【図1】 Ｔ４７Ｄ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって産生されたＳＥＶのサイズ及び特異的マーカーによる特徴付け。NanoSightによって評価した、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ａ）及びＴ４７Ｄ（Ｂ）によって産生されたＳＥＶのサイズ分布の代表例。ＳＥＶ濃度（粒子／ｍｌ：ｐｐ／ｍＬ）を粒子サイズ（ｎｍ）の関数で示す。（Ｃ）ＳＥＶ特徴付けのためのウェスタンブロット：全細胞タンパク質抽出物を、カルネキシンに対する抗体；ＣＤ６３及びＣＤ８１を用いて両方の細胞型についてＳＥＶタンパク質画分と比較した。

【図2】 低浸潤性Ｔ４７Ｄ及びＭＣＦ７細胞によって産生されたＳＥＶは、高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＳＵＭ１５９ＰＴ乳癌細胞並びにＷＭ．２６６．４黒色腫細胞の浸潤を阻害する。（Ａ）ＷＴ Ｔ４７Ｄ又はＷＴ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１によって、あるいは２つの異なる女性の肌から得られた２つの異なる原発性真皮線維芽細胞（ＦＨＮ２１、ＦＨＮ３２）によって産生された３，７５ｘ１０8ｐｐのＳＥＶのいずれかで、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を２４時間処理し、そして、インビトロで６時間浸潤アッセイに供した（ｎ＝２；＊ｐ＜０，０５）。浸潤指数は、任意に１に設定した対照ウェル中の浸潤性細胞の数と比較した、処理ウェル中の浸潤性細胞の数の割合として計算される。（Ｂ）黒色腫細胞株（ＷＭ．２６６．４）を、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された３，７５ｘ１０8ｐｐのＳＥＶで２４時間処理し、インビトロで６時間浸潤アッセイに供した（ｎ＝３；＊＊ｐ＜０，００５）。（Ｃ）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、ＷＴ Ｔ４７Ｄ又はＷＴ ＭＣＦ７のいずれかによって産生された３，７５ｘ１０8ｐｐのＳＥＶで２４時間処理し、インビトロで６時間浸潤アッセイに供した（ｎ＝３；＊＊＊ｐ＜０，０００５）。（Ｄ）ＳＵＭ－１５９－ＰＴを、ＷＴ Ｔ４７Ｄ又はＷＴ ＭＣＦ７のいずれかによって産生された３，７５ｘ１０8ｐｐのＳＥＶで２４時間処理し、インビトロで６時間浸潤アッセイに供した（ｎ＝３；＊＊＊ｐ＜０，０００５）。

【図3】 低浸潤性乳癌細胞由来のＳＥＶは、高度に浸潤性の乳癌細胞の増殖を改変しない。Ｔ４７Ｄ－ＷＴ由来のＳＥＶの指示量を用いて、高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ｎ＝２）（Ａ）を２４時間処理し、かつＳＵＭ－１５９－ＰＴ（ｎ＝２）（Ｂ）を２４、４８及び７２時間処理し、ＢｒｄＵ取り込み（Ａ）又は直接細胞計数（Ｂ）のいずれかによって細胞増殖を評価した。（Ｃ）高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、Ｔ４７Ｄ－ＷＴ由来のＳＥＶを用いて４８時間処理して、細胞アポトーシスを評価した（ｎ＝２）。

【図4】 高浸潤性細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＳＵＭ－１５９－ＰＴ）の浸潤能に対するＳＥＶの阻害効果は、低浸潤性ＳＥＶ産生細胞株Ｔ４７ＤにおけるＮＦＡＴ３の発現を必要とする。（Ａ）ｓｈＣｔｒｌ、ｓｈＮＦＡＴ３－３又はｓｈＮＦＡＴ３－４のいずれかを発現するＴ４７Ｄ細胞のウェスタンブロット。細胞溶解物全体を抗ＮＦＡＴ３によって暴露し、タンパク質の量を抗アクチンとの暴露によって正規化した。高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ｂ）又はＳＵＭ１５９ＰＴ（Ｃ）細胞を、低浸潤性Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株ＷＴによって産生されたＳＥＶ、あるいは、内在性ＮＦＡＴ３の発現を５０％に減少させるｓｈＲＮＡ（ｓｈＮＦＡＴ３－３、ｓｈＮＦＡＴ３－４）並びに、対照としてのｓｈＲＮＡ対照（ｓｈＣｔｒｌ）を安定して発現するＳＥＶで前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能を試験した（ｎ＝３，＊＊ｐ＜０．００５）。浸潤指数は、任意に１に設定した対照ウェル中の浸潤性細胞の数と比較した、処理ウェル中の浸潤性細胞の数の割合として計算される。

【図5】 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞におけるＴＧＦｂ１のデノボ誘導は、乳癌細胞浸潤を調節するためにＳＥＶを必要とする。（Ａ）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、アクチノマイシンの存在下又は非存在下で、ＷＴ－Ｔ４７Ｄによって分泌されたＳＥＶと共にインキュベートし、ＴＧＦβ１をＥＬＩＳＡによって測定した（ｎ＝２；＊ｐ＜０，０５）。（Ｂ）高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、ｓｉＲＮＡ対照により、又は内在性ＴＧＦｂ１に向けられたｓｉＲＮＡにより、一時的にトランスフェクトし、低浸潤性ＷＴ－Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株によって産生されたＳＥＶで前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能について試験した。場合によっては、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を外因性ＴＧＦｂ１で処理して、ｓｉＲＮＡの効果を逆転させた（ｎ＝２；＊ｐ＜０，００５）。

【図6】 ＷＴ－Ｔ４７Ｄ細胞によって産生されたＳＥＶは、ｈＴＧＦＢ１プロモーターの活性を上方制御する能力がある。（Ａ）ｈＴＧＦｂ１プロモーターの模式図。６つの潜在的なＮＦＡＴ結合部位がＮＦＡＴ結合部位を用いて見出され、それらはアドレス：ソフトウェア：http://www.fast-db.com/perl/nfat.plで開発され；＋１開始部位に対する相対位置が示されている。（Ｂ）ＳＵＭ－１５９－ＰＴ細胞を、ｐＣＳ４－（ｎ）－ｂ－ガラクトシダーゼ及びｈＴＧＦｂ１プロモータープラスミド又は対照としてのｐＧＬ３ベーシックベクターを用いてコトランスフェクトし、ＷＴ－Ｔ４７ＤからのＳＥＶで処理するか又は処理しないままとした。２４時間後、細胞を、ルシフェラーゼ及びｂ－ガラクトシダーゼ活性について分析した。ｈＴＧＦｂ１プロモーター媒介性ルシフェラーゼ活性の定量化はｂ－ガラクトシダーゼの活性に対して正規化され、ｐＧＬ３ベーシックベクターの対照ルシフェラーゼ活性と比較した。（ｎ＝２；＊ｐ＜０，００５）。

【図7A-7B】 低浸潤性乳癌細胞株によって産生されたＳＥＶの静脈内注射は、腫瘍増殖及び転移の出現を阻害し、ＴＧＦｂ１の誘導と相関する。（Ａ）１００ｍｌのＰＢＳ中の１．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のマウスAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体（left Fat Pad）に注射した。腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）として、脂肪体における細胞移植の７日後に、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ－４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ａ）又はＮ°６２５（Ｂ）からのデータにより、提示される。血液中の血清ＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ａ）又はＮ°６２５（Ｂ）からのデータにより、提示される。（Ｃ及びＤ）４２日に開始して、毎週、生物発光画像（原発性腫瘍は黒色組織で遮蔽された）を、Xenogenシステムで取得して、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束を定量した。転移の定量化は、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束として、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ｃ及びＤ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ｃ）又はＮ°６２５（Ｄ）からのデータにより、提示される。血中のＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶを静脈内に毎週注射されたマウスＮ°６１０（Ｃ）又はＮ°６２５（Ｄ）からのデータにより提示される。

【図7C-7D】 低浸潤性乳癌細胞株によって産生されたＳＥＶの静脈内注射は、腫瘍増殖及び転移の出現を阻害し、ＴＧＦｂ１の誘導と相関する。（Ａ）１００ｍｌのＰＢＳ中の１．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のマウスAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体（left Fat Pad）に注射した。腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）として、脂肪体における細胞移植の７日後に、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ－４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ａ）又はＮ°６２５（Ｂ）からのデータにより、提示される。血液中の血清ＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ａ）又はＮ°６２５（Ｂ）からのデータにより、提示される。（Ｃ及びＤ）４２日に開始して、毎週、生物発光画像（原発性腫瘍は黒色組織で遮蔽された）を、Xenogenシステムで取得して、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束を定量した。転移の定量化は、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束として、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ｃ及びＤ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１０（Ｃ）又はＮ°６２５（Ｄ）からのデータにより、提示される。血中のＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶを静脈内に毎週注射されたマウスＮ°６１０（Ｃ）又はＮ°６２５（Ｄ）からのデータにより提示される。

【図8A-8B】 低浸潤性乳癌細胞株によって産生されたＳＥＶの腫瘍内注射は、腫瘍増殖及び転移の出現を阻害し、ＴＧＦｂ１の誘導と相関する。（Ａ）１００ｍｌのＰＢＳ中の１．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のマウスAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体に注射した。腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）として、脂肪体への細胞移植の７日後に、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ－４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ａ）又はＮ°６０２（Ｂ）からのデータにより、提示される。血液中の血清ＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ）又はＮ°６０２（Ｂ）からのデータにより提示される。（Ｃ及びＤ）４２日に開始して、毎週、生物発光画像（原発性腫瘍は黒色組織で遮蔽された）を、Xenogenシステムで取得して、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束を定量した。転移の定量化は、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束として、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ｃ及びＤ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ｃ）又はＮ°６０２（Ｄ）からのデータにより提示される。血中のＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ｃ）又はＮ°６０２（Ｄ）からのデータにより提示される。

【図8C-8D】 低浸潤性乳癌細胞株によって産生されたＳＥＶの腫瘍内注射は、腫瘍増殖及び転移の出現を阻害し、ＴＧＦｂ１の誘導と相関する。（Ａ）１００ｍｌのＰＢＳ中の１．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のマウスAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体に注射した。腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）として、脂肪体への細胞移植の７日後に、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ－４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ａ）又はＮ°６０２（Ｂ）からのデータにより、提示される。血液中の血清ＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６２９（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ）又はＮ°６０２（Ｂ）からのデータにより提示される。（Ｃ及びＤ）４２日に開始して、毎週、生物発光画像（原発性腫瘍は黒色組織で遮蔽された）を、Xenogenシステムで取得して、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束を定量した。転移の定量化は、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束として、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ｃ及びＤ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ｃ）又はＮ°６０２（Ｄ）からのデータにより提示される。血中のＴＧＦｂ１測定は、ｎｇ／ｍｌとして、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１７（Ａ及びＢ）からのデータ、並びに、ＷＴ Ｔ４７Ｄによって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内注射されたマウスＮ°６１４（Ｃ）又はＮ°６０２（Ｄ）からのデータにより提示される。

【図9】 ＳＥＶの腫瘍内注射の腫瘍増殖に対する阻害効果は、Ｔ４７Ｄ－ＳＥＶ産生細胞におけるＮＦＡＴ３の発現を必要とし、ＴＧＦｂ１の誘導と相関する。１００ｍｌのＰＢＳ中の１．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のマウスAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体に注射した。（Ａ）腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）±ＳＥＭとして、脂肪体における細胞移植の７日後に、ＰＢＳで毎週腫瘍内注射されたマウスから（ＰＢＳ）、ｓｈＣｔｒｌ感染Ｔ４７Ｄ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内に注射されたマウスから（５０．１０8 Ｔ４７Ｄ－ｓｈＣｔｒｌ腫瘍内）、ｓｈＮＦＡＴ３－４感染Ｔ４７Ｄ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内に注射されたマウスから（５０．１０8 Ｔ４７Ｄ－ｓｈＮＦＡＴ３－４腫瘍内）、ｓｈＮＦＡＴ３－３感染Ｔ４７Ｄ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週腫瘍内に注射されたマウスから提示される、各群につき８匹のマウス。ＰＢＳで腫瘍内注射されたマウスで各時点について、両側の対応の無いスチューデントのｔ検定を用いて、比較を行った。（Ｂ）４２日に開始して、毎週、生物発光画像（原発性腫瘍は黒色組織で遮蔽された）を、Xenogenシステムで取得して、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束を定量した。転移の定量化は、転移性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞によって生成された平均光子束として、ＰＢＳ、あるいは５０．１０8 ｐｐのＳＥＶ Ｔ４７Ｄ－ｓｈＣｔｒｌ腫瘍内若しくは５０．１０8 ｐｐのＳＥＶ Ｔ４７Ｄ－ｓｈＮＦＡＴ３－４腫瘍内、又は５０．１０8 ｐｐのＳＥＶのｓｈＮＦＡＴ３－３感染Ｔ４７Ｄ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで毎週静脈内注射されたマウスからのデータにより提示される。＊ｐ＜０．０５ ＊＊ｐ＜０．００５及び ＊＊＊ｐ＜０．０００５。（Ｃ）及び（Ｄ）血清を、群（Ａ）のマウスから毎週採取し、血清中に存在するＴＧＦｂ１の濃度を実験の最後にＥＬＩＳＡアッセイにより評価した。（Ｃ）各群の各点は、１～９週の血清中のＴＧＦｂ１濃度の６０日平均を表す。ＰＢＳで腫瘍内注射されたマウスの各群で各時点について、両側の対応の無いスチューデントのｔ検定を用いて、比較を行った。＊ｐ＜０．０５。（Ｄ）データは、（Ａ）におけるように、１～９週のマウスの各群について表される。

【図10】 Ｔ４７Ｄ細胞によって産生されたＳＥＶの遅延注射は、腫瘍増殖を阻害する。１００ｍｌのＰＢＳ中の０，５．１０6個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（Ｄ３Ｈ２ＬＮ）を、それぞれ６週齢の雌のAthymic Nude-Foxn1nuマウスの左脂肪体に注射した。（Ａ）腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）＋／－ＳＥＭとして、２７日に開始してＰＢＳで静脈内に毎週注射されたマウスから（ＰＢＳ）、２７日に開始してＴ４７Ｄ－ＷＴ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで静脈内に毎週注射されたマウスから提示される。（Ｂ）腫瘍増殖は、平均腫瘍体積（ｃｍ３）＋／－ＳＥＭとして、２７日に開始してＰＢＳで腫瘍内に毎週注射されたマウスから（ＰＢＳ）、２７日に開始してＴ４７Ｄ－ＷＴ細胞によって産生された５０．１０8ｐｐのＳＥＶで腫瘍内に毎週注射されたマウスから提示される。両側の対応の無いスチューデントの検定を用いて各時点について比較を行った。＊ｐ＜０，０５、＊＊ｐ＜０，００５、＊＊＊ｐ＜０，０００５．（８匹のマウス／群）。

【図11】 提案される療法開発の概略図。

【図12】 ＮＦＡＴ３は、Ｔ４７Ｄ細胞におけるようにＨＥＫ細胞において発現される。Ｔ４７Ｄ細胞及びＨＥＫ細胞を、非標的化ｓｉＲＮＡ対照（ｓｉＣｔｌ）又は内在性ＮＦＡＴ３を標的化するｓｉＲＮＡ（ｓｉＮＦＡＴ３）のいずれかで、一時的にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後、全細胞溶解物を、ＮＦＡＴ３に対する抗体で内在性ＮＦＡＴ３についてプローブした。アクチンに対する抗体で膜をプロービングすることによって、等負荷（equal loading）の対照を評価した。

【図13】 ＮＦＡＴ３発現ＨＥＫ細胞の生成。（Ａ）ｔｄＴｏｍａｔｏタグと融合されたＨＥＫ細胞を感染させるために使用されるＮＦＡＴ３コンストラクトの表示。（Ｂ）Ｔ４７Ｄ乳癌細胞を、ＮＦＡＴ３ ＷＴのベクター対照、ΔＮＦＡＴ３又は最後の８５Ｃ末端アミノ酸を欠いたＮＦＡＴ３のいずれかで一時的にトランスフェクトし、古典的なトランズウェル（トランズウェル）浸潤アッセイにおいてそれらの浸潤能について評価した。（Ｃ）ＨＥＫ産生ＳＥＶにおける異なるＮＦＡＴ３コンストラクトの発現を、示された抗体を用いたウェスタンブロットによって評価した。

【図14】 ＨＥＫ細胞によって産生されたＳＥＶのサイズ及び特異的マーカーによる特徴付け。ＨＥＫ ｔｏ－Ｃｔｌ（Ａ）、ＨＥＫ ｔｏ－ＮＦＡＴ３（Ｂ）によって産生されたＳＥＶのサイズ分布の代表例。ＨＥＫ ｔｏ－ΔＮＦＡＴ３（Ｃ）及びＨＥＫ ｔｏ－ＮＦＡＴ３－８５Ｃ（Ｄ）は、ＮａｎｏＳｉｇｈｔによって評価された。ＳＥＶ濃度（粒子／ｍｌ：ｐｐ／ｍＬ）は、粒子サイズ（ｎｍ）の関数で示される。

【図15】 ＮＦＡＴ３発現ＨＥＫ細胞によって産生されたエクソソームは、高度に浸潤性のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の浸潤を阻害する。（Ａ）高度に浸潤性の乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）を、エクソソームを用いて前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能について試験した、ここで、斯かるエクソソームは、低浸潤性Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株ＷＴ、あるいはｔｏ－ＮＦＡＴ３又はｔｏ－ΔＮＦＡＴ３又はｔｏ－ＮＦＡＴ３－８５Ｃ）のいずれか及び対照としての空ベクター（ｔｏ－Ｃｔｌ）を安定して発現するＨＥＫヒト胚細胞株のいずれかによって産生された。＊ｐ＜０．０５ ＊＊ｐ＜０．００５及び＊＊＊ｐ＜０．０００５、未処理細胞（－）と比較した。（ｎ＝２）。（Ｂ）高度に浸潤性の乳癌細胞（ＳＵＭ－１５９－ＰＴ）を、エクソソームを用いて前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能について試験した、ここで、斯かるエクソソームは、低浸潤性Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株ＷＴ、あるいはｔｏ－ＮＦＡＴ３又はｔｏ－ΔＮＦＡＴ３又はｔｏ－ＮＦＡＴ３－８５Ｃ）のいずれか及び対照としての空ベクター（ｔｏ－Ｃｔｌ）を安定して発現するＨＥＫヒト胚細胞株のいずれかによって産生された。＊ｐ＜０．０５ ＊＊ｐ＜０．００５及び＊＊＊ｐ＜０．０００５、未処理細胞（－）と比較した。（ｎ＝２）（Ｃ）高度に浸潤性の膵臓癌細胞（ＢＸＰＣ３）を、エクソソームを用いて前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能について試験した、ここで、斯かるエクソソームは、低浸潤性Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株ＷＴ、あるいはｔｏ－ＮＦＡＴ３又はｔｏ－ΔＮＦＡＴ３又はｔｏ－ＮＦＡＴ３－８５Ｃ）のいずれか及び対照としての空ベクター（ｔｏ－Ｃｔｌ）を安定して発現するＨＥＫヒト胚細胞株のいずれかによって産生された。＊ｐ＜０．０５ ＊＊ｐ＜０．００５及び＊＊＊ｐ＜０．０００５、未処理細胞（－）と比較した。（ｎ＝２）（Ｄ）高度に浸潤性の膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）癌細胞（Ｕ８７ＭＧ）を、エクソソームを用いて前処理し又は前処理せずに、それらの浸潤能について試験した、ここで、斯かるエクソソームは、低浸潤性Ｔ４７Ｄ乳癌細胞株ＷＴ、あるいはｔｏ－ＮＦＡＴ３又はｔｏ－ΔＮＦＡＴ３又はｔｏ－ＮＦＡＴ３－８５Ｃ）のいずれか及び対照としての空ベクター（ｔｏ－Ｃｔｌ）を安定して発現するＨＥＫヒト胚細胞株のいずれかによって産生された。＊ｐ＜０．０５ ＊＊ｐ＜０．００５及び＊＊＊ｐ＜０．０００５、未処理細胞（－）と比較した。（ｎ＝２）。