特許 7296394 テイクソバクチンを含む医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-06-14

(45)【発行日】2023-06-22

(54)【発明の名称】テイクソバクチンを含む医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/15 20060101AFI20230615BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20230615BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20230615BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20230615BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20230615BHJP

【ＦＩ】

A61K38/15

A61K47/24

A61K47/34

A61K47/26

A61P31/04

【請求項の数】 24

(21)【出願番号】P 2020543489

(86)(22)【出願日】2019-02-06

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-06-03

(86)【国際出願番号】 US2019016796

(87)【国際公開番号】W WO2019160719

(87)【国際公開日】2019-08-22

【審査請求日】2022-02-03

(31)【優先権主張番号】62/687,950

(32)【優先日】2018-06-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/631,100

(32)【優先日】2018-02-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】513295261

【氏名又は名称】ノボバイオティック ファーマシューティカルズ， エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】カデテ ピレス， アナ クリスティーナ

(72)【発明者】

【氏名】デュアン， アランダ レイ

(72)【発明者】

【氏名】リン， ロシー ルーシー

【審査官】山村 祥子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１３－５２９６３８（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００４／０１１６３６０（ＵＳ，Ａ１）

【文献】Indian Journal of Pharmaceutical Sciences，2016年，78(1)，8-16

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３８／００

Ａ６１Ｋ ４７／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

テイクソバクチン（ＴＸＢ）およびペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を含む医薬組成物。

【請求項2】

前記ＰＰＬが、少なくとも１つの脂質鎖に共有結合により結合したホスホエタノールアミン部分を含む、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記ＰＰＬが、式（Ｉ）の化合物

【化13】

［式中、
Ｒ_１およびＲ_２は、独立に、４～５０個の炭素原子、０～１０個の二重結合または０から１０個の三重結合を含むアルキル鎖であり、
前記アルキル鎖は、置換されていないか、またはハロゲン、－ＮＯ_２、－ＣＯＨ、－ＯＲ’、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、－ＣＯＯＲ’、－ＣＯＮＲ’および－ＳＯ_４（Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６アルキルである）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されており、
ｎは、５～１０００の整数であり、
Ｘは、水素、一価のカチオンまたは二価のカチオンである］
である、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

Ｒ_１とＲ_２が異なる、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項5】

Ｒ_１とＲ_２が同一である、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項6】

Ｒ_１および／またはＲ_２がそれぞれ、１０～２０個の炭素原子を含む、請求項３から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項7】

Ｒ_１および／またはＲ_２がそれぞれ、二重結合も三重結合も含まない、請求項３から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

Ｒ_１および／またはＲ_２がそれぞれ、少なくとも１つの二重結合を含む、請求項３から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

ｎが、３０～１５０の整数である、請求項３から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

Ｘが、水素、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４ ^＋、Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋からなる群から選択される、請求項３から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

前記ＰＰＬが、以下の構造の１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］：

【化14】

１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化15】

１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化16】

１，２－ジオレオイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］

【化17】

１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］
からなる群から選択される化合物である、請求項３に記載の医薬組成物。

【請求項12】

Ｘが、ＮＨ_４ ^＋である、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

炭水化物をさらに含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記炭水化物が、デキストロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、リボース、キシロース、トレオース、マンノースおよびマンニトールからなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

１：１の重量比またはそれを超えるＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比でＰＰＬおよびテイクソバクチンを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項16】

ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、１：１（ｗ／ｗ）から１０：１（ｗ／ｗ）の間である、請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、１：１（ｗ／ｗ）、１．５：１（ｗ／ｗ）、２：１（ｗ／ｗ）、２．５：１（ｗ／ｗ）、３：１（ｗ／ｗ）、３．５：１（ｗ／ｗ）、４：１（ｗ／ｗ）、４．５：１（ｗ／ｗ）、５：１（ｗ／ｗ）、５．５：１（ｗ／ｗ）、６：１（ｗ／ｗ）、６．５：１（ｗ／ｗ）、７：１（ｗ／ｗ）、７．５：１（ｗ／ｗ）、８：１（ｗ／ｗ）、８．５：１（ｗ／ｗ）、９：１（ｗ／ｗ）、９．５：１（ｗ／ｗ）および１０：１（ｗ／ｗ）のＰＰＬ：ＴＸＢからなる群から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

請求項１から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製する方法であって、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む前記水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと
を含む、方法。

【請求項19】

以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと、
ＰＰＬおよびテイクソバクチンを含む前記水溶液に炭水化物を添加するステップと
を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

細菌感染の処置を必要としている被験体の細菌感染を処置するための、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項21】

前記医薬組成物が、静脈内投与されるものであることを特徴とする、請求項２０に記載の医薬組成物。

【請求項22】

前記細菌感染が、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）によって引き起こされる、請求項２０または２１に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記細菌感染が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる、請求項２０または２１に記載の医薬組成物。

【請求項24】

前記被験体が、ヒトである、請求項２０から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本願は、２０１８年２月１５日に出願された米国仮出願第６２／６３１，１００号および２０１８年６月２１日に出願された米国仮出願第６２／６８７，９５０号に基づく優先権の利益を主張する。前記出願それぞれの内容全体が、参照によって本明細書に援用される。

【0002】

政府援助
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＳＢＩＲ補助金番号第Ｒ４４ＡＩ１１８０００－０１号のもとの政府援助により行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
近年の医薬品の大きな業績として、疾患を引き起こす微生物に対する抗菌剤の開発およびその使用の成功が挙げられる。抗菌剤は、多くの生命を救い、多くの疾患および感染症の合併症を低減してきた。しかし、現在利用可能な抗菌剤は、かつてほどは有効でなくなっている。

【0004】

経時的に、多くの微生物が、公知の抗菌剤の抗菌作用を逃れるように発達してきており、近年、複数の抗菌剤に耐性がある微生物によって引き起こされる感染症が、世界的に増大している。世界旅行の利用率が増大し、容易になってきたため、世界中での薬物耐性微生物の急速な拡大が、深刻な問題になっている。地域社会においては、微生物の耐性は、薬物耐性病原体（例えば、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）およびバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ（ＶＲＥ））の院内感染；地域社会における抗生物質の使用による耐性出現（例えば、ペニシリン耐性およびキノロン耐性Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）；旅行の結果による耐性病原体（例えば、抗生剤耐性Ｓｈｉｇｅｌｌａ）への感染；または動物に抗菌剤を使用し、その後耐性病原体がヒトに伝染した結果による耐性病原体（例えば、抗生物質耐性Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）への感染から生じる場合がある。院内の抗生物質耐性は、通常は抗生物質の過剰使用から生じ、ＭＲＳＡ、ＶＲＥおよび多剤耐性のグラム陰性桿菌（ＭＤＲ－ＧＮＢ）（例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓおよびＥ．ｃｏｌｉ）について深刻な問題となっている。特に、細菌によるカテーテルに関係する血流感染、ならびに皮膚および軟組織感染症（ＳＳＴＩ）は、大きな問題になりつつある。

【0005】

細菌、ウイルス、真菌および寄生生物はすべて、公知の抗菌剤に対して耐性を発達させている。耐性は、通常は、（ｉ）薬物の標的が変化し、その結果抗菌剤が結合しにくくなり、それによって感染症を制御する効果が低下すること、（ｉｉ）薬物浸透または該薬物の能動的流出が損なわれた結果として、該薬物がその標的に接近しにくくなること、および（ｉｉｉ）微生物によって産生される酵素によって、該薬物が酵素的に不活化されることの３つの機構から生じる。抗菌剤耐性によって微生物は生存しやすくなり、それにより身体から微生物感染症を排除しにくくなっている。このように微生物感染症との闘いが増々困難になっていることから、院内および他の実践場面における感染症発生の危険性が高まってきた。現在、結核、マラリア、淋病および小児期耳感染症などの疾患は、わずか数十年前よりも処置が困難になっている。薬物耐性は、抗生物質を利用しなければ感染症に罹患しやすくなっている重症疾患の患者を抱える病院にとっては、重大な問題である。残念ながら、こうした患者には、薬物耐性を生じる微生物を変化させるために、抗生物質を多量に使用することが選択される。これらの薬物耐性菌は、最も強力な抗生物質に対して耐性があり、感染しやすい入院患者が依然として犠牲になっている。入院患者の５～１０パーセントが入院中に感染症に罹患していること、およびこの危険性はここ数十年で確実に増大していることが報告されている。

【0006】

こうした問題に関して、微生物感染症および薬物耐性増大の問題と闘うために、新規な抗菌剤の必要性が高まっている。利用可能な薬物に対して病原体が耐性を発達させているため、再度抗菌薬の発見に取り組むことは非常に重要である。

【0007】

これまでに、合成化合物では天然抗生物質を置き換えることができず、組合せの合成、ハイスループットスクリーニング、先進医薬品化学、ゲノミクスおよびプロテオミクス、ならびに合理的薬物設計を組み合わせた研究でも、新規な種類の広域スペクトルの化合物を生成するには至っていない。新しい合成抗生物質を得る上での問題は、合成抗生物質が、多剤耐性ポンプ（ＭＤＲ）によって細菌の外膜障壁を通して一様に送り出されるという事実に一部関連し得るということである。細菌の外膜は、両親媒性化合物に対する障壁であり（本質的にすべての薬物が両親媒性化合物である）、ＭＤＲは、この障壁を通して薬物を追い出す。進化により、この二重障壁／追い出し機構を大部分回避することができる抗生物質が生成されてはいるが、合成化合物は、ほとんどの場合、一様に成功に至っていない。

【0008】

例えば、米国特許第９，１６３，０６５号および米国特許第９，４０２，８７８号に記載されているテイクソバクチン（ＴＸＢ）は、グラム陽性病原体、ＭＲＳＡ、ＶＲＥ、バンコマイシン中程度感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＶＩＳＡ）、リネゾリド耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、ダプトマイシン非感受性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、ペニシリン耐性Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの広域スペクトルの新たに発見された阻害剤である。ＴＸＢは、細胞壁構成成分の前駆体である脂質ＩＩ上の非変異点および脂質ＩＩに結合することによって、ペプチドグリカン合成および壁タイコ酸合成の両方を阻害する非常に効果の高い殺菌化合物である。結核（ＴＢ）の原因微生物であるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対するＴＸＢの優れた活性は、この病原体におけるペプチドグリカンおよびアラビノガラクタンのウンデカプレニル結合脂質中間体に結合することに起因するようである。非変異点において複数の細胞壁標的に結合することにより、ＴＸＢに対する抵抗性が発生しにくいことが示唆される。

【0009】

ＴＸＢは、マウスの肺、大腿および血液感染モデルにおける有効性などの、多くの好ましい薬物特性を示している。しかし、高濃度では、ＴＸＢは、血清に曝露された場合にゲル化する可能性がある。したがって、ＴＸＢおよびＴＸＢアナログの新規医薬組成物、例えば、高濃度でのＴＸＢのゲル化が妨げられるかまたは有意に低減される医薬組成物が必要とされる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【文献】米国特許第９，１６３，０６５号明細書

【文献】米国特許第９，４０２，８７８号明細書

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0011】

発明の概要
したがって、本発明は、ＴＸＢのゲル化が妨げられるかまたは有意に低減される、ＴＸＢおよびＴＸＢアナログの医薬組成物を提供する。これらのＴＸＢの医薬組成物は、本発明者らが、ＴＸＢの医薬組成物中に存在する場合のＴＸＢのゲル化を妨げるかまたは低減する能力に関して、１，０００を超える構造的に異なったビヒクルおよびビヒクルの組合せをスクリーニングした後に予想外に発見された。実施例１に記載されているスクリーニングの結果は、ＴＸＢのゲル化を妨げるかまたは低減するビヒクルまたはビヒクルの組合せの能力が、たとえ、ＴＸＢのような疎水性分子を可溶化するその能力について公知であるビヒクルまたはビヒクルの組合せに関してであっても、予測不能であることを示す。広範囲に及ぶ実験の後に、本発明者らは、ペグ化リン脂質（ＰＰＬ）がＴＸＢの医薬組成物中に存在する場合に、ＴＸＢのゲル化が妨げられるかまたは低減され得ることを発見した。

【0012】

したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＸＢまたはそのアナログおよびＰＰＬを含む医薬組成物を提供する。

【0013】

いくつかの局面では、ＰＰＬは、少なくとも１つの脂質鎖に共有結合により結合したホスホエタノールアミン部分を含む。いくつかの実施形態では、ＰＰＬは、式（Ｉ）の化合物

【化1】

［式中、
Ｒ_１およびＲ_２は、独立に、４～５０個の炭素原子、０～１０個の二重結合または０から１０個の三重結合を含むアルキル鎖であり、
前記アルキル鎖は、置換されていないか、またはハロゲン、－ＮＯ_２、－ＣＯＨ、－ＯＲ’、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、－ＣＯＯＲ’、－ＣＯＮＲ’および－ＳＯ_４（Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６アルキルである）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されており、
ｎは、５～１０００の整数であり、
Ｘは、水素、一価のカチオンまたは二価のカチオンである］である。

【0014】

いくつかの態様では、Ｒ_１とＲ_２は異なる。他の態様では、Ｒ_１とＲ_２は同一である。

【0015】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１および／またはＲ_２はそれぞれ、１０～２０個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ_１および／またはＲ_２はそれぞれ、二重結合も三重結合も含まない。他の実施形態では、Ｒ_１またはＲ_２は、少なくとも１つの二重結合を含む。さらに他の実施形態では、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ、少なくとも１つの二重結合を含む。

【0016】

いくつかの態様では、ｎは、３０～１５０の整数である。いくつかの実施形態では、Ｘは、水素、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４ ^＋、Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋からなる群から選択される。いくつかの態様では、Ｘは、ＮＨ_４ ^＋である。

【0017】

いくつかの実施形態では、ｎは、５～５００、５～５０、１０～２００、４０～１２０、５～１５０、または５０～１２０の整数である。一実施形態では、ｎは、４５である。別の実施形態では、ｎは、１１２である。別の実施形態では、ｎは、６７である。さらに別の実施形態では、ｎは、２３である。さらに別の実施形態では、ｎは、１７である。さらに別の実施形態では、ｎは、８である。

【0018】

いくつかの実施形態では、ＰＰＬは、以下の構造の１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］：

【化2】

１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化3】

１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化4】

１，２－ジオレオイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］

【化5】

１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］
からなる群から選択される化合物である。

【0019】

一実施形態では、ＰＰＬは、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］であり、例えば、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］は、図２の番号２に示されている１６：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される。

【0020】

一実施形態では、ＰＰＬは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］であり、例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］は、図２の番号３に示されているように、１４：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される。

【0021】

一実施形態では、ＰＰＬは、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］であり、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］は、図２の番号４に示されているように、１８：１ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される。

【0022】

一実施形態では、ＰＰＬは、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］であり、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－５０００］は、図２の番号１に示されているように、１８：１ ＰＥＧ５０００ ＰＥとも称される。

【0023】

一実施形態では、ＰＰＬは、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］であり、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］は、図２の番号５に示されているように、１８：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される。

【0024】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、炭水化物をさらに含み、例えば、炭水化物は、デキストロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、リボース、キシロース、トレオース、マンノースおよびマンニトールからなる群から選択される。

【0025】

いくつかの実施形態では、医薬組成物中のＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比は、約１：１（ｗ／ｗ）のＰＰＬ：ＴＸＢであるかまたはそれを超える比である。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比は、約１：１（ｗ／ｗ）から約１０：１（ｗ／ｗ）の間のＰＰＬ：ＴＸＢ、例えば、約１：１（ｗ／ｗ）、約１．５：１（ｗ／ｗ）、約２：１（ｗ／ｗ）、約２．５：１（ｗ／ｗ）、約３：１（ｗ／ｗ）、約３．５：１（ｗ／ｗ）、約４：１（ｗ／ｗ）、約４．５：１（ｗ／ｗ）、約５：１（ｗ／ｗ）、約５．５：１（ｗ／ｗ）、約６：１（ｗ／ｗ）、約６．５：１（ｗ／ｗ）、約７：１（ｗ／ｗ）、約７．５：１（ｗ／ｗ）、約８：１（ｗ／ｗ）、約８．５：１（ｗ／ｗ）、約９：１（ｗ／ｗ）、約９．５：１（ｗ／ｗ）または約１０：１（ｗ／ｗ）のＰＰＬ：ＴＸＢである。

【0026】

いくつかの態様では、ＰＰＬのテイクソバクチンに対するモル比は、約０．１：１であるかまたはそれを超えるＰＰＬ：ＴＸＢである。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約０．１：１から約１０：１の間のＰＰＬ：ＴＸＢ、例えば、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１、約６：１、約６．５：１、約７：１、約７．５：１、約８：１、約８．５：１、約９：１、約９．５：１または約１０：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。

【0027】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＸＢの医薬組成物を調製する方法であって、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと
を含む方法も提供する。

【0028】

いくつかの実施形態では、方法は、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと、
ＰＰＬおよびテイクソバクチンを含む水溶液に炭水化物を添加するステップと
を含む。

【0029】

いくつかの態様では、本発明は、細菌感染の処置を必要としている被験体の細菌感染を処置するための方法であって、前記被験体に、ＴＸＢを含む本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法も提供する。一実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与される。

【0030】

さらなる実施形態では、細菌感染は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）によってまたはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる。

【0031】

いくつかの実施形態では、被験体は、ヒトである。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
テイクソバクチン（ＴＸＢ）およびペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を含む医薬組成物。
（項目２）
前記ＰＰＬが、少なくとも１つの脂質鎖に共有結合により結合したホスホエタノールアミン部分を含む、項目１に記載の医薬組成物。
（項目３）
前記ＰＰＬが、式（Ｉ）の化合物

【化13】

［式中、
Ｒ _１ およびＲ _２ は、独立に、４～５０個の炭素原子、０～１０個の二重結合または０から１０個の三重結合を含むアルキル鎖であり、
前記アルキル鎖は、置換されていないか、またはハロゲン、－ＮＯ _２ 、－ＣＯＨ、－ＯＲ’、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、－ＣＯＯＲ’、－ＣＯＮＲ’および－ＳＯ _４ （Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６アルキルである）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されており、
ｎは、５～１０００の整数であり、
Ｘは、水素、一価のカチオンまたは二価のカチオンである］
である、項目２に記載の医薬組成物。
（項目４）
Ｒ _１ とＲ _２ が異なる、項目３に記載の医薬組成物。
（項目５）
Ｒ _１ とＲ _２ が同一である、項目３に記載の医薬組成物。
（項目６）
Ｒ _１ および／またはＲ _２ がそれぞれ、１０～２０個の炭素原子を含む、項目３から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目７）
Ｒ _１ および／またはＲ _２ がそれぞれ、二重結合も三重結合も含まない、項目３から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目８）
Ｒ _１ および／またはＲ _２ がそれぞれ、少なくとも１つの二重結合を含む、項目３から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９）
ｎが、３０～１５０の整数である、項目３から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１０）
Ｘが、水素、Ｎａ ^＋ 、Ｋ ^＋ 、ＮＨ _４ ^＋ 、Ｃａ ^２＋ およびＭｇ ^２＋ からなる群から選択される、項目３から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１１）
前記ＰＰＬが、以下の構造の１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］：

【化14】

１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化15】

１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化16】

１，２－ジオレオイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］

【化17】

１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］
からなる群から選択される化合物である、項目３に記載の医薬組成物。
（項目１２）
Ｘが、ＮＨ _４ ^＋ である、項目１１に記載の医薬組成物。
（項目１３）
炭水化物をさらに含む、項目１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１４）
前記炭水化物が、デキストロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、リボース、キシロース、トレオース、マンノースおよびマンニトールからなる群から選択される、項目１３に記載の医薬組成物。
（項目１５）
ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、約１：１（ｗ／ｗ）またはそれを超えるＰＰＬ：ＴＸＢである、項目１から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１６）
ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、約１：１（ｗ／ｗ）から約１０：１（ｗ／ｗ）の間のＰＰＬ：ＴＸＢである、項目１５に記載の医薬組成物。
（項目１７）
ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、約１：１（ｗ／ｗ）、約１．５：１（ｗ／ｗ）、約２：１（ｗ／ｗ）、約２．５：１（ｗ／ｗ）、約３：１（ｗ／ｗ）、約３．５：１（ｗ／ｗ）、約４：１（ｗ／ｗ）、約４．５：１（ｗ／ｗ）、約５：１（ｗ／ｗ）、約５．５：１（ｗ／ｗ）、約６：１（ｗ／ｗ）、約６．５：１（ｗ／ｗ）、約７：１（ｗ／ｗ）、約７．５：１（ｗ／ｗ）、約８：１（ｗ／ｗ）、約８．５：１（ｗ／ｗ）、約９：１（ｗ／ｗ）、約９．５：１（ｗ／ｗ）および約１０：１（ｗ／ｗ）のＰＰＬ：ＴＸＢからなる群から選択される、項目１６に記載の医薬組成物。
（項目１８）
項目１から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製する方法であって、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む前記水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと
を含む、方法。
（項目１９）
以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にテイクソバクチンを添加するステップと、
ＰＰＬおよびテイクソバクチンを含む前記水溶液に炭水化物を添加するステップと
を含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
細菌感染の処置を必要としている被験体の細菌感染を処置するための方法であって、前記被験体に、項目１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与し、それによって、前記被験体の前記細菌感染を処置するステップを含む方法。
（項目２１）
前記医薬組成物が、静脈内投与される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記細菌感染が、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）によって引き起こされる、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記細菌感染が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２４）
前記被験体が、ヒトである、項目２０から２３のいずれか一項に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】図１は、テイクソバクチンの医薬組成物を調製するためのビヒクルをスクリーニングするために使用される手順の略図である。

【0033】

【図2】図２は、アンモニウム塩の形態の例示的なＰＰＬの名称および構造を示す図である。

【0034】

【図3】図３は、ＴＸＢ－ＰＰＬおよびＴＸＢ－水に対する、経時的な循環血液中のＴＸＢ濃度を示すグラフである。

【0035】

【図4】図４は、ＰＰＬ中ＴＸＢの単回投与または５日間連続投与の最大８時間後までの、ＣＤ－１マウスにおける循環血液中のＴＸＢ濃度を示すグラフである。

【0036】

【図5】図５は、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日または２５．０ｍｇ／ｋｇ／日用量のＴＸＢ－ＰＰＬの投与後８時間にわたる、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの血中におけるＴＸＢ濃度を示すグラフである。

【0037】

【図6】図６は、１０ｍｇ／ｋｇ／日または２０ｍｇ／ｋｇ／日用量のＴＸＢ－ＰＰＬの投与後２４時間にわたる、Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅウサギの血中におけるＴＸＢ濃度を示すグラフである。

【0038】

【図7】図７は、様々な処置群および未処置群に関する大腿組織１グラム当たりのｌｏｇ_１０ＣＦＵを示す棒グラフである。「ｎ／ａ」と標識した棒グラフは、感染したが、感染の２時間後に未処置の対照群に対応する。破線は、投与時の感染レベルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0039】

発明の詳細な説明
本発明は、ＴＸＢのゲル化、例えば、血清中のＴＸＢのゲル化が、ＴＸＢがペグ化リン脂質（ＰＰＬ）も含む医薬組成物の一部として被験体に投与される場合に、妨げられるかまたは有意に低減され得るという驚くべき発見に基づく。

【0040】

本発明の医薬組成物
いくつかの実施形態では、本発明は、テイクソバクチン（ＴＸＢ）またはテイクソバクチンアナログ（ＴＸＢアナログ）およびペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を含む医薬組成物を提供する。本明細書で使用される場合、用語「テイクソバクチン」は、用語「ＴＸＢ」と交換可能に使用され、以下の構造式のデプシペプチド

【化6】

を包含する。

【0041】

ＴＸＢは、例えば、米国特許第９，１６３，０６５号および米国特許第９，４０２，８７８号に記載されており、それらの文書はそれぞれ、内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる。用語「テイクソバクチン」は、テイクソバクチンの互変異性体またはテイクソバクチンの塩、例えば、テイクソバクチンの薬学的に許容される塩も含む。

【0042】

本明細書で使用される場合、用語「テイクソバクチンアナログ」は、用語「ＴＸＢアナログ」と交換可能に使用され、ＴＸＢの化学構造と類似する化学構造を有し、かつ抗菌活性を示す任意の化合物を包含する。いくつかの実施形態では、ＴＸＢアナログは、ＴＸＢの化学構造を改変することによって得られる。本発明に包含されるＴＸＢアナログの非限定的な例には、例えば、Yang et al., Chem Commun(Camb). 2017 Feb 28;53(18):2772-2775；Jin et al., Bioorg Med Chem. 2017 Sep 15;25(18):4990-4995；Parmar et al., Chem Commun(Camb). 2017 Jul 6;53(55):7788-7791；Fiers et al., ACS Infect Dis. 2017 Oct 13;3(10):688-690；Abdel Monaim et al., J Med Chem. 2017 Sep 14;60(17):7476-7482；Monaim et al., Molecules. 2017 Sep 28;22(10)；Chen et al., Chem Commun(Camb). 2017 Oct 12;53(82):11357-11359；Guo et al., Chemistry. 2017 Oct 9. doi: 10.1002/chem.201704167；Schumacher et al., Org Biomol Chem. 2017 Oct 25;15(41):8755-8760；Abdel Monaim et al., Bioorg Med Chem. 2017 Sep 30. pii: S0968-0896(17)31609-7；Singh, Future Med Chem. 2018 Jan;10(2):133-134；Mandalapu et al., J Org Chem. 2018 Jan 31. doi: 10.1021/acs.joc.7b02462；Parmar et al., J Med Chem. 2018 Jan 24. doi: 10.1021/acs.jmedchem.7b01634；Jin et al., Bioorg Med Chem. 2018 Feb 1. pii: S0968-0896(18)30002-6；Parmar et al., Chem Commun(Camb). 2016 Apr 26;52(36):6060-3；Parmar et al., Chem Commun(Camb). 2017 Feb 7;53(12):2016-2019；およびYad et al., Org Lett. 2015 Dec 18;17(24):6182-5に記載されているＴＸＢアナログを含み、これらのそれぞれの内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0043】

用語「塩」または「複数の塩」は、本明細書で使用される場合、無機酸および／または有機酸で形成される酸性塩を包含する。一実施形態では、塩は、薬学的に許容される塩、例えば、非毒性の塩であり得る。ＴＸＢの塩は、例えば、塩がその中で沈殿するものなどの媒体中または水性媒体もしくは水性有機媒体中で、ＴＸＢを、一定量の、例えば、等量の酸と反応させ、凍結乾燥させることによって形成することができる。

【0044】

ＴＸＢはまた、塩基性部分（例えば、アミンまたはグアニジン）を含有し、従って、様々な有機酸および無機酸と塩を形成し得る。例示的な酸付加塩には、酢酸塩（酢酸またはトリハロ酢酸、例えばトリフルオロ酢酸を用いて形成されるものなど）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩（例えば、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば、２－ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩（例えば、３－フェニルプロピオン酸塩）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩（硫酸を用いて形成されるものなど）、スルホン酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、例えばトシル酸塩、ウンデカン酸塩等が含まれる。いくつかの実施形態では、ＴＸＢは、塩化物塩、例えば、二塩化物塩の形態であり得る。

【0045】

いくつかの実施形態では、ＴＸＢは、細菌種から単離された天然産物、例えば、細菌単離株ＩＳＯ１８６２９の天然産物である。細菌単離株ＩＳＯ１８６２９は、２０１３年９月６日に、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＮＲＲＬ）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、１８１５ Ｎｏｒｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ ６１６０４に寄託され、ＮＲＲＬ受託番号Ｂ－５０８６８を割り当てられた。特定の実施形態では、テイクソバクチンは、細菌単離株ＩＳＯ１８６２９のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物から単離され得る。

【0046】

本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を含む。用語「ペグ化リン脂質」は、用語「ＰＰＬ」と交換可能に使用され、リン脂質およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む分子を指す。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＰＥＧに共有結合により結合されていてもよい。いくつかの実施形態では、リン脂質は、少なくとも１つの二重結合または少なくとも１つの三重結合をさらに含む脂質尾部を含み得る。

【0047】

ＰＰＬは、本発明の医薬組成物中に、塩、例えば、薬学的に許容される塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩またはアンモニウム塩の形態で存在し得る。特定の一実施形態では、ＰＰＬは、本発明の医薬組成物中に、アンモニウム塩の形態で存在する。別の特定の実施形態では、ＰＰＬは、本発明の医薬組成物中に、ナトリウム塩として存在する。

【0048】

ＰＰＬの一部であるリン脂質は、当技術分野で公知の任意のリン脂質であってもよい。本発明の文脈で有用なリン脂質の非限定的な例には、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジン酸（ホスファチデート、ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（セファリン、ＰＥ）、ホスファチジルコリン（レシチン、ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）およびホスホイノシチド、例えば、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトールリン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトールビスリン酸（ＰＩＰ２）およびホスファチジルイノシトールトリホスフェート（ＰＩＰ３）が含まれる。リン脂質の非限定的な例には、スフィンゴリン脂質、例えば、セラミドホスホリルコリン（スフィンゴミエリン、ＳＰＨ）、セラミドホスホリルエタノールアミン（スフィンゴミエリン、Ｃｅｒ－ＰＥ）およびセラミドホスホリル脂質（ｃｅｒａｍｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｌｉｐｉｄ）も含まれる。

【0049】

ＰＰＬの一部であり得るリン脂質の非限定的な例には、少なくとも１つの脂質鎖、例えば、４～５０個の炭素原子、０～１０個の二重結合または０～１０個の三重結合を含むアルキル鎖に共有結合により結合されているホスホエタノールアミン部分を含むリン脂質も含まれる。

【0050】

用語「ポリエチレングリコール」は、用語「ＰＥＧ」と交換可能に使用され、エチレンオキシドのオリゴマーまたはポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、リン脂質に共有結合により結合し、ペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を生じる。いくつかの態様では、ＰＥＧは、少なくとも５つのエチレンオキシド単位、例えば、少なくとも１０単位、少なくとも２０単位、少なくとも４０単位、少なくとも５０単位、少なくとも１００単位、少なくとも２００単位、少なくとも３００単位、少なくとも５００単位、少なくとも６００単位、少なくとも７００単位、少なくとも８００単位、少なくとも９００単位または少なくとも１０００単位を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、少なくとも約５０ダルトン（Ｄａ）、少なくとも約１００Ｄａ、少なくとも約２００Ｄａ、少なくとも約３００Ｄａ、少なくとも約４００Ｄａ、少なくとも約５００Ｄａ、少なくとも約６００Ｄａ、少なくとも約７００Ｄａ、少なくとも約８００Ｄａ、少なくとも約９００Ｄａ、少なくとも約１０００Ｄａ、少なくとも約１５００Ｄａ、少なくとも約２０００Ｄａ、少なくとも約２５００Ｄａ、少なくとも約３０００Ｄａ、少なくとも約３５００Ｄａ、少なくとも約４０００Ｄａ、少なくとも約４５００Ｄａ、少なくとも約５０００Ｄａ、少なくとも約５５００Ｄａ、少なくとも約６０００Ｄａ、少なくとも約６５００Ｄａ、少なくとも約７０００Ｄａ、少なくとも約７５００Ｄａ、少なくとも約８０００Ｄａ、少なくとも約８５００Ｄａ、少なくとも約９０００Ｄａ、少なくとも約９５００Ｄａまたは少なくとも約１００００Ｄａの平均分子量（平均ＭＷ）を有する。特定の一実施形態では、本発明の文脈において有用なＰＥＧの平均ＭＷは、２０００Ｄａである。別の特定の実施形態では、ＰＥＧの平均ＭＷは、５０００Ｄａである。

【0051】

いくつかの例では、ＰＰＬは、ホスホエタノールアミン部分およびＰＥＧを含むリン脂質を含み、式（Ｉ）の化合物

【化7】

［式中、
Ｒ_１およびＲ_２は、独立に、４～５０個の炭素原子、０～１０個の二重結合または０から１０個の三重結合を含むアルキル鎖であり、
アルキル鎖は、置換されていないか、またはハロゲン、－ＮＯ_２、－ＣＯＨ、－ＯＲ’、－ＣＯＲ’、－ＯＣＯＲ’、－ＣＯＯＲ’、－ＣＯＮＲ’および－ＳＯ_４（Ｒ’は水素またはＣ１～Ｃ６アルキルである）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されており、
ｎは、５～１０００の整数であり、
Ｘは、水素、一価のカチオンまたは二価のカチオンである］
である。

【0052】

いくつかの例では、Ｒ_１とＲ_２は、異なっていてもよい。他の例では、Ｒ_１とＲ_２は、同一であってもよい。

【0053】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１およびＲ_２は、１０～２０個の炭素原子を含み得る。ある特定の実施形態では、Ｒ_１およびＲ_２は、二重結合も三重結合も含まない場合があり、またはそれぞれ、少なくとも１つの二重結合を含み得る。

【0054】

式（Ｉ）では、ｎは、エチレングリコール単位の数を示し、３０～１５０、例えば、３０～５０、４０～１００、６０～８０、７０～１２０または１００～１５０の整数であり得る。

【0055】

式（Ｉ）では、Ｘは、水素、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、ＮＨ_４ ^＋、Ｃａ_２ ^＋およびＭｇ_２ ^＋からなる群から選択され得る。特定の一実施形態では、Ｘは、ＮＨ_４ ^＋である。別の特定の実施形態では、Ｘは、Ｎａ^＋である。

【0056】

いくつかの例では、式（Ｉ）のＰＰＬは、以下の構造の１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］：

【化8】

１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化9】

１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、

【化10】

１，２－ジオレオイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］

【化11】

１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］
からなる群から選択される化合物であり得る。

【0057】

特定の一実施形態では、式（Ｉ）のＰＰＬは、以下の構造の１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］：

【化12】

１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］
である。

【0058】

一例では、ＰＰＬは、図２の番号２で示されている、１６：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、例えば、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］であり得る。１６：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥは、平均分子量２０００Ｄａを有するＰＥＧを含む。

【0059】

別の例では、ＰＰＬは、図２の番号３で示されている、１４：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］であり得る。１４：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥは、平均分子量２０００Ｄａを有するＰＥＧを含む。

【0060】

別の例では、ＰＰＬは、図２の番号４で示されている、１８：１ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］であり得る。１８：１ ＰＥＧ２０００ ＰＥは、平均分子量２０００Ｄａを有するＰＥＧを含む。

【0061】

さらに別の例では、ＰＰＬは、図２の番号１で示されている、１８：１ ＰＥＧ５０００ ＰＥとも称される、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－５０００］であり得る。１８：１ ＰＥＧ５０００ ＰＥは、平均分子量５０００Ｄａを有するＰＥＧを含む。

【0062】

さらに別の例では、ＰＰＬは、図２の番号５に示されている、１８：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥとも称される、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］であり得る。１８：０ ＰＥＧ２０００ ＰＥは、平均分子量２０００Ｄａを有するＰＥＧを含む。

【0063】

ＰＰＬおよびＴＸＢは、ＰＰＬのテイクソバクチンに対する重量比が、約１：１（ｗ／ｗ）またはそれを超えるＰＰＬ：ＴＸＢの重量比で、本発明の医薬組成物中に存在し得る。例えば、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対する重量比は、約１：１（ｗ／ｗ）～約１０：１（ｗ／ｗ）の間のＰＰＬ：ＴＸＢ、例えば、約１：１（ｗ／ｗ）、約１．５：１（ｗ／ｗ）、約２：１（ｗ／ｗ）、約２．５：１（ｗ／ｗ）、約３：１（ｗ／ｗ）、約３．５：１（ｗ／ｗ）、約４：１（ｗ／ｗ）、約４．５：１（ｗ／ｗ）、約５：１（ｗ／ｗ）、約５．５：１（ｗ／ｗ）、約６：１（ｗ／ｗ）、約６．５：１（ｗ／ｗ）、約７：１（ｗ／ｗ）、約７．５：１（ｗ／ｗ）、約８：１（ｗ／ｗ）、約８．５：１（ｗ／ｗ）、約９：１（ｗ／ｗ）、約９．５：１（ｗ／ｗ）または約１０：１（ｗ／ｗ）のＰＰＬ：ＴＸＢであり得る。特定の一実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対する重量比は、約１：１（ｗ／ｗ）である。本発明のある特定の実施形態では、ＰＰＬのＴＸＢに対する重量比は、約１以上：１のＰＰＬ：ＴＸＢ（ｗ／ｗ）である。ＰＰＬが１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］である場合、出願人は、驚くべきことに、ＰＰＬのＴＸＢに対する重量比が、約１未満：１のＰＰＬ：ＴＸＢ（ｗ／ｗ）である場合に、ＴＸＢのゲル化が起こることを発見した。

【0064】

いくつかの実施形態では、ＰＰＬおよびＴＸＢは、約０．１：１またはそれを超えるＰＰＬのテイクソバクチンに対するモル比で、本発明の医薬組成物中に存在し得る。例えば、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約０．１：１～約１０：１の間のＰＰＬ：ＴＸＢ、例えば、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約１．５：１、約２：１、約２．５：１、約３：１、約３．５：１、約４：１、約４．５：１、約５：１、約５．５：１、約６：１、約６．５：１、約７：１、約７．５：１、約８：１、約８．５：１、約９：１、約９．５：１または約１０：１のＰＰＬ：ＴＸＢであり得る。一実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約０．１：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。別の実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約０．５：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。別の実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約１：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。さらに別の実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約２：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。さらに別の実施形態では、本発明の医薬組成物中のＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約５：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。本発明のある特定の実施形態では、ＰＰＬのＴＸＢに対するモル比は、約１以上：１のＰＰＬ：ＴＸＢである。

【0065】

本発明の医薬組成物は、追加の成分をさらに含み得る。一実施形態では、追加の成分は、炭水化物である。本発明の医薬組成物において使用するのに適する炭水化物の非限定的な例には、デキストロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、リボース、キシロース、トレオース、マンノースおよびマンニトールが含まれる。特定の一例では、炭水化物は、キシロースである。別の特定の例では、炭水化物は、グルコースである。さらに別の特定の例では、炭水化物は、デキストロースである。さらに別の特定の例では、炭水化物は、スクロースである。さらに別の特定の例では、炭水化物は、ガラクトースである。

【0066】

本発明の医薬組成物は、ＴＸＢのゲル化を避けるかまたは有意に低減させながら、ＴＸＢの治療有効濃度が被験体において達成されるように、ＴＸＢを被験体に投与することを可能にする。ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＴＸＢが、約３０μｇ／ｍＬまたはそれより多い、例えば、約４０μｇ／ｍＬもしくは約５０μｇ／ｍＬまたはそれより多いＴＸＢ濃度で、被験体の血清中に存在する場合に、ＴＸＢのゲル化を妨げる。ある特定の実施形態では、ＴＸＢがＰＰＬを含む本発明の医薬組成物中に存在する場合のＴＸＢのゲル化は、ＴＸＢがＰＰＬを含まない水溶液中に存在する場合のＴＸＢのゲル化と比較して、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％低減される。

【0067】

本発明の医薬組成物を調製する方法
本発明の医薬組成物は、当業者が、医薬組成物を調製するために適すると認識するであろう任意の方法によって調製することができる。本発明の医薬組成物を調製するための例示的な方法は、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にＴＸＢを添加するステップと
を含み得る。

【0068】

さらなる例では、本発明の医薬組成物を調製するための方法は、以下のステップ、
ＰＰＬを含む水溶液を提供するステップと、
ＰＰＬを含む水溶液にＴＸＢを添加するステップと、
ＰＰＬおよびＴＸＢを含む水溶液に炭水化物を添加するステップと
を含み得る。

【0069】

いくつかの実施形態では、炭水化物は、デキストロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、リボース、キシロース、トレオース、マンノースおよびマンニトールからなる群から選択され得る。

【0070】

本発明者らは、意外なことに、上記で概説されたステップの順序を維持すること、例えば、ＰＰＬを含む水溶液にＴＸＢを添加すること、またはＰＰＬを含む水溶液にＴＸＢを添加し、次いでこの水溶液に炭水化物を添加することが、ＴＸＢの有効な医薬組成物が形成されるのを確実にするために重要であることを発見した。医薬組成物の成分、すなわち、ＰＰＬ、ＴＸＢまたはＰＰＬ、ＴＸＢ、および炭水化物が、上記で明示した順序と異なる順序で、一緒に添加される場合、ＴＸＢの有効な医薬組成物が形成されない場合がある。

【0071】

本発明の医薬組成物を使用する処置方法
本発明は、病原体による感染を処置する方法も提供する。この方法は、病原体による感染の処置を必要としている被験体に、本発明の医薬組成物を投与し、それによって、被験体の病原体による感染を処置するステップを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、病原体の成長を阻害するステップも含む、および病原体を本発明の医薬組成物と接触させ、それによって病原体の成長を阻害するステップも含む。病原体の非限定的な例には、それらに限定されるものではないが、細菌、真菌、ウイルス、原生動物、蠕虫、寄生生物、およびそれらの組合せが含まれる。

【0072】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、それを必要としている被験体に有効な量で投与される。用語「有効量」は、本明細書で使用される場合、被験体、例えば、動物において所望の効果を生じるのに有効である医薬組成物の量を指す。薬剤が、治療効果を達成するのに使用される場合、「有効量」を含む実際の用量は、それらに限定されるものではないが、処置される特定の状態、疾患の重症度、患者の大きさおよび健康状態、ならびに投与経路を含むいくつかの条件に応じて変わることが認識されている。熟練した医療従事者であれば、医療分野で周知の方法を使用して、適切な用量を容易に決定することができる。いくつかの実施形態では、有効量は、障害の処置を必要としている被験体における障害を処置するため、例えば、病原体による感染を処置するために有効な量である。他の実施形態では、有効量は、例えば、本発明の医薬組成物が被験体に投与されない場合の病原体の成長と比較して、被験体における病原体の成長を阻害するのに有効な量である。さらに他の実施形態では、有効量は、例えば、本発明の医薬組成物が被験体に投与されない場合の病原体の成長と比較して、病原体の成長を低減することに有効な量も含む。さらに別の実施形態では、有効量は、病原体に感染した、または病原体と接触した被験体に投与された場合に、病原体の死滅をもたらす、本発明の医薬組成物の量である。

【0073】

さらに、本発明の医薬組成物の有効量は、微調整することによってかつ／または本発明の医薬組成物を単独で、もしくは別の治療剤（例えば、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、ステロイドなど）と併用して投与することによって低減または増大できることを、熟練した医療従事者は理解するであろう。有効量は、例えば経験的に、相対的に少ない量で開始し、段階的に増分すると同時に有益な効果（例えば、症状の低減）を評価することによって、決定することができる。実際の有効量は、当技術分野で標準的な方法を使用して、用量／応答アッセイによって確立される（Johnson et al., Diabetes. 42:1179,(1993)）。当業者に公知の通り、上記有効量は、ＴＸＢおよびＴＸＢを含む医薬組成物の生体利用能、生物活性、および生分解性に応じて決まる。

【0074】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物の有効量は、被験体の障害の症状、例えば、病原体による感染の症状を低減するのに十分な量である。したがって、この有効量は、処置を受ける被験体によって変わる場合がある。例えば、本発明の医薬組成物の有効量は、体重１ｋｇ当たり約１μｇ～体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、例えば、約１μｇ／ｋｇ～約１００μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ～約５００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ～約６５ｍｇ／ｋｇ／ 約５０ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ～約８０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ～約９５ｋｇまたは約８０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇのＴＸＢの用量を被検体に投与するのに十分なＴＸＢの量を含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物の有効量は、約１ｍｇ～約１０００ｍｇの間、例えば、約１ｍｇ～約１０ｍｇ、約５ｍｇ～約２０ｍｇ、約１０ｍｇ～約５０ｍｇ、約２５ｍｇ～約７０ｍｇ、約４０ｍｇ～約８５ｍｇ、約７０ｍｇ～約１００ｍｇ、約９０ｍｇ～約２００ｍｇ、約１００ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２００ｍｇ～約５００ｍｇ、約４００ｍｇ～約７００ｍｇ、約５００ｍｇ～約７５０ｍｇまたは約６５０ｍｇ～約１０００ｍｇであるＴＸＢの用量を含む。

【0076】

本発明の医薬組成物の投与は、１時間毎、毎日、毎週、毎月、毎年行うことができ、または単回事象であってもよい。さらに、投与は、１日から１年またはそれを超える期間行うことができる。いくつかの実施形態では、投与は、一定期間、例えば、約１週間、２週間、３週間、１カ月間、３カ月間、６カ月間または１年間にわたって毎日投与することを指し得る。いくつかの実施形態では、投与は、一定期間、例えば、約１カ月、３カ月、６カ月、１年またはそれを超える期間にわたって毎週投与することを指し得る。

【0077】

本明細書に記載の通り、本発明の医薬組成物は、病原体による感染を処置する方法において、または病原体の成長を阻害する方法において有用である。いくつかの実施形態では、病原体は、細菌、例えば、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌であり得る。グラム陽性細菌の非限定的な例には、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓが含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、以下の１種または複数種による感染を処置するために有用である：Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａスポロゾイト（Mycobacteria sporozoites）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、化膿性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Streptococcus pyogenes）（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、化膿性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ スポロゾイト、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓスポロゾイト、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｉｋｅｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍスポロゾイト、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｔｈｅｔａｉｏｔａｍｉｃｒｏｎ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｌｉ。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）またはバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｃｏｃｃｉ（ＶＲＥ）による感染を処置するために有用である。米国において、ＭＲＳＡにより、年間およそ１９，０００人が死亡している。これらの死亡のほとんどは、院内ＭＲＳＡ（ＨＡ－ＭＲＳＡ）に起因するが、市中ＭＲＳＡ（ＣＡ－ＭＲＳＡ）の方が実際には病原性が高く、まだ健康な個体にとっても致死的となる可能性があることが公知である。ＣＡ－ＭＲＳＡの毒性（ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ）は、部分的に、フェノール可溶性モジュリンまたはＰＳＭペプチドの発現に起因する。したがって、ＣＡ－ＭＲＳＡを処置するのに、本発明の医薬組成物を、それに限定されるものではないがＰＳＭペプチドなどの毒性因子の発現および／または活性をモジュレートする薬剤と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕｍ、およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅなどのスピロヘータによる感染を処置するために有用であり得る。

【0078】

特定の一実施形態では、グラム陽性菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｓｐｐ．、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ｓｐｐ．、Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉ ｓｐｐ．およびＳ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｓｐｐ．を含む）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓ．ｖｉｒｉｄａｎｓ ｓｐｐ．、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｐｐ．、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ ｓｐｐ．およびＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ ｓｐｐ．を含む）；Ｂａｃｉｌｌｕｓ（例えば、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ ｓｐｐ．およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ， ｓｐｐ．を含む）；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（例えば、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ ｓｐｐ．を含む）；Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ（例えば、Ｐ．ａｃｎｅｓ ｓｐｐ．を含む）；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ ｓｐｐ．、バンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ ｓｐｐ．およびバンコマイシン耐性Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ ｓｐｐ．を含む）；およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（例えば、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ ｓｐｐ．およびＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｓｐｐ．を含む）からなる群より選択することができる。特定の実施形態では、細菌は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。

【0079】

本明細書に記載の本発明の医薬組成物は、これらの細菌によって引き起こされる障害を処置するのに有用である。このような障害の例には、急性の細菌性皮膚および皮膚組織感染症、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅに関連する下痢、炭疽、敗血症、ボツリヌス中毒、尿路感染症、菌血症、細菌性心内膜炎、憩室炎、髄膜炎、肺炎、および結核が含まれる。

【0080】

本発明の医薬組成物は、これらの細菌によって引き起こされる障害を処置するのに有用である。このような障害の例には、インフルエンザ、菌血症、肺炎、急性の細菌性髄膜炎、淋疾、尿路感染症、気道感染症、カテーテルに関連する菌血症、創傷感染症、中耳炎、気管支炎、副鼻腔炎、および喉頭炎が含まれる。

【0081】

本発明の方法では、ＴＸＢを含む医薬組成物がそれを必要としている被検体に投与される。用語「被験体」は、本明細書で使用される場合、動物、例えば、それらに限定されるものではないが、ペット（例えば、ネコ、イヌ、フェレットなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギなど）、実験動物（例えば、ラット、マウス、サルなど）、および霊長類（例えば、チンパンジー、ヒトまたはゴリラ）を含む哺乳動物を含む。特定の実施形態では、被験体は、ヒトである。

【0082】

本発明の医薬組成物の投与
本発明の医薬組成物は、例えば、局所的または全身的に、当技術分野で公知の任意の方法によって投与されてもよい。例示的な投与経路には、経口、非経口、経皮、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内（例えば、ネブライザー、吸入器、エアロゾルディスペンサによる）、眼内（例えば、結膜炎の処置用）、耳内（例えば、耳の感染症の処置用）、結腸直腸、直腸、膣内、およびその任意の組合せが挙げられる。さらに、中枢神経系には、脳室内および髄腔内注入を含む任意の適切な経路によって、本発明の薬学的組成物を導入することが望ましい場合がある。脳室内注入は、例えばＯｍｍａｙａリザーバーなどのリザーバーに取り付けた脳室内カテーテルによって容易になる場合がある。導入方法は、再充填可能なまたは生分解性デバイス、例えばデポーによって提供することもできる。さらに投与は、デバイス、移植片、ステントまたは人工器官をコーティングすることによって行うこともできることが意図される。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、静脈内投与される。

【0083】

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、他の薬剤との併用療法の一部として投与することができる。併用療法とは、２種またはそれよりも多い異なる治療剤を併用する任意の投与形態を指す。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、以前に投与された治療剤が依然として体内で有効である間に投与される（例えば、２つの治療剤が患者において同時に有効であり、２つの化合物の相乗効果を含むことができる）。例えば、異なる治療剤は、同じ製剤の一部としてまたは別々の製剤として、同時にまたは逐次的に、のいずれかで投与することができる。

【0084】

例えば、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの他の公知の抗生物質と併用して投与することができる。本発明の医薬組成物および少なくとも１つの他の公知の抗生物質は、逐次的にまたは実質的に同時に投与することができる。ＴＸＢもしくは他の公知の抗生物質、またはその両方に対する耐性を生じる上記病原体、例えば、細菌の能力を低減するのに、抗生物質を変更することは有益であり得る。本発明の医薬組成物と併用して投与することができる他の公知の抗生物質の非限定的な例には、ペニシリン（例えば、天然ペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、抗シュードモナスペニシリン、アミノペニシリン）、テトラサイクリン、マイクロライド（例えば、エリスロマイシン）、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン）、ストレプトグラミン（例えば、Ｓｙｎｅｒｃｉｄ）、アミノグリコシド、およびスルホンアミドが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、それに限定されるものではないが、フェノール可溶性モジュリンなどの毒性因子を標的にする化合物と併用して投与され得る。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、上記病原体の排出ポンプを標的にする化合物と併用して投与され得る。

【0085】

本発明は、限定的なものと解釈されるべきではない以下の実施例によって、さらに例示される。本願を通して引用されるすべての参考文献、特許文書および公開された特許出願文書の内容は、その全体が本明細書において参照によって明示的に組み込まれる。

【実施例】

【0086】

（実施例１）
ＴＸＢの医薬組成物において使用するためのビヒクルとしてのペグ化リン脂質（ＰＰＬ）の識別
この研究の目的は、血清中のＴＸＢのゲル化を妨げるかまたは有意に低減する、ＴＸＢの医薬組成物に含まれるのに適するビヒクルを識別することであった。この目標を達成するために、一般的に安全とみなされ（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｇａｒｄｅｄ ａｓ Ｓａｆｅ）（ＧＲＡＳ）、ＦＤＡに承認された１，０００を超えるビヒクルおよびビヒクルの組合せをスクリーニングした。ビヒクルは、構造的に多様であった。表１は例示的なスクリーニングしたビヒクルを列挙する。

【0087】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【0088】

図１は、ビヒクルをスクリーニングするために使用される手順の略図である。第１のステップとして、ＴＸＢを可溶化する能力についてビヒクルをスクリーニングした。次に、ウサギ血清中におけるＴＸＢのゲル化および沈殿を、立体画像の検出およびゼータサイザー分析を使用してモニターした。最後に、マウスおよびウサギに関するｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して、ＴＸＢに適するビヒクルのリストを絞った。

【0089】

ペグ化リン脂質（ＰＰＬ）を、ＴＸＢ製剤に対する先導的ビヒクル候補物質として識別した。図２は、アンモニウム塩の形態の例示的なＰＰＬの名称および構造を示す。

【0090】

（実施例２）
ＴＸＢの例示的な医薬組成物の特徴付け
ＴＸＢを含む例示的な医薬組成物をＰＰＬと共に調製し、以降で「ＴＸＢ－ＰＰＬ」と称する。この医薬組成物では、ＴＸＢは、最大２０００μｇ／ｍＬの濃度で血清に添加された場合に、顕著にゲル化しなかった。これは、以前の最良の製剤に対して約２５倍を超える改善である。

【0091】

ＴＸＢ－ＰＰＬの一部として試験した場合、ＴＸＢは、０．２５μｇ／ｍＬのＭＲＳＡに対して、および０．１２５μｇ／ｍＬのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ株に対してＭＩＣを有した。これは、ＴＸＢが、ＰＰＬと共に製剤化された場合に、その抗菌的効能を失わなかったことを示す。この医薬組成物では、ＴＸＢは、脂質ＩＩおよび脂質ＩＩＩにも結合し、Ling et al., Nature 2015, 517:455-459に記載の作用機序と一致した。

【0092】

ＴＸＢ－ＰＰＬのｉｎ ｖｉｖｏスクリーニングは、ＣＤ－１マウス敗血症モデルにおいて、尾静脈への静脈内投与によって実施した。ＴＸＢ－ＰＰＬの最大耐用量（ＭＴＤ）を少なくとも５０ｍｇ／ｋｇであると決定した。これは、水中に溶解したＴＸＢ（ＴＸＢ－水）のＭＴＤより約５倍多い。予備薬物動態（ＰＫ）研究を、遊離ＴＸＢ（ＴＸＢ－水）に対するＴＸＢ－ＰＰＬの血中レベルを比較するために、マウスにおいて実施した。第１の研究では、ＰＰＬ中２０ｍｇ／ｋｇのＴＸＢの単回用量を静脈内に投与し、循環血液中のＴＸＢ濃度を注射後８時間にわたり測定した。第２の研究では、ＰＰＬ中５０ｍｇ／ｋｇのＴＸＢの単回用量またはＰＰＬ中５０ｍｇ／ｋｇの複数回連続投与を５日間にわたり静脈内に投与し、循環血液中のＴＸＢ濃度を注射後８時間にわたり測定した。

【0093】

表２は、実験において決定した種々の薬物動態パラメーターを示す。

【0094】

【表2】

【0095】

図３は、ＴＸＢ－ＰＰＬおよびＴＸＢ－水に対する、経時的な循環血液中のＴＸＢ濃度を示すグラフである。表２および図３に示した結果は、注射の０．５時間後の循環血液中のＴＸＢ濃度が、ＴＸＢ－水の注射後より、ＴＸＢ－ＰＰＬの注射後に約１１倍高いことを示す。この結果は、ＴＸＢ－ＰＰＬの注射により、最大８時間、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対する最少阻害濃度（ＭＩＣ）よりも高い循環血液中のＴＸＢレベルがもたらされることも示す。

【0096】

図４は、単回投与またはＰＰＬ中ＴＸＢの５日間連続投与の最大８時間後までの、循環血液中のＴＸＢ濃度を示すグラフである。この結果は、ＴＸＢの単回投与および複数回投与の両方の場合に、循環血液中のＴＸＢ濃度が、ＭＩＣより約１００倍高いレベルのままであることを示す。

【0097】

さらに、ＴＸＢ－ＰＰＬを使用する５日間の耐性およびＰＫ研究をＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットを使用して実施した。ラットは、以前のＴＸＢ組成物、例えば、２０％のカプチゾールおよび５％のデキストロースを含むＴＸＢの組成物を使用して達成された最大耐用量（ＭＴＤ）よりも高い、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日および２５ｍｇ／ｋｇ／日のＴＸＢ用量を受けた。血中におけるＴＸＢ濃度を、５回目（最終）投与の投与後８時間にわたり測定した。図５は、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日または２５．０ｍｇ／ｋｇ／日用量のＴＸＢ－ＰＰＬの投与後８時間にわたる、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの血中におけるＴＸＢ濃度を示すグラフである。図５で示した結果は、血中におけるＴＸＢ濃度が、数時間、ＭＲＳＡに対するＭＩＣを十分上回ったままであることを示す。いずれの用量でも有害作用は観察されなかった。また、５日目の投与の直前に採取した試料においてＴＸＢはほとんど検出されなかったかまたは検出されず、４日間の期間にわたり、血液中にＴＸＢの有意な蓄積がなかったことを示す。

【0098】

次に、５日間の耐性およびＰＫ研究を、ニュージーランド白ウサギにおいて、１０および２０ｍｇ／ｋｇ／日のＴＸＢ－ＰＰＬおよびＴＸＢ用量を使用して実施した。両用量は、５日間の期間にわたり十分に耐性であり、２頭の動物に各用量を注射した。血中におけるＴＸＢ濃度を、５回目（最終）投与の投与後２４時間にわたり測定し、種々の薬物動態パラメーターを決定した。表３は、実験において決定した種々の薬物動態パラメーターを示す。

【0099】

【表3】

【0100】

図６は、１０ｍｇ／ｋｇ／日または２０ｍｇ／ｋｇ／日用量のＴＸＢ－ＰＰＬの投与後２４時間にわたる、ウサギの血中におけるＴＸＢ濃度を示すグラフである。表３および図６に示した結果は、ＴＸＢ濃度が、１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量の反復投与後１２時間にわたり、かつ２０ｍｇ／ｋｇ／日の用量の反復投与後２４時間にわたり、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対するＭＩＣを十分に上回ったままであることを示す。ＰＫパラメーターは、ほぼ用量に比例していた。比較すると、ウサギは、より古いＴＸＢ製剤、例えば、５％のデキストロースを含むＴＸＢ製剤（Ｄ５Ｗ）または２０％のカプチゾールおよび５ｍｇ／ｋｇ／日のＴＸＢ濃度でＤ５Ｗを含むＴＸＢ製剤の複数日の注射に耐えることができなかった。よって、ＴＸＢ－ＰＰＬは、Ｄ５ＷのＴＸＢまたはＴＸＢよりも耐性が良好である。

【0101】

（実施例３）
ＴＸＢの例示的な医薬組成物のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性。
次に、ＴＸＢの有効性が、ＴＸＢがＰＰＬと共に製剤化された場合に有害な影響を及ぼさないことを確実にするために、２匹の感染症マウスモデルにおいてＴＸＢ－ＰＰＬを試験した。第１に、ＴＸＢ－ＰＰＬを標準的なマウスの敗血症保護モデルで試験し、良好な全身曝露を示す予備的な有効性情報を提供する。このモデルは、処置後４８時間後に感染したマウスの５０％生存率（ＰＤ_５０）をもたらす化合物用量を決定する。感染因子は、一般的に使用される臨床単離株、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＭＲＳＡ ＡＴＣＣ ３３５９１であった。雌のＣＤ－１マウスを、腹腔内注射によって、感染後４８時間以内に少なくとも９０％の死亡率を達成する濃度の、０．５ｍＬの細菌懸濁液（３．２８×１０^７ＣＦＵ／マウス）で感染させた。感染の１時間後にＴＸＢを、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積を使用して、漸増単回用量で、ＴＸＢ－ＰＰＬの一部として静脈内投与した。ＴＸＢは、以前に決定した値の０．１９ｍｇ／ｋｇと同様に（Ling et al., Nature 2015, 517:455-459）、０．２４ｍｇ／ｋｇの優れたＰＤ_５０を示した。

【0102】

第２の研究では、ＭＲＳＡ ＡＴＣＣ ３３５９１に感染した好中球減少性マウスの大腿感染モデルを使用した。このモデルは、ほとんどの宿主免疫系を排除した状態で、病原体への薬物の効果を測定するのに有用である。このモデルは、ヒトにおける投与を評価するために、薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）パラメーターを決定するのにも有用である。最後に、これは、ＴＸＢに関する潜在的な臨床的適応である、急性細菌性皮膚および皮膚構造感染症（ＡＢＳＳＳＩ）に関する良好なモデルでもある。雌のＣＤ－１マウス（１群当たり５匹のマウス）を、感染の４日前および１日前に、１５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇの２回の連続用量を投与したシクロホスファミドによって好中球減少性であるとみなした。細菌をマウス１匹当たり２．８×１０^５ＣＦＵで右大腿に注射した。感染の２時間後に、マウスに１０ｍＬ／ｋｇの投与体積で、ＴＸＢ－ＰＰＬとして単回用量のＴＸＢを静脈内投与した。マウスの２つの群を、感染したが未処置の対照群とした。感染の２時間後に、感染したが未処置のマウスの１群を安楽死させ、右大腿を無菌的に取り除き、秤量し、ホモジナイズし、連続希釈し、トリプチケースソイ寒天培地上にプレーティングした。４８時間後に、コロニーを計数して、処置時の大腿組織１グラム当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）を定量した。感染の２６時間後に、残りのマウス（処置した群および未処置の対照群）を安楽死させ、上記の通り右大腿を処理した。

【0103】

図７は、様々な処置群および未処置群に関する大腿組織１グラム当たりのｌｏｇ_１０ＣＦＵを示す棒グラフである。「ｎ／ａ」と標識した棒グラフは、感染したが、感染の２時間後に未処置の対照群に対応する。破線は、投与時の感染レベルを示す。

【0104】

図７に示した結果は、２．５ｍｇ／ｋｇを超える単回静脈内投与としての、ＴＸＢ－ＰＰＬをベースとする医薬組成物の一部として投与したＴＸＢが、病原体負荷を有意に低減したことを示す。ビヒクル対照と比較して、ＴＸＢ処置によりＣＦＵの３ｌｏｇの低減がもたらされた。これらの結果を、バンコマイシン、および４～５ｍｇ／ｋｇの有効用量を有する最近認可された薬物であるＯｒｂａｃｔｉｖ（登録商標）（オリタバンシン）と比較するのが好ましい。

【0105】

この研究は、ＴＸＢがＰＰＬと共に製剤化される場合、生物活性を少しも損なうことなく、血清中のゲル化の問題が解消されるかまたは有意に低減されることを示す。

【0106】

（実施例４）
ＴＸＢの例示的な医薬組成物を使用する追加のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態（ＰＫ）および安全性薬理研究。
この研究において使用するための動物種。通常、ばらつきを低減するために、非ＧＬＰおよびＧＬＰ安全性薬理研究では、雄の動物が使用される。しかし、性差を考慮するために、毒性研究では、雄と雌の両方が使用される。約２５０グラムの体重であり、約７～８週齢のＣｒｌ：ＣＤ（登録商標）Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂからの）を、ＰＫ、体内分布、排除、安全性薬理および毒性研究のための齧歯類種として使用する。６～１２ｋｇの体重であり、７～１５カ月齢のビーグル犬（Ｍａｒｓｈａｌｌ ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓからの）を、安全性薬理および毒性研究のための非齧歯類種として使用する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ代謝プロファイリングが、他の種がヒトに対してより関連性がある可能性を示す場合は、他の種（例えば、カニクイザル）を使用する。

【0107】

２．２～２．６ｋｇの体重であり、病原体フリーの、雌の、妊娠していないニュージーランド白ウサギ（Ｃｏｖａｎｃｅ、Ｄｅｎｖｅｒ、ＰＡからの）は、ＴＢ感染を処置する際の有効性を試験するための好ましい種である。この種は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓへのエアロゾル曝露後に、肺肉芽腫を形成し、ヒトにおける疾患進行に類似する。肺病変の数および病原体負荷により、試験抗生物質の有効性の定量が可能になる。

【0108】

マウスは、ＰＫ／ＰＤ研究のために選択した齧歯類である。マウスは、ヒトへの細菌感染に関する良好なモデルを与える、最も下等な系統学的種としての長い歴史を有する。この研究では、妊娠していない雌の、約６週齢の、２０～２５グラムの体重の、病原体フリーＩＣＲ（ＣＤ－１）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの）を使用する。マウスにおける細菌感染は非常に再現し易く、細菌の正確な定量のために大腿を容易に取り除くことができるため、マウスは、この研究にも望ましい。この研究には多数の動物が必要であり、一緒にケージに入れた場合に雄は闘い、ストレス応答を誘発する可能性があるため、この研究では雌のマウスを使用する。また、雌のマウスはＭＲＳＡにより簡単に感染し、得られるデータについては、発情周期によるばらつきを考慮する。

【0109】

動物の数。計画された実験のそれぞれにおいて使用する動物の数は、ＰＫ、有効性および毒性パラメーターにおける個体間のばらつきを考慮して、科学的に妥当な結果を得るために必要な動物の最小数である。従来からの許容値を以下に対して適用した：１）「検出力」を０．８（存在する場合、処置効果が検出される確率が８０％）に設定し、２）「ｐ値」を０．０５（偶然に有意差が生じる確率が５％）に設定する。

【0110】

以下の動物研究では、ＰＰＬと共に製剤化したＴＸＢを、動物に静脈内投与する。各動物に対するＴＸＢの用量を、最も直近の体重に基づいて計算する。各研究内での動物の年齢および体重は、可能な限り均一である。薬物動態（ＰＫ）、安全性薬理およびＰＫ／ＰＤ研究には、ラットにおける単回用量ＰＫ研究、ラットにおけるＰＫ用量範囲試験、ラットにおける複数用量ＰＫ評価、ラットにおける体内分布研究、ラットにおける排除研究、マウスにおけるＰＫ／ＰＤ研究／イヌにおいて心機能および電気生理を評価するための心臓安全性薬理研究、ラットにおけるＣＮＳ安全性薬理研究、およびラットにおける呼吸器安全性薬理が含まれる。毒性研究には、ラットにおける急性用量範囲設定毒性研究および７日間の反復投与研究、イヌにおける急性用量範囲設定毒性研究および７日間の反復投与研究、ラットにおける２８日間の毒性研究および回復期間、イヌにおける２８日間の毒性研究および回復期間、ならびにマウスにおける遺伝毒性能研究が含まれる。反復投与および複数回の血液サンプリングを含む研究では、動物（ラットおよびイヌ）の頚静脈カニューレおよび大腿静脈カテーテルの外科的埋め込みを使用して、血液サンプリングおよび投与を容易にする。

【0111】

（実施例５）
ＴＸＢのｉｎ ｖｉｖｏでの消長を特徴付けるための薬物動態（ＰＫ）および薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）研究。
この研究の目的は、ＰＫおよび薬物消長に関する標準的な齧歯類モデルとしてのラットにおいて、ＰＰＬと共に製剤化したＴＸＢのｉｎ ｖｉｖｏでの消長を特徴付けることである。加えて、複数種に由来する肝臓ミクロソームにおける代謝プロファイリングを実施して、任意の主要な代謝産物の産生を識別する。

【0112】

単回用量ＰＫ研究。この研究により、全身曝露、終末相半減期を含む滞留時間およびＴＸＢの全身曝露が評価される。この研究には６匹の雄のラットが使用され、投与された用量は０．５ＭＴＤである。１時点当たり３匹のラットから、８時点について、採血する（例えば、投与前；投与の５および３０分後；ならびに１、２、４、８および１２時間後）。採血のために動物をローテーションさせ、カリウムＥＤＴＡチューブにおよそ０．１～０．２ｍＬの血液を採血した。全血試料を、約４℃の冷却遠心機内で、約１５００×ｇで最低１０分間遠心分離する。採血および遠心分離の３０分以内に血漿を標識したチューブに移し、ＬＣ－ＭＳによるＴＸＢの分析まで、チューブを暗所で－８０℃で凍結保存する。最大（ＩＶに対する初期）ピーク血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）、血漿中終末相半減期（ｔ_１／２）および血漿中濃度の時間曲線下面積（ＡＵＣ）を血漿中濃度データから計算する。クリアランスおよび分布容積を、標準的な非区画分析による濃度－時間プロファイルから決定する。

【0113】

ＰＫ用量範囲設定研究。ＰＫパラメーターの用量依存性および全身曝露の用量比例性を評価するために、２４匹の雄のラットに単回の、漸増用量のＴＸＢを静脈内投与し、血漿中薬物レベルを経時的にモニターする。ＴＸＢの用量レベルは、単回用量評価の結果に応じて変わる。最も用量の多いＭＴＤに関して、最大４つの用量レベルを試験する。用量範囲設定研究は、十分に高レベルの（ＭＩＣの数倍）薬物濃度を確保する、さらなる研究に適当な用量レベルを選択する際に必須である。ＰＫ分析のために、１時点毎に３匹のラットから、８時点について、採血し（例えば、投与前、投与の５および３０分後、ならびに１、２、４、８および１２時間後）、上記の通り処理する。異なる用量間のＰＫパラメーターの比較により、用量比例および用量依存性、個体間のばらつきならびに吸収プロファイルおよび機序についての情報も得られる。記述的統計分析、およびテューキーの事後検定による一元配置分散分析を実施して、処置群間のパラメーターの差を識別する。

【0114】

複数回投与のＰＫ評価。薬物蓄積の程度およびクリアランス経路の潜在的な自己誘導または阻害を、複数回投与のＰＫ評価において評価する。この研究には、１２匹の雄のラットを使用し、ＴＸＢを１０回連続ＩＶ投与する。用量および時間間隔を単回投与評価の結果によって決定する。１時点毎に３匹のラットから、８時点について、採血する（例えば、投与前、投与の５および３０分後、ならびに１、２、４、８および１２時間後）。連続投与による有害作用が認められる場合、用量を減らす。血液試料を、一連の投与のうちの最初の投与後と最終投与後の時点で採血し、１つの試料は、いずれかの蓄積を評価するために最終投与の直前に得る。試料の処理および分析を上記の通り実施する。

【0115】

体内分布研究。ＬＣ－ＭＳを使用して、生体試料（肝臓、肺、心臓、腎臓、脳、脾臓、尿、糞便）中のＴＸＢおよび任意の主要な代謝産物を定量する。生物源に応じて、試料の調製には、必要な場合、組織のホモジナイズ、有機抽出、およびカラムクロマトグラフィーが含まれる。ＴＸＢの基本的な体内分布および器官／組織での蓄積を評価するために、５匹の雄のラットに、１０回の連続投与のために８時間毎にＴＸＢを単回ＩＶ投与する。用量は、複数回投与のＰＫ評価におけるものと同じである。最終投与の１時間後、動物を屠殺し、すべての主要な器官（肝臓、肺、心臓、腎臓、脳、および脾臓）を回収し、液体窒素中で凍結し、ホモジナイズまでに－８０℃で保存する。総薬物レベルおよび遊離薬物レベル、ならびにＴＸＢの任意の主要な代謝産物について、組織を分析する。

【0116】

排除研究。この研究の目的は、ＴＸＢの主要な代謝物および排除経路を評価することである。この研究では、５匹の雄のラットに、ＭＴＤでＴＸＢを単回ＩＶ投与する。尿試料を投与前、０～８時間および８～２４時間の間隔で、および４８時間にわたり２４時間間隔で回収する。糞便試料を投与前および２４時間間隔で投与後最大４８時間回収する。各回収間隔の終わりに、動物を新しいケージに移す。試料を、分析まで－２０℃で凍結保存する。親ＴＸＢおよび任意の主要な代謝産物について、ＬＣ－ＭＳによって試料を分析する。

【0117】

代謝物のプロファイリング。この研究の目的は、ＴＸＢ代謝産物の相当量が、マウス、ラット、イヌ、サルまたはヒトにおいて生成され得るかどうかを決定することおよびｉｎ ｖｉｖｏ研究のために選択された種の確認を補助することである。ＦＤＡの推奨に基づき、元の化合物の１０％以上で存在する代謝産物を有意とみなす。相当の代謝産物がヒトに対して特異的であることが立証される場合、次に、代謝産物は、ｉｎ ｖｉｖｏ薬理および動物毒性研究に含まれる。

【0118】

ＴＸＢの代謝物の安定性をマウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトのプールした肝臓のミクロソーム、Ｓ９および細胞質調製物において試験し、シトクロムＰ４５０による混合機能酸化システムおよび細胞質の可溶性第ＩＩ相酵素によって代謝を捉える。簡潔には、マウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトのプールした肝臓のミクロソーム、Ｓ９および細胞質調製物を３７℃でＴＸＢと共にインキュベートする。反応の終了後、遠心分離によって細胞内調製物から上清を分離し、代謝産物を単離してＬＣ－ＭＳにより特徴付ける。

【0119】

好中球減少性マウスの大腿モデルにおけるＰＫ／ＰＤ。標準的な好中球減少性マウスの大腿モデルを使用して、ＰＫ／ＰＤ研究を行い、漸増用量での細菌活性の割合を決定する。病原体フリーＩＣＲ（ＣＤ－１）マウスを、感染の前に、１５０ｍｇ／ｋｇの用量で４日間および１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日の、シクロホスファミドの腹腔内中注射によって、一過的に好中球減少性とみなす。細菌株Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ３３５９１（ＭＲＳＡ）を、５８０ｎｍでの吸光度が０．３まで、Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ（ＭＨ）ブロス中で培養する。培養物をＭＨブロス中で１：１０に希釈し、希釈物のアリコートをＭＨ寒天プレート上にプレーティングし、送達されたＣＦＵの実際の数を決定する。合計１０^６個の細菌（０．１ｍＬ接種）をハロタンで麻酔したマウスの大腿中に直接注射する。この研究では、合計１６９匹のマウスを使用し、以下に記載の通り２つの部分に分ける。

【0120】

薬物動態研究（第１部）として、大腿感染動物にＴＸＢを単回ＩＶ投与する（最大３種の濃度）。ＣＯ_２／Ｏ_２麻酔下で、心臓穿刺により投与当たり５分、３０分および１、２、４、８時間の時点毎に、３匹のマウスから血液を取り除き、血漿ＴＸＢレベル（総および遊離）を測定する。非区画分析によりＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ）を使用して、ＰＫ計算を実施する。ＰＫパラメーターをＭＩＣで積分することにより、３つのＰＫ／ＰＤパラメーターが得られ、抗生物質の活性を定量する：ピーク／ＭＩＣ比（ＭＩＣで除したＣ_ｍａｘ）、Ｔ＞ＭＩＣ（血清中レベルがＭＩＣを超える投与間隔のパーセンテージであるＭＩＣを超える時間）、および２４時間のＡＵＣ／ＭＩＣ比（ＭＩＣで除した２４時間のＡＵＣ）。合計５４匹のマウスをこの研究で使用する（１時点当たり３種のＴＸＢ濃度^＊６時点^＊３匹のマウス）。

【0121】

どのＰＫ／ＰＤパラメーターが有効性と最も相関しているかを決定するために（第２部）、１、２、４または６回の投与に分けた、２倍に増加する総用量を使用して、２０種の異なる投与レジメンにより、感染の２時間後に、ＩＶ投与によりマウスをＴＸＢで処置する。感染時、処置時および感染の２６時間後に未処置対照動物から、および治療の２４時間後の処置動物から、大腿を採取する。大腿を秤量し、生理食塩水中でホモジナイズし、ＣＦＵを決定するためにＭＨＡ寒天にプレーティングする。非線形回帰分析を使用して、どのＰＫ／ＰＤパラメーターが有効性と最も相関するかを決定する。この研究では、合計１１５匹のマウスを使用する（２０種の投与レジメン^＊１群当たり５匹のマウス＋感染直後の５匹の未処置マウス＋処置時の５匹の未処置マウス＋感染の２６時間後の５匹の未処置マウス）。

【0122】

ＴＸＢの血漿中濃度および大腿当たりのＣＦＵを処置用量に対して計算する。データを使用して、感染したマウスにおける用量レベル、ＴＸＢの血漿中濃度および大腿当たりのＣＦＵの変化の間の関係を分析する。

【0123】

（実施例６）
安全性薬理（ＧＬＰ）
この研究のセットは、ＴＸＢの薬理学的安全性を特徴付けることを目的とする。

【0124】

酵素と受容体パネルとの相互作用。ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理試験は、ＴＸＢの可能性のある副作用および存在する場合にはその主要な代謝産物を識別することを目的とする。具体的には、ＴＸＢがある特定の酵素または受容体と相互作用すると判明した場合、次いで、毒性研究における酵素または受容体の関連する機能に細心の注意が払われ、その機能を調査する追加の手順が実施される。潜在的有害事象の有用なマーカーである酵素のパネルへのｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴＸＢの可能性のある効果を評価する。このような例示的試験には、基本的な代謝酵素阻害（ＡＴＰａｓｅ、カルニチントランスフェラーゼ、一酸化窒素合成、種々のペプチダーゼ、セリン／トレオニンキナーゼ）および基本的な生理機能に関与する受容体部位における活性（アデノシン、種々の神経伝達物質、カルシウムおよびナトリウムチャネル）に関するアッセイが含まれる。良好な動物における有効性が観察される血清中のＴＸＢレベルの１０～１，０００倍の範囲の濃度でＴＸＢを試験する。これらのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイのそれぞれには、標的への５０％の応答または結合が惹起される陽性対照が含まれる。

【0125】

心臓安全性薬理：ｉｎ ｖｉｖｏでの心機能および電気生理。この研究は、血液動態レベルと電気生理レベルの両方の心臓周期全体を調査することを目的とする。この研究は、以下のパラメーター、動脈圧波形（収縮期、弛緩期の脈拍および平均）、心拍数（動脈波形から得られる）、ＥＣＧ波形（ＰＲ、ＱＲＳ、ＲＲ、ＱＴ、およびＱＴｃ間隔）、および体温を測定するために、テレメトリープローブを外科的に埋め込まれた４頭の雄のイヌを使用する。各動物に、投与間にウォッシュアウト期間を含むラテン方格投与設計を使用して、ビヒクル対照および３つのＴＸＢの静脈内用量レベルを投与する。中間用量および低用量と一緒に、高用量として、ＭＴＤに関して３つの用量を選択する。投与日に、ＴＸＢ投与前の各パラメーターについて、６０のミュートベースラインを記録する。テレメトリーデータを２４時間以上集める。最大無毒性量（ＮＯＡＥＬ）の評価を行う。ＮＯＡＥＬは、研究される機能について検出可能な有害な変更を引き起こさず、ヒトに最初に投与される用量よりも少なくとも１０倍多い、物質の最大量である。

【0126】

ＣＮＳ安全性薬理。この研究の目的は、ＴＸＢの３つの用量レベルおよびビヒクル対照のＩＶ投与後の４０匹の雄のラットにおける、任意の有害な神経行動学的作用を評価することである。動物を、１群当たり１用量の４つの群（１群当たり１０匹のラット）に無作為に分ける。高用量、中間用量、低用量、およびビヒクルのみの対照として、ＭＴＤに関して用量を選択する。Ｏｐｔｏ－Ｖａｒｉｍｅｘ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）活性モニタリングボックスを使用して、投与前およびピーク血中濃度に近い時点で運動活性を測定する。機能観察総合評価法（ＦＯＢ）を、投与前および投与後の１時点（およそ６０分）で行う。機能観察総合評価法には、４セットの観察が含まれる。第１の観察セット（姿勢、不随意運動、かみつき、眼瞼閉鎖状態および発声）は、動物がホームケージ内にいる間に実施する。第２の観察セット（動物をケージから移動させる容易さ、動物の取り扱い易さ、流涙、涙の色、唾液分泌、立毛、毛皮の外観、眼瞼閉鎖状態、眼球突出、呼吸）は、動物を最初に取り扱う際に実施する。第３の観察セット（移動性、姿勢、不随意運動、歩行障害、環境への覚醒の再活性化、常同行動、例えば、任意の反復運動、奇矯な行動、立ち上がりの回数、排便、排尿および発声）は、試験の場で実施する。第４の観察セット（接近応答、接触応答、聴覚応答、テールピンチ応答、瞬目応答、正向反射、後肢伸筋力応答、瞳孔の大きさ、体重）は、動物の取り扱い／特異的検査から構成される。ＣＮＳに関するＴＸＢの影響を評価するために、各動物をスコア化する。

【0127】

呼吸器安全性薬理。安全性薬理に対する追加の規制条件には、呼吸機能の研究が含まれる。この研究には、研究の開始前の数日間、順化された１６匹の雄のラットを使用する。研究の日に、動物を、１群当たり１用量の、４つの群（１群当たり４匹のラット）に無作為に分ける。高用量、中間用量、低用量、およびビヒクルのみの対照として、ＭＴＤに関して用量を選択する。研究の日に、動物の頭頚部をプレチスモグラフチャンバー内に密封する。すべてのデータ収集および計算は、ＢＵＸＣＯ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒによって実施する。試験物の投与前の最低１時間、動物をチャンバー内で安定化させ、投与前にデータを収集する。ＴＸＢまたはビヒクルのみの投与後に、５時間データを収集する。各動物に１つの用量レベルのみ投与される。以下のパラメーター、呼吸数、一回呼吸量および毎分呼吸量を記録するかまたは計算し、報告する。２回の１５分の投与前間隔について計算し、ベースラインとして報告する。投与後のデータを１５分間隔に群分けし、平均を計算し、データを分析して、呼吸機能へのＴＸＢの影響を調査する。毒性の欠如は、統計的または臨床的に有意（＞２５％）な機能変化がないものとして判断される。

【0128】

（実施例７）
毒性研究
毒性研究をラットおよびイヌにおいて行い、死亡率、体重の１０％を超える減少、または毒性の明白な臨床徴候を生じない用量として定義される最大耐用量（ＭＴＤ）を識別し、１週間の期間にわたり、反復投与ＭＴＤを識別する。この研究は、両方の種に対して２つの相（Ａ相およびＢ相）から構成される。Ａ相では、最大耐用量（ＭＴＤ）が決定されるまで、単回用量レベルが増加される。Ｂ相では、反復投与ＭＴＤを推定するために、単回用量ＭＴＤの画分で７日間毎日、動物に投与される。詳細な身体検査、体重および摂食量の測定を毎日行う。剖検は、死亡が判明するか、死に際して安楽死されるか、または計画した剖検において、すべての動物について実施する。投与経路は、ＩＶである。

【0129】

ラットにおける急性用量範囲設定毒性研究および７日間の反復投与研究（非ＧＬＰ）。相Ａでは、動物を群へと無作為化する（１群当たり３匹の雄と３匹の雌のラット）。動物数の内訳を表４に示す。

【0130】

【表4】

【0131】

各群には、最大耐用量（ＭＴＤ）が決定されるまで、漸増用量を与える。最大４用量のＴＸＢが試験され、投与の２４時間後に動物は屠殺される。単回用量を決定するために、急性ＭＴＤは、反復投与研究（相Ｂ）における高用量を選択することが可能である。

【0132】

相Ｂでは、３つの用量レベル、単回用量のＭＴＤ、０．５ＭＴＤおよび０．２５ＭＴＤならびにビヒクルのみを受ける対照群に関して反復投与セグメント（７日間、１日１回の投与）を行う。さらに、見出される任意の毒性との相関を可能にする毒性動態（ＴＫ）分析のためにサテライト群が存在する。これらの群は、主要研究におけるものと同じ用量のＴＸＢを受ける動物からなり、７日目の最終投与後の種々の時点で血液試料を回収するために使用される。すべての動物に関して、臨床徴候および死亡率チェックを毎日２回行う。ケージ側の観察は毎日１回行う。詳細な観察は、投与前期の間に１回、投与期の１、３、および７日目ならびに剖検の日に行う。摂食量（定量的、ケージ毎）を１～３、３～７日目に測定し、体重は、投与前期の間に１回、１、３、および７日目ならびに剖検の日に得る。試験物質含量および薬物動態パラメーター（Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｔ_１／２、ＡＵＣ、ＣＬ、Ｖｏｌ）について血液試料を分析する。反復投与動物の最期は、終末前臨床病理（血清化学、血液学に関する凝固および標準パネル）ならびに顕微鏡検査の標準的剖検ならびにすべての動物に関する、組織回収、器官重量（標準パネル）およびすべての組織に関する組織病理により、最終投与の２４時間後である。

【0133】

イヌにおける急性用量範囲設定毒性研究および７日間の反復投与研究（非ＧＬＰ）。イヌでは、相Ａは、ＴＸＢに関する最大耐用量（ＭＴＤ）を決定するための、動物の漸増投与からなる（１頭の動物／性別／用量／日）。動物の内訳を表４に示す。動物を保護するために、次の曝露の前に、薬物のクリアランスのために投与間に「ウォッシュアウト期間」を設け、同じ雄および雌のイヌをそれぞれ４つの用量レベルに曝露させる。

【0134】

この後に、１つの用量レベルを１日に１回７日間、同じ動物に投与する（２頭の動物／性別／用量）、反復投与セグメント（７日間、１日に１回の投与）である、相Ｂを行う。最大３つの用量レベルのＴＸＢを、ビヒクルのみの対照と共に試験する。体重およびケージ側の観察（性質、発症、およびすべての著しいもしくは目に見える毒性作用または薬理作用の持続時間）を投与の１、２．５、および４時間後に記録し、摂食量を処置期間の間に測定する。

【0135】

動物毎に６～８時点で最初および最終の投与後に回収した血液試料に関して、毒性動態分析を行う。試験物質の含有量について試料を分析し、薬物動態パラメーター（Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｔ_１／２、ＡＵＣ、ＣＬ、Ｖｏｌ）を決定する。動物は、最終投与の２４時間後に終末を迎える。臨床病理および全体の剖検を、ラットに関して上記の通り実施する。

【0136】

以下の研究は、７日間の研究におけるものと同じ種、年齢および性別を使用して、ＴＸＢの長期毒性を決定するために行う。これらの研究は、２８日間投与し、その後すべての動物を安楽死させる以外は、７日間の毒性研究についての一般的概要に従う。動物の追加群を投与期間終了後さらに２８日間観察下に置き、いずれかの潜伏性の毒性作用、および以前の投与からの回復速度を評価する。３つの用量レベルとビヒクルのみを受ける対照群を試験する。

【0137】

ラットにおける２８日間の毒性研究および回復期間。表５に示すように、動物を群に無作為化する。

【0138】

【表5】

【0139】

ＴＸＢの３つの用量を試験し、動物には２８日間、毎日１回投与する。瀕死および死亡率について、動物を１日に２回チェックし、毎週、詳細な臨床検査を受けさせ、摂食量および体重についてモニターする。毎週の詳細な臨床検査を伴う毎日の投与の１、２．５および４時間後に、ケージ側の観察を記録する。摂食量および体重を１日１回記録する。研究前および終末前の眼科検査を主要研究動物に関して行い、終末前臨床病理（血清化学、凝固、血液学および検尿）をすべての主要研究動物について分析する。主要研究における動物は、２８日間の投与後に、すべての主要研究動物に関する完全な全体的剖検と器官重量と共に、終末を迎える。完全な組織リストのために、対照および高用量の主要研究動物に関して組織病理を行う（全体でおよそ２，５６０の組織試料）。低用量群における罹患した器官について、組織病理を行う。

【0140】

サテライト群（処置群当たり性別毎に９匹）も同様に投与され、毒性動態のために血液をサンプリングし、あるいは、投与の初日および約最終日に、１時点当たり性別毎に３匹の動物として、６時点においてサンプリングする。試料は、ＴＫ日に単一の時点において、対照群の動物からも得る。試験物質含有量について血漿試料を分析し、ＰＫパラメーター（Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｔ_１／２、ＡＵＣ、ＣＬ、Ｖｏｌ）を決定する。

【0141】

さらに、対照の群（１群当たり５匹の雄と５匹の雌）および高用量群に２８日間同様に投与し、２８日間の回復動物として維持する。ケージ側の観察を毎日実施する。この動物のセットは、終末前臨床病理および眼科検査、ならびに標的組織に関する組織病理と共に、処置期間の完了の２８日後に終末を迎える。

【0142】

イヌにおける２８日間の毒性研究および回復期間。この研究は、上記の通り、ラットに関する研究を模倣し、追加の眼科的検査および心電図検査（ＥＣＧ）を試験前および投与終了付近および回復期間に実施する。

【0143】

動物を表６に示すように群に無作為化する。

【0144】

【表6】

【0145】

ＴＸＢの３つの用量を試験し、動物には２８日間、毎日１回投与する。生存能を毎日２回チェックする。ケージ側の観察を、投与の１、２．５および４時間後に、毎日記録する。毎週の詳細な臨床検査には、毎日の体重、イヌにおける毎日の食物摂取のモニタリング、研究前および終末前の眼科検査が含まれる。臨床病理（血清化学、凝固、血液学および検尿）を、すべてのイヌについて、処置前および終末前に行う。イヌでは、研究前および終末前のＥＣＧ検査がある。

【0146】

毒性動態のサンプリング（血漿）を、投与の初日および最終日に、試験物の血漿中濃度について、６時点において行う（試料をすべての動物から回収し、すべての時点においてすべての処置動物からと、単一の時点において対照動物からとの試料に関して分析を実施した）。血漿試料を試験物質含量について分析し、薬物動態パラメーター（Ｃ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｔ_１／２、ＡＵＣ、ＣＬ、Ｖｏｌ）を決定する。終末は、完全な全体的剖検、器官重量およびすべての動物に関する完全な組織リストに関する組織病理と共に、投与の２８日後である。

【0147】

２８日間同様に投与する対照群および高用量群において追加の群が存在する。追加の２８日間の回復後に、終末前臨床病理、眼科検査、およびＥＣＧに関して、動物を屠殺する。この群の回復動物に関する組織病理は標的組織に限定される。

【0148】

（実施例８）
変異原性および遺伝毒性試験（ＧＬＰ）
変異原性および遺伝毒性試験は、エイムス試験、哺乳動物細胞遺伝子変異アッセイ、およびｉｎ ｖｉｖｏでの哺乳動物遺伝毒性アッセイを行うことによって達成される。Ｌｅａｄｓｃｏｐｅ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ）によって以前に実施されたｉｎ ｓｉｌｉｃｏでの有望な研究では、予測モデルの総合評価法を使用するＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ（ＱＳＡＲ）分析により、ＴＸＢが遺伝毒性の潜在性について陰性であると予測されることが示された。

【0149】

エイムス試験。このアッセイでは、１プレート当たり１７～５，０００マイクログラムの範囲の濃度のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株のＴＡ１５３５、ＴＡ１５３７、ＴＡ９８およびＴＡ１００ならびにＥ．ｃｏｌｉのＷＰ２ｕｖｒＡにおける変異原性活性について試験する。この研究で使用される最も高い濃度は、ＩＣＨおよびＯＥＣＤガイドラインにおいて推奨される最大試験濃度に相当する。Ａｒｏｃｌｏｒ１２５４に誘導されるラットの肝臓調製物および混合機能オキシダーゼ活性に必要とされる補因子（Ｓ９ミックス）の存在下および非存在下で、寒天プレート上で、２つの変異アッセイ（１つは直接プレートおよび１つはプレインキュベーション）を行う。

【0150】

チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）／ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）の遺伝子変異アッセイ。培養ＣＨＯ細胞におけるＨＧＰＲＴ遺伝子座の遺伝子変異の化学的誘導に関するＣＨＯ／ＨＧＰＲＴアッセイ試験。代謝活性の有無にかかわらず、初期用量範囲設定試験を、１０用量レベルのＴＸＢに関して実施する。活性の有無にかかわらず、最終的試験を、二連の培養物および並行毒性試験と共に、５用量レベルで実施する。この研究では、６－チオグアニン抵抗性（６－ＴＧ）変異細胞を、６－ＴＧを補充した培養培地における発現期間後に、定量する。一致する陽性および陰性対照が含まれる。試験物の代謝作用を評価するために、添加される哺乳動物肝臓酵素調製物（Ｓ９）の存在下および非存在下で試験を実施する。この試験は、ビヒクルのみの対照と比較して、ＴＸＢインキュベート細胞における６－ＴＧ変異細胞数に有意な増加（Ｐ＜０．０２５）が存在しない場合、陰性と判断される。

【0151】

ｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝毒性の潜在性。４０匹の雄、４０匹の雌（妊娠していない）、約６週齢、２０～２５グラムの体重、０時間および２４時間の静脈内投与後ならびに最終投与の２４時間および４８時間後の２回のサンプリングポイントの病原体フリーＩＣＲ（ＣＤ－１）マウスの骨髄赤血球の、小核試験において、ＴＸＢを評価する。この試験は、小核化した多染性赤血球が、処置動物対未処置動物の骨髄で見つかる頻度の間の統計的差についてスコア化する。陽性の染色体切断物質および陰性の（ビヒクル）対照と共に、３つの濃度のＴＸＢをマウスの群（１群当たり性別毎に５匹）に投与する。ＴＸＢ処置群では、各動物に、２用量（ＭＴＤ、０．５ＭＴＤ、０．２５ＭＴＤ）のＴＸＢを、２４時間の間隔を空けて投与する。陽性の染色体切断物質対照群に、１日目～４日目に、２５ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドを毎日投与する。ビヒクルのみの対照群が含まれる。毒性および／または薬理作用の徴候について、動物を観察する。ＴＸＢ処置群では、一方の群は最終投与の２４時間後に屠殺され、別の群は最終投与の４８時間後に屠殺される。陽性対照群およびビヒクルのみの群は、投与の２４時間後に屠殺される。大腿骨の骨髄を回収する。骨髄スメアを調査して、各群の動物当たり、およそ２，０００個の未成熟赤血球と対応する数の成熟赤血球を計数する。染色体異常誘発能を小核化赤血球の割合として測定する。

【0152】

この試験は、対照（ビヒクルのみ）の群と比較して、毎日１回、２日間のＭＴＤを動物に投与した後に、小核化多染性赤血球の数に有意な増加（Ｐ＜０．０２５）が観察されない場合に、陰性と判断される。

【0153】

（実施例９）
結核（ＴＢ）の検証したウサギモデルにおけるＴＸＢの有効性。
急性ＴＢ有効性研究を、ＩＶ投与を使用するＴＢ有効性試験に好ましい種のうちの１つであるウサギにおいて行う。ウサギの感染では、リン酸緩衝生理食塩水中で、凍結病原体ストックを１０^６ＣＦＵ／ｍｌまで希釈することによって、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ株Ｈ３７Ｒｖのエアロゾル接種物を調製する。合計２０頭のウサギをこの研究において使用する。専用の生物学用安全キャビネット中に収容され、そこで操作される吸入装置に、フィルターを通した空気と６．４リットル／分のエアロゾルを送達するネブライザーを使用して、エアロゾルを生成する。ＩＶ薬物投与の容易さのために、頚静脈に外科的に挿入された内在カテーテルを有するウサギを、エアロゾルに１０分間、続いて、清浄な空気に５分間曝露させ、それらのケージに戻す。この手順により、およそ１００ＣＦＵ／リットルの感染性エアロゾルが送達され、ウサギの肺当たりおよそ５０個の肺気腫を生じる。

【0154】

感染は、９週間の発症を可能にし、その後、ウサギは、１０ｍｇ／ｋｇ／日および２０ｍｇ／ｋｇ／日で（以前に記載した耐性およびＰＫ研究から決定された）、ＴＸＢの静脈内投与を毎日、４週間受ける。ＴＸＢの投与体積は、２ｍＬ／ｋｇである。経口イソニアジド（５０ｍｇ／ｋｇ／日）を陽性対照として使用し、喉の裏側に、シリンジで毎日送達する。２つのＴＸＢ投与溶液中で使用されるビヒクルの最も高い濃度である、２０ｍｇ／ｋｇ／日で、ビヒクル対照（ＰＰＬ）を送達する。研究アーム当たり５匹の動物が存在する。投与の終了時に、剖検により、個々の病変および肺の細菌負荷を回収し、代表的な病変を群間で比較する。群間の比較に対するエンドポイントには、肺重量、リンパ節重量、病変体積、病変の組織学的外観、および細菌負荷が含まれる。この目的は、ビヒクル対照と比較して、薬物で処置した動物において明らかな有害作用を有さない、肺および代表的な病変において１．５対数以上のＣＦＵの低減を達成することである。

【0155】

均等物
前記した明細書は、当業者に本発明を実践させるのに十分であると考えられる。実施例は本発明の一態様の単一の例示として意図されているため、本発明は提供される実施例による範囲に限定されるべきではなく、他の機能的に均等な実施形態が本発明の範囲内にある。本明細書に示され、記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が、前記した記載から当業者には明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態に必ずしも包含される訳ではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】