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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-08-24
(45)【発行日】2023-09-01
(54)【発明の名称】変形性関節症を処置する化合物及び方法
(51)【国際特許分類】
C07H 3/06 20060101AFI20230825BHJP
【ＦＩ】
C07H3/06 CSP
【請求項の数】
2
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2021026160
(22)【出願日】2021-02-22
(65)【公開番号】P2022127918
(43)【公開日】2022-09-01
【審査請求日】2021-02-22
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 令和２年２月２１日にウェブサイト ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｐｄｆ／１０．１０２１／ｊａｃｓ．０ｃ００００５に掲載。 また、当該刊行物のＳｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎは、ウェブサイト ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｓｕｐｐｌ／１０．１０２１／ｊａｃｓ．０ｃ００００５／ｓｕｐｐｌ＿ｆｉｌｅ／ｊａ０ｃ００００５＿ｓｉ＿００１．ｐｄｆに掲載。
(73)【特許権者】
【識別番号】596118493
【氏名又は名称】アカデミア シニカ
【氏名又は名称原語表記】ＡＣＡＤＥＭＩＡ ＳＩＮＩＣＡ
【住所又は居所原語表記】１２８ Ｓｅｃ ２，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｋａｎｇ，Ｔａｉｐｅｉ １１５２９ ＴＷ
(74)【代理人】
【識別番号】100167689
【弁理士】
【氏名又は名称】松本 征二
(72)【発明者】
【氏名】ハング， シャング・チェング
(72)【発明者】
【氏名】ウォング， チ・ヒューイー
(72)【発明者】
【氏名】チェング， ティング・ジェン
【審査官】神谷 昌克
(56)【参考文献】
【文献】Tetrahedron，2008年，Vol.64, No.42，pp.9865-9873
【文献】Nature Chemical Biology，2019年，Vol.15, No.7，pp.699-709
【文献】Journal of Organic Chemistry，2015年，Vol.80, No.24，pp.12265-12279
【文献】Chemistry - A European Journal，2016年，Vol.22, No.7，pp.2356-2369
【文献】Database CAPlus [Online]: Chemical Abstracts Service, Columbus, Ohio ISA. ，2014年，Retrieved from STN，Accession Number (AN) 2014:813856，Document Number(DN) 161:903
【文献】ChemBioChem，2004年，Vol.5, No.1，pp.55-61
【文献】Glycoconjugate Journal，2004年，Vol.21, No.5，pp.179-195
【文献】Biochemical and Biophysical Research Communications，2002年，Vol.292, No.1，pp.222-230
【文献】生化学，2011年，第８３巻、第３号，pp.216-223
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｈ
Ｇ０１Ｎ
Ｃ１２Ｎ
Ｃ１２Ｑ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物又はその溶媒和物であって、【化1】
Ｒ１は、－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２はメチル又は－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、
Ｍは、ナトリウムである、化合物。
【請求項2】
式（ＩＩ）の化合物又はその溶媒和物であって、【化2】
Ｘは、Ｏであり、
Ｒ１は、－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２は、－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、
Ｍは、ナトリウムである、化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、概略として新規のエンド－Ｏ－スルファターゼ－１（Ｓｕｌｆ－１）基質及び阻害物質並びにその使用に関する。
【背景技術】
【0002】
変形性関節症（ＯＡ）は、直ちに生命を危険にさらすことはないが生活の質に深刻に影響し得る老化疾患である。人口の高齢化に伴い、（日本のような）高齢化社会に分類される国が増えており、それにより生活の質を維持するコストが増加する。
【0003】
ＯＡの診断について、ＯＡの段階を臨床的に定義する黄金律はない。ＯＡの診断は、（疼痛などの）病理学的診断及び画像診断（Ｘ線及びＭＲＩ）によってのみ行われ得る。画像診断は、主に関節腔狭窄（ＪＳＮ）及び骨棘（ケルグレン－ローレンス グレーディングスケール）に従って行われる。これらの評価方法は、初期のＯＡでの変化を検出するのに十分な感度がないだけでなく、グレーダーとスコアラーの間の差異を正確に評価することもできない。例えば、グレード１のＪＳＮの場合、軟骨の体積損失は、約１１～１３％であり、Ｘ線撮影又は膝の疼痛の評価によっては判断できない。これらの従来の感度の低い検出方法に基づくと、変形性関節症の警告、予防及び治療の重要な時期を逃すことが多い。この目的で、ＯＡの診断及び予測のための新規の方法を開発する必要がある。
【0004】
臨床現場では、画像診断は、ＯＡの第３段階及び第４段階のみを判断することができる。ＯＡのバイオマーカーについての研究は非常に普及している。軟骨基質は、主にコラーゲン、ヒアルロン酸、糖タンパク質で構成される。コラーゲンタンパク質は、繊維の長いストリップの形態であり、軟骨基質に織り込まれて、３次元の主な枠組みを形成する。格子の内部の領域は、ヒアルロン酸及び糖タンパク質で満たされる。コンドロイチン硫酸（ＣＳ）は、糖タンパク質の主成分である。これらの軟骨基質に特異的なタンパク質、合成又は分解中に生成される中間生成物は、通常、ＯＡのバイオマーカーとして使用される。
【0005】
現在、ＦＮＩＨ（国立衛生研究所財団）及びＯＡＲＳＩ（国際変形性関節症学会）のバイオマーカーデータベースには、変性関節炎を判断する可能性のある約１８個のバイオマーカーがある。これらのバイオマーカーをモニタリングする標本材料は、主に局所（関節液、軟骨組織）及び全身（血液など）に分けられ、それらは全て侵襲的な方法によって取得される必要がある。これらのバイオマーカーは、主に合成、軟骨基質の異化作用又は炎症をモニタリングする。変形性関節症は炎症性疾患でありながら炎症指標のバイオマーカーとして使用されるものの、身体の他の部分の炎症によって影響されやすい。軟骨基質代謝については、ＡＤＡＭＴＳ（トロンボスポンジンモチーフを有するディスインテグリン及びメタロプロテイン）、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテイナーゼ）が、主要なモニタリング標的である。ＮＯＳ－２（一酸化窒素合成酵素２）のような、高い酸化ストレスによって生成されるサイトカイン及びＣｏｌＩＩ（ＩＩ型コラーゲン）のような軟骨特異的タンパク質からの分解中間粒子も、主要なモニタリング対象物である。これらのＯＡバイオマーカーは、主に変形性関節症の中期段階又は後期段階での軟骨基質の分解をモニタリングする。変形性関節症の初期段階については、それらの有効な検出率は非常に低い。
【0006】
スルファターゼは、生体系において硫酸エステルを開裂するエステラーゼの部類の酵素である。それは、発生細胞シグナル伝達、病因、ホルモン調節及び細胞外マトリックスの分解に関与する多くの生理学的分子の機能を決定する硫酸化状態を調節する。しかし、スルファターゼのメカニズムは軟骨のホメオスタシスに影響し、軟骨形成は不明なままである。
【0007】
我々は、ＯＡ病変でのスルファターゼ１（ｓｕｌｆ１）の発現は、遠い病変部分よりも高いことを見出した。ｓｕｌｆ１は、免疫学的刺激剤の後にも誘発された。ＣＳ－６：ＣＳ－４の比率の変化は、ＯＡ患者の尿及び軟骨で見られた。成人期ではＣＳ－６は小児期よりもはるかに多いが、変形性関節症の患者についてはＣＳ－６の発現は減少した。スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ１）は、ヘパリン硫酸、ケラチン硫酸及びコンドロイチン硫酸から６－Ｏ－硫酸基を開裂する。我々は、６－Ｏ－硫酸基を開裂してＣＳの構造安定性を変化させるスルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）が、変形性関節症での細胞外マトリックスの分解に重要な役割を果たしていると仮定する。軟骨の不安定な細胞外マトリックスは、マトリックスの分解及びＯＡプロセスを誘発する。そこで、スルファターゼ１は、ＯＡの診断及び治療について有望な候補となる。
【0008】
関連技術において、ＯＡを有し又は有するものと疑われる被検体を特定及び処置する改善された方法のニーズが存在する。
【発明の概要】
【0009】
上記を考慮して、本開示は、新規のエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）基質及び阻害物質並びにＯＡを有する被検体を特定及び処置する方法を提供する。
【0010】
そこで、本開示の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物又はその溶媒和物であって、
Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ１は、－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２はＣ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、Ｈ、又はリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。
【化1】
Ｒ１は、－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２はＣ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、Ｈ、又はリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。
【0011】
本開示のある実施形態によれば、化合物は、
からなる群から選択されるヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質である。
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
からなる群から選択されるヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ１（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質である。
【0012】
本開示の更なる実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0013】
本開示の第２の態様は、式（ＩＩ）の化合物又はその溶媒和物であって、
ｎは、２又は３であり、
Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ１は、－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２は、Ｃ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、リチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。
【化13】
ｎは、２又は３であり、
Ｘは、メチレン、Ｏ又はＮであり、
Ｒ１は、－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、
Ｒ２は、Ｃ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、
Ｍは、リチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである、化合物に向けられる。
【0014】
本開示のある実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ（Ｓｕｌｆ－１）阻害物質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ２ＮＨ２であり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0015】
本開示の更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0016】
本開示のまた更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の化合物はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが３であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0017】
本開示の第３の態様は、変形性関節症を有する被検体を特定及び処置する方法に向けられる。方法は、
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び上記の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を備える。
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び上記の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を備える。
【0018】
本開示のある実施形態によれば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質はタグ分子で標識されて膜の表面にコーティングされ、４－ＭＵＳは膜の一端に線状にコーティングされる。
【0019】
タグ分子の例は、ビオチン、金コロイド及び三糖硫酸塩ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓを含むが、これに限定されない。
【0020】
本方法での使用に適した鎮痛剤の例は、アセトアミノフェン及びコデインなどを含むが、これに限定されない。
【0021】
本方法での使用に適したＮＳＡＩＤの例は、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ピロキシカム、インドメタシン、メロキシカム、ケトプロフェン、スリンダク、ジフルニサル、ナブメトン、オキサプロジン、トルメチン、サルサレート、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート及びメフェナム酸を含むが、これに限定されない。
【0022】
本方法での使用に適したコルチコステロイドの例は、コルチゾールを含むが、これに限定されない。
【0023】
本開示の１以上の実施形態の詳細を、以下の付随する説明において説明する。発明の他の特徴及び効果が、詳細な説明から、及び特許請求の範囲から明らかとなる。
【0024】
以上の概略説明及び以下の詳細な説明の双方は例示としてのものであり、特許請求される発明の更なる説明を与えることが意図されていることが理解されるべきである。
【0025】
明細書に取り込まれてその一部を構成する添付図面は、発明の種々の態様の種々の例示のシステム、方法及び他の例示的な実施形態を示す。本説明は、添付図面を考慮して読まれる以下の詳細な説明からより深く理解されることになる。
【図面の簡単な説明】
【0026】
【図1】図１は、４－ＭＵＳとの競合アッセイに基づくＳｕｌｆ－１基質のスクリーニングを示し、（Ａ）は、４－ＭＵＳ及びＳｕｌｆ－１基質としての競合物の蛍光アッセイであり、（Ｂ）は、Ｓｕｌｆ－１との４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の加水分解での競合物としての二糖１８、四糖１９、六糖２０及びヘパリン３０００の３２０μＭの蛍光強度である。Ｓｕｌｆ－１との４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の純水での強度を１００％に設定した。（Ｃ）Ｓｕｌｆ－１に対する競合基質としての種々のスルホン化四糖２１～３５の０．３２ｍＭの蛍光スクリーニング。
【発明を実施するための形態】
【0027】
添付図面との関連で以下に与えられる詳細な説明は、本開示の説明としてのものであり、本開示が構成又は利用され得る形態のみを示すものではない。
【0028】
１．定義
特に断りがない限り、用語「患者」又は「被検体」は、本開示において互換可能に使用することができ、任意の動物のことをいう。動物は、ヒト被検体であってもよいし、ヒト以外の被検体であってもよい。被検体はヒトであり得るが、獣医学的処置を必要とする哺乳動物、例えば、飼育動物又は狩猟動物、家畜及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット及び霊長類など）であってもよい。通常、動物は、ヒト以外の霊長類のようなヒト以外の哺乳動物である。ヒト以外の霊長類は、チンパンジー、シノモロガスサル、クモザル及びマカク、例えばＲｈｅｓｕｓ又はＰａｎを含む。飼育動物及び狩猟動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、シカ、バイソン、バッファロー、ミンク、ネコ科動物（例えば、飼いネコ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）、オオカミ及びキツネ、鳥類（例えば、トリ、シチメンチョウ及びダチョウ）並びに魚（例えば、マス、ナマズ及びサケ）を含む。被検体は、ここに記載の薬剤（例えば、本開示のＳｕｌｆ－１阻害物質）によって変形性関節症を患い又は発症するリスクを有しているとしてまだ特定されておらず、したがってそのための処置をまだ受けていないものであり得る。
特に断りがない限り、用語「患者」又は「被検体」は、本開示において互換可能に使用することができ、任意の動物のことをいう。動物は、ヒト被検体であってもよいし、ヒト以外の被検体であってもよい。被検体はヒトであり得るが、獣医学的処置を必要とする哺乳動物、例えば、飼育動物又は狩猟動物、家畜及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット及び霊長類など）であってもよい。通常、動物は、ヒト以外の霊長類のようなヒト以外の哺乳動物である。ヒト以外の霊長類は、チンパンジー、シノモロガスサル、クモザル及びマカク、例えばＲｈｅｓｕｓ又はＰａｎを含む。飼育動物及び狩猟動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、シカ、バイソン、バッファロー、ミンク、ネコ科動物（例えば、飼いネコ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）、オオカミ及びキツネ、鳥類（例えば、トリ、シチメンチョウ及びダチョウ）並びに魚（例えば、マス、ナマズ及びサケ）を含む。被検体は、ここに記載の薬剤（例えば、本開示のＳｕｌｆ－１阻害物質）によって変形性関節症を患い又は発症するリスクを有しているとしてまだ特定されておらず、したがってそのための処置をまだ受けていないものであり得る。
【0029】
特に断りがない限り、用語「治療する／処置する／処理する（ｔｒｅａｔ）」、「治療している／処置している／処理している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」及び「治療／処置／処理（ｔｒｅａｍｅｎｔ）」は、患者が特定の疾患又は障害を患う間に生じる作用であって、疾患若しくは障害の重症度又はその症状の１以上を軽減し、又は疾患若しくは障害の進行を阻止又は減速する作用を考慮する。
【0030】
本発明の化合物の溶媒和物も、ここでは考慮される。用語「溶媒和物」は、溶質（例えば、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物）及び溶媒によって形成される可変化学量論の複合体を意味すると理解されるべきである。適切な溶媒の例は、水、アセトン、メタノール、エタノール及び酢酸を含むが、これに限定されない。好ましくは、使用される溶媒は、薬学的に許容可能な溶媒である。薬学的に許容可能な適切な溶媒の例は、水、エタノール及び酢酸を含む。最も好ましくは、溶媒は水である。塩又は溶媒和物の調製は、当技術内で既知の方法によって実施され得る。薬学的に非許容な塩又は溶媒和物も、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物又はプロドラッグの調製に有用であり得るため、本発明の範囲内であることが留意されるべきである。
【0031】
発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは概数であるものの、特定の実施例で説明される数値は可能な限り厳密に報告される。ただし、いずれの数値も、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的にもたらされる所定の誤差を本来的に含む。また、ここで使用されるように、用語「約」は、所与の値又は範囲の１０％、５％、１％又は０．５％内を一般に意味する。あるいは、用語「約」は、当業者によって考慮される場合の平均の許容標準誤差内を意味する。有効な／効果的な実施例以外、又は明示の断りがない限り、ここに開示されるその材料の量、継続時間、温度、動作条件、量の比率などに対するものなどの数値範囲、量、値及び割合の全ては、いずれの場合においても用語「約」によって変更されるものとして理解されるべきである。したがって、逆のことが示されない限り、本開示及び添付の特許請求の範囲で説明される数値パラメータは、所望のように変化し得る概数である。少なくとも、各数値パラメータは、報告される有効数字の数を考慮してかつ通常の四捨五入手段を適用して少なくとも解釈されるべきである。
【0032】
ここで、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、そうでないことを文脈が明示しない限り、複数の参照を含むものとして使用される。
【0033】
２．本発明の化合物
本開示の態様は、所定の硫酸化オリゴ糖がヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ、特にＳｕｌｆ－１の基質であるという発見に関連し、それらのスルホンアミドはＳｕｌｆ－１の阻害物質であり、したがってこれらのオリゴ糖スルホンアミドは変形性関節症を有し又は有する疑いのある被検体を特定するために使用されることができ、それにより、適切な処置又は予防手段をそのような被検体に適時に展開させることができる。硫酸化オリゴ糖及びそれらのスルホンアミドの例は、ここに記載される。
本開示の態様は、所定の硫酸化オリゴ糖がヒトエンド－Ｏ－スルファターゼ、特にＳｕｌｆ－１の基質であるという発見に関連し、それらのスルホンアミドはＳｕｌｆ－１の阻害物質であり、したがってこれらのオリゴ糖スルホンアミドは変形性関節症を有し又は有する疑いのある被検体を特定するために使用されることができ、それにより、適切な処置又は予防手段をそのような被検体に適時に展開させることができる。硫酸化オリゴ糖及びそれらのスルホンアミドの例は、ここに記載される。
【0034】
一態様では、本発明は式（Ｉ）の硫酸化三糖又は薬学的に許容可能なその溶媒和物に関する。
【化14】
【0035】
式（Ｉ）において、Ｘはメチレン、Ｏ又はＮであり、Ｒ１は－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、Ｒ２はＣ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、Ｍはリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである。
【0036】
本開示の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の三糖は、以下からなる群から選択されるＳｕｌｆ－１阻害物質である。
【化15】
【化16】
【化17】
【化18】
【化19】
【化20】
【化21】
【化22】
【化23】
【化24】
【化25】
【0037】
本開示のある実施形態によれば、式（Ｉ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0038】
他の態様では、本開示は、式（ＩＩ）のオリゴ糖又は薬学的に許容可能なその溶媒和物に向けられる。
【化26】
【0039】
式（ＩＩ）において、ｎは２又は３であり、Ｘはメチレン、Ｏ又はＮであり、Ｒ１は－ＳＯ３Ｍ又は－ＳＯ２ＮＨ２であり、Ｒ２はＣ１－６アルキル又はＣ１－６アルキルアミンであり、Ｍはリチウム、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムからなる群から選択される一価カチオンである。
【0040】
本開示の好ましい実施形態によれば、式（ＩＩ）のオリゴ糖はＳｕｌｆ－１阻害物質であり、ｎは２であり、ＸはＯであり、Ｒ１は－ＳＯ２ＮＨ２であり、Ｒ２は－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍはナトリウムである。
【0041】
本開示のある実施形態によれば、式（ＩＩ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが２であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0042】
本開示の更なる実施形態によれば、式（ＩＩ）の三糖はＳｕｌｆ－１の基質であり、ｎが３であり、ＸがＯであり、Ｒ１が－ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）５ＮＨ２であり、Ｍがナトリウムである。
【0043】
本開示の硫酸化三糖又はオリゴ糖及びそれらのスルホンアミド（すなわち、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物）は、効果的な実施例に記載の手順に従って調製され得る。エナンチオマー及びジアステレオマーの形態を含む式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物の置換基上の不斉炭素に起因して存在し得るもののような、本化合物の全ての立体異性体は、本発明の範囲内で考慮される。発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、実質的に他の異性体を含んでいなくてもよいし、例えばラセミ体として、又は他の全ての立体異性体若しくは他の選択された立体異性体と共に混合されてもよい。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ１９７４勧告によって定義されるようなＳ又はＲ配置を有し得る。
【0044】
３．使用方法
本開示の他の態様は、変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法を提供することにある。この目的のために、本開示の実施形態は、競合物アッセイでの蛍光の変化を測定することを介して、ＯＡ被検体に由来する生物学的サンプル中のＳｕｌｆ－１のレベルの測定に向けられ、本オリゴ糖スルホンアミドは、Ｓｕｌｆ－１によって開裂された後に蛍光生成物（すなわち、４－メチルウンベリフェロン、（４－ＭＵ））を生じさせるＳｕｌｆ－１基質（すなわち、４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ））と競合する。したがって、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の本オリゴ糖スルホンアミドがＳｕｌｆ－１の活性を抑制した場合、コントロールのものと比較して、蛍光の減少が観察されるはずである。
本開示の他の態様は、変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法を提供することにある。この目的のために、本開示の実施形態は、競合物アッセイでの蛍光の変化を測定することを介して、ＯＡ被検体に由来する生物学的サンプル中のＳｕｌｆ－１のレベルの測定に向けられ、本オリゴ糖スルホンアミドは、Ｓｕｌｆ－１によって開裂された後に蛍光生成物（すなわち、４－メチルウンベリフェロン、（４－ＭＵ））を生じさせるＳｕｌｆ－１基質（すなわち、４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ））と競合する。したがって、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の本オリゴ糖スルホンアミドがＳｕｌｆ－１の活性を抑制した場合、コントロールのものと比較して、蛍光の減少が観察されるはずである。
【0045】
したがって、本発明は、変形性関節症を有し又は有すると疑われる被検体を特定及び処置する方法を包含する。方法は、
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び本開示の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を含む。
（ａ）被検体の尿サンプルを４－メチルウンベリフェリル硫酸塩（４－ＭＵＳ）及び本開示の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質と混合するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の混合物の蛍光強度を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の決定された蛍光強度が尿サンプル及び４－ＭＵＳの混合物であるコントロールサンプルのものよりも小さい場合に、鎮痛剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はコルチコステロイドによって被検体を処置するステップと、を含む。
【0046】
本開示での使用に適した式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質の例は、以下を含むが、これに限定されない。
【化27】
【化28】
【化29】
【化30】
【化31】
【化32】
【化33】
【化34】
【化35】
【化36】
【化37】
【化38】
【0047】
追加的又は代替的に、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＳｕｌｆ－１阻害物質はタグ分子でさらに標識されて膜の表面にコーティングされ、４－ＭＵＳは膜の一端に線状にコーティングされる。タグ分子の例は、ビオチン、金コロイド及び三糖硫酸塩ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓを含むが、これに限定されない。
【0048】
本方法での使用に適した鎮痛剤の例は、アセトアミノフェン及びコデインなどを含むが、これに限定されない。
【0049】
本方法での使用に適したＮＳＡＩＤの例は、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ピロキシカム、インドメタシン、メロキシカム、ケトプロフェン、スリンダク、ジフルニサル、ナブメトン、オキサプロジン、トルメチン、サルサレート、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトロラク、メクロフェナメート及びメフェナム酸を含むが、これに限定されない。
【0050】
本方法での使用に適したコルチコステロイドの例は、コルチゾールを含むが、これに限定されない。
【0051】
ここで、限定ではなく例証を目的として提供される以下の実施形態を参照して、本発明をより具体的に説明する。それらは標準的に使用され得るものであるが、当業者に公知の他の手順、方法論又は技術が代替的に使用されてもよい。
【実施例】
【0052】
材料及び方法
４－ＭＵＳ基質との競合アッセイ
３２０μＭの基質を含有する溶液を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中のＳｕｌｆ－１及び４－ＭＵＳと共に３７℃で１時間インキュベートし、蛍光強度を３５５／４６０ｎｍで測定した。競合する基質を有さないコントロール混合物を１００％蛍光強度として定義し、基質を有するサンプルを蛍光強度の割合：（基質サンプルの蛍光強度）／（コントロールサンプルの蛍光強度）として決定した。
４－ＭＵＳ基質との競合アッセイ
３２０μＭの基質を含有する溶液を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中のＳｕｌｆ－１及び４－ＭＵＳと共に３７℃で１時間インキュベートし、蛍光強度を３５５／４６０ｎｍで測定した。競合する基質を有さないコントロール混合物を１００％蛍光強度として定義し、基質を有するサンプルを蛍光強度の割合：（基質サンプルの蛍光強度）／（コントロールサンプルの蛍光強度）として決定した。
【0053】
Ｓｕｌｆ－１活性アッセイ
ヒトＳｕｌｆ－１を、以前に報告された手順に従って過剰発現及び精製した４８。Ｓｕｌｆ－１の活性を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中で４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）をＳｕｌｆ－１と共に３７℃で１時間インキュベートすることによって決定し、蛍光強度をＥＬＩＳＡリーダー（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダー）において３５５ｎｍでの励起に続いて４６０ｎｍで測定した。
ヒトＳｕｌｆ－１を、以前に報告された手順に従って過剰発現及び精製した４８。Ｓｕｌｆ－１の活性を５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中で４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）をＳｕｌｆ－１と共に３７℃で１時間インキュベートすることによって決定し、蛍光強度をＥＬＩＳＡリーダー（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒプレートリーダー）において３５５ｎｍでの励起に続いて４６０ｎｍで測定した。
【0054】
ＨＰＬＣアッセイ
基質の溶液（４８０μＭ）を、Ｓｕｌｆ１とともに又はＳｕｌｆ１なしで、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中において３７℃で１６時間インキュベートした。基質からの硫酸イオンの放出を、ＨＰＬＣを介して定量化した。各サンプル（５μＬ）をＡＳ９ＨＣ陰イオン交換カラム（Ｄｉｏｎｅｘ）に注入し、硫酸イオンを９ｍＭのＮａ２ＣＯ３で溶出し、そしてリージェントフリーコントローラー（ＰＲＯＤ、ＲＦＣ－１０）を有する導電率検出器（ＰＲＯＤ、ＡＥＲＳ５００、４ｍｍ、Ｔｈｅｒｍａｌ）で分析し、０～５００μＭのＮａ２ＳＯ４（Ｍｅｒｃｋ）による標準曲線と比較した。
基質の溶液（４８０μＭ）を、Ｓｕｌｆ１とともに又はＳｕｌｆ１なしで、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中において３７℃で１６時間インキュベートした。基質からの硫酸イオンの放出を、ＨＰＬＣを介して定量化した。各サンプル（５μＬ）をＡＳ９ＨＣ陰イオン交換カラム（Ｄｉｏｎｅｘ）に注入し、硫酸イオンを９ｍＭのＮａ２ＣＯ３で溶出し、そしてリージェントフリーコントローラー（ＰＲＯＤ、ＲＦＣ－１０）を有する導電率検出器（ＰＲＯＤ、ＡＥＲＳ５００、４ｍｍ、Ｔｈｅｒｍａｌ）で分析し、０～５００μＭのＮａ２ＳＯ４（Ｍｅｒｃｋ）による標準曲線と比較した。
【0055】
Ｓｕｌｆ－１阻害アッセイ
阻害活性を、ヒトＳｕｌｆ－１及び阻害物質の存在下で４－ＭＵＳから放出される４－ＭＵによって測定した。Ｓｕｌｆ－１を、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中で、阻害物質（０～１０μＭ）及び４－ＭＵＳ（０～２０ｍＭ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。４－ＭＵＳ加水分解の初期速度を、３５５ｎｍでの励起に続く４６０ｎｍでの蛍光強度を測定することによって決定した（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ、ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ）。得られたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄを使用してミカエリスメンテン式に整合させ、酵素阻害パラメータを決定した。
阻害活性を、ヒトＳｕｌｆ－１及び阻害物質の存在下で４－ＭＵＳから放出される４－ＭＵによって測定した。Ｓｕｌｆ－１を、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２及び５ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ７．４）中で、阻害物質（０～１０μＭ）及び４－ＭＵＳ（０～２０ｍＭ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。４－ＭＵＳ加水分解の初期速度を、３５５ｎｍでの励起に続く４６０ｎｍでの蛍光強度を測定することによって決定した（ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ、ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ）。得られたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄを使用してミカエリスメンテン式に整合させ、酵素阻害パラメータを決定した。
【0056】
表面プラズモン共鳴を使用する解離定数（ＫＤ）の決定
化合物４６を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用して、製造元のガイドラインに従ってＢｉａｃｏｒｅセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の表面に固定化した。動態解析研究を、ランニングバッファー［２０ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ５．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０］中で２５０、１２５、６３、３１及び１５ｎＭに段階希釈され、２５℃で２５μＬ／分の流速でチップ表面に注入された、異なる濃度のｈＳｕｌｆ１ｄ４１７－７２６タンパク質で行った。各実行で、チップセンサーの表面を４ＭのＮａＣｌを注入することによって再生した。滴定曲線は、平衡定数を計算するための１：１ラングミュア結合モデルに良好に整合した。
化合物４６を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用して、製造元のガイドラインに従ってＢｉａｃｏｒｅセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の表面に固定化した。動態解析研究を、ランニングバッファー［２０ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ５．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０］中で２５０、１２５、６３、３１及び１５ｎＭに段階希釈され、２５℃で２５μＬ／分の流速でチップ表面に注入された、異なる濃度のｈＳｕｌｆ１ｄ４１７－７２６タンパク質で行った。各実行で、チップセンサーの表面を４ＭのＮａＣｌを注入することによって再生した。滴定曲線は、平衡定数を計算するための１：１ラングミュア結合モデルに良好に整合した。
【実施例1】
【0057】
実施例１ ＨＳオリゴ糖の化学合成及びＳｕｌｆ－１基質のスクリーニング
１．１ 二糖供与体４及び四糖供与体７の合成
糖供与体４及び７の合成を、以前の報告（Ｚｕｌｕｅｔａ Ｍ．Ｍ．Ｌ．他、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１２、１３４、８９８８－８９９５）による、個々の単糖１及び２から（ ）－立体選択的グリコシル化によって生成される共通の二糖３（スキーム１）から開始した。化合物３のＣｕ（ＯＴｆ）２触媒によるアセトリシスに続いて、ＺｎＩ２の存在下でトリメチルシリルｐ－トルエニルチオエーテル（ＴＭＳＳＴｏｌ）を添加し、チオグリコシド供与体４（２ステップで７７％）を得た。２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）による３の２－ナフチルメチル（２－ＮＡＰ）基の４’－Ｏ位置での開裂は、４’－アルコール５（７５％）を供与した。Ｎ－ヨードスクシンイミド／トリフルオロメタンスルホン酸（ＮＩＳ／ＴｆＯＨ）活性に応じた化合物４とのカップリングは、期待される四糖６（８０％）を提供した。（ ）－グリコシド結合を、隣接基（２－Ｏ－Ｂｚ）の関与によって形成した。そして、化合物６を、アセトリシス及びチオグリコシド形成に供し、２ステップで所望の供与体７（７８％）を提供した。
１．１ 二糖供与体４及び四糖供与体７の合成
糖供与体４及び７の合成を、以前の報告（Ｚｕｌｕｅｔａ Ｍ．Ｍ．Ｌ．他、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１２、１３４、８９８８－８９９５）による、個々の単糖１及び２から（ ）－立体選択的グリコシル化によって生成される共通の二糖３（スキーム１）から開始した。化合物３のＣｕ（ＯＴｆ）２触媒によるアセトリシスに続いて、ＺｎＩ２の存在下でトリメチルシリルｐ－トルエニルチオエーテル（ＴＭＳＳＴｏｌ）を添加し、チオグリコシド供与体４（２ステップで７７％）を得た。２，３－ジクロロ－５，６－ジシアノ－１，４－ベンゾキノン（ＤＤＱ）による３の２－ナフチルメチル（２－ＮＡＰ）基の４’－Ｏ位置での開裂は、４’－アルコール５（７５％）を供与した。Ｎ－ヨードスクシンイミド／トリフルオロメタンスルホン酸（ＮＩＳ／ＴｆＯＨ）活性に応じた化合物４とのカップリングは、期待される四糖６（８０％）を提供した。（ ）－グリコシド結合を、隣接基（２－Ｏ－Ｂｚ）の関与によって形成した。そして、化合物６を、アセトリシス及びチオグリコシド形成に供し、２ステップで所望の供与体７（７８％）を提供した。
【0058】
スキーム１ 二糖供与体４及び四糖供与体７の調製
試薬及び条件：（ａ）（１）１．５ｍｏｌ％のＣｕ（ＯＴｆ）２、Ａｃ２Ｏ、０℃、２時間、（２）ＴＭＳＳＴｏｌ、ＺｎＩ２、ＣＨ２Ｃｌ２、２時間、４：７７％（２ステップ）、７：７８％（２ステップ）、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、室温、４時間、７５％、（ｃ）４、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、６０℃～－４０℃、４時間、８０％。Ａｃ、アセチル；Ｂｎ、ベンジル；Ｂｚ、ベンゾイル；２－ＮＡＰ、２－ナフチルメチル；ＰＢＢ、ｐ－ブロモベンジル；ＴＢＤＰＳ、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル；Ｔｆ、トリフルオロメチルスルホニル；ＴＭＳ、トリメチルシリル；Ｔｏｌ、４－メチルフェニル。
【化39】
試薬及び条件：（ａ）（１）１．５ｍｏｌ％のＣｕ（ＯＴｆ）２、Ａｃ２Ｏ、０℃、２時間、（２）ＴＭＳＳＴｏｌ、ＺｎＩ２、ＣＨ２Ｃｌ２、２時間、４：７７％（２ステップ）、７：７８％（２ステップ）、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、室温、４時間、７５％、（ｃ）４、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、６０℃～－４０℃、４時間、８０％。Ａｃ、アセチル；Ｂｎ、ベンジル；Ｂｚ、ベンゾイル；２－ＮＡＰ、２－ナフチルメチル；ＰＢＢ、ｐ－ブロモベンジル；ＴＢＤＰＳ、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル；Ｔｆ、トリフルオロメチルスルホニル；ＴＭＳ、トリメチルシリル；Ｔｏｌ、４－メチルフェニル。
【0059】
１．２ ＨＳオリゴ糖１８、１９及び２０の合成
直交的に保護されたチオグリコシド供与体４及び７を元に、スキーム２に記載される手順に従って、種々の鎖長のＨＳオリゴ糖を調製した。リンカー付着の二糖８の合成を、ＮＩＳ及びＴｆＯＨの組合せ下で、化合物４を５－（Ｎ－ベンジル－Ｎ－ベンジルオキシカルボニル）アミノ－１－ペンタノール［ＨＯ（ＣＨ２）５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ］とカップリングすることにより開始した。対応する（ ）型の生成物８を、７７％の収率で得た。化合物８のＤＤＱによる処置は、二糖受容体９（７５％）を提供し、それをその後、供与体４及び７と排他的（ ）－立体選択性でカップリングし、それぞれ四糖１０（８１％）及び六糖１１（８２％）を形成した。ナトリウムメトキシドを使用して化合物８、１０及び１１における全てのＡｃ及びＢｚ基を除去し、続いて（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル（ＴＥＭＰＯ）で酸化し、それぞれラクトン１２（６７％）、１３（７０％）及び１４（８０％）を得た。環状エステルは、ＨＭＢＣスペクトルにおける内部Ｌ－イズロニル残基の２－Ｈと６－Ｃの間の相関関係を通して、及び１７９０ｃｍ－１付近で観察された相対的に高いＩＲのＣ＝Ｏ伸縮バンドによって確認された。さらに、フッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）による６－Ｏ－脱シリル化、塩基性条件下でのラクトン開環及びＳＯ３・Ｅｔ３Ｎによる全ての遊離ヒドロキシ基のＯ－スルホン化は、硫酸塩誘導体１５、１６及び１７を３段階で、それぞれ６６％、７８％及び３０％の全収率で供与した。最後に、個々の標的化合物１８（９０％）、１９（８５％）及び２０（７０％）を、アジド基のアミノ基へのシュタウディンガー還元、全ての第一級アミンのＮ－硫酸化、並びに全てのベンジル、ＰＢＢ、２－ＮＡＰ及びＣｂｚ基を開裂するＰｄ（ＯＨ）２／Ｃを介した水素化分解を含む３ステップの変更を通して１５～１７から生成した。高頻度なピークの重複により、四糖１９及び六糖２０のＮＭＲスペクトルにおけるプロトンの直接的な割り当ては困難であった。化合物１８の分子量（Ｍ＋Ｈ＋、Ｃ１７Ｈ２９Ｎ２Ｏ２０Ｓ３Ｎａ４ ＋ に対して計算上７６９．００６７であり、７６９．００７６であった）、化合物１９の分子量（Ｍ＋Ｈ＋、Ｃ２９Ｈ４４Ｎ３Ｏ３９Ｓ６Ｎａ８ ＋ に対して計算上１４３３．９０５８であり、１４３３．９０５５であった）及び化合物２０の分子量（Ｍ－４Ｈ４－、Ｃ４１Ｈ６６Ｎ４Ｏ５８Ｓ９ ４－ に対して計算上４５７．４９５１であり、４５７．４９８１であった）を、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量スペクトルによってさらに確認した。
直交的に保護されたチオグリコシド供与体４及び７を元に、スキーム２に記載される手順に従って、種々の鎖長のＨＳオリゴ糖を調製した。リンカー付着の二糖８の合成を、ＮＩＳ及びＴｆＯＨの組合せ下で、化合物４を５－（Ｎ－ベンジル－Ｎ－ベンジルオキシカルボニル）アミノ－１－ペンタノール［ＨＯ（ＣＨ２）５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ］とカップリングすることにより開始した。対応する（ ）型の生成物８を、７７％の収率で得た。化合物８のＤＤＱによる処置は、二糖受容体９（７５％）を提供し、それをその後、供与体４及び７と排他的（ ）－立体選択性でカップリングし、それぞれ四糖１０（８１％）及び六糖１１（８２％）を形成した。ナトリウムメトキシドを使用して化合物８、１０及び１１における全てのＡｃ及びＢｚ基を除去し、続いて（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル（ＴＥＭＰＯ）で酸化し、それぞれラクトン１２（６７％）、１３（７０％）及び１４（８０％）を得た。環状エステルは、ＨＭＢＣスペクトルにおける内部Ｌ－イズロニル残基の２－Ｈと６－Ｃの間の相関関係を通して、及び１７９０ｃｍ－１付近で観察された相対的に高いＩＲのＣ＝Ｏ伸縮バンドによって確認された。さらに、フッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）による６－Ｏ－脱シリル化、塩基性条件下でのラクトン開環及びＳＯ３・Ｅｔ３Ｎによる全ての遊離ヒドロキシ基のＯ－スルホン化は、硫酸塩誘導体１５、１６及び１７を３段階で、それぞれ６６％、７８％及び３０％の全収率で供与した。最後に、個々の標的化合物１８（９０％）、１９（８５％）及び２０（７０％）を、アジド基のアミノ基へのシュタウディンガー還元、全ての第一級アミンのＮ－硫酸化、並びに全てのベンジル、ＰＢＢ、２－ＮＡＰ及びＣｂｚ基を開裂するＰｄ（ＯＨ）２／Ｃを介した水素化分解を含む３ステップの変更を通して１５～１７から生成した。高頻度なピークの重複により、四糖１９及び六糖２０のＮＭＲスペクトルにおけるプロトンの直接的な割り当ては困難であった。化合物１８の分子量（Ｍ＋Ｈ＋、Ｃ１７Ｈ２９Ｎ２Ｏ２０Ｓ３Ｎａ４ ＋ に対して計算上７６９．００６７であり、７６９．００７６であった）、化合物１９の分子量（Ｍ＋Ｈ＋、Ｃ２９Ｈ４４Ｎ３Ｏ３９Ｓ６Ｎａ８ ＋ に対して計算上１４３３．９０５８であり、１４３３．９０５５であった）及び化合物２０の分子量（Ｍ－４Ｈ４－、Ｃ４１Ｈ６６Ｎ４Ｏ５８Ｓ９ ４－ に対して計算上４５７．４９５１であり、４５７．４９８１であった）を、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量スペクトルによってさらに確認した。
【0060】
スキーム２ ＨＳオリゴ糖１８、１９及び２０の合成
試薬及び条件：（ａ）ＨＯ（ＣＨ２）５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３ÅのＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮ（１／２、ｖ／ｖ）、７８℃～－４０℃、３時間、７７％、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、４時間、７５％、（ｃ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、７８℃～－４０℃、３時間、１０（ｎ＝２、化合物４＋化合物９から）：８１％、１１（ｎ＝３、化合物７＋化合物９から）：８２％、（ｄ）（１）ＮａＯＭｅ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ）、室温、１８時間、（２）ＴＥＭＰＯ、ＢＡＩＢ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、ｖ／ｖ）、室温、１６時間、１２：６７％（２ステップ）、１３：７０％（２ステップ）、１４：８０％（２ステップ）、（ｅ）（１）１ＭのＴＢＡＦ、ＴＨＦ、５０℃、１日、（２）ＬｉＯＨ、室温、３時間、（３）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、１６時間、１５：６６％（３ステップ）、１６：７８％（３ステップ）、１７：３０（３ステップ）、（ｆ）（１）１ＭのＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、５時間、（２）ＳＯ３・ピリジン、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１日、（３）Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、室温、２日、１８：９０％（３ステップ）、１９：８５％（３ステップ）、２０：７０％（３ステップ）。ＢＡＩＢ、［ビス（アセトキシ）ヨード］ベンゼン；Ｃｂｚ、ベンジロオキシカルボニル；ＴＨＦ、テトラヒドロフラン。
【化40】
試薬及び条件：（ａ）ＨＯ（ＣＨ２）５Ｎ（Ｂｎ）Ｃｂｚ、ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３ÅのＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮ（１／２、ｖ／ｖ）、７８℃～－４０℃、３時間、７７％、（ｂ）ＤＤＱ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｈ２Ｏ（１８／１、ｖ／ｖ）、４時間、７５％、（ｃ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åのモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、７８℃～－４０℃、３時間、１０（ｎ＝２、化合物４＋化合物９から）：８１％、１１（ｎ＝３、化合物７＋化合物９から）：８２％、（ｄ）（１）ＮａＯＭｅ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ）、室温、１８時間、（２）ＴＥＭＰＯ、ＢＡＩＢ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、ｖ／ｖ）、室温、１６時間、１２：６７％（２ステップ）、１３：７０％（２ステップ）、１４：８０％（２ステップ）、（ｅ）（１）１ＭのＴＢＡＦ、ＴＨＦ、５０℃、１日、（２）ＬｉＯＨ、室温、３時間、（３）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、１６時間、１５：６６％（３ステップ）、１６：７８％（３ステップ）、１７：３０（３ステップ）、（ｆ）（１）１ＭのＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、５時間、（２）ＳＯ３・ピリジン、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１日、（３）Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、室温、２日、１８：９０％（３ステップ）、１９：８５％（３ステップ）、２０：７０％（３ステップ）。ＢＡＩＢ、［ビス（アセトキシ）ヨード］ベンゼン；Ｃｂｚ、ベンジロオキシカルボニル；ＴＨＦ、テトラヒドロフラン。
【0061】
本開示のＨＳオリゴ糖の化学的データを以下に提供する。
【0062】
化合物７
【化41】
【0063】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.11-8.08 (m, 2H, Bz-H), 8.00-7.97 (m, 2H, Bz-H), 7.85 (dd, J = 6.0, 3.4 Hz, 1H, Ar-H), 7.78-7.73 (m, 2H, Ar-H), 7.67 (dd, J = 7.9, 1.2 Hz, 2H, Ar-H), 7.65-7.62 (m, 2H, Ar-H), 7.60 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 2H, Ar-H), 7.58-7.54 (m, 3H, Ar-H), 7.52-7.48 (m, 2H, Ar-H), 7.48-7.44 (m, 4H, Ar-H), 7.43-7.35 (m, 13H, Ar-H), 7.35-7.32 (m, 3H, Ar-H), 7.32-7.28 (m, 4H, Ar-H), 7.28-7.24 (m, 5H, Ar-H), 7.24-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H, Ar-H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 5.54 (s, 1H, H-1), 5.36-5.33 (m, 2H, H-2, H-1’’), 5.14 (bs, 1H, H-2’’), 4.96 (d, J = 11.6 Hz, 1H, ArCH2), 4.85 (m, 4H, H-5, ArCH2), 4.71 (d, J = 11.4 Hz, 2H, ArCH2), 4.65 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’’’), 4.51 (d, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH2), 4.43 (d, J = 3.8 Hz, 1H, H-1’), 4.36-4.31 (m, 2H, H-6a, ArCH2), 4.28 (dt, J = 7.0, 2.0 Hz, 1H, H-5’’), 4.11-3.98 (m, 7H, H-3, H-6b, H-4’, H-6’a, H-3’’, H-6’’a, ArCH2), 3.93 (dd, J = 10.9, 7.0 Hz, 1H, H-6’’b), 3.89-3.84 (m, 2H, H-6’b, ArCH2), 3.82 (d, J = 10.6 Hz, 1H, H-4’’’), 3.77-3.72 (m, 2H, H-6’’’), 3.72-3.68 (m, 1H, H-5’’’), 3.67-3.62 (m, 1H, H-3’’’), 3.62-3.58 (m, 1H, H-5’), 3.51-3.48 (m, 2H, H-4, H-4’’), 3.45 (t, J = 9.0 Hz, 1H, H-3’), 3.28 (dd, J = 10.2, 3.5 Hz, 1H, H-2’’’), 3.20 (dd, J = 10.0, 3.8 Hz, 1H, H-2’), 2.33 (s, 3H, CH3), 1.87 (s, 3H, CH3), 1.69 (s, 3H, CH3), 1.06 (s, 9H, 3 TBDPS), 0.97 (s, 9H, 3 TBDPS).
【0064】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ 170.2 (C), 170.0 (C), 165.7 (C), 165.5 (C), 137.7 (C), 137.4 (C), 137.2 (C), 136.9 (C), 136.7 (C), 135.83 (CH), 135.90 (CH), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 135.4 (C), 133.3 (C), 133.2 (C), 133.1 (C, CH), 132.90 (C), 132.86 (C), 132.3 (CH), 131.5 (C), 131.4 (CH), 130.8 (CH), 129.80 (CH), 129.77 (CH), 129.71 (CH), 129.69 (CH), 129.66 (CH), 129.61 (CH), 129.59 (CH), 129.55 (CH), 129.5 (CH), 128.8 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.22 (CH), 128.15 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.70 (CH), 127.65 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 126.3 (CH), 126.2 (CH), 126.0 (CH), 125.7 (CH), 98.4 (CH), 97.8 (CH), 96.9 (CH), 86.2 (CH), 80.3 (CH), 79.1 (CH), 77.6 (CH), 75.1 (CH2), 74.22 (CH), 74.15 (CH2), 73.9 (CH2), 73.7 (CH), 73.1 (CH), 72.78 (CH, CH2), 72.75 (CH2),72.5 (CH), 72.4 (CH), 71.4 (CH), 69.7 (CH), 68.4 (CH), 66.1 (CH), 64.6 (CH), 64.2 (CH), 63.9 (CH), 62.9 (CH2), 62.2 (CH2), 62.1 (CH2), 61.9 (CH2), 26.8 (CH3), 26.7 (CH3), 21.1 (CH3), 20.59 (CH3), 20.57 (CH3), 19.4 (C), 19.3 (C); HRMS m/z (MALDI, M+Na+) C120H124N6O22SBr2Si2Na+ 2273.3711, found 2273.3811.
【0065】
化合物８
【化42】
【0066】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.18-8.15 (m, 2H, Ar-H), 7.88-7.86 (m, 1H, Ar-H), 7.81-7.79 (m, 2H, Ar-H), 7.72-7.69 (m, 4H, Ar-H), 7.62 (s, 1H, Ar-H), 7.55-7.53 (m, 2H, Ar-H), 7.43-7.34 (m, 26H, Ar-H), 7.18 (s, 1H, Ar-H), 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 2H, Ar-H), 5.22-5.18 (m, 3H, H-2, ArCH2) 4.99-4.92 (m, 4H, H-1, ArCH2), 4.80-4.76 (m, 2H, H-1’, ArCH2), 4.54-4.50 (m, 3H, ArCH2), 4.45-4.41 (m, 1H, H-6a), 4.38 (s, 1H, H-5), 4.21 (d, J = 9.8 Hz, 1H, ArCH2), 4.15 (dd, J = 4.5, 11.1 Hz, 1H, H-6b), 4.12-4.11 (m, 1H, H-3), 4.07-4.05 (m, 1H, H-6’a), 3.92 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H-6’b), 3.87-3.78 (m, 5H, H-3’, H-4’, H-5’, H-4, linker CH2), 3.48-3.43 (m, 1H, linker CH2), 3.34 (dd, J = 3.4, 10.1 Hz, 1H, H-2’), 3.28-3.21 (m, 2H, linker CH2), 2.00-1.95 (m, 3H, OAc), 1.67-1.57 (m, 4H, linker CH2), 1.36-1.31 (m, 2H, linker CH2), 1.09 (s, 9H, TBDPS).
【0067】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 170.2 (C), 165.5 (C), 156.5 (C), 156.0 (C), 137.8 (C), 137.7 (C), 136.6 (C), 135.7 (CH), 135.4 (CH), 135.3 (C),133.3 (C), 133.1 (C), 133.0 (CH), 132.89 (C), 132.87 (C), 131.3 (CH), 129.8 (CH), 129.7 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.4 (CH), 126.2 (CH), 126.1 (CH), 125.9 (CH), 125.5 (CH), 121.6 (C), 98.3 (CH), 98.1 (CH), 80.5 (CH), 77.9 (CH), 77.8 (CH), 75.0 (CH2), 74.3 (CH), 74.4 (CH2), 72.9 (CH), 72.8 (CH), 72.3 (CH2), 68.9 (CH), 67.8 (CH2), 67.0 (CH2), 65.5 (CH), 63.8 (CH), 62.8 (CH2), 62.1 (CH2), 50.4 (CH2), 50.1 (CH2), 47.0 (CH2), 46.0 (CH2), 26.7 (CH3), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C82H87N4O14SiBrNa+ 1481.5069, found 1481.5057.
【0068】
化合物９
【化43】
【0069】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.14-8.11 (m, 2H, Ar-H), 7.66-7.63 (m, 4H, Ar-H), 7.51-7.38 (m, 21H, Ar-H), 7.23-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.14-7.11 (m, 3H, Ar-H), 5.19-5.13(m, 3H, H-2, ArCH2), 4.93 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H-1), 4.83 (d, J = 11.1 Hz, 1H, ArCH2), 4.72-4.67 (m, 2H, H-1’, ArCH2), 4.52 (d, J = 11.0 Hz, 1H, ArCH2), 4.47-4.44 (m, 2H, ArCH2), 4.40-4.37 (m ,1H, H-6a), 4.34-4.31 (m, 1H, ArCH2), 4.29-4.26 (m, 1H, H-5), 3.91-3.87(m, 1H, H-6b), 4.04 (s, 1H, H-3), 3.91-3.87 (m, 1H, H-6’a), 3.81-3.77 (m, 1H, H-6’b), 3.73-3.68 (m, 4H, H-4, H-4’, H-5’, linker CH2), 3.61-3.57 (m, 1H, H-3’), 3.44-3.37 (m, 1H, linker CH2), 3.22-3.14 (m, 3H, H-2’, linker CH2), 1.95 (s, 3H, OAc), 1.53-1.47 (m, 4H, linker CH2), 1.31-1.25 (m, 2H, linker CH2), 1.02 (s, 9H, TBDPS).
【0070】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 170.4 (C), 165.7 (C), 156.7 (C), 156.1 (C), 137.9 (C), 137.7 (C), 137.0 (C), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 133.2 (CH), 132.8 (C), 132.7 (C), 131.5 (CH), 129.97 (CH), 129.95 (CH), 129.8 (CH), 129.6 (CH), 128.55 (CH), 128.50 (CH), 128.3 (CH), 128.0 (CH), 127.89 (CH), 127.84 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 121.7 (C), 98.2 (CH), 98.0 (CH), 80.2 (CH), 74.2 (CH2), 73.9 (CH), 73.1 (CH), 72.5 (CH2), 72.0 (CH), 69.4 (CH), 68.0 (CH2), 67.1 (CH2), 66.0 (CH), 64.0 (CH2), 63.0 (CH), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.1 (CH2), 46.2 (CH2), 29.1 (CH2), 27.9 (CH2), 27. 5(CH2), 26.8 (CH3), 23.4 (CH2), 20.8 (CH3), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C71H79N4O14SiBrNa+ 1341.4436, found 1341.4443.
【0071】
化合物１０
【化44】
【0072】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.24 (d, J = 7.2 Hz, 2H, Ar-H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 2H, Ar-H), 7.93-7.80 (m, 12H, Ar-H), 7.57-7.41 (m, 45H, Ar-H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 2H, Ar-H), 5.54 (s, 1H, H-1’’), 5.35-5.29 (m, 4H, H-2, H-2’’, ArCH2), 5.13-5.04 (m, 5H, H-1, ArCH2), 4.87-4.77 (m, 5H, H-1’, H-1’’’, ArCH2), 4.61-4.52 (m, 6H, H-6’’a, ArCH2), 4.26-4.12 (m, 12H, H-3, H-3’’, H-5, H-5’’, H-5’’’, H-6, H-6’, H-6’’b, H-6’’’), 3.92-3.78 (m, 8H, H-3’, H-3’’’, H-4, H-4’, H-4’’, H-4’’’, H-5’, linker CH2), 3.59-3.52 (m, 1H, ArCH2), 3.42 (dd, J = 2.8, 10.3 Hz, 1H, H-2’’’), 3.38-3.34 (m, 2H, H-2’, linker CH2), 3.30-3.25 (m, 1H, linker CH2), 1.94 (d, J = 9.3 Hz, 3H, OAc), 1.85 (s, 3H, OAc), 1.78-1.67 (m, 4H, linker CH2), 1.48-1.41 (m, 2H, linker CH2), 1.20 (s, 9H, TBDPS), 1.11 (s, 9H, TBDPS).
【0073】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 171.0 (C), 170.3 (C), 170.0 (C), 165.8 (C), 165.7 (C), 156.8 (C), 156.2 (C), 138.1 (C), 137.9 (C), 137.6 (C), 137.2 (C), 137.0 (C), 136.9 (C), 136.0 (CH), 136.0 (CH), 135.7 (CH), 135.6 (CH), 133.5 (C), 133.4 (C), 133.3 (CH), 133.15 (C), 133.11 (C), 131.6 (CH), 131.4 (CH), 131.4 (CH), 131.1 (CH), 130.2 (CH), 130.0 (CH), 130.0 (CH), 129.9 (CH), 129.9 (CH), 129.9 (CH), 129.8 (CH), 129.8 (CH), 129.6 (CH), 129.1 (CH), 128.9 (CH), 128.7 (CH), 128.6 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7(CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.3 (CH), 126.6 (CH), 126.3 (CH), 126.2 (CH), 125.9 (CH), 121.8 (C), 121.1 (C), 98.6 (CH), 98.4 (CH), 97.6 (CH), 97.1 (CH), 80.5 (CH), 79.3 (CH), 77.9 (CH), 77.6 (CH), 77.4 (CH), 77.2 (CH), 75.3 (CH2), 74.3 (CH2), 74.1 (CH2), 74.0 (CH), 73.8 (CH), 73.7 (CH), 73.2 (CH), 73.0 (CH2), 72.9 (CH2), 72.7 (CH), 72.6 (CH2), 69.2 (CH), 68.6 (CH), 68.1 (CH2), 67.2 (CH2), 65.4 (CH), 64.8 (CH), 64.4 (CH), 64.2 (CH), 62.99 (CH2), 62.94 (CH2), 62.5 (CH2), 62.2 (CH2), 60.4 (CH2), 50.7 (CH2), 50.3 (CH2), 47.3 (CH2), 46.3 (CH2), 29.2 (CH2), 28.1 (CH2), 27.6 (CH2), 27.1 (CH3), 26.9 (CH3), 21.1 (CH3), 20.8 (CH3), 20.7 (CH3), 19.6 (C), 19.5 (C), 14.4 (CH3); HRMS m/z (ESI, M+2Na2+) calcd for C133H141N7O25Si2Br2Na2
2+ 1247.8839, found 1247.8829.
【0074】
化合物１１
【化45】
【0075】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.12-8.10 (m, 2H, Ar-H), 8.00-7.98 (m, 4H, Ar-H), 7.86-7.84 (m, 1H Ar-H), 7.78-7.75 (m, 2H, Ar-H), 7.68-7.67 (m, 2H, Ar-H), 7.63-7.60 (m, 11H, Ar-H), 7.55 (s, 1H, Ar-H), 7.51-7.50 (m, 2H, Ar-H), 7.43-7.38 (m, 24H, Ar-H), 7.31-7.28 (m, 21H, Ar-H), 7.22-7.17 (m, 13H, Ar-H), 7.00-6.99 (m, 2H, Ar-H), 6.92-6.90 (m, 4H, Ar-H), 5.40 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.19-5.14 (m, 5H), 4.96-4.94 (m, 1H), 4.89-4.84 (m, 5H), 4.70-4.62 (m, 8H), 4.49-4.47 (m, 2H), 4.36-4.30 (m, 5H), 4.12-4.04 (m, 13H), 3.90-3.85 (m, 5H), 3.76-3.61 (m, 12H), 3.38 (s, 1H), 3.28-3.20 (m, 5H), 1.85-1.82 (m, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.61-1.53 (m, 4H), 1.33-1.28 (m, 2H), 1.06 (s, 9H), 0.99 (s, 9H), 0.97 (s, 9H).
【0076】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 170.2 (C), 170.0 (C), 169.9 (C), 165.79 (C), 165.70 (C), 165.5 (C), 156.7 (C), 156.2 (C), 138.0 (C), 137.7 (C), 137.38 (C), 137.36 (C), 137.09 (C), 137.00 (C), 136.8 (C), 135.9 (CH), 135.67 (CH), 135.63 (CH), 135.6 (CH), 135.5 (CH), 133.49 (CH), 133.40 (CH), 133.3 (CH), 133.26 (CH), 133.21 (CH), 133.1 (CH), 133.09 (CH), 133.00 (CH), 132.9 (CH), 131.5 (CH), 130.9 (CH), 129.87 (CH), 129.81 (CH), 129.78 (CH), 129.71 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 129.0 (CH), 128.9 (CH), 128.8 (CH), 128.7 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.46 (CH), 128.44 (CH), 128.3 (CH), 128.28 (CH), 128.26 (CH), 128.17 (CH), 128.11 (CH), 127.95 (CH), 127.91 (CH), 127.86 (CH), 127.80 (CH), 127.7 (CH), 127.67 (CH), 127.62 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.28 (CH), 127.20 (CH), 126.4 (CH), 126.2 (CH), 126.0 (CH), 125.8 (CH), 121.7 (C), 121.09 (C), 121.02 (C), 98.5 (CH), 98.2 (CH), 97.4 (CH), 97.09 (CH), 97.02 (CH), 96.9 (CH), 80.4 (CH), 79.1 (CH), 78.9 (CH), 77.7 (CH), 75.2 (CH2), 74.2 (CH2), 74.0 (CH2), 73.8 (CH), 73.7 (CH), 73.6 (CH), 73.03 (CH2), 73.00 (CH), 72.9 (CH), 72.88 (CH2), 72.83 (CH), 72.55 (CH2), 72.51 (CH), 72.3 (CH), 72.2 (CH), 69.2 (CH), 68.8 (CH), 68.4 (CH), 68.0 (CH2), 67.1 (CH2), 65.5 (CH), 65.0 (CH), 64.5 (CH), 64.2 (CH), 64.0 (CH), 62.7 (CH), 62.38 (CH2), 62.33 (CH2), 62.18 (CH2), 62.13 (CH2), 62.0 (CH2), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.17 (CH2), 46.19 (CH2), 29.1 (CH2), 27.9 (CH2), 27.5 (CH2), 26.9 (CH3), 26.8 (CH3), 26.8 (CH3), 23.4 (CH2), 20.7 (CH2), 20.66 (CH2), 20.60 (CH2), 19.49 (C), 19.45 (C), 19.40 (C); HRMS m/z (ESI, M+H+) calcd for C184H196Br3N10O36Si3
+ 3442.4810, found 3442.4816.
【0077】
化合物１２
【化46】
【0078】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.86-7.84 (m, 1H, Ar-H), 7.79-7.75 (m, 4H, Ar-H), 7.70-7.65 (m, 3H, Ar-H), 7.52-7.50 (m, 2H, Ar-H), 7.45-7.43 (m, 2H, Ar-H), 7.41-7.34 (m, 21H, Ar-H), 7.22-7.19 (m, 3H, Ar-H), 5.24-5.19 (m, 2H, ArCH2) 5.13-5.07 (m, 2H, H-1, H-1’), 4.98-4.88 (m, 4H, ArCH2), 4.77-4.71 (m, 2H, ArCH2), 4.60-4.53 (m, 3H, H-2, ArCH2), 4.41 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-5), 4.28-4.24 (m, 1H, H-4), 4.04-4.00 (m, 2H, H-6’), 3.95-3.92 (m, 2H, H-3, H-3’), 3.88-3.81 (m, 3H, H-4’, H-5’, linker CH2), 3.52-3.43 (m, 2H, H-2’, linker), 3.31.-3.24 (m, 2H, linker), 1.72-1.59 (m, 4H, linker CH2), 1.42-1.32 (m, 2H, linker CH2), 1.09 (s, 9H, TBDPS).
【0079】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 167.6 (C), 156.6 (C), 156.1 (C), 137.8 (C), 137.2 (C), 136.7 (C), 135.8 (CH), 135.5 (CH), 135.2 (C), 133.3 (C), 133.1 (C),132.9 (C), 132.8 (C), 131.4 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 128.6 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.2 (CH), 127.0 (CH), 126.0 (CH), 125.8 (CH), 125.4 (CH), 121.7 (C), 99.7 (CH), 96.8 (CH), 80.3 (CH), 79.6 (CH), 79.4 (CH), 78.0 (CH), 74.9 (CH2), 74.5 (CH2), 72.6 (CH), 72.1(CH), 72.0 (CH2), 69.4 (CH2), 69.3 (CH), 67.1 (CH2), 63.2 (CH), 62.1 (CH2), 50.4 (CH2), 50.1 (CH2), 47.0 (CH2), 46.0 (CH2), 29.0 (CH2), 26.8 (CH3), 19.2 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C73H77N4O12SiBrNa+ 1331.4388, found 1331.4397.
【0080】
化合物１３
【化47】
【0081】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.91-7.88 (m, 1H, Ar-H), 7.84-7.81 (m, 4H, Ar-H), 7.75-7.71 (m, 7H, Ar-H), 7.57-7.54 (m, 4H, Ar-H), 7.50-7.45 (m, 20H, Ar-H), 7.39-7.35 (m, 13H, Ar-H), 7.29-7.25 (m, 6H, Ar-H), 5.50 (s, 1H, H-1’’), 5.27-5.11 (m, 7H, H-1, H-1’, ArCH2), 4.90-4.71 (m, 10H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.38-4.31 (m, 5H, H-1’’’, H-3’’, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.13 (t, 1H, H-4’’), 4.08-4.07 (m, 1H, H-6’a), 3.99-3.88 (m, 11H, H-3, H-3’, H-3’’’, H-4, H-4’’’, H-5’, H-5’’’, H-6’b, H-6’’’, linker CH2), 3.73-3.72 (m, 1H, H-4’), 3.57-3.51 (m, 1H, linker CH2), 3.44-3.42 (m, 1H, H-2’), 3.37 (dd, J = 3.7, 10.2 Hz, 1H, H-2’’’), 3.34-3.28 (m, 2H, linker CH2), 1.75-1.64 (m, 4H, linker CH2), 1.45-1.38 (m, 2H, linker CH2), 1.16 (s, 9H, TBDPS), 1.11 (s, 9H, TBDPS).
【0082】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 167.8 (C), 167.1 (C), 156.2 (C), 137.9 (C), 137.6 (C), 137.2 (C), 136.9 (C), 136.8 (C), 136.7 (C), 136.0 (CH), 135.9 (CH), 135.6 (CH), 135.57 (CH), 135.52 (C), 133.6 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 132.8 (C), 132.7 (C), 131.64 (CH), 131.60 (CH), 130.0 (CH), 129.88 (CH), 129.80 (CH), 129.7 (CH), 129.7 (CH), 128.6 (CH), 128.58 (CH), 128.55 (CH), 128.50 (CH), 128.2 (CH), 128.08 (CH), 128.01 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.79 (CH), 127.75 (CH), 127.69 (CH), 127.60 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 126.2 (CH), 126.1 (CH), 125.9 (CH), 125.5 (CH), 121.9 (C), 121.2 (C), 99.8 (CH), 99.5 (CH), 97.1 (CH), 96.9 (CH), 80.7 (CH), 80.4 (CH), 79.8 (CH), 79.4 (CH), 78.4 (CH), 78.0 (CH), 77.8 (CH), 77.3 (CH), 77.1 (CH), 76.9 (CH), 76.4 (CH), 75.1 (CH2), 74.7 (CH2), 73.5 (CH2), 72.7 (CH), 72.4 (CH), 72.3 (CH), 72.2 (CH), 72.1 (CH2), 69.6 (CH2), 69.5 (CH), 69.2 (CH), 67.2 (CH2), 63.4 (CH), 63.1 (CH), 61.9 (CH2), 61.7 (CH2), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.2 (CH2), 46.1 (CH2), 29.2 (CH2), 26.99 (CH3), 26.95 (CH3), 23.2 (CH2), 19.4 (C), 19.2 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C115H121N7O21Si2Br2Na+ 2175.6434, found 2175.6418.
【0083】
化合物１４
【化48】
【0084】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.70 (s, 1H, Ar-H), 7.64-7.57 (m, 16H, Ar-H), 7.37-7.35 (m, 5H, Ar-H), 7.31-7.27 (m, 29H, Ar-H), 7.20-7.13 (m, 23H, Ar-H), 5.34 (s, 2H), 5.09-5.00 (m, 4H), 4.87-4.83 (m, 4H), 4.72-4.64 (m, 4H), 4.54-4.44 (m, 10H), 4.20-4.12 (m, 8H), 3.96-3.91 (m,3H), 3.81-3.75 (m, 6H), 3.65-3.58 (m, 11H), 3.45-3.43 (m, 1H), 3.26-3.16 (m, 5H), 1.50-1.43 (m, 4H), 1.25-1.19 (m, 2H), 0.99-0.96 (m, 27H).
【0085】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 167.7 (C), 167.1 (C), 167.0 (C), 156.6 (C), 156.1 (C), 137.8 (C), 137.5 (C), 137.4 (C), 137.1 (C), 136.8 (C), 136.79 (C), 136.75 (CH), 135.9 (CH), 135.8 (CH), 135.7 (CH), 135.5 (CH), 135.45 (CH), 135.43 (CH), 133.5 (C), 133.2 (C), 132.89 (C), 132.86 (C), 132.83 (C), 132.7 (C), 132.5 (C), 132.4 (C), 131.5 (CH), 131.49 (CH), 131.45 (CH), 129.9 (CH), 129.8 (CH), 129.79 (CH), 129.70 (CH), 129.6 (CH), 128.5 (CH), 128.46 (CH), 128.44 (CH), 128.3 (CH), 128.1 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.89 (CH), 127.87 (CH), 127.7 (CH), 127.67 (CH), 127.63 (CH), 127.60 (CH), 127.57 (CH), 127.50 (CH), 127.2 (CH), 127.09 (CH), 126.07 (CH), 125.8 (CH), 125.4 (CH), 121.7 (C), 121.18 (C), 121.13 (C), 99.7 (CH), 99.37 (CH), 99.32 (CH), 97.0 (CH), 96.9 (CH), 96.8 (CH), 80.6 (CH), 80.4 (CH), 80.2 (CH), 79.7 (CH), 79.2 (CH), 78.3 (CH), 78.2 (CH), 77.9 (CH), 76.9 (CH), 76.7 (CH), 76.36 (CH), 76.32 (CH), 75.0 (CH2), 74.6 (CH2), 73.5 (CH2), 73.4 (CH2), 72.6 (CH), 72.2 (CH), 72.17 (CH), 72.14 (CH), 72.0 (CH2), 69.5 (CH2), 69.3 (CH), 69.0 (CH), 67.1 (CH2), 63.3 (CH), 63.1 (CH), 63.0 (CH), 61.7 (CH2), 61.6 (CH2), 61.3 (CH2), 50.4 (CH2), 50.1 (CH2), 47.0 (CH2), 46.0 (CH2), 29.1 (CH2), 27.7 (CH2), 27.2 (CH2), 26.86 (CH3), 26.83 (CH3), 23.1 (CH2), 19.2 (C), 19.1 (C), 19.0 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C157H165Br3N10O30Si3Na+ 3019.0520, found 3019.0515.
【0086】
化合物１８
【化49】
【0087】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.39 (s, 1H, H-1’), 5.17 (s, 1H, H-1), 4.53 (s, 1H, H-5), 4.46-4.39 (m, 1H, H-6’b), 4.33-4.24 (m, 3H, H-2, H-3, H-6’a), 4.08 (m, 2H, H-4), 4.04-3.98 (m, 1H, H-5’), 3.81-3.69 (m, 4H, H-3’, H-4’, linker CH2), 3.36-3.28 (m, 1H, H-2’), 3.11-3.03 (m, 2H, linker CH2) , 1.85-1.71 (m, 4H, linker CH2), 1.58-1.47 (m, 2H, linker CH2).
【0088】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ = 174.8 (C), 98.6 (CH), 97.0 (CH), 75.7 (CH), 75.6 (CH), 70.9 (CH), 69.6 (CH), 69.1 (CH), 68.3 (CH), 68.3 (CH), 68.1 (CH2), 66.4 (CH2), 57.9 (CH), 39.4 (CH2), 27.8 (CH2), 26.2 (CH2), 22.2 (CH2); HRMS m/z (ESI, M+H+) calcd for C17H29N2O20S3Na4
+ 769.0067, found 769.0076.
【0089】
化合物１９
【化50】
【0090】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.49-5.43 (m, 2H, H-1’, H-1’’’), 5.26 (s, H-1’’), 5.16 (s, 1H, H-1), 4.87 (s, 1H, H-5’’), 4.53 (s, 1H, H-5), 4.45-4.34 (m, 8H, H-2, H-2’’, H-3, H-3’’, H-6’, H-6’’’), 4.15-4.12 (m , 2H, H-4, H-4’’), 4.07-4.04 (m, 2H, H-5’, H-5’’’), 3.83-3.70 (m, 6H, H-3’, H-3’’’, H-4’, H-4’’’, linker CH2), 3.36-3.31 (m, 2H, H-2’, H-2’’’), 3.09-3.04 (m, 2H, linker CH2), 1.75-1.69 (m, 4H, linker CH2), 1.54-1.50 (m, 2H, linker CH2).
【0091】
13C NMR (150MHz, D2O) δ = 174.8 (C), 174.7 (C), 99.1 (CH), 98.9 (CH), 96.8 (CH), 96.7 (CH), 76.2 (CH), 75.8 (CH), 75.78 (CH), 75.72 (CH), 71.0 (CH), 69.9 (CH), 69.5 (CH), 69.2 (CH), 68.9 (CH), 68.7 (CH), 68.6 (CH), 68.1 (CH2), 66.4 (CH2), 66.3 (CH2) , 57.95 (CH), 57.92 (CH), 39.4 (CH2), 27.8 (CH2), 26.2 (CH2), 22.2 (CH2); HRMS m/z (ESI, M+H+) C29H44N3O39Na8S6
+ 1433.9058, found 1433.9055.
【0092】
化合物２０
【化51】
【0093】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.44 (s, 3H), 5.24 (s, 2H), 5.12 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 4.45-4.40 (m, 5H), 4.31-4.29 (m, 2H), 4.26-4.23 (m, 2H), 4.26-4.23 (m, 5H), 4.15-4.12 (m, 3H), 4.08-4.04 (m, 3H), 3.83-3.80 (m, 3H), 3.72-3.69 (m, 4H), 3.59 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.26 (dd, J = 3.2, 10.3 Hz, 1H), 3.04-3.02 (m, 2H), 1.74-1.70 (m, 4H), 1.51-1.48 (m, 2H).
【0094】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ = 174.8 (C), 174.58 (C), 174.51 (C), 99.2 (CH), 99.1 (CH), 99.0 (CH), 96.8 (CH), 96.5 (CH), 96.4 (CH), 76.8 (CH), 75.95 (CH), 75.91 (CH), 75.7 (CH), 75.6 (CH), 70.9 (CH), 69.8 (CH), 69.49 (CH), 69.44 (CH), 69.3 (CH), 69.2 (CH), 69.1 (CH), 69.1 (CH), 69.0 (CH), 67.9 (CH2), 66.37 (CH2), 66.31 (CH2), 57.8 (CH2), 39.3 (CH2), 27.8 (CH2), 26.1 (CH2), 22.1 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-4H4-) calcd for C41H66N4O58S9
4- 457.4951, found 457.4981.
【0095】
１．３ ４－ＭＵＳとの競合アッセイに基づくＳｕｌｆ－１基質のスクリーニング
実施例１．２のＨＳオリゴ糖を、Ｓｕｌｆ－１基質の特定のために、４－ＭＵＳの存在下で競合基質として使用した。市販のヘパリン３０００と同様に化合物１８～２０を、Ｓｕｌｆ－１による４－ＭＵＳ開裂に対するそれらの競合効果について独立して評価して、蛍光性４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）を得た（図１、（Ａ））。４６０ｎｍの発光波長（３５５ｎｍの励起波長）での蛍光強度を測定し、純水での一般的な４－ＭＵＳ加水分解を１００％と見なした。精製されたＳｕｌｆ－１を４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の競合物として二糖１８（３２０μＭ）とインキュベートした場合、もたらされる蛍光（９４．５％）はコントロールの蛍光と同等であり、１８がＳｕｌｆ－１活性部位への４－ＭＵＳの侵入を阻止できなかったことを示している（図１、（Ｂ））。一方、四糖１９、六糖２０及びヘパリン３０００による結果は、４以上の糖単位が４－ＭＵＳと強く競合することを示した。
実施例１．２のＨＳオリゴ糖を、Ｓｕｌｆ－１基質の特定のために、４－ＭＵＳの存在下で競合基質として使用した。市販のヘパリン３０００と同様に化合物１８～２０を、Ｓｕｌｆ－１による４－ＭＵＳ開裂に対するそれらの競合効果について独立して評価して、蛍光性４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）を得た（図１、（Ａ））。４６０ｎｍの発光波長（３５５ｎｍの励起波長）での蛍光強度を測定し、純水での一般的な４－ＭＵＳ加水分解を１００％と見なした。精製されたＳｕｌｆ－１を４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の競合物として二糖１８（３２０μＭ）とインキュベートした場合、もたらされる蛍光（９４．５％）はコントロールの蛍光と同等であり、１８がＳｕｌｆ－１活性部位への４－ＭＵＳの侵入を阻止できなかったことを示している（図１、（Ｂ））。一方、四糖１９、六糖２０及びヘパリン３０００による結果は、４以上の糖単位が４－ＭＵＳと強く競合することを示した。
【0096】
Ｓｕｌｆ－１によるその基質中の構造的な必要条件をより良く理解するために、ＧｌｃＮ単位でＮ－Ａｃ／ＳＯ３
－及び６－Ｏ－ＳＯ３
－を有し、ＧｌｃＡ／ＩｄｏＡ単位で２－Ｏ－Ｈ／ＳＯ３
－を有するＨＳ四糖のアレイ（すなわち、化合物２１～３５、図１、（Ｃ））を、４－ＭＵＳに対する競合結合体としてアッセイした。この体系的な研究は、化合物１９に加えて化合物３１も優れた結合体であることを明らかにし、非還元末端付近の２－Ｏ－硫酸化ＩｄｏＡ単位が必須であり、還元末端でのＧｌｃＮでのＮ－硫酸基及びＧｌｃＡ／ＩｄｏＡでの２－Ｏ－硫酸基がＳｕｌｆ－１との相互作用において重要な役割を果たすことを示した。１９及び３１の双方が、それぞれ８７．８μＭ及び１５１μＭのＥＣ５０値を表した。
【実施例2】
【0097】
実施例２ ＨＳ三糖３６の合成及びその競合アッセイ
実施例１．３の結果に基づいて、１９の非還元末端でのＧｌｃＮ単位を欠損したＨＳ三糖３６（以下に示す）を、更なる調査のために選択した。
実施例１．３の結果に基づいて、１９の非還元末端でのＧｌｃＮ単位を欠損したＨＳ三糖３６（以下に示す）を、更なる調査のために選択した。
【0098】
化合物３６
化合物３６を、スキーム３に記載されたステップに従って、我々が以前に合成したＬ－ｉｄｏ供与体３７及び二糖受容体９から調製した。ＮＩＳ及びＴｆＯＨの存在下での３７及び９のカップリングは、望ましく連結された三糖３８（８２％）を供与し、そしてゼンプレーンの条件下で連続的な脱アシル化及びＴＥＭＰＯ酸化を受け、７０％の収率（２ステップ）でラクトン３９を提供した。メタノール及びトリエチルアミン中のラクトン３９の開環はメチルエステル４０（８９％）をもたらし、それはＳＯ３・Ｅｔ３ＮとのＯ－硫酸化に供され、２，２’’－ジ－Ｏ－硫酸化誘導体４１（７９％）を得た。６’－Ｏ位置でのＨＦ・Ｐｙｒによる４１の脱シリル化は、所望の６’－アルコール４２（８７％）を与え、それはさらにＯ－硫酸化されて三硫酸塩４３を８４％の収率で提供した。連続的な２つのカルボン酸エステル基の脱メチル化（Ｈ２Ｏ２／ＬｉＯＨ）、アジド基のシュタウディンガー還元（ＰＭｅ３）及び第一級アミノ基の硫酸化（ＳＯ３・Ｐｙｒ）を介する化合物４３の３ステップ変換は、対応するＮ－及びＯ－硫酸化生成物４４を５２％の全収率で提供した。水素化分解条件下での化合物４４の全体的な脱保護を順調に実行し、標的分子３６を、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５を通した精製及びＤｏｗｅｘ５０ＷＸ８－Ｎａ＋樹脂を用いたイオン交換クロマトグラフィー後に７４％の収率で得た。最終化合物３６及び中間体の化学構造を、広範な２次元ＮＭＲ実験によって確認した（補足情報を参照）。証拠を、高分解能ＥＳＩ－ＭＳ（［Ｍ－２Ｈ］２－、Ｃ２３Ｈ３８Ｎ２Ｏ２９Ｓ４ ２－ に対して計算上４６７．０２１６であり、４６７．０２４７であった）でさらに裏付けた。
【化52】
化合物３６を、スキーム３に記載されたステップに従って、我々が以前に合成したＬ－ｉｄｏ供与体３７及び二糖受容体９から調製した。ＮＩＳ及びＴｆＯＨの存在下での３７及び９のカップリングは、望ましく連結された三糖３８（８２％）を供与し、そしてゼンプレーンの条件下で連続的な脱アシル化及びＴＥＭＰＯ酸化を受け、７０％の収率（２ステップ）でラクトン３９を提供した。メタノール及びトリエチルアミン中のラクトン３９の開環はメチルエステル４０（８９％）をもたらし、それはＳＯ３・Ｅｔ３ＮとのＯ－硫酸化に供され、２，２’’－ジ－Ｏ－硫酸化誘導体４１（７９％）を得た。６’－Ｏ位置でのＨＦ・Ｐｙｒによる４１の脱シリル化は、所望の６’－アルコール４２（８７％）を与え、それはさらにＯ－硫酸化されて三硫酸塩４３を８４％の収率で提供した。連続的な２つのカルボン酸エステル基の脱メチル化（Ｈ２Ｏ２／ＬｉＯＨ）、アジド基のシュタウディンガー還元（ＰＭｅ３）及び第一級アミノ基の硫酸化（ＳＯ３・Ｐｙｒ）を介する化合物４３の３ステップ変換は、対応するＮ－及びＯ－硫酸化生成物４４を５２％の全収率で提供した。水素化分解条件下での化合物４４の全体的な脱保護を順調に実行し、標的分子３６を、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５を通した精製及びＤｏｗｅｘ５０ＷＸ８－Ｎａ＋樹脂を用いたイオン交換クロマトグラフィー後に７４％の収率で得た。最終化合物３６及び中間体の化学構造を、広範な２次元ＮＭＲ実験によって確認した（補足情報を参照）。証拠を、高分解能ＥＳＩ－ＭＳ（［Ｍ－２Ｈ］２－、Ｃ２３Ｈ３８Ｎ２Ｏ２９Ｓ４ ２－ に対して計算上４６７．０２１６であり、４６７．０２４７であった）でさらに裏付けた。
【0099】
スキーム３．ヘパラン硫酸三糖３６の調製
試薬及び条件：（ａ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、７８℃～－４０℃、４時間、８２％、（ｂ）（１）ＮａＯＭｅ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ）、室温、１８時間、（２）ＴＥＭＰＯ、ＢＡＩＢ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、ｖ／ｖ）、室温、１６時間、７０％（２ステップ）、（ｃ）ＭｅＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、４０℃、１８時間、８９％、（ｄ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、７９％、（ｅ）ＨＦ・Ｐｙｒ、Ｐｙｒ、ＴＨＦ、７２時間、８７％、（ｆ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、８４％、（ｇ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、５２％（３ステップ）、（ｈ）Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、室温、３日、７４％。
【化53】
試薬及び条件：（ａ）ＮＩＳ、ＴｆＯＨ、３Åモレキュラーシーブ、ＣＨ２Ｃｌ２、７８℃～－４０℃、４時間、８２％、（ｂ）（１）ＮａＯＭｅ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１、ｖ／ｖ）、室温、１８時間、（２）ＴＥＭＰＯ、ＢＡＩＢ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２（１／２、ｖ／ｖ）、室温、１６時間、７０％（２ステップ）、（ｃ）ＭｅＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、４０℃、１８時間、８９％、（ｄ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、７９％、（ｅ）ＨＦ・Ｐｙｒ、Ｐｙｒ、ＴＨＦ、７２時間、８７％、（ｆ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、８４％、（ｇ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、５２％（３ステップ）、（ｈ）Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）、室温、３日、７４％。
【0100】
化合物３８
【化54】
【0101】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.20-8.14 (m, 2H, Ar-H), 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 2H, Ar-H), 7.65 (d, J = 7.7 Hz, 2H, Ar-H), 7.60-7.56 (m, 3H, Ar-H), 7.46-7.35 (m, 33H, Ar-H), 7.21-7.17 (m, 5H, Ar-H), 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ar-H), 5.37(s, 1H, H-1’’), 5.28-5.20 (m, 4H, H-2, H-2’’, ArCH2), 5.02-4.92 (m, 3H, H-1, ArCH2), 4.76-4.67 (m, 4H, H-1’, ArCH2), 4.55-4.51 (m, 3H, ArCH2), 4.43-4.36 (m, 4H, H-5, H-5’’, H-6’’b, ArCH2), 4.19-4.05 (m ,8H, H-3, H-3’’, H-4’’, H-6, H-6’b, H-6’’a, ArCH2), 4.82-3.70 (m, 5H, H-3’, H-4, H-5, H-6’a, linker CH2), 3.53-3.43 (m, 2H, H-4’, linker CH2), 3.30-3.21(m, 3H, H-2’, linker CH2), 1.92-1.83 (m, 6H, OAc), 1.68-1.58 (m, 4H, linker CH2), 1.41-1.31 (m, 2H, linker CH2), 0.99 (s, 9H, TBDPS).
【0102】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 170.3 (C), 170.2 (C), 165.7 (C), 165.6 (C), 156.7 (C), 156.1 (C), 137.7 (C), 137.5 (C), 137.5 (C), 137.1 (C), 135.9 (CH), 135.5 (CH), 133.4 (CH), 133.2 (CH), 133.1 (CH), 130.9 (CH), 129.9 (CH), 129.8 (CH), 129.7 (CH), 129.69 (CH), 129.60 (CH), 129.5 (CH), 129.4 (CH), 128.9 (CH), 128.54 (CH), 128.51 (CH), 128.4 (CH), 128.34 (CH), 128.32 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 120.9 (C), 98.2 (CH), 97.3 (CH), 96.5 (CH), 79.0 (CH), 73.9 (CH2), 73.5 (CH), 73.4 (CH), 73.1 (CH2), 73.0 (CH), 72.8 (CH), 72.6 (CH), 72.5 (CH2), 72.4 (CH), 72.0 (CH2), 71.9 (CH), 69.2 (CH), 68.1 (CH), 68.0 (CH2), 67.1 (CH2), 65.6 (CH), 65.2 (CH), 64.2 (CH), 62.6 (CH2), 62.5 (CH2), 62.2 (CH2), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.1 (CH2), 46.1 (CH2), 29.1 (CH2), 27.9 (CH2), 27. 5(CH2), 26.8 (CH3), 26.7 (CH3), 23.4 (CH2), 20.7 (CH3), 20.6 (CH3), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C100H107N4O21SiBrNa+ 1829.6278, found 1829.6244.
【0103】
化合物３９
【化55】
【0104】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.66-7.62 (m, 4H, Ar-H), 7.45-7.34 (m, 27H, Ar-H), 7.23-7.22 (m, 2H, Ar-H), 7.20-7.14 (m, 6H, Ar-H), 5.42 (m, 1H, H-1’’), 5.19-5.14 (m, 2H, ArCH2), 5.08-5.02 (m, 2H, H-1’, H-1’’), 4.88-4.84 (m, 1H, ArCH2), 4.70-4.60 (m, 4H, H-2, ArCH2), 4.48-4.41 (m, 5H, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.30-4.21 (m ,5H, H-2’’, H-4’, ArCH2), 3.99-3.82 (m, 9H, H-3, H-3’, H-3’’, H-4, H-4’’, H-5’,H-6’, linker CH2), 3.46-3.39 (m, 1H, linker CH2 ), 3.28-3.19 (m, 3H, H-2’, linker CH2), 1.64-1.54 (m, 4H, linker CH2), 1.32-1.25 (m, 2H, linker CH2), 1.02 (s, 9H, TBDPS).
【0105】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 167.7 (C), 167.2 (C), 156.7 (C), 156.2 (C), 137.9 (C), 137.2 (C), 137.1 (C), 136.9 (C), 136.7 (C), 135.8 (CH), 135.6 (CH), 132.8 (C), 132.6 (C), 131.4 (CH), 130.0 (CH), 129.8 (CH), 129.1 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127. 8(CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.3 (CH), 127.1 (CH), 121.4 (C), 99.8 (CH), 98.2 (CH), 96.8 (CH), 80.6 (CH), 79.4 (CH), 79.3 (CH), 77.8 (CH), 77.7 (CH), 77.5 (CH), 73.8 (CH2), 72.3 (CH), 72.2 (CH2), 72.1 (CH2), 71.9 (CH), 71.4 (CH2), 69.6 (CH2), 69.4 (CH), 68.5 (CH), 67.1 (CH2), 63.0 (CH), 61.6 (CH2), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.1 (CH2), 46.0 (CH2), 29.1 (CH2), 27.7 (CH2), 27.3 (CH2), 26.8 (CH3), 19.2 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C82H87N4O17SiBrNa+ 1529.4917, found 1529.4907.
【0106】
化合物４０
【化56】
【0107】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.71-7.69 (m, 4H, Ar-H), 7.39-7.32 (m, 28H, Ar-H), 7.22-7.14 (m, 7H, Ar-H), 5.32(s, 1H, H-1’’), 5.17-5.13 (m, 2H, ArCH2), 4.97 (s, 1H, H-1), 4.91 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1’), 4.78-4.71 (m, 4H, H-2’’, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.56-4.48 (m, 8H, H-2, ArCH2), 4.06-4.04 (m ,2H, H-3’’, ArCH2), 3.89-3.73 (m, 9H, H-3, H-3’, H-4, H-4’’, H-5’, H-6’, linker CH2 ), 3.53-3.49 (m, 2H, H-2’, H-4’), 3.42 (s, 3H, CO2Me), 3.37 (s, 3H, CO2Me), 3.21-3.15 (m, 2H, linker CH2), 1.54-1.47 (m, 4H, linker CH2), 1.28-1.24 (m, 2H, linker CH2), 1.05 (s, 9H, TBDPS).
【0108】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 169.8 (C), 169.3 (C), 156.7 (C), 156.1 (C), 137.8 (C), 137.5 (C), 137.4 (C), 136.8 (C), 136.6 (C), 135.9 (CH), 135.8 (CH), 133.3 (C), 133.2 (C), 131.1 (CH), 129.7 (CH), 129.6 (CH), 129.0 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.3 (CH), 127.1 (CH), 121.1 (C), 99.8 (CH), 98.2 (CH), 96.8 (CH), 80.6 (CH), 79.4 (CH), 79.3 (CH), 73.8 (CH2), 72.3 (CH), 72.8 (CH2), 72.4 (CH2), 72.2 (CH2), 72.1 (CH2), 71.9 (CH), 71.4 (CH2), 69.6 (CH2), 69.4 (CH), 67.1 (CH2), 63.0 (CH), 61.6 (CH2), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.1 (CH2), 46.0 (CH2), 29.1 (CH2), 27.7 (CH2), 27.3 (CH2), 26.8 (CH3), 19.4 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C85H95N4O19SiBrNa+ 1593.5441, found 1593.5414.
【0109】
化合物４１
【化57】
【0110】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.83-7.80 (m, 4H, Ar-H), 7.47-7.44 (m, 6H, Ar-H), 7.39-7.32 (m, 16H, Ar-H), 7.25-7.17 (m, 13H, Ar-H), 5.54 (s, 1H, H-1’’), 5.27 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’), 5.19-5.14 (m, 3H, H-1, ArCH2), 4.85-4.79 (m, 4H, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.70-4.56 (m, 9H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.37-4.34 (m, 3H, H-3, H-3’’, ArCH2), 4.23 (dd, J = 3.4, 12.1Hz, 1H, H-6’a), 4.18 (t, J = 9.4 Hz, 1H, H-4’ ), 4.06 (s, 1H, H-4’’), 3.95 (d, J = 11.2 Hz, 1H, H-6’b), 3.75-3.72 (m, 4H, H-3’, CO2Me), 3.65-3.62 (m, 3H, H-4, H-5’, linker CH2), 3.55-3.48 (m, 1H, linker CH2), 3.31-3.28 (m, 4H, H-2’, CO2Me), 3.21-3.16 (m, 2H, linker CH2), 1.62-1.52 (m, 4H, linker CH2), 1.36-1.29 (m, 2H, linker CH2), 1.06 (s, 9H, TBDPS).
【0111】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.2 (C), 169.9 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 137.9 (C), 137.8 (C), 137.4 (C), 137.3 (C), 136.6 (C), 135.9 (CH), 135.6 (CH), 133.5 (C), 133.3 (C), 130.6 (CH), 129.2 (CH), 129.2 (CH), 129.1 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.8 (CH), 120.4 (C), 99.2 (CH), 98.3 (CH), 94.0 (CH), 78.4 (CH), 73.2 (CH2), 72.7 (CH), 72.7 (CH), 72.3 (CH), 71.8 (CH2), 71.7 (CH2), 71.5 (CH), 71.3 (CH), 70.6 (CH2), 70.3 (CH), 68.7 (CH), 67.9 (CH), 66.9 (CH), 66.9 (CH), 63.5 (CH), 62.2 (CH2), 56.9 (CH2), 51.7 (CH3), 50.7 (CH3), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 28.8 (CH2), 27.5 (CH2), 27.0 (CH2), 26.2 (CH3), 23.1 (CH2), 23.1 (CH2), 18.9 (CH3); HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C84H95N4O25S2BrSi2- 864.2261, found 864.2258.
【0112】
化合物４２
【化58】
【0113】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.43-7.40 (m, 4H, Ar-H), 7.31-7.23 (m, 20H, Ar-H), 7.13-7.10(m, 3H, Ar-H), 7.01-6.98 (m, 2H, Ar-H), 5.30 (s, 1H, H-1’’), 5.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H, H-1’), 5.15-5.09 (m, 3H, H-1, ArCH2), 4.77-4.75 (m, 4H, H-5, ArCH2), 4.69 (d, J = 1.9 Hz, 1H, H-5’’), 4.57-4.52 (m, 7H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.30 (s, 2H, H-3, ArCH2), 4.22 (d, J = 11.8 Hz, 1H, ArCH2 ), 4.18 (s, 1H, H-3’’), 4.09 (s, 1H, H-4), 3.92-3.89 (m, 2H, H-4’, H-6’a), 3.81-3.78 (m, 1H, H-6’b), 3.74 (s, 3H, CO2Me), 3.68-3.66 (m, 1H, H-3’), 3.56-3.54 (m, 3H, H-4’’, H-5’, linker CH2), 3.48-3.42 (m, 1H, linker CH2), 3.30-3.28 (m, 1H, H-2’), 3.18 (s, 3H, CO2Me), 3.16-3.10 (m, 2H, linker CH2), 1.60-1.48 (m, 4H, linker CH2), 1.30-1.23 (m, 2H, linker CH2).
【0114】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.5 (C), 170.4 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 147.9 (C), 137.9 (C), 137.8 (C), 137.5 (C), 137. 2(C), 137.0 (C), 136.7 (C), 136.6 (C), 130.7 (CH), 129.1 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.0 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 120.5 (C), 99.3 (CH), 98.0 (CH), 95.1 (CH), 78.4 (CH), 73.4 (CH2), 72.5 (CH), 72.4 (CH), 72.2 (CH), 71.8 (CH2), 71.6 (CH2), 70.7 (CH2), 70.7 (CH), 70.4 (CH), 70.0 (CH), 69.9 (CH), 68.1 (CH2), 68.0 (CH2), 67.1 (CH), 67.0 (CH), 66.9 (CH), 63.7 (CH), 59.7 (CH2), 57.0 (CH2), 51.7 (CH3), 51.2 (CH3), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 47.0 (CH2), 46.1 (CH2), 28.8 (CH2), 27.6 (CH2), 27.1 (CH2), 23.1 (CH2), 23.1 (CH2), 17.0 (CH3); HRMS m/z (ESI, M-2H+3Na+) calcd for C68H75N4O25S2BrNa3
+ 1559.3026, found 1559.3038.
【0115】
化合物４３
【化59】
【0116】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.48-7.40 (m, 9H, Ar-H), 7.29-7.23 (m, 15H, Ar-H), 7.14-7.11 (m, 3H, Ar-H), 7.03-7.00 (m, 2H, Ar-H), 5.43 (s, 1H, H-1’’), 5.20-5.13 (m, 4H, H-1, H-1’, ArCH2), 4.87-4.82 (m, 4H, H-5’’, ArCH2), 4.76-4.74 (m, 1H, ArCH2), 4.61-4.55 (m, 7H, H-2, H-2’’, H-5, ArCH2), 4.43 (d, J = 11.8 Hz, 2H, ArCH2), 4.34-4.27 (m, 5H, H-3, H-3’’, H-4, H-6’), 4.11-4.04 (m, 2H, H-4’, H-4’’ ), 3.87-3.75 (m, 6H, H-3’, H-5’, CO2Me, linker CH2), 3.49-3.44 (m, 1H, linker CH2), 3.31-3.30 (m, 1H, H-2’), 3.27-3.26 (m, 3H, CO2Me), 3.20-3.15 (m, 2H, linker CH2), 1.64-1.52 (m, 4H, linker CH2), 1.31-1.25 (m, 2H, linker CH2).
【0117】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.9 (C), 170.5 (C), 157.1 (C), 156.5 (C), 137.9 (C), 137.4 (C), 137.2 (C), 136.7 (C), 130.7 (CH), 129.3 (CH), 128.9 (CH), 128.6 (CH), 128.4 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 120.6 (C), 99.5 (CH), 97.3 (CH), 95.9 (CH), 78.2 (CH), 73.6 (CH), 72.1 (CH), 71.8 (CH2), 71.6 (CH2), 71.4 (CH), 71.2 (CH), 71.1 (CH), 70.8 (CH2), 70.5 (CH), 70.4 (CH), 69.7 (CH), 69.4 (CH), 68.0 (CH2), 67.1 (CH), 67.0 (CH), 66.8 (CH), 65.8 (CH2), 63.9 (CH), 56.9 (CH2), 51.9 (CH), 51.4 (CH), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 47.0 (CH2), 46.1 (CH2), 29.4 (CH2), 28.8 (CH2), 27.6 (CH2), 27.1 (CH2), 23.1(CH2); HRMS m/z (ESI, M-3H+Na2-) calcd for C68H74N4O28S2BrNa2- 796.1367, found 796.1370.
【0118】
化合物４４
【化60】
【0119】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.41-7.39 (m, 2H, Ar-H), 7.34-7.32 (m, 2H, Ar-H), 7.27-7.17 (m, 25H, Ar-H), 5.83 (s, 1H, H-1’’), 5.30-5.24 (m, 3H, H-1, H-1’, ArCH2 ), 5.06 (d, J = 13.0 Hz, 2H, ArCH2), 4.84-4.83 (m, 1H, H-5’’), 4.73-4.68 (m, 2H, ArCH2), 4.57-4.37 (m, 13H, H-2, H-2’’, H-3’’, H-5, H-6’, ArCH2), 4.07-3.99 (m ,6H, H-3’, H-4, H-4’, H-4’’, H-5’,H-3), 3.63-3.56 (m, 2H, H-2’, linker CH2), 3.47-3.39 (m, 1H, linker CH2), 3.14-3.08 (m, 2H, linker CH2), 1.54-1.45 (m, 4H, linker CH2), 1.27-1.23 (m, 2H, linker CH2).
【0120】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 177.5 (C), 174.0 (C), 157.1 (C), 156.6 (C), 139.0 (C), 138.0 (C), 137.9 (C), 137.7 (C), 137.6 (C), 136.7 (C), 136.6 (C), 130.5 (CH), 129.8 (CH), 128.8 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 126.9 (CH), 120.2(C), 98.8 (CH), 95.1 (CH), 94.3 (CH), 76.1 (CH), 75.2 (CH), 74.6 (CH), 72.8 (CH2), 72.7 (CH2), 71.5 (CH2), 70.8 (CH2), 70.5 (CH), 70.1 (CH), 69.5 (CH), 68.1 (CH2), 67.9 (CH2), 67.0 (CH2), 58.6527, 50.0 (CH2), 49.8 (CH2), 46.8 (CH2), 46.1 (CH2), 29.4 (CH2), 28.8 (CH2), 27.6 (CH2), 27.0 (CH2), 23.2 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-5H+3Na2-) calcd for C66H70N2O31S4BrNa3
2- 831.0861, found 831.0869.
【0121】
化合物３６
【化61】
【0122】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.43 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’), 5.21 (s, 1H, H-1), 5.12 (d, J = 2.9 Hz, 1H, H-1’’), 4.87 (s, 1H, H-5), 4.52 (d, J = 3 Hz, 1H, H-5’’), 4.35-4.34 (m, 2H, H-2, H-6’a), 4.30-4.28 (m, 1H, H-6’b), 4.26-4.25 (m, 1H, H-2’’), 4.23-4.22 (m, 1H, H-3’’), 4.13-4.12 (m, 2H, H-3, H-4’’), 4.09-4.08 (m, 1H, H-5’), 4.01 (s, 1H, H-4), 3.80-3.75 (m, 4H, H-3’, H-4’, linker CH2), 3.29 (dd, J = 3.4, 10.3 Hz, 1H, H-2’) , 3.05-3.03 (m, 2H, linker CH2), 1.73-1.69 (m, 4H, linker CH2), 1.52-1.49 (m, 2H, linker CH2).
【0123】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ = 99.1 (CH), 99.0 (CH), 96.5 (CH), 76.9 (CH), 76.6 (CH), 75.8 (CH), 74.1 (CH), 69.6 (CH), 69.3 (CH), 69.1 (CH), 69.1 (CH), 69.0 (CH), 68.9 (CH), 68.0 (CH2), 66.3 (CH2), 57.9 (CH), 39.4 (CH2), 27.8 (CH2), 26.1 (CH2), 22.2 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C23H38N2O29S4
2- 467.0216, found 467.0247.
【0124】
２．２ Ｓｕｌｆ－１活性を阻害した化合物３６
この実施例では、蛍光アッセイを実施して、Ｓｕｌｆ－１に対する競合基質として三糖３６（０．３２ｍＭ）を評価した。データは、３６が基質混合物中の４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の加水分解を低減させる大きな可能性を有することを明らかにした（図２、（Ａ））。ＥＬＩＳＡによって測定した３６のＥＣ５０値は３．８μＭであり、３６が１９のものと比較してＳｕｌｆ－１に対して相対的に高い親和性を有することを示した。
この実施例では、蛍光アッセイを実施して、Ｓｕｌｆ－１に対する競合基質として三糖３６（０．３２ｍＭ）を評価した。データは、３６が基質混合物中の４－ＭＵＳ（４．３５ｍＭ）の加水分解を低減させる大きな可能性を有することを明らかにした（図２、（Ａ））。ＥＬＩＳＡによって測定した３６のＥＣ５０値は３．８μＭであり、３６が１９のものと比較してＳｕｌｆ－１に対して相対的に高い親和性を有することを示した。
【0125】
生体外でのＳｕｌｆ－１によるＨＳの消化後の硫酸イオンを測定するＨＰＬＣベースのアッセイも開発した。硫酸塩放出の寄与を直接計算するために、化合物３６（４８０μＭ）をヒトＳｕｌｆ－１で処置し、硫酸塩分析物の量を、コントロールとしての未処置の３６の量と比較した（図２、（Ｂ））。硫酸塩濃度（３８１．１μＭ）を、強力なＡＳ９－ＨＣ陰イオン交換カラム及び導電率検出器を使用したＨＰＬＣによって決定した。このアッセイに基づき、二糖１８及び四糖１９の加水分解に応じた硫酸塩濃度を、それぞれ５．９μＭ及び４６．２μＭと決定した。さらに、４８０μＭの３６をＳｕｌｆ－１の量を変化させて（１、２及び５μＬ）１６時間処置し、それぞれ４９．９μＭ、９３．５μＭ及び１５５．８μＭのＳＯ４
２－が得られた。観察されたように、２μＬのＳｕｌｆ－１は、３６の６－Ｏ－硫酸基（図２、（Ｃ））をかなり加水分解することができた。特定の６－脱硫酸化現象の動態特性を、４８０μＭの３６を２μＬのＳｕｌｆ－１で異なる時点で処置することによってさらに評価した。ここで、Ｓｕｌｆ－１活性は２時間で最大に達した（図２、（Ｄ））。異なる基質濃度で放出された硫酸イオンの量を分析し、動態パラメータＶｍａｘ及びＫｍ（図２、（Ｅ））をそれぞれ１４．１μＭ／ｈ及び２５．８μＭと決定した。これらのデータは、化合物３６が人工基質４－ＭＵＳと比較して顕著に高い活性を有することを示した（Ｋｍ値は１０ｍＭとして測定された）。これらの発見はまた、ＨＳ基質の結合が４－ＭＵＳの酵素活性部位への侵入を阻止することを示唆し、三糖３６がヒトＳｕｌｆ－１に対する優れた基質であることを強調している。
【実施例3】
【0126】
実施例３ Ｓｕｌｆ－１の阻害物質の設計及び合成並びにそれらの阻害物質活性
３．１ Ｓｕｌｆ－１の阻害物質の設計及び合成
実施例１及び２からの結果に基づき、二糖類似体４５、三糖類似体４６及び四糖類似体４７を、スキーム４及び５に記載のステップに従って合理的に設計及び合成した。
３．１ Ｓｕｌｆ－１の阻害物質の設計及び合成
実施例１及び２からの結果に基づき、二糖類似体４５、三糖類似体４６及び四糖類似体４７を、スキーム４及び５に記載のステップに従って合理的に設計及び合成した。
【0127】
スキーム４では、ピリジン中のＣｌＳＯ２ＮＨＢｎによる６’－アルコール４２の処置では、化合物４８（９５％）を提供し、それは３ステップ変換（エステル脱メチル化、シュタウディンガー還元及びＮ－硫酸化）を受け、所望のＮ－硫酸塩４９を３２％の全収率で与えた。化合物４９の水素化分解では、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５を通した精製及びＤｏｗｅｘ５０ＷＸ８－Ｎａ＋樹脂によるイオン交換を通した精製後に４３％の収率で単離された標的化合物４６をもたらした。
【0128】
スキーム４．三糖スルホンアミド４６の調製
試薬及び条件：（ａ）ＣｌＳＯ２ＮＨＢｎ、Ｐｙｒ、室温、１０分、９５％、（ｂ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、３２％（３ステップ）、（ｃ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、室温、３日、４３％。
【化62】
試薬及び条件：（ａ）ＣｌＳＯ２ＮＨＢｎ、Ｐｙｒ、室温、１０分、９５％、（ｂ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、３２％（３ステップ）、（ｃ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、室温、３日、４３％。
【0129】
二糖類似体４５及び四糖類似体４７の合成をスキーム５に概説する。ＭｅＯＨ及びＥｔ３Ｎ中の塩基性条件下でのラクトン１２及び１３の開環により、それぞれメチルエステル５０（８３％）及び５１（９７％）を得た。化合物５０及び５１のＯ－硫酸化は、対応するＯ－硫酸塩５２（７５％）及び５３（６８％）を個別に提供し、それらは脱シリル化に供され、アルコール５４及び５５をそれぞれ６０％及び７６％の収率で提供した。第一級ヒドロキシ基での化合物５４及び５５のスルファモイル化は、ベンジルスルファメート５６（６１％）及び５７（８７％）の形成の成功をもたらし、それらは４８→４９と同様の３ステップの変更を受けてＮ－硫酸化誘導体５８及び５９をそれぞれ５６％及び３９％の全収率で供与した。最後に、全てのＢｎ、Ｃｂｚ、２－ＮＡＰ及びＰＢＢ基を除去する水素化分解では、予想される標的生成物４５（２９％）及び４７（２２％）を付随して与えた。
【0130】
スキーム５．二糖類似体４５及び四糖類似体４７の合成
試薬及び条件：（ａ）ＭｅＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、４０℃、１８時間、５０：８３％、５１：９７％、（ｂ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、５２：７５％、５３：６８％、（ｃ）ＨＦ・Ｐｙｒ、Ｐｙｒ、ＴＨＦ、７２時間、５４：６０％、５５：７６％、（ｄ）ＣｌＳＯ２ＮＨＢｎ、Ｐｙｒ、室温、１０分、５６：６１％、５７：８７％、（ｅ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、５８：５６％（３ステップ）、５９：３９％（３ステップ）、（ｆ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、室温、３日、４５：２９％、４７：２２％
【化63】
試薬及び条件：（ａ）ＭｅＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、４０℃、１８時間、５０：８３％、５１：９７％、（ｂ）ＳＯ３・Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、６０℃、１８時間、５２：７５％、５３：６８％、（ｃ）ＨＦ・Ｐｙｒ、Ｐｙｒ、ＴＨＦ、７２時間、５４：６０％、５５：７６％、（ｄ）ＣｌＳＯ２ＮＨＢｎ、Ｐｙｒ、室温、１０分、５６：６１％、５７：８７％、（ｅ）（１）ＬｉＯＨ水溶液、Ｈ２Ｏ２、ＴＨＦ、３７℃、１８時間、（２）ＰＭｅ３／ＴＨＦ、ＴＨＦ、ＮａＯＨ水溶液、室温、１４時間、（３）ＳＯ３・Ｐｙｒ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＨ水溶液、ＭｅＯＨ、室温、１８時間、５８：５６％（３ステップ）、５９：３９％（３ステップ）、（ｆ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２（バルーン）、ＭｅＯＨ、室温、３日、４５：２９％、４７：２２％
【0131】
化合物４８
【化64】
【0132】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.39-7.38 (m, 2H, Ar-H), 7.36-7.35 (m, 1H, Ar-H), 7.35-7.34 (m, 4H, Ar-H), 7.32-7.31 (m, 5H, Ar-H), 7.30-7.29 (m, 2H, Ar-H), 7.25-7.24 (m, 3H, Ar-H), 7.21-7.20 (m, 4H, Ar-H), 7.19-7.17(m, 6H, Ar-H), 7.15-7.14 (m, 1H, Ar-H), 7.13-7.12 (m, 2H, Ar-H), 7.10-7.09(m, 2H, Ar-H), 7.01-6.98 (m, 2H, Ar-H), 5.22 (s, 1H, H-1’’), 5.10-5.06 (m, 4H, H-1, H-1’, ArCH2), 4.75-4.73 (m, 3H, H-5’’, ArCH2), 4.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-5), 4.58-4.51 (m, 6H, H-2’’, ArCH2), 4.42 (s, 1H, H-2), 4.38-4.36 (m, 3H, H-3’’, H-6’b, ArCH2), 4.28-4.22 (m, 6H, H-6’a, H-3, ArCH2), 4.13-4.11 (m, 1H, H-4’’), 4.00 (m,3H, CO2Me), 3.84-3.82 (m, 1H, H-5’), 3.76-3.73 (m, 4H, H-4’, CO2Me), 3.66-3.59 (m, 3H, H-3’, H-4, linker CH2), 3.45-3.37 (m, 1H, linker CH2), 3.22-3.21 (m, 1H, H-2’), 3.14-3.09 (m, 2H, linker CH2), 1.57-1.46 (m, 4H, linker CH2), 1.30-1.11 (m, 2H, linker CH2).
【0133】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.2 (C), 170.1 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 137.9 (C), 137.7 (C), 137.6 (C), 137.3 (C), 137.2 (C), 136.7 (C), 133.1 (C), 130.7 (CH), 129.1 (CH), 128.7 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.8 (CH), 127.5 (CH), 127.5 (CH), 127.2 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 120.5 (C), 99.5 (CH), 98.6 (CH), 95.3 (CH), 78.1 (CH), 73.5 (CH), 73.3 (CH2), 72.5 (CH), 71.8 (CH2), 71.6 (CH2), 71.3 (CH), 71.1 (CH), 71.0 (CH), 70.8 (CH2), 70.7 (CH), 70.4 (CH), 70.1 (CH), 67.9 (CH2), 67.8 (CH), 67.7 (CH2), 67.1 (CH), 67.0 (CH2), 66.9 (CH2), 63.3 (CH), 51.7 (CH3), 50.9 (CH3), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 48.1 (CH), 47.0 (CH2), 46.7 (CH2), 46.1 (CH2), 43.1 (CH2), 29.2 (CH3), 28.7 (CH2), 27.5 (CH2), 27.1 (CH2), 23.0 (CH2) ; HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C75H84N5O27S3Br2- 829.6771, found 829.6764.
【0134】
化合物４９
【化65】
【0135】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.45-7.42 (m, 2H, Ar-H), 7.37-7.35 (m, 2H, Ar-H), 7.30-7.27 (m, 5H, Ar-H), 7.23-7.18 (m, 17H, Ar-H), 7.11-7.08 (m, 8H, Ar-H), 5.74 (s, 1H, H-1’’), 5.30-5.25 (m, 3H, H-1, H-1’, ArCH2 ), 5.10-5.07 (m, 2H, ArCH2), 4.85-4.84 (m, 1H, ArCH2), 4.75-4.74 (m, 1H, H-5’’), 4.66-4.60 (m, 5H, H-2’’, H-5, ArCH2), 4.43-4.39 (m ,6H, H-2, ArCH2), 4.25-4.21 (m, 2H, H-6’a, H-6’b ), 4.15-4.09 (m, 6H, H-3’, H-3’’, H-4’, H-5’, ArCH2), 3.99 (s, 1H, H-4), 3.94 (s, 1H, H-4’’), 3.85 (t, J = 10.3 Hz, 1H, H-3), 3.58-3.53 (m, 2H, H-2’, linker CH2), 3.45-3.39 (m, 1H, linker CH2), 3.16-3.09 (m, 2H, linker CH2), 1.58-1.47 (m, 4H, linker CH2), 1.31-1.21 (m, 2H, linker CH2).
【0136】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 175.9 (C), 174.6 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 139.0 (C), 138.2 (C), 137.8 (C), 137.69 (C), 137.61 (C), 130.5 (CH), 130.0 (CH), 128.5 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.7 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 126.9 (CH), 120.2 (C), 98.7 (CH), 96.3 (CH), 93.6 (CH), 75.3 (CH), 74.7 (CH), 73.3 (CH), 72.9 (CH2), 72.4 (CH2), 71.3 (CH), 71.3 (CH2), 71.0 (CH), 70.7 (CH2), 70.3 (CH), 70.0 (CH), 68.7 (CH), 68.0 (CH2), 67.2 (CH), 67.0 (CH2), 66.5 (CH), 59.1 (CH2), 50.0 (CH2), 49.8 (CH2), 28.9 (CH2), 27.6 (CH2), 27.1 (CH2), 23.2 (CH2) ; HRMS m/z (ESI, M-5H+2Na3-) calcd for C73H77N3O30S4BrNa2
3- 576.0818, found 576.0826.
【0137】
化合物４６
【化66】
【0138】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.40 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’), 5.25-5.18 (m, 2H, H-1, H-1’’), 4.88-4.86 (m, 1H, H-5), 4.56-4.49 (m, 3H, H-5’’, H-6’), 4.34 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-2), 4.28-4.25 (m ,2H, H-2’’, H-3’’), 4.17-4.08 (m, 4H, H-3, H-4, H-4’’, H-5’), 3.81-3.77 (m, 3H, H-3’, H-4’, linker CH2), 3.71-3.65 (m, 1H, linker CH2 ), 3.29 (dd, 1H, J = 3.1, 9.5 Hz, H-2’), 3.08-3.03 (m, 2H, linker CH2), 1.75-1.68 (m, 4H, linker CH2), 1.53-1.48 (m, 2H, linker CH2).
【0139】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ = 176.2 (C), 174.7 (C), 99.3 (CH), 98.8 (CH), 97.1 (CH), 77.4 (CH), 76.3 (CH), 76.0 (CH), 74.0 (CH), 69.5 (CH), 68.9 (CH), 68.8 (CH), 68.7 (CH), 68.6 (CH), 68.3 (CH2), 68.0 (CH2), 67.9 (CH), 58.0 (CH), 49.0 (CH), 46.6 (CH), 39.4 (CH2), 27.7 (CH2), 26.1 (CH2), 24.8 (CH2), 22.1 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-4H+5Na+) calcd for C23H37N3O28S4Na5
+ 1045.9935, found 1045.9938.
【0140】
化合物４６－１
【化67】
【0141】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.33 (d, J = 3.4, 1H, H-1’), 5.14 (s, 1H, H-1’’), 5.03 (s, 1H, H-1), 4.89-4.87 (m, 1H, H-5), 4.48-4.43 (m, 3H, H-5’’, H-6’), 4.30-4.21 (m, 3H, H-2, H-2’’, H-3’’), 4.10-3.97 (m, 4H, H-3, H-4, H-4’’, H-5’), 3.75-3.70 (m, 2H, H-3’, H-4’), 3.40 (s, 3H, OCH3), 3.25 (dd, 1H, J = 3.3, 12.2 Hz, H-2’)
【0142】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ =176.3 (C), 175.0 (C), 99.5 (CH), 99.4 (CH), 97.5 (CH), 77.6 (CH), 76.1 (CH), 74.5 (CH), 73.9 (CH), 69.4 (CH), 68.9 (CH), 68.8 (CH), 68.7 (CH), 68.6 (CH), 68.3 (CH2), 67.5 (CH), 67.3 (CH), 58.1 (CH), 55.4 (OCH3)
【0143】
HRMS m/z (ESI, M-6H+5Na+) calcd for C19H26N2O28S4Na5
- 972.9049, found 972.9021.
【0144】
化合物５０
【化68】
【0145】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.76-7.75 (m, 1H, Ar-H), 7.66-7.64 (m, 2H, Ar-H), 7.59 (d, J = 6.9 Hz, 2H, Ar-H), 7.54 (d, J = 7.2 Hz, 2H, Ar-H), 7.5 (s, 1H, Ar-H), 7.42-7.40 (m, 2H, Ar-H), 7.34-7.33 (m, 2H, Ar-H), 7.30-7.21 (m, 23H, Ar-H), 7.06 (s, 1H, Ar-H), 5.13 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1’), 5.04 (d, J = 18.3 Hz, 2H, ArCH2), 4.89-4.86 (m, 2H, H-1, ArCH2), 4.76-4.71 (m, 6H, ArCH2), 4.59 (d, J = 11.1 Hz, 1H, ArCH2), 4.37 (s, 2H, H-2, H-5), 4.04 (m, 1H, H-3), 3.88 (t, J = 5.1 Hz, 1H, H-4), 3.82-3.78 (m, 3H, H-3’, H-6’), 3.65-3.60 (m, 6H, H-4’, H-5’ OCH3, linker CH2 ), 3.45-3.38 (m, 2H, H-2’, linker CH2), 3.15-3.11 (m, 2H, linker CH2), 1.54-1.45 (m, 4H, linker CH2), 1.27-1.22 (m, 2H, linker CH2), 0.95 (s, 9H, TBDPS).
【0146】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 171.7 (C), 139.8 (C), 138.8 (C), 137.1 (CH), 136.9 (CH), 134.8 (C), 134.7 (C), 134.6 (C), 134.5 (C), 132.6 (C), 131.0 (CH), 129.7 (CH), 129.5 (CH), 129.4 (CH), 129.1 (CH), 129.0 (CH), 128.9 (CH), 128.5 (CH), 127.4 (CH), 127.2 (CH), 126.8 (CH), 122.7 (C), 102.9 (CH), 97.8 (CH), 81.8 (CH), 79.6 (CH), 79.5 (CH), 77.0 (CH), 76.2 (CH2), 75.5 (CH2), 74.3 (CH2), 74.2 (CH), 74.0 (CH2), 70.8 (CH), 70.7 (CH2), 69.9 (CH), 68.5 (CH), 65.2 (CH), 64.2 (CH2), 52.9 (CH), 27.6 (CH3), 20.3 (C); HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C74H81N4O13SiBrNa+ 1363.4650, found 1363.4653.
【0147】
化合物５２
【化69】
【0148】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.72-7.71 (m, 1H, Ar-H), 7.63-7.61 (m, 4H, Ar-H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H, Ar-H), 7.48 (s, 1H, Ar-H), 7.37-7.35 (m, 2H, Ar-H), 7.29-7.28 (m, 2H, Ar-H), 7.24-7.16 (m, 23H, Ar-H), 7.04-7.02 (m, 1H, Ar-H), 5.17 (d, J = 3.0 Hz, 1H, H-1’), 5.09 (s, 1H, H-1), 5.01(d, J= 25.5 Hz, 2H, ArCH2), 4.84-4.81 (m, 2H, ArCH2), 4.75-4.72 (m, 4H, H-5, ArCH2), 4.51-4.48 (m, 2H, H-2, ArCH2), 4.34-4.31 (m, 3H, H-3, ArCH2), 4.11 (s, 1H, H-4), 3.92-3.90 (m, 1H, H-5’), 3.86-3.82 (m, 2H, H-6’), 3.71-3.69 (m, 2H, H-3’, H-4’), 3.62-3.55 (m, 4H, linker, CO2Me), 3.41-3.36 (m, 1H, linker CH2), 3.25-3.24 (m, 1H, H-2’), 3.08-3.05 (m, 2H, linker CH2), 1.51-1.40 (m, 4H, linker CH2), 1.24-1.20 (m, 1H, linker CH2), 1.13-1.10 (m, 1H, linker CH2), 0.96 (s, 9H, TBDPS).
【0149】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 171.7 (C), 158.5 (C), 157.9 (C), 139.5 (C), 139.1 (C), 138.2 (C), 137.2 (C), 137.1 (CH), 136.8 (CH), 134.79 (C), 134.72 (C), 134.5 (C), 134.4 (C), 132.5 (CH), 131.08 (CH), 131.05 (CH), 131.0 (CH), 129.7 (CH), 129.6 (CH), 129.3 (CH), 129.2 (CH), 129.1 (CH), 129.0 (CH), 128.9 (CH), 128.7 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.1 (CH), 126.7 (CH), 122.5 (C), 100.9 (CH), 97.5 (CH), 81.4 (CH), 79.6 (CH), 79.5 (CH), 76.0 (CH2), 75.3 (CH2), 74.1 (CH), 73.19 (CH2), 73.12 (CH), 72.5 (CH), 72.4 (CH), 69.5 (CH2), 69.4 (CH2), 68.7 (CH), 68.5 (CH2), 68.4 (CH2), 65.2 (CH), 64.1 (CH2), 52.9 (CH), 51.6 (CH2), 51.4 (CH2), 48.5 (CH2), 48.0 (CH2), 47.6 (CH), 30.3 (CH2), 29.0 (CH2), 28.6 (CH2), 27.6 (CH3), 24.6 (CH), 24.6 (CH), 20.2 (C), 9.4 (CH3) ; HRMS m/z (ESI, M-H-) calcd for C74H80N4O16SiSBr- 1419.4243, found 1419.4247.
【0150】
化合物５４
【化70】
【0151】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.78-7.73 (m, 3H, Ar-H), 7.62 (m, 1H, Ar-H), 7.40-7.23 (m, 22H, Ar-H), 5.12-5.06 (m, 4H, H-1, H-1’, ArCH2), 4.83-4.81 (m, 2H, ArCH2), 4.77-4.72 (m, 4H, H-5, ArCH2), 4.54 (d, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH2), 4.44 ( s, 1H, H-2), 4.47-4.44 (m, 1H, ArCH2), 4.26 (s, 2H, ArCH2), 4.08 (s, 1H, H-3), 3.92 (s, 1H, H-4), 3.95-3.92 (m, 1H, H-3’), 3.75-3.70 (m, 6H, H-5’, H-6’, CO2Me), 3.64-3.59 (m, 2H, H-4’, linker CH2), 3.44-3.38 (m, 1H, linker CH2), 3.26-3.25 (m, 1H, H-2’), 3.15-3.10 (m, 2H, linker CH2), 1.60-1.47 (m, 4H, linker CH2), 1.29-1.23 (m, 2H, linker CH2).
【0152】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 171.8 (C), 158.4 (C), 157.9 (C), 139.5 (C), 139.2 (C), 138.1 (C), 137.4 (C), 134.8 (C), 134.4 (C), 132.3 (CH), 130.8 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 129.3 (CH), 129.1 (CH), 129.0 (CH), 128.7 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 127.2 (C), 127.23 (C), 127.0 (C), 126.8 (C), 122.3 (C), 101.0 (CH), 98.2 (CH), 81.1 (CH), 79.2 (CH), 75.7 (CH2), 75.2 (CH2), 73.9 (CH), 73.7 (CH), 73.1 (CH), 73.0 (CH2), 72.6 (CH), 69.4 (CH2), 69.3 (CH2), 68.5 (CH), 68.4 (CH2), 68.3 (CH2), 65.0 (CH), 61.6 (CH2), 52.9 (CH), 51.5 (CH2), 51.3 (CH2), 48.4 (CH), 48..0 (CH2), 47.6 (CH), 30.2 (CH3), 29.0 (CH2), 28.5 (CH2), 24.6 (CH2), 24.5 (CH2), 9.3 (CH3); HRMS m/z (ESI, M-H+2Na+) calcd for C58H62N4O16Na2SBr+ 1227.2860, found 1227.2854.
【0153】
化合物５６
【化71】
【0154】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.75-7.72 (m, 3H, Ar-H), 7.62 (s, 1H, Ar-H), 7.39-7.37 (m, 2H, Ar-H), 7.33-7.18 (m, 25H, Ar-H), 5.11-5.05 (m, 4H, H-1’, H-1, ArCH2), 4.82-4.80 (m, 2H, ArCH2), 4.75-4.71 (m, 4H, H-5, ArCH2), 4.52 (d, J = 11.4 Hz, 1H, ArCH2), 4.43 (s, 1H, H-2), 4.40-4.36 (m, 2H, ArCH2), 4.26-4.22 (m, 3H, H-3, H-6’), 4.13-4.08 (m, 3H, H-4, ArCH2), 3.99-3.94 (m, 2H, H-3’, H-5’), 3.66 (s, 3H, OCH3), 3.64-3.58 (m, 1H, linker CH2), 3.46 (t, J = 9.4 Hz, 1H, H-4’), 3.43-3.37 (m, 1H, linker CH2), 3.26-3.25 (m, 1H, H-2’), 3.14-3.08 (m, 2H, linker CH2), 1.60-1.46 (m, 4H, linker CH2), 1.29-1.18 (m, 2H, linker CH2);
【0155】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 171.9 (C), 158.5 (C), 158.0 (C), 139.4 (C), 139.1 (C), 138.6 (C), 138.1 (C), 137.1 (C), 134.8 (C), 134.5 (C), 132.4 (CH), 130.9 (CH), 129.6 (CH), 129.5 (CH), 129.3 (CH), 129.2 (CH), 129.16 (CH), 129.12 (CH), 129.07 (CH), 129.00 (CH), 128.79 (CH), 128.76 (CH), 128.49 (CH), 128.40 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.0 (CH), 126.8 (CH), 122.3 (C), 101.1 (CH), 98.8 (CH), 81.1 (CH), 79.5 (CH), 79.0 (CH), 75.7 (CH2), 75.3 (CH2), 74.3 (CH), 74.1 (CH), 73.0 (CH2), 72.2 (CH), 72.2 (CH), 71.4 (CH), 69.4 (CH2), 69.3 (CH2), 69.2 (CH2), 68.5 (CH2), 68.3 (CH2), 68.3 (CH), 65.0 (CH), 53.7 (CH), 53.1 (CH3), 51.5 (CH2), 51.3 (CH2), 49.6 (CH2), 48.4 (CH2), 48.2 (CH2), 47.9 (CH2), 47.7 (CH2), 47.6 (CH2), 30.3 (CH2), 30.2 (CH2), 29.0 (CH2), 28.5 (CH2), 24.6 (CH2), 24.5 (CH2) ; HRMS m/z (ESI, M-H-) calcd for C65H69N5O18S2Br- 1350.3262, found 1350.3259.
【0156】
化合物５８
【化72】
【0157】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.78-7.71 (m, 3H, Ar-H), 7.57 (s, 1H, Ar-H), 7.40-7.37 (m, 2H, Ar-H), 7.31-7.17 (m, 25H, Ar-H), 5.32 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-1’), 5.19 (s, 1H, H-1), 5.11-5.05 (m, 3H, ArCH2), 4.82-4.81 (m, 1H, ArCH2), 4.72-4.69 (m, 2H, ArCH2), 4.63-4.61 (m, 2H, ArCH2), 4.57-4.54 (m, 1H, H-5), 4.47-4.43 (m, 2H, H-2, H-6’a), 4.39-4.36 (m, 3H, H-6’b, ArCH2), 4.27 (s, 1H, H-3), 4.20-4.14 (m, 3H, H-4, ArCH2), 4.05 (d, J= 10.1 Hz, 1H, H-5’), 3.73 (t, J = 9.6 Hz, 1H, H-3’), 3.62-3.55 (m, 3H, H-2’, H-4’, linker CH2), 3.42-3.35 (m, 1H, linker CH2), 3.12-3.05 (m, 2H, linker CH2), 1.59-1.44 (m, 4H, linker CH2), 1.27-1.17 (m, 2H, linker CH2).
【0158】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 174.1 (C), 157.1 (C), 156.5 (C), 138.8 (C), 138.5 (C), 138.0 (C), 137.8 (C), 137.3 (C), 135.9 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 130.8 (CH), 129.8 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.28 (CH), 127.21 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 126.3 (CH), 125.8 (CH), 125.6 (CH), 125.5 (CH), 120.5 (C), 98.9 (CH), 98.8 (CH), 80.3 (CH), 77.3 (CH), 74.8 (CH), 74.6 (CH2), 74.1 (CH), 71.4 (CH2), 70.6 (CH), 69.0 (CH), 67.9 (CH2), 67.5 (CH2), 67.0 (CH), 66.9 (CH), 58.9 (CH), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 46.8 (CH2), 46.2 (CH2), 28.9 (CH2), 27.6 (CH2), 23.2 (CH2).; HRMS m/z (ESI, M-3H+4Na+) calcd for C164H67N3O21Na4S3Br+ 1480.2203, found 1480.2207.
【0159】
化合物４５
【化73】
【0160】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.38 (d, J = 2.9 Hz, 1H, H-1’), 5.16 (s, 1H, H-1), 4.55-4.51 (m, 2H, H-5, H-6’a), 4.44-4.39 (m, 1H, H-6’b), 4.26 (s, 2H, H-2, H-3), 4.10-4.06 (m, 2H, H-4, H-5’), 3.83-3.79 (m, 1H, linker CH2), 3.72-3.68 (m, 2H, H-3’, linker CH2), 3.56 (t, J = 9.4 Hz, 1H, H-4’), 3.26 (dd, J = 3.2, 10.3 Hz, 1H, H-2’), 3.07-3.03 (m, 2H, linker CH2) , 1.77-1.70 (m, 4H, linker CH2), 1.53-1.48 (m, 2H, linker CH2).
【0161】
13C NMR (150 MHz, D2O) δ = 174.9 (C), 98.6 (CH), 97.3 (CH), 76.1 (CH), 75.6 (CH), 70.9 (CH), 69.6 (CH), 69.2 (CH), 68.3 (CH), 68.2 (CH2), 68.1 (CH), 68.08 (CH2), 68.00 (CH), 57.9 (CH), 49.0 (CH2), 39.4 (CH2), 32.6 (CH), 27.7 (CH2), 26.2 (CH2), 24.9 (CH2), 22.2 (CH2) ; HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C17H33N3O19S3
2- 338.5357, found 338.5359.
【0162】
化合物５１
【化74】
【0163】
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 7.87-7.81 (m, 9H, Ar-H), 7.70 (d, J = 7.2 Hz, 2H, Ar-H), 7.64 (s, 1H, Ar-H), 7.54-7.52 (m, 2H, Ar-H), 7.46-7.37 (m, 36H, Ar-H), 7.25-7.24 (m, 1H, Ar-H), 7.19-7.18 (m, 2H, Ar-H), 7.10-7.08 (m, 2H, Ar-H), 5.42 (s, 1H, H-1’’), 5.21 (d, J = 15.9 Hz, 2H, ArCH2), 5.10-5.01 (m, 5H, H-1, H-1’, H-1’’’, ArCH2), 4.88-4.69 (m, 12H, H-2, H-2’’, H-3’’, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.17-4.13 (m, 2H, H-3, H-4’), 4.04-3.93 (m, 10H, H-4, H-5’’’, H-6’, H-6’’’, linker CH2, ArCH2), 4.78-4.73 (m, 3H, H-3’’’, H-4’’’, H-5’), 3.60-3.57 (m, 7H, H-2’, H-2’’’, H-3’, linker CH2, CO2Me), 3.46-3.44 (m, 1H, H-4’), 3.32 (s, 3H, CO2Me), 3.29-3.24 (m, 2H, linker CH2), 1.67-1.59 (m, 4H, linker CH2), 1.39-1.33 (m, 2H, linker CH2), 1.18-1.14 (m 18H, TBDPS).
【0164】
13C NMR (150 MHz, CDCl3) δ = 169.9 (C), 169.0 (C), 156.7 (C), 156.2 (C), 137.6 (C), 137.2 (C), 136.8 (C), 136.7 (C), 136.05 (CH), 136.00 (CH), 135.9 (CH), 135.67 (C), 135.63 (CH), 133.4 (C), 133.39 (C), 133.30 (C), 133.1 (C), 133.0 (C), 131.6 (CH), 131.2 (CH), 129.89 (CH), 129.86 (CH), 129.7 (CH), 129.1 (CH), 128.8 (CH), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 127.99 (CH), 127.94 (CH), 127.85 (CH), 127.81 (CH), 127.6 (CH), 127.4 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 126.3 (CH), 126.0 (CH), 125.9 (CH), 125.3 (CH), 121.9 (C), 121.2 (C), 101.6 (CH), 100.9 (CH), 95.4 (CH), 94.9 (CH), 80.9 (CH), 79.6 (CH), 77.7 (CH), 75.0 (CH2), 74.2 (CH2), 74.0 (CH2), 72.9 (CH), 72.7 (CH2), 72.6 (CH), 71.8 (CH), 71.6 (CH), 68.6 (CH2), 68.5 (CH2), 67.4 (CH), 67.2 (CH2), 66.9 (CH), 66.8 (CH), 66.2 (CH), 66.1 (CH), 64.2 (CH), 63.8 (CH), 62.3 (CH2), 62.0 (CH2), 52.1 (CH), 51.8 (CH), 50.5 (CH2), 50.2 (CH2), 47.1 (CH2), 46.1 (CH2), 29.2 (CH2), 28.0 (CH2), 27.5 (CH2), 23.5 (CH2), 23.4 (CH2), 19.52 (CH3), 19.50 (CH3) HRMS m/z (ESI, M+Na+) calcd for C117H129N7O23Si2Br2Na+ 2236.6943, found 2236.6885.
【0165】
化合物５３
【化75】
【0166】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.72-7.70 (m, 5H, Ar-H), 7.65-7.59 (m, 6H, Ar-H), 7.44 (s, 1H, Ar-H), 7.35-7.31 (m, 9H, Ar-H), 7.26-7.21 (m, 16H, Ar-H), 7.14-7.07 (m, 16H, Ar-H), -6.90 (d, J = 8.2 Hz, 2H, Ar-H), 5.52 (s, 1H, H-1’’), 5.18-5.09 (m, 5H, H-1, H-1’, H-1’’’, ArCH2), 4.81-4.80 (m, 2H, ArCH2), 4.77-4.70 (m, 7H, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.56-4.50 (m, 5H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.37-4.32 (m 5H, H-3, H-3’’,H-4’’, ArCH2), 4.14-4.10 (m, 2H, H-6’’’), 3.98-3.85 (m, 7H, H-3’, H-4’, H-4, H-5’, H-5’’’, H-6’), 3.66-3.63 (m, 5H, H-3’’’, H-4’’’, CO2Me), 3.54-3.52 (m, 1H, linker CH2), 3.44-3.37 (m, 1H, linker CH2), 3.25-3.23 (m, 2H, H-2’, H-2’’’), 3.19 (s, 3H, CO2Me), 3.10-3.04 (m, 2H, linker CH2), 1.54-1.42 (m, 4H, linker CH2), 1.23-1.17 (m, 2H, linker CH2), 0.96 (s, 9H, TBDPS), 0.91 (s, 9H, TBDPS).
【0167】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.3 (C), 169.4 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 137.9 (C), 137.79 (C), 137.72 (C), 137.6 (C), 137.3 (C), 136.68 (C), 136.63 (C), 135.9 (CH), 135.8 (CH), 135.79 (CH), 135.73 (CH), 135.4 (CH), 133.5 (C), 133.3 (C), 133.29 (C), 133.22 (C), 133.0 (C), 132.9 (C), 131.0 (CH), 130.7 (CH), 129.6 (CH), 129.56 (CH), 129.53 (CH), 129.3 (CH), 129.2 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 127.37 (CH), 127.33 (CH), 127.1 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 125.7 (CH), 125.6 (CH), 125.5 (CH), 125.3 (CH), 120.9 (C), 120.5 (C), 99.2 (CH), 98.2 (CH), 96.3 (CH), 94.0 (CH), 79.7 (CH), 78.6 (CH), 78.1 (CH), 77.9 (CH), 74.2 (CH2), 73.9 (CH2), 73.4 (CH2), 72.6 (CH), 72.3 (CH), 72.1 (CH), 71.8 (CH2), 71.1 (CH), 70.4 (CH), 70.2 (CH), 70.1 (CH), 68.9 (CH), 68.08 (CH2), 68.00 (CH2), 67.0 (CH2), 66.9 (CH2), 66.7 (CH), 63.8 (CH), 63.7 (CH), 62.48 (CH2), 62.42 (CH2), 51.8 (CH), 51.0 (CH), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 47.0 (CH2), 46.5 (CH2), 46.1 (CH2), 28.8 (CH2), 26.3 (CH3), 26.2 (CH3), 23.1 (C), 19.0 (C), 18.8 (C) HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C117H127N7O29Si2Br2
2- 1186.3027, found 1186.3027.
【0168】
化合物５５
【化76】
【0169】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.73-7.70 (m, 3H, Ar-H), 7.59 (s, 1H, Ar-H), 7.41-7.37 (m, 6H, Ar-H), 7.29-7.26 (m, 10H, Ar-H), 7.22-7.17 (m, 11H, Ar-H), 7.10-7.08 (m, 2H, Ar-H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar-H), 5.31 (s, 1H, H-1’’), 5.10-5.03 (m, 5H, H-1, H-1’, H-1’’’, ArCH2), 4.76-4.71 (m, 7H, H-5, H-5’’, ArCH2), 4.59-4.50 (m, 7H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.38-4.36 (m ,2H, ArCH2), 4.24-4.22 (m, 2H, H-3, H-3’’’), 4.07(s, 1H, H-4’’), 3.92-3.87 (m, 4H, H-3’’’, H-4, H-6’’’), 3.75-3.73 (m, 1H, H-6’a), 3.70-3.67 (m, 6H, H-3’, H-5’’’, H-6’b, CO2Me), 3.60-3.57 (m 4H, H-4’, H-4’’’, H-5’, linker CH2), 3.42-3.37 (m, 4H, linker CH2, CO2Me), 3.22-3.19 (m, 2H, H-2’, H-2’’’ ), 3.14-3.09 (m, 2H, linker CH2), 1.53-1.44 (m, 4H, linker CH2), 1.26-1.20 (m, 2H, linker CH2).
【0170】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.1 (C), 170.0 (C), 157.1 (C), 156.5 (C), 138.0 (C), 137.77 (C), 137.75 (C), 137.4 (C), 135.9 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 130.9 (CH), 130.7 (CH), 129.4 (CH), 129.1 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.36 (CH), 127.31 (CH), 126.9 (CH), 125.8 (CH), 125.7 (CH), 125.5 (CH), 125.4 (CH), 120.8 (C), 120.5 (C), 99.4 (CH), 98.3 (CH), 97.1 (CH), 95.7 (CH), 79.7 (CH), 78.2 (CH), 77.6 (CH), 74.2 (CH2), 73.8 (CH2), 73.2 (CH2), 73.0 (CH), 72.5 (CH), 72.4 (CH), 72.0 (CH2), 71.6 (CH2), 70.9 (CH), 70.5 (CH), 67.9 (CH2), 67.3 (CH2), 67.2 (CH), 67.1 (CH2), 66.9 (CH2), 63.8 (CH), 63.5 (CH), 60.0 (CH2), 59. 8(CH2), 51.6 (CH3), 51.2 (CH3), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 48.4 (CH), 48.2 (CH), 47.1 (CH), 47.0 (CH), 46.1 (CH2), 28.8 (CH2), 27.5 (CH2), 27.1 (CH2), 23.2 (CH2), 23.1 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C85H91N7O29S2Br2
2- 948.1851, found 948.1830.
【0171】
化合物５７
【化77】
【0172】
1H NMR (600 MHz, CD3OD) δ = 7.75-7.73 (m, 1H, Ar-H), 7.70-7.68 (m, 2H, Ar-H), 7.58 (s, 1H, Ar-H), 7.44-7.42 (m, 2H, Ar-H), 7.39-7.36 (m, 4H, Ar-H), 7.32-7.30 (m, 8H, Ar-H), 7.27-7.26 (m, 2H, Ar-H), 7.25-7.23 (m, 5H, Ar-H), 7.20-7.16 (m, 14H, Ar-H), 7.11-7.07 (m, 4H, Ar-H), 6.99 (d, J = 8.2 Hz, 2H, Ar-H), 5.26 (s, 1H, H-1’’), 5.13 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1’’’), 5.11-5.06 (m, 3H, H-1, ArCH2), 4.96 (d, J = 3.1 Hz, 1H, H-1’), 4.81-4.80 (m, 1H, ArCH2), 4.74-4.72 (m, 4H, H-5’’, ArCH2), 4.69-4.66 (m, 3H, H-5, ArCH2), 4.62-4.57 (m, 4H, H-2’’, ArCH2), 4.48 (d , J = 11.3 Hz, 1H, ArCH2), 4.45-4.40 (m, 4H, H-6’’’b, ArCH2), 4.29-4.25 (m, 5H, H-2, H-3’’, H-6’b, H-6’’’a, ArCH2), 4.19-4.13 (m, 5H, H-3, H-4’’, H-6’a, ArCH2), 3.95 (s, 1H, H-4), 3.91-3.84 (m, 4H, H-3’, H-4’’’, H-5’, H-5’’’), 3.72 (s, 3H, CO2Me), 3.67-3.61 (m, 2H, H-3’’’, linker CH2), 3.46-3.39 (m, 5H, H-4’, CO2Me, linker CH2), 3.27-3.25 (m, 1H, H-2’’’), 3.21 (dd, J = 3.1, 10.2 Hz, 1H, H-2’), 3.15-3.11 (m, 2H, linker CH2), 1.59-1.47 (m, 4H, linker CH2), 1.28-1.22 (m, 2H, linker CH2).
【0173】
13C NMR (150 MHz, CD3OD) δ = 170.3 (C), 169.8 (C), 157.1 (C), 156.5 (C), 147.9 (CH), 138.0 (C), 137.9 (C), 137.64 (C), 137.61 (C), 137.2 (C), 137.1 (C), 136.6 (C), 135.5 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 130.9 (CH), 130.8 (CH), 129.4 (CH), 129.1 (CH), 128.39 (CH), 128.31 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.84 (CH), 127.82 (CH), 127.68 (CH), 127.62 (CH), 127.60 (CH), 127.3 (CH), 127.2 (CH), 127.0 (CH), 126.9 (CH), 125.9 (CH), 125.7 (CH), 125.5 (CH), 125.4 (CH), 120.8 (C), 120.6 (C), 99.4 (CH), 98.8 (CH), 97.2 (CH), 95.2 (CH), 79.7 (CH), 78.1 (CH), 77.4 (CH), 74.2 (CH2), 73.9 (CH2), 73.4 (CH2), 73.3 (CH), 72.5 (CH), 72.3 (CH), 72.1 (CH2), 71.7 (CH2), 71.4 (CH), 71.0 (CH), 70.3 (CH), 70.23 (CH), 70.20 (CH), 69.9 (CH), 67.9 (CH), 67.8 (CH2), 67.7 (CH2), 67.19 (CH), 67.11 (CH), 67.0 (CH), 66.9 (CH2), 63.6 (CH), 63.4 (CH), 51.7 (CH), 51.4 (CH), 50.1 (CH2), 49.9 (CH2), 46.78 (CH2), 46.70 (CH2), 46.5 (CH2), 46.2 (CH2), 46.1 (CH2), 28.7 (CH2), 27.5 (CH2), 27.1 (CH2), 23.0 (CH3) HRMS m/z (ESI, M-2H2-) calcd for C99H105N9O33Br2
1116.7032, found 1116.7029.
【0174】
化合物５９
【化78】
【0175】
1H NMR (600 MHz, Methanol-d4) δ = 7.75-7.70 (m, 3H, Ar-H), 7.58 (s, 1H, Ar-H), 7.37-7.33 (m, 9H, Ar-H), 7.27-7.25 (m, 6H, Ar-H), 7.21-7.19 (m, 6H, Ar-H), 7.16-7.10 (m, 20H, Ar-H), 5.93 (s, 1H, H-1’’), 5.31-5.24 (m, 4H, H-1, H-1’, H-1’’’, ArCH2), 5.14-5.08 (m, 3H, ArCH2), 4.84-4.82 (m, 2H, H-5’’, ArCH2), 4.74-4.72 (m, 1H, H-5), 4.66-4.60 (m, 5H, H-2, H-2’’, ArCH2), 4.48-4.39 (m , 9H, H-3, H-3’’, H-6’’’, ArCH2), 4.24-4.13 (m, 12H, H-4, H-4’’, H-4’’’, H-5’, H-5’’’, H-6’, ArCH2), 3.87-3.84 (m, 2H, H-3’, H-3’’’), 3.58-3.53 (m, 4H, H-2’, H-2’’’, H-4’, linker), 3.46-3.39 (m, 1H, linker CH2), 3.12-3.06 (m, 2H, linker CH2), 1.55-1.45 (m, 4H, linker CH2), 1.27-1.18 (m, 2H, linker CH2).
【0176】
13C NMR (150MHz, Methanol-d4) δ = 175.9 (C), 174.3 (C), 157.0 (C), 156.5 (C), 138.9 (C), 138.8 (C), 138.19 (C), 138.16 (C), 137.9 (C), 137.7 (C), 137.5 (C), 137.3 (C), 136.7 (C), 135.7 (C), 133.3 (C), 133.0 (C), 130.8 (C), 130.5 (CH), 129.9 (CH), 129.7 (CH), 128.19 (CH), 128.14 (CH), 127.9 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.59 (CH), 127.57 (CH), 127.2 (CH), 127.17 (CH), 127.10 (CH), 126.9 (CH), 126.8 (CH), 126.5 (CH), 126.0 (CH), 125.7 (CH), 125.5 (CH), 120.5 (C), 120.2 (C), 98.7 (CH), 98.5 (CH), 96.1 (CH), 93.3 (CH), 80.2 (CH), 77.4 (CH), 75.4 (CH), 74.9 (CH), 74.5 (CH), 73.9 (CH2), 73.7 (CH), 73.2 (CH2), 73.0 (CH), 71.3 (CH2), 71.2 (CH2), 70.7 (CH), 70.3 (CH), 68.0 (CH2), 67.9 (CH2), 67.7 (CH), 67.3 (CH2), 67.0 (CH2), 66.9 (CH), 66.6 (CH), 59.0 (CH), 58.7 (CH), 50.0 (CH2), 49.8 (CH2), 46.8 (CH2), 46.5 (CH2), 28.8 (CH2), 27.6 (CH2), 27.0 (CH2), 23.1 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-4H+1Na3-) calcd for C97H103N5O39Br2Na3- 778.0940, found 778.0941.
【0177】
化合物４７
【化79】
【0178】
1H NMR (600 MHz, D2O) δ = 5.32 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-1’’’), 5.28 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-1’), 5.24 (s, 1H, H-1’’), 5.04 (s, 1H, H-1), 4.81 (s, 1H, H-5’’), 4.47-4.43 (m, 4H, H-5, H-6’a, H-6’’’), 4.35-4.32 (m , 2H, H-2’’, H-6’b), 4.19-4.16 (m, 3H, H-2, H-3, H-3’’), 4.05-4.00 (m, 4H, H-4, H-4’’, H-5’, H-5’’’), 3.69-3.64 (m, 5H, H-3’, H-3’’’, H-4’, H-4’’’, linker CH2), 3.47 (t, J = 9.5 Hz, 1H, linker CH2), 3.20-3.18 (m, 2H, linker CH2), 2.94-2.92 (m, 2H, H-2’, H-2’’’), 1.68-1.54 (m, 4H, linker CH2), 1.48-1.26 (m, 2H, linker CH2).
【0179】
13C NMR (150MHz, D2O) δ = 99.2 (CH), 98.9 (CH), 97.6 (CH), 96.9 (CH), 77.0 (CH), 76.2 (CH), 74.6 (CH), 70.8 (CH), 69.4 (CH), 68.9 (CH), 68.7 (CH), 68.6 (CH2), 68.3 (CH2), 68.0 (CH), 67.7 (CH), 57.9 (CH), 39.4 (CH2), 27.8 (CH2), 26.1 (CH2), 22.1 (CH2); HRMS m/z (ESI, M-3H3-) calcd for C29H50N5O37S6
3- 417.3503, found 417.3505.
【0180】
３．２ Ｓｕｌｆ－１に対する阻害物質活性についての実施例３．１の化合物のスクリーニング
Ｓｕｌｆ－１に対する化合物４５～４７の阻害物質活性を、４－ＭＵＳの４－ＭＵへの加水分解をモニタリングすることにより、蛍光アッセイでさらに調べた。Ｓｕｌｆ－１活性の２０％のみ、０．７ｍＭの二糖類似体４５で阻害された。対照的に、三糖類似体４６及び四糖類似体４７は、それぞれ０．５３μＭ及び２９．６μＭのＩＣ５０値でより強力な阻害を表した。さらに、４－ＭＵＳ活性アッセイを使用して、速度論的測定を行い４６の阻害物質活性を決定し、この阻害物質の選択性及び有効性を確認した。阻害物質活性の動態研究では、Ｋｉ値（０．３６μＭ、図３）がＩＣ５０値（０．５３μＭ）とよく一致していることを示した。
Ｓｕｌｆ－１に対する化合物４５～４７の阻害物質活性を、４－ＭＵＳの４－ＭＵへの加水分解をモニタリングすることにより、蛍光アッセイでさらに調べた。Ｓｕｌｆ－１活性の２０％のみ、０．７ｍＭの二糖類似体４５で阻害された。対照的に、三糖類似体４６及び四糖類似体４７は、それぞれ０．５３μＭ及び２９．６μＭのＩＣ５０値でより強力な阻害を表した。さらに、４－ＭＵＳ活性アッセイを使用して、速度論的測定を行い４６の阻害物質活性を決定し、この阻害物質の選択性及び有効性を確認した。阻害物質活性の動態研究では、Ｋｉ値（０．３６μＭ、図３）がＩＣ５０値（０．５３μＭ）とよく一致していることを示した。
【0181】
最も高い阻害物質活性で、阻害物質４６のヒトＳｕｌｆ－１との結合親和性を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってさらに測定した。保持された酵素活性を有する７５ｋＤａ及び５０ｋＤａサブユニットのジスルフィド結合ヘテロダイマーを形成する役割を有する２つのフーリン型プロテイナーゼ開裂部位を欠損しているＳｕｌｆ－１の親水性ドメイン欠失突然変異体、すなわち、ヒトＳｕｌｆ－１ｄ４１７－７２６を文献報告に従って構築した。化合物４６をＣＭ５センサーチップに固定化し、勾配濃度でのヒトＳｕｌｆ－１ｄ４１７－７２６のアリコートをチップ上に適用した。高速の会合及び非常に低速の解離に応じた安定的な複合体からもたらされる濃度依存滴定曲線（図４）から、解離定数（ＫＤ）は１２ｎＭとして決定され、４６が磁性ナノ粒子へのその付着を通して新規のＳｕｌｆ及び阻害物質を同定するのにプローブとして適用され得ることを示した。
【0182】
実施形態の上記説明は例示のみのために与えられること及び種々の変形が当業者によってなされ得ることが理解されるはずである。上記仕様、実施例及びデータは、発明の例示的実施形態の構造及び使用の完全な説明を与える。発明の種々の実施形態がある程度の特殊性で又は１以上の個別の実施形態を参照して上述されたが、当業者であれば、本開示の趣旨又は範囲から逸脱することなく開示の実施形態に対して多数の変更を行うことができるはずである。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図2E】
【図3】
【図4】
