特許 7360945 抗ヒトＧＰＶＩ抗体を用いた血小板凝集の阻害

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-04

(45)【発行日】2023-10-13

(54)【発明の名称】抗ヒトＧＰＶＩ抗体を用いた血小板凝集の阻害

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20231005BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231005BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20231005BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20231005BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20231005BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20231005BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/62 Z

A61K39/395 D

A61P9/10

A61P9/10 101

A61P7/02

A61P9/00

A61K39/395 N

【請求項の数】 20

(21)【出願番号】P 2019542193

(86)(22)【出願日】2018-02-02

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-03-12

(86)【国際出願番号】 EP2018052664

(87)【国際公開番号】W WO2018141909

(87)【国際公開日】2018-08-09

【審査請求日】2021-02-01

(31)【優先権主張番号】17154658.3

(32)【優先日】2017-02-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】518038906

【氏名又は名称】アクティコー バイオテック

(73)【特許権者】

【識別番号】520053762

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・シテ

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＰＡＲＩＳ ＣＩＴＥ

(73)【特許権者】

【識別番号】503455916

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・１３

【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＰＡＲＩＳ １３

(73)【特許権者】

【識別番号】507002516

【氏名又は名称】アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル）

(73)【特許権者】

【識別番号】321004758

【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・サクレー

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ビリアルド，フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】ジャンドロート－ペルス，マルティーヌ

(72)【発明者】

【氏名】アベナルド，ギレス

【審査官】山本 匡子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１０－５０７３８３（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５１４０７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２００６／１１８３５０（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－９０

Ｃ０７Ｋ

Ｃ１２Ｑ

ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＣＡＰＬＵＳ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／Ｇｅｎｅｓｅｑ

Ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｇｅｎｅｓｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する単離されたヒト化タンパク質を含む、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気の治療に使用するための組成物であって、前記単離されたヒト化タンパク質は、前記対象に少なくとも２時間投与され、
前記タンパク質は、抗体分子または抗体断片であり、
前記抗体分子または抗体断片の重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７を含み、
前記抗体分子または抗体断片の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８を含む、
組成物。

【請求項2】

前記単離されたヒト化タンパク質は、前記対象に少なくとも４～６時間投与される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記単離されたヒト化タンパク質は、注入される、請求項１または請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記単離されたヒト化タンパク質は、静脈内注入によって注入される、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のヒト化タンパク質が前記対象に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

約１ｍｇ／ｋｇ～約３２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のヒト化タンパク質が前記対象に投与される、請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

約８ｍｇ／ｋｇの用量のヒト化タンパク質が前記対象に投与される、請求項５または請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇの範囲の用量のヒト化タンパク質が前記対象に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

約５００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲の用量のヒト化タンパク質が前記対象に投与される、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記単離されたヒト化タンパク質の最初のボーラスが投与される、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項11】

前記最初のボーラスの投与は、投与される前記単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約２０％を含み、前記最初のボーラスは約１５分で投与される、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記タンパク質は１５ｎＭ未満のｈＧＰＶＩへの結合についてのＫ_Ｄを有し、前記Ｋ_Ｄは、９６０～１０７１ＲＵの可溶性ヒトＧＰＶＩおよびランニングバッファーとしてのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いる表面プラズモン共鳴によって測定され、前記単離されたヒト化タンパク質はインビボにおいてＧＰＶＩ枯渇表現型を誘導しない、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項13】

前記単離されたヒト化タンパク質は、全長抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂおよびユニボディからなる群から選択される抗体分子または抗体断片である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項14】

前記単離されたヒト化タンパク質は、一価である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記ＧＰＶＩに関連する病気は、動脈と静脈の血栓症、再狭窄、急性冠症候群、アテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害、虚血性脳卒中を含む脳血管疾患、静脈血栓塞栓症疾患、血栓性微小血管症、および血管性紫斑病から選択される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＧＰＶＩに関連する病気は、冠動脈および大脳動脈の疾患から選択される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項17】

前記ＧＰＶＩに関連する病気は、アテローム血栓症、虚血性イベント、急性冠動脈症候群、心筋梗塞、脳卒中、経皮的冠動脈介入、ステント血栓症、虚血性再狭窄、急性虚血、重症下肢虚血、慢性虚血、大動脈疾患およびその派生疾患、末梢動脈疾患、静脈血栓症、急性静脈炎、肺塞栓症、癌関連の血栓症、炎症性血栓症、および感染に関連する血栓症から選択される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項18】

前記対象が、前記タンパク質の投与の前に、または前記タンパク質の投与と同時に、または前記タンパク質の投与の後に、血栓溶解剤で治療される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項19】

前記血栓溶解剤が組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）である、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記対象が、血管内治療および／もしくは血栓摘出術によって、以前に治療されたか、またはこれから治療される、請求項１～１９のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は心血管疾患の治療に関する。特に本発明は、それを必要とするヒト患者への新規な抗ヒト糖タンパク質ＶＩ抗体またはその断片の連続投与を含む、心血管疾患を治療するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

現在、急性の冠動脈および脳血管障害は世界における主な死因である。また急性冠症候群に罹患してから治療後６ヶ月間における世界規模での再発および死亡の発生率はなお８～１５％である。

【0003】

ＳＴ上昇を有する急性冠症候群の場合、冠動脈血管形成術およびステントの導入による機械的治療は冠動脈の流れを緊急に回復させるには非常に効率的であるが、その後の６ヶ月間における患者の約１５％の罹患率／死亡率を防止するものではない。長期間の線維素溶解薬、抗凝固薬および抗凝集薬の組み合わせを用いる血栓溶解治療でさえもそれほど有望な結果は得られない。実際に、血栓症の医学的治療における向上にも関わらず、６ヶ月後の罹患率／死亡率はＳＴ上昇を有しない急性冠症候群で観察されるものと同様である。

【0004】

虚血性脳血管障害に関する治療は一般に、大部分の患者の治療の遅れや現在入手可能な抗血栓治療の出血のリスクが原因でなお非常に限られている。

【0005】

従って、心血管疾患の治療を向上させる臨床的必要性、特に入手可能な分子と比較して向上した特徴を有する新しい分子および前記分子を投与するための特定の投薬計画の臨床的必要性がなお存在する。直面する課題は、病的血栓症に対して優れた効率を有するが出血のリスクのない分子および投与プロトコルを得ることである。

【0006】

この要求に答えるために、その標的は健康な血管において出血を抑えることが求められる生理的止血よりも罹患した血管において生じる血栓形成においてより大きな役割を有するものでなければならない。これは、脳卒中を含む実験的血栓症すなわち血管リモデリングにおいて役割を担い、かつアテローム血栓症において重要であることが動物において実証されている血小板糖タンパク質ＶＩ（Glycoprotein VI：ＧＰＶＩ）の場合である。

【0007】

血栓症治療において現在使用されており、かつ血小板の最終活性化段階、すなわち血小板凝集を阻害するαＩＩｂβ３インテグリン拮抗薬および血小板動員拮抗薬（Ｐ２Ｙ１２ ＡＤＰ受容体阻害剤およびアスピリン）とは対照的に、ＧＰＶＩは血小板血栓の形成のいくつかの工程、すなわち損傷した血管壁との相互作用による開始、二次的作用物質の分泌を生じさせる最初の血小板活性化による増幅、インテグリンおよび血小板凝固促進活性の活性化、フィブリンとの相互作用による増殖および安定化に関わっている（Ｍａｍｍａｄｏｖａ－Ｂａｃｈら，２０１５．Ｂｌｏｏｄ．１２６（５）：６８３－９１）。従って、ＧＰＶＩ拮抗薬は血小板凝集だけでなく、血管の病変の発生を引き起こす二次的作用物質の遊離ならびに増殖因子およびサイトカイン分泌も防止することができる。最後に、ＧＰＶＩ発現は血小板および巨核球に限定され、従って抗血栓治療の完全に特異的な標的であることを表している。

【0008】

そこで、心血管疾患を治療するためにＧＰＶＩ拮抗薬が開発された。

【0009】

国際公開第２００１／０００８１０号および国際公開第２００３／００８４５４号はどちらもＧＰＶＩ細胞外ドメインとヒトＩｇのＦｃドメインとの間の融合タンパク質である可溶性ＧＰＶＩ組換えタンパク質について記載している。この可溶性組換えＧＰＶＩタンパク質はコラーゲンに結合するために血小板ＧＰＶＩと競合する。最初はこの可溶性ＧＰＶＩタンパク質により血栓症マウスモデルにおいて有望な結果が得られたが、これらの結果は立証されなかった。またこの手法は構造上、機能上および薬理上の欠点を含む。第１にこの化合物は高分子量キメラタンパク質（約１６０ｋＤａ）である。ＧＰＶＩ－Ｆｃは血管損傷部位において露出されたコラーゲンを標的にし、その量および到達性は予測可能性が不十分であり、従って注入される製品の量はＧＰＶＩ－Ｆｃの使用上の潜在的限界となる。別の限界は融合タンパク質上で潜在的に露出された新エピトープに対する免疫化のリスクである。

【0010】

ヒトＧＰＶＩに対する中和モノクローナル抗体についても当該技術分野において記載されている。

【0011】

例えば、ＥＰ１２２４９４２およびＥＰ１２２８７６８は、血栓性疾患の治療のためのマウスＧＰＶＩに特異的に結合するラット抗ＧＰＶＩモノクローナル抗体ＪＡＱ１を開示している。ＪＡＱ１抗体は、マウス血小板上のＧＰＶＩ受容体の不可逆的な内部移行を誘導する。

【0012】

ＥＰ１５３８１６５は、別のラット抗ＧＰＶＩモノクローナル抗体（ｈＧＰ ５Ｃ４）について記載しており、そのＦａｂ断片はコラーゲン刺激によって誘導される血小板の主要な生理的機能に対して顕著な阻害効果を有することが分かった。すなわち、コラーゲンによって媒介される生理的活性化マーカーＰＡＣ－ＩおよびＣＤ６２Ｐ－セレクチンの刺激はｈＧＰ ５Ｃ４のＦａｂによって完全に防止され、ｈＧＰ ５Ｃ４のＦａｂはどんな内因活性も引き起こすことなくエクスビボでヒト血小板凝集を強力に阻害した。しかし、５Ｃ４はラット抗体であり、従って非常に限られた治療可能性しか示さない。

【0013】

国際公開第２００５／１１１０８３号は、４種類のマウス抗ＧＰＶＩモノクローナル抗体ＯＭ１、ＯＭ２、ＯＭ３およびＯＭ４について記載しており、これらはインビトロでのＧＰＶＩのコラーゲンへの結合、コラーゲンに誘導される分泌およびトロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）形成ならびにエクスビボでのカニクイザルへの静脈内注射後のコラーゲン誘導性血小板凝集を阻害することが分かった。ＯＭ４はラット血栓症モデルにおいて血栓形成を阻害するようにも見える。

【0014】

国際公開第２００１／０００８１０号は、８Ｍ１４．３、３Ｆ８．１、９Ｅ１８．３、３Ｊ２４．２、６Ｅ１２．３、１Ｐ１０．２、４Ｌ７．３、７Ｈ４．６、９Ｏ１２．２、７Ｈ１４．１および９Ｅ１８．２という名称の各種マウス抗ＧＰＶＩモノクローナル抗体ならびにＡ９、Ａ１０、Ｃ９、Ａ４、Ｃ１０、Ｂ４、Ｃ３およびＤ１１という名称のいくつかのヒトファージ抗体ｓｃＦｖ断片についても記載している。抗体９Ｅ１８．３、７Ｈ４．６および９Ｏ１２．２ならびにｓｃＦｖ断片Ａ１０、Ａ４、Ｃ１０、Ｂ４、Ｃ３およびＤ１１などのこれらの抗体およびｓｃＦｖ断片のいくつかは、ＧＰＶＩのコラーゲンへの結合を阻害することが分かった。また、９Ｏ１２．２Ｆａｂ断片は、コラーゲン誘導性血小板凝集および分泌を完全に阻止し、フィブリン誘導性血小板凝集を阻止し、コラーゲン刺激性またはフィブリン刺激性血小板凝固促進活性および静的条件下でのコラーゲンまたはフィブリンへの血小板接着を阻害して血小板接着を減じて、動脈流条件下で血栓形成を防止することが分かった。

【0015】

国際公開第２００８／０４９９２８号は、９Ｏ１２．２に由来し、かつ（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３ペプチドを介して結合された９Ｏ１２．２モノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬドメインからなるｓｃＦｖ断片について記載している。

【0016】

しかし、現在知られている抗ＧＰＶＩ抗体はどれもインビボでは心血管疾患を予防および／または治療するのに効率的でないことが分かった。特に、報告されている抗ＧＰＶＩ抗体の大部分は、特にそれらが動物由来であるという理由でヒトにおける医学的使用のための抗血栓薬の開発には適していないように見えた。

【0017】

特に、ヒトＧＰＶＩに対するいくつかのヒトファージ抗体ｓｃＦｖは阻害性であることが報告されているが、それらの親和性は低いように見える。さらに、９Ｏ１２．２全長ＩｇＧなどの二価もしくは多価のリガンドによる血小板表面におけるＧＰＶＩの架橋結合により、ＧＰＶＩ二量体化およびＧＰＶＩの低親和性Ｆｃ受容体（ＦｃγＲＩＩＡ）への架橋結合を介して血小板の活性化が生じる。対照的に、一価の９Ｏ１２．２ＦａｂおよびｓｃＦｖ断片は阻害性である。

【0018】

しかし、これらの断片はそれらのサイズおよびヒト患者においてそれらを免疫原性にさせるそれらの動物由来性により治療薬で使用することができなかった。さらに、ｓｃＦｖ断片はそれらの治療可能性を制限する短い半減期を示す。

【0019】

従って、ヒトにおいて免疫原性を有しない中和ＧＰＶＩ拮抗薬がなお必要とされている。

【0020】

ＵＳ２００６／００８８５３１は、約７．９×１０^－７ＭのヒトＧＰＶＩへの結合のためのＫ_Ｄを示すヒトｓｃＦｖ断片１０Ｂ１２について記載している。Ｓｍｅｔｈｕｒｓｔ（Ｓｍｅｔｈｕｒｓｔら，２００４．Ｂｌｏｏｄ．１０３（３）：９０３－１１）は、ヒトＧＰＶＩのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１（Ｄ１）上の１０Ｂ１２によって結合されるエピトープについてさらに記載している。このエピトープは、ヒトＧＰＶＩの残基Ｒ５８、Ｋ６１、Ｒ６６、Ｋ７９およびＲ８０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９ＨＣＮ６に基づく番号付け）を含む。

【0021】

またＯ’Ｃｏｎｎｏｒ（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら，２００６．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（４４）：３３５０５－１０）は、ＧＰＶＩに対して低い親和性（５．４×１０^－７Ｍ）を有するヒトｓｃＦｖ断片１Ｃ３について記載しており、これはコラーゲン誘導性血小板凝集もＧＰＶＩのコラーゲンへの結合も阻止しなかったが、１０Ｂ１２抗体の阻害効果を増強させた。ＧＰＶＩ中の１Ｃ３エピトープはアミノ酸Ｉ１６８を含み、このエピトープがマウスからヒトに高度に保存されている領域である残基Ｓ１６４とＳ１８２との間の領域を包含しているかもしれないとさらに仮定される。

【0022】

そこで、ヒトにおける心血管疾患を効率的かつ満足に予防および／または治療するための手段として、先行技術の拮抗薬と比較して向上した親和性、有効性および半減期を有するヒト化抗体（すなわち、ヒトにおいて免疫原性を有しない抗体）が必要とされている。さらに、これらの拮抗薬は好ましくは容易に精製されるものでなければならない。

【0023】

当該技術分野において、ＧＰＶＩ枯渇表現型を誘導する抗ＧＰＶＩ抗体が記載されている（国際公開第２００６／１１８３５０号、国際公開第２０１１／０７３９５４号、ＥＰ２３６３４１６）。特に国際公開第２００６／１１８３５０号は、全ての哺乳類に対する抗ＧＰＶＩ抗体を開示している。この抗体によって結合されるＧＰＶＩのエピトープが記載されており、これはＧＰＶＩのＩｇ様Ｃ２型ドメイン２のループ９および１１に対応し、アミノ酸残基１３６～１４２および１５８～１６２にそれぞれ対応する。

【0024】

しかし、ＧＰＶＩ枯渇は制御できず、かつ不可逆的であるため望ましくない（すなわち、巨核球に対するＧＰＶＩ枯渇により血小板の寿命を持続させたりさらに引き延ばしたりする）。

【0025】

治療においては迅速かつ安全であって長期的（数時間という範囲）な抗血小板効果が必要とされる。従って、ＧＰＶＩ枯渇表現型を誘導せず、かつ好ましくはインビボでの血小板数の減少を誘導しない（すなわち可逆的効果を有する）抗体を開発しなければならない。

【0026】

本出願人は抗ＧＰＶＩ抗体を開発したが、前記抗体またはその抗原結合断片は、新規なこれまで記載されていない立体構造エピトープに結合する。前記抗ＧＰＶＩ抗体はヒトＧＰＶＩに対して強力な親和性を有し、かつインビボにおいて血小板数を減少させたりＧＰＶＩを枯渇させたりすることなくＧＰＶＩのそのリガンド（コラーゲンやフィブリンなど）との相互作用を阻止する。少なくとも２時間にわたって連続投与した場合、本抗体（またはその断片）は長期的なインビボ効果を示す。従って、本発明はヒトＧＰＶＩまたはその断片に特異的な向上したヒト化中和抗体の治療的使用に関する。

【発明の概要】

【0027】

本発明は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するための、ヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する単離されたヒト化タンパク質であって、当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間投与される単離されたヒト化タンパク質に関する。

【0028】

一実施形態では、本単離されたヒト化タンパク質は、好ましくは静脈内注入によって注入される。別の実施形態では、本単離されたヒト化タンパク質は腹腔内に注射される。

【0029】

一実施形態では、当該患者に約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約３２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約２．５ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの範囲、なおさらにより好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量のヒト化タンパク質が投与される。

【0030】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質の用量は、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇ、好ましくは約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇまたは約５００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲である。

【0031】

一実施形態では、最初のボーラスが投与され、好ましくは前記最初のボーラス投与は、投与される本単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約１０～５０％、好ましくは約２０％を含み、好ましくは前記最初のボーラスは約５～３０分、好ましくは約１５分で投与される。

【0032】

一実施形態では、前記タンパク質は、
－ ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、
－ ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と
を含む立体構造エピトープに結合する。

【0033】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基とを含む。

【0034】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３６またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３６と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはｈＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基とを含む。

【0035】

一実施形態では、前記タンパク質は１５ｎＭ未満のｈＧＰＶＩへの結合についてのＫ_Ｄを有し、前記Ｋ_Ｄは９６０～１０７１ＲＵの可溶性ヒトＧＰＶＩおよびランニングバッファーとしてのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いる表面プラズモン共鳴によって測定され、かつ前記単離されたヒト化タンパク質はインビボにおいてＧＰＶＩ枯渇表現型を誘導しない。

【0036】

一実施形態では、本発明に係る使用のためのｈＧＰＶＩに結合する単離されたヒト化タンパク質は、全長抗体（whole antibody）、ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂからなる群から選択される抗体分子、またはユニボディ、ドメイン抗体およびナノボディからなる群から選択される抗体断片、またはアフィボディー（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）、アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）、エバシン（ｅｖａｓｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）およびバーサボディー（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）からなる群から選択される単量体抗体模倣体、好ましくは一価の抗体である。

【0037】

一実施形態では、ｈＧＰＶＩに結合する本単離された抗体分子は、
－ 重鎖の可変領域が以下のＣＤＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＧＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＧＴＶＶＧＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）
のうちの少なくとも１つまたは配列番号１～３と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲを含み、かつ
－ 軽鎖の可変領域が以下のＣＤＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号４）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＬＱＬＴＨＶＰＷＴ（配列番号６）
のうちの少なくとも１つまたは配列番号４～６と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲを含む、
抗体分子である。

【0038】

一実施形態では、重鎖の可変領域はＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨ（配列番号１）、ＧＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）およびＧＴＶＶＧＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）のＣＤＲを含み、かつ軽鎖の可変領域はＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号４）、ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）およびＬＱＬＴＨＶＰＷＴ（配列番号６）のＣＤＲを含むか、あるいは前記配列番号１～６と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意のＣＤＲを含む。

【0039】

一実施形態では、重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列は配列番号７であり、かつ軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列は配列番号８であるか、あるいは前記配列番号７または８と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意の配列である。

【0040】

一実施形態では、重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列は配列番号７であり、かつ軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列は配列番号９であるか、あるいは前記配列番号７または９と少なくとも６０％の同一性を共有するアミノ酸配列を有する任意の配列である。

【0041】

一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は、動脈と静脈の血栓症、再狭窄、急性冠症候群、およびアテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害から選択される心血管疾患である。

【0042】

一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は、動脈と静脈の血栓症、再狭窄、急性冠症候群、アテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害、心筋梗塞、肺塞栓症、重症下肢虚血および末梢動脈疾患から選択される心血管疾患である。

【発明を実施するための形態】

【0043】

「糖タンパク質ＶＩ（ＧＰＶＩ）」は、血小板とコラーゲンとの相互作用に関与する血小板膜糖タンパク質である。ＧＰＶＩは血小板の表面で発現される膜貫通コラーゲン受容体である。一実施形態では、ヒトＧＰＶＩのアミノ酸配列は、配列番号１３（受入番号：ＢＡＡ８９３５３．１）または配列番号１３と少なくとも約９０％の同一性、好ましくは配列番号１３と少なくとも約９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれ以上の同一性を示す任意のアミノ酸配列である。
（配列番号１３）
ＭＳＰＳＰＴＡＬＦＣＬＧＬＣＬＧＲＶＰＡ（シグナルペプチド）
ＱＳＧＰＬＰＫＰＳＬＱＡＬＰＳＳＬＶＰＬＥＫＰＶＴＬＲＣＱＧＰＰＧＶＤＬＹＲＬＥＫＬＳＳＳＲＹＱＤＱＡＶＬＦＩＰＡＭＫＲＳＬＡＧＲＹＲＣＳＹＱＮＧＳＬＷＳＬＰＳＤＱＬＥＬＶＡＴＧＶＦＡＫＰＳＬＳＡＱＰＧＰＡＶＳＳＧＧＤＶＴＬＱＣＱＴＲＹＧＦＤＱＦＡＬＹＫＥＧＤＰＡＰＹＫＮＰＥＲＷＹＲＡＳＦＰＩＩＴＶＴＡＡＨＳＧＴＹＲＣＹＳＦＳＳＲＤＰＹＬＷＳＡＰＳＤＰＬＥＬＶＶＴＧＴＳＶＴＰＳＲＬＰＴＥＰＰＳＳＶＡＥＦＳＥＡＴＡＥＬＴＶＳＦＴＮＫＶＦＴＴＥＴＳＲＳＩＴＴＳＰＫＥＳＤＳＰＡＧＰＡＲＱＹＹＴＫＧＮ（細胞外ドメイン）
ＬＶＲＩＣＬＧＡＶＩＬＩＩＬＡＧＦＬＡＥＤＷＨＳＲＲＫＲＬＲＨＲＧＲＡＶＱＲＰＬＰＰＬＰＰＬＰＱＴＲＫＳＨＧＧＱＤＧＧＲＱＤＶＨＳＲＧＬＣＳ（膜貫通ドメインと細胞質ドメイン）

【0044】

ＧＰＶＩの細胞外ドメインは２つのＩｇ様Ｃ２型ドメイン、すなわちドメイン間ヒンジによって結合されたＤ１およびＤ２からなる。一実施形態では、Ｄ１は配列番号１３のアミノ酸残基２１～１０９を含む。一実施形態では、Ｄ１とＤ２とのドメイン間ヒンジは配列番号１３のアミノ酸残基１１０～１１３を含む。一実施形態では、Ｄ２は配列番号１３のアミノ酸残基１１４～２０７を含む。

【0045】

数字の前の「約」は前記数字の値の±１０％を意味する。

【0046】

「抗体」または「免疫グロブリン」－本明細書で使用される「免疫グロブリン」という用語は、あらゆる関連する特異的免疫反応性を有するか否かに関わらず２本の重鎖および２本の軽鎖の組み合わせを有するタンパク質を含む。「抗体」とは、目的の抗原（例えばヒトＧＰＶＩ）に対する有意な公知の特異的免疫反応活性を有するそのような組立体を指す。「抗ＧＰＶＩ抗体」という用語は、ヒトＧＰＶＩタンパク質に対する免疫学的特異性を示す抗体を指すように本明細書で使用される。本明細書のどこかで説明されているように、ヒトＧＰＶＩに対する「特異性」はＧＰＶＩの種相同体との交差反応を除外しない。抗体および免疫グロブリンはそれらの間の鎖間共有結合の有無に関わらず軽鎖および重鎖を含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は比較的よく理解されている。「免疫グロブリン」という一般名称は、生化学的に識別することができる５つの異なるクラスの抗体を含む。５つの全てのクラスの抗体が本発明の範囲内であるが、以下の考察は一般にＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子に関するものである。ＩｇＧに関して、免疫グロブリンは、約２３，０００ダルトンの分子量の２本の同一のポリペプチド軽鎖と約５３，０００～７０，０００ダルトンの分子量の２本の同一の重鎖とを含む。これらの４本の鎖はジスルフィド結合によって「Ｙ字型」に結合されており、軽鎖は「Ｙ字型」の口部から開始し、かつ可変領域を通してずっと続く重鎖を囲んでいる。抗体の軽鎖はカッパまたはラムダ（［κ］、［λ］）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスはカッパまたはラムダ軽鎖のいずれかに結合されていてもよい。一般に、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって産生される場合、軽鎖および重鎖は共有結合的に互いに結合されており、２本の重鎖の「尾部」領域は共有結合的ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合されている。重鎖におけるアミノ酸配列はＹ字型の分岐した端部にあるＮ末端から各鎖の底部にあるＣ末端まで続いている。当業者であれば、重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、それらの中にいくつかのサブクラス（例えばγ１～γ４）があることを分かっているであろう。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などは十分に特性解析されており、機能分化を与えることが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾型は本開示を考慮すれば当業者には容易に識別可能であり、従って本発明の範囲内である。前述のとおり、抗体の可変領域により抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識して特異的に結合することができる。すなわち、抗体の軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）および重鎖可変領域（ＶＨドメイン）は一緒になって３次元抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この４つからなる抗体構造は「Ｙ」の各アームの端部に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位はＶＨおよびＶＬ鎖のそれぞれにある３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって画定される。

【0047】

「単離された抗体」－本明細書で使用される「単離された抗体」は、その天然環境の成分から分離および／または回収された抗体である。その天然環境の夾雑成分は抗体の診断もしくは治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク性もしくは非タンパク性成分が挙げられる。好ましい実施形態では、当該抗体は、（１）ローリー法で測定した場合に抗体の８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５重量％またはそれ以上を超えるまで、最も好ましくは９９重量％を超えるまで精製されているか、（２）スピニングカップシークエネーターを用いて、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで精製されているか、あるいは（３）還元もしくは非還元条件下でクマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いるＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均質性が示されるまで精製されている。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１種の成分が存在していないため、組換え細胞内の原位置の抗体を含む。但し通常は、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程によって調製される。

【0048】

「親和性バリアント」－本明細書で使用される「親和性バリアント」という用語は、参照抗ＧＰＶＩ抗体と比較した場合にアミノ酸配列において１つ以上の変化を示すバリアント抗体を指し、親和性バリアントは参照抗体と比較してヒトＧＰＶＩタンパク質との親和性の変化を示す。典型的には、親和性バリアントは参照抗ＧＰＶＩ抗体と比較した場合にヒトＧＰＶＩに対して向上した親和性を示す。その向上は、ヒトＧＰＶＩに対するより低いＫ_Ｄ、ヒトＧＰＶＩに対するより高いＫ_Ａ、ヒトＧＰＶＩに対するより速い結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）またはヒトＧＰＶＩに対するより遅い解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）のいずれか、あるいは非ヒトＧＰＶＩ相同体との交差反応性のパターンにおける変化であってもよい。親和性バリアントは典型的に、参照抗ＧＰＶＩ抗体と比較した場合にアミノ酸配列（例えばＣＤＲなど）における１つ以上の変化を示す。そのような置換により、天然に生じるアミノ酸残基または天然に生じないアミノ酸残基であってもよい異なるアミノ酸残基によるＣＤＲ内の所与の位置に存在する元のアミノ酸の再配置が生じてもよい。アミノ酸置換は保存的であっても非保存的であってもよい。

【0049】

「結合部位」－本明細書で使用される「結合部位」という用語は、目的の標的抗原（例えばヒトＧＰＶＩ）への選択的結合に関与するタンパク質の領域を含む。結合ドメインまたは結合領域は少なくとも１つ結合部位を含む。例示的な結合ドメインとしては抗体可変領域が挙げられる。本発明のタンパク質は、単一の抗原結合部位または複数の（例えば、２つ、３つまたは４つの）抗原結合部位を含んでいてもよい。但し好ましくは、本発明のタンパク質は単一の抗原結合部位を含む。

【0050】

「保存的アミノ酸置換」－本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、ペプチド化学の当業者がポリペプチドの二次構造および親水性／疎水性（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｎａｔｕｒｅ）が実質的に変わっていないことを期待するような同様の特性を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。従って、アミノ酸置換は一般にアミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えばそれらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づいている。上記特性のいくつかを考慮した例示的な置換は当業者によく知られており、アルギニンとリジン、グルタミン酸とアスパラギン酸、セリンとトレオニン、グルタミンとアスパラギン、およびバリンとロイシンとイソロイシンが挙げられる。さらに残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性における類似性に基づいてアミノ酸置換を行ってもよい。例えば、負に荷電したアミノ酸としてはアスパラギン酸とグルタミン酸が挙げられ、正に荷電したアミノ酸としてはリジンとアルギニンが挙げられ、同様の親水性値を有する荷電していない極性の頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシンとイソロイシンとバリン、グリシンとアラニン、アスパラギンとグルタミン、およびセリンとトレオニンとフェニルアラニンとチロシンが挙げられる。保存的変化を表し得るアミノ酸の他の群としては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ、（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ、（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ、および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。同様の側鎖を有するアミノ酸残基の他のファミリーが当該技術分野で定義されおり、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。このように、免疫グロブリンポリペプチド内の非必須アミノ酸残基は同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基で置換されていてもよい。別の実施形態では、アミノ酸の鎖は側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成において異なる構造的に同様の鎖で置換されていてもよい。

【0051】

「キメラ」－本明細書で使用される「キメラ」タンパク質は、本来は天然に結合されない第２のアミノ酸配列に結合された第１のアミノ酸配列を含む。そのアミノ酸配列は、通常は融合タンパク質において１つになる別個のタンパク質中に存在してもよく、あるいは通常は同じタンパク質中に存在してもよいが、融合タンパク質において新しい配列で配置されている。キメラタンパク質は例えば化学合成によって、あるいはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを作製および翻訳することによって作り出してもよい。

【0052】

「ＣＤＲ」－本明細書で使用される「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に存在する非隣接抗原結合部位を意味する。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら，１９９１．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（５）：１７０９－１９）ならびにＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．およびＡ．Ｍ．Ｌｅｓｋ，１９８７．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１－１７）から推定される以下の規則に従ってＣＤＲを同定した。
－ ＣＤＲ－Ｌ１：
開始－およそ残基２４
前の残基は常にＣｙｓ
後の残基は常にＴｒｐ。典型的にはＴＲＰ－ＴＹＲ－ＧＬＮであるが、ＴＲＰ－ＬＥＵ－ＧＬＮ、ＴＲＰ－ＰＨＥ－ＧＬＮ、ＴＲＰ－ＴＹＲ－ＬＥＵであってもよい
長さは１０～１７残基
－ ＣＤＲ－Ｌ２：
開始－Ｌ１の終了後に常に１６残基
前の残基は一般にＩＬＥ－ＴＹＲであるが、ＶＡＬ－ＴＹＲ、ＩＬＥ－ＬＹＳ、ＩＬＥ－ＰＨＥであってもよい
長さは常に７残基
－ ＣＤＲ－Ｌ３：
開始－Ｌ２の終了後に常に３３残基
前の残基は常にＣｙｓ
後の残基は常にＰＨＥ－ＧＬＹ－ＸＸＸ－ＧＬＹ（配列番号２１）
長さは７～１１残基
－ ＣＤＲ－Ｈ１：
開始－およそ残基２６（ＣＹＳの後に常に４残基）、［Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭ定義］Ｋａｂａｔ定義は５残基後から開始
前の残基は常にＣＹＳ－ＸＸＸ－ＸＸＸ－ＸＸＸ（配列番号２２）
後の残基は常にＴＲＰ。典型的にはＴＲＰ－ＶＡＬであるが、ＴＲＰ－ＩＬＥ、ＴＲＰ－ＡＬＡであってもよい
長さは１０～１２残基（ＡｂＭ定義）、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は最後の４残基を除外する
－ ＣＤＲ－Ｈ２：
開始－ＣＤＲ－Ｈ１の終了（Ｋａｂａｔ／ＡｂＭ定義）後に常に１５残基
前の残基は典型的にＬＥＵ－ＧＬＵ－ＴＲＰ－ＩＬＥ－ＧＬＹ（配列番号２３）であるが、多くの変形が可能である
後の残基はＬＹＳ／ＡＲＧ－ＬＥＵ／ＩＬＥ／ＶＡＬ／ＰＨＥ／ＴＨＲ／ＡＬＡ－ＴＨＲ／ＳＥＲ／ＩＬＥ／ＡＬＡ
長さはＫａｂａｔ定義の１６～１９残基（ＡｂＭ定義は７残基前で終了）
－ ＣＤＲ－Ｈ３：
開始－ＣＤＲ－Ｈ２の終了後に常に３３残基（常にＣＹＳの後に２残基）
前の残基は常にＣＹＳ－ＸＸＸ－ＸＸＸ（典型的にはＣＹＳ－ＡＬＡ－ＡＲＧ）
後の残基は常にＴＲＰ－ＧＬＹ－ＸＸＸ－ＧＬＹ（配列番号２４）
長さは３～２５残基

【0053】

「ＣＨ２ドメイン」－本明細書で使用される「ＣＨ２ドメイン」という用語は、通常は約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０まで延在する重鎖分子の領域を含む。ＣＨ２ドメインは別のドメインと密接に対をなしていないという点で独特である。それどころか、２つのＮ結合された分岐鎖状炭水化物鎖がインタクトな天然のＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に挿入されている。この炭水化物はドメイン－ドメイン対形成の代わりとなってＣＨ２ドメインの安定化を助けることができると推測されている（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（１９８５）１６１－２０６）。

【0054】

「～に由来する」－本明細書で使用される、指定のタンパク質（例えば抗ＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片）「に由来する」という用語は、タンパク質の由来を指す。一実施形態では、特定の開始タンパク質に由来するタンパク質またはアミノ酸配列はＣＤＲ配列またはそれに関連する配列である。一実施形態では、特定の開始タンパク質に由来するアミノ酸配列は隣接していない。例えば一実施形態では、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲは開始抗体に由来している。一実施形態では、特定の開始タンパク質またはアミノ酸配列に由来するタンパク質またはアミノ酸配列は、開始配列またはその領域のアミノ酸配列と本質的に同一のアミノ酸配列を有し、その領域は少なくとも３～５個のアミノ酸、少なくとも５～１０個のアミノ酸、少なくとも１０～２０個のアミノ酸、少なくとも２０～３０個のアミノ酸または少なくとも３０～５０個のアミノ酸からなり、あるいはそれ以外に開始配列にその由来を有するものとして当業者によって同定可能である。一実施形態では、開始抗体に由来する１つ以上のＣＤＲ配列を変化させて、ＧＰＶＩ結合活性を維持するバリアントＣＤＲ配列、例えば親和性バリアントを作製する。

【0055】

「二重特異性抗体」－本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、Ｖドメインの鎖間であるが鎖内でない対形成が達成され、それにより二価の断片すなわち２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個の残基）を有するｓＦｖ断片（ｓＦｖのパラグラフを参照）を構築することによって調製された小さい抗体断片を指す。二重特異性抗体は、２つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「交差」ｓＦｖ断片からなるヘテロ二量体である。二重特異性抗体については、例えば欧州特許第０４０４０９７号、国際公開第１９９３／０１１１６１号およびＨｏｌｌｉｇｅｒ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら，１９９３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０（１４）：６４４４－６４４８）により完全に記載されている。

【0056】

「操作された」－本明細書で使用される「操作された」という用語は、合成手段（例えば、組換え技術、ペプチドの酵素結合または化学的結合によるインビトロでのペプチド合成、あるいはこれらの技術のいくつかの組み合わせ）による核酸またはポリペプチド分子の操作を含む。好ましくは本発明の抗体は操作されており、例えば、ヒト化および／またはキメラ抗体、および抗原結合、安定性／半減期またはエフェクター機能などの１つ以上の特性を向上させるように操作されている抗体が挙げられる。

【0057】

「エピトープ」－本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体が結合するタンパク質上に位置する特異的なアミノ酸配列を指す。エピトープは多くの場合、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、特異的３次元構造特性ならびに特異的電荷特性を有する。エピトープは直鎖状であっても立体構造であってもよく、すなわち必ずしも隣接していなくてもよい抗原の様々な領域に２つ以上のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

【0058】

「フレームワーク領域」－本明細書で使用される「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」という用語は、可変領域の一部であるがＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を含む（例えばＣＤＲのＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ定義を用いる）。従って、可変領域フレームワークは約１００～１２０個のアミノ酸長であるがＣＤＲの外側のアミノ酸のみを含む。重鎖可変領域の具体例およびＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されるＣＤＲについては、フレームワーク領域１はアミノ酸１～２５を包含する可変領域のドメインに対応してもよく、フレームワーク領域２はアミノ酸３６～４９を包含する可変領域のドメインに対応してもよく、フレームワーク領域３はアミノ酸６７～９８を包含する可変領域のドメインに対応してもよく、かつフレームワーク領域４はアミノ酸１１０から可変領域の終わりまでの可変領域のドメインに対応してもよい。軽鎖のフレームワーク領域は軽鎖可変領域ＣＤＲのそれぞれによって同様に分離されている。天然に生じる抗体では、各単量体抗体に存在する６つのＣＤＲは、抗体が水性環境においてその３次元構成をとるにつれて抗原結合部位を形成するように特異的に配置されたアミノ酸の短い非隣接配列である。重鎖および軽鎖可変ドメインの残りの部分はアミノ酸配列において分子間の可変性をほとんど示さず、フレームワーク領域と呼ばれている。フレームワーク領域は大部分が［β］シート立体構造をなし、ＣＤＲは［β］シート構造に接続し、かつ場合によってはその一部を形成するループを形成する。このようにして、これらのフレームワーク領域は、６つのＣＤＲを鎖間の非共有結合性相互作用によって正しい向きに位置決めする足場を形成するように機能する。位置決めされたＣＤＲによって形成される抗原結合部位は、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を画定する。この相補的な表面は免疫反応性抗原エピトープへの抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲの位置は当業者によって容易に特定することができる。

【0059】

「断片」－本明細書で使用される「断片」という用語は、インタクトすなわち完全抗体または抗体鎖よりも少ないアミノ酸残基を含む抗体または抗体鎖の一部または領域を指す。「抗原結合断片」という用語は、抗原に結合するか抗原結合（すなわちヒトＧＰＶＩへの特異的結合）のためにインタクトな抗体（すなわち、由来元のインタクトな抗体）と競合する免疫グロブリンまたは抗体のタンパク質断片を指す。本明細書で使用される抗体分子の「断片」という用語は、抗体の抗原結合断片、例えば、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、単一ドメイン抗体断片（ＤＡｂ）、１アーム（一価）の抗体、二重特異性抗体あるいはそのような抗原結合断片の組み合わせ、組立または結合によって形成されるあらゆる抗原結合分子を含む。例えばインタクトすなわち完全抗体または抗体鎖の化学もしくは酵素処理または組換え手段によって断片を得ることができる。

【0060】

抗体の「Ｆｃ」断片は、ジスルフィドによって互いに保持されている両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域における配列によって決定され、この領域は特定の種類の細胞上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。

【0061】

「Ｆｖ」－本明細書で使用される「Ｆｖ」という用語は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、密な非共有結合性会合状態の１本の重鎖および１本の軽鎖の可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合に寄与し、かつ抗体に抗原結合特異性を与える６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖のそれぞれから３つのループ）が生じる。但し、単一の可変ドメイン（すなわち抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても結合部位全体よりも親和性は低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。

【0062】

「重鎖領域」－本明細書で使用される「重鎖領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖の定常ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。重鎖領域を含むタンパク質は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上側、中央および／または下側ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインのうちの少なくとも１つあるいはそのバリアントまたは断片を含む。一実施形態では、本発明の結合分子は免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域（例えば、ヒンジ部、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン）を含んでいてもよい。別の実施形態では、本発明の結合分子は定常ドメインの少なくとも１つの領域（例えば、ＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠失している。特定の実施形態では、定常ドメインの少なくとも１つおよび好ましくは全てがヒト免疫グロブリン重鎖に由来している。例えば好ましい一実施形態では、重鎖領域は完全ヒトヒンジドメインを含む。他の好ましい実施形態では、重鎖領域は完全ヒトＦｃ領域（例えば、ヒト免疫グロブリンからのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン配列）を含む。特定の実施形態では、重鎖領域の構成要素である定常ドメインは異なる免疫グロブリン分子からのものである。例えば、タンパク質の重鎖領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ３またはＩｇＧ４分子に由来するヒンジ領域を含んでいてもよい。他の実施形態では、定常ドメインは異なる免疫グロブリン分子の領域を含むキメラドメインである。例えば、ヒンジはＩｇＧ１分子からの第１の領域とＩｇＧ３またはＩｇＧ４分子からの第２の領域とを含んでいてもよい。上に記載したように、天然に生じる（野生型）免疫グロブリン分子からアミノ酸配列において変化するように重鎖領域の定常ドメインを修飾し得ることが当業者によって理解されるであろう。すなわち、本明細書に開示されている本発明のタンパク質は、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３）のうちの１つ以上および／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）に対する変化または修飾を含んでいてもよい。例示的な修飾としては、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換が挙げられる。

【0063】

「ヒンジ領域」－本明細書で使用される「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の領域を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、かつ柔軟であるため、２つのＮ末端抗原結合領域を独立して移動させることができる。ヒンジ領域を３つの異なるドメイン、すなわち上側、中央および下側ヒンジドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘら，１９９８．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（８）：４０８３－９０）。

【0064】

超可変ループ（ＨＶ）は構造に基づいて定められるが、相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいて定められるため（Ｋａｂａｔ，Ｅｌｖｉｎ Ａ．（１９８３）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ（免疫学的関心のあるタンパク質の配列）（第５版），メリーランド州ベテスダ：米国公衆衛生局，国立衛生研究所）、「超可変ループ」および「相補性決定領域」という用語は厳密には同義ではなく、ＨＶおよびＣＤＲの限界はいくつかのＶＨおよびＶＬドメインにおいて異なってもよい。ＶＬおよびＶＨドメインのＣＤＲは典型的にＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ定義（上を参照）によって定めることができる。一実施形態では、ＶＬおよびＶＨドメインのＣＤＲは、軽鎖可変ドメインに残基２４～３９（ＣＤＲ－Ｌ１）、５５～６１（ＣＤＲ－Ｌ２）および９４～１０２（ＣＤＲ－Ｌ３）、および重鎖可変ドメインに残基２６～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６６（ＣＤＲ－Ｈ２）および９９～１０９（ＣＤＲ－Ｈ３）のアミノ酸を含んでいてもよい。従って、ＨＶは対応するＣＤＲ内に含まれていてもよく、本明細書においてＶＨおよびＶＬドメインの「超可変ループ」という場合、特に明記しない限り、対応するＣＤＲも包含するものとして解釈されるべきであり、その逆もまた同様である。本明細書に定義されているように、可変ドメインのより高度に保存された領域をフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ぶ。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ（それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含み、大部分が３つの超可変ループによって接続された［β］シート構造をなしている。各鎖の超可変ループはＦＲによって他の鎖の超可変ループと非常に近接して一緒に保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。抗体の構造解析により、配列と相補性決定領域によって形成された結合部位の形状との関係が明らかになった（Ｃｈｏｔｈｉａら，１９９２．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（３）：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら，１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５－１８２）。それらの高い配列可変性にも関わらず、６つのループのうちの５つは「カノニカル構造」と呼ばれる主鎖立体構造の小さいレパートリーのみを採用している。これらの立体構造は第一にループの長さによって決定され、第二にそれらの充填による立体構造、水素結合または普通でない主鎖立体構造をとる能力を決定するループおよびフレームワーク領域内の特定の位置にあるキーとなる残基の存在によって決定される。

【0065】

「ヒト化」－本明細書で使用される「ヒト化」という用語とは、マウスの免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’または抗体の他の抗原結合部分配列など）を指す。例えばヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が元の抗体（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置換されているが元の抗体の所望の特異性、親和性および能力を維持しているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。

【0066】

「ヒト化置換」－本明細書で使用される「ヒト化置換」という用語は、非ヒト抗ＧＰＶＩ抗体（例えばマウスの抗ＧＰＶＩ抗体）のＶＨまたはＶＬドメイン内の特定の位置に存在するアミノ酸残基が参照ヒトＶＨまたはＶＬドメイン内の同等の位置で生じるアミノ酸残基で置換されているアミノ酸置換を指す。参照ヒトＶＨまたはＶＬドメインはヒト生殖系列によってコードされるＶＨまたはＶＬドメインであってもよく、その場合、置換された残基を「生殖系列置換」と呼んでもよい。ヒト化／生殖系列置換は、本明細書で定義されている抗ＧＰＶＩ抗体のフレームワーク領域および／またはＣＤＲにおいてなされていてもよい。

【0067】

「高いヒト相同性」－重鎖可変（ＶＨ）ドメインおよび軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗体は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが一緒になって最も近く一致するヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５％またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を示す場合に高いヒト相同性を有するものとみなされる。高いヒト相同性を有する抗体としては、ヒト生殖系列配列と十分に高い配列同一性の割合（％）を示す天然の非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体ならびにそのような抗体の操作された特にヒト化バリアントが挙げられ、「完全ヒト」抗体も挙げられる。一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメインは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたって１つ以上のヒトＶＨドメインと７５％、８０％またはそれ以上のアミノ酸配列同一性または配列相同性を示してもよい。他の実施形態では、本発明のタンパク質のＶＨドメインと最も近く一致するヒト生殖系列ＶＨドメイン配列とのアミノ酸配列同一性または配列相同性は、８５％以上、９０％％以上、９５％以上、９７％以上または最大９９％またはさらには１００％であってもよい。一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメインは、最も近く一致するヒトＶＨ配列と比較してフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたって１つ以上（例えば１～２０個）のアミノ酸配列の不一致を含んでいてもよい。別の実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたって１つ以上のヒトＶＬドメインと８０％以上の配列同一性または配列相同性を示してもよい。他の実施形態では、本発明のタンパク質のＶＬドメインと最も近く一致するヒト生殖系列ＶＬドメイン配列とのアミノ酸配列同一性または配列相同性は、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上または最大９９％またはさらには１００％であってもよい。

【0068】

一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインは、最も近く一致するヒトＶＬ配列と比較してフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたって１個以上（例えば１～２０個、好ましくは１～１０個、より好ましくは１～５個）のアミノ酸配列の不一致を含んでいてもよい。高いヒト相同性を有する抗体とヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬとの配列同一性の割合を解析する前にカノニカルフォールド（ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｆｏｌｄ）を決定してもよく、これによりＨ１およびＨ２またはＬ１およびＬ２（およびＬ３）についてカノニカルフォールドの同一の組み合わせを有するヒト生殖系列セグメントのファミリーの同定が可能になる。その後に、配列相同性をスコア化するために、目的の抗体の可変領域と最高度の配列相同性を有するヒト生殖系列ファミリーメンバーを選択する。超可変ループＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１およびＨ２のＣｈｏｔｈｉａカノニカルクラスの決定は、ウェブページｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｃｈｏｔｈｉａ．ｈｔｍｌ．ｐａｇｅで公的に入手可能なバイオインフォマティクスツールを用いて行うことができる。そのプログラムの出力はデータファイル内のキーとなる残基の要件を示す。これらのデータファイルでは、キーとなる残基の位置は各位置において許容されるアミノ酸と共に示される。目的の抗体の可変領域の配列を入力として与え、最初にコンセンサス抗体配列とアラインメントしてＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームを割り当てる。カノニカルフォールドの解析は、ＭａｒｔｉｎおよびＴｈｏｒｎｔｏｎによって開発された自動化方法（Ｍａｒｔｉｎら，１９９６．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３（５）：８００－８１５）によって得られる１セットのキーとなる残基のテンプレートを使用する。Ｈ１およびＨ２またはＬ１およびＬ２（およびＬ３）についてカノニカルフォールドの同じ組み合わせを使用する公知の特定のヒト生殖系列Ｖセグメントを用いて、配列相同性の点で最も一致するファミリーメンバーを決定することができる。バイオインフォマティクスツールを用いて、目的の抗体のＶＨおよびＶＬドメインフレームワークのアミノ酸配列とヒト生殖系列によってコードされる対応する配列との配列同一性の割合を決定することができるが、実際には当該配列の手動アラインメントも行うことができる。ＶＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）またはＰｌｕｃｋｔｈｕｎ／Ｈｏｎｅｇｇｅｒデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／Ｇｅｒｍｌｉｎｅｓ）などのいくつかのタンパク質データベースからヒト免疫グロブリン配列を同定することができる。ヒト配列を目的の抗体のＶＨまたはＶＬドメインのＶ領域と比較するために、ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ／ｔｏｏｌｓ／＃ａｌｉｇｎのようなウェブサイトを介して入手可能であるような配列アラインメントアルゴリズムを使用することができるが、限られたセットの配列を用いて手動アラインメントも行うことができる。カノニカルフォールドの同じ組み合わせおよび各鎖のフレームワーク領域１、２および３と最高度の相同性を有するファミリーのヒト生殖系列軽鎖および重鎖配列を選択して目的の可変領域と比較し、ＦＲ４もヒト生殖系列ＪＨおよびＪＫまたはＪＬ領域に対して確認する。全体的な配列相同性の割合の計算において、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３の残基をカノニカルフォールドの同一の組み合わせを有するヒト生殖系列ファミリーからの最も近く一致する配列を用いて評価することに留意されたい。カノニカルフォールドの同じ組み合わせを有する同じファミリーの最も近く一致するものまたは他のメンバーとは異なる残基のみをスコア化する（注：あらゆるプライマーによってコードされる相違箇所を除外する）。但し、ヒト化のために、カノニカルフォールドの同じ組み合わせを有しない他のヒト生殖系列ファミリーのメンバーと同一のフレームワーク領域中の残基は、上記ストリンジェントな条件に従ってこれらが「マイナス」とスコア化されるという事実にも関わらず「ヒト」と見なすことができる。この仮定はヒト化のための「ミックスアンドマッチ」手法に基づいており、この手法では、Ｑｕおよび同僚（Ｑｕら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５：３０９５－３１００ （１９９９））ならびにＯｎｏおよび同僚（Ｏｎｏら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：３８７－３９５（１９９９））によって行われたように、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のそれぞれを別々にその最も近く一致するヒト生殖系列配列と比較し、故にヒト化分子は異なるＦＲの組み合わせを含む。Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキームを改変したものであるＩＭＧＴ番号付けスキーム（Ｌｅｆｒａｎｃら，Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｓ ２７：２０９－２１２（１９９９）；ｈｔｔｐ：／／ｉｍ．ｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）を用いて個々のフレームワーク領域の境界を割り当ててもよい。高いヒト相同性を有する抗体は、以下で詳細に考察するように、ヒトもしくはヒト様カノニカルフォールドを有する超可変ループまたはＣＤＲを含んでいてもよい。一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインのいずれかにおける少なくとも１つの超可変ループまたはＣＤＲは、非ヒト抗体のＶＨまたはＶＬドメインから得られるかそれらに由来していてもよく、ヒト抗体において生じるカノニカルフォールド構造に実質的に同一である予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造をなお示す。当該技術分野において、ヒト生殖系列によってコードされるＶＨドメインおよびＶＬドメインの両方に存在する超可変ループの一次アミノ酸配列は、定義上は高度に可変であるが、ＶＨドメインのＣＤＲ Ｈ３を除く全ての超可変ループは、カノニカルフォールドと呼ばれるたった数個の構造上異なる立体構造をとり（Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ６：３８２－ ９４（１９８９））、これらは超可変ループの長さおよびいわゆるカノニカルアミノ酸残基の存在の両方に依存するということが十分に確立されている（Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。インタクトなＶＨまたはＶＬドメインの超可変ループの実際のカノニカル構造は、構造解析（例えばＸ線結晶構造解析）によって決定することができるが、特定の構造に典型的なキーとなるアミノ酸残基に基づいてカノニカル構造を予測することもできる（以下でさらに考察する）。要するに、各カノニカル構造を決定する残基の特異的パターンは、未知の構造のＶＨまたはＶＬドメインの超可変ループにおいてカノニカル構造を認識するのを可能にする「サイン（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ）」を形成し、従って一次アミノ酸配列のみに基づいてカノニカル構造を予測することができる。高いヒト相同性を有する抗体における任意の所与のＶＨまたはＶＬ配列の超可変ループについて予測されるカノニカルフォールド構造は、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｃｈｏｔｈｉａ．ｈｔｍｌ、ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／～ｍａｒｔｉｎ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｈｔｍｌおよびｗｗｗ．ｂｉｏｃ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／Ｇｅｒｍｌｉｎｅｓ／Ｖｂａｓｅ＿ｈＶｋ．ｈｔｍｌから公的に入手可能なアルゴリズムを用いて解析することができる。これらのツールにより、公知のカノニカル構造のヒトＶＨまたはＶＬドメイン配列に対してアラインメントされる問い合わせＶＨまたはＶＬ配列ならびに問い合わせ配列の超可変ループについてなされるカノニカル構造の予測が可能になる。ＶＨドメインの場合、以下の判断基準の少なくとも１つ目、好ましくは両方が満たされる場合に、Ｈ１およびＨ２ループをヒト抗体において生じることが知られているカノニカルフォールド構造に「実質的に同一である」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化することができる。

【0069】

１．最も近く一致するヒトカノニカル構造クラスと同一の長さ（残基数によって決定される）。

【0070】

２．対応するヒトＨ１およびＨ２カノニカル構造クラスについて記載されているキーとなるアミノ酸残基と少なくとも３３％の同一性、好ましくは少なくとも５０％の同一性（上記解析のために、Ｈ１およびＨ２ループを別々に処理し、それぞれをその最も近く一致するヒトカノニカル構造クラスに対して比較することに留意されたい）。上記解析は目的の抗体のＨ１およびＨ２ループのカノニカル構造の予測に依存する。目的の抗体のＨ１およびＨ２ループの実際の構造が例えばＸ線結晶構造解析に基づき公知である場合、ループの長さが最も近く一致するヒトカノニカル構造クラスの長さとは異なる（典型的には＋１または＋２のアミノ酸だけ異なる）が目的の抗体のＨ１およびＨ２ループの実際の構造はヒトカノニカルフォールド構造に一致すれば、目的の抗体のＨ１およびＨ２ループをヒト抗体において生じることが知られているカノニカルフォールド構造と「実質的に同一である」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化することもできる。ヒトＶＨドメインの第１および第２の超可変ループ（Ｈ１およびＨ２）のヒトカノニカル構造クラスに存在するキーとなるアミノ酸残基については、「Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９－８１７（１９９２）」によって記載されており、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。特に、Ｃｈｏｔｈｉａらの８０２頁の表３（これは参照により本明細書に明確に組み込まれる）は、ヒト生殖系列において認められるＨ１カノニカル構造の重要な部位にある好ましいアミノ酸残基を列挙し、８０３頁の表４は（これも参照により明確に組み込まれる）は、ヒト生殖系列において認められるＣＤＲ Ｈ２カノニカル構造の重要な部位にある好ましいアミノ酸残基を列挙している。一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメイン中のＨ１およびＨ２はどちらも、ヒト抗体において生じるカノニカルフォールド構造と実質的に同一である予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造を示す。高いヒト相同性を有する抗体は、超可変ループＨ１およびＨ２が少なくとも１つのヒト生殖系列ＶＨドメインにおいて生じることが知られているカノニカル構造の組み合わせと同一であるカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成するＶＨドメインを含んでいてもよい。Ｈ１およびＨ２におけるカノニカルフォールド構造の特定の組み合わせのみがヒト生殖系列によってコードされるＶＨドメインにおいて実際に生じることが観察されている。一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメイン中のＨ１およびＨ２は非ヒト生物種のＶＨドメインから得られてもよく、ヒト生殖系列または体細胞突然変異したＶＨドメインにおいて生じることが知られているカノニカルフォールド構造の組み合わせに同一である予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせをなお形成する。非限定的な実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメイン中のＨ１およびＨ２は非ヒト生物種のＶＨドメインから得られてもよく、かつ１－１、１－２、１－３、１－６、１－４、２－１、３－１および３－５のカノニカルフォールドの組み合わせのうちの１つを形成する。高いヒト相同性を有する抗体は、ヒトＶＨとの高い配列同一性／配列相同性の両方を示し、かつヒトＶＨとの構造的相同性を示す超可変ループを含むＶＨドメインを含んでいてもよい。高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメイン中のＨ１およびＨ２に存在するカノニカルフォールドおよびそれらの組み合わせが全体的一次アミノ酸配列同一性の点で高いヒト相同性を有する抗体のＶＨドメインと最も近い一致を表すヒトＶＨ生殖系列配列について「正しい」ものであれば有利であり得る。例として、最も近い配列の一致がヒト生殖系列ＶＨ３ドメインとの一致である場合、Ｈ１およびＨ２がヒトＶＨ３ドメインにおいても天然に生じるカノニカルフォールドの組み合わせを形成すると有利であり得る。これは、非ヒト生物種に由来する高いヒト相同性を有する抗体、例えばラクダ科の従来の抗体に由来するＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体、特にヒト化ラクダ科ＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体の場合に特に重要であり得る。従って一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗ＧＰＶＩ抗体のＶＨドメインはフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたってヒトＶＨドメインと７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、あるいは最大９９％またはさらには１００％の配列同一性または配列相同性を示してもよく、また同じ抗体のＨ１およびＨ２は非ヒトＶＨドメインから得られるが、同じヒトＶＨドメインにおいて天然に生じることが知られているカノニカルフォールドの組み合わせと同じである予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成する。他の実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインのＬ１およびＬ２はそれぞれ非ヒト生物種のＶＬドメインから得られ、それぞれがヒト抗体において生じるカノニカルフォールド構造と実質的に同一である予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造を示す。ＶＨドメインと同様に、ＶλおよびＶκの両型のＶＬドメインの超可変ループは一つには長さによって決まり、かつ特定のカノニカル位置におけるキーとなるアミノ酸残基の存在によっても決まる限られた数の立体構造またはカノニカル構造をとることができる。高いヒト相同性を有する目的の抗体における非ヒト生物種、例えばラクダ科種のＶＬドメインから得られたＬ１、Ｌ２およびＬ３ループは、以下の判断基準の少なくとも１つ目、好ましくは両方が満たされる場合にヒト抗体において生じることが知られているカノニカルフォールド構造に「実質的に同一である」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化することができる。

【0071】

１．最も近く一致するヒト構造クラスと同一の長さ（残基数によって決定される）。

【0072】

２．ＶλまたはＶκレパートリーのいずれかからの対応するヒトＬ１またはＬ２カノニカル構造クラスについて記載されているキーとなるアミノ酸残基と少なくとも３３％の同一性、好ましくは少なくとも５０％の同一性（上記解析のために、Ｌ１およびＬ２ループを別々に処理し、それぞれをその最も近く一致するヒトカノニカル構造クラスに対して比較することに留意されたい）。上記解析は目的の抗体のＶＬドメインのＬ１、Ｌ２およびＬ３ループのカノニカル構造の予測に依存する。Ｌ１、Ｌ２およびＬ３ループの実際の構造が例えばＸ線結晶構造解析に基づき公知である場合、目的の抗体に由来するＬ１、Ｌ２またはＬ３ループを、ループの長さが最も近く一致するヒトカノニカル構造クラスの長さとは異なる（典型的には＋１または＋２のアミノ酸だけ異なる）が目的の抗体内のループの実際の構造がヒトカノニカルフォールドに一致すれば、ヒト抗体において生じることが知られているカノニカルフォールド構造と「実質的に同一である」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化することもできる。ヒトＶλおよびＶκドメインのＣＤＲについてヒトカノニカル構造クラスに存在するキーとなるアミノ酸残基は、「Ｍｏｒｅａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０：２６７－２７９（２０００）」および「Ｍａｒｔｉｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６３：８００－８１５（１９９６）」に記載されている。ヒトＶκドメインの構造的レパートリーは「Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．１４：４６２８－４６３８（１９９５）」にも記載されており、Ｖλドメインの構造的レパートリーは「Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６４：２２０－２３２（１９９６）」に記載されている。全てのこれらの文献の内容は参照により本明細書に組み込まれる。高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインのＬ１およびＬ２は、ヒト生殖系列ＶＬドメインにおいて生じることが知られているカノニカルフォールド構造の組み合わせと同一である予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成してもよい。非限定的な実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶλドメインのＬＩおよびＬ２は、１１－７、１３－７（Ａ、Ｂ、Ｃ）、１４－７（Ａ、Ｂ）、１２－１１、１４－１１および１２－１２のカノニカルフォールドの組み合わせのうちの１つを形成してもよい（Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６４：２２０－３２（１９９６）に定義され、かつｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃ．ｕｚｈ．ｃｈ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／Ｇｅｒｍｌｉｎｅｓ／ＶＢａｓｅ＿ｈＶＬ．ｈｔｍｌに図示されている）。非限定的な実施形態では、ＶκドメインのＬ１およびＬ２は、２－１、３－１、４－１および６－１のカノニカルフォールドの組み合わせのうちの１つを形成してもよい（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら，ＥＭＢＯ Ｊ．１４：４６２８－３８（１９９５）に定義され、かつｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃ．ｕｚｈ．ｃｈ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／Ｇｅｒｍｌｉｎｅｓ／ＶＢａｓｅ＿ｈＶＫ．ｈｔｍｌに図示されている）。

【0073】

さらなる実施形態では、高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインのＬ１、Ｌ２およびＬ３の３つ全てが実質的にヒト構造を示してもよい。高いヒト相同性を有する抗体のＶＬドメインがヒトＶＬとの高い配列同一性／配列相同性の両方を示し、かつＶＬドメインの超可変ループもヒトＶＬとの構造的相同性を示すことが好ましい。

【0074】

一実施形態では、高いヒト相同性を有する抗ＧＰＶＩ抗体のＶＬドメインは、フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４にわたってヒトＶＬドメインと７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上または最大９９％またはさらには１００％の配列同一性を示してもよく、また超可変ループＬ１および超可変ループＬ２は同じヒトＶＬドメインにおいて天然に生じることが知られているカノニカルフォールドの組み合わせと同じである予測もしくは実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成してもよい。当然ながら、ヒトＶＨとの高い配列同一性／配列相同性を示し、かつヒトＶＨの超可変ループとの構造的相同性も示すＶＨドメインをヒトＶＬとの高い配列同一性／配列相同性を示し、かつヒトＶＬの超可変ループとの構造的相同性も示すＶＬドメインと組み合わせて、ヒトにコードされるＶＨ／ＶＬ対との最大の配列および構造的相同性を有するＶＨ／ＶＬ対を含む高いヒト相同性を有する抗体を得ることが想定される。

【0075】

「免疫特異性である」「～に特異的である」または「～に特異的に結合する」－本明細書で使用されるように、抗体は検出可能な濃度で、好ましくは約１０^６Ｍ^－１以上、約１０^７Ｍ^－１以上、１０^８Ｍ^－１以上、１．５×１０^８Ｍ^－１以上、１０^９Ｍ^－１以上または５×１０^９Ｍ^－１以上の親和定数Ｋ_Ａで抗原と反応する場合に、抗原に対して「免疫特異性である」「特異的である」または「特異的に結合する」という。また、抗体のその同種抗原に対する親和性は一般に解離定数Ｋ_Ｄとしても表され、特定の実施形態では、抗体は、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１．５×１０^－８Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下または１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄで結合する場合に抗原に特異的に結合する。抗体の親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ Ｇらによって記載されている技術（Ｔｈｅ ａｔｔｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｏｒ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ ｉｏｎｓ（小分子およびイオンのためのタンパク質の引力）．Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９４９；５１：６６０－６７２）を用いて容易に決定することができる。抗体のその抗原、細胞または組織に対する結合特性は一般に、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光系アッセイ（免疫組織化学（ＩＨＣ）など）などの免疫検出法および／または蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡｃｏｒｅ）を用いて決定および評価することができる。

【0076】

「単離された核酸」－本明細書で使用される「単離された核酸」は、他のゲノムＤＮＡ配列ならびに天然配列に天然に付随するリボソームおよびポリメラーゼなどのタンパク質または複合体から実質的に分離された核酸である。この用語は、その天然に生じる環境から取り出された核酸配列を包含し、組換えもしくはクローン化ＤＮＡ単離体および化学合成された類似体または異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な核酸としては核酸の単離された形態が挙げられる。当然ながら、これは最初に単離された核酸を指すが、人為的に単離された核酸に後で追加された遺伝子または配列を除外するものではない。

【0077】

「ポリペプチド」という用語は、その従来の意味、すなわち１００個未満のアミノ酸からなる配列として使用される。通常ポリペプチドとは単量体の実体を指す。「タンパク質」という用語は１００個以上のアミノ酸配列および／または多量体の実体を指す。本発明のタンパク質は当該産物の特定の長さに限定されない。この用語は例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などのタンパク質の発現後修飾ならびに当該技術分野で知られている他の修飾（天然に生じるものと天然に生じないもの両方）を指さず、すなわちそれらを除外する。タンパク質はタンパク質全体またはその部分配列であってもよい。本発明の文脈において目的の特定のタンパク質は、ＣＤＲを含み、かつ抗原に結合することができるアミノ酸部分配列である。「単離されたタンパク質」は、同定されてその天然環境の成分から分離および／または回収されたものである。好ましい実施形態では、単離されたタンパク質を、（１）ローリー法で測定した場合にタンパク質の８０、８５、９０、９５重量％を超え、最も好ましくは９６、９７、９８または９９重量％を超えるまで精製されているか、（２）スピニングカップシークエネーターを用いて、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで精製されているか、あるいは（３）還元もしくは非還元条件下でクマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いるＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均質性が示されるまで精製されている。単離されたタンパク質は、タンパク質の天然環境の少なくとも１種の成分が存在していないため、組換え細胞内の原位置のタンパク質を含む。但し通常は、単離されたタンパク質は少なくとも１つの精製工程によって調製される。

【0078】

「同一性」または「同一」－本明細書で使用される「同一性」または「同一」という用語は、２つ以上のアミノ酸配列間の関係において使用される場合、２つ以上のアミノ酸残基からなる配列間の一致数によって決定されるアミノ酸配列間の配列関連性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ）の程度を指す。「同一性」とは、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって扱われるギャップアラインメント（存在すれば）を有する２つ以上の配列のより短い配列間の一致率の尺度である。関連するアミノ酸配列の同一性は公知の方法によって容易に計算することができる。そのような方法としては、限定されるものではないが、Ａｒｔｈｕｒ Ｍ．Ｌｅｓｋ，Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（コンピュータ分子生物学：配列解析のための情報源および方法）（ニューヨーク：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８８）、Ｄｏｕｇｌａｓ Ｗ．Ｓｍｉｔｈ，Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（情報科学およびゲノムプロジェクト）（ニューヨーク：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９３）、Ｈｕｇｈ Ｇ．ＧｒｉｆｆｉｎおよびＡｎｎｅｔｔｅ Ｍ．Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １（配列データのコンピュータ解析、第１部）（ニュージャージー：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９４）、Ｇｕｎｎａｒ ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｒｅａｓｕｒｅ Ｔｒｏｖｅ ｏｒ Ｔｒｉｖｉａｌ Ｐｕｒｓｕｉｔ（分子生物学における配列解析：貴重な発見またはトリビアル・パスート）（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７）、Ｍｉｃｈａｅｌ ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＪｏｈｎ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（配列解析プライマー）（ニューヨーク：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９９１）およびＣａｒｉｌｌｏら，１９８８．ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．４８（５）：１０７３－１０８２に記載されているものが挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間の最大の一致を与えるように設計されている。同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記述されている。好ましいコンピュータプログラムによる２つの配列間の同一性の決定方法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，１９８４．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２（１ Ｐｔ １）：３８７－３９５；ジェネティクスコンピュータグループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ）、ウィスコンシン大学バイオテクノロジーセンター、ウィスコンシン州マディソン）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＴＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３－４１０）などのＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）および他の提供源（ＢＬＡＳＴマニュアル，Ａｌｔｓｃｈｕｌら，ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ，メリーランド州ベセズダ，２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３－４１０）から公的に入手可能である。また周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用して同一性を決定してもよい。

【0079】

「修飾された抗体」－本明細書で使用される「修飾された抗体」という用語は、天然に生じないように変化させた合成型の抗体、例えば少なくとも２つの重鎖領域を含むが２本の完全な重鎖を含まない抗体（ドメイン欠失抗体またはミニボディなど）、２つ以上の異なる抗原または単一抗原上の異なるエピトープに結合するように変化させた多特異性抗体（例えば、二重特異性、三重特異性など）、ｓｃＦｖ分子に接合された重鎖分子などを含む。ＳｃＦｖ分子は当該技術分野で知られており、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。また「修飾された抗体」という用語は、多価型抗体（例えば同じ抗原の３つ以上のコピーに結合する三価、四価などの抗体）を含む。別の実施形態では、本発明の修飾された抗体は、ＣＨ２ドメインを欠失している少なくとも１つの重鎖領域を含み、かつ受容体リガンド対の１つのメンバーの結合領域を含むタンパク質の結合ドメインを含む融合タンパク質である。

【0080】

「哺乳類」－本明細書で使用される「哺乳類」という用語は、ヒト、家畜、動物園の動物、スポーツ動物またはペット動物、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどのあらゆる哺乳類を指す。好ましくは、哺乳類は霊長類であり、より好ましくはヒトである。

【0081】

「モノクローナル抗体」－本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体群から得られる抗体を指し、すなわち、その群に含まれる個々の抗体は微量で存在し得る天然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は他の抗体が混入されずに合成し得るという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、任意の特定の方法によって抗体を作製する必要があるものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明で有用なモノクローナル抗体は、「Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）」によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって調製してもよく、あるいは、細菌細胞、真核動物細胞または植物細胞における組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照）を用いて調製してもよい。また「モノクローナル抗体」を、例えば、「Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）」および「Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）」に記載されている技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。

【0082】

「天然配列」－本明細書で使用される「天然配列」ヌクレオチドという用語は、自然由来のポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを指す。従って、「天然配列」タンパク質は、自然由来の（例えば任意の生物種に由来する）タンパク質（例えば抗体）と同じアミノ酸配列を有するタンパク質である。そのような天然配列ポリヌクレオチドおよびタンパク質は自然から単離したり、組換えもしくは合成手段によって作製したりすることができる。本明細書で使用されるポリヌクレオチド「バリアント」という用語は１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入の点で本明細書に具体的に開示されているポリヌクレオチドとは典型的に異なるポリヌクレオチドである。そのようなバリアントは天然に生じたものであってもよく、あるいは例えば本明細書に記載されている１つ以上のポリヌクレオチド配列を修飾し、本明細書に記載されているようにコードされたタンパク質の１つ以上の生物活性を評価し、かつ／または当該技術分野で周知の複数の技術のいずれかを用いることによって合成により作製したものであってもよい。本明細書で使用されるタンパク質「バリアント」という用語は、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿入の点で本明細書に具体的に開示されているタンパク質とは典型的に異なるタンパク質である。そのようなバリアントは天然に生じたものであってもよく、あるいは例えば１つ以上の上記タンパク質配列を修飾し、本明細書に記載されているようにタンパク質の１つ以上の生物活性を評価し、かつ／または当該技術分野で周知の複数の技術のいずれかを用いることによって合成により作製したものであってもよい。修飾は本発明のポリヌクレオチドおよびタンパク質の構造においてなされていてもよく、望ましい特性を有するタンパク質バリアントまたは誘導体をコードする機能性分子がなお得られる。タンパク質のアミノ酸配列を変化させて、本明細書に記載されているタンパク質の均等物またはさらに改良されたバリアントまたは領域を作製したい場合、当業者は典型的にコードするＤＮＡ配列のコドンの１つ以上を変化させる。例えば、他のタンパク質（例えば抗原）または細胞に結合するその能力を大きく損失することなく、タンパク質構造において特定のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。タンパク質の生物学的機能活性を定めるのはタンパク質の結合能力および性質であるため、特定のアミノ酸配列の置換はタンパク質配列および当然ながらその基礎をなすＤＮＡコード配列においてなされていてもよく、それにも関わらず同様の特性を有するタンパク質が得られる。従って、本開示の組成物のアミノ酸配列または前記タンパク質をコードする対応するＤＮＡ配列において、それらの生物学的有用性または活性を大きく損失することなく様々な変更を加えることができるものと想定される。多くの例では、タンパク質バリアントは１つ以上の保存的置換を含む。「保存的置換」とは、あるアミノ酸がペプチド化学の当業者がタンパク質の二次構造および親水性／疎水性が実質的に変化していないことを期待するような同様の特性を有する別のアミノ酸で置き換えられる置換である。従って上に概説したように、アミノ酸置換は一般にアミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えばそれらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づいている。上記特性のいくつかを考慮した例示的な置換は当業者によく知られており、アルギニンとリジン、グルタミン酸とアスパラギン酸、セリンとトレオニン、グルタミンとアスパラギン、およびバリンとロイシンとイソロイシンが挙げられる。さらに残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性における類似性に基づいてアミノ酸置換を行ってもよい。例えば、負に荷電したアミノ酸としてはアスパラギン酸とグルタミン酸が挙げられ、正に荷電したアミノ酸としてはリジンとアルギニンが挙げられ、同様の親水性値を有する荷電していない極性の頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシンとイソロイシンとバリン、グリシンとアラニン、アスパラギンとグルタミン、およびセリンとトレオニンとフェニルアラニンとチロシンが挙げられる。保存的変化を表し得るアミノ酸の他の群としては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ、（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ、（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ、および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。バリアントは、追加または代わりとして、非保存的変化を含んでもよい。好ましい実施形態では、タンパク質バリアントは、５つ以下のアミノ酸の置換、欠失または付加によって天然配列とは異なる。バリアントは、追加（または代わりとして）、例えばタンパク質の免疫原性、二次構造および親水性／疎水性に対して最小の影響を有するアミノ酸の欠失または付加によって修飾されていてもよい。

【0083】

「薬学的に許容される賦形剤」－本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などを含む。前記賦形剤は、動物、好ましくはヒトに投与した場合に副作用、アレルギー反応または他の有害反応を生じさせない。ヒトへの投与のために、製剤は例えばＦＤＡ局またはＥＭＡなどの規制当局によって要求される無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度基準を満たすものでなければならない。

【0084】

「特異性」－本明細書で使用される「特異性」という用語は、所与の標的、例えばＧＰＶＩと特異的に結合する（例えば免疫反応する）能力を指す。タンパク質は単一特異性であり、かつ標的に特異的に結合する１つ以上の結合部位を含んでいてもよく、あるいはタンパク質は多特異性であり、かつ同じまたは異なる標的に特異的に結合する２つ以上の結合部位を含んでいてもよい。一実施形態では、本明細書に記載されている抗体は２つ以上の標的に対して特異的である。例えば一実施形態では、多特異性結合分子はＧＰＶＩおよび第２の分子に結合する。

【0085】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」としても省略される「一本鎖Ｆｖ」－本明細書で使用される「一本鎖Ｆｖ」、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、単一のアミノ酸鎖になるように結合されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖアミノ酸配列はｓＦｖが抗原結合にとって望ましい構造を形成するのを可能にするペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎの「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（モノクローナル抗体の薬理作用），第１１３巻，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ニューヨーク，２６９～３１５頁（１９９４）」、「Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５、以下」を参照されたい。

【0086】

「対象」－本明細書で使用される「対象」という用語は、哺乳類、好ましくはヒトを指す。一実施形態では、対象は、医療的ケアを受けるのを待っているか受けている途中である、または過去に医療処置の対象であったか現在対象であるか今後対象になる、あるいは疾患の発現について監視されている「患者」すなわち温血動物、より好ましくはヒトであってもよい。

【0087】

「合成」－本明細書で使用されるタンパク質に関する「合成」という用語は、天然に生じないアミノ酸配列を含むタンパク質を含む。例えば、天然に生じないタンパク質は天然に生じるタンパク質の修飾された形態（例えば、付加、置換または欠失などの突然変異を含む）、あるいは直鎖状アミノ酸配列において本来はそこには天然に結合されない第２のアミノ酸配列（天然に生じても生じなくてもよい）に結合されている第１のアミノ酸配列（天然に生じても生じなくてもよい）を含むタンパク質である。

【0088】

「治療的有効量」とは、標的に対して有意なマイナスまたは有害な副作用を引き起こすことなく、（１）ＧＰＶＩ関連疾患の発症を遅らせるか予防する、（２）ＧＰＶＩ関連疾患の１つ以上の症状の進行、増悪または悪化を減速または停止する、（３）ＧＰＶＩ関連疾患の症状の寛解をもたらす、（４）ＧＰＶＩ関連疾患の重症度または発生率を低下させる、または（５）ＧＰＶＩ関連疾患を治癒させることを目的とした薬剤のレベルまたは量を意味する。治療的有効量は、予防処置のためにＧＰＶＩ関連疾患の発症前に投与してもよい。代わりまたは追加として、治療的有効量は治療処置のためにＧＰＶＩ関連疾患の開始後に投与してもよい。

【0089】

「治療する」または「治療」または「軽減」－本明細書で使用される「治療する」または「治療」または「軽減」という用語は、治療処置および予防処置の両方を指し、その目的は、標的とされる病理学的疾患または障害を予防するか減速させる（和らげる）ことである。治療を必要とするものとしては、既に疾患に罹患しているものならびに疾患に罹患しやすいものまたは疾患が予防されるべきものが挙げられる。対象すなわち哺乳類は、本発明に係る治療量のタンパク質が投与された後に、対象すなわち哺乳類が、病原性細胞の数の減少、総病原性細胞の割合の減少および／または特定の疾患または病気に関連する１つ以上の症状のある程度の緩和、罹患率および死亡率の低下および／または生活の質の問題の改善のうちの１つ以上の観察可能および／または測定可能な改善を示す場合に、標的化された病的状態または疾患に対する「治療」が成功となる。治療の成功をおよび疾患の改善を評価するための上記パラメータは、医師が精通している通常の手順によって容易に測定可能である。

【0090】

「可変領域」または「可変ドメイン」－本明細書で使用される「可変」という用語は、可変ドメインＶＨおよびＶＬの特定の領域が抗体間で配列において広範囲に異なるという事実を指し、その標的抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において使用される。但し可変性は抗体の可変ドメイン全体に均一に分配されていない。それは抗原結合部位の一部を形成するＶＬドメインおよびＶＨドメインのそれぞれにある「超可変ループ」と呼ばれる３つのセグメントに集中している。Ｖλ軽鎖ドメインの第１、第２および第３の超可変ループを本明細書ではＬ１（λ）、Ｌ２（λ）およびＬ３（λ）と呼び、ＶＬドメインに残基２４～３３（９、１０または１１個のアミノ酸残基からなるＬ１（λ））、４９～５３（３個の残基からなるＬ２（λ））および９０～９６（６個の残基からなるＬ３（λ））を含むものとして定義してもよい（Ｍｏｒｅａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－２７９（２０００））。Ｖκ軽鎖ドメインの第１、第２および第３の超可変ループを本明細書ではＬ１（κ）、Ｌ２（κ）およびＬ３（κ）と呼び、ＶＬドメインに残基２５～３３（６、７、８、１１、１２または１３個の残基からなるＬ１（κ））、４９～５３（３個の残基からなるＬ２（κ））および９０～９７（６個の残基からなるＬ３（κ））を含むものとして定義してもよい（Ｍｏｒｅａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－２７９（２０００））。ＶＨドメインの第１、第２および第３の超可変ループを本明細書ではＨ１、Ｈ２およびＨ３と呼び、ＶＨドメインに残基２５～３３（７、８または９個の残基からなるＨ１）、５２～５６（３または４個の残基からなるＨ２）および９１～１０５（長さにおいて非常に可変であるＨ３）を含むものとして定義してもよい（Ｍｏｒｅａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－２７９ （２０００））。特に明記しない限り、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３という用語はそれぞれＶＬドメインの第１、第２および第３の超可変ループを指し、ＶκおよびＶλアイソタイプの両方から得られる超可変ループを包含する。Ｈ１、Ｈ２およびＨ３という用語はそれぞれＶＨドメインの第１、第２および第３の超可変ループを指し、［ガンマ］、［イプシロン］、［デルタ］、［アルファ］または［ミュー］を含む公知の重鎖アイソタイプのいずれかから得られる超可変ループを包含する。超可変ループＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３はそれぞれ、本明細書に上に定義されている「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」の一部を含んでいてもよい。

【0091】

「結合価」－本明細書で使用される「結合価」という用語は、タンパク質中の可能な標的結合部位の数を指す。各標的結合部位は１つの標的分子または標的分子上の特異的部位に特異的に結合する。タンパク質が２つ以上の標的結合部位を含む場合、各標的結合部位は同じまたは異なる分子に特異的に結合することができる（例えば、異なるリガンドまたは異なる抗原あるいは同じ抗原上の異なるエピトープに結合することができる）。主題の結合分子は、好ましくはヒトＧＰＶＩ分子に特異的な少なくとも１つの結合部位を有する。好ましくは、本明細書に提供されているタンパク質は一価である。

【0092】

本発明の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはそれを治療するのに使用するための、ヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する単離されたヒト化タンパク質であり、前記単離されたヒト化タンパク質は、当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0093】

一実施形態では、ヒトＧＰＶＩに結合する本単離されたヒト化タンパク質は、ヒトＧＰＶＩに対する単離されたヒト化抗体である。

【0094】

一実施形態では、本単離されたタンパク質は精製されている。

【0095】

一実施形態では、本タンパク質はＧＰＶＩの細胞外ドメインに結合する。

【0096】

一実施形態では、本タンパク質はヒトＧＰＶＩのＩｇ様Ｃ２型ドメイン２（Ig-like C2-type domain 2 (D2)）（Ｄ２）に結合する。

【0097】

従って一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～２０７またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～２０７と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。

【0098】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0099】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２，４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０個またはそれ以上アミノ酸残基を含む。

【0100】

一実施形態では、前記エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑ、１３６Ｔ、１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ）を含む。一実施形態では、前記エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑ、１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ）を含む。

【0101】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0102】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）の１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８個のアミノ酸残基を含む。

【0103】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0104】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）の１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１個のアミノ酸残基を含む。

【0105】

一実施形態では、前記エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑおよび／または１３６Ｔのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４または５つ）を含む。一実施形態では、前記エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇおよび／または１３３Ｑのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３または４つ）を含む。

【0106】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0107】

一実施形態では、前記エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）の１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２個のアミノ酸残基を含む。

【0108】

一実施形態では、前記エピトープはＧＰＶＩ配列中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば１、２または３つ）を含む。

【0109】

一実施形態では、本単離されたタンパク質は立体構造エピトープに結合する。

【0110】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのアミノ酸残基を含む。

【0111】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩのＩｇ様Ｃ２型ドメイン２（Ｄ２）の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのアミノ酸残基を含む。

【0112】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）の１１４～２０７からの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのアミノ酸残基を含む。

【0113】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0114】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１８７、好ましくは１１５～１８７、より好ましくは１１６～１８７、より好ましくは１１７～１８７、より好ましくは１１８～１８６、より好ましくは１１９～１８５、より好ましくは１２０～１８４、さらにより好ましくは１２１～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０個またはそれ以上のアミノ酸残基を含む。

【0115】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑ、１３６Ｔ、１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つ）を含む。一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑ、１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６または７つ）を含む。

【0116】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0117】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８個のアミノ酸残基を含む。

【0118】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0119】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１個のアミノ酸残基を含む。

【0120】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑおよび／または１３６Ｔのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４または５つ）を含む。一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇおよび／または１３３Ｑのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３または４つ）を含む。

【0121】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0122】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２個のアミノ酸残基を含む。

【0123】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ＧＰＶＩ配列中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば１、２または３つ）を含む。

【0124】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と
を含む。

【0125】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１４２、好ましくは１１５～１４１、より好ましくは１１６～１４０、より好ましくは１１７～１３９、より好ましくは１１８～１３８、より好ましくは１１９～１３７、より好ましくは１２０～１３６、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８個のアミノ酸残基と、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２個のアミノ酸残基と
を含む。

【0126】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と
を含む。

【0127】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１１４～１３５、好ましくは１１５～１３５、より好ましくは１１６～１３５、より好ましくは１１７～１３５、より好ましくは１１８～１３５、より好ましくは１１９～１３５、より好ましくは１２０～１３５、さらにより好ましくは１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１個のアミノ酸残基と、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６５～１８７、好ましくは１６６～１８６、より好ましくは１６７～１８５、より好ましくは１６８～１８４、さらにより好ましくは１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２個のアミノ酸残基と
を含む。

【0128】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、を含む。

【0129】

従って一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、を含む立体構造エピトープに結合する。

【0130】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、を含む。

【0131】

従って一実施形態では、本タンパク質は、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基と、を含む立体構造エピトープに結合する。

【0132】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑおよび／または１３６Ｔのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４または５つ）と、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２または３つ）と
を含む。

【0133】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇおよび／または１３３Ｑのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２、３または４つ）と、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび／または１７４Ｈのうちの少なくとも１つ（例えば、１、２または３つ）と
を含む。

【0134】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇ、１３３Ｑおよび１３６Ｔと、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび１７４Ｈと
を含む。

【0135】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１２５Ｓ、１２６Ｓ、１２８Ｇおよび１３３Ｑと、
－ ＧＰＶＩ配列（配列番号１３）中の以下の残基：１７１Ｔ、１７２Ａおよび１７４Ｈと
を含む。

【0136】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列、および
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列
からなる。

【0137】

従って一実施形態では、本タンパク質は、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列、および
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８３と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列
からなる立体構造エピトープに結合する。

【0138】

一実施形態では、前記立体構造エピトープは、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列、および
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列
からなる。

【0139】

従って一実施形態では、本タンパク質は、
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６、またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１２１～１３５もしくは１２１～１３６と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列、および
－ ヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０またはヒトＧＰＶＩ（配列番号１３）のアミノ酸残基１６９～１８０と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する配列
からなる立体構造エピトープに結合する。

【0140】

一実施形態では、本発明において使用するためのヒトＧＰＶＩに結合する単離されたタンパク質は、１５ｎＭ以下、好ましくは１０ｎＭ以下、より好ましくは５ｎＭ以下のヒトＧＰＶＩ（好ましくは可溶性ヒトＧＰＶＩ）への結合についてのＫ_Ｄを有する。

【0141】

一実施形態では、本単離されたタンパク質は、約８×１０^－４ｓｅｃ^－１以下、好ましくは約６×１０^－４ｓｅｃ^－１以下、より好ましくは約４×１０^－４ｓｅｃ^－１以下のヒトＧＰＶＩへの結合についてのｋ_ｏｆｆを有する。

【0142】

一実施形態では、本単離されたタンパク質は、少なくとも約５×１０^４Ｍ^－１ｓｅｃ^－１、好ましくは少なくとも約５．５×１０^４Ｍ^－１ｓｅｃ^－１、より好ましくは少なくとも約５．９×１０^４Ｍ^－１ｓｅｃ^－１、より好ましくは少なくとも約６×１０^－４ｓｅｃ^－１のヒトＧＰＶＩへの結合についてのｋ_ｏｎを有する。

【0143】

一実施形態では、約７００～約１６００共鳴単位（ＲＵ）（約８．５～約１１．３ｆｍｏｌ／ｍｍ²に対応する）、好ましくは約８５０～約１２００ＲＵ、より好ましくは約９５０～約１０７５ＲＵの範囲の用量で固定化された可溶性ＧＰＶＩおよび／またはランニングバッファーとしてのＰＢＳ（ｐＨ７．４）および／またはデータを解析するためのＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．０ソフトウェアを用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡｃｏｒｅ）によってＫ_Ｄを決定してもよい。一実施形態では、可溶性ＧＰＶＩは、ｈＦｃ配列へのリンカーを介して（例えばＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｒｇリンカーなどを介して）そのＣ末端において融合されたＧＰＶＩの細胞外ドメインに対応する。この可溶性ＧＰＶＩを可溶性ＧＰＶＩ－Ｆｃと呼ぶ場合もある。

【0144】

リガンドに対するタンパク質の親和性を決定するための方法は当該技術分野でよく知られている。可溶性ＧＰＶＩに対するタンパク質の親和性を決定するための方法の例は以下に示されている。

【0145】

可溶性ヒトＧＰＶＩへの本タンパク質の結合は、ＢＩＡｃｏｒｅ ２０００システム（スウェーデンのウプサラ）を用いる表面プラズモン共鳴を用いて解析する。

【0146】

可溶性ＧＰＶＩ－Ｆｃを約７００～約１６００ＲＵ（約８．５～約１１．３ｆｍｏｌ／ｍｍ²に対応する）、好ましくは約８５０～約１２００ＲＵ、より好ましくは約９５０～約１０７５ＲＵ、さらにより好ましくは約９６０～約１０７１ＲＵの範囲の用量で、アミンカップリング法（ウィザード（Ｗｉｚａｒｄ）法）を用いてカルボキシ－メチルデキストランＣＭ５センサーチップ上に固定化させる。次いでこのタンパク質を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（１０ｍＭのリン酸塩、１３８ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、２５．４℃でｐＨ７．４２）中で固定化されたＧＰＶＩ－Ｆｃの上を２０μＬ／分の流速および２５℃で通す。速度定数（ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ）および親和性は、データを結合モデルに当てはめることによってＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．０ソフトウェアを用いて決定する。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）はランニングバッファーである。

【0147】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、全長抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’_２、脱フコシル化抗体、双特異性抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体および四重特異性抗体からなる群から選択される抗体分子またはその断片である。

【0148】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、ユニボディ、ドメイン抗体およびナノボディからなる群から選択される抗体断片である。

【0149】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、アフィボディー、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマー、バーサボディーおよびデュオカリン（Ｄｕｏｃａｌｉｎ）からなる群から選択される抗体模倣体である。

【0150】

ドメイン抗体は当該技術分野でよく知られており、抗体の重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域に対応する抗体の最も小さい機能的結合単位を指す。

【0151】

ナノボディは当該技術分野でよく知られており、天然に生じる重鎖抗体の独特な構造および機能特性を含む抗体由来の治療用タンパク質を指す。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含んでいてもよい。

【0152】

ユニボディは当該技術分野でよく知られており、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠失している抗体断片を指す。ヒンジ領域の欠失により、従来のＩｇＧ４抗体の本質的に半分のサイズであり、かつＩｇＧ４抗体の二価の結合領域ではなく一価の結合領域を有する分子が生じる。

【0153】

アフィボディーは当該技術分野でよく知られており、ブドウ球菌性プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８個のアミノ酸残基からなるタンパク質ドメインに基づく親和性タンパク質を指す。

【0154】

ＤＡＲＰｉｎ（設計アンキリン反復タンパク質（Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ａｎｋｙｒｉｎ Ｒｅｐｅａｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ））は当該技術分野でよく知られており、非抗体タンパク質の結合能力を十分に引き出すために開発された抗体模倣体ＤＲＰ（設計反復タンパク質）技術を指す。

【0155】

アンチカリンは当該技術分野でよく知られており、結合特異性がリポカリンに由来する別の抗体模倣技術を指す。アンチカリンはデュオカリンと呼ばれる二重標的化タンパク質としてフォーマットされていてもよい。

【0156】

アビマーは当該技術分野でよく知られており、別の抗体模倣技術を指す。

【0157】

バーサボディーは当該技術分野でよく知られており、別の抗体模倣技術を指す。バーサボディーは１５％超のシステインを有する３～５ｋＤａの小さいタンパク質であり、高いジスルフィド密度の足場を形成し、典型的なタンパク質が有する疎水性コアの代わりとなる。

【0158】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は一価であり、一価の全長抗体、一価のヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂまたはユニボディ、ドメイン抗体およびナノボディからなる群から選択される抗体断片、あるいはアフィボディー、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー、エバシン、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、フィノマーおよびバーサボディーからなる群から選択される単量体抗体模倣体から好ましくは選択される。

【0159】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、治療薬に結合された抗体またはその断片を含むイムノコンジュゲートである。

【0160】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は造影剤に結合されたタンパク質を含む複合体である。前記タンパク質を例えば画像診断用途のために使用することができる。

【0161】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質はモノクローナル抗体またはその断片である。

【0162】

別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質はポリクローナル抗体またはその断片である。

【0163】

従って本発明の別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはその治療に使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片であり、前記抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0164】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片の重鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＨ－ＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨ（配列番号１）、
ＶＨ－ＣＤＲ２：ＧＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）、および
ＶＨ－ＣＤＲ３：ＧＴＶＶＧＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）
のうちの少なくとも１つを含む。

【0165】

ＣＤＲの番号付けおよび定義は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従っている。

【0166】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片の軽鎖の可変領域は、以下のＣＤＲ：
ＶＬ－ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号４）、
ＶＬ－ＣＤＲ２：ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）、および
ＶＬ－ＣＤＲ３：ＬＱＬＴＨＶＰＷＴ（配列番号６）
のうちの少なくとも１つを含む。

【0167】

ＣＤＲの番号付けおよび定義は、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従っている。

【0168】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、
－ 重鎖にＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨ（配列番号１）、ＧＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号２）およびＧＴＶＶＧＤＷＹＦＤＶ（配列番号３）のうちの少なくとも１つのＣＤＲ、および／または
－ 軽鎖にＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号４）、ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）およびＬＱＬＴＨＶＰＷＴ（配列番号６）のうちの少なくとも１つのＣＤＲ
を含む。

【0169】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、その重鎖に配列番号１、配列番号２および配列番号３の３つのＣＤＲを含む。

【0170】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、その軽鎖に配列番号４、配列番号５および配列番号６の３つのＣＤＲを含む。

【0171】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、その重鎖に配列番号１、配列番号２および配列番号３の３つのＣＤＲと、その軽鎖に配列番号４、配列番号５および配列番号６の３つのＣＤＲとを含む。

【0172】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、その重鎖に配列番号１、配列番号２および配列番号３の３つのＣＤＲと、その軽鎖に配列番号４、配列番号５および配列番号６の３つのＣＤＲとを含み、任意で前記配列のいずれかにおけるアミノ酸の１つ、２つ、３つまたはそれ以上は異なるアミノ酸で置換されていてもよい。

【0173】

本発明によれば、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のいずれかを、対応する配列番号に列挙されている特定のＣＤＲまたはＣＤＲセットと少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有するアミノ酸配列を有するものとして特徴づけてもよい。

【0174】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号１、２および３にそれぞれ示されている重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３）アミノ酸配列と、
（ｉｉ）配列番号４、５および６にそれぞれ示されている軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、ＶＬ－ＣＤＲ３）アミノ酸配列と
を有する抗体であり、任意で前記配列のいずれかにおけるアミノ酸の１つ、２つ、３つまたはそれ以上は異なるアミノ酸で置換されていてもよい。

【0175】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７の配列を含むかそれからなる重鎖可変領域を含む。
（配列番号７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＴＶＶＧＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0176】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８の配列を含むかそれからなる軽鎖可変領域を含む。
（配列番号８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱＬＴＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＴＲ

【0177】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９の配列を含むかそれからなる軽鎖可変領域を含む。
（配列番号９）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＬＴＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ

【0178】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体（ＡＣＴ０１７抗体）またはその抗原結合断片は、配列番号７の配列を含むかそれからなる重鎖可変領域と配列番号８の配列を含むかそれからなる軽鎖可変領域とを含む。

【0179】

本発明の別の実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体（ＡＣＴ００６抗体）またはその抗原結合断片は、配列番号７の配列を含むかそれからなる重鎖可変領域と配列番号９の配列を含むかそれからなる軽鎖可変領域とを含む。

【0180】

本発明によれば、本明細書の上に記載されている重鎖もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸の１つ、２つ、３つまたはそれ以上は異なるアミノ酸で置換されていてもよい。

【0181】

別の実施形態では、本発明において使用するための抗体（またはその断片）は、本明細書に記載されているＡＣＴ０１７抗体のアミノ酸配列に相同なアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含み、かつそれらの抗体は本発明に記載されているタンパク質の所望の機能的特性を保持している。

【0182】

別の実施形態では、本発明において使用するための抗体（またはその断片）は、本明細書に記載されているＡＣＴ００６抗体のアミノ酸配列に相同なアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域を含み、かつそれらの抗体は本発明に記載されているタンパク質の所望の機能的特性を保持している。

【0183】

本発明によれば、重鎖可変領域は、配列番号７と６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性を有する配列を包含する。

【0184】

本発明によれば、軽鎖可変領域は、配列番号８または配列番号９と６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性を有する配列を包含する。

【0185】

本発明において使用するための抗体のいずれか（例えばＡＣＴ０１７またはＡＣＴ００６）において、指定された可変領域およびＣＤＲ配列は保存的配列修飾を含んでいてもよい。保存的配列修飾とは、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に著しく影響を与えたりそれを変化させたりしないアミノ酸修飾を指す。そのような保存的修飾としては、アミノ酸の置換、付加および欠失が挙げられる。修飾は、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発などの当該技術分野で知られている標準的な技術によって、本発明において使用するための抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換は典型的に、アミノ酸残基が同様の物理化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。指定された可変領域およびＣＤＲ配列は、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれ以上のアミノ酸の挿入、欠失または置換を含んでいてもよい。置換がなされる場合、好ましい置換は保存的修飾である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。従って、本発明において使用するための抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換することができ、変化させた抗体を、本明細書に記載されているアッセイを用いて、保持されている機能（すなわち本明細書に記載されている特性）について試験することができる。

【0186】

一実施形態では、本発明において使用するための抗体（またはその断片）は、ＡＣＴ０１７またはＡＣＴ００６抗体と本質的に同じエピトープに結合する。本発明では、ＡＣＴ０１７またはＡＣＴ００６抗体と本質的に同じエピトープに結合する抗体をそれぞれＡＣＴ０１７様またはＡＣＴ００６様抗体と呼ぶ。

【0187】

一実施形態では、本発明において使用するための抗体（またはその断片）は、ｈＧＰＶＩへの結合のために本明細書の上に記載されている抗体、特にＡＣＴ０１７およびＡＣＴ００６から選択される抗体と競合する。

【0188】

本発明のいくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬドメインまたはそれらのＣＤＲを含む抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片は、そのアミノ酸配列が完全または実質的にヒトであるＣＨ１ドメインおよび／またはＣＬドメインを含んでいてもよい。ＧＰＶＩ結合タンパク質がヒトの治療的使用を目的とした抗体である場合、抗体の定常領域全体またはその少なくとも一部が完全または実質的にヒトアミノ酸配列を有するのが通常である。従って、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメイン（および存在すればＣＨ４ドメイン）の１つ以上またはあらゆる組み合わせは、そのアミノ酸配列に関して完全または実質的にヒトであってもよい。有利には、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメイン（および存在すればＣＨ４ドメイン）は全て、完全または実質的にヒトアミノ酸配列を有していてもよい。ヒト化もしくはキメラ抗体または抗体断片の定常領域の文脈において「実質的にヒト」という用語は、ヒト定常領域との少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を指す。この文脈における「ヒトアミノ酸配列」という用語は、生殖系列遺伝子、再編成された遺伝子および体細胞突然変異した遺伝子を含むヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列を指す。本発明は、「完全ヒト」ヒンジ領域の存在が明らかに必要とされている実施形態を除き、ヒト配列に対して１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換によって変化させた「ヒト」配列の定常ドメインを含むタンパク質の使用も想定している。本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体における「完全ヒト」ヒンジ領域の存在は、免疫原性を最小限に抑えると共に本抗体の安定性を最適化するのに有益であり得る。重鎖および／または軽鎖の定常領域内、特にＦｃ領域内で１つ以上のアミノ酸の置換、挿入または欠失を行うことができると考えられる。アミノ酸置換により、異なる天然に生じるアミノ酸または非天然もしくは修飾されたアミノ酸で置換されたアミノ酸が生じてもよい。例えばグリコシル化パターンにおける変化（例えば、Ｎ－もしくはＯ－結合されたグリコシル化部位の付加または欠失）などの他の構造修飾も許容される。本抗体の使用目的に応じて、Ｆｃ受容体へのその結合特性に関して本抗体を修飾すること、例えばエフェクター機能を調節することが望ましい場合がある。例えばシステイン残基をＦｃ領域に導入し、それによりこの領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にしてもよい。このようにして作製されたホモ二量体抗体は向上したエフェクター機能を有し得る。「Ｃａｒｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１－１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８－２９２２（１９９２）」を参照されたい。

【0189】

一実施形態では、配列番号７の配列の重鎖可変領域は、配列番号１０によってコードされる。
（配列番号１０）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＧＴＡＴＴＴＡＴＣＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧＡＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＣＴＣＧＧＧＡＣＡＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＡＣＣＧＴＧＧＴＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＴ

【0190】

一実施形態では、配列番号８の配列の軽鎖可変領域は、配列番号１１によってコードされる。
（配列番号１１）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＣＧＧ

【0191】

一実施形態では、配列番号９の配列の軽鎖可変領域は、配列番号１２によってコードされる。
（配列番号１２）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＣ

【0192】

一実施形態では、本発明において使用するための抗ＧＰＶＩ抗体またはその断片をコードする核酸配列は発現ベクターに含まれている。一実施形態では、当該発現ベクターは、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２または前記配列番号１０～１２と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を共有する核酸配列を有する任意の配列のうちの少なくとも１つを含む。

【0193】

一実施形態では、当該ベクターは、配列番号１０の配列および重鎖の定常領域をコードする配列を含む。重鎖の定常領域をコードする配列の非限定的な例は配列番号１４である。
（配列番号１４）
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＴＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＣＧＡＧＣＣＴＡＡＧＴＣＡＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣ。

【0194】

一実施形態では、当該ベクターは、配列番号１１または配列番号１２の配列および軽鎖の定常領域をコードする配列を含む。軽鎖の定常領域をコードする配列の非限定的な例は配列番号１５である。
（配列番号１５）
ＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ

【0195】

一実施形態では、当該ベクターはシグナルペプチドをコードする配列を含む。シグナルペプチド配列の非限定的な例としては、限定されるものではないが、配列番号１６および配列番号１７が挙げられる。
（配列番号１６）
ＡＴＧＧＡＴＡＴＧＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＴＣＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＣＴＡＧＡＴＧＴ
（配列番号１７）
ＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＴＧＧＡＧＡＡＴＣＣＴＡＴＴＣＴＴＧＧＴＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＣＡ

【0196】

一実施形態では、当該ベクターは配列番号１０および重鎖の定常領域をコードする配列（例えば配列番号１４など）およびシグナルペプチド配列を含む。そのようなベクターの例は配列番号１８を含むベクターである。配列番号１８はクローニング部位をさらに含む。
（配列番号１８）
ＧＣＧＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＴＧＧＡＧＡＡＴＣＣＴＡＴＴＣＴＴＧＧＴＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＧＴＴＡＣＡＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＧＡＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＧＴＡＴＴＴＡＴＣＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧＡＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＣＴＣＧＧＧＡＣＡＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＣＡＣＣＧＴＧＧＴＣＧＧＣＧＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＴＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＣＧＡＧＣＣＴＡＡＧＴＣＡＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＴＣＡＣＴＧＡＴＧＡＧＧＡＴＣＣ

【0197】

一実施形態では、当該ベクターは、配列番号８および軽鎖の定常領域をコードする配列（例えば配列番号１５など）およびシグナルペプチド配列を含む。そのようなベクターの例は配列番号１９を含むベクターである。配列番号１９はクローニング部位をさらに含む。
（配列番号１９）
ＧＡＣＧＴＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＡＴＧＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＴＣＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＣＴＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＡＡＧＴＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＴＡＴＣ

【0198】

一実施形態では、当該ベクターは、配列番号９および軽鎖の定常領域をコードする配列（例えば配列番号１５など）およびシグナルペプチド配列を含む。そのようなベクターの例は配列番号２０を含むベクターである。配列番号２０はクローニング部位をさらに含む。
（配列番号２０）
ＧＡＣＧＴＣＡＣＣＡＴＧＧＡＴＡＴＧＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＴＣＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＡＣＴＴＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴＴＣＧＴＧＧＴＧＣＴＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＴＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＡＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＧＧＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＧＡＣＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＣＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＴＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＴＡＴＣ

【0199】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているベクターは単離された宿主細胞に含まれている。前記宿主細胞は本発明において使用するための抗体の組換え産生のために使用してもよい。一実施形態では、宿主細胞は原核生物、酵母もしくは真核生物細胞、好ましくは哺乳類細胞、例えばＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎臓株（２９３または懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、マウス骨髄腫細胞ＳＰ２／０－ＡＧ１４（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５８１、ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８２８７）またはＮＳＯ（ＨＰＡ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ Ｎｏ．８５１１０５０３）、サル腎臓細胞（ＣＶｌ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳癌（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞およびヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）ならびにＤＳＭのＰＥＲＣ－６細胞株などであってもよい。これらの宿主細胞のそれぞれに使用するのに適した発現ベクターも一般に当該技術分野で知られている。なお、「宿主細胞」という用語は一般に培養された細胞株を指す。本発明に従って使用するための抗原結合タンパク質をコードする発現ベクターが導入されている人間そのものは、「宿主細胞」の定義から明示的に除外される。

【0200】

本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片を作製するための方法は当該技術分野でよく知られている。好適な方法の例は、本抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片の発現のために適した条件下で本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列を含む宿主細胞を培養すること、および発現された抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片を回収することを含む。この組換えプロセスは、インビボでの治療的使用を目的としたモノクローナル抗体などの本発明において使用するための抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片の大規模作製のために使用することができる。これらのプロセスは当該技術分野において利用可能であり、当業者に知られている。

【0201】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質をクロマトグラフィー、好ましくは親和性クロマトグラフィー、より好ましくはプロテインＬ－アガロース上での親和性クロマトグラフィーによって精製してもよい。

【0202】

従って一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質はプロテインＬ（ＰｐＬ）に結合するためのドメインを含む。ＰｐＬ結合活性を本発明のタンパク質上に移動させるための方法は、「Ｍｕｚａｒｄら，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３８８，３３１－３３８，２００９」および「Ｌａｋｈｒｉｆら，ＭＡｂｓ．２０１６；８（２）：３７９－８８」に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

【0203】

本発明において使用するための抗体（特に明記しない限りあるいは文脈に明らかに矛盾しない限り、本出願で使用される「抗体」という用語によって包含される）、好ましくはＡＣＴ０１７様またはＡＣＴ００６様抗体の断片および誘導体は、当該技術分野で知られている技術によって作製することができる。「断片」はインタクトな抗体の一部、一般に抗原結合部位または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ断片、二重特異性抗体、隣接するアミノ酸残基の１つの連続した配列からなる一次構造を有するタンパク質である任意の抗体断片（本明細書では「一本鎖抗体断片」または「一本鎖タンパク質」という）、例えば限定されるものではないが、（１）一本鎖Ｆｖ分子、（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含む一本鎖タンパク質または関連する重鎖部分を含まない軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むその断片、（３）１つの重鎖可変領域のみを含む一本鎖タンパク質または関連する軽鎖部分を含まない重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むその断片、ならびに抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。本抗体の断片は標準的な方法を用いて得ることができる。例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）_２断片を従来の技術に従って単離された抗体のプロテアーゼ消化により作製してもよい。当然のことながら、例えばインビボでのクリアランスを遅くし、かつより望ましい薬物動態学的プロファイルを得るための公知の方法を用いて免疫反応性断片を修飾することができ、この断片をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾してもよい。ＰＥＧをＦａｂ’断片に連結して部位特異的に結合させる方法は、例えば、「Ｌｅｏｎｇら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ １６（３）：１０６－１１９（２００１）」および「Ｄｅｌｇａｄｏら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３（２）：１７５－１８２（１９９６）」に記載されており、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0204】

あるいは、本発明において使用するための抗体、好ましくはＡＣＴ０１７様またはＡＣＴ００６様抗体をコードするＤＮＡを、断片をコードするように修飾してもよい。次いで、修飾したＤＮＡを発現ベクターに挿入し、適当な細胞を形質転換またはトランスフェクトするために使用し、次いで所望の断片を発現させる。

【0205】

本発明の別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはそれを治療するのに使用するための組成物であり、前記組成物は、本明細書の上に記載されているヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する少なくとも１種の単離されたヒト化タンパク質を含み、かつ前記組成物は当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0206】

本発明の別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはそれを治療するのに使用するための医薬組成物であり、前記医薬組成物は、本明細書の上に記載されているヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する少なくとも１種の単離されたヒト化タンパク質と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤とを含み、かつ前記医薬組成物は、当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0207】

これらの組成物に使用し得る薬学的に許容される賦形剤としては、限定されるものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒトの血清アルブミンなどの血清タンパク質、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、グルコースなどの糖類、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩）、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質（例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。

【0208】

本発明の別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはそれを治療するのに使用するための医薬組成物であり、前記医薬組成物のｐＨは４～６であり、好ましくは約５．０である。

【0209】

本発明の別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気を治療するまたはそれを治療するのに使用するための薬であり、前記薬は、本明細書の上に記載されているヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する少なくとも１種の単離されたヒト化タンパク質を含み、かつ前記薬は当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0210】

一実施形態では、本発明において使用するための組成物、医薬組成物または薬は、例えば血栓溶解剤などのＧＰＶＩに関連する病気を治療するのに有用な別の薬剤をさらに含む。血栓溶解剤の一例は、そのままのｔ－ＰＡおよび組換え型ｔ－ＰＡならびにそのままのｔ－ＰＡの酵素および／または線維素溶解活性を保持する修飾型ｔ－ＰＡなどのｔ－ＰＡである。本明細書で使用されるｔ－ＰＡは、当該技術分野におけるその一般的な意味を有し、かつ組織型プラスミノーゲン活性化因子を指す。修飾型ｔ－ＰＡの酵素活性は、プラスミノーゲンをプラスミンに変換する当該分子の能力を評価することによって測定してもよい。修飾型ｔ－ＰＡの線維素溶解活性は、当該技術分野で知られている任意のインビトロ血餅溶解試験によって決定してもよい。Ｔ－ＰＡはアルテプラーゼ（アクチバーゼ（登録商標）またはアクチライス（Ａｃｔｉｌｙｓｅ）（登録商標））として市販されている。組換え型ｔ－ＰＡは当該技術分野において記載されており、かつ当業者によって知られている。修飾型ｔ－ＰＡは当該技術分野において記載されており、かつ当業者によって知られており、限定されるものではないが、欠失もしくは置換されたアミノ酸またはドメインを有するｔ－ＰＡ、修飾されたグリコシル化状態、および他の分子に結合または融合されたバリアントが挙げられる。修飾型ｔ－ＰＡの例は例えば欧州特許第０３５２１１９号、国際公開第９３／２４６３５号、欧州特許第０３８２１７４号および国際公開第２０１３／０３４７１０号に記載されており、これらの特許は参照により本明細書に組み込まれる。

【0211】

一実施形態では、本発明において使用するための組成物、医薬組成物または薬は、国際公開第２０１３／０３４７１０号に記載されている突然変異型ｔ－ＰＡをさらに含む。

【0212】

一実施形態では、前記突然変異型ｔ－ＰＡは、配列番号２５（ヒトｗｔ ｔ－ＰＡ成熟型に対応する）または配列番号２６（ｔｃ－ｔ－ＰＡのヒトｗｔ ｔ－ＰＡの第１の鎖に対応する）、好ましくは配列番号２５または配列番号２６と配列番号２７（ｔｃ－ｔ－ＰＡのヒトｗｔ ｔ－ＰＡの第２の鎖に対応する）との会合からなる配列あるいは少なくとも８０％の同一性を有するそのバリアントを含み、前記配列は、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシンおよびヒスチジンから選択される親水性アミノ酸、好ましくはアルギニンによる配列番号２５または配列番号２６のリジン結合部位の任意のアミノ酸の再配置からなる突然変異、および／またはセリンによる配列番号２５または配列番号２６の２７５位のアルギニンの再配置からなる突然変異を含む。

【0213】

一実施形態では、前記突然変異型ｔ－ＰＡは、配列番号２５（ヒトｗｔ ｔ－ＰＡ成熟型に対応する）または配列番号２６（２本鎖ｔ－ＰＡのヒトｗｔ ｔ－ＰＡの第１の鎖に対応する）、好ましくは配列番号２５または配列番号２６と配列番号２７（２本鎖ｔ－ＰＡのヒトｗｔ ｔ－ＰＡの第２の鎖に対応する）との会合からなる配列あるいは少なくとも８０％の同一性を有するそのバリアントを含み、前記配列は、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシンおよびヒスチジンから選択される親水性アミノ酸、好ましくはアルギニンによる配列番号２５または配列番号２６の２５３位のトリプトファンの再配置からなる突然変異および／またはセリンによる配列番号２５または配列番号２６の２７５位のアルギニンの再配置からなる突然変異を含む。

【0214】

一実施形態では、前記突然変異型ｔ－ＰＡは、以下の突然変異：
－ アルギニンによる配列番号２５または配列番号２６の１２５位のプロリンの再配置、
－ Ｎ末端におけるフィンガードメインの欠失および／または配列番号２５または配列番号２６におけるＥＧＦ様ドメインの欠失および／またはグルタミンによる配列番号２５または配列番号２６の１１７位のアスパラギンの再配置、
－ アスパラギンによる配列番号２５または配列番号２６の１０３位のトレオニンの再配置および／またはグルタミンによる配列番号２５または配列番号２６の１１７位のアスパラギンの再配置および／またはアラニン－アラニン－アラニン－アラニン（ＡＡＡＡ）による配列番号２５の２９６～２９９位のリジン－ヒスチジン－アルギニン－アルギニン（ＫＨＲＲ）の再配置、
－ セリンによる配列番号２５または配列番号２６の８４位のシステインの再配置、
－ グルタミン酸またはグリシンによる配列番号２５または配列番号２６の２７５位のアルギニンの再配置および／または配列番号２５または配列番号２６におけるクリングル１ドメインの欠失
のうちの少なくとも１つをさらに含む。

【0215】

従って一実施形態では、本発明において使用するための組成物、医薬組成物または薬は、本明細書の上に記載されているヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する少なくとも１種の単離されたヒト化タンパク質、好ましくは本明細書の上に記載されている少なくとも１種の抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片と、ｔ－ＰＡ（そのまま、組換え型または修飾型のいずれか）とを含む。

【0216】

本発明の目的の１つは、第１の部分に本明細書の上に記載されているヒト糖タンパク質ＶＩ（ｈＧＰＶＩ）に結合する少なくとも１種の単離されたヒト化タンパク質（好ましくは本明細書の上に記載されている少なくとも１種の単離された抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片）と、第２の部分に少なくとも１種のｔ－ＰＡ（そのまま、組換え型または修飾型のいずれか）とを含む部分のキットである。

【0217】

従って別の目的は、それを必要とする対象におけるＧＰＶＩに関連する病気の治療に使用するための本明細書の上に記載されている部分のキットである。

【0218】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、ＧＰＶＩシグナル伝達および／またはＧＰＶＩのリガンドのシグナル伝達を阻害する抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその抗原結合断片である。本明細書で使用される「阻害する」という用語は、本発明において使用するためのタンパク質がそのリガンドとのＧＰＶＩ相互作用、ＧＰＶＩシグナル伝達および／またはＧＰＶＩシグナル伝達経路の分子の活性化を阻止、減少、防止または中和できることを意味する。

【0219】

ＧＰＶＩのリガンドの例としては、限定されるものではないが、コラーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、ビトロネクチンおよびラミニンが挙げられる。

【0220】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は中和抗ｈＧＰＶＩ抗体またはその断片である。

【0221】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、ＧＰＶＩのそのリガンド（例えば、コラーゲン、フィブリンまたは下流シグナル伝達および血小板活性化を誘導することができるあらゆる他のＧＰＶＩリガンドなど）への結合を阻害する。

【0222】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、例えばコラーゲンなどのＧＰＶＩのリガンドに応答した血小板の活性化、分泌および凝集を阻害および／または防止する。一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、ＧＰＶＩの例えばコラーゲンなどのリガンドへの血小板接着を阻害および／または防止する。

【0223】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、例えばフィブリンなどのＧＰＶＩのリガンドに応答したＧＰＶＩ依存性トロンビン産生を阻害および／または防止する。一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、コラーゲンおよび／または組織因子に応答した血小板によって触媒されるトロンビン産生を阻害および／または防止する。

【0224】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、ＧＰＶＩを介するＧＰＶＩのリガンド（例えばフィブリンなど）による血小板動員を阻害および／または防止する。

【0225】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、約１～約２００μｇ／ｍＬ、好ましくは約２～約１００μｇ／ｍＬ、より好ましくは約５～約５０μｇ／ｍＬの範囲の濃度で存在する場合に、全血中の血小板の飽和すなわち多血小板血漿を誘導する。

【0226】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、少なくとも約１５μｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも約１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した場合にコラーゲン誘導性血小板凝集を阻害する。好ましくは、本発明において使用するためのタンパク質はそのような濃度で使用した場合にコラーゲン誘導性血小板凝集を完全に阻害する。

【0227】

一実施形態では、コラーゲン誘導性血小板凝集を阻害するための本発明において使用するためのタンパク質のＩＣ５０は、約０．５～約１０μｇ／ｍＬ、好ましくは約１～約６μｇ／ｍＬ、より好ましくは約２～約３．２μｇ／ｍＬの範囲である。

【0228】

一実施形態では、コラーゲン誘導性血小板凝集の速度を５０％低下させる本発明において使用するためのタンパク質の濃度は、約０．５～約５μｇ／ｍＬ、好ましくは約１～約３μｇ／ｍＬの範囲、より好ましくは約２μｇ／ｍＬである。

【0229】

一実施形態では、コラーゲン誘導性血小板凝集の強度を低下させる本発明において使用するためのタンパク質の濃度は、約０．５～約１０μｇ／ｍＬ、好ましくは約１～約６μｇ／ｍＬの範囲、より好ましくは約３．２μｇ／ｍＬである。

【0230】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質はインビボ投与した場合、例えば０．０１～５００ｍｇの範囲の用量で投与した場合などに、ＧＰＶＩの枯渇を誘導しない。

【0231】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質はインビボ投与した場合、例えば０．０１～５００ｍｇの範囲の用量で投与した場合などに、血小板数の減少すなわち血小板減少症を誘導しない。

【0232】

ＧＰＶＩに関連する病気の例は当該技術分野でよく知られており、限定されるものではないが、炎症、血栓症、異常な巨核球および／または血小板の増殖、分化、形態、遊走、凝集、脱顆粒および／または機能を伴う疾患、血栓疾患（例えば冠動脈の血栓性閉塞など）、定量的もしくは定性的血小板機能不全を示す疾患および内皮機能不全を示す疾患、脳血管疾患、冠動脈疾患、血小板凝集を引き起こし得るあらゆる血管損傷により生じる疾患、ＧＰＶＩのリガンドに応答した異常なシグナル伝達を伴う疾患、ＧＰＶＩを正常に発現する細胞またはＧＰＶＩを発現しない細胞のいずれかにおける異常なレベルのＧＰＶＩ発現および／または活性を伴う疾患、あるいは血小板が炎症反応を調節することによって寄与する骨髄および末梢血における疾患が挙げられる。

【0233】

一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は、動脈と静脈の血栓症、再狭窄、急性冠症候群、アテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害、心筋梗塞、肺塞栓症、重症下肢虚血および末梢動脈疾患から選択される心血管疾患である。

【0234】

一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は静脈血栓症である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は再狭窄である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は急性冠症候群である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気はアテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は心筋梗塞である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は肺塞栓症である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は重症下肢虚血である。一実施形態では、前記ＧＰＶＩに関連する病気は末梢動脈疾患である。

【0235】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、炎症および／または血栓症において白血球および血小板を調節する。従って、一実施形態によれば、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して炎症および／または血栓症を治療する。

【0236】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して血小板接着凝集および脱顆粒を調節し、好ましくは防止する。

【0237】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、血栓性疾患（例えば冠動脈の血栓性閉塞など）、定量的もしくは定性的血小板機能不全を示す疾患および内皮機能不全を示す疾患を治療する。これらの疾患としては、限定されるものではないが、冠動脈および大脳動脈疾患が挙げられる。

【0238】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、虚血性脳卒中などの脳血管疾患、静脈血栓塞栓症疾患（例えば、下肢の腫脹、疼痛および潰瘍形成を伴う疾患、肺塞栓症、腹部の静脈血栓症など）、血栓性微小血管症、血管性紫斑病を治療する。

【0239】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、冠動脈疾患（例えば、不安定狭心症、心筋梗塞、急性心筋梗塞、冠動脈疾患、冠動脈の血管新生（ｃｏｒｏｎａｒｙ ｒｅｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、冠動脈再狭窄、心室血栓塞栓症（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｔｈｒｏｍｂｏｅｍｂｏｌｉｓｍ）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患（例えば動脈閉塞性疾患）、プラーク形成、心虚血（心血管疾患および経皮的冠動脈血管形成（バルーン血管形成）術などの冠動脈手術に関連する合併症など）を治療する。冠動脈手術に関して、当該手術の前、間または後における上に記載されているタンパク質の投与により、そのような治療を達成することができる。好ましい実施形態では、そのような投与を利用して血管形成後の急性心虚血を予防することができる。

【0240】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、血小板凝集を引き起こし得るあらゆる血管損傷から生じる疾患を治療する。そのような血管損傷としては、限定されるものではないが、それ以外はインタクトである血管内に露出している高度に血栓形成性の表面を生じさせる血管損傷などの血管壁損傷、例えば、ＡＤＰ、トロンビンおよび／またはエピネフリンの放出を引き起こす血管壁損傷、アテローム性プラーク部位における血管狭窄、破裂および／または裂傷部位で生じる流体剪断応力、およびバルーン血管形成術またはアテローム切除術による生じる損傷が挙げられる。

【0241】

さらに特定の実施形態では、本タンパク質は、作用物質に誘導される血小板形態変化（例えば、ＧＰＩｂ－ｖＷＦによって媒介される血小板活性化）、血小板内顆粒成分の放出、シグナル伝達経路の活性化、またはＧＰＶＩと相互作用しない作用物質による血小板活性化時のカルシウム動員の誘導などの他の血小板の性状または機能に影響を与えないことが好ましい。

【0242】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、ＧＰＶＩのリガンド（限定されるものではないが、コラーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、ビトロネクチンおよびラミニンなど）または他の細胞外マトリックスタンパク質に応答したシグナル伝達異常を伴う疾患を治療する。

【0243】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、通常ＧＰＶＩを発現する細胞またはＧＰＶＩを発現しない細胞のいずれかにおける異常なレベルのＧＰＶＩ発現および／または活性を伴う疾患を治療する。例えば、本タンパク質を使用して、通常ＧＰＶＩを発現しない癌性（例えば腫瘍）細胞におけるＧＰＶＩの異常な発現を伴う疾患を調節することができる。そのような障害としては、例えば腫瘍細胞の遊走および転移への進行を伴う疾患を挙げることができる。

【0244】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して血小板の免疫調節機能を調節する。

【0245】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して骨髄および末梢血における疾患を治療する。

【0246】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を使用して、血小板が炎症反応を調節することによって寄与する疾患、例えば、限定されるものではないが感染、関節炎、線維症または限定されるものではないが癌細胞増殖および／または転移などの細胞機能を血小板が調節する疾患に付随する持続的または長期的炎症を治療する。

【0247】

ＧＰＶＩに関連する疾患、障害または病気のさらなる例としては、限定されるものではないが、例えば、アテローム血栓症を含む動脈血栓症、虚血性イベント、急性冠動脈症候群、心筋梗塞（心臓発作）、急性の脳血管虚血（脳卒中）、経皮的冠動脈介入、ステント血栓症、虚血性疾患、再狭窄、虚血（急性および慢性）、大動脈疾患およびその派生疾患（大動脈瘤、血栓症など）、末梢動脈疾患、静脈血栓症、急性静脈炎および肺塞栓症、癌関連の血栓症（トルソー症候群）、炎症性血栓症および感染に関連する血栓症などの心血管疾患および／または心血管系イベントが挙げられる。

【0248】

一実施形態では、本発明の医薬組成物または薬は、動脈もしくは静脈血栓症、再狭窄、急性冠症候群、またはアテローム性動脈硬化症に起因する脳血管障害、好ましくは血栓症を治療するためのものであるかそれらを治療するのに使用するためのものである。

【0249】

一実施形態では、当該対象はＧＰＶＩに関連する疾患、障害または病気、好ましくは心血管疾患および／またはイベントによって冒されているもの、好ましくはそれらと診断されているものである。

【0250】

一実施形態では、当該対象は、本発明において使用するためのタンパク質の投与の前の４８時間未満、好ましくは２４時間未満、１２時間以内に心血管系イベント（例えば、血栓症、脳卒中、心筋梗塞または脳血管障害など）を経験したものである。

【0251】

一実施形態では、当該対象は治療プロトコルの一部として本明細書の上に記載されているタンパク質、組成物、医薬組成物または薬を摂取する。

【0252】

一実施形態では、前記治療プロトコルは、本発明のタンパク質の投与の前、それと同時またはその後に、例えば血栓溶解剤、好ましくはｔ－ＰＡ（そのままのｔ－ＰＡおよび組換え型ｔ－ＰＡならびにそのままのｔ－ＰＡの酵素および／または線維素溶解活性を保持する修飾型ｔ－ＰＡを含む）などのＧＰＶＩに関連する病気を治療するのに有用な別の薬剤の投与をさらに含む。

【0253】

一実施形態では、前記治療プロトコルは、本発明のタンパク質の投与の前、それと同時またはその後に、血管内治療および／または血栓摘出術（塞栓摘出術としても知られている）による当該対象の治療をさらに含む。

【0254】

従って一実施形態では、治療される対象は、血管内治療および／または血栓摘出術によって過去に治療されたかこれから治療されるものである。

【0255】

一実施形態では、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約３２ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量の本発明において使用するためのタンパク質が当該患者に投与される（または投与される予定である）。別の実施形態では、約２．５ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量のヒト化タンパク質が当該患者に投与される。一実施形態では、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または約５０ｍｇ／ｋｇの用量の本発明において使用するためのタンパク質が当該対象に投与される（または投与される予定である）。

【0256】

一実施形態では、約３０ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲、好ましくは約６０ｍｇ～約２０００ｍｇ、より好ましくは約１００～約１０００ｍｇの範囲、さらにより好ましくは約５００ｍｇの用量の本発明において使用するためのタンパク質が当該患者に投与される（または投与される予定である）。一実施形態では、約３０、６０、６２．５、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００または約３０００ｍｇの用量の本発明において使用するためのタンパク質が当該対象に投与される（または投与される予定である）。別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質の用量は、約１００ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇ、好ましくは約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇまたは約５００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲である。

【0257】

本組成物は当該対象への投与のために製剤化される。本組成物を非経口、吸入スプレー、直腸内または経鼻投与するか、埋め込み型リザーバーを介して投与してもよい。本明細書で使用される投与という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。

【0258】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は好ましくは静脈内注入によって注入される。別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は腹腔内に注射される。別の実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は皮内に注射される。

【0259】

注射に適した形態の例としては、限定されるものではないが、例えば無菌水溶液などの溶液、ゲル、分散液、乳濁液、懸濁液または使用前に液体を添加して溶液または懸濁液を調製するために使用するのに適した固体形態、例えば粉末およびリポソーム形態などが挙げられる。

【0260】

本組成物の無菌注射剤は、水性もしくは油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液を、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用する当該技術分野で知られている技術に従って製剤化してもよい。無菌注射剤は、非経口的に許容される非毒性希釈剤または溶媒に入れた無菌注射溶液または懸濁液であってもよい。用いることができる許容可能なビヒクルおよび溶媒としては、水、リンガー液および等張の塩化ナトリウム溶液が挙げられる。また無菌固定油は、従来通りに溶媒または懸濁媒として用いられる。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドなどのあらゆる無刺激性固定油を用いてもよい。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は注射剤の調製に有用であり、天然の薬学的に許容される油、例えば特にそれらのポリオキシエチル化された形態のオリーブ油またはヒマシ油も有用である。これらの油溶液または懸濁液は、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤または分散剤あるいは乳濁液および懸濁液などの薬学的に許容される剤形の製剤によく使用される同様の分散剤も含有していてもよい。また製剤のために、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓおよび他の乳化剤などのその他のよく使用される界面活性剤あるいは薬学的に許容される固体、液体または他の剤形の製造によく使用される生物学的利用能増強剤を使用してもよい。

【0261】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、当該対象に約２時間、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５または約１２時間にわたって投与される（または投与される予定である）。

【0262】

一実施形態では、本発明において使用するためのタンパク質は、当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間（例えば約２時間、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５または約１２時間）にわたって連続投与される。本明細書で使用される「連続投与される」という用語は、実質的に一定の投与速度での長時間にわたる化合物の投与を指す。

【0263】

別の実施形態では、本タンパク質の最初のボーラスが注射された後に、本タンパク質の残りの用量の連続投与が行われる。

【0264】

一実施形態では、前記最初のボーラス投与は、投与される本単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約１０～５０％、好ましくは約２０％を含む。一実施形態では、前記最初のボーラス投与は、投与される本単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または約５０％を含む。

【0265】

一実施形態では、前記最初のボーラスは約５～３０分、好ましくは約１５分で投与される。

【0266】

一実施形態では、本投与に使用するためのタンパク質の総投与量の約２０％が最初の１５分の投与の間に投与された後に、次の５時間４５分の間に残りの８０％の連続投与が行われる。

【0267】

一実施形態では、前記特定の投薬計画（任意に最初のボーラスを含む、少なくとも２時間にわたる連続投与）により本タンパク質の長期的効果が可能になり、これは実施例において実証されているように、前記タンパク質の投与の終了後に観察することができる。一実施形態では、血小板凝集に対する本タンパク質の効果は本タンパク質の投与の終了後に少なくとも約１、２、３、４、５、６、１２、１８、２４、３６または４８時間にわたって観察される。

【0268】

一実施形態では、医薬組成物中に存在する本発明において使用するためのタンパク質は、例えば１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬの濃度などの約１～約１００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で供給することができる。一実施形態では、本タンパク質は１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）のいずれかの使い捨てバイアルに入れて約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給される。

【0269】

一実施形態では、本医薬組成物はＰＢＳ（ｐＨ７．２～７．７）中に本発明のタンパク質を含んでいてもよい。

【0270】

一実施形態では、本医薬組成物は、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液および１３０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ５．０）中に本発明のタンパク質を含んでいてもよい。

【0271】

本発明の別の目的はＧＰＶＩに関連する病気の治療方法であり、前記方法は、本明細書の上に記載されているｈＧＰＶＩに結合する単離されたヒト化タンパク質あるいは本明細書の上に記載されている組成物、医薬組成物または薬を、それを必要とする対象に投与することを含む。本発明によれば、本発明の方法は、前記タンパク質、組成物、医薬組成物または薬を当該対象に少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって投与することを含む。

【0272】

一実施形態では、本発明のＧＰＶＩに関連する病気の治療方法は、当該患者を血管内治療および／または血栓摘出術により治療することをさらに含む。一実施形態では、前記血管内治療および／または血栓摘出術は本発明のタンパク質（好ましくは本抗体）の投与の前、それと同時またはその後に行う。

【0273】

一実施形態では、本発明のＧＰＶＩに関連する病気の治療方法は、例えば血栓溶解剤などのＧＰＶＩに関連する病気を治療するのに有用な別の薬剤、好ましくはｔ－ＰＡ（そのままのｔ－ＰＡおよび組換え型ｔ－ＰＡならびにそのままのｔ－ＰＡの酵素および／または線維素溶解活性を保持する修飾型ｔ－ＰＡを含む）を投与することをさらに含む。一実施形態では、前記さらなる薬剤は本発明のタンパク質（好ましくは本抗体）の投与の前、それと同時またはその後に投与される。

【0274】

一実施形態では、本発明の方法は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約３２ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、本発明の方法は、約２．５ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約８ｍｇ／ｋｇの用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。一実施形態では、本発明の方法は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または約５０ｍｇ／ｋｇの用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。

【0275】

一実施形態では、本発明の方法は、約３０ｍｇ～約３０００ｍｇの範囲、好ましくは約６０ｍｇ～約２０００ｍｇ、より好ましくは約１００～約１０００ｍｇの範囲、さらにより好ましくは約５００ｍｇの用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。一実施形態では、本発明の方法は、約３０、６０、６２．５、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００または約３０００ｍｇの用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。別の実施形態では、本発明の方法は、約１００ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約２０００ｍｇ、好ましくは約２５０ｍｇ～約１０００ｍｇまたは約５００ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲の用量の本発明に記載されているタンパク質を投与することを含む。

【0276】

一実施形態では、本発明に記載されているタンパク質は好ましくは点滴によって注射される。

【0277】

一実施形態では、本発明の方法は、本タンパク質を約２時間、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５または約１２時間にわたって投与することを含む。

【0278】

一実施形態では、本発明の方法は、本タンパク質を少なくとも２時間、好ましくは少なくとも４～６時間にわたって（例えば、約２時間、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５または約１２時間にわたって）連続投与することを含む。

【0279】

別の実施形態では、本発明の方法は、本タンパク質の最初のボーラスを投与した後に本タンパク質の残りの用量の連続投与を行うことを含む。

【0280】

一実施形態では、前記最初のボーラス投与は、投与される本単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約１０～５０％、好ましくは約２０％を含む。一実施形態では、前記最初のボーラス投与は、投与される本単離されたヒト化タンパク質の総投与量の約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または約５０％を含む。

【0281】

一実施形態では、前記最初のボーラスは約５～３０分、好ましくは約１５分で投与される。

【0282】

一実施形態では、本投与に使用するためのタンパク質の総投与量の約２０％が最初の１５分の投与の間に投与された後に、次の５時間４５分の間に残りの８０％の連続投与が行われる。

【0283】

一実施形態では、本発明の方法はＧＰＶＩ受容体機能および下流シグナル伝達を阻害し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0284】

一実施形態では、ＧＰＶＩ受容体機能および下流シグナル伝達を阻害するための方法は、血小板数、血小板表面におけるＧＰＶＩの発現または出血時間に影響を与えない。

【0285】

一実施形態では、ＧＰＶＩ受容体機能および下流シグナル伝達を阻害するための方法は効率的かつ可逆的である。

【0286】

一実施形態では、本発明の方法はＧＰＶＩのそのリガンド（好ましくは、限定されるものではないがコラーゲン）への結合を阻害し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0287】

一実施形態では、ＧＰＶＩのそのリガンドへの結合を阻害するための方法は、血小板数、血小板表面におけるＧＰＶＩの発現または出血時間に影響を与えない。

【0288】

一実施形態では、ＧＰＶＩのそのリガンドへの結合を阻害するための方法は効率的かつ可逆的である。

【0289】

一実施形態では、本発明の方法は、血小板のコラーゲンへの接着を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0290】

一実施形態では、本発明の方法は、コラーゲン誘導性血小板凝集を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0291】

一実施形態では、本発明の方法は、コラーゲンに応答した血小板活性化、特に血小板凝集を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0292】

一実施形態では、本発明の方法は、コラーゲンおよび／または組織因子に応答したトロンビン産生を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0293】

一実施形態では、本発明の方法は、ＧＰＶＩのフィブリンへの結合を阻害し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0294】

一実施形態では、本発明の方法は、ＧＰＶＩを介したフィブリンによる血小板動員を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0295】

一実施形態では、本発明の方法は、フィブリンに応答したＧＰＶＩ依存性トロンビン産生を阻害および／または防止し、それによりＧＰＶＩに関連する病気を治療するためのものである。

【0296】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質を対象に投与することによりインビボにおいてＧＰＶＩの枯渇は誘導されない。

【0297】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質を対象に投与することにより血小板数の減少は誘導されない。従って一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質を対象に投与することにより血小板減少症は誘導されない。

【0298】

一実施形態では、本明細書の上に記載されているタンパク質を対象に投与することにより出血時間の延長は誘導されない。

【0299】

一実施形態では、本発明の方法は治療的有効量の本タンパク質を対象に投与することを含む。

【0300】

本発明はさらに、ＧＰＶＩに関連する疾患を治療するための血栓溶解剤（好ましくはｔ－ＰＡ（そのままのｔ－ＰＡおよび組換え型ｔ－ＰＡならびにそのままのｔ－ＰＡの酵素および／または線維素溶解活性を保持する修飾型ｔ－ＰＡを含む））の効力を高めるための方法に関し、前記方法は、前記血栓溶解剤と本発明のタンパク質（好ましくは治療的有効量の本発明のタンパク質）との組み合わせを当該対象に投与することを含む。

【0301】

一実施形態では、本発明の方法により当該対象に投与される血栓溶解剤（好ましくはｔ－ＰＡ）の用量を減少させることができる。

【図面の簡単な説明】

【0302】

【図1】図１は、カニクイザル（ｎ＝４）への増加用量のＡＣＴ０１７（１、２、４、８ｍｇ／ｋｇ）の１５分間の注入終了から３０分後および２時間後に測定したコラーゲン誘導性血小板凝集の平均±ＳＥＭでの強度（Ａ）および速度（Ｂ）を示すグラフの組み合わせである。

【図2】図２は、あらゆる治療前（Ｔ０）または増加用量（１、２、４、８ｍｇ／ｋｇ）のビヒクルもしくはＡＣＴ０１７の注入から２４時間後に測定したカニクイザルの血中血小板数を示すグラフである。

【図3】図３は、治療前（時間＝０）ならびにカニクイザルへのＡＣＴ０１７（１、２、４、８ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルの注入から３０分後および２時間後に４匹の対象において測定した出血時間を示すグラフの組み合わせである。

【図4】図４は、カニクイザル（ｎ＝８）へのＡＣＴ０１７の２種類の用量（２および８ｍｇ／ｋｇ）の１時間の注入開始後の異なる時間に測定したコラーゲン誘導性血小板凝集の平均±ＳＤでの強度（Ａ）および速度（Ｂ）を示すグラフの組み合わせである。

【図5】図５は、２ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７の１時間の注入開始後の異なる時間にカニクイザル（ｎ＝８）の血小板に対するフローサイトメトリーによって測定したＧＰＶＩ発現レベルを示すグラフである（ＭＦＩ：平均蛍光強度）。

【図6】図６は、カニクイザルへの８ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７の２５分間のボーラス注射（ｎ＝４）、８ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７の１時間の注入（ｎ＝８）、または２ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７の１５分間のボーラスとその後の６ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７の５時間４５分の注入（ｎ＝４）、の終了後の異なる時間（２０分～２４時間）で測定したコラーゲン誘導性血小板凝集の平均±ＳＤでの強度を示すグラフである。

【図7】図７は、野生型ＧＰＶＩ－Ｆｃ（黒色のグラフ）およびＧＰＶＩ二重変異体（灰色のグラフ）のコラーゲンへの結合を示すグラフである。

【図8】図８は、ＡＣＴ０１７の野生型ＧＰＶＩ－Ｆｃ（黒色のグラフ）または二重変異体（灰色のグラフ）への結合を示すグラフである。

【図9】図９は、異なる時間（１５分～１６８時間）においてコホート４の２人の健康な対象で測定した血小板凝集率（％）を示すグラフである。コホート４の対象に５００ｍｇのＡＣＴ０１７またはプラセボを投与した。「スクリーニング時間」は、ＡＣＴ０１７またはその適合プラセボの投与の１週間前または２４時間前の血小板凝集率（％）の測定値を表す。「投与前」はＡＣＴ０１７またはその適合プラセボの投与のベースライン測定値を表す。健康な対象１のグラフは黒色で表されており、健康な対象２のグラフは灰色で表されている。

【実施例】

【0303】

以下の実施例によって本発明をさらに例示する。

【0304】

実施例１：非ヒト霊長類における生物学的データ

【0305】

材料および方法
動物
本研究ではどんな治療も過去に受けたことのない２８匹のカニクイザルを使用した。

【0306】

治療
最初に、増加用量のＡＣＴ０１７（１、２、４、８ｍｇ／ｋｇ）またはそのビヒクルを１５分間にわたって静脈内投与した（ｎ＝４～８）。投与から３０分後および２時間後の時点で血液を採取した。

【0307】

第２の実験では、ＡＣＴ０１７をボーラス注射または注入によって動物に投与した。３つの治療群、すなわち２５分のボーラス注射によって８ｍｇ／ｋｇで投与されるＡＣＴ０１７（ｎ＝４）、１時間の注入によって８ｍｇ／ｋｇで投与されるＡＣＴ０１７（ｎ＝８）、１５分のボーラス注射によって２ｍｇ／ｋｇおよびその後に５時間４５分の注入により６ｍｇ／ｋｇで投与されるＡＣＴ０１７（ｎ＝４）を本研究に含めた。投与から２０分～２４時間後の異なる時間で血液を採取した。

【0308】

解析
血小板凝集：遠心分離（１２０×ｇ、１５分、２０℃）後に多血小板血漿（ＰＲＰ）をサルから得て、即座に使用した。その凝集の速度および強度をＡＰＡＣＴ（登録商標）血小板凝集計および各種濃度の本発明のＦａｂを含むＰＲＰに対して２．５ｍｇ．ｍＬ^－１のコラーゲン（Ｈｏｒｍコラーゲン、Ｎｙｃｏｍｅｄ社、ＤＥ）濃度を用いて測定し、連続的に記録した。血小板凝集の強度を光透過における増加率（％）として測定した。注射の開始後の指示された時間における平均±ＳＤが提示されている。

【0309】

ＥＤＴＡ抗凝固処理血液中で血小板数を測定した。サルのパラメータに設定したｓｃｉｌ Ｖｅｔ ａｂｃ自動セルカウンター（Ｓｃｉｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｐａｎｙ社、フランスのホルツハイム）で血小板数を決定した。

【0310】

標準的な臨床診断法（Ｉｖｙ法）に従い、かつ０．５ｃｍのＳｕｒｇｉｃｕｔｔ（商標）出血時間装置を用いて、覚醒状態のサルの前腕の表面で出血時間を測定した。

【0311】

ＧＰＶＩ発現：注射前および増加用量のＡＣＴ０１７または同等量のビヒクルの注射から３０分後に血液試料をＥＤＴＡ上に採取し、カニクイザルＧＰＶＩと交差反応する市販のＦＩＴＣ結合抗ヒトＧＰＶＩモノクローナル抗体（クローン１Ｇ５、Ｂｉｏｃｙｔｅｘ社）と共にインキュベートし、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇａｌｌｉｏｓフローサイトメーターで蛍光を測定した。

【0312】

結果
ＡＣＴ０１７投与の効果を非ヒト霊長類において特徴づけた。８匹のカニクイザルがこの研究に参加した。

【0313】

最初に、増加用量のＡＣＴ０１７（１、２、４、８ｍｇ／ｋｇ）を１５分間にわたって静脈内投与した。投与から３０分後および２時間後の時点で血液を採取した。血小板凝集は用量依存的に可逆的に阻害された（図１）。１から２ｍｇ／ｋｇおよび２から４ｍｇ／ｋｇへと用量を増加させると効果が高まったが、８ｍｇ／ｋｇでは４ｍｇ／ｋｇと比較した場合にさらなる効果は生じなかった。注射から２４時間後に測定した血小板数は、注射前に得られた値と比較した場合に変化していなかった（図２）。ビヒクルあるいは２、４または８ｍｇ／ｋｇのＡＣＴ０１７での治療後に出血時間における有意な延長は観察されなかった（図３）。次に、ウォッシュアウト期間後に、カニクイザルに１時間の潅流として投与されるＡＣＴ０１７（２または８ｍｇ／ｋｇ）を与えた。血小板凝集およびＧＰＶＩ発現を治療の開始後の異なる時間（１、１．５、２、４および７時間）で測定した（図４および図５）。コラーゲン誘導性血小板凝集は可逆的に阻害され、その効果の持続期間は２ｍｇ／ｋｇと比較して８ｍｇ／ｋｇで治療したカニクイザルにおいて引き延ばされた（図４）。血小板上でのＧＰＶＩ発現は、治療前の値と比較した場合に治療開始後の異なる時間で安定なままであった（図５）。

【0314】

まとめると、これらの結果から、非ヒト霊長類においてＡＣＴ０１７の投与は、血小板数、血小板表面におけるＧＰＶＩの発現および出血時間に対して影響を与えることなくＧＰＶＩ機能を効率的かつ可逆的に阻害することが確認される。

【0315】

また上記結果によれば、１時間の注入後の血小板凝集に対するＡＣＴ０１７の阻害効果は、限られた期間において効率的であるように見えた。実際、ＡＣＴ０１７は投与の開始後の２時間の間のみ、すなわち１時間の誘導の終了後に最大で１時間にわたって、血小板凝集に対して明白かつ安定な阻害を誘導した（図４を参照）。２時間後には、この阻害が８ｍｇ／ｋｇで延長されていたとしても、ＡＣＴ０１７阻害剤の効果は全ての試験された用量において消失した。

【0316】

第２の実験では、８ｍｇ／ｋｇの用量のＡＣＴ０１７の血小板凝集に対する効果を、１時間および６時間の投与を含む異なる投与時間後に、さらに特徴づけた。血小板凝集は時間依存的に可逆的に阻害された（図６）。

【0317】

８ｍｇ／ｋｇでの２５分間のボーラス注射は、０．５時間で測定したコラーゲン誘導性血小板凝集の完全な阻害を誘導した。２時間では血小板凝集の阻害は消失し、凝集強度は２４±３４％の値に戻った。２４時間の時点ではＡＣＴ０１７の効果を観察できない。

【0318】

８ｍｇ／ｋｇでの１時間の注入により、コラーゲン誘導性血小板凝集の長期的阻害が生じた。但し、この阻害は２時間までのみ全ての動物について完全なもの（＜５％）であった。ＡＣＴ０１７の投与から４時間後および７時間後に阻害は消失し、凝集の総平均強度はそれぞれ１６±２９％および２５±３２％であった。従って２５分間の投与に関しては、ＡＣＴ０１７の阻害効果は、その１時間の投与後の短時間の間のみ明白であるように見える。

【0319】

８ｍｇ／ｋｇでの６時間の注入により、少なくとも９時間持続するコラーゲン誘導性血小板凝集の十分な阻害が生じた。実際、６時間の注入の開始後から９時間の間、血小板凝集強度は２％未満であった。さらに、解析は９時間～２４時間の間は行われなかったので、当該効果のより長い持続期間の可能性は排除されるものではない。２４時間の時点では、ＡＣＴ０１７の効果は４匹の動物のうちの３匹についてほぼ完全に逆戻りし、かつ平均凝集強度は４７±３０％に達した。

【0320】

結論として８ｍｇ／ｋｇの同じ用量では、６時間の注入は、投与の終了後から少なくとも３時間にわたってコラーゲン誘導性血小板凝集を阻害する長期的有効性を実証する。

【0321】

実施例２：健康な志願者におけるＡＣＴ０１７の安全性、忍容性、薬物動態および薬力学の研究

【0322】

材料および方法
本研究は、健康な志願者におけるＡＣＴ０１７の安全性、忍容性、薬物動態および薬力学に対する無作為化、二重盲検、プラセボ対照漸増単回投与研究である。

【0323】

対象
本研究に含めた対象は、３０～６０歳の年齢（両端の値を含む）のＢＭＩ≧１８ｋｇ／ｍ^２かつ≦３０ｋｇ／ｍ^２の健康な男性対象または妊娠しておらず授乳中でない女性対象であった。計４８人の対象を６つの漸増用量レベルコホートに登録し、各コホートは８人の対象（６人が有効成分、２人がプラセボ）からなっていた。各コホートを２つのサブコホートに分け、すなわち１つのコホート（１人は有効成分、１人はプラセボ）には最初に投薬し、それ以外のコホート（５人は有効成分、１人はプラセボ）にはその４８時間後に投薬した。

【0324】

各投薬期間の１日目に、対象は研究センターに入り、投薬後少なくとも４８時間までそこに滞在した。経過観察訪問は７日目に行われた。対象は１日目から３日目の朝まで入院した。

【0325】

治療
治験薬は５００ｍｇのＡＣＴ０１７および適合プラセボ溶液を含む５０ｍＬバイアルであった。６時間の注入の間に治療が行われた。

【0326】

各用量は、最終投与量の約４分の１に相当する最初のボーラスの１５分間の注射を含む６時間の注入として投与した。
コホート１：治療Ａ：６２．５ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。
コホート２：治療Ａ：１２５ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。
コホート３：治療Ａ：２５０ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。
コホート４：治療Ａ：５００ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。
コホート５：治療Ａ：１０００ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。
コホート６：治療Ａ：２０００ｍｇのＡＣＴ０１７（ｎ＝６）、治療Ｂ：適合プラセボ（ｎ＝２）。

【0327】

解析
ＡＣＴ０１７のための薬物動態採血は対象ごとに１５個の試料を必要とした。

【0328】

ＡＣＴ０１７のための採尿は対象ごとにおよそ５回の採尿間隔を必要とした。

【0329】

安全性および忍容性解析は以下の試験を含んでいた。
・有害事象：本研究の最初から最後まで
・バイタルサイン：頻繁
・ＥＣＧ（心電図）：バイタルサインよりも少ない頻度
・血液検査を含む臨床検査：２回
・凝固パラメータ：５回
・出血時間：４回
・血小板数：７回
・血小板凝集（コラーゲン）：６回
・免疫原性／ＡＤＡ：３回

【0330】

血小板凝集：最初の１５分で当該用量の２５％が投与され、その後の５時間４５分で当該用量の７５％が投与されるプラセボまたは５００ｍｇのＡＣＴ０１７が静脈内に投与された健康な対象から、遠心分離（１２０×ｇ、１５分、２０℃）後に多血小板血漿（ＰＲＰ）を得て、即座に使用した。凝集強度をＡＰＡＣＴ（登録商標）血小板凝集計および２．５ｍｇ．ｍＬ^－１のコラーゲン濃度（Ｈｏｒｍコラーゲン、各種濃度の本発明のＦａｂ）を用いて測定して連続的に記録した。血小板凝集の強度を光透過における増加率（％）として測定した。

【0331】

結果
図９に示すように、対象２における血小板凝集率（％）は、投与の開始から１５分後にのみ、ベースラインのパーセンテージと比較して約７０％減少し、その後の８時間にわたって約１０％に維持され、次いで再び上昇して２４時間後に約７０％の凝集に達し、次いで投与から４８時間後にベースラインに戻る。投与から１６８時間後に血小板凝集に対する効果は認められない。従って対象２において観察された効果は可逆的である。対象１では、血小板凝集率（％）は当該経験の１６８時間の間に変化しないようである。

【0332】

実施例３：ＧＰＶＩに対するＡＣＴ０１７のエピトープ親和性に関する研究

【0333】

ＧＰＶＩ上のＡＣＴ０１７のエピトープは、ＧＰＶＩ上の２つの領域（配列番号１３中のアミノ酸１２１～１３５およびアミノ酸１６９～１８３）を含む立体構造エピトープであるとエピトープマッピングによって過去に同定された。このエピトープを確認するために、以下の変異体：Ｓ１２５Ｐ、Ｓ１２６Ｑ、Ｇ１２８Ｒ、Ｑ１３３Ｋ、Ｔ１３６Ｓ、Ｔ１７１Ｄ、Ａ１７２ＬおよびＨ１７４Ｖを含む二重変異体を構築し、コラーゲンおよびＡＣＴ０１７に対するこの変異体の親和性を測定した。

【0334】

材料および方法
以下のように可溶性ＧＰＶＩ－Ｆｃを作製した：トリペプチドＧＧＲを介してヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに融合された最初のメチオニンからアスパラギン２６９までのヒトＧＰＶＩの外部ドメインをコードする遺伝子をコドンの最適化後に合成した。この遺伝子をｐＴＴ５ベクターにクローニングした後、ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞
にトランスフェクトした。分泌されたＧＰＶＩ－Ｆｃを、ＭＡｂｓｅｌｅｃｔ ｍａｔｒｉｘ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、１７５１９９０１）を用いた親和性クロマトグラフィー、およびその後のＮｕｖｉａ（商標）ＨＲ－Ｓ陽イオン交換樹脂（ＢｉｏＲａｄ社、１５６０５１）上でのポリッシングクロマトグラフィー（polishing chromatography）によって、上記細胞の馴化培地から精製した。

【0335】

ＧＰＶＩ－Ｆｃのコラーゲンへの結合に対する二重変異体の効果－マイクロタイトレーションプレートをコラーゲンのＰＢＳ溶液（２０μｇ／ｍＬ、１ウェルあたり１００μＬ）で４℃にて一晩コーティングした。非特異的結合部位を２００μＬの１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液で３０分間飽和させた。次いでこれらのプレートを増加する濃度の野生型もしくは二重変異体のＧＰＶＩ－Ｆｃ調製物（０．１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１００μＬのＰＢＳ溶液）と共に３０分間インキュベートした。３回の洗浄工程後に、プレートをペルオキシダーゼ結合二次ヒト抗Ｆｃ（ａｂ）と共に３０分間インキュベートした。最後に、１００μＬの基質溶液を各ウェルに４分間添加し、比色定量反応を２５μＬのＮａＯＨ（３Ｍ）で止めた。

【0336】

ＡＣＴ０１７のＧＰＶＩ－Ｆｃへの結合に対する二重変異体の効果－マイクロタイトレーションプレートをＧＰＶＩ－ＦｃのＰＢＳ（２０μｇ／ｍＬ、１ウェルあたり１００μＬ）溶液で４℃にて一晩コーティングした。非特異的結合部位を２００μＬの１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液で３０分間飽和させた。次いでこれらのプレートを増加する濃度のＡＣＴ０１７調製物（０．１％ＢＳＡおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１００μＬのＰＢＳ溶液）と共に３０分間インキュベートした。３回の洗浄工程後に、プレートをペルオキシダーゼ結合二次ヒト抗ＩｇＧと共に３０分間インキュベートした。最後に、１００μＬの基質溶液を各ウェルに４分間添加し、比色定量反応を２５μＬのＮａＯＨ（３Ｍ）で止めた。

【0337】

解析
４５０ｎｍでの吸光度をＦｌｕｓｔａｒ Ｏｐｔｉｍａで測定する。

【0338】

結果
図７に示すように、ＧＰＶＩ－Ｆｃの二重変異体は依然として、用量依存的にコラーゲンに結合することができ、これはコラーゲンに対するＧＰＶＩの親和性がこれらの変異体の存在下で主に保存されていることを示す。但し図８に示すように、ＡＣＴ０１７は野生型ＧＰＶＩ－Ｆｃに結合することができるが、高濃度であっても二重変異体には結合することはできない。従って、これらの結果により、ＧＰＶＩ配列上のＡＣＴ０１７のエピトープの位置が確認された。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

0007360945000001.app