特許 7366908 ＰＤ－１に対する単一ドメイン抗体及びその変異体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-13

(45)【発行日】2023-10-23

(54)【発明の名称】ＰＤ－１に対する単一ドメイン抗体及びその変異体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20231016BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20231016BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20231016BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20231016BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20231016BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20231016BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20231016BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20231016BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20231016BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20231016BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20231016BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20231016BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231016BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P35/00

A61P1/00

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K45/00

A61P43/00 121

A61P43/00 111

【請求項の数】 30

(21)【出願番号】P 2020538951

(86)(22)【出願日】2019-01-15

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2021-04-30

(86)【国際出願番号】 CN2019071691

(87)【国際公開番号】W WO2019137541

(87)【国際公開日】2019-07-18

【審査請求日】2022-01-14

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2018/072589

(32)【優先日】2018-01-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】518261261

【氏名又は名称】ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＬＥＧＥＮＤ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．６ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｏｗｎ，Ｎｏ．５６８ Ｌｏｎｇｍｉａｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｊｉａｎｇｎｉｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｎａｎｊｉｎｇ ｃｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ヤフェン

(72)【発明者】

【氏名】ウー， シュ

(72)【発明者】

【氏名】ヤン， シュアイ

(72)【発明者】

【氏名】チョウ， チュアン－チュ

【審査官】飯濱 翔太郎

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／０８７５８９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１１－５０４７４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１３－５０５９２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／０１４８５５（ＷＯ，Ａ１）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ

Ｃ１２Ｎ １／１５

Ｃ１２Ｎ １／１９

Ｃ１２Ｎ １／２１

Ｃ１２Ｎ ５／１０

Ｃ１２Ｐ ２１／０８

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｐ １／００

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｋ ４５／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＰＤ－１を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分（抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分）を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分が、以下：
（１）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；あるいは
（２）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
のいずれか１つを含む、単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項2】

前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分が、以下：
（Ｉ）
ａ－１）３７位のアミノ酸残基が、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶからなる群から選択され；
ａ－２）４４位のアミノ酸残基が、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、及びＬからなる群から選択され；
ａ－３）４５位のアミノ酸残基が、Ｌ、Ｒ、及びＣからなる群から選択され；
ａ－４）１０３位のアミノ酸残基が、Ｗ、Ｒ、Ｇ、及びＳからなる群から選択され；及び
ａ－５）１０８位のアミノ酸残基が、Ｑであり；または
（ＩＩ）
ｂ－１）３７位のアミノ酸残基が、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶからなる群から選択され；
ｂ－２）４４位のアミノ酸残基が、Ｅ、Ｑ、及びＧからなる群から選択され；
ｂ－３）４５位のアミノ酸残基が、Ｒであり；
ｂ－４）１０３位のアミノ酸残基が、Ｗ、Ｒ、及びＳからなる群から選択され；及び
ｂ－５）１０８位のアミノ酸残基が、Ｑ及びＬからなる群から選択される；
のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含み、
アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従っている、請求項１に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項3】

前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分が、
（ｉ）配列番号２９５、３２１～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、
（ｉｉ）配列番号２９５、３２１～３２４のいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＶ_ＨＨドメイン、または
（ｉｉｉ）配列番号２９５、３２１～３２４のいずれか１つに対して最大で３つのアミノ酸置換を含むＶ_ＨＨドメイン
を含む、請求項１または２に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項4】

前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分が、ラクダ、キメラ、部分ヒト化、または完全ヒト化である、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項5】

前記単離抗ＰＤ－１構築物が、適宜リンカーを介してＦｃ断片に融合した前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分を含む重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）である、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項6】

（ｉ）前記ＨＣＡｂが、二量体である、および／または
（ｉｉ）前記Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、もしくはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である、および／または
（ｉｉｉ）前記リンカーが、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、
請求項５に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項7】

前記ＨＣＡｂが、配列番号３３１、３５７～３６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項５または６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項8】

前記単離抗ＰＤ－１構築物が、第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項9】

前記第２の抗体部分が、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである、請求項８に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項10】

前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分、及び前記第２の抗体部分が、リンカーによって適宜連結される、請求項８または９に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項11】

前記リンカーが、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項12】

前記第２の抗体部分が、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ－４を特異的に認識する第２のｓｄＡｂである、請求項８～１１のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項13】

前記第２の抗体部分が、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる完全長抗体である、請求項８～１１のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項14】

前記重鎖のＦｃ断片が、ｈＩｇＧ１Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である、請求項１３に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項15】

前記単離抗ＰＤ－１構築物が、
（ｉ）前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分のＮ末端が、前記完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、
（ｉｉ）前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分のＣ末端が、前記完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、
（ｉｉｉ）前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分のＮ末端が、前記完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、
（ｉｖ）前記抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分のＣ末端が、前記完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、
（ｖ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、４個の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分を含み、各抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分の前記Ｃ末端が、前記完全長抗体の各鎖の前記Ｎ末端に融合される、および
（ｖｉ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、４個の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分を含み、前記４個の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分のうちの２個が互いに融合し、前記完全長抗体の各重鎖の前記Ｎ末端にさらに融合される
からなる群から選択される構成を含む、請求項１３または１４に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項16】

前記完全長抗体が、
（１）ＴＩＧＩＴを特異的に認識する（抗ＴＩＧＩＴ完全長抗体）、
（２）ＬＡＧ－３を特異的に認識する（抗ＬＡＧ－３完全長抗体）、
（３）ＴＩＭ－３を特異的に認識する（抗ＴＩＭ－３完全長抗体）、
（４）ＣＴＬＡ－４を特異的に認識する（抗ＣＴＬＡ－４完全長抗体）、または
（５）ＰＤ－１を特異的に認識する（抗ＰＤ－１完全長抗体）、
請求項１３～１５のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項17】

前記抗ＴＩＧＩＴ完全長抗体が、
（ｉ）配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び、配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３、ならびに／または
（ｉｉ）配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項18】

前記抗ＬＡＧ－３完全長抗体が、
（ｉ）配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３、ならびに／または
（ｉｉ）配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項19】

前記抗ＴＩＭ－３完全長抗体が、
（ｉ）配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３、ならびに／または
（ｉｉ）配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項20】

前記抗ＣＴＬＡ－４完全長抗体が、
（ｉ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３、ならびに／または
（ｉｉ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項21】

前記抗ＰＤ－１完全長抗体が、
（ｉ）配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３、ならびに／または
（ｉｉ）配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項22】

前記単離抗ＰＤ－１構築物が、
（ａ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、Ｎ末端からＣ末端に４個のポリペプチド（ｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ、（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－適宜ペプチドリンカー－第１の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－適宜ペプチドリンカー－第２の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、および（ｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含み、ポリペプチド（ｉ）のＶ_Ｌ－Ｃ_Ｌおよびポリペプチド（ｉｉ）のＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１が第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗体部分を形成し、ポリペプチド（ｉｖ）のＶ_Ｌ－Ｃ_Ｌおよびポリペプチド（ｉｉｉ）のＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１が第３のエピトープを特異的に認識する第３の抗体部分を形成する、
（ｂ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、Ｎ末端からＣ末端に２個のポリペプチド（ｉ）第２のエピトープを特異的に認識する第１のｓｃＦｖ－適宜ペプチドリンカー－第１の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３および（ｉｉ）第３のエピトープを特異的に認識する第２のｓｃＦｖ－適宜ペプチドリンカー－第２の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む、
（ｃ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、Ｎ末端からＣ末端に４個のポリペプチド（ｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－適宜ペプチドリンカー－第１の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｌ、（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－適宜ペプチドリンカー－第２の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－適宜ペプチドリンカー－第３の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、および（ｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－適宜ペプチドリンカー－第４の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｌを含み、ポリペプチド（ｉ）のＶ_Ｌ－Ｃ_Ｌおよびポリペプチド（ｉｉ）のＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１が第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗体部分を形成し、ポリペプチド（ｉｖ）のＶ_Ｌ－Ｃ_Ｌおよびポリペプチド（ｉｉｉ）のＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１が第３のエピトープを特異的に認識する第３の抗体部分を形成する、
（ｄ）前記単離抗ＰＤ－１構築物が、Ｎ末端からＣ末端に４個のポリペプチド（ｉ）第１の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｌ、（ｉｉ）第２のエピトープを特異的に認識する第１のｓｃＦｖ－適宜ペプチドリンカー－第２の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｉｉｉ）第３のエピトープを特異的に認識する第２のｓｃＦｖ－適宜ペプチドリンカー－第３の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３および（ｉｖ）第４の抗ＰＤ－１ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｌを含む、
からなる群から選択される構成を含む、請求項８～１１のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。

【請求項23】

請求項１～２２のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物、及び適宜、医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。

【請求項24】

個体においてＰＤ－１関連疾患を治療するための医薬であって、請求項１～２２のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物または請求項２３に記載の医薬組成物を、前記ＰＤ－１関連疾患の治療に有効な量で含む、医薬。

【請求項25】

前記ＰＤ－１関連疾患が、がん、病原性感染または免疫関連疾患である、請求項２４に記載の医薬。

【請求項26】

（ｉ）前記がんが、固形腫瘍である、または
（ｉｉ）前記病原性感染がウイルス感染である、または
（ｉｉｉ）前記免疫関連疾患がＴ細胞機能不全障害と関連する、
請求項２５に記載の医薬。

【請求項27】

（ｉ）前記固形腫瘍が、大腸がんである、または
（ｉｉ）前記Ｔ細胞機能不全障害が、Ｔ細胞アネルギー、サイトカイン分泌能力の低下、増殖能力の低下、細胞溶解活性実行能力の低下もしくはＴ細胞消耗によって特徴付けられる、
請求項２６に記載の医薬。

【請求項28】

請求項１～２２のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物をコードする、単離核酸。

【請求項29】

請求項２８に記載の単離核酸を含む、ベクター。

【請求項30】

請求項２８に記載の単離核酸、または請求項２９に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年１月１５日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０７２５８９号の利益を主張し、この内容は、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルによる配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイル上の以下の提出物の内容、すなわち、コンピューターで読取り可能な形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７６１４２２０００８４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１８年１月１４日、サイズ：２７１ＫＢ）は、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

本発明は、ＰＤ－１を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む構築物、及びこれらを作製し、使用する方法に関する。

【0004】

主として活性化Ｔ及びＢ細胞上で発現される免疫阻害性受容体である、プログラム細胞死受容体１（ＰＤ－１；プログラム死受容体１、プログラム細胞死タンパク質１、ＣＤ２７９とも呼ばれる）は、ＣＤ２８及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２）に関連する免疫グロブリンスーパーファミリーの成員である。ＰＤ－１（及び同様のファミリー成員）は、そのリガンドに結合する細胞外Ｉｇ可変型（Ｖ型）ドメイン及びシグナル伝達分子に結合する細胞質尾部を含有するＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＰＤ－１の細胞質尾部は、２つのチロシンに基づくシグナル伝達モチーフ、ＩＴＩＭ（免疫受容体チロシンに基づく阻害モチーフ）及びＩＴＳＭ（免疫受容体チロシンに基づくスイッチモチーフ）を含有する。

【0005】

ＰＤ－１は、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７４、Ｂ７－Ｈ１）とも呼ばれるプログラム細胞死リガンド１、及び／またはプログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２７３、Ｂ７－ＤＣ）とも呼ばれるプログラム細胞死リガンド２に結合した場合、Ｔ細胞応答を減弱させる。これらのリガンドのいずれかのＰＤ－１への結合は、Ｔ細胞増殖、サイトカイン産生、及び細胞傷害性機能を阻害するシグナルを変換する。ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を遮断することは、免疫系による腫瘍細胞のクリアランスを助けつつ、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞免疫を増強する。

【0006】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の抗体媒介遮断は、黒色腫、腎細胞がん、大腸がん、非小細胞肺がん、及び血液悪性腫瘍を含む難治性固形腫瘍の治療において臨床試験に入っている。しかしながら、特にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断の際の耐性及び再発の観点から、種々のがんの発症を治療する、安定させる、予防する、及び／または遅らせるための最適な治療が依然として必要とされている。

【0007】

本明細書に参照される全ての刊行物、特許、特許出願、及び公開特許出願の開示は、それらの全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は、ＰＤ－１（以下、「抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ」と呼ばれる）、例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ、例えば、ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の結晶性断片（Ｆｃ）断片に融合した抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質、及び、例えば、他のｓｄＡｂｓに融合したまたは完全長４本鎖抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）に融合した抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗原結合タンパク質を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物、及びこれらを作製し、使用する方法に関する。

【0009】

本出願の一態様は、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、ｓｄＡｂ部分が、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内であり、ＣＤＲ３は、配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0010】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、以下のいずれか１つを含む：
（１）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（４）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（５）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（６）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（７）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（８）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（９）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１０）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１１）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１２）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１３）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１４）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１５）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１６）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１７）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１８）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１９）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２０）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２１）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２２）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２３）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２４）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２５）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２６）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２７）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２８）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２９）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３０）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３１）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３２）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３３）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３４）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３５）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；または
（３５）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体。

【0011】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、以下のいずれか１つを含む：
（１）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（４）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（５）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（６）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（７）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（８）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（９）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１０）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１１）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１２）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１３）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１４）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１５）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１６）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１７）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１８）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（１９）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２０）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２１）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２２）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２３）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２４）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２５）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２６）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２７）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２８）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（２９）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３０）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３１）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３２）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３３）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３４）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；
（３５）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；または
（３６）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体。

【0012】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、以下のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む：ａ－１）３７位のアミノ酸残基は、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶ（例えば、Ｆ、ＹまたはＶ、または例えば、Ｆ）からなる群から選択され；ａ－２）４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、及びＬ（例えば、Ｅ、Ｑ、またはＧ、または例えば、Ｅ）からなる群から選択され；ａ－３）４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ、及びＣ（例えば、ＬまたはＲ）からなる群から選択され；ａ－４）１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ、Ｇ、及びＳ（例えば、Ｗ、Ｇ、またはＲ、または例えば、Ｗ）からなる群から選択され；及びａ－５）１０８位のアミノ酸残基は、Ｑであり；またはｂ－１）３７位のアミノ酸残基は、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶ（例えば、Ｆ、ＶまたはＹ、または例えば、Ｆ）からなる群から選択され；ｂ－２）４４位のアミノ酸残基は、Ｅ、Ｑ、及びＧからなる群から選択され；ｂ－３）４５位のアミノ酸残基は、Ｒであり；ｂ－４）１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ、及びＳ（例えば、Ｗ）からなる群から選択され；及びｂ－５）１０８位のアミノ酸残基は、Ｑ及びＬ（例えば、Ｑ）からなる群から選択され；アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従っており、１０８位は、１０８位がＱである場合、Ｌに適宜ヒト化することができる。

【0013】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、または配列番号２８９～３２４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）の配列同一性を有するその変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはＶ_ＨＨドメインにおいて最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、及び／またはＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３内である。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＦＲ、例えば、ＦＲ１、及び／またはＦＲ２、及び／またはＦＲ３、及び／またはＦＲ４内である。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ及びＦＲの両方の内である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。

【0014】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。

【0015】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0016】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、適宜リンカーを介してＦｃ断片に融合したＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）である。いくつかの実施形態では、ＨＣＡｂは、単量体である。いくつかの実施形態では、ＨＣＡｂは、二量体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの実施形態では、適宜リンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＡｂは、配列番号３２５～３６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0017】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、ＰＤ－１由来でない。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、ＰＤ－１由来であるが、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって特異的に認識されるものとは異なる。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって特異的に認識されるものと同じである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分及び第２の抗体部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーによって適宜連結される。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、ｓｄＡｂ、例えば、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ－４を特異的に認識するｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、Ｆａｂである。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる完全長抗体である。いくつかの実施形態では、重鎖のＦｃ断片は、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、上述したように、ＰＤ－１を特異的に認識する４つの同一なｓｄＡｂ部分を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分の各々のＣ末端は、適宜ペプチドリンカーを介して、完全長抗体の各鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、上述したように、ＰＤ－１を特異的に認識する４つの同一なｓｄＡｂ部分を含み、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜ペプチドリンカーを介して互いに融合され、他の２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜ペプチドリンカーを介して互いに融合され、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分融合ポリペプチドの各々のＣ末端は、適宜ペプチドリンカーを介して完全長抗体の各重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原



結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を各々が有する２つのポリペプチド鎖からなり、各ポリペプチド鎖のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））のコピーに特異的に結合するｓｃＦＶドメインを形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））の第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、以下のようなＮ末端からＣ末端までの構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｃ_Ｌからなり、ポリペプチド鎖（２）及び（３）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌの各々は、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））のコピーに特異的に結合するｓｃＦＶを形成し、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、ＰＤ－１のコピーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ完全長抗体は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＬＡＧ－３を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３完全長抗体は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ－３を特異的に認識する完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＴＩＭ－３を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３完全長抗体は、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ－３を特異的に認識する完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＣＴＬＡ－４を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４完全長抗体は、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）ＣＴＬＡ－４を特異的に認識するは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１完全長抗体は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。

【0018】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つに記載のいくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、生物学的に活性なタンパク質またはその断片をさらに含む。

【0019】

ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、ｓｄＡｂ部分が、配列番号２８９～３２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、単離抗ＰＤ－１構築物をさらに提供する。

【0020】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つと競合的にＰＤ－１に特異的に結合する単離抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合体）、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）をさらに提供する。

【0021】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つ、及び適宜、医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物をさらに提供する。

【0022】

本出願の別の態様は、個体に有効量の上述の医薬組成物のいずれか１つを投与することを含む、ＰＤ－１関連疾患（例えば、がん、または免疫関連疾患）を有する個体の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍、例えば、大腸がんである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、免疫関連疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、Ｔ細胞機能不全障害と関連する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞アネルギー、またはサイトカイン分泌能力、増殖能力、もしくは細胞溶解活性実行能力の低下によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、未解明な急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、病原性感染である。いくつかの実施形態では、方法は、個体に追加療法（例えば、がん療法）、例えば、外科外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加療法は、免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、個体に、免疫調節薬を含む第２の医薬組成物、例えば、免疫チェックポイント阻害薬（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、またはＰＤ－Ｌ１に特異的に認識する抗体）の有効量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、全身に、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）または腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所的に、例えば、腫瘍内に投与される。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。

【0023】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つをコードする単離核酸をさらに提供する。いくつかの実施形態では、単離核酸は、配列番号２５３～２８８のいずれか１つの核酸配列を含む。

【0024】

上述の単離核酸のいずれか１つを含むベクターをさらに提供する。

【0025】

上述の単離核酸またはベクターのいずれか１つを含む単離宿主細胞をさらに提供する。

【0026】

上述の単離抗ＰＤ－１構築物、単離核酸、ベクター、または単離宿主細胞のいずれか１つを含むキットをさらに提供する。

【0027】

本出願の別の態様は、上述の単離核酸またはベクターのいずれか１つを含む宿主細胞を培養すること、またはコードされた抗ＰＤ－１構築物の発現に効果的な条件下で上述の単離宿主細胞のいずれか１つを培養すること；及び発現された抗ＰＤ－１構築物を前記宿主細胞から得ることを含む、上述の単離抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つの産生方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、上述の単離核酸またはベクターのいずれか１つを含む宿主細胞を産生することをさらに含む。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
ＰＤ－１を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む、前記単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２)
前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において、最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む、項目１に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３)
前記ｓｄＡｂ部分が、以下：
（１）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（４）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（５）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（６）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（７）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（８）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（９）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１０）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１１）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１２）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１３）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１４）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１５）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１６）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１７）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１８）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１９）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２０）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２１）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２２）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２３）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２４）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２５）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２６）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２７）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２８）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２９）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３０）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３１）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３２）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３３）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３４）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３５）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；または
（３６）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体
のいずれか１つを含む、項目１または２に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４)
前記ｓｄＡｂ部分が、以下：
（１）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（４）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（５）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（６）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（７）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（８）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（９）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１０）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１１）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１２）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１３）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１４）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１５）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１６）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１７）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１８）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（１９）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２０）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２１）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２２）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２３）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２４）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２５）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２６）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２７）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２８）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（２９）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３０）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３１）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３２）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３３）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３４）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；
（３５）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または前記ＣＤＲ領域において最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体；または
（３６）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体
のいずれか１つを含む、項目１～３のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目５)
前記ｓｄＡｂ部分が、以下：
ａ－１）３７位のアミノ酸残基が、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶからなる群から選択され；
ａ－２）４４位のアミノ酸残基が、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、及びＬからなる群から選択され；
ａ－３）４５位のアミノ酸残基が、Ｌ、Ｒ、及びＣからなる群から選択され；
ａ－４）１０３位のアミノ酸残基が、Ｗ、Ｒ、Ｇ、及びＳからなる群から選択され；及び
ａ－５）１０８位のアミノ酸残基が、Ｑであり；または
ｂ－１）３７位のアミノ酸残基が、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶからなる群から選択され；
ｂ－２）４４位のアミノ酸残基が、Ｅ、Ｑ、及びＧからなる群から選択され；
ｂ－３）４５位のアミノ酸残基が、Ｒであり；
ｂ－４）１０３位のアミノ酸残基が、Ｗ、Ｒ、及びＳからなる群から選択され；及び
ｂ－５）１０８位のアミノ酸残基が、Ｑ及びＬからなる群から選択され；
のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ _Ｈ Ｈドメインを含み、
アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従っており、１０８位がＱである場合、１０８位が、Ｌに適宜ヒト化することができる、項目１～４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目６)
前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ _Ｈ Ｈドメイン、または配列番号２８９～３２４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性を有するその変異体を含む、項目１～５のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目７)
前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ _Ｈ Ｈドメイン、または前記Ｖ _Ｈ Ｈドメインにおいて最大で約３つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む、項目６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目８)
前記ｓｄＡｂ部分と前記ＰＤ－１の間の結合のＫ _ｄ が、約１０ ^－５ Ｍ～約１０ ^－１２ Ｍである、項目１～７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目９)
前記ｓｄＡｂ部分と前記ＰＤ－１の間の結合のＫ _ｄ が、約１０ ^－７ Ｍ～約１０ ^－１２ Ｍである、項目８に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１０)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分が、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である、項目１～９のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１１)
前記単離抗ＰＤ－１構築物が、適宜リンカーを介してＦｃ断片に融合したＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分を含む重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）である、項目１～１０のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１２)
前記ＨＣＡｂが、単量体または二量体である、項目１１に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１３)
前記Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である、項目１１または１２に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１４)
前記適宜リンカーが、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、項目１１～１３のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１５)
前記ＨＣＡｂが、配列番号３２５～３６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、項目１１～１４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１６)
前記単離抗ＰＤ－１構築物が、第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１７)
前記第２の抗体部分が、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’） _２ 、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである、項目１６に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１８)
前記抗ＰＤ－１構築物が、多重特異性である、項目１６または１７に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目１９)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分、及び前記第２の抗体部分が、ペプチドリンカーによって適宜連結される、項目１６～１８のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２０)
前記ペプチドリンカーが、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、項目１９に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２１)
前記第２の抗体部分が、ＰＤ－１またはＣＴＬＡ－４を特異的に認識する第２のｓｄＡｂである、項目１６～２０のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２２)
前記第２の抗体部分が、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる完全長抗体である、項目１６～２０のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２３)
前記重鎖のＦｃ断片が、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である、項目２２に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２４)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分のＮ末端が、前記完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、項目２２または２３に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２５)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分のＣ末端が、前記完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、項目２２または２３に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２６)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分のＮ末端が、前記完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、項目２２または２３に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２７)
ＰＤ－１を特異的に認識する前記ｓｄＡｂ部分のＣ末端が、前記完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、項目２２または２３に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２８)
前記完全長抗体が、ＴＩＧＩＴを特異的に認識する、項目２２～２７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目２９)
前記完全長抗体が、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び、配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む、項目２８に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３０)
前記完全長抗体が、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目２８または２９に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３１)
前記完全長抗体が、ＬＡＧ－３を特異的に認識する、項目２２～２７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３２)
前記完全長抗体が、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む、項目３１に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３３)
前記完全長抗体が、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目３１または３２に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３４)
前記完全長抗体が、ＴＩＭ－３を特異的に認識する、項目２２～２７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３５)
前記完全長抗体が、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む、項目３４に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３６)
前記完全長抗体が、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目３４または３５に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３７)
前記完全長抗体が、ＣＴＬＡ－４を特異的に認識する、項目２２～２７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３８)
前記完全長抗体が、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む、項目３７に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目３９)
前記完全長抗体が、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目３７または３８に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４０)
前記完全長抗体が、ＰＤ－１を特異的に認識する、項目２２～２７のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４１)
前記完全長抗体が、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む、項目４０に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４２)
前記完全長抗体が、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目４０または４１に記載の単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４３)
ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号２８９～３２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、前記単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４４)
項目１～４３のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物と競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、単離抗ＰＤ－１構築物。
(項目４５)
項目１～４４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物、及び適宜、医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
(項目４６)
ＰＤ－１関連疾患を有する個体の治療方法であって、前記個体に有効量の項目４５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
(項目４７)
前記ＰＤ－１関連疾患が、がんである、項目４６に記載の方法。
(項目４８)
前記がんが、固形腫瘍である、項目４７に記載の方法。
(項目４９)
前記がんが、大腸がんである、項目４８に記載の方法。
(項目５０)
前記個体に追加療法を投与することをさらに含む、項目４６～４９のいずれか１項に記載の方法。
(項目５１)
前記個体が、ヒトである、項目４６～５０のいずれか１項に記載の方法。
(項目５２)
項目１～４４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物をコードする、単離核酸。
(項目５３)
項目５２に記載の単離核酸を含む、ベクター。
(項目５４)
項目５２に記載の単離核酸、または項目５３に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
(項目５５)
項目１～４４のいずれか１項に記載の単離抗ＰＤ－１構築物、項目５２に記載の単離核酸、項目５３に記載のベクター、または項目５４に記載の単離宿主細胞を含む、キット。
(項目５６)
抗ＰＤ－１構築物の産生方法であって、
（ａ）コードされた抗ＰＤ－１構築物を発現するのに効果的な条件下で、項目５２に記載の単離核酸または項目５３に記載のベクターを含む宿主細胞、または項目５４に記載の単離宿主細胞を培養すること；及び
（ｂ）前記宿主細胞から発現した抗ＰＤ－１構築物を得ること
を含む、前記方法。
(項目５７)
工程（ａ）が、項目５２に記載の単離核酸または項目５３に記載のベクターを含む宿主細胞を産生することをさらに含む、項目５６に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0028】

【図1】Ａ～Ｂは、ＰＤ－１免疫化後の第１のラクダの免疫応答評価を示す。図１Ａは、６番目の免疫化後の第１のラクダの免疫前血清及び免疫血清の免疫応答評価を示す。図１Ｂは、６番目の免疫化（終末放血）後の重鎖抗体（ＩｇＧ２及びＩｇＧ３）の免疫応答評価を示す。免疫前血清から分画した重鎖抗体は、陰性対照として使用した。

【図2】Ａ～Ｂは、ＰＤ－１免疫化後の第２のラクダの免疫応答評価を示す。図２Ａは、６番目の免疫化後の第２のラクダの免疫前血清及び免疫血清の免疫応答評価を示す。図２Ｂは、６番目の免疫化（終末放血）後の重鎖抗体（ＩｇＧ２及びＩｇＧ３）の免疫応答評価を示す。免疫前血清から分画した重鎖抗体は、陰性対照として使用した。

【図3-1】Ａ～Ｆは、表面プラズマ共鳴によって測定された、選択された６つのラクダ科ｓｄＡｂの親和性を示す。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄ値を図３Ｇにまとめる。

【図3-2】Ａ～Ｆは、表面プラズマ共鳴によって測定された、選択された６つのラクダ科ｓｄＡｂの親和性を示す。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄ値を図３Ｇにまとめる。

【図4】Ａ～Ｂは、生成されたｓｄＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞への結合能力を示す。図４Ａは、フローサイトメトリーによる、ＡＳ０６９６２ ｓｄＡｂ、ＡＳ０７４２４ ｓｄＡｂ、及びＡ３１５４３ ｓｄＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞への結合を示す。ＥＣ_５０データを図４Ｂにまとめる。

【図5】Ａ～Ｂは、フローサイトメトリーによって測定された、生成されたｓｄＡｂのリガンド競合活性評価を示す。図５Ａは、ＰＤ－Ｌ１ Ｆｃ リガンド及びＰＤ－１発現細胞株を用いて、フローサイトメトリーによって測定された、ＡＳ０６９６２ ｓｄＡｂ及びＡ３１５４３ ｓｄＡｂのリガンド競合活性評価を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した。ＩＣ_５０を図５Ｂにまとめる。

【図6-1】Ｂ～Ｌは、表面プラズマ共鳴によって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂの親和性を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図６Ｋ）。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄパラメーターを図６Ａにまとめる。

【図6-2】Ｂ～Ｌは、表面プラズマ共鳴によって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂの親和性を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図６Ｋ）。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄパラメーターを図６Ａにまとめる。

【図6-3】Ｂ～Ｌは、表面プラズマ共鳴によって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂの親和性を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図６Ｋ）。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄパラメーターを図６Ａにまとめる。

【図7-1】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによる、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞への結合能力を示す。図７Ａ～７Ｖは、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞へのＦＡＣＳに基づく結合を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図７Ｗ）。ＥＣ_５０を図７Ｘにまとめる。

【図7-2】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによる、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞への結合能力を示す。図７Ａ～７Ｖは、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞へのＦＡＣＳに基づく結合を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図７Ｗ）。ＥＣ_５０を図７Ｘにまとめる。

【図7-3】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによる、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞への結合能力を示す。図７Ａ～７Ｖは、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのヒトＰＤ－１発現細胞へのＦＡＣＳに基づく結合を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図７Ｗ）。ＥＣ_５０を図７Ｘにまとめる。

【図8-1】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのリガンド競合活性評価を示す。図８Ａ～８Ｖは、ＰＤ－Ｌ１ Ｆｃ リガンド及びＰＤ－１発現細胞株を用いた、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイを示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図８Ｗ）。ＩＣ_５０を図８Ｘにまとめる。

【図8-2】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのリガンド競合活性評価を示す。図８Ａ～８Ｖは、ＰＤ－Ｌ１ Ｆｃ リガンド及びＰＤ－１発現細胞株を用いた、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイを示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図８Ｗ）。ＩＣ_５０を図８Ｘにまとめる。

【図8-3】Ａ～Ｘは、フローサイトメトリーによって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのリガンド競合活性評価を示す。図８Ａ～８Ｖは、ＰＤ－Ｌ１ Ｆｃ リガンド及びＰＤ－１発現細胞株を用いた、生成されたラクダ科ＨＣＡｂのＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイを示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図８Ｗ）。ＩＣ_５０を図８Ｘにまとめる。

【図9】Ａ～Ｈは、ＮＦＡＴ誘導ルシフェラーゼレポーター活性によって測定された、生成されたラクダ科ＨＣＡｂの生物学的活性評価を示す。図９Ａ～９Ｆは、ＰＤ－１エフェクター細胞及びＰＤ－Ｌ１細胞インキュベーション中の、生成されたラクダ科ＨＣＡｂの存在下における、ＩＬ－２プロモーターからＮＦＡＴ応答要素を介したＲＬＵ誘導を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図９Ｇ）。ＥＣ_５０を図９Ｈにまとめる。

【図10】Ａ～Ｃは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイによる、ラクダ科ＨＣＡｂ ＡＳ１５１４０＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１５６＿ＨＣＡｂ、及びＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂの機能的活性評価を示す。キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図１０Ｄ）。ＥＣ_５０を図１０Ｅにまとめる。

【図11】親ＡＳ１５１９３ ｓｄＡｂ、その対応する４つのヒト化バージョン、及びヒトアクセプターの配列アラインメントを示す。

【図12】Ａ～Ｅは、表面プラズマ共鳴によって測定された、４つのヒト化ＨＣＡｂ（図１２Ｂ～１２Ｅ）及び親ＨＣＡｂ（ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂ、図１２Ａ）の親和性を示す。ｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄ値を図１２Ｆにまとめる。

【図13】Ａ～Ｅは、４つのヒト化ＨＣＡｂ（図１３Ｂ～１３Ｅ）及び親ＨＣＡｂ（ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂ、図１３Ａ）のヒトＰＤ－１発現細胞への結合能力を示す。ＥＣ_５０を図１３Ｆにまとめる。

【図14】Ａ～Ｆは、フローサイトメトリーによって測定された、４つのヒト化ＨＣＡｂのリガンド競合活性評価を示す。図１４Ｂ～１４Ｅは、ＰＤ－Ｌ１－Ｆｃリガンド及びＰＤ－１発現細胞株を用いた、ヒト化ＨＣＡｂのＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイを示す。親ＨＣＡｂ ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂは、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図１４Ａ）。ＩＣ_５０を図１４Ｆにまとめる。

【図15】Ａ～Ｆは、ＮＦＡＴ誘発ルシフェラーゼレポーター活性によって測定された、４つのヒト化ＨＣＡｂ及びそれらの親ＨＣＡｂの生物学的活性評価を示す。図１５Ｂ～１５Ｅは、ＰＤ－１エフェクター細胞及びＰＤ－Ｌ１細胞インキュベーション中の、ヒト化ＨＣＡｂの存在下における、ＩＬ－２プロモーターからＮＦＡＴ応答要素を介したＲＬＵ誘導を示す。親ＨＣＡｂ ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂは、陽性抗ＰＤ－１対照抗体として使用した（図１５Ａ）。ＥＣ_５０を図１５Ｆにまとめる。

【図16】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端が、適宜ペプチドリンカーを介して１つの重鎖のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。完全長抗体は、第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図17】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＮ末端が、適宜ペプチドリンカーを介して１つの重鎖のＣ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する完全長抗体は、第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－Ｖ_ＨＨ；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－Ｖ_ＨＨ；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図18】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端が、適宜ペプチドリンカーを介して１つの軽鎖のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。完全長抗体は、第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図19】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＮ末端が、適宜ペプチドリンカーを介して１つの軽鎖のＣ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープに特異的に結合する。完全長抗体は、第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｖ_ＨＨ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｖ_ＨＨからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図20】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び４つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端が、適宜ペプチドリンカーを介して単一特異性完全長抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。完全長抗体は、各々が第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図21】２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、及び４つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを有する単一特異性完全長抗体を含み、各重鎖のＮ末端が、２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂであり、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂが、適宜ペプチドリンカーを介して互いに融合され、及び２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂが、適宜ペプチドリンカーを介して各重鎖のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。完全長抗体は、各々が第２のエピトープに特異的に結合する２つの抗原結合部位を有する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_ＨＨ－Ｖ_ＨＨ－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。単一特異性完全長抗体は、二重特異性完全長抗体と置換して、結合特異性をさらに拡張してもよい。

【図22】２つの同一の抗原結合（Ｆａｂ）断片、２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、及びＦｃ領域を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＮ末端が、適宜ペプチドリンカーを介してＦａｂ断片のＣ_Ｈ１領域のＣ末端に融合され、及び各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端が、Ｆｃ領域のＣ_Ｈ２領域のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。各Ｆａｂ断片は、第２のエピトープに特異的に結合する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。代替フォーマットでは、特異性を拡張するため、２つのＦａｂ断片は、異なるエピトープに特異的に結合することができ、及び／またはＶ_ＨＨ断片は、異なるエピトープに特異的に結合することができる。

【図23】２つの同一の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、２つの同一の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、及びＦｃ領域を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＮ末端が、適宜ペプチドリンカーを介してｓｃＦｖのＣ末端に融合され、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端が、Ｆｃ領域のＮ末端に融合される、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。各ｓｃＦｖは、第２のエピトープに特異的に結合する。例えば、ＢＡＢＰは、各々が以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する２つのポリペプチド鎖：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３からなり得、各ポリペプチド鎖のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープのコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌを含み得る。代替フォーマットでは、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは省略してもよく、または互いに融合した２つの同一または異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂと置換してもよい。さらに、特異性を拡張するため、２つのｓｃＦｖは、異なるエピトープに特異的に結合することができ、及び／またはＶ_ＨＨ断片は、異なるエピトープに特異的に結合することができる。

【図24】２つの同一のＦａｂ断片、各々が２つのＶ_ＨＨ断片を含む２つの同一のＦａｂ様断片、及びＦｃ領域を含む、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各Ｆａｂ様断片では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は各々、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂによって置換される。各Ｆａｂ様断片は、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。各Ｆａｂ断片は、第２のエピトープに特異的に結合する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（１）及び（２）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第１のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、ポリペプチド鎖（３）及び（４）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープの第２のコピーに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、特異性を拡張するため、２つのＦａｂ断片は、異なるエピトープに特異的に結合することができ、及び／またはＦａｂ様断片は、異なるエピトープ（例えば、ＰＤ－１から異なるエピトープ）に特異的に結合することができる。

【図25】２つの同一のｓｃＦｖ、各々が２つのＶ_ＨＨ断片を含む２つの同一のＦａｂ様断片、及びＦｃ領域を含む、例示的なＢＡＢＰの概略構造を示す。各Ｆａｂ様断片では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は各々、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂによって置換される。各Ｆａｂ様断片は、第１のエピトープ（ＰＤ－１）に特異的に結合する。各ｓｃＦｖは、第２のエピトープに特異的に結合する。例えば、ＢＡＢＰは、以下のようなＮ末端からＣ末端の構造を有する４つのポリペプチド鎖：（１）Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｌ；（２）Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；（３）Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３；及び（４）Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｌからなり得、ポリペプチド鎖（２）及び（３）のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、各々、第２のエピトープのコピーに特異的に結合するｓｃＦｖを形成し、各Ｖ_ＨＨは、第１のエピトープ（ＰＤ－１）のコピーに特異的に結合する。代替フォーマットでは、ｓｃＦｖのＣ末端は、Ｖ_ＨＨ－Ｃ_Ｌを含むＦａｂ様断片における鎖のＮ末端に融合され得；及び／またはｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌを含み得る。さらに、特異性を拡張するため、２つのｓｃＦｖは、異なるエピトープに特異的に結合することができ、及び／またはＶ_ＨＨ断片は、異なるエピトープ（例えば、ＰＤ－１から異なるエピトープ）に特異的に結合することができる。

【図26】Ａ～Ｂは、例示の抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの概略構造を示す。図２６Ａは、例示の単一特異性二価抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの概略構造を示す。図２６Ｂは、例示の二重特異性二価抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの概略構造を示す。

【図27】２つのヒト化ＨＣＡｂ ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１＿ＨＣＡｂ及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１＿ＨＣＡｂのインビボ効能試験を示す。

【図28】選択されたｓｄＡｂの精製概要を示す。

【図29】選択されたＨＣＡｂの精製概要を示す。

【発明を実施するための形態】

【0029】

本発明は、ＰＤ－１を特異的に認識する新規のｓｄＡｂ（以下、「抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ」とも呼ばれる）、及びその抗体変異体（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質、完全長抗体に融合した抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、またはｓｃＦｖを含む、より大きなタンパク質またはポリペプチド、または抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含む多重特異性抗原結合タンパク質（ＭＡＢＰ、例えば、二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＡＢＰ））、及びＰＤ－１関連疾患（例えば、がん）を治療するためのそれらの使用、ならびにそれらの作製方法を提供する。

【0030】

ｓｄＡｂは、軽鎖の助けを借りることなく抗原に対して高親和性を示すことができる単一単量体抗体可変ドメイン、例えば、重鎖可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）、を有することが、従来の４本鎖抗体とは異なる。ラクダ科動物のＶ_ＨＨは、おおよそ１５ｋＤの分子量を有する最小の機能的抗原結合断片として知られる。

【0031】

したがって、本出願の一態様は、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物を提供する。単離抗ＰＤ－１構築物は、例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ（例えば、天然、ヒト化、またはヒト）、一緒に融合した本明細書に記載の複数の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含むポリペプチド、Ｆｃ断片（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレス（不活性）ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ））に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ）、または完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）を特異的に認識する抗体）もしくは重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含むその抗原結合断片に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含むＭＡＢＰであり得る。抗ＰＤ－１構築物は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）、一価または多価（例えば、二価）であり得る。

【0032】

組成物（例えば、医薬組成物）、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物を含むキット及び製造品、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物の作製方法、及び本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物を用いたＰＤ－１関連疾患（例えば、がん）の治療方法も提供する。

【0033】

Ｉ．定義
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、エピトープは、通常、特異的な三次元構造特徴、ならびに特異的な電荷特性を有する。立体構造的エピトープ及び非立体構造的エピトープは、後者でなく前者に対する結合が変性溶媒の存在下で失われるという点で区別される。

【0034】

本明細書で使用する場合、「治療」または「治療すること」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的では、有益なまたは所望の結果としては、以下：疾患から生じる１つ以上の症状を緩和すること、疾患範囲を縮小すること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を予防または遅らせること）、疾患の拡散（例えば、転移）を予防または遅らせること、疾患の再発を予防または遅らせること、疾患の進行を遅延または遅らせること、疾患状態を改善すること、疾患の寛解（部分的なまたは完全な）を提供すること、疾患を治療するために必要な１つ以上の他の薬物適用の用量を低下させること、疾患の進行を遅らせること、生活の質を向上させること、及び／または生存を延長することの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。また、「治療」によって包含されるのは、がんの病理学的結果の縮小である。本発明の方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。

【0035】

「予防する」という用語、及び「予防した」、「予防すること」などの同様の言葉は、疾患または状態、例えば、がんの再発の可能性を予防、阻害、または低減するためのアプローチを示す。それは、疾患もしくは状態の再発を遅らせること、または疾患もしくは状態の症状の再発を遅らせることも指す。本明細書で使用する場合、「予防」及び同様の言葉は、疾患または状態の再発の前に、疾患または状態の強度、効果、症状、及び／または負担を軽減することも含む。

【0036】

本明細書で使用する場合、がんの発症を「遅らせること」とは、疾患の発症を引き延ばす、妨害する、遅らせる、妨げる、安定化する、及び／または延期することを意味する。この遅延は、治療する疾患及び／または個体の病歴に応じて時間の長さを変化させることであると言える。がんの発症を「遅延する」方法は、方法を用いない場合と比較して、所定の時間枠で疾患発症の可能性を低下させる及び／または所定の時間枠で疾患の程度を軽減する方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な数の個体を用いた臨床研究に基づいている。がんの発症は、コンピューター断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固試験、動脈造影、または生検を含むが、これらに限定されない標準方法を用いて検出可能であり得る。また、発症とは、最初は検出不可能であり得るがんの進行のことであってもよく、発生、再発、及び開始が含まれる。

【0037】

本明細書で使用される「有効量」という用語は、特異的な疾病、状態または疾患を治療する、例えば、その症状の１つ以上を改善、緩和、軽快、及び／または遅延させるのに十分な薬剤または薬剤の組み合わせの量を指す。がんを引き合いに出す場合、有効量は、腫瘍が退縮するか、及び／または腫瘍の増殖速度が低下するか（腫瘍増殖の抑制など）、または他の望ましくない細胞増殖が予防または遅延されるのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、発症を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、再発を予防するかまたは遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回または複数回の投与によって投与することができる。薬物または組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を減少させる、（ｉｉ）腫瘍のサイズを低減させる、（ｉｉｉ）がん細胞が末梢器管に浸潤するのを阻害、遅延、ある程度まで緩徐化及び望ましくは停止させる、（ｉｖ）腫瘍の転移を阻害する（すなわち、ある程度まで緩徐化し、望ましくは停止させる）、（ｖ）腫瘍の成長を阻害する、（ｖｉ）腫瘍の発現及び／または再発を予防または遅延させる、及び／または（ｖｉｉ）がんに伴う症状の１つ以上をある程度まで緩和することができる。

【0038】

本明細書で使用する場合、「個体」または「対象」は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類または霊長類を含むが、これらに限定されない哺乳動物を指す。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。

【0039】

「抗体」、「抗原結合部分」、または「抗体部分」という用語は、それらの最も広い意味で用いられ、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全長抗体及びその抗原結合断片を含むが、これらに限定されない種々の抗体構造を包含する。

【0040】

基本となる４本鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と、２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、ヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、基本ヘテロ四量体ユニットと共に、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドの５つから構成され、１０個の抗原結合部位を含有する一方、ＩｇＡ抗体は、重合し、Ｊ鎖と組み合わせて多価集合体を形成できる基本４本鎖ユニットのうち、２～５つを含む。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、一般的に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結される一方、２本のＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプによって１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。また、各Ｈ及びＬ鎖は、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を、続けて、α及びγ鎖のそれぞれには３つの定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）を、μ及びεアイソタイプには４つのＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を、続けて他方の末端に定常ドメインを有する。Ｖ_Ｌは、Ｖ_Ｈと並び、Ｃ_Ｌは、重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）と並ぶ。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の境界部を形成すると考えられている。Ｖ_ＨとＶ_Ｌの対形成は、共に単一の抗原結合部位を形成する。異なる種類の抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．，１９９４，ｐａｇｅ ７１及びＣｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。任意の脊椎動物由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ及びλと呼ばれる２種類の明らかに異なる種類のうちの１つに割り当てることができる。重鎖（Ｃ_Ｈ）の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンを異なる種類、つまりアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと指定される重鎖を有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭの５種類がある。γ及びαクラスは、Ｃ_Ｈの配列及び機能における比較的わずかな違いに基づいて、さらにサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２のサブクラスを発現している。

【0041】

「重鎖のみ抗体」または「ＨＣＡｂ」という用語は、重鎖を含むが、４本鎖抗体で通常見られる軽鎖が欠けている機能的抗体を指す。ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ラマ、またはアルカパ）は、ＨＣＡｂを産生することが知られている。

【0042】

「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一抗原結合ポリペプチドを指す。ｓｄＡｂのみは、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドと対合せずに抗原に結合することができる。場合によっては、単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物のＨＣＡｂから操作されており、それらの重鎖可変ドメインは、「Ｖ_ＨＨ」（重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン）とも本明細書で呼ばれる。ラクダ科動物のｓｄＡｂは、公知の最小抗原結合抗体断片の１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－８（１９９３）；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７４：１６８－７３（１９９５）；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ－Ｇｈａｓｓａｂｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３－２６（２０１３）を参照されたい）。基本的なＶ_ＨＨは、Ｎ末端からＣ末端までの以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を有し、ここで、ＦＲ１～ＦＲ４は、フレームワーク領域１～４をそれぞれ指し、ＣＤＲ１～ＣＤＲ３は、相補性決定領域１～３を指す。

【0043】

「単離された」抗体（または構築物）は、その産生（例えば、天然または組み換え）環境の成分から同定され、単離され、及び／または回収されたものである。単離されたポリペプチドは、その産生環境からの他の全ての成分と関連しないのが好ましい。その産生環境の混入汚染成分、例えば、組み換えトランスフェクト細胞から生じるものは、典型的には、抗体の研究、診断、または治療への使用を妨げる物質であり、それらには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法で測定した場合に、抗体の９５重量％を超えるまで、いくつかの実施形態では、９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いた非還元条件または還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。単離された抗体（または構築物）には、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分は存在しないことになるため、組み換え細胞内にインサイチュ抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチド、抗体、または構築物は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されることになる。

【0044】

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「Ｖ_Ｈ」及び「Ｖ_Ｌ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般的に、（同じクラスの他の抗体に対して）抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含有している。ラクダ科の種に由来する重鎖のみ抗体は、「Ｖ_ＨＨ」と呼ばれる単一重鎖可変領域を有する。従って、Ｖ_ＨＨは、特殊型のＶ_Ｈである。

【0045】

「可変」という用語は、可変ドメインのある特定のセグメントが抗体間で配列が広範囲に異なることを指す。Ｖドメインは、抗体結合に関与し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を定義付ける。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体にわたって均一に分布されていない。その代わり、軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方にある相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのうちより良く保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域を含み、大部分がβシート構造を採用しており、３つのＣＤＲによって接続されて、βシート構造に連結する、場合によっては構造の一部を形成するループを形成する。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域により近接して保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害における抗体の関与などの種々のエフェクター機能を示す。

【0046】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る自然発生突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）以外は同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原性部位に対するものであり、高特異性である。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物に比べて、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンが混入しない点で有利である。修飾語である「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とすると解釈されない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体を様々な技術で作製でき、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３－２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３－６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ法（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全てを有する動物中でヒトまたはヒト様抗体を産生する技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、ＷＯ１９９１／１０７４１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、及び同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；及びＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）を参照されたい）が挙げられる。

【0047】

「完全長抗体」、「無傷抗体」、または「全抗体」という用語は、交換可能に使用され、抗体断片とは対照的に、その実質的に無傷な形態の抗体を指す。具体的には、完全長４本鎖抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を伴うものを含む。完全長重鎖のみ抗体は、重鎖可変ドメイン（例えば、Ｖ_ＨＨ）及びＦｃ領域を含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。場合によっては、無傷抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0048】

「抗体断片」または「抗原結合断片」は、無傷抗体の一部、好ましくは、無傷抗体の抗原結合及び／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照されたい）；抗体断片から形成される一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）分子；単一ドメイン抗体（例えば、Ｖ_ＨＨ）、及び多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、ならびに残余「Ｆｃ」断片（この名称は容易に結晶化する能力を反映している）を産生した。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）を伴う完全Ｌ鎖からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一大型Ｆ（ａｂ’）_２断片を生じるが、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合Ｆａｂ断片におおよそ対応し、依然として抗原に架橋し得る。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含めてＣ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に２～３の付加的残基を有することでＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’に関する本明細書中での呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。

【0049】

「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含む、免疫グロブリンの他の部分である可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３ドメイン（総称して、Ｃ_Ｈ）、及び軽鎖のＣ_ＨＬ（またはＣ_Ｌ）ドメインを含む。

【0050】

いかなる脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて明確に区別される、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２タイプの１つに割り当てられ得る。

【0051】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識かつ結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、強く非共有結合的に会合している、１本の重鎖及び１本の軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これら２つのドメインが折り畳まれると、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を与える６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖それぞれに３つのループ）が延びる。しかしながら、結合部位全体よりも親和性は低いものの、単一可変ドメイン（つまり、抗原に特異的な３つのみのＣＤＲからなるＦｖの半分）であっても抗原を認識し、結合する能力を有する。

【0052】

「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される）は、単一ポリペプチド鎖に連結されるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓｃＦｖポリペプチドは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、抗原結合のために望ましい構造をｓｃＦｖに形成させる。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。

【0053】

「ダイアボディ」という用語は、Ｖ_ＨとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０）残基）を有するＦｖ断片（上記パラグラフを参照）を構築することによって調製される小さい抗体断片を指し、Ｖドメイン鎖内ではなく鎖間の対形成が達成されることによって、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られる。二重特異性ダイアボディは、２つの「クロスオーバー」するｓＦｖ断片のヘテロに量体であり、２つの抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが、異なるポリペプチド鎖に存在する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）で詳細に説明されている。

【0054】

本明細書のモノクローナル抗体は、特に「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含み、これは、所望の生物活性を示す限りにおいて、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である一方、鎖（複数可）の残部は、別の種に由来する、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、並びに、このような抗体の断片である（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））。「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

【0055】

非ヒト（例えば、ラマまたはラクダ科）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含有するキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、ここでは、レシピエントのＣＤＲ（以下で定義される）の残基が、所望の特異性、親和性及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、ラクダ、ラマ、アルパカ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置換される。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基が、対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体内にない残基を含んでもよい。結合親和性などの抗体の性能をさらに改善するため、これらの修飾がなされる場合がある。一般的に、ヒト化抗体は、実質的に全ての少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを含み、全てまたは実質的に全ての超可変ループは、非ヒト免疫グロブリン配列のものと一致し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域は、抗体の性能、例えば、結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する、１つ以上の個々のＦＲ残基の置換を含んでもよい。ＦＲ中のこれらのアミノ酸置換の数は、典型的にはＨ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は、任意に、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むだろう。さらなる詳細は、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。また、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）、並びに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照されたい。

【0056】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体の配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び／または、本明細書に開示されるヒト抗体を作製するためのいずれかの技術を用いて作製された抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を、具体的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む当該技術分野において既知の様々な技術を用いて作製できる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。また、ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法も使用可能である。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原投与に応答して、かかる抗体を産生するように改変されているが、内因性の遺伝子座が無効になっている、トランスジェニック動物、例えば、免疫化したゼノマウスに抗原を投与することによって調製できる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって発生するヒト抗体に関しては、例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）も参照されたい。

【0057】

「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書で使用する場合、配列が超可変である、及び／または構造的に定義されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、単一ドメイン抗体は、３つのＨＶＲ（またはＣＤＲ）：ＨＶＲ１（またはＣＤＲ１）、ＨＶＲ２（またはＣＤＲ２）、及びＨＶＲ３（またはＣＤＲ３）を含む。ＨＶＲ３（またはＣＤＲ３）は、３つのＨＶＲのうち最も高い多様性を示し、抗体に優れた特異性を付与するうえで特異な役割を果たすと考えられている。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照されたい。

【0058】

「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔシステムで定義されるように、超可変領域を指すように使用される。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ＳｅｒＶｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい。

【0059】

多くのＨＶＲ描写が本明細書において使用され、包含される。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づき、最も共通して使用される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループの間での妥協を表わし、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基を以下の表１に指摘する。

【表1】

【0060】

ＨＶＲは以下の通りの「伸長ＨＶＲ」：Ｖ_Ｌ内に、２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびに、Ｖ_Ｈ内に、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、もしくは９５～１０２（Ｈ３）を含み得る。可変ドメイン残基を、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａに従って、これらの定義の各々について番号付けする。

【0061】

単一ドメイン抗体（例えば、Ｖ_ＨＨ）のアミノ酸残基は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０００ Ｊｕｎ ２３；２４０（１－２）：１８５－１９５の論文においてラクダ科動物に由来するＶ_ＨＨドメインに適用されるように、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，ＵＳＰｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１）によって与えられたＶ_Ｈドメインに関する一般的な番号付けに従って番号付けされる。この番号付けに従うと、Ｖ_ＨＨのＦＲ１は、１位～３０位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＣＤＲ１は、３１位～３５位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＦＲ２は、３６位～４９位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＣＤＲ２は、５０位～６５位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＦＲ３は、６６位～９４位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＣＤＲ３は、９５位～１０２位のアミノ酸残基を含み、Ｖ_ＨＨのＦＲ４は、１０３位～１１３位のアミノ酸残基を含む。これに関して、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_ＨＨドメインに関して当該技術分野で既知のように、ＣＤＲそれぞれにおけるアミノ酸残基の総数は変わる可能性があり、Ｋａｂａｔ番号付けで示されるアミノ酸残基の総数に対応していなくてもよい（すなわち、Ｋａｂａｔ番号付けによる１つ以上の位置が実際の配列で占められていなくてもよく、または実際の配列が、Ｋａｂａｔ番号付けで可能な数より多くのアミノ酸残基を含有していてもよい）ことに留意すべきである。

【0062】

「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」という表現、ならびにそのバリエーションは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａにおいて抗体の編集での重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインについて使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用し、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮、またはその中への挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一アミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに従った残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔに従った残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付け配列を伴う抗体の配列の相同性の領域でのアライメントにより所与の抗体について決定することができる。

【0063】

本明細書で別段の指定がない限り、免疫グロブリン重鎖における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａと同様のＥＵインデックスのものである。「Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。

【0064】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0065】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」または「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶ_ＬまたはＶ_Ｈフレームワーク配列の選択において、最も共通に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶ_ＬまたはＶ_Ｈ配列の選択肢は、可変ドメイン配列のサブグループである。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）にあるようなサブグループである。例として、Ｖ_Ｌについては、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ（上記）にあるような、サブグループκＩ、κＩＩ、κＩＩＩまたはκＩＶであってよい。また、Ｖ_Ｈについては、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌにあるような、サブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであってよい。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、例えば、ドナーフレームワーク配列を様々なヒトフレームフレーム配列の集合とアライメントすることによって、ドナーフレームワークとの相同性に基づいてヒトフレームワーク残基を選択するときなど、特定の残基において、上記のもの由来である場合がある。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「由来である」アクセプターヒトフレームワークは、それらと同じアミノ酸配列を含んでよく、または、予め存在するアミノ酸配列変化を含んでもよい。いくつかの実施形態では、予め存在するアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。

【0066】

「親和性成熟した」抗体は、その１つ以上のＣＤＲに１つ以上の変更を伴うものであり、その変更により、それらの変更（複数可）を持たない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性の改善がもたらされる。いくつかの実施形態では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当該技術分野において既知の手順によって作製される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）は、Ｖ_Ｈ－及びＶ_Ｌ－ドメインのシャッフリングによる親和性成熟について述べている。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９－３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）に記載されている。

【0067】

本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、または「特異的である」という用語は、測定可能で再現性のある相互作用、例えば、標的と抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）の間での結合を指し、それは、生物学的分子を含む分子の異種集団の存在において標的の存在を決定可能である。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）は、より大きな親和性、アビディティを伴い、より容易に、及び／またはそれが他の標的に結合するよりも大きな持続時間を伴いこの標的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、無関係な標的への抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される通り、標的への抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）の結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）は、≦１０^－５Ｍ、≦１０^－６Ｍ、≦１０^－７Ｍ、≦１０^－８Ｍ、≦１０^－９Ｍ、≦１０^－１０Ｍ、≦１０^－１１Ｍ、または≦１０^－１２Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、異なる種からのタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は、排他的な結合を含み得るが、それを要求しない。抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当該技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＥＣＬ、ＩＲＭＡ、ＥＩＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ試験、及びペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。

【0068】

「特異性」という用語は、抗原の特定のエピトープに対する抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）の選択的認識を指す。天然抗体は、例えば、単一特異性である。「多重特異性」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質が、ポリトロープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つ、３つ、またはそれ以上の異なるエピトープに特異的に結合することができる、または２つ、３つ、またはそれ以上の異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することができる）ことを指す。「二重特異性」は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質が２つの異なる抗原結合特異性を有することを指す。別段の指定がない限り、二重特異性抗体によって結合した抗原を表記した順番は任意である。すなわち、例えば、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１」、「抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ」、「ＴＩＧＩＴ×ＰＤ－１」、「ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ」、「ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ」、「ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１」、「ＰＤ－１-ＴＩＧＩＴ」、及び「ＴＩＧＩＴ-ＰＤ－１」という用語は、ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１の両方を特異的に認識する二重特異性抗体を指すように交換可能に使用され得る。「単一特異性」という用語は、本明細書で使用する場合、各々が同じ抗原の同じエピトープに結合する１つ以上の結合部位を有する抗原結合タンパク質（例えば、ｓｄＡｂ）を指す。

【0069】

「価」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質における特定の数の結合部位の存在を指す。例えば、天然抗体または完全長抗体は、２つの結合部位を有し、二価である。このように、「三価」、「四価」、「五価」、及び「六価」という用語は、抗原結合タンパク質における２つの結合部位、３つの結合部位、４つの結合部位、５つの結合部位、及び６つの結合部位の存在をそれぞれ指す。

【0070】

「抗体エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異Ｆｃ領域）に起因するこれらの生物活性を指し、抗体アイソタイプによって変化する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、Ｂ細胞活性化が挙げられる。抗体エフェクター機能の「低下または最小化」は、野生型または未修飾の抗体から、少なくとも５０％（あるいは６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）低下することを意味する。抗体エフェクター機能の決定は、当業者によって容易に判定可能かつ測定可能である。好ましい実施形態では、抗体エフェクター機能である補体結合、補体依存性細胞傷害及び抗体依存性細胞傷害が影響を受ける。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、グリコシル化を排除した定常領域における変異、例えば、「エフェクターレス変異」によって解消される。一態様では、エフェクターレス変異は、Ｃ_Ｈ２領域におけるＮ２９７ＡまたはＤＡＮＡ（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ａ）変異である。Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６６０４（２００１）。あるいは、エフェクター機能の低下または解消をもたらす追加の突然変異としては、Ｋ３２２Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）が挙げられる。あるいは、エフェクター機能は、製造手法によって低下または解消されることがあり、例えば、グリコシル化しない宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ．）または、エフェクター機能の促進に無効であるかもしくは効果が低い、改変された変更されたグリコシル化パターンをもたらす宿主細胞（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（５）：３４６６－３４７３（２００３）中での発現である。

【0071】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」つまりＡＤＣＣは、細胞傷害の一形態を指し、分泌されたＩｇが特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合すると、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原提示標的細胞に特異的に結合し、続いてその標的細胞を細胞毒で死滅することを可能にする。細胞傷害性細胞の抗体「アーム」は、このメカニズムによる標的細胞の死滅に必要である。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）の４６４ページの表２にまとめられている。対象分子のＡＤＣＣ活性の評価には、米国特許第５，５００，３６２号または同５，８２１，３３７号に記載されるものなどの、インビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的または追加的に、対象分子のＡＤＣＣ活性を、インビボ、例えば、動物モデル（例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるもの）で評価してもよい。

【0072】

本明細書において「Ｆｃ領域」または「断片結晶化可能領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域（天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む）を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸展すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）を、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸の組み換え操作により除去してもよい。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を伴う及び伴わない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書に記載の使用のための適当な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。

【0073】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合するものであり、対立遺伝子変異体及び異なるスプライシングを受けた型を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が挙げられ、ＦｃγＲＩＩ受容体として、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体」）が挙げられ、これらは主に細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。抑制受容体ＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照されたい。ＦｃＲの総説は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）にある。他のＦｃＲ（将来同定されるものを含む）は、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。

【0074】

また、用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、胎児への母体ＩｇＧの移動を担う、新生児期受容体であるＦｃＲｎも含む。Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）。ＦｃＲｎへの結合の測定方法は、既知である（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：（１２）：５９２－８（１９９７）；Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５（７）：６３７－４０（１９９７）；Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３－６（２００４）；ＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）。インビボのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトされたヒト細胞株、または変異Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与された霊長類で評価することができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善または低下した抗体変異体について説明している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。

【0075】

「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的細胞を溶解することを指す。従来の補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、その同種抗原に結合する抗体（適切なサブクラスの）への結合によって開始される。補体活性化の評価には、ＣＤＣアッセイ、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されるものを実施してよい。Ｆｃ領域のアミノ酸配列が変更されており、Ｃ１ｑ結合能が増加または低下している抗体変異体が、米国特許第６，１９４，５５１（Ｂ１）号及びＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、具体的に参照することにより本明細書に組み込まれる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）も参照されたい。

【0076】

「結合親和性」は、一般的に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）の間での非共有結合的な相互作用の合計の強度を指す。別段の指定がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合対のメンバーの間での１：１の相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。結合親和性は、Ｋ_ｄ、Ｋ_ｏｆｆ、Ｋ_ｏｎ、またはＫ_ａによって示すことができる。「Ｋ_ｏｆｆ」という用語は、本明細書で使用する場合、動態選択の機構から決定される、抗体／抗原複合体からの抗体（または抗原結合ドメイン）の解離についてのｏｆｆ速度定数を指すことを意図し、ｓ^－１の単位で表される。「Ｋ_ｏｎ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体（または抗原結合ドメイン）が抗原に会合して、抗体／抗原複合体を形成するｏｎ速度定数を指すことを意図し、Ｍ^－１ｓ^－１の単位で表される。平衡解離定数「Ｋ_Ｄ」または「Ｋ_ｄ」という用語は、本明細書で使用する場合、特定の抗体－抗原相互作用の解離定数を指し、平衡状態にある抗体分子の溶液中に存在する全ての抗体結合ドメインの半分を占めるのに必要な抗原の濃度を示し、Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎに等しく、Ｍの単位で表される。Ｋ_ｄの測定から、全ての結合剤が溶液中にあることが想定される。例えば、酵母発現系で、抗体が細胞壁に繋がっている場合、対応する平衡速度定数は、ＥＣ_５０として表され、それからＫ_ｄの良好な近似値が得られる。親和性定数Ｋ_ａは、解離定数Ｋ_ｄの逆数であり、Ｍ^－１の単位で表される。解離定数（Ｋ_ＤまたはＫ_ｄ）は、抗体の抗原に対する親和性を示す指標として使用される。例えば、種々の標識剤で標識した抗体を用いたスキャチャード方法、ならびに市販の測定キットであるＢｉａｃｏｒｅＸ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）または類似のキットを用いて、当該キットに添付された取扱い説明書及び実験操作方法に従って容易に分析することができる。これらの方法を用いて求められるＫ_Ｄ値は、Ｍ（モル）の単位で表される。標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、例えば、≦１０^－５Ｍ、≦１０^－６Ｍ、≦１０^－７Ｍ、≦１０^－８Ｍ、≦１０^－９Ｍ、≦１０^－１０Ｍ、≦１０^－１１Ｍ、または≦１０^－１２Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）を有し得る。

【0077】

半分の最大阻害濃度（ＩＣ_５０）は、特定の生物学的または生化学的機能を阻害する際の物質（例えば、抗体）の効力の尺度である。それは、どの程度の量の特定の薬物または他の物質（阻害剤、例えば、抗体）が、所与の生物学的過程（例えば、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２の間の結合、または過程の成分、すなわち、酵素、細胞、細胞受容体、または微生物）を半分まで阻害するのに必要とされるかということを示す。値は、典型的には、モル濃度として表される。ＩＣ_５０は、作動薬または他の物質（例えば、抗体）に対するＥＣ_５０に匹敵する。また、ＥＣ_５０は、最大効果の５０％をインビボで得るために必要な血漿濃度を表す。本明細書で使用する場合、「ＩＣ_５０」は、抗原の生物学的活性（例えば、ＰＤ－１の生物学的活性）の５０％をインビトロで中和するために必要な抗体（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ）の有効な濃度を示すように使用される。ＩＣ_５０またはＥＣ_５０は、バイオアッセイ、例えば、ＦＡＣＳ分析によるリガンド結合の阻害（競合結合アッセイ）、細胞に基づくサイトカイン放出アッセイ、または増幅発光近接均質アッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ）によって測定することができる。

【0078】

ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、配列を整列させ、ギャップを導入し（必要な場合）、最高パーセント配列同一性を達成した後（任意の保存的置換を配列同一性の部分として考えず）、特定のペプチドまたはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野内にある種々の方法で、例えば、公的に利用可能なコンピューターソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどを使用して達成することができる。当業者は、アライメントを測定するための適切なパラメーター（比較されている配列の全長にわたる最高アライメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む）を決定することができる。

【0079】

本明細書に記載の構築物、抗体、またはその抗原結合断片をコードする「単離」核酸分子は、それが産生された環境において通常会合している少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離される核酸分子である。好ましくは、単離核酸は、産生環境に関連する全ての成分との会合がない。本明細書に記載のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、それが天然で見出される形態または設定以外の形態である。単離核酸分子は、従って、細胞中に天然に生じる本明細書に記載のポリペプチド及び抗体をコードする核酸から区別される。単離核酸は、核酸分子を通常含有する細胞中に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0080】

「対照配列」という用語は、特定の宿主生物における操作可能に連結されたコーディング配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。例えば、原核生物に適した対照配列は、プロモーター、任意のオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。

【0081】

核酸は、別の核酸配列と機能的関係に配置される場合、「操作可能に連結」される。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、その配列の転写に影響する場合、コード配列に操作可能に連結され、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するために配置される場合、コード配列に操作可能に連結される。一般的に、「操作可能に連結される」とは、連結されているＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合は、読まれるときに近接していることを意味する。しかしながら、エンハンサーは近接している必要はない。連結は、都合がいい制限部位でのライゲーションによって達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の方法に従って使用される。

【0082】

「ベクター」という用語は、本明細書で使用する場合、それが連結される別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結される核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、「発現ベクター」と本明細書中で呼ばれる。

【0083】

「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、本明細書で使用する場合、それによって外来性の核酸が宿主細胞に導入（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ）されるか、または導入（ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ）されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外来性の核酸を用いてトランスフェクション、形質転換、または形質導入された細胞である。細胞には、初代対象細胞及びその子孫が含まれる。

【0084】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、交換可能に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は、親細胞と核酸含量が完全に同一ではない場合があるが、突然変異を含み得る。最初に形質転換細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。

【0085】

「アジュバント設定」とは、ある個体が、がんの既往歴を持ち、全般的に（必ずしもそうとは限らない）、外科手術（例えば、外科切除）、放射線治療、及び化学療法などを含むが、これらに限定されない治療に応答的である場合の臨床設定である。しかしながら、がんの既往歴のため、これらの個体は、疾患の発症のリスクがあると考えられる。「アジュバント設定」における治療または投与とは、事後の治療方式を指す。リスクの程度（例えば、アジュバント設定における個体が、「高リスク」または「低リスク」と考えられる場合）は、いくつかの要因に依存するが、もっとも多くの場合、最初に治療されたときの疾患の程度に依存する。

【0086】

「ネオアジュバント設定」は、方法が、一次／根治治療の前に実施される臨床的設定を指す。

【0087】

「医薬組成物」の「医薬製剤」という用語は、有効成分の生物活性が有効となることを可能にするような形態であり、その製剤が投与される対象に許容されないほど毒性がある追加の成分を含まない、調製物を指す。このような製剤は、無菌である。「無菌」製剤は、無菌性であり、つまり、全ての生微生物及びその芽胞を含まない。

【0088】

本明細書に記載の本発明の実施形態は、実施形態「からなる」こと、及び／または実施形態「から本質的になる」を含むことを理解されたい。

【0089】

「約」に関して、本明細書における値またはパラメーターは、その値またはパラメーターそれ自体を対象とする変化量を含む（記載されている）。例えば、「約Ｘ」という記述は、「Ｘ」の記述を含む。

【0090】

本明細書で使用する場合、ある値またはパラメーター「ではない」という言及は、一般的にある値またはパラメーター「以外」を意味し、記載する。例えば、方法は、タイプＸのがんを治療するために使用されないということは、この方法は、Ｘ以外のタイプのがんを治療するために使用されることを意味する。

【0091】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられる単数形の「ある」、「または」、及び「その」は、文脈が別段に決定することが明らかでない限り、複数の指示を包含する。

【0092】

ＩＩ．抗ＰＤ－１構築物
（Ｉ）抗ＰＤ－１単一ドメイン抗体部分
本明細書に記載の単離抗ＰＤ－１構築物は、ＰＤ－１（または「抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ」）を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂである。

【0093】

いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0094】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。従って、いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0095】

いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である、抗ＰＤ１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0096】

いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0097】

本明細書に記載したＣＤＲの配列を表３に提供する。ＣＤＲは、種々のペアワイズ組み合わせで組み合わせて、多くの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を生成することができる。

【0098】

例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0099】

いくつかの実施形態では、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0100】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0101】

いくつかの実施形態では、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0102】

いくつかの実施形態では、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0103】

いくつかの実施形態では、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0104】

いくつかの実施形態では、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0105】

いくつかの実施形態では、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0106】

いくつかの実施形態では、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0107】

いくつかの実施形態では、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0108】

いくつかの実施形態では、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0109】

いくつかの実施形態では、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0110】

いくつかの実施形態では、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0111】

いくつかの実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0112】

いくつかの実施形態では、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0113】

いくつかの実施形態では、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0114】

いくつかの実施形態では、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0115】

いくつかの実施形態では、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0116】

いくつかの実施形態では、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0117】

いくつかの実施形態では、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0118】

いくつかの実施形態では、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0119】

いくつかの実施形態では、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0120】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0121】

いくつかの実施形態では、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0122】

いくつかの実施形態では、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0123】

いくつかの実施形態では、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0124】

いくつかの実施形態では、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0125】

いくつかの実施形態では、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0126】

いくつかの実施形態では、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0127】

いくつかの実施形態では、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0128】

いくつかの実施形態では、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0129】

いくつかの実施形態では、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0130】

いくつかの実施形態では、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0131】

いくつかの実施形態では、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0132】

いくつかの実施形態では、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0133】

いくつかの実施形態では、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0134】

抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、１つ以上のＦＲ配列中に１つ以上の「ホールマーク残基」を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、以下のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む：ａ－１）３７位のアミノ酸残基は、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶ（例えば、Ｆ、ＹまたはＶ、または例えば、Ｆ）からなる群から選択され；ａ－２）４４位のアミノ酸残基は、Ａ、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、及びＬ（例えば、Ｅ、Ｑ、またはＧ、または例えば、Ｅ）からなる群から選択され；ａ－３）４５位のアミノ酸残基は、Ｌ、Ｒ、及びＣ（例えば、ＬまたはＲ）からなる群から選択され；ａ－４）１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ、Ｇ、及びＳ（例えば、Ｗ、Ｇ、またはＲ、または例えば、Ｗ）からなる群から選択され；及びａ－５）１０８位のアミノ酸残基は、Ｑであり；またはｂ－１）３７位のアミノ酸残基は、Ｆ、Ｙ、Ｌ、Ｉ、及びＶ（例えば、Ｆ、Ｖ、またはＹ、または例えば、Ｆ）からなる群から選択され；ｂ－２）４４位のアミノ酸残基は、Ｅ、Ｑ、及びＧからなる群から選択され；ｂ－３）４５位のアミノ酸残基は、Ｒであり；ｂ－４）１０３位のアミノ酸残基は、Ｗ、Ｒ、及びＳ（例えば、Ｗ）からなる群から選択され；及びｂ－５）１０８位のアミノ酸残基は、Ｑ及びＬ（例えば、Ｑ）からなる群から選択され；アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従う。Ｋａｂａｔ番号付けによるアミノ酸位置３７、４４、４５、１０３及び１０８でのこれらの「ホールマーク残基」は、天然Ｖ_ＨＨ配列の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分に適用し、及びヒト化中に置換することができることに留意すべきである。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるアミノ酸位置１０８でのＱは、Ｌに適宜ヒト化することができる。他のヒト化置換は、当業者には明らかであろう。例えば、潜在的に有用なヒト化置換は、天然に生じるＶ_ＨＨのＦＲ配列を、１つ以上の密接に関連するヒトＶ_Ｈの対応するＦＲ配列と比較した後、当該技術分野で公知の（本明細書にも記載される）方法を用いて、１つ以上のそのような潜在的に有用なヒト化置換を前記Ｖ_ＨＨに導入することで決定することができる。得られるヒト化Ｖ_ＨＨ配列は、ＰＤ－１結合親和性、安定性、発現のしやすさ及びレベル、及び／または他の所望の特性について試験することができる。可能な残基置換は、抗体Ｖ_Ｈドメインから来てもよく、Ｖ_Ｈ／Ｖ_Ｌ界面は、１つ以上の高電荷アミノ酸残基を含む。本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、部分的または完全にヒト化することができる。好ましくは、得られるヒト化抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、本明細書に記載のＫ_ｄ、Ｋ_ｏｎ、Ｋ_ｏｆｆでＰＤ－１に結合する。

【0135】

いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、または配列番号２８９～３２４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）の配列同一性を有するその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはＶ_ＨＨドメインにおいて最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはその変異体を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ１、及び／またはＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはその変異体を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、アミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＦＲ、例えば、ＦＲ１、及び／またはＦＲ２、及び／またはＦＲ３、及び／またはＦＲ４内である。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはその変異体を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＣＤＲ及びＦＲの両方においてアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0136】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のいずれか１つと競合的にＰＤ－１に特異的に結合する抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分（以下、「競合抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分」または「競合抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ」と呼ばれる）または抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む、抗ＰＤ－１構築物（以下、「競合抗ＰＤ－１構築物」と呼ばれる）を提供する。いくつかの実施形態では、競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定してもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分と競合的にＰＤ－１に特異的に結合する抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分（または抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物）を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分と競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分（または抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物）を提供する。いくつかの実施形態では、競合抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、競合抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0137】

単一ドメイン抗体
例示的なｓｄＡｂとしては、重鎖のみ抗体に由来する重鎖可変ドメイン（例えば、ラクダ科におけるＶ_ＨＨ（重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン）または軟骨魚類におけるＶ_ＮＡＲ（サメ新抗原受容体の可変ドメイン））、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン（例えば、Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌ）、ヒト化重鎖のみ抗体、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットにより産生されたヒト単一ドメイン抗体、及び抗体に由来するもの以外の操作されたドメイン及び単一ドメイン足場が挙げられるが、これらに限定されない。ｓｄＡｂは、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、サカナ、サメ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であってもよい。本明細書で検討されるｓｄＡｂは、ラクダ科及びサメ以外の種に由来する天然に生じるｓｄＡｂ分子も含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に生じる単一ドメイン抗原結合分子（「重鎖のみ抗体」、または「ＨＣＡｂ」とも本明細書中で呼ばれる）由来である。そのような単一ドメイン分子は、例えば、ＷＯ９４／０４６７８及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８に開示されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子に由来する可変ドメインは、４本鎖免疫グロブリンの慣用のＶ_Ｈと区別するために、Ｖ_ＨＨとして本明細書で知られる。そのようなＶ_ＨＨ分子は、ラクダ科種、例えば、ラクダ、ラマ、ビクーニャ、ヒトコブラクダ、アルカパ、及びグアナコで育った抗体由来であり得る。ラクダ科以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、そのようなＶ_ＨＨは、本出願の範囲内である。

【0139】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軟骨魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域由来である。例えば、ｓｄＡｂは、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であり得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域に由来する単一ドメイン分子を生成する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１４：２９０１－２９０９に記載されている。

【0140】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化、及び／またはインビトロで生成される（例えば、ファージディスプレイにより選択される）。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域のアミノ酸配列は、フレームワーク領域における特定のアミノ酸残基の「ラクダ化」によって変更され得る。ラクダ化とは、従来の４本鎖抗体からの（天然に生じる）Ｖ_Ｈドメインのアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶ_ＨＨドメインにおける対応する位置（複数可）で生じる１つ以上のアミノ酸残基と置き換えるまたは置換することを指す。これは、それ自体が知られた方法で行うことができ、例えば、本明細書中のさらなる説明に基づいて、当業者には明白であろう。そのような「ラクダ化」置換は、本明細書で定義するように、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ界面及び／またはいわゆるラクダ科動物のホールマーク残基を形成する、及び／またはに存在するアミノ酸位置に挿入するのが好ましい（例えば、ＷＯ９４／０４６７８、Ｄａｖｉｅｓ及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３３９：２８５－２９０、１９９４；Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（６）：５３１－５３７，１９９６；ＲｉｅｃｈＭａｎｎ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５９：９５７－９６９，１９９６；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５－３８，１９９９を参照されたい）。

【0141】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットが産生するヒトｓｄＡｂである。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、及びＷＯ２００４０４９７９４を参照されたい。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、親和性成熟される。

【0142】

いくつかの実施形態では、特定の抗原または標的に対する天然に生じるＶ_ＨＨドメインは、ラクダ科動物のＶ_ＨＨ配列の（ナイーブまたは免疫）ライブラリーから得ることができる。そのような方法は、１つ以上のそれ自体が知られたスクリーニング技術を使用して、前記抗原または標的、またはその少なくとも一部、断片、抗原決定基またはエピトープを用いてそのようなライブラリーをスクリーニングすることを伴ってもよいし、伴わなくてもよい。そのようなライブラリー及び技術は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０、及びＷＯ０３／０３５６９４に記載されている。あるいは、（ナイーブまたは免疫）Ｖ_ＨＨライブラリーに由来する改良した合成または半合成ライブラリーは、例えば、ＷＯ００／４３５０７に記載されるように、無作為突然変異誘発及び／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術によって（ナイーブまたは免疫）Ｖ_ＨＨライブラリーから得られたＶ_ＨＨライブラリーのように使用してもよい。

【0143】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、従来の４本鎖抗体から生成される。例えば、ＥＰ０３６８６８４、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ １９８９ Ｏｃｔ．１２；３４１（６２４２）：５４４－６）、Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００３，２１（１１）：４８４－４９０；ＷＯ０６／０３０２２０；及びＷＯ０６／００３３８８を参照されたい。

【0144】

ｓｄＡｂの特有な特性により、Ｖ_ＨＨドメインを単一抗原結合タンパク質または抗原結合ドメイン（すなわち、より大きいタンパクやポリペプチドの一部として）として使用することは、従来のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域、ｓｃＦｖまたは従来の抗体断片（例えば、Ｆａｂまたは（Ｆａｂ’）_２）を上回る多くの有意な優位性を提供する：１）たった１つのドメインしか抗原が高い親和性で結合するのに必要でないので、第２のドメインを有する必要も、これら２つのドメインが正しい空間的な構造及び立体配置に存在することを確かめる必要もない（例えば、折り畳み中に重鎖と軽鎖を対合する必要がない、特別に設計されたリンカー（例えば、ｓｃＦｖに対して）を使用する必要がない）；２）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、１つの遺伝子から発現することができ、転写後の折り畳みまたは改変の必要がない；３）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、簡単に多価及び多重特異的な形態（例えば、本出願に記載されるもの）に操作することができる；４）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、高い可溶性を示し、凝集しやすい傾向（マウス由来「ｄＡｂ」に見られるような、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．１９８９ Ｏｃｔ １２；３４１（６２４２）：５４４－６）に記載されている）が見られない；５）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、熱、ｐＨ、プロテアーゼ、及び他の変性剤や変性条件に対して高い安定性を示す；６）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、例えば、微生物発酵を用いて、（大規模な生産規模であっても）容易かつ比較的安価に調製でき、（例えば、従来の抗体断片の生産に必要な）哺乳類の発現系を必要としない；７）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、従来の４本鎖抗体及びそれらの抗原結合断片と比較して比較的小さい（従来のＩｇＧよりもおおよそ１５ｋＤａまたは１０倍小さい）ため、例えば、固形腫瘍及び他の密集組織への（より）高い組織浸透能力を有する；及び８）Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、（従来のＶ_Ｈドメインのものと比較して拡張されたＣＤＲ３ループにより）いわゆる「空洞結合特性」を示すため、従来の４本鎖抗体及びその抗原結合断片が接近できなかった標的及びエピトープに接近することができる。例えば、Ｖ_ＨＨドメイン及び他のｓｄＡｂは、酵素を阻害することができることが示されている（例えば、ＷＯ１９９７０４９８０５；Ｔｒａｎｓｕｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．１９９８ Ｓｅｐ １；３２（４）：５１５－２２；Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１９９８ Ｊｕｌ １；１７（１３）：３５１２－２０を参照されたい）。

【0145】

ＰＤ－１
「プログラム細胞死タンパク質１」、「ＰＤ－１」、「ＰＤ－１抗原」、「ＰＤ－１エピトープ」、及び「プログラム死１」という用語は、交換可能に使用され、ヒトＰＤ－１の変異体、アイソフォーム、種ホモログ、及びＰＤ－１と少なくとも１つの共通エピトープを有するアナログが含まれる。

【0146】

ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９で開示される。アミノ酸１～２０の領域は、リーダーペプチドであり；２１～１７０は、細胞外ドメインであり；１７１～１９１は、膜貫通ドメインであり；及び１９２～２８８は、細胞質ドメインである。

【0147】

特定のヒトＰＤ－１配列は、一般的に、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のヒトＰＤ－１に対するアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であり、他の種（例えば、ネズミ）のＰＤ－１アミノ酸配列と比較した場合にアミノ酸配列をヒトとして同定するアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１に対してアミノ酸配列が少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１から１０未満のアミノ酸差異を示す。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１から５、４、３、２、または１未満のアミノ酸差異を示し得る。同一性パーセントは、本明細書に記載されるように決定することができる。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ－１配列は、例えば、保存された突然変異または非保存領域中の突然変異を有することによってＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のヒトＰＤ－１と異なる場合があり、ＰＤ－１は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のヒトＰＤ－１と実質的に同じ生物学的機能を有する。例えば、ヒトＰＤ－１の生物学的機能は、本開示の抗ＰＤ－１構築物によって特異的に結合されるＰＤ－１の細胞外ドメイン中にエピトープを有することであり、またはヒトＰＤ－１の生物学的機能は、Ｔ細胞活性の調節である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１に対して１００％のアミノ酸配列同一性を有するＰＤ－１ポリペプチドを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３６１または３６２のアミノ酸配列を含むＰＤ－１ポリペプチドを特異的に認識する。

【0148】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ヒト以外の種、またはヒトＰＤ－１に構造的に関連する他のタンパク質（例えば、ヒトＰＤ－１ホモログ）に由来するＰＤ－１と交差反応し得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ヒトＰＤ－１に対して完全に特異的であり、種または他の種類の交差反応性を示さない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ヒトＰＤ－１の可溶性アイソフォームを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ヒトＰＤ－１（例えば、配列番号３６１）の膜結合アイソフォームを特異的に認識する。

【0149】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－１ ＥＣＤのＮ末端部分を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－１ ＥＣＤのＣ末端部分を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－１ ＥＣＤの中央部分を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって特異的に認識されるＰＤ－１のＥＣＤは、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１の細胞外ドメインに対してアミノ酸配列が少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって特異的に認識されるＰＤ－１のＥＣＤは、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９のＰＤ－１の細胞外ドメインに対してアミノ酸配列が１００％同一である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３６２のアミノ酸配列を含むＰＤ－１ポリペプチドを特異的に認識する。

【0150】

抗体親和性
抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当該技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡｃｏｒｅ試験及びペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。

【0151】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－６Ｍ、約１０^－６Ｍ～約１０^－７Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－８Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－９Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１０Ｍ、約１０^－１０Ｍ～約１０^－１１Ｍ、約１０^－１１Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－６Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－１０Ｍ～約１０^－１２Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－１１Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１１Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１１Ｍ、約１０^－９Ｍ～約１０^－１１Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－１０Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－１０Ｍ、約１０^－８Ｍ～約１０^－１０Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－９Ｍ、約１０^－７Ｍ～約１０^－９Ｍ、約１０^－５Ｍ～約１０^－８Ｍ、または約１０^－６Ｍ～約１０^－８Ｍである。

【0152】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^２Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^４Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^６Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^２Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^３Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^５Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^３Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６Ｍ^－１ｓ^－１、または約１０^４Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６Ｍ^－１ｓ^－１である。

【0153】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｏｆｆは、約１ｓ^－１～約１０^－２ｓ^－１、約１０^－２ｓ^－１～約１０^－４ｓ^－１、約１０^－４ｓ^－１～約１０^－５ｓ^－１、約１０^－５ｓ^－１～約１０^－６ｓ^－１、約１ｓ^－１～約１０^－６ｓ^－１、約１０^－２ｓ^－１～約１０^－６ｓ^－１、約１０^－３ｓ^－１～約１０^－６ｓ^－１、約１０^－４ｓ^－１～約１０^－６ｓ^－１、約１０^－２ｓ^－１～約１０^－５ｓ^－１、または約１０^－３ｓ^－１～約１０^－５ｓ^－１である。

【0154】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＥＣ_５０は、増幅発光近接均質アッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ）で１０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＥＣ_５０は、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）または細胞に基づくサイトカイン放出アッセイによるリガンド結合の阻害において５００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＥＣ_５０は、１ｎＭ未満（例えば、約０．００１ｎＭ～約０．０１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．１ｎＭ～約１ｎＭなど）、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約５０ｎＭ、約５０ｎＭ～約１００ｎＭ、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、または約４００ｎＭ～約５００ｎＭである。

【0155】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＩＣ_５０は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡで１０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＩＣ_５０は、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）または細胞に基づくサイトカイン放出アッセイによるリガンド結合の阻害において５００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＩＣ_５０は、１ｎＭ未満（例えば、約０．００１ｎＭ～約０．０１ｎＭ、約０．０１ｎＭ～約０．１ｎＭ、約０．１ｎＭ～約１ｎＭなど）、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約５０ｎＭ、約５０ｎＭ～約１００ｎＭ、約１００ｎＭ～約２００ｎＭ、約２００ｎＭ～約３００ｎＭ、約３００ｎＭ～約４００ｎＭ、または約４００ｎＭ～約５００ｎＭである。

【0156】

キメラまたはヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、ラクダ科の種、例えば、ラマに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合により、ヒト定常領域の少なくとも部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換されている。

【0158】

ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に総説されており、かつ、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号；同第７，５２７，７９１号；同第６，９８２，３２１号；及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフト化を記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「再表面化」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）；及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導型選択」アプローチを記載する）にさらに記載されている。

【0159】

ヒト化のために用いることができるヒトフレームワーク領域としては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒトプロセシング型（体細胞突然変異型）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）；及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）；及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。

【0160】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、異種の種に対するその免疫原性を減少させながら、抗原に対するドメインの天然の親和性を減少させることなく改変される、例えば、ヒト化される。例えば、ラマ抗体の抗体可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）のアミノ酸残基は、決定することができ、例えば、フレームワーク領域におけるラクダ科動物のアミノ酸の１つ以上は、ヒトコンセンサス配列で見られるようにそれらのヒト対応物によって置換され、それなしでは、ポリペプチドは、その典型的な特性を失う、すなわち、ヒト化は、得られるポリペプチドの抗原結合能力に有意な影響を与えない。ラクダ科動物の単一ドメイン抗体のヒト化には、単一ポリペプチド鎖における限られた量のアミノ酸の導入及び突然変異誘発が必要である。これは、２本の鎖、軽鎖及び重鎖におけるアミノ酸変化の導入、ならびに両鎖のアセンブリの保存が必要なｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、及びＩｇＧのヒト化と対照的である。

【0161】

Ｖ_ＨＨドメインを含むｓｄＡｂは、ヒト様配列を有するようにヒト化することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で使用されるＶ_ＨＨドメインのＦＲ領域は、ヒトＶＨフレームワーク領域に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれか１つのアミノ酸配列相同性を含む。ヒト化Ｖ_ＨＨドメインの１つの例示的なクラスは、そのＶ_ＨＨが、Ｋａｂａｔ番号付けに従って、位置４５にグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、スレオニン、アスパラギン、またはグルタミンからなる群より選ばれるアミノ酸（例えば、Ｌ４５など）を持ち、位置１０３にトリプトファンを持つことを特徴とする。したがって、このクラスに属するポリペプチドは、ヒトＶＨフレームワーク領域に対して高いアミノ酸配列相同性を示し、前記ポリペプチドは、望ましくない免疫応答を引き起こす可能性を伴わず、かつさらなるヒト化の負担も伴わずに、ヒトに直接投与され得る。

【0162】

ヒト化ラクダ科単一ドメイン抗体の別の例示的なクラスは、ＷＯ０３／０３５６９４に記載されており、ヒト起源のまたは他の種由来の従来型抗体に典型的に見られる疎水性ＦＲ２残基を含有するが、この親水性の喪失を、二本鎖抗体由来のＶ_Ｈに存在する保存されたトリプトファン残基に代わる１０３位の荷電アルギニン残基によって補償している。したがって、これら２つのクラスに属するペプチドは、ヒトＶ_Ｈフレームワーク領域に対して高いアミノ酸配列相同性ーを示し、前記ペプチドは、望ましくない免疫応答を引き起こす可能性を伴わず、かつさらなるヒト化の負担も伴わずに、ヒトに直接投与され得る。

【0163】

ヒト抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ヒト抗体（ヒトドメイン抗体、またはヒトＤａｂとして知られる）である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１），Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８），ａｎｄ Ｃｈｅｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７（４）：９１２－２１（２０１０）に記載されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（またはＤＡｂ）を産生することができるトランスジェニックマウスまたはラットは、当該技術分野で公知である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、及びＷＯ２００４０４９７９４を参照されたい。

【0164】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、抗原攻撃に応答して、無傷ヒト抗体またはヒト可変領域を持つ無傷抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載する）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する）；米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）；米国特許出願公開２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する）も参照されたい。そのような動物で生成された無傷抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変される可能性がある。

【0165】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ハイブリドーマベースの方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のための、ヒトミエローマ及びマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生成を記載する）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ ２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．，２０（３）：９２７－９３７ （２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。

【0166】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ヒトに由来するファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。そのような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。

【0167】

特定の抗原または標的に対するＶ_ＨＨ配列を得る１つの技術は、重鎖抗体を発現することができるトランスジェニック哺乳動物を適当に免疫化すること（すなわち、免疫応答及び／または前記抗原または標的に対する重鎖抗体をもたらすために）、前記Ｖ_ＨＨ配列（をコードする核酸配列）を含有する前記トランスジェニック哺乳動物から適当な生物学的試料（例えば、血液試料、血清試料またはＢ細胞の試料）を得ること、及び次に、それ自体公知である任意の適当な技術（例えば、本明細書に記載の方法のいずれかまたはハイブリドーマ技術）を用いて、前記試料から開始して、前記抗原または標的に対するＶ_ＨＨ配列を生成することを伴う。例えば、この目的のために、重鎖抗体を発現するマウス、及びＷＯ０２／０８５９４５、ＷＯ０４／０４９７９４及びＷＯ０６／００８５４８及びＪａｎｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００６ Ｏｃｔ．１０；１０３（４１）：１５１３０－５に記載されるさらなる方法及び技術を用いることができる。例えば、そのような重鎖抗体を発現するマウスは、任意の適当な（単一）可変ドメイン、例えば、天然の供給源からの（単一）可変ドメイン（例えば、ヒトの（単一）可変ドメイン、ラクダ科動物の（単一）可変ドメインまたはサメの（単一）可変ドメイン）、ならびに、例えば、合成または半合成の（単一）可変ドメインを有する重鎖抗体を発現することができる。

【0168】

ライブラリー由来抗体
本出願の抗体は、所望の活性（１種または複数）を有する抗体について、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、かつ所望の結合特性を保持する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための、種々の方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に総説され、かつ、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５，Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）にさらに記載されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築する方法は、例えば、米国特許第７３７１８４９号に記載されている。

【0169】

ある特定のファージディスプレイ法では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに組み換えられ、これをその後、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。Ｖ_ＨＨ遺伝子のレパートリーは、ＰＣＲにより同様にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに組み換えられ、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体断片を、ｓｃＦｖ断片またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とせずに、免疫原に対して親和性の高い抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるようにして、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングし、いかなる免疫付与も無しに、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する、単一供給源の抗体を提供できる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、幹細胞由来の再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、かつ、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを用いて高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再構成を実行することにより、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）により記載される通りに、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、以下のものが挙げられる：米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号。

【0170】

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片とみなされる。

【0171】

生物学的活性
本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分の生物学的活性は、その標的に結合する抗体の効力の尺度であるその５０％有効濃度（ＥＣ_５０）、または、特異的な生物学的または生化学的機能を阻害する（例えば、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２の間の結合を阻害する）抗体の効力の尺度であるその５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）を測定することで決定することができる。例えば、ここで、ＥＣ_５０は、細胞表面上に５０％のＰＤ－１が結合するのに必要な抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂの有効濃度を示すために使用することができ、ＩＣ_５０は、ＰＤ－１生物活性の５０％をインビトロで中和するのに必要な抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂの有効濃度を示すために使用することができる。ＥＣ_５０は、最大効果の５０％をインビボで得るのに必要な血漿濃度も表す。ＥＣ_５０またはＩＣ_５０は、当該技術分野で公知のアッセイ、例えば、ＦＡＣＳ結合分析、ＦＡＣＳ分析（競合結合アッセイ）によるリガンド結合の阻害、細胞に基づくサイトカイン放出アッセイ、または増幅発光近接均質アッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ）などのバイオアッセイによって測定することができる。

【0172】

例えば、リガンド結合の遮断は、フローサイトメトリーを用いて試験することができる（実施例１も参照されたい）。ヒトＰＤ－１を発現するＣＨＯ細胞を接着培養フラスコから解離して、試験用の種々の濃度の試験用の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、及び一定濃度の標識ＰＤ－１タンパク質または標識ＰＤ－Ｌ２タンパク質（例えば、ビオチン標識ヒトＰＤ－Ｌ１－Ｆｃタンパク質またはビオチン標識ヒトＰＤ－Ｌ２－Ｆｃタンパク質）と混合することができる。抗ＰＤ－１抗体陽性対照、例えば、キイトルーダ（登録商標）を使用することができる。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。その後、一定濃度の標識ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２タンパク質を特異的に認識する抗体（例えば、ＰＥ／Ｃｙ５ストレプトアビジン二次抗体）を加え、室温で１５分間インキュベートする。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメトリーで分析する。非線形回帰を用いて、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）でデータを分析し、ＩＣ_５０を算出することができる。競合アッセイからの結果は、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂが標識ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２及びＰＤ－１の間の相互作用を阻害する能力を示すことができる。

【0173】

抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分の生物学的活性は、サイトカイン放出に対するＰＤ－１に基づく遮断アッセイによって試験することもできる（実施例１も参照されたい）。ＰＤ－１シグナル伝達は、典型的には、細胞増殖よりもサイトカイン産生に大きな影響を有し、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＩＬ－２産生に有意な影響を有する。従って、抗ＰＤ－１抗体によるＰＤ－１経路の遮断は、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ－γ放出、またはＩＬ－２分泌をモニターする種々のバイオアッセイを用いて試験することができる。ＰＤ－１が媒介する抑制性シグナル伝達も、ＴＣＲシグナル伝達の強度に依存しており、低レベルのＴＣＲ刺激においてより大きな阻害が送達される。この低減は、ＣＤ２８による共刺激により（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７－３４（２０００））またはＩＬ－２の存在により（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４－４３（２００２））克服され得る。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ－１に結合する際に（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７－３４（２０００））またはＩＬ－２の存在する際に（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４－４３（２００２））Ｔ細胞活性化を下方制御することが示された。

【0174】

例えば、ＰＤ－１エフェクター細胞（ヒトＰＤ－１タンパク質及びＮＦＡＴルシフェラーゼで安定してトランスフェクトさせたジャーカット細胞）及びＣＨＯ－Ｋ１／ヒトＣＤ２７４（ヒトＰＤ－Ｌ１を安定して発現するＣＨＯ－Ｋ１）をウェル中で混合する。抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを各ウェルに異なる濃度で添加する。バックグラウンド対照として抗体を使用することはできない。陰性対照（例えば、ヒトＩｇＧ４）及び陽性対照（例えば、キイトルーダ（登録商標））を使用することができる。３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーター中でインキュベーションの２４時間後、培地を各試験ウェルから取り出し、ＩＬ－２分泌測定（Ｃｉｓｂｉｏ）する。試験抗体ごとのＥＣ_５０値を測定し、これは、試験抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂが、ジャーカット細胞上のＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１の間の相互作用を遮断する能力を反映している（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用が、Ｔ細胞ＩＬ－２産生を阻害する）。

【0175】

抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分の生物学的活性はまた、ルシフェラーゼレポーター活性について、ＰＤ－１に基づく遮断レポーターアッセイによって試験することができる（実施例１も参照されたい）。エフェクター細胞は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１受容体－リガンド相互作用を破壊する際に誘導されるルシフェラーゼ構築物を含む。例えば、ＰＤ－１エフェクター細胞（ヒトＰＤ－１タンパク質及びＮＦＡＴルシフェラーゼで安定的にトランスフェクトしたジャーカット細胞）は、一晩載置した後、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを含む抗ＰＤ－１構築物の連続希釈でインキュベートし、ＰＤ－Ｌ１発現細胞（ＣＨＯ－Ｋ１／ヒトＣＤ２７４）を適当なＥ：Ｔ比で加えることができる。３７℃、５％ＣＯ_２での誘導の６時間後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を加えることができ、発光を判断することができる。結果は、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂがＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－１の間の相互作用を阻害する能力を示すことができる。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－１受容体により形質導入されたシグナルを遮断またはまたは拮抗する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２との相互作用からＰＤ－１を阻害するように、ＰＤ－１上のエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、抗体結合部位対ＰＤ－１リガンド結合部位の比が１：１より大きく、かつ、抗体の濃度が１０^－８Ｍより大きい条件下で、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２への結合を少なくとも約５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％、または９９．９％のいずれかまで減少させることができる。

【0177】

（ＩＩ）抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む構築物
抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物は、任意の可能な形式のものであり得る。

【0178】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物は、追加のポリペプチド配列、例えば、１つ以上の抗体部分（または抗原結合部分）、または免疫グロブリンのＦｃ断片をさらに含み得る。そのような追加のポリペプチド配列は、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂの（生物学的）特性に変化あるいはそれに影響を及ぼしても及ぼさなくてもよく、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂにさらなる機能性を追加しても追加しなくてもよい。いくつかの実施形態では、追加のポリペプチド配列は、本発明の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂに１つ以上の所望の特性または機能性を与える。

【0179】

いくつかの実施形態では、追加のポリペプチド配列は、第２のエピトープを特異的に認識する第２の抗原または第２の抗体部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、完全長抗体など）を含み得る。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、ＰＤ－１由来である。いくつかの実施形態では、第２のエピトープは、ＰＤ－１由来でない。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分（または第２の抗原結合部分）は、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂとして、ＰＤ－１上の同じエピトープを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分（または第２の抗原結合部分）は、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂとして、ＰＤ－１上の異なるエピトープを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、適宜リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、以下の「ペプチドリンカー」節に開示されるもののいずれか）を介して一緒に連結した、本明細書に記載の２つ以上の抗ＰＤ－１－ｓｄＡｂ部分を含む。一緒に連結した２つ以上の抗ＰＤ－１－ｓｄＡｂ部分は、同じか、または異なり得る。いくつかの実施形態では、適宜ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0180】

いくつかの実施形態では、追加のポリペプチド配列は、ＣＴＬＡ－４を特異的に認識する第２の抗原または第２の抗体部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、完全長抗体など）を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の１つ以上の抗ＰＤ－１－ｓｄＡｂ部分、及び、適宜リンカー（例えば、ペプチドリンカー、例えば、以下の「ペプチドリンカー」節に開示されるもののいずれか）を介して一緒に連結した１つ以上の抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂを含む。一緒に連結した１つ以上の抗ＰＤ－１－ｓｄＡｂ部分は、同じか、または異なり得、一緒に連結した１つ以上の抗ＣＴＬＡ－４－ｓｄＡｂは、同じか、または異なり得る。抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂは、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／１０５５０６及びＰＣＴ／ＣＮ２０１６／１０１７７７に開示されるものなど任意の形式であってもよく、それらの全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂは、Ａ３４３１１ＶＨ１１、ＡＳ０７０１４ＶＨ１１、またはＡＳ０７１８９ＴＫＤＶＨ１１のアミノ酸配列を含む。本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及び抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂを含む抗ＰＤ－１構築物は、例えば、Ｎ末端からＣ末端まで、（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_１－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ２）－Ｌ_２－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ）、（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_１－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ）－Ｌ_２－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ２）、（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ）－Ｌ_１－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_２－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ２）、（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_１－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２）－Ｌ_２－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ）、（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_１－（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ）－Ｌ_２－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２）、（抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ）－Ｌ_１－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１）－Ｌ_２－（抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２）などの任意の形式であり得る（Ｌ_１及びＬ_２は、同じかまたは異なる適宜リンカー、例えば、適宜ペプチドリンカーであり得る）。

【0181】

いくつかの実施形態では、追加のポリペプチド配列は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂそれ自体と比較して、本発明の抗ＰＤ－１構築物の抗体構築物半減期、溶解度もしくは吸収を増加させ、免疫原性もしくは毒性を低減し、望ましくない副作用を排除もしくは軽減し、及び／または他の有利な特性をそれに付与し、及び／またはその望ましくない特性を低減してもよい。そのような追加のポリペプチド配列のいくつかの非限定例は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（例えば、ＷＯ００／２７４３５を参照されたい）またはハプテン分子（例えば、循環抗体によって認識されるハプテン、例えば、ＷＯ９８／２２１４１を参照されたい）である。免疫グロブリンの断片（例えば、Ｖ_Ｈドメイン）を血清アルブミンまたはその断片に連結することが、抗体半減期を増加させ得ることを示した（例えば、ＷＯ００／２７４３５及びＷＯ０１／０７７１３７を参照されたい）。従って、いくつかの実施形態では、本発明の抗ＰＤ－１構築物は、適当なリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を適宜介して、血清アルブミン（またはその適当な断片）に連結した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、血清アルブミンドメインＩＩＩを少なくとも含む血清アルブミンの断片に連結することができる（ＰＣＴ／ＥＰ２００７／００２８１７を参照されたい）。抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－ＨＳＡ融合タンパク質は、例えば、（ｓｄＡｂ）_ｎ－ＨＳＡ（ｎは、少なくとも１の整数である）、ｓｄＡｂ－ＨＳＡ－ｓｄＡｂなどの任意の形式であり得る。いくつかの実施形態では、適宜ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0182】

抗ＰＤ－１重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）
いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、リンカー配列を適宜介して、１つ以上の（好ましくは、ヒト）Ｃ_Ｈ２及び／またはＣ_Ｈ３ドメイン、例えば、Ｆｃ断片に連結して、その半減期をインビボで増加させることができる。

【0183】

従って、いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、免疫グロブリン、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのＦｃ断片に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のいずれかのＦｃ配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＦｃ、例えば、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）Ｆｃ、ｈＩｇＧ２Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、抗体エフェクター機能が減少、最小化、または排除されたエフェクターレス、例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／またはＡＤＣＰ（抗体依存性細胞貪食）である。例えば、いくつかの実施形態では、エフェクターレスＦｃは、Ｃ_Ｈ２領域においてＮ２９７ＡまたはＤＡＮＡ突然変異（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、エフェクターレスＦｃは、Ｋ３２２Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、エフェクターレス（不活性）ＩｇＧ１ Ｆｃ、例えば、エフェクターレスｈＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、単量体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、二量体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、多重特異性かつ多価（例えば、二重特異性及び二価）であり、例えば、本明細書に記載の２つ以上の異なる抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む（図２６Ｂとして例示される）。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、単一特異性かつ多価（例えば、二価；図２６Ａとして例示される）である。

【0184】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及びＦｃ断片は、ペプチドリンカーによって適宜連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ（配列番号３６９）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、変異型ヒトＩｇＧ１ヒンジ（配列番号３６８）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ヒトＩｇＧ４ヒンジ（配列番号３６７）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ｈＩｇＧ２ヒンジである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つ、例えば、配列番号３７１、３７５、または３７６のアミノ酸配列を含む。

【0185】

従って、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；またはＣＤＲ領域において最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＤＲ１及び／またはＣＤＲ２内である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、または配列番号２８９～３２４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）の配列同一性を有するその変異体を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメイン、またはＶ_ＨＨドメインにおいて最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、Ｖ_ＨＨドメインにおけるアミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３などのＣＤＲ内である。いくつかの実施形態では、Ｖ_ＨＨドメインにおけるアミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのＦＲ１、及び／またはＦＲ２、及び／またはＦＲ３、及び／またはＦＲ４などのＦＲ内である。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つの両方のＣＤＲ及びＦＲ内である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識する２つのｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂであって、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのＣ末端は、適宜リンカーを介して免疫グロブリンのＦｃ断片のＮ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、同じである（図２６Ａとして例示される）。いくつかの実施形態では、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、異なる（図２６Ｂとして例示される）。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ２ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、単量体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、二量体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及びＦｃ断片は、ペプチドリンカーによって適宜連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0186】

いくつかの実施形態では、配列番号３２５～３６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。

【0187】

いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、または本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つと競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ（以下、「競合抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ」と呼ばれる）も提供する。競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３２５～３６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂと競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂと競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分（または抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物）と競合的にＰＤ－１に特異的に結合する、単離抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを提供する。いくつかの実施形態では、競合抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂのＦｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、競合抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ及びＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、競合抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0188】

多価及び／または多重特異性抗体
いくつかの実施形態では、単離抗ＰＤ－１構築物は、１つ以上の他の抗体部分または抗原結合部分（例えば、別のエピトープを特異的に認識する抗体部分）に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む。１つ以上の他の抗体部分は、任意の抗体または抗体断片形式、例えば、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂであり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗体部分（または抗原結合部分）は、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい；ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなっているＦａｂ断片及びＦ（ａｂ’）_２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。多重特異性抗体の概説については、Ｗｅｉｄｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１０（１）：１－１８，２０１３；Ｇｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３３（２）：６５－７９，２０１５；Ｓｔａｍｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，１（２）：１７２－１９８，２０１２を参照されたい。ダイアボディは、二価または二重特異的であり得る、２つの抗原結合性部位を含む抗体断片である。例えば、ＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０： ６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディについても、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。抗体断片は、種々の技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載されるように、無傷抗体の分解、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含む。

【0189】

多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ－イン－ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、それらに限定されない。また、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電気的操縦効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１－８３（１９８５）を参照されたい）；二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーを用いること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術を用いること（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を用いること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；ならびに、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているように、三重特異性抗体を調製すること；及びタンデム単一ドメイン抗体を含むポリペプチドを生成すること（例えば、米国特許出願第２０１１００２８６９５号；及びＣｏｎｒａｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１；２７６（１０）：７３４６－５０を参照されたい）によって、多重特異性抗体を作製することもできる。「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する改変抗体も、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。

【0190】

ペプチドリンカー
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物内の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ及び他の１つ以上の抗体部分（例えば、完全長抗体、ｓｄＡｂ、またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）は、ペプチドリンカーによって適宜連結することができる。抗ＰＤ－１構築物で使用されるペプチドリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度、及び／または他の特性は、１つ以上の特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性、またはアビディティを含むが、これらに限定されない特性にいくらかの影響を与え得る。例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にするために、より長いペプチドリンカーが選択され得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、隣接するドメインが互いに自由に動くように、可動性残基（例えば、グリシン及びセリン）を含む。例えば、グリシン－セリンダブレットは、適当なペプチドリンカーであり得る。

【0191】

ペプチドリンカーは、任意の適当な長さであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００以上のアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５未満のアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、または約１アミノ酸～約１００アミノ酸のいずれかである。

【0192】

ペプチドリンカーは、天然に生じる配列または非天然に生じる配列を有し得る。例えば、重鎖のみ抗体のヒンジ領域に由来する配列は、リンカーとして使用され得る。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ（配列番号３６９）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、変異ヒトＩｇＧ１ヒンジ（配列番号３６８）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ヒトＩｇＧ４ヒンジ（配列番号３６７）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ｈＩｇＧ２ヒンジである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、フレキシブルリンカーである。例示的なフレキシブルリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ（配列番号３７２）、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）_ｎ（配列番号３７３）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７４）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７５）、及び（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号３７６）、ｎは、少なくとも１つの整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で公知の他のフレキシブルリンカーが挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３７０（ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ）または３７１（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）のアミノ酸配列を含む。

【0193】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及び１つ以上の他の抗体部分（例えば、完全長抗体、ｓｄＡｂ、またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）を含む抗ＰＤ－１構築物は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、及び１つ以上の他の抗体部分（例えば、完全長抗体、ｓｄＡｂ、またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）を含む抗ＰＤ－１構築物は、多重特異性（例えば、二重特異性）である。多重特異性分子は、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する分子である（例えば、二重特異性抗体は、２つのエピトープに対して結合特異性を有する）。３つ以上の価数及び／または特異性を有する多重特異性分子も考慮される。例えば、三重特異性抗体は、調製することができる。Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。当業者であれば、本明細書に記載の個々の多重特異性分子の適切な機能を選択して、互いに組み合わせて、本発明の多重特異性の抗ＰＤ－１分子を形成できることが理解されるはずである。

【0194】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、多価であるが、単一特異性である、すなわち、抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分と同じＰＤ－１エピトープを特異的に認識する、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、及び少なくとも第２の抗体部分（例えば、完全長抗体、ｓｄＡｂ、またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分と同じＰＤ－１エピトープを特異的に認識する１つ以上の抗体部分は、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分と同じＣＤＲ及び／または同じＶ_ＨＨアミノ酸配列を含み得る。例えば、抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の２つ以上の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含み得、２つ以上の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、同じであり、ペプチドリンカー（複数可）によって適宜連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0195】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、多価及び多重特異性（例えば、二重特異性）である、すなわち、抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、及びＰＤ－１以外の第２の抗原を特異的に認識する少なくとも第２の抗体部分（例えば、完全長抗体、ｓｄＡｂ、またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分）、または本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分により認識される異なるＰＤ－１エピトープを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、ｓｄＡｂ、例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、または抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂである（例えば、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／１０５５０６及びＰＣＴ／ＣＮ２０１６／１０１７７７に開示されるもののいずれか、これらは、それら全体を参照することによって本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、第２の抗体部分のＮ末端及び／またはＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、三価及び二重特異性である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、及び第２の抗体部分（例えば、抗ＨＳＡ ｓｄＡｂ、抗ＣＴＬＡ－４ ｓｄＡｂ）を含み、第２の抗体部分は、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分の間にある。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ペプチドリンカー（複数可）によって適宜連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

【0196】

２つ以上の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む単一特異性または多重特異性の抗ＰＤ－１構築物は、本明細書に記載の単一抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のものと比較して、アビディティの増加を有し得る。

【0197】

完全長抗体に融合した抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む二重特異性抗体
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、第２の抗体部分に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含み、第２の抗体部分は、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及び完全長抗体は、適宜リンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して連結される。

【0198】

従って、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分、及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図１７として例示される）。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図１６として例示される）。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図１９として例示される）。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図１８として例示される）。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識する４つのｓｄＡｂ部分、及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の重鎖及び軽鎖の両方のＮ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図２０として例示される）。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識する４つのｓｄＡｂ部分、及び完全長抗体（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１を特異的に認識する完全長抗体（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含み；２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、第１の適宜リンカーを介して一緒に融合され、他の２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、第２の適宜リンカーを介して一緒に融合され、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ融合体の各セットのＣ末端は、第３及び第４の適宜リンカーを介して、完全長抗体の各重鎖のＮ末端に融合される、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する（図２１として例示される）。いくつかの実施形態では、４つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、同一である。いくつかの実施形態では、４つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、異なる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体のＦｃ断片は、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスｈＩｇＧ１ Ｆｃ、ｈＩｇＧ２ Ｆｃ、ｈＩｇＧ４ Ｆｃ、またはｈＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）である。いくつかの実施形態では、完全長抗体のＦｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、刺激性免疫チェックポイント分子のアクチベーターである。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、免疫チェックポイント阻害薬、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１の阻害剤（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープを特異的に認識する抗体）である。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂである。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、抗ＬＡＧ－３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂである。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、抗ＴＩＭ－３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体は、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体は、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体は、ＭＢＧ４５３である。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、



配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープを特異的に認識する）抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１完全長抗体は、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、及び配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１完全長抗体は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１完全長抗体は、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及び完全長抗体は、ペプチドリンカーによって適宜連結される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。

【0199】

ＴＩＧＩＴ
Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ：Ｖｓｔｍ３またはＷＵＣＡＭとしても知られる）は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫受容体である。ＴＩＧＩＴは、いくつかの機序を介してその阻害性免疫チェックポイント機能を発揮する。第１に、その主要リガンドＣＤ１５５（ＰＶＲ）に結合する際に、そのＩＴＩＭドメインにおけるＴＩＧＩＴのその後のリン酸化は、阻害シグナルを変換して、ＮＦ－κＢ経路を介してＴ細胞及びＮＫ細胞中のＩＦＮ－γ発現を下方調節する。第２に、ＴＩＧＩＴが、ＣＤ２２６とよりもＰＶＲと高親和性で相互作用する際に、ＴＩＧＩＴは、ＣＤ２２６と競合し、ＣＤ２２６によって変換された刺激性シグナルを減衰させる。第３に、ＰＶＲが樹状細胞上でＴＩＧＩＴに結合することで、ＩＬ－１０発現の上方調節及びＩＬ－１２発現の下方調節をもたらすため、樹状細胞の抗腫瘍免疫応答を損ない得る。最後に、ＴＩＧＩＴが、シスでＣＤ２２６に直接結合して、Ｔ細胞活性化に必要なＣＤ２２６二量体化を阻害することができることが、最近の研究により示された。したがって、ＴＩＧＩＴは、感染及びがんにおける免疫応答の重要な負の調節因子として作用し、ＴＩＧＩＴシグナル伝達の遮断は、がん治療用のＴ細胞及びＮＫ細胞免疫を強化するためのアプローチとして提案されている。本出願に適応することができる例示の抗ＴＩＧＩＴ抗体としては、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂが挙げられるが、これらに限定されない。

【0200】

ＴＩＧＩＴ及びＰＤ－１に対する二重特異性を含む構築物は、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１抗体」、「抗ＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１構築物」、「ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ抗体」、または「ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ」と以下で呼ばれる。

【0201】

ＬＡＧ－３
ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３、ＣＤ２２３）は、Ｔｒｅｇに対する作用、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接的な効果によって免疫応答を抑制するように働く（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２１（４）：５０３－１３；Ｇｒｏｓｓｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１１７（１１）：３３８３－９２）。本出願に適応することができる例示の抗ＬＡＧ－３抗体としては、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ（ＢＭＳ－９８６０１６）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0202】

ＬＡＧ－３及びＰＤ－１に対する二重特異性を含む構築物は、「抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－１抗体」、「抗ＬＡＧ－３／ＰＤ－１構築物」、「ＰＤ－１×ＬＡＧ－３抗体」、または「ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ」と以下で呼ばれる。

【0203】

ＴＩＭ－３
Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）は、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＨＡＶＣＲ２）としても知られる。それは、リンパ球活性の阻害、及び場合によってはリンパ球アネルギーの誘導に関連している免疫チェックポイント分子である（Ｐａｒｄｏｌｌ Ｄ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０１２ Ａｐｒｉｌ Ｖｏｌ．１２： ２５２）。ＴＩＭ－３は、ガレクチン９（ＧＡＬ９）の受容体であり、乳がんを含む様々な種類のがんで上方制御される。ＴＩＭ－３は、消耗ＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現される別の重要な阻害性受容体として同定されている。がんのマウスモデルでは、最も機能不全な腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＰＤ－１及びΤＩΜ－３と実際に同時発現することが示された。本出願に適応することができる例示の抗ＴＩＭ－３抗体としては、ＭＢＧ４５３が挙げられるが、これらに限定されない。

【0204】

ＴＩＭ－３及びＰＤ－１に対する二重特異性を含む構築物は、「抗ＴＩＭ－３／ＰＤ－１抗体」、「抗ＴＩＭ－３／ＰＤ－１構築物」、「ＰＤ－１×ＴＩＭ－３抗体」、または「ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ」と以下で呼ばれる。

【0205】

ＣＴＬＡ－４
細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、またはＣＤ１５２）は、ＣＤ２８のホモログであり、活性化Ｔ細胞上で上方調節される阻害性免疫チェックポイント分子として知られる。ＣＴＬＡ－４は、Ｂ７－１及びＢ７－２にも結合するが、ＣＤ２８よりも親和性が大きい。Ｂ７とＣＴＬＡ－４の間の相互作用は、Ｔ細胞活性化を弱め、これは、腫瘍免疫逃避の重要な機序を構成する。抗ＣＴＬＡ－４抗体療法は、黒色腫などの多くのがんに有望であることが示された。本出願に適応することができる例示の抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0206】

ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１に対する二重特異性を含む構築物は、「抗ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１抗体」、「抗ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１構築物」、「ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４抗体」、または「ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ」と以下で呼ばれる。

【0207】

ＰＤ－１
いくつかの実施形態では、第２の抗体部分は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるＰＤ－１エピトープと異なる、ＰＤ－１の別のエピトープを特異的に認識する、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる完全長抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を、異なるＰＤ－１エピトープを特異的に認識する抗ＰＤ－１完全長抗体と融合することで、抗体の効力を増加させる。本発明に適用することができる例示の抗ＰＤ－１抗体としては、ペムブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））及びニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0208】

ＰＤ－１に対する二重特異性を含む構築物は、「抗ＰＤ－１／ＰＤ－１抗体」、「抗ＰＤ－１／ＰＤ－１構築物」、「ＰＤ－１×ＰＤ－１抗体」、または「ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ」と以下で呼ばれる。

【0209】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つ（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ）、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む多重特異性または単一特異性の抗ＰＤ－１構築物、例えば、本明細書に記載のＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）と競合的にＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物（以下、「競合抗ＰＤ－１構築物」と呼ばれる）も提供する。

【0210】

抗ＰＤ－１多重特異性抗原結合タンパク質（ＭＡＢＰ）
いくつかの実施形態では、完全長抗体またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合断片に融合した本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物であって、抗ＰＤ－１構築物は、多重特異性である（以下、「多重特異性抗ＰＤ－１構築物」または「抗ＰＤ－１多重特異性抗原結合タンパク質（ＭＡＢＰ）」と呼ぶ）、単離抗ＰＤ－１構築物を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰは、二重特異性（以下、「二重特異性抗ＰＤ－１構築物」または「抗ＰＤ－１二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＡＢＰ）」と呼ぶ）である。抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、完全長抗体またはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合断片により認識される標的（複数可）とは異なるＰＤ－１に特異的に結合することで、より広範な標的化能力を与える。ｓｄＡｂの小さいサイズのため、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）は、完全長抗体または抗原結合断片成分のものと比較して、同様の分子量及び薬物動態特性を有し得る。例えば、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰは、臨床効果及び安全性が証明されたモノクローナル抗体に１つ以上の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を融合させることで設計し、多重特異性構築物の発現性を妨げることなく臨床的有用性の増加及び望ましい薬物動態特性を提供することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、適宜ペプチドリンカーによって完全長抗体または抗原結合断片に融合される。本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）は、ＰＤ－１を加えた種々の疾患関連エピトープまたは抗原の組み合わせ、例えば、免疫チェックポイント分子、細胞表面抗原（例えば、腫瘍抗原）、または炎症促進性分子との組み合わせによるＰＤ－１を標的にするように適用し、種々の疾患及び状態、例えば、がん、炎症、及び自己免疫疾患の治療に有用な薬剤を提供することができる。抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）は、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９３６４４に開示されるものなど任意の形式であってもよく、その全体を参照することによって本明細書に組み込まれる。

【0211】

例示的な抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ及びＢＡＢＰ
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、（ａ）本明細書に記載のＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む第２の抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１に特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される（以下、「ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＭＡＢＰ」または「ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ」で呼ばれる）。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、（ａ）本明細書に記載のＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む第２の抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される（以下、「ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＭＡＢＰ」または「ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ」と呼ばれる）。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、（ａ）本明細書に記載のＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む第２の抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される（以下、「ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＭＡＢＰ」または「ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ」と呼ばれる）。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、（ａ）本明細書に記載のＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む第２の抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される（以下、「ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＭＡＢＰ」または「ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ」と呼ばれる）。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、（ａ）本明細書に記載のＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む第２の抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープに特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される（以下、「ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰ」または「ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ」と呼ばれる）。

【0212】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂは、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ３及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図１７に示す構造を有する。

【0213】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図１６に示す構造を有する。

【0214】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｌ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図１９に示す構造を有する。

【0215】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｌ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図１８に示す構造を有する。

【0216】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分－Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、同じである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、異なる。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｌ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、ＶＨ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、図２０に示す構造を有する。

【0217】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、同じである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、異なる。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分、及び／またはＶＨ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、図２１に示す構造を有する。

【0218】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図２２に示す構造を有する。

【0219】

いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含むポリペプチドを含み、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合するｓｃＦｖを一緒に形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含むポリペプチドを含み、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合するｓｃＦｖを一緒に形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＬＡＧ－３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＴＩＭ－３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖを形成するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ、及び／またはｓｃＦｖ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、ポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＢＡＢＰは、図２３に示す構造を有する。

【0220】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を形成し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、同じである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、異なる。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＬＡＧ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＴＩＭ－３に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ１及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分、及び／またはＣ_Ｌ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、図２４に示す構造を有する。

【0221】

いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、ｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を提供する。いくつかの実施形態では、（ａ）Ｎ末端からＣ末端において、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ－抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３を含む第１のポリペプチド；及び（ｂ）Ｎ末端からＣ末端において、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分－Ｃ_Ｌを含む第２のポリペプチドを含み、ｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈは、第２のエピトープ（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合し、及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ1部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ2部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分の各々は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、同じである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ２部分は、異なる。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＬＡＧ－３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＴＩＭ－３に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ（またはｓｃＦｖを形成するＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）は、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖを形成するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ、及び／またはｓｃＦｖ及び抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ１部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを適宜介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃ、エフェクターレスＩｇＧ１ Ｆｃ、ＩｇＧ２ Ｆｃ、ＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）由来、例えば、配列番号３６３～３６５のいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、第１のポリペプチドの２つの同一のコピー、及び第２のポリペプチドの２つの同一のコピーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）は、図２５に示す構造を有する。

【0222】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つ（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む多重特異性（例えば、二重特異性）または単一特異性の抗ＰＤ－１構築物、例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１構築物（例えば、ＭＡＢＰまたはＢＡＢＰ）と競合的にＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）（以下、「競合抗ＰＤ－１構築物」、「競合抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ」、または「競合抗ＰＤ－１ ＢＡＢＰ」と呼ばれる）も提供する。

【0223】

（ＩＩＩ）抗ＰＤ－１構築物抗体変異体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ／ＢＡＢＰ）のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードする核酸配列に適切な改変を導入するか、またはペプチド合成によって調製し得る。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内における残基の欠失、及び／または挿入、及び／または置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するために、欠失、挿入及び置換のいかなる組み合わせも行うことができる。

【0224】

ａ）置換、挿入、欠失、及び変異体
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体を提供する。置換突然変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ（またはＣＤＲ）及びＦＲが含まれる。保存的置換は、「好ましい置換」という見出しの下で表２に示す。より実質的な変化は、「例示的な置換」という見出しの下で表２に提供し、これは、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下にさらに記載する通りである。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、生成物を所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、低減した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングすることができる。

【表2】

【0225】

アミノ酸は、側鎖の共通する特性に従って分類することができる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0226】

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

【0227】

置換変異体の１つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的に、さらなる研究のために選択される得られる変異体（複数可）は、ある特定の生物学的特性（例えば、増加した親和性、低減した免疫原性）において、親抗体に比して改変（例えば、改善）されているか、及び／または、親抗体のある特定の生物学的特性が実質的に保持されている。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載するようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡単に言えば、１つ以上のＨＶＲ残基を突然変異させ、ファージ上で変異体抗体を提示させ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。

【0228】

変化（例えば、置換）を、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて起こさせてもよい。そのような変化を、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度に突然変異を起こすコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｐ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）によってコードされる残基において起こさせてもよく、得られた変異体Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌを結合親和性について試験する。二次ライブラリーを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏＭ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリングまたはオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子に多様性を導入する。次いで、二次ライブラリーを作製する。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有するあらゆる抗体変異体を同定する。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化するＨＶＲ特異的なアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデル化を用いて具体的に同定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３は標的とされることが多い。

【0229】

いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変更が、抗体が抗原に結合する能力を実質的に低減させない範囲で、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変化（例えば、本明細書で提供される保存的置換）を、ＨＶＲ内で起こさせてもよい。そのような変化は、例えば、HVR「ホットスポット」またはＣＤＲの外であってもよい。上で提供された変異体Ｖ_ＨＨ配列のいくつかの実施形態では、各ＨＶＲは変化していないか、１、２、または３以下のアミノ酸置換しか含まない。

【0230】

突然変異誘発のための標的とし得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基または一群の標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕのような荷電残基）を同定し、それを中性または負電荷を持つアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置換して、抗体の、抗原との相互作用が影響を受けるか否かを決定する。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に、さらなる置換を導入してもよい。あるいは、またはさらに、抗体と抗原の間の接触点を同定するために、抗原－抗体複合体の結晶構造を用いることができる。このような接触残基及びその隣接残基を、置換の候補として標的にしても、排除してもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含むか否かを決定してもよい。

【0231】

アミノ酸配列挿入には、１残基から、１００残基またはそれ以上を含有するポリペプチドまでに及ぶ長さのアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入も含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体のＮ末端またはＣ末端への、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清中半減期を増加させるポリペプチドの融合が含まれる。

【0232】

ｂ）グリコシル化変異体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＰＤ－１構築物を変化させて、構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによって、簡便に達成することができる。

【0233】

抗ＰＤ－１構築物がＦｃ領域（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＭＡＢＰ、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰ）を含む場合、そこに結合する糖質を変化させてもよい。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、分岐した二分岐オリゴ糖を含み、これは一般的には、Ｆｃ領域のＣ_Ｈ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ連結によって結合される。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、ならびにフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、本出願の抗ＰＤ－１構築物におけるオリゴ糖の改変は、一定の改善された特性を有する抗体変異体を作成するために行われ得る。

【0234】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠く糖質構造を有する、抗ＰＤ－１構築物抗体変異体を提供する。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合型、混成型、及び高マンノース型構造）の合計に比しての、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかしながら、抗体における軽微な配列変異のため、Ａｓｎ２９７は、２９７位の上流側または下流側約±３アミノ酸、すなわち２９４位と３００位の間に位置する場合もあり得る。そのようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；ＹａＭａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を製造することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ， Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，特に、実施例１１）、及びアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）などのノックアウト細胞株が挙げられる。

【0235】

抗ＰＤ－１構築物変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖とともにさらに与えられる。そのような抗体変異体は、フコシル化を減少させ、及び／またはＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）；及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。そのような抗体変異体は、ＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。そのような抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。

【0236】

ｃ）Ｆｃ領域変異体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＭＡＢＰ、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰ）のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸改変を導入することにより、Ｆｃ領域変異体を生成させてもよい。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。

【0237】

いくつかの実施形態では、本出願は、インビボにおける抗ＰＤ－１構築物の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＭＡＢＰ、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＭＡＢＰ、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰ）変異体を意図している。インビトロ及び／またはインビボでの細胞傷害性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／またはＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、恐らくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する一次細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４ページの表２に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるように、インビボで、例えば、動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定ではまた、当該技術分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照されたい）。

【0238】

エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２つ以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。

【0239】

ＦｃＲへの改善または減少させた結合を持つある特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい）。

【0240】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／または３３４における置換（残基のＥＵ番号付け）を含む。

【0241】

本明細書に記載のＦｃ変異体のいずれかまたはそれらの組み合わせを含む抗ＰＤ－１構築物（例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、完全長抗体に融合した抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、または抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ／ＢＡＢＰ）が企図される。

【0242】

ｄ）システイン改変抗体変異体
いくつかの実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗ＰＤ－１構築物、例えば、「チオＭＡｂ」を作成することが望まれ得る。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲートを作成するために、例えば、薬物部分またはリンカー－薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。いくつかの実施形態では、以下の残基のいずれか１つ以上がシステインで置換され得る：重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗ＰＤ－１構築物は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。

【0243】

ＩＩＩ．医薬組成物
本明細書に記載されるようにＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂを含む抗ＰＤ－１構築物のいずれか１つ（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））、及び適宜、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物が本発明でさらに提供される。医薬組成物は、所望の純度を有する本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物を、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤と適宜混合することにより（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製することができる。

【0244】

医薬組成物は、安定的であることが好ましく、その中で、本明細書に記載の抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物は、その物理的及び化学的安定性ならびに保管時の完全性を本質的に保持する。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技術が当該技術分野で利用でき、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。

【0245】

医薬組成物をインビボでの投与のために使用するために、それらは無菌でなければならない。医薬組成物を、無菌ろ過膜を通じたろ過により無菌にしてもよい。本明細書における医薬組成物は、一般的に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針により穴を開けることができるストッパーを有する静脈用溶液のバッグまたはバイアル中に置く。

【0246】

投与経路は、公知の受け入れられた方法に従って、例えば、適した様式での長期間にわたる単回または複数回のボーラスまたは注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、または関節内経路による注射または注入、局所投与、吸入あるいは持続放出または延長放出の手段による。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与、例えば、腫瘍内に投与される。

【0247】

ここで、医薬組成物は、治療される特定の効能に必要な１つ以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。あるいは、またはさらに、組成物は、細胞毒性剤、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、または成長阻害剤を含み得る。そのような分子は、好適には、意図した目的に有効な量で組み合わせて存在する。

【0248】

ＩＶ．ＰＤ－１関連疾患の治療方法
本明細書に記載されるようにＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））、及びその組成物（例えば、医薬組成物）は、種々の用途、例えば、診断、分子アッセイ、及び治療において有用である。

【0249】

本発明の一態様は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物を含む医薬組成物の有効量を個体に投与することを含む、それを必要とする個体におけるＰＤ－１関連疾患もしくは状態の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、がん、例えば、固形腫瘍（例えば、大腸がん）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、病原性感染、例えば、ウイルス感染である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、免疫関連疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、Ｔ細胞機能不全障害と関連する。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞アネルギーまたはサイトカインを分泌し、増殖しまたは細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、未解明な急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物は、それを必要とする対象における免疫応答または機能の増加、増強、または刺激に使用され得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患（例えば、がん、免疫関連疾患）は、免疫チェックポイント分子モノ遮断に部分的な耐性を示す（例えば、抗ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１抗体単剤治療に部分的な耐性を示す）。

【0250】

本発明は、一部、少なくともいくつかの態様では、薬学的に許容可能な担体または賦形剤と一緒に、単体または別の治療法と任意の組み合わせのいずれかで投与することができる、タンパク質構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））、核酸分子及び／またはそれをコードするベクター、核酸分子及び／またはそれをコードするベクターを含む宿主細胞を企図している。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物の投与前に、それらは、当該技術分野で周知の適当な医薬担体及び賦形剤と組み合わせてもよい。本開示に従って調製された組成物は、がんの治療またはがんの悪化の遅延、または、それを必要とする対象における免疫応答または機能の増加、増強、または刺激に使用することができる。

【0251】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））を含む医薬組成物の有効量を個体に投与することを含む、ＰＤ－１関連疾患（例えば、がん、免疫関連疾患、例えば、Ｔ細胞機能不全障害と関連するもの）の治療方法であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び適宜薬学的に許容可能な担体を含む、ＰＤ－１関連疾患の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍（例えば、大腸がん）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患は、免疫関連疾患である。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、Ｔ細胞機能不全障害と関連する。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞アネルギーまたはサイトカインを分泌し、増殖しまたは細胞溶解活性を果たす能力の減少によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患は、未解明な急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１関連疾患（例えば、がん、免疫関連疾患）は、免疫チェックポイント分子モノ遮断に部分的な耐性を示す（例えば、抗ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１抗体単剤治療に部分的な耐性を示す）。いくつかの実施形態では、方法は、追加の療法（例えば、がん療法、例えば、外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせ）を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の療法は、例えば、免疫調節薬を含む第２の医薬組成物の有効量を個体に投与することによる免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、免疫チェックポイント阻害薬、例えば、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＬＡＧ－３、抗ＴＩＭ－３、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、全身投与される（例えば、静脈内または腹腔内）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与される（例えば、腫瘍内）。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、がんの治療方法は、以下の生物学的活性：（１）がん細胞の死滅（バイスタンダー死滅を含む）；（２）がん細胞の増殖の阻害；（３）腫瘍における免疫応答の誘導；（４）腫瘍サイズの減少；（５）がんを有する個体における１つ以上の症状の軽減；（６）腫瘍転移の阻害；（７）生存の延長；（８）がんの進行までの時間の延長；及び（９）がんの再発の可能性の防止、阻害、または低減の１つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介されるがん細胞の死滅方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの腫瘍細胞死率を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介されるがん細胞の死滅方法は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの（抗ＰＤ－１構築物をコードする腫瘍溶解度ＶＶによって非感染な）バイスタンダー腫瘍細胞死率を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介される腫瘍サイズの減少方法は、腫瘍サイズの少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれか）を減らすことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介される腫瘍転移の阻害方法は、転移の少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のいずれか）を阻害することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介される個体（例えば、ヒト）の生存の延長方法は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、または２４ヵ月のいずれかまで個体の生存率を延ばすことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物によって仲介されるがんの進行までの時間の延長方法は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間のいずれかまでがんの進行までの時間を延ばすことができる。いくつかの実施形態では、免疫関連疾患の治療方法は、対象における免疫応答または機能の増加、増強、または刺激することができる。いくつかの実施形態では、免疫応答または機能は、対象におけるエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、及び／または（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させることによって増加、増強、または刺激することができる。

【0252】

いくつかの実施形態では、方法は、異常なＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがん（非限定的な例としては、血液がん及び／または固形腫瘍が挙げられる）の治療に適当である。本発明の抗体を使用して増殖が阻害され得るいくつかのがんは、一般的に、免疫療法に応答するがんを含む。治療のための他のがんの非限定的な例としては、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓がん（例えば、明細胞がん腫）、前立腺がん（例えば、ホルモン抵抗性前立腺がん）、乳がん、大腸がん及び肺がん（例えば、非小細胞性肺がん）、胃がん、卵巣がん、及び膠芽腫が挙げられる。さらに、本発明は、本発明の抗体を使用して増殖が阻害され得る難治性または再発性悪性腫瘍を含む。本発明の方法を使用して治療し得る他のがんの例としては、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭部または頸部のがん、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮内膜のがん腫、子宮頸のがん腫、腟のがん腫、外陰のがん腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む慢性または急性白血病、幼児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱のがん、腎臓または尿管のがん、腎盂のがん腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘導されるがんを含む環境的に誘導されるがん、及び前記がんの組み合わせが挙げられる。本発明は、転移性がん、特に、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２を発現する転移性がんの治療にも有用である。いくつかの実施形態では、異常なＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがんは、ＰＤ－１モノ遮断に部分的な耐性を示す（例えば、抗ＰＤ－１抗体単剤治療に部分的な耐性を示す）、または免疫チェックポイント阻害薬単剤治療（例えば、抗ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４抗体単剤治療）に部分的な耐性を示す。そのような場合には、本明細書に記載のＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）などの抗ＰＤ－１ ＭＡＢＰ（例えば、ＢＡＢＰ）を使用することができる。

【0253】

本明細書に記載の方法は、固形がん及び液体がんの両方を含む、種々のがんの治療に適当である。方法は、早期がん、非転移性がん、原発性がん、進行がん、局所進行がん、転移性がん、または寛解のがんを含む、全てのステージのがんに適用可能である。本明細書に記載の方法は、アジュバント設定またはネオアジュバント設定において、第１の療法、第２の療法、第３の療法、または当該技術分野で公知の他の種類のがん治療、例えば、化学療法、外科手術、ホルモン療法、放射線、遺伝子療法、免疫療法（例えば、Ｔ細胞療法、または免疫調節薬の投与）、骨髄移植、幹細胞移植、標的治療、凍結療法、超音波療法、光線力学療法、ラジオ波焼灼療法などとの併用療法として使用され得る（すなわち、方法は、一次／根治治療の前に実施してもよい）。いくつかの実施形態では、方法を用いて、以前に治療されている個体を治療する。いくつかの実施形態では、がんは、前治療に無効であった。いくつかの実施形態では、方法を用いて、以前に治療されていない個体を治療する。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害薬単剤治療に部分的な耐性を示す（例えば、抗ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４抗体単剤治療に部分的な耐性を示す）。

【0254】

従って、いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物（例えば、異常なＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ－３／ＴＩＭ－３／ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１発現、活性、及び／またはシグナリングに対応するＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＭＡＢＰまたはＢＡＢＰ）を含む医薬組成物の有効量を個体に投与することを含む、がん（例えば、がん腫または腺がん、例えば、異常なＰＤ－１発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがん、及び／または異常なＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ－３／ＴＩＭ－３／ＣＴＬＡ－４発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがん）の治療方法であって、（ａ）配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含む第１の抗原結合部分、及び（ｂ）第２のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗原結合部分を含み、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、第２の免疫チェックポイント分子（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープ））に特異的に結合する抗原結合部位を一緒に形成し、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、互いに融合される；及び適宜薬学的に許容可能な担体を含む、がんの治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｖ_Ｈを含む重鎖、及びＶ_Ｌを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合部分は、重鎖のＮ末端、軽鎖のＮ末端、Ｆｃ領域のＮ末端、重鎖のＣ末端、または軽鎖のＣ末端で第２の抗原結合部分に融合される。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、完全長４本鎖抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原結合部分は、ＦａｂまたはｓｃＦｖを含む第２の抗原結合部分のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の抗原結合部分は、ペプチドリンカー、例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して適宜融合される。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、（例えば、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ１由来の）Ｆｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、配列番号３６３～３６５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体に融合したＰＤ－１を特異的に認識するｓｄＡｂ部分を含む単離抗ＰＤ－１構築物（例えば、異常なＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ－３／ＴＩＭ－３／ＣＴＬＡ－４／ＰＤ－１発現に対応するＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、またはＰＤ－１（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分によって認識されるものとは異なる第２のＰＤ－１エピトープを特異的に認識する抗体）を含む医薬組成物の有効量を個体に投与することを含む、がん（例えば、がん腫または腺がん、例えば、異常なＰＤ－１発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがん、及び／または異常なＴＩＧＩＴ／ＬＡＧ－３／ＴＩＭ－３／ＣＴＬＡ－４発現、活性、及び／またはシグナリングを有するがん）の治療方法であって、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７～７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号１０９～１４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び配列番号１８１～２１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または最大で約３つ（例えば、約１、２、または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び適宜薬学的に許容可能な担体を含む、がんの治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７７のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３７８のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＴＩＧＩＴ抗体である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３７９のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８０のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＬＡＧ－３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ＭＢＧ４５３由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８１のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８２のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、配列番号３８１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＴＩＭ－３抗体である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、イピリムマブ（例えば、ヤーボイ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８３のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８４のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは、ペンブロリズマブ（例えば、キイトルーダ（登録商標））またはニボルマブ（例えば、オプジーボ（登録商標））由来である。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号３８５のアミノ酸配列のＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含み、及びＶ_Ｌは、配列番号３８６のアミノ酸配列のＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分とＰＤ－１の間の結合のＫ_ｄは、約１０^－５Ｍ～約１０^－１２Ｍ（例えば、約１０^－７Ｍ～約１０^－１２Ｍ、または約１０^－８Ｍ～約１０^－１２Ｍ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ、キメラ、ヒト、部分ヒト化、または完全ヒト化である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の重鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＮ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の軽鎖の少なくとも１本のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、４つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含み、各抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分のＣ末端は、完全長抗体の各鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１構築物は、４つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分を含み、２つの抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は一緒に融合され、それは、完全長抗体の各重鎖のＮ末端にさらに融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分は、配列番号２８９～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶ_ＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ部分及び完全長抗体は、ペプチドリンカー（例えば、配列番号３６７～３７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドリンカー）によって適宜連結される。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍（例えば、大腸がん）である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、全身投与される（例えば、静脈内または腹腔内）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与される（例えば、腫瘍内）。いくつかの実施形態では、方法は、追加のがん療法（例えば、外科手術、放射線、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、またはそれらの組み合わせ）を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、個体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント分子モノ遮断に部分的な耐性を示す（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体単剤治療に部分的な耐性を示す）。

【0255】

本出願の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される特定用途に応じて変わり得る。適切な投与量または投与経路の決定は、当業者の能力の十分に範囲内である。動物実験は、ヒトの治療に対する有効量の決定において、信頼性のあるガイダンスを提供する。有効量の外挿は、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．「Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ Ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ」，Ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，ｐｐ．４２－４６に著される原則に従って実施することができる。

【0256】

再溶解製剤または液体製剤などが挙げられるが、これらに限定されない本出願の医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））による治療を必要とする個体、好ましくはヒトに、既知の方法、例えば、単回または一定時間にわたる持続的注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、静脈内（ｉ．Ｖ．）、関節内、滑液内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路によって投与される。再溶解製剤は、本明細書に記載の凍結乾燥した抗ＰＤ－１構築物を、タンパク質が全体に分散されるように希釈剤中に溶解させることによって調製することができる。本出願での使用に適当な例示的な薬学的に許容可能な（ヒトへの投与について安全かつ非毒性な）希釈剤としては、滅菌水、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、無菌生理食塩液、リンゲル液、またはデキストロース溶液、または塩及び／または緩衝剤の水溶液が挙げられるが、これらに限定されない。

【0257】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下（すなわち、皮膚の下）投与により個体に投与される。そのような目的のために、医薬組成物は、シリンジを使用して注射してもよい。しかしながら、医薬組成物の投与のための他のデバイス、例えば、注射デバイス；インジェクターペン；オートインジェクターデバイス、無針デバイス；及び皮下パッチ送達システムが利用可能である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、個体の静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、点滴静注などの注入によって個体に投与される。免疫療法の注入技術は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６（１９８８）を参照されたい）。

【0258】

Ｖ．調製方法
本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ）は、当該技術分野で公知の任意の方法を用いて、または本明細書に記載されるように調製され得る。実施例１～３も参照されたい。いくつかの実施形態では、（ａ）コードされた抗ＰＤ－１構築物の発現に効果的な条件下で本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物をコードする単離核酸またはベクターを含むの宿主細胞を培養すること；及び発現された抗ＰＤ－１構築物を前記宿主細胞から得ることを含む、抗ＰＤ－１構築物の産生方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、（ａ）本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物をコードする単離核酸またはベクターを含む宿主細胞を産生する工程をさらに含む。

【0259】

ｓｄＡｂの調製方法は記載されている。例えば、Ｅｌｓ Ｐａｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ，２０１４；９（３）：６７４を参照されたい。ｓｄＡｂ（例えば、Ｖ_ＨＨ）は、当該技術分野で公知の方法、例えば、ラクダ科の種（例えば、ラクダまたはラマ）を免疫化して、それからハイブリドーマを得ることによって、または当該技術分野で公知の分子生物学技術を用いて単一ドメイン抗体のライブラリーをクローニングして、未選択ライブラリーの個別クローンによるＥＬＩＳＡによるその後の選択によって、またはファージディスプレイを用いることによって得られ得る。

【0260】

ｓｄＡｂの組み換え産生の場合、単一ドメイン抗体をコードする核酸を単離し、複製可能なベクターに挿入し、さらにクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現させる。単一ドメイン抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）容易に単離され、配列決定される。多くのベクターが入手可能である。ベクターの選択は、使用される宿主細胞に部分的に依存する。一般的に、好ましい宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般的に、哺乳動物）起源のいずれかのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物をコードする単離核酸は、配列番号２５３～２８８のいずれか１つの核酸配列を含む。

【0261】

１．原核細胞における組み換え産生
真核生物での発現のために、ベクター成分は、一般的に、限定はされないが、以下：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、ならびにエンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列の１つ以上を含む。

【0262】

ａ）シグナル配列成分
真核生物宿主における使用のためのベクターはまた、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドをコードするインサートを含んでもよい。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞により認識され、処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものである。哺乳動物細胞での発現において、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルを利用可能である。

【0263】

そのような前駆体領域のためのＤＮＡを、リーディングフレーム中で、本出願の抗体をコードするＤＮＡに連結する。

【0264】

ｂ）複製起点
一般的に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターのために必要とされない（初期プロモーターを含むという理由だけでＳＶ４０起点を典型的に使用してもよい）。

【0265】

ｃ）選択遺伝子成分
発現ベクター及びクローニングベクターは、選択遺伝子（選択可能マーカーとも呼ばれる）を含んでもよい。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素（例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、またはテトラサイクリン）に対して耐性を付与する、（ｂ）栄養要求性欠損を補完する、または（ｃ）複雑な培地から利用可能ではない決定的な栄養分を供給するタンパク質をコードする（例えば、バシラス属についてのＤアラニンラセマーゼをコードする遺伝子）。

【0266】

選択計画の１例では、宿主細胞の増殖を停止させるための薬物を利用する。異種遺伝子を用いて成功裏に形質転換されるそれらの細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、このように選択計画中に生存する。そのような優性選択の例では、薬物（ネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシン）を使用する。

【0267】

哺乳動物細胞のための適した選択マーカーの別の例は、本出願の抗体をコードする核酸を取り込む能力がある細胞の同定を可能にするものである（例えば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネインＩ及びＩＩ、好ましくは霊長類のメタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなど）。

【0268】

例えば、ＤＨＦＲ選択遺伝子を用いて形質転換された細胞は、最初に、メトトレキサート（Ｍｔｘ）（ＤＨＦＲの競合的アンタゴニスト）を含む培養液中で形質転換体の全てを培養することにより同定される。野生型ＤＨＦＲを用いた場合での適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）である。

【0269】

あるいは、ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及び別の選択マーカー、例えば、アミノグリコシド３’ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などを用いて形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含む野生型宿主）を、選択マーカー用の選択薬剤（例えば、アミノグリコシド抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またはＧ４１８など）を含む培地中での細胞増殖により選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。

【0270】

ｄ）プロモーター成分
発現ベクター及びクローニングベクターは、通常、宿主生物により認識され、所望のポリペプチド配列をコードする核酸に機能的に連結されたプロモーターを含む。事実上、全ての真核生物遺伝子が、転写が開始される部位から約２５～３０塩基上流に位置付けられるＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、そこでＮは任意のヌクレオチドであり得る。大半の真核生物の３’末端は、ＡＡＴＡＡＡ配列であり、それはコード配列の３’末端へのポリＡテールの付加のためのシグナルであり得る。これらの配列の全てを、真核生物発現ベクター中に挿入してもよい。

【0271】

原核生物宿主との使用のために適した他のプロモーターは、ｐｈｏＡプロモーター、ラクタマーゼ及びラクトースプロモーターシステム、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、及びハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモーターなど）を含む。しかしながら、他の公知の細菌プロモーターが適する。細菌システムにおける使用のためのプロモーターはまた、抗体をコードするＤＮＡに機能的に連結されたＳｈｉｎｅ－Ｄａｌｇａｒｎｏ（Ｓ．Ｄ．）配列を含み得る。

【0272】

哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの抗体ポリペプチド転写は、例えば、以下のウイルスのゲノムから得られるプロモーターにより制御される：例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及び最も好ましくははサルウイルス４０（ＳＶ４０）、異種哺乳動物プロモーターから、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーターから（そのようなプロモーターが宿主細胞系に適合するという条件で）。

【0273】

ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含むＳＶ４０制限断片として便利に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として便利に得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるためのシステムが、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。このシステムの改変が、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。また、マウス細胞における単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのヒトインターフェロンｃＤＮＡの発現に関するＲｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：５９８－６０１（１９８２）を参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列をプロモーターとして使用することができる。

【0274】

ｅ）エンハンサーエレメント成分
より高い真核生物による本出願の抗体をコードするＤＮＡの転写は、しばしば、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することにより増加される。多くのエンハンサー配列が、現在、哺乳動物遺伝子から公知である（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリン）。典型的には、しかしながら、真核細胞ウイルスからのエンハンサーが使用され得る。例としては、複製開始点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（１００～２７０ｂｐ）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについては、Ｙａｎｉｖ，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７－１８（１９８２）も参照されたい。エンハンサーは、抗体コード配列に対する位置５’または３’でベクター中にスプライシングされ得るが、しかし、好ましくはプロモーターから部位５’に位置付けられる。

【0275】

ｆ）転写終結成分
真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物からの有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結のために及びｍＲＮＡを安定化させるために必要な配列も含み得る。そのような配列は、一般的に、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’及び、時には３’の非翻訳領域から利用可能である。これらの領域は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びその中で開示される発現ベクターを参照されたい。

【0276】

ｇ）宿主細胞の選択及び形質転換
本明細書におけるベクター中でＤＮＡをクローン化または発現するための適した宿主細胞は、本明細書に記載のより高い真核細胞（脊椎動物宿主細胞を含む）を含む。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、通常の手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、以下：ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚腎臓株（２９３細胞または浮遊培養中での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；仔ハムスター腎細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳癌（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝細胞癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。

【0277】

宿主細胞を、抗体産生のための上記の発現またはクローニングベクターを用いて形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜改変された従来の栄養培地中で培養する。

【0278】

ｈ）宿主細胞の培養
本出願の抗体を産生するために使用される宿主細胞を、種々の培地中で培養してもよい。商業的に利用可能な培地、例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などが、宿主細胞を培養するために適する。また、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；または同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国特許Ｒｅ．３０，９８５に記載される培地のいずれかを宿主細胞用の培養液として使用してもよい。これらの培地のいずれかに、必要に応じて、以下を補給してもよい：ホルモン及び／または他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子など）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸）、緩衝剤（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物）、微量元素（通常マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物と定義される）、及びグルコースまたは等価のエネルギー供給源。任意の他の必要な補給剤を、また、当業者に公知であり得る適切な濃度で含めてもよい。培養条件、例えば、温度、ｐＨなどは、発現のために選択された宿主細胞と共に以前に使用されたものであり、当業者に明らかであろう。

【0279】

ｉ）タンパク質精製
組み換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内に、ペリプラズム間隙中に産生され得る、または培地中に直接的に分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、最初の工程として、微粒子細片、宿主細胞または溶解断片のいずれかを、例えば、遠心分離または限外ろ過により除去する。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）には、Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズム間隙に分泌される抗体を単離するための手順が記載される。簡単に説明すると、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在において約３０分にわたり溶解させる。細胞片を遠心分離により除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合、そのような発現系からの上清を、一般的に、商業的に利用可能なタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外ろ過ユニットを使用して最初に濃縮する。プロテアーゼ阻害剤、例えば、ＰＭＳＦなどを、先の工程のいずれかに含め、タンパク質分解を阻害してもよく、抗生物質を含め、外来性混入菌の増殖を予防してもよい。

【0280】

細胞から調製された抗体組成物を、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用し、１、２、または４の重鎖を含むヒト免疫グロブリンに基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。プロテインＧが全てのマウスアイソタイプについて及びヒト３について推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着するマトリクスは、最もしばしばアガロースであるが、しかしながら、他のマトリクスを利用可能である。機械的に安定なマトリクス、例えば、制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレン－ジビニル）ベンゼンによって、アガロースを用いて達成することができるよりも速い流速及び短い処理時間が可能になる。抗体がＣ_Ｈ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ）が精製のために有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラムなど）上でのヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫安塩析も、回収される抗体に依存して利用可能である。

【0281】

任意の予備精製工程（複数可）に続き、目的の抗体及び混入物を含む混合物を、ｐＨが約２．５～４．５の溶出バッファーを使用し、好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩）で実施される、低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供してもよい。

【0282】

２．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、一般的に、関連抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓ．ｃ．）または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により動物において産生される。関連抗原を、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤に、二機能性薬剤または誘導体化薬剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通じた抱合）、Ｎヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を通じて）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ_２、またはＲ^１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、Ｒ及びＲ^１は、非依存的により低いアルキル基である）を使用して抱合することが有用であり得る。用いてもよいアジュバントの例としては、フロイント完全アジュバント及びＭＰＬ－ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコラート）が挙げられる。免疫化プロトコルは、過度の実験なしに当業者により選択され得る。

【0283】

動物を、抗原、免疫原性コンジュゲート、または誘導体に対して、例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質またはコンジュゲート（それぞれウサギまたはマウス用）を３容積のフロイント完全アジュバントと組み合わせることにより、及び、溶液を複数部位に皮内注射することにより免疫化する。１ヶ月後、動物に、フロイント完全アジュバント中のペプチドまたはコンジュゲートの最初の量の１／５～１／１０を用いて、複数部位での皮下注射により追加免役する。７～１４日後、動物を出血させ、血清を抗体価についてアッセイする。動物に、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。コンジュゲートも、タンパク質融合体として組み換え細胞培養において作製することができる。また、凝集剤（例えば、ミョウバン）が免疫応答を増強するために適する。ラクダの免疫化について実施例１も参照されたい。

【0284】

ＶＩ．製造品及びキット
単離抗ＰＤ－１構築物（例えば、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ、抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＨＣＡｂ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＧＩＴ二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＧＩＴ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＬＡＧ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＬＡＧ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＴＩＭ－３二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＴＩＭ－３ ＢＡＢＰ）、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＣＴＬＡ－４ ＢＡＢＰ）、または抗ＰＤ－１／ＰＤ－１二重特異性抗体（例えば、ＰＤ－１×ＰＤ－１ ＢＡＢＰ））、単離核酸またはそれをコードするベクター、または本明細書に記載の抗ＰＤ－１構築物をコードする単離核酸またはベクターを含む単離宿主細胞のいずれかを含むキット及び製造品がさらに提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つを含むキットが提供され、好ましくは、その使用のための説明書を提供する。

【0285】

本出願のキットは、適当に包装されている。適当な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、可動性包装（例えば、密封マイラーまたはビニール袋）などがあるが、これらに限定されない。キットは、例えば、緩衝剤及び解説情報などの追加の成分を適宜提供する。従って、本出願は、バイアル（例えば、密封バイアル）、ボトル、ジャー、可動性包装などを含む製造品も提供する。

【0286】

キットは、複数単位用量の医薬組成物及び使用説明書を含んでもよく、薬局、例えば、病院薬局及び調剤薬局で貯蔵及び使用するために十分な量で包装されている。

【実施例】

【0287】

以下の実施例は、完全に本発明の例であることを意図しており、したがって決して本発明を限定すると考えられるべきではない。以下の実施例及び詳細な説明は、限定としてではなく例証として提供される。

【0288】

実施例１：抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ及び抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの生成
免疫化
最新の動物保護規制に全て従い、ＰＤ－１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（受託番号ＮＰ＿００５００９．２、配列番号３６２）により２匹のラクダを免疫化した。免疫化用に、抗原をＣＦＡ（一次免疫化）またはＩＦＡ（ブースト免疫化）による乳剤として製剤化した。抗原は、首の筋肉内にダブルスポット注射で投与した。各動物に、１００μｇのＰＤ－１ ＥＣＤを含む乳剤を２本注射し、続いて５０μｇの抗原を含む４本の注射を１週間間隔でした。免疫化の間の異なった時点で、動物から１０ｍｌの血液試料を回収し、血清を調製した。抗原特異的体液免疫応答の誘導は、固定化したＰＤ－１ ＥＣＤタンパク質を用いたＥＬＩＳＡに基づく実験で血清試料を用いて確認した（図１Ａ～１Ｂ及び図２Ａ～２Ｂ）。最後の免疫化から５日後、２００ｍｌの血液試料を回収した。末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、ラクダ重鎖免疫グロブリン（ＨＣＡｂ）の遺伝源として、血液試料２００ｍｌからＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて単離し、５×１０^８個のＰＢＬを得た。抗体の最大多様性は、サンプリングしたＢリンパ球の数、すなわちＰＢＬの数の約２０％に等しいことが予想される（１×１０^８個）。ラクダにおける重鎖抗体の割合は、Ｂリンパ球の数の最大で２０％である。従って、血液試料２００ｍｌ中のＨＣＡｂの最大多様性は、２×１０^７個の異なる分子として計算する。

【0289】

ライブラリー構築及びバインダー選択
ＰＢＬ及びリンパ節から抽出したＲＮＡを、ＲＴ－ＰＣＲの出発物質として使用して、ｓｄＡｂをコードする遺伝子断片を増幅した。これらの断片を社内プラスミドベクターにクローニングした。ベクターは、ｓｄＡｂコード配列とインフレームで、Ｃ末端Ｈｉｓ６タグをコードする。ライブラリーサイズは、１×１０^９個を超える。ライブラリーファージは、標準プロトコルに従って調製し、滅菌ろ過の後、さらなる使用のために４℃で保管した。

【0290】

選択は、固形パニングならびに細胞に基づくパニングを用いて、上記ライブラリーで実施した。コロニーを採取して、９６ディープウェルプレート（１ｍｌ容量）で培養し、ＩＰＴＧ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎを添加することにより上清中でｓｄＡｂ発現を誘導した。（ＥＬＩＳＡによって）ＰＤ－１ ＥＣＤタンパク質及び（ＦＡＣＳによって）ＰＤ－１安定細胞株に結合する能力について上清を分析した。陽性バインダーを配列決定し、固有のクローンを選択し、さらに特徴付けた（表３）。

【0291】

ｓｄＡｂ産生
選択されたＨｉｓ６標識ｓｄＡｂは、ＡＫＴＡによるペリプラズム抽出液から精製した。ＮＴＡ樹脂は、製造者の指示に従って処理した。調製したペリプラズム抽出液を、回転子上で室温にて３０分間、樹脂でインキュベートした。樹脂をＰＢＳで洗浄し、カラムに移した。充填した樹脂を１５ｍＭイミダゾールで洗浄した。１５０ｍＭイミダゾールを用いて、ｓｄＡｂをカラムから溶出した。溶出した画分を、Ｈｙｂｏｎｄ Ｍｅｍｂｒａｎｅにスポットすることで分析し、Ｐｏｎｃｅａｕで可視化した。タンパク質を含む画分をプールし、ＰＢＳで透析した。透析したタンパク質を回収し、ろ過滅菌し、濃度を測定し、－２０℃で保存した。

【0292】

純度を決定するために、タンパク質試料を１２％のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルで分析した。１０μｌのＬａｅｍｍｌｉ試料緩衝液を１０μｌ（２μｇ）の精製タンパク質に添加し、試料を９５℃で１０分間加熱し、冷却して、１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにロードした。ゲルは、一般的な手順に従って処理し、クーマシーブリリアントブルー（ＣＢＢ）で染色した。精製データを図２８にまとめた。

【0293】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるｓｄＡｂの親和性測定
ｓｄＡｂの結合動態をＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上のＳＰＲによって決定した。簡単に言えば、ＰＤ－１ ＥＣＤを約５０ＲＵの密度でＣＭ５センサーチップにアミンカップリングさせた。ｓｄＡｂを３倍段階希釈による５つの濃度で（２ｎＭから開始して、１６２ｎＭまで）、被覆したセンサーチップに注入した。流速は、全ての実験で３０μｌ／分であった。会合相は、５分であり、解離相は、５分、１０分、または１５分であった。チップをグリシン／ＨＣｌ（ｐＨ１．５）を用いて再生させた。異なる濃度のｓｄＡｂでの結合曲線を１：１ラングミュア結合モデルに適合させて、動態パラメーターｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄを算出した（ｓｄＡｂ親和性データについて、図３Ａ～３Ｆを参照されたい）。センサーグラム処理及びデータ分析をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行った。親和性パラメーターを図３Ｇにまとめた。

【0294】

ＦＡＣＳ分析による細胞上で発現したＰＤ－１への結合
ｓｄＡｂの、ＣＨＯ細胞上で発現したＰＤ－１への結合は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）に基づくアッセイを用いて決定した。ヒトＰＤ－１を発現するＣＨＯ細胞を接着培養フラスコから解離して、種々の濃度の抗体と混合した（両方とも、９６ウェルプレート中で）。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。その後、二次抗体フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）共役抗ヒトカッパ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、室温で１５分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で再び洗浄し、フローサイトメトリーで分析した。非線形回帰を用いて、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でデータを分析し、ＥＣ_５０値を算出した。図４Ａ～４Ｂから分かるように、Ａ３１５４３、ＡＳ０６９６２、及びＡＳ０７４２４ ｓｄＡｂが、低濃度（１～１０μｇ／ｍｌ）でＰＤ－１に結合できることが、ＦＡＣＳ結合アッセイにより実証された。

【0295】

ＦＡＣＳ分析によるリガンド結合の阻害
リガンド結合の遮断は、フローサイトメトリーを用いて試験した。抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂを評価するため、ヒトＰＤ－１を発現するＣＨＯ細胞を接着培養フラスコから解離して、種々の濃度の抗体、及び一定濃度のビオチン標識ヒトＰＤ－Ｌ１／ＦｃまたはヒトＰＤ－Ｌ２／Ｆｃタンパク質と混合した（両方とも、９６ウェルプレート中で）。キイトルーダ（登録商標）は、抗ＰＤ－１抗体陽性対照として使用した。混合物を室温で３０分間平衡化し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。その後、ＰＥ／Ｃｙ５ストレプトアビジン二次抗体を添加し、室温で１５分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で再び洗浄し、フローサイトメトリーで分析した（図５Ａ）。非線形回帰を用いて、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でデータを分析し、ＩＣ_５０値を算出した。

【0296】

ＨＣＡｂ構築、産生、及び特徴付け
上記の研究から機能的活性及び遅いオフレートを有するｓｄＡｂを選択して、ＨＣＡｂ構築及び産生をした。選択されたｓｄＡｂのＤＮＡ配列をヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）のＤＮＡ配列と融合させて、ＨＣＡｂ構築物を作製した。ＨＣＡｂ構築物をＣＨＯ細胞にトランスフェクトして、ＨＣＡｂを発現させた。条件培地中の分泌ＨＣＡｂをプロテインＡカラムによって精製した。精製データを図２９にまとめた。

【0297】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＨＣＡｂの親和性測定
抗ＰＤ－１ラクダＨＣＡｂの結合動態をＳＰＲバイオセンサー、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて決定した。約５０ＲＵの密度でＦｃ捕捉法を介してセンサーチップ上に抗体を固定化した。ヒトＰＤ－１－Ｈｉｓ抗原を３倍段階希釈による５つの濃度で（３ｎＭから開始して、２４３ｎＭまで）、被覆したセンサーチップに注入した。流速は、全ての実験で３０μｌ／分であった。チップをグリシン／ＨＣｌ（ｐＨ１．５）を用いて再生させた。異なる濃度のＰＤ－１－Ｈｉｓ抗原での結合曲線を１：１ラングミュア結合モデルに適合させて、動態パラメーターｋ_ｏｎ、ｋ_ｏｆｆ、及びＫ_Ｄを算出した（ＨＣＡｂ親和性データについて、図６Ｂ～６Ｋを参照されたい）。キイトルーダ（登録商標）は、実験対照として使用した（図６Ｌ）。センサーグラム処理及びデータ分析をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行った。親和性パラメーターを図６Ａにまとめた。

【0298】

図６Ａ～６Ｌから分かるように、選択されたＨＣＡｂ（ＡＳ１５１４０＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１５２＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１５６＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂ、ＡＳ０６９６２＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５８８１＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５８８３＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５８９２＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５８９９＿ＨＣＡｂ、及びＡＳ２５１７０＿ＨＣＡｂ）は、キイトルーダ（登録商標）に匹敵する結合親和性を示す。

【0299】

ＦＡＣＳ分析によるＨＣＡｂの、細胞上で発現したＰＤ－１への結合
２２個の精製抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを、上述のように、ＣＨＯ細胞上で発現されたＰＤ－１に結合する能力について試験した（図７Ａ～７Ｖ）。キイトルーダ（登録商標）は、実験対照として使用した（図７Ｗ）。ＥＣ_５０を図７Ｘにまとめた。図７Ａ～７Ｘから分かるように、２２個全てのＨＣＡｂが細胞表面上のＰＤ－１に良好な結合を呈したことが、ＦＡＣＳ結合アッセイにより実証された。

【0300】

ＦＡＣＳ分析によるリガンド結合の阻害
２２個の精製抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを、上記と同様に、ＦＡＣＳ分析によってＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１結合を阻害する能力について試験した（図８Ａ～８Ｖ）。キイトルーダ（登録商標）は、実験対照として使用した（図８Ｗ）。ＩＣ_５０を図８Ｘにまとめた。図８Ａ～８Ｘから分かるように、低濃度（１～１０μｇ／ｍｌ）でＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を効果的に阻害する抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの能力が競合アッセイにより実証された。ＦＡＣＳデータのＩＣ_５０によれば、２２個全てのＨＣＡｂは、リガンド競合活性を示した。

【0301】

ＰＤ－１に基づく機能的遮断アッセイ
ＰＤ－Ｌ１を安定して発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、及びジャーカットエフェクター細胞を使用して、ＰＤ－１遮断を評価して、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを評価した。エフェクター細胞は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１受容体－リガンド相互作用を破壊する際に、例えば、ＰＤ－Ｌ１発現細胞を、ＰＤ－１を発現するエフェクター細胞と混合する際に誘導されるルシフェラーゼ構築物を含む。従って、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂによるＣＨＯ－Ｋ１安定細胞上のＰＤ－Ｌ１の、エフェクター細胞上のＰＤ－１との相互作用を阻害する有効性は、ルシフェラーゼレポーター活性を測定することによって評価することができる。アッセイは、以下のように行う。

【0302】

１日目に、ＣＨＯ－Ｋ１細胞を発現するＰＤ－Ｌ１を、細胞が解凍するまで（約３～４分）３７℃の水浴で解凍し、０．５ｍＬの解凍した細胞を１４．５ｍＬの細胞回収培地（１０％ＦＢＳ／Ｆ－１２）に移した。管を穏やかに１～２回逆さにすることによって、細胞懸濁液をよく混合した。その後、細胞懸濁液を無菌試薬リザーバーに移し、２５μＬの細胞懸濁液／ウェルでアッセイプレートに分配した。１００μＬのアッセイ培地をブランク対照としてウェルごとに添加した。１００μＬの細胞回収培地を、ブランク対照として作用するウェルのウェルごとに添加した。次いで、プレートに蓋をして、ＣＯ_２インキュベーター中で３７℃にて一晩インキュベートした。

【0303】

次に、ＰＤ－１ジャーカットエフェクター細胞を、細胞が解凍するまで（約３～４分）３７℃の水浴で解凍した。細胞懸濁液を上下にピペッティングすることによってバイアル中で穏やかに混合し、０．５ｍＬの細胞を５．９ｍＬのアッセイ緩衝液に添加した。管を穏やかに１～２回逆さにすることによって、細胞懸濁液をよく混合した。細胞をスピンダウンした後、２００μＬアッセイ緩衝液中の無菌試薬リザーバーに移し、細胞を有する４０μＬの緩衝液を、種々の濃度の抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂまたは対照抗体を含む各ウェルに分配した（３倍希釈で１μＭから開始して、合計で８つの濃度）。その後、１６０μＬのＰＤ－Ｌ１ ＣＨＯ－Ｋ１細胞を各ウェルに添加した。プレートに蓋をして、ＣＯ_２インキュベーター中で３７℃にて６時間インキュベートした。

【0304】

ルシフェラーゼアッセイシステムは、１ボトルの緩衝液を、基質を含むボトルに移すことによって再構成した。システムを室温で保管し、使用するまで遮光した。６時間の誘導後、アッセイプレートをＣＯ_２インキュベーターから除去し、周囲温度で５～１０分間平衡にした。８０μＬの試薬を各ウェルに添加した。プレートを周囲温度で５～１０分間インキュベートした。ＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）またはグロー型の発光読取能力を有するプレートリーダーで発光を測定した。

【0305】

発光は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。希釈したＨＣＡｂまたはキイトルーダ（登録商標）対照を有するウェルのＲＬＵ値を、抗体なしのＲＬＵに正規化し、ルシフェラーゼ誘導倍率を提供した。ＲＬＵ誘導倍率対ＨＣＡｂ抗体（またはキイトルーダ（登録商標）対照）のＬｏｇ１０濃度としてデータをグラフ化した。データを曲線に適合させて、各ＨＣＡｂ及び対照抗ＰＤ－１抗体キイトルーダ（登録商標）のＥＣ_５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍなどの曲線フィッティングソフトウエアを用いて決定した（図９Ａ～９Ｇ）。ＥＣ_５０データを図９Ｈにまとめた。

【0306】

抗体によるＰＤ－１阻害は、ＰＤ－１及び活性化Ｔ細胞を発現する標的細胞を含む混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＩＬ－２分泌レベルを決定することによって研究することができ、抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂは、種々の濃度で提供される。

【0307】

ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞及び同種異系単球は、単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｌ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、ＰＢＭＣから精製した。単球を樹状細胞中に誘導した。各ウェルは、１０^５個のＣＤ４^＋Ｔ細胞及び１０^４個の同種異系樹状細胞を含み、２００μｌの最終作用体積であった。抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを異なる濃度で各ウェルに添加した。抗体は、バックグラウンド対照として使用しなかった。ヒトＩｇＧ４は、陰性対照（不図示）として使用し、キイトルーダ（登録商標）は、陽性抗ＰＤ－１抗体対照として使用した。３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーターで７２時間インキュベーションした後、１００μｌ培地を各試験ウェルから採取し、ＩＬ－２分泌測定をした（Ｃｉｓｂｉｏ）。ＭＬＲ中のＩＬ－２の抗体濃度依存的分泌を使用して、抗ＰＤ－１抗体の抗ＰＤ－１活性のＥＣ_５０値を抽出し（図１０Ａ～１０Ｃ）、完全長抗ＰＤ－１抗体キイトルーダ（登録商標）のＥＣ_５０値と比較した（図１０Ｄ）。ＭＬＲアッセイのＥＣ_５０を図１０Ｅにまとめた。ＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイ結果（図８Ａ～８Ｘ）と一致して、ＰＤ－１を標的にする３つの選択されたＨＣＡｂの機能的活性は、ＭＬＲによって、それらのモノクローナル抗体キイトルーダ（登録商標）に匹敵した。

【0308】

実施例２：抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂヒト化及び特徴付け
抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂのヒト化
ＡＳ１５１９３ ｓｄＡｂのタンパク質配列を、最も高い相同性を共有している３つの最も近いヒト生殖細胞系列配列と並べた。最良のヒト生殖細胞系列配列をヒトアクセプターとして選択した。ホモロジーモデルを作製した。モデル分析データに従って、抗原結合または抗体足場形成のために潜在的に重要な残基を放置した一方、ヒト対応物に変換するために残りを選択した。３つの配列最適化変異体のパネルを生成し、結合、安定性、及び機能的活性データに基づいて選択した。４つの変異体（ＡＳ１５１９３ＶＨ８、ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１、ＡＳ１５１９３ＶＨ１８及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１）を結合及びオフレートランキングデータに基づいて選択した。ラクダ親ｓｄＡｂ、ヒト化変異体、及びヒトアクセプター配列を図１１で並べた。ヒト化ｓｄＡｂは、それらの名称において「ＶＨ」で示される。

【0309】

実施例３：ヒト化ＨＣＡｂ構築、産生、及び特徴付け
実施例２（データ不図示）でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００を用いた上記のオフレートランキング試験から機能的活性及び遅いオフレートを有する４つのｓｄＡｂ（ＡＳ１５１９３ＶＨ８、ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１、ＡＳ１５１９３ＶＨ１８、及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１）を選択して、ＨＣＡｂ構築及び産生をした。選択されたｓｄＡｂのＤＮＡ配列をヒトＩｇＧ４ Ｆｃ（Ｓ２２８Ｐ）のＤＮＡ配列と融合させて、ヒト化ＨＣＡｂ構築物を作製した。ＨＣＡｂ構築物をＣＨＯ細胞にトランスフェクトして、ＨＣＡｂを発現させた。条件培地中の分泌ＨＣＡｂをプロテインＡカラムによって精製した。

【0310】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるヒト化ＨＣＡｂの親和性測定
抗ＰＤ－１ヒト化ＨＣＡｂの結合動態は、ＳＰＲバイオセンサー、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて決定した。抗体は、実施例１で述べたように、Ｆｃ捕獲方法を介してセンサーチップ上に固定化した。抗原ＰＤ－１－Ｈｉｓタンパク質は、分析物として使用した（３倍段階希釈（１ｎＭから開始して、２７ｎＭまで）による４つの濃度のヒトＰＤ－１－Ｈｉｓ抗原）。解離（ｋ_ｄ）及び会合（ｋ_ａ）速度定数は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いて得た。見かけの平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、ｋ_ｄ／ｋ_ａの比から算出した。データを図１２Ｆにまとめた。データによれば、ヒト化ＨＣＡｂ（ＡＳ１５１９３ＶＨ８＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１９３ＶＨ１８＿ＨＣＡｂ、及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１＿ＨＣＡｂ）の結合親和性は、その親ＨＣＡｂ（ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂ）に近く、抗体親和性がヒト化後に維持されたことを示唆している。

【0311】

ＦＡＣＳ分析によるヒト化ＨＣＡｂの、細胞上で発現したＰＤ－１への結合
精製ヒト化抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを、実施例１に記載されているように、ＣＨＯ細胞上で発現されたＰＤ－１に結合するそれらの能力について試験した。図１３Ａ～１３Ｅから分かるように、種々のヒト化ＨＣＡｂが親ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂに匹敵する結合能力を呈したことがＦＡＣＳ結合アッセイにより実証された。ＦＡＣＳ結合ＥＣ_５０データを図１３Ｆにまとめた。上記の結合親和性結果と一致して、ヒト化ＨＣＡｂ（ＡＳ１５１９３ＶＨ８＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１＿ＨＣＡｂ、ＡＳ１５１９３ＶＨ１８＿ＨＣＡｂ、及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１＿ＨＣＡｂ）は、その親ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂに匹敵する結合能力も示した。

【0312】

ＦＡＣＳ分析によるリガンド結合の阻害
精製ヒト化抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂを、実施例１に記載されているように、ＦＡＣＳ分析によってＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を阻害するそれらの能力について試験した。図１４Ａ～１４Ｅから分かるように、低濃度（１～１０μｇ／ｍｌ）でＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を効果的に阻害するヒト化抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの能力が、競合アッセイ結果により実証された。ＦＡＣＳデータ（図１４Ｆ）のＩＣ_５０によれば、４つのヒト化ＨＣＡｂは、それらの親ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂに匹敵するリガンド遮断活性を示した。

【0313】

ＰＤ－１に基づく機能的遮断アッセイ
４つのヒト化ＨＣＡｂによるＰＤ－１阻害は、実施例１に記載されるように、ＩＬ－２に基づくルシフェラーゼレポーターアッセイによって試験した。ＩＬ－２レポーターの抗体濃度依存的活性化を使用して、ヒト化抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂの抗ＰＤ－１活性のＥＣ_５０値を抽出し、親ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂのＥＣ_５０値と比較した（図１５Ａ～１５Ｅ）。ＦＡＣＳに基づくリガンド競合アッセイ結果と一致して、４つのヒト化ＨＣＡｂの機能的活性は、それらの親ＡＳ１５１９３＿ＨＣＡｂに匹敵した。データを図１５Ｆにまとめた。

【0314】

ヒト化ＨＣＡｂのインビボ活性
ここで提示される試験では、ネズミ腫瘍モデルに対するＰＤ－１ヒト化ＨＣＡｂ遮断の有効性を調査した。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害は、抗腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を回復することで治療効果を発揮することが提案されるため、宿主の免疫系が完全に無傷である同系ネズミ腫瘍モデルで臨床前有効性試験を実施した。ヒトＰＤ－１トランスジェニックマウスを使用した。

【0315】

１×１０^６個のヒトＰＤ－Ｌ１過剰発現ＭＣ３８大腸がん細胞をマウスの右脇腹に皮下注射した。腫瘍の平均体積が約１００ｍｍ^３に到達すると、マウスを処置群（ｎ＝５）に選別した（試験０日目として定義）。２つのヒト化抗ＰＤ－１ ＨＣＡｂ：ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１＿ＨＣＡｂ及びＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１＿ＨＣＡｂをこの試験で試した。群に基準抗体キイトルーダ（１ｍｇ／ｋｇ）またはヒト化ＨＣＡｂ（０．５３ｍｇ／ｋｇ）を週２回で２週間静脈内投与した。２つの対照群を、１ｍｌ／ｋｇのＰＢＳまたは１ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照で処置した。腫瘍を試験期間中に週２回測定した。全ての処置群は、対照群と比較した場合、有意な有効性（Ｐ＜０．０５０）を示した（図２７）。抗ＰＤ－１療法が抗腫瘍ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を駆動する効果的な戦略であると、これらの観察は支持している。

【0316】

配列表
表３．抗ＰＤ－１ ｓｄＡｂ配列番号

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

配列番号２５３（Ａ３１５４３ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＣＴＴＴＧＧＡＴＴＡＴＴＡＴＧＣＣＡＴＡＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＧＴＡＴＴＡＧＴＡＧＴＡＧＣＧＡＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＴＴＡＴＣＡＣＴＧＴＧＣＧＡＣＡＧＡＴＣＧＧＧＣＧＴＧＣＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＧＧＴＴＡＧＧＧＧＣＣＧＡＡＴＣＡＴＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５４（ＡＳ０６９６２ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＡＧＡＡＡＴＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＧＣＧＡＡＴＴＧＧＴＣＧＣＧＣＴＡＡＴＴＧＣＧＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＣＡＣＡＴＴＡＴＧＣＧＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＴＡＡＣＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＣＧＣＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＴＡＴＧＴＣＧＡＴＧＴＣＴＣＧＣＣＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５５（ＡＳ１５０９０ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＡＴＡＴＴＣＣＣＡＡＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＡＣＡＣＴＴＡＴＴＴＴＴＡＣＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＡＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＴＧＴＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＴＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＣＣＧＡＡＣＧＴＴＧＴＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＡＣＧＡＣＡＧＡＡＴＡＴＣＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＡＴＴＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５６（ＡＳ１５１４０ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＴＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＣＡＴＡＣＡＣＣＴＡＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＧＣＴＧＴＣＧＣＡＡＣＧＡＴＴＴＡＴＡＴＴＧＣＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＣＧＣＡＴＣＴＣＴＡＡＡＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＧＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＣＣＣＧＧＴＡＣＧＧＴＡＧＴＡＣＣＴＧＣＧＧＣＧＡＡＴＡＴＴＴＡＧＣＴＧＡＣＴＡＴＡＣＣＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５７（ＡＳ１５１５２ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＴＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＧＣＡＡＣＴＴＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＧＧＣＴＡＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＡＴＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＴＣＡＧＡＴＣＴＴＴＣＧＧＡＣＧＧＴＡＣＴＴＧＧＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５８（ＡＳ１５１５６ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＴＡＣＡＡＴＣＧＴＡＡＣＴＴＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＧＡＡＣＧＣＡＣＧＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＴＴＴＧＣＧＧＧＡＴＧＧＴＡＣＴＴＧＧＧＡＴＡＣＧＧＧＣＧＴＡＴＧＧＡＡＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２５９（ＡＳ１５１９３ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＴＣＧＴＡＡＣＴＴＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＣＡＡＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＴＡＣＴＡＧＴＣＧＣＡＣＧＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＧＧＡＴＴＴＧＣＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＣＴＧＧＧＡＴＡＣＧＧＧＣＧＴＡＴＧＧＡＡＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６０（ＡＳ１５８７２ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＴＡＣＣＧＣＣＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧＧＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＴＣＴＡＴＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＣＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＴＴＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＴＴＧＣＣＧＣＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６１（ＡＳ１５８８１ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＣＧＡＴＡＧＡＴＡＴＧＧＴＧＧＧＡＣＡＡＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＴＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＧＡＧＧＣＴＣＴＴＣＧＴＧＴＧＡＣＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６２（ＡＳ１５８８３ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＴＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＣＧＡＴＡＧＡＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＣＧＡＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＴＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＡＴＣＧＡＧＧＣＴＣＴＴＣＧＴＧＴＧＡＣＧＣＧＧＡＴＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６３（ＡＳ１５８９２ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＡＧＴＴＣＧＴＡＣＴＧＣＧＧＧＧＣＣＴＧＧＴＴＴＣＧＣＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＣＧＡＴＡＧＡＴＡＴＧＧＴＧＧＧＡＣＡＡＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＴＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＧＡＧＧＣＴＣＴＴＣＧＴＧＴＧＡＣＧＣＧＧＡＧＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６４（ＡＳ１５８９９ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＧＣＣＧＧＴＡＧＣＣＴＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＴＡＧＴＡＧＧＧＡＡＧＡＣＴＡＣＴＧＣＧＡＣＡＧＧＧＧＴＴＡＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＣＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６５（ＡＳ１７０４９ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＡＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＡＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＡＣＡＣＣＡＡＣＡＡＣＴＴＧＡＡＣＴＴＣＡＧＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＴＴＡＴＣＡＣＴＣＡＣＴＣＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＡＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＣＴＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＡＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧＡＴＧＴＧＴＧＧＣＧＴＡＴＴＡＧＣＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＴＴＣＣＧＧＡＡＣＴＣＴＴＴＡＧＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６６（ＡＳ１７１１８ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＴＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＡＣＣＴＴＣＡＡＴＡＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＡＡＴＣＧＣＧＧＧＡＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＡＣＡＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＧＴＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＧＡＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＴＡＴＡＧＣＧＡＣＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＴＡＡＡＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＴＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６７（ＡＳ２４９８４ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＧＴＧＣＣＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＡＧＡＴＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＧＣＴＡＡＧＣＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＧＴＡＣＣＴＴＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６８（ＡＳ２５０３７ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＣＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＴＴＡＧＣＣＴＣＧＣＡＡＴＧＧＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＡＴＴＧＣＧＧＡＡＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＡＴＴＧＧＴＣＴＣＡＣＧＣＡＴＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＴＡＣＣＡＣＡＡＣＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＡＧＣＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＧＧＧＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＡＣＣＣＣＴＴＧＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２６９（ＡＳ２５０６４ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＣＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＡＡＧＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＧＣＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＴＣＡＣＴＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＴＧＧＣＡＴＧＴＡＣＧＴＣＴＧＴＧＴＧＧＴＡＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＴＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＡＣＴＧＣＣＡＡＴＴＣＡＡＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７０（ＡＳ２５０６７ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＣＧＧＴＧＣＡＧＡＣＣＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＡＴＣＧＧＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＧＧＴＣＡＣＧＡＣＡＡＴＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＡＣＴＧＧＴＡＧＣＧＣＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＧＣＡＣＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＣＧＧＴＴＴＡＣＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＧＣＴＴＴＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＣＡＴＴＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７１（ＡＳ２５０７１ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＧＧＣＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＡＴＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＧＣＴＴＣＧＣＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７２（ＡＳ２５１１５ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＣＧＴＡＣＡＣＣＧＣＣＡＧＴＡＡＴＴＡＴＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＡＧＴＣＧＣＡＡＧＴＡＴＴＡＡＴＧＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＣＡＣＡＡＧＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＧＣＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＴＣＴＣＣＡＡＡＴＧＡＡＣＣＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＡＣＣＣＣＧＧＡＴＧＧＴＴＡＣＴＧＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＡＧＡＣＴＴＴＣＣＣＧＧＴＧＧＡＧＡＴＡＴＧＡＧＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７３（ＡＳ２５１１７ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＡＴＡＴＣＡＧＧＡＡＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＡＧＴＣＡＴＧＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡＣＡＡＡＴＡＣＴＧＧＴＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＣＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡＴＡＣＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＣＴＴＧＡＡＣＣＡＴＴＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７４（ＡＳ２５１１９ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＣＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＣＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＧＴＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＡＡＧＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＧＣＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＴＣＡＣＴＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＴＧＧＣＡＴＧＴＡＣＧＴＣＴＧＴＧＴＧＡＴＡＧＧＡＴＧＧＡＧＡＧＴＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＡＣＴＧＣＣＡＡＴＴＣＡＡＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７５（ＡＳ２５１４９ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＣＧＡＴＧＧＡＣＡＣＡＣＡＡＧＡＴＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＧＣＡＡＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＴＣＴＴＣＴＣＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＧＴＡＣＣＴＴＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７６（ＡＳ２５１６４ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＡＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＣＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＡＣＧＴＡＣＧＧＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＧＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＧＣＡＡＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＧＣＴＴＣＧＣＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７７（ＡＳ２５１７０ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＡＴＧＴＡＣＴＣＡＧＡＣＴＴＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＣＧＣＧＡＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＡＣＴＴＣＧＧＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＡＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７８（ＡＳ２５２２２ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＧＡＣＡＧＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＡＧＴＣＧＣＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＡＣＴＡＡＴＡＣＴＧＣＧＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＧＡＡＣＧＴＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＣＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＴＡＴＡＣＧＧＧＧＧＧＴＡＡＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＣＴＴＧＡＧＣＣＡＴＴＧＧＣＧＴＧＧＣＡＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２７９（ＡＳ２５３９６ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＡＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＴＡＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＡＧＴＣＧＣＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＡＣＴＡＡＴＡＣＴＣＧＴＡＧＧＡＣＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＡＡＡＡＡＴＧＧＡＣＡＡＣＴＴＧＡＧＧＣＡＣＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＣＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡＴＡＣＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＣＴＴＧＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＣＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８０（ＡＳ２５４５７ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＡＴＣＡＧＧＡＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＡＧＴＣＧＣＧＡＣＴＡＴＴＴＴＴＡＣＴＡＡＴＡＣＴＣＧＴＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＡＴＧＧＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＡＡＧＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＴＴＧＡＡＡＣＴＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＣＡＣＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡＴＡＣＧＧＧＧＧＧＴＧＡＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＣＴＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８１（ＡＳ２５４８７ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＴＧＧＴＣＧＡＴＧＴＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＡＣＴＡＴＣＡＣＴＧＧＧＡＧＴＧＧＣＧＣＡＣＡＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＧＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＡＧＡＧＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＣＡＧＡＣＴＧＣＴＡＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＣＣＧＣＣＣＧＡＧＣＧＴＣＣＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８２（ＡＳ２５０９５ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＡＴＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＴＴＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＴＴＡＣＴＧＧＡＴＧＴＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＧＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＴＣＣＧＣＣＴＧＧＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＡＣＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＣＴＣＧＡＧＧＧＧＧＴＡＣＧＧＴＧＧＴＧＡＣＴＧＧＴＡＣＡＡＧＣＴＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＧＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８３（ＡＳ２５４３５ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＣＧＴＡＣＡＣＣＧＣＣＡＧＴＴＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＣＧＧＴＣＧＣＡＡＧＴＡＴＴＡＡＴＧＡＴＧＡＣＧＧＣＧＴＣＡＣＡＡＴＧＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＡＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＧＣＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＣＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＡＣＣＣＣＧＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＧＣＴＡＣＧＣＣＧＡＧＡＧＡＣＴＴＴＣＣＡＣＧＴＧＧＡＧＡＴＡＴＡＣＧＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８４（ＡＳ２５１５６ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＴＣＧＣＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＡＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＣＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＣＡＡＧＡＴＡＣＴＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＴＡＣＧＡＴＴＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴＴＡＣＧＴＧＣＴＴＣＧＣＧＡＣＣＧＣＴＴＡＣＧＣＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＣＴＧＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２８５（ＡＳ１５１９３ＶＨ８ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＣＡＴＣＴＣＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＴＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＧＧＡＴＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＴＡＣＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
配列番号２８６（ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＣＡＴＣＴＣＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＴＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＡＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＴＡＣＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
配列番号２８７（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＡＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＣＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＡＡＧＡＡＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＡＧＡＧＡＴＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＴＡＣＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
配列番号２８８（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１ ｓｄＡｂ核酸配列）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＡＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＴＡＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧＴＣＴＧＣＴＡＴＣＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＣＡＴＣＣＡＧＧＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＡＡＧＡＡＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＧＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＡＧＡＧＡＧＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＴＡＣＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
配列番号２８９（Ａ３１５４３ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＫＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＧＤＴＡＶＹＨＣＡＴＤＲＡＣＧＳＳＷＬＧＡＥＳＷＡＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９０（ＡＳ０６９６２ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＶＤＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＴＳＲＮＴＭＧＷＹＲＱＶＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＡＴＦＶＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＫＭＶＦＬＥＭＮＳＬＱＰＥＤＴＧＡＹＹＣＹＶＤＶＳＰＹＷＧＲＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９１（ＡＳ１５０９０ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＹＩＰＮＣＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＴＬＩＦＴＧＤＧＴＳＴＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＡＥＲＣＳＧＳＮＤＲＩＳＦＷＧＩＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９２（ＡＳ１５１４０ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＡＹＴＹＳＮＩＣＬＧＷＬＲＱＡＰＧＧＧＬＥＡＶＡＴＩＹＩＡＤＱＴＳＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＲＩＳＫＤＡＡＫＮＡＶＹＬＱＭＳＳＬＲＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＳＲＹＧＳＴＣＧＥＹＬＡＤＹＴＳＲＡＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９３（ＡＳ１５１５２ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＭＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＹＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＧＰＹＴＹＹＴＤＳＶＱＧＲＦＴＩＳＱＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＶＳＤＬＳＤＧＴＷＤＱＧＲＷＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９４（ＡＳ１５１５６ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＹＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＶＰＧＫＶＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＴＥＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＶＡＤＬＲＤＧＴＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９５（ＡＳ１５１９３ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＶＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９６（ＡＳ１５８７２ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＴＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＡＡＭＳＷＶＲＱＶＰＥＥＧＬＥＷＶＡＳＩＤＳＳＧＳＲＴＹＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＬＮＳＬＫＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＫＤＨＭＳＷＬＰＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９７（ＡＳ１５８８１ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＤＳＳＹＣＧＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＥＹＲＧＳＳＣＤＡＥＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９８（ＡＳ１５８８３ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＴＬＳＣＡＡＳＶＦＴＤＳＮＹＣＭＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＧＹＲＧＳＳＣＤＡＤＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号２９９（ＡＳ１５８９２ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＤＳＳＹＣＧＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＥＹＲＧＳＳＣＤＡＥＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３００（ＡＳ１５８９９ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＡＧＳＬＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＱＹＹＣＧＡＧＳＲＥＤＹＣＤＲＧＹＩＹＤＨＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０１（ＡＳ１７０４９ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＫＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＹＬＲＬＳＣＡＡＳＧＤＴＮＮＬＮＦＲＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＶＩＴＨＳＧＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＬＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＤＶＷＲＩＳＷＳＦＶＰＥＬＦＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０２（ＡＳ１７１１８ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＮＮＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＡＧＩＷＴＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＥＤＶＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＥＲＷＤＹＳＤＷＲＲＬＫＲＧＤＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０３（ＡＳ２４９８４ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＰＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＭＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＨＬＱＭＮＴＬＲＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＳＱＣＹＶＬＳＤＲＬＲＬＰＧＴＦＳＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０４（ＡＳ２５０３７ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＫＬＳＣＬＡＳＱＷＩＳＳＤＣＧＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＳＲＩＳＳＤＤＴＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＳＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＫＬＫＴＥＤＴＧＶＹＹＣＡＡＥＡＫＳＴＩＴＳＬＣＹＰＬＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０５（ＡＳ２５０６４ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＴＣＡＡＴＧＹＳＷＲＰＤＣＭＧＷＹＲＱＡＡＥＫＥＲＥＧＶＡＶＩＤＡＤＧＩＴＳＹＡＤＡＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＮＫＩＴＬＹＬＱＭＬＫＰＤＤＴＧＭＹＶＣＶＶＧＷＲＶＳＳＧＧＮＣＱＦＮＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０６（ＡＳ２５０６７ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＡＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＴＴＩＦＡＮＴＧＳＡＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＶＫＬＤＤＴＧＴＹＹＣＡＡＲＦＴＧＧＤＣＦＤＨＱＰＬＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０７（ＡＳ２５０７１ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＡＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＳＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０８（ＡＳ２５１１５ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＶＥＳＧＧＡＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＴＡＹＴＡＳＮＹＣＭＧＷＦＲＱＳＰＧＫＥＲＥＡＶＡＳＩＮＤＤＧＶＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＳＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＴＰＤＧＹＣＹＡＥＲＬＳＲＷＲＹＥＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３０９（ＡＳ２５１１７ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＩＳＧＴＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＭＳＩＦＴＮＴＧＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＫＬＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＥＰＬＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１０（ＡＳ２５１１９ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＰＬＲＬＴＣＡＡＴＧＹＳＷＲＰＤＣＭＧＷＹＲＱＡＡＥＫＥＲＥＧＶＡＶＩＤＡＤＧＩＴＳＹＡＤＡＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＮＮＩＴＬＹＬＱＭＬＫＰＤＤＴＧＭＹＶＣＶＩＧＷＲＶＳＳＧＧＮＣＱＦＮＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１１（ＡＳ２５１４９ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＫＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＡＡＭＹＹＣＡＹＤＲＮＱＣＹＶＬＬＤＲＬＲＬＰＧＴＦＳＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１２（ＡＳ２５１５６ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＣＳＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１３（ＡＳ２５１６４ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＮＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＴＹＧＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＤＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＮＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１４（ＡＳ２５１７０ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＭＤＧＨＴＭＹＳＤＬＡＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＤＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＮＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１５（ＡＳ２５２２２ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＴＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＡＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＧＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＮＶＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＮＣＦＮＬＥＰＬＡＷＨＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１６（ＡＳ２５３９６ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＲＲＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＶＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＫＭＤＮＬＲＨＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＤＰＬＳＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１７（ＡＳ２５４５７ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＲＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＫＬＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＥＰＶＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１８（ＡＳ２５４８７ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＶＷＳＭＳＷＶＲＱＡＰＧＥＧＬＥＷＶＳＴＩＴＧＳＧＡＱＴＹＹＡＳＳＶＲＧＲＦＴＴＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＤＤＴＡＶＹＹＣＥＲＧＮＧＱＴＡＭＥＡＬＩＮＰＰＥＲＰＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３１９（ＡＳ２５０９５ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＭＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＮＲＡＧＤＳＡＷＹＡＤＳＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＤＳＲＧＹＧＧＤＷＹＫＬＬＳＤＦＮＹＣＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３２０（ＡＳ２５４３５ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＴＡＹＴＡＳＦＹＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＡＳＩＮＤＤＧＶＴＭＹＡＤＳＶＫＧＱＦＴＩＳＱＤＳＡＴＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＴＰＥＧＹＣＹＡＥＲＬＳＴＷＲＹＴＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
配列番号３２１（ＡＳ１５１９３ＶＨ８ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２２（ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＥＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２３（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２４（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１ ｓｄＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＥＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３２５（Ａ３１５４３ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＫＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＧＴＬＤＹＹＡＩＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＳＣＩＳＳＳＤＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＧＤＴＡＶＹＨＣＡＴＤＲＡＣＧＳＳＷＬＧＡＥＳＷＡＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３２６（ＡＳ０６９６２ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＶＤＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＩＴＳＲＮＴＭＧＷＹＲＱＶＰＧＫＱＲＥＬＶＡＬＩＡＴＦＶＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＲＫＭＶＦＬＥＭＮＳＬＱＰＥＤＴＧＡＹＹＣＹＶＤＶＳＰＹＷＧＲＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３２７（ＡＳ１５０９０ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＹＩＰＮＣＭＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＴＬＩＦＴＧＤＧＴＳＴＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＡＡＥＲＣＳＧＳＮＤＲＩＳＦＷＧＩＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３２８（ＡＳ１５１４０ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＴＡＳＡＹＴＹＳＮＩＣＬＧＷＬＲＱＡＰＧＧＧＬＥＡＶＡＴＩＹＩＡＤＱＴＳＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＲＩＳＫＤＡＡＫＮＡＶＹＬＱＭＳＳＬＲＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＳＲＹＧＳＴＣＧＥＹＬＡＤＹＴＳＲＡＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３２９（ＡＳ１５１５２ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＭＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＹＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＧＰＹＴＹＹＴＤＳＶＱＧＲＦＴＩＳＱＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＶＳＤＬＳＤＧＴＷＤＱＧＲＷＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３０（ＡＳ１５１５６ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＹＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＶＰＧＫＶＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＴＥＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＶＡＤＬＲＤＧＴＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３１（ＡＳ１５１９３ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＶＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３２（ＡＳ１５８７２ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＴＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＡＡＭＳＷＶＲＱＶＰＥＥＧＬＥＷＶＡＳＩＤＳＳＧＳＲＴＹＹＡＧＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＬＮＳＬＫＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＫＤＨＭＳＷＬＰＲＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３３（ＡＳ１５８８１ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＤＳＳＹＣＧＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＥＹＲＧＳＳＣＤＡＥＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３４（ＡＳ１５８８３ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＴＬＳＣＡＡＳＶＦＴＤＳＮＹＣＭＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＧＹＲＧＳＳＣＤＡＤＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３５（ＡＳ１５８９２ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＤＳＳＹＣＧＡＷＦＲＱＶＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＤＲＹＧＧＴＭＹＫＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＴＡＫＮＩＬＹＬＱＭＮＳＬＫＬＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＥＹＲＧＳＳＣＤＡＥＳＧＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３６（ＡＳ１５８９９ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＡＧＳＬＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＩＹＴＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＱＹＹＣＧＡＧＳＲＥＤＹＣＤＲＧＹＩＹＤＨＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３７（ＡＳ１７０４９ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＫＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＹＬＲＬＳＣＡＡＳＧＤＴＮＮＬＮＦＲＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＶＩＴＨＳＧＳＴＹＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＬＡＫＮＴＭＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＡＤＶＷＲＩＳＷＳＦＶＰＥＬＦＳＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３８（ＡＳ１７１１８ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＮＮＹＡＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＩＡＧＩＷＴＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＥＤＶＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＥＲＷＤＹＳＤＷＲＲＬＫＲＧＤＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３３９（ＡＳ２４９８４ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＰＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＭＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＨＬＱＭＮＴＬＲＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＳＱＣＹＶＬＳＤＲＬＲＬＰＧＴＦＳＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４０（ＡＳ２５０３７ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＫＬＳＣＬＡＳＱＷＩＳＳＤＣＧＭＡＷＹＲＱＡＰＧＫＥＲＥＬＶＳＲＩＳＳＤＤＴＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＳＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＫＬＫＴＥＤＴＧＶＹＹＣＡＡＥＡＫＳＴＩＴＳＬＣＹＰＬＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４１（ＡＳ２５０６４ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＴＣＡＡＴＧＹＳＷＲＰＤＣＭＧＷＹＲＱＡＡＥＫＥＲＥＧＶＡＶＩＤＡＤＧＩＴＳＹＡＤＡＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＮＫＩＴＬＹＬＱＭＬＫＰＤＤＴＧＭＹＶＣＶＶＧＷＲＶＳＳＧＧＮＣＱＦＮＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４２（ＡＳ２５０６７ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＡＶＱＴＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＴＴＩＦＡＮＴＧＳＡＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＶＫＬＤＤＴＧＴＹＹＣＡＡＲＦＴＧＧＤＣＦＤＨＱＰＬＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４３（ＡＳ２５０７１ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＡＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＳＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４４（ＡＳ２５１１５ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＶＥＳＧＧＡＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＴＡＹＴＡＳＮＹＣＭＧＷＦＲＱＳＰＧＫＥＲＥＡＶＡＳＩＮＤＤＧＶＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＳＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＴＰＤＧＹＣＹＡＥＲＬＳＲＷＲＹＥＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４５（ＡＳ２５１１７ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＡＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＩＳＧＴＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＭＳＩＦＴＮＴＧＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＫＬＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＥＰＬＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４６（ＡＳ２５１１９ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＰＬＲＬＴＣＡＡＴＧＹＳＷＲＰＤＣＭＧＷＹＲＱＡＡＥＫＥＲＥＧＶＡＶＩＤＡＤＧＩＴＳＹＡＤＡＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＮＮＩＴＬＹＬＱＭＬＫＰＤＤＴＧＭＹＶＣＶＩＧＷＲＶＳＳＧＧＮＣＱＦＮＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４７（ＡＳ２５１４９ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＫＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＡＡＭＹＹＣＡＹＤＲＮＱＣＹＶＬＬＤＲＬＲＬＰＧＴＦＳＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４８（ＡＳ２５１５６ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＲＹＳＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＣＳＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４９（ＡＳ２５１６４ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＮＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＳＤＧＨＴＴＹＧＤＳＶＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＤＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＮＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＴＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５０（ＡＳ２５１７０ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＳＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＳＧＹＳＹＳＲＧＣＦＡＷＦＱＱＲＰＧＫＥＲＥＧＶＡＩＩＮＭＤＧＨＴＭＹＳＤＬＡＱＧＲＦＩＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＭＹＹＣＡＹＤＲＤＱＣＹＶＬＲＤＲＬＲＬＰＤＴＦＮＤＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５１（ＡＳ２５２２２ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＩＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＴＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＡＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＧＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＮＶＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＮＣＦＮＬＥＰＬＡＷＨＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５２（ＡＳ２５３９６ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＨＬＭＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＲＲＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＶＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＫＭＤＮＬＲＨＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＤＰＬＳＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５３（ＡＳ２５４５７ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＳＩＳＰＤＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＫＲＥＡＶＡＴＩＦＴＮＴＲＳＴＲＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＳＳＱＧＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＫＬＤＤＴＡＴＹＹＣＡＡＲＹＴＧＧＤＣＦＮＬＥＰＶＡＷＲＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５４（ＡＳ２５４８７ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＶＷＳＭＳＷＶＲＱＡＰＧＥＧＬＥＷＶＳＴＩＴＧＳＧＡＱＴＹＹＡＳＳＶＲＧＲＦＴＴＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＳＤＤＴＡＶＹＹＣＥＲＧＮＧＱＴＡＭＥＡＬＩＮＰＰＥＲＰＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５５（ＡＳ２５０９５ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＭＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＹＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＮＲＡＧＤＳＡＷＹＡＤＳＶＴＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＳＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＤＳＲＧＹＧＧＤＷＹＫＬＬＳＤＦＮＹＣＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５６（ＡＳ２５４３５ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＴＡＹＴＡＳＦＹＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＡＶＡＳＩＮＤＤＧＶＴＭＹＡＤＳＶＫＧＱＦＴＩＳＱＤＳＡＴＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＴＰＥＧＹＣＹＡＥＲＬＳＴＷＲＹＴＦＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５７（ＡＳ１５１９３ＶＨ８ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５８（ＡＳ１５１９３ＶＨ８Ｍ１ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＬＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＥＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３５９（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＤＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３６０（ＡＳ１５１９３ＶＨ１８Ｍ１ ＨＣＡｂアミノ酸配列；ＣＤＲは下線付き、リンカーは太字）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＮＩＹＮＲＮＦＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＧＶＳＡＩＹＴＧＴＳＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＤＬＲＥＧＦＷＤＴＧＶＷＮＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３６１（ヒトＰＤ－１アミノ酸配列、リーダーペプチドを除く）
ＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ
配列番号３６２（ヒトＰＤ－１アミノ酸配列の細胞外ドメイン）
ＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ
配列番号３６３（ＩｇＧ４ Ｆｃアミノ酸配列）
ＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３６４（ＩｇＧ１不活性Ｆｃアミノ酸配列）
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３６５（ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列）
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３６６（ヒトアクセプターアミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＹＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫ
配列番号３６７（ヒトＩｇＧ４（ｈＩｇＧ４）ヒンジアミノ酸配列）
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ
配列番号３６８（変異型ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）ヒンジアミノ酸配列）
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ
配列番号３６９（ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）ヒンジアミノ酸配列）
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
配列番号３７０（リンカーペプチド（９ＧＳ）アミノ酸配列）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号３７１（リンカーペプチドアミノ酸配列）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号３７２（リンカーペプチドアミノ酸配列、ｎは少なくとも１つの整数）
（Ｇ）_ｎ
配列番号３７３（リンカーペプチドアミノ酸配列、ｎは少なくとも１つの整数）
（ＧＳ）_ｎ
配列番号３７４（リンカーペプチドアミノ酸配列、ｎは少なくとも１つの整数）
（ＧＳＧＧＳ）_ｎ
配列番号３７５（リンカーペプチドアミノ酸配列、ｎは少なくとも１つの整数）
（ＧＧＧＳ）_ｎ
配列番号３７６（リンカーペプチドアミノ酸配列、ｎは少なくとも１つの整数）
（ＧＧＧＧＳ）_ｎ
配列番号３７７（抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ重鎖アミノ酸配列）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＫＴＹＹＲＦＫＷＹＳＤＹＡＶＳＶＫＧＲＩＴＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＦＹＣＴＲＥＳＴＴＹＤＬＬＡＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３７８（抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ ｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂ軽鎖アミノ酸配列）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＴＶＬＹＳＳＮＮＫＫＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＮＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＥＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＴＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３７９（抗ＬＡＧ－３ ｍＡｂ ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＤＹＹＷＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＲＧＳＴＮＳＮＰＳＬＫＳＲＶＴＬＳＬＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＲＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＦＧＹＳＤＹＥＹＮＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号３８０（抗ＬＡＧ－３ ｍＡｂ ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ軽鎖アミノ酸配列）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＬＴＦＧＱＧＴＮＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３８１（抗ＴＩＭ－３ ｍＡｂ ＭＢＧ４５３重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＹＰＧＱＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＡＴＭＴＡＤＫＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＧＧＡＦＰＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３８２（抗ＴＩＭ－３ ｍＡｂ ＭＢＧ４５３軽鎖アミノ酸配列）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＭＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＶＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＳＲＫＤＰＳＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３８３（抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂイピリムマブ重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３８４（抗ＣＴＬＡ－４ ｍＡｂイピリムマブ軽鎖アミノ酸配列）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＦＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号３８５（抗ＰＤ－１ ｍＡｂペンブロリズマブ（ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）重鎖アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３８６（抗ＰＤ－１ ｍＡｂペンブロリズマブ（ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）軽鎖アミノ酸配列）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図6-3】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【配列表】

0007366908000001.app