特許 7317023 新規抗ＨＬＡ－Ａ２抗体、およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-07-20

(45)【発行日】2023-07-28

(54)【発明の名称】新規抗ＨＬＡ－Ａ２抗体、およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20230721BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230721BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230721BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20230721BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230721BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230721BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20230721BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230721BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230721BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230721BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C07K14/725

C07K19/00

C12N5/10

C12N5/0783

A61K39/395 N

A61K35/17

A61P37/06

【請求項の数】 17

(21)【出願番号】P 2020537814

(86)(22)【出願日】2018-09-20

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-12-10

(86)【国際出願番号】 CA2018051174

(87)【国際公開番号】W WO2019056106

(87)【国際公開日】2019-03-28

【審査請求日】2021-09-16

(31)【優先権主張番号】62/560,841

(32)【優先日】2017-09-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/691,027

(32)【優先日】2018-06-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】300066874

【氏名又は名称】ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア

(73)【特許権者】

【識別番号】520097010

【氏名又は名称】サンガモ セラピューティクス フランス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】チョウ，リ

(72)【発明者】

【氏名】アベル，トビアス

(72)【発明者】

【氏名】マイヤー，フランソワ

(72)【発明者】

【氏名】レヴィングス，メーガン

(72)【発明者】

【氏名】ドーソン，ニコラス

(72)【発明者】

【氏名】ラマルシュ，キャロライン

【審査官】小倉 梢

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１４／０２０９２２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０２０－５３７５３７（ＪＰ，Ａ）

【文献】J. Clin. Invest.，2016年，Vol. 126, No. 4，p. 1413-1424

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １６／００ － １６／４６

Ｃ１２Ｎ １５／００ － １５／９０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、
ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１３を含む、
ヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

前記抗体が、全抗体もしくは抗原結合断片、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’_２、脱フコシル化抗体、または二重特異性抗体である、請求項１に記載のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または抗原結合断片。

【請求項3】

ｓｃＦｖである、請求項１～２のいずれか１項に記載のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号７２の配列を含むｓｃＦｖである、請求項１～３のいずれか１項に記載のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または抗原結合断片。

【請求項5】

（ａ）請求項１～４のいずれか１項に記載のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または抗原結合断片を含む細胞外ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、および
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項6】

前記ヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または抗原結合断片が、配列番号７２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖである、請求項５に記載のＣＡＲ。

【請求項7】

ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に特異的に結合する、請求項５または６に記載のＣＡＲ。

【請求項8】

前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８の膜貫通ドメインであり、前記細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの共刺激ドメインおよびＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項５～７のいずれか１項に記載のＣＡＲ。

【請求項9】

請求項５～８のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする、核酸分子。

【請求項10】

請求項５～８のいずれか１項に記載のＣＡＲまたは請求項９に記載の核酸分子を含む、免疫細胞。

【請求項11】

調節性Ｔ細胞である、請求項１０に記載の免疫細胞。

【請求項12】

請求項１０または１１に記載の免疫細胞と薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項13】

それを必要とする対象において免疫寛容を誘導するための使用のための、請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記免疫寛容が、移植された臓器または組織に対する寛容である、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

それを必要とする対象において臓器もしくは組織移植拒絶反応または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療するための使用のための、請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項16】

それを必要とする対象において免疫寛容を誘導するための、またはそれを必要とする対象において臓器もしくは組織移植拒絶反応または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療するための、少なくとも１つの免疫抑制剤と請求項１０または１１に記載の免疫細胞との組み合わせを含む医薬組成物。

【請求項17】

請求項１０または１１に記載の免疫細胞または請求項１２に記載の医薬組成物を第１の部分に含み、少なくとも１つの免疫抑制剤を第２の部分に含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＨＬＡ－Ａ２結合分子、特にヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体に関する。本発明は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの、ＨＬＡ－Ａ２結合分子を含む組換え分子にさらに関する。本発明の別の目的は、操作された免疫細胞、例えばＣＡＲを含む調節性Ｔ細胞、および治療法におけるその使用である。

【背景技術】

【0002】

クラスＩ ＨＬＡ抗原は、すべての有核細胞に発現する多型タンパク質であり、移植における免疫認識の重要な標的である。実際、ＨＬＡクラスＩ特異的Ｔ細胞および／または抗体の発生は、同種移植の急性および慢性拒絶反応の主要な危険因子であり、事前に形成された抗ドナーＨＬＡクラスＩ抗体の存在は、超急性拒絶反応を引き起こし得る。したがって、ＨＬＡクラスＩタンパク質に対する免疫応答を制御する方法を見出すことは、移植における大きい進歩となる。

【0003】

古典的なＨＬＡクラスＩ分子は多形性であり、感染からの進化の圧力に応答して進化した多くの異なる対立遺伝子によってコードされている。古典的なＨＬＡクラスＩタンパク質をコードする３つの遺伝子座があり、これらは、Ａ、Ｂ、Ｃ遺伝子座と呼ばれている。ＨＬＡ－Ａ遺伝子座内では、対立遺伝子のＨＬＡ－Ａ２ファミリーは、最大でかつ最も多様なファミリーであり、少なくとも３１の異なるＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子がヒトに存在することがわかっている。興味深いことに、他の多くのＨＬＡ対立遺伝子ファミリーとは異なり、ＨＬＡ－Ａ２は、すべての民族グループで頻出し、白人の５０％およびアフリカ系アメリカ人の３５％に見出される。多くのＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子は、１～９個のアミノ酸のみが異なっており、多型の大部分はペプチド結合溝の周りに集中している。ＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子は、２つの主要なグループにサブグループ化される：これらは、Ａ＊０２０１またはＡ＊０２０５からの対立遺伝子間変換事象を介して派生したものである。

【0004】

ＨＬＡタンパク質に対する不要な免疫を制御する方法としてＴ調節（Ｔｒｅｇ）細胞を用いる養子免疫療法、および移植拒絶反応を引き起こす他の抗原は、同種移植拒絶反応および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の有望な治療法である。同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防においてポリクローナルＴｒｅｇ細胞移植を使用することが報告されている。１型糖尿病のｃ－ペプチドレベルの維持においてＴｒｅｇ細胞導入を使用することも報告されている。しかし、特に、そのような細胞療法のためのポリクローナルＴｒｅｇ細胞の使用に関連する一般化された免疫抑制の一時的なリスクがあり得ることが報告されている。

【0005】

動物研究からのデータは、Ｔｒｅｇ細胞を用いる細胞治療の効力および特異性が、抗原特異的細胞を使用することにより大幅に強化され得ることを示している。例えば、自己免疫のモデルでは、抗原特異的Ｔｒｅｇ細胞は、疾患の軽減において、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞よりも優れている。膵臓リンパ節から分離された、または膵島抗原でパルスされたＴｒｅｇ細胞は、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞よりも、１型糖尿病の予防または治療に大いに優れており、自己抗原特異的トランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴｒｅｇ細胞は、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞よりも、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルで中枢神経系の炎症を抑制する点で優れている。同様に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの同種抗原刺激による拡張によって富化されたか、またはＴＣＲ導入遺伝子を発現するように操作された同種抗原特異的Ｔｒｅｇ細胞は、臓器および組織移植片の拒絶反応を予防する際に、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞よりも効果的である。同種抗原により拡張されたＴｒｅｇ細胞がＧＶＨＤを効果的に予防し、かつ抗原特異的Ｔｒｅｇ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ誘導がＧＶＨＤなしに造血同種移植片の受け入れを促進するというエビデンスがいくつかある。ヒト化マウスモデルは同様の結果を示している。同種抗原により拡張されたヒトＴｒｅｇ細胞は、ポリクローナルＴｒｅｇ細胞よりも、皮膚移植片拒絶反応のより強力な抑制因子である。

【0006】

過剰発現するトランスジェニックＴＣＲまたは抗原特異的Ｔ細胞を富化するための抗原刺激による拡張への代替的アプローチは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の使用である。細胞ベースの養子免疫療法では、患者から単離された免疫細胞を改変して、細胞が、その後患者に戻された後に新しい治療機能を実行できるようにする合成タンパク質を発現させることができる。こうした合成タンパク質の例は、ＣＡＲである。現在使用されているＣＡＲの例は、細胞外認識ドメイン（例えば、抗原結合ドメイン）、膜貫通ドメイン、および１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインの融合物である。抗原の結合時に、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達部分が、免疫細胞中で活性化関連応答を開始し得る。

【0007】

本発明は、ＨＬＡ－Ａ２を特異的に結合するＣＡＲを発現する免疫細胞、特に免疫調節細胞、およびその治療的使用に関する。

【発明の概要】

【0008】

本発明は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４およびそれらの任意の組み合わせからなる群、好ましくは、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有するヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体であって、
－重鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＳＹＨＩＱ（配列番号１）またはＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）またはＹＰＧＤＧＳ（配列番号５）、
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）、
または、配列番号１～５と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲ
のうちの少なくとも１つを含み、かつ／または
－軽鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７）、
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号８）、
または、配列番号６～８と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲ
のうちの少なくとも１つを含む、
ヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体に関する。

【0009】

一実施形態では、重鎖の可変領域は、請求項１で定義されたＣＤＲのうちの少なくとも１つを含み、軽鎖の可変領域は、請求項１で定義されたＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。

【0010】

一実施形態では、
－重鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：ＳＹＨＩＱ（配列番号１）、ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）およびＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）、もしくはＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４）、ＹＰＧＤＧＳ（配列番号５）およびＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）、または配列番号１～５と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲ、を含み、
－軽鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６）、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７）およびＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号８）、または配列番号６～８と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲ、を含む。

【0011】

一実施形態では、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号９であるか、または配列番号９と少なくとも６０％の同一性を共有する任意のアミノ酸配列である。

【0012】

一実施形態では、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０であるか、または配列番号１０と少なくとも６０％の同一性を共有する任意のアミノ酸配列であり、ここで、Ｘ_１はＶまたはＩであり、Ｘ_２はＴまたはＳであり、Ｘ_３はＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４はＳまたはＴであり、Ｘ_５はＰまたはＳであり、Ｘ_６はＴまたはＳであり、Ｘ_７はＬまたはＰであり、Ｘ_８はＥまたはＤであり、Ｘ_９はＰまたはＲであり、Ｘ_１０はＡまたはＶであり、Ｘ_１１はＳまたはＴであり、Ｘ_１２はＬまたはＱであり、Ｘ_１３はＳまたはＡであり、Ｘ_１４はＶまたはＩであり、Ｘ_１５はＫまたはＴであり、Ｘ_１６はＶまたはＬであり、Ｘ_１７はＡまたはＰであり、Ｘ_１８はＬまたはＦであり、Ｘ_１９はＧまたはＡである。

【0013】

一実施形態では、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１、配列番号１２および配列番号１３、または配列番号１１～１３と少なくとも６０％の同一性を共有する任意のアミノ酸配列を含む群から選択される。

【0014】

一実施形態では、重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号９と少なくとも６０％の同一性を共有する任意のアミノ酸配列であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０であり、ここで、Ｘ_１はＶまたはＩであり、Ｘ_２はＴまたはＳであり、Ｘ_３はＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４はＳまたはＴであり、Ｘ_５はＰまたはＳであり、Ｘ_６はＴまたはＳであり、Ｘ_７はＬまたはＰであり、Ｘ_８はＥまたはＤであり、Ｘ_９はＰまたはＲであり、Ｘ_１０はＡまたはＶであり、Ｘ_１１はＳまたはＴであり、Ｘ_１２はＬまたはＱであり、Ｘ_１３はＳまたはＡであり、Ｘ_１４はＶまたはＩであり、Ｘ_１５はＫまたはＴであり、Ｘ_１６はＶまたはＬであり、Ｘ_１７はＡまたはＰであり、Ｘ_１８はＬまたはＦであり、およびＸ_１９はＧまたはＡであり、好ましくは、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１１、配列番号１２および配列番号１３、または前記配列番号１０～１３と少なくとも６０％の同一性を共有する任意のアミノ酸配列を含む群から選択される。

【0015】

一実施形態では、抗体は、全抗体、単鎖抗体、二量体単鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディのほか、ユニボディ、ドメイン抗体、およびナノボディからなる群から選択される抗体断片、またはアフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディ、もしくはデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣物である。

【0016】

別の実施形態では、抗体は、全抗体、単鎖抗体、二量体単鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディであるか、ユニボディ、ドメイン抗体、およびナノボディからなる群から選択される抗体断片、またはアフィボディ、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質ベースの足場、ノッティン、ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディ、もしくはデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣物である。

【0017】

別の実施形態では、抗体は、ｓｃＦｖであり、好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の配列を有するｓｃＦｖである。

【0018】

本発明はさらに、以下を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する：
－上記のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を含む細胞外ドメイン、
－膜貫通ドメイン、および
－細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメイン。

【0019】

本発明の別の目的は、上記のＣＡＲをコードする核酸配列である。

【0020】

本発明の別の目的は、上記のＣＡＲまたは上記の核酸配列を含む免疫細胞であり、この免疫細胞は好ましくは調節性Ｔ細胞である。

【0021】

本発明はさらに、上記の免疫細胞を含む組成物に関し、好ましくは、組成物は医薬組成物であり、医薬的に許容される賦形剤をさらに含む。

【0022】

本発明はさらに、それを必要とする対象において免疫寛容を誘導する際に使用するための本明細書に記載の免疫細胞に関し、寛容は、好ましくは、移植された臓器または組織に対する寛容である。

【0023】

本発明はさらに、臓器または組織移植拒絶反応または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療する際に使用するための、本明細書に記載の免疫細胞に関する。

【0024】

一実施形態では、対象は、免疫抑制剤をさらに受ける。

【0025】

本発明はさらに、それを必要とする対象において免疫寛容を誘導するための、またはそれを必要とする対象において臓器もしくは組織移植拒絶もしくは移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療するための、本発明に記載の免疫細胞と、少なくとも１つの免疫抑制剤との組み合わせに関する。

【0026】

本発明はさらに、第１の部分に、本発明に記載される免疫細胞および／またはこうした免疫細胞を作製するための試薬（例えば、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ抗体またはＣＡＲをコードする核酸またはベクター）を含み、第２の部分に、少なくとも１つの免疫抑制剤を含む、キットに関する。

【0027】

本発明はさらに、それを必要とする対象において免疫寛容を誘導するための方法に関し、この方法は、本発明による免疫細胞を対象に投与することを含み、好ましくは寛容は、移植された臓器または組織に対する寛容である。

【0028】

本発明はさらに、それを必要とする対象における臓器または組織移植拒絶反応または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療するための方法に関し、この方法は、本発明に記載の免疫細胞を対象に投与することを含む。

【0029】

一実施形態では、本発明の方法は、少なくとも１つの免疫抑制剤を対象に投与することをさらに含む。

【発明を実施するための形態】

【0030】

定義
本発明において、以下の用語は以下の意味を有する。

【0031】

本発明の文脈において、一般的に存在する核酸塩基について以下の略語を使用する。「Ａ」はアデニンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアニンを指し、「Ｔ」はチミンを指し、「Ｕ」はウラシルを指す。

【0032】

「ａ」および「ａｎ」という用語は、冠詞の文法上の対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（エレメント）」は１つのエレメントまたは複数のエレメントを意味する。

【0033】

量、時間的持続時間などの測定可能な値に言及するときの「約」という用語は、こうした変動が、開示された方法を実行するのに適切であるように、指定された値の±２０％、場合によっては±１０％、または場合によっては±５％、または場合によっては±１％、または場合によっては±０．１％の変動を包含することを意味する。

【0034】

本明細書で使用される用語「活性化」は、検出可能な細胞応答を誘導するのに十分に刺激されているＴ細胞（例えば、調節性Ｔ細胞）の状態を指す。活性化はまた、例えば、サイトカイン産生または抑制活性などの検出可能なエフェクター機能（複数可）と関連し得る。「活性化された」調節性Ｔ細胞は、とりわけ、免疫応答を抑制できる調節性Ｔ細胞を指す。

【0035】

「アドネクチン」は、モノボディとしても公知であり、当技術分野において周知されており、抗原に対して高い親和性および特異性で結合するように設計されたタンパク質を指す。これらは、まとめて「抗体模倣物」と呼ばれる分子のクラスに属する。

【0036】

本明細書で使用される細胞透過性アルファボディとも呼ばれ得る「アルファボディ」は、様々な抗原に結合するように操作された小さい１０ｋＤａタンパク質を含む一種の抗体模倣物を指す。アルファボディは、細胞内タンパク質標的に到達し結合できる。

【0037】

「アフィボディ」は当技術分野において周知であり、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８個のアミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく親和性タンパク質を指す。

【0038】

本明細書で使用される「親和性」という用語は、２つの剤の可逆的結合の平衡定数を指し、解離定数（Ｋｄ）として表される。親和性は、無関係なアミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１０００倍以上、大きい可能性がある。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）～約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ～約１ピコモル（ｐＭ）、または約１００ｎＭ～約１フェムトモル（ｆＭ）以上であり得る。

【0039】

「アフィリン」は当技術分野で周知であり、選択的に抗原を結合するように設計された人工タンパク質を指す。それらは、抗原への親和性および特異性において抗体に似ているが、それらを一種の抗体模倣物にする構造においては似ていない。

【0040】

「同種異系」という用語は、物質が導入される個体と同じ種の異なる個体に由来する任意の物質を指す。１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でない場合、２つ以上の個体は互いに同種異系であると言われる。いくつかの態様では、同じ種の個体からの同種異系物質は、遺伝的に十分に異なり抗原的に相互作用し得る。

【0041】

「抗体」および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は同義的に使用され、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、複数鎖もしくは一本鎖、またはインタクト免疫グロブリンであり得、天然の供給源または組換え供給源に由来し得る。「抗体」という用語はまた、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、およびそれらが所望の生物学的活性を呈する限り、抗体断片を含む。また、抗体は、免疫グロブリン分子の四量体などの免疫グロブリン分子の多量体であり得る。

【0042】

基本的な四鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、定常ドメイン（ＣＬ）のアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に区別できるタイプの１つに割り当てることができる。それらの重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、それぞれアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と呼ばれる重鎖を有する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的わずかな差に基づいてサブクラスにさらに細分化され、例えば、ヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。各Ｌ鎖は１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結され、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖およびＬ鎖には、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド橋がある。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に、α鎖およびγ鎖のそれぞれについて３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμおよびεアイソタイプについて４つのＣＨドメインが続く。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、もう一方の端に定常ドメイン（ＣＬ）が続く。ＶＬはＶＨと整列され、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬを共にペアリングすることにより、単一の抗原結合部位が形成される。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドと共に５つの基本的なヘテロ四量体ユニットで構成されているため、１０個の抗原結合部位を含み、一方で、分泌されたＩｇＡ抗体は重合して、Ｊ鎖と共に２～５個の基本的な４鎖ユニットを含む多価の集合体を形成できる。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは一般に約１５０，０００ダルトンである。抗体の様々なクラスの構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ、Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．、１９９４年、７１頁、および第６章を参照されたい。

【0043】

「抗体断片」という用語は、抗原のエピトープと（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）特異的に相互作用する能力を保持する、インタクト抗体の少なくとも一部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、一本鎖抗体分子、特にｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨＩドメインで構成されるＦｄ断片、直鎖抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダ科のＶＨＨドメイン、例えば、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片から形成される多重特異性抗体、および単離されたＣＤＲまたは抗体の他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込むこともできる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２３：１１２６－１１３６、２００５年を参照されたい）。抗原結合断片はまた、フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドに基づく足場に移植することもできる（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して命名された、残りの「Ｆｃ」断片、とを生成する。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体とＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）で構成される。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、すなわち、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、２価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結Ｆａｂ断片にほぼ対応し、かつ抗原をなおも架橋できる、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片を生成する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での追加のいくつかの残基を有することによりＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を担持するＦａｂ’の、本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は元々、これらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして生成された。抗体断片の他の化学的カップリングについても公知である。

【0044】

本明細書で使用される「抗体の機能的断片または類似体」は、全長抗体と共通の定性的生物学的活性を有する化合物である。例えば、抗ＩｇＥ抗体の機能的断片または類似体は、そのような分子の能力が高親和性受容体ＦｃεＲＩに結合する能力を有することを妨げるか、または実質的に低減するような様式でＩｇＥ免疫グロブリンに結合できるものである。

【0045】

用語「抗体重鎖」は、それらの天然の立体配座で抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、これは通常、抗体が属するクラスを決定する。

【0046】

用語「抗体軽鎖」は、それらの天然の立体配座で抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指し、これは通常、抗体が属するクラスを決定する。カッパ（Ｋ）およびラムダ（λ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

【0047】

「アンチカリン」は当技術分野で周知であり、結合特異性がリポカリンに由来する抗体模倣技術を指す。アンチカリンは、デュオカリンと呼ばれる二重標的タンパク質としてフォーマットされてもよい。

【0048】

用語「抗原」または「Ａｇ」は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、または特定の免疫学的に適格な細胞の活性化のいずれか、またはその両方を伴い得る。当業者であれば、実質的にすべてのタンパク質またはペプチドを含む、任意の高分子が抗原として役立ち得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。したがって、当業者は、任意のＤＮＡが、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含み、このため、その用語が本明細書で使用される「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、抗原が遺伝子の全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要が必ずしもないことを理解するであろう。本発明は、これらに限定されないが、複数の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用を含むこと、およびこれらのヌクレオチド配列は、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードする様々な組み合わせで配置されることは、容易に明らかである。さらに、当業者であれば、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要が必ずしもないことを理解するであろう。抗原が合成され得るか、または生体試料から誘導され得るか、またはポリペプチド以外の高分子であり得ることは容易に明らかである。そのような生体試料としては、これらに限定されないが、組織試料、細胞または他の生物学的成分を含む流体を挙げることができる。

【0049】

「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、その表面で主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と複合された外来抗原を提示するアクセサリー細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）などの免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこれらの複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原を処理し、Ｔ細胞に提示する。

【0050】

本明細書で使用される「アルマジロリピートタンパク質ベースの足場」は、アルマジロリピートタンパク質に基づく人工ペプチド結合足場に対応するタイプの抗体模倣物を指す。アルマジロリピートタンパク質は、ペプチドまたはタンパク質との相互作用を媒介する約４２個のアミノ酸のタンデムアルマジロリピートで構成される、アルマジロドメインを特徴とする。

【0051】

「アトリマー」は、当技術分野で周知であり、それらの生物活性の必須条件として三量体化する、標的タンパク質に対する結合分子を指す。それらは、他の抗体模倣足場と比較して比較的大きい。

【0052】

「自家」という用語は、それが後で再導入される同じ個体に由来する任意の物質を指す。

【0053】

「アビマー」は、当技術分野で周知であり、抗体模倣技術を指す。

【0054】

「ＤＡＲＰｉｎ」（設計されたアンキリンリピートタンパク質）は、当技術分野で周知であり、非抗体ポリペプチドの結合能力を活用するために開発された抗体模倣ＤＲＰ（設計されたリピートタンパク質）技術を指す。

【0055】

本明細書で使用される用語「ＢＢ７．２」は、ＡＴＣＣ寄託ＨＢ－８２として識別されるマウスハイブリドーマを指す。ＢＢ７．２ハイブリドーマ細胞は、ＩｇＧ２ｂカッパアイソタイプのマウスモノクローナル抗体を分泌し（例えば、ＢＢ７．２抗体）、これは、Ｐａｒｈａｍ，Ｐ．らおよびにＨｉｌｔｏｎらよって特徴が明らかにされている（Ｐａｒｈａｍ，Ｐ．ら、１９８１年、Ｈｉｌｔｏｎら、２０１３年）。ＢＢ７．２抗体は、例えば、Ａｂｃａｍ（カタログ参照番号：ａｂ７４６７４）、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ （カタログ参照番号：１７－９８７６－４２）、またはＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（カタログ参照番号：ｓｃ－３２２３６）より入手可能である。ＢＢ７．２抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列は次のとおりである：
－重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）：ＳＹＨＩＱ（配列番号６２）；
－重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）：ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号６３）；
－重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）：ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号６４）；
－軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６５）
－軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号６６）；
－軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）：ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号６７）。

【0056】

本明細書で使用される「ＢＢ７．２抗体」は、ＢＢ７．２によって分泌されるモノクローナル抗体のＶＨ（配列番号９）およびＶＬ（配列番号１０）を有する抗体である。ＢＢ７．２抗体は、全抗体またはＢＢ７．２によって分泌されるモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬを有するｓｃＦｖなどの、ＢＢ７．２によって分泌されるモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬを有するその断片であり得る。

【0057】

「結合する」という用語は、例えば、塩橋および水橋などの相互作用を含む、共有結合的、静電的、疎水性、およびイオン的および／または水素結合の相互作用による、２つの分子間の直接の会合を指す。非特異的結合は、１０^－７Ｍ未満の親和性での結合、例えば１０^－６Ｍ、１０^－５Ｍ、１０^－４Ｍなどの親和性での結合を指す。

【0058】

本明細書で使用される「５’キャップ」（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７－メチルグアノシンキャップまたはＲＮＡ ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、転写開始直後の真核生物のメッセンジャーＲＮＡの「フロント」または５’末端に付加された改変グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、最初に転写されるヌクレオチドに連結される末端基から成る。その存在は、リボソームによる認識およびＲＮａｓｅからの保護にとって重要である。キャップの付加は転写と連動しており、それぞれ一方が他方に影響を与えるように、共転写的に起こる。転写開始直後に、合成されるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと結びついたキャップ合成複合体に結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャップ形成に必要とされる化学反応を触媒する。合成は、多段階の生化学反応として進行する。キャップ形成部分は、翻訳の安定性または効率などのｍＲＮＡの機能を調節するように改変できる。

【0059】

「キメラ抗体」は、抗体分子であり、ここで、（ａ）定常領域（すなわち、重鎖および／もしくは軽鎖）、またはその一部分は、抗原結合部位（可変領域）が異なるクラスまたは変更されたクラス、エフェクター機能および／もしくは種、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などの定常領域に連結されるように変更、置換、もしくは交換される、または（ｂ）可変領域もしくはその一部分は、異なるもしくは変更された抗原特異性を有する可変領域と変更、置換、もしくは交換される。キメラ抗体としてはまた、霊長類化抗体、特にヒト化抗体が挙げられる。さらに、キメラ抗体は、レシピエント抗体中またはドナー抗体中には見られない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに改善するために行われる。さらなる詳細は、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２年）を参照されたい（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４年）を参照されたい）。

【0060】

「キメラ受容体」または「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、１つのポリペプチドまたは、典型的には最も単純な実施形態では２つである、ポリペプチドのセットを指し、免疫細胞中にある場合、標的リガンドに対する特異性および細胞内でのシグナル発生を細胞にもたらす。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、互いに隣接している。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ポリペプチドのセットを含むキメラ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットとしては、二量体化分子が存在するときに、ポリペプチドを互いに結合させる、例えば、リガンド結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合させ得る二量体化スイッチが挙げられる。一実施形態では、キメラ受容体は、キメラ受容体融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意のリーダー配列を含む。一実施形態では、キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、リーダー配列は任意により、細胞プロセシング中およびキメラ受容体の細胞膜への局在化中にリガンド結合ドメインから切断される。

【0061】

「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含むタンパク質の生物学的機能に顕著な影響を及ぼさない、または変化させないアミノ酸改変を指す。このような保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加および欠失が挙げられる。改変は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などの当技術分野で公知の標準的技術によってタンパク質に導入できる。「保存的置換」は、ペプチド化学の当業者がポリペプチドの二次構造およびハイドロパシーの性質が実質的に変化しないと予測するような、類似の特性を有する別のアミノ酸でアミノ酸が置換されるものである。したがって、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。前述の様々な特徴を考慮に入れる例示的な置換は、当業者に周知であり、アルギニンとリジン、グルタミン酸塩とアスパラギン酸塩；セリンとスレオニン；グルタミンとアスパラギン；バリン、ロイシンおよびイソロイシンを含む。アミノ酸置換はさらに、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒性の性質の類似性に基づいて行われ得る。例えば、負に帯電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。正に帯電したアミノ酸としては、リジンおよびアルギニンが挙げられる。類似の親水性値を有する非荷電極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシンとバリン；グリシンとアラニン；アスパラギンとグルタミン；およびセリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。保存的変化を表し得る他のアミノ酸グループとしては、以下が挙げられる：（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ、（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ、および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓ。同様の側鎖を有するアミノ酸残基の他のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、本発明の抗体またはキメラ受容体内の１つ以上のアミノ酸残基を同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、改変された抗体またはキメラ受容体を、ＨＬＡ－Ａ２への結合について試験できる。

【0062】

「構成的プロモーター」という用語は、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、遺伝子産物を細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下にて細胞中で産生させる、ヌクレオチド配列を指す。

【0063】

「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、これに限定されないが増殖などのＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、次のタンパク質ファミリーに代表される：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、および活性化ＮＫ細胞受容体。

【0064】

「細胞傷害性細胞」としては、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および好中球が挙げられ、これらは、細胞傷害性応答を媒介し得る。

【0065】

その用語が本明細書で使用される「由来する」は、第１の分子と第２の分子の間の関係を示す。これは一般に、第１の分子と第２の分子の間の構造的類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に対するプロセスまたは供給源の制限を暗示することまたは含むことはない。例えば、ＣＤ３ゼータ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、必要な機能、すなわち適切な条件下でシグナルを生成する能力、を有するように、十分なＣＤ３ゼータ構造を保持している。それは、細胞内シグナル伝達ドメインを生成する特定のプロセスに対する制限を暗示することまたは含むことはない。例えば、それは、細胞内シグナル伝達ドメインを提供するために、ＣＤ３ゼータ配列で開始し、細胞内シグナル伝達ドメインに到着するために不要な配列を削除しなければならない、または突然変異を課さなければならないことを意味しない。

【0066】

「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖内ペアリングではなく鎖間ペアリングが達成されるように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５～１０残基）を含むｓｃＦｖ断片を構築することによって調製され、その結果、二価断片、すなわち２つの抗原結合部位を有する断片をもたらす小さい抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する、２つの「クロスオーバー」ｓｃＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第０４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３年）により完全に記載されている。

【0067】

「ドメイン抗体」は当業者に周知であり、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域に対応する、抗体の最小の機能的結合ユニットを指す。

【0068】

用語「コードする」は、定義されたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび高分子を合成するための鋳型として機能するための、例えば、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどの、ポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性およびその結果得られる生物学的性質を指す。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が、細胞または他の生物学的系においてタンパク質を産生するならば、タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、かつ通常は配列表に記載されている、コード鎖、および遺伝子またはｃＤＮＡを転写するための鋳型として使用される非コード鎖の両方を、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると称することができる。特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重型であり、かつ同じアミノ酸配列をコードする、すべてのヌクレオチド配列を含む。「タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」という語句はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかの型においてイントロン（複数可）を含み得る程度に、イントロンを含み得る。

【0069】

「内因性」という用語は、生物、細胞、組織、もしくは系からの、またはそれらの内部で産生された任意の物質を指す。

【0070】

「操作された」または「改変された」という用語は同義的に使用され、トランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞を指す。

【0071】

「エバシン」は当技術分野で周知であり、ケモカイン結合タンパク質のクラスを指す。

【0072】

「外因性」という用語は、生物、細胞、組織または系に導入されるか、またはそれらの外で産生される任意の物質を指す。

【0073】

「発現」という用語は、プロモーターによって駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳を指す。

【0074】

「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用性エレメントを含む。発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ発現系においてもたらされ得る。発現ベクターとしては、これらに限定されないが、コスミド、プラスミド（例えば、裸であるか、またはリポソームに含まれる）および組換えポリヌクレオチドを組み込むウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）など、当技術分野で公知のすべてのものが挙げられる。

【0075】

抗体の「Ｆｃ」断片は、ジスルフィドによって共に保持される両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって決定される。この領域は、特定の型の細胞に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。

【0076】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

【0077】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、密接な非共有結合的に会合した１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体から成る。これらの２つのドメインの折り畳みから、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が発生し、それらは抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を有する。

【0078】

「フィノマー」は当技術分野で周知であり、抗体模倣物のクラスに属するタンパク質を指す。これらは、熱安定性が高く免疫原性が低いため、魅力的な結合分子である。

【0079】

本明細書で使用される用語「移植片対宿主病」または「ＧＶＨＤ」は、遺伝的に異なるヒトから移植された組織を受け取った後の医学的合併症を指す。提供された組織（移植片）中の免疫細胞は、レシピエント（宿主）を異物として認識する。移植された免疫細胞はその後、宿主の体細胞を攻撃する。ＧＶＨＤは一般的に、幹細胞移植に関連するが、この用語は、他の形態の組織移植片から生じるＧＶＨＤを含む。ＧＶＨＤは、輸血後にも発生し得る。

【0080】

本明細書で使用される「ＨＬＡ－Ａサブタイプ」は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の対立遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊２５：０１」は、ＷＨＯ Ｔｈｅ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる「ＨＬＡ－Ａ＊２５：０１」という名称のＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２９：０２」および「ＨＬＡ－Ａ＊３０：０１」は、それぞれ「ＨＬＡ－Ａ＊２９：０２」および「ＨＬＡ－Ａ＊３０：０１」という名称のＨＬＡタンパク質を指す。

【0081】

本明細書で使用される「ＨＬＡ－Ａ２」という用語は、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊０２対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むヒト白血球抗原（ＨＬＡ）タンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ２」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊０２抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊０２抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ２」、「ＨＬＡ－Ａ０２」、および「ＨＬＡ－Ａ＊２」が挙げられる。様々な命名システムが開発されており、それらはこの対立遺伝子ファミリーによりコードされるＨＬＡタンパク質を識別しＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムを含む。「ＨＬＡ－Ａ２」という用語は、「ＨＬＡ－Ａ＊０２」で始まるこの命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指し、これらに限定されないが、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ－Ａ＊０２：１１」を含む。対立遺伝子の命名は、イタリック体で表示され得る。「ＨＬＡ－Ａ＊０２：」で始まり、２、３、または４桁の数字が続く対立遺伝子の命名は、完全な命名を構成するか、または命名の最初の部分を構成する場合がある。用語「ＨＬＡ－Ａ２」は、この命名システムに従って「ＨＬＡ－Ａ＊０２」で始まる名称で識別されるＨＬＡタンパク質も指し、これらに限定されないが、名称「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：１０」および「ＨＬＡ－Ａ＊０２：１１」を含む。

【0082】

本明細書で使用される「抗ＨＬＡ－Ａ２抗体」という用語は、ＨＬＡ－Ａ２に優先的または特異的に結合する抗体を指す。

【0083】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊０３」は、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊０３対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊０３」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型判定によりＨＬＡ－Ａ＊０３抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊０３抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ０３」および「ＨＬＡ－Ａ３」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊０３」は、「ＨＬＡ－Ａ＊０３」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0084】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊１１」、「ＨＬＡ－Ａ１１」および「Ａ１１」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊１１対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊１１」、「ＨＬＡ－Ａ１１」および「Ａ１１」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊１１抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊１１抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ１１」が挙げられる。「ＨＬＡ－Ａ＊１１」、「ＨＬＡ－Ａ１１」、および「Ａ１１」という用語は、「ＨＬＡ－Ａ＊１１：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0085】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊２３」、「ＨＬＡ－Ａ２３」および「Ａ２３」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊２３対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２３」、「ＨＬＡ－Ａ２３」および「Ａ２３」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊２３抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊２３抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ２３」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２３」、「ＨＬＡ－Ａ２３」、および「Ａ２３」は、「ＨＬＡ－Ａ＊２３：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0086】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊２５」、「ＨＬＡ－Ａ２５」および「Ａ２５」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊２５対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２５」、「ＨＬＡ－Ａ２５」および「Ａ２５」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊２５抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊２５抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ２５」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２５」、「ＨＬＡ－Ａ２５」、および「Ａ２５」は、「ＨＬＡ－Ａ＊２５：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0087】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊２６」、「ＨＬＡ－Ａ２６」および「Ａ２６」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊２６対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２６」、「ＨＬＡ－Ａ２６」および「Ａ２６」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊２６抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊２６抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ２６」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２６」、「ＨＬＡ－Ａ２６」、および「Ａ２６」は、「ＨＬＡ－Ａ＊２６：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0088】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊２９」、「ＨＬＡ－Ａ２９」および「Ａ２９」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊２９対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２９」、「ＨＬＡ－Ａ２９」および「Ａ２９」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊２９抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊２９抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ２９」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊２９」、「ＨＬＡ－Ａ２９」、および「Ａ２９」は、「ＨＬＡ－Ａ＊２９：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0089】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊３０」、「ＨＬＡ－Ａ３０」および「Ａ３０」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊３０対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３０」、「ＨＬＡ－Ａ３０」および「Ａ３０」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊３０抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊３０抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ３０」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３０」、「ＨＬＡ－Ａ３０」、および「Ａ３０」は、「ＨＬＡ－Ａ＊３０：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0090】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊３１」、「ＨＬＡ－Ａ３１」および「Ａ３１」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊３１対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３１」、「ＨＬＡ－Ａ３１」および「Ａ３１」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊３１抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊３１抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ３１」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３１」、「ＨＬＡ－Ａ３１」、および「Ａ３１」は、「ＨＬＡ－Ａ＊３１：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0091】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊３３」、「ＨＬＡ－Ａ３３」および「Ａ３３」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊３３対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３３」、「ＨＬＡ－Ａ３３」および「Ａ３３」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊３３抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊３３抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ３３」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３３」、「ＨＬＡ－Ａ３３」、および「Ａ３３」は、「ＨＬＡ－Ａ＊３３：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0092】

本明細書で使用される用語「ＨＬＡ－Ａ＊３４」、「ＨＬＡ－Ａ３４」および「Ａ３４」はそれぞれ、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ－Ａ遺伝子座でＨＬＡ－Ａ＊３４対立遺伝子ファミリーによってコードされる、細胞表面タンパク質を含むＨＬＡタンパク質を指す。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３４」、「ＨＬＡ－Ａ３４」および「Ａ３４」に包含されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験または遺伝子型分類によりＨＬＡ－Ａ＊３４抗原型に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ－Ａ＊３４抗原型の追加名としては、「ＨＬＡ－Ａ３４」が挙げられる。用語「ＨＬＡ－Ａ＊３４」、「ＨＬＡ－Ａ３４」、および「Ａ３４」は、「ＨＬＡ－Ａ＊３４：」で始まるＷＨＯ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＬＡ Ｓｙｓｔｅｍによって２０１０年に開発されたＨＬＡ命名システムによる命名を有する対立遺伝子によってコードされるＨＬＡタンパク質を指す。

【0093】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合配列）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体およびその抗体断片は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体または抗体断片）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。こうした抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。これらの改変により、抗体または抗体断片の性能をさらに改善し、最適化できる。一般に、ヒト化抗体またはその抗体断片は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを実質的にすべて含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、かつＦＲ領域のすべてまたはかなりの部分が、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体または抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含んでもよい。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５、１９８６年；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９，１９８８年；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６，１９９２年を参照されたい。

【0094】

「完全ヒト」は、例えば、分子全体がヒト起源であるか、または抗体もしくは免疫グロブリンのヒト型と同一のアミノ酸配列からなる、抗体もしくは抗体断片などの免疫グロブリンを指す。そのような抗体は、抗原チャレンジに応答して特定のヒト抗体を産生するように操作されたトランスジェニックマウスまたは他の動物から得ることができる（例えば、Ｇｒｅｅｎら、（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒら（１９９４年）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎ ６：５７９（その教示全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。完全ヒト抗体は、遺伝子または染色体トランスフェクション法、ならびにファージディスプレイ技術によって構築でき、それらはすべて当技術分野で公知である（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３を参照されたい）。ヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞によっても生成される（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照されたい。これらは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0095】

本明細書で使用されるとき、「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する、抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされた場合（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）ＶＬにおいて約残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）および８９～９７（Ｌ３）、およびＶＨにおいて約３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、９５～１０２（Ｈ３）、および／または「超可変ループ」からのそれらの残基（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７年）））に従って番号付けされた場合、ＶＬにおいて残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）および８９～９７（Ｌ３）、およびＶＨにおいて２６～３２（Ｈ１）、５２～５６（Ｈ２）、９５～１５ １０１（Ｈ３）、
；および／または「超可変ループ」からのそれらの残基（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２７：２０９－２１２（１９９９年）、Ｒｕｉｚ，Ｍ．ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８：２１９－２２１（２０００年））に従って番号付けされた場合、ＶＬ中の残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）および８９～９７（Ｌ３）、およびＶＨ中の２６～３２（Ｈ１）、５２～５６（Ｈ２）、９５～１５ １０１（Ｈ３）を含む。任意により、抗体は、ＡＨｏ（Ｈｏｎｎｅｇｅｒ，Ａ．ａｎｄ Ｐｌｕｎｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－６７０（２００１年））に従って番号付けされた場合、次のポイント、ＶＬ中の２８、３６（Ｌ１）、６３、７４～７５（Ｌ２）および１２３（Ｌ３）、およびＶＨ中の２８、３６（Ｈ１）、６３、７４～７５（Ｈ２）および１２３（Ｈ３）の１つ以上で、対称的な挿入を有する。

【0096】

「同一性」または「相同性」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間または核酸配列間の関係で使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基またはヌクレオチド残基のストリングス間の一致数によって決定される、ポリペプチドまたは核酸配列間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって指定されるギャップアラインメント（存在する場合）を有する２つ以上のより小さい配列間の同一の一致の割合を測定する。２つの分子の両方のサブユニットの位置が同じモノマーサブユニットで占められる場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれである位置がアデニンで占められる場合、それらはその位置で相同または同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置または相同な位置の数に直接対応し、例えば、２つの配列中の位置の半分（例えば、長さ１０のサブユニットのポリマー中の５つの位置）が相同である場合、２つの配列は５０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０個のうちの９個）が一致しているか、または相同である場合、２つの配列は９０％相同である。関連するポリペプチドまたは核酸配列の同一性は、既知の方法により容易に計算できる。こうした方法は、これらに限定されないが、以下に記載されている；Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，Ａ． Ｍ．，編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．，編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ１、Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ａ．Ｍ．、ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ １０ Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８７年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，編、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１年；およびＣａｒｉｌｌｏら、ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．４８、１０７３（１９８８年）。同一性を決定するための好ましい方法は、試験された配列間で最大の一致を与えるように設計される。同一性を決定する方法は、公的に入手可能なコンピュータープログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータープログラム方法としては、以下を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる；ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．＼２，３８７（１９８４年）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５、４０３－４１０（１９９０年））。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、上記）から公的に入手可能である。よく知られているＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して同一性を決定することもできる。

【0097】

本明細書で使用される用語「免疫細胞」は一般に、骨髄で産生された造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ））を含む。免疫細胞の例としては、これらに限定されないが、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）および骨髄由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）が挙げられる。

【0098】

本明細書で使用される用語「免疫エフェクター細胞」は、特定の免疫応答を開始できる形態である、免疫系の細胞を指す。

【0099】

本明細書で使用される用語「免疫応答」は、Ｔ細胞媒介性および／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含む。例示的な免疫応答としては、Ｔ細胞応答、例えば、サイトカイン産生および細胞毒性が挙げられる。さらに、免疫応答という用語は、Ｔ細胞活性化、例えば抗体産生（体液性応答）およびサイトカイン応答性細胞、例えばマクロファージの活性化によって間接的に影響を受ける免疫応答を含む。免疫応答に関与する免疫細胞としては、リンパ球が挙げられ、例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞（ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、Ｔｈ１、Ｔｈ２細胞）；抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂリンパ球、ランゲルハンス細胞などの専門的抗原提示細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、オリゴデンドロサイトなどの非専門的抗原提示細胞；ナチュラルキラー細胞；マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、顆粒球などの骨髄細胞が挙げられる。

【0100】

本明細書で使用される用語「免疫順応」は、レシピエント中に臓器または組織移植に特異的な抗体が存在するにもかかわらず、臓器または組織移植が正常に機能する移植レシピエントの状態を指す。

【0101】

本明細書で使用される用語「免疫学的寛容」または「免疫寛容」は、未処置の対象と比較して、処置された対象のある割合について実施される方法を指しここで：ａ）特定の免疫学的応答のレベルが低下される（抗原特異的エフェクターＴリンパ球、Ｂリンパ球、抗体、またはそれらの同等物により少なくとも一部には媒介されると考えられる）、ｂ）特定の免疫学的応答の開始または進行が遅延している、またはｃ）特定の免疫学的応答が開始または進行するリスクが低下される。「特定の」免疫学的寛容または免疫寛容は、他の抗原と比較して特定の抗原に対して免疫学的寛容または免疫寛容が優先的に引き起こされる場合に発生する。

【0102】

用語「誘導性プロモーター」は、遺伝子産物をコードするかまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、実質的に、プロモーターに対応する誘導因子が細胞に存在する場合にのみ、遺伝子産物を細胞中で産生させるヌクレオチド配列を指す。

【0103】

本明細書で使用される「説明資料」は、本発明の組成物および方法の有用性を伝えるために使用できる、刊行物、記録、図表、または他の任意の表現媒体を含む。本発明のキットの説明資料は、例えば、本発明の抗体、細胞、および／または組成物を含む容器に貼付され得るか、または本発明の抗体、細胞および／または組成物を含む容器と一緒に出荷され得る。あるいは、説明資料は、この説明資料および抗体、細胞および／または組成物がレシピエントによって協力的に使用されることを意図して、容器とは別に出荷されてもよい。

【0104】

「インタクトな」抗体は、抗原結合部位、およびＣＬ、および少なくとも重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列多様体であり得る。

【0105】

本明細書で使用される用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、キメラ受容体を含む細胞の免疫機能を促進するシグナルを生成する。キメラ受容体－Ｔ細胞における免疫機能の例としては、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性、抑制活性およびヘルパー活性を挙げることができる。

【0106】

本明細書で使用される「ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡ」は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ベクターから生成される。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写ベクターは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡを生成するために使用される鋳型を含む。

【0107】

「単離された」という用語は、天然の状態から改変されたか、除去されたことを意味する。例えば、生存している動物において天然に存在する核酸またはペプチドは単離されていないが、自然状態の共存物質から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは単離されている。単離された核酸またはペプチドは、実質的に精製された形態で存在し得るか、または例えば宿主細胞などの非天然環境に存在し得る。典型的には、単離された核酸またはペプチドの調製物は、少なくとも約８０％純粋であるか、少なくとも約８５％純粋であるか、少なくとも約９０％純粋であるか、少なくとも約９５％純粋であるか、９５％を超えて純粋であるか、９６％を超えて純粋であるか、９７％を超えて純粋であるか、９８％を超えて純粋であるか、９９％を超えて純粋である核酸またはペプチドを含む。

【0108】

「単離された抗体」は、その自然環境の成分から分離および／または回収されたものである。その自然環境の混入成分は、抗体の診断的使用または治療的使用を妨害し得る物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性成分を含み得る。好ましい実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定されたとき、９５重量％超の抗体、最も好ましくは９９重量％超の抗体まで、（２）スピニングカップシーケンサーの使用により、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）還元または非還元条件下で、かつクーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示されるように均質になるまで、精製される。単離された抗体は、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含む。なぜならその抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。

【0109】

「単離された核酸」または「単離された核酸配列」は、他のゲノムＤＮＡ配列、ならびに天然の配列に天然に付随するリボソームおよびポリメラーゼなどのタンパク質または複合体から実質的に分離された核酸である。この用語は、その天然の環境から取り除かれた核酸配列を包含し、組換えまたはクローン化されたＤＮＡ単離物および化学的に合成された類似体または異種系により生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な核酸は、単離された形態の核酸を含む。当然のことながら、これは元々単離された核酸を指し、後に手動で単離された核酸に追加された遺伝子または配列を除外するものではない。

【0110】

「単離されたポリペプチド」は、その自然環境の成分から同定および分離および／または回収されたものである。好ましい実施形態では、単離されたポリペプチドは、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定されたとき、９５重量％超の抗体、最も好ましくは９９重量％超の抗体まで、（２）スピニングカップシーケンサーの使用により、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、（３）還元または非還元条件下で、かつクーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示されるように均質になるまで、精製される。単離されたポリペプチドは、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕでのポリペプチドを含む。なぜならそのポリペプチドの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。しかし、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。

【0111】

本明細書で使用される「ノッティン」（阻害剤シスチンノットと呼ばれることもある）は、３つのジスルフィド架橋を含むタンパク質構造モチーフを含む抗体模倣物を指す。

【0112】

本明細書で使用される「ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド」は、抗体模倣物の一種を指し、プロテアーゼの機能を阻害するタンパク質の活性ドメインに基づく。

【0113】

用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染し得る点でレトロウイルスの中で独特である。それらはかなりの量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡに送達できるため、遺伝子送達ベクターの最も効率的な方法の１つである。レンチウイルスの例としては、これらに限定されないが、ＨＩＶ、ＳＩＶ、およびＦＩＶが挙げられる。

【0114】

用語「レンチウイルスベクター」は、Ｍｉｌｏｎｅら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９年）に記載されるような、特に自己不活性化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。診療所で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、これらに限定されないが、ＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ）、ＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステム（Ｌｅｎｔｉｇｅｎ）などが挙げられる。非臨床型のレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に知られている。

【0115】

用語「リガンド」は、ペアのリガンド／受容体のメンバーを指し、ペアの他のメンバーに結合する。

【0116】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在し得る天然由来の突然変異体を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向される。さらに、異なる決定因子（エピトープ）に対し指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子に対し指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体に混入されることなく合成され得るという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法論によって調製され得るか、または細菌、真核生物の動物または植物細胞で組換えＤＮＡ法を使用して作製されてもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４－６２８（１９９１年）およびＭａｒｋｓら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１年）に記載された技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。本明細書におけるモノクローナル抗体は、「キメラ」抗体を含む。

【0117】

用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態の、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）などの、ホスホジエステル結合によって共有結合により連結されたヌクレオチドのポリマーを指す。特に限定しない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し天然由来ヌクレオチドと同様の様式で代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に明記しない限り、特定の核酸配列は、保存的に改変されたその多様体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列、ならびに明示的に示された配列も暗示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１年）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５年）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１－９８（１９９４年））。

【0118】

「ナノボディ」は当技術分野で周知であり、天然に存在する重鎖抗体の独特の構造的および機能的特性を含む抗体由来の治療用タンパク質を指す。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。

【0119】

「天然配列」ポリヌクレオチドは、自然に由来するポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するものである。「天然配列」ポリペプチドは、天然に由来する（例えば、任意の種に由来する）ポリペプチド（例えば、抗体）と同じアミノ酸配列を有するものである。こうした天然配列のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、自然界から単離でき、または組換えもしくは合成手段によって産生され得る。

【0120】

用語「作動可能に連結された」または「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列の間の機能的連結を指し、その結果、異種核酸配列が発現する。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係で配置される場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、プロモーターはコード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、互いに隣接してもよく、かつ例えば、２つのタンパク質コード領域を接合させる必要がある場合、同じリーディングフレーム中にある。

【0121】

本明細書で使用される「機能的寛容（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」という用語は、感染症など他の問題に対応できる免疫担当宿主において、少なくとも１年間任意の免疫抑制薬物療法を行うことなく、急性または慢性拒絶を含む拒絶反応の組織学的兆候がなく安定した移植片機能がある、臨床状況を指す。

【0122】

用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合により連結されたアミノ酸残基を含む化合物を指す。ポリペプチドは、特定の長さに制限されないが、少なくとも２つのアミノ酸を含む必要があり、ポリペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数に制限はない。ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質は、ポリペプチドの定義内に含まれ、こうした用語は、特に別段の指示がない限り、本明細書では同義的に使用され得る。本明細書で使用されるこの用語は、例えば、当技術分野では一般にペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも呼ばれる短鎖、ならびに一般に当技術分野でタンパク質と呼ばれる長鎖の両方を指し、多くの種類がある。一実施形態では、本明細書で使用される用語「ペプチド」は、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸の直鎖ポリマーを指し、好ましくは約５０個未満のアミノ酸残基の鎖長を有する。「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって一緒に連結された少なくとも５０個のアミノ酸の直鎖ポリマーを指す。タンパク質は、１つ以上のペプチドまたはポリペプチド、任意によりグリコシル化された、および任意により非ポリペプチド補因子から形成される機能エンティティを具体的に指す。この用語はまた、ポリペプチドの発現後改変、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに当技術分野で公知の他の改変（天然由来および非天然由来の両方）を指すものではなく、また除外するものでもない。ポリペプチドは、タンパク質全体であってもよいし、その部分配列であってもよい。「ポリペプチド」としては、特に、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの多様体、改変ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質などが挙げられる。ポリペプチドとしては、天然ペプチド、組換えペプチド、またはそれらの組み合わせが挙げられる。本発明の文脈で目的の特定のポリペプチドは、ＣＤＲを含み抗原を結合できるアミノ酸部分配列である。

【0123】

「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」という用語は、動物、好ましくはヒトに投与されたときに、有害な、アレルギー性のまたは他の望ましくない反応を生じさせることのない賦形剤を指す。賦形剤としては、任意のすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。ヒト投与の場合、調製物は、例えば、ＦＤＡ当局またはＥＭＡなどの規制当局よって要求される無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の基準を満たす必要がある。

【0124】

本明細書で使用される「ポリ（Ａ）」は、ｍＲＮＡに接着された一連のアデノシン一リン酸塩である。一過性発現のための構築物の好ましい実施形態では、ポリＡは、５０～５００００アデノシン一リン酸塩であり、好ましくは６４以上、より好ましくは１００以上、最も好ましくは３００以上または４００以上のアデノシン一リン酸塩である。ポリ（Ａ）配列は、化学的または酵素的に改変されて、局在性、安定性、または翻訳効率などのｍＲＮＡの機能性を調節し得る。

【0125】

本明細書で使用される「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニル部位またはその改変多様体の共有結合的連結を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は３’末端でポリアデニル化されている。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素であるポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってプレｍＲＮＡに付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合、数百個）である。高等真核生物では、特定の配列であるポリアデニル化シグナルを含む転写産物にポリ（Ａ）テールが付加される。ポリ（Ａ）のテールおよびポリ（Ａ）のテールに結合されたタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護する際に役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、核からのｍＲＮＡのエクスポート、および翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡがＲＮＡに転写された直後に核内で生じるが、後に細胞質内でもさらに生じ得る。転写が終了すると、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用により、ｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は通常、切断部位の近くに塩基配列ＡＡＵＡＡＡが存在することにより特徴づけられる。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が、切断部位の遊離３’末端に付加される。

【0126】

「プロモーター／調節配列」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特定の転写を開始するのに必要とされる、細胞の合成機構、または導入された合成機構によって認識される核酸配列（例えば、ＤＮＡ配列など）を指し、これによって、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現を可能にする。いくつかの例では、この配列はコアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列はまた、遺伝子産物の発現に必要とされるエンハンサー配列および他の調節エレメントを含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的な様式で遺伝子産物を発現するものであり得る。

【0127】

本明細書で使用される用語「反応性」は、分子と反応する（すなわち、結合する）抗体の能力を指す（例えば、分子に特異的に結合する）。第１の抗体は、第１の抗体が第２の抗体と比較して分子への結合の低下を呈する場合、第２の抗体よりも分子（例えば、ＨＬＡ分子）に対して「低い反応性」を有する。１つ以上の特定のＨＬＡ分子に対する第１の抗体および第２の抗体の反応性を容易に比較するための手法が知られている。手法の例の１つは、実施例に記載されており、ここでは、ＦｌｏｗＰＲＡ（登録商標）単一抗原ビーズ（Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）を使用して、特定のＨＬＡ分子と反応（または結合）する能力について抗体を調べた。このようなフローサイトメトリー手法は、ハイスループットの抗体反応性分析に適している。

【0128】

用語「組換えタンパク質またはペプチド」は、組換えＤＮＡ技術を使用して生成されるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体またはＣＡＲ）、例えば、バクテリオファージまたは酵母発現系によって発現されるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体またはＣＡＲ）など、を指す。この用語はまた、タンパク質またはペプチド（例えば、抗体またはＣＡＲ）をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成されるタンパク質またはペプチド（例えば、抗体またはＣＡＲ）を意味すると解釈されるべきであり、そのＤＮＡ分子は、タンパク質もしくはペプチド（例えば、抗体もしくはＣＡＲ）、またはタンパク質もしくはペプチド（例えば、抗体またはＣＡＲ）を特定するアミノ酸配列を発現し、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当技術分野で利用可能であり周知されている組換えＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得られる。

【0129】

本明細書で使用される用語「調節性免疫細胞」は、免疫系の活性化を抑制する「調節的な」様式で作用しそれによって免疫系ホメオスタシスおよび自己抗原に対する寛容を維持する、免疫細胞を指す。「調節性免疫細胞」はまた、組織の修復または再生の促進などの臨床状態の改善をもたらす非免疫細胞に影響を及ぼし得る。調節性免疫細胞としては、これらに限定されないが、調節性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＤＮ Ｔ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、および調節性樹状細胞を挙げることができる。

【0130】

本発明で使用される「調節性Ｔリンパ球」、「調節性Ｔ細胞」、「Ｔ調節性細胞」、「Ｔｒｅｇ細胞」または「Ｔｒｅｇ」は同義であり、当技術分野で使用されるその標準的な定義を有することが意図される。Ｔｒｅｇ細胞は、「調節的な」様式で作用して免疫系の活性化を抑制しそれによって免疫系の恒常性および自己抗原への寛容を維持する、Ｔ細胞の特殊な亜集団である。Ｔｒｅｇは、サプレッサーＴ細胞と呼ばれることもある。Ｔｒｅｇ細胞は、常にではないが、多くの場合、フォークヘッドファミリー転写因子Ｆｏｘｐ３（フォークヘッドボックスｐ３）の発現を特徴とする。Ｔｒｅｇ細胞はまた、ＣＤ４またはＣＤ８表面タンパク質を発現し得る。これらの細胞はまた、ＣＤ２５を表現し得る。本発明で使用されるように、かつ他に特定されない限り、Ｔｒｅｇは、胸腺で発生する「天然の」Ｔｒｅｇ、胸腺の外で起こる（例えば、組織もしくは二次リンパ器官内、または定義された培養条件下での実験室の設定において）分化プロセスを介して生じる、誘導された／適応性の／末梢のＴｒｅｇ、および組換えＤＮＡ技術を使用して作製されたＴｒｅｇを含む。天然に存在するＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋）は、胸腺での他のすべてのＴ細胞と同様に発生する。対照的に、誘導された／適応性の／末梢のＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞など）は胸腺の外側で生じる。Ｔｒｅｇを誘導する１つの方法は、Ｔエフェクター細胞をＩＬ－１０またはＴＧＦ－βに曝露することによる。Ｔ細胞もまた、Ｔ細胞の混合集団へのＦｏｘｐ３遺伝子のトランスフェクションまたは形質導入によってＴｒｅｇ細胞に変換され得る。Ｆｏｘｐ３を発現させられるＴ細胞は、Ｔｒｅｇ表現型を示し、こうした組換えＴｒｅｇも本明細書では「Ｔｒｅｇ」と定義する。

【0131】

用語「拒絶反応」は、移植された臓器または組織がレシピエントの身体によって受け入れられない状態を指す。拒絶反応は、移植された臓器または組織を攻撃するレシピエントの免疫システムから生じる。拒絶反応は、移植後数日～数週間（急性）、または移植後数ヶ月～数年（慢性）に発生し得る。

【0132】

「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗体断片および重鎖の可変領域（ＶＨ）を含む少なくとも１つの抗体断片を含む融合タンパク質を指し、ここで、軽鎖および重鎖可変領域は、単一のポリペプチド鎖へと隣接して連結される。一実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造、例えば合成リンカー、例えば短い可撓性ポリペプチドリンカーを形成できるように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含む。したがって、ｓｃＦｖは、一本鎖ポリペプチドとして発現でき、かつそれが由来するインタクト抗体の特異性を保持する。特に明記しない限り、本明細書で使用されるｓｃＦｖは、例えばポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬおよびＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖはＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。

【0133】

本明細書で使用される抗体またはＣＡＲは、好ましくは約１０^４Ｍ^－１以上、または約１０^５Ｍ^－１以上、約１０^６Ｍ^－１以上、約１０^７Ｍ^－１以上、または以上１０^８Ｍ^－１、または１０^９Ｍ^－１以上、または１０^１０Ｍ^－１以上の親和性定数Ｋａを有して、それが検出可能なレベルで抗原と反応する場合、抗原に「免疫特異的」である、「特異的」である、または「特異的に結合」すると言われる。同族の抗原に対する抗体の親和性は、一般的に解離定数Ｋｄとしても表現され、ある実施形態では、抗体が１０^－４Ｍ以下、または約１０^－５Ｍ以下、約１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、または１０^－８Ｍ以下、または５．１０^－９Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、または５．１０^－１０Ｍ以下、または１０^－１０Ｍ以下のＫｄで結合する場合、抗体は抗原に特異的に結合する。抗体またはＣＡＲの親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄらによって記載されたもの（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ５１：６６０（１９４９年））を使用して容易に決定できる。抗体のその抗原、細胞または組織への結合特性は一般に、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）および／または蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光ベースのアッセイを含む、免疫検出法を使用して決定され評価され得る。一実施形態では、「特異的に結合する」という用語は、試料中に存在する結合パートナーを認識し結合するが、試料中の他の分子を実質的に認識しないか結合しない、抗体、ＣＡＲまたはリガンドを指す。

【0134】

「シグナル伝達経路」という用語は、細胞の一部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす、様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。

【0135】

用語「シグナル伝達ドメイン」は、セカンドメッセンジャーを生成すること、またはそのようなメッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することにより、規定のシグナル伝達経路を介して細胞活動を調節するために、細胞内情報を伝達することにより作用するタンパク質の、機能部分を指す。

【0136】

本明細書で使用される用語「幹細胞」としては一般に、多能性（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）または多分化能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）幹細胞が挙げられる。「幹細胞」としては、これらに限定されないが、胚性幹細胞（ＥＳ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）、コミットされた前駆細胞（造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄由来細胞など）が挙げられる。

【0137】

用語「刺激」は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはキメラ受容体）とその同族のリガンドの結合によって誘導され、それにより、これらに限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介するシグナル伝達、またはキメラ受容体のシグナル伝達ドメインを介するシグナル伝達などのシグナル伝達事象を媒介する、一次応答を指す。刺激は、特定の分子の変化した発現を媒介し得る。

【0138】

用語「刺激分子」は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様では、刺激する様式で免疫細胞の活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列（複数）をもたらす免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＢ細胞）によって発現される分子を指す。一態様では、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドが添加されたＭＨＣ分子の結合によって開始される一次シグナルであり、それは、これらに限定されないが、増殖、活性化、分化などＴ細胞応答の媒介をもたらす。刺激する様式で作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。

【0139】

用語「対象」は、その中で免疫応答を誘発できる生物を含むことを意図している。一実施形態では、対象は、温血動物、好ましくは哺乳動物（ヒト、家畜動物および農場動物、ならびに動物園動物、競技動物（ｓｐｏｒｔｓ）、またはイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどのペット動物など）であり、より好ましくはヒトである。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち、温血動物、より好ましくはヒトであり得、医療を受けるのを待機しているか、もしくは医療を受けているか、または医療処置の対象であったか、対象であるか、または対象となるか、または標的となる疾患もしくは状態の進展について、監視されている。一実施形態では、対象は成人である（例えば、１８歳を超える対象）。別の実施形態では、対象は小児である（例えば、１８歳未満の対象）。一実施形態では、対象は男性である。別の実施形態では、対象は女性である。

【0140】

用語「実質的に精製された細胞」は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞はまた、それがその天然に存在する状態で通常関連している他の細胞型から分離されている細胞も指す。一実施形態では、実質的に精製された細胞は、天然に存在する状態で通常関連している他の細胞型が少なくとも約７５％ない、８０％ない、または８５％ない、好ましくは約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％ない細胞を指す。場合によっては、実質的に精製された細胞の集団は、均質な細胞集団を指す。一実施形態では、実質的に精製された細胞の集団は、少なくとも約７５％均一であるか、８０％均一であるか、または８５％均一であるか、好ましくは約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％均一である細胞の集団を指す。他の例では、この用語は、それらが自然の状態で自然に関連している細胞から分離された細胞を単に指す。いくつかの態様では、細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。他の態様では、細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養されない。

【0141】

用語「Ｔ細胞」としては、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４^＋細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞、調節性ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、Ｔ調節性細胞（Ｔｒｅｇ）、ガンマデルタＴ細胞、およびダブルネガティブＴ細胞を含む、ＣＤ３を発現するすべての型の免疫細胞が挙げられる。

【0142】

用語「治療的有効量」は、特定の生物学的結果を達成するために有効な、本明細書に記載される免疫細胞または組成物の量を指す。したがって、用語「有効量」または「治療有効量」は、標的に重大な負のまたは有害な副作用を引き起こすことなく、以下を目的とする細胞または組成物のレベルまたは量を意味する；（１）標的とされる疾患または状態の発症を遅延させるか、または予防する；（２）標的とされる疾患もしくは状態の１つ以上の症状の進行、憎悪、もしくは悪化を減速もしくは停止させる；（３）標的とされる疾患もしくは状態の症状の改善をもたらす；（４）標的とされる疾患もしくは状態の重症度もしくは発生率を低下させる；または（５）標的とされる疾患もしくは状態を治癒する。治療的有効量は、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）作用のために、標的とされる疾患または状態の発症前に投与され得る。代替的にまたは追加的に、治療的有効量は、治療的作用のために、標的とされる疾患または状態の開始後に投与され得る。

【0143】

「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、それにより外因性核酸が宿主細胞に移入されるかまたは導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞である。細胞は、一次対象細胞およびその子孫を含む。

【0144】

用語「トランスファーベクター」は、単離された核酸を含み、かつ単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用できる、物質の組成物を指す。これらに限定されないが、直鎖ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスを含む、多数のベクターが当技術分野で公知である。したがって、用語「トランスファーベクター」は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。この用語はまた、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸の移入を容易にする非プラスミドおよび非ウイルス性化合物をさらに含むと解釈されるべきである。ウイルス移入ベクターの例としては、これらに限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。

【0145】

本明細書で使用される「一過性」は、数時間、数日または数週間の期間の非組み込み導入遺伝子の発現を指し、発現の期間は、宿主細胞でゲノム中に組み込まれるかまたは安定なプラスミドレプリコン内に含まれる場合の遺伝子の発現期間よりも短い。

【0146】

本明細書で使用される「移植」は、個体に導入される細胞、組織、または臓器を指す。移植される材料の供給源は、培養細胞、別の個体からの細胞、または同じ個体からの細胞であり得る（例えば、細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された後）。例示的な臓器移植は、腎臓、肝臓、心臓、肺、および膵臓である。例示的な組織移植は、膵島である。例示的な細胞移植は、同種造血幹細胞移植である。

【0147】

「治療する」または「治療」は、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指し、ここで目的は、標的とする病的状態または障害を予防するか、または減速（軽減）させることである。したがって、一実施形態では、これらの用語は、１つ以上の治療法（例えば、本発明のＴｒｅｇ細胞などの１つ以上の治療薬）の投与から生じる、標的とされる疾患または状態の進行、重症度および／または期間の低減もしくは改善、または標的とされる疾患または状態の１つ以上の症状（好ましくは、１つ以上の識別可能な症状）の改善を指す。特定の実施形態では、「治療する」および「治療」という用語は、標的とされる疾患または状態の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を指す。他の実施形態では、用語「治療する」および「治療」は、物理的に、例えば、識別可能な症状の安定化による、または生理学的に、例えば、物理的パラメータの安定化による、またはその両方による、標的とされる疾患または状態の進行の阻害を指す。治療を必要とするものとしては、すでに障害を有するもの、ならびに障害を有しやすいもの、または障害が予防されるものが挙げられる。対象は、本発明による治療量の細胞または組成物を受けた後に、対象が観察可能なおよび／または測定可能な、病原性細胞の数の減少、病原性である細胞の総割合の減少、特定の疾患または状態に関連する症状の１つ以上のある程度の緩和、罹患率および死亡率の低下、および／またはｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅの問題の改善、を示す場合、奏功するように「治療され」ている。奏功した治療および疾患の改善を評価するための上記のパラメータは、医師が精通しているルーチンの手順によって容易に測定可能である。

【0148】

「ユニボディ」は当技術分野で周知であり、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く抗体断片を指す。ヒンジ領域の欠失は、従来のＩｇＧ４抗体のサイズの本質的に半分でありかつＩｇＧ４抗体の二価の結合領域ではなく一価の結合領域を有する分子をもたらす。

【0149】

「可変」という用語は、Ｖドメインの特定のセグメントが、抗体間で配列が大きく異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかし、可変性は、可変ドメインの１１０～１３０個のアミノ酸のスパンに均等に分散されていない。その代わりに、Ｖ領域は、１５～３０個のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチで構成され、それぞれ９～１２個のアミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる可変性が非常に高い短い領域で区切られている。ネイティブ重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲを含み、大部分がβシート構成を採用し、３つの超可変領域によって接続され、これが、接続する、場合によってはβシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲにより密接に近接して一緒に、かつ他の鎖の超可変領域と共に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）を参照されたい）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）での抗体の関与など、様々なエフェクター機能を呈する。

【0150】

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」または「Ｖ_Ｈ」と称され得る。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」または「Ｖ_Ｌ」と称され得る。これらのドメインは、一般的に抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含む。

【0151】

本明細書で使用される用語ポリヌクレオチド「多様体」は、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入において本明細書で具体的に開示されるポリヌクレオチドと典型的に異なるポリヌクレオチドである。こうした多様体は、天然に存在するか、または例えば本発明のポリヌクレオチド配列の１つ以上を改変すること、および本明細書に記載のコードされたポリペプチドの１つ以上の生物活性を評価することによって、および／または当技術分野で周知の複数の技法のいずれかを用いることによって、合成的に生成され得る。本明細書で使用される用語ポリペプチド「多様体」は、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入において本明細書で具体的に開示されたポリペプチドと典型的に異なるポリペプチドである。そのような多様体は、天然に存在し得るか、または、例えば、上記のポリペプチド配列の１つ以上を改変すること、および本明細書に記載のポリペプチドの１つ以上の生物活性を評価することによって、および／または当技術分野で周知の複数の技法のいずれかを用いることによって、合成的に生成され得る。改変は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造中で行われてよく、かつ望ましい特性を有する多様体または誘導体ポリペプチドをコードする機能性分子を依然として得ることができる。ポリペプチドのアミノ酸配列を変更して、同等の、またはさらには改良された、本発明のポリペプチドの多様体または一部分を作製することが望まれる場合、当業者であれば通常、コードするＤＮＡ配列のコドンの１つ以上を変更するであろう。例えば、特定のアミノ酸が、他のポリペプチド（例えば、抗原）または細胞に結合する能力を明らかに失うことなく、タンパク質構造中の他のアミノ酸と置換され得る。そのタンパク質の生物学的機能活性を定義するのはタンパク質の結合能力および性質であるため、特定のアミノ酸配列の置換をタンパク質配列、および、当然のことながら、その基礎となるＤＮＡコード配列において行うことができ、同様の特性を有するタンパク質をそれでも得ることができる。したがって、様々な変更を、本発明のペプチド配列、またはこれらのペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列において、それらの生物学的有用性または活性を明らかに失うことなく行え得ることが企図される。多くの場合、ポリペプチド多様体は、１つ以上の保存的置換を含む。多様体はまた、あるいは代替的に、非保存的な変更を含む場合がある。好ましい実施形態では、多様体ポリペプチドは、５個以下のアミノ酸の置換、欠失または付加により天然配列とは異なる。多様体はまた（あるいは代替的に）、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造およびハイドロパシーの性質に最小限の影響を有するアミノ酸の欠失または付加、によって改変されてもよい。

【0152】

「バーサボディ」は当技術分野で周知であり、別の抗体模倣技術を指す。これらは、１５％を超えるシステインを含む３～５ｋＤａの小タンパク質であり、ジスルフィド密度の高い足場を形成し、典型的なタンパク質が有する疎水性コアを置き換える。

【0153】

用語「異種」は、異なる種の個体に由来する任意の物質を指す。用語「異種移植片」は、異なる種の個体に由来する移植片を指す。

【0154】

「ゼータ」または代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」または「ＴＣＲ－ゼータ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ番号ＢＡＧ３６６６４．１、または非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの同等の残基として提供されるタンパク質として定義される。および「ゼータ刺激ドメイン」または代替的に「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」または「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分である、ゼータ鎖の細胞質ドメイン、またはその機能的誘導体からのアミノ酸残基として定義される。一実施形態では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４、またはその機能的オルソログである、非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などに由来する同等の残基を含む。

【0155】

本発明の第１の目的は、ＨＬＡ－Ａ２に対する抗体、好ましくはＨＬＡ－Ａ２に対するヒト化抗体である。

【0156】

一実施形態では、本発明の抗体は、ＨＬＡ－Ａ２への結合について、以下を含む抗体と競合する：配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）。

【0157】

一実施形態では、本発明の抗体は、以下を含む抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープに結合する：配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）。

【0158】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープとＨＬＡ－Ａ２への結合について競合し、および／またはＢＢ７．２抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープに結合する。

【0159】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４およびこれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、Ａ３４：０１およびこれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0160】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの１つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0161】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの２つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0162】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの３つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの３つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0163】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの４つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの４つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0164】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの５つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの５つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0165】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの６つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの６つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0166】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの７つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの７つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0167】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの８つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの８つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0168】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４のうちの９つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１のうちの９つ以上から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対する低い反応性を有する。

【0169】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、およびＡ３４：０１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。

【0170】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５、Ａ２６、Ａ３０およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0171】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０のうちの１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２およびＡ３０：０１のうちの１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0172】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０のうちの２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２およびＡ３０：０１のうちの２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0173】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２およびＡ３０：０１を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。

【0174】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２５に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２９に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３０に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ１１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２６に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３２に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３３に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３４に対して低い反応性を有する。

【0175】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２５：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２９：０２に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３０：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ０３：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ１１：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ２６：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３１：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３３：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、好ましくはＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、ＨＬＡ－Ａ３４：０１に対して低い反応性を有する。

【0176】

ＨＬＡ－Ａサブタイプに対するＨＬＡ－Ａ２抗体の反応性を測定するための方法は当業者に周知であり、これに限定されないが、例えば、ＯＮＥ ＬＡＭＢＤＡによって提供されるＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙなどの単一抗原アッセイを含む。

【0177】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ａの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0178】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ａの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０、および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0179】

試験Ａ：
抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬ（ｍＡ２ ＣＡＲ）を発現する０．２５．１０^６Ｔ細胞を、ＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙビーズパネル（ＦＬ１ＨＤ０１、ＦＬ１ＨＤ０２、ＦＬ１ＨＤ０３、ＦＬ１ＨＤ０４、ＦＬ１ＨＤ０６およびＦＬ１ＨＤ０８、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）および固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と室温で３０分間インキュベートする。試料を洗浄し、０．５％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析する。試料あたり２００個の陰性対照ビーズを得る。ビーズのみを陰性対照として使用した。分析のために、死細胞を、最初に固定可能な生存率色素を使用して排除する。死細胞およびダブレットを排除した後、単一の抗原ビーズをゲーティングする。次に、ＨＬＡあたりのビーズの数を、それぞれのＰＥ強度ピークによって決定する。データを、各ＨＬＡピークにおいて対象となるビーズ数を２００で乗算し、試料中の陰性ビーズ数で除算することによって正規化する。各ＨＬＡピークについて、対照（非ＣＡＲ発現細胞）と比較したＣＡＲ Ｔｒｅｇの相対的結合率を、対照試料中のビーズ数からＣＡＲ－Ｔｒｅｇ中のビーズ数を引き、ＣＡＲ非発現対照内のビーズの平均数を除算し、１００倍することによって求める。

【0180】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ｂの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0181】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ｂの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０、および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0182】

試験Ｂ：
抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはＢＢ７．２抗体またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬまたは細胞表面上の切り詰め型ＮＧＦＲ形質導入マーカー（ＮＧＦＲ）（例えば、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の一部として）を発現する０．２５．１０^６Ｔ細胞を、ＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙビーズパネル（ＦＬ１ＨＤ、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）および固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とインキュベートし、０．５％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析する。分析のために、死細胞を、最初に固定可能な生存率色素を使用して排除する。死細胞およびダブレットを排除した後、単一ビーズをゲーティングする。次に、ＨＬＡあたりのビーズの数を、それぞれのＰＥ強度によって決定する。データを、試料中の陰性ビーズ数をＴｒｅｇ－ＮＧＦＲ試料中の陰性ビーズ数で除算し、Ｔｒｅｇ－ＮＧＦＲ試料中の陰性ビーズ数を乗算することにより正規化する。相対的結合率は、特定のＨＬＡのＮＧＦＲ試料中のビーズ数から、そのＨＬＡの試料中の正規化されたビーズ数を引いた数を、ＮＧＦＲ試料中のビーズ数で除算し、１００倍したものである。

【0183】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、好ましくは試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つよりも統計的に低い、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体よりも統計的に低い反応性を有する。

【0184】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、好ましくは試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つよりも統計的に低い、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体よりも統計的に低い反応性を有する。

【0185】

一実施形態では、「統計的に低い」という用語は、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体について測定された反応性（すなわち、例えば、試験Ａのまたは試験Ｂの条件における相対的結合）が、ＢＢ７．２抗体についてまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定された反応性より低いことを意味し、ここでは、特に二元配置分散分析（２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）、ダネット事後検定で分析される場合、ｐ値は最大で約０．０５、好ましくは最大で約０．０１、より好ましくは最大で約０．００５、さらにより好ましくは最大で約０．００１である。

【0186】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体の１つより低い反応性を有し、好ましくは本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体の１つより低い反応性を有し、より好ましくは、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体について測定される相対的結合は、ＢＢ７．２抗体についてまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定される相対的結合の最大で約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、またはそれ未満である。

【0187】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体の１つより低い反応性を有し、好ましくは、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体の１つより低い反応性を有し、より好ましくは、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体について測定される相対的結合は、ＢＢ７．２抗体についてまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定される相対的結合の最大で約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、またはそれ未満である。

【0188】

一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。

【0189】

別の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。

【0190】

一実施形態では、重鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＳＹＨＩＱ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）、
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）
のうちの少なくとも１つを含む。
ＣＤＲの番号付けおよび定義は、Ｋａｂａｔの定義による。

【0191】

一実施形態では、重鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＹＰＧＤＧＳ（配列番号５）、
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）のうちの少なくとも１つを含む。
ＣＤＲの番号付けおよび定義は、Ｃｈｏｔｈｉａの定義による。

【0192】

一実施形態では、軽鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７）、
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号８）のうちの少なくとも１つを含む。
ＣＤＲの番号付けおよび定義は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａの定義による。

【0193】

本発明の一実施形態では、抗－ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その重鎖中に１つのＶＨ－ＣＤＲ１（ＳＹＨＩＱ（配列番号１））、１つのＶＨ－ＣＤＲ２（ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２））、および／または１つのＶＨ－ＣＤＲ３（ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３））を含む。

【0194】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その重鎖中に３つのＣＤＲ：ＶＨ－ＣＤＲ１（ＳＹＨＩＱ（配列番号１））、ＶＨ－ＣＤＲ２（ＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２））およびＶＨ－ＣＤＲ３（ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３））を含む。

【0195】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その重鎖中に１つのＶＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４））、１つのＶＨ－ＣＤＲ２（ＹＰＧＤＧＳ（配列番号５））および／または１つのＶＨ－ＣＤＲ３（ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３））を含む。

【0196】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その重鎖中に３つのＣＤＲ：ＶＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号４））、ＶＨ－ＣＤＲ２（ＹＰＧＤＧＳ（配列番号５））およびＶＨ－ＣＤＲ３（ＥＧＴＹＹＡＭＤＹ（配列番号３））を含む。

【0197】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その軽鎖中に１つのＶＬ－ＣＤＲ１（ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６））、１つのＶＬ－ＣＤＲ２（ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７））および／または１つのＶＬ－ＣＤＲ３（ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号８））を含む。

【0198】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、その軽鎖中に３つのＣＤＲ：ＶＬ－ＣＤＲ１（ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号６））、ＶＬ－ＣＤＲ２（ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号７））およびＶＬ－ＣＤＲ３（ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号８））を含む。

【0199】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は以下を含む：
－その重鎖中に、３つのＣＤＲ、配列番号１、配列番号２および配列番号３；ならびに
－その軽鎖中に、３つのＣＤＲ、配列番号６、配列番号７および配列番号８。

【0200】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は以下を含む：
－その重鎖中に、３つのＣＤＲ、配列番号４、配列番号５および配列番号３；ならびに
－その軽鎖中に、３つのＣＤＲ、配列番号６、配列番号７および配列番号８。

【0201】

本発明によれば、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３のいずれかは、対応する配列番号１～８に記載される特定のＣＤＲまたはＣＤＲセットと、少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列を有するものとして特徴付けられ得る。

【0202】

本発明の一実施形態では、抗体抗ＨＬＡ－Ａ２は、配列番号９の配列の重鎖可変領域を含む。
（配列番号９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ

【0203】

本発明の一実施形態では、抗体抗ＨＬＡ－Ａ２の重鎖可変領域は、配列番号９と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する配列を有する。

【0204】

本発明の一実施形態では、抗体抗ＨＬＡ－Ａ２は、配列番号１０の配列の軽鎖可変領域を含む。
（配列番号１０）
ＤＸ_１ＶＭＴＱＸ_２ＰＸ_３Ｘ_４ＬＸ_５ＶＸ_６Ｘ_７ＧＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＸ_１２ＱＫＰＧＱＸ_１３ＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＸ_１４ＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＸ_１５ＩＳＲＸ_１６ＥＸ_１７ＥＤＸ_１８Ｘ_１９ＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。

【0205】

本発明の一実施形態では、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１０と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する配列を有する。

【0206】

一実施形態では、軽鎖領域は、配列番号１１の配列、または配列番号１１と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する任意の配列を有する。
（配列番号１１）
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0207】

一実施形態では、軽鎖領域は、配列番号１２の配列、または配列番号１２と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する任意の配列を有する。
（配列番号１２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0208】

一実施形態では、軽鎖領域は、配列番号１３の配列、または配列番号１３と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有する任意の配列を有する。
（配列番号１３）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0209】

一実施形態では、本発明のＨＬＡ－Ａ２抗体は、配列番号９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０を有する軽鎖可変領域、配列番号９～１０と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する任意の配列を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。

【0210】

一実施形態では、本発明のＨＬＡ－Ａ２抗体は、配列番号９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１の配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号９および１１と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する任意の配列を含む。

【0211】

一実施形態では、本発明のＨＬＡ－Ａ２抗体は、配列番号９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２の配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号９および１２と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する任意の配列を含む。

【0212】

一実施形態では、本発明のＨＬＡ－Ａ２抗体は、配列番号９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３の配列を有する軽鎖可変領域、または配列番号９および１３と少なくとも約６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する任意の配列を含む。

【0213】

本発明によれば、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のアミノ酸の１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多くが、異なるアミノ酸によって置換されてもよい。

【0214】

一実施形態では、本発明の抗体において、指定された可変領域およびＣＤＲ配列は、保存的配列改変を含み得る。保存的配列改変は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意な影響を与えず、またはそれを変更しないアミノ酸改変を指す。このような保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加および欠失が挙げられる。改変は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発などの当技術分野で公知の標準的な技術によって本発明の抗体に導入できる。

【0215】

本発明の別の目的は、配列番号９の配列の重鎖可変領域をコードする単離された核酸配列である。一実施形態では、核酸配列は、配列番号８６である。
（配列番号８６）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＡＧＴＡＣＡＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＡＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＴＴＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＴＣＣＴＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＧＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＴＴＣＴＴＣＴ

【0216】

本発明の別の目的は、配列番号１１の配列の軽鎖可変領域をコードする単離された核酸配列である。一実施形態では、核酸配列は、配列番号８７である。
（配列番号８７）
ＧＡＴＧＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＡＧＡＡＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＴＣＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧ

【0217】

本発明の別の目的は、配列番号１２の配列の軽鎖可変領域をコードする単離された核酸配列である。一実施形態では、核酸配列は、配列番号８８である。
（配列番号８８）
ＧＡＴＧＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＴＡＧＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＴＣＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧ

【0218】

本発明の別の目的は、配列番号１３の配列の軽鎖可変領域をコードする単離された核酸配列である。一実施形態では、核酸配列は、配列番号８９である。
（配列番号８９）
ＧＡＴＡＴＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＣＡＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＴＴＣＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＴＡＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＴＴＡＧＡＡＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＣＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧ

【0219】

本発明の別の目的は、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体をコードする核酸配列を含む発現ベクターである。

【0220】

本発明の別の目的は、このベクターを含む単離された宿主細胞である。この宿主細胞は、本発明の抗体の組換え産生のために使用され得る。

【0221】

一実施形態では、抗体は、全抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、二量体単鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディからなる群から選択される抗体分子である。

【0222】

別の実施形態では、抗体は、ユニボディ、ドメイン抗体、およびナノボディからなる群から選択される抗体断片である。

【0223】

別の実施形態では、抗体は、アフィボディ、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質ベースの足場、ノッティン、ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、ファイノマー、バーサボディ、およびデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣物である。

【0224】

本発明の抗体の断片および誘導体（これは、他に述べられないか、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本願で使用される「抗体」という用語に包含される）は、当技術分野で公知の技術によって産生され得る。「断片」は、インタクト抗体の一部分、一般的には抗原結合部位または可変領域、を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、連続したアミノ酸残基の１つの途切れない配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（本明細書では「単鎖抗体断片」または「単鎖ポリペプチド」と呼ばれる）が挙げられ、これらに限定されないが、（１）単鎖Ｆｖ分子、（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含む単鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含み、関連する重鎖部分のないその断片、ならびに（３）１つの重鎖可変領域のみを含む単鎖ポリペプチド、または関連する軽鎖部分のない、重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むその断片；および抗体断片から形成される多重特異性抗体、を含む。本抗体の断片は、標準的な方法を使用して得ることができる。

【0225】

例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２断片は、従来の技術に従って、単離された抗体のプロテアーゼ消化によって生成され得る。免疫反応性断片は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのクリアランスを遅くしより望ましい薬物動態プロファイルを得るために、公知の方法を使用して改変されてよく断片はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により改変され得ることが理解される。ＰＥＧをＦａｂ’断片にカップリングする、および部位特異的にコンジュゲートする方法は、例えば、Ｌｅｏｎｇら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ １６（３）：１０６－１１９（２００１年）およびＤｅｌｇａｄｏら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ５ ７３（２）：１７５－１８２（１９９６年）に記載されている。これらの開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。

【0226】

一実施形態では、本発明の抗体は、ｓｃＦｖまたはｓｃＦａｂ、好ましくはｓｃＦｖである。

【0227】

一実施形態では、本発明の抗体は、ｓｃＦｖのＮ末端およびＣ末端へいずれかの順序で、配列番号９の配列および配列番号１０の配列を含むｓｃＦｖであり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。好ましくは、本発明の抗体は、ｓｃＦｖのＮ末端およびＣ末端にいずれかの順序で、配列番号９の配列および配列番号１１、１２または１３の配列を含む、ｓｃＦｖである。

【0228】

一実施形態では、配列番号９の配列はＮ末端であり、配列番号１０、１１、１２または１３の配列はＣ末端である。

【0229】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号９、任意のリンカー、配列番号１０を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである（好ましくは、配列番号１１～１３のうちの１つ）。

【0230】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号１０（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである（好ましくは、配列番号１１～１３のうちの１つ））、任意のリンカー、配列番号９を含む。

【0231】

一実施形態では、ｓｃＦｖはリンカーを含む。リンカーの例としては、本明細書に記載のＧＳリンカーが挙げられるが、これに限定されない。一実施形態では、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むか、またはそれらからなる。

【0232】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号６９の配列、または配列番号６９と少なくとも約９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号６９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＸ_１ＶＭＴＱＸ_２ＰＸ_３Ｘ_４ＬＸ_５ＶＸ_６Ｘ_７ＧＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＸ_１２ＱＫＰＧＱＸ_１３ＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＸ_１４ＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＸ_１５ＩＳＲＸ_１６ＥＸ_１７ＥＤＸ_１８Ｘ_１９ＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。配列番号６９は、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号９、配列番号１８および配列番号１０からなる。

【0233】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号７０、７１または７２の配列、または配列番号７０、７１または７２と少なくとも約９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。配列番号７０～７２は、Ｎ末端からＣ末端へと、それぞれ、配列番号９、配列番号１８および配列番号１１～１３からなる。
（配列番号７０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
（配列番号７１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
（配列番号７２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0234】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、任意のリーダー配列の切断を容易にするために、Ｎ末端にＳ残基をさらに含む。

【0235】

したがって、一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは配列７３を有し、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。

【0236】

一実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、配列番号７４、７５または７６の配列を含むか、またはそれからなる。
（配列番号７４）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
（配列番号７５）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ
（配列番号７６）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ

【0237】

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を含む、少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体から本質的になる、または少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体からなる、組成物である。

【0238】

本明細書で使用されるとき、組成物に関して「本質的になる」は、上記の本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体が、組成物内で生物学的活性を有する唯一の治療剤または剤であることを意味する。

【0239】

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。

【0240】

薬学的に許容される担体の例としては、これらに限定されないが、媒体、溶媒、コーティング、等張剤および吸収遅延剤、添加剤、安定剤、防腐剤、界面活性剤、酵素分解を阻害する物質、アルコール、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、防腐剤および噴射剤が挙げられる。

【0241】

薬学的に許容される媒体の例としては、これらに限定されないが、水、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、通常生理食塩水または他の生理学的緩衝生理食塩水、またはグリコール、グリセロールなどの他の溶媒、およびオリーブ油などの油、または注射可能な有機エステルが挙げられる。薬学的に許容される媒体はまた、リポソームまたはミセルを含み得る。

【0242】

コーティング材料の例としては、これに限定されないが、レシチンが挙げられる。

【0243】

等張剤の例としては、これらに限定されないが、糖、塩化ナトリウムなどが挙げられる。

【0244】

吸収を遅延させる剤の例としては、これらに限定されないが、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンが挙げられる。

【0245】

添加剤の例としては、これらに限定されないが、マンニトール、デキストラン、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストランなど）、グリシン、ラクトースもしくはポリビニルピロリドン、または例えば、抗酸化剤もしくは不活性ガスなどの他の添加剤、安定剤またはｉｎ ｖｉｖｏ投与に好適である組換えタンパク質（例えばヒト血清アルブミン）が挙げられる。

【0246】

好適な安定剤の例としては、これらに限定されないが、スクロース、ゼラチン、ペプトン、ＮＺ－アミンまたはＮＺ－アミンＡＳなどの消化タンパク質抽出物が挙げられる。

【0247】

これらの組成物中で使用され得る薬学的に許容される担体は、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸、グリシン、ソルビン酸塩、ソルビン酸カリウムなどの緩衝物質、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質などの塩または電解質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、ウール脂肪をさらに含む。

【0248】

本発明の別の目的は、本明細書中上記に記載されるように、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を含むか、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体からなるか、または本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体から本質的になる、医薬品である。

【0249】

本発明の別の目的は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで、試料中の、好ましくは生体試料中のＨＬＡ－Ａ２を検出するための、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体の使用である。

【0250】

本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体が使用され得るアッセイの例としては、これらに限定されないが、ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＦＡＣＳ、組織免疫組織化学、ウエスタンブロット、および免疫沈降が挙げられる。

【0251】

本発明の別の目的は、試料を本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体と接触させること、およびＨＬＡ－Ａ２に結合された抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を検出すること、これにより試料中のＨＬＡ－Ａ２の存在を示すことを含む、試料中のＨＬＡ－Ａ２を検出するための方法である。

【0252】

本発明の一実施形態では、試料は生体試料である。生体試料の例としては、これらに限定されないが、体液、好ましくは血液、より好ましくは血清、血漿、滑液、気管支肺胞洗浄液、痰、リンパ液、腹水、尿、羊水、腹液、脳脊髄液、胸膜液、心膜液、および肺胞マクロファージ、組織溶解物、および病変組織または移植片から調製された抽出物が挙げられる。

【0253】

本発明の一実施形態では、用語「試料」は、任意の分析の前に個人から採取された試料を意味することを意図する。

【0254】

本発明の一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、検出可能な標識で直接標識され、かつ直接検出され得る。別の実施形態では、本発明のタンパク質は標識されず（かつ第１の抗体／一次抗体と呼ばれる）、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を結合できる二次抗体または他の分子が標識される。当技術分野で周知であるように、二次抗体は、一次抗体の特定の種およびクラスに特異的に結合できるように選択される。

【0255】

試料中の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体／ＨＬＡ－Ａ２複合体の存在は、標識された二次抗体の存在を検出することにより、検出でき、かつ測定できる。例えば、一次抗体／抗原複合体を含むウェルから、または複合体を含む膜（ニトロセルロースまたはナイロン膜など）から結合していない二次抗体を洗い流した後、結合した二次抗体を、例えば標識の化学発光に基づいて出現させ、検出することができる。

【0256】

抗ＨＬＡ－Ａ２抗体または二次抗体の標識としては、これらに限定されないが、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、磁性物質および放射性物質が挙げられる。こうした酵素の例としては、これらに限定されないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。補欠分子族複合体の例としては、これらに限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる。蛍光物質の例としては、これらに限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシン（ｄａｎｓｙｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄ）またはフィコエリトリンが挙げられる。発光材料の例としては、これに限定されないが、ルミナールが挙げられる。磁性剤の例としては、ガドリニウムが挙げられる。好適な放射性物質の例としては、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓまたは^３Ｈが挙げられる。

【0257】

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つの抗ＨＬＡ－Ａ２抗体、好ましくはモノクローナル抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を含むキットである。

【0258】

「キット」は、ＨＬＡ－Ａ２の発現を特異的に検出するための、少なくとも１つの試薬、好ましくは抗体、を含む任意の製品（例えば、パッケージまたは容器）を意図する。

【0259】

キットは、本発明の方法を実施するためのユニットとして促進、配布、または販売されてよい。さらに、キット試薬のいずれかまたはすべてを、外部環境からそれらを保護する容器内で（密閉容器中でなど）提供できる。

【0260】

キットは、キットおよびその使用方法を説明する添付文書も含み得る。

【0261】

サンドイッチＥＬＩＳＡを実行するためのキットは一般に、任意により固体支持体（例えば、マイクロタイタープレート）に固定化された捕捉抗体、および検出可能な物質、例えば、ＨＲＰ、蛍光標識、放射性同位体、β－ガラクトシダーゼ、およびアルカリホスファターゼなどと連結された暴露抗体（ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を含む。

【0262】

別の実施形態では、検出可能な物質は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレート）上に固定化される。

【0263】

本発明はさらに、ＨＬＡ－Ａ２に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。ＣＡＲは、標的抗原に対する抗体ベースの特異性を免疫細胞受容体活性化細胞内ドメインと組み合わせるキメラタンパク質分子である。

【0264】

本発明によれば、ＣＡＲは、１つ以上のポリペプチド中に、（ｉ）細胞外ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインであって、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体（好ましくは抗ＨＬＡ－Ａ２ ｓｃＦｖ）を含むか、またはそれからなる、細胞外ドメイン、（ｉｉ）任意により細胞外ヒンジドメイン、（ｉｉｉ）任意により膜貫通ドメイン、および（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。一実施形態では、キメラ受容体は、タグおよび／またはリーダー配列をさらに含む。

【0265】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＨＬＡ－Ａ２への結合について、以下を含む抗体と競合する：配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）。

【0266】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、以下を含む抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープに結合する：配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）。

【0267】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＨＬＡ－Ａ２への結合についてＢＢ７．２抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープと競合し、かつ／またはＢＢ７．２抗体と同じＨＬＡ－Ａ２エピトープに結合する。

【0268】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１、Ａ３４：０１およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0269】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0270】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0271】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の３つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の３つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0272】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の４つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の４つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0273】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の５つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の５つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0274】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の６つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の６つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0275】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の７つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の７つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0276】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の８つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の８つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0277】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４の９つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１の９つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0278】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３およびＡ３４を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３：０１、Ａ１１：０１、Ａ２３：０１、Ａ２５：０１、Ａ２６：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１、Ａ３１：０１、Ａ３３：０１およびＡ３４：０１を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。

【0279】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、好ましくは、ＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０およびＡ３４およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、抗体ＢＢ７．２と比較して、好ましくは、ＢＢ７．２ ｓｃＦｖと比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２、Ａ３０：０１およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、低い反応性を有する。

【0280】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０の１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２、およびＡ３０：０１の１つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0281】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０の２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２、およびＡ３０：０１の２つ以上から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0282】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５、Ａ２９およびＡ３０を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ２５：０１、Ａ２９：０２、およびＡ３０：０１を含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプの各々からの低い反応性を有する。

【0283】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２５に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２９に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３０に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ１１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２６に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３２に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３３に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３４に対して低い反応性を有する。

【0284】

一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２５：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２９：０２に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３０：に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ０３：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ１１：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ２６：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３１：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３３：０１に対して低い反応性を有する。一実施形態では、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体は、ＢＢ７．２を含むＣＡＲとまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、ＨＬＡ－Ａ３４：０１に対して低い反応性を有する。

【0285】

ＨＬＡ－Ａサブタイプに対するＣＡＲの反応性を測定するための方法は、当業者に周知であり、これらに限定されないが、例えば、ＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＯＮＥ ＬＡＭＢＤＡ）などの、単一抗原アッセイを含む。

【0286】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、試験Ａの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２を含むＣＡＲと比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0287】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、試験Ａの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。
試験Ａ：

【0288】

抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬ（ｍＡ２ ＣＡＲ）を発現する０．２５．１０^６Ｔ細胞を、ＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙビーズパネル（ＦＬ１ＨＤ０１、ＦＬ１ＨＤ０２、ＦＬ１ＨＤ０３、ＦＬ１ＨＤ０４、ＦＬ１ＨＤ０６およびＦＬ１ＨＤ０８、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）および固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と室温で３０分間インキュベートする。試料を洗浄し、０．５％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析する。試料あたり２００個の陰性対照ビーズを得る。ビーズのみを陰性対照として使用した。分析のために、死細胞を、最初に固定可能な生存率色素を使用して排除する。死細胞およびダブレットを排除した後、単一の抗原ビーズをゲーティングする。次に、ＨＬＡあたりのビーズの数を、それぞれのＰＥ強度ピークによって決定する。データを、各ＨＬＡピークにおいて対象のビーズ数を２００で乗算し、試料中の陰性ビーズ数で除算することによって正規化する。各ＨＬＡピークについて、対照（非ＣＡＲ発現細胞）と比較したＣＡＲ Ｔｒｅｇの相対的結合率を、対照試料中のビーズ数からＣＡＲ－Ｔｒｅｇ中のビーズ数を引き、ＣＡＲ非発現対照中のビーズの平均数を除算し、１００倍することによって求める。

【0289】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、試験Ｂの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２を含むＣＡＲと比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲと比較して、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。

【0290】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、試験Ｂの条件で測定される場合に抗体ＢＢ７．２と比較して、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較して、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０および任意の組み合わせを含む群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプに対して低い反応性を有する。
試験Ｂ：

【0291】

抗ＨＬＡ－Ａ２抗体またはＢＢ７．２抗体またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬまたは細胞表面上の切り詰め型ＮＧＦＲ形質導入マーカー（ＮＧＦＲ）（例えば、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の一部として）を発現する０．２５．１０^６ Ｔ細胞を、ＦｌｏｗＰＲＡ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙビーズパネル（ＦＬ１ＨＤ、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）および固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とインキュベートし、０．５％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析する。分析のために、死細胞を、最初に固定可能な生存率色素を使用して排除する。死細胞およびダブレットを排除した後、単一ビーズをゲーティングする。次に、ＨＬＡあたりのビーズの数を、それぞれのＰＥ強度によって決定する。データを、試料中の陰性ビーズ数をＴｒｅｇ－ＮＧＦＲ試料中の陰性ビーズ数で除算し、Ｔｒｅｇ－ＮＧＦＲ試料中の陰性ビーズ数を乗算することにより正規化する。相対的結合率は、特定のＨＬＡのＮＧＦＲ試料中のビーズ数から、そのＨＬＡの試料中の正規化されたビーズ数を引いた数を、ＮＧＦＲ試料中のビーズ数で除算し、１００倍したものである。

【0292】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、好ましくは試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲの１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲの１つより統計的に低い反応性を有する。

【0293】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、好ましくは試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体の１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体の１つより統計的に低い反応性を有する。

【0294】

一実施形態では、「統計的に低い」という用語は、本発明のＣＡＲについて測定された反応性（すなわち、例えば、試験Ａまたは試験Ｂの条件における相対的結合）が、ＢＢ７．２抗体またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定された反応性より低いことを意味し、特に二元配置分散分析（２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）、事後検定で分析される場合、ｐ値は最大で約０．０５、好ましくは最大で約０．０１、より好ましくは最大で約０．００５、さらにより好ましくは最大で約０．００１である。

【0295】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲの１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲの１つより低い反応性を有し、好ましくは本発明のＣＡＲは、試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ０３、Ａ１１、Ａ２３、Ａ２５、Ａ２６、Ａ２９、Ａ３０、Ａ３１、Ａ３３、Ａ３４を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲの１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲの１つより低い相対的結合を有し、より好ましくは本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体について測定される相対的結合は、ＢＢ７．２抗体またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定される相対的結合の最大で約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％またはそれ未満である。

【0296】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプに対して、ＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲの１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲの１つより低い反応性を有し、好ましくは本発明のＣＡＲは、試験Ａまたは試験Ｂの条件で測定される場合に、Ａ２５、Ａ２９、Ａ３０を含む群から選択される少なくとも１つのＨＬＡ－Ａサブタイプについて、ＢＢ７．２抗体を含むＣＡＲの１つまたはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲの１つより低い相対的結合を有し、より好ましくは本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２抗体について測定される相対的結合は、ＢＢ７．２抗体またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体について測定される相対的結合の最大で約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％またはそれ未満である。

【0297】

本発明は、上記に記載のＣＡＲをコードする核酸配列にさらに関し、核酸配列は、ｉ）ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインの核酸配列（好ましくは、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体、好ましくは上記の抗ＨＬＡ－Ａ２ ｓｃＦｖである）、（ｉｉ）任意により、細胞外ヒンジドメインの核酸配列、（ｉｉｉ）任意により、膜貫通ドメインの核酸配列、（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメインの１つ以上の核酸配列（複数可）、を含む。一実施形態では、核酸配列は、タグおよび／またはリーダー配列をコードする配列をさらに含む。

【0298】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、ｓｃＦｖのＮ末端およびＣ末端へいずれかの順序で、配列番号９の配列および配列番号１０の配列を含むｓｃＦｖであり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。好ましくは、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、ｓｃＦｖのＮ末端およびＣ末端へいずれかの順序で、配列番号９の配列および配列番号１１、１２または１３の配列を含む、ｓｃＦｖである。

【0299】

一実施形態では、配列番号９の配列はＮ末端であり、配列番号１０、１１、１２または１３の配列はＣ末端である。

【0300】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号９、任意のリンカー、配列番号１０を含み、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである（好ましくは、配列番号１１～１３の１つ）。

【0301】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号１０（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡ（好ましくは、配列番号１１～１３のうちの１つ）である）、任意のリンカー、配列番号９を含む。

【0302】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、リンカーを含む。リンカーの例としては、本明細書に記載のＧＳリンカーが挙げられるが、これに限定されない。一実施形態では、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むか、またはそれらからなる。

【0303】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、配列番号６９を含むか、またはこれらからなり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡである。配列番号６９は、Ｎ末端からＣ末端へと、配列番号９、配列番号１８および配列番号１０からなる。

【0304】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、配列番号７０、７１もしくは７２を含むか、またはこれらからなる。配列番号７０～７２は、Ｎ末端からＣ末端へと、それぞれ、配列番号９、配列番号１８および配列番号１１～１３からなる。

【0305】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、任意のリーダー配列の切断を容易にするために、Ｎ末端にＳ残基をさらに含む。

【0306】

したがって、一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、配列７３を有し、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。

【0307】

一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれるＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、配列番号７４、７５もしくは７６を含むか、またはこれらからなる。

【0308】

一実施形態では、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインは、ヒンジドメインによって膜貫通ドメインに接続され得る。

【0309】

一実施形態では、好ましくは２～１０個のアミノ酸の範囲の長さを有する短いオリゴまたはポリペプチドリンカーがヒンジドメインを形成し得る。一実施形態では、用語「リンカー」は、柔軟なポリペプチドリンカーを指す。

【0310】

例えば、グリシン－セリンダブレットは、特に好適なヒンジドメイン（ＧＳリンカー）を提供する。一実施形態では、ヒンジドメインは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＳリンカー、Ｇ２Ｓリンカー、Ｇ３Ｓリンカー、Ｇ４Ｓリンカーが挙げられる。

【0311】

Ｇ_２Ｓリンカーの例としては、これらに限定されないが、ＧＧＳが挙げられる。

【0312】

Ｇ３Ｓリンカーは、（ＧＧＧＳ）_ｎまたは（配列番号１４）ｎとも称されるアミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎを含み、ここで、ｎは、１以上の正の整数である（例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、またはｎ＝１０など）。Ｇ_３Ｓリンカーの例としては、これに限定されないがＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１５）が挙げられる。

【0313】

Ｇ_４Ｓリンカーに例としては、これらに限定されないが、ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）に対応する（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）に対応する（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_２；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）に対応する（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）３；およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１９）に対応する（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_４が挙げられる。

【0314】

また、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１２／１３８４７５号に記載されるヒンジドメインも、本発明の範囲内に含まれる。

【0315】

一実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列ＡＧＳＳＳＳＧＧＳＴＴＧＧＳＴＴ（配列番号２０）、アミノ酸配列ＧＴＴＡＡＳＧＳＳＧＧＳＳＳＧＡ（配列番号２１）、アミノ酸配列ＳＳＡＴＡＴＡＧＴＧＳＳＴＧＳＴ（配列番号２２）、および／またはアミノ酸配列ＴＳＧＳＴＧＴＡＡＳＳＴＳＴＳＴ（配列番号２３）を含む。

【0316】

一実施形態では、ヒンジドメインは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号２４）のヌクレオチド配列によってコードされる。

【0317】

別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＫＩＲＲＤＳＳ（配列番号２５）に対応するＫＩＲ_２ＤＳ_２ヒンジである。

【0318】

一実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジ（配列番号２６）のアミノ酸配列または配列番号２６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号２７の核酸配列または配列番号２７に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ８ヒンジである。
（配列番号２６）
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ
（配列番号２７）
ＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴ

【0319】

別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号２８）のアミノ酸配列または配列番号２８に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号２９の核酸配列または配列番号２９に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＧ４ヒンジである。
（配列番号２８）
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＭ
（配列番号２９）
ＧＡＧＡＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＣＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＡＴＡＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＣＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＣＴＴＴＡＧＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＡＴＧ

【0320】

別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＤヒンジ（配列番号３０）のアミノ酸配列または配列番号３０に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号３１の核酸配列または配列番号３１に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＩｇＤヒンジである。
（配列番号３０）
ＲＷＰＥＳＰＫＡＱＡＳＳＶＰＴＡＱＰＱＡＥＧＳＬＡＫＡＴＴＡＰＡＴＴＲＮＴＧＲＧＧＥＥＫＫＫＥＫＥＫＥＥＱＥＥＲＥＴＫＴＰＥＣＰＳＨＴＱＰＬＧＶＹＬＬＴＰＡＶＱＤＬＷＬＲＤＫＡＴＦＴＣＦＶＶＧＳＤＬＫＤＡＨＬＴＷＥＶＡＧＫＶＰＴＧＧＶＥＥＧＬＬＥＲＨＳＮＧＳＱＳＱＨＳＲＬＴＬＰＲＳＬＷＮＡＧＴＳＶＴＣＴＬＮＨＰＳＬＰＰＱＲＬＭＡＬＲＥＰＡＡＱＡＰＶＫＬＳＬＮＬＬＡＳＳＤＰＰＥＡＡＳＷＬＬＣＥＶＳＧＦＳＰＰＮＩＬＬＭＷＬＥＤＱＲＥＶＮＴＳＧＦＡＰＡＲＰＰＰＱＰＧＳＴＴＦＷＡＷＳＶＬＲＶＰＡＰＰＳＰＱＰＡＴＹＴＣＶＶＳＨＥＤＳＲＴＬＬＮＡＳＲＳＬＥＶＳＹＶＴＤＨ
（配列番号３１）
ＡＧＧＴＧＧＣＣＣＧＡＡＡＧＴＣＣＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＧＣＡＴＣＴＡＧＴＧＴＴＣＣＴＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＧＡＡＧＧＣＡＧＣＣＴＡＧＣＣＡＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＣＡＣＴＡＣＧＣＧＣＡＡＴＡＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＣＴＧＡＡＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＡＴＡＣＣＣＡＧＣＣＧＣＴＧＧＧＣＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＣＴＣＣＣＧＣＡＧＴＡＣＡＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＣＴＴＡＧＡＧＡＴＡＡＧＧＣＣＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＡＴＴＴＧＡＣＴＴＧＧＧＡＧＧＴＴＧＣＣＧＧＡＡＡＧＧＴＡＣＣＣＡＣＡＧＧＧＧＧＧＧＴＴＧＡＧＧＡＡＧＧＧＴＴＧＣＴＧＧＡＧＣＧＣＣＡＴＴＣＣＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧＡＡＣＧＣＣＧＧＧＡＣＣＴＣＴＧＴＣＡＣＡＴＧＴＡＣＴＣＴＡＡＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＡＴＧＧＣＣＣＴＴＡＧＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＴＴＡＡＧＣＴＴＡＧＣＣＴＧＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＣＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＧＧＣＴＣＴＴＡＴＧＣＧＡＡＧＴＧＴＣＣＧＧＣＴＴＴＡＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡＴＣＴＴＧＣＴＣＡＴＧＴＧＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＡＡＧＴＧＡＡＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＧＣＴＣＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＧＧＧＴＴＣＴＡＣＣＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＣＴＴＡＡＧＧＧＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＴＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＡＧＣＡＧＧＡＣＣＣＴＧＣＴＡＡＡＴＧＣＴＴＣＴＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＴＴＣＣＴＡＣＧＴＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＴ

【0321】

別の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号３２）のアミノ酸配列または配列番号３２に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号３３の核酸または配列番号３３に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８ヒンジである。
（配列番号３２）
ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ
（配列番号３３）
ＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣ

【0322】

本発明のキメラ受容体において使用され得る膜貫通ドメインの例としては、これらに限定されないが、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１ ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒ ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ１、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインが挙げられる。

【0323】

一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（配列番号３４）または配列番号３４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個または３個の改変を有するが、２０個、１０個または５個以下の改変を有するアミノ酸配列または配列番号３４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
（配列番号３４）
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

【0324】

別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインのヌクレオチド配列（配列番号３５）、または配列番号３５に対して９５～９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。
（配列番号３５）
ＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣ

【0325】

別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列（配列番号３６）または配列番号３６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３７の核酸配列または配列番号３７に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＣＤ２８膜貫通ドメインである。
（配列番号３６）
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ
（配列番号３７）
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ

【0326】

一実施形態では、膜貫通ドメインは組換えであってもよく、その場合これは、バリンまたはロイシンなどの主に疎水性のアミノ酸を含む。

【0327】

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインは、ＣＡＲが配置されている免疫細胞（例えば、調節性Ｔ細胞）のエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。用語「エフェクター機能」は、免疫細胞の特殊な機能を指す。例えば、調節性Ｔ細胞のエフェクター機能は、他の免疫細胞の誘導および／または増殖を抑制することまたはダウンレギュレーションすることを含み得る。さらに、Ｔｒｅｇのエフェクター機能は、組織の修復または再生の促進などの臨床状態の改善をもたらす非免疫細胞に対する影響を含み得る。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、かつ免疫細胞にその特殊な機能を実行するように指示するタンパク質の一部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用できるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切り詰められた部分が使用される程度について、こうした切断部分は、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクト鎖の代わりに使用されてよい。細胞内シグナル伝達ドメインという用語はしたがって、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切り詰められた部分を含むことを意味する。

【0328】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子、またはその機能的断片もしくは誘導体の、細胞内部分全体、または天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体を含み得る。

【0329】

一実施形態によれば、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つ（例えば、１つなど）のＴ細胞一次シグナル伝達ドメイン（またはそれに由来する配列）、および任意によりＴ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（またはそれら由来の配列（複数可））を含む。

【0330】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つ（例えば、１つなど）の一次シグナル伝達ドメインからなる。

【0331】

一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（複数可）を含む。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（複数可）からなる。

【0332】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインおよび少なくとも１つ（例えば、１つなど）の一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0333】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つの共刺激ドメインおよび少なくとも１つ（例えば、１つなど）の一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0334】

本発明の一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、一般的なＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（Ｆｃイプシロンリブ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２、ならびにそれらに由来する配列の群において選択されるタンパク質のシグナル伝達ドメインを含む。

【0335】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含むか、またはそれからなる。

【0336】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、配列番号３８、３９、４０または４１のＣＤ３ゼータドメインのアミノ酸配列、または配列番号３８～４１に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号３８）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号３９）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号４０）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号４１）
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0337】

別の実施形態では、ＣＤ３ゼータ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号３８～４１のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個または３個の改変を有するが２０個、１０個または５個以下の改変を有する、アミノ酸配列、または配列番号３８～４１に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0338】

したがって、一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号４２もしくは配列番号４３のＣＤ３ゼータドメインの核酸配列、または配列番号４２もしくは配列番号４３に対して９５～９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、またはこれらからなる。
（配列番号４２）
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＡＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ
（配列番号４３）
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ

【0339】

刺激的様式で作用するＴ細胞一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭＳ）として公知であるシグナル伝達モチーフを含み得る。

【0340】

本発明で特に有用なＩＴＡＭ含有Ｔ細胞一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ３ゼータ、または一般的なＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２のもの（または由来のもの）が挙げられる。

【0341】

一実施形態では、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメインは、改変されたＩＴＡＭドメイン、例えば、ネイティブＩＴＡＭドメインと比較して変化した（例えば、増加または減少した）活性を有する突然変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、改変されたＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化および／または切断されたＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１、２、３、４、またはそれより多いＩＴＡＭモチーフを含む。

【0342】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと組み合わせたＴ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインなど）を含む。共刺激シグナル伝達ドメイン（複数可）は、共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含むキメラ受容体の一部分を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要とされる、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。

【0343】

Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインの例としては、これらに限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、またはＣＤ８３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＡＲＨＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２ｒａ、ＩＬ６Ｒａ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＬ－１３ＲＡ１／ＲＡ２、ＩＬ－３３Ｒ（ＩＬ１ＲＬ１）、ＩＬ－１０ＲＡ／ＲＢ、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ（ＣＳＦ２ＲＢ）、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＣＤ９５、ＴＮＦＲ１（ＣＤ１２０ａ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＴＮＦＲ２（ＣＤ１２０ｂ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、ＴＧＦｂＲ１／２／３、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、一般的なガンマ鎖に特異的に結合するリガンド、またはＣＤ８３、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、もしくはＮＫＧ２Ｄと特異的に結合するリガンド、およびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質のシグナルドメインが挙げられる。

【0344】

本発明の一実施形態では、キメラ受容体は、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－１ならびにそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。

【0345】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４４）または配列番号４４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個または３個の改変を含むが２０個、１０個または５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる。
（配列番号４４）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

【0346】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４５）または配列番号４５に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個または３個の改変を含むが２０個、１０個または５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる。
（配列番号４５）
ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＲＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ

【0347】

一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４６）または配列番号４６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号４６のアミノ酸配列の少なくとも１個、２個または３個の改変を含むが２０個、１０個または５個以下の改変を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる。
（配列番号４６）
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ

【0348】

本発明の一実施形態では、キメラ受容体は、好ましくはＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ２７の細胞内ドメインおよび４－１ＢＢの細胞内ドメインから選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも２つの細胞内ドメインの組み合わせを含む。

【0349】

一実施形態では、キメラ受容体は、４－１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４４）または配列番号４４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４５）または配列番号４５に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0350】

別の実施形態では、キメラ受容体は、４－１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４４）または配列番号４４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４６）または配列番号４６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0351】

さらに別の実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４５）または配列番号４５に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４６）または配列番号４６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0352】

一実施形態では、キメラ受容体は、４－１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４４）または配列番号４４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４５）または配列番号４５に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列（配列番号４６）または配列番号４６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0353】

したがって、一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、４－１ＢＢ細胞内ドメインの核酸配列（配列番号４７）もしくは配列番号４７に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列、および／またはＣＤ２７細胞内ドメインの核酸配列（配列番号４８）もしくは配列番号４８に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列、および／またはＣＤ２８細胞内ドメインの核酸配列（配列番号４９）もしくは配列番号４９に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
（配列番号４７）
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ
（配列番号４８）
ＣＡＡＣＧＡＡＧＧＡＡＡＴＡＴＡＧＡＴＣＡＡＡＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＣＣＴＧＴＧＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＴＧＴＣＧＴＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＧＡＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＣＣＣ
（配列番号４９）
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ

【0354】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、
－配列番号４４の４－１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列または配列番号４４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号４５のＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列もしくは配列番号４５に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号４６のＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列もしくは配列番号４６に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列、ならびに
－配列番号３８～４１のＣＤ３ゼータ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号３８～４１に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
細胞内ドメインに含まれる配列は、同じフレームでかつ単一のポリペプチド鎖として発現される。

【0355】

したがって、一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、
－配列番号４７の４－１ＢＢ細胞内ドメインの核酸配列または配列番号４７に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列、および／または配列番号４８のＣＤ２７細胞内ドメインの核酸配列もしくは配列番号４８に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列、および／または配列番号４９のＣＤ２８細胞内ドメインの核酸配列もしくは配列番号４９に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列、ならびに
－配列番号４２または配列番号４３のＣＤ３－ゼータ細胞内ドメインの核酸配列、または配列番号４２または配列番号４３に対して９５～９９％の同一性を有する核酸配列
を含む。

【0356】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ランダムに、または指定された順序で互いに連結され得る少なくとも２つの異なるドメイン（例えば、Ｔ細胞共刺激分子の一次シグナルドメインおよび少なくとも１つの細胞内ドメイン）を含む。

【0357】

任意により、、例えば、長さが２～１０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸）の、短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、個別のシグナル伝達ドメイン間の連結を形成し得る。一実施形態では、グリシン－セリンダブレット（ＧＳ）が好適なリンカーとして使用される。一実施形態では、単一のアミノ酸、例えばアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）が、好適なリンカーとして使用される。

【0358】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上の、例えば２、３、４、５、またはそれより多い共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0359】

別の実施形態では、２つ以上の、例えば、２、３、４、５、またはそれより多い共刺激シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば、本明細書中上記に記載されるリンカー分子によって分離される。

【0360】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータの一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）およびＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号４６）を含む。

【0361】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータの一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）および４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号４４）を含む。

【0362】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）およびＣＤ２７のシグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号４５）を含む。

【0363】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインからＮ末端に配置されるリーダー配列をさらに含む。リーダー配列の非限定的な例は、ＣＤ８のリーダー配列であり、それは配列番号５０の配列を含み得るか、またはそれからなり得る。
（配列番号５０）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ

【0364】

一実施形態では、キメラ受容体はタグを、例えば、品質管理、濃縮、ｉｎ ｖｉｖｏの追跡などのためのタグなどを、さらに含む。タグは、Ｎ末端、Ｃ末端および／または内部に局在化され得る。本発明のキメラ受容体で使用され得るタグの例は、当業者に周知である。例えば、これらに限定されないが、本発明で使用されるタグは、ヘマグルチニンタグ、ポリアルギニンタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｍｙｃタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、Ｓ－タグ、ＨＡＴタグ、３ｘフラグタグ、カルモジュリン結合ペプチドタグ、ＳＢＰタグ、キチン結合ドメインタグ、ＧＳＴタグ、マルトース結合タンパク質タグ、蛍光タンパク質タグ（例えば、配列番号６８の配列を有するｅＧＦＰ）、Ｔ７タグ、Ｖ５タグおよびＸｐｒｅｓｓタグを含む群か、またはこれらからなる群から選択されるタグであり得る。タグの他の例としては、これらに限定されないが、ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号５１）またはＳＡＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号５２）が挙げられる。
（配列番号５１）
ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ
（配列番号５２）
ＳＡＷＳＨＰＱＦＥＫ
（配列番号６８）
ＭＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＶＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ

【0365】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、細胞内シグナル伝達ドメインからＣ末端に配置されるリボソーム切断部位をさらに含む。リボソーム切断部位の非限定的例は、Ｐ２Ａリボソーム切断部位ＡＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６１）である。

【0366】

第１の実施形態によれば、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３）（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）、任意により細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0367】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２マーカー結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0368】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２マーカー結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0369】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２マーカー結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0370】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0371】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0372】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0373】

第２の実施形態によれば、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つ）（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡである）、任意により細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、Ｔ細胞共刺激分子の単一の細胞内ドメイン、およびＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0374】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0375】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0376】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0377】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0378】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0379】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0380】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0381】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0382】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0383】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0384】

第３の実施形態によれば、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つ）（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡである）、任意により細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、Ｔ細胞共刺激分子の２つの細胞内ドメイン、およびＴ細胞一次シグナル伝達ドメインを含む。

【0385】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0386】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0387】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0388】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２６）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0389】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0390】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号２８）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0391】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、アミノ酸配列番号３０を含む）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0392】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３０）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0393】

別の実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0394】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、４－１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４４）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、およびＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン、ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは、配列番号３２）、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは、配列番号３６）、ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４５）、ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは、配列番号４６）、および、ＣＤ３－ゼータ一次シグナル伝達ドメイン（好ましくは、配列番号３８、３９、４０または４１）を含む。

【0395】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２、または７４～７６である）、（ｉｉ）ヒトＣＤ２８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含む。

【0396】

一実施形態では、ヒトＣＤ２８のヒンジ領域、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含むキメラ受容体の一部は、配列番号５３または５４のアミノ酸配列もしくは配列番号５３または５４に対して９５～９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
（配列番号５３）
ＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号５４）
ＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0397】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号５３もしくは５４のアミノ酸配列または配列番号５３もしくは５４と９５～９９％の同一性を有する配列もしくはアミノ酸配列に連結されているＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）を含む。

【0398】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むキメラ受容体の一部は、配列番号５５、５６、５７または５８のアミノ酸配列、または配列番号５５～５８に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号５５）
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号５６）
ＮＷＳＨＰＱＦＥＫＭＨＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＴＲＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号５７）
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号５８）
ＮＷＳＨＰＱＦＥＫＭＨＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＴＲＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0399】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号５５～５８のアミノ酸配列または配列番号５５～５８と９５～９９％の同一性を有する配列もしくはアミノ酸配列に連結されるＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）を含む。

【0400】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号７７で示される配列、または配列番号７７に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号７７）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＸ_１ＶＭＴＱＸ_２ＰＸ_３Ｘ_４ＬＸ_５ＶＸ_６Ｘ_７ＧＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＸ_１２ＱＫＰＧＱＸ_１３ＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＸ_１４ＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＸ_１５ＩＳＲＸ_１６ＥＸ_１７ＥＤＸ_１８Ｘ_１９ＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、Ｘ_１９は、ＧまたはＡである。

【0401】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、好ましくは配列番号５０の配列を有するリーダー配列をＮ末端にさらに含み、かつ配列番号８１または配列番号８１と９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むかまたはそれらからなる（ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡである）。
（配列番号８１）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＸ_１ＶＭＴＱＸ_２ＰＸ_３Ｘ_４ＬＸ_５ＶＸ_６Ｘ_７ＧＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１ＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＸ_１２ＱＫＰＧＱＸ_１３ＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＸ１４ＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＸ１５ＩＳＲＸ１６ＥＸ１７ＥＤＸ１８Ｘ_１９ＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0402】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号７８で示される配列、または配列番号７８に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号７８）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0403】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、好ましくは配列番号５０の配列を有するリーダー配列をＮ末端にさらに含み、かつ配列番号８２または配列番号８２に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
（配列番号８２）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＬＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0404】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号７９で示される配列、または配列番号７９に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号７９）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0405】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、好ましくは配列番号５０の配列を有するリーダー配列をＮ末端にさらに含み、かつ配列番号８３または配列番号８３に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
（配列番号８３）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＶＴＬＧＤＲＶＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＶＥＰＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0406】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号８０で示される配列、または配列番号８０に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号８０）
ＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0407】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、好ましくは配列番号５０の配列を有するリーダー配列をＮ末端にさらに含み、かつ配列番号８４または配列番号８４に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
（配列番号８４）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＶＱＬＶＱＳＧＰＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＨＩＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＹＰＧＤＧＳＴＱＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＲＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0408】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζの細胞内ドメイン、を含む。一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むキメラ受容体の一部は、配列番号５９または６０のアミノ酸配列、または配列番号５９または６０に対して９５～９９％の同一性を有する任意のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
（配列番号５９）
ＭＨＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＴＲＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
（配列番号６０）
ＭＨＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＴＲＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0409】

一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、配列番号５９または６０のアミノ酸配列または配列番号５９または６０と９５～９９％の同一性を有する配列もしくはアミノ酸配列に連結されるＨＬＡ－Ａ２結合ドメイン（好ましくは、配列番号６９または７３であり、ここで、Ｘ_１は、ＶまたはＩであり、Ｘ_２は、ＴまたはＳであり、Ｘ_３は、ＬまたはＳまたはＡであり、Ｘ_４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_５は、ＰまたはＳであり、Ｘ_６は、ＴまたはＳであり、Ｘ_７は、ＬまたはＰであり、Ｘ_８は、ＥまたはＤであり、Ｘ_９は、ＰまたはＲであり、Ｘ_１０は、ＡまたはＶであり、Ｘ_１１は、ＳまたはＴであり、Ｘ_１２は、ＬまたはＱであり、Ｘ_１３は、ＳまたはＡであり、Ｘ_１４は、ＶまたはＩであり、Ｘ_１５は、ＫまたはＴであり、Ｘ_１６は、ＶまたはＬであり、Ｘ_１７は、ＡまたはＰであり、Ｘ_１８は、ＬまたはＦであり、およびＸ_１９は、ＧまたはＡであり、より好ましくは、配列番号７０～７２または７４～７６の１つである）を含む。

【0410】

本発明はさらに、上記のようにＣＡＲを発現する免疫細胞、およびこうした免疫細胞の集団に関する。

【0411】

一実施形態では、本発明のＣＡＲをコードする核酸が免疫細胞中に導入され、それにより、細胞表面上に本発明のＣＡＲが発現する操作された細胞を生成する。

【0412】

本発明によれば、本発明の免疫細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を認識するキメラ受容体を発現するように遺伝子改変される。したがって、本発明の免疫細胞は、再指向された免疫細胞として定義され得る。

【0413】

本明細書で使用される用語「再指向される」は、本明細書に記載のキメラ受容体を保有する免疫細胞を指し、キメラ受容体は免疫細胞に、その免疫細胞が特異的であるか特異的であったかまたはそれによって活性化されるリガンドとは異なるリガンド（すなわち、ＨＬＡ－Ａ２）に結合し、かつそのリガンドによって活性化される能力を、付与する。一実施形態では、キメラ受容体は、免疫細胞がＨＬＡ－Ａ２によって活性化されるように、免疫細胞中で発現され得る。

【0414】

一実施形態では、本発明の免疫細胞は、哺乳動物免疫細胞、好ましくはヒト免疫細胞である。

【0415】

一実施形態では、本発明の免疫細胞は、凍結されかつ解凍されている。

【0416】

一実施形態では、免疫細胞は、リンパ球、骨髄由来細胞、およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。

【0417】

一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択されるリンパ球である。

【0418】

一実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、ダブルネガティブ（ＤＮ）Ｔ細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0419】

一実施形態では、免疫細胞は、例えば、Ｔヘルパー細胞、調節性Ｔ細胞、およびそれらの任意の組み合わせなどのＣＤ４^＋Ｔ細胞である。

【0420】

一実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４^＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、胸腺由来のＴｒｅｇ、または適応もしくは誘導されたＴｒｅｇである。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^＋調節性Ｔ細胞またはＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^－調節性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、好ましくはＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^＋調節性Ｔ細胞である。

【0421】

一実施形態では、免疫細胞は、例えば、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ細胞またはＣＤ８調節性Ｔ細胞などのＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

【0422】

好ましくは、免疫細胞は、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。一実施形態では、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋ＣＤ２８－調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１０３^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＦｏｘＰ３^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１２２^＋調節性Ｔ細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0423】

一実施形態では、免疫細胞は、ＩＮＦγ^＋ＩＬ１０^＋ＩＬ３４^＋ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＣ^ｌｏｗ調節性Ｔ細胞である。

【0424】

一実施形態では、免疫細胞はγδＴ細胞であり、好ましくは調節性γδＴ細胞である。

【0425】

一実施形態では、免疫細胞はＤＮ Ｔ細胞であり、好ましくは調節性ＤＮ Ｔ細胞である。

【0426】

一実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞であり、好ましくは調節性Ｂ細胞である。

【0427】

一実施形態では、調節性Ｂ細胞は、ＣＤ１９^＋ＣＤ２４^ｈｉＣＤ３８^ｈｉＢ細胞である。

【0428】

一実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞であり、好ましくは調節性ＮＫ細胞である。

【0429】

一実施形態では、免疫細胞は、骨髄由来細胞であり、好ましくは好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞、またはこれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。

【0430】

一実施形態では、免疫細胞は、マクロファージであり、好ましくは調節性マクロファージである。

【0431】

一実施形態では、免疫細胞は樹状細胞、好ましくは調節性樹状細胞である。

【0432】

好ましくは、免疫細胞は、例えば、細胞療法での使用に好適である任意の調節性免疫細胞などの、調節性免疫細胞である。

【0433】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＤＮ Ｔ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、調節性樹状細胞、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0434】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞である。ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞の例としては、これらに限定されないが、ＣＤ８^＋ＣＤ２８^－調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１０３^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＦｏｘＰ３^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋ＣＤ１２２^＋調節性Ｔ細胞、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0435】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性γδＴ細胞である。

【0436】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＤＮ Ｔ細胞である。

【0437】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｂ細胞である。調節性Ｂ細胞の例としては、これに限定されないが、ＣＤ１９^＋ＣＤ２４^ｈｉＣＤ３８^ｈｉＢ細胞が挙げられる。

【0438】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性ＮＫ細胞である。

【0439】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性マクロファージである。

【0440】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性樹状細胞である。

【0441】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、調節性Ｔ細胞、特に胸腺由来Ｔｒｅｇまたは適応性もしくは誘導性Ｔｒｅｇである。Ｔｒｅｇの例としては、ＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^＋調節性Ｔ細胞またはＣＤ４^＋ＦＯＸＰ３^－調節性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0442】

一実施形態では、調節性免疫細胞は、以下の表現型を有する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－など、例えば、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋など。好ましくは、調節性免疫細胞は、以下の表現型を有する：ＦｏｘＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、例えば、ＦｏｘＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－など、例えば、ＦｏｘＰ３^＋ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋など。

【0443】

一実施形態では、免疫調節細胞は、以下の表現型の少なくとも１つを提示する：ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋、ＦｏｘＰ３^＋、ＣＤ１２７^ｌｏ／－、ＣＴＬＡ－４^＋、ＣＤ３９^＋、Ｈｅｌｉｏｓ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋／ｈｉ、ＶＬＡ４^＋、ＬＦＡ１^＋、ＣＤ４９ｂ^ｉｎｔ、ＩＴＧｂ７^ｉｎｔ、ＰＳＧＬ－１^＋、ＩＣＯＳ^＋、ＧＩＴＲ^＋、ＰＤ－１^ｉｎｔ、Ｐｅｒｆ^ｌｏ／－、ＣＣＲ７^＋。一実施形態では、免疫調節細胞は、グランザイムＡおよび／またはグランザイムＢを発現しない。

【0444】

一実施形態では、分子の発現レベルの決定は、フローサイトメトリー、免疫蛍光または画像分析、例えば、高含量分析により行われる。好ましくは、分子の発現レベルの決定は、フローサイトメトリーによって行われる。一実施形態では、フローサイトメトリー分析を実施する前に、細胞を固定して透過性にし、それにより細胞内タンパク質を検出できるようにする。

【0445】

一実施形態では、細胞集団における分子の発現レベルの決定は、分子を発現する細胞集団の細胞（すなわち、分子の細胞「＋」）の割合を決定することを含む。好ましくは、分子を発現する細胞の割合は、ＦＡＣＳによって測定される。

【0446】

「発現する（または＋）」および「発現しない（または－）」という用語は、当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。この場合、「＋」に対応する細胞マーカーの発現レベルは、高いかまたは中程度であり、「＋／－」とも称され、「－」に対応する細胞マーカーの発現レベルはゼロ（ｎｕｌｌ）である。

【0447】

「ｌｏｗ」または「ｌｏ」または「ｌｏ／－」という用語は、当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指し、この場合、細胞マーカーの発現レベルは、全体として分析される細胞集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して低い。より具体的には、用語「ｌｏ」は、１つ以上の他の異なる細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する、異なる細胞集団を指す。

【0448】

「ｈｉｇｈ」または「ｈｉ」または「ｂｒｉｇｈｔ」という用語は、当技術分野で周知であり、目的の細胞マーカーの発現レベルを指し、この場合、細胞マーカーの発現レベルは、全体として分析される細胞集団におけるその細胞マーカーの発現レベルと比較して高い。

【0449】

一般的に、染色強度の上位２％、３％、４％、または５％の細胞は、「ｈｉ」と指定され、集団の上位半分にある細胞は「^＋」として分類される。蛍光強度の５０％を下回る細胞は「ｌｏ」細胞と称され、５％未満は「－」細胞と呼ばれる。

【0450】

目的の細胞マーカーの発現レベルは、このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色された細胞集団由来の細胞の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を、無関係の特異性を有するが同じアイソタイプ、同じ蛍光プローブを有しかつ同じ種に由来する蛍光標識抗体（アイソタイプ対照と称する）で染色された同じ細胞集団由来の細胞の蛍光強度（ＦＩ）と比較することにより、決定される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、かつアイソタイプ対照で染色された細胞と同等のＭＦＩまたはそれより低いＭＦＩを示す集団由来の細胞は、このマーカーを発現せずしたがって（－）または陰性と表示される。このマーカーに特異的な蛍光標識抗体で染色され、かつアイソタイプ対照で染色された細胞よりも高いＭＦＩ値を示す集団由来の細胞は、このマーカーを発現し、したがって（＋）または陽性と表示される。

【0451】

一実施形態では、本発明の免疫細胞は、その細胞表面で本発明のＣＡＲ、およびＨＬＡ－Ａ２以外の別のリガンドに結合する別の受容体（本明細書では「第２の受容体」と称する）を発現する。本発明によれば、この第２の受容体は、前述のとおり、細胞外リガンド結合ドメイン、任意によりヒンジ、任意により膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0452】

一実施形態では、第２の受容体は、内因性である（例えば、内因性ＴＣＲなど）。別の実施形態では、第２の受容体は外因性であり、その発現は、それをコードする核酸の形質転換または形質導入によって本発明の免疫細胞において誘導される。外因性受容体は、外因性ＴＣＲまたはキメラ抗原受容体であり得る。したがって、一実施形態では、本発明の免疫細胞は、２つのキメラ抗原受容体を発現し、最初の１つはＨＬＡ－Ａ２を認識し、２つ目は別個のリガンドを認識する。

【0453】

別の実施形態では、本発明の免疫細胞は、その細胞表面で本発明のＣＡＲ、およびＨＬＡ－Ａ２中の別のエピトープに結合する別の受容体（本明細書では「第２の受容体」と称する）を発現する。本発明によれば、この第２の受容体は、前述のとおり、細胞外リガンド結合ドメイン、任意によりヒンジ、任意により膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0454】

別の実施形態では、本発明の免疫細胞は、２つのＣＡＲを発現し、１つ目のＣＡＲは、ＨＬＡ－Ａ２の第１のエピトープを認識し、２つ目はＨＬＡ－Ａ２上の別個のエピトープを認識する。

【0455】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２の受容体は、別個の第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。第１の実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータなど）を含み、第２の受容体は、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８または４－１ＢＢとＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含む。第２の実施形態では、本発明のＣＡＲは、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、または４－１ＢＢとＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの組み合わせなど）を含み、第２の受容体は、Ｔ細胞一次シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータなど）を含む。

【0456】

その結果、これらの実施形態によれば、本発明の免疫細胞の完全な活性化は、本発明のＣＡＲのＨＬＡ－Ａ２への結合、およびそれが指向されるリガンドへの第２の受容体の結合の両方を必要とする。

【0457】

一実施形態では、第２の受容体によって認識されるリガンドは、罹患した組織もしくは臓器で、または自己免疫応答の部位で発現もしくは存在する。

【0458】

第２の受容体によって認識され得るリガンドの例としては、これらに限定されないが、一般的なヒトの食事からの食物抗原、自己抗原、吸入されたアレルゲン、摂取されたアレルゲンまたは接触アレルゲンが挙げられる。

【0459】

「一般的なヒトの食事からの食物抗原」という用語は、次の非限定的なリストの食物抗原などの、ヒトに一般的な食品に由来する免疫原性ペプチドを指す：リポカリンなどのウシ抗原、Ｃａ結合Ｓ１００、α－ラクトアルブミン、β－ラクトグロブリンなどのラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、カゼイン。食物抗原は、タイセイヨウサケ抗原（例えば、パルブアルブミン）、ニワトリ抗原（例えば、オボムコイド、オボアルブミン、Ａｇ２２、コンアルブミン、リゾチームまたはニワトリ血清アルブミン）、ピーナッツ抗原、エビ抗原（例えば、トロポミオシン）、コムギ抗原（例えば、凝集素またはグリアジン）、セロリ抗原（例えば、セロリプロフィリン）、ニンジン抗原（例えば、ニンジンプロフィリン）、リンゴ抗原（例えば、ソーマチン、リンゴ脂質転移タンパク質、リンゴプロフィリン）、ナシ抗原（例えば、ナシプロフィリンまたはイソフラボン還元酵素）、アボカド抗原（例えば、エンドキチナーゼ）、アンズ抗原（例えば、アンズ脂質伝達タンパク質）、モモ抗原（例えば、モモ脂質伝達タンパク質またはモモプロフィリン）、ダイズ抗原（例えば、ＨＰＳ、ダイズプロフィリンまたは（ＳＡＭ２２）ＰＲ－１０タンパク質）、断片、多様体、およびこれらの混合物。

【0460】

一実施形態では、自己抗原は、多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原または移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原である。

【0461】

「多発性硬化症関連抗原」という用語は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ／Ｃｌａｕｄｉｎｌ １）、熱ショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’－環状ヌクレオチド３’－ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、その断片、多様体および混合物を指す。

【0462】

用語「関節関連抗原」は、シトルリン置換環状および線状フィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、異種核リボ核タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ Ｂ１、ｈｎＲＮＰ Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、Ｉ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース６リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチルカルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ－７０、Ｓｃｌ－１００、リン脂質抗原、例えば、アニオン性カルジオリピンおよびホスファチジルセリン、中性に帯電したホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルコリン、フィブリリン、アグリカン、その断片、多様体および混合物を指す。

【0463】

用語「眼関連抗原」は、ＩＩ型コラーゲン、網膜アレスチン、Ｓ－アレスチン、視細胞間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、ベータクリスタリンＢ１、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質およびその断片、多様体ならびに混合物を指す。

【0464】

用語「ヒトＨＳＰ抗原」は、ヒトＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、それらの断片、多様体および混合物を指す。

【0465】

皮膚関連抗原の例としては、これらに限定されないが、ケラチノサイト抗原、真皮または表皮に存在する抗原、メラノサイト抗原（例えば、メラニンまたはチロシナーゼなど）、デスモグレイン（例えば、Ｄｓｇ１／３とも称され得るデスモグレイン１または３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、プレクチン、インテグリン（例えば、インテグリンα４β６）、コラーゲン（例えば、ＶＩＩ型コラーゲン）、ラミニン（例えば、ラミニン３３２またはラミニンγ１）、プラキン（例えば、エンボプラキン、ペリプラキン、またはデスモプラキン）、ケラチン（例えば、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１７およびＫＲＴ３１）、ケラチンフィラメント関連タンパク質、フィラグリン、コルネオデスモシン、およびエラスチンが挙げられる。

【0466】

一実施形態では、リガンドは、移植片拒絶またはＧＶＨＤに関与する抗原である。こうした抗原の例としては、これらに限定されないが、移植組織または宿主に特異的なＭＨＣ、β２－ミクログロブリン、ＡＢＯ系由来の抗原、アカゲザル系由来の抗原（特にＣ、ｃ、Ｅ、ｅおよびＤ系などの抗原）、およびイソヘマグルチニンが挙げられる。移植片拒絶反応またはＧＶＨＤに関与し得る抗原の他の例としては、これらに限定されないが、ＨＬＡ－ＤＲ（特に移植後の最初の６ヶ月間）、ＨＬＡ－Ｂ（特に移植後の最初の２年間）、マイナーな組織適合性抗原（ｍｉＨＡ、例えばＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－ＦおよびＨＬＡ－Ｇ）、ＭＨＣクラスＩ（ＢおよびＣ）に対応するＨＬＡ、ＭＨＣクラスＩＩ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯＡ、ＤＯＢ、ＤＱ、およびＤＲ）に対応するＨＬＡ、ならびにＭＨＣクラスＩＩＩ（例えば、補体系の構成成分）に対応するＨＬＡが挙げられる。

【0467】

自己抗原の他の例としては、これらに限定されないが、アクアポリン水チャネル（例えば、アクアポリン４水チャネル（ＡＱＰ４）など）、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン応答メディエータータンパク質５（ＣＲＭＰ５）、およびアンフィフィシン、電位依存性カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ－メチル－ｄ－アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチル－４－イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、チログロブリン、抗Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリンニコチン性シナプス後受容体、チロトロピン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（例えば、コラーゲンα－３（ＩＶ）鎖など）、リウマチ因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、アルファベータクリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５ｋＤａの抗原、ホスファチジルセリン、リボソームリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ－７０、Ｕ１－ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗－ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ－１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１－７０ ｋｄ ｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂガングリオシド、ＧＭ１、ａｓｉａｌｏ ＧＭ１、ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗肝臓腎臓ミクロソーム－１抗体（ＡＬＫＭ－１）、抗肝臓サイトゾル抗体－１（ＡＬＣ－１）、ＩｇＡ抗内膜筋抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌細胞壁抗原、胃壁細胞の内因性因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）、およびタンパク質チロシンホスファターゼ（例えば、ＩＡ２またはＩＣＡ５１２など）、ＰＬＡ２Ｒ１およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。

【0468】

一実施形態では、リガンドは、オボアルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン断片、それらの多様体および混合物を含む群から選択される。

【0469】

一実施形態では、リガンドは、オボアルブミン、その断片、多様体および混合物である。

【0470】

別の実施形態では、リガンドは、ＭＯＧ、それらの断片、多様体および混合物である。

【0471】

別の実施形態では、リガンドは、ＩＩ型コラーゲン、それらの断片、多様体および混合物である。

【0472】

別の実施形態では、リガンドは、ＩＬ２３Ｒ、それらの断片、多様体および混合物である。

【0473】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＨＬＡ－Ａ２とは異なるリガンドを認識する細胞外リガンド結合ドメインをさらに含む。一実施形態では、リガンド結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片である。

【0474】

一実施形態では、本発明のＣＡＲのリガンド結合ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２上の複数の異なるエピトープを認識する多機能抗体である。一実施形態では、本発明のＣＡＲのリガンド結合ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２上の２つの異なるエピトープを認識する二機能性抗体である。

【0475】

一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＨＬＡ－Ａ２結合ドメインおよびＨＬＡ－Ａ２とは異なるリガンドを認識する別のリガンド結合ドメインを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む。一実施形態では、リガンド結合ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２および別個のリガンドの両方を認識する二機能性抗体である。

【0476】

本発明のＣＡＲによって認識され得るＨＬＡ－Ａ２とは異なるリガンドの例は、上記に列挙されている。

【0477】

本発明はまた、上記で定義された免疫細胞の単離されたおよび／または実質的に精製された集団に関する。

【0478】

したがって、本発明の１つの目的は、免疫細胞の単離されたおよび／または実質的に精製された集団であり、集団の細胞はＣＡＲを含み、ＣＡＲはＨＬＡ－Ａ２を認識する。

【0479】

本明細書で使用される「単離された集団」は、その自然環境（末梢血など）から取り出され、単離、精製、または分離されておりかつ、天然に存在するが、それに基づき細胞が分離される細胞表面マーカーが欠如している他の細胞が少なくとも約７５％ない、８０％ない、８５％なく、好ましくは約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％ない、細胞集団を指す。

【0480】

本発明はさらに、上記で定義された免疫細胞の濃縮された集団に関する。

【0481】

一実施形態では、本発明の単離、精製および／または濃縮された免疫細胞集団は、凍結させ解凍されている。

【0482】

本発明の別の目的は、上記のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を含むベクターである。

【0483】

本発明において使用され得るベクターの例としては、これらに限定されないが、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドが挙げられる。

【0484】

ウイルスベクター技術は当技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、これらに限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスを含む。

【0485】

一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択可能なマーカー（例えば、参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第０１／９６５８４号、国際公開第０１／２９０５８号、および米国特許第６，３２６，１９３号に記載されている）を含む。

【0486】

哺乳動物細胞への遺伝子導入のために、多数のウイルスベースのシステムが開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系に便利なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で公知の技術を使用してベクターに挿入しレトロウイルス粒子にパッケージングできる。次に、組換えウイルスを単離して、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏのいずれかで対象の細胞に送達できる。複数のレトロウイルス系が当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。複数のアデノウイルスベクターが当技術分野で公知である。一実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。

【0487】

追加の転写活性エレメント、例えばプロモーターおよびエンハンサーは、転写開始の頻度を調節し得る。典型的には、コアプロモーターに関して、これらは開始部位の３０～１１０ｂｐ上流の領域にあるが、多数のプロモーターは開始部位の下流にも機能エレメントを含むことが近年示されており、エンハンサーエレメントは一般に、開始部位の５０～２０００ｂｐ上流にある。多くの場合プロモーターエレメント間の間隔は柔軟であり、そのため、エレメントが互いに反転するかまたは移動しても、プロモーター機能は保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐまで広げることができる。プロモーターに応じて、個々のエレメントが協調してまたは独立して機能し、転写を活性化できると考えられる。

【0488】

好適なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、これに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強力な構成的プロモーター配列である。好適なプロモーターの別の例は、伸長成長因子－ｌａ（ＥＦ－ｌａ）である。好適なプロモーターの別の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。しかし、これらに限定されないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ロングターミナルリピート（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バール・ウイルスの最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、これらに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターを含む、他の構成的プロモーター配列も使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、そのような発現が望まれる場合に作動可能に連結されているポリヌクレオチド配列の発現をオンにし、または発現が望まれない場合にその発現をオフにできる、分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、これらに限定されないが、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。さらに、２つ以上の遺伝子の効率的かつ協調的な発現を可能にする双方向プロモーターもまた、本発明において興味深い可能性がある。双方向性プロモーターの例としては、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第２００６２００８６９号に記載されているプロモーターが挙げられるが、これらに限定されず、ここで開示される双方向性プロモーターは、ｉ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはマウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）ゲノムに由来する第1の最小プロモーター配列、およびｉｉ）動物遺伝子に由来する完全に効率的なプロモーター配列、を含む。

【0489】

ＣＡＲポリペプチドまたはその一部分の発現を評価するために、免疫細胞に導入される発現ベクターはまた、例えばＣＤ３４もしくはレポーター遺伝子などの選択可能なマーカー遺伝子のいずれかまたはその両方を含み得、ウイルスベクターを介してトランスフェクトされるかまたは感染されることが求められる細胞の集団から発現する細胞の同定および選択を容易にできるようにする。他の態様では、選択可能なマーカーは、別個のＤＮＡ片に担持され得、同時トランスフェクション処置において使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方は適切な調節配列に隣接され、宿主細胞での発現を可能にし得る。有用な選択可能なマーカーとしては、例えば、ネオなどの抗生物質寛容遺伝子が挙げられる。

【0490】

本発明のいくつかの実施形態では、自殺遺伝子技術が使用され得る。それらの作用メカニズムに応じて、様々な自殺遺伝子技術が当技術分野で記述されている（Ｊｏｎｅｓら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０１４（５）：２５４）。非毒性薬物を毒性薬物に変換する遺伝子指向酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）の例としては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）およびシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）が挙げられる。他の例は、例えば誘導性Ｆａｓ（ｉＦａｓ）または誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）系などのアポトーシス成分に連結された薬物結合ドメインで構成されるキメラタンパク質である。他の例としては、抗ｃ－ｍｙｃ抗体の投与によりそれらの欠失を誘導するために操作された細胞の表面でｃ－ｍｙｃの過剰発現を誘導するなどの、治療用抗体によって媒介される系が挙げられる。ＥＧＦＲの使用は、ｃ－ｍｙｃ系と比較して同様の系として記載される。

【0491】

レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞を特定するため、かつ調節配列の機能を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエントの生物または組織に存在しないか、またはそれらの中で発現されない遺伝子であり、かつその発現が何らかの容易に検出可能な特性、例えば酵素活性によって明らかにされるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時期にアッセイされる。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を挙げることができる（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉら、２０００ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２）。好適な発現系は周知であり、既知の技術を使用して調製され得る、または商業的に入手され得る。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’フランキング領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。こうしたプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され得、プロモーター主導の転写を調節する能力について剤を評価するために使用され得る。

【0492】

細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターの文脈で、ベクターは、当技術分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に移入できる。

【0493】

ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、膜破壊などが挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を作製する方法は、当技術分野でよく知られている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。

【0494】

目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物、例えばヒトの細胞に挿入するために最も広く使用されている方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同５，５８５，３６２号を参照されたい。

【0495】

ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段は、高分子複合体、ナノ粒子（ナノスフェア、ナノカプセル）、ミクロスフェア、ビーズ、および水中油型エマルション、ミセル、混合ミセル、およびリポソームなどの脂質ベースの系などのコロイド分散系を含む。Ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。

【0496】

非ウイルス送達システムが利用される場合、例示的な送達ビヒクルはリポソームである。脂質配合物の使用は、宿主細胞へ核酸を導入するために（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで）企図される。別の態様では、核酸は脂質と関連し得る。脂質に関連する核酸は、リポソームの水性の内部に封入され得るか、リポソームの脂質二重層内に散在され得るか、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方に関連する連結分子を介してリポソームに接着され得るか、リポソームに封入され得るか、リポソームと複合体化され得るか、脂質を含む溶液に分散され得るか、脂質と混合され得るか、脂質と組み合わされ得るか、脂質の懸濁液として含まれ得るか、ミセルに含まれ得るかもしくはミセルと複合体化され得るか、または脂質と会合され得る。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセルとして、または「崩壊した」構造を有し、二重層構造で存在し得る。それらはまた、単に溶液中に散在され、おそらくサイズまたは形状が均一でない凝集体を形成する可能性がある。脂質は、天然由来または合成脂質であり得る、脂肪物質である。例えば、脂質としては、細胞質で自然に発生する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体（脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドなど）を含む化合物のクラスが挙げられる。

【0497】

使用に好適な脂質は、商業的供給源から入手できる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手できる。リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ＮＹ）から入手できる。コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから入手できる。ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）から入手できる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、約－２０℃で保存できる。クロロホルムは、メタノールよりも蒸発しやすいため、最適な溶媒として使用される。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単一のおよび多層の脂質媒体を含む総称である。リポソームは、リン脂質二重層膜および内部水性媒体を有する小胞構造を有するものとして特徴付けることができる。多重膜リポソームは、水性媒体によって分離される複数の脂質層を有する。これらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されると自発的に形成される。脂質成分は、閉構造が形成される前に自己再構成を受け、脂質二重層の間に水および溶質を閉じ込める（Ｇｈｏｓｈら、１９９１年、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ５：５０５－１０）。しかし、溶液中で通常の小胞構造とは異なる構造を有する組成物も含まれる。例えば、脂質はミセル構造をとるか、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン－核酸複合体も企図される。

【0498】

外因性核酸を宿主細胞中に導入するために使用される方法に関係なく、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイを行うことができる。こうしたアッセイは、例えば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ；例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）により、または本発明の範囲内にある剤を同定するための本明細書に記載のアッセイにより、特定のペプチドの存在または不在を検出することなどの、「生化学的」アッセイ、を含む。

【0499】

一実施形態では、本発明の遺伝子改変された免疫細胞は、ＲＮＡの導入により改変される。一実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡ ＣＡＲは、一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入できる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で生成される鋳型を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ転写によって生成され得る。任意の源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍＲＮＡ合成用の鋳型へとＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列または他の任意の適切なＤＮＡ供給源であり得る。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のための望ましい鋳型は、本発明のＣＡＲである。

【0500】

一実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然のＤＮＡ配列由来であり得る。一実施形態では、ＤＮＡは、目的の全長遺伝子または遺伝子の一部分である。遺伝子は、５’および／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部またはすべてを含んでよい。遺伝子は、エクソンおよびイントロンを含んでよい。一実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、ヒト遺伝子である。別の実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、５’および３’ＵＴＲを含むヒト遺伝子である。あるいは、ＤＮＡは、天然に存在する生物において通常発現しない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために一緒に連結される遺伝子の部分を含むものである。一緒に連結されるＤＮＡの部分は、単一の生物または複数の生物に由来し得る。

【0501】

ＰＣＲは、トランスフェクションに使用されるｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写用の鋳型を生成するために使用され得る。ＰＣＲを実施するための方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲで使用するためのプライマーは、ＰＣＲの鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的な領域を有するように設計される。本明細書で使用される「実質的に相補的」は、プライマー配列の大部分または塩基のすべてが相補的であるか、または１つ以上の塩基が非相補的であるかまたはミスマッチであるヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的である配列は、ＰＣＲに使用されるアニーリング条件下で、意図されるＤＮＡ標的とアニーリングまたはハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分に実質的に相補的であるように設計できる。例えば、プライマーは、５’および３’ＵＴＲを含み、細胞中で通常転写される遺伝子の一部分（オープンリーディングフレーム）を増幅するように設計できる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする遺伝子の一部分を増幅するように設計されてもよい。一実施形態では、プライマーは、５’および３’ＵＴＲのすべてまたは一部分を含み、ヒトｃＤＮＡのコード領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知である合成方法によって生成される。

【0502】

「フォワードプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流にある、ＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列の５’位を指すために使用される。「リバースプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、本明細書では、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列の３’位を指すために使用される。

【0503】

ＰＣＲに有用な任意のＤＮＡポリメラーゼを、本明細書に開示される方法で使用できる。試薬およびポリメラーゼは、複数の供給元から市販されている。

【0504】

安定性および／または翻訳効率を促進する能力を備えた化学構造も使用され得る。ＲＮＡは、好ましくは５’および３’ＵＴＲを有する。一実施形態では、５’ＵＴＲは、長さが０～３０００のヌクレオチドである。コード領域に追加される５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、これらに限定されないが、ＵＴＲの異なる領域にアニーリングするＰＣＲ用のプライマーの設計を含む、様々な方法で変更され得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクション後に最適な翻訳効率を達成するために必要とされる５’および３’ＵＴＲの長さを変更できる。５’および３’ＵＴＲは、目的の遺伝子の天然由来内因性５’および３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の遺伝子に内因性ではないＵＴＲ配列を、ＵＴＲ配列をフォワードプライマーおよびリバースプライマーに組み込むことによって、または鋳型の任意の他の変更によって付加し得る。目的の遺伝子に対して内因性でないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率の変更に有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵ豊富エレメントは、ｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られている。したがって、当技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づいて、３’ＵＴＲを選択または設計して、転写されたＲＮＡの安定性を高めることができる。

【0505】

一実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含み得る。あるいは、目的の遺伝子にとって内因性ではない５’ＵＴＲが上記のようにＰＣＲによって追加されている場合、５’ＵＴＲ配列を追加することによってコンセンサスコザック配列を再設計できる。コザック配列は、一部のＲＮＡ転写産物の翻訳効率を高めることができるが、効率的な翻訳を可能にするために、すべてのＲＮＡにとって必要であるとは考えられない。多くのｍＲＮＡに対するコザック配列の要件は、当技術分野で知られている。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞中で安定なＲＮＡウイルスに由来し得る。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類似体を３’または５’ＵＴＲで使用して、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨げることができる。

【0506】

遺伝子クローニングを必要とせずにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするには、転写のプロモーターが、転写される配列の上流のＤＮＡ鋳型に接着される必要がある。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に追加されると、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に組み込まれる。好ましい一実施形態では、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載されるように、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターとしては、これらに限定されないが、Ｔ３およびＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターが挙げられる。Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列は、当技術分野で公知である。

【0507】

好ましい実施形態では、ｍＲＮＡは、５’末端でのキャップおよび３’ポリ（Ａ）テールの両方を有し、それはリボソーム結合、翻訳の開始および細胞中のｍＲＮＡの安定性を決定する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡでは、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞での発現には好適でない長い鎖状産物を生成する。３’ＵＴＲの末端で線形化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後にポリアデニル化されたとしても真核生物のトランスフェクションには有効でない、通常のサイズのｍＲＮＡをもたらす。

【0508】

線形ＤＮＡ鋳型では、ファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を超えて転写産物の３’末端を伸長させ得る（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ ａｎｄ Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ、Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３：６２２３－３６（１９８５年）；Ｎａｃｈｅｖａ ａｎｄ Ｂｅｒｚａｌ－Ｈｅｒｒａｎｚ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５－６５（２００３年）。

【0509】

ＤＮＡ鋳型にポリＡ／Ｔストレッチを組み込む従来の方法は、分子クローニングである。しかし、プラスミドＤＮＡに組み込まれたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定性を引き起こし得る。そのため、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型は多くの場合、欠失および他の異常がかなり混入している。これがクローニング過程を、労力および時間を要するのみでなく、多くの場合信頼性の低いものにしている。そのため、クローニングなしにポリＡ／Ｔ３’ストレッチを用いてＤＮＡ鋳型を構築できる方法が強く望まれている。

【0510】

転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００Ｔテール（サイズは５０～５０００Ｔであり得る）などの、鋳型Ｔテールを含むリバースプライマーを使用することによってＰＣＲ中に、またはＰＣＲ後に、これらに限定されないが、ＤＮＡライゲーションまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ組換えを含む任意の他の方法により、産生され得る。ポリ（Ａ）テールは、ＲＮＡに安定性を付与し、ＲＮＡの分解を減少させる。一般に、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されるＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、１００～５０００のアデノシンである。

【0511】

ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、大腸菌ポリＡポリメラーゼ（Ｅ－ＰＡＰ）などのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写後にさらに伸長され得る。一実施形態では、ポリ（Ａ）テールの長さを１００ヌクレオチドから３００～４００ヌクレオチドに増加させることにより、ＲＮＡの翻訳効率が約２倍増加する。さらに、３’末端への異なる化学基の接着は、ｍＲＮＡの安定性を向上し得る。こうした接着は、改変／人工ヌクレオチド、アプタマーおよび他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰ類似体を、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに組み込むことができる。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性をさらに高めることができる。

【0512】

ＲＮＡの５’キャップもまた、ＲＮＡ分子に安定性をもたらす。好ましい実施形態では、本明細書に開示される方法によって産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり本明細書に記載されている技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２９：４３６－４４４（２００１年）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉら、ＲＮＡ，７：１４６８－９５（２００１年）；Ｅｌａｎｇｏら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３３０：９５８－９６６（２００５年））。

【0513】

本明細書に開示される方法によって産生されるＲＮＡはまた、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存性リボソームの結合を開始し翻訳の開始を容易にする、ウイルス、染色体、または人工的に設計された任意の配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤、界面活性剤などの、細胞透過性および生存能力を促進する因子を含み得る、細胞エレクトロポレーションに好適な任意の溶質を含んでもよい。

【0514】

ＲＮＡは、複数の異なる方法、例えば、エレクトロポレーション（Ａｍａｘａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ－ＩＩ（Ａｍａｘａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃｏｌｏｇｎｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、Ｍａｓｓ．））、またはＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ、Ｄｅｎｖｅｒ、Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ、Ｈａｍｂｕｒｇ Ｇｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマーカプセル化、ペプチド媒介トランスフェクション、または「遺伝子銃」などのバイオリスティック粒子送達システムを含むがこれらに限定されない、市販の方法、のいずれかを使用して標的細胞に導入され得る（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａら、Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、１２（８）：８６１－７０（２００１年）を参照されたい。

【0515】

一実施形態では、ＣＡＲ配列は、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現するレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターは、形質導入された細胞を担体として使用するか、またはカプセル化されるか、結合されるかまたは裸のベクターの無細胞の局所もしくは全身の送達を用いて、様々な種類の真核細胞中に、ならびに組織および生物全体中に送達され得る。使用される方法は、安定した発現が必要とされるか十分である、任意の目的のためであり得る。

【0516】

別の実施形態では、ＣＡＲ配列は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡを使用して細胞に送達される。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡ ＣＡＲは、トランスフェクトされた細胞を担体として使用するか、またはカプセル化されるか、結合されるかまたは裸のｍＲＮＡの無細胞の局所的もしくは全身的な送達を用いて、様々な種類の真核細胞中に、ならびに組織および生物全体中に送達され得る。使用される方法は、一過性の発現が必要とされるか十分である、任意の目的のためであり得る。

【0517】

別の実施形態では、所望のＣＡＲは、トランスポゾンによって細胞中で発現され得る。

【0518】

一実施形態では、本発明の免疫細胞はＴ細胞である。本発明のＴ細胞の拡張および遺伝子改変の前に、Ｔ細胞の供給源が対象から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、複数の供給源から得ることができる。本発明のある実施形態では、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用できる。本発明のある実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離またはＳｅｐａｘ分離システムなどの、当業者に公知の任意の数の技術を使用して、対象から収集された血液単位から得ることができる。好ましい一実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産生物は典型的に、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む、リンパ球を含む。一実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れることができる。本発明の一実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替的実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを含まず、マグネシウムを含まない場合もあり、またはすべてではないが、多くの二価カチオンを含まない場合もある。洗浄後に、細胞は、例えば、Ｃａ^２＋非含有、Ｍｇ^２＋非含有のＰＢＳ、プラズマライトＡ、またはバッファーの有無にかかわらず他の生理食塩水などの、様々な生体適合性バッファーに再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁させてもよい。

【0519】

別の実施形態では、Ｔ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離により、または向流遠心溶出により、赤血球を溶解し単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋などのＴ細胞の特定の亜集団、特に、例えばＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^ｌｏＣＤ４５ＲＡ^＋などの、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ１２７^ｌｏは、陽性または陰性の選択技術によってさらに分離できる。例えば、一実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な期間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３ｘ２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションにより単離される。一実施形態では、期間は約３０分である。さらなる実施形態では、期間は、３０分～３６時間またはそれより長い範囲であり、その間のすべての整数値の範囲である。さらなる実施形態では、期間は少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態では、期間は１０～２４時間である。好ましい一実施形態では、インキュベーション時間は２４時間である。白血病患者からのＴ細胞の単離のために、２４時間などの長いインキュベーション時間の使用は、細胞収量を増加させ得る。腫瘍組織からまたは免疫不全の個人から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合などの、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況では、より長いインキュベーション時間を用いて、Ｔ細胞を単離し得る。したがって、Ｔ細胞がＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合できる時間を単に短縮することまたは延長することにより、かつ／またはＴ細胞に対するビーズの比を増減することにより（ここでさらに記載する）、Ｔ細胞の亜集団を培養開始時にまたはプロセス中の他の時点でそれに関して、またはそれに対して、優先的に選択できる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比を増減することにより、Ｔ細胞の亜集団を培養開始時にまたは他の所望の時点で、それに関して、またはそれに対して、優先的に選択できる。当業者であれば、複数の選択ラウンドもまた、本発明の文脈において使用され得ることを認識するであろう。

【0520】

別の実施形態では、選択手順を実行し、「未選択」細胞を活性化および拡張プロセスで使用することが望ましい場合がある。「未選択」細胞は、さらなる選択ラウンドに供してもよい。陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択細胞に特有の表面マーカーに指向された抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに指向されたモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接着またはフローサイトメトリーによる細胞の分取および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４^＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。ある実施形態では、典型的には以下の表現型ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ６２Ｌ^ｈｉ、ＧＩＴＲ^＋、およびＦｏｘＰ３^＋を有する調節性Ｔ細胞を濃縮するか、または陽性選択することが望ましい場合がある。あるいは、ある実施形態では、Ｔ調節性細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇させられる。

【0521】

陽性または陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞の濃度および表面（例えば、ビーズなどの粒子）を変えることができる。ある実施形態では、細胞とビーズの最大の接触を確保するために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、濃度２０億細胞／ｍｌが使用される。一実施形態では、濃度１０億細胞／ｍｌが使用される。さらなる実施形態では、１億を超える細胞／ｍｌが使用される。さらなる実施形態では、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用することにより、細胞収量、細胞活性化、および細胞拡張が増加し得る。さらに、高細胞濃度を使用することで、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）由来の細胞をより効率的に捕捉できる。こうした細胞の集団は、治療的価値を有し得、これらを得ることが望ましい。

【0522】

刺激用のＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結することもできる。理論に拘束されることを望むものではないが、凍結およびその後の解凍ステップは、細胞集団中の顆粒球およびある程度まで単球を除去することにより、より均一な産物をもたらす。血漿および血小板を除去する洗浄ステップの後で、細胞は凍結溶液に懸濁され得る。多くの凍結溶液およびパラメータは、当技術分野で公知であり、この状況で有用であり、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％プラズマライトＡ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、７．５％ＤＭＳＯを含む培地、または例えば、ヘスパンおよびプラズマライトＡを含む他の好適な細胞凍結培地を使用することを伴い、細胞を次いで、毎分１℃の速度で－８０℃に凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相に貯蔵する。制御された凍結の他の方法を使用でき、ならびに－２０℃でまたは液体窒素中で制御されない凍結を直接使用できる。

【0523】

ある実施形態では、凍結保存された細胞は、本明細書に記載されるとおり解凍され、かつ洗浄され、活性化の前に室温で１時間静置される。

【0524】

また、本発明の文脈において企図されるのは、本明細書に記載されるような拡張された細胞が必要となり得る前の期間において、対象から血液試料またはアフェレーシス産物を収集することである。したがって、拡張される細胞の供給源を、必要な任意の時点で収集でき、かつＴ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載されているものなど、Ｔ細胞療法から利益を得るであろう任意の数の疾患または状態に対するＴ細胞療法での後の使用のために、単離しかつ凍結することができる。一実施形態では、血液試料またはアフェレーシスは、一般的に健康な対象から採取される。ある実施形態では、血液試料またはアフェレーシスは、疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない一般的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、後の使用のために単離され、かつ凍結される。ある実施形態では、Ｔ細胞は、拡張され、凍結され、後で使用され得る。

【0525】

望ましいＣＡＲを発現するためのＴ細胞（好ましくはＴｒｅｇ細胞）の遺伝子改変の前または後にかかわらず、Ｔ細胞は、例えば米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号および同第２００６／０１２１００５号（これらは、参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の方法を一般に用いて、活性化され、拡張され得る。

【0526】

一般に、本発明のＴ細胞（好ましくはＴｒｅｇ細胞）集団は、それに接着されたＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する剤およびＴ（好ましくはＴｒｅｇ）細胞集団の細胞の表面の共刺激分子を刺激するリガンドを有する表面との接触により拡張される。特に、Ｔ（好ましくはＴｒｅｇ）細胞集団は、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、または表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によって、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテインキナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触などによってなど、本明細書に記載されるとおり刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子を共刺激するために、アクセサリー分子を結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。いずれかのＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が使用され得る。抗ＣＤ２８抗体の例としては、これらに限定されないが、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられる。当技術分野で一般に公知である他の拡張方法が使用され得る（Ｂｅｒｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７、１９９８年、Ｈａａｎｅｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８、１９９９年、Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（ｌ－２）：５３－６３、１９９９年）。

【0527】

ある実施形態では、Ｔ（好ましくは、Ｔｒｅｇ）細胞集団の細胞に対する一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、異なるプロトコルによってもたらされ得る。例えば、各シグナルをもたらす剤は、溶液中にあるか、または表面に結合されていてもよい。表面に結合されるとき、剤は同じ表面に結合され得るか（すなわち、「シス」形成）、または別個の表面に結合され得る（すなわち、「トランス」形成）。あるいは、１つの剤が表面に結合され、他方の剤が溶液中にあってもよい。一実施形態では、共刺激シグナルをもたらす剤は細胞表面に結合され、一次活性化シグナルを提供する剤は溶液中にあるか、または表面に結合される。ある実施形態では、両方の剤が溶液中にあり得る。別の実施形態では、剤は、可溶性形態であり得、次いで、Ｆｃ受容体を発現する細胞、または抗体、または剤に結合する他の結合剤などの、表面に架橋され得る。これに関して、本発明におけるＴ細胞の活性化および拡張における使用が企図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）についての、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２００４０１０１５１９号および同第２００６００３４８１０号を参照されたい。

【0528】

一実施形態では、２つの剤は、同じビーズ上、すなわち「シス」、または別個のビーズに、すなわち「トランス」のいずれかで、ビーズ上に固定化される。一例として、一次活性化シグナルを提供する剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片であり、共刺激シグナルを提供する剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片であり、両方の剤は、同じ分子量で同じビーズに共固定化される。一実施形態では、ＣＤ４^＋Ｔ細胞拡張およびＴ細胞成長のためにビーズに結合された各抗体の比１：１を使用する。本発明の特定の態様では、ビーズに結合された抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比は、１：１の比を使用して観察される拡張と比較してＴ細胞拡張が増加していることが観察されるように使用される。１つの特定の実施形態では、１：１の比を使用して観察される拡張と比較して、約１～約３倍の増加が観察される。一実施形態では、ビーズに結合されたＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比は、１００：１～１：１００およびそれらの間のすべての整数値の範囲である。本発明の一態様では、抗ＣＤ３抗体よりも多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合され、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比は１未満である。本発明のある実施形態では、ビーズに結合された抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体の比は、２：１より大きい。特定の一実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。他の実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。さらなる実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。別の実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。１つの好ましい実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：１０のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。他の実施形態では、ビーズに結合された抗体の１：３のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。さらに別の実施形態では、ビーズに結合された抗体の３：１のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。

【0529】

１：５００～５００：１のおよびその間の任意の整数値の粒子対細胞の比を使用して、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激できる。当業者が容易に理解できるように、粒子対細胞の比は、標的細胞に対する粒子サイズに依存し得る。例えば、サイズの小さいビーズは少数の細胞にのみ結合し得るが、大きいビーズは多くの細胞に結合できる。ある実施形態では、細胞対粒子の比は、１：１００～１００：１およびその間の任意の整数値の範囲であり、さらなる実施形態では、比は、１：９～９：１、およびその間の任意の整数値を含み、Ｔ細胞を刺激するために使用される。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変化し得る。しかし、特定の好ましい値としては、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１が挙げられ、１つの好ましい比は、Ｔ細胞あたり少なくとも１：１の粒子である。１つの実施形態では、１：１以下の粒子対細胞の比が使用される。特定の一実施形態では、好ましい粒子：細胞比は１：５である。さらなる実施形態では、粒子対細胞比は、刺激の日に応じて変化させ得る。例えば、一実施形態では、粒子対細胞比は、１日目に１：１～１０：１であり、追加の粒子は、１：１～１：１０の最終的な比で（添加の日の細胞数に基づく）、その後最大１０日間、毎日または隔日で細胞に添加される。１つの特定の実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の１日目に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調整される。別の実施形態では、粒子は、毎日または隔日で、刺激の１日目には最終比１：１、３日目および５日目には最終比１：５まで添加される。別の実施形態では、粒子対細胞比は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調整される。別の実施形態では、粒子は、毎日または隔日で、刺激の１日目には最終比１：１、３日目および５日目には最終比１：１０まで添加される。当業者であれば、様々な他の比が本発明での使用に好適であり得ることを理解するであろう。特に、比は、粒子サイズならびに細胞のサイズおよびタイプによって異なる。

【0530】

本発明のさらなる実施形態では、Ｔ細胞（好ましくはＴｒｅｇ細胞）は、剤でコーティングされたビーズと組み合わされ、ビーズおよび細胞はその後分離され、次いで細胞が培養される。代替的実施形態では、培養前に、剤でコーティングされたビーズおよび細胞は分離されないが、一緒に培養される。さらなる実施形態では、ビーズおよび細胞は、磁力などの力を加えることによって最初に濃縮され、その結果、細胞表面マーカーのライゲーションが増加し、それによって細胞刺激を誘導する。

【0531】

一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が接着される常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）をＴｒｅｇ細胞集団の細胞と接触させることにより連結され得る。一実施形態では、細胞（例えば、１０^４～１０^９Ｔ細胞）およびビーズ（例えば、１：１の比のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標登録）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ常磁性ビーズ）は、緩衝液、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオンを含まない）中で組み合わされる。この場合も、当業者であれば、任意の細胞濃度を使用し得ることを容易に理解できる。例えば、標的細胞は、試料中で非常にまれであり得、かつ試料の０．０１％のみを構成し得るか、または試料全体（すなわち、１００％）が、目的の標的細胞を含み得る。したがって、いずれの細胞数も本発明の範囲内である。ある実施形態では、細胞と粒子の最大の接触を確保するために、粒子および細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、約２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。別の実施形態では、１億個を超える細胞／ｍｌが使用される。さらなる実施形態では、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０００万細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億細胞／ｍｌからの細胞の濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用することにより、細胞収量、細胞活性化、および細胞拡張が増加し得る。さらに、高細胞濃度を使用することにより、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞をより効率的に捕捉できる。こうした細胞の集団は、治療的価値を有し得、ある実施形態ではこれらの集団を得ることが望ましいであろう。

【0532】

本発明の一実施形態では、混合物は、数時間（約３時間）～約１４日間またはその間の任意の時間整数値の間培養されてよい。別の実施形態では、混合物は、２１日間培養され得る。本発明の一実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、約８日間一緒に培養される。別の実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、２～３日間一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上になり得るように、刺激が数サイクルの刺激が望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適した条件としては、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ－αまたは当業者に公知である細胞の成長のための他の添加物を含む、増殖および生存に必要な因子を含み得る適切な培地（例えば、Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ＭｅｄｉａまたはＲＰＭＩ Ｍｅｄｉａ１６４０、またはＸ－ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ））が挙げられる。細胞の成長のための他の添加剤としては、これらに限定されないが、界面活性剤、プラズマ酸塩、および還元剤、例えば、Ｎ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールが挙げられる。培地としては、ＲＰＭＩ １６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０オプティマイザーを挙げることができ、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加されており、血清を含まないか、または適切な量の血清（または血漿）もしくは規定されたホルモンのセット、および／またはＴ細胞の成長および増殖に十分な量のサイトカイン（複数可）が補充されているかのいずれかである。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験培養にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養には含まれない。標的細胞は、成長を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および大気（例えば、空気および５％ＣＯ_２）で維持される。

【0533】

様々な刺激時間に供されたＴ細胞は、異なる特性を呈し得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーシスされた末梢血単核細胞産物は、細胞毒性またはサプレッサーＴ細胞集団（Ｔｃ、ＣＤ８^＋）よりも多くのヘルパーＴ細胞集団（Ｔｈ、ＣＤ４^＋）を有する。ＣＤ３受容体およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のｅｘ ｖｉｖｏ拡張は、約８～９日より前は主にＴｈ細胞からなるＴ細胞の集団を生成し、一方で約８～９日後に、Ｔ細胞の集団はより多くのＴｃ細胞の集団を含む。したがって、治療の目的に応じて、主にＴｈ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利であり得る。同様に、Ｔｃ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合は、このサブセットをさらに拡張することが有益であり得る。

【0534】

さらに、ＣＤ４マーカーおよびＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは大幅に、しかし多くの部分において、細胞拡張プロセスの過程で再現的に、異なる。したがって、こうした再現性は、特定の目的のために活性化されたＴ細胞産物を調整する能力を可能にする。

【0535】

本発明の一実施形態では、例えば参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００７１１０７８５号に記載されるように、調節性Ｔ細胞を得るために、Ｔ細胞をラパマイシンの存在下で培養してもよい。調節性Ｔ細胞を生成する別の方法は、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第２０１６０２４４７０号に記載され、ここでは、Ｔ細胞は、例えばＴＣＲ／ＣＤ３抗体などのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３活性化因子、例えばＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ ＢＢ）、ＧＩＴＲ、Ｂ７－１／２、ＣＤ５、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ４０またはＣＤ１３７抗体などのＴＣＲ共刺激因子活性化因子、およびラパマイシンと共に培養される。

【0536】

本発明の一実施形態では、ＣＡＲの発現により遺伝子改変されたＴ細胞は、ＲＯＲ－Ｃ、Ｆｏｘｏ１、Ｔ－ｂｅｔ、またはＧａｔａ ３、ｃ－Ｍａｆ、ＡｈＲなどの少なくとも１つの細胞内因子の発現により遺伝子改変されていてもよい。一実施形態では、本発明の遺伝子改変された免疫細胞は、Ｆｏｘｏ１を発現する。

【0537】

一実施形態では、本発明の遺伝子改変された細胞は、例えば、同種Ｔ細胞またはＴｒｅｇ細胞などの同種免疫細胞であり得る。例えば、同種免疫細胞は、機能的ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えば、ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩの発現がないか、または機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現のない免疫細胞であり得る。

【0538】

一実施形態では、機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、その表面にいかなる機能的ＴＣＲも発現しないように操作できるか、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作できるか、またはその表面に機能的ＴＣＲをほとんど生成しないように操作できる。あるいは、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異型または切り詰め型の発現により、実質的に損なわれたＴＣＲを発現できる。「実質的に損なわれたＴＣＲ」という用語は、宿主において、このＴＣＲが有害な免疫反応を誘発しないことを意味する。

【0539】

別の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変細胞は、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作できる。例えば、本明細書に記載の免疫細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１および／またはＨＬＡクラスＩＩまたは非古典的ＨＬＡ分子がダウンレギュレートされるように操作できる。

【0540】

別の実施形態では、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ、ならびにＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩなどの機能的ＨＬＡを欠いてもよい。

【0541】

機能性ＴＣＲおよび／ＨＬＡの発現を欠く改変免疫細胞（例えば、改変されたＴ細胞またはＴｒｅｇ細胞など）は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウトまたはノックダウンを含む、任意の好適な手段によって得ることができる。例えば、免疫細胞としては、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、クラスタ化規則的スペース間短鎖パリンドローム反復（ＣＲＩＳＰＲ）転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても公知である）、またはｍｅｇａＴＡＬ（ＴＡＬエフェクターとｍｎ切断ドメインとを組み合わせたもの）を用いる、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡのノックダウンを挙げることができる（Ｏｓｂｏｒｎら、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＣＲ Ｇｅｎｅ Ｅｄｉｔｉｎｇ Ａｃｈｉｅｖｅｄ ｂｙ ＴＡＬＥＮｓ，ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９，ａｎｄ ｍｅｇａＴＡＬ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ」Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１６年Ｍａｒ；２４（３）：５７０－８１）。

【0542】

一実施形態では、ＴＣＲ発現および／またはＨＬＡ発現は、Ｔ細胞においてＴＣＲおよび／またはＨＬＡをコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。Ｔ細胞中のｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの発現は、例えばレンチウイルス発現系などの任意の従来の発現系を使用して達成できる。ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩ遺伝子の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは、例えば米国特許第２００７／００３６７７３号に記載されている。ＴＣＲの成分の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許第２０１２／０３２１６６７号に記載されている。

【0543】

本明細書で使用される「ＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、クラスタ化規則的スペース間短鎖パリンドローム反復のセット、またはこうした反復のセットを含む系を指す。本明細書で使用される「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、ＣＲＩＳＰＲおよびＣａｓに由来する系を指し、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子のサイレンシングまたは変異に使用できる。

【0544】

天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％、および配列決定された古細菌の約９０％に見られる。Ｇｒｉｓｓａら（２００７年）ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ８：１７２。この系は、プラスミドおよびファージなどの外来遺伝エレメントに対する寛容を付与する原核生物の免疫系の一種であり、獲得免疫の形態を提供する。Ｂａｒｒａｎｇｏｕら（２００７年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１５：１７０９－１７１２；Ｍａｒｒａｇｉｎｉら（２００８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２２：１８４３－１８４５。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、マウスまたは霊長類などの真核生物の遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、促進、変更）において使用するために改変されている。Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔら（２０１２年）Ｎａｔｕｒｅ ４８２：３３１－８。これは、特別に設計されたＣＲＩＳＰＲと１つ以上の適切なＣａｓを含むプラスミドを真核細胞に導入することによって達成される。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座と呼ばれることもあるＣＲＩＳＰＲ配列は、交互の反復およびスペーサーを含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲでは、スペーサーは通常、プラスミドまたはファージ配列などの、細菌にとって外来である配列を含む。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系では、スペーサーは、ＴＣＲまたはＨＬＡ遺伝子配列に由来する。ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座のＲＮＡは構成的に発現され、Ｃａｓタンパク質により小さいＲＮＡへと処理される。これらは、反復配列が隣接するスペーサーを含む。ＲＮＡは、他のＣａｓタンパク質を誘導して、ＲＮＡまたはＤＮＡレベルで外因性の遺伝的エレメントを抑制する。Ｈｏｒｖａｔｈら、（２０１０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２７：１６７－１７０；Ｍａｋａｒｏｖａら、（２００６年）Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｄｉｒｅｃｔ１：７。スペーサーはしたがって、ｓｉＲＮＡと同様に、ＲＮＡ分子の鋳型として機能する。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３年）Ｓｃｉｅｎｃｅ３４１：８３３－８３６。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系はしたがって、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡ遺伝子の編集（塩基対の不可または削除）、またはＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの発現を減少させる早期の停止の導入に使用できる。あるいは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系をＲＮＡ干渉のように使用し、ＨＬＡ遺伝子を可逆的様式でオフにすることもできる。哺乳動物細胞では、例えば、ＲＮＡはＣａｓタンパク質をＴＣＲおよび／またはＨＬＡプロモーターに誘導し、ＲＮＡポリメラーゼを立体的にブロックできる。

【0545】

ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、当技術分野で公知の技術、例えば、米国特許第２０１４００６８７９７号、およびＣｏｎｇ（２０１３年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３に記載されているものを使用して生成できる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する当技術分野で公知である、例えば、Ｔｓａｉ（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、３２：６ ５６９－５７６、米国特許第８，８７１，４４５号、同第８，８６５，４０６号、同第８，７９５，９６５号、同第８，７７１，９４５号、および同第８，６９７，３５９号に記載される、他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系もまた生成し得る。

【0546】

「ＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡに対するＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡを編集するために使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することによって人工的に生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の一部分を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に結合するように操作されてよい。操作されたＴＡＬＥをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ配列を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を生成できる。次に、これらの酵素を細胞に導入し、そこでこれらの酵素をゲノム編集に使用できる。Ｂｏｃｈ（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５－６；およびＢｏｃｈら（２００９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：１５０９－１２；Ｍｏｓｃｏｕら（２００９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２６：３５０１。

【0547】

ＴＡＬＥは、キサントモナス属細菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目と１３番目のアミノ酸を除き、繰り返される高度に保存された３３～３４のアミノ酸配列を含む。これらの２つの位置は、非常に可変性であり、特定のヌクレオチド認識との強い相関を示している。したがって、それらを、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作できる。ＴＡＬＥＮを産生するには、ＴＡＬＥタンパク質を、野生型または変異型のＦｏｋ１エンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）に融合する。ＴＡＬＥＮでの使用のために、いくつかの変異をＦｏｋｌに行った。これらは、例えば、切断特異性または活性を改善する。Ｃｅｒｍａｋら（２０１１年）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒら（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒら（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１－７３４；Ｗｏｏｄら（２０１１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎら（２０１０年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７４－７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋら（２００７年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６－７９３；およびＧｕｏら（２０１０年）／Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６。Ｆｏｋｌドメインは二量体として機能し、適切な配向および間隔を有する標的ゲノム中の部位に対する固有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋ１切断ドメインの間のアミノ酸残基の数、および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基の数はどちらも、高レベルの活性を達成するための重要なパラメータであると考えられる。Ｍｉｌｌｅｒら（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３－８。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ ＴＡＬＥＮを細胞内で使用して、二本鎖中断（ＤＳＢ）を生成できる。修復メカニズムが非相同末端結合を介して中断を不適切に修復すると、突然変異が中断部位に導入され得る。例えば、不適切な修復は、フレームシフト変異を導入し得る。あるいは、外来ＤＮＡを、外来ＤＮＡの配列および染色体配列に応じて、ＴＡＬＥＮと共に細胞に導入することもできる。このプロセスを使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子中の欠陥を修正するか、こうした欠陥をｗｔ ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子に導入して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を減少させることができる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に固有のＴＡＬＥＮは、モジュール式コンポーネントを使用する様々なスキームを含む、当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築できる。Ｚｈａｎｇら（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９－５３；Ｇｅｉｂｌｅｒら（２０１１年）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６：ｅｌ９５０９。

【0548】

「ＺＦＮ」または「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡに対するＺＦＮ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡを阻害するためのＺＦＮ」は、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡ遺伝子の編集に使用できる人工ヌクレアーゼであるジンクフィンガーヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合されたＦｏｋ１ヌクレアーゼドメイン（またはその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上のジンクフィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌら（２０１１年）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １８８：７７３－７８２；およびＫｉｍら（１９９６年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１１５６－１１６０。ジンクフィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンによって安定化された小さいタンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは、例えば、Ｃｙｓ_２Ｈｉｓ_２を含んでよく、約３ｂｐの配列を認識できる。既知の特異性の様々なジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５、または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを生成できる。ファージディスプレイ、酵母ワンハイブリッド系、細菌ワンハイブリッド系およびツーハイブリッド系、ならびに哺乳動物細胞を含む、様々な選択およびモジュラーアセンブリ技術が、特定の配列を認識するジンクフィンガー（およびその組み合わせ）を生成するために利用できる。

【0549】

ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮはＤＮＡを切断するために二量体化する必要がある。したがって、ＺＦＮのペアが、非パリンドロームＤＮＡ部位を標的にするために必要とされる。２つの個々のＺＦＮは、それらのヌクレアーゼを適切に離間させてＤＮＡの反対の鎖に結合する必要がある。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅら（１９９８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：１０５７０－５。またＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ内で二本鎖の中断を生じることができ、これは不適切に修復された場合フレームシフト変異を生じ得、細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらす。ＺＦＮはまた、相同組換えと共に使用されてＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子中で突然変異を起こすこともできる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築できる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ（２０１１年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１８：８０７－８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３年）Ｂｌｏｏｄ １２２：１３４１－１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎら（２００８年）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００－７；Ｑｕｏら（２０１０年）／Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許第２０１１／０１５８９５７号、および米国特許第２０１２／００６０２３０号を参照されたい。

【0550】

「メガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するメガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのメガヌクレアーゼ」は、大きい（＞１４塩基対）認識部位を有する単量体エンドヌクレアーゼを指し、これはＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の編集に使用できる。メガヌクレアーゼ（ｍｎ）は、細菌のホーミングエンドヌクレアーゼに由来し固有の標的部位用に操作された、天然ヌクレアーゼ活性を有する単量体タンパク質である。ホーミングエンドヌクレアーゼは、それらの宿主ゲノム中の個々の遺伝子座で二本鎖中断を生成できるＤＮＡ切断酵素であり、それによって部位特異的な遺伝子変換イベントを引き起こす（Ｓｔｏｄｄａｒｄ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０１１年１月１２日；１９（１）：７－１５）。それらの小さなサイズにもかかわらず、ホーミングエンドヌクレアーゼは長いＤＮＡ配列（典型的には、２０～３０塩基対）を認識する。ホーミングエンドヌクレアーゼは、非常に広く存在し、微生物で、ならびにファージおよびウイルスでも見られる。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧおよびＨｉｓ－Ｃｙｓボックス酵素（これらは、これらの酵素の中で最も配列特異的である）は、それらのＤＮＡ標的部位の主溝にドッキングする逆平行βシートに依存する（Ｆｌｉｃｋら、１９９８年；Ｊｕｒｉｃａら、１９９８年）。そこで、それらは、複数の連続する塩基対にわたって不均一に分布する配列特異的および非特異的な接触のコレクションを確立する（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、２００３年；Ｓｃａｌｌｅｙ－Ｋｉｍら、２００７年）。

【0551】

ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）ファミリーは、遺伝子標的化用途に使用される操作された酵素の主要な供給源である。ＬＨＥファミリーは、主に、古細菌内で、ならびに藻類および真菌の葉緑体およびミトコンドリアのゲノム中でコードされている（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、２００５年、Ｄａｌｇａａｒｄら、１９９７年、Ｓｅｔｈｕｒａｍａｎら、２００９年）。タンパク質鎖あたり１つの保存されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号８５）を有するメガヌクレアーゼは、パリンドロームおよびほぼパリンドロームのＤＮＡ標的配列を切断するホモ二量体タンパク質を形成し、一方でタンパク質鎖あたりこのようなモチーフを２つ含むメガヌクレアーゼは、完全に非対称のＤＮＡ配列を標的にし得る、より大きい擬似対称モノマーを形成する。

【0552】

メガヌクレアーゼは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とするように操作することができ、このためＤＮＡ中に二本鎖の中断を生じ、これは不適切に修復された場合フレームシフト変異を生じ得、細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらす。

【0553】

「ＭｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡに対するｍｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡを阻害するためのｍｅｇａｔａｌＴＡＬ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子の編集に使用できる、人工ヌクレアーゼを指す。ＭｅｇａＴＡＬは、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧホーミングエンドヌクレアーゼファミリーに由来するメガヌクレアーゼのＮ末端への最小ＴＡＬ（転写活性化因子様）エフェクタードメインの融合によって得られるハイブリッド単量体ヌクレアーゼである（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１４年２月；４２（４）：２５９１－６０１；Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１５；１２３９：１０５－３２．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－１－４９３９－１８６２－１＿６）。したがって、ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインによってもたらされるさらなる親和性および特異性を有する部位特異的メガヌクレアーゼ切断ヘッドで構成される。ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを標的とするように操作することができ、このためＤＮＡ中に二本鎖の中断を生じ、これは不適切に修復された場合フレームシフト変異を引き起こし得、細胞中のＨＬＡの発現および量の減少をもたらす。Ｉ－ＯｎｕＩメガヌクレアーゼ（ｍｎ）の多様体を使用してＴＣＲα－ｍｅｇａＴＡＬを設計し、Ｔ細胞受容体アルファ（ＴＣＲα）遺伝子をノックアウトした。ＴＣＲαｍｎを、ＴＣＲαｍｎ結合部位の上流のＤＮＡ配列に結合するように設計された１０．５リピートＴＡＬＥアレイに融合した。ＴＣＲαを標的とするｍｅｇａＴＡＬは、ヒト初代Ｔ細胞中で検出可能なオフターゲット切断を伴わずに、非常に高い遺伝子破壊を達成したことが判明した
（Ｂｏｉｓｓｅｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１４年２月；４２（４）：２５９１－６０１）。

【0554】

任意の特定の理論に束縛されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、治療用Ｔ細胞は、Ｔ細胞中のテロメアの短縮により、患者において短期間の持続性を有する。したがって、テロメラーゼ遺伝子によるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを伸長させ、かつ患者におけるＴ細胞の持続性を改善し得る。Ｃａｒｌ Ｊｕｎｅ「Ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１１７：１４６６－１４７６（２００７年）を参照されたい。したがって、一実施形態では、本発明の遺伝子改変免疫細胞は、テロメラーゼサブユニット、例えば、テロメラーゼの触媒サブユニット、例えば、ＴＥＲＴ、例えば、ｈＴＥＲＴを、異所的に発現する。いくつかの態様では、本開示は、テロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴ、をコードする核酸と免疫細胞を接触させることを含む、ＣＡＲ発現免疫細胞を産生する方法を提供する。細胞は、ＣＡＲをコードする構築物と接触される前に、同時に、または後に核酸と接触されてよい。

【0555】

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または免疫集団を含むか、またはこれらからなるか、または本質的にこれらからなる組成物である。

【0556】

一実施形態では、組成物は、本発明の少なくとも１つの単離された、かつ／または実質的に精製された免疫細胞集団を含むか、これらからなるか、または本質的にこれらからなる。

【0557】

一実施形態では、組成物は、凍結され解凍されている。

【0558】

本発明の別の目的は、本明細書に記載の少なくとも１つの免疫細胞または集団、および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含むか、これらからなる、またはこれらから本質的になる医薬組成物である。

【0559】

本発明の別の目的は、本明細書に記載される少なくとも１つの免疫細胞集団を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる医薬品である。

【0560】

一実施形態では、医薬組成物または医薬品は、本発明の単離された、および／または実質的に精製された免疫細胞集団を含む。

【0561】

本明細書で使用されるとき、医薬組成物または医薬品に関して「から本質的になる」という用語は、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または集団が、医薬組成物または医薬品内で生物学的活性を有する唯一の治療剤または剤であることを意味する。

【0562】

こうした組成物および医薬品は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含み得る。

【0563】

組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）を含む、任意の簡便な方法で行われ得る。本明細書に記載の組成物は、動脈内、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、脊髄内、筋肉内、静脈内（ｉｖ）注射、または腹腔内で患者に投与できる。一態様では、本発明の免疫細胞組成物は、皮内または皮下注射によって患者に投与される。

【0564】

一実施形態では、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または集団は、静脈内注射によって投与される。

【0565】

したがって、本発明の組成物は、一実施形態では、静脈内投与用に配合される。

【0566】

一実施形態では、本発明の操作された免疫細胞は、特定の免疫または炎症応答の部位に免疫細胞を動員するため、および免疫細胞を活性化してこれらの部位における免疫エフェクター細胞の免疫学的活性を抑制するための手段として使用され得る。ＣＡＲ媒介免疫細胞の動員および活性化はしたがって、それに対しこのような免疫抑制活性が有益である、多数の免疫学的疾患または障害を予防または治療する方法を提供し得る。

【0567】

一実施形態では、免疫細胞は、上記の調節性免疫細胞であり、好ましくは調節性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＤＮ Ｔ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、調節性樹状細胞、およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。

【0568】

一実施形態では、免疫細胞は、調節性Ｔ細胞である。調節性Ｔ細胞の活性化は抗原依存性であるが、これらの細胞の抑制作用は、抗原、ＴＣＲ－、およびＭＨＣ－に依存しない。したがって、調節性Ｔ細胞におけるＣＡＲの発現は、これらの細胞およびそれらの活性化を適切な標的組織に再指向し、これにより、それらが抗原特異的な様式で活性化されるようになる。しかし、それらの抑制効果は、疾患関連抗原をさらに認識する必要なく生じる。したがって、調節性Ｔ細胞が、免疫エフェクター細胞が存在する場所の近傍にあり、かつそれらの望ましくない効果を媒介する限り、再指向された調節性Ｔ細胞はその場所でトリガーされ、または活性化されて、これらの抑制効果をもたらし得る。

【0569】

一実施形態では、標的ＨＬＡ－Ａ２抗原は、免疫エフェクター細胞によって媒介される望ましくない免疫応答もしくは炎症応答の部位もしくは標的組織に存在し得るか、または発現し得る。

【0570】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、臓器または組織移植に関連する１つ以上の疾患、障害、症状、または状態（例えば、臓器または組織の拒絶反応／機能不全、ＧＶＨＤ、および／またはそれに関連する条件）の治療に使用され得る。移植拒絶反応は、免疫応答を介するレシピエントの免疫細胞によるドナーの移植組織の破壊を含む。免疫応答はＧＶＨＤにも関与している。しかし、この場合、レシピエントの組織は、移植を介してレシピエントに移されたドナーの免疫細胞によって破壊される。したがって、免疫細胞のＣＡＲ媒介再指向および活性化は、移植レシピエントにおいて免疫エフェクター細胞によるミスマッチ細胞および／または組織の拒絶反応を抑制する方法、またはＧＶＨＤの場合に移植された免疫担当細胞の病原性作用を阻害する方法を提供する。一実施形態では、ミスマッチ細胞および／または組織は、ＨＬＡ－Ａ２ミスマッチ細胞および／または組織を含む。

【0571】

したがって、本発明の別の目的は、対象において、臓器または組織移植に関連する１つ以上の疾患、障害、症状、または状態（例えば、臓器または組織拒絶反応／機能不全、ＧＶＨＤ、および／またはそれらに関連する状態）を治療するための方法であり、この方法は、本明細書に記載のＣＡＲ操作免疫細胞または組成物を対象に投与することを含む。

【0572】

一実施形態では、方法は細胞療法である。一実施形態では、細胞療法は自家である。一実施形態では、細胞療法は異種である。一実施形態では、細胞療法は同種異系である。一実施形態では、方法は遺伝子治療方法である。

【0573】

したがって、本発明の別の目的は、対象において、臓器または組織移植に関連する１つ以上の疾患、障害、症状、または状態（例えば、臓器または組織拒絶反応／機能不全、ＧＶＨＤ、および／またはそれらに関連する状態）の治療で使用するための、本明細書に記載のＣＡＲ操作免疫細胞または組成物である。

【0574】

本発明のＣＡＲ改変免疫細胞は、特に臓器または組織移植後の、対象における免疫寛容、操作寛容、および／または免疫順応を促進するためにさらに使用され得る。

【0575】

したがって、本発明の別の目的は、対象における免疫寛容、操作寛容、および／または免疫順応を促進する方法であり、この方法は、対象にＣＡＲ操作免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む。一実施形態では、この方法は、対象における移植された臓器または組織に対する免疫寛容、操作寛容、および／または免疫順応を促進するためであり得る。

【0576】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）は、臓器または組織の移植と同時に、その前に、またはその後に投与される。

【0577】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を使用して、移植された臓器または組織の拒絶反応を予防するか、または治療できる。移植された臓器または組織の拒絶反応の例としては、これらに限定されないが、移植された臓器または組織の超急性拒絶反応、および移植された臓器または組織の抗体媒介拒絶反応が挙げられる。

【0578】

一実施形態では、本発明の方法は、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を、移植された臓器または組織に曝された対象に投与することを含む。

【0579】

一実施形態では、移植された臓器もしくは組織は、骨髄移植、臓器移植、輸血、または対象に意図的に導入される任意の他の外来組織もしくは細胞を含み得る。

【0580】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）は、これらに限定されないが、同種移植拒絶反応または異種移植拒絶反応を含む、移植後の移植拒絶反応を阻害する治療法として使用され得る。

【0581】

本発明の別の目的は、対象における臓器または組織移植拒絶反応を予防するか、または治療する方法であって、本方法は、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、または免疫細胞を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0582】

本発明の別の目的はしたがって、対象において臓器または組織移植拒絶反応の予防または治療に使用するための、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、または免疫細胞を含む医薬組成物である。

【0583】

本発明の別の目的は、対象における移植片生存期間を延長する方法であって、本方法は、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、またはこれらを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0584】

一実施形態では、この方法は、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、２０年、３０年、４０年、５０年、６０年、７０年、８０年、９０年、１００年、または対象の寿命の移植片生存期間をもたらす。

【0585】

一実施形態では、対象は、いかなる免疫抑制剤療法も受けていない。

【0586】

一実施形態では、本発明の免疫細胞または組成物の投与は、対象が受ける免疫抑制剤療法の量を減らすことができる。

【0587】

一実施形態では、移植片は同種移植片である。一実施形態では、移植片は、レシピエントへの移植片の移植と同時に、その前に、またはその後に、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）に曝露され得る。一実施形態では、臓器または組織移植は、心臓、心臓弁、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、皮膚、血管、骨髄、幹細胞、骨、または島細胞であり得る。しかしながら、本発明は特定のタイプの移植に限定されない。

【0588】

一実施形態では、レシピエントに対する移植片の免疫原性を低下させ、それにより移植片拒絶反応を低減させるか予防するために、レシピエントに移植する前に臓器または組織移植片を本発明のＣＡＲ操作免疫細胞で処理することにより、ドナー移植片を「前調整（ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ）」または「前処理」できる。

【0589】

一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性である。一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性であり、ＨＬＡ－Ａ０３、ＨＬＡ－Ａ１１、ＨＬＡ－Ａ２３、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２９、ＨＬＡ－Ａ３０、ＨＬＡ－Ａ３１、ＨＬＡ－Ａ３３、およびＨＬＡ－Ａ３４からなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプについては陽性である。一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性であり、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２９、およびＨＬＡ－Ａ３０からなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプについては陽性である。

【0590】

一実施形態では、移植片はＨＬＡ－Ａ２陽性である。

【0591】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を使用して、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防または治療し得る。一実施形態では、本方法は、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を、移植された臓器または組織に曝された対象に投与することを含む。一実施形態では、移植された臓器もしくは組織は、骨髄移植、臓器移植、輸血、または対象に意図的に導入される任意の他の外来組織もしくは細胞を含み得る。例えば、ＧＶＨＤは、心臓、心臓弁、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、皮膚、血管、骨髄、幹細胞、骨または島細胞の移植後に生じ得る。しかしながら、本発明は特定のタイプの移植に限定されない。

【0592】

一実施形態では、ＧＶＨＤは、造血幹細胞移植後に起こり得る。

【0593】

本発明の別の目的はしたがって、対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するか、または治療する方法であって、本方法は、ＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0594】

一実施形態では、本発明は、レシピエントへの移植の移植と同時に、その前、またはその後に、ドナー移植片、例えば、生体適合性格子またはドナー組織、臓器または細胞を、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）と接触させる方法を提供する。

【0595】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）を使用してレシピエントに対するドナー移植による有害反応を改善するか、阻害するか、または低減し、それによりＧＶＨＤを予防するか、または治療することができる。

【0596】

本発明の別の目的はしたがって、対象におけるＧＶＨＤの発症を予防するか、または遅延させる方法であり、本方法は、対象にＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む。

【0597】

一実施形態では、ＧＶＨＤの発症を１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、２０年、３０年、４０年、５０年、６０年、７０年、８０年、９０年、１００年、または対象の寿命の間遅延させる。

【0598】

一実施形態では、対象は、いかなる免疫抑制剤療法も受けていない。

【0599】

一実施形態では、対象は免疫抑制療法を受けている。一実施形態では、本発明の免疫細胞は、免疫抑制療法の治療有効量を減少させる目的で対象に投与される。

【0600】

一実施形態では、ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤまたは慢性ＧＶＨＤであり得る。

【0601】

一実施形態では、ドナー移植は、レシピエントに対する移植の免疫原性を低下させるために、レシピエントに移植する前に移植片を本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）で処理することにより「前調整」または「前処理」され得、これにより、ＧＶＨＤを減少させるか、または予防する。一実施形態では、移植は、移植に関連し得るＴ細胞を活性化するために、移植前にレシピエントからの細胞または組織と接触させてもよい。レシピエントからの細胞または組織による移植片の治療後に、細胞または組織を移植片から除去してもよい。処理された移植片を次に、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）とさらに接触させて、レシピエントからの細胞または組織を処理することによって活性化された免疫エフェクター細胞の活性を低減させるか、阻害するか、または消失させることができる。本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）による移植片のこの処理の後で、ＣＡＲ改変免疫細胞は、レシピエントへの移植の前に移植片から除去され得る。しかし、一部のＣＡＲ操作免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）は移植片に接着し、したがって、移植片と共にレシピエントに導入され得る。この状況では、レシピエントに導入されたＣＡＲ操作免疫細胞（例えば、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）は、移植に関連する細胞によって引き起こされる、レシピエントに対する免疫応答を抑制し得る。

【0602】

一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性である。一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性であり、ＨＬＡ－Ａ０３、ＨＬＡ－Ａ１１、ＨＬＡ－Ａ２３、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２９、ＨＬＡ－Ａ３０、ＨＬＡ－Ａ３１、ＨＬＡ－Ａ３３、およびＨＬＡ－Ａ３４からなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプについては陽性である。一実施形態では、移植宿主またはレシピエントは、ＨＬＡ－Ａ２陰性であり、ＨＬＡ－Ａ２５、ＨＬＡ－Ａ２６、ＨＬＡ－Ａ２９、およびＨＬＡ－Ａ３０からなる群から選択されるＨＬＡ－Ａサブタイプについては陽性である。

【0603】

一実施形態では、移植片はＨＬＡ－Ａ２陽性である。

【0604】

本発明の別の目的は、対象における免疫細胞の集団を拡張する方法であって、本方法において、免疫細胞は、本発明によるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変され、本方法は、本明細書のいずれかの場所に記載される操作された免疫細胞を対象に投与することを含み、本方法において、投与された操作免疫細胞は、対象において子孫免疫細胞の集団を生成する。

【0605】

一実施形態では、免疫細胞は、好ましくは調節性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋調節性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋調節性Ｔ細胞、調節性γδＴ細胞、調節性ＤＮ Ｔ細胞、調節性Ｂ細胞、調節性ＮＫ細胞、調節性マクロファージ、調節性樹状細胞、およびそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される調節性免疫細胞であり、より好ましくは調節性Ｔ細胞である。

【0606】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで複製でき、それにより、標的細胞の免疫応答および免疫寛容の持続的な抑制をもたらし得る長期持続をもたらす。

【0607】

本発明の別の目的はしたがって、対象において調節性Ｔ細胞の持続的な集団を生成する方法であって、本方法において、調節性Ｔ細胞は、本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変され、本方法は、本明細書のいずれかの場所に記載される調節性Ｔ細胞を対象に投与することを含み、本方法において、改変された調節性Ｔ細胞の持続する集団は、対象において投与後少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、２００日間、３００日間、４００日間、５００日間、６００日間、７００日間、８００日間、９００日間、または１０００日間持続する。

【0608】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ－Ｔｒｅｇ細胞は、自己再生し得、かつ標的細胞の免疫応答を抑制するためにｉｎ ｖｉｖｏで再活性化され得る。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔｒｅｇ細胞は、標的細胞の免疫応答を抑制するために再活性化され得るメモリＣＡＲ－Ｔｒｅｇ細胞であり得る。

【0609】

免疫細胞は、任意の供給源から得ることができる。例えば、一実施形態では、免疫細胞は、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞を生成するために、組織ドナー、移植レシピエント、または他の無関係な供給源（全体として異なる個体または種）から得ることができる。したがって、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞は、移植レシピエントまたは他の無関係な供給源に対して自家、同種異系または異種であり得る。一実施形態では、本発明のＣＡＲ－Ｔｒｅｇ細胞は、移植レシピエントに対して自家、同種異系または異種であり得る。一実施形態では、本発明のＣＡＲ－Ｔｒｅｇ細胞は、移植レシピエントにとって自家であり得る。

【0610】

一実施形態では、対象は哺乳動物であってよい。一実施形態では、対象はヒトであってよい。

【0611】

一実施形態では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後、血液を再採取し（またはアフェレーシスを実施させ）、本発明に従ってそれらからＴ細胞を活性化し、これらの活性化され拡張されたＴ細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実行できる。ある実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化できる。ある実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化される。理論に束縛されるものではないが、この複数の採血／複数の再注入プロトコルを使用することは、Ｔ細胞の特定の集団を選択するのに役立ち得る。

【0612】

本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、単独で、または希釈剤および／またはこれらに限定されないが、ＩＬ－２または他のサイトカインまたは細胞集団を含む、他の成分と組み合わせた医薬組成物として投与され得る。

【0613】

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、１つ以上の医薬的または生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、本明細書のいずれかの場所に記載のＣＡＲ操作免疫細胞または細胞集団を含み得る。こうした組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含み得る。

【0614】

本発明の医薬組成物は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）を含む、任意の適切な方法で対象に投与され得る。本明細書のいずれかの場所に記載される医薬組成物は、非経口投与によって対象に投与され得る。本明細書のいずれかの場所に記載される医薬組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、脊髄内、筋肉内、胸骨内により、静脈内（ｉｖ）注射により、注入技術により、または腹腔内により対象に投与され得る。一実施形態では、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞組成物は、皮内または皮下注射によって対象に投与され得る。別の実施形態では、本発明のＣＡＲ改変免疫細胞組成物は、静脈内注射によって投与され得る。一実施形態では、ＣＡＲ改変免疫細胞の組成物は、リンパ節、感染部位、炎症部位、または組織もしくは臓器拒絶部位に直接注入され得る。

【0615】

本発明の医薬組成物は、予防されるかまたは治療される疾患に適切な様態で投与され得る。投与の量および頻度は、対象の状態、対象の疾患の種類および重症度などの要因によって決定されるが、適切な投与量は、臨床試験によって決定され得る。

【0616】

「有効量」または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、対象の年齢、体重、抗体価、および状態の個人差を考慮して決定され得る。本明細書のいずれかの場所に記載されるＣＡＲ操作免疫細胞を含む医薬組成物は、１ｘ１０^４～１ｘ１０^９細胞／ｋｇ体重または１ｘ１０^５～１００ｘ１０^５細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内のすべての整数値を含む）の投与量で投与され得ると一般的に述べることができる。ＣＡＲ操作免疫細胞組成物はまた、これらの投与量で複数回投与されてもよい。ＣＡＲ操作免疫細胞は、免疫療法で一般に知られている注入技術を使用することによって投与され得る。特定の対象に対する最適な用量および治療レジメンは、疾患の徴候について対象を監視すること、およびそれに応じて治療を調整することにより、容易に決定され得る。

【0617】

一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＣＡＲ操作免疫細胞は、別の活性剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与される。一実施形態によれば、少なくとも１つの免疫細胞集団は、別の活性剤の投与の前、同時にまたは後に投与される。

【0618】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、これらに限定されないが、抗ウイルス療法、化学療法、放射線、免疫抑制剤、抗体、免疫除去剤、サイトカイン、および照射などの手段による治療を含む、任意の数の関連治療法と組み合わせて（例えば、前に、同時にまたは後に）対象に投与され得る。

【0619】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、免疫抑制剤と組み合わせて投与され得る。当該分野で公知のいずれの免疫抑制剤が使用されてもよい。

【0620】

免疫抑制剤の例としては、これらに限定されないが、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、メトトレキサート、メトキサレン、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸ナトリウム、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、リツキシマブなどのカルシニューリン阻害剤、シロリムス、エベロリムス、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ベラタセプト、アレムツズマブ、ムロモナブＣＤ３、抗胸腺細胞グロブリン、グルココルチコステロイドなどのｍＴＯＲ阻害剤、またはプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0621】

本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、免疫抑制剤の前、後、または同時に対象に投与され得る。

【0622】

本発明のＣＡＲ操作免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植後に対象に投与され得る。代替的に、または追加的に、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植前に対象に投与され得る。本発明のＣＡＲ操作免疫細胞および／または免疫抑制剤は、移植手術中に対象に投与され得る。

【0623】

一実施形態では、ＣＡＲ操作免疫細胞を対象に投与する本発明の方法は、免疫抑制療法が開始されると実行される。

【0624】

いくつかの実施形態では、この方法は、例えば、移植レシピエントを経時的に監視するために、また、該当する場合は異なる免疫抑制療法レジメンで、複数回実施される。

【0625】

いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は、移植レシピエントが移植に対して寛容であることが予測される場合、低減される。いくつかの実施形態では、免疫抑制療法は、移植レシピエントが移植に対して寛容であることが予測される場合、処方されず、例えば、免疫抑制療法は中止される。

【0626】

したがって、本発明は、第１の部分に、本発明の免疫細胞または免疫細胞集団を含み、第２の部分に、これらに限定されないが、抗ウイルス療法剤、化学療法剤、放射線、免疫抑制剤、抗体、免疫除去剤、サイトカイン、および照射を含む別の活性剤を含む、部分からなるキットにさらに関する。好ましくは、本発明の部分からなるキットは、第１の部分に、本発明の免疫細胞または免疫細胞集団を含み、第２の部分に、１つ以上の免疫抑制剤を含む。

【0627】

一実施形態では、部分からなるキットは、本発明の細胞を作製するための１つ以上の試薬（例えば、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ抗体またはＣＡＲをコードする核酸または発現ベクター）を含む。

【0628】

本発明のキット中に存在し得る免疫抑制剤の例としては、これらに限定されないが、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン、メトトレキサート、メトキサレン、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸ナトリウム、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、リツキシマブなどのカルシニューリン阻害剤、シロリムス、エベロリムス、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ベラタセプト、アレムツズマブ、ムロモナブＣＤ３、抗胸腺細胞グロブリン、グルココルチコステロイドなどのｍＴＯＲ阻害剤、またはプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド、またはそれらの組み合わせなどが挙げられる。

【0629】

本発明の別の目的は、対象における臓器または組織移植片拒絶反応を予防するか、または治療する方法であり、この方法は、（ｉ）少なくとも１つの免疫抑制剤および（ｉｉ）本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、または免疫細胞を含む医薬組成物、を対象に投与することを含む。

【0630】

本発明の別の目的はしたがって、対象において臓器または組織移植拒絶反応を予防するか、または治療する際に使用するための、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、または免疫細胞を含む医薬組成物と、少なくとも１つの免疫抑制剤との組み合わせである。

【0631】

本発明の別の目的は、対象における移植片生存期間を増長させる方法であり、この方法は、本発明の少なくとも１つの免疫抑制剤およびＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）、またはこれらを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0632】

一実施形態では、本発明の少なくとも１つの免疫抑制剤とＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）の組み合わせは、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するか、または治療するために使用される。

【0633】

一実施形態では、ＧＶＨＤは、造血幹細胞移植後に起こり得る。

【0634】

本発明の別の目的はしたがって、対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するか、または治療する方法であり、この方法は、対象に少なくとも１つの免疫抑制剤およびＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくは、ＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む。

【0635】

一実施形態では、本発明は、レシピエントへの移植の移植と同時に、その前に、またはその後に、ドナー移植片、例えば、生体適合性格子またはドナー組織、臓器または細胞を、本発明の少なくとも１つの免疫抑制剤およびＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）と接触させる方法を提供する。

【0636】

一実施形態では、少なくとも１つの免疫抑制剤と本発明のＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）との組み合わせを使用して、レシピエントに対するドナー移植による有害反応を改善するか、阻害するか、または低減することができ、それにより、ＧＶＨＤを予防するか、または治療する。

【0637】

本発明の別の目的はしたがって、対象においてＧＶＨＤの発症を予防するか、または遅延させる方法であって、この方法は、少なくとも１つの免疫抑制剤およびＣＡＲ操作免疫細胞（好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇ細胞）または本明細書に記載される医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0638】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞および少なくとも１つの免疫抑制剤は、同時にまたは連続して投与される。

【0639】

一実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞、および任意により少なくとも１つの他の活性剤、好ましくは免疫抑制剤、は、移植と併せて（例えば、移植前に、同時に、または後に）投与される。

【0640】

本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、移植臓器または組織拒絶反応の診断後に投与され得、その後、臓器または組織拒絶反応の症状が治まるまで、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞および免疫抑制剤の両方の用量が投与される。

【0641】

さらなる実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞組成物は、骨髄移植と組み合わせて（例えば、その前に、同時に、または後に）対象に投与され得る。

【0642】

別の実施形態では、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞は、ＣＤ２０と反応する剤、例えば、リツキシマブなどのＢ細胞切除療法後に投与されてもよい。例えば、一実施形態では、対象は、大量化学療法による標準治療を受け、その後、末梢血幹細胞移植を受けてもよい。ある実施形態では、移植後に、対象は、本発明の拡張されたＣＡＲ操作免疫細胞の注入を受けてもよい。追加的実施形態では、拡張されたＣＡＲ操作免疫細胞は、手術の前または後に投与され得る。

【0643】

一実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または集団の最初の投与、および１つ以上のその後の投与を受け、１つ以上のその後の投与は、前回の投与後１５日未満、例えば、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、または２日に投与される。

【0644】

一実施形態では、本発明の免疫細胞の治療的有効量が対象に投与されるか、または投与される予定である。

【0645】

一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つの免疫細胞集団の免疫細胞の量は、少なくとも１０^２、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８または１０^９細胞である。

【0646】

一実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞の量は、約１０^２～約１０^９、約１０^３～約１０^８、約１０^４～約１０^７、または約１０^５～約１０^６細胞の範囲である。

【0647】

一実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞の量は、約１０^６～約１０^９、約１０^６～１０^７、約１０^６～１０^８、約１０^７～１０^９、約１０^７～１０^８、約１０^８～１０^９細胞の範囲である。別の実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞の量は、約１０^６、約１０^７、約１０^８、または約１０^９である。

【0648】

一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つの免疫細胞集団の免疫細胞の量は、少なくとも１０^２、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８または１０^９細胞／ｋｇ体重である。

【0649】

一実施形態では、対象に投与される本発明の免疫細胞の量は、約１０^４～１０^９細胞／ｋｇ体重または１０^５～１０^８細胞／ｋｇ体重の範囲であり、これらの範囲内のすべての整数値を含む。

【0650】

一実施形態では、本発明の少なくとも１つの免疫細胞または集団の２回以上の投与が、対象（例えば、ヒト）に毎週投与され、例えば、本発明の遺伝子改変免疫細胞または集団の２、３、または４回の投与が毎週投与される。

【0651】

本発明の別の目的は、移植拒絶反応またはＧＶＨＤの予防および／または治療に有用な材料を含む製造物品である。

【0652】

製造物品は、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。これらの容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成され得る。容器は、移植拒絶反応またはＧＶＨＤなどの免疫学的状態の予防および／または治療に有効な組成物を保持し、かつ無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明のＣＡＲ操作免疫細胞、好ましくはＣＡＲ操作Ｔｒｅｇである。

【0653】

ラベルまたは添付文書は、組成物が移植拒絶反応またはＧＶＨＤの予防または治療に使用されることを示し得る。

【0654】

製造物品、ラベル、または添付文書は、ＣＡＲ操作免疫細胞組成物を患者に投与するための説明資料をさらに含み得る。追加的には、製造物品は、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液などの、薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含み得る。製造物品はさらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料を含み得る。

【0655】

様々な目的のために（例えば、移植拒絶反応またはＧＶＨＤを予防するか、または治療するため）有用であるキットも提供される。ＣＡＲ操作免疫細胞を含むキットを提供できる。製造物品と同様に、キットは、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含み得る。容器は、少なくとも１つのＣＡＲ操作免疫細胞、好ましくは本発明のＣＡＲ操作Ｔｒｅｇを含む組成物を保持する。例えば、希釈剤および緩衝液を含む、追加の容器が含まれ得る。ラベルまたは添付文書は、組成物の説明ならびに意図された使用のための指示を提供し得る。

【図面の簡単な説明】

【0656】

【図1A】図１は、本発明の抗ＨＬＡ－Ａ２ ＣＡＲ構築物の一般的なＨＬＡ－ＡおよびＨＬＡ－Ｂ対立遺伝子変異体との交差反応性を示すグラフの組み合わせである。本発明のＣＡＲ構築物（またはマウス抗－ＨＬＡ－Ａ２ ＣＡＲ構築物）を発現するＧＦＰ^＋Ｔｒｅｇ細胞を、Ｆｌｏｗ Ｐａｎｅｌ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎビーズおよび固定可能な生存率色素と室温で３０分間インキュベートした。次に、試料を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーで分析した。データを、方法に記載されているとおり、分析した。ＡおよびＢのデータは、サイトメーターによって収集されたＨＬＡ陰性ビーズの数に対して正規化された、ＧＦＰのみを発現する対照Ｔｒｅｇ細胞に対する結合の割合（パーセント）を示す。線より上のデータポイントは、ビーズのみの対照の平均からの標準偏差が２を超え、従って統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）値を表す。データは２つの独立した実験の平均である。平均±ＳＥＭ。

【図1B】同上。

【実施例】

【0657】

本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。

【0658】

実施例１：

【0659】

材料および方法
ヒト化ＨＬＡ－Ａ２特異的ｓｃＦｖの生成。ＨＬＡ－Ａ２特異的ｓｃＦｖの配列は、米国特許出願公開第２０１３／００７８２４３号（Ａ１）に開示される配列に由来した。ヒト化ｓｃＦｖをコードするコドン最適化遺伝子配列は、供給業者によって提供されるコドン最適化アルゴリズムを使用して、ＧｅｎｅＡｒｔ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ）によって「Ｓｔｒｉｎｇ」として合成された。ＳｃＦｖは、Ｎ末端で、コザック配列およびＣＤ８シグナル配列と隣接させた。構築物は、ＢａｍＨＩおよびＭｆｅＩ制限部位にさらに隣接し、これは、自己不活性化レンチウイルスＣＡＲ発現プラスミドのＣＤ８ヒンジ領域へのフレーム内クローニングを可能にした。ＰＧＫプロモーター駆動のＣＡＲ発現プラスミドは、ヒトＣＤ８ヒンジおよびＣＤ８膜貫通ドメインを含み、その後にヒトＣＤ３ζに融合された細胞内ヒト４１ＢＢ共刺激ドメインが続く。ＣＡＲ配列に続いて、ＥＧＦＰレポータータンパク質が、細胞中の遺伝子導入の検出のために自己切断可能な２Ａ部位を介してフレーム内で連結された。

【0660】

ＨＬＡ－Ａ２－ＣＡＲの生成。ウイルスベクターを、第３世代パッケージングプラスミドを使用して、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてポリエチレンイミンベースの一過性トランスフェクションによって生成した（Ｔｒｏｎｏ ｌａｂ，ＥＰＦＬ（Ｅｃｏｌｅ ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｅｄｅｒａｌｅ ｄｅ Ｌａｕｓａｎｎｅ））。

【0661】

Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ．Ｊｕｒｋａｔ－Ｌｕｃｉａ ＮＦＡＴ－レポーター細胞株を、１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で培養した。細胞は、ウイルスベクターの異なる濃度でのインキュベーションを使用して形質導入され、３０～５０％の形質導入を達成して、複数のベクターの統合を回避した。正しく折り畳まれたＣＡＲの発現および提示は、ＡＰＣ共役ＨＬＡ－Ａ２マルチマー（デキストラマー、ＷＢ２６６６、Ｉｍｍｕｄｅｘ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）への結合によって実証された。ＣＡＲ媒介活性化は、ＨＬＡ－Ａ２特異的ＣＡＲのＨＬＡ－Ａ２陽性またはＨＬＡ－Ａ２陰性細胞株との同時インキュベーションにより達成された。培地中のＮＦＡＴ活性化依存ルシフェラーゼ分泌を、基質ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用して、ルミノメーター（Ｇｌｏｗｍａｘ、Ｐｒｏｍｅｇａ）で分析した。

【0662】

Ｔｒｅｇの分取、形質導入、および拡張。ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ）を介してＨＬＡ－Ａ２ドナーから単離し、ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、生きたＣＤ４^＋ＣＤ１２７^ｌｏＣＤ２５^ｈｉＴｒｅｇを分取する前にＣＤ２５^＋細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）について富化した。分取したＴｒｅｇを、１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２中のＬ細胞およびαＣＤ３ｍＡｂ（ＯＫＴ３；２００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。１日後、細胞１個に対してウイルス粒子１０個の感染多重度で、細胞にレンチウイルスを形質導入した。７日目に、細胞を上記のようにＬ細胞で再刺激し、５日間拡張させた。ＨＬＡ－Ａ２媒介刺激の効果を調べるために、Ｔｒｅｇを、ＩＬ－２を制限して（１００Ｕ／ｍＬ）一晩培養し、その後、照射された抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８を添加したＫ５６２．６４細胞またはＫ５６２．６４．ＨＬＡ－Ａ２細胞で、１：２（Ｋ５６２：Ｔ細胞）の比で２４時間再刺激した。

【0663】

フローサイトメトリー。表現型分析では、細胞を固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；４２３１０２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色し、かつ表面マーカーについて染色し、その後ＦＯＸＰ３／転写因子染色バッファーセット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で固定／透過し細胞内タンパク質について染色した。試料をＣｙｔｏｆｌｅｘ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）で読み取り、その結果を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン９．９．４および１０．３（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。表面染色をＣＤ３（５６４４６５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（３１７４１０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５（１３０－０９１－０２４、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）、ＬＡＰ（２５－９８２９－４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ６９（３１０９４６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１５４（５５５７０２、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＣＤ１２７（４８－１２７８－４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）について行った。四量体染色を、四量体にされたＨＬＡ－Ａ＊０２：０１単量体を用いて、ストレプトアビジン－アロフィコシアニン（ＰＪ２７Ｓ、Ｐｒｏｚｙｍｅ）で行った。細胞内染色を、ＣＴＬＡ－４（３６９６０６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）について行った。

【0664】

ＨＬＡ対立遺伝子交差反応性アッセイ。本発明によるＣＡＲ、またはＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含むＣＡＲ（ｍＡ２ ＣＡＲ）を発現する０．２５．１０^６Ｔ細胞を、ＦｌｏｗＰＲＡ（登録商標） Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙビーズパネル（ＦＬ１ＨＤ０１、ＦＬ１ＨＤ０２、ＦＬ１ＨＤ０３、ＦＬ１ＨＤ０４、ＦＬ１ＨＤ０６およびＦＬ１ＨＤ０８、Ｏｎｅ Ｌａｍｂｄａ）および固定可能な生存率色素（ＦＶＤ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、６５－０８６５－１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と室温で３０分間インキュベートした。試料を洗浄し、０．５％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーで分析した。１つの試料あたり２００の陰性対照ビーズを得た。ビーズのみを陰性対照として使用した。分析のために、死細胞を最初に、固定可能な生存率色素を使用して排除した。死細胞およびダブレットを排除した後、単一の抗原ビーズをゲーティングした。次に、ＨＬＡ抗原あたりのビーズの数を、それぞれのＰＥ強度ピークによって決定した。データを、各ＨＬＡピークにおいて対象となるビーズ数を２００で乗算し、試料中の陰性ビーズ数で除算することによって正規化した。各ＨＬＡピークについて、対照（非ＣＡＲ発現細胞）と比較したＣＡＲ Ｔｒｅｇの相対的結合率を、対照試料中のビーズ数からＣＡＲ－Ｔｒｅｇ中のビーズ数を引き、ＣＡＲ非発現対照中のビーズの平均数を除算し、１００倍することによって求めた。

【0665】

結果：
ヒト化ＨＬＡ－Ａ２特異的ＣＡＲの構築
１つのヒト化重鎖および３つの異なるヒト化軽鎖を生成し、合計３つの異なるキメラ抗原受容体を、ヒト化重鎖と軽鎖とを組み合わせることによって生成した。
ＣＡＲの発現および正しい折り畳みを、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーター細胞株を使用して検証した。

【0666】

他のクラスＩ ＨＬＡ対立遺伝子に対するＨＬＡ－Ａ２－ＣＡＲ構築物の交差反応性
より少ない数の祖先対立遺伝子から時間をかけて進化した、ＨＬＡの多くの異なる対立遺伝子がある。その結果、数個のアミノ酸のみが異なり得る対立遺伝子ファミリーがあり、単一の抗ＨＬＡ抗体が、進化的に関連したファミリー内の複数の対立遺伝子を認識し得る。マウスモノクローナル抗体（ＢＢ７．２）は、追加のＨＬＡ－Ａ対立遺伝子に対し交差反応を有することが公知である（Ｈｉｌｔｏｎ＆Ｐａｒｈａｍ、２０１３年）。具体的には、固相アッセイでテストした場合、ＢＢ７．２は、ＨＬＡ－Ａ２の５個のサブタイプ（＊０２：０１、＊０２：０２、＊０２：０３、＊０２：０５、＊０２：０６）を認識すること、およびＨＬＡ－Ａ＊６９：０１と交差反応すること、かつ高濃度でテストした場合、ＨＬＡ－Ａ＊２３：０１、Ａ＊２４：０２、Ａ＊２４：０３、Ａ＊６８：０１、およびＡ＊６８：０２（Ｈｉｌｔｏｎ＆Ｐａｒｈａｍ、２０１３年）と交差反応することが判明した。本発明のヒト化抗ＨＬＡ－Ａ２抗体の交差反応性を評価し、かつＢＢ７．２抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体と比較するために、血清中の抗ＨＬＡ抗体を測定するために設計された、ＯＮＥラムダ固相アッセイを採用して、目的のヒト化ＣＡＲへのＨＬＡコーティングビーズの結合を測定した。指示されたヒト化ＣＡＲを発現するＧＦＰ^＋ＴｒｅｇをＦｌｏｗ Ｐａｎｅｌ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｓｉｎｇｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎビーズとインキュベートし、単一クラスのビーズへの結合を、前方／側方散布図のビーズゲートでのシグナルの損失として定量化した。データを、試料中の陰性対照ビーズの数に対して正規化し、ＧＦＰ＋－対照Ｔｒｅｇによる結合の量に関連して、ｈＣＡＲ発現Ｔｒｅｇへの相対的結合量を、ＧＦＰ試料中の陰性ビーズの数にＧＦＰ試料中の陰性ビーズの数を乗算することによって計算した。

【0667】

結果を、配列番号７２を有するｓｃＦｖを含む構築物について図１に示す。このＨＬＡ－Ａ２－ＣＡＲ構築物は、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１を有意に結合した（図１Ａ）。驚くべきことに、本発明のＣＡＲ構築物について、Ａ＊０２：０１以外の試験されたあらゆるＨＬＡ－ＡまたはＢ対立遺伝子への統計的に有意な結合はいずれも観察されなかった（図１Ａ～１Ｂ）。

【図1A】

【図1B】

【配列表】

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