特許 7342005 エフェクター機能が減少した抗ＳＩＧＬＥＣ－７抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-09-01

(45)【発行日】2023-09-11

(54)【発明の名称】エフェクター機能が減少した抗ＳＩＧＬＥＣ－７抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20230904BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230904BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230904BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230904BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230904BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

A61K39/395 T

A61K47/68

A61P35/00

【請求項の数】 24

(21)【出願番号】P 2020538029

(86)(22)【出願日】2019-01-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-05-06

(86)【国際出願番号】 US2019013316

(87)【国際公開番号】W WO2019140273

(87)【国際公開日】2019-07-18

【審査請求日】2022-01-11

(31)【優先権主張番号】62/616,317

(32)【優先日】2018-01-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】519039249

【氏名又は名称】アラコス，インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100182730

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 浩明

(72)【発明者】

【氏名】クリストファー ベビントン

(72)【発明者】

【氏名】ウター コーバー

(72)【発明者】

【氏名】ネナド トマシェビッチ

【審査官】福間 信子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／０３８０６４（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／０４０３０１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１７／１５３４３３（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－９０

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体であって、当該抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７と結合し；当該抗体は、対応する野生型の人ＩｇＧＦｃ領域と比較してエフェクター機能を減少する、又は抗体安定性を増大する、１つ以上のアミノ酸改変を含む変異人ＩｇＧＦｃ領域を含み；当該抗体が：
ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）又は変異ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＹ（配列番号８９）；
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）；及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）又は変異ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＶ（配列番号９１）若しくはＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）；
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）又は変異ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）；
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＡＬＡＤ又は変異ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、又はＳＡＫＲＬＥＤ（配列番号１０３）；及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）；
を含む軽鎖可変領域、
を含む、抗体。

【請求項2】

前記抗体が、以下：
ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）又はＧＹＤＦＳＮＹ（配列番号８９）；
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）；
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）又はＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）；
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）又はＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）
を含む、請求項１に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項3】

前記抗体が、以下：
ａ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
ｂ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
ｃ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＹ配列番号８９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；又は
（ｄ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＹ配列番号８９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＧＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号９３）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
を含む、請求項２に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項4】

前記抗体が、以下：
ａ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
ｂ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＹ配列番号８９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＹ配列番号８９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＩ（配列番号９２）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；又は
（ｄ）ＨＣＤＲ１配列ＧＹＤＦＳＮＦ（配列番号７９）、
ＨＣＤＲ２配列ＹＰＧＤＧＥ（配列番号８０）、及び
ＨＣＤＲ３配列ＤＤＹＬＲＡＭＤＹ（配列番号８１）
を含む重鎖可変領域、並びに
ＬＣＤＲ１配列ＲＡＳＱＮＩＨＮＹＬＡ（配列番号１００）、
ＬＣＤＲ２配列ＳＡＫＲＬＥＳ（配列番号９４）、及び
ＬＣＤＲ３配列ＱＨＦＷＳＳＰＹＴ（配列番号９５）
を含む軽鎖可変領域；
を含む、請求項２に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項5】

Ｓｉｇｌｅｃ－７に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体であって、当該抗体が：
配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、又は５９のいずれか１つのアミノ酸配列に対し、ＣＤＲにおいて１００％の同一性を有し、それ以外の部分において９０％以上の同一性を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号６９、７０、７１、７６、７７、又は７８のいずれか１つのアミノ酸配列に対し、ＣＤＲにおいて１００％の同一性を有し、それ以外の部分において９０％以上の同一性を有する、軽鎖可変領域；
を有する、抗体。

【請求項6】

前記抗体が：
配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、又は５９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号６９、７０、７１、７６、７７、又は７８のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域；
を有する、請求項５に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項7】

前記抗体が：
配列番号４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、又は５９のいずれか１つのアミノ酸配列に対し、ＣＤＲにおいて１００％の同一性を有し、それ以外の部分において９０％以上の同一性を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号６９又は７８のいずれか１つのアミノ酸配列に対し、ＣＤＲにおいて１００％の同一性を有し、それ以外の部分において９０％以上の同一性を有する、軽鎖可変領域；
を有する、請求項５に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項8】

前記抗体が：
配列番号４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、又は５９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号６９又は７８のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域；
を有する、請求項７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項9】

前記抗体が：
配列番号４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７，又は５８のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号６９のアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域；
を有する、請求項７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項10】

前記抗体が：
配列番号５１、５２、５４、５５、５７、５８、又は５９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域；及び
配列番号７８のアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域；
を有する、請求項８に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項11】

前記抗体が：
（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；又は
（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域；
を有する、請求項８に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項12】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が野生型人ＩｇＧＦｃ領域に対し９０％以上のアミノ酸配列同一性を有し、当該変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２３２， ２３３， ２３４， ２３５， ２３６， ２３７， ２３８， ２４２， ２５２， ２５４， ２５６， ２５９， ２６７， ２６８， ２８７， ２９２， ２９７， ３０２， ３０６， ３０９， ３２２， ３２３， ３２７， ３２８， ３２９， ３３０， ３３１， ３３２， 及び３３４からなる群から選択される位置における１つ以上のアミノ酸改変を含み；又は２３２， ２３３， ２３４， ２３５， ２３６， ２３７， ２３８， ２４２， ２５２， ２５４， ２５６， ２５９， ２６７， ２６８， ２８７， ２９２， ２９７， ３０２， ３０６， ３０９， ３２２， ３２３， ３２７， ３２８， ３２９， ３３０， ３３１， ３３２， 及び３３４からなる群から選択される位置における２つ以上又は３つ以上のアミノ酸改変を有する、請求項１又は１１のいずれかに記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項13】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２３４， ２３５， ２３６， ２３７， ２３８， ２６７， ２６８， ２９７， ３０９， ３２２， ３２７， ３２８， ３３０，及び３３１からなる群から選択される位置で、エフェクター機能を減少する１つ以上のアミノ酸変異を含む、又は２３４， ２３５， ２３６， ２３７， ２３８， ２６７， ２６８， ２９７， ３０９， ３２２， ３２７， ３２８， ３３０， 又は及び３３１からなる群から選択される位置における２つ以上又は３つ以上のアミノ酸改変を有する、請求項１２に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項14】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２３４Ａ／Ｖ， ２３５Ａ， ２３６－， ２３７Ａ， ２３８Ｓ， ２３６－， ２６７Ｅ， ２６８Ｑ， ２９７Ａ／Ｇ／Ｑ， ３２７Ｇ， ３０９Ｌ， ３２２Ｑ， ３２７Ｇ， ３２８Ｆ， ３３０Ｓ，及び３３１Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む、又は２３４Ａ／Ｖ／Ｆ， ２３５Ａ／Ｑ， ２３６－， ２３７Ａ， ２３８Ｓ， ２３６－， ２６７Ｅ， ２６８Ｑ， ２９７Ａ／Ｇ／Ｑ， ３２７Ｇ， ３０９Ｌ， ３２２Ｑ， ３２７Ｇ， ３２８Ｆ， ３３０Ｓ， 及び３３１Ｓからなる群から選択される位置における２つ以上又は３つ以上のアミノ酸改変を有する、請求項１３に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項15】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２３３， ２４２， ２５２， ２５４， ２５６， ２５９， ２８７， ２９２， ３０２， ３０６， ３２３， ３２９， ３３２，及び３３４からなる群から選択される位置で、１つ以上のアミノ酸変異を含む、又は２３２， ２３３， ２４２， ２５２， ２５４， ２５６， ２５９， ２８７， ２９２， ３０２， ３０６， ３２３， ３２９， ３３２及び３３４からなる群から選択される位置における２つ以上又は３つ以上のアミノ酸改変を有する、請求項１２に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項16】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２３２Ｓ， ２３３Ｓ， ２４２Ｃ， ２５２Ｙ， ２５４Ｔ， ２５６Ｅ， ２５９Ｃ， ２８７Ｃ， ２９２Ｃ， ３０２Ｃ， ３０６Ｃ， ３２３Ｃ， ３２９Ｇ， ３３２Ｃ，及び３３４Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸、２つ以上のアミノ酸、又は３つ以上のアミノ酸を含む、請求項１５に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項17】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、更に２５２Ｙ， ２５４Ｔ， ２５６Ｅ， ２３２Ｓ及び２３３Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項18】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、２５２Ｙ， ２５４Ｔ，及び２５６Ｅのアミノ酸を含む、請求項１７に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項19】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、以下のアミノ酸変異：
（ｉ） Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；
（ｉｉ） Ａ３２７Ｇ， Ａ３３０Ｓ，及びＰ３３１Ｓ；
（ｉｉｉ） Ｅ２３３Ｐ， Ｌ２３４Ｖ， Ｌ２３５Ａ，及びＧ２３６－；
（ｉｖ） Ｅ２３３Ｐ， Ｌ２３４Ｖ，及びＬ２３５Ａ；
（ｖ） Ｅ２３３Ｐ， Ｌ２３４Ｖ， Ｌ２３５Ａ， Ｇ２３６－， Ａ３２７Ｇ， Ａ３３０Ｓ，及びＰ３３１Ｓ；
（ｖｉ） Ｅ２３３Ｐ， Ｌ２３４Ｖ， Ｌ２３５Ａ， Ａ３２７Ｇ， Ａ３３０Ｓ，及びＰ３３１Ｓ；
（ｖｉｉ） Ｎ２９７Ａ， Ｎ２９７Ｇ，又はＮ２９７Ｑ；
（ｖｉｉｉ） Ｌ２４２Ｃ， Ｎ２９７Ｃ，及びＫ３３４Ｃ；
（ｉｘ） Ａ２８７Ｃ， Ｎ２９７Ｇ，及びＬ３０６Ｃ；
（ｘ） Ｒ２９２Ｃ， Ｎ２９７Ｇ，及びＶ３０２Ｃ；
（ｘｉ） Ｎ２９７Ｇ， Ｖ３２３Ｃ，及びＩ３３２Ｃ；
（ｘｉｉ） Ｖ２５９Ｃ， Ｎ２９７Ｇ，及びＬ３０６Ｃ
（ｘｉｉｉ） Ｌ２３４Ｆ， Ｌ２３５Ｑ， Ｋ３２２Ｑ， Ｍ２５２Ｙ， Ｓ２５４Ｔ，及びＴ２５６Ｅ；又は
（ｘｉｖ） Ｌ２３４Ａ， Ｌ２３５Ａ，及びＰ３２９Ｇ；
を含む人ＩｇＧ１領域である、請求項１２に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項20】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、以下のアミノ酸変異：
（ｉ） Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ；
（ｉｉ） Ｖ２３４Ａ， Ｇ２３７Ａ， Ｐ２３８Ｓ， Ｈ２６８Ａ， Ｖ３０９Ｌ， Ａ３３０Ｓ，及びＰ３３１Ｓ；又は
（ｉｉｉ） Ｖ２３４Ａ， Ｇ２３７Ａ， Ｈ２６８Ｑ， Ｖ３０９Ｌ， Ａ３３０Ｓ， Ｐ３３１Ｓ， Ｃ２３２Ｓ， Ｃ２３３Ｓ， Ｓ２６７Ｅ， Ｌ３２８Ｆ， Ｍ２５２Ｙ， Ｓ２５４Ｔ，又はＴ２５６Ｅ
を含む人ＩｇＧ２領域である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項21】

前記変異人ＩｇＧＦｃ領域が、以下のアミノ酸変異：
（ｉ） Ｅ２３３Ｐ， Ｆ２３４Ｖ， Ｌ２３５Ａ，及びＧ２３６－；
（ｉｉ） Ｅ２３３Ｐ， Ｆ２３４Ｖ，及びＬ２３５Ａ；又は
（ｉｉｉ） Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ／Ａを含む人ＩｇＧ４領域である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体。

【請求項22】

請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体を含む二重特異性抗体又は多重特異性抗体。

【請求項23】

シアル化Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドを発現する腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物であって、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体又は請求項２２に記載の二重特異性抗体若しくは多重特異性抗体を治療有効量含有する、医薬組成物。

【請求項24】

前記腫瘍が、Ｓｉｇｌｅｃ－７を発現するＣＤ８＋浸潤Ｔ細胞の数が増大したものである、請求項２３に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、2018年1月11日に出願された米国仮出願62/616,317の優先権の利益を享受するものであり、当該米国仮出願は、本願において全ての目的で参照により援用される。

【0002】

本願は、2019年1月11日に作成したファイル容量99,169バイトのテキストファイル101413-1116918-000210PC_SL.txtに記載の配列表を含む。このテキストファイルに含まれる材料は、全ての目的でその全てが参照により援用される。

【背景技術】

【0003】

Ｓｉｇｌｅｃ－７（ｐ７５またはＡＩＲＭとしても知られている）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのシアル酸結合レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）の一員である。Ｓｉｇｌｅｃ受容体はシアル酸を含む糖鎖に結合するが、これらの受容体は結合位置化学での認識とシアル酸残基の空間分布が異なっている。ファミリーの構成員も異なる発現パターンを持つ。Ｓｉｇｌｅｃ－７がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞表面で高濃度に発現することが観察されている。また、（Ｔ細胞の）サブセットであるＣＤ８＋Ｔ細胞表面にも発現することが観察されている。Ｓｉｇｌｅｃ－７はまた、ＮＫ細胞媒介腫瘍クリアランスに対して阻害する役割を持つことが観察されている(Jandus, et al., J. Clin. Invest. 124: 1810-20, 2014); Hudak et al., Nat.Chem. Biol. 10:69-77, 2014)。

【0004】

広範囲にわたるヒト悪性腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドであるシアログリカン（Ｓｉｇｌｅｃ－７のリガンドであるシアログリカンを含む）を過剰発現する。Ｓｉｇｌｅｃ－７はまた、ＮＫ細胞媒介腫瘍クリアランスに対して阻害する役割を持つことが観察されている(Jandus, et al., J. Clin. Invest. 124: 1810-20, 2014)。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

一つの側面において、本願は、エフェクター機能を緩和する、及び／又は抗体を安定化する、Fc領域、例えば人Fc領域への変異を含む、抗Siglec-7抗体が提供される。好ましい態様において、前記Fc領域は、エフェクター機能を減少する1つ以上の変異及び／又は抗体安定性を増大する1つ以上の変異を含む。幾つかの態様において、前記Fc領域は、エフェクター機能を減少し、かつ抗体安定性を増大する変異を含む。

【0006】

従って、1つの側面において、本願は、抗Siglec-7抗体であって、対応する野生型のFc領域と比較してエフェクター機能を減少する、又は抗体安定性を増大する、1つ以上のアミノ酸改変を含む変異Fc領域を含む、抗体を提供する。幾つかの側面において、前記変異Fc領域が、野生型人Fc領域に対し80%以上、又は90%以上のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの側面において、前記変異Fc領域が、232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 242, 252, 254, 256, 259, 267, 268, 287, 292, 297, 302, 306, 309, 322, 323, 327, 328, 329, 330, 331, 332,及び334からなる群から選択される位置で、1つ以上のアミノ酸変異、又は2つ以上のアミノ酸変異、又は3つ以上のアミノ酸変異を含む。幾つかの態様において、変異Fc領域が、234, 235, 236, 237, 238, 267, 268, 297, 309, 322, 327, 328, 330,及び331からなる群から選択される位置で、エフェクター機能を減少する1つ以上のアミノ酸変異を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、234, 235, 236, 237, 238, 267, 268, 297, 309, 322, 327, 330, 331,及び328からなる群から選択される位置で、2つ以上のアミノ酸変異、又は3つ以上のアミノ酸変異を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、234A/V, 235A, 236-, 237A, 238S, 236-, 267E, 268Q, 297A/G/Q, 327G, 309L, 322Q, 327G, 328F, 330S,及び331Sからなる群から選択される1つ以上のアミノ酸を含む。更なるの態様において、前記変異Fc領域が、234A/V/F, 235A/Q, 236-, 237A, 238S, 236-, 267E, 268Q, 297A/G/Q, 327G, 309L, 322Q, 327G, 328F, 330S,及び331Sからなる群から選択される2つ以上のアミノ酸、又は3つ以上のアミノ酸を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、233, 242, 252, 254, 256, 259, 287, 292, 302, 306, 323, 329, 332,及び334からなる群から選択される位置で、1つ以上のアミノ酸変異を含む。更なる態様において、前記変異Fc領域が、232, 233, 242, 252, 254, 256, 259, 287, 292, 302, 306, 323, 329, 332,及び334からなる群から選択される位置で、2つ以上のアミノ酸変異、又は3つ以上のアミノ酸変異を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、232S, 233S, 242C, 252Y, 254T, 256E, 259C, 287C, 292C, 302C, 306C, 323C, 329G, 332C,及び334Cからなる群から選択される1つ以上のアミノ酸を含む。更なる態様において、前記変異Fc領域が、232S, 233S, 242C, 252Y, 254T, 256E, 259C, 287C, 292C, 302C, 306C, 323C, 329G, 332C,及び334Cからなる群から選択される2つ以上のアミノ酸、又は3つ以上のアミノ酸を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、エフェクター機能を減少する1つ以上の変異、例えば234, 235, 236, 237, 238, 267, 268, 297, 309, 322, 327, 330, 331,又は328における1つ以上の変異;及び252Y, 254T, 256E, 232S及び233Sからなる群から選択される1つ以上の更なるアミノ酸;を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、エフェクター機能を減少する1つ以上の変異、例えば234, 235, 236, 237, 238, 267, 268, 297, 309, 322, 327, 330, 331,又は328における1つ以上の変異;及び更なるアミノ酸252Y, 254T,及び256E;を含む。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、以下のアミノ酸変異:(i) L234A及びL235A;(ii) A327G, A330S,及びP331S;(iii) E233P, L234V, L235A,及びG236-;(iv) E233P, L234V,及びL235A;(v) E233P, L234V, L235A, G236-, A327G, A330S,及びP331S;(vi) E233P, L234V, L235A, A327G, A330S,及びP331S;(vii) N297A, N297G,又はN297Q;(viii) L242C, N297C,及びK334C;(ix) A287C, N297G,及びL306C;(x) R292C, N297G,及びV302C;(xi) N297G, V323C,及びI332C;(xii) V259C, N297G,及びL306C(xiii) L234F, L235Q, K322Q, M252Y, S254T,及びT256E;又は(xiv) L234A, L235A,及びP329G;を含む人IgG1領域である。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、以下のアミノ酸変異:(i) A330S及びP331S;(ii) V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S,及びP331S;又は(iii) V234A, G237A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T,又はT256Eを含む人IgG2領域である。幾つかの態様において、前記変異Fc領域が、以下のアミノ酸変異:(i) E233P, F234V, L235A,及びG236-;(ii) E233P, F234V,及びL235A;又は(iii) S228P及びL235E/Aを含む人IgG4領域である。

【0007】

幾つかの態様において、例えば上記2段落の本願抗Siglec-7抗体は、リガンドのＳｉｇｌｅｃ－７への結合を阻害し、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合について登録番号ICLC PD99003で預託されているハイブリドーマから生成された抗体ＱＡ７９と競合するが、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合について抗体Ｚ１７６または抗体Ｓ７．７と競合しない。態様によっては、前記抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合について図１および図２に２Ｇ１２として表されるＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗体と競合する。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２の重鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２の重鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２の重鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１６の軽鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１６の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１６の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗体は、図１および図２のように表される抗体２Ｇ１２の６つのＣＤＲを持つ。

【0008】

態様によっては、例えば上記2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性を持つが、Ｓｉｇｌｅｃ－７へのリガンドの結合を阻害せず、かつＳｉｇｌｅｃ－７への結合に関して抗体Ｓ７．７と競合するが抗体ＱＡ７９または抗体Ｚ１７６とは競合しない。態様によっては、前記抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１および図２に８Ａ２として表記されたＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗体と競合する。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号４の重鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号４の重鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号４の重鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１８の軽鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１８の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１８の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は図１および図２に８Ａ２と表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0009】

態様によっては、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性を持ち、リガンドのＳｉｇｌｅｃ－７への結合を阻害せず、かつＳｉｇｌｅｃ－７への結合に関して抗体Ｚ１７６と競合するがＱＡ７９またはＳ７．７と競合しない。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して５Ｄ１と表記された抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗体と競合する。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号３の重鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号３の重鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号３の重鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１７の軽鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１７の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１７の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗体は、図１および図２に５Ｄ１と表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0010】

態様によっては、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性を持ち、リガンドのＳｉｇｌｅｃ－７への結合を阻害せず、かつＳｉｇｌｅｃ－７への結合に関して抗体Ｚ１７６、ＱＡ７９、またはＳ７．７と競合しない。態様によっては、前記抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１および図２に４Ｂ１２と表記された抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗体と競合する。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１１の重鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１１の重鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１１の重鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２５の軽鎖可変領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２５の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号２５の軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は図１および図２に４Ｂ１２と表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0011】

幾つかの態様において、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図1に記載のＶ_Ｈ領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域；又は図１に示す重鎖可変領域配列のうちの１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域を持つ。

【0012】

幾つかの態様において、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図２に示すＶ_Ｌ領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域；あるいは図２に示す軽鎖可変領域配列のうちの１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を持つ。

【0013】

幾つかの態様において、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１に示すＶ_Ｈ領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｈ領域；および図２に示すＶ_Ｌ領域配列の少なくとも１つのＣＤＲまたは少なくとも２つのＣＤＲを含むＶ_Ｌ領域を含み、図２のＶ_Ｌ配列は図１のＶ_Ｈ配列と同じ抗体表示を持つ。

【0014】

幾つかの態様において、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１に示す重鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ領域、および図２に示す軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶ_Ｌ領域を含み、図２のＶ_Ｌ配列は図１のＶ_Ｈ配列と同じ抗体表示を持つ。

【0015】

幾つかの態様において、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して配列番号１の可変重鎖配列と配列番号１５の可変軽鎖配列を持つ抗体と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が本明細書で提供される。態様によっては、前記抗体は、内部移行活性を有し、Siglec-7へのリガンドの結合をブロックしない。幾つかの態様において、前記抗体は、１、２、または３個アミノ酸が置換されている配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、または配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。態様によっては、前記重鎖可変領域は、１、２、または３個のアミノ酸が置換されている配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ１、および／または１、２、または３個アミノ酸が置換されている配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ２を含む。態様によっては、前記重鎖可変領域は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ１、および配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ２を含む。態様によっては、本段落の上記の実施形態のいずれかと組み合わせてもよく、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１、２、または３個アミノ酸が置換されている配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、または配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。態様によっては、前記軽鎖可変領域は、１、２、または３個アミノ酸が置換されている配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ１、および／または１、２、または３個アミノ酸が置換されている配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ２を含む。態様によっては、前記軽鎖可変領域は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ１、および配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の配列を持つＣＤＲ２を含む。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、リガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0016】

他の態様において、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つの重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、または少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域、および／または配列番号６２および６４～７８のいずれか１つの軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、または少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が本明細書で提供される。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、５９、６０、または６１のいずれかの重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域、および配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、リガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0017】

さらなる態様では、配列番号４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５４、５５、５７、および５８から選択される重鎖可変領域配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が本明細書で提供される。また、配列番号５３、５４、５１、５５、５８、および５９から選択される重鎖可変領域配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が本明細書で提供される。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、リガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0018】

さらなる一態様では、本明細書で以下の可変領域（ａ）～（ｌ）のいずれかを含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が提供される。
（ａ）配列番号４３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号４５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号４８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域配列、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｊ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｋ）配列番号５７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号５８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はリガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0019】

さらなる一態様では、本明細書で以下の可変領域（ａ）～（ｆ）のいずれかを含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が提供される。
（ａ）配列番号５３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号５８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号５９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はリガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0020】

さらなる一態様では、本明細書で以下の可変領域（ａ）～（ｌ）のいずれかを含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が提供される。
（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｊ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｋ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はリガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭである。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0021】

さらなる一態様では、本明細書で以下の可変領域（ａ）～（ｆ）のいずれかを含む、例えば本項の初めの2段落の本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が提供される。
（ａ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はリガンド阻害活性を持ち、かつ／または１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満であり、かつ／または内部移行活性が約１００ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが約７５ｐＭ未満である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約７０ｐＭ以下である。態様によっては、前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は内部移行活性が約２５ｐＭ未満である。

【0022】

態様によっては、上記段落で記載した本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は多価または２価の形態である。態様によっては、前記抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４などのＩｇＧである。

【0023】

さらなる一態様では、本発明は上記実施形態のいずれか１つを含む二重特異性または多特異性抗体を提供する。

【0024】

1つの側面において、本願は、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を提供し、当該方法は、本願記載の抗Siglec-7抗体、例えば本項上記段落に記載の抗体を、治療有効量、癌を有する患者に投与することを含み、当該患者は、SIGLEC-7を発現するCD8+浸潤T細胞のレベルが高くなっている原発性腫瘍又は転移病巣を有し、更に、当該腫瘍又は転移病巣は、シアル化Siglec-7リガンドを発現する癌細胞を含む。幾つかの態様において、前記抗Siglec-7抗体のK_Dは50 pM以下である。幾つかの態様において、前記抗Siglec-7抗体は、IC₅₀約4000 pM以下で結合するリガンドをブロックし、又はIC₅₀約3500 pM以下で結合するリガンドをブロックし、任意でK_Dは50 pM以下であり得る。幾つかの態様において、上記態様と組み合わせられて、前記抗Siglec-7抗体は、約70 pM以下、又は約25 pM以下の内部移行活性を有する。幾つかの態様において、前記抗Siglec-7抗体は、約70 pM以下、又は約25 pM以下の内部移行活性を有し；リガンド結合をブロックしない。

【0025】

さらなる一態様では、本発明は、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供する。この方法は、シアルＳｉｇｌｅｃ－７リガンドを発現する腫瘍を持つ患者に上記段落に記載された抗体の何れか１つの抗体またはそのような抗体を含む二重特異性または多重特異性抗体を治療有効量で投与することを含む。態様によっては、前記腫瘍は、対応する細胞種の正常細胞で検出されるよりも多い量のシアル化Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドを発現している。

【0026】

さらなる一態様では、本開示はさらに、本明細書で記載する癌を治療する方法として本明細書で記載する抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】図１は、本願抗Siglec-7抗体の重鎖可変領域配列の例示を提供する。Kabatにより規定されたCDRに下線を付している。

【0028】

【図2】図２は、本願抗Siglec-7抗体の重鎖可変領域配列の例示を提供する。Chothiaにより規定されたCDRに下線を付している。

【0029】

【図3】図３は、本願抗Siglec-7抗体の軽鎖可変領域配列の例示を提供する。Kabat及びChothiaの両方により規定されたCDRに下線を付している。

【0030】

【図4】図４は、新鮮な原発腫瘍中の腫瘍-浸潤CD8+細胞においてSiglec-7が高いパーセンテージで検出されることを示すデータを提供する。

【0031】

【図5】図５は、腫瘍のサブセットから単離されたCD8+T細胞が高レベルのSiglec-7を有することを示すデータを提供する。

【0032】

【図6】図６は、Siglec-7リガンドが腫瘍のサブセット上で発現していることを示すデータを提供する。

【0033】

【図7】図７は、Z176, S7.7,又はQA79と比較してK_D値が改善した本願抗Siglec-7抗体を示すデータを提供する。

【0034】

【図8】図８は、Z176, S7.7,又はQA79と比較してリガンドブロック活性が改善した本願抗Siglec-7抗体を示すデータを提供する。

【0035】

【図9】図９は、Z176, S7.7,又はQA79と比較して内部移行活性が改善した本願抗Siglec-7抗体を示すデータを提供する。

【0036】

【図10】図１０は、本願抗体を使用した人NK細胞に対する迅速な濃度依存的かつ抗体誘導性のSiglec-7の内部移行を示すデータを提供する。

【0037】

【図11】図１１は、本願抗体の非リガンドブロック性の内部移行活性を示すデータを提供する。

【発明を実施するための形態】

【0038】

用語
本願において、「ある」、「前記」及び「当該」は、他の指図の無い限り、複数の参照を含む。従って、「ある抗体」は、任意でそのような分子の２つ以上の組合せを含む。

【0039】

本願において、「約」は、本分野の当業者に広く知られる各数値における通常の誤差範囲を意味し、例えば± 20%, ± 10%,又は± 5%は、言及される数値の想定される意味の中である。

【0040】

Siglec-7は、p75或いはAIRMとも称され、イムノグロブリン（Ig）スーパーファミリーのシアル酸結合レクチン(Siglec)のメンバーである。Siglec受容体はシアル酸を含むグリカンに結合するが、特定の糖構造の認識においてそれらは相違する。受入番号で利用可能な人Siglec-7タンパク質の配列を以下に示す。
1 mllllllpll wgrervegqk snrkdysltm qssvtvqegm cvhvrcsfsy pvdsqtdsdp
61 vhgywfragn diswkapvat nnpawavqee trdrfhllgd pqtknctlsi rdarmsdagr
121 yffrmekgni kwnykydqls vnvtalthrp nilipgtles gcfqnltcsv pwaceqgtpp
181 miswmgtsvs plhpsttrss vltlipqpqh hgtsltcqvt lpgagvttnr tiqlnvsypp
241 qnltvtvfqg egtastalgn ssslsvlegq slrlvcavds npparlswtw rsltlypsqp
301 snplvlelqv hlgdegeftc raqnslgsqh vslnlslqqe ytgkmrpvsg vllgavggag
361 atalvflsfc vifivvrscr kksarpaadv gdigmkdant irgsasqgnl teswaddnpr
421 hhglaahssg eereiqyapl sfhkgepqdl sgqeatnney seikipk (配列番号１０８)

【0041】

本願において、「抗体」は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体、及び所望の抗原結合活性を呈する限りの抗体断片を含む。

【0042】

本明細書に用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指す。すなわち、一般に少量存在する、例えば、自然発生の変異を含む、あるいはモノクローナル抗体調製の製造中に生じる変異など起こりうる多様体抗体を除いて、この集団を含む個々の抗体は同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して異なる抗体を含むポリクロナール抗体の調製に対して、モノクローナル抗体調製の各モノクローナル抗体は１種の抗原の単一の決定基に向けられている。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一の抗体集団から得られた抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の作製に必要であると解釈すべきではない。例えば、本発明に用いられるモノクローナル抗体は、様々な技術により作製されてもよい。そのような技術としては、これらに限定されないが、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージ提示法、およびヒト免疫グロブリン座位の全部または一部を含む遺伝子導入動物を用いる方法などが挙げられる。

【0043】

「抗体断片」は、完全な抗体の一部を含み、完全な抗体が結合する抗原に結合する完全な抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性抗体；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ分子）；および抗体断片から形成された多特異性抗体が挙げられる。

【0044】

基準抗体としての「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて基準抗体のその抗原への結合を５０％以上阻害する抗体を指す。また、その反対に、基準抗体は、競合アッセイにおいて抗体のその抗原への結合を５０％以上阻害する。例示的な競合アッセイは本明細書で提供される。

【0045】

本明細書で用いられる「Ｖ領域」は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、およびフレームワーク３、ＣＤＲ３およびフレームワーク４という断片を含む抗体可変領域ドメインを指す。これらの断片は、Ｂ細胞の分化時に重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子が再構成された結果としてＶ断片に付加されている。

【0046】

本明細書で用いられる「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、各鎖の３つの超可変領域（ＨＶＲ）を指す。これらの超可変領域は、軽鎖および重鎖可変領域に確立された４つの「フレームワーク」領域の間に入っている。これらのＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合に貢献する主要な部分である。各鎖のＣＤＲをＮ末端から順番にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と言う。また、ＣＤＲは特定のＣＤＲが配置されている鎖により同定される。従って、Ｖ_ＨのＣＤＲ３はこれを含む抗体の重鎖の可変領域に位置しており、Ｖ_ＬのＣＤＲ１はこれを含む抗体の軽鎖の可変領域にあるＣＤＲ１である。本明細書に用いられる用語「ＣＤＲ」は「ＨＶＲ」と互いに言い換え可能である。

【0047】

当該分野でよく知られている様々な定義を用いてＣＤＲおよびフレームワーク領域のアミノ酸配列を決定してもよい。定義の例は、Kabat, Chothia, international ImMunoGeneTics database (IMGT)、およびAbM (例えば、以下を参照のこと。Johnson et al., supra; Chothia & Lesk, 1987, Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J.Mol. Biol. 196, 901-917; Chothia C. et al., 1989, Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature 342, 877-883; Chothia C. et al., 1992, structural repertoire of the human VH segments J.Mol. Biol. 227, 799-817; Al-Lazikani et al., J.Mol.Biol 1997, 273(4))などである。また、以下の文献に抗原結合部位の定義が記載されている：Ruiz et al., IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res., 28, 219-221 (2000);及びLefranc,M.-P. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res. Jan 1;29(1):207-9 (2001);MacCallum et al, Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography, J.Mol. Biol., 262 (5), 732-745 (1996);及びMartin et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272 (1989);Martin, et al,Methods Enzymol., 203, 121-153, (1991); Pedersen et al, Immunomethods, 1, 126, (1992);及びRees et al, In SternbergM.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 (1996)。Kabat番号で決定されるＣＤＲに対する基準は、例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda,MD (1991)に基づいている。ChothiaによるＣＤＲはChothia（例えば、Chothia and Lesk J.Mol. Biol. 196:901-917 (1987)を参照のこと）に定義されているように決定される。

【0048】

「エピトープ」すなわち「抗原決定基」は抗体が結合する抗原の部位を指す。エピトープは、連続するアミノ酸から形成されていてもよく、あるいはタンパク質の三次構造への折り畳みの結果並置された不連続のアミノ酸から形成されていてもよい。連続するアミノ酸から形成されたエピトープは典型的には変性溶媒に曝されても保持されるが、三次構造への折り畳みにより形成されたエピトープは典型的には変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは典型的には、固有の立体構造で少なくとも３個、より一般的には少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの立体構造を決定する方法としては、例えば、Ｘ線結晶構造解析および２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、EpitopeMapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E.Morris, Ed (1996)を参照のこと。

【0049】

本明細書で用いられる「キメラ抗体」は、（ａ）異なる、すなわち変更したクラス、エフェクター機能および／または種の定常領域あるいはキメラ抗体に新しい特性を与える全く異なる分子（例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物など）に抗原結合部位（可変領域）が結合するように定常領域またはその一部が変更、置換、あるいは交換されているか、（ｂ）可変領域またはその一部が、異なるすなわち変化した抗原特異性を持つ可変領域またはその一部、あるいは他の種または他の抗体クラスあるいはサブクラスに由来する対応する配列で変更、置換、または交換されている免疫グロブリン分子を指す。

【0050】

「Ｆｃ領域」は、第一の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を指す。従って、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびこれらドメインの柔軟性のあるヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡとＩｇＭの場合、ＦｃはＪ鎖を含んでいてもよい。ＩｇＧの場合、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３と、Ｃγ１とＣγとのヒンジを含む。しかしながら、当該分野では自明であるが、Ｆｃ領域の境界は異なっていてもよく、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むと規定されている。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｋ４４７）は存在してもしなくてもよい。本願で他の特定の無い限り、Ｆｃ領域又は定常領域のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載のＥＵナンバリングシステム（ＥＵ indexともいう）に従う。本明細書に用いられる用語「Ｆｃ領域」は、単離でのこの領域、あるいは抗体または抗体断片の文脈でのこの領域を指す場合がある。「Ｆｃ領域」は、自然発生のアレル多様体、即ち野生型Ｆｃ領域、およびエフェクター機能を調節する修飾を含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機能の変化に繋がらないような多様体を含む。例えば、実質的に生物学的機能を失うことなく、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を削除することができる。当該分野で知られている一般規則に従って、活性に及ぼす効果を最少にするようにそのような多様体を選択してもよい（例えば、Bowie, et al., Science 247:306-1310, 1990を参照のこと）。例えば、ＩｇＧ４抗体では、単一のアミノ酸の置換（Kabat番号によるＳ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Ｐｒｏと表記される）を導入して組み換えＩｇＧ４抗体に見られる不均一性をなくしてもよい（例えば、Angal, et al., Mol Immunol 30:105-108, 1993を参照のこと）。

【0051】

「変異Ｆｃ領域」は、１つ以上のアミノ酸の変更、例えば１つ以上のアミノ酸の置換又は欠失により、野生型配列Ｆｃ領域のものと異なる、アミノ酸配列を含む。

【0052】

本願において、エフェクター機能が「減少した」抗体は、補体依存的細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存的細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存的細胞貪食（ＡＤＣＰ）等を含む抗体Ｆｃ領域により媒介されるエフェクター作用の例えば２０％以上、５０％以上、又は７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全体的減少を示す抗体を意味する。

【0053】

本明細書に用いられる用語「平衡解離定数（略してＫ_Ｄ）」は、結合速度定数（ｋａ、時間^－１ Ｍ^－１）で除した解離速度定数（ｋｄ、時間^－１）を指す。任意の方法を用いて平衡解離定数を測定してもよい。従って、実施形態によっては、本開示の抗体は、バイオセンサーシステム（例えば、Biacore（登録商標）システム）を用いて３７℃で行った表面プラズモン共鳴分析によって求められたＫ_Ｄが約５０ｎＭ未満、典型的には約２５ｎＭ未満、あるいは１０ｎＭ未満であり、例えば、約５ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満、しばしば約１０ｎＭ未満である。態様によっては、本開示の抗体はＫ_Ｄが５×１０^－５Ｍ未満、１０^－５Ｍ未満、５×１０^－６Ｍ未満、１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、１０^－１２Ｍ未満、５×１０^－１３Ｍ未満、１０^－１３Ｍ未満、５×１０^－１４Ｍ未満、１０^－１４Ｍ未満、５×１０^－１５Ｍ未満、１０^－１５Ｍ未満、または２価の抗体として測定した場合よりも小さい。本発明の文脈で「向上した」Ｋ_Ｄは小さいＫ_Ｄを指す。態様によっては、本開示の抗体は、Ｋ_Ｄが５×１０^－５Ｍ未満、１０^－５Ｍ未満、５×１０^－６Ｍ未満、１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、１０^－１２Ｍ未満、５×１０^－１３Ｍ未満、１０^－１３Ｍ未満、５×１０^－１４Ｍ未満、１０^－１４Ｍ未満、５×１０^－１５未満、１０^－１５Ｍ未満、あるいは１価の抗体、典型的には１価のＦａｂとして測定した場合よりも小さい。態様によっては、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、バイオセンサーシステム（例えば、Biacore（登録商標）システム）を用いて３７℃で行った表面プラズモン共鳴分析により１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが１００ｐＭ未満、例えば、７５ｐＭ未満、例えば、１～１００ｐＭの範囲である。態様によっては、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、バイオセンサーシステム（例えば、Biacore（登録商標）システム）を用いて３７℃で行った表面プラズモン共鳴分析により１価のＦａｂとして測定した場合にＫ_Ｄが５００ｐＭ未満、例えば、１～５００ｐＭ、１～２００、または１～２５０ｐＭの範囲である。本発明の文脈で「向上した」Ｋ_Ｄは小さいＫ_Ｄを指す。

【0054】

本明細書に用いられる用語「１価の分子」は１つの抗原結合部位、例えば、Ｆａｂを持つ分子を指す。

【0055】

本明細書に用いられる用語「２価の分子」は２つの抗原結合部位を持つ分子を指す。態様によっては、本発明の２価の分子は２価の抗体またはその２価の断片である。態様によっては、本発明の２価の分子は２価の抗体である。態様によっては、本発明の２価の分子はＩｇＧである。一般に、モノクローナル抗体は２価の塩基性構造を持つ。ＩｇＧとＩｇＥは１つの２価の単位を持つが、ＩｇＡとＩｇＭは複数の２価の単位（それぞれ、２および５個）からなり、従って価数が大きい。価数が２であることにより、抗体の抗原との親和性が高まる。

【0056】

本明細書に用いられる用語「１価の結合」または「１価で結合している」は１つの抗原結合部位がその抗原に結合していることを指す。

【0057】

本明細書に用いられる用語「２価の結合」または「２価で結合している」は２価の分子の両方の抗原結合部位がその抗原に結合していることを指す。２価の分子の両方の抗原結合部位は同じ抗原特異性を共有していることが好ましい。

【0058】

本明細書に用いられる用語「価数」は、抗体の抗原に対する異なる結合部位の数を指す。１価の抗体は抗原に対して１つの結合部位を含む。２価の抗体は、同じ抗原に対して２つの結合部位を含む。

【0059】

本明細書で抗体の抗原への結合という文脈で用いられる用語「親和性」は、抗体の複数の結合部位の合わせた結合強度を指す。従って、「２価の親和性」は２つの結合部位の合わせた強度を指す。

【0060】

タンパク質またはペプチドに言及する場合、抗原または標的に「特異的に（または選択的に）結合する」あるいは「特異的に（または選択的に）免疫反応性である」という表現は、抗体が目的の抗原または標的に結合する結合反応を指す。本発明の文脈では、抗体は、他の抗原に対する親和性に比べて少なくとも１００倍大きいＫ_ＤでＳＩＧＬＥＣ－７に結合する。

【0061】

本明細書で２つ以上のポリペプチド配列の文脈で用いられる用語「同一である」またはパーセント「同一性」は、比較窓または表示された領域の最大一致について比較および配列した場合に、２つ以上の同一配列または同一亜配列、あるいは指定された領域に対する同一性が同じ（例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）アミノ酸残基の指定された百分率を持つ２つ以上の配列または亜配列を指す。アミノ酸配列の百分率同一性を決定する目的での配列は、様々な方法で行ってもよく、例えば、公に利用可能なコンピュータソフトウェア（例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegalign (DNASTAR)ソフトウェアなど）が挙げられる。配列の百分率同一性および配列類似性を決定するのに好適なBLAST 2.0としては、例えば、Altschul et al., Nuc.Acids Res. 25:3389-3402 (1977)およびAltschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)に記載されているBLAST 2.0アルゴリズムが挙げられる。従って、BLAST 2.0は、配列の百分率を決定するのに記載されているパラメータの初期値と併せて用いることができる。

【0062】

本明細書で用いられる「保存的」置換は、側鎖基の鎖の電荷、疎水性、および／または寸法を維持するようなアミノ酸の置換を指す。互いに置換してもよいアミノ酸の例示的な集合としては、（ｉ）正に帯電したアミノ酸Ｌｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓ；（ｉｉ）負に帯電したアミノ酸ＧｌｕおよびＡｓｐ；（ｉｉｉ）芳香族アミノ酸Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐ；（ｉｖ）窒素環アミノ酸ＨｉｓおよびＴｒｐ；（ｖ）大型脂肪族非極性アミノ酸Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ；（ｖｉ）微極性アミノ酸ＭｅｔおよびＣｙｓ；（ｖｉｉ）小さい側鎖を持つアミノ酸Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、およびＰｒｏ；（ｖｉｉｉ）脂肪族アミノ酸Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、およびＣｙｓ；および（ｉｘ）ヒドロキシル基を持つ小さいアミノ酸ＳｅｒおよびＴｈｒが挙げられる。この段落のアミノ酸の電荷への言及は、生理学的ｐＨでの電荷を指す。

【0063】

抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体
本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、既知の抗Ｓｉｇｌｅｃ７抗体に比べて結合特性、例えば内部移行活性および／またはリガンド阻害活性が向上している。更に、本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、変異Ｆｃ領域、例えば対応する野生型Ｆｃ領域と比較してエフェクター作用が減少した人Ｆｃ領域を含む。態様によっては、本発明の抗体は内部移行活性を持つが、リガンドの結合を阻害しない。

【0064】

既知の抗Ｓｉｇｌｅｃ７モノクローナル抗体（例えば、Ｚ１７６、ＱＡ７９、およびＳ７．７）に比べて、本発明の抗体は典型的にＫ_Ｄが低くなっている。態様によっては、本発明の抗体はＫ_Ｄが約１００ｐＭ未満、約７５ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、または約３５ｐＭ未満である。態様によっては、本発明の抗体はＫ_Ｄが約１ｐＭ以下である。態様によっては、本発明の抗体は、図１または図２で１６Ｈ１１、３Ｆ１、ＳＬ９、８Ａ２、５Ｄ１、または５Ｇ１０として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、Ｋ_Ｄが向上した本発明の抗体は、図３で１６Ｈ１１、３Ｆ１、ＳＬ９、８Ａ２、５Ｄ１、または５Ｇ１０として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３の１６Ｈ１１、３Ｆ１、ＳＬ９、８Ａ２、５Ｄ１、または５Ｇ１０として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0065】

態様によっては、上記の抗Ｓｉｇｌｅｃ７モノクローナル抗体と比べてリガンド結合阻害能が高まっている。本発明の文脈でリガンド結合阻害能は、Ｓｉｇｌｅｃ－７の５０％がリガンドに結合しないようなモノクローナル抗体の濃度を指す。態様によっては、本発明の抗体のリガンド阻害活性はより能力が高く、すなわち、リガンドを阻害する抗体のＩＣ_５０は既知の抗体（例えば、Ｚ１７６、ＱＡ７９、およびＳ７）よりも低い。既知のアッセイを用いてリガンド阻害活性を評価してもよい。例えば、ヒトメラノーマ細胞株Ａ３７５など、細胞表面にＳｉｇｌｅｃ－７に対するリガンドを高濃度で発現している細胞株を用いてリガンド阻害活性を求めてもよい。例えば、実施例で説明するようにして阻害に関するＩＣ_５０値を求めてもよい。態様によっては、リガンド阻害活性が向上した本発明の抗体は、実施例で記載するアッセイ条件でアッセイした場合のＩＣ_５０が４０００ｐＭ未満、約３５００ｐＭ未満、約３０００ｐＭ未満、約２０００ｐＭ未満、約１５００ｐＭ未満、約１０００ｐＭ未満、または約５００ｐＭ以下である。実施形態によっては、向上したリガンド阻害活性を示す本発明の抗体は、図１または図２に９Ｄ４、ＳＬ１３、または５Ｇ１０として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は図３に９Ｄ４、ＳＬ１３、または５Ｇ１０として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３の９Ｄ４、ＳＬ１３、または５Ｇ１０として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0066】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、上記の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７モノクローナル抗体に比べて向上した内部移行を示す。本開示では、内部移行活性はＳｉｇｌｅｃ－７の５０％が健康な提供者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞表面で２４時間以内に内部移行する抗体の濃度を言う。本発明の文脈で「高められた」または「向上した」内部移行活性は、例えば、Ｚ１７６、ＱＡ７９、およびＳ７などの既知の抗体よりも内部移行に関するＩＣ_５０が低くなっていることを意味する。既知のアッセイを用いて内部移行を評価してもよい。例えば、健康な提供者から得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いて抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の内部移行活性を求めてもよい。例えば、実施例で記載するようにして内部移行に関するＩＣ_５０値を求めてもよい。態様によっては、本発明の抗体は内部移行ＩＣ_５０が、約７０ｐＭ未満であり、態様によっては、実施例で記載するアッセイ条件でアッセイした場合の抗体の内部移行ＩＣ_５０は約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２５ｐＭ未満、約２０未満、または約１０ｐＭ未満である。態様によっては、内部移行活性が向上した本発明の抗体は、図１または図２で３Ｆ１、ＳＬ９、１６Ｈ１１、８Ａ２、ＳＬ２、５Ｄ１、または１０Ｅ１１として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は図３の３Ｆ１、ＳＬ９、１６Ｈ１１、８Ａ２、ＳＬ２、５Ｄ１、または１０Ｅ１１として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で３Ｆ１、ＳＬ９、１６Ｈ１１、８Ａ２、ＳＬ２、５Ｄ１、または１０Ｅ１１として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。態様によっては、内部移行活性が向上した本発明の抗体は図１または図２の３Ｆ１または１６Ｈ１１として表記された抗体Ｖ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３で３Ｆ１または１６Ｈ１１として表記された抗体Ｖ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３の９Ｄ４、ＳＬ１３、または５Ｇ１０として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0067】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７を内部移行するが、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドのＳｉｇｌｅｃ－７との結合を阻害しない。本発明の文脈でリガンドのＳｉｇｌｅｃ－７との結合を阻害しない抗体は、実施例で説明する条件でアッセイした場合にリガンド結合が２５％超低下するような抗体を指す。態様によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドを内部移行するがリガンドのＳｉｇｌｅｃ－７との結合を阻害しない本発明の抗体は、図１または図２で４Ｂ１２または８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は図３で４Ｂ１２または８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で４Ｂ１２または８Ａ２として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0068】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ７抗体は、上述したＺ１７６、ＱＡ７９、およびＳ７などの抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体に対して異なるエピトープと結合する。Ｚ１７６およびＳ７．７は市販の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体である。ＱＡ７９はeBiosciencesから市販されている。ＱＡ７９を産生するハイブリドーマは、ＩＣＬＣ登録番号ＰＤ９９００３としても入手可能である。Ｚ１７６はBeckman Coulterから、Ｓ７．７はBioLegendからそれぞれ入手可能である。

【0069】

態様によっては、本発明の抗体はＳｉｇｌｅｃ－７リガンドへの結合についてＺ１７６、ＱＡ７９、およびＳ７のいずれとも競合しない。態様によっては、本発明の抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３で４Ｂ１２として表記された抗体と競合しない。態様によっては、本発明の抗体は、図１または図２で４Ｂ１２として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３で４Ｂ１２として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で４Ｂ１２として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0070】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｗ１３２Ａ変異が結合活性を損なうようにＷ１３２を含むエピトープに結合する。態様によっては、そのような抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３で２Ｇ１２として表記された抗体と競合する。態様によっては、そのような抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドへの結合について図１～図３で２Ｇ１２として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗体は、図１または図２で２Ｇ１２１として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３で２Ｇ１２として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で２Ｇ１２として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0071】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３で５Ｄ１として表記された抗体と競合する。態様によっては、そのような抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドへの結合について図１～図３で２Ｇ１２として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗体は図１または図２で５Ｄ１として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３の５Ｄ１として表記された抗体Ｖ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で５Ｄ１として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0072】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３で８Ａ２として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗体は、図１または図２で８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３で８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３で８Ａ２として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0073】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１または図２に示された重鎖可変アミノ酸配列から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図３に示された軽鎖可変領域から選択される１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１に示されたＨＣＤＲ３配列から選択されるＨＣＤＲ３と図３に示されたＬＣＤＲ３配列から選択されるＬＣＤＲ３を含む。

【0074】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３の１６Ｈ１１として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗体は、図１または図２で８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、図３の８Ａ２として表記された抗体のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。複数の実施形態では、図１～図３の８Ａ２として表記された抗体の６つのＣＤＲを持つ。

【0075】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域を含む。特定の態様では、図１または図２の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｈ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持する。特定の態様では、図１の重鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。

【0076】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、図３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｌ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持する。特定の態様では、図３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。

【0077】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、図１または図２の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域と図３の対応する抗体の軽鎖可変領域を含み、この軽鎖可変領域は図３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である。態様によっては、この抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、上の２つの段落で記載したような重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域に対する修飾を持つ。

【0078】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体では、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている、図１に記載のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。態様によっては、重鎖可変領域は、図１に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、または３個のアミノ酸が置換され、かつ／またはＣＤＲ２では少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸が置換されている。態様によっては、重鎖可変領域は、図２に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、３、または４個のアミノ酸が置換され、および／またはＣＤＲ２では少なくとも１、２、または３個のアミノ酸が置換されている。

【0079】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている、図２に記載のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。態様によっては、このような重鎖可変領域は、図２に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、または３個のアミノ酸が置換され、かつ／またはＣＤＲ２では少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸が置換されている。あるいは、図２に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、３、または４個のアミノ酸が置換され、かつ／またはＣＤＲ２では少なくとも１、２、または３個のアミノ酸が置換されている。

【0080】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体では、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている、図３に記載のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。態様によっては、軽鎖可変領域は、図３に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２では少なくとも１、２、３、または４個のアミノ酸が置換されている。

【0081】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７を内部移行し、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３の１６Ｈ１１として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７を内部移行し、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドへの結合について図１～図３に１６Ｈ１１として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗体は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載のＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗体は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載のＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載のＨＣＤＲ３配列から選択されるＨＣＤＲ３と、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載のＬＣＤＲ３配列から選択されるＬＣＤＲ３を含む。複数の実施形態では、表１に記載のＶ_Ｈ領域とＶ_Ｌ領域の対のいずれか１つに記載の６つのＣＤＲを持つ。

【0082】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つの重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域を含む。特定の態様では、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つの重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｈ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つの重鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、すべての置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。特定の態様では、ＣＤＲ領域で１、２、または３個の置換が生じる。

【0083】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つの軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つの軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｌ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つの軽鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、すべての置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。特定の態様では、ＣＤＲ領域で１、２、または３個の置換が生じる。

【0084】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５７、５８、５９、６０、または６１のいずれかの重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域と、配列番号６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、上の２つの段落で記載したような重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域に対する修飾を持つ。

【0085】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体では、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されているか、１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。態様によっては、重鎖可変領域は、１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む。態様によっては、重鎖可変領域は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されており、かつ／またはＣＤＲ２は１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。態様によっては、重鎖可変領域は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されており、および／またはＣＤＲ２は１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。態様によっては、重鎖可変領域は、配列番号２９～３１、３３、および３５～６１のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２では１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。

【0086】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、重鎖ＣＤＲ１配列G(G/Y)(K/T)FS(W/S/Y)(F/Y）（配列番号１０９）、重鎖ＣＤＲ２配列YP(G/I)(D/F)GE（配列番号１１０）、および重鎖ＣＤＲ３配列DYLRAMD(Y/I/V）（配列番号１１１）を含む。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）配列 DDYLRAMDY（配列番号８１）、DDYLRAMDV（配列番号９１）、またはDDYLRAMDI（配列番号９２）；重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）配列GYDFSNF（配列番号７９）、GYTFSNF（配列番号８２）、GGDFSNF（配列番号８３）、GYDFSSY（配列番号８７）、GYDFSSF（配列番号８８）、または GYDFSNY（配列番号８９）；および重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）配列YPGDGE（配列番号８０）、YPIDGE（配列番号８５）、またはYPGFGE（配列番号９０）を含む重鎖可変領域を含む。結合を無効にする変異を持つ例示的なＣＤＲ２配列は、IPGDGE（配列番号８４）およびYPGDGT（配列番号８６）である。

【0087】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体では、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されているか、１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。態様によっては、軽鎖可変領域は、１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３を含む。態様によっては、軽鎖可変領域は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１では１、２、３、または４個のアミノ酸が置換されているか、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されており、かつ／またはＣＤＲ２では１、２、３、または４個のアミノ酸が置換されているか、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。態様によっては、軽鎖可変領域は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２では１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。態様によっては、軽鎖可変領域は、配列番号６２および６４～７８のいずれか１つに記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２では１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている。

【0088】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、軽鎖ＣＤＲ１配列RAS(G/Q)(N/G)I(H/S)NYLA（配列番号１１２）、軽鎖ＣＤＲ２配列 (S/A)A(K/S)RL(E/A)(S/D）（配列番号１１３）、および軽鎖ＣＤＲ３配列QHFWSSPYT（配列番号９５）を含む。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）配列QHFWSSPYT（配列番号９５）；軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）配列RASGNIHNYLA（配列番号９３）、RASGGIHNYLA（配列番号９９）、RASQNIHNYLA（配列番号１００）、またはRASGNISNYLA（配列番号１０１）；および軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）配列SAKRLES（配列番号９４）、AASRLES（配列番号９７）、SASRLES（配列番号９８）、SAKRLAS（配列番号１０２）、またはSAKRLED（配列番号１０３）を含む軽鎖可変領域を含む。結合を無効にする例示的なＣＤＲ１変異は、RASGNIHNSLA（配列番号９６）である。

【0089】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）配列DDYLRAMDY（配列番号８１）、DDYLRAMDV（配列番号９１）、またはDDYLRAMDI（配列番号９２）；重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）配列GYDFSNF（配列番号７９）、GYTFSNF（配列番号８２）、GGDFSNF（配列番号８３）、GYDFSSY（配列番号８７）、GYDFSSF（配列番号８８）、またはGYDFSNY（配列番号８９）；および重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）配列YPGDGE（配列番号８０）、YPIDGE（配列番号８５）、またはYPGFGE（配列番号９０）を含み、前記軽鎖可変領域は軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）配列QHFWSSPYT（配列番号９５）；軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）配列RASGNIHNYLA（配列番号９３）、RASGGIHNYLA（配列番号９９）、RASQNIHNYLA（配列番号１００）、またはRASGNISNYLA（配列番号１０１）；および軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）配列SAKRLES（配列番号９４）、AASRLES（配列番号９７）、SASRLES（配列番号９８）、SAKRLAS（配列番号１０２）、またはSAKRLED（配列番号１０３）を含む。

【0090】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５４、５５、５７、および５８から選択される重鎖可変領域配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。態様によっては、前記重鎖可変領域は、配列番号５３、５４、５１、５５、５８、および５９から選択される重鎖可変領域配列に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号７８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0091】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７は、以下の可変領域（ａ）～（ｌ）を含む：
（ａ）配列番号４３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号４５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号４８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域配列、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｊ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｋ）配列番号５７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号５８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号６９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域。

【0092】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７は以下の可変領域（ａ）～（ｆ）のいずれかを含む。
（ａ）配列番号５３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号５８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号５９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域。

【0093】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７を内部移行し、Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して図１～図３に８Ａ２として表記された抗体と競合する。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号１０４または１０６のいずれか１つに示されたＶ_Ｈ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号１０５または１０７に示されたＶ_Ｌ配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つのＣＤＲを持つ。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は配列番号１０４または１０６に示されたＨＣＤＲ３配列と、配列番号１０５または１０７に示されたＬＣＤＲ３配列を含む。

【0094】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号１０４または１０６の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域を含む。特定の態様では、配列番号１０４または１０６の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｈ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持し、内部移行活性を持つ。特定の態様では、配列番号１０４または１０６の重鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、すべての置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。特定の態様では、ＣＤＲ領域では１、２、または３個の置換が生じる。

【0095】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号１０５または１０７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、配列番号１０５または１０７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶ_Ｌ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、そのような配列を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はＳｉｇｌｅｃ－７に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号１０５または１０７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列では合計１～２０個のアミノ酸が置換、挿入、および／または削除されている。特定の態様では、すべての置換、挿入、または欠失はフレームワーク領域で生じる。特定の態様では、ＣＤＲ領域では１、２、または３個の置換が生じる。

【0096】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、配列番号１０４または１０６の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変領域と、配列番号１０５または１０７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対する配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変領域を含む。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は上の２つの段落で記載した重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域に対する修飾を持つ。

【0097】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されているか、１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０４または１０６に記載のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む。態様によっては、重鎖可変領域は、１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０４または１０６に記載のＣＤＲ３を含む。態様によっては、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１では１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）され、かつ／またはＣＤＲ２では１または２個、あるいは１個だけアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０４または１０６に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含む。

【0098】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されているか、１または２個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０５または１０７に記載のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。態様によっては、軽鎖可変領域は、１個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０５または１０７に記載のＣＤＲ３を含む。態様によっては、軽鎖可変領域は、ＣＤＲ１で１、２、または３個のアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）され、かつ／またはＣＤＲ２で１または２個、あるいは１個だけアミノ酸が置換（例えば、保存的置換）されている配列番号１０５または１０７に記載の可変領域配列の３つのＣＤＲを含む。

【0099】

本発明のさらなる一態様では、上記実施形態のいずれかによる抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体はモノクローナル抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む）である。一態様では、抗体は、実質的に完全な長さの抗体（例えば、ＩｇＧ抗体、または本明細書で規定した他の抗体クラスすなわちアイソタイプ）である。

【0100】

態様によっては、本開示による抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、リガンドを阻害する１価の形態の抗体である。

【0101】

態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、二重特異性または多特異性形態で用いられる。例えば、実施形態によっては、抗体は、さらに以下で記載する治療抗体を含む二重特異性または多特異性抗体に組み込まれていてもよい。

【0102】

Ｆｃ操作
本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、本願に記載のように、例えば血清半減期の延長及び／又は補体結合、Ｆｃ受容体結合及び／又は抗体依存的細胞媒介細胞傷害を含む、抗体エフェクター機能の減少等の、抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるように操作された変異Ｆｃ領域であり得る。更に、本願抗体は、化学的に改変され（例えば１つ以上の化学部分が抗体に結合され得る）、又はそのグリコシル化を変化させるように改変され、その抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるように改変され得る。Ｆｃ領域に存在するアミノ酸を記載する目的で、位置はＥＵインデックスナンバリングを用いて番号付けられ、「（位置番号）Ｘ」という表記は、位置番号に示す位置に存在するアミノ酸Ｘが存在することを意味する。Ｆｃ領域の変異を記載するための「Ｘ（位置番号）Ｙ」という表記は、位置番号に示す位置に存在するアミノ酸ＸがＹに置き換えられることを意味する。例えばＬ２３４Ａは、Ｆｃ領域において、参照Ｆｃ領域配列の位置２３４に存在するＬがＡに置き換えられることを意味する。同様に、位置番号と「－」が組み合わせられた「（位置番号）－」は、Ｆｃ領域の位置番号に示す位置のアミノ酸の欠失を意味する。例えば、「２３６－」は、Ｆｃ領域において、参照Ｆｃ領域配列における位置２３６の残基が欠失していることを意味する。

【0103】

幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体のＦｃ領域に、例えば安定性を増大する及び／又はエフェクター機能を減少する、１つ以上のアミノ酸改変が導入され得る。従って、Ｆｃ領域変異は、天然のＦｃ領域配列と比較して１つ以上の置換等アミノ酸変異を含む、人ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４Ｆｃ領域配列等の人Ｆｃ領域配列を含み得る。また、Ｆｃ領域変異体は、更なる改変を含み得る。従って、幾つかの態様において、当該Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４領域に対し、８０％以上、８５％以上、９０％以上、又は９５％以上の同一性を有し、本願記載の特定のＦｃ領域改変を含む。

【0104】

幾つかの態様において、エフェクター機能の減少した本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１つ以上のアミノ酸改変；又は２つ以上の改変を含む。幾つかの態様において、１つ以上の改変は、位置228, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 268, 309, 322, 327, 330, 331, 233, 242,259, 287, 292, 297, 302, 306, 323, 332, 334, 252, 254, 256, 232, 233, 267, 328, 252, 254, 256及び329からなる群から選択されるＦｃ領域位置で起こる。

【0105】

幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、位置234, 235, 236, 237, 238, 267, 268, 297, 309, 322, 327, 330, 331及び328からなる群から選択されるＦｃ領域位置に１つ以上のアミノ酸改変を含む。幾つかの態様において、当該抗体は、更に、位置232, 233, 242, 252, 254, 256, 259, 287, 292, 302, 306, 323, 329, 332,及び334からなる群から選択される位置で、Ｆｃ領域中に１つ以上の改変を含む。

【0106】

幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、228P, 233P, 234V, 234A/V, 234F, 235A, 235E, 235Q, 236^- (即ち位置236の残基の欠失), 237A, 238S, 242C, 252Y, 254T, 256E, 259C, 268A, 287C, 292C, 297C, 297A, 297G, 297Q, 302C, 306C, 309L, 322Q, 323C, 327G, 329G, 330S, 331S, 332C,及び334Cからなる群から選択される１つ以上の残基を有するＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、228P, 233P, 234V, 234A/V, 234F, 235A, 235E, 235Q, 236^- (即ち位置236の残基の欠失), 237A, 238S, 242C, 252Y, 254T, 256E, 259C, 268A, 287C, 292C, 297C, 297A, 297G, 297Q, 302C, 306C, 309L, 322Q, 323C, 327G, 329G, 330S, 331S, 332C,及び334Cからなる群から選択される２つ以上又は３つ以上の残基を有するＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、234A及び235Aを含むＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、327G, 330S,及び331Sを含むＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、327G, 330S,及び331Sを含むＦｃ領域を含む。を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、233P, 234V, 235A,及び236-を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、233P, 234V,及び235Aを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、233P, 234V, 235A, 236-, 327G, 330S,及び331Sを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、233P, 234V, 235A, 327G, 330S,及び331Sを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、297A/G/Qを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、242C, 297C,及び334Cを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、287C, 297G,及び306Cを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、292C, 297G,及び302Cを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、297G, 323C,及び332Cを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、259C, 297G,及び306Cを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、234F, 235Q, 322Q, 252Y, 254T,及び256Eを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、234A, 235A,及び329Gを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、330S及び331Sを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、234A, 237A, 238S, 268A, 309L, 330S,及び331Sを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、233P, 234V, 235A,及び236^-を含む。幾つかの態様において、前記抗体は、228P, 234V,及び235Aを含む。幾つかの態様において、前記抗体は、228P及び235E/Aを含む。

【0107】

幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、エフェクター機能が減少した人ＩｇＧ１Ｆｃ領域変異体を含むＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ１Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ１Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し８５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ１Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ１Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し９０％以上、又は９５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記Ｆｃ領域は、エフェクター機能が減少し、かつ前記抗体の血清半減期を増大する改変を有する人ＩｇＧ１Ｆｃ領域変異体を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変L234A及びL235Aを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変A327G, A330S,及びP331Sを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変E233P, L234V, L235Aを含み、更にアミノ酸改変G236-,アミノ酸改変G236-, A327G, A330S,及びP331S;又はアミノ酸改変A327G, A330S,及びP331Sを含み得る、人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変N297A/G/Qを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変L242C, N297C,及びK334Cを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変A287C, N297G,及びL306Cを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変R292C, N297G,及びV302Cを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変N297G, V323C,及びI332Cを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変V259C, N297G,及びL306Cを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変L234F, L235Q, K322Q,及びM252Y, S254T, T256Eを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変L234A, L235A,及びP329Gを含む人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、N297A, N297G, N297Q, N297C, D265A, L234A, L235A, G237A, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E, L235Q, P329G, P331S, P331G, S267E, L328F, A287C, L306C, R292C, V259C, V302C, K322Q, V323C, I332C, A330L, A327G, A330S, L242C,及びK334Cからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸改変、又は２つ以上のアミノ酸改変を含む、人ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。

【0108】

幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、エフェクター機能が減少した人ＩｇＧ２Ｆｃ領域変異体を含むＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ２Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ２Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し８５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ２Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ２Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し９０％以上、又は９５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記Ｆｃ領域は、エフェクター機能が減少し、かつ前記抗体の血清半減期を増大する改変を有する人ＩｇＧ２Ｆｃ領域変異体を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変A330S及びP331Sを含む人ＩｇＧ２Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S,及びP331Sを含む人ＩｇＧ２Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、１つ以上のアミノ酸改変V234A, G237A, H268Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, S267E, L328F, M252Y, S254T,及びT256Eを含む人ＩｇＧ２Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、V234A, G237A, P238S, H268Q, V309L, A330S, P331S S267E, S267E,及びL328Fからなる群から選択される位置に１つ以上の改変又は２つ以上の改変を含む人ＩｇＧ２Ｆｃ領域を含む。

【0109】

幾つかの態様において、幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、エフェクター機能が減少した人ＩｇＧ４Ｆｃ領域変異体を含むＦｃ領域を含む。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ４Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ４Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し８５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記人ＩｇＧ４Ｆｃ領域変異体は、天然の人ＩｇＧ４Ｆｃ領域アミノ酸配列に対し９０％以上、又は９５％以上の同一性を有する。幾つかの態様において、前記Ｆｃ領域は、エフェクター機能が減少し、かつ前記抗体の血清半減期を増大する改変を有する人ＩｇＧ４Ｆｃ領域変異体を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変E233P, F234V, L235A,及びG236-を含む人ＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変E233P, F234V,及びL235Aを含む人ＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、アミノ酸改変S228P及びL235E/Aを含む人ＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む。幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、E233P, L235A又はL235E, G237A, L236E, S267E, E318A,及びL328Fからなる群から選択される１つ以上の改変を含む人ＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む。

【0110】

幾つかの態様において、本願抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の野生型人Ｆｃ領域の位置３２９のプロリンは、グリシン若しくはアルギニン、又はＦｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのＴｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体接触面内のプロリンサンドウィッチを破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基である(Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000))。幾つかの態様において、前記抗体は、１つ以上の更なるアミノ酸置換を含む。一つの態様において、当該更なるアミノ酸置換は、S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D,又はP331Sである。幾つかの態様において、当該更なるアミノ酸置換は、人ＩｇＧ１Ｆｃ領域のL234A及びL235A、又は人ＩｇＧ４Ｆｃ領域のS228P及びL235Eである(例えばUS 2012/0251531)。他の態様において、当該更なるアミノ酸置換は、人ＩｇＧ１Ｆｃ領域のL234A及びL235A及びP329Gである。

【0111】

幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、238, 265, 269, 270, 297, 327及び329からなる群から選択されるＦｃ領域の位置で、１つ以上のアミノ酸置換を含む(U.S. Patent No. 6,737,056)。そのようなＦｃ変異体は、265及び297残基がアラニンに置換された所謂「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体(US Patent No. 7,332,581)を含む、アミノ酸位置265, 269, 270, 297及び327の２つ以上の置換を有するＦｃ変異体を含む。

【0112】

幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、様々な人ＩｇＧアイソタイプに由来するＣＨドメインを含む。例えば、幾つかの態様において、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、ＩｇＧ２ＣＨ１ドメイン及びヒンジ配列、例えば配列ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(配列番号１１４)、及びアミノ酸置換S267E及び/又はL328F;及び/又はN297A又はN297Qを含むＩｇＧ１ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン配列を含み得る。幾つかの態様において、エフェクター機能が減少した抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、人ＩｇＧ２及びＩｇＧ４配列を含む。例えば、そのような抗体は、人ＩｇＧ２のアミノ酸１１７～２６０、及び人ＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７を含み得る。

【0113】

エフェクター機能の減少又は抗体半減期は、任意の適切なアッセイを用いて評価され得る。例えば、ＣＤＣ及び/又はＡＤＣＣ活性の減少を確認するために、インビトロ及び/又はインビボ細胞傷害性アッセイが行われ得る。幾つかの態様において、ＦｃγＲへの結合が減少した及び/又は検出不可能なことを判定するために、Ｆｃ受容体結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、U.S. Patent No. 5,500,362 (例えばHellstrom, I . et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985); 5,821 ,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351 -1361 (1987))に記載されている。或いは、非放射性アッセイが採用され得る(例えばフローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ(Promega, Madison, Wl))。

【0114】

そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核球細胞(ＰＢＭＣ)及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。或いは、又は加えて、所望の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるような動物モデル等においてインビボで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイも、抗体がｃｑに結合できない又は結合活性が低下しているためＣＤＣ活性が低下していることを確認するために実施され得る。例えばWO 2006/029879及びWO 2005/100402のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイが実施され得る(例えばGazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101 : 1045-1052 (2003);及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004))。

【0115】

典型的な態様において、エフェクター機能が減少した変異Ｆｃ領域は、野生型対応Ｆｃ領域と同じアッセイ及び抗体フォーマットを用いて比較した場合、エフェクター機能が少なくとも３０％、又は５０％以上減少している。

【0116】

本願エフェクター機能が減少したＦｃ領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、血清半減期が増大する改変も含み得る。幾つかの態様において、典型的に血清半減期に相関するＦｃＲｎ結合活性も評価され得る。半減期が増大し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合が改善した抗体は、US2005/0014934A1 (Hinton et al.)に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＲｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基434の置換(US Patent No. 7,371 ,826)等の、Ｆｃ領域残基238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311 , 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424又は434の１つ以上における置換を含む。Ｆｃ領域変異体の他の例に関するDuncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); U.S. Patent No. 5,648,260; U.S. Patent No. 5,624,821;及びWO 94/29351も参照されたい。血清半減期を改善する追加の変異は、ＹＴＥ変異、即ちそれぞれ位置２５２、２５４及び２５６のアミノ酸Ｙ、Ｔ及びＥの変異を含む。ＦｃＲｎ結合やインビボクリアランス/半減期の決定は、本分野で既知の方法を用いて実施され得る(例えばPetkova, S.B. et al. , Int'l. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006))。典型的な態様において、安定性の増大をもたらす変異Ｆｃ領域は、対応する野生型抗体と比較して、血清半減期が５％以上、又は１０％以上、２０％以上増大する。

【0117】

幾つかの態様において、生体半減期は、Presta et alによるU.S. Patent Nos. 5,869,046及び6,121,022に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２領域の２つのループから取ったサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１又はＣＬ領域内のＦｃ領域を改変することによって増大し得る。幾つかの態様において、人ＩｇＧ２のシステイン位置C232及びC233等の安定化変異が導入され、ジスルフィド結合交換が阻止されることにより、ＩｇＧ２－Ａコンフォーメーション中の人ＩｇＧ２が安定化する。

【0118】

さらに他の実施形態では抗体のグリコシル化が修飾されている。例えば、非グリコシル化抗体または変更したグリコシル化パターンを持つ抗体を作製してもよい。例えば、抗体の抗原に対する親和性を高める、あるいはＦｃ領域での場合はエフェクター機能に影響を及ぼすようにグリコシル化を変えてもよい。そのような炭水化物の修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変更することで達成されてもよい。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を脱離させるように１個以上のアミノ酸を置換し、これによりその部位のグリコシル化を脱離させてもよい。そのようなグリコシル化により、抗体の抗原に対する親和性を高めてもよい。
癌の治療

【0119】

本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、任意の数の癌を治療するのに用いられてもよい。本開示の態様によっては、抗体を用いて、高濃度のＳｉｇｌｅｃ－７の発現を伴うＣＤ８＋Ｔ細胞などの免疫細胞の浸潤を示す癌を治療する。態様によっては、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を用いて、Ｓｉｇｌｅｃ－７を発現しているＮＫ細胞または単球の浸潤を示す癌を治療してもよい。

【0120】

従って、態様によっては、本開示は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体で治療する候補である対象を確認する方法を提供する。従って、一態様では、本発明は、患者から得られた腫瘍試料中のＳｉｇｌｅｃ－７を発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤の量を確認する方法を提供する。態様によっては、この腫瘍試料は一次腫瘍に由来する。別の実施形態では、この腫瘍試料は転移性病変である。例えば、Ｔ細胞などの細胞表面でのＳｉｇｌｅｃ－７の発現濃度を、免疫組織化学検査またはフローサイトメトリーなど任意のアッセイを用いて測定してもよい。腫瘍浸潤性Ｔ細胞表面でのＳｉｇｌｅｃ－７の発現濃度の決定という文脈でＳｉｇｌｅｃ－７の「過剰発現」は、分析している細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）の少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも２５％、または少なくとも３０％、またはそれ以上が細胞表面で検出可能なＳｉｇｌｅｃ－７を発現しているものと見なされる。従って、この文脈での「過剰発現」は検出可能なＳｉｇｌｅｃ－７を発現しているＴ細胞の百分率を指す。この文脈での「過剰発現」は、検出可能なＳｉｇｌｅｃ－７を発現しているＴ細胞の百分率を指す場合に検出可能なＳｉｇｌｅｃ－７を発現しているＴ細胞の「数の増加」または「濃度の上昇」という用語と同義である。

【0121】

腫瘍が発現しているＳｉｇｌｅｃ－７リガンドの濃度はまた、典型的に高くなっている。腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ－７の検出可能な結合が腫瘍細胞表面で観察される場合、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドを発現していると見なされる。態様によっては、評価される試料中、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、またはそれ以上の腫瘍細胞表面でＳｉｇｌｅｃ－７リガンドが発現していれば、これを抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体で治療する患者を決定するための選択基準として用いてもよい。

【0122】

本明細書で記載するように、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体で任意の癌を治療してもよい。態様によっては、この癌は上皮性悪性腫瘍または肉腫である。態様によっては、この癌は血液癌である。態様によっては、この癌は乳癌、前立腺癌、精巣癌、腎細胞癌、膀胱癌、卵巣癌、頸部癌、子宮内膜癌、肺癌、結腸直腸癌、肛門癌、脾臓癌、胃癌、食道癌、肝細胞癌、頭部および頸部癌、膠芽細胞腫、中皮腫、メラノーマ、または骨あるいは軟組織肉腫である。態様によっては、この癌は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄白血病、副腎皮質上皮性悪性腫瘍、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫、基底細胞上皮性悪性腫瘍、胆管癌、膀胱癌、骨腫瘍、脳幹グリオーマ、脳癌、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、上衣腫、髄芽腫、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、視覚伝導路および視床下部膠腫、乳癌、気管支腺腫、バーキットリンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、頸部癌、軟骨肉腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、大腸癌、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、類上皮血管内皮腫（ＥＨＥ）、食道癌、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、眼球内メラノーマ、網膜芽、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ），胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性腫瘍、胃カルチノイド、有毛細胞白血病、頭部および頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部および視覚伝導路神経膠腫、小児、眼球内メラノーマ、島細胞上皮性悪性腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、白血病、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌，リンパ腫、マクログロブリン血症、男性乳癌、悪性骨線維性組織球腫、髄芽腫、メラノーマ，メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平上皮頸部癌、口癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄白血病、成人急性、骨髄増殖性障害、慢性、粘液腫、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭上皮性悪性腫瘍、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、乏突起膠腫、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、脾臓癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽細胞腫、下垂体腺腫、血漿細胞新生物、胸膜肺芽腫、一次中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎臓細胞上皮性悪性腫瘍、網膜芽、横紋筋肉腫、唾液腺癌、ユーイング肉腫、カポジ肉腫、軟組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、非メラノーマ皮膚癌、メラノーマメルケル細胞皮膚上皮性悪性腫瘍、小腸癌、扁平上皮細胞上皮性悪性腫瘍、扁平上皮頸部癌、胃癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行細胞癌、妊娠性絨毛性腫瘍、尿道癌、子宮癌、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍である。

【0123】

一態様では、本開示の方法は、前記癌の治療に好適な投与計画を用いて医薬組成物として治療有効量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を癌患者に投与することを含む。この組成物は、様々な薬物送達システムで用いられるために処方されてもよい。また、適切な製剤のため、この組成物は１種以上の生理学的に容認可能な賦形剤または担体を含んでいてもよい。本発明で用いる適切な製剤は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Philadelphia, PA. Lippincott Williams & Wilkins, 2005に見られる。

【0124】

上記の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、注射用の殺菌等張水溶液など、患者に投与するのに好適な溶液で提供される。この抗体は、容認可能な担体中に好適な濃度で溶解または懸濁している。態様によっては、この担体は例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの水性である。この組成物は、生理学的条件に近づけるのに必要な補助的な医薬品物質（例えば、ｐＨ調製および緩衝剤、等張調整剤など）を含んでいてもよい。

【0125】

病気またはその病気の症状およびその合併症を治癒する、あるいは少なくとも部分的に抑えるのに十分な量でこの医薬組成物を患者に投与する。これを達成するのに適切な量は、「治療有効投与量」として定義される。治療有効投与量は、患者の治療に対する応答を監視することで決定される。治療有効投与量を示す典型的な基準は、患者の病気の症状の改善を含む。この使用に有効な量は、病気の重症度および患者の一般的な健康状態（年齢、重量、性別、投与経路などの他の因子を含む）に依存する。患者が必要または許容する投与量と頻度により、抗体を単回または複数回投与してもよい。いずれにしても、上記方法は、効果的に患者を治療するのに十分な量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を提供する。

【0126】

任意の好適な手段（例えば、非経口投与、肺内投与、経鼻投与の他、腫瘍内投与などの局所投与を含む）で抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を投与してもよい。非経口注入は、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与を含む。態様によっては、抗体を吹き入れて投与してもよい。例示的な一実施形態では、抗体を４℃の注射用殺菌等張水性生理食塩水溶液中に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で保存しておいてもよく、患者に投与する前に注射ように１００ｍｌまたは２００ｍｌの０．９％塩化ナトリウムで希釈する。態様によっては、０．０１～２５ｍｇ／ｋｇの投与量で１時間かけて静脈注入により抗体を投与する。他の実施形態では、１５分～２時間かけて静脈注入により抗体を投与する。さらに他の実施形態では、投与手順は皮下急速静注注射によるものである。

【0127】

抗体の投与量は、患者に有効な治療を提供するために選択され、０．０１ｍｇ／ｋｇ（体重）～約２５ｍｇ／ｋｇ（体重）未満の範囲あるいは患者あたり１ｍｇ～２ｇの範囲である。投与量は０．１～１０ｍｇ／ｋｇまたは約５０ｍｇ～１０００ｍｇ／患者の範囲であることが好ましい。この投与量を適切な頻度で繰り返してもよく、その頻度は、抗体の薬物動態（例えば、循環血中の抗体の半減期）および薬力学的応答（例えば、抗体の治療効果の継続）に応じて１日１回から３ヶ月あるいは６ヶ月に１回の範囲であってもよい。態様によっては、生体内での半減期が約７～約２５日として、抗体の投与を１週間に１回から３ヶ月または６ヶ月に１回の頻度で繰り返す。他の実施形態では、１ヶ月に約１回抗体を投与する。

【0128】

抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を１種以上の追加の治療薬（例えば、化学療法薬および／または追加の免疫療法）と共に投与してもよい。

【0129】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を他のチェックポイント阻害剤と併用して投与してもよい。一態様では、チェックポイント阻害剤は生物学的治療または小分子である。他の態様では、チェックポイント阻害剤はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、融合タンパク質、またはこれらの組み合わせである。特定の態様では、チェックポイント阻害剤はチェックポイントタンパク質を阻害し、このチェックポイントタンパク質はＣＴＬＡ－４、ＰＤＬｌ、ＩＣＯＳ、ＰＤＬ２、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＰＤｌ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＬＡＧ３、ＫＩＲ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ，ＭＡＲＣＯ、ＯＸ－４０、ＳＬＡＭ、２Ｂ４、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１６０、ＣＤ３９、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＣＧＥＮ－１５０４９、２Ｂ４、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ７ファミリーリガンド、またはこれらの組み合わせであってもよい。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌｌの阻害剤である。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１の阻害剤である。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＣＴＬＡ－４の阻害剤である。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＬＡＧ３の阻害剤である。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＴＩＭ３の阻害剤である。態様によっては、上記免疫チェックポイント阻害剤はＩＣＯＳである。

【0130】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を、腫瘍細胞抗原を標的する抗体など、治療抗体と併用して投与してもよい。治療抗体の例としては、リツキシマブ、トラスツズマブ、トシツモマブ、イブリツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ベバシズマブ、エロツズマブ、ネシツムマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、アドトラスツズマブ、パニツムマブ、ペムブロリズマブ、ペルツズマブ、ラムシルマブ、およびラニビズマブが挙げられる。

【0131】

態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を化学療法薬と共に投与する。癌化学療法薬の例としては、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ））；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパ）；エチレンイミンおよびメチルメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチローロメラミンを含む）；窒素マスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロレタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、レドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質（例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルチェロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン）； 代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ））；葉酸類縁体（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリトリメトレキサート）；プリン類縁体（例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジン類縁体（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ）；男性ホルモン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；抗副腎薬（例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン）；葉酸補充薬（例えば、フォリン酸）； アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモル；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類縁体（例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；ドセタキセル、白金；エトポシド（ＶＰ－１６））；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；CPT-1 1；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体（例えば、ベキサロテン、アリトレチノイン）；デニロイキン・ディフティトックス；エスペラミシン；カペシタビン；およびこれらのいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。またこの定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤が含まれる。例えば、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ミフェプリストン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY 1 17018、オナプリストン、およびトレミフェン（フェアストン）を含む）；および抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロレリン、およびゴセレリン；およびこれらのいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、または誘導体などが挙げられる。さらに癌治療薬は、ソラフェニブおよび他のタンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、アファチニブ、アキシチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ルキソリチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、およびスニチニブ）；シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、およびその他のｍＴＯＲ阻害剤を含む。追加の化学療法薬としては、例えば、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン、およびこれらの類縁体または代謝物質、およびドキソルビシン）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、およびダウノルビシン）；アルキル化剤（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、およびシクロホスファミド）；ＤＮＡ干渉物質（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチン）；ＤＮＡ干渉物質および遊離ラジカル発生剤（例えば、ブレオマイシン；およびヌクレオシド模倣物（例えば、５－フルオロウラシル、カペシチビン、ゲムシタビン、フルダラビン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、およびヒドロキシ尿素）が挙げられる。また、例示的な化学療法薬としては、パクリタキセル、ドセタキセル、および関連類縁体；ビンクリスチン、ビンブラスチン、および関連類縁体；サリドマイド、レナリドミド、および関連類縁体（例えば、CC-5013およびCC-4047）；タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブおよびゲフィチニブ）；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）；ＮＦ－κΒ阻害剤（ΙκΒキナーゼの阻害剤および癌で上方調節、過剰発現、または活性化されることが知られており、その阻害は細胞複製を下方調節するその他のタンパク質または酵素の阻害剤を含む）が挙げられる。追加の薬剤としては、アスパラギナーゼおよびカルメット・ゲラン桿菌の調製剤が挙げられる。

【0132】

また、細胞系治療（例えば、ＮＫ又はＴ細胞治療または癌ワクチンなど）と併用して抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を癌患者に投与してもよい。場合によっては、癌ワクチンはペプチド系ワクチン、核酸系ワクチン、細胞系ワクチン、ウイルス系またはウイルス断片系ワクチン、あるいは抗原提示細胞（ＡＰＣ）系ワクチン（例えば、樹状細胞系ワクチン）である。癌ワクチンは、Gardasil（登録商標）、Cervarix（登録商標）、シプリューセル－Ｔ(Provenge登録商標)、NeuVax（登録商標）、HER-2 ICDペプチド系ワクチン、HER-2/neuペプチドワクチン、AdHER2/neu樹状細胞ワクチン、HER-2刺激(pulsed)DC1ワクチン、Ad-sig-hMUC-l/ecdCD40L融合タンパク質ワクチン、MVX-ONCO-1、hTERT/サルビビン/CMV多ペプチドワクチン、E39、J65、PlOs-PADRE、rV-CEA-Tricom、GVAX(登録商標)、Lucanix(登録商標)、HER2 VRP、AVX901、ONT-10、ISAlOl、ADXSl 1-001、VGX-3100、INO-9012、GSK1437173A、BPX-501、AGS-003、IDC-G305、HyperAcute(登録商標)-Renal (HAR)免疫治療法、Prevenarl3,MAGER-3.A1、NA17.A2、DCVax-Direct、潜伏膜タンパク質-2(LMP2)-充填樹状細胞ワクチン(NCT02115126)、HS410-101 (NCT02010203, Heat Biologies)、EAU RF 2010-01 (NCT01435356, GSK)、140036 (NCT02015104, Rutgers Cancer Institute of New Jersey)、130016 (NCTO 1730118, National Cancer Institute)、MVX-201101 (NCT02193503,Maxivax SA)、ITL-007-ATCR-MBC(NCT01741038, Immunovative Therapies, Limited)、CDR0000644921 (NCT00923143, Abramson cancer center of the University of Pennsylvania)、SuMo-Sec-01 (NCT00108875, JuliusMaximilians Universitaet Hospital)、またはMCC-15651 (NCT01176474,Medarex, Inc, BMS)を含む。

【0133】

本発明の文脈で本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体と共に投与される治療薬は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の投与の前あるいは後に投与されてもよい。態様によっては、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、追加の治療薬と同時に投与されてもよい。

【0134】

以下の実施例は例示目的で提供されており、本発明を限定する意図ではない。当業者には自明だが、本質的に同じ結果を得るために様々な重要でないパラメータを変更または修正してもよい。

【実施例】

【0135】

実施例１ 腫瘍浸潤性Ｔ細胞表面でのＳｉｇｌｅｃ－７の検出
Mylteni GentleMACSを用いて、製造者の指示に従ってヒト一次腫瘍試料に由来する細胞を含む試料を準備した。細胞を蛍光活性化細胞選別により分析して、生存率マーカーとしてＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ４５、および７－ＡＡＤを含む免疫細胞表面マーカーを決定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を7-AAD- CD45+ CD3+ CD8+として同定し、ゲートを設定した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－７－ＰＥ（クローンＳ７．７、Biolegend）を用いてＳｉｇｌｅｃ－７濃度を検出した。その結果から、Ｓｉｇｌｅｃ－７の発現の百分率（図４）と濃度（図５）が腫瘍のサブセットのＣＤ８＋腫瘍浸潤性Ｔ細胞表面で高くなっていることが判明した。

【0136】

実施例２ 腫瘍細胞表面でのＳｉｇｌｅｃ－７リガンドの検出
腫瘍細胞表面のリガンド濃度を評価した。組み換えＳｉｇｌｅｃ－７－Ｆｃ融合タンパク質の特異的結合を用いて、新しい一次腫瘍から単離した細胞表面でのＳｉｇｌｅｃ－７リガンドの濃度を評価した。特異性の対照として、０．１Ｕ／ｍＬのシアリダーゼ／ノイラミニダーゼ(Roche)で細胞を処理して、細胞表面からシアル酸を取り除いた。その結果から、Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンドが腫瘍の様々なサブセットに由来する腫瘍細胞の表面で検出されたことが判明した（図６）。細胞のシアリダーゼ処理（すなわち、細胞膜からのシアログリカンの「剥ぎ取り」）により、結合が取り除かれた。

【0137】

実施例３ Ｋ _Ｄ が向上した抗体
Ｓｉｇｌｅｃ－７への結合に関して抗体群を評価した。その結果から、市販の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体に比べてＫ_Ｄ値が向上した抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が確認された（図７）。

【0138】

実施例４ Ｓｉｇｌｅｃ－７リガンド阻害活性を持つ抗体
濃度を高めた抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の存在下、組換えＳｉｇｌｅｃ－７－ＦｃをＡ３７５細胞に加えて、細胞表面での複合体の結合を検出した。その結果から、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－７と様々な能力を持つＡ３７５ヒトメラノーマ細胞の表面に存在するリガンドとの相互作用を阻害することが判明した（図８）。また、この抗体は市販の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体に対してリガンド阻害活性が向上していることが判明した。

【0139】

実施例５ Ｓｉｇｌｅｃ－７内部移行活性を持つ抗体
抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の濃度を高めて、一次ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を２４時間インキュベートし、競合しない抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を用いてＮＫ細胞の細胞表面に残留したＳｉｇｌｅｃ－７を検出した。その結果から、抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体が様々な能力を持つ一次ヒトＮＫ細胞表面のＳｉｇｌｅｃ－７を内部移行させた（図９）ことが判明した。またこの抗体は、市販あるいは上記の抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体に比べて内部移行活性が向上していたことが判明した。モノクローナル抗体３Ｆ１を用いてヒトＮＫ細胞表面のＳｉｇｌｅｃ－７の素早い濃度依存性の抗体誘導内部移行を評価した。３Ｆ１は、市販のＳ７．７抗体に比べてより能力の高い内部移行活性を示した（図１０）。

【0140】

モノクローナル抗体８Ａ２の評価（図１１）から、この抗体はＳｉｇｌｅｃ－７／リガンド相互作用を阻害しない（左パネル）が、一次ヒト免疫細胞表面のＳｉｇｌｅｃ－７の内部移行を生じさせる（右パネル）ことが判明した。

【0141】

実施例６ ヒト化配列
モノクローナル抗体１６Ｈ１１および８Ａ２を用いてヒト化抗体を生成し、ヒト化内部移行抗Ｓｉｇｌｅｃ７抗体を生成した。

【0142】

Ｓｉｇｌｅｃ７に対する結合について１６Ｈ１１由来のヒト化抗体を評価した。抗体結合の結果（１価のＦａｂの形態で測定）を表１に示す。以下の重鎖および軽鎖可変領域を持つ抗体はＫ_Ｄ値（１価のＦａｂ）が約７５ｎＭ以下であった：ＶＨ４３８－４およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４０－２およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４１－２およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４３－１およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４４－２およびＶＬ４１８－２、ＶＨ４４５－３およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４９－４およびＶＬ４４８－３；ＶＨ４４９－６およびＶＬ４１８－２；ＶＨ３８７－１１およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４６－７およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４４６－７およびＶＬ４４８－３；ＶＨ４６３－２およびＶＬ４１８－２；Ｖｈ４６３－２およびＶＬ４４８－３；ＦＨ４６５－１７およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４８４－６およびＶＬ４１８－２；ＶＨ４８４－６およびＶＬ４４８－３；およびＶＨ４８４－７およびＶＬ４４８－３。選択した抗体ＡＫ４１０－１／ＡＫ４１８－２、ＡＫ４４６－７／ＡＫ４１８－２、およびＡＫ４４６－７／ＡＫ４４８－３（表１のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対で示される）の分析によって示されるように、１６Ｈ１１抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体のリガンド阻害活性は保存されている。

【表1】

方法
Ｋ_Ｄの測定

【0143】

バイオレイヤー干渉法(ForteBio)により抗体結合分析を行った。２５℃、１倍のForteBio Kinetics緩衝超純水溶液(ForteBio18-132)中でこのアッセイを行った。０．５ｕｇ／ｍＬで抗体を抗マウス動的（kinetic）センサーで捕捉した。Ｓｉｇｌｅｃ－７－ＥＣＤを検体として用いて、２倍希釈した５０ｎＭ～１．５６ｎＭのアッセイ緩衝液で希釈した。２分間の会合を行い、１０分間解離させた。対照である空の基準ＡＨＣセンサーに対する結果を求めて、ForteBio分析ソフトウェアを用いて１：１のグローバル適合パラメータで分析した。
Fortebioを用いた抗体競合

【0144】

飽和条件（１ｕｇ／ｍＬで１５分）でＳｉｇｌｅｃ－７－ＥＣＤ－ｈｕＦｃを０．５ｕｇ／ｍＬにて抗ヒトＩｇＧ動的センサーで捕捉し、その後、結合に関して競合する抗体を試験した。他のすべての抗体に対して各抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体を２つの方法（すなわち、飽和抗体として、また競合する抗体として）で試験した。センサー表面の抗体が溶液中の抗体と競合する場合、抗原とのさらなる結合は観察されない。結合信号が観察される場合、２つの抗体が競合しないようなかたちで抗原と結合している。
リガンド阻害アッセイ

【0145】

Ｓｉｇｌｅｃ－７に対するリガンドを高濃度で発現しているヒトメラノーマ細胞株Ａ３７５を用いて、細胞系アッセイでの抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の阻害活性を決定した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の２倍連続希釈液（４０ｎＭ～４０ｐＭ）を１０ｎＭのＳｉｇｌｅｃ－７－ＥＣＤ－ＦｃのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／２％のＢＳＡ）と混合し、３０分間氷上でインキュベートした。１ウェルあたり２．５×１０ｅ４のＡ３７５細胞をＦＡＣＳ緩衝液中の丸底の９６ウェル組織培養プレートに加えて、プレートを４００ｇで２分間遠心分離し、上澄みを除去した。細胞を１００ｕｌの抗体－Ｓｉｇｌｅｃ－７複合体に懸濁した。１時間、氷上でインキュベートした後、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中１ｕｇ／ｍｌでＡＦ６４７(Jackson IR labs)に結合させたヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）_２断片と共に３０分間インキュベートした。２回以上洗浄した後、細胞をＰＢＳ／２％ＰＦＡで固定し、Novocyteフローサイトメーター(ACEA biosciences)で捕捉した。ＡＰＣチャネルの平均蛍光強度のプロットとPrism Graphpadソフトウェアを用いたおよび分析に基づいて、阻害に関するＩＣ_５０値を決定した。
内部移行アッセイ

【0146】

健康な提供者の抹消血単核単球（ＰＢＭＣ）を用いて抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の内部移行活性を決定した。上記の凍結保存したＰＢＭＣを解凍して、完全培地（１０％ウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ培地）中３７℃で９０分間インキュベートした。抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体の５倍連続希釈（１００ｎＭ～０．０１ｐＭ）を完全培地で調製した。９６ウェル組織培養プレート内で細胞（１ウェルあたり５×１０ｅ４）および抗体希釈液を混合して、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞をhuFc block (Becton Dickinson)のＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁し、氷上で１時間、ＣＤ３－ＦＩＴＣ、ＣＤ１６－ＰＥ、および抗Ｓｉｇｌｅｃ－７抗体４Ｂ１２－ＡＦ６４７を含む抗体カクテルで染色した。２回の洗浄後、細胞をＰＢＳ／２％ＰＦＡで固定し、Novocyteフローサイトメーターで捕捉した。平均蛍光強度のＮＫ細胞（ＣＤ３－ＣＤ１６＋としてゲートされている）表面でのＡＰＣチャネルでの平均蛍光強度のプロットとPrism Graphpadソフトウェアを用いた分析に基づいて内部移行に関するＩＣ_５０値を決定した。
一次腫瘍分析

【0147】

Mylteni GentleMACS装置を用いて製造者の指示に従って一次ヒト腫瘍試料に由来する単一細胞を調製した。細胞をhuFc block (Becton Dickinson)のＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁し、 免疫細胞表面マーカー（生存率マーカーとしてＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ４５、および７－ＡＡＤを含む）に対する複合抗体を含むカクテルを用いて染色を行った。ＣＤ８＋Ｔ細胞を7-AAD- CD45+ CD3+ CD8+として同定し、ゲートを設定した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－７－ＰＥ（クローンＳ７．７、Biolegend）を用いてＳｉｇｌｅｃ－７の濃度を検出した。細胞をＰＢＳ／２％ＰＦＡで固定して、Novocyteサイトメーターで捕捉した。Flowjoソフトウェア(Tristar)を用いてゲート設定および分析を行った。

【0148】

上記のリガンド阻害アッセイで記載したようにＳｉｇｌｅｃ－７－ＥＣＤ－Ｆｃを用いて腫瘍細胞表面のリガンドの濃度を検出した。特異性の対照として、０．１Ｕ／ｍＬのシアリダーゼ／ノイラミニダーゼ(Roche)で細胞を処理して、シアル酸を細胞表面から除去した。

【0149】

自明であるが、本明細書で記載する実施例および実施形態は例示のためだけであり、その観点から当業者に様々な修正または変更が示唆され、本願の精神および範囲、ならびに添付の請求項の範囲に含まれる。本明細書で引用したすべての文献、特許、受入番号、および特許出願は、引用されている文脈での目的で参照により本明細書に組み込まれる。

【0150】

例示的配列の表

【表2】

配列番号１５ 軽鎖可変領域配列（１６Ｈ１１）；下線部はKabatおよびChothiaの両方に規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWFQQKQGKSPHFLVYSAKALADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGTYYCQHFWSSPYTFGGGTKLEIK
配列番号１６ 軽鎖可変領域配列（２Ｇ１２）；下線部はKabatおよびChothiaの両方に規定されたＣＤＲ
DIVLTQSHKFMSTSVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWTSTRHTGVPDRFTGSGSGTDHTLTISSVQAEDLALYYCHQQYSTPPTFGGGTKLEIK
配列番号１８ 軽鎖可変領域配列（８Ａ２）；下線部はKabatおよびChothiaの両方に規定されたＣＤＲ
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSRVIFMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVRFSGGGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPPTFGAGTKLELK
配列番号１７ 軽鎖可変領域配列（５Ｄ１）；下線部はKabatおよびChothiaの両方に規定されたＣＤＲ
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTIICRASQDISNFLNWYQQKPDGTVKLLMYDTSILQSGVPSRFSGRGSGADYSLTINNLEQEDLATYFCQQGKTLPYTFGGGTKLEIK
配列番号２５ 軽鎖可変領域配列（４Ｂ１２）；下線部はKabatおよびChothiaの両方に規定されたＣＤＲ
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKAVIYSASYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLTEYFCQQYNNYPYTFGGGTKLEIK
配列番号２９～７８ １６Ａ１１由来のヒト化可変領域配列：
配列番号２９ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３８６－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３０ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９２－３アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３１ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９２－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３２ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９３－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIIPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３３ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９３－８アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPIDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３４ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９４－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３５ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３９４－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３６ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４００－５アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３７ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４００－７アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３８ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４００－９アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSSYWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号３９ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４００－１４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４０ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４０１－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWISWVRQAPGQGLEWMGGIYPGFGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４１ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４１７－８アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDVWGQGTMVTVSS
配列番号４２ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４１７－１７ アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号４３ ヒト化Ｖ_Ｈ領域３８７－１１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４４ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４１０－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４５ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４３８－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４６ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４０－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号４７ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４１－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号４８ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４３－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号４９ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４４－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号５０ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４５－３アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTLTADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５１ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４６－７アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５２ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４７－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEINYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５３ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４９－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５４ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４４９－６アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKGSGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGGIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５５ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４６３－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号５６ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４６５－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５７ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４６５－１７アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５８ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４８４－６アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号５９ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４８４－７アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNYWMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号６０ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４８５－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFAMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号６１ ヒト化Ｖ_Ｈ領域４８５－５アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFSNFAMNWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGEIKYNQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDDYLRAMDIWGQGTMVTVSS
配列番号６２ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３８１－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６３ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９０－８アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNSLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６４ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９１－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６５ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９１－８アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSASRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６６ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９５－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGGIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６７ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９５－４アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６８ ヒト化Ｖ_Ｌ領域３９６－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNISNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号６９ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４１８－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７０ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４１９－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７１ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４２１－３アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK
配列番号７２ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４２４－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７３ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４２５－３アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７４ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４２６－２アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７５ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４２７－１アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７６ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４３５－７アミノ酸配列；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGGGTKVEIK
配列番号７７ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４３９－５アミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLEDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK
配列番号７８ ヒト化Ｖ_Ｌ領域４４８－３アミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNYLAWYQQKPGKAPKFLLYSAKRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWSSPYTFGQGTKLEIK
配列番号１０４～１０７ ８Ａ２由来のヒト化可変領域配列：
配列番号１０４ ヒト化重鎖可変領域配列ＲＨＡ；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTTYGWSWIRQPPGKGLEWIGYIWGGGNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKHKGTSHAMEYWGQGTMVTVSS
配列番号１０５：ヒト化軽鎖可変領域配列ＲＫＡ；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRVIFLAWYQQKPGQAPRLLIYDTSNKATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGGGTKVEIK
配列番号１０６ ヒト化重鎖可変領域配列ＲＨＢ；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTTYGVDWVRQPPGKGLEWIGVIWGGGNTNYNSSLKSRVTISKDTSKNQVFLKLSSVTAADTAVYYCAKHKGTSHAMEYWGQGTMVTVSS
配列番号１０７ ヒト化軽鎖可変領域配列ＲＫＢ；下線部はChothiaに規定されたＣＤＲ
QIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRVIFMYWYQQKPGQSPRLLIYDTSNLATGVPARFSGGGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSYPPTFGGGTKVEIK

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【配列表】

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