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分析用試料の調製方法、分析方法および分析用試料の調製用キット

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

糖鎖に含まれるシアル酸の分析のため、糖鎖に含まれるシアル酸を修飾する新規な方法が提案されることが望ましい。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明の第１の態様は、糖鎖を含む試料からの分析用試料の調製方法であって、前記糖鎖に含まれるシアル酸の少なくとも一部を、ラクトン化以外のエステル化に供するエステル化反応を行うことと、前記試料と、前記エステル化により修飾されているシアル酸と反応させるアンモニア、アミン、ヒドラジン、ヒドラジン誘導体およびヒドロキシアミンならびにこれらの塩からなる群から選択される少なくとも一つの化合物を含む、アミド・・・　続きを知財ポータルサイト IP Force にログインして見る

発明の効果[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明によれば、糖鎖に含まれるシアル酸の分析のための、新規なメカニズムによりシアル酸を修飾する方法を提供することができる。

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 図１は、一分析方法の流れを示すフローチャートである。
【図2】 図２は、分析用試料の調製用キットを示す概念図である。
【図3】 図３は、変形例に係る分析方法の流れを示すフローチャートである。
【図4A】 図４Ａは、糖鎖ＧＤ１ａの構造を示す概念図である。
【図4B】 図４Ｂは、糖鎖ＧＤ１ｂの構造を示す概念図である。
【図4C】 図４Ｃは、糖鎖Ａ２ＧＮ１の構造を示す概念図である。
【図5】 図５は、変形例に係る分析方法の流れを示すフローチャートである。
【図6】 図６は、実施例で用いた糖鎖の構造を示す概念図である。
【図7】 図７は、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、メチルエステル化反応を行った後、それぞれ１％（ｂ）、１０％（ｃ）、および４０％（ｄ） メチルアミン水溶液によるアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルとを示す図である。
【図8】 図８は、メチルエステル化反応を行った後、５．６％ アンモニア水（ａ）、１０％ メチルアミン溶液（ｂ）、１７．５％ エチルアミン溶液（ｃ）、１６．７％ ジメチルアミン溶液（ｄ）、２０％ トリメチルアミン溶液（ｅ）のそれぞれを用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルを示す図である。
【図9】 図９は、メチルエステル化反応を行った後、５％ メチルアミン水溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、メタノール（ｂ）、ジメチルスルホキシド（ｃ）およびアセトニトリル（ｄ）のそれぞれを溶媒として、６％ メチルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルを示す図である。
【図10】 図１０は、メチルエステル化反応を行った後、１７．５％ エチルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、エチルエステル化反応を行った後、１０％ メチルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトル（ｂ）とを示す図である。
【図11】 図１１は、ＧＤ１ａ糖鎖を含む試料に対し、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、ＧＤ１ａ糖鎖を含む試料に対し、メチルエステル化反応を行った後、１０％ メチルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトル（ｂ）と、ＧＤ１ｂ糖鎖を含む試料に対し、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ｃ）と、ＧＤ１ｂ糖鎖を含む試料に対し、メチルエステル化反応を行った後、１０％ メチルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトル（ｄ）とを示す図である。
【図12】 図１２は、実施例で用いた糖鎖の構造を示す概念図である。
【図13】 図１３は、血清糖タンパク質由来Ｎ型糖鎖に対し、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、メチルエステル化反応を行った後、それぞれ５％（ｂ）、１０％（ｃ）、２０％（ｄ）および４０％（ｅ） エチルアミン溶液（真空吸引により通液）によるアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルとを示す図である。
【図14】 図１４は、血清糖タンパク質由来Ｎ型糖鎖に対し、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、メチルエステル化反応を行った後、それぞれ５％（ｂ）、１０％（ｃ）、２０％（ｄ）および４０％（ｅ） エチルアミン溶液（自然落下により通液）によるアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルとを示す図である。
【図15】 図１５は、血清糖タンパク質由来Ｎ型糖鎖に対し、メチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、メチルエステル化反応を行った後、液相下で、それぞれ２．５％（ｂ）、５％（ｃ）、１０％（ｄ）、２０％（ｅ）および４０％（ｆ） エチルアミン溶液によるアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススペクトルとを示す図である。
【図16】 図１６は、ＧＤ１ａ糖鎖およびＡ２ＧＮ１糖鎖に対し、エチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ａ）と、エチルエステル化反応を行った後、溶媒をアセトニトリルとして、それぞれメチルアミン溶液（ｂ）、エチルアミン溶液（ｃ）およびプロピルアミン溶液（ｄ）を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススぺクトルとを示す図である。
【図17】 図１７は、ＧＤ１ｂ糖鎖およびＡ２ＧＮ１糖鎖に対し、エチルエステル化反応を行い、アミド化反応を行わずに調製した分析用試料のマススペクトル（ｅ）と、エチルエステル化反応を行った後、溶媒をアセトニトリルとして、それぞれメチルアミン溶液（ｆ）、エチルアミン溶液（ｇ）およびプロピルアミン溶液（ｈ）を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススぺクトルとを示す図である。
【図18】 図１８は、ＧＤ１ａ（ａ）およびＧＤ１ｂ（ｂ）糖鎖に対し、エチルエステル化反応を行った後、溶媒をアセトニトリルとしてプロピルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のMS/MSスぺクトルを示す図である。
【図19】 図１９は、ＧＤ１ａ糖鎖に対し、エチルエステル化反応を行った後、溶媒をアセトニトリルとして０Ｍ、０．１２５Ｍ、０．２５Ｍ、０．５Ｍ、１Ｍおよび３Ｍのそれぞれの濃度のプロピルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススぺクトルを示す図である。
【図20】 図２０は、ＧＤ１ｂ糖鎖に対し、エチルエステル化反応を行った後、溶媒をアセトニトリルとして０Ｍ、０．１２５Ｍ、０．２５Ｍ、０．５Ｍ、１Ｍおよび３Ｍのそれぞれの濃度のプロピルアミン溶液を用いてアミド化反応を行い調製した分析用試料のマススぺクトルを示す図である。

代表図 図1本件の代表的な図

１０…エステル化剤、１１…容器、１００…分析用試料の調製用キット。

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