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特許7286319エラスターゼ阻害活性を有するベータヘアピンペプチド模倣体及びそのエアロゾル剤形
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-05-26
(45)【発行日】2023-06-05
(54)【発明の名称】エラスターゼ阻害活性を有するベータヘアピンペプチド模倣体及びそのエアロゾル剤形
(51)【国際特許分類】
A61K 38/12 20060101AFI20230529BHJP
A61K 9/12 20060101ALI20230529BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230529BHJP
A61P 11/08 20060101ALI20230529BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230529BHJP
A61K 9/72 20060101ALI20230529BHJP
C07K 7/08 20060101ALN20230529BHJP
【ＦＩ】
A61K38/12 ZNA
A61K9/12
A61P11/00
A61P11/08
A61P43/00 111
A61K9/72
C07K7/08
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2018562561
(86)(22)【出願日】2017-05-31
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2019-08-29
(86)【国際出願番号】 EP2017025156
(87)【国際公開番号】W WO2017207117
(87)【国際公開日】2017-12-07
【審査請求日】2019-12-13
(31)【優先権主張番号】16020210.7
(32)【優先日】2016-05-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】512029010
【氏名又は名称】ポリフォー・アクチェンゲゼルシャフト
【氏名又は名称原語表記】ＰＯＬＹＰＨＯＲ ＡＧ
(74)【代理人】
【識別番号】100101454
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 卓二
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】クリスティアン・ルーディン
(72)【発明者】
【氏名】マンフレート・ケラー
【審査官】濱田 光浩
(56)【参考文献】
【文献】特表２００８－５３１４８５（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許第０８３８７８９５（ＵＳ，Ｂ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３８／１２
Ａ６１Ｋ ９／１２
Ａ６１Ｐ １１／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルであって、該分散液相が、（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］の酢酸塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有し、
該エアロゾルが、
約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含み、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲内の動粘度と約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力とを有する液体医薬組成物から調製される、
医薬用エアロゾル。
【請求項2】
少なくとも約０．１ｍＬ／分の分散液相の速度でエアロゾル発生器から放出される、請求項１に記載のエアロゾル。
【請求項3】
活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩が、少なくとも約０.８ｍｇ／分の平均送達速度でエアロゾル発生器から放出される、請求項１に記載のエアロゾル。
【請求項4】
約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩と、塩化ナトリウムとを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のエアロゾルを調製するための液体医薬組成物。
【請求項5】
約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲の動粘度を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力を有する、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項7】
少なくとも１種類の味覚修飾添加剤を含む、請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
請求項４～７のいずれか一項に記載の液体組成物を調製するための固体医薬組成物であって、組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含み、該固体組成物は水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で該活性化合物の酢酸塩を含み、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲内の動粘度と約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力とを有する液体組成物である、固体医薬組成物。
【請求項9】
分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルの調製及び送達のためのキットであって、該分散液相が
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］の酢酸塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有し、
該キットが、
噴霧器と、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で活性化合物の酢酸塩を含み、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲内の動粘度と約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力とを有する液体組成物とを含むか、
又は噴霧器と、液体組成物を調製するための固体医薬組成物とを含み、組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含み、該固体組成物が水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で該活性化合物の酢酸塩を含み、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲内の動粘度と約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力とを有する、
キット。
【請求項10】
噴霧器が、ジェット噴霧器、超音波噴霧器、圧電噴霧器、ジェット衝突噴霧器、電気流体力学噴霧器、毛細管力噴霧器、穿孔膜噴霧器及び穿孔振動膜噴霧器からなる群から選択される、請求項９に記載のキット。
【請求項11】
噴霧器が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の少なくとも約０．８ｍｇ／分の速度で、液体組成物をエアロゾル化することができるように適合されている、請求項９又は１０に記載のキット。
【請求項12】
活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の充填用量の少なくとも約７０重量％が、約５μｍ以下の質量中央径を有する液滴で構成される、請求項９～１１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項13】
肺投与用のエアロゾルを調製する方法であって、（ａ）約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含む液体医薬組成物を提供する工程、又は該液体組成物を調製するための固体医薬組成物を提供する工程であって、組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含み、該固体組成物が水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度の活性化合物の酢酸塩を含み、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲内の動粘度と約２５ｍＮ／ｍ～８０ｍＮ／ｍの範囲内の表面張力とを有する、工程；
（ｂ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の少なくとも約０．８ｍｇ／分の平均送達速度で該液体医薬組成物をエアロゾル化することができる噴霧器を提供する工程であって、該噴霧器が、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する分散液相を含むエアロゾルを放出するように適合される工程；および
（ｃ）該液体医薬組成物をエアロゾル化するために該噴霧器を作動させる工程、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、具体的に、ＷＯ２００６／０８７００１に開示され、ヒト好中球エラスターゼに対する阻害活性を有する式シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）のβヘアピンペプチド模倣体、又はその医薬として許容される塩を含む医薬用エアロゾルに関する。さらに、そのようなエアロゾルを調製し、投与するための固体又は液体の医薬組成物及びキットに関する。本発明は、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態、例えば、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの肺疾患、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患若しくは病態を引き起こす肺の感染症の予防、管理又は治療に使用することができる。そのため、本発明はさらに、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む医薬組成物又は医薬用エアロゾルに関する。
本発明は、具体的に、ＷＯ２００６／０８７００１に開示され、ヒト好中球エラスターゼに対する阻害活性を有する式シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）のβヘアピンペプチド模倣体、又はその医薬として許容される塩を含む医薬用エアロゾルに関する。さらに、そのようなエアロゾルを調製し、投与するための固体又は液体の医薬組成物及びキットに関する。本発明は、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態、例えば、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの肺疾患、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患若しくは病態を引き起こす肺の感染症の予防、管理又は治療に使用することができる。そのため、本発明はさらに、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む医薬組成物又は医薬用エアロゾルに関する。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
セリンプロテアーゼファミリーメンバーのヒト好中球エラスターゼ（ヒトＮＥ）は、重要な治療標的の構成要素となっている。カテプシンＧやプロテイナーゼ３に加え、ヒトＮＥはサイトカイン及びそれらの受容体の活性の調節に密接に関与している。特に、炎症部位で、高濃度のヒトＮＥが、炎症性サイトカインのレベルの上昇と密接に時間的に相関する浸潤性多形核細胞から放出されることは、このプロテアーゼが、サイトカインの生物活性及び可用性の制御に関与していることを強く示す（Ｕ．Ｂａｎｋ，Ｓ．Ａｎｓｏｒｇｅ，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００１，６９，１７７－９０）。ヒトＮＥは、細胞外タンパク質分解に主に関与することが知られており、多種多様なマトリックス高分子、血漿タンパク質、炎症性メディエーター、及び細胞表面受容体の加水分解を触媒することにより、重要な局所的及び全身の結果を伴う組織の損傷に関与する（Ｃ．Ａ．Ｏｖｅｎ；Ｅ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ；Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．１９９９,６５,１３７－１５０）。そのため、ヒトＮＥの阻害剤は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のような肺疾患、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）及び虚血－再灌流傷害を含む感染性炎症性疾患のための価値のある新規な薬物候補である（Ｈ．Ｏｈｂａｙａｓｈｉ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ２００２，１１，９６５－９８０；Ｂ．Ｋｏｒｋｍａｚ，Ｔ．Ｍｏｒｅａｕ，Ｆ．Ｇａｕｔｈｉｅｒ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ２００８，９０，２２７）。それらは、これらの疾患又は病態を効果的に予防若しくは治療及び／又は軽減する新しい治療法の重要なニーズを満たすことができる。
セリンプロテアーゼファミリーメンバーのヒト好中球エラスターゼ（ヒトＮＥ）は、重要な治療標的の構成要素となっている。カテプシンＧやプロテイナーゼ３に加え、ヒトＮＥはサイトカイン及びそれらの受容体の活性の調節に密接に関与している。特に、炎症部位で、高濃度のヒトＮＥが、炎症性サイトカインのレベルの上昇と密接に時間的に相関する浸潤性多形核細胞から放出されることは、このプロテアーゼが、サイトカインの生物活性及び可用性の制御に関与していることを強く示す（Ｕ．Ｂａｎｋ，Ｓ．Ａｎｓｏｒｇｅ，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００１，６９，１７７－９０）。ヒトＮＥは、細胞外タンパク質分解に主に関与することが知られており、多種多様なマトリックス高分子、血漿タンパク質、炎症性メディエーター、及び細胞表面受容体の加水分解を触媒することにより、重要な局所的及び全身の結果を伴う組織の損傷に関与する（Ｃ．Ａ．Ｏｖｅｎ；Ｅ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ；Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．１９９９,６５,１３７－１５０）。そのため、ヒトＮＥの阻害剤は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のような肺疾患、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）及び虚血－再灌流傷害を含む感染性炎症性疾患のための価値のある新規な薬物候補である（Ｈ．Ｏｈｂａｙａｓｈｉ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ２００２，１１，９６５－９８０；Ｂ．Ｋｏｒｋｍａｚ，Ｔ．Ｍｏｒｅａｕ，Ｆ．Ｇａｕｔｈｉｅｒ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ２００８，９０，２２７）。それらは、これらの疾患又は病態を効果的に予防若しくは治療及び／又は軽減する新しい治療法の重要なニーズを満たすことができる。
【0003】
投与経路は、薬物の効果が局所的（局所投与）であるか、又は全身性（経腸又は非経口投与）であるかで分類することができる。気管支や肺への医薬品の送達（肺への薬物送達）は、呼吸器系の疾患及び病態の局所治療に使用されてきた。しかしながら、吸収のために肺の大きな表面を利用する全身性疾患の治療のための投与の代替経路としての吸入の可能性は、同様に実証されている（Ｊ．Ｓ．Ｐａｔｔｏｎ，Ｐ．Ｒ．Ｂｙｒｏｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２００７，６，６７－７４；Ｍ．Ｈｏｈｅｎｅｇｇｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２０１０，１６，２４８４－２４９２）。
【0004】
特に、薬物物質は、エアロゾル化乾燥粉末又はエアロゾル化液体として呼吸器系に送達することができ、後者は、薬物物質の溶液か懸濁液などの分散液である。固体又は液体の組成物を、吸入を可能にするエアロゾルに変換するために、様々な装置が開発されてきた。水性薬物物質の溶液又は懸濁液を吸入エアロゾルに変換するために、ネブライザーが通常使用されている。それらは、高い肺用量を必要とする疾患（例えばＣＦ）や患者（例えば他の吸入装置の使用に必要な流速を調整又は達成することができない子供に特に有用である（Ｍ．Ｋｎｏｃｈ，Ｍ．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．２００５，２，３７７－３９０）。
【0005】
薬物物質の吸入は、呼吸器感染症及び／若しくは好中球エラスターゼ活性に関連する疾患の予防及び／又は治療に有利であり得る。好中球による気道浸潤は、細胞外区画内での好中球エラスターゼの増加をもたらし、それによって、有害な作用を誘発するという証拠がある。好中球アレルゲン負荷のマウスモデルにおいて、シベレスタットによる好中球エラスターゼの阻害は、気道過敏性及び炎症を減衰することが実証され得る（Ｈ．Ｋｏｇａ，Ｎ．Ｍｉｙａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２０１３，１４：８）。異なるマウスモデルにおいて、エラスターゼ阻害剤アルファ－１タンパク質分解酵素阻害剤（ａｌｐｈａ１ＰＩ）の組み換え型である非グリコシル化ｒｈａｌｐｈａ１ＰＩを鼻点滴によってＣＤ－１マウスの気道表面へ送達すると、エラスターゼ介在性傷害に対して非常に保護的であり、さらに、グリコシル化された血液由来のａｌｐｈａ１ＰＩよりも著しくより保護的であることが判明した。これらの結果から、ｒｈａｌｐｈａ１ＰＩのエアロゾル送達が、嚢胞性線維症の肺疾患と関連するエラスターゼ依存性病態生理を制御するのに効果的な計画であり得ることが示唆される。最近、Ｒ．Ｓｉｅｋｍｅｉｅｒは、遺伝性ａｌｐｈａ１ＰＩ欠損又は嚢胞性線維症の患者が吸入したａｌｐｈａ１ＰＩの肺沈着を目的とするこれまでに終了した臨床試験の結果をまとめた（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．２０１０，１５［補遺ＩＩ］，１６４）。両方の治療分野について、試験のほとんどは、吸入によるａｌｐｈａ１ＰＩの投与が過剰な炎症性タンパク質及び好中球エラスターゼを中和する強力な療法として役立ち得ることを示している。後者の効果は、患者の肺機能の改善を自動的にはもたらさないが、ａｌｐｈａ１ＰＩ治療後の明らかな気道炎症の低減は、肺構造の変化よりも重要である（Ｍ．Ｇｒｉｅｓｅ，Ｐ．Ｌａｔｚｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．２００７，２９，２４０）。
【0006】
一般的に、吸入による薬物物質送達の利点は、例えば、呼吸器疾患の場合に、全身毒性のリスクを最小限に抑えながら、十分な治療投与量の薬物を主要な作用部位に直接送達することができることである。さらに、全身薬物暴露に伴う不十分な薬物動態及び／又は薬力学は回避され得る。さらに、（自宅での）吸入は、（病棟での）静脈内注射よりも便利な投与様式である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
依然として、吸入薬物物質の送達に基づく治療の有効性は、主に選択される薬物、吸入に適するその医薬組成物及び使用される装置に依存する。そのため、現在知られている療法の結果を改善し、かつ／又は現在知られている療法の欠点を克服する、ヒトの好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する疾患若しくは病態の予防、管理又は治療に適するさらなる医薬組成物、エアロゾル及び治療用キットが強く求められている。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルを提供する。該分散液相は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又はその任意の医薬として許容される塩を含む水性液滴を含む。該分散相の液滴は、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、液滴サイズ分布は約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する。さらに、本発明によって提供されるのは、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルであり、該分散液相は、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療の方法において使用するための、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含む。
【発明の効果】
【0009】
別の態様において、本発明は、上記エアロゾルが調製され得る元の液体及び固体の医薬組成物を提供する。該液体組成物は、それぞれ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む。
【0010】
さらに別の態様において、本発明は、噴霧器及び液体又は固体の組成物を含むキットを提供し、該噴霧器は、上記のように、液体組成物をエアロゾルにエアロゾル化するように適合されている。さらに、本発明によって提供されるのは、噴霧器及び液体又は固体の組成物を含むキットであり、該噴霧器は、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療の方法において使用するために、上記のように、液体組成物をエアロゾルにエアロゾル化するように適合されている。
【0011】
さらに別の態様において、本発明はさらに、肺投与用のエアロゾルを調製及び送達する方法を開示する。この方法は、それぞれ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む液体医薬組成物を提供する工程、又は活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む液体組成物を調製するための固体医薬組成物を提供する工程であって、該固体組成物は水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物は、それぞれ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩を含む工程、かつ平均送達速度が少なくとも約０.８ｍｇ／分で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩の前記液体医薬組成物をエアロゾル化できる噴霧器を提供する工程であって、該噴霧器が、さらに、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する分散液相を含むエアロゾルを放出するように適合されている工程、を含む。次の工程で、該噴霧器は、最終的に哺乳類によって、より好ましくは、ヒト対象によって吸入され得る液体医薬組成物をエアロゾル化するように作動される。
【0012】
さらに別の態様において、本発明は、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療の方法で使用するための、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩、及び必要に応じて、１以上の医薬として許容される希釈剤、添加剤又は担体を含む医薬組成物を提供する。
【0013】
さらに別の態様において、本発明は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩、及び添付文書を含むキットであって、該添付文書が、該活性化合物を用いて、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の対象を治療するための説明を含むキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【図1】ラットの好中球活性化のＬＰＳ／ｆＭＬＰモデルにおける吸入によって投与されたシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の効果を示す。死んだラットの気管からのＢＡＬ上清を、好中球エラスターゼ活性について分析した。データは、ビヒクル対照に対して示されている。データは平均値として示されている。
【図2】ラットの好中球活性化のＬＰＳ／ｆＭＬＰモデルにおける吸入によって投与されたシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の効果を示す。死んだラットの気管からのＢＡＬ上清を、好中球エラスターゼ活性について分析した。データは、ビヒクル対照に対して示されている。データは、平均およびｓ．ｅ．ｍ．値と共に、個々のデータポイントとして示されている。
【図3】嚢胞性線維症の患者に吸入によって投与された単一漸増用量（コホート当たり８０ｍｇ、１６０ｍｇ及び３２０ｍｇ）のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の平均血漿濃度－時間曲線を示す。これらの曲線は、健康な対象によって吸入された同等用量の活性化合物から生じる曲線のプロファイルと類似の典型的なプロファイルを示す。
【図4】単一漸増用量（コホート当たり８０ｍｇ、１６０ｍｇ及び３２０ｍｇ）として嚢胞性線維症患者に吸入によって投与されたシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の平均痰濃度を示す。データは対時間表示である。痰（図４）及び血漿（図３）中の活性化合物の濃度の比較により、痰中の活性化合物の濃度が血漿中よりも約１０３倍高いことが示される。
【図5】単一漸増用量（コホート当たり８０ｍｇ、１６０ｍｇ及び３２０ｍｇ）として嚢胞性線維症患者に吸入によって投与されたシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）によって誘導された嚢胞性線維症患者の痰中の活性好中球エラスターゼに対する効果を示す。データは対時間表示で、平均値として示されている。さらに、プラセボのデータを同様に示す。全用量群における活性化合物の単回用量投与後数時間にわたる痰中の活性エラスターゼの強力な阻害（９０％超）が導出され得る。
【発明を実施するための形態】
【0015】
発明の詳細な説明
第１の態様において、本発明は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルを提供する。該分散液相は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含む。該分散相の液滴は、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、液滴サイズ分布は約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する。
第１の態様において、本発明は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルを提供する。該分散液相は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含む。該分散相の液滴は、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、液滴サイズ分布は約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する。
【0016】
本発明のエアロゾルは、エアロゾルの経口吸入によって好適に達成される肺送達のためのものである。本明細書及び特許請求の範囲において用いられる、肺送達とは、いわゆる、深部肺、末梢肺、肺胞、気管支及び細気管支を含む肺の任意の部分又は主要部へのエアロゾル送達を意味する。
【0017】
本発明のエアロゾルを用いて、哺乳類、より好ましくは、ヒト対象の予防、管理又は治療が潜在的に有用である肺の標的領域の病態は、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態、例えば、特に、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの肺疾患、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患若しくは病態を引き起こす肺の感染症を含む。
【0018】
本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、エアロゾルは、気相中の固相及び／又は液相の分散物である。不連続相とも呼ばれる分散相は、複数の固体及び／又は液体粒子を含む。エアロゾルの両方の基本的な物理的種類、すなわち、気相中の固体及び液体の分散物は、医薬用エアロゾルとして使用することができる。
【0019】
本発明によれば、エアロゾルは、分散液相及び連続気相を含む。そのようなエアロゾルは、時々、「液体エアロゾル」又はエアロゾル化液体と呼ばれる。分散液相の要件は、固相の存在を排除するものではないことに留意すべきである。特に、分散液相自体は、液体中の固体粒子の懸濁液などの分散物であり得る。
【0020】
連続気相は、医薬として許容される任意の気体又は気体の混合物から選択される。例えば、気相としての空気又は圧縮空気は、エアロゾル発生器として噴霧器を用いる吸入療法の中で最も一般的である。あるいは、酸素富化空気、又は窒素と酸素の混合物などの他の気体及び気体の混合物が使用され得る。連続気相としての空気の使用が最も好ましい。
【0021】
活性化合物は、ヒト好中球エラスターゼに対する阻害活性を有するシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩である。構造的には、該活性化合物は、ホモデティック環状トリデカペプチドであり、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり、ＤＰｒｏはＤ－プロリンである。残りのアミノ酸残基についての略語（３文字コード）は、一般的に認識されているとおりである。全てのアミノ酸残基は、１つのＤ－プロリン残基を除いてＬ配置にある。
【0022】
本明細書及び特許請求の範囲で用いられる、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）は、それぞれの溶媒和物を含むと理解されるべきである。
【0023】
溶媒和物並びに塩は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）を医薬組成物中の活性成分として使用することができる形態のカテゴリーである。
【0024】
塩は、イオン、すなわち、陽イオン及び陰イオンで構成される中性化合物である。活性化合物が酸のように作用することができる場合は、潜在的に有用な塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及び／若しくはアンモニウムなどの無機陽イオン、又はアルギニン、リジン、グリシン、及び／若しくはエチレンジアミンに由来するものなどの有機カチオンで形成することができる。該活性化合物（又はその一部）は、例えば、シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）のアミノ酸残基の１つであるＬｙｓ残基のような塩基として作用することができ、潜在的に有用な塩は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、リン酸塩（モノ塩基性又は二塩基性）、硫酸、硝酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエチルスルホン酸、ｎ－プロピルスルホン、スルホン酸イソプロピル、乳酸、リンゴ酸、及び／又はクエン酸などの無機アニオンで形成することができる。
【0025】
医薬として許容される塩又は医薬塩という用語は、対イオンと組み合わさって、中性の複合体を形成したイオン化可能な薬物又は活性化合物を指すために使用される。このプロセスを経て薬物又は活性化合物を塩に変換すると、例えば、その化学的安定性を改善させ、複合体の投与をより容易にさせ、かつ／又は薬剤の薬物動態プロファイルの操作を可能にすることができる。
【0026】
本発明の好ましい実施形態において、活性化合物の対イオンは酢酸イオンである。
【0027】
エアロゾルはさらに、分散液相の液滴が約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、液滴サイズ分布が約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有することを特徴とする。本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、質量中央径（ＭＭＤ）は、レーザー回折によって測定されるような分散液相の質量中央径である。Ｍａｌｖｅｒｎ ＭａｓｔｅｒＳｉｚｅｒ Ｘ又はＭａｌｖｅｒｎ ＳｐｒａｙＴｅｃなどのＭＭＤを決定するための様々な適切な分析装置は、知られており、市販されている。エアロゾル化液体粒子又は液滴の幾何標準偏差（ＧＳＤ）を含む幾何学的分布は、ＭＭＤと同時に決定することができる。ＧＳＤは、広がりの程度が数の集合であることを説明し、その好ましい平均は、幾何平均である。
【0028】
好ましい実施形態において、エアロゾルは、肺送達のためのものであり、そのようなエアロゾルの分散液相は、約２．０μｍ～約４．５μｍの範囲のＭＭＤを有し、約１．２～約１．７の範囲のＧＳＤを有する。より好ましくは、本発明のエアロゾルは、約２．５μｍ～約３．５μｍの範囲のＭＭＤを有し、約１．４～約１．６の範囲のＧＳＤを有する。これらの組み合わせのセットの各々は、エアロゾル化された活性化合物の量に対して、気管支及び細気管支を含む、肺中の活性化合物の高い局所濃度を達成するために特に有用である。
【0029】
別の好ましい実施形態において、該エアロゾルは、少なくとも約０．１ｍＬ／分の速度でエアロゾル発生器から放出される。別の実施形態において、該エアロゾルがエアロゾル発生器から放出される速度である（総）出力速度は、実用的な目的のためにその密度が１ｇ／ｍＬに近いそれらの液体エアロゾルについては少なくとも約０．１５０ｍＬ／分又は少なくとも約１５０ｍｇ／分であり、すなわち、約０．９５ｇ／ｍＬ～約１．０５ｇ／ｍＬの範囲内である。さらなる実施形態において、出力速度は、それぞれ約２００ｍｇ／分～約７００ｍｇ／分、又は約２５０ｍｇ／分～約６５０ｍｇ／分の範囲内である。
【0030】
別の好ましい実施形態において、該エアロゾルは、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の少なくとも約０．８ｍｇ／分の平均送達速度でエアロゾル発生器から放出される。薬物又は活性化合物の（平均）送達速度は、患者が治療期間中に与えられることが予想される薬物又は活性化合物の量を決定するための、例えば、Ｐｈ．Ｅｕｒ．（欧州薬局方）２．９．４４及び／又はＵＳＰ（米国薬局方）１６０１に従って定義及び測定される２つの別個のメトリクス又はパラメータの１つである。さらなる実施形態において、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の平均送達速度は、それぞれ、約３ｍｇ／分～約２５ｍｇ／分の範囲内、又は約５ｍｇ／分～約１８ｍｇ／分の範囲内である。
【0031】
本明細書及び特許請求の範囲に記載のエアロゾルを生成するのに適する適切なエアロゾル発生器、特に、噴霧器については、以下でより詳細に説明する。
【0032】
別の態様において、本発明は、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む、上記のエアロゾルを調製するための液体医薬組成物を対象とする。
【0033】
本明細書及び特許請求の範囲で定義されるように、液体医薬組成物は、少なくとも１種類の活性化合物及び少なくとも１種類の医薬として許容され、薬理学的に実質的に不活性な添加剤を含む液体材料である。用語「液体組成物」は、必ずしも固体材料が存在しないことを意味するものではないことに留意すべきである。例えば、連続液相中の固体粒子の分散を表す懸濁液はまた、上記の用語に包含される。
【0034】
好ましくは、エアロゾルが調製される液体組成物は、水性組成物であり、その結果、水は、そのような組成物の主な液体成分である。水以外の溶媒及び補助溶媒は避けるべきである。別の実施形態において、該組成物は、水を少なくとも約８０重量％含む。さらに別の実施形態において、該組成物の液体成分の少なくとも約９０重量％は水である。
【0035】
エタノール、グリセロール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどの非水性溶媒の配合を避けることができない場合、添加剤は、注意深く、該組成物のその生理学的許容性及び治療用途を考慮して選択すべきである。好ましい実施形態によれば、該組成物は、非水性溶媒を実質的に含まない。
【0036】
液体組成物中の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の濃度は、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内である。好ましくは、上記活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩の濃度は、それぞれ、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、又はより好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内である。エアロゾル化に適する組成物中の高濃度の活性化合物は、患者の利便性及びコンプライアンスを提供する：そのような濃度が高いほど、吸入される有効用量の活性化合物を含む液体組成物の総体積は小さくなり、かつそのような有効用量の吸入に必要である合計時間は短い。
【0037】
液体組成物の動粘度は、噴霧の効率及び噴霧によって形成されるエアロゾルの粒度分布に影響を与える。動粘度は、好ましくは、約０．８ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲に調整されるべきである。他の実施形態において、動粘度は、それぞれ、約１．０ミリパスカル～約１．７ミリパスカルの範囲、又は約１．２ミリパスカル～約１．６ミリパスカルの範囲である。
【0038】
肺投与に非常に適するエアロゾルを得るために、本発明の液体組成物の表面張力は、好ましくは、約２５ｍＮ／ｍ～約８０ｍＮ／ｍの範囲、より好ましくは、約３０ｍＮ／ｍ～約７０ｍＮ／ｍの範囲、又はさらにより好ましくは、約４５ｍＮ／ｍ～約５５ｍＮ／ｍの範囲に調整されるべきである。
【0039】
一般的に、エアロゾルの品質及び噴霧化の効率は、上記で提示した実施形態の下側部分に悪影響を与え得る。しかしながら、以下に説明する研究の結果は、上記の点で、本発明の液体組成物の性能に有意な変化がないことを示している。
【0040】
水性液体組成物に界面活性剤を添加すると、表面張力が水又は生理的緩衝溶液の表面張力よりもかなり顕著に低下し得ることは当技術分野で周知である。したがって、意図する用途に応じて、それぞれの場合において妥協点が見出されなければならない。
【0041】
十分に忍容性であるために、エアロゾルは、可能な限り、生理的張度又は浸透圧を有するべきである。そのため、エアロゾルの浸透圧を制御するための浸透活性添加剤を配合することが望ましい場合がある。そのような添加剤、又は複数の添加剤は、例えば、物質の組み合わせが使用される場合、理想的には、生理学的流体の浸透圧からあまり逸脱しないエアロゾルの浸透圧、すなわち、約１５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに達するように選択されるべきである。しかしながら、一方の物理化学的医薬ニーズと、他方の生理的要求との間で妥協点を見出されなければならない。一般的に、約８００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまでの浸透圧が許容され得る。特に、約２００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ～約６００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲の浸透圧が好ましい。さらなる実施形態において、浸透圧は、約２５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ～約５００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲内、又はそれぞれ約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ～約４５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲にある。
【0042】
該組成物の有効性及び／又は効力を改善するための１つのアプローチは、目的領域におけるエアロゾルの沈着後の組成物の局所的な滞留時間を増強することであり得る。例えば、肺における堆積した組成物の滞留時間が延びると、作用部位における活性化合物の高い連続暴露につながり得る。同時に、それは、必要な投与頻度を減らし、そのため、患者の利便性及びコンプライアンスを向上させ得る。
【0043】
一般に、活性化合物の長期保持を達成するために、様々な製剤計画は、例えば、高度に水溶性の活性化合物を難溶性塩などの溶解性の低い固体形態に変換することを追求することができる。その結果、該化合物は、マイクロ懸濁液又はナノ懸濁液の形態などの溶解していない形態のエアロゾルに存在する。エアロゾル液滴が堆積すると、該組成物の液相は、生理的流体、例えば、粘液と組み合わさって、薬物が溶解するのを可能にする。
【0044】
異なる製剤計画は、以下に記載のポリマー添加剤が、製剤からの活性化合物の放出、及び／又は目的組織上への堆積後の組成物の局所滞留時間に影響を及ぼし得るという事実に基づいている。したがって、そのような添加剤は、同様の作用部位で活性化合物の局所バイオアベイラビリティに影響を与える。
【0045】
好適な実施形態の１つにおいて、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、徐放及び局所的保持の延長をもたらすために、ポリマー添加剤と共に製剤化される。潜在的に適切なポリマーには、特に、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、ガラクトマンナン、デキストラン、寒天、グアーガム、トラガカント、及びそれらの混合物などの医薬として許容される水溶性又は水分散性ポリマーが含まれる。
【0046】
１種又はいく種類かのポリマー添加剤が本発明の液体組成物中に存在する場合、効率的なエアロゾル化を確実にするために、そのような組成物の動粘度への影響に注意を払わなければならない。そのため、動粘度は、約１．７ミリパスカルを超えるべきではない。一般に、そのような液体組成物中のポリマーの含有量を決定するために、ポリマーの正確なグレードおよび他の添加剤の存在について考慮すべきである。
【0047】
他の添加剤、すなわち、シクロデキストリンなどの錯化剤、カルシウムマグネシウム又はアルミニウムの塩などの二価又は多価金属塩、その塩を含むエチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、又はリン脂質又はレシチンなどの両親媒性の薬剤は、例えばポリマー添加剤と同様に、活性化合物の放出を延長することができることが知られている。
【0048】
本発明の液体組成物は、さらなる医薬として許容される添加剤、例えば、無機塩などの浸透剤；有機又は無機の塩、酸及び塩基などのｐＨを調整及び／又は緩衝するための添加剤、スクロース及びラクトースなどの増量剤並びに凍結乾燥助剤、マンニトール、ソルビトール、及びキシリトールのような糖アルコール、その誘導体を含むビタミンＥなどの安定化剤及び酸化防止剤、その誘導体を含むリコピン及びアスコルビン酸、リン脂質及びポリソルベートなどのイオン性及び非イオン性界面活性剤、味覚修飾剤、崩壊剤、着色剤、甘味料、及び／又は香味料を含み得る。
【0049】
好ましい実施形態のうちの１つにおいて、本明細書において上記で概説した好ましい範囲内の値に浸透圧を調節するために、塩化ナトリウムなどの１以上の浸透圧剤が該組成物中に配合される。より好ましい実施形態において、浸透圧剤は塩化ナトリウムである。
【0050】
十分に忍容性のあるエアロゾルを提供するために、本発明による調製は、体水分正常状態の（ｅｕｈｙｄｒｉｃ）ｐＨに調整されるべきである。用語「体水分正常状態」は、薬学的要件と生理学的要件の間に違いがあり得、その結果、例えば、一方で調製物は貯蔵時に十分安定であるが、他方では、なお十分に許容性があることを確実にする妥協点が見いだされなければならないことを示唆する。好ましくは、ｐＨ値は、弱酸性～中性領域、すなわち、約４～約８である。一般に、弱酸性環境に向かう逸脱は、アルカリシフトよりも良好に忍容性がある。特に好ましいのは、ｐＨが約４．５～約７．５の範囲内である組成物である。
【0051】
本発明の組成物のｐＨを調整し、かつ／又はそのような組成物を緩衝するために、生理学的に許容される酸、塩基、塩、及びこれらの組み合わせが使用され得る。ｐＨ値を低下させるのに、かつ／又は緩衝系の酸性成分として適する添加剤は、硫酸及び塩酸などの強鉱酸である。リン酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、メチオニン、乳酸、酢酸、グルクロン酸などの中強度の無機酸及び有機酸、並びにナトリウム又はカリウムを有する水素リン酸などの酸性の塩は、同様に使用することができる。ｐＨ値を上昇させるのに適する添加剤及び／又は緩衝系の基本的な構成要素は、水酸化ナトリウムなどの無機塩基、又は水酸化マグネシウム、水酸化カルシウムなどの他のアルカリ及びアルカリ土類の水酸化物並びに酸化物、又は水酸化アンモニウム、酢酸アンモニウムなどの塩基性アンモニウム塩、又はリジンなどの塩基性アミノ酸、又は炭酸ナトリウム若しくは炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウムなどの炭酸塩、又はクエン酸ナトリウムなどのクエン酸である。
【0052】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ｐＨを調整するための少なくとも１種類の添加剤を含む。より好ましい実施形態において、添加剤は水酸化ナトリウムである。
【0053】
主に医薬的な理由により、さらなる添加物によって、本発明の組成物の化学的安定性を示すことができる。水性調製物中で化学的に定義された活性化合物の最も一般的な分解反応は、特に、主に至適ｐＨ調整、及び酸化反応によって制限され得る加水分解反応を含む。活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）は、第１級アミノ基を有するリジン残基を含むので、後者は、例えば、酸化攻撃を受ける可能性がある。したがって、抗酸化剤、又は相乗作用物質と組み合わせた抗酸化剤の添加は、得策であるか、又は必要であり得る。
【0054】
抗酸化剤は、活性化合物の酸化を防止若しくは阻害することができる天然物質又は合成物質である。抗酸化剤は、主に、酸化可能なアジュバント及び／又は酢酸トコフェロール、リコペン、還元グルタチオン、カタラーゼ、過酸化物ジスムターゼなどの還元剤として作用する。さらに適切な抗酸化剤は、例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム及び他の塩及びアスコルビン酸の誘導体、例えば、パルミチン酸アスコルビル、フマル酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩である。
【0055】
相乗作用物質は、酸化プロセスにおける反応物として直接作用しないが、間接的なメカニズムによって、例えば、酸化プロセスにおいて触媒作用することが知られている金属イオンの錯体形成によってそのようなプロセスに対抗するものである。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩及び誘導体、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩は、キレート剤として作用し得るそのような相乗作用物質である。
【0056】
実施形態のうちの１つにおいて、本発明の組成物は、少なくとも１つの抗酸化剤を含む。さらなる実施形態において、該組成物は、抗酸化剤とキレート剤の両方を含む。
【0057】
上述したように、本発明の組成物は、味に影響を与える添加剤を含んでよい。悪い味は、特に吸入投与において非常に不快で刺激性であり、非コンプライアンスになり、そのため、治療が失敗し得る。悪い味は、吸入中に口腔咽頭域に沈殿するエアロゾルのその部分を介して患者によって知覚される。エアロゾルの粒径は、わずかな画分の調製物が上記領域中に沈殿するように最適化することができる場合であっても（口腔、咽頭又は鼻の粘膜が標的組織でない限り、前記画分は治療のために失われる）、活性化合物の悪い味はもはや知覚されないような程度まで前記画分を減らすことは、現在ほとんど不可能である。したがって、組成物の味又は活性化合物の味のマスキングの改善が重要であり得る。
【0058】
該組成物の味を改善するために、ナトリウムサッカリン、アスパルテーム、界面活性剤などの糖、糖アルコール、塩、香味料、錯化剤、ポリマー、甘味料の群からの１種以上の潜在的に有用な添加剤が配合され得る。
【0059】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１種の味覚修飾添加剤を含む。より好ましい実施形態において、前記味覚修飾添加剤は、サッカリンナトリウムである。
【0060】
別の実施形態において、該組成物は、さらなる活性化合物を含み、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）との組み合わせは、組み合わされた治療効果、又は、理想的には、相乗的な治療効果を有する。
【0061】
エアロゾル化用の液体製剤が、市場に適する製剤として機能するのに十分に長い貯蔵寿命を有し得ない場合には、代わりに固体組成物を提供することが有益であり得る。このような固体組成物は、一般に、液体組成物と比較して、より長い貯蔵寿命の可能性を有する。
【0062】
本発明の固体組成物は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又はその任意の医薬として許容される塩、及び少なくとも１種類の添加剤を含む。一般的には、既に上述したのと同じ添加剤を選択することができる。該固体組成物の製造プロセス／方法に応じて、１種以上の追加の添加剤が有用であり得る。該固体組成物が、例えば、そのような固体組成物を調製する好ましい方法の１つであるフリーズドライ（凍結乾燥）によって調製される場合、少なくとも１種類の増量剤及び／又は凍結乾燥助剤、例えば、スクロース、フルクトース、グルコース、トレハロースなどの糖、又はマンニトール、ソルビトール、キシリトール、イソマルトなどの糖アルコールを配合することが有利であり得る。
【0063】
固体組成物はさらに、それが水性液体溶媒に溶解可能又は分散可能であることを特徴とする。本明細書及び特許請求の範囲において定義される用語「溶解可能」とは、固体組成物と水性液体溶媒を組み合わせて、溶液又はコロイド溶液を形成することができることを意味するが、用語「分散可能」は、液体分散物、特に、エマルジョン及びマイクロ懸濁液の形成を含むと解釈されるべきである。用語「水性」は、溶媒の主要な液体成分が水であることを意味する。水以外の溶媒及び補助溶媒は避けるべきである。別の実施形態において、水性液体溶媒は、少なくとも約８０重量％の水を含む。さらに別の実施形態において、溶媒の液体成分の少なくとも約９０重量％は水である。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどの非水性溶媒の配合を避けることができない場合には、添加剤は、注意深く、組成物のその生理学的許容性及び治療用途を考慮して選択すべきである。好ましい実施形態によれば、組成物は、非水性溶媒を実質的に含まない。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどの非水性溶媒の配合を避けることができない場合には、上記と同じ予防策を考慮しなければならない。別の好ましい実施形態によれば、固体組成物を溶解又は分散する水性溶媒は、非水性溶媒を実質的に含まない。
【0064】
固体組成物中の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容される塩のその量は、水性液体溶媒への溶解又は分散後に、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度に対応しなければならない。より好ましくは、上記活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩の量は、水性液体溶媒への溶解又は分散後に、それぞれ、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、又はより好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度に対応しなければならない。
【0065】
さらなる実施形態において、固体組成物中の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の対イオンは、酢酸イオンである。
【0066】
再構成のための本発明の固体組成物は、医薬キットの一部であり得る。そのようなキットは、好ましくは、無菌形態の固体組成物を含む。本明細書及び特許請求の範囲で使用する用語「無菌の」又は「無菌性」は、通常の薬学的意味に従って定義され、そのため、再生することができる細菌の非存在として理解すべきである。無菌性は、関連する薬局方に定義されている適切な試験を用いて決定される。現在の科学的基準に従って、１０－６の無菌性保証レベル（ＳＡＬ）、すなわち、生存可能な微生物が滅菌物品中に存在するのは１百万分の１未満の見込みの保証）は、無菌調製物に許容されるとみなされる。実際には、汚染率が高くなる可能性があり、かつ無菌的に製造される調製物についての汚染率は、約１０－３に達し得る。実用上の理由から、絶対的な意味での無菌性を要求することは依然として困難である。したがって、本発明の組成物の無菌性は、前記組成物が無菌性に対する関連薬局方の要件を満たすように、本明細書及び特許請求の範囲において理解されるべきである。
【0067】
本発明の固体組成物は、エアロゾル化用に準備される液体組成物と同様の液体組成物を調製した後、それを乾燥させる、例えば、凍結乾燥することによって調製することができる。同様に、乾燥することによって固体組成物を調製する元の液体組成物は、例えば、再構成用の液体担体が１種以上の添加剤を含むように設計されている場合には、準備される液体組成物の固体成分を全て含まなくてもよいことを意味する。液体組成物のこれら２種類の成分の濃度が同一であることも必要ではない。本発明の固体組成物は、例えば、粉末形態の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩、必要に応じて少なくとも１種類の添加剤を調製した後、そのような粉末を残りの添加剤を含む粉末と混合し、最終的に粉末混合物を形成することによって調製することさえ可能である。
【0068】
別の態様において、本発明は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルの調製並びに送達のための医薬キットであって、該分散液相は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する医薬キットを提供する。該キットはさらに、エアロゾル噴霧器及び約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で活性化合物若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む組成物を含むか、又は噴霧器及び液体組成物を調製するための固体医薬組成物を含み、該組成物は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含み、該固体組成物は、水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物は、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩を含むことを特徴とする。
【0069】
噴霧器は、液体をエアロゾル化することができる装置である。好ましくは、本発明のキットの噴霧器は、ジェット噴霧器、超音波噴霧器、圧電噴霧器、ジェット衝突噴霧器（ｊｅｔ ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）、電気流体力学噴霧器、毛細管力噴霧器（ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｆｏｒｃｅ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）、穿孔膜噴霧器（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）及び穿孔振動膜噴霧器（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄ ｖｉｂｒａｔｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）から選択される（Ｍ．Ｋｎｏｃｈ，Ｍ．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．，２００５，２，３７７）。特に好ましいのは、圧電噴霧器、電気流体力学及び／又は穿孔膜型噴霧器、例えば、薬物送達プラットフォームＭｙｓｔｉｃ（商標）（Ｂａｔｔｅｌｌｅ Ｐｈａｒｍａ ［Ｂａｔｔｅｌｌｅ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ］、米国）、ｅＦｌｏｗ（商標）（Ｐａｒｉ ＧｍｂＨ、ドイツ）、Ａｅｒｏｎｅｂ（商標）、Ａｅｒｏｎｅｂ Ｐｒｏ（商標）、Ａｅｒｏ Ｄｏｓｅ（商標）（Ａｅｒｏｇｅｎ社、米国）である。噴霧器のこれらのタイプは、エアロゾルが気管支及び／又は肺に送達される場合に特に有用である。
【0070】
好ましくは、該噴霧器は、少なくとも約０.１ｍＬ／分の速度で液体組成物をエアロゾル化することができるように選択又は適合される。より好ましくは、該噴霧器は、実用的な目的のためにその密度が１ｇ／ｍＬに近い、すなわち、約０.９５ｇ／ｍＬ～約１.０５ｇ／ｍＬの範囲内であるそれらの液体組成物の（合計）出力速度（エアロゾルがエアロゾル発生器から放出される速度）が少なくとも約０.１５０ｍＬ／分又は少なくとも約１５０ｍｇ／分であり得る。さらなる実施形態において、該噴霧器の出力速度は、それぞれ約２００ｍｇ／分～約７００ｍｇ／分、又は約２５０ｍｇ／分～約６５０ｍｇ／分の範囲内である。
【0071】
該噴霧器はまた、好ましくは、少なくとも約０.８ｍｇ／分の平均送達速度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の液体組成物をエアロゾル化及び放出することができるように選択又は適合させる。薬物又は活性化合物の（平均）送達速度は、患者が治療期間中に与えられると予想される薬物又は活性化合物の量を決定するパラメータである。さらなる実施形態において、該噴霧器は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の平均送達速度が、それぞれ約３ｍｇ／分～約２５ｍｇ／分の範囲、又は約５ｍｇ／分～約１８ｍｇ／分の範囲になるように選択又は適合される。
【0072】
さらに好みに応じて、該噴霧器は、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の充填用量の少なくとも約７０重量％をエアロゾル化及び放出することができるように選択又は適合され、前記充填用量の画分は、約５μｍ以下の質量中央径を有する液滴から構成される。前記サイズの液滴は、大きな液滴とは対照的に、気管及び咽頭の代わりに肺に堆積する見込みが高いので、約５μｍ以下の液滴サイズを有する分散相の画分は、吸入性画分と呼ばれる場合が多い。より好ましくは、噴霧器に充填される用量の少なくとも約８０重量％は、約５μｍ以下のサイズの液滴をエアロゾル化し、装置から放出される。ｅＦｌｏｗ（商標）薬物送達プラットフォーム（Ｐａｒｉ ＧｍｂＨ、ドイツ）からの噴霧器などの振動穿孔膜設計に基づき、必要に応じてカスタマイズされた電子噴霧器を用いて選択されるそのような装置が最良であり得る。さらにより好ましい実施形態によれば、それぞれ充填用量の少なくとも約８５重量％及び約９０重量％が、約５μｍ以下のサイズの液滴にエアロゾル化され、放出される。
【0073】
別の態様において、本発明は、肺投与用のエアロゾルを調製及び送達する方法であって、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩を約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で含む液体医薬組成物を提供する工程、又は該液体組成物を調製するための固体医薬組成物を提供する工程であって、該組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含み、該固体組成物が、水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含み、少なくとも約０.８ｍｇ／分の平均送達速度で該活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）若しくは任意の医薬として許容されるその塩の前記液体医薬組成物をエアロゾル化することができる噴霧器を提供する工程であって、該噴霧器が、さらに、約１．５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する分散液相を含むエアロゾルを放出するように適合される工程、並びに該液体医薬組成物をエアロゾル化するために噴霧器を作動させる工程を含む方法を提供する。
【0074】
液体か、最初は固体であるか若しくは最終的にエアロゾル化される本発明の組成物、又は該組成物を含む医薬キットは、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態、例えば、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患若しくは病態を引き起こす肺の感染症などの肺疾患の予防、管理又は治療に使用することができる。
【0075】
本明細書で使用する用語「予防」／「予防すること」、例えば、予防的治療（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を含む。予防用途では、本発明の医薬組成物又は医薬用エアロゾルは、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態を有するか、又は発症するリスクがあると疑われる対象に投与される。
【0076】
本明細書で使用する用語「管理」は、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の症状、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態と関連する特徴の出現までの時間を延長すること、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の症状の重症度の増加を遅延させることを意味する。さらに、本明細書で使用される「管理」は、疾患進行の逆転又は阻害を含む。対象における疾患の進行又は疾患の合併症の「阻害」は、対象における疾患の進行及び／若しくは疾患の合併症を予防又は低減することを意味する。
【0077】
本明細書で使用される用語「治療」／「治療する」は、（１）該状態、疾患若しくは病態に罹患しているか、又はなりやすいが、該状態、疾患若しくは病態の臨床症状又は準臨床症状をまだ経験していないか、若しくは示さない動物、特に哺乳類、及び特にヒトにおける状態、疾患又は病態の臨床的症状の出現の遅延；（２）状態若しくは病態の阻害（維持療法、その少なくとも１つの臨床症状又は亜臨床症状の場合には、例えば、疾患の発症若しくはその再発の阻止、低減又は遅延）；並びに／又は（３）病態の緩和（すなわち、状態、疾患若しくは病態又はその臨床症状若しくは亜臨床症状の少なくとも１つの退行を引き起こすこと）を含む。治療される患者への利益は、統計学的に有意であるか、又は患者若しくは医師に少なくとも知覚される。しかしながら、薬剤が疾患を治療するために患者に投与される場合、結果は必ずしも効果的な治療になり得ないことを理解されたい。
【0078】
治療用途では、該医薬組成物は、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態に既に罹患している患者などの対象に、疾患若しくは病態の症状を治癒するか、又は少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で通常投与される。この使用に有効な量は、疾患の重症度及び経過、過去の治療、対象の健康状態及び薬物に対する応答、並びに治療する医師の判断に依存する。
【0079】
対象の状態が改善しない場合には、本発明の医薬組成物又は医薬用エアロゾルは、対象の疾患若しくは病態の症状を寛解するか、又はそうでなければ、制御若しくは制限するために、対象が生存している期間を含めて長期間にわたって、慢性的に投与することができる。
【0080】
対象の状態が改善しない場合には、該医薬組成物又は医薬用エアロゾルは、連続的に投与してよく、或いは、投与される薬物の用量を、一時的に減少させるか、又は一定期間、一時的に中断してよい（すなわち、「休薬期間」）。
【0081】
患者の病態の改善が起きたら、維持用量の本発明の医薬組成物又は医薬用エアロゾルが、必要に応じて、投与される。その後、投与量又は投与の頻度、又はその両方は、必要に応じて症状の関数として、改善された疾患が保持されるレベルまで低減される。
【0082】
したがって、別の態様において、本発明は、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するため、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための方法において使用するための、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧが（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり、DＰｒｏがＤ－プロリンである］若しくは任意の医薬として許容されるその塩と、場合により、１以上の医薬として許容される希釈剤、添加剤又は担体とを含む医薬組成物を提供する。
【0083】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための薬剤の製造のための、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の治療のための薬剤の製造のための、本明細書に記載の医薬組成物の使用を提供する。
【0084】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の治療のための、本明細書に記載の医薬組成物の使用を提供する。
【0085】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の治療のための方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を前記対象に投与すること、例えば、本明細書に記載の治療有効量の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【0086】
本明細書で使用する用語「医薬として許容される希釈剤、添加剤又は担体」は、過度の有害な副作用（毒性、刺激、およびアレルギー応答など）なしに、合理的な利益／リスク比に見合った、ヒト及び／又は動物での使用に適する担体又は添加剤又はまたは希釈剤を指す。それは、対象に本発明の化合物を送達するための、医薬として許容される溶媒、懸濁剤又はまたはビヒクルであり得る。
【0087】
治療有効量の決定は、特に本明細書に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。いくつかの実施形態において、治療有効量の活性化合物又はまたはその医薬として許容される塩は、（ｉ）対象の痰中の活性エラスターゼの濃度を低減することができ、ｉｉ）対象の痰中のヒト好中球エラスターゼ活性の活性を阻害することができる。様々な実施形態において、該量は、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の症状のうちの１以上を寛解、緩和、軽減、及び／又は遅延するのに十分である。
【0088】
治療有効量は、対象、治療される疾患若しくは病態、対象の体重及び年齢、疾患若しくは病態の重症度、及び投与様式に応じて変化してよく、当業者によって容易に決定され得る。
【0089】
一実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患又は病態を引き起こす肺の感染症などの肺疾患である。
【0090】
好ましい実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、肺疾患であり、該肺疾患は、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）又は嚢胞性線維症（ＣＦ）である。
【0091】
より好ましい実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、肺疾患であり、該肺疾患は嚢胞性線維症（ＣＦ）である。
【0092】
一実施形態において、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルとして対象に投与され、該分散液相は、
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する。
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する。
【0093】
好ましくは、該エアロゾルは、少なくとも約０.１ｍＬ／分の速度で分散液相がエアロゾル発生器から放出されるものである。
【0094】
同じく好ましくは、該エアロゾルは、少なくとも約０.８ｍｇ／分の平均送達速度で、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩がエアロゾル発生器から放出されるものである。
【0095】
該エアロゾルは、好ましくは、上記の好ましい実施形態に記載の速度及び平均送達速度でエアロゾル発生器から放出されるものである。
【0096】
一実施形態において、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物は、本明細書に記載のエアロゾルを調製するための液体医薬組成物であり、該液体医薬組成物は、それぞれ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは、約１７ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は約３５ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは、約７０ｍｇ／ｍＬ～約９５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む。
【0097】
別の態様において、本発明は、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、またはそれに起因する肺の疾患または病態の予防、管理または治療のための方法において使用するための、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルであって、該分散液相は、（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する、
医薬用エアロゾルを提供する。
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する、
医薬用エアロゾルを提供する。
【0098】
該エアロゾルは、好ましくは、上記の好ましい実施形態に記載の速度及び平均送達速度でエアロゾル発生器から放出されるものである。
【0099】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための医薬の製造のための、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載の医薬用エアロゾルの使用が提供される。
【0100】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための、本明細書に記載の医薬用エアロゾルの使用が提供される。
【0101】
また、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法、好ましくは、対象におけるヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための方法であって、本明細書に記載の医薬用エアロゾルを前記対象に投与すること、例えば、治療有効量の本明細書に記載の医薬用エアロゾルを、前記対象に投与することを含む方法が提供される。
【0102】
一実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、α－１アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、又はヒト好中球エラスターゼ活性が介在する肺の疾患又は病態を引き起こす肺の感染症などの肺疾患である。
【0103】
好ましい実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、肺疾患であり、該肺疾患は、非嚢胞性線維症気管支拡張症（ＮＣＦＢ）又は嚢胞性線維症（ＣＦ）である。
【0104】
より好ましい実施形態において、ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態は、肺疾患であり、該肺疾患は嚢胞性線維症（ＣＦ）である。
【0105】
対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物の対イオンは、上記活性化合物について記載したとおりであり、好ましくは酢酸イオンである。
【0106】
対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルは、通常、対象に経口吸入又は気管内に投与され、好ましくは、経口吸入によって投与される。
【0107】
本明細書に提供される方法における、医薬組成物又は医薬用エアロゾルに含まれる活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の投薬計画は、例えば、適応症、投与経路、及び病態の重症度に依存して変化し得る。投与経路に応じて、適切な用量は、体重、体表面積、又は臓器サイズに従って計算することができる。考慮され得るさらなる因子には、投与の時間及び頻度、薬物の組み合わせ、反応感受性、及び療法に対する耐性／応答が含まれる。量、例えば、治療有効量の活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又はその医薬として許容される塩は、所望の治療エンドポイントを達成するために、単回用量又は複数回用量で提供され得る。
【0108】
投薬の頻度は、投与される活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又はその医薬として許容される塩の薬物動態パラメータ、投与経路、及び治療される特定の疾患に依存する。投与の用量及び頻度はまた、薬物動態及び薬力学、並びに毒性及び治療効率データに依存し得る。例えば、活性化合物又はその医薬として許容される塩に関する薬物動態学的及び薬力学的情報は、前臨床インビトロ及びインビボ試験を通して収集され、後に臨床試験の過程でヒトにおいて確認することができる。そのため、本明細書で提供される方法において使用される活性化合物又はその医薬として許容される塩についての治療有効用量は、生化学及び／又は細胞ベースのアッセイから最初に推定することができる。その後、投与量は、望ましい循環濃度範囲を達成するために、動物モデルにおいて製剤化することができる。ヒトでの試験が行われるので、様々な疾患及び病態のための適切な投与量レベル及び治療期間に関するさらなる情報が明らかになるであろう。
【0109】
活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又はその医薬として許容される塩の毒性及び治療上の有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養又は実験動物における標準的な薬学的手順により決定することができる。毒性の影響と治療効果の間の用量比は、典型的には、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表される「治療指数」である。大きな治療指数を示す、すなわち、毒性用量が有効用量よりも実質的に高い化合物が好ましい。このような細胞培養アッセイ及びさらなる動物研究から得られるデータは、ヒトで使用するための用量の範囲で製剤化するのに使用することができる。このような化合物の用量は、好ましくは、ほとんど又は全く毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲である。
【0110】
例示的な治療計画は、１日１回、１日２回、１日３回、毎日、２日ごとに、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、週２回、週１回の投与を伴う。該活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、通常、複数の機会に投与される。単回投与の間隔は、例えば、１日未満、１日、２日、３日、４日、５日、６日又は１週間であり得る。本発明の組み合わせは、連続的で中断されない治療として与えられ得る。本発明の組み合わせはまた、対象が休薬又は非治療期間によって中断される治療サイクル（投与サイクル）を受ける計画で与えられ得る。
【0111】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約０．１～約１００００ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0112】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇの用量で該対象に投与される。
【0113】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約５～約１０００ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0114】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約２０～約９６０ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0115】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約８０～約３２０ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0116】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約２０、約６０、約１２０、約２４０、約４８０又は約９６０ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0117】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための医薬組成物又は医薬用エアロゾルの活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩は、約８０、約１６０、又は約３２０ｍｇ／日の用量で該対象に投与される。
【0118】
別の態様において、本発明は、分散液相及び連続気相を含む肺投与用の医薬用エアロゾルの調製並びに送達のためのキットであって、該分散液相が
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有し；
該キットが、
噴霧器と、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の活性化合物若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む液体組成物を含むか、又は噴霧器と、液体組成物を調製するための固体医薬組成物を含み、組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含み、該固体組成物が水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩を約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で含む、
キットを提供する。
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧは（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏはＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み；
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し；および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有し；
該キットが、
噴霧器と、約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度の活性化合物若しくは任意の医薬として許容されるその塩を含む液体組成物を含むか、又は噴霧器と、液体組成物を調製するための固体医薬組成物を含み、組成物が、活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含み、該固体組成物が水性液体溶媒中に溶解可能又は分散可能であり、該液体組成物が、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法において使用するための活性化合物又は任意の医薬として許容されるその塩を約４ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で含む、
キットを提供する。
【0119】
また、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための医薬の製造のための、好ましくは、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための医薬の製造のための本明細書に記載のキットの使用が提供される。
【0120】
また、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための、好ましくは、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療のための本明細書に記載のキットの使用が提供される。
【0121】
また、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法、好ましくは、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態の治療の方法であって、前記対象に本明細書に記載のキットの医薬用エアロゾルを投与すること、例えば、前記対象に本明細書に記載のキットの治療有効量の医薬用エアロゾル投与することを含む方法が提供される。
【0122】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法で使用するためのキットの噴霧器は、ジェット噴霧器、超音波噴霧器、圧電噴霧器、ジェット衝突噴霧器、電気流体力学噴霧器、毛細管力噴霧器、穿孔膜噴霧器及び穿孔振動膜噴霧器から選択される。
【0123】
一実施形態において、対象においてヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患若しくは病態の予防、管理又は治療のための方法で使用するためのキットの噴霧器は、少なくとも約０．８ｍｇ／分の速度で活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の液体組成物をエアロゾル化することができるように適合されている。
【0124】
一実施形態において、該キットに含まれる活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の充填用量の少なくとも約７０重量％は、約５μｍ以下の質量中央径を有する液滴から構成される。
【0125】
一実施形態において、該キットに含まれる活性化合物の対イオンは、上記活性化合物について記載されているとおりであり、好ましくは酢酸イオンである。
【0126】
別の態様において、本発明は、
活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧが（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏがＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩；および
ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態について、該活性化合物を用いて対象を治療するための説明書を含む添付文書
を含むキットを提供する。
活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）［ここで、ＯｃｔＧが（Ｓ）－２－アミノデカン酸であり；DＰｒｏがＤ－プロリンである］又は任意の医薬として許容されるその塩；および
ヒト好中球エラスターゼ活性が介在するか、若しくはそれに起因する肺の疾患又は病態について、該活性化合物を用いて対象を治療するための説明書を含む添付文書
を含むキットを提供する。
【0127】
一実施形態において、該キットは、分散液相及び連続気相を含む肺投与用のエアロゾルとして活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含み、
該分散液相は、
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み、
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する。
該分散液相は、
（ａ）活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩を含む水性液滴を含み、
（ｂ）約１.５μｍ～約５μｍの質量中央径を有し、および
（ｃ）約１.２～約１.７の幾何標準偏差を有する液滴サイズ分布を有する。
【0128】
一実施形態において、本キットに含まれる活性化合物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）又は任意の医薬として許容されるその塩の充填用量の少なくとも約７０重量％は、約５μｍ以下の質量中央径を有する液滴から構成される。
【0129】
一実施形態において、本キットに含まれる活性化合物の対イオンは、上記活性化合物について記載されているとおりであり、好ましくは酢酸イオンである。
【0130】
以下の実施例は、本発明を例示するものであって、いかなる意味においてもその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【0131】
実施例１：
９３．０３％（以下の計算を参照されたい）の正味のペプチド含有量に基づき、２３０．８８ｇの正味のペプチドに対応する２４８．１８ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１５４ｇの１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液を添加して２９５７ｇの総重量とした。２×０．２２μｍの孔径フィルターで滅菌濾過した後、生成物を、フルオロポリマーコーティングしたブロモブチルゴム栓とはぎ取り式の無地のアルミニウムオーバーシールを備えた欧州薬局方１型ガラスバイアルに詰めた。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。
９３．０３％（以下の計算を参照されたい）の正味のペプチド含有量に基づき、２３０．８８ｇの正味のペプチドに対応する２４８．１８ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１５４ｇの１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液を添加して２９５７ｇの総重量とした。２×０．２２μｍの孔径フィルターで滅菌濾過した後、生成物を、フルオロポリマーコーティングしたブロモブチルゴム栓とはぎ取り式の無地のアルミニウムオーバーシールを備えた欧州薬局方１型ガラスバイアルに詰めた。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。
【0132】
薬物物質（活性化合物）の正味のペプチド含有量の計算：
正味のペプチド含有量[％]＝[（１００－不純物[％]／１００）×（１００－含水率[％]／１００）×（１００－残留溶媒[％]／１００）×（１００－残留ＴＦＡ／１００）×遊離塩[％]／１００]×１００＝[（１００－０．７／１００）×（１００－２．５／１００）×（１００－０．０１３／１００）×９６．１／１００]×１００＝９３．０３％。
正味のペプチド含有量[％]＝[（１００－不純物[％]／１００）×（１００－含水率[％]／１００）×（１００－残留溶媒[％]／１００）×（１００－残留ＴＦＡ／１００）×遊離塩[％]／１００]×１００＝[（１００－０．７／１００）×（１００－２．５／１００）×（１００－０．０１３／１００）×９６．１／１００]×１００＝９３．０３％。
【0133】
実施例２：
０．６％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液を使用したことを除き、実施例１に記載したとおりに、実施例２の製剤を調製した。
０．６％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液を使用したことを除き、実施例１に記載したとおりに、実施例２の製剤を調製した。
【0134】
実施例３：
９５％純度に補正した４．２ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、４０ｍＬの０．６％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．６％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム溶液を加えて総体積５０ｍＬとした。０．２μｍのＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）シリンジフィルターを用いて無菌条件下で滅菌濾過（層流）した後、製剤を、滅菌テフロンコーティングしたゴム栓を有する無菌の５ｍＬのバイアルに等分し、それぞれ５±３℃及び室温（２５±２℃）で冷蔵保存した。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。１２週間、この溶液を安定性について観察した。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表１）及びエアロゾル特性（表２）を、観察期間の開始時及び終了時に決定した。エアロゾル特性の物理化学的特徴付け及び決定（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｘ, V.2.15 ［Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｒｅｎｂｅｒｇ，ドイツ］でのレーザー回折）は、薬局方に準拠した方法に従ってＰａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツが行った。
９５％純度に補正した４．２ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、４０ｍＬの０．６％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．６％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム溶液を加えて総体積５０ｍＬとした。０．２μｍのＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）シリンジフィルターを用いて無菌条件下で滅菌濾過（層流）した後、製剤を、滅菌テフロンコーティングしたゴム栓を有する無菌の５ｍＬのバイアルに等分し、それぞれ５±３℃及び室温（２５±２℃）で冷蔵保存した。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。１２週間、この溶液を安定性について観察した。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表１）及びエアロゾル特性（表２）を、観察期間の開始時及び終了時に決定した。エアロゾル特性の物理化学的特徴付け及び決定（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｘ, V.2.15 ［Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＧｍｂＨ，Ｈｅｒｒｅｎｂｅｒｇ，ドイツ］でのレーザー回折）は、薬局方に準拠した方法に従ってＰａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツが行った。
【0135】
表１：実施例３の製剤の物理化学的特性
【表1】
【0136】
表２：三重に測定した実施例３の製剤のエアロゾル特性
【表2】
【0137】
それぞれ５℃及び２５℃で、１２週間の貯蔵の間に、質量中央径、幾何標準偏差及び吸入性画分（５μｍ未満）において有意な（Ｐ＝９５％、ｎ＝３）変化は観察されなかった。５℃の試料の総出力速度のみがわずかに低下した。
【0138】
実施例４：
９５％純度に補正した１．０５ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．９％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解し、総体積を１０ｍＬにした。溶液の強度は１００ｍｇ／ｍＬであった。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表３）及びエアロゾル特性（表４）は、上述したとおり、Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツによって測定された。
９５％純度に補正した１．０５ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．９％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解し、総体積を１０ｍＬにした。溶液の強度は１００ｍｇ／ｍＬであった。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表３）及びエアロゾル特性（表４）は、上述したとおり、Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツによって測定された。
【0139】
表３：実施例４の製剤の物理化学的特性
【表3】
【0140】
表４：三重に測定した実施例４の製剤のエアロゾル特性
【表4】
【0141】
実施例５：
９５％純度に補正した１．０５ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．９％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解し、総体積を１０ｍＬにした。その後、０．０２％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０を添加した。溶液の強度は１００ｍｇ／ｍＬであった。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表５）及びエアロゾル特性（表６）は、上述したとおりに、Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツによって測定された。
９５％純度に補正した１．０５ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．９％（ｗ／ｗ）塩化ナトリウム水溶液に溶解し、総体積を１０ｍＬにした。その後、０．０２％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０を添加した。溶液の強度は１００ｍｇ／ｍＬであった。ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器によって調製し、送達したエアロゾルの物理化学的パラメータ（表５）及びエアロゾル特性（表６）は、上述したとおりに、Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，ＢＵ Ｐｈａｒｍａ，Ｇｒａｆｅｌｉｎｇ、ドイツによって測定された。
【0142】
表５：実施例５の製剤の物理化学的特性
【表5】
【0143】
表６：三重に決定した実施例５の製剤のエアロゾル特性
【表6】
【0144】
実施例６ａ～ｅ：
９３．０３％の正味のペプチド含有量に基づき（以下の計算を参照されたい）、５．０２３ｇの正味のペプチドに対応する５．４ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム溶液を添加し、総体積を７１．８ｍＬとした。溶液の強度は７０ｍｇ／ｍＬであった（実施例６ａ）。
９３．０３％の正味のペプチド含有量に基づき（以下の計算を参照されたい）、５．０２３ｇの正味のペプチドに対応する５．４ｇのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム水溶液に溶解した。この溶液を、１Ｍ 水酸化ナトリウムでｐＨ５．５に調整し、最後に、０．５％（ｗ／ｗ）の塩化ナトリウム溶液を添加し、総体積を７１．８ｍＬとした。溶液の強度は７０ｍｇ／ｍＬであった（実施例６ａ）。
【0145】
３５ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｂ）、１７．４ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｃ）、８．８ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｄ）及び４．３ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｅ）の強度を有する希釈溶液を、プラセボ（０．５％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）を用いて、表７にしたがって調製した。
【0146】
表７：実施例６ｂ、６ｃ、６ｄ及び６ｅの希釈液の調製スキーム
【表7】
【0147】
実施例６ｆ：
実施例６ｆの製剤を、実施例１に記載の手順に従って調製した。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。
実施例６ｆの製剤を、実施例１に記載の手順に従って調製した。溶液の強度は８０ｍｇ／ｍＬであった。
【0148】
実施例６ａ、６ｃ、６ｅ及び６ｆの送達速度（平均）並びに総送達用量の決定
送達速度及び総送達用量の測定は、７０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ａ）、１７．４ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｃ）及び４．３ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｅ）の製剤については三重で、及び８０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｆ）の製剤については五重で、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）及びシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含む製剤の前記測定に適する薬局方に準拠した方法を用いてＩｎｔｅｒｔｅｋ Ｍｅｌｂｏｕｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎ，英国）によって実施された。結果（平均値）を表８にまとめる。
送達速度及び総送達用量の測定は、７０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ａ）、１７．４ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｃ）及び４．３ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｅ）の製剤については三重で、及び８０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｆ）の製剤については五重で、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）及びシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含む製剤の前記測定に適する薬局方に準拠した方法を用いてＩｎｔｅｒｔｅｋ Ｍｅｌｂｏｕｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎ，英国）によって実施された。結果（平均値）を表８にまとめる。
【0149】
表８：実施例６ａ、６ｃ、６ｅ及び６ｆの送達速度並びに総送達用量
【表8】
【0150】
実施例６ａ、６ｃ、６ｅ及び６ｆの空気力学的粒径分布（ＡＰＳＤ）の測定
ＡＰＳＤの測定は、７０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ａ）、１７．４ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｃ）及び４．３ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｅ）の製剤については三重で、及び８０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｆ）の製剤については五重で、Ｎｅｘｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）及びＰａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）及びシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含む製剤のＡＰＳＤに適する薬局方に準拠した方法を用いて、Ｉｎｔｅｒｔｅｋ Ｍｅｌｂｏｕｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎ，英国）により実施された。結果（平均値）を表９にまとめる。
ＡＰＳＤの測定は、７０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ａ）、１７．４ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｃ）及び４．３ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｅ）の製剤については三重で、及び８０ｍｇ／ｍＬ（実施例６ｆ）の製剤については五重で、Ｎｅｘｔ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）及びＰａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）及びシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を含む製剤のＡＰＳＤに適する薬局方に準拠した方法を用いて、Ｉｎｔｅｒｔｅｋ Ｍｅｌｂｏｕｒｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎ，英国）により実施された。結果（平均値）を表９にまとめる。
【0151】
表９：実施例６ａ、６ｃ、６ｅ及び６ｆの空気力学的粒径分布（ＡＰＳＤ）の測定
【表9】
【0152】
上記の結果から、薬物合計濃度の低下の影響を除いて、提示される範囲内では、異なる強度の溶液の性能における有意な変化は見られなかった。
【0153】
ラットにおけるＧＬＰに準拠した２８日間の吸入毒性試験
チャールズ・リバー・ラボラトリーズ前臨床サービス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）（Ｔｒａｎｅｎｔ，英国エディンバラ）が実施したＧＬＰに準拠した２８日間のラットにおける吸入毒性試験において、実施例２に記載の製剤及びその希釈液並びにビヒクルを、２８日間、１日当たり１００分間、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）を用いて投与し、その後２週間の回復期間を設けた。ラットを、ビヒクル（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．６％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）又は、それぞれ、０、１１、５３及び１１９ｍｇ／ｋｇ／日の薬物用量を達成した全体平均群に対応する０．１５、０．７３及び１．６３ｍｇ／Ｌのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）を含有するエアロゾルで処置した。１０匹の動物を主な毒性試験に使用し、さらに回復期のために５匹の動物を使用した。評価パラメータには、臨床徴候、体重、食物消費量、眼科検査、臨床病理学、剖検所見、臓器重量及び病理組織学的検査が含まれた。ビヒクル対照群と比較して、体重増加のわずかな減少が、１１９ｍｇ／ｋｇ／日の雄で観察された。これは、処置された動物における食物消費の減少と関連していた。２８日～４２日の間の回復期間中に、体重増加の良好な回復が認められた。臨床徴候又は眼の所見は認められなかった。
チャールズ・リバー・ラボラトリーズ前臨床サービス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）（Ｔｒａｎｅｎｔ，英国エディンバラ）が実施したＧＬＰに準拠した２８日間のラットにおける吸入毒性試験において、実施例２に記載の製剤及びその希釈液並びにビヒクルを、２８日間、１日当たり１００分間、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）を用いて投与し、その後２週間の回復期間を設けた。ラットを、ビヒクル（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．６％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）又は、それぞれ、０、１１、５３及び１１９ｍｇ／ｋｇ／日の薬物用量を達成した全体平均群に対応する０．１５、０．７３及び１．６３ｍｇ／Ｌのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）を含有するエアロゾルで処置した。１０匹の動物を主な毒性試験に使用し、さらに回復期のために５匹の動物を使用した。評価パラメータには、臨床徴候、体重、食物消費量、眼科検査、臨床病理学、剖検所見、臓器重量及び病理組織学的検査が含まれた。ビヒクル対照群と比較して、体重増加のわずかな減少が、１１９ｍｇ／ｋｇ／日の雄で観察された。これは、処置された動物における食物消費の減少と関連していた。２８日～４２日の間の回復期間中に、体重増加の良好な回復が認められた。臨床徴候又は眼の所見は認められなかった。
【0154】
毒物学的に関連すると考えられた臨床病理学（血液学、凝固、臨床化学及び尿検査の調査）での所見は認められなかった。薬物での処置後の臓器重量又は全体所見において治療に関連した変化はなかった。喉頭の組織病理学によって、全群において異形成の細胞異型のない病巣の最小限の扁平上皮化生が明らかになった。これらの変化は、回復期間中に消散し、軽度の刺激に対する非有害な適応応答と考えられた。肺の組織病理学により、全群において最小から中程度の多病巣肺胞マクロファージの蓄積が明らかになった。マクロファージの蓄積のこのわずかな増加は、肺のクリアランス容量を超える高濃度の物質の吸入に非特異的な反応と考えられた。結論として、体重増加及び食物摂取及び喉頭における組織病理学的所見の変化は非有害とみなされたため、無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は１１９ｍｇ／ｋｇ／日であった。
【0155】
サルにおけるＧＬＰに準拠した２８日間の吸入毒性試験
チャールズ・リバー・ラボラトリーズ前臨床サービス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）（Ｔｒａｎｅｎｔ，英国エディンバラ）が実施したＧＬＰに準拠した２８日間のカニクイザルにおける吸入毒性試験において、実施例２に記載の製剤及びその希釈液並びにビヒクルを、２８日間、１日当たり６０分間、口腔鼻吸入マスクを有するＰａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）を用いて投与し、その後２週間の回復期間を設けた。サルを、ビヒクル（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．６％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）又はそれぞれ０、１１．２、３０．１及び１１２ｍｇ／ｋｇ／日の薬物用量を達成した推定平均に対応するエアロゾル化したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩で処置した。回復を含め毒性試験の各用量について、合計５匹の雄及び５匹の雌を使用した。評価パラメータには、臨床徴候、体重、心電図、眼科検査、臨床病理学、血漿中の毒物動態パラメータ、肉眼剖検所見、臓器重量及び組織病理学的検査が含まれた。薬物処置に起因する体重変化、臨床徴候、眼科若しくは心電図の所見又は尿パラメータの変化はなかった。血液学及び臨床病理学において、いくつかの小さな有意でない毒性変化が観察された。これらの所見はいずれも、応答の程度が小さく、ほとんどの所見が一方の性別に限定され、かつ／又は両方の性別が影響を受けた場合には退行のエビデンスを示したので、毒性学的に重要とは考えられなかった。肉眼所見には、１１２ｍｇ／ｋｇ／日で、雄で肺重量の増加、及び肺のまだらの外観及び気管気管支リンパ節の拡大が含まれた。組織病理学的所見は、肺胞マクロファージ、血管周囲／細気管支周囲の浸潤物、及び肺における顆粒好酸球沈着物の数の増加、及び気管気管支リンパ節におけるリンパ過形成を含め、全ての薬物用量レベルで観察されたが、完全な回復を示した。これらの所見は、回復中に完全な可逆性を実証し、正常な肺クリアランス容量を超える（特に１１２／ｋｇ／日）物質の吸入によるものと考えられた。結論として、上記の変化は全て非有害と考えられたので、本試験でのＮＯＡＥＬは１１２ｍｇ／ｋｇ／日であった。
チャールズ・リバー・ラボラトリーズ前臨床サービス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）（Ｔｒａｎｅｎｔ，英国エディンバラ）が実施したＧＬＰに準拠した２８日間のカニクイザルにおける吸入毒性試験において、実施例２に記載の製剤及びその希釈液並びにビヒクルを、２８日間、１日当たり６０分間、口腔鼻吸入マスクを有するＰａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）を用いて投与し、その後２週間の回復期間を設けた。サルを、ビヒクル（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．６％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）又はそれぞれ０、１１．２、３０．１及び１１２ｍｇ／ｋｇ／日の薬物用量を達成した推定平均に対応するエアロゾル化したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩で処置した。回復を含め毒性試験の各用量について、合計５匹の雄及び５匹の雌を使用した。評価パラメータには、臨床徴候、体重、心電図、眼科検査、臨床病理学、血漿中の毒物動態パラメータ、肉眼剖検所見、臓器重量及び組織病理学的検査が含まれた。薬物処置に起因する体重変化、臨床徴候、眼科若しくは心電図の所見又は尿パラメータの変化はなかった。血液学及び臨床病理学において、いくつかの小さな有意でない毒性変化が観察された。これらの所見はいずれも、応答の程度が小さく、ほとんどの所見が一方の性別に限定され、かつ／又は両方の性別が影響を受けた場合には退行のエビデンスを示したので、毒性学的に重要とは考えられなかった。肉眼所見には、１１２ｍｇ／ｋｇ／日で、雄で肺重量の増加、及び肺のまだらの外観及び気管気管支リンパ節の拡大が含まれた。組織病理学的所見は、肺胞マクロファージ、血管周囲／細気管支周囲の浸潤物、及び肺における顆粒好酸球沈着物の数の増加、及び気管気管支リンパ節におけるリンパ過形成を含め、全ての薬物用量レベルで観察されたが、完全な回復を示した。これらの所見は、回復中に完全な可逆性を実証し、正常な肺クリアランス容量を超える（特に１１２／ｋｇ／日）物質の吸入によるものと考えられた。結論として、上記の変化は全て非有害と考えられたので、本試験でのＮＯＡＥＬは１１２ｍｇ／ｋｇ／日であった。
【0156】
経口吸入される単回用量のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩製剤の安全性及び忍容性を調査するための健常対象におけるファーストインマン試験
Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ（ドイツ,ガウティング）が行った、４８人（６つの用量群についてそれぞれ８人）の健常者における吸入単回用量のこの無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行群（用量レベル当たり）用量漸増試験では、実施例１に記載の製剤及びその希釈液並びにプラセボ（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．５％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）の制御された経口吸入を、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）により行った。シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）の用量レベル及び対応する濃度を表１０にまとめる。
Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ（ドイツ,ガウティング）が行った、４８人（６つの用量群についてそれぞれ８人）の健常者における吸入単回用量のこの無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行群（用量レベル当たり）用量漸増試験では、実施例１に記載の製剤及びその希釈液並びにプラセボ（医薬グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．５％[ｗ／ｗ]塩化ナトリウム水溶液）の制御された経口吸入を、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）により行った。シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）の用量レベル及び対応する濃度を表１０にまとめる。
【0157】
表１０
【表10】
【0158】
プラセボ噴霧器溶液の容量は、特定用量レベルでの活性化合物の容量と対応するようにした。吸入期間は、噴霧器溶液の全量に応じて、数分～約１時間の範囲であった。有害事象は、国際医薬用語集（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）の現在のバージョンに応じて集計し、まとめた。
【0159】
安全性及び忍容性の結果
試験期間中、死亡、重篤な有害事象（ＡＥ）及び他の有意なＡＥはなかった。合計２７のＡＥのうち、１３対象において２４件の治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）が記録された（２７．１％）。これらの対象は全て活性化合物を投与していた。プラセボ溶液を吸入した対象については、ＡＥは報告されなかった。ＡＥの数並びにそれらの程度及び試験薬剤との因果関係について、他の用量レベルと比較した場合、ＡＥのより高い総数及び関連するＡＥが、最高用量の活性化合物を吸入する群（９６０ｍｇ；用量群６）から報告された。報告されたＡＥ及び症状の大部分は、「咳」、「気道炎症」、増加した粘液産生又は最初の１秒間における強制呼気容量（ＦＥＶ１）の一過性の減少等、呼吸器系に関連するものであった。特に活性化合物のより高い用量を吸入する群における、呼吸器症状及び呼吸ＡＥのより高い発生率は、おそらく長い吸入時間に関連している可能性がある。これらのＡＥは、必ずしも、実施例１の製剤及びその希釈液自体には関連していない可能性があり、手技上のＡＥかもしれない。局所忍容性に関しては、３件の吸入関連有害事象（「咳」）があった。全体的な忍容性は対象の大多数（９７．９％）について「非常に良い」又は「良い」と判断された。本試験をとおして、臨床検査値の大部分は、それぞれの基準範囲内に収まった。身体検査、バイタルサインの測定、心電図（ＥＣＧ）記録及び肺機能の結果の個々の結果のほとんどは、一般的に受け入れられている臨床検査基準の範囲内であった。測定した安全性パラメータに対する活性化合物の時間依存の明かな影響はなかった。異なる用量群の間で特に差はなかった。
試験期間中、死亡、重篤な有害事象（ＡＥ）及び他の有意なＡＥはなかった。合計２７のＡＥのうち、１３対象において２４件の治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）が記録された（２７．１％）。これらの対象は全て活性化合物を投与していた。プラセボ溶液を吸入した対象については、ＡＥは報告されなかった。ＡＥの数並びにそれらの程度及び試験薬剤との因果関係について、他の用量レベルと比較した場合、ＡＥのより高い総数及び関連するＡＥが、最高用量の活性化合物を吸入する群（９６０ｍｇ；用量群６）から報告された。報告されたＡＥ及び症状の大部分は、「咳」、「気道炎症」、増加した粘液産生又は最初の１秒間における強制呼気容量（ＦＥＶ１）の一過性の減少等、呼吸器系に関連するものであった。特に活性化合物のより高い用量を吸入する群における、呼吸器症状及び呼吸ＡＥのより高い発生率は、おそらく長い吸入時間に関連している可能性がある。これらのＡＥは、必ずしも、実施例１の製剤及びその希釈液自体には関連していない可能性があり、手技上のＡＥかもしれない。局所忍容性に関しては、３件の吸入関連有害事象（「咳」）があった。全体的な忍容性は対象の大多数（９７．９％）について「非常に良い」又は「良い」と判断された。本試験をとおして、臨床検査値の大部分は、それぞれの基準範囲内に収まった。身体検査、バイタルサインの測定、心電図（ＥＣＧ）記録及び肺機能の結果の個々の結果のほとんどは、一般的に受け入れられている臨床検査基準の範囲内であった。測定した安全性パラメータに対する活性化合物の時間依存の明かな影響はなかった。異なる用量群の間で特に差はなかった。
【0160】
ファーストインマン試験の上記の結果は、実施例１の製剤及びその希釈液が、広範囲の濃度でのエアロゾル化に非常に適しており、高濃度（８０ｍｇ／ｍＬ）でもヒトでの吸入投与に適用可能であることを示している。
【0161】
ラットにおける好中球活性化のインビボモデルにおけるシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の吸入投与の効果
本試験（Ｅｎｖｉｇｏ ＣＲＳ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ａｌｃｏｎｂｕｒｙ，イギリスハンティンドンによって行われた）の目的は、ラットにおける好中球活性化のＬＰＳ／ｆＭＬＰモデルにおいて、吸入投与したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の効果を評価することであった。
本試験（Ｅｎｖｉｇｏ ＣＲＳ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ａｌｃｏｎｂｕｒｙ，イギリスハンティンドンによって行われた）の目的は、ラットにおける好中球活性化のＬＰＳ／ｆＭＬＰモデルにおいて、吸入投与したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の効果を評価することであった。
【0162】
製剤の調製
試験動物群１用の製剤（ビヒクル）は、１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整し、０．２μｍフィルターで濾過した０．５％（ｗ／ｖ）の生理食塩水であった。
試験動物群１用の製剤（ビヒクル）は、１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整し、０．２μｍフィルターで濾過した０．５％（ｗ／ｖ）の生理食塩水であった。
【0163】
試験動物群２～４用の製剤を以下のように調製した：
適切な量のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を秤量し、適切な量のｐＨ５．５の０．５％（ｗ／ｖ）生理食塩水を添加して、８３．２８ｍｇ／ｍＬの処方濃度とした。最終溶液のｐＨを１Ｍ ＮａＯＨで５．５に調整した。
８３．２８ｍｇ／ｍＬのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の適切な量を、適切な量のビヒクルに添加して１５．６２ｍｇ／ｍＬの製剤を得た。
最後に、１５．６２ｍｇ／ｍＬのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の適切な量を、適切な量のビヒクルに添加して５．２１ｍｇ／ｍＬの製剤を得た。次いで、これら３つの製剤溶液（８３．２８ｍｇ／ｍＬ、１５．６２ｍｇ／ｍＬ、５．２１ｍｇ／ｍＬ）を、０．２μｍフィルターで濾過した。
適切な量のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩を秤量し、適切な量のｐＨ５．５の０．５％（ｗ／ｖ）生理食塩水を添加して、８３．２８ｍｇ／ｍＬの処方濃度とした。最終溶液のｐＨを１Ｍ ＮａＯＨで５．５に調整した。
８３．２８ｍｇ／ｍＬのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の適切な量を、適切な量のビヒクルに添加して１５．６２ｍｇ／ｍＬの製剤を得た。
最後に、１５．６２ｍｇ／ｍＬのシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の適切な量を、適切な量のビヒクルに添加して５．２１ｍｇ／ｍＬの製剤を得た。次いで、これら３つの製剤溶液（８３．２８ｍｇ／ｍＬ、１５．６２ｍｇ／ｍＬ、５．２１ｍｇ／ｍＬ）を、０．２μｍフィルターで濾過した。
【0164】
これらの製剤は、投与の１日前に調製し、使用の日まで暗所で２～８℃にて保存し、使用日にそれらを冷蔵庫から取り出して室温（２５℃以下）で維持し、少なくとも投与前の１時間穏やかに振盪した。
【0165】
１．０４１であるシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩／遊離塩基の比を考慮して、試験動物群１～４用に調製した製剤の濃度を表１１にまとめる。すなわち、これらの製剤は、実施例１に記載の製剤及びその希釈液に相当する。
【0166】
表１１
【表11】
【0167】
吸入治療コホートについての手順
動物に、エアロゾル化ＬＰＳ（リポ多糖、１ｍｇ／ｍＬ）を３０分間負荷した。ＬＰＳ負荷の終了後約３時間の時点で、動物にビヒクル又は上記のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩製剤のいずれかを、ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ；鼻のみに暴露）を用いて、３０分かけて吸入により投与した（群１～４）。ＬＰＳ負荷の完了の約４時間後に、全ての動物に、一過的な気体麻酔下、気管内経路を介して用量体積１ｍＬ／ｋｇのｆＭＬＰ（Ｎ－ホルミル－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ、５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ｆＭＬＰの投与後約２時間の時点で、動物を死亡させ、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行い、炎症性細胞浸潤及び好中球エラスターゼ活性を評価した。吸入治療コホートについての手順を表１２にまとめる。
動物に、エアロゾル化ＬＰＳ（リポ多糖、１ｍｇ／ｍＬ）を３０分間負荷した。ＬＰＳ負荷の終了後約３時間の時点で、動物にビヒクル又は上記のシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩製剤のいずれかを、ｅＦｌｏｗ（登録商標）３０ ＸＬ電子噴霧器（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ；鼻のみに暴露）を用いて、３０分かけて吸入により投与した（群１～４）。ＬＰＳ負荷の完了の約４時間後に、全ての動物に、一過的な気体麻酔下、気管内経路を介して用量体積１ｍＬ／ｋｇのｆＭＬＰ（Ｎ－ホルミル－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ、５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ｆＭＬＰの投与後約２時間の時点で、動物を死亡させ、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行い、炎症性細胞浸潤及び好中球エラスターゼ活性を評価した。吸入治療コホートについての手順を表１２にまとめる。
【0168】
表１２
【表12】
【0169】
ｆＭＬＰの用量及び時点を公開データ（例えば、Ｓ．Ｙａｓｕｉ，Ａ．Ｎａｇａｉ，Ｋ．Ａｏｓｈｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．，１９９５，８，１２９３；Ｔ．Ｙａｎｇ，Ｊ．Ｚｈａｎｇ，Ｋ．Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．２０１２，６１，５６３；Ｒ．Ｃｏｒｔｅｌｉｎｇ，Ｄ．Ｗｙｓｓ，Ａ．Ｔｒｉｆｉｌｉｅｆｆ，ＢＭＣ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００２，２，１を参照されたい）及びＥｎｖｉｇｏ ＣＲＳ株式会社での経験に基づいて選択した。薬物の用量選択は、Ｅｎｖｉｇｏ ＣＲＳ株式会社での以前の気管内の研究に基づいた。この以前の研究では、薬物の０．０３～３ｍｇ／ｋｇの気管内用量は、この動物モデルにおいて有効であることが見出された。
【0170】
試験項目に関連する臨床徴候は、投与期間から試験終了時の間は観察されなかった。群１（ビヒクル）の２匹は、深い麻酔により、ｆＭＬＰの投与直後に死亡した。
【0171】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）
死の確認後に、動物の気管を単離し、気管カニューレを挿入し、所定の位置に固定し、気道を３ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。洗浄を２回繰り返し、合計で、３ｍＬのＰＢＳの３つのロットを使用した。細胞を含有する第１の洗浄アリコートを、湿潤氷上の１５ｍＬの遠心チューブ（チューブＡ）に入れた。第２の２つの洗浄液からプールしたＢＡＬ液を、第２のチューブ（チューブＢ）に入れた。遠心分離するまで、チューブＡ及びＢを湿潤氷上に置いた。遠心分離は、約４℃で、１０分間、８００×ｇで行い、上清を回収した。好中球エラスターゼ分析まで、上清を約８０℃で保存した。
死の確認後に、動物の気管を単離し、気管カニューレを挿入し、所定の位置に固定し、気道を３ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。洗浄を２回繰り返し、合計で、３ｍＬのＰＢＳの３つのロットを使用した。細胞を含有する第１の洗浄アリコートを、湿潤氷上の１５ｍＬの遠心チューブ（チューブＡ）に入れた。第２の２つの洗浄液からプールしたＢＡＬ液を、第２のチューブ（チューブＢ）に入れた。遠心分離するまで、チューブＡ及びＢを湿潤氷上に置いた。遠心分離は、約４℃で、１０分間、８００×ｇで行い、上清を回収した。好中球エラスターゼ分析まで、上清を約８０℃で保存した。
【0172】
好中球エラスターゼ活性
ＢＡＬ上清の２つのアリコートを、以下のように好中球エラスターゼ活性について分析した：アリコート１からの１２０μＬのＢＡＬ上清を９６ウェルプレート（コーニング＃３６５０）に移した。並行して、市販のヒト好中球エラスターゼ（ｈＮＥ、Ｓｅｒｖａ番号２０９２７．０１）の１．６～０．０２５ｍＵ／ウェルの範囲の希釈液を調製した。各ｈＮＥ希釈液１２０μＬを二重に９６ウェルプレートに移した。酵素反応を開始し、５００μΜの最終濃度で８０μＬの蛍光ペプチド基質（ＭｅＯＳｕｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－ｖａｌ－ＡＭＣ）を各ウェルに添加し、プレートを、事前に３７℃に温めておいたｖｉｃｔｏｒ２ｖ蛍光リーダーに直ちに配置した。蛍光（λｅxｃ．４８５ｎｍ、λｅｍ．５３５ｎｍ）を３７℃で２時間記録した。全ての試料の酵素初期速度（ＲＦＵ／分）を計算し、ヒト好中球エラスターゼ標準範囲のプロット（ｈＮＥ希釈液のＲＦＵ／分対ｍＵ／ｍＬ）から得られた線形回帰式を用いて、ｍＵ／ｍＬのｈＮＥ当量に変換した。アリコート２からのＢＡＬ上清を用いてアッセイを繰り返した。報告された好中球エラスターゼデータは、両方のアリコートからの好中球エラスターゼ活性の平均値である。ＢＡＬ液中の好中球エラスターゼ活性を表１３及び図１及び２に示す。
ＢＡＬ上清の２つのアリコートを、以下のように好中球エラスターゼ活性について分析した：アリコート１からの１２０μＬのＢＡＬ上清を９６ウェルプレート（コーニング＃３６５０）に移した。並行して、市販のヒト好中球エラスターゼ（ｈＮＥ、Ｓｅｒｖａ番号２０９２７．０１）の１．６～０．０２５ｍＵ／ウェルの範囲の希釈液を調製した。各ｈＮＥ希釈液１２０μＬを二重に９６ウェルプレートに移した。酵素反応を開始し、５００μΜの最終濃度で８０μＬの蛍光ペプチド基質（ＭｅＯＳｕｃ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－ｖａｌ－ＡＭＣ）を各ウェルに添加し、プレートを、事前に３７℃に温めておいたｖｉｃｔｏｒ２ｖ蛍光リーダーに直ちに配置した。蛍光（λｅxｃ．４８５ｎｍ、λｅｍ．５３５ｎｍ）を３７℃で２時間記録した。全ての試料の酵素初期速度（ＲＦＵ／分）を計算し、ヒト好中球エラスターゼ標準範囲のプロット（ｈＮＥ希釈液のＲＦＵ／分対ｍＵ／ｍＬ）から得られた線形回帰式を用いて、ｍＵ／ｍＬのｈＮＥ当量に変換した。アリコート２からのＢＡＬ上清を用いてアッセイを繰り返した。報告された好中球エラスターゼデータは、両方のアリコートからの好中球エラスターゼ活性の平均値である。ＢＡＬ液中の好中球エラスターゼ活性を表１３及び図１及び２に示す。
【0173】
表１３
【表13】
【0174】
ＬＰＳ負荷の３時間後で、ｆＭＬＰ負荷の１時間前に、吸入経路によって０．３、３及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した薬物シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）は、ＬＰＳ負荷の６時間後に採取したＢＡＬ液中の好中球エラスターゼ活性を有意に阻害した。
【0175】
嚢胞性線維症患者におけるシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の経口吸入単回投与の安全性、忍容性及び薬物動態を調べるフェーズ１ｂ試験
この無作為化二重盲検、プラセボ対照、並行群（用量レベル当たり）用量漸増試験において、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者に吸入により投与したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の単一漸増投与（ＳＡＤ）の安全性及び忍容性を調べた。さらに、血漿及び痰中の単一漸増投与後の薬物の薬物動態及び痰中の好中球エラスターゼ活性に対するその薬力学的効果を評価した。
この無作為化二重盲検、プラセボ対照、並行群（用量レベル当たり）用量漸増試験において、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者に吸入により投与したシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の酢酸塩の単一漸増投与（ＳＡＤ）の安全性及び忍容性を調べた。さらに、血漿及び痰中の単一漸増投与後の薬物の薬物動態及び痰中の好中球エラスターゼ活性に対するその薬力学的効果を評価した。
【0176】
治療
Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ，Ｇａｕｔｉｎｇ、ドイツが行ったこの試験では、全ての選択基準を満たし、除外基準も存在しない嚢胞性線維症の２４人の対象が含まれており、無作為化治療を受けた。彼らを、各８人の対象の３つの用量群にグループ化した。６人の対象に、実施例１に記載の製剤及びその希釈液を与え、２人の対象にプラセボ（医薬品グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．５％[ｗ／ｗ]の塩化ナトリウム水溶液）を与えた。上記製剤及びプラセボの経口吸入を、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）によって行った。シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）の用量レベル及び対応する濃度を表１４にまとめる。
Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ，Ｇａｕｔｉｎｇ、ドイツが行ったこの試験では、全ての選択基準を満たし、除外基準も存在しない嚢胞性線維症の２４人の対象が含まれており、無作為化治療を受けた。彼らを、各８人の対象の３つの用量群にグループ化した。６人の対象に、実施例１に記載の製剤及びその希釈液を与え、２人の対象にプラセボ（医薬品グレードの１Ｍ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整した０．５％[ｗ／ｗ]の塩化ナトリウム水溶液）を与えた。上記製剤及びプラセボの経口吸入を、Ｐａｒｉ ｅＦｌｏｗ（登録商標）ＸＬ ３０噴霧器装置（Ｐａｒｉ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨ，Ｓｔａｒｎｂｅｒｇ，ドイツ）によって行った。シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）の用量レベル及び対応する濃度を表１４にまとめる。
【0177】
表１４
【表14】
【0178】
プラセボ噴霧器溶液の量は、特定の用量レベルの活性化合物のそれに相当した。吸入時間は７～２０分であると推定された。有害事象は、国際医薬用語集の現在のバージョンに応じて集計し、まとめた。
【0179】
安全性及び忍容性の結果
試験期間中に、死亡、重篤な有害事象（ＡＥ）及び他の顕著なＡＥは生じなかった。吸入に関連した局所ＡＥはなかった。２４人の対象はいずれも、ＡＥが原因で早めに試験が終了することはなかった。
試験期間中に、死亡、重篤な有害事象（ＡＥ）及び他の顕著なＡＥは生じなかった。吸入に関連した局所ＡＥはなかった。２４人の対象はいずれも、ＡＥが原因で早めに試験が終了することはなかった。
【0180】
合計６のＡＥは全て治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）であり、６人の対象において記録された。最も頻繁に報告された事項は、「めまい」及び「頭痛」で、それぞれ２つの事象があった。６つのＴＥＡＥは全て、活性化合物に関連していないとされた。ＴＥＡＥはいずれも重篤と評価されなかった。ＡＥ期間は一過性であった。全６つのＡＥは、後遺症もなく解消した。ＡＥの数並びにそれらの強度及び試験薬剤との因果関係について、用量レベルの間には明白な違いは明らかにならなかった。本試験を通して、臨床検査値だけでなく、ＥＣＧ及びバイタルサインの結果の大半は、それぞれの基準範囲内にとどまった。逸脱所見は、臨床的に関連せず、通常は、ＣＦ患者での試験で観察された偏差の程度と一致していた。肺機能検査の結果の大部分は、ＣＦ患者について予想されるとおりであった。
【0181】
薬物動態学的評価
以下の薬物動態パラメータを、シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）について評価した。
血漿：
主要変数として血漿中の活性化合物のＡＵＣ０－∞、ＡＵＣ０－∞／Ｄ、Ｃｍａｘ、Ｃｍａｘ／Ｄ及び二次変数として血漿中の活性化合物のｔｍａｘ、Ｔ１／２、λｚ、ＡＵＣ０－ｔｌａｓｔ
以下の薬物動態パラメータを、シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）（活性化合物）について評価した。
血漿：
主要変数として血漿中の活性化合物のＡＵＣ０－∞、ＡＵＣ０－∞／Ｄ、Ｃｍａｘ、Ｃｍａｘ／Ｄ及び二次変数として血漿中の活性化合物のｔｍａｘ、Ｔ１／２、λｚ、ＡＵＣ０－ｔｌａｓｔ
【0182】
痰：
痰中の活性化合物の濃度を計算し、Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０－ｔｌａｓｔを決定した。
痰中の活性化合物の濃度を計算し、Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０－ｔｌａｓｔを決定した。
【0183】
血漿試料のサンプリング及び試料処理
活性化合物の血漿濃度を決定するための血液試料を以下の時点で採取した：
１日目は、投与前、投与後（吸入開始後）１０分、及び０．５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１５時間、及び並びに２日目は投与後２４時間。
活性化合物の血漿濃度を決定するための血液試料を以下の時点で採取した：
１日目は、投与前、投与後（吸入開始後）１０分、及び０．５時間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１５時間、及び並びに２日目は投与後２４時間。
【0184】
試料を、閉じたＫ３－ＥＤＴＡ血漿サンプリングチューブ（Ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ（登録商標） Ｓａｒｓｔｅｄｔ、ドイツ）に収集した。個々の試験試料について試料取扱手順に許容される時間間隔、すなわち、試料採取から試料の遠心分離までの時間は、６０分を超えてはならず、遠心分離の終了から試料凍結までの時間も６０分を超えてはならなかった。
【0185】
試料を、１５分間、２２００×ｇで、約４℃（±２℃）で遠心分離した。次いで、得られた血漿上清を、２本のポリプロピレンチューブに移し（少なくとも１ｍＬの第１のアリコート及びバックアップ）、２０℃以下で、直立位置で凍結した。試料を、試料採取の翌日から生物分析場所（Ｐｈａｒｍａｃｅｌｓｕｓ ＧｍｂＨ，Ｓａａｒｂｒｕｃｋｅｎ、ドイツ）に出荷する（温度ロギング装置と共にドライアイス）まで、２０℃以下の連続温度制御下の冷凍庫内で保存した。
【0186】
痰試料のサンプリング及び試料処理
ＰＫ評価のための自発痰試料を、以下の時間間隔／期間中に収集した：
１日目の、対象が試験場所到着後できるだけ早く（ブランクＰＫ）、１日目の吸入開始後１時間～３時間、および２日目の朝、吸入開始後約２４時間。さらに、吸入開始後０～１時間に自発痰の喀出を収集した。
ＰＫ評価のための自発痰試料を、以下の時間間隔／期間中に収集した：
１日目の、対象が試験場所到着後できるだけ早く（ブランクＰＫ）、１日目の吸入開始後１時間～３時間、および２日目の朝、吸入開始後約２４時間。さらに、吸入開始後０～１時間に自発痰の喀出を収集した。
【0187】
自発痰試料を、ポリスチレンペトリ皿に収集し、直ちに氷上に置いた。全ての処理工程は、冷たい試薬で、可能な限り氷上で行わなければならなかった。プラグを唾液から分離したが、後者は廃棄しなかった。痰試料を痰分析のＰＫと好中球エラスターゼ活性の両方のために採取した場合、プラグを、約２等分に分割した。一方はＰＫ解析のために、他方は痰中の好中球エラスターゼ活性の評価のために処理した。
【0188】
ＰＫ処理のために、得られたプラグをほぼ２等分に分割した。これらは、ＰＫの評価（ＳＰ１）及びＰＫバックアップ（ＳＰ３）のための２本の移送管に移した。最高１．０ｍＬの唾液を、ＰＫ評価のために別の移送管（ＳＰ２）に移した。ペトリ皿に残った唾液を捨てた。痰試料（ＳＰ１＋ＳＰ３）の重量を測定し、全ての試料を凍結のためにドライアイスの上にすぐに置いた。凍結後、試料を－８０±１０℃で、直立位置で保存した。ＰＫ評価（ＳＰ１＋ＳＰ２）のため、痰および唾液試料を、ドライアイス上でＰｈａｒｍａｃｅｌｓｕｓ ＧｍｂＨに出荷した。バックアップ痰試料（ＳＰ３）を、Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ，Ｇａｕｔｉｎｇ、ドイツで－８０±１０℃で保存した。
【0189】
生物分析方法
血漿中の活性化合物の分析のために、有効な高感度液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を使用した。痰中の活性化合物の分析のために、有効な、又は利用できない場合は「目的に合った」高感度液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を用いた。
血漿中の活性化合物の分析のために、有効な高感度液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を使用した。痰中の活性化合物の分析のために、有効な、又は利用できない場合は「目的に合った」高感度液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を用いた。
【0190】
生物分析の手順を、生物分析アッセイのための現在の優良試験所基準（ＧＬＰ）規制、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）及びＥＭＡ検証要件に従って実施し、ルーチン分析の規制及び分析のための一般的な規制を含む適用可能な標準業務手順書（ＳＯＰ）に概説した。
【0191】
導出された薬物動態パラメータ
上述の薬物動態パラメータを、非コンパートメント手順を用いて、実際の血液及び痰のサンプリング時間に基づいて計算した。
上述の薬物動態パラメータを、非コンパートメント手順を用いて、実際の血液及び痰のサンプリング時間に基づいて計算した。
【0192】
シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の血漿濃度－時間曲線及び導出された薬物動態パラメータ
活性化合物の平均血漿濃度－時間曲線を図３に示す。
活性化合物の平均血漿濃度－時間曲線を図３に示す。
【0193】
活性化合物の曲線は、典型的なプロファイルを示し、健常対象が吸入する活性化合物の同等用量の結果に類似しており、その最初の血漿濃度は、ＣＦ患者に早期に検出された。
【0194】
活性化合物の血漿濃度は上昇し、用量群１では１．３時間、用量群２では１．５時間及び用量群３では２．３時間でそれぞれのピーク（ｔｍａｘ、平均値）に到達した。その後、活性化合物の血漿濃度は低下し、平均終末半減期（ｍｅａｎ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ）は、用量群１では４．１時間、用量群２では３．５時間及び用量群３では３．８時間であった。吸入後２４時間の時点で、活性化合物は、全用量群の対象において依然として検出することができ、平均血漿濃度は、用量群１では２．８ｎｇ／ｍＬ、用量群２では４．４ｎｇ／ｍＬ、及び用量群３では１５．２ｎｇ／ｍＬであった。
【0195】
シクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）の痰濃度
活性化合物の平均痰濃度を図４に示す。
活性化合物の平均痰濃度を図４に示す。
【0196】
吸入後の最初の痰サンプリング時点（０～１時間のサンプリング間隔）で既に、活性化合物は、全用量群の対象の大部分で検出された。痰中の活性化合物の濃度は、用量によって増加し、濃度の最高平均（ＳＤ）値は、０．６（０．７９）ｇ／Ｌ（用量群１、１～３時間のサンプリング間隔）、１．１（１．２３）ｇ／Ｌ（用量群２、０～１時間のサンプリング間隔）及び１．８（１．８１）ｇ／Ｌ（用量群３、０～１時間のサンプリング間隔）であった。活性化合物は、吸入後２４時間の時点で、全用量群の対象の痰中で依然として検出することができた。
【0197】
薬力学的評価
活性化合物の漸増単一用量の薬力学的効果を、ＰＢＳでの等分化及び凍結後にＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）アッセイを用いて、痰中の好中球エラスターゼ（ＮＥ）活性を評価することによって調べた。
活性化合物の漸増単一用量の薬力学的効果を、ＰＢＳでの等分化及び凍結後にＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）アッセイを用いて、痰中の好中球エラスターゼ（ＮＥ）活性を評価することによって調べた。
【0198】
痰試料のサンプリング及び試料処理
好中球エラスターゼ（ＮＥ）活性の評価のための自発痰試料を、以下の時間間隔／期間中に収集した：
ＮＥ活性のベースライン評価のためにスクリーニングの日（可能な場合）、１日目のＮＥ活性のベースライン評価のために対象が試験場所に到着した後できるだけ早い時点、１日目の吸入開始後１時間～３時間の間、及び２日目の朝の吸入開始後約２４時間の時点。
好中球エラスターゼ（ＮＥ）活性の評価のための自発痰試料を、以下の時間間隔／期間中に収集した：
ＮＥ活性のベースライン評価のためにスクリーニングの日（可能な場合）、１日目のＮＥ活性のベースライン評価のために対象が試験場所に到着した後できるだけ早い時点、１日目の吸入開始後１時間～３時間の間、及び２日目の朝の吸入開始後約２４時間の時点。
【0199】
自発痰試料を、ポリスチレンペトリ皿に収集し、直ちに氷上に置いた。全ての処理工程は、冷たい試薬で、可能な限り氷上で行わなければならなかった。プラグを唾液から分離したが、後者は廃棄しなかった。痰試料を、痰分析のＰＫとＮＥ活性の両方のために採取した場合、プラグを約２等分に分割した。上記のように、一方は痰中のＮＥ活性の評価のために、他方はＰＫ解析のために処理した。
【0200】
痰中のＮＥ活性の評価のために、最初に、痰試料の重量を測定し、精製した痰１グラムあたり８ｍＬの冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を添加した。試料を室温（１５～２４℃）で、３０秒間ボルテックスした。次いで、可溶性画分を遠心分離（１０分間、１０００×ｇ、４℃）により痰ペレットから分離した。上清を新しいチューブに移した。
【0201】
残りの不溶性粒子は、４℃で、１５分間、３５００×ｇで第２の遠心分離工程によって分離した。上清をすぐに等分しなかった場合は、ＰＢＳ／痰上清を新しいチューブに移した。
【0202】
５０μＬ ＰＢＳ／痰の１０アリコートを、評価のために移送管に移した。さらに、５０μＬ ＰＢＳ／痰の４アリコートを、バックアップとして移送管に移した。残りがあった場合には、残りの量を、評価のために直ちに移送管に移した。２．０ｍＬを超えて残ったものは廃棄した。
【0203】
試料をすぐに凍結し、－８０±１０℃で、直立位置で保存した。ＰＢＳ／痰試料を、ドライアイス上でＭＬＭ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｓ ＧｍｂＨ，Ｍｏｎｃｈｅｎｇｌａｄｂａｃｈ、ドイツへ出荷した。ＰＢＳ／痰バックアップ試料を、Ｉｎａｍｅｄ ＧｍｂＨ，Ｇａｕｔｉｎｇ、ドイツで、－８０±１０℃で保存した。
【0204】
生物分析方法
痰中のＮＥ活性を、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００８，３，９９１（Ｂ．Ｋｏｒｋｍａｚ，Ｓ．Ａｔｔｕｃｃｉ，Ｍ．Ａ．Ｊｕｌｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．）に記載のアッセイから適合されたＦＲＥＴエラスターゼアッセイを用いて評価し、ＭＬＭ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｓ ＧｍｂＨ，Ｍｏｎｃｈｅｎｇｌａｄｂａｃｈ、ドイツが確認した。
痰中のＮＥ活性を、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００８，３，９９１（Ｂ．Ｋｏｒｋｍａｚ，Ｓ．Ａｔｔｕｃｃｉ，Ｍ．Ａ．Ｊｕｌｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．）に記載のアッセイから適合されたＦＲＥＴエラスターゼアッセイを用いて評価し、ＭＬＭ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｓ ＧｍｂＨ，Ｍｏｎｃｈｅｎｇｌａｄｂａｃｈ、ドイツが確認した。
【0205】
アッセイは、基質２Ａｂｚ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｔｙｒ（３ＮＯ２）－ＯＨ（ＧｅｎｅＣｕｓｔ Ｅｕｒｏｐｅ Ｓ．Ａ．，Ｅｌｌａｎｇｅ，Ｌｕｘｅｍｂｏｕｒｇ、番号Ｐ１６０３０１－ＳＹ４５２８２４）とヒト好中球エラスターゼの反応に基づく。基質溶液を添加することにより酵素反応を開始し、試料中に存在するエラスターゼは、添加した基質と反応する。反応生成物を蛍光測定により検出し、初期反応速度を決定する。未知の試料中の活性エラスターゼの濃度を、標準物質から計算した検量線を用いて逆算する。
【0206】
既知の酵素活性を有するエラスターゼ基準原液（ヒト好中球エラスターゼ[ＥＬＡ２]、Ｈｏｌｔｚｅｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ，Ｋｏｌｎ，ドイツ，♯ＰＮ３１２５５）を調製した。正確な活性エラスターゼ酵素濃度を、規定濃度で、アルファ１アンチトリプシン溶液（Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｔｈｅｎｓ，米国、番号１６－１６－０１１６０９）に対する滴定によって決定した。活性エラスターゼ基準原液を、ＰＢＳを添加することによって３０００ｎＭの濃度に調整し、アリコートを－８０℃で保存した。
【0207】
ＦＲＥＴアッセイを、９６ウェル白色マイクロタイタープレート中でウェル当たり１００μＬの合計量で行った。エラスターゼ反応緩衝液中の１:５、１:５０及び１：１００のＰＢＳ痰希釈液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、７５０ｍＭ 塩化ナトリウム、０．０５％[ｖ／ｖ] ＮＰ－４０）を調製し、ウェル当たり５μＬを添加し、９０μＬのエラスターゼ反応緩衝液を添加した。３０％（ｖ/ｖ） Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド／水中２Ａｂｚ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｍｅｔ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｔｙｒ（３ＮＯ２）－ＯＨの５ｍＭの基質原液を調製し、さらにエラスターゼ反応緩衝液を添加することにより４００ｎＭまで希釈した。５μＬの４００ｎＭ 基質溶液をウェルに添加し、反応速度Ｖｉを、Ｅｘｃ：３２０ｎｍ－Ｅｍｉｓｓ：４２０ｎｍでＦＲＥＴにより決定した。ＰＢＳ痰中の活性エラスターゼの濃度を、活性エラスターゼ基準原液から定義された希釈液の反応速度の比較により決定した。
【0208】
この方法の分析測定範囲は、１１５．００～２８８０．００ｎｇ／ｍＬであった。アッセイ内及びアッセイ間の変動係数は、それぞれ１７．１４％以下及び８．９６％以下であった。
【0209】
痰中の活性好中球エラスターゼ
活性ＮＥの平均濃度を図５に示す。
活性ＮＥの平均濃度を図５に示す。
【0210】
活性ＮＥ濃度の結果は、全体を通して大きく変動した。ＦＲＥＴアッセイによって測定した場合、１日目（投与前）の痰中の活性ＮＥの平均（ＳＤ）濃度は、用量レベル１については１８８２３．６（１９７５８．７２）ｎｇ／ｍＬ、用量レベル２については９５４８．７（６２２２．５５）ｎｇ／ｍＬ及び用量レベル３については１０４８０．７（１０５２８．００）ｎｇ／ｍＬであった。プラセボ対象についての平均（ＳＤ）活性ＮＥ濃度は、４６７１１．８（４８４５６．８６）ｎｇ／ｍＬであった。
【0211】
痰中の活性ＮＥの濃度は、活性化合物を吸入した後に、対象において大きく減少した。吸入後１～３時間の時点で、平均（ＳＤ）濃度の値は、用量レベル１については６１２．５（１２１８．６２）ｎｇ／ｍＬ並びに用量レベル２及び３については１１５．０（０．００）ｎｇ／ｍＬであった。吸入後１～３時間の時点でのプラセボを吸入する対象の平均（ＳＤ）値は、３４３７０．０（１９９８８．１１）ｎｇ／ｍＬであった。
【0212】
吸入後２４時間の時点での痰中の平均（ＳＤ）活性ＮＥ濃度は、用量レベル１については１４６７．７（２１５４．４３）ｎｇ／ｍＬ、用量レベル２については１６８４９．４（２３５１８．５６）ｎｇ／ｍＬ及び用量レベル３については７７１２．５（１１３９４．０４）ｎｇ／ｍＬであった。プラセボ対象の２４時間の時点での平均（ＳＤ）活性ＮＥ濃度は、１９３３８．８（９０６２．３２）ｎｇ／ｍＬであった。
【0213】
薬力学的な結論
ＣＦ患者の痰中の活性ＮＥの平均濃度は、実施例１に記載の製剤によって、投与される活性化合物の単回用量吸入後に大きく減少した。検討した用量範囲において、この応答の程度は、投与される用量とは無関係であるようにみえた。データの変動が大きく判断するのが難しいが、痰中の活性ＮＥの平均濃度は、活性化合物の吸入後２４時間の時点で、明らかにベースラインレベルに戻った。プラセボ溶液の吸入は、痰中の活性ＮＥの平均濃度に明確な影響を与えなかった。これらの臨床結果は、実施例１に記載の製剤により投与されるシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）が、ＣＦ患者の痰中でＮＥを阻害することを示している。
ＣＦ患者の痰中の活性ＮＥの平均濃度は、実施例１に記載の製剤によって、投与される活性化合物の単回用量吸入後に大きく減少した。検討した用量範囲において、この応答の程度は、投与される用量とは無関係であるようにみえた。データの変動が大きく判断するのが難しいが、痰中の活性ＮＥの平均濃度は、活性化合物の吸入後２４時間の時点で、明らかにベースラインレベルに戻った。プラセボ溶液の吸入は、痰中の活性ＮＥの平均濃度に明確な影響を与えなかった。これらの臨床結果は、実施例１に記載の製剤により投与されるシクロ（－ＯｃｔＧ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＰｒｏ－Ｐｒｏ－）が、ＣＦ患者の痰中でＮＥを阻害することを示している。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】