特許 7299897 ＨＣＶのＲＮＡ複製阻害剤としての４’－フルオロ－２’－メチル置換ヌクレオシド誘導体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-06-20

(45)【発行日】2023-06-28

(54)【発明の名称】ＨＣＶのＲＮＡ複製阻害剤としての４’－フルオロ－２’－メチル置換ヌクレオシド誘導体

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7068 20060101AFI20230621BHJP

   A61K 31/7072 20060101ALI20230621BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230621BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20230621BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230621BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230621BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7068

A61K31/7072

A61P43/00 121

A61P31/14

A61P1/16

A61P29/00

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2020538752

(86)(22)【出願日】2018-09-21

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-11-26

(86)【国際出願番号】 US2018052239

(87)【国際公開番号】W WO2019060740

(87)【国際公開日】2019-03-28

【審査請求日】2021-09-21

(31)【優先権主張番号】62/561,237

(32)【優先日】2017-09-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】520098291

【氏名又は名称】リボサイエンス リミティド ライアビリティ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100197169

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 潤二

(72)【発明者】

【氏名】マーク スミス

(72)【発明者】

【氏名】クラウス ジー．クランプ

【審査官】新熊 忠信

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１６－５１８４５３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１５－５００８５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５０５５９５（ＪＰ，Ａ）

【文献】Advances in Pharmacology，2013年，Vol.67，pp.39-73

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４

Ａ６１Ｐ １／００

Ａ６１Ｐ ２９／００

Ａ６１Ｐ ３１／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉの化合物：

【化1】

［式中、
式ＩのＲはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
式ＩのＲ’はＯ－Ｒ^１ であり、
式ＩのＲ ^１は独立に、フェニルまたはナフチルであり、
式ＩのＲ^２ａおよびＲ^２ｂは、独立にＨまたは低級アルキルであり、
式Ｉの各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、または低級ハロアルキルであり、
式ＩのＸはＯであり、
式ＩのＹはＦであり、
式ＩのＹ’はＦである。］または薬理的に許容されるその塩を含み、式ＩＩの化合物：

【化2】

または薬理的に許容されるその塩
と組み合わせて、必要とする患者に逐次的に又は同時に投与される、
あるいは、
前記式ＩＩの化合物または薬理的に許容されるその塩を含み、前記式Ｉの化合物または薬理的に許容されるその塩と組み合わせて必要とする患者に逐次的に又は同時に投与される、
あるいは、
前記式Ｉの化合物または薬理的に許容されるその塩と、前記式ＩＩの化合物または薬理的に許容されるその塩とを含む、
ＨＣＶを治療するための組成物。

【請求項2】

式Ｉの化合物が

【化3】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

式Ｉの化合物が

【化5】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

式Ｉの化合物が

【化7】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

式ＩＩの化合物が

【化20】

である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

式ＩＩの化合物が

【化21】

である、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物がそれぞれ、

【化24】

および

【化25】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物がそれぞれ、

【化26】

および

【化27】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物がそれぞれ、

【化28】

および

【化29】

である、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記組成物が、リバビリン、ペグインターフェロンα、シメプレビル、レジパスビル、ダクラタスビルおよびベルパタスビルの１つ以上とさらに併用される、請求項１から９のいずれか一項記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条ｅ項の下で２０１７年９月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／５６１，２３７号の優先権の利益を主張するものであり、その開示内容は全体として参照により本明細書に取り込まれる。

【0002】

本発明はＨＣＶレプリコンＲＮＡ複製の阻害剤としてのヌクレオシド誘導体の組み合わせに関する。詳細には、本発明はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）サブゲノムＲＮＡ複製の阻害剤としてのピリミジンヌクレオシドであるシチジンおよびウリジンのピリミジン誘導体の組み合わせ、ならびにそのような化合物を含む医薬組成物の使用に関する。詳細には、式ＩＩのウリジンヌクレオシド類似体が組み合わされた式Ｉのシチジンヌクレオシド類似体はＨＣＶポリメラーゼの阻害に相乗効果を発揮する。

【背景技術】

【0003】

Ｃ型肝炎ウイルスは世界中の慢性肝疾患の主な原因である。ＨＣＶに感染した患者は肝硬変およびそれに続く肝細胞がんを発病するリスクがある。したがって、ＨＣＶは肝臓移植のための主な指標である。承認されている２つの治療法のみが、ＨＣＶ感染の治療法として現在利用できる。（Ｒ． Ｇ． Ｇｉｓｈ、Ｓｅｍ． Ｌｉｖｅｒ． Ｄｉｓ．、１９９９、１９、３５）これらはインターフェロン－αの単独療法であり、さらに最近ではヌクレオシド類似体であるリバビリン（ビラゾール）とインターフェロン－αとの併用療法である。

【0004】

ウイルス感染症の治療目的で承認されている医薬品の多くは、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、これらヌクレオシド類似体医薬品の大部分はウイルスのポリメラーゼ酵素を阻害することで、対応する三リン酸エステルへの転換に続いてウイルスの複製を阻害する。三リン酸エステルへのこの転換は、通常細胞キナーゼが媒介しており、したがってＨＣＶ複製の阻害剤としてのヌクレオシドの直接評価は、細胞検定を用いることによって唯一好都合に行える。ＨＣＶにおいては、真の細胞ベースのウイルス複製検定または感染の動物モデルを利用することができない。

【0005】

Ｃ型肝炎ウイルスはフラビウイルス科に属する。Ｃ型肝炎ウイルスはＲＮＡウイルスであり、このＲＮＡゲノムは子孫ＲＮＡの合成を確かなものにするのに必要な複製機構をプロセッシング後に産生する大型のポリタンパク質をコードしている。ＨＣＶのＲＮＡゲノムによってコードされている非構造タンパク質の大部分はＲＮＡ複製に関与していると考えられる。ＬｏｈｍａｎｎらはＨＣＶのサブゲノムＲＮＡ分子が導入され、高効率で複製することが明らかとなったヒト肝細胞腫（Ｈｕｈ７）細胞株の作成について記述している。［Ｖ． Ｌｏｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９、２８５、１１０－１１３］ これら細胞株のＲＮＡ複製の機序は感染した肝細胞におけるＨＣＶの全長ＲＮＡゲノムの複製と同一であると考えられる。これら細胞株の単離に使用されるＨＣＶのサブゲノムｃＤＮＡクローンによって、ＨＣＶ複製のヌクレオシド類似体阻害剤を同定する細胞検定を開発するための基盤が形成された。

【発明の概要】

【0006】

第１の態様では、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせ、

【化1】

［式中、
各Ｒは独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ’は独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ^１は独立に、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキルまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルであり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にHまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、シクロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｘは独立にＯまたはＳであり、
各Ｙは独立にＨまたはＦであり、
各Ｙ’は独立にＦまたはＯＨである。］または薬理的に許容されるこれらの塩（または本明細書で開示される任意の実施形態）を必要とする患者に投与することにより、ＨＣＶを治療する方法を提供する。

【0007】

第２の態様では、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ペンタン－３－イル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、
ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ペンタン－３－イル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ペンタン－３－イル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、
ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
ペンタン－３－イル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、および
イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート
から選択される式Ｉの化合物、
ならびにこれらのＳ_ＰおよびＲ_Ｐエピマーの混合物、
または上記の各化合物の薬学的に許容される塩を提供する。

【0008】

第３の態様では、また式ＩＩＩの化合物、

【化2】

［式中、
ＲはＯ－Ｒ^１またはＮＨＲ^１’であり、
またはＲおよびＲ^５がともに結合し、
Ｒ’はＮ（Ｒ^４）Ｃ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３または－ＯＲ^３であり、
Ｒ^１はＨ、低級ハロアルキル、またはアリール（式中、アリールは、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキル、－Ｎ（Ｒ^１ａ）_２、アシルアミノ、－ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^１ａ）_２、－ＣＯＲ^１ｂ、－ＳＯ_２（Ｒ^１ｃ）、－ＮＨＳＯ_２（Ｒ^１ｃ）、ニトロまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルである）、
各Ｒ^１ａは独立にＨまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^１ｂは独立に－ＯＲ^１ａまたは－Ｎ（Ｒ^１ａ）_２であり、
各Ｒ^１ｃは低級アルキルであり、
Ｒ^１’は－Ｃ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にＨ、低級アルキル、－（ＣＨ_２）_ｒＮ（Ｒ^１ａ）_２、低級ヒドロキシアルキル、－ＣＨ_２ＳＨ、－（ＣＨ_２）Ｓ（Ｏ）_ｐＭｅ、－（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、（１Ｈ－インドル－３－イル）メチル、（１Ｈ－インドル－４－イル）メチル、－（ＣＨ２）_ｍＣ（＝Ｏ）Ｒ^１ｂ、アリールおよびアリール低級アルキル（式中、アリールは１つ以上のヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、ニトロまたはシアノで任意に置換されてもよい）、
またはＲ^２ａはＨであり、Ｒ^２ｂおよびＲ^４はともに（ＣＨ_２）_ｎを形成し、
各Ｒ^３はＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｒ^４はＨ、低級アルキルであり、またはＲ^２bおよびＲ^４はともに（ＣＨ_２）_３を形成し、
Ｒ^５はＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ｃ、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^１ｂ、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１）（ＯＲ^１ａ）またはＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^１）（ＮＲ^４Ｒ^７）であり、
Ｒ^６はＯＨまたはＦであり、
Ｒ^７はＣ（Ｒ^２ａＲ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
ｍは０～３であり、
ｎは３、４または５であり、
ｐは０～２であり、
ｒは１～６であり、
ＸはＯまたはＳであり、かつ
塩基はウラシル、シトシン、グアニン、アデニン、チミンまたは複素環式アルキルである。（これらはそれぞれ１つ以上のヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、ニトロまたはシアノで任意に置換されてもよい）］または薬理的に許容されるこれらの塩を提供する。

【0009】

式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって媒介される病気の治療に有用である。

【0010】

本出願はまた、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療するために有効量の式ＩＩＩの化合物を必要とする患者に対し投与することを含む方法を提供する。

【0011】

本出願はさらに、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物および薬理的に許容される賦形剤を含む組成物を提供する。

実施の詳細な説明

【発明を実施するための形態】

【0012】

式ＩおよびＩＩの化合物は、肝細胞腫細胞株のＣ型肝炎ウイルスサブゲノム複製の阻害剤であることが明らかとなった。これらの化合物は、ヒトのＨＣＶ感染を治療するための抗ウイルス薬として有効なはずである。

定義：

【0013】

別段の記載がない限り、クレームおよび明細書で使用される以下の用語は下記のとおり意味する。

【0014】

本明細書で使用される「アルキル」の用語は、１～１２個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基を指す。「アルキル」の用語は、１～７個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基を指すことが好ましく、本明細書では低級アルキルと呼ばれてもよい。最も好ましい炭化水素残基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチルまたはペンチルである。アルキルは非置換であっても置換されていてもよい。置換基は１つ以上のシクロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルから選択される。一実施形態では、アルキルは非置換である。

【0015】

本明細書で使用される「シクロアルキル」の用語は、３～７個の炭素原子を含む任意に置換されたシクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルを指す。置換基は１つ以上のシクロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルから選択される。一実施形態では、シクロアルキルは非置換である。

【0016】

本明細書で使用される「シクロアルキルカルボニル」の用語は、Ｒが上記で定義されるシクロアルキルである一群の式－Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。

【0017】

本明細書で使用される「アルコキシ」の用語は、低級アルキルを含む「アルキル」部分が上記で定義される、任意に置換された直鎖または分岐鎖を有するアルキルオキシ基を指す。これらに限定されないが、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ－プロピルオキシ、ｉ－プロピルオキシ、ｎ－ブチルオキシ、ｉ－ブチルオキシ、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、ヘプチルオキシおよびそれらの異性体が挙げられる。

【0018】

本明細書で使用される「アルキルアミノ」の用語は、低級アルキルを含む「アルキル」部分が上記で定義される、直鎖または分岐鎖を有するアルキル－ＮＨ基を指す。

【0019】

本明細書で使用される「ジアルキルアミノ」の用語は、低級アルキルを含む「アルキル」部分が上記で定義される、直鎖または分岐鎖を有する（アルキル）_２－Ｎ基を指す。

【0020】

本明細書で使用される「アルコキシアルキル」の用語は、上記で定義される低級アルキルを含むアルキル基に結合している、上記で定義されるアルコキシ基を指す。例えば、メトキシメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシメチル、エトキシエチル、エトキシプロピル、プロピルオキシプロピル、メトキシブチル、エトキシブチル、プロピルオキシブチル、ブチルオキシブチル、ｔｅｒｔ－ブチルオキシブチル、メトキシペンチル、エトキシペンチル、プロピルオキシペンチルおよびそれらの異性体が挙げられる。

【0021】

本明細書で使用される「アルケニル」の用語は、２～７個の炭素原子を、好ましくは２～４個の炭素原子を有し、１つ以上のオレフィン二重結合を、好ましくは１つのオレフィン二重結合を有する非置換または置換された炭化水素鎖基を指す。２～４個の炭素原子を含むアルケニルは、本明細書では低級アルケニルと呼ばれてもよい。置換基は１つ以上のシクロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルから選択される。一実施形態では、アルケニルは非置換である。実施例では、アルケニルはビニル、１－プロペニル、２－プロペニル（アリル）または２－ブテニル（クロチル）である。

【0022】

本明細書で使用される「アルキニル」の用語は、２～７個の炭素原子を、好ましくは２～４個の炭素原子を有し、１つまたは可能であれば２つの３重結合を、好ましくは１つの三重結合を有する非置換または置換された炭化水素鎖基を指す。２～４個の炭素原子を含むアルキニルは、本明細書では低級アルキニルと呼ばれてもよい。置換基は１つ以上のシクロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルから選択される。一実施形態では、アルキニルは非置換である。実施例では、アルキニルはエチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニルまたは３－ブチニルである。

【0023】

本明細書で使用される「ヒドロキシアルキル」の用語は、上記で定義される低級アルキル基を含む直鎖または分岐鎖を有するアルキル基を指し、１、２、３または４個以上の水素原子がヒドロキシ基で置換されている。例えばヒドロキシメチル、１－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシエチル、１－ヒドロキシプロピル、２－ヒドロキシプロピル、３－ヒドロキシプロピル、ヒドロキシイソプロピル、ヒドロキシブチル等が挙げられる。

【0024】

本明細書で使用される「ハロアルキル」の用語は、上記で定義される低級アルキル基を含む直鎖または分岐鎖を有するアルキル基を指し、１、２、３または４個以上の水素原子がハロゲン基で置換されている。例えば１－フルオロメチル、１－クロロメチル、１－ブロモメチル、１－ヨードメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、トリヨードメチル、１－フルオロエチル、１－クロロエチル、１－ブロモエチル、１－ヨードエチル、２－フルオロエチル、２－クロロエチル、２－ブロモエチル、２－ヨードエチル、２，２－ジクロロエチル、３－ブロモプロピルまたは２，２，２－トリフルオロエチル等が挙げられる。

【0025】

本明細書で使用される「アリール」の用語は、別段の記載がない限り任意に置換されたフェニルおよびナフチル（例：１－ナフチル、２－ナフチルまたは３－ナフチル）を指す。アリール向けの好適な置換基はアルキルの名前を取って命名されている置換基から選択できる。しかしそれ以外に、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシおよび置換されてもよいアルキル（例：上記で定義された非置換または置換されたアルキル）、ハロアルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリールオキシはこの選択に加えることができる置換基である。一実施形態では、置換基はアルコキシ以外の置換基を含む。

【0026】

本明細書で使用される「アリールアルキル」の用語は、アルキルに結合しているアリールを指し、各用語は上記で定義されている。アリールがフェニルの場合は、本明細書ではフェニルアルキルと呼ばれてもよい。

【0027】

本明細書で使用される「ヘテロシクリル」または「ヘテロシクロアルキル」の用語は、任意に置換された飽和、一部分が不飽和または芳香族の単環、炭素環またはヘテロ環に縮合される窒素、酸素およびイオウから選択される１個以上のヘテロ原子を含む、任意に置換された飽和、一部分が不飽和または芳香族の単環、二環または三環のヘテロ環系を指す。ヘテロシクリル向けの好適な置換基はアルキルの名前を取って命名されている置換基から選択できる。しかしそれ以外に、置換されてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、オキソ基（＝Ｏ）またはアミノスルフォニル（－ＳＯ_２ＮＨ_２）はこの選択に加えることができる置換基である。好適なヘテロ環の例としては、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、テトラヒドロフリル、１，３－ジオキソラニル、ジヒドロピラニル、２－チエニル、３－チエニル、ピラジニル、イソチアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ピリミジニル、テトラゾリル、１－ピロリジニル、２－ピロリジニル、３－ピロリジニル、ピロリジノニル、（Ｎ－オキシド）－ピリジニル、１－ピロリル、２－ピロリル、１，２，３－トリアゾリルまたは１，２，４－トリアゾリルなどのトリアゾリル、１－ピラゾリル、２－ピラゾリル、４－ピラゾリル、ピペリジニル、モルホリニル（例：４－モルホリニル）、チオモルホリニル（例：４－チオモルホリニル）、チアゾリル、ピリジニル、ジヒドロチアゾリル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、１－イミダゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル、１，２，３－チアジアゾリルなどのチアジアゾリル、４－メチルピペラジニル、４－ヒドロキシピペリジン－１－イルが挙げられる。

【0028】

本明細書で使用される「アシル」（「アルキルカルボニル」）の用語は、Ｒが水素、１～７個の炭素原子を含む非置換または置換された直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基またはフェニル基である一群の式Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。最も好ましいアシル基は、Ｒが水素、１～４個の炭素原子を含む非置換の直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基またはフェニル基であるアシル基である。

【0029】

本明細書で使用される「アシルアミノ」の用語は、Ｒが水素、１～７個の炭素原子を含む非置換または置換された直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基またはフェニル基である一群の式－ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒを指す。最も好ましいアシル基は、Ｒが水素、１～４個の炭素原子を含む非置換の直鎖または分岐鎖を有する炭化水素残基またはフェニル基であるアシル基である。

【0030】

ハロゲンまたはハロはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味し、好ましくはフッ素、塩素または臭素を意味する。

【0031】

本明細書で使用される「フェニルアルキル」の用語は、上記で定義されるアルキルに結合しているフェニルを指す。これらに限定されないが、例えばベンジル、フェネチル等が挙げられる。

【0032】

本出願を通じてなされた図形表示において、先細太線

【化3】

は不斉炭素が属する環の平面より上方にある置換基を示し、点線

【化4】

は不斉炭素が属する環の平面より下方にある置換基を示す。

【0033】

本発明の化合物は立体異性を示す。これらの化合物は、式Ｉ、ＩＩまたはIII の化合物の任意の異性体またはエピマーを含むこれらの異性体の混合物であってもよい。本明細書で使用されるＲ_ＰおよびＳ_Ｐはリン原子における立体化学を指す。１個以上の不斉炭素を有する本発明の化合物および中間体は分離することができる立体異性体のラセミ混合物の形で得てもよい。

【0034】

式Ｉ、ＩＩまたはIII の化合物は、容易に相互変換できる２つ以上の化合物として本発明の化合物が存在することができることを意味する互変異性を示すことができる。多くの場合、これは他の２つの原子（このうちいずれか１つの原子に対して水素は共有結合する）間で水素原子が交換されることを単に意味するにすぎない。互変異性化合物はお互いに動的平衡で存在しており、従って単独の物質を調製する試みは、通常混合物が形成され、それは全ての物理化学特性が構成要素の構造に基づくと期待されることを示す結果に終わる。

【0035】

最も一般的な互変異性は、カルボニルまたはケト化合物および不飽和ヒドロキシル化合物すなわちエノール類に関与する互変異性である。立体構造変化は、水素原子が炭素原子と酸素原子の間で移行し、結合の転位を伴うものである。例えば、アセトアルデヒドなどの多くの脂肪族アルデヒド類およびケトン類ではケト形が主な形であり、フェノールではエノール形が主な構成要素である。

【0036】

塩基性の式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物は、ハロゲン化水素酸（例：塩酸および臭化水素酸）、硫酸、硝酸およびリン酸等などの無機酸、および有機酸（例：酢酸、酒石酸、コハク酸、フマール酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸およびｐ－トルエンスルホン酸等）と薬理的に許容される塩を形成することができる。当技術分野で知られている方法に従って、このような塩を形成しかつ単離することができる。

実施態様：
ＨＣＶを治療する方法

【0037】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせ、

【化5】

［式中、
各Ｒは独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ’は独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ^１は独立に、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキルまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルであり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にＨまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、シクロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｘは独立にＯまたはＳであり、
各Ｙは独立にＨまたはＦであり、
各Ｙ’は独立にＦまたはＯＨである。］または薬理的に許容されるこれらの塩を必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。
一実施形態において、式Ｉの化合物では各Ｒ^３が独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルである。

【0038】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化6】

である。

【0039】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化7】

である。

【0040】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化8】

である。

【0041】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化9】

である。

【0042】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化10】

である。

【0043】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化11】

である。

【0044】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化12】

である。

【0045】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化13】

である。

【0046】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化14】

である。

【0047】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化15】

である。

【0048】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化16】

である。

【0049】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化17】

である。

【0050】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化18】

である。

【0051】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化19】

である。

【0052】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化20】

である。

【0053】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、

【化21】

である。

【0054】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式ＩＩの化合物はソホシブビル

【化22】

である。

【0055】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式ＩＩの化合物は、

【化23】

である。

【0056】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式ＩＩの化合物は、

【化24】

である。

【0057】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式ＩＩの化合物は、

【化25】

である。

【0058】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物はそれぞれ、

【化26】

および

【化27】

である。

【0059】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物はそれぞれ、

【化28】

および

【化29】

である。

【0060】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物はそれぞれ、

【化30】

である。

【0061】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、

【化31】

である。

【0062】

本出願は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、

【化32】

である。

【0063】

本出願は、また式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は以下の化合物を含む群から選択される。

【0064】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0065】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0066】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0067】

シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0068】

ペンタン－３－イル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0069】

ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0070】

ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0071】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、

【0072】

ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0073】

シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0074】

ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0075】

ペンタン－３－イル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0076】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、

【0077】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0078】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0079】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0080】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0081】

イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0082】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0083】

シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0084】

ペンタン－３－イル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0085】

ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0086】

ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0087】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、

【0088】

ジイソプロピル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0089】

シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0090】

ジシクロヘキシル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（（アミノ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0091】

ペンタン－３－イル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0092】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート、

【0093】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、

【0094】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、および

【0095】

イソプロピル（（Ｒ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート、および

【0096】

それらのＳ_ＰおよびＲ_Ｐエピマーの混合物、または
上記の各化合物の薬学的に許容される塩。

【0097】

別の実施形態では、上記の図で示された式ＩＩの化合物は独立に、

【化33】

ＩＩ－１

【化34】

ＩＩ－２

【化35】

ＩＩ－３

および

【化36】

ＩＩ－４

またはこれらのＳ_ＰおよびＲ_Ｐエピマーの混合物から選択される。

【0098】

本出願は、また式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式Ｉの化合物は、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチシチジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチシチジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチシチジン－５’－（Ｏ－２－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルシチジン－３’，５’－環状リン酸イソプロピルエステル、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルシチジン－３’，５’－環状チオリン酸イソプロピルエステル、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－シチジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－２－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－２－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－３’，５’－環状リン酸イソプロピルエステル、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－３’，５’－環状チオリン酸イソプロピルエステル、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルシチジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]ホスホルジアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルシチジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]チオホスホルジアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]ホスホルジアミデート、および
４’－フルオロ－２’－メチルシチジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]チオホスホルジアミデート、
を含む群から選択される。

【0099】

本出願は、また式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物との組み合わせを必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。式ＩＩの化合物は、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－２－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－３’，５’－環状リン酸イソプロピルエステル、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２‘－メチルウリジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－２－（イソプロポキシカルボニル）エチル ホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－フェニル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－（Ｏ－１－ナフチル－Ｎ－（Ｓ）－２－（イソプロポキシカルボニル）エチル チオホスホルアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－３’，５’－環状リン酸イソプロピルエステル、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－３’，５’－環状チオリン酸イソプロピルエステル、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]ホスホルジアミデート、
２’－デオキシ－２’，４’－ジフルオロ－２’－メチルウリジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]チオホスホルジアミデート、
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]ホスホルジアミデート、および
４’－フルオロ－２’－メチルウリジン－５’－｛Ｎ，Ｎ’－ビス［（Ｓ）－１－（イソプロポキシカルボニル）エチル]チオホスホルジアミデート、
を含む群
から選択される。

【0100】

また、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物の組み合わせ（または本明細書の任意の実施形態）を必要とする患者に投与すること含むＨＣＶを治療する方法を提供する。その方法はさらにリバビリン、ペグインターフェロンα、シメプレビル、レジパスビル、ダクラタスビルおよびベルパタスビルの１つ以上を投与することを含む。

【0101】

本出願は、また式Ｉの化合物および／または式ＩＩの化合物を含む組成物、

【化37】

［式中、
各Ｒは独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ^Ｒ３であり、
各Ｒ’は独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ^Ｒ３であり、
各Ｒ^１は独立に、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキルまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルであり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にＨまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、シクロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｘは独立にＯまたはＳであり、
各Ｙは独立にＨまたはＦであり、
各Ｙ’は独立にＦまたはＯＨである。］または薬理的に許容されるこれらの塩、
（または本明細書の任意の実施形態）を少なくとも１つの担体、希釈剤また賦形剤と混合して必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。

【0102】

本出願は、また式Ｉの化合物または式Ｉと式ＩＩの組み合わせ、

【化38】

［式中、
各Ｒは独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ’は独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ^１は独立に、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキルまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルであり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にＨまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、シクロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｘは独立にＯまたはＳであり、
各Ｙは独立にＨまたはＦであり、
各Ｙ’は独立にＦまたはＯＨである。］または薬理的に許容されるこれらの塩、
（または本明細書の任意の実施形態）をさらにＨＣＶプロテアーゼ阻害剤であるＮＳ３Ａと組み合わせて必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。

【0103】

本出願は、さらに式Ｉの化合物または式Ｉと式ＩＩの組み合わせ、

【化39】

［式中、
各Ｒは独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ’は独立にＯ－Ｒ^１またはＮＨＣ（Ｒ^２ａ）（Ｒ^２ｂ）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^３であり、
各Ｒ^１は独立に、任意に１つ以上の低級アルキル、低級アルコキシ、ハロ、低級ハロアルキルまたはシアノで置換された、フェニルまたはナフチルであり、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立にＨまたは低級アルキルであり、
各Ｒ^３は独立にＨ、低級アルキル、低級ハロアルキル、シクロアルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり、
各Ｘは独立にＯまたはＳであり、
各Ｙは独立にＨまたはＦであり、
各Ｙ’は独立にＦまたはＯＨである。］または薬理的に許容されるこれらの塩、
（または本明細書の任意の実施形態）をさらに追加のＨＣＶポリメラーゼ阻害剤であるＮＳ５Ｂと組み合わせて必要とする患者に投与することを含むＨＣＶを治療する方法を提供する。

【0104】

本出願は、式Ｉの化合物および／または式ＩＩの化合物の組み合わせを投与することを含む細胞内のＨＣＶ複製を阻害する方法を提供する。

【0105】

本出願は、ＨＣＶ治療用薬物の製造時に式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物の組み合わせの使用を提供する。

【0106】

本出願は、本明細書に記載された化合物、組成物または方法を提供する。

【0107】

本発明によって包含され、本発明の範囲内にある式（Ｉ）の代表的な化合物の例は、下記表１に提供されている。

【0108】

通常は、本出願において使用されている命名法は当業者にとって一般的な標準核酸命名法に基づいている。図示された構造式とその構造式の名称の間に不一致がある場合は、図示された構造式が優先される。さらに、ある構造式の立体化学または構造式のある部分が例えば、太線または破線で示されていない場合は、その構造式または構造式の部分はそのすべての立体異性体を包含していると解釈される。

【表1-1】

【表1-2】

本明細書で開示される方法で使用することができる式Ｉの追加の化合物は下記表２に示されている。

【表2-1】

【表2-2】

併用療法：

【0109】

本発明の化合物、それらの異性体および薬理的に許容される塩は、単独でＨＣＶ感染を治療および防止する、または他の化合物と組み合わせて使用するとＨＣＶの生活環に関与するウイルス性または細胞性の構成要素または機能を標的とするのに有用である。本発明において有用な化合物のクラスは、これらに限定されないが、ＨＣＶ抗ウイルス剤の全てのクラスを含む。

【0110】

併用療法には、本発明の化合物と組み合わせると有用であり得る薬剤の機構分類としては、例えばＨＣＶポリメラーゼのヌクレオシドおよび非ヌクレオシド阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ＮＳ４Ｂ阻害剤および配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を機能的に阻害する薬剤およびＨＣＶの細胞付着、ウイルスの進入、ＨＣＶのＲＮＡ翻訳、ＨＣＶのＲＮＡ転写、複製またはＨＣＶの成熟、構築またはウイルスの放出を阻害する他の薬物が挙げられる。これらの分類にあり本発明で有用な具体的な化合物としては、これらに限定されないが、テラプレビル（ＶＸ－９５０）、ボセプレビル（ＳＣＨ－５０３０３４）、ナラプレビル（ＳＣＨ－９００５１８）、ＩＴＭＮ－１９１（Ｒ－７２２７）、ＴＭＣ－４３５３５０（ａ．ｋ．ａ．ＴＭＣ－４３５）、ＭＫ－７００９、ＢＩ－２０１３３５、ＢＩ－２０６１（シルプレビル）、ＢＭＳ－６５００３２、ＡＣＨ－１６２５、ＡＣＨ－１０９５（ＨＣＶのＮＳ４Ａプロテアーゼ補因子阻害剤）、ＶＸ－５００、ＶＸ－８１３、ＰＨＸ－１７６６、ＰＨＸ２０５４、ＩＤＸ－１３６、ＩＤＸ－３１６、ＡＢＴ－４５０－ＥＰ－０１３４２０（および同類物）およびＶＢＹ－３７６などの大環状、ヘテロ環および直鎖ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。本発明で有用なヌクレオシドのＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤としては、これらに限定されないが、Ｒ７１２８、ＰＳＩ－７８５１、ＩＤＸ－１８４、ＩＤＸ－１０２、Ｒ１４７９、ＵＮＸ－０８１８９、ＰＳＩ－６１３０、ＰＳＩ－９３８およびＰＳＩ－８７９ならびに他の様々なヌクレオシドおよびヌクレオチド類似体ならびに２’－Ｃ－メチル改変ヌクレオシ（チ）ド、４’－アザ改変ヌクレオシ（チ）ドおよび７’－デアザ改変ヌクレオシ（チ）ドとして導出された阻害剤を含む（ただし、これらに限定されない）ＨＣＶ阻害剤が挙げられる。本発明で有用な非ヌクレオシドのＨＣＶポリメラーゼ（レプリカーゼ）阻害剤としては、これらに限定されないが、ＨＣＶ－７９６、ＨＣＶ－３７１、ＶＣＨ－７５９、ＶＣＨ－９１６、ＶＣＨ－２２２、ＡＮＡ－５９８、ＭＫ－３２８１、ＡＢＴ－３３３、ＡＢＴ－０７２、ＰＦ－００８６８５５４、ＢＩ－２０７１２７、ＧＳ－９１９０、Ａ－８３７０９３、ＪＫＴ－１０９、ＧＬ－５９７２８およびＧＬ－６０６６７が挙げられる。

【0111】

さらに、本発明の化合物はサイクロフィリンおよびイムノフィリン拮抗薬（例：これらに限定されないが、ＤＥＢＩＯ化合物、ＮＭ－８１１ならびにサイクロフィリンおよびその誘導体）、キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質（例：ＨＳＰ９０およびＨＳＰ７０）の阻害剤、これらに限定されないがイントロンＡ、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ、Ｃａｎｆｅｒｏｎ－Ａ３００、Ａｄｖａｆｅｒｏｎ、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ、Ｈｕｍｏｆｅｒｏｎ、Ｓｕｍｉｆｅｒｏｎ ＭＰ、Ａｌｆａｆｅｒｏｎｅ、ＩＦＮ－β、Ｆｅｒｏｎ等などのインターフェロン類（－アルファ、－ベータ、－オメガ、－ガンマ、－ラムダまたは合成品）、ＰＥＧインターフェロン－α－２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ）、ＰＥＧインターフェロン－α－２ｂ（ＰＥＧＩｎｔｒｏｎ）およびペグ化されたＩＦＮ－α－ｃｏｎ１等などのポリエチレングリコール誘導体化（ペグ化）インターフェロン化合物、アルブミン縮合インターフェロン、Ａｌｂｕｆｅｒｏｎ、Ｌｏｃｔｅｒｏｎ等などのインターフェロン化合物の長時間作用型製剤および誘導体、さまざまなタイプの制御された送達システムを持つインターフェロン類（例：ＩＴＣＡ－６３８、ＤＵＲＯＳ皮下送達システムによって送達されたオメガ－インターフェロン）、レシキモド等などの細胞内インターフェロン合成を刺激する化合物、インターロイキン、ＳＣＶ－０７等などのタイプ１ヘルパーＴ細胞反応の展開を促進する化合物、ＣｐＧ－１０１０１（アクチロン）のようなＴＯＬＬ様受容体作動薬、イソトラビンおよびＡＮＡ７７３等などの鐘様受容体作動薬、サイモシイン―α－１、ＡＮＡ－２４５およびＡＮＡ－２４６、ヒスタミン二塩酸塩、プロパゲルマニウム、テトラクロロデカオキシド、アンプリゲン、ＩＭＰ－３２１、ＫＲＮ－７０００、シバシルおよびＸＴＬ－６８６５等などの抗体、ならびにＩｎｎｏＶａｃ Ｃ、ＨＣＶ Ｅ１Ｅ２／ＭＦ５９等などの予防用および治療用ワクチンと組み合わせて使用することができる。また、ＮＳ５Ａ阻害剤、Ｉ型インターフェロン受容体作動薬（例：ＩＦＮ－α）およびＩＩ型インターフェロン受容体作動薬（例：ＩＦＮ－γ）を投与する上記に記載した方法は有効量のＴＮＦ－α拮抗薬を投与することによって増強される。このような併用療法において使用される好適な例示的で非限定的なＴＮＦ－α拮抗薬としてはエンブレル、レミケードおよびヒュミラが挙げられる。

【0112】

また、本発明の化合物はこれらに限定されないがプロドラッグのニタゾキサニドなどのＨＣＶ感染を治療するのに有効と考えられる抗原虫剤および他の抗ウイルス剤と組み合わせて使用することができる。ニタゾキサニドは本発明で開示される化合物、ならびにペグインターフェロンα－２ａおよびリバビリンなどのＨＣＶ感染を治療するのに有用な他の薬剤と組み合わされた薬剤として使用することができる。

【0113】

本発明の化合物は、インターフェロン類およびペグ化インターフェロン類の代替形態、リバビリンまたはその類似体（例：タララバリン、レボビロン）、マイクロＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ化合物（例：ＳＩＲＰＬＥＸ－１４０－Ｎ等）、ヌクレオチドまたはヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、肝臓保護剤、抗炎症剤ならびに他の阻害剤であるＮＳ５Ａとともに使用することができる。ＨＣＶ生活環における他の標的に対する阻害剤としては、ＮＳ３ヘリカーゼ阻害剤、ＮＳ４Ａ補因子阻害剤、ＩＳＩＳ－１４８０３およびＡＶＩ－４０６５等などのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤、ベクターコード化小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ヘプタザイム、ＲＰＩおよび１３９１９等などの特定ＨＣＶリボザイム、ＨｅｐｅＸ－ＣおよびＨｕＭａｘ－ＨｅｐＣ等などの進入阻害剤、セルゴシビル、ＵＴ－２３１Ｂ等などのアルファグルコシダーゼ阻害剤ならびにＫＰＥ－０２００３００２およびＢＩＶＮ４０１およびＩＭＰＤＨ阻害剤が挙げられる。他の例示的なＨＣＶ阻害剤化合物としては以下の公開特許に開示されている化合物が挙げられる。米国特許第５，８０７，８７６号、第６，４９８，１７８号、第６，３４４，４６５号、および第６，０５４，４７２号、ＰＣＴ特許出願第ＷＯ９７／４００２８号、第ＷＯ９８／４０３８１号、第ＷＯ００／５６３３１号、第ＷＯ０２／０４４２５号、第ＷＯ０３／００７９４５号、第ＷＯ０３／０１０１４１号、第ＷＯ０３／０００２５４号、第ＷＯ０１／３２１５３号、第ＷＯ００／０６５２９号、第ＷＯ００／１８２３１号、第ＷＯ００／１０５７３号、第ＷＯ００／１３７０８号、第ＷＯ０１／８５１７２号、第ＷＯ０３／０３７８９３号、第ＷＯ０３／０３７８９４号、第ＷＯ０３／０３７８９５号、第ＷＯ０２／１００８５１号、第ＷＯ０２／１００８４６号、第ＷＯ９９／０１５８２号、第ＷＯ００／０９５４３号、第ＷＯ０２／１８３６９号、第ＷＯ９８／１７６７９号、第ＷＯ００／０５６３３１号、第ＷＯ９８／２２４９６号、第ＷＯ９９／０７７３４号、第ＷＯ０５／０７３２１６号、第ＷＯ０５／０７３１９５号および第ＷＯ０８／０２１９２７号。

【0114】

また、たとえばリバビリンとインターフェロンの組み合わせを、複数併用療法として本発明の化合物の少なくとも１つとともに投与してもよい。本発明は上記で述べた分類または化合物に限定されず、周知の化合物および新たな化合物および生物活性剤の組み合わせを企図する。本発明の併用療法は、その組み合わせが本発明の化合物群の抗ウイルス活性またはそれらの医薬組成物の抗ウイルス活性を排除しない限り、本発明の化合物群のうちの一化合物と本発明の化合物群のうちの別の化合物または本発明の化合物群以外の他の化合物との任意の化学的適合性のある組み合わせを含むことを意図している。

【0115】

併用療法は連続であってもよく、これは最初に第一の薬剤を投与し、次に第二の薬剤（例えば、各治療が当発明の異なる化合物を含む場合、または１つの治療が当発明の化合物を含み、もう一方の治療が１つ以上の生物活性剤を含む場合）を投与する治療であり、または併用療法は２つの薬剤を同時期（同時）に投与する治療であってもよい。連続治療は第一の治療が終わり第二の治療の開始前に適当な時間を含んでもよい。２つの薬剤を同時期に投与する治療では、一日当たり同じ用量であっても異なる用量であってもよい。併用療法は２つの薬剤に限定する必要はなく、３種類以上の薬剤を含んでもよい。同時および連続の両方の併用療法の投与量は、併用療法の構成成分の吸収、分配、代謝および排出速度および当業者にとって周知の他の要因によって決まる。投与量は緩和されるべき疾患の重症度によって異なる。さらに当然のことだが、いずれの特定の被験者に対しても、個別の投与計画および日程表は個人の必要性および併用療法の投与を実施または監督する当業者の判断に基づいて経時的に調整してもよい。

【0116】

本出願は、当発明の化合物のいずれか１つの化合物を治療上有効な量を必要とする患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）を治療する方法を提供する。

【0117】

本出願は、さらに免疫系修飾薬またはＨＣＶの複製を阻害する抗ウイルス剤、またはこれらの組み合わせを投与することを含む、上記方法を提供する。

【0118】

本出願は、免疫系修飾薬がインターフェロンまたは化学的誘導体化インターフェロンである、上記の方法を提供する。

【0119】

本出願は、抗ウイルス剤がＨＣＶプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶポリメラーゼ阻害剤、ＨＣＶヘリカーゼ阻害剤、ＨＣＶプライマーゼ阻害剤、ＨＣＶ融合阻害剤およびこれらの組み合わせを含む群から選択される、上記の方法を提供する。

【0120】

当然のことだが、本明細書における治療に関する参考文献は予防法および現行状態の治療にまで及び、動物の治療はヒトの治療および他の哺乳動物の治療を含む。さらに、本明細書で使用されるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の治療はまた、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に関連するか、もしくは媒介される病気もしくは疾患、またはこれらの臨床症状の治療または予防を含む。

投与方法および用法：

【0121】

下表Ａの生物的実施例に示すように、式Ｉの化合物は抗ウイルス剤としてヒトのＨＣＶ感染を治療するのに有効である可能性があるか、またはそのような活性を示す化合物へ代謝される。

【0122】

活性化合物またはそのプロドラッグ誘導体もしくは塩を、式Ｉの薬剤を含む抗肝炎薬剤などの別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与することができる。活性化合物またはそのプロドラッグ誘導体または塩を別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与すると、その活性は親化合物の活性を上回ることがある。このことは、誘導体を調製し本明細書に記載されている方法に従って抗ＨＣＶ活性を測定することによって容易に評価することができる。

【0123】

活性化合物の投与は連続投与（点滴）から一日当たり数回（例えば、１日４回）の経口投与まで多岐にわたってもよく、様々な投与経路の中でも経口、局所非経口、筋肉内、静脈、皮下、経皮（浸透促進剤を含んでもよい）、口腔および坐剤投与を含んでもよい。

【0124】

本明細書で開示される化合物およびそれらの医薬的に使用可能な塩は、任意の医薬製剤の形態で薬物として使用できる。医薬製剤は経腸投与、すなわち例えば錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬質および軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳濁液、シロップ剤または懸濁液の形態での経口投与、または例えば座薬の形態で直腸投与することができる。医薬製剤はまた例えば、注射液の形態での非経口投与（筋肉内投与、静脈投与、皮下投与または胸骨内注射または輸液手法）、例えば鼻スプレーまたは吸入スプレーの形態での経鼻投与、局所的な投与その他で行うことができる。

【0125】

医薬製剤を製造するには、本明細書で開示される化合物およびそれらの医薬的に使用可能な塩を、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬質および軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳濁液、または懸濁液を生産するために治療上不活性な無機または有機賦形剤を用いて製剤することができる。

【0126】

本明細書で開示される化合物を薬理的に許容される担体と混合物に製剤することができる。例えば、本発明の化合物を薬理的に許容される塩として経口投与することができる。本発明の化合物は大半が水溶性であることから、その生理食塩水溶液（例：ｐＨ約７．２～７．５に緩衝された）を静脈投与することができる。リン酸塩類、炭酸水素塩類またはクレン酸塩類などの通常の緩衝剤をこの目的のために使用することができる。当然、当業者は特定の投与経路向けにいくつかの製剤を提供するために、当発明の組成物を不安定にせず、その治療上の活性を犠牲にすることなしに当明細書が教示する範囲内で製剤を変更してもよい。具体的には、本発明の化合物を水または他の溶媒により溶けるように変更することは、例えば当業者内では好都合な軽微な変更（塩形成、エステル化等）によって容易に成し遂げることができる。また、本発明の化合物の薬物動態を管理し患者に対する薬効を最大にするために、特定化合物の投与経路および投与計画を変更することは当業者内では好都合である。

【0127】

非経口製剤では、担体は通常無菌水または塩化ナトリウム水溶液を含むが、分散を促進する成分などの他の成分も含んでもよい。当然、無菌水が無菌状態で使用および維持される場合は、組成物および担体を滅菌しなければならない。また注射用懸濁液を調製してもよく、その場合適切な液体担体、懸濁化剤等を使用してもよい。

【0128】

錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、および硬質ゼラチンカプセルに好適な賦形剤は、例えば乳糖、コーンスターチおよびその誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩である。希望するならば、錠剤またはカプセルを標準技法によって腸溶性または徐放性としてもよい。軟質ゼラチンカプセルに好適な賦形剤は、例えば植物油、ワックス、脂肪、半固形および液状ポリオールである。注射液用に好適な賦形剤は、例えば水、生理食塩水、アルコール、ポリオール、グリセリンまたは植物油である。座薬用に好適な賦形剤は、例えば天然油および硬化油、ワックス、脂肪、半液状または液状ポリオールである。経腸使用のための溶液およびシロップ剤用に好適な賦形剤は、例えば水、ポリオール、スクロース、転化糖およびグルコースである。

【0129】

本発明の医薬製剤をまた徐放性製剤または他の適切な製剤として提供してもよい。

【0130】

医薬製剤はまた、防腐剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、風味剤、浸透圧を調整するための塩類、緩衝剤、マスキング剤または酸化防止剤を含有することができる。医薬製剤はまた、当技術分野において知られている他の治療上活性な薬剤を含んでもよい。

【0131】

投与方法を広い制限内で可変することができ、当然各特定の症例において調整することになる。経口投与には、一日当たりの用量が約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重が単独療法および／または併用療法において適切である。好ましい用量は、約０．１～約５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは、０．１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましくは、一日当たり１．０～約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。典型的な製剤は約５％から約９５％濃度の活性化合物（重量比）を含有する。一日の投与は、一回または分割で投与することができ、典型的には一日当たり１～５回の投与である。

【0132】

ある医薬投与形態では、特にアシル化（アセチル化等）誘導体、ピリジンエステルおよび本発明の化合物のさまざまな塩の形態を含む化合物のプロドラッグ形態が好まれる。本発明の化合物をプロドラッグ形態へ即座に変更して、宿主生物体または患者内の標的部位への活性化合物の送達を促進する方法を当業者は分かっている。当業者はまた、本発明の化合物を宿主生物体または患者内の標的部位への送達に、可能な場合は、プロドラッグの有益な薬物動態パラメーターを利用して化合物の意図する効果を最大にすることができる。

一般的な合成：

【0133】

下記実施例の段落に記載された例示的な合成反応に図示されたさまざまな方法によって、本発明の化合物を生産することができる。

【0134】

これらの化合物を調製するのに使用される出発物質および試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏなどの供給者から市販されているか、またはＦｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１、Ｖｏｌｕｍｅｓ １－１５、Ｒｏｄｄ’ｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９８９、Ｖｏｌｕｍｅｓ １－５ ａｎｄ ＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓおよびＯｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１、Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４０などの参考文献に記載されている手順に従って業者に周知の方法で調製される。当然のことだが、実施例に示された合成反応の図式は単にそれによって本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法を例示したにすぎず、これらの合成反応の図式にはさまざまな変更を加えることができ、これら変更は本出願に含まれる開示を既に参照した当業者に示唆される。

【0135】

合成反応スキームの出発物質および中間体は、希望するならばこれらに限定されないがろ過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィー等を含む従来の技法を用いて単離および精製することができる。これらの物質は、物理定数およびスペクトルデータを含む従来の手段を用いて特性を明らかにすることができる。

【0136】

別段の記述がない限り、本明細書に記載される諸反応は典型的には不活性雰囲気の下、大気圧で反応温度は約－７８℃から約１５０℃の範囲で、頻繁には約０℃から約１２５℃、およびより頻繁で好都合には約室温（または常温）、例えば約２０℃で行われる。

【0137】

当発明の化合物に対するさまざまな置換基は出発化合物に存在してよく、置換および転換反応の知られている方法によって任意の中間体に付加されるか、最終生成物が形成された後に付加される。置換基自体が反応性を有している場合は、当技術分野において知られている技法に従って保護することができる。さまざまな保護基が当技術分野では知られており、使用することができる。多くの使用可能な基の例は、Ｇｒｅｅｎらによる“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９にある。例えば、ニトロ基はニトロ化によって付加することができ、ニトロ基は還元によってアミノ、アミノ基のジアゾ化およびジアゾ基をハロゲンと置換することによってハロゲンなどの他の基へ転換することができる。アシル基はフリーデル・クラフト・アシル化反応によって添加することができる。アシル基は次にウォルフ・キシュナー還元反応およびクレメンゼン還元反応を含むさまざまな方法によって対応するアルキル基へ変換される。アミノ基はアルキル化され、モノアルキルアミノ基およびジアルキルアミノ基を形成する。メルカプトおよびヒドロキシ基はアルキル化され、対応するエーテル類を形成する。１級アルコール類は当技術分野において知られている酸化剤で酸化され、カルボン酸またはアルデヒドを形成し、２級アルコール類は酸化され、ケトン類を形成する。したがって、置換および修飾反応を用いて、単離された生成物を含む出発物質、中間体または最終生成物の分子にわたってさまざまな置換基を提供することができる。

式ＩＩ化合物の合成：

【0138】

式ＩＩの化合物を下記のスキーム１～４に例示および記載されたように作成することができる。

スキーム１
１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン-２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオンの合成

【化40】

【0139】

出発物質１をＳｏｆｉａ， Ｍ． Ｊ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． （２０１０）、５３（１９）、７２０２－７２１８およびＣｌａｒｋ， Ｊ． Ｌ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． （２００５）、４８（１７）、５５０４－５５０８に記載された手順に従って調製することができる。１をヨウ素化した後、塩基性条件でヨウ化物を脱離して中間体２を得る。ベンゾイル基によって２の３’－ヒドロキシ基を保護した後、要となる立体特異的フッ素付加反応により中間体３を得る。フッ化物を４’α位に付加する同様の変換については、既にＡｊｍｅｒａ， Ｓ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ、（１９８８）、３１（６）、１０９４－１０９８およびＭｏｆｆａｔｔ， Ｊ．Ｇ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． （１９７１）、９３（１７）、４３２３－４３２４に記載されている。３における５’ヨウ化物を安息香酸ナトリウムで置換した後、３’，５’－ベンゾイル基を脱保護してヌクレオシド中間体４を得る。

スキーム２
１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－フルオロ－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオンの合成

【化41】

【0140】

塩基性条件で保護、ヨウ素化、次にヨード脱離して中間体７を得る。Ａｊｍｅｒａ， Ｓ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． （１９８８）、３１（６）、１０９４－１０９８およびＭｏｆｆａｔｔ， Ｊ．Ｇ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． （１９７１）、９３（１７）、４３２３－４３２４に記載のとおり、７を４’位でフッ素付加することができる。８の５’ヨウ素基を安息香酸ナトリウムで置換して中間体９を得る。脱保護した後、３’－および５’－ヒドロキシ基を１，３－ジクロロ－１，１，３，３－テトライソプロピルジシロキサン（ＤＩＰＳＣｌ）で選択的に保護し、その後デス・マーチン条件で酸化してケトン１１を生成する。この反応はＨａｙａｋａｗａ， Ｈ ｅｔ ａｌ．、Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．、（１９８７）、３５（６）、２６０５－２６０８に記載された同様な方法に従う。標準状態で脱保護し、シリル保護基を除去して所望の生成物１２を得る。

スキーム３
式ＩＩ化合物の合成、ただし塩基はウラシル、ＸはＯまたはＳ、Ｒは－ＯＡｒ（Ａｒはフェニルまたはナフチル）およびＲ’はＮＨＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－イソプロピル、ＹはＦおよびＹ’はＯＨまたはＦ

【化42】

【0141】

式ＩＩのホスホルアミダート化合物は強塩基の存在で、タイプ１３の好適に置換されたホスホクロリダートまたはそのイオウ類似体を用いてヌクレオシド４または１２の縮合により調製される。式ＩＩの結合物１６はまずカップリング反応により２種類のジアステレオマーの混合物として得られ、キラルカラム、キラル高速液体クロマトグラフィー、またはキラルＳＦＣクロマトグラフィーにより、それぞれ対応するキラルエナンチオマーに分離することができる。

スキーム４
式ＩＩ化合物の合成、ただし塩基はウラシル、ＸはＯまたはＳ、ＲおよびＲ’はＮＨＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－イソプロピル、ＹはＦおよびＹ’はＯＨまたはＦ

【化43】

【0142】

本発明における式ＩＩのホスホルジアミデート化合物は強塩基の存在で、タイプ１７の好適に置換されたホスホロジアミノ酸塩化物またはホスホロジアミドチオ酸塩化物を用いるヌクレオシド４または１２の縮合により調製される。
式（Ｉ）の化合物は上記スキーム１～４に開示の方法により、当技術分野で知られている方法および下記の実施例を利用して調製することができる。

【実施例】

【0143】

以下に述べる実施例および調製物を提示することによって、当事者は本発明をより明確に理解し実践することができる。これらは本発明の範囲を限定するものではなく、これらの単なる例示および典型例として考えるべきである。

【0144】

本出願に使用される略語としては、アセチル（Ａｃ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、アゾビスイソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、１－Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、気圧（Ａｔｍ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、９－ボラシクロ［３．３．１］ノナン（９－ＢＢＮまたはＢＢＮ）、メチル（Ｍｅ）、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ピロ炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルまたはｂｏｃ無水物（ＢＯＣ_２Ｏ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｎ）、ｍ－クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、ブチル（Ｂｕ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、ベンジルオキシカルボニル（ｃｂｚまたはＺ）、融点（ｍｐ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ＭｅＳＯ_２－（メシルまたはＭｓ）、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、マススペクトル（ｍｓ）、三フッ化ジエチルアミノイオウ（ＤＡＳＴ）、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、ジベンジリデンアセトン（Ｄｂａ）、Ｎ－カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ－５－エン（ＤＢＮ）、Ｎ－ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）、Ｎ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）、１，２－ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、プロピル（Ｐｒ）、アゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）、フェニル（Ｐｈ）、ジ－イソ－アゾジカルボン酸プロピル（ＤＩＡＤ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ジ－イソ－プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ピリジン（ｐｙｒ）、水素化ジ－イソ－ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ－Ｈ）、室温（ｒｔまたはＲＴ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルまたはｔ－ＢｕＭｅ_２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、４-Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン（Ｅｔ_３ＮまたはＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トリフラートまたはＣＦ_３ＳＯ_２－（Ｔｆ）、ジメチル＝スルホキシド（ＤＭＳＯ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’－ビス－（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、２，２，６，６－テトラメチルヘプタン－２，６－ジオン（ＴＭＨＤ）、１，１’－ビス－（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、トリメチルシリルまたはＭｅ_３Ｓｉ（ＴＭＳ）、エチル（Ｅｔ）、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨまたはｐＴｓＯＨ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、４－Ｍｅ－Ｃ_６Ｈ_４ＳＯ_２－またはトシル（Ｔｓ）、イソプロピル（ｉ－Ｐｒ）、Ｎ－ウレタン－Ｎ－カルボン酸無水物（ＵＮＣＡ）、エタノール（ＥｔＯＨ）が挙げられる。ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ－）、２級（ｓｅｃ－）、３級（ｔｅｒｔ－）およびネオ（ｎｅｏ）を含む従来の命名法は、アルキル部分と使用されて通常の意味を持つ。（Ｊ． Ｒｉｇａｕｄｙ ａｎｄ Ｄ． Ｐ． Ｋｌｅｓｎｅｙ、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＩＵＰＡＣ １９７９ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ．）

合成の実施例

【0145】

式Ｉ化合物の以下の調製物および中間体（引用例）を提示することによって、当事者は本発明の開示をより明確に理解し、実践することができる。これらは本開示の範囲を限定するものではなく、これらの単なる例示および典型例である。

【0146】

特段の記載がない限り、市販の材料および試薬をさらに精製せずに用いて、全ての反応を行った。シリカゲル板（Ｋｅｉｓｅｌｇｅｌ－６０－Ｆ２５４、メルク）を用いる薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および／または超高速高分離液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）によって全ての反応を監視した。紫外線を用い、ＴＬＣ板を過マンガン酸カリウムで染色しヒートガンで炭化して、ＴＬＣ板面のスポットを可視化した。Ａｃｑｕｉｔｙ－ＰＤＡ検出器、ＱＤＡ質量検出器および二元溶媒システムを備えたＷａｔｅｒｓ－Ａｃｑｕｉｔｙ－ＵＰＬＣ装置を使ってＵＰＬＣ１を記録した。Ａｃｑｕｉｔｙ－ＰＤＡ検出器、ＱＤＡ質量検出器および四元溶媒システムを備えたＷａｔｅｒｓ－Ａｃｑｕｉｔｙ－ＵＰＬＣ－ＨＣｌａｓｓ装置を使ってＵＰＬＣ２を記録した。ＣＳＨ－Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ）に０．１％ギ酸のアセトニトリル溶液および０．１％ギ酸の水溶液の可変勾配を用いて、０．８ｍＬ／ｍｉｎでＵＰＬＣ１酸性法を行った。ＣＳＨ－Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ）にアセトニトリル、水および２％ギ酸の水溶液の可変勾配を用いて、０．８ｍＬ／ｍｉｎでＵＰＬＣ２酸性法を行った。ＸＢ－Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、２．５μｍ）またはＸＢ－Ｃ８カラム（２．１×５０ｍｍ、２．５μｍ）のいずれかを用いて、アセトニトリルおよびアンモニア水溶液でｐＨ１０に調整した１０ｍＭのＮＨ_４ＨＣＯ_３の可変勾配を用いて、０．８ｍＬ／ｍｉｎで塩基性法を行った。¹Ｈ－ＮＭＲおよび必要に応じて¹³Ｃ、³¹Ｐおよび¹⁹Ｆ－ＮＭＲにより全ての生成物の構造を明らかにした。ＪＥＯＬ－ＥＣＸ３００－ＭＨｚまたはＪＥＯＬ－ＥＣＸ４００－ＭＨｚ分光計を用いてＮＭＲスペクトルデータを記録した。ケミカルシフトを百万分の一（ｐｐｍ）の値で表し、ｓ（単一線）、ｂｒ ｓ（幅広単一線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｑｕｉｎｔ（五重線）またはｍ（多重線）として示す。ＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍシリカゲルＬＣ６０Ａ－４０－６３ミクロンならびに試薬用ヘプタン、酢酸エチル、ジクロロメタンおよびメタノールを溶離液として用いるシリカゲルによるフラッシュカラムクロマトグラフィーを行った。ＰＤＡ検出器および３１００質量検出器を備えたＷａｔｅｒｓ自動精製システムを用いて、Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ－Ｃ１８カラム（１９×１５０ｍｍ）またはＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８カラム（１９×１５０ｍｍ）を用いる２０ｍＬ／ｍｉｎで質量測定用分取ＨＰＬＣを実施した。

基準物質１
４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）の合成

【化44】

【0147】

工程１：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－３－メチル－５－メチリデンオキソラン－２－イル]－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（化合物２）の調製

【0148】

工程（ｉ）：内部温度を１０℃～２０℃に維持しつつヨウ素（２６６５ｇ，１０．５０ｍｏｌ，１．０５当量）を少量ずつ一時間かけて１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－３－メチルオキソラン－２－イル］－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（２６０２ｇ，１０．００ｍｏｌ，１当量）（化合物１）、ＰＰｈ３（３４１０ｇ，１３．００ｍｏｌ，１．３０当量）、およびイミダゾール（８８５．０ｇ，１３．００ｍｏｌ，１．３０当量）のＴＨＦ（２５Ｌ）撹拌溶液に添加した。攪拌反応混合物を２０時間常温に加温した。懸濁液をろ過し、ろ液を濃縮し淡黄色の油状物として粗生成物を得た。残留物をメタノール（８．０Ｌ）に懸濁し、固形分を回収後石油エーテル（８Ｌ）で洗浄し、乾燥して白色固形物として３４３０ｇの１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヨードメチル）－３－メチルオキソラン－２－イル］－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（９２．６７％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ） δ_Ｈ １１．５２ （ｓ，１Ｈ）， ７．６１－７．６３ （ｄ， １Ｈ）， ５．９１－６．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．６７-５．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ２０ ＨＺ， １Ｈ）， ４．０６－４．１０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７－３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４９－３．６５ （ｍ， ３Ｈ）， １．２１-－１．２７ （ｄ， ３Ｈ）。

【0149】

工程（ｉｉ）：ナトリウムメトキシド（３０％メタノール溶液，６０８０ｇ，３３．７７ｍｏｌ，２．５当量）を１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヨードメチル）－３－メチルオキソラン－２－イル］－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（５０００ｇ，１３．５０９ｍｏｌ，１．０当量）のメタノール（２５．０Ｌ）溶液に添加した。反応混合物を６０℃で５時間攪拌し、次に１０℃に冷却した。懸濁液をろ別し、ろ液を濃縮して黄褐色の固形物として、さらなる精製なしに次工程で直接使用される粗生成物を得た。

【0150】

粗残留物をアセトニトリル（２５．０Ｌ）に溶解し、酢酸無水物（２７５８ｇ，２７．０１８ｍｏｌ，２．００当量）を添加した。反応混合物を６５℃で１５時間攪拌した。ＬＣ－ＭＳに基づき、追加の量の酢酸無水物（２７６．０ｇ，２．７０ｍｏｌ，０．２当量）を添加した。１２時間後に、反応混合物を減圧濃縮し、アセトニトリル（１５．０Ｌ）を除去した。残留物を１０℃に冷却し、ろ別した。ろ別した固形物を最小量のアセトニトリルおよび水でろ液のｐＨが７になるまで洗浄し、次に真空乾燥し、白色固形物として２４６１ｇ（６４．１％）の（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－１－イル）－４－フルオロ－４－メチル－２－メチリデンオキソラン－３－イル アセテートを得た。

【0151】

ナトリウムメトキシド（３０％メタノール溶液,７７．９７ｇ，０．４３３ｍｏｌ，０．０５当量）を（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－１－イル）－４－フルオロ－４－メチル－２－メチリデンオキソラン－３－イル アセテート（２４６１ｇ，８．６６２ｍｏｌ，１．０当量）のメタノール（１２．３０Ｌ）溶液に添加した。反応混合物を５０℃で１５時間攪拌した。ＨＰＬＣに基づき、追加の量のナトリウムメトキシド（３０％メタノール溶液，７７．９７ｇ，０．４３３ｍｏｌ，０．０５当量）を添加した。８時間後に反応を完了し、次に５℃に冷却した。５℃で１２時間攪拌後、沈殿物をろ別によって回収し、ろ別した固形物を最小量のメタノールで洗浄し、真空乾燥し黄みがかった白色固形物として１８５６ｇ（８８．４％）の１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－３－メチル－５－メチリデンオキソラン－２－イル］－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（化合物２）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ （ｐｐｍ）： １１．５６ （ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ６．１６－６．１２ （ｄ， １Ｈ）， ５．９８ （ｓ， １Ｈ）， ５．６８－５．６６ （ｓ， １Ｈ）， ４．６３－４．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２８ （ｓ， １Ｈ）， １．３７－１．３１ （ｄ， ３Ｈ）。

【0152】

工程２：１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヨードメチル）－３－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（化合物２１）の調製

【0153】

Ｎ－ヨードスクシンイミド（３２７４ｇ，１４．５５２ｍｏｌ，１．９当量）を１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－３－メチル－５－メチリデンオキソラン－２－イル］－１，２，３，４－テトラヒドロピリミジン－２，４－ジオン（化合物２）（１８５５ｇ，７．６６ｍｏｌ，１．０当量）、およびＴＥＡ・３ＨＦ（１９７６ｇ，１２．２５４ｍｏｌ，１．６当量）のＤＣＭ（３７Ｌ）溶液に添加した。反応混合物を２５℃で２４時間攪拌した。次に１０％ＮａＨＳＯ_３（１３Ｌ）水溶液を加え、混合物を２時間攪拌した。沈殿物をろ別によって回収した。ろ別した固形物を別のバッチ（１５５５ｇの０００１２８９－０１５－０１から開始）と一緒にした。一緒にした固形物を最小量のＤＣＭ、５％ＮａＨＣＯ_３水溶液および水でろ液のｐＨが７～８になるまで洗浄し、真空乾燥し、淡黄色固形物として５０６０ｇ（９２．６％）の粗生成物を得た。混合粗生成物（２５００ｇ）のメタノール（３７．５Ｌ）溶液を２時間加熱還流し、次に５℃に冷却した。５℃で２時間攪拌後、沈殿物をろ別によって回収し、ろ別した固形物を最小量のメタノールで洗浄後乾燥し、淡黄色固形物として１９７０ｇ（７８．８％）の１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヨードメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（化合物２１）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ_Ｈ １１．６３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１－７．５１ （ｍ， １Ｈ）， ６．３１－５．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７３-－５．７１ （ｄ， １Ｈ）， ４．５６－３．７８ （ｍ， ３Ｈ）， １．３０－１．２５ （ｍ， ３Ｈ）。

【0154】

工程３：（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－２－（ヨードメチル）－４－メチルテトラヒドロフラン－３－イル イソブチレート（化合物２２）の調製

【0155】

常温で４－ジメチルアミノピリジン（６．３０ｍｇ，５１．５ｍｍｏｌ，５ｍｏｌ％）およびトリエチルアミン（１７２ｍＬ，１．２４ｍｏｌ）を１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヨードメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（化合物２１）（４００ｇ，１．０３ｍｏｌ，１当量）のＥｔＯＡｃ（２Ｌ）攪拌懸濁溶液に添加した。懸濁液を０℃に冷却し、温度を１０℃未満に維持しつつ４０分間かけて塩化イソブチリル（１３０ｍＬ，１．２４ｍｏｌ，１．２当量）を滴下した。反応混合物を常温で３時間攪拌した。水（１Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を反応混合物に添加し、各相を分離した。次に水層をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出した。各有機層を一緒にし、ＭｇＳＯ_４およびＳｉＯ_２で乾燥し、ろ別した。ろ別した固形物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で洗浄し、ろ液を４０℃で真空濃縮し、白色固形物（４６１ｇ，収率９８％）として（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－２－（ヨードメチル）－４－メチルテトラヒドロフラン－３－イル イソブチレート（化合物２２）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ８．５９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．３０ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ５．８３ （ｄｄ， １Ｈ）， ３．７１－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７７ （ｓｅｐｔ， １Ｈ）， １．４５ （ｄ， ３Ｈ）， １．２６ （ｄ， ３Ｈ）。ＥＳ^＋ ｍ／ｚ ４５９ ＭＨ^＋

【0156】

工程４：（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２３）の調製

【0157】

０℃で３－クロロ過安息香酸（９６６ｇ，３．９２ｍｏｌ，３．９当量，７０％重量比）を少量ずつ２０分間かけて、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－２－（ヨードメチル）－４－メチルテトラヒドロフラン－３－イル イソブチレート（化合物２２）（４６１ｇ，１．０１ｍｏｌ，１当量）および３－クロロ安息香酸（１７３ｇ，１．１１ｍｏｌ，１．１当量）、リン酸水素二カリウム塩（３６４ｇ，２．０９ｍｏｌ，２．０８当量）、および硫酸テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（３４５ｇ，１．０２ｍｏｌ，１．０７当量）のＥｔＯＡｃ（３．５Ｌ）溶液、ならびに水（９００ｍＬ）の攪拌混合物に添加した。混合物を１８℃に加温し、１６時間攪拌した。混合物を０℃に冷却後、内部温度を５℃未満に維持しつつ３０分間かけてＮａ_２ＳＯ_３（２．４Ｌ，１０％水溶液）を滴下した。各相を分離し、有機相をＮａ_２ＳＯ_３（２×２Ｌ，１０％水溶液）、ＮａＨＣＯ_３（４×２Ｌ，飽和水溶液）、食塩水（２Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４およびＳｉＯ_２で乾燥後ろ別した。ろ液を４０℃で真空濃縮し、ゴム状生成物を得た。物質をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）に溶解した。ＮａＨＣＯ_３（８００ｍＬ，飽和水溶液）を反応混合物に添加し、２４時間攪拌した。次に有機相を分離し、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、４０℃で真空濃縮し、橙色のゴム状生成物を得た。その物質をＥｔＯＡｃに再溶解し、ＳｉＯ_２を添加した。混合物を１５分間攪拌し、次にＳｉＯ_２のパッドに通してろ別した。ろ別した固形物をＥｔＯＡｃで洗浄し、４０℃で真空濃縮し、橙色のゴム状生成物（４２６ｇ，収率８７％）として（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２３）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ８．９６ （ｓ， １Ｈ）， ８．００ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２ （ｄ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄ， １Ｈ）， ７．４３ （ｔ， １Ｈ）， ７．２０ （ｄ， １Ｈ）， ５．６７ （ｍ， １Ｈ）， ４．６１ （ｄｑ， ２Ｈ）， ２．７４ （ｓｅｐｔ， １Ｈ）， １．４４ （ｄ， ３Ｈ）， １．２５ （ｄ， ３Ｈ）。ＥＳ--^－ ｍ／ｚ ４８５ Ｍ－Ｈ

【0158】

工程５：（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチル－５－（２－オキソ－４－（１Ｈ－１，２，４－トリアゾル－１－イル）ピリミジン－１（２Ｈ）－イル）テトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２４）の調製

【0159】

常温でＥｔ_３Ｎ（２９１ｍＬ，２．１０ｍｏｌ，１０当量）を、（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２３）（１．０２ｇ，２１０ｍｍｏｌ，１当量）、およびトリアゾール（１４４ｇ，２．１０ｍｏｌ，１０当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１Ｌ）攪拌混合溶液に添加した。得られた混合物を０℃に冷却し、温度を１０℃未満に維持しつつオキシ塩化リン（Ｖ）（４９．０ｍＬ，５２４ｍｍｏｌ，２．５当量）を滴下した。混合物を０℃で３時間攪拌した。水を混合物に添加し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。各有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別後、４０℃で真空溶媒濃縮し、橙色の油状物（１１８ｇ，定量値）として（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチル－５－（２－オキソ－４－（１Ｈ－１，２，４－トリアゾル－１－イル）ピリミジン－１（２Ｈ）－イル）テトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２４）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ９．２５ （ｓ， １Ｈ）， ８．１４ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１－７．８０ （ｍ， ３Ｈ）， ７．６２ （ｄ， １Ｈ）， ７．６４ （ｔ， １Ｈ）， ４．６８ （ｍ， １Ｈ）， ２．７６ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｂｒ ｄ， ３Ｈ）， １．３０－１．１５ （ｍ， ６Ｈ）。ＥＳ--^＋ ｍ／ｚ ５３８ ＭＨ^＋

【0160】

工程６：４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）の調製

【0161】

常温でＮＨ_３（２００ｍＬ，高濃度水溶液）を、３（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－２，４－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチル－５－（２－オキソ－４－（１Ｈ－１，２，４－トリアゾル－１－イル）ピリミジン－１（２Ｈ）－イル）テトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２４）のＴＨＦ（１Ｌ）攪拌混合溶液に添加した。混合物を常温で１６時間攪拌した。混合物を４０℃で真空濃縮した。ＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）およびＮＨ_３（２５０ｍＬ，７ＮのＭｅＯＨ溶液）を得られたスラリーに添加し、混合物を常温で２時間攪拌した。混合物を４０℃で真空濃縮し、橙色のゴム状生成物を得た。ＥｔＯＡｃを添加し、混合物を常温で１６時間攪拌した。得られた固形物をろ別回収し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）およびＥｔ_２Ｏ（５００ｍＬ）で洗浄し、黄みがかった白色固形物（５７．０ｇ、収率６５％）として４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．８２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．５２ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ５．８９ （ｄ， １Ｈ）， ４．０７ （ｂｒ ｔ， １Ｈ）， １．３０ （ｄ， １Ｈ）。

基準物質２
１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（化合物４）の合成

【化45】

【0162】

ＮＨ_３（１Ｌ，７ＮのＭｅＯＨ溶液）を（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２－ジフルオロ－３－（イソブチリルオキシ）－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル ３－クロロベゾエート（化合物２３）（２３８ｇ，４８９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）溶液に添加した。混合物を常温で１６時間攪拌した。混合物を真空濃縮した。得られた油状物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２００ｍＬ）で１時間攪拌した。得られた固形物をろ別回収し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄後、５０℃で４８時間真空乾燥した。黄みがかった白色固形物（１０２ｇ、収率７５％）として１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン（化合物４）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．８０ （ｄ， １Ｈ）， ６．４５ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ５．７１ （ｄ， １Ｈ）， ４．１５ （ｂｒ ｍ， １Ｈ）， ３．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．３７ （ｄ， １Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＭｅＯＤ， ２８３ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１３５ （ｍ， １Ｆ）， －１５９ （ｍ， １Ｆ）。ＥＳ--^＋ ｍ／ｚ ２７９ ＭＨ^＋

［実施例１］
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－１）の合成

【化46】

【0163】

工程１：ナフタレン－１－イル ホスホロジクロリデート（化合物２６）の調製

【0164】

アルゴン気流中－７８℃で、１－ナフトール（４７．１ｇ，３２７ｍｍｏｌ，１当量）を、オキシ塩化リン（Ｖ）（３０．１ｍＬ，３２７ｍｍｏｌ，１当量）のジエチルエーテル（５００ｍＬ）攪拌溶液に添加した。温度を－６０℃未満に維持しつつ、トリエチルアミン（４５．０ｍＬ，３２７ｍｍｏｌ，１当量）を２時間滴下した。反応混合物を２時間常温に加温し、次に１６時間攪拌した。混合物をセライトでろ別し、ろ別した固形物をジエチルエーテルで洗浄し、無色の溶液を得た。ろ液を減圧濃縮（蒸留温度２５℃）し、黄色の油状物としてナフタレン－１－イル ホスホロジクロリデート（化合物２６）（７８．２ｇ、収率９２％）を得た。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ ４．４４ （ｓ）。

【0165】

工程２：イソプロピル（（Ｒ）－（ナフタレン－１－イルオキシ）（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物２７）の調製

【0166】

アルゴン気流中－７８℃で、トリエチルアミン（４３ｍＬ，５８９ｍｍｏｌ，２当量）を、ジクロロ亜リン酸ナフタレン－１－イル（化合物２６）（７８．２ｇ，２９９ｍｍｏｌ，１当量）およびイソプロピル－Ｌ－アラニン（４１．９ｇ，２９９ｍｍｏｌ，１当量）のジクロロメタン攪拌溶液に滴下し、温度を－７０℃未満に維持した。反応混合物を－７８℃で３０分間攪拌し、次に０℃で３０分間攪拌した。

【0167】

ペンタフルオロフェノール（６６．０ｇ，３５９ｍｍｏｌ，１．２当量）およびトリエチルアミン（４３ｍＬ，５８９ｍｍｏｌ，２当量）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に攪拌し、この混合物をバルク反応混合物に滴下した。１時間後、反応混合物を減圧濃縮し白色固形物を得た。固形物を酢酸エチル／ヘプタン（１：１，３００ｍＬ）に懸濁し、シリカを添加した。混合物を５分間攪拌し、次にろ別した。ろ別した固形物を酢酸エチル／ヘプタン（１：１，２００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を１：４の酢酸エチル：ヘプタン（５００ｍＬ）に懸濁し、常温で１６時間攪拌した。沈殿物をろ別によって回収し、白色固形物としてイソプロピル（（Ｒ）－（ナフタレン－１－イルオキシ）－（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物２６）（４９．２ｇ，３２％、ジアステレオマー比＞９９：１）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ）： ８．１０－８．１３ （ｍ， １Ｈ）， ７．８７ （ｄｄ， １Ｈ）， ７．７１ （ｄ， １Ｈ）， ７．５１－７．６１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４２ （ｔ， １Ｈ）， ４．９５－５．０３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１４－４．２７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９８－４．０６ （ｍ， １Ｈ）， １．４２ （ｑ， ３Ｈ）， １．１８－１．２５ （ｍ， ６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， １２２ ＭＨｚ）： －０．０５ （ｓ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ２３８ ＭＨｚ）： －１５２．５４ －１５３．４０ （ｄ， １Ｆ）， －１５８．８６ －１５９．６１ （ｔ， １Ｆ）， －１６１．６２ －１６２．３０ （ｔ， １Ｆ）

【0168】

工程３：（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－１）の調製

【0169】

アルゴン気流中－１０℃で、ｔｅｒｔ－ブチルマグネシウムクロリド（１ＭのＴＨＦ溶液、１００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ、２当量）を、４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（１３．９ｇ，５０．１ｍｍｏｌ，１当量）のジメチルホルムアミド（７０ｍＬ）攪拌溶液に、内部温度を１０℃未満に維持しつつ、３０分間かけて滴下した。反応混合物を－５℃で２０分間攪拌し、次にイソプロピル（（Ｒ）－（ペルフルオロ－フェノキシ）（ナフトキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（３７．８ｇ，７５．１ｍｍｏｌ，１．５当量．）を添加した。反応混合物を－５℃で３時間攪拌し、塩化アンモニウム（飽和水溶液、２００ｍＬ）と２－ＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ）を添加した。各相を分離し、水相を２－メチルテトラヒドロフランで抽出した。各有機相を一緒にし、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ別後、溶媒を減圧除去した。得られた油状物を乾燥フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、メタノール／ジクロロメタン２．５－１０％）を用いて精製し、橙色の油状物を得た。次に生成物を含む画分をＩｓｏｌｅｒａ（１２０ｇのＺＩＰ－ＳＰＨＥＲＥ、シリカ、溶離液５～７．５％メタノール／ジクロロメタン）を用いて精製した。夾雑物を除いた画分を水／アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥して黄みがかった白色固形物としてイソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－１）（３．１６ｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６ ｗｉｔｈ Ｄ_２Ｏ， ４００ ＭＨｚ）： ８．０３ （ｍ， １Ｈ）， ７．９０ （ｍ， １Ｈ）， ７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．５５－７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４３－７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１１ （ｍ， １Ｈ）， ６．４１ （ｂｒ ｄ， １Ｈ）， ５．５８－５．５０ （ｍ， １Ｈ）， ４．７７ （ｓｅｐｔ， １Ｈ）， ４．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９９ （ｔ， １Ｈ）， １．２２－１．０２ （ｍ， １２Ｈ）； ^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ）： －１２３ （ｍ， １Ｆ） －１５４ （ｍ， １Ｆ）； ^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ）： ４．７４ （ｓ）． ＥＳ^＋ ｍ／ｚ ５９７ ＭＨ^＋

［実施例２］
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－３）の合成

【化47】

【0170】

アルゴン気流中０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（２９６ｍＬの１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液、３００ｍｍｏｌ、２．０当量）を、４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（４１ｇ，１３４ｍｍｏｌ，１．０当量）の無水ジメチルホルムアミド（４１０ｍＬ）攪拌溶液に、内部温度を１０℃未満に維持しつつ３０分間かけて添加した。得られた混合物を０℃で１０分間攪拌し、次に固形物としてイソプロピル（（Ｓ）－（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物２８）（１３４ｇ，３００ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加した。得られた混合物を０℃で１０分間攪拌し、次に１時間常温に加温した。得られた混合物を常温で３０分間攪拌し、次に０℃に再冷却した。反応混合物を２－メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）で希釈し、次に塩化アンモニウムを加えて急冷し、次にさらに水と酢酸エチルで希釈した。セライト（約７５ｇ）を添加し、混合物をろ別し、ろ別した固形物を水と酢酸エチルで洗浄した。各層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。一緒にした酢酸エチル抽出物を炭酸水素ナトリウム（飽和水溶液）で洗浄し、この炭酸水素ナトリウム水溶液を酢酸エチルで再抽出した。一緒にした酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥、ろ別、減圧濃縮して茶色の油状物を得た。その油状物を酢酸エチルに再溶解し、炭酸水素ナトリウム（水で１．０Ｌに希釈した飽和水溶液）で洗浄した。炭酸水素ナトリウム水溶液を酢酸エチルで再抽出し、一緒にした酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥、ろ別、減圧濃縮して茶色の油状粗生成物（１１３ｇ）を得た。酢酸エチル－メタノール（０－１５％）またはジクロロメタン－メタノール（０－１０％）のいずれかの混合物を用いてシリカで乾燥フラッシュカラムクロマトグラフィーを繰り返し粗生成物を精製し、黄みがかった白色発泡物を得た。これを水-アセトニトリル（３５％）で凍結乾燥し、黄みがかった白色の非晶質固形物で、かつジアステレオマーの９５：５混合物として、イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－３）（２７．３ｇ）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ）： ７．３８－７．２７ （ｂｒ ｍ， ５Ｈ）， ７．２１－７．１６ （ｍ， ３Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ６．１２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ５．７０ （ｄ， １Ｈ）， ４．８３ （ｓｅｐｔｅｔ， １Ｈ）， ４．２４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．０４ （ｂｒ ｔｄ， １Ｈ）， ３．７９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．２０ （ｄ， ３Ｈ）， １．１７ （ｄ， ３Ｈ）， １．１１ （ｄ， ６Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ）： －１２０．３ ａｎｄ －１２２．９ （ｂｒ ｓ １Ｆ）， －１４８．５ ａｎｄ －１５４．７ （ｂｒ ｓ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ）： ４．２２ （ｓ）． ＥＳ^＋ ５４６．９７。

［実施例３］
シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－４）の合成

【化48】

【0171】

工程１：シクロヘキシル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニネート（化合物３０）の調製

【0172】

Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ′－エチルカルボジイミド塩酸塩（１０．１ｇ，５２．９ｍｍｏｌ，２当量）を（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニン（５ｇ，２６．４ｍｍｏｌ，１当量）、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（化合物２９）（３２３ｍｇ，２．６４ｍｍｏｌ，１０ｍｏｌ％）およびＥｔ_３Ｎ（１４．７ｍＬ，１０６ｍｍｏｌ，４当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）攪拌溶液に添加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。シクロヘキサノール（３．３５ｍＬ，３１．７ｍｍｏｌ，１．２当量）を添加し、反応混合物を常温で４８時間攪拌した。反応混合物を真空濃縮し、Ｅｔ_２Ｏおよび水で分配した油状固形物を得た。各相を分離し、有機相を水（５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥、ろ別、真空濃縮し、無色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，溶離液１１～１４％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）を用いて精製し、シクロヘキシル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニネート（化合物３０）（１．７６ｇ，収率２５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ５．０４ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．８３－４．７６ （ｍ， １Ｈ）， ４．２７ （ｂｒ ｑｕｉｎｔ， １Ｈ）， １．８４ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．７２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １５５－１．２３ （ｍ， ６Ｈ）， １．３７ （ｄ， ３Ｈ）。

【0173】

工程２：シクロヘキシルＬ－アラニネート（化合物３１）の調製

【0174】

０℃で、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）をシクロヘキシル（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニネート（化合物３０）（１．７６ｇ，６．４９ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１８ｍＬ）攪拌溶液に添加した。反応混合物を常温で２時間攪拌し、次に１６時間静置した。ＮａＨＣＯ_３（７０ｍＬ，飽和水溶液）を反応混合物に添加した。各相を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。各有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮し、黄色の油状物としてシクロヘキシルＬ－アラニネート（化合物３１）（１．１７９ｇ，収率１００％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ４．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｍ， １Ｈ）， １．８３－０．８５ （ｍ， １３Ｈ）。

【0175】

工程３：シクロヘキシル（（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３２）の調製

【0176】

アルゴン気流中で－７８℃で、シクロヘキシルＬ－アラニネート（化合物３１）（１ｇ，５．８４ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．８１ｍＬ，５．８４ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）溶液を、ホスホロジクロリド酸フェニル（１．２３ｇ，５．８４ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を－７８℃で３０分間攪拌し、次に常温に加温した。混合物を０℃に冷却し、ペンタフルオロフェノール（１．０７ｇ，５．８４ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）溶液を、次にＥｔ_３Ｎ（０．８１ｍＬ，５．８４ｍｍｏｌ，１当量）を添加した。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、次に常温で１６時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、白色固形物を得た。固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１，１００ｍＬ）に懸濁し、ＳｉＯ_２（５ｇ）を加えた。混合物を常温で５分間攪拌し、ろ別した。ろ別した固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１，２００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空濃縮し、白色固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，溶離液２０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）で精製し、シクロヘキシル（（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３２）（１．６２ｇ，収率５６％）を得た。

【0177】

工程４：シクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－４）の調製

【0178】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（１．２８ｍＬ，１．２８ｍｍｏｌ，２当量、１ＭのＴＨＦ溶液）を、４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（２８４ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ，１当量）の乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）攪拌懸濁溶液に添加した。シクロヘキシル（（（（Ｒ）－１－（シクロヘキシルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（６３２ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、反応混合物を０℃で２時間攪拌した。ＮＨ_４Ｃｌ（１０ｍＬ，飽和水溶液）を反応混合物に添加し、２－ＭｅＴＨＦで抽出した。一緒にした有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮し,茶色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，溶離液１０～１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）で精製し、黄色の発泡物を得た。この発泡物をＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８、溶離液３０％ＭｅＣＮ／水）で精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥し白色固形物として、シクロヘキシル（（Ｒ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（Ｒ_Ｐ）（１４ｍｇ，２％）およびシクロヘキシル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（目標化合物Ｉ－４）（Ｓ_Ｐ）（４９ｍｇ，８％）を得た。

【0179】

Ｒ _Ｐ ジアステレオマー： ^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．４０－７．２０ （ｂｒ ｍ， ３Ｈ）， ７．１９－７．１０ （ｂｒ ｍ， ３Ｈ）， ６．４５ （ｄ， １Ｈ）， ６．２１－６．１０ （ｂｒ ｍ， ２Ｈ）， ５．７０ （ｄ， １Ｈ）， ４．６０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．３０－４．２０ （ｂｒ ｍ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｂｒ ｔｄ， １Ｈ）， ３．７８ （ｂｒ ｑ， １Ｈ）， １．６８ （ｓ， ２Ｈ）， １．６０ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．４３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．３５－ｂｒ ｍ， ５Ｈ），ｍ １．１９ （ｄ， ３Ｈ）， １．１８／１．１２ （ｓ， ３Ｈ， 回転異性体）； ^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ （回転異性体） －１２０．１－－１２０．３／－１２２．４－－１２２．７ （ｂｒ ｍ， １Ｆ）， －１４８．３－－１４８．６／－１５４．７－－１５５．０ （ｂｒ ｍ， １Ｆ）； ^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ ４．１８ （ｓ）。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝２．１０１ 分， ９８．９４％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ５８７ ＭＨ^＋

【0180】

Ｓ _Ｐ ジアステレオマー（化合物Ｉ－４）： ^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．４０－７．２７ （ｂｒ ｍ， ５Ｈ）， ７．２２－７．１０ （ｂｒ ｍ， ３Ｈ）， ６．４７ （ｄ， １Ｈ）， ６．１９－６．１２ （ｂｒ ｍ， ２Ｈ）， ５．７１ （ｄ， １Ｈ）， ４．６１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．２５ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．０４ （ｂｒ ｔｄ， １Ｈ）， ３．８７－３．７５ （ｂｒ ｍ， １Ｈ）， １．６７ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．６１ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， １．４３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．３８－１．２５ （ｂｒ ｍ， ５Ｈ）， １．２３／１．１５ （ｓ， ３Ｈ， 回転異性体） ２．２１ （ｄ， ３Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ （回転異性体） －１２０．３／－１２３．０ （ｓ ｍ， １Ｆ）， １４８．５／－１５４．５－－１５４．８ （ｂｒ ｍ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ ４．２１ （ｓ）。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝２．１２ 分， ９９．４９％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ５８７ ＭＨ^＋

［実施例４］
ペンタン－３－イル（（Ｓ／Ｒ_Ｐ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－５）の合成

【化49】

【0181】

工程１：ペンタン－３－イルＬ－アラニネート（化合物３３）の調製

【0182】

常温で、塩化チオニル（６．１ｍＬ，８４．２ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ．）を３－ペンタノール（１５．２ｍＬ，１４０ｍｍｏｌ，２．５当量）およびＬ－アラニン（５ｇ，５６．１ｍｍｏｌ，１当量）の攪拌溶液に添加した。反応混合物を２４時間還流加熱し、次に常温に冷却した。その混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２およびＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）の激しく攪拌した混合物に添加した。この混合物を１５分間攪拌し、次に各相を分離した。水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮した。得られた油状物をトルエンおよびＥｔＯＡｃで共沸し、薄茶色の油状物としてペンタン－３－イルＬ－アラニネート（化合物３３）（９０５ｍｇ，１０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ４．７７ （ｑｕｉｎｔ， １Ｈ）， ３．５３ （ｑ， １Ｈ）， １．６２－１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．３４ （ｄ， １Ｈ）， ０．８７ （ｔ， ６Ｈ）。

【0183】

工程２：ペンタン－３－イル（（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３４）の調製

【0184】

アルゴン気流中で－７８℃で、ペンタン－３－イルＬ－アラニネート（９０５ｍｇ，５．８４ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）溶液を、ホスホロジクロリド酸フェニル（１．２ｇ，５．６８ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍＬ）溶液に添加した。Ｅｔ_３Ｎ（０．７９ｍＬ，５．６８ｍｍｏｌ，１当量）を添加した。反応混合物を－７８℃で１時間攪拌し、次に常温に加温した。混合物を０℃に冷却し、ペンタフルオロフェノール（１．０５ｇ，５．６８ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍＬ）溶液を，次にＥｔ_３Ｎ（１．５８ｍＬ，１１．４ｍｍｏｌ，２当量）を添加した。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、次に常温で２時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、白色固形物を得た。固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１，１００ｍＬ）に懸濁し、ＳｉＯ_２（５ｇ）を添加した。混合物を常温で５分間攪拌し、ろ別した。ろ別した固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１，２００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空濃縮し、白色固形物（ジアステレオマーの１：１ 混合物として）としてペンタン－３－イル（（ペルフルオロフェノキシ）－（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３４）（１．９ｇ，収率６９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．３６ （ｔ， ２Ｈ）， ７．２９－７．１９ （ｍ， ３Ｈ）， ４．８１ （ｓｅｘｔｅｔ， １Ｈ）， ４．２４－４．１５ （ｍ， １Ｈ）， ４．０７－３．９４ （ｍ， １Ｈ）， １．６２－１．５５ （ｍ， ４Ｈ）， １．４８ （ｄ， １．５Ｈ）， １．４７ （ｄ， １．５Ｈ）， ０．９０－０．８４ （ｍ， ６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， １２２ ＭＨｚ） δ_ｐ －０．９９ （ｓ）。

【0185】

工程３：ペンタン－３－イル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－５）の調製

【0186】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（１．４３ｍＬ，１．２８ｍｍｏｌ，１．５当量，１ＭのＴＨＦ溶液）を、４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（２６５ｍｇ，０．９５５ｍｍｏｌ，１当量）の乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）攪拌懸濁溶液に添加した。ペンタン－３－イル（（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３４）（６９０ｍｇ，１．４３ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、反応混合物を０℃で１．５時間攪拌した。反応混合物をＮＨ_４Ｃｌ（１０ｍＬ，飽和水溶液）に添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮し茶色の油状物を得た。ＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８、ＭｅＣＮ／水）を用いて精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥して白色固形物として、ペンタン－３－イル（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）－（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－５）（１５６ｍｇ、収率２８％、エピマーの混合物）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．４３－７．０８ （ｍ， ７Ｈ）， ６．４９ （ｄ， １Ｈ）， ６．２３－６．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７０ （ｄ， １Ｈ）， ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０３ （ｔ， １Ｈ）， ３．８０ （ｍ， １Ｈ）， １．５４ （ｍ， ３Ｈ）， １．３０－１．００ （ｍ， ５Ｈ）， ０．８２－０．７０ （ｍ， ６Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１２０ （ｍ）， －１２２ （ｍ）， －１２３．０ （ｍ）， －１４８ （ｍ）， －１５４ （ｍ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ ４．２５ （ｓ）。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝２．４８９ 分， １９．６５％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ５８７ ＭＨ^＋ Ｒ_Ｐ， ＲＴ＝２．６１０ 分， ６９．１１％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ５８７ ＭＨ^＋

［実施例５］
イソプロピル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－イソプロポキシ－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－６）の合成

【化50】

【0187】

工程１：イソプロピル（（（（Ｒ）－１－（イソプロピルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）（ペルフルオロフェノキシ）－ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３５）の調製

【0188】

アルゴン気流中で－７８℃に冷却して、イソプロピルＬ－アラニネート（化合物３５）（１．００ｇ，７．６２ｍｍｏｌ，２当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）溶液を、ＰＯＣｌ_３（０．３６０ｍＬ，３．８１ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）攪拌溶液に滴下し、温度を－６０℃未満に維持した。温度を－６０℃未満に維持しながら、Ｅｔ_３Ｎ（１．０６ｍＬ，７．６２ｍｍｏｌ，２当量）を滴下した。混合物を－７８℃で１時間攪拌し、次に０℃に加温し、４５分間攪拌した。ペンタフルオロフェノール（７００ｍｇ，３．８１ｍｍｏｌ，１当量）およびＥｔ_３Ｎ（１．０６ｍＬ，７．６２ｍｍｏｌ，２当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍＬ）事前攪拌混合溶液を主反応混合物に添加し、０℃で２時間攪拌し、次に常温で２時間攪拌した。ＳｉＯ_２（約５ｇ）およびＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を混合物に添加した。反応混合物を５分間攪拌し、次にろ別した。ろ別した固形物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空濃縮し、油状固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，溶離液３３～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）で精製し、白色固形物として、イソプロピル（（（（Ｒ）－１－（イソプロピルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３６）（６１９ｍｇ、収率３３％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ５．０６ （ｓｅｐｔｅｔ， ２Ｈ）， ４．０７ （ｓｅｐｔ， ２Ｈ）， ３．７４ （ｑ， ２Ｈ）， １．４６ （ｄ， ３Ｈ）， １．４３ （ｄ， ３Ｈ）， １．２８ （ｄ， ６Ｈ）， １．２７ （ｄ， ６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， １６２ ＭＨｚ） δ_ｐ １０．７０ （ｓ）。

【0189】

イソプロピル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－イソプロポキシ－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－６）の調製

【0190】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（０．７２ｍＬ，０．７２ｍｍｏｌ，２当量，１ＭのＴＨＦ溶液）を、４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（１００ｍｇ，０．３６０ｍｍｏｌ，１当量）の乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）攪拌懸濁溶液に添加した。ペンタン－３－イル（（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３６）（６９０ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ，２当量）を混合物に添加し、反応混合物を０℃で１．５時間攪拌した。反応混合物を２－ＭｅＴＨＦで希釈し、ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）および水を加えた。水相を２－ＭｅＴＨＦで抽出した。一緒にした有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮し、茶色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，溶離液１０～１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）で精製し、黄みがかった白色発泡物を得た。この発泡物をＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８、溶離液２０～４０％ＭｅＣＮ／水）を用いて精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥し、白色固形物としてイソプロピル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－イソプロポキシ－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－６）（２４ｍｇ，収率１１％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．３３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｄ， １Ｈ）， ６．４６ （ｄ， １Ｈ）， ６．０６ （ｄ， １Ｈ）， ５．７８ （ｄ， １Ｈ）， ４．９８ （ｑ， ２Ｈ）， ４．９０－４．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０４ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ３．７７－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， １．２２ （ｄ， ６Ｈ）， １．１７－１．１３ （ｍ， ５Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －２２．３ （ｔ， １Ｆ）， －１５４．９ （ｓｅｐｔ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ １３．６ （ｓ）。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝１．６８７ 分， ９８．５４ ＥＳＩ負 ｍ／ｚ ５８２ ［Ｍ－Ｈ］^－

［実施例６］
シクロヘキシル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－（シクロヘキソキシ）－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－７）の合成

【化51】

【0191】

シクロヘキシル（（（（Ｒ）－１－（シクロヘキシルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３７）の調製

【0192】

アルゴン気流中で－７８℃に冷却して、シクロヘキシルＬ－アラニネート（１．１１ｇ，６．４９ｍｍｏｌ，２当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液をＰＯＣｌ_３（３０３μＬ，３．２５ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）攪拌溶液に添加した。Ｅｔ_３Ｎ（０．９０２ｍＬ，６．４９ｍｍｏｌ，２当量）を滴下した。混合物を－７８℃で１時間攪拌し、次に０℃に加温し、３０分間攪拌した。ペンタフルオロフェノール（６５７ｍｇ，３．５７ｍｍｏｌ，１．１当量）およびＥｔ_３Ｎ（０．９０２ｍＬ，６．４９ｍｍｏｌ，２当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）事前攪拌混合溶液を主反応混合物に添加し、０℃で２時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、白色固形物を得た。固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（２：３）に懸濁し、ＳｉＯ_２を加え攪拌した。混合物をろ別し、ろ別した固形物をＥｔＯＡｃ／ヘプタン（２：３）で洗浄した。ろ液を真空濃縮し、無色の油状物を得た。Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳｉＯ_２，８０ｇのＺＩＰ－ＳＰＨＥＲＥカートリッジ，溶離液１２～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）を用いて精製し、白色固形物として、シクロヘキシル（（（（Ｒ）－１－（シクロヘキシルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物３７）（２５０ｍｇ，２５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ４．８６－４．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１４－４．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７９－３．６９ （ｍ， ２Ｈ）， １．８５－１．７２ （ｍ， ８Ｈ）， １．６２－１．２５ （ｍ， １８Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１５４ （ｄ， ２Ｆ）， －１６０ （ｔ， １Ｆ）， －１６２ （ｄ， ２Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ １０．７ （ｓ）。

【0193】

シクロヘキシル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－（シクロヘキソキシ）－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－７）の調製

【0194】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（１．２８ｍＬ，０．９１１ｍｍｏｌ，２当量，１ＭのＴＨＦ溶液）を４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（１６８ｍｇ，０．６０７ｍｍｏｌ，１当量）のＤＭＦ（５ｍＬ）攪拌溶液に添加した。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、懸濁物を得た。シクロヘキシル（（（（Ｒ）－１－（シクロヘキシルオキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）（ペルフルオロフェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（５０２ｍｇ，０．９１１ｍｍｏｌ，１．５当量）をこの混合物に添加し、０℃で２時間攪拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（３０ｍＬ，飽和水溶液）に添加し、２－ＭｅＴＨＦで抽出した。各有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮した。ＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８，溶離液３０～６０％ＭｅＣＮ／水）を用いて精製し、白色固形物として、シクロヘキシル（２Ｓ）－２－［［［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチル－テトラヒドロフラン－２－イル］メトキシ－［［（１Ｓ）－２－（シクロヘキソキシ）－１－メチル－２－オキソエチル］アミノ］ホスホリル］アミノ］プロパノエート（化合物Ｉ－７）（５８．５ｍｇ，収率１５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６ ｗｉｔｈ Ｄ_２Ｏ， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．３２ （ｄ， １Ｈ）， ６．４４ （ｄ， １Ｈ）， ５．７８ （ｄ， １Ｈ）， ４．９８ （ｄ， １Ｈ）， ４．６２ （ｄ， １Ｈ）， ４．０３ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．８６－１．００ （ｍ， ２９Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１２２ （ｍ， １Ｆ） －１５５ （ｍ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ １３．６ （ｓ）。ＵＰＬＣ （中性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝２．３７７ 分， ９９．５％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ６６４ ＭＨ^＋

［実施例７］
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート（化合物Ｉ－８）の合成

【化52】

【0195】

ペルフルオロフェニル＝ジフェニル ホスフェート（化合物３９）の調製

【0196】

アルゴン気流中で０℃で、ホスホロクロリド酸ジフェニル（化合物３８）（２．７０ｍＬ，１３．０ｍｍｏｌ，１．２当量）をペンタフルオロフェノール（２ｇ，１０．９ｍｍｏｌ，１当量）およびＥｔ_３Ｎ（３．７９ｍＬ，２７．２ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２攪拌溶液に添加した。混合物を０℃で１時間攪拌し、次に常温で１６時間攪拌した。反応混合物を真空濃縮した。得られた油状物をＥｔＯＡｃに懸濁し、水および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮し、薄茶色の油状物としてペルフルオロフェニル＝ジフェニル ホスフェート（化合物３９）（４．２３ｇ，収率９４％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．４２－７．３５ （ｍ， ５Ｈ）， ７．３２－７．２４ （ｍ， ５Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ －１６．４ （ｓ）。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝２．３７７ 分 ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ４１７ ＭＨ^＋

【0197】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート（化合物Ｉ－８）の調製

【0198】

常温で、１－メチルイミダゾール（０．２２ｍＬ，２．７１ｍｍｏｌ，５当量）を４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（１５０ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ，１当量）およびリン酸ペルフルオロフェニル＝ジフェニル（２７０ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＣＮ攪拌懸濁液に添加し、３時間攪拌した。ＥｔＯＡｃおよび食塩水を反応混合物に添加した。各相を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出した。一緒にした有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、真空濃縮して茶色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２，溶離液１０～１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）を用いて精製した後、ＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８，溶離液３０～６０％ＭｅＣＮ／水）を用いて精製し、白色固形物として（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル＝ジフェニル ホスフェート（化合物Ｉ－８）（９．５ｍｇ，収率３．５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．３８／７．２３－７．２０ （ｂｒ ｍ， １３Ｈ）， ６．４８／６．２７／５．９０－５．６４ （３Ｈ， ｍ）， ４．５９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．４７／４．０６ （ｂｒ ｔ， １Ｈ）， １．０３／１．１７ （ｂｒ ｄ， ３Ｈ） （回転異性体）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ２８３ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１２０．０／－１２．８ （ｍ， １Ｆ）， －１４８．９／－１５４．１ （ｍ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ －１１．５。ＵＰＬＣ （酸性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝１．４３ 分， ９７．２１％ ＥＳＩ負 ｍ／ｚ ５０８ ［Ｍ－Ｈ］^－

［実施例８］
イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－９）の合成

【化53】

【0199】

工程１：イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－９）の調製

【0200】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（１．７５ｍＬ，１．７５ｍｍｏｌ，１．５当量，１ＭのＴＨＦ溶液）を４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－３－フルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン－メタン（化合物４０）（３０１ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ，１当量）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）攪拌混合溶液に添加した。混合物を０℃で１５分間攪拌し、イソプロピル（（Ｓ）－（ペルフルオロフェノキシ）（フェニル）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（７９３ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。混合物を０℃で１時間攪拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）に添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ_２ＨＣＯ_３（飽和水溶液）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別、４０℃で真空濃縮した。粗生成物をＨＰＬＣ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８，溶離液２５～３０％ＭｅＣＮ／水）を用いて精製した。生成物を含む画分を一緒にし、凍結乾燥し、白色固形物として、イソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－４－フルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－９）（１３７ｍｇ，収率３０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６ ｗｉｔｈ Ｄ_２Ｏ， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．５１－７．０３ （ｍ， ６Ｈ）， ６．０８ （ｂｒ ｍ， １Ｈ）， ５．６８ （ｄ， １Ｈ）， ４．７９ （ｍ， １Ｈ）， ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９４ （ｍ， １Ｈ）， ３．８１－３．６２ （ｍ， ２Ｈ）， １．２４－１．０２ （ｍ， １２Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１５９ （ｍ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ ４．４２ （ｓ）。ＵＰＬＣ （中性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝１．７６３ 分， １００％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ２７９ ＭＨ^＋

［実施例９］
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル（４－メトキシベンジル）ホスホルジアミデート（化合物Ｉ－１０）の合成

【化54】

【0201】

工程１：４－メトキシベンジル（ペルフルオロフェニル）ホスホルジアミデート（化合物４１）の調製

【0202】

アルゴン気流中で、オキシ塩化リン（Ｖ）（６０９μＬ，６．５２ｍｍｏｌ，１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液を－７８℃に冷却した。４－メトキシベンジルアミン（１．７０ｍＬ，１３．０ｍｍｏｌ，２当量）を混合物に滴下し、次にトリエチルアミン（２．７３ｍＬ，１９．６ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を－７８℃で１時間攪拌し、次に０℃に加温した。ペンタフルオロフェノール（１．８０ｇ，９．７８ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。混合物を１時間常温に加温した。混合物を真空濃縮し、黄色固形物を得た。Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳｉＯ_２，８０ｇのＺＩＰ－ＳＰＨＥＲＥカートリッジ，溶離液０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）を用いて精製し、白色固形物（２．００ｇ，収率６１％）として４－メトキシベンジル（ペルフルオロフェニル）ホスホルジアミデート（化合物４１）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３， ４００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．２３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８５ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．７８ （ｓ， ６Ｈ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ １３．４ （ｓ）。

【0203】

（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル（４－メトキシベンジル）ホスホルジアミデート（化合物Ｉ－１０）の調製

【0204】

アルゴン気流中で０℃で、^ｔＢｕＭｇＣｌ（１．０８ｍＬ，１．４４ｍｍｏｌ，１．５当量，１ＭのＴＨＦ溶液）を４－アミノ－１－（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，５－ジフルオロ－４－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－３－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２（１Ｈ）－オン（化合物２５）（２００ｍｇ，０．７２１ｍｍｏｌ，１当量）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）攪拌混合溶液に添加した。混合物を０℃で１５分間攪拌し、４－メトキシベンジル（ペルフルオロフェニル）ホスホルジアミデート（４９５ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。混合物を０℃で１時間攪拌した。混合物をＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）に添加し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ_２ＨＣＯ_３（飽和水溶液）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、ろ別し、４０℃で真空濃縮した。この操作を同等の規模で繰り返し、粗物質を一緒にし、ＭＤＡＰ（ＸＳｅｌｅｃｔ－Ｃ１８，溶離液ＭｅＣＮ／水）を用いて精製した。生成物を含む画分を一緒にし、凍結乾燥し、白色固形物（１１３ｍｇ，収率１３％）として、（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メチル（４－メトキシベンジル）ホスホルジアミデート（化合物Ｉ－１０）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６ ｗｉｔｈ Ｄ_２Ｏ， ３００ ＭＨｚ） δ_Ｈ ７．２７ （ｄ， １Ｈ）， ７．１９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８１ （ｍ， ４Ｈ）， ６．４３ （ｄ， １Ｈ）， ５．７０ （ｄ， １Ｈ）， ５．１０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０－３．７７ （ｍ， ６Ｈ）， ３．６０ （ｓ， ６Ｈ）， １．１４ （ｄ， ３Ｈ）。^１９Ｆ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， ３７６ ＭＨｚ） δ_Ｆ －１２２ （ｍ， １Ｆ） －１５５ （ｍ， １Ｆ）。^３１Ｐ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ_６， １６１ ＭＨｚ） δ_ｐ １７．１ （ｓ）。ＵＰＬＣ （中性， ２－９５％， ＣＳＨ Ｃ１８） ＲＴ＝１．７９５ 分， ９９．６％ ＥＳＩ正 ｍ／ｚ ５９５ ＭＨ^＋

生物的実施例
ＨＣＶレプリコンの検定

【0205】

この検定により、式Ｉ化合物がＨＣＶのＲＮＡ複製を阻害する能力と、それによってＨＣＶ感染を治療するための潜在的な有用性を測定する。この検定は、レポーターを単にＨＣＶの細胞内レプリコンＲＮＡレベルの読み取りとして使用している。ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を遺伝型１ｂレプリコン構築物ＮＫ５．１（Ｎ． Ｋｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．、２００１ ７５（１０）：４６１４）の第一オープンリーディングフレームに導入する。これは細胞内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列の直後にあり、口蹄疫ウイルス由来の自己開裂ペプチド２Ａによって、ネオマインホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）と結合している（Ｍ．Ｄ． Ｒｙａｎ ＆ Ｊ． Ｄｒｅｗ、ＥＭＢＯ １９９４ １３（４）：９２８－９３３）。インビトロ転写の後、ＲＮＡをヒト肝細胞腫Ｈｕｈ７細胞に電気穿孔し、Ｇ４１８耐性コロニーを単離し、増やす。安定的に選択された細胞株２２０９－２３はＨＣＶのサブゲノム複製ＲＮＡを含み、レプリコンによって発現されるウミシイタケルシフェラーゼの活性は細胞中のそのＲＮＡレベルを反映する。抗ウイルス活性および化学物質の細胞毒性を同時に測定し、観測される活性が細胞増殖の低下または細胞死に起因していないことを確かめるために、１つは乳白色でもう１つは透明な一対のプレートを用いて検定を行う。

【0206】

ＨＣＶレプリコン細胞（２２０９－２３）（ウミシイタケルシフェラーゼレポーターを発現する）を、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１００８２－１４７）を含むダルベッコＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１０５６９－０１０）中で培養し、ウェル当たり５０００細胞を９６－ウェルプレートに蒔き、一晩培養する。２４時間後、さまざまな希釈率の化学物質を成長培地中の細胞に添加し、さらに３７℃で３日間培養する。培養が終わると、白色プレート内の細胞を収集し、シフェラーゼ活性をＲ．ルシフェラーゼ検定装置（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号．Ｅ２８２０）を用いて測定する。以下の段落に記載されるすべての試薬は、製造者キットに含まれ、試薬を調製する際は製造者の指示書に従う。細胞をウェル当たり１００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．０）で一回洗浄し、室温で２０分間培養する前に２０μｌの一倍Ｒ．ルシフェラーゼ検定溶解緩衝液に溶かす。次にプレートをＣｅｎｔｒｏ ＬＢ ９６０マイクロプレート照度計（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に挿入し、各ウェル当たり１００μｌのＲ．ルシフェラーゼ検定緩衝液を注入し、信号を２秒遅延、２秒測定プログラムで測定する。ＩＣ_５０（無処理の細胞対照区の測定値に対してレプリコン水準が５０％減少する薬剤の濃度）を上記に記載されるルシフェラーゼ活性対薬剤濃度の減少率を示す図から計算することができる。

【0207】

Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ社のＷＳＴ－１試薬（カタログ番号１６４４８０７）を細胞毒性検定に使用する。１０マイクロリッターのＷＳＴ－１試薬をブランクとして培地のみを含むウェルも含めて透明プレートの各ウェルに添加する。次に細胞を３７℃で２時間培養し、ＯＤ値をＭＲＸ Ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒプレート読み取り装置（Ｌａｂ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて４５０ｎｍ（参照フィルターは６５０ｎｍ）で測定する。また、ＣＣ_５０（無処理の細胞対照区の測定値に対して細胞増殖が５０％減少する薬剤の濃度）を上記に記載されるＷＳＴ－１測定値対薬剤濃度の減少率を示す図から計算することができる。

併用治療検定のプロトコールおよび結果
方法：
１．細胞培養培地

【0208】

ＤＭＥＭ生育培地は、１０％熱非働化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、一倍のＭＥＭ非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を含む。

【0209】

ＨＣＶレプリコン検定培地は、５％熱非働化ＦＢＳ、一倍のＭＥＭ非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたＤＭＥＭ－フェノールレッド不含を含む。

２．細胞培養

【0210】

ＨＣＶ１ｂレプリコン細胞（Ｈｕｈ７－Ｌｕｎｅｔ細胞内で、バイシストロニックな遺伝型１ｂレプリコンを発現している）を３７℃で５％ＣＯ_２を含む２５０μｇ／ｍｌのＧ４１８が添加されたＤＭＥＭ生育培地で培養した。

３．抗ウイルス組み合わせ検定

【0211】

ＨＣＶ１ｂレプリコン細胞を用いて、ＨＣＶ阻害組み合わせ検定を行った。化合物処理の２４時間前に、ＨＣＶ１ｂレプリコン細胞を４０００細胞／ウェル／１００μｌの密度で、９６－ウェル平底白色プレートに播種した。薬剤の組み合わせ試験のために、レプリコン検定培地内で化合物保存溶液（１００％ＤＭＳＯに、１．７５ｍＭのイソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物ＩＩ－１）および１ｍＭのイソプロピル（（Ｓ）－（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（４－アミノ－２－オキソピリミジン－１（２Ｈ）－イル）－２，４－ジフルオロ－３－ヒドロキシ－４－メチルテトラヒドロフラン－２－イル）メトキシ）（ナフタレン－１－イルオキシ）ホスホリル）－Ｌ－アラニネート（化合物Ｉ－１））を１００倍に希釈し、１％ＤＭＳＯ中にそれぞれ１７．５μＭの化合物ＩＩ－１および１０μＭの化合物Ｉ－１を得た。次にレプリコン検定培地内で２つの化合物に１％ＤＭＳＯを加えて連続的に１．５倍まで希釈し、それぞれ１０段階の濃度範囲、すなわち１．７５－０．０６８μＭ（化合物ＩＩ－１）および１－０．０８８μＭ（化合物Ｉ－１）を得た。これら１０倍に濃縮され連続希釈の１２．５μｌの化合物ＩＩ－１（横軸の薬剤）および１２．５μｌの化合物Ｉ－１（縦軸の薬剤）をレプリコン細胞に添加した。細胞培養培地中の最終ＤＭＳＯ濃度は、すべての試験地点で０．２％であった。処理３日後、抗ウイルス活性を７０μｌ／ウェルのＯｎｅ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加してレプリコンルシフェラーゼ活性を測定することで定量した。０．５ｓｅｃ／ウェルを読み取るようにセットされたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＳｐｉｒｅ読み取り機を用いて相対発光量（ＲＬＵ）を測定した。表Ａに示されるテンプレートを用いて、化合物ＩＩ－１および化合物Ｉ－１を組み合わせた薬剤処理スキームを作成した。

４．データ解析

【0212】

ＰｒｉｃｈａｒｄおよびＳｈｉｐｍａｎによって開発されたＭａｃＳｙｎｅｒｇｙ^ＴＭＩＩプログラムを用いてデータを解析した。ボンフェローニ調整後の９５％信頼区間における表面偏差値（μＭ濃度×μＭ濃度×％、またはμＭ^２％でもって表される値）によって、各対の阻害剤組み合わせ効果を計算した。

【表3】

結果

【表4】

【0213】

上記のとおり、式ＩＩのウリジンヌクレオシド類似体を組み合わせた式Ｉのシチジンヌクレオシド類似体は、ＨＣＶポリメラーゼ阻害に対しシナジー効果を生む。

【0214】

前述の明細書、または後述のクレーム、または添付の図面にて開示され、（特定の様式または開示された機能を果たすための手段、または開示された結果を達成するための方法または工程に関して表現された特徴事項を別々に、またはこれら特徴事項を任意に組み合わせて、本発明をその多様な形態で実現するために利用してもよい。

【0215】

明確さと理解のために、例示と実施例によってある程度詳細に前述の発明を記載した。添付の特許請求の範囲内で変更を加えてもよいことは、当業者にとって明らかである。したがって当然のことだが、上記の明細書は例示を意図したものであり、限定することを意図するものではない。したがって、上記の明細書に照らして本発明の範囲を特定すべきではなく、そのようなクレームの権利範囲と等価な全範囲に加えて以下に添付される特許請求の範囲に照らして特定すべきである。

【0216】

本出願において引用されるすべての特許、特許出願および刊行物は、あたかも個々の特許、特許出願または刊行物が個々に表示されているのと同程度に、あらゆる目的のためにその全体を参照により本明細書に取り込まれる。