特許 7332816 （３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の品質評価方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-08-15

(45)【発行日】2023-08-23

(54)【発明の名称】（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の品質評価方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 30/88 20060101AFI20230816BHJP

   G01N 30/90 20060101ALI20230816BHJP

   C07D 493/10 20060101ALN20230816BHJP

   A61P 3/00 20060101ALN20230816BHJP

   A61K 31/357 20060101ALN20230816BHJP

【ＦＩ】

G01N30/88 C

G01N30/90

C07D493/10

A61P3/00

A61K31/357

【請求項の数】 8

(21)【出願番号】P 2022547030

(86)(22)【出願日】2021-01-29

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-29

(86)【国際出願番号】 KR2021001191

(87)【国際公開番号】W WO2021154019

(87)【国際公開日】2021-08-05

【審査請求日】2022-07-29

(31)【優先権主張番号】10-2020-0012027

(32)【優先日】2020-01-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】513000366

【氏名又は名称】ヒュンダイ ファーム カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ジョン・ウン・ファン

(72)【発明者】

【氏名】キュ・ファン・イ

(72)【発明者】

【氏名】ウン・ヨン・キム

(72)【発明者】

【氏名】ス・キョン・チェ

【審査官】高田 亜希

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５３４５８２（ＪＰ，Ａ）

【文献】欧州特許出願公開第０３２０７９２８（ＥＰ，Ａ２）

【文献】特表２０１６－５１８３６６（ＪＰ，Ａ）

【文献】欧州特許出願公開第０２９８７７９１（ＥＰ，Ａ１）

【文献】米国特許出願公開第２００８／０３１２４５５（ＵＳ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｇ０１Ｎ ３０／００ － ３０／９６

Ｃ０７Ｄ ４９３／００ － ４９７／２２

Ｃ０７Ｄ ３１７／００ － ３２５／００

Ａ６１Ｋ ３１／３３ － ３３／４４

Ａ６１Ｐ ３／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式２：

【化1】

の化合物またはその塩を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の評価用組成物。

【請求項2】

下記化学式２：

【化2】

の化合物またはその塩を参照標準として用いて、医薬品中の（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の含有量を評価することを含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の品質評価方法。

【請求項3】

下記化学式２：

【化3】

の化合物またはその塩を参照標準として用いて、医薬品中の類縁物質の含有量を評価することを含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の品質評価方法。

【請求項4】

ａ）サンプルについてクロマトグラフィーを行って、データを収得する段階と、
ｂ）前記データを下記化学式２：

【化4】

の化合物またはその塩のクロマトグラフィーデータと比較する段階と、
を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含むサンプルを分析する方法。

【請求項5】

前記方法は、
（ａ）化学式２の化合物またはその塩を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の溶液を、高性能液体クロマトグラフィーにかけて、クロマトグラムを収得する段階と、
（ｂ）前記クロマトグラムで収得されたピークを、化学式２の化合物またはその塩で生成されたピークと比較する段階と、
を含む、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記方法は、
（ａ）化学式２の化合物またはその塩を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の溶液を、薄層クロマトグラフィーにかけて、クロマトグラムを収得する段階と、
（ｂ）前記クロマトグラムで収得されたスポットを、化学式２の化合物またはその塩で生成されたスポットと比較する段階と、
を含む、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸のクロマトグラフィーカラム保持時間を測定する方法であって、参照標準として下記化学式２：

【化5】

の化合物またはその塩を用いてクロマトグラフィーを行う段階を含む、方法。

【請求項8】

下記化学式２：

【化6】

の化合物またはその塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の類縁物質およびこれを用いた（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の品質評価方法に関する。

【背景技術】

【0002】

下記化学式１の化合物、すなわち（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸は、代謝性疾患治療剤として開発された薬物である（特許文献１、韓国特許登録第１０－１５６９５２２号；特許文献２、韓国特許登録第１０－１７２８９００号）。

【0003】

【化1】

【0004】

活性薬学成分（Ａｃｔｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ，「ＡＰＩ」）は、高い純度で製造されることが好ましいが、活性薬学成分の製造過程で反応生成物の混合物が純粋な単一化合物である場合は非常に珍しく、反応生成物の混合物には、反応の副産物および反応で使用される試薬などの不純物が含まれている。また、活性薬学成分は、製剤化過程または製剤の保管過程でも変形することがあるため、活性薬学成分のうち一部が分解されたり変形されて、不純物を生成することがある。したがって、原料医薬品または完成医薬品の製造、保管、使用時に医薬品中に存在する活性薬学成分の含有量を測定する必要があり、通常、ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、高性能液体クロマトグラフィー）またはＧＣ（Ｇａｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、気体クロマトグラフィー）分析によって活性薬学成分の純度を分析している。医薬品中に含まれた不純物は、類縁物質（ｒｅｌａｔｅｄ ｉｍｐｕｒｉｔｙまたはｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）とも呼ばれ、基準値以上の含有量（例えば、０．１％以上）を有する類縁物質の存在の有無を分析することも、医薬品の品質管理のために必須である。

【0005】

不純物は、クロマトグラム（ＴＬＣ（Ｔｈｉｎ－Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、薄層クロマトグラフィー）プレート上のスポット）中のピーク位置と関連がある（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐ．９５３）（Ｓｔｒｏｂｅｌ，Ｈ．Ａ．；Ｈｅｉｎｅｍａｎ，Ｗ．Ｒ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ：Ａ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ、３Ｒｄ ｄｄ．（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９））。

【0006】

したがって、不純物は、クロマトグラム中のその位置によって確認でき、これは、「保持時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）」と知られた、カラム上へのサンプルの注入時刻と特定成分が検出器を通じて溶出した時刻との間の時間として通常測定される。前記時間周期は、装置の状態および多くの他の要因によって毎日変化する。不純物の正確な確認に対してこのような変化がもたらす効果を低減するために、当業者は、「相対保持時間（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ＲＲＴ）」を使って不純物を確認する（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐ．９２２）。不純物のＲＲＴは、任意の参照標準の保持時間で割った不純物の保持時間である。理論上、活性薬学成分それ自体は、参照標準として用いられ得るが、実質的な物質として混合物内に過度な割合で存在してカラムを飽和させる傾向があり、再現不可能な保持時間を招く。したがって、検出可能に十分に顕著な量で混合物内に添加または存在させた、カラムを飽和させないほどの十分に低い含有量の代案的な化合物を選択し、このような化合物を参照標準として使用することが時には好ましい。

【0007】

薬物製造の研究者および開発者は、未知の混合物中の化合物の量を定量するために、相対的に純粋な状態の化合物が「参照標準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄ）」として使用できると理解される。化合物が「外部標準」として使用される場合、公知の濃度の化合物の溶液は、非公知の混合物と同じ技術によって分析される（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐ．９２４，Ｓｎｙｄｅｒ ｐ．５４９）（Ｓｎｙｄｅｒ，Ｌ．Ｒ．；Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｊ．Ｊ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、２版（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９７９））。混合物内の化合物の量は、検出器感度の等級を比較して測定できる。

【0008】

参照標準化合物は、また、二つの化合物に対する検出器の感度の差異を補償する「感度係数」がすでに決定された場合、混合物中の他の化合物の量を定量するのに使用できる（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐ．８９４）。前記目的のために、参照標準化合物を混合物に直接添加すえることができるが、この場合、これを「内部標準」（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐ．９２５，Ｓｎｙｄｅｒ ｐ．５５２）と称する。

【0009】

参照標準化合物は、未知の混合物が「標準添加」と呼ばれる技法でいくらかの参照標準化合物を含む場合に、内部標準として使用することができ、ここでは、２以上のサンプルは、既知の異なる量の内部標準を添加して調製される（Ｓｔｒｏｂｅｌ ｐｐ．３９１－３９３，Ｓｎｙｄｅｒ ｐｐ．５７１，５７２）。混合物中に本来存在していた参照標準化合物に起因した検出器感度の割合は、各サンプルに０まで添加される参照標準化合物の量に対する検出器感度のプロットの外挿によって測定することができる（例えば、Ｓｔｒｏｂｅｌ、図１１．４ ｐ．３９２）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【文献】韓国特許登録第１０－１５６９５２２号公報

【文献】韓国特許登録第１０－１７２８９００号公報

【非特許文献】

【0011】

【文献】Ｓｔｒｏｂｅｌ，Ｈ．Ａ．；Ｈｅｉｎｅｍａｎ，Ｗ．Ｒ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ：Ａ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ、３Ｒｄ ｄｄ．（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９）

【文献】Ｓｎｙｄｅｒ，Ｌ．Ｒ．；Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｊ．Ｊ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、２版（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９７９）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

本発明は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の類縁物質およびこれを用いた（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の品質評価方法を提供しようとする。

【0013】

［この発明を支援した国家研究開発事業］
［課題固有番号］ＨＩ１７Ｃ２５２９
［部署名］保健福祉部
［研究管理専門機関］韓国保健産業振興院
［研究事業名］先端医療技術開発
［研究課題名］（臨床１相）画期的血糖降下効果（ＨｂＡ１ｃ＞１％）を有する低血糖副作用がない強力な（ＥＣ５０＜１ｎＭ）糖尿病治療剤ＨＤ－６２７７開発
［寄与率］１／１
［主管機関］現代薬品（株）
［研究期間］２０１７１２１２～２０２００６３０

【課題を解決するための手段】

【0014】

本発明は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の類縁物質である下記化学式２の化合物またはその塩を提供する。

【0015】

【化2】

【0016】

本明細書において使用する用語「参照標準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄ）」は、活性薬学成分の定量および定性分析の両方に使用できる化合物を指す。例えば、ＨＰＬＣにおける化合物の保持時間は、相対保持時間の設定を許容して、定性分析を可能にする。ＨＰＬＣカラムに注入される前の溶液中の化合物の濃度は、ＨＰＬＣクロマトグラムのピーク下の面積比較を許容して、定量分析を可能にする。

【0017】

参照標準に関して当業界の一部の知識を、この点と関連して一般的に記述するが、当業者であれば検出器感度が、例えば、ＵＶ（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ、紫外線）または屈折率検出によってＨＰＬＣの溶離液（ｅｌｕｅｎｔ）から、または例えば、火炎イオン化検出または熱伝導性検出によってＧＣの溶離液から、またはその他の検出器感度、例えば、ＵＶ吸光によって蛍光ＴＬＣプレート上のスポットの溶離液から得られたクロマトグラムのピーク高さまたは統合されたピーク面積でありうることが理解できる。参照標準の位置は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸およびその他の不純物に対する相対保持時間を計算するのに使用できる。

【0018】

（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸が、光や、酸、温度、湿度などを用いたストレス条件に曝露されると、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の類縁物質が収得され、この類縁物質は、参照標準として使用することができる。

【0019】

本発明者らは、下記実施例１を通じて（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸合成過程でストレスを加えてこれの類縁物質を収得し、ＨＰＬＣおよび質量分析の結果から、その類縁物質が下記化学式２の化合物であることを確認した。

【0020】

【化3】

【0021】

前記化学式２の化合物は、参照標準として使用するために化学的合成を通じて製造することができる。これに制限されるものではないが、化学式２の化合物は、例えば、下記反応式１の過程を通じて収得することができる。

【0022】

【化4】

【0023】

具体的な合成方法は、下記の段階を含む。

【0024】

＜段階１＞（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）フェニル）メタノールの合成

【化5】

【0025】

（３－（１，４－ジオキサスピロ［４．５］デカ－７－エン－８－イル）フェニル）メタノールをエポキシ化して、（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）フェニル）メタノールを合成する。

【0026】

＜段階２＞３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ｄｉｏｘｏｌａｎ］－６－ｙｌ）ベンジルメタンスルホナートの合成

【化6】

【0027】

（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）フェニル）メタノールをメシル化させて、３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジルメタンスルホナートを合成する。

【0028】

＜段階３＞（３Ｓ）－エチル３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イノアートの合成

【化7】

【0029】

３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジルメタンスルホナートを（Ｓ）－エチル３－（４－ヒドロキシフェニル）ヘキサ－４－イノアートと反応させて、（３Ｓ）－エチル３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イノアートを得る。

【0030】

＜段階４＞（３Ｓ）－３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の合成

【化8】

【0031】

（３Ｓ）－エチル３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イノアートを加水分解して、（３Ｓ）－３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を得る。

【0032】

化学式２の化合物は、塩の形態で使用することができる。（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸は、薬学的に許容可能な塩の形態で医薬品中に含まれ得る。したがって、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の類縁物質である化学式２の化合物も、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の薬学的に許容される塩（特許文献１、韓国特許登録第１０－１５６９５２２号公報参照）に相当する塩の形態で使用可能である。例えば、化学式２の化合物は、参照標準として使用されるとき、薬学的に許容可能な金属塩またはアミノ酸塩の形態で使用可能である。例えば、金属塩としては、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩、アミノ酸塩としては、例えば、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、リシン、グルタミン酸などの天然アミノ酸塩が含まれる。

【0033】

一具体例において、本発明は、下記化学式２の化合物またはその塩を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の評価用組成物を提供する。

【0034】

【化9】

【0035】

上記で説明したように、化学式２の化合物またはその塩は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む原料医薬品または完成医薬品の品質を評価するための参照標準として使用することができる。換言すれば、医薬品中の（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸またはこれの類縁物質の含有量を分析して、医薬品製造過程での医薬品の純度や貯蔵安定性などを評価するための参照標準として使用することができる。

【0036】

本発明は、また、下記化学式２の化合物またはその塩を参照標準として用いて医薬品中の（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の含有量を評価することを含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の品質評価方法を提供する。

【0037】

化学式２の化合物またはその塩を参照標準として、医薬品または原料医薬品中の（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の含有量を分析する方法は、特に制限されず、組成物中の物質分析のための公知の方法を用いることができる。

【0038】

例えば、前記分析方法には、ＨＰＬＣを使用することができる。また、物質をＬＣ／ＭＳ（Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／Ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、ＮＭＲ（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）またはこれらのうち一つ以上を用いて定性分析する段階をさらに含んでもよい。

【0039】

例えば、ＨＰＬＣを用いてサンプルを分析する場合、検出器から出る電気的信号によりＸ軸を時間、Ｙ軸を信号の大きさにしてピークで示す。分離した物質のピーク高さおよび面積などから濃度に対する相対的結果を得ることができる。Ｘ軸の時間（ＲＴ：ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）は、既知の参照標準と比較した定性的要因となり、Ｙ軸を高さとし、ピークのＸ軸を底辺とするピークの面積（ｐｅａｋ ａｒｅａ，ｐｅａｋ ｈｅｉｇｈｔ）が定量性の要因となる。検出されたピーク面積のうちの総和分の各ピークの面積値で純度（Ａｒｅａ％：領域％）を計算する。

【0040】

前記医薬品の品質評価方法において、含有量評価の対象が必ず活性有効成分に限定される必要はない。例えば、活性有効成分の他に含まれている他の類縁物質も、化学式２の化合物またはその塩を参照標準としてこれらの含有量を分析することができる。

【0041】

したがって、本発明は、また、下記化学式２の化合物またはその塩を参照標準として用いて医薬品中の類縁物質の含有量を評価することを含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬品の品質評価方法を提供する。

【0042】

一具体例において、医薬品の長期保管条件（５℃±３℃下で３６ヶ月）の間に類縁物質が０．５％未満である場合、品質基準に適したものと判定する。

【0043】

他の具体例において、医薬品の長期保管条件（２５℃±２℃±５％ＲＨ）下で３６ヶ月保管時に、類縁物質が０．５％未満である場合、品質基準に適したものと判定する。

【0044】

さらに他の具体例において、医薬品の加速保管条件（４０℃±２℃±５％ＲＨ）下で２４ヶ月保管時に、類縁物質が０．５％未満である場合、品質基準に適したものと判定する。

【0045】

一具体例において、本発明は、
ａ）サンプルについてクロマトグラフィーを行って、データを収得する段階と、
ｂ）前記データを下記化学式２の化合物またはその塩のクロマトグラフィーデータと比較する段階と、
を含む、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含むサンプルを分析する方法を提供する。

【0046】

【化10】

【0047】

例えば、前記方法は、
（ａ）化学式２の化合物またはその塩を含む（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の溶液を高性能液体クロマトグラフィーにかけて、クロマトグラムを収得する段階と、
（ｂ）クロマトグラムで収得されたピークを化学式２の化合物またはその塩から生成されたピークと比較する段階と、
を含んでもよい。

【0048】

または、前記方法は、
（ａ）化学式２の化合物またはその塩を含む（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の溶液を薄層クロマトグラフィーにかけて、クロマトグラムを収得する段階と、
（ｂ）クロマトグラムで収得されたスポットを化学式２の化合物またはその塩で生成されたスポットと比較する段階と、
を含んでもよい。

【0049】

また、本発明は、（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸のクロマトグラフィーカラム保持時間を測定する方法であって、参照標準として下記化学式２の化合物またはその塩を用いてクロマトグラフィーを行う段階を含む方法を提供する。

【0050】

【化11】

【発明の効果】

【0051】

本発明によれば、化学式２の化合物またはその塩を参照標準（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄ）として用いて（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸を含む医薬組成物の品質および安定性などを評価することができる。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】化学式２の化合物のＩＲデータを示す図である。

【図2】化学式２の化合物のＤＳＣ－ＴＧＡデータを示す図である。

【図3】化学式２の化合物のＸＲＤデータを示す図である。

【図4】対照群と苛酷サンプルのＨＰＬＣ分析結果を比較して示す図である。図面で青色は対照群を示し、緑色（＊）は苛酷サンプルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0053】

以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、これは、本発明を説明するためのものに過ぎず、実施例によって本発明の範囲が何ら限定されるものではない。

【実施例】

【0054】

［実施例］
実施例１：類縁物質の分離
冷蔵条件（５℃±３℃）で約２年ほど保管された（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸含有物質約３５ｍｇを正確に測量して、５０ｍｌ容量のフラスコに入れた後、希釈液（ｄｉｌｕｅｎｔ）を２／３ほど入れ、よく混ぜた。その後、ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ）を用いて類縁物質を分析した。

【0055】

＜ＨＰＬＣ条件＞Ｏｐｅｒａｔｉｏｎ Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８、５ｕｍ、４．６×２５０ｍｍ
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５℃
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ：５μｌ
Ｓａｍｐｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ：０．７ｍｇ／ｍｌ
Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：２２０ｎｍ
Ｍｏｂｉｌｅ Ｐｈａｓｅ Ａ：０．０１Ｍ Ｋ_２ＨＰＯ_４（ｐＨ７）
Ｍｏｂｉｌｅ Ｐｈａｓｅ Ｂ：ＡＮ
Ｄｉｌｕｅｎｔ：Ｈ_２Ｏ／ＡＮ（８０／２０）
Ｇｒａｄｉｅｎｔ：

【表1】

Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：２２０（ｏｒ ２６０ｎｍ）。

【0056】

分析結果を下記に示した。

【表2】

【0057】

ＨＰＬＣ分析した類縁物質（ＲＲＴ：０．９３，Ａｒｅａ％ ０．２６％）が含有された物質をＱ－ＴＯＦ－ＬＣ／ＭＳ ｓｙｓｔｅｍでＭＳ ｓｃａｎおよびｐｒｏｄｕｃｔ ｉｏｎ ｓｃａｎで定性分析した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ｓｙｓｔｅｍは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍとＡｇｉｌｅｎｔ ６５５０ Ｑ－ＴＯＦ質量分析計を使って定性分析した。分析条件は、下記の通りである。

【0058】

＜ＨＰＬＣ条件＞
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ Ｃ１８ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍｎ（４×２０ｍｍ）を備えたＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（４．６×１５０ｍｍ，５μｍ）
Ｍｏｂｉｌｅ Ｐｈａｓｅ Ａ：ｏｆ ０．１％ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ＝６０／４０
Ｍｏｂｉｌｅ Ｐｈａｓｅ Ｂ：０．１％ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ／ＭｅＯＨ＝６０／４０
Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ（ｏｖｅｒ ３４ｍｉｎ）
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ：１０μｌ
Ｄｉｌｕｅｎｔ：Ｈ_２Ｏ／ＡＣＮ＝１０／９０

【表3】

Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：２２０（ｏｒ ２６０ｎｍ）。

【0059】

＜質量分析計条件＞
Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｖｏｌｔａｇｅ：３５００Ｖ
Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ：Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＥＳＩ＋）
Ｄｒｙｉｎｇ ｇａｓ：１４
Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ ｇａｓ：５０
Ｓｈｅａｔｈ ｇａｓ：１２
Ｓｈｅａｔｈ ｇａｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：４００℃
Ｄｒｙｉｎｇ ｇａｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５０℃
Ｆｕｌｌ ｓｃａｎ ＭＳ，ＭＳ／ＭＳ ｍｏｄｅ：（ｍ／ｚ １００－１０００）。

【0060】

検出段階で分離された分析物質が、質量分析計に流入するように設定し、この際、類縁物質の検出イオンを、質量スペクトルの特性イオン［Ｍ＋Ｎａ］を選定することによって定性的に分析した。

【0061】

分析結果、三つの予想化合物が導き出され、それぞれの予想化合物を合成してＭＳ分析した。その結果、ＲＲＴ ０．９３で現れる類縁物質の化学構造が下記化学式２の構造を有することを確認した。

【0062】

【化12】

【0063】

（３Ｓ）－３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸（（３Ｓ）－３－（４－（（３－（７－ｏｘａｓｐｉｒｏ［ｂｉｃｙｃｌｏ［４．１．０］ｈｅｐｔａｎｅ－３，２’－［１，３］ｄｉｏｘｏｌａｎ］－６－ｙｌ）ｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ）ｐｈｅｎｙｌ）ｈｅｘ－４－ｙｎｏｉｃ ａｃｉｄ）

【0064】

実施例２：化学式２の化合物の合成
化学式２の化合物は、下記反応式１によって下記のように合成した。

【0065】

【化13】

【0066】

＜段階１＞（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）フェニル）メタノールの合成

【化14】

【0067】

フラスコにメタクロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）（３６５．４０ｍｍｏｌ）を添加し、エチルアセテート（４５０ｍｌ）中に溶解させた。撹拌しつつ、内部温度を０℃に冷却した。（３－（１，４－ジオキサスピロ［４．５］デカ－７－エン－８－イル）フェニル）メタノール（ＤＳ－ＰＭＡ）（３０ｇ、１２１．８０ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（１５０ｍｌ）に溶かして０℃で添加した。添加後、常温で撹拌後、ＴＬＣでチェックして、反応が終結したことを確認した。反応物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３００ｍｌｘ３）、精製水（３００ｍｌｘ２）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過して、減圧濃縮した。シリカカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート：ｎ－ヘキサン＝１：２→エチルアセテート：ｎ－ヘキサン＝１：１）によって分離し、減圧濃縮して、固体化合物を得た。

【0068】

＜段階２＞３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジルメタンスルホナートの合成

【化15】

【0069】

（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）フェニル）メタノール（４．２５ｇ、１６．２０ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（４２．５ｍｌ）に溶解させた後、常温でトリエチルアミン（３．３８ｍｌ、２４．３０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌しつつ、温度を低減し、０℃でメシルクロリド（１．６３ｍｌ、２１．０６ｍｍｏｌ）をゆっくり滴加した。５℃で撹拌した。反応終結をＴＬＣで確認した。５℃で精製水（４２．５ｍｌ）を入れて撹拌した。有機層を抽出した後、精製水（４２．５ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウム（５０ｇ）で乾燥し、ろ過して、濃縮なしに次の反応を進めた。

【0070】

＜段階３＞（３Ｓ）－エチル３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イノアートの合成

【化16】

【0071】

メシル化（Ｍｅｓｙｌａｔｉｏｎ）した物質を収得率１００％で計算して、５．５１ｇでＳ_Ｎ２反応を進めた。

【0072】

３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジルメタンスルホナート（５．５１ｇ、１６．２０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）－エチル３－（４－ヒドロキシフェニル）ヘキサ－４－イノアート（３．５７ｇ、１５．３９ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、アセトニトリル（６４ｍｌ）に溶解させた。常温で第三リン酸カリウム（２１２．２７ｇ、３２．４０５ｍｍｏｌ）を添加した後、１時間３０分間７４～７６℃で加熱しつつ撹拌した。反応終結をＴＬＣで確認した後、温度を常温に下げた。精製水（３０ｍｌ）、エチルアセテート（３０ｍｌ）を入れ、撹拌した後、有機層と水層を分離した。有機層を５％塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥してろ過した。ろ過した有機層を減圧濃縮して、固体化合物を得た。

【0073】

＜段階４＞（３Ｓ）－３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸の合成

【化17】

【0074】

Ｓ_Ｎ２反応段階で収得率を１００％で計算して、７．１１ｇで加水分解反応を進めた。
（３Ｓ）－エチル３－（４－（（３－（７－オキサスピロ［ビシクロ［４．１．０］ヘプタン－３，２’－［１，３］ジオキソラン］－６－イル）ベンジル）オキシ）フェニル）ヘキサ－４－イノアート（７．１１ｇ、１４．９２ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（３６ｍｌ）、メタノール（３６ｍｌ）を入れ、撹拌した。水酸化カリウム（４．９２ｇ、７４．５９ｍｍｏｌ）を精製水（３６ｍｌ）に溶解して添加し、３０℃で３０分間撹拌した。反応終結をＴＬＣで確認した後、減圧濃縮した。精製水を入れ、撹拌した後、水層をエチルアセテートで２回洗浄した。内部温度を０～５℃に冷却した後、２Ｎ塩酸水溶液で酸性化して、有機層を抽出した。有機層を５％塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥後に減圧濃縮して、化合物を得た。

【0075】

合成された物質をＨＰＬＣおよび質量分析によって確認し、化学式２の構造を有することを確認した。また、この物質のＮＭＲおよびＩＲスペクトルを分析した。１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲおよびＩＲ（図１）の分析結果を下記に示す。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：１２．２７（ｂｒ、１Ｈ）、７．４３（１Ｈ）、７．３７（１Ｈ）、７．３２－７．２７（ｍ、３Ｈ）、６．９６（ｄ、２Ｈ）、５．０９（ｓ、１Ｈ）、３．９５－３．８１（ｍ、５Ｈ）、３．１２（ｄ、１Ｈ）、２．６１－２．５１（ｍ、３Ｈ）、２．１６（ｔ、２Ｈ）、２．０１（ｄ、１Ｈ）、１．７９（ｓ、３Ｈ）、１．６８－１．５６（ｍ、２Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ ｄ６）１７１．８５、１５７．１８、１４１．１１、１３７．２７、１３３．４８、１２８．４５、１２８．２９、１２６．７３、１２４．６８、１２４．３９、１１４．６４、１０５．４４、８０．５８、７８．１６、６９．１４、６３．８４、６３．５２、５９．８８、５９．２７、４２．８１、３４．７２、３２．７０、２７．９１、２５．４５、３．１４ｐｐｍ
吸収スペクトル（ＦＴ－ＩＲ、ＫＢｒ）：２９１２ｃｍ^－１、１７０６．１４ｃｍ^－１、１５０８．０３ｃｍ^－１、１１１１．６２ｃｍ^－１

【0076】

また、ＸＲＤおよびＤＳＣ／ＴＧＡを分析し、その結果を、それぞれ図２および図３に示した。ＸＲＤ、ＤＳＣ／ＴＧＡ分析条件は、下記の通りである。合成された物質は、無定形であることが確認された。
＜ＸＲＤ条件＞
Ｍｏｄｅｌ：Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ（Ｂｒｕｋｅｒ）
Ｐｏｗｅｒ：４０ｍＡ、４０ｋＶ、
Ｔｉｍｅ ｒａｎｇｅ：３ｍｉｎ－４５ｍｉｎ（６ｄｅｇ／ｍｉｎ＊３）
＜ＤＳＣ／ＴＧＡ条件＞
Ｍｏｄｅｌ：ＴＧＡ Ｑ５０００ ＩＲ／ＳＤＴ Ｑ６００（ＴＡ）
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒａｎｇｅ：４０℃～６００℃
Ｒａｔｅ：２０℃。

【0077】

実施例３：類縁物質としての化学式２の化合物の確認
類縁物質の生成を確認するために、酸化剤を用いてストレスを加えた苛酷サンプルを製造した。冷蔵条件（５℃±３℃）で約２年ほど保管された（３Ｓ）－３－（４－（３－（１，４－ジオキサスピロ［４，５］デカ－７－エン－８－イル）ベンジルオキシ）フェニル）ヘキサ－４－イン酸含有物質を約３５ｍｇを正確に測量して、５０ｍｌ容量のフラスコに入れた。希釈液（ｄｉｌｕｅｎｔ）を２／３ほど入れ、よく混ぜた。そこへ３％過酸化水素溶液２ｍｌを入れた後、よく混ぜ、希釈液で標線した。苛酷サンプルを室温に放置し、２４時間後、ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００ Ｓｅｒｉｅｓ）を用いて類縁物質を分析した。実施例１と同じ条件で分析した。その結果、苛酷サンプルで類縁物質が生成したことを確認した（ＲＲＴ ０．９３、Ａｒｅａ ３．８３％）。実施例１のサンプルを対照群として二つのサンプルのＨＰＬＣデータを比較して、図４に示した（青色：対照群、緑色：苛酷サンプル）。対照群と比較して、苛酷サンプルにおいて化学式２の類縁物質の生成が増加することを確認した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】