特許 7339159 心疾患の予防および治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-08-28

(45)【発行日】2023-09-05

(54)【発明の名称】心疾患の予防および治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230829BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20230829BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61P9/04

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2019551969

(86)(22)【出願日】2018-03-20

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-04-16

(86)【国際出願番号】 US2018023390

(87)【国際公開番号】W WO2018175460

(87)【国際公開日】2018-09-27

【審査請求日】2021-03-19

(31)【優先権主張番号】62/476,054

(32)【優先日】2017-03-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】504389991

【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー

(73)【特許権者】

【識別番号】301033259

【氏名又は名称】ベス・イスラエル・ディーコネス・メディカル・センター，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100124431

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 順也

(74)【代理人】

【識別番号】100174160

【弁理士】

【氏名又は名称】水谷 馨也

(74)【代理人】

【識別番号】100175651

【弁理士】

【氏名又は名称】迫田 恭子

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンツウェイグ， アンソニー

(72)【発明者】

【氏名】ロー， ジェイソン， ディー．

(72)【発明者】

【氏名】グラス， デイビッド， ジェー．

【審査官】大島 彰公

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／１７１９４８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／０６９２３４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１２－５２５１２８（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ、Ａ６１Ｐ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む、心不全の治療および／または予防に使用するための医薬組成物であって、
該心不全が、心臓弁膜症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、遺伝性心筋症、または特発性拡張型心筋症の少なくとも１つによって引き起こされるまたは関連付けられ、
前記抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７９の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、医薬組成物。

【請求項2】

前記心臓弁膜症が大動脈狭窄症である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記大動脈狭窄症が、構造的および／または機能的な心臓の異常と関連している、請求項２に記載の医薬組成物。

【請求項4】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４（配列番号１８２）からなるＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する、請求項１～３のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項5】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号１４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長重鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項6】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号１４１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項7】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号１０７の可変重鎖配列および配列番号９３の可変軽鎖配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項8】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、配列番号１４６の重鎖配列および配列番号１４１の軽鎖配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項9】

該抗ＡｃｔＲＩＩ抗体がビマグルマブである、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、２０１７年３月２４日に提出された米国仮出願第６２／４７６，０５４号の優先権を主張する。

【0002】

本開示は、アクチビン受容体ＩＩ型（ＡｃｔＲＩＩ）アンタゴニスト、例えば、アクチビン、成長分化因子（ＧＤＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、およびヒトＡｃｔＩＩ受容体へのミオスタチンの結合に拮抗することができる分子の分野にあり、例えばＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体、例えばビマグルマブが挙げられる。特に、治療有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを対象に投与することによる、駆出率の低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）および駆出率の保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）を含む心不全の予防および／または治療、ならびにこの状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常、例えば心臓弁膜症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子および遺伝性または特発性拡張型心筋症の治療に関する。注目すべきことに、これらの状態は、頻繁に共存するが単独で発生し得る臨床症候群を含み、収縮期および／または拡張期心不全、左側および／または右側心不全、うっ血性心不全と呼ばれることもある。

【背景技術】

【0003】

アクチビンＩＩＢ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＢ）は、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）のスーパーファミリーの様々なメンバーのシグナル伝達受容体である。このファミリーのメンバーには、アクチビンＡ、ノード、ＢＭＰ２、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＧＤＦ５、ＧＤＦ８（ミオスタチン）およびＧＤＦ１１が含まれ、これらはすべて筋肉の負の調節に関与している（Ａｋｐａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９）。

【0004】

ミオスタチン（ＧＤＦ８）はアクチビン受容体ＩＩ型を介して（主にＡｃｔＲＩＩＢを介して）作用し、その提案されたシグナル伝達は、タンパク質合成の阻害、および筋細胞の分化と増殖に関与するＳＭＡＤ ２／３経路を介する。ミオスタチン阻害または遺伝的アブレーションは、筋肉量と力を増加させる（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ ２００５、Ｌｅｅ ａｎｄ ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ ２００１、Ｗｈｉｔｔｅｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ ２００３）。

【0005】

ＢＹＭ３３８としても知られるビマグルマブは、ミオスタチンまたはその天然リガンドであるアクチビンよりも高い親和性でアクチビン受容体型ＩＩＢ（ＡｃｔＲＩＩ）に競合的に結合するように開発されたモノクローナル抗体である。ビマグルマブは、国際公開第２０１０／１２５００３号パンフレットに開示されており、完全に説明されているかのように参照により本明細書に組み込まれる。ビマグルマブは完全ヒト抗体（改変ＩｇＧ１、２３４－２３５－Ａｌａ－Ａｌａ、λ₂）であり、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＢのリガンド結合ドメインに結合し、それにより、骨格筋の成長の天然の阻害剤として作用するミオスタチンやアクチビンを含む、そのリガンドの結合およびその後のシグナル伝達を防止する。

【0006】

ビマグルマブは、ヒトおよびマウスＡｃｔＲＩＩＢと交差反応し、ヒト、カニクイザル、マウス、およびラットの骨格筋細胞に効果的である。ＡｃｔＲＩＩＢは、骨格筋、脂肪組織、および心臓を含む様々な臓器に広く分布している（Ｒｅｂｂａｐｒａｇａｄａ ｅｔ ａｌ．，２００３）。

【0007】

心不全は、心機能の障害が身体の代謝の要求を満たすのに不十分な全身の灌流を引き起こす臨床症候群である。心不全は、（１）駆出率の低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）（「収縮期心不全」とも知られる）、および（２）駆出率の保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）（「拡張期心不全」とも知られる）という２つの主要なタイプに分けられる。ＨＦｒＥＦでは、心収縮性の低下が、心拍出量を低下させて全身の灌流不足を引き起こす主要なメカニズムである。ＨＦｐＥＦでは、安静時の心収縮性が全体的に維持される。ただし、心予備力や拡張機能を含む心機能の他の複数の欠陥は、心臓の機能的能力を損なわせ、臨床的な心不全の同様の表現型をもたらす。様々な状態が、心臓を損傷または弱体化させ、心不全を引き起こす可能性がある。例えば、心臓弁膜症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、ならびに遺伝性および／または特発性拡張型心筋症が挙げられる。

【0008】

糖尿病、老化、高血圧、虚血性心疾患、冠動脈心疾患、心臓弁膜症、ならびに遺伝性および特発性心筋症などの病因による心不全は、世界中の罹患率および死亡率の主な原因である。このいっそう一般的になる病気のプロセスに利用できる薬理学的療法は限られている。心不全の標準治療には、この疾患の複雑な病態生理に関与する様々なメカニズムを標的とする複数の薬物療法が組み込まれている。残念なことに、ガイドラインに基づいた治療を行っても、これらの患者の予後は不良であり、５年死亡率は５０％に近い。進行した収縮期心不全では、患者は血行動態、腎性および不整脈性の副作用のために一般的な経口薬物療法に耐えることができないか、そのような療法により十分な緩和を達成できない場合が多い。これらの患者の場合、ＩＶ変力剤や、機械の支持装置、心臓移植などの高度な治療法は非常に限られ、高額であり、重大なリスクを伴う。

【0009】

本開示に先立って、アクチビンＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂ）の標的化された阻害は、心不全または心不全につながる可能性のある前述の状態の予防または治療として研究されていなかった。本明細書に開示されているように、マウス化版ＢＹＭ３３８（抗体のヒトＦｃ領域がマウスＦｃに置換されている）であるＣＤＤ８６６などのＡｃｔＲＩＩＡ／Ｂ受容体アンタゴニストの全身投与は、大動脈縮窄術（ＴＡＣ）にさらされたマウスの心機能に対し顕著に有益な効果を与える証拠が現在存在している。ＴＡＣは、圧力過負荷によって誘発される心肥大と心不全で、一般的に使用される実験モデルである。マウスＴＡＣモデルは、１９９１年にＲｏｃｋｍａｎらによって初めて検証され、ヒトの心血管疾患を模倣し、心肥大反応と心不全の発症に関与する基本的なシグナル伝達プロセスを理解するための貴重なツールとして広く使用されてきた（ｄｅＡｌｍｅｉｄａ ｅｔ ａｌ．２０１０）。本明細書で開示されるように、ＣＤＤ８６６は、ＴＡＣ媒介性心機能障害を予防するだけでなく、薬物投与の１～２週間以内に確立された心不全の後に心機能を回復させることもできる。また、進行した形態の心不全で頻繁に萎縮する骨格筋の成長を増加させ、ＴＡＣの病的ストレス／損傷を受けていない対照マウスで、最小限の心臓への影響を引き起こす。

【0010】

本明細書で開示されるのは、心臓弁膜症、虚血性心疾患、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、ならびに遺伝性および／または特発性拡張型心筋症などの状態によって引き起こされるまたは関連付けられる心不全を含む、心不全の治療および／または予防に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。また、前述の状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常の治療に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストも開示されている。心不全を治療および／または予防するため、および前述の状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常を治療するために、そのようなＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを使用する方法も提供される。

【発明の概要】

【0011】

本明細書で開示されるのは、心不全の治療および／または予防に使用するＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。心不全は、例えば弁膜症、例えば大動脈弁狭窄症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、ならびに遺伝性および／または特発性拡張型心筋症などの様々な状態によって引き起こされるか関連する場合がある。駆出率の低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）と駆出率の保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の両方がここに含まれている。

【0012】

また、本明細書で開示されるのは、心臓弁膜症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、および遺伝性または特発性拡張型心筋症などの状態に関連付けられる、構造的および／または機能的な心臓の異常の治療に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。場合によっては、周産期心筋症は妊娠後期または産後６ヶ月に発生する。ストレス心筋症は、閉経後の年配の女性に頻繁に発生する。心臓弁膜症の例は大動脈弁狭窄症であり、これは虚弱および／または筋肉減少症を伴う場合がある。ストレス心筋症は、心理的、病理学的または身体的ストレスの後に起こる可能性がある。

【0013】

本明細書では、心不全を治療および／または予防する方法が開示されている。この方法は、心不全を有する、または心不全を発症するリスクがある対象に、治療有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えばビマグルマブを投与することを含む。駆出率の低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）と駆出率の保持された心不全（ＨＦｐＥＦ）の両方がここに含まれている。心不全は、例えば、脳性ナトリウム利尿ペプチドの測定、その後陽性の場合は心臓の超音波検査、心エコー検査などの画像診断を含むよく知られた方法を使用して、患者で診断され得る。

【0014】

対象は、例えば、心臓弁膜症、冠動脈疾患（以前の心筋梗塞を含む）、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、および遺伝性または特発性拡張型心筋症などの状態がある場合、心不全を発症するリスクがある。

【0015】

また、本明細書で開示されるのは、心臓弁膜症、冠動脈疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、および遺伝性または特発性拡張型心筋症などの状態に関連付けられる、構造的および／または機能的な心臓の異常の治療方法である。この方法は、そのような状態に関連するそのような構造的および／または機能的な心臓の異常を有する対象に、有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを投与することを含む。

【0016】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストの例は、ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子であり、ＡｃｔＲＩＩへのミオスタチン、ＧＤＦ１１およびアクチビンＡなどのＡｃｔＲＩＩ相互作用リガンドのアクセスをブロックすることができる。ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子は、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体に結合することができる。ＡｃｔＲＩＩ結合分子の例には、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体に結合する抗体、例えば抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体は、ビマグルマブとしても知られるＢＹＭ３３８である。

【0017】

本明細書に記載の方法で使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストのさらなる例は、ミオスタチン、ＧＤＦ１１およびアクチビンＡなどのＡｃｔＲＩＩ相互作用リガンドに結合できるＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ受容体の細胞外ドメインの可溶性形態である。この「受容体」は、リガンドと競合することにより、細胞に結合したＡｃｔＲＩＩ受容体の機能を阻害する。

【0018】

本明細書に開示されるのは、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４（配列番号１８２）からなるＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体である、本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。

【0019】

本明細書に開示されるのは、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、
（ａ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）
を含むまたはからなるＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する、本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。

【0020】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるさらなる抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、例えば、
ａ）抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体であって、
（ａ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）
を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体；および
ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）、ここで抗体は約２ｐＭのＫ_Dを有する、
を含む。

【0021】

一実施形態では、本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩＡに結合するよりも約１０倍以上の親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する抗体である。

【0022】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗体であってもよい。

【0023】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、
（ａ）配列番号１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４７の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号６の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３４の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６２の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４９の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７７の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３６の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７９の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｊ）配列番号１０の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３８の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６６の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｋ）配列番号１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｌ）配列番号１２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｍ）配列番号１３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、または
（ｎ）配列番号１４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗体であり得る。

【0024】

別の実施形態において、本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、配列番号１４６～１５０および１５６～１６０からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長重鎖アミノ酸配列を含む抗体であり得る。

【0025】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、配列番号１４１～１４５および１５１～１５５からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長軽鎖アミノ酸配列を含む抗体であり得る。

【0026】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、
（ａ）配列番号９９の可変重鎖配列および配列番号８５の可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号１００の可変重鎖配列および配列番号８６の可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号１０１の可変重鎖配列および配列番号８７の可変軽鎖配列；
（ｄ）配列番号１０２の可変重鎖配列および配列番号８８の可変軽鎖配列；
（ｅ）配列番号１０３の可変重鎖配列および配列番号８９の可変軽鎖配列；
（ｆ）配列番号１０４の可変重鎖配列および配列番号９０の可変軽鎖配列；
（ｇ）配列番号１０５の可変重鎖配列および配列番号９１の可変軽鎖配列；
（ｈ）配列番号１０６の可変重鎖配列および配列番号９２の可変軽鎖配列；
（ｉ）配列番号１０７の可変重鎖配列および配列番号９３の可変軽鎖配列；
（ｊ）配列番号１０８の可変重鎖配列および配列番号９４の可変軽鎖配列；
（ｋ）配列番号１０９の可変重鎖配列および配列番号９５の可変軽鎖配列；
（ｌ）配列番号１１０の可変重鎖配列および配列番号９６の可変軽鎖配列；
（ｍ）配列番号１１１の可変重鎖配列および配列番号９７の可変軽鎖配列；または
（ｎ）配列番号１１２の可変重鎖配列および配列番号９８の可変軽鎖配列
を含む抗体であり得る。

【0027】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、
（ａ）配列番号１４６の重鎖配列および配列番号１４１の軽鎖配列；
（ｂ）配列番号１４７の重鎖配列および配列番号１４２の軽鎖配列；
（ｃ）配列番号１４８の重鎖配列および配列番号１４３の軽鎖配列；
（ｄ）配列番号１４９の重鎖配列および配列番号１４４の軽鎖配列；
（ｅ）配列番号１５０の重鎖配列および配列番号１４５の軽鎖配列；
（ｆ）配列番号１５６の重鎖配列および配列番号１５１の軽鎖配列；
（ｇ）配列番号１５７の重鎖配列および配列番号１５２の軽鎖配列；
（ｈ）配列番号１５８の重鎖配列および配列番号１５３の軽鎖配列；
（ｉ）配列番号１５９の重鎖配列および配列番号１５４の軽鎖配列；または
（ｊ）配列番号１６０の重鎖配列および配列番号１５５の軽鎖配列
を含む抗体であり得る。

【0028】

また、本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが開示され、前述の少なくとも１つの抗体により交差遮断（ｃｒｏｓｓ－ｂｌｏｃｋ）するまたは交差遮断される抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である。

【0029】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法におけるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、Ｆｃ領域の変異によりエフェクター機能が変化（ａｌｔｅｒ）した抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体であってもよい。

【0030】

本明細書に記載の使用のためのまたは方法における抗体の例は、ｐＢＷ５２２（ＤＳＭ２２８７３）またはｐＢＷ５２４（ＤＳＭ２２８７４）によってコードされる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体である。

【0031】

本明細書に記載の実施例は、抗体のヒトＦｃ領域がマウスＦｃによって置換されたＢＹＭ３３８のマウス化バージョンであるＣＤＤ８６６を利用する。

【0032】

しかし、本明細書に記載の使用のためのまたは方法における好ましい抗体は、完全ヒト抗体（修飾ＩｇＧ１、２３４－２３５－Ａｌａ－Ａｌａ、λ₂）であるビマグルマブ（ＢＹＭ３３８）である。

【0033】

「ＡｃｔＲＩＩ結合分子」とは、ヒトＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩ Ａおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）に単独または他の分子と関連付けられて結合できる分子を意味する。結合反応は、例えば、負の制御の試験を参照した、結合アッセイ、競合アッセイ、またはミオスタチンへのＡｃｔＲＩＩ受容体結合の阻害を判定するためのバイオアッセイ、またはあらゆる種類の結合アッセイを含む標準的な方法（定性アッセイ）によって示され得る。例えば、無関係な特異度だが理想的には同じアイソタイプの抗体、例えば抗ＣＤ２５抗体が使用される。ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子の非限定的な例には小分子、例えば、アプタマー、またはＢ細胞またはハイブリドーマおよびキメラ、ＣＤＲ移植またはヒト抗体によって産生されるときに受容体、リガンドデコイ、および抗体をＡｃｔＲＩＩ受容体に結合するように設計される、および／または結合にさらされる他の核酸分子、またはそのいずれかの断片、例えばＦ（ａｂ’）₂およびＦａｂ断片、ならびに単鎖または単一ドメイン抗体が含まれる。好ましくは、ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子は、ＡｃｔＲＩＩ受容体への天然リガンドの結合に拮抗する（例えば、減少、阻害、減少、遅延する）。開示された方法、レジメン、キット、プロセス、使用および組成物のいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体結合分子が使用される。

【0034】

別の実施形態では、組成物は、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４（配列番号１８２）からなる結合ドメイン、または（ａ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）を含むまたはからなるエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む。

【0035】

またさらに別の代替実施形態では、上記の組成物は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合するよりも１０倍以上の親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む。

【0036】

さらに、本開示は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体が、配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む組成物に関する。

【0037】

特定の実施形態において、本開示は、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、（ａ）配列番号１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｂ）配列番号２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｃ）配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｅ）配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４７の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｆ）配列番号６の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３４の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６２の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｇ）配列番号７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４９の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７７の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｈ）配列番号８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３６の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉ）配列番号９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７９の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｊ）配列番号１０の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３８の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６６の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｋ）配列番号１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｌ）配列番号１２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｍ）配列番号１３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、または（ｎ）配列番号１４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む組成物を提供する。

【0038】

さらに別の実施形態では、上記の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、（ｉ）配列番号１４６～１５０および１５６～１６０からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長重鎖アミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号１４１～１４５および１５１～１５５からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長軽鎖アミノ酸配列、または（ｉｉｉ）（ａ）配列番号９９の可変重鎖配列および配列番号８５の可変軽鎖配列；（ｂ）配列番号１００の可変重鎖配列および配列番号８６の可変軽鎖配列；（ｃ）配列番号１０１の可変重鎖配列および配列番号８７の可変軽鎖配列；（ｄ）配列番号１０２の可変重鎖配列および配列番号８８の可変軽鎖配列；（ｅ）配列番号１０３の可変重鎖配列および配列番号８９の可変軽鎖配列；（ｆ）配列番号１０４の可変重鎖配列および配列番号９０の可変軽鎖配列；（ｇ）配列番号１０５の可変重鎖配列および配列番号９１の可変軽鎖配列；（ｈ）配列番号１０６の可変重鎖配列および配列番号９２の可変軽鎖配列；（ｉ）配列番号１０７の可変重鎖配列および配列番号９３の可変軽鎖配列；（ｊ）配列番号１０８の可変重鎖配列および配列番号９４の可変軽鎖配列；（ｋ）配列番号１０９の可変重鎖配列および配列番号９５の可変軽鎖配列；（ｌ）配列番号１１０の可変重鎖配列および配列番号９６の可変軽鎖配列；（ｍ）配列番号１１１の可変重鎖配列および配列番号９７の可変軽鎖配列；または（ｎ）配列番号１１２の可変重鎖配列および配列番号９８の可変軽鎖配列を含む。

【0039】

特定の態様において、本開示は上記組成物に関し、含まれる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、（ａ）配列番号１４６の重鎖配列と配列番号１４１の軽鎖配列；（ｂ）配列番号１４７の重鎖配列および配列番号１４２の軽鎖配列；（ｃ）配列番号１４８の重鎖配列および配列番号１４３の軽鎖配列；（ｄ）配列番号１４９の重鎖配列および配列番号１４４の軽鎖配列；（ｅ）配列番号１５０の重鎖配列および配列番号１４５の軽鎖配列；（ｆ）配列番号１５６の重鎖配列および配列番号１５１の軽鎖配列；（ｇ）配列番号１５７の重鎖配列および配列番号１５２の軽鎖配列；（ｈ）配列番号１５８の重鎖配列および配列番号１５３の軽鎖配列；（ｉ）配列番号１５９の重鎖配列および配列番号１５４の軽鎖配列；または（ｊ）配列番号１６０の重鎖配列および配列番号１５５の軽鎖配列を含む。

【0040】

本開示のさらなる主題は、（ｉ）抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が上記抗体の１つにより交差遮断するまたは交差遮断される、（ｉｉ）Ｆｃ領域の変異によりエフェクター機能が変化した、および／または（ｉｉｉ）上記の抗体の１つによって認識されるエピトープに結合する組成物に関する。

【0041】

またさらに別の代替実施形態では、上記の組成物は、ＡｃｔＲＩＩＡに結合するよりも１０倍以上の親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む。

【0042】

さらに別の実施形態では、開示された組成物は、ｐＢＷ５２２（ＤＳＭ２２８７３）またはｐＢＷ５２４（ＤＳＭ２２８７４）によってコードされる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１Ａ ８週間にわたって毎週のＣＤＤ８６６または等方性コントロールＡｂ注射のいずれかで治療した野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスで測定したＣＤＤ８６６血漿レベルをグラフで示している。図１Ｂ 対照群のマウス、アイソタイプＡｂ（ｎ＝３）灰色の棒、および実験群マウスＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝３）^*ｐ＜０．０５、黒い棒の両方の心臓重量／脛骨長比（ＨＷ／ＴＬ）をグラフで示している。これは、ＣＤＤ８６６が成体野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの心臓質量を有意に増加させていないことを示している。図１Ｃ 対照群のマウス（アイソタイプＡｂ、灰色の棒）および実験群のマウス（ＣＤＤ８６６ Ａｂ ［ｎ＝３］。^*ｐ＜０．０５、黒色の棒）の両方における線維症の割合を示す棒グラフである。ＣＤＤ８６６は心筋線維症を減少させるが、成体の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスではベースラインでの線維症の割合が顕著に低かった。図１Ｄ 心筋細胞のサイズを強調したＰＡＳ染色心筋の代表的な顕微鏡写真を示している。図１Ｅ ＣＤＤ８６６が野生型動物の心筋細胞の大きさを有意に増加させないという所見をグラフで示している。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝対照群、アイソタイプＡｂ（ｎ＝３）。黒＝実験群、ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝３）。^*ｐ＜０．０５

【図2】図２Ａ ％短縮率（ＦＳ）で測定される収縮機能がＴＡＣ（水平線の棒）で予想通り減少するが、ＴＡＣ（対角線の棒）にさらされたＣＤＤ８６６治療動物では維持されていることをグラフで示している。ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）、黒の棒。ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）、灰色の棒；ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）、水平線の棒；ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）、対角線の棒。＃ｐ＜０．０１。図２Ｂ １１週間のＳＨＡＭまたはＴＡＣ手術後の代表的な心エコー画像を示し、ＣＤＤ８６６で治療されたＴＡＣ動物の収縮機能の維持を示している。図２Ｃ 異なる治療群のマウスの肺重量／脛骨長比（ＬＷ／ＴＬ）をグラフで示している。ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）、黒の棒。ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）、灰色の棒；ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）、水平線の棒；ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）、対角線の棒。^*ｐ＜０．０１。ＣＤＤ８６６治療動物では肺の重量が減少する傾向があり、また肺うっ血が少ないことを示している（マウスモデルでの心不全の代理）。図２Ｄ ＣＤＤ８６６の治療による主要エンドポイント（生存または％ＦＳ＜２０％）の有意の減少をグラフで示している。

【図3】図３Ａ 様々な治療群の血漿ＣＤＤ８６６レベルをグラフで示している：ＴＡＣ＋アイソタイプ；ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６；Ｓｈａｍ＋アイソタイプ；およびＳｈａｍ＋ＣＤＤ８６６。図３Ｂ 心臓フォリスタチン様３（ＦＳＴＬ３）の発現がＴＡＣと共に増加することを示す棒グラフであり、このことは、この心臓損傷モデルにおいて心臓ＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達が増加することを示す。ＣＤＤ８６６の治療は、心臓ＦＳＴＬ３の発現を減少させ、それがＴＡＣで誘導される心臓のＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的にブロックすることを示している。黒＝ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）。灰色＝ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）。水平線の棒＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）。対角線の棒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図３Ｃ 病的心肥大遺伝子の相対的なｍＲＮＡ発現がＣＤＤ８６６の治療で減少することをグラフで示している。ＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）；ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）；ａＭＨＣ（アルファミオシン重鎖）；ｂＭＨＣ（ベータミオシン重鎖）。黒＝ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）。灰色＝ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）。水平線の棒＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）。対角線の棒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図３Ｄ ＴＡＣ誘発性心不全における病理学的心線維症遺伝子の相対的なｍＲＮＡ発現がＣＤＤ８６６の治療で減少することを示す棒グラフである。ＣＯＬ１（コラーゲン１型）；ＣＴＧＦ（結合組織成長因子）。黒＝ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）。灰色＝ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）。水平線の棒＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）。対角線の棒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。

【図4】図４Ａ ＴＡＣの後に収縮機能を発現し、その後８週間の毎週のＣＤＤ８６６注射で治療されたマウスで測定されたＣＤＤ８６６血漿レベルをグラフで示している。図４Ｂ ＦＳＴＬ３（フォリスタチン様３）、アクチビン－Ａ、ＭＳＴＮ（ミオスタチン）ＡＣＶＲ２Ａ（アクチビンＡ受容体２Ａ型）およびＡＣＶＲ２Ｂ（アクチビンＡ受容体２Ｂ型）の相対的なｍＲＮＡ発現レベルを示す棒グラフである。このグラフは、ＣＤＤ８６６による治療アプローチが心臓ＦＳＴＬ３発現を低下させることができることを示しており、ＣＤＤ８６６がＴＡＣで誘発される心臓のＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナルを効果的にブロックできることを示している。図４Ｃ ％短縮率を週単位の時間に対してプロットしたグラフである。ＣＤＤ８６６は、早くも治療後１週間でＴＡＣ誘発性心不全の収縮機能障害を改善し、段階的な改善を示している。図４Ｄ ＣＤＤ８６６がマウスモデルの心不全の代理マーカーである肺重量と脛骨の長さの比も減少させることをグラフで示している。灰色＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ。黒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。ＬＷ／ＴＬ（肺重量／脛骨長比）。

【図5】図５Ａ ＴＡＣ後の週に対する壁厚をプロットしたグラフであり、ＣＤＤ８６６処理で壁厚が徐々に増加することを示している。矢印はＣＤＤ８６６の開始を示す。図５Ｂ 治療過程中の心室中部の連続エコー画像を示しており、アイソタイプ対ＣＤＤ８６６の治療動物の心臓の成長の違いを示している。Ｃｄｄ８６６を介した心臓の成長は、進行性の収縮機能障害に伴う異常なリモデリングを防ぐ。図５Ｃ ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（灰色の棒）とＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（黒の棒）で処理したマウスの両方について、心臓重量／脛骨長比（ＨＷ／ＴＬ）を示したグラフである。ＴＡＣモデルの心臓の質量をＣＤＤ８６６が増加させたことを示している。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図５Ｄ ＴＡＳ＋アイソタイプＡｂおよびＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６Ａｂ治療マウスの両方の心筋細胞サイズを強調するＰＡＳ染色心筋の顕微鏡写真を示す。図５Ｅ ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（灰色）とＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（黒）の両方の治療でマウスの心筋細胞断面積を示したグラフである。これは、ＣＤＤ８６６がＴＡＣの心筋細胞増殖を増加させることを示す。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。

【図6】図６Ａ 病的肥大に関連する遺伝子のｍＲＮＡ発現がＣＤＤ８６６の治療とともに減少することを示すグラフである。ＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）；ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）；αＭＨＣ（アルファミオシン重鎖）；βＭＨＣ（ベータミオシン重鎖）。ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（灰色）；ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（黒）が示されている。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図６Ｂ 週単位の時間に対するマウスの短縮率、壁厚および体重をプロットしている。矢印＝単回投与のタイミング；破線＝ＣＤＤ８６６治療なしで予想される軌道。プロットは、心臓の成長と体重に対するＣＤＤ８６６の影響が急速に発生し、一時的で可逆的であることを示している。ＣＤＤ８６６の単回投与の効果も１～２週間以内に発生し、少なくとも６週間持続する。図６Ｃ マッソントリクローム染色された心筋の顕微鏡写真を示し（青＝線維症、赤＝筋肉）、ＣＤＤ８６６で治療されたＴＡＣマウスの心臓線維症の減少を示している。図６Ｄ ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（灰色）およびＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（黒色）による線維化率を示す棒グラフであり、ＣＤＤ８６６の治療による心筋線維症の減少傾向を示している。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。

【図7】図７Ａ ｐ－ＳＭＡＤ３およびＧＡＰＤＨ抗体でプローブした腓腹筋のサンプルのウェスタンブロットである。ＴＡＣおよびその後のＣＤＤ８６６（ＴＴ－２からＴＴ－１０）またはアイソタイプコントロールＡｂ（ＴＴ－１１からＴＴ－２０）による８週間の治療後の心機能障害を確認したＣ５７ＢＬ／６マウスからサンプルを収集した。この図は、ＣＤＤ８６６がＴＡＣを介した心不全のマウスモデルの骨格筋のＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を減少させることを全体的に示している。Ｃ２Ｃ１２細胞におけるＭＳＴＮ刺激は、アッセイの陽性対照として使用した。図７Ｂ ベースラインからのマウスの体重の変化の割合が、治療後の週に対して測定されているグラフである。ひし形のデータポイント（赤）は、ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂを示す。正方形のデータポイント（青）は、ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂを示す。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。ＣＤＤ８６６は、全体の体重を徐々に増加させる。筋肉量の増加によるものと思われる。図７Ｃ 様々な骨格筋群、ＥＤＬ（長指伸筋）、腓腹筋および脛骨筋の筋肉量の制御からの変化率をグラフで示したものである。赤は、ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂを示す。青はＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂを示す。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。ＣＤＤ８６６は全体として３つの骨格筋群の質量を増加させる。図７Ｄ 線維分布の割合を連続的な組織切片に対してプロットしたグラフであり、ＣＤＤ８６６が骨格筋細胞サイズを増加させることを示している。赤はＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ治療を示す。青はＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ治療を示す。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図７Ｅ 線維分布の割合が、連続した組織切片に対してプロットされている４つのグラフを示している。これは、ＣＤＤ８６６が骨格筋で複数の線維タイプの切り替えを誘発することを示している。赤はＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ治療を示す。青はＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ治療を示す。

【図8】図８Ａ αＭＨＣ遺伝子（拡張型心筋症のマウスモデル）にミスセンス変異（Ｆ７６４Ｌ）を有するマウスの時間に対する％短縮率（ＦＳ）の変化を示すグラフである。１２週間のＣＤＤ８６６の治療は、収縮機能の増加に向く緩やかな傾向をもたらした。灰色＝アイソタイプＡｂ。黒＝ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図８Ｂ ＣＤＤ８６６（黒）またはアイソタイプＡｂ（灰色）のいずれかで治療されたこれらのマウスの心臓組織におけるＡｃｔＲＩＩ経路に関連する様々な遺伝子の相対的なｍＲＮＡ発現レベルを示す棒グラフである。ＣＤＤ８６６では心臓ＦＳＴＬ３の発現が減少する傾向があり、心臓におけるＡｃｔＲＩＩ受容体シグナル伝達の阻害が示唆されている。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。図８Ｃ アイソタイプＡｂまたはＣＤＤ８６６ Ａｂで治療されたマウスにおける病的肥大に関連する遺伝子の相対的なｍＲＮＡ発現レベルを示す棒グラフである。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。灰色＝アイソタイプＡｂ。黒＝ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。ＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）；ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）；αＭＨＣ（アルファミオシン重鎖）；βＭＨＣ（ベータミオシン重鎖）。病理学的肥大遺伝子発現プロファイルに有意差はない。

【0044】

定義
本開示がより容易に理解され得るために、特定の用語を最初に定義する。追加の定義は、詳細な説明全体で説明されている。

【0045】

「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」という用語は、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」を意味する。例えばＸを「含む」組成物は、Ｘのみからなるのでも、Ｘ＋Ｙなど、何か追加のものを含んでいるのでもよい。

【0046】

数値ｘに関する「約」という用語は、例えばｘ＋１０％を意味する。

【0047】

以下は、ＡｃｔＲＩＩ結合分子、より好ましくはＡｃｔＲＩＩに対するアンタゴニスト抗体、例えばビマグルマブによる治療の可能な効果を評価するための可能な前臨床治療計画を例示する。

【0048】

治療は、圧力過負荷誘発性心肥大および心不全で一般的に使用される実験モデルである大動脈縮窄術（ＴＡＣ）にさらされたマウスを使用することによって例示される。当業者は、他の種、特にヒトに対して適切な実験または投与計画を設定する方法を知っている。霊長類の研究では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えばビマグルマブは、静脈注射によりオスとメスのカニクイザルに最大３ヶ月間、週に１回投与することができる。３２匹のカニクイザル（１６／性）は４つの治療群（３～５動物／性／群）の１つに割り当てることができ、１３週間に亘り週に１回、１０または３０または１００ｍｇ／ｋｇで、ビヒクルまたはＡｃｔＲＩＩＢ抗体、例えばＢＹＭ３３８の静脈注射を投与することができる（合計１４用量。心疾患の症状に基づいて用量を選択する）。

【0049】

「ＡｃｔＲＩＩＡ」および「ＡｃｔＲＩＩＢ」という用語は、アクチビン受容体を示す。アクチビンは、少なくとも２つのＩ型（ＩおよびＩＢ）および２つのＩＩ型（ＩＩＡおよびＩＩＢ、別名ＡＣＶＲ２ＡおよびＡＣＶＲ２Ｂ）受容体を含む受容体セリンキナーゼのヘテロダイマー複合体を介してシグナルを送る。これらの受容体はすべて膜貫通タンパク質であり、システインリッチ領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびセリン／スレオニン特異性が予測される細胞質ドメインで構成されている。Ｉ型受容体はシグナル伝達に不可欠であるが、ＩＩ型受容体はリガンドの結合とタイプＩ受容体の発現／補充に必要である。Ｉ型およびＩＩ型受容体は、リガンド結合後に安定した複合体を形成し、ＩＩ型受容体によるＩ型受容体のリン酸化をもたらす。アクチビン受容体ＩＩＢ（ＡｃｔＲＩＩＢ）はミオスタチンの受容体である。アクチビン受容体ＩＩＡ（ＡｃｔＲＩＩＡ）もミソスタチンの受容体である。ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＩＩＢ受容体という用語は、配列番号１８１（ＡＡＣ６４５１５．１、ＧＩ：３７６９４４３）で定義されるヒトＡｃｔＲＩＩＢを示す。研究グレードのポリクローナルおよびモノクローナル抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（登録商標）、米国ミネソタ州によって製造されたものなど、当技術分野で知られている。もちろん、他の種のＡｃｔＲＩＩＢに対して抗体を作成し、それらの種の病的状態の治療に使用することができる。

【0050】

「免疫応答」という用語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および侵入する病原体、病原体に感染した細胞または組織、癌細胞、または自己免疫または病理学的炎症の場合、正常なヒトの細胞または組織の人体への選択的損傷、破壊、または人体からの排除に至る、上記の細胞または肝臓によって産生される可溶性高分子（例えば、抗体、サイトカイン、および補体）の作用を示す。

【0051】

「シグナル伝達活性」とは、一般に成長因子の受容体への結合などのタンパク質間の相互作用によって開始される生化学的因果関係を指し、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達をもたらす。一般に、伝達には、シグナル伝達を引き起こす一連の反応における１つまたは複数のタンパク質の１つまたは複数のチロシン、セリン、またはトレオニン残基の特異的リン酸化が含まれる。最後から２番目のプロセスには通常、核イベントが含まれ、遺伝子発現の変化をもたらす。

【0052】

本明細書で言及される「抗体」という用語には、抗体全体および任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）またはその単鎖が含まれる。自然に発生する「抗体」は、ジスルフィド結合により相互に接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Hと略記）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインで構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Lと略す）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、Ｃ_Lという１つのドメインで構成されている。Ｖ_HおよびＶ_L領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化できる。各Ｖ_HおよびＶ_Lは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されている。重鎖と軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれている。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的な補体系の最初の成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介できる。

【0053】

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗原部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の完全長または１つまたは複数の断片（例えばＡｃｔＲＩＩＢの部分）を示す。抗体の抗原結合機能は完全長の抗体の断片によって実行され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例には、Ｆａｂ断片、Ｖ_L、Ｖ_H、Ｃ_LおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；Ｆ（ａｂ）₂断片、２つのＦａｂ断片を含む二価断片であり、それぞれが同じ抗原に結合し、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結されている二価断片、Ｖ_HおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶ_LおよびＶ_HドメインからなるＦｖ断片；Ｖ_HドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。

【0054】

さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶ_LとＶ_Hは別々の遺伝子によってコードされているが、それらは組換え法を使用して、合成リンカーによって結合できる。それは、Ｖ_LおよびＶ_H領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；および Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９－５８８３を参照）として作成できる。そのような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合領域」という用語に含まれることが意図されている。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じように、有用性についてスクリーニングされる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を示す（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する単離された抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ただし、ＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する単離された抗体は、他の種のＡｃｔＲＩＩＢ分子など、他の抗原と交差反応する可能性がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞の物質および／または化学物質を実質的に含まない可能性がある。

【0056】

「交差遮断」、「交差遮断される」および「交差遮断している」という用語は、本明細書では互換的に使用され、標準的な競合結合アッセイにおいて抗体または他の結合剤がＡｃｔＲＩＩＢへの他の抗体または結合剤への結合、特にリガンド結合ドメインへの結合を妨害する能力を意味する。

【0057】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を示す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性と親和性を示す。

【0058】

本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もそのようなヒト配列に由来する。例えば、ヒト生殖系列配列、またはヒト生殖系列配列の突然変異バージョン、またはヒトフレームワーク配列分析に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ，ｅｔ ａｌ．（２０００．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６，５７－８６）に記載されているようにである。本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされていないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボでの体細胞突然変異により導入された突然変異）。しかし、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトのフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。

【0059】

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒトの配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を示す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。例えば、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスが挙げられる。

【0060】

本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作成または単離されるすべてのヒト抗体を含み、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマについてトランスジェニックまたはトランスクロモソミックである動物（例えばマウス）から単離された抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子、配列のすべてまたは一部を他のＤＮＡ配列に対してスプライシングすることを含む他のいずれかの手段により調製、発現、作成または単離された抗体がある。そのような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）にさらすことができ、したがって組換え抗体のＶ_HおよびＶ_L領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列Ｖ_HおよびＶ_L配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖細胞系列のレパートリー内に自然には存在できない配列である。

【0061】

本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、例えばＩｇＧ１またはＩｇＧ２など）を示す。

【0062】

「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。

【0063】

本明細書で使用される場合、「ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに特異的に結合する」抗体は、約１００ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_DでヒトＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに結合する抗体を指すことを意図している。「ＡｃｔＲＩＩＢ以外の抗原と交差反応する」抗体とは、約１０×１０^-9Ｍ以下、約５×１０^-9Ｍ以下、または約２×１０^-9Ｍ以下のＫ_Dでその抗原に結合する抗体を示すことを意図している。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、約１．５×１０^-8Ｍ以上のＫ_D、または約５－１０×１０^-8ＭのＫ_Dで、または約１×１０^-7Ｍ以上である当該の抗原に結合する抗体を指すことを意図している。特定の実施形態において、抗原と交差反応しないそのような抗体は、標準的な結合アッセイにおいてこれらのタンパク質に対して本質的に検出不可能な結合を示す。Ｋ_Dは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムやＳｏｌｕｔｉｏｎ Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ Ｔｉｔｒａｔｉｏｎなどのバイオセンサーシステムを使用して求められ得る。

【0064】

本明細書で使用される場合、「アンタゴニスト抗体」という用語は、ミオスタチン、またはアクチビンもしくはＧＤＦ－１１などの他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドの存在下でＡｃｔＲＩＩＢ誘導シグナル伝達活性を阻害する抗体、および／または、ミオスタチンまたはアクチビンやＧＤＦ－１１などの他のＡｃｔＲＩＩＡリガンドの存在下でＡｃｔＲＩＩＡ誘導シグナル伝達活性を阻害する抗体を指すことを意図している。これを検出するアッセイの例には、ミオスタチン誘発性シグナル伝達の阻害（例えば、Ｓｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイによる）、ミオスタチン誘発性Ｓｍａｄリン酸化の阻害（Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）、およびミオスタチン誘発性の阻害の骨格筋細胞分化の阻害（例えばクレアチンキナーゼアッセイによる）が挙げられる。

【0065】

いくつかの実施形態において、抗体は、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、または約１００ｐＭ以下のＩＣ₅₀でＳｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイで測定されるものとして、ミオスタチン誘発性シグナル伝達を阻害する。

【0066】

本明細書で使用される場合、「アゴニスト活性がない」抗体は、ミオスタチン誘発性シグナル伝達の阻害（例えば、Ｓｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイによる）、ミオスタチン誘発性Ｓｍａｄリン酸化の阻害（Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）、およびミオスタチン誘発性の阻害の骨格筋細胞分化の阻害（例えばクレアチンキナーゼアッセイによる）など、細胞ベースのアッセイにおいてミオスタチンの非存在下でＡｃｔＲＩＩＢ媒介シグナル伝達活性を顕著に増加させない抗体を指すことを意図している。

【0067】

本明細書で使用される場合、「Ｋ_assoc」または「Ｋ_a」という用語は、特定の抗体・抗原相互作用の会合の速度を指すことを意図しており、一方で本明細書で使用される場合、「Ｋ_dis」または「Ｋ_d」という用語は、特定の抗体・抗原相互作用の解離の速度を指すことを意図している。本明細書で使用される場合、「Ｋ_D」という用語は、Ｋ_dとＫ_aの比（すなわちＫ_d／Ｋ_a）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことを意図している。抗体のＫ_D値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して求めることができる。抗体のＫ_Dを求める方法は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）のバイオセンサーシステム、またはＳｏｌｕｔｉｏｎ Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ Ｔｉｔｒａｔｉｏｎ（ＳＥＴ）などの表面プラズモン共鳴を使用することによるものである（Ｆｒｉｇｕｅｔ Ｂ ｅｔ ａｌ．（１９８５） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ；７７（２）：３０５－３１９、およびＨａｎｅｌ Ｃ ｅｔ ａｌ．（２００５） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ；３３９（１）：１８２－１８４を参照されたい）。

【0068】

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、単一の抗原部位での抗体と抗原との間の相互作用の強さを示す。各抗原部位内で、抗体の「アーム」の可変領域は、多数の部位で抗原と弱い非共有結合力を介して相互作用する。相互作用が多いほど、親和性は強くなる。

【0069】

本明細書で使用される場合、「結合力」という用語は、抗体－抗原複合体の全体的な安定性または強度の有益な尺度を示す。それは、抗体エピトープ親和性、抗原と抗体の両方の原子価、相互作用する部分の構造的配置、という３つの主要な要因によって制御される。最終的に、これらの要因は抗体の特異度、つまり特定の抗体が正確な抗原エピトープに結合する可能性を規定する。

【0070】

本明細書で使用される場合、「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞傷害性」活性という用語は、ヒトＢ細胞の枯渇活性を示す。ＡＤＣＣ活性は、当技術分野で公知のヒトＢ細胞枯渇アッセイにより測定され得る。

【0071】

より高い結合力のプローブを取得するために、二量体コンジュゲート（ＦＡＣＳマーカーに結合した抗体タンパク質の２つの分子）を構築することができ、したがってＦＡＣＳにより低親和性相互作用（生殖系列抗体など）をより簡単に検出できる。さらに、抗原結合の結合力を増加させる別の手段は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の本明細書に記載の構築物のいずれかの二量体、三量体または多量体を生成することを含む。そのような多量体は、例えば、天然のＣからＮ末端への結合を模倣することにより、またはそれらの定常領域を通して一緒に保持される抗体二量体を模倣することにより、個々のモジュール間の共有結合により生成され得る。Ｆｃ／Ｆｃ界面に設計される結合は、共有結合でも非共有結合でもよい。さらに、Ｆｃ以外の二量体化または多量体化パートナーをＡｃｔＲＩＩＢハイブリッドで使用して、このような高次構造を作成できる。例えば、国際公開第２００４／０３９８４１号パンフレットに記載されている三量体化ドメインまたは国際公開第９８／１８９４３号パンフレットに記載されている五量体化ドメインなどの多量体化ドメインを使用することが可能である。

【0072】

本明細書で使用する場合、抗体の「選択性」という用語は、特定の標的ポリペプチドに結合するが、密接に関連するポリペプチドには結合しない抗体を示す。

【0073】

本明細書で使用される場合、抗体に対する「高親和性」という用語は、標的抗原に対して１ｎＭ以下のＫ_Dを有する抗体を示す。本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。

【0074】

「非ヒト動物」という用語には、すべての脊椎動物が含まれる。例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ネズミ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳類および非哺乳類が挙げられる。

【0075】

本明細書で使用される場合、「最適化された」という用語は、産生細胞または生物、一般に真核細胞、例えばピキアの細胞、トリコデルマの細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはヒトの細胞において好ましいコドンを使用して、ヌクレオチド配列がアミノ酸配列をコードするように変更されたことを意味する。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている開始ヌクレオチド配列によって最初にコードされたアミノ酸配列を完全にまたは可能な限り保持するように設計されている。本明細書の最適化された配列は、ＣＨＯ哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように設計されているが、本明細書では他の真核細胞におけるこれらの配列の最適化された発現も想定される。最適化されたヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列は、最適化されたものとも呼ばれる。

【発明を実施するための形態】

【0076】

ＡｃｔＲＩＩ受容体、例えばビマグルマブを対象とした抗体は、これらの受容体を介したシグナル伝達を低下させ、心疾患の予防および／または治療をもたらすことができることが発見されている。

【0077】

したがって、一態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ結合分子、例えば、ビマグルマブまたは前記抗体の抗原結合部分を含む機能性タンパク質を含む組成物を提供する。結合分子は、ＡｃｔＲＩＩＢ結合分子、例えばヒトＡｃｔＲＩＩＢであってもよい。ヒトＡｃｔＲＩＩＢのポリペプチド配列は、配列番号１８１（ＡＡＣ６４５１５．１、ＧＩ：３７６９４４３）に記載されている。一実施形態では、抗体または機能性タンパク質は、ヒトまたはラクダ科動物などの起源を有する哺乳動物に由来する。したがって、開示された組成物に含まれる抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体であり得る。特定の実施形態では、開示された組成物に含まれる抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、標的タンパク質ＡｃｔＲＩＩＢに特異的であり、ＡｃｔＲＩＩＢまたはＡｃｔＲＩＩＢの断片に結合する抗原結合領域を有するものとして特徴付けられる。

【0078】

一実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、アゴニスト活性がない、または低いアゴニスト活性であるＡｃｔＲＩＩアンタゴニストである。別の実施形態で、開示された組成物に含まれる抗体または機能的断片は、標的タンパク質ＡｃｔＲＩＩに結合し、ミオスタチンのＡｃｔＲＩＩへの結合を基礎レベルまで減少させる。この実施形態のさらなる態様において、開示された組成物に含まれる抗体または機能的断片は、ミオスタチンがＡｃｔＲＩＩに結合することを完全に防ぐ。さらなる実施形態において、開示された組成物に含まれる抗体または機能的断片は、Ｓｍａｄ活性化を阻害する。さらなる実施形態では、開示される組成物に含まれる抗体または機能的断片は、Ｓｍａｄ依存性経路を介した骨格分化のアクチビン受容体ＩＩＢ型媒介ミオスタチン誘導性阻害を阻害する。

【0079】

結合は、抗体による拮抗作用または作動作用である活性を測定するために使用できる、１つまたは複数のアッセイによって判定され得る。好ましくは、アッセイは、ＥＬＩＳＡによるＡｃｔＲＩＩＢへのミオスタチンの結合の阻害、ミオスタチン誘導性シグナル伝達の阻害（例えば、Ｓｍａｄ依存性レポーター遺伝子アッセイによる）、ミオスタチン誘導性Ｓｍａｄリン酸化（Ｐ－Ｓｍａｄ ＥＬＩＳＡ）の阻害、および骨格筋細胞の分化のミオスタチン誘導性阻害の阻害（例えば、クレアチンキナーゼアッセイによる）を含む、ＡｃｔＲＩＩＢに対する抗体の効果の少なくとも１つを測定する。

【0080】

一実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢのミオスタチン結合領域（すなわち、リガンド結合ドメイン）に特異的に結合する抗体を含む組成物を提供する。このリガンド結合ドメインは、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４からなり、本明細書では配列番号１８２に割り当てられている。リガンド結合ドメインは、以下で説明するいくつかのエピトープを含む。

【0081】

一実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、約１００ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下のＫ_DでＡｃｔＲＩＩＢに結合する。好ましくは、開示された組成物に含まれる抗体は、１００ｐＭ以下（すなわち、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約１０ｐＭ、約２ｐＭ、約１ｐＭ以下）の親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する。一実施形態において、開示された組成物に含まれる抗体は、約１～約１０ｐＭの親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0082】

一実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ関連タンパク質と交差反応せず、特にヒトＡｃｔＲＩＩＡ（ＮＰ＿００１６０７．１、ＧＩ：４５０１８９７）と交差反応しない。別の実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、Ａｃｔ ＲＩＩＡと交差反応し、同等の親和性、またはＡｃｔＲＩＩＡに結合するよりも約１、２、３、４または５倍大きい親和性、より好ましくは約１０倍、さらにより好ましくは約２０倍、３０倍、４０倍または５０倍、さらにより好ましくは約１００倍でＡｃｔＲＩＩＢに結合する。

【0083】

一実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、１００ｐＭ以上（すなわち、約２５０ｐＭ、約５００ｐＭ、約１ｎＭ、約５ｎＭ以上）の親和性でＡｃｔＲＩＩＡに結合する。

【0084】

一実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体はＩｇＧ₂アイソタイプのものである。

【0085】

別の実施形態において、開示された組成物に含まれる抗体はＩｇＧ₁アイソタイプのものである。さらなる実施形態において、開示された組成物に含まれる抗体はＩｇＧ１アイソタイプのものであり、Ｆｃ領域の変異によりエフェクター機能が変化している。該変化したエフェクター機能は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性の低下であり得る。一実施形態において、前記変化したエフェクター機能は、サイレンシングされたＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性である。

【0086】

別の関連する実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性またはＣＤＣ活性のない完全ヒトまたはヒト化ＩｇＧ１抗体であり、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４からなるＡｃｔＲＩＩＢの領域に結合する。

【0087】

別の関連する実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性またはＣＤＣ活性の低下した完全ヒトまたはヒト化ＩｇＧ１抗体であり、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４からなるＡｃｔＲＩＩＢの領域に結合する。

【0088】

本開示はまた、上記の心疾患などの心疾患の予防および／または治療に使用するためのヒトまたはヒト化抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を含む組成物に関する。

【0089】

特定の実施形態では、開示された組成物に含まれる抗体は、特定の重鎖および軽鎖の配列に由来し、かつ／または特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ領域などの特定の構造的特徴を含む。本開示は、単離されたＡｃｔＲＩＩＢ抗体、そのような抗体の作製方法、そのような抗体を含むイムノコンジュゲートおよび多価または多重特異性分子、および抗体、イムノコンジュゲートまたは二重特異性分子を含む医薬組成物を提供する。

【0090】

代替実施形態では、本開示は以下の態様に関する。

【0091】

１．心臓弁膜症、高血圧、冠動脈疾患、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性または感染性因子、および他の形態の遺伝性または特発性心筋症によって関連付けられるまたは引き起こされる心不全を含む心不全の治療および／または予防に使用するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。
１．

【0092】

２．ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが約３～１０ｍｇ／ｋｇの用量でそれを必要とする患者に投与されることになる、態様１による使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0093】

３．前記ミオスタチンアンタゴニストが約３または約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されることになる、態様２による使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0094】

あるいは、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは、約３、４、５、６、７、８、９または約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されることになる。

【0095】

４．前記ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが静脈内または皮下投与されることになる、態様１～３による使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0096】

５．前記ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストアンタゴニストが４週間ごとに投与されることになる、態様１～４のいずれか１つによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0097】

あるいは、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストは８週間ごとに投与することができる。

【0098】

６．前記ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが少なくとも３ヶ月間投与されることになる、態様１～５のいずれか１つによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0099】

７．前記ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが最大１２ヶ月間投与されることになる、態様１～６のいずれか１つによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0100】

好ましくは、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストアンタゴニストは、少なくともまたは最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２ヶ月間投与されることになる。

【0101】

８．心不全を有するまたは心不全を発症するリスクがある対象に有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを投与することを含む、心不全を治療および／または予防する方法。

【0102】

多くの場合、心不全は、心臓弁膜症、冠動脈心疾患、高血圧、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性および感染性因子への曝露、および他の形態の遺伝性または特発性心筋症などの状態によって引き起こされるまたは関連する場合がある。心不全を発症するリスクのある患者は、これらの状態の１つ以上を抱えている可能性がある。

【0103】

９．心臓弁膜症、高血圧、冠動脈疾患、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性および感染性因子、ならびに他の形態の遺伝性または特発性心筋症からなる群から選択される状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常を治療する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを、前記状態に関連する前記構造的および／または機能的な心臓の異常を有する対象に投与することを含む方法。

【0104】

１０．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを、それを必要とする患者に約３～１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む、態様８または９に記載の方法。

【0105】

１１．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを、それを必要とする患者に約３または約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与することを含む、態様８または９に記載の方法。

【0106】

１２．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを静脈内または皮下に投与することを含む、態様８または９に記載の方法。

【0107】

１３．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを４週間ごとに投与することを含む、態様８～１０のいずれか１つに記載の方法。

【0108】

１４．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを少なくとも３ヶ月間投与することを含む、態様８～１３のいずれか１つに記載の方法。

【0109】

１５．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを最大１２ヶ月間投与することを含む、態様１４に記載の方法。

【0110】

１６．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体である、態様１～１５のいずれか１つによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0111】

１７．抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体がビマグルマブである、態様１～１６のいずれか１つによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0112】

１８．ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストが、配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４（配列番号１８２）からなるＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩ抗体である、態様１７による使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0113】

１９．抗ＡｃｔＲＩＩ抗体が、
（ａ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）
を含むまたはからなるＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する、態様１６～１８のいずれか１つによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0114】

２０．ａ）抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体であって、
（ａ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）
を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体；
および
ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）、ここで抗体は約２ｐＭのＫ_Dを有する、
からなる群から選択される、態様１６～１９のいずれかによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0115】

２１．抗体がＡｃｔＲＩＩＡに結合するよりも１０倍以上高い親和性でＡｃｔＲＩＩＢに結合する、態様１６～２０のいずれかに記載の使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0116】

２２．抗体が、配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、態様１６～２１のいずれか１つによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0117】

２３．抗体が
（ａ）配列番号１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４７の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号６の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３４の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６２の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４９の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７７の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３６の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６４の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７９の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｊ）配列番号１０の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３８の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６６の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｋ）配列番号１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｌ）配列番号１２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｍ）配列番号１３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３、または
（ｎ）配列番号１４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、態様１６～２２のいずれかによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0118】

２４．抗体が、配列番号１４６～１５０および１５６～１６０からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長重鎖アミノ酸配列を含む、態様１６～２３のいずれかによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0119】

２５．抗体が、配列番号１４１～１４５および１５１～１５５からなる群から選択される少なくとも１つの配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する完全長軽鎖アミノ酸配列を含む、態様１６～２４のいずれかによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0120】

２６．抗体が、
（ａ）配列番号９９の可変重鎖配列および配列番号８５の可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号１００の可変重鎖配列および配列番号８６の可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号１０１の可変重鎖配列および配列番号８７の可変軽鎖配列；
（ｄ）配列番号１０２の可変重鎖配列および配列番号８８の可変軽鎖配列；
（ｅ）配列番号１０３の可変重鎖配列および配列番号８９の可変軽鎖配列；
（ｆ）配列番号１０４の可変重鎖配列および配列番号９０の可変軽鎖配列；
（ｇ）配列番号１０５の可変重鎖配列および配列番号９１の可変軽鎖配列；
（ｈ）配列番号１０６の可変重鎖配列および配列番号９２の可変軽鎖配列；
（ｉ）配列番号１０７の可変重鎖配列および配列番号９３の可変軽鎖配列；
（ｊ）配列番号１０８の可変重鎖配列および配列番号９４の可変軽鎖配列；
（ｋ）配列番号１０９の可変重鎖配列および配列番号９５の可変軽鎖配列；
（ｌ）配列番号１１０の可変重鎖配列および配列番号９６の可変軽鎖配列；
（ｍ）配列番号１１１の可変重鎖配列および配列番号９７の可変軽鎖配列；または
（ｎ）配列番号１１２の可変重鎖配列および配列番号９８の可変軽鎖配列
を含む、態様１６～２５のいずれかによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0121】

２７．抗体が、
（ａ）配列番号１４６の重鎖配列および配列番号１４１の軽鎖配列；
（ｂ）配列番号１４７の重鎖配列および配列番号１４２の軽鎖配列；
（ｃ）配列番号１４８の重鎖配列および配列番号１４３の軽鎖配列；
（ｄ）配列番号１４９の重鎖配列および配列番号１４４の軽鎖配列；
（ｅ）配列番号１５０の重鎖配列および配列番号１４５の軽鎖配列；
（ｆ）配列番号１５６の重鎖配列および配列番号１５１の軽鎖配列；
（ｇ）配列番号１５７の重鎖配列および配列番号１５２の軽鎖配列；
（ｈ）配列番号１５８の重鎖配列および配列番号１５３の軽鎖配列；
（ｉ）配列番号１５９の重鎖配列および配列番号１５４の軽鎖配列；または
（ｊ）配列番号１６０の重鎖配列および配列番号１５５の軽鎖配列
を含む、態様１６～２６のいずれかによる使用または方法のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0122】

２８．前記組成物に含まれる抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢへの結合を交差遮断する、または、態様２７の少なくとも１つの抗体によって交差遮断される、態様１６～２７のいずれかによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0123】

２９．前記組成物に含まれる抗体が、Ｆｃ領域の変異によりエフェクター機能が変化している、態様１６～２８のいずれかによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0124】

３０．前記組成物に含まれる抗体が、態様２６～２７に列挙された抗体によって認識されるエピトープに結合する、態様１６～２９のいずれかによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0125】

３１．抗体がｐＢＷ５２２（ＤＳＭ２２８７３）またはｐＢＷ５２４（ＤＳＭ２２８７４）によってコードされる、態様１６～３０のいずれかによる使用のためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト。

【0126】

３２．心不全の治療および／または予防に使用するため、または心臓弁膜症、高血圧、冠動脈疾患、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性および感染性因子、および他の形態の遺伝性または特発性心筋症からなる群から選択される状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常を治療する際に使用するためのビマグルマブであって、４週間ごとに約３～１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で静脈内投与する、ビマグマブ。

【0127】

３３．心不全の治療および／または予防に使用するため、または心臓弁膜症、高血圧、冠動脈疾患、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、毒性および感染性因子、および他の形態の遺伝性または特発性心筋症からなる群から選択される状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常を治療する際に使用するための１５０ｍｇ／ｍｌのビマグルマブを含む組成物。

【0128】

３４．１５０ｍｇ／ｍｌのビマグルマブを含む単位剤形。

【0129】

さらなる実施形態において、単位剤形、すなわちバイアルは、１００～２００ｍｇ／ｍｌのビマグルマブ、好ましくは１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００ｍｇ／ｍｌのビマグルマブを含む。

【0130】

３５．溶液で希釈された１つ以上のバイアルからの適切な量のビマグルマブを含む輸液バッグ。

【0131】

溶液はデキストロース溶液であることが好ましい。

【0132】

いくつかのさらなる実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストまたはビマグルマブなどの抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、約１、２、３、４、５、５、６、７、８、９、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されることになっている。

【0133】

本明細書に開示されるのは、心不全を治療および／または予防するための、ならびに心臓弁膜症、高血圧、冠動脈疾患、糖尿病、老化、不整脈、周産期心筋症、ストレス心筋症、および他の形態の遺伝性または特発性拡張型心筋症などの状態に関連する構造的および／または機能的な心臓の異常を治療するための薬剤を製造するためのＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストである。

【0134】

さらなる実施形態では、本明細書で開示されるすべての態様は、一方を他方のいずれかと組み合わせて使用することができる。

【0135】

本開示の様々な態様は、以下のサブセクションでさらに詳細に説明される。様々な種のＡｃｔＲＩＩに対する抗体の結合能力を評価する標準的なアッセイは、例えばＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットおよびＲＩＡを含めて、当技術分野で知られている。抗体の結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析または溶液平衡滴定などの当技術分野で知られている標準的なアッセイによっても評価することができる。Ｂｉａｃｏｒｅなどの表面プラズモン共鳴ベースの技術は、結合親和性の計算を可能にする結合動力学を判定できる。

【0136】

したがって、当技術分野で公知であり本明細書に記載の方法論に従って判定されるこれらのＡｃｔＲＩＩ機能特性（例えば、生化学、免疫化学、細胞、生理学、または他の生物活性など）の１つまたは複数を「阻害する」抗体が、抗体の不在下で見られるものと比較して（例えば、または無関係な特異度の対照抗体が存在する場合）、特定の活性における統計的に有意な減少に関連すると理解される。ＡｃｔＲＩＩ活性を阻害する抗体は、測定パラメーターの少なくとも１０％、少なくとも５０％、８０％または９０％だけそのような統計的に有意な減少をもたらし、特定の実施形態では、本開示の抗体は、ＡｃｔＲＩＩＢ機能活性の９５％、９８％、または９９％を超えて阻害し得る。

【0137】

抗体または他の結合剤がＡｃｔＲＩＩへの別の抗体または結合分子の結合を妨害できる能力または程度、またしたがって、本開示に従って交差遮断すると言うことができるかどうかということは、標準的な競合結合アッセイを使用して判定できる。１つの適切なアッセイには、表面プラズモン共鳴技術を使用して相互作用の程度を測定できるＢｉａｃｏｒｅのテクノロジーの使用が含まれる（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ、ウプサラ、スウェーデン）を使用することによる）。交差遮断を測定する別のアッセイでは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。さらなるアッセイは、ＦＡＣＳ分析を使用し、ＡｃｔＲＩＩＢ発現細胞への結合に関する様々な抗体の競合が検証される。

【0138】

本開示によれば、本開示による交差遮断抗体または他の結合剤は、記載されたＢＩＡｃｏｒｅ交差遮断アッセイにおいてＡｃｔＲＩＩに結合し、抗体または結合剤の組み合わせ（混合物）の記録された結合は、理論上結合で最大の８０％～０．１％（例えば８０％～４％）、具体的には理論上結合で最大の７５％～０．１％（例えば７５％～４％）、より具体的には７０％～０．１％（例えば７０％～４％）、より具体的には、組み合わせた２つの抗体または結合剤の理論上結合で最大（上記で定義）の６５％～０．１％（例えば６５％～４％）である。

【0139】

抗体は、陽性対照ウェル（すなわち、同じ抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体およびＡｃｔＲＩＩＢであるが「試験している」交差遮断抗体ではないもの）と比較した場合、検証している抗体が、ＡｃｔＲＩＩＢへの抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の結合を６０％～１００％、特に７０％～１００％、より具体的には８０％～１００％減少させることができる場合、ＥＬＩＳＡアッセイで、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を交差遮断することとして定義される。本明細書で引用される交差遮断抗体の例は、ＭＯＲ０８１５９およびＭＯＲ０８２１３（国際公開第２０１０／１２５００３号パンフレットに開示）である。したがって、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢへの結合についてＭＯＲ０８１５９またはＭＯＲ０８２１３を交差遮断する抗体を含む組成物を提供する。

【0140】

組換え抗体
本開示内で使用される組成物に含まれる抗体、例えば、ビマグルマブなどのＡｃｔＲＩＩに対するアンタゴニスト抗体には、本明細書に記載のような、単離され構造的に特徴付けられたヒト組換え抗体が含まれる。本発明の組成物に含まれる抗体のＶ_Hアミノ酸配列は、配列番号９９～１１２に示されている。本発明の組成物に含まれる抗体のＶ_Lアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８５～９８に示されている。本発明の組成物に含まれる抗体の好ましい完全長重鎖アミノ酸配列の例は、配列番号１４６～１５０および１５６～１６０に示されている。本発明の組成物に含まれる抗体の好ましい完全長軽鎖アミノ酸配列の例は、それぞれ配列番号１４１～１４５および１５１～１５５に示されている。本発明の組成物に含まれる他の抗体には、アミノ酸の欠失、挿入または置換により変異したが、上記の配列に示されているＣＤＲ領域とＣＤＲ領域で、依然少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９７または９９パーセントの同一性を有するアミノ酸が含まれる。いくつかの実施形態では、上記の配列に示されるＣＤＲ領域と比較した場合、ＣＤＲ領域のアミノ酸の欠失、挿入または置換により１、２、３、４または５個以下のアミノ酸が変異している変異アミノ酸配列が含まれる。

【0141】

さらに、可変重鎖親ヌクレオチド配列は、配列番号１２７～１４０に示されている。可変軽鎖親ヌクレオチド配列は、配列番号１１３～１２６に示されている。哺乳動物細胞での発現に最適化された完全長軽鎖ヌクレオチド配列は、配列番号１６１～１６５および１７１～１７５に示されている。哺乳動物細胞での発現に最適化された完全長重鎖ヌクレオチド配列は、配列番号１６６～１７０および１７６～１８０に示されている。本発明の組成物に含まれる他の抗体は、アミノ酸を含むか、変異したが上記の配列に対して少なくとも６０以上（すなわち８０、９０、９５、９７、９９またはそれより多い）のパーセントの同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、上記の配列に示される可変領域と比較した場合、可変領域におけるアミノ酸の欠失、挿入または置換により１、２、３、４または５個以下のアミノ酸が変異した変異アミノ酸配列が含まれる。

【0142】

これらの抗体はそれぞれ同じエピトープに結合し、同じ親抗体の継代であるため、Ｖ_H、Ｖ_L、完全長軽鎖、および完全長重鎖の配列（ヌクレオチド配列とアミノ酸配列）を「混合して適合」させ、本開示の他の抗ＡｃｔＲＩＩＢ結合分子を作成することができる。そのような「混合して適合」させた抗体のＡｃｔＲＩＩＢ結合は、上記の結合アッセイを使用して、例えばＥＬＩＳＡなどの周知の方法で試験することができる。これらの鎖が混在して適合される場合、特定のＶ_H／Ｖ_LペアリングからのＶ_H配列は、構造的に類似したＶ_H配列で置き換えられる必要がある。同様に、特定の完全長重鎖／完全長軽鎖のペアリングからの完全長重鎖配列は、構造的に類似した完全長重鎖配列で置き換える必要がある。同様に、特定のＶ_H／Ｖ_LペアリングからのＶ_L配列は、構造的に類似したＶ_L配列で置き換える必要がある。同様に、特定の完全長重鎖／完全長軽鎖のペアリングからの完全長軽鎖配列は、構造的に類似した完全長軽鎖配列に置き換える必要がある。したがって、一態様では、本開示は、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８５～９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体またはその抗原結合領域を含む組成物を提供する。

【0143】

別の態様では、本開示は、
（ｉ）配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む完全長重鎖；および配列番号８５～９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む完全長軽鎖を有する単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、または
（ｉｉ）その抗原結合部分を含む機能性タンパク質
を含む組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、
（ｉ）配列番号１２７～１４０からなる群から選択される哺乳動物の細胞での発現に最適化されたヌクレオチド配列によりコードされる完全長重鎖を有する単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、および配列番号１１３～１２６からなる群から選択される哺乳動物の細胞での発現のために最適化されたヌクレオチド配列によりコードされる完全長軽鎖、または
（ｉｉ）その抗原結合部分を含む機能性タンパク質
を含む組成物を提供する。

【0144】

本発明の組成物に含まれる抗体のＶ_H ＣＤＲ１のアミノ酸配列の例は、配列番号１～１４に示されている。抗体のＶ_H ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１５～２８に示されている。抗体のＶ_H ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２９～４２に示されている。抗体のＶ_L ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４３～５６に示されている。抗体のＶ_L ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号５７～７０に示されている。抗体のＶ_L ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号７１～８４に示されている。ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して描かれている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）。ＣＤＲ領域を判定する別の方法では、Ｃｈｏｔｈｉａが考案した方法を使用する（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．１９８９，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３）。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造ループ領域の場所に基づいている。ただし、Ｃｈｏｔｈｉａが使用する番号付けシステムの変更により（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／～ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ＧｅｎｅｒａｌＩｎｆｏ．ｈｔｍｌ ａｎｄ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／を参照）、このシステムは現在あまり使用されていない。ＣＤＲを定義する他のシステムが存在し、これら２つのＷｅｂサイトでも言及されている。

【0145】

これらの抗体のそれぞれがＡｃｔＲＩＩに結合でき、抗原結合特異性が主にＣＤＲ１、２、および３領域によって提供されることを考えると、Ｖ_H ＣＤＲ１、２、および３配列とＶ_L ＣＤＲ１、２、および３配列は「混合して適合させる」ことができる（すなわち、異なる抗体からのＣＤＲを混合および適合させることができ、各々Ｖ_H ＣＤＲ１、２および３およびＶ_L ＣＤＲ１、２および３を含む抗体は、本開示の他の抗ＡｃｔＲＩＩ結合分子を作成する。そのような「混合して適合」させた抗体のＡｃｔＲＩＩＢ結合は、上記および実施例に記載の結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）を使用して試験することができる。Ｖ_H ＣＤＲ配列を混合して適合させる場合、特定のＶ_H配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を構造的に類似したＣＤＲ配列で置き換える必要がある。同様に、Ｖ_L ＣＤＲ配列を混合して適合させる場合、特定のＶ_L配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に類似したＣＤＲ配列で置換される必要がある。モノクローナル抗体について本明細書に示されるＣＤＲ配列からの構造的に類似の配列で１つ以上のＶ_Hおよび／またはＶ_L ＣＤＲ領域配列を置換することにより、新規Ｖ_HおよびＶ_L配列を作成できることは、当業者に容易に明らかである。

【0146】

開示された組成物またはその抗原結合領域に含まれる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を有する。

【0147】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0148】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0149】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0150】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４７の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0151】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号６の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３４の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６２の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0152】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４９の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７７の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0153】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号８の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３６の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６４の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７８の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0154】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２３の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５１の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号７９の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0155】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３８の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６６の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0156】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５３の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８１の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0157】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１２の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４０の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６８の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８２の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0158】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２７の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５５の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号６９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８３の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0159】

一実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、配列番号１４の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号５６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７０の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号８４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。

【0160】

一実施形態では、本開示は、（ａ）配列番号８５の可変重鎖配列および配列番号９９の可変軽鎖配列；（ｂ）配列番号８６の可変重鎖配列および配列番号１００の可変軽鎖配列；（ｃ）配列番号８７の可変重鎖配列および配列番号１０１の可変軽鎖配列；（ｄ）配列番号８８の可変重鎖配列および配列番号１０２の可変軽鎖配列；（ｅ）配列番号８９の可変重鎖配列および配列番号１０３の可変軽鎖配列；（ｆ）配列番号９０の可変重鎖配列および配列番号１０４の可変軽鎖配列；（ｇ）配列番号９１の可変重鎖配列および配列番号１０５の可変軽鎖配列；（ｈ）配列番号９２の可変重鎖配列および配列番号１０６の可変軽鎖配列；（ｉ）配列番号９３の可変重鎖配列および配列番号１０７の可変軽鎖配列；（ｊ）配列番号９４の可変重鎖配列および配列番号１０８の可変軽鎖配列；（ｋ）配列番号９５の可変重鎖配列および配列番号１０９の可変軽鎖配列；（ｌ）配列番号９６の可変重鎖配列および配列番号１１０の可変軽鎖配列；（ｍ）配列番号９７の可変重鎖配列および配列番号１１１の可変軽鎖配列；または（ｎ）配列番号９８の可変重鎖配列および配列番号１１２の可変軽鎖配列を含む抗体を含む組成物を提供する。

【0161】

一実施形態では、本開示は、（ａ）配列番号１４６の重鎖配列と配列番号１４１の軽鎖配列；（ｂ）配列番号１４７の重鎖配列および配列番号１４２の軽鎖配列；（ｃ）配列番号１４８の重鎖配列および配列番号１４３の軽鎖配列；（ｄ）配列番号１４９の重鎖配列および配列番号１４４の軽鎖配列；（ｅ）配列番号１５０の重鎖配列および配列番号１４５の軽鎖配列；（ｆ）配列番号１５６の重鎖配列および配列番号１５１の軽鎖配列；（ｇ）配列番号１５７の重鎖配列および配列番号１５２の軽鎖配列；（ｈ）配列番号１５８の重鎖配列および配列番号１５３の軽鎖配列；（ｉ）配列番号１５９の重鎖配列および配列番号１５４の軽鎖配列；または（ｊ）配列番号１６０の重鎖配列および配列番号１５５の軽鎖配列を含む抗体を含む組成物を提供する。

【0162】

本明細書で使用される場合、ヒト抗体は、抗体の可変領域または完全長の鎖がヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子を使用するシステムから得られる場合、特定の生殖系列配列の「産物」または「由来」である重鎖または軽鎖可変領域または完全長重鎖または軽鎖を含む。そのような系は、目的の抗原でヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを免疫すること、または目的の抗原でファージに提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列の「産物」または「由来」であるヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列に最も近い配列（すなわち、最大％同一性）にあるヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を選択することにより、そのように同定できる。特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列の「産物」または「由来」であるヒト抗体は、例えば、自然に発生する体細胞変異または部位特異的突然変異の意図的な導入のために、生殖系列配列と比較してアミノ酸の違いを含む場合がある。ただし、選択されたヒト抗体は、通常、他の種の生殖細胞系免疫グロブリンアミノ酸配列と比較した場合に、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であり、ヒト抗体をヒトであると識別するアミノ酸残基を含む（例えば、マウス生殖系列配列）。特定の場合、ヒト抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によりコードされたアミノ酸配列とアミノ酸配列で少なくとも８０％、９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％さえ同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０個以下のアミノ酸の違いを示す。特定の場合、ヒト抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と５個以下、または４、３、２、または１個以下のアミノ酸の違いを示す場合がある。

【0163】

一実施形態では、本開示の組成物に含まれる抗体は、ｐＢＷ５２２またはｐＢＷ５２４（ＤＳＭＺ、Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７Ｂ，Ｄ－３８１２４ Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ ｏｎ １８ Ａｕｇｕｓｔ ２００９、それぞれ寄託番号ＤＳＭ２２８７３およびＤＳＭ２２８７４で寄託）によりコードされるものである。

【0164】

相同抗体
さらに別の実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、本明細書に記載の抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列と相同である完全長の重鎖および軽鎖アミノ酸配列、完全長重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列、可変領域重鎖および軽鎖ヌクレオチド配列、または可変領域重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有し、抗体は本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の所望の機能特性を保持する。

【0165】

例えば、本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含む組成物を提供し、重鎖可変領域は配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるアミノ酸配列を含み；軽鎖可変領域は、配列番号８５～９８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む；あるいは、組成物は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む組換え抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含み；重鎖可変領域は、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含む；軽鎖可変領域は、配列番号８５～９８からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含み、抗体は、次の機能特性、（ｉ）インビトロまたはインビボでミオスタチン結合を阻害する、（ｉｉ）Ｓｍａｄ依存性経路を介して筋肉分化の阻害を減少させる、および／または（ｉｉｉ）血液学的変化、特にＲＢＣの変化を誘発しないということの少なくとも１つを示す。これに関連して、「変化」という用語は、挿入、欠失、および／または置換を示す。

【0166】

さらなる例において、本開示は、完全長重鎖および完全長軽鎖を含む、単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含む組成物を提供し、ここで、完全長重鎖は、配列番号１４６～１５０および１５６～１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む；完全長軽鎖は、配列番号１４１～１４５および１５１～１５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む；あるいは、組成物は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含み、重鎖可変領域は配列番号１４６～１５０および１５６～１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含み；軽鎖可変領域は、配列番号１４１～１４５および１５１～１５５からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含み、抗体は、次の機能特性、（ｉ）インビトロまたはインビボでミオスタチン結合を阻害する、（ｉｉ）Ｓｍａｄ依存性経路を介して筋肉分化の阻害を減少させる、および／または（ｉｉｉ）血液学的変化、特にＲＢＣの変化を誘発しないということの少なくとも１つを示す。好ましくは、そのような抗体はＡｃｔＲＩＩＢおよび／またはＡｃｔＲＩＩＡのリガンド結合ドメインに結合する。これに関連して、「変化（ｃｈａｎｇｅ）」という用語は、挿入、欠失、および／または置換を示す。

【0167】

別の例において、本開示は、完全長重鎖および完全長軽鎖を含む、単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含む組成物を提供し、ここで、完全長重鎖は、配列番号１６６～１７０および１７６～１８０からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるヌクレオチド配列によりコードされる；完全長軽鎖は、配列番号１６１～１６５および１７１～１７５からなる群から選択されるヌクレオチド配列と少なくとも８０％、または少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５、９７または９９％）同一であるヌクレオチド配列によりコードされる；あるいは、組成物は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む組換え抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質）を含み、重鎖可変領域は配列番号１６６～１７０および１７６～１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含み；軽鎖可変領域は、配列番号１６１～１６５および１７１～１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列と比較して、５個以下のアミノ酸、または４個以下のアミノ酸、または３個以下のアミノ酸、または２個以下または１個以下のアミノ酸の変化を含み、抗体は、次の機能特性、（ｉ）インビトロまたはインビボでミオスタチン結合を阻害する、（ｉｉ）Ｓｍａｄ依存性経路を介して筋肉分化の阻害を減少させる、および／または（ｉｉｉ）血液学的変化、特にＲＢＣの変化を誘発しないということの少なくとも１つを示す。好ましくは、そのような抗体はＡｃｔＲＩＩＢのリガンド結合ドメインに結合する。これに関連して、「変化」という用語は、挿入、欠失、および／または置換を示す。

【0168】

様々な実施形態において、本発明の組成物に含まれる抗体は、上で議論された機能特性のうちの１つ以上、２つ以上、または３つを示し得る。抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。好ましくは、抗体は完全ヒトＩｇＧ１抗体である。

【0169】

他の実施形態では、Ｖ_Hおよび／またはＶ_Lアミノ酸配列は、上記の配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得る。他の実施形態では、Ｖ_Hおよび／またはＶ_Lアミノ酸配列は、１、２、３、４または５個以下のアミノ酸の位置でのアミノ酸置換を除いて同一であり得る。それぞれ配列番号９９～１１２および配列番号８５～９８のＶ_HおよびＶ_L領域に対して同一性が高い（すなわち８０％以上）Ｖ_HおよびＶ_L領域を有する抗体は、それぞれ核酸分子配列番号１２７～１４０および１１３～１２６の突然変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介変異誘発）により得ることができ、続いて、本明細書に記載の機能アッセイを使用して、保持機能（すなわち上記の機能）についてコードされた改変抗体の試験を行う。

【0170】

他の実施形態では、完全長重鎖および／または完全長軽鎖のアミノ酸配列は、上記の配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であってもよく、１、２、３、４、または５個以下のアミノ酸の位置でのアミノ酸の変化を除いて同一であってもよい。配列番号１４６～１５０および１５６～１６０のいずれかの完全長重鎖およびそれぞれ配列番号１４１～１４５および１５１～１５５のいずれかの完全長軽鎖に対して同一性が高い（すなわち少なくとも８０％以上）完全長重鎖および完全長軽鎖を有する抗体は、それぞれ核酸分子配列番号１６６～１７０および１７６～１８０および配列番号１６１～１６５および１７１～１７５の突然変異誘発（例えば、部位特異的またはＰＣＲ媒介突然変異誘発）により得ることができる。続いて、本明細書に記載の機能アッセイを使用して、保持機能（すなわち上記の機能）についてコードされた改変抗体の試験を行う。

【0171】

他の実施形態では、完全長重鎖および／または完全長軽鎖ヌクレオチド配列は、上記の配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であってもよい。

【0172】

他の実施形態では、重鎖および／または軽鎖ヌクレオチド配列の可変領域は、上記の配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得るか、１、２、３、４、または５個以下のアミノ酸の位置のアミノ酸の変化を除いて同一であり得る。

【0173】

本明細書で使用される場合、２つの配列間の同一性の割合は、ギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）。それは、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要がある。以下に説明するように、数学的アルゴリズムを使用して、２つの配列間の配列の比較と同一性の割合の判定を成し遂げることができる。

【0174】

２つのアミノ酸配列間の同一性の割合は、ＰＡＭ１２０重み残余テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．ＭｅｙｅｒｓとＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７，１９８８）を使用して判定できる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性の割合は、Ｂｌｏｓｓｏｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイト、および１、２、３、４、５、または６の長さウェイトを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ、Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３，１９７０）アルゴリズムを使用して決定できる。

【0175】

保存的修飾を施した抗体
特定の実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を有し、これらのＣＤＲ配列の１つ以上が、本明細書に記載の抗体に基づく特定されているアミノ酸配列、またはその１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化またはその保存的修飾を含むその変異体の配列を有し、抗体は本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の所望の機能特性を保持している。したがって、本開示は、単離された組換え抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質を含む組成物を提供し、それは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域からなり、重鎖可変領域ＣＤＲ１アミノ酸配列は配列番号１～１４、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ２アミノ酸配列は配列番号１５～２８、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ３アミノ酸配列は配列番号２９～４２、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ１アミノ酸配列は配列番号４３～５６、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ２アミノ酸配列は配列番号５７～７０、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ３アミノ酸配列は配列番号７１～８４、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体の配列、およびその保存的修飾からなる群から選択される。好ましくは、抗体は以下の機能特性、（ｉ）インビトロまたはインビボでミオスタチン結合を阻害する、（ｉｉ）Ｓｍａｄ依存性経路を介して筋肉分化の阻害を減少させる、および／または（ｉｉｉ）血液学的変化、特にＲＢＣの変化を誘発しないということの少なくとも１つを示す。

【0176】

種々の実施形態において、抗体は、上記に列挙された機能特性の一方または両方を示し得る。そのような抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。

【0177】

他の実施形態では、哺乳動物細胞での発現に最適化された本発明の組成物に含まれる抗体は、完全長重鎖配列および完全長軽鎖配列を有し、これらの配列の１つまたは複数は、本開示に記載の抗体に基づいて特定のアミノ酸配列またはその保存的修飾を有し、抗体は、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の所望の機能特性を保持する。したがって、本開示は、完全長重鎖および完全長軽鎖からなる哺乳動物細胞での発現に最適化された単離モノクローナル抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含む組成物を提供し、完全長重鎖は、配列番号１４６～１５０および１５６～１６０の群から選択されるアミノ酸配列、または１、２、３、４または５個のアミノ酸の変化を含むその変異体配列、およびその保存的修飾を有し；完全長軽鎖は、配列番号１４１～１４５および１５１～１５５の群から選択されるアミノ酸配列、または１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸の変化を含むその変異体配列、およびその保存的修飾を有し；抗体は以下の機能特性、（ｉ）インビトロまたはインビボでミオスタチン結合を阻害する、（ｉｉ）Ｓｍａｄ依存性経路を介して筋肉分化の阻害を減少させる、および／または（ｉｉｉ）血液学的変化、特にＲＢＣの変化を誘発しないということの少なくとも１つを示す。

【0178】

種々の実施形態において、抗体は、上記に列挙された機能特性の一方または両方を示し得る。そのような抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。

【0179】

本明細書で使用される場合、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に顕著な影響または変化を与えないアミノ酸修飾を指すことを意図している。そのような保存的修飾はアミノ酸置換、付加および欠失を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などの当技術分野で知られている標準的な技術によって、本開示の抗体に導入することができる。

【0180】

保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、本開示の抗体のＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、変更された抗体は、本明細書に記載の機能的なアッセイを使用して保持機能について試験することができる。

【0181】

開示された組成物に含まれる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体と同じエピトープに結合する抗体
別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の様々な特異的抗ＡｃｔＲＩＩ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。実施例に記載されている、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢへのミオスタチンの結合をブロックできる抗体はすべて、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢのエピトープの１つに高親和性で結合し、前記エピトープは配列番号１８１のアミノ酸１９～１３４の間に含まれる。

【0182】

したがって、追加の抗体は、標準的なＡｃｔＲＩＩＢ結合アッセイで本開示の他の抗体と交差競合する能力（例えば、統計的に有意な方法で結合を競合的に阻害する能力）に基づいて特定することができる。本発明の組成物に含まれる抗体のヒトＡｃｔＲＩＩＢへの結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体がヒトＡｃｔＲＩＩＢへの結合について前記抗体と競合できることを実証している。そのような抗体は、非限定的な理論によれば、それが競合する抗体と同じまたは関連する（例えば、構造的に類似または空間的に近位の）ヒトＡｃｔＲＩＩＢ上のエピトープに結合し得る。特定の実施形態では、本発明の組成物に含まれる抗体と同じヒトＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＡのエピトープに結合する抗体は、ヒト組換え抗体である。そのようなヒト組換え抗体は、実施例に記載されているように調製および単離することができる。
したがって、本開示は、配列番号８５に記載の可変重鎖配列、および配列番号９９に記載の可変軽鎖配列を有する抗体との結合のためにそれに認識されるおよび／または競合するエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0183】

したがって、本開示は、配列番号８６に記載の可変重鎖配列、および配列番号１００に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。
したがって、本開示は、配列番号８７に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０１に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。
したがって、本開示は、配列番号８８に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０２に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。
したがって、本開示は、配列番号８９に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０３に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0184】

したがって、本開示は、配列番号９０に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０４に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0185】

したがって、本開示は、配列番号９１に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０５に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0186】

したがって、本開示は、配列番号９２に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０６に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0187】

したがって、本開示は、配列番号９３に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０７に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0188】

したがって、本開示は、配列番号９４に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０８に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0189】

したがって、本開示は、配列番号９５に記載の可変重鎖配列、および配列番号１０９に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0190】

したがって、本開示は、配列番号９６に記載の可変重鎖配列、および配列番号１１０に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0191】

したがって、本開示は、配列番号９７に記載の可変重鎖配列、および配列番号１１１に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0192】

したがって、本開示は、配列番号９８に記載の可変重鎖配列、および配列番号１１２に記載の可変軽鎖配列を有する抗体によって認識されるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0193】

より詳細なエピトープマッピングの実験に続いて、本発明の組成物の好ましい抗体の結合領域がより明確に定義された。

【0194】

したがって、本開示は、配列番号１８１のアミノ酸７８～８３を含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）。
本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸７６～８４を含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）。

【0195】

本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸７５～８５を含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）。

【0196】

本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸５２～５６を含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）。
本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸４９～６３を含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）。

【0197】

本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸２９～４１を含むまたはからなるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）。

【0198】

本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０を含むまたはからなるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）。

【0199】

本開示はまた、これらの配列からなるエピトープまたはこれらのエピトープ領域の組み合わせを含むエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0200】

したがって、本開示はまた、配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）を含むまたはからなるエピトープに結合する抗体を含む組成物を提供する。

【0201】

遺伝子操作および改変された抗体
本発明の組成物に含まれる抗体はさらに、本明細書に示されるＶ_Hおよび／またはＶ_L配列の１つ以上を有する抗体を、出発抗体から改変された特性を有し得る修飾抗体を遺伝子操作するための出発材料として用いて、調製することができる。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、Ｖ_Hおよび／またはＶ_L）内、例えば１つまたは複数のＣＤＲ領域および／または１つまたは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することによって遺伝子操作できる。追加的または代替的に、例えば抗体のエフェクター機能を変更するために、定常領域内の残基を修飾することにより、抗体を遺伝子操作することができる。

【0202】

実行できる可変領域の遺伝子操作の１つのタイプは、ＣＤＲグラフトである。抗体は、６つの重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）にあるアミノ酸残基を主に介して、標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも個々の抗体間で多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体抗原相互作用の原因であるため、異なる特性を持つ異なる抗体のフレームワーク配列にグラフトされた特定の天然発生の抗体のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然発生の抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることができる（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ８６：１００２９－１００３３；Ｗｉｎｔｅｒへの米国特許第５，２２５，５３９号明細書、Ｑｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６２号明細書、および第６，１８０，３７０号明細書を参照）。

【0203】

したがって、本開示の別の実施形態は、モノクローナル抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質を含む組成物に関し、それは配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域をそれぞれ；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列；配列番号５７～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域をそれぞれ含む。したがって、そのような抗体は、モノクローナル抗体のＶ_HおよびＶ_L ＣＤＲ配列を含むが、これらの抗体とは異なるフレームワーク配列を含んでもよい。

【0204】

そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から入手することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系配列データベース（インターネット上のｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで入手可能）で見ることもでき、さらにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，［上記］；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；および Ｃｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６にもある。
本開示の抗体で使用するためのフレームワーク配列の例は、本開示の選択された抗体によって使用されるフレームワーク配列と構造的に類似するものである。例えば、本開示のモノクローナル抗体によって使用されるコンセンサス配列および／またはフレームワーク配列が挙げられる。Ｖ_H ＣＤＲ１、２、および３の配列、およびＶ_L ＣＤＲ１、２および３の配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子に見られるものと同じ配列を持つフレームワーク領域に移植でき、またはＣＤＲ配列は、生殖系列配列と比較して、１つ以上の突然変異を含むフレームワーク領域に移植され得る。例えば、特定の例では、フレームワーク領域内の残基を変異させて抗体の抗原結合能を維持または強化することが有益であることがわかっている（例えば、Ｑｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号明細書；第５，５８５，０８９号明細書；第５，６９３，７６２号明細書、および第６，１８０，３７０号明細書を参照）。

【0205】

別のタイプの可変領域修飾は、Ｖ_Hおよび／またはＶ_L ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それにより「親和性成熟」として知られる目的の抗体の１つまたは複数の結合特性（例えば親和性）を改善する。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して、突然変異を導入し、抗体結合または目的の他の機能的性質に対する効果を、本明細書に記載され、実施例にて提供されるインビトロまたはインビボのアッセイで評価することができる。保存的修飾（上記で説明）を導入できる。変異は、アミノ酸の置換、付加、または欠失であり得る。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の１つ、２つ、３つ、４つまたは５つ以下の残基が変更される。

【0206】

したがって、別の実施形態では、本開示は、単離された抗ＡｃｔＲＩＩモノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を含む機能性タンパク質を提供し、それは、配列番号１～１４を有する群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１～１４と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列からなるＶ_H ＣＤＲ１領域；配列番号１５～２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１５～２８と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するＶ_H ＣＤＲ２領域；配列番号２９～４２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２９～４２と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するＶ_H ＣＤＲ３領域；配列番号４３～５６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４３～５６と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するＶ_L ＣＤＲ１領域；配列番号５２～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号５２～７０と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するＶ_L ＣＤＲ２領域；および配列番号７１～８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７１～８４と比較して１、２、３、４または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するＶ_L ＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域からなる。

【0207】

ラクダ科抗体
ラマ種（Ｌａｍａ ｐａｃｃｏｓ、Ｌａｍａ ｇｌａｍａ、およびＬａｍａ ｖｉｃｕｇｎａ）などの新しい世界のメンバーを含むラクダおよびヒトコブラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓおよびＣａｍｅｌｕｓ ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓ）のメンバーから得られた抗体タンパク質は、サイズ、構造の複雑さ、およびヒト対象の抗原性に関して特徴付けられている。自然界に見られるこの哺乳類ファミリーの特定のＩｇＧ抗体は軽鎖を欠いているため、他の動物の抗体については、２つの重鎖と２つの軽鎖を持つ典型的な４鎖四次構造とは構造的に異なる（国際公開第９４／０４６７８号パンフレットを参照）。

【0208】

Ｖ_HHとして識別される小さな単一可変ドメインであるラクダ科の抗体の領域は、遺伝子工学によって得られ、標的に対して高い親和性を有する小さなタンパク質を生成することができ、「ラクダ科ナノボディ」として知られる低分子量抗体由来タンパク質をもたらす。（米国特許第５，７５９，８０８号明細書；Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：１２５６－１２６１；Ｄｕｍｏｕｌｉｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２００３ Ｎａｔｕｒｅ ４２４：７８３－７８８；Ｐｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００３ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １４：４４０－４４８；Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．２００２ Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８９：４５６－６２；およびＬａｕｗｅｒｅｙｓ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．１９９８ ＥＭＢＯ Ｊ １７：３５１２－３５２０を参照）。ラクダ科の抗体および抗体断片の遺伝子工学的ライブラリは、例えばベルギーのゲントのＡｂｌｙｎｘから市販されている。非ヒト起源の他の抗体と同様に、ラクダ科の抗体のアミノ酸配列を組み換えにより変更して、ヒト配列により類似した配列を得ることができる。すなわち、ナノボディを「ヒト化」することができる。したがって、ヒトに対するラクダ科の抗体の自然な低抗原性をさらに減らすことができる。

【0209】

ラクダ科のナノボディの分子量は、ヒトＩｇＧ分子の約１０分の１で、タンパク質の物理的直径はわずか数ナノメートルである。小さいサイズの１つの結果は、ラクダ科のナノボディが大きな抗体タンパク質には機能的に見えない抗原部位に結合する能力である。つまり、ラクダ科のナノボディは、別段では従来の免疫学的技術を使用して潜在的な抗原を検出する試薬として、および可能な治療薬として有用である。したがって、小さいサイズであることのさらに別の結果は、ラクダ科のナノボディが、標的タンパク質の溝または狭い裂け目の特定の部位へ結合する結果として阻害できるということであり、したがって、従来の抗体よりも、従来の低分子量の薬物の機能により似た能力を発揮できる。

【0210】

低分子量とコンパクトなサイズはさらに、非常に熱安定性が高く、極端なｐＨおよびタンパク質分解消化に対して安定で、抗原性が低いラクダ科ナノボディをもたらす。別の結果は、ラクダ科動物のナノボディが循環系から組織に容易に移動し、血液脳関門さえも通過し、神経組織に影響を及ぼす障害を治療できることである。ナノボディは、血液脳関門を通過する薬物輸送をさらに促進することができる（米国特許出願公開第２００４／０１６１７３８号明細書を参照）。これらの特徴は、ヒトに対する低い抗原性と相まって、大きな治療可能性を示している。さらに、これらの分子は大腸菌などの原核細胞で完全に発現でき、バクテリオファージとの融合タンパク質として発現され、機能的である。

【0211】

したがって、一実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢに対して高い親和性を有するラクダ科抗体またはナノボディを含む組成物に関する。本明細書の特定の実施形態において、ラクダ科抗体またはナノボディは、他の抗体について本明細書に記載の技術を使用して、ラクダ科動物で自然に産生される、すなわち、ＡｃｔＲＩＩＢまたはそのペプチド断片での免疫後のラクダ科動物によって産生される。あるいは、抗ＡｃｔＲＩＩＢラクダ科ナノボディは、本明細書の実施例に記載されているように、標的としてＡｃｔＲＩＩＢを用いたパニング手順を使用して、適切に変異誘発されたラクダ科ナノボディタンパク質を提示するファージのライブラリなどから選択することにより、遺伝子操作、つまり産生される。遺伝子操作のナノボディは、遺伝子工学によってさらにカスタマイズでき、レシピエント対象の半減期が４５分から２週間になる。特定の実施形態では、例えば国際公開第９４／０４６７８号パンフレットに記載されているように、本開示のヒト抗体の重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列をナノボディまたは単一ドメイン抗体フレームワーク配列に移植することにより、ラクダ科抗体またはナノボディが得られる。

【0212】

非抗体の足場
既知の非免疫グロブリンフレームワークまたは足場には、アドネクチン（フィブロネクチン）（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｉｎｃ．、ウォルサム、マサチューセッツ州）、アンキリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ ＡＧ、チューリッヒ、スイス）、ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｌｔｄ（ケンブリッジ、マサチューセッツ州）およびＡｂｌｙｎｘ ｎｖ（Ｚｗｉｊｎａａｒｄｅ、ベルギー））、リポカリン（アンチカリン）（Ｐｉｅｒｉｓ Ｐｒｏｔｅｏｌａｂ ＡＧ、Ｆｒｅｉｓｉｎｇ、ドイツ）、小型モジュール式免疫医薬品（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、シアトル、ワシントン州）、マキシボディ（Ａｖｉｄｉａ、Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、カリフォルニア州））、プロテインＡ（アフィボディ ＡＧ、スウェーデン）およびアフィリン（γ－クリスタリンまたはユビキチン）（Ｓｃｉｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＧｍｂＨ、ハレ、ドイツ）、タンパク質エピトープ模倣薬（Ｐｏｌｙｐｈｏｒ Ｌｔｄ、Ａｌｌｓｃｈｗｉｌ、スイス）が挙げられるが、それらに限定されない。

【0213】

（ｉ）フィブロネクチン足場
フィブロネクチン足場は、好ましくはフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型の１０番目のモジュール（１０ Ｆｎ３ドメイン））に基づいている。フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインは、２つのベータシートの間に分布する７または８個のベータ鎖を備え、それらは互いにパックしてタンパク質のコアを形成し、さらにベータ鎖を互いに接続し溶剤にさらされるループ（ＣＤＲに類似）を含む。ベータシートサンドイッチの各エッジには少なくとも３つのそのようなループがあり、エッジはベータストランドの方向に垂直なタンパク質の境界である（米国特許第６，８１８，４１８号明細書）。

【0214】

これらのフィブロネクチンベースの足場は免疫グロブリンではない、ただし全体の折り畳みは、最小機能抗体断片、重鎖の可変領域と密接に関連しており、それはラクダおよびラマＩｇＧの抗原認識ユニット全体を含む。この構造のため、非免疫グロブリン抗体は、抗体と性質および親和性が類似する抗原結合特性を模倣する。これらの足場は、インビボでの抗体の親和性成熟のプロセスに似たインビトロでのループランダム化およびシャッフル戦略で使用できる。これらのフィブロネクチンベースの分子は、標準的なクローニング技術を使用して、分子のループ領域を本開示のＣＤＲと置き換えることができる足場として使用することができる。

【0215】

（ｉｉ）アンキリン―分子パートナー
このテクノロジーは、アンキリン由来のリピートモジュールを含むタンパク質を、様々なターゲットへの結合に使用できる可変領域を担持するための足場として使用することに基づいている。アンキリンリピートモジュールは、２つの反平行αヘリックスと１つのβターンからなる３３アミノ酸のポリペプチドである。可変領域の結合は、リボソームディスプレイを使用することにより、ほとんどが最適化される。

【0216】

（ｉｉｉ）マキシボディ／アビマー－Ａｖｉｄｉａ
アビマーは、ＬＲＰ－１などの天然のＡドメイン含有タンパク質に由来する。これらのドメインは、本来タンパク質間の相互作用のために使用されており、ヒトでは２５０を超えるタンパク質が構造的にＡドメインに基づいている。アビマーは、アミノ酸リンカーを介してリンクされた複数の様々な「Ａドメイン」モノマー（２～１０）で構成されている。例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７５７５６号明細書、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８５１２号明細書、および米国特許出願公開第２００６／０００８８４４号明細書に記載されている方法論を使用して、標的抗原に結合できるアビマーを作成することができる。

【0217】

（ｖｉ）プロテインＡ－アフィボディ
アフィボディ（登録商標）アフィニティーリガンドは、プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つの足場に基づく３ヘリックスバンドルで構成される小さな単純なタンパク質である。プロテインＡは、黄色ブドウ球菌の表面タンパク質である。この足場ドメインは５８個のアミノ酸で構成され、そのうち１３個がランダム化されて、多数のリガンド変異体を含むアフィボディ（登録商標）ライブラリが生成される（例えば米国特許第５，８３１，０１２号明細書を参照）。アフィボディ（登録商標）分子は抗体を模倣しており、抗体の分子量１５０ｋＤａと比較して、分子量は６ｋＤａである。サイズが小さいにもかかわらず、アフィボディ（登録商標）分子の結合部位は抗体の結合部位に似ている。

【0218】

（ｖ）アンチカリン－Ｐｉｅｒｉｓ
アンチカリン（登録商標）は、Ｐｉｅｒｉｓ ＰｒｏｔｅｏＬａｂ ＡＧ社によって開発された製品である。それらはリポカリンに由来する。リポカリンは、化学的に感受性が高い、または不溶性の化合物の生理的輸送または貯蔵に通常関与する小さく強健なタンパク質の広範な群である。いくつかの天然リポカリンは、ヒトの組織または体液に存在する。
タンパク質の構造は免疫グロブリンを連想させ、剛体のフレームワークの上部に超可変ループがある。しかし、抗体またはその組換え断片とは対照的に、リポカリンは１６０～１８０アミノ酸残基の単一のポリペプチド鎖で構成されており、単一の免疫グロブリンドメインよりわずかに大きいだけである。
結合ポケットを構成する４つのループのセットは、顕著な構造的可塑性を示し、様々な側鎖に耐える。したがって、結合部位は、高い親和性と特異性で異なる形状の処方された標的分子を認識するために、独自のプロセスで再形成することができる。

【0219】

リポカリンファミリーの１つのタンパク質であるオオモンシロチョウのビリン結合タンパク質（ＢＢＰ）は、４つのループのセットに突然変異を起こさせることによってアンチカリンを開発するために使用されている。「アンチカリン」を記載した特許出願の一例は、国際公開第１９９９／１６８７３号パンフレットである。

【0220】

（ｖｉ）アフィリン－Ｓｃｉｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
アフィリン（商標）分子は、タンパク質と小分子に対する特定の親和性のために設計された小さな非免疫グロブリンタンパク質である。新しいアフィリン（商標）分子は、２つのライブラリから非常に迅速に選択できる。各ライブラリは、異なるヒト由来の足場タンパク質に基づいている。

【0221】

アフィリン（商標）分子は、免疫グロブリンタンパク質といかなる構造的な相同性も示さない。Ｓｃｉｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓは、２つのアフィリン（商標）足場を使用する。その１つはガンマ結晶、ヒトの構造的な眼の水晶体タンパク質、もう１つは「ユビキチン」スーパーファミリータンパク質である。両方のヒトの足場は非常に小さく、高温安定性を示し、ｐＨの変化と変性剤に耐性があるに近い。この高い安定性は、主にタンパク質の拡大されたベータシート構造によるものである。ガンマ結晶由来タンパク質の例は国際公開第２００１／００４１４４号パンフレットに記載されており、「ユビキチン様」タンパク質の例は国際公開第２００４／１０６３６８号パンフレットに記載されている。

【0222】

（ｖｉｉ）タンパク質エピトープ模倣薬（ＰＥＭ）
ＰＥＭは、タンパク質の相互作用に関与する主要な二次構造であるタンパク質のベータヘアピン二次構造を模倣する、中型の環状ペプチド様分子（ＭＷ１～２ｋＤａ）である。

【0223】

抗原結合ドメインの代替フレームワークまたは足場への移植
得られるポリペプチドがＡｃｔＲＩＩＢに特異的に結合する少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワークまたは足場を使用することができる。そのようなフレームワークまたは足場は、ヒト免疫グロブリンの５つの主要なイディオタイプまたはその断片（本明細書の他の箇所で開示されるものなど）を含み、好ましくはヒト化した側面を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。この点で、ラクダ科動物で同定されたものなどの単一の重鎖抗体が特に興味深い。新規のフレームワーク、足場および断片は、当業者により発見および開発され続けている。

【0224】

一態様では、本開示の組成物は、開示された抗体のＣＤＲが移植され得る非免疫グロブリン足場を使用する非免疫グロブリンベースの抗体を含み得る。配列番号１８１の標的タンパク質に特異的な結合領域（好ましくは、配列番号１８２に示すそのリガンド結合ドメイン）を含む限り、既知または将来の非免疫グロブリンフレームワークおよび足場を使用することができる。そのような化合物は、本明細書において「標的特異的結合領域を含むポリペプチド」として知られている。非免疫グロブリンフレームワークの例については、以下のセクションでさらに説明する（ラクダ科抗体および非抗体足場）。

【0225】

フレームワークまたはＦｃ遺伝子操作
本開示の組成物に含まれる遺伝子操作された抗体には、例えば抗体の特性を改善するため、Ｖ_Hおよび／またはＶ_L内のフレームワーク残基に修飾がなされたものが含まれる。通常、このようなフレームワークの修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に「突然変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含む場合がある。そのような残基は、抗体のフレームワーク配列を、抗体が由来する生殖系列配列と比較することにより同定できる。フレームワーク領域配列を生殖系列構成に戻すために、体細胞突然変異は、例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発により、生殖系列配列に「突然変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」することができる。そのような「突然変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」抗体も本開示の組成物に含まれ得る。

【0226】

別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを伴う。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも呼ばれ、米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号明細書でさらに詳しく説明されている。

【0227】

フレームワークまたはＣＤＲ領域内で行われた修飾に加えて、または代替として、本開示の抗体は、Ｆｃ領域内に修飾を含むように遺伝子操作され、通常、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つまたは複数の機能特性を変更することができる。さらに、本開示の組成物に含まれる抗体は、化学的に修飾することができ（例えば、１つ以上の化学部分を抗体に付着させることができる）、またはそのグリコシル化を変更するために、再び抗体の１つ以上の機能特性を変更するために修飾することができる。これらの実施形態のそれぞれについて、以下でさらに詳細に説明する。Ｆｃ領域の残基の番号は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスの番号である。

【0228】

一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変化するように、例えば増加または減少するように改変される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号でさらに説明されている。ＣＨ１のヒンジ領域のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進するために、または抗体の安定性を増加または減少させるために変更される。

【0229】

別の実施形態では、抗体の生物学的半減期を減少させるために、抗体のＦｃヒンジ領域が変異される。より具体的には、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に１つ以上のアミノ酸変異を導入し、抗体が天然のＦｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較してスタフィロコクシルプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を損なうようにする。このアプローチは、米国特許第６，１６５，７４５号明細書でさらに詳細に説明されている。

【0230】

別の実施形態では、抗体はその生物学的半減期を延長するために修飾される。様々なアプローチが可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されているように、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１つ以上の変異を導入することができる。あるいは、生物学的半減期を延長するために、抗体をＣＨ１またはＣＬ領域内で変更して、米国特許第５，８６９，０４６号明細書、および米国特許第６，１２１，０２２号明細書に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むことができる。

【0231】

さらに他の実施形態では、抗体のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することにより、Ｆｃ領域が変更される。例えば、１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対して変化した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。親和性が変化するエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載され、両方ともＷｉｎｔｅｒなどによる。特に、残基２３４および２３５が変異され得る。特に、これらの変異はアラニンに対するものである可能性がある。したがって、一実施形態では、本開示の組成物に含まれる抗体は、アミノ酸２３４および２３５の一方または両方でＦｃ領域に突然変異を有する。別の実施形態では、アミノ酸２３４および２３５の一方または両方をアラニンに置換することができる。アミノ酸２３４および２３５の両方をアラニンに置換すると、ＡＤＣＣ活性が低下する。

【0232】

別の実施形態において、記載された抗体のアミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣ１ｑ結合を変更し、および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低減または廃止するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号でさらに詳細に説明されている。

【0233】

別の実施形態において、記載された抗体の１つ以上のアミノ酸残基が変更され、それにより、補体を固定する抗体の能力が変更される。このアプローチは、国際公開第９４／２９３５１号パンフレットにさらに記載されている。

【0234】

さらに別の実施形態において、記載される抗体のＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を高めるために、および／または１つ以上のアミノ酸を改変することによりＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を高めるために改変される。このアプローチは、国際公開第００／４２０７２号パンフレットでさらに説明されている。さらに、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎのヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされ、結合が改善された変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｎ．２７６：６５９１－６６０４を参照）。

【0235】

さらに別の実施形態では、本開示の組成物に含まれる抗体のグリコシル化が改変される。例えば、非グリコシル化抗体を作成することができる（すなわち、抗体はグリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を高めるために変更することができる。そのような炭水化物の修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化部位の１つまたは複数の部位を変更することにより達成することができる。例えば、１つまたは複数のアミノ酸置換を行って、１つまたは複数の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を除去し、それによりその部位のグリコシル化を除去することができる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高める可能性がある。そのようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書および第６，３５０，８６１号明細書にさらに詳細に記載されている。

【0236】

追加または代替として、フコシル残基の量が少ない低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）抗体または二分枝ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、変更されたタイプのグリコシル化を有する抗体を使用することができる。そのような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を高めることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を備えた宿主細胞で抗体を発現させることにより達成することができる。グリコシル化機構が変更された細胞は当技術分野で記載されており、開示された組換え抗体を発現し、それによりグリコシル化が変更された抗体を産生する宿主細胞として使用できる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、このような細胞株で発現した抗体が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記述している。したがって、一実施形態では、本開示の組成物に含まれる抗体は、低フコシル化パターンを示す細胞株、例えばフコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の発現が欠損した哺乳動物細胞株における組換え発現によって産生される。国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、変異体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞について記載している。それは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合炭水化物に付着する能力を低下させ、その宿主細胞で発現された抗体の低フコシル化ももたらす（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照）。国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように遺伝子操作され、遺伝子操作された細胞株で発現した抗体は、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす二分枝ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すようにする細胞株を記載している（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照）。あるいは、本開示の組成物に含まれる抗体は、哺乳動物様のグリコシル化パターン用に遺伝子操作された酵母または糸状菌で産生することができ、グリコシル化パターンとしてフコースを欠く抗体を産生することができる（例えば欧州特許第１２９７１７２Ｂ１号明細書を参照）。

【0237】

本開示により企図される本明細書の抗体の別の修飾はペグ化である。抗体をペグ化して、例えば抗体の生物学的（例えば血清）半減期を延長することができる。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は、通常、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応する。ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応によって実施することができる。本明細書で使用する場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ－またはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含することを意図している。特定の実施形態では、使用されるペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化する方法は当技術分野で知られており、開示された抗体に適用することができる（例えば、欧州特許第０１５４３１６号明細書および欧州特許第０４０１３８４号明細書を参照）。

【0238】

本開示により企図される抗体の別の修飾は、得られた分子の半減期を延長する、本開示の組成物に含まれる抗体の少なくとも抗原結合領域と、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミンまたはその断片とのコンジュゲートまたはタンパク質融合である。（例えば、欧州特許第０３２２０９４号明細書を参照）。

【0239】

別の可能性は、少なくとも本開示の組成物に含まれる抗体の抗原結合領域と、得られる分子の半減期を延長するためのヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質に結合することができるタンパク質との融合である（例えば、欧州特許第０４８６５２５号明細書を参照）。

【0240】

変更された抗体を遺伝子操作する方法
上記のように、本明細書に示されるＣＤＲ配列、Ｖ_HおよびＶ_L配列または完全長の重鎖および軽鎖の配列を有する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を使用して、ＣＤＲ配列の完全長重鎖および／または軽鎖配列、Ｖ_Hおよび／またはＶ_L配列、またはそれに付着した定常領域を改変することにより、新しい抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を作成することができる。したがって、本開示の別の態様では、本開示の組成物に含まれる抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の構造的特徴を使用して、本開示の組成物に含まれる抗体の少なくとも１つの機能特性を保持する構造的に関連する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体が作成される。例えばヒトＡｃｔＲＩＩＢへ結合するが、またＡｃｔＲＩＩＢの１つまたは複数の機能特性（例えば、Ｓｍａｄ活性化の阻害）も阻害する。

【0241】

例えば、本開示の組成物またはその突然変異に含まれる抗体の１つまたは複数のＣＤＲ領域は、上記のように、既知のフレームワーク領域および／または他のＣＤＲと組換えで組み合わせて、本開示の組成物において含まれる追加の遺伝子組換え操作で抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を作成することができる。他のタイプの修飾には、前のセクションで説明した修飾が含まれる。遺伝子操作の方法の出発材料は、本明細書で提供されるＶ_Hおよび／またはＶ_L配列の１つまたは複数、またはその１つまたは複数のＣＤＲ領域である。遺伝子操作された抗体を作成するために、本明細書で提供される１つ以上のＶ_Hおよび／またはＶ_L配列、またはその１つ以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（すなわち、タンパク質として発現する）必要はない。むしろ、配列に含まれる情報は、元の配列から派生した「第２世代」配列を作成するための出発材料として使用され、次いで「第２世代」配列が調製され、タンパク質として発現される。

【0242】

改変された抗体配列は、配列番号２９～４２および配列番号７１～８４からなる群から選択される固定ＣＤＲ３配列、または米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号明細書に記載されている最小必須結合決定因子、およびＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列において多様性を有する抗体ライブラリをスクリーニングすることによっても調製できる。スクリーニングは、ファージディスプレイ技術など、抗体ライブラリから抗体をスクリーニングするのに適した任意のスクリーニング技術に従って実行することができる。

【0243】

標準的な分子生物学技術を使用して、変更された抗体配列を調製および発現させることができる。変更された抗体配列によってコードされる抗体は、本明細書に記載の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の機能特性の１つ、いくつか、またはすべてを保持するものであり、その機能特性には、ヒトＡｃｔＲＩＩＢへの特異的結合、およびＳｍａｄ活性化の阻害が含まれるが、これに限定されない。

【0244】

変更された抗体は、上記の機能特性の１つ以上、２つ以上、または３つ以上を示し得る。

【0245】

変更された抗体の機能特性は、実施例に記載されているものなどの、当技術分野で利用可能なおよび／または本明細書に記載されている標準的なアッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）を使用して評価することができる。
突然変異は、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体コード配列の全部または一部に沿ってランダムにまたは選択的に導入でき、得られた修飾された抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、本明細書に記載の結合活性および／または他の機能特性についてスクリーニングできる。突然変異法は当技術分野で記載されている。例えば、国際公開第０２／０９２７８０号パンフレットは、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリ、またはそれらの組み合わせを使用して抗体変異を作成およびスクリーニングする方法を記載している。あるいは、国際公開第０３／０７４６７９号パンフレットは、抗体の物理化学的特性を最適化するためのコンピューターによるスクリーニング方法を使用する方法を記載している。

【0246】

本開示の組成物に含まれる抗体をコードする核酸分子
哺乳動物細胞での発現に最適化された完全長軽鎖ヌクレオチド配列の例は、配列番号１６１～１６５および１７１～１７５に示されている。哺乳動物細胞での発現に最適化された完全長重鎖ヌクレオチド配列の例は、配列番号１６６～１７０および１７６～１８０に示されている。

【0247】

核酸は、細胞全体、細胞溶解物に存在していてもよく、部分的に精製された形態または実質的に純粋な形態の核酸であってもよい。核酸は、他の細胞の成分または他の汚染物質、例えば他の細胞の核酸またはタンパク質から精製された場合に「単離」または「実質的に純粋にレンダリング」される。それは標準的な技術により、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野で周知の他のものを含む。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．１９８７ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照。標準的な分子生物学技術を使用して核酸を得ることができる。ハイブリドーマによって発現される抗体（例えば、以下でさらに説明するようにヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）については、ハイブリドーマによって作られた抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリから得られた抗体の場合（例えば、ファージディスプレイ技術を使用して）、抗体をコードする核酸は、ライブラリのメンバーである様々なファージクローンから回収できる。

【0248】

Ｖ_HおよびＶ_LセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られたら、これらのＤＮＡ断片を標準的な組換えＤＮＡ技術でさらに操作して、例えば可変領域の遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換できる。これらの操作では、Ｖ_LまたはＶ_HをコードするＤＮＡ断片は、別のＤＮＡ分子、または抗体定常領域や柔軟なリンカーなどの別のタンパク質をコードする断片に機能的にリンクされる。この文脈で使用される「機能的にリンクされる」という用語は、例えば、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように、またはタンパク質が所望のプロモーターの制御下で発現されるように、２つのＤＮＡ断片が機能的に結合されることを意味することを意図している。

【0249】

Ｖ_H領域をコードする単離されたＤＮＡは、Ｖ_HをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に機能的にリンクすることにより、完全長重鎖遺伝子に変換できる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で知られており（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．［上記］を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であり得る。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプから選択できる。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、Ｖ_HをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に機能的にリンクされ得る。

【0250】

Ｖ_L領域をコードする単離されたＤＮＡは、Ｖ_LをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に機能的にリンクすることにより、完全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換できる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で知られており（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．［上記］を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ定常領域であり得る。

【0251】

ｓｃＦｖ遺伝子を作成するには、Ｖ_HおよびＶ_LをコードするＤＮＡ断片を、柔軟なリンカーをコードする、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）₃をコードする別の断片に機能的にリンクし、Ｖ_HおよびＶ_L配列が連続した単鎖タンパク質として発現され、Ｖ_LおよびＶ_H領域が柔軟なリンカーによって結合されるようにする（例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．ＡｃａｄＳｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０ Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４を参照）。

【0252】

モノクローナル抗体の生成
モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）は、様々な技術で産生でき、例えば従来のモノクローナル抗体方法論、例えばＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎの標準体細胞ハイブリダイゼーション技術（１９７５ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５）がある。モノクローナル抗体を産生するための多くの技術は、例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは発癌性形質転換に使用できる。
ハイブリドーマを調製するための動物系はマウス系である。マウスでのハイブリドーマ産生は、十分に確立された手順である。免疫プロトコルおよび融合のための免疫脾細胞の単離のための技術は、当技術分野で公知である。融合パートナー（マウス骨髄腫細胞など）および融合手順も知られている。

【0253】

本開示の組成物に含まれるキメラまたはヒト化抗体は、上記のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから取得し、標準的な分子生物学技術を使用して非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように遺伝子操作できる。例えば、キメラ抗体を作製するために、当技術分野で公知の方法を使用して、マウス可変領域をヒト定常領域にリンクすることができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）。ヒト化抗体を作成するために、当技術分野で知られている方法を使用して、マウスＣＤＲ領域をヒトフレームワークに挿入することができる（例えば、米国特許第５２２５５３９号明細書、第５５３０１０１号明細書、第５５８５０８９号明細書、第５６９３７６２号明細書および第６１８０３７０号明細書を参照）。

【0254】

特定の実施形態では、本開示の組成物に含まれる抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。ＡｃｔＲＩＩＢに対するよう対象とされたこのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を保有するトランスジェニックまたはトランスクロモソミックマウスを使用して生成することができる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソミックマウスには、本明細書でそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと呼ばれるマウスが含まれ、本明細書では集合的に「ヒトＩｇマウス」と呼ばれる。

【0255】

ＨｕＭＡｂ ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）には、未再構成のヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座と、内因性のμおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的変異が含まれる（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－８５９を参照）。したがって、マウスはマウスＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子はクラススイッチングおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナルを生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎ．ｅｔ ａｌ．，１９９４［上記］；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９４ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．，１９９５ Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３、およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９５ Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６－５４６でのレビュー）。ＨｕＭＡｂマウスの調製および使用、ならびにそのようなマウスによって保有されるゲノム修飾は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７－６２９５；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：６４７－６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：３７２０－３７２４；Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７－１２３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９３ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：８２１－８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２－２９２０；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７９－５９１；ａｎｄ Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５－８５１にてさらに記載される。これらのすべての内容は、参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる。さらに、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、第５，５６９，８２５号明細書、第５，６２５，１２６号明細書、第５，６３３，４２５号明細書、第５，７８９，６５０号明細書、第５，８７７，３９７号明細書、第５，６６１，０１６号明細書、第５，８１４，３１８号明細書、第５，８７４，２９９号明細書、第５，７７０，４２９号明細書、および第５，５４５，８０７号明細書、同様に国際公開第９２／１０３９１８号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９７／１１３８５２号パンフレット、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、国際公開第９９／４５９６２号パンフレット、および国際公開第０１／１４４２４号パンフレットを参照。

【0256】

別の実施形態では、本開示の組成物に含まれるヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖トランス染色体を保有するマウスなどの導入遺伝子およびトランス染色体上にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウスを使用して生じさせることができる。本明細書で「ＫＭマウス」と呼ばれるそのようなマウスは、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに詳細に記載されている。

【0257】

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系が当技術分野で利用可能であり、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を産生するために使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と呼ばれる代替のトランスジェニックシステムを使用できる。そのようなマウスは、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号明細書、第６，０７５，１８１号明細書、第６，１１４，５９８号明細書、第６，１５０，５８４号明細書、および第６，１６２，９６３号明細書にて記載されている。

【0258】

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する別のトランスクロモソミック動物系が当技術分野で利用可能であり、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を産生するために使用することができる。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖トランス染色体とヒト軽鎖トランス染色体の両方を保有するマウスを使用できる。そのようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：７２２－７２７に記載されている。さらに、ヒトの重鎖および軽鎖のトランス染色体を保有するウシは、当技術分野で記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：８８９－８９４）、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体を産生するために使用できる。

【0259】

また、本開示の組成物に含まれるヒト組換え抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製することができる。ヒト抗体を単離するためのそのようなファージディスプレイ法は、当技術分野で確立されているか、以下の実施例に記載されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号明細書、第５，４０３，４８４号明細書、第５，５７１，６９８号明細書、第５，４２７，９０８号明細書、第５，５８０，７１７号明細書、第５，９６９，１０８号明細書、第６，１７２，１９７号明細書、第５，８８５，７９３号明細書、第６，５２１，４０４号明細書、第６，５４４，７３１号明細書、第６，５５５，３１３号明細書、第６，５８２，９１５号明細書、および第６，５９３，０８１号明細書を参照。

【0260】

本開示の組成物に含まれるヒトモノクローナル抗体はまた、免疫時にヒト抗体応答が生成され得るようにヒト免疫細胞が再構成されたＳＣＩＤマウスを使用して調製することもできる。そのようなマウスは、例えば、米国特許第５，４７６，９９６号明細書、および第５，６９８，７６７号明細書に記載されている。

【0261】

ヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
本開示の組成物に含まれるヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫マウスから脾細胞および／またはリンパ節細胞を単離し、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合することができる。得られたハイブリドーマは、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングすることができる。例えば、免疫マウスの脾臓リンパ球の単一細胞懸濁液を、５０％ＰＥＧで６分の１の数のＰ３Ｘ６３－Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ １５８０）に融合させることができる。細胞を平底マイクロタイタープレートに約２×１４５で播種し、その後、２０％胎児クローン血清、１８％「６５３」馴化培地、５％オリゲン（ＩＧＥＮ）、４ｍＭ Ｌ－グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０：０５５ｍＭ ２－メルカプトエタノール、５０ユニット／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシン、および１Ｘ ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは融合の２４時間後に追加）を含む選択培地で２週間インキュベートする。約２週間後、ＨＡＴをＨＴに置き換えた培地で細胞を培養できる。次いで個々のウェルは、ヒトモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングできる。広範なハイブリドーマの増殖が発生すると、通常１０～１４日後に培地を観察できる。抗体を分泌するハイブリドーマを再播種し、再度スクリーニングすることができる。ヒトＩｇＧが依然陽性の場合、モノクローナル抗体は限界希釈により少なくとも２回サブクローニングできる。その後、安定したサブクローンをインビトロで培養して、特性評価のために組織培養培地で少量の抗体を生成できる。
ヒトモノクローナル抗体を精製するには、選択したハイブリドーマをモノクローナル抗体精製用の２リットルのスピナーフラスコで成長させてもよい。プロテインＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーの前に、上清をろ過して濃縮することができる。溶出したＩｇＧは、ゲル電気泳動と高速液体クロマトグラフィーでチェックして純度を確認できる。緩衝液はＰＢＳに交換でき、濃度は１．４３の吸光係数を使用してＯＤ₂₈₀で判定できる。モノクローナル抗体を分注し、－８０℃で保存できる。

【0262】

モノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本開示の組成物に含まれる抗体は、例えば、当技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマで産生することもできる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２）。

【0263】

例えば、抗体またはその抗体断片を発現するために、部分的または完全長軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技術（例えば、目的の抗体を発現するハイブリドーマを使用したＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング）によって得ることができ、遺伝子が転写および翻訳制御配列に機能的にリンクされるように、ＤＮＡを発現ベクターに挿入することができる。この文脈において、「機能的にリンクされた」という用語は、ベクター内の転写および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を調節する意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターに連結されることを意味することを意図している。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。抗体の軽鎖遺伝子と抗体の重鎖遺伝子は、別々のベクターに挿入することができる。より一般的には、両方の遺伝子を同じ発現ベクターに挿入する。抗体遺伝子は、標準的な方法で発現ベクターに挿入される（例えば、抗体遺伝子断片とベクターの相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合は平滑末端ライゲーション）。本明細書に記載の抗体の軽鎖および重鎖可変領域を使用して、所望のアイソタイプの重鎖定常および軽鎖定常領域を既にコードしている発現ベクターに挿入することにより、任意の抗体アイソタイプの完全長抗体遺伝子を作成でき、Ｖ_Hセグメントはベクター内のＣＨセグメントに機能的にリンクされ、Ｖ_Lセグメントはベクター内のＣＬセグメントに機能的にリンクされる。追加的または代替的に、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームでリンクされるように、抗体鎖遺伝子をベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であり得る。

【0264】

抗体鎖遺伝子に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保有している。「調節配列」という用語は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー、および他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図している。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ １９９０）に記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどの要因に依存する可能性があることを当業者は理解するであろう。哺乳類宿主細胞発現の調節配列には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、およびポリオーマ）に由来するプロモーターおよび／またはエンハンサーなど、哺乳動物細胞で高レベルのタンパク質の発現を指示するウイルスの要素が含まれる。あるいは、ユビキチンプロモーターまたはＰ－グロビンプロモーターなどの非ウイルス性調節配列を使用してもよい。さらにまた、異なるソースからの配列で構成される調節の要素、例えばＳＲａプロモーターシステムで構成され、それはＳＶ４０初期プロモーターとヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長い末端反復配列由来の配列を含む（Ｔａｋｅｂｅ、Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６－４７２）。

【0265】

抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、組換え発現ベクターは、追加の配列、例えば宿主細胞のベクターの複製を調節する配列（例えば、複製の起点）および選択可能なマーカー遺伝子を保有してもよい。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号明細書、第４，６３４，６６５号明細書および第５，１７９，０１７号明細書を参照）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬剤に対する耐性を付与する。選択可能なマーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサートの選択／増幅を伴うｄｈｆｒ宿主細胞での使用）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８の選択）が含まれる。

【0266】

軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術により宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の様々な形は、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞に導入するために一般に使用される多種多様な技術を包含することを意図している。例えばエレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどがある。原核生物または真核生物宿主細胞のいずれかで本開示の抗体を発現させることは理論的に可能である。このような真核細胞、また特に哺乳動物細胞は、原核細胞よりも、適切に折りたたまれた免疫学的に活性な抗体を組み立てて分泌する可能性が高いため、真核細胞、特に哺乳類宿主細胞での抗体の発現が議論されている。抗体遺伝子の原核生物発現は、高収率の活性抗体の産生には効果がないことが報告されている（Ｂｏｓｓ，Ｍ．Ａ．ａｎｄ Ｗｏｏｄ，Ｃ．Ｒ．，１９８５ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ６：１２－１３）。

【0267】

本開示の組成物に含まれる組換え抗体を発現させるための哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ，１９８２ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されているＤＨ ＦＲ選択可能マーカーとともに使用する、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，１９８０ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が含まれる。一実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ Ｋ１ＰＤ細胞である。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞で使用するための別の発現系は、国際公開第８７／０４４６２号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレットおよび欧州特許第３３８，８４１号明細書に示されているＧＳ遺伝子発現系である。本開示の組成物に含まれる組換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞には、例えば米国特許第６，９４６，２９２Ｂ２号明細書に記載されているようなＦＵＴ８遺伝子発現を欠く哺乳動物細胞株が含まれる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されると、抗体は、宿主細胞での抗体の発現、または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより産生される。標準的なタンパク質精製法を使用して、培地から抗体を回収できる。

【0268】

イムノコンジュゲート
別の態様では、本開示は、細胞毒素、薬物（例えば、免疫抑制剤）または放射性毒素などの治療部分にコンジュゲートした抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体またはその断片を含む組成物を特徴とする。そのようなコンジュゲートは、本明細書では「イムノコンジュゲート」と呼ばれる。１つ以上の細胞毒素を含むイムノコンジュゲートは、「免疫毒素」と呼ばれる。細胞毒素または細胞毒性剤には、細胞に有害な（例えば、殺す）任意の薬剤が含まれる。

【0269】

当技術分野で利用可能なリンカー技術を使用して、細胞毒素を本開示の抗体にコンジュゲートさせることができる。細胞毒素を抗体にコンジュゲートするために使用されてきたリンカータイプの例には、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが含まれるが、これらに限定されない。例えば、リソソーム区画内の低ｐＨによる切断を受けやすい、またはカテプシン（例えば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）などの腫瘍組織で優先的に発現されるプロテアーゼなどのプロテアーゼによる切断を受けやすいリンカーを選択できる。

【0270】

細胞毒素、リンカー、および治療薬を抗体にコンジュゲートさせる方法の種類のさらなる考察については、Ｓａｉｔｏ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，２００３ Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９－２１５；Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，２００３ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８－３３７；Ｐａｙｎｅ，Ｇ．２００３ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３：２０７－２１２；Ａｌｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．，２００２ Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ２：７５０－７６３；Ｐａｓｔａｎ，Ｉ．ａｎｄ Ｋｒｅｉｔｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，２００２ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３：１０８９－１０９１；Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｊ．，２００１ Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７－２６４も参照されたい。

【0271】

本開示の組成物に含まれる抗体はまた、放射性同位体とコンジュゲートして、放射性イムノコンジュゲートとも呼ばれる細胞毒性放射性医薬品を生成することができる。診断または治療に使用するために抗体にコンジュゲートできる放射性同位体の例には、ヨウ素¹³¹、インジウム¹¹¹、イットリウム⁹⁰、およびルテチウム¹⁷⁷が含まれるが、これらに限定されない。放射性イムノコンジュゲートを調製する方法は、当技術分野で確立されている。Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）（ＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＢｅｘｘａｒ（商標）（Ｃｏｒｉｘａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む放射性イムノコンジュゲートの例は市販されており、同様の方法を使用して、本開示の抗体を使用して放射性イムノコンジュゲートを調製することができる。

【0272】

本開示の組成物に含まれる抗体コンジュゲートは、所定の生物学的応答を改変するために使用でき、薬物部分は古典的な化学治療薬に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質には、例えば、酵素的に活性な毒素、またはその活性断片、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素；タンパク質、例えば腫瘍壊死因子またはインターフェロン－γ；または、生物学的応答修飾因子、例えばリンフォカイン、インターロイキン－１（「ＩＬ－１」）、インターロイキン－２（「ＩＬ－２」）、インターロイキン－６（「ＩＬ－６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ－ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ－ＣＳＦ」）、またはその他の成長因子が含まれ得る。

【0273】

そのような治療部分を抗体にコンジュゲートさせる技術は周知であり、例えば、Ａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６ （Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３ （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ‘８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６ （１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５），ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｎｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照されたい。

【0274】

二重特異性分子
別の態様では、本開示は、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体またはその断片を含む二重特異性または多重特異性分子を含む組成物を特徴とする。本開示の組成物に含まれる抗体、またはその抗原結合領域は、別の機能性分子、例えば少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成するための別のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンド）に誘導体化されるか、リンクされ得る。本開示の抗体は、実際には、２つ以上の異なる結合部位および／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成する２つ以上の他の機能分子に誘導体化またはリンクされ得る。そのような多重特異性分子も、本明細書で使用される場合、「二重特異性分子」という用語に含まれることが意図されている。本開示の二重特異性分子を作製するために、本開示の抗体は、二重特異性分子が生じるようにする、別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合する模倣薬などの１つまたは複数の他の結合分子に機能的にリンクすることができる（例えば、化学結合、遺伝子融合、非共有結合性会合など）。

【0275】

したがって、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢに対する少なくとも１つの第１の結合特異性および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む組成物を含む。例えば、第２の標的エピトープは、第１の標的エピトープとは異なるＡｃｔＲＩＩＢの別のエピトープであってもよい。

【0276】

さらに、二重特異性分子が多重特異性である組成物の場合、分子はさらに、第１および第２の標的エピトープに加えて、第３の結合特異性を含むことができる。

【0277】

一実施形態では、開示された組成物の二重特異性分子は、結合特異性として、少なくとも１つの抗体またはその抗体断片を含む。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖを含む。抗体は、軽鎖もしくは重鎖二量体、またはその内容が参照により明示的に組み込まれているＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号明細書に記載のＦｖまたは単鎖構築物などの任意のその最小断片であってもよい。

【0278】

二重特異性分子に使用できる他の抗体は、マウス、キメラ、およびヒト化モノクローナル抗体である。

【0279】

本開示の組成物に含まれる二重特異性分子は、当技術分野で公知の方法を使用して、構成要素結合特異性をコンジュゲートすることにより調製され得る。例えば、二重特異性分子の各結合特異性は別々に生じさせ、その後互いにコンジュゲートされることができる。結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合、様々なカップリング剤または架橋剤を共有結合に使用できる。架橋剤の例には、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロハクサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）（例えばＫａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，１９８４ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，ＭＡ ｅｔ ａｌ．，１９８５ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：８６４８を参照）が挙げられる。他の方法には、Ｐａｕｌｕｓ，１９８５ Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８－１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３、および Ｇｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８７ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７－２３７５が挙げられる。コンジュゲート剤は、ＳＡＴＡおよびスルホＳＭＣＣであり、両方ともＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（イリノイ州ロックフォード）から入手可能である。

【0280】

結合特異性が抗体の場合、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲートできる。特定の実施形態では、ヒンジ領域は、コンジュゲーションの前に、奇数個、例えば１個のスルフヒドリル残基を含むように修飾される。

【0281】

あるいは、両方の結合特異性を同じベクターでコードし、同じ宿主細胞で発現および組み立てることができる。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）₂、またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に役立つ。本開示の組成物に含まれる二重特異性分子は、１つの単鎖抗体および結合決定因子を含む単鎖分子、または２つの結合決定因子を含む単鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２つの単鎖分子を含んでもよい。二重特異性分子を調製する方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号明細書；第５，４５５，０３０号明細書；第４，８８１，１７５号明細書；第５，１３２，４０５号明細書；第５，０９１，５１３号明細書；第５，４７６，７８６号明細書；第５，０１３，６５３号明細書；第５，２５８，４９８号明細書；および第５，４８２，８５８号明細書に記載されている。

【0282】

二重特異性分子の特定の標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウエスタンブロットアッセイによって確認できる。これらのアッセイのそれぞれは、一般に、関心のある複合体に特異的な標識試薬（抗体など）を使用することにより、特定の関心のあるタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。

【0283】

多価抗体
別の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩＢに結合する開示された抗体の少なくとも２つの同一または異なる抗原結合部分を含む多価抗体を含む組成物に関する。一実施形態では、多価抗体は、抗体の少なくとも２つ、３つまたは４つの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、タンパク質融合または共有結合または非共有結合を介して互いに結合することができる。あるいは、二重特異性分子について結合方法が記載されている。様々な実施形態では、組成物は、一価、二価、または多価（例えば、１つ、２つ、またはいくつかの抗原に結合することができる）、および／または単一特異性、二重特異性または多重特異性（例えば、１つ、２つ、またはいくつかの異なる抗原に結合できる結合領域を有する）であり得る。組成物は、これらの任意の組み合わせ、例えば、一価および単一特異性（１つの抗原またはエピトープに結合する１つの結合領域を有する）；または、二価および二重特異性（それぞれ異なるエピトープまたは抗原に結合する２つの結合領域を有する）；または、二価および単一特異性（それぞれが同じエピトープまたは抗原に結合する２つの結合領域を有する）；または多価および単一特異性（すべてが同じ抗原またはエピトープに結合するいくつかの結合領域を有する）；または多価および多重特異性（いくつかの異なる抗原またはエピトープに結合するいくつかの結合領域を有する）であり得る。

【0284】

医薬組成物
別の態様では、本開示は、組成物、例えば、上記の抗体／モノクローナル抗体の１つまたは組み合わせ、またはその抗原結合部分を含む、薬学的に許容される担体と共に製剤化された医薬組成物を提供する。そのような組成物は、記載された抗体、またはイムノコンジュゲートまたは二重特異性分子の１つまたは組み合わせ（例えば、２つ以上の異なるもの）を含み得る。例えば、本開示の医薬組成物は、標的抗原の異なるエピトープに結合する抗体または相補的活性を有する抗体の組み合わせを含むことができる。

【0285】

本開示の医薬組成物は、併用療法で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、少なくとも１つの他の筋肉量／強度増加剤、例えばＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２またはＩＧＦ－１またはＩＧＦ－２、抗ミオスタチン抗体、ミオスタチンプロペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢに結合するがそれを活性化しないミオスタチンデコイタンパク質、ベータ２アゴニスト、グレリンアゴニスト、ＳＡＲＭ、ＧＨアゴニスト／模倣薬またはフォリスタチンの変異体と組み合わせた本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体を含むことができる。併用療法で使用できる治療薬の例は、本開示の抗体の使用に関するセクションで以下により詳細に説明されている。

【0286】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合するいずれかのまたあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば注射または注入による）、好ましくは静脈内注射または注入に適したものであるべきである。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち抗体、イムノコンジュゲート、または二重特異性分子を材料でコーティングして、酸の作用および化合物を不活性化する可能性のある他の自然条件から化合物を保護してもよい。

【0287】

本開示の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含んでもよい。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、いかなる望ましくない毒性効果をも与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９７７ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照）。そのような塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リンなどの無毒の無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル－置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの無毒の有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、およびＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが含まれる。

【0288】

本開示の医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤を含んでもよい。薬学的に許容される抗酸化剤の例には、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤が含まれる。

【0289】

本開示の医薬組成物に用いることができる適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、植物性油、例えばオリーブ油、および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルなどが含まれる。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。

【0290】

これらの組成物はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤および分散剤のような補助剤も含み得る。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順によって、および様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含めることによって確保され得る。また、糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることが望ましい場合がある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることにより、注射可能な医薬形態の長期吸収がもたらされ得る。
薬学的に許容される担体には、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で知られている。いずれかの従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、本開示の薬学的組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物も組成物に組み込むことができる。

【0291】

治療用組成物は、典型的には、製造および保管の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば糖類、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなどの多価アルコールを組成物に含めることができる。注射可能な組成物の長期にわたる吸収は、組成物に吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによりもたらされ得る。

【0292】

滅菌注射液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて、上に列挙した薬剤の１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒に組み込み、その後に精密ろ過滅菌を行うことにより調製できる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒体および上に列挙したものから得る必要な他の薬剤を含む滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥および凍結－乾燥（凍結乾燥）であり、活性薬剤の粉末と、以前に滅菌ろ過されたその溶液から、任意の追加の所望の薬剤が得られる。

【0293】

単一の剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性剤の量は、治療される対象、および特定の投与様式に応じて変わる。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性剤の量は、一般に、治療効果を生じる組成物の量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて約０．０１パーセントから約９９パーセントの活性剤、約０．１パーセントから約７０パーセント、または約１パーセントから約３０パーセントの活性剤の範囲である。

【0294】

投与計画は、最適な望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するために調整される。例えば、治療状況の緊急性によって示されるように、単一のボーラスを投与しても、数回に分けた用量を経時的に投与しても、用量を比例的に減少または増加させてもよい。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される用量単位形態は、治療される対象の単位用量として適した物理的に別個の単位を示す。各単位は、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生み出すために計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の投与単位形態の仕様は、活性化合物の固有の特性および達成される特定の治療効果、ならびに個人の治療の感度のためのそのような活性化合物を配合する技術に固有の制限によって規定され、直接依存する。

【0295】

組成物を含む抗体の投与のために、抗体投与量は、宿主の体重の約０．０００１から約１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には約０．０１から約３０ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、約１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で約１ｍｇ／ｋｇ体重、約３ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ／ｋｇ体重である。投与は必要に応じて繰り返され、週に１回程度から１０週に１回程度、例えば４～８週に１回の範囲であり得る。しかし、状況によっては、パルス療法を利用することもできる。例えば、緊急治療室などで、心疾患の急性増悪の患者にＡｃｔＩＩ受容体アンタゴニストを１回注射する。

【0296】

投与は静脈内で行うことが好ましい。本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体、例えばビマグルマブの投与計画には、静脈内投与による４週間に１回、約１ｍｇ／ｋｇ体重または約３ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重が含まれる。

【0297】

いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上のモノクローナル抗体が本開示の組成物に含まれ、したがって同時に投与され、その場合、投与される各抗体の用量は示された範囲内に入る。通常、抗体は複数回投与される。単回投与の間隔は、例えば、毎週、毎月、３ヶ月ごと、６ヶ月ごと、または毎年であり得る。患者の標的抗原に対する抗体の血中濃度を測定することで示されるように、間隔は不規則である場合もある。いくつかの方法では、約１～約１０００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように用量を調整し、いくつかの方法では約２５～約３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成する。例えば、本開示のＡｃｔＲＩＩ抗体は、抗ミオスタチン抗体と同時に投与され得る。

【0298】

投与量と頻度は、患者の抗体の半減期によって異なる。一般に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、その後にヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。投与の用量と頻度は、治療が予防か治療かによって異なり得る。予防の適用では、比較的低頻度の投与量が長期間にわたって比較的まれな間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって治療を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が軽減または終了するまで、または患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い投与量が必要になることがある。その後、患者に予防計画を行うことができる。

【0299】

本開示の組成物に含まれる抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の「治療有効用量」の投与は、疾患の症状の重症度の低下、疾患の症状のない期間の頻度および持続期間の増加、または障害の予防または疾患の苦悩、すなわち心機能の増大による障害をもたらし得る。

【0300】

活性化合物は、移植片、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、急速な放出から化合物を保護する担体とともに調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製のための多くの方法が特許にされているか、一般に当業者に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。

【0301】

治療組成物は、当技術分野で知られている医療機器で投与することができる。

【0302】

本開示の用途と方法
本開示の組成物および開示された抗体は、心疾患の治療または心疾患に罹患した患者の状態の改善または心疾患に関連する症状の軽減に影響を及ぼすため、治療上の有用性を有する。

【0303】

本明細書で使用される場合、「対象」または「個体」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含むことを意図している。人間以外の動物には、すべての脊椎動物が含まれる。例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、および爬虫類などの哺乳類および非哺乳類が挙げられる。

【0304】

したがって、本開示は、本開示の組成物または開示されたＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えばＡｃｔＲＩＩ結合分子、より好ましくはＡｃｔＲＩＩに対する抗体、例えばビマグルマブまたはＢＹＭ３３８がＡｃｔＲＩＩの機能を阻害、すなわち拮抗し、それにより、様々なタイプの心疾患の改善をもたらす治療方法にも関する。本開示は、治療有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えば好ましくはＡｃｔＲＩＩＢ結合分子、より好ましくはＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体、例えばビマグルマブまたはＢＹＭ３３８または開示された組成物を患者に投与することを含む、心疾患を予防および／または治療する方法を提供する。

【0305】

開示された治療方法で使用できるＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えばＡｃｔＲＩＩ結合分子、好ましくはＡｃｔＲＩＩＢ、例えばビマグルマブまたはＢＹＭ３３８に対するアンタゴニスト抗体の例は、上記で詳細に開示または記載されたものである。特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ抗体（例えば、ビマグルマブまたはＢＹＭ３３８）は、本明細書で開示される本発明の組成物に含まれる。

【0306】

本開示はまた、前述のような様々な形態の心疾患を治療するための医薬品の製造における、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えばＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ受容体結合分子、好ましくはＡｃｔＲＩＩに対するアンタゴニスト抗体、例えばＢＹＭ３３８の使用に関する。

【0307】

ＡｃｔＲＩＩ結合分子、好ましくはＡｃｔＲＩＩに対するアンタゴニスト抗体、例えば、ビマグルマブまたはＢＹＭ３３８は、単独の活性剤として、または例えば他の薬物、例えばＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、またはＩＧＦ－１またはＩＧＦ－２の変異体、抗ミオスタチン抗体、ミオスタチンプロペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢに結合するが活性化しないミオスタチンデコイタンパク質、ベータ２アゴニスト、グレリンアゴニスト、ＳＡＲＭ、ＧＨアゴニスト／模倣薬またはフォリスタチンに対する補助剤として、または組み合わせて、併用して投与することができる。例えば、本開示のアンタゴニストは、国際公開第２００７／１４６６８９号パンフレットに開示されているＩＧＦ－１模倣薬と組み合わせて使用され得る。

【0308】

上記に従って、本開示は、さらなる態様において、同時の投与、例えば、同時投与、または連続的に治療的有効量のＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、好ましくはＡｃｔＲＩＩ結合分子、より好ましくはＡｃｔＲＩＩに対するアンタゴニスト抗体、例えばビマグルマブまたはＢＹＭ３３８、および少なくとも１つの第２の薬物物質を含む上記で定義された方法または使用を提供し、前記第２の薬物物質は、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２またはＩＧＦ－１またはＩＧＦ－２の変異体、抗ミオスタチン抗体、ミオスタチンプロペプチド、ＡｃｔＲＩＩに結合するがそれを活性化しないミオスタチンデコイタンパク質、ベータ２アゴニスト、グレリンアゴニスト、ＳＡＲＭ、ＧＨアゴニスト／模倣薬またはフォリスタチンである。

【0309】

キット
本発明はまた、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体結合分子（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体またはその抗原結合断片、例えば、ビマグルマブまたはＢＹＭ３３８）またはＡｃｔＲＩＩ受容体（すなわち、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体）結合分子（例えば、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体またはその抗原結合断片）（例えば、液体または凍結乾燥形態）またはＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニストを含む医薬組成物（上記）を含み得るキットを包含する。さらに、そのようなキットは、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを投与するための手段（例えば、注射器およびバイアル、事前充填済み注射器、事前充填済みペン）および使用説明書を含み得る。これらのキットは、例えば、同封のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、例えばＢＹＭ３３８と組み合わせて送達するための追加の治療薬（上記）を含んでもよい。

【0310】

「投与手段」という語句は、事前に充填されたシリンジ、バイアルとシリンジ、注射ペン、自動注射器、点滴静注とバッグ、ポンプなどを含むが、これらに限定されない、薬物を患者に全身投与するための任意の利用可能な器具を示すために使用される。そのような物品では、患者が薬物を自己投与する（すなわち、自分で薬物を投与する）か、医師が薬物を投与する場合がある。
キットの各構成要素は通常、個々の容器に入れられ、様々な容器はすべて、使用説明書とともに単一のパッケージに収められている。

【0311】

配列
表１：配列のリスト

【0312】

【表1】

【0313】

開示された方法、治療、レジメン、使用およびキットの実施形態は、ＡｃｔＲＩＩ受容体アンタゴニスト、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ結合分子を使用する。さらなる実施形態において、ＡｃｔＲＩＩＢ結合分子はＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体である。

【0314】

開示される方法、治療、レジメン、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体は、以下からなる群から選択される：ａ）配列番号１８１の配列番号アミノ酸７８～８３を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合する抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）；および
ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ－配列番号１８８）を含むＡｃｔＲＩＩＢのエピトープに結合するＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体；
（ｂ）配列番号１８１のアミノ酸７６～８４（ＧＣＷＬＤＤＦＮＣ－配列番号１８６）；
（ｃ）配列番号１８１のアミノ酸７５～８５（ＫＧＣＷＬＤＤＦＮＣＹ－配列番号１９０）；
（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ－配列番号１８９）；
（ｅ）配列番号１８１のアミノ酸４９～６３（ＣＥＧＥＱＤＫＲＬＨＣＹＡＳＷ－配列番号１８７）；
（ｆ）配列番号１８１のアミノ酸２９～４１（ＣＩＹＹＮＡＮＷＥＬＥＲＴ－配列番号１９１）；
（ｇ）配列番号１８１のアミノ酸１００～１１０（ＹＦＣＣＣＥＧＮＦＣＮ－配列番号１９２）；または
（ｈ）配列番号１８１のアミノ酸７８～８３（ＷＬＤＤＦＮ）、および配列番号１８１のアミノ酸５２～５６（ＥＱＤＫＲ）、ここで抗体は約２ｐＭのＫ_Dを有する、
からなる群から選択される。

【0315】

開示された方法、治療、レジメン、使用およびキットのいくつかの実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢに対するアンタゴニスト抗体はヒト抗体である。

【0316】

開示された方法、治療、レジメン、使用およびキットのいくつかの実施形態では、抗体はビマグルマブまたはＢＹＭ３３８である。

【0317】

本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、上記の付随する説明に記載されている。本開示の実施または試験において、本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を使用することができる。本開示の他の特徴、目的、および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかであろう。本明細書および添付の特許請求の範囲において、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、単数形は複数の指示対象を含む。別に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で引用したすべての特許および刊行物は、参照により組み込まれている。以下の実施例は、本開示をより完全に例示することを意図しており、決してその範囲を限定することを意図していない。

【実施例】

【0318】

一般的な方法論
ＡｃｔＲＩＩＢ抗体、それらの特性評価およびそれに関連する方法は、国際公開第２０１０／１２５００３号パンフレットに開示されている。その方法は、（ｉ）機能アッセイ、（ｉｉ）レポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）、（ｉｉｉ）ＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞株の培養、（ｉｖ）ミオスタチン誘導ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイ、（ｖ）特異性ＥＬＩＳＡ、（ｖｉ）ＡｃｔＲＩＩＢ／Ｆｃ－ミオスタチン結合相互作用ＥＬＩＳＡ、（ｖｉｉ）ｈＡｃｔＲＩＩＢおよびｈＡｃｔＲＩＩＡ発現細胞でのＦＡＣＳ滴定、（ｖｉｉｉ）初代ヒト骨格筋細胞への結合、（ｉｘ）表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用した、選択された抗ヒトＡｃｔＲＩＩＢ Ｆａｂの親和性測定、（ｘ）ＣＫ ＡＳＳＡＹ、（ｘｉ）動物モデル、（ｘｉｉ）治療プロトコル、（ｘｉｉｉ）統計分析、（ｘｉｉｉｉ）パニング、（ｘｖ）抗体の同定と特性評価、（ｘｖｉ）最初の親和性成熟に由来する抗体の最適化、（ｘｖｉｉ）親和性成熟ＦａｂのＩｇＧ２変換（１番目の成熟）、（ｘｖｉｉｉｉ）２番目の親和性成熟、（ｘｘ）ＩｇＧ２の変換とＩｇＧ２の特性評価（２番目の成熟）、（ｘｘｉ）インビボでのマウス研究における抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体の特性評価、（ｘｘｉｉ）ＳＥＴによる親和性の確認、（ｘｘｉｉｉ）交差遮断研究、および（ｘｘｉｖ）エピトープマッピングの詳細と技術のようなものである。

【0319】

マウスのＴＡＣ（大動脈縮窄術）実験モデルは、圧力過負荷によって誘発される心肥大および心不全の一般的に使用される実験モデルであり、例えばＲｏｃｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）およびｄｅＡｌｍｅｉｄａ ｅｔ ａｌ．（２０１０）に記載されている。それは、完全に説明されているかのように参照により本明細書に組み込まれる。

【0320】

実施例１：ＴＡＣ予防研究
材料および方法：
この研究は、ＣＤＤ８６６が確立された心不全の横行大動脈狭窄症（ＴＡＣ）マウスモデルで心機能障害の発症を防ぐかどうかを検証する。
１６週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスの次の４つの群（ｎ＝７－１０／群）は研究の一部である。
１．ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ
２．ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ
３．ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ
４．ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ

【0321】

抗体は、１週間に１回、２０ｍｇ／ｋｇで皮下投与（ＳＱ）され、最後の投与量は屠殺の＜２４時間前に投与される。

【0322】

心エコー検査が、２週間ごとに実行されている。
主要エンドポイント：ＴＡＣ後の１１週間の事前に指定されたエンドポイントまたは％短縮率（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ）（ＦＳ）＜２０％

【0323】

結果：
図１Ａ～１Ｅに示すように、ＣＤＤ８６６ Ａｂの治療は、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスで最小限の心臓への影響しかない。具体的には、図１Ａに示すように、ＣＤＤ８６６の血漿レベルの測定値から、薬物が適切に投与されたことが確認される。ＣＤＤ８６６は、心臓の質量を有意に増加させていない（図１Ｂ）。健康な野生型コントロールでは、ベースラインでの％線維化率が顕著に低かったものの、ＣＤＤ８６６は心筋線維症を減少させる（図１Ｃ）。ＰＡＳ染色された心筋の代表的な顕微鏡写真（図１Ｄ）は、心筋細胞のサイズを強調している。図１Ｅは、ＣＤＤ８６６が野生型動物の心筋細胞の大きさを有意に増加させないという所見をグラフで示している。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝対照群、アイソタイプＡｂ（ｎ＝３）。黒＝実験群、ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝３）。^*ｐ＜０．０５

【0324】

図２Ａ～２Ｄに示すように、ＣＤＤ８６６の治療は、マウスのＴＡＣ誘発性心不全を予防する。図２Ａは、収縮期機能（％ＦＳで測定）がＴＡＣ（水平線の棒）で予想通り減少するが、ＴＡＣ（対角線の棒）にさらされたＣＤＤ８６６治療動物では維持されていることをグラフで示している。図２Ｂは、１１週間のＳＨＡＭまたはＴＡＣ手術後の代表的な心エコー画像であり、ＣＤＤ８６６で治療したＴＡＣ動物の収縮機能の維持を示している。ＣＤＤ８６６治療動物では肺の重量が減少する傾向があり、肺うっ血が少ないことを示している（マウスモデルでの心不全の代理（図２Ｃ））。ＣＤＤ８６６の治療では、主要エンドポイント（生存率または％ＦＳ＜２０％）に有意な減少が見られる（図２Ｄ）。データは、平均±標準偏差として表示される。黒＝ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）。灰色＝ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）。水平線の棒＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）。対角線の棒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１（黒はＳＨＡＭ＋アイソタイプ群との比較を示し、赤はＴＡＣ＋アイソタイプ群との比較を示す。

【0325】

図３Ａ～３Ｄに示すように、ＣＤＤ８６６ Ａｂは、心不全のＴＡＣモデルで心臓ＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的にブロックする。図３（Ａ）では、測定されたＣＤＤ８６６血漿レベルは、適切に投与された薬物を示している。心臓フォリスタチン様３（ＦＳＴＬ３）の発現はＴＡＣとともに増加し、この心臓損傷モデルでは心臓ＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達が増加することを示している。ＣＤＤ８６６の治療は、心臓ＦＳＴＬ３の発現を減少させ、それがＴＡＣで誘導される心臓のＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的にブロックすることを示している（図３Ｂ）。病的心肥大遺伝子の発現は、ＣＤＤ８６６の治療により減少する（図３Ｃ）。図３Ｄに示すように、ＴＡＣ誘発性心不全の病理学的心線維症プロファイルは、ＣＤＤ８６６の治療により減少する。データは、平均±標準偏差として表示される。黒＝ＳＨＡＭ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝７）。灰色＝ＳＨＡＭ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝７）。水平線の棒＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ（ｎ＝１０）。対角線の棒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝１０）。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１（黒はＳＨＡＭ＋アイソタイプ群との比較を示し、赤はＴＡＣ＋アイソタイプ群との比較を示す。

【0326】

要約すると、（ｉ）ＣＤＤ８６６は、野生型コントロールの心臓の成長／機能に対する影響が最小限である。（ｉｉ）ＣＤＤ８６６はＴＡＣ誘発性心不全の発症を効果的に防止する。（ｉｉｉ）ＣＤＤ８６６はＴＡＣの心不全モデルにおける全生存率を改善する。

【0327】

実施例２：ＴＡＣ治療研究
材料および方法：
この研究では、ＣＤＤ８６６がＴＡＣを受けた動物の確立された心機能不全を逆転させることにより、動物を心不全から救えるかどうかを検証する。
１６週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスの次の２つの群（ｎ＝１０／群）を検証する。
ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ
ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ

【0328】

抗体治療は、％短縮率の減少が４標準偏差を超えた後にのみ開始される。

【0329】

抗体はＳＱ、２０ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ×８週間投与される（屠殺の＜２４時間前に最後の投与が行われる）

【0330】

心エコー検査が、２週間ごとに実行されている。

【0331】

主要エンドポイント：８週間治療の事前指定エンドポイントまたは％ＦＳ＜２５％

【0332】

結果：
図４Ａ～４Ｄが示すように、ＣＤＤ８６６の治療は心機能を回復させ、動物をＴＡＣ誘発性心不全から救う。測定されたＣＤＤ８６６血漿レベルは、収縮機能において適切に投与された薬物を示す（図４Ａ）。図４Ｂは、ＣＤＤ８６６の治療により心臓ＦＳＴＬ３発現が減少するという発見をグラフで示しており、心臓におけるＴＡＣ誘導性ＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的にブロックしていることを示している。ＣＤＤ８６６は、ＴＡＣ誘発性心不全の収縮機能障害を回復させ、治療後１週間という早い段階で飛躍的な改善が見られる（図４Ｃ）。ＣＤＤ８６６は、マウスモデルの心不全の代理マーカーである肺重量も減少させる（図４Ｄ）。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ。黒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１

【0333】

ＣＤＤ８６６の治療は、ＴＡＣモデルで心臓の成長を誘発する。図５Ａのグラフで示すように、壁の厚さはＣＤＤ８６６の治療で徐々に増加する（黒矢印はＲｘ開始を示す）。図５Ｂは、治療過程中の心室中部の連続エコー画像を示しており、アイソタイプ対ＣＤＤ８６６の治療動物の心臓の成長の違いを示している。図５Ｃに示すように、ＣＤＤ８６６はＴＡＣモデルで心臓の質量を増加させる。図５Ｄは、心筋細胞のサイズを強調したＰＡＳ染色心筋の顕微鏡写真を示している。ＣＤＤ８６６は、ＴＡＣの心筋細胞の成長も増加させる（図５Ｅ）。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ。黒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１

【0334】

また、結果は、ＣＤＤ８６６が心不全を保護する生理学的な心臓の成長を誘発することを示している。図６Ａは、病的肥大に関連する遺伝子の発現がＣＤＤ８６６の治療とともに減少することをグラフで示している。図６Ｂに示すように、ＣＤＤ８６６の心臓の成長と体重への影響は一時的で可逆的である。ＣＤＤ８６６の単回投与によって誘発される心機能の改善は、少なくとも６週間持続する。（図６Ｂ矢印＝単回投与のタイミング；破線＝ＣＤＤ８６６の治療なしの予想軌跡）。図６Ｃは、マッソントリクローム染色された心筋の顕微鏡写真を示している（青＝線維症、赤＝筋肉）。図６Ｄに示すように、ＣＤＤ８６６の治療では心筋線維症が減少する傾向がある。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ。黒＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１

【0335】

ＣＤＤ８６６は、図７Ａ～７Ｅに示すように、ＴＡＣを介した心不全で骨格筋の成長を誘導する。ＣＤＤ８６６は骨格筋のｐ－ＳＭＡＤ３発現を減少させ、この心不全モデルで骨格筋のＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的にブロックすることを示している（図７Ａ）。ＣＤＤ８６６は、全体の体重を徐々に増加させる。筋肉量の増加によるものと思われる（図７Ｂ）。図７Ｃは、ＣＤＤ８６６が様々な骨格筋群（ＥＤＬ、ガス、ＴＣ）の全体の質量を増加させることを示している。骨格筋細胞のサイズもＣＤＤ８６６によって増加する（図７Ｄ）。骨格筋の線維タイプの切り替えはまた、ＣＤＤ８６６によって誘導される（図７Ｅ）。赤＝ＴＡＣ＋アイソタイプＡｂ。青＝ＴＡＣ＋ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１

【0336】

要約すると、ＣＤＤ８６６は、ＴＡＣによって誘発された確立された収縮機能障害を効果的に逆転させる。ＣＤＤ８６６は、心臓の成長を促進し、心筋線維症を減少させる。データが心不全を予防する生理学的な心肥大を示す。
ＣＤＤ８６６は、心不全のＴＡＣモデルで骨格筋の成長を促進し、進行性心不全の心悪液質の改善への用途を示している。

【0337】

実施例３：ＭＨＣＦ７６４Ｌタイムポイント研究
材料および方法：
この研究では、ＣＤＤ８６６が拡張型心筋症の遺伝子モデル（ＭＨＣＦ７６４Ｌ）の心機能を改善できるかどうかを検証する。
１４～２４週齢のオスＭＨＣ Ｆ７６４Ｌ＋／－変異マウスの２つの群が研究されている：
アイソタイプＡｂ（ｎ＝３）
ＣＤＤ８６６ Ａｂ（ｎ＝３）

【0338】

抗体は、ＳＱ、２０ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ×１２週間投与される（最終投与量は、屠殺の＜２４時間前に投与される）

【0339】

心エコー検査は２週間ごとに行われる（ｑ２ｗｋ）。

【0340】

主要エンドポイント：１２週間治療の事前指定エンドポイントまたは％ＦＳ＜２０％

【0341】

結果：
ＣＤＤ８６６の遺伝性拡張型心筋症モデルでは、心臓への影響は最小限に抑えられている（ただし、ベースラインではわずかな心臓表現型のみ）。図８Ａにグラフで示すように、ＣＤＤ８６６はＭＨＣＦ７４Ｌマウスで収縮機能がわずかに増加する傾向を誘発する。図８Ｂは、ＣＤＤ８６６の治療により心臓ＦＳＴＬ３発現が減少する傾向を示しており、心臓におけるＡｃｔＲＩＩ－Ａ／Ｂシグナル伝達を効果的に遮断していることを示している。図８Ｃに示すように、病理学的肥大遺伝子発現プロファイルに有意な差は観察されていない。データは、平均±標準偏差として表示される。灰色＝アイソタイプＡｂ。黒＝ＣＤＤ８６６ Ａｂ。^*ｐ＜０．０５。＃ｐ＜０．０１。

【0342】

要約すると、収縮機能の軽度の増加がＣＤＤ８６６の治療で観察される。
心不全の遺伝子発現プロファイルに有意差は検出されていない。

【0343】

参考文献
Akpan I, Goncalves MD, Dihr R, Yin X, Pistilli E, Bogdanovich S, Khurana, T, Ucran, J, Lachey, J, Ahima, RS. The effects of a soluble activin type MB receptor on obesity and insulin sensitivity. Int J Obes (Lond) 2009 Nov; 33(1 1): 1265-1273.
deAlmeida AC, van Oort RJ, Wehrens XH. Transverse aortic constriction in mice. J Vis Exp 2010 Apr 21 ; (38). http://w w.jove.com/detaiis.php?id=1729, doi: 10.3791/1729.
Lee SJ, McPherron AC. Regulation of myostatin activity and muscle growth. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001 Jul 31 ; 98(16):9306-11.
Lee SJ, Reed LA, Davies MV, Girgenrath S, Goad ME, Tomkinson KN, Wright JF, Barker C, Ehrmantraut G, Holmstrom J, Trowell B, Gertz B, Jiang MS, Sebald SM, Matzuk M, Li E, Liang LF, Quattlebaum E, Stotish RL, Wolfman NM. Regulation of muscle growth by multiple ligands signaling through activin type II receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Dec 13; 102(50): 181 17-22.
Rebbapragada A, Benchabane H, Wrana JL, Celeste AJ, Attisano L. Myostatin signals through a transforming growth factor beta-like signaling pathway to block adipogenesis. Mol Cell Biol. 2003; 23:7230-7242.
Rockman HA, Ross RS, Harris AN, Knowlton KU, Steinhelper ME, Field LJ, Ross Jr. J, Chien KR. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc Natl Acad Sci USA. 1991 September; 88:8277-8281.
Whittemore LA, Song K, Li X, Aghajanian J, Davies M, Girgenrath S, Hill JJ, Jalenak M, Kelley P, Knight A, Maylor R, O'Hara D, Pearson A, Quazi A, Ryerson S, Tan XY, Tomkinson KN, Veldman GM, Widom A, Wright JF, Wudyka S, Zhao L, Wolfman NM. Inhibition of myostatin in adult mice increases skeletal muscle mass and strength. Biochem Biophys Res Commun. 2003 Jan 24; 300(4):965-71.

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

0007339159000001.app