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特許7368579葉の中の１種または複数種のアルカロイドの量を変化させたタバコ植物ならびにそのような植物の使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-10-16
(45)【発行日】2023-10-24
(54)【発明の名称】葉の中の１種または複数種のアルカロイドの量を変化させたタバコ植物ならびにそのような植物の使用方法
(51)【国際特許分類】
A01H 5/12 20180101AFI20231017BHJP
A01H 1/00 20060101ALI20231017BHJP
A01H 6/82 20180101ALI20231017BHJP
A24B 15/10 20060101ALI20231017BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20231017BHJP
【ＦＩ】
A01H5/12 ZNA
A01H1/00 A
A01H6/82
A24B15/10
C12N15/09 100
【請求項の数】
17
(21)【出願番号】P 2022169123
(22)【出願日】2022-10-21
(62)【分割の表示】P 2021138736の分割
【原出願日】2014-12-08
(65)【公開番号】P2023011702
(43)【公開日】2023-01-24
【審査請求日】2022-11-14
(31)【優先権主張番号】61/912,752
(32)【優先日】2013-12-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/011,304
(32)【優先日】2014-06-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】517453405
【氏名又は名称】アルトリア クライアント サーヴィシーズ リミテッド ライアビリティ カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(72)【発明者】
【氏名】フレデリック ジェシー
(72)【発明者】
【氏名】シェン イエンシン
(72)【発明者】
【氏名】シュー トンメイ
(72)【発明者】
【氏名】ワレク ウイワラ
(72)【発明者】
【氏名】ストリックランド ジェイムズ アーサー
【審査官】長谷川 強
(56)【参考文献】
【文献】Plant Physiology, 2009, Vol.149, pp.708-718
【文献】Plant Cell Physiol., 2012, Vol.53, No.7, pp.1247-1254
【文献】PNAS, 2011, Vol.108, No.44, pp.18179-18184
【文献】The Plant Journal, 2012, Vol.72, pp.745-757
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ０１Ｈ ５／１２
Ａ０１Ｈ １／００
Ａ０１Ｈ ６／８２
Ａ２４Ｂ １５／１０
Ｃ１２Ｎ １５／０９
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＡＧＲＩＣＯＬＡ（ＳＴＮ）
ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＦＳＴＡ（ＳＴＮ）
ＳＣＩＳＥＡＲＣＨ（ＳＴＮ）
ＴＯＸＣＥＮＴＥＲ（ＳＴＮ）
ＰｕｂＭｅｄ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
内因性核酸分子に変異を含むニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)植物から作出され、該変異を含むタバコ乾葉であって、該内因性核酸分子がSEQ ID NO: 39に対して少なくとも95%同一の配列を有し、該変異を欠く対応する植物と比べて、該変異が該内因性核酸にコードされる輸送体の発現または機能の減少を生じさせる、前記タバコ乾葉。
【請求項2】
前記内因性核酸分子が、SEQ ID NO: 39に対して100％同一の配列を有する、請求項１記載のタバコ乾葉。
【請求項3】
前記ニコチアナ・タバカム植物が、バーレー種(Burley type)、ダーク種(dark type)、黄色種(flue-cured type)、メリーランド種(Maryland type)、およびオリエント種(Oriental type)からなる群より選択される、請求項１記載のタバコ乾葉。
【請求項4】
前記変異を欠く植物からのタバコ乾葉と比べて、ニコチンの少なくとも5％の減少を示す、請求項１記載のタバコ乾葉。
【請求項5】
自然乾燥、火力乾燥、熱風乾燥および日干し乾燥からなる群より選択される方法を用いて乾燥される、請求項１記載のタバコ乾葉。
【請求項6】
前記変異が、点変異、挿入、欠失、および置換からなる群より選択される、請求項１記載のタバコ乾葉。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか一項記載のタバコ乾葉を含む、タバコ製品。
【請求項8】
無煙タバコ製品である、請求項７記載のタバコ製品。
【請求項9】
前記無煙タバコ製品が、噛みタバコ、スヌース(snus)、パウチ、フィルム、タブレット、コーティングされたダボ(dowel)、およびロッドからなる群より選択される、請求項８記載のタバコ製品。
【請求項10】
シガリロ、非通気型リセスフィルター(recess filter)タバコ、通気型リセスフィルタータバコ、葉巻、嗅ぎタバコ、パイプタバコ、葉巻タバコ、紙巻タバコ、葉タバコ、刻みタバコ、およびカットタバコからなる群より選択される、請求項７記載のタバコ製品。
【請求項11】
フィルター部材またはロッド部材を含む、請求項７記載のタバコ製品。
【請求項12】
内因性核酸分子に変異を含むニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)植物であって、該内因性核酸分子がSEQ ID NO: 39に対して少なくとも95%同一の配列を有し、該変異を欠く対応する植物と比べて、該変異が該内因性核酸にコードされる輸送体の発現または機能の減少を生じさせる、前記植物。
【請求項13】
内因性核酸分子が、SEQ ID NO:39に対して100%同一である、請求項１２記載のニコチアナ・タバカム植物。
【請求項14】
前記植物からの葉が、前記変異を欠く植物からのタバコ乾葉と比べて、ニコチンの少なくとも5％の減少を示す、請求項１２記載のニコチアナ・タバカム植物。
【請求項15】
バーレー種(Burley type)、ダーク種(dark type)、黄色種(flue-cured type)、メリーランド種(Maryland type)、およびオリエント種(Oriental type)からなる群より選択される種である、請求項１２記載のニコチアナ・タバカム植物。
【請求項16】
前記変異が、点変異、挿入、欠失、および置換からなる群より選択される、請求項１２記載のニコチアナ・タバカム植物。
【請求項17】
請求項１２～１６のいずれか一項記載のニコチアナ・タバカム植物より産生され、前記変異を含む、種子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は概してタバコ植物に関する。
【背景技術】
【0002】
背景
タバコの低アルカロイド品種を作出しようという試みがなされている。しかし、こうした品種のほとんどは、結果的に、低品質の葉をもたらし、葉のアルカロイド含有量が減少した商業的に利用可能なタバコ系統は皆無である。したがって、タバコの葉のアルカロイドのプロファイル、特に葉のニコチン系アルカロイドのプロファイル、が変更され得るように遺伝子の発現を調節することができる、タバコ遺伝子を同定する必要がある。
タバコの低アルカロイド品種を作出しようという試みがなされている。しかし、こうした品種のほとんどは、結果的に、低品質の葉をもたらし、葉のアルカロイド含有量が減少した商業的に利用可能なタバコ系統は皆無である。したがって、タバコの葉のアルカロイドのプロファイル、特に葉のニコチン系アルカロイドのプロファイル、が変更され得るように遺伝子の発現を調節することができる、タバコ遺伝子を同定する必要がある。
【発明の概要】
【0003】
概要
タバコにおいて根から葉へのアルカロイドの輸送に関与する複数の配列を記載する。また、こうした配列を使用する方法も記載する。
タバコにおいて根から葉へのアルカロイドの輸送に関与する複数の配列を記載する。また、こうした配列を使用する方法も記載する。
【0004】
一局面では、タバコの交雑種(hybrid)、品種(variety)、系統(line)、または栽培品種(cultivar)が提供される。このようなタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種には、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する植物が含まれる。いくつかの態様では、該植物からのタバコ葉は、該変異を欠く植物からのタバコ葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す。いくつかの態様では、該植物からの乾葉(cured leaf)は、該変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示す。また、このようなタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種により産生された種子も提供され、その場合に該種子は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む。
【0005】
別の局面では、タバコ植物の作出方法が提供される。こうした方法は、典型的には、ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)細胞において変異誘発を引き起こして突然変異細胞を作製する段階、該突然変異細胞から1つまたは複数の植物を得る段階、およびSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む、該植物の少なくとも1つを同定する段階を含んでなる。このような方法はさらに、該変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を含む、前記植物の少なくとも1つを同定する段階を含むことができる。このような方法はまた、得られる乾葉が、該変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、前記植物の少なくとも1つを同定する段階を含むことができる。
【0006】
変異誘発は、化学的変異原または電離放射線を用いて引き起こすことができる。代表的な化学的変異原としては、亜硝酸、アジ化ナトリウム、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、およびメタンスルホン酸エチル(EMS)が挙げられるが、これらに限定されない。代表的な電離放射線としては、X線、ガンマ線、高速中性子照射、およびUV照射が挙げられるが、これらに限定されない。変異誘発はTALENまたはジンクフィンガー技術を用いて引き起こすことができる。
【0007】
別の局面では、タバコ植物の作出方法が提供される。こうした方法はまた、第1のタバコ系統の少なくとも1つの植物を第2のタバコ系統の少なくとも1つの植物と交配させる段階、および該変異を有する後代タバコ植物について選択する段階を含むことができる。一般的に、第1のタバコ系統の植物は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する。こうした方法はさらに、該変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を有する、後代タバコ植物について選択する段階を含むことができる。このような方法はまた、該変異を欠く植物からの乾葉と比べて、乾葉が少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、後代タバコ植物について選択する段階を含むことができる。
【0008】
別の局面では、タバコ製品が提供される。こうしたタバコ製品は、典型的には、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を含む。いくつかの態様では、タバコ製品の中に含まれる乾葉は、該変異を欠く植物から得られるタバコ製品に含まれる乾葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す。いくつかの態様では、タバコ製品の中の乾葉は、該変異を欠く植物から得られるタバコ製品に含まれる乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す。
【0009】
別の局面では、タバコ製品の製造方法が提供される。こうした方法は、一般的に、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を提供する段階、および該乾葉を用いてタバコ製品を製造する段階を含んでなる。いくつかの態様では、該乾葉は、該変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す。いくつかの態様では、該乾葉は、該変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す。
【0010】
本明細書に記載される変異は、点変異、挿入、欠失、または置換であり得るが、これらに限定されない。
【0011】
さらに別の局面では、植物発現ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物が提供される。典型的には、該発現ベクターは、長さが少なくとも25ヌクレオチドであり、かつSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列に対して少なくとも91％の配列同一性を有する、核酸分子を含む。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉をもたらす。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉をもたらす。また、このようなトランスジェニックタバコ植物により産生された種子も提供され、その場合に該種子は該発現ベクターを含む。
【0012】
一局面では、長さが少なくとも25ヌクレオチドの異種核酸分子を含むトランスジェニックタバコ植物が提供され、ここで、該核酸分子は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの核酸配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。いくつかの態様では、この異種核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉をもたらす。いくつかの態様では、この異種核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉をもたらす。また、このようなトランスジェニックタバコ植物により産生された種子も提供され、その場合に該種子は上記の異種核酸分子を含む。
【0013】
一局面では、ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物からの葉が提供される。一般的に、該ベクターは、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの核酸配列の25以上連続するヌクレオチドに対して少なくとも91％の配列同一性を有する核酸分子を含む。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉をもたらす。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉をもたらす。
【0014】
別の局面では、トランスジェニック植物の作出方法が提供される。こうした方法は、典型的には、該植物において導入遺伝子を発現させる段階を含む。この導入遺伝子は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの核酸配列からの発現を阻害する二本鎖RNA分子をコードする。この二本鎖RNA分子は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの配列に対して91％以上の配列同一性を有する、少なくとも25連続するヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、この導入遺伝子の発現は、結果的に、該導入遺伝子を発現しない植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、該植物からの葉をもたらす。いくつかの態様では、この導入遺伝子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しない植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉をもたらす。いくつかの態様では、上記の二本鎖RNA分子は、例えばSEQ ID NO: 51～56などの配列を有する。
【0015】
別の局面では、タバコ植物における葉の成分を変化させる方法が提供される。こうした方法は、一般的に、プロモーターに機能的に連結された異種核酸分子をタバコ細胞に導入してトランスジェニックタバコ細胞を作製する段階、および該トランスジェニックタバコ細胞からトランスジェニックタバコ植物を再生する段階を含んでなる。典型的には、この異種核酸分子は、長さが少なくとも25ヌクレオチドであり、かつSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの核酸配列に対して少なくとも91％の配列同一性を有する。このようなトランスジェニックタバコ植物は葉の成分が変化している。こうした方法はさらに、該異種核酸分子を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を有する、該トランスジェニックタバコ植物の少なくとも1つを選択する段階を含むことができる。こうした方法はさらに、該異種核酸分子を発現しないタバコ植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉を有する、該トランスジェニックタバコ植物の少なくとも1つを選択する段階を含むことができる。
【0016】
別の局面では、ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物からのタバコ乾葉が提供される。一般的に、該ベクターは、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90などの核酸配列の25以上連続するヌクレオチドに対して少なくとも91％の配列同一性(例えば、少なくとも92、93、94、95、96、97、98、99または100％の配列同一性)を有する核酸分子を含む。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉をもたらす。いくつかの態様では、この核酸分子の発現は、結果的に、該核酸分子を発現しないタバコ植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す乾葉をもたらす。ある態様では、この核酸はセンス方向にあり、また、ある態様では、この核酸はアンチセンス方向にある。
【0017】
さらに別の局面では、植物発現ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物が提供される。一般的に、該発現ベクターは、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、もしくは90などの配列、または機能性ポリペプチドをコードするこれらの配列のいずれかの断片に対して少なくとも95％の配列同一性を有する核酸分子を含む。いくつかの態様では、この核酸分子またはその機能性断片の発現は、結果的に、該核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示す葉をもたらす。また、このようなトランスジェニックタバコ植物により産生された種子も提供され、その場合に該種子は該発現ベクターを含む。
【0018】
別の局面では、異種核酸分子を含むトランスジェニックタバコ植物が提供される。一般的に、該核酸分子は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、もしくは90などの核酸配列、または機能性ポリペプチドをコードするその断片にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。いくつかの態様では、この異種核酸分子またはその機能性断片の発現は、結果的に、該核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示す葉をもたらす。また、このようなトランスジェニックタバコ植物により産生された種子も提供され、その場合に該種子は該異種核酸分子を含む。
【0019】
一局面では、ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物からの葉が提供される。典型的には、こうしたベクターは、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、もしくは90などの核酸配列、または機能性ポリペプチドをコードするその断片に対して少なくとも95％の配列同一性を有する核酸分子を含む。いくつかの態様では、該核酸分子またはその機能性断片の発現は、結果的に、該核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示す葉をもたらす。
【0020】
別の局面では、タバコ植物における葉の成分を変化させる方法が提供される。こうした方法は、典型的には、プロモーターに機能的に連結された異種核酸分子をタバコ細胞に導入してトランスジェニックタバコ細胞を作製する段階、および該トランスジェニックタバコ細胞からトランスジェニックタバコ植物を再生する段階を含んでなり、ここで、該トランスジェニックタバコ植物は葉の成分が変化している。この異種核酸分子は、典型的には、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、もしくは90などの核酸配列、または機能性ポリペプチドをコードするその断片に対して少なくとも95％の配列同一性を有する。こうした方法はさらに、該異種核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示す葉を有する、該トランスジェニックタバコ植物の少なくとも1つを選択する段階を含むことができる。いくつかの態様では、異種核酸分子は、粒子ボンバードメント、アグロバクテリウム(Agrobacterium)媒介形質転換、マイクロインジェクション、ポリエチレングリコール媒介形質転換、リポソーム媒介DNA取り込み、またはエレクトロポレーションを用いて、タバコ細胞中に導入される。
【0021】
一局面では、ベクターを含むトランスジェニックタバコ植物からのタバコ乾葉が提供される。典型的には、このベクターは、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、もしくは90などの核酸配列、または機能性ポリペプチドをコードするその断片に対して少なくとも95％の配列同一性を有する核酸分子を含む。いくつかの態様では、この核酸分子またはその機能性断片の発現は、結果的に、該核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示すタバコ葉をもたらす。
【0022】
代表的なアルカロイドとしては、ニコチン、ノルニコチン、アナバシン、ミオスミン、およびアナタビンが挙げられるが、これらに限定されない。通常、1種または複数種のアルカロイドの量は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-質量分析(MS)または高性能薄層クロマトグラフィー(HPTLC)を用いて測定される。
【0023】
本明細書に記載の方法で使用するのに適したタバコ植物は、バーレー種(Burley type)、ダーク種(dark type)、黄色種(flue-cured type)、メリーランド種(Maryland type)、またはオリエント種(Oriental type)であり得る。本明細書に記載の方法で使用するのに適したタバコ植物はN.タバカム(N. tabacum)由来であり、さまざまなN.タバカム品種からのものであってよい。品種は以下のものであり得る：BU 64、CC 101、CC 200、CC 13、CC 27、CC 33、CC 35、CC 37、CC 65、CC 67、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、CC 1063、Coker 176、Coker 319、Coker 371 Gold、Coker 48、CU 263、DF911、Galpaoタバコ、GL 26H、GL 338、GL 350、GL 395、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、GF 157、GF 318、RJR 901、HB 04P、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 196、NC 37NF、NC 471、NC 55、NC 92、NC2326、NC 95、NC 925、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、PVH 2254、PVH 2275、VA 116、VA 119、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY 10、KY 14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KTY14 x L8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、Narrow Leaf Madole、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、「Perique」タバコ、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN90LC、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR (Tom Rosson) Madole、VA 309、またはVA359。
【0024】
別の局面では、植物のスクリーニング方法が提供される。こうした方法は、典型的には、本明細書に記載される変異型植物からの植物材料を提供する段階、および植物組織中の1種または複数種のアルカロイドの量を測定する段階を含んでなる。いくつかの態様では、植物組織は葉である。いくつかの態様では、植物組織は根である。こうした方法は、植物組織中の1種または複数種のTSNAの量を測定する段階をさらに含むことができる。
【0025】
[本発明1001]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する植物を含んでなるタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1002]
前記植物からの葉が、前記変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1001のタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1003]
前記植物からの乾葉（cured leaf）が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示す、本発明1002のタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1004]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む、本発明1001～1003のいずれかのタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種により産生された種子。
[本発明1005]
ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)細胞において変異誘発を引き起こして突然変異細胞を作製する段階；
該突然変異細胞から1つまたは複数の植物を得る段階；および
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む植物の少なくとも1つを同定する段階；
を含んでなる、タバコ植物の作出方法。
[本発明1006]
前記変異を欠く植物からの葉と比べて少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を含む前記植物の少なくとも1つを同定する段階をさらに含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
乾燥した場合に、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す葉を含む前記植物の少なくとも1つを同定する段階をさらに含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
変異誘発が化学的変異原または電離放射線を用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1009]
化学的変異原が亜硝酸、アジ化ナトリウム、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、およびメタンスルホン酸エチル(EMS)からなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1010]
電離放射線がX線、ガンマ線、高速中性子照射、およびUV照射からなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1011]
変異誘発がTALENを用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1012]
変異誘発がジンクフィンガー技術を用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1013]
第1のタバコ系統の少なくとも1つの植物を第2のタバコ系統の少なくとも1つの植物と交配させる段階であって、第1のタバコ系統の植物は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する、段階；および
該変異を有する後代タバコ植物について選択する段階；
を含んでなる、タバコ植物の作出方法。
[本発明1014]
前記変異を欠く植物からの葉と比べて少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を含む後代タバコ植物について選択する段階をさらに含む、本発明1013の方法。
[本発明1015]
乾燥した場合に、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す葉を含む後代タバコ植物について選択する段階をさらに含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を含むタバコ製品。
[本発明1017]
葉が、前記変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1016のタバコ製品。
[本発明1018]
乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、本発明1017のタバコ製品。
[本発明1019]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を提供する段階；および
該乾葉を用いてタバコ製品を製造する段階；
を含んでなる、タバコ製品の製造方法。
[本発明1020]
前記乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記変異が点変異、挿入、欠失、および置換からなる群より選択される、本発明1001～1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
本発明1001～1003のいずれかの植物からの植物材料を提供する段階；および
植物組織中の1種または複数種のアルカロイドの量を測定する段階；
を含んでなる、植物のスクリーニング方法。
[本発明1024]
植物組織が葉である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
植物組織が根である、本発明1023の方法。
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本方法および組成物が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料は、本方法および組成物の実施または試験に使用できるが、好適な方法および材料を以下に記載する。さらに、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定することを意図したものではない。本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する植物を含んでなるタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1002]
前記植物からの葉が、前記変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1001のタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1003]
前記植物からの乾葉（cured leaf）が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示す、本発明1002のタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種。
[本発明1004]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む、本発明1001～1003のいずれかのタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種により産生された種子。
[本発明1005]
ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)細胞において変異誘発を引き起こして突然変異細胞を作製する段階；
該突然変異細胞から1つまたは複数の植物を得る段階；および
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を含む植物の少なくとも1つを同定する段階；
を含んでなる、タバコ植物の作出方法。
[本発明1006]
前記変異を欠く植物からの葉と比べて少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を含む前記植物の少なくとも1つを同定する段階をさらに含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
乾燥した場合に、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す葉を含む前記植物の少なくとも1つを同定する段階をさらに含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
変異誘発が化学的変異原または電離放射線を用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1009]
化学的変異原が亜硝酸、アジ化ナトリウム、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、およびメタンスルホン酸エチル(EMS)からなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1010]
電離放射線がX線、ガンマ線、高速中性子照射、およびUV照射からなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1011]
変異誘発がTALENを用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1012]
変異誘発がジンクフィンガー技術を用いて引き起こされる、本発明1005の方法。
[本発明1013]
第1のタバコ系統の少なくとも1つの植物を第2のタバコ系統の少なくとも1つの植物と交配させる段階であって、第1のタバコ系統の植物は、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有する、段階；および
該変異を有する後代タバコ植物について選択する段階；
を含んでなる、タバコ植物の作出方法。
[本発明1014]
前記変異を欠く植物からの葉と比べて少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す葉を含む後代タバコ植物について選択する段階をさらに含む、本発明1013の方法。
[本発明1015]
乾燥した場合に、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す葉を含む後代タバコ植物について選択する段階をさらに含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を含むタバコ製品。
[本発明1017]
葉が、前記変異を欠く植物からの葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1016のタバコ製品。
[本発明1018]
乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、本発明1017のタバコ製品。
[本発明1019]
SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、および90からなる群より選択される配列を有する1つまたは複数の内因性核酸に変異を有するタバコ植物からの乾葉を提供する段階；および
該乾葉を用いてタバコ製品を製造する段階；
を含んでなる、タバコ製品の製造方法。
[本発明1020]
前記乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記乾葉が、前記変異を欠く植物からの乾葉と比べて、少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記変異が点変異、挿入、欠失、および置換からなる群より選択される、本発明1001～1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
本発明1001～1003のいずれかの植物からの植物材料を提供する段階；および
植物組織中の1種または複数種のアルカロイドの量を測定する段階；
を含んでなる、植物のスクリーニング方法。
[本発明1024]
植物組織が葉である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
植物組織が根である、本発明1023の方法。
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本方法および組成物が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料は、本方法および組成物の実施または試験に使用できるが、好適な方法および材料を以下に記載する。さらに、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定することを意図したものではない。本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【0026】
【図2】図2は、本明細書に記載する4つの新規MDR配列と、代表的なMDRポリペプチド(アクセッション番号XP_004233862)とのアラインメントである。ボックスで囲った領域は、保存されたATPアーゼドメインを表す。
【図3】図3は、新規MATE配列と、N.タバカムMATE1とのアラインメントである。ボックスは予測される膜貫通ドメインを示す；予測されるN末端局在は陰影を付けてあり、予測される保存された切断部位は矢印で示してある。
【発明を実施するための形態】
【0027】
詳細な説明
タバコの低アルカロイド品種を生み出すために経路を変更する以前の試みは、低品質の葉をもたらすことがあった。現在のところ、(例えば、野生型タバコ植物からの)標準アルカロイド含有量を含む乾葉と同じ品質の乾葉を提供する、葉のアルカロイド含有量が減少した商業的タバコ系統は存在しない。
タバコの低アルカロイド品種を生み出すために経路を変更する以前の試みは、低品質の葉をもたらすことがあった。現在のところ、(例えば、野生型タバコ植物からの)標準アルカロイド含有量を含む乾葉と同じ品質の乾葉を提供する、葉のアルカロイド含有量が減少した商業的タバコ系統は存在しない。
【0028】
本開示は、N.タバカム由来のアルカロイド輸送体および調節ポリペプチドをコードする新規核酸の発見に基づいている。このような核酸SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90、およびそれによりコードされるポリペプチドSEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91が本明細書において提供され、特徴づけられる。この発見に基づいて、前記核酸配列の発現のレベルおよび/または前記ポリペプチドの機能がN.タバカムにおいてモジュレートされ、結果として生じる植物のアルカロイド輸送への影響が評価され得る。ポリペプチドの機能および/または遺伝子の発現をモジュレートすることは、タバコの葉および結果として得られるタバコ製品におけるアルカロイド組成の改善された制御を可能にすることができる。
【0029】
核酸およびポリペプチド
新規核酸が本明細書中に提供される(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90を参照されたい)。本明細書で使用する場合、核酸はDNAおよびRNAを含むことができ、1つまたは複数のヌクレオチド類似体または骨格修飾を含む核酸が含まれる。核酸は一本鎖でも二本鎖でもよく、これは通常、その意図した用途に依存する。本明細書に提供される新規核酸は、新規ポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91参照)をコードする。
新規核酸が本明細書中に提供される(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90を参照されたい)。本明細書で使用する場合、核酸はDNAおよびRNAを含むことができ、1つまたは複数のヌクレオチド類似体または骨格修飾を含む核酸が含まれる。核酸は一本鎖でも二本鎖でもよく、これは通常、その意図した用途に依存する。本明細書に提供される新規核酸は、新規ポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91参照)をコードする。
【0030】
また、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90およびSEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91と異なる、それぞれ、核酸およびポリペプチドも提供される。配列がSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90およびSEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91と異なる核酸およびポリペプチドは、それぞれ、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90およびSEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91に対して少なくとも50％の配列同一性(例えば、少なくとも55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％の配列同一性)を示すことができる。
【0031】
配列同一性パーセントを計算するには、2つの配列をアラインメントさせて、これら2つの配列間のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の完全な一致の数を決定する。その完全一致の数をアラインメントした領域の長さ(すなわち、アラインメントしたヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数)で割って100を掛けると、配列同一性パーセントの値になる。アラインメントされる領域の長さは、一方または両方の配列の一部分から最も短い配列の全長サイズまでとすることができることが理解されよう。また、単一の領域を2つ以上の他の配列とアラインメントすることができ、したがって、その単一の領域はアラインメントしたそれぞれの領域に対して異なる配列同一性パーセント値を有し得ることも理解されるであろう。
【0032】
配列同一性パーセントを決定するための2つ以上の配列のアラインメントは、コンピュータプログラムClustalWおよびデフォルトパラメータを用いて行うことができ、これは核酸またはポリペプチド配列のアラインメントをそれらの全体の長さにわたって実施することを可能にする(グローバルアライメント)。Chenna et al., 2003, Nucleic Acids Res., 31(13):3497-500。ClustalWは、クエリー(query)配列と1つまたは複数のサブジェクト(subject)配列との間の最良の一致を計算して、同一性、類似性および相違を決定することができるようにそれらを並置する。配列アラインメントを最大にするために、クエリー配列、サブジェクト配列、または両方に1個以上の残基のギャップを挿入することができる。核酸配列の高速ペアワイズアラインメントでは、デフォルトパラメータが使用される(すなわち、ワードサイズ：2；ウィンドウサイズ：4；スコアリング法：パーセンテージ；トップ対角線の数：4；およびギャップペナルティ：5)；多重核酸配列のアラインメントでは、次のパラメータが使用される：ギャップ開始ペナルティ：10.0；ギャップ伸長ペナルティ：5.0；およびウエイトトランジション(weight transitions)：あり。ポリペプチド配列の高速ペアワイズアラインメントでは、次のパラメータが使用される：ワードサイズ：1；ウィンドウサイズ：5；スコアリング法：パーセンテージ；トップ対角線の数：5；およびギャップペナルティ：3。ポリペプチド配列の多重アラインメントでは、次のパラメータが使用される：ウエイトマトリックス(weight matrix)：blosum；ギャップ開始ペナルティ：10.0；ギャップ伸長ペナルティ：0.05；親水性ギャップ：オン；親水性残基：Gly、Pro、Ser、Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys；および残基特異的ギャップペナルティ：オン。ClustalWは、例えば、ワールド・ワイド・ウェブ上のBaylor College of Medicine Search LauncherのウェブサイトまたはEuropean Bioinformatics Instituteのウェブサイトで実行することができる。
【0033】
変化を核酸分子(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)に導入することができ、それによって、コードされるポリペプチドのアミノ酸配列(例えば、SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、または91)の変化につながる。例えば、変化は、変異誘発(例：部位特異的変異誘発、PCR媒介変異誘発)を用いて、またはこのような変化を有する核酸分子を化学的に合成することによって、核酸コード配列に導入することができる。こうした核酸の変化は、1個以上のアミノ酸残基での保存的および/または非保存的アミノ酸置換につながることがある。「保存的アミノ酸置換」は、1個のアミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置換されるものであり(例えば、アミノ酸置換のための度数分布表を提供するDayhoffら(1978, Atlas of Protein Sequence and Structure, 5(Suppl. 3):345-352)を参照)、非保存的置換は、あるアミノ酸残基が類似の側鎖をもたないアミノ酸残基で置換されるものである。
【0034】
本明細書で使用する場合、「単離された」核酸分子は、その単離された核酸分子が由来する生物のゲノム中の該核酸の一端または両端に天然で隣接する配列を含まない核酸分子である(例えば、PCRまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって生成されたcDNAまたはゲノムDNA断片)。このような単離された核酸分子は、一般的に、操作の利便性のために、または融合核酸分子を作製するために、ベクター(例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター)に導入されるが、これについては以下で詳細に説明する。また、単離された核酸分子は、組換え体などの遺伝子操作された核酸分子または合成核酸分子を含むことができる。
【0035】
本明細書で使用する場合、「精製された」ポリペプチドは、該ポリペプチドに天然で付随する細胞成分から分離または精製されているポリペプチドである。典型的には、ポリペプチドが乾燥重量で少なくとも70％(例えば、少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、または99％)であり、それが天然で会合しているポリペプチドまたは天然由来の分子を含まない場合に、該ポリペプチドは「精製された」と考えられる。化学的に合成されたポリペプチドは、もともと、それに天然で付随する成分から分離されているので、合成ポリペプチドは「精製された」ものである。
【0036】
核酸は、当技術分野で日常的な技術を用いて単離することができる。例えば、核酸は、組換え核酸技術および/またはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を含むがこれらに限定されない任意の方法を用いて単離される。一般的なPCR技術は、例えば、PCR Primer: A Laboratory Manual, Dieffenbach & Dveksler, Eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995に記載されている。組換え核酸技術は、例えば、制限酵素消化およびライゲーションを含み、これは核酸を単離するために使用される。単離された核酸はまた、単一の核酸分子としてまたは一連のオリゴヌクレオチドとして、化学的に合成することもできる。
【0037】
ポリペプチドは、例えば、DEAEイオン交換、ゲルろ過、およびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーなどの公知の方法により、天然の供給源(例えば、生物学的サンプル)から精製することができる。ポリペプチドはまた、例えば、発現ベクター中の核酸を発現させることによっても、精製することができる。さらに、精製されたポリペプチドは化学合成によっても得ることができる。ポリペプチドの純度の程度は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはHPLC分析などの任意の適切な方法を用いて、測定することができる。
【0038】
また、核酸(例えば、ポリペプチドをコードする核酸)を含むベクターも提供される。ベクターは、発現ベクターを含めて、市販されているか、または当技術分野で日常的な組換えDNA技術により作製され得る。核酸を含むベクターは、こうした核酸に機能的に連結された発現エレメントを有し、さらに、選択マーカー(例えば、抗生物質耐性遺伝子)をコードする配列などの配列を含むことができる。核酸を含むベクターは、キメラまたは融合ポリペプチド(すなわち、ポリペプチドのN末端またはC末端にあり得る、異種ポリペプチドと機能的に連結されたポリペプチド)をコードすることができる。代表的な異種ポリペプチドは、コードされたポリペプチドの精製において使用できるもの(例えば、6xHisタグ、グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST))である。
【0039】
発現エレメントは、核酸コード配列の発現を指令および調節する核酸配列を含む。発現エレメントの一例はプロモーター配列である。発現エレメントはまた、イントロン、エンハンサー配列、応答エレメント、または核酸の発現をモジュレートする誘導可能なエレメントを含むことができる。発現エレメントは細菌、酵母、昆虫、哺乳動物、またはウイルス起源のものであってよく、ベクターは異なる起源からのエレメントの組み合わせを含むことができる。本明細書で使用する場合、機能的に連結されたとは、プロモーターまたは他の発現エレメント(複数可)が核酸の発現を指令または調節するように(例えば、インフレームで)該核酸に対してベクター中に位置づけられる、ことを意味する。宿主細胞に核酸をインビボおよびインビトロの両方で導入するための多くの方法は、当業者によく知られており、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール(PEG)形質転換、熱ショック、リポフェクション、マイクロインジェクション、およびウイルス媒介核酸導入が挙げられるが、これらに限定されない。
【0040】
本明細書に記載のベクターは、宿主細胞に導入することができる。本明細書で使用する「宿主細胞」とは、核酸が導入される特定の細胞を指し、また、該ベクターを保有するそのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞は任意の原核細胞または真核細胞であり得る。例えば、核酸は、大腸菌(E. coli)などの細菌細胞中で、または昆虫細胞、酵母もしくは哺乳動物細胞(例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)、COS細胞など)中で発現させることができる。その他の適切な宿主細胞は当業者に公知である。
【0041】
核酸は、さまざまな増幅技術(例えば、PCR Primer: A Laboratory Manual, 1995, Dieffenbach & Dveksler, Eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; ならびに米国特許第4,683,195号、第4,683,202号、第4,800,159号および第4,965,188号参照)を適切なオリゴヌクレオチド対(例えば、プライマー)と共に使用して検出することができる。オリジナルのPCRに対する複数の変更形態が開発されており、核酸を検出するために使用され得る。
【0042】
核酸はまた、ハイブリダイゼーションを用いて検出することができる。核酸間のハイブリダイゼーションは、Sambrookら(1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; セクション7.37-7.57, 9.47-9.57, 11.7-11.8および11.45-11.57)に詳細に説明されている。Sambrookらは、約100ヌクレオチド未満のオリゴヌクレオチドプローブに適したサザンブロット条件を開示している(セクション11.45-11.46)。長さが100ヌクレオチド未満である配列と第2の配列との間のTmは、セクション11.46に提供される式を用いて算出することができる。Sambrookらはさらに、約100ヌクレオチドを超えるオリゴヌクレオチドプローブのためのサザンブロット条件を開示している(セクション9.47-9.54参照)。長さが100ヌクレオチドを超える配列と第2の配列との間のTmは、Sambrookらのセクション9.50-9.51に提供される式を用いて算出することができる。
【0043】
核酸を含む膜がプレハイブリダイズおよびハイブリダイズされる条件、ならびに核酸を含む膜が非特異的に結合した過剰のプローブを除去するために洗浄される条件は、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに重要な役割を果たし得る。このようなハイブリダイゼーションおよび洗浄は、必要に応じて、中程度または高度のストリンジェンシー条件下で実施することができる。例えば、洗浄条件は、洗浄液中の塩濃度を減少させることによって、かつ/または洗浄が実施される温度を増加させることによって、よりストリンジェントにすることができる。単なる例として、高ストリンジェンシー条件は、典型的には、0.2×SSC中65℃での膜の洗浄を含む。
【0044】
さらに、ハイブリダイゼーションの量の読み取りは、例えば、標識オリゴヌクレオチドプローブの特異的活性によって、プローブがハイブリダイズされているテンプレート核酸上のプローブ結合部位の数によって、およびオートラジオグラフィーまたは他の検出媒体の露光量によって、影響を受ける可能性がある。当業者には容易に理解されるように、固定化標的核酸へのプローブ核酸分子のハイブリダイゼーションを試験するために、さまざまなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件が使用され得るが、標的核酸へのプローブのハイブリダイゼーションを同一のハイブリダイゼーション、洗浄および露光条件の下で試験することがより重要である。好ましくは、標的核酸は同じ膜上にある。
【0045】
ある核酸へのハイブリダイゼーションが別の核酸へのハイブリダイゼーションよりも少なくとも5倍(例えば、少なくとも6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、または100倍)高い場合、核酸分子はある核酸にハイブリダイズするが、別の核酸にはハイブリダイズしないと見なされる。ハイブリダイゼーションの量は、膜上で直接的に、またはオートラジオグラフから、例えばPhosphorImagerまたはデンシトメータ(Molecular Dynamics社, Sunnyvale, CA)を用いて、定量化することができる。
【0046】
ポリペプチドは、抗体を用いて検出することができる。抗体を用いてポリペプチドを検出するための技術としては、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、ウェスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が挙げられる。抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。ポリペプチドに対する特異的結合親和性を有する抗体は、当技術分野で周知の方法を用いて作製することができる。抗体は、当技術分野で公知の方法を用いて、マイクロタイタープレートなどの固相支持体に結合させることができる。ポリペプチドの存在下では、抗体-ポリペプチド複合体が形成される。
【0047】
検出(例えば、増幅産物、ハイブリダイゼーション複合体、またはポリペプチドの検出)は、通常、検出可能な標識を用いて達成される。用語「標識」は、直接標識の使用だけでなく間接標識の使用をも包含することが意図される。検出可能な標識としては、酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および放射性物質が挙げられる。
【0048】
本明細書に記載される特定の核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7または82)は、ニコチン取り込みパーミアーゼ(nicotine uptake permease: Nup)ファミリーの配列に属するポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 2、4、6、8または83)をコードすると予測される。Nupポリペプチドは、より大きなプリンパーミアーゼファミリーのメンバーである。例えば、Hildreth et al., 2011, PNAS USA, 108:18279-84を参照されたい。本明細書に開示される新規なNup核酸およびポリペプチド配列に加えて、ニコチアナ・タバカム由来の代表的なNup1およびNup2配列はアクセッション番号GU174268.1およびGU174267.1に示される。
【0049】
本明細書に記載される特定の核酸(例えば、SEQ ID NO: 9、11、13、15、70、72、74、76、78または80)は、多剤耐性(MDR)ファミリーの配列に属するポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 10、12、14、16、71、73、75、77、79または81)をコードすると予測される。多剤輸送体は、ほとんどの生物の細胞中に存在する膜タンパク質の大きなクラスを構成する。これらのタンパク質は潜在的に細胞毒性のさまざまな化合物に結合して、ATPまたはプロトン依存的プロセスにおいて細胞からそれらを除去する(Zhelenova et al., 2000, Trends Biochem. Sci., 25:39-43)。多剤輸送体は、以前に、4つのスーパーファミリーに分類されている：ATP結合カセット(ATP binding cassette: ABC)スーパーファミリー、主要ファシリテーター(major facilitator)スーパーファミリー、小型多剤耐性(small multidrug resistance)ファミリー、および耐性-結節形成-細胞分裂(resistance-nodulation-cell division)ファミリー(以下で詳細に述べるMATEファミリーは、多剤輸送体の5番目のスーパーファミリーであると最近認定された)。ATP結合カセットスーパーファミリーおよび主要ファシリテータースーパーファミリーに属する排出ポンプタンパク質は、多剤耐性(MDR)への最も顕著な寄与因子である。
【0050】
本明細書に記載される特定の核酸(例えば、SEQ ID NO: 17、19、21、23、25、27、29、31、86、88または90)は、多剤・毒性化合物排出型(MATE)ファミリーの配列に属するポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 18、20、22、24、26、28、30、32、87、89または91)をコードすると予測される。MATEポリペプチドファミリーは、12の推定上の膜貫通セグメントの存在および他の多剤輸送体スーパーファミリーに特異的な「シグネチャ配列」(signature sequences)の非存在によって特徴づけられる(Brown et al., 1999, Mol. Microbiol., 31:394-5)。MATEタンパク質は、プロトン依存性排出輸送体として機能すると考えられ、細菌および植物に豊富に存在する。
【0051】
本明細書に記載される特定の核酸(例えば、SEQ ID NO: 33および35)は、多面的薬剤耐性(pleiotropic drug resistance: PDR)ファミリーの配列に属するポリペプチド(例えば、SEQ ID NO: 34および36)をコードすると予測される。例えば、Moons, 2008, Planta, 229:53-71を参照されたい。PDRファミリーは、真菌および植物にのみ見出され、非特異的薬剤排出輸送体タンパク質をコードする遺伝子の発現増加によってサッカロマイセス・セレヴィシエ(Saccharomyces cerevisiae)において最初に特徴づけられた。PDRポリペプチドは、広範囲の機能的および構造的に無関係な毒性化合物(例えば、抗真菌剤および抗癌剤)に対する耐性を付与し、かつ弱有機酸を輸送することが確認されている。また、複数のPDR遺伝子が、例えばシロイヌナズナ(Arabidopsis)およびイネを含めて、いくつかの植物種において同定されている。
【0052】
葉の中のアルカロイドの量を減少させた植物および作出方法
本明細書に記載の1つまたは複数の内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)に変異を有するタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種が提供される。本明細書に記載するように、内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つまたは複数に変異を有する植物からの葉は、(例えば、該変異を欠く植物からの葉と比較して)少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示すことができる。また、内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つまたは複数に変異を有する植物からの葉は、(例えば、該変異を欠く植物からの葉と比較して)少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示すことができる。
本明細書に記載の1つまたは複数の内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)に変異を有するタバコ交雑種、品種、系統、または栽培品種が提供される。本明細書に記載するように、内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つまたは複数に変異を有する植物からの葉は、(例えば、該変異を欠く植物からの葉と比較して)少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示すことができる。また、内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つまたは複数に変異を有する植物からの葉は、(例えば、該変異を欠く植物からの葉と比較して)少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示すことができる。
【0053】
本明細書で言及するアルカロイドは、典型的には、ピリジンアルカロイドであり、これにはニコチン、ノルニコチン、アナバシン、ミオスミン、およびアナタビンが含まれる。例えば、Sheng et al., 2005, Chromatographia, 62:63-8を参照されたい。TSNAは乾燥(curing)時に生成される。亜硝酸は細菌による硝酸還元の結果として蓄積することがあり、TSNAは亜硝酸(ニトロソ化種の供給源)とアルカロイドとの化学反応によって形成される。代表的なTSNAとしては、例えば、N'-ニトロソノルニコチン(NNN)、4-(メチルニトロソアミノ)-1-(3-ピリジル)-1-ブタノン(NNK)、N'-ニトロソアナタビン(NAT)、N'-ニトロソアナバシン(NAB)、および4-(メチルニトロソアミノ)-1-(3-ピリジル)-1-ブタナール(NNAL)が挙げられる。
【0054】
アルカロイドまたはTSNAを検出する方法、および1種または複数種のアルカロイドまたはTSNAの量を測定する方法は、当技術分野で公知である。例えば、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-質量分析(MS)(HPLC-MS)または高性能薄層クロマトグラフィー(HPTLC)を使用して、1種または複数種のアルカロイドの存在を検出し、かつ/または1種または複数種のアルカロイドの量を測定することができる。また、さまざまなクロマトグラフィー法(例えば、ガスクロマトグラフィー/熱エネルギー分析(GC/TEA)、液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)、およびイオンクロマトグラフィー(IC))を用いて、1種または複数種のTSNAの存在を検出し、かつ/または1種または複数種のTSNAの量を測定することができる。
【0055】
変異を有するタバコ植物の作出方法は、当技術分野で公知である。変異はランダム変異または標的変異であり得る。ランダム変異誘発では、例えば、化学的変異原、電離放射線、または高速中性子ボンバードメントを用いて、細胞(例えば、ニコチアナ・タバカム細胞)に変異を誘発させることができる(例えば、Li et al., 2001, Plant J., 27:235-42を参照されたい)。代表的な化学的変異原としては、限定するものではないが、亜硝酸、アジ化ナトリウム、アクリジンオレンジ、臭化エチジウム、およびメタンスルホン酸エチル(EMS)が挙げられ、一方、代表的な電離放射線としては、限定するものではないが、X線、ガンマ線、高速中性子照射、およびUV照射が挙げられる。変異原性の化学物質または放射線の投与量は、致死性または生殖不稔性によって特徴づけられる閾値レベルを下回る変異頻度が得られるように、植物組織の種類ごとに実験的に決定される。変異誘発処理から得られるM1世代種子の数またはM1植物集団のサイズは、予想される変異頻度に基づいて推定される。標的変異誘発では、代表的な技術にTALEN(例えば、Li et al., 2011 , Nucleic Acids Res., 39(14):6315-25参照)またはジンクフィンガー(例えば、Wright et al., 2005, The Plant J., 44:693-705参照)が含まれる。ランダムまたは標的にかかわらず、変異は、点変異、挿入、欠失、置換、またはこれらの組み合わせであり得る。
【0056】
ポリペプチド中の保存されたドメインは、ポリペプチドの機能だけでなく、細胞および細胞内局在にとっても重要であり得る。図1は、本明細書に記載の新規Nup配列を含めて、Nup配列のアラインメントを示し、予測される膜貫通へリックスをボックスで示してある。図2は、本明細書に記載の新規MDR配列を含めて、MDR配列のアラインメントを示し、保存されたATPアーゼドメインをボックスで示してある。図3は、本明細書に記載の新規MATE配列を含めて、MATE配列のアラインメントを示す。図3のボックスは予測される膜貫通ドメインを示し、予測されるN末端シグナルペプチドを陰影で示してあり、予測される保存された切断部位を矢印で示してある。また、図4Aは、新規MDR配列の一つであるC11099と、ソラナム・リコペルシカムからの推定上のABC輸送体Bファミリーメンバー8様とのアラインメントを示す。以下の表5に示すように、これらの配列は、ヌクレオチドレベルで84％の配列同一性、およびアミノ酸レベルで85％の配列同一性を有する。さらに、図4Bは、「その他」の輸送体配列として同定された新規配列の一つであるC43677と、ソラナム・リコペルシカムからの双方向性糖輸送体SWEET12様配列とのアラインメントを示す。以下の表8に示すように、これらの配列は、ヌクレオチドレベルで71％の配列同一性、およびアミノ酸レベルで67％の配列同一性を有する。
【0057】
本明細書で述べるように、1個以上のヌクレオチドを変異させて、対応する野生型ポリペプチドの発現および/または機能と比べて、コードされたポリペプチドの発現および/または機能を変更することができる。例えば、高度に保存された領域(例えば、図1、2、3および4に示したアラインメントを参照)の1つまたは複数の変異は、ポリペプチドの機能を変える可能性が高いが、これらの保存された領域の外側の変異は、おそらくポリペプチドの機能にほとんどまたは全く影響を与えない、ことが理解されるであろう。また、単一のヌクレオチドの変異は終止コドンを生成することがあり、これはトランケートされたポリペプチドおよび、トランケーションの程度に応じて、機能喪失をもたらすであろう。
【0058】
好ましくは、本明細書に開示する新規核酸の1つにおける変異は、結果的に、該変異を含むタバコ植物において輸送体活性の低下または完全な消失さえも生じさせる。輸送体コード配列における適切な変異の種類には、ヌクレオチドの挿入、ヌクレオチドの欠失、または野生型輸送体コード配列におけるトランジションもしくはトランスバージョンが含まれるが、これらに限定されない。コード配列における変異は、コードされたポリペプチドにおいて1個以上のアミノ酸の挿入、1個以上のアミノ酸の欠失、および/または非保存的アミノ酸置換をもたらす可能性がある。いくつかの場合には、輸送体のコード配列は、複数の変異または複数の種類の変異を含む。
【0059】
コード配列中のアミノ酸の挿入または欠失は、例えば、コードされたポリペプチドの立体構造を破壊する可能性がある。アミノ酸の挿入または欠失はまた、結合リガンド(すなわち、輸送される分子(複数可))の認識にとって、またはポリペプチドの活性(すなわち、輸送体活性)にとって重要な部位を破壊し得る。より多数の連続アミノ酸の挿入または欠失が、より少数のアミノ酸の挿入または欠失と比較して、遺伝子産物を非機能的にする可能性が高いことは、当技術分野で公知である。また、1つまたは複数の変異(例えば、点変異)は、輸送体ポリペプチドの局在化を変更したり、終止コドンを導入してトランケート型ポリペプチドをもたらしたり、ポリペプチド内の活性部位またはドメイン(例えば、触媒部位またはドメイン、結合部位またはドメイン)を破壊したりする可能性がある。
【0060】
単なる例として、MATE輸送体配列(例えば、図3；例えば、C9954 (SEQ ID NO:26)、C46276 (SEQ ID NO:22)、C48594 (SEQ ID NO:24)、およびDC38072 (SEQ ID NO:20))は、残基24の荷電アミノ酸を非荷電アミノ酸に変えるように変異させることができる。こうした変異は、細胞表面への輸送ポリペプチドの通常の標的指向性(targeting)を破壊することができ、このことは、植物内の1種または複数種のアルカロイドの(例えば、木部への、および/または根から葉への)輸送を変更する可能性がある。また、MDR輸送体(例えば、C11099 (SEQ ID NO: 16))は、ヌクレオチド124のTをAに変えるように変異させることができ、これは8番目のアミノ酸残基の後に終止コドンをもたらすであろう。このような変異は、植物において輸送体ポリペプチドを大幅に減少させるか、または本質的に排除するであろう；終止コドンを導入する変異は、本明細書に開示の輸送体配列のいずれにも同様に適用することができる。さらに、MDR(例えば、図2および4A)およびPDR(例えば、SEQ ID NO: 33～36)ファミリーのポリペプチドは、輸送のためにATPの加水分解を必要とする；ATPアーゼドメインは高度に保存されており、加水分解に必要なアミノ酸残基が知られている(例えば、図2の残基676-682のWalker Aアミノ酸モチーフ(GXXGXGK))。したがって、MDRポリペプチド(例えば、DC3222 (SEQ ID NO: 10)、C11099 (SEQ ID NO: 16)、DC62783 (SEQ ID NO: 12)、およびDC26451 (SEQ ID NO: 14))またはPDRポリペプチド(例えば、C53160 (SEQ ID NO:34)、C22474 (SEQ ID NO:36))は、Walker Aモチーフ内で(例えば、保存されたリシン(K)アミノ酸で)変異させることができ、これは、ATPを加水分解することができず、かつその輸送能力を果たすことができないか、またはこうした能力が少なくとも減退している、ポリペプチドをもたらすであろう。
【0061】
非保存的アミノ酸置換は、あるクラスのアミノ酸を別のクラスのアミノ酸で置換することができる。非保存的置換は、遺伝子産物の電荷または疎水性に大きな変化を加える可能性がある。非保存的アミノ酸置換はまた、例えばイソロイシン残基の代わりにアラニン残基を用いて、残基側鎖のかさに大きな変化をもたらすことができる。非保存的置換の例には、非極性アミノ酸の代わりに塩基性アミノ酸、または酸性アミノ酸の代わりに極性アミノ酸が含まれる。
【0062】
輸送体ポリペプチドなどの膜貫通ポリペプチドは、該ポリペプチドが細胞内で局在化する場所を決定する特定の配列を含んでいる。例えば、以前に記載したMATE1タンパク質は、それを液胞に向かわせる配列を含むが、本明細書に記載の新規MATE配列は異なるN末端ドメインを有する(図3のアラインメントを参照されたい)。標的ペプチド配列は、多くの場合、該ポリペプチドが膜に挿入された後に(例えば、特定のヌクレオチドモチーフを認識する特異的プロテアーゼにより)切断される。標的配列または切断モチーフを変異させることによって、該ポリペプチドの標的指向性を変えることができる。
【0063】
変異誘発後、その変異誘発細胞からM0植物を再生させ、これらの植物またはその集団の後続の世代(例えば、M1、M2、M3など)を関心対象の配列(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)における変異についてスクリーニングすることができる。関心対象の配列に変異を有する植物のスクリーニングは、当技術分野でルーチンの方法(例えば、ハイブリダイゼーション、増幅、これらの組み合わせ)を用いて、または表現型を評価する(例えば、根および/または葉に含まれる1種または複数種のアルカロイドおよび/または1種または複数種のTSNAを検出しかつ/またはその量を測定する)ことによって行うことができる。一般的に、本明細書に開示する核酸配列(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つまたは複数に変異が存在することは、該変異を欠く対応する(例えば、同じ品種のバックグラウンドを有する)植物と比較して、変異型植物の葉に含まれる1種または複数種のアルカロイドおよび/または変異型植物の乾葉に含まれる1種または複数種のTSNAの減少につながる。
【0064】
本明細書で使用する場合、「減少した」または「減少」は、緑葉または乾葉のいずれかのタバコ葉に含まれる1種または複数種のアルカロイドの量、および/または緑葉または乾葉に含まれる1種または複数種のTSNAの量が、該変異を欠くタバコ植物からの同様に処理した葉(例えば、緑葉または乾葉)と比べて、少なくとも約5％～約95％(例えば、約5％～約10％、約5％～約20％、約5％～約50％、約5％～約75％、約10％～約25％、約10％～約50％、約10％～約90％、約20％～約40％、約20％～約60％、約20％～約80％、約25％～約75％、約50％～約75％、約50％～約85％、約50％～約95％、および約75％～約95％)減少すること(例えば、統計的に有意な減少)を意味する。本明細書で使用する場合、統計的有意性とは、統計的有意性の適切な尺度を用いて、例えば片側2標本t検定を用いて、0.05未満のp値、例えば、0.025未満のp値、または0.01未満のp値を指す。
【0065】
M1タバコ植物は、変異対立遺伝子についてヘテロ接合性であって、野生型の表現型を示す可能性がある。このような場合には、こうした植物の第一世代の自家受粉子孫の少なくとも一部は、野生型の表現型を示す。これとは別に、M1タバコ植物は変異対立遺伝子を有し、変異型の表現型を示す可能性がある。このような植物はヘテロ接合性であって、野生型対立遺伝子の存在にもかかわらず、ドミナントネガティブ抑制などの現象のために変異型の表現型を示す可能性があるか、またはこのような植物は両方の対立遺伝子において独立して誘発された変異のためにホモ接合性であり得る。
【0066】
変異対立遺伝子を保有するタバコ植物は、新規で有用な栽培品種、系統、品種および交雑種を作り出すために植物育種プログラムにおいて使用することができる。したがって、いくつかの態様では、少なくとも1つの変異を含むM1、M2、M3またはそれ以降の世代のタバコ植物が、第2のニコチアナ・タバカム植物と交配されて、変異(複数可)が存在する交配種の子孫を特定する。第2のニコチアナ・タバカム植物は本明細書に記載する種および品種の一つであり得ることが理解されよう。また、第2のニコチアナ・タバカム植物は、それが交配される植物と同じ変異、もしくは異なる変異を含むことができ、またはその遺伝子座において野生型であってもよいことが理解されよう。追加的にまたは選択的に、第2のタバコ系統は、例えば、次のような表現型形質を示すことができる：耐病性、高い収穫量、高い等級指数、乾燥性(curability)、乾燥品質、機械的収穫性、保持能力、葉の品質、高さ、植物の成熟(例えば、早生、中早生、中生、中晩生、または晩生)、茎の大きさ(例えば、小、中、または大)、および/または植物あたりの葉数(例えば、少数(例：5～10枚)、中位の数(例：11～15枚)、または多数(例：16～21枚)の葉)。
【0067】
育種は公知の手法を用いて行われる。DNAフィンガープリンティング、SNPまたは類似の技術は、本明細書に記載するように、変異対立遺伝子を他のタバコに導入または継承するために、マーカーアシスト選抜(MAS)育種プログラムで使用することができる。この交配種の子孫は、本明細書に記載の方法を用いて変異についてスクリーニングされ、本明細書に開示する核酸配列(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)に変異を有する植物が選抜され得る。例えば、F2または戻し交配世代の植物は、本明細書に記載する技術の一つを使用して、本明細書に記載の配列またはその断片から開発されたマーカーを用いてスクリーニングすることができる。また、子孫植物からの葉(適宜に、緑葉または乾葉)を1種または複数種のアルカロイドおよび/または1種または複数種のTSNAの量についてスクリーニングすることもでき、該変異を欠く対応する植物と比較して、減少した量を有する植物が選抜され得る。変異対立遺伝子および/または変異型の表現型を保有すると同定された植物は、スクリーニングされる第2の集団を生み出すために戻し交配または自家受粉させることができる。反復親の所望の表現型が回復されるまで、戻し交配または他の育種法を繰り返すことができる。
【0068】
成功した交配は、繁殖力があって、必要であれば両親の一方と戻し交配することができるF1植物をもたらす。いくつかの態様では、F2世代の植物集団は、標準的な方法(例えば、本明細書に開示する核酸配列に基づくプライマーを用いたPCR)を用いて、変異または変異型遺伝子の発現についてスクリーニングされる。次に、選抜された植物を一方の親と交配させ、第1戻し交配(BC1)世代の植物を自家受粉させてBC1F2集団を作り出し、これは変異型遺伝子の発現について再度スクリーニングされる。戻し交配、自家受粉およびスクリーニングのプロセスは、繁殖力がありかつ反復親にかなり類似する植物が最終スクリーニングによって得られるまで、例えば少なくとも4回、繰り返される。この植物は、必要に応じて、自家受粉され、続いてその子孫は、その植物が変異を含みかつ変異型遺伝子の発現を示すことを確認するために再度スクリーニングされる。選抜された植物の育種家種子(breeder's seed)は、標準方法、例えば圃場試験、ヌル条件(null condition)の確認、および/またはアルカロイドのレベルを測定するための葉(例えば、乾葉)の化学分析を用いて、生産することができる。
【0069】
本明細書に記載の変異型タバコ植物を用いた植物育種プログラムの結果は、新規で有用な栽培品種、品種、系統、および交雑種である。本明細書で使用する用語「品種」(variety)とは、一定した特性を共有する植物の集団を指し、かかる特性が同じ種の他の植物からそれらを分離する。品種は、必ずではないけれども、多くの場合、市販されている。1つまたは複数の特徴的な形質を保持しつつ、品種は、その品種内の個体間での非常に小さな全体的変化によってさらに特徴づけられる。「純系」(pure line)品種は、数世代の自家受粉と選抜によって、または組織もしくは細胞培養技術を用いる単一の親からの栄養繁殖によって、作り出すことができる。品種と区別される「系統」(line)は、ほとんどの場合、非商業的に、例えば植物の研究において、使用される一群の植物を表す。系統は、典型的には、関心対象の1つまたは複数の形質について個体間で全体的変化をほとんど示さないが、他の形質については個体間で多少の変化があるかもしれない。
【0070】
品種は、別の系統または品種に本質的に由来することができる。植物の新品種の保護に関する国際条約(International Convention for the Protection of New Varieties of Plants)(1961年12月2日、ジュネーブで1972年11月10日に、1978年10月23日に、および1991年3月19日に改正された)によって定義されるように、品種は、以下の要件を満たす場合に、原品種(initial variety)に「本質的に由来する」：a)それは原品種に主として由来するか、原品種に主として由来する品種に由来するが、原品種の遺伝子型またはその組み合わせから生ずる本質的な特性の表現を維持していることを条件とする；b)それは原品種と明確に区別される；およびc)由来する品種を得る行為から生ずる差異を除いて、それは原品種の遺伝子型またはその組み合わせから生ずる本質的な特性の表現において原品種に合致している。本質的に由来する品種は、例えば、自然的もしくは人工的突然変異体の選抜、ソマクローナル変異体(somaclonal variant)の選抜、原品種からの個々の変異型植物体の選抜、戻し交配、または形質転換によって得ることができる。
【0071】
タバコ交雑種は、第1の品種の雌性親植物(すなわち、種子親)の自家受粉を防止し、第2の品種の雄性親植物からの花粉を雌性親植物に受粉させ、該雌性植物にF1雑種種子を形成させることによって作出することができる。雌性植物の自家受粉は、花の発生の初期段階で花の除雄を行うことによって防止することができる。あるいは、花粉の形成は、雄性不稔の一形態を用いて雌性親植物で防止することができる。例えば、雄性不稔は、細胞質雄性不稔(CMS)、核雄性不稔、遺伝的雄性不稔、分子雄性不稔(この場合には、導入遺伝子が小胞子生成および/もしくは花粉形成、または自家不和合性を阻害する)によってもたらされる。CMSを含む雌性親植物は特に有用である。雌性親植物がCMSである態様では、雄性親植物は、典型的には、F1雑種が確実に稔性となるように稔性回復遺伝子を含む。雌性親がCMSである他の態様では、稔性回復因子を含まない雄性親を使用することができる。このような両親から作出されたF1雑種は雄性不稔性である。雄性不稔性の雑種種子は、得られる雄性不稔性植物での結実(seed-set)のための花粉を提供する雄性稔性の種子と混植することができる。
【0072】
本明細書に記載の品種、系統および栽培品種は、単交配(single-cross)タバコF1雑種を形成するために使用することができる。このような態様では、親品種の植物は、雄性親植物から雌性親植物への自然な他家受粉を促進するために、隣接する実質的に均質な集団として栽培することができる。雌性親植物に形成されたF2種子は、従来の手段により選択的に収穫される。また、これら2つの親植物品種をまとめて(in bulk)栽培し、雌性親に形成されたF1雑種種子と、自家受粉の結果として雄性親に形成された種子とのブレンドを収穫することもできる。あるいは、三系交配(three-way cross)を行うことができ、その場合には、単交配F1雑種を雌性親として使用して、別の雄性親と交配させる。別の方法として、複交配(double-cross)雑種を作出することができ、その場合には、2つの異なる単のF1子孫それら自体を交配させる。自己不和合性は、複交雑雑種を形成する際に雌性親の自家受粉を防止するために特に有利に使用することができる。
【0073】
本明細書に記載の方法で使用されるタバコ植物は、バーレー種、ダーク種、黄色種、メリーランド種、またはオリエント種であり得る。本明細書に記載の方法で使用されるタバコ植物は典型的にはN.タバカム由来であり、さまざまなN.タバカム品種に由来し得る。品種は以下のものとすることができる：BU 64、CC 101、CC 200、CC 13、CC 27、CC 33、CC 35、CC 37、CC 65、CC 67、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、CC 1063、Coker 176、Coker 319、Coker 371 Gold、Coker 48、CU 263、DF911、Galpaoタバコ、GL 26H、GL 338、GL 350、GL 395、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、GF 157、GF 318、RJR 901、HB 04P、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 196、NC 37NF、NC 471、NC 55、NC 92、NC2326、NC 95、NC 925、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、PVH 2254、PVH 2275、VA 116、VA 119、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY 10、KY 14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KTY14 x L8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、Narrow Leaf Madole、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、「Perique」タバコ、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN90LC、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR (Tom Rosson) Madole、VA 309、またはVA359。
【0074】
変異に加えて、タバコの葉に含まれるアルカロイドの量を低減させることができる別の方法は、阻害性RNA(すなわち、RNAi)を使用することである。したがって、少なくとも1つのRNAi分子をコードする導入遺伝子を含むトランスジェニックタバコ植物が提供され、この導入遺伝子は、発現された場合、本明細書に記載の内因性核酸(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の少なくとも1つをサイレンシングする。本明細書に記載するように、このようなトランスジェニック植物からの葉は、(例えば、該RNAiを欠くまたは発現しない植物からの葉と比較して)少なくとも1種のアルカロイドの減少した量を示す。また、このようなトランスジェニック植物からの葉は、(例えば、該RNAiを欠くまたは発現しない植物からの葉と比較して)少なくとも1種のタバコ特異的ニトロソアミン(TSNA)の減少した量を示す。
【0075】
RNAi技術は、当技術分野において公知であり、転写後遺伝子サイレンシングの非常に有効な形態である。RNAi分子は、典型的には、標的遺伝子に相補的なヌクレオチド配列(例えば、約18ヌクレオチド長(例：約19または20ヌクレオチド長)から約700ヌクレオチド長まで)をセンスおよびアンチセンスの両方向で含む。センス鎖とアンチセンス鎖は短い「ループ」配列(例えば、約5ヌクレオチド長から約800ヌクレオチド長まで)により連結されて、単一の転写産物として発現されるか、またはセンス鎖とアンチセンス鎖は別々のベクターもしくは構築物で標的細胞に送達され、該細胞において発現され得る。複数の会社がRNAiの設計および合成サービスを提供しており(例えば、Life Technologies社、Applied Biosystems社)、本明細書に記載の複数の新規配列に対する代表的なRNAi分子がSEQ ID NO: 51～56に提供される。
【0076】
RNAi分子は、植物発現ベクターを用いて発現させることができる。RNAi分子は、典型的には、少なくとも25ヌクレオチド長であり、本明細書に開示する核酸配列(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つに対して少なくとも91％の配列同一性(例えば、少なくとも95％、96％、97％、98％または99％の配列同一性)を有するか、またはストリンジェントな条件下で本明細書に開示する核酸配列(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)の1つにハイブリダイズする。ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、先に記載されている。
【0077】
核酸(例えば、異種核酸)を植物細胞に導入する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、粒子ボンバードメント、アグロバクテリウム媒介形質転換、マイクロインジェクション、ポリエチレングリコール媒介形質転換(例えば、プロトプラストを使用、例えば、Yooら(2007, Nature Protocols, 2(7):1565-72)を参照)、リポソーム媒介DNA取り込み、またはエレクトロポレーションを含む。形質転換に続いて、トランスジェニック植物細胞をトランスジェニックタバコ植物体に再生させることができる。本明細書に記載するように、導入遺伝子の発現は、結果的に、導入遺伝子を発現しない植物からの葉と比較して、得られる乾葉中の少なくとも1種のアルカロイドおよび/または少なくとも1種のTSNAの減少した量を示す葉につながる。再生されたトランスジェニック植物の葉は、得られる乾葉中の1種または複数種のアルカロイドおよび/または1種または複数種のTSNAの量についてスクリーニングされ、対応する非トランスジェニック植物における該量と比較して、得られる乾葉中の少なくとも1種のアルカロイドおよび/または少なくとも1種のTSNAの減少した量を有する植物が、例えば本明細書で説明するような育種プログラムにおいて、使用するために選択され得る。
【0078】
除草剤抵抗性(除草剤耐性とも呼ばれる)、昆虫抵抗性、またはストレス耐性などの形質を付与する核酸もまた、本明細書に記載の新規なタバコ植物中に存在することができる。成長点または分裂組織を阻害する除草剤、例えばイミダゾリノンまたはスルホニル尿素など、に対する耐性を付与する遺伝子が適切であり得る。このカテゴリー中の典型的な遺伝子は、例えば米国特許第5,767,366号および第5,928,937号に記載されるような、変異型ALSおよびAHAS酵素をコードする。米国特許第4,761,373号および第5,013,659号は、種々のイミダゾリノンまたはスルホンアミド除草剤に対して耐性を示す植物に向けられる。米国特許第4,975,374号は、変異型グルタミン合成酵素(GS)をコードする遺伝子を含む植物細胞および植物体に関し、これは、GSを阻害することが知られている除草剤、例えばホスフィノトリシンおよびメチオニンスルホキシミン、による阻害に耐性である。米国特許第5,162,602号には、シクロヘキサンジオンおよびアリールオキシフェノキシプロパン酸除草剤による阻害に耐性を示す植物が開示される。
【0079】
グリホサートに対する耐性のための遺伝子も適している。例えば、米国特許第4,940,835号および第4,769,061号を参照されたい。こうした遺伝子は、グリホサート塩、例えばトリメチルスルホニウム塩、イソプロピルアミン塩、ナトリウム塩、カリウム塩およびアンモニウム塩など、を含むがこれらに限定されない、グリホサート除草剤組成物に対する耐性を付与することができる。例えば、米国特許第6,451,735号および第6,451,732号を参照されたい。また、ホスホノ化合物、例えばグルホシネートアンモニウムまたはホスフィノトリシンなど、ピリジノキシまたはフェノキシプロピオン酸類、およびシクロヘキソン類に対する耐性のための遺伝子も適切である。例えば、米国特許第5,879,903号、第5,276,268号および第5,561,236号、ならびに欧州特許出願第0 242 246号を参照されたい。
【0080】
他の適切な除草剤には、光合成を阻害するもの、例えばトリアジンおよびベンゾニトリル(ニトリラーゼ)など、が含まれる。米国特許第4,810,648号を参照されたい。他の適切な除草剤としては、2,2-ジクロロプロピオン酸、セトキシジム、ハロキシホップ、イミダゾリノン除草剤、スルホニルウレア除草剤、トリアゾロピリミジン除草剤、s-トリアジン除草剤およびブロモキシニルが挙げられる。また、プロトックス(protox)酵素に対する耐性を付与する除草剤も適している。例えば、米国特許第6,084,155号およびUS 20010016956を参照されたい。
【0081】
昆虫、例えば鱗翅目(Lepidoptera)の昆虫、に対する耐性を付与する複数の遺伝子が利用可能である。典型的な遺伝子には、トランケート型Cry1A(b)およびCry1A(c)毒素をコードするものが含まれる。例えば、米国特許第5,545,565号、第6,166,302号および第5,164,180号に記載される遺伝子を参照されたい。また、Vaeck et al., 1997, Nature, 328:33-37およびFischhoff et al., 1987, Nature Biotechnology, 5:807-813も参照されたい。特に有用なものは、タバコスズメガ(Manduca sexta)(タバコイモムシ)、ニセアメリカタバコガ(Heliothis virescens Fabricius)(オオタバコガ幼虫)および/またはハスモンヨトウ(S. litura Fabricius)(タバコネキリムシ)に対して殺虫活性を示す毒素をコードする遺伝子である。
【0082】
葉の中のアルカロイドの量を増加させた植物および作出方法
本明細書に記載の配列は、葉の中の1種または複数種のアルカロイド(および/または1種または複数種のTSNA)の量を増加させるために、植物において過剰発現させることができる。したがって、植物において発現を引き出すことができるプロモーター(例えば、植物プロモーター)の制御下に本明細書に記載の核酸分子(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)またはその機能性断片で形質転換された、トランスジェニックタバコ植物またはこのような植物からの葉が提供される。本明細書で説明するように、植物発現ベクター中で使用される核酸分子は、本明細書に記載の配列とは異なる配列を有することができ、こうした配列は、(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90に対する)配列同一性パーセントとして、あるいは該配列がSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90にハイブリダイズする条件に基づいて、表現され得る。
本明細書に記載の配列は、葉の中の1種または複数種のアルカロイド(および/または1種または複数種のTSNA)の量を増加させるために、植物において過剰発現させることができる。したがって、植物において発現を引き出すことができるプロモーター(例えば、植物プロモーター)の制御下に本明細書に記載の核酸分子(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90)またはその機能性断片で形質転換された、トランスジェニックタバコ植物またはこのような植物からの葉が提供される。本明細書で説明するように、植物発現ベクター中で使用される核酸分子は、本明細書に記載の配列とは異なる配列を有することができ、こうした配列は、(例えば、SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90に対する)配列同一性パーセントとして、あるいは該配列がSEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、または90にハイブリダイズする条件に基づいて、表現され得る。
【0083】
全長配列を使用する代わりに、所望の機能性を有するポリペプチド断片(本明細書では「機能性断片」という)をコードする、該配列の一部を使用することができる。核酸に関して使用される場合、それは、機能性を保有する核酸断片のことではなく、コードされたポリペプチド断片のことである、と理解されるであろう。本明細書の開示ならびに図1、2、3および4に示したアラインメントに基づいて、当業者は、所望の機能性を付与しうるポリペプチドの部分(例えば、1つまたは複数のドメイン)を予測することができる。
【0084】
形質転換に続いて、トランスジェニックタバコ細胞は、トランスジェニックタバコ植物体に再生することができる。再生されたタバコ植物の葉は、1種または複数種のアルカロイドの量についてスクリーニングされ、対応する非トランスジェニック植物における該量と比較して、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を有する植物を選択して、例えば本明細書で説明するような育種プログラムにおいて、使用することができる。前記核酸分子またはその機能性断片の発現は、該核酸分子またはその機能性断片を発現しないタバコ植物からの葉と比較して、少なくとも1種のアルカロイドの増加した量を示す葉をもたらす可能性がある。除草剤抵抗性、昆虫抵抗性、またはストレス耐性を付与する核酸もまた、このようなタバコ植物に導入することができる。
【0085】
タバコ製品および製造方法
本明細書に記載の方法は、タバコ植物中の葉成分を変化させることが可能である。本明細書に記載するように、葉成分を変化させることは、葉の中の少なくとも1種のアルカロイドの量を減少または増加させることを指す。本明細書に記載するように、こうした方法は変異誘発(例えば、ランダムもしくは標的)または(例えば、RNAiもしくは過剰発現を用いる)トランスジェニック植物の作出を含むことができる。
本明細書に記載の方法は、タバコ植物中の葉成分を変化させることが可能である。本明細書に記載するように、葉成分を変化させることは、葉の中の少なくとも1種のアルカロイドの量を減少または増加させることを指す。本明細書に記載するように、こうした方法は変異誘発(例えば、ランダムもしくは標的)または(例えば、RNAiもしくは過剰発現を用いる)トランスジェニック植物の作出を含むことができる。
【0086】
このようなタバコ(例えば、1種または複数種のアルカロイドの減少または増加した量を有する)からの葉は、乾燥させ、熟成させ、コンディショニングし、かつ/または発酵させることができる。タバコを乾燥させる方法はよく知られており、例えば、自然乾燥、火力乾燥、熱風乾燥および日干し乾燥が含まれる。熟成もまた知られており、一般的には、木製ドラム(例えば、大だる)または段ボール箱に圧縮した状態で入れて、約10％～約25％の含水率で数年間(例えば、2～5年間)実施される(例えば、米国特許第4,516,590号および第5,372,149号を参照されたい)。コンディショニングは、例えば、US 2004/0118422またはUS 2005/0178398に記載されるような加熱、スェッティング(sweating)または低温殺菌工程を含むが、発酵は一般的に、高い初期水分含量、発熱、および乾燥重量の10～20％損失により特徴づけられる。例えば、米国特許第4,528,993号、第4,660,577号、第4,848,373号および第5,372,149号を参照されたい。また、タバコは、必要に応じて、さらに加工処理(例えば、切断、膨張、ブレンド、破砕、または粉末化)して、タバコ製品において使用することができる。
【0087】
タバコ製品は、当技術分野で公知であり、タバコ製品の任意の成分、部品、または付属品を含めて、ヒトでの消費を対象とした、タバコから作られたまたはタバコに由来する製品を包含する。代表的なタバコ製品としては、限定するものではないが、以下の製品が挙げられる：無煙タバコ製品、タバコ由来のニコチン製品、シガリロ、非通気型リセスフィルター(recess filter)タバコ、通気型リセスフィルタータバコ、葉巻、嗅ぎタバコ、パイプタバコ、葉巻タバコ、紙巻タバコ、噛みタバコ、葉タバコ、刻みタバコ、およびカットタバコ。代表的な無煙タバコ製品には、例えば、噛みタバコ、スヌース(snus)、パウチ、フィルム、タブレット、コーティングされたダボ(dowel)、ロッドなどが含まれる。代表的な紙巻タバコおよび他の喫煙物品には、例えば、フィルター部材またはロッド部材を含む喫煙物品が含まれ、喫煙可能材料のロッド部材はタバコブレンド内に乾燥タバコを含むことができる。本明細書に記載のアルカロイド低減タバコに加えて、タバコ製品は、結合剤、可塑剤、安定剤、および/または香味剤を含むがこれらに限定されない、他の成分をも含むことができる。タバコ製品の例については、例えば、US 2005/0244521、US 2006/0191548、US 2012/0024301、US 2012/0031414、およびUS 2012/0031416を参照されたい。
【0088】
本発明は以下の実施例においてさらに説明されるが、これらの実施例は特許請求の範囲に記載された方法および組成物の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【0089】
実施例1－根から葉へのアルカロイドの輸送
以前の研究では、ニコチアナ・タバカムの近縁種であるニコチアナ・アラタ(Nicotiana alata：ハナタバコ)は、葉にアルカロイドを輸送しないことが証明されている(Pakdeechanuan et al., 2012, Plant Cell Physiol., 53(7):1247-54)。この表現型は図5に示すように確認された。また、N.アラタが摘芯後にアルカロイドを輸送することができるという可能性についても試験された。表1を参照されたい。試験したどの条件下でも、アルカロイドの葉への輸送は見出されなかった。
以前の研究では、ニコチアナ・タバカムの近縁種であるニコチアナ・アラタ(Nicotiana alata：ハナタバコ)は、葉にアルカロイドを輸送しないことが証明されている(Pakdeechanuan et al., 2012, Plant Cell Physiol., 53(7):1247-54)。この表現型は図5に示すように確認された。また、N.アラタが摘芯後にアルカロイドを輸送することができるという可能性についても試験された。表1を参照されたい。試験したどの条件下でも、アルカロイドの葉への輸送は見出されなかった。
【0090】
(表1) 摘芯ありおよび摘芯なしのN.アラタの葉と根のアルカロイド含有量
LOQ, 定量レベル; ND, 検出されず
【0091】
実施例2－RNAの調製および配列決定
摘芯前および摘芯後のN.アラタ植物の根組織からのRNAを回収し、Illumina社からのTrue-Seqライブラリー構築キットを用いてRNAシークエンシングライブラリーを作製した。N.アラタRNAの配列決定は、Illumina MiSeqプラットフォームを用いて達成した。配列決定ランは150サイクルのペアエンドリード(paired end read)パラメータで実施し、ライブラリーの品質と平均サイズをE遺伝子キャピラリー電気泳動装置により測定した。TN90タバコにおける根特異的遺伝子の発現は、ArrayXpress社(Raleigh, NC)によって実施されたRNAディープシークエンシングにより決定した。
摘芯前および摘芯後のN.アラタ植物の根組織からのRNAを回収し、Illumina社からのTrue-Seqライブラリー構築キットを用いてRNAシークエンシングライブラリーを作製した。N.アラタRNAの配列決定は、Illumina MiSeqプラットフォームを用いて達成した。配列決定ランは150サイクルのペアエンドリード(paired end read)パラメータで実施し、ライブラリーの品質と平均サイズをE遺伝子キャピラリー電気泳動装置により測定した。TN90タバコにおける根特異的遺伝子の発現は、ArrayXpress社(Raleigh, NC)によって実施されたRNAディープシークエンシングにより決定した。
【0092】
配列決定の後、得られた配列をトリミングし、30を上回る品質スコアを有するリードをコンティグ(contig)にアセンブルした。次に、個々の配列リードをこれらのコンティグ上にマッピングした。配列決定ラン1は、合計69Mbの配列データに関して460万のマッピングされたリードをもたらし、配列決定ラン2は、合計37.5Mbの配列データに関して250万のマッピングされたリードをもたらした。これにより、106.5Mbの配列リードがN.アラタ遺伝子発現の分析に使用されることになった。
【0093】
全長コード配列は、95％配列同一性のカットオフを用いてN.ベンサミアナ(N. benthamiana：ベンサミアナタバコ)の参照ゲノムと比較することによって決定した。全長コード配列およびそれによりコードされる予測ポリペプチドは、SEQ ID NO: 1～50および70～91に示される。
【0094】
実施例3－発現レベルの分析
N.タバカムと比較して、N.アラタで異なって発現されるかまたは検出されない輸送関連遺伝子を同定するために、TN90とN.アラタの遺伝子発現データを分析した。TN90発現データを、他の組織との発現の差(＞9倍高い遺伝子発現、p値＜0.000001)に基づいて、根特異的発現についてフィルタリングした。次に、その結果を、高い根発現についてフィルタリングした(摘芯後に＞100のリード)。続いて、二次代謝産物の輸送体を表す遺伝子オントロジー(GO)用語について遺伝子をフィルタリングした(例えば、用語「輸送」を「薬物」または「プリン」と一緒に用いて、その結果をフィルタリングした)。2つの独立した配列決定ランにおいてN.アラタでは検出されなかった遺伝子を、同じGO基準を用いてフィルタリングした。その後、これらのデータセットを比較して、3つ全てのカテゴリー(すなわち、(i)高い根特異的発現、(ii)GO基準、および(iii)N.アラタでは発現されない)に分類される遺伝子を決定した。
N.タバカムと比較して、N.アラタで異なって発現されるかまたは検出されない輸送関連遺伝子を同定するために、TN90とN.アラタの遺伝子発現データを分析した。TN90発現データを、他の組織との発現の差(＞9倍高い遺伝子発現、p値＜0.000001)に基づいて、根特異的発現についてフィルタリングした。次に、その結果を、高い根発現についてフィルタリングした(摘芯後に＞100のリード)。続いて、二次代謝産物の輸送体を表す遺伝子オントロジー(GO)用語について遺伝子をフィルタリングした(例えば、用語「輸送」を「薬物」または「プリン」と一緒に用いて、その結果をフィルタリングした)。2つの独立した配列決定ランにおいてN.アラタでは検出されなかった遺伝子を、同じGO基準を用いてフィルタリングした。その後、これらのデータセットを比較して、3つ全てのカテゴリー(すなわち、(i)高い根特異的発現、(ii)GO基準、および(iii)N.アラタでは発現されない)に分類される遺伝子を決定した。
【0095】
これらの遺伝子は、TN90タバコでのそれらの発現レベルと共に、表2に示される。
【0096】
(表2) TN90における遺伝子発現
*, 摘芯後の時間; ND＝検出されず
【0097】
また、N.アラタで高度に発現されたが、N.タバカムでは発現されなかった、可能性のある調節および/または生合成遺伝子を決定するために、N.アラタ遺伝子の発現レベルをTN90発現と比べて分析した。4つの標的が同定され、それらを表3に示す。
【0098】
(表3) N.アラタで高度に発現された遺伝子の発現
a, 摘芯の72時間後に回収した根組織; *, 摘芯後の時間
【0099】
実施例4－配列アラインメント
輸送に関与すると予測される遺伝子は、5つの主なカテゴリーに分類される：ニコチン取り込みパーミアーゼ(Nup)ファミリー、多剤・毒性化合物排出型(MATE)ファミリー、多剤耐性(MDR)ファミリー、および多面的薬剤耐性(PDR)ファミリー、ならびに無関係な遺伝子のグループ。ヌクレオチド配列および予測されるポリペプチド配列を公開データベースに寄託された配列と比較した。これらの比較の結果は、表4(Nup配列)、表5(MDR配列)、表6(MATE配列)、表7(PDR配列)、表8(その他の輸送体配列)、および表9(高レベルで発現されたN.アラタ遺伝子)に示される。
輸送に関与すると予測される遺伝子は、5つの主なカテゴリーに分類される：ニコチン取り込みパーミアーゼ(Nup)ファミリー、多剤・毒性化合物排出型(MATE)ファミリー、多剤耐性(MDR)ファミリー、および多面的薬剤耐性(PDR)ファミリー、ならびに無関係な遺伝子のグループ。ヌクレオチド配列および予測されるポリペプチド配列を公開データベースに寄託された配列と比較した。これらの比較の結果は、表4(Nup配列)、表5(MDR配列)、表6(MATE配列)、表7(PDR配列)、表8(その他の輸送体配列)、および表9(高レベルで発現されたN.アラタ遺伝子)に示される。
【0100】
(表4) Nup配列
【0101】
(表5) MDR配列
【0102】
(表6) MATE配列
【0103】
(表7) PDR配列
【0104】
(表8) その他の輸送体配列
【0105】
(表9) N.アラタにおいて高レベルで発現された遺伝子
【0106】
N.タバカムと比べてN.アラタにおいて高度に発現された遺伝子の一つ、C33728は、ACリッチ結合因子(ACBF)調節タンパク質であるようである。このポリペプチドは、タバコに導入した場合、マメ由来の異種木部関連プロモーターの該プロモーター中のACリッチリピート領域に結合することが示され、全ての組織において発現されることが見出されたが、植物の茎において最も多く見られた(Seguin et al., 1997, Plant Mol. Biol., 35(3):281-91)。このポリペプチドは、遺伝子の活性化に関与している可能性がある、3つのはっきりと異なる予測RNA結合ドメインおよびグルタミンリッチ領域を含む。これらの予測ドメインは、以下のSEQ ID NO:50に下線で示される。N末端ドメインはグルタミンリッチである。このタイプのドメインアーキテクチャは複数のスプライシング因子において見出される(Lorkovic and Barta, 2002, Nuc. Acids Res., 30:623-35)。
【0107】
実施例5－RNAi系統の開発、プラスミドの構築および形質転換
候補遺伝子の機能を評価するために、一つは全長コード配列を使用し、一つはRNAi配列を使用して、二組のトランスジェニック植物を作出した(図6参照)。全長コード配列またはRNAi配列の発現のために、発現ベクター(SEQ ID NO:21)を使用したが、該ベクターは、CsVMVプロモーターおよびNOSターミネーター、ならびにアクチン2プロモーターの指令下のカナマイシン選択マーカー(NPT II)を有しかつNOSターミネーターを有するカセットを含有する。関心対象の導入遺伝子を担持する核酸構築物は、DNAボンバードメントまたは微粒子銃アプローチを用いて、タバコ葉ディスクに導入した。例えば、Sanford et al., 1993, Methods Enzymol., 217:483-510; およびOkuzaki and Tabei, 2012, Plant Biotechnology, 29:307-310を参照されたい。
候補遺伝子の機能を評価するために、一つは全長コード配列を使用し、一つはRNAi配列を使用して、二組のトランスジェニック植物を作出した(図6参照)。全長コード配列またはRNAi配列の発現のために、発現ベクター(SEQ ID NO:21)を使用したが、該ベクターは、CsVMVプロモーターおよびNOSターミネーター、ならびにアクチン2プロモーターの指令下のカナマイシン選択マーカー(NPT II)を有しかつNOSターミネーターを有するカセットを含有する。関心対象の導入遺伝子を担持する核酸構築物は、DNAボンバードメントまたは微粒子銃アプローチを用いて、タバコ葉ディスクに導入した。例えば、Sanford et al., 1993, Methods Enzymol., 217:483-510; およびOkuzaki and Tabei, 2012, Plant Biotechnology, 29:307-310を参照されたい。
【0108】
簡単に説明すると、形質転換カセットを含むプラスミドDNAを1μmの金粒子(DNA/金)に次のようにコーティングした。1μmの金粒子を180℃で12時間焼成し、ストック溶液(40mg/ml)を調製した。10ショット用の混合物を作るために、1.5mlチューブ内で100μlのストック溶液を40μlの発現ベクターDNA(1μg/μl)、100μlの2.5M CaCl2、および40μlの0.1Mスペルミジンと混合した。この混合物を13,000×gで30秒間遠心分離し、ペレットを500μlの100％エタノールで洗浄した。DNA/金混合物を100μlの水に懸濁し、10μlをマクロキャリアに塗布し、乾燥後に打ち込んだ(bombarded)。PDS-1000/Heシステム(Bio-Rad Laboratories社, Hercules, CA, 米国)で不完全真空(711mmHg)下に1,100psiラプチャーディスク(rupture disc)を用いて、プレートあたり2ショットを打ち込んだ。
【0109】
Narrow Leaf Madole(NLM)およびTennessee 90(TN90)タバコのリーフディスクをRNAi構築物による形質転換に使用し、また、ニコチアナ・アラタタバコのリーフディスクを全長候補遺伝子構築物による形質転換に使用した。全タバコ葉(長さ約45×30mm)をMS培地上に一晩置き、2日目にリーフディスクに該構築物を打ち込んだ。次に、葉を小片(約5×5mm)に切断し、TOM培地(20gスクロース/L、1mg/L IAAおよび2.5mg/L BAPを含むMS培地)上に再び置いて27℃で3～5日間生育させ、その後、300mg/1のカナマイシンを含むTOM培地(TOM-Kan)に移して生育させた。組織を新しいTOM-Kanプレートに2～3週間ごとに4～6週間移した(27℃、光線16時間)。カナマイシン耐性初代シュートは、ボンバードメント後4～6週間で再生された。シュートをMS-カナマイシンプレートに移して根を生育させた。
【0110】
T1植物体(および後続世代)からの葉および/または根は、1種または複数種のアルカロイドおよび/または1種または複数種のTSNAの量を測定するために評価される。
【0111】
実施例6－RNAi分子および発現構築物の配列
RNAi分子の配列は以下に示される。二重下線を引いた部分はループであり、これはタバコQS遺伝子配列に由来する。
RNAi分子の配列は以下に示される。二重下線を引いた部分はループであり、これはタバコQS遺伝子配列に由来する。
【0112】
【0113】
実施例7－ランダム変異誘発および変異体の特性解析
EMS変異のために、Tennessee 90タバコ(TN90)の変換種子(converter seed)1グラム(約10,000個の種子)を0.1％ Tween(登録商標)中で15分間洗浄し、次いで30mlのddH2O中に2時間浸漬した。その後、150μlの0.5％ EMS (Sigma社, カタログ番号M-0880)を種子/ddH2O溶液に混合し、換気フード下に室温(RT；約20℃)で(30rpmで回転しながら)8～12時間インキュベートした。次いで、液体を種子から除去し、その液体を除染および廃棄のために1M NaOH中で一晩混合した。その後、種子を2～4時間かけて100mlのddH2Oで2回洗浄した。洗浄した種子は、次いで、0.1％寒天：水の溶液中に懸濁した。
EMS変異のために、Tennessee 90タバコ(TN90)の変換種子(converter seed)1グラム(約10,000個の種子)を0.1％ Tween(登録商標)中で15分間洗浄し、次いで30mlのddH2O中に2時間浸漬した。その後、150μlの0.5％ EMS (Sigma社, カタログ番号M-0880)を種子/ddH2O溶液に混合し、換気フード下に室温(RT；約20℃)で(30rpmで回転しながら)8～12時間インキュベートした。次いで、液体を種子から除去し、その液体を除染および廃棄のために1M NaOH中で一晩混合した。その後、種子を2～4時間かけて100mlのddH2Oで2回洗浄した。洗浄した種子は、次いで、0.1％寒天：水の溶液中に懸濁した。
【0114】
寒天溶液中のEMS処理した種子を、薄い木箱(flat)内の水に浸したCarolina's Choice Tobacco Mix(商標)(Carolina Soil社, Kinston, NC)上に約2000個/木箱でむらなく広げた。次に、木箱をプラスチックのラップで覆い、生育チャンバーに入れた。実生の苗が土から出てきたら、プラスチックのラップに穴をあけ、湿度を徐々に低下させた。2週間後にプラスチックのラップを完全に取り除いた。木箱を温室に移して、NPK肥料を施した。苗をフロートトレイに詰め込んで、移植に適した大きさになるまで生育させた。植物を圃場に移植した。生育中に、植物を自家受粉させてM1種子を形成させた。成熟した段階で、各植物から5つの鞘を収穫し、各植物からの種子のセットに個別の名称を与えた。これによりM1集団が形成された。
【0115】
各M0植物からのM1種子の混合物を生育させ、M1植物からの葉を集めてDNAを抽出した。標的遺伝子を増幅させ、変異の同定のために配列決定した。
【0116】
実施例8－TALENを用いた標的変異誘発
遺伝子特異的TALEN認識配列は、特定の遺伝子標的内またはプロモーター配列内のいずれかに見出され、遺伝子の発現を低下させたり、または組織特異的発現を変更したりするために、標的欠失またはプロモーター挿入を可能にする。関心対象の領域の配列を以下に示す(SEQ ID NO: 61～69)。遺伝子C22474のための特定の標的配列(Pdr5b)は、関心対象の領域の対応する配列に下線が引かれている。関心対象のTALEN領域の全ての位置を図7に概略的に示す。黄色のバーは、イントロンを含む一次転写産物を表す。緑色は、プロモーター領域としてマークされる上流領域を表す。これらのTALEN部位は、既知のゲノム配列情報に基づいて、単一の遺伝子標的に特異的である。各遺伝子のTALEN領域1および2はプロモーターまたはコード領域の5'末端を破壊するために使用されるが、他の領域はコード配列のみを破壊するために使用される。
遺伝子特異的TALEN認識配列は、特定の遺伝子標的内またはプロモーター配列内のいずれかに見出され、遺伝子の発現を低下させたり、または組織特異的発現を変更したりするために、標的欠失またはプロモーター挿入を可能にする。関心対象の領域の配列を以下に示す(SEQ ID NO: 61～69)。遺伝子C22474のための特定の標的配列(Pdr5b)は、関心対象の領域の対応する配列に下線が引かれている。関心対象のTALEN領域の全ての位置を図7に概略的に示す。黄色のバーは、イントロンを含む一次転写産物を表す。緑色は、プロモーター領域としてマークされる上流領域を表す。これらのTALEN部位は、既知のゲノム配列情報に基づいて、単一の遺伝子標的に特異的である。各遺伝子のTALEN領域1および2はプロモーターまたはコード領域の5'末端を破壊するために使用されるが、他の領域はコード配列のみを破壊するために使用される。
【0117】
関心対象の遺伝子の標的配列は、転写活性化因子様(TAL)エフェクタータンパク質の可能な結合部位配列を決定するために、Life Technology社(Carlsbad, CA)に送られる。TALをLife Technology社により合成し、本発明者らの植物発現ベクターpALCS1にクローニングして、エントリーベクターとして使用する。目的に応じて、5つの異なるプロトコルを使用して変異原性タバコ系統を作出し得る：1) 1つまたは複数のエントリーベクター(標的TALを含むpALCS1)をタバコプロトプラストに直接形質転換して、ランダム配列欠失または挿入変異原性タバコ系統を作出する；2) 標的挿入配列と相同である配列が左右に配置されたドナー配列(例えばレポーター遺伝子、例：GUS遺伝子)を、1つまたは複数のエントリーベクター(標的TALを含むpALCS1)と共に、タバコプロトプラストに同時形質転換して、レポーター遺伝子を含む変異原性タバコ系統を作出する；3) 点変異を有する標的TALを含むドナー配列を、1つまたは複数のエントリーベクター(標的TALを含むpALCS1)と共に、タバコプロトプラストに同時形質転換して、点変異を有する変異原性タバコ系統を作出する；4) 組織特異的プロモーター配列を含むドナー配列により、組織特異的様式で内因性遺伝子を発現する変異型タバコ系統を作出する；および5) 上記のドナー配列とレポーター遺伝子構築物との組み合わせを含むドナー配列により、変異型タバコのスクリーニングを容易にする。
【0118】
生育室内のMagenta容器で生育中のTN90タバコ葉からタバコプロトプラストを分離する。3～4週齢の植物の十分に展開した葉(5cm)を中心部から0.5～1mmの葉片に切り取る。葉片は、葉片の両側を浸漬することによって、調製済みの酵素溶液(1％セルラーゼR10、0.25％マセロザイム(macerozyme)R10、0.4Mマンニトール、20mM KCl、20mM MES(pH5.7)、10mM CaCl2、0.1％ BSA)に移す。葉片を、振盪せずに室温で4時間から一晩かけて暗所にて消化を続けながら、デシケーターを用いて暗所で30分間減圧浸潤処理する。プロトプラストを100μmナイロンフィルターでろ過し、3mlのLymphoprepを用いて精製する。プロトプラストを遠心分離し、W5n溶液(154mM NaCl、125mM CaCl2、5mM KCl、2mM MES、991mg/lグルコースpH5.7)で洗浄し、W5n溶液に5×105個/mlの濃度で懸濁する。プロトプラストを氷上に30分間保持して、チューブの底に重力によって沈降させる。W5n溶液を除去し、プロトプラストを室温でP2溶液中に再懸濁した。50μlのDNA(10～20μgのプラスミド)、500μlのプロトプラスト(2×l05個のプロトプラスト)および550μlのPEG溶液(40％v/v 10ml 4g PEG4000、0.2Mマンニトール、0.1M CaCl2)を15mlマイクロチューブ内で穏やかに混合し、その混合物を室温で5分間インキュベートする。
【0119】
プロトプラストをペレット化し、1mlの2×8EN1 (8EN1：NH4NO3を含まないMS塩、MSビタミン、0.2％ myo-イノシトール、4mM MES、1mg/l NAA、1mg/l IAA、0.5Mマンニトール、0.5mg/l BAP、1.5％スクロース)により再懸濁する。形質転換されたプロトプラストを等量の低融点アガロース(LMA)でゼリー状にし、0.2mlのプロトプラスト-LAMを滴下してビーズを形成させる。該ビーズに10mlの8EN1を添加し、7日で、5mlの8EN1を取り出して、5mlの8EN2 (0.25Mマンニトールを含む8EN1)を追加する；さらに7日後(14日目)に、10mlの8EN2を取り出して、10mlの8EN2を追加する；さらに7日後(21日目)に、5mlの8EN2を取り出して、5mlの8EN3 (3％スクロースを含み、マンニトールを含まない8EN1)を追加する；さらに7日後(28日目)に、10mlの8EN3を取り出して、10mlの8EN3を追加する。プロトプラストをマイクロカルスの増殖まで2週間保持する。カルスが約5mmに達するまで(通常は約2週間)、それをNCM固形培地に移す。カルスをTOM-Kan固形培地に移してシュートを出させ、本明細書に記載の方法を用いて形質転換タバコ植物体を再生させた。
【0120】
(表10) TALエフェクター結合部位の配列
下線＝TAL結合部位；TAL結合部位間の非下線領域＝DNA切断が起こるように設計されている位置。
【0121】
実施例9－アルカロイド含有量の変更についての植物のスクリーニング
実施例5、6、7または8で同定されたトランスジェニック変異型タバコ植物を、10インチのポットに入れたCarolina's Choice Tobacco Mix (Carolina Soil社, Kinston, NC)で畑に似た条件下の温室で生育させる。開花期に、植物を摘芯して、2週間後に展開した葉と根から組織サンプルを採取する。
実施例5、6、7または8で同定されたトランスジェニック変異型タバコ植物を、10インチのポットに入れたCarolina's Choice Tobacco Mix (Carolina Soil社, Kinston, NC)で畑に似た条件下の温室で生育させる。開花期に、植物を摘芯して、2週間後に展開した葉と根から組織サンプルを採取する。
【0122】
該組織をすり鉢とすりこぎですりつぶす。アルカロイド含有量を、Arista Laboratories社からの認定プロトコルを用いて、質量分析に連結したガスクロマトグラフィーによって測定する。ニコチン、ノルニコチン、アナバシン、およびアナタビンの量、ならびに総アルカロイド含有量を測定する。
【0123】
実施例10－ニコチン供給アッセイ
若いトランスジェニック植物におけるニコチンの輸送は、内因性アルカロイドが測定可能になるのを待つよりもはるかに早くニコチンの量を増加させて表現型を決定するために、肥料を含んだ水と一緒にニコチンを供給することによって試験することができる。供給アッセイは2つの別々の方法で行った。第1の方法では、実生の苗をスタイロフォーム(Styrofoam)のフロートトレイに移した。これらの植物を、該トレイの底から根が出始めるまで、100ppmの肥料を含んだ水(Pete's Professional)で生育させた。次に、肥料を含んだニコチン溶液(1mMニコチン、100ppm肥料)に該トレイを3日間浮かべた。根と葉の組織を採取し、アルカロイドを上記のように抽出して分析した。葉と根のニコチン含有量だけでなく、葉と根のニコチンレベルの比率も計算した(図8)。第2の方法では、植物を4インチのポットに移した。根が土をまとめて保持する程度に十分生育した後、底を取り払った4インチのポットにそれらを移した。2週間の生育後、肥料を含んだニコチン溶液で1日2回2日間植物を処理した。ニコチン供給の前後に葉を採取し、アルカロイドを上記のように抽出して分析した。供給前後の葉のニコチン含有量を図9に示す。
若いトランスジェニック植物におけるニコチンの輸送は、内因性アルカロイドが測定可能になるのを待つよりもはるかに早くニコチンの量を増加させて表現型を決定するために、肥料を含んだ水と一緒にニコチンを供給することによって試験することができる。供給アッセイは2つの別々の方法で行った。第1の方法では、実生の苗をスタイロフォーム(Styrofoam)のフロートトレイに移した。これらの植物を、該トレイの底から根が出始めるまで、100ppmの肥料を含んだ水(Pete's Professional)で生育させた。次に、肥料を含んだニコチン溶液(1mMニコチン、100ppm肥料)に該トレイを3日間浮かべた。根と葉の組織を採取し、アルカロイドを上記のように抽出して分析した。葉と根のニコチン含有量だけでなく、葉と根のニコチンレベルの比率も計算した(図8)。第2の方法では、植物を4インチのポットに移した。根が土をまとめて保持する程度に十分生育した後、底を取り払った4インチのポットにそれらを移した。2週間の生育後、肥料を含んだニコチン溶液で1日2回2日間植物を処理した。ニコチン供給の前後に葉を採取し、アルカロイドを上記のように抽出して分析した。供給前後の葉のニコチン含有量を図9に示す。
【0124】
ニコチンレベルの減少は、PDRファミリー遺伝子C22474を標的とするRNAi構築物(pALCS-TDNA-R1)を発現する2つの植物において見出された；MDRファミリー遺伝子11099を標的とするRNAi構築物(pALCS-TDNA-R2)を発現する一つの植物は、供給後にニコチンレベルの減少を示した；さらに未分類遺伝子C43677を標的とするRNAi構築物(pALCS-TDNA-R4)を発現する一つの植物もまた、葉におけるニコチンレベルの減少を示した。RNAiの標的部位の位置を図7に示す。
【0125】
実施例11－N.タバカムとN.オトフォラとの比較
N.タバカムは、タバコ属の2つの異なる系統の交配に由来した。N.アラタは、アルカロイドを輸送しないN.シルベストリス(N. sylvestris)系統のメンバーに相当する(上記実施例3参照)。N.オトフォラ(N. otophora)は、他の系統(N.トメントシフォルミス(N. tomentosiformis))の非輸送性メンバーである。N.オトフォラからは失われているが、N.タバカムには高レベルで存在している輸送関連遺伝子を決定するために、RNAシークエンシングを実施した。
N.タバカムは、タバコ属の2つの異なる系統の交配に由来した。N.アラタは、アルカロイドを輸送しないN.シルベストリス(N. sylvestris)系統のメンバーに相当する(上記実施例3参照)。N.オトフォラ(N. otophora)は、他の系統(N.トメントシフォルミス(N. tomentosiformis))の非輸送性メンバーである。N.オトフォラからは失われているが、N.タバカムには高レベルで存在している輸送関連遺伝子を決定するために、RNAシークエンシングを実施した。
【0126】
簡単に述べると、N.オトフォラおよびN.タバカムTN90からの根サンプルを摘芯の10日後に採取した。RNAを抽出し、シークエンシングをAmbry Genetics社(Aliso Viejo, CA)で行った。RNAシークエンシングは1.25億の配列リードをもたらした。デノボコンティグ配列をN.オトフォラのために作製し、TN90から以前に得られたゲノム配列を比較のために使用した。配列リードをN.オトフォラのデノボコンティグ配列にマッピングし、次に、マッピングされなかった残りのリードをTN90ゲノムにマッピングして、N.オトフォラから欠落していると予測される遺伝子のリストを作成した。二次代謝産物の輸送に関連した遺伝子を遺伝子オントロジーの用語に基づいて選択した。さまざまな時点でのこれらの遺伝子の発現レベルを表11に示す。
【0127】
(表11) TN90における遺伝子発現
*, 摘芯後の時間；ND＝検出されず
【0128】
ヌクレオチド配列および予測されるポリペプチド配列を公開データベースに寄託された配列と比較した。これらの比較の結果を表12に示す。
【0129】
(表12) 配列アラインメント
【0130】
前記の方法および組成物は複数の異なる局面に関連して本明細書に説明されているが、さまざまな局面の前述の説明は、例示することを意図したものであり、前記の方法および組成物の範囲を限定するものではない、ことを理解すべきである。その他の局面、利点、および変更形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【0131】
配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> Altria Client Services LLC
<120> TOBACCO PLANTS HAVING ALTERED AMOUNTS OF
ONE OR MORE ALKALOIDS IN LEAF AND METHODS OF USING SUCH
PLANTS
<150> US 62/011,304
<151> 2014-06-12
<150> US 61/912,752
<151> 2013-12-06
<160> 91
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 796
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<220>
<221> misc_feature
<222> 793, 794, 795, 796
<223> n = A,T,C or G
<400> 1
atggaacatc aaggattaag caccaatatg aggagaatcc tcctgctgat taactgtcta 60
atactcgctg ttggtatctg tggtggtcct ctaatgatgc gtctatatta tagtagggtt 120
tggttacaaa ctgctggatg gccactcacc cttatacctc ttgccatcct atacttttat 180
cgtcgaaaaa ccgaaggctc taatgccaag ttttacttta taacaccccg aattttcatt 240
gcatcattcg tcattggcgt tgtcactggt cttgatgatt ttctctattc gtggggcggg 300
tcaaaactcc ctgtgtcaac ctcttcactt cttcttgctg ctcaacttgc cttcacggca 360
ataggtgctt tcttcatagt gaagctgaag ttcacaccct actctatcaa tgcagtggtt 420
ctgttgacag ttggtgctgt tttattgggt attcgatcta atggtgatcg accagagggt 480
gtgacaagta aagcctatat tcttggtttt atgatgacac ttctggcagc agctttatat 540
ggagtcattt tgccttgtat tgagttgatt tacttgaagg caaaacaagc tattactgct 600
acgttggtat tggagattca aatggtcatg tattttgcct tgtattgagt tgatttactt 660
gaaggcaaaa caagctatta ctgctacgtt ggtgttggag attcagatgg tcatgtgttt 720
tgctgctact gctttttgca ccgtaggaat gatcgccaat aacgattttc aggtactttt 780
ttcttccctt gtnnnn 796
<210> 2
<211> 215
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 2
Met Glu His Gln Gly Leu Ser Thr Asn Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
20 25 30
Met Arg Leu Tyr Tyr Ser Arg Val Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro
35 40 45
Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr
50 55 60
Glu Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr Phe Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile
65 70 75 80
Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Val Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr
85 90 95
Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu
100 105 110
Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys
115 120 125
Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val
130 135 140
Gly Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly
145 150 155 160
Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu
180 185 190
Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met
195 200 205
Val Met Tyr Phe Ala Leu Tyr
210 215
<210> 3
<211> 975
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 3
atggaacatc aaggattaag caccactatg aggagaatcc tcctgctcat taactgttta 60
atactcgctg ttggtatctg cggtggtcct ctaatgatgc gtctatatta tgtcgaggga 120
ggttcaagag tatggtttag cagttggtta caaactgctg gatggccatt cacccttata 180
cctcttgcca tcctatactt ctatcgtcga aaaaccgaag gcgctaatgc caagtattac 240
ttgataacac cccgaatttt catcgcatca ttcatcattg gcgttgtcac tggtcttgat 300
gattttctct attcgtgggg cgggtcaaaa cttcctgtgt caacctcttc acttcttctt 360
gctgctcaac ttgccttcac ggcaataggt gctttcttca tagtgaagct gaagttcaca 420
ccctactcta tcaatgcagt ggttctgttg acagttggtg ctgttttatt aggtgttcga 480
tctaatggtg atcggccaga gggtgtgaca agtaaagcct atattcttgg ttttatgatg 540
acacttttgg cagcagcttt atatggagtc attttgcctt gtattgagtt gatttacttg 600
aaggcaaagc aagctattac tgctacatta gtattggaga ttcaaatggt catgtgtttt 660
gctgctactg ctttttgcac tgttggaatg atcgccaata acgactttca gtgcttcttt 720
gtgggtgtca ttggagtcat ttactgctct tcttctttga tgtctggggt tatgatcgca 780
gttctacttc ctgttactga ggtattagct gtagttttct ttagggaaaa tttttcaggt 840
gaaaagggcc ttgctctttt tctttctctt tggggtttcg tctcatactt ttacggagag 900
ttcagacaaa caaagaagca gaagaacaaa agtccaaaaa ctgagatgac aacaacgcat 960
accgagtctg tttaa 975
<210> 4
<211> 324
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 4
Met Glu His Gln Gly Leu Ser Thr Thr Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
20 25 30
Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Val Trp Phe Ser Ser
35 40 45
Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro Phe Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile
50 55 60
Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ala Asn Ala Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Leu Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Ile Ile Gly Val Val
85 90 95
Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro
100 105 110
Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile
130 135 140
Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly Ala Val Leu Leu Gly Val Arg
145 150 155 160
Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu
165 170 175
Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu
180 185 190
Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Val Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala
210 215 220
Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Asn Asn Asp Phe Gln Cys Phe Phe
225 230 235 240
Val Gly Val Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu Met Ser Gly
245 250 255
Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu Ala Val Val
260 265 270
Phe Phe Arg Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala Leu Phe Leu
275 280 285
Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe Arg Gln Thr
290 295 300
Lys Lys Gln Lys Asn Lys Ser Pro Lys Thr Glu Met Thr Thr Thr His
305 310 315 320
Thr Glu Ser Val
<210> 5
<211> 1160
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 5
atggaagata aaggattaag caccaatatg aggagaatcc tcctactgat taactgtcta 60
atactcgctg ttggtatttg tggtggccct ctaatgatgc gtctatatta tgtcgaagga 120
ggtatggttg catgaggaga atactcctgt tggttaactg tctaatactc gctgttggtg 180
tttgtggtgg tcctcttatg atgcgcctat attatgtcga aggaggttca agagtatggt 240
tcagtagttg gttacaaact gctggatggc cactcaccct tatacctctt gccatcctat 300
acttctatcg tcgaaaaacc gaaggctcta atgccaagtt ttactttata acaccccgaa 360
ttttcattgc atcattcatc attggcgttg tcactggtgt tgatgatttt ctctattcgt 420
ggggcgggtc aaaactccct gtgtcaacct cttcacttct tcttgctgct caacttgcct 480
tcacggcagt aggtgctttc ttcatagtaa agttaaagtt cacaccctac tccatcaatg 540
cagtgatttt gttgacagtt ggtgctgttt tattgggtgt tcgatctaat ggtgatcgac 600
cagaaggtgt gacaagtaaa gcctatattc ttggttttat gatgacactt ctggcagcag 660
ctttgtatgg agtcattttg ccttgtattg agttgattta cttgaaggca aaacaagcta 720
ttactgctac gttggtgttg gagattcaga tggtcatgtg ttttgctgct actgcttttt 780
gcaccgtagg aatgatagca atatcaaggg aggcaaaaca atttaacctc ggagaagcta 840
gatattatac agtgatagta tggactgcca ttatttggca atgcttcttt gtgggtgtta 900
ttggagtcat ttactgctct tcttctttga tgtctggtgt tatgatcgca gttttactcc 960
ctgttactga ggtattagct gtagtttttt ttagggaaaa gttttcaggt gaaaagggcc 1020
ttgctttatt cctttctctt tggggtttcg tctcatactt ttacggagag ttcagacaaa 1080
caaagaagca gaagaataaa agtccagaaa ctgagatgac aatgatgcat accgagtctg 1140
tttgatttat tgagactgtt 1160
<210> 6
<211> 337
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 6
Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu Val Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly
1 5 10 15
Val Cys Gly Gly Pro Leu Met Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly
20 25 30
Ser Arg Val Trp Phe Ser Ser Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro Leu
35 40 45
Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr Glu
50 55 60
Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr Phe Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala
65 70 75 80
Ser Phe Ile Ile Gly Val Val Thr Gly Val Asp Asp Phe Leu Tyr Ser
85 90 95
Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala
100 105 110
Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Val Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu
115 120 125
Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Asn Ala Val Ile Leu Leu Thr Val Gly
130 135 140
Ala Val Leu Leu Gly Val Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val
145 150 155 160
Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala
165 170 175
Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys
180 185 190
Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Val
195 200 205
Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Ile
210 215 220
Ser Arg Glu Ala Lys Gln Phe Asn Leu Gly Glu Ala Arg Tyr Tyr Thr
225 230 235 240
Val Ile Val Trp Thr Ala Ile Ile Trp Gln Cys Phe Phe Val Gly Val
245 250 255
Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu Met Ser Gly Val Met Ile
260 265 270
Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu Ala Val Val Phe Phe Arg
275 280 285
Glu Lys Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala Leu Phe Leu Ser Leu Trp
290 295 300
Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe Arg Gln Thr Lys Lys Gln
305 310 315 320
Lys Asn Lys Ser Pro Glu Thr Glu Met Thr Met Met His Thr Glu Ser
325 330 335
Val
<210> 7
<211> 1223
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 7
ccttcggaga agaaaagcat ttcagcctga gtaacagaat actccaattt agtatccaaa 60
tctctagaaa aaaaatatgg aacatccagg attaagcacc aatatgagga gaatcctcct 120
gctgattagc tgcttaatac tcgctgttgg catatgtggt ggtcctctaa tgatgcgtct 180
atattatgtc gagggaggtt caagaatatg gcttagcagt tggttacaaa ctggtggatg 240
gccactcacc cttatacctc ttgccatcct atactattat cgtcgaaaaa ccgaaggctc 300
aaacgccaag ttttacttga tgacaccccg aatttttatt gcatcatttg ttattggcgt 360
tgccactggt cttgatgatt ttctctattc gtggggcggg tcaaaactcc ccgtatcaac 420
ctcttcactt cttcttgctg ctcaacttgc cttcacggca gtaggtgggt caaaactccc 480
cgtatcaacc tcttcacttc ttcttgctgc tcaacttgcc ttcacggcag taggtgcttt 540
cttcatagtg aagttgaagt tatcaccctt ctctatcaat gcagtggttt tactaacagt 600
tggtgctgtt ttattgggta ttcgatctaa tggtgatcga ccagagggcg tgacaagtaa 660
agaatatatt attggtttta tgatgacact tctagcagca gctttgtacg gagtcatttt 720
gccttgtatt gagttgattt acatgaaggc aaaacaagct attacttcta cgttagtatt 780
ggagattcag atgatcatgt gttttgctgc tactgctttt tgcactgtag gaatgatcgc 840
caataaggac tttcaggcaa tgtcaaggga ggcaaaacaa tttaacctcg gagaagctag 900
atattataca gttatagtat gcactgccgc tatttggcag tgcttcttcg tgggtattat 960
tggagttatc tactgctctt cttctttgat gtctggggtt atgattgcag ttttgctccc 1020
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tgctcttttc ctttctcttt ggggtttcgt ctcatacttc tatggagagt tcagacaaac 1140
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Ile Ser Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
20 25 30
Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Ile Trp Leu Ser Ser
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Trp Leu Gln Thr Gly Gly Trp Pro Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile
50 55 60
Leu Tyr Tyr Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Met Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Ala
85 90 95
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100 105 110
Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Val Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala
130 135 140
Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Val Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu
145 150 155 160
Lys Leu Ser Pro Phe Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly
165 170 175
Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val
180 185 190
Thr Ser Lys Glu Tyr Ile Ile Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala
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Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Met Lys
210 215 220
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Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Asn
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Lys Asp Phe Gln Ala Met Ser Arg Glu Ala Lys Gln Phe Asn Leu Gly
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Glu Ala Arg Tyr Tyr Thr Val Ile Val Cys Thr Ala Ala Ile Trp Gln
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Cys Phe Phe Val Gly Ile Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu
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Met Ser Gly Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu
305 310 315 320
Ala Val Ile Phe Phe Lys Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala
325 330 335
Leu Phe Leu Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe
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Arg Gln Thr Lys Lys Gln Lys Asn Lys Ser Pro Glu Ala Glu Met Thr
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Arg Thr Thr Thr His Thr Glu Ser Val
370 375
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 9
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aggactcttc tatcttccat tgatgtgctg cttttgctta ctttcattgt atttgcagta 120
caaaagttgt actcaaagtt gaggtccaat gagcactcta cttctagcat tgataagcct 180
ctaattgcac acaacaggac ttctgttaga accaatcttt ggtttaagct gtctctgatt 240
ttgtcagcta ttttagcctt atcttctata gttttatgca ttttggttat tgtgggaaat 300
tcccagtcgc cttggaaagt catagatgga ctgtattggt tgtttcaggc gattacacat 360
gttgtaatca ctatactaat agttcatgag aaaagatttc acgctatttc ccatccactg 420
tccctgcgcg tgttttggat tgcaaacttt gtagttatga gtttgttctt tggttgtgga 480
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tcattagttt catttcctat ttctgttgtt ctcttcattg ttgccattaa aggttcgacc 600
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tggaaggaag ttatttttac tgccattctt gcagtaatta gggtatgtgt tatgtatgta 960
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<213> Nicotiana tabacum
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Met Cys Cys Phe Cys Gly Lys Ile Phe Pro Pro Phe Ile Phe Leu Ser
1 5 10 15
Pro Cys Pro Gln Arg Thr Leu Leu Ser Ser Ile Asp Val Leu Leu Leu
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Leu Thr Phe Ile Val Phe Ala Val Gln Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Arg
35 40 45
Ser Asn Glu His Ser Thr Ser Ser Ile Asp Lys Pro Leu Ile Ala His
50 55 60
Asn Arg Thr Ser Val Arg Thr Asn Leu Trp Phe Lys Leu Ser Leu Ile
65 70 75 80
Leu Ser Ala Ile Leu Ala Leu Ser Ser Ile Val Leu Cys Ile Leu Val
85 90 95
Ile Val Gly Asn Ser Gln Ser Pro Trp Lys Val Ile Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Trp Leu Phe Gln Ala Ile Thr His Val Val Ile Thr Ile Leu Ile Val
115 120 125
His Glu Lys Arg Phe His Ala Ile Ser His Pro Leu Ser Leu Arg Val
130 135 140
Phe Trp Ile Ala Asn Phe Val Val Met Ser Leu Phe Phe Gly Cys Gly
145 150 155 160
Val Thr Arg Leu Val Ser Leu Lys Glu Ile Asp Pro Asn Leu Arg Met
165 170 175
Asp Asp Ile Ser Ser Leu Val Ser Phe Pro Ile Ser Val Val Leu Phe
180 185 190
Ile Val Ala Ile Lys Gly Ser Thr Gly Val Ala Val Ile Ser Asp Ser
195 200 205
Glu Ser His Leu Ser Asp Glu Thr Asn Gly Tyr Glu Leu Leu Asp Lys
210 215 220
Ser Ser Val Ser Gly Phe Ala Ser Ala Ser Leu Ile Ser Lys Ala Phe
225 230 235 240
Trp Ile Trp Met Asn Pro Leu Leu Gln Lys Gly Tyr Lys Ser Pro Leu
245 250 255
Lys Ile Asp Glu Val Pro Ser Leu Ser Pro Leu His Arg Ala Glu Lys
260 265 270
Met Ser Gln Leu Phe Glu Arg Asn Trp Pro Lys Pro Glu Glu Ile Ser
275 280 285
Lys His Pro Val Arg Thr Thr Leu Leu Arg Cys Phe Trp Lys Glu Val
290 295 300
Ile Phe Thr Ala Ile Leu Ala Val Ile Arg Val Cys Val Met Tyr Val
305 310 315 320
Gly Pro Thr Leu Ile Gln Arg Phe Val Asp Tyr Thr Ala Gly Lys Arg
325 330 335
Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile Gly Thr Leu Leu Ile Ala
340 345 350
Lys Phe Val Glu Val Arg Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile
355 360 365
Gly Thr Leu Leu Ile Ala Lys Phe Val Glu Val Leu Thr Ser His Gln
370 375 380
Phe Asn Phe Asn Ser Gln Lys Leu Gly Met Leu Ile Arg Ala Thr Leu
385 390 395 400
Leu Thr Ser Leu Tyr Lys Lys Gly Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Arg
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Gln Gln Leu Ser Asp Met Met Leu Gln Leu His Ser Ile Trp Leu Met
435 440 445
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485 490 495
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Ser Lys Leu Ile Lys Glu Glu Glu Arg Glu Thr Gly Lys Val Ser Pro
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Val Leu Val Ile Leu Phe Ser Phe Leu Trp Gln Ser Ser Leu Met Ala
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Ser Asp Tyr Trp Leu Ala Tyr Glu Thr Ser Ala Asp Arg Ala Met Ser
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Phe Asn Pro Ser Leu Phe Ile Gly Ile Tyr Gly Val Ile Ala Val Val
980 985 990
Ser Ser Leu Leu Ile Val Ile Arg Met Tyr Phe Val Thr Leu Met Gly
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Leu Lys Thr Ala Gln Ile Phe Phe Gly Gln Ile Leu Tyr Ser Ile Leu
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Leu Gly Trp Leu Asn Ile Trp Tyr Arg Gly Tyr Tyr Leu Ala Thr Ser
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Arg Glu Leu Thr Arg Leu Asp Ser Ile Thr Lys Ala Pro Val Ile His
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His Phe Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Met Thr Ile Arg Cys Phe Arg
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Arg Leu Glu Leu Met Gly Ser Leu Leu Leu Cys Val Ser Ala Met Phe
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Met Ile Val Leu Pro Ser Ser Ile Ile Lys Pro Glu Asn Val Gly Leu
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Ser Leu Ser Tyr Gly Leu Ser Leu Asn Ser Val Leu Phe Trp Ser Ile
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<211> 3684
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 11
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aggctactgg ctatgaattt gccagaatgg aaggaagcaa cgctgggatg tataggagca 1980
atattatttg gaggagttca accagtgtat gcttttgcaa tggggtcaat gatttctgtc 2040
tatttcttgc ctagtcatga tgagattaag gagaagacta agatatatgc tctgtgtttc 2100
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<213> Nicotiana tabacum
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Ile Phe Lys Asp Leu Cys Leu Thr Ile Pro Ser Gly Lys Thr Val Ala
1045 1050 1055
Leu Val Gly Glu Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Ile Ser Leu Ile
1060 1065 1070
Glu Arg Phe Tyr Asn Pro Glu Ser Gly Glu Ile Tyr Leu Asp Gly Val
1075 1080 1085
Glu Ile Lys Gln Phe Lys Leu Ser Trp Leu Arg Gln Gln Met Gly Leu
1090 1095 1100
Val Ser Gln Glu Pro Ile Leu Phe Asn Glu Thr Ile Arg Asp Asn Ile
1105 1110 1115 1120
Ala Tyr Ser Arg Gln Gly Asn Ala Thr Glu Glu Glu Ile Ile Gln Ala
1125 1130 1135
Ala Lys Ser Ala Asn Ala His Asn Phe Val Ser Ser Leu Pro Gln Gly
1140 1145 1150
Tyr Asp Thr Ser Val Gly Glu Arg Gly Val Gln Leu Ser Gly Gly Gln
1155 1160 1165
Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile
1170 1175 1180
Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ala Glu Ser Glu Ser
1185 1190 1195 1200
Ile Val Gln Glu Ala Leu Asp Arg Val Met Val Asn Arg Thr Thr Val
1205 1210 1215
Val Val Ala His Arg Leu Thr Thr Ile Lys Gly Ala Asp Ile Ile Ala
1220 1225 1230
Val Val Lys Asn Gly Val Ile Ala Glu Lys Gly Arg His Glu Val Leu
1235 1240 1245
Met Asn Ile Lys Asp Gly Val Tyr Ala Ser Leu Val Ala Leu His Met
1250 1255 1260
Thr Ser Thr
1265
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<211> 3847
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 15
tacgaaccta acaatttcca ttgtcacctt ttttcagctg ttggcgtgta gaaacggacc 60
tttgagcatt gttgaacttg ttttagaaaa gaaaaagaat gacgacttca tctgaaaaag 120
cattagcgaa gaaagataga aattcagtag ctattatttt cagatatgct gatggaatag 180
acattttatt gatgtgtttg ggcactattg gagccattgg agatggcata tcaacaaact 240
gtttgctggt atatgttagc catcttttta atagcttggg ttatggtaag actcaacaga 300
acaatgagat ttttatggaa gaaattgaga agtgcagctt gtattttgta ttattgggat 360
tggcagtcat ggttgtggcc tttatggaag gttactgctg gagtaaaaca agtgagcggc 420
aagtgctaaa aattcggtac aagtatttgg aagccattct taggcaagaa gttggtttct 480
ttgattctca agaagctacc acatcggaaa tcactaacag catttcgaaa gacacttgtc 540
tcatacagga agttcttagt gaaaaggtac ccatattttt tatgcataca acagttttca 600
tgtcaggaat tgcattttca gcctacttct cgtggaggtt ggctttagtt gccttaccaa 660
cacttattct cctcataatc ccaggtttga tctatgggaa atatctactc catttgtctg 720
aaaagtcgtt caaggaatat gggaaagcaa atgctattgt atggcaggct cttagctcca 780
ttaaaactat atattcattt actggtgaga agagcgtgat tgaaaggtat tcttcgattc 840
ttgatcgaac cataatgctg ggaatgaagc aaggaattgc aaaaggtctt gctgttggaa 900
gcactgggct ttcctttgca atatgggctt tactagcatg gtatgggagc catttgatta 960
tgcacaaagg agaaagtggt ggcagaattt atgcagctgg agtttctttt gtcttgggtg 1020
gactatcgct tgggatggca ctgcctgagg tgaaatactt gacagaagct tcagttgctg 1080
cctcaagaat atttgccagg attgatcgcg ttccagaaat tgatggggaa cacacaaggg 1140
gactcgttct agaaaatatt agaggagaag ttgaattcaa gaatgtaaac ttcacatatc 1200
cttgtcggcc agatagcgtt gtgctcaagg aattcaatct taaaattgaa gcaggaaaaa 1260
cagtggccct tgttggagca agtggtagtg gaaaatccac tgccattgcc atgattcaaa 1320
ggttttatga tactaacgtt ggagctatat gtattgatgg tgtagatata aagtcattgc 1380
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catctattaa gaagaatatt atgttaggga aaattgacgc aagcatggat gaagttgtgg 1500
ctgcagcaat gactgcgaat gctcataatt tcattacgca acttccagaa ggatatgaga 1560
ccaagattgg tgaaagagga gcatttttat caggtgggca aaagcaacga gtggcaatag 1620
cgagggccat agtgaaaaat ccagcgatac ttctactaga tgaggccaca agtgcacttg 1680
attctgaatc agaaaaacta gttcaggagg ctctagatca agcctccatt ggaagaacta 1740
cactggttgt tgcccacaag ttatcaacag ttagaaatgc agacctcatt gcaatagtga 1800
gtagtggttg catcactgaa ctagggtcac acaatgagct tatcgagaaa gatggacact 1860
atggaagaat ggcaaaactt caaagacaat ttagctctgt tgatcaagaa caaagcgcca 1920
aatctcttat ttcttcagta ggaagaagca gtgcaggaag acaacgctca attattagat 1980
caagtccgac tgtattcgcc tcacctttac tcatcgaaga cagctcccaa gcttcacctc 2040
atcctccccc ttccttctct cggctccttt tactaaactt acctgaatgg aagcaaggaa 2100
taattggaag cttatctgcc atttcatttg gttcagtgca gcctgtatat gcactgacca 2160
taggtggcat gatttcagca ttttactcac caactcacga ggaaatgcaa tttagaattc 2220
agaaatactg tttgattttc agtatccttt gccttgtttc atttgttctc aatctatgcc 2280
aacattacaa ttttgcttac atgggagaac gcctgacaag aagaataaga atgcaaatgc 2340
ttgagaaaat cttgacgttt gaagcagcct ggtttgatga ggaacagaat tcaagtggag 2400
ccttatgttc tagattgagc aatgaagcag ctatggttaa atcccttgtt gctgatagag 2460
tctcactctt ggtccaaagc atttcagctg tcactgttgc catggtaatg gggctagttg 2520
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acacgcgaaa agtcttgcta tccaccatca cagctaagtt cgtcaaggca caatatcaaa 2640
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ttgttggaaa gagtggctgc ggaaaatcaa cagtgattgc cttgattcaa agattttacg 3240
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caatattacg gaaaccaacc atactacttt tagacgaagc aacgagtgct ctagatgttc 3540
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Val Ala Ile Ile Phe Arg Tyr Ala Asp Gly Ile Asp Ile Leu Leu Met
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Cys Leu Gly Thr Ile Gly Ala Ile Gly Asp Gly Ile Ser Thr Asn Cys
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Leu Leu Val Tyr Val Ser His Leu Phe Asn Ser Leu Gly Tyr Gly Lys
50 55 60
Thr Gln Gln Asn Asn Glu Ile Phe Met Glu Glu Ile Glu Lys Cys Ser
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Leu Tyr Phe Val Leu Leu Gly Leu Ala Val Met Val Val Ala Phe Met
85 90 95
Glu Gly Tyr Cys Trp Ser Lys Thr Ser Glu Arg Gln Val Leu Lys Ile
100 105 110
Arg Tyr Lys Tyr Leu Glu Ala Ile Leu Arg Gln Glu Val Gly Phe Phe
115 120 125
Asp Ser Gln Glu Ala Thr Thr Ser Glu Ile Thr Asn Ser Ile Ser Lys
130 135 140
Asp Thr Cys Leu Ile Gln Glu Val Leu Ser Glu Lys Val Pro Ile Phe
145 150 155 160
Phe Met His Thr Thr Val Phe Met Ser Gly Ile Ala Phe Ser Ala Tyr
165 170 175
Phe Ser Trp Arg Leu Ala Leu Val Ala Leu Pro Thr Leu Ile Leu Leu
180 185 190
Ile Ile Pro Gly Leu Ile Tyr Gly Lys Tyr Leu Leu His Leu Ser Glu
195 200 205
Lys Ser Phe Lys Glu Tyr Gly Lys Ala Asn Ala Ile Val Trp Gln Ala
210 215 220
Leu Ser Ser Ile Lys Thr Ile Tyr Ser Phe Thr Gly Glu Lys Ser Val
225 230 235 240
Ile Glu Arg Tyr Ser Ser Ile Leu Asp Arg Thr Ile Met Leu Gly Met
245 250 255
Lys Gln Gly Ile Ala Lys Gly Leu Ala Val Gly Ser Thr Gly Leu Ser
260 265 270
Phe Ala Ile Trp Ala Leu Leu Ala Trp Tyr Gly Ser His Leu Ile Met
275 280 285
His Lys Gly Glu Ser Gly Gly Arg Ile Tyr Ala Ala Gly Val Ser Phe
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Val Leu Gly Gly Leu Ser Leu Gly Met Ala Leu Pro Glu Val Lys Tyr
305 310 315 320
Leu Thr Glu Ala Ser Val Ala Ala Ser Arg Ile Phe Ala Arg Ile Asp
325 330 335
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340 345 350
Asn Ile Arg Gly Glu Val Glu Phe Lys Asn Val Asn Phe Thr Tyr Pro
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Cys Arg Pro Asp Ser Val Val Leu Lys Glu Phe Asn Leu Lys Ile Glu
370 375 380
Ala Gly Lys Thr Val Ala Leu Val Gly Ala Ser Gly Ser Gly Lys Ser
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Thr Ala Ile Ala Met Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Thr Asn Val Gly Ala
405 410 415
Ile Cys Ile Asp Gly Val Asp Ile Lys Ser Leu Gln Leu Lys Trp Leu
420 425 430
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Ser Ile Lys Lys Asn Ile Met Leu Gly Lys Ile Asp Ala Ser Met Asp
450 455 460
Glu Val Val Ala Ala Ala Met Thr Ala Asn Ala His Asn Phe Ile Thr
465 470 475 480
Gln Leu Pro Glu Gly Tyr Glu Thr Lys Ile Gly Glu Arg Gly Ala Phe
485 490 495
Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Ile Val
500 505 510
Lys Asn Pro Ala Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp
515 520 525
Ser Glu Ser Glu Lys Leu Val Gln Glu Ala Leu Asp Gln Ala Ser Ile
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Gly Arg Thr Thr Leu Val Val Ala His Lys Leu Ser Thr Val Arg Asn
545 550 555 560
Ala Asp Leu Ile Ala Ile Val Ser Ser Gly Cys Ile Thr Glu Leu Gly
565 570 575
Ser His Asn Glu Leu Ile Glu Lys Asp Gly His Tyr Gly Arg Met Ala
580 585 590
Lys Leu Gln Arg Gln Phe Ser Ser Val Asp Gln Glu Gln Ser Ala Lys
595 600 605
Ser Leu Ile Ser Ser Val Gly Arg Ser Ser Ala Gly Arg Gln Arg Ser
610 615 620
Ile Ile Arg Ser Ser Pro Thr Val Phe Ala Ser Pro Leu Leu Ile Glu
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Leu Leu Leu Asn Leu Pro Glu Trp Lys Gln Gly Ile Ile Gly Ser Leu
660 665 670
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675 680 685
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Asp Gly Met Asp Ile Arg Leu Leu Asp Ile Gly Trp Tyr Arg Arg Gln
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Met Ala Leu Val Ser Gln Glu Pro Ala Pro Ser Met Lys Thr Phe Cys
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Leu Ala Asn Leu Met His Gln Lys Met Arg Ser Leu Asp Asn Gly Tyr
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Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Arg Lys Pro Thr Ile Leu
1125 1130 1135
Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Val Gln Ser Glu Gln Val
1140 1145 1150
Val Gln Glu Ala Leu Asp Arg Leu Met Val Gly Arg Thr Thr Val Val
1155 1160 1165
Val Ala His Arg Leu Asn Thr Ile Arg Asn Leu Asp Ser Ile Val Phe
1170 1175 1180
Val Tyr Glu Gly Lys Val Val Glu Lys Gly Thr Tyr Ser Gln Leu Lys
1185 1190 1195 1200
Asp Lys Arg Gly Ala Phe Phe Asn Leu Val Lys Leu Gln Ser Thr Cys
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Glu Glu Met Tyr Ser Arg Ile Val Ser Asn Phe Gly His Ile Asp Asn
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Leu Cys Ser Leu Lys Trp Ile Lys Ser Leu Leu Cys Ile Phe
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<213> Nicotiana tabacum
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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000
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gatcagtctg tacaatcatt ggtttcaccc ctcaggcgca ttagctaacg agttttgctc 60
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gaagtattta atactgagag cacttggtgc tcctgcagtc ctcctttctc tggctatgca 840
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atgctttgga tttactatgc atttctcaag acaaacacga cccttatcat caccataaac 2220
tcctttggct gcattgcgga gactatttat attgctattt attttgctta tgcgacaaaa 2280
aaaacaagga tgcaaacgtt gagacttgtt ctaatgttga atttcggtgg ctttgggttg 2340
attcttttcc tcacccaaat tttatgcaaa ggagcaaaac gagctgaagt tattggatgg 2400
atttgcatgg cgttttctat tagtgtgttt gtagcacctc taagcattat ggggcgggta 2460
atacggacca aaagtgtgga gttcatgcca tttaacttgt cgttaaccct tacacttagt 2520
gctgtgataa acgccaagcc aaataatcag gcagaagaga agaaactacc cactgttgtg 2580
aagctggagg agttgcctac aaaagttaat tctgaggttt atccagttag tttaccatcc 2640
atgggcagtg aaaacggaga ggctaaagat ggtaaacatt ttgaagatgc ccaaatcaaa 2700
tctcctatta tttacctgga aattaaccta actactgata caccgaattc cggtacaact 2760
tgcaagtcag taagtctagg gcaaaagtaa 2790
<210> 22
<211> 547
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 22
Met Ala Glu Gly Gly Asn Val Ala Cys Thr Glu Arg Lys Cys Lys Ile
1 5 10 15
Pro Leu Phe Val Phe Phe Glu Asp Ile Arg His Val Phe Lys Phe Asp
20 25 30
Asp Leu Gly Met Glu Ile Leu Ser Ile Ala Phe Pro Ala Ala Leu Ala
35 40 45
Leu Ala Ala Asp Pro Ile Ala Ser Leu Ile Asp Thr Ala Phe Ile Gly
50 55 60
His Leu Gly Ser Val Glu Ile Ala Ala Val Gly Val Ser Ile Ala Ile
65 70 75 80
Phe Asn Gln Ala Ser Lys Val Thr Ile Phe Pro Leu Val Asn Ile Thr
85 90 95
Thr Ser Phe Val Ala Glu Glu Asp Thr Val Arg Arg Ile Lys Glu Lys
100 105 110
Ala Ala Ile Ala Asp Leu Glu Lys Gly Ser Glu Glu Lys Asn Asp Thr
115 120 125
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Ala Ser Thr Lys Val Glu Thr Lys Glu Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro
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Ala Ala Glu Phe Lys Thr Thr Ala Cys Lys Ser Pro Asp Asn Gln Ser
165 170 175
Lys Gly Lys Val Lys Arg Val Lys Arg His Ile Pro Ser Ala Ser Thr
180 185 190
Ala Ile Leu Met Gly Cys Ile Leu Gly Ile Leu Gln Thr Ile Phe Leu
195 200 205
Ile Phe Leu Ala Lys Pro Ile Leu Ser Leu Met Gly Val Lys Ser Gly
210 215 220
Ser Ala Met Leu Ser Pro Ala Lys Lys Tyr Leu Ile Leu Arg Ala Leu
225 230 235 240
Gly Ala Pro Ala Val Leu Leu Ser Leu Ala Met Gln Gly Val Phe Arg
245 250 255
Gly Phe Lys Asp Thr Arg Thr Pro Leu Tyr Ala Thr Val Ala Gly Asp
260 265 270
Leu Thr Asn Ile Val Leu Asp Pro Ile Phe Ile Phe Val Phe Arg Trp
275 280 285
Gly Val Ser Gly Ala Ala Ile Ala His Val Leu Ser Gln Tyr Leu Ile
290 295 300
Ser Ile Ile Leu Leu Cys Lys Leu Met Thr Glu Val Glu Leu Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Ala Lys Asp Leu Gln Phe Ser Lys Phe Leu Lys Asn Gly Phe
325 330 335
Trp Leu Leu Ala Arg Val Ile Ala Val Thr Phe Cys Val Thr Leu Ala
340 345 350
Ala Ser Leu Ala Ala Arg Leu Gly Thr Thr Pro Met Ala Ala Phe Gln
355 360 365
Val Cys Leu Gln Ile Trp Leu Thr Ser Ser Leu Leu Ala Asp Gly Leu
370 375 380
Ala Val Ala Gly Gln Ala Ile Leu Ala Ser Ser Phe Ala Glu Lys Asp
385 390 395 400
Tyr Gln Lys Ala Lys Ala Ala Gly Val Arg Val Leu Gln Met Gly Phe
405 410 415
Val Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu Val Val Gly Ile Gly Leu Tyr Phe
420 425 430
Gly Ser Gly Val Phe Ser Lys Asp Lys Asn Val Ile Arg Leu Ile Thr
435 440 445
Ile Ala Ile Pro Phe Val Ala Gly Thr Gln Pro Ile Asn Ser Leu Ala
450 455 460
Phe Val Leu Asp Gly Val Asn Phe Gly Ala Asn Asp Phe Ala Tyr Ser
465 470 475 480
Ala Tyr Ser Met Val Leu Val Gly Ala Leu Thr Val Thr Cys Glu Phe
485 490 495
Val Leu Ser Lys Ser Asn Gly Tyr Ile Gly Ile Trp Ile Ala Leu Thr
500 505 510
Ile Phe Met Ala Leu Arg Thr Ile Ala Gly Leu Trp Arg Met Gly Thr
515 520 525
Gly Thr Gly Pro Trp Arg Phe Leu Arg Ile Pro Ser Ser Ser Pro Glu
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Ala Lys Ser
545
<210> 23
<211> 2179
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 23
ataaatatga aactatatca tctaaacaat tgtcagttgt gagtgaatgt tatgaatgag 60
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gaggaaattg cagacttggt gactatgatg tgaaccatgg ttagaggata ggggtaaatt 180
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tatgctgctt taatttggag aacaaagcag caaaagatta gatatggcga tggaagaggc 300
actgctggat gtgaataata ataataataa taataataat aataaggtag tgtttgggaa 360
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gagtgcagtg gagacactat gtgggcaggc atatggagct cacaagtatg gaaatcttgg 600
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tatttctata ttcgtggtcc gccatgtatg gggctatgta tttacctatg agaaagaagt 1380
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accttgctct tggggtgac 2179
<210> 24
<211> 479
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 24
Met Ala Met Glu Glu Ala Leu Leu Asp Val Asn Asn Asn Asn Asn Asn
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Asn Asn Asn Asn Lys Val Val Phe Gly Lys Glu Val Lys Glu Val Ser
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Arg Ile Ala Met Pro Met Ile Val Val Thr Val Ser Gln Tyr Leu Leu
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Arg Val Ser Pro Met Ile Met Leu Gly His Leu Gly Glu Leu Gln Leu
50 55 60
Ser Ser Ala Ser Ile Ala Thr Ser Leu Ser Asn Val Thr Gly Phe Ser
65 70 75 80
Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala
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100 105 110
Ile Ile Cys Leu Phe Leu Val Cys Ile Pro Val Ser Val Leu Trp Ile
115 120 125
Phe Thr Asp Arg Leu Leu Ile Leu Met Gly Gln Asp Pro Glu Ile Ala
130 135 140
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Tyr Ala Ile Leu Gln Ser Leu Val Arg Tyr Leu Gln Ala Gln Ser Leu
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Ile Leu Pro Met Leu Leu Ser Ala Val Val Ser Leu Cys Phe Gln Val
180 185 190
Pro Ile Cys Trp Val Phe Ile Phe Lys Leu Asp Leu Gly Asn Ala Gly
195 200 205
Ala Ala Met Ser Ile Gly Leu Ser Tyr Trp Leu Asn Val Ile Leu Leu
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Phe Ser Arg Asp Val Phe Leu Thr Ile Gly Asp Phe Phe Arg Phe Ala
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Ile Pro Ser Ala Val Met Val Cys Leu Glu Trp Trp Ser Phe Glu Leu
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Ile Ile Leu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Pro Ala Leu Glu Thr Ser
275 280 285
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290 295 300
Tyr Ser Phe Gly Ala Ala Ala Ser Thr Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly
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Ala Gly Arg Pro Gln Ala Ala Lys Val Ala Leu Gly Ala Val Leu Ile
325 330 335
Leu Ser Val Thr Glu Val Val Leu Ala Ser Ile Ser Ile Phe Val Val
340 345 350
Arg His Val Trp Gly Tyr Val Phe Thr Tyr Glu Lys Glu Val Ile Thr
355 360 365
Tyr Val Ala Glu Ile Thr Pro Val Leu Cys Ile Ser Ile Ile Met Asp
370 375 380
Gly Thr Gln Ala Val Leu Ser Gly Val Ala Arg Gly Ser Gly Trp Gln
385 390 395 400
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Pro Thr Ala Leu Leu Leu Gly Phe Val Leu His Leu Lys Gly Lys Gly
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Leu Trp Ile Gly Leu Val Ala Gly Ala Thr Val Gln Ser Ile Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ile Thr Gly Leu Thr Asn Trp Glu Lys Gln Ala Ile Glu Ala
450 455 460
Arg His Arg Ile Phe Ser Gly Arg Pro Ala Val Glu Asn Gln Asn
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<210> 25
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<220>
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<220>
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<221> misc_feature
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ggaagaggca ctgctggatg tgaataataa taataataat aataataata ataaggtagt 60
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nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnngaaata aaccttcaac ttgctatgat ttagcgagaa 1500
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tgtacgcaga ccttacccct accctggggt agagaggctg tttccaatag accctcggca 1860
taaatccc 1868
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<400> 26
000
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 27
ttaacctttt attatctcaa atgaaacctc gagatgacaa cttcatctag tatttatatg 60
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atttattttc caagaatata ctgctcgctc ttggtgaatc aaaactagtg gcatcagcag 600
cagcagtatt tgtttatggt ttgattccac aaatttttgc ttatgcggtg aacttcccaa 660
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tccaattaa 1869
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<211> 500
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<213> Nicotiana tabacum
<400> 28
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Ala His Gly Gly Ser Ser Glu Leu Glu Glu Val Leu Ser Asp Ser Gln
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Leu Leu Tyr Arg Leu Ala Ala Pro Ser Val Ala Val Tyr Met Ile Asn
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Ala Tyr Gly Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys
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Leu Val Ala Ser Ala Ala Ala Val Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln
165 170 175
Ile Phe Ala Tyr Ala Val Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ser
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Gln Ser Ile Val Ala Pro Ser Ala Phe Ile Ser Leu Gly Thr Leu Phe
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Val His Ile Leu Leu Ser Trp Val Val Val Tyr Lys Ile Gly Leu Gly
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Leu Leu Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser Phe Ser Trp Trp Ile Ile Val
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Val Ala Gln Phe Ile Tyr Ile Leu Lys Ser Glu Arg Cys Lys Ala Thr
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Trp Ala Gly Phe Arg Trp Glu Ala Phe Ser Gly Leu Cys Gln Phe Val
260 265 270
Lys Leu Ser Ala Gly Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr
275 280 285
Phe Gln Ile Leu Val Leu Leu Ser Gly Leu Leu Lys Asn Pro Glu Ile
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Ala Leu Ala Ser Ile Ser Val Cys Leu Ala Val Asn Gly Leu Met Phe
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Met Val Ala Val Gly Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn
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Glu Leu Gly Ala Ala His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Phe Met
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Val Thr Phe Ile Ser Phe Leu Ile Ala Val Val Glu Ala Ile Ile Val
355 360 365
Leu Ser Leu Arg Asn Val Ile Ser Tyr Ala Phe Thr Glu Gly Glu Val
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Val Ala Lys Glu Val Ser Ser Leu Cys Pro Tyr Leu Ala Val Thr Leu
385 390 395 400
Ile Leu Asn Gly Ile Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys
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<213> Nicotiana tabacum
<400> 29
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accatttctg agattaattg gacaaacaga ggacatatca cgggaagcag ggaaaatggc 600
tttatatatg attcctcaac tttatgcata tgccatgaat tttccaatcg ccaagttctt 660
gcagtcacag agcaaaatta tggtcatggc gtggattgca gcaatagcgt tggtattgca 720
tacttttttc agctggttat ttatgctaaa acttgggtgg gggctcgtcg gcgctgcggt 780
ggtgctgaac tcatcgtggt ggttcatagt ggtggcgcag ctgctatata tatttagtgg 840
gacttgtgga caagcttggt caggtttctc atggaaggct ttccataatc tatggggctt 900
tgttagatta tctcttgcgt cagctgtcat gctatgcctg gaaacttggt actttatggc 960
gttggtcctc ttcgctggtt atttaaagaa cgcagaagtc gctgttgatg ccctgtccat 1020
ttgtatgaac atattgggat gggcggtgat ggcagctatt ggatgcaatg cagctataag 1080
cgtgagagtg tcaaatgaac tcggggcagc tcatccaaga acggctaaat tttcagtggt 1140
ggtggtggta gtatcctcat tcttgattgg ccttcttcta tcggtctttt tacttgtctt 1200
tcgaaggcaa tatcctacct tattcgcgga gagtgaatca gtcaagcgtc ttgtctatga 1260
gctaacacca ttacttgcat tctgcatagt ggttaacaac attcagccag ctctatctgg 1320
tgtggcaatt ggagcaggat ggcaagcttt ggttgcttat gtcaatattg cttgttacta 1380
tttgtttggt attccactgg gtttactatt agggtataag ctcaatatgg gtgtccaagg 1440
tatttggtat ggaatggtta gcggaactct gattcaaact ttcgccttat tttggatagt 1500
ttacaaaacc agctggaaca aagaggcttc tattgcagca gagaggataa aaatgtgggg 1560
aggggaatca aatggaaagg ccgatgatgc agagaaatga actgcgattt ggagtcattg 1620
cattaagctc atcaagtgta tatgaagaaa ttttgaaaat ttaagttgct tattgttcaa 1680
tgtaacagct cagtagtact agtgttaatc attgtaagga actttgccaa aattattctc 1740
aacttgaaag tggacaagac ccttgataag ttagctttta gctaattttt ctagtgtttt 1800
gatatagctt tatgccccat ttgtcggaat taattgatta attatgcttt gaatgatgaa 1860
gtttcaggat 1870
<210> 30
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 30
Met Glu Gly Ser Ser Lys Gln Pro Leu Leu Ser Pro Lys Asp Pro Gln
1 5 10 15
Ile Thr Asp Gln Ala Ser Asp Asn Tyr Leu Ile Arg Leu Ser His Thr
20 25 30
Ser Phe Ala Ser Ser Phe Val Ala Asp Ser Asp Asp Ile Pro Pro Ile
35 40 45
Thr Gly Phe Arg Asp Phe Phe Arg Glu Phe Ser Val Glu Ser Lys Lys
50 55 60
Leu Trp Tyr Leu Ala Gly Pro Ala Ile Phe Thr Ser Leu Cys Gln Tyr
65 70 75 80
Ser Leu Gly Ala Val Thr Gln Thr Phe Ala Gly His Val Gly Thr Leu
85 90 95
Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Asn Ser Val Ile Ala Gly Phe Ser
100 105 110
Phe Gly Val Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Leu Glu Thr Leu Cys Gly
115 120 125
Gln Ala Phe Gly Ala Gly Gln Ile Asp Met Leu Gly Val Tyr Met Gln
130 135 140
Arg Ser Trp Val Ile Leu Asn Thr Thr Ala Val Ile Leu Met Leu Leu
145 150 155 160
Tyr Ile Phe Ala Ala Pro Phe Leu Arg Leu Ile Gly Gln Thr Glu Asp
165 170 175
Ile Ser Arg Glu Ala Gly Lys Met Ala Leu Tyr Met Ile Pro Gln Leu
180 185 190
Tyr Ala Tyr Ala Met Asn Phe Pro Ile Ala Lys Phe Leu Gln Ser Gln
195 200 205
Ser Lys Ile Met Val Met Ala Trp Ile Ala Ala Ile Ala Leu Val Leu
210 215 220
His Thr Phe Phe Ser Trp Leu Phe Met Leu Lys Leu Gly Trp Gly Leu
225 230 235 240
Val Gly Ala Ala Val Val Leu Asn Ser Ser Trp Trp Phe Ile Val Val
245 250 255
Ala Gln Leu Leu Tyr Ile Phe Ser Gly Thr Cys Gly Gln Ala Trp Ser
260 265 270
Gly Phe Ser Trp Lys Ala Phe His Asn Leu Trp Gly Phe Val Arg Leu
275 280 285
Ser Leu Ala Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr Phe Met
290 295 300
Ala Leu Val Leu Phe Ala Gly Tyr Leu Lys Asn Ala Glu Val Ala Val
305 310 315 320
Asp Ala Leu Ser Ile Cys Met Asn Ile Leu Gly Trp Ala Val Met Ala
325 330 335
Ala Ile Gly Cys Asn Ala Ala Ile Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu
340 345 350
Gly Ala Ala His Pro Arg Thr Ala Lys Phe Ser Val Val Val Val Val
355 360 365
Val Ser Ser Phe Leu Ile Gly Leu Leu Leu Ser Val Phe Leu Leu Val
370 375 380
Phe Arg Arg Gln Tyr Pro Thr Leu Phe Ala Glu Ser Glu Ser Val Lys
385 390 395 400
Arg Leu Val Tyr Glu Leu Thr Pro Leu Leu Ala Phe Cys Ile Val Val
405 410 415
Asn Asn Ile Gln Pro Ala Leu Ser Gly Val Ala Ile Gly Ala Gly Trp
420 425 430
Gln Ala Leu Val Ala Tyr Val Asn Ile Ala Cys Tyr Tyr Leu Phe Gly
435 440 445
Ile Pro Leu Gly Leu Leu Leu Gly Tyr Lys Leu Asn Met Gly Val Gln
450 455 460
Gly Ile Trp Tyr Gly Met Val Ser Gly Thr Leu Ile Gln Thr Phe Ala
465 470 475 480
Leu Phe Trp Ile Val Tyr Lys Thr Ser Trp Asn Lys Glu Ala Ser Ile
485 490 495
Ala Ala Glu Arg Ile Lys Met Trp Gly Gly Glu Ser Asn Gly Lys Ala
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515
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 31
atggttttgc catatctgtc ccatcattga atgaagttct acagatattc atgattgcag 60
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ctacctcaat gggcacacag acaattgctg cgcatcaggt catggtacaa ctgttcatga 180
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tatatggagt caaccgaaat ttgtcaaagg ctcggatgct gctgaagtcc cttttaatca 300
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<400> 32
000
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 33
gaaatatcaa ctggattgga cagttccact acttactcca ttgtgaattc cttaaggcaa 60
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catgttggaa ggaaactagg cgacgagctt gctactccat ttgacaagac caaatgtcac 420
cctgctgctt tgactaatga gaagtatggt ataggaaaga aagagctgtt gaaggtttgc 480
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cagcttacga taatggctct tataacaatg acactcttct tccgtactga gatgccacga 600
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actacttgag aaagtctttt cttttcaact tttgaatact aggtgtatgt tgttgtaata 3360
ttcattggaa atccaaactt tatttgttaa tataaaaaaa aaaaaaaaaa a 3411
<210> 34
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 34
Met Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg Lys Gly Val Ala Asp Phe Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Thr Ser Lys Lys Asp Gln Gln Gln Tyr Trp Ser Lys Arg Asn
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Glu Pro Tyr Arg Phe Ile Thr Ser Lys Glu Phe Ala Glu Ala Tyr Gln
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Ser Phe His Val Gly Arg Lys Leu Gly Asp Glu Leu Ala Thr Pro Phe
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Asp Lys Thr Lys Cys His Pro Ala Ala Leu Thr Asn Glu Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Ile Gly Lys Lys Glu Leu Leu Lys Val Cys Thr Glu Arg Glu Leu Leu
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Leu Met Lys Arg Asn Ser Phe Val Tyr Met Phe Lys Phe Ser Gln Leu
100 105 110
Thr Ile Met Ala Leu Ile Thr Met Thr Leu Phe Phe Arg Thr Glu Met
115 120 125
Pro Arg Asp Thr Thr Asp Asp Gly Gly Ile Tyr Ala Gly Ala Leu Phe
130 135 140
Phe Val Val Ile Met Ile Met Phe Asn Gly Met Ser Glu Leu Ala Met
145 150 155 160
Thr Ile Phe Lys Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Leu Leu Phe
165 170 175
Phe Pro Ser Trp Ala Tyr Ala Ile Pro Ser Trp Ile Leu Lys Ile Pro
180 185 190
Val Thr Leu Val Glu Val Gly Leu Trp Val Ile Leu Thr Tyr Tyr Val
195 200 205
Ile Gly Phe Asp Pro Asn Ile Ser Arg Phe Leu Lys Gln Phe Leu Leu
210 215 220
Leu Ile Val Val Asn Gln Met Ala Ser Gly Leu Phe Arg Phe Ile Gly
225 230 235 240
Ala Val Gly Arg Thr Met Gly Val Ala Ser Thr Phe Gly Ala Phe Ala
245 250 255
Leu Leu Leu Gln Phe Ala Leu Gly Gly Phe Val Leu Ser Arg Asp Asp
260 265 270
Val Lys Ser Trp Trp Ile Trp Gly Tyr Trp Thr Ser Pro Met Met Tyr
275 280 285
Ser Val Asn Ser Ile Leu Val Asn Glu Phe Asp Gly Lys Lys Trp Asn
290 295 300
His Ile Val Pro Gly Gly Asn Glu Thr Leu Gly Ser Thr Val Val Lys
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Ser Arg Gly Phe Phe Pro Glu Ala Tyr Trp Tyr Trp Ile Gly Val Gly
325 330 335
Ala Leu Val Gly Phe Thr Val Val Phe Asn Phe Cys Tyr Ser Leu Ala
340 345 350
Leu Ala Tyr Leu Asn Pro Phe Asp Lys Pro Gln Ala Val Leu Pro Glu
355 360 365
Asp Gly Glu Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ser Ser Gln Ile Thr Ser
370 375 380
Thr Asp Gly Gly Asp Ser Ile Thr Glu Ser Gln Asn Asn Asn Lys Lys
385 390 395 400
Gly Met Val Leu Pro Phe Glu Pro His Ser Ile Thr Phe Asp Asp Val
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Val Tyr Ser Val Asp Met Pro Gln Glu Met Lys Glu Gln Gly Ala Gly
420 425 430
Glu Asp Arg Leu Val Leu Leu Lys Gly Val Ser Gly Ala Phe Arg Pro
435 440 445
Gly Val Leu Thr Ala Leu Met Gly Val Ser Gly Ala Gly Lys Thr Thr
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Leu Met Asp Val Leu Ala Gly Arg Lys Thr Gly Gly Tyr Ile Asp Gly
465 470 475 480
Asp Ile Lys Ile Ser Gly Tyr Pro Lys Lys Gln Glu Thr Phe Ala Arg
485 490 495
Ile Ser Gly Tyr Cys Glu Gln Asn Asp Ile His Ser Pro Tyr Val Thr
500 505 510
Val Tyr Glu Ser Leu Val Tyr Ser Ala Trp Leu Arg Leu Pro Gln Asp
515 520 525
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565 570 575
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Leu Asp Ala Arg Ala Ala Ala Ile Val Met Arg Ala Val Arg Asn Thr
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Asn Pro Ala Thr Trp Met Leu Glu Val Thr Ala Ser Ala Gln Glu Met
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Leu Leu Tyr Phe Thr Phe Tyr Gly Met Met Ser Val Ala Val Thr Pro
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Asn Leu Phe Ser Gly Phe Ile Val Pro Arg Pro Arg Met Pro Val Trp
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Ala Phe Thr Phe Ala Phe Ala Ile Lys Ala Phe Asn Phe Gln Arg Arg
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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atcatacaga ggcttcccgt tttctacaag catagggacc ttctcttcca tccaccttgg 1860
gctttcactt taccaactgt gctcctaaag gtaccaattt ctgtgttcga gactattgtg 1920
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gagcttgtcg caaatccttc aattatattc atggatgaac cgacttctgg tctggatgca 3240
agagcagcag ctattgttat gagaactgta agaaacacag tagacaccgg gagaactgtt 3300
gtctgcacaa tacatcaacc aagtattgat atatttgaag catttgatga gctgcttctt 3360
atgaaaagag gaggacaagt aatttacgca ggtccattgg gtcgacattc tcagaaaatt 3420
attgaatatt tcgaggcaat tccaggagtt caaaaaatta aagagaaata caatccagca 3480
acctggatgc tagaagcgag ttcaattggc acagaagccc gacttggaat ggattttgct 3540
gaatactaca gatcatcagc tttacatcaa cgaaataagg ctcttgtcaa agagttgagt 3600
gcacctcctc ctggagccaa agacctctat tttaccacac aattttccca gccaacatgg 3660
ggtcagttta aatcctgctt atggaagcaa tggtggactt actggagaag tccagactat 3720
aaccttgtca gattcttctt tagtctggct gcagcactat tgattgggac aattttctgg 3780
aatgttggca gtaaaagaca aagtagtggt gatctaatga cagtcatcgg ggcaatgtat 3840
gcagctgtgc tgtttgttgg aatcaataat tgttcgaccg tacagccaat tgtagccgtc 3900
gaaagaaccg tcttttatag agaaagggct gctgggatgt attcagcttt accatatgct 3960
atggcacagg tatttgcaga aataccatac atactcgtcc aaactacata ctatactctt 4020
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gtaaccttct tctccttcct atactggacg tactatggaa tgatgaccgt ttccatcaca 4140
cccaaccacc aagtagccgc gatctttgct gcagctttct atgcactttt caatcttttc 4200
tccggtttct tcatccccag accgagaatt cccaagtggt ggatatggta ttactggatc 4260
tgtccagtgg catggactgt ttatggtagc attgtgtcac agtatggtga tgtggaggat 4320
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ttcggataca attcggactt catggcgcca gttgctgtgg ttttggttgg ttttgcagcc 4440
tttttcgcct ttatgtacgc ttacgctatt aagacattga acttccaaac tagatag 4497
<210> 36
<211> 1498
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 36
Met Glu Gly Asn Gly Gly Pro Arg Arg Leu Gly Ser Ser Arg Ser Ser
1 5 10 15
Met Ser Arg Thr Met Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ala Asn Trp Asn Val
20 25 30
Glu Asp Val Phe Asn Pro Met Pro Ser Arg Arg Ser Thr Arg Gly Glu
35 40 45
Glu Asp Glu Glu Ala Leu Thr Trp Ala Ala Leu Glu Lys Leu Pro Thr
50 55 60
Tyr Asp Arg Leu Arg Lys Thr Val Leu Lys Ser Val Met Glu Ser Glu
65 70 75 80
Asn Asn Gln Gly Asn Lys Lys Val Val His Lys Glu Val Asp Val Arg
85 90 95
Asn Leu Gly Met Asn Glu Arg Gln Glu Phe Ile Asp Arg Phe Phe Arg
100 105 110
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115 120 125
Ile Asp Lys Val Gly Ile Thr Leu Pro Thr Val Glu Val Arg Tyr Glu
130 135 140
His Leu Thr Ile Glu Ala Asp Cys Tyr Ile Gly Asp Arg Ala Leu Pro
145 150 155 160
Thr Leu Pro Asn Ala Ala Arg Asn Ile Ala Glu Ser Ala Leu Ser Cys
165 170 175
Val Gly Ile Asn Leu Ala Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ile Leu Lys Asp
180 185 190
Ala Ser Gly Ile Ile Lys Pro Ser Arg Met Thr Leu Leu Leu Gly Pro
195 200 205
Pro Ser Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Leu Ala Leu Ala Gly Lys Leu
210 215 220
Asp Pro Thr Leu Lys Val Arg Gly Glu Ile Thr Tyr Asn Gly His Gly
225 230 235 240
Leu Lys Glu Phe Val Pro Gln Lys Thr Ser Ala Tyr Ile Ser Gln Asn
245 250 255
Asp Val His Val Ala Glu Met Thr Val Lys Glu Thr Leu Asp Phe Ser
260 265 270
Ala Arg Cys Gln Gly Val Gly Ser Arg Tyr Glu Leu Leu Thr Glu Leu
275 280 285
Ala Arg Arg Glu Arg Asp Ala Gly Ile Phe Pro Glu Ala Glu Ile Asp
290 295 300
Leu Phe Met Lys Ala Thr Ala Met Glu Gly Val Glu Ser Ser Leu Ile
305 310 315 320
Thr Asp Tyr Thr Leu Arg Ile Leu Gly Leu Asp Val Cys Arg Asp Thr
325 330 335
Ile Val Gly Asp Glu Met Ile Arg Gly Ile Ser Gly Gly Gln Lys Lys
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Val Lys Cys Leu Gln Gln Ile Val His Leu Thr Glu Ala Thr Val Leu
385 390 395 400
Met Ser Leu Leu Gln Pro Ala Pro Glu Thr Phe Asp Leu Phe Asp Asp
405 410 415
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His Val Leu Glu Phe Phe Glu Thr Cys Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg
435 440 445
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450 455 460
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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545 550 555 560
Thr Val Phe Leu Arg Thr Lys Met His Thr Asn Thr Val Asp Asp Gly
565 570 575
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Asn Gly Phe Ser Glu Leu Ser Met Ile Ile Gln Arg Leu Pro Val Phe
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1330 1335 1340
Met Val Ala Phe Glu Trp Thr Ala Ala Lys Phe Phe Trp Phe Tyr Phe
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1365 1370 1375
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Val Val Leu Val Gly Phe Ala Ala Phe Phe Ala Phe Met Tyr Ala Tyr
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<213> Nicotiana tabacum
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gaaataagaa gtgcctagac tctgcaaccg agaacagttt tcattcacca cttactaatc 2940
cactcagtgg ggaaaagctt ttggagaaga aaagcttgga tttagtccga aaagataagg 3000
aatcaaatca tgatcttagt catggttgct ctgacgagga acatgatcat ctaaatttag 3060
acaaggcaca tgacagttgt gccttacaag aatgttgtta ttctgttcaa ggcaataaaa 3120
ctgatgtatc agaaactgga atccaggaag ctgctcattg tgacagcatc aatcaaacat 3180
gccaaactgc aatttcagga tcaatgacat gcggaaataa taagagtctg gactctctaa 3240
gcatccatgg ttgtcattcg catgataatc cactccacaa ggagaacaac ttggagcaga 3300
aaagcttgga tgttgttgga gaaggtataa aatcacctca tgctgtcggt catggctgtt 3360
cggacaagga acacgatcac tcgcatccag aaaaggcgta tgacagttgt gcaacagacg 3420
attgttgttt ttcagttcaa gtccatggca ttgacgacgt atcaagaagt gaaattcaag 3480
aaactgctca ttgtgacagc acaaaacaga gcacggtcat ccccagcagc tgcaaacatg 3540
aaccaaaaga tcaggtaaat cactgtggat ctcactctaa aagtattcca actgatgaag 3600
aactagccaa gctggttaga agatgctgca aatacaaacc atgccacgac gtccgttctg 3660
gctgcaggaa gcatgctgca gaatgtggtc caaccgttcg atcaaccatc aatatcttac 3720
gggacaacca tcatcatcat ctagactgca gtggtcgtaa ggtttgttcg ctgttggaga 3780
agagacacat tggtggatgc tgtgacagct tcagaaaaga atgttgtgcc aagaacaatc 3840
accttggagc aagttttgga ggaggtttat cagaaattga ttgggcatcg cttgggctaa 3900
tgccagttgt tagtgtacgt aacgaaggta agaagaaact tgttatcata gatatatgaa 3960
aaatcaactc atggataata aaggcgtagc accaaatatg tcggagtagc cccacccagt 4020
agatggaaaa gccagtagta ccaatcaagg aagccttgaa cggagcaggt tgcggtgaat 4080
tataatgtgc agaattgtgg ggtataaatt agatgattac aattgtggta aagtgtaatt 4140
atttattgta ctaattctat gtagctatct cccccgaata atggatccac tatgagaatt 4200
tatttagacc cg 4212
<210> 42
<211> 1274
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 42
Met Val Glu Ser Glu Lys Met Asn Asp Thr Lys Asn Leu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Phe Asp Val Leu Gly Ile Cys Cys Thr Ser Glu Val Val Leu Val
20 25 30
Glu Lys Ile Leu Lys Asn Leu Glu Gly Val Lys Glu Val Ser Val Ile
35 40 45
Val Thr Thr Lys Thr Val Ile Val Ile His Asp Ser Leu Leu Ile Ser
50 55 60
Gln Gln Gln Ile Val Lys Ala Leu Asn Gln Ala Arg Leu Glu Ala Ser
65 70 75 80
Ile Arg Val Lys Gly Glu Lys Asn Tyr Gln Lys Lys Trp Pro Ser Pro
85 90 95
Phe Ala Ile Gly Ser Gly Ile Leu Leu Gly Leu Ser Phe Leu Lys Tyr
100 105 110
Phe Phe Ala Pro Phe Gln Trp Leu Ala Leu Ala Ala Val Ala Val Gly
115 120 125
Ile Pro Pro Ile Ile Phe Arg Gly Val Ala Ala Val Arg Asn Leu Thr
130 135 140
Leu Asp Ile Asn Ile Leu Val Leu Ile Ala Val Thr Gly Ser Ile Val
145 150 155 160
Leu His Asp Tyr Trp Glu Ala Gly Thr Ile Val Phe Leu Phe Thr Ile
165 170 175
Ala Glu Trp Leu Glu Ser Arg Ala Ser His Lys Ala Thr Ala Ala Met
180 185 190
Ser Ser Leu Val Asn Ile Val Pro Pro Thr Ala Val Leu Ala Glu Ser
195 200 205
Gly Glu Val Val Asn Val Asp Glu Val Lys Leu Asn Ser Ile Leu Ala
210 215 220
Val Lys Ala Gly Glu Thr Ile Pro Ile Asp Gly Val Val Met Glu Gly
225 230 235 240
Glu Cys Asp Val Asp Glu Lys Thr Leu Thr Gly Glu Ser Phe Pro Val
245 250 255
Ser Lys Gln Ile Asp Ser Thr Val Trp Ala Gly Thr Thr Asn Leu Asn
260 265 270
Ala Ile Val Ala Ile Ser Ala Ser Leu Ala Ile Val Pro Thr Ala Leu
275 280 285
Arg Val His Asn Arg Asn Glu Trp Tyr Arg Leu Ala Leu Val Thr Leu
290 295 300
Val Ser Ala Cys Pro Cys Ala Leu Val Leu Ser Thr Pro Val Ala Met
305 310 315 320
Cys Cys Ala Leu Ser Lys Ala Ala Thr Ser Gly Leu Leu Phe Lys Gly
325 330 335
Ala Glu Tyr Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ile Lys Ile Met Ala Phe Asp
340 345 350
Lys Thr Gly Thr Ile Thr Arg Gly Glu Phe Met Val Thr Glu Phe Lys
355 360 365
Val Ser Ser Ile Glu Ser Lys Ser Gly His Pro Met Ala Ala Ala Leu
370 375 380
Val Asp Tyr Ala Gln Ser Asn Ser Val Glu Pro Lys Pro Asp Arg Val
385 390 395 400
Glu Gln Phe Gln Asn Phe Pro Gly Glu Gly Ile Phe Gly Arg Ile Asp
405 410 415
Gly Met Glu Ile Tyr Val Gly Asn Arg Lys Ile Ser Ser Arg Ala Gly
420 425 430
Cys Thr Thr Val Pro Glu Ile Glu Gly Asp Ser Phe Gln Gly Lys Ser
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Val Gly Tyr Ile Phe Leu Gly Ser Ser Pro Ala Gly Ile Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Asp Val Cys Arg Ile Gly Val Lys Glu Ala Met Arg Glu Leu Lys
465 470 475 480
Gln Met Gly Ile Lys Thr Ala Met Leu Thr Gly Asp Cys Tyr Ala Ala
485 490 495
Ala Asn His Val Gln Asp Gln Lys Glu Ala Pro Thr Ala Met Ile Gly
500 505 510
Asp Gly Leu Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Thr Ala Asp Ile Gly Ile
515 520 525
Ser Met Gly Ile Ser Gly Ser Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gly His Val
530 535 540
Ile Leu Met Thr Asn Asp Ile Gly Arg Ile Pro Lys Ala Ala Arg Leu
545 550 555 560
Ala Arg Arg Val Arg Arg Lys Ile Val Glu Asn Met Ile Ile Ser Val
565 570 575
Val Thr Lys Ala Ala Ile Val Ala Leu Ala Ile Ala Gly Tyr Pro Leu
580 585 590
Val Trp Ala Ala Val Leu Ala Asp Thr Gly Thr Cys Leu Leu Val Ile
595 600 605
Leu Asn Ser Met Leu Leu Leu Arg Gly Gly Thr Arg Arg His Gly Lys
610 615 620
Lys Cys Trp Arg Ser Ser Thr Pro Ser His Ala Pro His His Lys Asp
625 630 635 640
Lys Ala Ser Cys Cys Lys Ser Glu Asn Ala Pro Gln Leu Cys Cys Ser
645 650 655
Asp Ile Glu Ser Gln Lys Lys Cys Thr Ser Gln Ser Cys Ser Ser Glu
660 665 670
Val Cys Val Pro Arg Cys Gln Pro Val Ser Ser Gly Ser Lys Ser Cys
675 680 685
Gly Asn Asn Gln Cys Pro Asp Ser Val Glu Asn Ser Gly Phe His Ser
690 695 700
His Pro Arg Pro Gln Cys Cys Ser Ser Lys Met Ala Ala Lys Ala Cys
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Gln Ser Ala Val Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Gln Cys Pro
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Asp Ser Val Glu Asn Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Asn Cys
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Ser Glu Ser Ile Tyr Lys Ser Ser Cys His Ser Leu Thr Asn Ser Leu
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Val Cys Ser Ser Lys Met Ser Ala Pro Gln Cys His Ser Ala Thr Ser
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Ser Ala Pro Gly Cys Gln Ser Ala Val Ser Gly Ser Lys Ser Cys Gly
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Pro Asp His Gln Thr Cys Thr Ser Lys Leu Cys Ala Pro Gln Ser Gln
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900 905 910
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Lys Lys Ser Leu Asp Leu Val Arg Lys Asp Lys Glu Ser Asn His Asp
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Leu Ser His Gly Cys Ser Asp Glu Glu His Asp His Leu Asn Leu Asp
965 970 975
Lys Ala His Asp Ser Cys Ala Leu Gln Glu Cys Cys Tyr Ser Val Gln
980 985 990
Gly Asn Lys Thr Asp Val Ser Glu Thr Gly Ile Gln Glu Ala Ala His
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Cys Asp Ser Ile Asn Gln Thr Cys Gln Thr Ala Ile Ser Gly Ser Met
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Thr Cys Gly Asn Asn Lys Ser Leu Asp Ser Leu Ser Ile His Gly Cys
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His Ser His Asp Asn Pro Leu His Lys Glu Asn Asn Leu Glu Gln Lys
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Ser Leu Asp Val Val Gly Glu Gly Ile Lys Ser Pro His Ala Val Gly
1060 1065 1070
His Gly Cys Ser Asp Lys Glu His Asp His Ser His Pro Glu Lys Ala
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Tyr Asp Ser Cys Ala Thr Asp Asp Cys Cys Phe Ser Val Gln Val His
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Asp Ser Thr Lys Gln Ser Thr Val Ile Pro Ser Ser Cys Lys His Glu
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Pro Lys Asp Gln Val Asn His Cys Gly Ser His Ser Lys Ser Ile Pro
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Thr Asp Glu Glu Leu Ala Lys Leu Val Arg Arg Cys Cys Lys Tyr Lys
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Pro Cys His Asp Val Arg Ser Gly Cys Arg Lys His Ala Ala Glu Cys
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Gly Pro Thr Val Arg Ser Thr Ile Asn Ile Leu Arg Asp Asn His His
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His His Leu Asp Cys Ser Gly Arg Lys Val Cys Ser Leu Leu Glu Lys
1205 1210 1215
Arg His Ile Gly Gly Cys Cys Asp Ser Phe Arg Lys Glu Cys Cys Ala
1220 1225 1230
Lys Asn Asn His Leu Gly Ala Ser Phe Gly Gly Gly Leu Ser Glu Ile
1235 1240 1245
Asp Trp Ala Ser Leu Gly Leu Met Pro Val Val Ser Val Arg Asn Glu
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Gly Lys Lys Lys Leu Val Ile Ile Asp Ile
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<210> 43
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 43
atgggaagtg aagctttgga gttttttgct tgtgataata cttttcgata tgaaccaaaa 60
cgcataacaa tggaggagag tgatgatctt cccattaatg atggttcttg gtttgaagaa 120
gagattgatg ttgatctcaa atggtctttt gctttgaaca gtgtgctgca caaaggaaca 180
agcgagtacc aagatatcgc ccttttggac accaagcatt tcgggaaggt attggtgata 240
gatgggaaga tgcagagtgc agaagtggat gaatttatat atcatgaatg cttaattcat 300
ccagctctct tgtgtcaccc taacccaaaa aatgttttta taatgggagg tggtgaagga 360
tctgcagcaa gggaagctct cagacacaaa tctatggaga aagttgtcat gtgtgacatt 420
gatcaggagg ttgtggattt ctgcaggaag catctaacag caaaccatga ggcttttcgt 480
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ctctacacca aatctttcta cgaaaatatc cttaaaccta agctcaacga caatggcatc 660
ttcgttactc aggctggacc agcaggggtt ttcacacaca aggaagtttt ctcatccatt 720
tacaacacaa tcaagcaggt cttcaaatat gtgctggcat atacagctca tgtaccctct 780
tttgctgata catggggatg ggttatggct tctgaccaac cattctgtct tgatgctgga 840
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tgaggcaaca aattggtggg ggaactgtac agtcaagtgt ttggaaacaa agaaatatga 1080
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ttttggtttg gttcagcaaa ataggcttag gcttcttctg gttgtcctat gactatacat 1200
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gtcatatttt acatgtttgg taaatattat tcttat 1296
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 44
Met Gly Ser Glu Ala Leu Glu Phe Phe Ala Cys Asp Asn Thr Phe Arg
1 5 10 15
Tyr Glu Pro Lys Arg Ile Thr Met Glu Glu Ser Asp Asp Leu Pro Ile
20 25 30
Asn Asp Gly Ser Trp Phe Glu Glu Glu Ile Asp Val Asp Leu Lys Trp
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Ser Phe Ala Leu Asn Ser Val Leu His Lys Gly Thr Ser Glu Tyr Gln
50 55 60
Asp Ile Ala Leu Leu Asp Thr Lys His Phe Gly Lys Val Leu Val Ile
65 70 75 80
Asp Gly Lys Met Gln Ser Ala Glu Val Asp Glu Phe Ile Tyr His Glu
85 90 95
Cys Leu Ile His Pro Ala Leu Leu Cys His Pro Asn Pro Lys Asn Val
100 105 110
Phe Ile Met Gly Gly Gly Glu Gly Ser Ala Ala Arg Glu Ala Leu Arg
115 120 125
His Lys Ser Met Glu Lys Val Val Met Cys Asp Ile Asp Gln Glu Val
130 135 140
Val Asp Phe Cys Arg Lys His Leu Thr Ala Asn His Glu Ala Phe Arg
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Asn Lys Lys Leu Asn Leu Ile Ile Asn Asp Ala Lys Ala Glu Leu Glu
165 170 175
Gln Arg Gln Glu Lys Phe Asp Ile Ile Val Gly Asp Leu Ala Asp Pro
180 185 190
Val Glu Gly Gly Pro Cys Tyr Gln Leu Tyr Thr Lys Ser Phe Tyr Glu
195 200 205
Asn Ile Leu Lys Pro Lys Leu Asn Asp Asn Gly Ile Phe Val Thr Gln
210 215 220
Ala Gly Pro Ala Gly Val Phe Thr His Lys Glu Val Phe Ser Ser Ile
225 230 235 240
Tyr Asn Thr Ile Lys Gln Val Phe Lys Tyr Val Leu Ala Tyr Thr Ala
245 250 255
His Val Pro Ser Phe Ala Asp Thr Trp Gly Trp Val Met Ala Ser Asp
260 265 270
Gln Pro Phe Cys Leu Asp Ala Gly Lys Leu Asp Lys Lys Ile Ala Glu
275 280 285
Arg Ile Glu Gly Glu Leu Leu Tyr Leu Asn Gly Ala Ser Phe Phe Ser
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Ala Phe Arg Asn
340
<210> 45
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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<213> Nicotiana tabacum
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Met Asp His His Pro Ala Asn Tyr Asp Leu Asp Glu Lys Ser Asp Leu
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Lys Tyr Val Asp Trp Val Thr Phe Lys Ser His Ser Ser Lys Lys Val
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Glu Ser Leu Ile Leu Ala Arg Phe Pro Arg Trp Glu Tyr Trp Lys Leu
35 40 45
Cys Leu Val Asn Lys Arg Cys Ser Met Leu Leu Lys Ser Gly Glu Ile
50 55 60
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Leu Ala Ser Gly Glu Thr Asn Trp Trp Ala Phe Asp Arg Glu Phe Lys
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Tyr Arg Arg Lys Leu Pro Asp Leu Pro Ser Asp Glu Cys Phe Pro Phe
100 105 110
Ser Asp Lys Glu Ser Leu Cys Val Gly Thr His Leu Leu Val Ser Gly
115 120 125
Arg Glu Ile Asp Gly Leu Val Ile Trp Arg Phe Glu Leu Ala Thr Asn
130 135 140
Ser Trp His Lys Gly Pro Ser Met Val Asn Pro Arg Cys Leu Phe Ala
145 150 155 160
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Met Pro Asn Asn Glu Val Tyr Asp Thr Ala Glu Arg Tyr Asn Pro Asp
180 185 190
Ser Arg Leu Trp Glu Pro Leu Pro Arg Met Lys Arg Asn Arg Lys Leu
195 200 205
Cys Ser Gly Cys Tyr Met Asp Asn Arg Phe Tyr Val Ile Gly Gly Arg
210 215 220
Asn Lys Asn Gly Glu Leu Thr Cys Gly Glu Phe Phe Asp Glu Ala Lys
225 230 235 240
Asn Lys Trp Glu Leu Ile Pro Asp Met Leu Lys Asp Asp Pro Val Gln
245 250 255
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260 265 270
Ser Leu Glu Ala Ser Ser Asn Gln Leu Lys Val Tyr Leu Lys Lys Thr
275 280 285
Asn Thr Trp Lys Gln Leu Gly Pro Val Pro Val Arg Ala Asp Ser Asn
290 295 300
Arg Gly Trp Gly Ile Ala Phe Lys Ser Leu Gly Asn Glu Leu Leu Val
305 310 315 320
Ile Gly Ala Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ser Gly Asn Ser Met Ala
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Ser Val Met Val Ala
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<400> 47
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130 135 140
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180 185 190
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195 200 205
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<213> Nicotiana tabacum
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gctggcgagg ttatttctgt gaaaattatt cgaaacaagc agactggtca atcagagcgt 420
tatggatttg ttgagttcaa tactcacgca gcagcggaga aagtgctaca gagctacaat 480
ggcactatga tgccaaatgc agagcaaccc ttccgtttaa actgggcagg ctttagcact 540
ggtgaaaagc gtgcagaaac tggttctgat ttctcgattt ttgtaggaga tttggcttct 600
gatgttactg atacaatgtt gcgtgacaca tttgctagta gatatccatc tcttaaaggt 660
gcaaaagtag tagtagatgc aaacacaggc cactcaaaag gctatggctt tgtaaggttt 720
ggtgatgaaa gcgagaggtc tcgggccatg actgagatga atggtgtata ttgttccagc 780
agggccatgc gtattggtgt tgctacccca aagaaaccat cagcacagca acaatattct 840
tcacaagctg tgatattatc tggtggatat gcatcaaatg gtgctgcaac ccatggatcc 900
cagtctgatg gtgattcatc aaacactaca atttttgttg gaggacttga ttctgatgtc 960
actgacgagg aacttaggca atcctttaat cagtttggag aagtggtctc tgtgaaaata 1020
cctgctggaa aaggatgtgg ttttgtacaa ttttctgaca ggagctctgc acaggaagcg 1080
atacagaaat taagtggagc aataattggc aagcaggcag ttcgtctttc ctgggggcga 1140
agtccagcaa acaagcagat gagaactgat tctggtagtc aatggaatgg gggttataat 1200
ggaaggcaaa attatggagg atatggatat ggcgcatcgc aaaatcagga ttctggcatg 1260
tatgctactg gagcagctta cggagcatcc tctaatggat acgggaatca ccagcagcct 1320
gttagctgat ctctagtgga ctctgctgct aaatgagaga ttgccatagc tctgctctct 1380
cttccacttt gggggatcag atttatattt gacttataag cttaaagcat agtgtttgat 1440
gagaattttg tagctggatt tattttatgc ttagtgagtc caagatatgt taaacctaaa 1500
cttagaatga ttggtgaact tcgatttttc tactgctttt ttccaaaaaa aaaaaaaaaa 1560
aa 1562
<210> 50
<211> 395
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 50
Met Asp Gly Asp Ala Val Ser Ser Ser Ser Asn Gly Asp Ala Ala Thr
1 5 10 15
Asp Asp Val Trp Ser Ala Ile His Ala Leu Gln Gln His Gln Gln Gln
20 25 30
Gln Gln Lys Met Gln Gln Ser Pro Thr Gln Ile Gln Ser Ser Ser Glu
35 40 45
Asp Asn Lys Thr Ile Trp Ile Gly Asp Leu Gln Gln Trp Met Asp Glu
50 55 60
Ser Tyr Leu His Ser Cys Phe Ser Gln Ala Gly Glu Val Ile Ser Val
65 70 75 80
Lys Ile Ile Arg Asn Lys Gln Thr Gly Gln Ser Glu Arg Tyr Gly Phe
85 90 95
Val Glu Phe Asn Thr His Ala Ala Ala Glu Lys Val Leu Gln Ser Tyr
100 105 110
Asn Gly Thr Met Met Pro Asn Ala Glu Gln Pro Phe Arg Leu Asn Trp
115 120 125
Ala Gly Phe Ser Thr Gly Glu Lys Arg Ala Glu Thr Gly Ser Asp Phe
130 135 140
Ser Ile Phe Val Gly Asp Leu Ala Ser Asp Val Thr Asp Thr Met Leu
145 150 155 160
Arg Asp Thr Phe Ala Ser Arg Tyr Pro Ser Leu Lys Gly Ala Lys Val
165 170 175
Val Val Asp Ala Asn Thr Gly His Ser Lys Gly Tyr Gly Phe Val Arg
180 185 190
Phe Gly Asp Glu Ser Glu Arg Ser Arg Ala Met Thr Glu Met Asn Gly
195 200 205
Val Tyr Cys Ser Ser Arg Ala Met Arg Ile Gly Val Ala Thr Pro Lys
210 215 220
Lys Pro Ser Ala Gln Gln Gln Tyr Ser Ser Gln Ala Val Ile Leu Ser
225 230 235 240
Gly Gly Tyr Ala Ser Asn Gly Ala Ala Thr His Gly Ser Gln Ser Asp
245 250 255
Gly Asp Ser Ser Asn Thr Thr Ile Phe Val Gly Gly Leu Asp Ser Asp
260 265 270
Val Thr Asp Glu Glu Leu Arg Gln Ser Phe Asn Gln Phe Gly Glu Val
275 280 285
Val Ser Val Lys Ile Pro Ala Gly Lys Gly Cys Gly Phe Val Gln Phe
290 295 300
Ser Asp Arg Ser Ser Ala Gln Glu Ala Ile Gln Lys Leu Ser Gly Ala
305 310 315 320
Ile Ile Gly Lys Gln Ala Val Arg Leu Ser Trp Gly Arg Ser Pro Ala
325 330 335
Asn Lys Gln Met Arg Thr Asp Ser Gly Ser Gln Trp Asn Gly Gly Tyr
340 345 350
Asn Gly Arg Gln Asn Tyr Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Ala Ser Gln Asn
355 360 365
Gln Asp Ser Gly Met Tyr Ala Thr Gly Ala Ala Tyr Gly Ala Ser Ser
370 375 380
Asn Gly Tyr Gly Asn His Gln Gln Pro Val Ser
385 390 395
<210> 51
<211> 646
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 51
ggatccaaag agcaggccag cgatatggaa gctgatcaag aagaaagcac gggaagccca 60
agacttaaaa tcagccagtc gaagagagat gatctccctc gatccttatc tgcagcagat 120
ggaaataaga caagagaaat ggaaatccga cgaatgagca gtcatatcca ttctagtggc 180
ctctacagaa atgaggatgc aaatcttgag gctgcaaatg gtgtcgcagg ttctttactt 240
gaacatttta ggaatttagg aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg 300
tttattgttt gtttttatct tcactttagt gaggatacat attctgagca cactctgaaa 360
atatagctca tttatgttta tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggcaactg 420
cgacaccatt tgcagcctca agatttgcat cctcatttct gtagaggcca ctagaatgga 480
tatgactgct cattcgtcgg atttccattt ctcttgtctt atttccatct gctgcagata 540
aggatcgagg gagatcatct ctcttcgact ggctgatttt aagtcttggg cttcccgtgc 600
tttcttcttg atcagcttcc atatcgctgg cctgctcttt tctaga 646
<210> 52
<211> 604
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 52
ggatccgttt tggtcctttg cataaaattt gggtaaggaa aagaatcaat ccaaagccac 60
cgaaattcaa cagtaggaca agtctcagtg tttgcatctg caaaaccatt ccaaatttca 120
caatccacga aactgtgtaa caataactaa aacataacga aataaatact aggagtataa 180
tctataggca caaaattgaa gttgtgcatg ttctttactt gaacatttta ggaatttagg 240
aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg tttattgttt gtttttatct 300
tcactttagt gaggatacat attctgagca cactctgaaa atatagctca tttatgttta 360
tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggatgcac aacttcaatt ttgtgcctat 420
agattatact cctagtattt atttcgttat gttttagtta ttgttacaca gtttcgtgga 480
ttgtgaaatt tggaatggtt ttgcagatgc aaacactgag acttgtccta ctgttgaatt 540
tcggtggctt tggattgatt cttttcctta cccaaatttt atgcaaagga ccaaaacgtc 600
taga 604
<210> 53
<211> 603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 53
ggatccaaag atttcaagga ccttatttat gctcccaaac gaggtcacaa tcctatgatt 60
ataaacagcc tccacagcag tttgagtgct ttgatattgt gccttgacga acttagctgt 120
gatggtggat agcaagactt ttcgcgtgta aaagcataga attgtgagag gttggacagc 180
aatcataact agtgcaagct tccaagcgtt ctttacttga acattttagg aatttaggaa 240
atgcttgttc gtcatttgtt ttgtgtccta gcctattgtt tattgtttgt ttttatcttc 300
actttagtga ggatacatat tctgagcaca ctctgaaaat atagctcatt tatgtttata 360
gggaaaggag aaaagagaga gtcacatcat ggcaagcttg gaagcttgca ctagttatga 420
ttgctgtcca acctctcaca attctatgct tttacacgcg aaaagtcttg ctatccacca 480
tcacagctaa gttcgtcaag gcacaatatc aaagcactca aactgctgtg gaggctgttt 540
ataatcatag gattgtgacc tcgtttggga gcataaataa ggtccttgaa atctttgtct 600
aga 603
<210> 54
<211> 665
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 54
ggatccgtgt caacctcttc acttcttctt gctgctcaac ttgccttcac ggcaataggt 60
gctttcttca tagtgaagct gaaattcaca ccctactcta tcaatgcagt ggttctgttg 120
acagttggtg ctgttttatt aggtattcga tcaaatggtg atcggccaga gggtgtgaca 180
agtagagctt atatttactc tttgttcttt acttgaacat tttaggaatt taggaaatgc 240
ttgttcgtca tttgttttgt gtcctagcct attgtttatt gtttgttttt atcttcactt 300
tagtgaggat acatattctg agcacactct gaaaatatag ctcatttatg tttataggga 360
aaggagaaaa gagagagtca catcatggca aagaaagata aacctttagt actagtgagg 420
cttgaacgtc tgtgacattt aaagtcctaa gttagtttct attgtaattg aatataagct 480
ctacttgtca caccctctgg ccgatcacca tttgatcgaa tacctaataa aacagcacca 540
actgtcaaca gaaccactgc attgatagag tagggtgtga atttcagctt cactatgaag 600
aaagcaccta ttgccgtgaa ggcaagttga gcagcaagaa gaagtgaaga ggttgacact 660
ctaga 665
<210> 55
<211> 600
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 55
ggatccacac catctaaaac aaacgccaat gagttgattg gttgtgtacc agcgacaaac 60
tggcgaagga gcacaaggta aaaagaacag ttaaagatag tgaaacaaaa gaagaacaaa 120
ttgaaacaaa catatagtac tactatttat tgaatgtata ccgggatggc aatggttatg 180
agacggataa catttttgtc ctttgagttc tttacttgaa cattttagga atttaggaaa 240
tgcttgttcg tcatttgttt tgtgtcctag cctattgttt attgtttgtt tttatcttca 300
ctttagtgag gatacatatt ctgagcacac tctgaaaata tagctcattt atgtttatag 360
ggaaaggaga aaagagagag tcacatcatg gcaatcaaag gacaaaaatg ttatccgtct 420
cataaccatt gccatcccgg tatacattca ataaatagta gtactatatg tttgtttcaa 480
tttgttcttc ttttgtttca ctatctttaa ctgttctttt taccttgtgc tccttcgcca 540
gtttgtcgct ggtacacaac caatcaactc attggcgttt gttttagatg gtgttctaga 600
<210> 56
<211> 687
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 56
ggatccatgg gctgatgttc atggtttcaa tggggttcaa tgctgctgct agtgtaaggg 60
tgagcaatga gttaggagca ccacacccaa agtcagcagc attcttagtg tttgtggtga 120
cattcatttc atttctcata gctgtggtgg aagccataat tatgctgtgt ttgcgcaatg 180
tgatcagcta tgcattcact aagggttact ctttgttctt tacttgaaca ttttaggaat 240
ttaggaaatg cttgttcgtc atttgttttg tgtcctagcc tattgtttat tgtttgtttt 300
tatcttcact ttagtgagga tacatattct gagcacactc tgaaaatata gctcatttat 360
gtttataggg aaaggagaaa agagagagtc acatcatggc aaagaaagat aaacctttag 420
tactagtgag gcttgaacgt ctgtgacatt taaagtccta agttagtttc tattgtaatt 480
gacccttagt gaatgcatag ctgatcacat tgcgcaaaca cagcataatt atggcttcca 540
ccacagctat gagaaatgaa atgaatgtca ccacaaacac taagaatgct gctgactttg 600
ggtgtggtgc tcctaactca ttgctcaccc ttacactagc agcagcattg aaccccattg 660
aaaccatgaa catcagccca ttctaga 687
<210> 57
<211> 3155
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic nucleic acid construct
<400> 57
aagcttccag aaggtaatta tccaagatgt agcatcaaga atccaatgtt tacgggaaaa 60
actatggaag tattatgtga gctcagcaag aagcagatca atatgcggca catatgcaac 120
ctatgttcaa aaatgaagaa tgtacagata caagatccta tactgccaga atacgaagaa 180
gaatacgtag aaattgaaaa agaagaacca ggcgaagaaa agaatcttga agacgtaagc 240
actgacgaca acaatgaaaa gaagaagata aggtcggtga ttgtgaaaga gacatagagg 300
acacatgtaa ggtggaaaat gtaagggcgg aaagtaacct tatcacaaag gaatcttatc 360
ccccactact tatcctttta tatttttccg tgtcattttt gcccttgagt tttcctatat 420
aaggaaccaa gttcggcatt tgtgaaaaca agaaaaaatt tggtgtaagc tattttcttt 480
gaagtactga ggatacaact tcagagaaat ttgtaagttt gtggatcctg caggctagcg 540
tgcactctag actcgacgaa ctgacgagct cgaatttccc cgatcgttca aacatttggc 600
aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc 660
tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat 720
gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat 780
agcgcgcaaa ctatgataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta gatcgggaat 840
tcctcgagca actattttta tgtatgcaag agtcagcata tgtataattg attcagaatc 900
gttttgacga gttcggatgt agtagtagcc attatttaat gtacatacta atcgtgaata 960
gtgaatatga tgaaacattg tatcttattg tataaatatc cataaacaca tcatgaaaga 1020
cactttcttt cacggtctga attaattatg atacaattct aatagaaaac gaattaaatt 1080
acgttgaatt gtatgaaatc taattgaaca agccaaccac gacgacgact aacgttgcct 1140
ggattgactc ggtttaagtt aaccactaaa aaaacggagc tgtcatgtaa cacgcggatc 1200
gagcaggtca cagtcatgaa gccatcaaag caaaagaact aatccaaggg ctgagatgat 1260
taattagttt aaaaattagt taacacgagg gaaaaggctg tctgacagcc aggtcacgtt 1320
atctttacct gtggtcgaaa tgattcgtgt ctgtcgattt taattatttt tttgaaaggc 1380
cgaaaataaa gttgtaagag ataaacccgc ctatataaat tcatatattt tcctctccgc 1440
tttgaattgt ctcgttgtcc tcctcacttt catcagccgt tttgaatctc cggcgacttg 1500
acagagaaga acaaggaaga agactaagag agaaagtaag agataatcca ggagattcat 1560
tctccgtttt gaatcttcct caatctcatc ttcttccgct ctttctttcc aaggtaatag 1620
gaactttctg gatctacttt atttgctgga tctcgatctt gttttctcaa tttccttgag 1680
atctggaatt cgtttaattt ggatctgtga acctccacta aatcttttgg ttttactaga 1740
atcgatctaa gttgaccgat cagttagctc gattatagct accagaattt ggcttgacct 1800
tgatggagag atccatgttc atgttacctg ggaaatgatt tgtatatgtg aattgaaatc 1860
tgaactgttg aagttagatt gaatctgaac actgtcaatg ttagattgaa tctgaacact 1920
gtttaaggtt agatgaagtt tgtgtataga ttcttcgaaa ctttaggatt tgtagtgtcg 1980
tacgttgaac agaaagctat ttctgattca atcagggttt atttgactgt attgaactct 2040
ttttgtgtgt ttgcagctca taaaaggtac caaacaatga ttgaacaaga tggattgcac 2100
gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca 2160
atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt 2220
gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg 2280
tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga 2340
agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct 2400
cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg 2460
gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg 2520
gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc 2580
gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat 2640
ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac 2700
tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt 2760
gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct 2820
cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttttg agcgggactc 2880
tggcgatcgc cccgatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 2940
tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 3000
taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 3060
atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 3120
cgcggtgtca tctatgttac tagatcggga ctagt 3155
<210> 58
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 58
tatgttattc actaaatcat agttaattaa tatatatttt tacctta 47
<210> 59
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 59
ttcacaacta gaagagcgtg agaccttttc aattagaatt cgtagga 47
<210> 60
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 60
tccttaaatc ggtcatggaa agtgagaata atcagggcaa taaaaaa 47
<210> 61
<211> 201
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 61
aattcaaacc tgtcaaaacc ataaaaagat attggacaaa tgcttttaat ataattgcct 60
tagattaatc tatatatata tatatatata tataggtaaa tacttacttg tatcagacat 120
ttatctttat aaatatgtta ttcactaaat catagttaat taatatatat ttttacctta 180
aggggccgtt tggttgggaa a 201
<210> 62
<211> 201
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 62
tatcgcacta ctattgaacc tatcgccttt tgagttttga tatataaata gcgacgaacg 60
tttcttagat aatggactca taacctccct cttcacaact agaagagcgt gagacctttt 120
caattagaat tcgtaggaaa aaatcaaaca caaattcaca aaacaaaaat ttattaagat 180
ttcagcgacc aagcccgtga g 201
<210> 63
<211> 214
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 63
tcgtttgaga aaaacggtcc ttaaatcggt catggaaagt gagaataatc agggcaataa 60
aaaagttgtt cataaggaag ttgatgttcg gaatctggga ttgaatgagc gacaagagtt 120
cattgatcga tttttcaggg ttgctgagga agataatgaa aagtttctga gaaagttcag 180
aaatcgaatt gacaagtaag tttccagtat tact 214
<210> 64
<211> 211
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 64
acaagccaca agctacacta tccaaagagc aggccagcga tatggaagct gagcaagaag 60
aaagcacggg aacccctaga cttcgaatca gccagtcgaa gagagatgat ctccctcgat 120
ccttatctgc agcagatggg aacaagacaa gtatgatctt tagcccatca ataacagaat 180
ctgcttgggg aatataagta atgcttacag t 211
<210> 65
<211> 200
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 65
atacgataag tcctcttaaa attaccatac ttataaagtc ataaaagtag aaagaaaaag 60
gacctctttg aaaattttta tataaaaggg gctgaaaata tgcgataatg tcaagtagca 120
gtttggcttc atatattggt ccatgttatc ggagttggta tttatgttaa atattaagta 180
cttttttatc atatctatca 200
<210> 66
<211> 202
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 66
actcaatttc tgccacttta ttataaatag taagttagta ttccattctt ggtcagaaag 60
gagtatggga aatcaaggtc tattttctta gttacagacc taacaatttc cattgtcacc 120
ttttttcagc tgttggcgtg tagaaacgga cctttgagca ttgttgatgc gtttgacttg 180
ttttagaaaa gaaaaaagaa tg 202
<210> 67
<211> 234
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 67
ggctagttgt ggcttggaag cttgcactag ttatgattgc tgtccaacct ctcacaattc 60
tatgctttta cacgcgaaaa gtcttgctat ccaccatcac agctaagttc gtcaaggcac 120
aatatcaaag cactcaaact gctgtggagg ctgtttataa tcataggatt gtgacctcgt 180
ttgggagcat aaataaggtc cttgaaatct ttgatgaggc acaggatgag tcaa 234
<210> 68
<211> 207
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 68
tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60
ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120
atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180
atttatattt atgctctgcg tcaacag 207
<210> 69
<211> 207
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 69
tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60
ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120
atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180
atttatattt atgctctgcg tcaacag 207
<210> 70
<211> 2544
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 70
atggaattgg agaggggatt tccattgcta aaacagcagt acaaagcttt attaaagaag 60
aattttatag tggcatggag gaacaagaga gccacattcc ttcagttatt ctcatccctc 120
ttcttgatat tccttctttt tataatccaa aaagcaatag aagctcgctt ttcttcttcc 180
tcctcttacg agaacgtgcg ggacccacaa ccgttagtgt cgccgccaat cccgccctgt 240
gaacaaaaga acttcatccg tctcccctgc tatgattttg tttggagtgg ttctcagagt 300
ccaaaaatcg ggcagattgc gagcagaatt atggctaata atcctggccg gtctattcct 360
acctctaagg ttctgtcatt tagaacacga gatgaagtgg atgaatggct tttcaaaaac 420
cctatgcgtt gtcctggagc tctgcacttt gttgaaagga atgctagcat aatcagttat 480
ggcatacaga caaactccac tcctgttgtc aaacgaggag tctttgaaga tccaactttt 540
aaattccaaa tcccacttca actggcagca gaacgtgaaa ttgcaagatc tctgattgga 600
gatccaaact tcagttgggt tgtcagtttc aaagaatttg cacatcctgc ttttgaagtt 660
ttctcagcct tgggtgctgt tgggcctacc tttttcttgg ctgttgctat gtttggcttt 720
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<213> Nicotiana tabacum
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Phe Phe Ser Asn Leu Pro Val Tyr Asn Leu Arg Pro Gln Cys Pro Pro
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Asn Ser Thr Phe Ser Phe Pro Leu Glu Phe Gly Ser Val Ala Val Gln
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Val Val Phe Gly Ser Leu Val Gly Leu Lys Phe Phe Leu Leu Asn Asp
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cacctccctt ctgttttgaa aaacattaca tgcacatttc cgggaagtaa gaaagttggt 2400
gttgtgggaa ggacaggaag tggtaaatca accctcactc aagccctttt ccggatcgta 2460
gaacccaaag aaggaagcat tatcattgac aatatagata tttgcaagat aggtcttcat 2520
gatttgaggt caaggtttag tattattcct caagatccaa caatgttcga tggaacagtt 2580
agaggaaacc tagatccaat agcacagcac tctgatactg aaatctggga ggctctggac 2640
aaatgccaac ttggtgatat aatacgtgca aagccagaaa agctagaatc tacagtggtt 2700
gaaaacggag aaaactggag tgtgggtcaa aggcagcttt tctgtcttgg aagagctttg 2760
ctaaagaaaa gtagcattct cgttttggat gaagcaacag catcagttga tgctgcaact 2820
gatgcagtgt tacaaaagat tatcagtcaa gagttcagaa atcgaacagt tatcacaata 2880
gctcacagga tccatacagt cattaatagc gatcttgtct tagtcttgaa tgaaggaaga 2940
atagccgaat atgattcacc agcaaagcta ttggaaagag aggattcttt cttctcaaaa 3000
ctgataaagg agtattcgat gagatccaaa ggtgcaaagg tgattgagaa gcatgcagca 3060
cagctttgtg tgttagcaga ggactgcgac cagccagatt atgtcaaatt ggtcaaagca 3120
ctctgtgctg atcacaatgt cagcttgatc acagttccga atgcaaaaac tcttggcgaa 3180
tgggctggtt tgtgtaagat tgactctgaa gggaaagcaa ggaaagtggt tggctgcggc 3240
tgtgttgttg tgaaggatta tggggaagag actgagggtc tgcatattgt ccaggagtac 3300
gtaaagtccc attaa 3315
<210> 75
<211> 1104
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 75
Met Ser Arg Cys Phe Trp Glu Asp Ala Ser Ile Ile Val Phe Leu Gly
1 5 10 15
Phe Leu Gly Ile Leu Leu Leu Asp Ser Leu Leu Cys Lys Cys Arg Lys
20 25 30
Lys Val Met Thr Val Asp Gln Lys Tyr Thr Val Gly Thr Glu Val Arg
35 40 45
Val Ser Tyr Ser Tyr Ile Leu Ser Ile Ile Cys Thr Thr Ile Leu Ser
50 55 60
Cys Thr His Leu Ile Met Leu Leu Ile Leu Gln Lys Arg Asn Gly Ala
65 70 75 80
His Cys Gln Phe Arg Phe Pro Val Leu Ser Ser Glu Ile Leu Gln Ser
85 90 95
Thr Ser Trp Ala Val Ser Phe Phe Val Leu Tyr Arg Thr Arg Ser Arg
100 105 110
Lys Tyr Ile Lys Phe Pro Trp Val Leu Arg Ile Trp Trp Ile Ser Ser
115 120 125
Phe Phe Leu Ser Ile Ala Arg Ala Thr Leu Asp Ala His Phe Val Ile
130 135 140
Thr Ser Asp Glu His Leu Gly Leu Ala Asp Tyr Val Asp Ile Ile Gly
145 150 155 160
Leu Ile Ser Ser Ala Cys Leu Leu Gly Ile Ser Ile Arg Gly Lys Thr
165 170 175
Gly Ile Ile Leu Asp Ile Ser Asp Ser Thr Thr Glu Pro Leu Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Asn Glu Lys Asp Pro Glu Asp Lys Arg Asp Ser Pro Tyr Gly
195 200 205
Lys Ala Ser Leu Leu Gln Leu Ile Thr Phe Ser Trp Leu Asn Pro Leu
210 215 220
Phe Glu Val Gly Asn Lys Lys Pro Leu Asp Gln Asp Glu Val Pro Asp
225 230 235 240
Val Asp Phe Arg Asp Ser Ala Lys Phe Leu Ser Gly Ser Phe Asp Glu
245 250 255
Ser Leu Lys Tyr Val Lys Gly Arg Asn Gly Ala Lys Asn Pro Ser Ile
260 265 270
Tyr Lys Ala Ile Tyr Val Phe Ala Gly Lys Lys Ala Ala Ile Asn Ala
275 280 285
Val Phe Ala Val Ile Ser Ala Gly Ser Ser Tyr Val Gly Pro Tyr Leu
290 295 300
Met Asp Asp Phe Val Asn Phe Leu Asn Glu Lys Lys Leu Arg Gly Leu
305 310 315 320
Gln Thr Arg Ala Ala Tyr Gln Asp Ala Asp Ile Tyr Leu Leu Asp Asp
325 330 335
Pro Phe Ser Ala Val Asp Ala His Thr Gly Thr His Leu Phe Gln Glu
340 345 350
Cys Leu Arg Gly Val Leu Lys Asp Lys Thr Ile Leu Tyr Val Thr His
355 360 365
Gln Val Glu Phe Leu Pro Ala Ala Asp Leu Ile Leu Val Met Gln Asn
370 375 380
Gly Arg Ile Ala Gln Ala Gly Thr Phe Glu Glu Leu Leu Lys Gln Asn
385 390 395 400
Ile Gly Phe Glu Val Leu Val Gly Ala His Asn Gln Ala Leu Glu Ser
405 410 415
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Gly Ser Glu Met Asp Thr Asp Ser Asn Ile Asn Thr Glu Thr Lys Gln
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450 455 460
Leu Val Gln Asp Glu Glu Arg Val Lys Gly Ser Ile Gly Lys Glu Val
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Tyr Tyr Ser Tyr Leu Thr Thr Met Lys Gly Gly Ala Phe Val Pro Ile
485 490 495
Ile Leu Ile Ala Gln Ser Ser Phe Gln Val Leu Gln Ile Ala Ser Asn
500 505 510
Tyr Trp Met Ala Ser Ala Phe Pro Thr Gly Asp Asp Ala Ala Pro Ile
515 520 525
Ala Glu Lys Met Asn Phe Ile Leu Val Val Phe Val Leu Leu Ala Val
530 535 540
Gly Ser Ser Leu Cys Val Leu Val Arg Ala Ser Phe Val Ala Ile Ile
545 550 555 560
Gly Leu Gln Thr Ala Glu Lys Leu Phe Ser Asn Met Leu His Ser Ile
565 570 575
Leu Arg Ala Pro Met Ser Phe Phe Asp Ser Thr Pro Thr Gly Arg Ile
580 585 590
Leu Asn Arg Ala Ser Thr Asp Gln Ser Val Val Asp Leu Glu Ile Ala
595 600 605
Leu Lys Leu Gly Trp Cys Ala Leu Ser Ile Ile Gln Leu Leu Gly Thr
610 615 620
Ile Ala Val Met Ser Gln Val Ala Trp Glu Val Phe Val Leu Phe Ile
625 630 635 640
Pro Ile Thr Ala Val Tyr Val Trp Tyr Gln Gln Tyr Tyr Ile Pro Thr
645 650 655
Ala Arg Glu Leu Ala Arg Leu Ser Gly Val Gln Arg Ala Pro Ile Leu
660 665 670
His His Phe Ala Glu Ser Leu Ala Gly Ala Ala Thr Ile Arg Ala Phe
675 680 685
Asn Gln Lys Asp Arg Phe Ala His Ala Asn Leu Ser Leu Ile Asp Gly
690 695 700
Ile Ala Gly Leu Ala Val Thr Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Tyr Ser Gln
705 710 715 720
Ala Ala Val Ile Trp Asn Ile Cys Gly Thr Glu Asn Lys Met Ile Ser
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Val Glu Arg Ile Leu Gln Tyr Ser Asp Leu Ala Ser Glu Ala Pro Leu
740 745 750
Val Ile Glu Asn Cys Arg Leu Ser Ser Thr Trp Pro Glu Thr Gly Thr
755 760 765
Ile Ser Phe Gln Asn Leu Gln Ile Arg Tyr Ala Glu His Leu Pro Ser
770 775 780
Val Leu Lys Asn Ile Thr Cys Thr Phe Pro Gly Ser Lys Lys Val Gly
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Val Val Gly Arg Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Leu Thr Gln Ala Leu
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Asp Ile Cys Lys Ile Gly Leu His Asp Leu Arg Ser Arg Phe Ser Ile
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Ile Pro Gln Asp Pro Thr Met Phe Asp Gly Thr Val Arg Gly Asn Leu
850 855 860
Asp Pro Ile Ala Gln His Ser Asp Thr Glu Ile Trp Glu Ala Leu Asp
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980 985 990
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Leu Ala Glu Asp Cys Asp Gln Pro Asp Tyr Val Lys Leu Val Lys Ala
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Leu Cys Ala Asp His Asn Val Ser Leu Ile Thr Val Pro Asn Ala Lys
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Thr Leu Gly Glu Trp Ala Gly Leu Cys Lys Ile Asp Ser Glu Gly Lys
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Ala Arg Lys Val Val Gly Cys Gly Cys Val Val Val Lys Asp Tyr Gly
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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tccggtggct ggagaatgag gatttctctt gcgcgagccc tatttatgaa tccaacaatt 720
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Met Val Ser Asp Ala Ala Lys Lys Arg Asp Ala Gln Lys Lys Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Arg Arg Gly Gly Lys Gly Ala Ala Ala Ser Ser Lys Thr
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Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Ala Pro Glu Thr Asn Gly Val Asp Asn
35 40 45
Leu Thr Asn Gly Val Gly Asp Leu His Ile Ser Asp Arg Asn Cys Thr
50 55 60
Gly Val Leu Cys Ser His Pro Leu Ser Arg Asp Ile Arg Ile Gln Ser
65 70 75 80
Leu Ser Val Thr Phe His Gly His Asp Leu Ile Val Asp Ser Glu Leu
85 90 95
Glu Leu Asn Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Leu Leu Gly Leu Asn Gly Cys
100 105 110
Gly Lys Ser Thr Leu Leu Thr Ala Ile Gly Leu Arg Glu Leu Pro Ile
115 120 125
Pro Glu His Met Asp Ile Phe His Leu Ser Arg Glu Ile Asp Ala Ser
130 135 140
Asp Met Ser Ala Leu Glu Ala Val Ile Asn Cys Asp Glu Glu Arg Leu
145 150 155 160
Lys Leu Glu Lys Glu Ala Glu Ala Leu Ala Gly Gln Asp Asp Gly Gly
165 170 175
Gly Glu Gln Leu Glu Arg Ile Tyr Glu Arg Leu Glu Ala Met Asp Ala
180 185 190
Ala Thr Ala Glu Lys Arg Ala Ala Glu Ile Leu Phe Gly Leu Gly Phe
195 200 205
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Arg Met Arg Ile Ser Leu Ala Arg Ala Leu Phe Met Asn Pro Thr Ile
225 230 235 240
Leu Leu Arg Gly Leu Cys Val Val Arg Arg Ile Leu Glu Glu Phe Arg
245 250 255
Ala His Ser Gly Cys His Phe Thr Leu Pro Gly Phe Ser Gln Trp Cys
260 265 270
Leu Tyr Gln Tyr His Pro His Ala Lys Gln Glu Ile Glu Ala Leu Tyr
275 280 285
Arg Lys Leu Arg Pro Val Cys Ser Asn Pro Val Arg Ala Arg Arg Glu
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Pro Asp Glu Thr Val
305
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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Phe Pro Phe Ser Asn Ser Pro Pro Pro His Ile Ala Ala Ile Glu Ala
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Asn Asn Asn Thr Thr Gly Phe Ala Tyr Glu Glu Val Val Leu Pro Phe
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Asn Asn Glu Gly Ile Tyr Leu Thr Trp Lys Asp Leu Trp Val Thr Val
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Tyr Val Gln Pro Gly Gln Val Leu Ala Ile Met Gly Pro Ser Gly Cys
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Gly Lys Ser Thr Leu Leu Asp Thr Leu Ala Gly Arg Leu Asp Ser Asn
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Thr Arg Gln Thr Gly Glu Ile Leu Ile Asn Gly Arg Arg Gln Ala Leu
165 170 175
Ala Phe Gly Thr Ser Ala Tyr Val Thr Gln Asp Asp Thr Leu Met Thr
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Thr Leu Thr Val Lys Glu Ala Ile Tyr Tyr Ser Ala Gln Leu Gln Leu
195 200 205
Pro Asp Ser Ile Ile Val Gln Leu Ala Lys Gln Asp Gly Arg Thr Val
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Val Ala Ser Ile His Gln Pro Ser Ser Glu Val Phe Glu Leu Phe His
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Asn Leu Cys Leu Leu Ser Ser Gly Arg Thr Val Tyr Phe Gly Ser Ile
245 250 255
Ser Ala Ala Asn Glu Phe Phe Ala Leu Asn Gly Phe Pro Cys Pro Thr
260 265 270
Met Arg Asn Pro Ser Asp His Tyr Leu Arg Thr Ile Asn Lys Asp Phe
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Asp Ala Asp Ile Glu Lys Gly Val Gly Gly Lys Ala Thr Ala Thr Glu
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Ala Ile Asn Ile Leu Val Lys Ser Tyr Lys Thr Ser Gln Gly Cys Gln
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Gln Val Gln Arg Arg Val Leu Glu Ile Cys Gln Gln Asn Gly Gly Gln
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340 345 350
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Ile Phe His Asp Ile Gly His Asp Tyr Gly Ser Ile Gln Phe Arg Ser
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Tyr Asp Glu Asn Arg Val Leu Ser Tyr Ile Gly Met Leu Gly Ala Val
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ccagagctta tcgtaagaga aacagtagat ttcgcagcta gatgccaagg tgaaaatcac 120
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attgaagctc ttgtatggtc ttatgttgta tactggactg taggatttgc acctggtgct 840
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ttcggtggta ttaattgggt gaaggcagaa attcatgagt tttgtcaagt gaaattggtg 3840
gtgaaaatag agtag 3855
<210> 81
<211> 1284
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 81
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Ala Arg Cys Gln Gly Glu Asn His Asn Phe Glu Asp Tyr Val Leu Asn
35 40 45
Val Leu Arg Leu Asp Ile Cys Ser Asp Thr Leu Val Gly Asn Asp Ala
50 55 60
Ile Arg Gly Val Ser Gly Glu Gln Arg Lys Ile Gly Glu Met Ile Val
65 70 75 80
Gly Pro Arg Lys Thr Leu Phe Met Asp Glu Ile Ser Thr Gly His Asp
85 90 95
Ser Ser Thr Ser Ser Lys Ile Val Lys Cys Ile Gln Asn Phe Val His
100 105 110
Ile Met Glu Gly Thr Val Met Met Ala Leu Cys Arg Pro Ser Gln Glu
115 120 125
Thr Phe Glu Leu Phe Asp Asp Leu Val Leu Leu Ser Glu Gly Tyr Val
130 135 140
Leu Tyr His Gly Pro Arg Glu Asp Val Ile Pro Phe Phe Glu Trp Leu
145 150 155 160
Gly Phe Gln Leu Pro Asp Arg Lys Asp Val Val Asp Phe Ile Gln Glu
165 170 175
Val Ala Phe Val Gly Ser Val Thr Gly Thr Met Phe Leu Arg Thr Arg
180 185 190
Leu His Pro Thr Asp Leu Val Asn Gly Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Leu
195 200 205
Phe Phe Gly Leu Val His Met Met Leu Asp Gly Phe Ser Glu Leu Ser
210 215 220
Leu Phe Ile Tyr Arg Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Asn Phe
225 230 235 240
Phe Tyr Pro Ala Trp Val Trp Ser Leu Cys Ser Trp Ile Leu Ser Leu
245 250 255
Pro Tyr Ser Val Ile Glu Ala Leu Val Trp Ser Tyr Val Val Tyr Trp
260 265 270
Thr Val Gly Phe Ala Pro Gly Ala Gly Arg Phe Phe Ser Tyr Met Phe
275 280 285
Leu Leu Phe Ser Val His Gln Met Ala Met Gly Leu Phe Arg Leu Ile
290 295 300
Ala Ser Leu Ser Arg Asp Ile Ile Ile Ala Asn Thr Phe Gly Ser Ala
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Val Leu Ile Ile Phe Leu Leu Gly Gly Phe Ile Leu Pro Lys Glu Met
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340 345 350
Gly Gln Arg Ala Ile Ser Val Asn Glu Phe Thr Ala Thr Arg Trp Ile
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Glu Lys Thr Thr Ser Gly Asn Val Thr Leu Gly Tyr Ser Val Leu Gln
370 375 380
Ser His Ser Leu Pro Thr Ser Gly Tyr Trp Tyr Trp Leu Gly Leu Gly
385 390 395 400
Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Leu Leu Asn Ile Ile Leu Thr Val Ala
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Val Leu Ser Pro Gly Val Leu Ile Gly Leu Val Gly Ala Ser Gly Ala
485 490 495
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625 630 635 640
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Ser Ile Ala Ile Glu Leu Leu Ser Phe Gly His Arg Phe Val Ala Val
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Leu Gln Leu Ile Ser Ala Ala Ser Tyr Phe Arg Cys Tyr Thr Ser Gly
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Phe Arg Glu Ser Leu Lys Val Val Gly Asp Lys Leu Gly Ala Arg Ala
980 985 990
Leu Ala Lys Glu Ser Asn Leu Asp Glu Arg Gln Gln Arg Ala Val Gly
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Ser Ser Val Val Val Ala Val Trp Asp Asp Arg Leu Lys Ala Cys Pro
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Val Lys Ile Glu
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 82
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Tyr Gly Glu Ser Lys Cys Phe Asp Asp Asp Gly Arg Leu Lys Arg Ser
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Gly Ser Val Trp Thr Ala Ser Ala His Ile Ile Thr Ala Val Ile Gly
35 40 45
Ser Gly Val Leu Ser Leu Ala Trp Ala Thr Ala Gln Leu Gly Trp Val
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Ala Gly Pro Ala Val Leu Leu Leu Phe Ser Phe Val Thr Tyr Tyr Thr
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Ser Ala Leu Leu Ala Asp Cys Tyr Arg Ser Gly Asp Gln Val Ser Gly
85 90 95
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100 105 110
Leu Gln Val Lys Ile Cys Gly Val Ile Gln Tyr Val Asn Leu Phe Gly
115 120 125
Val Ala Val Gly Tyr Thr Ile Ala Ser Ser Ile Ser Met Met Ala Val
130 135 140
Lys Arg Ser Asp Cys Phe His Lys His Gly His Arg Ala Ala Cys Asn
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180 185 190
Ala Ala Val Met Ser Phe Thr Tyr Ser Thr Ile Gly Leu Gly Leu Gly
195 200 205
Val Ala Gln Val Ala Glu Thr Gly Lys Ile Gln Gly Ser Leu Thr Gly
210 215 220
Ile Ser Ile Gly Thr Glu Val Thr Glu Met Gln Lys Ile Trp Arg Ser
225 230 235 240
Phe Gln Ala Leu Gly Ala Ile Ala Phe Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Ile
245 250 255
Leu Ile Glu Ile Gln Ser Leu Thr Val Phe Asp His Val Asp Ile Ala
260 265 270
Leu Ser Gly Leu Asp His Val Glu Ser Val Leu Ala Phe Gly
275 280 285
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 84
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ctaacctcct tcccggaagt tttcattaat ggaggtatat tgctgggtta cgtgtctaac 540
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gtcccatcag tattcttagc cgtaagtgta ctcgccatgc ctgagtcacc tcgttggctc 660
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tttcagcaag caagtggaat cgacgccgtc gttttgtaca gcccgaggat ttttgaaaaa 960
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<211> 507
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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1 5 10 15
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Tyr Ala Ile Ala Cys Ser Phe Leu Ala Ser Leu Ala Ser Ile Leu Leu
35 40 45
Gly Tyr Asp Ile Gly Val Met Ser Gly Ala Ile Ile Tyr Ile Lys Lys
50 55 60
Asp Leu His Ile Thr Asp Thr Gln Val Glu Ile Leu Val Gly Ile Leu
65 70 75 80
Asn Ile Tyr Ser Leu Phe Gly Ser Ala Ala Ala Gly Arg Thr Ser Asp
85 90 95
Trp Ile Gly Arg Arg Tyr Thr Met Val Val Ala Ala Ala Ile Phe Phe
100 105 110
Ala Gly Ala Leu Leu Met Gly Phe Ala Thr Thr Tyr Ala Phe Leu Met
115 120 125
Val Gly Arg Phe Val Ala Gly Val Gly Val Gly Tyr Ala Leu Met Val
130 135 140
Ala Pro Val Tyr Thr Ala Glu Val Ser Pro Ala Ser Ser Arg Gly Phe
145 150 155 160
Leu Thr Ser Phe Pro Glu Val Phe Ile Asn Gly Gly Ile Leu Leu Gly
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ser Val Leu Ala Met Pro Glu Ser Pro Arg Trp Leu Val Met Gln Gly
210 215 220
Arg Leu Gly Asp Ala Arg Arg Val Leu Asn Lys Thr Ser Asp Ser Leu
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245 250 255
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260 265 270
Gly Asp Asn Val Trp Arg Glu Leu Ile Phe Ser Pro Thr Pro Ala Val
275 280 285
Arg His Ile Leu Leu Thr Gly Val Gly Ile His Phe Phe Gln Gln Ala
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Ser Gly Ile Asp Ala Val Val Leu Tyr Ser Pro Arg Ile Phe Glu Lys
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Ala Gly Ile Lys Ser Asp His Asp Lys Leu Leu Ala Thr Val Ala Val
325 330 335
Gly Phe Val Lys Thr Ile Phe Ile Leu Val Ala Thr Phe Met Leu Asp
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Lys Ser Gly Arg Arg Pro Leu Leu Leu Thr Ser Val Ala Gly Met Val
355 360 365
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Pro Ile Thr Trp Val Tyr Ser Ser Glu Ile Phe Pro Leu Arg Leu Arg
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Ala Thr Gly Cys Ser Ile Gly Val Ala Val Asn Arg Val Thr Ser Gly
405 410 415
Val Val Ser Met Thr Phe Leu Ser Leu Val Lys Ser Ile Thr Ile Gly
420 425 430
Gly Ala Phe Phe Leu Tyr Phe Gly Leu Ala Ala Val Ala Phe Val Phe
435 440 445
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450 455 460
Glu Ala Leu Phe Gly Ser Phe Trp Asp Trp Arg Lys Thr Ala Arg Glu
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Leu Lys Glu Ala Lys Ile Thr Glu Lys Asn Ser Asn Asp Asn Gly Gln
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 86
atgtctagca atggaaaaat agaggaaaat aaggttccat tattagatta tgcatcctct 60
aatatccaca agagttatat attagaacaa aaccaagatg aacaaagttt tgcaaataga 120
ttttggattg aaacaaagaa gctatggcat atagttggcc ctgctatttt tagtagaata 180
gtttcttact ccatgtttgt catcactcaa gcttttgctg gtcatcttgg tgatcttgaa 240
cttgctgcta tgtccattgc tagtaatgtt gttcttggct tcgatttcgg cctcatgggt 300
tacagtacta atatatcagc attttctaaa atatacatac atatgttcat ggatatttta 360
ttgaactttg cgggtactag tgaaccctcg cttggtaaca tggtttcgcc tccgtttgct 420
actatacaaa agcttccgtt atgtcaaaaa gattcaacaa tttatccaat ttgcatagta 480
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agagaagaag aagaaggagg aggaggagga ggaggaggag aaagagactg a 1191
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<213> Nicotiana tabacum
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1 5 10 15
Tyr Ala Ser Ser Asn Ile His Lys Ser Tyr Ile Leu Glu Gln Asn Gln
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130 135 140
Leu Pro Leu Cys Gln Lys Asp Ser Thr Ile Tyr Pro Ile Cys Ile Val
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Asn Ile Asn Gly Trp Glu Leu Met Ile Pro Leu Gly Phe Phe Ala Gly
195 200 205
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210 215 220
Leu Val Ala Val Thr Gln Ser Ile Val Ile Gly Leu Phe Phe Trp Ile
225 230 235 240
Leu Ile Ile Phe Phe His Asn Glu Leu Ala Leu Ile Phe Ser Thr Ser
245 250 255
Gln Pro Val Leu Glu Ala Val His Lys Leu Ser Ile Leu Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Val Leu Leu Asn Ser Val Gln Pro Ile Leu Ser Gly Val Ala Val
275 280 285
Gly Ser Gly Trp Gln Ala Tyr Val Ala Tyr Ile Asn Leu Gly Cys Tyr
290 295 300
Tyr Leu Leu Gly Val Pro Leu Gly Phe Ile Met Gly Trp Gly Phe His
305 310 315 320
Tyr Gly Val Met Gly Ile Trp Ala Gly Met Ile Phe Gly Gly Thr Ala
325 330 335
Ile Gln Thr Leu Ile Leu Ala Ile Ile Thr Ile Arg Cys Asp Trp Asn
340 345 350
Lys Glu His Gln His Gln Gln Lys Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu
355 360 365
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Arg Glu Glu Glu
370 375 380
Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Arg Asp
385 390 395
<210> 88
<211> 2223
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 88
atggattctt ctaaaaacaa catttaccag ccatttttag ataacaatgg aaattctagt 60
ttgtcacctc agttttctga aacccataat tttgaatcaa gcaatgagtt agaaactgta 120
cttttagaca ctgaaatacc actatggaat aaactccgtt tagctacatg gattgaaatg 180
aagctccttt ttcaccttgc tgcacctgct gttatggttt atatgattaa ttatattatg 240
tctatgtcaa ctcaaatatt ttctggtcat ttgggtaatc ttgagctggc tgctgcttca 300
cttggaaata ctggaattca agtttttgct tatggtctta tgttgggaat gggaagtgca 360
gttgaaacac tatgtgggca agcatttgga gcaaagaaat atgatatgtt aggagtttat 420
ctgcaaagat caacaattct cctaactcta acaggaattt tactcgcttt cgtgtacatt 480
ttctgcaagc caattctaat atttctaggc gaatcggaaa gaattgcttc agcagctgcc 540
ttattcgtgt acggtctaat tccccaaatt ttcgcctacg cgttaaattt cccaattcag 600
aagtttctac aagctcagag tattgtagcg ccaagtgcat acatttcagc tgcgacttta 660
gtgttgcatt tagtgatgag ttgggttgtg atttacaaga ttgggcttgg tctactcggg 720
gcgtctttga tactgagttt gtcatggtgg ataatcgtaa taggccaatt tgtgtatatt 780
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ttgccggtgt ttttcaagtt atcagcagcg tctgcggtga tgttgtgctt ggagacatgg 900
tactttcaaa ttgtggtttt gctcgctgga ttgcttgaaa atcctgaatt gtctttggat 960
gctctttcta tttgcatgac aatttctggt tgggtattca tgatatcagt tggattcaat 1020
gcagcagcaa gtgtgagagt gagcaatgaa ctaggagcaa ggcatccaaa atcagcagct 1080
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ggagctaagg gtatatggtc aggaatgctg ggaggtacgg tgatgcagac aatcattttg 1440
atatggatca ctgctcgaac cgattggaat aaagaggcca aggggttgga attcactctc 1500
agccacctca tccggttata tcgacctcga ctttttcgag gattaatcaa gctccaacac 1560
cgatcaacga agtccttttt tgcaagcatt gatgaggaca aagaccgagg ttggatgagc 1620
cggttcgtgc gggtaaggac ctgcgacctc atccctgagg agaaactgct gttccccgag 1680
aagtggaacc ctgatccggt tgcatggatg cctcacgtgg tccccgacct cgaagactgg 1740
ttcgaaagct ggctgcaact tcctcccatg ccgagcgctg ctggcgtgac atggcaaggg 1800
gcagatagga ggctaagaat catagtgagc tcatcttgcc tcggggatgt tgctgaaata 1860
aggcctacct cgcctgggga agaggtggat cccaaaccgg ttaaggacaa gaaaaggaga 1920
agggcctcac cctctgatac cccaaagtcc aagaagatta aggcccgtaa attgaaggac 1980
gattctgcca ctctatctgc cgacgtagtc caacagctac gagatgaaga agaggagggg 2040
gaagatgctg gttgtgatct ggtgcctcga aagaggggga gcgtcgaagc tccaaaaata 2100
gttgggccgg tgatggtcga ggagactcat ccttggaccg aggagatctc ggaaggtact 2160
ccgagcagag ttcccgagtc atcgggggcc caagatattc ccgtcgtgat gaaaaatcgg 2220
tga 2223
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<211> 740
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 89
Met Asp Ser Ser Lys Asn Asn Ile Tyr Gln Pro Phe Leu Asp Asn Asn
1 5 10 15
Gly Asn Ser Ser Leu Ser Pro Gln Phe Ser Glu Thr His Asn Phe Glu
20 25 30
Ser Ser Asn Glu Leu Glu Thr Val Leu Leu Asp Thr Glu Ile Pro Leu
35 40 45
Trp Asn Lys Leu Arg Leu Ala Thr Trp Ile Glu Met Lys Leu Leu Phe
50 55 60
His Leu Ala Ala Pro Ala Val Met Val Tyr Met Ile Asn Tyr Ile Met
65 70 75 80
Ser Met Ser Thr Gln Ile Phe Ser Gly His Leu Gly Asn Leu Glu Leu
85 90 95
Ala Ala Ala Ser Leu Gly Asn Thr Gly Ile Gln Val Phe Ala Tyr Gly
100 105 110
Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala
115 120 125
Phe Gly Ala Lys Lys Tyr Asp Met Leu Gly Val Tyr Leu Gln Arg Ser
130 135 140
Thr Ile Leu Leu Thr Leu Thr Gly Ile Leu Leu Ala Phe Val Tyr Ile
145 150 155 160
Phe Cys Lys Pro Ile Leu Ile Phe Leu Gly Glu Ser Glu Arg Ile Ala
165 170 175
Ser Ala Ala Ala Leu Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln Ile Phe Ala
180 185 190
Tyr Ala Leu Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ala Gln Ser Ile
195 200 205
Val Ala Pro Ser Ala Tyr Ile Ser Ala Ala Thr Leu Val Leu His Leu
210 215 220
Val Met Ser Trp Val Val Ile Tyr Lys Ile Gly Leu Gly Leu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Ser Leu Ile Leu Ser Leu Ser Trp Trp Ile Ile Val Ile Gly Gln
245 250 255
Phe Val Tyr Ile Val Lys Ser Glu Arg Cys Lys Gln Thr Trp Asn Gly
260 265 270
Phe Ser Leu Gln Ala Phe Ser Gly Leu Pro Val Phe Phe Lys Leu Ser
275 280 285
Ala Ala Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr Phe Gln Ile
290 295 300
Val Val Leu Leu Ala Gly Leu Leu Glu Asn Pro Glu Leu Ser Leu Asp
305 310 315 320
Ala Leu Ser Ile Cys Met Thr Ile Ser Gly Trp Val Phe Met Ile Ser
325 330 335
Val Gly Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly
340 345 350
Ala Arg His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Val Val Val Thr Ser
355 360 365
Trp Ser Phe Ile Leu Ser Val Ile Ala Ala Val Ile Val Leu Ala Leu
370 375 380
Arg Asn Leu Ile Ser Tyr Ala Phe Thr Gly Gly Glu Val Val Ala Gln
385 390 395 400
Ala Val Ser Asp Leu Cys Pro Leu Leu Ala Ile Ser Leu Ile Leu Asn
405 410 415
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420 425 430
Thr Phe Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Ile Val Gly Val
435 440 445
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Ile Trp Ile Thr Ala Arg Thr Asp Trp Asn Lys Glu Ala Lys Gly Leu
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Arg Ala Ser Pro Ser Asp Thr Pro Lys Ser Lys Lys Ile Lys Ala Arg
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Leu Arg Asp Glu Glu Glu Glu Gly Glu Asp Ala Gly Cys Asp Leu Val
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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tttgcttatg ctgccaattt tcctatccaa aagttcttgc aagcccaaag tattgtaaat 480
cccagcgcat atatagcagc agcgacatta gtcctccatc ttttcctaac atggattgtg 540
ctttatgtat ttgagtgggg attgtttgga ggagccttgg ttctaagtat ttcgtggtgg 600
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 91
Met Leu Glu Arg Ala Ser Val Ile Glu Leu Lys Asn Leu Phe Arg Leu
1 5 10 15
Ala Ala Pro Ser Val Ile Val Tyr Leu Leu Asn Asn Ile Thr Ser Met
20 25 30
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35 40 45
Ala Ser Leu Gly Asn Glu Gly Ile Gln Leu Leu Ala Tyr Gly Val Met
50 55 60
Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala Tyr Gly
65 70 75 80
Ala His Lys Tyr Gly Ser Leu Gly Ile Tyr Leu Gln Arg Ser Thr Ile
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Leu Leu Met Leu Ser Gly Ile Pro Ile Met Val Ala Tyr Leu Phe Ser
100 105 110
Lys Pro Ile Leu Ile Phe Leu Gly Glu Ser Glu Lys Val Ala Ser Ala
115 120 125
Ala Ala Leu Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln Ile Phe Ala Tyr Ala
130 135 140
Ala Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ala Gln Ser Ile Val Asn
145 150 155 160
Pro Ser Ala Tyr Ile Ala Ala Ala Thr Leu Val Leu His Leu Phe Leu
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Thr Trp Ile Val Leu Tyr Val Phe Glu Trp Gly Leu Phe Gly Gly Ala
180 185 190
Leu Val Leu Ser Ile Ser Trp Trp Ile Val Val Ile Ala Gln Phe Met
195 200 205
Tyr Ile Leu Trp Ser Asp Thr Cys Lys Lys Thr Trp Ser Gly Phe Ser
210 215 220
Leu Gln Ala Phe Ser Gly Leu Trp Asp Phe Phe Lys Leu Ser Ala Ala
225 230 235 240
Ser Ser Val Met Leu Cys Leu Glu Ala Trp Tyr Phe Gln Ile Leu Val
245 250 255
Leu Val Ala Gly Leu Leu Pro Asn Pro Glu Val Ala Leu Asp Ser Leu
260 265 270
Ala Val Cys Asn Thr Ile Leu Gly Cys Val Phe Met Leu Ser Val Gly
275 280 285
Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly Ala Gly
290 295 300
His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Val Val Val Thr Leu Ser Ser
305 310 315 320
Phe Val Ile Ala Val Val Ile Ala Ile Val Val Met Leu Leu Arg Asp
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Val Met Ser Tyr Ala Phe Thr Gly Gly Glu Thr Ile Ala Lys Ala Ser
340 345 350
Ser Glu Leu Ala Pro Leu Leu Ala Ala Ser Val Val Leu Asn Gly Ile
355 360 365
Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys Gly Trp Gln Gly Phe
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Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Val Val Gly Ile Pro Leu
385 390 395 400
Gly Val Leu Leu Gly Phe Lys Phe Lys Leu Gly Ala Lys Gly Ile Met
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Ala Gly His Val Trp Arg Asn Ser His Thr Asn Ser Asn Leu Thr Met
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Gly His Phe Ser Asn Gln Leu Gly Arg Arg Gly Gln Val Glu Lys Thr
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Lys Asn Arg Leu Asn Lys Trp Arg Asp Ser Ser Lys Thr Pro Leu Leu
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Asn Glu Ser
465
SEQUENCE LISTING
<110> Altria Client Services LLC
<120> TOBACCO PLANTS HAVING ALTERED AMOUNTS OF
ONE OR MORE ALKALOIDS IN LEAF AND METHODS OF USING SUCH
PLANTS
<150> US 62/011,304
<151> 2014-06-12
<150> US 61/912,752
<151> 2013-12-06
<160> 91
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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<212> DNA
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<220>
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<213> Nicotiana tabacum
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Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
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Met Arg Leu Tyr Tyr Ser Arg Val Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro
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Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr
50 55 60
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65 70 75 80
Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Val Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr
85 90 95
Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu
100 105 110
Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys
115 120 125
Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val
130 135 140
Gly Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly
145 150 155 160
Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala
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Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu
180 185 190
Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met
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gttctacttc ctgttactga ggtattagct gtagttttct ttagggaaaa tttttcaggt 840
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
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Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Val Trp Phe Ser Ser
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Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro Phe Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile
50 55 60
Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ala Asn Ala Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Leu Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Ile Ile Gly Val Val
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Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro
100 105 110
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115 120 125
Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile
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Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly Ala Val Leu Leu Gly Val Arg
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Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu
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Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu
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Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala
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Val Gly Val Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu Met Ser Gly
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Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu Ala Val Val
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Phe Phe Arg Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala Leu Phe Leu
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Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe Arg Gln Thr
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Lys Lys Gln Lys Asn Lys Ser Pro Lys Thr Glu Met Thr Thr Thr His
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Val Cys Gly Gly Pro Leu Met Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly
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Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys
180 185 190
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agaatatatt attggtttta tgatgacact tctagcagca gctttgtacg gagtcatttt 720
gccttgtatt gagttgattt acatgaaggc aaaacaagct attacttcta cgttagtatt 780
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caataaggac tttcaggcaa tgtcaaggga ggcaaaacaa tttaacctcg gagaagctag 900
atattataca gttatagtat gcactgccgc tatttggcag tgcttcttcg tgggtattat 960
tggagttatc tactgctctt cttctttgat gtctggggtt atgattgcag ttttgctccc 1020
cgttactgag gtattagctg taattttctt taaggaaaat ttttcaggtg aaaagggtct 1080
tgctcttttc ctttctcttt ggggtttcgt ctcatacttc tatggagagt tcagacaaac 1140
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Met Glu His Pro Gly Leu Ser Thr Asn Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ile Ser Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met
20 25 30
Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Ile Trp Leu Ser Ser
35 40 45
Trp Leu Gln Thr Gly Gly Trp Pro Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile
50 55 60
Leu Tyr Tyr Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Met Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Ala
85 90 95
Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro
100 105 110
Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala
115 120 125
Val Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala
130 135 140
Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Val Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu
145 150 155 160
Lys Leu Ser Pro Phe Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly
165 170 175
Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val
180 185 190
Thr Ser Lys Glu Tyr Ile Ile Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala
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Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Met Lys
210 215 220
Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ser Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Ile
225 230 235 240
Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Asn
245 250 255
Lys Asp Phe Gln Ala Met Ser Arg Glu Ala Lys Gln Phe Asn Leu Gly
260 265 270
Glu Ala Arg Tyr Tyr Thr Val Ile Val Cys Thr Ala Ala Ile Trp Gln
275 280 285
Cys Phe Phe Val Gly Ile Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu
290 295 300
Met Ser Gly Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu
305 310 315 320
Ala Val Ile Phe Phe Lys Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala
325 330 335
Leu Phe Leu Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe
340 345 350
Arg Gln Thr Lys Lys Gln Lys Asn Lys Ser Pro Glu Ala Glu Met Thr
355 360 365
Arg Thr Thr Thr His Thr Glu Ser Val
370 375
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 9
atgtgctgct tttgcgggaa aatcttccct ccattcattt tcctctctcc atgtccacaa 60
aggactcttc tatcttccat tgatgtgctg cttttgctta ctttcattgt atttgcagta 120
caaaagttgt actcaaagtt gaggtccaat gagcactcta cttctagcat tgataagcct 180
ctaattgcac acaacaggac ttctgttaga accaatcttt ggtttaagct gtctctgatt 240
ttgtcagcta ttttagcctt atcttctata gttttatgca ttttggttat tgtgggaaat 300
tcccagtcgc cttggaaagt catagatgga ctgtattggt tgtttcaggc gattacacat 360
gttgtaatca ctatactaat agttcatgag aaaagatttc acgctatttc ccatccactg 420
tccctgcgcg tgttttggat tgcaaacttt gtagttatga gtttgttctt tggttgtgga 480
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ggagttgctg taattagtga ttctgaatct cacttaagtg atgaaaccaa tggttatgaa 660
ctcctggata aatccagtgt gagtggcttt gcttcagctt ctctaatatc gaaagccttt 720
tggatttgga tgaacccttt actgcaaaaa ggttacaagt cacctctcaa gattgatgaa 780
gttccttcac tttccccact gcatagagca gagaaaatgt ctcaactttt cgaaagaaat 840
tggcctaaac ctgaagaaat atcaaagcat cctgtccgaa caacattgct gcgttgcttt 900
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gggccaacac tcatacaaag atttgttgat tacacagcag gaaagaggac atctccttat 1020
gaaggatact accttatagg aactctccta atagccaaat ttgtggaagt caggacatct 1080
ccttatgaag gatactacct tataggaact ctcctaatag ccaaatttgt ggaagttcta 1140
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Met Cys Cys Phe Cys Gly Lys Ile Phe Pro Pro Phe Ile Phe Leu Ser
1 5 10 15
Pro Cys Pro Gln Arg Thr Leu Leu Ser Ser Ile Asp Val Leu Leu Leu
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Leu Thr Phe Ile Val Phe Ala Val Gln Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Arg
35 40 45
Ser Asn Glu His Ser Thr Ser Ser Ile Asp Lys Pro Leu Ile Ala His
50 55 60
Asn Arg Thr Ser Val Arg Thr Asn Leu Trp Phe Lys Leu Ser Leu Ile
65 70 75 80
Leu Ser Ala Ile Leu Ala Leu Ser Ser Ile Val Leu Cys Ile Leu Val
85 90 95
Ile Val Gly Asn Ser Gln Ser Pro Trp Lys Val Ile Asp Gly Leu Tyr
100 105 110
Trp Leu Phe Gln Ala Ile Thr His Val Val Ile Thr Ile Leu Ile Val
115 120 125
His Glu Lys Arg Phe His Ala Ile Ser His Pro Leu Ser Leu Arg Val
130 135 140
Phe Trp Ile Ala Asn Phe Val Val Met Ser Leu Phe Phe Gly Cys Gly
145 150 155 160
Val Thr Arg Leu Val Ser Leu Lys Glu Ile Asp Pro Asn Leu Arg Met
165 170 175
Asp Asp Ile Ser Ser Leu Val Ser Phe Pro Ile Ser Val Val Leu Phe
180 185 190
Ile Val Ala Ile Lys Gly Ser Thr Gly Val Ala Val Ile Ser Asp Ser
195 200 205
Glu Ser His Leu Ser Asp Glu Thr Asn Gly Tyr Glu Leu Leu Asp Lys
210 215 220
Ser Ser Val Ser Gly Phe Ala Ser Ala Ser Leu Ile Ser Lys Ala Phe
225 230 235 240
Trp Ile Trp Met Asn Pro Leu Leu Gln Lys Gly Tyr Lys Ser Pro Leu
245 250 255
Lys Ile Asp Glu Val Pro Ser Leu Ser Pro Leu His Arg Ala Glu Lys
260 265 270
Met Ser Gln Leu Phe Glu Arg Asn Trp Pro Lys Pro Glu Glu Ile Ser
275 280 285
Lys His Pro Val Arg Thr Thr Leu Leu Arg Cys Phe Trp Lys Glu Val
290 295 300
Ile Phe Thr Ala Ile Leu Ala Val Ile Arg Val Cys Val Met Tyr Val
305 310 315 320
Gly Pro Thr Leu Ile Gln Arg Phe Val Asp Tyr Thr Ala Gly Lys Arg
325 330 335
Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile Gly Thr Leu Leu Ile Ala
340 345 350
Lys Phe Val Glu Val Arg Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile
355 360 365
Gly Thr Leu Leu Ile Ala Lys Phe Val Glu Val Leu Thr Ser His Gln
370 375 380
Phe Asn Phe Asn Ser Gln Lys Leu Gly Met Leu Ile Arg Ala Thr Leu
385 390 395 400
Leu Thr Ser Leu Tyr Lys Lys Gly Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Arg
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Gln Ala His Gly Val Gly Gln Ile Val Asn Tyr Met Ala Val Asp Ala
420 425 430
Gln Gln Leu Ser Asp Met Met Leu Gln Leu His Ser Ile Trp Leu Met
435 440 445
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450 455 460
Ala Ser Thr Val Val Thr Leu Ala Gly Leu Ala Ala Val Met Val Phe
465 470 475 480
Val Val Phe Gly Thr Lys Arg Asn Asn Arg Phe Gln Phe Asn Ile Met
485 490 495
Lys Asn Arg Asp Ser Arg Met Lys Ala Thr Asn Glu Met Leu Asn Tyr
500 505 510
Met Arg Val Ile Lys Phe Gln Ala Trp Glu Glu His Phe Asn Lys Arg
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530 535 540
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545 550 555 560
Val Ala Thr Leu Thr Phe Gly Ser Ala Ile Leu Leu Gly Ile Pro Leu
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Val Asp Lys Ala Val Glu Arg Leu Glu Gly Cys Gly Gly Thr Ile Ala
625 630 635 640
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Ala Val Val Gly Thr Val Gly Ala Gly Lys Ser Ser Leu Leu Ala Ser
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Val Leu Gly Glu Met His Lys Leu Ser Gly Gln Val Thr Ile Cys Gly
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Ser Thr Ala Tyr Val Ala Gln Thr Ser Trp Ile Gln Asn Gly Thr Ile
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Glu Val Ile Arg Val Cys Cys Leu Glu Lys Asp Leu Glu Ile Met Glu
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Phe Gly Asp Gln Thr Glu Ile Gly Glu Arg Gly Ile Asn Leu Ser Gly
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Gly Gln Lys Gln Arg Ile Gln Leu Ala Arg Ala Val Tyr Gln Asp Cys
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Leu Ile Leu Val Met Arg Asp Gly Met Ile Val Gln Ser Gly Lys Tyr
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Asn Glu Ile Leu Glu Ala Gly Met Asp Phe Lys Glu Leu Val Ala Ala
850 855 860
His Glu Thr Ser Leu Glu Leu Val Asp Val Glu Thr Thr Lys Glu Ser
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Asn Ala Ser Leu Glu Glu Ser Lys Ser Ser Arg Arg Leu Ser Lys Glu
885 890 895
Glu Asn Gly Asp Asp Lys Ser Gln Gln Ser Thr Ser Asp Arg Gly Asp
900 905 910
Ser Lys Leu Ile Lys Glu Glu Glu Arg Glu Thr Gly Lys Val Ser Pro
915 920 925
Arg Val Tyr Lys Leu Tyr Ile Thr Glu Ala Phe Gly Trp Trp Gly Val
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Val Leu Val Ile Leu Phe Ser Phe Leu Trp Gln Ser Ser Leu Met Ala
945 950 955 960
Ser Asp Tyr Trp Leu Ala Tyr Glu Thr Ser Ala Asp Arg Ala Met Ser
965 970 975
Phe Asn Pro Ser Leu Phe Ile Gly Ile Tyr Gly Val Ile Ala Val Val
980 985 990
Ser Ser Leu Leu Ile Val Ile Arg Met Tyr Phe Val Thr Leu Met Gly
995 1000 1005
Leu Lys Thr Ala Gln Ile Phe Phe Gly Gln Ile Leu Tyr Ser Ile Leu
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Ile Ile Thr Cys Gln Tyr Ser Trp Pro Thr Val Leu Leu Leu Ile Pro
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Leu Gly Trp Leu Asn Ile Trp Tyr Arg Gly Tyr Tyr Leu Ala Thr Ser
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Arg Glu Leu Thr Arg Leu Asp Ser Ile Thr Lys Ala Pro Val Ile His
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His Phe Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Met Thr Ile Arg Cys Phe Arg
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Lys Gln Glu Met Phe Cys Asn Glu Asn Val Asn Arg Val Asn Ser Asn
1140 1145 1150
Leu Arg Met Asp Phe His Asn Asn Gly Ser Asn Glu Trp Leu Gly Phe
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Arg Leu Glu Leu Met Gly Ser Leu Leu Leu Cys Val Ser Ala Met Phe
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Met Ile Val Leu Pro Ser Ser Ile Ile Lys Pro Glu Asn Val Gly Leu
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Ser Leu Ser Tyr Gly Leu Ser Leu Asn Ser Val Leu Phe Trp Ser Ile
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Phe Val Ser Cys Phe Val Glu Asn Lys Met Val Ser Val Glu Arg Leu
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Lys Gln Phe Ser Glu Ile Pro Ser Glu Ala Glu Trp Arg Lys Met Asp
1235 1240 1245
Phe Leu Pro Pro Ser Ser Trp Pro Ser Arg Gly Asn Val Glu Leu Glu
1250 1255 1260
Asn Val Gln Val Arg Tyr Arg Pro Asn Thr Pro Leu Val Leu Lys Gly
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Val Thr Leu Ser Ile Arg Gly Gly Glu Lys Ile Gly Val Val Gly Arg
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Thr Gly Gly Gly Lys Ser Thr Leu Ile Gln Val Phe Phe Arg Leu Val
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Leu Gly Leu His Asp Leu Arg Ser Arg Phe Gly Ile Ile Pro Gln Glu
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Gln Tyr Ser Asp Asp Glu Ile Trp Lys Ser Leu Glu Arg Cys Gln Leu
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Lys Asp Val Val Ser Leu Lys Pro Glu Lys Leu Asp Ser Pro Gly Thr
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Phe Ser Phe Ser Thr Ala Ser Leu Leu Ser Tyr Thr Ile Asn Phe Leu
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Cys Leu Ala Ile Tyr Ile Leu Asn Thr Val Ile Gly Lys Ile Val Val
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Gly Arg Val Met Leu Lys Arg Ser Arg Leu Leu Phe Met Asp Glu Ala
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1475 1480 1485
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Ala Lys Glu Phe Asp Lys Pro Ser Arg Leu Leu Glu Arg Pro Ser Leu
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 11
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ccatcaaatt taaatcctgg atccgcctct gactatgaca tacaaaatac aagtagccga 1800
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<213> Nicotiana tabacum
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Gly Gln Val Phe Lys Val Phe Phe Ala Leu Thr Leu Ser Ala Val Gly
965 970 975
Val Thr Gln Ser Thr Gly Met Ala Pro Asp Ala Asn Lys Ala Lys Asp
980 985 990
Ser Ile Ala Ser Ile Phe Asp Ile Leu Asp Arg Lys Pro Lys Ile Asp
995 1000 1005
Ser Asn Ser Asp Val Gly Thr Thr Leu Ala Val Ile Arg Gly Asp Ile
1010 1015 1020
Glu Phe Lys His Val Ser Tyr Arg Tyr Glu Thr Arg Pro Asp Val Gln
1025 1030 1035 1040
Ile Phe Lys Asp Leu Cys Leu Thr Ile Pro Ser Gly Lys Thr Val Ala
1045 1050 1055
Leu Val Gly Glu Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Ile Ser Leu Ile
1060 1065 1070
Glu Arg Phe Tyr Asn Pro Glu Ser Gly Glu Ile Tyr Leu Asp Gly Val
1075 1080 1085
Glu Ile Lys Gln Phe Lys Leu Ser Trp Leu Arg Gln Gln Met Gly Leu
1090 1095 1100
Val Ser Gln Glu Pro Ile Leu Phe Asn Glu Thr Ile Arg Asp Asn Ile
1105 1110 1115 1120
Ala Tyr Ser Arg Gln Gly Asn Ala Thr Glu Glu Glu Ile Ile Gln Ala
1125 1130 1135
Ala Lys Ser Ala Asn Ala His Asn Phe Val Ser Ser Leu Pro Gln Gly
1140 1145 1150
Tyr Asp Thr Ser Val Gly Glu Arg Gly Val Gln Leu Ser Gly Gly Gln
1155 1160 1165
Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asp Pro Lys Ile
1170 1175 1180
Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ala Glu Ser Glu Ser
1185 1190 1195 1200
Ile Val Gln Glu Ala Leu Asp Arg Val Met Val Asn Arg Thr Thr Val
1205 1210 1215
Val Val Ala His Arg Leu Thr Thr Ile Lys Gly Ala Asp Ile Ile Ala
1220 1225 1230
Val Val Lys Asn Gly Val Ile Ala Glu Lys Gly Arg His Glu Val Leu
1235 1240 1245
Met Asn Ile Lys Asp Gly Val Tyr Ala Ser Leu Val Ala Leu His Met
1250 1255 1260
Thr Ser Thr
1265
<210> 15
<211> 3847
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 15
tacgaaccta acaatttcca ttgtcacctt ttttcagctg ttggcgtgta gaaacggacc 60
tttgagcatt gttgaacttg ttttagaaaa gaaaaagaat gacgacttca tctgaaaaag 120
cattagcgaa gaaagataga aattcagtag ctattatttt cagatatgct gatggaatag 180
acattttatt gatgtgtttg ggcactattg gagccattgg agatggcata tcaacaaact 240
gtttgctggt atatgttagc catcttttta atagcttggg ttatggtaag actcaacaga 300
acaatgagat ttttatggaa gaaattgaga agtgcagctt gtattttgta ttattgggat 360
tggcagtcat ggttgtggcc tttatggaag gttactgctg gagtaaaaca agtgagcggc 420
aagtgctaaa aattcggtac aagtatttgg aagccattct taggcaagaa gttggtttct 480
ttgattctca agaagctacc acatcggaaa tcactaacag catttcgaaa gacacttgtc 540
tcatacagga agttcttagt gaaaaggtac ccatattttt tatgcataca acagttttca 600
tgtcaggaat tgcattttca gcctacttct cgtggaggtt ggctttagtt gccttaccaa 660
cacttattct cctcataatc ccaggtttga tctatgggaa atatctactc catttgtctg 720
aaaagtcgtt caaggaatat gggaaagcaa atgctattgt atggcaggct cttagctcca 780
ttaaaactat atattcattt actggtgaga agagcgtgat tgaaaggtat tcttcgattc 840
ttgatcgaac cataatgctg ggaatgaagc aaggaattgc aaaaggtctt gctgttggaa 900
gcactgggct ttcctttgca atatgggctt tactagcatg gtatgggagc catttgatta 960
tgcacaaagg agaaagtggt ggcagaattt atgcagctgg agtttctttt gtcttgggtg 1020
gactatcgct tgggatggca ctgcctgagg tgaaatactt gacagaagct tcagttgctg 1080
cctcaagaat atttgccagg attgatcgcg ttccagaaat tgatggggaa cacacaaggg 1140
gactcgttct agaaaatatt agaggagaag ttgaattcaa gaatgtaaac ttcacatatc 1200
cttgtcggcc agatagcgtt gtgctcaagg aattcaatct taaaattgaa gcaggaaaaa 1260
cagtggccct tgttggagca agtggtagtg gaaaatccac tgccattgcc atgattcaaa 1320
ggttttatga tactaacgtt ggagctatat gtattgatgg tgtagatata aagtcattgc 1380
agttgaaatg gttgagaggg cagatggggt tagtaagtca agaacatgca ttatttggaa 1440
catctattaa gaagaatatt atgttaggga aaattgacgc aagcatggat gaagttgtgg 1500
ctgcagcaat gactgcgaat gctcataatt tcattacgca acttccagaa ggatatgaga 1560
ccaagattgg tgaaagagga gcatttttat caggtgggca aaagcaacga gtggcaatag 1620
cgagggccat agtgaaaaat ccagcgatac ttctactaga tgaggccaca agtgcacttg 1680
attctgaatc agaaaaacta gttcaggagg ctctagatca agcctccatt ggaagaacta 1740
cactggttgt tgcccacaag ttatcaacag ttagaaatgc agacctcatt gcaatagtga 1800
gtagtggttg catcactgaa ctagggtcac acaatgagct tatcgagaaa gatggacact 1860
atggaagaat ggcaaaactt caaagacaat ttagctctgt tgatcaagaa caaagcgcca 1920
aatctcttat ttcttcagta ggaagaagca gtgcaggaag acaacgctca attattagat 1980
caagtccgac tgtattcgcc tcacctttac tcatcgaaga cagctcccaa gcttcacctc 2040
atcctccccc ttccttctct cggctccttt tactaaactt acctgaatgg aagcaaggaa 2100
taattggaag cttatctgcc atttcatttg gttcagtgca gcctgtatat gcactgacca 2160
taggtggcat gatttcagca ttttactcac caactcacga ggaaatgcaa tttagaattc 2220
agaaatactg tttgattttc agtatccttt gccttgtttc atttgttctc aatctatgcc 2280
aacattacaa ttttgcttac atgggagaac gcctgacaag aagaataaga atgcaaatgc 2340
ttgagaaaat cttgacgttt gaagcagcct ggtttgatga ggaacagaat tcaagtggag 2400
ccttatgttc tagattgagc aatgaagcag ctatggttaa atcccttgtt gctgatagag 2460
tctcactctt ggtccaaagc atttcagctg tcactgttgc catggtaatg gggctagttg 2520
tggcttggaa gcttgcacta gttatgattg ctgtccaacc tctcacaatt ctatgctttt 2580
acacgcgaaa agtcttgcta tccaccatca cagctaagtt cgtcaaggca caatatcaaa 2640
gcactcaaac tgctgtggag gctgtttata atcataggat tgtgacctcg tttgggagca 2700
taaataaggt ccttgaaatc tttgatgagg cacaggatga gtcaaggaag gaggctagga 2760
agaaatcgtg gttagctggt attggtatag gatcagcaca aggcctagct ttcatttgtt 2820
gggccctcga tttttggtat ggcggaaagc tagttaatgc tggagaaata tcagctgctg 2880
atgttttcaa gactttcttt atattagtca gcactggtaa ggtagtagct gaagctggaa 2940
gcatgacttc tgatctggcc aagggctcag cagcagttgc ttctatattt gccattcttg 3000
atcgaaactc actcatccat ggatcgtatg atgcgaagaa taacagtagc ggaaccaact 3060
tggagaagat gaccggtggg atagagatga aaaaggttga ttttgcatat ccaagccggc 3120
ctaatagcct agtgttgcgc gaattcagcc tggaagtgaa agcaggaact agcattggac 3180
ttgttggaaa gagtggctgc ggaaaatcaa cagtgattgc cttgattcaa agattttacg 3240
atgcagacag gggatcactg aaaattgatg gtatggacat tcgattactc gatataggat 3300
ggtatagaag gcaaatggcg cttgtgagcc aagaaccggc accatccatg aaaacatttt 3360
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gtggggagag aggtgtgcag ctatcaggag ggcaaaagca aagaattgcc attgcaagag 3480
caatattacg gaaaccaacc atactacttt tagacgaagc aacgagtgct ctagatgttc 3540
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ggaaggtggt ggagaaagga acctattctc agctaaagga taagcgaggc gcatttttca 3720
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<213> Nicotiana tabacum
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Val Ala Ile Ile Phe Arg Tyr Ala Asp Gly Ile Asp Ile Leu Leu Met
20 25 30
Cys Leu Gly Thr Ile Gly Ala Ile Gly Asp Gly Ile Ser Thr Asn Cys
35 40 45
Leu Leu Val Tyr Val Ser His Leu Phe Asn Ser Leu Gly Tyr Gly Lys
50 55 60
Thr Gln Gln Asn Asn Glu Ile Phe Met Glu Glu Ile Glu Lys Cys Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Phe Val Leu Leu Gly Leu Ala Val Met Val Val Ala Phe Met
85 90 95
Glu Gly Tyr Cys Trp Ser Lys Thr Ser Glu Arg Gln Val Leu Lys Ile
100 105 110
Arg Tyr Lys Tyr Leu Glu Ala Ile Leu Arg Gln Glu Val Gly Phe Phe
115 120 125
Asp Ser Gln Glu Ala Thr Thr Ser Glu Ile Thr Asn Ser Ile Ser Lys
130 135 140
Asp Thr Cys Leu Ile Gln Glu Val Leu Ser Glu Lys Val Pro Ile Phe
145 150 155 160
Phe Met His Thr Thr Val Phe Met Ser Gly Ile Ala Phe Ser Ala Tyr
165 170 175
Phe Ser Trp Arg Leu Ala Leu Val Ala Leu Pro Thr Leu Ile Leu Leu
180 185 190
Ile Ile Pro Gly Leu Ile Tyr Gly Lys Tyr Leu Leu His Leu Ser Glu
195 200 205
Lys Ser Phe Lys Glu Tyr Gly Lys Ala Asn Ala Ile Val Trp Gln Ala
210 215 220
Leu Ser Ser Ile Lys Thr Ile Tyr Ser Phe Thr Gly Glu Lys Ser Val
225 230 235 240
Ile Glu Arg Tyr Ser Ser Ile Leu Asp Arg Thr Ile Met Leu Gly Met
245 250 255
Lys Gln Gly Ile Ala Lys Gly Leu Ala Val Gly Ser Thr Gly Leu Ser
260 265 270
Phe Ala Ile Trp Ala Leu Leu Ala Trp Tyr Gly Ser His Leu Ile Met
275 280 285
His Lys Gly Glu Ser Gly Gly Arg Ile Tyr Ala Ala Gly Val Ser Phe
290 295 300
Val Leu Gly Gly Leu Ser Leu Gly Met Ala Leu Pro Glu Val Lys Tyr
305 310 315 320
Leu Thr Glu Ala Ser Val Ala Ala Ser Arg Ile Phe Ala Arg Ile Asp
325 330 335
Arg Val Pro Glu Ile Asp Gly Glu His Thr Arg Gly Leu Val Leu Glu
340 345 350
Asn Ile Arg Gly Glu Val Glu Phe Lys Asn Val Asn Phe Thr Tyr Pro
355 360 365
Cys Arg Pro Asp Ser Val Val Leu Lys Glu Phe Asn Leu Lys Ile Glu
370 375 380
Ala Gly Lys Thr Val Ala Leu Val Gly Ala Ser Gly Ser Gly Lys Ser
385 390 395 400
Thr Ala Ile Ala Met Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Thr Asn Val Gly Ala
405 410 415
Ile Cys Ile Asp Gly Val Asp Ile Lys Ser Leu Gln Leu Lys Trp Leu
420 425 430
Arg Gly Gln Met Gly Leu Val Ser Gln Glu His Ala Leu Phe Gly Thr
435 440 445
Ser Ile Lys Lys Asn Ile Met Leu Gly Lys Ile Asp Ala Ser Met Asp
450 455 460
Glu Val Val Ala Ala Ala Met Thr Ala Asn Ala His Asn Phe Ile Thr
465 470 475 480
Gln Leu Pro Glu Gly Tyr Glu Thr Lys Ile Gly Glu Arg Gly Ala Phe
485 490 495
Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Ile Val
500 505 510
Lys Asn Pro Ala Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp
515 520 525
Ser Glu Ser Glu Lys Leu Val Gln Glu Ala Leu Asp Gln Ala Ser Ile
530 535 540
Gly Arg Thr Thr Leu Val Val Ala His Lys Leu Ser Thr Val Arg Asn
545 550 555 560
Ala Asp Leu Ile Ala Ile Val Ser Ser Gly Cys Ile Thr Glu Leu Gly
565 570 575
Ser His Asn Glu Leu Ile Glu Lys Asp Gly His Tyr Gly Arg Met Ala
580 585 590
Lys Leu Gln Arg Gln Phe Ser Ser Val Asp Gln Glu Gln Ser Ala Lys
595 600 605
Ser Leu Ile Ser Ser Val Gly Arg Ser Ser Ala Gly Arg Gln Arg Ser
610 615 620
Ile Ile Arg Ser Ser Pro Thr Val Phe Ala Ser Pro Leu Leu Ile Glu
625 630 635 640
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645 650 655
Leu Leu Leu Asn Leu Pro Glu Trp Lys Gln Gly Ile Ile Gly Ser Leu
660 665 670
Ser Ala Ile Ser Phe Gly Ser Val Gln Pro Val Tyr Ala Leu Thr Ile
675 680 685
Gly Gly Met Ile Ser Ala Phe Tyr Ser Pro Thr His Glu Glu Met Gln
690 695 700
Phe Arg Ile Gln Lys Tyr Cys Leu Ile Phe Ser Ile Leu Cys Leu Val
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Ser Phe Val Leu Asn Leu Cys Gln His Tyr Asn Phe Ala Tyr Met Gly
725 730 735
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Thr Phe Glu Ala Ala Trp Phe Asp Glu Glu Gln Asn Ser Ser Gly Ala
755 760 765
Leu Cys Ser Arg Leu Ser Asn Glu Ala Ala Met Val Lys Ser Leu Val
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Ala Asp Arg Val Ser Leu Leu Val Gln Ser Ile Ser Ala Val Thr Val
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850 855 860
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Glu Ser Arg Lys Glu Ala Arg Lys Lys Ser Trp Leu Ala Gly Ile Gly
885 890 895
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900 905 910
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Val Phe Lys Thr Phe Phe Ile Leu Val Ser Thr Gly Lys Val Val Ala
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Glu Ala Gly Ser Met Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gly Ser Ala Ala Val
945 950 955 960
Ala Ser Ile Phe Ala Ile Leu Asp Arg Asn Ser Leu Ile His Gly Ser
965 970 975
Tyr Asp Ala Lys Asn Asn Ser Ser Gly Thr Asn Leu Glu Lys Met Thr
980 985 990
Gly Gly Ile Glu Met Lys Lys Val Asp Phe Ala Tyr Pro Ser Arg Pro
995 1000 1005
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1010 1015 1020
Ser Ile Gly Leu Val Gly Lys Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Val Ile
1025 1030 1035 1040
Ala Leu Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Ala Asp Arg Gly Ser Leu Lys Ile
1045 1050 1055
Asp Gly Met Asp Ile Arg Leu Leu Asp Ile Gly Trp Tyr Arg Arg Gln
1060 1065 1070
Met Ala Leu Val Ser Gln Glu Pro Ala Pro Ser Met Lys Thr Phe Cys
1075 1080 1085
Leu Ala Asn Leu Met His Gln Lys Met Arg Ser Leu Asp Asn Gly Tyr
1090 1095 1100
Asp Thr Glu Cys Gly Glu Arg Gly Val Gln Leu Ser Gly Gly Gln Lys
1105 1110 1115 1120
Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Arg Lys Pro Thr Ile Leu
1125 1130 1135
Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Val Gln Ser Glu Gln Val
1140 1145 1150
Val Gln Glu Ala Leu Asp Arg Leu Met Val Gly Arg Thr Thr Val Val
1155 1160 1165
Val Ala His Arg Leu Asn Thr Ile Arg Asn Leu Asp Ser Ile Val Phe
1170 1175 1180
Val Tyr Glu Gly Lys Val Val Glu Lys Gly Thr Tyr Ser Gln Leu Lys
1185 1190 1195 1200
Asp Lys Arg Gly Ala Phe Phe Asn Leu Val Lys Leu Gln Ser Thr Cys
1205 1210 1215
Glu Glu Met Tyr Ser Arg Ile Val Ser Asn Phe Gly His Ile Asp Asn
1220 1225 1230
Leu Cys Ser Leu Lys Trp Ile Lys Ser Leu Leu Cys Ile Phe
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Leu Leu Phe Ile Tyr Ile Phe Ser Lys Pro Ile Leu Ile Leu Leu Gly
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Leu Gln Ser Gln Ser Ile Ile Lys Pro Ser Ala Tyr Ile Ala Ala Ala
85 90 95
Thr Leu Val Val His Ser Phe Phe Thr Trp Leu Val Val Tyr Lys Thr
100 105 110
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Ile Ile Val Val Ala Gln Phe Val Tyr Ile Leu Ser Ser Lys Lys Cys
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 19
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ggcctttgtg gtgcaatgga gcctatttgt ggacaagctt ttggagccaa gaattacaaa 300
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cattagcagt ttgtggtgga attgtacgtg gaacggctag gccatggcta ggaatgtatg 1080
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000
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gatcagtctg tacaatcatt ggtttcaccc ctcaggcgca ttagctaacg agttttgctc 60
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aaaaccaatt ctaagcttaa tgggtgtgaa atctggatct gctatgcttt ccccagcaaa 780
gaagtattta atactgagag cacttggtgc tcctgcagtc ctcctttctc tggctatgca 840
aggcgttttc cgtggtttta aggatacaag aactccttta tatgctactg ttgctggaga 900
tttgacaaat atagttttgg acccaatctt tatctttgtt ttccgttggg gtgttagtgg 960
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tttcttttgc ttttgttgtt cttggtgatg cgtacagggt ggaaattgta cacactttct 1860
actcatatgt ttgtataata gtctgacttc agtgtcatta tcataagatt ttgtagctat 1920
atgcagatat atacatcttt gcatacgtaa actttaattg cttttatatt agctagtgcc 1980
atatcttcat gacataatgt tgtacgttta ggcatgcctg tccatcctga caacgttgca 2040
ggtaacatat tctccttcat ggtgtttatt tcgccagtac ctacatttta tgggatcgtt 2100
aagaagaaat caacagaagg ctatcaatca attccgtacg tggttgcact ctttagttca 2160
atgctttgga tttactatgc atttctcaag acaaacacga cccttatcat caccataaac 2220
tcctttggct gcattgcgga gactatttat attgctattt attttgctta tgcgacaaaa 2280
aaaacaagga tgcaaacgtt gagacttgtt ctaatgttga atttcggtgg ctttgggttg 2340
attcttttcc tcacccaaat tttatgcaaa ggagcaaaac gagctgaagt tattggatgg 2400
atttgcatgg cgttttctat tagtgtgttt gtagcacctc taagcattat ggggcgggta 2460
atacggacca aaagtgtgga gttcatgcca tttaacttgt cgttaaccct tacacttagt 2520
gctgtgataa acgccaagcc aaataatcag gcagaagaga agaaactacc cactgttgtg 2580
aagctggagg agttgcctac aaaagttaat tctgaggttt atccagttag tttaccatcc 2640
atgggcagtg aaaacggaga ggctaaagat ggtaaacatt ttgaagatgc ccaaatcaaa 2700
tctcctatta tttacctgga aattaaccta actactgata caccgaattc cggtacaact 2760
tgcaagtcag taagtctagg gcaaaagtaa 2790
<210> 22
<211> 547
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 22
Met Ala Glu Gly Gly Asn Val Ala Cys Thr Glu Arg Lys Cys Lys Ile
1 5 10 15
Pro Leu Phe Val Phe Phe Glu Asp Ile Arg His Val Phe Lys Phe Asp
20 25 30
Asp Leu Gly Met Glu Ile Leu Ser Ile Ala Phe Pro Ala Ala Leu Ala
35 40 45
Leu Ala Ala Asp Pro Ile Ala Ser Leu Ile Asp Thr Ala Phe Ile Gly
50 55 60
His Leu Gly Ser Val Glu Ile Ala Ala Val Gly Val Ser Ile Ala Ile
65 70 75 80
Phe Asn Gln Ala Ser Lys Val Thr Ile Phe Pro Leu Val Asn Ile Thr
85 90 95
Thr Ser Phe Val Ala Glu Glu Asp Thr Val Arg Arg Ile Lys Glu Lys
100 105 110
Ala Ala Ile Ala Asp Leu Glu Lys Gly Ser Glu Glu Lys Asn Asp Thr
115 120 125
Lys Leu Pro Val Thr Asp Asp Thr Asp His Glu Lys Leu Glu Lys Cys
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Val Glu Thr Lys Glu Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro
145 150 155 160
Ala Ala Glu Phe Lys Thr Thr Ala Cys Lys Ser Pro Asp Asn Gln Ser
165 170 175
Lys Gly Lys Val Lys Arg Val Lys Arg His Ile Pro Ser Ala Ser Thr
180 185 190
Ala Ile Leu Met Gly Cys Ile Leu Gly Ile Leu Gln Thr Ile Phe Leu
195 200 205
Ile Phe Leu Ala Lys Pro Ile Leu Ser Leu Met Gly Val Lys Ser Gly
210 215 220
Ser Ala Met Leu Ser Pro Ala Lys Lys Tyr Leu Ile Leu Arg Ala Leu
225 230 235 240
Gly Ala Pro Ala Val Leu Leu Ser Leu Ala Met Gln Gly Val Phe Arg
245 250 255
Gly Phe Lys Asp Thr Arg Thr Pro Leu Tyr Ala Thr Val Ala Gly Asp
260 265 270
Leu Thr Asn Ile Val Leu Asp Pro Ile Phe Ile Phe Val Phe Arg Trp
275 280 285
Gly Val Ser Gly Ala Ala Ile Ala His Val Leu Ser Gln Tyr Leu Ile
290 295 300
Ser Ile Ile Leu Leu Cys Lys Leu Met Thr Glu Val Glu Leu Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Ala Lys Asp Leu Gln Phe Ser Lys Phe Leu Lys Asn Gly Phe
325 330 335
Trp Leu Leu Ala Arg Val Ile Ala Val Thr Phe Cys Val Thr Leu Ala
340 345 350
Ala Ser Leu Ala Ala Arg Leu Gly Thr Thr Pro Met Ala Ala Phe Gln
355 360 365
Val Cys Leu Gln Ile Trp Leu Thr Ser Ser Leu Leu Ala Asp Gly Leu
370 375 380
Ala Val Ala Gly Gln Ala Ile Leu Ala Ser Ser Phe Ala Glu Lys Asp
385 390 395 400
Tyr Gln Lys Ala Lys Ala Ala Gly Val Arg Val Leu Gln Met Gly Phe
405 410 415
Val Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu Val Val Gly Ile Gly Leu Tyr Phe
420 425 430
Gly Ser Gly Val Phe Ser Lys Asp Lys Asn Val Ile Arg Leu Ile Thr
435 440 445
Ile Ala Ile Pro Phe Val Ala Gly Thr Gln Pro Ile Asn Ser Leu Ala
450 455 460
Phe Val Leu Asp Gly Val Asn Phe Gly Ala Asn Asp Phe Ala Tyr Ser
465 470 475 480
Ala Tyr Ser Met Val Leu Val Gly Ala Leu Thr Val Thr Cys Glu Phe
485 490 495
Val Leu Ser Lys Ser Asn Gly Tyr Ile Gly Ile Trp Ile Ala Leu Thr
500 505 510
Ile Phe Met Ala Leu Arg Thr Ile Ala Gly Leu Trp Arg Met Gly Thr
515 520 525
Gly Thr Gly Pro Trp Arg Phe Leu Arg Ile Pro Ser Ser Ser Pro Glu
530 535 540
Ala Lys Ser
545
<210> 23
<211> 2179
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 23
ataaatatga aactatatca tctaaacaat tgtcagttgt gagtgaatgt tatgaatgag 60
aaaggtttgg ctatagtaat tgggaagaca tggtggacca aggagctgat gcggataata 120
gaggaaattg cagacttggt gactatgatg tgaaccatgg ttagaggata ggggtaaatt 180
agtggagcgg gggacaagga atctggtggt tatataattg gcagtcttgg acgtatttgc 240
tatgctgctt taatttggag aacaaagcag caaaagatta gatatggcga tggaagaggc 300
actgctggat gtgaataata ataataataa taataataat aataaggtag tgtttgggaa 360
ggaggtgaag gaggtgagtc ggatagcaat gccgatgata gtggtgacgg tgtcacagta 420
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tgcttctatt gctacttcac tttccaatgt taccggcttc agtcttatgt tagggatggg 540
gagtgcagtg gagacactat gtgggcaggc atatggagct cacaagtatg gaaatcttgg 600
aacttttact tatggtgcaa ttatttgtct attccttgta tgcataccag tttctgttct 660
gtggatcttc acggataggc ttcttatatt gatgggccaa gatcctgaaa tcgcaactga 720
agctggaaaa tacacgattt ggctcattcc tacgctattt ccatatgcta ttcttcagtc 780
acttgtccgg tacctgcagg cacagagttt aatcctacca atgcttttga gtgctgttgt 840
atctttatgc ttccaagtgc cgatatgttg ggtttttata ttcaaattgg atttggggaa 900
cgctggagca gcaatgtcaa ttggtttatc ctattggctg aatgtgatct tgcttatgct 960
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gacttccgtt ctatccatat gctttacaac cacttcagtg cactaccata taccttattc 1200
tttcggtgcc gctgcaagca ctcgtgtttc aaatgagctt ggagcgggga ggccacaggc 1260
cgcgaaagtt gctcttggcg ctgtgctaat tctttctgtc acagaggttg ttcttgcaag 1320
tatttctata ttcgtggtcc gccatgtatg gggctatgta tttacctatg agaaagaagt 1380
aatcacttat gtagcagaaa ttactcctgt tctttgcatc tcaatcatca tggatggcac 1440
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ttcgctttcc cttatcacag gcctcaccaa ttgggaaaaa caggccattg aagcaagaca 1680
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tataacatac atatcgaaat aaaccttcaa cttgctatga tttagcgaga atcaccactc 1800
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accttgctct tggggtgac 2179
<210> 24
<211> 479
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 24
Met Ala Met Glu Glu Ala Leu Leu Asp Val Asn Asn Asn Asn Asn Asn
1 5 10 15
Asn Asn Asn Asn Lys Val Val Phe Gly Lys Glu Val Lys Glu Val Ser
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Arg Ile Ala Met Pro Met Ile Val Val Thr Val Ser Gln Tyr Leu Leu
35 40 45
Arg Val Ser Pro Met Ile Met Leu Gly His Leu Gly Glu Leu Gln Leu
50 55 60
Ser Ser Ala Ser Ile Ala Thr Ser Leu Ser Asn Val Thr Gly Phe Ser
65 70 75 80
Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala
85 90 95
Tyr Gly Ala His Lys Tyr Gly Asn Leu Gly Thr Phe Thr Tyr Gly Ala
100 105 110
Ile Ile Cys Leu Phe Leu Val Cys Ile Pro Val Ser Val Leu Trp Ile
115 120 125
Phe Thr Asp Arg Leu Leu Ile Leu Met Gly Gln Asp Pro Glu Ile Ala
130 135 140
Thr Glu Ala Gly Lys Tyr Thr Ile Trp Leu Ile Pro Thr Leu Phe Pro
145 150 155 160
Tyr Ala Ile Leu Gln Ser Leu Val Arg Tyr Leu Gln Ala Gln Ser Leu
165 170 175
Ile Leu Pro Met Leu Leu Ser Ala Val Val Ser Leu Cys Phe Gln Val
180 185 190
Pro Ile Cys Trp Val Phe Ile Phe Lys Leu Asp Leu Gly Asn Ala Gly
195 200 205
Ala Ala Met Ser Ile Gly Leu Ser Tyr Trp Leu Asn Val Ile Leu Leu
210 215 220
Met Leu Tyr Val Lys Tyr Ser Ser Ala Cys Ala Glu Thr Arg Ala Ser
225 230 235 240
Phe Ser Arg Asp Val Phe Leu Thr Ile Gly Asp Phe Phe Arg Phe Ala
245 250 255
Ile Pro Ser Ala Val Met Val Cys Leu Glu Trp Trp Ser Phe Glu Leu
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Ile Ile Leu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Pro Ala Leu Glu Thr Ser
275 280 285
Val Leu Ser Ile Cys Phe Thr Thr Thr Ser Val His Tyr His Ile Pro
290 295 300
Tyr Ser Phe Gly Ala Ala Ala Ser Thr Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly
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Ala Gly Arg Pro Gln Ala Ala Lys Val Ala Leu Gly Ala Val Leu Ile
325 330 335
Leu Ser Val Thr Glu Val Val Leu Ala Ser Ile Ser Ile Phe Val Val
340 345 350
Arg His Val Trp Gly Tyr Val Phe Thr Tyr Glu Lys Glu Val Ile Thr
355 360 365
Tyr Val Ala Glu Ile Thr Pro Val Leu Cys Ile Ser Ile Ile Met Asp
370 375 380
Gly Thr Gln Ala Val Leu Ser Gly Val Ala Arg Gly Ser Gly Trp Gln
385 390 395 400
His Ile Gly Ala Tyr Val Asn Leu Gly Ala Tyr Tyr Leu Val Gly Ile
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Pro Thr Ala Leu Leu Leu Gly Phe Val Leu His Leu Lys Gly Lys Gly
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Leu Trp Ile Gly Leu Val Ala Gly Ala Thr Val Gln Ser Ile Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ile Thr Gly Leu Thr Asn Trp Glu Lys Gln Ala Ile Glu Ala
450 455 460
Arg His Arg Ile Phe Ser Gly Arg Pro Ala Val Glu Asn Gln Asn
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<210> 25
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<220>
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<220>
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<221> misc_feature
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ggaagaggca ctgctggatg tgaataataa taataataat aataataata ataaggtagt 60
gtttgggaag gaggtgaagg aggtgagtcg gatagcaatg ccgatgatag tggtgacggt 120
gtcacagtac cttttgcgcg tttcaccaat gataatgttg ggtcatcttg gtgaacttca 180
actttctagt gcttctattg ctacttcact ttccaatgtt accggcttca gtcttatgtt 240
agggatgggg agtgcagtgg agacactatg tgggcaggca tatggagctc acaagtatgg 300
aaatcttgga acttttactt atggtgcaat tatttgtcta ttccttgtat gcataccagt 360
ttctgttctg tggatcttca cggataggct tcttatattg atgggccaag atcctgaaat 420
cgcaactgaa gctggaaaat acacgatttg gctcattcct acgctatttc catatgctat 480
tcttcagtca cttgtccggt acctgcaggc acagagttta atcctaccaa tgcttttgag 540
tgctgttgta tctttatgct tccaagtgcc gatatgttgg gtttttatat tcaaattgga 600
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gcttatgctt tatgtgaagt actcatcagc ttgtgcagaa actcgggctt cattctctag 720
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gccacaggcc gcgaaagttg ctcttggcgc tgtgctaatt ctttctgtca cagaggttgt 1020
tcttgcaagt atttctatat tcgtggtccg ccatgtatgg ggctatgtat ttacctatga 1080
gaaagaagta atcacttatg tagcagaaat tactcctgtt ctttgcatct caatcatcat 1140
ggatggcacc caagccgtat tatcaggagt tgcaagagga agtgggtggc agcatattgg 1200
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gcaatctatt tcgctttccc ttatcacagg cctcaccaat tgggaaaaac aggccattga 1380
agcaagacat agaatcttta gtggaaggcc tgctgttgaa aatcagnnnn nnnnnnnnnn 1440
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnngaaata aaccttcaac ttgctatgat ttagcgagaa 1500
tcaccactca tcatagtacc aattggacaa ttttgaaagt gatcagcctc ttagatgtaa 1560
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nnnnnnnaag ttgaatttgt tttgctttgc taaatcgttt agctgcggct tcttgtaact 1680
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tgtacgcaga ccttacccct accctggggt agagaggctg tttccaatag accctcggca 1860
taaatccc 1868
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<400> 26
000
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 27
ttaacctttt attatctcaa atgaaacctc gagatgacaa cttcatctag tatttatatg 60
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tccaattaa 1869
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<211> 500
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 28
Met Gly Lys Ser Met Lys Ser Glu Val Glu Gln Pro Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
Ala His Gly Gly Ser Ser Glu Leu Glu Glu Val Leu Ser Asp Ser Gln
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Leu Leu Tyr Arg Leu Ala Ala Pro Ser Val Ala Val Tyr Met Ile Asn
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Asn Ala Met Ser Met Ser Thr Arg Ile Phe Ser Gly Gln Leu Gly Asn
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Leu Gln Leu Ala Ala Ala Ser Leu Gly Asn Gln Gly Ile Gln Leu Phe
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Ala Tyr Gly Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys
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Gly Gln Ala Tyr Gly Ala His Arg Tyr Glu Met Leu Gly Val Tyr Leu
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Gln Arg Ala Thr Val Val Leu Ser Leu Thr Gly Ile Pro Leu Ala Val
130 135 140
Val Tyr Leu Phe Ser Lys Asn Ile Leu Leu Ala Leu Gly Glu Ser Lys
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Leu Val Ala Ser Ala Ala Ala Val Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln
165 170 175
Ile Phe Ala Tyr Ala Val Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ser
180 185 190
Gln Ser Ile Val Ala Pro Ser Ala Phe Ile Ser Leu Gly Thr Leu Phe
195 200 205
Val His Ile Leu Leu Ser Trp Val Val Val Tyr Lys Ile Gly Leu Gly
210 215 220
Leu Leu Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser Phe Ser Trp Trp Ile Ile Val
225 230 235 240
Val Ala Gln Phe Ile Tyr Ile Leu Lys Ser Glu Arg Cys Lys Ala Thr
245 250 255
Trp Ala Gly Phe Arg Trp Glu Ala Phe Ser Gly Leu Cys Gln Phe Val
260 265 270
Lys Leu Ser Ala Gly Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr
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Phe Gln Ile Leu Val Leu Leu Ser Gly Leu Leu Lys Asn Pro Glu Ile
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Ala Leu Ala Ser Ile Ser Val Cys Leu Ala Val Asn Gly Leu Met Phe
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Met Val Ala Val Gly Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn
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Glu Leu Gly Ala Ala His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Phe Met
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Val Thr Phe Ile Ser Phe Leu Ile Ala Val Val Glu Ala Ile Ile Val
355 360 365
Leu Ser Leu Arg Asn Val Ile Ser Tyr Ala Phe Thr Glu Gly Glu Val
370 375 380
Val Ala Lys Glu Val Ser Ser Leu Cys Pro Tyr Leu Ala Val Thr Leu
385 390 395 400
Ile Leu Asn Gly Ile Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys
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Gly Trp Gln Ala Phe Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Gly
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<213> Nicotiana tabacum
<400> 29
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atggtacctt gcgggtccag caatatttac ttccctttgt caatactctc ttggtgctgt 300
cactcaaact tttgctggac atgtcgggac tcttgagctt gctgccgttt ctgttgaaaa 360
ctcggtcatc gccggtttct cttttggtgt catgttggga atgggaagtg cgttagaaac 420
actatgtgga caagcatttg gagcaggaca aattgatatg ctaggagtat acatgcaaag 480
atcatgggtt attctcaata caacagcagt aattctaatg ttactttaca ttttcgcggc 540
accatttctg agattaattg gacaaacaga ggacatatca cgggaagcag ggaaaatggc 600
tttatatatg attcctcaac tttatgcata tgccatgaat tttccaatcg ccaagttctt 660
gcagtcacag agcaaaatta tggtcatggc gtggattgca gcaatagcgt tggtattgca 720
tacttttttc agctggttat ttatgctaaa acttgggtgg gggctcgtcg gcgctgcggt 780
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tgttagatta tctcttgcgt cagctgtcat gctatgcctg gaaacttggt actttatggc 960
gttggtcctc ttcgctggtt atttaaagaa cgcagaagtc gctgttgatg ccctgtccat 1020
ttgtatgaac atattgggat gggcggtgat ggcagctatt ggatgcaatg cagctataag 1080
cgtgagagtg tcaaatgaac tcggggcagc tcatccaaga acggctaaat tttcagtggt 1140
ggtggtggta gtatcctcat tcttgattgg ccttcttcta tcggtctttt tacttgtctt 1200
tcgaaggcaa tatcctacct tattcgcgga gagtgaatca gtcaagcgtc ttgtctatga 1260
gctaacacca ttacttgcat tctgcatagt ggttaacaac attcagccag ctctatctgg 1320
tgtggcaatt ggagcaggat ggcaagcttt ggttgcttat gtcaatattg cttgttacta 1380
tttgtttggt attccactgg gtttactatt agggtataag ctcaatatgg gtgtccaagg 1440
tatttggtat ggaatggtta gcggaactct gattcaaact ttcgccttat tttggatagt 1500
ttacaaaacc agctggaaca aagaggcttc tattgcagca gagaggataa aaatgtgggg 1560
aggggaatca aatggaaagg ccgatgatgc agagaaatga actgcgattt ggagtcattg 1620
cattaagctc atcaagtgta tatgaagaaa ttttgaaaat ttaagttgct tattgttcaa 1680
tgtaacagct cagtagtact agtgttaatc attgtaagga actttgccaa aattattctc 1740
aacttgaaag tggacaagac ccttgataag ttagctttta gctaattttt ctagtgtttt 1800
gatatagctt tatgccccat ttgtcggaat taattgatta attatgcttt gaatgatgaa 1860
gtttcaggat 1870
<210> 30
<211> 517
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 30
Met Glu Gly Ser Ser Lys Gln Pro Leu Leu Ser Pro Lys Asp Pro Gln
1 5 10 15
Ile Thr Asp Gln Ala Ser Asp Asn Tyr Leu Ile Arg Leu Ser His Thr
20 25 30
Ser Phe Ala Ser Ser Phe Val Ala Asp Ser Asp Asp Ile Pro Pro Ile
35 40 45
Thr Gly Phe Arg Asp Phe Phe Arg Glu Phe Ser Val Glu Ser Lys Lys
50 55 60
Leu Trp Tyr Leu Ala Gly Pro Ala Ile Phe Thr Ser Leu Cys Gln Tyr
65 70 75 80
Ser Leu Gly Ala Val Thr Gln Thr Phe Ala Gly His Val Gly Thr Leu
85 90 95
Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Asn Ser Val Ile Ala Gly Phe Ser
100 105 110
Phe Gly Val Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Leu Glu Thr Leu Cys Gly
115 120 125
Gln Ala Phe Gly Ala Gly Gln Ile Asp Met Leu Gly Val Tyr Met Gln
130 135 140
Arg Ser Trp Val Ile Leu Asn Thr Thr Ala Val Ile Leu Met Leu Leu
145 150 155 160
Tyr Ile Phe Ala Ala Pro Phe Leu Arg Leu Ile Gly Gln Thr Glu Asp
165 170 175
Ile Ser Arg Glu Ala Gly Lys Met Ala Leu Tyr Met Ile Pro Gln Leu
180 185 190
Tyr Ala Tyr Ala Met Asn Phe Pro Ile Ala Lys Phe Leu Gln Ser Gln
195 200 205
Ser Lys Ile Met Val Met Ala Trp Ile Ala Ala Ile Ala Leu Val Leu
210 215 220
His Thr Phe Phe Ser Trp Leu Phe Met Leu Lys Leu Gly Trp Gly Leu
225 230 235 240
Val Gly Ala Ala Val Val Leu Asn Ser Ser Trp Trp Phe Ile Val Val
245 250 255
Ala Gln Leu Leu Tyr Ile Phe Ser Gly Thr Cys Gly Gln Ala Trp Ser
260 265 270
Gly Phe Ser Trp Lys Ala Phe His Asn Leu Trp Gly Phe Val Arg Leu
275 280 285
Ser Leu Ala Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr Phe Met
290 295 300
Ala Leu Val Leu Phe Ala Gly Tyr Leu Lys Asn Ala Glu Val Ala Val
305 310 315 320
Asp Ala Leu Ser Ile Cys Met Asn Ile Leu Gly Trp Ala Val Met Ala
325 330 335
Ala Ile Gly Cys Asn Ala Ala Ile Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu
340 345 350
Gly Ala Ala His Pro Arg Thr Ala Lys Phe Ser Val Val Val Val Val
355 360 365
Val Ser Ser Phe Leu Ile Gly Leu Leu Leu Ser Val Phe Leu Leu Val
370 375 380
Phe Arg Arg Gln Tyr Pro Thr Leu Phe Ala Glu Ser Glu Ser Val Lys
385 390 395 400
Arg Leu Val Tyr Glu Leu Thr Pro Leu Leu Ala Phe Cys Ile Val Val
405 410 415
Asn Asn Ile Gln Pro Ala Leu Ser Gly Val Ala Ile Gly Ala Gly Trp
420 425 430
Gln Ala Leu Val Ala Tyr Val Asn Ile Ala Cys Tyr Tyr Leu Phe Gly
435 440 445
Ile Pro Leu Gly Leu Leu Leu Gly Tyr Lys Leu Asn Met Gly Val Gln
450 455 460
Gly Ile Trp Tyr Gly Met Val Ser Gly Thr Leu Ile Gln Thr Phe Ala
465 470 475 480
Leu Phe Trp Ile Val Tyr Lys Thr Ser Trp Asn Lys Glu Ala Ser Ile
485 490 495
Ala Ala Glu Arg Ile Lys Met Trp Gly Gly Glu Ser Asn Gly Lys Ala
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515
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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tatatggagt caaccgaaat ttgtcaaagg ctcggatgct gctgaagtcc cttttaatca 300
ttggagcatc aaatggatta ttactgggat ctgtcggagt atcagttaca tggtttttcc 360
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<400> 32
000
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 33
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catgttggaa ggaaactagg cgacgagctt gctactccat ttgacaagac caaatgtcac 420
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ttcattggaa atccaaactt tatttgttaa tataaaaaaa aaaaaaaaaa a 3411
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 34
Met Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg Lys Gly Val Ala Asp Phe Leu Gln
1 5 10 15
Glu Val Thr Ser Lys Lys Asp Gln Gln Gln Tyr Trp Ser Lys Arg Asn
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Glu Pro Tyr Arg Phe Ile Thr Ser Lys Glu Phe Ala Glu Ala Tyr Gln
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Ser Phe His Val Gly Arg Lys Leu Gly Asp Glu Leu Ala Thr Pro Phe
50 55 60
Asp Lys Thr Lys Cys His Pro Ala Ala Leu Thr Asn Glu Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Ile Gly Lys Lys Glu Leu Leu Lys Val Cys Thr Glu Arg Glu Leu Leu
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Leu Met Lys Arg Asn Ser Phe Val Tyr Met Phe Lys Phe Ser Gln Leu
100 105 110
Thr Ile Met Ala Leu Ile Thr Met Thr Leu Phe Phe Arg Thr Glu Met
115 120 125
Pro Arg Asp Thr Thr Asp Asp Gly Gly Ile Tyr Ala Gly Ala Leu Phe
130 135 140
Phe Val Val Ile Met Ile Met Phe Asn Gly Met Ser Glu Leu Ala Met
145 150 155 160
Thr Ile Phe Lys Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Leu Leu Phe
165 170 175
Phe Pro Ser Trp Ala Tyr Ala Ile Pro Ser Trp Ile Leu Lys Ile Pro
180 185 190
Val Thr Leu Val Glu Val Gly Leu Trp Val Ile Leu Thr Tyr Tyr Val
195 200 205
Ile Gly Phe Asp Pro Asn Ile Ser Arg Phe Leu Lys Gln Phe Leu Leu
210 215 220
Leu Ile Val Val Asn Gln Met Ala Ser Gly Leu Phe Arg Phe Ile Gly
225 230 235 240
Ala Val Gly Arg Thr Met Gly Val Ala Ser Thr Phe Gly Ala Phe Ala
245 250 255
Leu Leu Leu Gln Phe Ala Leu Gly Gly Phe Val Leu Ser Arg Asp Asp
260 265 270
Val Lys Ser Trp Trp Ile Trp Gly Tyr Trp Thr Ser Pro Met Met Tyr
275 280 285
Ser Val Asn Ser Ile Leu Val Asn Glu Phe Asp Gly Lys Lys Trp Asn
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His Ile Val Pro Gly Gly Asn Glu Thr Leu Gly Ser Thr Val Val Lys
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Ser Arg Gly Phe Phe Pro Glu Ala Tyr Trp Tyr Trp Ile Gly Val Gly
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Ala Leu Val Gly Phe Thr Val Val Phe Asn Phe Cys Tyr Ser Leu Ala
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Leu Ala Tyr Leu Asn Pro Phe Asp Lys Pro Gln Ala Val Leu Pro Glu
355 360 365
Asp Gly Glu Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ser Ser Gln Ile Thr Ser
370 375 380
Thr Asp Gly Gly Asp Ser Ile Thr Glu Ser Gln Asn Asn Asn Lys Lys
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Gly Met Val Leu Pro Phe Glu Pro His Ser Ile Thr Phe Asp Asp Val
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Glu Asp Arg Leu Val Leu Leu Lys Gly Val Ser Gly Ala Phe Arg Pro
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Asp Ile Lys Ile Ser Gly Tyr Pro Lys Lys Gln Glu Thr Phe Ala Arg
485 490 495
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500 505 510
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<213> Nicotiana tabacum
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tctctgatat tttcggcttt cctccggctc cctaaagaag tcagcaaaga agataagatg 3060
atttttgtgg atgaagtaat ggatctggtt gagctagaca atctcaagga tgcaattgta 3120
gggcttccag gagttactgg tttgtcaacg gaacaaagaa aaagattgac cattgcagta 3180
gagcttgtcg caaatccttc aattatattc atggatgaac cgacttctgg tctggatgca 3240
agagcagcag ctattgttat gagaactgta agaaacacag tagacaccgg gagaactgtt 3300
gtctgcacaa tacatcaacc aagtattgat atatttgaag catttgatga gctgcttctt 3360
atgaaaagag gaggacaagt aatttacgca ggtccattgg gtcgacattc tcagaaaatt 3420
attgaatatt tcgaggcaat tccaggagtt caaaaaatta aagagaaata caatccagca 3480
acctggatgc tagaagcgag ttcaattggc acagaagccc gacttggaat ggattttgct 3540
gaatactaca gatcatcagc tttacatcaa cgaaataagg ctcttgtcaa agagttgagt 3600
gcacctcctc ctggagccaa agacctctat tttaccacac aattttccca gccaacatgg 3660
ggtcagttta aatcctgctt atggaagcaa tggtggactt actggagaag tccagactat 3720
aaccttgtca gattcttctt tagtctggct gcagcactat tgattgggac aattttctgg 3780
aatgttggca gtaaaagaca aagtagtggt gatctaatga cagtcatcgg ggcaatgtat 3840
gcagctgtgc tgtttgttgg aatcaataat tgttcgaccg tacagccaat tgtagccgtc 3900
gaaagaaccg tcttttatag agaaagggct gctgggatgt attcagcttt accatatgct 3960
atggcacagg tatttgcaga aataccatac atactcgtcc aaactacata ctatactctt 4020
atagtgtatg ctatggtggc ctttgagtgg acggcagcta aattcttctg gttctatttt 4080
gtaaccttct tctccttcct atactggacg tactatggaa tgatgaccgt ttccatcaca 4140
cccaaccacc aagtagccgc gatctttgct gcagctttct atgcactttt caatcttttc 4200
tccggtttct tcatccccag accgagaatt cccaagtggt ggatatggta ttactggatc 4260
tgtccagtgg catggactgt ttatggtagc attgtgtcac agtatggtga tgtggaggat 4320
actatccaag taccgggagt gtttccaaac ccaaggatta aggactacat taaagatcat 4380
ttcggataca attcggactt catggcgcca gttgctgtgg ttttggttgg ttttgcagcc 4440
tttttcgcct ttatgtacgc ttacgctatt aagacattga acttccaaac tagatag 4497
<210> 36
<211> 1498
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 36
Met Glu Gly Asn Gly Gly Pro Arg Arg Leu Gly Ser Ser Arg Ser Ser
1 5 10 15
Met Ser Arg Thr Met Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ala Asn Trp Asn Val
20 25 30
Glu Asp Val Phe Asn Pro Met Pro Ser Arg Arg Ser Thr Arg Gly Glu
35 40 45
Glu Asp Glu Glu Ala Leu Thr Trp Ala Ala Leu Glu Lys Leu Pro Thr
50 55 60
Tyr Asp Arg Leu Arg Lys Thr Val Leu Lys Ser Val Met Glu Ser Glu
65 70 75 80
Asn Asn Gln Gly Asn Lys Lys Val Val His Lys Glu Val Asp Val Arg
85 90 95
Asn Leu Gly Met Asn Glu Arg Gln Glu Phe Ile Asp Arg Phe Phe Arg
100 105 110
Val Ala Glu Glu Asp Asn Glu Lys Phe Leu Arg Lys Phe Arg Asn Arg
115 120 125
Ile Asp Lys Val Gly Ile Thr Leu Pro Thr Val Glu Val Arg Tyr Glu
130 135 140
His Leu Thr Ile Glu Ala Asp Cys Tyr Ile Gly Asp Arg Ala Leu Pro
145 150 155 160
Thr Leu Pro Asn Ala Ala Arg Asn Ile Ala Glu Ser Ala Leu Ser Cys
165 170 175
Val Gly Ile Asn Leu Ala Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ile Leu Lys Asp
180 185 190
Ala Ser Gly Ile Ile Lys Pro Ser Arg Met Thr Leu Leu Leu Gly Pro
195 200 205
Pro Ser Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Leu Ala Leu Ala Gly Lys Leu
210 215 220
Asp Pro Thr Leu Lys Val Arg Gly Glu Ile Thr Tyr Asn Gly His Gly
225 230 235 240
Leu Lys Glu Phe Val Pro Gln Lys Thr Ser Ala Tyr Ile Ser Gln Asn
245 250 255
Asp Val His Val Ala Glu Met Thr Val Lys Glu Thr Leu Asp Phe Ser
260 265 270
Ala Arg Cys Gln Gly Val Gly Ser Arg Tyr Glu Leu Leu Thr Glu Leu
275 280 285
Ala Arg Arg Glu Arg Asp Ala Gly Ile Phe Pro Glu Ala Glu Ile Asp
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Leu Phe Met Lys Ala Thr Ala Met Glu Gly Val Glu Ser Ser Leu Ile
305 310 315 320
Thr Asp Tyr Thr Leu Arg Ile Leu Gly Leu Asp Val Cys Arg Asp Thr
325 330 335
Ile Val Gly Asp Glu Met Ile Arg Gly Ile Ser Gly Gly Gln Lys Lys
340 345 350
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355 360 365
Met Asp Glu Ile Ser Thr Gly Leu Asp Ser Ser Thr Thr Phe Gln Ile
370 375 380
Val Lys Cys Leu Gln Gln Ile Val His Leu Thr Glu Ala Thr Val Leu
385 390 395 400
Met Ser Leu Leu Gln Pro Ala Pro Glu Thr Phe Asp Leu Phe Asp Asp
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Ile Ile Leu Leu Ser Glu Gly Gln Ile Val Tyr Gln Gly Pro Arg Glu
420 425 430
His Val Leu Glu Phe Phe Glu Thr Cys Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg
435 440 445
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450 455 460
Glu Gln Tyr Trp Ala Asn Arg His Arg Pro Tyr Gln Tyr Ile Ser Val
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Thr Glu Phe Ala Lys Arg Phe Lys Arg Phe His Val Gly Leu Arg Ile
485 490 495
Glu Asn Glu Leu Ser Val Pro Tyr Asp Lys Thr Arg Ser His Pro Ala
500 505 510
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515 520 525
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Tyr Val Phe Lys Thr Val Gln Ile Ile Ile Val Ala Phe Ile Gly Ser
545 550 555 560
Thr Val Phe Leu Arg Thr Lys Met His Thr Asn Thr Val Asp Asp Gly
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Met Val Ala Phe Glu Trp Thr Ala Ala Lys Phe Phe Trp Phe Tyr Phe
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Val Thr Phe Phe Ser Phe Leu Tyr Trp Thr Tyr Tyr Gly Met Met Thr
1365 1370 1375
Val Ser Ile Thr Pro Asn His Gln Val Ala Ala Ile Phe Ala Ala Ala
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Val Val Leu Val Gly Phe Ala Ala Phe Phe Ala Phe Met Tyr Ala Tyr
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<213> Nicotiana tabacum
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gttcagactc gaaagacaat agtagccatc cttcacatcc cgatcatcaa acatgcacgt 2700
ctaagttgtg tgctccacaa agccaatctg caacttcaag ctccaggaca tgtggaaata 2760
tgaagtgctc ggacaccaat agcaagaatt cttgttattc acataccaac tctgaatcat 2820
gctcttcaaa gatgtctggt ccatcatgca aaactgctaa ttcaggttca aggtcatgca 2880
gaaataagaa gtgcctagac tctgcaaccg agaacagttt tcattcacca cttactaatc 2940
cactcagtgg ggaaaagctt ttggagaaga aaagcttgga tttagtccga aaagataagg 3000
aatcaaatca tgatcttagt catggttgct ctgacgagga acatgatcat ctaaatttag 3060
acaaggcaca tgacagttgt gccttacaag aatgttgtta ttctgttcaa ggcaataaaa 3120
ctgatgtatc agaaactgga atccaggaag ctgctcattg tgacagcatc aatcaaacat 3180
gccaaactgc aatttcagga tcaatgacat gcggaaataa taagagtctg gactctctaa 3240
gcatccatgg ttgtcattcg catgataatc cactccacaa ggagaacaac ttggagcaga 3300
aaagcttgga tgttgttgga gaaggtataa aatcacctca tgctgtcggt catggctgtt 3360
cggacaagga acacgatcac tcgcatccag aaaaggcgta tgacagttgt gcaacagacg 3420
attgttgttt ttcagttcaa gtccatggca ttgacgacgt atcaagaagt gaaattcaag 3480
aaactgctca ttgtgacagc acaaaacaga gcacggtcat ccccagcagc tgcaaacatg 3540
aaccaaaaga tcaggtaaat cactgtggat ctcactctaa aagtattcca actgatgaag 3600
aactagccaa gctggttaga agatgctgca aatacaaacc atgccacgac gtccgttctg 3660
gctgcaggaa gcatgctgca gaatgtggtc caaccgttcg atcaaccatc aatatcttac 3720
gggacaacca tcatcatcat ctagactgca gtggtcgtaa ggtttgttcg ctgttggaga 3780
agagacacat tggtggatgc tgtgacagct tcagaaaaga atgttgtgcc aagaacaatc 3840
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tgccagttgt tagtgtacgt aacgaaggta agaagaaact tgttatcata gatatatgaa 3960
aaatcaactc atggataata aaggcgtagc accaaatatg tcggagtagc cccacccagt 4020
agatggaaaa gccagtagta ccaatcaagg aagccttgaa cggagcaggt tgcggtgaat 4080
tataatgtgc agaattgtgg ggtataaatt agatgattac aattgtggta aagtgtaatt 4140
atttattgta ctaattctat gtagctatct cccccgaata atggatccac tatgagaatt 4200
tatttagacc cg 4212
<210> 42
<211> 1274
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 42
Met Val Glu Ser Glu Lys Met Asn Asp Thr Lys Asn Leu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Tyr Phe Asp Val Leu Gly Ile Cys Cys Thr Ser Glu Val Val Leu Val
20 25 30
Glu Lys Ile Leu Lys Asn Leu Glu Gly Val Lys Glu Val Ser Val Ile
35 40 45
Val Thr Thr Lys Thr Val Ile Val Ile His Asp Ser Leu Leu Ile Ser
50 55 60
Gln Gln Gln Ile Val Lys Ala Leu Asn Gln Ala Arg Leu Glu Ala Ser
65 70 75 80
Ile Arg Val Lys Gly Glu Lys Asn Tyr Gln Lys Lys Trp Pro Ser Pro
85 90 95
Phe Ala Ile Gly Ser Gly Ile Leu Leu Gly Leu Ser Phe Leu Lys Tyr
100 105 110
Phe Phe Ala Pro Phe Gln Trp Leu Ala Leu Ala Ala Val Ala Val Gly
115 120 125
Ile Pro Pro Ile Ile Phe Arg Gly Val Ala Ala Val Arg Asn Leu Thr
130 135 140
Leu Asp Ile Asn Ile Leu Val Leu Ile Ala Val Thr Gly Ser Ile Val
145 150 155 160
Leu His Asp Tyr Trp Glu Ala Gly Thr Ile Val Phe Leu Phe Thr Ile
165 170 175
Ala Glu Trp Leu Glu Ser Arg Ala Ser His Lys Ala Thr Ala Ala Met
180 185 190
Ser Ser Leu Val Asn Ile Val Pro Pro Thr Ala Val Leu Ala Glu Ser
195 200 205
Gly Glu Val Val Asn Val Asp Glu Val Lys Leu Asn Ser Ile Leu Ala
210 215 220
Val Lys Ala Gly Glu Thr Ile Pro Ile Asp Gly Val Val Met Glu Gly
225 230 235 240
Glu Cys Asp Val Asp Glu Lys Thr Leu Thr Gly Glu Ser Phe Pro Val
245 250 255
Ser Lys Gln Ile Asp Ser Thr Val Trp Ala Gly Thr Thr Asn Leu Asn
260 265 270
Ala Ile Val Ala Ile Ser Ala Ser Leu Ala Ile Val Pro Thr Ala Leu
275 280 285
Arg Val His Asn Arg Asn Glu Trp Tyr Arg Leu Ala Leu Val Thr Leu
290 295 300
Val Ser Ala Cys Pro Cys Ala Leu Val Leu Ser Thr Pro Val Ala Met
305 310 315 320
Cys Cys Ala Leu Ser Lys Ala Ala Thr Ser Gly Leu Leu Phe Lys Gly
325 330 335
Ala Glu Tyr Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ile Lys Ile Met Ala Phe Asp
340 345 350
Lys Thr Gly Thr Ile Thr Arg Gly Glu Phe Met Val Thr Glu Phe Lys
355 360 365
Val Ser Ser Ile Glu Ser Lys Ser Gly His Pro Met Ala Ala Ala Leu
370 375 380
Val Asp Tyr Ala Gln Ser Asn Ser Val Glu Pro Lys Pro Asp Arg Val
385 390 395 400
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405 410 415
Gly Met Glu Ile Tyr Val Gly Asn Arg Lys Ile Ser Ser Arg Ala Gly
420 425 430
Cys Thr Thr Val Pro Glu Ile Glu Gly Asp Ser Phe Gln Gly Lys Ser
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Val Gly Tyr Ile Phe Leu Gly Ser Ser Pro Ala Gly Ile Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Asp Val Cys Arg Ile Gly Val Lys Glu Ala Met Arg Glu Leu Lys
465 470 475 480
Gln Met Gly Ile Lys Thr Ala Met Leu Thr Gly Asp Cys Tyr Ala Ala
485 490 495
Ala Asn His Val Gln Asp Gln Lys Glu Ala Pro Thr Ala Met Ile Gly
500 505 510
Asp Gly Leu Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Thr Ala Asp Ile Gly Ile
515 520 525
Ser Met Gly Ile Ser Gly Ser Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gly His Val
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Ala Arg Arg Val Arg Arg Lys Ile Val Glu Asn Met Ile Ile Ser Val
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Val Thr Lys Ala Ala Ile Val Ala Leu Ala Ile Ala Gly Tyr Pro Leu
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Val Trp Ala Ala Val Leu Ala Asp Thr Gly Thr Cys Leu Leu Val Ile
595 600 605
Leu Asn Ser Met Leu Leu Leu Arg Gly Gly Thr Arg Arg His Gly Lys
610 615 620
Lys Cys Trp Arg Ser Ser Thr Pro Ser His Ala Pro His His Lys Asp
625 630 635 640
Lys Ala Ser Cys Cys Lys Ser Glu Asn Ala Pro Gln Leu Cys Cys Ser
645 650 655
Asp Ile Glu Ser Gln Lys Lys Cys Thr Ser Gln Ser Cys Ser Ser Glu
660 665 670
Val Cys Val Pro Arg Cys Gln Pro Val Ser Ser Gly Ser Lys Ser Cys
675 680 685
Gly Asn Asn Gln Cys Pro Asp Ser Val Glu Asn Ser Gly Phe His Ser
690 695 700
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Gln Ser Ala Val Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Gln Cys Pro
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Asp Ser Val Glu Asn Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Asn Cys
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Ser Glu Ser Ile Tyr Lys Ser Ser Cys His Ser Leu Thr Asn Ser Leu
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Val Cys Ser Ser Lys Met Ser Ala Pro Gln Cys His Ser Ala Thr Ser
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Lys Ala His Asp Ser Cys Ala Leu Gln Glu Cys Cys Tyr Ser Val Gln
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Cys Asp Ser Ile Asn Gln Thr Cys Gln Thr Ala Ile Ser Gly Ser Met
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Thr Cys Gly Asn Asn Lys Ser Leu Asp Ser Leu Ser Ile His Gly Cys
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Pro Lys Asp Gln Val Asn His Cys Gly Ser His Ser Lys Ser Ile Pro
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1205 1210 1215
Arg His Ile Gly Gly Cys Cys Asp Ser Phe Arg Lys Glu Cys Cys Ala
1220 1225 1230
Lys Asn Asn His Leu Gly Ala Ser Phe Gly Gly Gly Leu Ser Glu Ile
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Asp Trp Ala Ser Leu Gly Leu Met Pro Val Val Ser Val Arg Asn Glu
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Gly Lys Lys Lys Leu Val Ile Ile Asp Ile
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<210> 43
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 43
atgggaagtg aagctttgga gttttttgct tgtgataata cttttcgata tgaaccaaaa 60
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agcgagtacc aagatatcgc ccttttggac accaagcatt tcgggaaggt attggtgata 240
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ccagctctct tgtgtcaccc taacccaaaa aatgttttta taatgggagg tggtgaagga 360
tctgcagcaa gggaagctct cagacacaaa tctatggaga aagttgtcat gtgtgacatt 420
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tacaacacaa tcaagcaggt cttcaaatat gtgctggcat atacagctca tgtaccctct 780
tttgctgata catggggatg ggttatggct tctgaccaac cattctgtct tgatgctgga 840
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 44
Met Gly Ser Glu Ala Leu Glu Phe Phe Ala Cys Asp Asn Thr Phe Arg
1 5 10 15
Tyr Glu Pro Lys Arg Ile Thr Met Glu Glu Ser Asp Asp Leu Pro Ile
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Asn Asp Gly Ser Trp Phe Glu Glu Glu Ile Asp Val Asp Leu Lys Trp
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Ser Phe Ala Leu Asn Ser Val Leu His Lys Gly Thr Ser Glu Tyr Gln
50 55 60
Asp Ile Ala Leu Leu Asp Thr Lys His Phe Gly Lys Val Leu Val Ile
65 70 75 80
Asp Gly Lys Met Gln Ser Ala Glu Val Asp Glu Phe Ile Tyr His Glu
85 90 95
Cys Leu Ile His Pro Ala Leu Leu Cys His Pro Asn Pro Lys Asn Val
100 105 110
Phe Ile Met Gly Gly Gly Glu Gly Ser Ala Ala Arg Glu Ala Leu Arg
115 120 125
His Lys Ser Met Glu Lys Val Val Met Cys Asp Ile Asp Gln Glu Val
130 135 140
Val Asp Phe Cys Arg Lys His Leu Thr Ala Asn His Glu Ala Phe Arg
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Asn Lys Lys Leu Asn Leu Ile Ile Asn Asp Ala Lys Ala Glu Leu Glu
165 170 175
Gln Arg Gln Glu Lys Phe Asp Ile Ile Val Gly Asp Leu Ala Asp Pro
180 185 190
Val Glu Gly Gly Pro Cys Tyr Gln Leu Tyr Thr Lys Ser Phe Tyr Glu
195 200 205
Asn Ile Leu Lys Pro Lys Leu Asn Asp Asn Gly Ile Phe Val Thr Gln
210 215 220
Ala Gly Pro Ala Gly Val Phe Thr His Lys Glu Val Phe Ser Ser Ile
225 230 235 240
Tyr Asn Thr Ile Lys Gln Val Phe Lys Tyr Val Leu Ala Tyr Thr Ala
245 250 255
His Val Pro Ser Phe Ala Asp Thr Trp Gly Trp Val Met Ala Ser Asp
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Gln Pro Phe Cys Leu Asp Ala Gly Lys Leu Asp Lys Lys Ile Ala Glu
275 280 285
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Ala Phe Arg Asn
340
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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Lys Tyr Val Asp Trp Val Thr Phe Lys Ser His Ser Ser Lys Lys Val
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35 40 45
Cys Leu Val Asn Lys Arg Cys Ser Met Leu Leu Lys Ser Gly Glu Ile
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115 120 125
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Met Pro Asn Asn Glu Val Tyr Asp Thr Ala Glu Arg Tyr Asn Pro Asp
180 185 190
Ser Arg Leu Trp Glu Pro Leu Pro Arg Met Lys Arg Asn Arg Lys Leu
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Cys Ser Gly Cys Tyr Met Asp Asn Arg Phe Tyr Val Ile Gly Gly Arg
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Asn Lys Asn Gly Glu Leu Thr Cys Gly Glu Phe Phe Asp Glu Ala Lys
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Asn Lys Trp Glu Leu Ile Pro Asp Met Leu Lys Asp Asp Pro Val Gln
245 250 255
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260 265 270
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Asn Thr Trp Lys Gln Leu Gly Pro Val Pro Val Arg Ala Asp Ser Asn
290 295 300
Arg Gly Trp Gly Ile Ala Phe Lys Ser Leu Gly Asn Glu Leu Leu Val
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<213> Nicotiana tabacum
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65 70 75 80
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195 200 205
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Gly Ser Ala Val Ala Val Arg Asn Leu Ala Phe Arg Thr Leu Val Arg
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Gly Gly Tyr Ile Ala Ile Thr Thr Phe Leu Ser Ala Leu Leu Pro Phe
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275 280 285
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gaagaagtgg taaaattgat aagtgaaatt ggagggaaaa atgaacggag gagatatgaa 60
tcagcaacag caacagcagc agcaacaaca acagcagcaa caacaacaac agtggatggc 120
gatgcagcag tatcagcagc aatggatggc gatgcagtat ccagcagcag caatggcgat 180
gcagcaacag atgatgtatg gtcagcaata catgccttac agcaacatca acaacagcag 240
cagaagatgc agcagtcccc tactcagatt cagagctcat ctgaagataa taaaacgatc 300
tggattggtg atcttcagca gtggatggat gaaagttatc ttcattcttg cttttctcaa 360
gctggcgagg ttatttctgt gaaaattatt cgaaacaagc agactggtca atcagagcgt 420
tatggatttg ttgagttcaa tactcacgca gcagcggaga aagtgctaca gagctacaat 480
ggcactatga tgccaaatgc agagcaaccc ttccgtttaa actgggcagg ctttagcact 540
ggtgaaaagc gtgcagaaac tggttctgat ttctcgattt ttgtaggaga tttggcttct 600
gatgttactg atacaatgtt gcgtgacaca tttgctagta gatatccatc tcttaaaggt 660
gcaaaagtag tagtagatgc aaacacaggc cactcaaaag gctatggctt tgtaaggttt 720
ggtgatgaaa gcgagaggtc tcgggccatg actgagatga atggtgtata ttgttccagc 780
agggccatgc gtattggtgt tgctacccca aagaaaccat cagcacagca acaatattct 840
tcacaagctg tgatattatc tggtggatat gcatcaaatg gtgctgcaac ccatggatcc 900
cagtctgatg gtgattcatc aaacactaca atttttgttg gaggacttga ttctgatgtc 960
actgacgagg aacttaggca atcctttaat cagtttggag aagtggtctc tgtgaaaata 1020
cctgctggaa aaggatgtgg ttttgtacaa ttttctgaca ggagctctgc acaggaagcg 1080
atacagaaat taagtggagc aataattggc aagcaggcag ttcgtctttc ctgggggcga 1140
agtccagcaa acaagcagat gagaactgat tctggtagtc aatggaatgg gggttataat 1200
ggaaggcaaa attatggagg atatggatat ggcgcatcgc aaaatcagga ttctggcatg 1260
tatgctactg gagcagctta cggagcatcc tctaatggat acgggaatca ccagcagcct 1320
gttagctgat ctctagtgga ctctgctgct aaatgagaga ttgccatagc tctgctctct 1380
cttccacttt gggggatcag atttatattt gacttataag cttaaagcat agtgtttgat 1440
gagaattttg tagctggatt tattttatgc ttagtgagtc caagatatgt taaacctaaa 1500
cttagaatga ttggtgaact tcgatttttc tactgctttt ttccaaaaaa aaaaaaaaaa 1560
aa 1562
<210> 50
<211> 395
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 50
Met Asp Gly Asp Ala Val Ser Ser Ser Ser Asn Gly Asp Ala Ala Thr
1 5 10 15
Asp Asp Val Trp Ser Ala Ile His Ala Leu Gln Gln His Gln Gln Gln
20 25 30
Gln Gln Lys Met Gln Gln Ser Pro Thr Gln Ile Gln Ser Ser Ser Glu
35 40 45
Asp Asn Lys Thr Ile Trp Ile Gly Asp Leu Gln Gln Trp Met Asp Glu
50 55 60
Ser Tyr Leu His Ser Cys Phe Ser Gln Ala Gly Glu Val Ile Ser Val
65 70 75 80
Lys Ile Ile Arg Asn Lys Gln Thr Gly Gln Ser Glu Arg Tyr Gly Phe
85 90 95
Val Glu Phe Asn Thr His Ala Ala Ala Glu Lys Val Leu Gln Ser Tyr
100 105 110
Asn Gly Thr Met Met Pro Asn Ala Glu Gln Pro Phe Arg Leu Asn Trp
115 120 125
Ala Gly Phe Ser Thr Gly Glu Lys Arg Ala Glu Thr Gly Ser Asp Phe
130 135 140
Ser Ile Phe Val Gly Asp Leu Ala Ser Asp Val Thr Asp Thr Met Leu
145 150 155 160
Arg Asp Thr Phe Ala Ser Arg Tyr Pro Ser Leu Lys Gly Ala Lys Val
165 170 175
Val Val Asp Ala Asn Thr Gly His Ser Lys Gly Tyr Gly Phe Val Arg
180 185 190
Phe Gly Asp Glu Ser Glu Arg Ser Arg Ala Met Thr Glu Met Asn Gly
195 200 205
Val Tyr Cys Ser Ser Arg Ala Met Arg Ile Gly Val Ala Thr Pro Lys
210 215 220
Lys Pro Ser Ala Gln Gln Gln Tyr Ser Ser Gln Ala Val Ile Leu Ser
225 230 235 240
Gly Gly Tyr Ala Ser Asn Gly Ala Ala Thr His Gly Ser Gln Ser Asp
245 250 255
Gly Asp Ser Ser Asn Thr Thr Ile Phe Val Gly Gly Leu Asp Ser Asp
260 265 270
Val Thr Asp Glu Glu Leu Arg Gln Ser Phe Asn Gln Phe Gly Glu Val
275 280 285
Val Ser Val Lys Ile Pro Ala Gly Lys Gly Cys Gly Phe Val Gln Phe
290 295 300
Ser Asp Arg Ser Ser Ala Gln Glu Ala Ile Gln Lys Leu Ser Gly Ala
305 310 315 320
Ile Ile Gly Lys Gln Ala Val Arg Leu Ser Trp Gly Arg Ser Pro Ala
325 330 335
Asn Lys Gln Met Arg Thr Asp Ser Gly Ser Gln Trp Asn Gly Gly Tyr
340 345 350
Asn Gly Arg Gln Asn Tyr Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Ala Ser Gln Asn
355 360 365
Gln Asp Ser Gly Met Tyr Ala Thr Gly Ala Ala Tyr Gly Ala Ser Ser
370 375 380
Asn Gly Tyr Gly Asn His Gln Gln Pro Val Ser
385 390 395
<210> 51
<211> 646
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 51
ggatccaaag agcaggccag cgatatggaa gctgatcaag aagaaagcac gggaagccca 60
agacttaaaa tcagccagtc gaagagagat gatctccctc gatccttatc tgcagcagat 120
ggaaataaga caagagaaat ggaaatccga cgaatgagca gtcatatcca ttctagtggc 180
ctctacagaa atgaggatgc aaatcttgag gctgcaaatg gtgtcgcagg ttctttactt 240
gaacatttta ggaatttagg aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg 300
tttattgttt gtttttatct tcactttagt gaggatacat attctgagca cactctgaaa 360
atatagctca tttatgttta tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggcaactg 420
cgacaccatt tgcagcctca agatttgcat cctcatttct gtagaggcca ctagaatgga 480
tatgactgct cattcgtcgg atttccattt ctcttgtctt atttccatct gctgcagata 540
aggatcgagg gagatcatct ctcttcgact ggctgatttt aagtcttggg cttcccgtgc 600
tttcttcttg atcagcttcc atatcgctgg cctgctcttt tctaga 646
<210> 52
<211> 604
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 52
ggatccgttt tggtcctttg cataaaattt gggtaaggaa aagaatcaat ccaaagccac 60
cgaaattcaa cagtaggaca agtctcagtg tttgcatctg caaaaccatt ccaaatttca 120
caatccacga aactgtgtaa caataactaa aacataacga aataaatact aggagtataa 180
tctataggca caaaattgaa gttgtgcatg ttctttactt gaacatttta ggaatttagg 240
aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg tttattgttt gtttttatct 300
tcactttagt gaggatacat attctgagca cactctgaaa atatagctca tttatgttta 360
tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggatgcac aacttcaatt ttgtgcctat 420
agattatact cctagtattt atttcgttat gttttagtta ttgttacaca gtttcgtgga 480
ttgtgaaatt tggaatggtt ttgcagatgc aaacactgag acttgtccta ctgttgaatt 540
tcggtggctt tggattgatt cttttcctta cccaaatttt atgcaaagga ccaaaacgtc 600
taga 604
<210> 53
<211> 603
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 53
ggatccaaag atttcaagga ccttatttat gctcccaaac gaggtcacaa tcctatgatt 60
ataaacagcc tccacagcag tttgagtgct ttgatattgt gccttgacga acttagctgt 120
gatggtggat agcaagactt ttcgcgtgta aaagcataga attgtgagag gttggacagc 180
aatcataact agtgcaagct tccaagcgtt ctttacttga acattttagg aatttaggaa 240
atgcttgttc gtcatttgtt ttgtgtccta gcctattgtt tattgtttgt ttttatcttc 300
actttagtga ggatacatat tctgagcaca ctctgaaaat atagctcatt tatgtttata 360
gggaaaggag aaaagagaga gtcacatcat ggcaagcttg gaagcttgca ctagttatga 420
ttgctgtcca acctctcaca attctatgct tttacacgcg aaaagtcttg ctatccacca 480
tcacagctaa gttcgtcaag gcacaatatc aaagcactca aactgctgtg gaggctgttt 540
ataatcatag gattgtgacc tcgtttggga gcataaataa ggtccttgaa atctttgtct 600
aga 603
<210> 54
<211> 665
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 54
ggatccgtgt caacctcttc acttcttctt gctgctcaac ttgccttcac ggcaataggt 60
gctttcttca tagtgaagct gaaattcaca ccctactcta tcaatgcagt ggttctgttg 120
acagttggtg ctgttttatt aggtattcga tcaaatggtg atcggccaga gggtgtgaca 180
agtagagctt atatttactc tttgttcttt acttgaacat tttaggaatt taggaaatgc 240
ttgttcgtca tttgttttgt gtcctagcct attgtttatt gtttgttttt atcttcactt 300
tagtgaggat acatattctg agcacactct gaaaatatag ctcatttatg tttataggga 360
aaggagaaaa gagagagtca catcatggca aagaaagata aacctttagt actagtgagg 420
cttgaacgtc tgtgacattt aaagtcctaa gttagtttct attgtaattg aatataagct 480
ctacttgtca caccctctgg ccgatcacca tttgatcgaa tacctaataa aacagcacca 540
actgtcaaca gaaccactgc attgatagag tagggtgtga atttcagctt cactatgaag 600
aaagcaccta ttgccgtgaa ggcaagttga gcagcaagaa gaagtgaaga ggttgacact 660
ctaga 665
<210> 55
<211> 600
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 55
ggatccacac catctaaaac aaacgccaat gagttgattg gttgtgtacc agcgacaaac 60
tggcgaagga gcacaaggta aaaagaacag ttaaagatag tgaaacaaaa gaagaacaaa 120
ttgaaacaaa catatagtac tactatttat tgaatgtata ccgggatggc aatggttatg 180
agacggataa catttttgtc ctttgagttc tttacttgaa cattttagga atttaggaaa 240
tgcttgttcg tcatttgttt tgtgtcctag cctattgttt attgtttgtt tttatcttca 300
ctttagtgag gatacatatt ctgagcacac tctgaaaata tagctcattt atgtttatag 360
ggaaaggaga aaagagagag tcacatcatg gcaatcaaag gacaaaaatg ttatccgtct 420
cataaccatt gccatcccgg tatacattca ataaatagta gtactatatg tttgtttcaa 480
tttgttcttc ttttgtttca ctatctttaa ctgttctttt taccttgtgc tccttcgcca 540
gtttgtcgct ggtacacaac caatcaactc attggcgttt gttttagatg gtgttctaga 600
<210> 56
<211> 687
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 56
ggatccatgg gctgatgttc atggtttcaa tggggttcaa tgctgctgct agtgtaaggg 60
tgagcaatga gttaggagca ccacacccaa agtcagcagc attcttagtg tttgtggtga 120
cattcatttc atttctcata gctgtggtgg aagccataat tatgctgtgt ttgcgcaatg 180
tgatcagcta tgcattcact aagggttact ctttgttctt tacttgaaca ttttaggaat 240
ttaggaaatg cttgttcgtc atttgttttg tgtcctagcc tattgtttat tgtttgtttt 300
tatcttcact ttagtgagga tacatattct gagcacactc tgaaaatata gctcatttat 360
gtttataggg aaaggagaaa agagagagtc acatcatggc aaagaaagat aaacctttag 420
tactagtgag gcttgaacgt ctgtgacatt taaagtccta agttagtttc tattgtaatt 480
gacccttagt gaatgcatag ctgatcacat tgcgcaaaca cagcataatt atggcttcca 540
ccacagctat gagaaatgaa atgaatgtca ccacaaacac taagaatgct gctgactttg 600
ggtgtggtgc tcctaactca ttgctcaccc ttacactagc agcagcattg aaccccattg 660
aaaccatgaa catcagccca ttctaga 687
<210> 57
<211> 3155
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic nucleic acid construct
<400> 57
aagcttccag aaggtaatta tccaagatgt agcatcaaga atccaatgtt tacgggaaaa 60
actatggaag tattatgtga gctcagcaag aagcagatca atatgcggca catatgcaac 120
ctatgttcaa aaatgaagaa tgtacagata caagatccta tactgccaga atacgaagaa 180
gaatacgtag aaattgaaaa agaagaacca ggcgaagaaa agaatcttga agacgtaagc 240
actgacgaca acaatgaaaa gaagaagata aggtcggtga ttgtgaaaga gacatagagg 300
acacatgtaa ggtggaaaat gtaagggcgg aaagtaacct tatcacaaag gaatcttatc 360
ccccactact tatcctttta tatttttccg tgtcattttt gcccttgagt tttcctatat 420
aaggaaccaa gttcggcatt tgtgaaaaca agaaaaaatt tggtgtaagc tattttcttt 480
gaagtactga ggatacaact tcagagaaat ttgtaagttt gtggatcctg caggctagcg 540
tgcactctag actcgacgaa ctgacgagct cgaatttccc cgatcgttca aacatttggc 600
aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc 660
tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat 720
gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat 780
agcgcgcaaa ctatgataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta gatcgggaat 840
tcctcgagca actattttta tgtatgcaag agtcagcata tgtataattg attcagaatc 900
gttttgacga gttcggatgt agtagtagcc attatttaat gtacatacta atcgtgaata 960
gtgaatatga tgaaacattg tatcttattg tataaatatc cataaacaca tcatgaaaga 1020
cactttcttt cacggtctga attaattatg atacaattct aatagaaaac gaattaaatt 1080
acgttgaatt gtatgaaatc taattgaaca agccaaccac gacgacgact aacgttgcct 1140
ggattgactc ggtttaagtt aaccactaaa aaaacggagc tgtcatgtaa cacgcggatc 1200
gagcaggtca cagtcatgaa gccatcaaag caaaagaact aatccaaggg ctgagatgat 1260
taattagttt aaaaattagt taacacgagg gaaaaggctg tctgacagcc aggtcacgtt 1320
atctttacct gtggtcgaaa tgattcgtgt ctgtcgattt taattatttt tttgaaaggc 1380
cgaaaataaa gttgtaagag ataaacccgc ctatataaat tcatatattt tcctctccgc 1440
tttgaattgt ctcgttgtcc tcctcacttt catcagccgt tttgaatctc cggcgacttg 1500
acagagaaga acaaggaaga agactaagag agaaagtaag agataatcca ggagattcat 1560
tctccgtttt gaatcttcct caatctcatc ttcttccgct ctttctttcc aaggtaatag 1620
gaactttctg gatctacttt atttgctgga tctcgatctt gttttctcaa tttccttgag 1680
atctggaatt cgtttaattt ggatctgtga acctccacta aatcttttgg ttttactaga 1740
atcgatctaa gttgaccgat cagttagctc gattatagct accagaattt ggcttgacct 1800
tgatggagag atccatgttc atgttacctg ggaaatgatt tgtatatgtg aattgaaatc 1860
tgaactgttg aagttagatt gaatctgaac actgtcaatg ttagattgaa tctgaacact 1920
gtttaaggtt agatgaagtt tgtgtataga ttcttcgaaa ctttaggatt tgtagtgtcg 1980
tacgttgaac agaaagctat ttctgattca atcagggttt atttgactgt attgaactct 2040
ttttgtgtgt ttgcagctca taaaaggtac caaacaatga ttgaacaaga tggattgcac 2100
gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca 2160
atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt 2220
gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg 2280
tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga 2340
agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct 2400
cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg 2460
gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg 2520
gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc 2580
gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat 2640
ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac 2700
tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt 2760
gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct 2820
cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttttg agcgggactc 2880
tggcgatcgc cccgatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 2940
tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 3000
taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 3060
atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 3120
cgcggtgtca tctatgttac tagatcggga ctagt 3155
<210> 58
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 58
tatgttattc actaaatcat agttaattaa tatatatttt tacctta 47
<210> 59
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 59
ttcacaacta gaagagcgtg agaccttttc aattagaatt cgtagga 47
<210> 60
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 60
tccttaaatc ggtcatggaa agtgagaata atcagggcaa taaaaaa 47
<210> 61
<211> 201
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 61
aattcaaacc tgtcaaaacc ataaaaagat attggacaaa tgcttttaat ataattgcct 60
tagattaatc tatatatata tatatatata tataggtaaa tacttacttg tatcagacat 120
ttatctttat aaatatgtta ttcactaaat catagttaat taatatatat ttttacctta 180
aggggccgtt tggttgggaa a 201
<210> 62
<211> 201
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 62
tatcgcacta ctattgaacc tatcgccttt tgagttttga tatataaata gcgacgaacg 60
tttcttagat aatggactca taacctccct cttcacaact agaagagcgt gagacctttt 120
caattagaat tcgtaggaaa aaatcaaaca caaattcaca aaacaaaaat ttattaagat 180
ttcagcgacc aagcccgtga g 201
<210> 63
<211> 214
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 63
tcgtttgaga aaaacggtcc ttaaatcggt catggaaagt gagaataatc agggcaataa 60
aaaagttgtt cataaggaag ttgatgttcg gaatctggga ttgaatgagc gacaagagtt 120
cattgatcga tttttcaggg ttgctgagga agataatgaa aagtttctga gaaagttcag 180
aaatcgaatt gacaagtaag tttccagtat tact 214
<210> 64
<211> 211
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 64
acaagccaca agctacacta tccaaagagc aggccagcga tatggaagct gagcaagaag 60
aaagcacggg aacccctaga cttcgaatca gccagtcgaa gagagatgat ctccctcgat 120
ccttatctgc agcagatggg aacaagacaa gtatgatctt tagcccatca ataacagaat 180
ctgcttgggg aatataagta atgcttacag t 211
<210> 65
<211> 200
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 65
atacgataag tcctcttaaa attaccatac ttataaagtc ataaaagtag aaagaaaaag 60
gacctctttg aaaattttta tataaaaggg gctgaaaata tgcgataatg tcaagtagca 120
gtttggcttc atatattggt ccatgttatc ggagttggta tttatgttaa atattaagta 180
cttttttatc atatctatca 200
<210> 66
<211> 202
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 66
actcaatttc tgccacttta ttataaatag taagttagta ttccattctt ggtcagaaag 60
gagtatggga aatcaaggtc tattttctta gttacagacc taacaatttc cattgtcacc 120
ttttttcagc tgttggcgtg tagaaacgga cctttgagca ttgttgatgc gtttgacttg 180
ttttagaaaa gaaaaaagaa tg 202
<210> 67
<211> 234
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 67
ggctagttgt ggcttggaag cttgcactag ttatgattgc tgtccaacct ctcacaattc 60
tatgctttta cacgcgaaaa gtcttgctat ccaccatcac agctaagttc gtcaaggcac 120
aatatcaaag cactcaaact gctgtggagg ctgtttataa tcataggatt gtgacctcgt 180
ttgggagcat aaataaggtc cttgaaatct ttgatgaggc acaggatgag tcaa 234
<210> 68
<211> 207
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 68
tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60
ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120
atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180
atttatattt atgctctgcg tcaacag 207
<210> 69
<211> 207
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic oligonucleotide
<400> 69
tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60
ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120
atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180
atttatattt atgctctgcg tcaacag 207
<210> 70
<211> 2544
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 70
atggaattgg agaggggatt tccattgcta aaacagcagt acaaagcttt attaaagaag 60
aattttatag tggcatggag gaacaagaga gccacattcc ttcagttatt ctcatccctc 120
ttcttgatat tccttctttt tataatccaa aaagcaatag aagctcgctt ttcttcttcc 180
tcctcttacg agaacgtgcg ggacccacaa ccgttagtgt cgccgccaat cccgccctgt 240
gaacaaaaga acttcatccg tctcccctgc tatgattttg tttggagtgg ttctcagagt 300
ccaaaaatcg ggcagattgc gagcagaatt atggctaata atcctggccg gtctattcct 360
acctctaagg ttctgtcatt tagaacacga gatgaagtgg atgaatggct tttcaaaaac 420
cctatgcgtt gtcctggagc tctgcacttt gttgaaagga atgctagcat aatcagttat 480
ggcatacaga caaactccac tcctgttgtc aaacgaggag tctttgaaga tccaactttt 540
aaattccaaa tcccacttca actggcagca gaacgtgaaa ttgcaagatc tctgattgga 600
gatccaaact tcagttgggt tgtcagtttc aaagaatttg cacatcctgc ttttgaagtt 660
ttctcagcct tgggtgctgt tgggcctacc tttttcttgg ctgttgctat gtttggcttt 720
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accgagtgtg taataactat gaatgagatt tacgtatggc tcgtgtcaac attctttctg 1200
tggtttgttc ttgctattta cttggacaac ataattccga atgtttctgg tgtgagaaaa 1260
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<210> 71
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 71
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1 5 10 15
Leu Leu Lys Lys Asn Phe Ile Val Ala Trp Arg Asn Lys Arg Ala Thr
20 25 30
Phe Leu Gln Leu Phe Ser Ser Leu Phe Leu Ile Phe Leu Leu Phe Ile
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Ile Gln Lys Ala Ile Glu Ala Arg Phe Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Glu
50 55 60
Asn Val Arg Asp Pro Gln Pro Leu Val Ser Pro Pro Ile Pro Pro Cys
65 70 75 80
Glu Gln Lys Asn Phe Ile Arg Leu Pro Cys Tyr Asp Phe Val Trp Ser
85 90 95
Gly Ser Gln Ser Pro Lys Ile Gly Gln Ile Ala Ser Arg Ile Met Ala
100 105 110
Asn Asn Pro Gly Arg Ser Ile Pro Thr Ser Lys Val Leu Ser Phe Arg
115 120 125
Thr Arg Asp Glu Val Asp Glu Trp Leu Phe Lys Asn Pro Met Arg Cys
130 135 140
Pro Gly Ala Leu His Phe Val Glu Arg Asn Ala Ser Ile Ile Ser Tyr
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Asp Pro Thr Phe Lys Phe Gln Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Glu Arg
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Glu Ile Ala Arg Ser Leu Ile Gly Asp Pro Asn Phe Ser Trp Val Val
195 200 205
Ser Phe Lys Glu Phe Ala His Pro Ala Phe Glu Val Phe Ser Ala Leu
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Gly Ala Val Gly Pro Thr Phe Phe Leu Ala Val Ala Met Phe Gly Phe
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Val Phe Gln Ile Asn Val Leu Ile Ile Glu Lys Glu Leu Lys Leu Arg
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Val Leu Phe Gly Met Met Phe Gln Phe Glu Phe Phe Leu Asn Asn Ser
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Gly Phe Ala Phe Met Leu Ser Ala Phe Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr
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485 490 495
Gly Thr Ala Lys Met Gly Cys Cys Lys Cys Gln Arg Lys Ser Pro Tyr
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Leu Thr Gly Ile Thr Pro Val Thr Ala Gly Asp Ala Leu Val Tyr Gly
545 550 555 560
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Gly Val Cys Pro Gln Phe Asp Ile Leu Trp Asp Ala Leu Ser Gly Gln
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Leu Ser Val Ala Ile Ala Leu Ile Gly Glu Pro Lys Leu Leu Ile Leu
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 72
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Arg Lys Asn Leu Thr Phe Gln Met Gly Arg Asn Phe Phe Ser Ser Gly
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Ser Thr Leu Asn Ser Ser Asp Ile Phe Tyr Ser Leu Ala Tyr Asn Ile
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Leu Gly Ser Glu Ser Gln Thr Glu Leu Met Asn Phe Leu Glu Ala Ala
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Phe Phe Ser Asn Leu Pro Val Tyr Asn Leu Arg Pro Gln Cys Pro Pro
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Asn Ser Thr Phe Ser Phe Pro Leu Glu Phe Gly Ser Val Ala Val Gln
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100 105 110
Tyr Glu Ile Asn Asp Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Arg Lys Gly Asn Pro
115 120 125
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Asn Arg Asn Gly Phe Asn Val Asn Ile Trp Tyr Asn Ser Thr Tyr Lys
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Asp Asp Thr Gly Asn Arg Pro Met Ser Leu Thr Arg Val Pro Arg Ser
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Ala Arg Met Leu Phe Glu Phe Val Lys Glu Met Pro Lys Ala Glu Thr
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Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ala Ser Leu Leu Gly Pro Leu Phe Phe Thr
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Trp Val Val Leu Ile Ala Leu Val Tyr Glu Lys Gln Gln Lys Leu Arg
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Ile Met Met Lys Met His Gly Leu Ala Asp Gly Pro Tyr Trp Met Ile
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Val Val Phe Gly Ser Leu Val Gly Leu Lys Phe Phe Leu Leu Asn Asp
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Ser Leu Ala Phe Leu Val Ala Ala Phe Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala
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740 745 750
Pro Thr Leu Ser Val Thr Arg Ser Ile Asn Ser Gly Ser Asn Leu Asp
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770 775 780
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Ser Leu Glu His Met Phe Gly Gln Ser Ser Gly Ala Lys Leu Tyr His
835 840 845
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Thr Lys Ser Leu Ile Ser Gln Gly Ala Val Lys Ala Asn Ala Leu Val
885 890 895
Ser Ala Thr Lys Thr Asp Gly Gln Thr Asn Gly Tyr Thr Glu Gly Asn
900 905 910
Ser Ser Asn Gln Asn His Phe Phe Ser Lys Glu His Val Ser Glu Leu
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Val Asn Ile Ile Lys Gln Val Gln Ile Gly Asn Gly Gly Asn Ala Gly
930 935 940
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Phe Asp Ser Lys Ser Phe Leu Glu Val Arg Pro Leu His Ile Pro Leu
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gctcgtttat ctggagttca aagagctccg atcctccatc actttgcaga atcactggca 2040
ggagcagcaa caattcgcgc tttcaaccaa aaagatcgct ttgctcatgc aaaccttagc 2100
ctcatagatg gcattgcagg attagcagta acatatggca tctatttgaa ctattcacaa 2160
gctgcagtaa tatggaatat ttgcggtact gaaaacaaaa tgatatcagt tgaaaggatt 2220
ctccagtatt cagaccttgc cagtgaagca cccctcgtga ttgaaaactg caggctatcg 2280
agcacctggc cagaaactgg aacaatttcc ttccaaaatt tacagatacg ttatgctgaa 2340
cacctccctt ctgttttgaa aaacattaca tgcacatttc cgggaagtaa gaaagttggt 2400
gttgtgggaa ggacaggaag tggtaaatca accctcactc aagccctttt ccggatcgta 2460
gaacccaaag aaggaagcat tatcattgac aatatagata tttgcaagat aggtcttcat 2520
gatttgaggt caaggtttag tattattcct caagatccaa caatgttcga tggaacagtt 2580
agaggaaacc tagatccaat agcacagcac tctgatactg aaatctggga ggctctggac 2640
aaatgccaac ttggtgatat aatacgtgca aagccagaaa agctagaatc tacagtggtt 2700
gaaaacggag aaaactggag tgtgggtcaa aggcagcttt tctgtcttgg aagagctttg 2760
ctaaagaaaa gtagcattct cgttttggat gaagcaacag catcagttga tgctgcaact 2820
gatgcagtgt tacaaaagat tatcagtcaa gagttcagaa atcgaacagt tatcacaata 2880
gctcacagga tccatacagt cattaatagc gatcttgtct tagtcttgaa tgaaggaaga 2940
atagccgaat atgattcacc agcaaagcta ttggaaagag aggattcttt cttctcaaaa 3000
ctgataaagg agtattcgat gagatccaaa ggtgcaaagg tgattgagaa gcatgcagca 3060
cagctttgtg tgttagcaga ggactgcgac cagccagatt atgtcaaatt ggtcaaagca 3120
ctctgtgctg atcacaatgt cagcttgatc acagttccga atgcaaaaac tcttggcgaa 3180
tgggctggtt tgtgtaagat tgactctgaa gggaaagcaa ggaaagtggt tggctgcggc 3240
tgtgttgttg tgaaggatta tggggaagag actgagggtc tgcatattgt ccaggagtac 3300
gtaaagtccc attaa 3315
<210> 75
<211> 1104
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 75
Met Ser Arg Cys Phe Trp Glu Asp Ala Ser Ile Ile Val Phe Leu Gly
1 5 10 15
Phe Leu Gly Ile Leu Leu Leu Asp Ser Leu Leu Cys Lys Cys Arg Lys
20 25 30
Lys Val Met Thr Val Asp Gln Lys Tyr Thr Val Gly Thr Glu Val Arg
35 40 45
Val Ser Tyr Ser Tyr Ile Leu Ser Ile Ile Cys Thr Thr Ile Leu Ser
50 55 60
Cys Thr His Leu Ile Met Leu Leu Ile Leu Gln Lys Arg Asn Gly Ala
65 70 75 80
His Cys Gln Phe Arg Phe Pro Val Leu Ser Ser Glu Ile Leu Gln Ser
85 90 95
Thr Ser Trp Ala Val Ser Phe Phe Val Leu Tyr Arg Thr Arg Ser Arg
100 105 110
Lys Tyr Ile Lys Phe Pro Trp Val Leu Arg Ile Trp Trp Ile Ser Ser
115 120 125
Phe Phe Leu Ser Ile Ala Arg Ala Thr Leu Asp Ala His Phe Val Ile
130 135 140
Thr Ser Asp Glu His Leu Gly Leu Ala Asp Tyr Val Asp Ile Ile Gly
145 150 155 160
Leu Ile Ser Ser Ala Cys Leu Leu Gly Ile Ser Ile Arg Gly Lys Thr
165 170 175
Gly Ile Ile Leu Asp Ile Ser Asp Ser Thr Thr Glu Pro Leu Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Asn Glu Lys Asp Pro Glu Asp Lys Arg Asp Ser Pro Tyr Gly
195 200 205
Lys Ala Ser Leu Leu Gln Leu Ile Thr Phe Ser Trp Leu Asn Pro Leu
210 215 220
Phe Glu Val Gly Asn Lys Lys Pro Leu Asp Gln Asp Glu Val Pro Asp
225 230 235 240
Val Asp Phe Arg Asp Ser Ala Lys Phe Leu Ser Gly Ser Phe Asp Glu
245 250 255
Ser Leu Lys Tyr Val Lys Gly Arg Asn Gly Ala Lys Asn Pro Ser Ile
260 265 270
Tyr Lys Ala Ile Tyr Val Phe Ala Gly Lys Lys Ala Ala Ile Asn Ala
275 280 285
Val Phe Ala Val Ile Ser Ala Gly Ser Ser Tyr Val Gly Pro Tyr Leu
290 295 300
Met Asp Asp Phe Val Asn Phe Leu Asn Glu Lys Lys Leu Arg Gly Leu
305 310 315 320
Gln Thr Arg Ala Ala Tyr Gln Asp Ala Asp Ile Tyr Leu Leu Asp Asp
325 330 335
Pro Phe Ser Ala Val Asp Ala His Thr Gly Thr His Leu Phe Gln Glu
340 345 350
Cys Leu Arg Gly Val Leu Lys Asp Lys Thr Ile Leu Tyr Val Thr His
355 360 365
Gln Val Glu Phe Leu Pro Ala Ala Asp Leu Ile Leu Val Met Gln Asn
370 375 380
Gly Arg Ile Ala Gln Ala Gly Thr Phe Glu Glu Leu Leu Lys Gln Asn
385 390 395 400
Ile Gly Phe Glu Val Leu Val Gly Ala His Asn Gln Ala Leu Glu Ser
405 410 415
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420 425 430
Gly Ser Glu Met Asp Thr Asp Ser Asn Ile Asn Thr Glu Thr Lys Gln
435 440 445
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450 455 460
Leu Val Gln Asp Glu Glu Arg Val Lys Gly Ser Ile Gly Lys Glu Val
465 470 475 480
Tyr Tyr Ser Tyr Leu Thr Thr Met Lys Gly Gly Ala Phe Val Pro Ile
485 490 495
Ile Leu Ile Ala Gln Ser Ser Phe Gln Val Leu Gln Ile Ala Ser Asn
500 505 510
Tyr Trp Met Ala Ser Ala Phe Pro Thr Gly Asp Asp Ala Ala Pro Ile
515 520 525
Ala Glu Lys Met Asn Phe Ile Leu Val Val Phe Val Leu Leu Ala Val
530 535 540
Gly Ser Ser Leu Cys Val Leu Val Arg Ala Ser Phe Val Ala Ile Ile
545 550 555 560
Gly Leu Gln Thr Ala Glu Lys Leu Phe Ser Asn Met Leu His Ser Ile
565 570 575
Leu Arg Ala Pro Met Ser Phe Phe Asp Ser Thr Pro Thr Gly Arg Ile
580 585 590
Leu Asn Arg Ala Ser Thr Asp Gln Ser Val Val Asp Leu Glu Ile Ala
595 600 605
Leu Lys Leu Gly Trp Cys Ala Leu Ser Ile Ile Gln Leu Leu Gly Thr
610 615 620
Ile Ala Val Met Ser Gln Val Ala Trp Glu Val Phe Val Leu Phe Ile
625 630 635 640
Pro Ile Thr Ala Val Tyr Val Trp Tyr Gln Gln Tyr Tyr Ile Pro Thr
645 650 655
Ala Arg Glu Leu Ala Arg Leu Ser Gly Val Gln Arg Ala Pro Ile Leu
660 665 670
His His Phe Ala Glu Ser Leu Ala Gly Ala Ala Thr Ile Arg Ala Phe
675 680 685
Asn Gln Lys Asp Arg Phe Ala His Ala Asn Leu Ser Leu Ile Asp Gly
690 695 700
Ile Ala Gly Leu Ala Val Thr Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Tyr Ser Gln
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Ala Ala Val Ile Trp Asn Ile Cys Gly Thr Glu Asn Lys Met Ile Ser
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Val Glu Arg Ile Leu Gln Tyr Ser Asp Leu Ala Ser Glu Ala Pro Leu
740 745 750
Val Ile Glu Asn Cys Arg Leu Ser Ser Thr Trp Pro Glu Thr Gly Thr
755 760 765
Ile Ser Phe Gln Asn Leu Gln Ile Arg Tyr Ala Glu His Leu Pro Ser
770 775 780
Val Leu Lys Asn Ile Thr Cys Thr Phe Pro Gly Ser Lys Lys Val Gly
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Val Val Gly Arg Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Leu Thr Gln Ala Leu
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Asp Ile Cys Lys Ile Gly Leu His Asp Leu Arg Ser Arg Phe Ser Ile
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Leu Ala Glu Asp Cys Asp Gln Pro Asp Tyr Val Lys Leu Val Lys Ala
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 76
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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Met Val Ser Asp Ala Ala Lys Lys Arg Asp Ala Gln Lys Lys Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Arg Arg Gly Gly Lys Gly Ala Ala Ala Ser Ser Lys Thr
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Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Ala Pro Glu Thr Asn Gly Val Asp Asn
35 40 45
Leu Thr Asn Gly Val Gly Asp Leu His Ile Ser Asp Arg Asn Cys Thr
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Gly Val Leu Cys Ser His Pro Leu Ser Arg Asp Ile Arg Ile Gln Ser
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Leu Ser Val Thr Phe His Gly His Asp Leu Ile Val Asp Ser Glu Leu
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Asp Met Ser Ala Leu Glu Ala Val Ile Asn Cys Asp Glu Glu Arg Leu
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Lys Leu Glu Lys Glu Ala Glu Ala Leu Ala Gly Gln Asp Asp Gly Gly
165 170 175
Gly Glu Gln Leu Glu Arg Ile Tyr Glu Arg Leu Glu Ala Met Asp Ala
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Ala Thr Ala Glu Lys Arg Ala Ala Glu Ile Leu Phe Gly Leu Gly Phe
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Arg Met Arg Ile Ser Leu Ala Arg Ala Leu Phe Met Asn Pro Thr Ile
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Leu Leu Arg Gly Leu Cys Val Val Arg Arg Ile Leu Glu Glu Phe Arg
245 250 255
Ala His Ser Gly Cys His Phe Thr Leu Pro Gly Phe Ser Gln Trp Cys
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Leu Tyr Gln Tyr His Pro His Ala Lys Gln Glu Ile Glu Ala Leu Tyr
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Pro Asp Glu Thr Val
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
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Asn Asn Asn Thr Thr Gly Phe Ala Tyr Glu Glu Val Val Leu Pro Phe
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Thr Arg Gln Thr Gly Glu Ile Leu Ile Asn Gly Arg Arg Gln Ala Leu
165 170 175
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Thr Leu Thr Val Lys Glu Ala Ile Tyr Tyr Ser Ala Gln Leu Gln Leu
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Pro Asp Ser Ile Ile Val Gln Leu Ala Lys Gln Asp Gly Arg Thr Val
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Val Ala Ser Ile His Gln Pro Ser Ser Glu Val Phe Glu Leu Phe His
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Asn Leu Cys Leu Leu Ser Ser Gly Arg Thr Val Tyr Phe Gly Ser Ile
245 250 255
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260 265 270
Met Arg Asn Pro Ser Asp His Tyr Leu Arg Thr Ile Asn Lys Asp Phe
275 280 285
Asp Ala Asp Ile Glu Lys Gly Val Gly Gly Lys Ala Thr Ala Thr Glu
290 295 300
Ala Ile Asn Ile Leu Val Lys Ser Tyr Lys Thr Ser Gln Gly Cys Gln
305 310 315 320
Gln Val Gln Arg Arg Val Leu Glu Ile Cys Gln Gln Asn Gly Gly Gln
325 330 335
Glu Ala Lys Lys Gly Asn Gln Ala Ser Phe Ile Thr Gln Cys Thr Val
340 345 350
Leu Thr Arg Arg Ser Phe Val Asn Met Tyr Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr
355 360 365
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370 375 380
Ile Phe His Asp Ile Gly His Asp Tyr Gly Ser Ile Gln Phe Arg Ser
385 390 395 400
Tyr Asp Glu Asn Arg Val Leu Ser Tyr Ile Gly Met Leu Gly Ala Val
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ttctatcctg cgtgggtgtg gtcattgtgt agttggatct tgtcgttacc ttactctgtt 780
attgaagctc ttgtatggtc ttatgttgta tactggactg taggatttgc acctggtgct 840
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acttccaaat ataacacatc tgtactttat cagcttaaaa tgtgcctgtg gaagcaaagt 2340
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ttccgtaggg agagagatgc agggatgtac tcctgcgtag tatatgcagc atctcagggg 2520
ctgattgagg ttatttatgt cctggcccag actgtactat ttggagccat tacctattct 2580
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attgtattag gtgaattgag gaacgacgac aacccccatg aactaagtga ttgtcgggac 3720
attgaggtcg atgaggtcat ggaggcaatg caaggagatg aaaattgtcg gagaaagttt 3780
ttcggtggta ttaattgggt gaaggcagaa attcatgagt tttgtcaagt gaaattggtg 3840
gtgaaaatag agtag 3855
<210> 81
<211> 1284
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 81
Met Lys Thr Tyr Ser Thr Ala Gly Thr Ser Val Tyr Ile Ile Gln Thr
1 5 10 15
Asp Asn His Ile Pro Glu Leu Ile Val Arg Glu Thr Val Asp Phe Ala
20 25 30
Ala Arg Cys Gln Gly Glu Asn His Asn Phe Glu Asp Tyr Val Leu Asn
35 40 45
Val Leu Arg Leu Asp Ile Cys Ser Asp Thr Leu Val Gly Asn Asp Ala
50 55 60
Ile Arg Gly Val Ser Gly Glu Gln Arg Lys Ile Gly Glu Met Ile Val
65 70 75 80
Gly Pro Arg Lys Thr Leu Phe Met Asp Glu Ile Ser Thr Gly His Asp
85 90 95
Ser Ser Thr Ser Ser Lys Ile Val Lys Cys Ile Gln Asn Phe Val His
100 105 110
Ile Met Glu Gly Thr Val Met Met Ala Leu Cys Arg Pro Ser Gln Glu
115 120 125
Thr Phe Glu Leu Phe Asp Asp Leu Val Leu Leu Ser Glu Gly Tyr Val
130 135 140
Leu Tyr His Gly Pro Arg Glu Asp Val Ile Pro Phe Phe Glu Trp Leu
145 150 155 160
Gly Phe Gln Leu Pro Asp Arg Lys Asp Val Val Asp Phe Ile Gln Glu
165 170 175
Val Ala Phe Val Gly Ser Val Thr Gly Thr Met Phe Leu Arg Thr Arg
180 185 190
Leu His Pro Thr Asp Leu Val Asn Gly Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Leu
195 200 205
Phe Phe Gly Leu Val His Met Met Leu Asp Gly Phe Ser Glu Leu Ser
210 215 220
Leu Phe Ile Tyr Arg Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Asn Phe
225 230 235 240
Phe Tyr Pro Ala Trp Val Trp Ser Leu Cys Ser Trp Ile Leu Ser Leu
245 250 255
Pro Tyr Ser Val Ile Glu Ala Leu Val Trp Ser Tyr Val Val Tyr Trp
260 265 270
Thr Val Gly Phe Ala Pro Gly Ala Gly Arg Phe Phe Ser Tyr Met Phe
275 280 285
Leu Leu Phe Ser Val His Gln Met Ala Met Gly Leu Phe Arg Leu Ile
290 295 300
Ala Ser Leu Ser Arg Asp Ile Ile Ile Ala Asn Thr Phe Gly Ser Ala
305 310 315 320
Val Leu Ile Ile Phe Leu Leu Gly Gly Phe Ile Leu Pro Lys Glu Met
325 330 335
Ile Lys Pro Trp Phe Val Trp Ala Phe Trp Val Ser Pro Leu Ser Tyr
340 345 350
Gly Gln Arg Ala Ile Ser Val Asn Glu Phe Thr Ala Thr Arg Trp Ile
355 360 365
Glu Lys Thr Thr Ser Gly Asn Val Thr Leu Gly Tyr Ser Val Leu Gln
370 375 380
Ser His Ser Leu Pro Thr Ser Gly Tyr Trp Tyr Trp Leu Gly Leu Gly
385 390 395 400
Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Leu Leu Asn Ile Ile Leu Thr Val Ala
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435 440 445
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Val Leu Ser Pro Gly Val Leu Ile Gly Leu Val Gly Ala Ser Gly Ala
485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
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Val Arg Ala Ala Gly Thr Ile Phe Ile Tyr Ile Met Phe Leu Leu Leu
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Gln Arg Ser Val Arg Gly Arg Pro Arg Ile Arg Trp Gly Ser Leu Thr
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Tyr Ile Arg Lys Ala Ala Arg Glu Val Leu Gly Val Ser Ser Gly Arg
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 82
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catataatca cagcagttat tggttctgga gttttgtcat tagcttgggc cactgctcag 180
cttggttggg ttgctggtcc agctgttttg cttctcttct cctttgttac ttactacact 240
tctgcgctcc tcgctgattg ttaccgttct ggagatcaag tttctggcaa aagaaactat 300
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attcagtatg tgaatctttt tggagttgca gttggctata ctattgcatc ttctattagc 420
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cagtctttga ctgtgtttga tcatgtagat attgccttga gtggtttgga tcacgttgaa 840
agtgttttgg cttttggttg a 861
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
<400> 83
Met Gly Asp Asn Asn His His Gln Val Phe Asp Val Ser Ala Asn Gly
1 5 10 15
Tyr Gly Glu Ser Lys Cys Phe Asp Asp Asp Gly Arg Leu Lys Arg Ser
20 25 30
Gly Ser Val Trp Thr Ala Ser Ala His Ile Ile Thr Ala Val Ile Gly
35 40 45
Ser Gly Val Leu Ser Leu Ala Trp Ala Thr Ala Gln Leu Gly Trp Val
50 55 60
Ala Gly Pro Ala Val Leu Leu Leu Phe Ser Phe Val Thr Tyr Tyr Thr
65 70 75 80
Ser Ala Leu Leu Ala Asp Cys Tyr Arg Ser Gly Asp Gln Val Ser Gly
85 90 95
Lys Arg Asn Tyr Thr Tyr Met Asp Ala Val Arg Ala Asn Leu Gly Gly
100 105 110
Leu Gln Val Lys Ile Cys Gly Val Ile Gln Tyr Val Asn Leu Phe Gly
115 120 125
Val Ala Val Gly Tyr Thr Ile Ala Ser Ser Ile Ser Met Met Ala Val
130 135 140
Lys Arg Ser Asp Cys Phe His Lys His Gly His Arg Ala Ala Cys Asn
145 150 155 160
Val Ser Ser Thr Pro Tyr Met Ile Met Phe Gly Val Met Glu Ile Leu
165 170 175
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180 185 190
Ala Ala Val Met Ser Phe Thr Tyr Ser Thr Ile Gly Leu Gly Leu Gly
195 200 205
Val Ala Gln Val Ala Glu Thr Gly Lys Ile Gln Gly Ser Leu Thr Gly
210 215 220
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Phe Gln Ala Leu Gly Ala Ile Ala Phe Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Ile
245 250 255
Leu Ile Glu Ile Gln Ser Leu Thr Val Phe Asp His Val Asp Ile Ala
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Leu Ser Gly Leu Asp His Val Glu Ser Val Leu Ala Phe Gly
275 280 285
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<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum
<400> 84
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<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum
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50 55 60
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Asn Ile Tyr Ser Leu Phe Gly Ser Ala Ala Ala Gly Arg Thr Ser Asp
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100 105 110
Ala Gly Ala Leu Leu Met Gly Phe Ala Thr Thr Tyr Ala Phe Leu Met
115 120 125
Val Gly Arg Phe Val Ala Gly Val Gly Val Gly Tyr Ala Leu Met Val
130 135 140
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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245 250 255
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275 280 285
Arg His Ile Leu Leu Thr Gly Val Gly Ile His Phe Phe Gln Gln Ala
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Ser Gly Ile Asp Ala Val Val Leu Tyr Ser Pro Arg Ile Phe Glu Lys
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Ala Gly Ile Lys Ser Asp His Asp Lys Leu Leu Ala Thr Val Ala Val
325 330 335
Gly Phe Val Lys Thr Ile Phe Ile Leu Val Ala Thr Phe Met Leu Asp
340 345 350
Lys Ser Gly Arg Arg Pro Leu Leu Leu Thr Ser Val Ala Gly Met Val
355 360 365
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405 410 415
Val Val Ser Met Thr Phe Leu Ser Leu Val Lys Ser Ile Thr Ile Gly
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Gly Ala Phe Phe Leu Tyr Phe Gly Leu Ala Ala Val Ala Phe Val Phe
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Glu Ala Leu Phe Gly Ser Phe Trp Asp Trp Arg Lys Thr Ala Arg Glu
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<213> Nicotiana tabacum
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Asn Ile Asn Gly Trp Glu Leu Met Ile Pro Leu Gly Phe Phe Ala Gly
195 200 205
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225 230 235 240
Leu Ile Ile Phe Phe His Asn Glu Leu Ala Leu Ile Phe Ser Thr Ser
245 250 255
Gln Pro Val Leu Glu Ala Val His Lys Leu Ser Ile Leu Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Val Leu Leu Asn Ser Val Gln Pro Ile Leu Ser Gly Val Ala Val
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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<213> Nicotiana tabacum
<400> 88
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cttggaaata ctggaattca agtttttgct tatggtctta tgttgggaat gggaagtgca 360
gttgaaacac tatgtgggca agcatttgga gcaaagaaat atgatatgtt aggagtttat 420
ctgcaaagat caacaattct cctaactcta acaggaattt tactcgcttt cgtgtacatt 480
ttctgcaagc caattctaat atttctaggc gaatcggaaa gaattgcttc agcagctgcc 540
ttattcgtgt acggtctaat tccccaaatt ttcgcctacg cgttaaattt cccaattcag 600
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gcagcagcaa gtgtgagagt gagcaatgaa ctaggagcaa ggcatccaaa atcagcagct 1080
ttttctgttg ttgtggttac gtcgtggtct ttcattctct cggtgattgc tgcagtcatc 1140
gttcttgcat tgcgtaatct catcagttat gccttcactg gtggtgaagt tgttgctcaa 1200
gctgtctccg atctttgtcc attgctcgcg atttccctta tactcaatgg aattcaaccc 1260
gtcttgtcag gtgtggctgt tggctgtgga tggcaaactt ttgtggccta tgtaaatgtt 1320
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ggagctaagg gtatatggtc aggaatgctg ggaggtacgg tgatgcagac aatcattttg 1440
atatggatca ctgctcgaac cgattggaat aaagaggcca aggggttgga attcactctc 1500
agccacctca tccggttata tcgacctcga ctttttcgag gattaatcaa gctccaacac 1560
cgatcaacga agtccttttt tgcaagcatt gatgaggaca aagaccgagg ttggatgagc 1620
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gaagatgctg gttgtgatct ggtgcctcga aagaggggga gcgtcgaagc tccaaaaata 2100
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【配列表】