ナルトレキソンは、遊離塩基、塩、溶媒和物、共結晶、又はこれらの組合せの形態で本方法に使用することができる。
【0026】
生体適合性及び生分解性を有するポリマーは、ホモポリマー、コポリマー、若しくはターポリマーとするか、又はエステル基等の基で連結された繰り返しモノマー単位とすることができる。ポリマーは、約１種以上のヒドロキシカルボン酸残基の単位から構成されていてもよいポリエステルであってもよく、単位の分布は、ランダム、ブロック、交互（ｐａｉｒｅｄ）、又は逐次重合による（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ）分布を示し得る。生分解性ポリマーがポリエステルである場合、ポリエステルとしては、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ＰＬＧＡが挙げられる。一態様において、生分解性ポリマーは、ポリ乳酸、ＰＬＧＡ、又はこれらの組合せである。好ましくは、好適な生分解性ポリエステルは、乳酸：グリコール酸（Ｌ：Ｇ）（モル）比が５０：５０～１００：０、好ましくは６５：３５～９０：１０、より好ましくは７５：２５～８５：１５である。好ましくは、好適な生分解性ポリエステルは、６０：４０～９５：５ ＰＬＧＡである。より好ましくは、好適な生分解性ポリエステルは、７０：３０～９０：１０ ＰＬＧＡである。更に好ましくは、生分解性ポリエステルは、７５：２５～８５：１５ ＰＬＧＡである。最も好ましくは、生分解性ポリエステルは、８５：１５ ＰＬＧＡである。一態様において、生分解性ポリエステルの平均分子量は５０,０００～１５０，０００ダルトンである。
【0027】
混合物（エマルジョン）は、微粒子を得るための適切な溶媒抽出処理に付され、溶媒量は、最終的に、許容できる水準まで低減される。本開示における「抽出する（ｅｘｔｒａｃｔ）」、「抽出（すること）（ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ）」、及び「抽出（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）」、という語は、ポリ（ビニルアルコール）、生分解性ポリマー、ナルトレキソン、及び１種以上の溶媒を含む混合物又はエマルジョンを抽出相と接触させることを指
す。溶媒抽出処理においては、１種以上の有機溶媒が混合物（エマルジョン）の油粒子から除去され、その結果としてポリマー及びナルトレキソンを含む微粒子が得られる。
す。溶媒抽出処理においては、１種以上の有機溶媒が混合物（エマルジョン）の油粒子から除去され、その結果としてポリマー及びナルトレキソンを含む微粒子が得られる。
【0028】
溶媒抽出処理は、少なくとも１回の抽出処理を含む。この抽出処理（１回目）においては、混合物（エマルジョン）に対し水又は水溶液である抽出相を用いて処理を実施することにより、微粒子が得られる。水溶液は、ポリ（ビニルアルコール）、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種を含むことができる。好ましくは、抽出相は、ポリビニルアルコール、ジクロロメタン、ベンジルアルコール、及び酢酸エチルからなる群から選択される少なくとも１種を０～３％（ｗ／ｖ）含む水とすることができる。より好ましくは、抽出相は、ポリ（ビニルアルコール）を０～２％（ｗ／ｖ）、ジクロロメタンを０～１．８％（ｗ／ｖ）、ベンジルアルコールを０～２％（ｗ／ｖ）、又は酢酸エチルを０～３％（ｗ／ｖ）を含む水とすることができる。
【0029】
溶媒抽出処理が２回の抽出処理を含む場合、更なる抽出処理（２回目）は、微粒子に対しエタノール性水溶液（本開示においては、エタノール性抽出相又はエタノール溶液とも称する）を用いて処理を実施することができる。エタノール性抽出相は、エタノール約１～５０％（ｖ／ｖ）の水溶液である。
【0030】
各抽出処理の温度は約４～３０℃の範囲とすることができる。好ましくは、１回目の（水性）抽出処理は、約４～１０℃の範囲の温度で行うことができる。好ましくは、２回目の（エタノール性）抽出処理は、約２０～３０℃の範囲の温度で行うことができる。抽出時間は約２～８時間の範囲とすることができる。
【0031】
一態様においては、溶媒抽出処理を行った後に、任意選択的に微粒子の乾燥を行う。この乾燥は、真空下に約４～３０℃の範囲の温度で行うこともできるし、又は凍結乾燥等の他の乾燥処理を行うこともできる。溶媒抽出処理が２回の抽出処理を含む場合、２回の抽出処理の間に任意選択的な更なる乾燥処理を行うことができる。中間の乾燥は、真空下に約４～３０℃の範囲の温度で行うことができる。
【0032】
本方法は、各乾燥処理を行う前に、混合物（エマルジョン）、溶液、分散液等から微粒子を回収するための回収処理を含む。回収処理は、様々な孔径（ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ）を有する篩を用いて行われる。篩の孔径は１０～２００μｍの範囲にある。
【0033】
本方法は、溶媒抽出処理の後に、任意選択的な洗浄処理も含むことができる。本方法が回収処理を含む場合、洗浄処理は、回収後の、乾燥を行う前に行うことができる。洗浄処理は、本開示においては、溶媒や未反応物質等の残留物を除去する処理にもなり得る。
【0034】
一実施形態においては、注射可能な微粒子製剤が提供される。一態様においては、本発明の方法に従い、注射可能な微粒子製剤が調製される。
【0035】
本開示の注射可能な微粒子製剤は、ナルトレキソン及び生分解性ポリマーを含む微粒子を含む。この微粒子は、ナルトレキソンの持続放出特性を示す。一態様においては、ナルトレキソンの持続放出は４週間よりも長く、最大１００日間持続する。他の態様において、ナルトレキソンは、約８週間～約１２週間持続放出される。微粒子は、ナルトレキソンを約２０～４０％（ｗ／ｗ）含む。ナルトレキソンは、遊離塩基、塩、溶媒和物、共結晶、又はこれらの組合せの形態とすることができる。
【0036】
生分解性ポリマーは、ポリ乳酸、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）、又はこれらの組合せを含む。好ましくは、生分解性ポリマーの乳酸：グリコール酸（Ｌ：Ｇ）（モル）比
は、５０：５０～１００：０、好ましくは６５：３５～９０：１０、より好ましくは７５：２５～８５：１５とすることができる。生分解性ポリマーの分子量は、５０，０００ダルトン～１５０，０００ダルトンとすることができる。
は、５０：５０～１００：０、好ましくは６５：３５～９０：１０、より好ましくは７５：２５～８５：１５とすることができる。生分解性ポリマーの分子量は、５０，０００ダルトン～１５０，０００ダルトンとすることができる。
【0037】
好ましい実施形態において、注射可能なナルトレキソン微粒子は、後述の実施例に記載するもの等の、分子量が少なくとも５０，０００ダルトンである８５：１５のＰＬＧＡ中に、ナルトレキソンを含む。好ましくは、ＰＬＧＡの分子量は、５０，０００ダルトン～１５０，０００ダルトンである。
【0038】
好ましい一実施形態において、ナルトレキソンは、長時間作用型製剤中に、製剤の総重量に対するナルトレキソンの量が、少なくとも約２０重量％、好ましくは少なくとも約３０重量％、より好ましくは少なくとも約３５重量％、例えば約４０重量％となるように存在する。一態様において、ナルトレキソンは、長時間作用型製剤中に、約２０～４０％（ｗ／ｗ）の量で存在する。
【0039】
微粒子は、２０Ｇよりも細い針を用いて皮下及び／又は筋肉内に注射するのに適した範囲の粒子径分布で調製することができる。粒子径、形状、形態（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）、及び空隙率は、放出特性が制御されるように、且つシリンジ及び針を通過できるように操作することができる。ナルトレキソンを内包する微粒子は、１～２００μｍの範囲の粒子径分布を有することができる。より好ましくは、粒子径分布は、約１０～１２５μｍの範囲とすることができる。更に好ましくは、粒子径分布は、約２５～１００μｍの範囲とすることができる。一態様において、微粒子の平均粒子径は、２５～１２５μｍの範囲とすることができる。
【0040】
一実施形態においては、生分解性微粒子を注射する方法が提供される。この方法は、許容可能な（生体適合性を有する）担体中に生分解性微粒子を含む流動性組成物を注射することを含む。許容可能な（生体適合性を有する）担体としては、水性（ａｑｕｅｏｕｓ－ｂａｓｅｄ）担体、油性（ｏｉｌ－ｂａｓｅｄ）担体、又はこれらの組合せが挙げられる。好ましくは、許容可能な担体は、水性系（ａｑｕｅｏｕｓ ｂａｓｅｄ ｓｙｓｔｅｍ）である。この水性系は、塩化ナトリウム等の等張化剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム等の粘度向上剤、ポリソルベート等の湿潤剤、又はこれらの組合せを含む。一態様において、水性系は、ポリソルベート２０等の湿潤剤と、カルボキシメチルセルロースナトリウムやヒアルロン酸等の粘度向上剤とから構成することができる。他の許容可能な担体は、吸水速度制限剤（ｗａｔｅｒ ｕｐｔａｋｅ ｒａｔｅ ｌｉｍｉｔｅｒ）及び／又は拡散障壁としても作用する油性担体とすることもでき、それにより、初期放出を制限するか又は定常状態の速度を低下させるかのいずれかによって放出速度を変更することができる。生体適合性を有する油担体は、落花生油、ヒマシ油、ゴマ油、ヒマワリ油、大豆油、コーン油、綿実油、又はこれらの任意の組合せを含む。一態様において、好適な許容可能な媒体は、水性担体及び油性担体の組合せとすることもできる。微粒子は皮下又は筋肉内に投与することができる。
【0041】
一実施形態において、放出制御製剤は、治療に有益な量のナルトレキソンを、対象に、少なくとも４週間、好ましくは少なくとも６週間、より好ましくは少なくとも８週間の期間に亘り提供する。
【0042】
好ましい一実施形態においては、ナルトレキソンをビビトロール（Ｖｉｖｉｔｒｏｌ）に使用されている用量と等しい用量（ナルトレキソン３８０ｍｇ）で使用することにより、治療に有益な量のナルトレキソンの作用持続時間が、４週間よりも長く、好ましくは６週間よりも長く、より好ましくは８週間よりも長く、更に好ましくは１２週間よりも長くなる。
【0043】
一実施形態においては、オピオイド乱用若しくは過剰摂取、アルコール依存、又は疼痛に関連する疾患を、ナルトレキソン又はその代謝物により治療又は予防する方法が提供される。この方法は、そのような治療又は予防を必要とする患者（対象）に、ナルトレキソンを含む微粒子、この微粒子を含む微粒子製剤、又はこの微粒子若しくは微粒子製剤を含む組成物を有効量投与することを含む。
【0044】
他の実施形態においては、注射可能な微粒子製剤を含む組成物が提供される。この組成物は生体適合性担体を含むことができ、生体適合性担体は、水性担体、油性担体、又はその両方を含む。一態様において、この組成物は、注射剤として製剤化されている。
【0045】
一実施形態においては、オピオイド乱用若しくは過剰摂取、アルコール依存、又は疼痛に関連する疾患の治療又は予防に使用するための、注射可能な微粒子製剤を含む組成物が提供される。この組成物は、生体適合性担体を含むことができ、生体適合性担体は、水性担体、油性担体、又はその両方を含む。一態様において、この組成物は、注射剤として製剤化されている。
【0046】
他の実施形態においては、オピオイド乱用若しくは過剰摂取、アルコール依存、又は疼痛に関連する疾患を治療又は予防するための注射可能な微粒子製剤の使用が提供される。
【0047】
他の実施形態においては、オピオイド乱用若しくは過剰摂取、アルコール依存、又は疼痛に関連する疾患を治療又は予防するための医薬の調製における、注射可能な微粒子製剤の使用が提供される。
【0048】
放出特性は、数ある因子の中でも特に、生分解性及び生体適合性を有するＰＬＧＡポリマーの、Ｌ：Ｇ比、分子量、末端基、及び多分散度、残留溶媒の含有量、製造手法に応じて変化し得る。更に、放出特性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ実験間の温度の違い、放出される媒体及び間質液の違い、並びに／又は投与に使用される担体等の因子に起因して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの条件間でも変化し得る。
【0049】
４週間を超える、特に約８～１２週間（又は１００日間）に亘る放出能力を有する微粒子を提供することにより、対象は、注射回数が減り、通院に必要な回数が減ることになる。本開示の微粒子は、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏの両方の条件下で、ナルトレキソンの典型的な持続放出を示す。患者の服薬遵守を向上するために、微粒子の粒子径及び／又はナルトレキソンの量を修正することができる。
【0050】
以下に示す実施例は、説明を目的として提供されるものであって、限定を目的とするものと解釈すべきではない。
【実施例】
【0051】
実施例１
ＰＬＧＡ ７５：２５を処理に用いることの影響
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解さ
せたＰＬＧＡ ７５：２５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５６Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから、又は２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ７５：２５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５６Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ＰＬＧＡ ７５：２５を処理に用いることの影響
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解さ
せたＰＬＧＡ ７５：２５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５６Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから、又は２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ７５：２５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５６Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0052】
これら２種の製剤を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ系ラットを用いる薬物動態試験にて、３８ｍｇ／ｋｇの用量で評価した。
【0053】
結果として得られた薬物内包率及び残留ベンジルアルコール含有量を表１に示す。どちらの製剤も約９０％のカプセル化効率を達成したが、約４～５週間しか放出されず、薬物内包率が高い方が速度が速かった。図２中、Ｆ．１－１についてはレベルＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ－ｉｎ ｖｉｖｏ相関が認められたが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、Ｆ．１－２で観測されたものよりも速いｉｎ ｖｉｖｏ反応を予測している。
【0054】
【表1】
【0055】
薬物内包率（％ｗ／ｗ）は、微粒子に含まれるナルトレキソンの量を示し、ＥＥ（％）は、微粒子調製におけるナルトレキソンの出発量と比較した、最終的に残存しているナルトレキソンの量を示す。
【0056】
実施例２
ＰＬＧＡ ７５：２５の分子量及び供給業者の影響
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（
フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ７５：２５を５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を、脱イオン水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ＰＬＧＡ ７５：２５の分子量及び供給業者の影響
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（
フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））１．３３３ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ７５：２５を５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を、脱イオン水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0057】
結果として得られた薬物内包率及び残留ベンジルアルコール含有量を表２に示す。
【0058】
レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５０及び７５６を用いた場合、結果として得られる薬物内包率及び放出プロファイルが類似しており、これは、ＲＧ ７５０の方が範囲が広いものの、固有粘度が類似していることに起因すると考えられる。固有粘度の規格値が非常に類似しているレソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ７５５及びラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００７－１に関しても、結果として得られる薬物内包率及び薬物放出プロファイルが類似していた。ラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００７－２は、試験に供した他のＰＬＧＡと同程度の薬物内包率が得られたが、放出プロファイルに関しては、放出速度がはるかに速かった。製剤Ｆ．２－１～Ｆ．２－５の薬物放出プロファイルは約３０～３５日間持続した。
【0059】
【表2】
【0060】
実施例３
ナルトレキソン微粒子の調製：製剤３
連続相を、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した
。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ、エヴォニク・サイロ、ニュージャージー州パーシッパニー（Ｅｖｏｎｉｋ Ｃｙｒｏ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ））５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＤＣＭ０．５％ｗ／ｖを含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：製剤３
連続相を、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した
。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ、エヴォニク・サイロ、ニュージャージー州パーシッパニー（Ｅｖｏｎｉｋ Ｃｙｒｏ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ））５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＤＣＭ０．５％ｗ／ｖを含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0061】
結果として得られた薬物内包率は２８．１％（７５．９％ＥＥ）であり、残留ベンジルアルコールは０．５５％であった。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物放出プロファイルにおいては、約５０日間に亘り擬０次放出速度を示した。
【0062】
実施例４
ナルトレキソン微粒子の調製：製剤４
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＤＣＭ０．６６％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである４℃の抽出相に移した。次いで微粒子を８時間撹拌した後、２３μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２３μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：製剤４
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで混合物を、ＤＣＭ０．６６％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである４℃の抽出相に移した。次いで微粒子を８時間撹拌した後、２３μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２３μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0063】
結果として得られた薬物内包率は２１．７％（５８．６％ＥＥ）であり、残留ベンジルアルコールは０．８３％であった。抽出相中のＤＣＭの量がより多く（０．６６％（ｗ／ｖ））、出発時点の有機相のベンジルアルコール含有量がより多いと、製剤の薬物内包率が大幅に低下する。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物放出プロファイルにおいては、約６０日間に亘り擬０次放出速度を示した。
【0064】
実施例５
ナルトレキソン微粒子の調製：乳化媒体中の溶媒の影響
連続相は、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ４．０ｇ及びベンジルアルコール１．９０８ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ
８５８Ｓ）１．０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））８１８ｍｇから、又は２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ４．０ｇ及びベンジルアルコール１．０４ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）１．０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））８１８ｍｇから構成されるものとした。連続相又は連続相にＤＣＭ若しくはベンジルアルコール（ＢＡ）を更に混合したもの（表３に記載）１５ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を抽出相（表３に記載）７６０ｍＬに移し、４℃で４時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液４００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２３μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：乳化媒体中の溶媒の影響
連続相は、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ４．０ｇ及びベンジルアルコール１．９０８ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ
８５８Ｓ）１．０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））８１８ｍｇから、又は２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ４．０ｇ及びベンジルアルコール１．０４ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）１．０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））８１８ｍｇから構成されるものとした。連続相又は連続相にＤＣＭ若しくはベンジルアルコール（ＢＡ）を更に混合したもの（表３に記載）１５ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで混合物を抽出相（表３に記載）７６０ｍＬに移し、４℃で４時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液４００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２３μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0065】
結果として得られた薬物内包率及び残留ベンジルアルコール含有量を表３に示す。ベンジルアルコールの出発量がより多いと、残留ベンジルアルコールが増加することが分かる。８０～９０％のカプセル化効率を達成することができる。この実施例では、抽出媒体がジクロロメタンを含む場合、結果として残留するベンジルアルコール含有量が最も少なくなるが、この処理によってナルトレキソンも失われる。薬物放出曲線は、１％ＰＶＡ中に３．３％ＢＡ（ベンジルアルコール）を含む場合と１％ＰＶＡのみの場合とでは放出に差が見られないようである。１％ＰＶＡ中に１．８％ＤＣＭを含む場合は、初期の放出速度がわずかに低下したが、これは薬物内包率がより低いことに起因する可能性がある。
【0066】
【表3】
【0067】
実施例６
ナルトレキソン微粒子の調製：油／水比の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有
機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内で酢酸エチル（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））３．１５ｇ及びベンジルアルコール１．１７ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）０．６３０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））３７０ｍｇから構成されるものとした。連続相を更に酢酸エチルと混合し、酢酸エチル６．５２５％（ｗ／ｖ）を含む連続相２０ｍＬを有機相と一緒に、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて４，０００又は７，０００ＲＰＭで３０秒間乳化させた。次いで混合物を、酢酸エチル２．５％（ｗ／ｖ）を含む水２５０ｍＬである抽出相に移し、４℃で２時間又は４時間撹拌した。次いで、１０μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液１５０ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄し、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１５０μｍの篩を通過させ、１０μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：油／水比の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有
機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内で酢酸エチル（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））３．１５ｇ及びベンジルアルコール１．１７ｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）０．６３０ｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））３７０ｍｇから構成されるものとした。連続相を更に酢酸エチルと混合し、酢酸エチル６．５２５％（ｗ／ｖ）を含む連続相２０ｍＬを有機相と一緒に、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて４，０００又は７，０００ＲＰＭで３０秒間乳化させた。次いで混合物を、酢酸エチル２．５％（ｗ／ｖ）を含む水２５０ｍＬである抽出相に移し、４℃で２時間又は４時間撹拌した。次いで、１０μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液１５０ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄し、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１５０μｍの篩を通過させ、１０μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0068】
結果として得られた薬物内包率及び残留ベンジルアルコール含有量を表４に示す。
【0069】
カプセル化効率は、ジクロロメタンを用いて類似の条件で調製した製剤よりも低いようである。３種の製剤のｉｎ ｖｉｔｒｏ放出プロファイルには最小限の差しか認められず、全ての製剤が約５５日間よりもわずかに長く持続した。
【0070】
【表4】
【0071】
実施例７
ゲル浸透クロマトグラフィーの４つの検出器（Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）によるＰＬＧＡの分子量測定
レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ及びラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００６－２Ｐを試料として用いて、濃度が約２．５ｍｇ／ｍＬとなるようにアセトンに溶解し、０．２２μｍのＰＴＦＥフィルターで濾過し、注入用のＨＰＬＣオートサンプラーバイアルに回収した。試料をＧＰＣ－４Ｄを用いて分析した。ＧＰＣ－４Ｄシステムは、ダイナプロ・ナノスター（Ｄｙｎａｐｒｏ Ｎａｎｏｓｔａｒ）ＤＬＳに光ケーブルを介して連結されたドーン・ヘレオス（Ｄａｗｎ Ｈｅｌｅｏｓ）ＩＩ（ＭＡＬＬＳ）、オプティラボ（Ｏｐｔｉｌａｂ）Ｔ－ｒＥＸ（ＲＩ検出器）、及びビスコスター（Ｖｉｓｃｏｓｔａｒ）ＩＩＩ粘度計をアジレント１２６０インフィニティ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ）ＩＩ ＨＰＬＣに接続したものから構成されるものとし、Ａｓｔｒａ７ソフトウェアで操作した。ＧＰＣ分析を、ポリマー溶液５０．０μＬを注入することにより実施した。リニアグラジアントカラム（東ソー・バイオサイエンス（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）ＬＬＣ、ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＨＨＲ－Ｌ、７．８ｍｍ×３０ｃｍ）を用いて、アセトンの流速を０．６ｍＬ／分とし、運転時間を６０分間として実施した。ポリマー試料の分子量を表５に示す。
ゲル浸透クロマトグラフィーの４つの検出器（Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）によるＰＬＧＡの分子量測定
レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ及びラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００６－２Ｐを試料として用いて、濃度が約２．５ｍｇ／ｍＬとなるようにアセトンに溶解し、０．２２μｍのＰＴＦＥフィルターで濾過し、注入用のＨＰＬＣオートサンプラーバイアルに回収した。試料をＧＰＣ－４Ｄを用いて分析した。ＧＰＣ－４Ｄシステムは、ダイナプロ・ナノスター（Ｄｙｎａｐｒｏ Ｎａｎｏｓｔａｒ）ＤＬＳに光ケーブルを介して連結されたドーン・ヘレオス（Ｄａｗｎ Ｈｅｌｅｏｓ）ＩＩ（ＭＡＬＬＳ）、オプティラボ（Ｏｐｔｉｌａｂ）Ｔ－ｒＥＸ（ＲＩ検出器）、及びビスコスター（Ｖｉｓｃｏｓｔａｒ）ＩＩＩ粘度計をアジレント１２６０インフィニティ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ）ＩＩ ＨＰＬＣに接続したものから構成されるものとし、Ａｓｔｒａ７ソフトウェアで操作した。ＧＰＣ分析を、ポリマー溶液５０．０μＬを注入することにより実施した。リニアグラジアントカラム（東ソー・バイオサイエンス（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）ＬＬＣ、ＴＳＫｇｅｌ ＧＭＨＨＲ－Ｌ、７．８ｍｍ×３０ｃｍ）を用いて、アセトンの流速を０．６ｍＬ／分とし、運転時間を６０分間として実施した。ポリマー試料の分子量を表５に示す。
【0072】
【表5】
【0073】
実施例８
ナルトレキソン微粒子の調製：８５：１５の分子量及び抽出時間の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ（ＩＶ １．３～１．７ｄＬ／ｇ、ロット番号Ｄ１６１０００５６８、エヴォニク・サイロ、ニュージャージー州パーシッパニー（Ｅｖｏｎｉｋ Ｃｙｒｏ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ））又はラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００６－２Ｐ（ＩＶ ０．７６～０．８５ｄＬ／ｇ、ロット番号Ａ１７－０６８、デュレクト、カリフォルニア州クパチーノ（Ｄｕｒｅｃｔ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ））５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで混合物を、抽出相（ジクロロメタン０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で２、４、又は７時間撹拌した。次いで２５μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：８５：１５の分子量及び抽出時間の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ（ＩＶ １．３～１．７ｄＬ／ｇ、ロット番号Ｄ１６１０００５６８、エヴォニク・サイロ、ニュージャージー州パーシッパニー（Ｅｖｏｎｉｋ Ｃｙｒｏ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ））又はラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）Ｂ６００６－２Ｐ（ＩＶ ０．７６～０．８５ｄＬ／ｇ、ロット番号Ａ１７－０６８、デュレクト、カリフォルニア州クパチーノ（Ｄｕｒｅｃｔ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ））５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで混合物を、抽出相（ジクロロメタン０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で２、４、又は７時間撹拌した。次いで２５μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0074】
結果として得られた薬物内包率、残留ベンジルアルコール含有量、及びカプセル化効率を表６に示す。２種類のＰＬＧＡ間及びそれぞれの薬剤内包率における抽出時間の影響は最小限であった。ラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）のバッチはレソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）のバッチと比較して、残留ベンジルアルコールが僅かに多いようである。抽出時間は放出速度に影響を与えないようであるが、その一方で、放出プロファイルは２種のポリマー間で明らかに異なる。レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）のバッチはラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）のバッチを用いた場合よりも停滞期間（ｌａｇ ｐｈａｓｅ）が短く、その結果、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいては、ラクテル（Ｌａｃｔｅｌ）のバッチと比較して、６０日間に亘りより安定した状態で放出されるようである。
【0075】
【表6】
【0076】
実施例９
ナルトレキソン微粒子の調製：エタノール洗浄なしｖｓ２５％エタノール洗浄
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（０．５％（ｗ／ｖ）ＤＣＭを含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で２時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することによって、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去するか、又は１２５μｍの篩を通過させて、４８時間真空乾燥させた。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収して、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：エタノール洗浄なしｖｓ２５％エタノール洗浄
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（０．５％（ｗ／ｖ）ＤＣＭを含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で２時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することによって、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去するか、又は１２５μｍの篩を通過させて、４８時間真空乾燥させた。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収して、４８時間真空乾燥させた。
【0077】
結果として得られた薬物内包率、残留ベンジルアルコール含有量、及びカプセル化効率を表７に示す。エタノール洗浄を行った結果、微粒子の残留ベンジルアルコール含有量が低下すると共に、薬物内包率が高くなった。これはベンジルアルコールが抽出されたことに起因するようである。最初の１０日間の放出は、洗浄した粒子及び未洗浄の粒子で同程度であるが、１０日よりも後の放出速度は、未洗浄の粒子の方が洗浄した粒子よりも速い。
【0078】
【表7】
【0079】
実施例１０
ナルトレキソン微粒子の調製：洗浄エタノール濃度の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有
機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））３０５ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（ＤＣＭ０．３３％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を、６．２５、１２．５、２５、又は５０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
ナルトレキソン微粒子の調製：洗浄エタノール濃度の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有
機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））３０５ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にＤＣＭと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（ＤＣＭ０．３３％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を、６．２５、１２．５、２５、又は５０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子からＰＶＡ及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0080】
結果として得られた薬物内包率、残留ベンジルアルコール含有量、及びカプセル化効率を表８に示す。６．２５、１２．５、２５％（ｖ／ｖ）を用いた場合、薬物内包率には有意差も傾向も見られなかった。残留ベンジルアルコール含有量は、この条件下では、洗浄エタノール濃度の増加と共に減少する。５０％（ｖ／ｖ）を用いた場合、洗浄中にかなりの量のナルトレキソンが失われ、ナルトレキソンの放出速度は、６．２５、１２．５、２５％の条件に比べて非常に速かった。
【0081】
【表8】
【0082】
実施例１１
ナルトレキソン微粒子の調製：エタノール洗浄温度の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇに溶解した、ＰＬＧＡ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２９４ｍｇから構成されるものとした。この連続相を更にジクロロメタンと混合し、ジクロロメタン１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで、２５μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、４℃又は２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。
次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。結果として得られた薬物内包率、残留ベンジルアルコール含有量、及びカプセル化効率を表９に示す。
ナルトレキソン微粒子の調製：エタノール洗浄温度の影響
連続相を、ＰＶＡ４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でＤＣＭ２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇに溶解した、ＰＬＧＡ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（スペックジーエックス・エルエルシー（ＳｐｅｃＧｘ，ＬＬＣ））２９４ｍｇから構成されるものとした。この連続相を更にジクロロメタンと混合し、ジクロロメタン１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるホモジナイザーＩＫＡ Ｔ２５（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間乳化した。次いで、混合物を抽出相（ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬ）に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで、２５μｍの篩で微粒子を回収し、４℃で約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、４℃又は２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。
次いで、洗浄した微粒子を１２５μｍの篩を通過させ、２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。結果として得られた薬物内包率、残留ベンジルアルコール含有量、及びカプセル化効率を表９に示す。
【0083】
エタノール洗浄を２２℃で行った結果、微粒子の残留ベンジルアルコール含有量が低下し、薬物内包率が高くなった。これはベンジルアルコールが抽出されたことに起因するようである。２２℃で洗浄した微粒子からのナルトレキソンの放出速度は、１０日目まではより速かった。４℃の場合は、微粒子からのｉｎ ｖｉｔｒｏでのナルトレキソンの放出速度は、最初の１０日間が経過した後により速くなり、約３５日間しか持続しなかった。一方、２２℃で洗浄した粒子は約５０日間ナルトレキソンを放出した。
【0084】
【表9】
【0085】
実施例１２
製剤のｉｎ ｖｉｖｏ反応
ナルトレキソン（遊離塩基）内包率が約２０％～約４０％である７種の製剤を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いた薬物動態試験にて評価した。７種の製剤の中で、Ｆ．１２－１、Ｆ．１２－２、Ｆ．１２－４、及びＦ．１２－６は、それぞれＦ．３－５、Ｆ．４－１、Ｆ．８－６、及びＦ．５－４と同じ方法で調製し、Ｆ．１２－３、Ｆ．１２－５、及びＦ．１２－７は、以下に記載する通りに調製した。
製剤のｉｎ ｖｉｖｏ反応
ナルトレキソン（遊離塩基）内包率が約２０％～約４０％である７種の製剤を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いた薬物動態試験にて評価した。７種の製剤の中で、Ｆ．１２－１、Ｆ．１２－２、Ｆ．１２－４、及びＦ．１２－６は、それぞれＦ．３－５、Ｆ．４－１、Ｆ．８－６、及びＦ．５－４と同じ方法で調製し、Ｆ．１２－３、Ｆ．１２－５、及びＦ．１２－７は、以下に記載する通りに調製した。
【0086】
Ｆ．１２－３
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで
、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））４６７ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２９４ｍｇから構成されるものとした。連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ｒｐｍで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＰＶＡ １％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で８時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで
、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0087】
Ｆ．１２－５
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））４０９ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にジクロロメタンと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ
Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＤＣＭ０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で４時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩上で回収し、４８時間真空乾燥させた。
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇに溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））４０９ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にジクロロメタンと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ
Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＤＣＭ０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で４時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩上で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0088】
Ｆ．１２－７
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にジクロロメタンと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＤＣＭ０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で７時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
連続相を、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）（モビオール（Ｍｏｗｉｏｌ）４０－８８、シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））４０ｇを秤量し、脱イオン水４Ｌと混合することにより調製した。有機相は、２０ｍＬのシンチレーションバイアル内でジクロロメタン（ＤＣＭ）（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））２．０ｇ及びベンジルアルコール（フィッシャー・サイエンティフィック、ニュージャージー州フェアローン（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆａｉｒ Ｌａｗｎ，ＮＪ））６２３ｍｇ中に溶解させたＰＬＧＡ ８５：１５（レソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）ＲＧ ８５８Ｓ）５００ｍｇ及びナルトレキソン遊離塩基（テコランド・コーポレーション、カリフォルニア州アーバイン（Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ））２６７ｍｇから構成されるものとした。連続相を更にジクロロメタンと混合し、ＤＣＭ１．８％（ｗ／ｖ）を含む連続相１０ｍＬを有機相の上に加え、Ｓ２５Ｎ－１０Ｇジェネレータを備えるＩＫＡ Ｔ２５ホモジナイザー（アイケーエー・ワークス・インコーポレーテッド、ノースカロライナ州ウィルミントン（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ））を用いて７，０００ＲＰＭで６０秒間均質化した。次いで、混合物を、ＤＣＭ０．５％（ｗ／ｖ）を含む水３８０ｍＬである抽出相に移し、４℃で７時間撹拌した。次いで微粒子を２５μｍの篩で回収した。篩上に保持された生成物を２２℃で１５分間脱水し、約１６時間真空乾燥させた。次いで、微粒子を２５％（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００ｍＬ中に懸濁させ、２２℃で８時間洗浄することにより、微粒子から乳化剤（ＰＶＡ）及び残留溶媒を除去した。次いで、洗浄した微粒子を２５μｍの篩で回収し、４８時間真空乾燥させた。
【0089】
薬物内包率、溶媒系、及び溶媒濃度がナルトレキソンの放出に与える影響を評価した。薬物内包率が最も低い試料（Ｆ．１２－２）は、その製剤の定常状態に比べて、最大のバースト放出が見られた。薬物内包率が約２８％から約３８％へと増加するに従い、２日目頃から２０日目までは観測される濃度がより高くなったが、２０日目以降から６０日目頃までは、観測された定常状態の血漿中濃度は約１．５～４ｎｇ／ｍＬと同程度であった。０．５ｎｇ／ｍＬのナルトレキソン濃度を約１００日間維持した。
【0090】
【表10】
【0091】
薬物内包率（％ｗ／ｗ）は微粒子重量を基準とする。
【0092】
試験手順
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける試験製剤からのナルトレキソンの放出
トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０（シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））０．０５％及びアスコルビン酸ナトリウム（シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））０．０６２５％（ｗ／ｖ）を含むｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水２０ｍＬを媒体とし、被験物質約５ｍｇと共に５０ｍＬの共栓三角フラスコに装入し、３７℃、１００ＲＰＭの湯浴に入れた。様々な時点で試料を採取し、新たな放出媒体に交換した。緩衝液中のナルトレキソン含有量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける試験製剤からのナルトレキソンの放出
トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０（シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））０．０５％及びアスコルビン酸ナトリウム（シグマ・アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））０．０６２５％（ｗ／ｖ）を含むｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水２０ｍＬを媒体とし、被験物質約５ｍｇと共に５０ｍＬの共栓三角フラスコに装入し、３７℃、１００ＲＰＭの湯浴に入れた。様々な時点で試料を採取し、新たな放出媒体に交換した。緩衝液中のナルトレキソン含有量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測定した。
【0093】
ナルトレキソンを定量するための逆相ＨＰＬＣ
ＨＰＬＣは次に示す条件で行った：移動相：メタノール／リン酸カリウム緩衝液（６５：３５）、ｐＨ６．６；流速：１．０ｍＬ／分；オートサンプラー温度：室温；カラム温度：３０℃；検出：２１０ｎｍ（ＵＶ）；総分析時間：７分；注入量：１０μＬ；カラム：ゾルバックス（Ｚｏｒｂａｘ）ＳＢ－Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ、５μｍ；ナルトレキソンのおおよその保持時間：４．８分。
ＨＰＬＣは次に示す条件で行った：移動相：メタノール／リン酸カリウム緩衝液（６５：３５）、ｐＨ６．６；流速：１．０ｍＬ／分；オートサンプラー温度：室温；カラム温度：３０℃；検出：２１０ｎｍ（ＵＶ）；総分析時間：７分；注入量：１０μＬ；カラム：ゾルバックス（Ｚｏｒｂａｘ）ＳＢ－Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ、５μｍ；ナルトレキソンのおおよその保持時間：４．８分。
【0094】
ｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態試験
ラット前臨床試験は全てＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いて実施した。試験製剤１種につき３～５匹のラットの首筋（ｓｃｒｕｆｆ ｂｅｈｉｎｄ ｔｈｅ ｎｅｃｋ）又は肩甲骨付近に、塩化ナトリウム０．９％、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を０．０２％、及びカルボキシメチルセルロースナトリウム０．５％から構成される水性溶媒１ｍＬ中で、ナルトレキソンの投与量が５０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲となるように皮下注射した。
ラット前臨床試験は全てＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを用いて実施した。試験製剤１種につき３～５匹のラットの首筋（ｓｃｒｕｆｆ ｂｅｈｉｎｄ ｔｈｅ ｎｅｃｋ）又は肩甲骨付近に、塩化ナトリウム０．９％、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を０．０２％、及びカルボキシメチルセルロースナトリウム０．５％から構成される水性溶媒１ｍＬ中で、ナルトレキソンの投与量が５０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲となるように皮下注射した。
【0095】
試験期間中、動物を、明白な毒性徴候並びに注射部位の発赤、腫れ、出血、分泌物、及び内出血を含む、被験部位の異常の有無について観察した。また、投与時及び試験期間終了時の体重も測定して記録した。
【0096】
選択された時点において、ラットの尾静脈又は顎下静脈から麻酔下に採血（約２５０μＬ）した。血液をラベル付きのエチレンジアミン四酢酸三カリウム入り試験管に回収した。血液を４，０００ｒｐｍで１０分間４℃で遠心分離した。血漿画分をラベル付きの１ｍＬプラスチックチューブに移し、分析時まで－８０℃で保管した。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】