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特許7272714抗薬剤耐性菌活性を有するプレウロムリンレインエステルおよびその調製方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-05-01
(45)【発行日】2023-05-12
(54)【発明の名称】抗薬剤耐性菌活性を有するプレウロムリンレインエステルおよびその調製方法
(51)【国際特許分類】
C07C 69/94 20060101AFI20230502BHJP
C07C 67/14 20060101ALI20230502BHJP
C07C 67/56 20060101ALI20230502BHJP
A61K 31/235 20060101ALI20230502BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20230502BHJP
C07B 61/00 20060101ALN20230502BHJP
【ＦＩ】
C07C69/94 CSP
C07C67/14
C07C67/56
A61K31/235
A61P31/04
C07B61/00 300
【請求項の数】
4
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2022029312
(22)【出願日】2022-02-28
(65)【公開番号】P2022162967
(43)【公開日】2022-10-25
【審査請求日】2022-03-31
(31)【優先権主張番号】202110391549.8
(32)【優先日】2021-04-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(73)【特許権者】
【識別番号】521378163
【氏名又は名称】シーアン・カンユアンシェン・バイオメディカル・テクノロジー・カンパニー・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＸＩ’ＡＮ ＫＡＮＧＹＵＡＮＳＨＥＮＧ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】ＲＯＯＭ Ａ‐１１７‐１１， Ｉ ＣＨＵＡＮＧＴＵ ＺＨＯＮＧＣＨＵＡＮＧ ＰＡＲＫ， ＮＯ． １４ ＧＡＯＸＩＮ ２ＮＤ ＲＯＡＤ， ＨＩＧＨ‐ＴＥＣＨ ＺＯＮＥ， ＸＩ’ＡＮ， ７１００７５ ＳＨＡＡＮＸＩ， ＣＨＩＮＡ
(74)【代理人】
【識別番号】110001818
【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ジャ
(72)【発明者】
【氏名】コン，チュンチュン
(72)【発明者】
【氏名】リ，ジンイ
(72)【発明者】
【氏名】ジャオ，チエンチエン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン，ダン
【審査官】中島 芳人
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１０５３９９６８４（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０１６７１３６７（ＣＮ，Ａ）
【文献】特表２００１－５２１０３３（ＪＰ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０５９４９１４６（ＣＮ，Ａ）
【文献】米国特許第１０９４７１８２（ＵＳ，Ｂ１）
【文献】米国特許第１０７１７６９９（ＵＳ，Ｂ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｃ ６９／
Ｃ０７Ｃ ６７／
Ａ６１Ｋ ３１／
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（Ｉ）を有する抗薬剤耐性菌活性を有する化合物。【化1】
【請求項2】
式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて式（Ｉ）の化合物を得ることを含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、【化2】
前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１～１：１．３のモル比で反応器に入れる工程、
窒素雰囲気下で、有機溶媒と触媒量のトリエチルアミンを添加して反応混合物を得る工程、
前記反応混合物を２０～７０℃で３～６時間加熱する工程、
前記反応混合物を濃縮し、濃縮溶液を酢酸エチルで抽出して粗生成物を得る工程、
前記粗生成物を、ジクロロメタンおよび酢酸エチルを溶離剤として用いたシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラムにより精製して、式（Ｉ）の化合物を得る工程、を含む方法。
【請求項3】
前記有機溶媒はトルエン、ジクロロメタンまたはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物のモル比は１ ： １．１であり、前記反応混合物を２５℃で加熱し、前記反応混合物を５時間加熱し、前記溶離剤はジクロロメタン：酢酸エチル＝２：１である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記化合物は、多剤耐性黄色ブドウ球菌、多剤耐性緑膿菌、および、多剤耐性アシネトバクター・バウマニに対して有効である請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は２０２１年４月１３日に出願された中国特許出願第２０２１１０３９１５４９．８号の優先権を主張し、これは、あたかも本明細書に完全に記載されているかのように、全ての目的のために参照により援用される。
【0002】
本発明は医薬化学の分野に関し、特に、抗薬剤耐性菌活性を有するプレウロムリンレインエステル（pleuromulin rhein ester）およびその調製方法に関する。
【背景技術】
【0003】
抗菌薬剤の普及、 各種侵襲手術の増加に伴い、 臨床的な感染病原体のスペクトラムは変化し続け、 細菌の耐性化も増加の一途をたどっている。多剤耐性菌（ＭＤＲＯ）の感染率と患者の死亡率は年々増加している。ＭＤＲＯには、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus）（ＭＲＳＡ）、メチシリン耐性コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（methicillin-resistant coagulase-negative Staphylococcus）（ＭＲＣＮＳ）、ＥＳＢＬを産生する大腸菌（Escherichia coli）と肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）、そして、カルバペネム耐性エンテロバクター（carbapenem-resistant Enterobacter）（ＣＲＥ）、多剤耐性エンテロバクター（multi-drug-resistant Enterobacter）、多剤耐性アシネトバクター・バウマニ（multi-drug-resistant Acinetobacter baumannii）（ＭＤＲＡＢ）、多剤耐性緑膿菌（multi-drug-resistant Pseudomonas aeruginosa）（ＭＤＲＰＡ）、多剤耐性エンテロコッカス（multi-drug-resistant Enterococcus）、多剤耐性肺炎レンサ球菌（multi-drug-resistant Streptococcus pneumoniae）の、合計１０種類が含まれる。アシネトバクター・バウマニと緑膿菌は医療環境に広く分布し、生存期間が長い。それらは、様々な医療装置および供給品の表面上にバイオフィルムを形成することができる。患者の生得の腔粘膜を排除することは困難であり、コロニーを形成しやすい。その治療は深刻な問題を引き起こした。今日、細菌耐性の問題はますます深刻になっている。良好な抗菌活性、特有の抗菌メカニズム、他の薬剤との交差耐性が容易でなく、新しい構造を有する化合物を見出すことが特に重要である。
【0004】
プレウロムリンは、担子菌Pleurotus pleurotusmutilisおよびpleurotus passeckeranius株の高等真菌の深部培養によって産生されるジテルペン化合物である。プレウロムリンおよびその誘導体は、多くのグラム陽性菌、一部のグラム陰性難治性菌およびマイコプラズマ感染症に特有の効果を有する。このクラスの抗生物質は、タンパク質合成を選択的に阻害することによって抗菌活性を達成する。この方法は、タンパク質合成を阻害する他の抗生物質の抗菌メカニズムとは異なる。原核生物のリボソームと結合する特有のメカニズムである。切断型プレウロチン（Pleurotin）の臨床使用を通して、細菌特異的標的耐性の出現は非常に遅いことが証明され、ムピロシン、β－ラクタム、マクロライド系抗生物質またはキノロン類に対する交差耐性は見出されていない。
【0005】
レインは、ルバーブ、ケツメイシ、フリースフラワー根（fleece flower root）、アロエなどの中国の漢方薬に広く見出される親油性アントラキノン化合物である。抗腫瘍活性、抗菌活性、免疫抑制作用、利尿作用、緩下作用、抗炎症作用を有する。また、糖尿病や腎臓病の治療効果もある。レインは黄色ブドウ球菌、ヘリコバクター・ピロリ、連鎖球菌、ジフテリア、枯草菌、炭疽菌等に対して良好な抗菌活性を有することがこれまでの研究で示されている。その抗菌メカニズムはレインが細菌のＤＮＡとＲＮＡの生合成を阻害し、ミトコンドリア呼吸鎖の電子伝達を妨げ、細菌の嫌気呼吸と発酵に関与する遺伝子の転写を妨げることに関係している可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明において、プレウロムリンは、レイン構造によって改変されて、プレウロムリンレインエステルを得る。予備的な抗菌活性試験は化合物が優れた抗菌活性を有し、多剤耐性菌によって引き起こされる感染症の治療において高い医学的研究および応用価値を有することを示す。
【課題を解決するための手段】
【0007】
一実施形態において、本発明は、多剤耐性菌感染によって引き起こされる感染症を治療するための新しいタイプの抗菌薬剤として使用することができる、プレウロムリンレインエステルを提供する。本発明の化合物の構造式は、式Ｉに示す通りである。
【化1】
【0008】
別の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製する方法を提供する。この方法は、有機溶媒中で式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応させて式（Ｉ）の化合物を得ることを含む。
【化2】
【0009】
別の実施形態において、前記式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、以下の工程、
前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１～１：１．３のモル比で反応器に入れる工程、窒素雰囲気下で、有機溶媒および触媒量のトリエチルアミンを添加して反応混合物を得る工程、前記反応混合物を２０～７０℃で３～６時間加熱する工程、濃縮溶液を酢酸エチルで抽出して粗生成物を得る工程、ジクロロメタンおよび酢酸エチルを溶離剤として用いてシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラムにより前記粗生成物を精製して、式（Ｉ）の化合物を得る工程、とを含む。
前記式（ＩＩ）の化合物および前記式（ＩＩＩ）の化合物を、１：１～１：１．３のモル比で反応器に入れる工程、窒素雰囲気下で、有機溶媒および触媒量のトリエチルアミンを添加して反応混合物を得る工程、前記反応混合物を２０～７０℃で３～６時間加熱する工程、濃縮溶液を酢酸エチルで抽出して粗生成物を得る工程、ジクロロメタンおよび酢酸エチルを溶離剤として用いてシリカゲルフレッシュクロマトグラフィーカラムにより前記粗生成物を精製して、式（Ｉ）の化合物を得る工程、とを含む。
【0010】
別の実施形態において、前記有機溶媒は、トルエン、ジクロロメタンまたはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドである。
【0011】
別の実施形態において、前記有機溶媒は、ジクロロメタンである。
【0012】
別の実施形態において、前記式（ＩＩ）の化合物と前記式（ＩＩＩ）の化合物とのモル比が１ ： １．１である。
【0013】
別の実施形態において、前記反応混合物を２５℃に加熱する。
【0014】
別の実施形態において、前記反応混合物を５時間加熱する。
【0015】
別の実施形態において、前記溶離剤は、ジクロロメタン：酢酸エチル＝２：１である。
【0016】
別の実施形態において、前記化合物は、多剤耐性黄色ブドウ球菌、多剤耐性緑膿菌および多剤耐性アシネトバクター・バウマニに対して有効である。
【0017】
前述した一般的な説明と、以下の詳細な説明とは、どちらも例示的および説明的であり、特許請求される本発明のさらなる説明を提供するように意図されていることを理解されたい。
【0018】
本発明のさらなる理解を提供するために含まれ、本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は本発明の実施形態を示し、説明と共に本発明の原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【発明を実施するための形態】
【0020】
次に、本発明の実施形態を詳細に参照し、その例を添付の図面に示す。以下の実施例は本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0021】
実施例１
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボン酸塩（プレウロムリンレインエステル）の調製
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボン酸塩（プレウロムリンレインエステル）の調製
【0022】
窒素雰囲気下の反応器中で、ジクロロメタンに、一定量のレインおよび塩化オキサリルを添加した。ＤＭＦ （ジメチルホルムアミド）を触媒として添加し、２５℃で２時間反応させて、式（ＩＩＩ）の化合物であるレイン誘導体（酸塩化物）を得た。
【0023】
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリン（式（ＩＩ）の化合物）および６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル３０２．２ｍｇ（総収率７３．７８％）を得た。
【0024】
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ）δ（ｐｐｍ）：１２．０６（１Ｈ、ｄ）、８．５１（１Ｈ、ｓ）、８．０３（１Ｈ、ｓ）、７．９２（１Ｈ、ｄ）、７．８０（１Ｈ、ｄ）、７．３９（１Ｈ、ｄ）、６．５１（１Ｈ、ｔ）、５．８９（１Ｈ、ｄ）、５．４１（２Ｈ、ｓ）、５．２４（１Ｈ、ｄ）、４．９２（１Ｈ、ｄ）、４．１５（１Ｈ、ｔ）、４．０７（１Ｈ、ｓ）、３．４２（１Ｈ、ｄ）、２．２６（１Ｈ、ｄ）、２．１７－２．０８（４Ｈ、ｔ）、１．８０－１．２８（１２Ｈ、ｔ）、０．８５（３Ｈ、ｓ）、０．７８ （３Ｈ、ｄ）；１３Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ）δ（ｐｐｍ）：２１６．７、１７２．１、１６２．９、１３８．９、１３８．７、１２５．６、１２０．４、１１７．３、７４．６、６９．９、５８．１、４５．４、４４．８、４４．０、４１．９、３６．６、３６．１、３４．４、３０．４、２６．８、２６．４、２４．８、１６．６、１４．８、 １１．５。
【0025】
実施例２
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５６．２ｍｇ（総収率６２．５５％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５６．２ｍｇ（総収率６２．５５％）を得た。
【0026】
実施例３
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で６時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６８．０ｍｇ（総収率６５．４３％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で６時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６８．０ｍｇ（総収率６５．４３％）を得た。
【0027】
実施例４
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で６時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２７５．１ｍｇ（総収率６７．１５％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２１４．４ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で６時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２７５．１ｍｇ（総収率６７．１５％）を得た。
【0028】
実施例５
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６０．４ｍｇ（総収率６３．５７％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６０．４ｍｇ（総収率６３．５７％）を得た。
【0029】
実施例６
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２５６．７ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６９．５ｍｇ（総収率６５．７８％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２５６．７ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２５℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６９．５ｍｇ（総収率６５．７８％）を得た。
【0030】
実施例７
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２１７．４ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、６０℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５４．５ｍｇ（総収率６１．６３％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２１７．４ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、６０℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５４．５ｍｇ（総収率６１．６３％）を得た。
【0031】
実施例８
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５１．４ｍｇ（総収率６１．３６％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、３０℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２５１．４ｍｇ（総収率６１．３６％）を得た。
【0032】
実施例９
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、６５℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６１．７ｍｇ（総収率６３．８８％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。２３５．６ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、６５℃で３時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６１．７ｍｇ（総収率６３．８８％）を得た。
【0033】
実施例１０
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。１９６．３ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、５０℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６３．９ｍｇ（総収率６４．４１％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのトルエンに溶解した。１９６．３ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのトルエンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、５０℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝３：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６３．９ｍｇ（総収率６４．４１％）を得た。
【0034】
実施例１１
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２５３．７ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、４０℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６８．９ｍｇ（総収率６５．６３％）を得た。
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。２５３．７ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、４０℃で４時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝１：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２６８．９ｍｇ（総収率６５．６３％）を得た。
【0035】
実施例１２
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
化合物２－（（（３ａＲ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）－５－ヒドロキシ－４，６，９－トリメチル－１－オキソ－６－ビニルデカヒドロ－３ａ，９－プロパノシクロペンタ［８］アヌレン－８－イル）オキシ）－２－オキソエチル４，５－ジヒドロキシ－９，１０－ジオキソ－９，１０－ジヒドロアントラセン－２－カルボキシレートの調製
【0036】
２００ｍＬの三つ口フラスコ中で、２４６．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のプレウロムリンおよび６．１ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを、窒素雰囲気下で５０ｍＬのジクロロメタンに溶解した。１９６．３ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のレイン誘導体を２０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、分液漏斗によって反応混合物にゆっくりと滴下した。滴下終了後、２０℃で５時間反応を行った。薄層クロマトグラフィーを使用して反応を完了まで追跡し、加熱を停止し、次いで保護装置を除去した。反応溶液を濃縮し、水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、濃縮し、乾燥して、プレウロムリンレインエステル粗生成物を得た。ジクロロメタン／酢酸エチル＝２：１を溶離剤として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物をさらに精製し、溶離剤を減圧濃縮し、乾燥させて、プレウロムリンレインエステル２８８．９ｍｇ（総収率７０．５３％）を得た。
【0037】
実施例１３
本発明の化合物の抗菌活性試験
本発明の化合物の抗菌活性試験
【0038】
マイクロブロス希釈法によって決定される化合物の最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、陽性対照としてセフタジジムおよびバンコマイシンを用いて測定した。
【0039】
試験株は、薬剤耐性グラム陽性菌：メチシリン耐性黄色ブドウ球菌ＭＲＳＡ １８－５７５、薬剤耐性グラム陰性菌：多剤耐性緑膿菌ＭＤＲ－ＰＡ １８－１２６、１８－７５６、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ ＣＲ－ＡＢ １８－１８４、１８－５６０であった。これらの試験株は全て、復旦大学（Fudan University）（復旦大学抗生物質研究所：Fudan University Antibiotic Research Institute）に所属する華山病院（Huashan Hospital）から寄付され、従来の方法で同定された後に使用された。
【0040】
試験株の調製：
【0041】
ＭＨＢ培地の調製：
２０．０ｇのＭＨＢ培地を１Ｌの蒸留水に添加し、完全に溶解するまで沸騰させ、コニカルボトルに詰め、１２１℃で１５分間滅菌した。
２０．０ｇのＭＨＢ培地を１Ｌの蒸留水に添加し、完全に溶解するまで沸騰させ、コニカルボトルに詰め、１２１℃で１５分間滅菌した。
【0042】
試験株を対数増殖期まで培養した：
無菌条件下で、試験株を１００ｍＬのＭＨＢ培地に接種し、３７℃の恒温恒湿インキュベーター中で２０～２２時間インキュベートした。
無菌条件下で、試験株を１００ｍＬのＭＨＢ培地に接種し、３７℃の恒温恒湿インキュベーター中で２０～２２時間インキュベートした。
【0043】
保存溶液の調製：
試験するサンプルを秤量し、１％ＤＭＳＯ溶液で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製し、陽性参照物質を秤量し、無菌蒸留水で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製する。
試験するサンプルを秤量し、１％ＤＭＳＯ溶液で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製し、陽性参照物質を秤量し、無菌蒸留水で溶解し、濃度２５６０μｇ／ｍＬの保存溶液を調製する。
【0044】
細菌懸濁液の調製：
無菌条件下で、対数増殖期まで培養した試験株をＭＨＢ培地で０．５ ＭＣＦ濁度基準に調整し、１：１０に希釈し、濃度１０6 ＣＦＵ／ｍＬの細菌懸濁液をスタンバイ用に調製した。
無菌条件下で、対数増殖期まで培養した試験株をＭＨＢ培地で０．５ ＭＣＦ濁度基準に調整し、１：１０に希釈し、濃度１０6 ＣＦＵ／ｍＬの細菌懸濁液をスタンバイ用に調製した。
【0045】
保存溶液希釈、試験株の接種：
無菌条件下、保存溶液を２５６μｇ／ｍＬに希釈し、滅菌した９６ウェルプレートを取り、１番目と２番目のウェルを除く各ウェルに１００μＬのＭＨＢ培地を加え、１番目のウェルに１００μＬの陽性対照液を加え、２番目と３番目のウェルに１００μＬの化合物サンプル溶液を加え、３ウェル中でサンプル溶液を培地と混合し、１００μＬを４番目のウェルにピペットで分取し、混合後に、１００μＬを５番目のウェルにピペットで分取し、一連の時点において、９番目のウェルから１００μＬを採取し、廃棄する。１０番目のウェルは薬剤を含まない増殖対照であり、次に、各ウェルに上記で調製した細胞懸濁液の１００μＬを加えて、各ウェルの最終細菌濃度を５×１０5 ＣＦＵ／ｍＬとし、陽性対照溶液の濃度は１２８μｇ／ｍＬであり、サンプル溶液の濃度は、１２８、６４、３２、１６、８、４、２、１μｇ／ｍＬであった。
無菌条件下、保存溶液を２５６μｇ／ｍＬに希釈し、滅菌した９６ウェルプレートを取り、１番目と２番目のウェルを除く各ウェルに１００μＬのＭＨＢ培地を加え、１番目のウェルに１００μＬの陽性対照液を加え、２番目と３番目のウェルに１００μＬの化合物サンプル溶液を加え、３ウェル中でサンプル溶液を培地と混合し、１００μＬを４番目のウェルにピペットで分取し、混合後に、１００μＬを５番目のウェルにピペットで分取し、一連の時点において、９番目のウェルから１００μＬを採取し、廃棄する。１０番目のウェルは薬剤を含まない増殖対照であり、次に、各ウェルに上記で調製した細胞懸濁液の１００μＬを加えて、各ウェルの最終細菌濃度を５×１０5 ＣＦＵ／ｍＬとし、陽性対照溶液の濃度は１２８μｇ／ｍＬであり、サンプル溶液の濃度は、１２８、６４、３２、１６、８、４、２、１μｇ／ｍＬであった。
【0046】
インキュベーション：
試験株を接種した９６ウェルプレートを覆い、３７℃の恒温恒湿ボックス中で２０～２２時間インキュベートする。
試験株を接種した９６ウェルプレートを覆い、３７℃の恒温恒湿ボックス中で２０～２２時間インキュベートする。
【0047】
ＭＩＣエンドポイントの解釈：
黒色バックグラウンド下の９６ウェルプレートにおける細菌の増殖を完全に阻害することができる濃度は、細菌に対するサンプルの最小阻害濃度である。
黒色バックグラウンド下の９６ウェルプレートにおける細菌の増殖を完全に阻害することができる濃度は、細菌に対するサンプルの最小阻害濃度である。
【0048】
図１～５において、１０個のウェルは、左から右へ、陽性、１２８μｇ／ｍＬ、６４μｇ／ｍＬ、３２μｇ／ｍＬ、１６μｇ／ｍＬ、８μｇ／ｍＬ、４μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、陰性の１０個の群を表す。図１に薬剤耐性菌ＭＡＲＳ １８－５７５に対するプレウロムリンレインエステルのｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性を示す。図２に薬剤耐性菌ＭＤＲ－ＰＡ １８－７５６に対するプレウロムリンレインエステルのｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性を示す。図３に薬剤耐性菌ＭＤＲ－ＰＡ １８－１２６に対するプレウロムリン レインエステルのｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性を示す。図４に薬剤耐性菌ＣＲ－ＡＢ １８－１８４に対するプレウロムリン レインエステルのｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性を示す。図５に薬剤耐性菌ＣＲ－ＡＢ １８－５６０に対するプレウロムリンレインエステルのｉｎ ｖｉｔｒｏ抗菌活性を示す。その結果を表１に示す。
【0049】
【表1】
【0050】
図１～５および表１の試験結果によると、プレウロムリンおよびレインは薬剤耐性菌に対しては抑制作用を示さなかったが、プレウロムリンレインエステルは薬剤耐性グラム陽性菌ＭＲＳＡ（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）、薬剤耐性グラム陽性菌ＭＤＲ－ＰＡ（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）およびＣＲ－ＡＢ（ＭＩＣ＝６４μｇ／ｍＬ）に対して強い抑制作用を示し、静菌作用は陽性対照薬より強かった。要約すると、本発明のプレウロムリンレインエステルは多剤耐性緑膿菌、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニおよび多剤耐性黄色ブドウ球菌の抗菌薬剤候補として使用することができ、さらに前臨床研究を進めることもできる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
