特許 7329474 アンチエイジング化粧品組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-08-09

(45)【発行日】2023-08-18

(54)【発明の名称】アンチエイジング化粧品組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/9789 20170101AFI20230810BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20230810BHJP

   A61K 36/185 20060101ALN20230810BHJP

   A61P 17/00 20060101ALN20230810BHJP

【ＦＩ】

A61K8/9789

A61Q19/00

A61K36/185

A61P17/00

【請求項の数】 3

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2020055582

(22)【出願日】2020-03-26

(65)【公開番号】P2021020886

(43)【公開日】2021-02-18

【審査請求日】2020-03-27

【審判番号】

【審判請求日】2021-12-27

(31)【優先権主張番号】201910694725.8

(32)【優先日】2019-07-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】520045491

【氏名又は名称】ゼァージァン ヤンシェンタン インスティテュート オブ ナチュラル メディケイション カンパニー、リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ワン、シャシャ

(72)【発明者】

【氏名】チャン、ジェンファン

【合議体】

【審判長】井上 典之

【審判官】瀬良 聡機

【審判官】関 美祝

(56)【参考文献】

【文献】特開２００６－１３１５４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００１－５８９２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／１９６４８２（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

A61K8/00-8/99

A61Q1/00-90/00

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンチエイジング化粧品組成物における濃縮カバノキ樹液の使用であって、前記濃縮カバノキ樹液が１．１～４倍の濃縮度を有し、
前記アンチエイジング化粧品組成物はさらに添加される水を含まない、使用。

【請求項2】

濃縮カバノキ樹液を含むアンチエイジング化粧品組成物であって、前記濃縮カバノキ樹液が１．１～４倍の濃縮度を有し、
前記アンチエイジング化粧品組成物はさらに添加される水を含まない、アンチエイジング化粧品組成物。

【請求項3】

アンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で１８～９８重量％の濃縮カバノキ樹液を含む、請求項２に記載のアンチエイジング化粧品組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、濃縮カバノキ樹液、及び濃縮カバノキ樹液を含むアンチエイジング化粧品組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

カバノキはカバノキ科の落葉樹であり、現在世界中に約１００種が存在し、主に北部温帯及び冷温帯に分布している。その中でも、中国には約２９種が存在し、主に北東部、北西部及び南西部に分布している。カバノキの木は主に、人の干渉がほとんどなく、産業汚染のない人里離れた山岳地帯で成長している。カバノキ樹液（バーチジュースとも呼ばれる）は、切断されたカバノキ樹皮又は穴を開けた幹からの新鮮な樹液である。カバノキ樹液は無色又は淡黄色で、沈殿物も不純物もなく、淡いカバノキの芳香がある。カバノキ樹液は、糖、アミノ酸、ビタミン、ビオチン、サイトカイニン、微量ミネラル元素、芳香油、ベツリン及びサポニンなどの多数の化合物を含有し、優れたアンチエイジング効果を有する。

【0003】

皮膚の老化は、身体を保護及び調節する皮膚の能力の低下を意味し、したがって、内部及び外部環境の変化に適応できず、皮膚の色及び状態などの全体的な外観のいくらかの変化を示し、その結果、皮膚の弾力性の低下又は消失、皮膚のたるみ、しわの増加、乾燥肌、菲薄化、容易な落屑、かゆみ、くすんだ肌色、つやのなさ、ならびに濃い斑点及びいぼの併発をもたらす。人口の高齢化及び生活水準の継続的な改善に伴い、消費者の抗しわに対する意識は高まり続けており、ますます多くの消費者が、若い外観を維持するための化粧品を使用したがっている。統計によると、アンチエイジング化粧品は、中国の化粧品市場で最も成長が早く、最も有望なカテゴリーになっている。

【発明の概要】

【0004】

一態様では、本発明は、１．０５～８倍、好ましくは１．１～４倍、より好ましくは１．２～２倍の濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液を提供する。濃縮カバノキ樹液は有意なアンチエイジング効果を有する。

【0005】

本発明に関与するカバノキ樹液は、ベタラアルバ（Ｂｅｔａｌａａｌｂａ）、ヨーロッパダケカンバ（Ｂｅｔｕｌａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、ベチュラ・ペンデュラ（Ｂｅｔｕｌａ Ｐｅｎｄｕｌａ）及びシラカンバ（Ｂｅｔｕｌａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ）の４つの変種を含むカバノキ科（Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ）カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ）から得られる。カバノキ樹液は、雪が溶け始めてから木が葉を出すまで、カバノキの木の幹の基部に人工的に穴を開けて、ここから回収することによって得られる沈殿物も不純物もない無色透明で栄養価の高いカバノキ樹液である。カバノキ樹液は市販されており、そのまま使用されており（この場合、これはまた非濃縮カバノキ樹液、又はカバノキ樹液原液とも呼ばれる）、例えば、Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入することができる。

【0006】

本発明で使用される濃縮カバノキ樹液は、上記の市販のカバノキ樹液原液製品を濃縮することによって得られる。加熱濃縮、低温及び真空濃縮、ならびに膜濃縮などの濃縮方法は、当技術分野で知られている。本発明では、濃縮が、好ましくは低温凍結濃縮又は膜濃縮プロセスによって行われる。例えば、市販のカバノキ樹液原液を低温乾燥装置に導入し、－４０～－７０℃に冷却し、低温及び真空濃縮プロセスのために０．１～３０Ｐａに真空引きして、様々な濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液を得る。

【0007】

本発明者らは、驚くべきことに、非濃縮カバノキ樹液原液と比較して、濃縮カバノキ樹液が有意に優れた保湿及びアンチエイジング効果を有し、細胞外マトリックス中のＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、ＶＩＩ型、ＸＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン及びラミニンの合成を促進し、マトリックスメタロプロテイナーゼＭＭＰ－１の発現を低下させ、ヒアルロン酸の産生を促進し、表皮、真皮、及び真皮－表皮接合部の構造的完全性及び機能性を強化し、皮膚の弾力性を改善し、しわを減らすと同時に、皮膚のバリアを改善し、経表皮水分蒸散量（ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｗａｔｅｒ ｌｏｓｓ）を減らし、抗炎症及び鎮静化の機能を有することができることを発見した。

【0008】

さらに、本発明者らはまた、濃縮カバノキ樹液のアンチエイジング効果が、その濃縮度と単純に線形に関連するのではなく、最初に増加し、次いで、濃縮度が増加するにつれて減少する傾向を示す、すなわち、カバノキ樹液の濃縮度が一定のレベルに達すると、濃縮カバノキ樹液は細胞の増殖及び生存率をある程度抑制し、細胞内外の老化関連遺伝子の発現を抑制することを発見した。したがって、カバノキ樹液の濃縮度を制御することが重要である。本発明では、カバノキ樹液の濃縮度を、約１．０５～８倍、好ましくは約１．１～４倍、より好ましくは約１．２～２倍に制御する。

【0009】

別の態様では、本発明は、アンチエイジング化粧品組成物における濃縮カバノキ樹液の使用に関する。

【0010】

さらに別の態様では、本発明は、（Ａ）上記の濃縮カバノキ樹液を含むアンチエイジング化粧品組成物に関する。

【0011】

好ましい実施形態では、アンチエイジング化粧品組成物が、ＥＤＴＡ塩、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム及びグルコン酸等などのキレート剤を含まない。

【0012】

アンチエイジング化粧品組成物は、さらに添加される水を含まないが、組成物の成分の各々に本質的に含まれる水分を排除しない。

【0013】

濃縮カバノキ樹液の含有量は、アンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で約１８～９８重量％、好ましくは２０～９５重量％、より好ましくは２２～９０重量％、最も好ましくは３０～９０重量％である。

【0014】

成分（Ａ）上記の濃縮カバノキ樹液に加えて、アンチエイジング化粧品組成物は、場合により（Ｂ）ビヒクル、有効成分、及び賦形剤を含むスキンケア化粧品組成物で一般的に使用される成分をさらに含んでもよい。成分（Ｂ）は当技術分野で既知であり、その種類及び量は必要に応じて当業者が選択することができる。例えば、成分（Ｂ）の含有量は、アンチエイジング化粧品組成物の総重量基準で約２～８２重量％である。

【0015】

ビヒクルには、例えば、希釈剤、分散剤、又は担体が含まれる。その例としては、それだけに限らないが、エタノール、ジプロピレングリコール、及びブタンジオールが挙げられる。化粧品組成物中のビヒクルの含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で０．５～２０％である。

【0016】

有効成分には、例えば、皮膚軟化剤、保湿剤、アンチエイジング有効成分等が含まれる。

【0017】

皮膚軟化剤の例としては、それだけに限らないが、オリーブ油、マカダミアナッツ油、スイートアーモンド油、グレープシード油、アボカド油、コーン油、ゴマ油、大豆油、ピーナッツ油、メドウフォーム種子油、ベニバナ種子油、イヌバラ（Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ）果実油、アルガニア・スピノサ（Ａｒｇａｎｉａ ｓｐｉｎｏｓａ）核油、ホホバ（Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）種子油、ヒマワリ種子油、オオミテングヤシ（Ｍａｕｒｉｔｉａ ｆｌｅｘｕｏｓａ）果実油、スクアラン、パルミチン酸エチルヘキシル、ミリスチン酸イソプロピル、水素化ポリイソブチレン、イソセタン、イソドデカン、炭酸ジエチルヘキシル、炭酸ジオクチル、ラウロイルサルコシンイソプロピル、イソノナン酸イソノニル、水素化ポリデセン、トリエチルヘキサノイン、ヘキサン酸セチルエチル、ビス－ジエトキシジグリコールシクロヘキサン１，４－ジカルボキシラート、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、エルカ酸オレイル、オクチルドデカノールミリスタート、オクチルドデカノール、ポリジメチルシロキサン、オクチルポリメチルシロキサン、セチルジメチコン、シクロペンタジメチルシロキサンなどが挙げられる。固体皮膚軟化剤の例としては、それだけに限らないが、セチルアルコール、ステアリルアルコール、セテアリルアルコール、ベヘニルアルコール、スクアリルアルコール、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、蜜蝋、カンデリラ蝋、カルナウバ蝋、ラノリン、オゾケライト、ホホバ種子ワックス、パラフィンワックス、ミクロクリスタリンワックス、水添コメヌカロウ、水添ココグリセリル、ベヘン酸／エイコサン二酸グリセリル、ミリスチン酸ミリスチル、ビス－ジグリセリルポリアシルアジパート－２、ブチロスパーマム・パーキー（ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ ｐａｒｋｉｉ）（シアバター）、及びアストロカリウムムルムル（ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍｕｒｕｍｕｒｕ）種子脂の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の皮膚軟化剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で１～５０％である。

【0018】

保湿剤の例としては、それだけに限らないが、グリセロール、ジグリセロール、ブタンジオール、プロピレングリコール、１，３－プロパンジオール、ジプロピレングリコール、１，２－ペンタンジオール、ポリエチレングリコール－８、ポリエチレングリコール－３２、メチルグルセス－１０、メチルグルセス－２０、ＰＥＧ／ＰＰＧ－１７／６コポリマー、グリセレス－７、グリセレス－２６、グリセリルグルコシド、ＰＰＧ－１０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ－２０メチルグルコースエーテル、ＰＥＧ／ＰＰＧ／ポリブチレングリコール－８／５／３グリセロール、スクロース、トレハロース、ラムノース、マンノース、ラフィノース、ベタイン、エリスリトール、キシリトール、尿素、乳酸グリセレス－５、ヒアルロン酸ナトリウム、加水分解ヒアルロン酸ナトリウム、アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム、ポリグルタミン酸ナトリウム、加水分解スクレロチウムガム、プルラン、トレメラム（ｔｒｅｍｅｌｌａｍ）、及びタマリンド（ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ ｉｎｄｉｃａ）種子多糖体の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の保湿剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で１～３０％である。

【0019】

アンチエイジング有効成分の例としては、それだけに限らないが、トコフェロール（ビタミンＥ）、レチノール、パルミチン酸レチニル、加水分解コラーゲン、加水分解エラスチン、アラントイン、酵母エキス、オリザノール、テトラヒドロクルクミン、エラグ酸、ユビキノン、乳清タンパク質、アセチルヘキサペプチド－８、パルミトイルペンタペプチド－４、サリチロイルフィトスフィンゴシン、濃縮カバノキ樹液、シリマリン、セリシン、トコフェリルリン酸ナトリウム、リボ核酸（ＲＮＡ）、ジペプチドジアミノブチロイルベンジルアミドジアセタート、パルミトイルトリペプチド－５、オリゴペプチド－１、ヘキサペプチド－９、パルミトイルオリゴペプチド、パルミトイルテトラペプチド－７、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ）種子抽出物、プロテカルプス（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）樹皮抽出物、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）ポリフェノール、ワイン抽出物、リンゴ種子抽出物、ヨーロッパブナ（Ｆａｇｕｓ ｓｙｌｖａｔｉｃａ）芽抽出物、アフリカバオバブ（Ａｄａｎｓｏｎｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ）抽出物、アルテミア（Ａｒｔｅｍｉａ）抽出物、イリス・フロレンティナ（Ｉｒｉｓ ｆｌｏｒｅｎｔｉｎａ）根抽出物、ヘスペリジン、ジンセノシド、タンジン（Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）抽出物、ニコチンアミド、ウルソール酸、ヒアルロン酸ナトリウム、アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム、加水分解ヒアルロン酸ナトリウム、リコペン、コーヒーノキ（Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ）抽出物、ジペプチド－２、乳酸、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）油、セラミド、ジパルミトイルヒドロキシプロリン、ヒドロキシステアリン酸、サリチル酸、エルゴチオネイン、リゾレシチン、カルノシン、デカルボキシカルノシンＨＣＬ、リポ酸、アデノシン、グリコーゲン、レスベラトロール、フェルラ酸、ビフィズス菌培養溶解緩衝液及び乳酸球菌培養溶解緩衝液の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中のアンチエイジング有効成分の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で０．０１～１０％である。

【0020】

賦形剤には、例えば、乳化剤、増粘剤、防腐剤、芳香剤等が含まれる。

【0021】

乳化剤の例としては、それだけに限らないが、オリーブ油脂肪酸セテアリル、オリーブ油脂肪酸ソルビタン、ポリソルベート－６０、ポリソルベート－８０、セスキステアリン酸メチルグルコース、セスキステアリン酸ＰＥＧ－２０メチルグルコース、ＰＥＧ－４０硬化ヒマシ油、ＰＰＧ－２６－ブテス－２６、ステアリン酸ＰＥＧ－４ポリグリセリル－２、ＰＥＧ－６０硬化ヒマシ油、ステアレス－２、ステアレス－２１、ＰＰＧ－１３－デシルテトラデセス－２４、セテアリルグルコシド、ステアリン酸ＰＥＧ－１００、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリルＳＥ、ココグルコシド、セテアレス－２５、ステアリン酸ＰＥＧ－４０、ジステアリン酸ポリグリセリル－３メチルグルコース、クエン酸ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ポリグリセリル－１０、ミリスチン酸ポリグリセリル－１０、ジオレイン酸ポリグリセリル－１０、ラウリン酸ポリグリセリル－１０、イソステアリン酸ポリグリセリル－１０、オレイン酸ポリグリセリル－１０、ジイソステアリン酸ポリグリセリル－１０、ラウリン酸ポリグリセリル－６、ミリスチン酸ポリグリセリル－６、ステアリン酸スクロース、及びポリステアリン酸スクロースの１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の乳化剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で０．５～１０％である。

【0022】

増粘剤の例としては、それだけに限らないが、カルボマー、アクリレート及びその誘導体、キサンタンガム、アラビアガム、ポリエチレングリコール－１４Ｍ、ポリエチレングリコール－９０Ｍ、スクシニル多糖、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの高分子ポリマーの１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の増粘剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で０．１～１０％である。

【0023】

防腐剤の例としては、それだけに限らないが、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、フェノキシエタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、ビス（ヒドロキシメチル）イミダゾリジニル尿素、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、クロルフェネシン（ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｅｓｉｎ）、デヒドロ酢酸ナトリウム、カプリルヒドロキサム酸、１，２－ヘキサンジオール、１，２－ペンタンジオール、ｐ－ヒドロキシアセトフェノン、カプリリルグリコール、カプリル酸グリセリル、ウンデシレン酸グリセリル、カプリル酸ソルビタン、エチルヘキシルグリセロール、及びシャクヤク根抽出物の１つ又は複数が挙げられる。化粧品組成物中の防腐剤の含有量は当技術分野で既知であり、例えば、典型的には成分（Ｂ）の総重量基準で０．０１～２％である。

【0024】

本発明によるアンチエイジング化粧品組成物は、当技術分野で既知の適切な方法のいずれかによって調製することができる。例えば、溶解タンク、乳化ポット、分散機、移送ポンプ等などの化粧品の分野で一般的に使用される装置を使用して組成物を調製することができる。調製中、水溶性物質を水相溶解ケトルに装入し、油溶性物質を油相溶解ケトルに装入し、２つのケトルをそれぞれ約８０℃に加熱する；凝集した原材料の場合、分散機を使用して事前に分散させることができる。溶解が完了したら、油相と水相を乳化ポットに移し、約５～１５分間均質化及び乳化する。乳化が完了したら、バルクを室温まで冷却し、場合により芳香剤、防腐剤などを添加し、必要に応じて製品のｐＨを調整する。

【0025】

上記の調製方法は、製品形態の要件に応じて変更又は調整することができる。アンチエイジング化粧品組成物は、軟膏、クリーム、ミルク、ローション、エッセンス等などの種々の製品形態に調製することができる。

【0026】

例
本発明を、例を参照して、さらに以下で詳細に説明する。しかしながら、これらの例及び比較例は、本発明を具体的に説明するためにのみ使用され、いかなる様式でも本発明の添付の特許請求の範囲を限定するものと理解されるべきではない。

【0027】

例１：老化関連遺伝子の発現に対するカバノキ樹液原液及び濃縮カバノキ樹液の効果
この例では、老化関連遺伝子の発現に対する、カバノキ樹液原液及び様々な濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液の効果を試験し、比較した。

【0028】

１．カバノキ樹液の濃縮
Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した新鮮なカバノキ樹液（シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ Ａｌｂａ）樹液）原液を、低温乾燥装置に導入し、－６５℃に冷却し、０．１Ｐａに真空引きし、１．０５倍、１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、４倍、８倍の程度までそれぞれ濃縮した。

【0029】

２．試験
実験機器：蛍光定量ＰＣＲ（Ｒｏｃｈｅ）、クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、ＣＯ_２インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、マイクロオシレーター。
実験試薬及び材料：ヒト初代線維芽細胞、６ウェル培養プレート、線維芽細胞用培養培地、ＲＮＡ抽出キット、逆転写キット、Ｔｒｉｚｏｌ溶解緩衝液等。

【0030】

線維芽細胞に基づく遺伝子発現の分析ステップは以下の通りであった：
（１）接種：細胞を６ウェル培養プレートに５Ｅ５細胞／ウェルの密度で接種し、５％ＣＯ_２を含むインキュベーターで、３７℃で一晩インキュベートした；
（２）投与：６ウェル培養プレートの細胞播種率が約６０％に達したら、各群の試験物質をそこに添加し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供した；
（３）試料回収：５％ＣＯ_２を含むインキュベーターに、３７℃で２４時間接種した後、培養培地を廃棄し、各ウェルに１ｍＬのＴｒｉｚｏｌを添加し、細胞を溶解した後、試料を回収した；
（４）ＰＣＲ検出：ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに逆転写し、蛍光定量ＰＣＲによって検出した；
（５）分析：２^{－ΔΔＣＴ}法を使用して結果を計算し、Ｔ検定法を統計分析に使用した。

【0031】

試験結果を以下の表に示した。

【表1】

【0032】

上記の結果は、カバノキ樹液原液と比較して、１．１～４倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物が、線維芽細胞に基づくアンチエイジング関連遺伝子の発現レベルを有意に増加させ、特に濃縮度が１．２～２倍の場合に、Ｉ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン及びラミニンの遺伝子発現レベルが全て、カバノキ樹液原液の遺伝子発現レベルよりも有意に高いことを示した。

【0033】

例２：アンチエイジング関連タンパク質の発現に対するカバノキ樹液原液及び濃縮カバノキ樹液の効果
この例では、アンチエイジング関連タンパク質の発現に対する、カバノキ樹液原液及び様々な濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液の効果を試験し、比較した。

【0034】

１．カバノキ樹液の濃縮
Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した新鮮なカバノキ樹液（シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ Ａｌｂａ）樹液）原液を、低温乾燥装置に導入し、－６５℃に冷却し、０．１Ｐａに真空引きし、１．０５倍、１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、４倍、８倍の程度までそれぞれ濃縮した。

【0035】

２．試験
実験機器：クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、免疫洗浄マイクロプレートウォッシャー（ＢＩＯ－ＲＡＤ）、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、ＣＯ_２インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）。
実験試薬及び材料：ヒト初代線維芽細胞、１２ウェル培養プレート、線維芽細胞用培養培地、様々な指標用のＥＬＩＳＡキット等。

【0036】

試験手順は以下の通りとした：
（１）接種：細胞を１２ウェル培養プレートに２Ｅ５細胞／ウェルの密度で接種し、５％ＣＯ_２を含むインキュベーターで、３７℃でインキュベートし、培養培地を２日毎に交換した；
（２）投与：１２ウェル培養プレートの細胞播種率が約６０％に達したら、各群の試験物質をそこに添加し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供した；
（３）試料回収：５％ＣＯ_２を含むインキュベーターに、３７℃で４８時間接種した後、培養培地を廃棄し、各ウェルに１ｍＬのＴｒｉｚｏｌを添加し、細胞を溶解した後、試料を回収した；
（４）検出：指標はＥＬＩＳＡキットの決定方法に従って決定した。
（５）分析：Ｔ検定法を統計分析に使用した。

【0037】

試験結果を以下の表に示した。

【表2】

【0038】

上記の結果は、カバノキ樹液原液と比較して、１．１～４倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物が、線維芽細胞に基づくアンチエイジング関連タンパク質の発現レベルを有意に増加させ、特に濃縮度が１．２～２倍の場合に、Ｉ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン及びラミニンのタンパク質発現レベルが全て、カバノキ樹液原液の遺伝子発現レベルよりも有意に高いことを示した。

【0039】

例３：組織（組換え３Ｄ全層皮膚モデル）に対するカバノキ樹液原液及び濃縮カバノキ樹液の効果
この例では、組換え３Ｄ全層皮膚モデルに対する、カバノキ樹液原液及び様々な濃縮度を有する濃縮カバノキ樹液の効果を試験し、比較した。

【0040】

１．カバノキ樹液の濃縮
Ｄａｘｉｎｇａｎｌｉｎｇ Ｃｈａｏｙｕｅ Ｗｉｌｄ Ｂｅｒｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した新鮮なカバノキ樹液（シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ Ａｌｂａ）樹液）原液を、逆浸透循環装置に導入し、操作圧力を０．５～５ｂａｒで制御し、温度を２０～３５℃にし、カバノキ樹液が１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍及び４倍の程度までそれぞれ濃縮されるまで循環させた。

【0041】

２．試験方法
実験機器：クリーンベンチ（Ｓｕ Ｊｉｎｇ）、インキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）、ＵＶＡ及びＵＶＢ照射器、マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ－ＴＥＫ）、凍結ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ）。
実験試薬及び材料：３Ｄ全層皮膚モデル（実験室で自作）、様々な指標用のＥＬＩＳＡキット、ＭＴＴ（３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド）キット等。

【0042】

試験手順は以下の通りとした：
（１）３Ｄ全層皮膚モデルの構築：３Ｄ全層皮膚モデルを、ケラチノサイト及び線維芽細胞を使用して構築した；
（２）モデリング及び投与：モデルが工場を出るとき、すなわち０日目に、ＳＳＵＶ照射処理（ＵＶＡ：３０Ｊ／ｃｍ^２；ＵＶＢ：５０ｍＪ／ｃｍ^２）を毎日行い、次いで、一定量の試料を対応するモデルの表面に施用した；モデル対照では、モデル培養培地のみを施用し、試験物質の各群に６複製ウェルを提供し、１日１回、合計４日間施用を行った；
（３）試料回収及び検出：モデリング及び投与後、培養培地を回収し、ＥＬＩＳＡキットを使用してＭＭＰ－１（マトリックスメタロプロテイナーゼ１）を決定した；試験物質の各群から３つのモデルを取得し、ＭＴＴキットを使用して細胞増殖生存率を決定してＭＴＴ値を得て；残りの３つのモデルを組織固定及びＩＨＣ染色に供して、表皮と真皮との間の接合部のＩＶ型コラーゲンの含有量を決定した；
（４）分析：Ｔ検定法を統計分析に使用した。

【0043】

試験結果を以下の表に示した。

【表3】

【0044】

ＭＴＴ値の結果は、カバノキ樹液原液と比較して、１．１～４倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物が、３Ｄ全層皮膚モデルの組織活力を有意に増加させることを示した。同様に、１．１～４倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物を使用した表皮と真皮との間の接合部でのＩＶ型コラーゲンの相対的発現レベルは、カバノキ樹液原液のレベルよりも有意に高かった。ＭＭＰ－１の結果は、１．１～４倍の濃縮度を有するカバノキ樹液濃縮物がカバノキ樹液原液よりも有意に優れていることを示した。上記の結果はまた、カバノキ樹液の濃縮度が１．１～２倍の場合に、組換え３Ｄ全層皮膚モデルの組織活力を有意に改善し、表皮と真皮との間の接合部でＩＶ型コラーゲンの相対的発現レベルを促進し、細胞外マトリックスにおけるＭＭＰ－１の発現を減少させることができることを示した。

【0045】

例４：アンチエイジングフェイスクリーム組成物の調製
アンチエイジングフェイスクリーム組成物の配合を以下の表に示した：

【表4】

【0046】

アンチエイジングフェイスクリーム組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料４、６、７、８、９、１１、１２、１３、１５及び２１を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料２、１６及び１８を室温でよく混合した；
３．原材料１０、１４、１７、２０を室温でよく混合した；
４．水相：原材料１、３及び５を８０℃に加熱し、ステップ２からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
５．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料１９を添加した；
６．攪拌しながら４０℃に冷却する際、ステップ３からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出してアンチエイジングフェイスクリーム組成物を得た。

【0047】

この例では、組換え３Ｄ全層皮膚モデルに対するアンチエイジングクリーム組成物の効果を試験した。

【0048】

結果は、アンチエイジングクリーム組成物が、組換え３Ｄ全層皮膚モデルの組織活力を極めて有意に増加させ、表皮と真皮との間の接合部でＩＶ型コラーゲンの相対的発現レベルを促進し、細胞外マトリックスにおけるＭＭＰ－１の発現を減少させることができることを示した。

【0049】

例５：アンチエイジングアイクリーム組成物の調製
アンチエイジングアイクリーム組成物の配合を以下の表に示した：

【表5】

【0050】

アンチエイジングアイクリーム組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料３、５、６、７、９及び１１を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料２及び１６を室温でよく混合した；
３．原材料１０、１４及び１７を室温でよく混合した；
４．水相：原材料１、４、８、１３、１８、１９及び２０を８０℃に加熱し、ステップ２からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
５．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料１２及び１５を添加した；
６．攪拌しながら４０℃に冷却する際、ステップ３からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出してアンチエイジングアイクリーム組成物を得た。

【0051】

顔半分対照試験法を使用して、２０人の対象を製品を使用する前と製品使用の４週間後で以下の通り試験した：
１）Ｐｒｉｍｏｓを使用して対象の左右の目尻を撮影し、ソフトウェアを使用して、しわの量、しわの面積、しわの深さ等を含むしわのパラメータを計算した；及び
２）Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒを使用して、左右の目尻の皮膚水分量を試験した；

【0052】

結果は、２０人のうち１８人の対象が、目尻の皮膚水分量が有意に増加し、このうち１５人が有意に浅く軽い目のしわ、しわ面積の減少、及びしわの量の減少を示した。

【0053】

例６：アンチエイジングエマルジョン組成物の調製
アンチエイジングエマルジョン組成物の配合は以下の通りとした：

【表6】

【0054】

アンチエイジングエマルジョン組成物を以下のように調製した：
１．油相：原材料４、５、６、７、１２及び１３を油相ポットに添加し、８０℃に加熱し、溶解し、よく混合した；
２．原材料２、８及び１１を室温でよく混合した；
３．原材料９、１０及び１６を室温でよく混合した；
４．水相：原材料１、３及び１４を８０℃に加熱し、ステップ２からの混合物を添加し、溶解し、よく混合した；
５．乳化：水相と油相を乳化タンクに添加し、８０℃に保持し、３０００ｒｐｍで５分間均質化及び乳化し、乳化が完了したら、原材料１５を添加した；
６．攪拌しながら４０℃に冷却する際、ステップ３からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出してアンチエイジングエマルジョン組成物を得た。

【0055】

２０人の対象をエマルジョン組成物で４週間処置し、主観的評価を行った。その中で、１８人が皮膚水分量の有意な増加及び滑らかで繊細で弾力のある皮膚を報告し；１６人がほうれい線及び目のしわの有意な改善を報告した。

【0056】

例７：アンチエイジングエッセンス組成物
アンチエイジングエッセンス組成物の配合を以下の表に示した：

【表7】

【0057】

アンチエイジングエッセンス組成物を以下のように調製した：
１．原材料１、２、３、４、６、１２及び１３を乳化タンクに添加し、８０℃に保持した；
２．原材料５、１０及び１１を室温でよく混合した；
３．原材料７、８及び９を室温でよく混合した；
４．原材料１４を添加し、ｐＨを調整した；
５．攪拌しながら４０℃に冷却する際、原材料１５及び１６ならびにステップ３からの混合物を添加し、よく攪拌し、排出してアンチエイジングエッセンス組成物を得た。

【0058】

顔半分対照試験法を使用して、２０人の対象を製品を使用する前と製品使用の８週間後で以下の通り試験した：
１）Ｐｒｉｍｏｓを使用して対象の左右の目尻を撮影し、ソフトウェアを使用して、しわの量、しわの面積、しわの深さ等を含むしわのパラメータを計算した；
２）Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒを使用して、左右の目尻の皮膚水分量を試験した；
３）Ｔｅｗａｍｅｔｅｒを使用して、左右の頬の経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ値）を試験した。

【0059】

結果は、２０人のうち１８人の対象が、目尻の皮膚水分量が有意に増加し、このうち１５人が有意に浅く軽い目のしわ、しわ面積の減少、及びしわの量の減少を示した。２０人のうち１８人の対象が、皮膚水分量が有意に増加し、ＴＥＷＬ値が有意に減少し、このうち１６人が有意に浅く軽いほうれい線及び目のしわ、しわ面積の減少、ならびにしわの量の減少を示した。

【0060】

上記の例の技術的解決策は、本発明の好ましい実施形態である。本発明の精神及び原理から逸脱することなく、種々の修正及び変形を行うことができ、これらの修正及び変形も本発明の範囲内とみなされるべきである。