特許 7357609 抗トランスサイレチン抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-09-28

(45)【発行日】2023-10-06

(54)【発明の名称】抗トランスサイレチン抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20230929BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230929BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230929BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230929BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 19/04 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230929BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230929BHJP

   C12N 1/15 20060101ALN20230929BHJP

   C12N 1/19 20060101ALN20230929BHJP

   C12N 1/21 20060101ALN20230929BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20230929BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12P21/08

A61K39/395 N

A61P9/00

A61P25/28

A61P19/02

A61P19/04

A61P27/02

A61P43/00 121

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

【請求項の数】 26

(21)【出願番号】P 2020518649

(86)(22)【出願日】2018-10-05

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-12-17

(86)【国際出願番号】 US2018054720

(87)【国際公開番号】W WO2019071205

(87)【国際公開日】2019-04-11

【審査請求日】2021-10-01

(31)【優先権主張番号】62/569,436

(32)【優先日】2017-10-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/598,965

(32)【優先日】2017-12-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】523169132

【氏名又は名称】ノボ ノルディスク エー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】サルマンズ，ジョシュア レジナルド

(72)【発明者】

【氏名】アレクサンダー，スヴェトラナ

(72)【発明者】

【氏名】バーバー，ロビン

(72)【発明者】

【氏名】ヒガキ，ジェフェリー エヌ．

(72)【発明者】

【氏名】ニハル，ターロチャン エス．

【審査官】小田 浩代

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２００８／００５４５５（ＷＯ，Ａ２）

【文献】米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０１４－５１０９０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１６－５１４０９１（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／１１５３３１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Higaki JN. et al.，Novel conformation-specific monoclonal antibodies against amyloidogenic forms of transthyretin，Amyloid，2016年，Vol. 23(2)，pp. 86-97

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離モノクローナル抗体であって、
ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合し、
３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲである配列番号９３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ２および配列番号９のＣＤＲ－Ｈ３を含む成熟重鎖可変領域、かつ３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲである配列番号１１のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１５のＣＤＲ－Ｌ３を含む成熟軽鎖可変領域を含む、抗体。

【請求項2】

前記成熟重鎖可変領域が、配列番号８１のアミノ酸配列を含みかつ前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。

【請求項4】

ヒトＩｇＧ１アイソタイプ、ヒトＩｇＧ２アイソタイプまたはヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する請求項１または３に記載の抗体。

【請求項5】

以下に挙げる位置の少なくとも１つが、指定のアミノ酸によって占められる、Ｈ３７がＶまたはＡによって占められ、Ｈ４５がＬまたはＱによって占められ、Ｈ４７がＬまたはＷによって占められ、Ｈ４８がＶまたはＩによって占められ、Ｈ４９がＡまたはＧによって占められ、かつＨ９４がＳまたはＲによって占められる、請求項３に記載のヒト化抗体。

【請求項6】

ＶＨ領域中の与えられた位置Ｈ３７、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ４８、Ｈ４９、およびＨ９４が、それぞれ、Ａ、Ｑ、Ｗ、Ｉ、Ｇ、およびＲによって占められる、請求項５に記載のヒト化抗体。

【請求項7】

以下の位置の少なくとも１つが、指定のアミノ酸のアミノ酸によって占められる、Ｌ２がＩまたはＶによって占められかつＬ４５がＱまたはＲによって占められる、請求項３に記載のヒト化抗体。

【請求項8】

ＶＬ領域中の与えられた位置Ｌ２およびＬ４５が、それぞれ、ＶおよびＲによって占められる、請求項７に記載のヒト化抗体。

【請求項9】

前記成熟重鎖可変領域が、配列番号８５～８６のいずれか１つのアミノ酸配列を有しかつ前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号９１～９２のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、請求項３に記載のヒト化抗体。

【請求項10】

インタクト抗体である請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項11】

結合フラグメントである請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項12】

前記成熟軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合されかつ前記成熟重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合され、そして前記重鎖定常領域が、天然のヒト重鎖定常領域に比べ低下されたＦｃγ受容体への結合を有する前記天然のヒト重鎖定常領域の変異体型である、請求項３～９のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項13】

前記成熟軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合されかつ前記成熟重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合され、そして前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、請求項３～９のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項14】

前記成熟軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合されかつ前記成熟重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合され、そして前記成熟重鎖可変領域が、Ｃ末端リジンの有無を問わずに配列番号２２の配列を有する重鎖定常領域に融合されかつ／または前記成熟軽鎖可変領域が、配列番号２４の配列を有する軽鎖定常領域に融合される、請求項３～９のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれかに記載の第一の抗体と、前記第一の抗体により結合されるものとは異なるＴＴＲのエピトープを結合する第二の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項16】

２つの抗原結合ドメインと、３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲである配列番号９３のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７のＣＤＲ－Ｈ２および配列番号９のＣＤＲ－Ｈ３を含む成熟重鎖可変領域、かつ３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲである配列番号１１のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１３のＣＤＲ－Ｌ２および配列番号１５のＣＤＲ－Ｌ３を含む成熟軽鎖可変領域を含む第一の抗原結合ドメインであって、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）に結合する、第一の抗原結合ドメインと、前記第一の抗原結合ドメインにより結合されるものとは別のＴＴＲの領域を特異的に結合する第二の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗体。

【請求項17】

請求項１～１４および１６のいずれかに記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項18】

請求項１～１４および／または１６のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸。

【請求項19】

請求項１～１４および／または１６のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする核酸。

【請求項20】

マウス抗体をヒト化する方法であって、
（ａ）１つまたは複数のヒトアクセプター抗体配列を選択することと、
（ｂ）保持されるべきマウス抗体のアミノ酸残基を特定することと、
（ｃ）前記マウス抗体の重鎖のＣＤＲを含むヒト化重鎖をコードする核酸および前記マウス抗体の軽鎖のＣＤＲを含むヒト化軽鎖をコードする核酸を合成することと、
（ｄ）宿主細胞中で前記核酸を発現させてヒト化抗体を産生すること
を含み、前記マウス抗体が、配列番号８１のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と配列番号８７のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、方法。

【請求項21】

請求項１～１４および１６のいずれか１項に記載の抗体を含む、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスの治療またはその予防に使用するための医薬組成物。

【請求項22】

前記トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスが、心筋症または心肥大、家族性アミロイドニューロパチー、中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）、老人性全身性アミロイドーシス、老人性心アミロイドーシス、脊柱管狭窄症、変形性関節症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、加齢黄斑変性、および靭帯または腱の障害のいずれかから選択される病態に関連する、請求項２１に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスが、家族性トランスサイレチンアミロイドーシスまたは孤発性トランスサイレチンアミロイドーシスである、請求項２１に記載の医薬組成物。

【請求項24】

前記家族性トランスサイレチンアミロイドーシスが、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、家族性アミロイドニューロパチー（ＦＡＰ）、または中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記孤発性トランスサイレチンアミロイドーシスが、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）または老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスが、心臓、末梢神経系、自律神経系、腎臓、眼球、腹部脂肪、または消化管でのアミロイド蓄積に関連する、請求項２１に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、２０１７年１０月６日に出願された米国仮特許出願第６２／５６９，４３６号および２０１７年１２月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５９８，９６５号の利益を主張するものであり、上記出願はそれぞれ、その全体があらゆる目的において参照により組み込まれる。

【0002】

（配列表の参照）
ファイル５１６７１１ＳＥＱＬＳＴ．ｔｘｔに記載されている配列表は、５９．６キロバイトであり、２０１８年９月２０日に作成されたものであり、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

疾患特異的タンパク質のフォールディングおよび凝集の異常が原因であると考えられている疾患がいくつかある。このようなタンパク質は、アミロイドとして知られる病理診断的な蓄積物として蓄積することがあり、特定の組織学的染色によって可視化される。アミロイドは、炎症性応答を誘発すると考えられており、関係のある組織に複数の負の結果をもたらす。さらに、フォールディングが異常なタンパク質の小さい凝集体が存在し細胞毒性効果をもたらすこともある。

【0004】

トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、ミスフォールドして凝集する（例えば、アミロイドを形成する）ことが知られている多数のタンパク質の１つである。トランスサイレチン介在性のアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）には、変異ＴＴＲまたはバリアントＴＴＲのミスフォールディングによって生じる家族性疾患、ならびに野生型ＴＴＲのミスフォールディングおよび凝集を原因とする孤発性非遺伝性疾患の２つの形態の疾患が含まれる。ＴＴＲアミロイド形成の過程で、神経系および／または心臓ならびにそれ以外の組織に病態が生じることがある。

【発明の概要】

【0005】

一態様では、本発明は、ミスフォールドＴＴＲに特異的に結合し、天然型のタンパク質には結合しない単離モノクローナル抗体を提供する。このような抗体の例は、配列番号２６の成熟領域のアミノ酸残基１０１～１０９内のエピトープに結合する。

【0006】

いくつかのこのような抗体は、ミスフォールドヒトＴＴＲへの結合に関して抗体１８Ｃ５と競合する。いくつかのこのような抗体は、ヒトトランスサイレチン上にある１８Ｃ５と同じエピトープに結合する。

【0007】

いくつかのこのような抗体は、モノクローナル抗体１８Ｃ５の３つの軽鎖ＣＤＲと３つの重鎖ＣＤＲとを含み、１８Ｃ５は、配列番号８１を含むアミノ酸配列を有有する成熟重鎖可変領域および配列番号８７を含むアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を特徴とする、マウス抗体である。

【0008】

いくつかのこのような抗体は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合によって定義される３つの重鎖ＣＤＲ（配列番号５、７および９）と、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合によって定義される３つの軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１、１３および１５）とを含む。

【0009】

いくつかのこのような抗体は、１８Ｃ５、またはそのキメラ型、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型、もしくはヒト化型である。いくつかのこのような抗体は、配列番号２６の成熟領域中の１０１～１０９位内のエピトープに結合する。いくつかのこのような抗体はモノクローナル抗体である。いくつかのこのような抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト化抗体、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体、またはヒト抗体である。いくつかのこのような抗体では、成熟重鎖可変領域がヒト配列と８５％以上の同一性を有する。いくつかのこのような抗体では、成熟軽鎖可変領域がヒト配列と８５％以上の同一性を有する。いくつかのこのような抗体では、天然の重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、ヒト配列と８５％以上の同一性を有する。

【0010】

いくつかのこのような抗体はヒト化抗体である。いくつかのこのような抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかのこのような抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプまたはヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する。

【0011】

いくつかのこのような抗体は、トランスサイレチンに特異的に結合するヒト化抗体またはキメラ１８Ｃ５抗体であり、１８Ｃ５は、配列番号８１の成熟重鎖可変領域および配列番号８７の成熟軽鎖可変領域を特徴とする、マウス抗体である。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つの重鎖ＣＤＲを含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つの軽鎖ＣＤＲを含む。

【0012】

いくつかの抗体では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔからなる群より選択される定義のものである。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合重鎖ＣＤＲ（配列番号５、７および９）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１、１３および１５）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号９３、配列番号７および配列番号９）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１、配列番号１３および配列番号１５）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＣｈｏｔｈｉａ重鎖ＣＤＲ（配列番号９４、配列番号９６および配列番号９）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＣｈｏｔｈｉａ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１、配列番号１３および配列番号１５）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＡｂＭ重鎖ＣＤＲ（配列番号５、配列番号９７および配列番号９）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＡｂＭ軽鎖ＣＤＲ（配列番号１１、配列番号１３および配列番号１５）を含む。いくつかの抗体では、ヒト化成熟重鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＣｏｎｔａｃｔ重鎖ＣＤＲ（配列番号１００～１０２）を含み、ヒト化成熟軽鎖可変領域が１８Ｃ５の３つのＣｏｎｔａｃｔ軽鎖ＣＤＲ（配列番号９５、配列番号９８および配列番号９９）を含む。

【0013】

いくつかの抗体は、配列番号８５～８６のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟重鎖可変領域と、配列番号９１～９２のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するヒト化成熟軽鎖可変領域とを含む。

【0014】

いくつかの抗体では、以下に挙げる位置の少なくとも１つが、指定のアミノ酸によって占められる、すなわち、Ｈ３７がＶまたはＡによって占められ、Ｈ４５がＬまたはＱによって占められ、Ｈ４７がＬまたはＷによって占められ、Ｈ４８がＬまたはＩによって占められ、Ｈ４９がＡまたはＧによって占められ、Ｈ９４がＳまたはＲによって占められる。いくつかの抗体では、ＶＨ領域中のＨ３７位、Ｈ４５位、Ｈ４７位、Ｈ４８位、Ｈ４９位、およびＨ９４位が、それぞれＡ、Ｑ、Ｗ、Ｉ、Ｇ、およびＲによって占められる。

【0015】

いくつかの抗体では、以下に挙げる位置の少なくとも１つが、指定のアミノ酸によって占められる、すなわち、Ｌ２がＩまたはＶによって占められ、Ｌ４５がＱまたはＲによって占められる。いくつかの抗体では、ＶＬ領域中のＬ２位およびＬ４５位が、それぞれＶおよびＲによって占められる。

【0016】

いくつかの抗体は、配列番号８５～８６のいずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号９１～９２のいずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。いくつかの抗体は、配列番号８５～８６のいずれか１つと少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号９１～９２のいずれか１つと少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む。

【0017】

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域が配列番号８５～８６のいずれかのアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号９１～９２のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。

【0018】

いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を有する。いくつかの抗体では、成熟重鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を有する。

【0019】

いくつかの抗体では、抗体はインタクト抗体である。いくつかの抗体では、抗体は結合フラグメントである。いくつかのこのような抗体では、結合フラグメントは、一本鎖抗体フラグメント、Ｆａｂフラグメント、またはＦａｂ’２フラグメントである。

【0020】

いくつかの抗体では、成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合され、成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合される。いくつかのこのような抗体では、重鎖定常領域は、天然のヒト重鎖定常領域よりもＦｃγ受容体への結合が低下している、天然のヒト重鎖定常領域の変異体型である。いくつかのこのような抗体では、重鎖定常領域はＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかのこのような抗体では、成熟重鎖可変領域が、配列番号２２の配列を有する重鎖定常領域に融合され、かつ／または成熟軽鎖可変領域が配列番号２４の配列を有する軽鎖定常領域に融合される。

【0021】

別の態様では、本発明は、上記のいずれかの請求項の第一の抗体と、１８Ｃ５に結合されるものとは異なるＴＴＲのエピトープを結合する第二の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。いくつかのこのような医薬組成物では、第二の抗体は、９Ｄ５、１４Ｇ８、５Ａ１、６Ｃ１、ＡＤ７Ｆ６、ＲＴ２４、ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１、ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５、ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１、ＭＦＤ１１４、またはそのキメラ型もしくはヒト化型である。いくつかのこのような医薬組成物では、第二の抗体は、ＴＴＲの残基８９～９７、１１８～１２２、１１５～１２４、５３～６３、５４～６１、３６～４９、４９～６１、１０９～１２１、３０～６６、７０～１２７、８０～１２７、９０～１２７、１００～１２７、１１０～１２７、または１１５～１２７内を結合する抗体である。

【0022】

別の態様では、本発明は、２つの抗原結合領域、すなわち、ＴＴＲの１０１～１０９内を特異的に結合する第一の抗原結合ドメインと、ＴＴＲの別の領域を特異的に結合する第二の抗原結合ドメインとを含む、二重特異性抗体を提供する。いくつかのこのような二重特異性抗体では、第二の抗原結合ドメインが、９Ｄ５、１４Ｇ８、５Ａ１、６Ｃ１、ＡＤ７Ｆ６、ＲＴ２４、ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１、ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５、ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１、ＭＦＤ１１４、またはそのキメラ型もしくはヒト化型に由来する抗原結合ドメインである。いくつかのこのような二重特異性抗体では、第二の抗原結合ドメインが、ＴＴＲの残基８９～９７、１１８～１２２、１１５～１２４、５３～６３、５４～６１、３６～４９、４９～６１、１０９～１２１、３０～６６、７０～１２７、８０～１２７、９０～１２７、１００～１２７、１１０～１２７、または１１５～１２７内を結合する。

【0023】

別の態様では、本発明は、上記のいずれかの新規な抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。

【0024】

別の態様では、本発明は、上記のいずれかの抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、核酸を提供する。別の態様では、本発明は、このような核酸を含む、組換え発現ベクターを提供する。別の態様では、本発明は、このような組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。

【0025】

別の態様では、本発明は、抗体をヒト化する方法であって、
（ａ）ヒトアクセプター抗体を選択することと、
（ｂ）保持されるべきマウス抗体のアミノ酸残基を特定することと、
（ｃ）マウス抗体の重鎖のＣＤＲを含むヒト化重鎖をコードする核酸、およびマウス抗体の軽鎖のＣＤＲを含むヒト化軽鎖をコードする核酸を合成することと、
（ｄ）宿主細胞中で核酸を発現させてヒト化抗体を産生すること
を含み、マウス抗体が、配列番号８１のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号８７のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とを含む、方法を提供する。

【0026】

別の態様では、本発明は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体を作製する方法であって、
（ａ）細胞が抗体を分泌するように、抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸で形質転換された細胞を培養することと、
（ｂ）細胞培地から抗体を精製すること
を含み、抗体が、ヒト化型、キメラ型、またはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型の１８Ｃ５である、方法を提供する。

【0027】

別の態様では、本発明は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体を産生する細胞系を作製する方法であって、
（ａ）抗体の重鎖および軽鎖と選択マーカーとをコードするベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）ベクターのコピー数が増加した細胞を選択する条件下で細胞を増殖させることと、
（ｃ）選択された細胞から単一の細胞を単離することと、
（ｄ）抗体の産生量に基づき選択した単一の細胞からクローン化した細胞をバンク化すること
を含み、抗体が、ヒト化型、キメラ型、またはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型の１８Ｃ５である、方法を提供する。

【0028】

いくつかのこのような方法は、細胞を選択条件下で増殖させることと、２４時間で細胞１０^６個当たり少なくとも１００ｍｇ／Ｌを天然に発現し分泌する細胞系をスクリーニングすることとをさらに含む。

【0029】

別の態様では、本発明は、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有するかこれを発現するリスクのある対象中のトランスサイレチンの凝集を阻害または軽減する方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施し、それにより対象中のトランスサイレチンの凝集を阻害または軽減することを含む、方法を提供する。

【0030】

別の態様では、本発明は、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有するかこれを発現するリスクのある対象中のトランスサイレチン原線維形成を阻害または軽減する方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施し、それにより対象中のトランスサイレチン原線維形成を阻害または軽減することを含む、方法を提供する。

【0031】

別の態様では、本発明は、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有するかこれを発現するリスクのある対象中のトランスサイレチンの沈着物および凝集物を減少させる方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施し、それにより対象中のトランスサイレチン沈着物を減少させることを含む、方法を提供する。

【0032】

別の態様では、本発明は、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有するかこれを発現するリスクのある対象中のトランスサイレチンアミロイドを除去する方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施し、それにより抗体を受けていないトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有するかこれを発現するリスクがある対象に比して対象からトランスサイレチンアミロイドを除去することを含む、方法を提供する。

【0033】

別の態様では、本発明は、対象のトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを治療する、またはその予防を実施する方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施することを含む、方法を提供する。

【0034】

別の態様では、本発明は、対象のトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスの発症を遅らせる方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施することを含む、方法を提供する。

【0035】

いくつかのこのような方法では、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスは、心筋症または心肥大、家族性アミロイド多発性ニューロパチー、中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）、老人性全身性アミロイドーシス、老人性心アミロイドーシス、脊柱管狭窄症、変形性関節症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、加齢黄斑変性、および靭帯または腱の障害のいずれかから選択される病態に関連する。

【0036】

別の態様では、本発明は、心筋症または心肥大、家族性アミロイドニューロパチー、中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）、老人性全身性アミロイドーシス、老人性心アミロイドーシス、脊柱管狭窄症、変形性関節症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、加齢黄斑変性、および靭帯または腱の障害のいずれかを有するかこれを発現するリスクがある対象を治療する方法であって、対象に上記のいずれかの新規な抗体の有効なレジメンを実施することを含む、方法を提供する。

【0037】

いくつかのこのような方法では、抗体を、８Ｃ５に結合されるものとは異なるＴＴＲのエピトープを結合する第二の抗体と組み合わせて投与する。いくつかのこのような方法では、第二の抗体は、９Ｄ５、１４Ｇ８、５Ａ１、６Ｃ１、ＡＤ７Ｆ６、ＲＴ２４、ＮＩ～３０１．３５Ｇ１１、ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５、ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１、ＭＦＤ１１４、またはそのキメラ型もしくはヒト化型である。いくつかのこのような方法では、第二の抗体は、ＴＴＲの残基８９～９７、１１８～１２２、１１５～１２４、５３～６３、５４～６１、３６～４９、４９～６１、１０９～１２１、３０～６６、７０～１２７、８０～１２７、９０～１２７、１００～１２７、１１０～１２７、または１１５～１２７内を結合する。

【0038】

別の態様では、抗体を単独療法として投与する。

【0039】

別の態様では、本発明は、対象中のトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを診断する方法であって、対象由来の生体試料を、有効量の上記のいずれかの新規な抗体と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかのこのような方法は、対象由来の生体試料を、１８Ｃ５に結合されるものとは異なるＴＴＲのエピトープを結合する有効量の第二の抗体と接触させることをさらに含む。いくつかのこのような方法では、第二の抗体は、９Ｄ５、１４Ｇ８、５Ａ１、６Ｃ１、８Ｃ３、７Ｇ７、ＡＤ７Ｆ６、ＲＴ２４、ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１、ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５、ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１、ＭＦＤ１１４、またはそのキメラ型もしくはヒト化型である。いくつかのこのような方法では、第二の抗体は、ＴＴＲの残基８９～９７、１１８～１２２、１１５～１２４、５３～６３、５４～６１、３６～４９、４９～６１、１０９～１２１、３０～６６、７０～１２７、８０～１２７、９０～１２７、１００～１２７、１１０～１２７、または１１５～１２７内を結合する。

【0040】

いくつかのこのような方法は、トランスサイレチンへの抗体の結合を検出することをさらに含み、結合した抗体の存在が、対象がトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有することを示す。

【0041】

いくつかのこのような方法は、生体試料への抗体の結合を、対照試料への抗体の結合と比較することをさらに含み、対照試料に比べ生体試料への抗体の結合が増大していることが、対象がトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有することを示す。

【0042】

いくつかのこのような方法では、生体試料と対照試料は、同じ組織起源の細胞を含む。いくつかのこのような方法では、生体試料および／または対照試料は、血液、血清、血漿、または固形組織である。いくつかのこのような方法では、固形組織は、心臓、末梢神経系、自律神経系、腎臓、眼球、腹部脂肪、または消化管に由来する。

【0043】

いくつかのこのような方法では、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスは、家族性トランスサイレチンアミロイドーシスまたは孤発性トランスサイレチンアミロイドーシスである。いくつかのこのような方法では、家族性トランスサイレチンアミロイドーシスは、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、家族性アミロイドニューロパチー（ＦＡＰ）、または中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）である。いくつかのこのような方法では、孤発性トランスサイレチンアミロイドーシスは、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）または老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）である。

【0044】

いくつかのこのような方法では、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスは、対象の心臓、末梢神経系、自律神経系、腎臓、眼球、腹部脂肪、または消化管へのアミロイド蓄積に関連する。

【0045】

別の態様では、本発明は、対象中のトランスサイレチン沈着物の有無を検出する方法であって、アミロイド蓄積を有することが疑われる対象由来の生体試料を、有効量の上記のいずれかの新規な抗体と接触させることを含む、方法を提供する。

【0046】

いくつかのこのような方法は、トランスサイレチンへの抗体の結合を検出することをさらに含み、結合した抗体の検出が、トランスサイレチン沈着物の存在を示す。

【0047】

いくつかのこのような方法は、生体試料への抗体の結合を、対照試料への抗体の結合と比較することをさらに含み、対照試料に比べ生体試料への抗体の結合が増大していることが、対象がトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを有することを示す。

【0048】

いくつかのこのような方法では、生体試料と対照試料は、同じ組織起源の細胞を含む。いくつかのこのような方法では、生体試料および／または対照試料は、血液、血清、血漿、または固形組織である。いくつかのこのような方法では、固形組織は、心臓、末梢神経系、自律神経系、腎臓、眼球、腹部脂肪、または消化管に由来する。

【0049】

別の態様では、本発明は、対象中のトランスサイレチン沈着物のレベルを決定する方法であって、上記のいずれかの新規な抗体を投与すること、および対象中の結合した抗体の存在を検出することを含む。いくつかのこのような方法では、結合した抗体の存在を陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）によって決定する。

【0050】

別の態様では、本発明は、対象においてトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを治療する、またはその予防を実施する方法であって、ＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療剤、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸の有効なレジメンを実施することを含み、対象が既に上記のいずれかの新規な抗体による治療を受けている、方法を提供する。いくつかのこのような方法では、対象はもはや抗体による治療を受けない。いくつかのこのような方法では、ＴＴＲ四量体安定化剤はタファミジスまたはジフルニサルである。いくつかのこのような方法では、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤はイノテルセンである。いくつかのこのような方法では、ＲＮＡｉベースの治療剤はパチシランまたはレブシランである。

【0051】

いくつかの方法では、抗体をＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療剤、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸と組み合わせて投与する。いくつかのこのような方法では、ＴＴＲ四量体安定化剤はタファミジスまたはジフルニサルである。いくつかのこのような方法では、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤はイノテルセンである。いくつかのこのような方法では、ＲＮＡｉベースの治療剤はパチシランまたはレブシランである。

【0052】

いくつかの方法では、抗体をＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療剤、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸と同時に投与する。いくつかのこのような方法では、ＴＴＲ四量体安定化剤はタファミジスまたはジフルニサルである。いくつかのこのような方法では、ＴＴＲ四量体安定化剤はジフルニサルである。いくつかのこのような方法では、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療剤はイノテルセンである。いくつかのこのような方法では、ＲＮＡｉベースの治療剤はパチシランまたはレブシランである。

【0053】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する抗体を特定する方法であって、（ａ）動物をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作することと；（ｂ）誘導された抗体をスクリーニングして、ＴＴＲの残基１０１～１０９内を結合する抗体を特定することとを含む、方法を提供する。いくつかの方法では、免疫感作を、ＴＴＲの残基１０１～１０９内の少なくとも３個の連続する残基を含むＴＴＲの最大２５個の連続する残基からなるフラグメントで実施する。いくつかの方法では、フラグメントは、任意選択で担体に連結された、ＴＴＲの残基１０１～１０９からなる。いくつかの方法では、スクリーニングを、ＴＴＲの残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントへの抗体の結合を決定することによって実施する。

【0054】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する抗体を特定する方法であって、抗体のディスプレイライブラリーを準備することと；ディスプレイライブラリーをスクリーニングして、ＴＴＲの残基１０１～１０９内を結合する抗体を特定することとを含む、方法を提供する。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーは、抗体をＦｖフラグメントとして提示する。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーは未刺激のディスプレイライブラリーである。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーを、げっ歯類をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸をディスプレイベクター中にクローン化することによって作製する。いくつかの方法では、スクリーニングを、残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントへのライブラリーのメンバーの結合を決定することにより実施する。いくつかの方法では、スクリーニングを、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する参照抗体の存在下でＴＴＲへのライブラリーのメンバーの結合を決定することにより実施する。いくつかの方法では、参照抗体は１８Ｃ５である。

【0055】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲとの結合に関して抗体１８Ｃ５と結合について競合する抗体を特定する方法であって、ＴＴＲを抗体１８Ｃ５の存在下および不在下で抗体と接触させることと、ＴＴＲへの抗体の結合を決定することを含み、抗体１８Ｃ５の存在下で結合が減少することが、抗体がＴＴＲとの結合に関して抗体１８Ｃ５と競合することを示す、方法を提供する。

【0056】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定する方法であって、（ａ）ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを決定することと；（ｂ）動物をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作することと；（ｃ）誘導された抗体をスクリーニングして、抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定することとを含む、方法を提供する。いくつかの方法では、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを、ＴＴＲの変異誘発により決定する。いくつかの方法では、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを、Ｘ線結晶構造解析により決定する。

【0057】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定する方法であって、（ａ）ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを決定することと；（ｂ）抗体のディスプレイライブラリーを準備することと；（ｃ）ディスプレイライブラリーをスクリーニングして、抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定することとを含む、方法を提供する。いくつかの方法では、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５が結合するエピトープを、ＴＴＲの変異誘発により決定する。いくつかの方法では、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを、Ｘ線結晶構造解析により決定する。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーは、抗体をＦｖフラグメントとして提示する。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーは未刺激のディスプレイライブラリーである。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーを、げっ歯類をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸をディスプレイベクター中にクローン化することによって作製する。いくつかの方法では、スクリーニングを、残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントへのライブラリーのメンバーの結合を決定することにより実施する。いくつかの方法では、スクリーニングを、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する参照抗体の存在下でＴＴＲへのライブラリーのメンバーの結合を決定することにより実施する。いくつかの方法では、参照抗体は１８Ｃ５である。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーの各メンバーが、同じ軽鎖可変領域および異なる重鎖可変領域を提示する。いくつかの方法では、軽鎖可変領域は抗体１８Ｃ５の軽鎖可変領域である。いくつかの方法では、重鎖可変領域を、再編成されたヒト重鎖可変領域のライブラリーから得る。いくつかの方法では、ディスプレイライブラリーの各メンバーが、同じ重鎖可変領域および異なる軽鎖可変領域を提示する。いくつかの方法では、重鎖可変領域は抗体１８Ｃ５の重鎖可変領域である。いくつかの方法では、軽鎖可変領域を、再編成されたヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得る。

【0058】

別の態様では、本発明は、対象においてトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを治療する、またはその予防を実施する方法であって、抗体１８Ｃ５が特異的に結合するＴＴＲの最大２０個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む免疫原を投与することを含み、ペプチドが単独で、かつ／または異種担体に連結されるとき、対象中のＴＴＲに特異的に結合する抗体の形成を誘導する、方法を提供する。

【0059】

いくつかの方法では、免疫原は、抗体１８Ｃ５が特異的に結合するエピトープを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基８９～１２７由来の最大２０個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基１００～１１０由来の最大１１個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基１０１～１０９由来の最大９個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。

【0060】

いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基８９～１２７由来の４～１１個の連続するアミノ酸からなる。いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基１００～１１０由来の４～１１個の連続するアミノ酸からなる。いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基１０１～１０９由来の４～９個の連続するアミノ酸からなる。

【0061】

別の態様では、本発明は、ＴＴＲペプチドに対する抗体の誘発を促進する異種担体に連結されたＴＴＲの残基８９～１２７由来の最大２０個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む、免疫原を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0062】

【図1】ウエスタンブロット実験の結果を示す図であり、この結果は、１８Ｃ５が変性ＴＴＲ単量体に対しては反応性が強く、変性二量体に対しては反応性が弱く、天然ＴＴＲ種に対しては反応性が極めて弱いことを示している。

【図2】ウエスタンブロット実験の結果を示す図であり、この結果は、市販のＴＴＲ抗体には、天然ＴＴＲと変性ＴＴＲとを識別することが不可能であり、単量体および二量体の天然および変性ＴＴＲに対して極めて強い反応性がみられることを示している。

【図3】マウス１８Ｃ５抗体（配列番号８１）、ヒト生殖系列配列ＩＧＨＶ３－４８^＊０１（配列番号８４）、ヒトアクセプター５ＶＺＹ－ＶＨ＿ｈｕＦｒｗｋ（Ｃｒｅｎｅｆａｂ－ＶＨ）（配列番号８３）、およびヒト化型の１８Ｃ５抗体（ｈｕ１８Ｃ５＿ＶＨ－ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５＿ＶＨ－ｖ２、それぞれ配列番号８４および８５）の重鎖可変領域のアライメントを示す図である。マウス１８Ｃ５重鎖可変領域配列の中で、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合によって定義されるＣＤＲが太字で示されている。

【図4】マウス１８Ｃ５抗体（配列番号８７）、ヒト生殖系列配列ＩＧＫＶ２－３０^＊０２（配列番号９０）、ヒトアクセプター５ＶＺＹ－ＶＬ＿ｈｕＦｒｗｋ（Ｃｒｅｎｅｆａｂ－ＶＬ）（配列番号８９）、およびヒト化型の１８Ｃ５抗体（ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ－ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ－ｖ２、それぞれ配列番号９１および９２）の軽鎖可変領域のアライメントを示す図である。マウス１８Ｃ５軽鎖可変領域配列の中で、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合によって定義されるＣＤＲが太字で示されている。

【発明を実施するための形態】

【0063】

（配列の簡単な説明）
配列番号１は、シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0064】

配列番号２は、シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列を表す。

【0065】

配列番号３は、シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0066】

配列番号４は、シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５抗体の軽鎖可変領域をコードする核酸配列を表す。

【0067】

配列番号５は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0068】

配列番号６は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｈ１をコードする核酸配列を表す。

【0069】

配列番号７は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0070】

配列番号８は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｈ２をコードする核酸配列を表す。

【0071】

配列番号９は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0072】

配列番号１０は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｈ３複合をコードする核酸配列を表す。

【0073】

配列番号１１は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0074】

配列番号１２は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ１をコードする核酸配列を表す。

【0075】

配列番号１３は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0076】

配列番号１４は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ２をコードする核酸配列を表す。

【0077】

配列番号１５は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0078】

配列番号１６は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合ＣＤＲ－Ｌ３をコードする核酸配列を表す。

【0079】

配列番号１７は、キメラ１８Ｃ５重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１）のアミノ酸配列を表す。

【0080】

配列番号１８は、キメラ１８Ｃ５重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１）のアミノ酸配列をコードする核酸配列を表す。

【0081】

配列番号１９は、キメラ１８Ｃ５軽鎖定常領域（ヒトカッパ）のアミノ酸配列を表す。

【0082】

配列番号２０は、キメラ１８Ｃ５軽鎖定常領域（ヒトカッパ）アミノ酸配列をコードする核酸配列を表す。

【0083】

配列番号２１は、例示的ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。

【0084】

配列番号２２は、例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。

【0085】

配列番号２３は、例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。

【0086】

配列番号２４は、Ｎ末端アルギニンを有する例示的軽鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。

【0087】

配列番号２５は、Ｎ末端アルギニンのない例示的軽鎖定常領域のアミノ酸配列を表す。

【0088】

配列番号２６は、アクセッション番号Ｐ０２７６６．１（ＵｎｉＰｒｏｔ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。

【0089】

配列番号２７は、アクセッション番号ＡＡＢ３５６３９．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。

【0090】

配列番号２８は、アクセッション番号ＡＡＢ３５６４０．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。

【0091】

配列番号２９は、アクセッション番号およびＡＢＩ６３３５１．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列を表す。

【0092】

配列番号３０は、ヒトトランスサイレチンの残基１０１～１０９のアミノ酸配列を表す。

【0093】

配列番号３１は、ヒトトランスサイレチンの残基８７～１２７のアミノ酸配列を表す。

【0094】

配列番号３２は、例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域をコードする核酸配列を表す。

【0095】

配列番号３３は、Ｎ末端アルギニンを有する例示的軽鎖定常領域をコードする核酸配列を表す。

【0096】

配列番号３４は、Ｎ末端アルギニンのない例示的軽鎖定常領域をコードする核酸配列を表す。

【0097】

配列番号３５は、重鎖定常領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。

【0098】

配列番号３６は、重鎖定常領域シグナルペプチドをコードする核酸配列を表す。

【0099】

配列番号３７は、軽鎖定常領域シグナルペプチドのアミノ酸配列を表す。

【0100】

配列番号３８は、軽鎖定常領域シグナルペプチドをコードする核酸配列を表す。

【0101】

配列番号３９は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0102】

配列番号４０は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0103】

配列番号４１は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0104】

配列番号４２は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0105】

配列番号４３は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0106】

配列番号４４は、抗体１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0107】

配列番号４５は、抗体５Ａ１のエピトープのアミノ酸配列を表す。

【0108】

配列番号４６は、抗体５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0109】

配列番号４７は、抗体５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0110】

配列番号４８は、抗体５ＡのＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0111】

配列番号４９は、抗体５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0112】

配列番号５０は、抗体５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0113】

配列番号５１は、抗体５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0114】

配列番号５２は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0115】

配列番号５３は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0116】

配列番号５４は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0117】

配列番号５５は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0118】

配列番号５６は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0119】

配列番号５７は、抗体６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0120】

配列番号５８は、抗体ＡＤ７Ｆ６のＶＨ領域のアミノ酸配列を表す。

【0121】

配列番号５９は、抗体ＡＤ７Ｆ６のＶＬ領域のアミノ酸配列を表す。

【0122】

配列番号６０は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0123】

配列番号６１は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0124】

配列番号６２は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0125】

配列番号６３は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0126】

配列番号６４は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0127】

配列番号６５は、抗体ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0128】

配列番号６６は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0129】

配列番号６７は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0130】

配列番号６８は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0131】

配列番号６９は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0132】

配列番号７０は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0133】

配列番号７１は、抗体ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0134】

配列番号７２は、抗体ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５のエピトープのアミノ酸配列を表す。

【0135】

配列番号７３は、抗体ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１のエピトープのアミノ酸配列を表す。

【0136】

配列番号７４は、抗体ＭＦＤ１１４のエピトープのアミノ酸配列を表す。

【0137】

配列番号７５は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0138】

配列番号７６は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0139】

配列番号７７は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0140】

配列番号７８は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0141】

配列番号７９は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0142】

配列番号８０は、抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0143】

配列番号８１は、マウス１８Ｃ５抗体の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0144】

配列番号８２は、マウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ＃１７の重鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１２１２２１５９３５を表す。

【0145】

配列番号８３は、ヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＰＤＢ：５ＶＺＹの重鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１２２９７４９８７５を表す。

【0146】

配列番号８４は、ヒト生殖系列配列ＩＧＨＶ３－４８^＊０１の重鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１ＦＮ５５０２８９．１を表す。

【0147】

配列番号８５は、ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0148】

配列番号８６は、ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0149】

配列番号８７は、マウス１８Ｃ５抗体の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0150】

配列番号８８は、マウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ＃１７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１２１２２１５９３４を表す。

【0151】

配列番号８９は、ヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＰＤＢ：５ＶＺＹの軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号１２２９７４９８７６を表す。

【0152】

配列番号９０は、ヒト生殖系列配列ＩＧＫＶ２－３０^＊２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ７７３１５を表す。

【0153】

配列番号９１は、ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0154】

配列番号９２は、ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表す。

【0155】

配列番号９３は、マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0156】

配列番号９４は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0157】

配列番号９５は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列を表す。

【0158】

配列番号９６は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0159】

配列番号９７は、マウス１８Ｃ５抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0160】

配列番号９８は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を表す。

【0161】

配列番号９９は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を表す。

【0162】

配列番号１００は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列を表す。

【0163】

配列番号１０１は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列を表す。

【0164】

配列番号１０２は、マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を表す。

【0165】

定義
モノクローナル抗体をはじめとする生物学的実体は通常、単離形態で提供される。このことは、抗体をはじめとする生物学的実体が通常、その作製または精製から生じる妨害タンパク質をはじめとする夾雑物に対し純度が少なくとも５０重量％であることを意味するが、モノクローナル抗体が、その使用を容易にすることを目的とする過剰の薬学的に許容される担体（１つまたは複数）をはじめとする媒体と組み合わされる可能性を排除するものではない。モノクローナル抗体は場合によっては、作製または精製から生じる妨害タンパク質をはじめとする夾雑物に対し純度が少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％である。多くの場合、単離されたモノクローナル抗体をはじめとする生物学的実体は、その精製後に残っている主要な高分子種である。

【0166】

標的抗原への抗体の特異的な結合とは、親和性が少なくとも１０^６Ｍ^－１、１０^７Ｍ^－１、１０^８Ｍ^－１、１０^９Ｍ^－１、または１０^１０Ｍ^－１であることを意味する。特異的結合は、強度が検出可能により高く、少なくとも１つの無関係な標的に対して起こる非特異的結合と区別可能である。特異的結合は、特定の官能基の間の結合形成または特定の空間的嵌合（例えば、鍵－鍵穴型）の結果であり得るが、これに対し非特異的結合は通常、ファンデルワールス力の結果である。特異的結合はしかし、抗体がただ１つの標的のみを結合することを必ずしも意味しない。

【0167】

抗体の基本的な構造単位はサブユニットの四量体である。各四量体にはポリペプチド鎖の同一のペアが２組含まれており、各ペアは１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）と１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分には、主に抗原認識を担う約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域が含まれる。この可変領域は最初、切断可能なシグナルペプチドに連結されて発現する。シグナルペプチドを有さない可変領域を成熟可変領域と呼ぶこともある。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有さない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を定める。

【0168】

軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、それぞれ抗体のアイソタイプＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定める。軽鎖および重鎖内では、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって可変領域と定常領域が連結され、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．編，第２版，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，第７章（その全体があらゆる目的において参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0169】

免疫グロブリンの軽鎖可変領域または重鎖可変領域（本明細書ではそれぞれ「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも呼ぶ）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって分断される「フレームワーク」領域からなる。「フレームワーク領域」には、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整列させる役割がある。ＣＤＲは、主に抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を含む。ＶＬドメインおよびＶＨドメインはともに、アミノ末端からカルボキシル末端へと、以下のフレームワーク（ＦＲ）領域およびＣＤＲ領域：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。ＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、本明細書ではそれぞれＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３とも呼び、ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、本明細書ではそれぞれＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３とも呼ぶ。

【0170】

各ＶＬドメインおよびＶＨドメインへのアミノ酸の割当ては、従来のＣＤＲの定義に準ずるものである。従来の定義としては、Ｋａｂａｔの定義（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａの定義（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３，１９８９）；ＣＤＲ－Ｈ１がＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲとＫａｂａｔ ＣＤＲの複合体であるＣｈｏｔｈｉａ Ｋａｂａｔ ＣＤＲ複合体；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社の抗体モデリングソフトウェアで使用されるＡｂＭ定義；およびＭａｒｔｉｎらのＣｏｎｔａｃｔ定義（ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）が挙げられる（表１を参照されたい）。Ｋａｂａｔは、広く用いられている慣例的な番号付け（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供しており、この番号付けでは、異なる重鎖同士または異なる軽鎖同士で対応する残基に同じ番号を割り当てる。抗体が特定のＣＤＲの定義（例えば、Ｋａｂａｔ）によるＣＤＲを含むと言う場合、その定義は抗体に存在するＣＤＲ残基の最小数を明記する（すなわち、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）。それは、別の従来のＣＤＲの定義には当てはまるが、指定される定義には当てはまらない他の残基を排除するものではない。例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲを含む抗体としては、考え得る抗体のなかでもとりわけ、ＣＤＲにＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み他のＣＤＲ残基を含まない抗体および、ＣＤＲ Ｈ１がＣｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ１複合体であり他のＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み別の定義に基づく追加のＣＤＲ残基を含まない抗体が挙げられる。

【0171】

【表1】

^＊ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲ－Ｈ１はＨ３２、Ｈ３３、またはＨ３４で終わる可能性がある（ループの長さに応じて）。これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームでは、余分な残基の挿入を３５Ａおよび３５Ｂに位置付けるのに対し、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けでは、それを３１Ａおよび３１Ｂに位置付けることによる。Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂ（Ｋａｂａｔ番号付け）がともに存在しない場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループはＨ３２で終わる。Ｈ３５Ａのみが存在する場合、それはＨ３３で終わる。Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂがともに存在する場合、それはＨ３４で終わる。

【0172】

「抗体」という用語は、「インタクト抗体」およびその結合フラグメントを包含する。フラグメントは通常、標的への特異的結合に関して元のインタクト抗体と競合し、分離した重鎖、分離した軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｄａｂ、ナノボディ、およびＦｖを含む。フラグメントは、組換えＤＮＡ技術により、またはインタクト免疫グロブリンの酵素的分離もしくは化学的分離によって作製できる。「抗体」という用語はまた、二重特異性抗体および／またはヒト化抗体も包含する。二重特異性抗体または二機能性抗体とは、２種類の異なる重鎖／軽鎖ペアと２種類の異なる結合部位とを有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、ＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉおよびＬａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７－５３（１９９２）を参照されたい）。いくつかの二重特異性抗体では、２種類の異なる重鎖／軽鎖ペアは、ヒト化１８Ｃ５重鎖／軽鎖ペアと、１８Ｃ５が結合するものとは異なるトランスサイレチン上のエピトープに対して特異的な重鎖／軽鎖ペアとを含む。

【0173】

いくつかの二重特異性抗体では、一方の重鎖／軽鎖ペアが、のちにさらに開示する１８Ｃ５抗体であり、他方の重鎖／軽鎖ペアが、血液脳関門に発現する受容体、例えばインスリン受容体、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）受容体、レプチン受容体、リポタンパク質受容体、またはトランスフェリン受容体などと結合する抗体に由来する（Ｆｒｉｄｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：４７７１－４７７５，１９９１；Ｆｒｉｄｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：３７３－３７７，１９９３）。このような二重特異性抗体は、受容体介在型トランスサイトーシスによって血液脳関門を通過可能である。血液脳関門受容体に対するその親和性が低下するよう二重特異性抗体を設計することによって、二重特異性抗体の脳での取込みをさらに増大させることができる。受容体に対する親和性を低下させることによって、脳内にさらに広範囲に分布するという結果が得られている（例えば、Ａｔｗａｌら，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４３，２０１１；Ｙｕら，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４４，２０１１を参照されたい）。

【0174】

例示的な二重特異性抗体はまた、（１）各軽鎖および重鎖が短いペプチド結合を介して２つの可変ドメインをタンデムに含む、二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ）（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２０１０）のＷｕら，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ）；（２）各標的抗原に対して２つの結合部位を有する四価二重特異性抗体をもたらす２つの単一鎖ダイアボディの融合物である、Ｔａｎｄａｂ；（３）多価分子をもたらすｓｃＦｖとダイアボディの組み合わせである、フレキシボディ（ｆｌｅｘｉｂｏｄｙ）；（４）Ｆａｂに適用すると、異なる１つのＦａｂフラグメントに連結される２つの同一のＦａｂフラグメントからなる三価二重特異性結合タンパク質をもたらす、プロテインキナーゼＡでの「二量体化／ドッキングドメイン」を土台とする、いわゆる「ドック・アンド・ロック（ｄｏｃｋ ａｎｄ ｌｏｃｋ）」分子；または（５）例えばヒトＦｃ領域の両端に融合される２つのｓｃＦｖを含む、いわゆるＳｃｏｒｐｉｏｎ分子であってよい。二重特異性抗体の調製に有効なプラットフォームの例としては、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ社）、ＦｃａｂおよびＭａｂ２（Ｆ－ｓｔａｒ社）、Ｆｃ操作ＩｇＧ１（Ｘｅｎｃｏｒ社）またはＤｕｏＢｏｄｙ（Ｆａｂアームの交換に基づくもの、Ｇｅｎｍａｂ社）が挙げられる。

【0175】

「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続するアミノ酸または１つまたは複数のタンパク質の三次フィールディングによって並列される非連続のアミノ酸から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープ（直線状エピトープとしても知られる）は通常、変性溶媒に曝露しても保持されるのに対し、三次フォールディングによって形成されるエピトープ（立体構造エピトープとしても知られる）は通常、変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは通常、固有の空間的構造の少なくとも３個、より通常には少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的構造を明らかにする方法としては、例えばＸ線結晶構造解析および２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第６６巻，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６）のＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓを参照されたい。エピトープは、例えば、配列番号２６の２～５個、３～５個、３～９個、または５～９個の連続するアミノ酸、例えば、配列番号２６の成熟領域の残基１０１～１０９内の２個以上の連続するアミノ酸を含む連続するアミノ酸からなるエピトープのような直線状であり得る。エピトープはまた、例えば、配列番号２６の成熟領域の残基１０１～１０９内のアミノ酸の２つ以上の非連続セグメントを含む、立体構造エピトープであり得る。例えば、抗体がトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアミノ酸残基１０１～１０９（配列番号２６の成熟領域）内のエピトープと結合すると言う場合、その意味は、エピトープが、範囲の外側の境界を定めるものを含み記載されるアミノ酸の範囲内にあるということである。それは必ずしも、その範囲内のあらゆるアミノ酸がエピトープの一部を構成することを意味するわけではない。したがって、例えば、ＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９内のエピトープは、配列番号３０の直線状のセグメントのなかでもとりわけ、配列番号２６のアミノ酸１０１～１０９、１０１～１０８、１０２～１０９、１０１～１０７、１０２～１０８、１０３～１０９、１０１～１０６、１０２～１０７、１０３～１０８、１０４～１０９、１０１～１０５、１０２～１０６、１０３～１０７、１０４～１０８、１０５～１０９、１０１～１０４、１０２～１０５、１０３～１０６、１０４～１０７、１０５～１０８、１０６～１０９、１０１～１０３、１０２～１０４、１０３～１０５、１０４～１０６、１０５～１０７、１０６～１０８、１０７～１０９、１０１～１０２、１０２～１０３、１０３～１０４、１０４～１０５、１０５～１０６、１０６～１０７、１０７～１０８、または１０８～１０９からなるか、立体構造エピトープの場合、配列番号３０のアミノ酸の非連続セグメントからなるものであり得る。

【0176】

同じエピトープまたは重複するエピトープを認識する抗体は、標的抗原への結合に関して別の抗体と競合するある抗体の能力を示す単純なイムノアッセイで特定できる。抗体のエピトープもまた、接触残基を特定するためにその抗原と結合した抗体のＸ線結晶構造解析によって明らかにできる。あるいは、一方の抗体の結合を低下または消失させる抗原中の全てのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を低下または消失させる場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低下または消失させるいくつかのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を低下または消失させる場合、２つの抗体は重複するエピトープを有する。

【0177】

抗体間の競合は、被験抗体が共通の抗原への参照抗体の結合を阻害するアッセイにより決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。競合結合アッセイで測定して過剰の被験抗体（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍）が参照抗体の結合を少なくとも５０％阻害する場合、被験抗体は参照抗体と競合する。参照抗体の結合を少なくとも７５％、９０％または９９％阻害する被験抗体もある。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同じエピトープと結合する抗体、および立体障害を起こす程度に参照抗体が結合するエピトープに近い位置にある近接エピトープと結合する抗体が挙げられる。

【0178】

構造トランスサイレチン（ＴＴＲ）に関する「天然の」という用語は、正常にフォールドし正しく機能する状態にあるＴＴＲの構造（すなわち、ＴＴＲ四量体）を指す。ＴＴＲは天然にフォールドした形態で四量体であることから、非天然形態のＴＴＲとしては、例えば、ミスフォールドしたＴＴＲ四量体、ＴＴＲ単量体、凝集形態のＴＴＲ、および原線維形態のＴＴＲが挙げられる。非天然形態のＴＴＲは、野生型ＴＴＲのアミノ酸配列または変異を含む分子を含み得る。

【0179】

ＴＴＲに関する「ミスフォールドした」という用語は、ＴＴＲポリペプチドの単量体または多量体の二次構造または三次構造を指し、ポリペプチドが、正しく機能する状態にあるそのタンパク質には正常ではない立体構造をとっていることを表す。ＴＴＲのミスフォールディングはタンパク質の変異（例えば、欠失、置換、または付加）によって引き起こされ得るが、野生型ＴＴＲタンパク質が疾患でミスフォールドすることもあり、特定のエピトープを曝露する。

【0180】

「薬学的に許容される」という用語は、担体、希釈剤、補形剤、または補助剤が製剤の他の成分と適合し、その被投与者に実質的に有害でないことを意味する。

【0181】

「患者」という用語は、予防処置または治療処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を包含する。

【0182】

ある個体は、既知の危険因子（例えば、遺伝学的因子、生化学的因子、家族歴、および環境曝露）であって、その危険因子を有する個体がそれをもたない個体よりも疾患を発症するリスクが統計的に有意に高い危険因子をその対象が少なくとも１つ有する場合、その疾患のリスクが高い。

【0183】

「生体試料」という用語は、生物学的供給源、例えばヒトまたは哺乳動物対象中の、またはそれらの対象から採取できる生物学的材料の試料を指す。このような試料は、器官、細胞小器官、組織、組織切片、体液、末梢血、血漿、血清、細胞、タンパク質およびペプチドなどの分子、ならびにそれらに由来する任意の部分または組合せであり得る。生体試料という用語はまた、試料を処理することによって得られる任意の材料を包含し得る。得られる材料は、細胞またはそれらの子孫を含み得る。生体試料の処理は、ろ過、蒸留、抽出、濃縮、固定、妨害成分の不活化などの１つまたは複数を含み得る。

【0184】

「対照試料」という用語は、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のトランスサイレチン（ＴＴＲ）、例えばＴＴＲアミロイド沈着物などを含むと知られていない、または推測されない生体試料を指す。対照試料は、ＴＴＲアミロイドーシスまたは具体的に選択した種類のＴＴＲアミロイドーシスに罹患していない個体から得られる。あるいは、対照試料は、ＴＴＲアミロイドーシスまたは具体的に選択した種類のＴＴＲアミロイドーシスに罹患している患者から得られる。このような試料は、ＴＴＲアミロイドーシスを含むと考えられる生体試料と同時に得ても、または異なる機会に得てもよい。生体試料および対照試料はともに、同じ組織（例えば、ＴＴＲアミロイド沈着物と周囲の正常組織の両方を含む組織切片）から得てもよい。好ましくは、対照試料は実質的にまたは完全に、ＴＴＲアミロイド沈着物を含まない組織からなり、ＴＴＲアミロイド沈着物を含むと考えられる生体試料との比較に用いることができる。好ましくは、対照試料中の組織は、生体試料中の組織と同じ種類（例えば、心臓中の心筋細胞）である。

【0185】

「疾患」という用語は、生理的機能を損なう任意の異常な状態を指す。この用語は広義に使用され、病因の性質に関係なく生理的機能が損なわれる任意の障害、病気、異常、病態、疾病、状態、または症候群を包含する。

【0186】

「症状」という用語は、対象によって知覚される疾患の主観的証拠、例えば歩行異常などを指す。「徴候」は、医師による観察が可能な疾患の客観的証拠を指す。

【0187】

アミノ酸置換を保存的置換または非保存的置換に分類する目的で、アミノ酸を以下のグループに分ける：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸の間で置換を含む。非保存的置換は、上記のうちの１つクラスのメンバーが別のクラスのメンバーに置き換わるものである。

【0188】

配列同一性のパーセントは、慣習的なＫａｂａｔ番号付けによって最大に整列させた抗体の配列によって求められる。整列後、目的の抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）を参照抗体の同じ領域と比較する場合、目的の抗体の領域と参照抗体の領域との間の配列同一性のパーセントは、目的の抗体の領域および参照抗体の領域の両方で同じアミノ酸によって占められる位置の数を、この２つの領域の整列された位置の総数で除し、ギャップをカウントせずに、１００を乗じてパーセントに変換したものである。

【0189】

１つまたは複数の記載される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に記載されていない他の要素を含み得る。例えば、抗体を「含む」組成物は、抗体を単独で、または他の成分と組み合わせて含有し得る。

【0190】

数値の範囲の指定は、その範囲内に含まれる整数またはその範囲を定める整数、およびその範囲内の整数によって定められる全ての部分範囲を含む。

【0191】

「約」という用語は、文脈上そうでないことが明らかでない限り、記載される数値の測定標準誤差（例えば、ＳＥＭ）内の数値を包含する。

【0192】

統計的に有意であるとは、ｐ≦０．０５を意味する。

【0193】

本発明の抗体は、抗体と同じ適応症に対する別の治療と組み合わせて投与できる、つまり、抗体を投与する期間、例えば抗体の最初の投与の１か月前から始まり、最後の投与から１か月後に終わる期間などの間に少なくとも１回、他の治療を実施する。他の治療は、この期間の間に反復する間隔で実施でき、この間隔は、抗体を投与する間隔と同じであっても、同じでなくてもよい。他の治療は対症療法であり得る。

【0194】

ある治療が疾患の原因、すなわちその病因ではなく、疾患の１つまたは複数の症状にのみ影響を及ぼす場合、それは対症的なものである。

【0195】

単数形の冠詞「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別の意味を表す場合を除き、複数形の指示対象を包含する。例えば、「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または「少なくとも１つの化合物」は、複数の化合物をその混合物も含んで包含し得る。

【0196】

文脈から明らかでない限り、本明細書に、ある製品または方法がある特定の特徴または特徴の組合せを含むことが開示される場合、本明細書は、選択の可能性として、その特徴または特徴の組合せよりなる、または実質的にそれよりなる製品または方法を開示しているものとして解釈されるべきである。

【0197】

（詳細な説明）
Ｉ．概略
本発明は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）の残基１０１～１０９と特異的に結合する抗体を提供する。一部の抗体は、天然の四量体形態のＴＴＲよりも単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのうちのいずれかまたは全てと優先的に結合する。一部の抗体は、天然の四量体形態のＴＴＲよりも単量体形態またはミスフォールド形態のＴＴＲのうちの一方または両方と優先的に結合する。この抗体は、ＴＴＲの蓄積またはＴＴＲ沈着物の蓄積に関連する疾患または障害（例えば、ＴＴＲアミロイドーシス）を治療または予防するために使用できる。この抗体はまた、ＴＴＲアミロイドーシスを診断するため、およびＴＴＲの凝集を阻害または軽減するために使用できる。この抗体はまた、諸用途のなかでもとりわけ、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスに対する治療法の薬力学効果を明らかにするのに使用できる。優先的に結合することは、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのうちのいずれかまたは全てに対する結合定数が、天然の四量体形態のＴＴＲの少なくとも５倍であることを意味する。任意選択で、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのうちのいずれかまたは全てに対する結合定数は、天然の四量体形態のＴＴＲの少なくとも１０倍である。任意選択で、１８Ｃ５などの抗体には、例えば、天然の四量体形態のＴＴＲに対する特異的結合がみられない。

【0198】

ＩＩ．標的分子
トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、血清中および脳脊髄液中に存在する１２７アミノ酸、５５ｋＤａの輸送タンパク質であり、主に肝臓で合成される。それはまたプレアルブミン、チロキシン結合プレアルブミン、ＡＴＴＲ、およびＴＢＰＡとも呼ばれている。その天然の状態では、ＴＴＲは四量体として存在する。ホモ接合体では、四量体は同一の１２７アミノ酸ベータシートリッチサブユニットを含む。ヘテロ接合体では、ＴＴＲ四量体は、通常は統計的に組み合わされるバリアントサブユニットおよび／または野生型サブユニットからなる。

【0199】

血液中での確立されたＴＴＲの機能は、ホロ－レチノール結合タンパク質の輸送である。げっ歯類の血液中でＴＴＲはチロキシン（Ｔ_４）の主要な担体であり、ホロ－レチノール結合タンパク質に用いられるものと直交する結合部位を利用するが、ヒトではこのＴ_４結合部位は事実上空いている。

【0200】

ＴＴＲは、様々な凝集構造へのその細胞外でのミスフォールドおよび／または誤会合（アミロイド形成）がアミロイド疾患と呼ばれる変性性疾患を引き起こすと考えられる、少なくとも３０種類の異なるヒトタンパク質のうちの１つである。ＴＴＲは立体構造変化を受けてアミロイド原性となる。ＴＴＲ四量体の解離および部分的なアンフォールディングによって、伸長した立体構造の、大部分が非荷電で疎水性のひと続きの残基が露出し、これがほぼ不定形の球状凝集体へと効率的に誤会合し、最終的にはクロスベータシートアミロイド構造へと立体構造変換する。

【0201】

文脈上そうでないことが明らかでない限り、トランスサイレチン（ＴＴＲ）またはそのフラグメントもしくはドメインへの言及は、アイソフォーム、変異体、および対立遺伝子変異体を含む天然のヒトアミノ酸配列を含む。例示的なＴＴＲポリペプチド配列は、アクセッション番号Ｐ０２７６６．１（ＵｎｉＰｒｏｔ）（配列番号２６）、ＡＡＢ３５６３９．１（ＧｅｎＢａｎｋ）（配列番号２７）、ＡＡＢ３５６４０．１（ＧｅｎＢａｎｋ）（配列番号２８）、およびＡＢＩ６３３５１．１（ＧｅｎＢａｎｋ）（配列番号２９）で表される。残基はＳｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０２７６６．１に従って番号付けされ、成熟タンパク質（すなわち、２０アミノ酸のシグナル配列を含まない）の最初のアミノ酸を残基１と表す。他の任意のＴＴＲタンパク質では、最大アライメントでＰ０２７６６．１中の対応する残基に合わせて残基を番号付けする。

【0202】

ＩＩＩ．トランスサイレチンアミロイドーシス
トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスは、病原性のミスフォールドＴＴＲおよびＴＴＲからなるアミロイド原線維の細胞外沈着を特徴とする全身障害である。ＴＴＲアミロイドーシスは、天然のＴＴＲ四量体形態の不安定化（環境条件または遺伝条件による）により一般に引き起こされ、ＴＴＲの解離、ミスフォールディング、およびアミロイド原線維への凝集が起こり、これが様々な器官および組織に蓄積し、進行性の機能不全を引き起こす。例えば、ＡｌｍｅｉｄａおよびＳａｒａｉｖａ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６：２８９１－２８９６（２０１２）；Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。

【0203】

ヒトでは、野生型ＴＴＲ四量体および変異体サブユニットと野生型サブユニットとからなる混合型四量体の両方が、罹患組織の変性をもたらすアミロイド形成の過程で、解離、ミスフォールド、および凝集し得る。したがって、ＴＴＲアミロイドーシスは、ＴＴＲにおける変異により生じるまたは変異していないミスフォールドＴＴＲによって生じる病原性のミスフォールドＴＴＲを原因とする疾患を包含する。

【0204】

例えば、野生型ＡＴＴＲアミロイドーシス（老人性全身性アミロイドーシスまたはＳＳＡとも呼ばれる）および老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）は加齢に関連する種類のアミロイドーシスであり、心臓の心筋細胞の外側と内側に野生型ＴＴＲアミロイドが沈着することによって起こる。ＴＴＲアミロイドーシスはまた、最も頻度の高い形態の遺伝性（家族性）アミロイドーシスでもあり、ＴＴＲタンパク質を不安定化する変異を原因とする。ＴＴＲ遺伝子中の点変異に関連するＴＴＲアミロイドーシスとしては、家族性アミロイドニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、およびまれな中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）が挙げられる。遺伝性（家族性）ＴＴＲアミロイドーシスの患者はほぼ例外なくヘテロ接合体であり、このことは、ＴＴＲ四量体が、一般には統計的に分布する変異体ＴＴＲサブユニットおよび／または野生型ＴＴＲサブユニットからなることを意味する。遺伝性（家族性）のＴＴＲアミロイドーシスは一般に常染色体優性であり、通常、孤発性の疾患（ＳＳＡおよびＳＣＡ）よりも早期に発症する。

【0205】

ＴＴＲをコードする遺伝子中の変異で、常染色体優性障害のＦＡＰおよびＦＡＣに関与すると考えられているものは１００を超える。例えば、米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４号；Ｓａｒａｉｖａ，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１７（６）：４９３－５０３（２００１）；ＤａｍａｓおよびＳａｒａｉｖａ，Ｊ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１３０：２９０－２９９；ＤｗｕｌｅｔおよびＢｅｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１４：６５７－６６２（１９８３）を参照されたい。これらのアミロイドを生じる変異はＴＴＲの分子全体にわたって分布している。一般に、変異体サブユニットがＴＴＲの四量体構造をより不安定化させるほど、アミロイド疾患の発症がより早くなる。ＴＴＲバリアントが病原性となる可能性は一般に、その不安定性と細胞分泌効率とを組み合わせて求められる。ＴＴＲバリアントが引き起こす初期の病態は、ＴＴＲバリアントが心組織を選択的に破壊することによるものもあれば、ＴＴＲバリアントによって末梢神経系および自律神経系が損なわれることによるものもある。ＴＴＲアミロイド形成を原因とする組織損傷は、小さい拡散性のＴＴＲ凝集体の毒性によるものがほとんどであると思われるが、細胞外アミロイドの蓄積が一因であることもあり、その場合、ＴＴＲアミロイドーシスの後期に器官構造がほぼ確実に損なわれる。

【0206】

ＴＴＲアミロイドーシスには多数の異なる形態がみられ、表現型に相当な個体差および地域差がある。例えば、ＴＴＲアミロイドーシスは進行性の軸索性感覚性自律神経性運動性ニューロパチーとしてみられることがある。ＴＴＲアミロイドーシスはまた、浸潤性心筋症としてみられることがある。

【0207】

疾患関連症状が発現する年齢は１０代～８０代の間で様々であり、集団間で大きなばらつきがみられる。ＴＴＲアミロイドーシスが多系統に及ぶことは、その診断の手掛かりの１つとなる。例えば、以下に挙げるものが１つまたは複数みられる場合、ＴＴＲアミロイドーシスの診断が考慮される：（１）特に心不全に関わる、神経障害性疾患の家族歴；（２）原因不明の神経因性疼痛または進行性感覚障害；（３）原因が明らかでなく、特に両側性で外科的開放を必要とする手根管症候群；（４）原因不明の消化管運動障害または自律神経機能不全（例えば、勃起不全、起立性低血圧症、神経因性膀胱）；（５）高血圧がみられず心室壁肥厚を特徴とする心疾患；（６）原因が不明であり、特に心肥大を伴う高度房室ブロック；および（６）綿花状の硝子体封入体。Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。その他の症状としては、例えば、多発性ニューロパチー、間隔消失、疼痛、下肢脱力、発汗異常、下痢、便秘、体重減少、および尿失禁／尿閉が挙げられる。

【0208】

ＴＴＲアミロイドーシスの診断は通常、標的器官の生検を頼りにし、次いで、摘出組織をアミロイド特異的色素であるコンゴー赤で組織学的に染色する。検査結果がアミロイド陽性である場合、次いでＴＴＲに関して免疫組織化学染色および質量分析による同定を実施して、アミロイド形成の原因である前駆体タンパク質が実際にＴＴＲであることを確認する。本明細書に開示される抗体は、ＴＴＲアミロイドーシスと非ＴＴＲアミロイドーシス、例えば原発性全身性アミロイドーシスとしても知られるアミロイド軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシスとを鑑別するのに有用である。家族性の疾患では、ＴＴＲをコードする遺伝子に変異があることを次いで明らかにしてから診断を下す必要がある。これは、例えば、等電点電気泳動、ポリメラーゼ連鎖反応、またはレーザー分析／液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析によって遂行され得る。例えば、米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４号；ＲｕｂｅｒｇおよびＢｅｒｋ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １２６：１２８６－１３００（２０１２）；Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。

【0209】

ＩＶ．抗体
Ａ．結合特異性および機能的特性
本発明は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）タンパク質、より具体的には、ＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９（配列番号３０）内のエピトープと結合する、モノクローナル抗体を提供する。このようなエピトープは、天然のＴＴＲ四量体では埋没しており、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲでは露出している。

【0210】

１つのこのような抗体として、１８Ｃ５ならびにそのキメラ型、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型、およびヒト化型がある。この抗体は、ＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９（配列番号３０）内に特異的に結合する。この抗体はさらに、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲと結合できるが、天然の四量体形態のＴＴＲとは結合できないことを特徴とする。特定のタンパク質またはそのフラグメントと結合する能力は、実施例に記載する例示的アッセイフォーマットを用いて示され得る。１８Ｃ５と言う場合、文脈上そうでないことが明らかでない限り、マウス型、キメラ型、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型またはヒト化型のいずれかを指すものと理解されるべきである。モノクローナル抗体１８Ｃ５を産生するハイブリドーマ細胞系は、２０１７年１０月３１日、バージニア州マナサス２０１１０－２２０９にあるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）の特許寄託機関に寄託され、特許寄託番号ＰＴＡ－１２４５７０が割り当てられている。

【0211】

いくつかの抗体は、１８Ｃ５と称する抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープと結合する。１８Ｃ５の重鎖成熟可変領域および軽鎖成熟変領域の配列はそれぞれ、配列番号１および３と称される。このような結合特異性を有する他の抗体は、マウスをＴＴＲまたは所望のエピトープを含むＴＴＲの一部分（例えば、配列番号３０）で免疫し、得られた抗体について単量体ＴＴＲまたは配列番号３０を含むペプチドと結合するかどうかを、任意選択でマウス１８Ｃ５の可変領域（ＩｇＧ１、カッパ）を有する抗体と競合させて、スクリーニングスクリーニングすることによって作製できる。所望のエピトープを含むＴＴＲのフラグメントを、フラグメントに対する抗体応答を誘発しやすくする担体に連結し、かつ／またはそのような応答を誘発しやすくするアジュバントと組み合わせてもよい。このような抗体について、野生型ＴＴＲ、単量体型ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、配列番号２６）への差異的結合を特定の残基の変異体と比較してスクリーニングできる。このような変異体に対するスクリーニングは、より正確に結合特異性を明らかにして、特定の残基の変異誘発によってその結合が阻害されかつ他の例示抗体と同じ機能的特性を有する可能性のある抗体の特定を可能にする。変異は、標的全体でまたはエピトープが存在することがわかっているその区画全体で、１回に１残基またはさらに間隔を空けて実施するアラニン（または既にアラニンが存在する場合はセリンまたはグリシン）による系統的置換であり得る。同じ変異のセットによって２つ抗体の結合が有意に低下すれば、その２つの抗体は同じエピトープを結合する。

【0212】

選択したマウス抗体（例えば、１８Ｃ５）の結合特異性を有する抗体はまた、ファージディスプレイ方法の変法を用いて作製できる。Ｗｉｎｔｅｒの国際公開第９２／２０７９１号を参照されたい。この方法は、ヒト抗体の作製に特に適している。この方法では、選択したマウス抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかを出発物質として用いる。例えば、軽鎖可変領域を出発物質として選択する場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわち、マウス出発物質）および異なる重鎖可変領域を提示するファージライブラリーが構築される。重鎖可変領域は、例えば、再編成されたヒト重鎖可変領域のライブラリーから得ることができる。単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９）に対して強い特異的結合（例えば、少なくとも１０^８Ｍ^－１、好ましくは少なくとも１０^９Ｍ^－１）を示すファージを選択する。このファージから得た重鎖可変領域は、次いでさらなるファージライブラリーを構築するための出発物質となる。このライブラリーでは、各ファージは同じ重鎖可変領域（すなわち、最初のディスプレイライブラリーで特定された領域）および異なる軽鎖可変領域を提示する。軽鎖可変領域は、例えば、再編成したヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得ることができる。同じく、単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９）に対して強い特異的結合を示すファージを選択する。得られる抗体は通常、マウス出発物質と同じないし類似のエピトープ特異性を有する。

【0213】

１８Ｃ５などの例示的抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発によって、他の抗体を得ることができる。成熟重鎖可変領域および／もしくは成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列において１８Ｃ５と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であり、その機能的特性を維持し、かつ／または少数の機能的に重要ではないアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入を有する点で各抗体と異なるモノクローナル抗体も本発明に含まれる。従来の定義（ただし、Ｋａｂａｔが好ましい）によって定義されるＣＤＲを少なくとも１つまたは６つとも有し、１８Ｃ５の対応するＣＤＲと９０％、９５％、９９％または１００％同一であるモノクローナル抗体も含まれる。

【0214】

本発明はまた、完全にまたは実質的に１８Ｃ５に由来するＣＤＲを一部または全部（例えば、３つ、４つ、５つ、および６つ）有する抗体も提供する。このような抗体は、１８Ｃ５の重鎖可変領域に完全にもしくは実質的に由来するＣＤＲを２つ、通常は３つとも有する重鎖可変領域および／または１８Ｃ５の軽鎖可変領域に完全にもしくは実質的に由来するＣＤＲを少なくとも２つ、通常は３つとも有する軽鎖可変領域を含み得る。抗体は重鎖および軽鎖の両方を含み得る。ＣＤＲは、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下の置換、挿入、または欠失を含む場合、対応する１８Ｃ５のＣＤＲに実質的に由来するが、ただし、ＣＤＲ－Ｈ２（Ｋａｂａｔによって定義される場合）は、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下の置換、挿入、または欠失を有し得る。このような抗体は、成熟重鎖可変領域および／もしくは成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列において１８Ｃ５に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有し、それらの機能的特性を維持し、かつ／または少数の機能的に重要ではないアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、欠失、もしくは挿入を有する点で１８Ｃ５と異なり得る。

【0215】

１８Ｃ５の重鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ複合体（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）はそれぞれ、配列番号５、７、および９と称され、１８Ｃ５の軽鎖のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ複合体（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）はそれぞれ、配列番号１１、１３、および１５と称される。

【0216】

表２に、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの複合体（本明細書では「Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合体」とも呼ぶ）、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔによって定義される１８Ｃ５ ＣＤＲを示す。

【0217】

【表2】

【0218】

上記のようなアッセイによって特定されるいくつかの抗体は、実施例をはじめとする箇所に記載されるように、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲに結合できるが、天然の四量体形態のＴＴＲには結合できない。同じように、ＴＴＲ媒介性アミロイドーシスの組織に対して免疫反応を示すが、健常組織に対しては免疫反応を示さない抗体もある。

【0219】

いくつかの抗体は、動物モデルまたは臨床試験でＴＴＲの凝集を阻害もしくは軽減し、ＴＴＲ原線維形成を阻害もしくは軽減し、ＴＴＲ沈着物もしくは凝集したＴＴＲを減少させるか除去し、またはＴＴＲの非毒性立体構造を安定化させ得る。いくつかの抗体は、動物モデルまたは臨床試験で示されるように、ＴＴＲアミロイドーシスを治療もしくは予防し得るか、ＴＴＲアミロイドーシスの発症を遅らせ得る。ＴＴＲアミロイドーシスに対する活性を検討するための例示的動物モデルとしては、Ｋｏｈｎｏら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０（４）：１４９７－１５０８（１９９７）；Ｔｅｎｇら，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ８１：３８５－３９６（２００１）；Ｗａｋａｓｕｇｉら，Ｐｒｏｃ．Ｊａｐａｎ Ａｃａｄ．６３Ｂ：３４４－３４７（１９８７）；Ｓｈｉｍａｄａら，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．６：３３３－３４３（１９８９）；Ｎａｇａｔａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１７：１６９－１７５（１９９５）；Ｓｏｕｓａら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１６１：１９３５－１９４８（２００２）；およびＳａｎｔｏｓら，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ３１：２８０－２８９（２０１０）に記載されているものが挙げられる。

【0220】

動物をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および誘導された抗体をスクリーニングしてＴＴＲの残基１０１～１０９内を結合する抗体を特定することによって、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する抗体を特定できる。動物は、例えば、マウス、ウサギ、またはラットなどのげっ歯類であり得る。動物は、トランスジェニック、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子を有するよう改変したげっ歯類などであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内の少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、または９個の連続する残基を含むＴＴＲの最大２５個の連続する残基からなるフラグメントであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９からなるものであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、担体に連結されて抗体誘導の誘発を促進し得る。抗体が残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントに結合するかどうかを決定することによって抗体をスクリーニングできる。任意選択で、完全長ＴＴＲへの結合に関して抗体をスクリーニングしてもよい。

【0221】

抗体のディスプレイライブラリーを準備すること、およびディスプレイライブラリーをスクリーニングしてＴＴＲの残基１０１～１０９内を結合する抗体を特定することによって、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープ内に結合する抗体を特定できる。ディスプレイライブラリーは特に、ファージディスプレイライブラリー、酵母ディスプレイライブラリー、リボソームディスプレイライブラリーであり得る。ディスプレイライブラリーは、例えば、抗体をＦｖフラグメントまたはＦａｂとして提示し得る。ディスプレイライブラリーは未刺激のディスプレイライブラリーであり得る。ファージディスプレイライブラリーから抗体を単離する方法については、例えば国際公開第２０１７／２０７７３９号に開示されている。あるいは、げっ歯類をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸をディスプレイベクターにクローン化することによって、ディスプレイライブラリーを作製できる。げっ歯類は、例えば、マウス、ウサギ、またはラットであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内の少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、または９個の連続する残基を含むＴＴＲの最大２５個の連続する残基からなるフラグメントであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９からなるものであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、担体に連結されて抗体誘導の誘発を促進し得る。残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントへの結合に関してライブラリーのメンバーをスクリーニングできる。任意選択で、完全長ＴＴＲへの結合に関してライブラリーのメンバーをスクリーニングしてもよい。ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する参照抗体の存在下でライブラリーのメンバーをスクリーニングできる。参照抗体は抗体１８Ｃ５であり得る。

【0222】

抗体１８Ｃ５の存在下および不在下でＴＴＲを被験抗体と接触させること、およびＴＴＲへの抗体の結合を決定することによって、ＴＴＲへの結合に関して抗体１８Ｃ５と結合について競合する被験抗体を特定できる。抗体１８Ｃ５の存在下で抗体の結合が減少することは、抗体がＴＴＲへの結合に関して抗体１８Ｃ５と競合することを示す。上記のものに代えてまたは加えて、被験抗体の存在下でＴＴＲを抗体１８Ｃ５と接触させることによってアッセイを実施してもよく、この場合、被験抗体の存在下でＴＴＲへの１８Ｃ５の結合が減少することが競合を示す。

【0223】

ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを決定すること、動物をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および誘導された抗体をスクリーニングして抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定することによって、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定できる。動物は、例えば、マウス、ウサギ、またはラットなどのげっ歯類であり得る。動物は、トランスジェニック、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子を有するよう改変したげっ歯類などであり得る。

【0224】

ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを決定すること、抗体のディスプレイライブラリーを準備すること、およびディスプレイライブラリーをスクリーニングして抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定することによって、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を特定できる。ディスプレイライブラリーは、ファージディスプレイライブラリー、酵母ディスプレイライブラリー、またはリボソームディスプレイライブラリーであり得る。ディスプレイライブラリーは、例えば、抗体をＦｖフラグメントまたはＦａｂフラグメントとして提示し得る。ディスプレイライブラリーは未刺激のディスプレイライブラリーであり得る。ファージディスプレイライブラリーから抗体を単離する方法については、例えば国際公開第２０１７／２０７７３９号に開示されている。

【0225】

ファージディスプレイ法によって、選択したマウス抗体（例えば、１８Ｃ５）の結合特異性を有する抗体を作製してもよい。この方法では、選択したマウス抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を出発物質として使用する。例えば、軽鎖可変領域を出発物質として選択する場合、メンバーが同じ軽鎖可変領域（すなわち、マウス出発物質）および異なる重鎖可変領域を提示するファージライブラリーが構築される。重鎖可変領域は、例えば、再編成されたヒト重鎖可変領域のライブラリーから得ることができる。単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９）に対して強い特異的結合（例えば、少なくとも１０^８Ｍ^－１、好ましくは少なくとも１０^９Ｍ^－１）を示すファージを選択する。次いで、このファージに由来する重鎖可変領域をさらなるファージライブラリー構築のための出発物質とする。このライブラリーでは、各ファージは同じ重鎖可変領域（すなわち、最初のディスプレイライブラリーから特定された領域）および異なる軽鎖可変領域を提示する。軽鎖可変領域は、例えば、再編成されたヒト可変軽鎖領域のライブラリーから得ることができる。同じく、単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９）に対して強い特異的結合を示すファージを選択する。得られる抗体は通常、マウス出発物質と同じ、または類似のエピトープ特異性を有する。

【0226】

げっ歯類をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫感作すること、および抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸をディスプレイベクターにクローン化することによって、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５と同じエピトープに結合する抗体を作製するためのディスプレイライブラリーを作製できる。げっ歯類は、例えば、マウス、ウサギ、またはラットであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内の少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、または９個の連続する残基を含むＴＴＲの最大２５個の連続する残基からなるフラグメントであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、ＴＴＲの残基１０１～１０９からなるものであり得る。免疫感作に使用されるフラグメントは、担体に連結されて抗体誘導の誘発を促進し得る。

【0227】

残基１０１～１０９からなるＴＴＲのフラグメントへの結合に関してディスプレイライブラリーのメンバーをスクリーニングできる。任意選択で、完全長ＴＴＲへの結合に関してライブラリーのメンバーをスクリーニングしてもよい。ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープに結合する参照抗体の存在下でライブラリーのメンバーをスクリーニングできる。参照抗体は抗体１８Ｃ５であり得る。

【0228】

ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープは、例えば、野生型、単量体型のＴＴＲまたはそのフラグメントへの１８Ｃ５の結合を指定の残基の変異体と比較して測定することによって、決定できる。変異は、標的全体にわたって、またはエピトープが存在することがわかっている標的の一区画にわたって、１回１残基、またはそれより広く間隔をあけて、アラニン（アラニンが既に存在する場合、セリンまたはグリシン）での体系的な置換であり得る。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少または消失させる抗原中のアミノ酸変異がいずれも、他方の抗体の結合を減少または消失させるならば、同じエピトープを有する。その抗原に結合した抗体のＸ線結晶構造解析を実施して接触残基を特定することによって、ＴＴＲ上の抗体１８Ｃ５に結合されるエピトープを決定してもよい。２つの抗体は、それらが同じ接触残基を有する場合、同じエピトープを結合する。

【0229】

１８Ｃ５のものとは異なるＴＴＲエピトープに結合する抗ＴＴＲ抗体は、そのキメラ型およびヒト化型を含み、本発明の１８Ｃ５抗体とともに併用療法で、二重特異性抗体で、ＴＴＲ関連障害を診断および／または治療する方法で、ならびにＴＴＲを検出する方法で有用である。１８Ｃ５のものとは異なるＴＴＲエピトープに結合するこのような抗ＴＴＲ抗体は、下の表３の抗体を含み得る。

【0230】

【表3】

【0231】

Ｂ．非ヒト抗体
単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９）に対する他の非ヒト抗体、例えば、マウス抗体、モルモット抗体、霊長類抗体、ウサギ抗体またはラット抗体の作製は、例えば、動物をＴＴＲまたはそのフラグメントで免疫することによって遂行できる。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ＣＳＨＰ ＮＹ，１９８８）（あらゆる目的において参照により組み込まれる）を参照されたい。このような免疫原は、天然源から、ペプチド合成によって、または組換え発現によって得ることができる。任意選択で、融合をはじめとする方法で免疫原を担体タンパク質と複合体形成させて投与してもよい。任意選択で、免疫原をアジュバントとともに投与してもよい。のちに記載する通り、いくつかの種類のアジュバントを用いることができる。実験動物の免疫感作には、フロイント完全アジュバント、次いで不完全アジュバントが好ましい。ポリクローナル抗体の作製には通常、ウサギまたはモルモットを用いる。モノクローナル抗体の作製には通常、マウスを用いる。単量体ＴＴＲまたはＴＴＲ内のエピトープ（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９のうちの１つまたは複数のものを含むエピトープ）と特異的に結合する抗体をスクリーニングする。このようなスクリーニングは、単量体ＴＴＲバリアント、例えばアミノ酸残基１０１～１０９を有するかその残基内に変異を有するＴＴＲバリアントなどの収集物への抗体の結合を決定し、その抗体にどのＴＴＲバリアント抗体が結合するかを決定することによって遂行できる。結合は、例えば、ウエスタンブロット、ＦＡＣＳ、またはＥＬＩＳＡによって評価できる。

【0232】

Ｃ．ヒト化抗体
ヒト化抗体は、遺伝子操作によって非ヒト「ドナー」抗体のＣＤＲをヒト「アクセプター」抗体配列内に移植した抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，米国特許第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号；Ｗｉｎｔｅｒ，米国特許第５，２２５，５３９号；Ｃａｒｔｅｒ，米国特許第６，４０７，２１３号；Ａｄａｉｒ，米国特許第５，８５９，２０５号；および米国特許第６，８８１，５５７号を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域の配列であり得る。したがって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的にドナー抗体に由来するＣＤＲを少なくとも３つ、４つ、５つまたは全部ならびに、存在する場合は、完全にまたは実質的にヒト抗体配列に由来する可変領域フレームワーク配列および定常領域を有する抗体である。同じように、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖に由来するＣＤＲを少なくとも１つ、２つ、通常は３つ全部ならびに、存在する場合は、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク配列および定常領域配列に由来する重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域を有する。同じように、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖に由来するＣＤＲを少なくとも１つ、２つ、通常は３つ全部ならびに、存在する場合は、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク配列および定常領域配列に由来する軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域を有する。ナノボディおよびｄＡｂ以外にも、ヒト化抗体はヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体のＣＤＲは、各ＣＤＲ間で対応する残基（任意の従来の定義、好ましくはＫａｂａｔによって定義されるもの）の少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が一致する場合、非ヒト抗体での対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、任意の従来の定義、好ましくはＫａｂａｔによって定義される対応する残基の少なくとも８５％、９０％、９５％または１００％が同一である場合、それぞれヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。２０１４年の世界保健機関（ＷＨＯ）国際一般名（ＩＮＮ）によるヒト化抗体の定義でヒト化に分類されるには、抗体は、成熟可変領域にヒト生殖系列抗体配列（すなわち、体細胞超変異のの前）と少なくとも８５％の同一性を有するものでなければならない。混合抗体とは、一方の抗体鎖（例えば、重鎖）は閾値を満たすが、他方の鎖（例えば、軽鎖）は閾値を満たさない抗体のことである。ある抗体の鎖がいずれも閾値を満たさない場合、両鎖の可変フレームワーク領域が実質的にヒトであっても、マウス復帰変異がいくつかみられれば、その抗体はキメラに分類される。Ｊｏｎｅｓら（２０１６）Ｔｈｅ ＩＮＮ ａｎｄ ｏｕｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ，ｍＡｂｓ ８：１，１－９，ＤＯＩ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１５．１１１４３２０を参照されたい。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆ）から入手可能であり、参照により本明細書に組み込まれる「ＷＨＯ－ＩＮＮ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）」（インターネット）２０１４も参照されたい。誤解を避けるため、本明細書で使用される「ヒト化」という用語は、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによるヒト化抗体の定義に限定されないものとする。本明細書に提供されるヒト化抗体の一部は、一方または両方の成熟可変領域にヒト生殖系列配列と少なくとも８５％の配列同一性を有し、本明細書に提供されるヒト化抗体の一部は、一方または両方の成熟可変領域にヒト生殖系列配列と８５％未満の配列同一性を有する。本明細書に提供されるヒト化抗体の成熟重鎖可変領域の一部は、ヒト生殖系列配列と約６０％～１００％、例えば、約６０％～６９％、７０％～７９％、８０％～８４％、または８５％～８９％などの範囲内の配列同一性を有する。成熟重鎖可変領域重鎖のうち、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義を下回り、例えば、ヒト生殖系列配列と約６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％または８２％、８３％または８４％の配列同一性を有するものもあれば、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義を満たし、ヒト生殖系列配列と約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、またはそれ以上の配列同一性を有するものもある。本明細書に提供されるヒト化抗体の成熟軽鎖可変領域の一部は、ヒト生殖系列配列と約６０％～１００％、約８０％～８４％または８５％～８９％などの範囲内の配列同一性を有する。成熟軽鎖可変領域のうち、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義を下回り、例えば、ヒト生殖系列配列と約８１％、８２％、８３％、または８４％の配列同一性を有するものもあれば、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義を満たし、ヒト生殖系列配列と約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、またはそれ以上の配列同一性を有するものもある。本明細書に提供され、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義で「キメラ」である一部のヒト化抗体は、ヒト生殖系列配列と８５％未満の同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ヒト生殖系列配列と８５％未満の同一性を有する成熟軽鎖可変領域とが対になっている。本明細書に提供される一部のヒト化抗体は、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる定義で「混合」であり、例えば、ヒト生殖系列配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ヒト生殖系列配列と８５％未満の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とが対になっているか、またはその逆である。本明細書に提供される一部のヒト化抗体は、２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる「ヒト化」の定義を満たし、ヒト生殖系列配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する成熟重鎖可変領域と、ヒト生殖系列配列と少なくとも８５％の配列同一性を有する成熟軽鎖可変領域とが対になっている。２０１４年のＷＨＯ ＩＮＮによる「ヒト化」の定義を満たす例示的１８Ｃ５抗体としては、配列番号８５または配列番号８６のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域とが対になっている抗体が挙げられる。

【0233】

ヒト化抗体はマウス抗体由来の６つのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔによって定義されるもの）を全て組み込むことが多いが、マウス抗体由来のＣＤＲが全部に満たない（例えば、ＣＤＲが少なくとも３つ、４つまたは５つである）ヒト化抗体を作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２；Ｖａｊｄｏｓら，Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２０：４１５－４２８，２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９－１０９１，１９９９；Ｔａｍｕｒａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：１４３２－１４４１，２０００）。

【0234】

いくつかの抗体では、ヒト化抗体での結合を保持するためにＣＤＲの一部、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットのみを必要とする。抗原と接触せずＳＤＲにも存在しないＣＤＲ残基は、これまでの研究に基づき、分子モデリングおよび／または経験的に、またはＧｏｎｚａｌｅｓら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３，２００４に記載されている通りに、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７）の外側に存在するＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から識別できる（例えば、ＣＤＲ Ｈ２の残基Ｈ６０～Ｈ６５は多くの場合必要とされない）。このようなヒト化抗体では、１つまたは複数のドナーＣＤＲ残基が存在しない位置またはドナーＣＤＲ全体が除去されている位置で、この位置を占めるアミノ酸は、アクセプター抗体配列での対応する位置（Ｋａｂａｔ番号付けによるもの）を占めるアミノ酸であり得る。ＣＤＲ中に含まれるべきこのようなドナーアミノ酸からアクセプターアミノ酸への置換の数は、相容れない考慮事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減らし、その結果、潜在的免疫原性を低下させるのに有利である可能性がある。しかし、置換によって親和性が変化する可能性もあり、親和性の大幅な低下は回避するのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸は、経験的に選択することもできる。

【0235】

ヒトアクセプター抗体配列は任意選択で、ヒトアクセプター配列の可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間に高い配列同一性（例えば、６５～８５％の同一性）が得られるよう多数の既知のヒト抗体配列のなかから選択できる。

【0236】

１８Ｃ５重鎖のアクセプター配列の例が、ＰＤＢアクセッションコード５ＶＺＹのヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＶＨ（配列番号８３）である。１８Ｃ５軽鎖のアクセプター配列の例が、ＰＤＢアクセッションコード５ＶＺＹのヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＶＬ（配列番号８９）がある。１８Ｃ５軽鎖のアクセプター配列のまた別の例が、ヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０^＊０２（配列番号９０）がある。

【0237】

１つの鎖（軽鎖または重鎖）に２つ以上のヒトアクセプター抗体配列を選択する場合、その鎖にこれらのアクセプターの複合体またはハイブリッドを使用でき、異なるに使用するアミノ酸を使用するいずれかのヒトアクセプター抗体配列から取ることができる。

【0238】

ヒト可変領域フレームワーク残基からの特定のアミノ酸が、ＣＤＲの立体構造および／または抗原への結合に及ぼすそれらの予想される影響に基づき、選択され得る。そのような予想される影響の調査は、モデリング、特定の位置でのアミノ酸の特徴の検討、または特定のアミノ酸の置換または変異誘発の影響の経験的な観察による。

【0239】

例えば、あるアミノ酸がマウス可変領域フレームワーク残基と選択したヒト可変領域フレームワーク残基との間で異なっている場合、ヒトフレームワークのアミノ酸をマウス抗体からの同等のフレームワークのアミノ酸で置換可能であり、その場合、そのアミノ酸は、
（１）直接抗原と非共有結合する；
（２）ＫａｂａｔではなくＣｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲ領域に隣接するか、そのＣＤＲ内にある；
（３）別の方法でＣＤＲ領域（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内にある）、（例えば、相同な既知の免疫グロブリン鎖で明らかになった構造上で軽鎖もしくは重鎖をモデル化することによって同定される）と相互作用する；または
（４）ＶＬ－ＶＨ界面に関与する残基である
ことが合理的に予想される。

【0240】

本発明は、２種類の例示されるヒト化重鎖成熟可変領域（ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１（配列番号８５）およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２（配列番号８６））および２種類の例示されるヒト化軽鎖成熟可変領域（ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１（配列番号９１）およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２（配列番号９２））を含む、ヒト化型のマウス１８Ｃ５抗体を提供する。

【0241】

一実施形態では、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ部位特異的変異誘発［Ｗａｎｇ，Ｗ．およびＭａｌｃｏｌｍ，Ｂ．Ａ．（１９９９）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２６：６８０－６８２）］を用いて複数の変異、欠失、および挿入を導入することが可能な２段階のＰＣＲプロトコルを用いて、ヒト化配列を作製する。

【0242】

Ｑｕｅｅｎの米国特許第５，５３０，１０１号によって定義されるクラス（１）～（３）のフレームワーク残基は、カノニカル残基およびバーニア残基と代わりに呼ばれることがある。ＣＤＲループの立体構造を規定するのに役立つフレームワーク残基は、カノニカル残基と呼ばれることがある（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；ＴｈｏｒｎｔｏｎおよびＭａｒｔｉｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００－８１５（１９９６））。抗原結合ループの立体構造を支え、抗原への抗体の嵌合の微調整に何らかの役割を果たすフレームワーク残基は、バーニア残基と呼ばれることがある（ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２２４：４８７－４９９（１９９２））。

【0243】

置換の候補となる他のフレームワーク残基は、潜在的なグリコシル化部位を形成する残基である。また別の置換の候補は、ヒト免疫グロブリンのその位置には通常みられないアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の同等の位置からのアミノ酸またはより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で置換できる。

【0244】

置換の候補となるその他のフレームワーク残基には、グルタミン（Ｑ）に置き換え得るＮ末端グルタミン酸残基（Ｅ）がある。

【0245】

例示的なヒト化抗体には、Ｈｕ１８Ｃ５と称するヒト化型のマウス１８Ｃ５がある。

【0246】

マウス抗体１８Ｃ５は、配列番号８１および配列番号８７をそれぞれ含むアミノ酸配列を有する、成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域を含む。本発明は、２種類の例示されるヒト化成熟重鎖可変領域、すなわち、ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２を提供する。本発明はさらに、２種類の例示されるヒト成熟軽鎖可変領域、すなわち、ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２を提供する。マウス１８Ｃ５および様々なヒト化抗体の軽鎖可変領域（表６および図４）および重鎖可変領域（表７および図３）のアライメントを示す。

【0247】

ＣＤＲの立体構造および／または抗原への結合に対する予想される影響、重鎖と軽鎖との間の相互作用を仲介すること、定常領域との相互作用、望ましい翻訳後修飾または望ましくない翻訳後修飾の部位であること、ヒト可変領域配列のその位置には通常みられない残基でありしたがって免疫原となる可能性があること、凝集能を獲得すること、および他の理由などのため、実施例７でさらに明記する以下の１８Ｃ５の８個の可変領域フレームワーク位置を、２種類の例示されるヒト成熟軽鎖可変領域および２種類の例示されるヒト成熟重鎖可変領域での置換の候補として考慮した：Ｌ２（Ｉ２Ｖ）、Ｌ４５（Ｑ４５Ｒ）、Ｈ３７（Ｖ３７Ａ）、Ｈ４５（Ｌ４５Ｑ）、Ｈ４７（Ｌ４７Ｗ）、Ｈ４８（Ｖ４８Ｉ）、Ｈ４９（Ａ４９Ｇ）、およびＨ９４（Ｓ９４Ｒ）。

【0248】

別の箇所と同じくここでも、１番目に記載される残基は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたはＣＤＲ－Ｈ１の場合はＣｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ複合体をヒトアクセプターフレームワーク内に移植することによって形成されるヒト化抗体の残基であり、２番目に記載される残基は、そのような残基を置き換えるのに考慮される残基である。したがって、可変領域フレームワーク内では、１番目に記載される残基はヒト残基であり、ＣＤＲ内では、１番目に記載される残基はマウス残基である。

【0249】

このようなヒト化抗体のＣＤＲ領域は、１８Ｃ５マウスドナー抗体のＣＤＲ領域と同一または実質的に同一であり得る。ＣＤＲ領域は、任意の従来の定義、例えば表１に示される定義などによって定義され得るが、ＫａｂａｔまたはＫａｂａｔ＋Ｃｈｏｔｈｉａ複合体によって定義されるのが好ましい。

【0250】

可変領域フレームワークの位置は、特に明記されない限りＫａｂａｔ番号付けに従う。

【0251】

ヒト化１８Ｃ５での追加の変異として考えられるものは、可変領域フレームワーク中の追加の復帰変異である。ヒト化ｍＡｂにおいてＣＤＲと接していないフレームワーク残基の多くは、ドナーマウスｍＡｂまたは他のマウス抗体またはヒト抗体の対応する位置からのアミノ酸の置換を受け入れることができ、多くの潜在的なＣＤＲ接触残基もまた置換に適している。ＣＤＲ内のアミノ酸でさえ、例えば、可変領域フレームワークを供給するのに使用されるヒトアクセプター配列の対応する位置にみられる残基で改変され得る。さらに、代替のヒトアクセプター配列を、例えば重鎖および／または軽鎖に使用できる。異なるアクセプター配列を使用する場合、上で推奨した復帰変異の１つまたは複数は、復帰変異がなくても対応するドナー残基とアクセプター残基が既に同じであることを理由に実施されない。

【0252】

Ｈｕ１８Ｃ５のバリアントの一部の置換または復帰変異（保存的であるかどうかを問わず）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性にも力価にも、つまり、単量体ＴＴＲと結合するその能力に何ら実質的な影響を及ぼさない（例えば、バリアントヒト化１８Ｃ５抗体の本発明の実施例に記載されるアッセイのいくつかまたは全部における力価は、マウスのマウス１８Ｃ５抗体の力価と実質的に同じである、つまり、実験誤差の範囲内にある）。

【0253】

Ｄ．キメラ抗体およびベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体
本発明はさらに、キメラ型およびベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型の非ヒト抗体、具体的には実施例の１８Ｃ５抗体を提供する。

【0254】

キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス抗体）の軽鎖および重鎖の成熟可変領域がヒト抗体の軽鎖定常領域および重鎖定常領域と組み合わされた抗体である。このような抗体は、マウス抗体の結合特異性を実質的にまたは完全に保持しており、約３分の２がヒト配列である。一実施形態では、キメラ１８Ｃ５抗体は、配列番号８１の成熟重鎖可変領域アミノ酸配列、配列番号８７の成熟軽鎖可変領域アミノ酸配列、配列番号１７のヒト重鎖定常領域アミノ酸配列、および配列番号１９のヒト軽鎖定常領域アミノ酸配列を有する。

【0255】

ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体はヒト化抗体の一種であり、いくつかの、通常は全部のＣＤＲおよび非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワーク残基の一部を保持しているが、Ｂ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基、例えば露出残基（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）がヒト抗体配列の対応する位置からの残基に置き換わっている。その結果、抗体はＣＤＲが完全にまたは実質的に非ヒト抗体由来であり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によってさらにヒト抗体様にされる。本発明にはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）型の１８Ｃ５抗体が含まれる。

【0256】

Ｅ．ヒト抗体
以下に記載する様々な技術によって、単量体ＴＴＲまたはそのフラグメント（例えば、ＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９（配列番号３０））に対するヒト抗体が得られる。いくつかのヒト抗体は、特定のマウス抗体、例えば実施例に記載されるマウスモノクローナル抗体の１つなどと同じエピトープ特異性を有するように、上記の競合結合実験により、Ｗｉｎｔｅｒのファージディスプレイ法により選択される。ヒト抗体はまた、ＴＴＲのフラグメント、例えばＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９のみを含むＴＴＲバリアントなどのみを標的抗原として使用することによって、および／またはＴＴＲバリアントの収集物、例えばＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９内に様々な変異を有するＴＴＲバリアントなどに対する抗体をスクリーニングすることによって、特定のエピトープ特異性に関してスクリーニングされ得る。

【0257】

ヒト抗体を作製する方法としては、Ｏｅｓｔｂｅｒｇら，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：３６１－３６７（１９８３）；Ｏｅｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，６６４号；およびＥｎｇｌｅｍａｎら，米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら，国際公開第９３／１２２２７号（１９９３）；米国特許第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；同第５，８１４，３１８号；同第５，７８９，６５０号；同第５，７７０，４２９号；同第５，６６１，０１６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，５４５，８０６号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；およびＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，国際公開第９１／１０７４１号（１９９１）を参照されたい）ならびにファージディスプレイ法（例えば、Ｄｏｗｅｒら，国際公開第９１／１７２７１号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，国際公開第９２／０１０４７号；米国特許第５，８７７，２１８号；同第５，８７１，９０７号；同第５，８５８，６５７号；同第５，８３７，２４２号；同第５，７３３，７４３号；および同第５，５６５，３３２号を参照されたい）が挙げられる。

【0258】

Ｆ．定常領域の選択
キメラ抗体、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体またはヒト化抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部分に連結できる。定常領域の選択は部分的に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用および／または補体依存性細胞傷害を所望するかどうかに左右される。例えば、ヒトアイソタイプのＩｇＧ１およびＩｇＧ３には補体依存性細胞傷害性があり、ヒトアイソタイプのＩｇＧ２およびＩｇＧ４にはない。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２およびＩｇＧ４よりも強力な細胞仲介性エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域はラムダまたはカッパであり得る。定常領域の番号付けの慣例としては、ＥＵ番号付け（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９））、Ｋａｂａｔ番号付け（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、１９９１）、ＩＭＧＴ固有番号付け（Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．－Ｐ．ら，ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｃ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，１８５－２０３（２００５）、およびＩＭＧＴエクソン番号付け（Ｌｅｆｒａｎｃ、上記）が挙げられる。

【0259】

軽鎖および／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端で１つまたは複数のアミノ酸、例えば重鎖のＣ末端リジンは、分子の一部または全部で欠損しているか、誘導体化されていてよい。定常領域に置換を施して、補体仲介性細胞傷害性またはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低下または増大させたり（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら，米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら，米国特許第５，８３４，５９７号；およびＬａｚａｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６を参照されたい）、ヒトでの半減期を長くしたり（例えば、Ｈｉｎｔｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）してもよい。例示的な置換としては、抗体の半減期を増大させるための２５０位のＧｌｎおよび／または４２８位のＬｅｕ（この段落では定常領域にＥＵ番号付けを用いる）が挙げられる。２３４位、２３５位、２３６位および／または２３７位のいずれかまたは全部での置換は、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性を低下させる（例えば、米国特許第６，６２４，８２１号を参照されたい）。エフェクター機能を低下させるために、ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位、および２３７位のアラニン置換を用いることができる。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低下させるために、ヒトＩｇＧ１の２３４位、２３５位および２３７位にアラニン置換を有する。任意選択で、ヒトＩｇＧ２の２３４位、２３６位および／または２３７位をアラニンで置換し、２３５位をグルタミンで置換する（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号を参照されたい）。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる２４１位、２６４位、２６５位、２７０位、２９６位、２９７位、３２２位、３２９位、および３３１位の１つまたは複数の位置での変異を用いる。いくつかの抗体では、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けによる３１８位、３２０位、および３２２位の１つまたは複数の位置での変異を用いる。いくつかの抗体では、２３４位および／または２３５位をアラニンで置換し、かつ／または３２９位をグリシンで置換する。いくつかの抗体では、配列番号２７でのように、２３４位および２３５位をアラニンで置換する。いくつかの抗体では、アイソタイプはヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４である。

【0260】

例示的ヒト軽鎖カッパ定常領域は、配列番号２４のアミノ酸配列を有する。配列番号２４のＮ末端アルギニンが除去されていてもよく、その場合、軽鎖カッパ定常領域は配列番号２５のアミノ酸配列を有する。例示的ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する（Ｃ末端リジンの有無を問わず）。抗体は、２つの軽鎖と２つの重鎖とが含まれる四量体として、分離した重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖と軽鎖の成熟可変ドメインがスペーサーを介して連結される一本鎖抗体として発現させてもよい。

【0261】

ヒト定常領域は個体間でアロタイプ変異およびイソアロタイプ変異を示し、つまり、定常領域は１つまたは複数の多型位置で個体によって異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つまたは複数の他のアイソタイプの非多型領域と結合するという点でアロタイプとは異なる。したがって、例えば、別の重鎖定常領域はＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３アロタイプのものであり、配列番号２２のアミノ酸配列を有する。ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３アロタイプの別の重鎖定常領域は、配列番号２３のアミノ酸配列を有する（Ｃ末端リジンの有無を問わず）。ヒト定常領域への言及は、任意の天然のアロタイプまたは天然のアロタイプでの位置を占める残基の任意の順列を含む。

【0262】

Ｇ．組換え抗体の発現
抗体発現細胞系（例えば、ハイブリドーマ）を用いてキメラ抗体およびヒト化抗体を作製する方法が多数知られている。例えば、周知の方法を用いて抗体の免疫グロブリン可変領域をクローン化し配列を決定できる。１つの方法では、ハイブリドーマ細胞から調製したｍＲＮＡを用いるＲＴ－ＰＣＲにより重鎖可変ＶＨ領域をクローン化する。翻訳開始コドンを含むＶＨ領域リーダーペプチドに対しては、５’プライマーおよびｇ２ｂ定常領域特異的３’プライマーとしてコンセンサスプライマーを用いる。例示的なプライマーはＳｃｈｅｎｋによる米国特許公開第２００５／０００９１５０号（以下「Ｓｃｈｅｎｋ」）に記載されている。別個に得た複数のクローンの配列を比較して、増幅の際に変化が導入されないことを確実にできる。ＶＨ領域の配列はまた、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法および３’ｇ２ｂ特異的プライマーによって得られるＶＨフラグメントの配列のシーケンシングによって、決定または確認することができる。

【0263】

軽鎖可変ＶＬ領域は同じようにクローン化できる。１つの方法では、翻訳開始コドンを含むＶＬ領域にハイブリダイズするよう設計した５’プライマーおよびＶ－Ｊ連結領域下流のＣｋ領域に特異的な３’プライマーを用いるＶＬ領域の増幅のために、コンセンサスプライマーセットを設計する。第二の方法では、５’ＲＡＣＥ ＲＴ－ＰＣＲ法を用いてＶＬをコードするｃＤＮＡをクローン化する。例示的なプライマーは上記のＳｃｈｅｎｋに記載されている。次いで、クローン化した配列を、ヒト（またヒト以外の種）の定常領域をコードする配列と組み合わせる。ヒト定常領域をコードする例示的な配列としては、ヒトＩｇＧ１定常領域をコードする配列番号３２、ならびにヒトカッパ軽鎖定常領域をコードする配列番号３３および３４が挙げられる。

【0264】

１つの方法では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれのＶＤＪ連結部またはＶＪ連結部の下流にスプライスドナー配列をコードするよう再設計し、哺乳動物発現ベクター中に、例えば重鎖はｐＣＭＶ－ｈγ１中に、軽鎖はｐＣＭＶ－Ｍｃｌ中にクローン化する。これらのベクターは、挿入した可変領域カセットの下流のエキソンフラグメントとしてヒトγ１およびＣｋ定常領域をコードする。配列を検証した後、重鎖および軽鎖の発現ベクターをＣＨＯ細胞中に共トランスフェクトしてキメラ抗体を産生させることができる。トランスフェクションから４８時間後に馴化培地を収集し、ウエスタンブロット解析により抗体産生に関してアッセイするか、ＥＬＩＳＡにより抗原結合に関してアッセイする。キメラ抗体は上記のようにヒト化される。

【0265】

キメラ抗体、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体は通常、組換え発現によって生産される。組換えポリヌクレオチド構築物は通常、プロモーターなどの天然と結合している発現制御エレメントまたは異種の発現制御エレメントを含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。発現制御配列は、真核宿主細胞または原核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトできるベクター中のプロモーター系であり得る。ベクターをしかるべき宿主内に組み込んだ後、ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応抗体の収集および精製に適した条件下で宿主を維持する。

【0266】

上記の発現ベクターは通常、エピソームとしてまたは宿主染色体ＤＮＡと一体になった部分として宿主生物体内で複製できる。発現ベクターは通常、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞を検出できるように、選択マーカー、例えばアンピシリン耐性またはヒグロマイシン耐性を含む。

【0267】

大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、抗体、特に抗体フラグメントの発現に有用な原核宿主の１つである。酵母などの微生物も発現に有用である。サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）は、所望に応じて発現制御配列、複製起点、終止配列などを有する適切なベクターを持つ酵母宿主の１つである。典型的なプロモーターとしては、３－ホスホグリセリン酸キナーゼをはじめとする糖分解酵素が挙げられる。誘導性の酵母プロモーターとしてはとりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロームＣ、ならびにマルトースおよびガラクトースの利用を担う酵素に由来するプロモーターが挙げられる。

【0268】

免疫グロブリンまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチドの発現に、哺乳動物細胞を用いることができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。インタクトの異種タンパク質を分泌できる適切な宿主細胞系が多数開発されており、ＣＨＯ細胞系、様々なＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞ならびに、Ｓｐ２／０およびＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫を含む。細胞は非ヒト細胞であってよい。これらの細胞に用いる発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Ｑｕｅｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））ならびに、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報部位を含み得る。発現制御配列は、内在遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターを含み得る。Ｃｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。

【0269】

あるいは、抗体コード配列を導入遺伝子に組み込んで、トランスジェニック動物のゲノム内に導入した後トランスジェニック動物の乳の中に発現させてもよい（例えば、米国特許第５，７４１，９５７号；米国特許第５，３０４，４８９号；および米国特許第５，８４９，９９２号を参照されたい）。適切な導入遺伝子としては、カゼインまたはベータラクトグロブリンなどの乳腺特異的遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結された、軽鎖および／または重鎖のコード配列が挙げられる。

【0270】

目的とするＤＮＡセグメントを含むベクターは、細胞宿主の種類に応じた方法により宿主細胞に導入できる。例えば、原核細胞には塩化カルシウムトランスフェクションがよく用いられ、他の細胞宿主にはリン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、遺伝子銃、またはウイルスベースのトランスフェクションを用いることができる。哺乳動物細胞の形質転換に用いられる方法としては、ポリブレンの使用、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェクションが挙げられる。トランスジェニック動物の作製には、導入遺伝子をマイクロインジェクションにより受精卵母細胞内に注入するか胚性幹細胞のゲノム内に組み込み、そのような細胞の核を除核卵母細胞内に移入できる。

【0271】

抗体の重鎖および軽鎖をコードするベクター（１つまたは複数）を細胞培養物中に導入した後、細胞プールを無血清培地中で増殖力および産物の品質についてスクリーニングできる。次いで、最も産生量の多い細胞プールをＦＡＣＳベースの単一細胞クローン化に供して、モノクローナル系を作製できる。培地１Ｌ当たり７．５ｇ超に相当する、１日当たり５０ｐｇ／細胞または１００ｐｇ／細胞超の具体的な産生量を用いることができる。単一細胞クローンにより産生される抗体を濁度、ろ過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ－ＳＥＣ、炭水化物－オリゴ糖マッピング、質量分析ならびに、ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅなどの結合アッセイについて試験できる。次いで、選択したクローンを複数のバイアルに貯蔵しのちの使用のために凍結保存する。

【0272】

発現後、抗体をプロテインＡ捕捉、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該技術分野の標準的方法に従って精製できる（全般的には、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照されたい）。

【0273】

コドン最適化、プロモーターの選択、転写エレメントの選択、ターミネーターの選択、無血清単一細胞クローン化、細胞バンキング、コピー数増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、またはタンパク質力価の向上を含む、抗体の商業的生産の方法論を用いることができる（例えば、米国特許第５，７８６，４６４号；同第６，１１４，１４８号；同第６，０６３，５９８号；同第７，５６９，３３９号；国際公開第２００４／０５０８８４号；同第２００８／０１２１４２号；同第２００８／０１２１４２号；同第２００５／０１９４４２号；同第２００８／１０７３８８号；同第Ｗ０２００９／０２７４７１号；および米国特許第５，８８８，８０９号を参照されたい）。

【0274】

ＩＶ．活性な免疫源
本発明はまた、対象においてトランスサイレチン介在性のアミロイドーシスを治療する、またはその予防を実施するための方法であって、ＴＴＲに対する抗体を含む免疫応答を誘導する薬剤を投与することを含む、方法を提供する。薬剤は、それ自体で、かつ／または担体に連結されるとき、かつ／またはアジュバントの存在下で、抗体を誘導し得る。能動的免疫感作のために使用されるこのような薬剤は、受動免疫に関連して上に記載したものと同じタイプの抗体を患者において誘導する役割を果たす。いくつかのこのような方法は、抗体１８Ｃ５が特異的に結合するエピトープを含む免疫原を、ＴＴＲに対する抗体を生じさせるのに効果的なレジメンで対象に投与することを含む。いくつかの方法では、免疫原は、抗体１８Ｃ５が特異的に結合するＴＴＲの最大２０個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基８９～１２７由来の最大２０個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基１００～１１０由来の最大１１個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、免疫原は、ＴＴＲの残基１０１～１０９由来の最大９個の連続するアミノ酸からなるＴＴＲペプチドを含む。いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基８９～１２７由来の４～１１個の連続するアミノ酸からなる。いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基１００～１１０由来の４～１１個の連続するアミノ酸からなる。いくつかの方法では、ＴＴＲペプチドエピトープは、ＴＴＲの残基１０１～１０９由来の４～９個の連続するアミノ酸からなる。免疫原として使用されるいくつかのＴＴＲペプチドは、Ｔ細胞エピトープを欠く。このようなペプチドは、異種担体に連結されてＴ細胞エピトープを補う。

【0275】

１８Ｃ５と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体を誘導するために、これらの抗体のエピトープ特異性をマッピングできる（例えば、ＴＴＲにわたる一連の重複するペプチドへの結合を試験することによって）。そのエピトープからなる、またはこれを含む、またはこれと重複するＴＴＲのフラグメントを次いで、免疫原として使用できる。

【0276】

任意選択で、ＴＴＲペプチドを異種担体に連結し、かつ／またはアジュバントと組み合わせて投与して、抗体の誘発を促進する。異種担体およびアジュバントは、使用される場合、モノクローナル抗体の作製に使用されるのと同じものであってよいが、医薬品としてヒトでの使用にさらに適するよう選択されてもよい。適切な担体としては、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイドまたは他の病原菌、例えばジフテリア（例えば、ＣＲＭ１９７）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、コレラ菌、もしくはピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）などに由来するトキソイド、あるいは弱毒化毒素誘導体が挙げられる。Ｔ細胞エピトープも適切な担体分子である。免疫刺激性ポリマー分子（例えば、トリパルミトイル－Ｓ－グリセリンシステイン（Ｐａｍ_３Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）、またはグルカン（ａβ１→２ポリマー））、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１アルファおよびβペプチド、ＩＬ－２、γ－ＩＮＦ、ＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦ）、ならびにケモカイン（例えば、ＭＩＰ１－αおよびβ、ならびにＲＡＮＴＥＳ）へ本発明の薬剤を連結することによって、いくつかのコンジュゲートを形成できる。スペーサーアミノ酸（例えば、ｇｌｙ－ｇｌｙ）を用いて、または用いずに免疫原を担体に連結し得る。ほかの担体としては、ウイルス様粒子が挙げられる。偽ビリオンまたはウイルス由来粒子とも呼ばれるウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、ｉｎ ｖｉｖｏで輪郭が明確な球対称のＶＬＰへと自己集合できるウイルスカプシドおよび／またはエンベロープタンパク質の複数のコピーからなるサブユニット構造を示す（Ｐｏｗｉｌｌｅｉｔら，（２００７）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２（５）：ｅ４１５）。あるいは、ペプチド免疫原を、汎用ＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）などの大部分のＭＨＣクラスＩＩ分子を結合できる少なくとも１つの人工Ｔ細胞エピトープに連結してもよい。ＰＡＤＲＥは、米国特許第５，７３６，１４２号、国際公開第９５／０７７０７号、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：７５１－７６１（１９９４）に記載されている。活性な免疫原は、免疫原の複数コピーおよび／またはその担体が単一の共有結合分子として提示される多量体形態で提示できる。

【0277】

フラグメントを多くの場合、薬学的に許容されるアジュバントとともに投与する。アジュバントは、ペプチドが単独で使用された場合と比較して誘導される抗体の力価および／または誘導される抗体の結合親和性を増大させる。様々なアジュバントをＴＴＲの免疫原性フラグメントと組み合わせて使用して、免疫応答を誘発できる。好ましいアジュバントは、応答の質的形態に影響を及ぼす免疫原の立体構造を変化させることなく、免疫原に対する内因性の応答を増強する。好ましいアジュバントとしては、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩、３Ｄｅ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））（英国特許第２２２０２１１号（ＲＩＢＩ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社、ハミルトン、モンタナ州、現在Ｃｏｒｉｘａ社の一部）を参照されたい）が挙げられる。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ－２１は、南米にみられるキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンである（ｓｅｅ Ｋｅｎｓｉｌら，Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）；米国特許第５，０５７，５４０号を参照されたい）、（Ａｑｕｉｌａ ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、フレーミングハム、マサチューセッツ州；現在Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ社、ニューヨーク、ニューヨーク州）。他のアジュバントは、任意選択でモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１（１９９７）を参照されたい）、プルロニックポリマーおよび死菌マイコバクテリアなどの免疫刺激剤と組み合わせた、水中油型乳剤（スクアレンまたはラッカセイ油など）免疫刺激剤である。Ｒｉｂｉアジュバントは水中油型乳剤である。Ｒｉｂｉは、Ｔｗｅｅｎ ８０を含有する生理食塩水で乳化した代謝可能な油（スクアレン）を含む。Ｒｉｂｉはまた、免疫刺激剤として作用する精製マイコバクテリア産物および細菌モノホスホリルリピドＡを含む。別のアジュバントはＣｐＧ（国際公開第９８／４０１００号）である。アジュバントは、治療用組成物の成分として活性薬剤とともに投与されるか、治療剤の投与とは別に、治療剤の投与前に、治療剤の投与と同時に、または治療剤の投与後に投与されてよい。

【0278】

ＴＴＲに対する抗体を誘導するＴＴＲの天然のフラグメントの類似体を使用してもよい。例えば、このようなペプチド中の１つもしくは複数の、またはすべてのＬアミノ酸をＤアミノ酸で置換できる。アミノ酸の順序を逆にしてもよい（レトロペプチド）。任意選択で、ペプチドは、すべてのＤアミノ酸を逆の順序で含む（レトロ－インバースペプチド）。必ずしもＴＴＲペプチドとの顕著なアミノ酸配列類似性を有するわけではないペプチドおよび他の化合物は、それでもＴＴＲペプチドの模倣体としての役割を果たし、同じような免疫応答を誘導する。上記のＴＴＲに対するモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体を使用してもよい。このような抗Ｉｄ抗体は、抗原を模倣し、それに対する免疫応答を生じる（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｉｔ編，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ ６ｔｈ ｅｄ．，ｐ．１８１を参照されたい）。

【0279】

ペプチドをコードする核酸の形態でペプチド（および任意選択で、ペプチドに融合された担体）を投与し、患者においてｉｎ ｓｉｔｕで発現させてもよい。免疫原をコードする核酸セグメントは通常、調節エレメント、例えば患者の目的とする標的細胞でＤＮＡセグメントを発現させるプロモーターおよびエンハンサーなどに連結される。免疫応答の誘導に望ましい血液細胞での発現には、軽鎖もしくは重鎖免疫グロブリン遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーエレメント、またはＣＭＶ主要中間初期プロモーターおよびエンハンサーが発現を指令するのに適している。連結された調節エレメントとコード配列を多くの場合、ベクター中にクローン化する。抗体を、抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸の形態で投与してもよい。重鎖および軽鎖がともに存在する場合、鎖を一本鎖抗体として連結するのが好ましい。受動的投与のための抗体を例えば、ペプチド免疫原で処置した患者の血清からアフィニティークロマトグラフィーにより調製してもよい。

【0280】

ＤＮＡを、ネイキッド形態で（すなわち、コロイド物質も封入物質も用いずに）送達できる。あるいは、レトロウイルス系（例えば、ＬａｗｒｉｅおよびＴｕｍｉｎ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３，１０２－１０９（１９９３）を参照されたい）；アデノウイルスベクター（例えば、Ｂｅｔｔら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，５９１１（１９９３）を参照されたい）；アデノ随伴ウイルスベクター（例えば、Ｚｈｏｕら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９，１８６７（１９９４）を参照されたい）、ワクシニアウイルスおよびトリポックスウイルスを含むポックス科のウイルスベクター、アルファウイルス属のウイルスベクター、例えば、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウイルス（例えば、Ｄｕｂｅｎｓｋｙら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０，５０８－５１９（１９９６）を参照されたい）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（米国特許第５，６４３，５７６号を参照されたい）およびラブドウイルス、例えば水疱性口内炎ウイルス（国際公開第９６／３４６２５号を参照されたい）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６，３２５－３３３（１９９５）；Ｗｏｏら，国際公開第９４／１２６２９号ならびにＸｉａｏおよびＢｒａｎｄｓｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４，２６３０－２６２２（１９９６））などに由来するものなどを含む多数のウイルスベクター系を使用できる。

【0281】

免疫原をコードするＤＮＡまたは免疫原を含むベクターを、リポソーム中にパッケージングできる。適切な脂質および関連する類似体は、米国特許第５，２０８，０３６号、同第５，２６４，６１８号、同第５，２７９，８３３号および同第５，２８３，１８５号によって記載されている。免疫原をコードするベクターおよびＤＮＡを微粒子担体に吸着または結合させてもよく、このような担体の例としては、ポリメチルメタクリラートポリマーおよびポリラクチドおよびポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）が挙げられる（例えば、ＭｃＧｅｅら，Ｊ．Ｍｉｃｒｏ Ｅｎｃａｐ．１９９６を参照されたい）。

【0282】

Ｈ．抗体スクリーニングアッセイ
抗体に結合アッセイ、機能スクリーニング、ＴＴＲ沈着物による疾患の動物モデルを用いるスクリーニング、および診療試験を含むいくつかのスクリーニングを実施できる。結合アッセイでは、単量体ＴＴＲまたはそのフラグメントに対する特異的結合ならびに、任意選択で親和性およびエピトープ特異性を試験する。例えば、結合アッセイによって、天然のＴＴＲ四量体では埋没しており単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲでは露出しているエピトープである、アミノ酸残基１０１～１０９と結合する抗体をスクリーニングできる。同様にして、このような結合特異性を有する抗体を誘導する能力について活性な免疫原をスクリーニングできる。この場合、活性な免疫原を用いて実験動物を免疫感作し、得られた血清について、結合特異性が適切なものであるかどうかを試験する。抗体はまた、天然のＴＴＲの立体構造ではなく前原線維性の非天然の立体構造のＴＴＲおよびＴＴＲアミロイド原線維を結合する能力についてスクリーニングされる。例えば、抗体は、実施例その他に記載されるように、天然の四量体ＴＴＲの解離または脱凝集によって生じる単量体型ＴＴＲと結合する能力についてスクリーニングされ、かつ天然の四量体ＴＴＲに対してカウンタースクリーニングされる。同じように、抗体はまた、健常組織に対してではなくＴＴＲ媒介性アミロイドーシス組織に対するそれらの免疫反応性についてスクリーニングされる。このようなスクリーニングは場合によっては、１８Ｃ５またはＩｇＧ１カッパアイソタイプの可変領域を有する抗体などの例示的抗体と競合して実施する。このようなアッセイでは、任意選択で抗体またはＴＴＲ標的を固定化する。

【0283】

機能アッセイは、天然にＴＴＲを発現する細胞またはＴＴＲもしくはそのフラグメントをコードするＤＮＡをトランスフェクトした細胞を含む細胞モデルで実施できる。適切な細胞としては、ＴＴＲアミロイド形成が認められる心組織または他の組織に由来する細胞が挙げられる。細胞は、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのレベル低下について（例えば、細胞の抽出物または上清のウエスタンブロッティングまたは免疫沈降によって）または単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲに起因する毒性低下に関してスクリーニングされる。例えば、抗体は、ＴＴＲの凝集を阻害もしくは軽減する能力、ＴＴＲ原線維形成を阻害もしくは軽減する能力、ＴＴＲ沈着物を減少させる能力、凝集したＴＴＲを除去する能力、またはＴＴＲの非毒性立体構造を安定化する能力について試験される。

【0284】

その他の機能アッセイを溶液中で実施でき、例えば、溶液中の単量体ＴＴＲまたはミスフォールドＴＴＲ中間体を抗体と接触させたとき、抗体がＴＴＲ原線維形成を妨害または軽減することができるかどうかなどを試験できる。原線維の形成度は、例えば、温度制御ユニットを備えた紫外可視光分光光度計で４００ｎｍでの濁度測定によって調べることができる。チオフラビンＴもまた、アミロイド原線維の形成度の評価に用いることができる。例えば、５倍モル過剰のチオフラビンＴをＴＴＲ試料に加え、室温で３０分間放置した後、測定を実施できる。チオフラビンＴの蛍光は蛍光光度計を用いてモニターできる。米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４号を参照されたい。

【0285】

動物モデルを用いるスクリーニングでは、ＴＴＲまたはＴＴＲ沈着物の蓄積に関連するヒト疾患を模倣する動物モデルにおける徴候または症状を治療または予防する抗体または活性な免疫原の能力を試験する。このような疾患としては、野生型ＡＴＴＲアミロイドーシス（老人性全身性アミロイドーシス、ＳＳＡとも呼ばれる）、老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）、家族性アミロイドニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、および中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）などの各種ＴＴＲアミロイドーシスが挙げられる。モニターし得る適切な徴候または症状としては、消化管または心臓などの様々な組織でのアミロイド沈着物の存在および程度が挙げられる。活性な免疫原を血清中での抗体の誘導について試験してもよい。活性な免疫原アミロイド沈着物の減少度は、しかるべき対照、例えば対照抗体（例えば、アイソタイプが一致する対照抗体）もしくは対照免疫原、プラセボを投与した対照動物、または治療を一切実施していない対照動物中のＴＴＲアミロイド沈着物のレベルなどとの比較によって求めることができる。ＴＴＲアミロイドーシスに対する活性を試験するための例示的動物モデルは、内在性マウスＴｔｒ遺伝子座でのヌル変異と、家族性アミロイド性多発性ニューロパチーと関連するＶ３０Ｍ変異を含むヒト変異型ＴＴＲ遺伝子とを有するマウスモデルである。例えば、Ｋｏｈｎｏら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０（４）：１４９７－１５０８（１９９７）；ＣａｒｄｏｓｏおよびＳａｒａｉｖａ，ＦＡＳＥＢ Ｊ ２０（２）：２３４－２３９（２００６）を参照されたい。同様のモデルも存在し、家族性のＴＴＲアミロイドーシスの他のモデルおよび孤発性のＴＴＲアミロイドーシスのモデルがこれに含まれる。例えば、Ｔｅｎｇら，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８１（３）：３８５－３９６（２００１）；Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｐｐ．２６１－２８０のＩｔｏおよびＭａｅｄａ，Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ Ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ（２００９）（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。トランスジェニック動物は、ヒトＴＴＲ導入遺伝子、例えばＴＴＲアミロイドーシスに関連する変異を有するＴＴＲ導入遺伝子または野生型ＴＴＲ導入遺伝子などを含み得る。動物モデルでの試験を容易にするため、動物モデルに適した定常領域を有するキメラ抗体を使用できる（例えば、ラットでの抗体の試験にはマウス－ラットキメラを使用し得る）。あるヒト化型の抗体は、対応するマウス抗体またはキメラ抗体がしかるべき動物モデルで効果的であり、かつそのヒト化抗体が同程度の結合親和性（例えば、１．５倍、２倍または３倍などの実験誤差の範囲内で）を有する場合、効果的であると結論付けることができる。

【0286】

臨床試験では、ＴＴＲアミロイドーシスに関連する疾患を有するヒトを対象に安全性および有効性を試験する。

【0287】

Ｉ．核酸
本発明はさらに、上記の重鎖および軽鎖のいずれかをコードする核酸（例えば、配列番号２、４、１８および２０）を提供する。このような核酸は任意選択で、シグナルペプチドをさらにコードし、定常領域に連結されたシグナルペプチド（例えば、配列番号３６（重鎖）および３８（軽鎖）によってそれぞれコードされ得る配列番号３５（重鎖）および配列番号３７（軽鎖）のアミノ酸配列を有するシグナルペプチド）とともに発現させることができる。コード配列を確実に発現させるため、核酸のコード配列はプロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終止シグナルなどの制御配列と作動可能に連結され得る。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、分離形態で存在しても、１つまたは複数のベクター中にクローン化されていてもよい。核酸は、例えば固相合成または重複するオリゴヌクレオチドのＰＣＲによって合成できる。重鎖と軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で、１つの連続する核酸として連結されていてもよく、または例えばそれぞれの発現ベクター中にクローン化されて、分離していてもよい。

【0288】

Ｊ．コンジュゲート抗体
病原性形態のＴＴＲでは露出しているが天然の四量体形態のＴＴＲでは露出していない抗原、例えばＴＴＲのアミノ酸残基１０１～１０９（配列番号３０）と特異的に結合するコンジュゲート抗体は、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のＴＴＲの有無の検出；ＴＴＲアミロイドーシスと診断された患者の治療に使用される治療剤の有効性のモニタリングおよび評価；ＴＴＲの凝集の阻害もしくは軽減；ＴＴＲ原線維形成の阻害もしくは軽減；ＴＴＲ沈着物の減少もしくは除去；ＴＴＲの非毒性立体構造の安定化；または患者のＴＴＲアミロイドーシスの治療もしくは予防に有用である。例えば、このような抗体は別の治療部分、別のタンパク質、別の抗体、および／または検出可能な標識とコンジュゲートできる。国際公開第０３／０５７８３８号；米国特許第８，４５５，６２２号を参照されたい。

【0289】

コンジュゲートされる治療部分は、患者の望ましくない病態または疾患、例えばＴＴＲアミロイドーシスを治療、対処、寛解、予防、または改善するために使用し得る任意の薬剤であり得る。治療部分としては、例えば、抗体の活性を促進または増強する免疫調節物質または任意の生物学的に活性な薬剤が挙げられる。免疫調節物質は、免疫応答の発現または維持を刺激または抑制する任意の薬剤であり得る。このような治療部分を単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲに特異的な抗体、例えば本明細書に記載される抗体にカップリングすると、カップリングされた治療部分は、非天然の病原性形態のＴＴＲに対して天然の四量体形態のＴＴＲを上回る特異的親和性を有するようになる。このため、コンジュゲート抗体の投与は病原性形態のＴＴＲを含む組織を直接標的とし、周囲の正常な健常組織への損傷は最小限である。これは、毒性が強すぎてそのものを投与できない治療部分に関して特に有用である。さらに、より少量の治療部分を使用できる。

【0290】

適切な治療部分の例としては、ＴＴＲレベルを低下させる薬物、ＴＴＲの天然の四量体構造を安定化させる薬物、ＴＴＲの凝集を阻害する薬物、ＴＴＲ原線維もしくはＴＴＲアミロイドの形成を妨害する薬物、または細胞毒性を打ち消す薬物が挙げられる。例えば、ＡｌｍｅｉｄａおよびＳａｒａｉｖａ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６：２８９１－２８９６（２０１２）；Ｓａｒａｉｖａ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４９８：２０１－２０３（２００１）；Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）；Ｒｕｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂｅｒｋ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １２６：１２８６－１３００（２０１２）；Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２１（２－３）：１８５－２０３（２０１２，ＵｅｄａおよびＡｎｄｏ，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ３：１９（２０１４）ならびにＨａｗｋｉｎｓら，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４７：６２５－６３８（２０１５））を参照されたい。例えば、抗体をタファミジス，ジフルニサル，ＡＬＮ－ＴＴＲ０１、ＡＬＮＴＴＲ０２、ＩＯＮＩＳ ＴＴＲＲｘ（イノテルセン）などのアンチセンスオリゴヌクレオチド、パチシランもしくはレブシランなどのｓｉＲＮＡ、ドキシサイクリン（ｄｏｘｙ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、Ｄｏｘｙ－ＴＵＤＣＡ、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、４’－ヨード－４’－デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、エピガロカテキンガラート（ＥＧＣＧ）、クルクミン、レスベラトロール（３，５，４’－トリヒドロキシスチルベン）、または血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）に対する抗体にコンジュゲートできる。他の代表的な治療部分としては、ＴＴＲアミロイドーシスまたはＴＴＲアミロイドーシスの症状の治療、管理、または寛解に有用であることが知られている他の薬剤が挙げられる。例えば、よくみられるＴＴＲアミロイドーシスの臨床症状およびその症状の治療に使用される典型的な薬剤については、Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。

【0291】

抗体はまた、他のタンパク質とカップリングできる。例えば、抗体はフィノマーとカップリングできる。フィノマーは、ヒトＦｙｎ ＳＨ３ドメインに由来する小さい結合タンパク質（例えば、７ｋＤａ）である。それらは安定かつ可溶性であり、システイン残基およびジスルフィド結合を欠くこともある。フィノマーは、抗体と同じ親和性および特異性で標的分子と結合するよう設計できる。フィノマーは、抗体をベースとする多特異性融合タンパク質の作製に適している。例えば、フィノマーを抗体のＮ末端および／またはＣ末端に融合して、異なる構造を有する二特異性ＦｙｎｏｍＡｂおよび三特異性ＦｙｎｏｍＡｂを作製できる。最適な特性を有するフィノマーを効率的に選択できるＦＡＣＳ、Ｂｉａｃｏｒｅ、および細胞ベースのアッセイを用いるスクリーニング技術によりフィノマーライブラリーを用いて、フィノマーを選択できる。フィノマーの例は、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６－３２０４（２００７）；Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２０：５７－６８（２００７）；Ｓｃｈｌａｔｔｅｒら，ＭＡｂｓ．４：４９７－５０８（２０１１）；Ｂａｎｎｅｒら，Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６９（Ｐｔ６）：１１２４－１１３７（２０１３）；およびＢｒａｃｋら，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．１３：２０３０－２０３９（２０１４）に開示されている。

【0292】

本明細書に開示される抗体はまた、１つまたは複数の他の抗体にカップリングまたはコンジュゲートできる（それにより例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを作製する）。そのような他の抗体は、ＴＴＲもしくはその一部分の中の異なるエピトープと結合するか、異なる標的抗原と結合できる。１８Ｃ５のものとは異なるＴＴＲエピトープと結合するこのような抗ＴＴＲ抗体としては、表３の抗体が挙げられる。

【0293】

抗体はまた、検出可能な標識とカップリングできる。このような抗体は、例えば、ＴＴＲアミロイドーシスの診断、ＴＴＲアミロイドーシスの進行のモニタリング、および／または治療効果の評価に用いることができる。このような抗体は、ＴＴＲアミロイドーシスに罹患しているか罹患しやすい対象中で、またはそのような対象から採取したしかるべき生体試料で上記のような決定を実施するのに特に有用である。本明細書に開示される抗体にカップリングまたは連結し得る代表的な検出可能な標識としては、様々な酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β‐ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ；ストレプトアビジン、アビジン、またはビオチンなどの補欠分子族；蛍光物質、例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリン；ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンなどの発光物質；放射性物質、例えばイットリウム^９０（９０Ｙ）、放射性銀－１１１、放射性銀－１９９、ビスマス^２１３、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５Ｉｎ、^１１３Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ）、テクネチウム（^９９Ｔｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、^１５３Ｓｍ、^１７７Ｌｕ、^１５９Ｇｄ、^１４９Ｐｍ、^１４０Ｌａ、^１７５Ｙｂ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^４７Ｓｃ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１４２Ｐｒ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^６８Ｇｅ、^５７Ｃｏ、^６５Ｚｎ、^８５Ｓｒ、^３２Ｐ、^１５３Ｇｄ、^１６９Ｙｂ、^５１Ｃｒ、^５４Ｍｎ、^７５Ｓｅ、^１１３Ｓｎ、および^１１７Ｔｉｎ；様々な陽電子放射断層撮影法を用いる陽電子放出金属；非放射性常磁性金属イオン；ならびに放射標識した分子または特定の放射性同位元素にコンジュゲートした分子が挙げられる。本明細書に開示される抗体にカップリングまたは連結し得る代表的な検出可能な標識としては、電気化学発光標識、例えばＭＳＤ ＧＯＬＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ ＨＳ－Ｅｓｔｅｒ（ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州）が挙げられる。

【0294】

抗体への放射性同位元素の連結は、従来の二官能性キレートを用いて実施し得る。放射性銀－１１１および放射性銀－１９９の連結には、硫黄系リンカーを用い得る。Ｈａｚｒａら，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４－２５：１－７（１９９４）を参照されたい。銀放射性同位元素の連結は、免疫グロブリンをアスコルビン酸で還元することを含み得る。１１１Ｉｎおよび９０Ｙなどの放射性同位元素には、イブリツモマブチウキセタンを用いることができ、イブリツモマブチウキセタンは上記の同位体と反応して、それぞれ１１１Ｉｎ－イブリツモマブチウキセタンおよび９０Ｙ－イブリツモマブチウキセタンを形成する。Ｗｉｔｚｉｇ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ９１－Ｓ９５（２００１）を参照されたい。

【0295】

治療部分、その他のタンパク質、その他の抗体、および／または検出可能な標識は、当該技術分野で公知の技術を用いて、マウス、キメラ、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）またはヒト化１８Ｃ５抗体に直接カップリングまたはコンジュゲートしても、介在物（例えば、リンカー）を介して間接的にカップリングまたはコンジュゲートしてもよい。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）のＡｒｎｏｎら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（第２版），Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）のＴｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎら（編），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照されたい。適切なリンカーとしては、例えば、切断可能なリンカーおよび切断可能でないリンカーが挙げられる。酸性または還元性の条件下で、特定のプロテアーゼに曝露したとき、またはその他の定められた条件下で、カップリングした治療部分、タンパク質、抗体、および／または検出可能な標識を放出する様々なリンカーを用いることができる。

【0296】

Ｖ．治療応用
上記の抗体は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）により少なくとも部分的に、および特に単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲにより媒介される疾患を有するか、そのような疾患のリスクのある患者における疾患の治療または予防に使用できる。実施にあたって機序を理解する必要はないが、上記の抗体を用いるＴＴＲアミロイドーシスの治療に以下の機序：ＴＴＲ凝集および原線維形成の抗体介在性阻害、ＴＴＲの非毒性立体構造（例えば、テトラマー形態）の抗体介在性安定化、または凝集ＴＴＲ、オリゴマーＴＴＲ、もしくは単量体ＴＴＲの抗体介在性除去のいずれかまたは全部が寄与するものと考えられる。抗体－薬物コンジュゲートは、コンジュゲート部分によって決まるさらなる作用機序を有し得る。

【0297】

抗体は有効なレジメン、つまり、発症を遅らせ、重症度を軽減し、さらなる増悪を抑制し、かつ／または治療する障害の少なくとも１つの徴候もしくは症状を寛解する用量、投与経路および投与頻度で、投与される。患者が既に障害に罹患している場合、そのレジメンを治療上有効なレジメンと呼ぶことができる。患者が一般集団よりも障害のリスクが高いが未だ症状を認めない場合、そのレジメンを予防上有効なレジメンと呼ぶことができる。いくつかの場合には、治療有効性または予防有効性が、個々の患者において既存対照または同一患者での過去の経験と比較して観察され得る。別の場合には、治療有効性または予防有効性は、前臨床試験または臨床試験で、治療を実施した患者の集団と未治療患者の対照集団とを比較して明らかにできる。

【0298】

投与頻度は、様々な因子のなかでもとりわけ、循環血中の抗体の半減期、患者の状態および投与経路によって決まる。頻度は、患者の状態または治療する障害の進行度の変化に応じて、連日、週１回、月１回、年４回、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、治療の連続的な原因にわたって週１回～年４回であるが、より多いまたは少ない頻度も可能である。皮下投与では、例示的な投与頻度は連日～月１回であるが、より多いまたは少ない投与頻度も可能である。

【0299】

投与回数は、障害が急性であるのか慢性であるのか、および障害の治療に対する応答によって決まる。急性障害または慢性障害の急性増悪には、多くの場合１～１０回で十分である。急性障害または慢性障害の急性増悪には、任意選択で分割形態での、単回ボーラス投与で十分なこともある。急性障害または急性増悪の再発に対して治療を反復し得る。慢性障害には、抗体を少なくとも１年間、５年間または１０年間、ないし患者の生涯にわたって定期的な間隔で、例えば週１回、隔週、月１回、年４回、６か月に１回、投与し得る。

【0300】

ＶＩ．医薬組成物および使用方法
本明細書では、トランスサイレチン（ＴＴＲ）により少なくとも部分的に、および特に単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲにより媒介される疾患または病態（例えば、ＴＴＲアミロイドーシス）を診断、モニタリング、治療または予防するいくつかの方法が提供される。このような疾患の例としては、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）などの家族性ＴＴＲアミロイドーシス、または運動選手もしくは他の過度の有酸素運動を実施している者の心筋症または心肥大、家族性アミロイドニューロパチー（ＦＡＰ）、または中枢神経系選択性アミロイドーシス（ＣＮＳＡ）、および老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）または老人性心アミロイドーシス（ＳＣＡ）などの孤発性ＴＴＲアミロイドーシスが挙げられる。ＴＴＲアミロイドーシスはまた、組織または器官の変性または外傷を特徴とする様々な疾患および病態の原因または結果と関連し得る。ＴＴＲ沈着物の蓄積は、疾患または病態に関連する器官または組織の機能不全の一因である。本発明の薬剤および方法による治療または予防が適しているこのような病態の例は、脊柱管狭窄症（Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋら，Ｕｐｓａｌａ Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １１９，２２３－２３８（２０１４）およびＹａｎａｇｉｓａｗａら．，Ｍｏｄｅｒｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２８，２０１－２０７（２０１５））である。同様に治療または予防に適しているまた別の疾患は、変形性関節症（Ｔａｋａｎａｓｈｉら，Ａｍｙｌｏｉｄ ２０，１５１－１５５（２０１３）、Ｇｕら，Ｂｉｏｍｅｄ ＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，９２－９９；Ｔａｋｉｎａｍｉら，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ８，８５－９５（２０１４）；Ａｋａｓａｋｉら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．６７，２０９７－２１０７（２０１５））である。同様に治療または予防に適しているまた別の疾患は、関節リウマチ（Ｃｌｅｍｅｎｔら，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ １ ｅｐｕｂｌｉｓｈ（２０１６））である。治療または予防に適しているまた別の疾患は、若年性特発性関節炎（Ｓｈａｒｍａら，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ９，ｅ９３９０５；１－１２（２０１４））である。治療または予防に適しているまた別の疾患は、加齢黄斑変性（滲出型または乾燥型）である。同様に治療または予防に適しているまた別のクラスの病態は、靭帯および腱の障害、例えば回旋筋腱板の障害（Ｓｕｅｙｏｓｈｉら，Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌ．４２，１２５９－６４（２０１１）などである。

【0301】

上記の抗体は、上記のいずれかの疾患および病態の治療または予防で使用する医薬組成物中に組み込まれ得る。一般に、抗体または抗体を含有する医薬組成物が、それを必要とする対象に投与される。治療に適する患者としては、ＴＴＲアミロイドーシスのリスクはあるが症状を認めない個体ならびに、現時点で症状を呈する患者が挙げられる。患者によっては、ＴＴＲアミロイドーシスの前駆段階の間に治療され得る。

【0302】

医薬組成物は、ＴＴＲアミロイドーシスの既知の遺伝的リスクのある個体に予防的に投与できる。このような個体としては、そのような疾患を経験した親類をもつ個体および、本明細書に提供される診断方法の使用を含む遺伝子マーカーまたは生化学マーカー（例えば、ＴＴＲアミロイドーシスに関連するＴＴＲ中の変異）の分析によってリスクが決定される個体が挙げられる。例えば、ＴＴＲをコードする遺伝子中に、ＴＴＲアミロイドーシスに関与する１００種類を超える変異がある。例えば、米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４号；Ｓａｒａｉｖａ，Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１７（６）：４９３－５０３（２００１）；ＤａｍａｓおよびＳａｒａｉｖａ，Ｊ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１３０：２９０－２９９；ＤｗｕｌｅｔおよびＢｅｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１４：６５７－６６２（１９８３）を参照されたい。

【0303】

ＴＴＲアミロイドーシスに罹患している個体は、（１）特に心不全に関わる、神経障害性疾患の家族歴；（２）原因不明の神経因性疼痛または進行性感覚障害；（３）原因が明らかでなく、特に両側性で外科的開放を必要とする手根管症候群；（４）原因不明の消化管運動障害または自律神経機能不全（例えば、勃起不全、起立性低血圧症、神経因性膀胱）；（５）高血圧がみられず心室壁肥厚を特徴とする心疾患；（６）原因が不明であり、特に心肥大を伴う高度房室ブロック；および（６）綿花状の硝子体封入体の１つまたは複数を含むＴＴＲアミロイドーシスの臨床症状から認識されることもある。Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。しかし、ＴＴＲアミロイドーシスの確定診断は通常、標的器官の生検を頼りにし、次いで、析出組織をアミロイド特異的色素であるコンゴー赤で組織学的に染色する。検査結果がアミロイド陽性である場合、次いでＴＴＲに関して免疫組織化学染色および質量分析による同定を実施して、アミロイド形成の原因である前駆体タンパク質が実際にＴＴＲであることを確認する。家族性の疾患では、ＴＴＲをコードする遺伝子に変異があることを次いで明らかにしてから診断を下す必要がある。

【0304】

対象の特定は、臨床現場で実施しても、あるいはそれ以外の場所で、例えば対象の自宅で、例えば対象自身が自己検査キットを用いて実施してもよい。例えば、末梢性ニューロパチー（感覚性ニューロパチーおよび運動性ニューロパチー）、自律神経性ニューロパチー、胃腸障害、心筋症、腎障害、または眼内沈着などの様々な症状に基づいて対象を特定できる。Ａｎｄｏら，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ８：３１（２０１３）を参照されたい。対象はまた、実施例に開示されるように、対照試料に比して対象からの血漿試料中の非天然形態のＴＴＲのレベルが上昇していることによっても特定できる。

【0305】

家族歴、遺伝子検査、または医学的スクリーニングによってＴＴＲアミロイドーシスが裏付けられると、任意の年齢（例えば、２０歳、３０歳、４０歳、５０歳、６０歳または７０歳）で治療を開始し得る。治療は通常、一定期間にわたる反復投与を必要とし、治療剤（例えば、アミノ酸残基１０１～１０９を含む、短縮形態のＴＴＲ）に対する抗体または活性化されたＴ細胞もしくはＢ細胞の応答を経時的にアッセイすることによってモニターできる。応答が低下した場合、追加投与が適応される。

【0306】

予防応用では、疾患（例えば、ＴＴＲアミロイドーシス）に罹患しやすいか、または疾患のリスクがある対象に、疾患のリスクを軽減する、疾患の重症度を軽減する、または疾患の少なくとも１つの徴候または症状の発現を遅らせるために有効なレジメン（投与の用量、頻度および経路）で、抗体もしくは抗体を誘導する薬剤、またはその医薬組成物を投与する。治療応用では、疾患（例えば、ＴＴＲアミロイドーシス）が疑われるか、または既に疾患に罹患している対象に、疾患の少なくとも１つの徴候または症状のさらなる増悪を寛解するか、少なくともそれを抑制するために有効なレジメン（投与の用量、頻度および経路）で、抗体または抗体を誘導する免疫原を投与する。

【0307】

レジメンは、治療を実施した個々の対象が、本明細書に開示される方法による治療を実施していない同等の対象からなる対照集団での平均転帰よりも良好な転帰を達成した場合、あるいはあるレジメンで治療を実施した対象が、対照臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相または第ＩＩＩ相試験）での対照対象または動物モデルよりもｐ＜０．０５もしくはｐ＜０．０１、場合によってはｐ＜０．００１のレベルで良好な転帰を示した場合に、治療上または予防上有効であると見なされる。

【0308】

ある抗体の有効なレジメンは、例えば、ＴＴＲ蓄積に関わる病態を有するかそのリスクのある対象中のＴＴＲ凝集を阻害もしくは軽減する；ＴＴＲ蓄積に関わる病態を有するかそのリスクのある対象中のＴＴＲ原線維形成を阻害もしくは軽減する；ＴＴＲ蓄積に関わる病態を有するかそのリスクのある対象中のＴＴＲ沈着物もしくは凝集ＴＴＲを減少もしくは除去する；ＴＴＲ蓄積に関わる病態を有するかそのリスクのある対象中のＴＴＲの非毒性立体構造を安定化する；ＴＴＲ蓄積に関わる病態を有するかそのリスクのある対象中のＴＴＲ凝集体、原線維もしくは沈着物の毒性作用を阻害する；アミロイド蓄積を有することが疑われる組織中のＴＴＲアミロイド蓄積の有無を診断する；抗体投与後の対象中の結合抗体の有無を検出することにより対象中のＴＴＲ沈着物レベルを決定する；対象中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のＴＴＲの存在を検出する；ＴＴＲアミロイドーシスと診断された患者を治療するために使用される治療剤の有効性をモニタリングおよび評価する；対象中でＴＴＲに対する抗体を含む免疫応答を誘導する；対象中でＴＴＲアミロイド蓄積に関わる病態の発症を遅延する；または患者中のＴＴＲアミロイドーシスを治療もしくは予防するために使用できる。

【0309】

有効量は、多数の異なる因子、例えば投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトであるのか動物であるのか、投与する他の薬剤、および治療が予防的であるのか治療的であるのかなどによって異なる。

【0310】

抗体の例示的な用量範囲は、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ体重、もしくは０．５～５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ）または固定用量として１０～１５００ｍｇであり得る。用量は、様々な因子のなかでもとりわけ、患者の状態および、もしあれば以前の治療に対する応答、治療が予防的あるのか治療的であるのか、および障害が急性であるのか慢性であるのかによって決まる。

【0311】

抗体は上記の用量で連日、隔日、週１回、隔週、月１回、年４回、または経験的解析によって定められる他の任意の計画に従って投与し得る。例示的な治療は、例えば、少なくとも６か月間の長期間にわたる反復投与を必要とする。追加の例示的な治療レジメンは、２週間に１回、１か月に１回または３～６か月に１回の投与を必要とする。

【0312】

能動的投与のための薬剤の量は、ヒトへの投与で患者当たり０．１～５００μｇ、より通常には、注射１回当たり１～１００μｇまたは１～１０μｇの範囲で異なる。用量は、免疫応答の誘発を促進するために連結する担体を含まない免疫感作のための活性薬剤の重量を指す。注射のタイミングは、１日１回～年１回、～１０年に１回で大幅に異なり得る。典型的なレジメンは、免疫感作と、それに続く６週間または２か月などの間隔をあけた追加免疫注射を含む。別のレジメンは、免疫感作と、それに続く１か月後、２か月後、および１２か月後の追加免疫注射を含む。別のレジメンは、生涯にわたる２か月毎の注射を含む。あるいは、追加免疫注射を、免疫応答のモニタリングによる適応に応じて不定期で実施し得る。

【0313】

抗体または抗体を誘導する薬剤は末梢経路により投与できる。投与経路としては、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内または筋肉内が挙げられる。抗体投与の例示的経路は、静脈内または皮下であり得る。抗体投与の例示的経路は、静脈内または皮下であり得る。能動的免疫感作の例示的経路には、皮下および筋肉内がある。静脈内投与は、例えば３０～９０分などの時間にわたる注入によるものであり得る。この種の注射は、腕または脚の筋肉で最も典型的に実施される。いくつかの方法では、薬剤を沈着物が蓄積した特定の組織の中に直接注射し、例えば頭蓋内に注射する。

【0314】

非経口投与用の医薬組成物は、無菌で実質的に等張（２５０～３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水）であり得、ＧＭＰ条件下で製造できる。医薬組成物は、単位用量形態（すなわち、単回投与のための用量）で提供できる。医薬組成物は、１つまたは複数の生理的に許容される担体、希釈剤、補形剤または補助剤を用いて製剤化できる。製剤は、選択する投与経路によって決まる。注射用に、抗体を水溶液中、例えばハンクス液、リンガー溶液、生理食塩水または酢酸塩緩衝液などの生理的に適合する緩衝液中で製剤化できる（注射部位の不快感を軽減するため）。溶液は、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの製剤用剤を含有し得る。あるいは、抗体は、使用前に適切な媒体、例えば無菌無発熱物質水で構築するための凍結乾燥形態であり得る。

【0315】

レジメンは、治療する疾患の治療または予防に効果のある別の薬剤と組み合わせて、同時に、または逐次的に投与され得る。このような薬剤としては、ＴＴＲの発現を阻害するｓｉＲＮＡまたは四量体形態のＴＴＲの安定化剤であるＶｙｎｄａｑｅｌが挙げられる。このような薬剤としては、タファミジスまたはジフルニサルなどのＴＴＲ四量体安定化剤が挙げられる（例えば、国際公開第２０１１１１６１２３号、米国特許第９，１５０，４８９号を参照されたい）、ＴＴＲ発現を抑制する遺伝子治療剤、例えば、ＩＯＮＩＳ－ＴＴＲＲｘ（イノテルセン）などのアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第８，１０１，７４３号、同第８，６９７，８６０号、同第９，０６１，０４４号、および同第９，３９９，７７４号；日本特許第５８９６１７５号を参照されたい）またはパチシランもしくはレブシランなどのｓｉＲＮＡ（例えば、国際公開第２０１６０３３３２６号を参照されたい）など、アミロイド分解化合物、例えばドキシサイクリン（ｄｏｘｙ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、Ｄｏｘｙ－ＴＵＤＣＡ、シクロデキストリン（ＣｙＤ）、４’－ヨード－４’－デオキシドキソルビシン（ＩＤＯＸ）、または血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）に対する抗体が挙げられる。

【0316】

既に本明細書に開示される抗体による治療を実施した対象に、治療する疾患の治療または予防に効果のある別の薬剤を投与し得る。治療する疾患の治療または予防に効果のある別の薬剤による治療を実施した対象に、本明細書に開示される抗体による治療をもう実施しなくてもよい。

【0317】

本明細書に開示される抗体による治療を、治療する障害に対して効果的な他の治療と併用できる。併用治療は、一緒に処方するか、別個に実施できる。併用療法に有用な治療のいくつかの例として、１８Ｃ５のものとは異なるエピトープと結合する第二の抗ＴＴＲ抗体、例えば、表３に開示される抗体が挙げられる。

【0318】

治療後に、対象の状態を評価して、そのような治療の進行状況または有効性を決定できる。このような方法は好ましくは、ＴＴＲアミロイドのレベルまたは非天然形態のＴＴＲのレベルの変化を検査する。例えば、ＴＴＲアミロイドのレベルを評価して、治療前の同等の状況下での対象のＴＴＲアミロイドのレベルに比する改善を決定し得る。対象のＴＴＲアミロイドのレベルもまた同等の状況下の対照集団と比較できる。対照集団は、（様々な対照対象のなかでもとりわけ）同じように罹患した未治療対象または正常な未治療対象であり得る。同じように罹患した未治療対象に比して改善がみられる場合または諸レベルが未治療の正常対象のレベルに近づいているか到達している場合、それは治療に対する正の応答を示す。

【0319】

ＴＴＲアミロイドのレベルは、イメージング技術を含む多数の方法によって測定できる。適切なイメージング技術の例としては、放射標識したそのフラグメントのＴＴＲ、ＴＴＲ抗体またはそのフラグメント、コンゴー赤系のアミロイド造影剤、例えばＰＩＢ（米国特許出願公開第２０１１／０００８２５５号）、アミロイドイメージングペプチドｐ３１（Ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｙｌｏｉｄ－ｉｍａｇｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ，ｐ３１，ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ａｍｙｌｏｉｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｃｏｎｇｏ ｒｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ，Ｗａｌｌら，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．１５７３，２０１１ ＩＳＮＭ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ）など、およびその他のＰＥＴ標識を用いるＰＥＴスキャンが挙げられる。非天然形態のＴＴＲのレベルは、例えば、実施例に記載されるように、対象からの血漿試料または生検試料に本明細書に開示される抗体を用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥ／ウエスタンブロットまたはＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙプレートアッセイを実施し、対照試料と比較することによって測定できる。

【0320】

Ａ．診断およびモニタリングの方法
ＴＴＲ沈着または病原性形態のＴＴＲ（例えば、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態または原線維形態のＴＴＲ）に関連する疾患に罹患しているか罹患しやすい患者中でＴＴＲに対する免疫応答を検出する方法も提供される。この方法は、本明細書に提供される薬剤による治療的処置または予防的処置の経過をモニターするのに使用できる。受動免疫後の抗体プロファイルは通常、抗体濃度の直後のピークとそれに続く指数関数的減衰を示す。さらなる投与を実施しなければ、投与した抗体の半減期に応じて数日～数か月以内に減衰が治療前のレベルに近づく。例えば、いくつかのヒト抗体の半減期は２０日程度である。

【0321】

いくつかの方法では、投与前に対象中のＴＴＲに対する抗体のベースライン値を測定し、投与直後に２回目の測定を実施して抗体レベルのピーク値を求め、かつ間隔を空けてさらに１回または複数回の測定を実施して抗体レベルの減衰をモニターする。抗体レベルがベースライン値またはピーク値とベースライン値の差の所定の割合（例えば、５０％、２５％または１０％）に低下したとき、追加の用量抗体を投与する。いくつかの方法では、ピーク値またはその後に測定したレベルからバックグラウンドを減じた値を、予め求めた参照レベルと比較して、他の対象に有益な予防処置または治療処置のレジメンを設定する。測定した抗体レベルが参照レベルよりも有意に低い（例えば、治療から利益を得る対象の集団での参照値の平均マイナス１または、好ましくはマイナス２標準偏差よりも低い）場合、追加の用量の抗体の投与が適応される。

【0322】

対象中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲを、例えば、対象由来の試料中のＴＴＲアミロイドまたは病原性形態のＴＴＲ（例えば、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲ）を測定することによって、または対象中のＴＴＲのｉｎ ｖｉｖｏイメージングによって検出する方法も提供される。このような方法は、上記の病原性形態のＴＴＲ（例えば、ＴＴＲアミロイドーシス）に関連する疾患、またはそれに対する易罹患性の診断または診断の確定に有用である。この方法はまた、無症候性の対象に用いることができる。単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在は、今後症候性の疾患に罹患しやすいことを示す。この方法はまた、既にＴＴＲアミロイドーシスであると診断されている対象における疾患の進行および／または治療に対する応答をモニタリングするのに有用である。

【0323】

ＴＴＲアミロイドーシスを有する、有することが疑われる、または有するリスクのある対象から採取した生体試料を、本明細書に開示される抗体と接触させて、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在を評価できる。例えば、上記の対象中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのレベルを健常対象中のものと比較し得る。あるいは、疾患に対する治療を受けている上記の対象中のＴＴＲアミロイドまたは病原性形態のＴＴＲ（例えば、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲ）のレベルを、ＴＴＲアミロイドーシスに対する治療を実施していない対象のものと比較してもよい。いくつかのこのような検査は、上記の対象から採取した組織の生検を含む。例えば、液体試料中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲのレベルを評価するのに、ＥＬＩＳＡアッセイを用いることもできる。いくつかのこのようなＥＬＩＳＡアッセイは、天然の四量体形態のＴＴＲと比べて単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲを優先的と結合する抗ＴＴＲ抗体を含む。

【0324】

いくつかのこのような検査にサンドイッチイムノアッセイがある。いくつかのこのようなイムノアッセイは、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）電気化学発光プラットフォーム（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州）を用いるものである。いくつかのこのようなイムノアッセイは、レポーター抗体上の電気化学発光標識を用いるもの、例えば、ＭＳＤアッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州）である。例えば、レポーター抗体をＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ標識（（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州）で標識できる。電気化学発光アッセイに有用なプレートは、電極を組み込むものであり得る（例えば、ＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州））。電気化学発光アッセイに有用なプレートは、各ウェルの底に電極を組み込むものであり得る（例えば、ＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ロックビル、メリーランド州））。いくつかのアッセイは、標識した捕捉抗体を用いるものである。例えば、標識した捕捉抗体は、１８Ｃ５、またはそのヒト化バリアント、キメラバリアントもしくはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）バリアントであり得る。いくつかのアッセイは、標識したレポーター抗体を用いるものである。例えば、標識したレポーター抗体は、１８Ｃ５、またはそのヒト化バリアント、キメラバリアントもしくはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）バリアントであり得る。標識したレポーター抗体はまた、表３の抗体、またはそのヒト化バリアント、キメラバリアントもしくはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）バリアントであり得る。標識したレポーター抗体は、ＴＴＲと結合し、立体構造特異性のない抗体であり得る。一実施形態では、ＴＴＲと結合し、立体構造特異性のない抗体は、８Ｃ３もしくは７Ｇ７、またはそのヒト化バリアント、キメラバリアントもしくはベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）バリアントであり得る（例えば、国際公開第２０１６／１２０８１１号を参照されたい）。一実施形態では、ＴＴＲと結合し、立体構造特異性のない抗体は、ポリクローナル抗体であり得る。一実施形態では、ポリクローナル抗体はポリクローナルウサギ抗ヒトプレアルブミン（カタログ番号Ａ０００２０２－２、Ｄａｋｏ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、サンタクララ、カリフォルニア州）である。一実施形態では、ポリクローナルウサギ抗ＴＴＲ抗体は、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＨＰＡ００２５５０（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、セントルイス、ミズーリ州）である。

【0325】

いくつかのアッセイは、試料中の全ミスフォールドＴＴＲ（すなわち、単量体および多量体を含めたあらゆるミスフォールド形態のＴＴＲ）を検出するものである。他のアッセイは、単量体ミスフォールドＴＴＲまたは多量体ミスフォールドＴＴＲを特異的に検出するものである。他のアッセイは、あらゆる形態のＴＴＲ（ミスフォールド形態および天然の四量体形態）を検出するものである。いくつかのこのようなアッセイは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合する捕捉抗体と、ＴＴＲの異なるエピトープと特異的に結合するレポーター抗体とを用い；試料中にミスフォールドＴＴＲが存在する場合、捕捉抗体およびレポーター抗体がミスフォールドＴＴＲと結合してサンドイッチ複合体を形成し；ミスフォールドＴＴＲと結合するレポーター抗体が存在すればそれを検出することにより、試料中に存在するあらゆるミスフォールド形態のＴＴＲの有無を示すものである。このようなレポーター抗体としては、９Ｄ５、１４Ｇ８、５Ａ１、６Ｃ１、ＡＤ７Ｆ６、ＲＴ２４、ＮＩー３０１．３５Ｇ１１、ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５、ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１、ＭＦＤ１１４、またはそのキメラ型もしくはヒト化型が挙げられる。このようなレポーター抗体としては、ＴＴＲの残基８９～９７、１１８～１２２、１１５～１２４、５３～６３、５４～６１、３６～４９、４９～６１、１０９～１２１、３０～６６、７０～１２７、８０～１２７、９０～１２７、１００～１２７、１１０～１２７、または１１５～１２７内に結合する抗体が挙げられる。このレポーター抗体としては、８Ｃ３または７Ｇ７が挙げられる（例えば、国際公開第２０１６／１２０８１１号を参照されたい）。このようなレポーター抗体としては、ポリクローナルウサギ抗ヒトプレアルブミン（カタログ番号Ａ０００２０２～２、Ｄａｋｏ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、サンタクララ、カリフォルニア州）またはポリクローナルウサギ抗ＴＴＲ抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＨＰＡ００２５５０、Ｓｉｇｍａ～Ａｌｄｒｉｃｈ社、セントルイス、ミズーリ州）が挙げられる。

【0326】

いくつかのアッセイは、試料中の多量体形態のミスフォールドＴＴＲを検出するものである。このようなアッセイは、単量体ミスフォールドＴＴＲより優先的に、または単量体ミスフォールドＴＴＲに対して排他的に多量体ミスフォールドＴＴＲを検出するよう構成できる。いくつかのアッセイは、ＴＴＲの１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合する捕捉抗体と、ＴＴＲの１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合するレポーター抗体とを用いるものである。このような捕捉抗体とレポーター抗体の組合せは、ＴＴＲのコピーが複数存在することにより、抗体が結合するエピトープが複数存在することになるため、単量体ＴＴＲより優先的に、または単量体ＴＴＲに対して排他的に多量体ＴＴＲと結合できる。多量体ミスフォールドＴＴＲと結合するレポーター抗体が存在すればそれを検出することにより、多量体ミスフォールドＴＴＲの有無が示される。いくつかのこのようなアッセイでは、レポーター抗体がＴＴＲとの結合に関して捕捉抗体と競合し、かつ／またはレポーター抗体と捕捉抗体がＴＴＲの同じ、または重複するエピトープと結合する。いくつかのこのようなアッセイでは、捕捉抗体が多量体ミスフォールドＴＴＲ内の第一のミスフォールドＴＴＲ分子と結合し、レポーター抗体が多量体ミスフォールドＴＴＲ内の第二のミスフォールドＴＴＲ分子と結合する。捕捉抗体とレポーター抗体との間で結合が競合することにより、（競合が重複エピトープの結果であるか、立体障害の結果であるかによって）単量体ミスフォールドＴＴＲの同時の結合および検出が妨げられるか、少なくとも減少する。いくつかのこのようなアッセイでは、多量体ＴＴＲ内の第二のミスフォールドＴＴＲ分子と結合するレポーター抗体の結合を検出することにより、多量体ミスフォールドＴＴＲの有無が示される。

【0327】

本明細書に開示される抗体は、生体試料中の総多量体ミスフォールドトランスサイレチン（ＴＴＲ）のレベルと総ミスフォールドＴＴＲのレベルの比を決定する方法に使用できる。生体試料の第一の部分について、単量体ミスフォールドＴＴＲおよび多量体ミスフォールドＴＴＲを検出するアッセイで試料中の全ミスフォールドＴＴＲ（すなわち、単量体および多量体を含めたあらゆるミスフォールド形態のＴＴＲ）をアッセイできる。第一のアッセイは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合する捕捉抗体と、ＴＴＲの異なるエピトープと特異的に結合するレポーター抗体とを用いるものであり得る。試料中にミスフォールドＴＴＲが存在する場合、捕捉抗体およびレポーター抗体がミスフォールドＴＴＲと結合してサンドイッチ複合体を形成する。ミスフォールドＴＴＲと結合するレポーター抗体が存在すればそれを検出することにより、試料中のミスフォールドＴＴＲの有無が示される。生体試料の第二の部分について、単量体ミスフォールドＴＴＲより優先的に多量体ミスフォールドＴＴＲを検出するアッセイで生体試料中の多量体形態のミスフォールドＴＴＲをアッセイできる。第二のアッセイは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合する捕捉抗体と、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合するレポーター抗体とを用いるものであり得る。試料中に多量体ミスフォールドＴＴＲが存在する場合、捕捉抗体およびレポーター抗体が多量体ミスフォールドＴＴＲと結合してサンドイッチ複合体を形成する。多量体ミスフォールドＴＴＲが存在すれば、捕捉抗体とレポーター抗体が同時に、それと優先的または排他的に結合して、多量体ミスフォールドＴＴＲの有無を示すことができる。いくつかのこのようなアッセイでは、レポーター抗体は、ＴＴＲとの結合に関して捕捉抗体と競合するか、捕捉抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープと結合する。いくつかのこのようなアッセイでは、捕捉抗体が多量体ミスフォールドＴＴＲ内の第一のミスフォールドＴＴＲ分子と結合し、レポーター抗体が多量体ミスフォールドＴＴＲ内の第二のミスフォールドＴＴＲ分子と結合する。捕捉抗体とレポーター抗体との間で競合が競合することにより、（競合が重複エピトープの結果であるか、立体障害の結果であるかによって）単量体ミスフォールドＴＴＲの同時の結合および検出が妨げられるか、少なくとも減少する。いくつかのこのようなアッセイでは、多量体ＴＴＲ内の第二のミスフォールドＴＴＲ分子と結合するレポーター抗体の結合を検出することにより、多量体ミスフォールドＴＴＲの有無が示される。いくつかのアッセイでは、多量体ミスフォールドＴＴＲと全ミスフォールドＴＴＲの比を算出する。

【0328】

本明細書に開示される抗体はまた、生体試料中の全ミスフォールドＴＴＲのレベルと総ＴＴＲ（ミスフォールド形態および天然の四量体形態）の比を決定する方法に使用できる。生体試料の第一の部分について、単量体ミスフォールドＴＴＲおよび多量体ミスフォールドＴＴＲを検出するアッセイで試料中の全ミスフォールドＴＴＲ（すなわち、単量体および多量体を含めたあらゆるミスフォールド形態のＴＴＲ）をアッセイできる。第一のアッセイは、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと特異的に結合する捕捉抗体と、ＴＴＲの異なるエピトープと特異的に結合するレポーター抗体とを用いるものであり得る。試料中にミスフォールドＴＴＲが存在する場合、捕捉抗体およびレポーター抗体がミスフォールドＴＴＲと結合してサンドイッチ複合体を形成する。ミスフォールドＴＴＲと結合するレポーター抗体が存在すればそれを検出することにより、試料中のミスフォールドＴＴＲの有無が示される。生体試料の第二の部分について、総ＴＴＲを検出する第二のアッセイで総ＴＴＲ（ミスフォールド形態および天然の四量体形態）をアッセイできる。第二のアッセイは、ＴＴＲと結合し、立体構造特異性のない捕捉抗体と、ＴＴＲと結合し、立体構造特異性のないレポーター抗体とを用いるものであり得る。試料中にＴＴＲが存在する場合、捕捉抗体およびレポーター抗体がＴＴＲと結合してサンドイッチ複合体を形成する。ＴＴＲと結合するレポーター抗体が存在すればそれを検出することにより、試料中に存在するＴＴＲの有無が示される。全ミスフォールドＴＴＲと総ＴＴＲ（ミスフォールド形態および天然の四量体形態）の比を算出できる。

【0329】

ｉｎ ｖｉｖｏイメージング法は、試薬、例えば対象の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲと結合する抗体を投与した後、その試薬が結合してからそれを検出することによって実施できる。このような抗体は通常、ＴＴＲの残基１０１～１０９内のエピトープと結合する。必要に応じて、完全長の定常領域を欠く抗体フラグメント、例えばＦａｂを使用することによって除去応答を回避できる。いくつかの方法では、同じ抗体が治療試薬および診断試薬の両方の役割を果たし得る。

【0330】

診断試薬は、対象の体内への静脈内注射によって、または妥当であると考えられるその他の経路により投与できる。試薬の用量は、治療方法のものと同じ範囲内に収めるべきである。通常、試薬を標識するが、いくつかの方法では、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲに対する親和性を有する一次試薬は非標識であり、二次標識剤を用いて一次試薬に結合させる。標識の選択は検出手段によって決まる。例えば、蛍光標識は光学的検出に適している。常磁性標識の使用は、外科的介入のない断層撮影による検出に適している。放射性標識もまた、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴを用いて検出され得る。

【0331】

診断は、標識部位の数、大きさ、および／または強度を対応するベースライン値と比較することによって実施する。ベースライン値は、未罹患の個体の集団での平均レベルであり得る。ベースライン値はまた、同じ対象で以前に求めたレベルであり得る。例えば、治療開始前に対象におけるベースライン値を求め、測定した値をその後にベースライン値と比較できる。値がベースライン値に比べ低下していることは一般に、治療に対する正の応答を示す。

【0332】

ミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、抗ＴＴＲ抗体結合などの量の変化をモニターすることにより、治療に応じて治療レジメンを調整することが可能になる。次いで、治療を調整するかどうかを決定し、必要に応じ、モニタリングに応じて治療を調整できる。有意な変化は、治療後のパラメータの値と基底値とを比較することにより、治療が有益な効果をもたらしたか、そうでないかを示す何らかの証拠が得られることを意味する。いくつかの場合には、患者のパラメータの値の変化そのものが、治療が有益な効果をもたらしたか、そうでないかを示す証拠となる。他の場合には、患者に値の変化があり、治療を受けていない患者の代表的な対照集団に値の変化があれば、それらを比較する。特定の患者の応答と対照患者の正常な応答との間の差（例えば、平均＋標準偏差の分散）も、治療レジメンによって患者に有益な効果が得られるかどうかを示す証拠となり得る。治療を調整するかどうか、どのように治療を調整するかを決定するにあたって、上記のＴＴＲパラメータの変化を副作用などの徴候または症状の他の変化（１つまたは複数）と組み合わせることもできる。

【0333】

一部の患者では、モニタリングにより、ミスフォールドＴＴＲの量、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合が、以前に検出されたもの以上であることが示される。このような患者では、許容できない副作用がみられない場合、治療レジメンをそのまま継続するか、最大推奨用量に未だ達していなければ投与頻度および／または投与量を増やすことさえできる。

【0334】

一部の患者では、モニタリングにより、ミスフォールドＴＴＲ、ミスフォールド多量体ＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、抗ＴＴＲ抗体結合などの検出可能な減少がみられるが、そのミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合の量が依然として正常を上回っていることが示される。このような患者では、許容できない副作用がみられない場合、治療レジメンをそのまま継続するか、最大推奨用量に未だ達していなければ投与頻度および／または投与量を増やすことさえできる。あるいは、一部のこのような患者では、治療レジメンを中止し、治療を他の薬剤、例えば、ＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療法、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸などに置き換えることができる。

【0335】

モニタリングにより、患者のミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、抗ＴＴＲ抗体結合などの量が既に、正常レベルのミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物の量、または抗ＴＴＲ抗体結合の量まで、またはその付近まで減少していることが示される場合、治療レジメンを導入の治療レジメン（すなわち、ミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合の量のレベルを低下させるもの）から維持の治療レジメン（すなわち、ミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合の量をほぼ一定レベルに維持するもの）に調整できる。このようなレジメンは、投与量および／または治療を実施する頻度を減らすことによって実施できる。あるいは、一部の患者では、治療レジメンを中止し、治療を他の薬剤、例えば、ＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療法、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸などに置き換えることができる。

【0336】

他の患者では、モニタリングにより、治療レジメンが幾分有益な効果を示すが、最適以下の効果であることが示され得る。最適な効果は、治療開始後の所与の時点における、治療レジメンを実施していない患者の代表的な試料にみられるミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物の量、または抗ＴＴＲ抗体結合の量の変化の上位２分の１または４分の１に含まれるミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合の量の減少の割合と定義できる。減少が少ない患者、またはミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、もしくは抗ＴＴＲ抗体結合の量が依然として一定であるか、程度は少ないにせよ、治療レジメンを実施しない場合に予想される量（例えば、治療レジメンを実施していない患者の対照群から推測される量）よりも増加さえしている患者は、正であるが最適以下の応答がみられるものに分類できる。このような患者には任意選択で、薬剤を投与する量および／または頻度を増やすレジメンの調整を実施できる。上記のものに代えて、またはこれに加えて、上方調整で応答の改善が得られない場合、一部のこのような患者では、治療レジメンを中止し、治療を他の薬剤、例えば、ＴＴＲ四量体安定化剤、アンチセンスオリゴヌクレオチドベースの治療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ベースの治療法、またはドキシサイクリン＋タウロウルソデオキシコール酸に置き換えることができる。

【0337】

一部の患者では、ミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合の量が、治療を実施していない患者のミスフォールドＴＴＲ、多量体ミスフォールドＴＴＲ、トランスサイレチン沈着物、または抗ＴＴＲ抗体結合と同程度またはそれ以上まで増大し得る。このような増大が一定期間にわたって持続する場合、必要に応じて治療を中止し、１つまたは複数の他の薬剤による治療を優先できる。

【0338】

本明細書に開示される抗体を用いる診断方法を、１８Ｃ５のものとは異なるエピトープと結合する第二の抗ＴＴＲ抗体、例えば、表３に開示される抗体と組み合わせて実施できる。

【0339】

また、トランスサイレチン介在性のアミロイドーシスと非ＴＴＲアミロイドーシス、例えば原発性全身性アミロイドーシスとしても知られるアミロイド軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシスとを鑑別する方法が提供される。

【0340】

ＩＸ．キット
本発明はさらに、本明細書に開示されるヒト化１８Ｃ５抗体と、それに関連する材料、例えば使用指示書（例えば、添付文書）とを含む、キット（例えば、容器）を提供する。使用指示書は、例えば、抗体および任意選択で１つまたは複数の追加の薬剤の投与に関する指示を含み得る。抗体の容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数用量包装）、または小単位用量であり得る。

【0341】

添付文書は、治療用製品の市販の包装品に慣例的に含まれ、そのような治療用製品の使用に係る適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または注意事項に関する情報を含む指示書を指す。

【0342】

キットはまた、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液およびブドウ糖溶液を含む、第二の容器を含み得る。それはまた、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む商業上の観点および使用者の観点から望ましい他の材料を含み得る。

【0343】

Ｘ．その他の応用
抗体は、臨床診断、臨床治療または研究において単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のトランスサイレチン（ＴＴＲ）またはそのフラグメントを検出するのに用いることができる。例えば、抗体を用いて、生体試料がＴＴＲアミロイド沈着物を含むことの指標として生体試料中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在を検出できる。生体試料への抗体の結合を、対照試料への抗体の結合と比較できる。対照試料と生体試料は、同じ組織を起源とする細胞を含み得る。対照試料と生体試料は、同じ個体または異なる個体から同じ機会または異なる機会に採取され得る。必要に応じて、複数の生体試料と複数の対照試料を複数の機会に評価して、試料間の差とは無関係のランダムな変動から保護する。次いで、生体試料（１つまたは複数）と対照試料（１つまたは複数）とを直接比較して、生体試料（１つまたは複数）への抗体の結合（すなわち、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在）が対照試料（１つまたは複数）への抗体の結合に比して増大しているのか、減少しているのか、同じであるのかを決定できる。生体試料（１つまたは複数）への抗体の結合が対照試料（１つまたは複数）に比して増大していることは、生体試料（１つまたは複数）中に単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲが存在することを示す。いくつかの場合には、抗体結合の増大は統計的に有意である。任意選択で、生体試料への抗体の結合は、対照試料への抗体の結合より少なくとも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍高い。

【0344】

さらに、抗体を用いて、ＴＴＲアミロイドーシスと診断された患者を治療するために使用される治療剤の有効性をモニタリングおよび評価するために生体試料中の単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの有無を検出できる。治療剤で治療を開始する前に、ＴＴＲアミロイドーシスと診断された患者からの生体試料を評価して試料への抗体の結合のベースライン値（すなわち、試料中に単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲが存在するときのベースライン値）を設定する。いくつかの場合には、患者からの複数の生体試料を複数の機会に評価して、ベースライン値および治療とは無関係のランダムな変動の測定値の両方を設定する。次いで、治療剤をレジメンに従って投与する。レジメンは、一定期間にわたる薬剤の反復投与を含み得る。任意選択で、患者からの複数の生体試料中の抗体の結合（すなわち、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在）を複数の機会に評価して、ランダムな変動の測定を行いかつ免疫療法に対する応答の傾向を明らかにする。生体試料への抗体結合の様々な評価を次いで比較する。評価を２回のみ実施する場合、２回の評価を直接比較して、抗体結合（すなわち、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態または原線維形態のＴＴＲの存在）が２回の評価の間で増大したのか、減少したのか、同じままなのかを決定できる。評価を３回以上実施する場合、治療剤で治療する前に始まり治療過程を進行する経時変化として測定値を解析できる。生体試料への抗体の結合（すなわち、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、または原線維形態のＴＴＲの存在）が減少した患者では、患者におけるＴＴＲアミロイドーシスを治療するのに治療剤が効果的であると結論付けることができる。抗体結合の減少は統計的に有意であり得る。任意選択で、結合は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％減少する。抗体結合の評価は、ＴＴＲアミロイドーシスの他の徴候および症状の評価とともに実施できる。

【0345】

抗体はまた、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のＴＴＲまたはそのフラグメントを検出する際の研究用の研究試薬として使用できる。このような用途では、抗体は蛍光分子、スピン標識分子、酵素、または放射性同位元素で標識され、検出アッセイを実施するのに必要な全試薬を収納したキットの形態で提供され得る。抗体はまた、例えばアフィニティークロマトグラフィーによって、単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のＴＴＲ、または単量体形態、ミスフォールド形態、凝集形態、もしくは原線維形態のＴＴＲ結合パートナーを精製するのに使用できる。

【0346】

抗体はまた、生体試料のＴＴＲの凝集を阻害もしくは軽減する、ＴＴＲ原線維形成を阻害もしくは軽減する、ＴＴＲ沈着物もしくはＴＴＲ凝集体を減少もしくは除去する、またはＴＴＲの非毒性立体構造を安定化するために使用できる。生体試料は、例えば血液、血清、血漿、または組織（例えば、心臓、末梢神経系、自律神経系、腎臓、眼球、または消化管由来の組織）を含み得る。いくつかの場合には、ＴＴＲ凝集、ＴＴＲ原線維形成、またはＴＴＲ沈着は少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、または７５％（例えば、１０％～７５％または３０％～７０％）阻害または軽減される。原線維形成を検出するアッセイについては本明細書の別の箇所に記載する。米国特許出願公開第２０１４／００５６９０４号も参照されたい。

【0347】

これまでに、またはのちに引用される特許出願、ウェブサイト、その他の刊行物、アクセッション番号などはいずれも、個々の項目の全体があらゆる目的で参照により組み込まれることが具体的かつ個別に明記された場合と同様に組み込まれる。ある配列の様々なバージョンを様々な時点のアクセッション番号と関連付ける場合、本願の有効出願日の時点のアクセッション番号と関連するバージョンとする。有効出願日は、該当するアクセッション番号に関して実際の出願日または優先出願の出願日のうち早い方を意味する。同じように、刊行物、ウェブサイトなどの公開時期が版によって異なる場合、特に明記されない限り、本願の有効出願日の時点で最新版のものとする。特に明記されない限り、本発明の任意の特徴、段階、要素、実施形態、または態様を他の任意のものと組み合わせて用いることができる。ここまで、本発明を明確に示し理解させることを目的に、説明および具体例によってある程度詳細に記載してきたが、添付の「特許請求の範囲」の範囲内で何らかの変更および修正を施し得ることは明らかであろう。

【0348】

（実施例）
実施例１．１８Ｃ５に対する免疫原の調製および免疫感作またはマウス
Ｆ８７ＭおよびＬ１１０Ｍでの変異を用いて設計し、トランスサイレチン二重変異体（ＴＴＲ－ＤＭ）と称するトランスサイレチンをＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７ＢＬ／６の両雌マウスに注射した。ＢＡＬＢ／ｃ５匹を用いて週１回、ＲＩＢＩアジュバントに乳濁させたＴＴＲ－ＤＭの腹腔内注射を５０μｇ／マウスで３回、次いで２５μｇ／マウスで３回、次いで１０μｇ／マウスで４回実施し、さらに、ＲＩＢＩアジュバントに乳濁させたものをＣ５７ＢＬ／６マウス５匹に５０μｇ／マウスで３回、２５μｇ／マウスで３回、１０μｇ／マウスで４回注射した。ＴＴＲ－ＤＭ、天然の四量体ＴＴＲ、およびｈｉｓ－ＭＣＡＭに対してマウスの力価を求めた。ＴＴＲ－ＤＭに対する力価が最も高いマウスと、天然の四量体ＴＴＲおよびｈｉｓ－ＭＣＡＭに対する力価が最も低いマウス（ＢＡＬＢ／ｃ番号１および５とＣ５７ＢＬ／６番号４および５）を、ケーラーとミルスタインの改変法により融合した。得られたハイブリドーマをＴＴＲ－ＤＭ、天然の四量体ＴＴＲ、およびｈｉｓ－ＭＣＡＭに対してスクリーニングした。ＴＴＲ－ＤＭに対して特異性を示すハイブリドーマをクローン化し、さらに特徴付けた。１８Ｃ５が確認された。

【0349】

実施例２．ＢＩＡｃｏｒｅによる１８Ｃ５の特徴付け
６Ｍ塩酸グアニジンで変性させた組換えヒトＴＴＲ（Ｇｕ－ｈＴＴＲ）、６Ｍ塩酸グアニジンで変性させたカニクイザルＴＴＲ（Ｇｕ－ｃＴＴＲ）、および天然の四量体ヒトＴＴＲに対するマウス抗体の結合親和性を比較するため、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて解析を実施した。抗マウス抗体をアミンカップリングによりセンサーチップＣＭ３（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上に固定化し、分析物の結合が最大５０ＲＵ（約２５０ＲＵのリガンド結合）になるレベルまでマウス抗体（リガンド）を捕捉させた。捕捉されたリガンドの上に（０．４ｎＭ～１００ｎＭの範囲内の）様々な濃度のＧｕ－ＴＴＲをランニング緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、５０ｍＭ Ｇｕ－ＨＣｌ）中、５０μＬ／分で、３００秒の結合時間および９００秒の解離時間にわたって通過させた。ｐＨ１．７の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌを２回、短時間注入することにより、チップ表面を再生させた。使用したＧｕ－ｃＴＴＲの濃度は１～１０００ｎＭに範囲内であり、ヒトＴＴＲ四量体の濃度は１０ｎＭ～１０，０００ｎＭの範囲内であった。リガンドを含まないセンサーおよび分析物濃度０ｎＭの両方に対して、データからブランクを減算した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ３．０）で全般的な１：１フィットを用い、バルク屈折率をゼロＲＵに設定して解析を実施した。結合データを表６に示す。

【0350】

【表4】

【0351】

実施例３．ＢＩＡｃｏｒｅによるキメラ１８Ｃ５の特徴付け
６Ｍ塩酸グアニジンで変性させた組換えヒトＴＴＲ（Ｇｕ－ｈＴＴＲ）に対するマウス抗体およびキメラ抗体の結合親和性を比較するため、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて解析を実施した。センサーチップＣＭ３（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上のフローセル１および２に抗ヒト抗体を、フローセル３および４に抗マウス抗体を、それぞれアミンカップリングにより固定化した。分析物の結合が最大５０ＲＵ（約２５０ＲＵのリガンド結合）になるレベルまでキメラ１８Ｃ５抗体およびマウス１８Ｃ５抗体（リガンド）を捕捉させた。捕捉されたリガンドの上に（０．４ｎＭ～１００ｎＭの範囲内の）様々な濃度のＧｕ－ＴＴＲをランニング緩衝液（ＨＢＳ＋０．０５％Ｐ－２０、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、５０ｍＭ Ｇｕ－ＨＣｌ）中、５０μＬ／分で、３００秒の結合時間および９００秒の解離時間にわたって通過させた。３Ｍ塩化マグネシウムを２回またはｐＨ１．７の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌを２回、短時間注入することにより、チップ表面を再生させた。リガンドを含まないセンサーおよび分析物濃度０ｎＭの両方に対して、データからブランクを減算した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ｖ３．０）で全般的な１：１フィットを用い、バルク屈折率をゼロＲＵに設定して解析を実施した。結合データを表５に示す。

【0352】

キメラ１８Ｃ５抗体の成熟重鎖可変領域アミノ酸配列を配列番号８１として記載し、キメラ１８Ｃ５抗体の成熟軽鎖可変領域アミノ酸配列を配列番号８７、配列番号１７のヒト重鎖定常領域アミノ酸配列、および配列番号１９のヒト軽鎖定常領域アミノ酸配列として記載する。

【0353】

【表5】

【0354】

実施例４．１８Ｃ５のエピトープマッピング
最初のマッピングでは、１８Ｃ５に対するエピトープが配列番号２６の８７～１２７内にあることがわかった。さらなるマッピングでは、同エピトープが配列番号２６の１０１～１０９の間にあることがわかった。ミスフォールドカニクイザルＴＴＲに対する親和性がはるかに低いことは、アミノ酸１０４がヒトＴＴＲとカニクイザルＴＴＲの間にみられる唯一のアミノ酸置換であることから、同アミノ酸が重要であることを示唆するものである。

【0355】

実施例５．１８Ｃ５の配列
１８Ｃ５ハイブリドーマクローンＬＡ８９ １８Ｃ５．Ａ１．Ａ１凍結細胞ペレットをｍＲＮＡの抽出および精製に用いた。Ｏｌｉｇｏｔｅｘ ｄｉｒｅｃｔ ｍＲＮＡミニキット（Ｑｉａｇｅｎ社、カタログ番号７２０２２）のプロトコルを用いて、ｍＲＮＡの単離および精製を実施した。簡潔に述べれば、ＲＮアーゼを不活化し変性力の高いグアニジン－イソチオシアナート緩衝液の存在下でハイブリドーマクローン細胞９×１０^６個を溶解させ、ホモジナイズした。この溶解混合物にＯｌｉｇｏｔｅｘ懸濁液を加え、ｏｌｉｇｏｔｅｘ粒子のオリゴｄＴ３０とｍＲＮＡのポリＡテールとの間でハイブリダイゼーションを生じさせた。次いで、夾雑物を洗浄し、ポリ－Ａ＋ＲＮＡを溶離させた。Ｍａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社、カタログ番号６３４９１３）を用いて、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡの５’末端にアダプターをライゲートした。５’ＲＡＣＥ法を用いてＶ領域を増幅した。ＰＣＲには５’Ｖ領域コンセンサスプライマーおよび定常領域特異的アンカープライマーを用いた。増幅したＶ領域をｐＴＯＰＯクローニングベクターにクローン化し、Ｔｏｐ１０大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に形質転換した。１５～２０の個々のクローンを成長させ、精製したプラスミドの配列を決定した。クローン配列が以下の基準、すなわち、
Ｍｅｔ領域とＣ領域の間に終止コドンがない
配列に抗体Ｖ領域の重要な特徴が含まれている
配列に定義可能なＣＤＲが含まれている。
ＯＲＦがマッチする最低３つの独立したクローン
を満たす場合、それを真のＶ領域配列とした。

【0356】

決定した可変領域配列を発現ベクターにクローン化し、ＣＨＯ細胞内にトランスフェクトした。マウス１８Ｃ５を対照抗体として用い、精製キメラ抗体を結合に関して特徴付けた。

【0357】

１８Ｃ５の成熟重鎖可変アミノ酸配列を配列番号８１として記載し、１８Ｃ５の成熟軽鎖可変アミノ酸配列を配列番号８７として記載する。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ重鎖複合体ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号５、７、および９として記載する。Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ軽鎖複合体ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１１、１３、および１５として記載する。

【0358】

実施例６．ウエスタンブロット解析によって示した１８Ｃ５の特異性
１８Ｃ５の非天然（変性）ＴＴＲに対する立体構造特異性を示すため、ウエスタンブロット解析を以下の通りに実施した：

【0359】

手順：
ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル
天然ＴＴＲ：ＬＤＳ試料緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）に組換えヒトＴＴＲを入れた試料１．０μｇ、０．５μｇ、および０．１μｇを１０％ＮｕＰＡＧＥビス‐トリスゲル（ＭＥＳ緩衝液；９０Ｖ、１０５分）上で泳動させ、ニトロセルロース膜に転写して、ウエスタンブロット解析に供した。

【0360】

変性ＴＴＲ：ＬＤＳ試料緩衝液が還元剤を含有し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥの前に煮沸によって試料を変性させた以外、天然ＴＴＲについて上に記載した通りに組換えヒトＴＴＲを調製した。

【0361】

ウエスタンブロット解析
ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルをニトロセルロース膜（ｉＢｌｏｔ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）上にブロットし、ブロッキング緩衝液（ＬＩ－ＣＯＲ社、リンカーン、ネブラスカ州）で処理し、１．０μｇ／ｍＬの一次抗体中でインキュベートし、１×ＴＢＳで洗浄し、１：２０，０００希釈のＩＲＤｙｅ ８００ＣＷコンジュゲートヤギ抗マウスおよび抗ウサギ二次抗体（ＬＩ－ＣＯＲ社、リンカーン、ネブラスカ州）に入れ、次いで、Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘ赤外線撮像装置（ＬＩ－ＣＯＲ社、リンカーン、ネブラスカ州）で撮像した。

【0362】

結果および結論：
天然組換えＴＴＲと変性ＴＴＲのウエスタンブロット（図１）から、１８Ｃ５は天然ＴＴＲ種に対する反応性は極めて弱い（レーン１～３）が、変性ＴＴＲ単量体（約１５ｋＤａ）に対する反応性は極めて強く、変性二量体（約３０ｋＤａ）に対する反応性は弱い（レーン５～７）ことがわかった。レーン４は分子量マーカーを示している。

【0363】

これとは対照的に、立体構造的に特異的でない市販のＴＴＲ抗体（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号ＨＰＡ００２５５０）は、天然ＴＴＲと変性ＴＴＲとを識別することはなく、単量体および二量体の天然ＴＴＲおよび変性ＴＴＲに対して極めて強い反応性を示した（図２）。レーン１～３は天然ＴＴＲの結果を示し；レーン４は分子量マーカーを示し、レーン５～７は変性ＴＴＲの結果を示している。

【0364】

実施例７．ヒト化１８Ｃ５抗体の設計
ヒト化の出発点、つまりドナー抗体をマウス抗体１８Ｃ５とした。成熟ｍ１８Ｃ５の重鎖可変アミノ酸配列を配列番号８１として記載する。成熟１８Ｃ５の軽鎖可変アミノ酸配列を配列番号８７として記載する。重鎖Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合体ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号５、７、および９として記載する。軽鎖Ｋａｂａｔ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１１、１３、および１５として記載する。全体を通じてＫａｂａｔ番号付けを用いる。

【0365】

１８Ｃ５の可変領域配列と、Ｋａｂａｔらによる抗体可変領域のコンセンサス配列とのアライメントから、１８Ｃ５の重鎖可変領域（ＶＨ）が、ヒトＶＨサブグループ３に対応するマウスＶＨサブグループ３ｂに属性ことがわかる。１８Ｃ５のカッパ軽鎖可変領域（ＶＬ）は、ヒトＶｋサブグループ２に対応するマウスＶｋサブグループ２に属する。［Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．ＮＩＨ公開番号９１－３２４２．］。

【0366】

ＶｋとメインとＶｈドメインとの界面にある残基は、Ａｌａが重鎖の３７位にあることを除いて共通にみられる残基であるのに対して、ＶａｌまたはＨｅは通常、この位置にある。Ｖｈの９５位にあるＬｅｕは通常、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、またはＳｅｒである。これらの位置は復帰変異の候補となる。Ｖｋ鎖のＧｌｕ３４は通常、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、またはＳｅｒであり、これらの位置は復帰変異の候補となる。

【0367】

マーチンによる配列に基づくＣＤＲ同定法則を用いて、１８Ｃ５のＶＨおよびＶＬのＣＤＲを同定した。次いで、Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ．（２０１０）．Ｉｎ：Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＲおよびＤｉｉｂｅｌ Ｓ（編）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ＡＧ．）の表３．５に示されているキー残基のまとめを用いて、ＣＤＲをＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラスに割り当てた：
ＣＤＲ－Ｈ１は、１０個のアミノ酸からなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１とほぼ同じである。
ＣＤＲ－Ｈ２は、１７個のアミノ酸からなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラス３とほぼ同じである。
ＣＤＲ－Ｈ３は、４個のアミノ酸からなり；ＣＤＲ－Ｈ３のクラスは存在しない。
ＣＤＲ－Ｌ１は、１６個のアミノ酸からなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラス４とほぼ同じである。
ＣＤＲ－Ｌ２は、７個のアミノ酸からなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１に属する。
ＣＤＲ－Ｌ３は、９個のアミノ酸からなり、Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラス１とほぼ同じである。

【0368】

１８Ｃ５の大まかな構造モデルになると思われる構造を見つけるため、ＰＤＢデータベースのタンパク質配列を検索した［Ｄｅｓｈｐａｎｄｅら，２００５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３：Ｄ２３３－Ｄ２３７］。マウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ＃１７（ＰＤＢコード５ＭＹＫ）の結晶構造［Ｐｉｅｃｈｏｔｔａ，Ａ．ら（（２０１１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９２：１２７１３－１２７２４］は、解像度に優れ（１．６Ａ）、全体的な配列が１８Ｃ５のＶｈおよびＶｋと類似し、同じループのカノニカル構造を保持していることから、Ｖｈ構造およびＶｋ構造にはともにこの結晶構造を用いた。Ｂｉｏｌｕｍｉｎａｔｅソフトウェアを用いて１８Ｃ５の大まかな構造をモデル化した。このソフトウェアは、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ社のライセンスを取得しているものである。

【0369】

１８Ｃ５のＶＨおよびＶＬのフレームワークは、Ｕｌｔｓｃｈ Ｍ．ら（（２０１６）Ｓｃｉ Ｒｅｐ．６：３９３７４）が設計したヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＰＤＢ：５ＶＺＹの対応する領域と高い配列類似性を共有する。１８Ｃ５とＣｒｅｎｅＦａｂの可変ドメインはまた、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３ループについて、同じ長さを共有している。ＣｒｅｎｅＦａｂのＶＨ（５ＶＺＹ－ＶＨ）およびＶＬ（５ＶＺＹ－ＶＬ）のフレームワーク領域を１８Ｃ５のＣＤＲに対するアクセプター配列として選択した。Ｂｉｏｌｕｍｉｎａｔｅソフトウェアを用いて構造をモデル化した。このソフトウェアは、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ社のライセンスを取得しているものである。

【0370】

抗体ヒト化工程で得た重鎖および軽鎖のバリアント配列についてさらに、ＥＶＩＧＴ Ｄｏｍａｉｎ ＧａｐＡｌｉｇｎツールを用い、ヒト生殖系列配列と配列比較して、ＷＨＯ ＩＮＮ委員会ガイドライン（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｎａｍｅｓ（ＩＮＮ）ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ａ ｒｅｖｉｅｗ）（インターネット）２０１４。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｉｎｎ／ＢｉｏＲｅｖ２０１４．ｐｄｆから入手可能）によって概説される通りに重鎖および軽鎖のヒト化度を評価した。ヒト化度を高めるため、可能な場合には、残基を変化させて対応するヒト生殖系列配列と配列比較した。ヒト化ＶＬ＿ｖ２バリアントには、Ｑ４５Ｒ変異を導入して、配列をヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０^＊０２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ７７３１５；配列番号９０）にさらに類似させた。ＣｒｅｎｅＦａｂのフレームワークと１８Ｃ５のＣＤＲとからなるアミノ酸配列をｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１と命名した。

【0371】

様々なフレームワーク残基の抗原結合および免疫原性に対する寄与の評価を可能にするため、ほかの型のｈｕ１８Ｃ５－ＶＨおよびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬも設計した。変異に考えられる位置としては、以下のものが挙げられる：
－カノニカルＣＤＲ立体構造を定める位置（Ｍａｒｔｉｎ ２０１０に総括されている）、
－バーニアゾーン内にある位置（Ｆｏｏｔｅ ＪおよびＷｉｎｔｅｒ Ｇ．（１９９２）．ＪＭｏｌＢｉｏｌ．２２４（２）：４８７－９９）、
－ＶＨ／ＶＬドメイン界面にある位置（Ｌｅｇｅｒ ＯＪＰおよびＳａｌｄａｎｈａ Ｊ．（２０００）Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｅ ｒｏｄｅｎｔ ｓｐｌｅｅｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ＣＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｓｈｅｐｈｅｒｄ Ｐ ａｎｄ Ｄｅａｎ Ｃ（編）．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓに総括されている）、
－グリコシル化もしくはピログルタミン化などの翻訳後修飾を受けやすい位置、
－クレネズマブＦａｂのフレームワーク上に移植した１８Ｃ５のＣＤＲのモデルに従い、ＣＤＲと衝突することが予測される残基によって占められている位置、または
－配列決定されているヒト抗体にはまれであり、親マウス１８Ｃ５残基もしくは何らかの他の残基の方がはるかに高頻度にみられる残基によって占められている、位置。

【0372】

様々な順列の置換を含むヒト化重鎖可変領域バリアント２種類およびヒト化軽鎖可変領域バリアント２種類：ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２（それぞれ配列番号８５～８６）ならびにｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２＿ｖ６（それぞれ配列番号９１～９２）（表６および７）を構築した。選択したヒトフレームワークに基づく復帰変異および他の変異を有する例示的なヒト化ＶｋおよびＶｈの設計を、それぞれ表６および７に示す。表６および７の太字の領域は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ複合体によって定義されるＣＤＲを示す。「＿」は、示される位置にアミノ酸がないことを示す。配列番号８６および９２には、表８に示すように、復帰変異および他の変異が含まれている。ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２中の位置にあるアミノ酸を表９に挙げる。ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２中の位置にあるアミノ酸を表１０に挙げる。最も類似したヒト生殖系列遺伝子ＩＧＨＶ３－４８^＊０１に対するヒト化ＶＨ鎖ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２（それぞれ配列番号８５～８６）のヒト化度のパーセントならびに最も類似したヒト生殖系列遺伝子ＩＧＫＶ２－３０^＊０２に対するヒト化ＶＬ鎖ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１およびｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２（それぞれ配列番号９１～９２）のヒト化度のパーセントを表１１に示す。

【0373】

【表6】

【0374】

【表7】

【0375】

【表8】

【0376】

【表9】

【0377】

【表10】

【0378】

【表11】

【0379】

Ｃｈｏｔｈｉａクラスカノニカル残基、バーニア残基、または界面／パッキング残基がマウスアクセプター配列とヒトアクセプター配列とで異なる位置が置換の候補となる。Ｃｈｏｔｈｉａクラスカノニカル残基の例としては、表６および７のＫａｂａｔ残基Ｈ４８が挙げられる。界面／パッキング（ＶＨ＋ＶＬ）残基の例としては、６および７のＫａｂａｔ残基Ｈ３５、Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３、Ｈ９５、Ｈ１０３、Ｌ３４、Ｌ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７、Ｌ８９、Ｌ９１、Ｌ９６、およびＬ９８が挙げられる。

【0380】

置換の候補として表６に示した軽鎖可変領域中の位置を選択した根拠は、以下の通りである。
Ｉ２ＶはＣｈｏｔｈｉａカノニカル残基の復帰変異である。
Ｑ４５ＲはＩＧＫＶ２－３０^＊０２生殖系列残基に対する変異である。Ｑは、ヒトでこの位置にあるのはまれである。Ｒはこの位置に頻繁にみられる。

【0381】

ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ１：ＣｒｅｎｅＦａｂのフレームワーク上に移植した１８Ｃ５－ＶＬ（５ＶＺＹ－ＶＬ）のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３ループ。

【0382】

ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２：Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するのに重要である、バーニアゾーンの一部である、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面にある位置でのあらゆるフレームワーク置換を復帰させる；ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿ｖ２は、ヒトアクセプターである復帰変異Ｉ２Ｖを生殖系列変異Ｑ４５Ｒに組み込んで、これらの位置の抗原結合親和性および免疫原性への寄与の評価を可能にする。

【0383】

軽鎖可変領域：
ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿１（配列番号９１）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿２（配列番号９２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

【0384】

置換の候補として表７に示した重鎖可変領域中の位置を選択した根拠は、以下の通りである。
Ｖ３７Ａ：バーニアゾーン内の復帰変異である。ＶａｌはＴｒｐ４７との反発相互作用を示す。
Ｌ４５Ｑ：Ｃｈｏｔｈｉａによるコア界面残基の復帰変異である。この位置のＬｅｕは反発的なファンデルワールス相互作用を示す。
Ｌ４７Ｗ：界面残基の復帰変異である。マウス１８Ｃ５では、Ｔｒｐが４７位にあり、ＴｒｐがＳｅｒ３５と水素結合を形成し、それにより鎖間ベータシートを安定化する。Ｌｅｕはいかなる残基とも全く海面を確立することはなく、立体構造を不安定化し得る。
Ｖ４８Ｉ：バーニアゾーン残基と相互作用してこの相互作用を保存する、ＣＤＲの復帰変異である。
Ａ４９Ｇ：バーニアゾーン残基の復帰変異である。
Ｓ９４Ｒ：ＣＤＲ相互作用を保存する、バーニアゾーン残基の復帰変異である。

【0385】

１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ１：ＣｒｅｎｅＦａｂ ＶＨのフレームワーク上に移植した１８Ｃ５－ＶＨ（５ＶＺＹ－ＶＨ）のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３ループ。

【0386】

Ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２：Ｃｈｏｔｈｉａカノニカルクラスを定義するのに重要である、バーニアゾーンの一部である、またはＶＨ／ＶＬドメイン界面にある位置でのあらゆるフレームワーク置換を復帰させる。１８Ｃ５－ＶＨ＿ｖ２は、復帰変異Ｖ３７Ａ、Ｌ４５Ｑ、Ｌ４７Ｗ、Ｖ４８Ｉ、Ａ４９Ｇ、およびＳ９４Ｒを組み込んで、これらの位置の抗原結合親和性および免疫原性への寄与の評価を可能にする。

【0387】

重鎖可変領域：
ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿１（配列番号８５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿２（配列番号８６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＡＲＱＡＰＧＫＧＱＥＷＩＧＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

【0388】

配列表：
配列番号１
シグナルペプチドを有する１８Ｃ５ ＶＨアミノ酸配列
ＭＤＦＧＬＩＦＦＩＶＡＬＬＫＧＶＱＣＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＮＬＳＣＶＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＡＲＱＡＰＧＲＧＱＥＷＩＧＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ

配列番号２
シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５ ＶＨをコードするヌクレオチド配列
ＡＴＧＧＡＴＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＡＴＴＧＴＴＧＣＣＣＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＡＧＧＴＡＡＡＧＣＴＴＣＴＣＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＡＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＴＴＣＧＡＴＴＴＴＡＧＴＡＧＡＴＴＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴＴＧＧＧＣＴＣＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＣＡＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＴＡＡＡＣＴＡＴＡＣＧＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＴＡＡＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＧＣＡＡＡＧＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＡＧＣＣＣＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＣＴＧＧＧＧＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＡＣＧＧＡＴＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ

配列番号３
シグナルペプチドを有する１８Ｃ５ ＶＬアミノ酸配列
ＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬＭＦＷＩＰＡＳＲＳＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ

配列番号４
シグナルペプチドを有するマウス１８Ｃ５ ＶＬをコードするヌクレオチド配列
ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＣＴＧＣＴＴＣＣＡＧＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＴＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＧＴＣＴＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＡＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＧＴＡＧＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴＡＧＡＡＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＴＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ

配列番号５
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳ

配列番号６
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ１をコードする核酸配列
ＧＧＡＴＴＣＧＡＴＴＴＴＡＧＴＡＧＡＴＴＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴ

配列番号７
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤ

配列番号８
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ２をコードする核酸配列
ＧＡＧＡＴＴＡＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＴＡＡＡＣＴＡＴＡＣＧＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＴ

配列番号９
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹ

配列番号１０
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｈ３をコードする核酸配列
ＣＴＧＧＧＧＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＡＣＧＧＡＴＧＧＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＡＣ

配列番号１１
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥ

配列番号１２
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ１をコードする核酸配列
ＡＧＡＴＣＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＧＴＡＧＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴＡＧＡＡ

配列番号１３
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＫＶＳＮＲＦＳ

配列番号１４
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ２をコードする核酸配列
ＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＴＴＣＴ

配列番号１５
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ

配列番号１６
１８Ｃ５ ＣＤＲ－Ｌ３をコードする核酸配列
ＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧ

配列番号１７
キメラ１８Ｃ５重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１）のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号１８
キメラ１８Ｃ５重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１）をコードする核酸
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ

配列番号１９
キメラ１８Ｃ５軽鎖定常領域（ヒトカッパ）のアミノ酸配列
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号２０
キメラ１８Ｃ５軽鎖定常領域（ヒトカッパ）のアミノ酸配列をコードする核酸配列
ＣＧＧＧＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ

配列番号２１
例示的ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＶＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号２２
例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号２３
例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号２４
Ｎ末端アルギニンを有する例示的軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号２５
Ｎ末端アルギニンを有さない例示的軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号２６
アクセッション番号Ｐ０２７６６．１（ＵｎｉＰｒｏｔ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列
ＭＡＳＨＲＬＬＬＬＣＬＡＧＬＶＦＶＳＥＡＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＥＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ
配列番号２７
アクセッション番号ＡＡＢ３５６３９．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列
ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＱＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ

配列番号２８
アクセッション番号ＡＡＢ３５６４０．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列
ＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＱＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ

配列番号２９
アクセッション番号およびＡＢＩ６３３５１．１（ＧｅｎＢａｎｋ）で表されるヒトトランスサイレチンのアミノ酸配列
ＭＡＳＨＲＬＬＬＬＣＬＡＧＬＶＦＶＳＥＡＧＰＴＧＴＧＥＳＫＣＰＬＭＶＫＶＬＤＡＶＲＧＳＰＡＩＮＶＡＶＨＶＦＲＫＡＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥＥＥＦＶＥＧＩＹＫＶＥＩＤＴＫＳＹＷＫＡＬＧＩＳＰＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ

配列番号３０
ヒトトランスサイレチンの残基１０１～１０９のアミノ酸配列
ＧＰＲＲＹＴＩＡＡ

配列番号３１
ヒトトランスサイレチンの残基８７～１２７のアミノ酸配列
ＦＨＥＨＡＥＶＶＦＴＡＮＤＳＧＰＲＲＹＴＩＡＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶＶＴＮＰＫＥ

配列番号３２
例示的ＩｇＧ１ Ｇ１ｍ３重鎖定常領域をコードする核酸配列
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＴＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡ

配列番号３３
Ｎ末端アルギニンを有する例示的軽鎖定常領域をコードする核酸配列
ＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３４
Ｎ末端アルギニンを有さない例示的軽鎖定常領域をコードする核酸配列
ＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３５
重鎖定常領域シグナルペプチドのアミノ酸配列
ＭＮＦＧＬＳＬＩＦＬＶＬＶＬＫＧＶＱＣ

配列番号３６
重鎖定常領域シグナルペプチドをコードする核酸配列
ＡＴＧＡＡＣＴＴＴＧＧＧＣＴＣＡＧＣＴＴＧＡＴＴＴＴＣＣＴＴＧＴＣＣＴＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴ

配列番号３７
軽鎖定常領域シグナルペプチドのアミノ酸配列
ＭＥＳＨＴＱＶＦＶＦＶＦＬＷＬＳＧＶＤＧ

配列番号３８
軽鎖定常領域シグナルペプチドをコードする核酸配列
ＡＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡＴＡＣＴＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧＴＡＴＴＣＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＧＧＴＴＧＴＣＴＧＧＴＧＴＴＧＡＣＧＧＡ

配列番号３９
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＳＹＴＭＳ

配列番号４０
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＥＩＮＮＳＧＤＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ

配列番号４１
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＨＹＹＹＧＧＧＹＧＧＷＦＦＤＶ

配列番号４２
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＮＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ

配列番号４３
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＲＶＳＮＬＡＳ

配列番号４４
１４Ｇ８のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＭＱＨＬＥＹＰＬＴ

配列番号４５
５Ａ１のエピトープ
ＥＨＡＥＶＶＦＴＡ

配列番号４６
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＮＹＡＭＳ

配列番号４７
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＳＩＳＳＧＧＳＴＹＹＰＤＳＶＫＧ

配列番号４８
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＹＹＹＧＱＹＦＤＦ

配列番号４９
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＫＡＳＱＤＶＳＴＴＶＡ

配列番号５０
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＳＡＳＹＲＣＴ

配列番号５１
５Ａ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＱＱＨＹＳＴＰＬＴ

配列番号５２
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＮＹＹＭＳ

配列番号５３
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＹＩＳＩＤＧＮＮＩＹＨＰＤＳＶＫＧ

配列番号５４
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＤＳＤＹＧＹＦＤＶ

配列番号５５
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ

配列番号５６
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＫＶＳＫＲＦＳ

配列番号５７
６Ｃ１のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＦＱＧＳＨＶＰＬＴ

配列番号５８
ＡＤ７Ｆ６のＶＨ領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＳＷＩＲＱＴＰＤＫＲＬＥＷＶＡＴＩＳＳＳＧＴＹＴＹＹＴＥＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＬＳＬＱＭＳＮＬＫＳＤＤＴＡＭＹＹＣＴＲＱＡＹＧＲＥＹＦＤＶＷＧＴＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＳＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＳＶＨＴＦＰＡＬＬＱＳＧＬＹＴＭＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＱＴＶＴＣＳＶＡＨＰＡＳＳＴＴＶＤＫＫＬＥＰＳＧＰＩＳＴＩＮＰＣＰＰＣＫＥＣＨＫＣＰＡＰＮＬＥＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＮＩＫＤＶＬＭＩＳＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＲＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＩＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＩＫＧＬＶＲＡＰＱＶＹＩＬＰＰＰＡＥＱＬＳＲＫＤＶＳＬＴＣＬＶＶＧＦＮＰＧＤＩＳＶＥＷＴＳＮＧＨＴＥＥＮＹＫＤＴＡＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＩＹＳＫＬＤＩＫＴＳＴＶＧＥＮＲＦＬＬＭＱＲＥＴＲＧＳＥＫＬＬＰＥＥＤＵＬＰＳＰＧＫ

配列番号５９
ＡＤ７Ｆ６のＶＬ領域のアミノ酸配列
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＦＤＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＫＱＳＮＹＬＲＴＦＧＧＧＴＲＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＦＩＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ

配列番号６０
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＲＹＷＩＴ

配列番号６１
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＤＩＹＰＧＳＧＲＴＮＹＮＥＫＦＫＮ

配列番号６２
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＹＹＧＳＴＹＦＹＶ

配列番号６３
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＳＫＳＬＬＹＫＤＧＫＴＹＬＮ

配列番号６４
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＭＳＴＲＡＳ

配列番号６５
ＲＴ２４のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＱＱＬＶＥＹＰＲＴ

配列番号６６
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＳＹＡＭＳ

配列番号６７
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＳＩＳＧＳＧＤＴＴＫＹＴＤＳＶＫＧ

配列番号６８
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＤＧＳＧＲＩＤＰＦＡＬ

配列番号６９
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＳＲＳＬＶＹＳＤＧＮＩＹＬＮ

配列番号７０
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＫＶＳＮＲＤＳＧ

配列番号７１
ＮＩ－３０１．３５Ｇ１１のＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＭＱＧＴＨＷＰＲＴ

配列番号７２
ＭＦＤ１０１、ＭＤＦ１０２、ＭＦＤ１０３、ＭＦＤ１０５のエピトープ
ＡＤＤＴＷＥＰＦＡＳＧＫＴ

配列番号７３
ＭＦＤ１０７、ＭＦＤ１０８、ＭＦＤ１０９、ＭＦＤ１１１のエピトープ
ＴＳＥＳＧＥＬＨＧＬＴＴＥ

配列番号７４
ＭＦＤ１１４のエピトープ
ＡＬＬＳＰＹＳＹＳＴＴＡＶ

配列番号７５
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＳＹＴＭＳ

配列番号７６
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＥＩＳＮＳＧＤＴＴＹＹＰＤＴＶＫＧ

配列番号７７
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＨＹＹＹＧＧＧＹＧＧＷＦＦＤＶ

配列番号７８
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ

配列番号７９
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＲＶＳＮＬＡＳ

配列番号８０
抗体９Ｄ５のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＭＱＨＬＥＹＰＬＴ

配列番号８１
マウス１８Ｃ５抗体の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＮＬＳＣＶＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＡＲＱＡＰＧＲＧＱＥＷＩＧＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＳＡＬＹＹＣＡＲＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ

配列番号８２
マウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ＃１７の重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＧＭＡＷＶＲＱＡＰＧＫＧＰＥＷＶＡＦＩＳＬＡＹＳＩＹＹＡＤＴＶＴＧＲＦＴＩＳＲＥＮＡＫＮＴＬＹＬＥＭＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＹＤＹＤＮＩＬＤＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ

配列番号８３
ヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＰＤＢ：５ＶＺＹの重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＳＩＮＳＮＧＧＳＴＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＧＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号８４
ヒト生殖系列配列ＩＧＨＶ３－４８^＊０１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号８５
ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿１の重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号８６
ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＨ＿２の重鎖可変領域のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＦＷＭＳＷＡＲＱＡＰＧＫＧＱＥＷＩＧＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号８７
マウス１８Ｃ５抗体の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ

配列番号８８
マウス抗ピログルタミン酸Ａベータ抗体Ｆａｂ ｃ＃１７の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＳＴＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ

配列番号８９
ヒト化クレネズマブＦａｂ（ＣｒｅｎｅＦａｂ）ＰＤＢ：５ＶＺＹの軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＹＳＮＧＤＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＳＴＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号９０
ヒト生殖系列配列ＩＧＫＶ２－３０^＊２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＨＷＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号９１
ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶL＿１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号９２
ヒト化１８Ｃ５抗体ｈｕ１８Ｃ５－ＶＬ＿２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＤＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号９３
マウス１８Ｃ５抗体のＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＲＦＷＭＳ

配列番号９４
マウス１８Ｃ５抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＧＦＤＦＳＲＦ

配列番号９５
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＳＲＦＷＭＳ

配列番号９６
マウス１８Ｃ５抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＮＰＧＳＳＴ

配列番号９７
マウス１８Ｃ５抗体のＡｂＭ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮ

配列番号９８
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列
ＷＩＧＥＩＮＰＧＳＳＴＩＮ

配列番号９９
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＡＲＬＧＹＧＮＹＧＷＡＬＤ

配列番号１００
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＮＴＹＬＥＷＹ

配列番号１０１
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦ

配列番号１０２
マウス１８Ｃ５抗体のＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＦＱＧＳＨＶＰＬ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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