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特許7339285ＴＬＲ７ペプチドコンジュゲート

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-08-28

(45)【発行日】2023-09-05

(54)【発明の名称】ＴＬＲ７ペプチドコンジュゲート

(51)【国際特許分類】

A61K 47/55 20170101AFI20230829BHJP

A61K 39/00 20060101ALI20230829BHJP

A61K 39/02 20060101ALI20230829BHJP

A61K 39/12 20060101ALI20230829BHJP

A61K 39/39 20060101ALI20230829BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20230829BHJP

A61P 31/12 20060101ALI20230829BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20230829BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20230829BHJP

C07K 2/00 20060101ALI20230829BHJP

C07D 239/49 20060101ALI20230829BHJP

【ＦＩ】

A61K47/55

A61K39/00 H

A61K39/02

A61K39/12

A61K39/39

A61P31/04

A61P31/12

A61P35/00

A61P37/04

C07K2/00 ZNA

C07D239/49 CSP

【請求項の数】 26

(21)【出願番号】P 2020567229

(86)(22)【出願日】2019-06-03

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-09-27

(86)【国際出願番号】 US2019035194

(87)【国際公開番号】W WO2019236469

(87)【国際公開日】2019-12-12

【審査請求日】2022-05-27

(31)【優先権主張番号】62/680,332

(32)【優先日】2018-06-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】519201950

【氏名又は名称】アプロスセラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本健策

(72)【発明者】

【氏名】ウー，トムヤオ－シャン

【審査官】田澤俊樹

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１３－５３８２１７（ＪＰ，Ａ）

【文献】Dong Gao et al.，"Synthesis and Evaluation of Conjugates of Novel TLR7 Inert Ligands as Self-Adjuvanting Immunopotentiators"，ACS Medicinal Chemistry Letters，2015年，Vol.6，p.249-253

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ４７／００－４７／６９

３９／００－３９／４４

Ａ６１Ｐ１／００－４３／００

Ｃ０７Ｋ１／００－１９／００

Ｃ０７Ｄ２３９／００－２３９／９６

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩

【化84】

（式中、
ペプチドは、ペプチドであって、（Ｃ＝Ｏ）が（ｉ）前記ペプチドのＮ末端、または（ｉｉ）前記ペプチドの側鎖に結合しているペプチドであり、Ｃ＝Ｏが結合している前記側鎖の官能基はＮＨ_２であり、
Ｒ^１ａはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化85】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、Ａ^２、－ＯＨおよび－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
Ｙは、結合、－ＣＨ_２－、－ＣＦ_２－、

【化86】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化87】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化88】

【化89】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化90】

【請求項2】

式（１ａ）もしくは（２ａ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化91-1】

【化91-2】

（式中、
各ＡＡは独立にアミノ酸であり、（ＡＡ）_ｑは、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している前記ペプチドであり、
ｑは８～４０の整数であり、
Ｄは、Ｈまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｅは、ＯＨまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドである）
を有する、請求項１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

式（１ｂ）もしくは（２ｂ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化92】

を有する、請求項２に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化93】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｙが－ＣＨ_２－である、
請求項１から３のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている、請求項１から４のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ^１ａが

【化94】

である、請求項１から５のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

Ｘがメチルである、請求項１から６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

ｐが３である、請求項１から７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

ｏが１である、請求項１から８のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

Ｙが－ＣＨ_２－である、請求項１から９のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

前記ペプチドが抗原である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

前記抗原が細菌抗原またはウイルス抗原である、請求項１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

前記抗原がエピトープである、請求項１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項14】

前記抗原が共有される腫瘍抗原である、請求項１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項15】

前記抗原が個別化新生抗原である、請求項１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項16】

前記ペプチドがワクチンである、請求項１から１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項17】

請求項１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。

【請求項18】

腫瘍の処置をそれを必要とする対象において行うための、請求項１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩を含む組成物、または請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

腫瘍に対してのワクチン接種をそれを必要とする対象において行うための、請求項１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩を含む組成物、または請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記腫瘍が固形腫瘍である、請求項１８または１９に記載の組成物または医薬組成物。

【請求項21】

請求項１から１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化95】

（式中、
Ｒ^１ａはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、－ＯＺ、－ＮＨＺ、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＺ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化96】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、Ａ^２、－ＯＺおよび－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＺからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
Ｙは、結合、－ＣＨ_２－、－ＣＦ_２－、

【化97】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化98】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化99】

【化100】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化101】

【請求項22】

前記ペプチドが固相に結合させられる、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記固相から前記コンジュゲートを切断するステップをさらに含む、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

治療における使用のための、請求項１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物。

【請求項25】

治療における使用のための、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項26】

医薬の製造における、請求項１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年６月４日に出願された米国仮特許出願第６２／６８０，３３２号に対する利益を主張するものである。

【0002】

本開示は、増強された免疫調節特性を有するピリミジン誘導体ペプチドコンジュゲートのクラスに関する。

【背景技術】

【0003】

さまざまなワクチンプラットフォームは、さまざまな程度の効力で免疫系の別個のアームを標的化することができる。例えば、ウイルス／核酸ワクチン（ベクター）は、ＣＤ８＋（キラー）Ｔ細胞応答を駆動するのに極めて有効である一方、サブユニットワクチンは、キラーＴ細胞の不十分な誘導物質であるが、抗体およびＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞応答の強力な誘導物質である（D'Argenio and Wilson. Immunity. 2010. 33:437-40）。ペプチドワクチンは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によるヘルパーおよび／またはキラーＴ細胞への提示のための既定のエピトープを提供するために日常的に使用されるプラットフォームである。ペプチドワクチンはまた、Ｂ細胞によって認識される線状エピトープに対する抗体応答を誘導するために使用することもできる（Winblad et al. The Lancet. 2012. 11:597-604）。

【0004】

生弱毒化微生物、核酸ベクターおよび組換えタンパク質サブユニットと比較して、ペプチドワクチンは、規定の化学構造および迅速な製造という利点を有する。しかしながら、ペプチドワクチンは通常、注射後の短い半減期のために免疫原性が不十分であり、したがって、最適なワクチン効力を達成するためにアジュバントを要する。結果として、ほとんどのワクチンが、抗原（複数可）およびアジュバントで構成され、それにより抗原がＴおよび／またはＢ細胞受容体の特異的標的を提供し、アジュバント成分が抗原特異的応答の一般的な免疫エンハンサーとして働く（O'Hagan and Valiante Nat Rev Drug Discov. 2003. 9:727-35）。

【0005】

ペプチドワクチンは、ウイルス感染症およびがんの予防および治療の文脈で最も広範囲に研究されており、キラーおよびヘルパーＴ細胞応答がこれらの疾患に対する宿主防御にとって重要である。近年、ペプチドワクチンで容易に標的化することができるＴ細胞抗原の重要なクラス（腫瘍新生抗原（neoantigen））が特定されている。次世代シーケンシング（ＮＧＳ）およびバイオインフォマティクスが、新生抗原として認識される可能性を有する腫瘍突然変異を特定するために使用されている。新生抗原の患者特異的な性質のために、個別化がんワクチンを開発するためにはエピトープの迅速な合成が必要である。よって、ペプチドベースの新生抗原ワクチンは、新たながん治療の基礎として相当な注目を集めている。科学論文が、黒色腫の患者に使用するための個別化新生抗原ワクチンを記載しており、このワクチンがヒトで免疫原性であることを示している（Wu et. al. Nature, 2017, 547, 217-221）。このワクチンでは、ポリ－ＩＣ（ＴＬＲ３アゴニスト）が、合成ペプチド抗原と混和することによってアジュバントとして使用された。
しかしながら、非共有結合的に結合したペプチド抗原とアジュバントの同時投与は、注射後の分離をもたらし得る。ペプチド抗原とアジュバントが異なる組織で濃縮し、アジュバントの免疫原性増強利益が減少する可能性がある。これにより、ペプチド抗原の有効性が減少する。ワクチンの抗原特異的応答を増強し、同時投与したアジュバントの利益を改善する化合物および方法が必要である。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【文献】D'Argenio and Wilson. Immunity. 2010. 33:437-40

【文献】Winblad et al. The Lancet. 2012. 11:597-604

【文献】O'Hagan and Valiante Nat Rev Drug Discov. 2003. 9:727-35

【文献】Wu et. al. Nature, 2017, 547, 217-221

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

一態様では、本開示は、合成ＴＬＲ７アゴニストに共有結合的にコンジュゲートしたペプチド抗原を記載する。別の態様では、ペプチドが、従来の固相ペプチド合成を使用して合成され、樹脂切断前の最後のステップでＴＬＲ７アゴニストとカップリングされる。この方法は、現在のペプチド合成に最小限の複雑性を付け加えるだけで、Ｎ末端をＴＬＲ７アゴニストで修飾した配列を提供する。本明細書に記載されるペプチドコンジュゲートは、ペプチド抗原の免疫原性を増加させる、および／または有効用量を低下させる。複数のペプチド抗原を含むワクチンでは、免疫原性増強および／または用量節約アジュバント技術によって、ワクチンの全体的な有効性、利便性および費用対効果を大いに改善することができる。典型的には、ＴＬＲアゴニストと、抗原、ワクチン、ペプチドベースの新生抗原ワクチンまたはエピトープなどのペプチドとの間に共有結合を形成することによって、ペプチドコンジュゲートが調製される。

【0008】

一態様では、本開示は、式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する

【化1】

【化2】

【化3】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化4】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化5】

【化6】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化7】

【0009】

一態様では、本開示は、ペプチドが固相合成によって調製される、本明細書に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0010】

一態様では、本開示は、本明細書に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。

【0011】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化8】

【化9】

【化10】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化11】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化12】

【化13】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化14】

【0012】

別の態様では、本開示は、治療における使用のための、本明細書に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0013】

別の態様では、本開示は、治療における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。

【0014】

別の態様では、本開示は、医薬の製造における、本明細書に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩

【化84】

（式中、
ペプチドは、ペプチドであって、（Ｃ＝Ｏ）が（ｉ）前記ペプチドのＮ末端、または（ｉｉ）前記ペプチドの側鎖に結合しているペプチドであり、Ｃ＝Ｏが結合している前記側鎖の官能基はＮＨ _２であり、
Ｒ ^１ａはＨまたはＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ _２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ _２ＣＨ _３、－ＳＣＨ _３、－ＯＣＨ _３、

【化85】

およびＡ ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸはＨまたはＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、Ａ ^２、－ＯＨおよび－Ｃ（ＣＨ _３） _２ＯＨからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
Ｙは、結合、－ＣＨ _２－、－ＣＦ _２－、

【化86】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ _２－、－ＮＨ－および－ＣＨ _２ＣＨ _２－からなる群から選択され、
Ａ ^１は、

【化87】

からなる群から選択され、
Ｌ ^１は、結合、－（ＣＨ _２） _ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ _２） _ｎ－、

【化88】

【化89】

からなる群から選択され、
Ｌ ^２は、結合、－（ＣＨ _２） _ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ _２） _ｎ－、

【化90】

【化91-1】

【化91-2】

（式中、
各ＡＡは独立にアミノ酸であり、（ＡＡ） _ｑは、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している前記ペプチドであり、
ｑは８～４０の整数であり、
Ｄは、Ｈまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｅは、ＯＨまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドである）
を有する、項目１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３）
式（１ｂ）もしくは（２ｂ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化92】

を有する、項目２に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４）
Ｒ ^１ａがＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、前記アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ _２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ _２ＣＨ _３、－ＳＣＨ _３、－ＯＣＨ _３、

【化93】

およびＡ ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸがＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、
Ｙが－ＣＨ _２－である、
項目１から３のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目５）
Ｒ ^１ａがＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ _２ＣＨ _３で置換されている、項目１から４のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目６）
Ｒ ^１ａが

【化94】

である、項目１から５のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目７）
Ｘがメチルである、項目１から６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目８）
ｐが３である、項目１から７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目９）
ｏが１である、項目１から８のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１０）
Ｙが－ＣＨ _２－である、項目１から９のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１１）
前記ペプチドが抗原である、項目１から１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１２）
前記抗原が細菌抗原またはウイルス抗原である、項目１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１３）
前記抗原がエピトープである、項目１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１４）
前記抗原が共有される腫瘍抗原である、項目１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１５）
前記抗原が個別化新生抗原である、項目１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１６）
前記ペプチドがワクチンである、項目１から１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１７）
前記ペプチドが固相合成によって調製される、項目１から１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１８）
項目１から１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
（項目１９）
腫瘍の処置をそれを必要とする対象において行う方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩、または項目１８に記載の医薬組成物を、前記それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
（項目２０）
腫瘍に対してのワクチン接種をそれを必要とする対象において行う方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩、または項目１８に記載の医薬組成物を、前記それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
（項目２１）
前記腫瘍が固形腫瘍である、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
項目１から１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化95】

（式中、
Ｒ ^１ａはＨまたはＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、－ＯＺ、－ＮＨＺ、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＺ、－ＳＯ _２ＣＨ _３、－ＳＣＨ _３、－ＯＣＨ _３、

【化96】

およびＡ ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸはＨまたはＣ _１～Ｃ _４アルキルであり、前記アルキルは、必要に応じて、Ａ ^２、－ＯＺおよび－Ｃ（ＣＨ _３） _２ＯＺからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
Ｙは、結合、－ＣＨ _２－、－ＣＦ _２－、

【化97】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ _２－、－ＮＨ－および－ＣＨ _２ＣＨ _２－からなる群から選択され、
Ａ ^１は、

【化98】

からなる群から選択され、
Ｌ ^１は、結合、－（ＣＨ _２） _ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ _２） _ｎ－、

【化99】

【化100】

からなる群から選択され、
Ｌ ^２は、結合、－（ＣＨ _２） _ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ _２） _ｎ－、

【化101】

、－［Ｏ（ＣＨ _２ＣＨ _２）］ _ｎ－、－［Ｏ（Ｃ _１～Ｃ _４アルキレン）］－、－［Ｏ（ＣＨ _２ＣＨ _２）］ _ｎ－ＯＣＨ _２ＣＨ _２ＣＦ _２－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ _２ＣＨ _２－［Ｏ（ＣＨ _２ＣＨ _２）］ _ｍ－および－Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ _２ＣＨ _２－［Ｏ（ＣＨ _２ＣＨ _２）］ _ｍ－ＯＣＨ _２ＣＨ _２ＣＦ _２－からなる群から選択され、
各Ｚは独立にＨまたは保護基であり、
ｍは０～４の整数であり、
ｎおよびｐは独立に１～４の整数であり、
ｏは０～４の整数である）
の化合物とコンジュゲートするステップを含む方法。
（項目２３）
前記ペプチドが固相に結合させられる、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記固相から前記コンジュゲートを切断するステップをさらに含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
治療における使用のための、項目１から１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２６）
治療における使用のための、項目１８に記載の医薬組成物。
（項目２７）
医薬の製造における、項目１から１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本開示の具体的な実施形態を本明細書で例示し、詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。詳細な説明は、本発明の例示として提供され、本発明のいずれの限定を構成するとも解釈されるべきではない。改変は当業者に自明であり、本発明の精神を逸脱しない全ての改変が、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることを意図している。
用語

【0016】

以下の定義は、定義される用語を明白にするものであり、限定するものではない。本明細書で使用される特定の用語が具体的に定義されていない場合、このような用語は不明確と解釈されるべきではない。むしろ、用語はその許容される意味の範囲内で使用される。

【0017】

本明細書で使用される「アルキル」という用語は、直鎖または分岐の飽和炭化水素を指す。例えば、アルキル基は、１～８個の炭素原子（すなわち、（Ｃ_１～Ｃ_８）アルキル）または１～６個の炭素原子（すなわち、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル）または１～４個の炭素原子（すなわち、（Ｃ_１～Ｃ_４）アルキル）を有することができる。

【0018】

本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される２個の一価ラジカル中心を有する直鎖または分岐の飽和炭化水素ラジカルを指す。例えば、アルキレン基は、１～８個の炭素原子、１～６個の炭素原子、または１～４個の炭素原子を有することができる。

【0019】

本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、酸素原子を通して親分子部分に結合したアルキル基を指す。

【0020】

本明細書で使用される「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって共有結合的に連結された２個またはそれよりも多いアミノ酸単位で構成される化合物を指す。ジペプチドは２個のアミノ酸残基を有し、トリペプチドは３個有し、テトラペプチドは４個有するなどである。ペプチドは、オリゴペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質を含み得る。

【0021】

本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および合成アミノ酸、ならびにＤアミノ酸およびＬアミノ酸の両方を指す。「天然アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質を典型的に形成する２０種類の主要な天然に存在するアミノ酸のいずれかを意味する。「合成アミノ酸」は、合成的に調製されたか天然源から誘導されたかに関わらず、任意の他のアミノ酸を意味する。本明細書で使用される場合、「合成アミノ酸」は、それだけに限らないが、塩、誘導体（アミドなど）および置換を含む化学的に修飾されたアミノ酸も包含する。本開示のペプチド内に含まれるアミノ酸は、特にカルボキシ末端またはアミノ末端で、メチル化、アミド化、アセチル化または他の化学基による置換によって修飾され得る。さらに、ジスルフィド結合が本開示のペプチド中に存在しても存在しなくてもよい。

【0022】

本明細書で使用される「アミノ酸残基」という用語は、ペプチド中のアミノ酸単位を指す。

【0023】

本明細書で使用される「残基」という用語は、アミノ酸がペプチド鎖に加わってペプチド結合を形成する際、Ｈ_２Ｏが放出された後に残るものを指す。

【0024】

本明細書で使用される「オリゴペプチド」という用語は、１２個超で約２０個未満のアミノ酸残基のペプチド鎖を指す。

【0025】

本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、約２０個超のアミノ酸残基のペプチド鎖を指す。

【0026】

本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、１つまたは複数のポリペプチド鎖で構成される分子を指す。

【0027】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、製剤の他の成分と適合性であり、医薬組成物のレシピエントにとって有害でない担体（複数可）、希釈剤（複数可）、賦形剤（複数可）または塩形態を指す。

【0028】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと必要に応じて混和された本開示の化合物を指す。医薬組成物は、好ましくは製造および商業化目的に適したものとなるよう環境条件に対する安定性の程度を呈する。

【0029】

本明細書で使用される場合、「有効量」、「治療量」または「有効用量」という用語は、所望の薬理学的効果または治療効果を惹起し、よって障害の有効な予防または処置をもたらすのに十分な有効成分の量を指す。障害の予防は、障害の進行を遅延させるまたは予防する、ならびに障害に関連する症状の開始を遅延させるまたは予防することによって現れ得る。障害の処置は、症状の減少または排除、障害の進行の抑制または逆転、ならびに患者の健康への任意の他の寄与によって現れ得る。

【0030】

有効用量は、患者の状態、障害の症状の重症度、および医薬組成物が投与される方法などの要因に応じて、変化し得る。典型的には、有効用量で投与されるためには、化合物は３０ｍｇ未満の量で投与される必要がある。通常、化合物は、約１ｍｇ未満～約１００μｇ未満、時折約１０μｇ～１００μｇ未満の量で投与され得る。前記有効用量は、典型的には、２４時間の期間にわたって投与される一もしくは複数用量としてまたは単一用量として投与される量を表す。ヒト患者については、化合物の有効用量が、少なくとも約１μｇ／２４時間／患者であるが、約２４００μｇ／２４時間／患者以下、通常約５００μｇ／２４時間／患者以下の量で化合物を投与することを必要とし得る。
ペプチドコンジュゲート

【0031】

一態様では、本開示は、式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩

【化15】

【化16】

【化17】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化18】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化19】

【化20】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化21】

【0032】

一部の実施形態では、本開示は、式１が、式（１ａ）もしくは（２ａ）の構造

【化22-1】

【化22-2】

（式中、
各ＡＡは独立にアミノ酸であり、（ＡＡ）_ｑは、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している前記ペプチドであり、
ｑは８～４０の整数であり、
Ｄは、Ｈまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｅは、ＯＨまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、および
Ｒ^１ａ、Ｘ、Ｙ、ｐおよびｏは式Ｉについて定義される通りである）
を有する、式１の構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0033】

一部の実施形態では、本開示は、式１ｂの構造

【化23】

（式中、ＡＡおよびｑは式１ａおよび２ａについて定義される通りであり；
Ｒ^１ａ、Ｘ、Ｙ、ｐおよびｏは式Ｉについて定義される通りである）
を有する式１ａのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0034】

一部の実施形態では、本開示は、式２ｂの構造

【化24】

（式中、ＤおよびＥは式１ａおよび２ａについて定義される通りであり；
Ｒ^１ａ、Ｘ、Ｙ、ｐおよびｏは式Ｉについて定義される通りである）
を有する式２ａのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0035】

一部の実施形態では、本開示は、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。代替実施形態では、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドの側鎖に結合しており、Ｃ＝Ｏが結合している側鎖の官能基がＮＨ_２である。

【0036】

一部の実施形態では、本開示は、アミノ酸が天然アミノ酸である、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、アミノ酸が合成アミノ酸である。一部の実施形態では、アミノ酸が天然アミノ酸または合成アミノ酸である。

【0037】

一部の実施形態では、本開示は、Ｒ^１ａがＨである、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。代替実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化25】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている。一部の実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが必要に応じて－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている。一部の実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている。より具体的な実施形態では、Ｒ^１ａが

【化26】

である。

【0038】

一部の実施形態では、本開示は、ＸがＨである、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。代替実施形態では、ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである。具体的な実施形態では、Ｘがメチルである。一部の実施形態では、ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、Ａ^２、－ＯＨおよび－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている。

【0039】

一部の実施形態では、本開示は、Ｙが－ＣＨ_２－である、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0040】

一部の実施形態では、本開示は、ｏが０である、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、ｏが１である。一部の実施形態では、ｏが２である。一部の実施形態では、ｏが３である。一部の実施形態では、ｏが４である。

【0041】

一部の実施形態では、本開示は、ｐが１である、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、ｐが２である。一部の実施形態では、ｐが３である。

【0042】

一部の実施形態では、本開示は、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化27】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており；
ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｙが－ＣＨ_２－である、
式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0043】

一部の実施形態では、本開示は、以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化28】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている；
ｂ）ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；
ｆ）ｐが３である；および
ｇ）ペプチドが抗原またはワクチンである
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0044】

一部の実施形態では、本開示は、以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている；
ｂ）ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；
ｆ）ｐが３である；および
ｇ）ペプチドが抗原またはワクチンである
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0045】

一部の実施形態では、本開示は、以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａが

【化29】

である；
ｂ）Ｘがメチルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；
ｆ）ｐが３である；および
ｇ）ペプチドが抗原またはワクチンである
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ペプチド

【0046】

本開示は、ペプチドがペプチドである、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、ペプチドがオリゴペプチドである。別の実施形態では、ペプチドがポリペプチドである。さらに別の実施形態では、ペプチドがタンパク質である。

【0047】

本開示は、ペプチドコンジュゲートのペプチドが以下：

【化30】

に示される、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。ある特定の実施形態では、ペプチドコンジュゲートのペプチドに関連する場合の「ペプチド」になされる言及は、上記の表に示されるペプチドコンジュゲートの部分を指す。

【0048】

一部の実施形態では、ペプチドが天然アミノ酸で構成される。一部の実施形態では、ペプチドが合成アミノ酸で構成される。一部の実施形態では、ペプチドが天然アミノ酸と合成アミノ酸の両方で構成される。一部の実施形態では、ペプチドが天然アミノ酸からなる。一部の実施形態では、ペプチドが合成アミノ酸からなる。一部の実施形態では、ペプチドが天然アミノ酸と合成アミノ酸の両方からなる。

【0049】

一部の実施形態では、本開示は、ペプチドが抗原である、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、抗原が細菌抗原またはウイルス抗原である。一部の実施形態では、抗原がエピトープである。一部の実施形態では、抗原が共有される腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原が個別化新生抗原である。一部の実施形態では、ペプチドがワクチンである。

【0050】

一部の実施形態では、本開示は、ペプチドが２～８０個のアミノ酸、２～４０個のアミノ酸、２～２０個のアミノ酸または２～１０個のアミノ酸で構成される、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、ペプチドが、１０～８０個のアミノ酸、１０～４０個のアミノ酸、１０～３０個のアミノ酸または１０～２５個のアミノ酸で構成される。一部の実施形態では、ペプチドが、２０～８０個のアミノ酸、２０～４０個のアミノ酸、２０～３０個のアミノ酸または２０～２５個のアミノ酸で構成される。

【0051】

一部の実施形態では、本開示は、ｑが２～８０；２～４０；２～２０；または２～１０の整数である、式１ａ、式１ｂのペプチドコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、ｑが８～８０；８～４０；８～３０；８～２０；または８～１０の整数である。

【0052】

本開示は、ＤがＨであり、Ｅが１～４０個のアミノ酸である、式２ａ、式２ｂのペプチドコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、Ｄが１～４０個のアミノ酸であり、ＥがＯＨである。一部の実施形態では、Ｄが１～２０個のアミノ酸であり、Ｅが１～２０個のアミノ酸である。一部の実施形態では、Ｄが１～３０個のアミノ酸であり、Ｅが１～１０個のアミノ酸である。一部の実施形態では、Ｄが１～１０個のアミノ酸であり、Ｅが１～３０個のアミノ酸である。
ペプチドコンジュゲートの調製

【0053】

一態様では、本開示は、ペプチドが固相合成によって調製される、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、本開示は、ペプチドとＴＬＲ７アゴニストとの間の共有結合の形成がペプチドが固相に結合されているときに起こる、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。一部の実施形態では、ペプチドとＴＬＲ７アゴニストとの間の共有結合の形成がペプチドが固相に結合されているときに起こり、得られたペプチドコンジュゲートが固相から切断される。

【0054】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化31】

（式中、
Ｒ^１ａはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルは、必要に応じて、－ＯＺ、－ＮＨＺ、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＺ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化32】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており；
ＸはＨまたはＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルは、必要に応じて、Ａ^２、－ＯＺおよび－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＺからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており；
Ｙは、結合、－ＣＨ_２－、－ＣＦ_２－、

【化33】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され；
Ａ^１は

【化34】

からなる群から選択され；
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化35】

【化36】

からなる群から選択され；
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化37】

【0055】

一部の具体的な実施形態では、３ａの式が、式３ｂの構造

【化38】

（式中、Ｒ^１ａ、Ｘ、Ｙ、ｐおよびｏは式３ａについて定義される通りである）
を有する。

【0056】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、Ｒ^１ａがＨである式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。代替実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化39】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている。一部の実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている。一部の実施形態では、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている。より具体的な実施形態では、Ｒ^１ａが

【化40】

である。

【0057】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、ＸがＨである式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。代替実施形態では、ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである。具体的な実施形態では、Ｘがメチルである。一部の実施形態では、ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、Ａ^２、－ＯＨおよび－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨからなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている。

【0058】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、Ｙが－ＣＨ_２－である式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。

【0059】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、ｏが１である式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、ｏが０である。一部の実施形態では、ｏが２である。一部の実施形態では、ｏが３である。

【0060】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、ｐが１である式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、ｐが２である。一部の実施形態では、ｐが３である。

【0061】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化41】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており；
ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり；
Ｙが－ＣＨ_２－である
式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含む方法を提供する。

【0062】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含み、式３の化合物が以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化42】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されている；
ｂ）ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；および
ｆ）ｐが３である
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、方法を提供する。

【0063】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含み、式３の化合物が以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている；
ｂ）ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；および
ｆ）ｐが３である
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、方法を提供する。

【0064】

一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式３または式３ｂの化合物とコンジュゲートするステップを含み、式３の化合物が以下の特徴：
ａ）Ｒ^１ａが

【化43】

である；
ｂ）Ｘがメチルである；
ｃ）Ｙが－ＣＨ_２－である；
ｄ）Ｃ_１～３アルコキシがＣＨ_３Ｏ－である；
ｅ）ｏが１である；および
ｆ）ｐが３である
のうちの１つ、２つもしくは３つまたはそれよりも多くを有する、方法を提供する。

【0065】

感受性または反応性基のための保護基は、一般原則または合成化学に従って必要な場合に使用されることが十分に理解される。保護基は、有機合成の標準的な方法に従って操作される（T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third edition, Wiley, New York 1999）。これらの基は、当業者に容易に明らかな方法を使用して、化合物合成の好都合な段階で除去される。方法ならびに反応条件およびその実行順序の選択は、本明細書に開示のペプチドコンジュゲートおよび化合物の調製と一致するものとする。

【0066】

一部の実施形態では、Ｚがアミノ保護基である。アミノ保護基の非限定的な例としては、９－フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、ｔ－ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、アセトアミド（Ａｃ）、トリフルオロアセトアミド、フタルアミド、ベンジルアミン（Ｂｎ）、トリフェニルメチルアミン（トリチルアミン、Ｔｒ）、ベンジリデンアミン、ｐ－トルエンスルホンアミド（Ｔｓ、トシルアミド）が挙げられる。

【0067】

一実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを固相に結合する、方法を提供する。別の実施形態では、本方法は、固相からコンジュゲートを切断するステップをさらに含む。

【0068】

コンジュゲートするステップは、ペプチドとＴＬＲ７アゴニストとの間に共有結合を形成することを含む。一実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストが低分子量分子であり、ポリマー種と対照的に「小分子」として公知である。一実施形態では、共有結合が、ペプチドのＮ末端とＴＬＲ７アゴニストの－ＣＯＯＨ基との間で形成される。別の実施形態では、共有結合が、ペプチドの側鎖とＴＬＲ７アゴニストのＣＯＯＨ基との間で形成される。より具体的な実施形態では、側鎖がアミノ基である。別の実施形態では、側鎖がリシン残基である。
医薬組成物

【0069】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物が腫瘍ワクチンである。腫瘍ワクチンは、既存の腫瘍を処置することができる、または腫瘍の発生を予防することができる。

【0070】

式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂまたは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩は、単独で使用され得るが、一般的には式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂまたは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩（有効成分）が薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と一緒に医薬組成物の形態で投与される。適切な医薬製剤の選択および調製のための従来の手順は、例えば、"Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載される。

【0071】

本開示は、本開示のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、薬学的に許容される担体がカルボキシメチルセルロース、生理食塩水、水または別の水溶液である。別の実施形態では、薬学的に許容される担体が水中０．１％～５％カルボキシメチルセルロースである。

【0072】

投与様式に応じて、医薬組成物は、約０．０５ｗｔ％～約９９ｗｔ％（重量パーセント、またはｗ／ｗ％）、さらに詳細には約０．０５ｗｔ％～約８０ｗｔ％、なおさらに詳細には約０．１０ｗｔ％～約７０ｗｔ％、一層さらに詳細には約０．１０ｗｔ％～約５０ｗｔ％の有効成分を含み、全ての重量パーセンテージは全組成物に基づく。

【0073】

本開示はまた、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と一緒に上に定義される式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂまたは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。

【0074】

本開示はさらに、本開示の医薬組成物を調製する方法であって、前に定義される式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂまたは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合するステップを含む方法を提供する。
使用方法

【0075】

ある特定の抗原に対する免疫応答は、ワクチンアジュバントとして公知である免疫増強剤の使用を通して増強することができる。免疫学的アジュバントの議論は、"Current Status of Immunological Adjuvants", Ann. Rev. Immunol., 1986, 4, pp. 369-388および"Recent Advances in Vaccine Adjuvants and Delivery Systems" by D. T. O'Hagan and N. M. Valiante, Nat. Rev. Drug Discovery, 2003, 2(9), 727-35に見出すことができる。米国特許第４，８０６，３５２号；同第５，０２６，５４３号；および同第５，０２６，５４６号の開示は、特許文献に現れるさまざまなワクチンアジュバントを記載している。これらの参考文献の各々が、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0076】

本開示は、本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートを単独でまたは他の薬剤と組み合わせて投与することによって、ワクチンを投与する方法を提供する。別の実施形態では、合成ペプチド、細菌抗原またはウイルス抗原などの供給源からの抗原エピトープを含む本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートの投与が、免疫応答をもたらす。他の実施形態では、本開示は、前記１つまたは複数の抗原に対する細胞媒介応答を刺激するのに有効な本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートを含む免疫原性組成物を提供する。

【0077】

別の態様では、本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートの使用は、抗原用量節約効果をもたらす。抗原用量節約効果において、より低い抗原用量で同じまたは類似の抗原有効性が得られる。これはまた、抗原の有効用量が低下することを意味する。これは、不十分な溶解度を有する抗原にとって要因である。不十分な溶解度によって制限される抗原は、抗原が良好な溶解度を有し、より生物学的に利用可能である場合よりも高い抗原用量を要求し得る。溶解性に乏しい抗原をコンジュゲートして式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂに開示されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩に到達することによって、より低用量で同じまたは類似の抗原有効性を得ることができる。例えば、２０個またはそれよりも多いペプチドを含む、プールされた新生抗原ワクチンの製剤は、ペプチドの不十分な溶解度によって制限される。ペプチド部分がプールされた新生抗原ワクチンを含む、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩は、より高用量で投与されるコンジュゲートされていないプールされた新生抗原ワクチンと同じまたは類似の有効性を達成し得る。一実施形態では、ペプチドが抗原である本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートの使用は、コンジュゲートされていない抗原と比較して、抗原の有効用量を低下させる。別の実施形態では、ペプチドが抗原である本明細書に開示されるペプチドコンジュゲートの使用は、コンジュゲートされていない抗原と比較して、抗原の免疫原性を増加させる。

【0078】

それを必要とする対象において障害を処置する方法における使用のための、式Ｉ、式１ａ、式２ａ、式１ｂもしくは式２ｂのペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、あるいは前記ペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩のいずれかを含む医薬組成物が本明細書でさらに提供される。本明細書で提供される方法および使用の一部の実施形態では、障害が腫瘍である。

【0079】

一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍を処置する方法であって、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。

【0080】

別の態様では、本開示は、腫瘍に対してのワクチン接種をそれを必要とする対象において行う方法であって、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。

【0081】

本明細書で使用される固形腫瘍は、通常は嚢胞も液体領域も含まない組織の異常な塊を指す。固形腫瘍は良性または悪性であり得る。固形腫瘍は、いくつかの場所、例えば、骨、筋肉および臓器に生じ得る。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫およびリンパ腫である。肉腫は、血管、骨、脂肪組織、靭帯、リンパ管、筋肉または腱の腫瘍である。肉腫には、ユーイング肉腫および骨肉腫が含まれ、これらは共に骨がん肉腫である。横紋筋肉腫は、筋肉に見られる軟部組織肉腫である。癌腫は、上皮細胞に形成する腫瘍である。上皮細胞は、皮膚、腺および臓器の裏層に見られる。これらの臓器には、膀胱、尿管および腎臓の一部が含まれる。１つの一般的な癌腫は副腎皮質癌である。一般的な小児科固形腫瘍がんには、脳腫瘍、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、骨肉腫およびユーイング肉腫が含まれる。

【0082】

一部の実施形態では、腫瘍が固形腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍が、副腎皮質腫瘍、胞状軟部肉腫、癌腫、軟骨肉腫、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、卵黄嚢腫瘍、類上皮血管内皮腫、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍（固形腫瘍）、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎腫、神経芽細胞腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫（ＮＲＳＴＳ）、骨肉腫、傍脊柱肉腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫およびウィルムス腫瘍からなる群から選択される。

【0083】

一部の実施形態では、腫瘍が固形腫瘍ではない。

【0084】

別の態様では、本開示は、治療における使用のための、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

【0085】

別の態様では、本開示は、治療における使用のための、本明細書に記載される医薬組成物を提供する。

【0086】

別の態様では、本開示は、医薬の製造における、本明細書に記載されるペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
例示的な実施形態

【0087】

実施形態Ｉ－１．式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩

【化44】

【化45】

【化46】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化47】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化48】

【化49】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化50】

【0088】

実施形態Ｉ－２．式（１ａ）もしくは（２ａ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化51】

（式中、
各ＡＡは独立にアミノ酸であり、（ＡＡ）_ｑは、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している前記ペプチドであり、
ｑは８～４０の整数であり、
Ｄは、Ｈまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｅは、ＯＨまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドである）
を有する、実施形態Ｉ－１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0089】

実施形態Ｉ－３．式（１ｂ）もしくは（２ｂ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化52】

を有する、実施形態Ｉ－２に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0090】

実施形態Ｉ－４．Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化53】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｙが－ＣＨ_２－である、
実施形態Ｉ－１からＩ－３のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0091】

実施形態Ｉ－５．Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている、実施形態Ｉ－１からＩ－４のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0092】

実施形態Ｉ－６．Ｒ^１ａが

【化54】

である、実施形態Ｉ－１からＩ－５のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0093】

実施形態Ｉ－７．Ｘがメチルである、実施形態Ｉ－１からＩ－６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0094】

実施形態Ｉ－８．ｐが３である、実施形態Ｉ－１からＩ－７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0095】

実施形態Ｉ－９．ｏが１である、実施形態Ｉ－１からＩ－８のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0096】

実施形態Ｉ－１０．Ｙが－ＣＨ_２－である、実施形態Ｉ－１からＩ－９のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0097】

実施形態Ｉ－１１．前記ペプチドが抗原である、実施形態Ｉ－１からＩ－１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0098】

実施形態Ｉ－１２．前記抗原が細菌抗原またはウイルス抗原である、実施形態Ｉ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0099】

実施形態Ｉ－１３．前記抗原がエピトープである、実施形態Ｉ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0100】

実施形態Ｉ－１４．前記抗原が共有される腫瘍抗原である、実施形態Ｉ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0101】

実施形態Ｉ－１５．前記抗原が個別化新生抗原である、実施形態Ｉ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0102】

実施形態Ｉ－１６．前記ペプチドがワクチンである、実施形態Ｉ－１からＩ－１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0103】

実施形態Ｉ－１７．前記ペプチドが固相合成によって調製される、実施形態Ｉ－１からＩ－１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0104】

実施形態Ｉ－１８．実施形態Ｉ－１からＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。

【0105】

実施形態Ｉ－１９．実施形態Ｉ－１からＩ－１６のいずれか一項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化55】

【化56】

【化57】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化58】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化59】

【化60】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化61】

【0106】

実施形態Ｉ－２０．前記ペプチドが固相に結合させられる、実施形態Ｉ－１９に記載の方法。

【0107】

実施形態Ｉ－２１．前記固相から前記コンジュゲートを切断するステップをさらに含む、実施形態Ｉ－２０に記載の方法。

【0108】

実施形態Ｉ－２２．治療における使用のための、実施形態Ｉ－１からＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0109】

実施形態Ｉ－２３．治療における使用のための、実施形態Ｉ－１８に記載の医薬組成物。

【0110】

実施形態Ｉ－２４．医薬の製造における、実施形態Ｉ－１からＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【0111】

実施形態ＩＩ－１．式Ｉの構造を有するペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩

【化62】

【化63】

【化64】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化65】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化66】

【化67】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化68】

【0112】

実施形態ＩＩ－２．式（１ａ）もしくは（２ａ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化69】

（式中、
各ＡＡは独立にアミノ酸であり、（ＡＡ）_ｑは、（Ｃ＝Ｏ）がペプチドのＮ末端に結合している前記ペプチドであり、
ｑは８～４０の整数であり、
Ｄは、Ｈまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｅは、ＯＨまたはアミノ酸または２～４０個のアミノ酸を含むペプチドである）
を有する、実施形態ＩＩ－１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0113】

実施形態ＩＩ－３．式（１ｂ）もしくは（２ｂ）、またはその薬学的に許容される塩の構造

【化70】

を有する、実施形態ＩＩ－２に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0114】

実施形態ＩＩ－４．Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、前記アルキルが、必要に応じて、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨＡｃ、－ＣＯＯＨ、－ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＳＣＨ_３、－ＯＣＨ_３、

【化71】

およびＡ^１からなる群から選択される１～３個の置換基で置換されており、
ＸがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、
Ｙが－ＣＨ_２－である、
実施形態ＩＩ－１からＩＩ－３のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0115】

実施形態ＩＩ－５．Ｒ^１ａがＣ_１～Ｃ_４アルキルであり、アルキルが－ＳＯ_２ＣＨ_３で置換されている、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－４のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0116】

実施形態ＩＩ－６．Ｒ^１ａが

【化72】

である、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－５のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0117】

実施形態ＩＩ－７．Ｘがメチルである、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0118】

実施形態ＩＩ－８．ｐが３である、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0119】

実施形態ＩＩ－９．ｏが１である、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－８のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0120】

実施形態ＩＩ－１０．Ｙが－ＣＨ_２－である、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－９のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0121】

実施形態ＩＩ－１１．前記ペプチドが抗原である、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0122】

実施形態ＩＩ－１２．前記抗原が細菌抗原またはウイルス抗原である、実施形態ＩＩ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0123】

実施形態ＩＩ－１３．前記抗原がエピトープである、実施形態ＩＩ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0124】

実施形態ＩＩ－１４．前記抗原が共有される腫瘍抗原である、実施形態ＩＩ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0125】

実施形態ＩＩ－１５．前記抗原が個別化新生抗原である、実施形態ＩＩ－１１に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0126】

実施形態ＩＩ－１６．前記ペプチドがワクチンである、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１０のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0127】

実施形態ＩＩ－１７．前記ペプチドが固相合成によって調製される、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0128】

実施形態ＩＩ－１８．実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。

【0129】

実施形態ＩＩ－１９．腫瘍の処置をそれを必要とする対象において行う方法であって、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩、または実施形態ＩＩ－１８に記載の医薬組成物を、前記それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。

【0130】

実施形態ＩＩ－２０．腫瘍に対してのワクチン接種をそれを必要とする対象において行う方法であって、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、もしくはその薬学的に許容される塩、または実施形態ＩＩ－１８に記載の医薬組成物を、前記それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。

【0131】

実施形態ＩＩ－２１．前記腫瘍が固形腫瘍である、実施形態ＩＩ－１９または２０に記載の方法。

【0132】

実施形態ＩＩ－２２．実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を作製する方法であって、ペプチドを、式（３ａ）

【化73】

【化74】

【化75】

、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ_２－、－ＮＨ－および－ＣＨ_２ＣＨ_２－からなる群から選択され、
Ａ^１は、

【化76】

からなる群から選択され、
Ｌ^１は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化77】

【化78】

からなる群から選択され、
Ｌ^２は、結合、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_ｎ－、

【化79】

【0133】

実施形態ＩＩ－２３．前記ペプチドが固相に結合させられる、実施形態Ｉ－２２に記載の方法。

【0134】

実施形態ＩＩ－２４．前記固相から前記コンジュゲートを切断するステップをさらに含む、実施形態Ｉ－２３に記載の方法。

【0135】

実施形態ＩＩ－２５．治療における使用のための、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。

【0136】

実施形態ＩＩ－２６．治療における使用のための、実施形態Ｉ－１８に記載の医薬組成物。

【0137】

実施形態ＩＩ－２７．医薬の製造における、実施形態ＩＩ－１からＩＩ－１７のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩の使用。

【実施例】

【0138】

以下の実施例は本開示を例示するために提供され、これを限定するものと解釈されるべきでない。これらの実施例では、別段の指示がない限り、全ての部およびパーセンテージは重量による。実施例中の略語を以下に述べる。

【表1】

化学合成実施例
（合成実施例１）
ペプチドコンジュゲートにおける使用のための、ＴＬＲ７アゴニスト、化合物１の合成
（実施例１ａ）
ＴＬＲ７アゴニスト、化合物１の合成

【0139】

この実施例は、化合物１、（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルスルホニル）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）酢酸の調製を記載する。いったん得られたら、このＴＬＲ７アゴニストを、任意のアミノ酸のアルファ－アミノ基またはリシンの側鎖アミノ基上にコンジュゲートすることができる。

【化80】

ステップ１：メチル３－ヒドロキシ－２－メチレンブタノエート

【0140】

１：１ジオキサン／水（８．５Ｍ）中アクリル酸メチル（１．０当量）、アセトアルデヒド（３．０当量）およびＤＡＢＣＯ（１．０当量）の混合物をｒ．ｔ．で一晩撹拌した。混合物をＤＣＭ／水に分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（溶離液ＰＥ／ＥＡ＝１００：１～２：１）によって精製して、標題化合物を得た。
ステップ２：メチル２－（５－（シアノメチル）－２－メトキシベンジル）－３－オキソブタノエート

【0141】

ＭｅＣＮ（０．４４Ｍ）中２－（３－ブロモ－４－メトキシフェニル）アセトニトリル（１．０当量）、メチル３－ヒドロキシ－２－メチレンブタノエート（２．０当量）、ＰｄＣｌ_２（Ｐ（ｏ－ｔｏｌ）_３）_２（０．０３当量）、ＴＥＡ（２．０当量）の混合物を７０℃で一晩撹拌した。混合物をＥＡ／水に分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィー（溶離液ＰＥ／ＥＡ＝１００：１～２：１）によって精製して、標題化合物を得た。
ステップ３：２－（３－（（２－アミノ－４－ヒドロキシ－６－メチルピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル

【0142】

メチル２－（５－（シアノメチル）－２－メトキシベンジル）－３－オキソブタノエート（１．０当量）、ＭｅＯＨ（０．４６Ｍ）中炭酸グアニジン（１．０当量）の混合物を６５℃で一晩撹拌した。ｒ．ｔ．に冷却した後、反応混合物を濾過した。濾過ケークを真空下で乾燥させて、標題化合物を得た。
ステップ４：２－（３－（（２－アミノ－４－クロロ－６－メチルピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル

【0143】

２－（３－（（２－アミノ－４－ヒドロキシ－６－メチルピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル（１．０当量）のＰＯＣｌ_３（０．９Ｍ）中溶液を、Ｎ_２下１００℃で１６時間撹拌した。反応混合物をｒ．ｔ．に冷却し、ＰＯＣｌ_３を減圧下で蒸発させた。残渣を水で希釈した。固体ＮａＨＣＯ_３を添加することによって、ｐＨ値を８に調整した。次いで、混合物を５０℃で１時間撹拌し、ｒ．ｔ．に冷却し、沈殿を濾過によって回収した。濾過ケークを水で洗浄し、真空中で乾燥させて、標題化合物を白色固体として得た。
ステップ５：（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルチオ）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル

【0144】

ＮＭＰ（１．７Ｍ）中２－（３－（（２－アミノ－４－クロロ－６－メチルピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル（１．０当量）および（Ｓ）－１－（メチルチオ）ヘプタン－３－アミン（１．５当量）の混合物を、窒素下１２０℃で１６時間撹拌した。混合物を水で希釈し、水相をＥＡで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０：１）によって精製して、標題化合物を黄色固体として得た。
ステップ６：（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルスルホニル）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル

【0145】

（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルチオ）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル（１当量）の１：１：１ＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（０．２Ｍ）中溶液に、ｒ．ｔ．でオキソン（１．２当量）を小分けで添加した。反応物をｒ．ｔ．で２時間撹拌し、次いで、ＤＣＭで希釈した。有機層を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、淡黄色固体を得て、これを次のステップに直接使用した。
ステップ７：（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルスルホニル）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）酢酸

【0146】

（Ｓ）－２－（３－（（２－アミノ－４－メチル－６－（（１－（メチルスルホニル）ヘプタン－３－イル）アミノ）ピリミジン－５－イル）メチル）－４－メトキシフェニル）アセトニトリル（１．０当量）の１：１ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（０．１Ｍ）中溶液に、ＫＯＨ（７．５当量）を添加した。反応物を１２０℃で４時間撹拌した。溶媒を除去し、ＨＣｌを添加してｐＨ９を達成した。混合物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＮＨ_３．Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ）によって精製して、標題化合物１を淡黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４７９．３
¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.16 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.30-4.22 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.77-3.68 (m, 2H), 3.32 (s, 2H), 2.91-2.70 (m, 5H), 2.32 (s, 3H), 2.08-1.95 (m, 1H), 1.81-1.69 (m, 1H), 1.56-1.05 (m, 6H), 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
（実施例１ｂ）
化合物中間体（Ｓ）－１－（メチルチオ）ヘプタン－３－アミンの合成

【0147】

以下のスキームは、上記のＴＬＲ７アゴニスト（化合物１）の調製に使用される、化合物中間体（Ｓ）－１－（メチルチオ）ヘプタン－３－アミンの合成を記載する。

【化81】

ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－ヘプタ－２－エノエート

【0148】

ペンタナール（１．０当量）およびＴＨＦ（１Ｍ）中ｔｅｒｔ－ブチル２－（トリフェニル－λ^５－ホスファニリデン）アセテート（１．０５当量）の混合物を５０℃で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、ＰＥを添加した。固体を濾別し、濾液を蒸発乾固した。粗残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ～ＰＥ／ＥＡ＝１００：１）によって精製して、標題化合物を黄色油状物として得た。
ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－３－（ベンジル（（Ｓ）－１－フェニルエチル）アミノ）ヘプタノエート

【0149】

－７８℃の（Ｓ）－Ｎ－ベンジル－１－フェニルエタン－１－アミン（１．３当量）のＴＨＦ（０．９Ｍ）中溶液に、２．５Ｍｎ－ＢｕＬｉ（１．２当量）を２０分間にわたって滴加した。混合物を－７８℃で１０分間撹拌し、次いで、ＴＨＦ（０．７Ｍ）中ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－ヘプタ－２－エノエート（１．０当量）を滴加した。得られた混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、次いで、ＮＨ_４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥＡで抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ～ＰＥ／ＥＡ＝１００：１）によって精製して、標題化合物を黄色油状物として得た。
ステップ３：（Ｓ）－３－（ベンジル（（Ｓ）－１－フェニルエチル）アミノ）ヘプタン－１－オール

【0150】

０℃のｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－３－（ベンジル（（Ｓ）－１－フェニルエチル）アミノ）ヘプタノエート（１．０当量）の無水ＴＨＦ（０．４Ｍ）中溶液に、ＬｉＡｌＨ_４（１．６当量）を少しずつ添加した。添加後、混合物をｒ．ｔ．で５時間撹拌した。混合物を１．０ＭＮａＯＨ溶液でクエンチし、濾過し、濾液をＥＡで抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ～ＰＥ／ＥＡ＝５：１）によって精製して、標題化合物を黄色油状物として得た。
ステップ４：（Ｓ）－３－アミノヘプタン－１－オール

【0151】

（Ｓ）－３－（ベンジル（（Ｓ）－１－フェニルエチル）アミノ）ヘプタン－１－オール（１．０当量）のＭｅＯＨ（０．１Ｍ）中溶液を、Ｈ_２雰囲気下、Ｐｄ／Ｃ（１０％ｗｔ）の存在下で、５０℃で４８時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を褐色油状物として得た。
ステップ５：ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－ヒドロキシヘプタン－３－イル）カルバメート

【0152】

０℃の（Ｓ）－３－アミノヘプタン－１－オール（１．０当量）の１：１ジオキサン／Ｈ_２Ｏ（０．５Ｍ）中溶液に、ＮａＯＨ（１．２当量）およびＢｏｃ_２Ｏ（１．２当量）を添加し、ｒｔに加温した。反応が完了した後、混合物をＨ_２Ｏ／ＥＡに分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ～ＰＥ／ＥＡ＝３：１）によって精製して、標題化合物を白色固体として得た。
ステップ６：（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプチルメタンスルホネート

【0153】

ＤＣＭ（０．４Ｍ）中ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－ヒドロキシヘプタン－３－イル）カルバメート（１．０当量）およびＴＥＡ（１．２当量）の混合物に塩化メタンスルホニル（１．１当量）を滴加し、０℃で１時間撹拌した。得られた混合物をＥＡと水に分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、標題化合物を褐色油状物として得た。
ステップ７：ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（メチルチオ）ヘプタン－３－イル）カルバメート

【0154】

ＤＭＦ（０．７Ｍ）中（Ｓ）－３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプチルメタンスルホネート（１．０当量）およびＭｅＳＮａ（２．０当量）の混合物を７０℃で１６時間撹拌した。得られた混合物をＥＡと水に分配した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＰＥ～ＰＥ／ＥＡ＝１０：１）によって精製して、標題化合物を黄色がかった油状物として得た。
ステップ８：（Ｓ）－１－（メチルチオ）ヘプタン－３－アミン

【0155】

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（メチルチオ）ヘプタン－３－イル）カルバメート（１．０当量）のＤＣＭ（０．５Ｍ）中溶液に、過剰な４ＭＨＣｌ／ジオキサン（１／３体積当量）を添加した。得られた混合物をｒ．ｔ．で１６時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣をＥｔ_２Ｏで粉砕し、沈殿した固体を濾過によって回収して、標題化合物を白色固体（ＨＣｌ塩）として得た。LC-MS: [M+H]⁺= 162 ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.43 (br s, 3H), 3.41-3.38 (m, 1H), 2.71 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.11-2.03 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.82-1.66 (m, 2H), 1.52-1.32 (m, 4H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
（合成実施例２）
ＴＬＲ７アゴニストとアミノ酸のコンジュゲーション

【0156】

この実施例は、ＨＡＴＵ化学を使用した、ＴＬＲ７アゴニストである化合物１（合成実施例１）とアラニンのアルファ－アミノ基のコンジュゲーションを実証する。

【化82】

【0157】

化合物１（１．０当量）のＤＭＦ（０．０４Ｍ）中溶液に、室温でエチルＬ－アラニネート塩酸塩（１．０当量）、ヘキサフルオロホスフェートアザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ、２．０当量）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、４．０当量）を添加した。反応物を窒素下で４時間撹拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。粗生成物を２：１ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（０．０４Ｍ）に溶解し、過剰なＮａＯＨ（３０．０当量）を添加した。反応物を８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＮＨ_３／ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）によって精製して、標題化合物を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋１］^＋＝５５０
¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.18 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J =8.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.45-4.35 (m, 1H), 4.17-4.11 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.01-2.80 (m, 5H), 2.32 (s, 3H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.92-1.83 (m, 1H), 1.58-1.44 (m, 2H), 1.32-1.05 (m, 7H) , 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
（合成実施例３）
ＴＬＲ７アゴニストとアミノ酸側鎖のコンジュゲーション

【0158】

この実施例は、ＮＨＳエステル化学を使用した、ＴＬＲ７アゴニストである化合物１（合成実施例１）とリシンの側鎖アミノ基のコンジュゲーションを実証する。

【化83】

【0159】

化合物１（１．０当量）のＤＭＦ（０．３６Ｍ）中溶液および１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２当量）に、ｒ．ｔ．でＤＣＣ（２．０当量）を添加した。反応物を窒素下ｒ．ｔ．で１６時間撹拌した。固体を濾別した。濾液をＥＡで希釈し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、ＮＨＳエステルを得た。ＮＨＳエステルを、ｒ．ｔ．で２：１Ｈ_２Ｏ／ＴＨＦ中アセチル－Ｌ－リシン（１５当量）と反応させた。反応は急速に進行し、５分以内に完了した。混合物を分取ＨＰＬＣ（移動相：ＮＨ_３／ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ）によって精製して、標題化合物を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ：［Ｍ＋１］^＋＝６４９
¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.18 (dd, J = 8.4 Hz 2.0 Hz, 1H), 6.97 (d, J =8.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.46-4.40 (m, 1H), 4.23 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.20-2.80 (m, 7H), 2.29 (s, 3H), 2.15-201 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.95-1.69 (m, 3H), 1.62-1.05 (m, 10H), 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
（合成実施例４）
ペプチドコンジュゲーション

【0160】

この実施例は、マウスエピトープおよび合成実施例１に記載されるＴＬＲ７アゴニスト（化合物１）に基づくペプチドコンジュゲートの調製を記載する。
１．ペプチド配列

【0161】

以下は、ペプチドコンジュゲートに使用される１２個のＢａｌｂ／ｃＨ－２^ｄエピトープのリストである。エピトープはＩＥＤＢ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ）から予測される。

【表2】

1) マウスMHC複合体はH-2と呼ばれる
2) 3つのMHCクラスI遺伝子座: H-2D、H-2KおよびH-2Lが存在する
3) 2つのMHCクラスII遺伝子座: H-2IAおよびH-2IEが存在する
4) 遺伝子が多型であるので、対立遺伝子は上付き文字で示される(例えば、Balb/cのH-2D^d)
5) 近交系マウスは、全ての遺伝子座について同じ対立遺伝子名を有する(例えば、Balb/cについてH-2^d)
6) 全ての系統が全ての遺伝子座を有するわけではない(例えば、C57 Black/6はH-2D^b、H-2K^bおよびH-2IE^bのみを有する)。これらは他の対立遺伝子についてヌルである
7) 最小エピトープは太字で強調される(クラスIIエピトープは通常、クラスIエピトープよりも長い)
２．ペプチドコンジュゲーション

【0162】

全てのペプチド合成が、標準的な固相ペプチド法に従った。示される具体的な配列については、Ｆｍｏｃ化学を使用し、カップリング試薬はＨＢＴＵとした。化合物１のコンジュゲーションを樹脂切断の直前にＮ末端で行った。例として、コンジュゲーションステップに使用される条件は、以下である：
・１～２当量の合成実施例１からの化合物１
・等しい当量のＨＢＴＵ
・溶媒はＤＭＦである
・反応はｒ．ｔ．で一晩行われる
・樹脂切断後の純度は８０％超である。

【0163】

ペプチドコンジュゲートを、Ｃ１８カラムを使用して分取ＨＰＬＣによって精製した。移動相は、ＡにおいてＢを増加させる適切な勾配からなる（Ａ＝Ｈ_２Ｏ中０．０５％ＴＦＡ；Ｂ＝ＣＨ_３ＣＮ中０．０５％ＴＦＡ）。ペプチドおよびコンジュゲートされたペプチドの特性評価を以下に示す：

【表3-1】

【表3-2】

^ａ（＊）は、ＴＬＲ７アゴニストである化合物１（合成実施例１）のペプチドコンジュゲートを示す
^ｂ分析的ＨＰＬＣはＣ１８カラムで構成さ、移動相勾配０～８０％、０．０５％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏにおける０．０５％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ
^c質量分析データはApplied Biosystem Voyager 1099(正極性)で収集した
生物学的実施例
（生物学的実施例１）
ＨＥＫＴＬＲ７アッセイ

【0164】

この実施例は、ＴＬＲ７アゴニストである化合物１が、アミノ酸とのコンジュゲーション（合成実施例２および３に記載されるコンジュゲート）後でさえＴＬＲ７アゴニスト活性を維持することを実証する。

【0165】

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＴＬＲ７細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（サンディエゴ、カリフォルニア）から購入した。以下の説明は製品情報シートから取った。

【0166】

「ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ７細胞は、ＮＦ－ｋＢの活性化をモニタリングすることによって、ヒトＴＬＲ７（ｈＴＬＲ７）の刺激を試験するために設計されている。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＴＬＲ７細胞は、ｈＴＬＲ７遺伝子および最適化分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子のＨＥＫ２９３細胞へのコトランスフェクションによって得られた。ＳＥＡＰレポーター遺伝子は、５つのＮＦ－ｋＢおよびＡＰ－１結合部位に融合したＩＦＮ－ｂ最小プロモーターの制御下に置かれる。ＴＬＲ７リガンドによる刺激がＮＦ－ｋＢおよびＡＰ－１を活性化し、それによってＳＥＡＰの産生が誘導され、これがＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）検出細胞培養培地によって検出される。」

【0167】

典型的なアッセイプロトコールは以下のステップを含んでいた：
１．細胞を製品情報シートに従って培養した。
２．ＤＭＳＯ中１０ｍＭ化合物ストックを最初に３ｍＭに希釈し、次いで、ＤＭＳＯを使用して３倍段階希釈して、１０ｐｔ希釈を得た。
３．さらなる２０倍希釈のために３μｌの希釈ＤＭＳＯを５７μｌのＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）検出培地に添加した。
４．１０μｌのアッセイ培地中希釈化合物を、３８４ウェルプレート中の４０μｌの細胞培養物（ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）検出培地中）に添加した。最終細胞濃度＝細胞８０００個／ウェル。
５．プレートを、３７℃、５％ＣＯ２で１６時間インキュベートした。６２０～６５５ｎｍで分光光度計を使用してＳＥＡＰを決定した。

【0168】

以下の表は、ＨＥＫ－ＴＬＲ７活性の結果を要約している。

【表4】

【0169】

ＨＥＫ－ＴＬＲ７データは、化合物１のＴＬＲ７アゴニスト活性が、アルファ位または側鎖（例えば、リシン）のいずれかでのアミノ酸との共有結合コンジュゲーション後であっても維持されることを実証している。
（生物学的実施例２）
免疫原性試験

【0170】

この予言的な実施例は、マウスにおいてペプチドコンジュゲート（^＊ＡＰ）を、ペプチドおよび公知のアジュバントの混和物（ＡＰ－ｐ）、およびペプチド単独（ＡＰ）と比較する実験を記載する。

【数1】

【0171】

Ｂａｌｂ／ｃマウスの免疫化後に、ペプチド－ＴＬＲ７コンジュゲート（^＊ＡＰ）のＴ細胞刺激能力を、コンジュゲートされていないペプチド単独（ＡＰ）またはポリＩ：Ｃと混和したコンジュゲートされていないペプチド（ＡＰ－ｐ）と比較する。１２個の異なるエピトープ（ＡＰ１～ＡＰ１２）を合わせて、２つのワクチン製剤にし（それぞれ６つのペプチド）、指示される用量で６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化するために使用する（０日目および１４日目に２回ｉ．ｍ．）。対照動物をワクチン緩衝剤単独で免疫化する。試験の２１日目に、動物を屠殺し、脾臓を採取し、ホモジナイズして、脾細胞の単一細胞懸濁物を得る。脾細胞をｅｘｖｉｖｏで、培地単独、各個々のコンジュゲートされていないペプチド、または１２個全てのコンジュゲートされていないペプチドのプールで再刺激する。培養後、細胞を、ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８に対する蛍光標識抗体で染色して、Ｔ細胞サブセットを特定する。次に、ＩＦＮ－ｇおよびＴＮＦ－ａに特異的な蛍光標識抗体を使用して、フローサイトメトリーによって、各ペプチドの個々に、およびプール全体に応答するＴ細胞の頻度を決定する。

【0172】

マウスのワクチン投与を以下に要約する：

【表5】

（生物学的実施例３）
化合物１－ペプチドコンジュゲートのＨＥＫＴＬＲ７活性

【0173】

この実施例は、化合物１ＴＬＲ７アゴニストにコンジュゲートしたペプチド（２０～３０アミノ酸長）が、ＴＬＲ７細胞活性を示すことを実証する。化合物１の非存在下では、「裸の」対応するペプチドは、測定可能なＴＬＲ７活性を示さない。

【表6】

（＊）は、ＴＬＲ７アゴニストである化合物１（実施例１）のペプチドコンジュゲートを示す
均等物

【0174】

本発明を上に示される具体的な実施形態と合わせて説明してきたが、その多くの代替、改変およびその他の変形が当業者に明らかである。このような代替、改変および変形の全てが本発明の精神および範囲内に入ることが意図されている。

【配列表】

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