特許 7317827 腎線維症および／または慢性腎臓疾患の治療におけるＦＸＩＩａインヒビターの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-07-21

(45)【発行日】2023-07-31

(54)【発明の名称】腎線維症および／または慢性腎臓疾患の治療におけるＦＸＩＩａインヒビターの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230724BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230724BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20230724BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20230724BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20230724BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230724BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 D ZNA

A61K39/395 N

A61P13/12

A61K47/60

A61K47/64

A61K47/65

A61K47/68

【請求項の数】 12

(21)【出願番号】P 2020531919

(86)(22)【出願日】2018-12-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-02-22

(86)【国際出願番号】 AU2018051333

(87)【国際公開番号】W WO2019113642

(87)【国際公開日】2019-06-20

【審査請求日】2021-12-08

(31)【優先権主張番号】17207595.4

(32)【優先日】2017-12-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】500021413

【氏名又は名称】シーエスエル、リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】マルゴザタ・ヴィグレツカ

(72)【発明者】

【氏名】マルク・ノルテ

(72)【発明者】

【氏名】コン・パノーシス

【審査官】柴原 直司

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１６－５１１２６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】日本内科学会雑誌, (2015), 104, [8], p.1658-1664

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ４５／００

Ａ６１Ｋ ３８／００－３８／５８

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象における、特にヒトまたは動物対象における慢性腎臓疾患および／または腎線維症の治療または防止で使用するための、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビターを含む医薬組成物であって、
前記ＦＸＩＩのインヒビターは、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片であり、
慢性腎臓疾患および／または腎線維症は、以下：腎炎、ループス腎炎、Ｃ３－糸球体腎炎、デンスデポジット病、非定型溶血性尿毒症症候群、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、腎臓移植の抗体媒介性拒絶反応を含む群から選択される、糸球体硬化症、腎瘢痕、腎臓における虚血／再灌流障害、急性腎臓傷害、腎臓の移植片／同種移植片の拒絶反応、再発性基礎疾患、および／もしくはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体形成と関係がある炎症性腎臓疾患の１つもしくはそれ以上の結果である、ならびに／またはこれらの１つもしくはそれ以上に関連する、前記医薬組成物。

【請求項2】

抗ＦＸＩＩ抗体は：
（ｉ）以下を含むＶ_H：
－配列番号６に記載される配列；もしくは
－配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
－配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶ_L：
－配列番号７に記載される配列；もしくは
－配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
－配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１５に記載される配列を含むＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

抗ＦＸＩＩ抗体は：
（ｉ）配列番号１８に記載される配列を含むＶ_Hおよび配列番号１９に記載される配列を
含むＶ_L、または
（ｉｉ）配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

抗ＦＸＩＩ抗体は、単一特異性、二重特異性または三重特異性ＩｇＧ抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項5】

ＦＸＩＩのインヒビターは、融合パートナーに連結しており、融合パートナーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または半減期増強ポリペプチドを含み、半減期増強ポリペプチドは、アルブミン、アファミン、アルファフェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項6】

半減期増強ポリペプチドは、リンカーを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結している、請求項５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩのインヒビターに連結されたヒトアルブミンを含む融合タンパク質である、請求項５または６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

ＦＸＩＩのインヒビターは、対象に静脈内または皮下または髄腔内投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

ＦＸＩＩのインヒビターは：
－単回用量で；または
－複数回の用量で；または
－持続用量として
対象に投与される、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項10】

ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で対象に投与され、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で対象に投与される、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項11】

対象は、慢性腎臓疾患および／または腎線維症を発生する危険性があり、慢性腎臓疾患および／または腎線維症は、以下：腎炎、ループス腎炎、Ｃ３－糸球体腎炎、デンスデポジット病、非定型溶血性尿毒症症候群、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、腎臓移植の抗体媒介性拒絶反応を含む群から選択される、糸球体硬化症、腎瘢痕、腎臓における虚血／再灌流障害、急性腎臓傷害、腎臓の移植片／同種移植片の拒絶反応、再発性基礎疾患、および／もしくはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体形成と関係がある炎症性腎臓疾患の１つもしくはそれ以上の結果である、ならびに／またはこれらの１つもしくはそれ以上に関連する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【請求項12】

対象における慢性腎臓疾患および／または腎線維症の治療または防止に使用するためのキットであって、該慢性腎臓疾患および／または腎線維症は、以下：腎炎、ループス腎炎、Ｃ３－糸球体腎炎、デンスデポジット病、非定型溶血性尿毒症症候群、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、腎臓移植の抗体媒介性拒絶反応を含む群から選択される、糸球体硬化症、腎瘢痕、腎臓における虚血／再灌流障害、急性腎臓傷害、腎臓移植／同種移植の拒絶反応、再発性基礎疾患、および／もしくはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体形成と関係がある炎症性腎臓疾患の１つもしくはそれ以上の結果である、ならびに／またはこれらの１つまたはそれ以上に関連し：
－請求項１～１１のいずれか一項に記載の、少なくとも１つの医薬組成物；
－対象における慢性腎臓疾患および／または腎線維症の治療または防止でキットを使用するための指示書、ならびに
－少なくとも１つのさらなる治療的に活性な化合物または薬物を含む、前記キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、腎疾患または腎臓疾患を治療または防止する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

米国成人人口の１０％より多く（約３０００万人）が慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）に罹患している。適切な根治治療がないこととともに、この罹患率によって、ＣＫＤの新規な治療戦略の開発が求められている。腎線維症は、その一次病因とは無関係に、大抵の慢性腎臓疾患の最終的な症状発現であると考えられる。腎臓実質のほぼ９９％は、尿細管間質からなる。細胞死の亢進および／または増殖／再生の低下に基づく尿細管上皮細胞（ＴＥＣ）の喪失は、腎疾患を慢性化および線維化に導くことに関与する初期の決定的な機構に相当する。線維芽細胞の過剰活性化および筋線維芽細胞へのその分化とともに、ＴＥＣの死は、細胞外基質（ＥＣＭ）の制御されない生成および蓄積を促進し、それによって、機能的ネフロンが線維化瘢痕組織と置き換わる。

【0003】

片側尿管閉塞（ＵＵＯ）の実験モデルは、尿管閉塞後の線維化の進展が高度に再現可能であり、ヒト腎線維症において生じる一連の病原的事象を加速された方法で繰り返すので、尿細管間質性線維化の病因を研究するために広く使用されている。特発性肺線維症と対照的に、浸潤性マクロファージは間質性腎線維症の主な特色のうちの１つである。マクロファージは、以下の機構を介して腎臓損傷に影響を及ぼし得る：ｉ）多くの炎症促進性メディエーターを放出することによって、炎症反応を高めること、ｉｉ）マクロファージ由来の活性酸素種およびＴＮＦ－αが、ＴＥＣのアポトーシスおよび壊死を誘発することができ、したがって、腎損傷を拡大することができること、およびｉｉｉ）マクロファージによる線維化促進性サイトカインおよび成長因子の過剰生成が、線維芽細胞の増殖およびα－平滑筋アクチン（ＳＭＡ）陽性筋線維芽細胞へのその分化を刺激することができ、それによって、異常な創傷治癒を、最終的に線維化を誘導することができること。証拠の蓄積によって、マクロファージ浸潤の程度が腎損傷の重症度と強く相関することが示唆される。腎臓疾患の病因におけるマクロファージの有害な役割は、同じ疾患モデルにおいて、マクロファージの枯渇により半月体形成性糸球体腎炎の発生が停止し、骨髄由来マクロファージの養子移植によって腎損傷が悪化することを実証する研究によっても支持される。ＵＵＯモデルは、例えば、非特許文献１に記載されている。

【0004】

接触システムまたは血漿カリクレイン－キニンシステムは、３種のセリンプロテアーゼ：ハーゲマン因子（凝固第ＸＩＩ因子、ＦＸＩＩ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）および血漿カリクレイン（ＰＫＬＫ）ならびに非酵素補助因子の高分子量キニノーゲン（ＨＫ）からなる。接触システムの活性化は、カオリン、硫酸デキストラン、内毒素、細胞外ＲＮＡ、ポリホスフェートおよびヘパリンなどの負に荷電した表面へのＦＸＩＩの曝露の際に生じる。この環境では、ＦＸＩＩは、２本鎖の活性プロテアーゼ、ＦＸＩＩａに変換される。ＦＸＩＩａは、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）の活性化を介して内在性血液凝固経路を開始する。しかし、最近のデータは、ＦＸＩＩは生理的止血に必ずしも必要でないという考えを支持し、病的血栓症におけるＦＸＩＩの必須の役割を実証する。さらに、ＦＸＩＩａはプレカリクレインをカリクレインへ変換し、次にこれが、さらなるＦＸＩＩを活性化し、高分子量キニノーゲン（ＨＫ）からブラジキニン（ＢＫ）を遊離させる。さらに、ＦＸＩＩは、ｕＰＡＲ依存的に内皮細胞の増殖を刺激する。

【0005】

先行技術文献、特許文献１は、凝固第ＸＩＩ因子を阻害するための抗ＦＸＩＩ抗体の使用、および静脈性または動脈性の血栓形成と関係がある障害の治療または予防における対応する抗体またはインヒビターの使用、すなわち抗血栓剤としての使用に関する。先行技術文献、特許文献２は、間質性肺疾患を治療するための第ＸＩＩ因子インヒビターの使用に関する。論文、非特許文献２は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の病因における凝固経路との関連におけるＦＸＩ／ＦＸＩＩに関する。先行技術文献、特許文献３は、神経外傷性障害を治療するための第ＸＩＩ因子インヒビターの使用に関する。非特許文献３は、心血管疾患を治療するためのアプローチとしてのＦＸＩＩの標的化を論じている。

【0006】

今までに、腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）の発生におけるＦＸＩＩの役割は評価されていない。

【0007】

腎臓または腎線維症に関する臨床試験を受けているまたは受けたことがある既知の小分子または薬剤は、異なる標的および／または機構に関連する（非特許文献４）。ピルフェニドンは、げっ歯類において腎臓線維症を防止することができるが、この利益は腎患者においてまだ確証されていない。７７人の腎臓疾患患者をともなう研究において、ピルフェニドンは腎機能を改善したが、タンパク尿を有意に低減せず、これは、ピルフェニドンは腎機能を改善するが、有足細胞損傷を改善しないことを示唆する。腎線維症を媒介するいくつかの重要なシグナリング経路が特定されているが、現在、これらの経路を標的化する薬物のいずれも、大規模な臨床試験において、腎臓疾患に対する抗線維化療法において有効であるということが証明されておらず、新規な標的が提案され続けている（非特許文献５）。

【0008】

ある研究において、マウスにおける虚血再灌流障害（ＩＲＩ）に対する初期炎症反応および線維化へのその後の進行に対するヒトＣ１インヒビター（Ｃ１ ＩＮＨ）の影響が調査され、再灌流より前にＣ１－ＩＮＨが与えられた動物は、ビヒクル（ＰＢＳ）処理した対応動物と比較して、優れた腎機能に加えて生存率の有意な改善を有することが観察された。これに関する発見により、虚血傷害より前のＣ１－ＩＮＨの静脈内送達は、炎症性損傷および線維化へのその後の進行から腎臓を保護することを示すことが分かった。本発明者らは、ＩＲＩにおける初期補体遮断は、虚血性急性腎臓傷害後の線維化の防止における有効な戦略を構成すると結論する（非特許文献６）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【文献】ＷＯ２００６／０６６８７８

【文献】ＷＯ２０１１／１２１１２３Ａ１

【文献】ＷＯ２０１５／１９３４５７Ａ１

【非特許文献】

【0010】

【文献】Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００９）、７５、１１４５～１１５２（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｋｉ．２００９．８６）

【文献】「Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｉｎｓｔｒｉｎｓｉｃ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ」、Ｅｗａ Ｊａｂｌｏｎｓｋａ、２０１０年１１月２９日、ＶＶＢ Ｌａｕｆｅｒｓｗｅｉｌｅｒ、Ｇｉｅｓｓｅｎ（ＩＳＢＮ：９７８－３－８３５９－５６９３－３）

【文献】Ｖｏｒｌｏｖａら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．２０１７年１月５日；１１７（１）：１７６～１８７（ｄｏｉ：１０．１１６０／ＴＨ１６－０６－０４６６；Ｅｐｕｂ ２０１６年１０月２７日）

【文献】Ｎａｎｔｈａｋｕｍａｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１５年、６９３～７２０、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｄ４５９２

【文献】Ｎｕｇｅｎｔら、ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２０１５年（６）、論文１３２、ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｐｈｙｓ．２０１５．００１３２

【文献】Ｄａｎｏｂｅｉｔｉａ Ｊ．Ｓ，Ｚｉｅｍｅｌｉｓ Ｍ，Ｍａ Ｘ，Ｚｉｔｕｒ ＬＪ，Ｚｅｎｓ Ｔ，Ｃｈｌｅｂｅｃｋ ＰＪら（２０１７）、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ａｃｕｔｅ ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ ａｆｔｅｒ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｍｉｔｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ；ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（８）：ｅ０１８３７０１．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１８３７０１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

前述の努力にもかかわらず、現在、腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）の治療に対して承認された医薬はない。したがって、好ましくは、制御されないＴＥＣ死を防止し、尿細管の増殖／再生を促進し、線維芽細胞の活性化を阻害する抗線維化戦略に対する、いまだに対処されていない臨床的要求が存在する。

【課題を解決するための手段】

【0012】

前述の要求を満たすために、本発明は、
対象における、特にヒトまたは動物対象における慢性腎臓疾患および／または腎線維症の
－ 治療または防止で使用するための第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）のインヒビター
－ 治療および防止で使用するためのキット、ならびに
－ 治療および防止で使用するための抗第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）抗体またはその抗原結合性断片を提供し、特に、慢性腎臓疾患および／または腎線維症は、以下：限定されないが、腎炎、ループス腎炎、Ｃ３－糸球体腎炎、デンスデポジット病、非定型溶血性尿毒症症候群、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病および腎臓移植の抗体媒介性拒絶反応の群から選択される、糸球体硬化症、腎瘢痕、腎臓における虚血／再灌流障害、急性腎臓傷害、腎臓の移植片／同種移植片の拒絶反応、再発性基礎疾患、および／もしくはＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体形成と関係がある炎症性腎臓疾患の１つもしくはそれ以上の結果である、ならびに／またはこれらの１つもしくはそれ以上に関連する。

【0013】

本発明の文脈において、および明細書および特許請求の範囲の全体を通して、用語「第ＸＩＩ因子のインヒビター」は、Ｃ１ＩＮＨを包含しないように、すなわち、「第ＸＩＩ因子のインヒビターがＣ１ ＩＮＨではないという条件で」理解されるものとする。

【0014】

本発明をもたらす際に、本発明者らは、片側尿管閉塞（ＵＵＯ）の上記の実験モデルを使用する腎線維症のマウスモデルにおいて、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）の阻害効果を研究した。本発明者らは、実験的腎線維症におけるＦＸＩＩ阻害は、
（ｉ）細胞外基質タンパク質の存在量を顕著に低減させ、
（ｉｉ）初期において、マクロファージの蓄積にもサイトカインの産生にも影響を及ぼさず、
（ｉｉｉ）疾患の初期および後期において、アポトーシス性腎尿細管上皮細胞の数の顕著な減少をもたらし、
（ｉｖ）疾患の初期および後期において、増殖性腎尿細管上皮細胞の数の増加をもたらし、
（ｖ）体重減少を減弱する
ことを見出した。

【0015】

本発明者らは、ヒト腎線維症において生じる一連の病原的事象を加速された方法で繰り返す、腎線維症の認められた動物モデルに、ＦＸＩＩのインヒビターを投与することによって、これらの効果を実証した。

【0016】

本発明者らによる発見は、ＦＸＩＩを阻害することによって、対象における腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を治療または防止するための方法の基礎を提供する。本発明者らによる発見は、対象における腎線維症および／またはＣＫＤの治療または防止で使用するためのＦＸＩＩのインヒビターの基礎も提供する。

【0017】

例えば、本開示は、対象における腎線維症および／またはＣＫＤを治療するための方法であって、ＦＸＩＩのインヒビターを対象に投与することを含む方法を提供する。別の例では、本開示は、対象における腎線維症を防止するための方法であって、ＦＸＩＩのインヒビターを対象に投与することを含む方法を提供する。

【0018】

代替例では、本開示は、対象において腎線維症を治療するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。別の例では、本開示は、対象において腎線維症を防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。

【0019】

本発明者らは、このインヒビターが対象において腎線維症の進行を小さくすることができることも発見した。したがって、本開示はさらに、対象において腎線維症の進行を小さくする方法または対象において腎線維症の進行を小さくするのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。例えば、本開示は、対象における腎線維症の危険性を低減する、もしくは対象における腎線維症を防止する方法、または対象における腎線維症の危険性を低減する、もしくは対象における腎線維症を防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを提供する。

【0020】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的インヒビターである。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合する。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を阻害する。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩａに結合し、ＦＸＩＩａの活性を阻害する。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩに結合し、ＦＸＩＩの活性化を阻害する。一例では、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は、それぞれ少なくとも約５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％阻害される。例えば、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性は、それぞれ約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％阻害される。ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａの活性を決定するための方法は当技術分野で公知であり、および／または本明細書に記載される。

【0021】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターである。例えば、ＦＸＩＩインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４である。別の例では、ＦＸＩＩインヒビターはＳＰＩＮＫ－１である。さらなる例では、ＦＸＩＩインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４またはＳＰＩＮＫ－１の変異体である。

【0022】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４ではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体ではない。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１ではない。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはＳＰＩＮＫ－１の変異体ではない。

【0023】

一例では、本開示の方法または本開示で使用するためのＦＸＩＩのインヒビターはＦＸＩＩのインヒビターを投与することを含み、このインヒビターは以下を含む：
（ｉ）野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４ポリペプチド配列（配列番号１）、もしくは：
（ａ）配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１；および／もしくは、
（ｂ）配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；または、
（ｉｉ）野生型ＳＰＩＮＫ－１ポリペプチド配列（配列番号２）、もしくは：
（ａ）Ｎ末端アミノ酸位置２～１３を配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２；および／もしくは、
（ｂ）配列番号２に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列
を含むポリペプチド配列；または、
（ｉｉｉ）ＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１（配列番号３）、Ｋ２（配列番号４）もしくはＫ３（配列番号５）のうちの１つ。

【0024】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号１に記載される配列を含む。

【0025】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは改変Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された、配列番号１に記載される配列を含む。

【0026】

別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に記載される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有し、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に対して約７５％の同一性、または配列番号１に対して約８０％の同一性、または配列番号１に対して約８５％の同一性、または配列番号１に対して約９０％の同一性、または配列番号１に対して約９５％の同一性、または配列番号１に対して約９８％の同一性、または配列番号１に対して約９９％の同一性を有する。

【0027】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターＳＰＩＮＫ－１の配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号２に記載される配列を含む。

【0028】

別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｎ末端アミノ酸位置２～１３を配列番号１のＮ末端アミノ酸２～１３と置き換えるように変異され；場合により、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性を高める１～５つのさらなるアミノ酸変異を含有するようにさらに改変された配列番号２に記載される配列を含む。

【0029】

別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に記載される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有し、配列番号２由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号２に対して約７５％の同一性、または配列番号２に対して約８０％の同一性、または配列番号２に対して約８５％の同一性、または配列番号２に対して約９０％の同一性、または配列番号２に対して約９５％の同一性、または配列番号２に対して約９８％の同一性、または配列番号２に対して約９９％の同一性を有する。

【0030】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは可変領域断片（Ｆｖ）を含むタンパク質である。例えば、タンパク質は以下からなる群から選択される：
（ｉ）単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）；または
（ｉｖ）ダイアボディ（すなわち、二重特異性抗体）；
（ｖ）トリアボディ（すなわち、三重特異性抗体）；
（ｖｉ）テトラボディ（すなわち、四重特異的抗体）；
（ｖｉｉ）Ｆａｂ；
（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２；
（ｉｘ）Ｆｖ；
（ｘ）抗体の定常領域、Ｆｃもしくは重鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）２および／もしくはＣ_Ｈ３に連結した（ｉ）～（ｉｘ）のうちの１つ；または
（ｘｉ）抗体。

【0031】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは抗体である。例えば、抗体は抗ＦＸＩＩ抗体である。別の例では、抗体は抗ＦＸＩＩａ抗体である。

【0032】

例示的抗体は全長および／またはネイキッド抗体である。

【0033】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは組換え、キメラ、ＣＤＲ移植、ヒト化、合成ヒト化、霊長類化、脱免疫化またはヒトのタンパク質である。

【0034】

一例では、抗体はＩｇＧ抗体である。

【0035】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６に記載される配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。

【0036】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号７に記載される配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。

【0037】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６に記載される配列を含むＶ_Ｈおよび配列番号７に記載される配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0038】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号６および配列番号７のＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を含む。

【0039】

一例では、タンパク質または抗体は、前述のタンパク質または抗体のうちのいずれかをコードする核酸によってコードされたタンパク質または抗体の任意の形態であり、例えば、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基を欠く変異体である。

【0040】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶ_Ｈ：
（ａ）配列番号６に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは（ｃ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶＬ：
（ａ）配列番号７に記載される配列；もしくは
（ｂ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１６に記載される配列を含むＣＤＲ３；もしくは
（ｃ）配列番号１３に記載される配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４に記載される配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１５に記載される配列を含むＣＤＲ３。

【0041】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶ_Ｈ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１２に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶ_Ｌ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１６に記載の配列を含むＣＤＲ３。

【0042】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶ_Ｈ：
（ａ）配列番号８に記載される配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９に記載される配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１１に記載される配列を含むＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶ_Ｌ：
（ａ）配列番号１３に記載の配列を含むＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載の配列を含むＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載の配列を含むＣＤＲ３。

【0043】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は以下を含む：
（ｉ）以下を含むＶ_Ｈ
（ａ）配列番号８に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０に記載されるＣＤＲ２（ここで、位置３のＸはＤであり、位置４のＸはＩであり、位置５のＸはＰであり、位置６のＸはＴであり、位置７のＸはＫであり、位置８のＸはＧである）；および
（ｃ）配列番号１１に記載されるＣＤＲ３；ならびに／または
（ｉｉ）以下を含むＶ_Ｌ
（ａ）配列番号１３に記載されるＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４に記載されるＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号１５に記載されるＣＤＲ３。

【0044】

例えば、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号１８に記載される配列を含むＶ_Ｈおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0045】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はラムダ軽鎖定常領域を含む。

【0046】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。

【0047】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は組成物内に存在する。例えば、組成物は、本明細書に記載の抗体可変領域またはＶ_ＨまたはＶ_Ｌまたは抗体を含むタンパク質を含む。一例では、組成物は、タンパク質または抗体の１種またはそれ以上の変異体をさらに含む。例えば、組成物は、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基、例えば、抗体もしくはＶ領域のＮ末端グルタミンを欠く変異体および／または分泌シグナルのすべてまたは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド化変異体は、イソアスパラギン酸およびアスパラギン酸アイソフォームを生成することができ、または隣接するアミノ酸残基を含むスクシンアミドさえもたらすことができる。コードされたグルタミン残基の脱アミド化変異体はグルタミン酸をもたらすことができる。特定のアミノ酸配列を参照する場合に、そのような配列および変異体の異種混合物を含む組成物が含まれることが意図される。

【0048】

本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは融合パートナーに連結している。例えば、融合パートナーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または半減期増強ポリペプチドを含む。

【0049】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的に融合パートナーに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介して融合パートナーに連結している。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的に半減期増強ポリペプチドに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介して半減期増強ポリペプチドに連結している。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的にＰＥＧに連結している。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターはリンカーを介してＰＥＧに連結している。

【0050】

一例では、リンカーは介在性ペプチドリンカーである。例えば、リンカーは切断可能なリンカーである。

【0051】

一例では、半減期増強ポリペプチドはアルブミン、アファミン、アルファ－フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃからなる群から選択される。例えば、半減期増強ポリペプチドはアルブミンである。

【0052】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩインヒビターに連結したヒトアルブミンを含む融合タンパク質である。

【0053】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは非経口的に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは静脈内または皮下または髄腔内に投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは皮下に投与される。別の例では、ＦＸＩＩのインヒビターは静脈内に投与される。

【0054】

本明細書に記載の任意の方法の一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、１回またはそれ以上の用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは：
（ｉ）単回用量で；または
（ｉｉ）複数回の用量で；または
（ｉｉｉ）持続注入もしくは塗布として
対象に投与される。

【0055】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは対象に単回用量で投与される。

【0056】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは複数回の用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、２回用量または３回用量または４回用量または５回用量またはそれ以上の用量として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数時間の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１時間または約２時間または約３時間または約４時間または約６時間または約８時間または約１２時間または約１６時間または約２０時間または約２４時間の期間で隔てられる。

【0057】

例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数日の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１日または約２日または約３日または約４日または約５日または約６日または約７日の期間で隔てられる。

【0058】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、少なくとも１４日または少なくとも２８日隔てられる。

【0059】

例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は数週間の期間で隔てられる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は、約１週間または約２週間または約３週間または約４週間または約５週間または約６週間の期間で隔てられる。

【0060】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの各用量の投与は少なくとも１か月間隔てられる。

【0061】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは投与過程を通して同じである。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは投与過程を通して異なる。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、所定の用量数に従って、療法の開始時に週１回の頻度で投与され、次いで月１回の頻度で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターの投与間の時間の長さは変動し得る。

【0062】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは持続用量として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターはある期間にわたって持続注入として対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは約１分～約２４時間の期間にわたって投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１０分～約１２時間または約１０分～約６時間または約１０分～約５時間または約１０分～約４時間または約１０分～約３時間または約１０分～約２時間または約１０分～約１時間または約３０分の期間にわたって投与される。

【0063】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは複数回投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは１回またはそれ以上投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、腎線維症が治療されるまたは防止されるまで投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、数日～数か月の期間にわたって投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約１日または約２日または約３日または約４日または約５日または約６日または約１週間または約２週間または約４週間または約６週間または約２か月にわたって投与される。

【0064】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは治療的または予防的に有効な量で投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重または約５０ｍｇ／ｋｇ体重または約１００ｍｇ／ｋｇ体重または約２００ｍｇ／ｋｇ体重または約５００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０００ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇまたは約５０ｍｇ／ｋｇ～約５００ｍｇ／ｋｇまたは約５０ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0065】

一例では、対象は腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を有する。一例では、対象は腎線維症および／またはＣＫＤに罹患していると診断されている。一例では、対象は腎線維症および／またはＣＫＤの治療を受けている。一例では、対象は腎線維症および／またはＣＫＤに関連した状態（例えば、糖尿病性腎障害、高血圧性腎障害、糸球体腎炎、糸球体硬化症、間質性腎炎）の治療を受けている。一例では、患者は生得のもしくは同種移植の腎臓の線維症および／またはＣＫＤの治療を受けている。例えば、対象は、ＡＣＥインヒビター、抗高血圧薬、コルチコステロイド、免疫抑制剤（アザチオプリン、ＭＭＦ、シクロホスファミド、リツキシマブ）による治療を受けている。

【0066】

一例では、対象は透析または血液透析の形態で治療を受けている。一例では、対象はＲＡＡＳインヒビターによる治療を受けている。

【0067】

本明細書に記載の任意の方法または本明細書に記載の使用のためのＦＸＩＩのインヒビターの一例では、対象は、腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性がある。この関連で、ＦＸＩＩのインヒビターは防止的もしくは予防的様式で使用され、または一次防止様式で使用されると言うことができる。腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性がある例示的対象は糖尿病に罹患している。例えば、糖尿病は２型糖尿病である。

【0068】

腎線維症および／またはＣＫＤに罹患する危険性がある対象の、さらなるまたは代替の特徴としては、以下の特徴の１つまたはそれ以上が挙げられる：
・糖尿病性腎障害
・高血圧性腎障害
・糸球体腎炎
・ループス腎炎
・腎血管炎
・糸球体硬化症
・間質性腎炎
・常染色体優性多発性嚢胞腎
・アルポート症候群
・鎮痛薬腎障害
・虚血再灌流または拒絶反応と関係がある腎臓同種移植損傷

【0069】

一例では、腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を発生する危険性がある高血圧性腎障害（腎硬化症）を有する対象は、線維形成を抑制するために、ＦＸＩＩａのインヒビターで治療される。

【0070】

一例では、腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性がある慢性糸球体腎炎を有する対象は、腎臓線維症を防止するために、ＦＸＩＩのインヒビターで治療される。

【0071】

一例では、腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性があるアルポート症候群に罹患している対象は、腎線維症を低減するために、ＦＸＩＩのインヒビターで治療される。

【0072】

腎血管炎に罹患している患者は、急性期炎症マーカーのレベルが上昇した：循環中のＣ反応性タンパク質およびＩＬ－６のレベルが増大した、糸球体と尿細管間質の両方に激しい腎炎症を有する。

【0073】

本明細書に記載の任意の方法の一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは腎線維症および／またはＣＫＤの発症の前または後に対象に投与される。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは予防的または治療的に投与される。一例では、インヒビターは予防的に対象に投与される。一例では、インヒビターは治療的に対象に投与される。

【0074】

毎年、米国において、およそ１００，０００人のＣＫＤ患者が、基礎腎疾患に関係なく、末期腎線維症のために、腎代替療法を開始する必要がある。本開示は、本明細書に記載の方法を実施することによって、透析および／または腎臓移植を受けなければならないという危険性を低減させるための方法を提供する。

【0075】

ＦＸＩＩのインヒビターは、以下の効果を誘発するのに十分である量で、糖尿病性腎障害を有する患者に投与される：タンパク尿の低減および糸球体濾過率（ＧＦＲ）の喪失の緩徐化。

【0076】

ＦＸＩＩのインヒビターは、末期腎疾患をともなう腎線維症を防止するために、腎線維症および／またはＣＫＤの発生の前に、初期糸球体硬化症に罹患している患者に投与される。患者のある群では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＧＦＲのさらなる喪失を緩徐化することができるかどうかを調査するために、腎線維症および／またはＣＫＤの発生の後に投与される。

【0077】

糖尿病性腎障害を有する患者の群では、ＦＸＩＩａのインヒビターは、タンパク尿を低減させることができるかどうかを調べるために、腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）の症状の発症後に投与される。糖尿病性腎障害を有する患者のさらなる群では、ＦＸＩＩのインヒビターは、腎線維症および／またはＣＫＤの症状、例えば、タンパク尿およびＧＦＲの低下の１つまたはそれ以上を軽減するまたは低減する用量で投与される。

【0078】

腎線維症および／またはＣＫＤの臨床徴候および症状は当業者に知られている。それらとしては、以下が挙げられる：
－ 高血圧
－ 容量過負荷
－ 貧血
－ 二次性または三次性副甲状腺機能亢進
－ 代謝性アシドーシス
－ 高カリウム血症
－ そう痒
－ 尿毒症性脳症

【0079】

本明細書に記載の使用のための治療方法またはＦＸＩＩのインヒビターは、腎線維症および／またはＣＫＤを防止するおよび／または治療するためにコルチコステロイドおよび他の免疫抑制剤（アザチオプリン、ＭＭＦ、シクロホスファミド、リツキシマブ）を投与する必要性をさらに低減することができる。

【0080】

本開示は、それらを必要とする対象において腎線維症および／またはＣＫＤを治療または防止するのに使用するためのＦＸＩＩのインヒビターを含む組成物も提供する。本開示は、対象において腎線維症および／またはＣＫＤを治療または防止するための医薬の製造におけるＦＸＩＩのインヒビターの使用も提供する。

【0081】

本開示は、対象において腎線維症および／またはＣＫＤを治療または防止するのに使用するために、指示書とともにパッケージ化された少なくとも１種のＦＸＩＩのインヒビターを含むキットも提供する。場合により、キットは治療的に活性な化合物または薬物をさらに含む。

【0082】

本開示は、場合により治療的に活性な化合物または薬物と組み合わせて、腎線維症および／もしくはＣＫＤに罹患しているまたは腎線維症および／もしくはＣＫＤに罹患する危険性がある対象にＦＸＩＩのインヒビターを投与するために、指示書とともにパッケージ化された少なくとも１種のＦＸＩＩのインヒビターを含むキットも提供する。

【0083】

腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）の例示的影響およびＦＸＩＩのインヒビターは本明細書に記載され、前の５段落に示された本開示の例に準用すると解釈されるものとする。

【0084】

発明者は、ヒト対象の治療に使用するのに適するＦＸＩＩのインヒビター、例えば、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も産生した。このインヒビターは、すべてではないがほとんどのフレームワーク領域中残基を生殖系列ヒト抗体のものと同じにするように改変され、それによって、免疫原性の可能性を低減する、親和性成熟ヒト抗体である。この抗体はまた、ＦＸＩＩａを阻害することができ、優れた製造可能特性を有する。したがって、本開示は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も提供し、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号１８に記載される配列を含むＶ_Ｈおよび配列番号１９に記載される配列を含むＶ_Ｌを含む。

【0085】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はラムダ軽鎖定常領域を含む。一例では、抗ＦＸＩＩ抗体はＩｇＧ４または安定化ＩｇＧ４定常領域を含む。例えば、安定化ＩｇＧ４定常領域は、Ｋａｂａｔのシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７および／または１９９１）に従って、ヒンジ領域の位置２４１にプロリンを含む。

【0086】

一例では、抗ＦＸＩＩ抗体は、配列番号２０に記載される配列を含む重鎖および配列番号２１に記載される配列を含む軽鎖を含む。一例では、本開示は、抗ＦＸＩＩ抗体または抗原結合性断片および担体、例えば、医薬的に許容可能な担体を含む組成物を提供する。一例では、組成物は、タンパク質または抗体の１種またはそれ以上の変異体をさらに含む。例えば、組成物は、コードされたＣ末端リジン残基を欠く変異体、脱アミド化変異体および／またはグリコシル化変異体および／または例えば、タンパク質のＮ末端にピログルタミン酸を含む変異体および／またはＮ末端残基、例えば、抗体もしくはＶ領域のＮ末端グルタミンを欠く変異体および／または分泌シグナルのすべてもしくは一部を含む変異体を含む。コードされたアスパラギン残基の脱アミド化変異体は、イソアスパラギン酸およびアスパラギン酸アイソフォームを生成することができ、または隣接するアミノ酸残基を含むスクシンアミドさえもたらすことができる。コードされたグルタミン残基の脱アミド化変異体は、グルタミン酸をもたらすことができる。特定のアミノ酸配列を参照する場合に、そのような配列および変異体の異種混合物を含む組成物が含まれることが意図される。

【0087】

本開示は、医学的使用のための抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片も提供する。

【0088】

本開示は、対象において障害を治療または防止するための方法も提供し、この方法は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、障害は、ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体活性化と関係がある腎疾患からなる群から選択される。

【0089】

ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性補体活性化と関係がある炎症性腎臓疾患：
－ ループス腎炎
－ Ｃ３－糸球体腎炎
－ デンスデポジット病
－ 非定型溶血性尿毒症症候群
－ 連鎖球菌感染後糸球体腎炎
－ ヘノッホ－シェーンライン紫斑病
－ 腎臓移植の抗体媒介性拒絶反応

【0090】

ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ誘導性補体活性化と関係があるこれら上記の腎臓疾患に罹患している患者は、ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａインヒビターによる治療について選択されるであろう。

【0091】

遺伝性腎炎を有する患者については、腎炎症およびその後の線維化の有効な治療はない。これらの患者は、ＦＸＩＩａのインヒビターまたは抗ＦＸＩＩ抗体で治療されるであろう。

【0092】

体外治療（血液透析、血漿アフェレーシス、カスケード濾過および脂質アフェレーシス）を受けている患者は、負に荷電した人工膜を含む装置に暴露され、これは、ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａ媒介性キニン形成および補体活性化を引き起こし得る。前記ヒト対象に行われる医療処置の間および／または後に、対象の血液と人工表面の接触の間および／または後に、前記抗体またはその抗原結合性断片は、前記医療処置の前および／または間および／または後に投与され、ここで、
（ｉ）人工表面は対象の血液量の少なくとも１００％に暴露され、人工表面は少なくとも１．０ｍ^２である、または
（ｉｉ）人工表面は対象の体外の体外循環の一部である、または
（ｉｉｉ）人工表面は、透析機器の一部、例えば、透析膜、チューブシステム、バブルキャッチャーおよびドリップチャンバー（空気への血液の曝露）である。

【0093】

本開示は、本発明の抗体または抗原結合性断片でコーティングされた医療装置も提供し、この装置は透析機、血液の酸素化のための体外膜型酸素供給システム、血液の補助ポンピング用装置、血液透析装置、血液の体外濾過用装置、血液の採取に使用するための貯蔵用容器、腔内カテーテル、ステント、ならびに／またはチューブ、カニューレ、遠心ポンプ、弁、ポートおよび／もしくはダイバーターを含めた、前記装置のうちのいずれか１つのための付属品である。

【0094】

本開示は、体外処置を受けている患者に抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む方法も提供し、医療処置は、以下の少なくとも１つとの接触を含む：
（ａ）血液透析、
（ｂ）血漿アフェレーシス、
（ｃ）脂質アフェレーシス。

【0095】

本開示は、進行性ネフローゼ症候群、タンパク質消耗糖尿病性腎障害（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｗａｓｔｉｎｇ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）を含めた、腎血管透過性の増大に関連する状態を治療または防止するための方法も提供し、この方法は、抗ＦＸＩＩ抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0096】

【図1A】損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓において決定した尿細管損傷スコアを示す図である。

【図1B】損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からのＰＡＳ染色切片を示す図である。

【図2】図２Ａ～Ｃは、損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓における、ｑＰＣＲ（図２Ａ）、ウエスタンブロッティング（図２Ｂ）および免疫組織化学的検査（図２Ｃ）によって評価したα－ＳＭＡの発現を示す図である。

【図3】図３Ａ～Ｃは、損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓における、ｑＰＣＲ（図３Ａ）、ウエスタンブロッティング（図３Ｂ）および免疫組織化学的検査（図３Ｃ）によって評価したフィブロネクチンの発現を示す図である。

【図4】図４Ａ～Ｃは、損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓における、ｑＰＣＲ（図４Ａ）、ヒドロキシプロリン含量（図４Ｂ）および免疫組織化学的検査（図４Ｃ）によって評価したコラーゲンＩ（Ｃｏｌ Ｉ）の発現を示す図である。

【図5】図５Ａおよび５Ｂは、損傷後１０日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓におけるマクロファージ（Ｆ４／８０陽性細胞）の蓄積を示す図である。

【図6】損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からの代表的な切断カスパーゼ－３染色切片を示す図である。

【図7】損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からの代表的なＫｉ６７染色切片を示す図である。

【図8】損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化腎臓からの代表的なＰＡＳ染色切片を示す図である。

【図9】損傷後１０日目の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓を有するＩｇＧ－および３Ｆ７－治療マウスの体重減少を示す図である。

【図10】損傷後１０日目の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓を有するＩｇＧ－および３Ｆ７－治療マウスの腎臓／体重の比を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0097】

配列表の解説
配列番号１は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４のアミノ酸配列である。
配列番号２は野生型ＳＰＩＮＫ－１のアミノ酸配列である。
配列番号３はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ１のアミノ酸配列である。
配列番号４はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ２のアミノ酸配列である。
配列番号５はＳＰＩＮＫ－１突然変異体Ｋ３のアミノ酸配列である。
配列番号６は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶ_Ｈからのアミノ酸配列である。
配列番号７は抗ＦＸＩＩ抗体３Ｆ７のＶ_Ｌからのアミノ酸配列である。
配列番号８は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号９は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１０は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１１は 抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１２は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｈ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１３は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１４は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲ２からのアミノ酸配列である。
配列番号１５は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１６は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲ３からのアミノ酸配列である。
配列番号１７は抗ＦＸＩＩ抗体のＶ_Ｌ ＣＤＲ１からのアミノ酸配列である。
配列番号１８は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶ_Ｈのアミノ酸配列である。
配列番号１９は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５のＶ_Ｌのアミノ酸配列である。
配列番号２０は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２１は抗ＦＸＩＩ抗体ｇＶＲ１１５の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２２はヒト第ＸＩＩ因子からのアミノ酸配列である。
配列番号２３はヒトアルブミンの成熟型のアミノ酸配列である。
配列番号２４はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。
配列番号２５はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体のアミノ酸配列である。

【0098】

一般原則
本明細書全体にわたって、特に記載のない限りまたは文脈上特に必要でない限り、単一工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物に対する言及は、そうした工程、物質の組成物、一群の工程または一群の物質の組成物の１つおよび複数（すなわち、１つまたはそれ以上）を包含すると解釈されるものとする。

【0099】

本開示が具体的に記載されるもの以外の変形および改変を受けることができることを当業者であれば理解するであろう。本開示がすべてのそのような変形および改変を含むことを理解されたい。本開示は、本明細書で個々にまたはまとめて言及されるまたは示される工程、特色、組成物および化合物のすべて、ならびに前記工程または特色のありとあらゆる組み合わせまたは任意の２つまたはそれ以上も含む。

【0100】

本開示は、本明細書に記載の特定例によって範囲が制限されるものではなく、特定例は、例示の目的のみを意図する。機能的に等価な生成物、組成物および方法は明らかに本開示の範囲内である。

【0101】

本明細書における本開示のいかなる例も、特に記載のない限り、本開示の任意の他の例に準用すると解釈されるものとする。

【0102】

特に他に定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学および生化学において）当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有すると解釈されるものとする。

【0103】

別段指示がない限り、本開示で利用される組換えタンパク質、細胞培養および免疫学的技法は標準的な手順であり、当業者に周知である。そのような技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編）、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１および２巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．ＧｌｏｖｅｒおよびＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１～４巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５および１９９６）ならびにＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までのすべての更新を含む）、Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）ならびにＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在までのすべての更新を含む）などの出典の文献の全体にわたって記載および説明されている。

【0104】

本明細書における可変領域およびその一部、免疫グロブリン、抗体およびその断片の説明および定義は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７および１９９１、Ｂｏｒｋら、Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２、３０９～３２０、１９９４、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７、１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２、８７７～８８３、１９８９、ならびに／または、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３、９２７～９４８、１９９７における議論によってさらに明らかになり得る。本明細書におけるタンパク質または抗体のいかなる議論も、製造および／または貯蔵の間に産生される、タンパク質または抗体の任意の変異体を含むと理解される。例えば、製造または貯蔵の間に、抗体は（例えば、アスパラギンまたはグルタミン残基において）脱アミド化される、および／またはグリコシル化の変化がある、および／またはピログルタミンに変換したグルタミン残基を有する、および／または除去されたもしくは「切り取られた（ｃｌｉｐｐｅｄ）」Ｎ末端もしくはＣ末端残基を有する、および／または不完全にプロセッシングされた（結果として、抗体の末端に残る）シグナル配列の一部もしくはすべてを有する可能性がある。特定のアミノ酸配列を含む組成物は、記載されたもしくはコードされた配列および／または記載されたまたはコードされた配列の変異体の異種混合物でもよいことが理解されよう。

【0105】

用語「および／または」、例えば、「Ｘおよび／またはＹ」は、「ＸおよびＹ」か「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると理解されるものであり、両方の意味またはいずれかの意味に対する明確な支持を与えると解釈されるものとする。

【0106】

本明細書全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと」などの変形形態は、記載されるエレメント、要素（ｉｎｔｅｇｅｒ）もしくは工程または一群のエレメント、要素または工程の包含を意味するが、任意の他のエレメント、要素もしくは工程または一群のエレメント、要素または工程の排除を意味しないと理解される。

【0107】

本明細書で使用する場合、用語「に由来する」は、指定の要素を特定の供給源から得ることができる（必ずしも直接その供給源からとは限らない）ことを示すと解釈されるものとする。

【0108】

選択された定義
用語「腎（ｒｅｎａｌ）」および「腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）」は、本明細書で互換的に使用される。

【0109】

ハーゲマン因子またはＦＸＩＩとしても知られる凝固第ＸＩＩ因子は血漿タンパク質である。これは、セリンプロテアーゼ（またはセリンエンドペプチダーゼ）クラスの酵素である第ＸＩＩａ因子の酵素前駆体形態である。ヒトでは、第ＸＩＩ因子はＦ１２遺伝子によってコードされる。限定目的ではなく命名の目的のみのために、ヒト第ＸＩＩ因子の例示的配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０００４９６．２；ＮＣＰＩタンパク質受託番号ＮＰ＿０００４９６および配列番号２２に記載されている。第ＸＩＩ因子のさらなる配列を本明細書および／もしくは公的に利用可能なデータベースに提供される配列を使用して決定することができ、ならびに／または（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までのすべての更新を含む）またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されているような）標準的な技法を使用して決定することができる。

【0110】

本明細書で使用する場合、用語「第ＸＩＩ因子インヒビター」または「ＦＸＩＩインヒビター」または「ＦＸＩＩのインヒビター」は、第ＸＩＩ因子（活性化より前、すなわち、その酵素前駆体）と活性化第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩａ）のいずれかまたは両方およびＦＸＩＩの活性化のインヒビターを指す。したがって、「ＦＸＩＩのインヒビター」は、ＦＸＩＩとＦＸＩＩａ（αＦＸＩＩａとも称される）のいずれかまたは両方ならびにＦＸＩＩａ切断生成物のＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータ（ＦＸＩＩｆとも称される）を含めたＦＸＩＩの活性化のインヒビターを含むことができる。ＦＸＩＩインヒビターは、野生型インヒビターの機能的な変異体および断片を包含する。機能的な変異体または断片は、野生型分子がＦＸＩＩ、ＦＸＩＩａまたはＦＸＩＩの活性化を阻害する能力の少なくとも５０％（例えば、約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９９％、または約１００％）を保持する分子である。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは非内在性インヒビターであり；すなわち、これは、ヒトまたは動物の体内に天然に存在するインヒビターではない。

【0111】

本明細書で使用する場合、用語「直接的ＦＸＩＩインヒビター」または「直接的インヒビター」は、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）との接触（例えば、結合）を介して作用するインヒビターを指し、すなわち、ＦＸＩＩインヒビターは、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａに結合し、その活性および／または活性化を阻害する。これに対して、間接的インヒビターは、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）タンパク質と接触することなしに作用することができる。例えば、アンチセンスＲＮＡは、ＦＸＩＩ遺伝子の発現を低下させるのに使用することができ、または小分子は、第ＸＩ因子のような下流のＦＸＩＩａ反応パートナーとの相互作用を介して、ＦＸＩＩａの効果を阻害することができ；これらは、ＦＸＩＩタンパク質と直接的に相互作用しない。したがって、間接的インヒビターは、直接的インヒビターとは対照的に、ＦＸＩＩタンパク質の上流または下流で作用する。一例では、ＦＸＩＩインヒビターはＦＸＩＩまたはＦＸＩＩａに特異的であり、特にヒトＦＸＩＩまたはＦＸＩＩａに特異的である。

【0112】

本明細書で使用する場合、用語「第ＸＩＩ因子のインヒビター」または「第ＸＩＩ因子インヒビター」は、加えて、Ｃ１－ＩＮＨを包含しないように、すなわち、「第ＸＩＩ因子のインヒビターがＣ１ ＩＮＨではないという条件で」理解されるものとする。

【0113】

本明細書で使用する場合、用語「結合する」は、タンパク質またはその抗原結合部位と抗原との相互作用に関連して、相互作用が抗原の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存していることを意味する。例えば、抗体は、一般に、タンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識し、それに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合する場合、標識された「Ａ」およびタンパク質を含有する反応において、エピトープ「Ａ」を含有する分子（または遊離した非標識の「Ａ」）の存在は、抗体に結合している標識された「Ａ」の量を低減する。

【0114】

本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」は、タンパク質またはその抗原結合部位が、別の抗原または細胞と比べて、より頻度に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより大きな親和性で、特定の抗原またはそれを発現する細胞と反応または結合することを意味すると解釈されるものとする。例えば、タンパク質またはその抗原結合部位は、これが、多反応性自然抗体（すなわち、ヒトで天然に見られる様々な抗原に結合することが知られている天然に存在する抗体）によって一般に認識される他の血液凝固因子または抗原に結合するよりも、実質的に大きな親和性（例えば、１．５倍または２倍または５倍または１０倍または２０倍または４０倍または６０倍または８０倍～１００倍または１５０倍または２００倍）で、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）に結合する。一般に、必ずしもそうとは限らないが、結合への言及は特異的結合を意味し、各用語は他の用語に対する明示的な支持を提供することを理解されたい。

【0115】

用語「アミド分解活性」は、ＦＸＩＩのインヒビターが別のポリペプチド中の少なくとも１つのペプチド結合の加水分解を触媒する能力を指す。本明細書で使用する場合、用語「同一性」または「同一の」は、同一の、または保存的置換を構成するアミノ酸のパーセンテージ数を指す。相同性は、参照によって本明細書に組み入れる、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、１９８４、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２、３８７～３９５）などの配列比較プログラムを使用して、決定することができる。このような方法で、アライメント中にギャップを挿入することによって、本明細書で引用されるものと同様のまたは実質的に異なる長さの配列を比較することができ、そのようなギャップは、例えば、ＧＡＰが使用する比較アルゴリズムによって、決定される。

【0116】

「半減期増強ポリペプチド」または「ＨＬＥＰ」は、患者においてまたは動物においてＦＸＩＩインヒビターの半減期をｉｎ ｖｉｖｏで増大させることができる、ポリペプチド融合パートナーである。例としては、アルブミンならびに免疫グロブリンおよびＦｃドメインなどのその断片、またはその誘導体が挙げられ、これらは、直接的にまたは切断可能なもしくは切断不可能なリンカーを介してＦＸＩＩインヒビターに融合することができる。Ｂａｌｌａｎｃｅら（ＷＯ２００１／７９２７１）は、ヒト血清アルブミンに融合した数多くの異なる治療的ポリペプチドを含む融合ポリペプチドを記載した。本明細書で使用する場合、用語「アルブミン」および「血清アルブミン」は、ヒトアルブミン（ＨＡ）およびその変異体を包含する。限定目的ではなく命名の目的のみのために、完全成熟型のアルブミンの例示的配列が配列番号２３に記載され、ならびに他の種由来のアルブミンおよびそれらの変異体も記載される。本明細書で使用する場合、「アルブミン」は、アルブミンのポリペプチドもしくはアミノ酸配列またはアルブミンの１つもしくはそれ以上の機能活性（例えば、生物活性）を有するアルブミン変異体を指す。ある種の例では、アルブミンは、ＦＸＩＩインヒビターの治療活性を安定化するまたは延ばすために使用される。アルブミンは、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物、例えばヒト、サル、ウシ、ヒツジまたはブタに由来し得る。非哺乳類のアルブミンも使用することができ、限定はされないが、ニワトリおよびサケ由来のアルブミンが挙げられる。アルブミン結合型ポリペプチドのアルブミン部分は治療的ポリペプチド部分と異なる動物由来でもよい。アルブミン融合タンパク質の例については、参照によりその全体を本明細書に組み入れるＷＯ２００８／０９８７２０を参照されたい。

【0117】

用語「組換え体」は、人工の遺伝子組換えの生成物を意味すると理解されたい。したがって、抗体可変領域を含む組換えタンパク質の文脈において、この用語は、Ｂ細胞の成熟中に生じる天然の組換えの生成物である、対象の体内に天然に存在する抗体を包含しない。しかし、そのような抗体が単離される場合、これは、抗体可変領域を含む単離タンパク質であるとみなされるべきである。同様に、タンパク質をコードする核酸が単離され、組換え手段を使用して発現される場合、得られるタンパク質は組換えタンパク質である。組換えタンパク質は、例えばそれが発現される細胞、組織または対象内にある場合、人工の組換え手段によって発現されるタンパク質も包含する。

【0118】

用語「タンパク質」は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合で連結された一連の連続的なアミノ酸または共有結合的もしくは非共有結合的に互いに連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を含むと解釈されるものとする。例えば、一連のポリペプチド鎖は、適切な化学結合またはジスルフィド結合を使用して共有結合させることができる。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力および疎水性相互作用が挙げられる。

【0119】

用語「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」は、前述の段落から、ペプチド結合で連結された一連の連続的なアミノ酸を意味すると理解される。

【0120】

「抗体」は、一般に、複数のポリペプチド鎖、例えば、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むポリペプチドおよび重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含むポリペプチドで構成されている可変領域を含むタンパク質であるとみなされることを当業者であれば認識しているであろう。抗体は一般に定常ドメインも含み、そのうちのいくつかは、重鎖の場合には、定常断片または結晶性断片（Ｆｃ）を含む定常領域中に配置される可能性がある。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは相互作用して、１つまたは少数の密接に関連する抗原に特異的に結合することができる抗原結合領域を含むＦｖを形成する。一般に、哺乳動物の軽鎖はκ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかであり、哺乳動物の重鎖はα、δ、ε、γまたはμである。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１およびＩｇＡ_２）またはサブクラスのものでもよい。用語「抗体」は、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヒト抗体、合成ヒト化抗体およびキメラ抗体も包含する。「抗ＦＸＩＩ抗体」は、ＦＸＩＩの酵素前駆体ならびにＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータ切断断片を含めた活性化タンパク質（ＦＸＩＩａ）のいずれかもしくは両方に結合するおよび／またはこれらを阻害する抗体を含む。いくつかの例では、抗体は、ＦＸＩＩａまたはＦＸＩＩａのアルファもしくはベータ鎖断片に特異的に結合する。

【0121】

用語「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」は互換的に使用されて、抗体の抗原結合性断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指す。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）でもよいし、またはそれらのアミノ酸配列変異体でもよい。

【0122】

本明細書で使用する場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合することができ、相補性決定領域（ＣＤＲ）；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、本明細書で定義されるような抗体の軽鎖および／または重鎖の一部を指す。例示的可変領域は、３つまたは４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および場合によりＦＲ４）を３つのＣＤＲとともに含む。ＩｇＮＡＲに由来するタンパク質の場合には、タンパク質はＣＤＲ２を欠いていてもよい。Ｖ_Ｈは重鎖の可変領域を指す。Ｖ_Ｌは軽鎖の可変領域を指す。

【0123】

本明細書で使用する場合、用語「相補性決定領域」（同義語はＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）は、その存在が抗原結合に必要である、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。各可変ドメインは、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として特定された３つのＣＤＲ領域を有する。ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．、１９８７および１９９１、または本開示の実施における他の番号付けシステム、例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７、１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２、８７７～８８３、１９８９；ならびに／もしくはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７～９４８、１９９７の標準的番号付けシステム；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖｅｌ．Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７：５５～７７、２００３のＩＭＧＴ番号付けシステム；もしくはＨｏｎｎｅｇｈｅｒおよびＰｌｕｋｔｈｕｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３０９：６５７～６７０、２００１のＡＨＯ番号付けシステムに従って定義することができる。

【0124】

「フレームワーク領域」（ＦＲ）はＣＤＲ残基以外のそれらの可変ドメイン残基である。

【0125】

本明細書で使用する場合、用語「可変領域断片」または「Ｆｖ」は、複数のポリペプチドから構成されるか、単一のポリペプチドから構成されるかに関わらず、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈを含み、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈが結合して、抗原結合部位を有する、すなわち、抗原に特異的に結合することができる複合体を形成する、任意のタンパク質を意味すると解釈されるものとする。抗原結合部位を形成するＶ_ＨおよびＶ_Ｌは、単一のポリペプチド鎖中または異なるポリペプチド鎖中に存在することができる。さらに、本開示のＦｖ（および本開示の任意のタンパク質）は、同じ抗原に結合してもよいし結合しなくてもよい、複数の抗原結合部位を有し得る。この用語は、抗体に直接由来する断片および組換え手段を使用して産生される、そのような断片に対応するタンパク質を包含すると理解されたい。いくつかの例では、Ｖ_Ｈは重鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）に連結しておらず、および／またはＶ_Ｌは軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）に連結していない。例示的Ｆｖ含有ポリペプチドまたはタンパク質としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディもしくは高次複合体、または定常領域もしくはそのドメイン、例えばＣ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３ドメインに連結した前述のうちのいずれか、例えば、ミニボディまたは抗体が挙げられる。「Ｆａｂ断片」は、抗体の一価抗原結合性断片からなり、酵素パパインで全抗体を消化してインタクトな軽鎖および重鎖の一部からなる断片をもたらすことによって産生することができ、または組換え手段を使用して産生することができる。抗体の「Ｆａｂ’断片」は、全抗体をペプシンで処理し、続いて還元して、インタクトな軽鎖ならびにＶ_Ｈおよび単一の定常ドメインを含む重鎖の部分からなる分子をもたらすことによって、得ることができる。このように処理した抗体あたり２つのＦａｂ’断片が得られる。Ｆａｂ’断片は、組換え手段によって産生することもできる。抗体の「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つのジスルフィド結合によって互いに結合している２つのＦａｂ’断片の二量体からなり、全抗体分子を酵素ペプシンで処理し、その後の還元を行わないことによって得られる。「Ｆａｂ２」断片は、例えばロイシンジッパーまたはＣ_Ｈ３ドメインを使用して連結された２つのＦａｂ断片を含む組換え断片である。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体のＦｖを含有する組換え分子であり、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域は適切な可動性ポリペプチドリンカーで共有結合している。前述の議論から明らかなように、この用語は、抗体またはＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含むその抗原結合性断片を包含する。

【0126】

本明細書で使用する場合、２つのポリペプチド配列間の「配列同一性」または「同一性」という用語は、好ましくは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２４、２５にコードされるアミノ酸配列の全長にわたって、配列間で同一である、アミノ酸のパーセンテージを示す。本発明の好ましいポリペプチド配列は、それぞれ少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。

【0127】

本明細書で使用する場合、用語「防止すること」、「防止する」または「防止」は、本開示の化合物を投与して、それによって、状態の少なくとも１つの症状の発生または進行を止めるまたは妨げることを含む。

【0128】

本明細書で使用する場合、用語「治療すること」、「治療する」または「治療」は、本明細書に記載のタンパク質を投与して、それによって、特定の疾患または状態の少なくとも１つの症状を低減もしくは除去すること、または疾患または状態の進行を遅らせることを含む。本明細書で使用する場合、用語「対象」は、ヒトを含めた任意の動物、例えば哺乳動物を意味すると解釈されるものとする。例示的対象としては、限定されないが、ヒトおよび非ヒト霊長類が挙げられる。例えば、対象はヒトである。

【0129】

腎線維症および慢性腎臓疾患の防止および治療
本明細書における開示は、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することによって腎線維症および／または慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を治療する方法を提供する。

【0130】

本開示は、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することを含む、対象における腎線維症および／またはＣＫＤを防止するための方法も提供する。

【0131】

ＣＫＤは、ステージＩからＶまでに細分される進行性疾患である。疾患の重症度に応じて、第ＸＩＩ因子のインヒビターを対象に投与することによって、あるステージから別のステージへの進行を遅らせるおよび／または防止することができる。

【0132】

本明細書に開示される治療および防止の方法は、生得の腎臓と移植／同種移植腎臓の両方に適用される。

【0133】

一例では、対象は以下の腎障害の１つまたはそれ以上に罹患している：
－ 腎線維症
－ 糖尿病性腎障害、糸球体腎炎
－ ループス腎炎
－ 腎血管炎
－ 糸球体硬化症
－ 高血圧性腎障害（腎硬化症）
－ 間質性腎炎
－ 常染色体優性多発性嚢胞腎
－ アルポート症候群
－ 鎮痛薬腎障害
－ 虚血再灌流または拒絶反応と関係がある腎臓同種移植損傷。

【0134】

一例では、対象は腎線維症または腎臓線維症に関連する状態に罹患していたか、罹患している。例えば、対象は糖尿病に罹患していたか、罹患している。

【0135】

本開示の方法は、腎線維症および／またはＣＫＤに関連する腎障害の任意の形態に容易に適用することができる。

【0136】

一例では、対象は、腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性があるが、腎線維症の発症はまだ起こっていない。対象は、対象が対照集団よりも腎線維症および／またはＣＫＤを発生する危険性が高い場合、危険性がある。対照集団は、糖尿病または腎線維症に関連する他の腎臓疾患に罹患したことがない、またはこれらの家族歴を有する、（例えば、年齢、性別、人種および／または民族性がマッチする）一般集団から無作為に選択される１またはそれ以上の対象を含むことができる。

【0137】

対象を、腎線維症および／またはＣＫＤに関連する「危険因子」がその対象に関連することが見出される場合（ＧＦＲの低減、タンパク尿、糖尿病、高血圧、肥満、腎臓移植患者におけるヒト白血球抗体の存在）、腎線維症および／またはＣＫＤの危険性があるとみなすことができる。危険因子としては、例えば、対象の集団に対する統計学的または疫学的研究によって所与の障害に関連する、任意の活性、形質、事象または特性を挙げることができる。したがって、たとえ根底にある危険因子を特定する研究が対象を特に含んでいなかったとしても、腎線維症の危険性があると対象を分類することができる。

【0138】

上記で、および下記の実施例セクションで論じるように、本開示の方法は以下の１つまたはそれ以上の効果を達成する：
ＦＸＩＩａのインヒビターによる治療は、
（ｉ）細胞外基質タンパク質の存在量を顕著に低減させ、
（ｉｉ）初期および後期において、マクロファージの蓄積にもサイトカインの産生にも影響を及ぼさず、
（ｉｉｉ）初期および後期において、アポトーシス性腎尿細管上皮細胞の数の顕著な減少をもたらし、
（ｉｖ）初期および後期において、増殖性腎尿細管上皮細胞の数の増加（＝再生）をもたらし、ならびに／または
（ｖ）体重減少を減弱する。

【0139】

当業者に明らかであるように、対象における腎線維症などの腎障害の症状または影響の「低減」または「減弱」は、腎線維症などの腎障害に同様に罹患しているが、本明細書に記載の方法による治療を受けていない別の対象、または治療前の対象に対する比較に基づく。これは、２つの対象の並列比較を必ずしも必要とするとは限らない。むしろ、集団データを信頼することができる。例えば、本明細書に記載の方法による治療を受けていない、腎線維症に罹患する対象の集団（場合により、治療される対象と、例えば、年齢、体重、糖尿病状態が同様の対象の集団）が評価され、平均値が本明細書に記載の方法で治療される対象または対象の集団の結果と比較される。

【0140】

第ＸＩＩ因子のインヒビター
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは直接的ＦＸＩＩインヒビター、例えば特異的ＦＸＩＩインヒビターである。例えば、特異的ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼまたは他の内在性タンパク質を約２５％以下阻害する。例えば、ＦＸＩＩの特異的インヒビター／ＦＸＩＩａインヒビターは、前記インヒビターが、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対前記インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２５％以下阻害する。一例では、ＦＸＩＩインヒビターは、１：１のモル比で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを約２０％以下または約１５％以下または約１０％以下または約５％以下または約１％以下阻害する。例えば、特異的ＦＸＩＩ抗体は、血漿セリンプロテアーゼＦＸＩａを約５％阻害し、ここで、前記抗体に対するＦＸＩａのモル比は１：１であり、一方で、同ＦＸＩＩ抗体はＦＸＩＩａを少なくとも約８０％、または少なくともＦＸＩＩａを約９０％阻害する。

【0141】

一例では、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、他の１つの血漿セリンプロテアーゼが約５０％より多く阻害される。本開示の別の例では、それぞれの血漿セリンプロテアーゼ対インヒビターについて１：１のモル比で使用される場合、他の２つの血漿セリンプロテアーゼが約５０％より多く阻害される。

【0142】

セリンプロテアーゼインヒビター
一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはセリンプロテアーゼインヒビターである。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４またはその変異体に対応する配列を含む。一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、ＳＰＩＮＫ－１またはその変異体に対応する配列を含む。

【0143】

Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４
一例では、本開示は、ｉｎｆｅｓｔｉｎドメイン４（「Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４」と称される）を含むＦＸＩＩのインヒビターを提供する。Ｉｎｆｅｓｔｉｎは、シャーガス病を引き起こすことが知られている寄生体トリパノソーマ・クルージの主な媒介体である吸血性昆虫ブラジルサシガメの中腸に由来するセリンプロテアーゼインヒビターのクラスである（Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、３２ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．９９１～９９７、２００２；Ｃａｍｐｏｓ ＩＴＮら、５７７ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５１２～５１６、２００４；ＷＯ２００８／０９８７２０）。この昆虫は、これらのインヒビターを使用して、摂取した血液の凝固を防ぐ。ｉｎｆｅｓｔｉｎ遺伝子は、凝固経路の異なる因子を阻害することができるタンパク質をもたらす４つのドメインをコードする。特に、ドメイン４は、ＦＸＩＩａの強いインヒビターであるタンパク質（Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４）をコードする。Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、出血合併症をもたらすことなくマウスに投与された（ＷＯ２００８／０９８７２０；Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１２１：１５１０～１７）。

【0144】

一実施形態では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４を含む。本明細書で使用する場合、用語「Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４」は、ＦＸＩＩを阻害する能力を保持する、野生型ペプチドの変異体または断片を包含する。限定目的ではなく命名の目的のみのために、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の例示的配列を配列番号１に示す。

【0145】

一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＦＸＩＩａを阻害するその能力のために選択される。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体を含み、変異体はＩｎｆｅｓｔｉｎドメイン４、場合により、Ｉｎｆｅｓｔｉｎドメイン１、２および／または３を含む。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は（Ｈｉｓ）_６－タグが付けられたＩｎｆｅｓｔｉｎ－４構築物である。

【0146】

別の例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４に連結または結合した半減期増強ポリペプチド（例えば、アルブミン、ＩｇＧのＦｃドメインまたはＰＥＧ）などの融合パートナーを含む融合タンパク質である。一例では、リンカーが融合パートナーをＩｎｆｅｓｔｉｎ－４に接続する。様々な実施形態では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４はＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されているｒＨＡ－Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４タンパク質である。一例では、組成物は、Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されているｒＨＡ－Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４タンパク質に可動性リンカーによって結合しているアルブミンを含む。別の例では、他のＦＸＩＩのＩｎｆｅｓｔｉｎ－４インヒビターが使用され、その例は、ＷＯ２００８／０９８７２０およびＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１０；１１７：１１５３～６０に記載されており、これらの両方は、その全体を参照によって組み入れる。

【0147】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４の変異体である。本明細書で使用する場合、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の「変異体」という用語は、１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を有するポリペプチドを指し、「変異」は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）に対する置換、欠失または付加と定義される。Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の「変異体」という用語は、野生型の機能的断片または変異されたＩｎｆｅｓｔｉｎ－４配列も含む。

【0148】

一例では、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対する１つまたはそれ以上の変異は、ＦＸＩＩを阻害するためのポリペプチドの機能的能力を実質的に変えない。例えば、１つまたはそれ以上の変異は、ＦＸＩＩを阻害するためのポリペプチドの能力を完全にまたは実質的に除去しない。例えば、変異体は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４の阻害能力の少なくとも約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９８％、または約９９％またはそれ以上を保持する。

【0149】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に記載の野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列のアミノ末端からの残基２～１３を含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0150】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１の残基２～１３を含み、配列番号１の残基２～１３の外側に、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）と比べて少なくとも１つのアミノ酸変異も含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体を含む。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、少なくとも２つのアミノ酸変異または少なくとも３つのアミノ酸変異または少なくとも４つのアミノ酸変異または少なくとも５つのアミノ酸変異を含む。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１を含むポリペプチド配列を含む。

【0151】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列由来の６つの保存システイン残基を保持するＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体である。一例では、６つの保存システイン残基は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列（配列番号１）の位置６、８、１６、２７、３１および４８のアミノ酸である。一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は、位置４８に最終的な保存システインを含む。別の例では、システイン残基の正確な位置および互いの相対位置は、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体配列における挿入または欠失が原因で、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列の位置６、８、１６、２７、３１および４８から変化し得る。

【0152】

一例では、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体は野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ４配列に対して少なくとも約７０％同一である。例えば、Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４は、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対して少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有する。例えば、ＦＸＩＩのインヒビターは、配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含むポリペプチド配列を含む。

【0153】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターはＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体であり、野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列由来の６つの保存システイン残基を保持し、および／または野生型Ｉｎｆｅｓｔｉｎ－４配列に対して少なくとも約７０％同一の配列を有する。

【0154】

一例では、ＦＸＩＩのインヒビターは配列番号１のＮ末端アミノ酸位置２～１３の外側に１～５つのアミノ酸変異を含有するように改変された配列番号１；および配列番号１に対して少なくとも７０％同一であり、配列番号１由来の６つの保存システイン残基を保持する配列を含むＩｎｆｅｓｔｉｎ－４変異体である。

【実施例】

【0155】

方法
実験的腎線維症の治療における３Ｆ７抗体の効能を評価するために、腎損傷および線維化のＵＵＯモデルを用いた。このモデルマウスでは、尿管閉塞後７～１０日以内に重度の間質性腎線維症が発生する。

【0156】

左尿管の閉塞のために、ケタミン／キシラジン（それぞれ５０および５ｍｇ／ｋｇ；Ｐｆｉｚｅｒ、ＧｅｒｍａｎｙのＫｅｔａｖｅｔおよびＢａｙｅｒ、ＧｅｒｍａｎｙのＲｏｍｐｕｎ）で２か月齢のＣ５７Ｂｌ／６マウスを麻酔にかけた。左側を剪毛し、左腎臓上で正中線切開を行った。エンドポイントまで左尿管を縫合糸で２回縛り、切開を閉じた。手術の間、３７℃の加熱パッド上にマウスを置くことによって体温を維持した。マウスを以下の２群：ビヒクル（アイソタイプ対照としてのＩｇＧ、マウスあたり１ｍｇ、ｎ＝５）または抗ＦＸＩＩａ抗体（３Ｆ７、マウスあたり１ｍｇ、ｎ＝１０）のいずれかを与える片側尿管閉塞（ＵＵＯ）マウスに分けた。３Ｆ７は、ＵＵＯが始まった後の初日から与えた。これらの物質は、結紮の直後に尾静脈に静脈内注射し、次いで、その後毎日、解析のためにマウスを屠殺するまで静脈内注射した。反対側の腎臓は、対照として扱った（Ｓｃｈａｅｆｅｒ Ｌ．ら、Ｊ Ｐａｔｈｏｌ、２００２）。ＵＵＯ後３日目または１０日目にマウスを屠殺した。左尿管閉塞から３日後または１０日後に、血漿および腎臓を解析した。

【実施例1】

【0157】

萎縮尿細管の数の減少／尿細管拡張の低減
上記の方法セクションに記載されているように、ＵＵＯから１０日後にマウスを屠殺し、標的器官の形態的および生化学的変化によって、線維化の程度を特性評価した。パラフィン包埋試料の連続切片（２μｍ）をＰＡＳで染色した。以前に記載された活性指標（Ｍｏｒｅｔｈ Ｋ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、２０１０）を使用して、尿細管間質病変の重症度を０～５（正常、軽度、中程度、進行性または重度）まで段階分けした。各動物について、皮質および髄質中の少なくとも１５の尿細管間質領域を評価し、尿細管の拡張および萎縮について段階分けした。各画像に対する合計した個々のスコアの平均として、各マウスの尿細管損傷スコアを計算した。結果を図１Ａおよび１Ｂに示し、図１Ａは、損傷後１０日目のＩｇＧ－および３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓において決定した尿細管損傷スコアを示し、図１Ｂは、損傷後１０日目のＩｇＧ－および３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からのＰＡＳ染色切片を示す。図１Ａおよび１Ｂから分かるように、３Ｆ７抗体による治療は、ＩｇＧ治療対照と対比して、３Ｆ７抗体で治療したマウス由来の閉塞化腎臓において、萎縮尿細管の数を顕著に減少させ、尿細管拡張を低減させた。

【実施例2】

【0158】

α－ＳＭＡ発現に対する減弱効果
ＵＵＯの間、アイソタイプ（ＩｇＧ）治療した対照腎臓は、ＵＵＯから１０日後に、ｑＰＣＲ、ウエスタンブロッティングおよび免疫組織化学的検査によって評価した場合に、α－ＳＭＡの発現の顕著な増大を示した。３Ｆ７抗体によるＦＸＩＩａの阻害は、ウエスタンブロッティング（図２Ｂ）および免疫組織化学的検査（図２Ｃ）によって評価したα－ＳＭＡの発現を示す図２ＢおよびＣから分かるように、ＵＵＯ腎臓においてα－ＳＭＡ発現を有意に低減した。３Ｆ７抗体で治療したＵＵＯ腎臓において、ｑＰＣＲによって評価した場合に、α－ＳＭＡ ｍＲＮＡ発現の低減はなかった（図２Ａ）。

【実施例3】

【0159】

細胞外基質タンパク質の発現に対する減弱効果
同様に、ｑＰＣＲ（図３Ａ）、ウエスタンブロッティング（図３Ｂ）および免疫組織化学的検査（図３Ｃ）によって評価したＦＮの発現を示す図３Ａ～Ｃ、ならびにｑＰＣＲ（図４Ａ）、ヒドロキシプロリン含量の測定（図４Ｂ）および免疫組織化学的検査（図４Ｃ）によって評価したＣｏｌ Ｉの発現を示す図４Ａ～Ｃから分かるように、ＵＵＯは、細胞外基質タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）およびコラーゲンＩ（Ｃｏｌ Ｉ）の発現を大きく増強したが、３Ｆ７抗体による治療は、ＵＵＯから１０日後の閉塞化腎臓におけるこれらの成分の存在量を顕著に低減させた。

【実施例4】

【0160】

Ｆ４／８０陽性マクロファージに対する効果に関する調査
ＦＸＩＩａ阻害の観察された有益効果が炎症の抑制の結果であるかどうかを決定するために、発明者らは、ＵＵＯから１０日後のＵＵＯ腎臓におけるマクロファージ浸潤およびサイトカインレベルも調べた。発明者らは、ＵＵＯは腎臓においてＦ４／８０陽性マクロファージの蓄積を誘導するが、３Ｆ７抗体による治療は、閉塞化器官におけるその数に対して影響がなかったことを見出した。この結果を図５Ａおよび５Ｂに示す。さらに、ＩｇＧ治療ＵＵＯ動物と３Ｆ７治療ＵＵＯ動物の間で、ＴＮＦ－αおよびＩＬ－６のレベルの違いはなかった（データ非表示）。

【実施例5】

【0161】

アポトーシス細胞の数の減少
ＵＵＯから１０日後に、炎症反応ではなく線維化が起こるので、発明者らは、損傷後３日目の閉塞化腎臓も解析した。驚いたことに、３Ｆ７抗体の投与は、ＵＵＯ腎臓において、マクロファージの蓄積にもサイトカインの産生にも影響を及ぼさなかった（データ非表示）。しかし、図６に示す、損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からの代表的なカスパーゼ－３染色切片から分かるように、この時点で、ＩｇＧチャレンジＵＵＯ同腹子と比較して、３Ｆ７治療ＵＵＯマウスにおけるアポトーシス性（切断カスパーゼ－３陽性）腎尿細管上皮細胞の数の顕著な減少が観察された。

【0162】

さらに、図７に示す、損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化（ＵＵＯ）腎臓からの代表的なＫｉ６７染色切片から分かるように、ＩｇＧを注射したマウスと比較して、３Ｆ７が与えられた動物における増殖性（Ｋｉ６７陽性）腎尿細管上皮細胞の数の増加が見られた。

【0163】

これにより、図８に示す、損傷後３日目のＩｇＧ－または３Ｆ７－治療マウス由来の対照および閉塞化腎臓からの代表的なＰＡＳ染色切片から分かるように、機能的尿細管の数の増加ならびに崩壊および萎縮した尿細管の顕著な減少がもたらされた。尿細管の形態の改善は、細胞外基質成分の蓄積の低減と非常によく相関した（データ非表示）。

【0164】

これらの発見は、肺傷害の初期におけるアポトーシス性および増殖性肺胞上皮細胞の数が３Ｆ７治療マウスとＩｇＧ治療マウスの間で差がなかったという肺線維症のブレオマイシンモデルで観察された結果と異なるので、非常に驚くべきことである。

【実施例6】

【0165】

体重減少の減弱
図９から分かるように、ＵＵＯ後の体重減少は、ＩｇＧ治療マウスと比較して、３Ｆ７治療マウスで低減する。図１０から分かるように、腎臓／体重比について同じことが言える。

【0166】

まとめると、これらの実施例は、腎臓線維症のＵＵＯモデルにおけるＦＸＩＩａの阻害は、機能的尿細管の喪失を防止し、腎線維症の進展を低減させ、体重減少を減弱することを示す。

【実施例7】

【0167】

遺伝子発現に対する３Ｆ７の効果
遺伝子発現プロファイリング
方法
キットの指示書に従ってＬＩＲＡＫキット（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して、精製した全ＲＮＡを増幅し、Ｃｙ３標識した。反応あたり、全ＲＮＡ２００ｎｇを使用した。Ｃｙ標識したａＲＮＡを、８×６０Ｋの６０ｍｅｒオリゴヌクレオチドがスポッティングされたマイクロアレイスライド（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、設計ＩＤ ０７４８０９）と一晩ハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーションおよびその後のスライドの洗浄および乾燥は、Ａｇｉｌｅｎｔハイブリダイゼーションプロトコールに従って行った。乾燥させたスライドは、ＩｎｎｏＳｃａｎ ９００（Ｉｎｎｏｐｓｙｓ、Ｃａｒｂｏｎｎｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、２μｍ／画素解像度でスキャンした。Ｍａｐｉｘ ６．５．０ソフトウェアを用いて画像解析を行い、すべてのスポットに対する計算値をＧｅｎｅＰｉｘ結果ファイルとして保存した。ＢｉｏＣｏｎｄｕｃｔｏｒのＲソフトウェアおよびｌｉｍｍａパッケージを使用して、記憶されたデータを評価した。さらなる解析のために、Ｌｏｇ平均スポットシグナルを得た。データは、陰性対照スポットに対してＮｏｒｍＥｘｐ法を使用してバックグラウンド補正し、平均化の前に分位正規化した。モデレートｔ統計量を使用して、差次的発現について遺伝子を順位付けした。経路解析は、ｔ値の順位に対する遺伝子セット検定を使用して行った。

【0168】

実験および結果
ｉｎ ｓｉｔｕでの分子シグネチャに対する抗ＦＸＩＩ抗体（３Ｆ７）治療の効果を決定するために、本発明者らは、抗ＦＸＩＩ抗体（３Ｆ７）またはＩｇＧアイソタイプ対照のいずれかで治療した動物由来のＵＵＯ腎臓のホモジネート試料に対して遺伝子発現プロファイリングを行った。抗ＦＸＩＩ抗体治療群において最も下方制御された５つの遺伝子が抑制方向に向いていた：１）アポトーシス：ｈａｒａｋｉｒｉ（Ｈｒｋ）、２）Ｗｎｔ／β－カテニンシグナリング：ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質２（Ｄｋｋ２）、３）細胞増殖：核内受容体サブファミリー２グループＥメンバー１（Ｎｒ２ｅ１）、ＣＷＦ１９様細胞周期制御因子１（Ｃｗｆ１９ｌ１）、および４）グルタミン酸輸送：溶質輸送体ファミリー１メンバー３（Ｓｌｃ１ａ３）。抗ＦＸＩＩ抗体治療群において最も上方制御された４つの遺伝子は、以下のものに対してＦＸＩＩ阻害の影響を示唆した：１）ＥＣＭ－細胞および細胞－細胞間情報伝達：デスモグレイン１ガンマ（Ｄｓｇ１ｃ）、２）血管新生：アンジオポエチン様７（Ａｎｇｐｔｌ７）、３）イオン恒常性：アノクタミン２（Ａｎｏ２）、および４）転写調節：調節因子Ｘ６（Ｒｆｘ６）（表１）。

【0169】

【表1】

【0170】

いかなる特定の作用理論にも拘束されることを望むものではないが、本明細書で報告する実験結果は、３Ｆ７治療は、実験動物において報告される効果、例えば、アポトーシス細胞の数の減少（上記の実施例５を参照されたい）、または前述の、機能的尿細管の喪失の防止、腎線維症の進展の低減および体重減少の減弱を説明することができる、遺伝子発現に対する効果を有することを示す。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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