特許 7362084 ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１分離株及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-06

(45)【発行日】2023-10-17

(54)【発明の名称】ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１分離株及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20231010BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20231010BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20231010BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20231010BHJP

   A23K 10/00 20160101ALI20231010BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 A

C12N1/20 E

A61K35/747

A61P3/00

A61P3/04

A61P3/10

A61P3/06

A61P1/16

A23L33/135

A23K10/00

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2022001515

(22)【出願日】2022-01-07

(65)【公開番号】P2023055601

(43)【公開日】2023-04-18

【審査請求日】2022-01-07

(31)【優先権主張番号】110137219

(32)【優先日】2021-10-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】TW

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用 （その１） 開催日 ２０２１年１月８日 開催場所 高雄醫學大學研究所 （その２） ウェブサイトの掲載日 ２０２１年１月２５日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐｓ：／／ｈｄｌ．ｈａｎｄｌｅ．ｎｅｔ／１１２９６／ｅ２ｂｑｆａ

【微生物の受託番号】BCRC  BCRC911037

(73)【特許権者】

【識別番号】522010303

【氏名又は名称】樂牧生技股▲フン▼有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】謝豐欽

(72)【発明者】

【氏名】呉慶軒

(72)【発明者】

【氏名】林志傑

【審査官】斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１１－５２３４０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１９／２０８１５０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Ye, Haiqing et al，Effect of a novel potential probiotic Lactobacillus paracasei Jlus66 isolated from fermented milk on，Food & Function，Vol.8, No.12，2017年，pp.4539-4546

【文献】El-Shafie, Hanaa A. et al，Hypocholesterolemic action of Lactobacillus plantarum NRRL-B-4524 and Lactobacillus paracasei in mic，Australian Journal of Basic and Applied Sciences，Vol.3, No.1，2009年，pp.218-228

【文献】Pu, Fangfangb et al，Lactobacillus paracasei N1115 can Alter Lipid Metabolismin of High-fat Diet Fed SD Rats.，FASEB Journal，Vol. 31, No. Suppl. 1，2017年04月01日，Abstract Numbe 965.4.

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

台湾の財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センターに寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託されているラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１。

【請求項2】

請求項１に記載のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を有効成分として含み、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用されることを特徴とする組成物。

【請求項3】

前記メタボリック代謝症候群関連疾患は、肥満、高血糖症、糖尿病、脂質異常症、高脂血症、脂肪肝及びそれらの組み合わせからなる群より選択されることを特徴とする請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

食品組成物であることを特徴とする請求項２または請求項３に記載の組成物。

【請求項5】

医薬品組成物であることを特徴とする請求項２または請求項３に記載の組成物。

【請求項6】

前記医薬品組成物は、薬学的に許容可能な担体を更に含むことを特徴とする請求項５に記載の組成物。

【請求項7】

前記医薬品組成物は、非経腸投与、経口投与または局所投与の剤形になっていることを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、台湾の微生物寄託機関である財団法人食品工業發展研究所（Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＦＩＲＤＩ）のバイオソース収集・研究センター（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ、ＢＣＲＣ）に寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託されているラクトバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＬＭ－１４１分離株に関し、該ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１分離株は、メタボリック代謝症候群関連疾患（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ)の予防や治療に使用されることができる。

【背景技術】

【0002】

人体が過量の高脂質食品を摂取する上、充分な運動をしていないと、余分のカロリー（食物から得られる栄養学的熱量）が、脂肪の形で脂肪組織（ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ）に蓄積されて、体脂肪（ｂｏｄｙ ｆａｔ）になる。

【0003】

人の体内の体脂肪の蓄積が正常ではない場合、または脂肪代謝（ｆａｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）に異常がある場合、例えば肥満（ｏｂｅｓｉｔｙ）、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ）、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、高血圧（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）、心臓血管疾患（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ、ＣＶＤｓ）などのメタボリック代謝症候群関連疾患に罹る可能性がある。

【0004】

現在、臨床でメタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用される方法は、食事制限と運動以外、抗肥満薬（ａｎｔｉ－ｏｂｅｓｉｔｙ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）、血糖降下薬（ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ａｇｅｎｔｓ）または脂質低下薬（ｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ａｇｅｎｔｓ）の服用を含む。しかし、上記の薬の長期服用は、希望の効果が得られないだけでなく更には患者に厳重な副作用（ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ）をもたらす可能性がある。従って、この技術分野に関連する研究者は、メタボリック代謝症候群関連疾患の有効な予防や治療が可能であり且つ望まない副作用が生じない薬物の開発に取り組んでいる。

【0005】

乳酸菌（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ、ＬＡＢ）は、一般に安全と認められ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ ｓａｆｅ、ＧＲＡＳ）、且つ、広く知られて使用されているプロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）である。

【0006】

そのような乳酸菌は、ラクトバシラス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（レンサ球菌属）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）などを含む。

【0007】

従来の研究により、ラクトバチルス・パラカセイ（またはラクチカゼイバチルス・パラカセイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）と称する）は、抗肥満、及び、血中や体内の脂質を低下させるなどの効果がある。例えば、非特許文献１では、高脂肪飼料誘発された肥満［ｈｉｇｈ ｆａｔ ｄｉｅｔ（ＨＦＤ）－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｉｔｙ］のラットに対して、ラクトバチルス・パラカセイＳＴ１１を投与することにより、ラクトバチルス・パラカセイＳＴ１１に、ラットの体重を低減し且つ腹部の脂肪重量を減らす効果があることを発見したと示されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【文献】Ｔａｎｉｄａ Ｍ． ｅｔ ａｌ． （２００８）， Ｏｂｅｓ． Ｒｅｓ． Ｃｌｉｎ． Ｐｒａｃｔ．， ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｏｒｃｐ．２００８．０４．００３

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

しかし、業界においては、非特許文献１に記載されている微生物以外にも、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に有効な微生物が尚も求められている。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本願発明者は１種のラクトバチルス分離株の分離に成功し、該分離株は特徴鑑定によりラクトバチルス・パラカセイに属するので、本願出願人によりラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１と命名され、台湾の財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センターに寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託されている。

【0011】

そこで本発明は、台湾の財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センターに寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託されているラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を提供する。

【0012】

また、本発明は、上記のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を有効成分として含んでいて、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用されることを特徴とする組成物を提供する。

【発明の効果】

【0013】

ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、生体内の（ｉｎ ｖｉｖｏ）の実験により、高脂肪飼料（ＨＦＤ）誘発された肥満のラットに対して、体重、体脂肪、血糖を低減する効果と、耐糖能性（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）とインスリン抵抗性（ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）とを改善する効果と、脂質異常症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）及び肝臓の脂肪の蓄積を遅らせる効果とを有するので、本願発明者は、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１においてメタボリック代謝症候群関連疾患を予防や治療する薬などに発展する潜在能力が高いと考えている。

【0014】

すなわち、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】各群のラットで経口ブドウ糖負荷試験（ｏｒａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｅｓｔ）を行って得られた血糖濃度－時間曲線（ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅ ｃｕｒｖｅ）を示す図である。一般対照群は特に処理されていないラットであり、病態対照群は高脂肪飼料が与えられたラットであり、実験群１はラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液１が投与され且つＨＦＤが与えられたラットであり、実験群２はラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液２が投与され且つＨＦＤが与えられたラットであり、“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。

【図2】投与開始から４週、９週、１４週が経過した時の、上記各群のラットの空腹時血糖値を示す図である。“＊”または“＊＊＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５またはｐ＜０．００１であることを示し、“＃＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０１であることを示す。

【図3】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの恒常性モデル評価のインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）指数を示す図である。“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。

【図4】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの血清中の総コレステロール濃度を示す図である。“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。

【図5】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの血清中のトリグリセリド濃度を示す図である。“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃”または“＃＃”は病態対照群と比べてｐ＜０．０５またはｐ＜０．０１であることを示す。

【図6】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの血清中の低密度リポタンパク質／高密度リポタンパク質（ＬＤＬ／ＨＤＬ）比率を示す図である。“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。

【図7】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの血清中のアスパラギン酸アミノ基転移酵素/アラニンアミノ基転移酵素（ＡＳＴ／ＡＬＴ）比率を示す図である。“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示し、“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。

【図8】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの肝臓組織がオイルレッドＯ（Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ）により染色された後観察された結果を示す図である。矢印は脂肪滴（ｌｉｐｉｄ ｄｒｏｐｌｅｔｓ）の蓄積を指す。

【図9】投与開始から１４週が経過した時の、上記各群のラットの肝臓組織がヘマトキシリン－エオシン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ）染色により染色された後観察された結果を示す図である。矢印は脂肪空胞（ｆａｔ ｖａｃｕｏｌｅｓ）の蓄積を指す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

まず、何らかの先行技術文献が本明細書において引用されても、台湾またはいかなる国においても、該先行技術文献の内容が本発明の属する分野における一般知識であることを示すものではないことを理解されたい。

【0017】

また、「含む」という用語は「含むが、これに限定されない」ことを意味し、「有する」という用語もこれに対応する意味を有することも理解されたい。

【0018】

他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。当業者であれば、本開示の実施において、本明細書に記載のものと類似又は同等の多くの方法及び材料を認識し、利用することができる。実際、本開示は記載された方法及び材料に決して限定されない。

【0019】

本発明は、台湾の財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センター（ＢＣＲＣ ｏｆ ＦＩＲＤＩ）に寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託されているラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１分離株を提供する。

【0020】

本発明は、また、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を有効成分として含み、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用される組成物を提供する。

【0021】

本明細書で使用する場合、「メタボリック代謝症候群（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」という用語は、個体において慢性の代謝異常により１つ以上の関連疾患が（多数の場合には同時に）発生することを指す。

【0022】

ここでいうメタボリック代謝症候群関連疾患は、具体的には例えば、これらに限らないが、メタボリック代謝症候群、肥満、高血糖症（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ）、高インスリン血症（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉａ）、糖尿病[２型真性糖尿病（ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ、Ｔ２ＤＭ）を含む]及びそれによる合併症（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ） [例えば、糖尿病性網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性白内障（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃａｔａｒａｃｔ）、糖尿病性神経障害（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性ネフロパシー腎症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）及び糖尿病性心筋症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）など]、脂質異常症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）[高脂血症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ）、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ）、高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）及び高リポタンパク血症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａ）を含む]、高血圧、心臓血管疾患[例えば、冠動脈疾患（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅｓ、ＣＡＤｓ）、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、心不全（ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ）、狭心症（ａｎｇｉｎａ ｐｅｃｔｏｒｉｓ）及び心不整脈（ｃａｒｄｉａｃ ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ）など]、脂肪肝（ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ） [また肝脂肪変性（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）と称し、急性脂肪肝 （ａｃｕｔｅ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ）、慢性脂肪肝（ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ）、大滴性の脂肪肝（ｍａｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ）、小滴性脂肪肝（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ）及び非アルコール性脂肪性肝疾患（ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ、ＮＡＦＬＤ）を含む]、肝線維症（ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、肝硬変（ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）を含むことができる。

【0023】

好ましくは、メタボリック代謝症候群関連疾患は、肥満である。

【0024】

好ましくは、メタボリック代謝症候群関連疾患は、２型真性糖尿病（Ｔ２ＤＭ）である。

【0025】

本明細書で使用する場合、メタボリック代謝症候群関連疾患に対する用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、該疾患の重症度（ｓｅｖｅｒｉｔｙ）または該疾患の症状（ｓｙｍｐｔｏｍ）が低減される（ｒｅｄｕｃｅｄ）、あるいは、該疾患が部分的に（ｐａｒｔｉａｌｌｙ）または完全に（ｅｎｔｉｒｅｌｙ）取り除かれる（ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ）ようにすることを指す。

【0026】

本明細書で使用する場合、メタボリック代謝症候群関連疾患に対する用語「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」又は「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、個体が診査により該疾患を罹患していない時に、該疾患の発生率（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ）を削減（ｅｌｉｍｉｎａｔｅ）または低減し（ｒｅｄｕｃｅ）、及び、該疾患の可能性（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）または確率（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）を遅らせ（ｓｌｏｗ）、遅延（ｄｅｌａｙ）、制御（ｃｏｎｔｒｏｌ）または減らす（ｄｅｃｒｅａｓｅ）ことを指す。

【0027】

本発明において、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、生菌、死菌、濃縮された（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ）、未濃縮（ｎｏｎ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ）、液体（ｌｉｑｕｉｄ）、ペースト（ｐａｓｔｅ）、半固形（ｓｅｍｉ－ｓｏｌｉｄ）、固形（ｓｏｌｉｄ） [例えば、ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）、顆粒（ｇｒａｎｕｌｅ）または粉末（ｐｏｗｄｅｒ）]、加熱不活性化した（ｈｅａｔ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ）、冷凍（ｆｒｏｚｅｎ）、乾燥した（ｄｒｉｅｄ）、凍結乾燥した（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）[例えば、凍結乾燥またはスプレー／流動床乾燥 （ｓｐｒａｙ／ｆｌｕｉｄ ｂｅｄ ｄｒｉｅｄ）] の形態であり得る。本発明の好ましい具体例において、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は生菌の形態である。

【0028】

本発明において、前記組成物は、食品組成物（ｆｏｏｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）とすることができ、例えば食品添加物（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ）の形態で、食用材料（ｅｄｉｂｌｅ ｍａｔｅｒｉａｌ）に添加されて、人や動物が食用するための食品製品に作成することができる。本発明において、該食品製品の例として、これらに限らないが、牛乳（ｍｉｌｋ）や濃縮乳（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｍｉｌｋ）などの液状乳製品（ｆｌｕｉｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ヨーグルト（ｙｏｇｕｒｔ）やサワーミルク（ｓｏｕｒ ｍｉｌｋ）やフローズンヨーグルト（ｆｒｏｚｅｎ ｙｏｇｕｒｔ）などの発酵乳（ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｍｉｌｋ）、粉ミルク（ｍｉｌｋ ｐｏｗｄｅｒ）、アイスクリーム（ｉｃｅ ｃｒｅａｍ）、クリームチーズ（ｃｒｅａｍ ｃｈｅｅｓｅｓ）、ドライチーズ（ｄｒｙ ｃｈｅｅｓｅｓ）、豆乳（ｓｏｙｂｅａｎ ｍｉｌｋ）、発酵豆乳（ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｉｌｋ）などの乳酸菌発酵飲料（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ）、野菜・フルーツジュース（ｖｅｇｅｔａｂｌｅ－ｆｒｕｉｔ ｊｕｉｃｅｓ）、フルーツジュース（ｆｒｕｉｔ ｊｕｉｃｅｓ）、スポーツドリンク（ｓｐｏｒｔｓ ｄｒｉｎｋｓ）、菓子（ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｅｒｙ）、ゼリー（ｊｅｌｌｙ）、キャンディー（ｃａｎｄｉｅｓ）、乳児用調製粉乳（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ）などの乳児用食品（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｏｄ）、漢方薬（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ）などの健康食品（ｈｅａｌｔｈ ｆｏｏｄｓ）、動物用飼料（ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄｓ）、栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）を含むことができる。

【0029】

本発明において、前記組成物は、医薬品組成物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）とすることができる。

【0030】

本発明において、該医薬品組成物は、非経口投与、非経腸投与（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、経口投与（ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または局所投与（ｔｏｐｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）の剤形（ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）にすることができる。該医薬品組成物は、経口投与の剤形にすることが好ましい。

【0031】

本発明において、該医薬品組成物は、薬物の製造技術に広く使用されている薬学的に許容可能な担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）を更に含むことができる。該薬学的に許容可能な担体は、以下に挙げられているもの及びそれらの組み合わせからなる群より選択されるものを含むことができ、例えば、溶剤（ｓｏｌｖｅｎｔ）、緩衝剤（ｂｕｆｆｅｒ）、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、分解剤（ｄｅｃｏｍｐｏｓｅｒ）、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、結合剤（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）、安定化剤（ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、キレート剤（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、ゲル化剤（ｇｅｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、防腐剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ）、湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、潤滑剤（ｌｕｂｒｉｃａｎｔ）、吸収遅延剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｄｅｌａｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、リポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）及びそれらと類似するものが挙げられる。前述の薬学的に許容可能な担体の選択及び量は、当業者の専門知識及び通常の技術の範囲内である。

【0032】

本発明において、該医薬品組成物は、当業者の専門的な知識技術により非経腸投与に適する剤形[注射品（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、例えば、滅菌水溶液（ｓｔｅｒｉｌｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）または分散液（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）を含む]に作成することができ、且つ、腹腔内注射（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、胸腔内注射（ｉｎｔｒａｐｌｅｕｒａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、筋肉内注射（ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、静脈内注射（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、動脈内注射（ｉｎｔｒａａｒｔｅｒｉａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、関節内注射（ｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、滑液嚢内注射（ｉｎｔｒａｓｙｎｏｖｉａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、髄腔内注射（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、頭蓋内注射（ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、表皮内注射（ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、皮下注射（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、皮内注射（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、病巣内注射（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）及び舌下投与（ｓｕｂｌｉｎｇｕａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）からなる方法の群より選択されて投与する。

【0033】

本発明において、該医薬品組成物は、当業者の専門的な知識技術により経口投与に適する剤形に作成することができ、例えば、これらに限らないが、無菌粉末、タブレット（ｔａｂｌｅｔ）、トローチ（ｔｒｏｃｈｅ）、ロゼンジ（ｌｏｚｅｎｇｅ）、ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）、カプセル（ｃａｐｓｕｌｅ）、分散性粉末（ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）、顆粒（ｇｒａｎｕｌｅ）、溶液、懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）、エマルジョン（ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、シロップ（ｓｙｒｕｐ）、エリキシル剤（ｅｌｉｘｉｒ）、スラリー（ｓｌｕｒｒｙ）及びそれらと類似するものを含む。

【0034】

本発明において、該医薬品組成物は、当業者の専門的な技術知識により局所的に皮膚上に使用する外用剤（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）に作成することができ、例えば、これらに限らないが、エマルジョン（ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、ゲル（ｇｅｌ）、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、クリーム（ｃｒｅａｍ）、パッチ（ｐａｔｃｈ）、塗布薬（ｌｉｎｉｍｅｎｔ）、パウダー（ｐｏｗｄｅｒ）、エアロゾル（ａｅｒｏｓｏｌ）、スプレー（ｓｐｒａｙ）、ローション（ｌｏｔｉｏｎ）、セラム（ｓｅｒｕｍ）、ペースト（ｐａｓｔｅ）、泡（ｆｏａｍ）、ドロップ（ｄｒｏｐ）、懸濁液（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）、膏薬（ｓａｌｖｅ）、包帯（ｂａｎｄａｇｅ）を含む。

【0035】

本発明はまた、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用する方法を提供し、それは個体に上記のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を投与することを含む。

【0036】

また、メタボリック代謝症候群関連疾患を罹患する個体または罹患する疑いがある個体を、上記のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１を投与することにより治療する方法を提供する。

【0037】

本明細書で使用する場合、用語「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」及び「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、互換的に使用することができ、且つ、任意の適切なルートで個体に予定の活性成分を導入（ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ）、提供（ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ）または供給（ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ）し、予定の効果を奏することを指す。

【0038】

本明細書で使用する場合、用語「個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、関心対象の哺乳類を指し、例えば、ヒト（ｈｕｍａｎｓ）、サル（ｍｏｎｋｅｙｓ）、牛（ｃｏｗｓ）、羊（ｓｈｅｅｐ）、馬（ｈｏｒｓｅｓ）、豚（ｐｉｇｓ）、ヤギ（ｇｏａｔｓ）、イヌ（ｄｏｇｓ）、猫（ｃａｔｓ）、マウス（ｍｉｃｅ）、ラット（ｒａｔｓ）が挙げられる。

【0039】

本発明により、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の投与量及び投与回数は、治療する疾患の重症度、投与ルート、治療する個体の年齢、身体状況及び反応といった要因により変化する。一般的に、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、１回の投与量または複数回の投与量で非経腸投与、経口投与または局所投与により投与されることができる。

【0040】

以下、本発明の実施例について説明する。これらの実施例は、例示的かつ説明的なものであり、且つ、本発明を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。
実施例
一般実験材料
１．実験動物
以下の実施例に使用するオスのＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（５週齢）は、台湾ＢｉｏＬａｓｃｏ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ., Ｌｔｄ社から購入したものである。

【0041】

すべての実験動物は、明期が１２時間及び暗期が１２時間の明暗周期で、室温を２５±１℃に維持する独立の空気調節システムがある動物ルームで飼養されていて、充分の水分及び飼料が提供されている。

【0042】

実験動物の飼養環境、処理及びすべての実験手順について、アメリカ国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、ＮＩＨ）の実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に合致する。

【0043】

２.以下の実施例に使用された一般飼料（ｎｏｒｍａｌ ｄｉｅｔ）と高脂肪飼料（ｈｉｇｈ ｆａｔ ｄｉｅｔ、ＨＦＤ）は表１に示される成分を有する。

【0044】

【表1】

【0045】

一般実験方法
１. 統計分析（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ）
以下の実施例において、各群の実験データは、「平均値（ｍｅａｎ）±標準誤差（ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎ、ＳＥＭ）」で示される。すべてのデータは、統計ソフトＳｉｇｍａ Ｐｌｏｔ（ｖｅｒｓｉｏｎ １０．０、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．）で統計分析を行い、且つ、スチューデントのｔ検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ‘ｓ ｔ－ｔｅｓｔ）で分析し、各群の間の差異を評価した。得られた結果はｐ＜０．０５であれば、統計的有意性（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）があることを意味する。

【0046】

実施例１：ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１の選別と特徴鑑定
Ａ. ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１の取得元及び分離：
出願者は、台湾泡菜（台湾風の野菜の漬物、台湾の伝統的な市場から購入）をサンプルの取得元として、ラクトバシラスＭＲＳ寒天培地（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ ＭＲＳ Ａｇａｒ）(米Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製、ＢＤ Ｄｉｆｃｏ)を用いて、ラクトバチルスの分離及び選別を行い、ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１を得た。

【0047】

ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１が所属する菌種を特定するため、ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１に対して以下Ｂに記載の解析を行った。

【0048】

Ｂ.１６Ｓ ｒＤＮＡ解析（１６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）
１６Ｓ ｒＤＮＡ解析は、台湾の国立嘉義大学の食品科学科及び研究所（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉａｙｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ)の呂英震（Ｌｅｕ Ｙｉｎｇ Ｃｈｅｎ）教授の研究室に依頼して行われた。簡単に説明すると、ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１のゲノム（ｇｅｎｏｍｅ）ＤＮＡをテンプレート（ｔｅｍｐｌａｔｅ）として、細菌の１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子により設計され以下に示されるヌクレオチド配列（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を有するプライマー対（ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒ）のフォワードプライマー（ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）Ｆ１及びリバースプライマー（ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）Ｒ１を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ、ＰＣＲ）を行って、ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１の１６Ｓ ｒＤＮＡ断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）を増幅した。ＰＣＲの反応条件は以下の表２に示される。

【0049】

フォワードプライマーＦ１
５’－ａｇａｇｔｔｔｇａｔｃｃｔｇｇｃｔｃａｇ－３’(配列識別番号：１)
リバースプライマーＲ１
５’－ｇｔａｔｔａｃｃｇｃｇｇｃｔｇｃｔｇ－３’(配列識別番号：２)

【0050】

【表2】

【0051】

ＰＣＲが完了した後、１．５％のアガロースゲル電気泳動（ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）により、大きさが約５５０ｂｐのＰＣＲ増幅生成物を得たかを確認し、ゲルから確認されたＰＣＲ生成物を回収純化した。

【0052】

そして、ターゲティング分析（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）によりラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１の１６ＳｒＤＮＡ配列（配列識別番号：３）を得た。更に、米国ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のウェブサイトにおける遺伝子データベースと照会したところ、ラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１の１６ＳｒＤＮＡ配列は、ラクトバチルス・パラカセイの１６ＳｒＤＮＡ配列［Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ）：ＮＣ＿０１４３３４．２］と９７％の類似性を有するという結果が得られた。

【0053】

上記の実験結果により、発明者は、本発明のラクトバチルス分離株ＬＭ－１４１が１種のラクトバチルス・パラカセイ分離株であることが判明したので、ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１と命名し、２０２１年１月２９日付で台湾財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センター（住所：Ｎｏ． ３３１， Ｓｈｉｐｉｎ Ｒｄ．， Ｅａｓｔ Ｄｉｓｔ．， Ｈｓｉｎｃｈｕ Ｃｉｔｙ ３００１９３， Ｔａｉｗａｎ）に寄託番号ＢＣＲＣ９１１０３７で寄託した。

【0054】

実施例２. ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１が肥満関連メタボリック代謝症候群（ｏｂｅｓｉｔｙ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を改善する効果の評価
実験材料：
１. ラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液の作成
上記実施例１で得られたラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１をＭＲＳ培地（ＭＲＳ Ｂｒｏｔｈ）（米Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製、ＢＤ Ｄｉｆｃｏ）に接種し、３７℃で１２時間培養した。そして、得られた培養物を４℃で４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清液を除いて、適量のＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で沈殿物（ｐｅｌｌｅｔｓ）を洗って、適量の殺菌された水で分散させて、２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬ及び２×１０^９ＣＦＵ／ｍＬの細菌濃度に調整して、細菌濃度が２×１０^７ＣＦＵ／ｍＬであるラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液１及び細菌濃度が２×１０^９ＣＦＵ／ｍＬであるラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液２を得られた。なお、細菌濃度は、寒天平板計数法（ａｇａｒ ｐｌａｔｅ ｃｏｕｎｔ）で細菌数を計算して得た。

【0055】

実験方法
Ａ．肥満の誘発及びラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の投与
先ず、オスのＳＤラットを、１つの一般対照群（ｎ＝６）、１つの病態対照群（ｎ＝６）、２つの実験群（各群ｎ＝８）(即ち実験群１と実験群２)との４群にランダムに分けた。そして、経口胃管栄養法（ｏｒａｌ ｇａｖａｇｅ）で、実験群１と実験群２とのラットのそれぞれに１ｍＬの、上記の実験材料の第１項で得られたラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液１とラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１の実験菌液２とを投与した。一般対照群及び病態対照群のラットには１ｍＬの逆浸透水を投与した。各群のラットは、毎日一回投与され、投与時間合計１４週である。

【0056】

投与から２週経過した後、病態対照群、実験群１及び実験群２のラットに高脂肪飼料を与え、一般対照群のラットに一般飼料を与え、合計１２週与えた。

【0057】

投与前及び投与開始から１４週経過後に、各群のラットの体重を測定した。

【0058】

Ｂ．生物サンプルの作成
投与開始から４週及び９週経過した時、及び１４週経過した後の体重測定の後に、各群のラットを１６時間断食させて（ｆａｓｔｉｎｇ）、そして静脈穿刺からの採血（ｖｅｎｉｐｕｎｃｔｕｒｅ ｂｌｅｅｄｉｎｇ）により、各群のラットの尾静脈（ｃａｕｄａｌ ｖｅｉｎ）から血液を収集し、得られた血液サンプルを以下の第Ｆ項の実験に使用した。また、第１４週の血液サンプルの一部を、４℃で４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、得られた血清サンプルを以下の第Ｇ項～第Ｊ項の実験に使用した。

【0059】

第１４週後の血液サンプルを収集した後、経口胃管栄養法により各群のラットにブドウ糖溶液（ハネウェル・リーデルデハーン社から購入、商品番号（ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ）１６３２５）（用量：２ｇ／ｋｇ）を投与し、且つ、ブドウ糖溶液の投与前（即ち第０分）及び投与開始から第１５分、第３０分に、静脈穿刺からの採血により、各群のラットの尾静脈から血液を収集し、得られた血液サンプルを以下の第Ｅ項の実験に使用した。

【0060】

その後、二酸化炭素でラットを屠殺して、各群のラットの脂肪組織（ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ）［即ち、副睾丸脂肪（ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌ ｆａｔ）及び腎周囲脂肪（ｐｅｒｉｒｅｎａｌ ｆａｔ）]及び肝組織（ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ）を取り出して、それぞれを以下の第Ｄ項及び第Ｋ項の実験に使用した。

【0061】

Ｃ．体重増加比率（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ ｒａｔｉｏ）の測定
体重増加比率は、各群のラットの投与前及び投与開始から１４週経過後の体重を以下の数式（１）に代入して計算された。
数式（１）：Ａ＝（Ｂ－Ｃ）／Ｃ
Ａ＝体重増加比率
Ｂ＝投与開始から１４週経過後の体重（ｇ）
Ｃ＝投与前の体重（ｇ）

【0062】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0063】

Ｄ．体脂肪率（ｂｏｄｙ ｆａｔ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ）の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの脂肪組織の重量を測定して、各群のラットの体脂肪の重量を得た。

【0064】

体脂肪率は、各群のラットの体脂肪の重量及び投与開始から１４週経過後の体重を以下の数式（２）に代入して計算された。
数式（２）：Ｄ＝（Ｅ/Ｆ）×１００
Ｄ＝体脂肪率（％）
Ｅ＝体脂肪の重量（ｇ）
Ｆ＝投与開始から１４週経過後の体重（ｇ）

【0065】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0066】

Ｅ．経口ブドウ糖負荷試験
上記第Ｂ項で得られた各群のラットのブドウ糖溶液の投与前（即ち第０分）及び投与開始から第１５分、第３０分に収集した３種の血液サンプルのそれぞれを、Ｒｉｇｈｔｅｓｔ ＧＭ５５０血糖値測定システム（Ｒｉｇｈｔｅｓｔ ＧＭ５５０ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）(台湾Ｂｉｏｎｉｍｅ社製)で血液ブドウ糖濃度（ｍｇ／ｄＬ）を測定し、そして、得られた血液ブドウ糖濃度を時間に対してグラフを作成し、血糖濃度―時間曲線を得た。

【0067】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0068】

Ｆ．空腹時血糖値（ｆａｓｔｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ｓｕｇａｒ ｌｅｖｅｌ）の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの投与開始から４週、９週及び１４週経過した後に収集した血液サンプルを上記Ｒｉｇｈｔｅｓｔ ＧＭ５５０血糖値測定システムで空腹時血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を測定した。

【0069】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0070】

Ｇ．恒常性モデル評価のインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）［ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＨＯＭＡ－ＩＲ） ｉｎｄｅｘ］指数の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの血清サンプルは、製造元の操作マニュアルに基づいてラットインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｒａｔ Ｉｎｓｕｌｉｎ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ）（Ｍｅｒｃｏｄｉａ ＡＢ社製）を使用してインシュリン値（Ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｅｖｅｌ）（ｍＩＵ／Ｌ）を測定した。ＨＯＭＡ－ＩＲ指数は、得られた各群のラットのインシュリン値及び上記第Ｆ項で得られた空腹時血糖値を以下の数式（３）に代入して計算された。
数式（３）：Ｇ＝（Ｈ×Ｉ）／４０５
Ｇ＝ＨＯＭＡ－ＩＲ指數
Ｈ＝空腹時血糖値（ｍｇ／ｄＬ）
Ｉ＝インシュリン値（ｍＩＵ／Ｌ）

【0071】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0072】

Ｈ．血清総コレステロール（ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、ＴＣ）及びトリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ、ＴＧ）濃度の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの血清サンプルは、台湾の財団法人国家実験研究院国家実験動物センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｒ．Ｏ．Ｃ．）に依頼して、製造元の操作マニュアルに基づいてＨＩＴＡＣＨＩ７０８０生化学自動分析装置（ＨＩＴＡＣＨＩ ７０８０ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ）を使用して血清総コレステロール及びトリグリセリド濃度（ｍｇ／ｄＬ）を測定した。

【0073】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0074】

Ｉ．低密度リポタンパク質／高密度リポタンパク質（ＬＤＬ／ＨＤＬ）比率［ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉn （ＬＤＬ／ＨＤＬ） ｒａｔｉｏ］の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの血清サンプルは、台湾の財団法人国家実験研究院国家実験動物センターに依頼して、製造元の操作マニュアルに基づいて上記ＨＩＴＡＣＨＩ ７０８０生化学自動分析装置を使用して血清低密度リポタンパク質及び高密度リポタンパク質（ｍｇ／ｄＬ）を測定した。

【0075】

低密度リポタンパク質／高密度リポタンパク質比率（ＬＤＬ／ＨＤＬ ｒａｔｉｏ）は、得られた各群のラットの血清低密度リポタンパク質及び高密度リポタンパク質を以下の数式（４）に代入して計算された。
数式（４）：Ｊ＝Ｋ／Ｌ
Ｊ＝ＬＤＬ／ＨＤＬ比率
Ｋ＝血清低密度リポタンパク質（ｍｇ／ｄＬ）
Ｌ＝血清高密度リポタンパク質（ｍｇ／ｄＬ）

【0076】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0077】

Ｊ. アスパラギン酸アミノ基転移酵素／アラニンアミノ基転移酵素（ＡＳＴ／ＡＬＴ）比率［ａｓｐａｒｔａｔｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ／ ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＳＴ／ＡＬＴ） ｒａｔｉｏ］の測定
上記第Ｂ項で得られた各群のラットの血清サンプルは、台湾の財団法人国家実験研究院国家実験動物センターに依頼して、製造元の操作マニュアルに基づいて上記ＨＩＴＡＣＨＩ ７０８０生化学自動分析装置を使用して血清アスパラギン酸アミノ基転移酵素及びアラニンアミノ基転移酵素濃度（ｍｇ／ｄＬ）を測定した。

【0078】

アスパラギン酸アミノ基転移酵素/アラニンアミノ基転移酵素比率（ＬＤＬ／ＨＤＬ ｒａｔｉｏ）は、得られた各群のラットの血清中のアスパラギン酸アミノ基転移酵素及びアラニンアミノ基転移酵素濃度を以下の数式（５）に代入して計算された。
数式（５）：Ｍ＝Ｎ／Ｏ
Ｍ＝ＡＳＴ／ＡＬＴ比率
Ｎ＝血清アスパラギン酸アミノ基転移酵素濃度（ｍｇ／ｄＬ）
Ｏ＝血清アラニンアミノ基転移酵素濃度（ｍｇ／ｄＬ）

【0079】

そして、一般実験方法の第1項の統計分析により、得られた実験データを分析した。

【0080】

Ｋ. 肝臓組織の組織病理学検査（ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）
先ず、４℃で１０％のホルマリン（ｆｏｒｍａｌｉｎ）で、上記第Ｂ項で得られた各群のラットの肝臓組織に対して４８時間の固定処理（ｆｉｘａｔｉｏｎ）を行い、そして、一部の固定された組織サンプルを２０％のスクロース水溶液に４８時間浸漬した。そして、組織サンプルをティシュー・テック（登録商標）Ｏ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド（サクラファインテック社製Ｔｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ（登録商標）Ｏ．Ｃ．Ｔ． Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）で包埋（ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ）し、そして、切片にして厚さ８μｍの組織切片（ｔｉｓｓｕｅ ｓｅｃｔｉｏｎｓ）を得た。得られた組織切片をイソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ）で洗い、Ｏｉｌ Ｒｅｄ Ｏ染色剤[０．５ｇのＯｉｌＲｅｄＯを１００ｍＬのイソプロパノールに添加し、そして蒸留水と３：２（ｖ/ｖ）の比で混合して得た]で組織内に蓄積された脂肪滴を染色した。光学顕微鏡（オリンパス社製）を用いて、２００倍の放大倍率で染色された組織切片を観察し且つ写真を撮った。

【0081】

そして、他の固定された組織サンプルをパラフィン（ｐａｒａｆｆｉｎ）で包埋し、そして、切片にして厚さ３μｍの組織切片を得た。得られた組織切片を、本発明が属する技術分野の通常の知識を有する者が知っている常用の技術でヘマトキシリン－エオシンを使用して染色した。光学顕微鏡（オリンパス社製）を用いて、２００倍の放大倍率で染色された組織切片を観察し且つ写真を撮った。

【0082】

結果
Ａ.本実験で測定した結果は以下の表３に示される。

【0083】

【表3】

“＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．０５であることを示す。
“＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０１であることを示す。

【0084】

表３からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの体重増加比率は、顕著に増加したので、ＨＦＤはラットの肥満を誘発することに成功したことが示された。

【0085】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの体重増加比率は、顕著に低下した、特に実験群２のラットの体重増加比率は、一般対照群の体重増加比率に近い。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、体重を低減する効果があることが示された。

【0086】

Ｂ.体脂肪率の測定
本実験で測定した結果は以下の表４に示される。

【0087】

【表4】

“＊＊＊”は一般対照群と比べてｐ＜０．００１であることを示す。
“＃＃” は病態対照群と比べてｐ＜０．０１であることを示す。

【0088】

表４からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの体脂肪率は、顕著に増加したので、ＨＦＤはラットの体脂肪の蓄積（ｂｏｄｙ ｆａｔ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ）を誘発することに成功したことが示された。

【0089】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの体脂肪率は、顕著に低下した。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、体脂肪を低減する効果があることが示された。

【0090】

上記の第Ａ項及び第Ｂ項の実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、体重及び体脂肪を低減する効果があるので、抗肥満に使用できることが明らかになった。

【0091】

Ｃ. 経口ブドウ糖負荷試験
図１は、各群のラットが経口ブドウ糖負荷試験により得られた血糖濃度－時間曲線を示す。

【0092】

図１からみると、ブドウ糖溶液を投与した後第０分～第３０分において、各群のラットの血糖濃度は時間の経過と伴って上昇した。病態対照群の血糖濃度の上昇程度は、一般対照群の血糖濃度の上昇程度より顕著に高いので、ＨＦＤはラットの耐糖能異常（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を誘発することに成功したことが示された。

【0093】

各実験群のラットの血糖濃度－時間曲線は、一般対照群の血糖濃度－時間曲線に近く、特に実験群２の結果は一般対照群に近い。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、耐糖能異常を改善する効果があることが示された。

【0094】

Ｄ. 空腹時血糖値の測定
図２は、投与開始から、４週、９週、１４週が経過した時の、各群のラットの空腹時血糖値を示す。

【0095】

図２からみると、投与開始から、第４週～第１４週において、病態対照群のラットの空腹時血糖値は時間の経過と伴って顕著に上昇した。それに対して、一般対照群は顕著な変化がないので、ＨＦＤはラットの空腹時血糖値の異常上昇を誘発することに成功したことが示された。

【0096】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの空腹時血糖値は、顕著に低下して一般対照群の空腹時血糖値に近い。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、空腹時血糖値を低減する効果があることが示された。

【0097】

Ｅ. 恒常性モデル評価のインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）指数の測定
図３は、投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの恒常性モデル評価のインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ－ＩＲ）指数を示す。

【0098】

図３からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットのＨＯＭＡ－ＩＲ指数は顕著に増加したので、ＨＦＤはラットのインスリン抵抗性を誘発することに成功したことが示された。

【0099】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットのＨＯＭＡ－ＩＲ指数は、顕著に低下し、特に実験群１のラットで顕著に低下した。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、インスリン抵抗性を改善する効果があることが示された。

【0100】

上記の第Ｃ項～第Ｅ項の実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、血糖を有効に低減する効果及び耐糖能異常とインスリン抵抗性とを有効に改善する効果があるので、高血糖症及び糖尿病の遅らせに使用できることが明らかになった。

【0101】

Ｆ. 血清総コレステロール（ＴＣ）及びトリグリセリド濃度（ＴＧ）の測定
図４は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの血清中の総コレステロール濃度（ＴＣ）を示す。図５は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの血清中のトリグリセリド濃度（ＴＧ）を示す。

【0102】

図４及び図５からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの血清中のＴＣ及びＴＧ濃度は顕著に増加したので、ＨＦＤはラットの脂質異常症を誘発することに成功したことが示された。

【0103】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの血清中のＴＣ及びＴＧ濃度は、顕著に低下して一般対照群の血清中のＴＣ及びＴＧ濃度に近く、特に実験群２のラットの血清中のＴＧ濃度は一般対照群の血清中のＴＧ濃度より低い。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、脂質異常症を改善する効果があることが示された。

【0104】

Ｇ. 低密度リポタンパク質／高密度リポタンパク質（ＬＤＬ／ＨＤＬ）比率の測定
図６は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの血清中の低密度リポタンパク質／高密度リポタンパク質（ＬＤＬ／ＨＤＬ）比率を示す。

【0105】

図６からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの血清中のＬＤＬ／ＨＤＬ比率は顕著に増加したので、ＨＦＤはラットのリポタンパク質代謝の異常を誘発することに成功したことが示された。

【0106】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの血清中のＬＤＬ／ＨＤＬ比率は、顕著に低下しただけではなく、更に一般対照群の血清中のＬＤＬ／ＨＤＬ比率より低い。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、リポタンパク質代謝の異常を改善する効果があることが示された。

【0107】

上記の第Ｆ項～第Ｇ項の実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、脂質及びリポタンパク質代謝の異常を有効に改善する効果があるので、脂質異常症及び高脂血症の遅らせに使用できることが明らかになった。

【0108】

Ｈ. アスパラギン酸アミノ基転移酵素/アラニンアミノ基転移酵素（ＡＳＴ／ＡＬＴ）比率の測定
図７は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの血清中のアスパラギン酸アミノ基転移酵素／アラニンアミノ基転移酵素（ＡＳＴ／ＡＬＴ）比率を示す。

【0109】

図７からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの血清中のＡＳＴ／ＡＬＴ比率は顕著に増加したので、ＨＦＤはラットの肝臓損傷（ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ）を誘発することに成功したことが示された。

【0110】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの血清中のＡＳＴ／ＡＬＴ比率は、顕著に低下した。この実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、肝臓損傷を改善する効果があることが示された。

【0111】

Ｉ. 肝臓組織の組織病理学検査
図８は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの肝臓組織がＯｉｌ Ｒｅｄ Ｏにより染色された後観察された結果を示す。図中、矢印は脂肪滴の蓄積を指す。

【0112】

図８からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの肝臓組織切片には大量な脂肪滴が現れたので、ＨＦＤはラットの肝臓組織内の脂肪滴の蓄積をもたらすことが示された。

【0113】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの肝臓組織切片に現れた脂肪滴は、顕著に減少した。

【0114】

図９は投与開始から１４週が経過した時の、各群のラットの肝臓組織がヘマトキシリン－エオシン染色により染色された後観察された結果を示す。図中、矢印は脂肪空胞の蓄積を指す。

【0115】

図９からみると、一般対照群と比較した結果、病態対照群のラットの肝臓組織切片には大量な脂肪空胞が現れたので、ＨＦＤはラットの肝臓組織内の脂肪空胞の蓄積をもたらすことが示された。

【0116】

病態対照群と比較した結果、各実験群のラットの肝臓組織切片に現れた脂肪空胞は、顕著に減少した。

【0117】

これら実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、肝臓組織内の脂肪の蓄積を改善する効果があることが示された。

【0118】

上記の第Ｈ項～第Ｉ項の実験結果により、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、肝臓の損傷及び脂肪の蓄積を有効に改善する効果があるので、脂肪肝の遅延に使用できることが明らかになった。

【0119】

上記の実験結果によれば、本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用できる。

【0120】

本明細書で引用されているすべての特許及び文献の参考文献、ならびにそこに記載されている参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。矛盾する場合は、定義を含み本説明が優先される。

【0121】

上記実施形態は例示的に本発明の原理及び効果を説明するものであり、本発明を制限するものではない。本技術を熟知する当業者であれば本発明の精神及び範囲から離れないという前提の下、上記の実施形態に対して若干の変更や修飾が可能である。従って、当業者が本発明の主旨から離れないという前提の下、行った全ての変更や修飾も本発明の保護範囲に含まれるものとされるべきである。

【産業上の利用可能性】

【0122】

本発明のラクトバチルス・パラカセイＬＭ－１４１は、メタボリック代謝症候群関連疾患の予防や治療に使用できる。

【受託番号】

【0123】

寄託機関：台湾財団法人食品工業發展研究所のバイオソース収集・研究センター。寄託日：２０２１年１月２９日、寄託番号：ＢＣＲＣ９１１０３７

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】