特許7277476アレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせを含む化学療法剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-05-10
(45)【発行日】2023-05-19
(54)【発明の名称】アレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせを含む化学療法剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/155 20060101AFI20230511BHJP
A61K 33/22 20060101ALI20230511BHJP
A61P 13/00 20060101ALI20230511BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230511BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20230511BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20230511BHJP
【ＦＩ】
A61K31/155 ZMD
A61K33/22
A61P13/00
A61P35/00
A61K9/14
A61K47/20
【請求項の数】
11
(21)【出願番号】P 2020548648
(86)(22)【出願日】2019-03-11
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2021-09-24
(86)【国際出願番号】 TR2019050152
(87)【国際公開番号】W WO2020018037
(87)【国際公開日】2020-01-23
【審査請求日】2022-01-24
(31)【優先権主張番号】2018/03493
(32)【優先日】2018-03-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】TR
(73)【特許権者】
【識別番号】512081166
【氏名又は名称】イェディテペ・ウニヴェルシテシ
【氏名又は名称原語表記】ＹＥＤＩＴＥＰＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥＳＩ
(74)【代理人】
【識別番号】110002527
【氏名又は名称】弁理士法人北斗特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】シャヒン フィクレッティン
(72)【発明者】
【氏名】カシクジ エズギ
(72)【発明者】
【氏名】アイデミル チョバン エスラ
【審査官】植原 克典
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１４／２００４４７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開２０１８－０３５１５１（ＪＰ，Ａ）
【文献】Mol.Cancer Ther.,2006,5(9),p.2234-2240
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４
Ａ６１Ｐ ３５／００－３５／０４
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける膵臓癌細胞の生存率の低減に使用されるアレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物化合物との組み合わせで製造された化学療法剤。
【請求項2】
請求項１に記載の化学療法剤であって、
－アレキシジンジヒドロクロリド化合物を計量し、
－前記アレキシジンジヒドロクロリド化合物にジメチルスルホキシド化合物を添加し、１０μＭの濃度で原液を調製し、
－前記原液を－２０℃の温度で暗い環境において使用時まで保管し、
－五硼酸ナトリウム五水和物溶液を供給し、該五硼酸ナトリウム五水和物溶液を培地に溶解させることで１０００μＭの濃度で五硼酸ナトリウム五水和物溶液を生成し、
－前記培地に溶解された五硼酸ナトリウム五水和物の前記溶液を２５０μＭの濃度に希釈し、
－２５０μＭに希釈された前記溶液をフィルタリングし、滅菌し、
－終濃度が２．５μＭになるように、アレキシジンジヒドロクロリドを２５０μＭの濃度を有する五硼酸ナトリウム五水和物溶液に添加する工程により得られる化学療法剤。
【請求項3】
２．９ｍｇのアレキシジンジヒドロクロリド化合物を含む請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項4】
アレキシジンジヒドロクロリド化合物に０．５ｍｌのジメチルスルホキシド化合物を添加することにより得られる請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項5】
２．５ｍｇの五硼酸ナトリウム五水和物化合物を含む請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項6】
劣化せずに４℃の温度で７２時間保管可能な請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項7】
膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）の生存率を６０～８０％低減する請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項8】
正常膵細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）の生存率を１０～１５％低減する請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項9】
正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）の生存率を１０～１５％低減する請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項10】
ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）の生存率を１０～１５％低減する請求項１に記載の化学療法剤。
【請求項11】
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の生存率を５～１０％低減する請求項１に記載の化学療法剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、膵臓癌に対するアレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせの効果に関する。
【背景技術】
【0002】
膵臓は臓器であって、この臓器は約１５ｃｍの長さであり、腹部の最後部に位置し、胃、十二指腸、および大腸により完全に覆われた前面を有する。膵臓癌は癌の種類の中でも治療に対する反応が最も小さいことが知られている。膵臓癌の外科的療法の結果についての悲観的な予測は、８０年代以降は比較的良好な結果になる余地を残した。
【0003】
膵臓癌の病因は正確には知られていないが、いくつかの危険因子は特定されている。年齢（５０歳以降の上昇したリスク）、性別（男性における膵臓癌の上昇したリスク）、喫煙（膵臓癌症例の３０％は喫煙に関連すると考えられる）、食事（食事および運動についての見解をまとめることは困難であるが、果物類、野菜類、および繊維食品の摂取が危険を低減する一方で、肉および脂肪性生産品の摂取はリスクを上昇させると考えられている）などの因子がある。
【0004】
膵臓における腫瘍の正確な位置、疾患のステージ、患者の身体的状態（年齢、体重など）が膵臓癌の治療のために評価され、その後、外科的療法、放射線療法、および化学療法から選択された１つまたは複数が使用される。
【0005】
化学療法は、抗癌剤を使用して癌細胞を殺すことである。膵臓癌は、手術前後に患者の全体的な状態を考慮して、化学療法と呼ばれる薬物療法により治療され得る。化学療法は、手術前に腫瘍を縮小させるために、または、手術の代わりの放射線療法との組み合わせで一次療法として適用され得る。手術および放射線療法は、進行したステージの転移疾患においては有用ではない。この群の患者に対する化学療法の適用によって患者の生活の質を大幅に向上できることが知られている。
【0006】
米国特許第９３９９０３２号明細書には、当技術分野では知られているように、アレキシジンジヒドロクロリドを含む一群の化学薬品はガラクトース中に溶解されると細胞の成長を選択的に阻止することが開示されている。
【0007】
２００６年９月刊行の、Kenneth W. Yip、Emma Ito、Xinliang Mao、 P.Y. Billie Au、David W. Hedley、 Joseph D. Mocanu、 Carlo Bastianutto、 Aaron SchimmerおよびFei-Fei Liuにより刊行されたMolecular Cancer Therapeuticsという本の「Potentialuse of alexidine dihydrochloride as an apoptosis-promoting anticancer agent」という題名の記事の要約において、アレキシジンジヒドロクロリドが癌治療に使用されることが開示されている。
【0008】
David Katz、 EmmaIto、 Ken S. Lau、 Joseph D. Mocanu、 Carlo Bastianutto、 Aaron D. Schimmer、およびFei-Fei Liuにより２００８年２月に刊行されたBio Techniquesという名前の本の「Increased efficiency for performing colony formation assays in 96-well plates: novel applications to combination therapies and high-throughputscreening」という題名の記事に、アレキシジンジヒドロクロリドを抗癌用途に使用できることが記載されている。
【発明の概要】
【0009】
本発明の目的は、アレキシジンジヒドロクロリド化合物に五硼酸ナトリウム五水和物を添加することにより製造された製品の治療効果を１０～２０％上昇させることである。
【0010】
本発明の別の目的は、アレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせを膵臓癌治療のための化学療法剤として使用することである。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【発明の詳細な説明】
【0012】
本発明は、膵臓癌治療において使用され、
－２．９ｍｇのアレキシジンジヒドロクロリド化合物を計量し、
－アレキシジンジヒドロクロリドにジメチルスルホキシド溶液を添加することにより２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、５μＭ、２．５μＭ、１．２５μＭ、０．６μＭ、０．３μＭ、０．１５μＭ、０．０７８μＭ、および０．０３９μＭの濃度をそれぞれ有するアレキシジンジヒドロクロリド溶液を調製し、
－膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）と、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）とを含む培地に、ジメチルスルホキシド比率が１／１０００未満になるように溶液を個別に添加し、
－通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて２４時間、４８時間、および７２時間それぞれ培養し、
－比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行い、
－最適な結果が出るように分析の結果に基づいて決定された４８時間培養された２．５μＭのアレキシジンジヒドロクロリドを調製し、
－１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度の五硼酸ナトリウム五水和物溶液をそれぞれ調製し、
－通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、および膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）の培地に対して前記調製した五硼酸ナトリウム五水和物溶液を適用し、
－五硼酸ナトリウム五水和物溶液と細胞とを含む培地において比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行い、
－１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度の五硼酸ナトリウム五水和物溶液をそれぞれ調製し、通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、および膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌおよびＰｓｎ－ｌ）をそれぞれ含む培地に対して前記五硼酸ナトリウム五水和物溶液をアレキシジンジヒドロクロリドと共に適用し、
－アレキシジンジヒドロクロリドと、五硼酸ナトリウム五水和物溶液と、細胞との溶液を含む培地において比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行う工程により得られる化学療法剤である。
－２．９ｍｇのアレキシジンジヒドロクロリド化合物を計量し、
－アレキシジンジヒドロクロリドにジメチルスルホキシド溶液を添加することにより２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、５μＭ、２．５μＭ、１．２５μＭ、０．６μＭ、０．３μＭ、０．１５μＭ、０．０７８μＭ、および０．０３９μＭの濃度をそれぞれ有するアレキシジンジヒドロクロリド溶液を調製し、
－膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）と、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）とを含む培地に、ジメチルスルホキシド比率が１／１０００未満になるように溶液を個別に添加し、
－通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて２４時間、４８時間、および７２時間それぞれ培養し、
－比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行い、
－最適な結果が出るように分析の結果に基づいて決定された４８時間培養された２．５μＭのアレキシジンジヒドロクロリドを調製し、
－１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度の五硼酸ナトリウム五水和物溶液をそれぞれ調製し、
－通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、および膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）の培地に対して前記調製した五硼酸ナトリウム五水和物溶液を適用し、
－五硼酸ナトリウム五水和物溶液と細胞とを含む培地において比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行い、
－１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度の五硼酸ナトリウム五水和物溶液をそれぞれ調製し、通常の細胞培養条件である３７℃の温度で湿度８５％のインキュベーターにおいて膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、および膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌおよびＰｓｎ－ｌ）をそれぞれ含む培地に対して前記五硼酸ナトリウム五水和物溶液をアレキシジンジヒドロクロリドと共に適用し、
－アレキシジンジヒドロクロリドと、五硼酸ナトリウム五水和物溶液と、細胞との溶液を含む培地において比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行う工程により得られる化学療法剤である。
【0013】
本発明の化学療法剤は、アレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせを含み、膵臓癌細胞における細胞消滅を誘発する。アレキシジンジヒドロクロリドは、５８１．７１グラム／モルの分子量とＣ２６Ｈ５６Ｎ１０・２ＨＣ１の化学式とを有する化合物であり、１０ｍｇ／ｍｌ以上のジメチルスルホキシドに溶解する。膵臓癌に対するアレキシジンジヒドロクロリドの有効量は、膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）と、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）とに対して比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定を行うことにより決定される。
【0014】
アレキシジンジヒドロクロリドをジメチルスルホキシドに溶解させて２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、５μＭ、２．５μＭ、１．２５μＭ、０．６μＭ、０．３μＭ、０．１５μＭ、０．０７８μＭ、および０．０３９μＭの濃度のアレキシジンジヒドロクロリド溶液を調製し、ジメチルスルホキシド比率が１／１０００未満であるように、膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）と、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）とを含む培地に添加した。７２時間の培養後に行った比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定の結果、正常膵細胞と正常椎間板細胞とは影響を受けていないが、膵臓癌細胞の生存率は、中央毒性投与量（ＴＤ５０）である２．５μＭと４８時間の培養とによって５０％に低減されたと判断された。
【0015】
アレキシジンジヒドロクロリド溶液の化学療法的効果を上昇させるために、溶液に五硼酸ナトリウム五水和物化合物を添加することが計画されている。五硼酸ナトリウム五水和物は、２９５．１０７グラム／モルの分子量とＢ５Ｈ１０ＮａＯ１３の化学式とを有する化合物である。
【0016】
五硼酸ナトリウム五水和物化合物は、使用され滅菌を可能にするためにフィルタリングされた細胞のための適切な培地に溶解された。使用された濃度の五硼酸ナトリウム五水和物化合物は、何等かの追加の溶媒の添加を必要とすることなく培地に即座に溶解される。培地の通常のｐＨ値は７．４であり、培地は、五硼酸ナトリウム五水和物沈殿物を７２時間は形成しなかった。次に、五硼酸ナトリウム五水和物を１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度でそれぞれ調製し、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）と、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）と、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）とを含む培地に注入し、その後、４８時間の間培養した。その後、毒性分析（比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定）を行った。４８時間培養された１０００μＭの濃度の五硼酸ナトリウム五水和物の溶液は、７０％の平均生存率という最適な結果を出した。
【0017】
次に、２．５μＭのアレキシジンジヒドロクロリドを１０００μＭ、５００μＭ、２５０μＭ、１００μＭの濃度でそれぞれ調製した五硼酸ナトリウム五水和物溶液に添加し、膵臓の正常細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）と、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）と、ヒト包皮間葉系幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）と、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）とを含む培地に注入し、その後４８時間培養した。その後、毒性分析（比色テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）生存率検定）を行った。分析の結果、正常細胞を損傷しない最適な組み合わせ結果は、２５０μＭおよび１００μＭの五硼酸ナトリウム五水和物と２．５μＭのアレキシジンジヒドロクロリドとの組み合わせであると判断された。
【0018】
同じ濃度の溶液を調製し、それらを膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）を含む培地に添加し、比色テトラゾリウム（ＭＴＳ）生存率検定を行う際に、正常細胞にとっては非致死量である２５０μＭの五硼酸ナトリウム五水和物と２．５μＭのアレキシジンジヒドロクロリドとの組み合わせが膵臓癌細胞の生存率を４８時間の培養の際に５０％を超えて低減したことが観察された。この値は、アレキシジンジヒドロクロリド単独の化学療法的効果よりも１０～２０％高い。
【0019】
培地において調製されたアレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との溶液は、４℃で７２時間を過ぎるとその効果を失い始めることが観察された。この溶液は、新鮮な状態で調製され、化学療法剤として一度に使用されるのがよい。
【0020】
実験解析データ
実験解析データを示すグラフにおいて、「ＮＡＢ」は、五硼酸ナトリウム五水和物の省略形として使用され、「ＡＤ」は、アレキシジンジヒドロクロリドの省略形として使用される。陰性対照は、「ＮＣ」と省略され、細胞の培地が単独で使用されることを示す。
実験解析データを示すグラフにおいて、「ＮＡＢ」は、五硼酸ナトリウム五水和物の省略形として使用され、「ＡＤ」は、アレキシジンジヒドロクロリドの省略形として使用される。陰性対照は、「ＮＣ」と省略され、細胞の培地が単独で使用されることを示す。
【0021】
図１は、正常細胞および膵臓癌細胞の生存率に対するアレキシジンジヒドロクロリドの効果（比色テトラゾリウム（ＭＴＳ）生存率検定）を説明するグラフを示す。
【0022】
当該のグラフにおいて、ＡＤと共に４８時間培養された正常膵細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）、および膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２、ＡｓＰｃ－ｌ、およびＰｓｎ－ｌ）の生存率が分析された。得られた結果から、２．５μＭの濃度のＡＤと共に４８時間培養することは正常細胞を損傷しないが、膵臓癌細胞の生存率をＭＩＡＰａＣａ－２については５３％に、ＡｓＰｃ－ｌについては５８％に、そして、Ｐｓｎ－ｌについては４５％に低減したことが観察された。
【0023】
図２は、正常ヒト包皮幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）の細胞の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0024】
当該のグラフにおいて、正常ヒト包皮幹細胞（ｈＦＳＳＣｓ）の生存率プロファイルは、単独のＮＡＢと共に、および、ＡＤと組み合わせられたＮＡＢと共に、４８時間培養した際に観察された。得られた結果によると、ｈＦＳＳＣ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は低い（８５％の生存率）ことが観察された。
【0025】
図３は、正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0026】
当該のグラフにおいて、正常ヒト臍帯静脈内皮細胞の生存率プロファイルは、単独のＮＡＢと共に、および、ＡＤと組み合わせられたＮＡＢと共に４８時間培養した際に観察された。得られた結果によると、ＨＵＶＥＣ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は低い（９４％の生存率）ことが観察された。
【0027】
図４は、正常椎間板細胞（ＨＮＰＣ）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0028】
当該のグラフにおいて、正常椎間板細胞の生存率プロファイルは、ＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの４８時間培養の結果として観察された。得られた結果によると、ＨＮＰＣ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は低い（８６％の生存率）ことが観察された。
【0029】
図５は、正常ヒト膵細胞（ｈＴｅｒｔ－ＨＰＮＥ）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0030】
当該のグラフにおいて、正常ヒト膵細胞の生存率プロファイルは、ＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの４８時間培養の結果として観察された。得られた結果によると、ＨＮＰＣ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は低い（８９％の生存率）ことが観察された。
【0031】
単独のＮＡＢと共に、および、ＡＤと組み合わせられたＮＡＢと共に正常細胞に対して行われた分析の結果として、正常細胞および癌細胞に対して使用されることになる投与量は、２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせであると判断された。正常細胞に対して使用されたこの投与量および他の投与量を、膵臓癌細胞に注入し、４８時間以内のそれらの効果を観察した。
【0032】
図６は、膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0033】
当該のグラフにおいて、膵臓癌細胞（ＭＩＡＰａＣａ－２）の生存率プロファイルは、ＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの４８時間培養の結果として観察された。得られた結果によると、ＭＩＡＰａＣａ－２細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は、同じ投与量のＡＤの単独での効果よりも高いと判断された（４１％）。ＡＤの単独での適用はＭＩＡＰａＣａ－２細胞の生存率を５３％に低減した一方で、ＮＡＢとＡＤとが組み合わせて適用された場合、さらに１２％の低減が生存率において観察された。
【0034】
図７は、膵臓癌細胞（Ｐｓｎ－ｌ）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0035】
当該のグラフにおいて、膵臓癌細胞（Ｐｓｎ－ｌ）の生存率プロファイルは、ＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの４８時間培養の結果として観察された。得られた結果によると、Ｐｓｎ－ｌ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は、同じ投与量のＡＤの単独での効果よりも高いことが観察された（４１．６０％）。ＡＤの単独での適用はＰｓｎ－ｌ細胞の生存率を５１．６％に低減した一方で、ＮＡＢとＡＤとが組み合わせで適用された場合は、さらに１０％の低減が生存率において観察された。
【0036】
図８は、膵臓癌細胞（ＡｓＰｃ－１）の生存率に対する４８時間培養の終了時のＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの効果のグラフを示す。
【0037】
当該のグラフにおいて、膵臓癌細胞（ＡｓＰｃ－ｌ）の生存率プロファイルは、ＮＡＢの単独での、およびＡＤとの組み合わせでの４８時間培養の結果として観察された。得られた結果によると、ＡｓＰＣ－ｌ細胞に対する２５０μＭのＮＡＢと２．５μＭのＡＤとの組み合わせの生存率破壊効果は、同じ投与量のＡＤの単独での効果よりも高いことが観察された（３９．２％）。ＡＤの単独での適用はＡｓＰＣ－ｌ細胞の生存率を５８．３％に低減した一方で、ＮＡＢとＡＤとが組み合わせで適用された場合は、さらに１９％の低減が生存率において観察された。
【0038】
実施された解析法の結果として、アレキシジンジヒドロクロリドが膵臓癌細胞対して化学療法活性を有するということが証明された。正常細胞は膵臓癌細胞にとっての中央毒性投与量（ＴＤ５０）である２．５μＭのＡＤにより死滅しないことが見出された。見出されたこの情報によると、アレキシジンジヒドロクロリドを膵臓癌治療における化学療法剤として使用することができる。
【0039】
本発明によると、アレキシジンジヒドロクロリドと五硼酸ナトリウム五水和物との組み合わせは、膵臓癌の治療における化学療法剤として得られ、かつ使用され得る。この組み合わせにより、膵臓癌細胞の生存率は少なくとも１０％以上低減された。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】