特許 7319761 非アルコール性脂肪肝疾患および他の使用のためのブドウ生成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-07-25

(45)【発行日】2023-08-02

(54)【発明の名称】非アルコール性脂肪肝疾患および他の使用のためのブドウ生成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/87 20060101AFI20230726BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230726BHJP

   A61K 131/00 20060101ALN20230726BHJP

【ＦＩ】

A61K36/87

A61P1/16

A61K131:00

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2017533218

(86)(22)【出願日】2015-12-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2017-12-28

(86)【国際出願番号】 US2015066585

(87)【国際公開番号】W WO2016100774

(87)【国際公開日】2016-06-23

【審査請求日】2018-12-13

【審判番号】

【審判請求日】2021-02-05

(31)【優先権主張番号】62/094,963

(32)【優先日】2014-12-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】514275509

【氏名又は名称】ソノマシューティカルズ・エルエルシー

(73)【特許権者】

【識別番号】514275417

【氏名又は名称】ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ・アズ・リプレゼンテッド・バイ・ザ・セクレタリー・オブ・アグリカルチャー

【氏名又は名称原語表記】Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ａｓ Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】トーリー・ジェイムズ・アーヴィク

(72)【発明者】

【氏名】ヒョンスーク・キム

(72)【発明者】

【氏名】ウォレス・エイチ・ヨコヤマ

(72)【発明者】

【氏名】スコット・アール・フォースバーグ

【合議体】

【審判長】井上 典之

【審判官】齋藤 恵

【審判官】岡崎 美穂

(56)【参考文献】

【文献】Ｋｈｏｓｈｂａｔｅｎ Ｍ ｅｔ ａｌ，Ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｌｉｖｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｃｈａｎｇｅ，Ｓａｕｄｉ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１０年 ７月，Ｖｏｌ．１６， Ｎｏ．３，ｐ．１９４－１９７，ｄｏｉ： １０．４１０３／１３１９－３７６７．６５１９７

【文献】Ｋｉｍ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈａｒｄｏｎｎａｙ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｆｌｏｕｒ ｒｅｄｕｃｅｓ ｐｌａｓｍａ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ， ａｎｄ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｆａｔ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４年 ２月，Ｖｏｌ．６２， Ｎｏ．８，ｐ．１９１９－１９２５，ｄｏｉ： １０．１０２１／ｊｆ４０４８３２ｓ

【文献】Ｃｈａｒｒａｄｉ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ａｎｄ ｓｋｉｎ ｅｘｔｒａｃｔ ａｇａｉｎｓｔ ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｚｉｎｃ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ，Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４年 ４月，Ｖｏｌ．５９， Ｎｏ．８，ｐ．１７６８－１７７８，ｄｏｉ： １０．１００７／ｓ１０６２０－０１４－３１２８－０

【文献】Ｃｈｏｉ ＳＫ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｂｙ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，２０１２年，Ｖｏｌ．６， Ｎｏ．１，ｐ．３－８，ｄｏｉ： １０．４１６２／ｎｒｐ．２０１２．６．１．３

【文献】満尾 正，ハーブサプリメント，炎症と免疫，２００２年，第１０巻，第４号，ｐ．４３９－４４４

【文献】メルクマニュアル 第１８版 日本語版，日経ＢＰ社，２００７年 ４月２５日，ｐ．１３８０

【文献】Ｈｗａｎｇ ＩＫ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｅｘｔｒａｃｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ／ｅｔｈａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００９年，Ｖｏｌ．２３， Ｎｏ．８，ｐ．１１８２－１１８５

【文献】メルクマニュアル 第１８版 日本語版，日経ＢＰ社，２００７年 ４月２５日，ｐ．１３５８－１３５９

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

A61K36/00-9068

A61K45/00-08

A61K31/00-80

A23L33/00-29

ＰｕｂＭｅｄ

医中誌ＷＥＢ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳類の、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）を処置するための、処置するために有効な量のブドウ生成物を含む医薬組成物であって、前記ブドウ生成物は、シャルドネの種子粉末、シャルドネの種子抽出物、シャルドネ搾りかすミール又はシャルドネ搾りかす粉末であり、該組成物は、哺乳動物の肝臓に沈着した脂肪の量を減少させることを特徴とする、前記医薬組成物。

【請求項2】

哺乳類の、脂肪肝、脂肪肝炎または肝線維症を減少させるための、処置するために有効な量のブドウ生成物を含む医薬組成物であって、前記ブドウ生成物は、シャルドネの種子粉末、シャルドネの種子抽出物、シャルドネ搾りかすミール又はシャルドネ搾りかす粉末であり、該組成物は、哺乳動物の肝臓に沈着した脂肪の量を減少させることを特徴とする、前記医薬組成物。

【請求項3】

ブドウ生成物は、シャルドネの種子粉末、又はシャルドネ搾りかす粉末である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

ブドウ生成物は、シャルドネ搾りかす抽出物である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

ブドウ生成物は、シャルドネ種子抽出物である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項6】

抽出物は、メタノールまたはエタノール抽出物である、請求項４又は５に記載の医薬組成物。

【請求項7】

哺乳類は、高脂肪食餌中である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項8】

哺乳類は、３０から５０カロリー％含有量の脂肪を含む食餌中である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項9】

シャルドネのブドウ種子粉末又はシャルドネのブドウ種子抽出物は、１ｍｇから１５，０００ｍｇの有効な量で投与される、請求項１又は２に記載の医薬組成物。

【請求項10】

哺乳類は、ヒト、愛玩用動物、飼育動物、畜産動物又は家畜である、請求項１～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書に記載される実施形態は、それに限定されないが、シャルドネブドウ生成物を含めたブドウ生成物の使用を提供する。

【背景技術】

【0002】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、重要な公衆衛生の問題として認識されている。ＮＡＦＬＤの有病率は、西欧諸国の一般人口の２０％から３０％である。ＮＡＦＬＤは、脂肪肝（単純脂肪肝）から、肝臓に関連した罹患率および死亡率を増大する状態である、非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）の範囲にわたる。過剰な肝脂質蓄積、酸化的および小胞体（ＥＲ）ストレス、およびインスリン耐性は、この疾患が進行していることを示す主要な兆候である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0003】

なんら特定の理論に拘束されるものではないが、ＮＡＦＬＤは、例えば、過剰な肝脂質蓄積により引き起こされ、続いて酸化的ストレスおよび炎症の増大により、肝臓損傷を生じる。ＮＡＦＬＤは、継続的な問題である。本明細書に記載される実施形態は、これらの問題および他のものに対する解決策を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0004】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置または予防する方法であって、哺乳類に、ＮＡＦＬＤを処置または予防するために有効な量のブドウ種子生成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0005】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での脂肪肝を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0006】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での脂肪肝炎を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝炎を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0007】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での肝線維症を減少させる方法であって、哺乳類に、肝線維症を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、哺乳類での肝線維症を減少させる方法を提供する。

【0008】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）を処置または予防する方法であって、哺乳類に、ＮＡＳＨを処置または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0009】

本明細書に開示される実施形態は、哺乳類での健康な肝臓を支持する方法であって、哺乳類に、健康な肝臓を支持するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0010】

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、哺乳類は、非アルコール性脂肪肝疾患を有すると同定されてきた。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、肝臓に沈着した脂肪の量を減少させる。

【0011】

本明細書に記載される実施形態は、ブドウ生成物および少なくとも１種の追加の化合物を含む医薬組成物を提供する。

【0012】

本明細書に開示される実施形態は、本明細書に記載されるとおりの１つまたはそれ以上の遺伝子の発現を調節する方法であって、１つまたはそれ以上の遺伝子を発現する哺乳類にブドウ生成物を投与することを含む、１つまたはそれ以上の遺伝子の発現を調節する方法を提供する。

【0013】

いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子粉末、全搾りかすまたはその画分（例えば、種子、皮、葉、茎などの画分）、ブドウ抽出物（例えば、種子抽出物、皮抽出物など）、ブドウの皮生成物（例えば、皮フラワー（skin flower）、皮粉体など）、もしくはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の抽出物である。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、限定されないが、シャルドネのブドウ種子粉末のようなシャルドネ生成物である。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】血漿脂質におけるシャルドネのブドウ種子粉末（ＣｈｒＳｄ）の影響を示すグラフである。雄の食餌性肥満マウス（ＤＩＯ）を、５週間、５％ 結晶セルロース（ＭＣＣ、対照）または１０％（ｗ／ｗ）ＣｈｒＳｄを含有する高脂肪（ＨＦ）食餌で飼育し、血液を、絶食状態で採取した。ＶＬＤＬ、超低密度リポタンパク質；ＬＤＬ、低密度リポタンパク質；ＨＤＬ、高密度リポタンパク質。データは、平均±ＳＥとして表される；ｎ＝８～１０／群。Ｐ＜０．０５。

【図2】図２Ａおよび２Ｂは、パネルＡ。５週間、５％結晶セルロース（ＭＣＣ、対照）または１０％（ｗ／ｗ）シャルドネのブドウ種子粉末（ＣｈｒＳｄ）のいずれかで補充された高脂質（ＨＦ）食餌で飼育された肥満マウスでのグルコース耐性。（Ａ）グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を、絶食状態で行った。パネルＢ。曲線下面積（ＡＵＣ）値（Ａに由来）。データは、平均±ＳＥとして表される。ｎ＝８～９／群。Ｐ＜０．０５。

【図3】図３Ａおよび３Ｂは、パネルＡ。５週間、５％結晶セルロース（ＭＣＣ、対照）または１０％（ｗ／ｗ）シャルドネのブドウ種子粉末（ＣｈｒＳｄ）のいずれかで補充された高脂肪（ＨＦ）食餌で飼育された肥満マウスでのインスリン耐性。（Ａ）インスリン負荷試験（ＩＴＴｓ）を、絶食状態で行った。パネルＢ。曲線下面積（ＡＵＣ）値（Ａに由来）。データは、平均±ＳＥとして表される。ｎ＝８～９／群。Ｐ＜０．０５。

【発明を実施するための形態】

【0015】

特に定義されない限り、本明細書に使用される全ての技術的および学術的用語は、当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または等しい方法および材料は、実地または試験で使用されるが、適切な方法および材料は、本明細書に記載される。本明細書に言及される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、全体的に参照によって本明細書に組み入れられる。矛盾する場合には、定義を含めた本明細書が、規制する。さらに、材料、方法および実施例は、例示のみであり、限定することは意図されない。本明細書に開示される実施形態の他の特徴および利点は、本詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。

【0016】

用語「塩」または「塩類」は、遊離酸の付加塩または遊離塩基の付加塩を含めた任意の酸付加塩を指す。これらの塩の全ては、（または他の類似の塩）は、従来の手段により調製される。このような塩の全ては、その塩が、非毒性であり、実質的に所望の薬物動態活性を妨げないという条件で許容される。

【0017】

用語「医薬上許容しうる」および／または「治療上許容しうる」は、生理学的に許容でき、好ましくは、ヒトに投与される場合、異常亢進、目まいなどのようなアレルギーまたは類似の不都合な反応を一般に生じない分子実体および組成物を指す。本明細書で使用される場合、いくつかの実施形態では、用語「医薬上許容しうる」は、連邦または州政府の当局により認可されるか、米国薬局方または他の一般に認識されている薬局方（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５年））で、動物、さらに特にヒトでの使用について列挙されていることを意味する。

【0018】

用語「約」または「およそ」は、プラスまたはマイナス５％を意味する。

【0019】

本明細書でおよび添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容が明確にそれ以外を指示しない限り、複数形の言及を含む。

【0020】

本明細書で使用される場合、用語「含む（comprise）」、「有する（have）」および「含む（include）」およびそれらの同語源の語は、本明細書で使用される場合、「それを含むが、それに限定されないこと」を意味する。種々の組成物、方法およびデバイスが、種々の成分または工程を「含む（comprising）」という用語で記述される（「それを含むが、それに限定されないこと」を意味すると解釈される）が、その組成物、方法およびデバイスは、種々の成分および工程「から本質的になる」または「からなる」こともある。

【0021】

本明細書で使用される場合、語句「それを必要とする」は、動物または哺乳類が、特定の方法または処置についての必要性を有すると認識または推定されたことを意味する。いくつかの実施形態では、認識は、診断のいずれかの手段によりうる。本明細書に記載される方法および処置のいずれかで、動物または哺乳類は、それを必要としていることがある。いくつかの実施形態では、動物または哺乳類は、特定の疾患、障害または状態が、広く蔓延している環境にあるか、または環境に移行しつつある。

【0022】

本明細書で使用される場合、互換的に使用される用語「対象」、「個人」または「患者」は、マウス、ラット、他のげっ歯類、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはヒトのような霊長類のような哺乳類を含めたあらゆる動物を意味する。

【0023】

本明細書で使用される場合、用語「動物」は、それらに限定されないが、ヒト、および野生、家畜および畜産動物のような非ヒト脊椎動物が挙げられる。

【0024】

本明細書で使用される場合、語句「ＸからＹの整数」は、端点を含む任意の整数を意味する。すなわち、範囲が開示される場合、端点を含む範囲にある各整数が開示される。例えば、語句「整数１から５」は、１、２、３、４または５、ならびに１から５の範囲を開示する。

【0025】

本明細書で使用される場合、用語「哺乳類」は、げっ歯類（すなわち、マウス、ラットまたはモルモット）、サル、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ブタまたはヒトを意味する。いくつかの実施形態では、哺乳類は、ヒトである。

【0026】

本明細書で使用される場合、用語「処置する（treat）」、「処置された（treated）」または「処置すること（treating）」は、目的が、望ましくない生理学的状態、障害または疾患を予防または下げる（減少させる）こと、または有益なまたは所望の臨床的結果を得ることである治療的処置および／または防止的もしくは予防的措置を指す。本明細書に記載される実施形態の目的については、有益なまたは所望の臨床結果としては、それに限定されないが、症状の緩和；状態、障害または疾病の範囲の軽減；状態、障害または疾病の安定化（すなわち、悪化していない）状態；発症の遅延または状態、障害または疾患進行の低減；検出可能または非検出可能にかかわらず、状態、障害または疾患状態の改善または回復（部分的または全体的にかかわらず）；必ずしも患者により認識されることはない、少なくとも１つの測定可能な身体的パラメーターの改善；または状態、障害または疾患の増強または改善が挙げられる。処置としては、過剰なレベルの副作用なしに、臨床的に有意な応答を導くことも挙げられる。処置は、処置を受けないとしても予想される生存と比較した場合、生存を延ばすことも含む。

【0027】

本明細書に記載される場合、シャルドネのブドウ生成物のようなブドウ生成物は、ヒトでの非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）およびそのさらに重篤な形態である非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）についての処置として使用される。他の実施形態が、本明細書に記載される。

【0028】

本明細書に記載される実施形態は、ブドウ生成物の使用に関する。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、シャルドネのブドウ生成物である。他のブドウ生成物も、本明細書に記載される。

【0029】

いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子生成物である。いくつかの実施形態では、種子生成物は、搾りかすミール、搾りかす粉末、種子ミールのような種子の脱脂部分（例えば、ブドウ種子）、またはいくつかの実施形態では、種子粉末を含有する。いくつかの実施形態では、種子生成物は、有機溶媒により抽出可能でない、例えばエタノールおよび／またはメタノールにより抽出可能でない脱脂種子の内容物を含む。いくつかの実施形態では、種子生成物は、１００ｇの種子当たり少なくとも６００ｍｇのエピカテキンのエピカテキン含有量、または１００ｇの種子当たり少なくとも７００ｍｇのエピカテキンのエピカテキン含有量を有する種子から調製される。いくつかの実施形態では、エピカテキン含有量は、６００～８００ｍｇ／１００ｇの種子または６５０～８００ｍｇ／１００ｇの種子の範囲にある。

【0030】

本明細書に記載される場合、ブドウ生成物は、全搾りかすまたはその一部、ブドウの皮生成物、ブドウ種子生成物、もしくはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の抽出物でありうる。生成物またはその抽出物の各々は、単独で、または互いに任意に組み合わせて使用される。生成物または抽出物は、シャルドネのブドウ、カベルネソービニヨンのブドウ、ピノノワールのブドウ生成物、ソービニヨンブランのブドウ生成物、ホワイトリースリングのブドウ生成物など、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの実施形態では、ブドウは、沿岸地域で生育したブドウである。いくつかの実施形態では、ブドウは、ウィンクラー地域気候のＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶ型で育成されたブドウである。

【0031】

疑問を避けるために、ブドウ生成物は、全体的に無傷のブドウではなく、むしろ加工されたブドウである。ブドウ生成物の例は、本明細書に記載される。

【0032】

本明細書で使用される場合、「種子ミール」は、破砕された全種子であり、「種子粉末」は、油が抽出された後の破砕された種子である。種子粉末は、種子から油を抽出して、脱脂種子粉末を生じる技術として知られている「コールドプレス」、「ホットプレス」および溶媒抽出プロセスを使用して得られる。ミールまたは粉末は、食品生成物を乾燥させるために適切な従来の乾燥技術を使用して所望の水分含有量に乾燥される。

【0033】

乾燥ミールまたは粉末は、周囲温度条件下でさらに破砕して、流動性粒子を有する種子粉体を形成できる。いくつかの実施形態では、流動性粒子は、８４１ミクロン（２０メッシュ）を超えないサイズから３７ミクロン（４００メッシュ）を超えないサイズまでの範囲にある。特定の実施形態では、サイズは、２０メッシュ、４０メッシュ、６０メッシュ、８０メッシュ、１００メッシュ、２００メッシュ、３００メッシュまたは４００メッシュを超えない。

【0034】

いくつかの実施形態では、種子粉末は、例えば、ブドウジュース（例えば、ワインを製造するために）を生成するためにブドウが加圧された後に生成される搾りかすから、ブドウ種子を分離し、乾燥させることにより製造される。ブドウ種子は、それらを脱脂するために「コールドプレス」にかけられる（副産物として種子油を生成する）。ブドウ種子粉末は、油が放出された後のプレスケークから破砕される。一実施形態では、ブドウを絞った後に、種子は、皮から分離され、洗浄し、機械で脱脂し、微細に破砕し、篩にかけて、１００～８０メッシュ（１４９～１７７ミクロン）流動性粉体を作り出す。

【0035】

種子粉末は、多様な源からも購入される。例えば、特定のタイプのブドウ種子粉末は、Ａｐｒｅｓ Ｖｉｎ（Ｙａｋｉｍａ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）、Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｏｉｌ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ（Ｓｐｏｏｎｅｒ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）またはＦｒｕｉｔｓｍａｒｔ，Ｉｎｃ．（Ｇｒａｎｄｖｉｅｗ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）から購入される。種子粉末は、しばしば、８０メッシュの流動性粉体として購入される。いくつかの実施形態では、この生成物をさらに破砕し、篩にかけて、より小さい粒子サイズを有する粉末を生成する。

【0036】

いくつかの実施形態では、加圧前に、皮、茎および葉（搾りかすの残り）は、種子から除去される。皮、茎および葉の除去が、最適な搾油を可能にする。

【0037】

いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、全ブドウ搾りかすまたは種子、皮、葉、茎などの画分を含めた、それらの一部である。これらの画分は、様々な比の混合物でも存在する。

【0038】

「種子抽出物」は、エタノールまたはメタノールのような適切な溶媒で、ブドウの種子の溶媒抽出により製造される。例えば、それに限定されないが、シャルドネの種子抽出物などのブドウ種子抽出物が、抽出溶媒として４０％エタノール溶液を使用して製造される。抽出プロセスは、溶媒可溶性成分を含有する抽出物に加えて、不溶性固体の残渣も生成する。その後、種子抽出物は、本明細書に記載される他のブドウ生成物と組み合わせるか、または単独で使用される。搾りかすの他の抽出物も使用される。皮の抽出物も、使用または調製される。

【0039】

本明細書に開示されるブドウ種子生成物に加えて、他のブドウ生成物も、本方法で使用される。他のブドウ種子生成物は、シャルドネの種子生成物の代わりに、または組み合わせて使用される。他のブドウ種子生成物の例としては、それらに限定されないが、シラーのブドウ種子生成物、カベルネソービニヨンのブドウ種子生成物、ピノノワールのブドウ種子生成物、ソービニヨンブランのブドウ種子生成物、ホワイトリースリングのブドウ種子生成物などが挙げられる。

【0040】

種子生成物は、栄養飲料（例えば、栄養シェーク）、焼き製品（例えば、クッキー、ブラウニー、ケーキ、パン、ビスケット、クラッカー）、プディング、砂糖菓子（すなわち、キャンディ）、スナック食品（例えば、プレッツエル）、アイスクリーム、冷凍砂糖菓子および商品、または健康またはエネルギーバーを含めたバーのような非焼き（non-baked）で押出食品生成物のような多様な食品生成物に含まれる。シャルドネの種子生成物は、錠剤もしくはカプセル剤形態でのいずれかで栄養サプリメントとして、または栄養食品もしくは飲料添加剤として使用するための粉体としても提供される。

【0041】

いくつかの実施形態では、種子生成物は、種子生成物が豊富な食品生成物の調製での使用のための他の乾燥食品材料と混合される。乾燥食品材料としては、例えば、乾燥スタート含有材料、乾燥タンパク質含有材料またはそれらの組み合わせが挙げられる。適切なスターチ含有材料は、例えば、米、トウモロコシ、大豆、アサ、ヒマワリ、セイヨウアブラナ（canola）、小麦、エンバク、ライムギ、ジャガイモまたはそれらの任意の組み合わせに由来する。適切な乾燥タンパク質含有材料は、例えば、食肉、ミルク、魚またはそれらの任意の組み合わせに由来する。パン焼き用途については、種子生成物は、３％から１５％の乾燥食品材料（例えば、白小麦または小麦の全粒粉）の範囲にある量で適切に使用される。乾燥食品は、場合によりビタミン、ミネラル増強剤、塩、着色剤、風味、風味増強剤または甘味剤などの追加の成分も含みうる。

【0042】

種子生成物は、飲料、加工食肉、冷凍デザート、砂糖菓子生成物、乳製品型生成物、ソース組成物および穀物粒生成物に組み入れられる。飲料生成物としては、例えば、スムージー、調製粉乳、フルーツジュース飲料、ヨーグルト飲料、コーヒー飲料、ビール、乾燥飲料ミックス、茶の融合飲料（tea fusion beverage）、スポーツ飲料、ソイリカー（soy liquor）、カスカセカ（casca seca）、ソーダ、スラッシュおよび冷凍飲料ミックスが挙げられる。食肉生成物としては、例えば、トリ挽肉生成物、加水したハム製品、ボローニャ、ホットドッグ、フランクフルト、チキンパテ、チキンナゲット、ビーフパテ、フィッシュバテ、すり身（surimi）、ベーコン、ランチョンミート、サンドイッチの具、デリミート、食肉スナック、ミートボール、干し肉、ファヒータ、ベーコンビット、注入した食肉（injected meat）およびブラットブルストが挙げられる。砂糖菓子生成物としては、例えば、チョコレート、ムース、チョコレートコーティング、ヨーグルトコーティング、ココア、砂糖衣、 キャンディー、エネルギーバーおよびキャンディーバーが挙げられる。冷凍デザート生成物としては、例えば、アイスクリーム、麦芽、シェイク、氷菓子、シャーペットおよび冷凍プディング生成物が挙げられる。乳製品タイプの生成物としては、例えば、ヨーグルト、チーズ、アイスクリーム、泡立てたトッピング（whipped topping）、コーヒークリーム、クリームチーズ、サワークリーム、カテージチーズ、バター、マヨネーズ、ミルクを加えたソース（milk-based sauce）、ミルクを加えたサラダドレッシング、およびチーズカードが挙げられる。穀物粒生成物としては、例えば、パン、マフィン、ベーグル、ペストリー、ヌードル、クッキー、パンケーキ、ワッフル、ビスケット、セモリナ、チップス、トルティーヤ、ケーキ、クラッカー、朝食用シリアル（インスタントおよび調理済みシリアルの両方を含めて）、プレッツエル、乾燥ベーカリーミックス、メルバトースト、棒状パン、クルトン、詰め物、エネルギーバー、ドーナッツ、ケーキ、ポップコーン、タコスシェル、フライ用ころも、練粉、パン粉づけ（breading）、クラスト、ブラウニー、パイ、泡立てソイケーキ（puffed soy cake）、クレープ、クロワッサン、小麦粉（flour）、およびポレンタが挙げられる。ソース組成物としては、サラダドレッシング、ナッツバタースプレッド（例えば、ピーナッツバタースプレッド）、マリネ、ソース、サルサ、ジャム、チーズソース、マヨネーズ、タルタルソース、大豆ユーマス、ディップ、果実シロップ、およびメープルシロップが挙げられる。ソース組成物は、組成物の均一性を維持する上で助けになる懸濁剤も含みうる。適切な懸濁剤の例としては、スターチ、セルロース（例えば、結晶セルロース）およびカラギーナンのような多糖、ならびにペクチンのようなポリウロニドが挙げられる。ゼラチンは、同様に飲料組成物で使用されうる懸濁剤の別の例である。本明細書に記載されるプレミックスを使用して調製された追加の補充食品生成物の例としては、それらに限定されないが、トーフ、配合ソイエッセンス、タンパク質サプリメント末、ジュース混合用タンパク質サプリメント、発泡剤、白濁剤、ベビーフード、ミートレスボール、食肉類似物、卵生成物（例えば、スクランブルエッグ）、スープ、チャウダー、ブイヨン、ミルク代用品、豆乳生成物、チリ、スパイスミックス、スプリンクル（sprinkle）、ソイウィズ（soy whiz）、サラダ用トッピング、食用フィルム、食用スティック、チューインガム、ベーコンビット、ベジビット、ピザクラストバリヤー、ソイパイ、ガスなし合成ビーンズ（no-gas synthetic beans）、ソイヘルパー、ソイコットンキャンディ、フルーツビット、ピザロール、マッシュポテト、スパンソイタンパク質ファイバー（spun soy protein fiber）、ソイロールアップ、押出スナック、調味料、ローション、フライ、ゼラチンデザート製品、ビタミンサプリメント、栄養バー、ドライケーキ、パンまたはマフィンミックスおよび電子レンジ用インスタント乾燥ミックスが挙げられる。

【0043】

いくつかの実施形態では、種子生成物は、エネルギーバー（身体的活動の間の消費のために適した）または食事代替バーとして提供される。エネルギーバーまたは食事代替バーは、１つまたはそれ以上のビタミン、ミネラル、食品サプリメント、植物、または植物もしくはハーブ抽出物もしくは当業界で公知の成分を含有しうるか、またはフルーツジュースまたは抽出物、ハーブまたはバーブフレーバー、天然または人工フレーバー、ビタミン、ミネラル、抗酸化物質含有抽出物、補酵素Ｑ、オメガ－３脂肪酸、ガラナ、カフェイン、テオブロミン、マルトデキストリンおよびタンパク質のようなエネルギーバーまたは食事代替バーで使用される。いくつかの実施形態では、エネルギーバーまたは食事代替バーは、それぞれ４０／３０／３０の炭水化物／タンパク質／脂肪の総利用可能エネルギーレベルを有しうる。

【0044】

エネルギーおよび食事代替バーは運動能力増強、精神的能力または認知焦点増強（cognitive focus enhancement）、および／または栄養面での恩恵についてさらに補充される。例示のサプリメントとしては、それらに限定されないが、ビンポセチン、ビンカミン・ギンコー・ビロバ（Ginkgo Biloba）、Ｌ－アルギニン、アセチル－Ｌ－カルニチン、ナツシロギク、ＤＭＡＥ（ジメチルアミノエタノール）、ＤＭＡＥ酒石酸水素塩、Ｐ－クロロフェノキシアセテート、ビタミンＢ－複合体、人参、５ＨＴＰ（５－ヒドロキシトリプトファン）、Ｌ－テアニン、アンドロステンジオン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－チロシン、Ｌ－グリシン、Ｌ－リジン、乳清タンパク質およびＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）または任意のそれらの組み合わせが挙げられる。

【0045】

種子生成物または組成物は、第１の種子生成物でない量の１つまたはそれ以上の追加のブドウ種子またはブドウの皮生成物も含有しうる。いくつかの実施形態では、第１の種子生成物の量は、第２のブドウ種子またはブドウの皮生成物の量を有する種子組成物に置換される。所与の量の種子生成物と同じ利益を達成する種子組成物に追加される必要がある第２のブドウ種子またはブドウの皮生成物の量は、当業者により容易に決定される。

【0046】

本明細書に記載の方法により調製される種子生成物は、例えば、医薬組成物および製剤でも使用される。医薬組成物は、１つまたはそれ以上生理学的に許容しうる担体または賦形剤を使用した標準技術により製剤される。いくつかの実施形態では、製剤は、緩衝剤および／または保存剤を含有しうる。化合物およびそれらの生理学的に許容しうる塩および溶媒和物は、１つまたはそれ以上医薬上許容しうる担体を含むビヒクル中で吸入を介して、局所に、鼻腔内に、経口で、非経口で（例えば、静脈内で、腹腔内で、膀胱内でまたはクモ膜下内で）または直腸でを含めて、任意の適切な経路により投与のために製剤される。その比率は、ペプチドの可溶性および化学的特性、選択される投与の経路、および標準的な生物学的実践により決定される。

【0047】

いくつかの実施形態により、例えば、医薬上許容しうる希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または他の担体と一緒に、本明細書に記載される方法により製造される１つまたはそれ以上の化合物の有効量を含む医薬組成物が提供される。このような組成物は、種々の緩衝剤含有量の希釈剤（例えば、ＴＲＩＳまたは他のアミン、炭酸塩、リン酸塩、アミノ酸、例えば、グリシンアミド塩酸塩（特に生理学的ｐＨ範囲で）、Ｎ－グリシルグリシン、リン酸ナトリウムもしくはカルシウム（二塩基性、三塩基性）など、またはＴＲＩＳ－ＨＣｌもしくはアセテート）、ｐＨおよびイオン強度；洗剤および可溶化剤（例えば、プルロニック（Pluronics）、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート（Polysorbate）８０）、クレモフォール（Cremophor）のような界面活性剤、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールのようなポリオールなど）のような添加剤、抗酸化物質（例えば、アスコルビン酸、二亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメルソール、ベンジルアルコール、パラベンなど）および増量物質（例えば、ショ糖、ラクトース、マンニトールのような糖、ポリビニルピロリドンまたはデキストランのようなポリマーなど）を含み；および／またはポリ乳酸、ポリグリコール酸のような重合体化合物の顆粒調製物（particulate preparation）に、またはリポソームにその材料を組み込むことを含む。ヒアルロン酸も使用される。このような組成物は、身体状態、安定性、本発明の化合物のインビボ放出の速度、および本発明の化合物のインビボクレアランスの速度に影響するように使用される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（１９９０年、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２）１４３５～１７１２頁を参照されたい。それらは、参照によって本明細書に組み入れられる。組成物は、例えば、液体形態で調製されるか、または凍結乾燥形態のような乾燥粉末でありうる。このような組成物を投与する特定の方法は、以下に記載される。組成物は、結晶化または沈殿もされる。結晶化または沈殿の方法の例は、例えば、２０１４年２月７日に出願された米国仮出願第６１／９３６，９１４号で見い出され、それは、全体的に参照によって本明細書に組み入れられる。

【0048】

緩衝剤が、製剤に含まれる場合、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、およびトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタンまたはそれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝剤の各１つは、代替実施形態を構成する。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、グリシルグリシン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはそれら混合物である。

【0049】

医薬上許容しうる保存剤は、本発明の製剤に含まれる場合、保存剤は、フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ－ヒドロキシ安息香酸プロピル、２－フェノキシエタノール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸ブチル、２－フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノールおよびチオメロサール（thiomerosal）またはそれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の保存剤の各１つが、代替実施形態を構成する。いくつかの実施形態では、保存剤は、フェノールまたはｍ－クレゾールである。

【0050】

いくつかの実施形態では、保存剤は、約０．１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約０．１ｍｇ／ｍｌから約２５ｍｇ／ｍｌの濃度で、または約０．１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、保存剤は、約１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約１ｍｇ／ｍｌから約２５ｍｇ／ｍｌの濃度で、または約１ｍｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0051】

医薬組成物での保存剤の使用は、当業者に周知である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５年が便宜上参照される。

【0052】

いくつかの実施形態では、製剤は、キレート剤をさらに含み、ここでキレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸およびアスパラギン酸の塩、ならびにそれらの混合物から選択される。これらの特定のキレート剤の各１つが、代替実施形態を構成する。

【0053】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0054】

医薬組成物でのキレート剤の使用は、当業者に周知である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５年が便宜上参照される。

【0055】

いくつかの実施形態では、製剤は、高分子量ポリマーまたは低分子量化合物の群から選択される安定剤をさらに含み、ここでこのような安定剤は、それらに限定されないが、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、様々の塩（例えば、塩化ナトリウム）、Ｌ－グリシン、Ｌ－ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニンおよびそれらの混合物が挙げられる。これらの特定の安定剤の各１つは、代替実施形態を構成する。いくつかの実施形態では、安定剤は、Ｌ－ヒスチジン、イミダゾールおよびアルギニンからなる群から選択される。

【0056】

いくつかの実施形態では、高分子量ポリマーは、０．１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌから３０ｍｇ／ｍｌまたは３０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0057】

いくつかの実施形態では、低分子化合物は、０．１ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌから３０ｍｇ／ｍｌまたは３０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0058】

医薬組成物での安定剤の使用は、当業者に周知である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５年が便宜上参照される。

【0059】

いくつかの実施形態では、製剤は、界面活性剤をさらに含み、ここで、界面活性剤は、洗剤、エトキシ化ひまし油、ポリグリコライズドグリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、１８８および４０７のようなポロキサマー、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アルキル化およびアルコキシ化誘導体（ツイーン類、例えばＴｗｅｅｎ－２０またはＴｗｅｅｎ－８０）のようなポリオキシンエチレン誘導体、モノグリセリドまたはそのエトキシ化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、グリセロール、コール酸またはその誘導体、レシチン、アルコールおよびリン脂質、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、スピンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）およびスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）、ＤＳＳ（ドクサートナトリウム、ドクサートカルシウム、ドクサートカリウム、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、胆汁酸およびその塩ならびにグリシンまたはタウリン接合体、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ－ヘキサデシル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アンモニオ－１－プロパンスルホン酸、アニオン性（アルキル－アリール－スルホン酸）一価界面活性剤、パルミトイルリゾホスファチジル－Ｌ－セリン、リゾリン脂質（例えば、エタノールアミンの１－アシル－ｓｎ－グリセロ－３－リン酸エステル、コリン、セリンまたはスレオニン）、アルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、リゾホスファチジルおよびホスファチジルコリンのアルコキシ（アルキルエーテル）誘導体、例えば、リゾホスファチジルコリンのラウロイルおよびミリストイル誘導体，ジパルミトイホスファチジルコリン、およびコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、および正に負荷されたＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリンおよびリゾホスファチジルスレオニンである極性頭部の修飾、双極界面活性剤（例えば、Ｎ－アルキル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニオ－１－プロパンスルホネート、３－クロロアミド－１－プロピルジメチルアンモニオ－１－プロパンスルホネート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリソホスファチジルコリン、鶏卵リソレシチン）、陽イオン性界面活性剤（四級アンモニウム塩基）（例えば、セチル－トリメチルアンモニウムブロミド、セチルピリジニウムクロリド）、非イオン性界面活性剤、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ／Ｔｅｔｒｏｎｉｃｓ、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、ドデシルβ－Ｄ－グルコピラノシド）または重合体界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ－４０、Ｔｗｅｅｎ－８０、Ｂｒｉｊ－３５）、フシジン酸誘導体（例えば、ナトリウムタウロ－ジヒドロフシデートなど）、長鎖脂肪酸およびその塩Ｃ６～Ｃ１２（例えば、オレイン酸およびカプリル酸）、アシルカルニチンおよび誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンのＮα－アシル化誘導体、またはリジンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニンもしくはヒスチジンの任意の組み合わせを含むジペプチドのＮα－アシル化誘導体、および中性もしくは酸性アミノ酸、中性アミノ酸および２価アミノ酸の任意の組み合わせを含むトリペプチドのＮα－アシル化誘導体から選択され、または界面活性剤は、イミダゾリン誘導体またはそれらの混合物の群から選択される。これらの特定の界面活性剤の各１つは、代替実施形態を構成する。

【0060】

医薬組成物での界面活性剤の使用は、当業者に周知である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、１９版、１９９５年を便宜上参照される。

【0061】

いくつかの実施形態では、組成物は、医薬上許容しうる甘味剤を含めた甘味剤を含むことができる。医薬上許容しうる甘味剤の例としては、サッカリン、サッカリンナトリウムまたはカルシウム、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、サイクラミン酸ナトリウム、アリターム、ジヒドロカルコン甘味剤、モネリン、ステビオシドまたはスクラロース（４，１’，６’－トリクロロ－４，１’，６’－トリデオキシガラクトスクロース）のような少なくとも１つの強い甘味剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、医薬上許容しうる甘味剤の例としては、サッカリン、サッカリンナトリウムまたはカルシウム、場合によりソルビトール、マンニトール、フルクトース、ショ糖、マルトース、イソマルト、グルコース、水素化グルコースシロップ、キシリトール、キャラメルまたはハチミツのようなバルク甘味料が挙げられる。

【0062】

強い甘味剤は、例えば、低濃度でも使用される。例えば、サッカリンナトリウムの場合には、濃度は、最終製剤の総体積に基づいて０．０４％から０．１％（ｗ／ｖ）の範囲にあり、低用量製剤で約０．０６％であり、高用量のもので約０．０８％でありうる。バルク甘味剤は、約１０％から約３５％または約１０％から１５％（ｗ／ｖ）の範囲にある大量で有効に使用される。

【0063】

製剤は、従来の技術により、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９８５年で、またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５年に記載されるとおりに調製され、ここで、製薬業界のこのような従来の技術は、成分を適切に溶解および混合して、所望の最終生成物を得ることを含む。

【0064】

本明細書に記載される組成物および生成物は、当業界で公知の任意の方法によっても投与される。例えば、投与は、経皮、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼用、脳室内、関節内、脊髄内、大槽内、腹腔内で、脳室内、くも膜下腔内、鼻腔内、エアロゾル、坐剤により、または経口投与である。いくつかの実施形態では、本明細書で調製される化合物の医薬組成物は、注射用、または経口、肺、鼻腔、経皮、眼科投与のためである。

【0065】

経口投与については、組成物は、カプセル剤または錠剤のような単位剤形で製剤にされる。錠剤またはカプセル剤は、結合剤、例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース；フィラー、例えば、ラクトース、結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム；滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム；または湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムを含めた医薬上許容しうる賦形剤で従来の方法により調製される。錠剤は、当業界で周知の方法により被覆される。経口投与用の液体製剤は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形態を取ることができ、またはそれらの製剤は、使用前に、水または他の適切なビヒクルとの構成のために乾燥生成物として存在しうる。このような液体製剤は、医薬上許容しうる添加剤、例えば、懸濁剤、例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または水素化食用脂；乳化剤、例えば、レシチンまたはアカシア；非水性ビヒクル、例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコールまたは機能性植物油；および保存剤、例えば、メチルまたはプロピル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸で従来の手段により調製される。製剤は、必要に応じて、緩衝剤塩、風味剤、着色剤および／または甘味剤も含有しうる。所望の場合、経口投与用の製剤は、活性化合物の放出制御を得るために適切に製剤される。その化合物は経口吸着を促進するためにシクロデキストリンまたは他の大型分子と共に調製される。

【0066】

局所投与については、組成物は、０．１から１０パーセントまたは０．５から５パーセントの活性化合物を含有する医薬上許容しうるビヒクルで製剤される。そのような製剤は、クリーム、ローション、舌下錠、エアゾールおよび／またはエマルジョンの形態であってよく、この目的のために当業界で従来からあるマトリックスまたはリザーバー型の経皮または頬パッチに含まれる。

【0067】

非経口投与については、化合物は、医薬上許容しうるビヒクルまたは担体との組成物で静脈内、皮下、または筋肉内注射により投与される。組成物は、注射により、例えば、ポーラス注入または持続注入により非経口投与のために製剤される。注射用の製剤は、単位剤形で、例えば、アンプルで、または複数回用量容器で、添加された保存剤と共に存在する。組成物は、油状または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態を取ることができ、製剤化剤、例えば、懸濁、安定化および／または分散剤を含有することができる。代わりに、活性成分は、使用の前に、適切なビヒクル、例えば、滅菌発熱物質不含水との構成のために粉体形態でありうる。

【0068】

注射による投与については、組成物は、緩衝剤または保存剤のような他の溶質、ならびに溶液を等張にするために十分な量の医薬上許容しうる塩またはグルコースも含有しうる滅菌水性ビヒクル中の溶液で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射用投与のための滅菌溶液または懸濁液を提供するために医薬上許容しうる担体と製剤される。特に、注入物質は、液体溶液または懸濁液、注射の前に液体中に溶解もしくは懸濁するのに適した固形形態として、またはエマルジョンとしてのいずれかとして、従来の形態で調製される。適切な賦形剤は、例えば、水、サリン、デキストロース、マンニトール、ラクトース、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸システインなどである。さらに、所望の場合、注射用医薬組成物は、湿潤剤、ｐＨ緩衝剤などの微量の非毒性補助物質を含有してもよい。所望の場合、吸着増強製剤（例えば、リポソーム）が利用される。適切な医薬担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。

【0069】

吸引による投与については、組成物は、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスの使用と共に加圧パックまたはネブライザーからエアゾール噴霧プレゼンテーションの形態で都合よく送達されうる。加圧エアゾールの場合には、投薬量単位は、定量を送達するバルブを供することにより測定される。インヘラーまたは吸入器で使用するための例えば、ゼラチンのカプセル剤およびカートリッジは、製剤にできて、化合物および適切な粉体基材、例えば、ラクトースまたはスターチの粉体ミックスを含有する。鼻腔内投与については、本発明の組成物は、例えば、液体スプレーとして、粉末として、または液滴の形態で使用される。

【0070】

組成物は、例えば、従来の坐剤基材、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドを含有する直腸組成物、例えば、坐剤または滞留浣腸でも製剤される。

【0071】

さらに、組成物は、デポ製剤として製剤される。このような長時間作用性製剤は、移植（例えば、皮下でまたは筋肉内で）または筋肉内注射により投与される。したがって、例えば、化合物は、適切な重合体もしくは疎水性材料（例えば、許容しうる油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と共に、または難溶性誘導体として、例えば難溶性塩として製剤される。

【0072】

所望の場合、組成物は、活性成分を含有する１つまたはそれ以上の単位剤形を含有できるパックまたはディスペンサーデバイスに存在する。パックは、例えば、金属またはプラスチック製箔、例えば、ブリスターパックを含むことができる。パックまたはディスペンサーデバイスは、投与についての指示書を伴うことができる。

【0073】

本明細書に記載される方法により調製される組成物は、本明細書に記載される疾患および障害を予防、処置または制御するために治療的に有効な用量を含めて、有効な用量で患者に投与される。それらは、本明細書に記載されるとおりの健康な肝臓を回復または維持するためにも使用される。医薬組成物は、患者における有効な維持、保護、回復または治療的応答を引き出すために十分な量で患者に投与されうる。これを達成するために適切な量は、「治療的に有効な用量」として定義される。その用量は、使用される特定の組成物の効力、および対象の状態、ならびに体重または処置されるべき領域の表面積により決定される。用量のサイズも、特定の対象での特定の化合物またはベクターの投与に付随する存在、特性、および任意の有害影響の範囲により決定される。

【0074】

このような組成物の毒性および治療効率は、細胞培養物または実験動物での標準薬学的手段により、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定することにより決定される。毒性および治療効果の間の用量比は、治療指数であり、比、ＬＤ５０／ＥＤ５０として表される。大きな治療指数を示す組成物が好ましい。毒性の副作用を示す組成物を使用できるが、正常な細胞に対する潜在的損傷を最小にし、それにより、副作用を減らすために、そのような化合物を冒されている組織の部位に向けて導くデリバリーシステムを設計するのに注意を払うべきである。

【0075】

細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトで使用するための投薬量範囲を処方するために使用される。このような化合物の投薬量は、ほとんどまたは全く毒性なしのＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にあるのが好ましい。投薬量は、使用される剤形および投与の経路によりこの範囲内で変動しうる。本明細書に記載される方法で使用される任意の組成物については、治療的に有効な用量は、例えば、細胞培養アッセイから最初に見積もられる。用量は、細胞培養で決定されるとおりＩＣ５０（症状の最大阻害の半分値を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成する動物モデルで処方される。そのような情報は、ヒトでの有用な用量をいっそう厳密に決定するために使用される。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定される。一般に、調節因子の用量等価物は、典型的な対象について、または本明細書の他のどこかに記載されるとおり約１ｎｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇである。

【0076】

組成物の投与の量および頻度は、患者の年齢、状態およびサイズのような因子、ならびに処置されるべき症状の重症度を考慮して、使用者または担当する臨床医の判断により調整される。通常の技術を習得した医師または獣医師は、症状の進行を予防、対抗または妨げるために必要とされる有効な量の薬物を容易に決定および処方できる。一般に、有効な量は、０．００１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．０１ｍｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ体重、または本明細書に記載されるとおりであることが、意図される。いくつかの実施形態では、有効な量が、１２時間から１４日の期間、０．０１マイクログラム／ｋｇ体重／分から１００マイクログラム／ｋｇ体重／分の静脈内投与により連続して注入されることが、意図される。その１日を通して適切な間隔で、２回、３回、４回またはそれ以上のサブ用量として必要とされる用量を投与することが適切である。上記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり、０．０１から５００ｍｇ、特に０．１ｍｇから２００ｍｇの組成物を含有する単位剤形として製剤される。

【0077】

いくつかの実施形態では、医薬製剤は、単位剤形にある。このような形態では、製剤は、適切な量の活性成分、例えば、所望の目的を達成するために有効な量を含有する適切にサイズ分けされた単位用量に分割される。製剤の単位用量中の活性化合物の量は、特定の用途により、約０．０１ｍｇから約１０００ｍｇ、約０．０１ｍｇから約７５０ｍｇ、約０．０１ｍｇから約５００ｍｇ、または約０．０１ｍｇから約２５０ｍｇに変動または調整される。使用される実際の投薬量は、患者の必要性および処置されるべき症状の重症度により変動しうる。特定の状況についての適切な投薬量レジメンの決定は、当業界の技術の範囲内である。便宜上、総投薬量は、必要に応じて１日の間に部分的に分割して投与される。

【0078】

本方法のいくつかの実施形態では、毎日の食餌の百分率として消費されるブドウ生成物の量は、少なくとも３質量％、少なくとも５質量％、または少なくとも８質量％である。いくつかの実施形態では、毎日の食餌の５から１０質量％、７質量％、または１０質量％が消費される。

【0079】

本方法のいくつかの実施形態では、毎日の食餌の百分率として消費されるブドウ生成物の量は、消費される総カロリーの少なくとも３％、少なくとも５％または少なくとも８％である。いくつかの実施形態では、毎日のカロリーの５～１０％、７％または１０％が、ブドウ生成物から得られる。

【0080】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせが、約１ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約１ｍｇから約９，０００ｍｇ、約１ｍｇから約８，０００ｍｇ、約１ｍｇから約７，０００ｍｇ、約１ｍｇから約６，０００ｍｇ、約１ｍｇから約５，０００ｍｇ、約１ｍｇから約４，０００ｍｇ、約１ｍｇから約３，０００ｍｇ、約１ｍｇから約２，０００ｍｇ、約１ｍｇから約１，０００ｍｇ、約１ｍｇから約９００ｍｇ、約１ｍｇから約８００ｍｇ、約１ｍｇから約７００ｍｇ、約１ｍｇから約６００ｍｇ、約１ｍｇから約５００ｍｇ、約１ｍｇから約４００ｍｇ、約１ｍｇから約３００ｍｇ、約１ｍｇから約２００ｍｇ、約１ｍｇから約１００ｍｇ、約１ｍｇから約７５ｍｇ、約１ｍｇから約５０ｍｇ、または約１ｍｇから約２５ｍｇの量で投与される。

【0081】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約５ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約５ｍｇから約９，０００ｍｇ、約５ｍｇから約８，０００ｍｇ、約５ｍｇから約７，０００ｍｇ、約５ｍｇから約６，０００ｍｇ、約５ｍｇから約５，０００ｍｇ、約５ｍｇから約４，０００ｍｇ、約５ｍｇから約３，０００ｍｇ、約５ｍｇから約２，０００ｍｇ、約５ｍｇから約１，０００ｍｇ、約５ｍｇから約９００ｍｇ、約５ｍｇから約８００ｍｇ、約５ｍｇから約７００ｍｇ、約５ｍｇから約６００ｍｇ、約５ｍｇから約５００ｍｇ、約５ｍｇから約４００ｍｇ、約５ｍｇから約３００ｍｇ、約５ｍｇから約２００ｍｇ、約５ｍｇから約１００ｍｇ、約５ｍｇから約７５ｍｇ、約５ｍｇから約５０ｍｇ、または約５ｍｇから約２５ｍｇの量で投与される。

【0082】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末、もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約１０ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約９，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約８，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約７，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約６，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約５，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約４，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約３，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約２，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約１，０００ｍｇ、約１０ｍｇから約９００ｍｇ、約１０ｍｇから約８００ｍｇ、約１０ｍｇから約７００ｍｇ、約１０ｍｇから約６００ｍｇ、約１０ｍｇから約５００ｍｇ、約１０ｍｇから約４００ｍｇ、約１０ｍｇから約３００ｍｇ、約１０ｍｇから約２００ｍｇ、約１０ｍｇから約１００ｍｇ、約１０ｍｇから約７５ｍｇ、約１０ｍｇから約５０ｍｇ、または約１０ｍｇから約２５ｍｇの量で投与される。

【0083】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせが、約２５ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約９，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約８，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約７，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約６，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約５，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約４，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約３，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約２，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約１，０００ｍｇ、約２５ｍｇから約９００ｍｇ、約２５ｍｇから約８００ｍｇ、約２５ｍｇから約７００ｍｇ、約２５ｍｇから約６００ｍｇ、約２５ｍｇから約５００ｍｇ、約２５ｍｇから約４００ｍｇ、約２５ｍｇから約３００ｍｇ、約２５ｍｇから約２００ｍｇ、約２５ｍｇから約１００ｍｇ、約２５ｍｇから約７５ｍｇ、または約２５ｍｇから約５０ｍｇの量で投与される。

【0084】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、またはその上述のものの組み合わせが、約５０ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約９，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約８，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約７，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約６，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約５，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約４，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約３，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約２，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約１，０００ｍｇ、約５０ｍｇから約９００ｍｇ、約５０ｍｇから約８００ｍｇ、約５０ｍｇから約７００ｍｇ、約５０ｍｇから約６００ｍｇ、約５０ｍｇから約５００ｍｇ、約５０ｍｇから約４００ｍｇ、約５０ｍｇから約３００ｍｇ、約５０ｍｇから約２００ｍｇ、約５０ｍｇから約１００ｍｇ、または約５０ｍｇから約７５ｍｇの量で投与される。

【0085】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約７５ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約９，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約８，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約７，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約６，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約５，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約４，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約３，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約２，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約１，０００ｍｇ、約７５ｍｇから約９００ｍｇ、約７５ｍｇから約８００ｍｇ、約７５ｍｇから約７００ｍｇ、約７５ｍｇから約６００ｍｇ、約７５ｍｇから約５００ｍｇ、約７５ｍｇから約４００ｍｇ、約７５ｍｇから約３００ｍｇ、約７５ｍｇから約２００ｍｇまたは約７５ｍｇから約１００ｍｇの量で投与される。

【0086】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約１００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約１００ｍｇから約９００ｍｇ、約１００ｍｇから約８００ｍｇ、約１００ｍｇから約７００ｍｇ、約１００ｍｇから約６００ｍｇ、約１００ｍｇから約５００ｍｇ、約１００ｍｇから約４００ｍｇ、約１００ｍｇから約３００ｍｇまたは約１００ｍｇから約２００ｍｇの量で投与される。

【0087】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約２００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約２００ｍｇから約９００ｍｇ、約２００ｍｇから約８００ｍｇ、約２００ｍｇから約７００ｍｇ、約２００ｍｇから約６００ｍｇ、約２００ｍｇから約５００ｍｇ、約２００ｍｇから約４００ｍｇまたは約２００ｍｇから約３００ｍｇの量で投与される。

【0088】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約３００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約３００ｍｇから約９００ｍｇ、約３００ｍｇから約８００ｍｇ、約３００ｍｇから約７００ｍｇ、約３００ｍｇから約６００ｍｇ、約３００ｍｇから約５００ｍｇまたは約３００ｍｇから約４００ｍｇの量で投与される。

【0089】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約４００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約４００ｍｇから約９００ｍｇ、約４００ｍｇから約８００ｍｇ、約４００ｍｇから約７００ｍｇ、約４００ｍｇから約６００ｍｇ、約４００ｍｇから約５００ｍｇの量で投与される。

【0090】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはそれらの任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約５００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約５００ｍｇから約９００ｍｇ、約５００ｍｇから約８００ｍｇ、約５００ｍｇから約７００ｍｇ、または約５００ｍｇから約６００ｍｇの量で投与される。

【0091】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはそれらの任意の部分、皮生成物、種子粉末、もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約６００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約６００ｍｇから約９００ｍｇ、約６００ｍｇから約８００ｍｇまたは約６００ｍｇから約７００ｍｇの量で投与される。

【0092】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはそれらの任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約７００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約１，０００ｍｇ、約７００ｍｇから約９００ｍｇまたは約７００ｍｇから約８００ｍｇの量で投与される。

【0093】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約８００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約２，０００ｍｇ、約８００ｍｇから約１，０００ｍｇまたは約８００ｍｇから約９００ｍｇの量で投与される。

【0094】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約９００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約３，０００ｍｇ、約９００ｍｇから約２，０００ｍｇまたは約９００ｍｇから約１，０００ｍｇの量で投与される。

【0095】

本方法のいくつかの実施形態では、ブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせは、約１，０００ｍｇから約１５，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約１４，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約１３，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約１２，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約１１，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約１０，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約９，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約８，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約７，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約６，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約５，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約４，０００ｍｇ、約１，０００ｍｇから約３，０００ｍｇまたは約１，０００ｍｇから約２，０００ｍｇの量で投与される。

【0096】

いくつかの実施形態では、毎日消費されるブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせの量は、少なくとも、もしくは約０．１ｇであり、少なくとも、もしくは約０．５ｇ、少なくとも、もしくは約１ｇであり、少なくとも、もしくは約２ｇであり、少なくとも、もしくは約３ｇであり、少なくとも、もしくは約４ｇであり、少なくとも、もしくは約５ｇ、少なくとも、もしくは約１０ｇ、少なくとも、もしくは約１５ｇ、少なくとも、もしくは約２０ｇ、少なくとも、もしくは約２５ｇ、少なくとも、もしくは約３０ｇ、少なくとも、もしくは約３５ｇ、少なくとも、もしくは約４０ｇ、または少なくとも、もしくは約４５ｇである。いくつかの実施形態では、少なくとも、もしくは約５０ｇのブドウ生成物が、毎日消費される。

【0097】

いくつかの実施形態では、毎日消費されるブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせの量は、少なくとも大さじ１杯、少なくとも大さじ２杯、少なくとも大さじ３杯、少なくとも大さじ４杯、または少なくとも大さじ５杯である。

【0098】

いくつかの実施形態では、毎日消費されるブドウ生成物、全搾りかすもしくはその任意の部分、皮生成物、種子粉末もしくは種子生成物、もしくはそれらの任意の抽出物、または前述のものの任意の組み合わせの量は、重量：体重基準で、少なくとも０．２ｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｇ／ｋｇ、または少なくとも０．７ｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、体重のｋｇ当たり少なくとも１ｇのブドウ生成物が、１日当たりに消費される。

【0099】

種子粉末は、全搾りかすもしくはその任意の部分、搾りかすミール、搾りかす粉末、皮粉末、皮生成物、種子生成物もしくは種子ミール、またはその任意の抽出物と置換または組み合わせられ、または前述のものの任意の組み合わせは、本明細書に記載の方法または実施形態のいずれかで投与される。所与の量の種子粉末と同じ利益を得るために毎日消費される必要がある搾りかすミール、搾りかす粉末、皮粉末、種子抽出物または種子ミールの量は、当業者により、本明細書に記載されるとおり容易に決定される。例えば、対象は、所与の量の種子粉末と同じ利益を達成するために約３倍多くの皮粉末を消費する必要があると考えられる。

【0100】

いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、週に少なくとも２回、週に少なくとも３回、または一日おきに摂取される。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、毎日の食事に組み入れられる。いくつかの実施形態では、生成物は、日に２回、日に３回、または日に４回投与される。

【0101】

ブドウ生成物は、本明細書に記載のとおり種子生成物により処置および／または予防することを受け入れられる状態を処置および／または予防するために十分な期間にわたり摂取される。ブドウ生成物は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも１年、または不確定の間、摂取される。

【0102】

本方法のいくつかの実施形態では、第１のブドウ生成物ではない、第２のブドウ生成物が、個体に投与される。いくつかの実施形態では、第１のブドウ生成物および第２のブドウ生成物（種子、皮、搾りかすなど）の組み合わせが、第１のブドウ生成物単独の投与の効果より大きい治療効果または健康利益を提供する。

【0103】

いくつかの実施形態では、第１のブドウ生成物の量、および第２のブドウ生成物またはブドウ種子、搾りかすまたは皮生成物の量は、達成される効果が、単独で投与される第１の種子生成物の所与の量により達成される効果と少なくとも同じであるように選択される。

【0104】

いくつかの実施形態では、哺乳類での非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、哺乳類に、ＮＡＦＬＤを処置または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子生成物である。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、本明細書に記載される様々のブドウ生成物の組み合わせまたは抽出物である。いくつかの実施形態では、種子生成物は、シャルドネの種子生成物である。非アルコール性脂肪肝疾患は、ほとんどまたは全くアルコール飲まない人々の肝臓での脂肪の蓄積を記述するために使用される用語である。いくつかの実施形態では、哺乳類は、アルコールを消費しない。いくつかの実施形態では、哺乳類は、肝臓の炎症を有する。いくつかの実施形態では、哺乳類は、肝臓に瘢痕がある。瘢痕を有するＮＡＦＬＤの形態は、非アルコール性脂肪肝肝炎を指すことができる。いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤを有する哺乳類は、肝不全も有する可能性がある。本明細書に記載される組成物は、これらの状態のいずれかを処置または緩和するために使用される。

【0105】

いくつかの実施形態では、哺乳類での脂肪肝を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝を減少されるのに有効な量のブドウ生成物を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、シャルドネのブドウ生成物である。

【0106】

いくつかの実施形態では、哺乳類での脂肪肝炎を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝炎を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、シャルドネのブドウ生成物である。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子生成物またはその抽出物である。

【0107】

いくつかの実施形態では、哺乳類での肝線維症を減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、哺乳類に、肝線維症を減少させるために有効な量のブドウ種子生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、シャルドネのブドウ生成物である。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子生成物またはその抽出物である。

【0108】

いくつかの実施形態では、哺乳類での非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、哺乳類に、ＮＡＳＨを処置または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、シャルドネのブドウ生成物である。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、ブドウ種子生成物またはその抽出物である。

【0109】

いくつかの実施形態では、哺乳類での健康な肝臓を支持する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、哺乳類に、健康な肝臓を支持するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、健康な肝臓は、肝臓の正常な機能を保存することにより支持される。これは、例えば、エネルギーを代謝する肝臓の能力を増強または保存することにより行われる。いくつかの実施形態では、これは、肝臓を外部損傷から保護および／または支持するために免疫応答を支持することにより行われる。

【0110】

いくつかの実施形態では、環境的毒素および／または消費された生成物への曝露により、対象における肝臓に急性ストレスで誘発される損傷を制御する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、対象に、本明細書に記載されるとおりの量のブドウ生成物を投与することを含む。

【0111】

いくつかの実施形態では、毒性ストレス応答を改善する対象の肝臓でｍｉＲＮＡを調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、対象に、本明細書に記載されるとおりの量のブドウ生成物を投与することを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、対象での肝臓が再生および／または治癒する能力を増大する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、対象に、本明細書に記載されるとおりの量のブドウ生成物を投与することを含む。

【0113】

ブドウ生成物は、酸化的ストレスを阻害または処置するためにも使用される。その生成物は、哺乳類での健康な酸化的ストレスレベルを維持するためにも使用される。その方法は、哺乳類に、本明細書に記載される有効な量のブドウ種子生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、酸化的ストレスが、肝臓に存在する。いくつかの実施形態では、ブドウ種子生成物は、肝臓炎症を減少させるために使用される。

【0114】

いくつかの実施形態では、哺乳類の肝臓での酸化的ストレスを減少または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、その方法は、哺乳類に、哺乳類の肝臓での酸化的ストレスを減少または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、その方法は、肝臓での脂質過酸化を減少または予防する。

【0115】

いくつかの実施形態では、哺乳類の肝臓でのチトクロムＰ４５０および／または第ＩＩ相の酵素的解毒系を保護、支持、増強または維持する方法であって、哺乳類に、哺乳類の肝臓でのチトクロムＰ４５０および／または第ＩＩ相の酵素的解毒系を保護、支持、増強または維持するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む方法が提供される。

【0116】

いくつかの実施形態では、哺乳類での解毒酵素の産生を制御する遺伝子の発現を上方制御する方法であって、哺乳類に、哺乳類での解毒酵素の産生を制御する遺伝子の発現を上方制御するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＮＲＦ２である。

【0117】

いくつかの実施形態では、哺乳類での抗酸化物質の産生を増大する方法であって、哺乳類に、哺乳類での抗酸化物質の産生を増大するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、増大した抗酸化物質は、グルタチオン、スーパーオキシドジスムターゼ、またはカタラーゼである。

【0118】

本明細書に記載される種々の実施形態で、哺乳類または対象は、それを必要とする哺乳類または対象である。いくつかの実施形態では、哺乳類は、非アルコール性脂肪肝疾患または関連状態を有すると同定され、それは本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物は、哺乳類での肝臓に沈着した脂肪の量を減少させる。

【0119】

本明細書に記載される場合、ブドウ種子生成物は、ブドウ種子粉末でありうる。したがって、いくつかの実施形態では、種子粉末は、シャルドネの種子粉末でもありうる。いくつかの実施形態では、ブドウ種子生成物は、ブドウ種子抽出物である。いくつかの実施形態では、抽出物は、シャルドネの種子抽出物である。

【0120】

本明細書に記載される場合、組成物は、ブドウ生成物および少なくとも１つの追加の化合物を含有しうる。いくつかの実施形態では、化合物は、抗酸化物質である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＥ、シナモン、黒熊の胆（black bear bile）、オベチコール酸、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、ＤＮＰ－メチルエーテル（ＤＮＰＭＥ）、抗血糖化合物、または抗コレステロール化合物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、カロテノイド、リポ酸、ユビキノール、ユビキノンまたはグルタチオンである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、第２のタイプのブドウ種子生成物である。すなわち、組成物は、２つまたはそれ以上の異なるタイプのブドウに由来するブドウ種子組成物を含みうる。そのタイプのブドウは、それに限定されないが、本明細書に記載されるブドウのタイプなどの任意のタイプでありうる。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗血糖化合物は、インスリン感受性改善薬である。インスリン感受性改善薬の例としては、それらに限定されないが、ピオグリタゾン、メトホルミン、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンが挙げられる。

【0122】

いくつかの実施形態では、抗コレステロール化合物は、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤である。これらは、しばしば、口語的に「スタチン」と称される。いくつかの実施形態では、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンまたはシンバスタチンである。

【0123】

いくつかの実施形態では、その方法は、同時に、または連続して、ブドウ生成物および追加の生成物を投与することを含む。したがって、その生成物は、連続して、または同時に投与される。いくつかの実施形態では、ブドウ生成物および少なくとも１つの追加の化合物または組成物は、同じ製剤または単位剤形に組み込まれ、一緒に投与される。本明細書に記載される場合、単位剤形は、例えば、粉剤、カプセル剤または錠剤でありうる。いくつかの実施形態では、様々な組成物が、別個の製剤で投与される。

【0124】

ブドウ生成物および少なくとも１つの追加の化合物または組成物を含む製剤も、提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物または組成物は、第２のタイプのブドウ生成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、ブドウ生成物および少なくとも１つの追加の化合物を含む。いくつかの実施形態では、それは、抗酸化物質である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＥ、オベチコール酸、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、ＤＮＰ－メチルエーテル（ＤＮＰＭＥ）、抗血糖化合物または抗コレステロール化合物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、カロテノイド、リポ酸、ユビキノール、ユビキノンまたはグルタチオンである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、それらに限定されないが、ｓ－アデノシル－メチオニン、トリメチルグリシンまたはメチオニンのようなメチル供与体である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、それらに限定されないが、ホスファチド、必須脂肪酸、コリンまたはＢビタミンのような代謝栄養物である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の化合物は、それらに限定されないが、ミルクシスル、チョウセンゴミシ、ゴボウ、タンポポ、アーティチョーク、ウコン、クサノオウ、葛、チコリもしくはイエロードック（yellow dock）またはそれらの任意の抽出物のような植物または植物性抽出物である。抗血糖化合物または抗コレステロール化合物の例は、本明細書に記載される。例えば、いくつかの実施形態では、抗血糖化合物は、インスリン感受性改善薬である。いくつかの実施形態では、インスリン感受性改善薬は、ピオグリタゾン、メトホルミン、チアゾリジンジオンまたはスルホニル尿素である。いくつかの実施形態では、組成物は、抗コレステロール化合物、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチンである。

【0125】

いくつかの実施形態では、組成物は、哺乳類（例えば、ヒト、家畜、畜産動物、ペット）消費にとって適合性がある。いくつかの実施形態では、組成物は、ウシ、家禽、イヌ、ネコなどにとって適合性がある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、生菌と組み合わせられる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で、対象は、哺乳類（例えば、ヒト、家畜、畜産動物、ペット）である。いくつかの実施形態では、対象は、ウシ、家禽、イヌ、ネコなどである。

【0126】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、インスリン耐性を増大するために使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、正常な（例えば、健康な）インスリン耐性を維持するために使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、健康なレベルの肝臓レプチンを維持するために使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、健康または正常なレベルに肝臓レプチンを回復するために使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、それを必要とする哺乳類を含めて、哺乳類での肝臓レプチン感受性を改善、維持または回復するために使用される。したがって、組成物は、脂肪肝を減少させるために使用される。

【0127】

いくつかの実施形態では、組成物は、ブドウ生成物（例えば、種子抽出物または粉末）なしの食餌での哺乳類と比較した場合、肝臓および／または精巣上体の脂肪組織重量を３０～４０％まで減少させるために使用される。いくつかの実施形態では、組成物は、対照食餌での哺乳類と比較した場合、高脂肪食餌での哺乳類で、肝臓の脂質含有量を、約４０～５０％まで減少させるために使用される。いくつかの実施形態では、組成物は、哺乳類での肝臓の脂質含有量を減少させるために使用される。組成物は、例えば、本明細書に記載される量で、本明細書に記載される種々の方法により投与される。

【0128】

本明細書に開示される実施形態は、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の遺伝子の発現を調節する方法も提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、１つまたはそれ以上の遺伝子を発現する哺乳類にブドウ抽出物（例えば、種子抽出物、搾りかすまたは粉末）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子の発現を調節するために有効な量で、哺乳類に、ブドウ種子抽出物を投与することを含む哺乳類での遺伝子の発現を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、遺伝子発現は、増大される。いくつかの実施形態では、遺伝子発現は、減少される。いくつかの実施形態では、哺乳類は、遺伝子発現の調節を必要とする哺乳類である。いくつかの実施形態では、遺伝子の発現は、ブドウ種子抽出物を投与されない哺乳類と比較して少なくとも１．５倍に増大または減少される。いくつかの実施形態では、遺伝子の発現は、少なくとも２、３、４、５または６倍に増大、減少される。いくつかの実施形態では、遺伝子の発現は、約１．５から６、１．５から５、１．５から４、１．５から３、１．５から２、２から６、２から５、２から４、２から３、３から６、３から５、３から４、４から６、４から５、５から６または６から７倍に増大または減少される。いくつかの実施形態では、遺伝子発現は、実施例で示される量により調節される。

【0129】

いくつかの実施形態では、遺伝子は、Ｃｈｉ３ｌ１、Ｃｅｓ１ｄ、Ａｄｒａ１ｂ、Ｓｌｃ１３ａ３、Ｎｔｒｋ２、Ｃｙｐ２１ａ１、Ａｑｐ８、Ｇｃｋ、Ｐｆｋｍ、Ｔｘｎ１、Ｃｋｂ、Ｇｃｋｒ、Ｆｅｎ１、Ｃｙｐ４６ａ１、Ｖｌｄｌｒ、Ｐｐｃｄｃ、Ｂｄｈ２、Ｓｃｄ１、Ａｃｏｔ１１、Ｍｌｘｉｐｌ（ＣｈＲＥＢＰ）、Ｌｃｎ１３、Ｐｒｏｄｈ、Ｇｓｔｔ３、Ｍｃ５ｒ、Ｔａｓ２ｒ１０４、Ｖｍｎ１ｒ１９２、Ｒａｓｌ２－９、Ｃｆｄ、Ｃｔｓｅ、Ｏｒｍ２、Ｒｏｒｃ、Ｔｌｒ５、Ｈｎｍｔ、Ｃｙｐ２ｂ１３、Ｃｙｐ２ｄ４０、Ｈａｏ２、Ｇｄｆ１５、Ｓｐｔｌｃ３、Ｍｏｇａｔ１、Ｐｌｉｎ４、Ｉｆｎａ９、Ａｓｎｓ、Ｇｏｔ１、Ａｔｐ６ｖ０ｄ２、Ｃｙｐ７ｂ１、Ｃｙｐ１７ａ１、Ｉｄ１、Ａｖｐｒ１ａ、Ｏｃｌｎ、Ｃｙｐ５１、Ｆｄｆｔ１、Ｈｍｇｃｒ、Ｈｓｄ１７ｂ７、Ｉｎｓｉｇ１、Ｌｓｓ、Ｍｖｄ、Ｍｖｋ、Ｎｓｄｈｌ、Ｓｃ４ｍｏｌ、Ｔｍ７ｓｆ２、Ａｐｏｍ、Ｌｅｐｒ、Ｐｃｓｋ９、Ｓｑｌｅ、Ｉｌ１７ｒｂ、Ａｃｓｌ３、Ａｇｘｔ、Ａｌｄｏｃ、Ｐｇｋ２、Ｔｌｒ１３、Ｈｍｇｃｓ１、Ｓｔａｒｄ４、Ｍｍｐ７およびＩｇｆｂｐ２のうちの１つまたはそれ以上である。いくつかの実施形態では、遺伝子は、前述のリストの２、３、４または５である。いくつかの実施形態では、遺伝子は、前述のリストの遺伝子の各々である。

【0130】

本明細書で提供される実施形態は、それらに限定されないが、以下のものも含まれる：
１．哺乳類での非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置または予防する方法であって、哺乳類に、ＮＡＦＬＤを処置または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
２．哺乳類での脂肪肝を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
３．哺乳類での脂肪肝炎を減少させる方法であって、哺乳類に、脂肪肝炎を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
４．哺乳類での肝線維症を減少させる方法であって、哺乳類に、肝線維症を減少させるために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
５．哺乳類での非アルコール性脂肪肝肝炎（ＮＡＳＨ）を処置または予防する方法であって、哺乳類に、ＮＡＳＨを処置または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
６．哺乳類での健康な肝臓を支持する方法であって、哺乳類に、健康な肝臓を支持するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
７．哺乳類が、非アルコール性脂肪肝疾患を有すると同定された、実施形態６の方法。
８．哺乳類の肝臓での酸化的ストレスを減少または予防する方法であって、哺乳類に、哺乳類の肝臓での酸化的ストレスを減少または予防するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
９．脂質過酸化を減少または予防する、実施形態８の方法。
１０．哺乳類の肝臓でのチトクロムＰ４５０および／または第ＩＩ相の酵素的解毒系を保護、支持、増強または維持する方法であって、哺乳類に、哺乳類の肝臓でのチトクロムＰ４５０および／または第ＩＩ相の酵素的解毒系を保護、支持、増強または維持するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
１１．哺乳類での解毒酵素の産生を制御する遺伝子の発現を上方制御する方法であって、哺乳類に、哺乳類での解毒酵素の産生を制御する遺伝子の発現を上方制御するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
１２．遺伝子は、ＮＲＦ２である、実施形態１１の方法。
１３．哺乳類での抗酸化物質の産生を増大する方法であって、哺乳類に、哺乳類での抗酸化物質の産生を増大するために有効な量のブドウ生成物を投与することを含む、方法。
１４．抗酸化物質は、グルタチオン、スーパーオキシドジスムターゼまたはカタラーゼである、実施形態１３の方法。
１５．ブドウ生成物は、肝臓に沈着した脂肪の量を減少させる、実施形態１～１４のいずれか１つの方法。
１６．哺乳類は、それを必要とする哺乳類である、実施形態１～１５のいずれか１つの方法。
１７．ブドウ生成物は、全搾りかすもしくはその一部、ブドウ種子生成物、ブドウの皮生成物、もしくはその任意の抽出物、またはそれらの任意の組み合わせである、実施形態１～１６のいずれか１つの方法。
１８．ブドウ種子生成物は、ブドウ種子粉末である、実施形態１７の方法。
１９．ブドウ生成物は、ブドウの皮抽出物、ブドウの皮粉末またはブドウの皮粉体である、実施形態１７の方法。
２０．ブドウ生成物は、搾りかす抽出物である、実施形態１７の方法。
２１．ブドウ生成物は、ブドウ種子抽出物である、実施形態１７の方法。
２２．ブドウ抽出物は、メタノールまたはエタノール抽出物である、実施形態２１の方法。
２３．ブドウ生成物は、約１ｍｇから約１５，０００ｍｇの有効な量で投与される、実施形態１～２２のいずれか１つの方法。
２４．哺乳類は、ヒト、愛玩用動物、飼育動物、畜産動物または家畜である、実施形態１～２３のいずれか１つの方法。
２５．少なくとも１つの追加の化合物をさらに含む、実施形態１～２４のいずれか１つの方法。
２６．少なくとも１つの追加の化合物は、抗酸化物質、抗コレステロール薬剤、抗血糖化合物またはインスリン感受性改善薬である、実施形態２５の方法。
２７．少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＥ、ビタミンＡ、ビタミンＣ、カロテノイド、リポ酸、ユビキノール、ユビキノンまたはグルタチオンである、実施形態２５の方法。
２８．少なくとも１つの追加の化合物は、ｓ－アデノシル－メチオニン、トリメチルグリシンまたはメチオニンである、実施形態２５の医薬組成物。
２９．少なくとも１つの追加の化合物は、ホスファチド、必須脂肪酸、コリンまたはＢビタミンである、実施形態２５の医薬組成物。
３０．少なくとも１つの追加の化合物は、植物またはその抽出物である、実施形態２５の医薬組成物。
３１．植物またはその抽出物は、ミルクシスル、チョウセンゴミシ、ゴボウ、タンポポ、アーティチョーク、ウコン、クサノオウ、葛、チコリもしくはイエロードック、またはそれらの任意の抽出物である、実施形態３０の医薬組成物。
３２．抗血糖化合物は、インスリン感受性改善薬である、実施形態２６の方法。
３３．インスリン感受性改善薬は、ピオグリタゾン、メトホルミン、スルホニル尿素またはチアゾリジンジオンである、実施形態３２の方法。
３４．抗コレステロール化合物は、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤である、実施形態２６の方法。
３５．ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンまたはシンバスタチンである、実施形態３４の方法。
３６．ブドウ生成物および追加の化合物は、同時にまたは連続して投与される、実施形態２５の方法。
３７．ブドウ生成物および追加の化合物は、同じ製剤で、または異なる製剤で投与される、実施形態２５の方法。
３８．哺乳類は、高脂肪食餌中である、実施形態１～３７のいずれか１つの方法。
３９．哺乳類は、３０から５０カロリー％含有量の脂肪を含む食餌中である、実施形態１～３７のいずれか１つの方法。
４０．ブドウは、シャルドネのブドウである、実施形態１～３９のいずれか１つの方法。
４１．ブドウは、カベルネソービニヨンのブドウ、ピノノワールのブドウ、ソービニヨンブランのブドウ、またはホワイトリースリングのブドウである、実施形態１～３９のいずれか１つの方法。
４２．ブドウ生成物および少なくとも１つの追加の化合物を含む、医薬組成物。
４３．ブドウ生成物は、全搾りかすもしくはその一部、ブドウ種子生成物、ブドウの皮生成物、もしくはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の抽出物である、実施形態４２の医薬組成物。
４４．ブドウ種子生成物は、ブドウ種子粉末である、実施形態４３の医薬組成物。
４５．ブドウの皮生成物は、ブドウの皮抽出物である、実施形態４３の医薬組成物。
４６．ブドウは、シャルドネのブドウ、カベルネソービニヨンのブドウ、ピノノワールのブドウ、ソービニヨンブランのブドウ、またはホワイトリースリングのブドウ生成物である、実施形態４２～４５の医薬組成物。
４７．少なくとも１つの追加の化合物は、抗酸化物質である、実施形態４２の医薬組成物。
４８．少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＥ、オベチコール酸、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、ＤＮＰ－メチルエーテル（ＤＮＰＭＥ）、抗血糖化合物または抗コレステロール化合物である、実施形態４２の医薬組成物。
４９．少なくとも１つの追加の化合物は、ビタミンＥ、ビタミンＡ、ビタミンＣ、カロテノイド、リポ酸、ユビキノール、ユビキノンまたはグルタチオンである、実施形態４２の医薬組成物。
５０．少なくとも１つの追加の化合物は、ｓ－アデノシル－メチオニン、トリメチルグリシンまたはメチオニンである、実施形態４２の医薬組成物。
５１．少なくとも１つの追加の化合物は、ホスファチド、必須脂肪酸、コリンまたはＢビタミンである、実施形態４２の医薬組成物。
５２．少なくとも１つの追加の化合物は、植物またはその抽出物である、実施形態４２の医薬組成物。
５３．植物またはその抽出物は、ミルクシスル、チョウセンゴミシ、ゴボウ、タンポポ、アーティチョーク、ウコン、クサノオウ、葛、チコリもしくはイエロードックまたはそれらの任意の抽出物である、実施形態５２の医薬組成物。
５４．抗血糖化合物は、インスリン感受性改善薬である、実施形態４８の医薬組成物。
５５．インスリン感受性改善薬は、ピオグリタゾン、メトホルミン、チアゾリジンジオンまたはスルホニル尿素である、実施形態５４の医薬組成物。
５６．抗コレステロール化合物は、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤である、実施形態４８の医薬組成物。
５７．ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチンである、実施形態５６の医薬組成物。
５８．表３の１つまたはそれ以上の遺伝子の発現を調節する方法であって、１つまたはそれ以上の遺伝子を発現する哺乳類にブドウ生成物を投与することを含む、方法。
５９．遺伝子は、Ｃｈｉ３ｌ１、Ｃｅｓ１ｄ、Ａｄｒａ１ｂ、Ｓｌｃ１３ａ３、Ｎｔｒｋ２、Ｃｙｐ２１ａ１、Ａｑｐ８、Ｇｃｋ、Ｐｆｋｍ、Ｔｘｎ１、Ｃｋｂ、Ｇｃｋｒ、Ｆｅｎ１、Ｃｙｐ４６ａ１、Ｖｌｄｌｒ、Ｐｐｃｄｃ、Ｂｄｈ２、Ｓｃｄ１、Ａｃｏｔ１１、Ｍｌｘｉｐｌ（ＣｈＲＥＢＰ）、Ｌｃｎ１３、Ｐｒｏｄｈ、Ｇｓｔｔ３、Ｍｃ５ｒ、Ｔａｓ２ｒ１０４、Ｖｍｎ１ｒ１９２、Ｒａｓｌ２－９、Ｃｆｄ、Ｃｔｓｅ、Ｏｒｍ２、Ｒｏｒｃ、Ｔｌｒ５、Ｈｎｍｔ、Ｃｙｐ２ｂ１３、Ｃｙｐ２ｄ４０、Ｈａｏ２、Ｇｄｆ１５、Ｓｐｔｌｃ３、Ｍｏｇａｔ１、Ｐｌｉｎ４、Ｉｆｎａ９、Ａｓｎｓ、Ｇｏｔ１、Ａｔｐ６ｖ０ｄ２、Ｃｙｐ７ｂ１、Ｃｙｐ１７ａ１、Ｉｄ１、Ａｖｐｒ１ａ、Ｏｃｌｎ、Ｃｙｐ５１、Ｆｄｆｔ１、Ｈｍｇｃｒ、Ｈｓｄ１７ｂ７、Ｉｎｓｉｇ１、Ｌｓｓ、Ｍｖｄ、Ｍｖｋ、Ｎｓｄｈｌ、Ｓｃ４ｍｏｌ、Ｔｍ７ｓｆ２、Ａｐｏｍ、Ｌｅｐｒ、Ｐｃｓｋ９、Ｓｑｌｅ、Ｉｌ１７ｒｂ、Ａｃｓｌ３、Ａｇｘｔ、Ａｌｄｏｃ、Ｐｇｋ２、Ｔｌｒ１３、Ｈｍｇｃｓ１、Ｓｔａｒｄ４、Ｍｍｐ７およびＩｇｆｂｐ２のうちの１つまたはそれ以上である、実施形態５８の方法。
６０．ブドウ生成物は、ブドウ種子粉末抽出物である、実施形態５８の方法。
６１．ブドウ生成物は、ブドウ種子粉末である、実施形態５８の方法。
６２．ブドウは、シャルドネのブドウである、実施形態５８～６１のいずれか１つの方法。
６３．ブドウは、カベルネソービニヨン、ピノノワールのブドウ、ソービニヨンブランのブドウまたはホワイトリースリングのブドウである、実施形態５８～６１のいずれか１つの方法。

【0131】

実施形態は、実施例を参照してさらには記載されないが、非限定的である。

【実施例】

【0132】

〔実施例１〕
食餌性肥満（ＤＩＯ）ハムスターを、１０週間、高脂肪（ＨＦ）食餌で飼育した。低グルコース耐性を示し、最も重いカテゴリーにあった動物が、種々の処置を受けた。動物を、それぞれ、１０および２０週間、部分的に脱脂されたシャルドネのフラボノイド－リッチワインブドウ種子粉末（ＣｈｒＳｄ）、市販の抽出物またはＣｈｒＳｄの実験室で生成されたエタノール抽出物を含有する食餌で飼育した。１０週目に半数を犠牲にし、肝不全の兆候について試験し、他の半数は、２０週後に試験した。処置中の動物は、恩恵を受けた。ＣｈｒＳｄ全粉末処置中の動物は、肝臓での異所性脂肪の兆候を示さなかったのに対して、ＨＦ対照食餌にあるものは、肝臓での広範な脂肪沈着を示した。種々の処置下の動物の肝臓は、ＨＦ対照でのものより有意に少なく秤量された。種々のブドウ種子処置中の動物の血中脂質プロファイルは、血中脂質プロファイルが改善されたことを示した。したがって、ＣｈｒＳｄは、動物が、高脂肪食餌にかけられているような場合に、健康な血中脂質プロファイルを維持するために使用される。

【0133】

〔実施例２〕
ＣｈｒＳｄが、インスリン耐性および脂肪肝の病原性を改善したかどうかを決定するために、食餌性肥満（ＤＩＯ）マウスを、５週間、部分的に脱脂されフラボノイド－リッチのシャルドネのブドウ種子粉末（ＣｈｒＳｄ）または結晶セルロース（ＭＣＣ、対照）のいずれかを含有する高脂肪（ＨＦ）食餌で飼育した。２時間のインスリンおよびグルコース曲線下面積は、ＣｈｒＳｄにより有意に低下され、ＣｈｒＳｄが、インスリン感受性およびグルコース代謝を改善することを示した。ＣｈｒＳｄ摂取は、食物摂取での顕著な増加にもかかわらず、体重増加、肝臓および脂肪組織重量、肝臓脂質含有量、および血漿中低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールも有意に減少させた。肝臓遺伝子発現のエクソンマイクロアレイ分析は、トリグリセリドおよびセラミド合成、免疫応答、酸化的ストレスおよび炎症に関連した遺伝子の下方制御、ならびに脂肪酸酸化、コレステロール、および胆汁酸合成に関連した遺伝子の上方制御を明らかにした。レプチン受容体の発現が上方制御されたことから、増強された肝臓のレプチン感受性を示唆している。マイクロアレイデータの経路分析は、脂質およびコレステロール代謝、ならびに感染性および代謝性疾患経路が、ＣｈｒＳｄにより差次的に制御されたことを明らかにした。結論として、ＣｈｒＳｄは、酸化的ストレス、炎症ならびに脂質およびコレステロール代謝に関連した遺伝子の肝臓発現の調節を介して、ＤＩＯマウスでの体重増加、インスリン耐性、および脂肪肝の進行におけるＨＦ食餌の効果を改善した

【0134】

動物および食餌。
雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、環境を制御した部屋（２０～２２℃、相対湿度６０％、１２時間の明／暗サイクルを交互）で個々に収容した。マウスを順応させ、実験的食餌の開始前に、１週間、水およびマウス用チャウ食餌（ＬａｂＤｉｅｔ ５０１５、ＰＭＩ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｒｅｄｗｏｏｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を自由に利用させた。マウスを秤量し、各々３０匹のマウスの２つの群にランダム化させた。マウス用チャウ食餌またはエネルギーの１７％をタンパク質として、３７％を炭水化物として、および４７％を脂肪として、０．１％コレステロールと共に含有するＨＦ食餌のいずれかで、マウスを自由に飼育した。５週間後、マウスを秤量し、食餌性肥満（ＤＩＯ）マウスを、チャウで飼育したマウスより有意にいっそう重量を得たものと識別した。その後、ＤＩＯマウスを、２つの群にランダム化し（各々ｎ＝１０）、１０％ＣｈｒＳｄ（Ｓｏｎｏｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＬＣ／ＷｈｏｌｅＶｉｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｓａｎｔａ Ｒｏｓａ、ＣＡ）または５％結晶セルロース（ＭＣＣ、対照食餌；Ｄｙｅｔｓ Ｉｎｃ．、Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ、ＰＡ）のいずれかを含有するＨＦ食餌で５週間、自由に飼育した（表１）。不溶性ファイバーであるＭＣＣは、ステロール代謝にほとんど効果を示さない（Ｈｏｒｔｏｎ、１９９４、５６番）。シャルドネのブドウ搾りかすは、カリフォルニア州ソノマカウンティ－の沿岸ブドウ園から得た。２０１０年醸造ワインから得た種子を、加熱空気（５５～７０℃）を使用して乾燥させ、皮と茎から分離した。油が種子から押し出された後に、残留プレスケークを破砕し、８５メッシュ篩を通した。ＣｈｒＳｄの総フラボノイド、総カテキン、カテキンおよびエピカテキン含有量は、それぞれ、１２，０００、１６１０、７０１および７３２ｍｇ／１００ｇであった。体重を、毎週記録し、食物摂取を、週当たり２回観察した。研究プロトコル、番号Ｐ－０４－０２は、実験動物委員会（ｔｈｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， ＵＳＤＡ， Ａｌｂａｎｙ， ＣＡ， ＵＳＡ．により承認された。

【0135】

血漿および肝臓採取
マウスを、１２時間絶食させ、イソフルラン（Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｊｏｓｅｐｈ、ＭＯ、ＵＳＡ）で麻酔にかけた。血液を、ＥＤＴＡカリウム溶液（１５％ｗ／ｖ）で予め洗浄したシリンジでの心臓穿刺により採取した。血漿を、２，０００×ｇで３０分間、４℃で遠心分離後に分離した。肝臓および精巣上体の脂肪組織を採取し、秤量し、後の分析のために、液体窒素ですぐに凍結した。凍結乾燥後、肝臓末を秤量し、２ｍＬのＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ（２：１）と混合し、５分間超音波処理し、その後、一夜インキュベートした。サンプルを、１０分間、１０００ｒｐｍで遠心分離し、上澄を除去した。別の２ｍＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨを添加し、超音波処理し、一夜静置して抽出させた。溶媒を、窒素下で合わせた抽出物から除去し、総肝臓総脂質含有量を、重量測定法で測定した。

【0136】

血漿中脂質分析
血漿中リポタンパク質コレステロールを、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。簡潔には、温度制御された水ジャケット（Ａｕｒａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｓ、Ｓｔａｔｅｎ、ＮＹ、ＵＳＡ）中のミキシングコイル（１６１５－５０ Ｂｏｄｍａｎ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡ）からなるＳｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲ ＨＰＬＣカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）と共にＡｇｉｌｅｎｔの１１００ＨＰＬＣクロマトグラフィーを使用して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。Ｈｅｗｌｅｔｔ－ＰａｃｋａｒｄのＨＰＬＣポンプ（７９８５１－Ａ；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を、０．２ｍＬ／分の流速でコレステロール試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳＡ）を送達するために使用した。仔ウシコレステロールリポタンパク質基準は、ピーク領域の原則でのシグナルを較正するために使用された。

【0137】

グルコース負荷試験（ＧＴＴ）およびインスリン負荷試験（ＩＴＴ）
３時間の絶食の後、マウスに、腹腔内でグルコース（２ｇ／ｋｇ体重）を投与し、尾部静脈血グルコースレベルを、ＯｎｅＴｏｕｃｈ Ｕｌｔｒａｍｅｔｅｒ（ＬｉｆｅＳｃａｎ Ｉｎｃ．、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ）を使用したグルコース注射の０、１５、３０、６０および１２０分後に測定した。マウスに、腹腔内にインスリン（０．５Ｕ／ｋｇ体重）を投与した後にＩＴＴを行った。ＯｎｅＴｏｕｃｈ Ｕｌｔｒａｍｅｔｅｒ（ＬｉｆｅＳｃａｎ Ｉｎｃ．）を使用したインスリン注射の０、３０および６０分後に尾部静脈血でグルコースレベルを測定した

【0138】

遺伝子発現およびエクソンマイクロアレイ分析。
総肝臓ＲＮＡは、ＴＲＩｚｏｌｐｌｕｓ ＲＮＡ精製キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，
Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、各群内の３つの生物学的複製から抽出した。２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装置およびＲＮＡ６０００Ｎａｎｏ ＬａｂＣｈｉｐアッセイ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、総ＲＮＡの質を測定した。その後、総ＲＮＡ（１０μｇ）を使用して、１サイクルｃＤＮＡ（第１の鎖および第２の鎖ｃＤＮＡ合成）を合成し、続いて二重鎖ｃＤＮＡを除去し、ビオチンで標識されたｃＲＮＡを合成した。１サイクル標的標識および対照試薬（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、ビオチンで標識されたｃＲＮＡを、断片化した。断片化されたｃＲＮＡサンプルを、１２０万のプローブセットを含む発現おびエクソンスプライシングアレイである、８００００遺伝子を提示するＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐマウスエクソン１．０ＳＴアレイにハイブリダイズした。ハイブリダイゼーションシグナルが、獲得され、ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｓｃａｎｎｅｒ ３０００高解像度スキャナー（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）およびＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇソフトウェア（ＧＣＯＳ）を使用して、分析した。ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇＧＸバージョン１１．０プログラム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用して、マイクロアレイデータから遺伝子発現およびエクソン選択的スプライシングの両方の分析を行った。変化が、１．５倍以上であることが見出された場合、遺伝子発現は、有意であると決定された。スプライス指数は、遺伝子レベル発現にわたるエクソンレベル発現の比の対数として定義された。処置および対照群の間のスプライス指数値での倍数変化≧２は、差次的にスプライスされたと考えられた。少なくとも１つの差次的にスプライスしたエクソンを有する転写産物は、差次的に制御されたスプライシングであると考えられた。

【0139】

統計的分析
全てのデータは、平均±ＳＥとして表される。血漿中脂質レベルでの処置の効果、体重および組織重量、総エネルギー摂取、および供給効率比における処置の効果を試験するために、ＪＭＰ７統計学的プログラム（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳＡ）を使用して、分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行った。有意性は、Ｐ＜０．０５として定義された。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙｓ Ａｎａｌｙｓｉｓツール（ＩＰＡバージョン８．７、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ．ｃｏｍ）を使用して、エクソンマイクロアレイデータを分析し、差次的に発現した遺伝子から生物学的機構、経路および機能を測定した。右側フィッシャー直接検定（Right-tailed Fisher's exact test）を、Ｐ値を計算するために使用した。Ｐ値は、各データセットの生物学的機能、各データセットについて特定のネットワークに割当てられる生物学的機能および疾患、およびデータセットでの遺伝子と対応する標準経路の間の関連性が、偶然であると解釈された可能性を表す。

【0140】

代謝効果
５週間のＨＦ食餌のＣｈｒＳｄ補給は、総エネルギー摂取の有意な増加にもかかわらず、ＤＩＯマウスの体重増加を有意に低下させ、これらのマウスの７２％低いエネルギー効率比を生じた（表２）。ＣｈｒＳｄを補充した食餌は、対照食餌でのマウスと比較してそれぞれ３８％および３５％まで肝臓および精巣上体の脂肪組織重量を有意に低下させた（表２）。総肝臓脂質含有量は、対照食餌と比較して、ＣｈｒＳｄで飼育したＤＩＯマウスで４３％低かった（Ｐ＜０．０５）（表２）。食餌性ＣｈｒＳｄ補給は、６０分でのピーク血中グルコース応答（Ｐ＜０．０５）および２時間のグルコース応答の間の曲線下面積（ＡＵＣ）を有意に低下させた（図２ＡおよびＢ）。ＣｈｒＳｄ補給は、３０分での（Ｐ＜０．０５）および６０分での（Ｐ＜０．０５）インスリン応答の著しい減少も生じた（図３ＡおよびＢ）。

【0141】

肝臓遺伝子発現プロファイルのマイクロアレイ分析
５％ＭＣＣまたは１０％ＣｈｒＳｄ粉末のいずれかで補充したＨＦ食餌で飼育したＤＩＯマウスでの肝臓遺伝子の総合的発現は、エクソンマイクロアレイ分析により評価された。多数の遺伝子が、５％ＭＣＣで飼育したものと比較した場合、１０％ＣｈｒＳｄで飼育したマウスで差次的に発現された（Ｐ＜０．０５、倍数変化≧１．５）（表３）。これらの遺伝子のうち、いくつかは、下方制御され、いくつかは、上方制御された。表３は、ＣｈｒＳｄにより差次的に下方および上方制御され、生物学的プロセスにより分類された遺伝子を示す。核内因子－カッパＢ（ＮＦ－κＢ）－誘発キナーゼ活性の活性化に関与したタンパク質をコードし、炎症および組織リモデリングに関与したキチナーゼ様１（Ｃｈｉ３ｌ１；倍数変化、－１．５）が、下方制御された。コルチコステロイド（cortiscosteroid）生合成に関与した酵素をコードする遺伝子（Ｃ２１－ステロイドホルモン生合成、チトクロムＰ４５０、ファミリー２１、サブファミリーのポリペプチド１（Ｃｙｐ２１ａ１；倍数変化、－１．６））を下方制御した。細管胆汁酸輸送に関連したタンパク質をコードするアクアポリン８（Ａｑｐ８；倍数変化、－１．８）の発現レベルは、下方制御された。遺伝子コード化タンパク質は、ジアシルグリセロールおよびトリアシルグリセロール生合成プロセス（ステアロイル補酵素Ａ不飽和化酵素１［Ｓｃｄ１］に関与した；モノアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ１［Ｍｏｇａｔ１］）が下方制御された（両方について、倍数変化、－１．６）。グルコースおよび脂質代謝に関与した匂い分子結合タンパク質２Ａ（Ｌｃｎ１３）の発現が、下方制御された（倍数変化、－３．５）。補体因子Ｄ（Ｃｆｄ；倍数変化，－２．４）、カテプシンＥ（Ｃｔｓｅ；倍数変化，－１．７）、オロソムコイド２（Ｏｒｍ２、倍数変化、－１．７）、レチノイン酸受容体関連オーファン受容体ガンマ（Ｒｏｒｃ；倍数変化－１．５）およびトール様受容体５（Ｔｌｒ５；倍数変化，－２）を含めた免疫系プロセスに関与した遺伝子が下方制御された。スフィンゴ脂質代謝に関与したセリンパルミトイルトランスフェラーゼ、長鎖ベースサブユニット３（Ｓｐｔｌｃ３；倍数変化，－１．７）は、下方制御された。トリグリセリド代謝プロセスに関与した脂肪滴関連タンパク質ペリリピン４（Ｐｌｉｎ４；倍数変化，－３．５）の発現は、ＭＣＣで飼育されたマウスと比較した場合、ＣｈｒＳｄで飼育されたマウスも下方制御された。宿主免疫防御応答に関連したタンパク質をコードする遺伝子であるインターフェロンアルファ９（Ｉｆｎａ９；倍数変化，１．８）は、上方制御された。胆汁酸代謝に関連したチトクロムＰ４５０、ファミリー７、サブファミリーｂ、ポリペプチド１（Ｃｙｐ７ｂ１；倍数変化、１．６）およびチトクロムＰ４５０、ファミリー１７、サブファミリーａ、ポリペプチド１（Ｃｙｐ１７ａ１；倍数変化，２．５）をコードする遺伝子の発現は、上方制御された。ステロール１４－デメチラーゼ（Ｃｙｐ５１；倍数変化，５．６）、３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリール－補酵素Ａ還元酵素（Ｈｍｇｃｒ；倍数変化，２．５）、ヒドロキシステロイド（１７－β）脱水素酵素７（Ｈｓｄ１７ｂ７；倍数変化，２．８）、インスリン誘発遺伝子１（Ｉｎｓｉｇ１；倍数変化，１．８）、ステロール－Ｃ４－メチルオキシダーゼ様（Ｓｃ４ｍｏｌ；倍数変化，４．５）、およびレプチン受容体（Ｌｅｐｒ；倍数変化，１．６）を含めたコレステロール代謝に関与した遺伝子が上方制御された。脂肪酸β－酸化に関与したアシル－ＣｏＡシンテターゼ長鎖ファミリーメンバー３（Ａｃｓｌ３）の発現レベルが、上方制御された。

【0142】

ＩＰＡシステムを使用する経路分析は、ＣｈｒＳｄ補給により差次的に制御された数種の生物学的機能および標準遺伝子経路を同定した（表４）。生物学的機能によりグループ分けした場合、脂質代謝、血液学的疾患、および代謝性疾患に関連した遺伝子の発現レベルは、ＣｈｒＳｄ補給により有意に影響された。標準経路の観点から、ＣｈｒＳｄは、コレステロール生合成スーパーパスウエイおよびチモステロール生合成経路に影響を及ぼした。脂質代謝および感染性疾患に関与するネットワークは、ＣｈｒＳｄ補給により影響される。コレステロール濃度を制御するＩｎｓｉｇ１は、主要な制御効果ネットワークとして同定された（データは示されず）。ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇＧＸ１１．０プログラムを使用するエクソンマイクロアレイデータの分析は、ＣｈｒＳｄ補給の存在下でＳＩ＞｜２．０｜で８４遺伝子の同定を生じた（データは示されず）。ＲＴ－ＰＣＲを使用することによるさらなる分析は、これらの遺伝子の選択的スプライシングを確認するために行われる必要がある。

【0143】

最近の研究では、エクソンマイクロアレイ分析が、ＤＩＯマウスでの差次的に発現された肝臓遺伝子を同定して、ＨＦ食餌性脂肪肝でのＣｈｒＳｄ補給の効果に新規生物学的洞察を提供するために使用された。発明者らは、コレステロール、胆汁酸および脂質代謝に関与した遺伝子の発現に影響を及ぼすことに加えて、食物性ＣｈｒＳｄ補給が、Ｃ２１－ステロイド代謝、免疫系プロセス、炎症、組織リモデリングおよび脂質貯蔵に関与した遺伝子の肝臓発現に有意に影響を及ぼしたことを見出した。ＣｈｒＳｄ補給は、胆汁酸およびコレステロール合成に関連した遺伝子（Ｃｙｐ１７ａ１、Ｃｙｐ５１、ＨｍｇｃｒおよびＩｎｓｉｇ１）の肝臓発現、ならびに脂肪酸β－酸化（Ａｃｓｌ３）を著しく上方制御したのに対して、それは、脂肪酸生合成（Ｓｃｄ１、Ａｃｏｔ１１およびＭｌｘｉｐｌ／炭水化物応答配列結合タンパク質［ＣｈＲＥＢＰ］）、トリアシルグリセロール生合成（Ｍｏｇａｔ１）、酸化的ストレス（成長分化因子１５、Ｇｄｆ１５）、炎症および免疫プロセス（Ｃｆｄ、Ｃｈｉ３ｌ１、Ｃｔｓｅ、Ｏｒｍ２、ＲｏｒｃおよびＴｌｒ５）、セラミド生合成（Ｓｐｔｌｃ３）、および脂質貯蔵（Ｐｌｉｎ４）に関連した遺伝子の発現を有意に下方制御した。肝臓組織でのこれらの改変された遺伝子発現プロファイルは、ＭＣＣで補充した対照群と比較して、血漿中ＬＤＬ－コレステロール濃度、肝臓、脂肪および体重、供給効率比およびインスリン耐性で有意な減少を伴った。特に、ＣｈｒＳｄ補給は、Ｉｎｓｉｇ－１、ｌｅｐＲ、神経栄養性チロシンキナーゼ受容体、２型（Ｎｔｒｋ２）、メラノコルチン５受容体（Ｍｃ５ｒ）およびマトリックスメタロペプチダーゼ７（Ｍｍｐ７）を含めて、肥満における役割を有する遺伝子の肝臓発現を低下させた。

【0144】

なんら特定の理論に拘束されるものではないが、発明者らは、多量のフラボノイドを含有するＣｈｒＳｄでの補給が、反応性酸素種（ＲＯＳ）およびフリーラジカルの捕捉に関連した遺伝子を上方制御でき、酸化的ストレス、炎症および脂肪酸生合成に関連した遺伝子を下方制御できて、ＨＦで誘発されたインスリン耐性およびＮＡＦＬＤの改善にいたることを仮定する。フラボノイドの抗酸化物質活性に関与すると示唆された機構は、：１）フリーラジカル捕捉および金属キレート活性；２）細胞から細胞へのシグナル経路；および３）抗酸化物質酵素遺伝子発現である。ブドウ種子生成物の抗酸化物質活性は、インビトロで観察された。インビトロ活性のインビボ生物学的有意性は、オリゴマーおよび大型フラボノイドは、あまり吸収されないので明らかでない一方で、モノマーは、迅速に代謝され、体から消える。本研究では、ストレス応答性遺伝子（Ｇｄｆ１５およびＣｈＲＥＢＰ）の発現は、ＣｈｒＳｄ補給に続いて下方制御された。形質転換成長因子（ＴＧＦ）βスーパーファミリーのメンバーであるＧｄｆ１５の肝臓発現は、ＥＲストレス下での脂肪肝に関連している。酸化的ストレスは、脂質生成および解糖遺伝子を転写的に調節するＣｈＲＥＢＰを活性化し、脂肪肝を生じる。まとめると、これらの知見は、フラボノイド－リッチＣｈｒＳｄサプリメントが、抗酸化物質活性を増強でき、酸化的ストレスを減少させ、肝臓でのＣｈＲＥＢＰおよび脂質生成性遺伝子（Ｓｃｄ１、Ａｃｏｔ１１、Ｍｏｇａｔ１）の転写下方制御を生じることを示した。ストレス関連遺伝子の下方制御にもかかわらず、標準経路分析は、ＣｈｒＳｄで補充したＤＩＯマウスの肝臓でのフリーラジカルおよびＥＲストレス関連シグナル経路で顕著な変化を明らかにしなかった。酸化的ストレスおよび炎症は、肥満に密接に連関する。しかし、改善された酸化的ストレスおよび炎症は、肝臓の脂質レベルでの減少に対して二次的であるか、独立的であるかは明確でない。さらに、発明者らは、１０週間ＨＦ食餌（脂肪としてエネルギーの４７％）で飼育したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスが、肥満関連のＥＲストレス応答をすでに通過し、脂質生成ステージに入った可能性を排除できなかった。ＥＲストレスから脂質生成へのこの移行は、１６週間のＨＦ食餌でのＡｐｏＥ３Ｌマウスの先の研究で示された；これらの動物は、ストレス経路に関連した遺伝子での変化、続いて脂質蓄積に関連した遺伝子を含む後期相により特徴づけられるＨＦ食餌に対する初期相の肝臓応答を示した。同様に、本研究では、フリーラジカルおよびＥＲ－ストレス応答に関連した遺伝子のＣｈｒＳｄ誘発変化はほとんど見出されなかった。

【0145】

Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、脂肪肝を研究するために広く使用されてきている。この動物モデルは、ＢＡＬＢ／ｃマウスより、ＨＦ食餌性脂肪肝疾患に罹患しやすいことを示す。１５週間ＨＦ食餌（脂肪として４０％エネルギー）で飼育した野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスでの２６Ｓプロテアソームおよびユビキチンプロテアソームシステムに関連した遺伝子は、プロテアソーム活性が低下したトランスジェニックマウスと比較して、上方制御され、肥満および脂肪肝を生じた。対照的に、ＥＲ－ストレスおよび炎症に関連した遺伝子の有意な調節は観察されなかった。別の研究では、ＨＦ食餌（脂肪としてエネルギーの６０％）で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、２４週後に、脂肪肝および炎症を発生した。本研究では、発明者らは、５週間ＨＦ食餌で飼育し、その後さらに５週間、ＣｈｒＳｄまたはＭＣＣ（対照）のいずれかで補充したＨＦ食餌で処置するためにＤＩＯマウスを選択することにより、肥満応答性マウスを選択した。低い程度のフリーラジカル捕捉応答は、酸化的ストレス応答を示す先の研究と比較した場合、その研究のＣｈｒＳｄ補給相の短い期間、および低レベルの食物性脂肪のためでありうる。

【0146】

これらの研究のほとんどが、インビトロで行われ、非常に少数が、インビボまたはヒト分析で行われるが、フラボノイドは、免疫調節および抗炎症特性を示すことが報告された。ヒトでは、４週間の６００ｍｇ／日のブドウ種子抽出物の消費は、インスリン耐性のマーカー（例えば、血中Ｃ－反応性タンパク質［ＣＲＰ］濃度）および心臓血管疾患についての高い危険がある２型糖尿病患者での炎症を改善した。この研究では、ＣｈｒＳｄ補給は、免疫および炎症プロセスに関連した遺伝子（Ｃｆｄ、Ｃｈｉ３ｌ１、Ｃｔｓｅ、Ｏｒｍ２、Ｒｏｒｃ、Ｔｌｒ５）の肝臓発現を下方制御した。Ｃｆｄ（アジプシン）は、外来性抗原および病原体の除去で宿主応答因子として関与したセリンプロテアーゼである。Ｃｈｉ３ｌ１遺伝子は、ＮＦ－κＢ－誘発キナーゼ活性および炎症の活性化に関連する。Ｃｔｓｅは、マクロファージのような免疫関連細胞で高度に発現される細胞内アスパラギン酸プロテイナーゼであり、その主な役割は、マクロファージ侵入、脂質生成、および脂肪肝に関連する。Ｏｒｍ２は、肝細胞および脂肪細胞で発現され、急性期反応物質免疫調節因子タンパク質として代謝性および炎症性ストレス下で血漿に分泌される。Ｒｏｒｃは、Ｔｈ１７細胞分化を制御し、炎症性サイトカインの産生を制御する。Ｔｌｒ５は、腸粘膜の上皮細胞で優先的に発現され、肝臓および脂肪組織でのそれの発現は、比較的非常に低い。興味深いことに、ＨＦ食餌は、マウスの精巣上体の脂肪組織でのＴｌｒ５発現を増大することが示された。それは、細菌性フラジェリンタンパク質により活性化され、生来の免疫応答およびＮＦ－κＢを誘発する。肝臓のＴｌｒ５下方制御の生物学的有意性は不明であるが、ＣｈｒＳｄ補給は、ＨＦ誘発ストレスに対する腸内細菌滞留由来の炎症反応を減少する可能性がある。発明者らの先の研究は、肝臓のコレステロール代謝が、ＣｈｒＳｄ補給に続いてハムスターでの腸内微生物群の組成により、および腸内線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）１５遺伝子発現により影響されることを示唆した。集合的に、これらの知見は、ＣｈｒＳｄ補給が、免疫／炎症経路に関連した遺伝子の肝臓発現の下方制御を介して肝臓でのＨＦ食餌性炎症を予防しうることを示す。

【0147】

ＣｈｒＳｄ補給は、対照と比較して、１．５倍まで肝臓のレプチン受容体発現を上方制御した。脂肪組織により産生されるホルモンであるレプチンは、エネルギー摂取および支出を制御し、肝臓および筋肉での脂肪酸酸化を増強する。ＤＩＯマウスでは、肝臓のレプチン受容体発現の下方制御が観察され、肥満が、レプチンに対する肝臓の非感受性を誘発することを示唆する。したがって、肝臓のレプチン受容体発現でのＣｈｒＳｄ関連上方制御は、肝臓のレプチン感受性は、このサプリメントにより改善され、これは、部分的に、脂肪肝の減少に貢献する可能性があることを示唆した。

【0148】

いくつかの研究は、酸化的ストレスが、インスリン耐性および２型糖尿病のような肥満関連の合併症の発生に重要な役割を果たしうることを示唆した。赤ブドウ抽出物の消費は、２型糖尿病患者に関連の健康な肥満度１でのフルクトース誘発ＥＲストレスおよびインスリン感受性を改善した。同様に、発明者らの研究は、フラボノイド－リッチのＣｈｒＳｄを用いた補給が、対照と比較した場合、それぞれ、２時間のＩＴＴおよびＧＴＴの間のＡＵＣでの２６％および１９％減少により示されるとおり、インスリン感受性およびグルコース代謝を有意に改善したことを明らかにした。ＣｈｒＳｄ補給は、絶食中のグルコース濃度も有意に低下させた。さらに、このインスリン感受性の改善は、肝臓Ｇｄｆ１５発現の下方制御に匹敵する。Ｇｄｆ１５発現は、酸化的ストレスおよび炎症に応答して誘発され、そのレベルは、異常な肥満、ＣＶＤおよびインスリン耐性を有する個体で増大することが報告された。炎症および免疫プロセスに関連した遺伝子の肝臓発現の抑制が、ＨＦ誘発脂肪肝の肝臓機能が改善されることに関連したことを示した。他方では、セラミドのような脂質誘導体は、細胞ストレスの重要な調節因子であり、それらの蓄積は、インスリンシグナル伝達を阻害する。フラボノイドは、スフィンゴ脂質代謝に影響し、損傷を受けた肝臓細胞の上昇したセラミド含有量を正常化させることができることが見出された。これらの観察は、セラミド生合成に関連した遺伝子である肝臓Ｓｐｔｌｃ３のＣｈｒＳｄ関連の下方制御、および本研究で報告された肝臓脂質含有量の減少およびインスリン感受性の改善の間の潜在的関係を示した。したがって、インスリン耐性の改善および肝臓の脂質含有量の減少は、ＣｈｒＳｄで補充されたＤＩＯマウスでの酸化的ストレスおよび炎症での減少により媒介されていると思われた。

【0149】

グルコキナーゼ（Ｇｃｋ）活性化は、この酵素が、グルコースをリン酸化して、グルコース－６－ホスフェートを産生するのでげっ歯類での脂肪肝を誘発する可能性がある；これは、肝臓のグルコース除去を制御し、肝臓の脂質生成を刺激する。最近の研究は、肝臓でのＧｃｋ過剰発現が、肝臓の脂質生成および循環脂質濃度を増大させることを示した。さらに、肝臓のＧｃｋ発現は、ヒトの肝臓生検の肝臓の脂質生成遺伝子発現および脂質含有量に関連した。ＣｈｒＳｄ補給は、ＧｃｋおよびＧｃｋｒ（グルコキナーゼ制御タンパク質）の肝臓の発現を下方制御し、これは、ＨＦ誘発された肝臓の脂質含有量を減少させるのにも貢献する可能性がある。

【0150】

要約すると、ブドウ酒造りの副産物であるフラボノイド－リッチのＣｈｒＳｄが、ＨＦ誘発脂肪肝、血漿中脂質プロファイル、体重増加ならびにインスリン耐性を改善したことが本明細書で実証された。これらの改善は、胆汁酸、コレステロール、および脂肪酸代謝に関連した遺伝子の肝臓発現の調節、酸化的ストレス、炎症および免疫応答に関連した。エクソンマイクロアレイデータの分析は、脂質およびコレステロール代謝に関与した経路、感染性および代謝性疾患が、ＣｈｒＳｄにより差次的に制御されたことを明らかにした。供給効率比の減少、および肝臓脂質含有量、脂肪組織重量、肝臓セラミド合成、および酸化的ストレスでの減少は、インスリン感受性で観察された改善に貢献した。これらの結果は、フラボノイド－リッチのＣｈｒＳｄの消費が、酸化的ストレスおよび炎症の減少、コレステロールおよび胆汁酸合成の調節、肝臓での脂質代謝の調節、およびインスリン耐性の改善、ならびに全体的肝臓の健康の促進により、ＮＡＦＬＤおよび他の代謝性疾患の予防および／または処置にとって有益でありうることを示す。

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【表1】

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【表2】

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【表8】

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実施形態は、例示の実施形態を参照して描写および記載されてきたが、そのような参照は、範囲の限定を暗示せず、そのような限定は推定されるものはない。実施形態は、本開示の利益を有する、関連技術の当業者が想起するように、形態および機能で相当な変更、改変および等価物が可能である。本明細書に引用される全ての参照は、全体的に参照によって、およびそれらの意図される目的のために本明細書に組み入れられる。

【図1】

【図2】

【図3】