特許 7326557 ＳＮＡＲＥを活用した核酸構築物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-08-04

(45)【発行日】2023-08-15

(54)【発明の名称】ＳＮＡＲＥを活用した核酸構築物

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230807BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20230807BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230807BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230807BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230807BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20230807BHJP

   A61K 39/02 20060101ALI20230807BHJP

   A61K 39/35 20060101ALI20230807BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230807BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20230807BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230807BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230807BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20230807BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20230807BHJP

   C07K 14/77 20060101ALN20230807BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230807BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/85 Z

A61K48/00

A61K31/7088

A61K35/76

A61K39/00 H

A61K39/02

A61K39/35

A61P37/04

A61P37/08

A61P37/02

A61P43/00 111

A61P43/00 121

C07K19/00

C07K14/47

C07K14/77

C12N15/12 ZNA

【請求項の数】 14

(21)【出願番号】P 2022125894

(22)【出願日】2022-08-05

(65)【公開番号】P2023024409

(43)【公開日】2023-02-16

【審査請求日】2023-03-10

(31)【優先権主張番号】P 2021130022

(32)【優先日】2021-08-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】000000918

【氏名又は名称】花王株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】佐山 慧門

(72)【発明者】

【氏名】菅沼 貴也

(72)【発明者】

【氏名】堀 智史

(72)【発明者】

【氏名】久保 竣

(72)【発明者】

【氏名】山本 征輝

(72)【発明者】

【氏名】深川 聡子

(72)【発明者】

【氏名】石川 准子

【審査官】松原 寛子

(56)【参考文献】

【文献】特表２００８－５０００１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】The journal of biological chemistry，2008年，vol.283，p.20897-20906

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／１２

Ｃ１２Ｎ １５／６２

Ｃ１２Ｎ １５／８５

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ａ６１Ｋ ３１／７０８８

Ａ６１Ｋ ３５／７６

Ａ６１Ｋ ３９／００

Ａ６１Ｋ ３９／０２

Ａ６１Ｋ ３９／３５

Ａ６１Ｐ ３７／０４

Ａ６１Ｐ ３７／０８

Ａ６１Ｐ ３７／０２

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ｃ０７Ｋ １４／４７

Ｃ０７Ｋ １４／７７

Ｃ０７Ｋ １９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、及びＳＥＣ２２Ｂからなる群より選択されるいずれかのＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物。

【請求項2】

前記ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドの下流に前記抗原をコードするポリヌクレオチドが前記プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、請求項１記載の核酸構築物。

【請求項3】

前記ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドの下流に前記抗原をコードするポリヌクレオチドが前記プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド及びリンカーをコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、請求項１記載の核酸構築物。

【請求項4】

プラスミドベクター、ｍＲＮＡ、又はウイルスベクターである、請求項１記載の核酸構築物。

【請求項5】

前記抗原ががん抗原、自己抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、及びアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１記載の核酸構築物。

【請求項6】

請求項１～５のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強剤。

【請求項7】

請求項１～５のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強剤。

【請求項8】

請求項１～５のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする核酸ワクチン。

【請求項9】

抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答を誘導又は増強するものである、請求項８記載の核酸ワクチン。

【請求項10】

抗原特異的細胞性免疫応答を誘導又は増強するものである、請求項８記載の核酸ワクチン。

【請求項11】

がんワクチンであり、前記抗原ががん抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の核酸ワクチン。

【請求項12】

アレルギー予防又は治療用ワクチンであり、前記抗原がアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の核酸ワクチン。

【請求項13】

自己免疫疾患治療用ワクチンであり、前記抗原が自己抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項８記載の核酸ワクチン。

【請求項14】

非経口により投与される、請求項８記載の核酸ワクチン。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含む核酸構築物に関する。

【背景技術】

【0002】

ワクチンは、抗原を投与し、抗原に対する獲得免疫を確立することにより、感染予防や疾患の治療を図る手段である。従来、弱毒化した細菌やウイルスをそのままワクチンとして用いる生ワクチン、細菌やウイルスをホルマリンや加熱などで処理し、感染力を失わせた不活化ワクチン、細菌の産生する毒素を分離精製し、ホルマリンなどで処理して不活化したトキソイドといったワクチンが主に皮下注射、筋肉内注射により投与されている。これら以外にも、効果、安全性、利便性の向上を目指して、投与部位を粘膜とする粘膜ワクチン、抗原成分を核酸とする核酸ワクチンなどの開発が進められている。なかでも、低コストで迅速に製造できる新モダリティとして、核酸ワクチンの開発が急速に進展している。

【0003】

核酸ワクチンの効果向上にあたっては、抗原の免疫原性の向上が重要な課題の１つであり、抗原を適切な組織や抗原提示細胞に誘導し、免疫応答を効率よく惹起することが求められている。特許文献１には、アレルゲンタンパク質（抗原）をリソソーム膜タンパク質（ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ；ＬＡＭＰ）の細胞小器官内安定化ドメインと膜貫通ドメインの間に挿入した融合タンパク質をコードする核酸を用いることで、抗原に対する免疫応答が増強されたことが開示されている。一方で、ＬＡＭＰ内腔に抗原を付加すると、抗原特異的な抗体産生が著しく減弱してしまう場合があることが報告されている（非特許文献１）。また、特許文献２には、抗原、膜貫通領域及び主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子鎖の細胞質領域を含む融合分子をコードする核酸を用いることにより、抗原の免疫原性が増加したことが開示されている。特許文献２は、抗原とＳＮＡＲＥ（ｓｏｌｕｂｌｅ Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）タンパク質の細胞質領域を含む融合分子にも言及しているが、該融合分子により、抗原の免疫原性がどのように変化するのかについては全く示されていない。

【0004】

ＳＮＡＲＥタンパク質は、２０～３０ｋＤａのＳＮＡＲＥモチーフを有するタンパク質ファミリーである。多くのＳＮＡＲＥタンパク質は、Ｃ末端の膜貫通ドメインを介して脂質二重膜上に係留されており、小胞が標的の細胞内小器官に融合する過程に関与する（非特許文献２及び３）。ＳＮＡＲＥタンパク質が関与する膜融合は、真核細胞において小胞輸送やオルガネラの膜形態形成、細胞外受容体のリサイクリングなども含めたエンドサイトーシス過程、ホルモン分泌やシナプス神経伝達物質の放出を含めたエキソサイトーシス過程など、細胞機能に不可欠な多くの重要な生命現象に必須である。また、ＳＮＡＲＥタンパク質による膜融合の分子機構は、単細胞である出芽酵母からヒトを含めた高等動物に至るまで、すべての真核生物で保存されていると考えられている。ＳＮＡＲＥタンパク質は、ＳＮＡＲＥモチーフのアミノ酸残基の特徴から、更にＱＡ－ＳＮＡＲＥ、ＱＢ－ＳＮＡＲＥ、ＱＣ－ＳＮＡＲＥ、そしてＲ－ＳＮＡＲＥの４つのサブファミリーに分類される。各ＳＮＡＲＥタンパク質は、それぞれ特異的な細胞内膜画分（小胞体（ＥＲ）、ゴルジ体、エンドソーム、液胞・リソソームなどのオルガネラ、分泌小胞、細胞質膜など）に局在し、特定の細胞内輸送経路における膜融合の過程で機能すると考えられている。また、ＳＮＡＲＥタンパク質は、エクソソームに含まれる可能性があることも知られている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【文献】特開２０１７－７９７４２号公報

【文献】特表２００８－５０００１４号公報

【非特許文献】

【0006】

【文献】Chen AC, et al. J Immunother Cancer. 2020; 8(1): e000258.

【文献】Jahn R, Scheller RH. Nat Rev Mol Cell Biol. 2006; 7(9): 631-643.

【文献】Hong W. Biochim Biophys Acta. 2005; 1744(2): 120-144.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、抗原特異的な免疫応答を増強する核酸構築物を提供することに関する。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている核酸構築物を用いることで、抗原をコードするポリヌクレオチドのみを含む核酸構築物及びＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含むが、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドがプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介さずに連結されている核酸構築物と比較して、抗原特異的なＴｈ１型免疫応答を誘導又は増強でき、また、抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導又は増強できることを見出した。

【0009】

よって、本発明は、以下の１）～４）を提供する。
１）ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物。
２）１）の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強剤。
３）１）の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強剤。
４）１）の核酸構築物を有効成分とする核酸ワクチン。

【発明の効果】

【0010】

本発明の核酸構築物によれば、抗原特異的なＴｈ１型免疫応答を誘導又は増強でき、また、抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導又は増強することができる。斯かる核酸構築物は、核酸ワクチンとして有用である。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの免疫原性の評価。ＩＦＮγの産生量を産生細胞数（ｓｐｏｔ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ；ＳＦＣ）で示す。Ｅｍｐｔｙはトランスフェクション試薬のみのコントロールを、Ｅｍｐｔｙ（Ｎ．Ｔ．）は抗原による再刺激を行わなかったコントロールを、ＳＮＡＲＥタンパク質－ＯＶＡはＳＮＡＲＥタンパク質－抗原（ＯＶＡ）融合ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを示す。

【図2】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際のＩｇＧサブクラスの抗体価。（Ａ）はＩｇＧ抗体価を、（Ｂ）はＩｇＧ１抗体価を、（Ｃ）はＩｇＧ２ａ抗体価を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図3】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の免疫応答の評価。（Ａ）はＩＦＮγの産生量を、（Ｂ）はＩＬ－４の産生量をＳＦＣで示す。（Ｃ）はＩＬ－４産生量に対するＩＦＮγ産生量の比（ＩＦＮγ／ＩＬ－４）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図4】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際のＩｇＧサブクラスの抗体価。（Ａ）はＩｇＧ抗体価を、（Ｂ）はＩｇＧ１抗体価を、（Ｃ）はＩｇＧ２ａ抗体価を、（Ｄ）はＩｇＧ１抗体価に対するＩｇＧ２ａ抗体価の比（ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡはそれぞれＶＡＭＰ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図5】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の免疫応答の評価。（Ａ）はＩＦＮγの産生量を、（Ｂ）はＩＬ－４の産生量をＳＦＣで示す。（Ｃ）は無刺激条件下に対する抗原刺激条件下のＩＬ－４産生量の比（ＩＬ－４ ｒａｔｉｏ）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡはそれぞれＶＡＭＰ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図6】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチド又はＬＡＭＰ内部に抗原を含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の経時的な抗体価。（Ａ）はＩｇＧ抗体価を、（Ｂ）はＩｇＧ１抗体価を、（Ｃ）はＩｇＧ２ａ抗体価を、（Ｄ）は５週目のＩｇＧ１抗体価に対するＩｇＧ２ａ抗体価の比（ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡはプロタンパク質転換酵素認識配列を含むＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］はＬＡＭＰ内部にＯＶＡを含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図7】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の免疫応答の評価。（Ａ）はＩＦＮγの産生量を、（Ｂ）はＩＬ－４の産生量をＳＦＣで示す。（Ｃ）は無刺激条件下に対する抗原刺激条件下のＩＬ－４産生量の比（ＩＬ－４ ｒａｔｉｏ）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡはプロタンパク質転換酵素認識配列を含むＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図8】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際のＩｇＧサブクラスの抗体価。（Ａ）～（Ｄ）は抗原としてＷＴ１を、（Ｅ）～（Ｈ）は抗原としてＭＯＧ^{３５－５５}を用いた場合の結果を示す。（Ａ）及び（Ｅ）はＩｇＧ抗体価を、（Ｂ）及び（Ｆ）はＩｇＧ１抗体価を、（Ｃ）及び（Ｇ）はＩｇＧ２ａ抗体価を、（Ｄ）及び（Ｈ）はＩｇＧ１抗体価に対するＩｇＧ２ａ抗体価の比（ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＷＴ１又はＭＯＧ^{３５－５５}）をコードしない空プラスミドベクターを、ＷＴ１、ＭＯＧ^{３５－５５}はそれぞれＷＴ１、ＭＯＧ^{３５－５５}をコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}はそれぞれＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＷＴ１、ＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＭＯＧ^{３５－５５}融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図9】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の免疫応答の評価。（Ａ）～（Ｄ）は抗原としてＷＴ１を、（Ｅ）～（Ｈ）は抗原としてＭＯＧ^{３５－５５}を用いた場合の結果を示す。（Ａ）及び（Ｅ）はＩＦＮγの産生量を、（Ｂ）及び（Ｆ）はＩＬ－４の産生量をＳＦＣで示す。（Ｃ）及び（Ｇ）は無刺激条件下に対する抗原刺激条件下のＩＬ－４産生量の比（ＩＬ－４ ｒａｔｉｏ）を、（Ｄ）及び（Ｈ）はＩＬ－４産生量に対するＩＦＮγ産生量の比（ＩＦＮγ／ＩＬ－４）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＷＴ１又はＭＯＧ^{３５－５５}）をコードしない空プラスミドベクターを、ＷＴ１、ＭＯＧ^{３５－５５}はそれぞれＷＴ１、ＭＯ^{３５－５５}をコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}はそれぞれＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＷＴ１、ＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＭＯＧ^{３５－５５}融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図10】ＳＮＡＲＥタンパク質－抗原融合ポリペプチド又はＬＡＭＰ内部に抗原を含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際の免疫応答の評価。（Ａ）はＩＦＮγの産生量を、（Ｂ）はＩＬ－４の産生量をＳＦＣで示す。（Ｃ）は無刺激条件下に対する抗原刺激条件下のＩＬ－４産生量の比（ＩＬ－４ ｒａｔｉｏ）を、（Ｄ）はＩＬ－４産生量に対するＩＦＮγ産生量の比（ＩＦＮγ／ＩＬ－４）を示す。Ｅｍｐｔｙは抗原（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡはプロタンパク質転換酵素認識配列を含むＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］はＬＡＭＰ内部にＯＶＡを含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【図11】ＳＮＡＲＥタンパク質－アレルゲン融合ポリペプチド又はＬＡＭＰ内部にアレルゲンを含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをアレルギーモデルマウスに投与した際のアレルギー反応の評価。（Ａ）は経時的な直腸温度の変化を、（Ｂ）はアレルゲン特異的ＩｇＥの産生量を示す。Ｅｍｐｔｙはアレルゲン（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］はＬＡＭＰ内部にＯＶＡを含む融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。（－）は感作なしを、（＋）は感作ありを示す。

【図12】ＳＮＡＲＥタンパク質－アレルゲン融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターをマウスに投与した際のＯＶＡ血中濃度の評価。Ｅｍｐｔｙはアレルゲン（ＯＶＡ）をコードしない空プラスミドベクターを、ＯＶＡはＯＶＡをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡはＶＡＭＰ７－プロタンパク質転換酵素認識配列－ＯＶＡ融合ポリペプチドをコードするプラスミドベクターを示す。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本明細書において、「核酸」、「ヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド」と云う用語は、互換的に使用され、ＤＮＡ又はＲＮＡを意味する。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡのいずれもが含まれ、ＲＮＡには、ｔｏｔａｌ ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ及び合成のＲＮＡのいずれもが含まれる。中でもｍＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｖｏにおける翻訳反応の開始、ｍＲＮＡの安定化、分解の抑制等の理由から、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応によって合成された後、Ｃａｐ化酵素による５’Ｃａｐ（メチル化グアノシン）の付加、並びにＰｏｌｙ（Ａ）Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅによるｐｏｌｙ Ａの付加が行われる。ｐｏｌｙ Ａ配列はｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応に用いるテンプレートＤＮＡに組み込まれていても良い。この時、Ｃａｐ構造やｐｏｌｙＡが付加されたｍＲＮＡ及び一部の塩基が修飾（例えばウリジンがシュードウリジンや１メチルシュードウリジンに置換）されているＲＮＡも含まれる。

【0013】

本明細書において、「遺伝子」とは、ゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡの他、ｃＤＮＡを含む１本鎖ＤＮＡ（正鎖）、当該正鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（相補鎖）、及びこれらの断片を包含するものであって、ＤＮＡを構成する塩基の配列情報の中に、何らかの生物学的情報が含まれているものを意味する。
また、当該「遺伝子」は特定のヌクレオチド配列で表される「遺伝子」だけではなく、これらの同族体（すなわち、ホモログもしくはオーソログ）、遺伝子多型等の変異体、及び誘導体をコードする核酸が包含される。
本明細書中に開示される遺伝子の名称及びＧｅｎｅ ＩＤは、ＮＣＢＩ（［ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／］）に記載のあるＯｆｆｉｃｉａｌ Ｓｙｍｂｏｌ及びＧｅｎｅ ＩＤに従う。

【0014】

本明細書において、「ペプチド」、「ポリペプチド」又は「タンパク質」と云う用語は、互換的に使用される。

【0015】

本明細書において、「アミノ酸残基」とは、タンパク質を構成する２０種のアミノ酸残基、アラニン（Ａｌａ又はＡ）、アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）、アスパラギン（Ａｓｎ又はＮ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）、システイン（Ｃｙｓ又はＣ）、グルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ又はＥ）、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ又はＨ）、イソロイシン（Ｉｌｅ又はＩ）、ロイシン（Ｌｅｕ又はＬ）、リシン（Ｌｙｓ又はＫ）、メチオニン（Ｍｅｔ又はＭ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ又はＦ）、プロリン（Ｐｒｏ又はＰ）、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）、スレオニン（Ｔｈｒ又はＴ）、トリプトファン（Ｔｒｐ又はＷ）、チロシン（Ｔｙｒ又はＹ）及びバリン（Ｖａｌ又はＶ）を意味する。

【0016】

本明細書において、ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の同一性は、Ｌｉｐｍａｎ－Ｐｅａｒｓｏｎ法（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５－１４４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ－Ｗｉｎのホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ ｓｉｚｅ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。

【0017】

本明細書において、ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。

【0018】

本明細書において、別途定義されない限り、ヌクレオチド配列におけるヌクレオチドの欠失、置換、付加又は挿入に関して使用される「１又は数個」とは、好ましくは１～１５個、より好ましくは１～９個、さらに好ましくは１～６個を意味し得る。また、本明細書において、別途定義されない限り、アミノ酸配列におけるアミノ酸残基の欠失、置換、付加又は挿入に関して使用される「１又は数個」とは、好ましくは１～５個、より好ましくは１～３個、さらに好ましくは１～２個を意味し得る。本明細書において、ヌクレオチド又はアミノ酸残基の「付加」には、配列の一末端及び両末端へのヌクレオチド又はアミノ酸残基の付加が含まれる。

【0019】

本明細書において、「ストリンジェントな条件」としては、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ ＴＨＩＲＤ ＥＤＩＴＩＯＮ（Ｊｏｓｅｐｈ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｄａｖｉｄ Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）記載のサザンハイブリダイゼーション法の条件、例えば、６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成：０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）、０．５％ＳＤＳ、５×デンハート及び１００ｍｇ／ｍＬニシン精子ＤＮＡを含む溶液にプローブとともに４２℃で８～１６時間恒温し、ハイブリダイズさせる条件が挙げられる。

【0020】

本明細書において、ポリヌクレオチドの「フラグメント」とは、該ポリヌクレオチドの部分ポリヌクレオチドを意味する。部分ポリヌクレオチドの長さは、全長のポリヌクレオチドがコードするポリペプチドと同等の機能を有するポリペプチドをコードする限りにおいて、特に限定されるものではない。例えば、部分ポリヌクレオチドは、全長のポリヌクレオチドに対し好ましくは３０％以上、より好ましくは４０％以上、さらに好ましくは５０％以上、かつ、好ましくは９０％以下、より好ましくは８０％以下、さらに好ましくは７０％以下、さらにより好ましくは６０％以下の長さの連続するヌクレオチドからなるポリヌクレオチドを意味し得る。また、本明細書において、ポリペプチドの「フラグメント」とは、該ポリペプチドの部分ポリペプチドを意味する。部分ポリペプチドの長さは、特に限定されるものではない。例えば、部分ポリペプチドは、全長のポリペプチドに対し好ましくは３０％以上、より好ましくは４０％以上、さらに好ましくは５０％以上、かつ、好ましくは９０％以下、より好ましくは８０％以下、さらに好ましくは７０％以下、さらにより好ましくは６０％以下の長さの連続するアミノ酸残基からなるポリペプチドを意味し得る。

【0021】

本明細書において、「制御領域」とは、その下流に配置された遺伝子（例えばタンパク質をコードする領域）の発現を制御する機能を有する領域である。より具体的には、「制御領域」とは、遺伝子のコーディング領域の上流に存在し、ＲＮＡポリメラーゼと相互作用して該コーディング領域の転写を制御する機能を有する領域として定義され得る。制御領域は、転写開始制御領域及び／又は翻訳開始制御領域、あるいは転写開始制御領域から翻訳開始制御領域に至るまでの領域を含む。転写開始制御領域はプロモーター及び転写開始点を含む領域であり、翻訳開始制御領域は開始コドンと共にリボソームに認識され翻訳開始に必要なＫｏｚａｋ配列に相当する部位である。

【0022】

本明細書において、制御領域と遺伝子のポリヌクレオチド（例えばタンパク質をコードするポリヌクレオチド）との「作動可能な連結」とは、遺伝子と制御領域とが、該遺伝子が該制御領域の制御の下で発現し得るように連結されていることをいう。遺伝子と制御領域との「作動可能な連結」の手順は当業者に周知である。

【0023】

本明細書において、第一の遺伝子のポリヌクレオチド（例えばタンパク質をコードするポリヌクレオチド）及び第二の遺伝子のポリヌクレオチド（例えばタンパク質をコードするポリヌクレオチド）との「発現可能な連結」とは、第一の遺伝子と第二の遺伝子とが、適切な発現ベクターに挿入され、該発現ベクターが適切な細胞に導入された場合に、該第一の遺伝子がコードするタンパク質と該第二の遺伝子がコードするタンパク質が融合タンパク質として生産されるように連結されることをいう。ここで、「連結」とは、第一の遺伝子と第二の遺伝子が直接結合している場合も、他のヌクレオチド配列を介して結合している場合も含む概念である。第一の遺伝子と第二の遺伝子との「発現可能な連結」の手順は当業者に周知である。

【0024】

本明細書において、遺伝子又はそのヌクレオチド配列に関する「上流」及び「下流」とは、該遺伝子の転写方向の上流及び下流をいう。例えば、遺伝子の「上流配列」「下流配列」とは、それぞれＤＮＡセンス鎖において該遺伝子の５’側及び３’側に位置する配列をいう。

【0025】

本明細書において、「抗原」とは、生体に抗体の産生や細胞性免疫等の免疫応答を引き起こす分子を意味する。また、本明細書において、「免疫原性」とは、抗原が抗体の産生や細胞性免疫を誘導する性質を意味する。

【0026】

本明細書において、「核酸ワクチン」とは、抗原をコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を生体に投与することで免疫を誘導するワクチンをいう。核酸ワクチンには、ＤＮＡワクチン、ｍＲＮＡワクチン、ウイルスベクターワクチンが包含され、いずれも液性免疫と細胞性免疫の両方を誘導すると考えられている。ＤＮＡワクチンは、抗原をコードするプラスミドを含む。生体に投与されたプラスミドが細胞に取り込まれて核内でｍＲＮＡに転写され、細胞質内でｍＲＮＡが抗原タンパク質に翻訳されて、抗原特異的な免疫応答が誘導される。ｍＲＮＡワクチンは、抗原をコードするｍＲＮＡを含む。生体に投与されたｍＲＮＡが細胞に取り込まれ、細胞質内でｍＲＮＡが抗原タンパク質に翻訳されて、抗原特異的な免疫応答が誘導される。ウイルスベクターワクチンは、抗原をコードするポリヌクレオチドを組み込んだ病原性がないもしくは弱毒性のウイルスベクターを含む。生体に投与されたウイルスが細胞に侵入し、細胞に抗原タンパク質を合成させて、抗原特異的な免疫応答が誘導される。

【0027】

本明細書において、「細胞性免疫」とは、生体に侵入した病原体、ウイルス感染細胞、がん細胞などの異物の排除に働く獲得免疫応答のうち、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞等をエフェクターとする免疫応答をいう。また、本明細書において、「液性免疫」とは、獲得免疫応答のうち、抗体をエフェクターとする免疫応答をいう。

【0028】

本明細書において、「Ｔｈ１型の免疫応答」とは、ヘルパーＴ細胞のサブセットのうち、Ｔｈ１細胞により促進される免疫応答を指す。Ｔｈ１細胞は、サイトカインとして主にＩＦＮγを産生し、Ｍ１マクロファージ、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞を主な標的細胞とし、主に細胞性免疫を誘導する。Ｔｈ１細胞は、Ｂ細胞を活性化してＩｇＧ２ａの産生を誘導することが知られている。また、本明細書において、「Ｔｈ２型の免疫応答」とは、ヘルパーＴ細胞のサブセットのうち、Ｔｈ２細胞により促進される免疫応答を指す。Ｔｈ２細胞は、サイトカインとして主にＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３を産生し、肥満細胞、Ｍ２マクロファージ、好酸球及び好塩基球を主な標的細胞とし、主に液性免疫を誘導する。Ｔｈ２細胞は、Ｂ細胞を活性化してＩｇＧ１の産生を誘導することが知られている。

【0029】

本発明は、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物を提供する。

【0030】

本発明において、ＳＮＡＲＥタンパク質は、ＳＮＡＲＥモチーフを有するタンパク質ファミリーに属するタンパク質である。ＳＮＡＲＥタンパク質は、ＳＮＡＲＥモチーフのアミノ酸残基の特徴から、ＱＡ－ＳＮＡＲＥ、ＱＢ－ＳＮＡＲＥ、ＱＣ－ＳＮＡＲＥ、及びＲ－ＳＮＡＲＥの４つのサブファミリーに分類されるが、本発明で用いられるＳＮＡＲＥタンパク質はいずれのサブファミリーに属するものであってもよい。該ＳＮＡＲＥタンパク質は、膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞に局在するものが好ましく、具体的には、ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、ＳＥＣ２２Ｂ、ＳＴＸ６、ＶＡＭＰ３、ＶＡＭＰ４、ＶＴＩ１Ｂ、ＢＥＴ１、ＢＥＴ１Ｌ、ＵＳＥ１などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。該ＳＮＡＲＥタンパク質としては、免疫誘導又は増強の点から、ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、及びＳＥＣ２２Ｂからなる群より選択されるいずれかが好ましく、ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかがより好ましく、ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかがさらに好ましく、ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかがさらに好ましく、ＶＡＭＰ７がさらに好ましい。

【0031】

ＶＡＭＰ７（ｖｅｓｉｃｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ７）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、後期エンドソーム、リソソーム及び細胞膜に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＡＭＰ７は、哺乳動物のＶＡＭＰ７である。より好ましい一例において、ＶＡＭＰ７は、ヒトＶＡＭＰ７であり、配列番号１のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６８４５）にコードされる、配列番号１０のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＡＭＰ７には、ＶＡＭＰ７及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0032】

ＧＯＳＲ２（ｇｏｌｇｉ ＳＮＡＰ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ ｍｅｍｂｅｒ ２）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体－ゴルジ体中間区間及びゴルジ体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＧＯＳＲ２は、哺乳類のＧＯＳＲ２である。より好ましい一例において、ＧＯＳＲ２は、ヒトＧＯＳＲ２であり、配列番号２のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９５７０）にコードされる、配列番号１１のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＧＯＳＲ２には、ＧＯＳＲ２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0033】

ＳＴＸ（ｓｙｎｔａｘｉｎ）１０は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、トランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ１０は、哺乳類のＳＴＸ１０である。より好ましい一例において、ＳＴＸ１０は、ヒトＳＴＸ１０であり、配列番号３のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８６７７）にコードされる、配列番号１２のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ１０には、ＳＴＸ１０及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0034】

ＳＴＸ１８は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ１８は、哺乳類のＳＴＸ１８である。より好ましい一例において、ＳＴＸ１８は、ヒトＳＴＸ１８であり、配列番号４のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５３４０７）にコードされる、配列番号１３のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ１８には、ＳＴＸ１８及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0035】

ＢＮＩＰ１（ＢＣＬ２ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＢＮＩＰ１は、哺乳類のＢＮＩＰ１である。より好ましい一例において、ＢＮＩＰ１は、ヒトＢＮＩＰ１であり、配列番号５のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６６２）にコードされる、配列番号１４のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＢＮＩＰ１には、ＢＮＩＰ１及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0036】

ＳＴＸ７は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、初期エンドソーム及び後期エンドソームに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ７は、哺乳類のＳＴＸ７である。より好ましい一例において、ＳＴＸ７は、ヒトＳＴＸ７であり、配列番号６のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８４１７）にコードされる、配列番号１５のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ７には、ＳＴＸ７及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0037】

ＶＴＩ１Ａ（ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔ－ＳＮＡＲＥｓ １Ａ）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、トランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＴＩ１Ａは、哺乳類のＶＴＩ１Ａである。より好ましい一例において、ＶＴＩ１Ａは、ヒトＶＴＩ１Ａであり、配列番号７のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１４３１８７）にコードされる、配列番号１６のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＴＩ１Ａには、ＶＴＩ１Ａ及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0038】

ＳＴＸ１６は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、トランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ１６は、哺乳類のＳＴＸ１６である。より好ましい一例において、ＳＴＸ１６は、ヒトＳＴＸ１６であり、配列番号８のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８６７５）にコードされる、配列番号１７のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ１６には、ＳＴＸ１６及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0039】

ＳＴＸ５は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ５は、哺乳類のＳＴＸ５である。より好ましい一例において、ＳＴＸ５は、ヒトＳＴＸ５であり、配列番号９のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：６８１１）にコードされる、配列番号１８のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ５には、ＳＴＸ５及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0040】

ＧＯＳＲ１は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体及びトランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＧＯＳＲ１は、哺乳動物のＧＯＳＲ１である。より好ましい一例において、ＧＯＳＲ１は、ヒトＧＯＳＲ１であり、配列番号７１のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９５２７）にコードされる、配列番号８３のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＧＯＳＲ１には、ＧＯＳＲ１及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0041】

ＳＴＸ８は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、初期エンドソーム、後期エンドソーム、及び細胞膜に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ８は、哺乳動物のＳＴＸ８である。より好ましい一例において、ＳＴＸ８は、ヒトＳＴＸ８であり、配列番号７２のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９４８２）にコードされる、配列番号８４のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ８には、ＳＴＸ８及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0042】

ＳＴＸ１２は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体、初期エンドソーム及びリサイクリングエンドソームに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ１２は、哺乳動物のＳＴＸ１２である。より好ましい一例において、ＳＴＸ１２は、ヒトＳＴＸ１２であり、配列番号７３のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２３６７３）にコードされる、配列番号８５のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ１２には、ＳＴＸ１２及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0043】

ＶＡＭＰ８は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、リソソーム、初期エンドソーム、後期エンドソーム及び細胞膜に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＡＭＰ８は、哺乳動物のＶＡＭＰ８である。より好ましい一例において、ＶＡＭＰ８は、ヒトＶＡＭＰ８であり、配列番号７４のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８６７３）にコードされる、配列番号８６のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＡＭＰ８には、ＶＡＭＰ８及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0044】

ＳＥＣ２２Ｂ（ＳＥＣ２２ ｈｏｍｏｌｏｇ Ｂ，ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク及びトランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＥＣ２２Ｂは、哺乳動物のＳＥＣ２２Ｂである。より好ましい一例において、ＳＥＣ２２Ｂは、ヒトＳＥＣ２２Ｂであり、配列番号７５のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９５５４）にコードされる、配列番号８７のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＥＣ２２Ｂには、ＳＥＣ２２Ｂ及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0045】

ＳＴＸ６は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＳＴＸ６は、哺乳動物のＳＴＸ６である。より好ましい一例において、ＳＴＸ６は、ヒトＳＴＸ６であり、配列番号７６のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０２２８）にコードされる、配列番号８８のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＳＴＸ６には、ＳＴＸ６及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0046】

ＶＡＭＰ３（Ｖｅｓｉｃｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ３）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、細胞膜及びゴルジ体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＡＭＰ３は、哺乳動物のＶＡＭＰ３である。より好ましい一例において、ＶＡＭＰ３は、ヒトＶＡＭＰ３であり、配列番号７７のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：９３４１）にコードされる、配列番号８９のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＡＭＰ３には、ＶＡＭＰ３及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0047】

ＶＡＭＰ４（Ｖｅｓｉｃｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ４）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体及びトランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＡＭＰ４は、哺乳動物のＶＡＭＰ４である。より好ましい一例において、ＶＡＭＰ４は、ヒトＶＡＭＰ４であり、配列番号７８のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：８６７４）にコードされる、配列番号９０のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＡＭＰ４には、ＶＡＭＰ４及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0048】

ＶＴＩ１Ｂ（Ｖｅｓｉｃｌｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔ－ＳＮＡＲＥｓ ｈｏｍｏｌｏｇ １Ｂ）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム及びリサイクリングエンドソームに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＶＴＩ１Ｂは、哺乳動物のＶＴＩ１Ｂである。より好ましい一例において、ＶＴＩ１Ｂは、ヒトＶＴＩ１Ｂであり、配列番号７９のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０４９０）にコードされる、配列番号９１のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＶＴＩ１Ｂには、ＶＴＩ１Ｂ及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0049】

ＢＥＴ１（Ｂｅｔ１ ｇｏｌｇｉ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体、ゴルジ体及びシスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＢＥＴ１は、哺乳動物のＢＥＴ１である。より好ましい一例において、ＢＥＴ１は、ヒトＢＥＴ１であり、配列番号８０のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：１０２８２）にコードされる、配列番号９２のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＢＥＴ１には、ＢＥＴ１及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0050】

ＢＥＴ１Ｌ（Ｂｅｔ１ ｇｏｌｇｉ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｋｅ）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、ゴルジ体及びトランスゴルジネットワークに局在すると予想されている。好ましい一例において、ＢＥＴ１Ｌは、哺乳動物のＢＥＴ１Ｌである。より好ましい一例において、ＢＥＴ１Ｌは、ヒトＢＥＴ１Ｌであり、配列番号８１のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５１２７２）にコードされる、配列番号９３のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＢＥＴ１Ｌには、ＢＥＴ１Ｌ及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0051】

ＵＳＥ１（Ｕｎｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＳＮＡＲＥ ｉｎ ｔｈｅ ＥＲ １）は、ＳＮＡＲＥタンパク質の１種であり、膜貫通ドメインを有し、小胞体に局在すると予想されている。好ましい一例において、ＵＳＥ１は、哺乳動物のＵＳＥ１である。より好ましい一例において、ＵＳＥ１は、ヒトＵＳＥ１であり、配列番号８２のヌクレオチド配列からなる遺伝子（Ｇｅｎｅ ＩＤ：５５８５０）にコードされる、配列番号９４のアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明で用いられるＵＳＥ１には、ＵＳＥ１及びこれと同等の機能を有するポリペプチドが包含される。

【0052】

本発明において、ＳＮＡＲＥタンパク質と同等の機能を有するポリペプチドとは、該ＳＮＡＲＥタンパク質と同等の生物学的活性を有するポリペプチドを指す。斯かるポリペプチドとしては、例えば、膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（好ましくは対応するＳＮＡＲＥタンパク質が局在する細胞内小胞）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドが挙げられる。具体例としては、下記の（ｂ）～（ｅ）、又は下記の（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）のポリペプチドが挙げられる。

【0053】

ＶＡＭＰ７としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム、リソソーム又は細胞膜）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号１のヌクレオチド配列からなるＶＡＭＰ７遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑ（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ）にＮＭ＿００１１８５１８３．２、又はＮＭ＿００１１４５１４９．３として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１１７２１１２．１、又はＮＰ＿００１１３８６２１．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0054】

ＧＯＳＲ２としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号２のヌクレオチド配列からなるＧＯＳＲ２遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿０５４０２２．４、ＮＭ＿００４２８７．５、ＮＭ＿００１３５３１１４．２、ＮＭ＿００１０１２５１１．３、ＮＭ＿００１３６３８５１．２、ＮＭ＿００１３３０２５２．２、ＮＭ＿００１３５３１１６．２、ＮＭ＿００１３５３１１５．２、又はＮＭ＿００１３２１１３４．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿４７３３６３．１、ＮＰ＿００４２７８．２、ＮＰ＿００１３４００４３．１、ＮＰ＿００１０１２５２９．１、ＮＰ＿００１３５０７８０．１、ＮＰ＿００１３１７１８１．１、ＮＰ＿００１３４００４５．１、ＮＰ＿００１３４００４４．１、又はＮＰ＿００１３０８０６３．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0055】

ＳＴＸ１０としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号３のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ１０遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１２７１６１０．２、ＮＭ＿１２７１６０９．２、又はＮＭ＿００１２７１６１１．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１２５８５３９．１、ＮＰ＿００１２５８５３８．１、又はＮＰ＿００１２５８５４０．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0056】

ＳＴＸ１８としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号４のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ１８遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１３４６２８１．２、ＮＭ＿００１３４６２８２．２、又はＮＭ＿００１３４６３００．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１３３３２１０．１、ＮＰ＿００１３３３２１１．１、又はＮＰ＿００１３３３２２９．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0057】

ＢＮＩＰ１としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号５のヌクレオチド配列からなるＢＮＩＰ１遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿０１３９８０．３、ＮＭ＿００１２０５．３、又はＮＭ＿０１３９７８．３として登録され、それぞれ、ＮＰ＿０５３５８３．２、ＮＰ＿００１１９６．２、又はＮＰ＿０５３５８１．２として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0058】

ＳＴＸ７としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号６のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ７遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１３２６５７８．２、ＮＭ＿００１３２６５７９．２、又はＮＭ＿００１３２６５８０．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１３１３５０７．１、ＮＰ＿００１３１３５０８．１、又はＮＰ＿００１３１３５０９．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0059】

ＶＴＩ１Ａとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号７のヌクレオチド配列からなるＶＴＩ１Ａ遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿１４５２０６．４、ＮＭ＿００１３６５７１１．１、ＮＭ＿００１３６５７１０．２、ＮＭ＿００１３６５７１２．１、ＮＭ＿００１３６５７１３．１、ＮＭ＿００１３６５７１４．１、又はＮＭ＿００１３１８２０５．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿６６０２０７．２、ＮＰ＿００１３５２６４０．１、ＮＰ＿００１３５２６３９．１、ＮＰ＿００１３５２６４１．１、ＮＰ＿００１３５２６４２．１、ＮＰ＿００１３５２６４３．１、又はＮＰ＿００１３０５１３４．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0060】

ＳＴＸ１６としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号８のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ１６遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１１３４７７２．３、ＮＭ＿１１３４７７３．３、ＮＭ＿００３７６３．６、又はＮＭ＿００１２０４８６８．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１１２８２４４．１、ＮＰ＿００１１２８２４５．１、ＮＰ＿００３７５４．２、又はＮＰ＿００１１９１７９７．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0061】

ＳＴＸ５としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号９のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ５遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１２４４６６６．３、又はＮＭ＿００１３３０２９４．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１２３１５９５．１、又はＮＰ＿００１３１７２２３．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0062】

ＧＯＳＲ１としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号７１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号７１のヌクレオチド配列からなるＧＯＳＲ１遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１００７０２５．２又はＮＭ＿００１００７０２４．２として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１００７０２６．１又はＮＰ＿００１００７０２５．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0063】

ＳＴＸ８としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0064】

ＳＴＸ１２としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0065】

ＶＡＭＰ８としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0066】

ＳＥＣ２２Ｂとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0067】

ＳＴＸ６としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８８のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号７６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号７６のヌクレオチド配列からなるＳＴＸ６遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１２８６２１０．２として登録され、ＮＰ＿００１２７３１３９．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0068】

ＶＡＭＰ３としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0069】

ＶＡＭＰ４としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号７８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号７８のヌクレオチド配列からなるＶＡＭＰ４遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１１８５１２７．２として登録され、ＮＰ＿００１１７２０５６．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0070】

ＶＴＩ１Ｂとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0071】

ＢＥＴ１としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号９２のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号９２のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号８０のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号８０のヌクレオチド配列からなるＢＥＴ１遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１３１７７３９．２として登録され、ＮＰ＿００１３０４６６８．１として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0072】

ＢＥＴ１Ｌとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号９３のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｄ）配列番号８１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントにコードされるアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｄ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。
配列番号８１のヌクレオチド配列からなるＢＥＴ１Ｌ遺伝子のスプライシングバリアントとしては、ＮＣＢＩのＲｅｆＳｅｑにＮＭ＿００１０９８７８７．２、又はＮＭ＿０１６５２６．５として登録され、それぞれ、ＮＰ＿００１０９２２５７．１、又はＮＰ＿０５７６１０．２として登録されるタンパク質をコードするバリアントが挙げられる。

【0073】

ＵＳＥ１としては、具体的には以下が挙げられる。
（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｃ）配列番号９４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド；
（ｅ）上記（ａ）～（ｃ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド。

【0074】

本発明で用いられるＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドには、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド及びＳＮＡＲＥタンパク質と同等の機能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが包含される。ＳＮＡＲＥタンパク質と同等の機能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの具体例としては、下記の（ｇ）～（ｋ）及び（ｍ）～（ｏ）、又は下記の（ｇ）、（ｈ）、（ｊ）、（ｋ）及び（ｍ）～（ｏ）のポリヌクレオチドが挙げられる。

【0075】

ＶＡＭＰ７をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号１のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１０のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、後期エンドソーム又はリソソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0076】

ＧＯＳＲ２をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号２のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１１のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体－ゴルジ体中間区間又はゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0077】

ＳＴＸ１０をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号３のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号３のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１２のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0078】

ＳＴＸ１８をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号４のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１３のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0079】

ＢＮＩＰ１をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号５のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号５のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１４のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0080】

ＳＴＸ７をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号６のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号６のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１５のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0081】

ＶＴＩ１Ａをコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0082】

ＳＴＸ１６をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号８のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１７のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、トランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0083】

ＳＴＸ５をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号９のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号９のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号１８のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0084】

ＧＯＳＲ１をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７１のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７１のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号７１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８３のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0085】

ＳＴＸ８をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７２のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７２のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８４のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0086】

ＳＴＸ１２をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７３のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７３のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８５のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８５のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体、初期エンドソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0087】

ＶＡＭＰ８をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７４のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７４のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７４のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８６のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８６のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、リソソーム、初期エンドソーム又は後期エンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0088】

ＳＥＣ２２Ｂをコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７５のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７５のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８７のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８７のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、小胞体－ゴルジ体中間区間、ゴルジ体、シスゴルジネットワーク又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0089】

ＳＴＸ６をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７６のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７６のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号７６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７６のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８８のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８８のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0090】

ＶＡＭＰ３をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７７のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７７のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７７のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号８９のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号８９のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号８９アミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0091】

ＶＡＭＰ４をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７８のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７８のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号７８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７８のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号９０のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号９０のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0092】

ＶＴＩ１Ｂをコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号７９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号７９のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号７９のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号７９のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号９１のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号９１のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、初期エンドソーム、後期エンドソーム、リソソーム又はリサイクリングエンドソーム）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0093】

ＢＥＴ１をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号８０のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号８０のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号８０のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号８０のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号８０のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号９２のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号９２のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体、ゴルジ体又はシスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0094】

ＢＥＴ１Ｌをコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号８１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号８１のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号８１のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｉ）配列番号８１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドのスプライシングバリアントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号８１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号９３のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号９３のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、ゴルジ体又はトランスゴルジネットワーク）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0095】

ＵＳＥ１をコードするポリヌクレオチドとしては、具体的には以下が挙げられる。
（ｆ）配列番号８２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｇ）配列番号８２のヌクレオチド配列と少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｈ）配列番号８２のヌクレオチド配列に対して１個又は数個のヌクレオチドが欠失、置換、付加、又は挿入されたヌクレオチド配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｊ）配列番号８２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｋ）上記（ｆ）～（ｈ）及び（ｊ）のいずれかのポリヌクレオチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号９４のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｍ）配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号９４のアミノ酸配列に対して１個又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）上記（ｌ）～（ｎ）のいずれかのポリペプチドのフラグメントであり、かつ膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞（例えば、小胞体）又はエクソソームに局在することができるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチド。

【0096】

本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドの取得方法としては、特に制限されず、通常の化学合成法又は遺伝子工学的手法により得ることができる。例えば、配列番号１～９及び７１～８２のいずれかのヌクレオチド配列に基づいて、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドを人工合成することができる。人工合成には、例えば、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社等から提供される市販のＤＮＡ合成サービスを利用することができる。あるいは、例えば、ヒト由来の試料から、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ ＴＨＩＲＤ ＥＤＩＴＩＯＮ（Ｊｏｓｅｐｈ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｄａｖｉｄ Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）記載の方法に従って、配列番号１～９及び７１～８２のいずれかのヌクレオチド配列をクローニングすることができる。

【0097】

本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドはまた、例えば、配列番号１～９及び７１～８２のいずれかのヌクレオチド配列からなるＤＮＡに突然変異を導入することによって製造することができる。突然変異導入の手法としては、例えば、紫外線照射及び部位特異的変異導入法が挙げられる。部位特異的変異導入の手法としては、Ｓｐｌｉｃｉｎｇ ｏｖｅｒｌａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ（ＳＯＥ）ＰＣＲ（Ｈｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７７，６１－６８，１９８９）を利用した方法、ＯＤＡ法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ－Ｇｏｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１５２，２７１－２７６，１９９５）、Ｋｕｎｋｅｌ法（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｔ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５，８２，４８８）等が挙げられる。あるいは、Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ Ｍｕｔａｎ－ＳｕｐｅｒＥｘｐｒｅｓｓ Ｋｍキット（タカラバイオ）、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｒ^TM Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキット（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社）、ＫＯＤ－Ｐｌｕｓ－Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（東洋紡社）等の市販の部位特異的変異導入用キットを利用することもできる。突然変異導入したＤＮＡから、膜貫通ドメインを有し、細胞内小胞に局在し得るものを選択することによって、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドを取得することができる。突然変異を導入したＤＮＡがコードするポリペプチドが膜貫通ドメインを有するか否かは、例えば、該ＤＮＡがコードするポリペプチドのアミノ酸配列を基にＳＯＳＵＩ（Ｈｉｒｏｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１４（４）：３７８－３７９，１９９８）、ＴＭＨＭＭ（Ｋｒｏｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３０５（３）：５６７－５８０，２００１）などの予測ツールを用いて判別することができる。

【0098】

あるいは、ヌクレオチド配列に対するヌクレオチドの欠失、置換、付加、又は挿入の方法は、例えば、Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈら（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂａｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，５８１－６２１，１９９５）に記載されている。

【0099】

あるいは、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、例えば、配列番号１～９及び７１～８２のいずれかのヌクレオチド配列からなるＤＮＡを人工ＤＮＡ切断酵素（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ＤＮＡ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ又はＰｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｎｕｃｌｅａｓｅ）を用いたゲノム編集に供することによっても得ることが出来る。

【0100】

本発明において、抗原としては、任意のものを用いることができる。具体的には、がん抗原、自己抗原、感染症抗原、アレルゲンなどが挙げられる。

【0101】

本発明において、がん抗原は、免疫システムによるがんの攻撃の際にがん細胞と正常細胞とを区別するための目印となる、がん細胞には発現しているが正常細胞には発現していないか発現していても発現量が少ないタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。がん抗原としては、特に制限されないが、ＭＡＧＥＡ１－４、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ２、ＣＴ８３、ＣＤ１９、ＧＰ１００、ＭＡＲＴ１、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、チロシナーゼ、ＷＴ１、ＨＥＲ２、ＭＵＣ１、ＣＥＡ、ｓｕｒｖｉｖｉｎ、サイクリンＢ１、ＥＧＦＲ、メソテリン、テロメラーゼ、ＭＵＣ１Ｔ、ＬＳＰ１、ＢＣＲ－ＡＢＬ１、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳなどのがん患者に共通して認められるタンパク質又はそれに由来するペプチド、がん細胞における遺伝子変異に伴い新たに生じたがん抗原であり、免疫原性が高いと考えられているネオアンチゲンなどが挙げられる。このうち、がん抗原として、ＷＴ１、ネオアンチゲン、又はそれらに由来するペプチドが好ましく、ＷＴ１又はそれに由来するペプチドがより好ましい。

【0102】

本発明において、自己抗原は、本来正常な身体構成成分であるにも関わらず、宿主で自己免疫反応を誘発し自己免疫疾患の原因となるタンパク質若しくはそれに由来するペプチド、又は宿主における特定の疾患原因となる抗原であって、当該抗原に対して人為的に免疫応答を誘発することで疾患治療が期待できる標的タンパク質若しくはそれに由来するペプチドを意味する。自己免疫疾患の原因となる自己抗原としては、特に制限されないが、例えばＩ型糖尿病では、Ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ Ｈ、Ｃｈｒｏｍｏｇｒａｎｉｎ Ａ、Ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ、Ｉｍｏｇｅｎ－３８、Ｉｎｓｕｌｉｎ、Ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ ａｎｔｉｇｅｎ－２、Ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ ａｎｔｉｇｅｎ－２Ｂ、Ｉｓｌｅｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｐｒｏｉｎｓｕｌｉｎなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、多発性硬化症では、α－ｅｎｏｌａｓｅ、Ａｑｕａｐｏｒｉｎ－４、β－ａｒｒｅｓｔｉｎ、Ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｉｃ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、Ｐｒｏｔｅｏｌｉｐｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｓ１００－βなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、関節リウマチでは、Ｃｉｔｒｕｌｌｉｎａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｃｏｌｌａｇｅｎ ＩＩ、Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｈｕｍａｎ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ３９などのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、全身性エリテマトーデスでは、Ｌａ ａｎｔｉｇｅｎ、ｈｉｓｔｏｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ－β－２ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉ ｃｏｍｐｌｅｘ、Ｐｏｌｙ （ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ） ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、Ｓｍ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｕ－Ｉ ｓｍａｌｌ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、シェーグレン症候群では、ＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＲＯ６０、Ｌｕｐｕｓ Ｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｍ３、Ａｑｕａｐｏｒｉｎ－５、Ｓａｌｉｖａｒｙ Ｇｌａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ １、Ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ６、Ｐａｒｏｔｉｄ ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ、Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ－１１などのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、多発性筋炎／皮膚筋炎では、Ａｍｉｎｏａｃｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｈｉｓｔｉｄｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｔｈｒｅｏｎｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ａｌａｎｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｉｓｏｌｅｕｃｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｇｌｙｃｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ａｓｐａｒａｇｉｎｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｔｙｒｏｓｙｌ－ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、Ｓｉｇｎａｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｐａｒｔｉｃｌｅ、Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １α、ＮｕＲＤ ｈｅｌｉｃａｓｅ、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ ｆａｃｔｏｒ－１－γ、ＰＭＳ１ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎ ＮＸＰ２、ＳＵＭＯ－１ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ Ａなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、バゼドウ氏病では、Ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。このうち、自己抗原として、Ｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｉｃ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ又はそれに由来するペプチドが好ましい。
人為的に免疫応答を誘発する標的となる自己抗原としては、アルツハイマー型認知症では、Ａｍｙｌｏｉｄ β、Ｔａｕ ｐｒｏｔｅｉｎなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、パーキンソン病では、α ｓｉｎｕｃｌｅｉｎなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、動脈硬化症では、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｅｓｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ、ＡｐｏＢ－１００、Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ ｔｙｐｅ ９、Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ６０などのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、高血圧症では、Ｔｙｐｅ－１ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ａｌｐｈａ １Ｄ－Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、２型糖尿病では、Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ４などのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、肥満症では、Ｇｌｕｃａｇｏｎ－ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ－１、Ｇｈｒｅｌｉｎ、Ｐｅｐｔｉｄｅ ＹＹなどのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられ、骨粗しょう症では、ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ＮＦ－ｋａｐｐａＢ ｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）などのタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。

【0103】

本発明において、感染症抗原としては、感染症の原因となるウイルス、細菌、真菌及び原生動物に由来する抗原が挙げられる。ウイルス抗原は、ウイルスを構成するタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。ウイルス抗原としては、特に限定されないが、インフルエンザウイルス、コロナウイルス、ＲＳウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、日本脳炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ノロウイルス、ロタウイルス、ジカウイルス、サイトメガロウイルス、パピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、成人Ｔ細胞白血病ウイルスなどのウイルスの構成タンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。
細菌抗原は、細菌を構成するタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。細菌抗原としては、特に限定されないが、百日咳菌、ジフテリア菌、大腸菌、インフルエンザ菌、ヘリコバクター、髄膜炎菌、緑膿菌、肺炎球菌、Ａ群連鎖球菌、Ｂ群連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌、レジオネラ菌、結核菌、マイコプラズマなどの細菌の構成タンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。
真菌抗原としては、真菌やその胞子を構成するタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。真菌抗原としては、アスペルギルス属真菌（例えばAspergillus fumigatus、Aspergillus flavus、Aspergillus terreus、Aspergillus nidulans、Aspergillus niger、Aspergillus ustus等)、ブラストミセス属真菌（例えば、Blastomyces dermatitidis等）、カンジダ属真菌（例えばCandida albicans等）、コクシジオイデス属真菌（例えばCoccidiodes immitis等）、クリプトコッカス属真菌（例えばCryptococcus neoformans、Cryptococcus gattii等）、ヒストプラズマ属真菌（例えばHistoplasma capsulatum等）、パラコクシジオイデス属真菌（例えばParacoccidioides brasiliensis等）、スポロトリクス属真菌（例えばSporothrix schenckii等）などの真菌やその胞子の構成タンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。
原生動物抗原としては、原生動物を構成するタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。原生動物抗原としては、マラリア原虫、リーシュマニア、クリプトスポリジウム、ガンビアトリパノソーマ、ローデシアトリパノソーマ、クルーズトリパノソーマ、トリコモナス、トキソプラズマ、バベシア、赤痢アメーバ、ジアルジアなどの原生動物の構成タンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。
このうち、感染症抗原として、細菌抗原、真菌抗原、又は原生動物抗原が好ましい。

【0104】

本発明において、アレルゲンは、吸入、刺入、摂取又は接触により外部から生体に入り、過敏反応やアレルギー反応を惹起するタンパク質又はそれに由来するペプチドを意味する。アレルゲンとしては、特に限定されないが、イネ科植物花粉（アシ、オオアワガエリ、オオスズメノテッポウ、カモガヤ、ギョウギシバ、小麦、コヌカグサ、スズメノヒエ、セイバンモロコシ、ナガハグサ、ハルガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギなど）；雑草花粉（アキノキリンソウ、イラクサ、オオブタクサ、カナムグラ、シロザタンポポ、ニガヨモギ、ヒメスイバ、ブタクサ、ブタクサモドキ、フランスギク、ヘラオオバコ、ヨモギなど）；樹木花粉（アカシア、オリ一ブ、カエデ、クルミ、クワ、コナラ、シラカンバ、スギニレ、ハンノキ、スギ、ヒノキ、ビャクシン、ブナ、マツ、ヤナギなど）；真菌又は細菌類（アスペルギルス、アルテルナリア、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、カンジダ、クラドスポリウム、トリコフィトン、ピティロスポリウム、ペニシリウム、ヘルミントスポリウム、マラセチア、ムコールなど）；動物表皮（アヒル羽毛、猫皮屑、犬皮屑、牛皮屑、馬皮屑、家兎上皮、ハムスター上皮、モルモット上皮、羊上皮、豚上皮、ヤギ上皮、ニワトリ羽毛、ガチョウ羽毛、セキセイインコ羽毛、セキセイインコのふん、マウス、ラットなど）；昆虫（アシナガバチ、ガ、ゴキブリ、スズメバチ、ミツバチ、ヤブカ、ユスリカ(成虫)など）；寄生虫（アニサキス、回虫など）；ダニ（アシブトコナダニ、ケナガコナダニ、コナヒョウダニ、サヤアシニクダニ、ヤケヒョウダニなど）；食物（卵、乳、小麦、そば、落花生、えび、かに、アーモンド、あわび、いか、いくら、オレンジ、カシューナッツ、キウイフルーツ、牛肉、くるみ、ごま、さけ、さば、大豆、鶏肉、バナナ、豚肉、まつたけ、もも、やまいも、りんご、ゼラチンなど）；ヒトインシュリンなどに含まれるタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。このうち、アレルゲンとして、食物に含まれるタンパク質又はそれに由来するペプチドが好ましく、卵に含まれるタンパク質又はそれに由来するペプチドがより好ましい。

【0105】

その他の抗原としては、セリアック病の原因となるグルテンを構成するグルテニンやグリアジンタンパク質又はそれに由来するペプチドが挙げられる。

【0106】

本発明の抗原をコードするポリヌクレオチドの取得方法としては、特に制限されず、上述のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドを取得する場合と同様に、通常の化学合成法又は遺伝子工学的手法により得ることができる。抗原をコードするポリヌクレオチドとしては、抗原の全長をコードするポリヌクレオチドであってもよいし、抗原として機能する限りにおいて、抗原の部分ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであってもよい。また、１つの抗原をコードするポリヌクレオチドを複数連続して発現可能に連結させたポリヌクレオチドであってもよいし、２種以上の抗原をコードするポリヌクレオチドを発現可能に連結させたポリヌクレオチドであってもよい。本発明の核酸構築物に用いる抗原は、少なくとも１種類であり、かつ、好ましくは５種類以下、より好ましくは３種類以下、さらに好ましくは２種類以下である。また、本発明の核酸構築物に用いる抗原は、５種類、４種類、３種類、２種類又は１種類であり得る。

【0107】

本発明において、プロタンパク質転換酵素（ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ）認識配列とは、ゴルジ体などでプロタンパク質を生理学的に活性なタンパク質又はペプチドに転換するセリンプロテアーゼであるプロタンパク質転換酵素が認識するアミノ酸配列を指し、具体的には、Ｘ－Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇからなるアミノ酸配列（例えば、配列番号２２）である。ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基を示す。プロタンパク質転換酵素としては、ｆｕｒｉｎ、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＣ５／６、ＰＣ７、ＰＡＣＥ４などが挙げられ、これらの酵素が共通してＡｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇモチーフをよく認識することが知られている（Remacle AG, et al. Journal of Biological Chemistry 2008, 283(30): 20897-20906）。よって、プロタンパク質転換酵素認識配列は、Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇであり得る。ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基を示す。プロタンパク質転換酵素は、上記アミノ酸配列を認識し、Ｃ末端のアルギニン残基のＣ末端側を切断する。本発明において、好ましくは、プロタンパク質転換酵素はｆｕｒｉｎであり、ｆｕｒｉｎ認識配列は上記のプロタンパク質転換酵素認識配列と同じである。プロタンパク質転換酵素認識配列は、これが１～５回程度繰り返された配列とすることもできる。

【0108】

プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドの取得方法としては、特に制限されず、通常の化学合成法又は遺伝子工学的手法により得ることができる。

【0109】

本発明の核酸構築物は、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して発現可能に連結された核酸構築物である。好ましくは、本発明の核酸構築物は、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドの下流に該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して発現可能に連結された核酸構築物である。尚、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドの間には、両者の発現を損ねない限りにおいて、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド以外の任意のポリヌクレオチドを含んでいてもよい。例えば、本発明の核酸構築物には、リンカーをコードするポリヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。リンカーをコードするポリヌクレオチドを含む場合、本発明の核酸構築物は、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドがプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド及びリンカーをコードするポリヌクレオチドを介して発現可能に連結された核酸構築物である。リンカーをコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドの連結順序は特に制限されず、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドの上流にリンカーをコードするポリヌクレオチドが連結されていてもよいし、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドの下流にリンカーをコードするポリヌクレオチドが連結されていてもよいし、リンカーをコードする複数のポリヌクレオチドがプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを挟む形で連結されていてもよい。

【0110】

本発明において、リンカーとは、２種のポリペプチドを連結するペプチドリンカーを指す。リンカーとしては、ＳＮＡＲＥタンパク質と抗原を正常に機能させることができるものであればよく、特に制限されない。リンカーの長さは、好ましくは３アミノ酸残基以上、より好ましくは４アミノ酸残基以上、さらに好ましくは５アミノ酸残基以上であり、かつ、好ましくは３０アミノ酸残基以下、より好ましくは２５アミノ酸残基以下、さらに好ましくは２０アミノ酸残基以下である。また、リンカーの長さは、好ましくは３～３０アミノ酸残基、より好ましくは４～２５アミノ酸残基、さらに好ましくは５～２０アミノ酸残基である。斯かるリンカーとしては、Ｇ、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１０６）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１０７）、ＥＡＡＡＫ（配列番号１０８）、またはＸＰを構成要素として有するリンカーが挙げられる。ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基を示す。具体例としては、それぞれの構成要素が１～５回、好ましくは３もしくは４回繰り返された配列からなるリンカーが挙げられ、好ましい具体例としては、ＧＧＧＧＳが３回繰り返された配列からなるリンカーが挙げられる（配列番号２０）。配列の構成要素がＧＧＧＧＳの場合、繰り返し配列の前にアミノ酸残基Ｓが付加されてもよく、又はＥＡＡＡＫの場合、繰り返し配列の前後にアミノ酸残基Ａが付加されてもよい。

【0111】

リンカーをコードするポリヌクレオチドの取得方法としては、特に制限されず、通常の化学合成法又は遺伝子工学的手法により得ることができる。

【0112】

本発明の核酸構築物に含まれるＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド、抗原をコードするポリヌクレオチド、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド、又はリンカーをコードするポリヌクレオチドは、必要に応じて、該核酸構築物の投与対象の種にあわせて、コドン最適化されてもよい。各種生物が使用するコドンの情報は、Ｃｏｄｏｎ Ｕｓａｇｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（[www.kazusa.or.jp/codon/]）から入手可能である。

【0113】

好ましい一例において、本発明の核酸構築物は、発現カセットであり、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド、及び抗原をコードするポリヌクレオチドの発現を制御するための制御領域を含む。発現カセットにおいて、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド、及び抗原をコードするポリヌクレオチドは、制御領域と作動可能に連結されている。制御領域の例としては、プロモーター、ターミネーター、エンハンサーなどが挙げられる。好ましくは、発現カセットは、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド、プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド、及び抗原をコードするポリヌクレオチドの上流に連結されたプロモーターを含む。

【0114】

本発明の核酸構築物は、一端又は両端に、制限酵素認識部位を有することができる。該制限酵素認識部位を使用して、本発明の核酸構築物をベクターに導入することができる。例えば、ベクターを制限酵素で切断し、そこに、制限酵素認識部位を端部に有する本発明の核酸構築物を添加することによって、該核酸構築物をベクターに導入することができる。

【0115】

ベクターの種類は特に限定されず、プラスミドベクター、ファージ、ファージミド、コスミド、ウイルスベクター等の任意のベクターであってよい。一例において、本発明の核酸構築物を組み込むべきベクターは発現ベクターであり得るが、一方、組み込まれる核酸構築物が発現カセットである場合は、発現ベクターである必要はない。一例においては、本発明の核酸構築物は制御領域を含む発現カセットであり、任意のベクターに組み込まれて発現ベクターを構築する。別の一例においては、制御領域を含む発現ベクターに本発明の核酸構築物を組み込むことで、該発現ベクター上に本発明の発現カセットが構築される。

【0116】

好ましい一例において、本発明の核酸構築物はプラスミドベクターである。プラスミドベクターとしては、これらに限定されるものではないが、ｐＶＡＸ１などのプラスミドベクターが挙げられる。ここで、プラスミドベクターには、一般的に、細菌培養中にプラスミドベクターを選択的に保持することを目的として薬剤耐性遺伝子が配列内に組み込まれているが、生体内の細菌叢への当該遺伝子の伝播や哺乳類プロモーターを介した当該遺伝子の活性化並びに発現の危険性があることから、当該遺伝子配列を除去したプラスミドベクターがより好ましい。

【0117】

好ましい一例において、本発明の核酸構築物はウイルスベクターである。ウイルスベクターとしては、これらに限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、センダイウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどが挙げられる。

【0118】

好ましい一例において、本発明の核酸構築物はｍＲＮＡ構築物である。例えば、ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチド及び抗原をコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡを鋳型として、ＨｉＳｃｒｉｂｅ Ｔ７ ＡＲＣＡ ｍＲＮＡ Ｋｉｔ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、Ｔ７ ｍＳｃｒｉｐｔ^ＴＭ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｍＲＮＡ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＣＥＬＬＳＣＲＩＰＴ）、ＨｉｇｈＹｉｅｌｄ Ｔ７ ＡＲＣＡ ｍＲＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｊｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）等の市販のｉｎ ｖｉｔｒｏ転写用キットを利用することで、本発明の核酸構築物をｍＲＮＡとして得ることができる。

【0119】

後記実施例に示すように、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている核酸構築物は、抗原をコードするポリヌクレオチドのみを含む核酸構築物及びＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含むが、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドがプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介さずに連結されている核酸構築物と比較して、免疫原性が高く、抗原特異的なＴｈ１型の免疫応答を誘導又は増強し、抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導又は増強することができる。これは、細胞内に取り込まれた核酸構築物が翻訳又は転写及び翻訳されて抗原タンパク質として発現し、細胞内小胞に輸送されて抗原の一部が主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と結合し、細胞表面に輸送される抗原提示プロセスにおいて、本発明の核酸構築物では、抗原タンパク質がＳＮＡＲＥタンパク質と抗原の融合ポリペプチドとして発現することで、抗原タンパク質の細胞内小胞への標的化が図られ、さらにプロタンパク質転換酵素に認識され切断されることで小胞内に抗原タンパク質が遊離されて、抗原タンパク質とＭＨＣ分子との会合確率が上昇することにより、抗原提示の効率が向上したためと推測される。加えて、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、抗原を含有したエクソソームが抗原特異的なＴｈ１型の免疫応答を増強することが報告されている（Qazi KR, et al. Blood. 2009, 113(12): 2673-83.）。よって、抗原タンパク質がＳＮＡＲＥタンパク質と抗原の融合ポリペプチドとして発現することで、抗原タンパク質のエクソソームへの標的化が図られ、免疫原性が向上した可能性も考えられる。
また、後記実施例に示すように、本発明の核酸構築物は、アレルギーモデルにおいて、抗原をコードするポリヌクレオチドのみを含む核酸構築物比較して、アナフィラキシーに伴う体温低下を改善し、血中のアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体濃度を低下できる。この結果は、本発明の核酸構築物が優れたアレルギー抑制効果を有することを示している。さらに、従来のアレルゲン免疫療法では、体外から摂取されたアレルゲンが一部血中へと放出され、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体に捕捉されることによりアナフィラキシー等のＩ型アレルギーに分類される副反応が引き起こされることが知られているが、後記実施例に示すように、本発明の核酸構築物では、投与後の血中へのアレルゲン放出が抑制される。この結果は、本発明の核酸構築物がアナフィラキシーリスクを軽減できる可能性を示している。

【0120】

尚、免疫応答がＴｈ１型であるかＴｈ２型であるか、あるいは細胞性免疫応答であるか液性免疫応答であるかを判定するための指標となり得るＩＦＮγ、ＩＬ－４などのサイトカインの産生量は、従来公知の方法で測定することができる。そのような方法としては、例えば、ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）、ＥＬＩＳＰＯＴ（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ｓｐｏｔ）アッセイ、免疫組織染色、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＲＴ－ＰＣＲ、マイクロアレイ、フローサイトメトリーなどが挙げられる。後記実施例で用いているＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）など、サイトカイン産生測定のための試薬やキットは市販されており、これを用いて測定してもよい。
また、免疫応答がＴｈ１型であるかＴｈ２型であるか、あるいは細胞性免疫応答であるか液性免疫応答であるかを判定するための別の指標となり得るＩｇＧのサブクラス別の産生量は、従来公知の方法で測定することができる。そのような方法としては、ＥＬＩＳＡ、免疫比濁法などが挙げられる。
Ｔｈ１型免疫応答及び細胞性免疫応答は、サイトカインの産生量及び／又はＩｇＧサブクラスの産生量を指標として、評価することができる。例えば、ＩＦＮγの産生量又はＩＬ－４に対するＩＦＮγの産生量比率（ＩＦＮγ／ＩＬ－４）が増加すれば、Ｔｈ１型免疫応答及び細胞性免疫応答が誘導又は増強されたと評価でき、一方、ＩＦＮγの産生量又はＩＦＮγ／ＩＬ－４が低下すれば、Ｔｈ１型免疫応答及び細胞性免疫応答が減弱したと評価できる。あるいは、ＩｇＧ２ａの産生量及び／又はＩｇＧ１に対するＩｇＧ２ａの産生量比率（ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１）が増加すれば、Ｔｈ１型免疫応答及び細胞性免疫応答が誘導又は増強されたと評価でき、一方、ＩｇＧ２ａの産生量及び／又はＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１が低下すれば、Ｔｈ１型免疫応答及び細胞性免疫応答が減弱したと評価できる。

【0121】

したがって、本発明の核酸構築物は、抗原特異的なＩＦＮγ産生増強剤、ＩｇＧ２ａ産生増強剤、Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強剤、細胞性免疫応答誘導又は増強剤（以下、細胞性免疫応答誘導又は増強剤等と称する）となり得、該核酸構築物は、細胞性免疫応答誘導又は増強剤等を製造するために使用できる。
また、本発明の核酸構築物は、抗原特異的なＩＦＮγ産生を増強するため、ＩｇＧ２ａ産生を増強するため、Ｔｈ１型免疫応答を誘導又は増強するため、細胞性免疫応答を誘導又は増強するために使用できる。ここで、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物への投与、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。尚、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。

【0122】

本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等は、それ自体で、抗原特異的なＩＦＮγ産生増強のため、ＩｇＧ２ａ産生増強のため、Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強のため、細胞性免疫応答誘導又は増強のための医薬品、医薬部外品となり、また当該医薬品、医薬部外品に配合して使用される素材又は製剤となり得る。

【0123】

本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等を医薬品（医薬部外品を含む）として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられるが、好ましくは非経口投与であり、より好ましくは注射剤による非経口投与である。
このような種々の剤型の医薬製剤は、本発明の核酸構築物と他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤、増粘剤、乳化剤、滑沢剤、分散剤、被膜剤、界面活性剤、被膜剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、嬌味剤、矯臭剤、香料等を適宜組み合わせて調製することができる。

【0124】

上記医薬品（医薬部外品を含む）における本発明の核酸構築物の含有量は、対象とする抗原や投与される対象、投与経路によって変動するため、特に限定されず広範囲に適宜選択される。一例として、組成物全体の０．００００１～１００質量％の間で当該核酸構築物を含み得る。

【0125】

本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等の投与量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、投与量は、本発明の核酸構築物の量として、成人（体重６０ｋｇ）１人、１日あたり、１ｎｇ～１０ｍｇの間で決定される。核酸構築物がウイルスベクターの場合、投与量は、一例として成人（体重６０ｋｇ）１人、１日あたり、１０～１×１０^１５ウイルス粒子であり得る。

【0126】

本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等は、ヒト及び非ヒト動物のいずれに対しても投与することができる。非ヒト動物としては、非ヒト哺乳動物が挙げられ、非ヒト哺乳動物としては、例えば類人猿、その他霊長類、マウス、ラット、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ハムスター、及びコンパニオン動物等が挙げられる。好ましくは、本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等は、ヒトに投与される。より好ましくは、本発明の細胞性免疫応答誘導又は増強剤等は、がん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの患者、又はがん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの恐れのあるヒトに投与される。

【0127】

また、本発明の核酸構築物は、核酸ワクチンとなり得、該核酸構築物は、核酸ワクチンを製造するために使用できる。
さらに、本発明の核酸構築物は、抗原特異的なＴｈ１型免疫応答を誘導もしくは増強するため及び／又は抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導もしくは増強するために使用できる。ここで、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物への投与、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。

【0128】

本発明の核酸ワクチンは、それ自体で、抗原特異的なＴｈ１型免疫応答を誘導もしくは増強するため及び／又は抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導もしくは増強するための医薬品となり、また当該医薬品に配合して使用される素材又は製剤となり得る。

【0129】

一実施形態において、核酸ワクチンは、ＤＮＡワクチンである。ＤＮＡワクチンは、プラスミドベクターである本発明の核酸構築物を含む。プラスミドベクターとしては、特に限定されないが、例えば、ｐＶＡＸ１ベクターが挙げられる。なかでも、安全性の点から、薬剤耐性遺伝子を含まないプラスミドベクターが好ましい。

【0130】

別の一実施形態において、核酸ワクチンは、ｍＲＮＡワクチンである。ｍＲＮＡワクチンは、ｍＲＮＡである本発明の核酸構築物を含み、該核酸構築物は、ｍＲＮＡの安定化、翻訳効率向上或いは過剰な免疫応答を防ぐため、Ｃａｐ構造やｐｏｌｙＡを付加する処理を施したｍＲＮＡ、及び／又は一部の塩基が修飾（例えばウリジンがシュードウリジンや１メチルシュードウリジンに置換）されているｍＲＮＡであってもよい。また、本発明の核酸構築物を含み、ウイルス由来ＲＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＲｄＲＰ） ｃｏｍｐｌｅｘの配列及びその複製起点（５’ＣＳＥ、３’ＣＳＥ）を含むＳｅｌｆ－ａｍｐｌｙｆｉｎｇ ＲＮＡや、本発明の核酸構築物及びＲｄＲＰ ｃｏｍｐｌｅｘの複製起点を含むＲＮＡとＲｄＲＰ ｃｏｍｐｌｅｘの配列を含むｍＲＮＡを混合したＴｒａｎｓ－ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡワクチンは、好ましくはｍＲＮＡの安定化と送達のためのキャリアとして脂質を構成成分とするリポソーム又は脂質ナノ粒子、高分子ポリマーを構成成分とするＰＬＧＡナノ粒子等のポリマーナノ粒子などのドラッグデリバリーを担う構築物をさらに含み、より好ましくはｍＲＮＡが当該構築物に封入されている。

【0131】

さらに別の一実施形態において、核酸ワクチンは、ウイルスベクターワクチンである。ウイルスベクターワクチンは、ウイルスベクターである本発明の核酸構築物を含む。ウイルスベクターとしては、特に限定されないが、例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、センダイウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどが挙げられる。

【0132】

本発明の核酸ワクチンは、上記核酸構築物の他に、適宜、薬学的に許容され得る担体を含有し、所定の形態で製剤化され得る。
ここで、担体としては、ワクチンの製造に通常用いられる担体が挙げられ、具体的には、緩衝剤、乳化剤、保存剤（例えば、チメロサール）、等張化剤、ｐＨ調整剤、粘稠剤、アジュバント若しくは免疫刺激剤等が例示される。アジュバントとは、抗原と共に投与することで、当該抗原に対する免疫応答を増強させる物質であるが、本発明の核酸ワクチンは、自身がアジュバントとして機能し得ることから、アジュバントの添加は必ずしも必要とせず、アジュバントを含有しない組成物としてもよい。

【0133】

本発明の核酸ワクチンは、好ましくは液体形態で、意図する投与経路に適合するように適当に製剤される。投与経路としては経口投与と非経口投与があり、例えば、筋肉内、皮内、皮下、経皮、鼻腔内、舌下、経口、吸入等が挙げられるが、好ましくは筋肉内、皮内、又は皮下投与である。注射投与製剤としては、例えば、液剤、エマルジョン剤、水溶性又は疎水性の懸濁剤や、液体を添加して溶解あるいは懸濁させて使用する乾燥粉末の剤型が挙げられる。あるいは、本発明の核酸ワクチンは、本発明の核酸ワクチンを導入した樹状細胞として投与することもできる。斯かる投与は、具体的には、投与対象の生体より末梢血を採取して樹状細胞前駆細胞を分離し、適当なサイトカイン存在下で該前駆細胞より樹状細胞を分化誘導し、本発明の核酸ワクチンを導入して樹状細胞に抗原を提示させ、該樹状細胞を該投与対象に投与することにより行うことができる。投与される樹状細胞は、いわゆる樹状細胞ワクチンと称されるものである。樹状細胞ワクチンにより、抗原提示の効率を向上し、免疫誘導能を高めることが可能である。

【0134】

本発明の核酸ワクチンにおける本発明の核酸構築物の含有量は、対象とする抗原や投与される対象、投与経路によって変動するため、特に限定されず広範囲に適宜選択される。一例として、核酸ワクチン全体の０．００００１～１００質量％の間で当該核酸構築物を含み得る。

【0135】

本発明の核酸ワクチンの投与量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、投与量は、本発明の核酸構築物の量として、１投与単位あたり、１ｎｇ～１０ｍｇの間で決定される。核酸構築物がウイルスベクターの場合、投与量は、一例として１投与単位あたり、１０～１×１０^１５ウイルス粒子であり得る。

【0136】

本発明の核酸ワクチンは、ヒト及び非ヒト動物のいずれに対しても投与することができる。非ヒト動物としては、上記同様のものが挙げられる。好ましくは、本発明の核酸ワクチンは、ヒトに投与される。より好ましくは、本発明の核酸ワクチンは、がん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの患者、又はがん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの恐れのあるヒトに投与される。

【0137】

本発明の核酸ワクチンの投与回数は、用途に応じて適宜設定すればよく、少なくとも１回であるが、有効性の観点から、２回以上としてもよい。更なる投与を時に追加免疫といい、これにより、より効果の高い感染防御あるいは治療効果を奏することができる。追加免疫の間隔は、少なくとも１週間が推奨され、１～４週間の間隔が好ましい。

【0138】

核酸ワクチンは、細菌やウイルスそのものとは異なり病原性がなく、生ワクチンや不活化ワクチンと比べて安全性が高いと考えられる。また、抗原をコードする核酸を変更することにより多種多様な抗原に対応でき、核酸であることから低コストで迅速な製造が可能となる。

【0139】

好ましい一実施形態において、本発明の核酸ワクチンは、がんワクチンである。具体的には、該がんワクチンは、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原としてがん抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている核酸構築物を含む。該がんワクチンは、そのまま生体に投与するか、樹状細胞ワクチンとして投与すればよい。斯かるがんワクチンは、がん抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導又は増強し、抗腫瘍効果を発揮できると考えられる。

【0140】

別の好ましい一実施形態において、本発明の核酸ワクチンは、感染症ワクチンである。具体的には、該感染症ワクチンは、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原としてウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、又は原生動物抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物を含む。該感染症ワクチンは、そのまま生体に投与すればよい。斯かる感染症ワクチンは、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、又は原生動物抗原特異的な細胞性免疫応答を誘導又は増強することで、感染症に対する予防又は治療効果を発揮できると考えられる。特に、従来のワクチンでは十分な予防又は治療効果が得られないヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、結核などを原因とする慢性感染症の予防又は治療ワクチンとして期待される。

【0141】

別の好ましい一実施形態において、本発明の核酸ワクチンは、アレルギー予防又は治療用ワクチン、好ましくはアレルギー免疫療法用ワクチンである。具体的には、該アレルギー予防又は治療用ワクチンは、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原としてアレルゲンをコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物を含む。該アレルギー予防又は治療用ワクチンは、そのまま生体に投与すればよい。斯かるアレルギー予防又は治療用ワクチンは、アレルゲン特異的なＴｈ１型免疫応答並びに細胞性免疫応答を誘導又は増強することで、Ｔｈ２型免疫応答の過剰な活性化によって引き起こされるアレルギー応答に対する抑制効果を発揮できると考えられる。

【0142】

別の好ましい一実施形態において、本発明の核酸ワクチンは、自己免疫疾患治療用ワクチンである。具体的には、該自己免疫疾患治療用ワクチンは、本発明のＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原として自己抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物を含む。該自己免疫疾患治療用ワクチンは、そのまま生体に投与すればよい。斯かる自己免疫疾患治療用ワクチンは、コードされた自己抗原に対する免疫寛容を誘導することにより、自己免疫反応に対する抑制効果を発揮できると考えられる。

【0143】

本発明の例示的実施形態として、以下の物質、製造方法、用途、方法等をさらに本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。

【0144】

〔１〕ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドとプロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドと抗原をコードするポリヌクレオチドとを含み、該ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと該抗原をコードするポリヌクレオチドが該プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、核酸構築物。
〔２〕前記ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドの下流に前記抗原をコードするポリヌクレオチドが前記プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、〔１〕記載の核酸構築物。
〔３〕前記ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドと前記抗原をコードするポリヌクレオチドが前記プロタンパク質転換酵素認識配列をコードするポリヌクレオチド及びリンカーをコードするポリヌクレオチドを介して連結されている、〔１〕又は〔２〕記載の核酸構築物。
〔４〕前記該プロタンパク質転換酵素認識配列が、Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇからなるアミノ酸配列（Ｘは任意のアミノ酸残基を示す）であり、好ましくはＸ－Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇからなるアミノ酸配列（Ｘは任意のアミノ酸残基を示す）であり、より好ましくは配列番号２２で示されるアミノ酸配列である、〔１〕～〔３〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔５〕プラスミドベクター、ｍＲＮＡ、又はウイルスベクターである、〔１〕～〔４〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔６〕前記抗原が、がん抗原、自己抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原及びアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種であり、好ましくはがん抗原、自己抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、及びアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種であり、より好ましくはがん抗原、自己抗原、細菌抗原、真菌抗原、及び原生動物抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１〕～〔５〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔７〕前記ＳＮＡＲＥタンパク質が、好ましくは哺乳動物のＳＮＡＲＥタンパク質であり、より好ましくはヒトＳＮＡＲＥタンパク質である、〔１〕～〔６〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔８〕前記ＳＮＡＲＥタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、好ましくは配列番号１～９及び７１～８２のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド及びこれらと同等の機能を有するポリヌクレオチドからなる群より選択されるいずれかのポリヌクレオチドであり、より好ましくは配列番号１～９及び７１～８２のいずれかのヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドである、〔１〕～〔７〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔９〕前記ＳＮＡＲＥタンパク質が、好ましくはＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、ＳＥＣ２２Ｂ、ＳＴＸ６、ＶＡＭＰ３、ＶＡＭＰ４、ＶＴＩ１Ｂ、ＢＥＴ１、ＢＥＴ１Ｌ、及びＵＳＥ１からなる群より選択されるいずれかであり、より好ましくはＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、及びＳＥＣ２２Ｂからなる群より選択されるいずれかであり、さらに好ましくはＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかであり、さらに好ましくはＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかであり、さらに好ましくはＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、及びＧＯＳＲ１からなる群より選択されるいずれかであり、さらに好ましくはＶＡＭＰ７である、〔１〕～〔８〕のいずれか１項記載の核酸構築物。

【0145】

〔１０〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を含む医薬組成物。
〔１１〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする核酸ワクチン。
〔１２〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答を誘導又は増強するものである、〔１１〕記載の核酸ワクチン。
〔１３〕抗原特異的細胞性免疫応答を誘導又は増強するものである、〔１１〕記載の核酸ワクチン。
〔１４〕がんワクチンであり、前記抗原ががん抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１１〕～〔１３〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。
〔１５〕感染症ワクチンであり、前記抗原がウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原及び原生動物抗原からなる群より選択される少なくとも１種の感染症抗原である、〔１１〕～〔１３〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。
〔１６〕アレルギー予防又は治療用ワクチンであり、前記抗原がアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種である、〔１１〕～〔１３〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。
〔１７〕自己免疫疾患治療用ワクチンであり、前記抗原が自己抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１１〕～〔１３〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。
〔１８〕前記核酸ワクチンが、前記核酸構築物を、好ましくは０．００００１～１００質量％含有する、〔１１〕～〔１７〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。

【0146】

〔１９〕核酸ワクチンを製造するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔２０〕前記核酸ワクチンががんワクチンであり、前記抗原ががん抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１９〕記載の使用。
〔２１〕前記核酸ワクチンが感染症ワクチンであり、前記抗原がウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原及び原生動物抗原からなる群より選択される少なくとも１種の感染症抗原である、〔１９〕記載の使用。
〔２２〕前記核酸ワクチンがアレルギー予防又は治療用ワクチンであり、前記抗原がアレルゲンからなる群より選択される少なくとも１種である、〔１９〕記載の使用。
〔２３〕前記核酸ワクチンが自己免疫疾患治療用ワクチンであり、前記抗原が自己抗原からなる群より選択される少なくとも１種である、〔１９〕記載の使用。
〔２４〕前記核酸ワクチンが、前記核酸構築物を、好ましくは０．００００１～１００質量％含有する、〔１９〕～〔２３〕のいずれか１項記載の使用。

【0147】

〔２５〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強のための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔２６〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強に使用するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔２７〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強方法。

【0148】

〔２８〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強のための、〔１１〕～〔１８〕のいずれか１項記載の核酸ワクチンの使用。
〔２９〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強に使用するための、〔１１〕～〔１８〕のいずれか１項記載の核酸ワクチン。
〔３０〕〔１１〕～〔１８〕のいずれか１項記載の核酸ワクチンを、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答の誘導もしくは増強及び／又は抗原特異的細胞性免疫応答の誘導もしくは増強方法。
〔３１〕〔１４〕記載の核酸ワクチンを、それを必要とする対象に有効量で投与する、がんの治療方法。
〔３２〕〔１５〕記載の核酸ワクチンを、それを必要とする対象に有効量で投与する、感染症の予防又は治療方法。
〔３３〕〔１６〕記載の核酸ワクチンを、それを必要とする対象に有効量で投与する、アレルギーの予防又は治療方法。
〔３４〕〔１７〕記載の核酸ワクチンを、それを必要とする対象に有効量で投与する、自己免疫疾患治療方法。
〔３５〕前記核酸ワクチンの投与量が、該核酸ワクチンがＤＮＡワクチン又はｍＲＮＡワクチンの場合に、１投与単位あたり、前記核酸構築物の量として、好ましくは１ｎｇ～１０ｍｇであり、該核酸ワクチンがウイルスベクターワクチンの場合に、１投与単位あたり、好ましくは１０～１×１０^１５ウイルス粒子である、〔３０〕～〔３４〕のいずれか１項記載の方法。

【0149】

〔３６〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的ＩＦＮγ産生増強剤。
〔３７〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増強剤。
〔３８〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強剤。
〔３９〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を有効成分とする抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強剤。
〔４０〕前記剤が、前記核酸構築物を、好ましくは０．００００１～１００質量％含有する、〔３６〕～〔３９〕のいずれか１項記載の剤。

【0150】

〔４１〕抗原特異的ＩＦＮγ産生増強剤を製造するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４２〕抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増強剤を製造するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４３〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強剤を製造するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４４〕抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強剤を製造するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４５〕前記剤が、前記核酸構築物を、好ましくは０．００００１～１００質量％含有する、〔４１〕～〔４４〕のいずれか１項記載の使用。

【0151】

〔４６〕抗原特異的ＩＦＮγ産生増強のための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４７〕抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増強のための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４８〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強のための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。
〔４９〕抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強のための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物の使用。

【0152】

〔５０〕抗原特異的ＩＦＮγ産生増強に使用するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔５１〕抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増強に使用するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔５２〕抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強に使用するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物。
〔５３〕抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強に使用するための、〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物。

【0153】

〔５４〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的ＩＦＮγ産生増強方法。
〔５５〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的ＩｇＧ２ａ産生増強方法。
〔５６〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答誘導又は増強方法。
〔５７〕〔１〕～〔９〕のいずれか１項記載の核酸構築物を、それを必要とする対象に有効量で投与する、抗原特異的細胞性免疫応答誘導又は増強方法。
〔５８〕前記核酸構築物の投与量が、１日あたり、好ましくは１ｎｇ～１０ｍｇ／６０ｋｇ体重であり、該核酸構築物がウイルスベクターの場合に、１日あたり、好ましくは１０～１×１０^１５ウイルス粒子／６０ｋｇ体重である、〔５４〕～〔５７〕のいずれか１項記載の方法。

【0154】

〔５９〕〔１１〕～〔２４〕及び〔２８〕～〔３５〕において、核酸ワクチンは経口又は非経口、好ましくは非経口により投与されるものである。
〔６０〕〔２７〕、〔３０〕、〔３５〕及び〔５４〕～〔５８〕において、対象はがん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの患者、又はがん、自己免疫疾患、もしくはアレルギーの恐れのあるヒトである。
〔６１〕〔３１〕において、対象はがん患者又はがんの恐れのあるヒトである。
〔６２〕〔３３〕において、対象はアレルギー患者又はアレルギーの恐れのあるヒトである。
〔６３〕〔３４〕において、対象は自己免疫疾患患者又は自己免疫疾患の恐れのあるヒトである。

【実施例】

【0155】

以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

【0156】

参考例１ ＳＮＡＲＥタンパク質の検討
２１種類の各ヒトＳＮＡＲＥタンパク質のＣ末端側にアレルゲンであるオボアルブミン（ＯＶＡ、アミノ酸配列：配列番号２４）をリンカー（ヌクレオチド配列：配列番号１９、アミノ酸配列：配列番号２０）で連結した融合ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２５～４５）又はＯＶＡのみのアミノ酸配列をコードしたｍＲＮＡを作製した。この時、抗原又は融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列はコドン最適化を施したうえでプラスミドＤＮＡ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へ組み込んだ。プラスミドＤＮＡに組み込んだＯＶＡのヌクレオチド配列を配列番号９５に、融合ポリペプチドのヌクレオチド配列を配列番号４８～６８に示す。また、ＯＶＡのコドン最適化前のヌクレオチド配列を配列番号２３に示す。ｍＲＮＡの作製にはＨｉＳｃｒｉｂｅ Ｔ７ ＡＲＣＡ ｍＲＮＡ Ｋｉｔ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いた。具体的には、各配列を組み込んだプラスミドＤＮＡについて制限酵素を用いて線形化した後、当該ＤＮＡを鋳型としてＴ７ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅによるｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍＲＮＡ合成並びにＡＲＣＡによる５’末端のＣａｐ化を行った。続いて、ＤＮａｓｅを添加することで鋳型として用いたＤＮＡを分解した後、Ｐｏｌｙ（Ａ）ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅによるポリＡ鎖の付加を行った。得られたｍＲＮＡをＲＮｅａｓｙ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて精製し、以降の操作に用いた。精製したｍＲＮＡをＴｒａｎｓＩＴ－ｍＲＮＡ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ）を用いて添付のプロトコルに従い、成熟したヒトＣＤ１４^＋樹状細胞（Ｌｏｎｚａ）にトランスフェクションした。コントロールとして、ｍＲＮＡを含まないトランスフェクション試薬のみを樹状細胞に添加した。トランスフェクションの翌日から、同ドナー由来のヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｌｏｎｚａ）１．０×１０^６ｃｅｌｌｓとトランスフェクションした樹状細胞２．５×１０^５ｃｅｌｌｓについて共培養を計７日間行い、ｍＲＮＡ由来ＯＶＡの抗原提示を行った。その後、ＥＬＩＳＰＯＴプレート上で共培養したＣＤ４^＋Ｔ細胞１．０×１０^６ｃｅｌｌｓを同ドナー由来のヒトＣＤ１４^＋樹状細胞１．０×１０^５ｃｅｌｌｓと再度共培養すると共に、２００μｇ／ｍＬのＯＶＡタンパク質を添加して抗原刺激を行った。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、ＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞を検出した。

【0157】

結果を図１に示す。特定のＳＮＡＲＥタンパク質（ＶＡＭＰ７、ＧＯＳＲ２、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＢＮＩＰ１、ＳＴＸ７、ＶＴＩ１Ａ、ＳＴＸ１６、ＳＴＸ５、ＧＯＳＲ１、ＳＴＸ８、ＳＴＸ１２、ＶＡＭＰ８、又はＳＥＣ２２Ｂ）とＯＶＡの融合タンパク質を樹状細胞で発現させることで、ＯＶＡ特異的にＩＦＮγを産生するＣＤ４^＋Ｔ細胞の数が有意に上昇した。一般的に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は抗原提示を受けるとＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔｒｅｇ等様々な細胞種に分化し特定のサイトカインを放出するが、ＩＦＮγはＴｈ１細胞で特徴的に分泌されるサイトカインである。以上の点から、本発明に係る特定のＳＮＡＲＥ－ＯＶＡ融合タンパク質を樹状細胞等の抗原提示細胞に導入することにより、Ｔｈ１免疫応答を誘導又は増強できることが示された。本実験は、各群ｎ＝３で行い、ＯＶＡタンパク質による再刺激を行ったコントロール群（Ｅｍｐｔｙ）を対照として、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された群を有意差があると判断した。また、Ｅｍｐｔｙを対照として、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．１と判定された群も有意差があると判断した。なお、Ｅｍｐｔｙ（Ｎ．Ｔ．）群はＯＶＡタンパク質による再刺激を行わなかったコントロール群（Ｅｍｐｔｙ）である。

【0158】

参考例２ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ抗体価
参考例１でＩＦＮγの産生を増加させたＳＮＡＲＥタンパク質からＶＡＭＰ７を選択し、ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を作製した。コントロールとしては、抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１、ネッパジーン株式会社）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、３５日目に安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、抗体価測定を行った。抗体価測定では、１０μｇ／ｍＬのＯＶＡ（Ｍｅｒｃｋ）を溶解したＤＰＢＳ溶液を９６ ｗｅｌｌ ＥＬＩＳＡ ｐｌａｔｅ（ＩＷＡＫＩ）に対し１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、ＯＶＡの固相化を行った。翌日、ｐｌａｔｅを洗浄した後、１００μＬ／ｗｅｌｌの１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳでブロッキングを１時間行った。続いて、ｐｌａｔｅを洗浄した後、分離した血清を段階的に２倍希釈しながら１００μＬ／ｗｅｌｌ添加した。２時間後、血清を洗浄して除き、１μｇ／ｍＬのａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ２ａ抗体（ａｂｃａｍ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し１時間静置した。その後、ＴＭＢ溶液（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し発色反応を行った。１０分後、Ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（４５０ｎｍ）を行った。この時、血清の代わりにＤＰＢＳを添加したコントロールの吸光度と比較して、２倍以上の吸光度値が測定された最大希釈倍率の値を各サンプルの抗体価と定義した。

【0159】

結果を図２に示す。ＯＶＡ単独と比較して、ＶＡＭＰ７－ＯＶＡ（Ｖ７－ＯＶＡ）では、ＯＶＡ特異的なＩｇＧ１抗体価の有意な低下が認められた。一方で、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａについては、コントロール群（Ｅｍｐｔｙ）と比較してＶＡＭＰ７－ＯＶＡのみで有意な抗体価の上昇が認められた。ＯＶＡ特異的なＩｇＧ全体の抗体価については、ＯＶＡ単独とＶＡＭＰ７－ＯＶＡとの間で有意な差はなかった。一般的には、Ｔｈ１型免疫応答によってＢ細胞からＩｇＧ２ａ抗体が産生される一方、Ｔｈ２型免疫応答ではＢ細胞からＩｇＧ１抗体が産生されることが知られている。そのため、抗原特異的なＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ抗体の抗体価を測定することで、生体内で引き起こされている免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２バランスを推定することができる。本結果では、ＯＶＡ単独と比較してＶＡＭＰ７－ＯＶＡではＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体価は低下し、ＩｇＧ２ａ抗体価は上昇していることから、ＶＡＭＰ７－ＯＶＡがｉｎ ｖｉｖｏにおいてもＴｈ１型免疫応答を誘導又は増強できることが示された。本実験は、各群ｎ＝１０で行い、各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0160】

参考例３ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列、又はＯＶＡのアミノ配列のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を作製した。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、３５日目に安楽死させ脾臓を採取した。採取した脾臓を、２％ＦＢＳ含有ＤＰＢＳを添加しながら４０μｍセルストレーナー上ですりつぶした。得られた懸濁液について２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ^ＴＭ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し３分間静置することで懸濁液に含まれる赤血球を溶血した。再度、２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、ＤＰＢＳで２回洗浄を行い、ＣＴＬ－Ｔｅｓｔ^ＴＭ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を添加することで脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）懸濁液を得た。１．０×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍＬのｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅをＥＬＩＳＰＯＴプレート上に１００μＬ／ｗｅｌｌ播種し、ＯＶＡタンパク質（Ｍｅｒｃｋ）を添加したＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ １００μＬと混合することで終濃度５０μｇ／ｍＬで抗原刺激を行った。ネガティブコントロールとしてはＯＶＡタンパク質を添加していない群（Ｎ．Ｔ）を用意した。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、抗原（ＯＶＡ）特異的にＩＦＮγ、ＩＬ－４を産生する細胞を検出した。脾臓は２次リンパ組織であり、その構成細胞であるＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅはＴ細胞を豊富に含有することから、抗原特異的な免疫応答を示すＴ細胞を検出するため本実験ではＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅを用いた。

【0161】

結果を図３に示す。ＶＡＭＰ７－ＯＶＡ（Ｖ７－ＯＶＡ）を用いた場合、ＯＶＡ単独と比較して、ＯＶＡ特異的にＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数は変わらない一方で、ＯＶＡ特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数は有意に増大した。一般的に、ＩＬ－４はＴｈ２細胞によって分泌され、ＩＦＮγはＴｈ１細胞、または細胞性免疫に関与する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）によって分泌されることが知られているため、本結果はＶＡＭＰ７を抗原と融合することで、抗原特異的なＴｈ２型免疫応答は引き起こさず、選択的に抗原特異的なＴｈ１型免疫応答並びに細胞性免疫を誘導又は増強できることを示している。本実験は、各群ｎ＝１０で行い、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）、またはＯＶＡ刺激条件下（ＯＶＡ）における各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0162】

参考例４ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ抗体価
ＶＡＭＰ７、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、若しくはＧＯＳＲ１のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５、２７、２８、４１）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を作製した。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、３５日目に安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、抗体価測定を行った。抗体価測定では、１０μｇ／ｍＬのＯＶＡ（Ｍｅｒｃｋ）を溶解したＤＰＢＳ溶液を９６ ｗｅｌｌ ＥＬＩＳＡ ｐｌａｔｅ（ＩＷＡＫＩ）に対し１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、ＯＶＡの固相化を行った。翌日、ｐｌａｔｅを洗浄した後、１００μＬ／ｗｅｌｌの１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳで１時間ブロッキングを行った。続いて、ｐｌａｔｅを洗浄した後、分離した血清を段階的に２倍希釈しながら１００μＬ／ｗｅｌｌ添加した。２時間後、血清を洗浄して除き、１μｇ／ｍＬのａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ２ａ抗体（ａｂｃａｍ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し１時間静置した。その後、ＴＭＢ溶液（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し発色反応を行った。１０分後、Ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（４５０ｎｍ）を行った。この時、血清の代わりにＤＰＢＳを添加したコントロールの吸光度と比較して、２倍以上の吸光度値が測定された最大希釈倍率の値を各サンプルの抗体価と定義した。

【0163】

結果を図４に示す。ベクターの投与から５週目において、Ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを投与した群と比較して、ＯＶＡ単独及び各ＳＮＡＲＥ配列をＯＶＡと連結した群全てにおいてＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の有意な上昇が認められた。中でも、ＯＶＡ単独と比較してＶＡＭＰ７－ＯＶＡ（Ｖ７－ＯＶＡ）及びＧＯＳＲ１－ＯＶＡはＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価に変化は認められなかった一方で、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ及びＳＴＸ１８－ＯＶＡはＯＶＡ単独と比較しＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の有意な低下が認められた。ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体価については、ＯＶＡ単独と比較して各ＳＮＡＲＥ配列をＯＶＡと連結した群全てにおいて有意な低下が認められた。また、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａ抗体価については、Ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを投与した群と比較してＶ７－ＯＶＡのみ有意な上昇が認められた。前記のＯＶＡ特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価の各個体における比率を算出したＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１については、有意差は認められなかったもののＯＶＡ単独と比較して各ＳＮＡＲＥ配列をＯＶＡと連結した群全てにおいて上昇していた。ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１のグラフにおいて各群のドットプロット上部に平均値を示している。本結果は、ＶＡＭＰ７以外のＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＧＯＳＲ１といったＳＮＡＲＥ ｆａｍｉｌｙにおいても、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体価が低下し、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１の比率が上昇していることから、これらのＳＮＡＲＥ配列を抗原と連結した場合、ｉｎ ｖｉｖｏにおいても抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答を誘導又は増強できることを示している。本実験は、各群ｎ＝５で行い、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。Ｅｍｐｔｙ群との比較の場合は＊、ＯＶＡ群との比較の場合は†で有意差を表示している。

【0164】

参考例５ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＶＡＭＰ７、ＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、若しくはＧＯＳＲ１のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ、ＳＴＸ１０－ＯＶＡ、ＳＴＸ１８－ＯＶＡ、ＧＯＳＲ１－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５、２７、２８、４１）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を作製した。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、３５日目に安楽死させ脾臓を採取した。採取した脾臓を、２％ＦＢＳ含有ＤＰＢＳを添加しながら４０μｍセルストレーナー上ですりつぶした。得られた懸濁液について２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し３分間静置することで懸濁液に含まれる赤血球を溶血した。再度、２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、ＤＰＢＳで２回洗浄を行い、ＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ）を添加することで脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）懸濁液を得た。１．０×１０^７ｃｅｌｌｓのｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅをＥＬＩＳＰＯＴプレート上に１００μＬ／ｗｅｌｌ播種し、ＯＶＡタンパク質（Ｍｅｒｃｋ）を添加したＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ １００μＬと混合することで終濃度５０μｇ／ｍＬで抗原刺激を行った。ネガティブコントロールとしてはＯＶＡタンパク質を添加していない群（Ｎ．Ｔ）を用意した。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、抗原（ＯＶＡ）特異的にＩＦＮγ、ＩＬ－４を産生する細胞を検出した。脾臓は２次リンパ組織であり、その構成細胞であるＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅはＴ細胞を豊富に含有することから、抗原特異的な免疫応答を示すＴ細胞を検出するため本実験ではＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅを用いた。

【0165】

結果を図５に示す。ＯＶＡ単独と比較して、各ＳＮＡＲＥ配列をＯＶＡと連結した群全てにおいてＯＶＡ特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数が有意に増大した。一方でＯＶＡ特異的なＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数については、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）及びＯＶＡ刺激条件下（ＯＶＡ）の各条件下において有意な群間差が認められたものの、Ｎ．Ｔ及びＯＶＡの各条件下で各個体における比率を算出したＩＬ－４ ｒａｔｉｏにおいては全ての群で変化が認められなかった。本結果は、ＶＡＭＰ７以外のＳＴＸ１０、ＳＴＸ１８、ＧＯＳＲ１といったＳＮＡＲＥ ｆａｍｉｌｙにおいても抗原と連結することにより、抗原特異的Ｔｈ２型免疫応答は引き起こさず、選択的に抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答並びに細胞性免疫を誘導又は増強できることを示している。本実験は、各群ｎ＝５で行い、無刺激条件下、またはＯＶＡ刺激条件下における各群でＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。Ｅｍｐｔｙ群との比較の場合は＊、ＯＶＡ群との比較の場合は†で有意差を表示している。

【0166】

実施例１ 経時的抗体価
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５）、該融合ポリペプチド中のリンカーのＣ末端側にプロタンパク質転換酵素認識配列（ヌクレオチド配列：配列番号２１、アミノ酸配列：配列番号２２）を付加した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号４６）、リソソーム結合タンパク質ＬＡＭＰ（特許文献１）内にＯＶＡのアミノ酸配列を挿入した融合ポリペプチド（ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］）のアミノ酸配列（配列番号４７）又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。プラスミドＤＮＡに組み込んだＶ７－ｐｃ－ＯＶＡのヌクレオチド配列を配列番号６９に、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］のヌクレオチド配列を配列番号７０に示す。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った。実験期間中、１週間毎に尾静脈から採血を行い、３５日目に安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、抗体価測定を行った。抗体価測定では、１０μｇ／ｍＬのＯＶＡ（Ｍｅｒｃｋ）を溶解したＤＰＢＳ溶液を９６ ｗｅｌｌ ＥＬＩＳＡ ｐｌａｔｅ（ＩＷＡＫＩ）に対し１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、ＯＶＡの固相化を行った。翌日、ｐｌａｔｅを洗浄した後、１００μＬ／ｗｅｌｌの１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳでブロッキングを１時間行った。続いて、ｐｌａｔｅを洗浄した後、分離した血清を段階的に２倍希釈しながら１００μＬ／ｗｅｌｌ添加した。２時間後、血清を洗浄して除き、１μｇ／ｍＬのａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ２ａ抗体（ａｂｃａｍ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し１時間静置した。その後、ＴＭＢ溶液（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し発色反応を行った。１０分後、Ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（４５０ｎｍ）を行った。この時、血清の代わりにＤＰＢＳを添加したコントロールの吸光度と比較して、２倍以上の吸光度値が測定された最大希釈倍率の値を各サンプルの抗体価と定義した。

【0167】

結果を図６に示す。実施例２と同様にＯＶＡ単独と比較して、ＶＡＭＰ７－ＯＶＡ（Ｖ７－ＯＶＡ）及びＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡ（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）では、ＯＶＡ特異的なＩｇＧ１抗体価の有意な低下が認められた。一方で、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａ抗体価については、ＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡでより抗体価の上昇が認められた。ＯＶＡ特異的なＩｇＧ全体については、３週目、４週目においてＯＶＡ単独でより抗体価が上昇する傾向があったものの、５週目時点では特にＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡでＯＶＡ単独と比較して遜色ない抗体価の上昇が認められた。また、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］ではＯＶＡ特異的な抗体価の上昇がほとんど認められなかった。５週目のＯＶＡ特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価の各個体における比率を算出したＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１については、有意差は認められなかったもののＯＶＡ単独やＬＡＭＰ［ＯＶＡ］と比較してＶＡＭＰ７－ＯＶＡやＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡにおいて上昇していた。本結果は、プロタンパク質転換酵素認識配列を導入することによってＩｇＧ２ａ抗体の産生が更に促進され、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答が誘導又は増強されていることを示している。また、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］と比較しても、ＶＡＭＰ７－ＯＶＡやＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡにおける抗原特異的ＩｇＧ抗体産生が優れ、かつ抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答が増強されることを示している。本実験は、各群ｎ＝５で行い、各週において各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。Ｅｍｐｔｙ群との比較の場合は＊、ＯＶＡ群との比較の場合は†で有意差を表示している。

【0168】

実施例２ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５）、該融合ポリペプチド中のリンカーのＣ末端側にプロタンパク質転換酵素認識配列を付加した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号４６）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、３５日目に安楽死させ脾臓を採取した。採取した脾臓を、２％ＦＢＳ含有ＤＰＢＳを添加しながら４０μｍセルストレーナー上ですりつぶした。得られた懸濁液について２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し３分間静置することで懸濁液に含まれる赤血球を溶血した。再度、２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、ＤＰＢＳで２回洗浄を行い、ＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を添加することで脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）懸濁液を得た。１．０×１０^７ｃｅｌｌｓのｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅをＥＬＩＳＰＯＴプレート上に１００μＬ／ｗｅｌｌ播種し、ＯＶＡタンパク質（Ｍｅｒｃｋ）を添加したＣＴＬ－Ｔｅｓ Ｍｅｄｉｕｍ １００μＬと混合することで終濃度５０μｇ／ｍＬで抗原刺激を行った。ネガティブコントロールとしてはＯＶＡタンパク質を添加していない群（Ｎ．Ｔ）を用意した。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、抗原（ＯＶＡ）特異的にＩＦＮγ、ＩＬ－４を産生する細胞を検出した。脾臓は２次リンパ組織であり、その構成細胞であるＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅはＴ細胞を豊富に含有することから、抗原特異的な免疫応答を示すＴ細胞を検出するため本実験ではＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅを用いた。

【0169】

結果を図７に示す。プロタンパク質転換酵素認識配列を導入することによって、ＯＶＡ特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数が更に増大した。一方でＯＶＡ特異的なＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数については、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）及びＯＶＡ刺激条件下（ＯＶＡ）の各条件下において有意な群間差が認められたものの、Ｎ．Ｔ及びＯＶＡの各条件の各個体における比率を算出したＩＬ－４ ｒａｔｉｏにおいては全ての群で変化が認められなかった。本結果は、プロタンパク質転換酵素認識配列の導入が抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答や細胞性免疫を更に増強できることを示唆している。プロタンパク質転換酵素はプロテアーゼの一種であり、細胞内の前駆型・未成熟型タンパク質を切断して、成熟型・活性型に変換する役割を担っている。プロタンパク質転換酵素はゴルジ体やエンドソームに局在するため、生体内で細胞内小胞に輸送されたＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡ融合タンパク質を切断することで、小胞内にＯＶＡを遊離させより効率的にＭＨＣ分子との会合を誘導したと考えられる。加えて、遊離したＯＶＡがエクソソーム内に封入されて分泌されることで免疫応答の増強が誘導された可能性も考えられる。本実験は、各群ｎ＝５で行い、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）、またはＯＶＡ刺激条件下における各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0170】

実施例３ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ抗体価
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にプロタンパク質転換酵素認識配列とがん抗原であるヒトＷｉｌｍ Ｔｕｍｏｒ １（ＷＴ１、アミノ酸配列：配列番号９８）若しくは自己抗原であるマウスｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎペプチドの繰り返し配列（ＭＯＧ^{３５－５５}、アミノ酸配列：配列番号１０１）をリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}）のアミノ酸配列（配列番号１０３、１０５）、又はＷＴ１若しくはＭＯＧ^{３５－５５}のアミノ酸配列のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。この時、抗原又は融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列はコドン最適化を施したうえでプラスミドＤＮＡ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へ組み込んだ。プラスミドＤＮＡに組み込んだＷＴ１のヌクレオチド配列を配列番号９７に、ＭＯＧ^{３５－５５}のヌクレオチド配列を配列番号１００に、Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１のヌクレオチド配列を配列番号１０２に、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}のヌクレオチド配列を配列番号１０４に示す。また、ＷＴ１のコドン最適化前のヌクレオチド配列を配列番号９６に、ＭＯＧ^{３５－５５}のコドン最適化前のヌクレオチド配列を配列番号９９に示す。ここで、ＭＯＧ^{３５－５５}とは、マウスＭＯＧの３５～５５残基部分を７回繰り返したペプチドである。コントロールとしては、抗原（ＷＴ１又はＭＯＧ^{３５－５５}）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、２８日目に安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、抗体価測定を行った。抗体価測定では、１μｇ／ｍＬのヒトＷＴ１（Ｃｕｓａｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＬＬＣ）又は１０μｇ／ｍＬのマウスＭＯＧ^{３５－５５} ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｍｅｒｃｋ）を溶解したＤＰＢＳ溶液を９６ ｗｅｌｌ ＥＬＩＳＡ ｐｌａｔｅ（Ｉｗａｋｉ）に対し１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、各抗原の固相化を行った。翌日、ｐｌａｔｅを洗浄した後、１００μＬ／ｗｅｌｌの１％ＢＳＡ含有ＤＰＢＳでブロッキングを１時間行った。続いて、ｐｌａｔｅを洗浄した後、分離した血清を段階的に２倍希釈しながら１００μＬ／ｗｅｌｌ添加した。２時間後、血清を洗浄して除き、１μｇ／ｍＬのａｎｔｉ－Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ２ａ抗体（ａｂｃａｍ）を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し１時間静置した。その後、ＴＭＢ溶液（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し発色反応を行った。１０分後、Ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｂｃａｍ）を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（４５０ｎｍ）を行った。この時、血清の代わりにＤＰＢＳを添加したコントロールの吸光度と比較して、２倍以上の吸光度値が測定された最大希釈倍率の値を各サンプルの抗体価と定義した。

【0171】

結果を図８に示す。ベクターの投与から４週目において、Ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを投与した群と比較して、有意差は認められないもののＷＴ１単独及びＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＷＴ１（Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１）の両群においてＷＴ１特異的ＩｇＧ抗体価の上昇が認められた。一方でＷＴ１特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価については、有意差は認められないもののＥｍｐｔｙ及びＷＴ１単独と比較してＶ７－ｐｃ－ＷＴ１では上昇が認められた。前記のＷＴ１特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価の各個体における比率を算出したＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１については、ＷＴ１単独とＶ７－ｐｃ－ＷＴ１の間に変化は認められなかった。また、ＭＯＧ特異的ＩｇＧ抗体価を測定した実験では、Ｅｍｐｔｙと比較して、ＭＯＧ^{３５－５５}単独及びＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}（Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}）の両群で変化は認められなかった。一方でＭＯＧ特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価については、Ｅｍｐｔｙ及びＭＯＧ^{３５－５５}単独と比較してＶ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}では上昇が認められ、ＩｇＧ１抗体価のみ有意な変化だった。前記のＭＯＧ^{３５－５５}特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価の各個体における比率を算出したＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１については、ＭＯＧ^{３５－５５}単独とＶ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}の間に有意な変化は認められなかった。本実験は、各群ｎ＝５で行い、Ｔｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0172】

実施例４ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にプロタンパク質転換酵素認識配列とヒトＷＴ１若しくはマウスＭＯＧ^{３５－５５}をリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}）のアミノ酸配列（配列番号１０３、１０５）、又はＷＴ１若しくはＭＯＧ^{３５－５５}のアミノ酸配列（配列番号９８、１０１）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ（ｐＶＡＸ１ ｖｅｃｔｏｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を作製した。コントロールとしては、抗原（ＷＴ１又はＭＯＧ^{３５－５５}）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置を実験開始から０、７、１４日目に行った後、２８日目に安楽死させ脾臓を採取した。採取した脾臓を、２％ＦＢＳ含有ＤＰＢＳを添加しながら４０μｍセルストレーナー上ですりつぶした。得られた懸濁液について２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し３分間静置することで懸濁液に含まれる赤血球を溶血した。再度、２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、ＤＰＢＳで２回洗浄を行い、ＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を添加することで脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）懸濁液を得た。１．０×１０^７ｃｅｌｌｓのｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅをＥＬＩＳＰＯＴプレート上に１００μＬ／ｗｅｌｌ播種し、ヒトＷＴ１ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｘ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、又はマウスＭＯＧ^{３５－５５} ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｍｅｒｃｋ）を添加したＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ １００μＬと混合することで各終濃度が１．２ｎｍｏｌ／ｍＬ、又は５μｇ／ｍＬで抗原刺激を行った。ネガティブコントロールとしては抗原を添加していない群（Ｎ．Ｔ）を用意した。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、抗原（ＷＴ１又はＭＯＧ^{３５－５５}）特異的にＩＦＮγ、ＩＬ－４を産生する細胞を検出した。脾臓は２次リンパ組織であり、その構成細胞であるＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅはＴ細胞を豊富に含有することから、抗原特異的な免疫応答を示すＴ細胞を検出するため本実験ではＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅを用いた。

【0173】

結果を図９に示す。ＷＴ１単独と比較して、Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１ではＷＴ１特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数が有意に増大した。同様に、ＭＯＧ^{３５－５５}単独と比較して、Ｖ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}ではＭＯＧ^{３５－５５}特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数が有意に増大した。一方で、ＷＴ１特異的なＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数については、ＷＴ１ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｘ刺激条件下（ＷＴ１）において有意な群間差が認められたものの、無刺激（Ｎ．Ｔ）及びＷＴ１の各条件下で各個体における比率を算出したＩＬ－４ ｒａｔｉｏにおいては全ての群で変化が認められなかった。同様に、ＭＯＧ^{３５－５５}特異的なＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数についても、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）及びＭＯＧ^{３５－５５} ｐｅｐｔｉｄｅ刺激条件下（ＭＯＧ^{３５－５５}）の各条件下において有意な群間差が認められたものの、Ｎ．Ｔ及びＭＯＧ^{３５－５５}の各条件下で各個体における比率を算出したＩＬ－４ ｒａｔｉｏにおいては全ての群で変化が認められなかった。更に、各個体においてＩＦＮγとＩＬ－４を産生するＴ細胞数の比率ＩＦＮγ／ＩＬ－４を算出すると、各抗原刺激時に各抗原単独と比較し、Ｖ７－ｐｃ－ＷＴ１又はＶ７－ｐｃ－ＭＯＧ^{３５－５５}ではＩＦＮγ／ＩＬ－４が有意に増大していた。実施例８においてＩｇＧ２ａ優位なＴｈ１型の抗体応答は認められなかったが、本結果がＴ細胞の抗原特異的免疫応答を直接検出できるＥＬＩＳＰＯＴ解析を行ったものであることを考慮すると、ＶＡＭＰ７をはじめとした特定のＳＮＡＲＥ ｆａｍｉｌｙに対してＯＶＡと異なる抗原と連結した場合においても、抗原特異的Ｔｈ２型免疫応答は引き起こさず、選択的に抗原特異的Ｔｈ１型免疫応答並びに細胞性免疫を誘導又は増強できることを示している。本実験は、各群ｎ＝５で行い、無刺激条件下、または抗原刺激条件下における各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0174】

実施例５ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５）、該融合ポリペプチド中のリンカーのＣ末端側にプロタンパク質転換酵素認識配列を付加した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号４６）、リソソーム結合タンパク質ＬＡＭＰ（特許文献１）内にＯＶＡのアミノ酸配列を挿入した融合ポリペプチド（ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］）のアミノ酸配列（配列番号４７）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。コントロールとしては抗原（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを用いた。作製したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置から７日目に安楽死させ脾臓を採取した。採取した脾臓を、２％ＦＢＳ含有ＤＰＢＳを添加しながら４０μｍセルストレーナー上ですりつぶした。得られた懸濁液について２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し３分間静置することで懸濁液に含まれる赤血球を溶血した。再度、２００×ｇで５分間遠心を行い、上清を除いた後、ＤＰＢＳで２回洗浄を行い、ＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を添加することで脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）懸濁液を得た。１．０×１０^７ｃｅｌｌｓのｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅをＥＬＩＳＰＯＴプレート上に１００μＬ／ｗｅｌｌ播種し、ＯＶＡタンパク質（Ｍｅｒｃｋ）を添加したＣＴＬ－Ｔｅｓｔ Ｍｅｄｉｕｍ １００μＬと混合することで終濃度５０μｇ／ｍＬで抗原刺激を行った。ネガティブコントロールとしてはＯＶＡタンパク質を添加していない群（Ｎ．Ｔ）を用意した。２４時間後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイキット（Ｃ．Ｔ．Ｌ．）を用い、添付のプロトコルに従ってＥＬＩＳＰＯＴアッセイを行い、抗原（ＯＶＡ）特異的にＩＦＮγ、ＩＬ－４を産生する細胞を検出した。脾臓は２次リンパ組織であり、その構成細胞であるＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅはＴ細胞を豊富に含有することから、抗原特異的な免疫応答を示すＴ細胞を検出するため本実験ではＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅを用いた。

【0175】

結果を図１０に示す。ｖｅｃｔｏｒの投与からわずか１週目でも、ＶＡＭＰ７－ＯＶＡやＬＡＭＰ［ＯＶＡ］と比較して、ＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡではＯＶＡ特異的にＩＦＮγを分泌するＴ細胞の数が有意に増大していることが確認された。一方でＯＶＡ特異的なＩＬ－４を分泌するＴ細胞の数については、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）及びＯＶＡ刺激条件下（ＯＶＡ）の各条件下において有意な群間差が認められたものの、Ｎ．Ｔ及びＯＶＡの各条件下で各個体における比率を算出したＩＬ－４ ｒａｔｉｏにおいては全ての群で変化が認められなかった。更に、各個体においてＩＦＮγとＩＬ－４を産生するＴ細胞数の比率ＩＦＮγ／ＩＬ－４を算出すると、ＯＶＡ刺激時にＶ７－ＯＶＡやＬＡＭＰ［ＯＶＡ］と比較し、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡではＩＦＮγ／ＩＬ－４が有意に増大していた。本結果は、ＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡが１週目という比較的早期から、抗原特異的Ｔｈ２型免疫応答は引き起こさず、選択的に抗原特異的なＴｈ１型免疫や細胞性免疫を誘導することができ、更には従来の技術と比較しても優越した免疫誘導効果があることを示している。本実験は、各群ｎ＝５で行い、無刺激条件下（Ｎ．Ｔ）、またはＯＶＡ刺激条件下における各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【0176】

実施例６：ＯＶＡ食物アレルギーモデル有効性
１００μｇ ＯＶＡと１ｍｇ Ａｌｕｍアジュバント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を２００μＬ ＤＰＢＳに混合し３０分間転倒混和し感作用混合物を得た。作製した感作用混合物を雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに対して０、１４日目に腹腔投与し、感作を行った。また、ＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみ、ＶＡＭＰ７のＣ末端側にＯＶＡをリンカー及びプロタンパク質転換酵素認識配列で連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号４６）、又はＬＡＭＰ内にＯＶＡのアミノ酸配列を挿入した融合ポリペプチド（ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］）のアミノ酸配列（配列番号４７）をコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。コントロールとしてはアレルゲン（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ（Ｅｍｐｔｙ）を用意した。実験開始から２１、２８、３５日目において、用意したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ ５０μｇをＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。実験開始から４２、４３、４４、４５、４６日目において、ＯＶＡ ５０ｍｇを２００μＬ ＤＰＢＳに溶解したチャレンジ用混合物を１日につき１回経口投与し、食物アレルギー症状を誘導した。実験開始から４６日目において、チャレンジ用混合物の投与開始前及び、投与開始後１５、３０、４５、６０分後に体温測定用プローブ（株式会社夏目製作所）を用いて直腸温測定を行った。その後、マウスを安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ濃度測定を行った。ＯＶＡ特異的ＩｇＥ濃度測定ではＬＢＩＳ Ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ－ＯＶＡ－ＩｇＥ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（富士フイルムワコーシバヤギ株式会社）を用いた。ＯＶＡタンパク質を固相化した９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに対し、５０μＬのビオチン結合抗ＩｇＥ抗体と１０μＬの希釈血清又は標準溶液を添加し、室温で１時間静置反応させた。続いて洗浄液で３回洗浄を行ったのち、１００μＬのペルオキシダーゼ・アビジン結合物を添加し、室温で３０分間静置反応させた。続いて３回洗浄を行ったのち、１００μＬのＴＭＢ発色液を添加し、室温で発色反応を行った。２０分後、１００μＬの１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４を添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（主波長４５０ｎｍ、副波長６２０ｎｍ）を行った。標準液の吸光度値から得られた検量曲線を用いて、各血清サンプルにおけるＯＶＡ特異的ＩｇＥ濃度を算出した。

【0177】

結果を図１１に示す。ＯＶＡ非感作のＥｍｐｔｙ群（Ｅｍｐｔｙ（－））と比較し、ＯＶＡ感作を行ったＥｍｐｔｙ群（Ｅｍｐｔｙ（＋））、ＯＶＡ単独群（ＯＶＡ（＋））、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］群（ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］（＋））では、ＯＶＡの経口感作を行った際にアナフィラキシーに伴う体温低下が有意に認められた。一方で、ＯＶＡ感作を行ったＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡ群（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ（＋））では、Ｅｍｐｔｙ（－）と比較して体温低下は認められず、かつＥｍｐｔｙ（＋）やＯＶＡ（＋）、ＬＡＭＰ［ＯＶＡ］（＋）と比較すると体温低下が有意に抑制されていた。また、Ｅｍｐｔｙ（－）と比較してＯＶＡ（＋）ではＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度が有意に上昇していた一方で、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ（＋）やＬＡＭＰ［ＯＶＡ］ではＯＶＡ（＋）と比較しＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体濃度は有意に低下していた。アナフィラキシーに伴う体温低下がアレルギー動物モデルにおける一般的な表現型であること、そして血中におけるアレルゲン特異的ＩｇＥ濃度がアレルギーの病勢を示す一般的なマーカーであることを考慮すると、この結果は、ＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡがＯＶＡ単独や従来の技術と比較しても優れたアレルギー抑制効果があることを示している。直腸温測定は、各群ｎ＝８で行い、各測定時間において各群でＤｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。Ｅｍｐｔｙ（－）群との比較の場合は＊、Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ（＋）群との比較の場合は†で有意差を表示している。ＯＶＡ特異的ＩｇＥ濃度測定は、Ｅｍｐｔｙ（＋）群のみｎ＝７、それ以外の群はｎ＝８で行い、各群でＴｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ群及びＬＡＭＰ［ＯＶＡ］群においては各群のドットプロット上に平均値を示している。

【0178】

実施例７ ＯＶＡ血中濃度
ＶＡＭＰ７とＯＶＡをリンカーで連結した融合ポリペプチド（Ｖ７－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号２５）、該融合ポリペプチド中のリンカー後部にプロタンパク質転換酵素認識配列を付加した融合ポリペプチド（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）のアミノ酸配列（配列番号４６）、又はＯＶＡのアミノ酸配列（配列番号２４）のみをコードしたｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒを作製した。コントロールとしてはアレルゲン（ＯＶＡ）をコードしていないＥｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ（Ｅｍｐｔｙ）を用意した。用意したそれぞれのｖｅｃｔｏｒ ５０μｇを雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿筋内部へ筋肉内投与した後、エレクトロポレーター（ＮＥＰＡ２１）を用いて電圧を負荷し遺伝子導入を行った。上記処置から７日目に安楽死させ血液を採取した。採取した血液から血清を分離し、ＯＶＡ濃度測定を行った。ＯＶＡ濃度測定ではＩＴＥＡ卵白アルブミン（ＯＶＡ）ＥＬＩＳＡキット（ＩＴＥＡ株式会社）を用いた。抗ＯＶＡ抗体を固相化した９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに対し、１００μＬ／ｗｅｌｌの血清又は標準溶液を添加し、室温で１時間静置反応させた。続いて洗浄液で３回洗浄を行ったのち、１００μＬ／ｗｅｌｌの酵素標識抗ＯＶＡ抗体を添加し、室温で１時間静置反応させた。続いて３回洗浄を行ったのち、１００μＬ／ｗｅｌｌのＴＭＢ発色基質液を添加し、室温で発色反応を行った。１５分後、１００μＬ／ｗｅｌｌの反応停止液を添加し、発色反応を停止させ、吸光度測定（主波長４５０ｎｍ、副波長６２０ｎｍ）を行った。標準液の吸光度値から得られた検量曲線を用いて、各血清サンプルにおけるＯＶＡ濃度を算出した。

【0179】

結果を図１２に示す。Ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒを投与した群（Ｅｍｐｔｙ）と比較し、ＯＶＡ単独ではｖｅｃｔｏｒ投与後１週目の血中においてＯＶＡタンパク質が検出されることが確認された。一方で、ＯＶＡ単独と比較しＶＡＭＰ７－ＯＶＡ（Ｖ７－ＯＶＡ）及びＶＡＭＰ７－ｐｃ－ＯＶＡ（Ｖ７－ｐｃ－ＯＶＡ）では血中におけるＯＶＡタンパク質濃度はＥｍｐｔｙとほぼ同等まで低下していた。本結果は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてＯＶＡ単独で投与した場合、生体内で発現したＯＶＡタンパク質が血中へと一部放出されることを意味している。一方で、Ｖ７－ＯＶＡやＶ７－ｐｃ－ＯＶＡでは、ＯＶＡタンパク質をそもそも発現させないＥｍｐｔｙと同等程度にまで血中ＯＶＡタンパク質濃度が低下していることから、１週目時点で血中にＯＶＡタンパク質がほとんど存在しないと考えられる。従来のアレルゲン免疫療法では、体外から摂取されたアレルゲンが一部血中へと放出され、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体に捕捉されることによりアナフィラキシー等のＩ型アレルギーに分類される副反応が引き起こされることが知られている。本結果のように、アレルゲン単独ではなくＶＡＭＰ７とプロタンパク質転換酵素認識配列と連結すれば、血中へのアレルゲン放出が抑制され、前記の治療に伴うＩ型アレルギーに分類される副反応を軽減できる可能性が考えられる。本実験は、各群ｎ＝５で行い、Ｔｕｋｅｙ ｔｅｓｔを行った際にｐ＜０．０５と判定された場合、有意差があると判断した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

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