特許7320920IP Force 特許公報全文掲載

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技術分野

関連出願の相互参照 本願は、２０１５年５月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／１６５６９０号明細書、２０１５年５月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／１６６６１６号明細書および２０１５年５月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／１６８４１５号明細書の優先権および利益を主張するものであり、各仮特許出願の名称は「ＡＬＤＣ方法」である。

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明の目的は、より良好な安定性および／または活性を有するＡＬＤＣ酵素を提供することであり、任意選択により、微生物から回収し得るＡＬＤＣ酵素の収量が改善される。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

ＡＬＤＣ酵素のための組成物および方法を提供する。

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 アセト乳酸デカルボキシラーゼ、ａｌｄＢを発現させるためのプラスミドマップを示す。
【図2】 アセト乳酸デカルボキシラーゼ、ａｌｄＢを発現させるためのＲＩＨＩ－ａｌｄＢのプラスミドマップを示す。
【図3】 バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株において様々な時点で発現したａｌｄＢの切断変異体を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥを示し、同定されたＡｌｄＢ変異体はドットでマークされている。レーン：１）２４時間、２－欠損株、２）２４時間、５－欠損株、３）２４時間、７－欠損株、４）４８時間、２－欠損株、５）４８時間、５－欠損株、６）４８時間、７－欠損株、７）７２時間、２－欠損株、８）７２時間、５－欠損株および９）７２時間、７－欠損株。
【図4】 ４０℃でのインキュベーション２日後（左）および１０日後（右）の２－欠損、５－欠損および７－欠損バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）株の２つのカゼインスポットプレートアッセイを示す。プロテアーゼ活性後、ホワイトハロー形成を行ってもよい。プレートにラベルを記載し、バチルス・サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の中性プロテアーゼをポジティブコントロールとして使用し、バッファをネガティブコントロールとして使用した。
【図5】 各種の宿主細胞由来のａｌｄＢ酵素：Ａ）２－欠損株由来のａｌｄＢ、Ｂ）５－欠損株由来のａｌｄＢおよびＣ）７－欠損株由来のａｌｄＢの存在下または非存在下での３種の個々の麦芽を使用した発酵におけるビシナルジケトン（ＶＤＫ）の相対的生成を示す。比較のため、計算により算出されたＶＤＫ含有量（ジアセチルと２，３－ペンタンジオンとの合計と定義される）を、酵素を含まないコントロール試料で得られた最高値に正規化した（１００％）。全てのａｌｄＢ酵素に類似のＡＬＤＣ活性０．０４Ｕ／ｍｌ－麦汁を与えた。１４℃で８日間の発酵中、ＶＤＫの生成を追った。

代表図 図1本件の代表的な図

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