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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-05-01
(45)【発行日】2023-05-12
(54)【発明の名称】イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/543 20060101AFI20230502BHJP
【ＦＩ】
G01N33/543 525W
G01N33/543 521
G01N33/543 525U
【請求項の数】
5
(21)【出願番号】P 2019129433
(22)【出願日】2019-07-11
(65)【公開番号】P2021015033
(43)【公開日】2021-02-12
【審査請求日】2022-02-25
(73)【特許権者】
【識別番号】000223045
【氏名又は名称】東洋濾紙株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】000003296
【氏名又は名称】デンカ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110001612
【氏名又は名称】弁理士法人きさらぎ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】中西 利公
(72)【発明者】
【氏名】新田 雅貴
(72)【発明者】
【氏名】内野 斐隆
(72)【発明者】
【氏名】宮澤 恭
(72)【発明者】
【氏名】斎藤 祐司
(72)【発明者】
【氏名】村松 志野
(72)【発明者】
【氏名】桑原 三和
【審査官】白形 優依
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１８－０４８８５０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１８－５１８５４３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１０－２１６９７３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１７－２１７８４０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００５－０３４８３４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１０－１０３４４４（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／４８ － ３３／９８
Ｃ０８Ｊ ９／００ － ９／４２
Ｂ０１Ｄ ７１／２０
Ｂ０８Ｂ １１／００
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法であって、表面にダストを有するイムノクロマトアッセイ用メンブレンを準備し、
前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面に、一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを密着させた後、
前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの前記表面から前記可撓性シートを剥離することにより前記ダストを前記可撓性シートの表面に移動させて、前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの前記表面の均一性を高めることを特徴とするイムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法。
【請求項2】
前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンは、セルロースエステル製であることを特徴とする請求項１に記載の表面処理方法。
【請求項3】
前記可撓性シートは、圧着または加熱圧着により前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面に密着させることを特徴とする請求項１又は２に記載の表面処理方法。
【請求項4】
前記可撓性シートが粘着テープであり、その粘着力は、１．０Ｎ/２４ｍｍ以上であることを特徴とする請求項１～３のいずれか１項に記載の表面処理方法。
【請求項5】
前記可撓性シートがラミネートフィルムであり、加熱圧着処理の加熱温度が７０～１２０℃であることを特徴とする請求項３に記載の表面処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法に関する。
【背景技術】
【0002】
抗原抗体反応を利用した簡易な免疫測定として、イムノクロマトアッセイ法が広く普及している。イムノクロマトアッセイ法は、操作が簡便であり、短時間で測定可能であることから、特に妊娠診断やインフルエンザの感染確認など速報性を要する場合の臨床検査や診断に広く用いられている（例えば、非特許文献１）。
【0003】
イムノクロマトアッセイ法には、一般的に硝酸セルロースや酢酸セルロースといったセルロースエステルからなる多孔性メンブレンが使用されている。しかし、このようなメンブレンを製造する際のメンブレン形成プロセスにおいては、粒子状の不純物としてセルロースエステルからなるダストも同時に形成され、これらダストはメンブレン上面側に存在することが知られている。イムノクロマトアッセイ法では、検体は毛管現象によりメンブレン中を移動するので、メンブレン中におけるダストの存在は、試験の性能などに影響を及ぼすおそれがある。さらに、検査キットの製造における製造工程の汚染を引き起こす可能性があり、このようなダストをメンブレン中から除去することが課題となっている。
【0004】
この課題に対して、支持体上にセルロースエステルポリマー溶液をキャストした後、メンブレン表面を洗浄液ですすぎながら機械的なブラッシングによって、メンブレン中のダストを除去することを提案している（例えば、特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【文献】米国特許第７８０７４７５号公報
【非特許文献】
【0006】
【文献】小山由利子、杉田慶、「イムノクロマトグラフィーを用いたタンパク質の検出法」、ぶんせき、１７０（２０１８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
特許文献１に記載されているように乾燥前のキャスト膜の表面をブラッシングすることで、セルロースエステル粒子とともに不純物もメンブレンから除去することができる。しかしながら、膜中の界面活性剤の量が減少して、親水特性に悪影響を与えることが指摘された。界面活性剤の損失を追加の工程により補償しようとした場合には、製造コストが増加するのに加え、最終製品としてのメンブレンの品質のばらつきに影響を及ぼすおそれがある。
【0008】
そこで本発明は、何ら不都合を伴わずに、イムノクロマトアッセイ用メンブレンからダストを除去する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0009】
以上の目的を達成するため、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、特定の表面を有する可撓性シートを用いてイムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面を処理することにより、表面のダストの量を低減して、さらにメンブレンの表面の均一性を高めることができることを見出した。すなわち、本発明は、イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面処理方法であって、前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの表面に、一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを密着させた後、前記イムノクロマトアッセイ用メンブレンの前記表面から前記可撓性シートを剥離することを特徴とする表面処理方法である。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、何ら不都合を伴わずに、イムノクロマトアッセイ用メンブレンからダストを除去することができ、さらにメンブレンの表面の均一性を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理の前後のメンブレンのイムノクロマト測定結果を示す写真であり、図１（ａ）は、実施例１～９、比較例１の陽性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真であり、図１（ｂ）は、実施例１～９、比較例１の陰性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真である。
【図2】一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理の前後のメンブレンのイムノクロマト測定結果を示す、陽性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真であり、図２（ａ）は、実施例１２～１４、比較例１の写真、図２（ｂ）は、実施例１０，１５～１８及び比較例２の写真、図２（ｃ）は、実施例１１，１９～２２、比較例３の写真である。
【図3】一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理の前後のメンブレンのイムノクロマト測定結果を示す、陰性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真であり、図３（ａ）は、実施例１２～１４、比較例１の写真、図３（ｂ）は、実施例１０，１５～１８、比較例２の写真、図３（ｃ）は、実施例１１，１９～２２、比較例３の写真である。
【図4】一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理の前後のサンプル１のＳＥＭ写真であり、図４（ａ）は、実施例３の表面処理後の写真、図４（ｂ）は、実施例９の表面処理後の写真、図４（ｃ）は、比較例１（未処理）の写真である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
本発明に係る方法で表面処理されるイムノクロマトアッセイ用メンブレン（以下、単にメンブレンとも称する）は、タンパク質を吸着するセルロースエステル製である。このようなメンブレンとしては、具体的には、東洋濾紙（株）製のイムノクロマト用メンブレンが挙げられる。
【0013】
メンブレンは多孔質体であり、表面にニトロセルロースのダストが付着していることが多い。ニトロセルロースのダストは、メンブレンの微細孔の中に存在していることもある。本発明においては、所定の可撓性シートでメンブレンの表面を処理して、ニトロセルロースの粉を低減することができた。さらには、メンブレンの表面の均一性を高めることが可能となった。
【0014】
メンブレンは、表面処理に先立って裏面をプラスチック支持体に固定することが好ましい。プラスチック支持体としては、メンブレンを載置できる十分な大きさを有し、それ自体が固定できるものが挙げられる。プラスチック支持体の材質は特に限定されず、例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製の支持体を用いることができる。
【0015】
メンブレンは、両面テープによって裏面をプラスチック支持体に固定してもよい。また、セルロースエステルを有機溶媒に溶解させた溶液（ドープ）を用いて、メンブレンをプラスチック支持体に固定することもできる。この場合には、プラスチック支持体の表面に溶液をコーティングし、溶媒を蒸発させることで、プラスチック支持体上にメンブレンが固定される。
【0016】
プラスチック支持体に固定されたメンブレンの表面には、一面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを密着させる。具体的には、可撓性シートとしては、粘着テープ及びラミネートフィルムが挙げられる。可撓性シートは、メンブレンの表面を完全に覆う大きさであることが好ましい。
【0017】
粘着テープは、基材に粘着剤が塗布された粘着面を有している。粘着テープに用いるプラスチックシートや不織布の材質は、例えばポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル及び再生セルロース等から選択することができる。粘着テープの適切な粘着剤としては、例えば、ゴム系粘着剤、アクリル系粘着剤、シリコーン系粘着剤、ウレタン系粘着剤等が挙げられる。
【0018】
ラミネートフィルムは、基材に熱接着性の接着剤が塗布された接着面を有している。ラミネートフィルムに用いるプラスチックシートの材質は、例えばポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、及びポリエステル等から選択することができる。ラミネートフィルムの適切な接着剤としては、例えば、エチレン・酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）、エチレン・アクリル酸エチル共重合体（ＥＥＡ）、エチレン・アクリル酸共重合体（ＥＡＡ）、エチレン・メタクリル酸共重合体（ＥＭＡＡ）、ポリエチレン（ＰＥ）、アイオノマーポリエチレン等またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【0019】
（粘着テープを用いた表面処理）
粘着テープの粘着剤が塗布された粘着面をメンブレンの表面に載せ、ニップロールを用いてメンブレンと粘着テープとを圧着する。その後、メンブレンの表面から粘着テープを剥離する。粘着テープは、均一な速度で剥離することが好ましい。
粘着テープの粘着剤が塗布された粘着面をメンブレンの表面に載せ、ニップロールを用いてメンブレンと粘着テープとを圧着する。その後、メンブレンの表面から粘着テープを剥離する。粘着テープは、均一な速度で剥離することが好ましい。
【0020】
粘着テープの粘着力は、一般的には１～２０Ｎ／２４ｍｍ程度である。粘着力により密着している粘着テープをメンブレンの表面から剥離することで、ニトロセルロースのダストがメンブレンの表面から粘着テープの粘着面に移動する。さらに、メンブレンの微細孔内部に存在しているニトロセルロースのダストも、粘着テープに移動することができる。メンブレンにおけるニトロセルロースのダストの量が減少して、さらにはメンブレンの表面の均一性が高められる。
【0021】
（ラミネートフィルムを用いた表面処理）
ラミネートフィルムを用いる場合には、ラミネートフィルムの接着剤が塗布された接着面をメンブレンの表面に載せ、加熱ニップロールを用いて７０～１２０℃、好ましくは８０～１１０℃でメンブレンとラミネートフィルムとを加熱圧着する。その後、メンブレンの表面からラミネートフィルムを剥離する。ラミネートフィルムは、均一な速度で剥離することが好ましい。
ラミネートフィルムを用いる場合には、ラミネートフィルムの接着剤が塗布された接着面をメンブレンの表面に載せ、加熱ニップロールを用いて７０～１２０℃、好ましくは８０～１１０℃でメンブレンとラミネートフィルムとを加熱圧着する。その後、メンブレンの表面からラミネートフィルムを剥離する。ラミネートフィルムは、均一な速度で剥離することが好ましい。
【0022】
粘着テープと同様、ラミネートフィルムを用いる場合も、メンブレンの表面から剥離することでニトロセルロースのダストがメンブレンの表面からラミネートフィルムの接着面に移動する。メンブレンの微細孔内部に存在しているニトロセルロースのダストも、ラミネートフィルムに移動することができる。メンブレンにおけるニトロセルロースのダストの量が減少して、さらにはメンブレンの表面の均一性が高められる。
【0023】
本発明の方法では、粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートをメンブレンに密着させた後、可撓性シートを剥離するという簡便な操作でメンブレンの表面処理が行われる。本発明の方法により、何ら不都合を伴わずにメンブレン中のダストを除去することができ、さらにはメンブレンの表面の均一性を高めることができる。
【0024】
処理されるメンブレンは、ニトロセルロース製で多孔質体であるので、温度及び湿度といった環境の影響を受ける場合がある。温度や湿度は、可撓性シートの性能にも影響を及ぼす。メンブレンの表面から可撓性シートへのニトロセルロースの粉の移動を妨げないために、本発明の表面処理は、温度５～３５℃程度、相対湿度４５～８５％程度の環境で行うことが望まれる。
【実施例】
【0025】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが、これらは本発明の目的を限定するものではなく、また、本発明は、これら実施例に限定されるものではない。実施例において示されるメンブレンの製造方法および試験方法は、以下の通りである。
【0026】
１．メンブレンの製造
まず、表面処理の対象となるイムノクロマトアッセイ用メンブレンを、以下の手法により製造した。
具体的には、ニトロセルロース樹脂４．６質量％、酢酸セルロース樹脂０．２質量％、アセトン４３．７質量％、プロパノール４６．２質量％、イソプロピルアルコール２．０質量％、及び水３．４質量％をタンクに収容し、攪拌して均一な製膜溶液とした。その後、湿度を５５％に調節した雰囲気中にて、製膜溶液を３３℃に加熱した支持体（ポリエステルフィルム）上に流延し、溶媒を蒸発させて製膜溶液を凝固させた。その後、乾燥させてメンブレンを得た。
得られたメンブレンにドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを添加して、サンプル１とした。サンプル１から幅１０ｍｍ、長さ５０ｍｍの試験片を切り出し、試験片の長さ方向の一方の端から水を吸い上げた。その結果、４０ｍｍの高さまで水が吸い上がる時間は、１０９秒であった。
まず、表面処理の対象となるイムノクロマトアッセイ用メンブレンを、以下の手法により製造した。
具体的には、ニトロセルロース樹脂４．６質量％、酢酸セルロース樹脂０．２質量％、アセトン４３．７質量％、プロパノール４６．２質量％、イソプロピルアルコール２．０質量％、及び水３．４質量％をタンクに収容し、攪拌して均一な製膜溶液とした。その後、湿度を５５％に調節した雰囲気中にて、製膜溶液を３３℃に加熱した支持体（ポリエステルフィルム）上に流延し、溶媒を蒸発させて製膜溶液を凝固させた。その後、乾燥させてメンブレンを得た。
得られたメンブレンにドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを添加して、サンプル１とした。サンプル１から幅１０ｍｍ、長さ５０ｍｍの試験片を切り出し、試験片の長さ方向の一方の端から水を吸い上げた。その結果、４０ｍｍの高さまで水が吸い上がる時間は、１０９秒であった。
【0027】
さらに、ニトロセルロース樹脂４．２質量％、酢酸セルロース樹脂０．１質量％、アセトン４２．７質量％、プロパノール４５．２質量％、イソプロピルアルコール７．３質量％、及び水６．１質量％をタンクに収容し、攪拌して均一な製膜溶液とした。その後、サンプル１と同様の方法で作製して、サンプル２を得た。サンプル２から幅１０ｍｍ、長さ５０ｍｍの試験片を切り出し、試験片の長さ方向の一方の端から水を吸い上げた。その結果、４０ｍｍの高さまで水が吸い上がる時間は、７２秒であった。
【0028】
またさらに、ニトロセルロース樹脂４．７質量％、酢酸セルロース樹脂０．２質量％、アセトン４４．３質量％、プロパノール４６．８質量％、イソプロピルアルコール７．３質量％、及び水２．０質量％をタンクに収容し、攪拌して均一な製膜溶液とした。その後、湿度を５５％に調節した雰囲気中にて、製膜溶液を３５℃に加熱した支持体であるポリエステルフィルム上に流延した。これ以外は上述と同様の方法でサンプル３を得た。サンプル２から幅１０ｍｍ、長さ５０ｍｍの試験片を切り出し、試験片の長さ方向の一方の端から水を吸い上げた。その結果、４０ｍｍの高さまで水が吸い上がる時間は、１８０秒であった。
【0029】
２．ダストの量の変化
本発明の方法でメンブレンの表面を処理することによって、メンブレンにおけるセルロースエステルのダストの量が減少する。ダストの量の減少は、以下の手法により間接的に確認することができる。具体的には、表面処理前後のメンブレンから得られた抽出液の吸光度を測定し、吸光度の変化から、メンブレンにおけるニトロセルロースのダストの量の変化を求めることができる。
本発明の方法でメンブレンの表面を処理することによって、メンブレンにおけるセルロースエステルのダストの量が減少する。ダストの量の減少は、以下の手法により間接的に確認することができる。具体的には、表面処理前後のメンブレンから得られた抽出液の吸光度を測定し、吸光度の変化から、メンブレンにおけるニトロセルロースのダストの量の変化を求めることができる。
【0030】
まず、メンブレンの試験片（５ｍｍ×４０ｍｍ）を６枚準備する。表面処理前の試験片を試験管に収容し、０．０５％のドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（ＳＤＢＳ）を５ｍＬ加える。ボルテックスミキサーで２０秒攪拌して抽出液を得、その吸光度（５６０ｎｍ）を分光光度計により測定する。
表面処理後のメンブレンについても、同様の試験片として抽出液を得、同様に吸光度を測定し、以下の式によりダスト変化率を算出する。
表面処理後のメンブレンについても、同様の試験片として抽出液を得、同様に吸光度を測定し、以下の式によりダスト変化率を算出する。
【0031】
【数1】
【0032】
３．粘着テープの粘着力の測定
粘着テープの粘着力は、ＪＩＳ Ｚ０２３７「粘着テープ・粘着シート試験方法」に準じて、試験板に対する１８０°引きはがし粘着力として測定した。具体的には、ＳＵＳ３０４の試験板に２４ｍｍ幅の粘着テープを質量２ｋｇの圧着ローラーを用いて貼り付け、粘着テープの一端を万能試験機（（株）島津製作所製ＡＧＳ－Ｈ）のチャックに固定した。試験機を３００ｍｍ／ｍｉｎの速度で運転することで試験板から粘着テープを引きはがし、運転開始から２５ｍｍ変位した地点から５０ｍｍ引きはがされた範囲の試験力の平均を粘着力（Ｎ／２４ｍｍ）とした。
粘着テープの粘着力は、ＪＩＳ Ｚ０２３７「粘着テープ・粘着シート試験方法」に準じて、試験板に対する１８０°引きはがし粘着力として測定した。具体的には、ＳＵＳ３０４の試験板に２４ｍｍ幅の粘着テープを質量２ｋｇの圧着ローラーを用いて貼り付け、粘着テープの一端を万能試験機（（株）島津製作所製ＡＧＳ－Ｈ）のチャックに固定した。試験機を３００ｍｍ／ｍｉｎの速度で運転することで試験板から粘着テープを引きはがし、運転開始から２５ｍｍ変位した地点から５０ｍｍ引きはがされた範囲の試験力の平均を粘着力（Ｎ／２４ｍｍ）とした。
【0033】
４．イムノクロマト測定
イムノクロマト測定は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を被検出物質として測定する系で、メンブレンに吸収パッドを組み付け、標識抗体とｈＣＧの混合溶液を展開するハーフストリップ法で行った。
イムノクロマト測定は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を被検出物質として測定する系で、メンブレンに吸収パッドを組み付け、標識抗体とｈＣＧの混合溶液を展開するハーフストリップ法で行った。
【0034】
（１）クロマト媒体上への検出ライン、コントロールラインの作製
イムノクロマト測定用の媒体として、１００μｍの厚さのポリエステル製シートで裏打ちし前記の方法で作製したセルロースエステルメンブレンを用いた。このメンブレンに、ｈＣＧ認識抗体をキャプチャー抗体として固定した検出ライン、標識抗体であるマウスＩｇＧの認識抗体を固定化したコントロールラインを設置した。
ア．テストライン用抗体溶液
抗ｈＣＧ抗体を、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で希釈して、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度のテストライン用の抗体溶液とした。
イ．コントロールライン用抗体溶液
ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で（ｐＨ７．０）で０．５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、コントロールライン用の抗体溶液とした。
ウ．クロマト媒体へのスポッティング
上記ア．イ．の抗体溶液を、ＢｉｏＤｏｔ社製イムノクロマト分注システムＸＹＺ３０６０を用いてクロマトグラフ媒体であるセルロースエステルメンブレンに抗体溶液を塗布し、５０℃で３０分間乾燥させた。
エ．ブロッキング処理
上記ウのメンブレンに、０．３質量％のホウ酸、０．０９５質量％のアジ化ナトリウムを含む０．５質量％のカゼイン溶液（ｐＨ８．５）を含浸させ、５０℃で３０分間乾燥させた。
オ．洗浄処理
上記エのメンブレンを、０．５質量％のスクロース、０．０１％のドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを含む５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）に室温で３０分浸漬し、取り出して５０℃で３０分間乾燥させた。
イムノクロマト測定用の媒体として、１００μｍの厚さのポリエステル製シートで裏打ちし前記の方法で作製したセルロースエステルメンブレンを用いた。このメンブレンに、ｈＣＧ認識抗体をキャプチャー抗体として固定した検出ライン、標識抗体であるマウスＩｇＧの認識抗体を固定化したコントロールラインを設置した。
ア．テストライン用抗体溶液
抗ｈＣＧ抗体を、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で希釈して、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度のテストライン用の抗体溶液とした。
イ．コントロールライン用抗体溶液
ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で（ｐＨ７．０）で０．５ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、コントロールライン用の抗体溶液とした。
ウ．クロマト媒体へのスポッティング
上記ア．イ．の抗体溶液を、ＢｉｏＤｏｔ社製イムノクロマト分注システムＸＹＺ３０６０を用いてクロマトグラフ媒体であるセルロースエステルメンブレンに抗体溶液を塗布し、５０℃で３０分間乾燥させた。
エ．ブロッキング処理
上記ウのメンブレンに、０．３質量％のホウ酸、０．０９５質量％のアジ化ナトリウムを含む０．５質量％のカゼイン溶液（ｐＨ８．５）を含浸させ、５０℃で３０分間乾燥させた。
オ．洗浄処理
上記エのメンブレンを、０．５質量％のスクロース、０．０１％のドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムを含む５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）に室温で３０分浸漬し、取り出して５０℃で３０分間乾燥させた。
【0035】
（２）標識抗体溶液の作製
金コロイド液（ＢＢＩ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ製：ＥＭＧＣ４０）９ｍＬに、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を１ｍＬ加えて撹拌し、ｈＣＧ認識抗体５０μｇ／ｍＬ溶液１．１ｍＬを加えて撹拌し、室温で１０分放置した。更に１質量％のポリエチレングリコール（平均分子量２００００）０．５ｍＬ、１０質量％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えて撹拌した。
金コロイド液（ＢＢＩ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ製：ＥＭＧＣ４０）９ｍＬに、５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を１ｍＬ加えて撹拌し、ｈＣＧ認識抗体５０μｇ／ｍＬ溶液１．１ｍＬを加えて撹拌し、室温で１０分放置した。更に１質量％のポリエチレングリコール（平均分子量２００００）０．５ｍＬ、１０質量％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えて撹拌した。
【0036】
その後、７５００×ｇで１５分間遠心分離を行い、上清を除去して１ｍＬを残し、１質量％のＢＳＡ、０．０５質量％のポリエチレングリコール（平均分子量２００００）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０９５質量％のアジ化ナトリウムを含む２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．２）２０ｍＬを加え撹拌した。
次いで、７５００×ｇで１５分間遠心分離を行った。上清を除去して１ｍＬを残し、５２０ｎｍにおける吸光度が６．０になるように１質量％のＢＳＡ、０．０５質量％のポリエチレングリコール（平均分子量２００００）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０９５質量％のアジ化ナトリウムを含む２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．２）を加え撹拌し、標識抗体溶液を作製した。
次いで、７５００×ｇで１５分間遠心分離を行った。上清を除去して１ｍＬを残し、５２０ｎｍにおける吸光度が６．０になるように１質量％のＢＳＡ、０．０５質量％のポリエチレングリコール（平均分子量２００００）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０９５質量％のアジ化ナトリウムを含む２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．２）を加え撹拌し、標識抗体溶液を作製した。
【0037】
（３）被検出物質の調製
ｈＣＧ試薬（標準物質）を、１質量％ＢＳＡを含むＰＢＳに溶解し、５０ｍＩＵ／ｍＬになるように希釈し、これを陽性検体とした。またｈＣＧ試薬を添加しない１質量％ＢＳＡを含むＰＢＳを陰性検体とした。
ｈＣＧ試薬（標準物質）を、１質量％ＢＳＡを含むＰＢＳに溶解し、５０ｍＩＵ／ｍＬになるように希釈し、これを陽性検体とした。またｈＣＧ試薬を添加しない１質量％ＢＳＡを含むＰＢＳを陰性検体とした。
【0038】
（４）イムノクロマト測定条件
バッキングシートに、上記（１）で作製したイムノクロマト測定用の媒体と吸収パッド（東洋濾紙株式会社製濾紙 Ｎｏ．５９０）を貼り付け、カッターで５ｍｍ幅にカットした試験ストリップを使用して、ハーフストリップ法によるイムノクロマトグラフィー測定を行った。
上記（２）の標識抗体溶液５μＬと上記（３）の被験物質溶液１００μＬとを混合し、混合溶液を試験ストリップのメンブレン下端から吸い上げた。吸い上げ開始から１０分後、２０分後の試験ストリップに出現した検出ラインとコントロールラインの金コロイドの赤い発色を、イムノクロマトリーダーを用いて測定し、発色強度を測定した。
バッキングシートに、上記（１）で作製したイムノクロマト測定用の媒体と吸収パッド（東洋濾紙株式会社製濾紙 Ｎｏ．５９０）を貼り付け、カッターで５ｍｍ幅にカットした試験ストリップを使用して、ハーフストリップ法によるイムノクロマトグラフィー測定を行った。
上記（２）の標識抗体溶液５μＬと上記（３）の被験物質溶液１００μＬとを混合し、混合溶液を試験ストリップのメンブレン下端から吸い上げた。吸い上げ開始から１０分後、２０分後の試験ストリップに出現した検出ラインとコントロールラインの金コロイドの赤い発色を、イムノクロマトリーダーを用いて測定し、発色強度を測定した。
【0039】
５．表面処理
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いて、サンプル１のメンブレンの表面処理を行った、その結果を以下に示す。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いて、サンプル１のメンブレンの表面処理を行った、その結果を以下に示す。
【0040】
（実施例１）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 スコッチ（登録商標）はってはがせるテープ８１１）を用いて、上述した手法によりサンプル１の表面処理を行った。ニップロールの線圧は、０．５ｋｇｆ／ｃｍとした。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は０．６Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 スコッチ（登録商標）はってはがせるテープ８１１）を用いて、上述した手法によりサンプル１の表面処理を行った。ニップロールの線圧は、０．５ｋｇｆ／ｃｍとした。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は０．６Ｎ／２４ｍｍであった。
【0041】
（実施例２）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（トラスコ中山株式会社製 表面保護テープＴＳＰ－５Ｂ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は１．３Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（トラスコ中山株式会社製 表面保護テープＴＳＰ－５Ｂ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は１．３Ｎ／２４ｍｍであった。
【0042】
（実施例３）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（日東電工株式会社製 金属板用表面保護フィルムＳＰＶ－Ｍ－６０３０）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は２．０Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（日東電工株式会社製 金属板用表面保護フィルムＳＰＶ－Ｍ－６０３０）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は２．０Ｎ／２４ｍｍであった。
【0043】
（実施例４）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 スコッチ（登録商標）ＰＴＦＥテープ５４９０）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はシリコーン系粘着剤であり、粘着力は５．４Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 スコッチ（登録商標）ＰＴＦＥテープ５４９０）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はシリコーン系粘着剤であり、粘着力は５．４Ｎ／２４ｍｍであった。
【0044】
（実施例５）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（ニチバン株式会社製 セロテープ（登録商標）Ｎｏ.４０５）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は１０．５Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（ニチバン株式会社製 セロテープ（登録商標）Ｎｏ.４０５）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は１０．５Ｎ／２４ｍｍであった。
【0045】
（実施例６）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 キズからまもる透明保護テープ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は１５．４Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（３Ｍ社製 キズからまもる透明保護テープ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はアクリル系粘着剤であり、粘着力は１５．４Ｎ／２４ｍｍであった。
【0046】
（実施例７）
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（日東電工株式会社製 屋内平滑床面用ラインテープＥ－ＳＤ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は１９．７Ｎ／２４ｍｍであった。
一方の面に粘着剤が塗布された可撓性シートとして粘着テープ（日東電工株式会社製 屋内平滑床面用ラインテープＥ－ＳＤ）を用いて、サンプル１に実施例１と同様の表面処理を行った。この粘着テープの粘着剤はゴム系粘着剤であり、粘着力は１９．７Ｎ／２４ｍｍであった。
【0047】
（実施例８）
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、ＰＥＴ基材のラミネートフィルムを用いて、上述した手法によりサンプル１の表面処理を行った。ニップロールの線圧は０．５ｋｇｆ／ｃｍとし、ラミネートフィルム側のニップロールを９１℃に加熱した。このラミネートフィルムの接着剤はＰＥ＋ＥＶＡであった。
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、ＰＥＴ基材のラミネートフィルムを用いて、上述した手法によりサンプル１の表面処理を行った。ニップロールの線圧は０．５ｋｇｆ／ｃｍとし、ラミネートフィルム側のニップロールを９１℃に加熱した。このラミネートフィルムの接着剤はＰＥ＋ＥＶＡであった。
【0048】
（実施例９）
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、ＰＥＴ基材のラミネートフィルムを用いて、サンプル１に実施例８と同様の表面処理を行った。このラミネートフィルムの接着剤はＰＥ＋ＥＥＡであった。
一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートとして、ＰＥＴ基材のラミネートフィルムを用いて、サンプル１に実施例８と同様の表面処理を行った。このラミネートフィルムの接着剤はＰＥ＋ＥＥＡであった。
【0049】
（比較例１）
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル１のメンブレンである。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル１のメンブレンである。
【0050】
実施例１～９、比較例１のダスト変化率及びイムノクロマト測定の結果を、表１及び表２にまとめる。さらに、実施例１～９及び比較例１について、陽性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真を図１（ａ）に示し、陰性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真を図１（ｂ）に示す。
いずれの実施例においても、比較例１に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、いずれの実施例も、比較例１に比べて発色強度の大きな低下は見られず、表面処理によりイムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
いずれの実施例においても、比較例１に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、いずれの実施例も、比較例１に比べて発色強度の大きな低下は見られず、表面処理によりイムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
【0051】
【表1】
【0052】
【表2】
【0053】
異なる製造条件で製造したサンプル１～３に、一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートを用いて表面処理を行った、その結果を以下に示す。
【0054】
（実施例１０）
実施例３と同様の表面処理を、サンプル２に行った。
実施例３と同様の表面処理を、サンプル２に行った。
【0055】
（実施例１１）
実施例３と同様の表面処理を、サンプル３に行った。
実施例３と同様の表面処理を、サンプル３に行った。
【0056】
（実施例１２）
ニップロールの温度を７１℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
ニップロールの温度を７１℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
【0057】
（実施例１３）
ニップロールの温度を８２℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
ニップロールの温度を８２℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
【0058】
（実施例１４）
ニップロールの温度を１０３℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
ニップロールの温度を１０３℃に変更した以外は実施例９と同様の表面処理を、サンプル１に行った。
【0059】
（実施例１５）
サンプル２に実施例１２と同様の表面処理を行った。
サンプル２に実施例１２と同様の表面処理を行った。
【0060】
（実施例１６）
サンプル２に実施例１３と同様の表面処理を行った。
サンプル２に実施例１３と同様の表面処理を行った。
【0061】
（実施例１７）
サンプル２に実施例９と同様の表面処理を行った。
サンプル２に実施例９と同様の表面処理を行った。
【0062】
（実施例１８）
サンプル２に実施例１４と同様の表面処理を行った。
サンプル２に実施例１４と同様の表面処理を行った。
【0063】
（実施例１９）
サンプル３に実施例１２と同様の表面処理を行った。
サンプル３に実施例１２と同様の表面処理を行った。
【0064】
（実施例２０）
サンプル３に実施例１３と同様の表面処理を行った。
サンプル３に実施例１３と同様の表面処理を行った。
【0065】
（実施例２１）
サンプル３に実施例９と同様の表面処理を行った。
サンプル３に実施例９と同様の表面処理を行った。
【0066】
（実施例２２）
サンプル３に実施例１４と同様の表面処理を行った。
サンプル３に実施例１４と同様の表面処理を行った。
【0067】
（比較例２）
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル２のメンブレンである。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル２のメンブレンである。
【0068】
（比較例３）
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル３のメンブレンである。
一方の面に粘着剤又は接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理をしない、サンプル３のメンブレンである。
【0069】
実施例１０～２２、比較例２～３のダスト変化率及びイムノクロマト測定の結果を、表３～５にまとめる。さらに、実施例１０～２２、比較例２～３について、陽性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真を図２（ａ）～２（ｃ）に示し、陰性検体の検液全量吸い上げ、乾燥後の写真を図３（ａ）～３（ｃ）に示す。
いずれの実施例においても、比較例に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、サンプル２を用いた実施例は、比較例２を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。また、サンプル３を用いた実施例は、比較例３を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。異なる製造条件で製造したセルロースエステルメンブレンサンプルにおいても、一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理により、イムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
いずれの実施例においても、比較例に比べてダストの量は減少した。イムノクロマト測定の結果、サンプル２を用いた実施例は、比較例２を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。また、サンプル３を用いた実施例は、比較例３を比べて発色強度の大きな低下は見られなかった。異なる製造条件で製造したセルロースエステルメンブレンサンプルにおいても、一方の面に接着剤が塗布された可撓性シートを用いた表面処理により、イムノクロマト測定に何ら不都合を与えることはない。
【0070】
【表3】
【0071】
【表4】
【0072】
【表5】
【0073】
粘着テープまたはラミネートフィルムを用いて表面処理をしたサンプル１および未処理のサンプル１の表面ＳＥＭ写真を図４に示した。図４（ａ）及び図４（ｂ）は、それぞれ実施例３及び実施例９で表面処理を行ったサンプル１の表面写真であり、図４（ｃ）は比較例１（未処理）のサンプル１の表面写真である。
【0074】
粘着テープまたはラミネートフィルムを用いて表面処理をしたサンプル２および未処理のサンプル２の表面ＳＥＭ写真を図５に示した。図５（ａ）及び図５（ｂ）は、それぞれ実施例１０及び実施例１７で表面処理を行ったサンプル２の表面写真であり、図５（ｃ）は比較例２（未処理）のサンプル２の表面写真である。
【0075】
粘着テープまたはラミネートフィルムを用いて表面処理をしたサンプル３および未処理のサンプル３の表面ＳＥＭ写真を図６に示した。図６（ａ）及び図６（ｂ）は、それぞれ実施例１１及び実施例２１で表面処理を行ったサンプル３の表面写真であり、図６（ｃ）は比較例３（未処理品）のサンプル３の表面写真である。
【0076】
いずれのメンブレンサンプルも、粘着テープ、ラミネートフィルムを用いた処理によって表面の均一性が向上することが示されている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
