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特許7328808ジメチルスルホキシドを含む糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-08-08
(45)【発行日】2023-08-17
(54)【発明の名称】ジメチルスルホキシドを含む糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法
(51)【国際特許分類】
C12Q 1/37 20060101AFI20230809BHJP
C12Q 1/26 20060101ALI20230809BHJP
C12Q 1/28 20060101ALI20230809BHJP
C12N 9/50 20060101ALN20230809BHJP
C12N 9/04 20060101ALN20230809BHJP
C12N 9/08 20060101ALN20230809BHJP
【ＦＩ】
C12Q1/37
C12Q1/26
C12Q1/28
C12N9/50
C12N9/04 Z
C12N9/08
【請求項の数】
39
(21)【出願番号】P 2019123003
(22)【出願日】2019-07-01
(65)【公開番号】P2021007345
(43)【公開日】2021-01-28
【審査請求日】2022-04-19
(73)【特許権者】
【識別番号】303046299
【氏名又は名称】旭化成ファーマ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(72)【発明者】
【氏名】植田 祐生
(72)【発明者】
【氏名】本庄 暁子
【審査官】北村 悠美子
(56)【参考文献】
【文献】特開２００５－２９８６３２（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１１／１２６０６７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表平１１－５０４８０８（ＪＰ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１０４１６４４７３（ＣＮ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２００４／０１２６８３０（ＵＳ，Ａ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｑ １／００－３／００
Ｇ０１Ｎ ２１／００－２１／９５８
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
【請求項2】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項１に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項3】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項１又は２に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項4】
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、請求項１から３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項5】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きく、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬。
【請求項6】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項５に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項7】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項５又は６に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項8】
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項５から７のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項9】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
【請求項10】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項９に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項11】
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項９又は１０に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項12】
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、請求項９から１１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項13】
前記キレート剤が、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ'－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ"，Ｎ"－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシンおよびその塩からなる郡より選択される、請求項１から４、及び７から１２のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項14】
前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、請求項１から４、及び７から１３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項15】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記ジメチルスルホキシドをさらに含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、請求項１から１４のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項16】
前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、請求項１から１５のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項17】
２℃以上１０℃以下で保存される、請求項１から１６のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項18】
前記糖化アミノ酸オキシダーゼ及び前記ペルオキシダーゼが前記トリンダー試薬含有部分組成物に含まれる、請求項１から１７のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【請求項19】
糖化タンパク質の測定方法であって、検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
【請求項20】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項１９に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項21】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項１９又は２０に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項22】
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、請求項１９から２１のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項23】
糖化タンパク質の測定方法であって、検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きく、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質の測定方法。
【請求項24】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項２３に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項25】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項２３又は２４のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項26】
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項２３から２５のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項27】
糖化タンパク質の測定方法であって、検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
【請求項28】
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、請求項２７に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項29】
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、請求項２７又は２８のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項30】
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、請求項２７から２９のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【請求項31】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【請求項32】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【請求項33】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【請求項34】
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、請求項３１から３３のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【請求項35】
前記保存することにおいて、前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で保存することをさらに含む、請求項３１から３４のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【請求項36】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【請求項37】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【請求項38】
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含み、
前記プロテアーゼと前記ジメチルスルホキシドが同じ部分組成物に含まれる、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【請求項39】
５℃で１４日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比が９５％以上である、請求項３６から３８のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は臨床検査薬に関し、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法に関する。
【背景技術】
【0002】
糖尿病の診断及び管理を行う上で、糖化タンパク質の測定は重要であり、過去約１～２ヶ月の平均血糖値を反映する糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）、過去約２週間の平均血糖値を反映する糖化アルブミン（ＧＡ）、及び血清中の糖化タンパク質の総称であるフルクトサミン（ＦＲＡ）等が日常的に測定されている。
【0003】
精度が高く、安価で、簡便に糖化タンパク質を測定する方法として、酵素法が挙げられる。例えば特許文献１、２、３は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献４は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いた際の酸素の消費量を発色反応又は酸素電極で測定することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献５、６は、糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンにプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、及び４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンを測定できることを記載している。
【0004】
これらの糖化タンパク質測定試薬には、試薬の安定性を改善するためにプロテアーゼ安定化剤が含まれている。例えば、特許文献６は、ジメチルスルホキシド、アルコール、水溶性カルシウム塩、食塩、第四級アンモニウム塩、又は第四級アンモニウム塩型陽イオン界面活性剤をプロテアーゼ安定化剤として開示している。
【0005】
一方、トリンダー試薬、及び４－アミノアンチピリンなどの色素を使用して過酸化水素を比色定量する試薬において、試薬中や検体中の測定成分以外の成分によって、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンが非特異的に縮合発色することがあり、試薬ブランクと呼ばれている。試薬ブランクが大きいと、検体中の測定成分（シグナル）に対する試薬ブランク（ノイズ）の割合が高くなり、測定誤差の原因となることから試薬ブランクは低い方が好ましい。例えば特許文献７は、糖化タンパク質測定試薬において、プロテアーゼ含有試薬にカタラーゼを共存させ、試薬中の過酸化物を消去することで試薬ブランクを抑制する方法を記載している。特許文献８では、ビリルビン等の還元性物質による測定誤差を防止する目的で配合されるフェロシアン化物と、トリンダー試薬など水素供与体とを含む試薬に、両性界面活性剤を配合することで試薬ブランクを抑制できることを記載している。さらに、トリンダー試薬及び４－アミノアンチピリンと色素は異なるが、特許文献９は、テトラゾリウム系色素含有試薬の保存時と検体反応時のｐＨを制御することで試薬ブランクを抑制できることを記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【文献】特開平６－４６８４６号公報
【文献】特開平５－１９２１９３号公報
【文献】国際公開第９６／３４９７７号
【文献】特開平２－１９５９００号公報
【文献】国際公開第１９９７／１３８７２号
【文献】国際公開第２００２／０６１１１９号
【文献】特開２００４－４９０６３号公報
【文献】特開２００６－１０７１１号公報
【文献】特開２００９－７２１３６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
上述したように、試薬ブランクを抑制することは測定精度を向上させるため、種々の方法が検討されている。そこで本発明では、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬において、試薬ブランクをより抑制することを課題の一部とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
上記課題を解決するために本発明者は鋭意研究を行った結果、トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と、４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、フェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物と、を含み、かつ、プロテアーゼ及びジメチルスルホキシドを含む糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物にキレート剤を含めるか、あるいはフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨを７．０より大きくすること、又は４－アミノアンチピリン含有部分組成物にキレート剤を含めることにより、試薬ブランクを顕著に抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【0009】
［１］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
【0010】
［２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0011】
［３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［１］又は［２］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0012】
［４］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［１］から［３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0013】
［５］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、
糖化タンパク質測定試薬。
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、
糖化タンパク質測定試薬。
【0014】
［６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［５］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0015】
［７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［５］又は［６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0016】
［８］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［５］から［７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0017】
［９］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬であって、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。
【0018】
［１０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［９］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0019】
［１１］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［９］又は［１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0020】
［１２］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［９］から［１１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0021】
［１３］前記キレート剤が、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシンおよびその塩からなる郡より選択される、［１］から［４］、及び［７］から［１２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0022】
［１４］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［１］から［４］、及び［７］から［１２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0023】
［１５］前記キレート剤が、酒石酸若しくはその塩、又はエチレンジアミン四酢酸若しくはその塩ではない、［１］から［４］、及び［７］から［１２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0024】
［１６］前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１］から［４］、及び［７］から［１５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0025】
［１７］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0026】
［１８］前記キレート剤の濃度が１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、［１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0027】
［１９］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0028】
［２０］前記キレート剤の濃度が５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0029】
［２１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記ジメチルスルホキシドをさらに含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［２０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0030】
［２２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0031】
［２３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［２１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0032】
［２４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0033】
［２５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［２１］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0034】
［２６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．１以上１０以下である、［１］から［２５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0035】
［２７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．５以上である、［２６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0036】
［２８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが８以上である、［２６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0037】
［２９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９．５以下である、［２６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0038】
［３０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９以下である、［２６］に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0039】
［３１］銅を含まない、［１］から［３０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0040】
［３２］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［１］から［３１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0041】
［３３］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［１］から［３２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0042】
［３４］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［１］から［３３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0043】
［３５］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１］から［３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0044】
［３６］２℃以上１０℃以下で保存される、［１］から［３５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0045】
［３７］５℃で１４日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比が９５％以上である、［１］から［３６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0046】
［３８］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼをさらに含む、［１］から［３７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬。
【0047】
［３９］
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
【0048】
［４０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［３９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0049】
［４１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［３９］又は［４０］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0050】
［４２］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［３９］から［４１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0051】
［４３］
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、
糖化タンパク質の測定方法。
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、
糖化タンパク質の測定方法。
【0052】
［４４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［４３］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0053】
［４５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［４３］又は［４４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0054】
［４６］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［４３］から［４５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0055】
［４７］
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
糖化タンパク質の測定方法であって、
検体に、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬を接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
少なくとも前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、
少なくとも前記トリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、
少なくとも前記フェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、
糖化タンパク質の測定方法。
【0056】
［４８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［４７］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0057】
［４９］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［４７］又は［４８］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0058】
［５０］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［４７］から［４９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0059】
［５１］前記キレート剤が、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシンおよびその塩からなる郡より選択される、［３９］から［４２］、及び［４５］から［５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0060】
［５２］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［３９］から［４２］、及び［４５］から［５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0061】
［５３］前記キレート剤が、酒石酸若しくはその塩、又はエチレンジアミン四酢酸若しくはその塩ではない、［３９］から［４２］、及び［４５］から［５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0062】
［５４］前記糖化タンパク質測定試薬における前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［３９］から［４２］、及び［４５］から［５３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0063】
［５５］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0064】
［５６］前記キレート剤の濃度が１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、［５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0065】
［５７］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0066】
［５８］前記キレート剤の濃度が５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［５４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0067】
［５９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記ジメチルスルホキシドをさらに含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３９］から［５８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0068】
［６０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0069】
［６１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0070】
［６２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0071】
［６３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［５９］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0072】
［６４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．１以上１０以下である、［３９］から［６３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0073】
［６５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．５以上である、［６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0074】
［６６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが８以上である、［６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0075】
［６７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９．５以下である、［６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0076】
［６８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９以下である、［６４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0077】
［６９］前記糖化タンパク質測定試薬が銅を含まない、［３９］から［６８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0078】
［７０］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［３９］から［６９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0079】
［７１］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［３９］から［７０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0080】
［７２］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［３９］から［７１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0081】
［７３］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［３９］から［７２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0082】
［７４］前記糖化タンパク質測定試薬が前記検体に接触する前に、前記糖化タンパク質測定試薬を２℃以上１０℃以下で保存することをさらに含む、［３９］から［７３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0083】
［７５］５℃で１４日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比が９５％以上である、［３９］から［７４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0084】
［７６］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼをさらに含む、［３９］から［７５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質の測定方法。
【0085】
［７７］
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0086】
［７８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［７７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0087】
［７９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［７７］又は［７８］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0088】
［８０］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［７７］から［７９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0089】
［８１］
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0090】
［８２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［８１］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0091】
［８３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［８１］又は［８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0092】
［８４］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［８１］から［８３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0093】
［８５］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の保存方法であって、
少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
少なくとも前記トリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくとも前記フェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を保存することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0094】
［８６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［８５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0095】
［８７］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［８５］又は［８６］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0096】
［８８］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［８５］から［８７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0097】
［８９］前記キレート剤が、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシンおよびその塩からなる郡より選択される、［７７］から［８０］、及び［８３］から［８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0098】
［９０］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［７７］から［８０］、及び［８３］から［８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0099】
［９１］前記キレート剤が、酒石酸若しくはその塩、又はエチレンジアミン四酢酸若しくはその塩ではない、［７７］から［８０］、及び［８３］から［８８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0100】
［９２］前記糖化タンパク質測定試薬における前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［７７］から［８０］、及び［８３］から［９１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0101】
［９３］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［９２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0102】
［９４］前記キレート剤の濃度が１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、［９２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0103】
［９５］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［９２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0104】
［９６］前記キレート剤の濃度が５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［９２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0105】
［９７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記ジメチルスルホキシドをさらに含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７７］から［９６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0106】
［９８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0107】
［９９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0108】
［１００］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0109】
［１０１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［９７］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0110】
［１０２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．１以上１０以下である、［７７］から［１０１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0111】
［１０３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．５以上である、［１０２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0112】
［１０４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが８以上である、［１０２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0113】
［１０５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９．５以下である、［１０２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0114】
［１０６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９以下である、［１０２］に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0115】
［１０７］前記糖化タンパク質測定試薬が銅を含まない、［７７］から［１０６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0116】
［１０８］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［７７］から［１０７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0117】
［１０９］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［７７］から［１０８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0118】
［１１０］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［７７］から［１０９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0119】
［１１１］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［７７］から［１１０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0120】
［１１２］前記保存することにおいて、前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で保存することをさらに含む、［７７］から［１１１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0121】
［１１３］５℃で１４日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比が９５％以上である、［７７］から［１１２］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0122】
［１１４］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼをさらに含む、［７７］から［１１３］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の保存方法。
【0123】
［１１５］
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物及びキレート剤を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0124】
［１１６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［１１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0125】
［１１７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［１１５］又は［１１６］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0126】
［１１８］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［１１５］から［１１７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0127】
［１１９］
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリンを含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含む、ｐＨが７．０より大きいフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0128】
［１２０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［１１９］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0129】
［１２１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［１１９］又は［１２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0130】
［１２２］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［１１９］から［１２１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0131】
［１２３］少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含む糖化タンパク質測定試薬の安定化方法であって、
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
少なくともトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物を調製することと、
少なくとも４－アミノアンチピリン及びキレート剤を含む４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
少なくともフェロシアン化物を含むフェロシアン化物含有部分組成物を調製することと、
を含む、
糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0132】
［１２４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記プロテアーゼ及び前記ジメチルスルホキシドをさらに含む、［１２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0133】
［１２５］前記フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［１２３］又は［１２４］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0134】
［１２６］前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい、［１２３］から［１２５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0135】
［１２７］前記キレート剤が、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシンおよびその塩からなる郡より選択される、［１１５］から［１１８］及び［１２１］から［１２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0136】
［１２８］前記キレート剤がクエン酸又はその塩である、［１１５］から［１１８］、及び［１２１］から［１２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0137】
［１２９］前記キレート剤が、酒石酸若しくはその塩、又はエチレンジアミン四酢酸若しくはその塩ではない、［１１５］から［１１８］、及び［１２１］から［１２６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0138】
［１３０］前記糖化タンパク質測定試薬における前記キレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１１５］から［１１８］、及び［１２１］から［１２９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0139】
［１３１］前記キレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0140】
［１３２］前記キレート剤の濃度が１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である、［１３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0141】
［１３３］前記キレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0142】
［１３４］前記キレート剤の濃度が５ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0143】
［１３５］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物が前記ジメチルスルホキシドをさらに含み、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３０ｗｔ／ｖоｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１５］から［１３４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0144】
［１３６］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0145】
［１３７］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上である、［１３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0146】
［１３８］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が７０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0147】
［１３９］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物における前記ジメチルスルホキシドの濃度が５０ｗｔ／ｖоｌ％以下である、［１３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0148】
［１４０］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．１以上１０以下である、［１１５］から［１３９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0149】
［１４１］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．５以上である、［１４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0150】
［１４２］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが８以上である、［１４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0151】
［１４３］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９．５以下である、［１４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0152】
［１４４］前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物又は前記フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが９以下である、［１４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0153】
［１４５］前記糖化タンパク質測定試薬が銅を含まない、［１１５］から［１４４］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0154】
［１４６］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物が液状である、［１１５］から［１４５］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0155】
［１４７］前記フェロシアン化物がフェロシアン化カリウムである、［１１５］から［１４６］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0156】
［１４８］前記トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリンである、［１１５］から［１４７］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0157】
［１４９］前記糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１１５］から［１４８］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0158】
［１５０］前記トリンダー試薬含有部分組成物、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及び前記フェロシアン化物含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で保存することをさらに含む、［１１５］から［１４９］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0159】
［１５１］５℃で１４日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存された前記トリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び前記フェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比が９５％以上である、［１１５］から［１５０］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【0160】
［１５２］前記トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼをさらに含む、［１１５］から［１５１］のいずれか１項に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。
【発明の効果】
【0161】
本発明によれば、試薬ブランクの上昇を従来技術より抑制することができる糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法を提供することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【0162】
【図1】実施例２に係るキレート剤の種類及びｐＨと試薬ブランクとの関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0163】
以下、本発明の好適な実施の形態（以下において、「実施形態」という。）について詳細に説明する。なお以下に示す実施形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。
【0164】
第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含み、少なくともトリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、少なくとも４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、少なくともフェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含む。
【0165】
第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼ及びジメチルスルホキシドをさらに含んでいてもよい。または第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含んでいてもよい。または第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きくてもよい。なお、ｐＨが７．０より大きいとは、ｐＨ＝７．０を含まない。
【0166】
第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含み、少なくともトリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、少なくとも４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、少なくともフェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きい。なお、ｐＨが７．０より大きいとは、ｐＨ＝７．０を含まない。
【0167】
第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼ及びジメチルスルホキシドをさらに含んでいてもよい。または第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含んでいてもよい。または第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含んでいてもよい。
【0168】
第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくともトリンダー試薬、４－アミノアンチピリン、プロテアーゼ、ジメチルスルホキシド、及びフェロシアン化物を含み、少なくともトリンダー試薬がトリンダー試薬含有部分組成物に含まれ、少なくとも４－アミノアンチピリンが４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれ、少なくともフェロシアン化物がフェロシアン化物含有部分組成物に含まれ、４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む。
【0169】
第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物がプロテアーゼ及びジメチルスルホキシドをさらに含んでいてもよい。または第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物がキレート剤をさらに含んでいてもよい。または第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨが７．０より大きくてもよい。なお、ｐＨが７．０より大きいとは、ｐＨ＝７．０を含まない。
【0170】
以下において、特段の説明がない限りは、第１から第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬に共通する事項を説明する。
【0171】
第１から第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、キットの形態で保存、流通及び使用されてもよい。キットの形態としては、例えば２試薬系キット、３試薬系キット等が挙げられるが、トリンダー試薬と、４－アミノアンチピリンと、フェロシアン化物と、を別保存する形態である３試薬系キットにすることで、検体感度残存率を向上することができる。
【0172】
本開示において、試薬とは、測定対象を測定する試薬であり、例えば部分組成物の集合体である。試薬は、それのみで測定対象を検出可能である。部分組成物とは、試薬の一部を構成する組成物である。部分組成物は、それのみでは測定対象を測定することができない。
【0173】
糖化タンパク質は、例えば糖化アルブミン（ＧＡ）、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）である。
【0174】
トリンダー試薬含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼをさらに含み得る。
【0175】
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬と、測定対象の検体（サンプル検体）に含まれるグルコースが結合したタンパク質（糖化タンパク質）と、を接触させると、糖化タンパク質がプロテアーゼにより糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに分解される。糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドは、糖化アミノ酸オキシダーゼによりアミノ酸あるいはペプチドとグルコソンに分解される。また、この際、糖化アミノ酸オキシダーゼにより、水と酸素が反応して、過酸化水素が生じる。トリンダー試薬と、４－アミノアンチピリンと、は、過酸化水素及びペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合反応し呈色する。例えばトリンダー試薬として、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン（ＴＯＤＢ）を用いた場合、青紫色に呈色する発色反応が生じる。青紫色の呈色は、波長５４６ｎｍにおける吸光度の測定により検出される。波長５４６ｎｍにおける吸光度に基づき、検体に含まれる糖化タンパク質の濃度が定量される。
【0176】
糖化タンパク質の濃度を測定する際、サンプル検体に最初に糖化アミノ酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼを含むトリンダー試薬含有部分組成物を添加すると、サンプル検体に混在する遊離の糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドが消去されるので、好ましいことが知られている。実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の通常の使用方法においては、例えば、予め、４－アミノアンチピリン含有部分組成物とフェロシアン化物含有部分組成物とが混合され、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物が用意される。さらに、サンプル検体にトリンダー試薬含有部分組成物を添加し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体とトリンダー試薬含有部分組成物の混合物を放置して、その後、当該混合物に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物を添加し、発色の程度を測定することによって、糖化タンパク質が測定できる。ただし、場合によっては、サンプル検体に添加する際に、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物を予め混合してサンプル検体に添加してもよいし、先ず４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有部分組成物をサンプル検体に添加し、その後、トリンダー試薬含有部分組成物を添加してもよい。
【0177】
糖化タンパク質を定量するためには、通常、糖化タンパク質濃度が既知である１つ以上の検量用物質（キャリブレーター）を測定し、キャリブレーションを行うことが多い。キャリブレーターの作成方法やキャリブレーション方法としては公知情報に基づき当業者は実施することができるが、例えば、国際公開第２００１／０９４６１８号や特開２００５－２６１３８３号公報等の記載を参考に適宜実施することができる。また、測定試薬保存中の感度低下による測定値の変動を補正するために、例えば１カ月に１回等定期的にキャリブレーションを行うのが通常である。
【0178】
プロテアーゼは、例えば４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれるが、フェロシアン化物含有部分組成物に含まれていてもよい。プロテアーゼは、糖化タンパク質を分解して糖化アミノ酸又は糖化ペプチドを有効に生成するものであればよい。プロテアーゼは、例えば、エンドペプチダーゼである。エンドペプチダーゼの例としては、セリンエンドペプチダーゼが挙げられる。プロテアーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、トリチラチウム（Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ）属、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属等の微生物由来プロテアーゼ並びにその遺伝子組み換え型プロテアーゼが挙げられる。バチルス属由来プロテアーゼの例としては、アルカラーゼ、ニュートラーゼ、エスペラーゼ、サビナーゼ（以上、ノボザイムズ社製）、ビオプラーゼ ＯＰ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、ビオプラーゼ ３０Ｌ、ビオプラーゼ ３０Ｇ、ビオプラーゼ ＡＬ－１５ＦＧ、ビオプラーゼ ＡＰＬ－３０、プロテアーゼＣＬ－１５（以上、ナガセケムテックス社製）、プロチン ＳＤ ＰＣ－１０ＣＦ、サモアーゼ ＰＣ－１０Ｆ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、プロチン ＳＤ－ＮＹ１０（以上、天野エンザイム社製）、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｘ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｅ（以上、ダニスコジャパン社製）、オリエンターゼ ２２ＢＦ、ヌクレイシン、オリエンターゼ１０ＮＬ、オリエンターゼ９０Ｎ（以上、エイチビイアイ社製）、アロアーゼ ＡＰ－１０、アロアーゼ ＮＰ－１０、アロアーゼ ＸＡ－１０（以上、ヤクルト薬品工業社製）、サブチリシン、細菌プロテイナーゼ タイプ ＸＸＩＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＶＩＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＩＸ、サーモリシン Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ由来 タイプ Ｘ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＸＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．由来 タイプ ＸＸＶＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＸＸＸＩ（以上、シグマ社製）、サーモリシン（富士フイルム和光純薬社製）、ディスパーゼＩ、ディスパーゼＩＩ（以上、合同酒精社製）、Ｎｅｕｔｒａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）等が挙げられる。ストレプトマイセス属由来プロテアーゼの例としては、プロナーゼ、プロテアーゼ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ由来 タイプ ＸＩＶ（以上、シグマ社製）、Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）、デナチーム ＰＭＣ ＳＯＦＴＥＲ（ナガセケムテックス社製）等が挙げられる。トリチラチウム属由来プロテアーゼの例としては、プロテイナーゼＫ（シグマ社製）等が挙げられる。アスペルギルス属由来プロテアーゼの例としては、プロテアーゼ Ｐ「アマノ」３ＳＤ、プロテアーゼ Ａ「アマノ」ＳＤ、プロテアーゼ Ｍ「アマノ」ＳＤ（以上、天野エンザイム社製）、スミチーム ＭＰ、スミチーム ＬＰＬ－Ｇ、スミチーム ＬＰ５０Ｄ、スミチーム ＡＰ（以上、新日本化学工業社製）、オリエンターゼ ＯＰ、オリエンターゼ ＡＹ（以上、エイチビイアイ社製）、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ由来 タイプ ＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ由来 タイプ ＸＩＸ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｅｌｌｅｕｓ由来 タイプ ＸＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来（以上、シグマ社製）、デナチーム ＡＰ、デナプシン ２Ｐ（以上、ナガセケムテックス社製）、パンチダーゼ ＮＰ－２、パンチダーゼ ＭＰ、パンチダーゼ Ｐ（以上、ヤクルト薬品工業社製）等が挙げられる。これらのうち、アルカラーゼ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、アロアーゼ ＸＡ－１０、サブチリシン、プロナーゼ、プロテイナーゼＫ、ＰＲ“Ａｍａｎｏ”Ｋが好適である。
【0179】
また別の観点からプロテアーゼとしては、例えば、酵素番号がＥＣ：３．４、又はＥＣ：３．４．２１のプロテアーゼが好ましい例として挙げられる。またＥＣ：３．４．２１．６２のプロテアーゼもさらに好ましい例として挙げられる。
【0180】
ジメチルスルホキシドは、例えば４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれるが、フェロシアン化物含有部分組成物に含まれていてもよい。ジメチルスルホキシドは、プロテアーゼの安定化剤として機能し得る。
【0181】
フェロシアン化物は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に影響を与えることを抑制する。フェロシアン化物の例としては、フェロシアンイオンを含有するいずれの化合物であってもよく、フェロシアン化カリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｋ4）やフェロシアン化ナトリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｎａ4）などが挙げられる。
【0182】
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれ得る糖化アミノ酸オキシダーゼとしてはヒトタンパク質由来の糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに有効に作用する糖化アミノ酸オキシダーゼであればよく、その例としては、ジベレラ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ペニシリウム（
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、アクレモニウム（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属、デバリオマイゼス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）属、及びコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属由来の糖化アミノ酸オキシダーゼ、並びにその遺伝子組み換え型糖化アミノ酸オキシダーゼ変異体等が挙げられる。さらに具体的には、ケトアミンオキシダーゼ（ＫＡＯＤ、旭化成ファーマ社製、Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、２００２年、３２４、ｐ．６１－７１に記載）、変異型ＫＡＯＤ（ＫＡＯＤ－Ｖ、旭化成ファーマ社製、特許文献１に記載）、及びＦＡＯＤ－Ｅ（キッコーマン社製）等が挙げられる。
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、アクレモニウム（Ａ
ｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属、デバリオマイゼス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）属、及びコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属由来の糖化アミノ酸オキシダーゼ、並びにその遺伝子組み換え型糖化アミノ酸オキシダーゼ変異体等が挙げられる。さらに具体的には、ケトアミンオキシダーゼ（ＫＡＯＤ、旭化成ファーマ社製、Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、２００２年、３２４、ｐ．６１－７１に記載）、変異型ＫＡＯＤ（ＫＡＯＤ－Ｖ、旭化成ファーマ社製、特許文献１に記載）、及びＦＡＯＤ－Ｅ（キッコーマン社製）等が挙げられる。
【0183】
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれるトリンダー試薬の例としては、具体的にはＮ－（３－スルホプロピル）アニリン（ＨＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ）、Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＨＤＡＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＤＡＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）アニリン（ＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン（ＡＤＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン（ＡＤＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＯＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン（ＴＯＤＢ）、及び３－ヒドロキシ－２，４，６－トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ）、並びにそれらの塩等が挙げられる。これらのうち、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢが好適である。
【0184】
ＴＯＰＳを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ＡＬＰＳを用いた場合の発色波長は５６１ｎｍである。ＴＯＯＳを用いた場合の発色波長は５５５ｎｍである。ＴＯＤＢを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ただし、吸光度を測定する装置が測定する波長は、発色波長と厳密に一致している必要はない。例えば、波長５４６ｎｍにおける吸光度を測定する装置で、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢのそれぞれを用いた場合の発色反応を測定することが可能である。
【0185】
なお、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンとを同一試薬中に含めると、自然に酸化縮合反応して保存中に呈色するため、トリンダー試薬はトリンダー試薬含有部分組成物に含有され、４－アミノアンチピリンは４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含有される。
【0186】
従来、測定試薬や検体などに由来する過酸化物によって非特異的な発色反応が起こり、この吸光度が測定精度を低下させることがある。これら非特異的な発色を試薬ブランクという。これに対し、トリンダー試薬含有部分組成物に含まれ得るペルオキシダーゼは、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンの酸化縮合反応を促進するとともに、過酸化物を消去して、試薬ブランクを低減する機能を有する。ペルオキシダーゼはいずれの由来のものも使用でき、その例としては、西洋わさび由来等の植物由来のペルオキシダーゼ、及び細菌由来、カビ由来などの微生物由来のペルオキシダーゼ等が挙げられる。具体的には、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ（Ｓｉｇｍａ社製）、ペルオキシダーゼ、西洋わさび由来（富士フイルム和光純薬社製）、ＰＯ”ＡＭＡＮＯ”３（天野エンザイム社製）等が挙げられる。
【0187】
キレート剤は、フェロシアン化物含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物の少なくともいずれかに含まれる。キレート剤の塩を使用すると、ｐＨ変動が抑制されるため好ましい。
【0188】
キレート剤の例としては、グリコールエーテルジアミン四酢酸、Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）、ニトリロ三酢酸、トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸、１，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸、グルコン酸、りんご酸、クエン酸、サリチル酸、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン、及びそれらの塩が挙げられる。好ましいキレート剤は、例えば、クエン酸及びその塩である。ただし、本実施形態において、キレート剤は、酒石酸若しくはその塩、又はエチレンジアミン四酢酸若しくはその塩を除く。
【0189】
キレート剤の塩としては、塩を形成するものであればその種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよく、双性イオンの形態をとっていてもよい。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩基付加塩、あるいはメチルアミン、２－アミノエタノール、アルギニン、リジン、若しくはオルニチン等の有機塩基との塩基付加塩などが含まれる。これらのうち無機塩基との塩基付加塩が好適である。なお、代表的な塩基付加塩としては、ナトリウム塩が例示される。
【0190】
トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、溶媒として、水及び有機溶媒等をさらに含んでいてもよい。有機溶媒の例としては、アルコール系溶媒（炭素数１～１８のアルコールが挙げられ、具体的には、メタノール、ブタノール、エチレングリコール、及びグリセリン等）、ケトン系溶媒（アセトン、及びメチルエチルケトン等）、並びにエーテル系溶媒等（ジエチルエーテル、エチレングリコールモノアルキルエーテル、及びテトラヒドロフランに代表される環状エーテル等）が挙げられる。
【0191】
また、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、緩衝剤を含んでいてもよい。緩衝剤の例としては、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－シクロヘキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－ヒドロキシ－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－ヒドロキシ－３－プロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２－ヒドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、等を用いた緩衝剤、又はホウ酸、アンモニア、グリシン、炭酸、酢酸、リン酸、ジエタノールアミン、ｐ－フェノールスルホン酸、２－アミノ－２－メチルプロパン－１，３－ジオール、カコジル酸、マレイン酸、ベロナール及び３，３－ジメチルグルタル酸等が挙げられる。
【0192】
また、トリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物、及びフェロシアン化物含有部分組成物のそれぞれは、その他の添加物として防腐剤、酵素の安定化剤、界面活性剤、及びその他の酵素等をさらに含んでいてもよい。防腐剤の例としては、アジ化ナトリウム、及びプロクリン（ＰｒｏＣｌｉｎ）等が挙げられる。酵素の安定化剤としては、保存中に酵素を安定化させる安定化剤であればいずれも利用可能であるが、例えば、シクロデキストリン、スクロース、マンノース、フルクトース、ラクトース、ガラクトース及びトレハロース等の糖、ソルビトール、マンニトール等の糖アルコールが挙げられる。界面活性剤としては、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、及び非イオン性界面活性剤の何れを用いてもよく、例えば非イオン性界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、及びポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー等が挙げられる。また、両性界面活性剤の例としては、アルキルベタイン、酢酸ベタイン、スルホベタイン、及びアルキルアミンオキサイド等が挙げられる。その他の酵素としては、例えばアスコルビン酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カタラーゼ等が挙げられ、これは検体中に含まれるアスコルビン酸やビリルビン、または内在性の過酸化物が測定値に影響を与えるのを抑制するために用いられる。
【0193】
第１から第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、銅を含まない。
【0194】
４－アミノアンチピリン含有部分組成物における４－アミノアンチピリンの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
【0195】
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるプロテアーゼの濃度は、適当な時間内に糖化タンパク質を分解できる濃度であればよく、下限としては、１００Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１ｋＵ／ｍＬ以上、より好ましくは１０ｋＵ／ｍＬ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１０００ｋＵ／ｍＬ以下、好ましくは２００ｋＵ／ｍＬ以下、より好ましくは１００ｋＵ／ｍＬ以下が例示される。
【0196】
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるジメチルスルホキシドの濃度は、プロテアーゼを安定化できる濃度であればよく、下限としては例えば３０ｗｔ／ｖоｌ％以上、３２．５ｗｔ／ｖоｌ％以上、３５ｗｔ／ｖоｌ％以上、あるいは３７．５ｗｔ／ｖоｌ％以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、７０ｗｔ／ｖоｌ％以下、あるいは５０ｗｔ／ｖоｌ％以下が例示される。
【0197】
フェロシアン化物含有部分組成物におけるフェロシアン化物の濃度は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に与える影響を抑制するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．００１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．９ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ以下、０．６ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
【0198】
トリンダー試薬含有部分組成物における糖化アミノ酸オキシダーゼの濃度は、生じた糖化アミノ酸と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１０Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは２００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下が例示される。
【0199】
トリンダー試薬含有部分組成物におけるトリンダー試薬の濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
【0200】
トリンダー試薬含有部分組成物におけるペルオキシダーゼの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは０．１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、５００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは５０Ｕ／ｍＬ以下が例示される。
【0201】
４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるキレート剤の濃度の下限としては、例えば５μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上、５０μｍｏｌ／Ｌ以上、７５μｍｏｌ／Ｌ以上、１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは１.２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、例えば、４－アミノアンチピリン含有部分組成物又はフェロシアン化物含有部分組成物におけるキレート剤の濃度の上限としては、１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、２５ｍｍｏｌ／Ｌ以下、１５ｍｍｏｌ／ｌ以下、１０ｍｍｏｌ／ｌ以下、さらに好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。
【0202】
第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの下限は、例えば５．０以上、５．５以上、６．０以上、６．５以上、７．０以上、７．０より大、７．１以上、７．５以上、あるいは８．０以上である。第１実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの上限は、例えば１０以下、９．５以下、あるいは９．０以下である。
【0203】
第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの下限は７．０より大、７．１以上、７．５以上、あるいは８．０以上である。第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、フェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの上限は、例えば１０以下、９．５以下、あるいは９．０以下である。
【0204】
第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物のｐＨの下限は、例えば５．０以上、５．５以上、６．０以上、６．５以上、７．０以上、７．０より大、７．１以上、７．５以上、あるいは８．０以上である。第２実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物のｐＨの上限は、例えば１０以下、９．５以下、あるいは９．０以下である。
【0205】
第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの下限は、例えば５．０以上、５．５以上、６．０以上、６．５以上、７．０以上、７．０より大、７．１以上、７．５以上、あるいは８．０以上である。第３実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及び／又はフェロシアン化物含有部分組成物のｐＨの上限は、例えば１０以下、９．５以下、あるいは９．０以下である。
【0206】
トリンダー試薬含有部分組成物は液状であってもよく、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。トリンダー試薬含有部分組成物において、含有物は混合されている。４－アミノアンチピリン含有部分組成物は液状であってもよく、トリンダー試薬含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。４－アミノアンチピリン含有部分組成物において、含有物は混合されている。フェロシアン化物含有部分組成物は液状であってもよく、トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。フェロシアン化物含有部分組成物において、含有物は混合されている。フェロシアン化物含有部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、トリンダー試薬含有部分組成物とは、それぞれ、別個に包装されてもよい。
【0207】
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、例えば、流通に要する実用的な期間の間、安定的に保存することが可能である。例えば、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬は、少なくとも１カ月間、保存可能である。実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存期間の下限としては、１日以上、１カ月以上、６カ月以上、あるいは１年以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存期間の上限としては、５年以下、２年以下、１年６カ月以下、１年３カ月以下、６カ月以下、あるいは７日以下が例示される。
【0208】
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存温度の下限としては、２℃以上、４℃以上、あるいは５℃以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬の保存温度の上限としては、１０℃以下、８℃以下、あるいは５℃以下が例示される。
【0209】
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、５℃で１４日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で１４日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物と、３０℃で２８日保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。感度残存率の下限としては、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、９０％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１００％以下が例示される。
【0210】
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬において、５℃で２８日保存されたトリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、５℃で１年間保存されたトリンダー試薬含有部分組成物、４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びフェロシアン化物含有部分組成物と、を組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、長期の感度残存率という。長期の感度残存率の下限としては、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、９０％以上、あるいは９５％以上が例示される。上限としては、１１０％以下、あるいは１００％以下が例示される。
【実施例】
【0211】
次に、本発明の実施例を説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではないことはもちろんである。
【0212】
実施例における吸光度の測定には、７１７０形日立自動分析装置（日立ハイテクノロジーズ社製）を用いた。装置において、主波長を５４６ｎｍ、副波長を７００ｎｍと設定した。検体の吸光度Ａｂｓは、波長５４６ｎｍにおける吸光度をＡｂｓ546、波長７００ｎｍにおける吸光度をＡｂｓ700として、下記（１）式を用いて算出した。
Ａｂｓ＝Ａｂｓ546－Ａｂｓ700 （１）
Ａｂｓ＝Ａｂｓ546－Ａｂｓ700 （１）
【0213】
［実施例１：キレート剤による試薬ブランク抑制効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
【0214】
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、プロテアーゼの安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、プロテアーゼの安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
後述する濃度の安定化剤
【0215】
（２試薬系：４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
【0216】
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
【0217】
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整したフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整したフェロシアン化物含有液状部分組成物であって、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
【0218】
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
【0219】
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物と、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
【0220】
（測定準備）
３試薬系の場合、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
３試薬系の場合、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
【0221】
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （２）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（２）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （２）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
【0222】
サンプル検体を用いて測定された吸光度変化をＡｃｓ、サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（３）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （３）
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （３）
【0223】
１４日保存後の感度ΔＡｂｓ１４、２８日保存後の感度ΔＡｂｓ２８として下記（４）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。１４日後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて表１に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （４）
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （４）
【表1-1】
【表1-2】
【0224】
表１から明らかなように、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物とフェロシアン化物含有液状部分組成物を分けて保存した３試薬系のほうが、２試薬系より感度残存率が向上した。
【0225】
また、表１から明らかなように、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物にキレート剤であるクエン酸を添加すると、試薬ブランクが抑制された。３試薬系においては、フェロシアン化物含有液状部分組成物にキレート剤であるクエン酸三ナトリウムを添加した場合も試薬ブランクが抑制された。さらに、フェロシアン化物含有液状部分組成物に加えて４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物にキレート剤であるクエン酸三ナトリウムを添加しても、試薬ブランクが抑制された。
【0226】
［実施例２：キレート剤種類とｐＨによる試薬ブランク抑制効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
【0227】
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
【0228】
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを調整して、異なるｐＨのフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のｐＨに調整
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを調整して、異なるｐＨのフェロシアン化物含有液状部分組成物（１）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のｐＨに調整
【0229】
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）のｐＨ）
ｐＨ６．５
ｐＨ７．０
ｐＨ７．５
ｐＨ８．０
ｐＨ６．５
ｐＨ７．０
ｐＨ７．５
ｐＨ８．０
【0230】
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、キレート剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のキレート剤
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に調整して、キレート剤を含有するフェロシアン化物含有液状部分組成物（２）を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のキレート剤
【0231】
（フェロシアン化物含有液状部分組成物（２）に含有させたキレート剤）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グリコールエーテルジアミン四酢酸（同仁化学社製，略称ＥＧＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸，四カリウム塩，水和物（同仁化学社製，略称ＢＡＰＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（同仁化学社製，略称ＨＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロトリス（メチルホスホン酸），三ナトリウム塩（同仁化学社製，略称ＮＴＰＯ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロ三酢酸（同仁化学社製，略称ＮＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸，１水和物（同仁化学社製，略称ＣｙＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸（同仁化学社製，略称ＤＴＰＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ １，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（同仁化学社製，略称ＤＰＴＡ－ＯＨ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グルコン酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ（－）－りんご酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ サリチル酸（ナカライテスク社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（同仁化学社製，略称Ｔｒｉｃｉｎｅ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（同仁化学社製，略称Ｂｉｃｉｎｅ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グリコールエーテルジアミン四酢酸（同仁化学社製，略称ＥＧＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノフェニル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸，四カリウム塩，水和物（同仁化学社製，略称ＢＡＰＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸（同仁化学社製，略称ＨＩＤＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロトリス（メチルホスホン酸），三ナトリウム塩（同仁化学社製，略称ＮＴＰＯ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ニトリロ三酢酸（同仁化学社製，略称ＮＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－四酢酸，１水和物（同仁化学社製，略称ＣｙＤＴＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－五酢酸（同仁化学社製，略称ＤＴＰＡ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ １，３－ジアミノ－２－プロパノール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（同仁化学社製，略称ＤＰＴＡ－ＯＨ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ グルコン酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ（－）－りんご酸ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ サリチル酸（ナカライテスク社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（同仁化学社製，略称Ｔｒｉｃｉｎｅ）
５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（同仁化学社製，略称Ｂｉｃｉｎｅ）
【0232】
（サンプル）
以下のサンプルを用意した。
精製水
以下のサンプルを用意した。
精製水
【0233】
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を５℃で３カ月保存した。４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物は調製した当日に使用した。
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を５℃で３カ月保存した。４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物は調製した当日に使用した。
【0234】
（測定準備）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）又は（２）と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物（１）又は（２）と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
【0235】
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプルを添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプルの混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（５）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （５）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプルを添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプルの混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（５）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （５）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
【0236】
【0237】
表２及び図１から明らかなように、フェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨが大きくなるほど、試薬ブランクが抑制される傾向があることが明らかとなった。また、フェロシアン化物含有液状部分組成物にキレート剤を添加することにより、キレート剤の種類に依存せずに試薬ブランクが抑制されることが示された。
【0238】
［実施例３：ｐＨによる試薬ブランク抑制効果］
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
（トリンダー試薬含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有液状部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム二水和物（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（富士フイルム和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，二ナトリウム塩（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（天野エンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
【0239】
（３試薬系：４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物において、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、安定化剤としてジメチルスルホキシドを含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物において、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物を調製した。
２５０ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
６．２５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
６２５Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
５０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム二水和物（富士フイルム和光純薬社製）
３７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
【0240】
（３試薬系：フェロシアン化物含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整してフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。さらに、ｐＨ８．０のフェロシアン化物含有液状部分組成物は、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．０又はｐＨ８．０に調整してフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。さらに、ｐＨ８．０のフェロシアン化物含有液状部分組成物は、クエン酸三ナトリウムを含有する液状部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない液状部分組成物と、を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
０．５ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製）
【0241】
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
【0242】
（試薬保存）
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
調製したトリンダー試薬含有液状部分組成物を５℃で１４日又は２８日保存した。また、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を３０℃で１４日又は２８日保存した。
【0243】
（測定準備）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物と、フェロシアン化物含有液状部分組成物と、を容量比４：１で混合して、測定に使用する４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を調製した。
【0244】
（測定手順）
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（６）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （６）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
トリンダー試薬含有液状部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有液状部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１から、トリンダー試薬含有液状部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（６）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （６）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有液状部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有液状部分組成物と４－アミノアンチピリン及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の総液量を意味する。
【0245】
サンプル検体の代わりに精製水を用いて測定された吸光度変化を試薬ブランクＡｃｂとし、下記（７）式に示すように、サンプル検体を用いて測定された吸光度変化Ａｃｓから試薬ブランクの吸光度変化Ａｃｂを引いた値を感度ΔＡｂｓとして算出した。
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （７）
ΔＡｂｓ＝ Ａｃｓ － Ａｃｂ （７）
【0246】
１４日保存後の感度ΔＡｂｓ１４、２８日保存後の感度ΔＡｂｓ２８として下記（８）式に示すように感度残存率をΔＡｂｓ１４とΔＡｂｓ２８の割合として算出した。１４日後の試薬ブランクＡｃｂの結果と合わせて表３に示す。
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （８）
感度残存率（％）＝ ΔＡｂｓ２８ ÷ ΔＡｂｓ１４×１００ （８）
【表3】
【0247】
表３から明らかなように、フェロシアン化物含有液状部分組成物のｐＨを７．０より大きくすることで試薬ブランクが低下する傾向が認められた。４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物及びフェロシアン化物含有液状部分組成物の少なくとも一方にキレート剤を添加することで、試薬ブランクが低下する傾向が認められた。
【図1】
