特許 7344300 ＡＲＣベースのカプシドおよびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-09-05

(45)【発行日】2023-09-13

(54)【発明の名称】ＡＲＣベースのカプシドおよびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/435 20060101AFI20230906BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20230906BHJP

   C12N 15/87 20060101ALI20230906BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20230906BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230906BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230906BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230906BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230906BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230906BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230906BHJP

【ＦＩ】

C07K14/435 ZNA

C12N15/12

C12N15/87 Z

A61K47/42

A61K48/00

A61K31/7088

A61K45/00

A61K39/395 A

A61K39/395 H

A61P35/00

A61P35/02

【請求項の数】 25

(21)【出願番号】P 2021539499

(86)(22)【出願日】2019-09-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-11

(86)【国際出願番号】 US2019051786

(87)【国際公開番号】W WO2020061229

(87)【国際公開日】2020-03-26

【審査請求日】2022-09-16

(31)【優先権主張番号】62/733,015

(32)【優先日】2018-09-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

【早期審査対象出願】

(73)【特許権者】

【識別番号】521107013

【氏名又は名称】ブイエヌブイ ニューコ インク．

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(74)【復代理人】

【識別番号】110003797

【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】マローン，コリン

(72)【発明者】

【氏名】ペイコン，イアン

(72)【発明者】

【氏名】ギルバート，ザック

(72)【発明者】

【氏名】ピーサレフ，アンドレイ

(72)【発明者】

【氏名】フレイツ，アダム

(72)【発明者】

【氏名】クリスプ，ジェシカ

【審査官】北村 悠美子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１８－５１６５５８（ＪＰ，Ａ）

【文献】Cell，2018年01月11日，Vol.172, pp.275-288

【文献】TREND in Genetics，2006年，Vol.22, No.11, pp.585-589

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

組換えの哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチド、および前記哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチドに固有ではない異種のカーゴを含むカプシドであって、ａ）前記哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチドがＡｒｃポリペプチドではないこと、および、ｂ）前記哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチドが、腫瘍随伴性のＭａ抗原ファミリーポリペプチド、レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーポリペプチド、または、ＳＣＡＮドメインファミリーポリペプチドであること、
を特徴とするカプシド。

【請求項2】

前記哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチドは腫瘍随伴性のＭａ抗原ファミリーポリペプチドである、請求項１に記載のカプシド。

【請求項3】

前記腫瘍随伴性のＭａ抗原ファミリーポリペプチドは、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、あるいは、
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
を含む、請求項２に記載のカプシド。

【請求項4】

前記異種のカーゴは核酸である、請求項２に記載のカプシド。

【請求項5】

前記異種のカーゴはＲＮＡである、請求項４に記載のカプシド。

【請求項6】

前記異種のカーゴは治療剤である、請求項２に記載のカプシド。

【請求項7】

前記異種のカーゴはポリペプチドである、請求項２に記載のカプシド。

【請求項8】

前記異種のカーゴは遺伝子編集システムである、請求項２に記載のカプシド。

【請求項9】

第２のポリペプチドをさらに含む、請求項２に記載のカプシド。

【請求項10】

前記第２のポリペプチドは抗体またはその結合フラグメントである、請求項９に記載のカプシド。

【請求項11】

前記第２のポリペプチドは標的部位に結合する、請求項９に記載のカプシド。

【請求項12】

マイクロベシクル、微粒子、リポソーム、またはミセルを含む送達成分をさらに含む、請求項２に記載のカプシド。

【請求項13】

細胞外小胞を含む送達成分をさらに含む、請求項２に記載のカプシド。

【請求項14】

前記哺乳動物内因性のＧａｇポリペプチドはレトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーポリペプチドである、請求項１に記載のカプシド。

【請求項15】

前記レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーポリペプチドは、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、あるいは、
ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、
を含む、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項16】

前記異種のカーゴは核酸である、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項17】

前記異種のカーゴはＲＮＡである、請求項１６に記載のカプシド。

【請求項18】

前記異種のカーゴは治療剤である、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項19】

前記異種のカーゴはポリペプチドである、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項20】

前記異種のカーゴは遺伝子編集システムである、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項21】

第２のポリペプチドをさらに含む、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項22】

前記第２のポリペプチドは抗体またはその結合フラグメントである、請求項２１に記載のカプシド。

【請求項23】

前記第２のポリペプチドは標的部位に結合する、請求項２１に記載のカプシド。

【請求項24】

マイクロベシクル、微粒子、リポソーム、またはミセルを含む送達成分をさらに含む、請求項１４に記載のカプシド。

【請求項25】

細胞外小胞を含む送達成分をさらに含む、請求項１４に記載のカプシド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本特許出願は、２０１８年９月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／７３３，０１５号の利益を主張するものであり、文献は全体として参照によって組み込まれる。

【発明の概要】

【0002】

特定の実施形態において、組換えおよび操作されたＡｒｃポリペプチドと、組換えおよび操作された内因性のＧａｇ（ｅｎｄｏ－Ｇａｇ）ポリペプチドが本明細書で開示されている。いくつかの実施形態では、充填されたまたは空のＡｒｃベースのカプシドおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシド、ならびにカプシドを調製する方法も含まれる。加えて、Ａｒｃベースのカプシドおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを標的の部位に送達する方法も含まれる。

【0003】

特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドと、治療剤とを含むカプシドが本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、治療剤は核酸である。いくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドはヒト内因性のＧａｇポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0004】

本明細書に開示される、特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドを含むカプシドであり、ここで、組換えＡｒｃポリペプチドはラットＡｒｃポリペプチドまたはヒトＡｒｃポリペプチドではない。いくつかの実施形態では、カプシドはカーゴをさらに含む。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、カーゴはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0005】

特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドをコードするＤＮＡをベクターが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ベクターはさらに治療剤をコードする。いくつかの実施形態では、治療剤は核酸である。いくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドはヒト内因性のＧａｇポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0006】

特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドをコードするＤＮＡをベクターが本明細書に開示され、ここで、組換えＡｒｃポリペプチドはラットＡｒｃポリペプチドまたはヒトＡｒｃポリペプチドではない。いくつかの実施形態では、ベクターはさらにカーゴをコードする。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、カーゴはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0007】

特定の実施形態では、細胞にカーゴを送達する方法が本明細書に開示され、上記方法は、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドと、治療剤とを含むカプシドを細胞へ投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤は核酸である。いくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドはヒト内因性のＧａｇポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、細胞は真核細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は脊椎動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、細胞は核酸によってコードされた遺伝子を発現する。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。

【0008】

特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドを含むカプシドを細胞に投与する工程を含む、細胞にカーゴを送達する方法が本明細書に開示され、ここで、組換えＡｒｃポリペプチドはラットＡｒｃポリペプチドまたはヒトＡｒｃポリペプチドではない。いくつかの実施形態では、カプシドはカーゴをさらに含む。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、カーゴはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、細胞は真核細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は脊椎動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、細胞は核酸によってコードされた遺伝子を発現する。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。

【0009】

特定の実施形態では、細胞に核酸をトランスフェクトする方法が本明細書に開示され、上記方法は、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドと、治療剤とを含むカプシドを細胞へ投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤は核酸である。いくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドはヒト内因性のＧａｇポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0010】

特定の実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドまたは組換えの内因性のＧａｇポリペプチドを含むカプシドを細胞に投与する工程を含む、細胞に核酸をトランスフェクトするする方法が本明細書に開示され、ここで、組換えＡｒｃポリペプチドはラットＡｒｃポリペプチドまたはヒトＡｒｃポリペプチドではない。いくつかの実施形態では、カプシドはカーゴをさらに含む。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸である。いくつかの実施形態では、カーゴはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡｒｃポリペプチドは、以下を含むＡｒｃポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、組換えの内因性のＧａｇポリペプチドは、以下を含む内因性のＧａｇポリペプチドである：ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列；あるいは、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２であるアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列。

【0011】

特定の実施形態では、カーゴ結合ドメインと、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドからの少なくとも１つのカプシド形成サブユニットとを含む、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは核酸結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、小分子と結合するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、タンパク質、ペプチド、または抗体あるいはその結合フラグメントに結合するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、ペプチド模倣物またはヌクレオチド模倣物に結合するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＡ Ｎ－ロ－ブおよび／またはＣＡ Ｃ－ローブに対応するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、異なる種のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドからの第２のカプシド形成サブユニットを含む。いくつかの実施形態では、第２のカプシド形成サブユニットは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＡ Ｎ－ロ－ブおよび／またはＣＡ Ｃ－ローブに対応するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットと第２のカプシド形成サブユニットはそれぞれ独立して、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択されたある種のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇから選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットおよび第２のカプシド形成サブユニットは、２つの異なる種に由来する。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第２のカプシド形成サブユニットは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第２のカプシド形成サブユニットは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＮ末端に融合され、および、第２のカプシド形成サブユニットは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、カーゴ結合ドメインは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＣ末端に融合され、および、第２のカプシド形成サブユニットは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、第２のポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、直接、または、リンカーを介して、少なくとも１つのカプシド形成サブユニットの末端に融合される。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、直接、または、リンカーを介して、カーゴ結合ドメインに融合される。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、タンパク質または抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ヒトタンパク質またはウイルスタンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質はヒトＧａｇ様タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、所望の標的受容体に結合するように設計されたデノボ操作（ｄｅ ｎｏｖｏ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）タンパク質である。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、所望の標的部位への、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドによって形成されたカプシドの送達をガイドする。

【0012】

特定の実施形態では、切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドが本明細書に開示され、ここで、カプシド形成、核酸結合、または送達に関与しない部分は除去される。いくつかの実施形態では、上記部分は、マトリックス（ｍＡ）ドメイン、逆転写酵素（ＲＴ）ドメイン、ヌクレオチド結合ドメイン、またはその組み合わせを含み、ただし、ヌクレオチド結合ドメインはヒトＡｒｃＲＮＡ結合ドメインではないとする。いくつかの実施形態では、上記部分はＣＡ Ｃ－ローブドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記部分は、Ｎ末端欠失、Ｃ末端欠失、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端欠失は、最大で１０のアミノ酸、２０のアミノ酸、３０のアミノ酸、または５０のアミノ酸の欠失を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端欠失は、最大で１０のアミノ酸、２０のアミノ酸、３０のアミノ酸、または５０のアミノ酸の欠失を含む。

【0013】

特定の実施形態では、切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドであり得る、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドによって形成されたカプシドによってカプセル化されたカーゴとを含む、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、カーゴは核酸分子である。いくつかの実施形態では、核酸分子はＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡの混合物である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡとＲＮＡはそれぞれ独立して、一本鎖、二本鎖、または一本鎖と二本鎖の混合物である。いくつかの実施形態では、カーゴは小分子である。いくつかの実施形態では、カーゴはタンパク質である。いくつかの実施形態では、カーゴはペプチドである。いくつかの実施形態では、カーゴは抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、カーゴはペプチド模倣物またはヌクレオチド模倣物である。いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとは異なる１つ以上の種のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質からの１つ以上の追加のカプシドサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、非Ａｒｃベースのタンパク質からの１つ以上の追加のカプシドサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加のカプシドサブユニットは、コピアタンパク質、ＡＳＰＲＶ１タンパク質、ＳＣＡＮドメインファミリーからのタンパク質、腫瘍随伴性のＭａ抗原ファミリーによってコードされたタンパク質（例えば、ＰＮＭＡ５、ＰＮＭＡ６、ＰＮＭＡ６ＡとＰＮＭＡ６Ｂ）、レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーからのタンパク質（例えば、ＲＴＬ３、ＲＴＬ６、ＲＴＬ８Ａ、ＲＴＬ８Ｂ）、またはその組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加のカプシドサブユニットは、ＢＯＰ、ＬＤＯＣ１、ＭＯＡＰ１、ＰＥＧ１０、ＰＮＭＡ３、ＰＮＭＡ５、ＰＮＭＡ６Ａ、ＰＮＭＡ６Ｂ、ＲＴＬ３、ＲＴＬ６、ＲＴＬ８Ａ、ＲＴＬ８Ｂ、およびＺＮＦ１８を含む。いくつかの実施形態では、カプシドは少なくとも１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、５０ｎｍ、８０ｎｍ、１００ｎｍ、１２０ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、またはそれ以上の直径を有する。いくつかの実施形態では、カプシドは、約１ｎｍ～約６００ｎｍ、約１ｎｍ～約５００ｎｍ、約１ｎｍ～約２００ｎｍ、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１ｎｍ～約５０ｎｍ、または約１ｎｍ～約３０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態では、カプシドは減少したオフターゲット効果を有する。いくつかの実施形態では、カプシドはオフターゲット効果を有していない。いくつかの実施形態では、カプシドはエクスビボで形成される。いくつかの実施形態では、カプシドはインビトロで形成される。

【0014】

特定の実施形態では、本明細書に記載される組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチド、あるいは組換えまたは操作された内因性のＧａｇポリペプチドをコードする核酸ポリマーが本明細書に開示される。

【0015】

特定の実施形態では、本明細書に記載される組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチド、あるいは組換えまたは操作された内因性のＧａｇポリペプチドをコードする核酸ポリマーを含むベクターが本明細書に開示される。

【0016】

特定の実施形態では、充填されたＡｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを調製する方法が本明細書に開示され、上記方法は、充填されたカプシドを生成するのに十分な時間にわたって、溶液中で、複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチド、あるいは複数の組換えまたは操作された内因性のＧａｇポリペプチドをカーゴでインキュベートする工程を含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、カーゴでインキュベートする前に、複数の操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドを含む溶液を、複数の非Ａｒｃまたは非ｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットと混合する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、複数の非Ａｒｃまたは非ｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットは、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１の比率で、複数の組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと混合される。いくつかの実施形態では、複数の非Ａｒｃまたは非ｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットは、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、または１：１０の比率で、複数の操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと混合される。いくつかの実施形態では、上記方法は、カーゴでインキュベートする前に、複数の切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドを含む溶液を、複数の非Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットと混合する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、複数の非Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットは、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１の比率で、複数の切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと混合される。いくつかの実施形態では、複数の非Ａｒｃまたは非ｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシド形成サブユニットは、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、または１：１０の比率で、複数の切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと混合される。いくつかの実施形態では、複数の操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、細菌細胞系、昆虫細胞系、または哺乳動物細胞系から得られる。いくつかの実施形態では、複数の操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、無細胞系から得られる。いくつかの実施形態では、複数の切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、細菌細胞系、昆虫細胞系、または哺乳動物細胞系から得られる。いくつかの実施形態では、複数の切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、無細胞系から得られる。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシドは、全身投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースカプシドは、局所投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースカプシドは、非経口投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースカプシドは、経口投与のために製剤される。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースカプシドは、局所投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、充填されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースカプシドは、舌下またはエアロゾル投与のために製剤化される。

【0017】

特定の実施形態では、所望の部位へのカーゴの送達のための、操作されたまたは組換えのＡｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドの使用が本明細書に開示され、上記使用は、カプシドの細胞取り込みを促進するのに十分な時間にわたって、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドに、所望の部位の細胞を接触させることを含む。いくつかの実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は固形腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍細胞は、膀胱癌、乳癌、脳癌、大腸癌、腎癌、肝臓癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、または甲状腺癌由来の細胞である。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は血液悪性腫瘍に由来する。いくつかの実施形態では、血液悪性腫瘍はＢ細胞悪性腫瘍またはＴ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、血液悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、または末梢性Ｔ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、細胞は体細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞または前駆細胞である。場合によっては、細胞は間葉系幹細胞または前駆細胞である。場合によっては、細胞は造血幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、筋細胞、皮膚細胞、血液細胞、または免疫細胞である。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は細胞の中で過剰発現されているか、または枯渇している。いくつかの実施形態では、細胞中の標的遺伝子は１つ以上の突然変異を有する。いくつかの実施形態では、細胞は損傷を受けたスプライシング機構を含む。いくつかの実施形態では、使用はインビボでの使用である。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースカプシドは、被験体に全身投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、局所投与を介して被験体に投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、被験体に非経口的に投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースカプシドは、被験体に経口的に投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、被験体に局所的に投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、舌下またはエアロゾル投与を介して被験体に投与される。いくつかの実施形態では、使用はインビトロまたはエクスビボでの使用である。

【0018】

特定の実施形態では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチド、切断されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチド、組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドをコードするベクター、あるいはＡｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを含むキットが本明細書に開示される。

【図面の簡単な説明】

【0019】

本開示の様々な態様が、添付の請求項において具体的に明記されている。本開示の特徴と利点についてのよりよい理解は、本開示の原則が利用されている例示的な実施形態を説明する以下の詳細な記載と以下の添付の図面とを参照することにより得られる。

【図1】例示的なＡｒｃポリペプチドを図示したものである。

【図2】例示的な操作されたＡｒｃポリペプチドを図示したものである。

【図3A】（Ａ）特定のカーゴ（例えば、ＲＮＡペイロード）を運ぶように、または（Ｂ）オフ機能効果を取り除くように、Ａｒｃポリペプチドを操作する例示的な方法を例証する。

【図3B】（Ａ）特定のカーゴ（例えば、ＲＮＡペイロード）を運ぶように、または（Ｂ）オフ機能効果を取り除くように、Ａｒｃポリペプチドを操作する例示的な方法を例証する。

【図4A】イミダゾール勾配を有するＨｉｓＴｒａｐカラムからの溶出による６ｘＨｉｓ－タグ付けヒトＡｒｃの単離を示す。

【図4B】ＮａＣｌ勾配により溶出されたモノＱカラム上の残存する核酸からの６ｘＨｉｓ－タグ付けヒトＡｒｃの分離を示す。

【図5】ネガティブ染色されたヒトＡｒｃカプシドの透過電子顕微鏡画像を示す。

【図6】組換え発現されたＡｒｃオルソログから形成されたネガティブ染色されたカプシドの透過電子顕微鏡画像を示す。

【図7】組換え発現されたｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質から形成されたネガティブ染色されたカプシドの透過電子顕微鏡画像を示す。

【図8】ＨｅＬａ細胞によるＡｌｅｘａ５９４標識されたＡｒｃカプシドの選択的な内在化を示す。

【図9】ＡｒｃカプシドによるＨｅＬａ細胞に対するＣｒｅ ＲＮＡの送達を示す。

【図10】異種のＲＮＡペイロードを伝達する能力についてＡｒｃとｅｎｄｏ－Ｇａｇの遺伝子候補をスクリーニングする方法を例証している。

【発明を実施するための形態】

【0020】

診断薬や治療剤を所望の部位に正確に投与することは、継続的な課題となっている。核酸を細胞に送達する利用可能な方法には、無数の制限がある。例えば、遺伝子治療によく用いられるＡＡＶウイルスベクターは、免疫原性があり、ペイロード容量が３ｋｂ未満と限られており、生体内での分布が悪く、直接注射でしか投与することができず、統合により宿主遺伝子を破壊する危険性がある。非ウイルス性の方法には異なる制限がある。リポソームは主に肝臓に送達される。細胞外小胞は、ペイロード容量が１ｋｂ未満と限られており、拡張性にも限界があり、精製も困難である。したがって、治療用ペイロードを送達する新しい方法に対するニーズが認識されている。

【0021】

ほとんどの分子は、体内で固有の親和性を持たない。他のケースでは、投与された薬剤は、クリアランスのために肝臓や腎臓に蓄積するか、意図しない組織または細胞タイプに蓄積する。送達を改善する方法には、最適な薬剤を疎水性の化合物またはポリマーでコーティングする工程を含む。このようなアプローチは、循環における前記薬剤の持続時間を長くし、細胞への取り込みのための疎水性を増大させる。一方で、このアプローチは、所望の送達部位に積極的にカーゴを誘導するものではない。

【0022】

治療が必要な部位を特異的に標的とするために、治療用化合物は随意に、標的細胞の表面に表示される受容体を認識して結合するリガンド、抗体、およびアプタマーなどの部分に融合する。所望の細胞に到達すると、治療用化合物は随意に、細胞内の標的にさらに送達される。例えば、治療用ＲＮＡは、細胞の細胞質内のリボソームと接触すると、タンパク質に翻訳され得る。

【0023】

Ａｒｃ（活性を制御された細胞骨格関連タンパク質）は、α－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチルイソキサゾール－４－プロピオン酸（ＡＭＰＡ）型グルタミン酸受容体のエンドサイトーシス輸送を調節する。Ａｒｃの活性は、シナプスの強度や神経細胞の可塑性に関連している。マウス実験モデルでＡｒｃを失った表現型は、長期記憶の形成不全や、神経細胞の活性と可塑性の低下などを含んでいた。

【0024】

ＡｒｃはレトロウイルスＧａｇタンパク質と同様の分子特性を示す。Ａｒｃ遺伝子は、Ｔｙ３／ｇｙｐｓｙレトロトランスポゾンに由来することがある。内在性Ｇａｇ（ｅｎｄｏ－Ｇａｇ）タンパク質とは、Ａｒｃを含む真核生物に内在するタンパク質であり、ウイルスのＧａｇタンパク質との類似性が予測され、アノテートされているものである。例示的なｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質は、Ｃａｍｐｉｌｌｏｓ Ｍ、 Ｄｏｅｒｋｓ Ｔ、 Ｓｈａｈ ＰＫ、 ａｎｄ Ｂｏｒｋ Ｐ、 Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｇａｇ－ｌｉｋｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ、 Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ． ２００６ Ｎｏｖ； ２２（１１）：５８５－９に開示されている。ｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質は随意に、原核細胞または真核細胞、あるいは細菌、酵母、昆虫、脊椎動物、哺乳動物、もしくはヒトの細胞を含む、任意の宿主細胞によって組換え発現される。本明細書に記載されているように、いくつかの実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質はｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシドに組み立てられる。

【0025】

特定の実施形態において、所望のカーゴを送達するためにカプシドに組み立てられるＡｒｃおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、所望のカーゴの送達のためにカプシドに組み立てられる、操作されたＡｒｃおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドも本明細書に記載されている。さらなる実施形態では、所望のカーゴを送達するためのカプシド、例えば、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドが本明細書に記載されている。

【0026】

Ａｒｃポリペプチドおよび内因性のＧａｇポリペプチド
特定の実施形態では、Ａｒｃポリペプチドが本明細書に開示される。特定の実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドが本明細書に開示される。ｅｎｄｏ－Ｇａｇ配列がこの段落に記載される任意のタイプの操作されたＡｒｃポリペプチドを形成するためにＡｒｃ配列の任意の代わりであることが理解されるに違いない。

【0027】

いくつかの例では、Ａｒｃは非ヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの例では、Ａｒｃポリペプチドは完全長のＡｒｃポリペプチド（例えば、完全長の非ヒトＡｒｃポリペプチド）を含む。他の例では、Ａｒｃポリペプチドは、カプシドの形成に関与する、切断されたＡｒｃポリペプチドなどの非ヒトＡｒｃの断片を含む。さらなる例では、Ａｒｃポリペプチドは、非ヒトＡｒｃポリペプチドの１つ以上のドメインを含み、ここで、ドメインの少なくとも１つはカプシドの形成に関与する。さらなる例では、Ａｒｃポリペプチドは組換えＡｒｃポリペプチドである。

【0028】

いくつかの例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇは非ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドである。いくつかの例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、完全長のｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド（例えば、完全長の非ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド）を含む。他の例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、カプシドの形成に関与する、切断されたｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドなどの非ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇの断片を含む。さらなる例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、非ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの１つ以上のドメインを含み、ここで、ドメインの少なくとも１つはカプシドの形成に関与する。さらなる例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは組換えのｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドである。

【0029】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃは、ヒトＡｒｃに固有ではないカーゴに結合するように修飾された少なくともそのＲＮＡ結合ドメインを有するヒトＡｒｃポリペプチドである。いくつかの実施態様では、Ａｒｃポリペプチドは、ヒトＡｒｃタンパク質に固有ではないカーゴに結合するように修飾された少なくともそのＲＮＡ結合ドメインを有する完全長ヒトＡｒｃポリペプチドを含む。他の例では、Ａｒｃポリペプチドは、少なくともそのＲＮＡ結合ドメインに修飾を含むヒトＡｒｃ断片を含む。さらなる例では、Ａｒｃポリペプチドは、ヒトＡｒｃポリペプチドの１つ以上のドメインを含み、ここで、ドメインの少なくとも１つはカプシドの形成に関与し、ＲＮＡ結合ドメインは、固有のヒトＡｒｃタンパク質が結合しないカーゴに結合するように修飾れている。さらなる例では、Ａｒｃポリペプチドは、組換えヒトＡｒｃポリペプチドであり、少なくともＲＮＡ結合ドメインは、ヒトＡｒｃタンパク質に固有ではないカーゴのローディングを可能にするように修飾されている。

【0030】

いくつかの実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇは、ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇに固有ではないカーゴに結合するように修飾された少なくともそのＲＮＡ結合ドメインを有するヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドである。いくつかの実施態様では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質に固有ではないカーゴに結合するように修飾された少なくともそのＲＮＡ結合ドメインを有する完全長ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを含む。他の例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、固有のヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質が結合しないカーゴに結合する少なくともそのＲＮＡ結合ドメインに修飾を含むヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇ断片を含んでいる。さらなる例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの１つ以上のドメインを含み、ここで、ドメインの少なくとも１つはカプシドの形成に関与し、ＲＮＡ結合ドメインは、ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質に固有ではないカーゴに結合するように修飾されている。さらなる例では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、組換えヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドであり、少なくともＲＮＡ結合ドメインは、ヒトｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質に固有ではないカーゴのローディングを可能にするように修飾されている。

【0031】

いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドである。本明細書で使用されるように、操作されたポリペプチドは、完全長の野生型のポリペプチドに配列で同一ではない組換えのポリペプチドである。いくつかの例では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、第１の種由来のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドの断片と、第２の種のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチド由来の少なくとも追加の断片を含む。場合によっては、第１のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、動物界、植物界、真菌界、または原生生物界のメンバーから選択される。場合によっては、第１の種は、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、脊椎動物、真核生物、昆虫、真菌、または植物から選択される。場合によっては、第２のＡｒｃポリペプチドは、第１のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドと同じであるか、または異なるものである、動物界、植物界、真菌界、または原生生物界のメンバーから選択される。場合によっては、第２の種は、第１の種とは異なる、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、脊椎動物、真核生物、昆虫、真菌、または植物から選択される。

【0032】

いくつかの実施形態では、組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドとして発現させるための例示的な哺乳動物Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質は、ホモサピエンス種に由来する。組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドとして発現させるための霊長類のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の追加の例示的な種は、ｇｏｒｉｌｌａ、ｐｏｎｇｏ ａｂｅｌｉｉ、ｐａｎ ｐａｎｉｓｃｕｓ、ｍａｃａｃａ ｎｅｍｅｓｔｒｉｎａ、ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ｓａｂａｅｕｓ、ｐａｐｉｏ ａｎｕｂｉｓ、ｒｈｉｎｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ｒｏｘｅｌｌａｎａ、ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、ｎｏｍａｓｃｕｓ ｌｅｕｃｏｇｅｎｙｓ、ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ、ａｏｔｕｓ ｎａｎｃｙｍａａｅ、ｃｅｂｕｓ ｃａｐｕｃｉｎｕｓ ｉｍｉｔａｔｏｒ、ｓａｉｍｉｒｉ ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、ｏｔｏｌｅｍｕｒ ｇａｒｎｅｔｔｉｉ、ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ、およびｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓを含む。

【0033】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現されるげっ歯類のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｆｕｋｏｍｙｓ ｄａｍａｒｅｎｓｉｓ、ｍｉｃｒｏｃｅｂｕｓ ｍｕｒｉｎｕｓ、ｈｅｔｅｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ ｇｌａｂｅｒ、ｐｒｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ｃｏｑｕｅｒｅｌｉ、ｍａｒｍｏｔａ ｍａｒｍｏｔａ ｍａｒｍｏｔａ、ｇａｌｅｏｐｔｅｒｕｓ ｖａｒｉｅｇａｔｕｓ、ｃａｖｉａ ｐｏｒｃｅｌｌｕｓ、ｄｉｐｏｄｏｍｙｓ ｏｒｄｉｉ、ｏｃｔｏｄｏｎ ｄｅｇｕｓ，ｃａｓｔｏｒ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ ｎａｎｎｏｓｐａｌａｘ ｇａｌｉｌｉ、ｃａｒｌｉｔｏ ｓｙｒｉｃｈｔａ、ｃｈｉｎｃｈｉｌｌａ ｌａｎｉｇｅｒａ、ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ、ｉｃｔｉｄｏｍｙｓ ｔｒｉｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔｕｓ、ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、ｍｉｃｒｏｔｕｓ ｏｃｈｒｏｇａｓｔｅｒ、ｏｔｏｌｅｍｕｒ ｇａｒｎｅｔｔｉｉ、ｍｅｒｉｏｎｅｓ ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｓ、ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓ、ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ、ｎｅｏｔｏｍａ ｌｅｐｉｄａ、ｊａｃｕｌｕｓ ｊａｃｕｌｕｓ、ｍｕｓｔｅｌａ ｐｕｔｏｒｉｕｓ ｆｕｒｏ、ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓ ａｕｒａｔｕｓ、ｔｕｐａｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉｓｅｕｓ、ｃｈｒｙｓｏｃｈｌｏｒｉｓ ａｓｉａｔｉｃａ、ｅｌｅｐｈａｎｔｕｌｕｓ ｅｄｗａｒｄｉｉ、ｅｒｉｎａｃｅｕｓ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ、ｏｃｈｏｔｏｎａ ｐｒｉｎｃｅｐｓ、ｓｏｒｅｘ ａｒａｎｅｕｓ、ｍｏｎｏｄｅｌｐｈｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ、ｅｃｈｉｎｏｐｓ ｔｅｌｆａｉｒｉ、およびｃｏｎｄｙｌｕｒａ ｃｒｉｓｔａｔａを含む。

【0034】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現されるＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｖｕｌｐｅｓ ｖｕｌｐｅｓ、ｃａｎｉｓ ｌｕｐｕｓ ｄｉｎｇｏ、ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ、ｐａｎｔｈｅｒａ ｐａｒｄｕｓ、ｃａｌｌｏｒｈｉｎｕｓ ｕｒｓｉｎｕｓ、ｏｄｏｂｅｎｕｓ ｒｏｓｍａｒｕｓ ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、ｅｑｕｕｓ ａｓｉｎｕｓ、ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ、ｍａｎｉｓ ｊａｖａｎｉｃａ、ｃｅｒａｔｏｔｈｅｒｉｕｍ ｓｉｍｕｍ ｓｉｍｕｍ、ｌｅｐｔｏｎｙｃｈｏｔｅｓ ｗｅｄｄｅｌｌｉｉ、ｅｎｈｙｄｒａ ｌｕｔｒｉｓ ｋｅｎｙｏｎｉ、ｌｉｐｏｔｅｓ ｖｅｘｉｌｌｉｆｅｒ、ｂｏｓ ｇｒｕｎｎｉｅｎｓ、ｂｕｂａｌｕｓ ｂｕｂａｌｉｓ、ｃａｍｅｌｕｓ ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ、ｖｉｃｕｇｎａ ｐａｃｏｓ、ｏｒｃｉｎｕｓ ｏｒｃａ、ｎｅｏｍｏｎａｃｈｕｓ ｓｃｈａｕｉｎｓｌａｎｄｉ、ｔｕｒｓｉｏｐｓ ｔｒｕｎｃａｔｕｓ、ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ、ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ、ｄｅｌｐｈｉｎａｐｔｅｒｕｓ ｌｅｕｃａｓ、ｏｖｉｓ ａｒｉｅｓ ｍｕｓｉｍｏｎ、ｂａｌａｅｎｏｐｔｅｒａ ａｃｕｔｏｒｏｓｔｒａｔａ ｓｃａｍｍｏｎｉ、ｎｅｏｐｈｏｃａｅｎａ ａｓｉａｅｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ ａｓｉａｅｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ、ｍｉｎｉｏｐｔｅｒｕｓ ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ、ｐｔｅｒｏｐｕｓ ａｌｅｃｔｏ、ｐｈｙｓｅｔｅｒ ｃａｔｏｄｏｎ、ｌｏｘｏｄｏｎｔａ ａｆｒｉｃａｎａ、ｏｒｙｃｔｅｒｏｐｕｓ ａｆｅｒ ａｆｅｒ、ｂｏｓ ｍｕｔｕｓ、ｄｅｓｍｏｄｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ、ｈｉｐｐｏｓｉｄｅｒｏｓ ａｒｍｉｇｅｒ、ａｉｌｕｒｏｐｏｄａ ｍｅｌａｎｏｌｅｕｃａ、ｔｒｉｃｈｅｃｈｕｓ ｍａｎａｔｕｓ ｌａｔｉｒｏｓｔｒｉｓ、ｒｏｕｓｅｔｔｕｓ ｌａｔｉｒｏｓｔｒｉｓ、ｒｏｕｓｅｔｔｕｓ ａｅｇｙｐｔｉａｃｕｓ、ｅｐｔｅｓｉｃｕｓ ｆｕｓｃｕｓ、ｒｈｉｎｏｌｏｐｈｕｓ ｓｉｎｉｃｕｓ、ｃｅｒｖｕｓ ｅｌａｐｈｕｓ ｈｉｐｐｅｌａｐｈｕｓ、ｏｄｏｃｏｉｌｅｕｓ ｖｉｒｇｉｎｉａｎｕｓ ｔｅｘａｎｕｓ、ｐａｎｔｈｏｌｏｐｓ ｈｏｄｇｓｏｎｉｉ、ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、ｓａｒｃｏｐｈｉｌｕｓ ｈａｒｒｉｓｉｉ、ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｓ ｃｉｎｅｒｅｕｓ、およびｏｒｎｉｔｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ａｎａｔｉｎｕｓを含む。

【0035】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される鳥類のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ、ｃｏｒｖｕｓ ｃｏｒｎｉｘ、ｃｏｒｎｉｘ、ｐａｒｕｓ ｍａｊｏｒ、ｃｏｒｖｕｓ ｂｒａｃｈｙｒｈｙｎｃｈｏｓ、ｄｒｏｍａｉｕｓ ｎｏｖａｅｈｏｌｌａｎｄｉａｅ、および、ａｐｔｅｒｙｘ ｒｏｗｉを含む。

【0036】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される爬虫類のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇの例示的な種のリストは、ｐｙｔｈｏｎ ｂｉｖｉｔｔａｔｕｓ、ｐｏｇｏｎａ ｖｉｔｔｉｃｅｐｓ、ａｎｏｌｉｓ ｃａｒｏｌｉｎｅｎｓｉｓ、ｐｒｏｔｏｂｏｔｈｒｏｐｓ ｍｕｃｒｏｓｑｕａｍａｔｕｓ、ａｌｌｉｇａｔｏｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、ｃｒｏｃｏｄｙｌｕｓ ｐｏｒｏｓｕｓ、ｇａｖｉａｌｉｓ ｇａｎｇｅｔｉｃｕｓ、ａｌｌｉｇａｔｏｒ ｍｉｓｓｉｓｓｉｐｐｉｅｎｓｉｓ、ｐｅｌｏｄｉｓｃｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、ｔｅｒｒａｐｅｎｅ ｍｅｘｉｃａｎａ ｔｒｉｕｎｇｕｉｓ、ｃｈｒｙｓｅｍｙｓ ｐｉｃｔａ ｂｅｌｌｉｉ、ｃｈｅｌｏｎｉａ ｍｙｄａｓ、ｎａｎｏｒａｎａ ｐａｒｋｅｒｉ、ｘｅｎｏｐｕｓ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ、およびｌａｔｉｍｅｒｉａ ｃｈａｌｕｍｎａｅを含む。

【0037】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される魚のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇの例示的な種のリストは、ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓｓ、ａｃａｎｔｈｏｃｈｒｏｍｉｓ ｐｏｌｙａｃａｎｔｈｕｓ、ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｋｉｓｕｔｃｈ、ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ、および ａｕｓｔｒｏｆｕｎｄｕｌｕｓ ｌｉｍｎａｅｕｓを含む。

【0038】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される昆虫Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｓｅｒｒａｔａ、ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｂｉｐｅｃｔｉｎａｔａ、ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ ｉｎｖｉｃｔａ、ｔｅｍｎｏｔｈｏｒａｘ ｃｕｒｖｉｓｐｉｎｏｓｕｓ、ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、ａｇｒｉｌｕｓ ｐｌａｎｉｐｅｎｎｉｓ、ｃａｍｐｏｎｏｔｕｓ ｆｌｏｒｉｄａｎｕｓ、ｐｏｇｏｎｏｍｙｒｍｅｘ ｂａｒｂａｔｕｓ、ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ ｌｕｇｅｎｓ、ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ、ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍ、および ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａを含む。

【0039】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される植物Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａとｅｒｙｔｈｒａｎｔｈｅ ｇｕｔｔａｔａを含む。

【0040】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される真菌タンパク質の例示的な種のリストは、ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａｒ、ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、ｒｈｉｚｏｐｈａｇｕｓ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｓ、ｆｕｓａｒｉｕｍ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ、ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ、ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓ、ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ、ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ、ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ、ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ、ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｚｙｍｏｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ、およびｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍを含む。

【0041】

組換えまたは操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドとして発現される原生生物Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質の例示的な種のリストは、ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、ｐａｕｌｉｎｅｌｌａ ｍｉｃｒｏｐｏｒａ、ｇｕｉｌｌａｒｄｉａ ｔｈｅｔａ、ｏｘｙｒｒｈｉｓ ｍａｒｉｎａ、ｓｅｍｉｎａｖｉｓ ｒｏｂｕｓｔａ、ｅｕｇｌｅｎａ ｌｏｎｇａ、ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｇｒｕｂｅｒｉ、およびｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓを含む。

【0042】

いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇは、カプシドアセンブリ／成形（ＣＡ）ドメイン、カーゴ結合ドメイン（例えば、ＲＮＡ結合ドメイン）、および、随意にマトリックス（ＭＡ）ドメイン、逆転写酵素（ＲＴ）ドメイン、またはこれらの組み合わせを含む。場合によっては、ＣＡドメインは、Ｎ－ローブドメインとＣ－ローブドメインにさらに分割される。場合によっては、カーゴ結合ドメインは、ＲＮＡ結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、タンパク質結合ドメイン、ペプチド結合ドメイン、抗体結合ドメイン、小分子結合ドメイン、またはペプチド模倣薬／ヌクレオチド模倣結合ドメインを含む。例示的なカーゴ結合ドメインとしては、限定されないが、ＧＰＣＲ、抗体、またはその結合フラグメント、リポタンパク質、インテグリン、チロシンキナーゼ、ＤＮＡ結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ヌクレアーゼ、リガーゼ、プロテアーゼ、インテグラーゼ、イソメラーゼ、ホスファターゼ、ＧＴＰアーゼ、アロマターゼ、エステラーゼ、アダプタータンパク質、Ｇタンパク質、ＧＥＦ、サイトカイン類、インターロイキン、インターロイキン受容体、インターフェロン、インターフェロン受容体、カスパーゼ、転写因子、神経栄養因子、およびそれらの受容体、成長因子およびそれらの受容体、シグナル認識粒子および受容体成分、細胞外マトリックスタンパク質、膜内在性成分、リボソームタンパク質、翻訳延長因子、翻訳開始因子、ＧＰＩアンカータンパク質、組織因子、ジストロフィン、ユートロフィン、ジストロブレビン、任意のそれらの融合、組み合わせ、サブユニット、誘導体、またはドメインに由来するドメインを含む。

【0043】

いくつかの実施形態では、カプシド形成や核酸結合に関与しない１つ以上の非必須領域は、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドを生成するためにＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質から取り除かれる。そのような例では、１つ以上の非必須領域（例えば、Ｎ末端領域（例えば、最大１０のアミノ酸、最大２０のアミノ酸、最大３０のアミノ酸、または最大５０のアミノ酸）、Ｃ末端領域（例えば、最大１０のアミノ酸、最大２０のアミノ酸、最大３０のアミノ酸、または最大５０のアミノ酸）、ＲＴドメイン）、ＭＡドメイン、またはその組み合わせは、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドを生成するために、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのタンパク質から欠失させられる。場合によっては、カプシドアセンブリ／成形およびカーゴ結合に関与する必須領域だけが、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドに残る。さらなる場合では、カプシドアセンブリ／成形（例えば、Ｎ－ローブおよび／またはＣ－ローブ）に関与する必須領域だけが、Ａｒｃポリペプチドに残る。

【0044】

特定の実施形態では、ＲＴドメイン、ＭＡドメイン、および／または、内因性のＲＮＡ結合ドメインは、他のカーゴ結合ドメインと取り替えられ、例えば、ＤＮＡ結合ドメイン、タンパク質結合ドメイン、ペプチド結合ドメイン、抗体結合ドメイン、小分子結合ドメイン、ペプチド模倣結合ドメイン、またはヌクレオチド模倣結合ドメインと取り替えられる。いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、カプシド形成、核酸結合、または送達に関与するドメインの切断または修飾を含む。

【0045】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、ＭＡドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、カーゴ結合ドメイン、およびＲＴドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＭＡドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、ＲＴドメイン、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＭＡドメイン、ＲＴドメイン、カーゴ結合ドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびＣＡ Ｃ－ローブを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：カーゴ結合ドメイン、ＭＡドメイン、ＲＴドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびＣＡ Ｃ－ローブを含む。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、ドメインの各々は、それぞれの２つの隣接するドメインへ直接または間接的に融合される。

【0046】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、ＭＡドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＭＡドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＭＡドメイン、カーゴ結合ドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびＣＡ Ｃ－ローブを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：カーゴ結合ドメイン、ＭＡドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびＣＡ Ｃ－ローブを含む。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、ドメインの各々は、それぞれの２つの隣接するドメインへ直接または間接的に融合される。

【0047】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＣＡ Ｎ－ローブ、ＣＡ Ｃ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：カーゴ結合ドメイン、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびＣＡ Ｃ－ローブを含む。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、ドメインの各々は、それぞれの２つの隣接するドメインへ直接または間接的に融合される。

【0048】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、ＣＡ Ｎ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：ＣＡ Ｎ－ローブ、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端から末端まで、以下のドメイン：カーゴ結合ドメイン、およびＣＡ Ｎ－ローブを含む。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、２つのドメインは、互いに直接または間接的に融合される。

【0049】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、操作されたＡｒｃポリペプチドを生成するために、１つ以上の追加の種からのカーゴ結合ドメイン、ＣＡドメイン、ＭＡドメイン、またはＲＴドメインを含むように操作される。例えば、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、第１の種からのカーゴ結合ドメイン、ＣＡドメイン、ＭＡドメイン、またはＲＴドメインと、第２の種からのカーゴ結合ドメイン、ＣＡドメイン、ＭＡドメイン、またはＲＴドメインを含む。場合によっては、第１の種は、真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。場合によっては、第２の種は、第１の種とは異なる、真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。

【0050】

いくつかの例では、操作されたまたはｅｎｄｏ－ＧａｇＡｒｃポリペプチドは、第１の種からのカーゴ結合ドメインと第２の種からのＣＡドメイン（例えば、ＣＡ Ｎ－ローブと随意にＣＡ Ｃ－ローブ）を含む。操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは随意に、第１の種または第２の種のいずれかのＭＡドメインおよびＲＴドメインを含む。場合によっては、第１の種は、真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。場合によっては、第２の種は、第１の種とは異なる、真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。

【0051】

いくつかの例では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、カーゴ結合ドメイン、第１のＣＡドメイン、第２のＣＡドメイン、ならびに、随意に、ＭＡドメインおよび／またはＲＴドメインを含む。場合によっては、カーゴ結合ドメイン、第１のＣＡドメイン、ならびに、随意にＭＡドメインおよび／またはＲＴドメインは第１の種に由来し、第２のＣＡドメインは第２の種に由来する。場合によっては、第１のＣＡドメインは第１の種に由来し、カーゴ結合ドメイン、第２のＣＡドメイン、ならびに、随意にＭＡドメインおよび／またはＲＴドメインは第２の種に由来する。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、ドメインの各々は、それぞれの２つの隣接するドメインに直接または間接的に融合される。

【0052】

いくつかの例では、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、カーゴ結合ドメイン、第１のＣＡドメイン、および第２のＣＡドメインを含む。場合によっては、カーゴ結合ドメインおよび第１のＣＡドメインは第１の種に由来し、第２のＣＡドメインは第２の種に由来する。場合によっては、第１のＣＡドメインは第１の種に由来し、カーゴ結合ドメインと第２のＣＡドメインは第２の種に由来する。そのような場合、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：カーゴ結合ドメイン、第１のＣＡドメイン、および第２のＣＡドメインを含む。そのような場合、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：第１のＣＡドメイン、カーゴ結合ドメイン、および第２のＣＡドメインを含む。そのような場合、操作されたＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、以下のドメイン：第１のＣＡドメイン、第２のＣＡドメイン、およびカーゴ結合ドメインを含む。いくつかの例では、ドメインは、カプシドアセンブリおよびカーゴ結合を妨害しない順序で配される。いくつかの例では、ドメインの各々は、それぞれの２つの隣接するドメインへ直接または間接的に融合される。

【0053】

いくつかの例では、操作されたＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、第２のポリペプチドをさらに含む。いくつかの例では、第２のポリペプチドは、リンカーによって、以下の１つ以上に直接あるいは間接的に融合する：カーゴ結合ドメイン、第１のＣＡドメイン、第２のＣＡドメイン、ＭＡドメイン（存在する場合）、またはＲＴドメイン（存在する場合）。場合によっては、第２のポリペプチドは、タンパク質（例えば、ヒトタンパク質）、抗体またはその結合フラグメント、ウイルスタンパク質、Ｇａｇ様タンパク質（例えば、ヒトＧａｇ様タンパク質）、または対象の標的受容体に結合するように設計された、デノボ操作されたタンパク質である。いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、マウス抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗体またはその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、多重特異性抗体またはその結合フラグメント、二重特異性抗体またはその結合フラグメント、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ_２、Ｆ（ａｂ）’_３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス－ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）_２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ ＮＡＲ、ラクダ科抗体またはその結合フラグメント、あるいはそれらの化学修飾された誘導体を含む。いくつかの例では、第２のポリペプチドは、対象の標的部位への、操作されたＡｒｃポリペプチドによって形成されたカプシドの送達を誘導する。

【0054】

いくつかの実施形態では、本開示の核酸配列またはアミノ酸配列（例えば、Ａｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドをコードする）は、本明細書で提供されるアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％の相同性、少なくとも７１％の相同性、少なくとも７２％の相同性、少なくとも７３％の相同性、少なくとも７４％の相同性、少なくとも７５％の相同性、少なくとも７６％の相同性、少なくとも７７％の相同性、少なくとも７８％の相同性、少なくとも７９％の相同性、少なくとも８０％の相同性、少なくとも８１％の相同性、少なくとも８２％の相同性、少なくとも８３％の相同性、少なくとも８４％の相同性、少なくとも８５％の相同性、少なくとも８６％の相同性、少なくとも８７％の相同性、少なくとも８８％の相同性、少なくとも８９％の相同性、少なくとも９０％の相同性、少なくとも９１％の相同性、少なくとも９２％の相同性、少なくとも９３％の相同性、少なくとも９４％の相同性、少なくとも９５％の相同性、少なくとも９６％の相同性、少なくとも９７％の相同性、少なくとも９８％の相同性、少なくとも９９％の相同性、少なくとも９９．１％の相同性、少なくとも９９．２％の相同性、少なくとも９９．３％の相同性、少なくとも９９．４％の相同性、少なくとも９９．５％の相同性、少なくとも９９．６％の相同性、少なくとも９９．７％の相同性、少なくとも９９．８％の相同性、少なくとも９９．９％あるいは少なくとも９９．９９％の相同性を有する。様々な方法およびソフトウエアプログラム、例えば、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、ＭＡＦＦＴ、クラスタルオメガ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＡｌｉｇｎＭｅ、Ｐｒａｌｉｎｅ、または他の適切な方法あるいはアルゴリズムが、２つ以上の配列（ｔｗｏ ｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）間の相同性を決定するために使用される。

【0055】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトポリペプチドである。

【0056】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、シャチポリペプチドである。

【0057】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、オジロジカポリペプチドである。

【0058】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、カモノハシポリペプチドである。

【0059】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ガチョウポリペプチドである。

【0060】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ダハイイロペリカンポリペプチドである。

【0061】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、オジロワシポリペプチドである。

【0062】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、キングコブラポリペプチドである。

【0063】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、条鰭類ポリペプチドである。

【0064】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、マッコウクジラポリペプチドである。

【0065】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、シチメンチョウポリペプチドである。

【0066】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、フトアゴヒゲトカゲ ポリペプチドである。

【0067】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヨウスコウアリゲーターポリペプチドである。

【0068】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列をしているアメリカアリゲーターポリペプチドである。

【0069】

ある実施形態では、Ａｒｃポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ニホンヤモリポリペプチドである。

【0070】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＰＮＭＡ３ポリペプチドである。

【0071】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＰＮＭＡ５ポリペプチドである。

【0072】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＰＮＭＡ６Ａポリペプチドである。

【0073】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＰＮＭＡ６Ｂポリペプチドである。

【0074】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＲＴＬ３ポリペプチドである。

【0075】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＲＴＬ６ポリペプチドである。

【0076】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＲＴＬ８Ａポリペプチドである。

【0077】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＲＴＬ８Ｂポリペプチドである。

【0078】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＢＯＰポリペプチドである。

【0079】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＬＤＯＣ１ポリペプチドである。

【0080】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＺＮＦ１８ポリペプチドである。

【0081】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＭＯＡＰ１ポリペプチドである。

【0082】

ある実施形態では、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の同一性を持つ配列を有する、ヒトＰＥＧ１０ポリペプチドである。

【0083】

場合によっては、組換えＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、図１に例示されるＡｒｃポリペプチドである。

【0084】

場合によっては、操作されたＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、図２に例示される操作されたＡｒｃポリペプチドである。

【0085】

リンカー
ある実施形態では、本開示のポリペプチドはリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの例では、リンカーは剛性リンカーである。他の例では、リンカーは可動性リンカーである。場合によっては、リンカーは非切断性リンカーである。他の場合では、リンカーは切断可能なリンカーである。さらなる場合では、リンカーは、線形構造、または非線形構造（例えば、環状構造）を含む。

【0086】

ある実施形態では、非切断性リンカーは、様々な長さの短鎖ペプチドを含む。例示的な非切断性リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、または（ＥＡＡＡＲ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）（ここで、ｎは１～５である）、および、最大３０の残基のグルタミン酸－プロリンリピートあるいはリジン－プロリンリピートを含む。いくつかの実施形態では、非切断性リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）あるいは（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）（ここで、ｎは１～１０である）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）；または、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）を含む。いくつかの実施形態では、非切断性リンカーは、ポリ－Ｇｌｙ／Ａｌａポリマーを含む。

【0087】

ある実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカー、例えば、細胞外の切断可能なリンカー、または細胞内の切断可能なリンカーである。いくつかの例では、リンカーは、特定の条件の存在下での、または特定の環境における（例えば、生理的条件下での）切断のために設計される。例えば、特定の酵素などの特定の条件による切断のためのリンカーの設計により、特定位置への細胞取り込みの標的化が可能になる。

【0088】

いくつかの実施形態では、リンカーはｐＨ感受性リンカーである。一例では、リンカーは、塩基性のｐＨ条件下で切断される。他の例では、リンカーは、酸性のｐＨ条件下で切断される。

【0089】

いくつかの実施形態では、リンカーは、限定されないが、トロンビン、メタロプロテアーゼ、フューリン、カテプシンＢ、壊死性酵素（ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ）（例えば、カルパイン）などを含むセリンプロテアーゼなどの内因性酵素（例えば、プロテアーゼ）によって、インビボで切断される。例示的な切断可能なリンカーとしては、限定されないが、ＧＧＡＡＮＬＶＲＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）；ＳＧＲＩＧＦＬＲＴＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）；ＳＧＲＳＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）；ＧＦＬＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）；ＡＬＡＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）；ＦＫ；ＰＩＣ（Ｅｔ）Ｆ－Ｆ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１）（ここで、Ｃ（Ｅｔ）はＳ－エチルシステインを示す）；ＰＲ（Ｓ／Ｔ）（Ｌ／Ｉ）（Ｓ／Ｔ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）；ＤＥＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）；ＧＷＥＨＤＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）；ＲＰＬＡＬＷＲＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）；または、それらの組み合わせが挙げられる。

【0090】

カプシド
いくつかの実施形態では、カプシドが本明細書で開示される。いくつかの例では、カプシドは、Ａｒｃポリペプチドおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、例えば、コピアタンパク質、ＡＳＰＲＶ１タンパク質、ＳＣＡＮドメインファミリーからのタンパク質、腫瘍随伴性Ｍｍａ抗原ファミリーによってコードされたタンパク質、タンパク質あるいはレトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせ、またはそれらの組み合わせを含む。例示的なｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、ＢＯＰ、ＬＤＯＣ１、ＭＯＡＰ１、ＰＥＧ１０、ＰＮＭＡ３、ＰＮＭＡ５、ＰＮＭＡ６Ａ、ＰＮＭＡ６Ｂ、ＲＴＬ３、ＲＴＬ６、ＲＴＬ８Ａ、ＲＴＬ８Ｂ、およびＺＮＦ１８である。いくつかの例では、Ａｒｃポリペプチド、コピアタンパク質、ＡＳＰＲＶ１タンパク質、ＳＣＡＮドメインファミリーから選択されたタンパク質、腫瘍随伴性Ｍａ抗原ファミリーによってコード化されたタンパク質、レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせはそれぞれ独立して、完全長のポリペプチドである。他の例では、Ａｒｃポリペプチド、コピアタンパク質、ＡＳＰＲＶ１タンパク質、ＳＣＡＮドメインファミリーから選択されたタンパク質、腫瘍随伴性Ｍａ抗原ファミリーによってコード化されたタンパク質、レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせはそれぞれ独立して、その機能的フラグメントであり、その機能的フラグメントは、例えば、カプシドのサブユニットを形成することができる。

【0091】

Ａｒｃベースのカプシドおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシド
いくつかの実施形態では、カプシドはＡｒｃベースのカプシドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを含む。いくつかの例では、Ａｒｃベースおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇのカプシドは、上に記載される複数の組換えＡｒｃポリペプチドおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、上に記載される複数の操作されたＡｒｃポリペプチドおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、あるいはそれらの組み合わせを含む。場合によっては、Ａｒｃベースのカプシドは、複数の組換えＡｒｃポリペプチドを含む。その他の場合では、Ａｒｃベースのカプシドは、複数の操作されたＡｒｃポリペプチドを含む。場合によっては、ｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、複数の組換えｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを含む。その他の場合において、ｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、複数の操作されたｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、第１の種からの第１の複数のＡｒｃポリペプチドおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、ならびに、少なくとも第２の種からの第２の複数のＡｒｃポリペプチドおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを含む。場合によっては、第１の種は、真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。場合によっては、第２の種は、第１の種とは異なる真核生物、脊椎動物、ヒト、哺乳動物、げっ歯類、鳥、爬虫類、魚、昆虫、真菌、または植物から選択される。

【0093】

いくつかの例では、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、あるいは１００：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、２：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、４：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、５：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、８：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１０：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、２０：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対するＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの第１の複数の比は、５０：１である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１００：１である。いくつかの例では、比はモル濃度での比較である。いくつかの例では、比率は、サブユニットを形成するカプシドの数の比較である（例えば、操作されたＡｒｃポリペプチドの各々がカプシドサブユニットを形成する）。

【0094】

いくつかの例では、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：２０、あるいは１：５０である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：２である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：５である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：８である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：１０である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：２０である。場合によっては、第２の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドに対する第１の複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの比は、１：５０である。いくつかの例では、比率はモル濃度での比較である。いくつかの例では、比率は、サブユニットを形成するカプシドの数の比較である（例えば、組換えあるいは操作されたＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドの各々が、カプシドサブユニットを形成する）。

【0095】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースのカプシドあるいはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、複数の組換えあるいは操作されたＡｒｃポリペプチドと複数の非Ａｒｃタンパク質とを含む。非Ａｒｃタンパク質の例示的な種としては、限定されないが、コピア、ＡＳＰＲＶ１、ＳＣＡＮドメインファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせ、腫瘍随伴性Ｍａ抗原ファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせ、あるいは、レトロトランスポゾンＧａｇ様ファミリーから選択されたタンパク質あるいはタンパク質の組み合わせが挙げられる。非Ａｒｃタンパク質の例示的な種としては、ＢＯＰ、ＬＤＯＣ１、ＭＯＡＰ１、ＰＥＧ１０、ＰＮＭＡ３、ＰＮＭＡ５、ＰＮＭＡ６Ａ、ＰＮＭＡ６Ｂ、ＲＴＬ３、ＲＴＬ６、ＲＴＬ８Ａ、ＲＴＬ８Ｂ、およびＺＮＦ１８が挙げられる。

【0096】

いくつかの例では、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、あるいは１００：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、２：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、４：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、５：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、８：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１０：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、２０：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、５０：１である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１００：１である。いくつかの例では、比率はモル濃度での比較である。いくつかの例では、比率は、サブユニットを形成するカプシドの数の比較である（例えば、組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの各々が、カプシドサブユニットを形成する）。

【0097】

いくつかの例では、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：２０、あるいは１：５０である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：２である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：５である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：８である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：１０である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：２０である。場合によっては、複数の非Ａｒｃタンパク質に対する複数の組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの比は、１：５０である。いくつかの例では、比率はモル濃度での比較である。いくつかの例では、比率は、サブユニットを形成するカプシドの数の比較である（例えば、組換えまたは操作されたＡｒｃポリペプチドの各々が、カプシドサブユニットを形成する）。

【0098】

いくつかの実施形態では、カプシドの直径は、少なくとも１ｎｍであるか、またはそれより大きい。いくつかの例では、カプシドの直径は、少なくとも２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍであるか、またはそれより大きい。いくつかの例では、カプシドの直径は、少なくとも５ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも１０ｎｍであるか、またはそれより大きい。いくつかの例では、カプシドの直径は、少なくとも２０ｎｍであるか、またはそれより大きい。る。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも３０ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも４０ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも５０ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも８０ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも１００ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも２００ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも３００ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも４００ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも５００ｎｍであるか、またはそれより大きい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも６００ｎｍであるか、またはそれより大きい。

【0099】

いくつかの実施形態では、カプシドの直径は、最大で１ｎｍであるか、またはそれより小さい。いくつかの例では、カプシドの直径は、最大で２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍであるか、またはそれより小さい。いくつかの例では、カプシドの直径は、最大で５ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、最大で１０ｎｍであるか、またはより少ないいくつかの例では、カプシドの直径は、最大で２０ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、最大で３０ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも４０ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも５０ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも８０ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも１００ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも２００ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも３００ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも４００ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも５００ｎｍであるか、またはそれより小さい。場合によっては、カプシドの直径は、少なくとも６００ｎｍであるか、またはそれより小さい。

【0100】

いくつかの実施形態では、カプシドの直径は、約１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、または６００ｎｍである。いくつかの例では、カプシドの直径は約５ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約１０ｎｍである。いくつかの例では、カプシドの直径は約２０ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約３０ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約４０ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約５０ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約８０ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約１００ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約２００ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約３００ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約４００ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約５００ｎｍである。場合によっては、カプシドの直径は約６００ｎｍである。

【0101】

いくつかの実施形態では、カプシドの直径は、約１ｎｍ～約６００ｎｍである。いくつかの例では、カプシドの直径は、約２ｎｍ～約５００ｎｍ、約２ｎｍ～約４００ｎｍ、約２ｎｍ～約３００ｎｍ、約２ｎｍ～約２００ｎｍ、約２ｎｍ～約１００ｎｍ、約２ｎｍ～約５０ｎｍ、約２ｎｍ～約３０ｎｍ、約２０ｎｍ～約４００ｎｍ、約２０ｎｍ～約３００ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約３０ｎｍ、約３０ｎｍ～約５００ｎｍ、約３０ｎｍ～約４００ｎｍ、約３０ｎｍ～約３００ｎｍ、約３０ｎｍ～約２００ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約３００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２ｎｍ～約２５ｎｍ、約２ｎｍ～約２０ｎｍ、約２ｎｍ～約１０ｎｍ、約５ｎｍ～約２５ｎｍ、約５ｎｍ～約２０ｎｍ、約５ｎｍ～約１０ｎｍ、約１０ｎｍ～約２５ｎｍ、または約１０ｎｍ～約２０ｎｍである。

【0102】

いくつかの実施形態では、カプシドは減少したオフターゲット効果を有する。場合によっては、オフターゲット効果は、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、または０．５％未満である。場合によっては、オフターゲット効果は、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、または０．５％以下である。

【0103】

場合によっては、カプシドはオフターゲット効果を有していない。

【0104】

ある実施形態では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドの形成は、エクスビボあるいはインビトロのいずれかで生じる。

【0105】

いくつかの例では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、インビボで組み立てられる。

【0106】

いくつかの例では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、室温で安定している。場合によっては、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、空である。その他の場合では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、充填される（例えば、カーゴおよび／または治療剤（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）で充填される）。

【0107】

いくつかの例では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、約２℃～約３７℃の温度で安定している。いくつかの例では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、約２℃～約８℃、約２℃～約４℃、約２０℃～約３７℃、約２５℃～約３７℃、約２０℃～約３０℃、約２５℃～約３０℃、または約３０℃～約３７℃の温度で安定している。場合によっては、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、空である。その他の場合では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、充填される（例えば、カーゴおよび／または治療剤（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）で充填される）。

【0108】

いくつかの例では、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、少なくとも約１日、２日、４日、５日、７日、１４日、２８日、３０日、６０日、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、３年、５年、またはそれより長く安定している。場合によっては、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、分解されるＡｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドの総集団に基づいて、例えば、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満の最小の分解を有している。場合によっては、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは空である。その他の場合において、Ａｒｃおよび／またはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、充填される（例えば、治療剤（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）で充填される）。

【0109】

さらなるカプシド
いくつかの実施形態では、カプシドはコピアタンパク質を含む。いくつかの例では、コピアタンパク質は、キイロショウジョウバエ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０４１４６）、チチュウカイミバエ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｗ８ＢＨＹ５）、またはオナジショウジョウバエ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０８４６１）からのものである。

【0110】

いくつかの実施形態では、カプシドはタンパク質ＡＳＰＲＶ１を含む。ＡＳＰＲＶ１タンパク質は、皮膚バリアの発達と維持に関与する構造タンパク質である。いくつかの例では、タンパク質ＡＳＰＲＶ１は、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ５３ＲＴ３）からのものである。

【0111】

いくつかの実施形態では、カプシドは、ＳＣＡＮドメインファミリーからのタンパク質を含む。ＳＣＡＮドメインは、ジンクフィンガー転写因子のスーパーファミリーである。ＳＣＡＮドメインは、ロイシンリッチ領域（ＬｅＲ）としても知られており、他のタンパク質との自己会合または選択的な会合を媒介するタンパク質相互作用ドメインとして機能する。

【0112】

いくつかの実施形態では、カプシドは、腫瘍随伴性Ｍａ抗原ファミリーからのタンパク質を含む。腫瘍随伴性Ｍａ抗原ファミリーは、神経特異的タンパク質および精巣特異的タンパク質の約１４のメンバーを含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、カプシドは、レトロトランスポゾンＧａｇ様遺伝子によってコード化されたタンパク質を含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、カプシドは、ＢＯＰ、ＬＤＯＣ１、ＭＯＡＰ１、ＰＥＧ１０、ＰＮＭＡ３、ＰＮＭＡ５、ＰＮＭＡ６Ａ、ＰＮＭＡ６Ｂ、ＲＴＬ３、ＲＴＬ６、ＲＴＬ８Ａ、ＲＴＬ８Ｂ、および／またはＺＮＦ１８を含む。

【0115】

カーゴ
いくつかの実施形態では、本開示の組成物（例えば、カプシド）はカーゴを含む。いくつかの実施形態では、カーゴは治療剤である。いくつかの実施形態では、カーゴは、核酸分子、小分子、タンパク質、ペプチド、抗体またはその結合フラグメント、ペプチド模倣薬、あるいはヌクレオチド模倣物（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）である。いくつかの例では、カーゴは、治療用カーゴであり、例えば、１つ以上の薬物を含む。いくつかの例では、カーゴは、プロファイリングのための診断ツール、例えば、１つ以上マーカー（１つ以上の疾患表現型と関連するマーカーなど）を含む。さらなる例では、カーゴは画像化ツールを含む。

【0116】

いくつかの例では、カーゴは核酸分子である。例示的な核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡの混合物を含む。いくつかの例では、核酸分子はＤＮＡポリマーである。場合によっては、ＤＮＡは一本鎖ＤＮＡポリマーである。その他の場合では、ＤＮＡは二本鎖ＤＮＡポリマーである。さらなる例では、ＤＮＡは、一本鎖ＤＮＡポリマーと二本鎖ＤＮＡポリマーのハイブリッドである。

【0117】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＲＮＡポリマー、例えば、一本鎖ＲＮＡポリマー、二本鎖ＲＮＡポリマー、一本鎖ＲＮＡポリマーと二本鎖ＲＮＡポリマーのハイブリッドである。いくつかの例では、ＲＮＡは、アンチセンスオリゴリボヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ＳｎＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、または非コードＲＮＡを含み、および／またはコードする。

【0118】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡとＲＮＡのハイブリッドを含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡのハイブリッドを随意に含む。

【0120】

いくつかの例では、核酸分子は、ｍＲＮＡ分子を含む、および／またはコードする。

【0121】

いくつかの実施形態では、核酸分子はＲＮＡｉ分子を含み、および／またははコードする。場合によっては、ＲＮＡｉ分子は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）分子である。その他の場合では、ＲＮＡｉ分子はｓｉＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡおよび／またはｓｉＲＮＡは、随意に二本鎖であるか、またはヘアピンとしてであるか、および、さらに随意に前駆体分子としてさらに被包される。

【0122】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、核酸ベースの治療で使用される。いくつかの例では、核酸分子は、遺伝子発現を調節する（例えば、ｍＲＮＡ翻訳あるいは分解を調節する）か、ＲＮＡスプライシングを調節するか、またはＲＮＡ干渉のためのものである。場合によっては、核酸分子は、遺伝子発現の調節、ＲＮＡスプライシングの調節、あるいはＲＮＡ干渉で使用される、アンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ分子、ｍＲＮＡ分子を含む、および／またはコードする。

【0123】

いくつかの例では、核酸分子は遺伝子編集で使用される。例示的な遺伝子編集システムとしては、限定されないが、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、およびＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システムが挙げられる。場合によっては、核酸分子は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、ＺＦＮシステム、あるいはＴＡＬＥＮシステムに関与する成分を含む、および／またはコードする。

【0124】

場合によっては、核酸分子は、治療用および／または予防用ワクチンの産生のための抗原産生で使用される。例えば、核酸分子は、発現され、望ましい免疫応答（例えば、炎症促進性免疫応答、抗炎症性免疫応答、Ｂ細胞応答、抗体産生応答、Ｔ細胞応答、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答、Ｔｈ１免疫応答、Ｔｈ２免疫応答、Ｔｈ１７免疫応答、Ｔｒｅｇ免疫応答、またはそれらの組み合わせ）を誘発する抗原をコードする。

【0125】

場合によっては、核酸分子は核酸酵素を含む。核酸酵素は、触媒活性を有する、ＲＮＡ分子（例えば、リボザイム）またはＤＮＡ分子（例えば、デオキシリボザイム）である。いくつかの例では、核酸分子はリボザイムである。他の例では、核酸分子はデオキシリボザイムである。場合によっては、核酸分子は、バイオセンサおよび／または分子スイッチとして機能するＭＮＡｚｙｍｅである（例えば、Ｍｏｋａｎｙ， ｅｔ ａｌ．， “ＭＮＡｚｙｍｅｓ， ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｅｎｚｙｍｅｓ ｔｈａｔ ｃａｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｗｉｔｃｈｅｓ，” ＪＡＣＳ １３２（２）： １０５１－１０５９ （２０１０）を参照）。

【0126】

いくつかの例では、核酸分子の例示的な標的としては、限定されないが、ＵＬ１２３（ヒト－サイトメガロウイルス）、ＡＰＯＢ、ＡＲ（アンドロゲン受容体）遺伝子、ＫＲＡＳ、ＰＣＳＫ９、ＣＦＴＲ、およびＳＭＮ（例えば、ＳＭＮ２）が挙げられる。

【0127】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、少なくとも５ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１０ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１２ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１５ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１８ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１９ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２０ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２１ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２２ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２３ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２４ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２５ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２６ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２７ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２８ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２９ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも３０ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも４０ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも５０ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも３００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも５００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも１０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも２０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも３０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも４０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも５０００ヌクレオチド以上の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、少なくとも８０００ヌクレオチド以上の長さである。

【0128】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、最大で１２ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、９０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１５ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１８ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１９ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２０ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２１ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２２ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２３ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２４ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２５ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２６ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２７ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２８ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２９ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で３０ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で４０ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で５０ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で３００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で５００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で１０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で２０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で３０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で４０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で５０００ヌクレオチド以下の長さである。いくつかの例では、核酸分子は、最大で８０００ヌクレオチド以下の長さである。

【0129】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、約５ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１０ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１９ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２０ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２２ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２５ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２７ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２８ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２９ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約３０ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約４０ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約５０ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約３００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約５００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約１０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約２０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約３０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約４０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約５０００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約８０００ヌクレオチドの長さである。

【0130】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、約５～約１００００ヌクレオチドの長さである。いくつかの例では、核酸分子は、約５～約９０００ヌクレオチドの長さ、約５～約８０００ヌクレオチドの長さ、約５～約７０００ヌクレオチドの長さ、約５～約６０００ヌクレオチドの長さ、約５～約５０００ヌクレオチドの長さ、約５～約４０００ヌクレオチドの長さ、約５～約３０００ヌクレオチドの長さ、約５～約２０００ヌクレオチドの長さ、約５～約１０００のヌクレオチドの長さ、約５～約５００ヌクレオチドの長さ、約５～約１００ヌクレオチドの長さ、約５～約５０ヌクレオチドの長さ、約５～約４０ヌクレオチドの長さ、約５～約３０ヌクレオチドの長さ、約５～約２５ヌクレオチドの長さ、約５～約２０ヌクレオチドの長さ、約１０～約８０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約７０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約６０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約５０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約４０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約３０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約２０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約１０００ヌクレオチドの長さ、約１０～約５００ヌクレオチドの長さ、約１０～約１００ヌクレオチドの長さ、約１０～約５０ヌクレオチドの長さ、約１０～約４０ヌクレオチドの長さ、約１０～約３０ヌクレオチドの長さ、約１０～約２５ヌクレオチドの長さ、約１０～約２０ヌクレオチドの長さ、約１８～約８０００のヌクレオチドの長さ、約１８～約７０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約６０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約５０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約４０００ヌクレオチドの長さ、、約１８～約３０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約２０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約１０００ヌクレオチドの長さ、約１８～約５００ヌクレオチドの長さ、約１８～約１００ヌクレオチドの長さ、約１８～約５０ヌクレオチドの長さ、約１８～約４０ヌクレオチドの長さ、約１８～約３０ヌクレオチドの長さ、約１８～約２５ヌクレオチドの長さ、約１２～約５０ヌクレオチドの長さ、約２０～約４０ヌクレオチドの長さ、約２０～約３０ヌクレオチドの長さ、または約２５～約３０ヌクレオチドの長さである。

【0131】

いくつかの実施形態では、核酸分子は、天然、合成、または人工のヌクレオチドアナログあるいは塩基を含む。場合によっては、核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、および／またはヌクレオチドアナログの組み合わせを含む。いくつかの例では、合成または人工のヌクレオチドアナログあるいは塩基は、リボース部分、リン酸塩部分、ヌクレオシド部分、もしくはそれらの組み合わせの１つ以上での修飾を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、上記のヌクレオチドアナログあるいは人工ヌクレオチド塩基は、リボース部分の２’ヒドロキシル基に修飾を有する核酸を含む。いくつかの例では、上記修飾は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、またはＣＮを含み、ここで、Ｒはアルキル部分である。例示的なアルキル部分としては、限定されないが、ハロゲン、硫黄、チオール、チオエーテル、チオエステル、アミン（一級、二級、または三級）、アミド、エーテル、エステル、アルコール、および酸素が挙げられる。いくつかの例では、アルキル部分はさらに修飾を含む。いくつかの例では、修飾は、アゾ基、ケト基、アルデヒド基、カルボキシル基、ニトロ基、ニトロソ基、ニトリル基、複素環（例えば、イミダゾール、ヒドラジノ、あるいはヒドロキシルアミノ）基、イソシアネートまたはシアナート基、あるいは硫黄含有基（例えば、スルホキシド、スルホン、スルフィド、あるいはジスルフィド）を含む。いくつかの例では、アルキル部分はヘテロ置換をさらに含む。いくつかの例では、複素環基の炭素は、窒素、酸素、または硫黄によって置換される。いくつかの例では、複素環式置換としては、限定されないが、モルホリノ、イミダゾール、および、ピロリジノが挙げられる。

【0133】

いくつかの例では、２’ヒドロキシル基の修飾は、２’－Ｏ－メチル修飾または２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）修飾である。場合によっては、２’－Ｏ－メチル修飾は、メチル基をリボース部分の２’ヒドロキシル基に加え、一方で、２’Ｏ－メトキシエチル修飾は、メトキシエチル基をリボース部分の２’ヒドロキシル基に加える。

【0134】

いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基の修飾は、プロピルリンカーを含む伸長したアミン基がアミン基を２’酸素に結合させる、２’－Ｏ－アミノプロピル修飾である。いくつかの例では、この修飾は、糖ごとにアミン基から１つの正電荷を導入することによってオリゴヌクレオチド分子のリン酸塩由来の全体的な負電荷を中和し、それによって、その双性イオン特性による細胞取り込み特性を改善する。

【0135】

いくつかの例では、２’ヒドロキシル基の修飾はロックドまたは架橋リボース修飾（例えば、ロックド核酸またはＬＮＡ）であり、そのロックドまたは架橋リボース修飾では、２’炭素で結合された酸素分子はメチレン基によって４’炭素に結合され、したがって、２’－Ｃ，４’－Ｃ－オキシ－メチレン結合の二環式リボヌクレオチド単量体を形成する。

【0136】

いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基での追加の修飾は、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）を含む。

【0137】

いくつかの実施形態では、ヌクレオチドアナログは、修飾塩基、例えば、限定されないが、５－プロピニルウリジン、５－プロピニルシチジン、６－メチルアデニン、６－メチルグアニン、Ｎ、Ｎ、－ジメチルアデニン、２－プロピルアデニン、２プロピルグアニン、２－アミノアデニン、１－メチルイノシン、３－メチルウリジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および５位に修飾を有する他のヌクレオチド、５－（２－アミノ）プロピルウリジン、５－ハロシチジン、５－ハロリジン、４－アセチルシチジン、１－メチルアデノシン、２－メチルアデノシン、３－メチルシチジン、６－メチルウリジン、２－メチルグアノシン、７－メチルグアノシン、２，２－ジメチルグアノシン、５－メチルアミノエチルウリジン、５－メトキシウリジン、デアザヌクレオチド（７－デアザ－アデノシン、６－アジリジン、６－アゾシチジン、あるいは６－アゾチミジン（ａｚｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）など）、５－メチル－２－チオウリジン、他のチオ塩基（２－チオウリジン、４－チオウリジン、および２－チオシチジンなど）、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、キューオシン、アルカエオシン、ナフチルおよび置換されたナフチル基、Ｏ－およびＮ－アルキル化プリンおよびピリミジン（Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、ウリジン５－オキシ酢酸、ピリジン－４－オン、あるいはピリジン－２－オン）、フェニルおよび修飾フェニル基、例えば、アミノフェノールまたは２，４，６－トリメトキシベンゼン、Ｇ－クランプヌクレオチドとして機能する修飾されたシトシン、８－置換されたアデニンおよびグアニン、５－置換されたウラシルおよびチミン、アザピリミジン、カルボキシヒドロキシアルキルヌクレオチド、カルボキシアルキルアミノアルキルヌクレオチド、ならびに、アルキルカルボニルアルキル化ヌクレオチドを含む。修飾されたヌクレオチドはさらに、リボシルではない糖あるいはそのアナログを有するヌクレオチドと同様に、糖部に対して修飾されるヌクレオチドを含む。例えば、場合によっては、糖部は、マンノース、アラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース、および、その他の糖類、複素環、または炭素環であるか、または、これらに基づくものである。ヌクレオチドとの用語は、ユニバーサル塩基も含む。一例として、ユニバーサル塩基としては、限定されないが、３－ニトロピロール、５－ニトロインドール、またはネブラリンが挙げられる。

【0138】

いくつかの実施形態では、ヌクレオチドアナログは、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’ホスホラミダイト、または１’，５’－アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）をさらに含む。モルホリノまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴ（ＰＭＯ）は合成分子を含み、その合成分子の構造は、天然の核酸構造を模倣しているが、正常な糖とリン酸塩の構造からは逸脱している。いくつかの例では、５員のリボース環は、４つの炭素、１つの窒素、および１つの酸素を含有している６員のモルホリノ環で置換される。いくつかの場合では、リボース単量体は、リン酸基の代わりにホスホロジアミデート基によって結合される。場合によっては、骨格の変質は、荷電オリゴヌクレオチドによって使用されるような細胞送達剤（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｇｅｎｔｓ）の助けを借りることなく細胞膜を横断することができるモルホリノ中性分子を作る、すべての正および負の電荷を除去する。

【0139】

いくつかの実施形態では、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、糖環もホスフェート結合も含まず、塩基は、オリゴグリシン様分子によって結合し、適切に間隔が置かれ、それにより、骨格電荷を除去する。

【0140】

いくつかの実施形態では、１つ以上の修飾が随意にヌクレオチド間結合で生じる。いくつかの例では、修飾されたヌクレオチド間結合は、限定されないが、ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；メチルホスホネート；５’－アルキレンホスホネート；５’－メチルホスホネート；３’－アルキレンホスホネート；三フッ化ホウ素；３’－５’結合あるいは２’－５’結合のボラノリン酸エステルとセレノホスフェート；ホスホトリエステル；チオノアルキルホスホトリエステル；水素ホスホネート結合；アルキルホスホネート；アルキルホスホノチオエート；アリールホスホノチオエート；ホスホロセレノアート；ホスホロジセレノアート；ホスフィネート；ホスホルアミデート；３’－アルキルホスホルアミデート；アミノアルキルホスホルアミデート；チオノホスホルアミデート；ホスホロピペラジデート；ホスホロアニロチオエート；ホスホロアニリデート；ケトン；スルホン；スルホンアミド；炭酸塩；カルバマート；メチレンヒドラゾ；メチレンジメチルヒドラゾ；ホルムアセタール；チオホルムアセタール；オキシム；メチレンイミノ；メチレンメチルイミノ；チオアミデート；リボアセチル基との結合；アミノエチルグリシン；シリルまたはシロキサン結合；例えば、飽和あるいは不飽和である、および／または置換される、および／またはヘテロ原子を含有している、１～１０の炭素のヘテロ原子を用いるか、あるいは用いない、アルキルまたはシクロアルキル結合；塩基が骨格のアザ窒素に直接的あるいは間接的に結合しているモルホリノ構造、アミド、またはポリアミドとの結合；および、これらの組み合わせを含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、１つ以上の修飾は、修飾が中性または無荷電の骨格を生成する、修飾されたホスフェート骨格を含む。いくつかの例では、ホスフェート骨格は、アルキル化によって修飾され、無荷電または中性のホスフェート骨格を生成する。本明細書で使用されるように、アルキル化は、メチル化、エチル化、およびプロピル化を含む。場合によっては、アルキル基とは、アルキル化の文脈において本明細書で使用されるように、１～６の炭素原子を含有している直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を指す。いくつかの例では、例示的なアルキル基としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３．３－ジメチルブチル、および２－エチルブチルの基が挙げられる。場合によっては、修飾されたホスフェートは、米国特許第９４８１９０５号に記載されるホスフェート基である。

【0142】

いくつかの実施形態では、追加の修飾されたホスフェート骨格は、メチルホスホネート、エチルホスホネート、メチルチオホスホネート、またはメトキシホスホネートを含む。場合によっては、修飾されたホスフェートはメチルホスホネートである。場合によっては、修飾されたホスフェートはエチルホスホネートである。場合によっては、修飾されたホスフェートはメチルチオホスホネートである。場合によっては、修飾されたホスフェートはメトキシホスホネートである。

【0143】

いくつかの実施形態では、１つ以上の修飾は、リボース部分、ホスフェート骨格、およびヌクレオシドの修飾、または３’末端または５’末端のヌクレオチドアナログの修飾をさらに含む。例えば、３’末端は、随意に、または、３’－３’結合で３’末端にあるヌクレオシドを反転させることによって、３’カチオン基を含む。別の代替物では、３’末端は、アミノアルキル基、例えば、３’Ｃ５－アミノアルキルｄＴと随意に結合する。追加の代替物では、３’末端は、脱塩基部位、例えば、アプリン酸部位またはアピリミジン酸部位と随意に結合する。いくつかの例では、５’末端は、アミノアルキル基、例えば、５’－Ｏ－アルキルアミノ置換基と結合する。場合によっては、５’末端は、脱塩基部位、例えば、アプリン酸部位またはアピリミジン酸部位と結合する。

【0144】

いくつかの実施形態では、例示的な核酸カーゴとしては、限定されないが、ホミビルセン、ミポメルセン、ＡＺＤ５３１２（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ヌシネルセン、およびＳＢ０１０（Ｓｔｅｒｎａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓが挙げられる。

【0145】

小分子
いくつかの実施形態では、カーゴは小分子である。いくつかの例では、小分子は、阻害剤（例えば、パン阻害剤（ｐａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）または選択的阻害薬）である。その他の例では、小分子はアクチベーターである。さらなる場合では、小分子は、アゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、混合アゴニスト／アンタゴニスト、または競争拮抗剤である。

【0146】

いくつかの実施形態では、小分子は、鎮痛剤、抗不安薬、不整脈治療剤、抗菌性、抗生物質、抗凝固剤と血栓溶解薬、抗痙攣薬、抗うつ薬、下痢止め、鎮吐薬、抗真菌剤、抗ヒスタミン剤、抗高血圧剤、抗炎症薬、抗腫瘍薬、抗精神病剤、下熱薬、抗ウイルス剤、バルビツール酸塩、β－遮断薬、気管支拡張薬、低温硬化、コルチコステロイド、咳止め薬、細胞毒性薬、うっ血除去薬、利尿薬、去痰薬、ホホルモン剤、血糖低下薬、免疫抑制薬、緩下薬、筋弛緩剤、性ホルモン剤、睡眠薬、または精神安定剤のクラスに分類される薬物である。

【0147】

いくつかの実施形態では、小分子は、阻害剤（例えば、キナーゼ経路の阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ経路またはセリン／トレオニンのキナーゼ経路）である。場合によっては、小分子は、二重タンパク質キナーゼ阻害剤である。場合によっては、小分子は脂質キナーゼ阻害剤である。

【0148】

いくつかの例では、小分子はノイラミニダーゼ阻害剤である。

【0149】

場合によっては、小分子は炭酸脱水酵素阻害薬である。

【0150】

いくつかの実施形態では、小分子の例示的な標的としては、限定されないが、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、血管内皮増殖因子受容体３（ＶＥＧＦＲ３）、線維芽細胞成長因子受容体１（ＦＧＦＲ１）、線維芽細胞成長因子受容体２（ＦＧＦＲ２）、線維芽細胞成長因子受容体３（ＦＧＦＲ３）、線維芽細胞成長因子受容体４（ＦＧＦＲ４）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、サイクリン依存性キナーゼ６（ＣＤＫ６）、受容体チロシンキナーゼ、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）アイソフォーム（例えば、ＰＩ３Ｋδ（ｐ１１０δとしても知られている）、ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＦＧ－Ｒ）のファミリーからの受容体、炭酸脱水酵素（例えば、炭酸脱水酵素Ｉ）が挙げられる。

【0151】

いくつかの実施形態では、小分子は、ウイルスタンパク質、例えば、ウイルスエンベロープタンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、小分子は、宿主細胞へのウイルスの吸着を減少させる。いくつかの実施形態では、小分子は、宿主細胞内へのウイルスの侵入を減少させる。いくつかの実施形態では、小分子は、宿主または宿主細胞におけるウイルス複製を減少させる。いくつかの実施形態では、小分子は、ウイルス構築を減少させる。

【0152】

いくつかの実施形態では、例示的な小分子カーゴとしては、限定されないが、レンバチニブ、パルボシクリブ、レゴラフェニブ、イデラリシブ、トファシチニブ、ニンテダニブ、ザナミビル、エトキシゾラミド、およびアルテミシニンが挙げられる。

【0153】

タンパク質
いくつかの実施形態では、カーゴはタンパク質である。いくつかの例では、タンパク質は完全長のタンパク質である。他の例では、タンパク質は、フラグメント（例えば、機能的フラグメント）である。いくつかの例では、タンパク質は自然発生のタンパク質である。さらなる例では、タンパク質はデノボ操作されたタンパク質である。さらなる場合では、タンパク質は融合タンパク質である。さらなる場合では、タンパク質は、組換えタンパク質である。例示的なタンパク質としては、限定されないが、Ｆｃ融合タンパク質、抗凝固剤、血液因子、骨形成タンパク質、酵素、成長因子、ホルモン、インターフェロン、インターロイキン、および血栓溶解薬が挙げられる。

【0154】

いくつかの例では、タンパク質は酵素補充療法で使用される。

【0155】

場合によっては、タンパク質は、治療用および／または予防用のワクチン産生のための抗原産生において使用される。例えば、タンパク質は、望ましい免疫応答（例えば、炎症促進性免疫応答、抗炎症性免疫応答、Ｂ細胞応答、抗体産生応答、Ｔ細胞応答、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答、Ｔｈ１免疫応答、Ｔｈ２免疫応答、Ｔｈ１７免疫応答、Ｔｒｅｇ免疫応答、またはそれらの組み合わせ）を誘発する抗原を含む。

【0156】

いくつかの例では、例示的なタンパク質カーゴとしては、限定されないが、ロミプロスチム、リラグルチド、ヒト成長ホルモン（ｒＨＧＨ）、ヒトインスリン（ＢＨＩ）、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、第ＶＩＩＩ因子、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、αガラクトシダーゼＡ、α－Ｌ－イズロニダーゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－４－スルファターゼ、ドルナーゼアルファ、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）を含む。グルコセレブロシダーゼ、アンターフェロンベータ－１ａインシュリン様増殖因子１（ＩＧＦ－１）、またはラスブリカーゼが挙げられる。

【0157】

ペプチド
いくつかの実施形態では、カーゴはペプチドである。いくつかの例では、ペプチドは自然発生のペプチドである。他の例では、ペプチドは、人工的に操作されたペプチドあるいは組換えペプチドである。場合によっては、ペプチドは、Ｇタンパク質結合受容体、イオンチャネル、微生物、抗微生物標的、触媒性または他のＩｇファミリーの受容体、細胞内標的、膜に固定された標的、あるいは細胞外標的を標的とする。

【0158】

場合によっては、ペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも１０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも１５のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも２０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも３０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも４０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも５０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも６０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも７０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも８０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも９０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは少なくとも１００のアミノ酸を含む。

【0159】

場合によっては、ペプチドは、最大で３つのアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは、最大で４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で１０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で１５のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で２０のアミノ酸を含む。場合によっては、プチドドは最大で３０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で４０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で５０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で６０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で７０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で８０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で９０のアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドは最大で１００のアミノ酸を含む。

【0160】

場合によっては、ペプチドは約１～約１０ｋＤａを含む。場合によっては、ペプチドは、約１～約９ｋＤａ、１～約６ｋＤａ、約１～約５ｋＤａ、約１～約４ｋＤａ、約１～約３ｋＤａ、約２～約８ｋＤａ、約２～約６ｋＤａ、約２～約４ｋＤａ、約１．２～約２．８ｋＤａ、約１．５～約２．５ｋＤａ、または約１．５～約２ｋＤａを含む。

【0161】

いくつかの実施形態では、ペプチドは環状ペプチドである。いくつかの例では、環状ペプチドは大環状ペプチドである。いくつかの例では、環状ペプチドは拘束ペプチドである。環状ペプチドは、さまざまな結合、例えば、頭部－尾部（ｈｅａｄ－ｔｏ－ｔａｉｌ）、頭部－側鎖（ｈｅａｄ－ｔｏ－ｓｉｄｅ－ｃｈａｉｎ）、側鎖－尾部（ｓｉｄｅ－ｃｈａｉｎ－ｔｏ－ｔａｉｌ）、および側鎖－側鎖（ｓｉｄｅ－ｃｈａｉｎ－ｔｏ－ｓｉｄｅ－ｃｈａｉｎ）の結合を用いて構築される。いくつかの例では、環状ペプチド（例えば、大環状ペプチドまたは拘束ペプチド）は、約５００のダルトン～約２０００ダルトンの分子量を有している。他の例では、環状ペプチド（例えば、大環状ペプチド拘束ペプチド）は、約１０のアミノ酸～約１００のアミノ酸、約１０のアミノ酸～約７０のアミノ酸、または約１０のアミノ酸～約５０のアミノ酸の範囲である。

【0162】

場合によっては、ペプチドは、治療用および／または予防用のワクチン産生のための抗原産生において使用される。例えば、ペプチドは、望ましい免疫応答（例えば、炎症促進性免疫応答、抗炎症性免疫応答、Ｂ細胞応答、抗体産生応答、Ｔ細胞応答、ＣＤ４＋ Ｔ細胞応答、ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答、Ｔｈ１免疫応答、Ｔｈ２免疫応答、Ｔｈ１７免疫応答、Ｔｒｅｇ免疫応答、またはそれらの組み合わせ）を誘発する抗原を含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、ペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの例では、アミノ酸残基とは、アミノ基とカルボキシル基の両方を含有している分子を指す。適切なアミノ酸は、限定することなく、有機合成または他の代謝経路によって調製された非自然発生のアミノ酸だけでなく、自然発生のアミノ酸のＤ－異性体およびＬ－異性体の両方を含む。アミノ酸との用語には、本明細書で使用されるように、限定することなく、αアミノ酸、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、およびアミノ酸アナログが含まれる。

【0164】

いくつかの例では、αアミノ酸とは、アミノ基と、指定されたα炭素である炭素に結合されたカルボキシル基の両方を含有する分子を指す。

【0165】

いくつかの例では、βアミノ酸とは、β構成のアミノ基とカルボキシル基の両方を含有する分子を指す。

【0166】

いくつかの実施形態では、アミノ酸アナログはラセミ混合物である。いくつかの例では、アミノ酸アナログのＤ異性体が使用される。場合によって、アミノ酸アナログのＬ異性体が使用される。いくつかの例では、アミノ酸アナログは、ＲまたはＳの構成であるキラル中心を含む。

【0167】

いくつかの実施形態では、例示的なペプチドカーゴとしては、限定されないが、ペギネサチド、インスリン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、カルシトニン、オキシトシン、バソプレシン、オクトレオリド（ｏｃｔｒｅｏｌｉｄｅ）、およびリュープロレリンが挙げられる。

【0168】

いくつかの実施形態では、例示的なペプチカーゴとしては、限定されないが、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、アニデュラファンギン、ランレオチド、パシレオチド、ロミデプシン、リナクロチド、およびペギネサチドが挙げられる。

【0169】

抗体
いくつかの実施形態では、カーゴは抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、マウス抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗体またはその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、二重特異性抗体またはその結合フラグメント、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ_２、Ｆ（ａｂ）’_３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス－ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）_２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ ＮＡＲ、ラクダ科抗体またはその結合フラグメント、あるいはそれらの化学修飾された誘導体を含む。

【0170】

いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは、細胞表面タンパク質を認識する。いくつかの例では、細胞表面タンパク質は、癌細胞によって発現される抗原である。いくつかの例では、細胞表面タンパク質はネオエピトープである。いくつかの例では、細胞表面タンパク質は、野生型タンパク質と比較して、１つ以上の突然変異を含む。例示的な癌抗原としては、限定されないが、アルファフェトプロテイン、ＡＳＬＧ６５９、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦ－Ｒ、ブレビカン、ＣＡ１２５（ＭＵＣ１６）、ＣＡ１５－３、ＣＡ１９－９、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ２４２、ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来成長因子）、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ５、Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、上皮成長因子、ＥＴＢＲ、Ｆｃ受容体様タンパク質（ＦＣＲＨ１）、ＧＥＤＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のβサブユニット）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＩＣＯＳ、ＩＬ－２受容体、ＩＬ２０Ｒα、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２（ＩＲＴＡ２）、Ｌ６、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、Ｌｅｗｉｓ Ｘ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ ４、ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＤＰ、ＭＰＦ（ＳＭＲ、ＭＳＬＮ）、ＭＣＰ１（ＣＣＬ２）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＰＧ、ＭＳＧ７８３、ムチン、ＭＵＣ１－ＫＬＨ、Ｎａｐｉ３ｂ（ＳＬＣ３４Ａ２）、ネクチン－４、Ｎｅｕ癌遺伝子産物、ＮＣＡ、胎盤アルカリホスファターゼ、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、前立腺酸性ホスファターゼ、ＰＳＣＡ ｈｌｇ、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５（Ｐ２Ｘ５）、ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ｇｐ１００、Ｐ２１、前立腺の６－膜貫通上皮抗原（ｓｉｘ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ）（ＳＴＥＡＰ１）、ＳＴＥＡＰ２、Ｓｅｍａ ５ｂ、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャンネル（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｃａｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ）、サブファミリーＭ、メンバー４）などが挙げられる。

【0171】

いくつかの例では、細胞表面タンパク質は、分化（ＣＤ）細胞表面マーカーのクラスターを含む。例示的なＣＤ細胞表面マーカーとしては、限定されないが、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｅ、（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７１、ＣＤ７９（例えば、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ）、ＣＤ９０、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１２５（ＩＬ５ＲＡ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２２１、ＣＤ２７４、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３２６（ＥｐＣＡＭ）などが挙げられる。

【0172】

いくつかの実施形態では、例示的な抗体またはその結合フラグメントとしては、限定されないが、ザルツムマブ（ＨｕＭａｘ－ＥＦＧｒ、Ｇｅｎｍａｂ、アバゴボマブ（Ｍｅｎａｒｉｎｉ）、アビツズマブ（ａｂｉｔｕｚｕｍａｂ）（Ｍｅｒｃｋ）、アデカツムマブ（ＭＴ２０１）、アラシズマブペゴール、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ、あるいはＣａｍｐａｔｈ－１Ｈ；Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ）、ＡｌｌｏＭｕｎｅ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ、アマツキシマブ（Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ Ｉｎｃ．）、抗ＶＥＧＦ（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）、アナツモマブマフェナトックス、アポリツマブ（ａｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（ｈｕ１Ｄ１０）、アスクリンバクマブ（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、Ｂ４３．１３（ＯｖａＲｅｘ、ＡｌｔａＲｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ、ＡＭＧ１０３；Ａｍｇｅｎ）、ＢＥＣ２（ＩｍＧｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、カルルマブ（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、カツマキソマブ（Ｒｅｍｏｖａｂ、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ）、ＣＥＡｃｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、ＩｍＣｌｏｎｅ）、シタツズマブ・ボガトクス（ＶＢ６－８４５）、シクツムマブ（ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）（ＩＭＣ－Ａ１２、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、コナツムマブ（ＡＭＧ ６５５、Ａｍｇｅｎ）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０、ｈｕＳ２Ｃ６Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標），Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、デツモマブ、ドロジツマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、デュルバルマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、デュシギツマブ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、エドレコロマブ（ＭＡｂ１７－１Ａ， Ｐａｎｏｒｅｘ，Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、エロツズマブ（Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ（商標），Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、エミベツズマブ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、エナバツズマブ（Ｆａｃｅｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ．）、エンフォルツマブベドチン（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、エンシツズマブ（ｅｎｓｉｔｕｘｕｍａｂ）（Ｎｅｏｇｅｎｉｘ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、エプラツズマブ（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、エルツマキソマブ（Ｒｅｘｏｍｕｎ（登録商標）、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ）、エタラシズマブ（Ａｂｅｇｒｉｎ、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ファーレツズマブ（ＭＯＲＡｂ－００３、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ Ｉｎｃ．）、ＦＢＴＡ０５（Ｌｙｍｐｈｏｍｕｎ、Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ）、フィクラツズマブ（ＡＶＥＯ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、フィギツムマブ（ＣＰ－７５１８７１、Ｐｆｉｚｅｒ）、フランボツマブ（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、フレゾリムマブ（ＧＣ１００８、Ａａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、フツキシマブ、グラキシマブ（ｇｌａｘｉｍａｂ）、ガニツマブ（Ａｍｇｅｎ）、ジレンツキシマブ（Ｒｅｎｃａｒｅｘ（登録商標）、Ｗｉｌｅｘ ＡＧ）、ＩＭＡＢ３６２（Ｃｌａｕｄｉｘｉｍａｂ、Ｇａｎｙｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＡＧ）、イマルマブ（Ｂａｘａｌｔａ）、ＩＭＣ－１Ｃ１１（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ－Ｃ２２５（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、イムガツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、インテツムマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、イラツムマブ（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）、イサツキシマブ（ＳＡＲ６５０９８４、Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、レクサツムマブ（ＥＴＲ２－ＳＴ０１、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、リンツズマブ（ＳＧＮ－３３、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ルミリキシマブ、マパツズマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ１、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、マツズマブ（ＥＭＤ ７２０００、Ｍｅｒｃｋ）、ミラツズマブ（ｈＬＬ１、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ミツモマブ（ＢＥＣ－２、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ナルナツマブ（ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（商標）、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ネスバクマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ニモツズマブ（ｈ－Ｒ３、ＢＩＯＭＡｂ ＥＧＦＲ、ＴｈｅｒａＣＩＭ、Ｔｈｅｒａｌｏｃ、あるいはＣＩＭＡｈｅｒ；Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、オビヌツズマブ（ＧａｚｙｖａまたはＧａｚｙｖａｒｏ；Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、オカラツズマブ（ＡＭＥ－１３３ｖ、ＬＹ２４６９２９８；Ｍｅｎｔｒｉｋ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＬＬＣ）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）、Ｇｅｎｍａｂ）、オナルツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、オンツキシズマブ（Ｏｎｔｕｘｉｚｕｍａｂ）（Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ，Ｉｎｃ．）、オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ（登録商標）、ＡｌｔａＲｅｘ Ｃｏｒｐ．）、オトレルツズマブ（ｏｔｌｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ）、パニツムマブ（ＡＢＸ－ＥＧＦ、Ａｍｇｅｎ）、パンコマブ（ｐａｎｋｏｍａｂ）（Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ ＧＭＢＨ）、パルサツズマブ（ｐａｒｓａｔｕｚｕｍａｂ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、パトリツマブ（ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ）、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（Ｔｈｅｒａｇｙｎ、Ａｎｔｉｓｏｍａ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）、ポラツズマブベドチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、プリツムマブ、ラコツモマブ（Ｖａｘｉｒａ（登録商標）、Ｒｅｃｏｍｂｉｏ）、ラムシルマブ （Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標），ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ロバツムマブ（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）、セリバントマブ（Ｓａｎｏｆｉ／Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｙｌｖａｎｔ（商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｓｍａｒｔ ＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．），Ｓｍａｒｔ ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ、Ｉｎｃ．）、タバルマブ（ＬＹ２１２７３９９、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、タプリツモマブペプトクス、テナツモマブ（ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テプロツムマブ（Ｒｏｃｈｅ）、テツロマブ、ＴＧＮ１４１２（ＣＤ２８－ＳｕｐｅｒＭＡＢあるいはＴＡＢ０８）、ティガツズマブ（ＣＤ－１００８、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）、トシツモマブ、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トレメリムマブ（ＣＰ－６７２，２０６；Ｐｆｉｚｅｒ）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥＭＤ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ウブリツキシマブ、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３， Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ボロシキシマブ（Ｍ２００、Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、およびザツキシマブ（ｚａｔｕｘｉｍａｂ）が挙げられる。

【0173】

いくつかの例では、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。場合によっては、ＡＤＣのペイロードは、例えば、限定されないが、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）誘導体、メイタンシン、メイタンシノイド、タキサン、カリケアマイシン、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）（ＰＤＢ）、またはチューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）を含む。いくつかの例では、ペイロードは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）あるいはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を含む。いくつかの例では、ペイロードは、ＤＭ２（メルタンシン）またはＤＭ４を含む。いくつかの例では、ペイロードは、ピロロベンゾジアゼピン二量体を含む。

【0174】

さらなるカーゴ
いくつかの実施形態では、カーゴはペプチド模倣薬である。ペプチド模倣薬は、ペプチドを模倣するように設計された小さなタンパク質様ポリマーである。いくつかの例では、ペプチド模倣薬はＤ－ペプチドを含む。他の例では、ペプチド模倣薬はＬ－ペプチドを含む。例示的なペプチド模倣薬は、ペプトイドおよびβ－ペプチドを含む。

【0175】

いくつかの実施形態では、カーゴはヌクレオチド模倣物である。

【0176】

ベクターおよび発現系
ある実施形態では、上に記載されるＡｒｃポリペプチド、ｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、操作されたＡｒｃ、および操作されたｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドは、プラスシドベクターによってコードされる。いくつかの実施形態では、ベクターは、真核生物または原核生物の供給源に由来する任意の適切なベクターも含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、細菌（例えば、大腸菌）、昆虫、酵母（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、藻類、または哺乳動物の供給源から得られる。

【0177】

例示的な細菌ベクターとしては、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤベクター系、ｐＢＡＤＭベクター系、ｐＥＴベクター系、ｐＥＴＭベクター系、ｐＧＥＸベクター系、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ－ｃ２、ｐＭａｌ－ｐ２、ｐＱＥベクター系、ｐＲＳＥＴ Ａ、ｐＲＳＥＴ Ｂ、ｐＲＳＥＴ Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２系、ｐＺＡ３１－Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１－ＭＣＳ－１、ｐＦＬＡＧ ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ Ｓｈｉｆｔ－１２ｃ、ｐＴＡＣ－ＭＡＴ－１、ｐＦＬＡＧ ＣＴＣ、またはｐＴＡＣ－ＭＡＴ－２が挙げられる。

【0178】

例示的な昆虫ベクターとしては、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｂ、 ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１２、ｐＰｏｌｈ－ＦＬＡＧ１またはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ２などのＦＬＡＧベクター、あるいはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ１またはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ２などのＭＡＴベクターが挙げられる。

【0179】

場合によっては、酵母ベクターとしては、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１５ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ－ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ－ＤＥＳＴ４９ Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）目的ベクター、ｐＡＯ８１５ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＦＬＤ１ Ｐｉｃｈｉ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＧＡＰＺＡ、Ｂ、＆Ｃ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ６ Ａ、Ｂ、＆Ｃ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ９Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴ Ａ、Ｂ、＆Ｃ酵母ベクター、またはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターが挙げられる。

【0180】

例示的な藻類ベクターとしては、ｐＣｈｌａｍｙ－４ベクターまたはＭＣＳベクターが挙げられる。

【0181】

哺乳動物ベクターの例としては、一過性発現ベクターまたは安定発現ベクターが挙げられる。哺乳動物の一過性発現ベクターとしては、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ８、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ １９、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２３、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ６ａ、ｂ、ｃ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５ａ、ｂ、ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ７．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２４、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ３、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ４が挙げられる。哺乳動物の安定発現ベクターとしては、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １３、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２５、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １４、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２６、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ １、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ２が挙げられる。

【0182】

いくつかの例では、無細胞系は、細胞からの細胞質成分および／または核成分の混合物であり、インビトロでの核酸合成に使用される。場合によっては、無細胞系は、原核細胞成分または真核細胞成分のいずれかを利用する。時々、核酸合成は、例えば、ショウジョウバエ細胞、ツメガエル卵、またはＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－２（商標））に基づく無細胞系で得られる。例示的な無細胞系としては、限定されないが、Ｅ． ｃｏｌｉ Ｓ３０ Ｅｘｔｒａｃｔ ｓｙｓｔｅｍ、Ｅ． ｃｏｌｉ Ｔ７ Ｓ３０ｓｙｓｔｅｍ、またはＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）が挙げられる。

【0183】

宿主細胞
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、天然由来の細胞または遺伝子改変細胞などの適切な細胞も含む。いくつかの例では、宿主細胞は、生産宿主細胞である。いくつかの例では、宿主細胞は、真核細胞である。いくつかの例では、宿主細胞は、原核細胞である。場合によっては、真核細胞は、真菌（例えば、酵母菌）、動物細胞、または植物細胞を含む。場合によっては、原核細胞は細菌細胞である。細菌細胞の例としては、グラム陽性菌またはグラム陰性菌が挙げられる。いくつかの実施形態では、グラム陰性菌は、嫌気性であるか、桿状であるか、またはその両方である。

【0184】

いくつかの例では、グラム陽性菌は、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ、またはＴｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓを含む。場合によっては、グラム陰性菌は、Ａｑｕｉｆｉｃａｅ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ－Ｔｈｅｒｍｕｓ、Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｅｓ－Ｃｈｌｏｒｏｂｉ／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ（ＦＣＢ ｇｒｏｕｐ）、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｇｅｍｍａｔｉｍｏｎａｄｅｔｅｓ、Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａｅ、Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ－Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ／ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ （ＰＶＣ ｇｒｏｕｐ）、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ、またはＳｙｎｅｒｇｉｓｔｅｔｅｓを含む。いくつかの実施形態では、細菌は、Ａｃｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｃｈｌｏｒｏｆｌｅｘｉ、Ｃｈｒｙｓｉｏｇｅｎｅｔｅｓ、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ、Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｉ、Ｔｈｅｒｍｏｄｅｓｕｌｆｏｂａｃｔｅｒｉａ、またはＴｈｅｒｍｏｔｏｇａｅである。いくつかの実施形態では、細菌細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、またはＣｏｌｉ ｂａｃｉｌｌｉである。

【0185】

例示的な原核生物の宿主細胞としては、限定されないが、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）、またはＳｔｂｌ４（商標）が挙げられる。

【0186】

いくつかの例では、動物細胞には、脊椎動物または無脊椎動物の細胞が含まれる。場合によっては、動物細胞には、海洋無脊椎動物、魚、昆虫、両生類、爬虫類、哺乳動物、またはヒトの細胞が含まれる。場合によっては、真菌細胞には、ビール酵母、パン酵母、またはワイン酵母などの酵母菌が含まれる。

【0187】

真菌には、酵母、カビ、糸状菌、担子菌、または接合菌などの子嚢菌が含まれる。いくつかの例では、酵母には、ＡｓｃｏｍｙｃｏｔａまたはＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａが含まれる。場合によっては、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａには、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ（真正イースト、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（パン酵母））、またはＴａｐｈｒｉｎｏｍｙｃｏｔｉｎａ（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔｅｓ（分裂酵母））が含まれる。場合によっては、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａは、Ａｇａｒｉｃｏｍｙｃｏｔｉｎａ（例えば、Ｔｒｅｍｅｌｌｏｍｙｃｅｔｅｓ）、またはＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｏｔｉｎａ（例えば、Ｍｉｃｒｏｂｏｔｒｙｏｍｙｃｅｔｅｓ）が含まれる。

【0188】

例示的な酵母または糸状菌としては、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、またはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａの属が挙げられる。例示的な酵母あるいは糸状菌としては、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ－Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉの種が挙げられる。

【0189】

例示的な酵母宿主細胞としては、限定されないが、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８Ｈ、ならびにＸ－３３などのＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母菌株；および、ＩＮＶＳｃ１などのＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母菌株を含む。

【0190】

いくつかの例では、さらなる動物細胞には、軟体動物、節足動物、環形動物、または海綿動物から得られる細胞が含まれる。場合によっては、さらなる動物細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト、霊長類、類人猿、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、あるいはげっ歯類である。場合によっては、げっ歯類には、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ファンシーラット、またはモルモットが含まれる。

【0191】

例示的な哺乳動物宿主細胞としては、限定されないが、２９３Ａ細胞株、２９３ＦＴ細胞株、２９３Ｆ細胞、２９３Ｈ細胞、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）Ｔ－ＲＥｘ（商標）２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－２９３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－３Ｔ３細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＢＨＫ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＨＯ細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＶ－１細胞株、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ ＭＳＲ細胞株、ＧＳ－ＣＨＯ細胞株、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－２９３細胞株、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－ＣＨＯ細胞株、およびＴ－ＲＥｘ（商標）－ＨｅＬａ細胞株が挙げられる。

【0192】

いくつかの例では、哺乳動物宿主細胞は初代細胞である。いくつかの例では、哺乳動物宿主細胞は、安定した細胞株、または、対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込んでおり、かつ多世代にわたる細胞分裂の後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有している細胞株である。場合によっては、哺乳動物宿主細胞は、一過性の細胞株、または、対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込んでおらず、かつ多世代にわたる細胞分裂の後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有していない細胞株である。

【0193】

例示的な昆虫宿主細胞としては、限定されないが、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞、およびｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞が挙げられる。

【0194】

いくつかの例では、植物細胞は藻類からの細胞を含む。例示的な昆虫細胞株としては、限定されないが、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ １３７ｃ、またはＳｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｅｌｏｎｇａｔｕｓ ＰＰＣ ７９４２からの株が挙げられる。

【0195】

使用方法
ある実施形態において、カーゴを被包するカプシドを調製する方法が、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、上記方法は、複数のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、操作されたＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチド、および／または組換えのＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを、充填されたＡｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを生成するのに十分な時間にわたって、溶液中で、カーゴによりインキュベートする工程を含む。

【0196】

いくつかの例では、上記方法は、カーゴでインキュベートする前に、複数の操作されたおよび／または組換えのＡｒｃポリペプチドを含む溶液を、複数の非Ａｒｃカプシド形成サブユニットと混合する工程を含む。場合によっては、複数の非Ａｒｃカプシド形成サブユニットは、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または１０：１の比で、複数の操作されたおよび／または組換えＡｒｃポリペプチドと混合される。その他の場合において、複数の非Ａｒｃカプシド形成サブユニットは、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、または１：１０の比で、複数の操作されたおよび／または組換えＡｒｃポリペプチドと混合される。

【0197】

場合によっては、充填されたＡｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを生成するのに十分な時間は、少なくとも約５分、少なくとも約１０分、少なくとも約２０分、少なくとも約３０分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約６時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、またはそれ以上である。

【0198】

場合によっては、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、約２℃～約３７℃の温度で調製される。いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇのベースのカプシドは、約２℃～約８℃、約２℃～約４℃、約２０℃～約３７℃、約２５℃～約３７℃、約２０℃～約３０℃、約２５℃～約３０℃、あるいは約３０℃～約３７℃の温度で調製される。

【0199】

場合によっては、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、室温で調製される。

【0200】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、全身投与のためにさらに製剤化される。

【0201】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、局所投与のためにさらに製剤化される。

【0202】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、非経口（例えば、動脈内、関節内、皮内、病巣内、筋肉内、眼内、骨内の注入、腹腔内、髄腔内、静脈内、硝子体内、皮下）投与のためにさらに製剤化される。

【0203】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、局所投与のためにさらに製剤化される。

【0204】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、経口投与のためにさらに製剤化される。

【0205】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、舌下投与のためにさらに製剤化される。

【0206】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、エアロゾル投与のためにさらに製剤化される。

【0207】

ある実施形態では、対象の部位にカーゴを送達するために、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを使用することが本明細書に記載される。いくつかの例では、方法は、カプシドの細胞取込を促進するのに十分な時間にわたって、対象の部位にある細胞を、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドに接触させる工程を含む。

【0208】

場合によっては、細胞は、筋細胞、皮膚細胞、血液細胞、または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞あるいはＢ細胞）である。

【0209】

いくつかの例では、前記細胞は腫瘍細胞、例えば固形腫瘍細胞、または血液系悪性腫瘍由来の細胞である。場合により、前記固形腫瘍細胞は、膀胱癌、乳癌、脳癌、大腸癌、腎癌、肝臓癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、胃癌、または甲状腺癌由来の細胞である。場合により、血液系悪性腫瘍由来の細胞はＢ細胞悪性腫瘍またはＴ細胞悪性腫瘍由来である。場合により、前記細胞は、白血病、リンパ腫、骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）由来である。

【0210】

いくつかの実施形態では、前記細胞は体細胞である。いくつかの例では、前記細胞は、血液細胞、皮膚細胞、結合組織細胞、骨細胞、筋細胞、または器官由来の細胞である。

【0211】

いくつかの実施形態では、前記細胞は、上皮細胞、結合組織細胞、筋細胞、またはニューロンである。

【0212】

いくつかの例では、前記細胞は、内胚葉細胞、中胚葉細胞、または外胚葉細胞である。いくつかの例では、内胚葉は、呼吸器系、腸、肝臓、胆嚢、膵臓、ランゲルハンス島、甲状腺、または後腸の細胞を含む。場合により、中胚葉は、骨軟骨前駆（ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）細胞、筋細胞、消化器系由来の細胞、腎臓の幹細胞、生殖器系由来の細胞、循環系由来の細胞（内皮細胞など）を含む。外胚葉由来の典型的な細胞は、上皮細胞、下垂体前葉の細胞、末梢神経系の細胞、神経内分泌系の細胞、眼の細胞、中枢神経系の細胞、上衣の細胞、または松果腺の細胞を含む。場合により、中枢神経系と末梢神経系に由来する細胞は、ニューロン、シュワン細胞、サテライトグリア細胞、オリゴデンドロサイト、またはアストロサイトを含む。場合により、ニューロンはさらに、介在ニューロン、錐体ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、脊髄由来の運動ニューロン、または抑制性脊柱のニューロンを含む。

【0213】

いくつかの実施形態では、前駆細胞は幹細胞または前駆細胞である。場合により、前記細胞は間葉系幹細胞または前駆細胞である。他の場合、前記細胞は造血幹細胞または前駆細胞である。

【0214】

場合により、標的タンパク質は細胞中で過剰発現されるか、または枯渇している。場合により、前記標的タンパク質は細胞中で過剰発現される。さらなる場合、前記標的タンパク質は細胞中で枯渇している。

【0215】

場合により、細胞中の標的遺伝子には１つ以上の突然変異がある。

【0216】

場合により、前記細胞はスプライシング機構が損なわれている。

【0217】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドは、必要とする被験体に全身投与される。

【0218】

他の例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、必要とする被験体に局所投与される。

【0219】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、必要とする被験体に非経口投与、経口投与、局所投与、舌下腺を介して投与、またはエアロゾルにより投与される。場合により、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシド、必要とする被験体に非経口投与される。他の場合、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、必要とする被験体に経口投与される。さらなる場合、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、必要とする被験体に局所投与、舌下腺を介して投与、またはエアロゾルにより投与される。

【0220】

いくつかの実施形態では、送達成分は、目標部位への標的送達のためにＡｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドと組み合わされる。いくつかの例では、前記送達構成分は、担体、例えば、ミセル、リポソーム、あるいはマイクロベシクルなどの細胞外小胞、またはウイルスエンベロープを含む。

【0221】

いくつかの例では、前記送達成分は、自身の送達成分を含まない（例えば、中に第２のポリペプチドが存在しない）、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを対象とする主要な送達ビヒクルとして機能する。この場合、前記送達成分は、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを目標の標的部位へと向けて、随意に細胞内吸収を容易にする。

【0222】

他の例では、前記送達成分は、Ａｒｃベースのカプシドに含まれる第２のポリペプチドの標的特異性および／または感度を増強する。このような場合、前記送達成分は、標的部位に対するＡｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドの特異性および／または親和性を増強する。さらなる場合、前記送達成分は、特異性および／または親和性を約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、またはそれ以上増強する。さらなる場合、前記送達成分は、特異性および／または親和性を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、５００％、またはそれ以上増強する。またさらには、前記送達成分は随意に、オフターゲット効果を約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、またはそれ以上最小化する。またさらには、前記送達成分は随意に、オフターゲット効果を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、５００％、またはそれ以上最小化する。

【0223】

さらなる例では、前記送達成分は、Ａｒｃベースのカプシドを一般的な標的領域（例えば腫瘍微小環境）に輸送する第１のビヒクルとして機能し、または、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドに含まれる第２のポリペプチドは、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドを特定の標的部位に誘導して随意に細胞内吸収を容易にする、第２の送達分子として機能する。このような場合、前記送達成分は、オフターゲット効果を約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、またはそれ以上最小化する。このような場合、前記送達成分は、オフターゲット効果を約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、５００％、またはそれ以上最小化する。

【0224】

さらなる例では、前記送達成分は、Ａｒｃベースのカプシドを目標の標的部位に輸送する第１のビヒクルとして機能し、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドに含まれる第２のポリペプチドは、細胞内吸収を容易にする第２の送達分子として機能する。

【0225】

いくつかの実施形態では、前記送達成分は細胞外小胞を含む。いくつかの例では、前記細胞外小胞は、マイクロベシクル、リポソーム、またはミセルを含む。いくつかの例では、前記細胞外小胞の直径は、約１０ｎｍ～約２０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１０ｎｍ～約８００ｎｍ、約２０ｎｍ～約６００ｎｍ、約３０ｎｍ～約５００ｎｍ、約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、または約８０ｎｍ～約１００ｎｍである。

【0226】

いくつかの実施形態では、前記送達成分はマイクロベシクルを含む。循環するマイクロベシクルまたは微粒子としても知られるマイクロベシクルは、リン脂質を含む膜結合小胞である。いくつかの例では、前記マイクロベシクルの直径は、約５０ｎｍ～約１０００ｎｍ、約１００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約５０ｎｍ～約４００ｎｍである。

【0227】

いくつかの例では、前記マイクロベシクルは、細胞膜逆位、エキソサイトーシス、剥離、小胞形成、または出芽から生じる。いくつかの例では、前記マイクロベシクルは分化細胞から生成される。他の例では、前記マイクロベシクルは、未分化細胞、例えば芽細胞、前駆細胞、または幹細胞から生成される。

【0228】

いくつかの実施形態では、前記送達成分はリポソームを含む。いくつかの例では、前記リポソームは、目標の部位または領域への標的送達のために複数のリポペプチドを含んでおり、これらはリポソームの表面に存在する。場合により、リポソームは標的細胞と融合し、これによりリポソームの内容物はすべて標的細胞に移る。場合により、リポソームは食作用性の細胞によりエンドサイトーシスされる。エンドサイトーシスの後、リポソーム脂質のリソソーム内分解とカプセルに包まれた薬剤の放出が行われる。

【0229】

取り込みに適切な典型的なリポソームとして、多重層ベシクル（ＭＬＶ）、オリゴ層状ベシクル（ＯＬＶ）、単層ベシクル（ＵＶ）、小さな単層ベシクル（ＳＵＶ）、中型単層ベシクル（ＭＵＶ）、大型単層ベシクル（ＬＵＶ）、巨大単層ベシクル（ＧＵＶ）、多胞体ベシクル（ＭＶＶ）、逆相蒸発法により作られた単一あるいはオリゴ層状ベシクル（ＲＥＶ）、逆相蒸発法により作られた多重層ベシクル（ＭＬＶ－ＲＥＶ）、安定した複数層ベシクル（ＳＰＬＶ）、凍結融解したＭＬＶ（ＦＡＴＭＬＶ）、押出法により調製されたベシクル（ＶＥＴ）、フレンチプレスにより調製されたベシクル（ＦＰＶ）、融合により調製されたベシクル（ＦＵＶ）、脱水－再水和ベシクル（ＤＲＶ）、バブルソーム（ｂｕｂｂｌｅｓｏｍｅｓ）（ＢＳＶ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの例では、リポソームはＡｍｐｈｉｐｏｌ（Ａ８－３５）を含む。リポソームを調製するための技術は、例えば、ＣＯＬＬＯＩＤＡＬ ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ ｖｏｌ．６６（Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．（１９９４））に記載されている。

【0230】

調製方法に応じて、リポソームは単層状または多層状であり、直径は約２０μｍ～約１０００μｍ超の範囲で変動する。

【0231】

いくつかの例では、本明細書に提供されるリポソームはさらに担体脂質を含む。いくつかの実施形態では、前記担体脂質はリン脂質である。リポソームを形成可能な担体脂質として、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ、レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、またはホスファチジルセリン（ＰＳ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。他の適切なリン脂質としてはさらに、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）など、またはこれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態において、リポソームは、リポソーム形成を調節するステロール（例えばコレステロール）をさらに含む。前記担体脂質は随意に、任意の非リン酸塩極性脂質である。

【0232】

いくつかの実施形態では、前記送達成分はミセルを含む。いくつかの例では、前記ミセルの直径は、約２ｎｍ～約２５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約２００ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、または約５０～約１００ｎｍである。

【0233】

いくつかの例では、前記ミセルは高分子ミセルであり、これはコアシェル構造を特徴とし、中では疎水性コアが親水性シェルに取り囲まれている。場合により、前記親水性シェルはさらに、親水性ポリマーまたはコポリマー、およびｐＨ感受性成分を含む。

【0234】

典型的な親水性ポリマーまたはコポリマーとして、ポリ（Ｎ置換アクリルアミド）、ポリ（Ｎ－アクリロイルピロリジン）、ポリ（Ｎ－アクリロイルピペリジン）、ポリ（Ｎ－アシル－Ｌ－アミノ酸アミド）、ポリ（エチルオキサゾリン）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルアクリレート、ヒドロキシアルキルセルロース誘導体、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（Ｎ－ビニル－２－ピロリドン）、ポリエチレングリコール誘導体、それらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0235】

ｐＨ感受性部分として、メタクリル酸、エチルアクリル酸、プロピルアクリル酸、ブチルアクリル酸などのアルキルアクリル酸、またはグルタミン酸などのアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0236】

いくつかの例では、前記疎水性部分はミセルのコアを構築するものであり、例えば、オクタデシルアクリレートなどの単一アルキル鎖、または、ホスファチジルエタノールアミンあるいはジオクタデシルアミンなどの二重鎖アルキル化合物が挙げられる。場合により、前記疎水性部分は随意に、ポリ（乳酸）またはポリ（ｅ－カプロラクトン）などの非水溶性ポリマーである。

【0237】

ｐＨ感受特性を呈する高分子ミセルも企図され、これらは例えば、メタクリル酸、メタクリル酸エステル、およびアクリル酸エステル、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸セルロース、またはトリメリト酢酸セルロース由来のコポリマーが挙げられるがこれらに限定されないｐＨ感受性ポリマーの使用により形成される。

【0238】

いくつかの実施形態では、前記送達成分はウイルスエンベロープを含む。ウイルスエンベロープは、糖タンパク質、リン脂質、および宿主から得た付加的なタンパク質を含む。いくつかの例では、前記ウイルスエンベロープは広範囲の標的細胞に寛容である。他の例では、前記ウイルスエンベロープは不寛容であり、目標の標的細胞に特異的である。場合により、前記ウイルスエンベロープは細胞特異的結合タンパク質、および随意に、カーゴと標的細胞との融合を補助する融合分子を含む。場合により、前記ウイルスエンベロープは内在性ウイルスエンベロープを含む。他の場合、前記ウイルスエンベロープは、１つ以上の外来タンパク質を含む修飾エンベロープである。

【0239】

いくつかの例では、前記ウイルスエンベロープはＤＮＡウイルス由来である。典型的なエンベロープＤＮＡウイルスとして、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス由来のウイルスが挙げられる。

【0240】

他の例では、前記ウイルスエンベロープはＲＮＡウイルス由来である。典型的なエンベロープＲＮＡウイルスとして、ブンヤウイルス、コロナウイルス、フィロウイルス、フラビウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、トガウイルスの各ファミリー由来のウイルスが挙げられる。

【0241】

さらなる例では、前記ウイルスエンベロープはレトロウイルスのファミリー由来のウイルスに由来する。

【0242】

いくつかの実施形態では、前記ウイルスエンベロープは、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ１）あるいはポックスウイルス（例えばワクシニアウイルスやミキソーマウイルス）のファミリー由来の腫瘍溶解性ＤＮＡウイルスなどの腫瘍溶解性ウイルス、または、ラプドウイルス（例えばＶＳＶ）あるいはパラミクソウイルス（例えばＭＶやＮＤＶ）のファミリー由来の腫瘍溶解性ＲＮＡウイルスに由来する。

【0243】

いくつかの例では、前記ウイルスエンベロープはさらに、抗原または細胞表面分子に結合する、異物または操作されたタンパク質を含む。標的化を目的とする典型的な抗原と細胞表面分子として、Ｐ－糖タンパク質、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦ－Ｒ）、カドヘリン、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１７（ｃ－ｋｉｔ）、ＣＤ１３３、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ケモカインレセプター５（ＣＣＲＳ）、幹細胞マーカーＡＢＣＧ２輸送体、卵巣癌抗原ＣＡ１２５、免疫グロブリン、インテグリン、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、樹状細胞特異的細胞間接着分子３結合ノンインテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）、チログロブリン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、筋原性分化促進因子－１（ＭｙｏＤ－１）、Ｌｅｕ－７（ＣＤ５７）、ＬｅｕＭ－１、モノクローナル抗体Ｋｉ－６７（Ｋｉ－６７）により画定される細胞増殖関連ヒト核抗原、ウイルスエンベロープタンパク質、ＨＩＶ ｇｐ１２０、またはトランスフェリン受容体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0244】

いくつかの実施形態では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、インビトロでの使用を目的とする。

【0245】

いくつかの例では、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、エクスビボでの使用を目的とする。

【0246】

場合により、Ａｒｃベースのカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇベースのカプシドは、インビボでの使用を目的とする。

【0247】

キット／製品
本明細書中のある実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の方法とともに使用されるキットと製品が開示される。このようなキットは、バイアルやチューブなどの１つ以上の容器を収容するために仕切られた運搬装置、パッケージ、または容器を含み、この容器の各々は本明細書に記載の方法に使用される別個の要素のうち１つを備えている。適切な容器として、例えばボトル、バイアル、シリンジ、試験管が挙げられる。他の実施形態では、前記容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料で形成される。

【0248】

例えば前記容器は、組み換え型あるいは操作されている、上述のＡｒｃポリペプチドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇポリペプチドを含む。このようなキットは随意に、識別用の記載文あるいはラベル、または本明細書に記載の方法での使用に関する説明書を含む。例えばキットは通常、内容物を列記するラベルおよび／または使用説明書、ならびに使用説明書を備えた添付文書を含んでいる。一組の説明書も通常は含まれる。

【0249】

特定の用語
別段の定めのない限り、本明細書に使用される技術用語と科学用語はすべて、一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。詳細な説明は例示的かつ説明的なものに過ぎず、請求される発明特定事項を制限するものではないことを理解されたい。本出願では、単数形の使用は、特に明記されない限り複数形を含む。本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に定めていない限り、複数の指示対象を含む。本出願では、「または」の使用は、特に明記しない限り「および／または」を意味する。さらに、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態と同様、制限はない。

【0250】

本発明の様々な特徴が１つの実施形態の文脈に記載されてもよいが、これらの特徴は個別に、または任意の適切な組み合わせにおいて提供されてもよい。反対に、本発明は明確性のために別個の実施形態の観点から本明細書に記載されてもよいが、本発明は単一の実施形態でも実施されてもよい。

【0251】

本明細書における「いくつかの実施形態」、「実施形態」、「一実施形態」、または「他の実施形態」への言及は、その実施形態と関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも一部の実施形態に含まれるが、必ずしもすべての実施形態には含まれていないことを意味する。

【0252】

本明細書で使用されるように、範囲と量は、「およその（ａｂｏｕｔ）」特定の値または範囲として表すことができる。「約」は正確な量も含んでいる。したがって「約５μＬ」は、「約５μＬ」と「５μＬ」を意味する。概して、用語「約」は、実験誤差内にあると予想される量を含んでいる。

【0253】

本明細書に使用される章の見出しは、単に構成上の目的のために付けたものであり、記載される発明特定事項を制限するものと解釈されるべきではない。

【0254】

本明細書では、本明細書に記載のＣＡ Ｎ－ローブの配列はヒトＣＡ Ｎ－ローブに相当する。いくつかの例では、ヒトＣＡ Ｎ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２０７～２７８を含む。いくつかの例では、本明細書に記載のＣＡ Ｎ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２０７～２７８に対し約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む。場合により、本明細書に記載のＣＡ Ｎ－ローブは、ヒトＣＡ Ｎ－ローブと構造的に類似している。例えば本明細書に記載のＣＡ Ｎ－ローブは、ヒトＣＡ Ｎ－ローブと構造的に約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％類似している。場合により、前記ＣＡ Ｎ－ローブは、高度な構造的類似性（例えば８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％ ９８％、または９９％の構造的類似性）を共有するが、高度な配列同一性を共有していない（例えば配列同一性は、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、または３０％未満である）。場合により、前記ＣＡ Ｎ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２０７～２７８を含む。

【0255】

本明細書では、本明細書に記載のＣＡ Ｃ－ローブの配列はヒトＣＡ Ｃ－ローブに相当する。いくつかの例では、ヒトＣＡ Ｃ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２７８～３７０を含む。いくつかの例では、本明細書に記載のＣＡ Ｃ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２７８～３７０に対し約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む。場合により、本明細書に記載のＣＡ Ｃ－ローブは、ヒトＣＡ Ｃ－ローブと構造的に類似している。例えば本明細書に記載のＣＡ Ｃ－ローブは、ヒトＣＡ Ｃ－ローブと構造的に約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％類似している。場合により、前記ＣＡ Ｃ－ローブは、高度な構造的類似性（例えば８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％ ９８％、または９９％の構造的類似性）を共有するが、高度な配列同一性を共有していない（例えば配列同一性は、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、または３０％未満である）。場合により、前記ＣＡ Ｃ－ローブは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の残基２７８～３７０を含む。

【0256】

本明細書では、用語「個体」、「被験体」、および「患者」は任意の哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、前記哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトではない。いかなる用語も、保健従事者（例えば、医師、正看護師、臨床看護師、医師助手、看護助手、またはホスピスの職員）の監督（例えば、常時または断続的）を特徴とする状況には制限されない。

【実施例】

【0257】

これら実施例は例示目的のためだけに提供され、本明細書に提供される請求の範囲を制限するものではない。

【0258】

実施例１－組み換えＡｒｃタンパク質と操作されたＡｒｃタンパク質をコードするＤＮＡベクターの構築
Ａｒｃ発現のために組み換えＤＮＡベクターを構築するために、完全長ｃＤＮＡのオープンリーディングフレームは、初めのメチオニンを除きクローニングベクターへ挿入され、続いて標準分析法に従い発現ベクターへと移動される。同じ手法を使用して、ｅｎｄ－ＧＡＧタンパク質を発言させるために組み換えＤＮＡベクターを構築する。ヒトＡｒｃ ｃＤＮＡは、注釈されたマトリクスドメイン（ＭＡ）とカプシドドメインを含む。カプシドドメインにはＮ末端ローブ（ＮＴＤ）とＣ末端ローブ（ＣＴＤ）がある。図１は、ヒトＡｒｃタンパク質の構造、ならびに、パイソン（Ｐｙｔｈｏｎ）、カモノハシ（Ｐｌａｔｙｐｕｓ）、およびシャチ（Ｏｒｃａ）からのＡｒｃの予測構造を示す。

【0259】

操作されたＡｒｃタンパク質をコードするｃＤＮＡは随意に、様々な種に由来するＡｒｃ配列を組み換え（図２）、他のタンパク質の機能ドメインをＡｒｃタンパク質に挿入し（図３Ａ）、Ａｒｃタンパク質の配列を修飾し（図３Ｂ）、および／または図２～３に例示した手法の任意の組み合わせにより、生成される。操作されたｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質をコードするｃＤＮＡも同様に、様々な種に由来するｅｎｄｏ－Ｇａｇ配列を組み換え、他のタンパク質の機能ドメインをｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質に挿入し、ｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質の配列を修飾し、および／またはこれら手法の任意の組み合わせにより、生成される。さらに、操作されたｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質は随意にＡｒｃ配列を含んでおり、操作されたＡｒｃタンパク質は随意にｅｎｄｏ－Ｇａｇ配列を含んでいる。操作されたＡｒｃタンパク質と操作されたｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質の単量体はカプシドへと集まる。

【0260】

表１のＡｒｃタンパク質をコードするＤＮＡとｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質をコードするｃＤＮＡは、ｐＥＴ－４１ａ（＋）（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｎｏｖａｇｅｎ）Ｃａｔ＃７０５６６）に由来する発現ベクターへと挿入した。ｐＥＴ－４１ａ（＋）のクローニング部位全体を取り除いて、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のヌクレオチド配列を持つＤＮＡと取り替えた。このＤＮＡは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列を持ち、かつ６ｘＨｉｓタグ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）、６アミノ酸スペーサー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）、およびＡｃＴＥＶ（商標）切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）を含む代替的なＮ末端をコードする。出発メチオニンコドンを含まないＡｒｃとｅｎｄ－ＧＡＧのオープンリーディングフレームを、ＧｉｂｓｏｎアセンブリによりＡｃＴＥＶ（商標）切断部位の後に挿入した。Ｇｉｂｓｏｎ ＤＧ，Ｙｏｕｎｇ Ｌ，Ｃｈｕａｎｇ ＲＹ，Ｖｅｎｔｅｒ ＪＣ，Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ ＣＡ ３ｒｄ，Ｓｍｉｔｈ ＨＯ（２００９）．“Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｕｐ ｔｏ ｓｅｖｅｒａｌ ｈｕｎｄｒｅｄ ｋｉｌｏｂａｓｅｓ”．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ．６（５）：３４３－３４５。発現とＡｃＴＥＶ（商標）切断の後、結果として生じるＡｒｃタンパク質またはｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質のＮ末端には、ＡｃＴＥＶ（商標）切断部位から残存する１つのグリシンがある。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７ ＡＴＧＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＴＡＧＣＧＡＡＡＡＴＣＴＧＴＡＣＴＴＣＣＡＧＧＧＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８ ＭＨＨＨＨＨＨＧＳＧＳＧＳＥＮＬＹＦＱＧ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９ ＨＨＨＨＨＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０ ＧＳＧＳＧＳ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１ ＥＮＬＹＦＱＧ

【0261】

【表1】

【0262】

実施例２－Ａｒｃタンパク質とｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質の発現と精製
Ａｒｃおよびｅｎｄｏ－Ｇａｇのオープンリーディングフレームを含む発現ベクター構築物を、Ｒｏｓｅｔｔａ ２（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ大腸菌株（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃７１４０３）に形質転換させた。０．１ｍＭのＩＰＴＧ、続いて１６℃で１６時間のインキュベーションを用いて、Ａｒｃまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇの発現を誘導した。細胞ペレットを、２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、０．１Ｍ ＮａＣｌ、４０ｍＭイミダゾール、１ｍＭ ＤＴＴ、および１０％グリセロールにおいて音波粉砕により溶解させた。過剰量のＴＵＲＢＯ ＤＮａｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃ＡＭ２２３８）、ＲＮａｓｅ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃ＡＭ２２８６）、およびＢｅｎｚｏｎａｓｅ Ｎｕｃｌｅａｓｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃７１２０５）を用いて溶解物を処理し、核酸を取り除いた。ＮａＣｌを溶解物に添加してＮａＣｌ濃度を０．５Ｍに調整し、続いて遠心分離と濾過により細胞デブリを取り除いた。６ｘＨｉｓタグを付けた組み換えタンパク質をＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃａｔ＃１７－５２４７－０１）の上に載せ、緩衝液Ａ（２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、０．５Ｍ ＮａＣｌ、４０ｍＭイミダゾール、１０％グリセロール）で洗浄し、直線濃度勾配の緩衝液Ｂ（２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、０．５Ｍ ＮａＣｌ、５００ｍＭイミダゾール、１０％グリセロール）で溶離させた。採取管をあらかじめ、溶出物１ｍｌにつき１０μｌの０．５Ｍ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０で補足した。結果として生じるＡｒｃタンパク質またはｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質は概して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析により明らかになるように純度が９５％を超えており、収率は細菌培養液１Ｌにつき最大５０ｍｇであった。図４Ａを参照。

【0263】

モノＱ ５／５０ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃａｔ＃１７５１６６０１）上で陰イオン交換クロマトグラフィーを行うことにより、残る核酸を取り除いた。カラムに投入する前に、組み換えタンパク質を、製造業者の指示に従い「Ｐｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ ＰＥＳ，１０Ｋ ＭＷＣＯ，５－２０ｍｌ」（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃８８５２８）を使用して緩衝液Ｃ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ８．０、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール）に緩衝液交換した。投入後、モノＱレジンを２ｍｌの緩衝液Ｃで洗浄した。直線濃度勾配の緩衝液Ｄ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール）を使用して、Ａｒｃタンパク質とｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質を溶離した。ＲＮＡをＡｒｃから効率的に分離し、６００ｍＭのＮａＣｌで溶離した（図４Ｂ）。

【0264】

１０ｋＤａのＭＷＣＯ ＰＥＳ濃縮装置を使用してモノＱで精製したＡｒｃのピーク分画を濃縮し、次いで１０％ｖ／ｖのＡｃＴＥＶ（商標）プロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）＃１２５７５０２３）により処理することにより、Ｎ末端６ｘＨｉｓタグとスペーサーを取り除いた。ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイにより明らかとなるように、切断効率は９９％を超えている。その後、タンパク質をＨｉｓＴｒａｐ緩衝液Ａへ希釈し、ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰレジンで清浄した。結果として生じる精製ＡｒｃにはＮ末端グリシン残基があるが、初めのメチオニンを含んでいない。

【0265】

実施例３－カプシドアセンブリ
切断Ａｒｃタンパク質（１ｍｇ／ｍＬ）を２０ｋＤａのＭＷＣＯ透析カセットへ投入し、一晩かけて１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）の中、室温で透析した。翌日、溶液をカセットから取り出し、微量遠心分離管に移して、卓上遠心分離器の中最大速度で５分間回転させた。上清を１００ｋＤａのＭＷＣＯ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ濃縮装置に移した。緩衝液をＰＢＳ ｐＨ７．５と交換し、体積を２０倍減少させた。

【0266】

カプシドアセンブリを透過型電子顕微鏡法により解析した。ＥＭグリッド（Ｃａｒｂｏｎ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｆｉｌｍ、Ｓｑｕａｒｅ Ｇｒｉｄ、４００ ｍｅｓｈ、５～６ｎｍ、Ｃｏｐｐｅｒ、ＣＦ４００－Ｃｕ－ＵＬ）をグロー放電により調製した。精製Ａｒｃの５μＬ試料をグリッドに２０秒間適用し、付いて濾紙を使用して水分を取り除いた。その後、グリッドをＭｉｌｌｉＱ Ｈ_２Ｏで洗浄し、Ｈ_２Ｏに１％酢酸ウラニル５μＬを溶かしたもので３０秒かけて染色し、１分間風乾した。Ｇａｔａｎ ４ｋ×４ｋ ＯｎｅＶｉｅｗカメラを搭載したＦＥＩ Ｔａｌｏｓ Ｌ１２０Ｃ ＴＥＭを使用して、Ａｒｃカプシドの画像を取得した。図５は濃縮ヒトＡｒｃカプシドを示す。図６は、他の脊椎動物種由来の組み換え発現Ａｒｃオルソログから形成されるカプシドを示す。図７は、他の脊椎動物種由来の組み換え発現ｅｎｄｏ－Ｇａｇ遺伝子から形成されるカプシドを示す。

【0267】

実施例４－Ａｒｃカプシドの選択的細胞インターナリゼーション
ＰＢＳ（ｐＨ８．５）の中で５０モル過剰のＮＨＳエステルＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）５９４－ＮＨＳ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）＃Ａ２０００４）（ＤＭＳＯに溶解）と反応させることにより、単離された組み換えヒトＡｒｃタンパク質（０．５ｍｇ／ｍｌ）からアセンブルしたカプシドを蛍光標識した。反応を暗所で２時間実施した。その後、Ａｌｅｘａ５９４で標識したカプシドを、暗所の中室温で一晩かけてＰＢＳ（ｐＨ７．５）により透析し、少なくとも２つの緩衝液を未標識の染料と交換した。

【0268】

ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－２（商標））を実験の２４時間前に９６ウェルプレートに蒔くと、これら細胞の集密度は処置に対して最大８０％に達する。その後、標識カプシドを完全組織培養培地へとスパイクし（ｓｐｉｋｅｄ）、最終カプシド濃度を０．０５ｍｇ／ｍｌとした。処理を３７℃で４時間進め、次いで細胞を撮像前に１０ｕｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ核染色試薬を含有する撮像培地（ＤＭＥＭ、フェノールレッドなし、１０％のＦＢＳと２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含む）で３回洗浄する。蛍光顕微鏡検査法により小さな斑状の染色パターンが明らかとなり、このことは、ＡｒｃカプシドがＨｅＬａ細胞によりインターナリゼーションされたことを示唆している（図８）。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）５９４で標識したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍｌ）または４５．６μＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）５９４の投与の後には、細胞内染色はほとんど、または全く観察されなかった。

【0269】

実施例５－Ａｒｃカプシドによる非相同ＲＮＡ送達
（１Ｍリン酸ナトリウムへの透析による）カプシド形成中に過剰量のＲＮＡの中でスパイクすることにより、ヒトＡｒｃカプシドにＣｒｅ ＲＮＡを投入した。Ｃｒｅ ＲＮＡを投入したカプシドを、最終カプシド濃度０．０５ｍｇ／ｍｌ、３７℃で４時間、生物学的トリプリケート（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）においてＨｅＬａ細胞に投与した。その後、細胞を氷冷１×ＰＢＳで３回洗浄してから、ＲＮＡ抽出（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）ＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬＃１５５９６０２６）を行った。精製された細胞関連ＲＮＡを、技術的トリプリケートにおいてｑＰＣＲにより定量化し、細胞ＧＡＰＤＨレベルに値を標準化し、タンパク質精製から持ち越し可能な大腸菌ｒｒｓＡ ｍＲＮＡおよびＡｒｃ ＲＮＡと比較した。表２は、ＰＣＲ反応に使用したプライマーを示す。検出された細胞関連Ｃｒｅ ＲＮＡの量は、ＡｒｃカプシドにＣｒｅ ＲＮＡが投入されていると、Ｃｒｅ ＲＮＡを投入していない対照カプシドと比較して２７倍より高かった（図９）。

【0270】

【表2】

【0271】

図１０は、Ａｒｃカプシドまたはｅｎｄｏ－Ｇａｇカプシドによる異種ＲＮＡの送達を実証する代替方法を例示する。６ｘＨｉｓタグを付けたＡｒｃ遺伝子またはｅｎｄｏ－Ｇａｇ遺伝子を、宿主細胞に発現させる。結果として生じるＡｒｃ単量体をカプシド形成条件下で翻訳可能なＣｒｅ ｍＲＮＡと組み合わせて、Ｃｒｅ ｍＲＮＡを投入したカプシドを形成する。その後、Ｃｒｅを投入したカプシドをＬｏｘＰルシフェラーゼレポーターマウスに投与する。マウス細胞へのＣｒｅ ｍＲＮＡの送達の成功、その後のＣｒｅレコンビナーゼタンパク質の翻訳に際して、レポーターのＬｏｘＰ部位を組み換えるとルシフェラーゼ発現が生じ、この発現は随意に、ルシフェリン投与に際した生物発光撮像により検出される。この方法を使用して、候補のＡｒｃ遺伝子とｅｎｄｏ－Ｇａｇ遺伝子の透過可能性を試験する。正のルシフェラーゼ信号により、候補のＡｒｃ遺伝子またはｅｎｄｏ－Ｇａｇ遺伝子は、異種のカーゴを組み込んでこれを標的細胞に送達するカプシドへとアセンブル可能なＡｒｃタンパク質またはｅｎｄｏ－Ｇａｇタンパク質をコードすることが認められる。

【0272】

本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、かつ記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明白である。多数の変形、変更、および置き換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法と構造は、それにより包含されることが、意図されている。

【0273】

【表3-1】

【0274】

【表3-2】

【0275】

【表3-3】

【0276】

【表3-4】

【0277】

【表3-5】

【0278】

【表3-6】

【0279】

【表3-7】

【0280】

【表3-8】

【0281】

【表3-9】

【0282】

【表3-10】

【0283】

【表3-11】

【0284】

【表3-12】

【0285】

【表3-13】

【0286】

【表3-14】

【0287】

【表3-15】

【0288】

【表3-16】

【0289】

【表3-17】

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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