特許 7268038 抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-04-24

(45)【発行日】2023-05-02

(54)【発明の名称】抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230425BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230425BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230425BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230425BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230425BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230425BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230425BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C07K16/28

C07K16/46

C12N15/63 Z

A61K39/395 N

A61P25/28

C12P21/08

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2020541805

(86)(22)【出願日】2019-01-31

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-05-27

(86)【国際出願番号】 US2019016156

(87)【国際公開番号】W WO2019152715

(87)【国際公開日】2019-08-08

【審査請求日】2022-01-28

(31)【優先権主張番号】62/624,600

(32)【優先日】2018-01-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/783,096

(32)【優先日】2018-12-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】517041235

【氏名又は名称】アレクトル エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】コング フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】リン ハーブ

(72)【発明者】

【氏名】シュワーブ ティナ

(72)【発明者】

【氏名】イー アンジー

(72)【発明者】

【氏名】タッシ イラリア

(72)【発明者】

【氏名】アラワグリ ムハンマド アッバース

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンタール アーノン

【審査官】西 賢二

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／１４３０３６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Sanyal, R. et al.，"MS4A4A: a novel cell surface marker for M2 macrophages and plasma cells"，Immunol. Cell Biol.，2017年，Vol. 95，pp. 611-619

【文献】Tomay, F.，"Regulation and function of the tetraspanin-like molecule MS4A4A in alternatively activated and tumor-associated macrophages", [online]，2015年，pp. 1-160，Internet, [retrieved on 2022.12.05], <URL: https://air.unimi.it/retrieve/dfa8b991-817f-748b-e053-3a05fe0a3a96/phd_unimi_R09505.pdf>

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であって、
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、前記抗体。

【請求項2】

前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域が、それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の抗体。

【請求項3】

カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに結合する、請求項１または２に記載の単離した抗体。

【請求項4】

マウス抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項5】

ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項6】

ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項５に記載の抗体。

【請求項7】

抗体フラグメントである、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項8】

前記フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項７に記載の抗体。

【請求項9】

（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、ｂａｓｉｇｉｎ、Ｇｌｕｔ１、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｃ）疾患原因ペプチドもしくは疾患原因タンパク質または疾患原因核酸からなる群から選択される疾患原因作用物質であって、前記疾患原因核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復伸長ＲＮＡであり、前記疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質もしくはそのフラグメント、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、前記疾患原因作用物質；
（ｄ）免疫細胞上で発現するリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンからなる群から選択される、前記リガンド及び／またはタンパク質；または
（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上で発現するタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質
をさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離した核酸。

【請求項11】

請求項１０に記載の核酸を含むベクター。

【請求項12】

可溶性ＴＲＥＭ２レベルを増大させる、原形質膜もしくは細胞表面のＴＲＥＭ２レベルを増大させる、または、可溶性ＴＲＥＭ２を増大させかつ骨髄細胞における原形質膜もしくは細胞表面のＴＲＥＭ２レベルを増大させる、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離した抗体。

【請求項13】

請求項１～９、および１２のいずれか１項に記載の抗体と薬学的に許容可能な担体とを含む、薬学的組成物。

【請求項14】

請求項１～９、および１２のいずれか１項に記載の抗体を含む、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、前記疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または前記疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療するための薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月３１日に出願した米国仮特許出願第６２／６２４，６００号、及び、２０１８年１２月３０日に出願した米国仮特許出願第６２／７８３，０９６号の利益を主張するものであり、それぞれの出願の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する：コンピューターで読み取り可能な（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：７３５０２２００２１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年１月３１日、サイズ：１４６ＫＢ）。

【0003】

本開示の技術分野
本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、そのような抗体の治療的使用に関する。

【背景技術】

【0004】

本開示の背景
４回膜貫通ドメインサブファミリーＡ（ＭＳ４Ａ）遺伝子クラスターは、染色体１１ｑ１２に存在しており、また、１８個の遺伝子を含む。このＭＳ４Ａ遺伝子ファミリーは、一般的には、テトラ貫通トポロジーを有する膜タンパク質をコードする（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３（非特許文献１）；Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｔｅｄｄｅｒ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７（非特許文献２）；Ｅｆｔｈｙｍｉｏｕ ａｎｄ Ｇｏａｔｅ，２０１７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１２：４３（非特許文献３））。これらの膜貫通ドメインは、１つの細胞内ループと、２つの細胞外ループによって相互に接続されており、Ｎ末端とＣ末端の両方がサイトゾル内にある。大部分のＭＳ４Ａタンパク質は、ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）とアミノ酸配列の相同性（２０～３０％の類似性）を共有しており、最初の３つの膜貫通ドメインで、最も高い配列同一性が認められる。異なるＭＳ４Ａタンパク質にまで及び、これらの膜貫通領域内において高度に保存されたモチーフは、当該膜貫通ドメインが、ＭＳ４Ａタンパク質の機能において重要である一般的な役割を果たすことを示唆している。ＭＳ４Ａタンパク質の間での最大の変動領域が、Ｎ末端とＣ末端の細胞質ドメイン、及び第２の推定細胞外ループで認められており（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３（非特許文献１））、これらの領域が、独特の機能特性を付与することを示唆している。

【0005】

この多様性にもかかわらず、ＭＳ４Ａドメインには、幾つかの共有要素がある。例えば、ＭＳ４Ａタンパク質（ＭＳ４Ａ８Ｂ、及び、ＭＳ４Ａ１２を除く）で保存されている注目に値する機能の１つは、ジスルフィド架橋を形成し得る第２の推定細胞外ループでの２つのシステイン残基の保存である。ＭＳ４Ａタンパク質のＮ末端ドメインとＣ末端ドメインも、プロリン残基が豊富であるが、この機能的な重要性は未だ解明されていない（Ｈｕｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７（非特許文献４））。しかしながら、プロリンに富む領域は、一般的に、細胞骨格の再構成、転写の開始、シグナル伝達カスケード、及び、タンパク質間相互作用を促すアダプターシステムの一部としてＳＨ３ドメインと関連するなど、様々な細胞プロセスに関与している（Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，２０００，ＦＡＳＥＢ Ｊ，１４：２３１－２４１（非特許文献５））。

【0006】

ＭＳ４Ａタンパク質ファミリーは、ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）がＢリンパ球においてのみ発現し、当該タンパク質がＢ細胞抗原受容体、及び、カルシウム流入によるシグナル伝達機能を有するという一部の重要な例外を除いて、機能面では特徴決定があまり進んでいない。ＣＤ２０は、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、自己免疫疾患、及び、固形臓器移植における病原性Ｂ細胞を枯渇させるために使用する免疫療法抗体の標的である。ＭＳ４Ａ２（ＦｃεＲβ）は、肥満細胞に関する高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）、及び、低親和性ＩｇＧ受容体（ＦｃεＲＩＩＩ）のシグナル伝達サブユニットであり、過敏症とアレルギー反応において重要な役割を果たす。ＭＳ４Ａ２は、４つのタンパク質の高親和性ＩｇＥ受容体複合体を介してシグナルを増幅するＩＴＡＭドメインのタンパク質である。ＭＳ４Ａ３（Ｈｔｍ４）は、リンパ系、及び、骨髄系細胞の細胞内膜に発現し、そして、細胞周期調節のアダプタータンパク質として機能する。

【0007】

ＭＳ４Ａファミリーのメンバーの大部分は特徴決定されていないが、ＭＳ４Ａタンパク質が、脂肪酸、ペプチド、及び、硫酸化ステロイドなどの様々な外因性、及び、内因性リガンドの化学センサー、及び、化学受容体として機能しており、そして、カルシウム流入の媒介、エンドサイトーシスの調節、輸送に関与しており、また、シグナル伝達複合体のアダプターとして機能し得ることを示唆する報告がある（Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７（非特許文献６）；Ｇｒｅｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８（非特許文献７）；Ｅｏｎ Ｋｕｅｋ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８（非特許文献８）；Ｋｏｓｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８：３４５８－３４６６（非特許文献９）；Ｂｕｂｉｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９３；Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１２１：１１２１－１１３２（非特許文献１０））。

【0008】

特定のＭＳ４Ａ遺伝子は、様々な障害や疾患、特に、神経変性障害と遺伝的に関連している。例えば、ゲノムワイド有意性関連分析は、染色体１１ｑ１２にあるＭＳ４Ａ遺伝子クラスターを、最も重要なアルツハイマー病の遺伝子座の１つとして特定した。特に興味深い同定した遺伝子の１つは、ＭＳ４Ａ４Ａである（Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４５：１４５２－１４５８（非特許文献１１）；Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４２９－４３５（非特許文献１２）；Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４３６－４４１（非特許文献１３））。

【0009】

したがって、ＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する抗体など、ＭＳ４Ａ４Ａを標的とする治療法、及び／または、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質レベルまたは活性を低減するまたは増大させることによって、ＭＳ４Ａ４Ａ活性に関連する様々な疾患、障害、及び、病態を治療することで、ＭＳ４Ａ４Ａの活性を調節する（例えば、阻害するまたは低減する、活性化するまたは向上させる）ことができる治療法が必要とされている。

【0010】

特許出願、及び、刊行物を含む、本明細書で引用するすべての文献を、本明細書の一部を構成するものとして、それらの全内容を援用する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0011】

【文献】Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６５：８７－９３

【文献】Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｔｅｄｄｅｒ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７

【文献】Ｅｆｔｈｙｍｉｏｕ ａｎｄ Ｇｏａｔｅ，２０１７，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１２：４３

【文献】Ｈｕｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７

【文献】Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，２０００，ＦＡＳＥＢ Ｊ，１４：２３１－２４１

【文献】Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７

【文献】Ｇｒｅｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８

【文献】Ｅｏｎ Ｋｕｅｋ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８

【文献】Ｋｏｓｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８：３４５８－３４６６

【文献】Ｂｕｂｉｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９３；Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１２１：１１２１－１１３２

【文献】Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４５：１４５２－１４５８

【文献】Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４２９－４３５

【文献】Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，４３：４３６－４４１

【発明の概要】

【0012】

本開示の概要
本開示は概して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、そのような抗体を使用する方法に関する。本明細書で提供する方法は、神経変性の疾患、障害、もしくは、病態の予防、当該疾患、障害、もしくは、病態のリスクの低減、または該疾患、障害、もしくは、病態を有する個体の治療における用途を見出す。一部の実施形態では、本開示は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、認知症、及び、認知障害からなる群から選択される神経変性の疾患、障害、もしくは、病態を予防する、当該疾患、障害、もしくは、病態のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、病態を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの発現または活性の増大に関連する疾患、障害、もしくは、病態を予防する、当該疾患、障害、もしくは、病態のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、病態を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの発現または活性の低減に関連する疾患、障害、もしくは病態を予防する、当該疾患、障害、もしくは病態のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは病態を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0013】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、不連続のＭＳ４Ａ４Ａエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該不連続のＭＳ４Ａ４Ａエピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または、１０個以上のペプチドを含む。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ペプチドのそれぞれは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含むか；または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含む。

【0014】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座エピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの線状エピトープに結合する。

【0015】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１（ＥＣＬ１）に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８９）内の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２（ＥＣＬ２）に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９０）内の１つ以上のアミノ酸に結合する。

【0016】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＬＡＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９６）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＬＡＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９６）内の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９７）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９７）内の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９８）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９８）内の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９９）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９９）内の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３００）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａの領域またはエピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３００）内の１つ以上のアミノ酸残基に結合する。

【0017】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に対する結合について、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及びそれらのあらゆる組み合わせからなる群から選択される１つ以上のリファレンス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と競合する。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ（例えば、以下の表４Ｂ及び表９Ｂに示したようなもの）を含む。

【0018】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体が結合したＭＳ４Ａ４Ａエピトープと同じ、または、重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａエピトープに結合する。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ（例えば、以下の表４Ｂ及び９Ｂに示したようなもの）を含む。

【0019】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体が結合した、実質的に同じＭＳ４Ａ４Ａエピトープに結合する。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ（例えば、以下の表４Ｂ及び表９Ｂに示したようなもの）を含む。

【0020】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａでの線状エピトープに結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１～６４の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基６５～８５の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基９９～１１９の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１２０～１３７の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１３８～１５８の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１８０～２００の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基２０１～２３９の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１（ＥＣＬ１）に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２（ＥＣＬ２）に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ１ドメイン、及び、ＥＣＬ２ドメインに結合する。

【0021】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域、及び、軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０～３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５～８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0022】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0023】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0024】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；及び、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0025】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域、及び、軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２～１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４～１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８～１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３～１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７～２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０～２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0026】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0027】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0028】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；及び、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0029】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域、及び、軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４～３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０～３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６～３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み；かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２～３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８～３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４～３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0030】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0031】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、軽鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0032】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体であり、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；及び、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0033】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、哺乳動物タンパク質、または、ヒトタンパク質である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、野生型タンパク質である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、天然に存在するバリアントである。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、アゴニスト抗体であり、当該抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を誘導する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該単離した抗体は、細胞表面でのＭＳ４Ａ４Ａクラスター形成を誘導する、増進させる、または、維持する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、アンタゴニスト抗体であり、当該抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を阻害または低減する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該単離した抗体は、細胞表面上のＭＳ４Ａ４Ａクラスター形成を低減または阻害する。

【0034】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、少なくとも１つのＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を低減または阻害する。

【0035】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、少なくとも１つのＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を増大または向上させる。

【0036】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを増大させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、膜ＴＲＥＭ２レベルを増大させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２レベル、及び、原形質膜／細胞表面ＴＲＭＥ２レベルを増大させる。

【0037】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞、例えば、マクロファージでのＭ２細胞表面マーカーのレベルを減少させる、または、低減する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞、例えば、マクロファージでのＣＤ２００Ｒ、デクチン－１、及び／または、ＣＤ１６３の細胞表面レベルを減少させる、または、低減する。

【0038】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＡＭをコードするアダプタータンパク質に関連するシグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、阻害性シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＩＭをコードするアダプタータンパク質に関連する阻害性シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。

【0039】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＡＭをコードするアダプタータンパク質に関連するシグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、阻害性シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＩＭをコードするアダプタータンパク質に関連する阻害性シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0040】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを低減すること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位をブロックすること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、細胞内局在化に必要なＭＳ４Ａ４Ａに関する１つ以上の翻訳後事象を予防すること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を誘発すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0041】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを増大させること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位を安定させること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面発現を維持して、ホモオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、適切な細胞局在化の維持を可能にすること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を低減すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を増大させる、または、増進させる。

【0042】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを低減すること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位をブロックすること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、細胞内局在化に必要なＭＳ４Ａ４Ａに関する１つ以上の翻訳後事象を予防すること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を誘発すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、１つ以上のシグナル伝達アダプタータンパク質を有する、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0043】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを増大させること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位を安定させること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面発現を維持して、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、適切な細胞局在化の維持を可能にすること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を低減すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、１つ以上のシグナル伝達アダプタータンパク質を有する、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を増大させる、または、増進させる。

【0044】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。

【0045】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａであり、かつ、当該第２の抗原は、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ｂａｓｉｇｉｎ、Ｇｌｕｔ１、及び、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される。

【0046】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、モノクローナル抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、多価抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、または、哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質でのアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体フラグメントである。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。

【0047】

本開示のその他の態様は、単離した（例えば、モノクローナル）抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関するものであり、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体の６つのＨＶＲ（例えば、以下の表４Ａ及び表９Ａに示したようなもの）を含む。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体のＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌを含む。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ（例えば、以下の表４Ｂ及び表９Ｂに示したようなもの）を含む。

【0048】

本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をコードする核酸配列を含む単離した核酸に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの核酸を含むベクターに関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかのベクターを含む単離した宿主細胞に関する。本開示のその他の態様は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を産生する方法であって、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が産生されるように、前出の実施形態のいずれかの宿主細胞を培養することを含む、当該方法に関する。特定の実施形態では、当該方法は、宿主細胞によって産生された抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を回収することをさらに含む。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの方法によって産生された、単離した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物に関する。

【0049】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、マウスＭＳ４Ａ４Ａ、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ、または、それらの組み合わせに対して特異的に結合する。

【0050】

本開示の一部の態様は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体を提供しており、当該抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを増大させる、原形質膜もしくは細胞表面ＴＲＥＭ２レベルを増大させる、または、可溶性ＴＲＥＭ２を増大させかつ骨髄細胞における原形質膜もしくは細胞表面ＴＲＥＭ２レベルを増大させる。一部の実施形態では、当該抗体は、同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも１００％増大させる。一部の実施形態では、当該抗体は、同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、原形質膜または細胞表面のＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１０５％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、または、少なくとも１５０％増大させる。一部の実施形態では、当該抗体は、骨髄細胞上でのＭ２細胞表面受容体／マーカーの発現を低減する。

【0051】

本開示のその他の態様では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体を提供しており、当該抗体は、骨髄細胞上でのＭ２細胞表面受容体／マーカーの発現を低減する。一部の実施形態では、当該抗体は、骨髄細胞上でのＣＤ２００Ｒ、デクチン－１、ＣＤ１６３、ＣＤ１４、及び、ＳＩＲＰαのうちの１つ以上の発現を低減する。

【0052】

本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、当該抗体は、マクロファージの生存能力を増大させる。

【0053】

本開示のその他の態様では、単離した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０からなる群から選択される抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む。

【0054】

本開示のその他の態様では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体を提供しており、当該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、当該重鎖可変領域は、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～１９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４～１９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２～１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２～１５３に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４～３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４～３０９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０～３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０～３７に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４～１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４～１６７に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０～３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０～３１５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８～５５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８～１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８～１８２に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６～３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６～３２１に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ当該軽鎖可変領域は、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６～７４に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３～１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３～１９６に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２～３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２～３２７に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５～８５からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５～８５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７～２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７～２０９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８～３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８～３３３に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６～１００に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０～２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０～２２４に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４～３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４～３３９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む。

【0055】

本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0056】

本開示の一部の態様は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する単離した抗体を提供しており、当該抗体は、重鎖可変領域、及び、軽鎖可変領域を含み、（ａ）当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むか；（ｂ）当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むか；または、（ｃ）当該重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ、当該軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0057】

本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、当該抗体は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに結合する。

【0058】

本開示の一部の態様では、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａへの結合について、上記の実施形態のうちのいずれか１つの抗体のうちの１つ以上と競合する。一部の態様では、当該抗体は、上記の実施形態のいずれか１つの抗体と本質的に同じ、または、重複するＭＳ４Ａ４Ａエピトープに結合する。

【0059】

本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７の中の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＹ９２、Ｈ１６１、Ｙ１６４、Ｎ１６６、Ｎ１７０、Ｔ１７７、及び、Ｍ１７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＹ９２、Ｈ１６１、Ｙ１６４、Ｎ１６６、Ｎ１７０、Ｔ１７７、及び、Ｍ１７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質における１つ以上のアミノ酸残基に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、少なくとも１つのＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を、低減または阻害する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、少なくとも１つのＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を、増大または向上させる。一部の実施形態では、当該抗体は、認知及び行動機能の低下を低減し、かつ、認知及び行動機能を改善する。

【0060】

本開示の上記態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、当該抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、抗体フラグメントである。一部の実施形態では、当該フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。一部の実施形態では、当該抗体は、（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；（ｃ）疾患原因ペプチドもしくは疾患原因タンパク質または疾患原因核酸からなる群から選択される疾患原因作用物質であって、当該疾患原因核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復伸長ＲＮＡであり、当該疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質もしくはそのフラグメント、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９番染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、当該疾患原因作用物質；（ｄ）免疫細胞上で発現するリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンからなる群から選択される、当該リガンド及び／またはタンパク質；ならびに、（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上で発現するタンパク質、脂質、多糖または糖脂質をさらに含む。

【0061】

本開示のその他の態様は、上記の実施形態のいずれか１つの抗体をコードする核酸配列を含む単離した核酸に関する。本開示のその他の態様は、本開示の核酸を含むベクターに関する。本開示のその他の態様は、本開示のベクターを含む単離した宿主細胞に関する。本開示のその他の態様は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合する抗体を産生する方法に関するものであり、当該抗体が産生されるように、本開示の細胞を培養することを含む。一部の実施形態では、当該方法は、細胞によって産生された抗体を回収することをさらに含む。本開示のその他の態様は、本開示の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物に関する。

【0062】

本開示のその他の態様は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法に関するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、本開示の抗体の治療有効量を投与することを含む。本開示のその他の態様は、ＭＳ４Ａ４Ａの過剰発現もしくは活性増大に起因もしくは関連する疾患、障害、病態、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、病態、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、病態、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法に関するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、本開示の抗体の治療有効量を投与することを含む。

【0063】

[本発明1001]
可溶性ＴＲＥＭ2レベルを増大させる、原形質膜もしくは細胞表面のＴＲＥＭ2レベルを増大させる、または、可溶性ＴＲＥＭ2を増大させかつ骨髄細胞における原形質膜もしくは細胞表面のＴＲＥＭ2レベルを増大させる、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体。
[本発明1002]
同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、可溶性ＴＲＥＭ2レベルを少なくとも15％増大させる、本発明1001の単離した抗体。
[本発明1003]
同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、原形質膜または細胞表面のＴＲＥＭ2レベルを少なくとも65％増大させる、本発明1001または本発明1002の単離した抗体。
[本発明1004]
骨髄細胞上でのＭ2細胞表面受容体／マーカーの発現を低減する、本発明1001～1004のいずれかの単離した抗体。
[本発明1005]
骨髄細胞上でのＭ2細胞表面受容体／マーカーの発現を低減する、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体。
[本発明1006]
骨髄細胞上でのＣＤ200Ｒ、デクチン－1、ＣＤ163、ＣＤ14、及び、ＳＩＲＰαのうちの1つ以上の発現を低減する、本発明1004または本発明1005の単離した抗体。
[本発明1007]
マクロファージの生存能力を増大させる、本発明1001～1006のいずれかの単離した抗体。
[本発明1008]
4Ａ－2、4Ａ－3、4Ａ－4、4Ａ－5、4Ａ－6、4Ａ－7、4Ａ－8、4Ａ－9、4Ａ－10、4Ａ－11、4Ａ－12、4Ａ－13、4Ａ－14、4Ａ－15、4Ａ－16、4Ａ－17、4Ａ－18、4Ａ－19、4Ａ－20、4Ａ－21、4Ａ－23、4Ａ－24、4Ａ－201、4Ａ－202、4Ａ－203、4Ａ－204、4Ａ－205、4Ａ－206、4Ａ－207、4Ａ－208、4Ａ－209、4Ａ－210、4Ａ－213、4Ａ－214、4Ａ－216、4Ａ－217、4Ａ－219、4Ａ－25、4Ａ－26、4Ａ－239、4Ａ－225、及び、4Ａ－220からなる群から選択される抗体の少なくとも1つ、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、または、少なくとも6つのＨＶＲを含む、単離した抗ＭＳ4Ａ4Ａ抗体。
[本発明1009]
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体であって、
前記重鎖可変領域が、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：4～19からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：4～19に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：142～153からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：142～153に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：304～309からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：304～309に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｈ1；
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：20～37からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：20～37に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：154～167からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：154～167に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：310～315からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：310～315に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｈ2；及び
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38～55からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38～55に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：168～182からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：168～182に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：316～321からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：316～321に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｈ3
を含み、かつ
前記軽鎖可変領域が、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：56～74からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：56～74に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：183～196からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：183～196に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、配列番号ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：322～327からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：322～327に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｌ1；
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：75～85からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：75～85に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：197～209からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：197～209に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：328～333からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：328～333に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｌ2；及び
ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：86～100からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：86～100に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：210～224からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：210～224に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：334～339からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：334～339に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含む、ＨＶＲ－Ｌ3
を含む、
前記抗体。
[本発明1010]
前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：101～120からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：101～120に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：225～239からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：225～239に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：340～345からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：340～345に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1001～1009のいずれかの抗体。
[本発明1011]
前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：121～139からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：121～139に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：240～254からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：240～254に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：346～351からなる群から選択されるアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：346～351に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1001～1009のいずれかの抗体。
[本発明1012]
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体であって、
ａ）前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：15のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：15に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：32のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：32に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：50のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：50に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ3を含み、かつ前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：69のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：69に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：82のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：82に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：96のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：96に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ3を含むか；
ｂ）前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：18のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：18に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：35に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：53のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：53に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ3を含み、かつ前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：72のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：72に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：77のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：77に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：99のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：99に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ3を含むか；または、
ｃ）前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：143のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：143に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：155のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：155に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：169のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：169に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ3を含み、かつ、前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：184のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：184に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ1、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：198のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：198に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ2、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：211のアミノ酸配列もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：211に対して少なくとも約95％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ3を含む、
前記抗体。
[本発明1013]
カニクイザルＭＳ4Ａ4Ａに結合する、本発明1001～1012のいずれかの単離した抗体。
[本発明1014]
ヒトＭＳ4Ａ4Ａに対する結合について、本発明1001～1013のいずれかの抗体のうちの1つ以上と競合する、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体。
[本発明1015]
本発明1001～1013のいずれかの抗体と本質的に同じ、または、重複するＭＳ4Ａ4Ａエピトープに結合する、ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する単離した抗体。
[本発明1016]
ヒトＭＳ4Ａ4Ａの細胞外ドメイン1に結合する、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1017]
ヒトＭＳ4Ａ4Ａの細胞外ドメイン2に結合する、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1018]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：1のヒトＭＳ4Ａ4Ａのアミノ酸残基155～177の中の1つ以上のアミノ酸に結合する、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1019]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：1のＹ92、Ｈ161、Ｙ164、Ｎ166、Ｎ170、Ｔ177、及び、Ｍ178からなる群から選択される1つ以上のアミノ酸残基に結合するか、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：1のＹ92、Ｈ161、Ｙ164、Ｎ166、Ｎ170、Ｔ177、及び、Ｍ178からなる群から選択されるアミノ酸残基に対応する哺乳動物ＭＳ4Ａ4Ａタンパク質における1つ以上のアミノ酸残基に結合する、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1020]
ＭＳ4Ａ4Ａと少なくとも1つのＭＳ4Ａ4Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を低減または阻害する、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1021]
ＭＳ4Ａ4Ａと少なくとも1つのＭＳ4Ａ4Ａリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を増大または向上させる、本発明1001～1015のいずれかの抗体。
[本発明1022]
認知機能及び行動機能の低下を低減し、かつ、認知機能及び行動機能を改善する、本発明1001～1021のいずれかの抗体。
[本発明1023]
マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である、本発明1001～1022のいずれかの抗体。
[本発明1024]
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、本発明1001～1023のいずれかの抗体。
[本発明1025]
ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、またはＩｇＧ4アイソタイプを有する、本発明1024の抗体。
[本発明1026]
抗体フラグメントである、本発明1001～1025のいずれかの抗体。
[本発明1027]
前記フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、本発明1026の抗体。
[本発明1028]
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質1及び2（ＬＰＲ－1及び2）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ197、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ30（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及び、ＡＮＧ1005からなる群から選択される、血液脳関門を通過する輸送を促す抗原；
（ｃ）疾患原因ペプチドもしくは疾患原因タンパク質または疾患原因核酸からなる群から選択される疾患原因作用物質であって、前記疾患原因核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ2Ｃ4）反復伸長ＲＮＡであり、前記疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質もしくはそのフラグメント、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－43、ＦＵＳタンパク質、Ｃ9ｏｒｆ72（第9番染色体オープンリーディングフレーム72）、ｃ9ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン1、アタキシン2、アタキシン3、アタキシン7、アタキシン8、アタキシン10、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ2ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、前記疾患原因作用物質；
（ｄ）免疫細胞上で発現するリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ40、ＯＸ40、ＩＣＯＳ、ＣＤ28、ＣＤ137／4－1ＢＢ、ＣＤ27、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ1、ＣＴＬＡ－4、ＰＤ－Ｌ2、ＰＤ－1、Ｂ7－Ｈ3、Ｂ7－Ｈ4、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ9、ＴＩＭ3、Ａ2ＡＲ、ＬＡＧ－3、及び、ホスファチジルセリンからなる群から選択される、前記リガンド及び／またはタンパク質；ならびに
（ｅ）1つ以上の腫瘍細胞上で発現するタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質
をさらに含む、本発明1001～1027のいずれかの抗体。
[本発明1029]
前記本発明のいずれかの抗体をコードする核酸配列を含む、単離した核酸。
[本発明1030]
本発明1029の核酸を含むベクター。
[本発明1031]
本発明1030のベクターを含む、単離した宿主細胞。
[本発明1032]
ヒトＭＳ4Ａ4Ａに結合する抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように、本発明1031の細胞を培養することを含む、前記方法。
[本発明1033]
前記細胞によって産生された前記抗体を回収することをさらに含む、本発明1032の方法。
[本発明1034]
本発明1001～1028のいずれかの抗体と薬学的に許容可能な担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1035]
アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、前記疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または前記疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、治療有効量の本発明1001～1028のいずれかの抗体を投与することを含む、前記方法。
[本発明1036]
ＭＳ4Ａ4Ａの過剰発現もしくは活性増大に起因もしくは関連する疾患、障害、病態、もしくは、損傷を予防する、前記疾患、障害、病態、もしくは、損傷のリスクを低減する、または前記疾患、障害、病態、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、治療有効量の本発明1001～1028のいずれかの抗体を投与することを含む、前記方法。
本明細書に記載の様々な実施形態の１つ、一部、または、全部の特性を組み合わせて、本開示のその他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。本開示のこれらの態様、及び、その他の態様は、当業者には自明である。本開示のこれらの実施形態、及び、その他の実施形態を、以下にさらに詳細に説明する。

【図面の簡単な説明】

【0064】

特許または出願のファイルは、カラーで出力した少なくとも１枚の図面を含む。カラーで出力した図面を具備した特許公報、または、特許出願公報公開のコピーは、所定の請求を行い、かつ、所定の手数料を支払うことで、庁から提供を受ける。

【図1】図１Ａは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含むハイブリドーマ上清で染色した、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）、及び、トランスフェクトしていない細胞（影付きのトレース）の代表的なＦＡＣＳプロットを示す。図１Ｂは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含むハイブリドーマ上清で染色した、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）、及び、トランスフェクトしていない細胞（影付きのトレース）の代表的なＦＡＣＳプロットを示す。図１Ｃは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で染色した、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）、及びトランスフェクトしていない細胞（影付きのトレース）の代表的なＦＡＣＳプロットを示している。図１Ｄは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２で染色した、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）、及びトランスフェクトしていない細胞（影付きのトレース）の代表的なＦＡＣＳプロットを示す。

【図2】ヒトＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトし、かつ、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した３００．１９細胞（図２Ａ）、Ｋ５６２細胞（図２Ｂ）、及び、Ｕ９３７細胞（図２Ｃ）のＦＡＣ分析；カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトし、かつ、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａを含むハイブリドーマ上清で染色した３００．１９細胞（図２Ｄ）、Ｋ５６２細胞（図２Ｅ）、及び、Ｕ９３７細胞（図２Ｆ）のＦＡＣＳ分析を示す。図２のそれぞれのパネルでは、左側の赤色のトレースは、トランスフェクトしていない細胞に対応しており、そして、右側の青色のトレースは、トランスフェクトした細胞に対応する。

【図3】トランスフェクトしていない３００．１９細胞（灰色の陰影）、ヒトＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトした３００．１９細胞（青色のトレース）、及び、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトした３００．１９細胞（橙色のトレース）に対して結合する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＦＡＣＳ分析を示す。図３Ａは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を示す表を示す。図３Ｂは、ＦＡＣＳプロットを示しており、図３Ａに示した本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のそれぞれに対応する。

【図4】トランスフェクトしていないＵ９３７細胞（灰色の陰影）に対して結合する、または、ヒトＭＳ４Ａ４ＡをトランスフェクトしたＵ９３７細胞（青色トレース）に対して結合する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＦＡＣＳ分析を示す。図４Ａは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を示す表を示す。図４Ｂは、ＦＡＣＳプロットを示しており、この図の左側の表に示した本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のそれぞれに対応する。

【発明を実施するための形態】

【0065】

本開示の詳細な説明
本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；それらの抗体を作製及び使用する方法；それらの抗体を含む薬学的組成物；それらの抗体をコードする核酸；及び、それらの抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。

【0066】

本明細書で説明または参照した技術や手順は、一般的に、よく理解がされており、そして、当業者であれば、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （２００１） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， （２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）に記載されている方法論など、広く利用がされている方法論である従来の方法論を進んで使用している。

【0067】

Ｉ．定義
本明細書では、用語「ＭＳ４Ａ４Ａ」または「ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチド」を、互換的に使用しており、特に断りがない限り、霊長類（例えば、ヒト、及び、カニクイザル）、及び、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）などの哺乳類を含む、あらゆる脊椎動物起源の天然のあらゆるＭＳ４Ａ４Ａのことを指す。一部の実施形態では、この用語は、野生型配列、及び、天然に存在するバリアント配列、例えば、スプライスバリアント、または、対立遺伝子バリアントの両方を含む。一部の実施形態では、この用語は、「全長」の未処理ＭＳ４Ａ４Ａ、ならびに、細胞内での処理が関与するあらゆる形態のＭＳ４Ａ４Ａを含む。一部の実施形態では、当該ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａである。一部の実施形態では、例示的なＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、２００１年１２月１日現在でのＵｎｉｐｒｏｔ受託番号：Ｑ９６ＪＱ５である。一部の実施形態では、例示的なヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１である。

【0068】

用語「抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体」、「ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗体」、及び、「ＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する抗体」は、ＭＳ４Ａ４Ａを標的にする診断薬、及び／または、治療薬として有用な抗体であり、ＭＳ４Ａ４Ａに対して十分な親和性で結合することができる抗体のことを指す。ある実施形態では、無関係の非ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で決定したように、ＭＳ４Ａ４Ａに対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、異なる種に由来するＭＳ４Ａ４Ａの間で保存されているＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する。

【0069】

標的分子に対する抗体の結合に関して、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、非特異的相互作用とは異なる測定可能な結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定して測定することができる。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰の非標識標的に類似するコントロール分子と競合させて決定することができる。この事例では、プローブに対する標識した標的の結合を、過剰な非標識標的が競合的に阻害しておれば、特異的結合を示す。本明細書で使用する用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、例えば、概ね、１０^－４Ｍ以下、１０^－５Ｍ以下、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下のいずれかの標的に関するＫＤ、または、１０^－４Ｍ～１０^－６Ｍ、または、１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍ、または、１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍの範囲のＫＤを有する分子として示すことができる。当業者であれば、親和性とＫＤ値とが反比例することを理解する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値として表れる。ある実施形態では、用語「特異的結合」とは、分子が、あらゆるその他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対して実質的に結合せずに、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチドに関するエピトープに対して結合する結合のことを指す。

【0070】

本明細書では、用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）を、「抗体」と互換的に使用する。本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味で使用しており、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限りは、抗体フラグメントを含む。

【0071】

「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖、及び、２つの同一の重（「Ｈ」）鎖から構成されている約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合で重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。それぞれの重鎖、及び、それぞれの軽鎖は、規則的な間隔を開けた鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端に、可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有しており、これに、幾つかの定常ドメインが続く。それぞれの軽鎖は、一端に、可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有しており、他端に、定常ドメインを有しており；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列しており、そして、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。

【0072】

異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。

【0073】

あらゆる脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）、及び、ラムダ（「λ」）と称する２つの明確に異なる種類のうちの一方に割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及び、ＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及び、ミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能での相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトでは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２を発現する。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造、及び、三次元構成は公知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）で概説されている。

【0074】

本開示のＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインのことを指す。当該重鎖及び軽鎖の可変ドメインを、それぞれ、「Ｖ_Ｈ」及び「Ｖ_Ｌ」と称し得る。これらのドメインは、一般的に、（同じクラスのその他の抗体と比較して）最も変化しやすい抗体の箇所であり、そして、抗原結合部位を含む。

【0075】

用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示のＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の間で配列が大きく異なるという事実のことを指す。当該可変ドメインは、抗原結合を媒介し、そして、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、当該可変性は、当該可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている３つのセグメントに集中している。可変ドメインにおいて高度に保存されている部分を、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＨＶＲで接続した、ベータシート立体配置を主体とする４つのＦＲ領域を含み、それらは、当該ベータシート構造に接続するループ、及び、一部の事例では、当該ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。それぞれの鎖でのＨＶＲは、ＦＲ領域に非常に近接して一緒に保持され、他方の鎖に由来するＨＶＲと共に、それらの抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。当該定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を呈する。

【0076】

本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体集団から得た抗体、例えば、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体のことを指し、すなわち、当該集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る自然発生の変異、及び／または、翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つ以上の抗原部位に指向する。一般的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、当該抗原の単一の決定基に指向する。それらの特異性に加えて、当該モノクローナル抗体は、その他の免疫グロブリンによる汚染を受けていないハイブリドーマ培養で合成するという点で有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特徴を示すものであり、あらゆる特定の方法で抗体を産生する必要があると解釈すべきではない。例えば、本開示にしたがって使用するモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、または、ヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部またはすべてを有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術などの様々な技術によって作製し得る。

【0077】

用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または、「全抗体」とは、抗体フラグメントとは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体を指すために、互換的に使用している。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。当該定常ドメインは、ネイティブ配列の定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列の定常ドメイン）、または、そのアミノ酸配列バリアント体とし得る。一部の事例では、当該インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0078】

「抗体フラグメント」とは、インタクト抗体が結合する抗原に対して結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子のことを指す。抗体フラグメントの例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及び、Ｆｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照されたい）；一本鎖抗体分子、及び、抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体がある。

【0079】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」フラグメントと称する２つの同一の抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を反映した名称を有する残留「Ｆｃ」フラグメントとを生成する。当該Ｆａｂフラグメントは、軽鎖全体に加えて、重鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）と、１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）とからなる。それぞれのＦａｂフラグメントは、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体をペプシン処理すると、単一の大きなＦ（ａｂ’）_２フラグメントが得られ、これは、異なる抗原結合活性を有するジスルフィド結合した２つのＦａｂフラグメントに概ね対応しており、また、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含んだ幾つかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つＦａｂ’に関する本明細書での表記である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体フラグメントは、本来は、そのフラグメント間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして産生された。抗体フラグメントのその他の化学的カップリングも公知である。

【0080】

当該Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドと共に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域は、特定の細胞型で認められるＦｃ受容体（ＦｃＲ）でも認識される。

【0081】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体の「機能性フラグメント」は、インタクト抗体の一部分を含み、一般的には、インタクト抗体の抗原結合領域または可変領域、または、ＦｃＲ結合能力を保持する、または、改変したＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体フラグメントの例として、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び、抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体がある。

【0082】

用語「ダイアボディ」とは、可変ドメインの鎖内ではなく、鎖間のペアリングを達成し、それにより、二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントが得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個）の残基）を用いてｓＦｖフラグメント（前出の段落を参照されたい）を構築して調製した小さな抗体フラグメントのことを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインが、異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。

【0083】

本明細書で使用する「キメラ抗体」とは、本開示のキメラ抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体、または、特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同であり、かつ、その（それらの）鎖の残部が、別の種に由来する抗体、または、別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同である、抗体、ならびに、所望の生物活性を奏する限りは、それら抗体のフラグメントのことを指す。本明細書で対象とするキメラ抗体として、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体があり、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルによって目的の抗原で免疫処置して産生された抗体に由来する。本明細書で使用する、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用する。

【0084】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のヒト化など、非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及び、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び、一般的には、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて、または、実質的にすべてが、非ヒト抗体のＨＶＲに対応しており、そして、ＦＲのすべて、または、実質的にすべてが、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体とは、ヒト化を受けた抗体のことを指す。

【0085】

「ヒト抗体」は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のように、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む抗体、及び／または、本明細書に開示したヒト抗体を作製する技術のいずれかを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、かかる抗体を抗原接種に応答して産生するように改変されているが、例えば、免疫処置したゼノマウス、ならびに、ヒトＢ細胞ハイブリドーマを介して生成させて、その内因性遺伝子座を無効化したトランスジェニック動物に対して当該抗原を投与して、調製することができる。

【0086】

本明細書で使用する用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」とは、配列が超可変性であり、及び／または、構造的に定義したループを形成する、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の抗体可変ドメインの領域などの抗体可変ドメインの領域のことを指す。一般的に、抗体には、６つのＨＶＲがあり；３つが、Ｖ_Ｈ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、そして、３つが、Ｖ_Ｌ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ネイティブ抗体では、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲのうちで最も多様性に富んでおり、そして、特に、Ｈ３が、抗体に対して優れた特異性を与える上で独特の役割を果たすものと考えられている。重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖がなくとも機能的であり、かつ、安定している。

【0087】

数多くのＨＶＲの記載を、本明細書で使用しており、かつ、本明細書に含んでいる。一部の実施形態では、これらのＨＶＲは、配列変動性に基づいたＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）とし得るものであり、そして、最も一般的に使用している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲）。一部の実施形態では、それらのＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲとし得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、どちらかと言えば、構造的ループの位置を指すものである（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、ＡｂＭ ＨＶＲとし得る。これらのＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の折衷案を示しており、そして、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、「接触」ＨＶＲとし得る。当該「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれの残基を、以下に示す。

【0088】

ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬでの２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び、８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、及び、ＶＨでの２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び、９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。当該可変ドメイン残基を、これらの伸長ＨＶＲ定義のそれぞれに対して、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲に従って付番する。

【0089】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0090】

本明細書で使用する「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶ_ＬまたはＶ_Ｈフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含み得る、または、既存のアミノ酸配列変化を含み得る。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９つ以下、８つ以下、７つ以下、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、または、２つ以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいアミノ酸変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び、７８Ｈのうちの３つ、２つ、または、１つのみに生じ；例えば、当該位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または、７８Ａとし得る。ある実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、Ｖ_Ｌヒト免役グロブリンフレームワーク配列、または、ヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。

【0091】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンのＶ_ＬまたはＶ_Ｈフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免役グロブリンのＶ_Ｌ配列またはＶ_Ｈ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行う。一般的には、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、Ｖ_Ｌに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、または、カッパＩＶとし得る。さらに、Ｖ_Ｈに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，上掲などのサブグループＩ、サブグループＩＩ、または、サブグループＩＩＩとし得る。

【0092】

例えば本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の、指定した位置での「アミノ酸改変」とは、指定した残基の置換もしくは欠失、または、少なくとも１つのアミノ酸残基を、指定した残基に隣接するように挿入することを指す。指定した残基に「隣接する」挿入とは、そこから１個～２個の残基までに挿入することを意味する。当該挿入は、指定した残基のＮ末端側またはＣ末端側で行い得る。本明細書における好ましいアミノ酸改変は、置換である。

【0093】

例えば、本開示の親和性成熟抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの「親和性成熟」抗体とは、当該抗体の１つ以上のＨＶＲが、１つ以上の変更を有し、その結果、抗原に対する抗体の親和性が、当該変更を有しない親抗体と比較して改善した抗体である。ある実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、または、ひいてはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で公知の手法によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９～７８３（１９９２）は、Ｖ_Ｈ－及びＶ_Ｌ－ドメインのシャッフリングを用いた親和性成熟について記載している。ＨＶＲ、及び／または、フレームワーク残基のランダム変異導入については、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７～１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４～２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０～９（１９９５）；及び、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）に記載されている。

【0094】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位、及び、抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、１つの重鎖可変領域ドメインと、１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供して、この抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。

【0095】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略称される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態で接続したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体フラグメントである。好ましくは、当該ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成する、ことを可能にする。

【0096】

抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、アミノ酸配列バリアントＦｃ領域）が関与する生物活性のことを指しており、また、抗体のアイソタイプに応じて異なる。

【0097】

本明細書で使用する用語「Ｆｃ領域」とは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び、バリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６、または、Ｐｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端にまで及ぶものと定義される。当該Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムでの残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または、抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することで除去し得る。したがって、インタクト抗体の組成は、すべてのＫ４４７残基を除去した抗体集団、Ｋ４４７残基を除去していない抗体集団、及び、Ｋ４４７残基を持つ抗体とそれを持たない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適なネイティブ配列Ｆｃ領域として、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び、ＩｇＧ４がある。

【0098】

「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、自然界で認められるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域として、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ、及び、Ａアロタイプ）、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに、それらの天然バリアントがある。

【0099】

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変、好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換によって、ネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書でのバリアントＦｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び／または、親ポリペプチドのＦｃ領域に対して、少なくとも約８０％の相同性、及び、最も好ましくは、それらに対して少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらに対して少なくとも約９５％の相同性を有する。

【0100】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体のことを表す。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合する抗体であり、そして、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び、ＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体があり、これらの受容体の対立遺伝子バリアント、及び、選択的スプライシング形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体として、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なるＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）と、ＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）とを含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系阻害性モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含む。その他のＦｃＲは、今後同定されるものを含めて、本明細書での用語「ＦｃＲ」に含まれる。また、ＦｃＲは、抗体の血清での半減期を長くすることができる。

【0101】

ペプチド、ポリペプチド、または、抗体配列に関して本明細書で使用する、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「ホモロジー」は、配列を整列させ、必要に応じて、最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない、指定のペプチド、または、ポリペプチド配列でのアミノ酸残基と同一である候補配列でのアミノ酸残基のパーセンテージのことを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲に属する様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、または、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において公知のあらゆるアルゴリズムなど、アラインメントを評価するための適切なパラメーターを決定することができる。

【0102】

同じエピトープについて競合する抗体（例えば、中和抗体）の文脈で使用する用語「競合する」とは、試験する抗体が、共通の抗原（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ、または、そのフラグメント）に対するリファレンス分子（例えば、リガンド、または、リファレンス抗体）の特異的結合を予防または阻害（例えば、低減）するアッセイによって決定する抗体間の競合のことを意味する。無数のタイプの競合結合アッセイを使用して、抗体が、別の抗体と競合するか否かを判断でき、例えば；固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９）固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；１－１２５ラベルを使用した固相直接ラベルＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照されたい）；及び、直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２）がある。一般的には、そのようなアッセイは、非標識試験抗体、及び、標識参照抗体のいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定して測定する。通常、当該試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイ（競合抗体）で同定した抗体として、リファレンス抗体と同じエピトープに対して結合する抗体と、立体障害を招くリファレンス抗体が結合するエピトープに対して十分近位の隣接エピトープに対して結合する抗体がある。競合結合を決定するための方法に関するさらなる詳細を、本明細書の実施例において説明する。通常、競合する抗体が過剰に存在すると、共通抗原に対するリファレンス抗体の特異的結合は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、及び／または、少なくともほぼ１００％を阻害（例えば、低減）する。

【0103】

本明細書で使用するＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の「相互作用」として、タンパク質間相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及び、イオン結合があるが、これらに限定されない。本明細書において、抗体が、２つのポリペプチドの間の相互作用を、妨害、低減、または、完全に排除する場合、当該抗体は、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。その抗体が、２つのポリペプチドのうちの一方に結合する場合、本開示の抗体は、２つのポリペプチドの間の「相互作用を阻害する」。一部の実施形態では、当該相互作用は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７．５％、及び／または、少なくともほぼ１００％のいずれかで阻害することができる。

【0104】

用語「エピトープ」として、抗体が結合することができる、あらゆる決定基がある。エピトープは、その抗原を標的とする抗体が結合する抗原の領域であり、また、抗原がポリペプチドである場合、当該抗体と直接に接触する特定のアミノ酸を含む。大抵の場合、エピトープは、ポリペプチドに存在するが、一部の事例では、核酸などのその他の種類の分子に存在することができる。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子に属する化学的に活性な表面を含み、そして、特定の三次元構造特性、及び／または、特定の電荷特性を有することができる。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド、及び／または、高分子の複雑な混合物での標的抗原に関するエピトープを優先的に認識する。

【0105】

「アゴニスト」抗体、または、「活性化」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、増大させる）抗体である。

【0106】

「アンタゴニスト」抗体、または、「ブロッキング」抗体、または、「阻害」抗体とは、当該抗体が、抗原と結合した後に、１つ以上のリガンドに対する抗原結合を低減し、阻害し、かつ／または、排除する（例えば、減少させる）抗体、及び／または、当該抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を低減し、阻害し、かつ／または、排除する（例えば、低下させる）抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または、ブロッキング抗体、または、阻害抗体は、１つ以上のリガンドへの抗原結合、及び／または、当該抗原の１つ以上の活性または機能を、実質的または完全に阻害する。

【0107】

本開示の単離した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの「単離した」抗体は、その産生環境の成分から（例えば、自然に、または、組換えて）同定、分離、及び／または、回収したものである。好ましくは、当該単離した抗体は、その産生環境に由来するその他のすべての汚染成分とは関連がない。組換えトランスフェクト細胞から得られるものなど、その産生環境に由来する汚染成分は、一般的には、抗体の研究、診断、または、治療への使用を妨げる物質であり、そして、酵素、ホルモン、及び、その他のタンパク質性、または、非タンパク質性溶質を含み得る。好ましい実施形態では、抗体を、（１）例えば、ローリー法で決定した抗体の９５重量％を超えるまで、そして、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで；（２）スピニングカップシーケンサーを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または、（３）クマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用する非還元または還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥで均一になるまで精製する。単離した抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内の元の位置に抗体を含む。しかしながら、通常、単離したポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程で調製する。

【0108】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体などの抗体をコードする「単離した」核酸分子とは、それが産生された環境において通常会合している少なくとも１つの汚染核酸分子から同定及び分離した核酸分子である。好ましくは、当該単離した核酸は、その産生環境に関連するすべての構成成分とは会合しない。本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする単離した核酸分子は、自然界で認められる形態または状況とは異なる形態で存在する。したがって、単離した核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする核酸とは区別される。

【0109】

本明細書で使用する用語「ベクター」とは、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子のことを指す。「プラスミド」は、ベクターの一種であり、さらなるＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡのことを指す。ファージベクターは、別の種類のベクターである。別の種類のベクターとして、ウイルスベクターがあり、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムに対してライゲーションすることができる。特定のベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、及び、エピソーム哺乳動物ベクター）は、それらを導入した宿主細胞において自己複製が可能である。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結した遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書では、「組み換え発現ベクター」、または、簡略して「発現ベクター」と称する。一般的に、組換えＤＮＡ技法で用いる発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが、ベクターのうちで最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用し得る。

【0110】

本明細書で互換的に使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、あらゆる長さのヌクレオチドの重合体のことを指すものであり、そして、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。当該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドまたは塩基、及び／または、それらの類似体、または、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、または、合成反応により重合体に組み込まれ得るあらゆる基質とすることができる。

【0111】

「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクターのレシピエントになることができる、または、レシピエントになっている個々の細胞、または、細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、そして、その子孫は、自然発生的、偶発的、または、意図的な変異により、起源の親細胞と必ずしも完全に（形態学的に、または、ゲノムＤＮＡ相補鎖において）同一でなくともよい。宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトした細胞を含む。

【0112】

本明細書で使用する「担体」は、使用する用量、及び、濃度で、そこに曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒であり、薬学的に許容される担体、賦形剤、または、安定剤を含む。

【0113】

本細書で使用する用語「予防する」とは、個体における特定の疾患、障害、または、病態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害、もしくは、病態にかかりやすくてもよい、当該疾患、障害、もしくは、病態に影響を受けやすくてもよい、または、そのような疾患、障害、もしくは、病態を発症するリスクがあってもよいが、未だに、当該疾患、障害、または、病態であると診断されていない。

【0114】

本明細書で使用する、特定の疾患、障害、または、病態を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有し得または有し得ず、そして、本明細書に記載した治療法を行う前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示し得または示し得ない。「リスクがある」とは、個体が、特定の疾患、障害、または、病態の発症と相関する測定可能なパラメーターである、当該技術分野で公知の１つ以上のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子のうちの１つ以上を持たない個体よりも、特定の疾患、障害、または、病態を発症する可能性が高くなる。

【0115】

本明細書で使用する用語「治療」とは、臨床病理の経過期間で治療を受けている個体の自然な経過を変えるようにデザインした臨床介入のことを指す。治療の望ましい効果として、進行速度の低下、病的状態の改善または緩和、及び、特定の疾患、障害、または、病態の寛解または予後の改善がある。例えば、特定の疾患、障害、または、病態に関連する１つ以上の症状が緩和または排除された場合、個体の「治療」は成功している。

【0116】

「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間での少なくとも有効な量のことを指す。有効量は、１回以上の投与で提供することができる。本明細書に記載の有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び、体重、ならびに、個体において所望の応答を誘発する治療の能力などの要因によって変化し得る。有効量は、治療のあらゆる毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が勝る量でもある。予防的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患の生化学的、組織学的、及び／または、行動的症状、その合併症、及び、疾患の進行過程での中間的病理学的表現型など、疾患のリスクの排除または軽減、重症度の軽減、または、発症の遅延などの結果がある。治療的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患が関与する１つ以上の症状の減少、疾患を煩った方々の生活の質の向上、疾患の治療に必要なその他の薬物の投与量の減少、標的化などを介した別の薬物の効果の改善、疾患の進行の遅延、及び／または、生存期間の延長などがある。薬物、化合物、または、薬学的組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床の関連での理解では、薬物、化合物、または、薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または、薬学的組成物と組み合わせて達成し得る、または、達成し得ない。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬を投与する状況で考慮し得るものであり、そして、単一の薬剤が、１つ以上のその他の薬剤と組み合わせて、所望の結果を達成し得る、または、達成するのであれば、有効量で与えられると考え得る。

【0117】

リスクの治療、予防、または、軽減を目的とする「個体」とは、ヒト、飼育動物、及び、家畜、ならびに、動物園展示用動物、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類されるあらゆる動物のことを指す。好ましくは、個体は、ヒトである。

【0118】

本明細書で使用する、別の化合物または組成物との「併用」投与とは、同時投与、及び／または、異なる時点での投与を含む。また、併用投与は、合剤としての投与、または、別個の組成物としての投与を含み、異なる投与頻度または間隔で、かつ、同じ投与経路、または、異なる投与経路を使用することを含む。一部の実施形態では、併用投与は、同じ治療レジメンの一部としての投与である。

【0119】

本明細書で使用する用語「約」とは、それぞれの数値の通常の誤差範囲のことを指しており、当該技術分野の当業者であれば、容易に理解する。本明細書において「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その数値、または、パラメーターそれ自体を対象にした実施形態を含む（及び、説明する）。

【0120】

本明細書、及び、添付した特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び、「その（ｔｈｅ）」は、特に断りのない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、１つの抗体から、モル量の数多くの抗体までを指すものであり、そして、当業者に公知のそれらの等価物なども含む。

【0121】

本明細書で説明する本開示の態様及び実施形態は、態様、及び、実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」、及び、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を含む、ことを理解されたい。

【0122】

Ｉ．抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
本明細書では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。本明細書で提供する抗体は、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ関連障害の診断または治療に有用である。

【0123】

ある態様では、本開示は、本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のエピトープに結合する単離した（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質として、哺乳動物ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、マウスＭＳ４Ａ４Ａタンパク質、及び、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａタンパク質があるが、これらに限定されない。本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、天然に存在するＭＳ４Ａ４Ａのバリアントを含む。

【0124】

ヒトＭＳ４Ａ４Ａは、膜糖タンパク質をコードする２３９アミノ酸のタンパク質である。ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１：

に記載している。

【0125】

加えて、マウスＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２：

に記載している。

【0126】

加えて、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３：

に記載している。

【0127】

加えて、ヒトＭＳ４Ａ６Ａのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９１：

に記載している。

【0128】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、骨髄細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、脳細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、成熟星状細胞など、これに限定されない星状細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、乏突起膠細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、ミクログリア細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、及び、Ｔ細胞などであるが、これらに限定されない免疫細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、嗅覚細胞において発現させる。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａを、細胞表面上で発現させる。

【0129】

本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１～６４；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を参照されたい）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基６５～８５）；ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８に対応する細胞外ドメイン（細胞外ドメイン１；ＥＣＬ１）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基９９～１１９）；細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１２０～１３７）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１３８～１５８）；アミノ酸残基１５９～１７９に対応する細胞外ドメイン（細胞外ドメイン２；ＥＣＬ２）；膜貫通ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１８０～２００）；及び、細胞質ドメイン（ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基２０１～２３９）などであるがこれらに限定されない幾つかのドメインを含む。加えて、本開示のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質を、脳、ニューロン、グリア細胞、内皮細胞、血管周囲細胞、周皮細胞などであるが、これらに限定されない、数多くの組織、及び、細胞において発現させる。

【0130】

ＭＳ４Ａ４Ａ結合パートナー及びアダプタータンパク質
本明細書では、ＭＳ４Ａ４Ａに結合し、かつ、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの間の相互作用をブロックする抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。一部の実施形態では、ペプチドライブラリーを合成することができ、そこでは、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質を、１つのアミノ酸残基で分離した連続する１５－マー、及び、２５－マーのペプチドに切断し、次いで、フィルター上にスポットする。次いで、ＭＳ４Ａ４Ａリガンド、または、結合パートナーの結合が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の存在下または非存在下で、ＭＳ４Ａ４Ａペプチド、または、ペプチド類と相互作用する能力を、ＳＰＯＴ結合分析で試験をすることができる（例えば、Ｆｒａｎｋ， Ｒ ａｎｄ Ｏｖｅｒｗｉｎ， Ｈ （１９９６） Ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ６６， １４９－１６９；Ｒｅｉｎｅｋｅ， Ｕ ｅｔ ａｌ， （２００２） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６７， １３－２６；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ， ＯＳ ｅｔ ａｌ， （２０１０） Ｊ， ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ２８５， １２２１０－１２２２２）。一部の実施形態では、セルロース支持体は、Ｎ－修飾セルロース－アミノヒドロキシルプロピルエーテル膜として調製することができ、そして、合成の全ラウンドを、ペプチドと膜との間にアラニンリンカーをもたらす９－フルオレニルメトキシカル－ボニルアラニン－ペンタフルフェニルエステルで、スポット形成することから始める。例えば、異なるアミノ酸を段階的に加える自動線形合成は、９－フルオレニル－メトキシカルボニルと、成長するペプチド鎖に対する適切な側鎖保護とでＮ末端を保護している。一部の実施形態では、脱保護、活性化、及び、カップリングのパターンを、１６－マーのペプチドを生成するまで継続し、その結果、共有結合で固定化したペプチドのアレイを、Ｎ末端遊離端を有する、それらのＣ末端に、セルロース支持体に均等に分散する（Ｓｃｈａｒｎ、Ｄ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２，３６１－３６９）。一部の実施形態では、サイド保護基の除去を、２つのステップで行うことができる。まず、膜を、９０％トリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％ Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタンにて）で処理し；次いで、例えば、６０％のトリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％ Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタン）で処理することができる。トリフルオロ酢酸塩を除去するために、Ｈ_２Ｏ、エタノール、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、及び、エタノールで、膜を数回洗浄し、そして、乾燥させる。最後に、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ｐＨ８．０）で拡張し、そして、５％ショ糖を、２時間かけて加えたブロッキング緩衝剤でブロックしてから、所定のペプチドライブラリーを、リガンド結合分析に供する。一部の実施形態では、セルロース結合ペプチドの結合を研究するために、膜結合ライブラリーを、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の存在下または非存在下で、例えば、４℃で、一晩、ブロッキング緩衝剤にて、Ｓ－ペプチドと、ポリヒスチジンタグ付けリガンドとを組み合わせてインキュベートし、続いて、ブロッキング緩衝剤で、室温で、３時間、１ｍｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質と、２回目のインキュベートをする。その後、当該膜を、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、３回洗浄することができ、その後、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、ＬｕｍｉＩｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行うと、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポットシグナルの強度を提供し得る。あるいは、結合したリガンドの検出は、由来のヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイで行うことができる。標準的なウエスタンブロッティング手順と、スポット検出とを用いて、インキュベートすることができる。

【0131】

本明細書では、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの間の相互作用（例えば、結合）をブロックする抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。

【0132】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａと、ＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーとの間の相互作用を、表面プラズモン共鳴分析を使用して特徴決定し得る（例えば、Ｓｋｅｌｄａｌ ｅｔ ａｌ，２０１２ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２８７：４３７９８；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０－１２２２２）。ブロッキング抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の存在下または非存在下での固定化ＭＳ４Ａ４Ａに対するＭＳ４Ａ４Ａリガンドまたは結合パートナーの直接結合の決定は、例えば、標準ランニング緩衝剤（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、及び、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０）としてＣａＨＢＳを使用するＢｉａｃｏｒｅ２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）で実施することができる。一部の実施形態では、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＣＭ５）のバイオセンサーチップを、ＮＨＳ／ＥＤＣ法を使用して活性化し、次いで、７９ ｆｍｏｌ／ｍｍ^２のタンパク質密度にまで、ＭＳ４Ａ４Ａでコーティングして、当該結合パートナーの親和性測定に使用することができる。ｐｒｏ－ＭＳ４Ａ４Ａを有するバイオセンサー表面の調製は、同じ手順に従う。リガンド結合実験のそれぞれのサイクルの後でのフローセルの再生は、再生緩衝剤（１０ｍＭ グリシン－ＨＣｌ，ｐＨ４．０，５００ｍＭ ＮａＣｌ，２０ｍＭ ＥＤＴＡ、及び、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０）の２度の１０－μｌパルスと、０．００１％ ＳＤＳの１度の注射で行うことができる。親和性推定のためのセンサーグラムの調整は、例えば、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．１を使用して行うことができる。同様のプロトコールに従って、ＨｉｓＳ－ＮＧＦｐｒｏ、または、ＨｉｓＳ－ＢＤＮＦｐｒｏの固定化を、ＮＨＳ／ＥＤＣカップリングキットを使用して、ＣＭ５バイオセンサーチップで行って、固定化したタンパク質に同様の表面密度（約３００ ｆｍｏｌ／ｍｍ^２）を与え得る。ＭＳ４Ａ４Ａリガンド、または、結合パートナーを固定化したバイオセンサーチップを使用して、競合するＭＳ４Ａ４Ａ抗体の存在下または非存在下で、ＭＳ４Ａ４Ａの結合を調べることもできる。

【0133】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａと、ＭＳ４Ａ４Ａリガンド及び結合パートナーとの間の相互作用は、プルダウンアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０－１２２２２）。例えば、ＭＳ４Ａ４Ａが発現した細胞内または細胞外ドメインを、ＭＳ４Ａ４Ａブロッキング抗体の非存在下または存在下で、タグ付きＭＳ４Ａ４Ａリガンド、または、結合パートナーとインキュベートし、そして、１００μｌのグルタチオン（ＧＳＨ）－セファロースビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，カタログ番号１７－０７５６－０１）を使用して沈殿させることができる。使用した受容体ドメインの量は、コントロールとしてＴａｌｏｎビーズを使用した沈殿で決定することができる。結合したタンパク質は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析で分離し、そして、標準的なウェスタンブロット分析で、抗ヒスチジン抗体を使用して視覚化できる。

【0134】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａと、ＭＳ４Ａ４Ａリガンド及び結合パートナーとの間の相互作用を、セルロース結合タンパク質を使用して特徴決定し得る（Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ， ２０１０ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２８５， １２２１０－１２２２２）。例えば、膜結合タンパク質を、別のＭＳ４Ａ４Ａリガンド、または、結合パートナーと、４℃で、一晩、ブロッキング緩衝剤とインキュベートし、続いて、ブロッキング緩衝剤で、室温で、３時間、１μｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質を用いて、２度目のインキュベーションを行うことができる。その後、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、３回洗浄することができ、その後、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、ＬｕｍｉＩｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行うと、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポットシグナルの強度を提供し得る。あるいは、結合したリガンドの検出は、ヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイで行うことができる。標準的なウエスタンブロッティング手順と、スポット検出とを用いて、インキュベートすることができる。

【0135】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａと、ＭＳ４Ａ４Ａリガンド及び結合パートナーとの間の相互作用を、近接ライゲーションアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ｇｕｓｔａｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１３ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３３：６４－７１）。例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ、及び、そのリガンドまたは結合パートナーを発現する、または、それらに曝露する細胞に対する近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）（ＤｕｏｌｉｎｋＩＩ）は、一次抗体抗ＭＳ４Ａ４Ａ、及び、当該結合パートナーに対する抗体を用いて実行することができ、続いて、その後に加える環形成オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、かつ、４０ｎｍ以内に抗原が近接するとローリングサークル増幅を開始する、オリゴヌクレオチドと共役した二次抗体とインキュベーションする。増幅した当該ＤＮＡは、相補的な蛍光標識オリゴヌクレオチドを加えることで、視覚化することができる。

【0136】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａと、ＭＳ４Ａ４Ａリガンド及び結合パートナーとの間の相互作用を、細胞結合アッセイでのアルカリホスファターゼをタグ付けしたリガンドを使用して、特徴決定することができる（例えば、Ｈｕ ｅｔ ａｌ，２００５，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５２９８－５３０４；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｎａｔｕｒｅ ４０９，３４１－３４６；Ｌａｕｒｅｎ ｅｔ ａｌ，２００９，Ｎａｔｕｒｅ ４５７，１１２８－１１３２；及び、Ｈｕ ｅｔ ａｌ，２０１０，Ｎｅｕｒｏｎ ６８，６５４－６６７）。例えば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）をタグ付けしたリガンドを作成して、トランスフェクトした細胞、または、初代ニューロンに関するＭＳ４Ａ４Ａに対する結合を評価することができる。ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に対するＡＰをタグ付けしたリガンド結合を検出するために、培養物を、例えば、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳナトリウム、ｐＨ７．０５、及び、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＨ）で洗浄することができる。次に、これらのプレートを、ＡＰをタグ付けしたリガンドと共に、ＭＳ４Ａ４Ａブロッキング抗体の存在下または非存在下において、例えば、ＨＢＨにおいて、２３℃で、２時間インキュベートすることができる。ＡＰ結合リガンドを、当該技術分野で周知の方法で、検出、及び、定量することができる。

【0137】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ａ）１つ以上のリガンドまたは結合タンパク質との相互作用のために利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを低減すること；ｂ）；１つ以上のリガンドまたは結合タンパク質との相互作用に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位をブロックすること；ｃ）１つ以上のリガンドまたは結合タンパク質との相互作用、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、細胞内局在化に必要であるＭＳ４Ａ４Ａに関する１つ以上の翻訳後事象を予防すること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を誘導すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、そのリガンド、シグナル伝達タンパク質、または結合タンパク質のうちの１つ以上との間の相互作用をさらに阻害する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、マウスＭＳ４Ａ４Ａ、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ、または、それらの組み合わせに対して特異的に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａであり、かつ、当該第２の抗原は、血液脳関門を通る輸送を促す抗原である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原は、ＭＳ４Ａ４Ａ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイ、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、及び、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される。

【0138】

シグナル伝達アダプタータンパク質とは、シグナル伝達経路に関連するその他のタンパク質に付随するタンパク質であるが、これらに限定されない。アダプタータンパク質は、様々なタンパク質結合モジュール、または、モチーフを含んでおり、これらは、一緒に結合またはタンパク質結合するパートナーであり、そして、より大きなシグナル伝達複合体の生成を促す。アダプタータンパク質は、大抵の場合、構造内に１つ以上のその他の特定のタンパク質との特定の相互作用を許容する幾つかのドメインを含む。例えば、Ｓｒｃホモロジー２（ＳＨ２）ドメインは、ホスホチロシン残基を含むタンパク質での特定のアミノ酸残基配列を認識する。アダプタータンパク質とその他のシグナル伝達タンパク質との相互作用により、特定の協調したタンパク質間の相互作用の多様性が、シグナル伝達の間に、そして、シグナル伝達に関連して細胞内で発生する。

【0139】

免疫受容体チロシンをベースとした活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）とは、免疫系の特定の細胞表面タンパク質の細胞質尾部で２回繰り返される保存された４つのアミノ酸残基の配列である。そのコンセンサスモチーフは、特定のタンパク質のＣ末端でのＹｘｘＩ／Ｌｘ_{（６－１２）}ＹｘｘＩ／Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５５）である。２つのリピートは、一般的に、６～１２アミノ酸残基（ＹｘｘＬ／Ｉｘ_{（６－１２）}ＹｘｘＬ／Ｉ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５５））の間で分離している。ＩＴＡＭは、シグナル伝達にとって重要であり；これらのモチーフでのチロシン残基は、受容体分子と、そのリガンドの相互作用の後にリン酸化を受け、そして、シグナル伝達に関与するその他のタンパク質のドッキング部位を形成する（Ｂａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｔｒｏｗｓｄａｌｅ，２００６，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３６：１６４６－１６５３）。

【0140】

免疫受容体チロシンをベースとした阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）とは、免疫系の特定の阻害受容体の細胞質尾部で認められる保存されたアミノ酸の配列（Ｓ／Ｉ／Ｖ／ＬｘＹｘｘＩ／Ｖ／Ｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５２））である。ＩＴＩＭを含む阻害受容体がそのリガンドと相互作用した後に、それらのＩＴＩＭモチーフは、Ｓｒｃキナーゼファミリーの酵素によってリン酸化され、シグナル伝達に関与する分子の活性化を減少させるその他の酵素（様々なホスホチロシンホスファターゼなど）を動員できるようになる。（Ｂａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｔｒｏｗｓｄａｌｅ，２００６，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３６：１６４６－１６５３）。

【0141】

あるいは、一部の受容体は、固有のＩＴＡＭモチーフを持っておらず、代わりに、リジンまたはアルギニンなどの正に荷電した膜貫通アミノ酸をコードする。これらの正に帯電したアミノ酸残基は、ＩＴＡＭをコードするアダプタータンパク質において対応する負に帯電した膜貫通アミノ酸残基との結合を媒介する。リガンド認識と受容体クラスター形成があると、チロシンアミノ酸残基は、Ｓｒｃファミリーのタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）によってリン酸化される。二重リン酸化ＩＴＡＭモチーフは、ＺＡＰ－７０、または、ＳｙｋなどのＳｙｋファミリーＰＴＫのタンデムＳＨ２ドメインのドッキング部位として機能する。ＳｙｋファミリーＰＴＫは、一連の細胞内基質をリン酸化し、膜近位足場の形成をもたらし、ホスホリパーゼＣ－ｃ（ＰＬＣｃ）などの重要なエフェクター分子の動員をもたらし、カルシウムシグナル伝達、ならびに、Ｒａｓ活性化をもたらし、その結果、ＥＲＫ経路と細胞活性化を刺激する。

【0142】

複数の研究は、下流の生化学的シグナルを調節または伝搬するその他の細胞表面膜タンパク質とのシグナル伝達複合体の形成におけるＭＳ４Ａタンパク質の重要性を支持している。結合パートナーは、大抵の場合、未だに、ＭＳ４Ａ１及びＭＳ４Ａ２以外のＭＳ４Ａタンパク質に関しては明確に決定されていないが、予測タンパク質分析は、Ｓｒｃホモロジー２（ＳＨ２）、及び、ＳＨ３ドメイン結合部位が、一般的に、ＭＳ４Ａタンパク質のＮ－及びＣ－末端領域に認められており、これがその他のシグナル伝達分子のドッキングプラットフォームとして機能し得ることを示す（Ｄｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，４０：ＤＤ２４２－Ｄ２５１）。ＳＨドメインは、プロリンに富む配列に優先的に結合しており、これも、一般的に、ＭＳ４Ａタンパク質の細胞質尾部に認められる（Ｌｉａｎｇ ａｎｄ Ｔｅｄｄｅｒ，２００１，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７２：１１９－１２７；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ，２０００，ＦＡＳＥＢ Ｊ，１４：２３１－２４１）。ＭＳ４Ａタンパク質のこの特徴は、タンパク質間相互作用にそれらが密接に関与していること、また、シグナル伝達複合体を形成するために互いに関連し得ることの明確な根拠を示す。

【0143】

したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＡＭをコードするアダプタータンパク質に関連するシグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、阻害性シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＩＭをコードするアダプタータンパク質に関連する阻害性シグナル伝達複合体の形成を増進または増大させる。

【0144】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＡＭをコードするアダプタータンパク質に関連するシグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、阻害性シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＩＴＩＭをコードするアダプタータンパク質に関連する阻害性シグナル伝達複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0145】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを低減すること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位をブロックすること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、細胞内局在化に必要なＭＳ４Ａ４Ａに関する１つ以上の翻訳後事象を予防すること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を誘発すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0146】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを増大させること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位を安定させること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面発現を維持して、ホモオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、適切な細胞局在化の維持を可能にすること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を低減すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、ＭＳ４Ａ４Ａホモオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を増大させる、または、増進させる。

【0147】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを低減すること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位をブロックすること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、細胞内局在化に必要なＭＳ４Ａ４Ａに関する１つ以上の翻訳後事象を予防すること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を誘発すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、１つ以上のシグナル伝達アダプタータンパク質を有する、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。

【0148】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ａ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に利用可能なＭＳ４Ａ４Ａの有効レベルを増大させること；ｂ）ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成に必要なＭＳ４Ａ４Ａ上の１つ以上の部位を安定させること；ｃ）ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面発現を維持して、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー複合体の形成、及び／もしくは、ＭＳ４Ａ４Ａの適切な処理、及び／もしくは、適切な細胞局在化の維持を可能にすること；ｄ）ＭＳ４Ａ４Ａの分解を低減すること；ｅ）ＭＳ４Ａ４Ａの立体配座を変化させること、または、それらのあらゆる組み合わせによって、１つ以上のシグナル伝達アダプタータンパク質を有する、ＭＳ４Ａ４Ａヘテロオリゴマー細胞表面タンパク質複合体の形成を増大させる、または、増進させる。

【0149】

前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体のクラスター形成を増大させる、または、増進させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体のクラスター形成を阻害する、または、低減する。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体のクラスター形成の増大または増進、または、阻害または低減は、骨髄細胞におけるものである。

【0150】

マクロファージ及びミクログリア細胞機能におけるＭＳ４Ａ４Ａ
中枢神経系（ＣＮＳ）のマクロファージ及び骨髄細胞は、本質的に多様な表現型及び機能を有する。マクロファージは、インビトロで、食細胞性、及び、潜在的炎症性、表現型、及び、活性が異なる、Ｍ１マクロファージ及びＭ２マクロファージに分けることができる。例えば、末梢器官では、Ｍ１表現型を有するマクロファージは、炎症誘発性及び抗菌性の表現型及び機能を有するものと考えられており、一方で、Ｍ２表現型を有するマクロファージは、抗炎症性の表現型及び機能を有しており、さらに恒常的な状態にあると考えられている。

【0151】

健康で恒常性状態に関連するミクログリアは、Ｍ１マーカー（例えば、ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６）の発現と比較して、それらの細胞表面で、より多くのＭ２マーカー（例えば、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及び、ＣＤ１１５など）を発現する（Ｇｉｎｈｏｕｘ ａｎｄ Ｐｒｉｎｚ，２０１５，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ，７：ａ０２０５３７）。しかしながら、アルツハイマー病のマウスモデルと、ヒトアルツハイマー病との両方の疾患関連ミクログリア（ＤＡＭ）は、炎症性または活性化状態にある。炎症性または活性化状態の疾患関連ミクログリアは、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性疾患に関連する病理の低減に積極的な役割を果たしており、有益であると考えられている。

【0152】

ＭＳ４Ａ４Ａの発現は、インビトロで、Ｍ２マクロファージにおいて上昇しており、また、ＭＳ４Ａ４Ａは、Ｍ２マクロファージの新規の細胞表面マーカーであることが示唆されている。加えて、ＭＳ４Ａ４Ａは、肥満細胞上でのｃＫｉｔの細胞表面輸送を調節することも示しており、肥満細胞の脱顆粒と生存の調節におけるＭＳ４Ａ４Ａの役割を示唆している（Ｃｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２６：１７１１－１７２７）。まとめると、これらの報告での知見は、ＭＳ４Ａ４Ａを標的にすると、Ｍ１及びＭ２マクロファージ表現型に関連する様々なマクロファージ細胞表面受容体の再利用、発現、及び／または、分解に影響を与え、それが故に、機能と活動に影響を与える可能性があることを示唆している。

【0153】

本明細書に記載したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、Ｍ２マクロファージ細胞表面マーカーの発現に影響を与えた。特に、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、マクロファージにおけるＣＤ２００Ｒ、デクチン－１、及び、ＣＤ１６３の細胞表面発現を低減しており、このことは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、Ｍ２マクロファージ細胞表面受容体の発現を低減することで、マクロファージの分極、機能、及び／または、活性を調節することを示唆している。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、Ｍ２マクロファージ細胞表面受容体を低減しており、このことは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ミクログリア細胞の生理学的状態を、より保護的な表現型へと、例えば、より炎症性または活性化の状態へと、効果的に変更することを示唆している。したがって、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、一部では、マクロファージ及びミクログリアの表現型を、炎症誘発性及び活性化状態に変更すると、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性障害の治療において有用である。

【0154】

ＭＳ４Ａ４Ａ及びＴＲＥＭ２の発現
神経変性疾患は、一部では、中枢神経系（ＣＮＳ）の欠陥免疫機能によって特徴決定される。例えば、ＣＮＳ骨髄細胞の一部の生存能力と機能の低下は、ミクログリアに限ったものではなく、アルツハイマー病などの神経変性疾患に対する感受性に寄与するものと考えられている。骨髄細胞の生存能力及び／または機能を向上させる薬理学的介入は、そのような神経変性の疾患、及び、障害の発症、重症度、または、進行を改善するための効果的な治療を提供する。

【0155】

骨髄細胞で発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、マクロファージ、樹状細胞、単球、皮膚のランゲルハンス細胞、クッパー細胞、破骨細胞、ミクログリアなどの骨髄細胞上で主に発現する免疫グロブリン様受容体である。ＴＲＥＭ２は、実験的自己免疫性脳脊髄炎、及び、アルツハイマー病の間に、ＣＮＳのミクログリア及び浸潤性マクロファージで高度に発現する（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ，２００７，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３７：１２９０－１３０１；Ｗａｎｇ，２０１５，Ｃｅｌｌ，１６０：１０６１－１０７１）。当該ＴＲＥＭ２経路は、ＣＮＳ骨髄細胞の生存能力と機能の重要な調節因子と考えられている。

【0156】

ヒトの遺伝学研究からのデータは、ＭＳ４Ａ４ＡとＴＲＥＭ２との間に強い遺伝的関連があり、かつ、アルツハイマー病に感受性であることを示唆している（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１３１：９２５－９３３０）。特に、アルツハイマー病の予防のためのＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子は、患者の脳脊髄液でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大に関連している。

【0157】

本明細書に記載したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、マクロファージにおける細胞ＡＴＰレベルを増大させたが、このことは、抗ＭＡ４Ａ４Ａ抗体が、細胞（例えば、マクロファージ、骨髄細胞）の生存能力、及び、機能の増大、維持、または、増強に有効であることを示している。加えて、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２が、培養したヒトマクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを低減したことを報告した従前の報告とは対照的に、マクロファージでのｓＴＲＥＭ２、及び、ｍＴＲＥＭ２レベルを増大させた（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１８，ｂｉｏＲｘｉｖ，ｄｏｉ：ｄｘｄｏｉｏｒｇ／１０．１１０１／３５２１７９）。アルツハイマー病に関するＭＳ４Ａ４Ａ保護対立遺伝子の増加は、ｓＴＲＥＭ２レベルの増大と関連しているので、本明細書で提供した結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ｓＴＲＥＭ２、及び、ｍＴＲＥＭ２レベルの増大を受けて、アルツハイマー病などの神経変性の疾患、及び、障害での保護的表現型を、模倣または複製することを示すものである。

【0158】

本明細書に記載したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞において、ｓＴＲＥＭ２レベルを増大させる、ｍＴＲＥＭ２レベルを増大させる、または、ｓＴＲＥＭ２及びｍＴＲＥＭ２の両方のレベルを増大させる。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、可溶性ＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、少なくとも１００％増大させる。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、同じアイソタイプのコントロール抗体と比較して、原形質膜または細胞表面のＴＲＥＭ２レベルを、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１０５％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、または、少なくとも１５０％増大させる。骨髄細胞におけるＴＲＥＭ２レベルは、当業者に公知のあらゆるアッセイで測定することができる。例えば、本開示の実施例４１は、精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した場合のヒト初代マクロファージでの、可溶性及び原形質膜または細胞表面ＴＲＥＭ２の調節を測定するためのアッセイを記載している。エンドトキシン不含、または、低レベルのエンドトキシンを含む精製抗体を生成する例示的な方法を、本明細書の実施例４１に記載している。これらのマクロファージを、精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とインキュベートした後に、上清を回収し、そして、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）アッセイを使用してｓＴＲＥＭ２レベルを測定する。あるいは、マクロファージを、インキュベーションした後に回収し、そして、フローサイトメトリーに供して、アロフィコシアニン、または、類似のフルオロフォアにコンジュゲートした抗ＴＲＥＭ２抗体を使用してｍＴＲＥＭ２レベルを決定する。

【0159】

アゴニスト抗体
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、一般的に、細胞において発現した１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する。本開示のあるクラスの抗体は、アゴニスト抗体である。例えば、当該ＭＳ４Ａ４Ａ受容体は、シグナルを伝達するために、細胞表面でのクラスター形成を必要とし得る。したがって、アゴニスト抗体は、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体を刺激する独特の特徴を有し得る。例えば、それらは、受容体活性化と互換性のある適切なエピトープ特異性、ならびに、細胞表面での受容体クラスター形成を誘導または保持する能力を有し得る。

【0160】

インビボでは、抗体は、複数の潜在的なメカニズムによって受容体のクラスターを形成し得る。ＩｇＧ２のようなヒト抗体の一部のアイソタイプは、その独特の構造が故に、受容体のクラスターを形成する、または、受容体をクラスター構成で保持する固有の能力を持ち合わせており、それにより、Ｆｃ受容体に結合せずに、ＭＳ４Ａ４Ａなどの受容体を活性化する（例えば、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７、１３８－１４８）。

【0161】

その他の抗体は、隣接する細胞のＦｃｇ受容体に結合することで、受容体（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ）のクラスターを形成する。抗体の定常ＩｇＧ Ｆｃ部分がＦｃｇ受容体に結合すると、抗体が凝集し、そして、抗体は、次に、可変領域を介して結合する受容体を凝集させる（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３；及び、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ，（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９，１０１－１１３）。サイトカインの分泌、酸化的バースト、食作用の増大、及び、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の増進を惹起しない阻害性Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩＢ）に対する結合は、ＦｃｇＲＩＩＢに対する結合が、免疫の副作用と関連していないので、インビボで抗体のクラスターを形成するための好ましい方法であることが多い。

【0162】

その他のメカニズムを使用して、受容体（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ）をクラスター形成し得る。例えば、一緒に架橋する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）は、上記のように、Ｆｃｇ受容体に結合するＦｃ領域を有する抗体と同様の方法で受容体（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ）のクラスターを形成するために使用し得る。理論に拘束されることを望むものではないが、架橋した抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）が、細胞表面に受容体クラスターを誘導し、そして、標的（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ）の適切なエピトープに結合する場合、アゴニスト抗体として機能し得ると考えられる。

【0163】

したがって、一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する抗体は、それらのエピトープ特異性が故に、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合し、そして、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を活性化するアゴニスト抗体を含み得る。理論に拘束されることを望むものではないが、そのような抗体は、標的抗原（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ）のリガンド結合部位に結合し、そして、天然リガンドの作用を模倣するか、または、リガンド結合部位ではない１つ以上のドメインに結合することで、標的抗原を刺激してシグナルを伝達する。そのような抗体は、リガンド結合を妨げず、そして、天然のリガンドと相加的または相乗的に作用し得る。

【0164】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を誘導するまたは増大させるアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、細胞において発現するＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の１つ以上の活性を誘導する、または、増大させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を低減、または、阻害するアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、細胞において発現するＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の１つ以上の活性を低減、または、阻害する。

【0165】

不活性抗体
本開示の別のクラスの抗体として、不活性抗体がある。本明細書で使用する「不活性」抗体とは、それらの標的抗原に特異的に結合するが、抗原機能を調節しない（例えば、低下させない／阻害しない、または、活性化しない／誘導し）抗体のことを指す。例えば、ＭＳ４Ａ４Ａの事例では、不活性抗体は、リガンド結合、及び／または、ＭＳ４Ａ４Ａ活性を調節しない。理論に拘束されることを望むものではないが、細胞表面でＭＳ４Ａ４Ａのクラスターを形成する能力を持たない抗体は、受容体活性化と互換性のあるエピトープ特異性を持ち合わせていても、不活性抗体であり得ると考えられる。

【0166】

一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに結合する抗体を含み得るが、それらのエピトープ特異性が故に、タンパク質機能を調節しない。このような機能的に不活性な抗体は、カリケアマイシンのクラスに由来する細胞毒性剤にコンジュゲートされ、かつ、急性骨髄性白血病腫瘍を標的として死滅させるために使用するＣＤ３３抗体ゲムツズマブゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇとして市販）について説明されているように、毒素を輸送する際のカーゴとして使用することができる（Ｎａｉｔｏ ｅｔ ａｌ，（２０００），Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１４，１４３６－１４４３；Ｒｉｃａｒｔ（２０１１）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １７；６４１７－６４３６；Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，（２００２）Ｊｏｕｒｎａｌ：Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３、４７－５８；及び、Ｂｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ，（２００１）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７；１４９０－６）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに結合するが、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性（例えば、本明細書に記載したＭＳ４Ａ４Ａ活性）を誘導することができない、不活性抗体である。

【0167】

アンタゴニスト抗体
本開示の第３のクラスの抗体は、アンタゴニスト抗体を含む。一部の実施形態では、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に結合する抗体として、ＭＳ４Ａ４Ａとそのリガンドとの間の相互作用を妨げる、あるいは、リガンドの存在下で、ＭＳ４Ａ４Ａのシグナルを細胞質へ伝達することを妨げることで、ＭＳ４Ａ４Ａに結合して、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を阻害するアンタゴニスト抗体があり得る。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗体は、本開示のアゴニスト抗体のエピトープ特異性を有し得るが、Ｆｃｇ受容体に結合することができず、したがって、例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ受容体のクラスターを形成することができないＦｃドメインを有する。

【0168】

一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ依存性遺伝子の活性を減少させする。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドとの間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａシグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、当該アンタゴニスト抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａと、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａリガンドとの間の相互作用を阻害し、そして、ＭＳ４Ａ４Ａシグナル伝達を阻害する。

【0169】

一部の実施形態では、アゴニスト抗体機能のために、抗体架橋が必要である。抗体架橋は、インビトロでの二次抗体への結合を介して、または、インビボでのＦｃ受容体への結合を介して作り出すことができる。例えば、アンタゴニスト抗体は、インビトロでのビオチン／ストレプトアビジン架橋、または、二次抗体結合を介して、アゴニスト抗体へと変換することができる（例えば、Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１９９６、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：６７５－６８５；Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１９９４、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，７：５５１－５５７を参照されたい）。アゴニスト抗体は、受容体リガンドの生物学的活性を模倣する、または、受容体凝集を増強することで、それらの活性を発揮し、それにより、受容体シグナル伝達を活性化し得る。一部の実施形態では、抗体架橋の不存在が、アンタゴニスト活性のために必要である。アンタゴニスト抗体は、受容体－リガンド相互作用をブロックすることで、それらの活性を発揮し得る。

【0170】

カルシウム流入
ＭＳ４Ａ１をトランスフェクトした細胞株は、原形質膜全体のカルシウム伝導度の増大を示しており、このことは、ＭＳ４Ａ１が、カルシウムの恒常性を調節するための重要なチャネルとして機能していることを示唆している。（Ｐａｒｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ＣｅｌｌＢｉｏｌ，４４：２０９５－２１０５；Ｌｉ ｅｔ ａｌ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２７８：４２４２７－４２４３４）したがって、ＭＳ４Ａタンパク質は、カルシウム流入の調節（例えば、増量）、及び／または、細胞内貯蔵由来のカルシウムの動員によって、細胞内遊離カルシウム濃度の制御に関与している（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ，２６４：８７－９３）。ＭＳ４Ａファミリー内でタンパク質構造が保存されているので、その他のＭＳ４Ａタンパク質（例えば、ＭＳ４Ａ４Ａ、及び、ＭＳ４Ａ６Ａ）は、重複したカルシウム調節機能を共有し得る（Ｍａ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，５１：１２４０－１２４８）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、細胞内のカルシウムレベル、カルシウム流入、及び／または、細胞内貯蔵由来のカルシウムの動員を調節する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４４Ａ抗体は、細胞においてカルシウム流入を増大させ、かつ／または、細胞において、細胞内貯蔵由来のカルシウムの動員を増大させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、細胞においてカルシウム流入を低減し、かつ／または、細胞において、細胞内貯蔵由来のカルシウムの動員を低減する。

【0171】

加えて、ＭＳ４Ａタンパク質ファミリーのメンバーは、ネックレス嗅覚ニューロンで発現する化学受容体である。結果は、ＭＳ４Ａ受容体が、吸入した匂い物質に結合し、そして、ネックレス嗅覚ニューロンにカルシウム流入を誘導するモデルを支持しており、様々な細胞中でのカルシウム流入の調節におけるＭＳ４Ａファミリーメンバーの役割を支持している（Ｇｒｅｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｃｅｌｌ，１６５：１７３４－１７４８）。

【0172】

Ａ．例示的な抗体及び特定のその他の抗体の実施形態
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0173】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0174】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0175】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0176】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0177】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_L ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0178】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_L ＨＶＲ配列を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0179】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0180】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；及び、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0181】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。

【0182】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0183】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_L ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0184】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_L ＨＶＲ配列を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0185】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0186】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0187】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または、少なくとも６つのＨＶＲを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0188】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0189】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_L ＨＶＲ配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0190】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｈ ＨＶＲ配列を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶ_Ｌ ＨＶＲ配列を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0191】

一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。

【0192】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び１２０において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び１２０において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び１２０のＶ_Ｈ配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0193】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、及び、１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_L）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、及び、１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_L配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、及び、１３９において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、及び、１３９において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、及び、１３９のＶ_L配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Lは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６，５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0194】

一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。ある実施形態では、当該抗体は、その配列の翻訳後修飾と共に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0195】

一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌからなる群から選択される。

【0196】

一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、当該重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含む。

【0197】

一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、当該重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７のアミノ酸配列を含む。

【0198】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、及び、２３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、及び、２３９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、または、２３９において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、または、２３９において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、または、２３９のＶ_Ｈ配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0199】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、及び、２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_L）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、及び、２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_L配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、または、２５４において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、または、２５４において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、または、２５４のＶ_L配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Lは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0200】

一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。ある実施形態では、当該抗体は、その配列の翻訳後修飾と共に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0201】

一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌからなる群から選択される。

【0202】

一部の実施形態では、本開示は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、当該重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６のアミノ酸配列を含み、かつ、当該軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含む。

【0203】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、及び、３４５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、及び、３４５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、及び、３４５において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、及び、３４５において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、及び、３４５のＶ_Ｈ配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0204】

別の態様では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、及び、３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または、少なくとも１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_L）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、及び、３５１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または、少なくとも９９％の同一性を有するＶ_L配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、または、３５１において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、または、３５１において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、または、３５１のＶ_L配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、Ｖ_Lは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。

【0205】

一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｈ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶ_Ｌを含む。ある実施形態では、当該抗体は、その配列の翻訳後修飾と共に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0206】

一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び、軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供しており、当該Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌからなる群から選択される。

【0207】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０から選択される少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。

【0208】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体のＭＳ４Ａ４Ａに対する結合を、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の非存在下でのＭＳ４Ａ４Ａに対する結合と比較して、約５０％～１００％の範囲の量で低減する場合に、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体と競合する。

【0209】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体のＭＳ４Ａ４Ａに対する結合を、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の非存在下でのＭＳ４Ａ４Ａに対する結合と比較して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、１００％低減する場合に、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体と競合する。一部の実施形態では、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体のＭＳ４Ａ４Ａに対する結合を１００％低減する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体のＭＳ４Ａ４Ａに対する結合を本質的に完全にブロックすることを示す。一部の実施形態では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上の抗体とは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体との、１０：１比率、９：１比率、８：１比率、７：１比率、６：１比率、５：１比率、４：１比率、３：１比率、２：１比率、１：１比率、０．７５：１比率、０．５：１比率、０．２５：１比率、０．１：１比率、０．０７５：１比率、０．０５０：１比率、０．０２５：１比率、０．０１：１比率、０．００７５：比率、０．００５０：１比率、０．００２５：１比率、０．００１：比率、０．０００７５：１比率、０．０００５０：１比率、０．０００２５：１比率、０．０００１：比率、１：１０比率、１：９比率、１：８比率、１：７比率、１：６比率、１：５比率、１：４比率、１：３比率、１：２比率、１：０．７５比率、１：０．５比率、１：０．２５比率、１：０．１比率、１：０．０７５比率、１：０．０５０比率、１：０．０２５比率、１：０．０１比率、１：０．００７５比率、１：０．００５０比率、１：０．００２５比率、１：０．００１比率、１：０．０００７５比率、１：０．０００５０比率、１：０．０００２５比率、または、１：０．０００１比率に対応する量で存在する。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上の抗体の量と比較して、約１．５倍～１００倍、または、１００倍超の範囲の量で過剰に存在している。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体の量と比較して、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、または、１００倍超の範囲の量で存在する。

【0210】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０から選択される少なくとも１つのリファレンス抗体が結合するＭＳ４Ａ４Ａエピトープと同じ、または、重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する。

【0211】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０から選択される少なくとも１つのリファレンス抗体が結合するＭＳ４Ａ４Ａエピトープと本質的に同じＭＳ４Ａ４Ａエピトープに対して結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための例示的な方法の詳細は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に示されている。

【0212】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－１、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２３、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－５、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－２２、及び、４Ａ－２４、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体と競合する。

【0213】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－１、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２３、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－５、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－２２、及び、４Ａ－２４、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。

【0214】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－１、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２３、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体と同じ、または、重複するＭＳ４Ａ４Ａのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－５、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－２２、及び、４Ａ－２４、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される少なくとも１つのリファレンス抗体と同じ、または、重複するＭＳ４Ａ４Ａのエピトープを有する。

【0215】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基１～６４の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基６５～８５の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基８６～９８の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基９９～１１９の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１２０～１３７の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１３８～１５８の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１８０～２００の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基２０１～２３９の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン１（ＥＣＬ１）に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８９）内の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ドメイン２（ＥＣＬ２）に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９０）内の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。

【0216】

一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７の中の１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＬＡＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９６）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＬＡＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９６）内の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９７）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＦＹＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９７）内の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９８）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９８）内の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９９）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９９）内の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３００）を含むヒトＭＳ４Ａ４Ａでの領域またはエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アミノ酸配列ＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３００）内の１つ以上のアミノ酸残基に対して結合する。

【0217】

ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、または、フローサイトメトリーなどの当該技術分野で公知のあらゆる適切な競合アッセイ、または、ＭＳ４Ａ４Ａ結合アッセイを用いて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、４Ａ－２、４Ａ－３、４Ａ－４、４Ａ－５、４Ａ－６、４Ａ－７、４Ａ－８、４Ａ－９、４Ａ－１０、４Ａ－１１、４Ａ－１２、４Ａ－１３、４Ａ－１４、４Ａ－１５、４Ａ－１６、４Ａ－１７、４Ａ－１８、４Ａ－１９、４Ａ－２０、４Ａ－２１、４Ａ－２３、４Ａ－２４、４Ａ－２０１、４Ａ－２０２、４Ａ－２０３、４Ａ－２０４、４Ａ－２０５、４Ａ－２０６、４Ａ－２０７、４Ａ－２０８、４Ａ－２０９、４Ａ－２１０、４Ａ－２１３、４Ａ－２１４、４Ａ－２１６、４Ａ－２１７、４Ａ－２１９、４Ａ－２５、４Ａ－２６、４Ａ－２３９、４Ａ－２２５、及び、４Ａ－２２０、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のリファレンス抗体と競合する（または、結合を競合的に阻害する）か否かを決定し得る。例示的な競合アッセイでは、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、または、細胞表面にＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、ＭＳ４Ａ４Ａ（例えば、ヒト、または、非ヒト霊長類）に対して結合する第１の標識抗体、及び、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する当該第１の抗体と競合する能力に関する試験に供する第２の非標識抗体を含む溶液でインキュベートする。当該第２の抗体は、ハイブリドーマ上清に存在し得る。コントロールとして、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、または、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液でインキュベートする。ＭＳ４Ａ４Ａに対する第１の抗体の結合を許容可能な条件下でインキュベートした後に、未結合の過剰な抗体を除去し、そして、固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、または、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に関連する標識の量を測定する。固定化したＭＳ４Ａ４Ａ、または、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に関連する標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料で大幅に減少しておれば、ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合について、第２の抗体が、第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。

【0218】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または、同抗体に対する結合と競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0219】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び、１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、及び、３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び、５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、及び、７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、及び、８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、及び、１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合したエピトープと同じ、または、重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１～１２０、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１～１３９である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合するエピトープと同じである。

【0220】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または、同抗体に対する結合と競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0221】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、及び、１５３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、及び、１６７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、及び、１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、及び、１９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、及び、２０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合したエピトープと同じ、または、重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５～２３９、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０～２５４である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、当該ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合したエピトープと同じである。

【0222】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または、同抗体に対する結合と競合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をさらに提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。

【0223】

本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、及び、３０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、及び、３１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、及び、３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶ_Ｈドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、及び、３２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、及び、３３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、及び、３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶ_Lドメインを含む抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合したエピトープと同じ、または、重複するヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０～３４５、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６～３５１である、Ｖ_Ｈ、及び、Ｖ_Ｌ配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、当該ヒトＭＳ４Ａ４Ａのエピトープは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が結合したエピトープと同じである。

【0224】

一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒト化及び／またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、または、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、実質的な全長抗体、例えば、本明細書で定義するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または、その他の抗体クラス、または、アイソタイプである。

【0225】

一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、以下の第１～７節に記載したように、あらゆる特徴を、単独で、または、組み合わせて取り込み得る。

【0226】

（１）抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合親和性
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定カロリメトリー（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップト－フロー分析、及び、比色分析、または、蛍光タンパク質融解分析などのあらゆる生化学的または生物物理学的技法など、あらゆる解析技法で決定することができる。ある実施形態では、Ｋｄを、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定する。一部の実施形態では、ＲＩＡを、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９））に記載された、目的の抗体のＦａｂバージョン、または、その抗原を用いて実施する。一部の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００、または、ＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを使って、約１０反応単位（ＲＵ）の固定化した抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で、Ｋｄの測定を行う。一部の実施形態では、当該Ｋ_Ｄを、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）、または、完全長抗体を使用して決定する。一部の実施形態では、当該Ｋ_Ｄを、一価形態の全長抗体を使用して決定する。

【0227】

（２）抗体フラグメント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、１つ以上の当該抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントとして、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及び、ｓｃＦｖフラグメント、及び、後述するその他のフラグメントがあるが、これらに限定されない。特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖフラグメントの概説については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；及び、米国特許第５５７１８９４号、及び、同第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ、インビボでの半減期が延びたＦａｂ、及び、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントの考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。

【0228】

ダイアボディは、２価、または、二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ、及び、テトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部または一部、または、軽鎖可変ドメインの全部または一部を含む抗体フラグメントである。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。

【0229】

抗体フラグメントは、本明細書に記載した通り、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに、組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、または、ファージ）による産生などであるが、これらに限定されない様々な技術で作製することができる。

【0230】

（３）キメラ及びヒト化抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。ある例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または、サルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）、及び、ヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを親抗体のものから変化させた「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。

【0231】

本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性と親和性とを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、標的に対して、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、同第５６９３７６１号；同第５６９３７６２号；及び、同第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施形態では、免疫原性を低下させながら、抗原結合ドメインの本来の親和性を低減せずに改変することができる抗体可変ドメインのアミノ酸を同定する。例えば、米国特許第５７６６８８６号、及び、同第５８６９６１９号を参照されたい。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（またはその一部）が、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体での一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換する。

【0232】

ヒト化抗体、及び、それらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説されており、また、例えば、米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、及び、同第７０８７４０９号に記載されている。ヒト化に使用し得るヒトフレームワーク領域として、「ベストフィット」法を使用して選択したフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）；及び、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒトの成熟した（体細胞変異）フレームワーク領域、または、ヒトの生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、及び、ＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）、及び、Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。

【0233】

（４）ヒト抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）、及び、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）で説明されている。

【0234】

ヒト抗体は、抗原接種に応答して、ヒト可変領域を有する、インタクトなヒト抗体、または、インタクトな抗体を産生するように改変したトランスジェニック動物に対して免疫原を投与して調製することができる。そのようなマウスが、マウス抗体の非存在下でヒト抗体を産生するものとして予想して、ヒトＩｇ遺伝子座の大きなフラグメントを有するマウス抗体産生を欠損しているマウス系統を遺伝子操作することができる。大きなヒトＩｇフラグメントは、大きな可変遺伝子の多様性、ならびに、抗体の産生と発現の適切な調節を続けることができる。抗体の多様化と選択、及び、ヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如のためのマウス機構を用いることで、これらのマウス系統において再現したヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原などの目的の抗原に対する高親和性完全ヒト抗体を生み出すことができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭＡｂ抗体を、産生及び選択することができる。特定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及び、ＥＰ５４６０７３で説明されている。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６０７５１８１号、及び、同第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許番号７０４１８７０号、及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号を参照されたい。そのような動物が生成したインタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせて、さらに改変し得る。

【0235】

また、ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づいた方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫、及び、マウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）、及び、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１））。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成したヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１ ０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法として、例えば、（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を説明している）米国特許第７１８９８２６号に記載されている方法がある。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７（２００５）、及び、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。また、ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択したＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで生成し得る。次に、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を、以下に説明する。

【0236】

本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、インビトロ法、及び／または、所望の１つ以上の活性を有する抗体に関するコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングして単離したヒト抗体である。適切な例として、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（かつてのＰｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などがあるが、これらに限定されない。特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ、及び、ＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で別々にクローニングし、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているファージライブラリーでランダムに再結合する。例えば、当該技術分野では、ファージディスプレイライブラリーを生成し、そして、所望の結合特性を保有する抗体に関する当該ライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が公知である。Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０、２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及び、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（－２）：１１９－１３２（２００４）も参照されたい。一般的に、ファージは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、または、Ｆａｂフラグメントのいずれかで抗体フラグメントを表す。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要がなく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、未処理のレパートリーを、（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているようにして、免疫化処置をせずに、広範囲の非自己抗原、それに、自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配置していないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、そして、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して可変性に富んだＨＶＲ３領域をコードし、そして、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８、１９９２に記載されているようにして、インビトロでの再配置を達成した。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献として、例えば：米国特許第５７５０３７３号、ならびに、米国特許公開第２００７／０２９２９３６号、及び、同第２００９／０００２３６０号がある。ヒト抗体ライブラリーから単離した抗体は、本明細書では、ヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なす。

【0237】

（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、Ｆｃを含む。一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／または、ＩｇＧ４アイソタイプである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。

【0238】

本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａ活性を誘導し、または、Ｆｃ受容体に対する結合とは無関係に誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0239】

本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0240】

本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0241】

本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２６０、及び、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７を含む、アミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。

【0242】

一部の実施形態では、当該Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、クラスター形成を増大させる。一部の実施形態では、当該抗体は、当該抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する。

【0243】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を改変して、エフェクター機能を改変すること、及び／または、抗体の血清半減期を長くすることも望ましい場合もある。例えば、当該定常領域のＦｃ受容体結合部位を改変または変異させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／または、ＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去または低減して、抗体依存性細胞性細胞毒性を低減し得る。一部の実施形態では、当該抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインにおける）Ｆｃ領域のＮ－グリコシル化を除去すると、当該エフェクター機能は低下する。一部の実施形態では、ＷＯ９９／５８５７２、及び、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６４：１９２５－１９３３（２０００）に記載されているようなヒトＩｇＧの２３３～２３６、２９７、及び／または、３２７～３３１などの領域を改変すると、当該エフェクター機能は低下する。その他の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を改変して、抗体依存性細胞媒介細胞毒性及び抗体依存性細胞食作用などの体液性応答を活性化せずに隣接細胞上でのＭＳ４Ａ４Ａ抗体のクラスター形成を増大させるためにＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を増大させるためのエフェクター機能を改変することも望ましい。

【0244】

当該抗体の血清半減期を長くするために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されているようにして、サルベージ受容体結合エピトープを、当該抗体（特に、抗体フラグメント）に組み込み得る。本明細書で使用する用語「サルベージ受容体結合エピトープ」とは、インビボでのＩｇＧ分子の血清半減期の延長に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、または、ＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープのことを指す。その他のアミノ酸配列の改変。

【0245】

（６）多重特異性抗体
多重特異性抗体とは、同じ、または、別のポリペプチド（例えば、本開示の１つ以上のＭＳ４Ａ４Ａポリペプチド）のエピトープなど、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体のことである。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、二重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、三重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、四重特異性抗体とすることができる。そのような抗体を、完全長抗体、または、抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）に由来する抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａでの第１の部位に対して結合する第１の抗原結合領域を含み、かつ、ＭＳ４Ａ４Ａでの第２の部位に対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する第１の抗原結合領域、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。

【0246】

本明細書では、第１の抗原結合領域を含む多重特異性抗体を提供しており、当該第１の抗原結合領域は、ＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する本明細書に記載の抗体の６つのＨＶＲ、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該第１の抗原結合領域は、本明細書に記載している抗体のＶ_ＨまたはＶ_Ｌを含む。

【0247】

当該多重特異性抗体のいずれかの一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ａ）血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、及び、ＡＮＧ１００５から選択される血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質もしくはそのフラグメント、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される疾患原因タンパク質；（ｄ）免疫細胞上で発現するリガンド及び／もしくはタンパク質であって、当該リガンド及び／もしくはタンパク質が、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンから選択される、当該リガンド及び／もしくはタンパク質；ならびに／または、（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上で発現するタンパク質、脂質、多糖、もしくは糖脂質、及びそれらのあらゆる組み合わせである。

【0248】

血液脳関門を通る輸送を促す多数の抗原は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ Ｒ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７：４８－５７（２０１０））。そのような第２の抗原として、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性変異体）などのジフテリア毒素、ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、または、ペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン、ポリアルギニン、または、一般的に正電荷を有するペプチド、ＡＮＧ１００５などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）、及び、血液脳関門内皮細胞上で濃縮を受けるその他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（１０）：ｅ１３７４１（２０１０）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。

【0249】

当該多価抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ抗原、ならびに、さらなる抗原Ａβペプチド、抗原またはα－シヌクレインタンパク質抗原、または、タウタンパク質抗原、または、ＴＤＰ－４３タンパク質抗原、または、プリオンタンパク質抗原、または、ハンチンチンタンパク質抗原、または、ＲＡＮ、グリシン－アラニン（ＧＡ）、グリシン－プロリン（ＧＰ）、グリシン－アルギニン（ＧＲ）、プロリン－アラニン（ＰＡ）、または、プロリン－アルギニン（ＰＲ）、からなるジペプチド反復、（ＤＰＲペプチド）を含む翻訳産物抗原、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体などを認識し得るが、これらに限定されない。トランスフェリン受容体、または、抗体の移動を促すその他の抗原は、血液脳関門を通る。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、トランスフェリンである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、タウである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、Ａβである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２である。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、α－シヌクレインである。

【0250】

当該多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び、好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含み、１つ以上の当該ポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＤ１－（Ｘ１）_ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）_ｎ－Ｆｃを含み得るものであり、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、そして、ｎは、０または１である。同様に、１つ以上のポリペプチド鎖は、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１可撓性リンカー－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｆｃ領域鎖；または、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｆｃ領域鎖を含む。本明細書の多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（及び、好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２～約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書で企図する軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、また、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。

【0251】

多重特異性抗体を作製するための技術として、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアの組換え共発現があるが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及び、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１））、及び、「ノブ－イン－ホール」遺伝子操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）を参照されたい）。また、ＷＯ２０１３／０２６８３３（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。また、多特異性抗体は、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製する静電ステアリング効果を操作して（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体を架橋して（例えば、米国特許第４６７６９８０号を参照されたい）；ロイシンを使用して；二重特異性抗体フラグメントを作製する「ダイアボディ」技術を使用して（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；そして、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用して（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているようにして三重特異性抗体を調製して、作製し得る。

【0252】

本明細書は、「オクトパス抗体」などの３つ以上の機能的な抗原結合部位を有する遺伝子操作した抗体も含む（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６を参照されたい）。また、本明細書の抗体は、複数のＭＳ４Ａ４Ａに対して結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。

【0253】

（７）抗体バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体のアミノ酸配列バリアントを企図している。例えば、抗体の結合親和性、及び／または、その他の生物学的特性を改善することが望ましい。

【0254】

（ｉ）置換、挿入、及び、欠失バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントを提供する。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入すること、または、ペプチド合成により調製し得る。そのような改変として、例えば、当該抗体のアミノ酸配列での残基の欠失、及び／または、挿入、及び／または、残基の置換がある。

【0255】

（表Ａ）アミノ酸置換

【0256】

当該抗体の生物特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シートまたはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または、（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することで達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて、
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
に分けられる。

【0257】

例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスのものと交換することに関係する。そのような置換した残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、または、当該分子の非相同領域に導入することができる。

【0258】

本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変化させる場合、特定の実施形態では、アミノ酸の疎水性指標を考慮することができる。それぞれのアミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいて、疎水性指標を割り当てている。それらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸塩（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸塩（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；及び、アルギニン（－４．５）である。

【0259】

タンパク質に対して相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２）。特定のアミノ酸では、類似の疎水性指標、または、スコアを有するその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、かつ、なおも類似の生物活性を保持することができる、ことは公知である。疎水性指標に基づいて変化させる場合、特定の実施形態では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換を含む。特定の実施形態では、±１以内の事例を含み、そして、特定の実施形態では、±０．５以内の事例を含む。

【0260】

また、類似のアミノ酸の置換を、親水性に基づいて効果的に行うことができ、特に、そうして生成した生物学的機能性タンパク質またはペプチドは、本事例のように免疫学的実施形態での使用を意図している、ことも理解されたい。特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性が支配するタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性、及び、抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。

【0261】

これらのアミノ酸残基には、アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸塩（＋３．０±１）；グルタミン酸塩（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）、及び、トリプトファン（－３．４）の親水性値を割り当てている。類似の親水性値に基づいて変化させる場合、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±１以内のアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±０．５以内のアミノ酸の置換を含む。親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを同定することもできる。これらの領域を、「エピトープコア領域」とも称する。

【0262】

特定の実施形態において、置換、挿入、または、欠失は、そのような変更が、抗体が抗原に対して結合する能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲで起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲで行い得る。そのような変更は、例えば、ＨＶＲの抗原接触残基の外側で行い得る。前出のバリアントＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態では、それぞれのＨＶＲは変更されておらず、または、１つ以下、２つ以下、または、３つ以下のアミノ酸置換を含む。

【0263】

アミノ酸配列挿入として、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／またはカルボキシル末端での融合、ならびに、１つ以上のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体がある。抗体分子のその他の挿入バリアントとして、（例えば、ＡＤＥＰＴのための）酵素に対する抗体のＮ－またはＣ－末端、または、当該抗体の血清半減期を長くするポリペプチドへの融合がある。

【0264】

抗体の適切な立体構造の維持に関与しないいずれのシステイン残基も、一般的に、セリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、そして、異常な架橋を阻止することができる。逆に、システイン結合を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（特に、当該抗体が、Ｆｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）。

【0265】

（ｉｉ）グリコシル化バリアント
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体を変更して、当該抗体がグリコシル化する程度を増大または減少させる。抗体に対するグリコシル化部位の追加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を、生成または除去するように当該アミノ酸配列を変更することで好都合に達成し得る。

【0266】

抗体のグリコシル化は、一般的に、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ－結合とは、アスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の付着のことを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン、及び、アスパラギン－Ｘ－スレオニンがあり、式中、Ｘは、プロリン以外のあらゆるアミノ酸であり、これらの配列は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、または、キシロースの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリン、または、スレオニンに対して付着することを指すが、５－ヒドロキシプロリン、または、５－ヒドロキシリジンも使用し得る。

【0267】

抗体に対するグリコシル化部位の付加は、（Ｎ－結合グリコシル化部位に関する）上記のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含むようにアミノ酸配列を変更することで、好都合に達成する。また、当該変更は、（Ｏ－結合型グリコシル化部位に関しては）当初の抗体の配列に対して、１つ以上のセリン、または、スレオニン残基を追加または置換しても達成し得る。

【0268】

当該抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、そこに付着した炭水化物を変更し得る。哺乳動物細胞が生成するネイティブ抗体は、一般的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ付番法でのＡｓｎ２９７に対するＮ結合で一般的に付着している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。このオリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及び、シアル酸、ならびに、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含み得る。一部の実施形態では、本発明の抗体でのオリゴ糖の修飾を、特定の改善した特性を有する抗体バリアントを作り出すために行い得る。

【0269】

ある実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的に、または、間接的に）付着したフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体バリアントを提供する。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、及び、同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フチコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例として、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）がある。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｄ ３ ＣＨＯ細胞がある（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及び、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、及び、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８（２００６）を参照されたい）がある。

【0270】

（ｉｉｉ）改変した定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃとは、抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、改変である。一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、改変は、Ｆｃガンマ受容体に対して結合することができる。

【0271】

本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該改変した抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１改変Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換は、そのアミノ酸位置をＥＵ付番法で定めている、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１－６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４；Ａｌｅｇｒｅｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ２００８，１０５：２０１６７－２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。

【0272】

あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ番号法でのＤ２６５Ａ、及び、Ｎ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＤ２７０Ａ変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異の（すべてを含む）１つ以上を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での１つ以上のＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。一部では ＩｇＧ１改変Ｆｃのいずれかの実施形態、Ｆｃは、ＥＵ付番法によるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重鎖１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を、ＣＨ１で置換すること、及び、ＩｇＧ２のヒンジ領域（ＥＵ付番法によるＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）を、カッパ軽鎖で置換することを含む。

【0273】

あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、抗体クラスター形成を増大させる２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、当該抗体は、位置Ｅ４３０Ｇでのアミノ酸置換、及び、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置でのＦｃ領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ａ３３０Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。

【0274】

あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、本明細書では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃをさらに含み、かつ、補体の活性化を回避するために、ＥＵ付番規定でのＡ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０（２００６））、または、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓ変異のうちの１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））と組み合わせ得る。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓのうちの１つ以上をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ付番でのＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／または、Ｓ４４０Ｗのうちの１つ以上をさらに含み得る。

【0275】

本開示のその他の態様は、改変した定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。ＦｃｇＲ受容体に対する結合に依存して標的化受容体を活性化させる抗体を、ＦｃｇＲ結合を排除するように遺伝子操作すると、そのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９：１０１－１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒ ａｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；及び、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）を参照されたい）。したがって、当該抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１、及び、ヒンジ領域）由来のＦｃドメイン、または、阻害性ＦｃｇＲＩＩＢｒ受容体、または、その変異体を優先的に結合することができる別のタイプのＦｃドメインを有しておれば、適正なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、最小限の副作用で、標的抗原を活性化できると考えられる。

【0276】

本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２改変Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２改変Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換は、ＥＵ付番規定でのＶ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３－５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／または、Ｃ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３（２００８））；及び、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｖ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ２１９Ｓ、または、Ｃ２２０Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。

【0277】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７、１３８－１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。

【0278】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0279】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆるＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0280】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）と、ヒンジ領域とを含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５））。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの特定の実施形態では、当該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１、及び、ヒンジ領域は、ＥＵ付番法での１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。あらゆるＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、または、その両方、及び／または、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。

【0281】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び、Ｓ４４０Ｗに１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。あらゆるＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓをさらに含み得る。

【0282】

あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２アミノ酸１１８～２６０、及び、ＩｇＧ４アミノ酸２６１～４４７を含む。あらゆるＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓに１つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0283】

あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、または、Ｐ３３１Ｓ；及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。

【0284】

あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１、及び／または、あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１、及び／または、あらゆる当該ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ａ３３０Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。

【0285】

本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４改変Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４改変Ｆｃは、１つ以上の改変を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４改変Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換は、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５－１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及び、Ｅ３１８Ａをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ、及び、Ｌ２３５Ｅをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆをさらに含み得る。

【0286】

あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－１０８（１９９３））、及び／または、（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７（２９）：２４５２５－３３（２０１２））に記載されている１つ以上の変異と組み合わせて、抗体安定性を向上させ得る。

【0287】

あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。

【0288】

あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３５Ｅを含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０にアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４改変Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙにアミノ酸置換を含む。

【0289】

（８）その他の抗体改変
あらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、誘導体である。用語「誘導体」とは、アミノ酸（または、核酸）の挿入、欠失、または、置換以外の化学修飾を含む分子のことを指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または、その他の有機もしくは無機部分を有する化学結合などであるが、これらに限定されない共有結合的修飾を含む。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、化学修飾を受けていない抗原結合タンパク質よりも循環半減期を長くすることができる。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または、臓器に対する標的化能力を改善することができる。一部の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、または、ポリプロピレングリコールなどであるが、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾する。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号、及び、同第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー、または、ランダムコポリマーのいずれか）、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、及び、ポリビニルアルコール、ならびに、そのようなポリマーの混合物などであるが、これらに限定されない１つ以上のポリマーを含む。

【0290】

特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーを、誘導体の、１つ以上の特定の位置において、例えば、アミノ末端において結合する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖に対してランダムに結合する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、抗原結合タンパク質の治療能力を改善するために使用する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、ヒト化抗体の治療能力を改善するために使用する。このような特定の方法は、例えば、米国特許第６１３３４２６号で論じられており、本明細書の一部を構成するものとして、同文献を、あらゆる目的のために援用する。

【0291】

ペプチド類似体は、製薬業界では、テンプレートペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬として一般的に使用されている。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と称されている。本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する、Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及び、Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピューター化した分子モデリングを用いて、開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣体を使用して、類似の治療効果、または、予防効果を得ることができる。一般的に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性、または、薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に似ているが、当該技術分野で周知の方法によって、－ＣＨ_２ＮＨ－、－ＣＨ_２Ｓ－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス、及び、トランス）、－ＣＯＣＨ_２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－、及び、－ＣＨ_２ＳＯ－から選択される結合で任意に置換した１つ以上のペプチド結合を有する。特定の実施形態では、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸を、同じタイプのＤ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）で体系的に置換すると、より安定なペプチドを生成することができる。加えて、コンセンサス配列、または、実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む固定化したペプチドは、当該技術分野で公知の方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２）、本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する）、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を加えることで、生成することができる。

【0292】

薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞毒性（抗がん）ペイロード、または、特定の腫瘍マーカーを特異的に標的とする抗体（例えば、理想的には、腫瘍細胞内、または、腫瘍細胞上にだけ認められるポリペプチド）に対する薬物のカップリングに関与する。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、そして、がん細胞の表面に付着する。当該抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、当該腫瘍細胞においてシグナルを発生させ、次いで、当該抗体を、細胞毒素と共に、吸収し、または、内部に取り込む。ＡＤＣを内部に取り込んだ後に、細胞毒性薬を放出して、がんを死滅させる。この標的作用により、理想的には、当該薬物の副作用が小さくなり、かつ、その他の化学療法剤よりも治療ウィンドウが広くなる。抗体をコンジュゲートする技術は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｊａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ ＯｎｃＬｉｖｅ Ｊｕｌｙ ５，２０１２；ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及び、Ｄｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１（１）：５－１３（２０１０）を参照されたい。

【0293】

ＩＩ．核酸、ベクター、及び、宿主細胞
本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載の組み換え方法、及び、組成物を使用して産生され得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離した核酸を提供する。かかる核酸は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列、及び／または、Ｖ_Ｈを含むアミノ酸配列（例えば、当該抗体の軽鎖、及び／または、重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一部の実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、（１）当該抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列、及び、当該抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または、（２）当該抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び、当該抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、形質導入している）。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、リンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。また、本開示の宿主細胞として、単離した細胞、インビトロで培養した細胞、及び、エクスビボで培養した細胞があるが、これらに限定されない。

【0294】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を作製する方法を提供する。一部の実施形態では、当該方法は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、当該抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、当該抗体を、その後に、宿主細胞（または、宿主細胞培養培地）から回収する。

【0295】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を組換え産生するために、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体をコードする核酸を単離し、そして、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、当該抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離を行い、そして、配列決定し得る。

【0296】

本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、または、細胞表面で発現したそのフラグメント、または、ポリペプチド、本明細書に記載したポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターとして、クローニングベクター、及び、発現ベクターがあるが、これらに限定されない。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、または、当該技術分野において入手可能な数多くのクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製能を有しており、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有することができ、及び／または、当該ベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例として、プラスミド、及び、細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣｌ８、ｐＵＣｌ９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）、及び、その誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびに、ｐＳＡ３、及び、ｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらのクローニングベクター、及び、数多くのその他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及び、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの業者から入手可能である。

【0297】

抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞として、原核細胞または真核細胞がある。例えば、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、特に、グリコシル化、及び、Ｆｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌において産生し得る。細菌での抗体フラグメント、及び、ポリペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号、及び、同第５８４０５２３号。発現の後に、当該抗体を、可溶性画分での細菌細胞ペーストから単離し、そして、さらに精製することができる。

【0298】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、このようなものとして、グリコシル化経路を「ヒト化」して、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を産生する真菌株及び酵母株がある（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；及び、Ｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。

【0299】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物、及び、脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞、及び、昆虫細胞がある。昆虫細胞とともに、特に、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる、数多くのバキュロウイルス株が同定されている。また、植物細胞培養物も、宿主として用いることができる（例えば、トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号、及び、同第６４１７４２９号）。

【0300】

また、脊椎動物細胞も、宿主として使用し得る。例えば、懸濁液で成長するように適合させた哺乳動物細胞株が有用である。有用な宿主哺乳動物細胞株のその他の例として、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞、または、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されたＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及び、ＦＳ４細胞がある。その他の有用な宿主哺乳動物細胞株として、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびに、Ｙ０，ＮＳ０、及び、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株がある。抗体産生に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0301】

ＩＩＩ．薬学的組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と薬学的に許容可能な担体とを含む薬学的組成物及び／または薬学的製剤を提供する。

【0302】

一部の実施形態では、薬学的に許容可能な担体は、好ましくは、使用する用量、及び、濃度でレシピエントに対して無毒である。本明細書に記載の抗体は、固体、半固体、液体、または、気体の形態の調製物に製剤し得る。このような製剤の例として、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及び、エアロゾル剤があるが、これらに限定されない。薬学的に許容可能な担体は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための薬学的組成物を製剤するために一般的に使用するビヒクルである、薬学的に許容可能な非毒性の希釈剤の担体を含み得る。特定の実施形態では、薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、吸着または浸透を改変、維持、または、保存するための製剤材料を含むことができる。

【0303】

特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体として、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、または、リジンなど）；抗菌剤；酸化防止剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または、亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または、その他の有機酸など）；増量剤（マンニトール、または、グリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、または、ヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリンなど）；増量剤；単糖類；二糖類；及び、その他の炭水化物（グルコース、マンノース、または、デキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または、免疫グロブリンなど）；着色剤、矯味矯臭剤、及び、希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩を形成する対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または、過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、または、ポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール、または、ソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤、または、湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパルなど）；安定性増強剤（スクロース、または、ソルビトールなど）；等張化増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトールなど）；送達媒体；希釈剤；賦形剤、及び／または、薬学的アジュバントがあるが、これらに限定されない。様々な種類の投与に適した製剤のさらななる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ２２ｎｄ ｅｄ．（２０１３）に認められる。薬物送達法の簡潔な総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３（１９９０）を参照されたい。

【0304】

非経口投与に好適な製剤として、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張性無菌注射液剤と、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び、防腐剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁剤とがある。

【0305】

製剤を、脳または中枢神経系で保持し、そして、安定させるように最適化し得る。作用物質を頭蓋区画に投与すると、その作用物質が、その区画内に保持され、拡散せず、または、拡散しても血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技法として、分子量の増大を達成するために、架橋、多量体化、または、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への結合などがある。

【0306】

保持を確実ならしめるためのその他の方策として、生分解性または生体侵食性インプラントへの本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の封じ込めがある。治療的活性物質の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送速度、及び、インプラントの生分解速度によって制御される。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどとし得るものであり、また、選択した挿入部位に適合するあらゆるサイズまたは形状とし得る。使用し得る生分解性ポリマー組成物は、分解したときにモノマーなど、生理学的に許容可能な分解生成物を生成する有機エステルまたはエーテルとし得る。無水物、アミド、オルトエステルなどを、単独で、または、その他のモノマーと組み合わせて使用し得る。これらのポリマーを、縮合ポリマーとし得る。これらのポリマーは、架橋したもの、または、未架橋のものとし得る。特に対象となるものは、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれかであるヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、それに、多糖である。対象となるポリエステルとして、Ｄ－乳酸、Ｌ－乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及び、これらの組み合わせのポリマーがある。対象となる多糖として、アルギン酸カルシウム、及び、官能化セルロース、特に、非水溶性であり、分子量が約５ｋＤ～５００ｋＤであることを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルなどがある。生分解性ヒドロゲルも、本開示のインプラントに採用し得る。ヒドロゲルとは、一般的に、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。

【0307】

ＩＶ．治療用途
本明細書で開示したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、疾患及び障害を予防する、当該疾患及び障害のリスクを低減する、または当該疾患及び障害を治療するために使用し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害を予防する、当該アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害のリスクを低減する、または当該アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び、認知障害を治療する上で有効である。

【0308】

疾患標的としてのＭＳ４Ａ４Ａ
ゲノムワイド関連研究は、ＭＳ４Ａファミリーの様々なメンバーが、アルツハイマー病に関連していることを確認している。これらは、ＭＳ４Ａ２、ＭＳ４Ａ３、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＭＳ４Ａ４Ｅ、ＭＳ４Ａ６Ａ、及び、ＭＳ４Ａ６Ｅである。関連するＳＮＰは、ＭＳ４Ａ６Ａの３‘ＵＴＲ（ｒｓ６１０９３２）、及び、ＭＳ４Ａ４ＥとＭＳ４Ａ６Ａとの間の遺伝子間領域（ｒｓ６７０１３９）で認められる。ＭＳ４Ａ遺伝子クラスターの３つのＳＮＰは、遅発性アルツハイマー病のリスクの増大と関連している。これらには、ＭＳ４Ａ４Ａのｒｓ４９３８９３３、ＭＳ４Ａ４Ｅのｒｓ６７０１３９、及び、ＭＳ４Ａ６Ａのｒｓ６１０９３２などがある（Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４２９－４３５；Ｎａｊ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４３：４３６－４４１；Ａｎｔｕｎｅｚ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３、ａｒｔｉｃｌｅ ３３）。加えて、ＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子座のＳＮＰ（ｒｓ２３０４９３３、及び、ｒｓ２３０４９３５）は、ＭＳ４Ａ４Ａのレベルが高くなること、また、遅発性アルツハイマー病（ＬＯＡＤ）などのアルツハイマー病のリスクが高くなることと関連している（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：２２１－２２８）。

【0309】

本明細書で提供する方法は、神経変性の疾患、障害、もしくは病態の予防、当該疾患、障害、もしくは病態のリスクの低減、または当該疾患、障害、もしくは病態を有する個体の治療における用途を見出す。一部の実施形態では、本開示は、神経変性障害を予防する、当該神経変性障害のリスクを低減する、または当該神経変性障害を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0310】

一部の実施形態では、本開示は、アルツハイマー病を予防する、当該アルツハイマー病のリスクを低減する、または当該アルツハイマー病を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0311】

一部の実施形態では、本開示は、遅発性アルツハイマー病を予防する、当該遅発性アルツハイマー病のリスクを低減する、または当該遅発性アルツハイマー病を有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0312】

一部の実施形態では、本開示は、軽度認知機能障害を予防する、当該軽度認知機能障害のリスクを低減する、または当該軽度認知機能障害を有する個体を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0313】

一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの過剰発現または活性増大に関連する疾患、障害、もしくは、病態を予防する、当該疾患、障害、もしくは、病態のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、病態を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0314】

一部の実施形態では、本開示は、ＭＳ４Ａ４Ａの発現または活性の低減に関連する疾患、障害、もしくは、病態を予防する、当該疾患、障害、もしくは、病態のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、病態を有する個体を治療するための方法を提供するものであり、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。

【0315】

本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法であって、当該個体に対して、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療有効量を投与することを含む、当該方法に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷の予防、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクの低減、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体の治療における使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、転移の予防または低減のために使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、がんの予防、当該がんのリスクの低減、または当該がんを有する個体の治療に使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。

【0316】

本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療するための医薬の製造における、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の使用に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療する方法に関に関するものであり、当該方法は、個体に対して、前出の実施形態のいずれか治療有効量の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与することを含む。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、軽度認知機能障害、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷の予防、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクの低減、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体の治療のために使用する前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療する医薬の製造における、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の使用に関する。

【0317】

ＭＳ４Ａ遺伝子座の幾つかの遺伝子は、ＭＳ４Ａ４Ａなど、炎症反応と関連付けられている。（Ｋａｒｃｈ ａｎｄ Ｇｏａｔｅ，２０１５，Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，７７：４３－５１）。加えて、ＭＳ４Ａファミリー遺伝子の過剰発現は、Ｔ細胞の活性化を増大させて、血液脳関門を通過するＴ細胞の輸送を促した。活性化Ｔ細胞はミクログリアと相互作用して、ミクログリアを活性化させ、炎症性サイトカインの放出をもたらし、ニューロンの損傷を招く。ＭＳ４Ａ４Ｂの過剰発現は、Ｔ細胞のアポトーシスを低減したが、ＭＳ４Ａ４Ｂのノックダウンは、Ｔ細胞をアポトーシスに誘導した。（Ｍａ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，５１：１２４０－１２４８．）

【0318】

自己炎症性疾患は、臨床症状のグループに属しており、自己免疫症候群とは異なる。自己炎症性疾患は、自己反応性Ｔリンパ球と自己抗体を持たない自然免疫系の調節異常に起因する、非誘発性炎症のエピソードを特徴とするので、古典的な自己免疫疾患とは異なる。自己炎症性疾患は、２つのグループ：単一遺伝子自己炎症性疾患と、多因子性自己炎症性疾患に分類されている。一部の実施形態では、本開示の方法で予防または治療される自己炎症性障害として、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、メバロン酸キナーゼ欠乏症に関連する周期性熱（高免疫グロブリンＤ症候群）、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、ＮＬＲＰ１２関連自己炎症性障害（例えば、ＮＡＬＰ１２関連周期性発熱）、インターロイキン－１受容体拮抗薬（ＤＩＲＡ）欠乏症、化膿性無菌性関節炎・壊疽性膿皮症・アクネ（ＰＡＰＡ）症候群、マジード症候群、ブラウ症候群、周期性発熱症候群を伴う高免疫グロブリン血症Ｗ（ＨＩＤＳ）、家族性風邪自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）、マックルウェルス症候群（ＭＷＳ）、及び、新生児期発症多臓器性炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）などの単一遺伝子自己炎症性疾患があるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、本開示の方法で予防または治療される自己炎症性障害として、周期的発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎、及び、アデノパシー症候群（ＰＦＡＰＡ）、ベーチェット病、全身性若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スティル病、成人発症スティル病（ＡＯＳＤ）、クローン病、シュニッツラー症候群、スウィート症候群、慢性再発性多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、滑膜炎にきび膿疱症骨増殖症骨炎症候群（ＳＡＰＨＯ）、及び、成人発症スティル病などの多因子性自己炎症性疾患があるが、これらに限定されない。（Ｃｉｃｃａｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２１：２６１－２６９を参照されたい。）

【0319】

ＭＳ４Ａ遺伝子は、十分に特徴決定されていないが、免疫における重要な役割が、ＭＳ４Ａ１、ＭＳ４Ａ２、及び、ＭＳ４Ａ４Ｂなど、このクラスターの幾つかのメンバーで示されている（Ｚｕｃｃｏｌｏ ｅｔ ａｌ， ２０１０，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ；Ｚｕｃｃｏｌｏ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４：１９５）。

【0320】

自己免疫疾患は、正常な身体組織に対する異常な免疫反応に起因する。一部の実施形態では、本開示の方法で予防または治療される自己免疫疾患または障害として、アディソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫血管性浮腫、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性腎炎、軸索及びニューロン神経障害（ＡＭＡＮ）、バロー病、ベーチェット病、良性粘膜類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病（ＣＤ）、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発多巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・シュトラウス、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷アグルチニン病、先天性心臓ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円盤状ループス、ドレッジエ症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、必須混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維性巨細胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発性血管炎を伴う肉芽腫症、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性ヘルペスまたは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、間質性膀胱炎（ＩＣ）、若年性関節炎、若年性糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎（ＪＭ）、川崎病、ランバート－イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質結膜炎、線形ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、狼瘡、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モーレン潰瘍、ムッカハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ、腫瘍随伴性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間頻尿ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリーロンバーグ症候群、扁平上皮炎（末梢ブドウ膜炎）、パーソネイジ－ターナー症候群、天疱瘡、末梢神経症、脳脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、Ｉ型、ＩＩ型、及び、ＩＩＩ型多腺性症候群、多発性筋痛リウマチ、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、再発性多発性軟骨炎、むずむず脚症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維化症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子及び精巣自己免疫、全身硬直症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スサック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサハント症候群（ＴＨＳ）、横断性骨髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織病（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及び、ウェゲナー肉芽腫症（または、多発血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ））があるが、これらに限定されない。

【0321】

一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物として、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及び、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、そして、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）があるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、当該対象または個体は、ヒトである。

【0322】

本明細書で提供する抗体（及び、あらゆるさらなる治療薬）を、非経口、肺内、鼻腔内、病巣内投与、脳脊髄内、頭蓋内、髄腔内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、または、吸入経路などのあらゆる適切な手段で投与することができる。非経口注入として、ボーラスとしての筋肉内、静脈内投与、または、一定期間にわたる持続注入、動脈内、関節内、腹腔内、または、皮下投与がある。一部の実施形態では、当該投与は、静脈内投与である。一部の実施形態では、当該投与を、皮下にする。投与時間の長短をも加味して、投与は、適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射で実施できる。本明細書では、単回投与、または、様々な時点に及ぶ複数回投与、ボーラス投与、及び、パルス注入などであるが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールを企図している。

【0323】

本明細書で提供する抗体は、優れた医療行為と一致する方法で、製剤、投薬、及び、投与する。この関連で考慮すべき要素として、治療する特定の障害、治療を受ける特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び、開業医に公知のその他の要素がある。当該抗体は、必須ではないが、問題の障害の予防または治療のために現在用いられている１つ以上の作用物質を用いて、任意に製剤する。そのようなその他の作用物質の有効量は、製剤に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び、先述した考察でのその他の要素によって定まる。これらは、一般的には、本明細書に記載したのと同じ用量、及び、投与経路で、または、本明細書に記載した用量の約１～９９％、または、あらゆる用量で、かつ、経験的／臨床的に適切であると決定したあらゆる経路で使用する。

【0324】

疾患の予防または治療のための（単独で、または、１つ以上のその他のさらなる治療剤と組み合わせて使用する場合の）本開示の抗体の適切な用量は、治療する疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度と経過、当該抗体を予防または治療のいずれの目的で投与するのかの区別、従前の治療、患者の病歴と抗体に対する反応、及び、主治医の裁量によって定まる。当該抗体を、一度に、または、一連の治療において、適切に患者に対して投与する。

【0325】

疾患の種類、及び、重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体を、例えば、１回以上の別々の投与、または、持続注入のいずれかで、当該患者に対して投与する最初の候補用量とすることができる。上記の要素に応じて、ある一般的な１日用量を、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲とし得る。病態に応じて、数日以上の反復投与に関しては、一般的に、治療は、疾患症状に所望の抑制が認められるまで続ける。当該抗体のある例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または、１０ｍｇ／ｋｇ（または、それらのあらゆる組み合わせ）の１つ以上の用量を、患者に対して投与し得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週、または、３週間ごと（例えば、当該患者が、約２～約２０、または、例えば、約６用量の抗体の投与を受けるよう）に投与し得る。特定の実施形態では、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、または、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、または、それ以上である。最初に高負荷用量を、続いて、１回以上の低用量を投与し得る。しかしながら、その他の投与計画も有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術とアッセイで容易にモニターできる。

【0326】

Ｖ．診断用途
あらゆる抗体の一部の実施形態では、本明細書で提供するあらゆる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、試料または個体におけるＭＳ４Ａ４Ａの存在を検出する上で有用である。本明細書で使用する用語「検出する」とは、定量的または定性的検出を含む。本明細書では、個体、または、個体に由来する組織試料でのＭＳ４Ａ４Ａの検出など、診断目的で本開示の抗体を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、当該個体は、ヒトである。

【0327】

当該検出方法は、抗原に結合した抗体の定量が関与し得る。生物学的試料での抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、または、マイクロ陽電子放射断層撮影など、当該技術分野で公知のあらゆる方法で行い得る。特定の実施形態では、当該抗体を、例えば、^１８Ｆで放射性標識し、次いで、マイクロ陽電子放出断層撮影分析を用いて検出する。また、抗体結合も、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピューター断層撮影、単一光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及び、コンピューター断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的手法で、患者において定量し得る。

【0328】

ＶＩ．製造物
本明細書では、本明細書で説明した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含む製造物（例えば、キット）を提供する。製造物は、本明細書に記載した抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封したＭｙｌａｒ、または、プラスチックバッグ）などであるが、これらに限定されない、あらゆる適切な包装とし得る。これらの容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または、サブユニット用量とし得る。

【0329】

一部の実施形態では、これらのキットは、第２の作用物質をさらに含み得る。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び、デキストロース溶液などであるが、これらに限定されない、薬学的に許容可能な緩衝剤または希釈剤である。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、薬学的に活性な作用物質である。

【0330】

あらゆる製造物の一部の実施形態では、当該製造物は、本開示の方法に従って使用するための指示書をさらに含む。一般的に、当該指示書は、意図した治療のための用量、投薬スケジュール、及び、投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの指示書は、本開示のあらゆる方法に従って、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、認知障害または認識機能障害、軽度認知機能障害、血管性認知症、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の損傷、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落などであるが、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状から選択される疾患、障害、もしくは、損傷を予防する、当該疾患、障害、もしくは、損傷のリスクを低減する、または当該疾患、障害、もしくは、損傷を有する個体を治療するための、本開示の単離した抗体（例えば、本明細書で説明した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体）の投与であって、当該個体に対して、前出の実施形態のいずれかの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療有効量を投与することを含む、当該投与に関する説明を含む。

【0331】

一部の実施形態では、当該指示書は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、第２の作用物質（例えば、薬学的に活性な第２の作用物質）の使用に関する説明を含む。

【0332】

以下の実施例を参照することで、本開示の理解は十分に深まる。しかしながら、それらを、本開示の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。本開示全体でのすべての引用を、本明細書の一部を構成するものとして、明示的に援用する。

【実施例】

【0333】

実施例１：ＤＮＡ免疫処置のためのＭＳ４Ａ４Ａ発現プラスミドの構築
ＭＳ４Ａ４Ａに対する抗体を開発するために、ＤＮＡ免疫処置手法を使用した。ヒトＭＳ４Ａ４ＡをコードするｃＤＮＡ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、及び、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＭＳ４Ａ４ＡをコードするｃＤＮＡ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を、ＤＮＡ免疫処置のために、ｐＣＡＧＧＳ発現ベクター（ＫｅｒａＦＡＳＴ ＥＨ１０１７）にクローニングした。それぞれのＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドの発現を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への発現構築物の一過性トランスフェクションに続いて、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（クローン５Ｃ１２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ カタログ番号３７２５０２；クローン３Ｆ２、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ カタログ番号ＭＡＢＣ１１７４；クローン４Ｈ２、Ｋｅｒａｆａｓｔ カタログ番号ＥＵＣ００３）を用いた細胞外フローサイトメトリーを使用して確認した。次いで、これらの発現構築物を、後述するようにして、マウスでのＤＮＡ免疫処置のために用いた。

【0334】

実施例２：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ抗体の生成
ＭＳ４Ａ４Ａに対する抗体を得るために、以下の手順を用いて、ハイブリドーマを生成した。Ｂａｌｂ／ｃ、または、ＳＪＬマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、乳酸リンゲル液で希釈したｍＦｌｔ３リガンド（ＤＮＡ）、及び、ｍＧＭ－ＣＳＦ（ＤＮＡ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の有無に関係なく、ヒト、または、カニクイザルの全長ＭＳ４Ａ４Ａをコードする５０μｇのプラスミドＤＮＡ発現構築物で、それぞれを、毎週、同時に免疫処置した。ＤＮＡ免疫処置のために、ＭＳ４Ａ４Ａ発現プラスミドの注射を、合計で８回、マウスごとに実施した。最後のＤＮＡ免疫処置の３日後に、マウスから脾臓を採取した。マウスから得た血清は、ヒト、及び／または、カニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞を使用して、ＦＡＣＳ分析で、ＭＳ４Ａ４Ａに対する反応性について分析した。ヒト、及び／または、カニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞に対する強力な結合をＦＡＣＳ分析で示した血清を持つマウスの脾細胞を、電気融合（ＥＣＭ２００１，ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を介して、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞（ＣＲＬ－１５８０，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合させ、そして、３７℃、５％ ＣＯ_２で、一晩、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）でインキュベートした。

【0335】

翌日、融合細胞を遠心分離し、そして、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含む１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃに再懸濁し、次いで、メチルセルロースを主成分とし、ＨＡＴコンポーネントを含む、９０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と穏やかに混合した。これらの細胞を、Ｎｕｎｃ ＯｍｎｉＴｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に置き、３７℃、５％ ＣＯ_２で、８日間増殖させた。蛍光コロニーを選択し、そして、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む９６ウェルプレートに移した。５日後に、後述するようにして、ハイブリドーマ由来の組織培養上清を、全長ヒトＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞に対するＦＡＣＳでスクリーニングした。４回の独立した融合を行い、合計で、７０６個のハイブリドーマクローンを生成した。

【0336】

実施例３：ＭＳ４Ａ４Ａ ｃＤＮＡを用いたＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクション
ヒトＭＳ４Ａ４Ａをコードする発現プラスミドを、ＨＥＫ２９３細胞に、以下のようにしてトランスフェクトした。ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５７３）を、ダルベッコの改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ），Ｓｉｇｍａ）＋１０％ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で、＞８０％のコンフルエントになるまで培養した。次に、細胞を、非酵素的細胞解離緩衝剤（ＣｅｌｌＳｔｒｉｐｐｅｒ，Ｃｏｒｎｉｎｇ）で解離し、トランスフェクションの２４時間前に、Ｔ１５０フラスコ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号０８－７７２－４８）にて、４０～５０％の集密度で播種した。製造業者のプロトコールに従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、トランスフェクションを行った。ＨＥＫ２９３細胞におけるＭＳ４Ａ４Ａ過剰発現の毒性効果に先行させるために、トランスフェクションの２４時間後に、細胞を回収した。回収した細胞を、ＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面発現を確認するためにＦＡＣＳ分析に直ちに使用するか、あるいは、その後の使用のために１０％ＤＭＳＯで凍結した。

【0337】

フローサイトメトリーを、以下のようにして行った。すなわち、一過性にトランスフェクトした細胞を、氷上で、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号Ｌ３４９５７）で、３０分間、標識した。ＰＢＳで洗浄した後に、２×１０^５個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに等分し、そして、５０μｌの培養上清と共に、氷上で、３０分間インキュベートした。一次インキュベーションの後に、当該上清を、遠心分離で除去し、これらの細胞を、１７５μｌの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄した後に、１：２００に希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）と共に、氷上で、２０分間インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。分析を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ゲートを取り出して、死滅した（Ａｑｕａ陽性）細胞を排除した。

【0338】

代表的なＦＡＣＳプロットを、図１に示している。図１Ａでは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）、及び、（トランスフェクトしていない）親のＨＥＫ２９３細胞（影付きのトレース）を、上記のようにして生成したクローンのうちの１つに由来するハイブリドーマ上清で染色した。この特定のフローサイトメトリー実験では、平均蛍光強度（ＭＦＩ）が４６倍も増大した。図１Ｂでは、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ（影無しのトレース）またはコントロール細胞（影付きのトレース）をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、同じ上清で標識し、そして、ＭＦＩが８．５倍も増大したことが認められた。図１Ｃでは、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）と（トランスフェクトしていない）親のＨＥＫ２９３細胞（影付きのトレース）を、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体である抗体５Ｃ１２で染色したところ、ＭＦＩは、５４倍も増大した。図１Ｄでは、カニクイザルＭＳ４Ａ４ＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（影無しのトレース）と（トランスフェクトしていない）親のＨＥＫ細胞（影無しのトレース）を、抗体５Ｃ１２で染色した。カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに対する５Ｃ１２の交差反応性は認められなかった。

【0339】

実施例４：ＭＳ４Ａ４Ａ発現プラスミドを用いたその他の細胞株のトランスフェクション、及び、ＭＳ４Ａ４Ａノックアウト細胞株の生成
組換えヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現する安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞株の生成が困難であることを考慮して、その他のＤＮＡベクター、及び、細胞株を試験して、ＭＳ４Ａ４Ａ発現に関する良好な適合性の有無を調べた。安定的なトランスフェクションのために、ＭＳ４Ａ４Ａコード配列を、発現ベクターｐＤ２５３３－Ｇ４１８、または、ｐＤ３５３９－ｐｕｒｏ（Ａｔｕｍ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ，ＵＳＡ）に導入した。

【0340】

ＭＳ４Ａ４Ａは、インビボで、骨髄細胞においてネイティブに発現している。したがって、上記の細胞を使用して認められた毒性の問題を克服するために、組換えＭＳ４Ａ４Ａの一過性発現に対して、幾つかの骨髄由来細胞株を使用した。骨髄由来細胞株のパネルとして、ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ２０２）、Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５９３．２）、Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ２４３）、ＨＬ６０細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ２４０）、及び、Ｋａｓｕｍｉ－１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２７２４）が含まれた。マウスのプレＢ細胞株である３００．１９細胞（Ｔｕｆｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｔ０００７１０）も、組換えタンパク質の発現目的で一般的に使用されているので試験を行った。選択とトランスフェクション効率に適したＧ４１８またはピューロマイシンの用量を決定するために、これらの細胞株のそれぞれの抗生物質感受性をスクリーニングした。Ｕ９３７細胞、Ｋ５６２細胞、及び、３００．１９細胞のトランスフェクタントが、ＭＳ４Ａ４Ａ発現プラスミドのトランスフェクションと、抗生物質選択とをした後に生存可能であることが認められた。限界希釈でクローニングした後に、それぞれのクローンを生成し、そして、上記の方法論を使用して、フローサイトメトリーによって、ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質細胞表面発現についてスクリーニングした。

【0341】

これらの実験でのこれらの結果を、図２に示す。３００．１９細胞（図２Ａ）、Ｋ５６２（図２Ｂ）、及び、Ｕ９３７（図２Ｃ）は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクされ、そして、抗体５Ｃ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色された。３００．１９細胞（図２Ｄ）、Ｋ５６２（図２Ｅ）、及び、Ｕ９３７（図２Ｆ）は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトされ、そして、フローサイトメトリーのために、実施例２で生成したハイブリドーマ上清で染色された。従来の市販試薬（５Ｃ１２、４Ｈ２、３Ｆ２）では、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに対して結合しないので、これを使用した。図２のそれぞれのパネルでは、左側のトレースは、トランスフェクトしていない細胞に対応する；右側のトレースは、トランスフェクトした細胞に対応する。当該クローンは、抗生物質選択を受けているにもかかわらず、カニクイザルＭＳ４Ａ４ＡをトランスフェクトしたＵ９３７細胞以外は、すべてのクローンで、抗ＭＳ４Ａ４Ａ反応性について陽性であった。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ上清が、細胞の表面で発現したＭＳ４Ａ４Ａに結合することができることを示している。次いで、上記で生成した安定的な細胞株を、マウスにおける細胞をベースとした免疫処置、及び、後述する後続のスクリーニング方法に使用した。

【0342】

また、ＭＳ４Ａ４Ａノックアウト細胞株を作製して、結合及び機能の研究における陰性コントロールとして用いた。当該ＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子をノックアウトしたＵ９３７細胞株を、当分野でＡｐｐｌｉｅｄ ＳｔｅｍＣｅｌｌ（Ｍｉｌｐｉｔａｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）が確立した方法を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術で生成した。ＭＳ４Ａ４Ａ遺伝子ノックアウトを有する２つの独立したＵ９３７細胞株を、その後の研究のために選択した。これらのノックアウト細胞株におけるＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の発現の欠如は、細胞を、４０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡで２日間分化させた後に、フローサイトメトリーで確認しており、これは、野生型細胞の表面でのＭＳ４Ａ４Ａ発現を誘導する（データ示さず）。

【0343】

実施例５：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマの一次スクリーニング
抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマの最初のスクリーニングを、以下のように行った。まず、得られた７０６個のハイブリドーマ由来の組織培養上清を、トランスフェクトした細胞と比較して、（トランスフェクトしていない）親のＨＥＫ２９３細胞に対する結合の程度を比較することで、ヒトＭＳ４Ａ４ＡトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞に対して特異的に結合する能力をスクリーニングした。実施例３に記載したものに改変を加えた製造業者のプロトコールに従って、リポフェクタミンシステムを使用して、ＭＳ４Ａ４Ａ発現細胞を、ＨＥＫ２９３細胞の一過性トランスフェクションを介して産生した。スクリーニング実験全体の再現性を確保するために、トランスフェクトした細胞の大きなバンク（約１×１０^９個）を、一過性トランスフェクションの単一のラウンドで準備し、そして、以降のすべてのスクリーニング実験のために等分して凍結した。

【0344】

ハイブリドーマ細胞培養上清のスクリーニングのために、ヒトＭＳ４Ａ４ＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルＵ底プレート（２×１０^５個の細胞／ウェル）に等分し、そして、氷上で、５０μＬのハイブリドーマ細胞培養上清と、３０分間インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離して上清を除去し、これらの細胞を、１７５μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、さらに、氷上で、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－アロフィコシアニン（ＡＰＣ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）（１：２００に希釈した）と、２０分間、インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積３０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５５６４６３）に再懸濁した。細胞に関する結合強度を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、ソートゲートを取り出して、ヨウ化プロピジウムに陽性を示す死滅した細胞を排除した。ＭＳ４Ａ４Ａ－トランスフェクタントと親のＨＥＫ２９３細胞とに関するＡＰＣ中央蛍光強度（ＭＦＩ）の比率を、それぞれのハイブリドーマ上清について計算した。全部で４７個のクローンについて、（トランスフェクトしていない）親のＨＥＫ２９３細胞に対する結合と比較して、ＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対する結合に１．５倍超の違いがあることが認められた。

【0345】

前出の同定した陽性クローンを増殖し、次いで、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、または、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞と、親のＨＥＫ２９３細胞とに対する特異性について改めてスクリーニングした。これらの実験は、最初の選択を行った後にさらに増殖させたハイブリドーマクローン由来の上清を使用して行った。すなわち、以前に準備を行って凍結保存した一過性にトランスフェクトした細胞を、氷上で、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌ３４９５７）で、３０分間、標識した。ＰＢＳで洗浄した後に、２×１０^５個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに等分し、そして、５０μｌの培養上清と共に、氷上で、３０分間インキュベートした。一次インキュベーションの後に、当該上清を、遠心分離で除去し、これらの細胞を、１７５μｌの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄した後に、１：２００に希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）と共に、氷上で、２０分間インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。分析を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ゲートを取り出して、死滅した（Ａｑｕａ陽性）細胞を排除した。ＭＳ４Ａ４Ａ＋／親のＨＥＫ２９３細胞に関するＡＰＣ ＭＦＩの比率を、それぞれのハイブリドーマについて計算を行い；これらの結果を、以下の表１に示す。陽性クローン（１．８以上の変化倍率）を、さらなる試験に供した。これらのクローンを、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１～４Ａ－２４と命名し、そして、以下のように、さらなる特徴決定を行った。

【0346】

（表１）

【0347】

実施例６：ＭＳ４Ａ４Ａ細胞外ドメインに対応するペプチドに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ＥＣＬ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８）、及び、ＥＣＬ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９）に対応するＭＳ４Ａ４Ａペプチドに対する結合について、抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ上清を試験した。要するに、９６ウェルポリスチレンプレートを、１～１０μｇ／ｍｌの非合成ペプチドまたはＢＳＡコンジュゲートペプチドを含むコーティング緩衝剤（０．０５Ｍ炭酸塩緩衝剤、ｐＨ９．６、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ Ｃ３０４１）にて、４℃で、一晩、コーティングした。次いで、コーティングしたプレートを、ＥＬＩＳＡ希釈剤（ＰＢＳ＋０．５％ ＢＳＡ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で、１時間ブロックし、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０，Ｔｈｅｒｍｏ カタログ番号２８３５２）で、３×３００μＬで洗浄し、次いで、それらの抗体を、プレートに加えた（５０μｌ／ｍｌ）。３０分間のインキュベーション（室温で、震盪しながら）の後に、それらのプレートを、３×３００μＬのＰＢＳＴで洗浄した。二次抗マウスＨＲＰ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ カタログ番号１１５－０３５－００３）を、１：１０００に希釈したＥＬＩＳＡ希釈剤（５０μｌ／ウェル）に加え、そして、震盪しながら、室温で、３０分間、インキュベートした。最終セットの（３×３００μＬのＰＢＳＴでの）洗浄の後に、５０μＬのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ ＴＭＢＷ－１０００－０１）を加え、次いで、この反応を、５０μＬの停止溶液（ＢｉｏＦｘ ＢＳＴＰ－１０００－０１）で、５～１０分後に、停止した。反応停止した反応ウェルを、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで、６５０ｎｍの吸光度で検出した。

【0348】

前出の同定した２４個の抗ＭＳ４Ａ４Ａ陽性ハイブリドーマクローンのうち、１７個のハイブリドーマクローン由来の上清は、無関係な陰性コントロールペプチドであるＢＳＡ－マウスＤＡＰ１２と比較して、ＢＳＡ－ＭＳ４Ａ４Ａ－ＥＬＣ２ペプチドに対して強力な結合を示した。結合を示さないハイブリドーマクローンは、幾つかの要因、例えば、これらの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、この方法論によってモデル化していない立体配座エピトープに結合し得る、または、これらの抗体が、ＥＣＬ１とＥＣＬ２の両方から作り出されるエピトープを認識し得る、ということで説明し得る。

【0349】

一方で、この方法を用いてスクリーニングしたハイブリドーマクローンのいずれについても、ＥＣＬ１に対する結合は検出されなかった。このことは、長さが２１アミノ酸残基であるＥＣＬ２と比較して、長さが１３アミノ酸残基のＥＣＬ１のサイズが小さいことに起因し得る。ＭＳ４Ａ４Ａが、４ヘリックスバンドルを形成する場合、より大きなＥＣＬ２ドメインが、抗体結合に利用可能な露出した表面を支配し得る。本明細書で同定した特定の抗体は、ＥＣＬ１及びＥＣＬ２に位置するアミノ酸残基の組み合わせが形成したエピトープを認識しており、したがって、この方法論では検出されない可能性がある。

【0350】

ＥＬＩＳＡ結合実験の結果を、以下の表２に示す。

【0351】

（表２）

【0352】

実施例７：安定的にトランスフェクトした細胞株に関する抗ＭＳ４Ａ４Ａスクリーニング
また、最初の選択ラウンドで同定した抗ヒトＭＳ４Ａ４Ａ抗体ハイブリドーマクローンを、ヒト骨髄細胞株Ｋ５６２及びＵ９３７、ならびに、マウス骨髄腫細胞株３００．１９で発現したＭＳ４Ａ４Ａに結合する能力についてスクリーニングした。

【0353】

フローサイトメトリーを、以下のようにして行った。すなわち、一過性にトランスフェクトした細胞を、氷上で、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ｌ３４９５７）で、３０分間、標識した。ＰＢＳで洗浄した後に、これらの細胞上で豊富に発現しているＦｃ受容体を介した非特異的結合を、１％ ＢＳＡ、３３％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ Ｈ４５２２）、及び、３３％ヒトＦｃブロック（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １４－９１６１－７３）で細胞をインキュベートしてブロックした。２×１０^５個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに等分し、そして、５０μｌの培養上清と共に、氷上で、３０分間インキュベートした。一次インキュベーションの後に、当該上清を、遠心分離で除去し、これらの細胞を、１７５μｌの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄した後に、１：２００に希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）と共に、氷上で、２０分間インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。分析を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ゲートを取り出して、死滅した（Ａｑｕａ陽性）細胞を排除した。

【0354】

ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトした３００．１９細胞、及び、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトした３００．１９細胞に対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体についてのこのＦＡＣＳ分析の結果を、図３に示す。ヒトＭＳ４Ａ４Ａを一過性にトランスフェクトしたＵ９３７細胞に対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結果を、図４に示す。試験した抗体のうち、２４個のすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、これらの一過性にトランスフェクトした細胞株に提示したヒトＭＳ４Ａ４Ａに結合した。さらに、２４個の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のうち、１９個がヒトＭＳ４Ａ４ＡとカニクイザルＭＳ４Ａ４Ａの両方に交差反応をしており、さらに３個の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が多少なりとも結合反応性を示す、ことが明らかとなった。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ交差反応性を示さなかった。ヒトＭＳ４Ａ４ＡまたはカニクイザルＭＳ４Ａ４Ａをトランスフェクトした細胞に対する結合の交差反応性を示した抗体のリストを、以下の表３に示す。

【0355】

（表３）

【0356】

実施例８：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ抗体の分子クローニング
上記のハイブリドーマから得た抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、以下のようにしてクローニングした。５×１０^５個のハイブリドーマ細胞を、０．５ｍｌ Ｔｒｉｚｏｌ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号１５５９６０２６）に再懸濁した。クロロホルム抽出、及び、エタノール沈殿で、全ＲＮＡを、細胞から抽出した。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ Ｉｎｃ，カタログ番号６３４８５９）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ｃＤＮＡを、細胞から抽出した。

【0357】

ＲＡＣＥキットに提供した５’ＵＰＭプライマー、及び、重鎖定常領域プライマー（５’－ＡＧＣＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡ－３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０］と、軽定常領域プライマー（５’－ＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡ－３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１］とを使用するタッチダウンＰＣＲによって、可変重免疫グロブリン領域と、軽免疫グロブリン領域とを個別にクローニングした。

【0358】

ＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ，カタログ番号２８１０６）で精製し、そして、ｐＣＲ２．１（登録商標）－ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングベクター（ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に結合し、そして、ＯＮＥＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテント細胞を形質転換した。

【0359】

形質転換した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（Ｅ．ｃｏｌｉ）コロニーを単離し、そして、対応するハイブリドーマ細胞株ごとに、可変重鎖（ＶＨ）、及び、可変軽鎖（ＶＬ）の核酸の配列決定を行った。配列決定に続いて、可変重鎖領域、及び、可変軽鎖領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位（ＨＶに関してはＢｓｒＧＩとＢｓｔＥＩＩ、ＬＶに関してはＢｓｓＨＩＩとＢｓｉＷＩ）を含むプライマーを使用して、ＰＣＲで増幅を行い、そして、ヒトＩｇＧ１、及び、ＩｇＧＫを、それぞれコードするｐＪＧ哺乳動物発現ベクター（Ａｌｅｃｔｏｒ Ｉｎｃ．）にサブクローニングした。

【0360】

実施例９：抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
生成した２４個の抗体のうち、２１個に関して、標準的な技術を使用して、生成した抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を決定した。これらの抗体のＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ配列、及び、重鎖ＣＤＲ配列を、以下の表４Ａに示す。これらの抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域の配列を、以下の表４Ｂに示す。

【0361】

（表４Ａ）抗体ＣＤＲ配列

【0362】

（表４Ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列

【0363】

実施例１０：組換え抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の産生
精製したハイブリドーマ由来の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、それらのハイブリドーマを低ＩｇＧ培地、または、化学的に定義した培地で培養した後に、ハイブリドーマ上清由来のプロテインＡを使用して精製する。ヒトＦｃドメイン（ヒトＩｇＧ１）を含有するキメラ抗体の産生のための組換え発現プラスミドに、それらのハイブリドーマから得た可変遺伝子領域を直接的にクローニングすることで、一部の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体も産生する。当該発現プラスミドを、一過性にＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトし、そして、得られた抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、プロテインＡを介して精製する。

【0364】

抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の組換え産生は、以下のようにして行う。当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体ＶＨ及びＶＬ鎖をコードする核酸を含む発現プラスミドのトランスフェクションを、製造業者のプロトコールに従って、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ－２９３システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ａ１４５２４）を使用して実行する。要するに、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に関して、１２μｇの軽鎖プラスミドＤＮＡ、及び、１８μｇの重鎖プラスミドＤＮＡを、８０μＬのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を加えた１．５ｍＬ ＯｐｔｉＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号３１９８５０７０）で希釈する。得られた溶液を混合し、そして、室温で、３０分間、インキュベートした後に、１２５ｍＬのフラスコ（Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＩＳ＃ＰＢＶ１２－５）内にある３０ｍＬのＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ１４５２７）を含むＥｘｐｉ２９３発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ａ１４３５１０１）を加える。トランスフェクションの前に、トランスフェクトされる細胞を、約３×１０^∧６細胞／ｍｌにまで培養する。Ｅｘｐｉ２９３細胞の培養条件は、３７℃／８％ ＣＯ２にて、１２５ｒｐｍでのオービタル震盪である。トランスフェクションの１６～２４時間後に、１５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１、及び、１．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２を、それぞれのフラスコに加えて、組換え抗体の収量を向上させる。トランスフェクションの５～７日後に、培養上清を回収し、濾過（０．２マイクロメートル）し、そして、プロテインＡクロマトグラフィーで精製する。

【0365】

実施例１１：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の動力学的特徴決定
ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１及びＥＣＬ２、ならびに、ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１及びＥＣＬ２ペプチドに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合動力学的特徴を、以下のようにして、独自のアレイ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）装置（ＭＸ－９６）を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）で決定した。Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）を使用して、抗体を、ＣＭＤ５００Ｄチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＃ＳＰＭＸＣＭＤ５００Ｄ）に捕捉した。まず、このチップを、１００ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５、１００μＬ ＥＤＣ（最終濃度１３３ｍＭ）、１００μＬのＳ－ＮＨＳ（最終濃度３３．３ｍＭ）を用いて、７分間かけて活性化した。抗マウスＩｇＧ－Ｆｃのローン（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ カタログ番号１１５－００５－０７１）を、１５分間かけて注射して、１００００～１２０００ＲＵの表面密度を確立した後に、チップ表面を、１Ｍエタノールアミン、ｐＨ８．５で、１０分間かけて不活性化した。抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ上清、または、精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤（Ｔｅｋｎｏｖａ カタログ番号Ｈ８０２２）で希釈し、次いで、同じ試料溶液から２０分間と５分間の印刷でもってして２重に印刷した。

【0366】

動力学的分析を実行するために、ＥＣＬ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８）、及び、ＥＣＬ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９）に対応するヒトＭＳ４Ａ４Ａペプチド、または、ＥＣＬ１に対応するヒトＭＳ４Ａ６Ａペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９１のヒトＭＳ４Ａ６Ａのアミノ酸残基６８～８５）、及び、ＥＣＬ２に対応するヒトＭＳ４Ａ６Ａペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９１のヒトＭＳ４Ａ６Ａのアミノ酸残基１３８～１８５）を、２０００ｎＭ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎｍ、及び、３．２ｎＭの最終アッセイ濃度で、１ｍｇ／ｍｌＢＳＡを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤で調製した。次に、これらを、チップに５分間かけて注入した後に、非再生的な動力学的シリーズで、毎秒８ｕＬで、７分間の解離時間を設けた。再現性を確保するために、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の重複測定を行った。結合速度（Ｋｏｎ）と解離速度（Ｋｏｆｆ）は、単一の１対１のラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率として計算した。

【0367】

本開示での２４個のハイブリドーマ上清、及び、試験した３つの市販のマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（５Ｃ１２、４Ｈ２、及び、３Ｆ２）のうち、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は、上記の方法を使用して、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ２ペプチドに対する結合を示した。これらの実験で抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１について決定した速度定数は、Ｋｏｎ（（Ｍ－１ ｓ－１）、２．５Ｅ＋０５；Ｋｏｆｆ（ｓ－１）、７．８Ｅ－０３；及び、３１ｎＭのＫＤであった。上記の方法論を使用すると、試験したその他の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１、ＭＳ４Ａ６Ａ ＥＣＬ１、または、ＭＳ４Ａ６Ａ ＥＣＬ２ペプチドに結合しなかった。

【0368】

実施例１２：一過性かつネイティブに発現する細胞株に対するＭＳ４Ａ４Ａ抗体の親和性測定
精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、様々なＭＳ４Ａ４Ａ発現細胞株に対する、それらの結合親和性について評価をする。これらには、実施例８に記載したトランスフェクトした細胞、ならびに、ＭＳ４Ａ４Ａを内因的に発現する骨髄細胞株、及び、初代細胞がある。試験する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ハイブリドーマ上清から精製したマウスＩｇＧ、または、Ｅｘｐｉ２９３細胞において組換え産生したヒトＩｇＧ１ Ｆｃキメラである。細胞に対する親和性結合は、以下のように決定する。要するに、細胞を回収し、洗浄し、そして、Ａｑｕａ Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄで標識をして、生存を識別する。ＰＢＳで洗浄をした後に、２×１０^∧５個の細胞を、９６ウェルＵ底プレートのウェルごとに等分し、そして、様々な濃度（１０μｇ／ｍｌから始める３倍希釈）の５０μＬの精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を含むＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ）で、インキュベートする。一次インキュベーションの後に、遠心分離で上清を除去し、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で細胞を２回洗浄し、そして、適切な二次抗体と、氷上で、３０分間、インキュベートする。二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積が２００μＬであるＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁する。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行う。結合データを、蛍光強度の中央値を使用して分析し、そして、曲線を、Ｐｒｉｓｍ（非線形回帰：４つのパラメーターを使用したｌｏｇ阻害剤対用量反応）にあてはめて、ＥＣ５０値を決定した。

【0369】

実施例１３：ペプチド結合による抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープ決定
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープ結合の特徴を、２つの相補的手法で決定する。まず、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、及び、ヒトＭＳ４Ａ６Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９１）の細胞外ループ（ＥＣＬ）に由来する重複ペプチドのパネルを、ＪＰＴペプチド（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成した。これらのペプチドは、１５個のアミノ酸の長さであり、それぞれに、２個のアミノ酸を補った。これらのペプチドを、Ｎ末端でビオチン化した。ペプチド４Ａ．１～４Ａ．４は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１と、その周辺領域に由来するものであった。ペプチド４Ａ．５～４Ａ．１２は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ２と、その周辺領域に由来するものであった。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、及び、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、独自のアレイＳＰＲ機器（ＭＸ－９６）を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で、様々な線状ペプチドに対する結合について試験した。

【0370】

当該ペプチドライブラリーを、Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｐｏｔｔｅｒ（ＣＦＭ）を使用して、ストレプトアビジンでコーティングしたチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＳＡＤ５０Ｍ，Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に印刷した。まず、このチップを、１００ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５、１００μＬ ＥＤＣ（最終濃度１３３ｍＭ）、１００μＬのＳ－ＮＨＳ（最終濃度３３．３ｍＭ）を用いて活性化した。当該ペプチドライブラリーを、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、及び、１μｇ／ｍｌマウスＩｇＧ－ビオチンを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤（Ｔｅｋｎｏｖａ カタログ番号Ｈ８０２２）で希釈した２５０ｎＭ／ペプチドで、チップに固定化した。固定化の後に、当該チップの表面を、１Ｍエタノールアミンで、ｐＨ８．５で、１０分間かけて不活性化した。ハイブリドーマ上清、及び、精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡを含むＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝剤で希釈し、そして、チップに注入した。再現性を確保するために、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の重複測定を行った。それぞれのペプチド－抗体の組み合わせに対して結合の特徴決定を行い、それぞれの抗体が相互作用する線形ペプチド領域のマッピングを可能にする。

【0371】

抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、及び、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２は、以下の表５において太字で示したように、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ２の領域に対応するペプチドに対して強固な結合を示した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は、ペプチド４Ａ．５～４Ａ．９に結合し、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５５～１７７に及ぶ。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２は、ペプチド４Ａ．６～４Ａ．９に結合し、ヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５７～１７７に及ぶ。これら２つの抗体の結合領域は、重複しているが同一ではなく、ヒトＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ２内での異なる残基と相互作用することを示している。これらの２つの抗体のいずれも、上記の方法論を使用しても、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１に対する結合を示さなかった。

【0372】

（表５）

【0373】

一部の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、不連続なエピトープに結合する。Ｐｅｐｓｃａｎ（Ｌｅｌｓｔａｄ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）は、そのようなエピトープに対処するようにデザインした、ＣＬＩＰＳとして知られている技術を開発した。この技術では、三次構造模倣物のライブラリーをデザインし、そして、固体支持体にて合成を行う。これらの模倣物は、ループ、アルファヘリックス、及び、ベータ鎖などのタンパク質の二次構造要素をモデル化することができる。それぞれのペプチド構築物に対する抗体の結合を決定し、そして、定量する。当該ライブラリーに対する結合の程度は、所定の抗体が相互作用する領域、したがって、そのエピトープを示す。

【0374】

実施例１４：細胞結合による抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープビニング
ＭＳ４Ａ４Ａは、複数回膜貫通タンパク質であるので、組換え産生した可溶性タンパク質は、抗体：タンパク質相互作用を調べる好適な試薬にはならない。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、修正した古典的なサンドイッチ法を使用してビニングする。例えば、抗体ＡとＢが同じビンにあるか否かを判断するために、まず、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、飽和レベルの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体Ａでインキュベートする。ＦＡＣＳ緩衝剤で洗浄した後に、フルオロフォアアロフィコシアニン（ＡＰＣ）で標識した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体Ｂを細胞に対して加えて、氷上で、１５分間インキュベートする。これらの細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、ゲートを取り出して、死滅した細胞を排除する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体Ａの存在下または非存在下での抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体Ｂの結合レベルを比較する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体Ａの存在下での結合の低減または消失は、これら２つの抗体の間の競合を示す。この手順は、その他の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体に対しても反復して行えるので、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体パネル全体をビニングする。

【0375】

実施例１５：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体によるＭＳ４Ａ４Ａタンパク質のダウンレギュレーション
様々な細胞株及び初代細胞におけるＭＳ４Ａ４Ａの細胞表面、及び、総細胞タンパク質レベルを低減する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の能力を評価する。いずれかの区画でのＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の減少は、細胞内のＭＳ４Ａ４Ａ活性の低減を示す。

【0376】

細胞を、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と共に、様々な時間をかけてインキュベートし、次いで、ＦＡＣＳ（細胞表面）、または、ウエスタンブロット（総タンパク質レベル）のいずれかで、細胞に関連するＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の残存レベルをアッセイする。ＦＡＣＳアッセイでは、残余のＭＳ４Ａ４Ａの検出は、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）が直接にコンジュゲートした非競合抗体を用いて行う。ウェスタンブロット検出では、細胞を、５０μＬの溶解緩衝剤（ＲＩＰＡ溶解緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号８９９００）＋１：１００ ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号８７７８６）を添加することにより溶解し、そして、１４，０００ｘｇで、１５分間、遠心分離して不溶性の破片を除去する。可溶性画分を、タンパク質定量のために、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）試薬でアッセイする。それぞれの試料から得た等量のタンパク質を、４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｌｕｓポリアクリルアミドゲル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮＷ０４１２０）にロードし、電気泳動分離を行った後に、当該ゲルでのタンパク質を、ｉＢｌｏｔ２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＭ２１００１）、及び、Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｓｔａｃｋｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＢ２４００２）を使用して、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜に転写する。この膜を、１％ウシ血清アルブミン、または、５％脱脂乳でブロックして、非特異的結合を防ぐ。次に、この膜を、独自の、または、市販の検出抗体とインキュベートし、洗浄して、ＨＲＰ結合二次抗体（ウサギ、Ａｂｃａｍ＃２０５７１８、マウス、Ａｂｃａｍ＃２０５７１９）とインキュベートする。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号３４５７７）で現像して結合を視覚化し、そして、ｉＢｒｉｇｈｔ ＦＬ１０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａ３２７５２）、または、その他の互換システムでデジタル記録する。

【0377】

実施例１６：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が誘発する細胞内シグナル伝達
ＭＳ４Ａ４Ａは、細胞表面分子として、細胞外シグナルとの細胞の相互作用に、直接的または間接的に関与し得る。ＭＳ４Ａファミリーのその他の分子は、表面受容体複合体の成分であり、また、シグナル伝達を調節することが示されている。

【0378】

ＭＳ４Ａ４Ａのトポロジーは、原形質膜を横断する束ねたバレルを形成することで、イオンチャネルとして機能する能力があることが示唆されている。カルシウムは、そのようなイオンチャネルの一般的な第２のメッセンジャーである。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、細胞株及び初代細胞において、カルシウム流入を誘導する可能性について、以下のように調査をする。カルシウム感受性色素（例えば、Ｆｕｒａ－２、Ｉｎｄｏ－１、または、Ｆｌｕｏ－４（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））を、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に担持させる。次いで、細胞を、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と共に、３０分までインキュベートし、そして、蛍光レベルを、フローサイトメーター、蛍光顕微鏡、または、蛍光分光計でモニターする。

【0379】

ＭＳ４Ａ４Ａは、その他の細胞シグナル伝達事象も、直接的または間接的に調節し得る。タンパク質のリン酸化／脱リン酸化は、細胞内シグナル伝達に関連するメカニズムである。ＭＳ４Ａ４Ａには、公知のプロテインキナーゼモチーフが含まれていないので、キナーゼ、または、ホスファターゼ自体でない可能性はあるが、ＭＳ４Ａ４Ａは、その他のシグナル伝達分子との相互作用を介して、下流のリン酸化、または、脱リン酸化事象を調節し得る。このことを調べるために、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞株及び初代細胞を、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とインキュベートする。様々な処理時点で、細胞を回収し、細胞内タンパク質のセリン／スレオニンリン酸化、または、チロシンリン酸化について、ウエスタンブロッティングで分析する。ウェスタンブロット検出では、細胞を、５０μＬの溶解緩衝剤（ＲＩＰＡ溶解緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号８９９００）＋１：１００ ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号８７７８６））を添加することにより溶解し、そして、１４，０００ｘｇで、１５分間、遠心分離して不溶性の破片を除去する。可溶性画分を、タンパク質定量のために、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）試薬でアッセイする。それぞれの試料から得た等量のタンパク質を、４～１２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｌｕｓポリアクリルアミドゲル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮＷ０４１２０）にロードし、電気泳動分離を行った後に、当該ゲルでのタンパク質を、ｉＢｌｏｔ２（Ｔｈｅｒｍｏ ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＭ２１００１）、及び、Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｓｔａｃｋｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＩＢ２４００２）を使用して、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜に転写する。この膜を、１％ウシ血清アルブミン、または、５％脱脂乳でブロックして、非特異的結合を防ぐ。次に、この膜を、セリン／スレオニンリン酸化、または、チロシンリン酸化に対する、独自の、または、市販の検出抗体とインキュベートする。次いで、膜を洗浄し、そして、ＨＲＰ結合二次抗体（ウサギ、Ａｂｃａｍ＃２０５７１８、マウス、Ａｂｃａｍ＃２０５７１９）とインキュベートする。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ化学発光基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 番号３４５７７）で現像して結合を視覚化し、そして、ｉＢｒｉｇｈｔ ＦＬ１０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３２７５２）、または、その他の互換システムでデジタル記録する。

【0380】

ＭＳ４Ａ４Ａは、細胞外リガンドに直接に関与せず、原形質膜の受容体タンパク質複合体のその他の細胞受容体に影響を及ぼし得る。例えば、ＭＳ４Ａ４Ａは、トール様受容体（ＴＬＲ）、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、スカベンジャー受容体、骨髄細胞１または２で発現するトリガー受容体、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃファミリー、もしくは、ＣＤ２００、Ｆｃ受容体などの阻害受容体、または、骨髄細胞またはミクログリア細胞の機能を調節するその他の細胞表面受容体と、タンパク質複合体を形成し得る。このことを実験で調べるために、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞株と初代細胞を、これらの受容体の同族リガンドと抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の両方と共結合させる。カルシウム動員やタンパク質リン酸化などの下流のシグナル伝達事象は、上記のようにして調べる。加えて、遺伝子発現の変化を、ＲＴ－ＰＣＲ、または、ＲＮＡＳｅｑまたはマイクロアレイなどのグローバルプロファイリング法により分析する。

【0381】

実施例１７：ＭＳ４Ａ４Ａと結合パートナーとの間の相互作用の特徴決定
ＭＳ４Ａ４Ａと様々な結合パートナーとの相互作用のブロックするための抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の使用を試験し得る。インビボでＭＳ４Ａ４Ａと相互作用するタンパク質については、ほとんど知見が無い。このような結合パートナーを同定するために、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を使用して、ＭＳ４Ａ４Ａを、骨髄細胞株、及び、初代細胞から免疫沈降する。免疫沈降物を、タンデム質量分析に供し、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質と共沈したタンパク質を同定する。一旦同定が行われると、この相互作用を、ウェスタンブロット、または、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）分析で確認する。あるいは、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞株に抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を投与し、次いで、共局在または蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）のいずれかの読み出しを使用して、ＭＳ４Ａ４Ａと潜在的な結合パートナーの両方を染色する。

【0382】

実施例１８：骨髄細胞の代謝、生物学、及び機能に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の特徴決定
ＣＮＳのミクログリアなどの骨髄細胞にあるその標的に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が関与する下流後遺症は、例えば、単球由来マクロファージ、及び、樹状細胞などの骨髄細胞株、及び、初代細胞の培養物を、モデルシステムとして使用して詳細に調べる。これらの細胞は、それらの機能がインビトロで定期的に研究されているので、骨髄細胞の生物学の調査で広範に用いられている。これらの機能として、エネルギー代謝、サイトカイン産生、食作用、細胞表面分子発現、分極、移動、及び、抗原提示がある。

【0383】

要するに、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を、抗体がそれらの細胞標的にインビボで提示される様々な方法で模倣するプレート結合、可溶性、または、事前複合化形式で提示する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とインキュベートする。インキュベーションの条件と時間は、分析する読み取り値に依存するが、一般的には、１時間から７日間である。インキュベーションした後に、細胞を回収し、そして、ｍＲＮＡまたはタンパク質分析のために溶解することができる。これらの細胞を、細胞表面分子発現のためにフローサイトメトリー分析にも供する。代謝研究では、細胞を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、または、その他の互換性のある試薬とインキュベートして、細胞内のＡＴＰ含有量、または、細胞生存能力のその他のパラメーターを測定する。培養上清を回収し、そして、ＥＬＩＳＡまたはその他の同様の方法に供して、処理した細胞によって、サイトカイン、ケモカイン、及び、その他の分子の分泌を測定する。処理した細胞の食作用能力は、ラテックスビーズ、細菌または真菌粒子などの蛍光標識した基質、及び、Ａ－ベータ、タウ、または、プリオン分子などのタンパク質の凝集粒子を細胞に供給して決定する。細胞の移動は、マクロファージスクラッチアッセイ（Ｌｉａｎｇ ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２００７；２（２）：３２９）、または、トランスウェルアッセイ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ，ＵＳＡ）で決定する。

【0384】

実施例１９：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病の動物モデルを用いる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の活性の特徴決定
前出の説明の通り、老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病などの動物モデルにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の治療上の有用性も試験することができる（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ ３６，３７５－３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６－７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９－５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０－２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２－１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１１８３，３２－４２；Ｗｅｉ，Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９－１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ １１８，８７－９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ ４２７，８４３－８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６－６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５－５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０－２３９０；Ａｌ－Ｓｈａｗｉ，Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３－２１１４；及び、Ｙａｎｏ，Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０－１４８０２）。

【0385】

実施例２０：腫瘍学用動物モデルを用いる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の特徴決定
骨髄系細胞は、大部分の固形腫瘍に存在する免疫細胞の主成分である。腫瘍生物学におけるそれらの役割は状況依存的であり、そのような細胞は、腫瘍の根絶において重要な役割を果たす可能性があるが、それらは、大抵の場合、宿主腫瘍による吸収を受けて、腫瘍促進表現型の提供を補助する。このことは多くの場合、骨髄細胞が、Ｍ２表現型へ分極することで達成することができ、また、これは、一般的には、免疫抑制性であるので、当該免疫系が、当該腫瘍を根絶するのを阻止する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、骨髄細胞の再分極を介して、この免疫抑制表現型を逆転させ、そして、抗腫瘍免疫応答を促し得る。

【0386】

数多くの動物腫瘍モデルが存在する。関連する動物モデルの例として、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）に代表される、マウスの免疫システムを遺伝的に欠失したヒト化マウスモデルがある。これらのマウスは、ヒト免疫細胞の受容宿主として機能し、ヒトの適応性、及び、自然免疫細胞の生着をもたらす。次いで、これらの動物に対して、通常は、脇腹の皮下に腫瘍細胞を接種する。経時的な腫瘍サイズは、腫瘍細胞の成長と、宿主免疫系によるそれらの根絶との間のバランスを表す。治療期間全体を通して、これらの動物を抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で治療すると、アイソタイプ治療した動物と比較して、腫瘍の進行を修正する。治療期間の終わりに、腫瘍を抽出し、そして、様々な分析を行って、腫瘍細胞及び浸潤免疫細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を決定する。腫瘍を、切片にし、スライドに載置し、顕微鏡下で組織学的変化を分析することができる。ｍＲＮＡを、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮＡＳｅｑ、または、マイクロアレイで分析して、遺伝子発現の変化を決定することができる。腫瘍及び浸潤性免疫細胞の単一細胞懸濁液を調製し、様々な細胞表面マーカーに対する抗体で染色し、そして、フローサイトメトリーで分析すると、特に、マクロファージやＴ細胞などの免疫細胞における細胞表面表現型の変化を表すことができる。これらの分析のいずれかにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ処理の結果として認められた変化は、これらの抗体の免疫調節機能を示す。

【0387】

実施例２１：さらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ抗体の生成
さらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、前出の実施例１～４に記載した方法に以下の改変を加えた方法で、細胞とＤＮＡ免疫処置法との組み合わせを使用して取得した。Ｓｉｇｍａ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）の有無に関係なく、ＰＢＳで希釈したヒト、または、カニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａを安定的に過剰発現する３００．１９マウスプレ－Ｂ細胞を、それぞれ、Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に対して、１５００万個の細胞を用いて、毎週、腹腔内でブーストした。細胞の注射を４回した後に、乳酸リンゲル液で希釈したｍＧＭ－ＣＳＦ ＤＮＡを含む全長のヒトまたはカニクイザルＭＳ４Ａ４Ａをコードする５０μｇのプラスミドＤＮＡのそれぞれを、マウスに対して毎週２回注射した。マウスに対して、ヒトまたはカニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａを安定的に過剰発現する３００．１９細胞を用いて最後のブーストを行い、そして、３日後に、マウスから脾臓とリンパ節を採取した。

【0388】

マウスから得た血清を、ヒトまたはカニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａを安定的に過剰発現している３００．１９及びＫ５６２細胞を使用して、ＦＡＣＳ分析で、ＭＳ４Ａ４Ａに対する反応性について分析した。ＦＡＣＳで血清と細胞との強力な結合を示したマウスの脾細胞を、電気融合（ＥＣＭ２００１，ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を介して、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＣＲＬ－１５８０，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、または、ＳＰ２／ｍＩＬ－６（ＣＲＬ－２０１６，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）マウス骨髄腫細胞と融合させ、そして、３７℃、５％ＣＯ_２で、一晩、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）でインキュベートした。

【0389】

翌日、融合細胞を遠心分離し、そして、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含む１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃに再懸濁し、次いで、メチルセルロースを主成分とし、ＨＡＴコンポーネントを含む、９０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と穏やかに混合した。これらの細胞を、Ｎｕｎｃ ＯｍｎｉＴｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に置き、３７℃、５％ＣＯ_２で、７日間増殖させた。蛍光コロニーを選択し、そして、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む９６ウェルプレートに移した。６日後に、後述するようにして、ハイブリドーマ由来の組織培養上清を、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの全長を過剰発現する３００．１９、Ｋ５６２、及び／または、Ｕ９３７細胞に対するＦＡＣＳでスクリーニングした。この免疫処置で、合計で、１３８７個のハイブリドーマクローンを生成した。

【0390】

実施例２２：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマのスクリーニング
前出の実施例２１に記載したようにして得た抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマの最初のスクリーニングを、以下のようにして行った。まず、１３８７個のハイブリドーマクローン由来の組織培養上清を、トランスフェクトした細胞と比較して、親のＵ９３７、Ｋ５６２、及び／または、３００．１９細胞に対する結合の程度を比較することで、Ｕ９３７、Ｋ５６２、及び／または、３００．１９を安定的に発現するヒトＭＳ４Ａ４Ａに特異的に結合する能力についてスクリーニングした。

【0391】

ハイブリドーマ細胞培養上清をスクリーニングするために、それぞれの細胞株を色素で標識して、独自の蛍光バーコードを作成する多重ＦＡＣＳを使用した。要するに、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを発現している親のＵ９３７、Ｋ５６２、及び／または、３００．１９細胞を、５００ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅバイオレット色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｃ３４５５７）、６ｎＭもしくは２００ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｃ３４５７０）、または、これら二つの組み合わせで、製造業者のプロトコールに従って染色した。標識した細胞を洗浄して遊離色素を除去した後に、これらの細胞上で豊富に発現されているＦｃ受容体を介した非特異的結合を、これらの細胞を、１％ＢＳＡ、３３％ヒト血清（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｈ４５２２）、及び、３３％ヒトＦｃブロック（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１４－９１６１－７３）とインキュベートすることでブロックした。細胞を、９６ウェルのＵ底プレート（８×１０^４個の細胞／細胞株／ウェル）に等分し、そして、５０μＬのハイブリドーマ細胞培養上清と、氷上で、３０分間、インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離をして上清を除去し、細胞を、１７５μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、さらに、氷上で、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－アロフィコシアニン（ＡＰＣ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ、カタログ番号１１５－１３６－０７１）（１：１０００の希釈物）と共に、２０分間、インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積１００μＬのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。細胞への結合強度を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、ソートゲートを取り出して、それぞれの細胞株を、独自の蛍光バーコードで区別した。ＭＳ４Ａ４Ａトランスフェクタントと親細胞のＡＰＣ平均蛍光強度（ＭＦＩ）の比率を、それぞれのハイブリドーマ上清について計算した。合計で１２１個のクローンが同定されており、（トランスフェクトしていない）親の細胞に対する結合と比較して、ＭＳ４Ａ４Ａを安定的にトランスフェクトした細胞に対する結合では２．２倍を超える差異が認められた。

【0392】

実施例２３：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマの二次スクリーニング
前出の実施例２２で同定した陽性クローンを増殖し、次いで、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ、または、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ、及び、親のＵ９３７、Ｋ５６２、及び／または、３００．１９細胞を安定的に過剰発現するＵ９３７、Ｋ５６２、及び／または、３００．１９細胞に対する特異性について改めてスクリーニングした。これらの実験は、最初の選択を行った後にさらに増殖させたハイブリドーマクローン由来の上清を使用して行った。要するに、安定的にトランスフェクトした細胞を、氷上で、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ番号Ｌ３４９５７）で、３０分間、標識した。ＰＢＳで洗浄した後に、これらの細胞上で豊富に発現するＦｃ受容体を介した非特異的結合を、細胞を１％ＢＳＡ、３３％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ カタログ番号Ｈ４５２２）、及び、３３％ヒトＦｃブロック（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１４－９１６１－７３）とインキュベートしてブロックした。２×１０^５個の細胞を、９６ウェルのＵ底プレートに等分し、そして、５０μｌの培養上清と、氷上で、３０分間、インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離をして上清を除去し、細胞を、１７５μｌの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、そして、氷上で、１：１０００に希釈した抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）と共に、２０分間、インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁した。ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析を行い、ゲートを取り出して、死滅した（Ａｑｕａ陽性）細胞を排除した。

【0393】

ＡＰＣ比は、それぞれの抗体に関して、以下のように算出した。親（Ｐａｒ）の細胞株に関しては、測定した結合と、無関係な精製マウスＩｇＧ抗体を使用して認められた結合とを比較して、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合比を計算した。ヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ｈ４Ａ）、または、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａ（ｃｙ４Ａ）を過剰発現する細胞株に関しては、測定した結合と、対応する親の細胞株で認められた結合と比較して、比率を計算した。以下の表６は、それぞれの細胞株に対する抗体結合の程度を示している。＋／－は、ＭＦＩの１．５倍の増大；＋、＋＋、及び、＋＋＋は、ＭＦＩの２倍超の増大を示す。ＭＳ４Ａ４Ａ過剰発現細胞株（１．５より大きな結合比を有する）のいずれかに対して結合し、かつ、２未満の比率で親細胞に対して結合するクローンについて、さらに特徴決定を行った。これらのクローンを、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０１～４Ａ－２４０と命名した。

【0394】

（表６）

【0395】

ｈｕＭＳ４Ａ４Ａに対するそれらの結合に基づいて、さらなる特徴決定を行うために選択した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、表７に記載している。カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに対するそれらの交差反応性も記載している。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａに対して交差反応性を示さなかった。

【0396】

（表７）

【0397】

実施例２４：ヒトＭＳ４Ａ４Ａ細胞外ドメインに対応するペプチドに対して結合する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体
抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ上清（原体）、または、精製したｍＩｇＧ（５μｇ／ｍｌ）を、ＥＣＬ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基８６～９８）、及び、ＥＣＬ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のヒトＭＳ４Ａ４Ａのアミノ酸残基１５９～１７９）に対応するヒトＭＳ４Ａ４Ａペプチドに対する結合に関して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して試験した。要するに、９６ウェルポリスチレンプレートを、２または１０μｇ／ｍｌの合成物不含ペプチド、または、ＢＳＡコンジュゲートペプチドを含むコーティング緩衝剤（０．０５Ｍ炭酸塩緩衝剤、ｐＨ９．６，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｃ３０４１）で、４℃で、一晩、コーティングした。次いで、コーティングしたプレートを、ＥＬＩＳＡ希釈剤（ＰＢＳ＋０．５％ ＢＳＡ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で、１時間、ブロックし、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号２８３５２）の３ｘ３００μＬで洗浄した後に、これらの抗体を、プレートに加えた（５０μｌ／ウェル）。３０分間インキュベーション（室温、震盪）した後に、これらのプレートを、ＰＢＳＴの３ｘ３００μＬで洗浄した。二次抗マウスＨＲＰ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－０３５－００３）を、ＥＬＩＳＡ希釈剤（５０μｌ／ウェル）で、１：１０００希釈で加え、そして、震盪しながら、室温で、３０分間、インキュベートした。最後の洗浄セット（ＰＢＳＴで３ｘ３００μＬ）の後に、５０μＬのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘカタログ番号ＴＭＢＷ－１０００－０１）を加え、そして、５～１０分後に、５０μＬの反応停止液（ＢｉｏＦｘカタログ番号ＢＳＴＰ－１０００－０１）で反応を停止させた。反応停止させた反応ウェルを、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙマイクロプレートリーダーで、６５０ｎｍの吸光度で検出した。

【0398】

前出の実施例２３で同定した１９個の抗ＭＳ４Ａ４Ａ陽性ハイブリドーマクローンのうち、１８個の上清を、３つの精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａマウス抗体（４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２５；前出の実施例７を参照されたい）、及び、３つの市販のマウス抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２）を用いて試験した。４つの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－２１、４Ａ－２５、４Ａ－２０２、及び、４Ａ－２１４）は、無関係の陰性ペプチドコントロールであるＢＳＡマウスＤＡＰ１２で認められたものと比較して、ｈｕＭＳ４Ａ４Ａ－ＥＬＣ２不含ペプチドに対して強力に結合した。３つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬ１、及び、ＥＣＬ２ペプチドに対する結合を示さなかった。結合を示さないハイブリドーマクローンのことは、例えば、これらの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、この方法論でモデル化しなかったコンフォメーションエピトープに結合し得ること、または、これらの抗体が、ＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ１とＥＣＬ２の双方が作り出すエピトープを認識し得る、などの幾つかの要因で説明がつく。

【0399】

ＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ１に対する結合は、この方法論を使用してスクリーニングしたハイブリドーマクローンのいずれについても検出されなかった。このことは、長さが２１アミノ酸残基であるＥＣＬ２と比較して、長さが１３アミノ酸残基であるＥＣＬ１のサイズが小さいことに起因し得る。ＭＳ４Ａ４Ａは、４ヘリックスバンドル構造を形成すると予測されている。ＥＣＬ２ドメインが大きくなると、より小さなＥＣＬ１ドメインを覆い隠してしまい、抗体の結合を妨げ得る。本明細書で同定した特定の抗体は、本明細書で使用する線形ＥＣＬ１ペプチドが反復していないＭＳ４Ａ４Ａのコンフォメーションエピトープに結合する、または、ＥＣＬ１及びＥＣＬ２に位置するアミノ酸残基の組み合わせから形成したエピトープを認識することにより、この方法論では、検出されなくなる可能性もある。

【0400】

ＥＬＩＳＡ結合実験の結果を、以下の表８に示す。

【0401】

（表８）

【0402】

実施例２５：抗ＭＳ４Ａ４Ａハイブリドーマ抗体の分子クローニング、及び、キメラ抗体発現ベクターの生成
前出の実施例２１～２４に記載したハイブリドーマから得たさらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、以下のようにして、クローニングした。５×１０^５個のハイブリドーマ細胞を、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，カタログ番号７４１０４）の構成要素である０．３５ｍｌのＲＬＴ緩衝剤に再懸濁した。製造業者の指示に従って、スピンカラムに対する結合を介して、全ＲＮＡを抽出した。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ Ｉｎｃ，カタログ番号６３４８５９）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ｃＤＮＡを生成した。

【0403】

可変重及び軽免疫グロブリン領域を、ＲＡＣＥキットで提供している５’ＵＰＭプライマーと、重鎖定常領域プライマー（５’－ＡＧＣＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡ－３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０］、及び、軽定常領域プライマー（５’－ＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡ－３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１］とを使用して、タッチダウンＰＣＲで、別々にクローニングした。

【0404】

ＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ，カタログ番号２８１０６）で精製し、次いで、ｐＣＲ２．１（登録商標）－ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングベクター（ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲーションし、そして、ＯＮＥＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテントセルに形質転換した。

【0405】

形質転換した大腸菌コロニーを分離し、そして、対応するハイブリドーマ細胞株ごとに可変重鎖（ＶＨ）と可変軽鎖（ＶＬ）の核酸の配列決定を行った。配列決定に続いて、可変重鎖領域と可変軽鎖領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位（ＨＶに関しては、ＢｓｒＧＩとＢｓｔＥＩＩ、次いで、ＬＶに関しては、ＢｓｓＨＩＩとＢｓｉＷＩ）を含むプライマーを使用してＰＣＲで増幅し、そして、ヒトＩｇＧ１とＩｇＧＫのそれぞれをコードするｐｃＤＮＡ哺乳類発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。

【0406】

実施例２６：抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、さらなる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を決定した。それらの抗体のＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ配列、及び、重鎖ＣＤＲ配列を、以下の表９Ａに示す。それらの抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域の配列を、以下の表９Ｂに示す。

【0407】

（表９Ａ）抗体ＣＤＲ配列

【0408】

（表９Ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列

【0409】

実施例２７：精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａキメラ抗体の生成
ＶＨ及びＶＬ領域に関するアミノ酸配列を、次のようにして、ＨＥＫ細胞における発現に最適化した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のＶＨ及びＶＬをコードするヌクレオチド配列に、５’端に抗体シグナルペプチドをコードする配列と、軽鎖及び重鎖のそれぞれのヒトカッパ定常領域、または、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域とを加えることで、電子的に修正した。ＳａｐＩ制限酵素部位を、それぞれの端に加えて、ベクターへのクローニングを可能にした。これらのインサートを含むＨＣ及びＬＣ ＤＮＡ配列を、Ａｔｕｍ Ｂｉｏ（Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ）で合成し、そして、ｐＭ２６９シャトルベクターに挿入した。これらのＨＣ及びＬＣ ＤＮＡインサートを、Ｅｌｅｃｔｒａクローニングキットを使用して、発現のためのｐＤ２６１０－Ｖ６ベクターにクローニングした。コンピテントＤＨ１０Ｂ大腸菌（Ｍａｘ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ＤＨ１０Ｂカタログ番号１８２９７０１０）を氷上で解凍し、次いで、２μｌのライゲーションミックス（約２０ｎｇのプラスミドＤＮＡ）を、３０ｕｌのコンピテントセルに加え、そして、氷上で、３０～４５分間、インキュベートした。次いで、これらの細胞を、３９℃で、４５秒間、熱ショックを与え、そして、氷上に戻した。０．５ｍｌのＳＯＣ培地を加え、そして、これらの細胞を、３７℃で、さらに３０～４５分間インキュベートした。５ｕｌの形質転換ミックスを、カナマイシン（ＴＥＫＮＯＶＡ）を含むＬＢ寒天プレートに播種し、３７℃で、一晩、増殖させた。個々のコロニーを採取し、そして、ＬＢ＋Ｋａｎで、一晩増殖させた。得られたミニプレップを、Ｑｉａｇｅｎミニ－プレップキットを使用して精製し、そして、配列を確認した。安定的な細胞株の構築に十分なＤＮＡを生成するために、６０ｍＬの大腸菌培養物の適切なコロニーを、２日間培養し、そして、Ｑｉｇｅｎ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ Ｐｒｅｐキットを使用して精製した。

【0410】

ＨＥＫ２９３細胞へのトランスフェクションを、ＥＸＰＩ－２９３トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、１Ｌの震盪フラスコで、２５０ｍｌスケールで行った。１５０μｇの軽鎖発現ベクターと、１００μｇの重鎖発現ベクターを、フェクチン試薬と共に混合し、２０分間静置した後に、穏やかに混合しながら細胞に加えた。これらの細胞を、震盪インキュベーターに６時間置き、その後、製造業者の指示に従って、エンハンサー培地を加えた。トランスフェクションの５～６日後に、臨床用遠心分離機で細胞を遠心分離し、Ｎａｌｇｅｎｅ ０．２μｍフィルターを使用して無細胞上清を滅菌濾過し、そして、精製まで馴化培地を４℃でストリングして、細胞を回収した。

【0411】

タンパク質を、ガラスまたはポリプロピレンカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填したプロテインＡマトリックス（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ）を使用して精製した。馴化培地をカラムにロードし、入念に洗浄した後に、アルギニンまたはグリシンを含む溶出緩衝剤勾配で、ｐＨ３．０～３．５で溶出した。溶出した抗体を、中和し、そして、保存用緩衝剤（抗体の溶解度に応じてクエン酸またはヒスチジン）で製剤し、＞１ｍｇ／ｍｌに濃縮してから、滅菌ろ過した。これらの抗体を、出荷前に、ナノドロップ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＳＥＣで試験した。％モノマー含有量が、９５％未満であれば、分取ＳＥＣを行った。一般的に、収量は、発現する抗体ペアに応じて１５～５０ｍｇの抗体の範囲であった。

【0412】

実施例２８：ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞に対する精製した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合
精製したｈｕＩｇＧ１キメラ抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、ヒトＭＳ４Ａ４Ａを安定的に過剰発現するＵ９３７細胞、ノックアウトしたヒトＭＳ４Ａ４Ａを有するＵ９３７細胞、及び、親のＵ９３７細胞のＭＳ４Ａ４Ａに対して多様に結合する能力についてスクリーニングをした。これらの細胞上で発現したＭＳ４Ａ４Ａに対する異なる結合を、上記のように、５μｇ／ｍｌの精製抗ＭＳ４Ａ４Ａキメラ抗体を用いたＦＡＣＳ分析で評価した。それぞれの抗体のＡＰＣ ＭＦＩを決定した；二次抗体結合だけの場合に認められたＭＦＩ値に対するそれらのＭＦＩ値の比率を、以下の表１０に示す。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して特異的に結合しており、かつ、ノックアウトしたヒトＭＳ４Ａ４Ａを有する細胞には結合しないことを示した。

【0413】

（表１０）

【0414】

実施例２９：ＭＳ４Ａ４Ａ構造予測、エピトープマッピングのためのバリアントペプチドデザイン、及び、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のエピトープ決定
ＭＳ４Ａ４Ａの一次アミノ酸配列は、その二次及び三次構造に関する重要な情報を提供する。当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質は、４回膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）を有しており、それぞれのＴＭＤは、２１個のアミノ酸から構成されている。一般的なＴＭＤは、厚さが約４０Åのホスホジエステル脂質二重層からなる。当該リン酸の頭部は、細胞外、または、サイトゾルスペースのいずれかで、親水性環境と相互作用する親水性層を作成し、また、当該脂質の尾部は、ＴＭＤの親油性残基と相互作用する内部脂質二重層を生成する。当該ＴＭＤ脂質二重層の厚さは、約３２～３４Åである。アミノ酸組成、残基数、及び、脂質二重層の厚さから予測すると、ＭＳ４Ａ４Ａは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、それぞれ、ＴＭＤ１とＴＭＤ２、そして、ＴＭＤ３とＴＭＤ４とを接続している２つの余分な細胞ループ（ＥＣＬ）を有する４ヘリックスバンドル（４ＨＢ）を含むものと予測される。４ヘリックスバンドルは、ヘリックス－脂質二重層相互作用と、ヘリックス－ヘリックス相互作用から得られる有意なエンタルピーゲインによって、膜内のＭＳ４Ａ４Ａを安定させる。

【0415】

ＭＳ４Ａ４Ａ ＥＣＬの一次アミノ酸配列と組成は、エピトープと動的特性に関連する重要な特徴を示す。ＥＣＬ１は、１つのシステイン、１つのメチオニン、１つのアラニン、３つのセリン、１つのスレオニン、２つのアスパラギン、１つのチロシン、１つのプロリン、１つのイソロイシン、及び、唯一のグリシン残基を含む、１３個のアミノ酸からなる。ＥＣＬ２は、８つのアミノ酸、３つのセリン、１つのスレオニン、１つのフェニルアラニン、３つのヒスチジン、１つのプロリン、３つのチロシン、４つのアスパラギン、１つのメチオニン、及び、２つだけのグリシン残基で分離した２つのシステイン残基を含む２１個のアミノ酸からなる。ＥＣＬ１及びＥＣＬ２には、グリシン残基はほとんど無く、幾つかの大きなベータ分岐アミノ酸残基と、プロリン残基が認められる。さらに、ＥＣＬ２は、構造内エントロピーをさらに減少させるループ内ジスルフィド結合を生成すると予測される２つのシステイン残基を含む。その結果、ＥＣＬ１及びＥＣＬ２は、剛体タイプの内部運動で互いに相互作用する立体配座異性体の個数が大幅に減少する傾向がある。

【0416】

Ｃ末端ＧＦＰタグを含むヒトＭＳ４Ａ４Ａ（ＮＭ＿０２４０２１）をコードする発現プラスミドを、Ｏｒｉｇｅｎｅ（カタログ番号ＲＧ２２３５５７）から購入し、そして、ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ループ１（ＥＣＬ１）のコード領域に単一のアラニンスキャン変異を生成するためのテンプレートとして使用した（以下の表１１での４Ａ．Ａｌａ１－Ａｌａ１３；ＥＣＬ１に対応するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣ６７～Ｓ７９；ＣＭＡＳＮＴＹＧＳＮＰＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８９）；ヒトＭＳ４Ａ４Ａの細胞外ループ２（ＥＣＬ２）のコード領域内（以下の表１１での４Ａ．Ａｌａ１４－Ａｌａ３４；ＥＣＬ２に対応するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＳ１４０～Ｓ１６０；ＳＦＨＨＰＹＣＮＹＹＧＮＳＮＮＣＨＧＴＭＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９０）；及び、以下の表１２でのＥＣＬ２欠失変異（４Ａ．Ａｌａ３５（ＥＣＬ２でのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基１５０～１５２の欠失）、及び、４Ａ．Ａｌａ３６（ＥＣＬ２でのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基１４８～１５２の欠失））。これらの突然変異は、当技術分野で標準的な重複ポリメラーゼ連鎖反応技術を使用して行った。それぞれのポリメラーゼ連鎖反応ポリ核酸フラグメントを精製し、そして、ＭｌｕＩとＡｓｉＳＩ制限部位を使用して、発現ベクターにサブクローニングした。

【0417】

アラニンスキャニング技術を使用してエピトープ決定を行う前に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において上記の発現構築物の一過性トランスフェクションを使用して、以下のようにして、当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の相対的ＥＣ５０を決定した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、６ウェルプレートに播種し、そして、一晩、増殖させた。翌日、製造業者のプロトコールに従って、Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、または、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、４：１の比率のＦｕｇｅｎｅとＤＮＡ、または、３：１の比率のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅとＤＮＡを細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの約２４時間後に、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して細胞を回収し、そして、ＦＡＣＳ染色のために処理した。

【0418】

ＦＡＣＳ染色については、１５０，０００個の細胞を、９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに加え、次いで、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の滴定を、ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ ＦＢＳ）に対して加え、そして、氷上で、６０分間、インキュベートした。プレートを遠心分離し（１，４００ｒｐｍ、３分間）、上清をデカントして、細胞を、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤で３回洗浄した後に、それぞれを、遠心分離とデカントの工程に供した。抗体を、ｍｓＩｇＧ１、または、ｈｕＩｇＧ１キメラとして試験し、そして、ヤギ抗ヒトＰＥ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４０－０９、１：２００）、または、ヤギ抗マウスＡＰＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５０８２６、１：１００）のいずれかを、氷上で、３０分間、ＦＡＣＳ緩衝剤に加えた。続いて、細胞を、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、ｉＱｕｅサイトメーターで画像化した。蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を、ＭＳ４Ａ４Ａを発現する細胞を表すＧＦＰポジティブ集団で測定した。

【0419】

最初に試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のうちの６つは、野生型（ＷＴ）ＭＳ４Ａ４Ａ－ＧＦＰを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞に結合する；このようなものとして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、４Ａ－２０２、ならびに、公開されたマウスモノクローナル抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ｈ２（Ｋｅｒａｆａｓｔ）、５Ｃ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、３Ｆ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）がある。それぞれの抗体の滴定曲線を決定して、その後のエピトープマッピング研究に最適な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体濃度を確立した。

【0420】

エピトープマッピング実験については、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、異なるヒトＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物（上記のとおり、以下の表１１を参照されたい）をトランスフェクトされ、そして、６つの異なる抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体：４Ａ－２１、４Ａ－１８、４Ａ－２０２、４Ｈ２、５Ｃ１２、及び、３Ｆ５を使用して、抗体結合を測定された。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合は、野生型ヒトＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物をトランスフェクトした細胞に対する結合でのＭＦＩの％として計算した。当該ＭＳ４Ａ４Ａポリペプチドでのアミノ酸変異が、抗体結合を、野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合の２０％未満にまで低下させておれば、当該変異したアミノ酸は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合に必要な重要なアミノ酸と考えられる。当該ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の一部のアミノ酸変異が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合を、（野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合と比較して）５１％未満から２０％を超えるまで減少させておれば、そのようなアミノ酸を、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合に寄与するアミノ酸として定義した。

【0421】

ＭＳ４Ａ４Ａの一部のアミノ酸は、ＭＳ４タイプのタンパク質でシステイン架橋を形成すると考えられている２つのシステイン、Ｃ１６５及びＣ１７４など、試験したすべての抗体の結合に影響を及ぼした。そのようなアミノ酸は、構造アミノ酸であると考えられた。

【0422】

これらの実験の結果を、以下の表１１に示す。上記のように、Ａｌａ．１～Ａｌａ．１３とは、ＥＣＬ１でのＭＳ４Ａ４Ａ変異のことを指す；Ａｌａ．１４～Ａｌａ．３６とは、ＥＣＬ２でのＭＳ４Ａ４Ａ変異のことを指す。データは、野生型ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合と比較して、様々なアラニンスキャン変異に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の％結合として示している。これらのマッピング実験は、独立して、２回繰り返しており、非常に類似した結果が得られた。１つの差異は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１及び４Ａ－１８が、２つの濃度で、ｈｕＩｇＧ１として１度、ｍｓＩｇＧ１として２度目の試験をしたことであった。以下の表１２は、これらの抗体のｍｓＩｇＧ１試験の結果を示している。その他のすべての抗体について、表１１は、両方の実験における平均抗体結合を示している。ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を示す数値のうち、野生型ＭＳ４Ａ４Ａに対する結合についての測定値の２０％未満のものを、以下の表１１では、太字で示している。

【0423】

すべての変異は、約２２～３３％の同等のトランスフェクション効率を示した（データは示さず）。細胞内の平均抗体結合とＧＦＰレベルとの間に相関関係は認められず、このことは、ＧＦＰレベルが、ＭＳ４Ａ４Ａ細胞表面発現の予測因子として使用できないことを示唆している。

【0424】

（表１１）

^＊ｈｕＩｇＧ１キメラとして試験した抗体。

【0425】

上記の結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＭＳ４Ａ４Ａでの別個の線形、及び／または、３Ｄ構造エピトープを認識することを示唆している。

【0426】

これらの実験から得た抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体結合データに基づいて、ヒトＭＳ４Ａ４Ａでの次のループアミノ酸残基を、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質での構造アミノ酸と見なしたが、これは、それらのそれぞれを変異させると、試験したすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体：Ｍ８７、Ｃ１６５、Ｙ１６７、Ｙ１６８、Ｃ１７４（ヒトＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に基づく；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）の結合に影響を及ぼしたためである。アミノ酸残基Ｃ１６５及びＣ１７４は、ＥＣＬ２にてループを形成するシステイン架橋を確立すると予測された。このシステイン架橋が無いと、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質に対して結合せず、このことは、ＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ２でのループ構造が、抗体結合に重要であることを示唆している。ループ構造が重要であるとのさらなる証拠は、これらの抗体の結合にも強く影響する２つのループ欠失変異体（Ａｌａ．３５、及び、Ａｌａ．３６）から得られる。

【0427】

これらの結果は、アミノ酸残基Ｙ１６７及びＹ１６８が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、４Ａ－１８、４Ｈ２、５Ｃ１２、及び、３Ｆ２の結合に強く影響することをさらに示した。これらのアミノ酸残基は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２の結合には、あまり影響しなかった。加えて、ＥＣＬ１でのアミノ酸残基Ｐ９６、Ｉ９７、及び、Ｓ９８は、試験したすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を、ある程度は低減した。これらの結果は、これらの５つのアミノ酸残基のいずれかの変異が、抗体の認識と結合において重要な細胞外ドメインの構造を変更すること、あるいは、これらのアミノ酸残基が、列挙した６つの抗ＭＳ４Ａ４Ａのそれぞれの相互作用と結合において重要であることを示唆した。プロリンは、最も抑制を受けたアミノ酸残基であり、ポリペプチドの二次、及び、三次構造において重要である。例えば、プロリンは、アルファヘリックスやベータシートのものなど、通常の二次構造要素の中央で攪乱物質として機能する；しかしながら、通常、プロリンは、アルファヘリックスの最初のアミノ酸残基として、かつ、ベータシートの端において認められる。チロシン、イソロイシン、及び、セリン残基は、例えば、ファンデルワールス相互作用、パイ－パイスタッキング、及び、パイ－フェイシアル水素結合相互作用、及び／または、水素結合など、複数の抗原抗体相互作用を提供する。したがって、チロシン、プロリン、イソロイシン、または、セリン残基のいずれかは、明確に定義した構造エピトープを作り出すことができる。これらの４つのアミノ酸残基の微妙な変化は、抗体の結合親和性を著しく損ないかねない。

【0428】

ＭＳ４Ａ４Ａでのアミノ酸残基Ｍ８７Ａの変異は、試験したすべての抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を、大幅に低減または解消した。ＥＣＬ１とＥＣＬ２は、明確に定義した堅牢な構造を使用しており、また、互いに相互作用し得るという予測に基づいて、Ｍ８７Ａ結合結果は、Ｍ８７の側鎖が、主鎖側鎖、及び／または、主鎖－主鎖相互作用を介して、ファンデワールスの接触と水素結合によって、ＥＣＬ１及び／またはＥＣＬ２における１つ以上のベータ分岐アミノ酸と相互作用できるので、Ｍ８７アミノ酸残基が、ＭＳ４Ａ４Ａの堅牢なループ構造を維持する上で最も重要な残基の１つであると予測されることを示した。

【0429】

以下の表１２は、本明細書に開示した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の独特の結合アミノ酸残基を列挙している。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１は、ヒトＭＳ４Ａ４Ａに対して結合するにあたって、ＥＣＬ２にＮ１６６を必要とする。このデータは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８及び５Ｃ１２が、ヒトＭＳ４Ａ４ＡのＥＣＬ１ならびにＥＣＬ２に結合することを示した。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２０２では、アミノ酸残基Ｙ１６４が、結合において多少なりとも寄与した。

【0430】

３つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、すべてＰ１６３に結合するが、ここで開示し、かつ、この研究で試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、いずれも結合しなかった。ヒトＭＳ４Ａ４ＡのこのプロリンＰ１６３は、カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａタンパク質では、アルギニンに置換されている。そのような知見は、このプロリンからアルギニンへの変化が、市販のＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合特性が示すように、カニクイザルの交差反応性、または、その欠如を決定する上で重要であることを示唆している。プロリンは、構造的に最も抑制を受けたアミノ酸残基であり、そして、（カニクイザルＭＳ４Ａ４Ａでの）アルギニンは、生理的ｐＨで、正に帯電したアミノ酸である。ヒトとカニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａにおけるプロリンとアルギニンの差異は、ＭＳ４Ａ４Ａタンパク質の立体配座に大きな影響を与え得るものであり、したがって、市販のＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合を妨げる。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２０２は、結合については、このアミノ酸に依存しておらず、したがって、カニクイザルタンパク質に対する結合には影響が無かったと考えられた。

【0431】

まとめると、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－２１、４Ａ－１８、及び、４Ａ－２０２は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のものとは異なるＭＳ４Ａ４Ａでのエピトープに結合した（下記の表１２）。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ｈ２及び３Ｆ２は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２のエピトープと大半が重複している同一のエピトープを示した。対照的に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８、４Ａ－２１、及び、４Ａ－２０２は、それぞれが、互いに相違しており、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とは異なる独自のエピトープ結合特性を示した。結合特性でのこれらの差異を、表１１に示す。加えて、これらの結果は、試験した２つの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ヒトＭＳ４Ａ４Ａでの同一のエピトープに結合しないことを示した；しかしながら、一部、または、すべての抗体で、アミノ酸結合残基（例えば、アミノ酸残基Ｙ１６７、及び、Ｙ１６８、Ｙ１６４、Ｎ１７０、Ｔ１７７）が共有されている。

【0432】

（表１２）

【0433】

実施例３０：ＴＲＥＭ２発現に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ヒトの遺伝学研究からのデータは、ＭＳ４Ａ４ＡとＴＲＥＭ２との間の強力な遺伝的関連と、アルツハイマー病に対する感受性とを示唆している（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，２０１６、Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１３１：９２５－９３３０。アルツハイマー病の予防のためのＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子は、脳脊髄液でのｓＴＲＥＭ２レベルの増大と関連している。マクロファージでのｓＴＲＥＭ２、及び、原形質膜／細胞表面ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベルを調節する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べるために、以下の研究を行った。

【0434】

初代ヒトマクロファージを、前出の実施例２４に記載のようにして生成した。次いで、単離した細胞を、９６ウェルプレートに播種し、そして、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のパネル（１０μｇ／ｍｌ）を含む完全ＲＰＭＩで処理した。４８時間のインキュベートの後に、上清を回収し、そして、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を使用して、ｓＴＲＥＭ２レベルを測定した。すなわち、ＭＳＤプレート（カタログ番号ＬＩ５ＸＡ－３）のウェルを、オービタルシェーカーで、４℃で、５００ＲＰＭで、一晩、１μｇ／ｍｌの捕捉抗体とインキュベートした。ウェルを洗浄した後に、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、結合緩衝剤（１％熱不活性化高品質ＢＳＡ）を含むＰＢＳ）でブロックした。標準（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｔｒｅｍ２ Ｆｃ １８２８－Ｔ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））、及び、未知の試料を、適切な濃度で、結合緩衝剤で調製し、ウェルに加え、次いで、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、インキュベートした。ウェルを洗浄した後に、オービタルシェーカーで、５００ＲＰＭで、２０℃で、１時間、１００ｎｇ／ｍｌの二次抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号ＢＡＦ１８２８））と、インキュベートした。ウェルを洗浄し、次いで、０．２μｇ／ｍｌの検出試薬（Ｓｕｌｆｏ Ｔａｇ－Ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ；ＭＳＤカタログ番号Ｒ３２ＡＤ）を含む結合緩衝剤でインキュベートした。次いで、ウェルを洗浄し、１５０μｌの読み取り緩衝剤（１ｘ、ＭＳＤ）をそれぞれのウェルに加え、そして、それらのプレートを、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒで読み取った。

【0435】

これとは別に、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞（前出）を回収し、そして、フローサイトメトリーに供して、アロフィコシアニン、または、類似のフルオロフォアにコンジュゲートした抗ＴＲＥＭ２抗体（Ａｌｅｃｔｏｒ）を使用して、ｍＴＲＥＭ２レベルを決定した。

【0436】

表１３に示すように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、様々なドナーから得た培養ヒト初代マクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２のレベルを増大させた。本明細書に記載した結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ヒト初代マクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを増大させるまたは上方制御することを示した。表１３で報告している数値は、１００に設定したアイソタイプコントロール抗体を使用して得た数値に関連するものである。

【0437】

（表１３）

【0438】

以下の表１４に示すように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、様々なドナーから得た培養ヒト初代マクロファージの原形質膜／細胞表面ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）のレベルを増大させた。これらの結果は、上記の表１３に示すように、これらの細胞の上清で認められたｓＴＲＥＭ２の対応する増大と一致していた。表１４で報告している数値は、１００に設定したアイソタイプコントロール抗体を使用して得た数値に関連するものである。

【0439】

（表１４）

【0440】

これらのデータは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体でヒト初代マクロファージを処理することで、骨髄細胞系列でのこれらの細胞におけるｓＴＲＥＭ２及びｍＴＲＥＭ２レベルの双方が増大したことを示した。これらの結果は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２が、培養したヒトマクロファージの上清でのｓＴＲＥＭ２レベルを低減したことを示す従前の報告とは符合しない（Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ、前掲）。遺伝学的研究は、アルツハイマー病患者でのｓＴＲＥＭ２のレベルを増大させるアルツハイマー病保護ＭＳ４Ａ４Ａ対立遺伝子と関連付けているので、これらの結果は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ＴＲＥＭ２活性と機能を調節する（すなわち、増大させる）ことで、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性障害の効果的な治療法であることを示唆した。

【0441】

実施例３１：細胞のＡＴＰレベルに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
細胞内ＡＴＰレベルは、細胞の健康と生存能力とに相関しており、かつ、それらを反映する。骨髄細胞の健康と生存能力の障害は、神経変性の疾患と障害の原因であるため、骨髄細胞の生存能力と機能を向上させる治療は、神経変性の疾患と障害の重症度と進行に対して影響を及ぼし得る。細胞内のＡＴＰレベルに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を調べるために、以下の実験を行った。製造業者のプロトコールに従って、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ ヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び、Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離を使用して、ヒト単球を全血から単離した。ＡＣＫ溶解緩衝剤で赤血球を溶解した後に、単球を、完全培地（ＲＰＭＩ、１０％ ＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｌ－グルタミン、ＨＥＰＥＳ、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム）に再懸濁した。樹状細胞の誘導にあたっては、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＧＭ－ＣＳＦ（ｈｕ－ＧＭＣＳＦ）と、ヒトＩＬ－４（ｈｕ－ＩＬ－４）を、これらの単球に対して、６～７日間かけて加えた。マクロファージについては、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＭ－ＣＳＦと、８％ｖ／ｖのヒト血清を、これらの細胞に対して、５～７日間かけて加えた。

【0442】

次いで、これらの細胞を、５０，０００細胞／ウェルを含む完全ＲＰＭＩ－１６４０で接種し、様々な濃度（１０μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、及び、０．１μｇ／ｍｌ）の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、または、アイソタイプコントロール抗体を含む溶液の存在下または非存在下で、２日間、培養した。次いで、製造業者のプロトコールに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生存能力キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）を使用して、細胞内のＡＴＰ含有量を定量した。表１５Ａ及び１５Ｂに示したデータは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で４８時間処理した後の初代ヒトマクロファージ内のＡＴＰ含有量（任意の単位として）を示しており；数値は、それぞれの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で得た数値からアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）を使用して得た数値を引いて補正する。表１５Ａ及び１５Ｂに示すように、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ヒトマクロファージのＡＴＰレベルを調節しており；その効果は、一般的に、用量依存的であり、試験した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のパネル間で様々な効力が認められた。

【0443】

（表１５Ａ）

【0444】

（表１５Ｂ）

【0445】

上記のように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体でヒト初代マクロファージを処理すると、アイソタイプ抗体で認められたものを超える細胞内ＡＴＰレベルの増大を誘発した。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、骨髄細胞の健康と生存能力を向上させる上で効果的であり、したがって、様々な神経変性の疾患及び障害に関連するＣＮＳ骨髄細胞機能の喪失を逆転または低減できることを示唆した。

【0446】

加えて、前出の実施例３０に示したように、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２、及び、膜ＴＲＥＭ２のレベルを増大させた。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の添加に応答して、生存能力とＡＴＰレベルの増大と共にＴＲＥＭ２が増大することは、ＴＲＥＭ２で認められた増大が、細胞の機能的結果によるものであることを示した。

【0447】

実施例３２：マクロファージ細胞表面マーカーに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
様々なＭ１及びＭ２マクロファージ細胞表面マーカーに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして調べた。ヒト一次マクロファージを、様々な抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（１０μｇ／ｍｌ）を含む完全ＲＰＭＩ１６４０で、４８時間、処理した。次いで、これらの細胞を回収し、そして、Ｍ１マーカー（ＣＤ１６、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ８６）、Ｍ２マーカー（ＣＤ２００Ｒ、デクチン－１、ＣＤ１６３）、及び、汎マクロファージマーカーＣＤ１４に特異的な抗体を使用して、フローサイトメトリーに供した。

【0448】

これらの研究の結果を、以下の表１６Ａ及び表１６Ｂに示す。細胞表面マーカーの発現レベルを、フローサイトメトリーでアッセイし、そして、１００％に設定したアイソタイプコントロール抗体で処理した細胞において得たレベルに正規化した。このデータを、それぞれのマーカーについて、３名のドナーで平均化した。ＣＤ８６やＭＨＣ－ＩＩなどの特定のＭ１マーカーの細胞表面発現は、変更されていなかったか、あるいは、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理の影響をわずかに受けていた。対照的に、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及び、デクチン－１などの特定のＭ２マーカーの細胞表面発現は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理すると顕著な低減を受けた。加えて、ＳＩＲＰα、及び、汎マクロファージマーカーＣＤ１４の細胞表面発現レベルを、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理で低減した。特定の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、ＣＤ１４とＳＩＲＰα、及び、Ｍ１マーカーであるＣＤ２００ＲとＣＤ１６３の細胞表面発現を、市販の抗体３Ｆ２、４Ｈ２、及び、５Ｃ１２と比較して大幅に低減した。

【0449】

まとめると、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、マクロファージ分極に影響を及ぼし、Ｍ２表現型から離間した細胞に影響を及ぼすことを示した。これらの結果は、ＣＮＳにおいて、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体治療が、神経変性の疾患及び障害に関連する神経保護機能を強化、増大、または、回復することで、ミクログリア活性の有益な改善を提供し得ることを示唆した。健康状態での恒常性ミクログリアは、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３、及び、ＣＤ１１５などのＭ２マーカーをさらに発現するので、これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、ミクログリア細胞の生理学的状態の、進行した炎症状態または活性化状態など、より保護的な表現型の状態への変更に影響を及ぼすことを示唆した。アルツハイマー病マウスモデル、及び、ヒトアルツハイマー病における疾患関連ミクログリア（ＤＡＭ）は、炎症誘発性または活性化状態にあり、アルツハイマー病において有益であると考えられており、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、アルツハイマー病、及び、その他の神経変性障害の治療において有用である。

【0450】

（表１６Ａ）

【0451】

（表１６Ｂ）

【0452】

実施例３３：抗体ヒト化
抗体ヒト化は、ヒト投与における免疫原性を防ぐために、異なる種で生成した抗体を形質転換して、配列と構造的関係とをヒト抗体に最もよく似せるために使用する。異種由来の抗体は、非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）のヒト抗体フレームワークへの移植を許容する特徴的な配列と構造的特徴を共有している。これにより、非ヒト抗体の特異性を保持する。ヒト化プロセスには、フレームワーク領域やＳＤＲなど、非ヒト抗体の配列と機能の同定が関与している。次の基準を、抗体をヒト化するために使用する：１）非ヒト抗体と公知のヒト抗体との間のフレームワーク領域の類似性パーセント、２）非ヒト抗体と公知のヒト抗体との間のＳＤＲの長さの類似性、３）当該ヒト抗体のフレームワーク領域を生成するために使用する遺伝子、及び、４）ヒト化、及び、治療目的のヒト抗体フレームワークの従前の使用。同様に、フレームワーク領域とＳＤＲの長さに差異があると、当該抗体において構造上の差異が生じてしまい、当該抗体の特異性を変更させてしまうので、それらは重要である。ヒト抗体のフレームワークを生成するために使用する特定の遺伝子は、抗体の安定性または特異性に関して有益または有害であることが公知であり、そして、それに応じて、選択的に使用または回避する。最後に、ヒトの治療に使用するものを含めて、従前に成功したヒト化のフレームワークは、良好な半減期で十分に許容されており、将来的に成功するヒト化の候補となり得る。

【0453】

抗体ヒト化のために様々な方法を使用することができる。例えば、本開示の抗ＴＭＷＭ１０６Ｂ抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）、及び、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列は、ＮＣＢＩウェブサイト（Ｙｅ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２０１３，４１：Ｗ３４－Ｗ４０）でのＩｇＢＬＡＳＴプログラムへと入力として使用する。ＩｇＢＬＡＳＴは、マウスのＶＨまたはＶＬ配列を取得し、そして、既知のヒト生殖系列配列のライブラリーと比較する。使用するデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ，２７３生殖系列配列）と、ＩＭＧＴヒトＬＶカッパ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４生殖系列配列）である。適切なＶＨ生殖細胞系列と結合領域（Ｊ遺伝子）、及び、適切なＶＬ生殖細胞系列と結合領域（Ｊ遺伝子）を、良好なアクセプター配列として選択する。抗体ＶＨ及びＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＡｂＭ定義（ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア）に従って定義する。ヒト化抗体への結合を最適化するために、対応する親のマウス配列へのヒト生殖系列フレームワーク（すなわち、当該ＶＨ及びＶＬでの非ＣＤＲ残基）位置の変更が必要になり得る。

【0454】

実施例３４：ＴＲＥＭ２転写及びｍＲＮＡに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ＴＲＥＭ２転写レベルとｍＲＮＡに対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果は、以下のようにして評価する。培養細胞を、様々な濃度の本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で、様々な時間をかけて処理する。その後、細胞内のＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡレベルの変化を、当業者に周知のｍＲＮＡレベルを測定、及び／または、定量するための標準的な方法論を使用して決定する。

【0455】

実施例３５：ＴＲＥＭ２の再利用及び分解に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
増大したレベルのｓＴＲＥＭ２及びｍＴＲＥＭ２に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果の理解をさらに深めるために、ＴＲＥＭ２の再利用及び／または分解を調べる以下の研究を行う。これらの研究では、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理に関連する新たなＴＲＥＭ２合成をさらに防ぐために、細胞のシクロヘキシミド処理を使用する。当該技術分野で公知の様々な方法が、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞と比較して、コントロール細胞におけるＴＲＭＥ２の再利用と分解を調べるために利用可能である。

【0456】

実施例３６：ＤＡＰ１２関連のＴＲＥＭ２リン酸化に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ＴＲＥＭ２は、その結合パートナーであるＤＡＰ１２を介してシグナルを送り、ＰＩ３キナーゼの下流の活性化と、その他の細胞内シグナル伝達をもたらす。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体がＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２の活性化を誘導する能力を、タンパク質細胞抽出物でのＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２のリン酸化状態を測定することで、培養マクロファージにおいて調べる。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で刺激する前に、マウスまたはヒトのマクロファージを、１％血清を含む培地で飢餓状態にする。次いで、これらの細胞を、氷上で、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体、または、アイソタイプコントロール抗体とインキュベートする。次いで、これらの細胞を洗浄し、そして、ヤギ抗マウスＩｇＧ、または、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下で、３７℃で、インキュベートする。刺激をした後に、これらの細胞を、溶解緩衝剤で溶解し、次いで、４℃で、遠心分離して、不溶性物質を除去する。細胞溶解物を、抗ＴＲＥＭ２抗体で免疫沈降させる。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分画し、ＰＶＤＦメンブレンに転写し、そして、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブする。次いで、メンブレンを剥がし、そして、抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌｓ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｄ７Ｇ１Ｘ）で改めてプローブする。これらの免疫沈降に使用するそれぞれの細胞溶解物は、コントロールの抗アクチン抗体が示すようなタンパク質を等量で含んでいる。

【0457】

抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体処理に応答したＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２リン酸化の変化と程度を、アイソタイプコントロール抗体で処理した細胞において認められたものと比較する。

【0458】

実施例３７：ＴＲＥＭ２の輸送に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
細胞におけるＴＲＥＭ２の輸送に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして評価する。細胞とは、ＴＲＥＭ２を活性化するために、抗ＴＲＥＭ２抗体で刺激した細胞のことである。当該細胞／ＴＲＥＭ２結合抗ＴＲＥＭ２抗体を、当該細胞のＴＲＥＭ２に結合した標識抗ＴＲＥＭ２抗体のエンドサイトーシスを追跡することでＴＲＥＭ２のエンドサイトーシスを追跡するために標識する。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体を、それらの細胞に加える。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞のＴＲＥＭ２エンドサイトーシスと内在化の変化を、未処理の細胞において認められたものと比較して決定する。これらの研究は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、細胞におけるＴＲＥＭ２内在化の動態を変化または変更できるか否かを試験する。

【0459】

実施例３８：ミエリン分解及びミエリン食作用に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果
ミエリン分解及び食作用に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を、以下のようにして評価する。マクロファージとミクログリアを、標準的な方法で分離する。これらの細胞を、１２ウェルプレートに播種する。ミエリンを、ＰＢＳ（ｐＨ８．０）で、ｐＨ感受性色素（ｐＨ－ローダミン、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と、１時間、インキュベートする。染色したミエリンをペレット化し、ＰＢＳ（ｐＨ８．０）に再懸濁し、そして、マクロファージまたは骨髄細胞に加える。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体とアイソタイプコントロール抗体を、標識ミエリンの添加前または添加後に、細胞に対して加える。その後、ミエリンの取り込みをモニターする。染色したミエリンと細胞とのインキュベーションの後に、細胞を洗浄し、分離し、ペレット化し、そして、内部移行したミエリンを定量するフローサイトメーターに通す。

【0460】

実施例３９：ＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物を安定的にトランスフェクトした細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の機能的親和性
モノクローナル抗体と、それらの抗原性標的との間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、一般的に、精製したタンパク質試薬で決定する。短い細胞外ループを持つ膜貫通型受容体であるＭＳ４Ａ４Ａには、そのような可溶性タンパク質試薬は用いることはできない。この点に対処するために、ヒト及びカニクイザルのＭＳ４Ａ４Ａ発現構築物を安定的にトランスフェクトした細胞に対する抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の結合特性を、フローサイトメトリーで決定した。この手順で得られるＫ_Ｄ値は、「機能的親和性」として公知であり、抗体とその細胞表面結合抗原との間の相互作用が、１：１の相互作用ではないという事実を反映している（Ｄｒａｋｅ ａｎｄ Ｋｌａｋａｍｐ ２００７，ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｊｉｍ．２００６．０８．０１５）。

【0461】

機能的親和性／Ｋ_Ｄの決定は、以下のようにして行った。ＭＳ４Ａ４Ａを発現する構築物を安定的にトランスフェクトした一定数の３００．１９細胞を、非特異的結合に対してブロックし、次いで、飽和結合から抗体不存在にまで至る所定の様々な濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体と、氷上で、３時間、インキュベートすると、当該反応は、ほぼ平衡に到達する。次いで、細胞を洗浄し、次に、フルオロフォア結合二次抗体とインキュベートし、再度洗浄し、そして、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏｓ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅ、ＮＪ）でシグナルを測定した。機能／Ｋ_Ｄを決定するために、可変勾配を有する４つのパラメーターの用量反応曲線を、ＤｒａｋｅとＫｌａｋａｍｐ（前掲）が説明した複数の独立した結合部位モデルに基づいて、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で、データに適合させた。

【0462】

Ｐｒｉｓｍで決定した機能的親和性／Ｋ_Ｄの測定値を、以下の表１７に記載している（４つのパラメーターの用量反応曲線を適合させて決定した；すべての数値は、ナノモルである；ＮＤ、未決定）。抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８及び４Ａ－２０２は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２よりも、かなり強力な機能的親和性を示した。これらの結果は、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２、３Ｆ２、及び、４Ｈ２と比較して、改善した結合特性を有することを示した。

【0463】

（表１７）

【0464】

実施例４０：初代ヒトマクロファージでの生存能力の誘導における抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効力
抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体でヒト初代マクロファージを処理すると、細胞内ＡＴＰレベルの増大を招くこととなり、このことは、本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した細胞における代謝状態の変化と、生存能力の増大を示す。本開示における一部の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効力を決定するために、用量漸増を行った。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体も、このアッセイで効力を試験した。

【0465】

初代ヒトマクロファージを、５０，０００個の細胞／ウェルで、完全ＲＰＭＩ－１６４０に播種し、そして、溶液における所定の濃度の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体またはアイソタイプコントロール抗体の存在下または非存在下で、２日間、培養した。次いで、細胞内のＡＴＰ含有量に及ぶ用量を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光細胞生存能力キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）を使用して、製造業者のプロトコールに従って定量し、そして、細胞生存能力の測定値としての発光を決定した。得られた数値を、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の可変勾配を有する４つのパラメーターの用量反応曲線に当てはめて、最大応答の半分を与える抗体の濃度であるＥＣ５０を決定した。低い値は高い抗体効力に対応する。

【0466】

これらの実験の結果を、以下の表１８に示す。試験した本開示の３つの抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のうちの２つ、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体４Ａ－１８と４Ａ－２０２は、３つの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のいずれか１つと比較して、有意に小さなＥＣ５０（したがって、より大きな効力）を示した。本開示の第３の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（４Ａ－２１）は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体５Ｃ１２に匹敵しており、また、抗ＭＳ４Ａ３４Ａ抗体３Ｆ２及び４Ｈ２よりも強力であるとの結果を示した。

【0467】

（表１８）

【0468】

実施例４１：抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体によるＴＲＥＭ２の調節
ＭＳ４Ａ遺伝子座でのＳＮＰが、ヒトでの可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）レベルに影響を与えること、そして、ヒトマクロファージの培養物を市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理すると、ｓＴＲＥＭ２レベルが低下することが報告されている（Ｐｉｃｃｉｏ ｅｔ．ａｌ．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ ２０１６、１３１：９２５－９３３）。ｓＴＲＥＭ２及び膜結合ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）に対する本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の効果を決定した。

【0469】

ヒト初代マクロファージを、９６ウェルプレートに播種し、そして、完全ＲＰＭＩ培地で１０μｇ／ｍｌに希釈した抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体のパネルで処理した。４８時間のインキュベーションの後に、上清を回収し、そして、ＭＳＤアッセイを使用してｓＴＲＥＭ２レベルを測定した。個別に処理した細胞を回収し、そして、アロフィコシアニンまたは類似のフルオロフォアに結合した独自の抗ＴＲＥＭ２抗体を使用するフローサイトメトリーに供して、ｍＴＲＥＭ２レベルを決定した。当該抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、エンドトキシンレベルを抑えるように調製した。

【0470】

機能研究のための精製キメラ抗体の生成には、以下のプロトコールを使用した。ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列を、ＨＥＫ細胞における発現に向けて最適化した。ＡＬ１０１抗体のＶＨ及びＶＬをコードするヌクレオチド配列は、５’末端に抗体シグナルペプチドをコードする配列を、軽鎖及び重鎖のそれぞれにヒトカッパ定常領域またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を加えることで、電子的に変更した。ＳａｐＩ制限酵素部位を両端に加えて、当該ベクターへのクローニングを可能にした。それらのインサートを構成するＨＣ及びＬＣ ＤＮＡ配列を、Ａｔｕｍ Ｂｉｏ（Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ）で合成し、そして、ｐＭ２６９シャトルベクターに挿入した。当該ＨＣ及びＬＣ ＤＮＡインサートを、Ｅｌｅｃｔｒａクローニングキットを使用して、発現のためにｐＤ２６１０－Ｖ６ベクターにクローニングした。コンピテントＤＨ１０Ｂ大腸菌（Ｍａｘ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ＤＨ１０Ｂ カタログ番号１８２９７０１０）を氷上で解凍した。２ｕｌのライゲーションミックス（約２０ｎｇのプラスミドＤＮＡ）を、３０ｕｌのコンピテントセルに加え、そして、氷上で、３０～４５分間、インキュベートした。次いで、これらの細胞に、３９℃で、４５秒間、熱ショックを与え、そして、氷上に置いた。０．５ｍｌのＳＯＣ培地を加え、そして、これらの細胞を、３７℃で、さらに３０～４５分間インキュベートした。５ｕｌの形質転換混合物を、カナマイシン（ＴＥＫＮＯＶＡ）を含むＬＢ寒天プレートに播種し、そして、３７℃で、一晩増殖させた。個々のコロニーを採取し、そして、ＬＢ＋Ｋａｎで、一晩増殖させた。得られたミニプレップを、Ｑｉａｇｅｎミニ－プレップキットを使用して精製し、そして、配列を確認した。安定的な細胞株の構築に十分なＤＮＡを生成するために、６０ｍＬの大腸菌培養物の適正なコロニーを、２日間培養し、そして、Ｑｉｇｅｎ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ Ｐｒｅｐキットを使用して精製した。

【0471】

ＨＥＫ２９３細胞へのトランスフェクションは、ＥＸＰＩ－２９３トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、１Ｌの震盪フラスコで、２５０ｍｌのスケールで行った。１５０ｕｇの軽鎖ベクターと、１００ｕｇの重鎖ベクターを、フェクチン試薬と共に混合し、そして、２０分間放置した後に、穏やかに混合しながら細胞に対して加えた。これらの細胞を、シェーカーインキュベーターに戻して６時間置き、その後、製造業者の指示に従ってエンハンサー培地を加えた。トランスフェクションの５～６日後に、臨床用遠心分離機で細胞を遠心分離し、Ｎａｌｇｅｎｅ ０．２ｕｍフィルターを使用して無細胞上清を滅菌濾過し、そして、精製まで馴化培地を４℃でストリングして、細胞を回収した。

【0472】

タンパク質を、ガラス、または、ポリプロピレンカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填したプロテインＡマトリックス（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ）を使用して精製した。馴化培地をカラムにロードし、入念に洗浄した後に、アルギニンまたはグリシンを含む溶出緩衝剤勾配で、ｐＨ３．０～３．５で溶出した。溶出した抗体を、中和し、そして、保存用緩衝剤（抗体の溶解度に応じてクエン酸またはヒスチジン）で製剤し、＞１ｍｇ／ｍｌに濃縮してから、滅菌ろ過した。これらの抗体を、出荷前に、ナノドロップ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＳＥＣで試験した。％モノマー含有量が、９５％未満であれば、分取ＳＥＣを行った。一般的に、収量は、発現する抗体ペアに応じて１５～５０ｍｇの抗体の範囲であった。

【0473】

培養上清で測定したｓＴＲＥＭ２のレベルを、以下の表１９に示す。本開示の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体の大半は、高度に精製し、かつ、エンドトキシンを含んでいなければ、様々な程度でｓＴＲＥＭ２レベルの増大を誘発した。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体３Ｆ２、４Ｈ２、及び、５Ｃ１２も、ｓＴＲＥＭ２レベルを増大させるが、低レベルのものでしかない。これらの結果は、これらの市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体が、培養物でのｓＴＲＥＭ２レベルを低減することを示した従前に公開されたデータとは対照的であり；このことは、市販の調製品に存在するエンドトキシン、不純物、及び、凝集物による汚染に起因するものと考えられる。表１９のデータは、アイソタイプコントロール抗体（アイソタイプコントロール由来のデルタ）と比較して、３名のドナーでの平均パーセント変化としてｎｇ／ｍｌで表したｓＴＲＥＭ２のレベルを示している。

【0474】

認められたｓＴＲＥＭ２の増大は、抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体で処理した後の膜結合ＴＲＥＭ２（ｍＴＲＥＭ２）レベルの増大と平行している（以下の表２０）。ドナーの反応性にばらつきがあるにもかかわらず、大部分の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体は、試験した３名のドナーのうちの２名または３名において、ｍＴＲＥＭ２のレベルが増大していた。市販の抗ＭＳ４Ａ４Ａ抗体（３Ｆ２、４Ｈ２、及び、５Ｃ１２）と比較すると、本開示における数多くの抗体は、同等の活性、または、優れた活性を示す。以下の表２０に示すレベルは、フローサイトメトリーによって決定した３名のドナー全体の平均パーセント変化として表しており、また、アイソタイプコントロール抗体（アイソタイプコントロール抗体を１００％に設定した）を使用して認められるレベルに正規化する。

【0475】

（表１９）

【0476】

（表２０）

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4】

【配列表】

0007268038000001.app