特許 7321137 ＸＢＰ１ペプチド、ＣＤ１３８ペプチドおよびＣＳ１ペプチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-07-27

(45)【発行日】2023-08-04

(54)【発明の名称】ＸＢＰ１ペプチド、ＣＤ１３８ペプチドおよびＣＳ１ペプチド

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20230728BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20230728BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230728BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230728BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230728BHJP

   C07K 7/06 20060101ALN20230728BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H ZNA

A61K38/08

A61P35/00

A61P37/04

A61K45/00

C07K7/06

【請求項の数】 20

(21)【出願番号】P 2020189192

(22)【出願日】2020-11-13

(62)【分割の表示】P 2018214477の分割

【原出願日】2009-06-01

(65)【公開番号】P2021054825

(43)【公開日】2021-04-08

【審査請求日】2020-11-13

(31)【優先権主張番号】61/058,180

(32)【優先日】2008-06-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】399052796

【氏名又は名称】デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ニキル シー． マンシ

(72)【発明者】

【氏名】ジェウン バエ

(72)【発明者】

【氏名】ケニス シー． アンダーソン

【審査官】佐々木 大輔

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２００３／０１１３３３２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２００７－５０３４６５（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１１－５２３５６０（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２００８／０１９３７８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２００８／０１９３７６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２００７－５３０６７５（ＪＰ，Ａ）

【文献】Clinical cancer research，2003年，Vol.9, No.5，p.1850-1857

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

Ａ６１Ｋ ３８／００－３８／５８

Ａ６１Ｋ ４５／００

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＣ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含む第１のＸＢＰ－１ペプチド；または
（ｂ）（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列、および、（ｉｉ）存在する場合、スプライシングＸＢＰ１において配列番号９に隣接するアミノ酸である、配列番号１０のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含む第２のＸＢＰ－１ペプチド
を含む、組成物。

【請求項2】

前記第１のＸＢＰ－１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記第２のＸＢＰ－１ペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列からなる、請求項１～２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項4】

（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＣ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含むＣＳ－１ペプチド
をさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記ＣＳ－１ペプチドが、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＮ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＣ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、を含む、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記ＣＳ－１ペプチドが、配列番号１６のアミノ酸配列からなる、請求項４～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＣ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含む第１のＸＢＰ－１ペプチド；
（ｂ）（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列、および、（ｉｉ）存在する場合、スプライシングＸＢＰ１において配列番号９に隣接するアミノ酸である、配列番号１０のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含む第２のＸＢＰ－１ペプチド；および
（ｃ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、ＣＤ１３８において配列番号１２に隣接するアミノ酸である、配列番号１２のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、ＣＤ１３８において配列番号１２に隣接するアミノ酸である、配列番号１２のＣ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含むＣＤ１３８ペプチド
を含む、被験体における免疫応答の誘導に使用するための組成物。

【請求項8】

（ａ）前記第１のＸＢＰ－１ペプチドが、存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＮ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、および、存在する場合、非スプライシングＸＢＰ１において配列番号２に隣接するアミノ酸である、配列番号６のＣ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、を含む；
（ｂ）前記第２のＸＢＰ－１ペプチドが、存在する場合、スプライシングＸＢＰ１において配列番号９に隣接するアミノ酸である、配列番号１０のＮ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、を含む；かつ
（ｃ）前記ＣＤ１３８ペプチドが、存在する場合、ＣＤ１３８において配列番号１２に隣接するアミノ酸である、配列番号１２のＮ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、および、存在する場合、ＣＤ１３８において配列番号１２に隣接するアミノ酸である、配列番号１２のＣ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、を含む、
請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

配列番号６のアミノ酸配列からなる第１のＸＢＰ－１ペプチドを含む、請求項７～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

配列番号１０のアミノ酸配列からなる第２のＸＢＰ－１ペプチドを含む、請求項７～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

配列番号１２のアミノ酸配列からなるＣＤ１３８ペプチドを含む、請求項７～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む、請求項７～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

治療薬、診断薬、予防薬、および免疫刺激剤からなる群より選択される１つまたは複数の薬剤をさらに含む、請求項７～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記１つまたは複数の薬剤が、免疫刺激剤を含む、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

（ｄ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＮ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＣ末端のすぐ隣の０個から３個までのアミノ酸、を含むＣＳ－１ペプチド
をさらに含む、請求項７～１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

（ｄ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列、（ｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＮ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、および、（ｉｉｉ）存在する場合、ＣＳ－１において配列番号１６に隣接するアミノ酸である、配列番号１６のＣ末端のすぐ隣の０個から２個までのアミノ酸、を含むＣＳ－１ペプチド
をさらに含む、請求項７～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるＣＳ－１ペプチド
をさらに含む、請求項７～１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

前記被験体が、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、または有するリスクがある、請求項７～１７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項19】

前記被験体がＨＬＡ－Ａ２を発現する、請求項７～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記被験体がヒトである、請求項７～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

連邦政府によって資金供与を受けた研究開発に関する声明
本出願に記載された研究は、各々ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈから授与された、助成金番号第Ｐ５０－１００７０７号、第ＰＯ１－７８３７８号および第ＲＯ１－５０９４７号によって補助された。したがって、政府は、本発明に一定の権利を有する。

【背景技術】

【0002】

背景
多発性骨髄腫およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症は、米国でそれぞれ年間約４５，０００人および１，５００人が罹患する２つの血液癌である。両障害は、しばしば、例えば、化学療法を単独で使用するか、骨髄移植と組み合わせて使用して処置されるにもかかわらず、これらの障害の１つに罹患した患者の予後は一般的に不良である。したがって、有効な治療および／または予防的レジメンが緊急に必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

概要
本開示は、免疫原性Ｘ－Ｂｏｘタンパク質１（ＸＢＰ１）、ＣＤ１３８、およびＣＤ２サブセット１（ＣＳ１）に由来するペプチドおよびこのペプチドの使用方法に関する。本ペプチドは、多数の性質（例えば、ＨＬＡ－Ａ２分子に対する高親和性、ＨＬＡ－Ａ２のペプチド結合裂溝内の高安定性、およびＭＨＣ分子と会合して細胞（例えば、癌細胞）表面上に発現した場合にＴ細胞の活性化および増殖を誘導する能力が含まれる）を保有することが発見された。

【0004】

ペプチド（およびその薬学的組成物）を種々の適用（免疫応答の誘導方法、Ｔ細胞の活性化方法、抗体の産生方法、および、例えば、癌（例えば、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの形質細胞癌）の処置方法など）で使用することができることが以下の記載から明らかであろう。さらに、本ペプチドをＭＨＣ分子多量体組成物中に含めることができ、これを使用して、例えば、細胞集団中のペプチド特異的Ｔ細胞を検出することができる。

【0005】

１つの態様では、本開示は、配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６（例えば、少なくとも６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９）％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを特徴とする。本ペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子など）に結合することができる。

【0006】

別の態様では、本開示は、配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６（例えば、少なくとも６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９）％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを特徴とする。本ペプチドを、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と会合して、Ｔ細胞上の抗原特異的Ｔ細胞受容体によって認識することができる。

【0007】

別の態様では、本開示は、配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６（例えば、少なくとも６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９）％同一であるペプチドからなる第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを特徴とする。

【0008】

別の態様では、本開示は、配列番号１～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチドを特徴とする。４個以下の置換は、保存的または非保存的であり得る。

【0009】

さらに別の態様では、本開示は、配列番号１～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを特徴とする。４個以下の置換は、保存的または非保存的であり得る。

【0010】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の任意の単離ペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子）に結合することができる。ＭＨＣ分子は、例えば、ＨＬＡ－Ａ２分子であり得る。ＭＨＣ分子は、例えば、ヒトＭＨＣ分子であり得る。

【0011】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の任意の単離ペプチドを、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と会合して、Ｔ細胞上の抗原特異的Ｔ細胞受容体によって認識することができる。

【0012】

本明細書中に記載の任意の単離ペプチドのいくつかの実施形態では、第２のアミノ酸配列は、ターゲティングポリペプチド、免疫刺激分子、免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント、免疫グロブリン分子のＦｃ受容体結合領域、またはキャリアポリペプチドを構成することができるか、これらであり得る。ターゲティングポリペプチドは、例えば、単離ペプチドを抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、またはＢ細胞）にターゲティングさせるペプチドであり得る。免疫刺激分子は、例えば、サイトカインまたはＴヘルパーエピトープであり得る。免疫グロブリンは、例えば、単鎖Ｆｖ免疫グロブリンフラグメントまたは免疫グロブリン分子全体であり得る。キャリアペプチドは、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）ポリペプチドを含むことができるか、ＫＬＨであり得る。

【0013】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の任意の単離ペプチドは、リンカー配列を含むことができる。リンカー配列は、第１のアミノ酸配列を第２のアミノ酸配列に連結することができる。リンカー配列は、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０、またはこれを超える）のプロテアーゼ切断部位を含むか、これらからなることができる。

【0014】

本明細書中に記載の任意の単離ペプチドのいくつかの実施形態では、第２のアミノ酸配列は、第１のアミノ酸配列のアミノ末端またはカルボキシ末端側にあり得る。

【0015】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の任意の単離ペプチドを検出可能に標識することができる。

【0016】

さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書中に記載の任意の単離ペプチドをコードする単離核酸、（ｉｉ）（ｉ）の単離核酸を含むベクター、または（ｉｉｉ）（ｉｉ）のベクターを含む培養細胞を特徴とする。ベクターを、発現調節配列に作動可能に連結することができる。培養細胞は、原核細胞または真核細胞であり得る。培養細胞は、例えば、真菌細胞、植物細胞、または動物細胞（例えば、線虫細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、魚類細胞、または哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞））であり得る。培養細胞は、免疫細胞（本明細書中に記載の任意の免疫細胞など）であり得る。

【0017】

別の態様では、本開示は、ペプチドの産生方法を特徴とする。本方法は、ペプチドを発現させる条件下で本明細書中に記載の任意の培養細胞を培養する工程を含む。本方法はまた、細胞または細胞が培養された培地からペプチドを単離する工程を含むことができる。

【0018】

別の態様では、本開示は、１つまたは複数の本明細書中に記載の任意の単離ペプチドおよび薬学的に許容可能なキャリアを含む薬学的組成物を特徴とする。組成物はまた、例えば、１つまたは複数の治療薬、診断薬、予防薬、または免疫刺激剤を含むことができる。免疫刺激剤には、例えば、Ｔヘルパーエピトープ、改変ペプチドリガンド、アジュバント、または本明細書中に記載の任意の他の免疫刺激剤が含まれるが、これらに限定されない。Ｔヘルパーエピトープは、例えば、ＰＡＤＲＥ配列またはユニバーサル破傷風トキソイドＴヘルパー（ＴＴ Ｔｈ）エピトープであり得る。アジュバントを、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ｔｏｌｌ受容体のリガンド、ＱＳ２１、ＲＩＢＩ、コレラ毒素（ＣＴ）、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＬＴ）、変異体ＣＴ（ＭＣＴ）、および変異体Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＭＬＴ）からなる群より選択することができる。

【0019】

さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）１つまたは複数の本明細書中に記載の任意の単離ペプチド、および被験体にペプチドを投与するための説明書、および／または（ｉｉ）１つまたは複数の単離ペプチドをコードする単離核酸、１つまたは複数の単離核酸を含むベクター、あるいは１つまたは複数のベクターを含む培養細胞、および単離ペプチド産生のための説明書を含むキットを特徴とする。

【0020】

いくつかの実施形態では、キットはまた、例えば、１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリア、１つまたは複数の免疫刺激剤、あるいは１つまたは複数の治療薬、診断薬、もしくは予防薬を含むことができる。１つまたは複数の免疫刺激剤を、Ｔヘルパーエピトープ、改変ペプチドリガンド、およびアジュバントからなる群より選択することができる。

【0021】

別の態様では、本開示は、容器および容器内に含まれる組成物を含む製造品であって、組成物が哺乳動物において免疫応答を誘導するための有効成分を含み、有効成分が１つまたは複数の本明細書中に記載の任意の単離ペプチドを含む、製造品を特徴とする。容器は、組成物が哺乳動物において免疫応答を誘導するのに使用するものであることを示すラベルを有することができる。ラベルは、さらに、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある哺乳動物に組成物を投与することを示すことができる。製造品はまた、哺乳動物に組成物を投与するための説明書を含むことができる。組成物は、例えば、溶液、乾燥物、または凍結乾燥物であり得る。

【0022】

さらに別の態様では、本開示は、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個）の本明細書中に記載の任意の単離ペプチドを被験体に送達する工程を含む、被験体において免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。本方法はまた、被験体への１つまたは複数のペプチドの送達後に、被験体において免疫応答が起こったかどうかを決定する工程を含むことができる。１つまたは複数のペプチドを、薬学的組成物として被験体に送達することができる。被験体は、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）または本明細書中に記載の任意の他の被験体であり得る。被験体は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有し得るか、有する疑いがあり得るか、発症するリスクがあり得るか、これらからの寛解状態にあり得る。

【0023】

いくつかの実施形態では、本方法は、被験体の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の形質細胞がＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程を含むことができる。

【0024】

いくつかの実施形態では、本方法は、１つまたは複数の化学療法薬、電離放射線の１つまたは複数の形態、あるいは１つまたは複数の免疫療法薬を被験体に投与する工程を含むことができる。電離放射線の１つまたは複数の形態は、例えば、γ線照射、Ｘ線照射、またはβ線照射であり得る。１つまたは複数の化学療法薬を、シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトセシン、アドリアマイシン、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド、ベラムピル（ｖｅｒａｍｐｉｌ）、ポドフィロトキシン、タキソール、トランス白金（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、メトトレキサート、および上記の任意のアナログからなる群より選択することができる。本方法はまた、１つまたは複数の免疫刺激剤を被験体に投与する工程を含むことができる。

【0025】

いくつかの実施形態では、送達する工程は、１つまたは複数のペプチドを被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態では、送達する工程は、１つまたは複数の核酸を被験体に投与することを含み、各核酸は１つまたは複数のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は発現調節配列に作動可能に連結される。核酸は、核酸でトランスフェクトされた組換え細胞中に存在し、１つまたは複数のペプチドを発現し得る。組換え細胞は、被験体から得た細胞のトランスフェクションによって作製されたトランスフェクトされた細胞またはトランスフェクトされた細胞の子孫であり得る。組換え細胞は、抗原提示細胞（樹状細胞、マクロファージ、単球、またはＢ細胞などであるが、これらに限定されない）であり得る。

【0026】

上記の任意の方法のいくつかの実施形態では、送達する工程は、１つまたは複数のペプチドを細胞と接触させること、および細胞への１つまたは複数のペプチドの接触後、細胞を被験体に送達することを含む。細胞は、例えば、抗原提示細胞（本明細書中に記載の任意の抗原提示細胞など）であり得る。細胞は、例えば、被験体から得た細胞または細胞の子孫であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、被験体と同一の種の別の被験体から得た細胞または細胞の子孫であり得る。他の被験体は、被験体と共通の少なくとも１つのＭＨＣ分子を発現することができる。少なくとも１つのＭＨＣ分子は、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ－Ａ２分子など）であり得る。

【0027】

いくつかの実施形態では、本方法はまた、１つまたは複数のペプチドを被験体に投与する前に被験体から１つまたは複数の造血幹細胞を含む細胞集団を得る工程を含むことができる。

【0028】

別の態様では、本開示は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の処置方法を特徴とする。本方法は、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個）の本明細書中に記載の任意のペプチドを被験体に投与する工程であって、被験体が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、発症するリスクがある、工程を含む。

【0029】

別の態様では、本開示は、処置を必要とする哺乳動物に処置を選択するための方法を特徴とする。本方法は、哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現するかどうかを決定する工程であって、癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、および１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現する場合、（ａ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、（ｃ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む。本方法はまた、１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現することを決定した後に、選択された１つまたは複数のペプチドを被験体に送達する工程を含むことができる。

【0030】

さらに別の態様では、本開示は、癌を有する哺乳動物の処置を選択するための方法を特徴とする。本方法は、哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現するかどうかを決定する工程であって、癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、および１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現する場合、（ａ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および（ｃ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む。本方法はまた、１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現することを決定した後に、１つまたは複数のペプチドを被験体に送達する工程を含むことができる。

【0031】

別の態様では、本開示は、処置を必要とする哺乳動物に処置を選択するための方法を特徴とする。本方法は、哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程であって、癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、および１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現する場合、（ａ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１５～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、（ｃ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む。本方法はまた、１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現することを決定した後に、選択された１つまたは複数のペプチドを被験体に送達する工程を含むことができる。

【0032】

さらに別の態様では、本開示は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法を特徴とする。本方法は、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現する場合、（ａ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および（ｃ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む。

【0033】

さらに別の態様では、本開示は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法であって、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現する場合、（ａ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および（ｃ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む、方法を特徴とする。

【0034】

別の態様では、本開示は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法であって、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現する場合、（ａ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、（ｂ）配列番号１５～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および（ｃ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および（ｄ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む、方法を特徴とする。

【0035】

上記の任意の方法のいくつかの実施形態では、被験体または哺乳動物は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の治療を受けており、且つ前記治療に応答しなかった被験体または哺乳動物であり得る。

【0036】

別の態様では、本開示は、哺乳動物において免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。本方法は、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個）の本明細書中に記載の任意のペプチドと接触させた免疫細胞または免疫細胞の子孫を被験体に投与する工程を含む。本方法は、免疫細胞を１つまたは複数のペプチドと接触させる工程を含むことができる。免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞であり得る。Ｔ細胞を、抗原提示細胞の存在下で１つまたは複数のペプチドと接触させることができる。

【0037】

いくつかの実施形態では、本方法はまた、接触前に免疫細胞を得る工程を含むことができる。免疫細胞を、被験体または被験体と同一の種の別の被験体から得ることができる。

【0038】

いくつかの実施形態では（例えば、細胞を別の被験体から得る実施形態では）、免疫細胞は被験体と共通の少なくとも１つのＭＨＣ分子を発現する。少なくとも１つのＭＨＣ分子は、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ－Ａ２分子など）であり得る。

【0039】

さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）１つまたは複数の本明細書中に記載の任意のペプチドおよび（ｉｉ）２個以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）のＭＨＣ分子のペプチド結合領域を含む主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子多量体を含む組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、各ペプチド結合領域はこれに結合した（ｉ）を有する。いくつかの実施形態では、各ペプチド結合領域は、これに非共有結合または共有結合した（ｉ）を有する。ＭＨＣ分子多量体は、２個以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）のＭＨＣ分子全体を含むことができる。ＭＨＣ分子多量体は、ヒトＭＨＣ分子を含むことができる。ＭＨＣ分子多量体は、ＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ－Ａ２分子など）を含むことができる。

【0040】

いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも２個以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）のペプチドを含むことができる。

【0041】

いくつかの実施形態では、２個以上のペプチド結合領域は同一のＭＨＣ分子に由来し得る。いくつかの実施形態では、２個以上のペプチド結合領域は異なるＭＨＣ分子に由来する。いくつかの実施形態では、２個以上のペプチド結合領域は、少なくとも２個（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）の同一ＭＨＣ分子由来の領域と少なくとも１個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）の異なるＭＨＣ分子由来の領域との混合物であり得る。

【0042】

いくつかの実施形態では、ＭＨＣ分子多量体は、１つまたは複数のペプチドのうちの少なくとも１つに結合することができる。

【0043】

いくつかの実施形態では、組成物を検出可能に標識することができる。例えば、１つまたは複数のペプチドおよび／あるいは１つまたは複数のペプチド結合領域を検出可能に標識することができる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＭＨＣ分子多量体のうちの少なくとも１つあるいは１つまたは複数のペプチドのうちの少なくとも１つを検出可能に標識する。

【0044】

さらに別の態様では、本開示は、各多量体がＭＨＣ分子の２個以上のペプチド結合領域を含む１つまたは複数の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子多量体、および１つまたは複数の本明細書中に記載の任意のペプチドを含む組成物を含むキットを特徴とする。本キットはまた、組成物の細胞との接触についての説明書、１つまたは複数のＭＨＣ分子多量体のうちの１つあるいは１つまたは複数のペプチドのうちの１つを検出可能に標識するための説明書、１つまたは複数の検出可能な標識、および／あるいは１つまたは複数の検出可能な標識のうちの少なくとも１つを検出するための説明書を含むことができる。１つまたは複数の検出可能な標識を、発光標識、蛍光標識、放射性標識、および酵素標識からなる群より選択することができる。

【0045】

他で定義しない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、本発明に属する当業者によって一般に理解される意味を有する。矛盾する場合、本書類（定義が含まれる）に従う。好ましい方法と材料を以下に記載しているが、本明細書中に記載の方法と材料に類似するか等価な方法と材料を本発明の実施または試験で使用することもできる。本明細書中に言及した全ての刊行物、特許出願、特許、および他の引例は、その全体が参考として援用される。本明細書中に開示の材料、方法、および実施例は例示のみを目的とし、本発明を制限することを意図しない。

【0046】

本発明の他の特徴および利点（例えば、被験体における免疫応答の誘導方法）は、以下の説明、図面、および特許請求の範囲から明らかであろう。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチドであって、
上記ペプチドが主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合する、単離ペプチド。
（項目２）
配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチドであって、
上記ペプチドが、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と会合して、Ｔ細胞上の抗原特異的Ｔ細胞受容体によって認識される、単離ペプチド。
（項目３）
配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるペプチドからなる第１のアミノ酸配列、および
上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列
を含む単離ペプチド。
（項目４）
配列番号１～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド。
（項目５）
配列番号１～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および
上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列
を含む単離ペプチド。
（項目６）
上記４個以下の置換の少なくとも１つが保存的置換である、項目４または５に記載の単離ペプチド。
（項目７）
上記ペプチドが主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合する、項目３から６のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目８）
上記ＭＨＣ分子がヒトＭＨＣ分子である、項目１、２、または７に記載の単離ペプチド。
（項目９）
上記ペプチドが、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と会合して、Ｔ細胞上の抗原特異的Ｔ細胞受容体によって認識される、項目１、または３から７のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目１０）
上記ＭＨＣ分子がＭＨＣクラスＩ分子である、項目１、２、または７から９のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目１１）
上記ＭＨＣ分子がＨＬＡ－Ａ２分子である、項目１０に記載の単離ペプチド。
（項目１２）
上記ＭＨＣ分子がＭＨＣクラスＩＩ分子である、項目１、２、または７から９のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目１３）
上記第２のアミノ酸配列がターゲティングポリペプチドを構成する、項目３または５から１２のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目１４）
上記ターゲティングポリペプチドにより、上記単離ペプチドが抗原提示細胞にターゲティングされる、項目１３に記載の単離ポリペプチド。
（項目１５）
上記抗原提示細胞が樹状細胞である、項目１４に記載の単離ペプチド。
（項目１６）
上記抗原提示細胞がマクロファージ、単球、またはＢ細胞である、項目１４に記載の単離ペプチド。
（項目１７）
上記第２のアミノ酸配列が免疫刺激分子を構成する、項目３または５から１２に記載の単離ペプチド。
（項目１８）
上記免疫刺激分子がサイトカインまたはＴヘルパーエピトープである、項目１７に記載の単離ペプチド。
（項目１９）
上記第２のアミノ酸配列が免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメントを構成する、項目３または５から１２のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目２０）
上記免疫グロブリンが単鎖Ｆｖ免疫グロブリンフラグメントである、項目１９に記載の単離ペプチド。
（項目２１）
上記第２のアミノ酸配列が免疫グロブリン分子のＦｃ受容体結合領域を含む、項目３または５から１２のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目２２）
上記第２のアミノ酸配列が免疫グロブリン分子全体を構成する、項目２１に記載の単離ペプチド。
（項目２３）
上記第２のアミノ酸配列がキャリアポリペプチドを含む、項目３または５から１２のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目２４）
上記キャリアペプチドがＫＬＨポリペプチドを含む、項目２３に記載の単離ペプチド。
（項目２５）
リンカー配列をさらに含む、項目３または５から２４のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目２６）
上記リンカー配列が上記第１のアミノ酸配列を上記第２のアミノ酸配列に連結させる、項目２５に記載の単離ペプチド。
（項目２７）
上記リンカー配列が少なくとも１つのプロテアーゼ切断部位を含む、項目２５または２６に記載の単離ペプチド。
（項目２８）
上記リンカー配列が少なくとも１つのプロテアーゼ切断部位からなる、項目２５から２７のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目２９）
上記第２のアミノ酸配列が上記第１のアミノ酸配列のアミノ末端またはカルボキシ末端側にある、項目３または５から２８のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目３０）
上記単離ペプチドが検出可能に標識される、項目１から２９のいずれか１項に記載の単離ペプチド。
（項目３１）
配列番号１から１８のいずれか１つからなる単離ペプチド。
（項目３２）
項目１から３１のいずれか１項に記載のペプチドをコードする単離核酸。
（項目３３）
項目３２に記載の核酸配列を含むベクター。
（項目３４）
上記核酸配列が発現調節配列に作動可能に連結される、項目３３に記載のベクター。
（項目３５）
項目３３に記載のベクターを含む培養細胞。
（項目３６）
項目３４に記載のベクターを含む培養細胞。
（項目３７）
上記細胞が哺乳動物細胞である、項目３５または３６に記載の培養細胞。
（項目３８）
上記細胞がヒト細胞である、項目３７に記載の培養細胞。
（項目３９）
上記細胞が免疫細胞である、項目３５から３８のいずれか１項に記載の培養細胞。
（項目４０）
ペプチドの産生方法であって、項目３６から３９のいずれか１項に記載の細胞を上記ペプチドを発現させる条件下で培養する工程を含む、方法。
（項目４１）
上記細胞または上記細胞が培養された培地から上記ペプチドを単離する工程をさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
１つまたは複数の項目１から３１のいずれか１項に記載のペプチドおよび薬学的に許容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目４３）
１つまたは複数の免疫刺激剤をさらに含む、項目４２に記載の薬学的組成物。
（項目４４）
上記１つまたは複数の免疫刺激剤が、Ｔヘルパーエピトープ、改変ペプチドリガンド、およびアジュバントからなる群より選択される、項目４３に記載の薬学的組成物。
（項目４５）
上記ＴヘルパーエピトープがＰＡＤＲＥ配列またはユニバーサル破傷風トキソイドＴヘルパー（ＴＴ Ｔｈ）エピトープである、項目４４に記載の薬学的組成物。
（項目４６）
上記アジュバントが、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、ミョウバン、Ｔｏｌｌ受容体のリガンド、ＱＳ２１、ＲＩＢＩ、コレラ毒素（ＣＴ）、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＬＴ）、変異体ＣＴ（ＭＣＴ）、および変異体Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＭＬＴ）からなる群より選択される、項目４４に記載の薬学的組成物。
（項目４７）
１つまたは複数の治療薬、診断薬、または予防薬をさらに含む、項目４２から４６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
（項目４８）
１つまたは複数の項目１から３１に記載の任意のペプチド、および
上記ペプチドを被験体に投与するための説明書
を含む、キット。
（項目４９）
１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む、項目４８に記載のキット。（項目５０）
１つまたは複数の免疫刺激剤をさらに含む、項目４８または４９に記載のキット。
（項目５１）
上記１つまたは複数の免疫刺激剤が、Ｔヘルパーエピトープ、改変ペプチドリガンド、およびアジュバントからなる群より選択される、項目５０に記載のキット。
（項目５２）
１つまたは複数の治療薬、診断薬、または予防薬をさらに含む、項目４８から５１のいずれか１項に記載のキット。
（項目５３）
容器、および
上記容器内に含まれる組成物
を含む、製造品であって、
上記組成物が哺乳動物において免疫応答を誘導するための有効成分を含み、上記有効成分が１つまたは複数の項目１から３１に記載の任意のペプチドを含み、上記容器は、上記組成物が哺乳動物において免疫応答を誘導するのに使用するものであることを示すラベルを有する、製造品。
（項目５４）
上記ラベルが、多発性骨髄腫を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある哺乳動物に上記組成物を投与すべきであることをさらに示す、項目５３に記載の製造品。
（項目５５）
上記ラベルが、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある哺乳動物に上記組成物を投与すべきであることをさらに示す、項目５３または５４に記載の製造品。
（項目５６）
上記哺乳動物に上記組成物を投与するための説明書をさらに含む、項目５３から５５のいずれか１項に記載の製造品。
（項目５７）
上記組成物が乾燥または凍結乾燥されている、項目５３から５６のいずれか１項に記載の製造品。
（項目５８）
被験体において免疫応答を誘導するための方法であって、１つまたは複数の項目１から３１に記載の任意のペプチドを被験体に送達する工程を含む、方法。
（項目５９）
上記被験体への１つまたは複数のペプチドの送達後に、上記被験体において免疫応答が起こったかどうかを決定する工程をさらに含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
上記１つまたは複数のペプチドを薬学的組成物として上記被験体に送達する、項目５８または５９に記載の方法。
（項目６１）
上記被験体が哺乳動物である、項目５８から６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
上記哺乳動物がヒトである、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
上記被験体が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するかどうかを決定する工程をさらに含む、項目５８から６３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６４）
上記被験体が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、有する疑いがある、項目５８から６３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
上記被験体が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症からの寛解にある、項目５８から６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
上記被験体の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の形質細胞がＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程をさらに含む、項目６４または６５に記載の方法。
（項目６７）
１つまたは複数の化学療法薬、電離放射線の１つまたは複数の形態、あるいは１つまたは複数の免疫療法薬を上記被験体に投与する工程をさらに含む、項目５８から６６のいずれか１項に記載の方法。
（項目６８）
上記電離放射線の１つまたは複数の形態がγ線照射、Ｘ線照射、またはβ線照射である、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
上記１つまたは複数の化学療法薬が、シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトセシン、アドリアマイシン、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド、ベラムピル、ポドフィロトキシン、タモキシフェン、タキソール、トランス白金、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、メトトレキサート、および上記のいずれかのアナログからなる群より選択される、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
上記被験体に１つまたは複数の免疫刺激剤を投与する工程をさらに含む、項目５８から６９のいずれか１項に記載の方法。
（項目７１）
上記送達する工程が、上記１つまたは複数のペプチドを上記被験体に投与することを含む、項目５８から７０のいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
上記送達する工程が１つまたは複数の核酸を上記被験体に投与することを含み、上記核酸がそれぞれ上記１つまたは複数のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、上記ヌクレオチド配列が発現調節配列に作動可能に連結される、項目５８から７０のいずれか１項に記載の方法。
（項目７３）
上記核酸が上記核酸でトランスフェクトされた組換え細胞中に存在し、上記１つまたは複数のペプチドを発現する、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
上記組換え細胞が、上記被験体から得た細胞のトランスフェクションによって作製されたトランスフェクトされた細胞またはトランスフェクトされた細胞の子孫である、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
上記組換え細胞が抗原提示細胞である、項目７３または７４に記載の方法。
（項目７６）
上記抗原提示細胞が樹状細胞である、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
上記抗原提示細胞がマクロファージ、単球、またはＢ細胞である、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
上記送達する工程が、
上記１つまたは複数のペプチドを細胞と接触させること、および
上記細胞への上記１つまたは複数のペプチドの接触後、上記細胞を上記被験体に送達すること
を含む、項目５８から７７のいずれか１項に記載の方法。
（項目７９）
上記細胞が抗原提示細胞である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
上記抗原提示細胞が、樹状細胞、マクロファージ、単球、またはＢ細胞である、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
上記細胞が、上記被験体から得た細胞または細胞の子孫である、項目７８から８０のいずれか１項に記載の方法。
（項目８２）
上記細胞が、上記被験体と同一の種の別の被験体から得た細胞または細胞の子孫である、項目７８から８０のいずれか１項に記載の方法。
（項目８３）
その他の被験体が上記被験体と共通の少なくとも１つのＭＨＣ分子を発現する、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
上記少なくとも１つのＭＨＣ分子がＭＨＣクラスＩ分子である、項目８３に記載の方法。（項目８５）
上記ＭＨＣクラスＩ分子がＨＬＡ－Ａ２分子である、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
上記１つまたは複数のペプチドを上記被験体に投与する前に上記被験体から１つまたは複数の造血幹細胞を含む細胞集団を得る工程をさらに含む、項目５８から８５のいずれか１項に記載の方法。
（項目８７）
多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を治療するための方法であって、
１つまたは複数の項目１から３１に記載の任意のペプチドを被験体に投与する工程を含み、上記被験体が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、発症するリスクがある、方法。
（項目８８）
処置を必要とする哺乳動物に処置を選択するための方法であって、
哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現するかどうかを決定する工程であって、上記癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、および
１つまたは複数の上記癌細胞がＸＢＰ１を発現する場合、
（ａ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、
（ｃ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド
からなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程、を含む、方法。
（項目８９）
上記１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現することを決定した後に、上記選択された１つまたは複数のペプチドを上記被験体に送達する工程をさらに含む、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
癌を有する哺乳動物のための処置を選択するための方法であって、
哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現するかどうかを決定する工程であって、上記癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、ならびに
１つまたは複数の上記癌細胞がＣＤ１３８を発現する場合、
（ａ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および
（ｃ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド
からなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程、を含む、方法。
（項目９１）
上記１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現することを決定した後に、上記１つまたは複数のペプチドを上記被験体に送達する工程をさらに含む、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
処置を必要とする哺乳動物に処置を選択するための方法であって、
哺乳動物中の癌の１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程であって、上記癌が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症である、工程、ならびに
１つまたは複数の上記癌細胞がＣＳ１を発現する場合、
（ａ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１５～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、
（ｃ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド
からなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程、を含む、方法。
（項目９３）
上記１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現することを決定した後に、上記選択された１つまたは複数のペプチドを上記被験体に送達する工程をさらに含む、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法であって、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１を発現する場合、
（ａ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および
（ｃ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１～１０のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド
からなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む、方法。
（項目９５）
多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法であって、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＣＤ１３８を発現する場合、
（ａ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および
（ｃ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１１～１４のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド
からなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む、方法。
（項目９６）
多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有する哺乳動物のために治療薬を選択するための方法であって、哺乳動物の多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の１つまたは複数の癌細胞がＣＳ１を発現する場合、
（ａ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる単離ペプチド、
（ｂ）配列番号１５～１８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるが、４個以下の置換を有する単離ペプチド、および
（ｃ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つからなるが、４個以下の置換を有する第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチド、および
（ｄ）（ｉ）配列番号１５～１８のいずれか１つと少なくとも６６％同一であるアミノ酸配列からなる第１のアミノ酸配列、および（ｉｉ）上記第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列、を含む単離ペプチドからなる群より選択される１つまたは複数のペプチドを上記哺乳動物のための治療薬として選択する工程を含む、方法。
（項目９７）
上記被験体または哺乳動物が多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の治療を受けており、且つ上記治療に応答しなかった、項目８８から９６のいずれか１項に記載の方法。
（項目９８）
哺乳動物において免疫応答を誘導するための方法であって、１つまたは複数の項目１から３１に記載の任意のペプチドと接触させた免疫細胞または上記免疫細胞の子孫を被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目９９）
上記方法が接触する工程を含む、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
上記免疫細胞がＴ細胞である、項目９８または９９に記載の方法。
（項目１０１）
上記Ｔ細胞を、抗原提示細胞の存在下で上記１つまたは複数のペプチドと接触させる、項目１００に記載の方法。
（項目１０２）
上記接触前に上記免疫細胞を得る工程をさらに含む、項目９９から１０１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０３）
上記免疫細胞を上記被験体から得る、項目９８から１０２のいずれか１項に記載の方法。（項目１０４）
上記免疫細胞を上記被験体と同一の種の別の被験体から得る、項目９８から１０２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０５）
上記免疫細胞が上記被験体と共通の少なくとも１つのＭＨＣ分子を発現する、項目１０４に記載の方法。
（項目１０６）
上記少なくとも１つのＭＨＣ分子がＭＨＣクラスＩ分子である、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
上記ＭＨＣクラスＩ分子がＨＬＡ－Ａ２分子である、項目１０６に記載の方法。
（項目１０８）
（ｉ）項目１から３１のいずれか１項に記載のペプチドおよび（ｉｉ）主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子多量体を含み、上記多量体がＭＨＣ分子の２個以上のペプチド結合領域を含む、組成物。
（項目１０９）
上記ＭＨＣ分子多量体がＭＨＣ分子の４個または５個のペプチド結合領域を含む、項目１０８に記載の組成物。
（項目１１０）
各ペプチド結合領域がこれに結合した（ｉ）を有する、項目１０８または１０９に記載の組成物。
（項目１１１）
各ペプチド結合領域がこれに非共有結合した（ｉ）を有する、項目１１０に記載の組成物。
（項目１１２）
各ペプチド結合領域がこれに共有結合した（ｉ）を有する、項目１１０に記載の組成物。（項目１１３）
上記ＭＨＣ分子多量体が２個以上のＭＨＣ分子全体を含む、項目１０８から１１２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１４）
上記ＭＨＣ分子多量体がヒトＭＨＣ分子を含む、項目１０８から１１３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１５）
上記ＭＨＣ分子多量体がＭＨＣクラスＩ分子を含む、項目１０８から１１４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１６）
上記ＭＨＣクラスＩ分子がＨＬＡ－Ａ２分子である、項目１１５に記載の組成物。
（項目１１７）
上記組成物が少なくとも２個以上の上記ペプチドを含む、項目１０８から１１６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１８）
上記２個以上のペプチド結合領域が同一のＭＨＣ分子に由来する、項目１０８から１１７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１９）
上記２個以上のペプチド結合領域が異なるＭＨＣ分子に由来する、項目１０８から１１７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２０）
上記ＭＨＣ分子多量体が上記１つまたは複数のペプチドのうちの少なくとも１つに結合することができる、項目１０８から１１９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２１）
上記組成物が検出可能に標識されている、項目１０８から１２０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１２２）
各多量体がＭＨＣ分子の２個以上のペプチド結合領域を含む、１つまたは複数の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子多量体、および
１つまたは複数の項目１から３１のいずれか１項に記載のペプチド
を含む組成物を含むキット。
（項目１２３）
上記組成物の細胞との接触についての説明書をさらに含む、項目１２２に記載のキット。（項目１２４）
１つまたは複数の検出可能な標識をさらに含む、項目１２２または１２３に記載のキット。
（項目１２５）
上記１つまたは複数の検出可能な標識が、発光標識、蛍光標識、放射性標識、および酵素標識からなる群より選択される、項目１２４に記載のキット。
（項目１２６）
上記１つまたは複数のＭＨＣ分子多量体のうちの１つまたは上記１つまたは複数のペプチドのうちの１つを検出可能に標識するための説明書をさらに含む、項目１２２から１２５のいずれか１項に記載のキット。
（項目１２７）
上記１つまたは複数の検出可能な標識の少なくとも１つを検出するための説明書をさらに含む、項目１２５または１２６に記載のキット。
（項目１２８）
上記１つまたは複数のＭＨＣ分子多量体の少なくとも１つまたは上記１つまたは複数のペプチドの少なくとも１つを検出可能に標識する、項目１２２から１２７のいずれか１項に記載のキット。

【図面の簡単な説明】

【0047】

【図1】図１は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子に対するフルオロフォア標識したＸＢＰ１ペプチドの親和性を示す棒グラフである。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はアッセイでスクリーニングした以下の種々のペプチドを示す：ＸＢＰ１_{１１７～１２５}（ＬＬＲＥＫＴＨＧＬ（配列番号１）；ＸＢＰ１番号１ペプチド）、ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２）；ＸＢＰ１番号２ペプチド）、ＸＢＰ１_{１８９～１９７}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号３）；ＸＢＰ１番号３ペプチド）、ＸＢＰ１_{１９２～２００}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号４）；ＸＢＰ１番号４ペプチド）、ＸＢＰ１_{１１０～１１８}（ＫＬＬＬＥＮＱＬＬ（配列番号５）；ＸＢＰ１番号５ペプチド）、およびＸＢＰ１_{９３～１０１}（ＲＭＳＥＬＥＱＱＶ（配列番号２７）；ＸＢＰ１番号６ペプチド）。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））もコントロールとして評価した。

【図2】図２は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子の裂溝内のフルオロフォア標識したＸＢＰ１ペプチド（ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（ＸＢＰ１ ２Ｎ；配列番号２））およびＹＩＳＰＷＩＬＡＶ（ＸＢＰ１ ２Ｍ；配列番号６））の安定性を示す棒グラフである。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））もコントロールとして評価した。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はペプチドの安定性を測定した時間間隔を示す。

【図3】図３は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子に対するフルオロフォア標識したＸＢＰ１ペプチドの親和性を示す棒グラフである。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はアッセイでスクリーニングした以下の種々のペプチドを示す：未変性ＸＢＰ１_{１９６～２０４}（ＧＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号７）；ＸＢＰ１ ＳＰ番号１ｐ）およびＸＢＰ１_{３６７～３７５}（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号９）；ＸＢＰ１ ＳＰ番号３ｐ）。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４）；「Ｉｎｆ．ｖ．ｐ．」））もコントロールとして評価した。

【図4】図４は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子の裂溝内のフルオロフォア標識したＸＢＰ１ペプチド（ＸＢＰ１ ＳＰ １Ｎ（ＧＩＬＤＮＬＤＰＶ；配列番号７）；ＸＰＢ１ ＳＰ ３Ｎ（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ；配列番号９）およびＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ（ＹＬＦＰＱＬＩＳＶ 配列番号１０））の安定性を示す棒グラフである。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はペプチドの安定性を測定した後の時間間隔を示す。

【図5】図５は、ヒトリンパ球の混合集団中のＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔリンパ球の比率を示す一連の一次元蛍光フローサイトメトリー（ＦＦＣ）ヒストグラムである。細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）集団を、刺激しないか（ｕｎｓｔｉｍ）、ＸＢＰ１ ２Ｍ（ＸＢＰ１ ２Ｍ－ＣＴＬ）またはＸＢＰ－１ Ｓ３Ｍ（上記）のうちの１つで刺激した。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４）；「Ｉｎｆ．ｖ．ｐ．」）もコントロールとして評価した。各ヒストグラムのＹ軸は細胞数を示し、Ｘ軸は細胞上のＣＤ４抗原（左列）またはＣＤ８抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示す。ゲート内に細胞の比率を示す。

【図6】図６は、ＸＢＰ１ペプチド（ＸＢＰ１ ２ＭまたはＸＢＰ１ ３Ｍ）での刺激後のＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋またはＣＤ４５ＲＡ^＋／ＣＣＲ７^＋であるリンパ球集団中の細胞の比率を示す一連の二次元ＦＦＣヒストグラムである。各ドットプロットのＹ軸は細胞上のＣＤ６９抗原（左列）またはＣＤ４５ＲＡ抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示し、各ドットプロットのＸ軸は細胞上のＣＤ４５ＲＯ抗原（左列）またはＣＣＲ７抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示す。ドットプロットの右上象限中に細胞の比率を示す。

【図7】図７は、多発性骨髄腫（ＭＭ）ＭｃＣＡＲ細胞およびＭＭ１Ｓ細胞ならびに急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ＭＬ－２細胞と共培養したＩＦＮ－γ（インターフェロン－γ）ＸＢＰ１－ＣＴＬ（ＸＢＰ１ ２Ｍ－ＣＴＬおよびＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ－ＣＴＬ）の放出を示す棒グラフである。Ｙ軸はＣＴＬ含有細胞から放出されたＩＦＮ－γ量を単位ｐｇ／ｍＬで示す。

【図8】図８は、ＭＭ細胞またはＡＭＬ細胞との共培養後のＸＢＰ１－ＣＴＬ（ＸＢＰ１ ２Ｍ－ＣＴＬおよびＸＢＰ１－ＳＰ ３Ｍ ＣＴＬ）の増殖を示す一連の二次元ＦＦＣヒストグラムである。Ｙ軸は集団中の各細胞数を示し、Ｘ軸は細胞中のカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）量を示す。

【図9】図９および１０は、カルセイン放出アッセイによって決定した癌細胞のＸＢＰ１－ＣＴＬ依存性溶解を示す一対の折れ線グラフである。ＸＢＰ１－２Ｍ特異的ＣＴＬ（図９）またはＸＢＰ１－ＳＰ－３Ｍ－ＣＴＬ（図１０）をＵ２６６癌細胞、ＭｃＣａＡＲ癌細胞、ＭＬ－２癌細胞、またはＭＭ１Ｓ癌細胞とそれぞれ共培養し、ＣＴＬによる癌細胞溶解量を癌細胞から放出されたカルセイン量の関数として計算した。Ｙ軸は標的細胞の特異的溶解比を示し、Ｘ軸はＣＴＬの癌細胞に対する比（エフェクターの標的細胞に対する比）（１：１、１０：１、２０：１、または６０：１）を示す。

【図10】図９および１０は、カルセイン放出アッセイによって決定した癌細胞のＸＢＰ１－ＣＴＬ依存性溶解を示す一対の折れ線グラフである。ＸＢＰ１－２Ｍ特異的ＣＴＬ（図９）またはＸＢＰ１－ＳＰ－３Ｍ－ＣＴＬ（図１０）をＵ２６６癌細胞、ＭｃＣａＡＲ癌細胞、ＭＬ－２癌細胞、またはＭＭ１Ｓ癌細胞とそれぞれ共培養し、ＣＴＬによる癌細胞溶解量を癌細胞から放出されたカルセイン量の関数として計算した。Ｙ軸は標的細胞の特異的溶解比を示し、Ｘ軸はＣＴＬの癌細胞に対する比（エフェクターの標的細胞に対する比）（１：１、１０：１、２０：１、または６０：１）を示す。

【図11】図１１は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子に対するフルオロフォア標識したＣＤ１３８ペプチドの親和性を示す棒グラフである。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はアッセイでスクリーニングした以下の種々のペプチドを示す：ＣＤ１３８_{２５６～２６４}（ＶＩＡＧＧＬＶＧＬ；ＣＤ１３８番号１ｐ（配列番号１１））；ＣＤ１３８_{２６０～２６８}（ＧＬＶＧＬＩＦＡＶ；ＣＤ１３８番号２ｐ（配列番号１２））；ＣＤ１３８_５～１３（ＡＬＷＬＷＬＣＡＬ；ＣＤ１３８番号３ｐ（配列番号１３））；およびＣＤ１３８_７～１５（ＷＬＷＬＣＡＬＡＬ；ＣＤ１３８番号３ｐ（配列番号１４））。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４）；「Ｉｎｆ．ｖ．ｐ．」）もコントロールとして評価した。

【図12】図１２は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子の裂溝内のフルオロフォア標識したＣＤ１３８番号２ペプチドの安定性を示す棒グラフである（インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４）；「Ｉｎｆ．ｖ．ｐ．」）と比較した場合）。Ｙ軸は平均蛍光強度を示し、Ｘ軸はペプチドの安定性を測定した時間間隔を示す。

【図13】図１３は、集団中のＣＤ４^＋Ｔリンパ球およびＣＤ８^＋Ｔリンパ球の比率を示す一連の一次元ＦＦＣヒストグラムである。ＣＴＬ集団を刺激しなかったか（ｕｎｓｔｉｍ）、ＣＤ１３８番号２ペプチド（ＣＤ１３８－ＣＴＬ）で刺激した。各ヒストグラムのＹ軸は細胞数を示し、Ｘ軸は細胞上のＣＤ４抗原（左列）またはＣＤ８抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示す。

【図14】図１４は、ＣＤ１３８番号２ペプチドでの刺激後のＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋またはＣＤ４５ＲＡ^＋／ＣＣＲ７^＋であるリンパ球集団中の細胞の比率を示す一連の二次元ＦＦＣヒストグラムである。ＣＴＬ集団を刺激しなかったか（ｕｎｓｔｉｍ）、ＣＤ１３８番号２ペプチド（ＣＤ１３８－ＣＴＬ）で刺激した。各ドットプロットのＸ軸（ＦＬ－１）は細胞上のＣＤ６９抗原（左列）またはＣＤ４５ＲＡ抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示し、各ドットプロットのＹ軸（ＦＬ－２）は細胞上のＣＤ４５ＲＯ抗原（左列）またはＣＣＲ７抗原（右列）に結合した蛍光標識した特異的抗体の蛍光強度を示す。ドットプロットの右上象限中に細胞の比率を示す。

【図15】図１５は、多発性骨髄腫（ＭＭ）ＭｃＣＡＲ細胞（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ－Ａ２^＋）、ＭＭ１Ｓ細胞（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ－Ａ２^－）、または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ＭＬ－２細胞（ＣＤ１３８^－／ＨＬＡ－Ａ２^－）と共培養したＣＤ１３８－ＣＴＬからのＩＦＮ－γ放出を示す棒グラフである。Ｙ軸はＣＴＬからのＩＦＮ－γの放出量を単位ｐｇ／ｍＬで示し、Ｘ軸は刺激細胞として使用した癌細胞を示す。ＣＤ１３８－ＣＴＬの抗原特異性およびＨＬＡ－Ａ２拘束を、腫瘍細胞株での一晩の刺激後のＩＦＮ－γ分泌の誘導の測定によって決定した。

【図16】図１６は、ＭｃＣＡＲ癌細胞、ＭＬ－２癌細胞、またはＭＭ１Ｓ癌細胞との共培養後のＣＤ１３８－ＣＴＬ（ＣＤ１３８番号２ｐ－ＣＴＬ）の増殖を示す一連の一次元ＦＦＣヒストグラムである。Ｙ軸は集団中の各細胞数を示し、Ｘ軸は細胞中のカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）量を示す。ドットプロットの右上象限中に細胞の比率を示す。

【図17】図１７は、カルセイン放出アッセイによって決定した癌細胞のＣＤ１３８－ＣＴＬ依存性溶解を示す折れ線グラフである。ＣＤ１３８番号２ｐ特異的ＣＴＬ（癌細胞Ｕ２６６、ＭＬ－２、またはＭＭ１Ｓ細胞とそれぞれ共培養した）およびＣＴＬによる癌細胞溶解量を、癌細胞からのカルセインの放出量の関数として計算した。Ｙ軸は標的細胞の特異的溶解比を示し、Ｘ軸はＣＴＬの癌細胞に対する比（エフェクター：標的比）（１：１、１０：１、２０：１、または６０：１）を示す。

【図18A】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＣＤ１０７アッセイによって決定した癌細胞のＣＤ１３８－ＣＴＬ依存性溶解を示す一連の二次元ＦＦＣヒストグラムである。各ドットプロットのＸ軸はＣＤ１０７ａおよびＣＤ１０７ｂに特異的に結合するＦＩＴＣ抱合抗体の蛍光強度を示し、Ｙ軸はＣＤ８に特異的に結合するＰＥ抱合抗体の蛍光強度を示す。図１８Ａは異なる比（エフェクター：標的比）（５：１、１：１、または１：５）でのＣＤ１３８ペプチドでパルスしたＴ２細胞または無関係のＭＡＧＥ３ペプチドでパルスしたＴ２細胞のＣＴＬによる溶解を示す。図１８Ｂは、ＣＴＬのＭｃＣＡＲ細胞に対する比（エフェクター：標的比）（１：１）でＣＤ１３８ペプチドでパルスしたＭｃＣＡＲ細胞または無関係のＭＡＧＥ３ペプチドでパルスしたＭｃＣＡＲ（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ^－Ａ２^＋）細胞のＣＴＬによる溶解を示す。ドットプロットの右上象限中に細胞の比率を示す。

【図18B】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＣＤ１０７アッセイによって決定した癌細胞のＣＤ１３８－ＣＴＬ依存性溶解を示す一連の二次元ＦＦＣヒストグラムである。各ドットプロットのＸ軸はＣＤ１０７ａおよびＣＤ１０７ｂに特異的に結合するＦＩＴＣ抱合抗体の蛍光強度を示し、Ｙ軸はＣＤ８に特異的に結合するＰＥ抱合抗体の蛍光強度を示す。図１８Ａは異なる比（エフェクター：標的比）（５：１、１：１、または１：５）でのＣＤ１３８ペプチドでパルスしたＴ２細胞または無関係のＭＡＧＥ３ペプチドでパルスしたＴ２細胞のＣＴＬによる溶解を示す。図１８Ｂは、ＣＴＬのＭｃＣＡＲ細胞に対する比（エフェクター：標的比）（１：１）でＣＤ１３８ペプチドでパルスしたＭｃＣＡＲ細胞または無関係のＭＡＧＥ３ペプチドでパルスしたＭｃＣＡＲ（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ^－Ａ２^＋）細胞のＣＴＬによる溶解を示す。ドットプロットの右上象限中に細胞の比率を示す。

【図19】図１９は、多数の各多発性骨髄腫癌細胞サンプルによるＣＳ１ ｍＲＮＡの相対発現（Ｙ軸）を示す棒グラフである。各サンプルを、多発性骨髄腫を有する異なるヒト患者から得た。

【図20】図２０は、ヒトＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子に対するフルオロフォア標識したＣＳ１ペプチドの親和性を示す棒グラフである。Ｘ軸は平均蛍光強度を示し、Ｙ軸はアッセイでスクリーニングした以下の種々のペプチドを示す：ＣＳ１－Ｐ１：ＣＳ１_{２３６～２４５}（ＬＬＬＳＬＦＶＬＧＬ（配列番号１５））；ＣＳ１－Ｐ２：ＣＳ１_{２３９～２４７}（ＳＬＦＶＬＧＬＦＬ（配列番号１６））；ＣＳ１－Ｐ３：ＣＳ１_{２３２～２４０}（ＬＬＶＰＬＬＬＳＬ（配列番号１７））；およびＣＳ１－Ｐ４：ＣＳ１_９～１７（ＴＬＩＹＩＬＷＱＬ（配列番号１８））。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４）；「インフルエンザ基質５８～６６」）もコントロールとして評価した。

【図21】図２１は、チミジン取り込みアッセイによって決定したＣＳ１－Ｐ２ペプチド提示するヒトＴ２細胞（「Ｐ２－Ｔ２」）と接触させたＣＳ１－Ｐ２－ＣＴＬの増殖を示す折れ線グラフである。Ｙ軸は分裂細胞に取り込まれた^３Ｈ－チミジンの１分あたりの数（ＣＰＭ）を示し、Ｘ軸はＣＴＬ含有細胞をＴ２細胞と培養した時間を示す。

【図22】図２２は、ＣＳ１－Ｐ１、ＣＳ１－Ｐ２、ＣＳ１－Ｐ３、またはＣＳ１－Ｐ４ペプチドをそれぞれ提示するＴ２細胞と共培養したＣＳ１－ＣＴＬ（Ｐ１－、Ｐ２－、Ｐ３－、およびＰ４－ＣＴＬ）からのＩＦＮ－γの放出を示す棒グラフである。Ｙ軸はＣＴＬからのＩＦＮ－γの放出量を単位ｐｇ／ｍＬで示す。

【図23】図２３は、カルセイン放出アッセイによって決定した癌細胞のＣＳ１－ＣＴＬ依存性溶解を示す棒グラフである。Ｐ２－ＣＴＬを癌細胞Ｕ２６６細胞、ＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、またはＭＭ１Ｓ細胞とそれぞれ共培養し、ＣＳ１－ＣＴＬによって誘導された癌細胞の溶解量を癌細胞からのカルセインの放出量の関数として計算した。Ｙ軸は細胞毒性率を示す。

【発明を実施するための形態】

【0048】

詳細な説明
本開示は、例えば、被験体における免疫応答を誘導するか（例えば、ＣＴＬ応答を刺激する）、抗体産生を刺激するために使用することができる免疫原性ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、およびＣＳ１に由来するペプチド（およびその薬学的組成物）を特徴とする。ペプチドを、種々の適用（免疫応答の誘導方法、抗体の産生方法、および癌（例えば、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの形質細胞疾患の処置方法など）で使用することができる。ペプチドを、ＭＨＣ分子多量体組成物中に含めることもでき、例えば、細胞集団中のＴ細胞の検出方法で使用することもできる。

【0049】

ペプチドならびに例示的なペプチドの作製および使用方法の詳細な説明を以下に示す。

【0050】

ペプチド
本開示は、表１に記載の配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも６６％（例えば、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、または９０％、またはこれを超える）同一のアミノ酸配列からなるか本質的になる単離ペプチドを特徴とする。

【0051】

【表1】

表１に示し、且つアミノ酸位置で表記した「ＸＢＰ１、非スプライシング」ペプチドは、その末端が２６１個のアミノ酸および以下の配列を有するヒトＸＢＰ１タンパク質の非スプライシング形態の関連アミノ酸位置に対応するＸＢＰ１のフラグメントである：

【0052】

【化1】

表１に示し、且つアミノ酸位置で表記した「ＸＢＰ１、スプライシング」ペプチドは、その末端が３７６個のアミノ酸および以下の配列を有するヒトＸＢＰ１タンパク質のスプライシング形態（ＸＢＰ１スプライシング）の関連アミノ酸位置に対応するＸＢＰ１のフラグメントである：

【0053】

【化2】

表１に示し、且つアミノ酸位置で表記した「ＣＤ１３８」ペプチドは、その末端が３１０個のアミノ酸および以下の配列を有するヒトＣＤ１３８タンパク質内の関連アミノ酸位置に対応するＣＤ１３８のフラグメントである：

【0054】

【化3】

表１に示し、且つアミノ酸位置で表記した「ＣＳ１」ペプチドは、その末端が３３５個のアミノ酸および以下の配列を有するヒトＣＳ１タンパク質内の関連アミノ酸位置に対応するＣＳ１のフラグメントである：

【0055】

【化4】

関連配列が配列番号１９～２２を有する野生型で全長の成熟ヒトタンパク質中で生じるので、本明細書中に記載のペプチドを、本明細書中でしばしば、ペプチドのＮ末端およびＣ末端アミノ酸の残基数（例えば、ＸＢＰ１_{１１７～１２５}）を使用して言及する。これらのペプチドは、頻繁に、配列番号１９～２２を有する野生型で全長の成熟タンパク質の対応するセグメントと同一の配列を有するであろう。しかし、用語「ＸＢＰ１、非スプライシングペプチド」（例えば、アミノ酸位置：１１７～１２５、１８４～１９２、１８９～１９７、１９２～２００、または１１０～１１８を有するＸＢＰ１、非スプライシングペプチド）、「ＸＢＰ１、スプライシングペプチド」（例えば、アミノ酸位置：１９６～２０４、１９３～２０１、または３６７～３７５を有するＸＢＰ１、スプライシングペプチド）、「ＣＤ１３８ペプチド」（例えば、アミノ酸位置：２５６～２６４、２６０～２６８、５～１３、または７～１５を有するＣＤ１３８ペプチド）、およびＣＳ１ペプチド（例えば、アミノ酸位置２３６～２４５、２３９～２４７、２３２～２４０、または９～１７を有するＣＳ１ペプチド）がヒト以外の種のＸＢＰ１非スプライシングペプチド、ＸＢＰ１スプライシングペプチド、ＣＤ１３８、またはＣＳ１ポリペプチド（それぞれ）のペプチドフラグメントであり得ると理解される。当業者に認識されるように、かかる非ヒトポリペプチドのペプチドフラグメントのＮ末端およびＣ末端アミノ酸数は、必ずしもヒトポリペプチドの対応するペプチドフラグメント中の数と同一ではない。さらに、非ヒトポリペプチドのペプチドフラグメントの長さおよび／またはアミノ酸は、必ずしも、ヒトポリペプチドの対応するペプチドフラグメント中の長さおよび／またはアミノ酸と同一ではないであろう。当業者は、非ヒトＸＢＰ１非スプライシング、ＸＢＰ１スプライシング、ＣＤ１３８、およびＣＳ１ポリペプチド由来のペプチドのＮ末端およびＣ末端アミノ酸、長さ、およびアミノ酸配列を確立する方法を理解しているであろう。これを行うための１つの有用な方法は、配列アラインメント、特に、最大相同性配列アラインメントである。

【0056】

２ペプチド配列間の同一率（例えば、配列番号１～１８のペプチドおよびこのペプチドと少なくとも６６％同一であり得る別のアミノ酸配列）を、種々のアルゴリズムおよびコンピュータプログラム（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ（Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＭＢＬ－ＥＢＩ）、ＢＬＡＳＴ－Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ），Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、およびＰＳＡｌｉｇｎ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ａ＆Ｍ；Ｓｚｅら（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ １３：３０９－３１９）が含まれるが、これらに限定されない）を使用して決定することができる。

【0057】

上記のヒトおよび非ヒトペプチドのバリアントも本明細書中に開示する。本明細書中に記載のヒトおよび非ヒトペプチドのバリアントには、（ｉ）４個以下（例えば、３、２、または１個）のアミノ酸置換（例えば、保存的置換または非保存的置換）、（ｉｉ）末端または内部の欠失、または（ｉｉｉ）末端または内部の付加（全て以下に詳述する）を有するペプチド形態が含まれ得る。

【0058】

本開示はまた、配列番号１～１８のアミノ酸配列（表１に記載）からなるか、本質的になるが、４個以下（例えば、３個以下、２個以下、または１個以下）の置換を有するペプチドを特徴とする。置換は、例えば、保存的または非保存的であり得る（上記）。

【0059】

保存的置換には、以下の群内の置換が含まれる：バリン、アラニン、およびグリシン；ロイシン、バリン、およびイソロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギンおよびグルタミン；セリン、システイン、およびトレオニン；リジンおよびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン。非極性疎水性アミノ酸には、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびメチオニンが含まれる。極性中性アミノ酸には、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが含まれる。正電荷の（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン、およびヒスチジンが含まれる。負電荷の（酸性）アミノ酸には、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。上記の極性群、塩基性群、または酸性群の一方のメンバーの同一群の別のメンバーとの任意の置換を、保存的置換と見なすことができる。対照的に、非保存的置換は、一方のアミノ酸の異なる特徴を有する別のアミノ酸との置換である。

【0060】

いくつかの実施形態では、任意のペプチドの位置３、４、５、６、７、および８の１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、または５個全て）を置換しない。いくつかの実施形態では、任意のペプチドの位置３、４、５、６、７、および８の１つまたは複数は表１中のペプチドのアミノ酸と同一である。

【0061】

表１に記載の配列番号１～１８のいずれか１つから本質的になるか、いずれか１つからなる第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含むペプチドも特徴とする。第１のアミノ酸配列は、例えば、４個以下の置換（保存的置換または非保存的置換）を有し得るか、表１に記載の配列番号１～１８のいずれか１つと少なくとも約６６％（例えば、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、または９０％、またはこれを超える）同一であり得る。

【0062】

ペプチドの第２の相同アミノ酸配列は、一般に、細胞中での配列番号１～１８の免疫原性ペプチドの生成に悪影響を及ぼさない（そして、悪影響を及ぼさないように選択される）。細胞機構は、ペプチド中の任意のさらなる配列が除去されて配列番号１～１８の免疫原性ペプチドが得られると予想され、このペプチドがクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣ分子によって提示されてＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現する癌細胞に対する免疫応答を刺激する。

【0063】

第１のアミノ酸配列に対して「異種の」アミノ酸配列または用語「異種アミノ酸配列」は、天然に存在する第１のアミノ酸配列に隣接するアミノ酸配列以外の任意のアミノ酸配列である。例えば、ヒトＸＢＰ１中のＬＬＲＥＫＴＨＧＬ（配列番号１）に直接隣接する２個以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０、またはこれを超える）および／または２０個未満（例えば、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個）のカルボキシおよび／またはアミノ末端アミノ酸は、配列番号１に対して異種であると見なされない。配列番号１～１８のアミノ酸配列と１００％未満同一であるか１～４個の保存的置換を含む第１のアミノ酸配列を含むペプチドは全く天然に存在し得ないと理解される。

【0064】

いくつかの実施形態では、第２のアミノ酸配列は、単一アミノ酸であり得る。第１のアミノ酸配列に対して「異種の」アミノ酸、すなわち、用語「異種アミノ酸」は、天然に存在する第１のアミノ酸配列に隣接するアミノ酸以外の任意のアミノ酸であると理解される。例えば、ヒトＸＢＰ１中のＬＬＲＥＫＴＨＧＬ（配列番号１）に直接隣接する２個のアミノ酸は、配列番号１に対して異種であると見なされない。

【0065】

異種配列は、例えば、組換えタンパク質（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン（例えば、ヘキサヒスチジン）、血球凝集素（ｈｅｍａｇｌｕｔｔａｎｉｎ）（ＨＡ）、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、またはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ））の精製のために使用される配列であり得る。異種配列はまた、診断用または検出用マーカーとして有用なタンパク質（例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ））であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、別のタンパク質由来のシグナル配列（ＫＤＥＬ（配列番号２３）配列または本明細書中に記載の任意の他の配列など）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、免疫グロブリン分子の全てまたは一部（例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域の全てまたは一部、以下を参照のこと）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、治療ポリペプチドまたは免疫刺激ポリペプチド（例えば、Ｔヘルパーエピトープ（例えば、ＰＡＤＲＥエピトープまたは破傷風トキソイドユニバーサルＴヘルパー細胞エピトープ）またはサイトカインまたはケモカインの全部または一部）、および／または例えば、免疫応答（例えば、抗体生成のため）の誘発で有用なキャリア（例えば、ＫＬＨ）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１つまたは複数のリンカーペプチド配列を含むことができる（以下を参照のこと）。ペプチドはまた、ターゲティングポリペプチドを含むことができる。異種配列は種々の長さであってよく、いくつかの場合、異種アミノ酸配列が付着する第１のアミノ酸配列より長い配列であり得る。第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含むペプチドは配列に関して天然に存在するタンパク質に対応しないと理解される。

【0066】

本明細書中で使用する場合、ターゲティングポリペプチドは、これらが（例えば、第１のアミノ酸配列）に付着する部分を特異的組織（例えば、リンパ節）もしくは細胞（例えば、抗原提示細胞または他の免疫細胞）、または、ｉｎ ｖｉｔｒｏの場合、特異的な単離分子または分子複合体にターゲティングさせるポリペプチドである。ターゲティングポリペプチドは、例えば、抗体（免疫グロブリン）もしくはその抗原結合フラグメントまたは細胞表面受容体のリガンドであり得る。抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、完全なヒト抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、または抗体のＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆｖフラグメント、もしくはｓｃＦｖフラグメントであり得る。Ｆｃ領域（抗原結合領域を含むか含まない）を含むかＦｃ領域である抗体フラグメントを使用して、Ｆｃ受容体発現細胞（例えば、指状嵌入樹状細胞、マクロファージ、単球、またはＢ細胞などの抗原提示細胞）に試薬をターゲティングさせることもできる。細胞表面受容体のリガンドは、例えば、ケモカイン、サイトカイン（例えば、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６）、または細胞死受容体リガンド（例えば、ＦａｓＬまたはＴＮＦα）であり得る。

【0067】

いくつかの実施形態では、異種配列は、例えば、細胞または細胞の特異的区画（例えば、小胞体またはゴルジ装置）へのペプチドの送達を補助する「輸送配列」であり得る。輸送配列には、例えば、膜転位配列、トランスポータン配列、アンテナペディア配列、環状インテグリン結合ペプチド、およびＴａｔ媒介ペプチド、またはこれらの改変バージョンが含まれ得る。

【0068】

リンカーペプチドは、第１のアミノ酸配列を１つまたは複数の異種アミノ酸配列に連結することができる。例えば、リンカーペプチドは、第１のアミノ酸配列を第２のアミノ酸配列に連結することができる。リンカーペプチドは、例えば、少なくとも４～６個のアミノ酸がグリシンであるアミノ酸ストレッチであり得るか、これらを含むことができる。（例えば、Ｍａｎｃｅｂｏら（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：２４９２－２５０２を参照のこと）。リンカーはまた、６個以上（例えば、７、８、９、１０、１１、または１２個、またはこれを超える）ヒスチジン残基であり得るか、これらを含むことができる。リンカーペプチドは、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個、またはこれを超える）プロテアーゼ切断部位を含むことができるか、これらであり得る。プロテアーゼ部位は、例えば、トリプシン、キモトリプシン（ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｉｎ）、または第Ｘａ因子切断部位であり得る。かかるプロテアーゼ部位は、例えば、異種配列から第１のアミノ酸配列を分離するのに有用であり得る。例えば、トリプシンプロテアーゼ切断部位によってポリヒスチジン配列（この場合、精製のために使用した）に連結した第１のアミノ酸配列を含むペプチドの発現および精製後、ポリヒスチジン配列を、ペプチドのトリプシンとの接触によって第１のアミノ酸配列から除去することができる。

【0069】

第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を、種々の方法で相互に会合することができる。本明細書中で使用する場合、２個以上の原子または分子単位の間の相互作用という背景における「～と会合する」には、２個以上の原子または分子単位（例えば、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列）の任意の共有結合または非共有結合、または物理的混合物が含まれる。共有結合（１つまたは複数の価電子対を共有する２個の原子）の化学的性質は当該分野で公知であり、例えば、ジスルフィド結合またはペプチド結合が含まれる。非共有結合は、価電子対を共有しない原子間または分子間の化学結合である。例えば、非共有相互作用には、例えば、疎水性相互作用、水素結合相互作用、イオン結合、ファンデルワールス結合、または双極子－双極子相互作用が含まれる。かかる非共有相互作用の例には、抗体－抗原複合体形成または結合対相互作用（第１および第２の結合対メンバーの相互作用（ストレプトアビジンとビオチンとの間の相互作用など））が含まれる。したがって、用語「～と会合した」（例えば、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列という背景における）は、用語「含む」と同一の広がりを有すると理解される。

【0070】

いくつかの実施形態では、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含むペプチドは融合タンパク質であり得る。例えば、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を、単一の核酸配列によってコードすることができる（そして、単一の核酸配列由来の融合タンパク質として発現することができる）。いくつかの例では、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を、２個以上（例えば、３、４、５、または６個、またはこれを超える）の異なる核酸配列によってコードすることができる。例えば、第１のアミノ酸配列を第１の核酸配列によってコードすることができ、第２のアミノ酸配列を第２の核酸配列によってコードすることができる（以下の「核酸およびペプチドの産生方法」を参照のこと）。

【0071】

個別に発現または産生する場合、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を、多数の公知の化学架橋剤のいずれかを使用して相互に架橋することができる。かかる化学架橋剤の例は、「障害」ジスルフィド結合が含まれる結合を介して２個のアミノ酸残基を連結させる化学架橋剤である。これらの結合では、架橋単位内のジスルフィド結合は、例えば、還元型グルタチオンまたは酵素ジスルフィドレダクターゼの作用によって（いずれかのジスルフィド結合側の基の障害による）還元から防御される。１つの適切な化学架橋剤である４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α（２－ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、一方のアミノ酸配列上の末端リジンおよび他方のアミノ酸配列上の末端システインを使用した２アミノ酸配列間にかかる結合を形成する。ヘテロ二官能性試薬は、各アミノ酸配列上の異なるカップリング部分によって架橋させる。このような方法で、得られた「二量体」は、いずれかのホモ二量体（例えば、２個の第１のアミノ酸配列または２個の第２のアミノ酸配列）またはホモ二量体とヘテロ二量体との混合物よりもむしろヘテロ二量体（第１および第２のアミノ酸配列を含むペプチド）であろう。したがって、第１のアミノ酸配列上のカップリング部分はシステイン残基であり得、他方はリジン残基であり得る。他の有用な架橋剤には、２個のアミノ基（例えば、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド）、２個のスルフヒドリル基（例えば、１，４－ビス－マレイミドブタン）、アミノ基およびスルフヒドリル基（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基およびカルボキシル基（例えば、４－［ｐ－アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、ならびにアルギニン側鎖中に存在するアミノ基およびグアニジウム（ｇｕａｎａｄｉｕｍ）基（例えば、ｐ－アジドフェニルグリオキサール一水和物）に連結する化学物質が含まれるが、これらに限定されない。

【0072】

カップリング部分は、好ましくは、各アミノ酸配列の末端（ＣまたはＮ）に存在するであろう。これらは、上記のように、各アミノ酸配列上のシステイン残基または一方のアミノ酸配列上のシステインおよび他方のアミノ酸配列上のリジンであり得る。カップリング部分が２個のシステイン残基である場合、例えば、アミノ酸配列を酸化条件に曝露することによって架橋することができる。

【0073】

ペプチドは第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含むことができるか、ペプチドは１個を超える（例えば、２、３、４、５、６、７、または８個、またはこれを超える）さらなる異種アミノ酸配列を含むことができる。さらなる異種アミノ酸配列は、第１のアミノ酸配列のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に隣接するか連結することができる。

【0074】

２個を超えるアミノ酸配列が連結される場合、少なくとも１つのアミノ酸配列は１個を超える架橋部分を有することができる。例えば、第１のアミノ酸配列は、アミノ末端およびカルボキシ末端に架橋部分を有することができる。かかる多量体を、「連続的に」構築することができる。したがって、各アミノ酸配列は、鎖中の末端アミノ酸配列のみがドメイン間（または作用因子間）結合に関与する１つの残基を有する一方で、「内部」アミノ酸配列がそれぞれドメイン間結合に関与する２個の部分を有するように次ぎに連結される。あるいは、一方のアミノ酸配列（第１のアミノ酸配列など）を、複数（例えば、２、３、４、または５個）の他のアミノ酸配列に連結することができる。

【0075】

第１の成分が表１に記載の配列番号１～１８のアミノ酸配列からなるか、本質的になる第１の成分および第２の成分を含むペプチド組成物も特徴とする。第２の成分は、例えば、異種アミノ酸配列（上記）、任意の他の抗原性ペプチド（例えば、本明細書中に記載のもの以外のＸＢＰ－１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１ペプチド、検出可能な標識（以下を参照のこと）、治療薬、診断薬、または予防薬（以下を参照のこと）であり得る。例えば、ペプチド組成物は、配列番号１～１８のうちの１つおよび検出可能な標識（放射性核種など）からなるか、本質的になるアミノ酸配列を含むことができる。

【0076】

いくつかの実施形態では、配列番号１～１８のいずれか１つのペプチドは、アミノ末端および／またはカルボキシ末端に異種であるか未変性タンパク質中に存在する２００個まで（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００個）のアミノ酸を有することができると理解される。

【0077】

本明細書中に記載のペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子）に結合することができる。「主要組織適合遺伝子複合体」または「ＭＨＣ」は、生理学的免疫応答を担う細胞相互作用の調節で役割を果たす遺伝子クラスターである。ヒトでは、ＭＨＣはＨＬＡ複合体として公知である（例えば、Ｐａｕｌら，ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９３）およびＳｔｉｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．，ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，８^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌａｎｇｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，Ｃａｌｉｆ．（１９９４）を参照のこと）。

【0078】

本明細書中で使用する場合、「ＨＬＡスーパータイプまたはファミリー」は、共有するペプチド結合特異性に基づいて分類したＨＬＡ分子組をいう。一定のアミノ酸モチーフを保有するペプチドに対していくらか類似の結合親和性を共有するＨＬＡクラスＩ分子を、ＨＬＡスーパータイプに分類する。用語ＨＬＡスーパーファミリー、ＨＬＡスーパータイプファミリー、ＨＬＡファミリー、およびＨＬＡ ｘｘ様分子（ｘｘは特定のＨＬＡ型を示す）は同義語である。ＨＬＡクラスＩ分子の型には、例えば、ＨＬＡ－Ａ１、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ３、ＨＬＡ－Ａ２４、ＨＬＡ－Ｂ７、ＨＬＡ－Ｂ２７、ＨＬＡ－Ｂ４４、ＨＬＡ－Ｂ５８、またはＨＬＡ－Ｂ６２が含まれる。かかるＨＬＡ分子は、米国特許第７，０２６，４４３号（その開示全体が参考として援用される）に詳述されている。

【0079】

ペプチドは、高親和性または中親和性でＭＨＣ分子に結合することができる。本明細書中で使用する場合、ＨＬＡクラスＩ分子へのペプチドの「高親和性」結合を、解離定数（Ｋ_Ｄ）５０ｎＭ未満（例えば、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、１、０．５、０．１、または０．０５未満）での結合と定義する。「中親和性」は、約５０ｎＭと約５００ｎＭとの間（例えば、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、または５００ｎＭ）のＫ_ＤでのＨＬＡクラスＩ分子へのペプチドの結合である。ＨＬＡクラスＩＩ分子へのペプチドの「高親和性」結合を、１００ｎＭ未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、１、０．５、０．１、または０．０５未満）のＫ_Ｄでの結合と定義する。ＨＬＡクラスＩＩ分子に対するペプチドの「中親和性」は、約１００と約１０００ｎＭとの間（例えば、１００、１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、または１０００ｎＭ）のＫ_Ｄでの結合である。ペプチドおよびＭＨＣ分子の結合親和性を決定する方法は当該分野で公知であり、添付の実施例に記載されている。適切な方法は、例えば、米国特許第７，０２６，４４３号にも記載されている。

【0080】

本明細書中に記載のペプチドを、ＭＨＣ分子と会合して、Ｔ細胞上の抗原特異的Ｔ細胞受容体によって認識することもできる。種々の適切な方法を使用して、ペプチドがＭＨＣ分子と会合してＴ細胞上のＴ細胞受容体によって認識されるかどうかを決定することができる。例えば、正常な被験体由来の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、抗原提示細胞存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで数週間にわたって試験ペプチドと培養することができる。ペプチドに特異的なＴ細胞はこの期間中に活性化されるようになり、このＴ細胞を、例えば、増殖アッセイ（^３Ｈ－チミジンアッセイのカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）アッセイ）、限界希釈アッセイ、細胞傷害性アッセイ（例えば、カルセイン放出アッセイ）、またはサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）、リンホカイン－、もしくは^５１Ｃｒ放出アッセイを使用して検出することができる（例えば、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈ，Ｐ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６０３，１９９５；Ｃｅｌｉｓ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２１０５，１９９４；Ｔｓａｉ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１７９６，１９９７；Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５９：１，１９９８（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと）。適切なｉｎ ｖｉｖｏ法は、ペプチドを含むアジュバントをＨＬＡトランスジェニックマウスに皮下投与するＨＬＡトランスジェニックマウスの免疫化を含み、免疫化の数週間後、脾細胞を取り出し、試験ペプチドの存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで約１週間培養する。ペプチド特異的Ｔ細胞を、例えば、^５１Ｃｒ放出アッセイを使用して検出する（例えば、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈ，Ｐ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９７，１９９６；Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈ，Ｐ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６５１，１９９６；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９：４７５３，１９９７（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと）。適切な方法は、添付の実施例にも記載されている。例えば、（ＭＨＣ分子という背景における）ペプチドによるＴ細胞の活性化を、ＣＤ１０７毒性アッセイまたはカルセイン放出アッセイによって決定することができる（例えば、実施例１３および１４を参照のこと）。

【0081】

さらに、抗原特異的Ｔ細胞の直接定量を、検出可能に標識されたＭＨＣ複合体（本明細書中に記載の任意のＭＨＣ分子多量体組成物（以下を参照のこと）など）またはＨＬＡ－Ｉ四量体でのＴ細胞の染色によって行うことができる（例えば、Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０３３０，１９９３ ａｎｄ Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４，１９９６（各開示全体が参考として援用される）に記載）。

【0082】

いくつかの実施形態では、ペプチドの１つまたは複数の性質を調整する（例えば、増加または減少させる）ために、ペプチドを改変することができる（例えば、ペプチドのアミノ酸を置換することができる）。例えば、ＭＨＣ分子に対するペプチドの親和性を増加させるために、表１に記載のペプチドのうちの１つの１つまたは複数の（例えば、２、３、または４個の）アミノ酸を置換することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体とペプチドとの間の結合相互作用（ＭＨＣ分子という背景において）を増強させるために、本明細書中に記載のペプチドのうちの１つのアミノ酸（例えば、ペプチドのアミノ酸残基に接触するＴ細胞受容体）を改変することができる。かかる改変ペプチドを、しばしば、「改変ペプチドリガンド」という。（例えば、Ｋａｌｅｒｇｉｓら（２０００）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（１）：２８０；Ｃｏｎｌｏｎら（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ １８０１および国際公開番号ＷＯ０２０７０００３号（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと。）
適切なペプチドの修飾方法および修飾の影響の決定方法は、添付の実施例に記載され、例えば、Ｃｏｌｌｉｎｓら（Ｉｍｍｕｎｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）１６３：１５１－１６０，（その開示全体が参考として援用される）に記載されている。

【0083】

核酸およびペプチドの産生方法
本開示はまた、上記の任意のペプチドの１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個）をコードする核酸配列（および核酸配列を含む核酸ベクター）およびその産生方法を特徴とする。かかる方法は、任意選択的に、本明細書中に記載の任意のペプチドの１つまたは複数をコードする核酸配列（この核酸配列は発現調節配列に作動可能に連結される）を含む核酸ベクターを含む細胞（または細胞群）を準備する工程およびペプチドを発現させる条件下で細胞を培養する工程を含むことができる。本方法はまた、細胞または細胞を培養した培地から１つまたは複数のペプチドを単離する工程を含むことができる。

【0084】

１つまたは複数の本明細書中に記載のペプチドの組換え発現のための核酸配列およびベクター（例えば、発現ベクター）の適切な構築方法は当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｖｏｌ．１，２ ａｎｄ ３．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ，Ｎｏｖ．１９８９（その開示全体が参考として援用される）に記載されている。核酸およびベクターを使用して、例えば、広範な種々の宿主細胞（例えば、細菌細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞が含まれる）中にペプチドを発現させることができる。核酸およびベクターを、例えば、下記のｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ法で使用することもできる。

【0085】

ペプチドコード配列を、核酸によってコードされるペプチドの発現を指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーエレメントに作動可能に連結することができる。エンハンサーにより、時間、位置、およびレベルに関して発現特異性が得られる。プロモーターと異なり、エンハンサーは、プロモーターが存在する場合に転写開始部位から種々の距離で存在する場合に機能することができる。エンハンサーはまた、転写開始部位の下流または関連遺伝子のエクソン中に存在することができる。コード配列をプロモーターの調節下におくために、プロモーターの１ヌクレオチドと約５０ヌクレオチドとの間の下流（３’）にペプチドの翻訳読み取り枠の翻訳開始部位を配置する必要がある。目的のプロモーターには、サイトメガロウイルスｈＣＭＶ最初期遺伝子、ＳＶ４０アデノウイルスの初期または後期プロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣ系、ＴＲＣ系、ファージＡの主要オペレーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の調節領域、３－ホスホグリセリン酸キナーゼのプロモーター、酸性ホスファターゼのプロモーター、および酵母α接合因子のプロモーター、アデノウイルスＥ１ｂ最小プロモーター、またはチミジンキナーゼ最小プロモーターが含まれるが、これらに限定されない。

【0086】

ペプチドコード配列またはペプチドコード配列を含むベクターは、シグナルペプチドをコードするリーダー配列を含むことができる。リーダー配列は、１つまたは複数の本明細書中に記載のペプチドをコードする配列の５’末端に存在し得る。シグナルペプチドは、所与のペプチドのＮ末端のすぐ後ろに存在し得るか、リーダー配列がペプチドをコードする核酸配列とインフレームで存在する場合、１つまたは複数（例えば、２、３、４、６、８、１０、１５、または２０個）のアミノ酸によってＮ末端から離れていてもよい。一般に分泌前にペプチドから切断されるシグナルペプチド（勿論、シグナルペプチドが膜貫通タンパク質の挿入を指示しない限り）は、付着されるペプチドを翻訳中に宿主細胞小胞体（ＥＲ）の内腔に方向付け、次いで、ペプチドが分泌小胞を介して宿主細胞環境に分泌される。有用なシグナルペプチドには、例えば、サイトカインまたは成長因子の未変性のリーダー配列、ＫＤＥＬ（配列番号２３）または、例えば、米国特許第５，８２７，５１６号（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）に記載の任意のシグナル配列が含まれる。

【0087】

いくつかの実施形態では、ペプチドコード配列の５’末端は、外来ＡＴＧ「開始配列」を含むことができる。すなわち、例えば、ペプチドが適切に転写および翻訳されることを確実にするために、ペプチドをコードする核酸にＡＴＧ配列を付加することができる。リーダー配列が一般にＡＴＧ開始配列を含むにもかかわらず、含まない実施形態では、ＡＴＧ配列を、リーダー配列をコードする核酸の５’末端に付加することができる。

【0088】

ペプチドコード配列および発現ベクターの適切な構築方法は当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｖｏｌ．１，２ ａｎｄ ３．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ，Ｎｏｖ．１９８９（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。

【0089】

組換えベクターを、種々の方法を使用して細胞に導入することができる。これらの方法は、少なくともその一部が、核酸が導入される細胞の型に依存し得る。例えば、細菌細胞を、エレクトロポレーションまたは熱ショックなどの方法を使用して形質転換することができる。酵母細胞のトランスフェクション方法には、例えば、スフェロプラスト技術またはホールセル塩化リチウム酵母形質転換法が含まれる（例えば、米国特許第４，９２９，５５５号；Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：１９２９；Ｉｔｏら（１９８３）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３；米国特許第４，８７９，２３１号；およびＳｒｅｅｋｒｉｓｈｎａら（１９８７）Ｇｅｎｅ ５９：１１５（各開示全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。動物細胞のトランスフェクションは、例えば、リン酸カルシウム、エレクトロポレーション、熱ショック、リポソーム、またはトランスフェクション試薬（ＦＵＧＥＮＥ（登録商標）またはリポフェクタミン（登録商標）など）の使用、または溶液中での裸の核酸ベクターの細胞との接触による細胞へのベクターの導入を特徴とすることができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出を参照のこと）。

【0090】

本明細書中に記載のペプチドの小規模または大規模産生のために使用することができる発現系には、以下などの微生物：組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；組換え酵母発現ベクターで形質転換された真菌（例えば、酵母（例えば、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓおよびＰｉｃｈｉａ））；組換えウイルス発現ベクターを感染させた昆虫細胞系（例えば、バキュロウイルス）；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））を感染させたか、組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；または哺乳動物細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、またはワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）に由来するプロモーターを含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＷＩ３８、およびＮＩＨ ３Ｔ３細胞）が含まれるが、これらに限定されない。哺乳動物から直接獲得し、プラスミドベクターで形質転換されたか、ウイルスベクター（例えば、特に、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、弱毒化ワクシニアウイルス、カナリアポックスウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなどのウイルスベクター）を感染させた初代細胞または第２継代細胞も宿主細胞として有用である。

【0091】

上記のように、本明細書中に記載の任意のペプチドの発現後、ペプチドを、標準的技術を使用して培養細胞または細胞が培養された培地から単離することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出を参照のこと）。タンパク質の単離方法は当該分野で公知であり、例えば、液体クロマトグラフィ（例えば、ＨＰＬＣ）、アフィニティクロマトグラフィ（例えば、金属キレート化または免疫アフィニティクロマトグラフィ）、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、沈殿、または差時的可溶化が含まれる。

【0092】

より小さなペプチド（例えば、２００個未満（例えば、１７５個未満、１５０個未満、１２５個未満、１００個未満、９０個未満、８０個未満、７０個未満、または６０個未満）のアミノ酸を有するペプチド）を、ＦＭＯＣ固相合成などの標準的な化学的手段によって化学合成することができる（実施例１を参照のこと）。

【0093】

本明細書中に記載のペプチドを、単離することができるが、必須ではない。本明細書中に記載の任意のペプチドに適用する場合、用語「単離された」は、天然に伴う成分（例えば、タンパク質または天然に存在する生体分子または有機分子）から単離または精製されたペプチド、そのフラグメント、（または、組成物については高分子複合体）をいう。組換え分子（例えば、組換えペプチド）は常に「単離されている」と理解される。典型的には、調製物中の同型の総分子の少なくとも６０重量％（例えば、サンプル中の同型の総分子の６０％）を構成する場合、ペプチド（またはフラグメントもしくは高分子複合体）は単離されている。例えば、調製物またはサンプル中の総タンパク質の少なくとも６０重量％を構成する場合、本明細書中に記載のペプチドを単離されたと見なす。いくつかの実施形態では、調製物中の分子は、調製物中の同型の総分子の少なくとも７５重量％、少なくとも９０重量％、または少なくとも９９重量％からなる。

【0094】

同様に、本明細書中に記載のペプチドコード配列またはペプチドコード配列を含むベクターも単離することができる。本明細書中に記載の任意のペプチドコード配列またはベクターに適用する場合、用語「単離された」は、天然に伴う成分（例えば、核酸、タンパク質、または他の天然に存在する生体分子または有機分子）から分離または精製されたペプチドコード配列またはベクター、そのフラグメントをいう。組換え分子（例えば、組換えベクターまたはペプチドコード配列）は常に「単離されている」と理解される。典型的には、調製物中の同型の総分子の少なくとも６０重量％（例えば、サンプル中の同型の総分子の６０％）を構成する場合、ペプチドコード配列またはベクター（またはそのフラグメント）は単離されている。例えば、調製物またはサンプル中の総核酸の少なくとも６０重量％を構成する場合、本明細書中に記載のペプチドコード配列またはベクターを単離されたと見なす。いくつかの実施形態では、調製物中の分子は、調製物中の同型の総分子の少なくとも７５重量％、少なくとも９０重量％、または少なくとも９９重量％からなる。

【0095】

いくつかの実施形態では、単離ペプチド、ペプチドコード配列、またはベクターを、凍結、凍結乾燥、または固定し、分子が活性（例えば、ペプチドがＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩ分子など）に結合する能力またはベクターが細胞中のペプチドの発現を補助する能力）を保持できる適切な条件下で保存することができる。

【0096】

ペプチドのさらなるプロセシング
本明細書中に記載の任意のペプチドの発現または合成後、ペプチドをさらにプロセシングすることができる。さらなるプロセシングはペプチドに対する化学的または酵素的改変を含むことができるか、ペプチドを改変する場合、プロセシングは既存の改変の酵素的または化学的変更またはその両方を含むことができる。ペプチドのさらなるプロセシングは、異種アミノ酸配列（上記の任意の異種アミノ酸配列などであるが、これらに限定されない）の付加（共有結合的または非共有結合的連結）を含むことができる。酵素処置は、例えば、ペプチドが修飾される条件下での１つまたは複数のプロテアーゼ、ホスファターゼ、またはキナーゼとのペプチドの接触を含むことができる。酵素処置は、ペプチドのグリコシル化またはグリコシル化の改変が可能な１つまたは複数の酵素（例えば、オリゴサッカリルトランスフェラーゼまたはマンノシダーゼ）とのペプチドの接触を含むことができる。

【0097】

プロセシングは、例えば、検出可能な標識のペプチドへの付加を含むことができる。例えば、ペプチドを、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ）、蛍光物質（例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン、フルオレセイン、ダンシルクロリド、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、またはフィコエリトリン）、発光物質（例えば、ランタニドまたはそのキレート）、生体発光物質（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、またはエクオリン）、または放射性核種（例えば、^３Ｈ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^１２５Ｉ、または^３５Ｓ）で検出可能に標識することができる。

【0098】

プロセシングはまた、ポリマー（例えば、ポリアルキレングリコール部分（ポリエチレングリコール部分など））へのペプチドのカップリングを含むことができる。いくつかの実施形態では、ポリマーを、ペプチド上のＮ末端である部位にてポリペプチドにカップリングする。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ポリマーを抱合することができる内部ポリマー抱合部位が得られる１つまたは複数の内部アミノ酸挿入を含むことができる。

【0099】

薬学的組成物
任意の本明細書中に記載のペプチドおよびペプチドをコードする核酸を、薬学的組成物に組み込むことができる。かかる組成物は、典型的には、１つまたは複数のペプチド（および／またはペプチドをコードする核酸）および薬学的に許容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用する場合、用語「薬学的に許容可能なキャリア」には、薬学的投与に適合する溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。１つまたは複数のペプチドを、シロップ、エリキシル、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、水溶液、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、乳濁液などの形態の薬学的組成物として処方することができる。補助的活性化合物（例えば、１つまたは複数の化学療法薬）を組成物に組み込むこともできる。

【0100】

薬学的組成物を、一般に、その意図する投与経路に適合するように処方する。投与経路の例には、経口、直腸、および非経口（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、吸入、経皮、または経粘膜）が含まれる。非経口適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含むことができる：滅菌希釈剤（注射用蒸留水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒など）、抗菌薬（ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど）、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸など）、緩衝液（酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、またはリン酸緩衝液など）、および張度調整剤（塩化ナトリウムまたはデキストロースなど）。塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基でｐＨを調整することができる。組成物を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または多用量バイアル中に封入することができる。

【0101】

注射に適切な薬学的組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および滅菌注射液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与のために、適切なキャリアには、生理食塩水、静菌化蒸留水、クレモフォールＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合、薬学的組成物は無菌でなければならず、容易にシリンジ中に存在する範囲の流動物であるべきである。製造および保存条件下で安定であるべきであり、微生物（細菌および真菌など）によるいかなる汚染に対しても保存されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびその安定な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合の必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。微生物による汚染の防止を、種々の抗菌薬および抗真菌薬（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチロメサールなど）によって行うことができる。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖、多価アルコール（マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなど）、塩化ナトリウム）を含めることが望ましいであろう。注射用組成物の吸収の延長を、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に含めることによって促進することができる。

【0102】

滅菌注射液を、上記列挙の１成分または成分の組み合わせと共に適切な溶媒中に必要量の１つまたは複数のペプチド（またはペプチドをコードする１つまたは複数の核酸）を組み込み、必要に応じて、その後に濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、上記列挙の基剤となる分散媒および必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルへのペプチド（またはペプチドをコードする核酸）の組み込みによって分散液を調製する。滅菌注射液調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、その予め濾過滅菌した溶液から有効成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる真空乾燥または凍結乾燥を含むことができる。

【0103】

経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。経口治療的投与のために、１つまたは複数のペプチドを賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセル（例えば、ゼラチンカプセル）の形態で使用することができる。経口組成物を、含嗽剤として使用するための流動物キャリアを使用して調製することもできる。薬学的に適合する結合剤および／またはアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、カプセル、およびトローチなどは、任意の以下の成分または類似の性質の化合物を含むことができる：結合剤（微結晶性セルロース、トラガカントゴム、またはゼラチンなど）、賦形剤（デンプンまたはラクトースなど）、崩壊剤（アルギン酸、プリモゲル、またはトウモロコシデンプンなど）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、またはステロートなど）、流動促進剤（コロイド状二酸化ケイ素など）；甘味剤（スクロースまたはサッカリンなど）；または香味剤（ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバーなど）
粉末および錠剤は、１％～９５％（ｗ／ｗ）の各ペプチドまたは２つ以上のペプチドの混合物を含むことができる。一定の実施形態では、ペプチドは、約５％～７０％（ｗ／ｗ）の範囲であり得る。適切なキャリアは、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、およびカカオバターなどである。用語「調製」は、キャリアとしてのカプセル化材料でのペプチド（または核酸）の処方を含むことを意図する。この処方により、他のキャリアを含むか含まないペプチドがキャリアで取り囲まれ、それにより、ペプチドが組み込まれるカプセルが得られる。同様に、カシェおよびロゼンジが含まれる。錠剤、粉末、カプセル、丸薬、カシェ、およびロゼンジを、経口投与に適切な固体投薬形態として使用することができる。

【0104】

経口使用に適切な水溶液を、水への活性成分の溶解および適切な所望の着色剤、フレーバー、安定剤，増粘剤の添加によって調製することができる。経口使用に適切な水性懸濁液を、粘着性物質（天然ゴムまたは合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤など）を有する水への微粉化した活性成分の分散によって作製することができる。

【0105】

吸入による投与のために、ペプチドまたは核酸を、適切な噴射剤（例えば、二酸化炭素などのガス）を含む加圧容器またはディスペンサーまたは噴霧器からエアゾールスプレーの形態で送達することができる。

【0106】

経粘膜手段または経皮手段によって全身投与することもできる。経粘膜投与または経皮投与のために、浸透すべきバリアに適切な浸透剤を処方物中で使用する。かかる浸透剤は当該分野で一般に公知であり、例えば、経粘膜投与のための界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。鼻内噴霧または座剤の使用によって経粘膜投与を行うことができる。経皮投与のために、ペプチドまたは核酸を、当該分野で一般に公知の軟膏、蝋膏、ゲル、またはクリームに処方することができる。

【0107】

ペプチドまたは核酸を、直腸送達のための座剤（例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の座剤の基剤を使用）または停留浣腸の形態で調製することもできる。

【0108】

１つの実施形態では、ペプチドまたは核酸を、体内からの急速な排出からペプチドを防御するキャリア（制御放出処方物（埋没物およびマクロカプセル化送達系が含まれる）など）を使用して調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマー（エチレンビニルアセタート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、およびポリ乳酸など）を使用することができる。かかる処方物の調製方法は当業者に明らかであろう。材料を、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入することもできる。リポソーム懸濁液（例えば、ＡＰＣ特異的抗原に対するモノクローナル抗体を使用してＡＰＣにターゲティングしたリポソームが含まれる）を、薬学的に許容可能なキャリアとして使用することもできる。これらを、当業者に公知の方法（例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の方法）にしたがって調製することができる。

【0109】

投与が容易であり、且つ一様に投薬するための投薬単位形態での経口組成物または非経口組成物を処方することが有利であり得る。本明細書中で使用する場合、投薬単位形態は、処置すべき被験体のための単位投薬として適切な物理的に個別の単位をいい、各単位は、必要な薬学的キャリアと関連して所望の治療効果が得られるように計算された所定量のペプチド（または核酸）を含む。投薬単位は、使用説明書を同封することもできる。

【0110】

ペプチドをコードする核酸分子をベクターに挿入し、遺伝子療法ベクター（上記）として使用することができる。遺伝子療法ベクターを、例えば、静脈内注射、局所投与（例えば、米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）によるか、定位注射（例えば、Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３０５４－３０５７を参照のこと）によって被験体に送達することができる。遺伝子療法ベクターの薬学的調製物は、許容可能な希釈剤中に遺伝子療法ベクターを含むことができるか、遺伝子送達ビヒクルが包埋された遅延放出マトリックスを含むことができる。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターを組換え細胞（例えば、レトロウイルスベクター）からインタクトに産生することができる場合、薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１つまたは複数の細胞を含むことができる（以下の「Ｅｘ Ｖｉｖｏ法）を参照のこと）。

【0111】

遺伝子送達ビヒクルのさらなる例には、リポソーム、生体適合性ポリマー（天然高分子および合成高分子が含まれる）、リポタンパク質、ポリペプチド、ポリサッカリド、リポ多糖、人工ウイルスエンベロープ、金属粒子、細菌、ウイルス（バキュロウイルス、アデノウイルス、およびレトロウイルスなど）、バクテリオファージ、コスミド、プラスミド、真菌ベクター、ならびに種々の真核宿主および原核宿主中での発現について記載した当該分野で典型的に使用され、且つ遺伝子療法および簡潔なタンパク質発現のために使用することができる他の組換えビヒクルが含まれるが、これらに限定されない。

【0112】

ウイルスベクターの例には、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターなどが含まれる。抗体またはそのフラグメントなどのターゲティング部分を含むリポソームを使用して、被験体への送達のための核酸の薬学的組成物を調製することもできる。

【0113】

本明細書中に記載の任意の薬学的組成物を、下記のように投与のための説明書と共に容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。

【0114】

ＭＨＣ分子多量体組成物およびこの組成物の使用方法
本開示はまた、（ｉ）１つまたは複数の上記の任意のペプチドおよび（ｉｉ）主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子多量体を含む組成物を特徴とする。多量体は、２個以上の（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）ＭＨＣ分子全体またはＭＨＣ分子のペプチド結合領域を含む。１つまたは複数のペプチドを、ＭＨＣ分子多量体に会合（例えば、共有結合または非共有結合）することができる。

【0115】

多量体のＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子（例えば、ＨＬＡ－Ａ２分子）またはＭＨＣクラスＩＩ分子であり得る。ＭＨＣ分子は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、非ヒト霊長類、ヒト、または本明細書中に記載の任意の他の哺乳動物）のＭＨＣ分子であり得る。

【0116】

多量体中の２個以上のＭＨＣ分子（またはＭＨＣ分子のペプチド結合領域）は、同一のＭＨＣ分子または異なるＭＨＣ分子に由来し得る。例えば、ＭＨＣ分子多量体は、５個のＭＨＣ分子を含むことができ、そのうちの３個は同一のＭＨＣ分子であり、そのうちの２個は最初の３個と異なる。別の例では、多量体の各ＭＨＣ分子は異なる。ＭＨＣ分子の少なくとも１個は、ペプチドの少なくとも１個に結合することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、上記組成物は、少なくとも２個（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１５個、またはこれを超える）の本明細書中に記載の任意のペプチドを含むことができる。

【0118】

組成物を、検出可能な標識と会合することもできる。例えば、多量体の１つまたは複数のＭＨＣ分子を、検出可能な標識に共有結合または非共有結合することができる。適切な検出可能な標識（例えば、酵素、蛍光物質、発光物質、生体発光物質、または放射性核種）および検出可能な標識をペプチドまたはＭＨＣ分子に連結する方法は上に記載されている。

【0119】

ＭＨＣ多量体組成物を、以下のように上記ペプチドを使用して生成することができる：ＨＬＡ分子に結合するペプチドを対応するＨＬＡ重鎖およびβ_２－ミクログロブリンの存在下で再折り畳みして、三分子複合体を生成する。次いで、複合体を、予め重鎖に操作した部位の重鎖のカルボキシル末端でビオチン化する。次いで、ストレプトアビジンの添加により多量体形成を誘導する。

【0120】

Ｔ細胞受容体が広範な種々の他のペプチド－ＭＨＣ複合体のうちの標的細胞上の特異的ペプチド－ＭＨＣ複合体を認識することができるので、本明細書中に記載のＭＨＣ多量体組成物を使用して、例えば、無関係のＴ細胞集団中の抗原特異的Ｔ細胞を検出することができる（以下を参照のこと）。かかるアッセイのために、多量体を、一般に、検出可能に標識するであろう（上記を参照のこと）。

【0121】

例えば、多量体ＭＨＣ分子／ペプチド複合体をアッセイで使用して、免疫原への曝露後の抗原特異的ＣＴＬの存在について末梢血単核球を評価することができる。ＭＨＣ多量体複合体を使用して、抗原特異的ＣＴＬを直接視覚化し（例えば、Ｏｇｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７９：２１０３－２１０６，１９９８およびＡｌｔｍａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ １７４：９４－９６，１９９６を参照のこと）、末梢血単核球サンプル中の抗原特異的ＣＴＬ集団の頻度を決定することができる。１つの例では、ＭＨＣ多量体の多量体化のために使用した検出可能に標識されたストレプトアビジンを使用して、多量体のＭＨＣ分子／ペプチド複合体に結合するＴ細胞を標識することができる。これを行うために、多量体で処置した細胞を、例えば、標識（例えば、ビオチンに抱合したフルオロフォア）に曝露する。次いで、細胞を、例えば、フローサイトメトリーを使用して容易に単離または検出することができる。

【0122】

適用
本明細書中に記載のペプチド（およびその薬学的組成物）、組成物を含むＭＨＣ多量体、キット、および製造品を、種々の方法で使用することができる。例えば、ペプチドを使用して、（ｉ）被験体（例えば、癌を有する被験体）において免疫応答を誘導し、（ｉｉ）培養物中でＴ細胞を活性化し、そして／または（ｉｉｉ）多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの癌を処置またはさらに防止することができる。上記のように、組成物を含むＭＨＣ多量体を使用して、例えば、無関係のＴ細胞集団中の抗原特異的Ｔ細胞を検出することができる。

【0123】

ペプチド（またはその薬学的組成物）、組成物を含むＭＨＣ多量体、キット、または製造品の有用性は本明細書中に記載の特定の実施形態に決して制限されないが、これらの試薬を使用することができる例示的方法を以下に示す。

【0124】

免疫応答の誘導方法
本開示はまた、被験体における免疫応答の種々の誘導方法を特徴とする。被験体における免疫応答の誘導方法は、本明細書中に記載の任意のペプチド（またはペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクター）（あるいは１つまたは複数の本明細書中に記載のペプチド（またはベクター）を含む任意の薬学的組成物）の１つまたは複数を被験体に投与する工程を含むことができる。任意の本明細書中に記載のペプチドを使用して、１つまたは複数の本明細書中に記載のペプチドをコードする核酸発現系の使用によって免疫応答を刺激することができる。すなわち、被験体における免疫応答の誘導方法は、１つまたは複数の本明細書中に記載のペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクター（または発現ベクターを含む薬学的組成物）を被験体に投与する工程を含むことができる。免疫応答は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、Ｔ_Ｈ１応答、Ｔ_Ｈ２応答、または両応答型の組み合わせであり得る。

【0125】

任意の上記方法はまた、例えば、被験体における癌（例えば、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの形質細胞障害、またはＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現する任意の他の癌）を処置または防止（予防）する方法であり得る。用語「防止する」、「防止すること」、または「防止」を、本明細書中で、所与の容態のための所与の処置に関連して使用する場合、この用語は、処置された被験体が臨床的に観察可能なレベルの容態を全く発症しないか（例えば、被験体が容態の１つまたは複数の症状を示さないか、癌の場合、被験体が検出可能なレベルの癌を発症しない）、被験体における容態が処置しなかった場合よりもゆっくりおよび／または低い程度（例えば、被験体における症状がより少ないか、癌細胞数がより少数である）で発症することを意味する。これらの用語は、被験体がいかなる容態の態様も経験しない状況に単に制限されない。例えば、容態（進行癌）の所与の徴候が生じると予想される癌の早期診断（例えば、被験体由来のサンプル中の少数の癌細胞の検出）中に処置し、別で予想されるよりも被験体がより少数および／または軽度の容態の症状を経験する場合、処置により容態が「防止された」というであろう。被験体の癌の明らかな症状が軽度でしかない場合、処置により、癌（例えば、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの形質細胞障害）を「防止する」ことができる。「防止」は、このように処置された被験体によって１つの癌細胞でさえ生じなかったに違いないということを意味しない。

【0126】

一般に、被験体に送達されたペプチドは、薬学的に許容可能なキャリア（例えば、生理食塩水）中に懸濁され、経口、直腸、または非経口で投与されるであろう（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、髄腔内、腹腔内、直腸内、膣内、鼻腔内、胃内，気管内、または肺内に注射されるであろう（以下を参照のこと）。

【0127】

薬学的組成物の定期的ボーラス注射によって投与することができるか、外部（例えば、ＩＶバッグ）または内部（例えば、生体内分解性（ｂｉｏｅｒｏｄａｂｌｅ）埋没物、生体人工臓器、または植え込んだ試薬産生細胞のコロニー）に存在するリザーバからの静脈内または腹腔内投与によって不断的または連続的に投与することができる。例えば、米国特許第４，４０７，９５７号、同第５，７９８，１１３号、および同第５，８００，８２８号（それぞれの全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。

【0128】

治療核酸の従来の薬学的に許容可能な投与経路には、筋肉内経路、皮下経路、皮内経路、経皮経路、静脈内経路、直腸経路（例えば、浣腸、坐薬）、経口経路、胃内経路、鼻腔内経路、および有効な吸入経路の他の経路、ならびに他の非経口投与経路が含まれるが、必ずしもこれらに限定されない。投与経路を組み合わせることができるか、必要に応じて、核酸分子および／または免疫応答に及ぼす所望の影響に応じて調整することができる。被験体への核酸の投与方法には、種々の周知の技術（ベクター媒介遺伝子移入（例えば、ウイルス感染／トランスフェクションまたは種々の他のタンパク質ベースもしくは脂質ベースの遺伝子送達複合体）など）ならびに「裸の」ポリヌクレオチドの送達を容易にする技術（エレクトロポレーション、「遺伝子銃」送達、および被験体または被験体の細胞へのポリヌクレオチドの導入のために使用される種々の他の技術など）が含まれ得る。

【0129】

一般に、ペプチドまたは核酸の必要とされる投薬量は、投与経路の選択、処方物の性質、被験体の疾病の性質または重症度、被験体の免疫状態、被験体のサイズ、体重、表面積、年齢、および性別、投与される他の薬物、ならびに担当する医療専門家の判断に依存する。

【0130】

免疫応答誘導に適切なペプチドの投薬量は、被験体１ｋｇあたり、０．０００００１～１０ｍｇの試薬または抗原性／免疫原性組成物の範囲である。種々の試薬および種々の投与経路の有効性の相違を考慮して、必要な投薬量は非常に変化すると予想される。例えば、経鼻投与または直腸投与には、静脈内注射による投与より高い投薬量が必要であり得る。これらの投薬レベルの変動を、当該分野で十分に理解されている至適化のための標準的な経験による日常業務を使用して調整することができる。投与は単回または複数回であり得る（例えば、２、３、４、６、８、１０、２０、５０、１００、１５０、またはこれを超える回数）。例えば、ペプチドを初回免疫として投与し、次いで、追加免疫として１回または複数回投与することができる。

【0131】

本明細書中に記載の方法という背景における被験体への核酸の投与用量は、長期間にわたる被験体における有利な治療応答を得るためか、症状を緩和するために十分であるべきである。例えば、被験体または達成すべき臨床的目的に依存して使用投薬量が変化するにもかかわらず（以下を参照のこと）、適切な投薬量範囲は、約１μｇまで、約１，０００μｇまで、約５，０００μｇまで、約１０，０００μｇまで、約２５，０００μｇまで、または約５０，０００μｇの核酸／ｍｌキャリアの単回投薬量が得られる範囲である。

【0132】

治療効率（例えば、被験体における免疫応答を誘導するための１つまたは複数のペプチドまたはペプチドをコードする核酸の効率）を最適にするために、ペプチドまたは核酸を含む組成物を、異なる投与レジメンで最初に投与することができる。単位用量およびレジメンは、例えば、哺乳動物の種、その免疫状態、哺乳動物の体重が含まれる要因に依存する。

【0133】

薬学的組成物（例えば、本明細書中に記載の１つまたは複数のペプチドあるいは１つまたは複数のペプチドをコードする１つまたは複数の核酸配列を含む薬学的組成物）のための投与頻度は、医療従事者（例えば、医師または看護士）の技術および臨床判断の範囲内である。典型的には、投与レジメは、至適な投与パラメーターを確立することができる臨床試験によって確立される。しかし、従事者は、被験体の年齢、健康状態、体重、性別、および医学的状態に応じてかかる投与レジメを変化させることができる。

【0134】

いくつかの実施形態では、薬学的組成物を、少なくとも２回（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、または２０回、またはこれを超える回数）被験体に投与することができる。例えば、薬学的組成物を、１ヶ月に１回を３ヶ月間、１週間に１回を１ヶ月間、１年に１回を３年間、１年に１回を５年間、５年毎に１回、１０年毎に１回、または３年毎に１回を一生被験体に投与することができる。

【0135】

いくつかの実施形態では、試薬を、免疫調節薬（Ｔｏｌｌ受容体リガンドまたはアジュバントなど）と共に投与することができる（以下を参照のこと）。

【0136】

本明細書中で定義する場合、ペプチドまたはペプチドをコードする核酸の「治療有効量」は、処置した被験体において免疫応答を生じることができるペプチドまたは核酸の量である。ペプチドの治療有効量（すなわち、有効投薬量）には、被験体またはサンプルの重量１キログラムあたりのミリグラム、マイクログラム、ナノグラム、またはピコグラム量の試薬が含まれる（例えば、約１ナノグラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１マイクログラム／キログラム～約５００ミリグラム／キログラム、約１００マイクログラム／キログラム～約５ミリグラム／キログラム、または約１マイクログラム／キログラム～約５０マイクログラム／キログラム）。核酸の治療有効量には、被験体またはサンプル重量１キログラムあたりのマイクログラム、ナノグラム、またはピコグラム量の試薬も含まれる（例えば、約１ナノグラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１マイクログラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１００マイクログラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、または約１マイクログラム／キログラム～約５０マイクログラム／キログラム）。

【0137】

本明細書中で定義する場合、ペプチドまたはペプチドをコードする核酸の「予防有効量」は、処置した被験体中の癌細胞（例えば、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の細胞）に対して免疫応答を生じることができるペプチドまたは核酸の量である。この免疫応答は、被験体における癌の発症を防止することができるか、被験体が癌を発症するか発症し続ける機会を実質的に軽減することができる（上記を参照のこと）。ペプチドの予防有効量（すなわち、有効投薬量）には、被験体またはサンプルの重量１キログラムあたりのミリグラム、マイクログラム、ナノグラム、またはピコグラム量の試薬が含まれる（例えば、約１ナノグラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１マイクログラム／キログラム～約５００ミリグラム／キログラム、約１００マイクログラム／キログラム～約５ミリグラム／キログラム、または約１マイクログラム／キログラム～約５０マイクログラム／キログラム）。核酸の予防有効量には、被験体またはサンプル重量１キログラムあたりのマイクログラム、ナノグラム、またはピコグラム量の試薬も含まれる（例えば、約１ナノグラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１マイクログラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、約１００マイクログラム／キログラム～約５００マイクログラム／キログラム、または約１マイクログラム／キログラム～約５０マイクログラム／キログラム）。

【0138】

被験体は、抗原に対して免疫応答を生じることができる任意の動物（哺乳動物（例えば、ヒト（例えば、ヒト患者）または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、ヒヒ、またはサル）、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ウマ、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、またはヤギ）、イヌ、ネコ、またはクジラ）などであるが、これらに限定されない）であり得る。被験体は、癌（多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症など）またはＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現する任意の他の癌型を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある被験体であり得る。被験体は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症からの寛解にある被験体であり得る。

【0139】

本方法はまた、１つまたは複数のペプチド（または核酸）を被験体に投与する前に、被験体の癌（例えば、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの形質細胞障害）の１つまたは複数の癌細胞がＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程を含むことができる。これらのタンパク質の発現には、ｍＲＮＡ発現およびタンパク質発現の両方が含まれる。細胞中のタンパク質発現およびｍＲＮＡ発現の検出方法は当該分野で公知であり、例えば、タンパク質検出のための酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンおよびドットブロッティング技術、または免疫組織化学技術、およびｍＲＮＡ検出のための逆転写－ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）またはノーザンブロッティング技術が含まれる（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，前出を参照のこと）。

【0140】

本方法はまた、１つまたは複数の化学療法薬、電離放射線の１つまたは複数の形態、あるいは１つまたは複数の免疫調節薬を被験体に投与する工程を含むことができる。電離放射線の１つまたは複数の形態は、γ線照射、Ｘ線照射、またはβ線照射であり得る。１つまたは複数の化学療法薬を、シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトセシン、アドリアマイシン、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド、ベラムピル、ポドフィロトキシン、タモキシフェン、タキソール、サリドマイド、レナリドマイド、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、ｈｓｐ９０インヒビター（例えば、タネスピンマイシン）、トランス白金、５－フルオロウラシル（５－ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ）、メトトレキサート、または上記のいずれかのアナログからなる群より選択することができる。免疫調節薬には、例えば、種々のケモカインおよびサイトカイン（インターロイキン ２（ＩＬ－２）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、およびインターロイキン １２（ＩＬ－１２）など）が含まれる。

【0141】

被験体は、多発性骨髄腫またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症などの癌を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがあり得る。「癌を有する疑いがある」被験体は、癌の１つまたは複数の症状を有する被験体である。癌の症状は当業者に周知であり、一般に、疼痛、体重減少、脱力感、過剰な疲労、摂食困難、無食欲、慢性咳嗽、息切れの悪化、喀血、血尿、血便、嘔気、嘔吐、腹部膨満、鼓脹，腹膜腔中の液体、膣出血、便秘、腹部膨隆、結腸の穿孔、急性腹膜炎（感染、発熱、疼痛）、疼痛、吐血、大量の発汗、発熱、高血圧、貧血、下痢、黄疸、眩暈、悪寒、筋攣縮、および嚥下困難などが含まれるが、これらに限定されない。多発性骨髄腫の症状には、具体的には、例えば、骨痛（例えば、背中または肋骨中）、高レベルの血中カルシウム、過度の口渇または排尿、便秘、嘔気、無食欲、錯乱、脚の脱力感またはしびれ、体重減少、または反復性感染症が含まれる。ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を示す症状には、例えば、脱力感、リンパ節の腫脹、重度の疲労、鼻出血、体重減少、神経学的問題が含まれる。

【0142】

本明細書中で使用する場合、「癌の発症するリスクがある」被験体は、癌を発症する素因（すなわち、腫瘍抑制遺伝子の変異（例えば、ＢＲＣＡ１、ｐ５３、ＲＢ、またはＡＰＣの変異）などの癌を発症する遺伝的素因）を有するか、条件にさらされていたか、現在条件にさらされており、それによって癌に罹患し得る被験体である。したがって、被験体はまた、被験体が変異原性または発癌性レベルの一定の化合物（例えば、紙巻きタバコ中の発癌性化合物（アクロレイン、４－アミノビフェニル、芳香族アミン、ベンゼン、ベンズ｛ａ｝アントラセン、ベンゾ｛ａ｝ピレン、ホルムアルデヒド、ヒドラジン、ポロニウム－２１０（ラドン）、ウレタン、または塩化ビニルなど））に曝されている場合、「癌の発症するリスクがある」被験体であり得る。被験体が、例えば、大量の紫外線またはＸ線照射に曝されたか、腫瘍を引き起こす／関連するウイルス（パピローマウイルス、エプスタイン・バーウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、またはヒトＴ細胞白血病－リンパ腫ウイルスなど）に曝された（例えば、感染した）場合、被験体は、「癌の発症するリスクにあり」得る。さらに、被験体が炎症（例えば、慢性炎症）に罹患している場合、被験体は、「癌の発症するリスクにあり」得る。例えば、被験体が意義未確定の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）を有する場合、被験体は多発性骨髄腫の発症するリスクがあり得る。

【0143】

上記から、「癌を有する疑いがある」または「癌の発症するリスクがある」被験体は、目的の種内の全ての被験体というわけではないことが明らかであろう。

【0144】

いくつかの実施形態では、本方法はまた、被験体へのペプチドまたは核酸の投与後に被験体で免疫応答が起こったかどうかを決定する工程を含むことができる。被験体において免疫応答が起こったかどうかを決定するための適切な方法は、例えば、被験体由来の生物サンプル中のペプチドに特異的な抗体の存在を検出するための免疫アッセイの使用を含む。例えば、被験体へのペプチドの投与後、生物サンプル（例えば、血液サンプル）を被験体から得て、ペプチドに特異的な抗体の存在について試験することができる。免疫応答を、サンプル中の活性化Ｔ細胞の存在または量のアッセイによって検出することもできる。かかるアッセイには、例えば、増殖アッセイ、限界希釈アッセイ、細胞傷害性アッセイ（例えば、リンホカインまたは^５１Ｃｒ放出アッセイ）が含まれる（上記）。

【0145】

いくつかの実施形態では、本方法はまた、被験体が癌を有するかどうかを決定する工程を含むことができる。適切なかかる決定方法は、被験体中で検出すべき癌の型に依存するが、これは、当該分野で公知である。かかる方法は定性的または定量的であり得る。例えば、医療従事者は、被験体が多発性骨髄腫の２つ以上の（例えば、３、４、５、または６つまたはこれを超える）症状（本明細書中に記載の任意の症状など）を示す場合、被験体は多発性骨髄腫を有すると診断することができる。被験体の血中カルシウムレベル、白血球数または赤血球数、または尿中タンパク質量の測定によって、被験体が多発性骨髄腫を有することを決定することもできる。

【0146】

ｅｘ ｖｉｖｏアプローチ。被験体における免疫応答のｅｘ ｖｉｖｏ誘導ストラテジーは、被験体から得た適切なＡＰＣ（例えば、樹状細胞、単球、またはマクロファージ）を任意の本明細書中に記載のペプチドと接触させる工程を含むことができる。あるいは、細胞を、１つまたは複数のペプチドをコードする核酸（例えば、発現ベクター）でトランスフェクトし、任意選択的に、ペプチドを発現させる期間および条件下で培養することができる。トランスフェクション方法は、細胞および細胞にトランスフェクトされる核酸の型に依存するであろう（上記の「核酸およびペプチドの産生方法」およびＳａｍｂｒｏｏｋら，前出も参照のこと）。接触またはトランスフェクション後、細胞を被験体に戻す。

【0147】

細胞は、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子を発現する広範な種々の型のいずれかであり得る。例えば、細胞には、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｔ細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、または細胞傷害性Ｔ細胞）、またはＢ細胞が含まれ得る。

【0148】

ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫応答の刺激方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで（例えば、被験体から得たリンパ球集団中の）Ｔ細胞を、本明細書中に記載のペプチドの１つに結合したＭＨＣ分子を発現する抗原提示細胞と、Ｔ細胞の活性化に十分な期間（および条件下で）接触させる工程を含むことができる。接触後、活性化したＴ細胞を、この細胞を得た被験体に再導入する。本明細書中に記載のペプチドのうちの１つに結合したＭＨＣ分子を発現するＡＰＣの生成方法を、本項の上に記載している。

【0149】

任意のｅｘ ｖｉｖｏ法のいくつかの実施形態では、細胞を、本被験体以外の同種の被験体（同種間）から得て、これを試薬（または免疫原性／抗原性組成物）と接触させ、被験体に投与することができる。

【0150】

被験体における抗体の産生方法
免疫原（例えば、１つまたは複数の本明細書中に記載の任意のペプチド）に特異的な抗体の産生方法は当該分野で公知であり、以下で詳述している。例えば、本明細書中に記載のペプチドに特異的な抗体または抗体フラグメントを、例えば、動物を使用した免疫化またはファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ法によって生成することができる。本明細書中に記載のペプチドの全部または一部を使用して、抗体または抗体フラグメントを生成することができる。

【0151】

ペプチドを使用して、ペプチドでの適切な被験体（例えば、ウサギ、ヤギ、マウス、または他の哺乳動物（ヒトなど））の免疫化によって抗体を調製することができる。適切な免疫原性調製物は、例えば、本明細書中に記載の任意の試薬を含むことができる。調製物は、さらに、アジュバント（フロイント完全または不完全アジュバントなど）、ミョウバン、ＲＩＢＩ、または類似の免疫賦活薬を含むことができる。アジュバントは、例えば、コレラ毒素（ＣＴ）、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＬＴ）、変異体ＣＴ（ＭＣＴ）（Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：１２０３－１２１０）、および変異体Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＭＬＴ）（Ｄｉ Ｔｏｍｍａｓｏら（１９９６）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ６４：９７４－９７９）も含む。ＭＣＴおよびＭＬＴは、親分子と比較してアジュバント活性を実質的に損わなずに毒性を実質的に減少させる点変異を含む。免疫原性ペプチド調製物（例えば、本明細書中に記載の任意の試薬）での適切な被験体の免疫化により、ポリクローナル抗ペプチド抗体応答が誘導される。

【0152】

本明細書中で使用する場合、用語抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、ペプチド（例えば、本明細書中に記載のペプチド）に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）をいう。本明細書中に記載のペプチドに特異的に結合する抗体は、ペプチドに結合するが、サンプル中の他の分子に実質的に結合しない抗体である。免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分の例には、例えば、Ｆ（ａｂ）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、または本明細書中に記載の任意の他の抗体フラグメントが含まれる（以下を参照のこと）。

【0153】

抗ペプチド抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の調製物であり得る。本明細書中で使用する場合、用語モノクローナル抗体は、ペプチドと免疫反応することができる抗原結合部位のたった１つの種を含む抗体分子集団をいう。したがって、モノクローナル抗体組成物は、典型的には、免疫反応する特定のペプチドに対して単一の結合親和性を示す。

【0154】

ポリクローナル抗ペプチド抗体を、ペプチド免疫原での適切な被験体の免疫化によって上記のように調製することができる。免疫化した被験体における抗ペプチド抗体力価を、標準的な技術（固定化ペプチドを使用した酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などを使用）によって長期にわたってモニタリングすることができる。必要に応じて、ペプチドに指向する抗体分子を哺乳動物から（例えば、血液から）単離し、プロテインＡクロマトグラフィなどの技術によってさらに精製して、ＩｇＧ画分を得ることができる。免疫化後の適切な時期に（例えば、抗ペプチド抗体力価が最高の時点で）、抗体産生細胞を被験体から得、これを使用して、標準的技術（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７によって最初に記載されたハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２）、またはＥＢＶ－ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９８５），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６）など）によってモノクローナル抗体を調製することができる。リンパ球および固定化細胞株の融合のために使用される多数の周知のプロトコールのいずれかを、抗ペプチドモノクローナル抗体の生成のために適用することができる（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｓｕｐｒａ；Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６６：５５０５２；Ｒ．Ｈ．Ｋｅｎｎｅｔｈ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８０）；およびＬｅｒｎｅｒ（１９８１）Ｙａｌｅ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，５４：３８７－４０２（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと）。

【0155】

モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマの別の調製方法として、モノクローナル抗ペプチド抗体を、本明細書中に記載のペプチドを使用した組換え組み合わせ免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレイライブラリー）のスクリーニングによって同定および単離し、ペプチドに結合する免疫グロブリンライブラリーメンバーを単離することができる。

【0156】

抗ペプチド抗体（例えば、モノクローナル抗体）を使用して、アフィニティクロマトグラフィまたは免疫沈降などの技術によってペプチドを単離することができる。さらに、抗ペプチド抗体を使用して、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイにおいてペプチドを検出することができる。抗体を、任意選択的に、検出可能な標識（本明細書中に記載の任意の検出可能な標識など）または結合対の第１または第２のメンバー（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンまたはアビジン／ビオチン）にカップリングすることができ、その第２のメンバーを検出可能な標識に抱合することができる。

【0157】

標的ペプチド（例えば、本明細書中に記載のペプチド）に対する非ヒト抗体を、非ヒト宿主（例えば、げっ歯類）中で産生し、次いで、例えば、米国特許第６，６０２，５０３号、欧州特許第２３９ ４００号、米国特許第５，６９３，７６１号、および米国特許第６，４０７，２１３号（各開示全体が参考として援用される）に記載のようにヒト化することもできる。

【0158】

欧州特許第２３９ ４００号（Ｗｉｎｔｅｒら）は、（所与の可変領域内での）その一方の種のＣＤＲの他方の種由来のＣＤＲとの置換による抗体の変更を記載している。ＣＤＲ置換抗体は、真のキメラ抗体と比較して、ヒトにおける免疫応答を誘発する可能性が低いかもしれない。これはＣＤＲ置換抗体が非ヒト成分の含有量がかなり少ないからである。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４－１５３６（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと。典型的には、マウス抗体のＣＤＲを、組換え核酸技術の使用によってヒト抗体中の対応する領域に置換して、所望の置換抗体をコードする配列を産生する。所望のアイソタイプのヒト定常領域遺伝子セグメント（例えば、ＣＨについてのγＩおよびＣＬについてのκ）を付加することができ、ヒト化した重鎖および軽鎖の遺伝子を哺乳動物細胞中で同時発現させて可溶性ヒト化抗体を産生することができる。

【0159】

ＷＯ９０／０７８６１号は、元のマウス抗体のＶ領域フレームワークに対する至適なタンパク質配列相同性についてコンピュータ分析によってヒトＶフレームワーク領域を選択する工程、およびマウスＶ領域の三次構造をモデリングしてマウスＣＤＲと相互作用する可能性が高いフレームワークアミノ酸残基を視覚化する工程を含むプロセスを記載している。次いで、これらのマウスアミノ酸残基を、相同なヒトフレームワークに重ね合わせる。米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、および同第５，５３０，１０１号も参照のこと。Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９，２６６－２７１は、標準として、マウス残基のラジカル導入を行わないＣＤＲグラフティングのためにＮＥＷＭおよびＲＥＩの重鎖および軽鎖にそれぞれ由来するＶ領域フレームワークを使用する。ＮＥＷＭおよびＲＥＩベースのヒト化抗体を構築するためのＴｅｍｐｅｓｔらのアプローチ使用の利点は、ＮＥＷＭおよびＲＥＩ可変領域の三次元構造がＸ線結晶学から知られており、したがって、ＣＤＲとＶ領域フレームワーク残基との間の特異的相互作用をモデリングすることができることである。

【0160】

特定の位置（例えば、１つまたは複数（例えば、少なくとも５、１０、１２、または全て）の以下の位置：（軽鎖可変ドメインのフレームワーク中）４Ｌ、３５Ｌ、３６Ｌ、３８Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、５８Ｌ、４６Ｌ、６２Ｌ、６３Ｌ、６４Ｌ、６５Ｌ、６６Ｌ、６７Ｌ、６８Ｌ、６９Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、８５Ｌ、８７Ｌ、９８Ｌ、および／または（重鎖可変ドメインのフレームワーク中）２Ｈ、４Ｈ、２４Ｈ、３６Ｈ、３７Ｈ、３９Ｈ、４３Ｈ、４５Ｈ、４９Ｈ、５８Ｈ、６０Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、６９Ｈ、７０Ｈ、７３Ｈ、７４Ｈ、７５Ｈ、７８Ｈ、９１Ｈ、９２Ｈ、９３Ｈ、および／または１０３Ｈ（Ｋａｂａｔナンバリングに従う））に、ヒト免疫グロブリン配列（例えば、コンセンサスヒトアミノ酸残基）を挿入する置換を含むように非ヒト抗体を改変することができる。例えば、米国特許第６，４０７，２１３号（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。

【0161】

標的ペプチドに結合する完全なヒトモノクローナル抗体を、例えば、Ｂｏｅｒｎｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７，８６－９５に記載のようにｉｎ ｖｉｔｒｏ予備刺激ヒト脾細胞を使用して産生することができる。これらを、Ｐｅｒｓｓｏｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：２４３２－２４３６またはＨｕａｎｇ ａｎｄ Ｓｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１，２２７－２３６、また米国特許第５，７９８，２３０号（各開示全体が本明細書中で参考として援用される）に記載のレパートリークローニングによって調製することができる。巨大な非免疫化ヒトファージディスプレイライブラリーを使用して、標準的なファージテクノロジーを使用してヒト治療薬として開発することができる高親和性抗体を単離することもできる（例えば、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ，１９９６；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１－２０；ａｎｄ
Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１－８；米国特許出願公開第２００３－０２３２３３３号（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと）。

【0162】

本明細書中で使用する場合、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列をいう。例えば、配列には、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部が含まれ得る。例えば、配列は、１、２、またはそれを超えるＮ末端またはＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を省略することができるか、１つまたは複数の挿入またはさらなる末端アミノ酸を含むことができるか、他の変化を含むことができる。１つの実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むペプチドは、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合して標的結合構造（すなわち、「抗原結合部位」）（例えば、標的ペプチドと相互作用する構造）を形成することができる。

【0163】

抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖または軽鎖の定常領域の全部または一部をさらに含み、それにより、重鎖または軽鎖の免疫グロブリン鎖をそれぞれ形成することができる。１つの実施形態では、抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖の四量体である。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖を、ジスルフィド結合によって連結することができる。重鎖定常領域は、典型的には、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）およびヒンジ領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的には、ＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、典型的には、宿主組織または因子（種々の免疫系細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）が含まれる）への抗体の結合を媒介する。

【0164】

抗体の１つまたは複数の領域は、ヒトであり得るか、事実上ヒトであり得るか、ヒト化され得る。例えば、１つまたは複数の可変領域は、ヒトであり得るか、事実上ヒトであり得る。例えば、１つまたは複数のＣＤＲ（例えば、重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３）はヒトであり得る。各軽鎖ＣＤＲはヒトであり得る。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトであり得る。１つまたは複数のフレームワーク領域（ＦＲ）はヒトであり得る（例えば、ＨＣまたはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）。いくつかの実施形態では、全フレームワーク領域はヒトである（例えば、ヒト体細胞（例えば、免疫グロブリンを産生する造血細胞または非造血細胞）に由来する）。１つの実施形態では、ヒト配列は、例えば、生殖系列核酸によってコードされる生殖系列配列である。１つまたは複数の定常領域は、ヒトであり得るか、事実上ヒトであり得るか、ヒト化され得る。別の実施形態では、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、または９８％のフレームワーク領域（例えば、集合的にＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３または集合的にＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）または全抗体は、ヒトであり得るか、事実上ヒトであり得るか、ヒト化され得る。例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３は、集合的に、ヒト生殖系列セグメントによってコードされるヒト配列と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９８、または９９％同一であり得る。いくつかの実施形態では、マウス抗体をヒト化するために、マウスＩｇ遺伝子座の１つまたは複数の領域を、対応するヒトＩｇ遺伝子座に置換することができる（例えば、Ｚｏｕら（１９９６）Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ １０，１２２７－１２３２；Ｐｏｐｏｖら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（１０）１６１１－１６１９；およびＮｉｃｈｏｌｓｏｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６８９８－６９０６（各開示全体が参考として援用される）を参照のこと）。

【0165】

「事実上ヒトの」免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないために十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「事実上ヒトの」抗体は、抗体が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないために十分な数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。

【0166】

「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、改変形態が非改変形態よりもヒトにおいて免疫応答を少なく誘発するように改変された（例えば、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないために十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように改変された）免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの説明は、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号および米国特許第５，６９３，７６２号（各開示全体が本明細書中で参考として援用される）を含む。いくつかの場合、ヒト化免疫グロブリンは、１つまたは複数のフレームワークアミノ酸位置に非ヒトアミノ酸を含むことができる。

【0167】

抗体の全部または一部は、免疫グロブリン遺伝子またはそのセグメントによってコードすることができる。例示的ヒト免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに多種多様な免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０アミノ酸）で可変領域遺伝子によってコードされ、ＣＯＯＨ末端でκまたはλ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは４４６アミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および他の上記定常領域遺伝子の１つ（例えば、γ（約３３０アミノ酸をコードする））によってコードされる。

【0168】

用語、全長抗体の「抗原結合フラグメント」は、目的の標的に特異的に結合する能力を保持する全長抗体のフラグメントをいう。用語、全長抗体の「抗原結合フラグメント」の範囲内に含まれる結合フラグメントの例には、以下が含まれる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる１価フラグメント）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメント）、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント（単一の抗体アームのＶＬおよびＶＨドメインからなる）、（ｖ）ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）（ＶＨドメインからなる））、および（ｖｉ）機能性を保持する単離相補性決定領域（ＣＤＲ）。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）が個別の遺伝子にコードされるにもかかわらず、これらのドメインを、組換え法を使用して、合成リンカーによって連結し、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知の１価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製可能である（例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３，（各開示全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。

【0169】

抗体
本明細書中に記載の方法によって産生された単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１～１８のいずれかのアミノ酸配列内またはこれに重複するエピトープに選択的に結合することができる。抗体はまた、配列番号１～１８のいずれかのアミノ酸配列内またはこれに重複するエピトープに結合する抗体の結合をクロスブロッキングする抗体であり得る。典型的には、１０^－６Ｍ未満のＫ_Ｄで抗体が結合する場合、エピトープへの抗体の結合は選択的と見なす。必要に応じて、結合条件の変化によって、選択的結合に実質的に影響を及ぼすことなく非特異的結合を減少させることができる。「クロスブロッキングする」抗体または「クロスブロッキング抗体」は、（第１の抗体の非存在下で起こるペプチドへの第２の抗体の結合と比較して）エピトープ（例えば、配列番号１～１８のいずれかの中またはこれに重複して含まれるエピトープ）に結合した場合に第２の抗体がペプチドに結合する能力が減少または消失する第１の抗体をいう。

【0170】

本明細書中に記載の方法によって産生された抗体（例えば、本明細書中に記載の１つまたは複数のペプチドに特異的な抗体）を使用して、例えば、ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現する癌細胞を検出することができ、したがって、本明細書中に記載の多数の例示的方法で有用であることが理解される。

【0171】

治療の選択方法
癌（例えば、形質細胞障害（多発性骨髄腫および／またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症など）またはＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１が発現される任意の癌）を有する被験体のための治療を選択する方法は、任意選択的に、被験体の癌の１つまたは複数の細胞（例えば、形質細胞）がＸＢＰ１を発現するかどうかを決定する工程、および、１つまたは複数の細胞がＸＢＰ１を発現する場合、配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドを含む組成物を被験体のための治療として選択する工程を含む。上記のように、アミノ酸配列が、（ｉ）被験体中に免疫応答を誘導することができ、（ｉｉ）ＭＨＣ分子に結合することができ、（ｉｉｉ）ＭＨＣ分子の背景において、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体によって認識することができる場合、アミノ酸配列は、配列番号１～１０のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも６６％同一であり得るか、４個以下の置換を含むことができる。ペプチドはまた、表１に記載の配列番号１～１０のいずれか１つから本質的になるか、これからなる第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含むペプチドであり得る。

【0172】

癌を有する被験体のために治療を選択する方法は、任意選択的に、被験体の癌の１つまたは複数の細胞（例えば、形質細胞）がＣＤ１３８を発現するかどうかを決定する工程、および、１つまたは複数の細胞がＣＤ１３８を発現する場合、配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくともペプチドを含む組成物を被験体のための治療として選択する工程を含むことができる。上記のように、アミノ酸配列が、（ｉ）被験体中に免疫応答を誘導することができ、（ｉｉ）ＭＨＣ分子に結合することができ、（ｉｉｉ）ＭＨＣ分子の背景において、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体によって認識することができる場合、アミノ酸配列は、配列番号１１～１４のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも６６％同一であり得るか、４個以下の置換を含むことができる。ペプチドはまた、表１に記載の配列番号１１～１４のいずれか１つから本質的になるか、これからなる第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含むペプチドであり得る。

【0173】

癌を有する被験体のために治療を選択する方法は、任意選択的に、被験体の癌の１つまたは複数の細胞（例えば、形質細胞）がＣＳ１を発現するかどうかを決定する工程、および、１つまたは複数の細胞がＣＳ１を発現する場合、配列番号１５～１８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくともペプチドを含む組成物を被験体のための治療として選択する工程を含むことができる。上記のように、アミノ酸配列が、（ｉ）被験体中に免疫応答を誘導することができ、（ｉｉ）ＭＨＣ分子に結合することができ、（ｉｉｉ）ＭＨＣ分子の背景において、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体によって認識することができる場合、アミノ酸配列は、配列番号１５～１８のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも６６％同一であり得るか、４個以下の置換を含むことができる。ペプチドはまた、表１に記載の配列番号１５～１８のいずれか１つから本質的になるか、これからなる第１のアミノ酸配列および第１のアミノ酸配列に対して異種の第２のアミノ酸配列を含むペプチドであり得る。

【0174】

被験体の癌の１つまたは複数の細胞（例えば、形質細胞）がＸＢＰ１、ＣＤ１３８、およびＣＳ１の２つ以上を発現する場合、適切なペプチドの組み合わせを被験体に送達することができると理解される。例えば、被験体の癌の１つまたは複数の細胞（例えば、形質細胞）がＸＢＰ１およびＣＤ１３８を発現すると決定される場合、治療の選択方法は、（ａ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドを含む組成物と、配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドを含む組成物との組み合わせ、または（ｉｉ）配列番号１～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドおよび配列番号１１～１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む少なくとも１つのペプチドを含む組成物を被験体のための治療として選択する工程を含むことができる。

【0175】

１つまたは複数の細胞がＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１を発現するかどうかを決定する方法は当該分野で公知であり、上に記載している。例えば、被験体から得た生物サンプル（例えば、血液サンプルまたはリンパ節組織サンプル）を、本明細書中に記載の方法によって作製したＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１特異的抗体を使用して試験して、細胞（または細胞溶解物）によるＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１ポリペプチド発現の存在または量を検出することができる（例えば、実働する実施例およびＳａｍｂｒｏｏｋら前出を参照のこと）。ポリペプチドの存在または量について生物サンプルをアッセイする方法には、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッティング、またはドットブロッティングアッセイが含まれる。

【0176】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の任意の方法はまた、被験体由来の生物サンプルを準備する工程および／または被験体から生物サンプルを得る工程を含むことができる。本明細書中に記載の方法に適切な生物サンプルには、目的の分析タンパク質（例えば、ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１タンパク質）を含む任意の体液、細胞、組織、またはそのフラグメントが含まれる。生物サンプルは、例えば、被験体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）から得た検体であり得るか、かかる被験体に由来し得る。例えば、サンプルは、生検によって得た組織切片または組織培養物中に存在するかこれに適応した細胞であり得る。生物サンプルはまた、細胞含有体液（尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、痰、脳脊髄液、涙、粘液、または吸引液（例えば、肺吸引液または乳頭吸引液）など）、または紙またはポリマー基質上に吸収させたかかるサンプルであり得る。生物サンプルを、必要に応じて、特定の細胞型を含む画分にさらに分画することができる。例えば、血液サンプルを、血清または特定の血球型（赤血球または白血球（白血球細胞）など）を含む画分に分画することができる。必要に応じて、サンプルは、被験体由来のサンプル型の組み合わせ（組織と体液との組み合わせなど）であり得る。

【0177】

生物サンプルを、被験体（例えば、癌（例えば、多発性骨髄腫および／またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症）を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある被験体）から得ることができる。任意の適切な生物サンプルを得る方法を使用することができるが、例示的な方法には、例えば、静脈切開、スワブ（例えば、口内スワブ）、吸引、または細針吸引生検手順が含まれる。細針吸引に感受性を示す組織の非限定的な例には、リンパ節、肺、甲状腺、乳房、および肝臓が含まれる。サンプルを、例えば、マイクロダイセクション（例えば、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（ＬＣＭ）またはレーザーマイクロダイセクション（ＬＭＤ））、膀胱洗浄、スメア（ＰＡＰスメア）、または乳管洗浄によって回収することもできる。

【0178】

例えば、上記方法を使用した被験体における癌（例えば、多発性骨髄腫および／またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症）の検出後、医療従事者（例えば、医師）は、例えば、（ｉ）薬物の処方箋の記入、（ｉｉ）被験体への薬物の提供（しかし、必ずしも投与しない）（例えば、患者が医師のオフィスに滞在している間の患者に対する処方薬物サンプルの付与）、（ｉｉｉ）提案または推奨される治療法（例えば、本明細書中に記載の１つまたは複数のペプチドを含む治療）の患者への伝達（会話、書面（処方箋以外）、または電子的伝達（電子メール、安全なサイトへの電子的投稿））；または（ｉｖ）被験体に適切な治療法の同定および、例えば、診療録による他の医療関係者への情報の周知によって被験体に適切な治療法（例えば、本明細書中に記載の１つまたは複数のペプチドを含む治療）を選択することができる。後者（ｉｖ）は、例えば、１個を超える治療または治療薬を異なる医療従事者によって患者に投与すべき場合に有用であり得る。

【0179】

（任意の上記方法を使用した）被験体中のＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１の存在または量の検出および／または被験体のための治療の選択後、医療従事者（例えば、医師）は、適切な治療法を被験体に施与ことができる。本明細書中に記載の１つまたは複数のペプチドを含む治療の施与方法は、上に詳述している。

【0180】

さらに、医療従事者はまた、１つまたは複数のさらなる癌治療薬または抗癌剤の副作用を処置するための１つまたは複数の薬物を選択、処方、および／または投与することができる。多発性骨髄腫および／またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症の処置に適切な化学療法薬には、例えば、メルファラン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、プレドニゾン、デキサメタゾン、プロテオソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、またはレナリドマイドが含まれる。

【0181】

抗癌剤の副作用には、例えば、貧血、胃腸管の症状（例えば、嘔気、嘔吐、下痢）、白血球減少症（感染症を引き起こし得る白血球数の減少）、一過性の脱毛、または血小板減少症（出血を引き起こし得る血小板数の減少）が含まれる。したがって、医師は、抗貧血薬（エポエチンα（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）またはＥｐｏｇｅｎ（登録商標））など）と共に化学療法薬（ビンクリスチンなど）を被験体に処方するか投与することができる。

【0182】

キットおよび製造品
本開示はまた、種々のキットを特徴とする。キットは、例えば、１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）の本明細書中に記載の任意のペプチド（あるいは１つまたは複数のペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクター）、および被験体にペプチドを投与するための説明書を含むことができる。キットは、１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアおよび／あるいは１つまたは複数の免疫刺激剤を含むことができる。免疫刺激剤は、例えば、Ｔヘルパーエピトープ、改変ペプチドリガンド、またはアジュバントであり得る。

【0183】

キットはまた、１つまたは複数の治療薬、診断薬、または予防薬を含むことができる。１つまたは複数の治療薬、診断薬、または予防薬には、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）炎症反応を調整する薬剤（例えば、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ステロイド、クロモリンナトリウム、またはテオフィリン）、（ｉｉ）腎臓および／または心血管機能に影響を及ぼす薬剤（例えば、フロセミド、チアジド、アミロライド、スピロノラクトン、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、ジゴキシン、イソルジル、ドブタミン、リドカイン、キニジン、アデノシン、ジギタリス、メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、またはメバロナート）、（ｉｉｉ）胃腸機能に影響を及ぼす薬物（例えば、オメプラゾールまたはスクラルファート）、（ｉｖ）抗生物質（例えば、テトラサイクリン、クリンダマイシン、アンホテリシンＢ、キニーネ、メチシリン、バンコマイシン、ペニシリンＧ、アモキシシリン、ゲンタマイシン、エリスロマイシン、シプロフロキサシン、ドキシサイクリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、クロラムフェニコール、イソシアジド、フルコナゾール、またはアマンタジン）、（ｖ）抗癌剤（例えば、シクロホスファミド、メトトレキサート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ヒドロキシ尿素、プレドニゾン、タモキシフェン、シスプラチン、またはデカルバジン）、（ｖｉ）免疫調節薬（例えば、インターロイキン、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦβ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、アザチオプリン、ステロイド）、（ｉｘ）血液および／または造血器官に作用する薬物（例えば、インターロイキン、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、エリスロポエチン、ヘパリン、ワルファリン、またはクマリン）、または（ｖｉｉ）ホルモン（例えば、成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン、黄体形成ホルモン、ＴＳＨ、ＡＣＴＨ、インスリン、ＦＳＨ、ＣＧ、ソマトスタチン、エストロゲン、アンドロゲン、プロゲステロン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、チロキシン、トリヨードサイロニン）、ホルモンアンタゴニスト、石灰化および骨代謝回転に影響を及ぼす薬剤（例えば、リン酸カルシウム、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、ビタミンＤ、ビスホスホネート、カルシトニン、フルオリド）。

【0184】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書中に記載のＸＢＰ１、ＣＤ１３８、および／またはＣＳ１抗体のいずれかの１つまたは複数（例えば、１、２、または３、またはこれを超える）を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、それぞれ異なるタンパク質に特異的な２つの抗体を含むことができる。例えば、キットは、１つのＸＢＰ１特異的抗体（本明細書中に記載）および１つのＣＳ１特異的抗体（本明細書中に記載）を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、それぞれ異なるタンパク質に特異的な３つの抗体を含むことができる。キットは、任意選択的に、１つまたは複数のＸＢＰ１、ＣＤ１３８、および／またはＣＳ１タンパク質の存在または量について生物サンプルをアッセイするための説明書を含むことができる。

【0185】

容器、および容器内に含まれる組成物を含む製造品であって、組成物が哺乳動物（例えば、ヒト）において免疫応答を誘導するための有効成分を含み、有効成分が１つまたは複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、またはこれを超える）の本明細書中に記載の任意のペプチドを含み、容器は組成物が哺乳動物（例えば、本明細書中に記載の任意の哺乳動物）における免疫応答の誘導用であることを示すラベルを有する、製造品も特徴とする。ラベルは、さらに、多発性骨髄腫および／またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症を有するか、有する疑いがあるか、発症するリスクがある哺乳動物に組成物を投与すべきであることを示すことができる。製造品の組成物は乾燥物または凍結乾燥物であり得、例えば、乾燥または凍結乾燥した組成物の溶解のための１つまたは複数の解決法（および／または説明書）を含むことができる。

【0186】

製造品はまた、哺乳動物（例えば、上記）に組成物を投与するための説明書を含むことができる。

【0187】

以下の実施例は、本発明を例示することを意図するが、本発明を制限しない。

【実施例】

【0188】

実施例１．材料と方法
細胞株。ヒト多発性骨髄腫細胞株：ＭｃＣＡＲ、ＭＭ１Ｓ、およびＵ２２６を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。ヒト急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株（ＭＬ－２）は、Ｄｒ．Ｙ．Ｍａｔｓｕｏ，Ｆｕｊｉｓａｋｉ Ｃｅｌｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｏｋａｙａｍａ，Ｊａｐａｎから特別に提供して頂いた。ＨＬＡ－Ａ２．１分子を発現するヒトＢ細胞およびＴ細胞ハイブリッドであるＴ２細胞株（Ｚｗｅｅｒｉｎｋら，（１９９３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０（５）：１７６３－７１）は、Ｄｒ．Ｊ．Ｍｏｌｌｄｒｅｍ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ Ｍ．Ｄ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）から提供して頂き、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の供給源として使用した。全細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ；ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ－Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補足したＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ－Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中で培養した。

【0189】

試薬。フィコエリトリン（ＰＥ）に抱合したマウス抗ヒトＣＤ８０またはＣＤ８３モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ（Ｈｉａｌｅｉｇｈａ，ＦＬ）から購入した。フルオレセインイチオシアナート（ｆｌｕｏｒｏｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｙｏｃｙａｎａｔｅ）（ＦＩＴＣ）、ＰＥ、またはＰｅｒＣＰと抱合したＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＣＲ７、ＨＬＡ－Ａ２、およびＨＬＡ－ＤＲ特異的ｍＡｂｓをＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ／Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。

【0190】

合成ペプチド。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ；配列番号２５）およびＭＡＧＥ－３ペプチド（ＦＬＷＧＰＲＡＬＶ；配列番号２６）を、コントロールＨＬＡ－Ａ２結合ペプチドとして使用した。６つの未変性スプライシングＸＢＰ１ペプチド：ＸＢＰ１_{１１７～１２５}（ＬＬＲＥＫＴＨＧＬ；配列番号１）；ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２））；ＸＢＰ１_{１８９～１９７}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号３））；ＸＢＰ１_{１９２～２００}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号４））；ＸＢＰ１_{１１０～１１８}（ＫＬＬＬＥＮＱＬＬ（配列番号５））；ＸＢＰ１_{９３～１０１}（ＲＭＳＥＬＥＱＱＶ（配列番号２７））；３つの未変性スプライシングＸＢＰ１ペプチド（ＳＰ ＸＢＰ１_{１９６～２０４}（ＧＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号７））；ＳＰ ＸＢＰ１_{１９３～２０１}（ＩＬＬＧＩＬＤＮＬ（配列番号８））；ＳＰ ＸＢＰ１_{３６７～３７５}（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号９））が含まれる）；ヘテロクリティックＸＢＰ１（ＹＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号６））；およびヘテロクリティックスプライシングＸＢＰ１（ＹＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号２７））；およびＹＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号１０））ペプチドをデザインし、潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合ペプチドとして試験した。本明細書中で使用する場合、「ヘテロクリティック」（例えば、ヘテロクリティックペプチド）は、対応する野生型ペプチドよりも免疫原性が高いペプチドを産生するために野生型または元の配列由来の１つまたは複数のアミノ酸が改変されたペプチドの形態をいう。例えば、すぐ上に記載の例示的ヘテロクリティックペプチドでは、太字のアミノ酸は、ＸＢＰ１の野生型配列から改変したアミノ酸を示す。

【0191】

４つの未変性ＣＤ１３８ペプチド：ＣＤ１３８_{２５６～２６４}（ＶＩＡＧＧＬＶＧＬ（配列番号１１））；ＣＤ１３８_{２６０～２６８}（ＧＬＶＧＬＩＦＡＶ（配列番号１２））；ＣＤ１３８_５～１３（ＡＬＷＬＷＬＣＡＬ（配列番号１３））；およびＣＤ１３８_７～１５（ＷＬＷＬＣＡＬＡＬ（配列番号１４））をデザインし、潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合ペプチドとして試験した。

【0192】

４つの未変性ＣＳ１ペプチド：ＣＳ１－Ｐ１：ＣＳ１_{２３６～２４５}（ＬＬＬＳＬＦＶＬＧＬ（配列番号１５））；ＣＳ１－Ｐ２：ＣＳ１_{２３９～２４７}（ＳＬＦＶＬＧＬＦＬ（配列番号１６））；ＣＳ１－Ｐ３：ＣＳ１_{２３２～２４０}（ＬＬＶＰＬＬＬＳＬ（配列番号１７））；およびＣＳ１－Ｐ４：ＣＳ１_９～１７（ＴＬＩＹＩＬＷＱＬ（配列番号１８））を、（３つの異なるデータベースＲＡＮＫＰＥＰ、ＢＩＭＡＳ、およびＮｅｔＭＨＣを使用して）デザインし、潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合ペプチドとして試験した（例えば、Ｒｅｃｈｅら（２００２）Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６３：７１０－７０９を参照のこと）。

【0193】

ＸＢＰ－１およびＣＤ１３８ペプチドを、標準的なＦＭＯＣ（９－フルオレニルメチル－オキシカルボニル）化学によって合成し（Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，ＴＸ）、逆相クロマトグラフィを使用して８５％超に精製し、質量分析によって分子量について確証した。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ＬＬＣによって純度９５％超のＣＳ１ペプチドを合成した。凍結乾燥したペプチドをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に溶解し、ＡＩＭ－Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ－Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で希釈し、－１４０℃で保存した。

【0194】

ペプチド結合アッセイ。ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１ペプチドを、Ｔ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２結合について評価した。アッセイでは、Ｔ２細胞を洗浄し、無血清ＡＩＭ－Ｖ培地に最終濃度１×１０^６細胞／ｍｌで再懸濁し、２４ウェル組織培養プレートに移した。細胞を、５０μｇ／ｍｌの各ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１ペプチド、または３０μｇ／ｍｌインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド＋３μｇヒトβ_２ミクログロブリン（Ｓｉｇｍａ）とインキュベートし、加湿空気中にて３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。一晩のインキュベーション後、細胞を洗浄し、次いで、ＦＩＴＣ抱合した（またはＨＬＡ－Ａ２へのＣＳ１ペプチドの結合の決定の場合、ＰＥ抱合した）マウス抗ヒトＨＬＡ－Ａ２モノクローナル抗体と４℃で１５分間接触させた。細胞を再度洗浄し、次いで、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商標）ｖ２．１ソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を具備したＦＡＣＳｏｒｔ（商標）フローサイトメーターを使用した蛍光フローサイトメトリー（ＦＦＣ）によって分析した。ペプチドがＨＬＡ－Ａ２に結合する能力を、ＨＬＡ－Ａ２へのペプチドの結合に原因するＴ２細胞表面上のＨＬＡ－Ａ２分子の上方制御の測定によって決定し、ＦＦＣ分析を使用して平均蛍光強度（ＭＦＩ）に反映させた。

【0195】

ペプチド安定性アッセイ。ＨＬＡ－Ａ２分子の結合溝中のＸＢＰ１またはＣＤ１３８ペプチドの安定性を、ヒトＴ２細胞株を使用して試験した。Ｔ２細胞を、上記の種々のペプチドとインキュベートした。一晩のインキュベーション後、細胞を洗浄して非結合ペプチドを除去し、次いで、１０μｇ／ｍｌブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ）と３７℃で１時間インキュベートして、新規に合成されたＨＬＡ－Ａ２．１分子の細胞表面発現をブロッキングした。ペプチド／ＨＬＡ－Ａ２結合安定性を、ブレフェルジンＡ処置の０、２、４、６、および１８時間後に測定した。インキュベーション後、細胞を採取し、洗浄し、ＦＩＴＣ抱合マウス抗ヒトＨＬＡ－Ａ２モノクローナル抗体で染色し、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商標）ｖ２．１ソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を具備したＦＡＣＳｏｒｔ（商標）フローサイトメーターを使用したＦＦＣによって分析した。

【0196】

単球由来成熟樹状細胞の生成。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ Ｓｗｅｄｅｎ）による標準的な密度勾配遠心分離を使用して正常なヒトドナーから得たロイコパックから単離した。樹状細胞（ＤＣ）を、以下のように接着細胞画分として得た単球から生成した。未成熟ＤＣ（ｉｍｍＤＣ）を生成するために、単球を、１，０００Ｕ／ｍｌ ＧＭ－ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）および１，０００Ｕ／ｍｌ ＩＬ－４（インターロイキン－４）の存在下にて、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ；ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を補足したＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ－Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中で７日間培養した。新鮮な培地＋ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を、１日おきに培養物に添加した。１，０００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮ－α（インターフェロンα）＋１０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦ－α（腫瘍壊死因子α）中で７日目に新鮮なＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を含む１０％ＦＣＳ－ＲＰＭＩと共にｉｍｍＤＣを３日間培養することによって成熟ＤＣ（ｍＤＣ）を得た。ｉｍｍＤＣおよびｍＤＣを回収し、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、およびＨＬＡ－ＤＲ特異的抗体およびＦＦＣ分析を使用して、その発現表現型について試験した。

【0197】

ＣＤ３^＋Ｔ細胞の単離。正常ドナーのＴ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）のＰａｎＴ細胞単離キットを使用して、ＰＢＭＣの非接着細胞画分（単球接着後）から得た。簡潔に述べれば、ハプテン抱合したＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３６、およびＣＤ５６抗体のカクテルを使用した標識ならびに抗ハプテンモノクローナル抗体にカップリングしたＭＡＣマイクロビーズを含むカラムによるＢ細胞、ＮＫ細胞、初期赤血球系細胞、血小板、および好塩基球の枯渇によってＴ細胞を富化させた。溶出物（陰性細胞画分）を、富化ＣＤ３^＋Ｔ細胞としてカラムから回収した。最初に得たＴ細胞から富化したＣＤ３^＋Ｔ細胞の純度（平均±標準偏差）を、フローサイトメトリーによって試験し、９４±２％であることが判明した。

【0198】

ペプチド特異的ＣＴＬの誘導。ペプチド特異的ＣＴＬ（すなわち、ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１－ペプチド特異的ＣＴＬ）を、ＸＢＰ１、ＣＤ１３８、またはＣＳ１－ペプチドパルスした抗原提示細胞（ＡＰＣ）（Ｔ２細胞またはｍＤＣのいずれか）での正常なＨＬＡ－Ａ２^＋ドナーから得たＣＤ３^＋Ｔリンパ球の反復刺激によってｅｘ ｖｉｖｏで生成した。簡潔に述べれば、Ｔ２細胞を洗浄し、無血清ＡＩＭ－Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ
ＢＲＬ）に再懸濁し、５０μｇ／ｍｌの適切なＸＢＰ１またはＣＤ１３８ペプチドで３７℃で一晩パルスした。ペプチドパルスしたＡＰＣを洗浄し、計数し、１０Ｇｙで照射し、これを使用して、１０％ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を補足したＡＩＭ－Ｖ培地中にて、Ｔ２／ペプチド（刺激物質）のＣＤ３^＋Ｔ細胞（反応物）に対する比が１：４０でＣＤ３^＋Ｔ細胞を予備刺激した。Ｔ細胞培養物を、照射したＡＰＣ／ペプチドにて７日間毎に合計で４サイクル再刺激して、ＸＢＰ１ペプチド特異的ＣＴＬ（ＸＢＰ１－ＣＴＬ）、ＣＤ１３８ペプチド特異的ＣＴＬ（ＣＤ１３８－ＣＴＬ）、またはＣＳ１ペプチド特異的ＣＴＬ（ＣＳ１－ＣＴＬ）を生成した。本明細書中で言及した「ＸＢＰ１－ＣＴＬ」、「ＣＤ１３８－ＣＴＬ」、および「ＣＳ１－ＣＴＬ」がクローン性（または均一な）集団ではないことが上記から明らかである。むしろ、ＸＢＰ１－ＣＴＬ細胞、ＣＤ１３８－ＣＴＬ細胞、およびＣＳ１－ＣＴＬ細胞は、正常ドナーから得た非特異的ＣＴＬ、ＡＰＣ、および他のリンパ球と共にＸＢＰ１ペプチド、ＣＤ１３８ペプチド、またはＣＳ１ペプチド特異的ＣＴＬを含むリンパ球（ｌｙｍｐｏｃｙｔｅ）の不均一な集団である。５０Ｕ／ｍｌのインターロイキン－２（ＩＬ－２）を、第２の刺激の２日後に培養物に添加した。コントロールＴ細胞培養物（ペプチドで刺激せず）を、５０Ｕ／ｍｌ ＩＬ－２を含む１０％ヒトＡＢ血清を補足したＡＩＭ－Ｖ培地中で保存した。

【0199】

ＸＢＰ１－ＣＴＬ、ＣＤ１３８－ＣＴＬ、または標的細胞の表現型分析。ＸＢＰ１－ＣＴＬ、ＣＤ４、またはＣＤ８の表現型を決定するために、細胞による発現を抗ＣＤ４－ＰＥまたは抗ＣＤ８－ＦＩＴＣマウス抗ヒトｍＡｂを使用して検出した。さらに、種々の他の発現マーカーを、ＦＩＴＣ抱合した抗ＣＤ６９／ＰＥ抱合した抗ＣＤ４５ＲＯまたはＦＩＴＣ抱合した抗ＣＤ４５ＲＡ－ＦＩＴＣ／ＰＥ抱合した抗ＣＣＲ７マウス抗ヒトｍＡｂのいずれかの組み合わせを使用して細胞上で検出した。あるいは、Ｕ２６６細胞、ＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、およびＭＭ１Ｓ細胞によるＨＬＡ－Ａ２発現を、ＦＩＴＣ抱合した抗ＨＬＡ－Ａ２抗ヒトｍＡｂを使用して決定した。細胞の抗体との４℃で１５分間の接触後、細胞を洗浄し、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ ｖ２．１ソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｋｉｎｓｏｎ）を具備したＦＡＣＳｏｒｔ（商標）フローサイトメーターを使用して分析した。

【0200】

ウェスタンブロッティング。各細胞株（Ｕ２６６、ＭｃＣＡＲ、ＭＬ－２、およびＭＭ１Ｓ）由来の約１００μｇタンパク質溶解物を、Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．８）、１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．０５％β－メルカプトエタノール、１０％グリセロール、および０．００１％ブロモフェノールブルーを含む）に懸濁し、２分間ボイルし、８～１６％勾配ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）に８０Ｖで２時間供した（Ｘｃｅｌｌ Ｓｕｒｅｌｏｃｋ Ｍｉｎｉ Ｃｅｌｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）。タンパク質ラダー（既知の分子量のタンパク質の混合物）をゲルにおけるサイズマーカーとして使用して、ペプチドの分子量を決定した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）。ゲルを、ニトロセルロース膜（Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ，０．２ミクロン転写膜，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣＡ）上にトリス－グリシン緩衝液中にて４０Ｖで２時間エレクトロブロッティングした。ニトロセルロース膜上へのタンパク質の移行を、ポンソーＳ染色によって確認した。マウス抗ヒトＸＢＰ１抗体または抗ヒトＣＤ１３８抗体との膜のインキュベーションを、１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝化生理食塩水およびＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）中で一定に震盪しながら１時間行った。膜をＰＢＳＴで３回洗浄し、３％脱脂粉乳を含むＰＢＳＴ中の抗マウスＩｇＧ－西洋ワサビペルオキシダーゼ抱合体中にて１時間インキュベートした。洗浄後、特異的タンパク質を、製品マニュアル中に提供された説明書（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）にしたがって高感度化学発光を使用して検出した。

【0201】

ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ。多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞（ＭｃＣＡＲ、ＭＭ１Ｓ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞（ＭＬ－２）、またはＴ２細胞（上記）との共培養後のＸＢＰ１－ＣＴＬ、ＣＤ１３８－ＣＴＬ、またはＣＳ１－ＣＴＬによるＩＦＮ－γ放出を、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のヒトＩＦＮ－γＥＬＩＳＡキットを使用して測定した。簡潔に述べれば、標準としての精製ＩＦＮ－γまたはＣＴＬ上清の希釈物を、モノクローナル抗ヒトＩＦＮ－γ捕捉抗体でプレコーティングした９６ウェルプレートのウェルに移し、室温で２時間インキュベートした。数回の洗浄後、検出抗体およびアビジン－西洋ワサビペルオキシダーゼ抱合体を含む緩衝液を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、次いで、各ウェルに西洋ワサビペルオキシダーゼ基質溶液を添加し、室温で３０分間インキュベートした。停止液を各ウェルに添加し、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｗａｌｌａｃ Ｖｉｃｔｏｒ２カウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を使用して４５０ｎｍでの吸光度を決定した。ＣＴＬ培養物上清中のサイトカインの存在量を、ＩＦＮ－γ検量線に基づいて計算した。

【0202】

カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）追跡による細胞増殖。ＸＢＰ１－ＣＴＬまたはＣＤ１３８－ＣＴＬをＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ－ＢＲＬ）で２回洗浄し、ＲＰＭＩ－１６４０培養培地に濃度１×１０^６細胞／ｍｌで再懸濁した。ＤＭＳＯ中の５ｍＭ保存液の形態のＣＦＳＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）をＣＴＬに添加して最終濃度５μＭにし、遮光したＣＯ_２インキュベーター中に３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベーション後、ＣＴＬ細胞の体積の５倍に等価な体積の氷冷ＰＢＳ（２％ＦＣＳ含有）を細胞に添加して反応を停止させた。細胞を氷上で５分間インキュベートし、遠心分離し、全部で３回の洗浄後に新鮮なＰＢＳ（２％ＦＣＳ含有）に再懸濁した。ＣＦＳＥ標識したＴ細胞を、ＲＰＭＩ培養培地を使用して濃度２×１０^６細胞／ｍｌに調整し、２×１０^５細胞／ｍｌのＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、ＭＭ１Ｓ細胞、または細胞なしで刺激した。刺激したＣＦＳＥ標識細胞を、４日目にＦＦＣ分析によって試験した。

【0203】

細胞傷害性アッセイ。ＸＢＰ１－ＣＴＬ、ＣＤ１３８－ＣＴＬ、またはＣＳ１－ＣＴＬの細胞傷害活性を、例えば、Ｒｏｄｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２２６：２９－４１に記載のカルセイン放出アッセイによって測定した。簡潔に述べれば、標的細胞（３×１０^５細胞）（Ｔ２、Ｕ２６６細胞、ＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、およびＭＭ１Ｓ細胞が含まれる）を、１０ｍＭカルセイン－ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を含む無血清培養培地中にて３７℃で３０分間インキュベートし、５％ＦＣＳを含む冷ＰＢＳで３回洗浄し、エフェクター細胞（５×１０^３細胞／ウェル）と種々のエフェクター：標的細胞比にて９６ウェルＵ底マイクロタイタープレート（三連ウェル／サンプル）中でインキュベートした。プレートを、３７℃および５％ＣＯ_２にて３時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を１，０００ｒｐｍで５分間の遠心分離によってペレット化し、１００μｌの上清を９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）のウェルに移し、カルセイン放出を、細胞からの蛍光放出量として測定した（ＶＩＣＴＯＲ^２－１４２０マルチラベルカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用）。最大カルセイン放出を界面活性剤放出した標的細胞数から得、自発的放出をエフェクター細胞の非存在下での標的細胞数から得た。細胞傷害性を以下のように計算した：％比溶解（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｙｓｉｓ）＝［（実験的放出－自発的放出）÷（最大放出－自発的放出）］×１００。

【0204】

ＣＤ１０７細胞傷害性アッセイ。ＣＤ１０７細胞傷害性アッセイを、Ｂｅｔｔｓら（２００３）およびＭｉｔｔｅｎｄｏｒｆら（２００５）を以下に詳述のように少し変更して行った。無血清培地中および組織培養プレートのウェル中で成長したＴ２細胞またはＭｃＣＡＲ細胞を、ＣＤ１３８ペプチドまたはＭＡＧＥペプチドと３７℃で約１２時間接触させた。次いで、細胞を洗浄して、非結合ペプチドを除去した。次いで、ＣＤ１３８－ＣＴＬを、上記の処置したＴ２細胞またはＭｃＣＡＲ細胞（それぞれ、ペプチド抗原を提示する）と種々のエフェクター：標的比で共培養した。１０μｌアリコートの各ＣＤ１０７ａおよびＣＤ１０７ｂ（共に検出可能な標識ＦＩＴＣに抱合）を、ＣＤ１３８－ＣＴＬ添加と同時に各ウェルに添加した。細胞を含むプレートを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、０．０２μｇのブレフェルジンＡを各ウェルに添加し、細胞を３７℃でさらに４時間インキュベートした。細胞を回収し、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ染色緩衝液（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ－ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で洗浄し、ＰＥ抱合したマウス抗ヒトＣＤ８抗体と３０分間接触させてＣＤ８発現を検出した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。

【0205】

実施例２．ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ）およびスプライシングＸＢＰ１_{３６７～１４５}（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ）ペプチドはＨＬＡ－Ａ２結合に対して高い親和性／安定性を示す。

【0206】

非スプライシングまたはスプライシングＸＢＰ１タンパク質（上記を参照のこと）の全長配列を、検索ソフトウェアＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（ＭＨＣリガンドおよびペプチドモチーフのデータベース、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｉｄｌｂｅｒｇ）を使用して分析して、ＨＬＡ－Ａ２に特異的なペプチドを予想し、その後にＢＩＭＡＳプログラムによって半減期解離速度が延長されたペプチドを選択した。全部で６つの潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合未変性ペプチドを、以下の非スプライシングＸＢＰ１タンパク質から選択した：ＸＢＰ１_{１１７～１２５}（ＬＬＲＥＫＴＨＧＬ（配列番号１）；ＸＢＰ１番号１ペプチド）、ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２）；ＸＢＰ１番号２ペプチド）、ＸＢＰ１_{１８９～１９７}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号３）；ＸＢＰ１番号３ペプチド）、ＸＢＰ１_{１９２～２００}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号４）；ＸＢＰ１番号４ペプチド）、ＸＢＰ１_{１１０～１１８}（ＫＬＬＬＥＮＱＬＬ（配列番号５）；ＸＢＰ１番号５ペプチド）、およびＸＢＰ１_{９３～１０１}（ＲＭＳＥＬＥＱＱＶ（配列番号２７）；ＸＢＰ１番号６ペプチド）。さらに、３つの潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合未変性ペプチドを、評価のために以下のスプライシングＸＢＰ１タンパク質から選択した：ＳＰ ＸＢＰ１_{１９６～２０４}（ＧＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号７）；ＳＰ ＸＢＰ１番号１ペプチド）、ＳＰ ＸＢＰ１_{１９３～２０１}（ＩＬＬＧＩＬＤＮＬ（配列番号８）；ＳＰ ＸＢＰ１番号２ペプチド）、およびＳＰ ＸＢＰ１_{３６７～３７５}（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号９）；ＳＰ ＸＢＰ１番号３ペプチド）。これらの未変性ＸＢＰ１ペプチドおよびインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））（ＨＬＡ－Ａ２結合ペプチドであることが公知）のＨＬＡ－Ａ２親和性を、Ｔ２ペプチド結合アッセイを使用して評価した。ペプチドの特異的親和性を、ＨＬＡ－Ａ２へのペプチド結合後のＴ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２上方制御の関数であるＨＬＡ－Ａ２－平均蛍光強度（ＭＦＩ）として評価した。非スプライシングＸＢＰ１タンパク質由来の試験ペプチドのうち、ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２）；ＸＢＰ１番号２ｐという）は、ＨＬＡ－Ａ２に対して最も高い親和性を有し（ＭＦＩ＝７２０±１４０）、インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号１６））（ＭＦＩ＝６０４±１０）よりもさらに高い親和性を保有すると判断された。残りのペプチドであるＸＢＰ１_{１１７～１２５}（ＬＬＲＥＫＴＨＧＬ（配列番号１））、ＸＢＰ１_{１８９～１９７}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号３））、ＸＢＰ１_{１９２～２００}（ＩＬＡＶＬＴＬＱＩ（配列番号４））、ＸＢＰ１_{１１０～１１８}（ＫＬＬＬＥＮＱＬＬ（配列番号５））、およびＸＢＰ１_{９３～１０１}（ＲＭＳＥＬＥＱＱＶ（配列番号２７））はまた、ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２））ペプチドよりも低いが、ＨＬＡ－Ａ２親和性に対して有意な親和性を有していた（図１）。

【0207】

各ペプチドのＨＬＡ－Ａ２結合安定性を、ブレフェルジンＡ処置の０、２、４、６、および１８時間後に評価した。予備研究により、非スプライシングＸＢＰ１番号２ｐペプチドがインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））と比較して有意に低レベルのＨＬＡ－Ａ２結合安定性を有することが証明された。ＨＬＡ－Ａ２裂溝内のＸＢＰ１番号２ｐの安定性を改善するために、アルギニン１８４をチロシンと置換したヘテロクリティックペプチドを未変性ＸＢＰ１_{１８４～１９２}（ＮＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号２））からデザインした（ヘテロクリティックＹＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号６）ペプチド；本明細書中でＸＢＰ１ ２Ｍと呼ばれる；太字のアミノ酸は野生型配列から改変されたアミノ酸を示す）。図２は、ＸＢＰ１ ２ＭのＨＬＡ－Ａ２結合安定性を試験するための実験結果を示す。図２に示すように、未変性ペプチド対応物と比較してヘテロクリティックペプチドについて有意により長い期間のＴ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２上方制御（ペプチドの結合安定性の関数として）が認められた。これらの結果は、ペプチドの改変によってより高いＨＬＡ－Ａ２結合安定性が得られたことを証明した。

【0208】

試験したスプライシングＸＢＰ１ペプチドのうち、未変性ＳＰ ＸＢＰ１_{１９６～２０４}（ＧＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号７）；ＳＰ ＸＢＰ１番号１ｐ）およびＳＰ ＸＢＰ１_{３６７～３７５}（ＥＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号９）；ＳＰ ＸＢＰ１番号３ｐ）は、それぞれＭＦＩスコア７６２±１６７および７８５±８４に反映されるように、ＨＬＡ－Ａ２に対する高親和性を有していた。この親和性は、ＭＦＩ＝８０７±１１３を有するインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））の親和性に匹敵した（図３）。ペプチド配列ＳＰ ＸＢＰ１番号１ｐおよびＳＰ ＸＢＰ１番号３ｐを上記のように改変して、そのＨＬＡ－Ａ２結合安定性を増強した。すなわち、各ペプチドの第１のアミノ酸をチロシンと置換した。図４は、その未変性対応物と比較してヘテロクリティックペプチドＹＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号１０；ＳＰ ＸＢＰ１番号３Ｍという）によって誘導されたＴ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２上方制御の増加を示す。このより高いレベルのＨＬＡ－Ａ２上方制御を、細胞含有ウェルからの過剰な非結合ペプチドの除去後のヘテロクリティックペプチドのブレフェルジンＡ中での６時間の培養によって維持した。ＸＢＰ１番号３Ｍの有効性と対照的に、ヘテロクリティックペプチドＹＩＬＤＮＬＤＰＶ（配列番号２８）（未変性ペプチドＸＢＰ１番号１ｐに由来）は、その未変性対応物を超えるＨＬＡ－Ａ２安定性の有意な増加を示さなかった。

【0209】

したがって、ヘテロクリティックペプチドＹＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号１０）およびＹＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号６）を、ＸＢＰ１抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＸＢＰ１－ＣＴＬ）を活性化する能力をさらに評価するために選択した。

【0210】

実施例３．ＸＢＰ１－ＣＴＬは非刺激Ｔ細胞と異なる表現型を示す
細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を、異なる細胞表面抗原（例えば、ＣＤ８）の発現によって表現型的に定義する。細胞表面抗原を使用して、ナイーブまたは活性化記憶細胞としてＣＴＬをさらに定義することもできる。例えば、ナイーブヒトＣＴＬをＣＤ４５ＲＡ^＋／ＣＣＲ７^＋の存在によって同定することができるのに対して、活性化ヒト記憶細胞をＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋として同定することができる。ヘテロクリティックペプチドで刺激したヒトＴ細胞集団に対してフローサイトメトリーを行って、ナイーブまたは活性化記憶細胞であったＣＴＬの比率を決定した。図５は、ＸＢＰ１ヘテロクリティックペプチドで刺激したＣＴＬが非刺激Ｔ細胞培養物（３３％）と比較して有意に高い比率のＣＤ８^＋Ｔ細胞を誘導し（非スプライシングペプチド刺激：８１％；スプライシングペプチド刺激：７５％）、非刺激Ｔ細胞培養物（６４％）と比較して低い比率のＣＤ４^＋Ｔ細胞（非スプライシングペプチド刺激：１４％；スプライシングペプチド刺激：１８％）を誘導することを示す。非刺激コントロールＴ細胞またはＣＤ１３８－ＣＴＬを、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ^＋／ＣＣＲ７^＋）または活性化記憶（ＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋）細胞状態についてさらに試験した。コントロールＴ細胞培養物が２４％のＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＣＲ７^＋ナイーブ細胞を含んでいた場合、たった１％または２％のＸＢＰ１－ＣＴＬしかこの表現型を示さなかった。さらに、ＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋（活性化記憶）表現型を発現する細胞集団は、コントロールＴ細胞（４％）と比較してＸＢＰ１－ＣＴＬ中で有意に高かった（非スプライシングペプチド刺激：６２％；スプライシングペプチド刺激：６４％）（図６）。これらの結果は、ＸＢＰ１ヘテロクリティックペプチドがＴ細胞の表現型を活性化ＣＴＬに変化させることを証明している。

【0211】

実施例４．ＭｃＣＡＲおよびＵ２６６はＨＬＡ－Ａ２およびＸＢＰ１抗原を発現する
いくつかの多発性骨髄腫細胞株中でのＨＬＡ－Ａ２およびＸＢＰ１抗原の発現を、フローサイトメトリーおよびウェスタンブロッティングを使用して決定した。Ｕ２６６細胞、ＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、およびＭＭ１Ｓ細胞をそれぞれ検出可能に標識した抗ＨＬＡ－Ａ２抗体と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した。高ＨＬＡ－Ａ２表面発現は、Ｕ２６６細胞株、ＭｃＣＡＲ細胞株、およびＭＬ－２細胞株で検出されたが、ＭＭ１Ｓ細胞株で検出されなかった。種々の各細胞株中でのＸＢＰ１の細胞内発現を、ウェスタンブロットによって決定した。細胞溶解物を各細胞株から調製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥに供した。これらの分析により、スプライシングＸＢＰ１タンパク質がＵ２６６細胞株、ＭｃＣＡＲ細胞株、およびＭＭ１Ｓ細胞株中で発現したが、ＭＬ－２細胞株中で発現しなかったことが示された。対照的に、全ての試験した細胞株中に非スプライシングＸＢＰ１が認められた。

【0212】

実施例５．ＸＢＰ１－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性のＩＦＮ－γ分泌
上記で生成したＸＢＰ１－ＣＴＬの抗原特異性およびＨＬＡ－Ａ２．１拘束を、上記で参照した多発性骨髄腫細胞株での刺激後のＩＦＮ－γ分泌の誘導の測定によって決定した。ＸＢＰ１－ＣＴＬは、ＭｃＣＡＲ細胞と培養した場合にＩＦＮ－γ分泌の有意な増加（＊ｐ＜０．０５）を示した。対照的に、ＭＬ－２細胞またはＭＭ１Ｓ細胞と培養した場合にＸＢＰ１－ＣＴＬ由来の極めて少ないＩＦＮ－γ分泌が認められた（図７）。ＭｃＣＡＲ細胞のみがＨＬＡ－Ａ２およびＸＢＰ１の両方を発現することが見出された。これらの結果により、ＸＢＰ１－ＣＴＬは多発性骨髄腫細胞上に提示されたＸＢＰ１ペプチドに対して抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束応答が可能であることが示唆される。

【0213】

実施例６．ＸＢＰ１－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の細胞増殖
ＸＢＰ１－ＣＴＬを、上記のようにカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）に曝露した。種々の腫瘍株での刺激に応答したＸＢＰ１－ＣＴＬの増殖を、細胞中のＣＦＳＥ量の測定によって決定した。ＣＦＳＥは膜透過性色素であり、細胞によって取り込まれる。細胞分裂の際、ＣＦＳＥの半分が各娘細胞に分配される。次いで、各娘細胞が分裂する場合、元のＣＦＳＥ濃度の全部で１／４が第３世代細胞に分配される。したがって、細胞分裂数を、各細胞集団中の色素の濃度の逆数として決定することができる。

【0214】

ＸＢＰ１－ＣＴＬを、膜透過性色素ＣＦＳＥと１０分間インキュベートし、洗浄し、次いで、上記多発性骨髄腫細胞と接触させた。ＣＦＳＥ量をフローサイトメトリーを使用して決定した。細胞を５０Ｕ／ｍｌ ＩＬ－２とインキュベートした場合、有意なＣＴＬ増殖は認められなかった。しかし、ＸＢＰ１－ＣＴＬ細胞をＭｃＣＡＲ細胞と培養した場合に有意により高いＣＴＬ増殖が認められた（Ｍ１ゲーティング；ＸＢＰ１－２Ｍ：５５％、ＸＢＰ１ ＳＰ－３Ｍ：４２％）（図８）。これらの結果は、ＣＴＬ細胞の増殖がＸＢＰ１特異的且つＨＬＡ－Ａ２拘束性であり、ＩＦＮ－γ分泌データと一致することを証明する。

【0215】

実施例７．ＸＢＰ１－ＣＴＬの抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の細胞傷害活性
ヘテロクリティックＸＢＰ１ペプチド特異的ＣＴＬが多発性骨髄腫細胞を特異的に標的して溶解する能力を決定した。ＹＩＳＰＷＩＬＡＶ（配列番号６；ＸＢＰ１ ＳＰ ２Ｍ）またはＹＬＦＰＱＬＩＳＶ（配列番号１０；ＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ）ペプチドのいずれかで誘導したＸＢＰ１－ＣＴＬを、カルセイン放出細胞傷害性アッセイによって多発性骨髄腫細胞の溶解能力について試験した。各ＣＴＬ集団をＭＭ細胞またはＡＭＬ細胞と共培養し、溶解量を、溶解細胞からのカルセイン放出量の測定によって決定した。図９および１０に示すように、ＸＢＰ１ ２Ｍ特異的ＣＴＬ（図９）およびＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ特異的ＣＴＬ（図１０）は、ＨＬＡ－Ａ２^＋／ＸＢＰ１^＋悪性ＭＭ細胞を溶解することができた（ＭｃＣＡＲ（ＸＢＰ１ ２Ｍ－ＣＴＬによって９～５０％溶解およびＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ－ＣＴＬによって１５～６９％溶解）およびＵ２６６（ＸＢＰ１ ２Ｍ－ＣＴＬによって１６～７４％溶解およびＸＢＰ１ ＳＰ ３Ｍ－ＣＴＬによって１８～８３％溶解））。しかし、ＣＴＬは、ＨＬＡ－Ａ２^＋ＡＭＬ細胞（ＭＬ－２）またはＨＬＡ－Ａ２^－ＭＭ細胞（ＭＭ１Ｓ）の溶解を有意に誘導せず、この細胞傷害性が抗原特異的且つＨＬＡ－Ａ２拘束性であることが証明された。さらに、ＣＴＬはナチュラルキラー（ＮＫ）感受性細胞株Ｋ５６２を死滅させず、多発性骨髄腫細胞に対して認められた細胞傷害性はＸＢＰ１－ＣＴＬ中のＮＫ細胞の夾雑に起因しないことが確認された。

【0216】

実施例８．ＨＬＡ－Ａ２結合に対するＣＤ１３８ペプチドの親和性
ＣＤ１３８の全長配列（上記を参照のこと）を、検索ソフトウェアＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（ＭＨＣリガンドおよびペプチドモチーフのデータベース、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ
Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｉｄｌｂｅｒｇ）を使用して分析して、ＨＬＡ－Ａ２に特異的なペプチドを予想し、その後にＢＩＭＡＳプログラムによって半減期解離速度が延長されたペプチドを選択した。全部で以下の４つの潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合未変性ペプチドを選択した：ＣＤ１３８_{２５６～２６４}（ＶＩＡＧＧＬＶＧＬ；ＣＤ１３８番号１ｐ（配列番号１１））；ＣＤ１３８_{２６０～２６８}（ＧＬＶＧＬＩＦＡＶ；ＣＤ１３８番号２ｐ（配列番号１２））；ＣＤ１３８_５～１３（ＡＬＷＬＷＬＣＡＬ；ＣＤ１３８番号３ｐ（配列番号１３））；およびＣＤ１３８_７～１５（ＷＬＷＬＣＡＬＡＬ；ＣＤ１３８番号４ｐ（配列番号１４））。これらの未変性ＣＤ１３８ペプチドおよびインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））のＨＬＡ－Ａ２結合親和性を、Ｔ２ペプチド結合アッセイを使用して評価した。ペプチドの親和性をＨＬＡ－Ａ２－平均蛍光強度（ＭＦＩ）（ＨＬＡ－Ａ２は、ＨＬＡ－Ａ２特異的結合によってＴ２細胞上で上方制御される）として評価した。

【0217】

ＣＤ１３８由来の試験ペプチドのうち、ＣＤ１３８番号２ｐが最も特異的なＨＬＡ－Ａ２結合を有すると判断された（ＭＦＩ＝６９０±６５）。これは、ＨＬＡ－Ａ２特異的コントロールインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}の親和性（ＭＦＩ＝７０５±８０）に近かった。残りのペプチド（ＣＤ１３８番号１ｐ、ＣＤ１３８番号３ｐ、およびＣＤ１３８番号４ｐ）は、ＣＤ１３８番号２ｐペプチドよりも有意に低いＨＬＡ－Ａ２結合親和性を示した（図１１）。

【0218】

ＣＤ１３８番号２ｐのＨＬＡ－Ａ２結合安定性も、ブレフェルジンＡ処置の０、２、４、６、および１８時間後に評価した。図１２は、ＣＤ１３８番号２ｐのＨＬＡ－Ａ２結合安定性を試験するための実験の結果を示す。図１２中に示すように、ＣＤ１３８番号２ｐは、長期間（ペプチドパルス化後０時間、２時間、４時間、６時間、または一晩）にわたってＴ２上でＨＬＡ－Ａ２上方制御を誘導する能力がインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））とほぼ等価であった。これにより、ＨＬＡ－Ａ２分子へのＣＤ１３８番号２ｐ結合の安定性レベルが高いことが証明された。

【0219】

したがって、ＣＤ１３８抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＤ１３８－ＣＴＬ）を活性化する能力のさらなる評価のためにＣＤ１３８番号２ｐを選択した。

【0220】

実施例９．ＣＤ１３８－ＣＴＬは非刺激Ｔ細胞と異なる表現型を示す
ヘテロクリティックペプチドで刺激したＴ細胞集団に対してＦＦＣを実施して、ナイーブまたは活性化記憶細胞であったＣＴＬの比率を決定した。図１３は、ＣＤ１３８番号２ｐペプチドで刺激したＣＴＬが非刺激Ｔ細胞培養物（３３％）と比較して有意に高いＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率（ペプチド刺激：８２％）を示し、非刺激Ｔ細胞培養物（６４％）と比較して低いＣＤ４^＋Ｔ細胞の比率（ペプチド刺激：１５％）を示したことを示す。刺激していないコントロールＴ細胞またはＣＤ１３８－ＣＴＬを、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ^＋／ＣＣＲ７^＋）または活性化記憶（ＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋）細胞状態についてさらに試験した。コントロールＴ細胞培養物が２４％のＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＣＲ７^＋ナイーブ細胞を含んでいた場合、たった１％のＣＤ１３８－ＣＴＬしかこの表現型を示さなかった。さらに、ＣＤ６９^＋／ＣＤ４５ＲＯ^＋（活性化記憶）表現型を発現する細胞集団は、コントロールＴ細胞（４％）と比較してＣＤ１３８－ＣＴＬ（６７％）において有意に高かった（図１４）。これらの結果は、ＣＤ１３８番号２ｐペプチドが、Ｔ細胞の表現型を活性化ＣＴＬの表現型に変化させたことを証明している。

【0221】

実施例１０． ＭｃＣＡＲおよびＵ２６６はＨＬＡ－Ａ２およびＣＤ１３８抗原を発現する。

【0222】

いくつかの多発性骨髄腫細胞株におけるＨＬＡ－Ａ２およびＣＤ１３８抗原の発現をＦＦＣを使用して決定した。Ｕ２６６細胞株、ＭｃＣＡＲ細胞株、およびＭＬ－２細胞株で高ＨＬＡ－Ａ２表面発現が検出されたが、ＭＭ１Ｓ細胞株では検出されなかった。Ｕ２６６細胞株、ＭｃＣＡＲ細胞株、およびＭＭ１Ｓ細胞株でＣＤ１３８の細胞内発現が認められたが、ＭＬ－２細胞株では認められなかった。

【0223】

実施例１１．ＣＤ１３８－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性のＩＦＮ－γ分泌
種々の腫瘍細胞株での一晩の刺激後のＩＦＮ－γ分泌の誘導によってＣＤ１３８－ＣＴＬの抗原特異性およびＨＬＡ－Ａ２拘束をさらに確認した。ＣＤ１３８－ＣＴＬは、多発性骨髄腫ＭＭ１Ｓ細胞（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ－Ａ２^－）または急性骨髄性白血病ＭＬ－２細胞（ＣＤ１３８^－／ＨＬＡ－Ａ２^－）での刺激と比較してＭｃＣＡＲ細胞（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ－Ａ２^＋）での刺激後にＩＦＮ－γ分泌の有意な増加（＊ｐ＜０．０５）を示した。これらの結果により、ＣＤ１３８－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の応答がさらに証明される。

【0224】

実施例１２．ＣＤ１３８－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の細胞増殖
種々の腫瘍株での刺激に応答したＣＤ１３８－ＣＴＬの増殖を、細胞中のＣＦＳＥ量の測定によって決定した。ＣＤ１３８－ＣＴＬを、膜透過性色素ＣＦＳＥと１０分間インキュベートし、洗浄し、次いで、上記多発性骨髄腫細胞と接触させた。ＦＦＣを使用してＣＦＳＥ量を決定した。細胞を５０Ｕ／ｍｌ ＩＬ－２とインキュベートした場合、有意な細胞増殖は認められなかった。しかし、ＣＤ１３８－ＣＴＬ細胞をＭｃＣＡＲ細胞と培養した場合、有意により高いＣＴＬ増殖が認められた（Ｍ１ゲーティング；５０％）（図１６）。これらの結果により、ＣＴＬ細胞増殖がＣＤ１３８特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性であり、ＩＦＮ－γ分泌データと一致することが証明される。

【0225】

実施例１３．カルセイン（Ｃａｌｃｉｅｎ）－細胞傷害性アッセイにおけるＣＤ１３８－ＣＴＬ
ＣＤ１３８－ＣＴＬが多発性骨髄腫細胞を特異的にターゲティングして溶解する能力を決定した。いずれかのＣＤ１３８番号２ｐペプチドで誘導したＣＤ１３８－ＣＴＬを、カルセイン放出細胞傷害性アッセイによって多発性骨髄腫細胞を溶解する能力について試験した。図１７に示すように、ＣＤ１３８－ＣＴＬは、ＨＬＡ－Ａ２^＋／ＣＤ１３８－１^＋悪性多発性骨髄腫細胞Ｕ２６６を溶解することができた。しかし、ＣＴＬはＨＬＡ－Ａ２^＋ＡＭＬ細胞（ＭＬ－２）やＨＬＡ－Ａ２^－ＭＭ細胞（ＭＭ１Ｓ）を有意に溶解せず、この細胞傷害性が抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性であることが証明された。さらに、ＣＴＬはナチュラルキラー（ＮＫ）感受性細胞株Ｋ５６２を死滅させず、多発性骨髄腫細胞に対して認められた細胞傷害性がＣＤ１３８－ＣＴＬ中のＮＫ細胞の夾雑に起因しないことが確認された。

【0226】

実施例１４．ＣＤ１０７細胞傷害性アッセイにおけるＣＤ１３８－ＣＴＬ
ＣＤ１０７アッセイにより、脱顆粒（標的細胞溶解中に起こる最初の事象）中のみで発現されるマーカーを使用して、応答するＣＤ８^＋Ｔ細胞の表現型および機能を特徴づけることが可能である。このアッセイを使用して、ＣＤ１３８－ＣＴＬの細胞傷害性レベルを、フローサイトメトリー分析によってＣＤ１３８－ＣＴＬの細胞表面上のＣＤ１０７ａおよびＣＤ１０７ｂの上方制御レベルを分析することによって測定した。結果により、ＣＤ１３８－ＣＴＬが生理学的変化を受けて、異なるエフェクターに対する標的比（５：１、１：１、または１：５）で、対応するＣＤ１３８－ペプチド提示Ｔ２細胞の溶解を誘導するが、無関係のＭＡＧＥ３ペプチドパルスしたＴ２細胞では誘導しなかったことが証明された（図１８Ａ）。さらに、ＣＤ１３８－ＣＴＬは、対応するＣＤ１３８ペプチド提示ＭｃＣＡＲ細胞（ＣＤ１３８^＋／ＨＬＡ－Ａ２^＋）細胞の溶解を誘導したが、無関係のＭＡＧＥ３ペプチド提示細胞は誘導しなかった（ＣＴＬ：刺激物質比（１：１）で）（図１８Ｂ）。

【0227】

実施例１５．多発性骨髄腫細胞株および初代多発性骨髄腫癌細胞によるＣＳ１ポリペプチドの発現
いくつかの多発性骨髄腫細胞株におけるＨＬＡ－Ａ２およびＣＳ１抗原の発現を、ＦＦＣマイクロアレイ分析を使用して決定した。Ｕ２６６細胞、ＭｃＣＡＲ細胞、ＭＬ－２細胞、およびＭＭ１Ｓ細胞をそれぞれ検出可能に標識した抗ＨＬＡ－Ａ２抗体および検出可能に標識した抗ＣＳ１抗体と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した。同様に、ＭＭを有する６人の各患者から初代ＭＭ細胞を得、検出可能に標識した抗ＨＬＡ－Ａ２抗体および検出可能に標識した抗ＣＳ１抗体と接触させ、フローサイトメトリー分析に供した。高レベルのＨＬＡ－Ａ２およびＣＳ１タンパク質表面発現がＵ２６６細胞株、ＭｃＣＡＲ細胞株、およびＭＬ－２細胞株の表面上で検出されたが、ＭＭ１Ｓ細胞株上には検出されなかった。

【0228】

ＣＳ１がヒト患者から得た初代ＭＭ細胞中で発現されるかどうかを試験するために、マイクロアレイ分析を複数の患者から得た初代ＭＭサンプルに対して行った。総ＲＮＡを各ＭＭ患者のＣＤ１３８精製腫瘍細胞から単離し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３ Ｐｌｕｓ ２．０アレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用してマイクロアレイ分析に供した。ＭＭを持たない患者由来の細胞中の発現と比較して、ＭＭ細胞中の高ＣＳ１ ｍＲＮＡ発現が大部分のＭＭ細胞中で認められた（図１９）。

【0229】

まとめると、これらの結果により、ＣＳ１タンパク質が初代および培養したＭＭ細胞の両方で発現されることが証明される。

【0230】

実施例１６．ＨＬＡ－Ａ２結合に対するＣＳ１ペプチドの親和性
ＣＳ１タンパク質の全長配列（上記を参照のこと）を検索ソフトウェアＲＡＮＫＰＥＰ、ＢＩＭＡＳ、およびＮｅｔＭＨＣを使用して分析して、ＨＬＡ－Ａ２に特異的なペプチドを予想した。全部で４つの以下の潜在的なＨＬＡ－Ａ２結合未変性ペプチドを選択した：ＣＳ１－Ｐ１：ＣＳ１_{２３６～２４５}（ＬＬＬＳＬＦＶＬＧＬ（配列番号１５））；ＣＳ１－Ｐ２：ＣＳ１_{２３９～２４７}（ＳＬＦＶＬＧＬＦＬ（配列番号１６））；ＣＳ１－Ｐ３：ＣＳ１_{２３２～２４０}（ＬＬＶＰＬＬＬＳＬ（配列番号１７））、およびＣＳ１－Ｐ４：ＣＳ１_９～１７（ＴＬＩＹＩＬＷＱＬ（配列番号１８））。これらの未変性ＣＳ１ペプチドおよびインフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチド_{５８～６６}（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ（配列番号２４））のＨＬＡ－Ａ２結合親和性を、Ｔ２ペプチド結合アッセイを使用して評価した。ペプチドの親和性を、ＨＬＡ－Ａ２－平均蛍光強度（ＭＦＩ）（ＨＬＡ－Ａ２はＨＬＡ－Ａ２特異的結合によってＴ２細胞上で上方制御される）として評価した。ＨＬＡ－Ａ＊０２０１分子に結合するペプチドを、Ｔ２細胞株を使用して測定した。Ｔ２細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ）を、３μｇのヒトβ_２－ミクログロブリンおよび／または５０μｇ／ｍＬのＣＳ１ペプチドとインキュベートした。インフルエンザウイルスタンパク質基質ペプチドを、ポジティブコントロールとして使用した。一晩のインキュベーション後、細胞を洗浄し、ＰＥ標識したマウス抗ヒトＨＬＡ－Ａ２ ｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。蛍光指標（ＦＩ＝ペプチド＋β_２ミクログロブリンでパルスしたＴ２細胞の平均チャネル蛍光／β_２ミクログロブリンのみでパルスしたＴ２細胞の平均チャネル蛍光）を計算して、ＨＬＡ－Ａ２．１特異的ペプチド結合に原因するＴ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２．１分子の上方制御を決定した。

【0231】

ＣＳ１由来の試験ペプチドのうち、３つ（Ｐ２、Ｐ３、およびＰ４）は、インフルエンザ基質ペプチドよりもＨＬＡ－Ａ２に対して高い親和性を有していた。残りのペプチドＰ１（ＣＳ１_{２３６～２４５}（ＬＬＬＳＬＦＶＬＧＬ（配列番号１５）））は、インフルエンザ基質ペプチドよりもわずかに低いＨＬＡ－Ａ２結合親和性しか示さなかった（図２０）。

【0232】

実施例１７．Ｐ２ペプチド特異的ＣＳ１－ＣＴＬの拡大
ＣＤ８＋Ｔ細胞をヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離し、Ｐ２（ＣＳ１_{２３９～２４７}（ＳＬＦＶＬＧＬＦＬ（配列番号１６）））ペプチド提示自己樹状細胞と培養した。ＣＤ８＋細胞を、７日毎のペプチド提示樹状細胞の添加によって再刺激した。４回目の再刺激後、ＣＳ１_{２３９～２４７}に特異的な培養物中のＣＴＬの比率を、ＰＥ抱合したＨＬＡ－Ａ＊０２０１ Ｐ２－四量体検出部分およびＦＩＴＣ抱合した抗ＣＤ８モノクローナル抗体で染色したフロー分析によって評価した。集団中の約４．１％の細胞がＨＬＡ－Ａ＊０２０１ Ｐ２－四量体および抗ＣＤ８抗体の両方によって結合され、約４．１％の細胞がＣＳ１－ＣＴＬであることを示した。

【0233】

実施例１８．ＣＳ１－ＣＴＬのＣＳ１ Ｐ２ペプチド特異的細胞活性化
ＣＳ１－ＣＴＬの増殖活性を、トリチウム化チミジン（^３Ｈ－チミジン）組み込みアッセイによって評価した。ＣＳ１－ＣＴＬ（５×１０^４／ウェル）を、ＣＳ１ Ｐ２ペプチドを提示する（または提示しない）照射Ｔ２細胞（５×１０^３／ウェル）とそれぞれ２４、４８、および７２時間培養した。^３Ｈ－チミジン（０．５μＣｉ）を、細胞回収の１２時間前にウェルに添加した。ＣＳ１ Ｐ２提示Ｔ２細胞と培養したＣＳ１－ＣＴＬは、ＣＳ１ Ｐ２ペプチドを提示しないＴ２細胞と接触させたＣＳ１－ＣＴＬと比較して、増殖が顕著に増加した（図２１）。モノクローナル抗ＣＤ２５－ＰＣ５抗体を使用したフローサイトメトリーによる表面ＰＣ５発現の上方制御の測定によって、インキュベーションの４８時間後にＣＳ１－ＣＴＬの活性化を決定した。増殖ＣＳ１－ＣＴＬがＣＳ１ Ｐ２提示Ｔ２細胞との培養の際にＰＣ５発現の増加を示した所見により、ＣＳ１－ＣＴＬも活性されることが示唆された。

【0234】

実施例１９．ＣＳ１－ＣＴＬによる抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性のＩＦＮ－γ分泌
ＣＳ１－ＣＴＬの抗原特異性およびＨＬＡ－Ａ２拘束を、表面ＨＬＡ－Ａ２と関連して各ＣＳ１ペプチドを提示するＴ２細胞での４つの異なる各ＣＳ１－ＣＴＬ集団（ＣＳ１－Ｐ１－ＣＴＬ、ＣＳ１－Ｐ２－ＣＴＬ、ＣＳ１－Ｐ３－ＣＴＬ、およびＣＳ１－Ｐ４－ＣＴＬ）の一晩の刺激後のＩＦＮ－γ分泌の誘導によってさらに確認した。各ＣＳ１－ＣＴＬ集団がＩＦＮ－γ分泌のいくらかの増加を示した一方で、ＣＳ１－Ｐ２－ＣＴＬはＰ２－ペプチド提示Ｔ２細胞との接触後に最も高い程度のＩＦＮ－γ分泌を示した（図２２）。これらの結果は、ＣＳ１－ＣＴＬ集団による抗原特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の応答をさらに証明する。

【0235】

実施例２０．カルセイン（Ｃａｌｃｉｅｎ）－細胞傷害性アッセイにおけるＣＳ１－ＣＴＬ
ＣＳ１－ＣＴＬが多発性骨髄腫細胞を特異的にターゲティングして溶解する能力を決定した。ＣＳ１－ＣＴＬをＣＳ１－Ｐ２ペプチドで２回活性化し（１日目および７日目）、カルセイン放出細胞傷害性アッセイによって多発性骨髄腫細胞の溶解能力について試験した。ＭＭ細胞株（ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、およびＭＣＣＡＲ）をカルセイン－ＡＭ（５μｇ／ｍｌ）によって標識し、これらを標的細胞として５，０００細胞／ウェルで使用した。エフェクター細胞の標的細胞に対する比は２０：１であった。図２３に示すように、ＣＳ１－Ｐ２－ＣＴＬは標的ＭＭ細胞株ＭＣＣＡＲ（ＨＬＡ－Ａ２^＋／ＣＳ１^＋）の死滅に有効であった（３０％細胞傷害性）のに対して、ＭＭ．１Ｓ（ＨＬＡ－Ａ２^－／ＣＳ１^＋）およびＵ２６６（ＨＬＡ－Ａ２^＋／ＣＳ１^－）標的細胞では有意な細胞傷害性は認められなかった。さらに、ＣＳ１－ＣＴＬはＰ２ペプチドと接触させたＭＣＣＡＲ細胞に対して高い細胞傷害性を示し、それにより、ペプチド特異的およびＨＬＡ－Ａ２拘束性の細胞傷害効果が確認された。

【0236】

他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて記載しているが、上記説明は本発明の例示を意図し、本発明の範囲を制限することを意図せず、本発明は添付の特許請求の範囲によって定義される。他の態様、利点、および修正形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【配列表】

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