特許7282692IP Force 特許公報全文掲載

技術分野

相互参照 本出願は、2017年6月7日に出願された米国特許仮出願第62/516,619号、および2017年8月21日に出願された米国特許仮出願第62/548,036号に基づく優先権の利益を主張しており、これら仮出願は全て、これにより、その全体が参考として本明細書によって援用される。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

概要 ガイド核酸の収集物、これを作製する方法、およびこれを使用する方法が、本明細書に提供される。

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 図1は、ゲノムDNAからgRNAの収集物(gRNAライブラリー)を生成するための例示的なスキームを図解する。
【図2】 図2は、ゲノムDNAからgRNAの収集物(gRNAライブラリー)を生成するための別の例示的なスキームを図解する。
【図3】 図3は、DNAをニッキングし、その後にポリメラーゼ処理して平滑末端を生成するための例示的なスキームを図解する。
【図4】 図4は、3種のアダプタを使用した、gNAのライブラリーの逐次生成のための例示的なスキームを図解する。
【図5】 図5は、1種のアダプタおよび1種のオリゴ(oligo)を使用した、gNAのライブラリーの逐次生成のための例示的なスキームがどのようかを図解する。
【図6】 図6は、ニッキング酵素媒介性DNA増幅(NEMDA)を使用した、平滑末端を有するDNA断片の大規模プールの生成のための例示的なスキームがどのようかを図解する。
【図7】 図7は、核酸断片の生成のための例示的なスキームを図解する。
【図8A】 図8Aは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図8B】 図8Bは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図8C】 図8Cは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図8D】 図8Dは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図9A】 図9Aおよび図9Bは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図9B】 図9Aおよび図9Bは、インプット核酸からガイド核酸ライブラリーを構築するための例示的なスキームを図解する。
【図10】 図10は、ガイド核酸の収集物を設計するための例示的なスキームを図解する。
【図11】 図11は、ガイド核酸の収集物を設計するための例示的なスキームを図解する。
【図12】 図12は、標的化された核酸を枯渇、分配または捕捉するための例示的なスキームを図解する。
【図13】 図13は、鎖スイッチング方法の例示的な模式図を図解する。
【図14】 図14は、単一のワークフローでのライブラリー生成および濃縮のための例示的なスキームを図解する。
【図15】 図15は、MseIまたはMluCIのいずれかで切断され、マングビーンヌクレアーゼで処理されて一本鎖オーバーハングを分解した、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図16A】 図16Aおよび図16Bは、アデノシンがイノシンに置き換えられた、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図16B】 図16Aおよび図16Bは、アデノシンがイノシンに置き換えられた、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図17A】 図17Aおよび図17Bは、チミジンがウラシルに置き換えられた、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図17B】 図17Aおよび図17Bは、チミジンがウラシルに置き換えられた、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図18】 図18は、非特異的ニッカーゼおよびT7エンドヌクレアーゼI(フラグメンターゼ(fragmentase))でランダムに断片された、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図19A】 図19Aおよび図19Bは、ランダムに剪断され、メチル化された、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図19B】 図19Aおよび図19Bは、ランダムに剪断され、メチル化された、DNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図20A】 図20A、図20Bおよび図20Cは、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図20B】 図20A、図20Bおよび図20Cは、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図20C】 図20A、図20Bおよび図20Cは、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図21A】 図21Aおよび図21Bは、環状アダプタのライゲーションを使用した、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図21B】 図21Aおよび図21Bは、環状アダプタのライゲーションを使用した、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図22A】 図22A、図22B、図22Cおよび図22Dは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図22B】 図22A、図22B、図22Cおよび図22Dは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図22C】 図22A、図22B、図22Cおよび図22Dは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図22D】 図22A、図22B、図22Cおよび図22Dは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図23A】 図23A、図23Bおよび図23Cは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図23B】 図23A、図23Bおよび図23Cは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図23C】 図23A、図23Bおよび図23Cは、平滑末端修復された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。
【図24】 図24は、環状化された、ランダムに剪断されたDNA供給源からのガイド核酸ライブラリーのための例示的なスキームを図解する。

代表図 図1本件の代表的な図

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