特許 7321584 蛍光染料及びその製造方法と使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-07-28

(45)【発行日】2023-08-07

(54)【発明の名称】蛍光染料及びその製造方法と使用

(51)【国際特許分類】

   C09B 23/14 20060101AFI20230731BHJP

   C07D 241/20 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 213/74 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 239/42 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 213/78 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 241/24 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 471/06 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 209/18 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 333/66 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 495/04 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 333/24 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 413/10 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 333/36 20060101ALI20230731BHJP

   C07D 409/14 20060101ALI20230731BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALI20230731BHJP

   C09B 23/16 20060101ALI20230731BHJP

   C09K 11/06 20060101ALI20230731BHJP

【ＦＩ】

C09B23/14 100

C07D241/20 CSP

C07D213/74

C07D239/42

C07D213/78

C07D241/24

C07D471/06

C07D209/18

C07D333/66

C07D495/04 101

C07D333/24

C07D413/10

C07D333/36

C07D409/14

C12Q1/68 ZNA

C09B23/16

C09K11/06

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2021564230

(86)(22)【出願日】2020-04-27

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-05

(86)【国際出願番号】 CN2020087311

(87)【国際公開番号】W WO2020221217

(87)【国際公開日】2020-11-05

【審査請求日】2021-12-24

(31)【優先権主張番号】201910352348.X

(32)【優先日】2019-04-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】521398149

【氏名又は名称】フルオレッセンス ダイアグノシス（シャンハイ） バイオテック カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100166729

【弁理士】

【氏名又は名称】武田 幸子

(72)【発明者】

【氏名】チュー リンヨン

(72)【発明者】

【氏名】ヤン イー

(72)【発明者】

【氏名】チャン ダーシェン

(72)【発明者】

【氏名】チェン シャンジュン

(72)【発明者】

【氏名】リン チウニン

(72)【発明者】

【氏名】スー ニー

【審査官】堀 洋樹

(56)【参考文献】

【文献】米国特許第０６３３５４４６（ＵＳ，Ｂ１）

【文献】米国特許出願公開第２００４／００４７８０６（ＵＳ，Ａ１）

【文献】中国特許出願公開第１０６９３９１６３（ＣＮ，Ａ）

【文献】Chemistry of Materials ，2009年，21，p.5819-5825

【文献】Dyes and Pigments，2014年，105，p.223-231

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０９Ｂ １／００－６９／１０

Ｃ０７Ｄ

Ｃ１２Ｑ １／００－３／００

Ｃ０９Ｋ １１／００－１１／８９

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

構造式が式（Ｉ）に示される蛍光染料であって、

【化1】

式中、
Ｄ－は、ＨＯ－又はＮ（Ｘ_１）（Ｘ_２）－であり、Ｘ_１、Ｘ_２はそれぞれ独立して、水素、アルキル基及び変性アルキル基から選択され、Ｘ_１、Ｘ_２は、互いに結合してＮ原子とともに脂肪族複素環を形成してもよく、
Ｒは、シアノ基、カルボキシル基、アミド基、エステル基、スルホキシド基、スルホン基、又はスルホンアミド基から選択され、
Ａｒ_１は、アリーレン基、ヘテロアリーレン基から選択され、
Ａｒ_２は、下式（ＩＩ－１）～（ＩＩ－８）から選択される構造であり、

【化2】

そのうち、Ａｒ_１、Ａｒ_２における水素原子はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルデヒド基、カルボキシル基、エステル基、アミド基、リン酸基、アミノ基、一級アミノ基、二級アミノ基、又はアルキル基で置換されてもよく、
Ｘ_１、Ｘ_２は独立して、Ａｒ_１と脂肪族複素環を形成してもよく、
ただし、
前記「アルキル基」はそれぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_１０直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｃ_１～Ｃ_７直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、イソアミル基、１－エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、３－エチルペンチル基又は２，２，３－トリメチルブチル基から選択されてもよく、
前記「変性アルキル基」はそれぞれ独立して、アルキル基の任意の炭素原子が、ハロゲン原子、－ＯＨ、－ＣＯ－、－Ｏ－、－ＣＮ、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－（Ｓ＝Ｏ）－、アジド基、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基、四級アンモニウム塩基から選択される１種又は複数種の基で置換された基であり、前記変性アルキル基は、１～１０個の炭素原子を有し、その炭素－炭素単結合が独立して炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合で置換されてもよく、
前記炭素原子の置換とは、炭素原子又は炭素原子とそれに結合した水素原子とが対応する基で置換されることを意味し、
前記「ハロゲン原子」はそれぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、
前記「脂肪族複素環」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉのうちの１種又は複数種のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の４～１５員の単環又は多環の脂肪族複素環であり、前記脂肪族複素環中にＳ原子を有する場合、－Ｓ－、－ＳＯ－又は－ＳＯ_２－であり、前記脂肪族複素環は、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基又は変性アルキル基で置換されてもよく、
前記「アリーレン基」は、５～１３員の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のアリーレン基であり、
前記「ヘテロアリーレン基」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉから選択される１種又は複数種のヘテロ原子を有する５～１３員の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のヘテロアリーレン基であり、
前記「エステル基」は、Ｒ'（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ”基であり、
前記「アミド基」は、Ｒ'ＣＯＮＲ”Ｒ”'基であり、
前記「スルホンアミド基」は、Ｒ'ＳＯ_２ＮＲ”Ｒ”'基であり、
前記「リン酸基」は、Ｒ'ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２基であり、
前記「スルホン基」は、Ｒ'ＳＯ_２Ｒ”基であり、
前記「スルホキシド基」は、Ｒ'ＳＯＲ”基であり、
前記「一級アミノ基」は、Ｒ'ＮＨ_２基であり、
前記「二級アミノ基」は、Ｒ'ＮＨＲ”基であり、
前記「三級アミノ基」は、Ｒ'ＮＲ”Ｒ”'基であり、
前記「四級アンモニウム塩基」は、Ｒ'Ｒ”Ｒ”'Ｒ””Ｎ^＋基であり、
各Ｒ'、Ｒ”、Ｒ”'、Ｒ””はそれぞれ独立して、単結合、水素、アルキル基、アルキレン基、変性アルキル基又は変性アルキレン基であり、
前記「アルキレン基」は、Ｃ_１～Ｃ_１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、Ｃ_１～Ｃ_７直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、
前記「変性アルキレン基」は、Ｃ_１～Ｃ_１０（好ましくはＣ_１～Ｃ_６）アルキレン基の任意の炭素原子が－Ｏ－、－ＯＨ、－ＣＯ－、－ＣＳ－、－（Ｓ＝Ｏ）－から選択される基で置換された基である、
蛍光染料。

【請求項2】

前記「変性アルキル基」は、－ＯＨ、－Ｏ－、エチレングリコール単位、単糖単位、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＳＯ_２－Ｏ－、－ＳＯ－、Ｍｅ_２Ｎ－、Ｅｔ_２Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ基から選択される１種又は複数種基を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載の蛍光染料。

【請求項3】

Ａｒ_１は、下式（ＩＩ－１）～（ＩＩ－２２）から選択される構造である、
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の蛍光染料。

【化3】

【請求項4】

式（Ｉ）に示される化合物は、下式化合物から選択される、
ことを特徴とする請求項１～３のいずれか１項に記載の蛍光染料。

【化4A】

【化4B】

【請求項5】

請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料の製造方法であって、式（ａ）化合物と式（ｂ）化合物がアルドール縮合反応を行う工程を含む、
ことを特徴とする製造方法。

【化5】

【請求項6】

請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出での使用であって、前記使用は疾患の診断方法のための使用ではない、使用。

【請求項7】

請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用。

【請求項8】

請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料を含む、蛍光活性化発生型プローブ。

【請求項9】

請求項８に記載の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出での使用であって、前記使用は疾患の診断方法のための使用ではない、使用。

【請求項10】

請求項８に記載の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、蛍光染料技術分野に関し、詳しくは、粘度応答性でバックグラウンド蛍光の低い蛍光染料及びその製造方法と使用に関する。

【背景技術】

【0002】

分子ローターは、一種の蛍光強度が微小環境の粘度に応じて変化する染料であり、光励起後に分子に立体配座の歪みが生じてＴＩＣＴ分子内電荷移動状態を形成し、励起状態エネルギーは主に非放射の形で放出されるが、粘度が比較的大きい又は比較的剛性である微小環境にある時、このような分子の分子立体配座の歪みが制限され、この時の染料励起状態エネルギーは主に放射発光の形で放出され、即ち、このような分子の蛍光性質が活性化される。重要なのは、このような分子の蛍光強度が微小環境の粘度の変化に応じて変化し、微小環境の粘度変化をリアルタイムで、インサイトで、敏感かつ可視化に示すことができる。

【0003】

現在、分子ローターの立体配座の歪みの制限による蛍光発光は、粘度検出分野に用いられるほか、蛍光活性化プローブの構築にも広く使用されている。例えば、分子ローターとＢＳＡが結合した後、分子立体配座がタンパク質によって制限され、蛍光を発するが、タンパク質と結合していない染料の励起状態エネルギーは依然として非放射の形で放出され、これによって、タンパク質をリアルタイムで定量的に検出する効果を奏する。また、例えば、チアゾールオレンジは、ＤＮＡやＲＮＡと結合する前に蛍光消光の状態にあり、ＤＮＡ又はＲＮＡと結合した後に分子立体配座が制限されることにより、蛍光が活性化されるため、ＤＮＡ、ＲＮＡの検出とトレースに広く使用されている。また、マラカイトグリーンなどの分子ローターは、抗体に被覆されて、分子の立体配座変化が制限されて、タンパク質の活性化型蛍光イメージングに利用される。また、ＤＨＢＩは、アプタマーと結合して、ＲＮＡトレース用の蛍光タンパク質模擬体を構築する。更にまた、例えば、アミロイドタンパク質と結合して、分子の立体配座変化が制限されて、アルツハイマー病の検出と研究などに利用される。

【0004】

ところで、現在の分子ローターは、普遍的にバックグラウンド蛍光が高い欠点が存在し、即ち、分子ローターの自由状態での蛍光強度が高く、例えば、生体試料中の内因性タンパク質、核酸、代謝物質などの、サンプル量が少く、成分が複雑であり、被検物存在度が低いサンプル検出と標識に適用し難い。したがって、バックグラウンド蛍光の低い分子ローターの開発は、現在の蛍光ローターの使用を拡大することができる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明の目的は、粘度応答性を有し、バックグラウンド蛍光の低い蛍光染料を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明の第一の局面は、式（Ｉ）に示される蛍光染料であって、

【化1】

式中、
Ｄ－は、ＨＯ－又はＮ（Ｘ_１）（Ｘ_２）－であり、Ｘ_１、Ｘ_２はそれぞれ独立して、水素、アルキル基及び変性アルキル基から選択され、Ｘ_１、Ｘ_２は、互いに結合してＮ原子とともに脂肪族複素環を形成してもよく、
Ｒは、シアノ基、カルボキシル基、アミド基、エステル基、スルホキシド基、スルホン基、スルホネート基又はスルホンアミド基から選択され、Ａｒ_１及びＡｒ_２はそれぞれ独立して、アリーレン基、ヘテロアリーレン基から選択され、そのうち、Ａｒ_１、Ａｒ_２における水素原子はそれぞれ独立して、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルデヒド基、カルボキシル基、エステル基、アミド基、シアノ基、スルホン酸基、リン酸基、アミノ基、一級アミノ基、二級アミノ基、アルキル基又は変性アルキル基で置換されてもよく、
Ｘ_１、Ｘ_２は独立して、Ａｒ_１と脂肪族複素環を形成してもよく、
前記「アルキル基」はそれぞれ独立して、Ｃ_１～Ｃ_１０直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｃ_１～Ｃ_７直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、イソアミル基、１－エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、３－エチルペンチル基又は２，２，３－トリメチルブチル基から選択されてもよく、
前記「変性アルキル基」はそれぞれ独立して、アルキル基の任意の炭素原子が、ハロゲン原子、－ＯＨ、－ＣＯ－、－Ｏ－、－ＣＮ、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－（Ｓ＝Ｏ）－、アジド基、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基、四級アンモニウム塩基から選択される１種又は複数種の基で置換された基であり、前記変性アルキル基は、１～１０個の炭素原子を有し、その炭素－炭素単結合が独立して炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合で置換されてもよく、
前記炭素原子の置換とは、炭素原子、又は炭素原子とそれに結合した水素原子とが対応する基で置換されることを意味し、
前記「ハロゲン原子」はそれぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、
前記「脂肪族複素環」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉのうちの１種又は複数種のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の４～１５員の単環又は多環の脂肪族複素環であり、前記脂肪族複素環中にＳ原子を有する場合、－Ｓ－、－ＳＯ－又は－ＳＯ_２－であり、前記脂肪族複素環は、ハロゲン原子、アルキル基、アリール基又は変性アルキル基で置換されてもよく、
前記「アリーレン基」は、５～１３員の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のアリーレン基であり、
前記「ヘテロアリーレン基」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉから選択される１種又は複数種のヘテロ原子を有する５～１３員の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のヘテロアリーレン基であり、
前記「エステル基」は、Ｒ’（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ”基であり、
前記「アミド基」は、Ｒ’ＣＯＮＲ”Ｒ”’基であり、
前記「スルホン酸基」は、Ｒ’ＳＯ_３Ｈ基であり、
前記「スルホネート基」は、Ｒ’ＳＯ_２ＯＲ”基であり、
前記「スルホンアミド基」は、Ｒ’ＳＯ_２ＮＲ”Ｒ”’基であり、
前記「リン酸基」は、Ｒ’ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２基であり、
前記「スルホン基」は、Ｒ’ＳＯ_２Ｒ”基であり、
前記「スルホキシド基」は、Ｒ’ＳＯＲ”基であり、
前記「一級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨ_２基であり、
前記「二級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨＲ”基であり、
前記「三級アミノ基」は、Ｒ’ＮＲ”Ｒ”’基であり、
前記「四級アンモニウム塩基」は、Ｒ’Ｒ”Ｒ”’Ｒ””Ｎ^＋基であり、
各Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’、Ｒ””はそれぞれ独立して、単結合、水素、アルキル基、アルキレン基、変性アルキル基又は変性アルキレン基であり、
前記「アルキレン基」は、Ｃ_１～Ｃ_１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、Ｃ_１～Ｃ_７直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、
前記「変性アルキレン基」は、Ｃ_１～Ｃ_１０（好ましくはＣ_１～Ｃ_６）アルキレン基の任意の炭素原子が－Ｏ－、－ＯＨ、－ＣＯ－、－ＣＳ－、－（Ｓ＝Ｏ）－から選択される基で置換された基であり、
前記「変性アルキル基」は、－ＯＨ、－Ｏ－、エチレングリコール単位（－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－）、単糖単位、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＳＯ_２－Ｏ－、－ＳＯ－、Ｍｅ_２Ｎ－、Ｅｔ_２Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ基から選択される１種又は複数種の基を有してもよく、
Ａｒ_１及びＡｒ_２はそれぞれ独立して、下式（ＩＩ－１）～（ＩＩ－２２）から選択される構造であってもよく、

【化2】

式（Ｉ）に示される化合物は、下式の化合物から選択されてもよい、

【化3A】

【化3B】

蛍光染料を提供する。

【0007】

本発明の第二の局面は、式（ａ）化合物と式（ｂ）化合物がアルドール縮合反応を行う工程を含む前記蛍光染料の製造方法を提供する。

【化4】

【0008】

本発明の第三の局面は、前記蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出での使用を提供し、前記使用は疾患の診断方法のための使用ではない。

【0009】

本発明の第四の局面は、前記蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用を提供する。

【0010】

本発明の第五の局面は、前記蛍光染料を含む蛍光活性化発生型プローブを提供する。

【0011】

本発明の第六の局面は、前記蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出での使用を提供し、前記使用は疾患の診断方法のための使用ではない。

【0012】

本発明の第七の局面は、前記蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用を提供する。

【0013】

本発明による蛍光染料は、サンプルの粘度測定に使用可能であり、例えば、微視的粘度の測定に適用する。別の実施形態によれば、得られる蛍光染料は、対応する抗体、アプタマー又はアミロイドタンパク質などと特異的に結合し、あるいは、リガンド又は阻害剤を介してタンパク質タグ又は酵素と結合して、一連の蛍光活性化発生型プローブを得て、タンパク質、酵素又は核酸の蛍光標識、定量又はモニタリングに使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】分子ローターＩＩＩ－３（１×１０^－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光発光強度図である。

【図2】分子ローターＩＩＩ－３（１×１０^－５Ｍ）の粘度条件と蛍光強度の線形関係図である。

【図3】分子ローターＩＩＩ－４（１×１０^－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光発光強度図である。

【図4】分子ローターＩＩＩ－４（１×１０^－５Ｍ）の粘度条件と蛍光強度の線形関係図である。

【図5】分子ローターＩＩＩ－２８（１×１０^－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光発光強度図である。

【図6】分子ローターＩＩＩ－２８（１×１０^－５Ｍ）の粘度条件と蛍光強度の線形関係図である。

【図7】分子ローターＩＩＩ－３４（１×１０^－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光発光強度図である。

【図8】分子ローターＩＩＩ－３４（１×１０^－５Ｍ）の粘度条件と蛍光強度の線形関係図である。

【図9】分子ローターＩＩＩ－１１とＩＩＩ－３６（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図10】分子ローターＩＩＩ－３４とＩＩＩ－３７（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図11】分子ローターＩＩＩ－３１、ＩＩＩ－３２、ＩＩＩ－３３とＩＩＩ－３８（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図12】分子ローターＩＩＩ－３とＩＩＩ－３９（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図13】分子ローターＩＩＩ－２１とＩＩＩ－４０（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図14】分子ローターＩＩＩ－２８、ＩＩＩ－２９、ＩＩＩ－３０とＩＩＩ－４１（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図15】分子ローターＩＩＩ－３とＩＩＩ－４２（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図16】分子ローターＩＩＩ－３とＩＩＩ－４３（１×１０^－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンドの比較図である。

【図17】分子ローターＩＩＩ－３、ＩＩＩ－４、ＩＩＩ－６、ＩＩＩ－７、ＩＩＩ－８、ＩＩＩ－１８、ＩＩＩ－２１を細胞内ＲＮＡアプタマーの標識に使用し、Ａは標的ＲＮＡアプタマーを発現した細胞であり、Ｂは標的ＲＮＡアプタマーを発現していない細胞である。

【図18】分子ローターＩＩＩ－３、ＩＩＩ－４３を細胞内ｍＲＮＡの標識に使用した。

【発明を実施するための形態】

【0015】

実施例１：
化合物ＩＩＩ－１：

【化5】

４－Ｎ，Ｎ－ジメチル－ベンズアルデヒド（０．３５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、４－シアノ－フェニルアセトニトリル（０．４ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの丸形フラスコに取り、４０ｍｌの無水エタノールを加えて溶解して、ピペリジンを２滴加えて、Ａｒ保護条件下、オイルバスで２ｈ加熱還流し、反応完了後、室温まで冷却し、固形物が大量に析出し、ろ過して、冷たいエタノールでろ過ケーキを３回リンスし、真空乾燥してオレンジ色固体（０．６０ｇ、９５％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝３．０５（ｓ，６Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４－７．９４（ｍ，６Ｈ），８．０２ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１６Ｏ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：２７４．１３４４．Ｆｏｕｎｄ：２７４．１３４５．

【0016】

実施例２：
化合物ＩＩＩ－２：

【化6】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３４ｇ、８９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝１．２３（ｔ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，６Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，４Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４－７．９５（ｍ，６Ｈ），８．０９ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_２０Ｏ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０２．１６５７．Ｆｏｕｎｄ：３０２．１６５８．

【0017】

実施例３：
化合物ＩＩＩ－３：

【化7】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３３ｇ、９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，６Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．７７（ｓ，１Ｈ），３．５５（ｄ，Ｊ＝２８．０Ｈｚ，４Ｈ），３．０４（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１８Ｎ_３Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０４．１４５０．Ｆｏｕｎｄ：３０４．１４５１．

【0018】

実施例４：
化合物ＩＩＩ－４：

【化8】

化合物ＩＩＩ－３（０．６１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、４０ｍＬの乾燥ＤＣＭに取り、ＴＥＡ（０．２５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加えて、０℃条件でＰ－トルエンスルホニルクロリド（０．３８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の１０ｍｌ ＤＣＭ溶液をゆっくり加えて、Ａｒ保護条件下、室温までゆっくり昇温させ、反応完了後、２ｍＬの水を加えて反応を中止し、有機相を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧条件で有機溶媒を除去し、残留物を更に処理することなく、そのまま次の工程に用いた。

【0019】

残留物を２０ｍｌのアセトニトリルに溶解して、１ｍｌのメチルアミンのメタノール溶液を加えて、Ａｒ保護条件下、系をオイルバスで一晩加熱還流し、反応完了後、加圧して溶媒を除去し、系を５０ｍｌ ＤＣＭに溶解して、水、飽和食塩水のそれぞれで洗浄し（２×１００ｍｌ）、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、加圧して溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離してオレンジレッド色固体（０．５４ｇ、８２％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４－７．６５（ｍ，４Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），３．６０－３．５５（ｍ，２Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ），２．５７－２．５２（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_２３Ｎ_４［Ｍ＋Ｈ］^＋：３３１．１９２３．Ｆｏｕｎｄ：３３１．１９２５．

【0020】

実施例５：
化合物ＩＩＩ－５：

【化9】

４－ヒドロキシ－３，５－ジフルオロ－ベンズアルデヒド（０．３２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、４－シアノ－フェニルアセトニトリル（０．３５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの丸形フラスコに取り、４０ｍｌの無水エタノールを加えて溶解して、ピペリジンを２滴加えて、Ａｒ保護条件下、オイルバスで２ｈ加熱還流し、反応完了後、室温まで冷却し、固形物が大量に析出し、ろ過して、冷たいエタノールでろ過ケーキを３回リンスし、真空乾燥してオレンジ色固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４－７．６６（ｍ，４Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１６Ｈ_９Ｆ_２Ｎ_２Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：２８３．０６８３．Ｆｏｕｎｄ：２８３．０６８４．

【0021】

実施例６：
化合物５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－ピラジン－２－カルバルデヒド：

【化10】

４－Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアミン（２．６ｇ、３５ｍｍｏｌ）、５－クロロ－ピラジン－２－カルバルデヒド（０．５０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの丸形フラスコに取り、２０ｍｌの無水アセトニトリルを加えて溶解して、Ｋ_２ＣＯ_３（０．７１ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を加えて、Ａｒ保護条件下、オイルバスで２４ｈ加熱還流し、反応完了後、室温まで冷却し、ろ過して、真空で溶媒を除去し、残留物を１００ｍｌ ＤＣＭに溶解して、水、飽和食塩水のそれぞれで洗浄し（２×１００ｍｌ）、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、有機溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して、５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）－ピラジン－２－カルバルデヒド（０．４８ｇ、７６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ９．８８（ｓ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｍ，２Ｈ），３．８８－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_８Ｈ_１２Ｎ_３Ｏ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：１８２．１．Ｆｏｕｎｄ：１８２．１．

【0022】

化合物ＩＩＩ－６：

【化11】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３６ｇ、９６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．３９（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．８８－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１７Ｈ_１６Ｎ_５Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０６．１３５５．Ｆｏｕｎｄ：３０６．１３５７．

【0023】

実施例７：
化合物ＩＩＩ－７：

【化12】

化合物ＩＩＩ－４の合成方法を参照した（０．２１ｇ、６７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ８．３７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），８．００－７．８５（ｍ，４Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_２１Ｎ_６［Ｍ＋Ｈ］^＋：３３３．１８２８．Ｆｏｕｎｄ：３３３．１８２９．

【0024】

実施例８：
化合物６－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－ピラジン－３－カルバルデヒド：

【化13】

化合物５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－ピラジン－２－カルバルデヒドの合成方法に従った（０．４５ｇ、６８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝９．６９（ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．７９（ｍ，４Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_９Ｈ_１３Ｏ_２Ｎ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：１８１．１．Ｆｏｕｎｄ：１８１．１．

【0025】

化合物ＩＩＩ－８：

【化14】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３９ｇ、８９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．５４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝９．３，２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_２７Ｎ_４Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０５．１４０２．Ｆｏｕｎｄ：３０５．１４０１．

【0026】

実施例９：
化合物ＩＩＩ－９：

【化15】

化合物ＩＩＩ－４の合成方法を参照した（０．３１ｇ、９２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．５５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄｄ，Ｊ＝９．３，２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２６Ｎ_５［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６０．２１８８．Ｆｏｕｎｄ：３６０．２１８７．

【0027】

実施例１０：
４－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－カルバルデヒド－ピリジン：

【化16】

化合物４－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－Ｎ’，Ｎ’－ジメチル－エチル）－ベンズアルデヒドの合成方法を参照した（０．３１ｇ、４９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．８６（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_８Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：１５１．１．Ｆｏｕｎｄ：１５１．１．

【0028】

化合物ＩＩＩ－１０：

【化17】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３６ｇ、９６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．８６（ｄ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｍ，４Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１７Ｈ_１５Ｎ_４［Ｍ＋Ｈ］^＋：２７５．１２９７．Ｆｏｕｎｄ：２７５．１２９８．

【0029】

実施例１１：
２－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－５－カルバルデヒド－ピリミジン：

【化18】

化合物４－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－Ｎ’，Ｎ’－ジメチル－エチル）－ベンズアルデヒドの合成方法を参照した（０．４２ｇ、７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．８９（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_８Ｈ_１２Ｎ_３Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：１８２．１．Ｆｏｕｎｄ：１８２．１．

【0030】

化合物ＩＩＩ－１１：

【化19】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３６ｇ、９６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２６（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，２Ｈ），７．６４（ｍ，４Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１７Ｈ_１６Ｎ_５Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０６．１３５５．Ｆｏｕｎｄ：３０６．１３５６．

【0031】

実施例１２：
５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－２－カルバルデヒド－ピリミジン：

【化20】

化合物４－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－Ｎ’，Ｎ’－ジメチル－エチル）－ベンズアルデヒドの合成方法を参照した（０．４２ｇ、７２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．９８（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｓ，２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_８Ｈ_１２Ｎ_３Ｏ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：１８２．１．Ｆｏｕｎｄ：１８２．１．

【0032】

１－シアノ－１－（４－フェニルアセトニトリル）－２－２－（５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－）ピリミジン－エチレン：

【化21】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．５６ｇ、８９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２１（ｓ，２Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，４Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１７Ｈ_１６Ｎ_５Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０６．１．Ｆｏｕｎｄ：３０６．１．

【0033】

化合物ＩＩＩ－１２：

【化22】

化合物ＩＩＩ－４の合成方法を参照した（０．３６ｇ、９６％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２１（ｓ，２Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，４Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_２１Ｎ_６［Ｍ＋Ｈ］^＋：３３３．１８２８．Ｆｏｕｎｄ：３３３．１８２９．

【0034】

実施例１３：
２－アセトニトリル－５－シアノ－ピリジン：

【化23】

２－ブロモメチル－５－シアノピリジン（０．５０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの丸形フラスコに取り、５０ｍｌ ＴＨＦを加えて溶解して、Ａｒ保護条件下、ＮａＣＮの２Ｍ水溶液を１０ｍｌ加えて、オイルバスで１２ｈ加熱還流し、反応完了後、系を室温まで冷却し、ＤＣＭで抽出し（３×１００ｍｌ）、有機相を合併し、水、飽和食塩水のそれぞれで洗浄し（２×１００ｍｌ）、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧して溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで精製分離して、２－アセトニトリル－５－シアノピリジン（０．１９ｇ、５６％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．７８（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｍ，１Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_８Ｈ_６Ｎ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：１４４．１．Ｆｏｕｎｄ：１４４．１．

【0035】

化合物ＩＩＩ－１３：

【化24】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．４５ｇ、９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．７８（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｍ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１７Ｎ_４Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０５．１４０２．Ｆｏｕｎｄ：３０５．１４０３．

【0036】

実施例１４：
２－シアノ－５－アセトニトリル－ピラジン：

【化25】

２－クロロ－ピラジン－５－アセトニトリル（０．３２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ＣｕＣＮ（０．９３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの丸形フラスコに取り、３０ｍｌの乾燥ＤＭＳＯを加えて溶解して、Ａｒ保護条件下、８０℃のオイルバスで１２ｈ加熱して、反応完了後、系を１００ｍｌの水に注いで、ＤＣＭで抽出し（４×５０ｍｌ）、有機相を合併し、水、飽和食塩水のそれぞれで洗浄し（２×１００ｍｌ）、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧して有機溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して、２－シアノ－ピラジン－５－アセトニトリル（０．２０ｇ、６９％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．６０（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｓ，２Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_７Ｈ_５Ｎ_４［Ｍ＋Ｈ］^＋：１４５．１．Ｆｏｕｎｄ：１４５．１．

【0037】

化合物ＩＩＩ－１４：

【化26】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２５ｇ、９１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．６０（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１７Ｈ_１６Ｎ_５Ｏ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３０６．１３５５．Ｆｏｕｎｄ：３０６．１３５４．

【0038】

実施例１５：
化合物ＩＩＩ－１５：

【化27】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２５ｇ、９１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７７－７．６９（ｍ，１Ｈ），７．４３－７．３４（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３１－３．２５（ｍ，４Ｈ），２．６６－２．６３（ｍ，４Ｈ），１．８９－１．８１（ｍ，４Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２０Ｎ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：３２６．１６５７．Ｆｏｕｎｄ：３２６．１６５８．

【0039】

実施例１６：
化合物ＩＩＩ－１６：

【化28】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２９ｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），７．９９（３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６、３．０Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ），６．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），４．８２（１Ｈ，ｂｔ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），３．０１－３．０８（ｍ，２Ｈ），３，５３－３．６０（ｍ，２Ｈ），２．８９（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１６Ｎ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：２８６．１３４４．Ｆｏｕｎｄ：２８６．１３４５．

【0040】

実施例１７：
６－メチルアミン－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒド：

【化29】

６－ブロモベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒド（０．４２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、ジメチルエチルアミン（４０％水溶液、１ｇ、８．９ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１３．９ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）、Ｋ_３ＰＯ_４・Ｈ_２Ｏ（１５５．４ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、メチルアミン（３３％水溶液、１ｇ）を、１００ｍｌの耐圧瓶に取り、密封条件で６０℃のオイルバスで１２ｈ加熱して、系を室温まで冷却し、５０ｍｌの水を加えて、ＤＣＭで抽出し（３×１００ｍｌ）、有機相を合併し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧して有機溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離精製した（０．２３ｇ、６８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．９２（１Ｈ，ｓ），８．１４（１Ｈ，ｓ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．３Ｈｚ），３．０５（３Ｈ，ｓ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１０Ｈ_１０ＮＯＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋：１９２．０．Ｆｏｕｎｄ：１９２．０．

【0041】

化合物ＩＩＩ－１７：

【化30】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２９ｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．４５（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１４Ｎ_３Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６０．１１７１．Ｆｏｕｎｄ：３６０．１１７３．

【0042】

実施例１８：
６－Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒド：

【化31】

化合物６－メチルアミン－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒドの合成方法を参照した（０．５４ｇ、７９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．９１（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１２Ｈ_１４ＮＯ_２Ｓ，［Ｍ＋Ｈ］^＋：２３５．１．Ｆｏｕｎｄ ２３６．１．

【0043】

化合物ＩＩＩ－１８：

【化32】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２１ｇ、９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．４５（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６３－３．５７（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_１９Ｎ_３ＯＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６０．１１７１．Ｆｏｕｎｄ：３６０．１１７３．

【0044】

実施例１９：
５－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミン－２－カルバルデヒドチエノ［３，２－ｂ］チオフェン：

【化33】

化合物６－Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒドの合成方法を参照した（０．５４ｇ、７９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．６６（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｂｔ，１Ｈ），３．０７（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_９Ｈ_１２ＮＯＳ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：２１４．０；ｆｏｕｎｄ ２１４．０．

【0045】

化合物ＩＩＩ－１９：

【化34】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３１ｇ、９０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．３４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１４Ｎ_３Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：３３６．０６２９．Ｆｏｕｎｄ：３３６．０６３０．

【0046】

実施例２０：
５－Ｎ，Ｎ－ジエチルアミン－２－カルバルデヒドチエノ［３，２－ｂ］チオフェン：

【化35】

化合物６－Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒドの合成方法を参照した（０．４４ｇ、７５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．７８（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），４．８７（ｂｔ，１Ｈ），３．２７（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_９Ｈ_１２ＮＯＳ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：２１４．０；ｆｏｕｎｄ ２１４．０．

【0047】

化合物ＩＩＩ－２０：

【化36】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３１ｇ、９０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．３４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_１８Ｎ_３Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６４．０９４２．Ｆｏｕｎｄ：３６４．０９４３．

【0048】

実施例２１：
５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル）アミノ－２－カルバルデヒドチエノ［３，２－ｂ］チオフェン：

【化37】

化合物６－Ｎ－メチル－Ｎ－ヒドロキシエチル－ベンゾ［ｂ］チオフェン－２－カルバルデヒドの合成方法を参照した（０．４４ｇ、７５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝９．６６（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｂｔ，１Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０７（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１０Ｈ_１２ＮＯ_２Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：２４１．０；ｆｏｕｎｄ ２４２．０．

【0049】

化合物ＩＩＩ－２１：

【化38】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３１ｇ、９０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ８．３４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｓ，１Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１６Ｎ_３ＯＳ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６６．０７３５．Ｆｏｕｎｄ：３６６．０７３６．

【0050】

実施例２２：
化合物ＩＩＩ－２２：

【化39】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３１ｇ、９０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝３．０４（ｓ，６Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），７．８４－７．９４（ｍ，６Ｈ），８．０２ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２４Ｈ_１９Ｏ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：３５０．１６５７．Ｆｏｕｎｄ：３５０．１６５６．

【0051】

実施例２３：
化合物ＩＩＩ－２３：

【化40】

化合物ＩＩＩ－１：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝３．０２（ｓ，６Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．０２ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_１８Ｎ_３Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３５６．１２２１．Ｆｏｕｎｄ：３５６．１２２０．

【0052】

実施例２４：
化合物ＩＩＩ－２４：

【化41】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物１はＣｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１１，４７，９８５－９８７．の合成方法を参照した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝３．６３（ｍ，１６Ｈ），３．７７（ｍ，４Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｍ，４Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_３０Ｈ_３２Ｏ_３Ｎ_４Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋：５３０．２１１４．Ｆｏｕｎｄ：５３０．２１１５．

【0053】

実施例２５：
化合物ＩＩＩ－２５：

【化42】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、その化合物２はＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００８，７３，６５８７－６５９４．の合成方法を参照した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝１．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），３．３５（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），５．７８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_３０Ｈ_３２Ｏ_３Ｎ_４Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３９０．１０９９．Ｆｏｕｎｄ：３９０．１０９７．

【0054】

実施例２６：
化合物ＩＩＩ－２６：

【化43】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝３．３０（ｓ，６Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_１７Ｏ_２Ｎ_２Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：３８１．０７３１．Ｆｏｕｎｄ：３８１．０７３０．

【0055】

実施例２７：
化合物ＩＩＩ－２７：

【化44】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物４はＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，１９９７，４６，４８９－５０１．を参照した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２．０７（ｍ，４Ｈ），３．３３（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），４．２（ｓ，３Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２３Ｈ_２１Ｏ_２Ｎ_２Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：４２１．１０４４．Ｆｏｕｎｄ：５２１．１０４２．

【0056】

実施例２８：
化合物ＩＩＩ－２８：

【化45】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物５はＷＯ２０１８０１４８２１を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０２（ｓ，３Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_１６ＯＮ_３Ｓ_３．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４２２．０４５５．Ｆｏｕｎｄ：４２２．０４５６．

【0057】

実施例２９：
化合物ＩＩＩ－２９：

【化46】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物６はＷＯ２０１８０１４８２１を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ）７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．５６（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_１９Ｏ_２Ｎ_２Ｓ_３．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４３９．０６０９．Ｆｏｕｎｄ：４３９．０６１０．

【0058】

実施例３０：
化合物ＩＩＩ－３０：

【化47】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物７はＷＯ２０１４０４８５４７を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２１Ｈ_１７Ｏ_１Ｎ_２Ｓ_４．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４２９．００２４．Ｆｏｕｎｄ：４２９．００２６．

【0059】

実施例３１：
化合物ＩＩＩ－３１：

【化48】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物９はＪ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２０１２，４，１６６１－１６６９．を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．１４（ｓ，３Ｈ），３．０１（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２３Ｏ_２Ｎ_２Ｓ_３Ｓｉ．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４７１．０６９１．Ｆｏｕｎｄ：４７１．０６９０．

【0060】

実施例３２：
化合物ＩＩＩ－３２：

【化49】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．７７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．００（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２４Ｏ_３Ｎ_３Ｓ_３Ｓｉ．［Ｍ＋Ｈ］^＋：５０２．０７４９．Ｆｏｕｎｄ：５０２．０７５２．

【0061】

実施例３３：
化合物ＩＩＩ－３３：

【化50】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８９（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０６（ｓ，３Ｈ），０．４６（ｓ，６Ｈ）．Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２３Ｈ_２２ＯＮ_３Ｓ_２Ｓｉ．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４４８．０９７４．Ｆｏｕｎｄ：４４８．０９７２．

【0062】

実施例３４：
化合物ＩＩＩ－３４：

【化51】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８３（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０６（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２４Ｈ_２４Ｏ_２Ｎ_３Ｓ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：４５０．１３１０．Ｆｏｕｎｄ：４５０．１３１１．

【0063】

実施例３５：

【化52】

化合物１２：
文献に開示された方法を参照した（Ｋ．Ｔ．Ａｒｕｎ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ．２００５，１０９，５５７１－５５７８．）。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１０．０１（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．５２－３．６５（ｍ，２０Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２４Ｈ_２２ＯＮ_３Ｓ_２Ｓｉ．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４３２．１２０４．Ｆｏｕｎｄ：４３２．１２０３．Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２４Ｈ_３６Ｏ_６Ｎ_１Ｓ_２．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４９７．３．Ｆｏｕｎｄ：４９７．３．

【0064】

化合物ＩＩＩ－３５：

【0065】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８９（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．５２－３．６５（ｍ，２０Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_３３Ｈ_３９Ｏ_５Ｎ_３Ｓ_２．［Ｍ＋Ｈ］^＋：６２２．２４０９．Ｆｏｕｎｄ：６２２．２４０９．

【0066】

比較例１：
化合物ＩＩＩ－３６：

【化53】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２５ｇ、９１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２１（ｓ，２Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，４Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１６Ｈ_１７Ｎ_４Ｏ_４Ｓ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３６１．０９７１．Ｆｏｕｎｄ：３６１．０９７０

【0067】

比較例２：
化合物ＩＩＩ－３７：

【化54】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．３９ｇ、９１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８３（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０５（ｓ，３Ｈ），１．４６（ｓ，６Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２３Ｈ_２３Ｎ_２Ｏ_４Ｓ_３［Ｍ＋Ｈ］^＋：４８７．０８２０．Ｆｏｕｎｄ：４８７．０８２１．

【0068】

比較例３：
化合物ＩＩＩ－３８：

【化55】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照し、そのうちの化合物１１はＣＮ１０６３４９１０５を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０１（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_２３Ｏ_４Ｎ_２Ｓ_３Ｓｉ．［Ｍ＋Ｈ］^＋：５０３．０５８９．Ｆｏｕｎｄ：２０３．０５８８．

【0069】

比較例４：
化合物ＩＩＩ－３９：

【化56】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０１（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１９Ｏ_４Ｎ_２Ｓ_．［Ｍ＋Ｈ］^＋：３５９．１０６６．Ｆｏｕｎｄ：３５９．１０６５．

【0070】

比較例５：
化合物ＩＩＩ－４０：

【化57】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．３４（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３４（ｓ，１Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_１７Ｏ_４Ｎ_２Ｓ_３．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４２１．０３５０．Ｆｏｕｎｄ：４２１．０３５１．

【0071】

比較例６：
化合物ＩＩＩ－４１：

【化58】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した。^１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝７．８５（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．４３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．８０Ｈｚ），３．０１（ｓ，３Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_１７Ｏ_４Ｎ_２Ｓ_４．［Ｍ＋Ｈ］^＋：４７７．００７１．Ｆｏｕｎｄ：４７７．００７０．

【0072】

比較例７：
化合物ＩＩＩ－４２：

【化59】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２５ｇ、９１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．２２（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７７－７．６９（ｍ，１Ｈ），７．４３－７．３４（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．０９（ｓ，１Ｈ）．ＬＲ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１８Ｎ_３Ｏ_２［Ｍ＋Ｈ］^＋：３２０．１３９９．Ｆｏｕｎｄ：３２０．１３９７．

【0073】

比較例８：
化合物ＩＩＩ－４３：

【化60】

化合物ＩＩＩ－１の合成方法を参照した（０．２９ｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ＝８．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），７．９９（３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，３．０Ｈｚ），７．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ），６．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），４．８２（１Ｈ，ｂｔ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），３．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），３．５６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），３．０９（３Ｈ，ｓ）．ＬＲ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）：Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_１８Ｎ_３ＯＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋：３３６．１１７１．Ｆｏｕｎｄ：３３６．１１７０．

【0074】

試験例１：
実施例１～３５で製造された蛍光染料（分子ローター）のそれぞれをジメチルスルホキシドに溶解して、濃度が１×１０^－２Ｍの母液をそれぞれ調製し、各母液をグリセリン及びメタノールのそれぞれに加えて、均一に混合し、最終濃度が１×１０^－５Ｍの溶液をそれぞれ調製した。蛍光染料に応じて、順次に各蛍光染料の最大励起波長を用いて同じ条件でその蛍光発光スペクトルを測定し、結果は表１に示されたとおりであり、本発明の蛍光染料は粘度変化への応答が敏感であることを示している。

【0075】

【表1】

【0076】

試験例２：
分子ローターＩＩＩ－３、ＩＩＩ－４、ＩＩＩ－２８、ＩＩＩ－３４を、エチレングリコール－グリセリン混合溶液に加えて、最終濃度が１×１０^－５Ｍの溶液に調製し、４８０ｎｍで励起し、異なる粘度条件での蛍光発光スペクトルを図１、３、５、７に示した。同じ濃度の分子ローターの異なる粘度条件での蛍光強度が次第に増大することから、分子ローターの蛍光強度が環境粘度の増大につれて増し、蛍光強度の対数と溶媒粘度との対数関係がホフマン方程式に合致し、良い線形関係を有することが分かり、図２、４、６、８に示されるように、分子ローターは粘度応答が敏感であり、かつ未知サンプルの粘度測定に使用できることを証明している。

【0077】

試験例３：
分子ローターＩＩＩ－１１とＩＩＩ－３６；ＩＩＩ－３４とＩＩＩ－３７；ＩＩＩ－３１、ＩＩＩ－３２、ＩＩＩ－３３とＩＩＩ－３８；ＩＩＩ－３とＩＩＩ－３９；ＩＩＩ－２１とＩＩＩ－４０；ＩＩＩ－２８、ＩＩＩ－２９、ＩＩＩ－３０とＩＩＩ－４１；ＩＩＩ－３とＩＩＩ－４２；ＩＩＩ－３とＩＩＩ－４３を、ＰＢＳ溶液に加えて、最終濃度が１×１０^－６Ｍの溶液を調製し、それぞれを各化合物の最大励起波長で励起し、それらのＰＢＳでの蛍光強度を測定した。各グループの最大蛍光強度を１００として、各サンプルを規格化し、それぞれを図９、図１０、図１１、図１２、図１３、図１４、図１５及び図１６に示した。その結果、電子求引基上の芳香環にスルホン酸基が置換されてある分子ローターや置換されていない分子ローターと比較して、本発明の電子求引基上の芳香環にシアノ基、エステル基、スルホキシド、スルホン、スルホンアミドが置換されてある分子ローターは、より低いバックグラウンド蛍光を有することが分かる。

【0078】

試験例４：
化合物ＩＩＩ－３、ＩＩＩ－４、ＩＩＩ－６、ＩＩＩ－７、ＩＩＩ－８、ＩＩＩ－１８、ＩＩＩ－２１は、ＲＮＡアプタマー（配列１０：Ｆ３０－８Ｐｅｐｐｅｒ－５ＲＮＡアプタマー配列

【数1】

と特異的に結合し、結合後の化合物の蛍光が顕著に活性化され、適切な波長励起光の励起で明るい蛍光を発行し、結合後の光学特性を表２に示した。化合物は、細胞内で該アプタマーと結合することもできる。図１７Ａに示されるように、該ＲＮＡアプタマーを転写した細胞は明るい蛍光を有するが、図１７Ｂに示されるように、該ＲＮＡアプタマーを発現していない細胞は蛍光がないことから、この一連の染料は核酸の標識に使用できることが分かる。

【0079】

【表2】

【0080】

注：蛍光量子収率は、ローダミン６Ｇを基準として（ＱＹ＝０．９４）、相対法によって測定した。

【0081】

試験例５：
アプタマー（ＡＣＴＢ－４Ｐｅｐｐｅｒ ＲＮＡアプタマー配列
ＡＵＧＧＡＵＧＡＵＧＡＵＡＵＣＧＣＣＧＣＧＣＵＣＧＵＣＧＵＣＧＡＣＡＡＣＧＧＣＵＣＣＧＧＣＡＵＧＵＧＣＡＡＧＧＣＣＧＧＣＵＵＣＧＣＧＧＧＣＧＡＣＧＡＵＧＣＣＣＣＣＣＧＧＧＣＣＧＵＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＧＵＧＡＵＧＧＵＧＧＧＣＡＵＧＧＧＵＣＡＧＡＡＧＧＡＵＵＣＣＵＡＵＧＵＧＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＣＡＵＣＣＵＣＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＡＣＣＣＣＡＵＣＧＡＧＣＡＣＧＧＣＡＵＣＧＵＣＡＣＣＡＡＣＵＧＧＧＡＣＧＡＣＡＵＧＧＡＧＡＡＡＡＵＣＵＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＡＧＣＵＧＣＧＵＧＵＧＧＣＵＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＡＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＣＣＣＣＵＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＵＧＡＣＣＣＡＧＡＵＣＡＵＧＵＵＵＧＡＧＡＣＣＵＵＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡＵＧＵＡＣＧＵＵＧＣＵＡＵＣＣＡＧＧＣＵＧＵＧＣＵＡＵＣＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＵＣＵＧＧＣＣＧＵＡＣＣＡＣＵＧＧＣＡＵＣＧＵＧＡＵＧＧＡＣＵＣＣＧＧＵＧＡＣＧＧＧＧＵＣＡＣＣＣＡＣＡＣＵＧＵＧＣＣＣＡＵＣＵＡＣＧＡＧＧＧＧＵＡＵＧＣＣＣＵＣＣＣＣＣＡＵＧＣＣＡＵＣＣＵＧＣＧＵＣＵＧＧＡＣＣＵＧＧＣＵＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＵＧＡＣＵＧＡＣＵＡＣＣＵＣＡＵＧＡＡＧＡＵＣＣＵＣＡＣＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＵＡＣＡＧＣＵＵＣＡＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＡＧＣＧＧＧＡＡＡＵＣＧＵＧＣＧＵＧＡＣＡＵＵＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＵＧＵＧＣＵＡＣＧＵＣＧＣＣＣＵＧＧＡＣＵＵＣＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＵＧＧＣＣＡＣＧＧＣＵＧＣＵＵＣＣＡＧＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＧＡＧＡＡＧＡＧＣＵＡＣＧＡＧＣＵＧＣＣＵＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＵＣＡＵＣＡＣＣＡＵＵＧＧＣＡＡＵＧＡＧＣＧＧＵＵＣＣＧＣＵＧＣＣＣＵＧＡＧＧＣＡＣＵＣＵＵＣＣＡＧＣＣＵＵＣＣＵＵＣＣＵＧＧＧＣＡＵＧＧＡＧＵＣＣＵＧＵＧＧＣＡＵＣＣＡＣＧＡＡＡＣＵＡＣＣＵＵＣＡＡＣＵＣＣＡＵＣＡＵＧＡＡＧＵＧＵＧＡＣＧＵＧＧＡＣＡＵＣＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＡＡＣＡＣＡＧＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＵＧＵＡＣＣＣＵＧＧＣＡＵＵＧＣＣＧＡＣＡＧＧＡＵＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＵＣＡＣＵＧＣＣＣＵＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＡＵＧＡＡＧＡＵＣＡＡＧＡＵＣＡＵＵＧＣＵＣＣＵＣＣＵＧＡＧＣＧＣＡＡＧＵＡＣＵＣＣＧＵＧＵＧＧＡＵＣＧＧＣＧＧＣＵＣＣＡＵＣＣＵＧＧＣＣＵＣＧＣＵＧＵＣＣＡＣＣＵＵＣＣＡＧＣＡＧＡＵＧＵＧＧＡＵＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＵＡＵＧＡＣＧＡＧＵＣＣＧＧＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＣＣＡＣＣＧＣＡＡＡＵＧＣＵＵＣＵＡＧＣＡＣＵＣＧＣＵＡＧＡＧＣＡＵＧＧＵＵＡＡＧＣＵＵＣＣＣＡＣＧＧＡＧＧＡＵＣＣＣＣＡＡＵＣＧＵＧＧＣＧＵＧＵＣＧＧＣＣＵＣＵＣＣＣＡＡＵＣＧＵＧＧＣＧＵＧＵＣＧＧＣＣＵＣＵＣＣＣＡＡＵＣＧＵＧＧＣＧＵＧＵＣＧＧＣＣＵＣＵＣＣＣＡＡＵＣＧＵＧＧＣＧＵＧＵＣＧＧＣＣＵＣＵＣＣＣＡＡＵＣＧＵＧＧＣＧＵＧＵＣＧＧＣＣＵＣＵＣＵＵＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＣＵＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＣＵＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＣＵＧＧＣＧＣＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＣＵＧＧＣＧＣＣＧＧＧＡＵＣＣＵＣＣＧＵＧＧＧ）を骨格タンパク質ｍＲＮＡと融合させた、安定した細胞株（２９３Ｔ／１７細胞株）を構築し、通常の哺乳動物細胞培養条件（３７℃、５％二酸化炭素、１００％相対湿度）で、該細胞株と対照細胞（２９３Ｔ／１７）が細胞コンフルエンスが９０％になるまで成長した後、細胞を消化して取り、８００ｒｐｍで遠心して、０．２μＭのＩＩＩ－３及び０．２μＭのＩＩＩ－４３分子を含むＰＢＳ再懸濁細胞を用いて５分間インキュベーションした後、流体検出を行い、検出結果を図１８に示した。ＩＩＩ－３分子ローターは、標的ＲＮＡを発現した細胞株で骨格タンパク質のｍＲＮＡを特異的に標識することができ、且つ明らかなバックグラウンド蛍光がなく（図１８ａを参照）、一方、ＩＩＩ－４３分子は、バックグラウンド蛍光がＩＩＩ－３よりも高く、ＡＣＴＢの発現の有無を明確に区別することができない（図１８ｂを参照）。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【配列表】

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