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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-08-04
(45)【発行日】2023-08-15
(54)【発明の名称】肺がんの検査方法及び肺がん評価用の尿検査キット
(51)【国際特許分類】
C12Q 1/68 20180101AFI20230807BHJP
C12Q 1/37 20060101ALI20230807BHJP
C12Q 1/6886 20180101ALI20230807BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20230807BHJP
【ＦＩ】
C12Q1/68 ZNA
C12Q1/37
C12Q1/6886 Z
C12N15/09 Z
【請求項の数】
3
(21)【出願番号】P 2022082254
(22)【出願日】2022-05-19
【審査請求日】2022-05-27
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 令和３年９月２日 公益財団法人 喫煙科学研究財団 令和２年度 助成研究発表会において、岡崎 勲、安藤 航、植松 崇之、尾鳥 勝也、横森 弘昭、曽我部 将哉、石川 成美、遠藤 俊輔、坪地 宏嘉が発明した受動喫煙によると考えられる肺癌患者における血中および尿中ＥＸＳＯＭＥＳのｍｉｃｒｏＲＮＡ分析について公開した。
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 令和３年６月 令和２年度 喫煙科学研究財団研究年報において、岡崎 勲、安藤 航、植松 崇之、尾鳥 勝也、横森 弘昭、曽我部 将哉、石川 成美、遠藤 俊輔、坪地 宏嘉が発明した受動喫煙によると考えられる肺癌患者における血中および尿中ＥＸＳＯＭＥＳのｍｉｃｒｏＲＮＡ分析について公開した。
(73)【特許権者】
【識別番号】519353215
【氏名又は名称】岡▲崎▼ 勲
(73)【特許権者】
【識別番号】522198863
【氏名又は名称】石川 成美
(73)【特許権者】
【識別番号】519353237
【氏名又は名称】安藤 航
(73)【特許権者】
【識別番号】505246789
【氏名又は名称】学校法人自治医科大学
(74)【代理人】
【識別番号】110001070
【氏名又は名称】弁理士法人エスエス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】岡▲崎▼ 勲
(72)【発明者】
【氏名】安藤 航
(72)【発明者】
【氏名】植松 崇之
(72)【発明者】
【氏名】尾鳥 勝也
(72)【発明者】
【氏名】横森 弘昭
(72)【発明者】
【氏名】曽我部 将哉
(72)【発明者】
【氏名】石川 成美
(72)【発明者】
【氏名】遠藤 俊輔
(72)【発明者】
【氏名】坪地 宏嘉
【審査官】千葉 直紀
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０２２／０１３６０５６（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特開２０１６－０２８５８４（ＪＰ，Ａ）
【文献】YAO et al.，FEBS Open Bio，2019年，Vol. 9, No. 12，p.2149-2158，DOI: 10.1002/2211-5463.12753
【文献】WU et al.，Cancer Management and Research，2020年，Vol. 12，p.485-495，DOI: 10.2147/CMAR.S232383
【文献】LI et al.，ELECTROPHORESIS，2011年，Vol. 32，No. 15，p.1976-1983，DOI: 10.1002/elps.201000598
【文献】LI et al.，Lung Cancer，2010年，Vol. 69, No. 3，p.341-347，DOI: 10.1016/j.lungcan.2009.12.007
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／４８－３３／９８
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ１２Ｑ １／００－３／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、
前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び
前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）
を含む、肺がんの検査方法であって、
前記対象が男性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きく、かつ、工程（Ｂ３）で得られたＭＭＰ－１の発現量／エクソソーム特異的タンパク質の発現量が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示し、
前記対象が女性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さく、かつ、工程（Ｂ３）で得られたＭＭＰ－１の発現量／エクソソーム特異的タンパク質の発現量が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示し、
前記基準値（Ｍ）が、男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量であり、
前記基準値（Ｆ）が、女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量であり、
前記基準値（Ｔ）が、健常人の尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１の発現量／前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量である、検査方法。
【請求項2】
前記エクソソーム特異的タンパク質がＣＤ６３である、請求項１に記載の検査方法。
【請求項3】
尿からエクソソームを分離、精製するエクソソーム調製試薬、マイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬、マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬、およびエクソソーム特異的タンパク質測定試薬を含む、肺がん評価用の尿検査キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、肺がんの検査方法及び肺がん評価用の尿検査キットに関する。
【背景技術】
【0002】
肺がん（ＬＣ）は、先進国だけでなく後進国においても、２０１８年における男性の死亡原因の第１位であり、女性の死亡原因の第３位である。日本においても、２０１９年の統計によれば、肺がんは、男性での死亡率が最も高く、罹患率が４番目に高い疾患であり、女性においても死亡率が３番目、罹患率が４番目に高い。低被爆量のＣＴやＭＲＩにより、主に早期肺がん、特に腫瘍の大きさが２ｃｍ以下の症例の発見が増えていることから、肺がんの治療成績は劇的に改善しつつあるが、肺がんの予後は依然として悪いままである。日本では、労働安全衛生法により、労働災害による結核や肺疾患を予防するために、すべての労働者に胸部Ｘ線検査を受けることが求められているものの、単純Ｘ線写真では早期の肺がんを診断することが難しく、特異性や感度も不十分であるため、肺がんの検出には適していない。そのため、早期の肺がん患者を発見するためには、簡便に行えて、感度が高く、非侵襲で、安価な肺がん検査方法を開発する必要がある。
【0003】
近年、がんを早期発見するために、様々なバイオマーカーとがんとの関連性が研究されている。がん細胞は、自身の生存に有利なタンパク質やマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）等の分子をエクソソームに内包して分泌することにより、近傍だけでなく遠隔地にある細胞へも情報を伝達し、がん微小環境の形成や前転移ニッチェの形成などを行うことが明らかになってきた。そのため、エクソソームが内包する分子をバイオマーカーとしてがんとの関連を探る研究が行われている。
【0004】
エクソソームに内包されるｍｉＲＮＡについては、例えば、尿中エクソソームのｍｉＲＮＡの発現レベルを測定することにより前立腺がんを早期発見する方法等が報告されている（特許文献１）。
また、尿中のエクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－２１（ｍｉＲＮＡ－２１、ｍｉＲ－２１とも称する）とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の組み合わせを用いて、早期の乳がんを検出できる乳がんスクリーニング法も報告されている（特許文献２）。
しかし、尿中のエクソソームを用いた肺がん検査方法はこれまで報告されていない。
また、尿中のエクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－２１（ｍｉＲＮＡ－２１、ｍｉＲ－２１とも称する）とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の組み合わせを用いて、早期の乳がんを検出できる乳がんスクリーニング法も報告されている（特許文献２）。
しかし、尿中のエクソソームを用いた肺がん検査方法はこれまで報告されていない。
【0005】
ＭＭＰ－１は、早期の肺がんで発現量が増加することが報告されているものの（非特許文献１）、肺がんを診断するバイオマーカーとする研究は行われていない。
【0006】
肺がんとの関連が報告されているｍｉＲＮＡとしては、マイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）がある。ｍｉＲ－４８６－５ｐは、腫瘍細胞の増殖抑制に関与するＰＩＫ３Ｒ１遺伝子を標的としたｍｉＲＮＡであり、種々のがんやメタボリックシンドローム、冠動脈疾患との関連が報告されている（非特許文献１）。特に、非小細胞肺がん患者の組織および血清におけるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、健常人に比べて低いため、ｍｉＲ－４８６－５ｐは、非小細胞肺がんを診断するバイオマーカーになり得ることが報告されている（非特許文献２）。しかし、これらの報告では、組織および血清中のｍｉＲ－４８６－５ｐを直接分析しているため、エクソソーム中のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量については不明であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【文献】特表２０１８－５０４９１５号公報
【文献】特開２０２１－５６１０３号公報
【非特許文献】
【0008】
【文献】Sauter W, Rosenberger A, Beckmann L, Kropp S, Mittelst rass K, Timofeeva M, et al. Matrix metalloproteinase 1 (MMP 1) is associated with early onset lung cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2008; 17:1127-35
【文献】ElKhouly AM, Youness RA, Gad MZ, MicroRNA-486-5p and microRNA-486-3p, Multifaceted pleiotropic mediators in oncological and non-oncological conditions. Noncoding RNA Res 2020, 5(1):11-21
【文献】Tian F, Wang J, Ouyang T, Lu N, Lu J, Shen Y, Bai Y, Xie X, Ge Q, MiR-486-5p Serves as a Good Biomarker in Nonsmall Cell Lung Cancer and Suppresses Cell Growth With the Involvement of a Target PIK3R1, Front Genet 2019, 10:688
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
本発明者らは、早期の肺がん患者を発見するために、低費用で気軽に受けることができる肺がん検査を提供したいと考えた。安価で簡便な肺がん検査があれば、まずその検査でスクリーニングを行い、肺がんの疑いがあった場合にのみ従来の肺がん検診や精密検査を受ければよいので、従来よりも低費用、かつ短時間で肺がん検査をうけることができるようになる。そこで、本発明は、簡便で、感度が高く、非侵襲的な肺がんの検査方法、および肺がん評価用の尿検査キットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0010】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した。その結果、以下の構成を有することにより上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、例えば以下の〔１〕～〔１０〕に関する。
〔１〕 対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法。
〔２〕 前記対象が男性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔１〕に記載の検査方法。
〔３〕 前記対象が女性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔１〕に記載の検査方法。
〔４〕 さらに、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の検査方法。
〔５〕 前記エクソソーム特異的タンパク質がＣＤ６３である、〔４〕に記載の検査方法。
〔６〕 対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、肺がんの検査方法。
〔７〕 工程（Ｂ３）で得られた値が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔６〕に記載の検査方法。
〔８〕 前記エクソソーム特異的タンパク質がＣＤ６３である、〔６〕又は〔７〕に記載の検査方法。
〔９〕 エクソソーム調製試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キット。
〔１０〕 エクソソーム調製試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キット。
本発明は、例えば以下の〔１〕～〔１０〕に関する。
〔１〕 対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法。
〔２〕 前記対象が男性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔１〕に記載の検査方法。
〔３〕 前記対象が女性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔１〕に記載の検査方法。
〔４〕 さらに、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の検査方法。
〔５〕 前記エクソソーム特異的タンパク質がＣＤ６３である、〔４〕に記載の検査方法。
〔６〕 対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、肺がんの検査方法。
〔７〕 工程（Ｂ３）で得られた値が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示す、〔６〕に記載の検査方法。
〔８〕 前記エクソソーム特異的タンパク質がＣＤ６３である、〔６〕又は〔７〕に記載の検査方法。
〔９〕 エクソソーム調製試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キット。
〔１０〕 エクソソーム調製試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キット。
【発明の効果】
【0011】
本発明によれば、簡便で、感度が高く、非侵襲的な肺がんの検査方法、および肺がん評価用の尿検査キットが得られる。
【0012】
本発明の効果は、より具体的には以下の通りである。
１．対象の尿を検査試料とするので、対象は痛みを感じずに検査を受けることができ、試料の採取も簡便である。
２．対象が放射線被ばくを受けたり、体に傷跡が残る危険性がない。
３．高価で大型の検査機器を必要とせず、安価に検査が行える。また、多数の検査試料を同時に解析できる。
４．肺がん、特に早期の肺がんを高感度で検出することができる。本発明は、特に非喫煙者の女性の肺がんおよび非喫煙者の腺がんの検出に好適である。
５．従来の肺がんスクリーニング法、例えば、問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診等の前に行う、肺がん一次スクリーニングとして行うことにより、忙しい人や、お金のない人でも肺がん検診を気軽に受けられる。
６．従来の肺がん診断方法、例えば、問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、生検による病理組織学的所見等と組み合わせることにより、医師による肺がんの確定診断をより的確なものとするための検査データを収集し、提供することができる。
１．対象の尿を検査試料とするので、対象は痛みを感じずに検査を受けることができ、試料の採取も簡便である。
２．対象が放射線被ばくを受けたり、体に傷跡が残る危険性がない。
３．高価で大型の検査機器を必要とせず、安価に検査が行える。また、多数の検査試料を同時に解析できる。
４．肺がん、特に早期の肺がんを高感度で検出することができる。本発明は、特に非喫煙者の女性の肺がんおよび非喫煙者の腺がんの検出に好適である。
５．従来の肺がんスクリーニング法、例えば、問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診等の前に行う、肺がん一次スクリーニングとして行うことにより、忙しい人や、お金のない人でも肺がん検診を気軽に受けられる。
６．従来の肺がん診断方法、例えば、問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、生検による病理組織学的所見等と組み合わせることにより、医師による肺がんの確定診断をより的確なものとするための検査データを収集し、提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【発明を実施するための形態】
【0014】
次に本発明について具体的に説明する。
本発明は、大きく分けて４つの態様がある。
本発明は、大きく分けて４つの態様がある。
【0015】
第一の態様は、対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法である。該検査方法を肺がんの検査方法（Ｉ）と称する。
【0016】
第二の態様は、対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、肺がんの検査方法である。該検査方法を肺がんの検査方法（ＩＩ）と称する。
【0017】
第三の態様は、エクソソーム調製試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。該尿検査キットを肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）と称する。
【0018】
第四の態様は、エクソソーム調製試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。該尿検査キットを肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）と称する。
【0019】
〈対象〉
本発明における対象は、特に制限されないが、通常ヒトである。
本発明における対象は、特に制限されないが、通常ヒトである。
【0020】
〈尿〉
本発明に用いる尿は、対象から採取された通常の尿であればよく、採取の時刻やタイミングは制限されない。尿道や外陰部からの細菌の混入を防ぐため、中間尿が好ましく、体動や運動の影響が除外され、濃縮尿であるため、感度がよいことから、起床後最初に採取した早朝尿がより好ましい。
本発明に用いる尿は、対象から採取された通常の尿であればよく、採取の時刻やタイミングは制限されない。尿道や外陰部からの細菌の混入を防ぐため、中間尿が好ましく、体動や運動の影響が除外され、濃縮尿であるため、感度がよいことから、起床後最初に採取した早朝尿がより好ましい。
【0021】
採取後の尿は、すぐに工程（Ａ１）または工程（Ｂ１）に供してもよいし、保存してから供してもよい。尿の保存は通常、－８０℃クラスの超低温層で行う。
採取後の尿は、通常、赤血球や白血球、尿酸結晶、細胞、細菌などの固形物を除くために、工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）を行う前に遠心分離を行う。また、工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）を行う前に、ｍｉＲ－４８６－５ｐ又はＭＭＰ－１の発現量の測定に影響しない範囲で、フィルターろ過、濃縮、希釈等の前処理を行ってもよい。
工程（Ａ１）または工程（Ｂ１）に供する尿の量は、ｍｉＲ－４８６－５ｐ又はＭＭＰ－１の発現量の測定ができれば特に制限されないが、１．０ｍＬ～１５ｍＬが好ましく、２．０ｍＬ～１０ｍＬがより好ましい。
採取後の尿は、通常、赤血球や白血球、尿酸結晶、細胞、細菌などの固形物を除くために、工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）を行う前に遠心分離を行う。また、工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）を行う前に、ｍｉＲ－４８６－５ｐ又はＭＭＰ－１の発現量の測定に影響しない範囲で、フィルターろ過、濃縮、希釈等の前処理を行ってもよい。
工程（Ａ１）または工程（Ｂ１）に供する尿の量は、ｍｉＲ－４８６－５ｐ又はＭＭＰ－１の発現量の測定ができれば特に制限されないが、１．０ｍＬ～１５ｍＬが好ましく、２．０ｍＬ～１０ｍＬがより好ましい。
【0022】
〈エクソソーム〉
エクソソームは細胞から分泌される、直径が２０ｎｍ～２００ｎｍの膜小胞である。エクソソームの直径は、より好ましくは３０ｎｍ～１５０ｎｍである。
工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）は、エクソソームの存在を確認できることから、尿からエクソソームを分離及び精製したエクソソーム調製物を調製し、そのエクソソーム調製物中のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量又はＭＭＰ－１の発現量を測定することが好ましい。
エクソソームは細胞から分泌される、直径が２０ｎｍ～２００ｎｍの膜小胞である。エクソソームの直径は、より好ましくは３０ｎｍ～１５０ｎｍである。
工程（Ａ１）又は工程（Ｂ１）は、エクソソームの存在を確認できることから、尿からエクソソームを分離及び精製したエクソソーム調製物を調製し、そのエクソソーム調製物中のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量又はＭＭＰ－１の発現量を測定することが好ましい。
【0023】
尿からエクソソーム調製物を調製する場合、その方法は、特に制限されず、例えば超遠心分離や限外ろ過、ゲル濾過、ＨＰＬＣ、フィルター法、ポリマーを用いた沈殿法、抗体やレクチンを利用してビーズやカラムに吸着させる方法などが挙げられ、これらを応用した市販品としてＥｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ｔｏｔａｌ Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎシリーズ、ＥｘｏＴｒａｐTM、ＰｕｒｅＥｘｏTM、ＤＩＡＧ ＥｘｏTM等の市販のエクソソーム分離、精製用のスピンカラム、キット等が挙げられる。本発明においてエクソソーム調製物を調製するためには、操作が簡便で、エクソソームの純度が高いことから、ビーズ法を用いることが好ましく、Ｍｙｌｔｅｎｙｉ社製のＥｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いることがより好ましい。
【0024】
エクソソームは、その形状が丸いこと、および大きさを確認することが好ましく、その手段としては例えば電子顕微鏡や動的光散乱法が挙げられる。エクソソームの大きさだけでなく形状も目視で確認できることから、電子顕微鏡が好ましい。
【0025】
エクソソームは、エクソソーム特異的タンパク質の存在を確認することが好ましく、その手段としては、例えばウエスタンブロッティングが挙げられる。エクソソーム特異的タンパク質については後述する。
【0026】
〈測定〉
本発明において、測定、または測定するとは、相対存在量または絶対存在量を求めることを意味する。
本発明において、測定、または測定するとは、相対存在量または絶対存在量を求めることを意味する。
【0027】
〈肺がん〉
本発明における肺がんとは、肺のいずれかの組織に発生する悪性腫瘍をいう。肺がんは、原発性肺がん、転移性肺がんのいずれであってもよいが、好ましくは原発性肺がんである。肺がんは、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、大細胞がん等の非小細胞がんと呼ばれるものが多く、次いで小細胞肺がん、多形がんや肉腫などがある。本発明における肺がんはこれらのいずれであってもよい。このうち、腺がんとは、肺の分泌腺組織に発生するがんをいう。
本発明における肺がんとは、肺のいずれかの組織に発生する悪性腫瘍をいう。肺がんは、原発性肺がん、転移性肺がんのいずれであってもよいが、好ましくは原発性肺がんである。肺がんは、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、大細胞がん等の非小細胞がんと呼ばれるものが多く、次いで小細胞肺がん、多形がんや肉腫などがある。本発明における肺がんはこれらのいずれであってもよい。このうち、腺がんとは、肺の分泌腺組織に発生するがんをいう。
【0028】
本発明における肺がんは、肺がんＴＮＭ分類第８版による臨床ステージが０期、ＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、ＩＩＢ期、ＩＩＩＡ期、ＩＩＩＢ期、ＩＩＩＣ期、ＩＶＡ期、ＩＶＢ期のいずれのステージのものであってもよい。がん腫瘤の大きさが２ｃｍ以下である肺がん又は肺がんＴＮＭ分類第８版による臨床ステージ０期、ＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、またはＩＢ期のいずれかの肺がんは、早期肺がんの中でも初期の肺がんであり、従来の肺がん検査方法、特に単純Ｘ線写真での発見が難しい肺がんである。なお、早期肺がんとは、一般的には転移のない肺がんをいう。
【0029】
〈肺がんの検査方法〉
本発明の肺がんの検査方法は、人体等の対象から収集された試料（尿）を用いて検査を行う方法であり、対象がヒトである場合であっても、人間を診断する方法（医療目的で人間の病状や健康状態等の身体状態または精神状態について判断する工程を含む方法）を含まない。
本発明の肺がんの検査方法は、「肺がんに関するデータを提供する、肺がんに関する検査方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を判定する方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を評価する方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を試験する方法」、「対象の肺がんへの罹患の有無を判定する方法」又は「肺がんの判定のための方法」等と言い換えることができる。また、本発明の肺がんの検査方法は、対象の肺がんについて医師が診断を行うための材料となる検査結果を提供するものであるから、「肺がんの診断のためにデータを収集する方法」、「対象が肺がんに罹患していると推定するための診断用情報の分析方法」、又は「対象が肺がんに罹患しているとの推定を補助するための診断用情報の分析方法」と言い換えることもできる。
本発明の肺がんの検査方法は、人体等の対象から収集された試料（尿）を用いて検査を行う方法であり、対象がヒトである場合であっても、人間を診断する方法（医療目的で人間の病状や健康状態等の身体状態または精神状態について判断する工程を含む方法）を含まない。
本発明の肺がんの検査方法は、「肺がんに関するデータを提供する、肺がんに関する検査方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を判定する方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を評価する方法」、「対象が肺がんに罹患している可能性を試験する方法」、「対象の肺がんへの罹患の有無を判定する方法」又は「肺がんの判定のための方法」等と言い換えることができる。また、本発明の肺がんの検査方法は、対象の肺がんについて医師が診断を行うための材料となる検査結果を提供するものであるから、「肺がんの診断のためにデータを収集する方法」、「対象が肺がんに罹患していると推定するための診断用情報の分析方法」、又は「対象が肺がんに罹患しているとの推定を補助するための診断用情報の分析方法」と言い換えることもできる。
【0030】
本発明の肺がんの検査方法は、初期の肺がんのスクリーニングに有用であることから、症状がなく健康と思われる人に対する肺がんスクリーニング検査として用いることが好ましい。本発明の肺がんの検査方法は、簡便で安価に行うことができることから、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、又は生検の前段階として用いることが好ましい。前記肺がんの検査方法は、前記肺がんの検査方法により、対象が肺がんに罹患している可能性が高いことが示された場合に、専門の医師による問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、又は生検を推奨するために用いることがより好ましい。
【0031】
〈肺がんの検査方法（Ｉ）〉
肺がんの検査方法（Ｉ）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法である。
肺がんの検査方法（Ｉ）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法である。
【0032】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（Ｉ）における肺がんは、臨床ステージＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、またはＩＢ期のいずれかの肺がんである。
【0033】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（Ｉ）における肺がんは、好ましくは非喫煙者の肺がんであり、より好ましくは女性非喫煙者の肺がんである。
【0034】
〈工程（Ａ１）〉
前記工程（Ａ１）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４８６－５ｐ、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐとも称する）の発現量を測定する工程である。
前記工程（Ａ１）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４８６－５ｐ、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐとも称する）の発現量を測定する工程である。
【0035】
〈マイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）〉
ｍｉＲ－４８６－５ｐは、ヒトゲノムの８番染色体（８ｐ１１．２１）上にあるＭＩＲ４８６－１遺伝子によってコードされているマイクロＲＮＡ－４８６（ｍｉＲ－４８６）の５ｐ型である。
ＭＩＲ４８６－１遺伝子から、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによって転写されたＰｒｉ－ｍｉＲ－４８６は、核内においてＤｒｏｓｈａによって切断され、Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６が生成される。Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６はその後、細胞質基質においてＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ（ＲＩＳＣ）を経て、一本鎖ＲＮＡである、ｍｉＲ－４８６－５ｐ及びｍｉＲ－４８６－３ｐを生ずる。Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６において５’側にあったｍｉＲ－４８６をｍｉＲ－４８６－５ｐ、３’側にあったｍｉＲ－４８６をｍｉＲ－４８６－３ｐ型と称する。ｍｉＲ－４８６－５ｐ（ｍｉＲＢａｓｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）の配列は、ＵＣＣＵＧＵＡＣＵＧＡＧＣＵＧＣＣＣＣＧＡＧ（配列番号１）である。
ｍｉＲ－４８６－５ｐは、ヒトゲノムの８番染色体（８ｐ１１．２１）上にあるＭＩＲ４８６－１遺伝子によってコードされているマイクロＲＮＡ－４８６（ｍｉＲ－４８６）の５ｐ型である。
ＭＩＲ４８６－１遺伝子から、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによって転写されたＰｒｉ－ｍｉＲ－４８６は、核内においてＤｒｏｓｈａによって切断され、Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６が生成される。Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６はその後、細胞質基質においてＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ（ＲＩＳＣ）を経て、一本鎖ＲＮＡである、ｍｉＲ－４８６－５ｐ及びｍｉＲ－４８６－３ｐを生ずる。Ｐｒｅ－ｍｉＲ－４８６において５’側にあったｍｉＲ－４８６をｍｉＲ－４８６－５ｐ、３’側にあったｍｉＲ－４８６をｍｉＲ－４８６－３ｐ型と称する。ｍｉＲ－４８６－５ｐ（ｍｉＲＢａｓｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）の配列は、ＵＣＣＵＧＵＡＣＵＧＡＧＣＵＧＣＣＣＣＧＡＧ（配列番号１）である。
【0036】
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、絶対発現量又は相対対発現量のいずれであってもよい。
ｍｉＲ－４８６－５ｐの絶対発現量としては、ｍｉＲ－４８６－５ｐのコピー数、又は重量を用いることができる。
ｍｉＲ－４８６－５ｐの絶対発現量としては、ｍｉＲ－４８６－５ｐのコピー数、又は重量を用いることができる。
【0037】
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する方法は、ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定できれば特に制限されず、公知の方法を用いることができるが、例えば、定量ＲＴ－ＰＣＲ、マイクロＲＮＡアレイ、ＲＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）、Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｍｉＲＮＡ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ等が挙げられる。
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、市販のキットを使用して測定してもよい。定量ＲＴ－ＰＣＲの市販品のキットとしては、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）が挙げられる。
ｍｉＲ－４８６－５ｐを測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、定量ＲＴ－ＰＣＲが好ましく、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いる定量ＲＴ-ＰＣＲがより好ましい。
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、市販のキットを使用して測定してもよい。定量ＲＴ－ＰＣＲの市販品のキットとしては、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）が挙げられる。
ｍｉＲ－４８６－５ｐを測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、定量ＲＴ－ＰＣＲが好ましく、ｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いる定量ＲＴ-ＰＣＲがより好ましい。
【0038】
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、定量ＲＴ－ＰＣＲにより測定する場合、健常人の発現量に対する相対発現量であることが好ましく、定量ＲＴ-ＰＣＲにおける肺がん患者または健常人の個々のｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）から、健常人全員でのｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ値の平均値を差し引いて算出したΔＣＴから求めた２ΔCTの値（２のΔＣＴ乗）であることがより好ましい。
定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいてｍｉＲ－４８６－５ｐが増幅するサイクル数は、健常人男性と健常人女性で異なっているため、健常人全員でのｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ値の平均値は、性別ごとに算出し、肺がん患者または健常人の性別に応じた値を差し引いて、ΔＣＴを算出することが好ましい。
定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいてｍｉＲ－４８６－５ｐが増幅するサイクル数は、健常人男性と健常人女性で異なっているため、健常人全員でのｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ値の平均値は、性別ごとに算出し、肺がん患者または健常人の性別に応じた値を差し引いて、ΔＣＴを算出することが好ましい。
【0039】
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、健常人と肺がん患者で異なることから、肺がんの検査方法（Ｉ）は、肺がんへの罹患の有無の判定に利用できる。
肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を、健常人のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量から得られた基準値と比較することにより、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定するものである。
肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を、健常人のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量から得られた基準値と比較することにより、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定するものである。
【0040】
男性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、男性健常人よりも大きいことから、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きい場合に、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。
そのため、肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、対象が男性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
そのため、肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、対象が男性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
【0041】
基準値（Ｍ）は、特に制限されず、男性肺がん患者の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量と、男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量とを比較することにより適宜決定することができる。
【0042】
基準値（Ｍ）は、好ましくは、男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量である。前記男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、好ましくは複数の男性健常人のグループから得られた上記ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量の測定方法、好適には定量ＲＴ－ＰＣＲにより得られた複数の測定結果から算出された値、または数値範囲であり、例えば平均値、中央値、平均値±標準偏差等が挙げられる。
基準値（Ｍ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
基準値（Ｍ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
【0043】
男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、男性健常人の尿をサンプルとして前記工程（Ａ１）と同様にして測定すればよい。
健常人とは、胸部Ｘ線検査において肺がんの疑いがない者、または肺がんと診断されていない者をいう。
健常人とは、胸部Ｘ線検査において肺がんの疑いがない者、または肺がんと診断されていない者をいう。
【0044】
女性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、女性健常人よりも少ないことから、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さい場合に、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。
そのため、肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、対象が女性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
そのため、肺がんの検査方法（Ｉ）は、好ましくは、対象が女性である場合、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
【0045】
基準値（Ｆ）は、特に制限されず、女性肺がん患者の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量と、女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量とを比較することにより適宜決定することができる。
【0046】
基準値（Ｆ）は、好ましくは、女性健常人の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量である。前記女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、好ましくは複数の女性健常人のグループから得られた上記ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量の測定方法、好適には定量ＲＴ－ＰＣＲにより得られた複数の測定結果から算出された値、または数値範囲であり、例えば平均値、中央値、平均値±標準偏差等が挙げられる。
基準値（Ｆ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
基準値（Ｆ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
【0047】
女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、女性健常人の尿をサンプルとして前記工程（Ａ１）と同様にして測定すればよい。
【0048】
〈工程（Ａ２）、工程（Ａ３）〉
肺がんの検査方法（Ｉ）は、工程（Ａ１）に加えて、
健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を前記工程（Ａ２）で得られた結果と比較して、肺がんに罹患している可能性を判定する工程（Ａ３）
を含んでもよい。
肺がんの検査方法（Ｉ）は、工程（Ａ１）に加えて、
健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を前記工程（Ａ２）で得られた結果と比較して、肺がんに罹患している可能性を判定する工程（Ａ３）
を含んでもよい。
【0049】
肺がんの検査方法（Ｉ）は、対象が男性である場合、工程（Ａ１）に加えて、
男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２Ｍ１）、
前記工程（Ａ２Ｍ１）で得られた結果から基準値（Ｍ）を算出する工程（Ａ２Ｍ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を基準値（Ｍ）と比較して、前記工程（Ａ１）で得られた結果が基準値（Ｍ）よりも大きい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ａ３Ｍ）
を含んでもよい。
男性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２Ｍ１）、
前記工程（Ａ２Ｍ１）で得られた結果から基準値（Ｍ）を算出する工程（Ａ２Ｍ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を基準値（Ｍ）と比較して、前記工程（Ａ１）で得られた結果が基準値（Ｍ）よりも大きい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ａ３Ｍ）
を含んでもよい。
【0050】
肺がんの検査方法（Ｉ）は、対象が女性である場合、工程（Ａ１）に加えて、
女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２Ｆ１）、
前記工程（Ａ２Ｍ１）で得られた結果から基準値（Ｆ）を算出する工程（Ａ２Ｆ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を基準値（Ｆ）と比較して、前記工程（Ａ１）で得られた結果が基準値（Ｆ）よりも小さい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ａ３Ｆ）
を含んでもよい。
女性健常人の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定する工程（Ａ２Ｆ１）、
前記工程（Ａ２Ｍ１）で得られた結果から基準値（Ｆ）を算出する工程（Ａ２Ｆ２）、及び
前記工程（Ａ１）で得られた結果を基準値（Ｆ）と比較して、前記工程（Ａ１）で得られた結果が基準値（Ｆ）よりも小さい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ａ３Ｆ）
を含んでもよい。
【0051】
〈その他の工程〉
肺がんの検査方法（Ｉ）は、肺がん罹患の可能性の判定の感度と特異度を向上させるため、好ましくは、さらに、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む。
すなわち、肺がんの検査方法（Ｉ）は、肺がんの検査方法（ＩＩ）と組み合わせることが好ましい。肺がんの検査方法（Ｉ）と、肺がんの検査方法（ＩＩ）とを組み合わせた肺がんの検査方法を肺がんの検査方法（ＩＩＩ）と称する。
肺がんの検査方法（ＩＩ）、工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）及び工程（Ｂ３）の詳細については後述する。
肺がんの検査方法（Ｉ）は、肺がん罹患の可能性の判定の感度と特異度を向上させるため、好ましくは、さらに、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む。
すなわち、肺がんの検査方法（Ｉ）は、肺がんの検査方法（ＩＩ）と組み合わせることが好ましい。肺がんの検査方法（Ｉ）と、肺がんの検査方法（ＩＩ）とを組み合わせた肺がんの検査方法を肺がんの検査方法（ＩＩＩ）と称する。
肺がんの検査方法（ＩＩ）、工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）及び工程（Ｂ３）の詳細については後述する。
【0052】
肺がんの検査方法（Ｉ）における工程（Ｂ１）に用いる尿は、工程（Ａ１）に用いる尿と同一の対象から得られたものであればよく、採取の時期は制限されない。試験を簡便に行うために、工程（Ｂ１）に用いる尿は、工程（Ａ１）に用いる尿と同時に採取されたものであることが好ましい。
工程（Ａ１）と工程（Ｂ１）を行う順序は制限されず、２つの工程を同時に行ってもよい。
工程（Ａ１）と工程（Ｂ１）を行う順序は制限されず、２つの工程を同時に行ってもよい。
【0053】
〈肺がんの検査方法（ＩＩ）〉
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、肺がんの検査方法である。
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程（Ｂ１）、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ２）、及び前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ３）を含む、肺がんの検査方法である。
【0054】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩ）における肺がんは、好ましくは臨床ステージ０期、ＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、又はＩＩＢ期のいずれかの肺がんであり、より好ましくは臨床ステージＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、又はＩＩＢ期のいずれかの肺がんであり、さらに好ましくは臨床ステージＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、又はＩＢ期のいずれかの肺がんである。
【0055】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩ）における肺がんは、好ましくは腺がん又は小細胞がんであり、より好ましくは腺がんである。
【0056】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩ）における肺がんは、好ましくは非喫煙者における肺がんであり、より好ましくは非喫煙者における腺がんであり、さらに好ましくは非喫煙者の女性における腺がんである。
【0057】
<工程（Ｂ１）>
工程（Ｂ１）は、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程である。
工程（Ｂ１）は、前記対象の尿中エクソソームに含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）の発現量を測定する工程である。
【0058】
マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）は、ＭＭＰ－１、ｍｍｐ－１とも称する。
ＭＭＰ－１は、コラゲナーゼ１とも呼ばれる、コラーゲンタイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩを分解するプロテアーゼであり、Ｎ末から３：１の部位でコラーゲン分子を切断する。ＭＭＰ－１は、がん細胞周囲のコラーゲンを分解することにより、がん細胞が増殖したり運動したりするスペースを作るといわれており、がん浸潤における細胞外マトリックス（Ｅｘｔｒａ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｍａｔｒｉｘ、ＥＣＭ）分解の中心的な役割を果たす酵素である。
ＭＭＰ－１は、コラゲナーゼ１とも呼ばれる、コラーゲンタイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩを分解するプロテアーゼであり、Ｎ末から３：１の部位でコラーゲン分子を切断する。ＭＭＰ－１は、がん細胞周囲のコラーゲンを分解することにより、がん細胞が増殖したり運動したりするスペースを作るといわれており、がん浸潤における細胞外マトリックス（Ｅｘｔｒａ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｍａｔｒｉｘ、ＥＣＭ）分解の中心的な役割を果たす酵素である。
【0059】
ＭＭＰ－１は、まず不活性な潜在型ＭＭＰ－１（ＰｒｏＭＭＰ－１）として発現し、ＰｒｏＭＭＰ－１のプロペプチド部分が切断されて５４ｋＤａの活性型ＭＭＰ－１となる。ＰｒｏＭＭＰ－１、活性型ＭＭＰ－１と、ＭＭＰ－１のインヒビターであるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害因子（Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ、ＴＩＭＰｓ）が複合体を形成することにより、ＭＭＰ－１の活性は制御される。
【0060】
本発明において発現量を測定するＭＭＰ－１は活性型ＭＭＰ－１である。
ＭＭＰ－１の発現量は、絶対発現量又は相対発現量のいずれであってもよい。
ＭＭＰ－１の発現量を測定する方法は、ＭＭＰ－１タンパク質の発現量を測定できる方法であれば特に制限されず、例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ等の抗ＭＭＰ－１抗体を用いる方法、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＣ／ＭＣ）、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｏｎｉｔｏｒｔｉｎｇ（ＭＲＭ）等の質量分析を用いる方法が挙げられる。ＭＭＰ－１の発現量を測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、抗ＭＭＰ－１抗体を用いるウエスタンブロッティングが好ましく、抗ＭＭＰ－１抗体を用いるウエスタンブロッティングにより５４ｋＤａ付近に検出されるバンドの濃さから測定する方法がより好ましい。
抗ＭＭＰ－１抗体は市販品を使用してもよく、例えば、抗ＭＭＰ－１ウサギポリクローナル抗体であるウサギ由来抗ＭＭＰ－１抗体（ａｂｃａｍ社製、ＮＯ.ａｂ１３４１８４）が挙げられる。
ＭＭＰ－１の発現量は、絶対発現量又は相対発現量のいずれであってもよい。
ＭＭＰ－１の発現量を測定する方法は、ＭＭＰ－１タンパク質の発現量を測定できる方法であれば特に制限されず、例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ等の抗ＭＭＰ－１抗体を用いる方法、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＣ／ＭＣ）、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｏｎｉｔｏｒｔｉｎｇ（ＭＲＭ）等の質量分析を用いる方法が挙げられる。ＭＭＰ－１の発現量を測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、抗ＭＭＰ－１抗体を用いるウエスタンブロッティングが好ましく、抗ＭＭＰ－１抗体を用いるウエスタンブロッティングにより５４ｋＤａ付近に検出されるバンドの濃さから測定する方法がより好ましい。
抗ＭＭＰ－１抗体は市販品を使用してもよく、例えば、抗ＭＭＰ－１ウサギポリクローナル抗体であるウサギ由来抗ＭＭＰ－１抗体（ａｂｃａｍ社製、ＮＯ.ａｂ１３４１８４）が挙げられる。
【0061】
<工程（Ｂ２）>
工程（Ｂ２）は、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程である。
工程（Ｂ２）は、前記尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程である。
【0062】
エクソソーム特異的タンパク質としては、例えばエクソソーム表面に発現するテトラスパニンファミリーに属するタンパク質やエクソソーム内に存在するＨＳＰ７０やＲａｂファミリーに属するタンパク質等、より具体的にはＣＤ６３、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ８２、ＣＤ１３、ＣＤ１１、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ－１、Ｒａｂ５、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ、及びＬＡＭＰ１が挙げられる。エクソソーム特異的タンパク質は、これらの中でも好ましくは、テトラスパニンファミリーに属するタンパク質であり、より好ましくは、ＣＤ６３、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ８２、ＣＤ１３、ＣＤ１１、又はＣＤ８６であり、さらに好ましくはＣＤ６３、ＣＤ９、又はＣＤ８１であり、特に好ましくはＣＤ６３である。
【0063】
エクソソーム特異的タンパク質の発現量は、絶対発現量又は相対発現量のいずれであってもよい。
エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する方法は、エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定できる方法であれば特に制限されず、例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ等のエクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いる方法、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＣ／ＭＣ）、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｏｎｉｔｏｒｔｉｎｇ（ＭＲＭ）等の質量分析を用いる方法が挙げられる。エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、エクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いる方法が好ましく、エクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いるウエスタンブロッティングがより好ましく、ウエスタンブロッティングにより検出される、エクソソーム特異的タンパク質に特異的なバンドの濃さから測定する方法がさらに好ましい。
エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する方法は、エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定できる方法であれば特に制限されず、例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ等のエクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いる方法、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＣ／ＭＣ）、ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｏｎｉｔｏｒｔｉｎｇ（ＭＲＭ）等の質量分析を用いる方法が挙げられる。エクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する方法は、操作が簡便で定量性に優れることから、エクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いる方法が好ましく、エクソソーム特異的タンパク質に対する抗体を用いるウエスタンブロッティングがより好ましく、ウエスタンブロッティングにより検出される、エクソソーム特異的タンパク質に特異的なバンドの濃さから測定する方法がさらに好ましい。
【0064】
エクソソーム特異的タンパク質に対する抗体は、特に制限されず、市販品を用いてもよい。市販品としては、例えば、ビオチン化抗ＣＤ６３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社製、ＮＯ.３５３０１７）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ６３（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：Ｈ５Ｃ６）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ９（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：Ｍ－Ｌ１３）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ８１（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：ＪＳ－８１）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ３７（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：Ｍ－Ｂ３７１）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ５３（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：ＨＩ２９）、Ａｎｔｉ－ＣＤ８２ ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｃ３３］（アブカム社製）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ１３（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：ＷＭ１５）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ１１ａ（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：２７／ＣＤ１１ａ）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ１１ｂ／Ｍａｃ－１（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：ＩＣＲＦ４４）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ１１ｃ（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：３．９）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＣＤ８６（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：２３３１ (ＦＵＮ－１)）、Ａｎｔｉ－ＩＣＡＭ１ ａｎｔｉｂｏｄｙ［ＨＭ１］（アブカム社製）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｒａｂ５（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：１／Ｒａｂ５）、Ａｎｔｉ－Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ ａｎｔｉｂｏｄｙ［ＥＰＲ３９７９］（アブカム社製）、Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ Ｌａｍｐ－１（日本ベクトン・ディッキンソン社製、クローン：２５／Ｌａｍｐ－１）等が挙げられる。
【0065】
工程（Ｂ２）に用いる尿は、工程（Ｂ１）に用いる尿と同一である。
工程（Ｂ１）と工程（Ｂ２）を行う順序は制限されず、２つの工程を同時に行ってもよい。
工程（Ｂ１）と工程（Ｂ２）を行う順序は制限されず、２つの工程を同時に行ってもよい。
【0066】
<工程（Ｂ３）>
工程（Ｂ３）は、前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程である。
工程（Ｂ３）では、ＭＭＰ－１の発現量をエクソソーム特異的タンパク質の発現量で除して、ＭＭＰ－１とエクソソーム特異的タンパク質の発現量比である、ＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質を算出する。例えば、エクソソーム特異的タンパク質としてＣＤ６３を用いる場合、ＭＭＰ－１タンパク質の発現量をＣＤ６３タンパク質の発現量で除した値である、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３を算出する。
工程（Ｂ３）は、前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程である。
工程（Ｂ３）では、ＭＭＰ－１の発現量をエクソソーム特異的タンパク質の発現量で除して、ＭＭＰ－１とエクソソーム特異的タンパク質の発現量比である、ＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質を算出する。例えば、エクソソーム特異的タンパク質としてＣＤ６３を用いる場合、ＭＭＰ－１タンパク質の発現量をＣＤ６３タンパク質の発現量で除した値である、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３を算出する。
【0067】
エクソソーム特異的タンパク質の発現量は、肺がん患者か健常人かによって変化しないので、ＭＭＰ－１タンパク質の発現量をエクソソーム特異的タンパク質の発現量で除することにより、尿中エクソソーム量やサンプル調整によるばらつき等を排除して標準化することができる。
【0068】
工程（Ｂ３）で得られた値、すなわち、ＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、健常人と肺がん患者で異なることから、肺がんの検査方法（ＩＩ）は、肺がんへの罹患の可能性の判定に利用できる。
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、好ましくは、ＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質を、健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質から得られた基準値と比較することにより、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定するものである。
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、好ましくは、ＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質を、健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質から得られた基準値と比較することにより、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定するものである。
【0069】
肺がん患者のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、健常人よりも高いことから、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きい場合に、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。
そのため、肺がんの検査方法（ＩＩ）は、好ましくは、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
そのため、肺がんの検査方法（ＩＩ）は、好ましくは、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
【0070】
基準値（Ｔ）は、特に制限されず、肺がん患者のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質と、健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質とを比較することにより適宜決定することができる。
基準値（Ｔ）は、好ましくは、健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質である。前記健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、好ましくは複数の健常人のグループから得られた複数の測定結果から算出された値、または数値範囲であり、例えば平均値、中央値、平均値±標準偏差等が挙げられる。
基準値（Ｔ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
基準値（Ｔ）は、好ましくは、健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質である。前記健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、好ましくは複数の健常人のグループから得られた複数の測定結果から算出された値、または数値範囲であり、例えば平均値、中央値、平均値±標準偏差等が挙げられる。
基準値（Ｔ）は、ＲＯＣ曲線に基づいて決定することが好ましい。
【0071】
健常人のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、健常人の尿をサンプルとして前記工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）、及び（Ｂ３）と同様にして測定および算出すればよい。
健常人とは、胸部Ｘ線検査において肺がんの疑いがない者、または肺がんと診断されていない者をいう。
健常人とは、胸部Ｘ線検査において肺がんの疑いがない者、または肺がんと診断されていない者をいう。
【0072】
<その他の工程>
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）、及び工程（Ｂ３）に加えて、
健常人の尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１の発現量を測定する工程（Ｂ４）、
前記健常人の尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ５）、
前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ６）、及び
前記工程（Ｂ３）で得られた結果を前記工程（Ｂ６）で得られた結果と比較して、肺がんに罹患している可能性を判定する工程（Ｂ７－１）
を含んでもよい。
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）、及び工程（Ｂ３）に加えて、
健常人の尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１の発現量を測定する工程（Ｂ４）、
前記健常人の尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ５）、
前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ６）、及び
前記工程（Ｂ３）で得られた結果を前記工程（Ｂ６）で得られた結果と比較して、肺がんに罹患している可能性を判定する工程（Ｂ７－１）
を含んでもよい。
【0073】
肺がんの検査方法（ＩＩ）は、工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）、及び工程（Ｂ３）に加えて、
健常人の尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１の発現量を測定する工程（Ｂ４）、
前記健常人の尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ５）、及び
前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ６）、
前記工程（Ｂ６）で得られた結果から基準値（Ｔ）を算出する工程（Ｂ６－２）、
前記工程（Ｂ３）で得られた結果を基準値（Ｔ）と比較して、前記工程（Ｂ３）で得られた結果が基準値（Ｔ）よりも大きい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ｂ７－２）
を含んでもよい。
健常人の尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１の発現量を測定する工程（Ｂ４）、
前記健常人の尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質の発現量を測定する工程（Ｂ５）、及び
前記ＭＭＰ－１の発現量／前記エクソソーム特異的タンパク質の発現量を算出する工程（Ｂ６）、
前記工程（Ｂ６）で得られた結果から基準値（Ｔ）を算出する工程（Ｂ６－２）、
前記工程（Ｂ３）で得られた結果を基準値（Ｔ）と比較して、前記工程（Ｂ３）で得られた結果が基準値（Ｔ）よりも大きい場合に、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定する工程（Ｂ７－２）
を含んでもよい。
【0074】
〈肺がんの検査方法（ＩＩＩ）〉
肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、肺がんの検査方法（Ｉ）と肺がんの検査方法（ＩＩ）とを組み合わせることにより、肺がんの検査方法（Ｉ）単独又は肺がんの検査方法（ＩＩ）単独よりも肺がんへの罹患の可能性をより精度よく判定できる。
肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、肺がんの検査方法（Ｉ）と肺がんの検査方法（ＩＩ）とを組み合わせることにより、肺がんの検査方法（Ｉ）単独又は肺がんの検査方法（ＩＩ）単独よりも肺がんへの罹患の可能性をより精度よく判定できる。
【0075】
ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量に変化がある場合、偽陽性及び偽陰性も含まれ得るが、ｍｉＲ－４８６－５ｐ発現量に加えてＭＭＰ－１の発現量を測定することにより、偽陽性及び偽陰性を減らすことができる。また、ＭＭＰ－１の発現量は、乳がん、前立腺がん、肝細胞がん等においても変化するので、ｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量及びＭＭＰ－１の発現量に変化がある場合、対象の訴え、理学的所見、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）以外の検査データ等を併せて考慮することにより、肺以外に原発巣があること、又は、がんが肺以外に転移していることを疑うことが可能になる。
【0076】
ＭＭＰ－１の発現量に変化がある場合、既存の情報から乳がん、前立腺がん、肝細胞がん等の疾病も疑われるが、ＭＭＰ－１発現量に加えてｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量を測定することにより、他の疾病よりも優先して肺がんを疑うことが可能になる。
【0077】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）における肺がんは、好ましくは臨床ステージ０期、ＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、又はＩＩＢ期のいずれかの肺がんであり、より好ましくは臨床ステージＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、又はＩＩＢ期のいずれかの肺がんであり、さらに好ましくは臨床ステージＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、又はＩＢ期のいずれかの肺がんである。
【0078】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）における肺がんは、好ましくは腺がん又は小細胞がんであり、より好ましくは腺がんである。
【0079】
精度良く肺がんへの罹患の可能性を判定できることから、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）における肺がんは、好ましくは非喫煙者における肺がんであり、より好ましくは非喫煙者における腺がん又は非喫煙の女性における肺がんであり、さらに好ましくは非喫煙者の女性における腺がんである。
【0080】
男性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、男性健常人よりも大きく、また、肺がん患者のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、健常人よりも高いことから、対象が男性である場合、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きい場合に、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。
そのため、対象が男性である場合、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、好ましくは、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
そのため、対象が男性である場合、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、好ましくは、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｍ）よりも大きく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
【0081】
女性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、女性健常人よりも小さく、また、肺がん患者のＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質は、健常人よりも高いことから、対象が女性である場合、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きい場合に、対象は肺がんに罹患している可能性が高いと判定することができる。
そのため、対象が女性である場合、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、好ましくは、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
そのため、対象が女性である場合、肺がんの検査方法（ＩＩＩ）は、好ましくは、肺がんの検査方法（Ｉ）において、工程（Ａ１）で得られたｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量が基準値（Ｆ）よりも小さく、かつ、肺がんの検査方法（ＩＩ）において、工程（Ｂ１）で得られたＭＭＰ－１／エクソソーム特異的タンパク質が基準値（Ｔ）よりも大きいことが、前記対象は肺がんに罹患している可能性が高いことを示すものである。
【0082】
〈肺がん評価用の尿検査キット〉
本発明の肺がん評価用の尿検査キットは、対象から収集された試料（尿）を用いて肺がんを評価するためのキットである。
肺がんを評価するとは、肺がんを診断する、肺がんへの罹患の有無又は罹患の可能性を推定する、判定する、又は評価する、若しくはそれらを補助すること等を含み、肺がんの臨床ステージ又は肺がんの分類を推定する、判定する、又は評価する、若しくはそれらを補助することを含む。
本発明の肺がん評価用の尿検査キットは、対象から収集された試料（尿）を用いて肺がんを評価するためのキットである。
肺がんを評価するとは、肺がんを診断する、肺がんへの罹患の有無又は罹患の可能性を推定する、判定する、又は評価する、若しくはそれらを補助すること等を含み、肺がんの臨床ステージ又は肺がんの分類を推定する、判定する、又は評価する、若しくはそれらを補助することを含む。
【0083】
本発明の肺がん評価用の尿検査キットは、検査を受ける対象が自ら用いてもよく、医療従事者（医師、看護師、薬剤師、臨床検査技師等）が用いてもよいが、肺がんの評価は医師が行うことが好ましい。
【0084】
本発明の肺がん評価用の尿検査キットは、簡便で安価に行うことができることから、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、又は生検の前段階の検査に用いることが好ましい。前記本発明の肺がん評価用の尿検査キットは、前記本発明の肺がん評価用の尿検査キットにより、対象が肺がんに罹患している可能性が示された場合に、専門の医師による問診、胸部Ｘ線検査、喀痰細胞診、胸部ＣＴ検査、気管支鏡検査、又は生検を推奨するために用いることがより好ましい。
【0085】
<肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）>
肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）は、エクソソーム調製試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。
肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）は、エクソソーム調製試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。
【0086】
エクソソーム調製試薬は、尿からエクソソームを分離、精製し、エクソソーム調製物を調製するための試薬であり、その調製方法は特に制限されない。例えば超遠心分離や限外ろ過、ゲル濾過、ＨＰＬＣ、フィルター法、ポリマーを用いた沈殿法、抗体やレクチンを利用してビーズやカラムに吸着させる方法などが挙げられ、これらを応用した市販品としてＥｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、Ｔｏｔａｌ Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎシリーズ、ＥｘｏＴｒａｐTM、ＰｕｒｅＥｘｏTM、ＤＩＡＧ ＥｘｏTM等の市販のエクソソーム分離、精製用のスピンカラム、キット等が挙げられる。
【0087】
マイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬は、尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐの量を測定するための試薬であり、その測定方法は制限されない。ｍｉＲ－４８６－５ｐ測定試薬としては、例えば、定量ＲＴ－ＰＣＲ、マイクロＲＮＡアレイ、ＲＮＡ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）、又はＭｕｌｔｉｐｌｅｘ ｍｉＲＮＡ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ等に用いられる、ｍｉＲ－４８６－５ｐ特異的なプライマー、及びｍｉＲ－４８６－５ｐ特異的なプローブ等が挙げられる。
【0088】
尿からエクソソーム調製物を調製せずに、尿から直接エクソソームを検出する場合、肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）は、エクソソーム調製試薬の代わりに、エクソソーム検出試薬を含んでもよい。すなわち、肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）は、エクソソーム検出試薬とマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットであってもよい。
エクソソーム検出試薬は、エクソソームの分離及び精製をせずに尿から直接エクソソームを検出するための試薬であり、その検出方法は特に制限されない。例えばフローサイトメトリー、マイクロアレイや表面プラズモン共鳴等によりエクソソームを含む画分を機器上で検出するために用いる、エクソソームを特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
エクソソーム検出試薬は、エクソソームの分離及び精製をせずに尿から直接エクソソームを検出するための試薬であり、その検出方法は特に制限されない。例えばフローサイトメトリー、マイクロアレイや表面プラズモン共鳴等によりエクソソームを含む画分を機器上で検出するために用いる、エクソソームを特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
【0089】
エクソソーム調製試薬、エクソソーム検出試薬又はｍｉＲ－４８６－５ｐ測定試薬は、本発明の効果を妨げない限り、さらに安定化剤、ｐＨ調整剤や乳化剤等の公知の任意成分を含有してもよい。
【0090】
肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）は、エクソソーム調製試薬、又はエクソソーム検出試薬及びｍｉＲ－４８６－５ｐ測定試薬以外に、洗浄、濃縮、希釈、固定、乾燥、保存、染色、発色、観察等のためのその他の試薬を含んでもよく、必要に応じて実験器具等を含んでもよい。
【0091】
<肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）>
肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）は、エクソソーム調製試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。
肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）は、エクソソーム調製試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットである。
【0092】
肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）におけるエクソソーム調製試薬は、肺がん評価用の尿検査キット（Ｉ）におけるエクソソーム調製試薬と同様である。
【0093】
マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬は、尿中エクソソームに含まれるＭＭＰ－１を測定するための試薬であり、その測定方法は制限されない。例えばウエスタンブロッティングやＥＬＩＳＡに用いる、ＭＭＰ－１分子を特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
【0094】
エクソソーム特異的タンパク質測定試薬は、尿中エクソソームに含まれるエクソソーム特異的タンパク質を測定するための試薬であり、その測定方法は制限されない。例えばウエスタンブロッティングやＥＬＩＳＡに用いる、エクソソーム特異的タンパク質を特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
【0095】
尿からエクソソーム調製物を調製せずに、直接エクソソームを検出する場合、肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）は、エクソソーム調製試薬の代わりに、エクソソーム検出試薬を用いることができる。すなわち、肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）は、エクソソーム検出試薬とマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬とエクソソーム特異的タンパク質測定試薬とを含む、肺がん評価用の尿検査キットであってもよい。
エクソソーム検出試薬は、エクソソームの分離・精製をせずに尿から直接エクソソームを検出するための試薬であり、その検出方法は特に制限されない。例えばフローサイトメトリー、マイクロアレイや表面プラズモン共鳴等によりエクソソームを含む画分を機器上で検出するために用いる、エクソソームを特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
エクソソーム検出試薬は、エクソソームの分離・精製をせずに尿から直接エクソソームを検出するための試薬であり、その検出方法は特に制限されない。例えばフローサイトメトリー、マイクロアレイや表面プラズモン共鳴等によりエクソソームを含む画分を機器上で検出するために用いる、エクソソームを特異的に認識する抗体、アプタマー等が挙げられる。
【0096】
エクソソーム調製試薬、エクソソーム検出試薬、マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬、又はエクソソーム特異的タンパク質測定試薬は、本発明の効果を妨げない限り、さらに安定化剤、ｐＨ調整剤や乳化剤等の公知の任意成分を含有してもよい。
【0097】
肺がん評価用の尿検査キット（ＩＩ）は、エクソソーム調製試薬、又はエクソソーム検出試薬、マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）測定試薬及びエクソソーム特異的タンパク質測定試薬以外に、洗浄、濃縮、希釈、固定、乾燥、保存、染色、発色、観察等のためのその他の試薬を含んでもよく、必要に応じて実験器具等を含んでもよい。
【実施例】
【0098】
次に本発明について実施例を示してさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【0099】
〔実施例１〕尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ－４８６－５ｐ及びＭＭＰ－１／ＣＤ６３と肺がんとの関連性
〔被験者〕
本試験は、国際医療福祉大学病院及び北里大学メディカルセンターの倫理委員会の承認を受け、被験者の書面によるインフォームドコンセントを得てから行われた。３５人の肺がん患者及び４０人の健常人を被験者とした。
肺がん患者３５人（男性２４人、女性１１人、平均年齢はそれぞれ７１．０±８．４歳、６４．８±９．５歳）は、胸部Ｘ線、胸部ＣＴ、胸部ＭＲＩを用いて肺がんと診断され、必要に応じて手術前に針生検を行った。最終的な病理診断は、外科的切除により行った。
〔被験者〕
本試験は、国際医療福祉大学病院及び北里大学メディカルセンターの倫理委員会の承認を受け、被験者の書面によるインフォームドコンセントを得てから行われた。３５人の肺がん患者及び４０人の健常人を被験者とした。
肺がん患者３５人（男性２４人、女性１１人、平均年齢はそれぞれ７１．０±８．４歳、６４．８±９．５歳）は、胸部Ｘ線、胸部ＣＴ、胸部ＭＲＩを用いて肺がんと診断され、必要に応じて手術前に針生検を行った。最終的な病理診断は、外科的切除により行った。
【0100】
試験対照は、国際医療福祉大学病院予防医学科に健康診断で来院した５３３名（男性３５１人、女性１８２人）の中から選ばれた４０人（男性２０人、女性２０人）の健常人とした。各性別における４０歳代、５０歳代、６０歳代、７０歳代以上の選択者数は５名以上であった（表３）。４０人の健常人は全員、愁訴はなく、肥満や血液性高血圧などの身体所見の異常、末梢血液検査や血液化学検査の異常、心電図所見の異常、胸部Ｘ線検査や上部消化管内視鏡検査、腹部エコー検査の異常もなかった。また、がん、異形成の兆候、炎症性疾患、自己免疫疾患、心疾患、肝疾患、腎疾患などの慢性疾患の既往もなかった。
【0101】
被験者は、身長、体重を測定し、アルコール摂取量(g/日)、喫煙についても事前に調査した。被験者から採血し、常法に従い、腫瘍マーカーであるＣＥＡ（Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）、クレアチニンＣＲＮＮ（ｍｇ/ｄＬ）、総たんぱく量（ＴＰ；ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｇ／ｄＬ）、及びＡＬＴ（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＩＬ／ｄＬ）を測定した。
また、外科的切除された肺癌の病理組織を、抗ＰＤ－Ｌ１マウスモノクローナル抗体（クローン：２２Ｃ３）で免疫染色して主要細胞中のＰＤＬ－１発現陽性細胞の割合を測定し、ＰＤＬ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ １－Ｌｉｇａｎｄ １）（％）とした。
また、外科的切除された肺癌の病理組織を、抗ＰＤ－Ｌ１マウスモノクローナル抗体（クローン：２２Ｃ３）で免疫染色して主要細胞中のＰＤＬ－１発現陽性細胞の割合を測定し、ＰＤＬ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ １－Ｌｉｇａｎｄ １）（％）とした。
【0102】
〔尿サンプルの採取〕
朝食を摂取する前に採取した早朝尿の中間尿をサンプルとし、エクソソームを分離するまで－８０℃で保存した。すべてのサンプルは、患者が手術、化学療法、又は放射線療法を受ける前、若しくは遠隔転移の証拠がない状態で採取された。
朝食を摂取する前に採取した早朝尿の中間尿をサンプルとし、エクソソームを分離するまで－８０℃で保存した。すべてのサンプルは、患者が手術、化学療法、又は放射線療法を受ける前、若しくは遠隔転移の証拠がない状態で採取された。
【0103】
〔肺がんの臨床ステージ〕
肺がんの臨床ステージは、肺がんＴＮＭ分類第８版に従って分類した。基準の概略は以下の通りである。
肺がんの臨床ステージは、肺がんＴＮＭ分類第８版に従って分類した。基準の概略は以下の通りである。
【0104】
Ｔ：原発腫瘍
ＴＸ：原発腫瘍の存在が判定できない，あるいは喀痰または気管支洗浄液細胞診でのみ陽性で画像診断や気管支鏡では観察できない
Ｔ０：原発腫瘍を認めない
Ｔｉｓ：上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）：肺野型の場合は，充実成分径０ｃｍかつ病変全体径≦３ｃｍ
Ｔ１：腫瘍の充実成分径≦３ｃｍ，肺または臓側胸膜に覆われている，葉気管支より中枢への浸潤が気管支鏡上認められない（すなわち主気管支に及んでいない）
Ｔ１ｍｉ：微少浸潤性腺癌：部分充実型を示し，充実成分径≦０．５ｃｍかつ病変全体径≦３ｃｍ
Ｔ１ａ：充実成分径≦１ｃｍでかつＴｉｓ・Ｔ１ｍｉには相当しない
Ｔ１ｂ：充実成分径＞１ｃｍでかつ≦２ｃｍ
Ｔ１ｃ：充実成分径＞２ｃｍでかつ≦３ｃｍ
ＴＸ：原発腫瘍の存在が判定できない，あるいは喀痰または気管支洗浄液細胞診でのみ陽性で画像診断や気管支鏡では観察できない
Ｔ０：原発腫瘍を認めない
Ｔｉｓ：上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）：肺野型の場合は，充実成分径０ｃｍかつ病変全体径≦３ｃｍ
Ｔ１：腫瘍の充実成分径≦３ｃｍ，肺または臓側胸膜に覆われている，葉気管支より中枢への浸潤が気管支鏡上認められない（すなわち主気管支に及んでいない）
Ｔ１ｍｉ：微少浸潤性腺癌：部分充実型を示し，充実成分径≦０．５ｃｍかつ病変全体径≦３ｃｍ
Ｔ１ａ：充実成分径≦１ｃｍでかつＴｉｓ・Ｔ１ｍｉには相当しない
Ｔ１ｂ：充実成分径＞１ｃｍでかつ≦２ｃｍ
Ｔ１ｃ：充実成分径＞２ｃｍでかつ≦３ｃｍ
【0105】
Ｔ２：充実成分径＞３ｃｍでかつ≦５ｃｍ，または充実成分径≦３ｃｍでも以下のいずれかであるもの
‐主気管支に及ぶが気管分岐部には及ばない
‐臓側胸膜に浸潤
‐肺門まで連続する部分的または一側全体の無気肺か閉塞性肺炎がある
Ｔ２ａ：充実成分径＞３ｃｍでかつ≦４ｃｍ
Ｔ２ｂ：充実成分径＞４ｃｍでかつ≦５ｃｍ
‐主気管支に及ぶが気管分岐部には及ばない
‐臓側胸膜に浸潤
‐肺門まで連続する部分的または一側全体の無気肺か閉塞性肺炎がある
Ｔ２ａ：充実成分径＞３ｃｍでかつ≦４ｃｍ
Ｔ２ｂ：充実成分径＞４ｃｍでかつ≦５ｃｍ
【0106】
Ｔ３：充実成分径＞５ｃｍでかつ≦７ｃｍ，または充実成分径≦５ｃｍでも以下のいずれかであるもの
‐壁側胸膜，胸壁（ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｓｕｌｃｕｓ ｔｕｍｏｒを含む），横隔神経，心膜のいずれかに直接浸潤
‐同一葉内の不連続な副腫瘍結節
‐壁側胸膜，胸壁（ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｓｕｌｃｕｓ ｔｕｍｏｒを含む），横隔神経，心膜のいずれかに直接浸潤
‐同一葉内の不連続な副腫瘍結節
【0107】
Ｔ４：充実成分径＞７ｃｍ，または大きさを問わず横隔膜，縦隔，心臓，大血管，気管，反回神経，食道，椎体，気管分岐部への浸潤，あるいは同側の異なった肺葉内の副腫瘍結節
【0108】
Ｎ：所属リンパ節
ＮＸ：所属リンパ節評価不能
Ｎ０：所属リンパ節転移なし
Ｎ１：同側の気管支周囲かつ／または同側肺門，肺内リンパ節への転移で原発腫瘍の直接浸潤を含める
Ｎ２：同側縦隔かつ／または気管分岐下リンパ節への転移
Ｎ３：対側縦隔，対側肺門，同側あるいは対側の前斜角筋，鎖骨上窩リンパ節への転移
ＮＸ：所属リンパ節評価不能
Ｎ０：所属リンパ節転移なし
Ｎ１：同側の気管支周囲かつ／または同側肺門，肺内リンパ節への転移で原発腫瘍の直接浸潤を含める
Ｎ２：同側縦隔かつ／または気管分岐下リンパ節への転移
Ｎ３：対側縦隔，対側肺門，同側あるいは対側の前斜角筋，鎖骨上窩リンパ節への転移
【0109】
Ｍ：遠隔転移
Ｍ０：遠隔転移なし
Ｍ１：遠隔転移がある
Ｍ１ａ：対側肺内の副腫瘍結節，胸膜または心膜の結節，悪性胸水（同側・対側），悪性心嚢水
Ｍ１ｂ：肺以外の一臓器への単発遠隔転移がある
Ｍ１ｃ：肺以外の一臓器または多臓器への多発遠隔転移がある
Ｍ０：遠隔転移なし
Ｍ１：遠隔転移がある
Ｍ１ａ：対側肺内の副腫瘍結節，胸膜または心膜の結節，悪性胸水（同側・対側），悪性心嚢水
Ｍ１ｂ：肺以外の一臓器への単発遠隔転移がある
Ｍ１ｃ：肺以外の一臓器または多臓器への多発遠隔転移がある
【0110】
ＴＮＭ分類の３つの因子を組み合わせて、ＴＮＭ臨床病期分類（ＵＩＣＣ－８版）に従い、臨床ステージを０期、ＩＡ１期、ＩＡ２期、ＩＡ３期、ＩＢ期、ＩＩＡ期、ＩＩＢ期、ＩＩＩＡ期、ＩＩＩＢ期、ＩＩＩＣ期、ＩＶＡ期、ＩＶＢ期に分類した。
【0111】
〔肺がんの病理組織学的診断〕
肺がん患者から手術時に切除した組織を、常法に従い、病理組織学的に解析した。
ＡＣ：ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ、腺がん
ＳＣ：ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、扁平上皮がん
ＳＣＬＣ：ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、小細胞肺がん
ＬＣＣ：ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、大細胞がん
ｐｌｅｏｍｏｒｐｈｉｃ（Ｓａｒｃｏｍａ）、多形性（肉腫）
肺がん患者から手術時に切除した組織を、常法に従い、病理組織学的に解析した。
ＡＣ：ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ、腺がん
ＳＣ：ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、扁平上皮がん
ＳＣＬＣ：ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、小細胞肺がん
ＬＣＣ：ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、大細胞がん
ｐｌｅｏｍｏｒｐｈｉｃ（Ｓａｒｃｏｍａ）、多形性（肉腫）
【0112】
〔エクソソーム調製物〕
尿サンプルは溶解後、２ｍＬを４℃にて３０００ｇで１５分間遠心分離し、上清を０．２２μｍのナイロンフィルターでろ過した。ろ過後の上清から、Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｙｌｔｅｎｙｉ社製）を用いて分離、精製したものをエクソソーム調製物とした。
尿サンプルは溶解後、２ｍＬを４℃にて３０００ｇで１５分間遠心分離し、上清を０．２２μｍのナイロンフィルターでろ過した。ろ過後の上清から、Ｅｘｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｙｌｔｅｎｙｉ社製）を用いて分離、精製したものをエクソソーム調製物とした。
【0113】
得られたエクソソーム調製物は、電子顕微鏡により観察した。エクソソーム調製物はｃａｒｂｏｎ／ＦｏｒｍｖａｒでコートしたＴＥＭグリッド（応研商事株式会社製）にのせ、２％酢酸ウラニルで２分間染色した。電子顕微鏡はＨｉｔａｃｈｉ Ｈ－７６００を用いた。観察の結果、直径１００ｎｍ程度の球形のエクソソームが存在することを確認できた。写真を図１に示す。
【0114】
〔ウエスタンブロッティング〕
２ｍｌの尿から得られたエクソソーム調製物の６分の１を用いて、エクソソーム調製物中のＭＭＰ－１の発現を、抗ＭＭＰ－１抗体（ａｂｃａｍ社製、ＮＯ.ａｂ１３４１８４）を用いたウエスタンブロッティングにより解析した。５４ｋＤａ付近に検出されたバンドの強度をイメージアナライザー（Ｉｍａｇｅ Ｊ １．５２ａ）で定量することにより、ＭＭＰ－１を定量した。同様にビオチン化抗ＣＤ６３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社製、ＮＯ.３５３０１７）を用いて、５３ｋＤａ付近に検出されたバンドの強度を定量することにより、エクソソーム特異的タンパク質であるＣＤ６３を定量した。抗ＭＭＰ－１抗体及びビオチン化抗ＣＤ６３抗体は、１：１０００で用いた。ＭＭＰ－１の定量結果をＣＤ６３の定量結果で除して、ＭＭＰ－１の発現量とＣＤ６３の発現量の比であるＭＭＰ－１／ＣＤ６３を算出した。すべての実験は２回行い、平均値または中央値を用いた。
抗ＭＭＰ－１抗体および抗ＣＤ６３抗体により検出されたバンドの画像を図２に示す。
２ｍｌの尿から得られたエクソソーム調製物の６分の１を用いて、エクソソーム調製物中のＭＭＰ－１の発現を、抗ＭＭＰ－１抗体（ａｂｃａｍ社製、ＮＯ.ａｂ１３４１８４）を用いたウエスタンブロッティングにより解析した。５４ｋＤａ付近に検出されたバンドの強度をイメージアナライザー（Ｉｍａｇｅ Ｊ １．５２ａ）で定量することにより、ＭＭＰ－１を定量した。同様にビオチン化抗ＣＤ６３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社製、ＮＯ.３５３０１７）を用いて、５３ｋＤａ付近に検出されたバンドの強度を定量することにより、エクソソーム特異的タンパク質であるＣＤ６３を定量した。抗ＭＭＰ－１抗体及びビオチン化抗ＣＤ６３抗体は、１：１０００で用いた。ＭＭＰ－１の定量結果をＣＤ６３の定量結果で除して、ＭＭＰ－１の発現量とＣＤ６３の発現量の比であるＭＭＰ－１／ＣＤ６３を算出した。すべての実験は２回行い、平均値または中央値を用いた。
抗ＭＭＰ－１抗体および抗ＣＤ６３抗体により検出されたバンドの画像を図２に示す。
【0115】
〔ＲＴ-ＰＣＲ〕
得られたエクソソーム調製物からＴｏｔａｌ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＲＮＡ＆Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いてＲＮＡを抽出した。得られたＲＮＡをテンプレートとして、Ｔａｑｍａｎ ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、逆転写を行いｃＤＮＡを合成した。なお、採取したｍｉＲＮＡの５ｎｇを用いて逆転写反応を行い、多数のサンプル間のｍｉＲＮＡ量を補正した。このｃＤＮＡをテンプレートとし、ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量ＲＴ－ＰＣＲはｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、製造者のプロトコールに従って行った。また、ｍｉＲ２１の定量ＲＴ－ＰＣＲはｍｉＲ－２１ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、製造者のプロトコールに従って行った。１サンプルあたり、デュプリケートで反応を行った。定量ＲＴ－ＰＣＲシステムはＳｔｅｐ Ｏｎｅ ＰｌｕｓTM（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いた。
得られたエクソソーム調製物からＴｏｔａｌ Ｅｘｏｓｏｍｅ ＲＮＡ＆Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いてＲＮＡを抽出した。得られたＲＮＡをテンプレートとして、Ｔａｑｍａｎ ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、逆転写を行いｃＤＮＡを合成した。なお、採取したｍｉＲＮＡの５ｎｇを用いて逆転写反応を行い、多数のサンプル間のｍｉＲＮＡ量を補正した。このｃＤＮＡをテンプレートとし、ｍｉＲ－４８６－５ｐの定量ＲＴ－ＰＣＲはｍｉＲＮＡ－４８６－５ｐ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、製造者のプロトコールに従って行った。また、ｍｉＲ２１の定量ＲＴ－ＰＣＲはｍｉＲ－２１ Ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用い、製造者のプロトコールに従って行った。１サンプルあたり、デュプリケートで反応を行った。定量ＲＴ－ＰＣＲシステムはＳｔｅｐ Ｏｎｅ ＰｌｕｓTM（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いた。
【0116】
健常人４０人のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量と、３５人の肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐの発現量は、相対値として算出した。肺がん患者または健常人の個々のｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｃｙｃｌｅ）値から、健常人全員でのｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ値の平均値を差し引いてΔＣＴを算出した。ただし、定量的ＲＴ－ＰＣＲのサイクル数は、健常人男性と健常人女性で異なっていた。そのため、健常人全員でのｍｉＲ－４８６－５ｐのＣＴ値の平均値は、性別ごとに算出し、肺がん患者または健常人の性別に応じた値を差し引いて、ΔＣＴを算出した。最後に、２ΔCT（２のΔＣＴ乗）を算出し、ｍｉＲ－４８６－５ｐの相対発現量として用いた。２ΔCTの値を以下、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量とも称する。
【0117】
健常人４０人のｍｉＲ－２１の相対発現量と、３５人の肺がん患者のｍｉＲ－２１の相対発現量も、ｍｉＲ－４８６－５ｐの相対発現量と同様にして算出した。
【0118】
〔統計解析〕
統計解析は、ＰＲＩＳＭ ７ ｆｏｒ Ｍａｃ ＯＳ Ｘ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｉｎｃ社製）を用いて行った。データは、パラメトリック検定の妥当性を確認するために正規性と等分散性を試験した。正規分布に従うデータは、Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ検定を行った。集団間の差を評価するために、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔ、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ ｔｅｓｔおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ'ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔを用いた。ｐ値０．０５未満を統計学的に有意とした。データは平均値±標準偏差（ＳＤ）または中央値（９５％信頼区間［ＣＩ］）で示す。
統計解析は、ＰＲＩＳＭ ７ ｆｏｒ Ｍａｃ ＯＳ Ｘ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｉｎｃ社製）を用いて行った。データは、パラメトリック検定の妥当性を確認するために正規性と等分散性を試験した。正規分布に従うデータは、Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ検定を行った。集団間の差を評価するために、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔ、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ／Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ ｔｅｓｔおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ'ｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔｅｓｔを用いた。ｐ値０．０５未満を統計学的に有意とした。データは平均値±標準偏差（ＳＤ）または中央値（９５％信頼区間［ＣＩ］）で示す。
【0119】
〔結果〕
〔被験者のプロファイルとｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量、ｍｉＲ－２１相対発現量、およびＭＭＰ－１／ＣＤ６３〕
肺がん患者のプロファイルとＴＮＭ分類、臨床ステージ、病理組織学的診断、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３、ｍｉＲ－２１相対発現量（２ΔCT）、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量（２ΔCT）、家族歴を表１－１、表１－２に示す。
〔被験者のプロファイルとｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量、ｍｉＲ－２１相対発現量、およびＭＭＰ－１／ＣＤ６３〕
肺がん患者のプロファイルとＴＮＭ分類、臨床ステージ、病理組織学的診断、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３、ｍｉＲ－２１相対発現量（２ΔCT）、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量（２ΔCT）、家族歴を表１－１、表１－２に示す。
【0120】
【表1-1】
【0121】
【表1-2】
【0122】
[肺がん患者の臨床的特徴と病理組織学的所見]
対象となった肺がん患者は、そのほとんどが肺がん検診を含む健康診断のために受診し、疑わしい病変は肺ＣＴやＭＲＩを用いて検査されていたため、比較的早期に発見された症例であった（表１－１、表１－２）。
対象となった肺がん患者は、そのほとんどが肺がん検診を含む健康診断のために受診し、疑わしい病変は肺ＣＴやＭＲＩを用いて検査されていたため、比較的早期に発見された症例であった（表１－１、表１－２）。
【0123】
手術で切除された組織の病理所見は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）が３０例、より詳細には、腺がん（ＡＣ）が２４例（男性１５例、女性９例）、扁平上皮がん（ＳＣ）が５例（男性４例、女性１例）、大細胞がん（ＬＣ）が男性１例に認められた。小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）は４名（男性３名、女性１名）、多形性（肉腫）は男性１名に認められた。
【0124】
３５人の肺がん患者のうち、０期は男性１人、Ｉ期は１９人（男性１０人、女性９人）、ＩＩ期は男性５人、ＩＩＩ期は３人（男性２人、女性１人）、ＩＶ期は７人（男性６人、女性１人）であった。
【0125】
肺がん患者の臨床データを表２－１、表２－２に示す。
【0126】
【表2-1】
【0127】
【表2-2】
【0128】
表２－１、表２－２中、タバコの欄の数字は現在の一日あたり喫煙本数を示し、ｆ（ｆｏｒｍｅｒ）が記載されている場合は、過去の一日あたり喫煙本数を示す。現在喫煙している者を能動喫煙者（ｃｕｒｒｅｎｔ）、過去に喫煙していた者を喫煙歴がある者（ｆｏｒｍｅｒ）、生来全く喫煙していない者を非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）として分類した。
【0129】
表２－１、表２－２中の治療法の略号は以下の通りである。
ＶＡＴＳ：ｖｉｄｅｏ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ、ビデオ補助下胸部手術
ＬＵｗ：Ｌｅｆｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、左上葉楔状切除
ＲＵｗ：Ｒｉｇｈｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右上葉楔状切除
ＲＭｗ：Ｒｉｇｈｔ ｍｉｄｄｌｅ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右中葉楔状切除
ＲＬｗ：Ｒｉｇｈｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右下葉楔状切除
ＲＵＬ：Ｒｉｇｈｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、右上葉切除
ＬＵＬ：Ｌｅｆｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、左上葉切除
ＲＬＬ：Ｒｉｇｈｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、右下葉切除
ＬＬＬ：Ｌｅｆｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、左下葉切除
Ｒ６ｓｅｇ：Ｒｉｇｈｔ Ｓ６ ｓｅｇｍｅｎｔｅｃｔｏｍｙ、右Ｓ６区域切除
ＬＰｎ：Ｌｅｆｔ ｐｎｅｕｍｏｎｅｃｔｏｍｙ、左肺切除
Ｃｘ：Ｃｈｅｓｔ ｗａｌｌ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、胸壁切除
ＢＳＣ：Ｂｅｓｔ ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ ｃａｒｅ、ベストサポーティブケア
ＬＬｗ：Ｌｅｆｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、左下葉楔状切除
ＥＧＦＲ－ＴＫＩ：ＥＧＦＲ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬
ＣＢＤＣＡ：ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、カルボプラチン
ＣＰＴ１１：ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｈｙｄｒａｔｅ、イリノテカン
ＶＰ１６：ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、エトポシド
ＰＥＭ：ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒａｔｅ、ペメトレキセド
Ｐｅｍｂｒｏ：ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、ペムブロリズマブ
ＶＡＴＳ：ｖｉｄｅｏ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｓｕｒｇｅｒｙ、ビデオ補助下胸部手術
ＬＵｗ：Ｌｅｆｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、左上葉楔状切除
ＲＵｗ：Ｒｉｇｈｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右上葉楔状切除
ＲＭｗ：Ｒｉｇｈｔ ｍｉｄｄｌｅ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右中葉楔状切除
ＲＬｗ：Ｒｉｇｈｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、右下葉楔状切除
ＲＵＬ：Ｒｉｇｈｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、右上葉切除
ＬＵＬ：Ｌｅｆｔ ｕｐｐｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、左上葉切除
ＲＬＬ：Ｒｉｇｈｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、右下葉切除
ＬＬＬ：Ｌｅｆｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅｃｔｏｍｙ、左下葉切除
Ｒ６ｓｅｇ：Ｒｉｇｈｔ Ｓ６ ｓｅｇｍｅｎｔｅｃｔｏｍｙ、右Ｓ６区域切除
ＬＰｎ：Ｌｅｆｔ ｐｎｅｕｍｏｎｅｃｔｏｍｙ、左肺切除
Ｃｘ：Ｃｈｅｓｔ ｗａｌｌ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、胸壁切除
ＢＳＣ：Ｂｅｓｔ ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ ｃａｒｅ、ベストサポーティブケア
ＬＬｗ：Ｌｅｆｔ ｌｏｗｅｒ ｌｏｂｅ ｗｅｄｇｅ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ、左下葉楔状切除
ＥＧＦＲ－ＴＫＩ：ＥＧＦＲ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬
ＣＢＤＣＡ：ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、カルボプラチン
ＣＰＴ１１：ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｈｙｄｒａｔｅ、イリノテカン
ＶＰ１６：ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、エトポシド
ＰＥＭ：ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒａｔｅ、ペメトレキセド
Ｐｅｍｂｒｏ：ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、ペムブロリズマブ
【0130】
健常人のプロファイルと、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３、ｍｉＲ－２１相対発現量（２ΔCT）、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量（２ΔCT）を表３－１、表３－２に示す。
【0131】
【表3-1】
【0132】
【表3-2】
【0133】
肺がん患者と健常人における、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３、ｍｉＲ－２１相対発現量（２ΔCT）、及びｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量（２ΔCT）の性別及び年齢グループ（６０歳以下及び６０歳超）ごとの値を表４に示す。数値は中央値［９５％信頼区間（ＣＤ）］で示した。
【0134】
【表4】
【0135】
肺がん患者における、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量（２ΔCT）を、喫煙歴と肺がんのタイプに基づいて比較した結果を表５に示す。数値は中央値［９５％信頼区間（ＣＤ）］で示した。
【0136】
【表5】
【0137】
【0138】
【0139】
【0140】
【0141】
【0142】
【0143】
【0144】
【0145】
【0146】
[ＭＭＰ－１／ＣＤ６３について]
表４Ａより、健常人の男性と女性におけるＭＭＰ－１／ＣＤ６３は同じ分布傾向を示した。また、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、６０歳以下及び６０歳超の年齢グループ及び合計、男性、女性の全てのグループにおいて、健常人よりも肺がん患者の方が高かった。特に、男性、女性どちらにおいても、６０歳以下のグループで、肺がん患者のＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、健常人よりも顕著に高かった。
表４Ａより、健常人の男性と女性におけるＭＭＰ－１／ＣＤ６３は同じ分布傾向を示した。また、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、６０歳以下及び６０歳超の年齢グループ及び合計、男性、女性の全てのグループにおいて、健常人よりも肺がん患者の方が高かった。特に、男性、女性どちらにおいても、６０歳以下のグループで、肺がん患者のＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、健常人よりも顕著に高かった。
【0147】
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、Ａｌｌ（被験者全員）で比較した場合、健常人よりも肺がん患者の方が高かった（図３Ａ）。肺がん患者のＭＭＰ－１／ＣＤ６３の中央値は１．３４２（９５％ＣＩ：０．８９０－１．９７４）であり、健常人の０．６００（９５％ＣＩ：０．４９０－０．９００）よりも有意に高かった（ｐ＜０．０００１）。また、男性（Ｍａｌｅ）及び女性（Ｆｅｍａｌｅ）においても、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、健常人よりも肺がん患者の方が高く（図３Ｂ、図３Ｃ）、性別に関係なく、同じ傾向を示した。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0148】
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、Ａｌｌ（被験者全員）で比較した場合、ステージＩ及びステージＩＩの肺がん患者において、健常人よりも有意に高かった（図３Ｄ）。ステージ０およびＩの肺がん患者におけるＭＭＰ－１／ＣＤ６３は１．３４２（９５％ＣＩ：０．８８８－２．３１９）であり、健常人よりも有意に高かった（ｐ＝０．００２９）。また、ステージＩＩの肺がん患者におけるＭＭＰ－１／ＣＤ６３は１．７９５（９５％ＣＩ：１．１０５－４．４１４）であり、健常人よりも高かった（ｐ＝０．００７７）。
また、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、男性（Ｍａｌｅ）においては、ステージＩＩの肺がん患者において、健常人よりも有意に高かった（図３Ｅ）。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、女性（Ｆｅｍａｌｅ）においては、ステージＩの肺がん患者において、健常人よりも有意に高かった（図３Ｆ）。
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、特にステージ０、Ｉ、又はＩＩの肺がんで高いことが明らかになった。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、特に初期の肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
また、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、男性（Ｍａｌｅ）においては、ステージＩＩの肺がん患者において、健常人よりも有意に高かった（図３Ｅ）。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、女性（Ｆｅｍａｌｅ）においては、ステージＩの肺がん患者において、健常人よりも有意に高かった（図３Ｆ）。
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、特にステージ０、Ｉ、又はＩＩの肺がんで高いことが明らかになった。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、特に初期の肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0149】
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、Ａｌｌ（肺がん患者全員）で比較した場合、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）において、能動喫煙者（ｃｕｒｒｅｎｔ）よりも有意に高く、喫煙歴がある者（ｆｏｒｍｅｒ）よりも有意に高かった（図３Ｇ）。男性（Ｍａｌｅ）、女性（Ｆｅｍａｌｅ）に分類した場合、肺がん患者における、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３の喫煙歴による差は有意ではなかった（図３Ｈ、図３Ｉ）。
【0150】
表５Ａより、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）である腺がん（ＡＣ）患者のＭＭＰ－１／ＣＤ６３（２．３２、ＣＩ：１．８５－４．０２）は、能動喫煙者（ｃｕｒｒｅｎｔ）（０．９０、ＣＩ：０．７６－０．９９）および喫煙歴がある者（ｆｏｒｍｅｒ）（０．８５、ＣＩ：０．５４－１．１６）よりも高かった。
３５名の肺がん患者のうち、１１名が非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）であった（男性４名、女性７名）。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）１１名のうち９名（男性３名、女性６名）で１．２５を超えていた。興味深いことに、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）１１名は全員が腺がん（ＡＣ）であり、そのうち、６４％（７／１１）が女性であった（表１）。また、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）のＡＣグループでは、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３はＳＣグループに比べてやや高い比率であった（表５Ａ）。さらに、小細胞肺がん(ＳＣＬＣ）ではＭＭＰ－１／ＣＤ６３が増加していた（表５Ａ）。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、特に非喫煙者における腺がん（ＡＣ）において高い傾向にあり、この傾向は女性において顕著であることが明らかになった。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、特に非喫煙者（特に女性）における肺がん（特に腺がん）のスクリーニングに有用であることが示唆された。
３５名の肺がん患者のうち、１１名が非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）であった（男性４名、女性７名）。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）１１名のうち９名（男性３名、女性６名）で１．２５を超えていた。興味深いことに、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）１１名は全員が腺がん（ＡＣ）であり、そのうち、６４％（７／１１）が女性であった（表１）。また、非喫煙者（ｎｅｖｅｒ）のＡＣグループでは、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３はＳＣグループに比べてやや高い比率であった（表５Ａ）。さらに、小細胞肺がん(ＳＣＬＣ）ではＭＭＰ－１／ＣＤ６３が増加していた（表５Ａ）。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、特に非喫煙者における腺がん（ＡＣ）において高い傾向にあり、この傾向は女性において顕著であることが明らかになった。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３は、バイオマーカーとして、特に非喫煙者（特に女性）における肺がん（特に腺がん）のスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0151】
[ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量について]
表４Ｃより、６０歳以下の年齢グループの健常人では、男性のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は女性よりも低く（ｐ＜０．０１）、６０歳超の年齢グループの健常人では、男性のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は女性よりも高かった（ｐ＜０．０５）。
表４Ｃより、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、６０歳以下及び６０歳超の年齢グループにおいて、合計及び男性において、健常人よりも肺がん患者の方が高かったが、女性においては、健常人よりも肺がん患者の方が低かった。また、健常人におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量には性差があることがあることが明らかになった。
表４Ｃより、６０歳以下の年齢グループの健常人では、男性のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は女性よりも低く（ｐ＜０．０１）、６０歳超の年齢グループの健常人では、男性のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は女性よりも高かった（ｐ＜０．０５）。
表４Ｃより、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、６０歳以下及び６０歳超の年齢グループにおいて、合計及び男性において、健常人よりも肺がん患者の方が高かったが、女性においては、健常人よりも肺がん患者の方が低かった。また、健常人におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量には性差があることがあることが明らかになった。
【0152】
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、Ａｌｌ（被験者全員）で比較した場合、健常人よりも肺がん患者の方が高かった（図４Ａ）。男性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の中央値は２．５６５（９５％ＣＩ：１．８００－４．４２０）であり、男性健常人の中央値（１．２５４、９５％ＣＩ：０．７９０－１．５３０）よりも有意に高かった（ｐ＝０．０００４、図４Ｂ）。女性肺がん患者のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の中央値は、０．４６０（９５％ＣＩ：０．０６０－２．１３０）であり、女性健常人の中央値（１．２５０、９５％ＣＩ：０．４７０－２．５１０、ｐ＝０．１５６６）よりも低い傾向にあった（図４Ｃ）。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の健常人と肺がん患者との違いには性差があることがあることが明らかになった。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、性別に応じた肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の健常人と肺がん患者との違いには性差があることがあることが明らかになった。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、性別に応じた肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0153】
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、ステージＩ及びステージＩＶの男性（Ｍａｌｅ）肺がん患者においては、健常人よりも有意に高かった（図４Ｅ）。ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、ステージＩの女性（Ｆｅｍａｌｅ）肺がん患者においては、健常人より低い傾向にあった（図４Ｆ）。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、肺がん患者の中でもステージＩの肺がんにおいて健常人との違いが見られる可能性が示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、特に初期の肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、肺がん患者の中でもステージＩの肺がんにおいて健常人との違いが見られる可能性が示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、特に初期の肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0154】
肺がん患者におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、肺がん患者全員で解析すると、男性（Ｍａｌｅ）においても、女性（Ｆｅｍａｌｅ）においても、喫煙歴によって有意な差は見られなかった（図４Ｈ、図４Ｉ）。
しかし、データをより詳細に見ると、非喫煙者の女性肺がん患者７例では、２例を除いて、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量が女性健常人の中央値（１．２５０、９５％ＣＩ：０．４７０－２．５１０、ｐ＝０．１５６６）よりも低かった（表１－１、表１－２）。一方、非喫煙者である男性肺がん患者４例では、２例のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量が男性健常人の平均値（１．２５４、９５％ＣＩ：０．７９０－１．５３０）よりも大きく、２例のみが男性健常人の中央値よりも小さかった。（表１－１、表１－２）。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、肺がん患者の中でも特に非喫煙者において健常人との違いが見られ、この傾向は女性において顕著である可能性が示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、特に非喫煙者（特に女性）における肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
しかし、データをより詳細に見ると、非喫煙者の女性肺がん患者７例では、２例を除いて、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量が女性健常人の中央値（１．２５０、９５％ＣＩ：０．４７０－２．５１０、ｐ＝０．１５６６）よりも低かった（表１－１、表１－２）。一方、非喫煙者である男性肺がん患者４例では、２例のｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量が男性健常人の平均値（１．２５４、９５％ＣＩ：０．７９０－１．５３０）よりも大きく、２例のみが男性健常人の中央値よりも小さかった。（表１－１、表１－２）。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、肺がん患者の中でも特に非喫煙者において健常人との違いが見られ、この傾向は女性において顕著である可能性が示唆された。
これらの結果から、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、バイオマーカーとして、特に非喫煙者（特に女性）における肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0155】
[ｍｉＲ－２１相対発現量について]
表４Ｂより、健常人におけるｍｉＲＮＡ－２１の相対発現量は、男女ともに、６０歳超の健常者は、６０歳以下の健常人に比べてやや高い値を示したが、統計的な差はなかった。６０歳以下と６０歳超を含む健常人男性では、健常人女性よりもやや高い値を示したが、統計的な差はなかった（表２Ｂ）。
表４Ｂより、健常人におけるｍｉＲＮＡ－２１の相対発現量は、男女ともに、６０歳超の健常者は、６０歳以下の健常人に比べてやや高い値を示したが、統計的な差はなかった。６０歳以下と６０歳超を含む健常人男性では、健常人女性よりもやや高い値を示したが、統計的な差はなかった（表２Ｂ）。
【0156】
図５Ａより、ｍｉＲ－２１相対発現量は、肺がん患者と健常人の間に僅かに差が見られたが、その差は有意ではなかった（ｐ＝０．４３７８）。男性と女性に分けて解析した場合も同様であった（図５Ｂ、図５Ｃ）。これは、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量については、肺がん患者と健常人の間のｐ値が、男性でｐ＝０．０００４、女性でｐ＝０．１５６６と低値であったこととは対照的であった。
【0157】
【0158】
これらの結果から、ｍｉＲ－２１相対発現量では、肺がんへの罹患の可能性を判定することができないことが明らかになった。ｍｉＲ－２１は、循環血漿エクソソームを用いた肺がんの診断/スクリーニングに有用であることが数多くの文献で報告されており、また、乳がん患者の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ２１は健常人に比べて有意に低いことが報告されているが、予想に反して、肺がん患者の尿中エクソソームに含まれるｍｉＲ２１は健常人との間に有意な差はないことが明らかになった。
【0159】
〔ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量、およびＭＭＰ－１／ＣＤ６３を用いた肺がん判定の妥当性〕
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量、およびＭＭＰ－１／ＣＤ６３を用いた肺がん検査の妥当性をＲＯＣ曲線（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｏｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ、受信者動作特性曲線）を用いて検討した。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３のＲＯＣ曲線を図６Ａ、男性におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量のＲＯＣ曲線を図６Ｂ、女性におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量のＲＯＣ曲線を図６Ｃに示す。
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量、およびＭＭＰ－１／ＣＤ６３を用いた肺がん検査の妥当性をＲＯＣ曲線（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｏｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ、受信者動作特性曲線）を用いて検討した。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３のＲＯＣ曲線を図６Ａ、男性におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量のＲＯＣ曲線を図６Ｂ、女性におけるｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量のＲＯＣ曲線を図６Ｃに示す。
【0160】
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３を用いた肺がん検査のＡＵＲＯＣ（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ＲＯＣ）は、０．７５５（９５％ＣＩ：０．６４０－０．８７１）であった（図６Ａ）。また、最適カットオフ値１．２５としたときの、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３を用いた肺がん検査の感度は０．９２５、特異度は０．５４３であった。
【0161】
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を用いた、男性における肺がん検査のＡＵＲＯＣは０．８０１（９５％ＣＩ： ０．６６９－０．９３９）であった（図６Ｂ）。また、最適カットオフ値２．１４としたときの、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を用いた男性における肺がん検査の感度と特異度はそれぞれ０．８５０と０．７０８であった。
【0162】
ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を用いた、女性における肺がん検査のＡＵＲＯＣは０．６２７（９５％ＣＩ： ０．３９６－０．８５８）であった（図６Ｃ）。また、最適カットオフ値０．９１としたときの、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を用いた女性における肺がん検査の感度と特異度はそれぞれ０．７００と０．７２７であった。
【0163】
ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を組み合わせて用いる肺がん検査では、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３の最適カットオフ値１．２５、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の最適カットオフ値を男性２．１４、女性０．９１として算出すると、感度０．８６、特異度０．８５となった。ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を組み合わせて用いる肺がん検査では、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３又はｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を単独で用いるよりも、感度と特異度は向上した。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の組み合わせは、バイオマーカーとして、性別に応じた肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
これらの結果から、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量の組み合わせは、バイオマーカーとして、性別に応じた肺がんのスクリーニングに有用であることが示唆された。
【0164】
［ロジスティック回帰分析］
肺がんの有無を従属変数とし、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３及びｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を独立変数として、年齢、性別、喫煙習慣を共変量として調整したロジスティック回帰分析を行った。ロジスティック回帰モデルの予測にはＲＯＣ解析を適用し、カットオフ値はＹｏｕｄｅｎ ｉｎｄｅｘで算出した。ロジスティック回帰分析とそのＲＯＣ解析は、ＩＢＭ ＳＰＳＳ ｖｅｒ ２６．０によって行った。
肺がんの有無を従属変数とし、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３及びｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を独立変数として、年齢、性別、喫煙習慣を共変量として調整したロジスティック回帰分析を行った。ロジスティック回帰モデルの予測にはＲＯＣ解析を適用し、カットオフ値はＹｏｕｄｅｎ ｉｎｄｅｘで算出した。ロジスティック回帰分析とそのＲＯＣ解析は、ＩＢＭ ＳＰＳＳ ｖｅｒ ２６．０によって行った。
【0165】
分析の結果、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３と肺がんの有無の関連は、オッズ比が３１．７０（９５％ＣＩ：４．１２－２４３．６７）、ｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量と肺がん有無の関連はオッズ比が１．５６（９５％ＣＩ：１．０１－２．４２）であり、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３及びｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量は、どちらも肺がんの有無と有意な関連があった。また、このモデルを元に、ＭＭＰ－１／ＣＤ６３とｍｉＲ－４８６－５ｐ相対発現量を組み合わせて用いる肺がん検査のＲＯＣ曲線とＡＵＲＯＣを求めたところ、カットオフ値０．４８で、ＡＵＲＯＣは０．９５４（９５％ＣＩ：０．９０８－１．０００）、感度は８９％、特異性は８８％であり、予測精度が高いことが明らかになった。
【0166】
配列番号１：ｍｉＲ－４８６－５ｐの核酸配列
【要約】
【課題】簡便で、感度が高く、非侵襲的な肺がんの検査方法、および肺がん評価用の尿検査キットを提供することを課題とする。
【解決手段】対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法。
【選択図】なし
【解決手段】対象の尿中エクソソームに含まれるマイクロＲＮＡ－４８６－５ｐ（ｍｉＲ－４８６－５ｐ）の発現量を測定する工程（Ａ１）を含む、肺がんの検査方法。
【選択図】なし
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】