(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-10-17
(45)【発行日】2023-10-25
(54)【発明の名称】ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体、およびその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20231018BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20231018BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20231018BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20231018BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20231018BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20231018BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20231018BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20231018BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20231018BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20231018BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20231018BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20231018BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61K39/395 U
A61P35/00
A61K45/00
【請求項の数】
16
(21)【出願番号】P 2022536765
(86)(22)【出願日】2020-12-14
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-12-08
(86)【国際出願番号】 IB2020061896
(87)【国際公開番号】W WO2021124073
(87)【国際公開日】2021-06-24
【審査請求日】2022-10-04
(31)【優先権主張番号】62/949,120
(32)【優先日】2019-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/110,693
(32)【優先日】2020-11-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】ハビエル フェルナンド カパロ リッジャーズ
(72)【発明者】
【氏名】シー‐シュン チェン
(72)【発明者】
【氏名】シェン ディン
(72)【発明者】
【氏名】パウエル カミール ドミニク
(72)【発明者】
【氏名】シャーラム サレク‐アーダカニ
(72)【発明者】
【氏名】ジェシカ リン スタンフィールド
(72)【発明者】
【氏名】トーマス ジョン ヴァン‐ブラーコム
【審査官】平林 由利子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１９／０６８３０２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／０２８１２５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／２３４５７６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／２１５８３５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１８／２０５９３６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１５－５３６３５１（ＪＰ，Ａ）
【文献】J. Biol. Chem., 2017, 292(35):14706-14717
【文献】Pharmacology & Therapeutics, 2019, Vol.201, pp.103-119
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １／００－ ７／０８
Ｃ１２Ｐ １／００－４１／００
Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４
Ａ６１Ｋ ４５／００－４５／０８
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む単離二重特異性抗体であって、配列番号１に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＨ、配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＬ、配列番号４に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＨ、および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＬを含む、単離二重特異性抗体であって、ＰＤ－Ｌ１に対する抗ＰＤ－Ｌ１抗原結合部分の親和性がＣＤ４７に対する抗ＣＤ４７抗原結合部分の親和性よりも高い、単離二重特異性抗体。
【請求項2】
Ｆｃドメインを含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
【請求項3】
ＦｃドメインがＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項4】
Ｆｃドメインの第１のＦｃ鎖および第２のＦｃ鎖が、第１のＦｃ鎖と第２のＦｃ鎖の会合を促進する１つまたは複数の修飾を含有する、請求項２または３に記載の二重特異性抗体。
【請求項5】
配列番号６１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７重鎖を含み、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１重鎖を含む、請求項２から４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項6】
配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７軽鎖および配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１軽鎖をさらに含む、請求項２から５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
【請求項7】
第１の抗体重鎖、第２の抗体重鎖、第１の抗体軽鎖、および第２の抗体軽鎖を含み、 第１の抗体重鎖が配列番号６１のアミノ酸配列を含み、第２の抗体重鎖が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、 第１の抗体軽鎖および第２の抗体軽鎖がどちらも配列番号６２のアミノ酸配列を含む、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する単離二重特異性抗体であって、ＰＤ－Ｌ１に対する抗ＰＤ－Ｌ１抗原結合部分の親和性がＣＤ４７に対する抗ＣＤ４７抗原結合部分の親和性よりも高い、単離二重特異性抗体。
【請求項8】
治療上有効な量の請求項１から７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項9】
請求項１から７のいずれか一項に記載のアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項10】
請求項９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項11】
請求項１から７のいずれか一項に記載のアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項12】
請求項１１に記載の宿主細胞を、請求項１から７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体の産生をもたらす条件下で培養することと、産生された抗体または二重特異性抗体を精製することとを含む、抗体または二重特異性抗体を産生させる方法。
【請求項13】
癌の処置において使用するための医薬品の製造における、請求項１から７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、請求項８に記載の医薬組成物、請求項９に記載のポリヌクレオチド、請求項１０に記載のベクター、または請求項１１に記載の宿主細胞の使用。
【請求項14】
癌の処置のための、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項15】
第２の治療剤と組み合わせて使用するための、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項16】
癌が、胃癌、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、頭頸部癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝臓癌、胃癌、甲状腺癌、肺癌（たとえば非小細胞肺癌を含む）、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、食道癌、膵癌、神経膠腫、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸癌、口腔癌、膠芽細胞腫、皮膚癌、または黒色腫である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１のうちの一方または両方と特異的に結合する抗体に関する。本発明はさらに、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する二重特異性抗体に関する。本発明はまた、関連分子、たとえばそのような抗体または二重特異性抗体をコードしている核酸、組成物、関連方法、たとえばそのような抗体および二重特異性抗体を産生および精製する方法、ならびに診断剤および治療剤におけるその使用にも関する。
【背景技術】
【0002】
タンパク質ＣＤ４７は様々な腫瘍型（たとえば、卵巣、肺、頭頸部）上で過剰発現されており、患者における低い生存率に相関している。ＣＤ４７は、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの骨髄細胞上で発現されてその活性を抑制する先天性免疫チェックポイントである、そのリガンドＳＩＲＰαと結合する。これは、ＣＤ４７を過剰発現する腫瘍細胞が先天性免疫監視を回避することを可能にする。ＣＤ４７はまた、末梢血中の赤血球（ＲＢＣ）および血小板などの健康な細胞上でも発現され、モノクローナル抗体によるＣＤ４７－ＳＩＲＰαの相互作用の遮断がこれらの細胞を枯渇させることが示されており、一部の状況においては用量規制毒性をもたらしている。
【0003】
腫瘍または抗原提示細胞上のＰＤ－Ｌ１とＴ細胞上のＰＤ－１との結合を遮断する抗ＰＤ－Ｌ１免疫療法は、複数種の癌（たとえば、ＮＳＣＬＣ、ＲＣＣ、ＨＣＣ、ＨＮＳＣＣ、リンパ腫、メルケル細胞癌）を有する患者において結果を出している。しかし、これらの抗ＰＤ－Ｌ１感受性の腫瘍型においてさえ、多くの患者は処置に応答しない。上記列挙した腫瘍型に加えて、低い抗ＰＤ－（Ｌ）１感度を有する多くの他の腫瘍型もＣＤ４７が濃縮されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
したがって、現在の抗ＣＤ４７抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療剤の様々な制限を考慮すると、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１を標的とする改善された分子が必要である。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本明細書中では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体、ならびにＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する二重特異性抗体を提供する。また、関連核酸、組成物、ならびに抗体を作製および使用する方法も本明細書中に提供する。
【0006】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号１、３、７、８、または９に示すＶＨ配列のＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１）、ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２）、およびＶＨ相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ＶＨは、（ｉ）配列番号１３、１４、１５、２２、２３、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３７、３８、または３９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６、１７、２８、２９、３４、または３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８、２４、３０、３６、または４０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。抗体は、配列番号２または６に示すＶＬ配列のＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１）、ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２）、およびＶＬ相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含んでいてもよい。ＶＬは、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。
【0007】
ＣＤ４７と特異的に結合する抗体に関与する、本明細書中で提供する一部の実施形態では、ＶＨは、（ｉ）配列番号１３、１４、または１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６または１７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１、３、７、８、または９のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは配列番号１または３のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ｉ）ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列の変異体を含み、変異体配列は、配列番号１と比較して１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むこと、および、ｉｉ）ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列の変異体を含み、変異体配列は、配列番号２と比較して１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むことの一方または両方であってもよい。置換は、保存的アミノ酸置換であってもよい。置換は、ＣＤＲ領域内でない残基中のものであってもよい。
【0008】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【0009】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する単離抗体を本明細書中で提供し、抗体は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＳＰＬＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＲＳＳＤＶＧＷＹＶＧＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）のＶＨ配列またはその変異体を含むＶＨを含み、配列は、配列番号７の位置２７、３０、３１、５０、５２、５３、５４、５５、９９、１００、１０４、１０５、１０８、１１３、または１１４のうちの１つまたは複数に変異アミノ酸を有する。抗体は、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬをさらに含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【0010】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する単離抗体を本明細書中で提供し、抗体は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＳＰＬＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＲＳＳＤＶＧＷＹＶＧＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）のＶＨ配列またはその変異体を含むＶＨを含み、ａ）位置２７のアミノ酸はＧである（Ｙ２７Ｇ）、ｂ）位置３０のアミノ酸はＳである（Ｔ３０Ｓ）、ｃ）位置３１のアミノ酸はＳである（Ｎ３１Ｓ）、ｄ）位置５０のアミノ酸はＲである（Ｇ５０Ｒ）、ｅ）位置５２のアミノ酸はＩである（Ｓ５２Ｉ）、ｆ）位置５３のアミノ酸はＧである（Ｐ５３Ｇ）、ｇ）位置５４のアミノ酸はＩである（Ｌ５４Ｉ）、ｈ）位置５５のアミノ酸はＬである（Ｆ５５Ｌ）、ｉ）位置９９のアミノ酸はＥである（Ｄ９９Ｅ）、ｊ）位置１００のアミノ酸はＡ、Ｓ、Ｑ、もしくはＶである（Ｇ１００Ａ、Ｇ１００Ｓ、Ｇ１００Ｑ、もしくはＧ１００Ｖ）、ｋ）位置１０５のアミノ酸はＥである（Ｄ１０５Ｅ）、ｌ）位置１０８のアミノ酸はＹ、Ｆ、もしくはＡである（Ｗ１０８Ｙ、Ｗ１０８Ｆ、もしくはＷ１０８Ａ）、ｍ）位置１１３のアミノ酸はＬもしくはＩである（Ｍ１１３ＬもしくはＭ１１３Ｉ）、ｎ）位置１１４のアミノ酸はＥである（Ｄ１１４Ｅ）、ｏ）位置５３のアミノ酸はＧであり、位置１０５のアミノ酸はＥである、ｐ）位置５３のアミノ酸はＧであり、位置１１４のアミノ酸はＥである、ｑ）位置５４のアミノ酸はＡであり、位置１１４のアミノ酸はＥである、ｒ）位置５４のアミノ酸はＡであり、位置１０２のアミノ酸はＡである、ｓ）位置５４のアミノ酸はＡであり、位置１０４のアミノ酸はＥである、ｔ）位置２７のアミノ酸はＧであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡである、ｕ）位置２７のアミノ酸はＧであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１１３のアミノ酸はＬである、ｖ）位置２７のアミノ酸はＧであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１１３のアミノ酸はＩである、ｗ）位置３０のアミノ酸はＳであり、位置３１のアミノ酸はＳであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡである、ｘ）位置２７のアミノ酸はＧであり、位置３１のアミノ酸はＳであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１１３のアミノ酸はＬである、ｙ）位置３０のアミノ酸はＳであり、位置３１のアミノ酸はＳであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１１３のアミノ酸はＬである、ｚ）位置３０のアミノ酸はＳであり、位置３１のアミノ酸はＳであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１１３のアミノ酸はＩである、またはａａ）位置３０のアミノ酸はＳであり、位置３１のアミノ酸はＳであり、位置５４のアミノ酸はＩであり、位置１００のアミノ酸はＡであり、位置１０８のアミノ酸はＹであり、位置１１３のアミノ酸はＬである。抗体は、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬをさらに含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６の配列を含んでいてもよい。
【0011】
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号４、５、１０、１１、または１２のアミノ酸を有するＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む。ＶＨは、（ｉ）配列番号４１、４２、４３、４７、４８、または４９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４、４５、５０、５１、５８、または５９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６、５２、５６、５７、または６０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。抗体は、配列番号２または６に示すＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含んでいてもよい。ＶＬは、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。
【0012】
ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体に関与する、本明細書中で提供する一部の実施形態では、ＶＨは、（ｉ）配列番号４１、４２、または４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４または４５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号４、５、１０、１１、または１２のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは配列番号４のアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ｉ）ＶＨは、配列番号４のアミノ酸配列の変異体を含み、変異体配列は、配列番号４と比較して１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むこと、および、ｉｉ）ＶＬは、配列番号２のアミノ酸配列の変異体を含み、変異体配列は、配列番号２と比較して１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むことの一方または両方であってもよい。置換は、保存的アミノ酸置換であってもよい。置換は、ＣＤＲ領域内でない残基中のものであってもよい。
【0013】
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【0014】
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する単離抗体を本明細書中で提供し、抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＫＴＫＡＤＧＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＤＰＧＳＹＷＤＳＶＹＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）のＶＨ配列またはその変異体を含むＶＨを含み、配列は、配列番号１１の位置５６、５７、６１、６２、１０３、１０４、１０５、１０７、１０９、１１２、１１３のうちの１つまたは複数に変異アミノ酸を有する。抗体は、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬをさらに含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【0015】
一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する単離抗体を本明細書中で提供し、抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＫＴＫＡＤＧＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＤＰＧＳＹＷＤＳＶＹＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）のＶＨ配列またはその変異体を含むＶＨを含み、ａ）位置５６のアミノ酸はＥであり（Ｄ５６Ｅ）、位置５７のアミノ酸はＥもしくはＡである（Ｇ５７ＥもしくはＧ５７Ａ）、ｂ）位置６１のアミノ酸はＱ、Ｅ、Ａ、もしくはＳであり（Ｄ６１Ｑ、Ｄ６１Ｅ、Ｄ６１Ａ、もしくはＤ６１Ｓ）、位置６２のアミノ酸はＥ、Ｓ、Ｑ、Ａである（Ｙ６２Ｅ、Ｙ６２Ｓ、Ｙ６２Ｑ、もしくはＹ６２Ａ）、ｃ）位置１０３のアミノ酸はＩである（Ｇ１０３Ｉ）、ｄ）位置１０４のアミノ酸はＡ、Ｈ、Ｙ、Ｅ、もしくはＩである（Ｓ１０４Ａ、Ｓ１０４Ｈ、Ｓ１０４Ｙ、Ｓ１０４Ｅ、もしくはＳ１０４Ｉ）、ｅ）位置１０５のアミノ酸はＨである（Ｙ１０５Ｈ）、ｆ）位置１０７のアミノ酸はＳ、Ｌ、もしくはＹである（Ｄ１０７Ｓ、Ｄ１０７Ｌ、もしくはＤ１０７Ｙ）、ｇ）位置１０９のアミノ酸はＳである（Ｖ１０９Ｓ）、ｈ）位置１１２のアミノ酸はＡもしくはＳである（Ｇ１１２ＡもしくはＧ１１２Ｓ）、またはｉ）位置１１３のアミノ酸はＬである（Ｍ１１３Ｌ）。抗体は、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬをさらに含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号２または６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【0016】
本明細書中で提供する抗体の一部の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド安定化Ｆｖ（ｄｓＦｖ）断片、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、モノクローナル抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、多特異性抗体、二重特異性ヘテロ二量体ジアボディ、二重特異性ヘテロ二量体ＩｇＧ、ポリクローナル抗体、標識抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、およびその断片からなる群から選択される。抗体は、ヒトまたはヒト化ＶＨフレームワークおよびヒトまたはヒト化ＶＬフレームワークを含んでいてもよい。抗体は二重特異性抗体であってもよい。
【0017】
本明細書中で提供する二重特異性抗体の一部の実施形態では、二重特異性抗体はＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する。抗体は、第１の抗原結合部分および第２の抗原結合部分を含んでいてもよく、第１の抗原結合部分はＣＤ４７と特異的に結合し、第２の抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と特異的に結合し、第１の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、第２の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、第１の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列および第２の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列は同じアミノ酸配列を有する。第１の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列および第２の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列は、配列番号２に示すアミノ酸配列、または配列番号２と比較して１、２、３、４、５、６、７、もしくは８個のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでいてもよい。第１の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列および第２の抗原結合部分のＶＬのアミノ酸配列は、配列番号６に示すアミノ酸配列、または配列番号６と比較して１、２、３、４、５、６、７、もしくは８個のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでいてもよい。置換は、保存的アミノ酸置換であってもよい。置換は、ＣＤＲ領域内でない残基中のものであってもよい。
【0018】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、第１の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、第２の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、以下のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてである：ａ）第１の抗原結合部分ＶＨは、配列番号１、３、７、８、または９に示すＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含む、ｂ）第１の抗原結合部分ＶＬは、配列番号２に示すＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む、ｃ）第２の抗原結合部分ＶＨは、配列番号４、５、１０、１１、または１２に示すＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびにｄ）第２の抗原結合部分ＶＬは、配列番号２または６に示すＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含む。以下のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてであってもよい：ａ）第１の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号１３、１４、１５、２２、２３、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３７、３８、または３９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６、１７、２８、２９、３４、または３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８、２４、３０、３６、または４０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ｂ）第１の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、ｃ）第２の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号４１、４２、４３、４７、４８、または４９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４、４５、５０、５１、５８、または５９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６、５２、５６、５７、または６０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびにｄ）第２の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９または５３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０または５４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１または５５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。以下のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてであってもよい：ａ）第１の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号１３、１４、または１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６または１７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ｂ）第１の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、ｃ）第２の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号４１、４２、または４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４または４５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む、ならびにｄ）第２の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。以下のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてであってもよい：ａ）第１の抗原結合部分ＶＨは配列番号１または３のアミノ酸配列を含む、ｂ）第１の抗原結合部分ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含む、ｃ）第２の抗原結合部分ＶＨは配列番号４のアミノ酸配列を含む、およびｄ）第２の抗原結合部分ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【0019】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＨ、配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＬ、配列番号４に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＨ、および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＬを含む。
【0020】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、抗体は、配列番号３に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＨ、配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第１の抗原結合部分ＶＬ、配列番号４に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＨ、および配列番号２に示すアミノ酸配列を含む第２の抗原結合部分ＶＬを含む。
【0021】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む単離抗体を本明細書中で提供し、第１の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、第２の抗原結合部分はＶＨおよびＶＬを含み、ａ）第１の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号１３、１４、または１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６または１７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、ｂ）第２の抗原結合部分ＶＨは、（ｉ）配列番号４１、４２、または４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４または４５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。第１の抗原結合部分ＶＨは配列番号１に示すアミノ酸配列を含んでいてもよく、第２の抗原結合部分ＶＨは配列番号４に示すアミノ酸配列を含んでいてもよい。ａ）第１の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてよく、ｂ）第２の抗原結合部分ＶＬは、（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含んでいてよい。第１の抗原結合部分ＶＬは配列番号２に示すアミノ酸配列を含んでいてよく、第２の抗原結合部分ＶＬは配列番号２に示すアミノ酸配列を含んでいてよい。
【0022】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む単離二重特異性抗体を本明細書中で提供し、第１の抗原結合部分は、本明細書中で提供する任意の抗ＣＤ４７抗体のＶＨおよびＶＬを含み、第２の抗原結合部分は、本明細書中で提供する任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のＶＨおよびＶＬを含む。
【0023】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する二重特異性抗体において、二重特異性抗体はＦｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインであってもよい。Ｆｃドメインの第１のＦｃ鎖および第２のＦｃ鎖は、第１のＦｃ鎖と第２のＦｃ鎖の会合を促進する１つまたは複数の修飾を含有してもよい。第１のＦｃ鎖および第２のＦｃ鎖はそれぞれ、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含んでノブまたはホールを形成してもよく、Ｆｃ鎖のうちの一方がノブを含み、他方のＦｃ鎖がホールを含む。ノブを含むＦｃ鎖は、突然変異Ｙ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗのうちの一方または両方を含んでいてもよく、ホールを含むＦｃ鎖は、突然変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、および／またはＹ４０７Ｖ（付番はＥＵインデックスに従う）のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む。
【0024】
一部の実施形態では、配列番号６１または６３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７重鎖および配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１重鎖を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供する。抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７軽鎖および配列番号６２のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１軽鎖をさらに含んでいてもよい。抗ＣＤ４７軽鎖および抗ＰＤ－Ｌ１軽鎖は同じアミノ酸配列を有していてよい。
【0025】
一部の実施形態では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、抗体は、第１の抗体重鎖、第２の抗体重鎖、第１の抗体軽鎖、および第２の抗体軽鎖を含み、第１の抗体重鎖は配列番号６１のアミノ酸配列を含み、第２の抗体重鎖は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、第１の抗体軽鎖および第２の抗体軽鎖はどちらも配列番号６２のアミノ酸配列を含む。
【0026】
一部の実施形態では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、抗体は、第１の抗体重鎖、第２の抗体重鎖、第１の抗体軽鎖、および第２の抗体軽鎖を含み、第１の抗体重鎖は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、第２の抗体重鎖は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、第１の抗体軽鎖および第２の抗体軽鎖はどちらも配列番号６２のアミノ酸配列を含む。
【0027】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体において、抗体中の１つまたは複数の重鎖はＣ末端リシンを欠き得る。たとえば、一部の実施形態では、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体において、抗体中の１つまたは複数の重鎖はＣ末端リシンを欠き得る。たとえば、配列番号６１、６３、または６４のアミノ酸配列を含む本明細書中で提供する二重特異性抗体において、配列番号６１、６３、または６４のアミノ酸配列中のＣ末端リシンを欠く抗体も本明細書中に含まれる。
【0028】
本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体可変領域のＰＤ－Ｌ１に対する親和性は、抗ＣＤ４７抗体可変領域のＣＤ４７に対する親和性よりも高い。抗ＰＤ－Ｌ１抗体可変領域のＰＤ－Ｌ１に対する親和性は、抗ＣＤ４７抗体可変領域のＣＤ４７に対する親和性よりも１００倍～１０００倍または１０００倍～５０００倍高くてもよい。ｉ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体可変領域のＫＤは０．１～１ｎＭもしくは０．０５～５ｎＭであること、および／またはｉｉ）抗ＣＤ４７抗体可変領域のＫＤは１０～５００ｎＭ、１０～１０００ｎＭ、もしくは５～１０００ｎＭであることの一方または両方であってもよい。
【0029】
本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の一部の実施形態では、抗体はヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。
【0030】
一部の実施形態では、第１の抗体重鎖、第２の抗体重鎖、第１の抗体軽鎖、および第２の抗体軽鎖を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、以下のうちの１つ、２つ、または３つすべてである：ａ）第１の抗体重鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有すること、ｂ）第２の抗体重鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有すること、ならびにｃ）第１の抗体軽鎖および第２の抗体軽鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有すること。
【0031】
一部の実施形態では、治療上有効な量の本明細書中で提供する抗体（たとえば単一特異性または二重特異性）と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を本明細書中で提供する。
【0032】
一部の実施形態では、本明細書中で提供するアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、またはベクターもしくは組換えポリヌクレオチドを含む宿主細胞を本明細書中で提供する。一部の実施形態では、配列番号６７～７４のうちの任意の１つのヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを本明細書中で提供する。
【0033】
一部の実施形態では、以下のうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む宿主細胞を本明細書中で提供する：ａ）配列番号１または３のアミノ酸配列を有するＶＨをコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド、ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨをコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド、およびｃ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬをコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド。宿主細胞は、以下のうちの１つ、２つ、または３つすべてを含んでいてもよい：ａ）配列番号６１または６３のアミノ酸配列を有する重鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド、ｂ）配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド、およびｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチド。宿主細胞は、本明細書中で提供する抗体を組換え産生してもよい。宿主細胞は、細菌、哺乳動物、酵母、または昆虫の細胞系であってもよい。哺乳動物細胞系はＣＨＯ細胞系であってもよい。
【0034】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する宿主細胞を、本明細書中で提供する抗体または二重特異性抗体の産生をもたらす条件下で培養することと、産生された抗体または二重特異性抗体を精製することとを含む、抗体または二重特異性抗体を産生させる方法を本明細書中で提供する。
【0035】
また、医薬品の製造における、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、医薬組成物、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞の使用も本明細書中で提供する。
【0036】
また、医薬品として使用するための、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物の使用も本明細書中で提供する。抗体、二重特異性抗体、医薬組成物、または医薬品は、癌の処置において使用するためのものであってもよい。
【0037】
一部の実施形態では、対象に、有効量の本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物を投与することを含む、それを必要としている対象において疾患を処置する方法を本明細書中で提供する。疾患を処置する方法は、免疫応答または機能をモジュレートするまたは刺激することを含んでいてもよい。適応および自然免疫応答または機能をどちらもモジュレートしても刺激してもよい。疾患は感染症であってもよい。疾患は癌であってもよい。方法は、第２の治療剤を対象に投与することをさらに含んでいてもよい。第２の治療剤は抗癌剤であってもよい。抗癌剤は、ＴＬＲ３作用剤、ＴＬＲ７／８作用剤、もしくはＴＬＲ９作用剤などのＴＬＲ作用剤、ＣＤＫ４／６もしくはＣＤＫ２／４／６阻害剤などのＣＤＫ阻害剤、またはオラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、もしくはタラゾパリブなどのＰＡＲＰ阻害剤であってもよい。ＴＬＲ９作用剤は、ＣｐＧ２４５５５、ＣｐＧ１０１０３、ＣｐＧ７９０９（ＰＦ－３５１２６７６）、ＣｐＧ１０１８であってもよい。ＣＤＫ阻害剤は、ＰＦ－０６８７３６００またはパルボシクリブであってもよい。
【0038】
一部の実施形態では、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体＋ＴＬＲ作用剤（たとえばＴＬＲ９作用剤）の組合せは、いずれかの薬剤の個々の抗癌活性よりも高い抗癌活性を有する。一部の実施形態では、組合せは相乗的な抗癌活性を有する。
【0039】
一部の実施形態では、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体＋ＣＤＫ阻害剤（たとえばＣＤＫ２／４／６阻害剤）の組合せは、いずれかの薬剤の個々の抗癌活性よりも高い抗癌活性を有する。一部の実施形態では、組合せは相乗的な抗癌活性を有する。
【0040】
一部の実施形態では、対象に、有効量の本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物を投与することを含む、対象において免疫応答を増強させる方法を本明細書中で提供する。
【0041】
一部の実施形態では、対象に、有効量の本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物を投与することを含む、対象において癌細胞の成長を阻害するまたは低下させる方法を本明細書中で提供する。一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物は、癌細胞の成長を、抗体または二重特異性抗体の非存在下における癌細胞の成長よりも、少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、または少なくとも１０％阻害するまたは低下させる。
【0042】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体または二重特異性抗体は、ヒトの赤血球および／または血小板に対してこれが有する親和性の、それぞれ少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、または少なくとも１０％である親和性で、カニクイザルの赤血球および／または血小板と結合する。
【0043】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する処置方法において使用するための、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物を本明細書中で提供する。一部の実施形態では、癌の処置において使用するためおよび／または対象において免疫応答を増強させるための、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物を本明細書中で提供する。一部の実施形態では、本明細書中で提供する処置方法において使用するための医薬品の製造における、本明細書中で提供する抗体、二重特異性抗体、または医薬組成物の使用を本明細書中で提供する。一部の実施形態では、医薬品は、癌の処置において使用するためおよび／または対象において免疫応答を増強させるためのものである。
【0044】
癌に関与する、本明細書中で提供する一部の実施形態では、癌は、胃癌、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、頭頸部癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝臓癌、胃癌、甲状腺癌、肺癌（たとえば非小細胞肺癌を含む）、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、食道癌、膵癌、神経膠腫、膠芽細胞腫、脳腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、腎臓癌、膀胱癌、尿路上皮癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、または黒色腫である。
【図面の簡単な説明】
【0045】
【図1】図１は、ヒトＮＣＩ－Ｈ２９２腫瘍細胞上のマクロファージの抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性に対するＢｓＡｂ１（黒丸）、抗ＣＤ４７抗体Ｐ０１Ａ１１＿７５（黒菱形）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ｐ０６Ｂ０５＿２４５（白四角）、または対照抗体（白丸）の効果を試験する実験からのデータを示す図である。Ｙ軸は、Ｘ軸上に示すそれぞれの抗体の濃度で貪食された腫瘍細胞の％を示す。
【図2-1】図２Ａは、ＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおける、ＢｓＡｂ３および他の関連抗体の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図２Ａに示す実験では、ＣＴ２６腫瘍を保有するマウスを、対照抗体（黒丸）、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白四角）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（黒三角形、点を実線でつないだ）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体と合わせた抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白逆三角形）、ＢｓＡｂ３（黒菱形、点を破線でつないだ）、またはＦｃヌルＢｓＡｂ３（白丸）で処置した。Ｘ軸は処置後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。図２Ｂは、ＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおける、ＢｓＡｂ３および他の関連抗体の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図２Ｂに示す実験では、ＣＴ２６腫瘍を保有するマウスを、対照抗体（黒丸）、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白四角）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（黒三角形、点を実線でつないだ）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体と合わせた抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白逆三角形）、ＢｓＡｂ３（黒菱形、点を破線でつないだ）、またはＦｃヌルＢｓＡｂ３（白丸）で処置した。Ｘ軸は処置後の日数を示し、Ｙ軸は体重の百分率を示す。
【図2-2】図２Ｃは、ＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおける、ＢｓＡｂ３および他の関連抗体の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図２Ｃに示す実験では、ＣＴ２６腫瘍を保有するマウスを、対照抗体（黒丸）、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白四角）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（黒三角形、点を実線でつないだ）、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体と合わせた抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白逆三角形）、ＢｓＡｂ３（黒菱形、点を破線でつないだ）、またはＦｃヌルＢｓＡｂ３（白丸）で処置した。Ｘ軸は処置後の日数を示し、Ｙ軸はパーセント生存を示す。
【図3】図３Ａは、ＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおける、様々な用量のＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図３Ａに示す実験では、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（白四角）、２０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（黒三角形）、または４０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（白丸）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。図３Ｂは、ＭＣ３８マウス腫瘍モデルにおける、様々な用量のＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図３Ｂに示す実験では、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（白四角）、２０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（黒三角形）、または４０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（白丸）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は体重の百分率を示す。
【図4】図４Ａは、Ｂ１６Ｆ１０マウス腫瘍モデルにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図４Ａに示す実験では、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を保有するマウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）または２０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（黒三角形）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。図４Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０マウス腫瘍モデルにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図４Ｂに示す実験では、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を保有するマウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）または２０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３（黒三角形）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は体重の百分率を示す。
【図5-1】図５Ａは、ＢｓＡｂ３を様々なクラスの免疫細胞を枯渇させるまたは阻害する様々な抗体と同時投与した場合に、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図５Ａに示す実験では、マウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、ＢｓＡｂ３（白丸）、ＢｓＡｂ３＋抗ＣＤ８ ｍＡｂ（黒逆三角形）、ＢｓＡｂ３＋抗ＣＤ４ ｍＡｂ（黒三角形）、またはＢｓＡｂ３＋抗ＣＤ４ ｍＡｂ＋抗ＣＤ８ ｍＡｂ（白菱形）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。図５Ｂは、ＢｓＡｂ３を様々なクラスの免疫細胞を枯渇させるまたは阻害する様々な抗体と同時投与した場合に、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図５Ｂに示す実験では、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＢＡＴＦ３－／－マウスを、対照アイソタイプ抗体またはＢｓＡｂ３で処置した。図５Ｂは、対照抗体で処置した野生型マウス（黒丸）、ＢｓＡｂ３で処置した野生型マウス（白丸）、対照抗体で処置したＢＡＴＦ３－／－マウス（白四角）、およびＢｓＡｂ３で処置したＢＡＴＦ３－／－マウス（黒三角形）からのデータを示す。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。
【図5-2】図５Ｃは、ＢｓＡｂ３を様々なクラスの免疫細胞を枯渇させるまたは阻害する様々な抗体と同時投与した場合に、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図５Ｃに示す実験では、マウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、ＢｓＡｂ３（白丸）、またはＢｓＡｂ３＋抗ＣＳＦ１Ｒ ｍＡｂ（黒逆三角形）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。図５Ｄは、ＢｓＡｂ３を様々なクラスの免疫細胞を枯渇させるまたは阻害する様々な抗体と同時投与した場合に、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスにおける、ＢｓＡｂ３の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。図５Ｄに示す実験では、マウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、ＢｓＡｂ３（白丸）、またはＢｓＡｂ３＋抗ＮＫ１．１ ｍＡｂ（黒逆三角形）で処置した。Ｘ軸は腫瘍接種後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。
【図6】図６は、ＮＳＧ免疫不全マウスにおける、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞に対するＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の抗腫瘍有効性を試験する実験からのデータを示す図である。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍を保有するマウスを、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、１ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（黒三角形）、５ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（白菱形）、１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（白三角形）、１ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（白丸）、５ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（黒菱形）、または１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（黒四角）で処置した。Ｘ軸は処置後の日数を示し、Ｙ軸は腫瘍体積をｍｍ３で示す。
【発明を実施するための形態】
【0046】
本明細書中では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体、ならびにＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する二重特異性抗体を提供する。共通軽鎖を共有する二重特異性抗体を、本明細書中でさらに提供する。また、関連核酸、組成物、ならびに抗体を作製および使用する方法も本明細書中に提供する。
【0047】
一般技法
本発明の実施には、別段に指定しない限りは、当分野の技術範囲内にある、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣用技術を用いる。そのような技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献中、ならびに必要に応じて上記参考文献のその後の版および対応するウェブサイトに、詳述されている。
本発明の実施には、別段に指定しない限りは、当分野の技術範囲内にある、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の慣用技術を用いる。そのような技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献中、ならびに必要に応じて上記参考文献のその後の版および対応するウェブサイトに、詳述されている。
【0048】
本発明を以下、以下の定義および実施例を参考として使用して詳述する。特許および刊行物中に開示されるすべての配列を含めた、本明細書中に引用するすべての特許および刊行物は、参考として明確に組み込まれている。
【0049】
定義
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての専門用語、表記法、および他の科学用語または用語法は、本発明が属する分野の技術者によって一般的に理解される意味を有することを意図する。たとえば、本明細書中で「Ａおよび／またはＢ」などの語句中で使用される用語「および／または」は、ＡおよびＢ、ＡまたはＢの両方、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句中で使用される用語「および／または」は、以下の実施形態のそれぞれを包含することを意図する：Ａ、Ｂ、およびＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、ＡおよびＣ、ＡおよびＢ、ＢおよびＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、ならびにＣ（単独）。一部の事例では、一般的に理解される意味を持つ用語は、明瞭性および／または即時参照のために本明細書中に定義されており、そのような定義を本明細書中に包含することは、必ずしも当分野において一般的に理解されているものとの実質的な差異を表すと解釈されるべきでない。
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての専門用語、表記法、および他の科学用語または用語法は、本発明が属する分野の技術者によって一般的に理解される意味を有することを意図する。たとえば、本明細書中で「Ａおよび／またはＢ」などの語句中で使用される用語「および／または」は、ＡおよびＢ、ＡまたはＢの両方、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句中で使用される用語「および／または」は、以下の実施形態のそれぞれを包含することを意図する：Ａ、Ｂ、およびＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、ＡおよびＣ、ＡおよびＢ、ＢおよびＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、ならびにＣ（単独）。一部の事例では、一般的に理解される意味を持つ用語は、明瞭性および／または即時参照のために本明細書中に定義されており、そのような定義を本明細書中に包含することは、必ずしも当分野において一般的に理解されているものとの実質的な差異を表すと解釈されるべきでない。
【0050】
本明細書中で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容により明確にそうでないと指示されない限りは、その対応する複数の指示対象を含む。
【0051】
本明細書中で使用する数値範囲は、範囲を定義する数値を包括する。
【0052】
本明細書中における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体、およびそのパラメータについて記述した数値を１０％も下回るまたは上回る場合がある値またはパラメータを対象とする実施形態を含む（かつそれを説明する）。たとえば、「約５ｍｇ／ｋｇ」の用量は５ｍｇ／ｋｇを含み、４．５ｍｇ／ｋｇ～５．５ｍｇ／ｋｇの任意の値も含む。用語「約」を期間（年、月、週、日など）のコンテキスト内で使用する場合、用語「約」とは、その期間±次の下位期間の１定量（たとえば、約１年間とは１１～１３カ月間を意味し、約６カ月間とは６カ月±１週間を意味し、約１週間とは６～８日間を意味するなど）または示した値の１０パーセント以内の、いずれか長い方を意味する。
【0053】
本明細書中で使用するように、それぞれ、核酸は左から右に５’から３’の方向に記載され、アミノ酸配列は左から右にアミノからカルボキシの配向で記載される。従事者は、当分野の定義および用語のために特にＳａｍｂｒｏｏｋら、１９８９およびＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭら、１９９３を参照されたい。記載した具体的な方法論、プロトコル、および試薬は変動し得るため、本発明はそれらに限定されないことを理解されたい。
【0054】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は本明細書中で互換性があるように使用され、任意の長さのアミノ酸の鎖を指す。たとえば、鎖は比較的短いもの（たとえば１０～１００個のアミノ酸）またはより長いものであり得る。鎖は、直鎖状もしくは分枝状であってよく、修飾アミノ酸を含んでよく、および／または非アミノ酸によって中断されてよい。この用語は、天然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸鎖、たとえば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識構成成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは修飾も包含する。また、この定義内には、たとえば、アミノ酸の１つまたは複数の類似体（たとえば非天然アミノ酸などを含む）および当分野で知られている他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。ポリペプチドは単鎖または会合した鎖として生じることができることが理解されよう。
【0055】
「抗体」とは、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的と、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を通じて、特異的結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書中で使用するこの用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、別段に指定しない限りは、特異的結合についてインタクトな抗体と競合するその任意の抗原結合部分、抗原結合部分を含む融合タンパク質、および、抗原認識部位を含む、免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された立体配置も包含する。抗原結合部分としては、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ、たとえばサメおよびラクダ抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む断片、単鎖可変断片抗体（ｓｃＦｖ）、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体、ジアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、およびビス－ｓｃＦｖ、ならびに、ポリペプチドに特異的抗原結合を与えるために十分である免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが挙げられる。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＭなどの任意のクラス（またはそのサブクラス）の抗体を含み、抗体は任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを様々なクラスへと割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２へとさらに分け得る。免疫グロブリンの様々なクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの様々なクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。
【0056】
抗体の「可変領域」とは、単独または組み合わせたもののどちらかの、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。当分野で知られているように、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、３つの超可変領域としても知られる相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。対象可変領域の変異体、特にＣＤＲ領域外（すなわちフレームワーク領域中）のアミノ酸残基に置換を有するものが所望される場合、対象可変領域を、対象可変領域と同じカノニカルクラスのＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することによって、適切なアミノ酸置換、好ましくは保存的アミノ酸置換を同定することができる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、１９６（４）：９０１～９１７、１９８７）。
【0057】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲの決定的な描写および抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解像することおよび／または抗体－リガンド複合体の構造を解像することによって達成される。ある特定の実施形態では、これは、Ｘ線結晶構造解析などの当業者に知られている様々な技法のうちの任意のものによって達成することができる。ある特定の実施形態では、様々な分析方法を用いてＣＤＲ領域を同定または近似することができる。そのような方法の例としては、それだけには限定されないが、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、接触定義、およびコンホメーション定義が挙げられる。Ｋａｂａｔ定義は、抗体中の残基に付番するための標準であり、典型的にはＣＤＲ領域を同定するために使用される。たとえばＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、２０００、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２８：２１４～８を参照されたい。Ｃｈｏｔｈｉａ定義はＫａｂａｔ定義と似ているが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は特定の構造的ループ領域の位置を考慮に入れる。たとえば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１～１７、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７～８３を参照されたい。ＡｂＭ定義は、抗体構造をモデリングする、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐによって作成されたコンピュータプログラムの統合スイートを使用する。たとえば、Ｍａｒｔｉｎら、１９８９、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ（ＵＳＡ）、８６：９２６８～９２７２、「ＡｂＭ（商標），Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、英国Ｏｘｆｏｒｄ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照されたい。ＡｂＭ定義は、知識データベースおよびＳａｍｕｄｒａｌａら、１９９９、「Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ補遺、３：１９４～１９８によって記載されているものなどのアブイニシオ方法の組合せを使用して、一次配列から抗体の三次構造をモデリングする。接触定義は、利用可能な複合体結晶構造分析に基づく。たとえばＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、５：７３２～４５を参照されたい。本明細書中でＣＤＲの「コンホメーション定義」と呼ぶ別の手法では、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピーの寄与を行う残基として同定され得る。たとえばＭａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６～１１６６を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記手法のうちの１つに厳密に従わない場合があるが、それにもかかわらずＫａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するであろう。ただし、これらは、特定の残基または残基群が抗原結合に有意に影響を与えないという予測または実験的発見に鑑みて、短縮または延長されている場合がある。本明細書中で使用するＣＤＲとは、手法の組合せを含めた、当分野で知られている任意の手法によって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書中で使用する方法は、これらの手法のうちの任意ものに従って定義されたＣＤＲを利用し得る。複数のＣＤＲを含有する任意の所定の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、延長、ＡｂＭ、接触、および／またはコンホメーション定義のうちの任意のものに従って定義し得る。
【0058】
本明細書中で使用する用語「Ｆｃ鎖」とは抗体重鎖のＣ末端領域を指し、アイソタイプに応じて２～３個の定常ドメインを含む。本明細書中で使用するＦｃ鎖は、ネイティブまたは変異Ｆｃ配列を含み得る。本明細書中で別段に指定しない限りは、Ｆｃ鎖または定常領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州Ｂｅｔｈｅｓｄａ、１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ付番システムに従うものである。
【0059】
本明細書中で使用する用語「Ｆｃドメイン」とは、２本のＦｃ鎖を含む抗体の領域を指す。たとえば、標準のＩｇＧ形式では、抗体は２本の重鎖を有しており、それらはどちらも１本のＦｃ鎖を有する。合わせて、２本のＦｃ鎖は本明細書中で「Ｆｃドメイン」と呼ばれる。
【0060】
「野生型Ｆｃ鎖」は、自然で見つかるＦｃ鎖のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。「野生型」ヒトＩｇＧ Ｆｃとは、ヒト集団内で天然に生じるアミノ酸の配列を意味する。もちろん、個体間で若干変動し得ることと同様に、１つまたは複数の変更を野生型配列へ行っても、依然として本発明の範囲内にとどまり得る。
【0061】
「変異Ｆｃ鎖」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾が理由で野生型Ｆｃ鎖のものとは異なるが、それでも野生型Ｆｃ鎖の少なくとも１つのエフェクター機能を保持しているアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、変異Ｆｃ鎖は、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する、たとえば、野生型Ｆｃ鎖中に約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書中における変異Ｆｃ鎖は、好ましくは野生型Ｆｃ鎖と少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくはそれと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくはそれと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、Ｆｃ鎖は野生型ヒンジ領域の一部または全部を（一般的にそのＮ末端に）含む。一部の実施形態では、Ｆｃポリペプチドは機能的または野生型ヒンジ領域を含まない。
【0062】
本明細書中で使用する用語「ヒンジ領域」は、たとえば、Ｊａｎｅｗａｙら、ＩｍｍｕｎｏＢｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．、ＮＹ（第４版、１９９９）、Ｂｌｏｏｍら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６：４０７～４１５、１９９７、およびＨｕｍｐｈｒｅｙｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０９：１９３～２０２、１９９７に例示されている、当分野で知られている意味を含む。
【0063】
本明細書中で使用する用語「連結した」、「融合した」、および「融合」とは、互換性があるように使用され、さらに２つの要素または構成成分を、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含めた任意の手段によって一緒に合わせることを指す。
【0064】
本明細書中で使用する用語「共有連結した」とは、指定した部分が、互いに直接共有結合しているか、連結ペプチドもしくは部分などの介在部分もしくは複数の部分を通じて互いに間接的に共有的に一緒になっているかどちらかであることを意味する。
【0065】
本明細書中で使用する用語「遺伝子融合した」および「遺伝子融合」とは、２つ以上のタンパク質、ポリペプチド、またはその断片の、その個々のペプチド主鎖を介した、これらのタンパク質、ポリペプチド、または断片をコードしている単一のポリヌクレオチド分子の遺伝子発現を通じた、同一直鎖状の共有連結または付着を指す。そのような遺伝子融合は、単一の連続した遺伝子配列の発現をもたらす。
【0066】
本明細書中で使用する用語「修飾」とは、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、および／もしくは欠失、タンパク質と化学的に連結した部分への変更、またはタンパク質、たとえば抗体の機能の改変を指す。たとえば、修飾は、抗体の機能の変更、またはタンパク質に付着した炭水化物構造の変更であり得る。本明細書中で使用する「アミノ酸修飾」とは、抗体中の１つまたは複数のアミノ酸残基の突然変異（置換）、挿入（付加）、または欠失を指す。用語「アミノ酸突然変異」とは、少なくとも１つの既存のアミノ酸残基を別の異なるアミノ酸残基で置換すること（たとえばアミノ酸残基を置き換えること）を示す。用語「アミノ酸欠失」とは、アミノ酸配列中の事前に決定された位置での少なくとも１つのアミノ酸残基の除去を示す。たとえば、突然変異Ｌ２３４Ａは、抗体Ｆｃ領域中の位置２３４のアミノ酸残基リシンが、アミノ酸残基アラニンによって置換されていることを示す（リシンをアラニンで置換）（付番はＥＵインデックス付番システムに従う）。
【0067】
本明細書中で使用する用語「薬剤」とは、生体高分子、生体物質から作製した抽出物、生体高分子の混合物、化学物質、化学物質の混合物、および／または化学物質と生体高分子の混合物を示す。用語「治療剤」とは、生物活性を有する薬剤を指す。
【0068】
「ヒト化」抗体とは、非ヒト超可変領域由来のアミノ酸残基およびヒトフレームワーク領域由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。好ましくは、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および容量を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ由来の残基（ドナー抗体）によって置き換えられている。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見つからないが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために含められる残基を含み得る。
【0069】
「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された抗体のものに対応するアミノ酸配列、および／または本明細書中に開示するヒト抗体を作製する技法のうちの任意のものを使用して作製されたアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に排除する。
【0070】
用語「キメラ抗体」とは、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体などの、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体を指すことを意図する。
【0071】
「単一特異性抗体」とは、抗体の任意かつすべての結合部位が抗原上の同一のエピトープを特異的に認識するように、１個の分子あたり１つまたは複数の抗原結合部位を含む抗体を指す。したがって、単一特異性抗体が複数の抗原結合部位を有する場合、結合部位は、１つの抗原分子との結合について互いに競合する。
【0072】
本明細書中で使用する「二重特異性抗体」とは、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する分子である。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原と同時に結合することができる。他の実施形態では、２つの異なるエピトープは同じ抗原上に存在し得る。
【0073】
本明細書中で使用する「標的抗原」、「標的細胞抗原」、「腫瘍抗原」、または「腫瘍特異的抗原」とは、標的細胞、たとえば、癌細胞または腫瘍間質の細胞などの腫瘍中の細胞の表面上に提示される抗原決定基を指す。
【0074】
本明細書中で使用する「単離抗体」とは、同定され、その天然環境の少なくとも１つの構成成分から分離および／または回収された抗体を意味する。たとえば、生物の少なくとも１つの構成成分から、または抗体が天然に存在するもしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的のために「単離抗体」である。単離抗体はまた、組換え細胞内にｉｎ ｓｉｔｕの抗体も含む。単離抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップに供された抗体である。特定の実施形態によれば、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学薬品を実質的に含まない場合がある。
【0075】
本明細書中で使用する用語「リンカー」とは、２つ以上のアミノ酸の長さのアミノ酸配列を指す。リンカーは、中性の極性または無極性のアミノ酸からなることができる。リンカーは、たとえば、２～５０個のアミノ酸の長さ、たとえば、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸の長さなどの、２～１００個のアミノ酸の長さであり得る。リンカーは、たとえば、自己切断、または酵素的もしくは化学的な切断によって、「切断可能」であり得る。アミノ酸配列中の切断部位ならびにそのような部位で切断する酵素および化学薬品は当分野で周知であり、本明細書中にも記載されている。
【0076】
本明細書中で使用する用語「ジスルフィド結合」または「システイン－システインジスルフィド結合」とは、２つのシステイン間の共有的相互作用を指し、システインの硫黄原子が酸化されてジスルフィド結合を形成する。水素結合の１～２ｋｃａｌ／ｍｏｌと比較して、ジスルフィド結合の平均結合エネルギーは約６０ｋｃａｌ／ｍｏｌである。本発明のコンテキストにおいて、ジスルフィド結合を形成するシステインは単鎖抗体のフレームワーク領域内にあり、抗体のコンホメーションを安定化する役割を果たす。システイン残基は、安定化ジスルフィド結合を分子内に作製することができるように、たとえば部位特異的突然変異誘発によって導入することができる。
【0077】
抗体に関して本明細書中で使用する用語「競合する」とは、第１の抗体またはその抗原結合断片（もしくは一部分）が第２の抗体またはその抗原結合部分の結合と十分に類似した様式でエピトープと結合し、その結果、第１の抗体とそのコグネイトエピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下における第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下において検出可能に減少することを意味する。第２の抗体とそのエピトープとの結合も第１の抗体の存在下において検出可能に減少しているその代替は、そうである場合があるが、必ずしもそうではない。すなわち、第１の抗体は、第２の抗体が第１の抗体とその対応するエピトープとの結合を阻害することなしに、第２の抗体とそのエピトープとの結合を阻害することができる。しかし、それぞれの抗体が、他方の抗体とそのコグネイトエピトープまたはリガンドとの結合を、同程度、より多い程度、または少ない程度までかにかかわらず、検出可能に阻害する場合、抗体は、そのそれぞれのエピトープの結合について互いに「交叉競合する」と言われる。競合および交叉競合抗体はどちらも本発明に包含される。そのような競合または交叉競合が起こる機構にかかわらず（たとえば、立体障害、コンホメーション変化、または共通エピトープもしくはその一部分との結合）、当業者には、本明細書中で提供する教示に基づいて、そのような競合および／または交叉競合抗体が包含され、本明細書中に開示した方法に有用である可能性があることが理解されたい。
【0078】
本明細書中で使用する「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｓ）を発現する非特異的細胞毒性細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。目的分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されているものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞が挙げられる。その代わりに、またはそれに加えて、目的分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、たとえばＣｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２～６５６、１９９８中に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価し得る。
【0079】
本明細書中で使用する「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下における標的の溶解を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）と、コグネイト抗原と複合体形成した分子（たとえば抗体）との結合によって開始される。補体活性化を評価するために、たとえばＧａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３、１９９６に記載されているＣＤＣアッセイを行い得る。
【0080】
本明細書中で使用する用語「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、および類似の用語は、抗原（たとえばエピトープまたは免疫複合体）と特異的に結合し、別の分子と特異的に結合しない分子、たとえば結合ドメインを指す。抗原と特異的に結合する分子は、当分野で知られているアッセイ、たとえば、免疫アッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、または他のアッセイによって決定して、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドと結合し得る。好ましくは、抗原と特異的に結合する分子は、他のタンパク質と交叉反応しない。
【0081】
用語「エピトープ」とは、パラトープとして知られる抗体の抗原結合領域のうちの１つまたは複数で、抗体が認識、接触、および／または結合し得る、分子の一部分を指す。単一の抗原は複数のエピトープを有し得る。したがって、様々な抗体が抗原上の様々な領域と結合してよく、様々な生物学的効果を有し得る。エピトープはしばしば、アミノ酸または糖側鎖などの化学活性のある表面分子群からなり、特異的三次元構造的特徴および特異的電荷特徴を有する。本明細書中で使用するエピトープは、立体構造的または直鎖状のどちらかであり得る。コンフォメーションエピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の様々なセグメントからの空間的に並置されたアミノ酸によって生じる。直線状エピトープとは、ポリペプチド鎖中の隣接アミノ酸残基によって生じるものである。ある特定の実施形態では、エピトープは、抗原上のサッカライドの部分、ホスホリル基、またはスルホニル基を含み得る。
【0082】
本明細書中で使用する用語「抗原エピトープ」とは、当分野で周知の任意の方法、たとえば慣例の免疫アッセイによって決定して抗体が特異的に結合することができる、ポリペプチドの一部分として定義される。「非線形エピトープ」または「コンフォメーションエピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原タンパク質内の、連続していないポリペプチド（またはアミノ酸）を含む。抗原上の所望のエピトープが決定された後、そのエピトープに対する抗体を、たとえば本明細書中に記載の技法を使用して作製することが可能である。
【0083】
抗体とタンパク質またはペプチドとの相互作用を参照して使用する用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、タンパク質上の特定の構造（すなわち抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存する相互作用を指す。言い換えれば、抗体は、タンパク質一般ではなく特異的タンパク質構造を認識してそれと結合する。たとえば、抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識した「Ａ」および抗体を含有する反応中における、エピトープＡを含有するタンパク質（または遊離した未標識のＡ）の存在は、抗体と結合した標識したＡの量を減らすであろう。
【0084】
ある特定の実施形態では、「特異的に結合する」とは、たとえば、抗体が、約０．１ｎＭ以下、より一般的には約１μＭ未満のＫＤでタンパク質と結合することを意味する。ある特定の実施形態では、「特異的に結合する」とは、抗体が、ある時には少なくとも約０．１μＭ以下、またある時には少なくとも約０．０１μＭ以下、またある時には少なくとも約１ｎＭ以下のＫＤで標的と結合することを意味する。様々な種中の相同タンパク質間の配列同一性が理由で、特異的結合は、複数の種中のタンパク質（たとえばヒトＣＤ４７およびマウスＣＤ４７）を認識する抗体を含むことができる。同様に、様々なタンパク質のポリペプチド配列の特定の領域内の相同性が理由で、特異的結合は、複数のタンパク質を認識する抗体を含むことができる。ある特定の実施形態では、第１の標的と特異的に結合する抗体または結合部分は、第２の標的と特異的に結合してもしなくてもよいことを理解されたい。したがって、「特異的結合」は、排他的結合、すなわち単一の標的との結合を必ずしも必要としない（ただし、含むことはできる）。したがって、一部の実施形態では、抗体は複数の標的と特異的に結合し得る。ある特定の実施形態では、複数の標的が抗体上の同じ抗原結合部位と結合し得る。たとえば、特定の事例では、抗体は２つの同一の抗原結合部位を含んでよく、そのそれぞれが２つ以上のタンパク質上の同じエピトープと特異的に結合する。特定の代替実施形態では、抗体は多特異性であってよく、異なる特異性を有する少なくとも２つの抗原結合部位を含む。非限定的な例として、二重特異性抗体は、１つのタンパク質上のエピトープを認識する１つの抗原結合部位を含んでよく、第２のタンパク質上の異なるエピトープを認識する第２の異なる抗原結合部位をさらに含んでよい。一般的に、必ずしもではないが、結合への言及は特異的結合を意味する。
【0085】
抗原と特異的に結合する抗体は、当分野で知られているアッセイ、たとえば、免疫アッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、または他のアッセイによって決定して、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドと結合し得る。好ましくは、抗原と特異的に結合する抗体は他のタンパク質と交叉反応しない。
【0086】
抗体とタンパク質またはペプチドとの相互作用を参照して使用する用語「非特異的結合」または「バックグラウンド結合」とは、特定の構造の存在に依存しない相互作用を指す（すなわち、抗体は、エピトープなどの特定の構造ではなくタンパク質一般と結合している）。
【0087】
本明細書中で使用する用語「ｋｏｎ」または「ｋａ」とは、抗体と抗原との会合の速度定数を指す。
【0088】
本明細書中で使用する用語「ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」とは、抗体の抗体／抗原複合体からの解離の速度定数を指す。
【0089】
本明細書中で使用する用語「ＫＤ」とは、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
【0090】
ＫＤおよび他の比を決定するための、会合および解離速度定数ｋｏｎおよびｋｏｆｆのそれぞれの決定は、たとえば、表面プラズモン共鳴に基づくバイオセンサーを使用して、分析物／リガンドの相互作用を特徴づけるために、捕捉試薬を介して低容量でセンサー表面上に固定されたリガンドの結合に関して分析物が一価である条件下で行い得る。分析は、たとえば、Ｋａｒｌｓｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ、３４９、１３６～１４７、２００６に記載の動力学的滴定方法を使用して、またはマルチサイクル動力学的分析を使用して行い得る。所定のアッセイで用いるセンサーチップ、捕捉試薬、およびアッセイ緩衝剤は、Ｍｙｓｚｋａ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ、１２、２７９～２８４、１９９９における推奨のように、リガンドのセンサー表面上への安定した捕捉を与えるため、分析物と表面との非特異的結合を最小限にするため、動力学的分析に適切な分析物結合応答を得るために選択する。分析物／リガンドの相互作用あたりの分析物結合応答は二重参照を行い、ＭｙｓｚｋａおよびＭｏｒｔｏｎら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ、６４、１２７～１３７（１９９７）中に記載のようにｋａ、ｋｄ、およびＲｍａｘをグローバルパラメータとして用いた１：１ラングミュアー「物質輸送限定モデル（ｍａｓｓ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｍｏｄｅｌ）」に当てはめた。平衡解離定数ＫＤは運動速度定数の比から推定し、ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎである。そのような決定は、好ましくは２５℃または３７℃で行う。典型的には、速度定数（ｋｏｎ／ｋａおよびｋｏｆｆ／ｋｄ）ならびに平衡解離定数は、全抗体および単量体（たとえばＣＤ４７タンパク質またはＰＤ－Ｌ１タンパク質）を使用して測定する。
【0091】
本明細書中で使用する用語「結合親和性」とは、一般的に、分子（たとえば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（たとえば抗原）との非共有的相互作用の合計の強度を指す。別段に指摘しない限りは、本明細書中で使用する「結合親和性」とは、結合対のメンバー（たとえば抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する、内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。たとえば、ＫＤは、約２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、８ｎＭ、６ｎＭ、４ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、またはより強力であり得る。親和性は、本明細書中に記載したものを含めた、当分野で知られている一般方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般的に抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向にある一方で、高親和性抗体は、一般的に抗原とより速く結合し、より長く結合したまま保たれる傾向にある。結合親和性を測定する様々な方法が当分野で知られており、これらのうちの任意ものを、本発明の目的のために使用することができる。具体的には、用語「結合親和性」とは、特定の抗原－抗体の相互作用の解離速度を指すことを意図する。ＫＤは、「オフ速度（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度対会合速度または「オン速度（ｋｏｎ）」の比である。したがって、ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。したがって、ＫＤが小さければ小さいほど、結合の親和性がより強力になるということになる。したがって、１μＭのＫＤは、１ｎＭのＫＤと比較して弱い結合親和性を示す。抗体のＫＤ値は、当分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための一方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用すること、典型的にはＢＩＡＣＯＲＥシステムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。ＢＩＡＣＯＲＥ動力学的分析は、固定された分子（たとえばエピトープ結合ドメインを含む分子）をその表面上に有するチップからの、抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫＤを決定するための別の方法は、バイオ層干渉法を使用すること、典型的にはＯＣＴＥＴ（登録商標）技術（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅシステム、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用することによるものである。
【0092】
抗体、断片、またはその誘導体などの本発明の二重特異性抗体に関して「生物活性のある」、「生物活性」、および「生物学的特徴」とは、そうでないと指定されない限りは、生体分子と結合する能力を有することを意味する。
【0093】
本明細書中で使用する用語「ポリヌクレオチド」、「核酸」、および「ヌクレオチド配列」としては、ＤＮＡ分子（たとえばｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（たとえばｍＲＮＡ）、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子の組合せまたはハイブリッドＤＮＡ／ＲＮＡ分子、およびＤＮＡまたはＲＮＡ分子の類似体が挙げられる。そのような類似体は、たとえば、それだけには限定されないがイノシンまたはトリチル化塩基を含むヌクレオチド類似体を使用して作製することができる。そのような類似体は、たとえばヌクレアーゼ耐性または細胞膜を横切る能力の増加などの有益な特質を分子に添える修飾された主鎖を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子も含むことができる。核酸またはヌクレオチド配列は、一本鎖、二本鎖であり得、また、一本鎖および二本鎖部分をどちらも含有してよく、三重鎖部分を含有してよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【0094】
本明細書中で使用する用語「単離した」とは、その元の環境（たとえば、天然に存在するものであれば天然環境）から取り出された物質を指す。たとえば、生きた動物中に存在する、天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、天然系において共存する物質の一部または全部から分離された、同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの一部であり得る、および／あるいは、そのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、組成物、たとえば、混合物、溶液、もしくは懸濁液の一部である、または、ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドを含む単離細胞もしくは培養細胞を含むことができ、それでも、ベクターまたは組成物がその天然環境の一部ではないという点で依然として単離されている。本明細書中で提供する任意の分子を単離し得る。
【0095】
本明細書中で使用する用語「作動可能に連結した」とは、記載した構成成分が、それらがその意図される様式で機能することを許可する関係性にある状況を指す。たとえば、コード配列と「作動可能に連結した」制御配列は、制御配列に適したまたは適合性のある条件下でコード配列の発現が達成されるような様式でライゲーションされる。一般的に、「作動可能に連結した」とは、連結されるＤＮＡ配列が連続していること、分泌リーダーの場合は連続しておりかつ読取り相が一致していることを意味する。しかし、エンハンサーは連続している必要がない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを慣用の実施に従って使用する。
【0096】
本明細書中で使用する「ベクター」とは、１つまたは複数の目的の遺伝子または配列を宿主細胞中に送達すること、かつ好ましくは発現させることが可能な構築体を意味する。ベクターの例としては、それだけには限定されないが、ウイルスベクター、裸ＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、陽イオン性縮合剤と会合させたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中にカプセル封入したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
【0097】
本明細書中で使用する用語「発現制御配列」または「制御配列」とは、それがライゲーションされているコード配列の発現をもたらすために必要なポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は宿主生物に応じて異なる。たとえば、原核生物では、そのような制御配列は一般的にプロモーター、リボソーム結合部位、およびターミネーターを含み、一部の例ではエンハンサーを含む。したがって、用語「制御配列」とは、最小限でも、その存在が発現に必要であるすべての構成成分を含むことを意図し、その存在が有利である追加の構成成分、たとえばリーダー配列も含み得る。
【0098】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を取り込むためのベクターレシピエントとなることができる、またはそうであった、個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然、偶発的、または意図的な突然変異が原因で、必ずしも元の親細胞と完全に同一でなくてよい（形態学またはゲノムＤＮＡ補体において）。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトした細胞を含む。
【0099】
本明細書中で使用する「哺乳動物細胞」は、ヒト、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、チンパンジー、またはマカクを含めた哺乳動物に由来する細胞への言及を含む。細胞はｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養し得る。
【0100】
本明細書中で使用する用語「精製生成物」とは、生成物が通常会合している細胞構成物および／または目的試料中に存在し得る他の種類の細胞から単離された生成物の調製物を指す。
【0101】
本明細書中で使用する「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち汚染物質を含まない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、さらにより好ましくは少なくとも９８％純粋、最も好ましくは少なくとも９９％純粋である材料を指す。
【0102】
本明細書中で使用する用語「癌」または「癌性」とは、異常な制御されない細胞の成長から生じる調節されない細胞成長、新生物、または腫瘍によって典型的に特徴づけられる、哺乳動物における生理的条件を指すまたはそれを説明する。一部の態様では、癌とは、局所的に留められている、転移のない悪性原発性腫瘍を指す。他の態様では、癌とは、隣接する身体構造に浸潤しそれを破壊し、遠位にまで拡大している、悪性腫瘍を指す。一部の態様では、癌は特異的癌抗原に関連している。
【0103】
本明細書中で使用する用語「悪性細胞」または「悪性腫瘍」とは、侵襲性であるおよび／または転移を受けることができる腫瘍または腫瘍細胞、すなわち癌細胞を指す。
【0104】
本明細書中で使用する用語「処置する」、「処置すること」、または「処置」とは、有益または所望の臨床結果を得るための手法である。本発明の目的のために、処置は、抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、または抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子（たとえば、ＣＤ４７モノクローナル抗体、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）を、対象、たとえば患者に投与することとして定義される。そのような投与は、たとえば、対象への直接投与によるもの、または対象に戻される、対象由来の単離した組織もしくは細胞への施用によるものであり得る。抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、単独で、または１つもしくは複数の薬剤と組み合わせて投与することができる。処置は、障害、障害の症状、または障害、たとえば癌に対する素因を治す、治癒する、緩和させる、解放する、変更する、救済する、軽快させる、和らげる、改善させる、またはそれに影響を与えるためのものであり得る。
【0105】
本明細書中で使用する用語「対象」とは、特定の処置のレシピエントとなる、それだけには限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯動物などを含めた任意の動物（たとえば哺乳動物）を含むことを意図する。たとえば、対象は癌を有する患者（たとえばヒト患者または獣医学的患者）であり得る。典型的には、用語「対象」、「個体」、および「患者」は、ヒト対象への言及に関して本明細書中で互換性があるように使用される。
【0106】
本発明の用語「非ヒト動物」は、別段に注記しない限りは、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類、マウス、ラット、ウサギ、またはヤギなどの、すべての非ヒト脊椎動物、たとえば非ヒト哺乳動物および非哺乳動物を含む。
【0107】
本明細書中で使用する用語「薬学的に許容できる」とは、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって認可された（もしくは認可可能な）、または米国薬局方もしくはヒトを含めた動物における使用について他の一般的に認識されている薬局方中に列挙されている生成物または化合物を指す。
【0108】
本明細書中で使用する用語「薬学的に許容できる賦形剤、担体、もしくはアジュバント」または「許容される医薬担体」とは、対象に、本開示の少なくとも１つの抗体と一緒に投与することができ、抗体の活性を破壊しない、賦形剤、担体、またはアジュバントを指す。賦形剤、担体、またはアジュバントは、治療効果を送達するために十分な用量で抗体と共に投与した場合に無毒性であるべきである。
【0109】
本明細書中で使用する用語「軽快させること」とは、本発明の抗体分子を投与しないことと比較して１つまたは複数の症状減らすまたは改善させることを意味する。また、「軽快させること」は、症状の持続期間の短縮または低下も含む。
【0110】
本明細書中で使用する用語「防止する」、「防止すること」、および「防止」とは、予防剤または治療剤の投与の結果の、対象における、障害の１つまたは複数の症状の再発または発症の防止を指す。
【0111】
本明細書中で使用する「有効量」、「治療上有効な量」、「治療上十分な量」、または「有効投与量」とは、対象に単一または複数の用量で投与した際に、疾患、障害、もしくは副作用を防止する、治癒する、軽快させる、処置する、もしくは管理することにおいて、または疾患もしくは障害の進行速度を減少することにおいて、または本明細書中に記載の障害を有する対象の状態を、そのような処置の非存在下において予想されるものを超えて、治癒を延長する、緩和させる、解放する、もしくは改善させることにおいて有効または十分な、任意の量の治療剤を指す。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理的機能を増強させるために有効な量も含む。有効量は１つまたは複数の治療剤を投与するコンテキストにおいて考慮されることがあり、１つまたは複数の他の薬剤と併せて望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合は、単一の薬剤を有効量で与えることが考慮されることがある。
【0112】
本明細書中で使用する、腫瘍または癌の「成長を阻害すること」とは、その成長および／または転移を遅くする、中断させる、静止させる、または停止させることを指し、必ずしも腫瘍成長の完全排除を示さない。
【0113】
作用強度とは、所定の強度の効果を生じるために必要な量の観点から表す、治療剤の活性の測度である。低濃度でより小さな応答を引き起こすより低い作用強度の薬剤と比較して、非常に強力な薬剤は低濃度でより大きな応答を引き起こす。作用強度は親和性および有効性の関数である。有効性とは、標的リガンドと結合した際に生物学的応答を生じる治療剤の能力、およびこの応答の定量的規模を指す。本明細書中で使用する用語「最大半量有効濃度（ＥＣ５０）」とは、ベースラインと指定した曝露時間後の最大との真ん中の応答を引き起こす治療剤の濃度を指す。治療剤は阻害または刺激を引き起こし得る。ＥＣ５０値は、作用強度の測度として一般的に使用される、および本明細書中で使用する。
【0114】
本明細書中で使用する「組合せ療法」または「と組み合わせた」投与とは、複数の予防剤および／または治療剤の使用を指す。用語「組合せ療法」または「組み合わせて」の使用は、予防剤および／または治療剤を障害を有する対象に投与する順序を制限しない。言い換えれば、組合せ療法は、別々、順次、または同時に治療剤で処置することによって行い得る。「順次投与」の場合、第２の薬剤を投与した際またはそれが対象において活性となった際に、第１の投与した薬剤は対象に対して何らかの生理的効果を発揮している場合がある。
【0115】
予防剤および／または治療剤の投与に関して本明細書中で使用する用語「同時投与」とは、個々の薬剤が対象内に同時に存在するように薬剤を投与することを指す。同時投与は、分子を単一の組成物中で、または同じもしくは近い時間に投与する別々の組成物中で配合することによってもたらし得る（ａｆｆｅｃｔｅｄ）。順次投与は必要に応じて任意の順序であり得る。
【0116】
本明細書中で使用する「ＣＤ４７」とは、哺乳動物表面抗原分類４７（ＣＤ４７）タンパク質、好ましくはヒトＣＤ４７タンパク質を指す。ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列および関連情報は、たとえば、すべての目的のために本明細書中に参考として組み込まれているＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ａ０Ａ０Ａ１ＴＳＧ４の下で提供されている。
【0117】
典型的には、ＣＤ４７の天然に存在する対立遺伝子変異体は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ａ０Ａ０Ａ１ＴＳＧ４に記載されているタンパク質と少なくとも９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有する。ＣＤ４７タンパク質は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属しており、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）、および膜インテグリンなどの様々なリガンドと相互作用する膜貫通タンパク質として特徴づけられている。ＣＤ４７は様々な種類の癌細胞によって過剰発現される。ＣＤ４７リガンドＳＩＲＰαは、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの先天性免疫系の様々な細胞上で発現される。ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの結合はＳＩＲＰαを発現する免疫細胞の活性を抑制し、したがって、腫瘍細胞が先天性免疫系監視を回避することを可能にする。
【0118】
本明細書中で使用する「ＣＤ４７と結合する抗体」、「ＣＤ４７を認識する抗体」、「抗ＣＤ４７抗体」、「抗ＣＤ４７抗体分子」、「ＣＤ４７と特異的に結合する抗体」、「ＣＤ４７抗体」などは、ＣＤ４７と特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインを含有する分子を含む。本発明のＣＤ４７抗体分子は、ＣＤ４７、たとえば、ヒトＣＤ４７、マウスＣＤ４７、ラットＣＤ４７、カニクイザルＣＤ４７と相互作用するまたはそれを認識する、たとえば結合する（たとえば特異的に結合する）その抗体を含む。
【0119】
本明細書中で使用する「ＰＤ－Ｌ１」とは、哺乳動物プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質、好ましくはヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質を指す。ＰＤ－Ｌ１はＣＤ２７４またはＢ７－Ｈ１としても知られる。ヒトＰＤ－Ｌ１のアミノ酸配列および関連情報は、たとえば、すべての目的のために本明細書中に参考として組み込まれているＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｑ９ＮＺＱ７の下で提供されている。
【0120】
典型的には、ＰＤ－Ｌ１の天然に存在する対立遺伝子変異体は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｑ９ＮＺＱ７に記載されているタンパク質と少なくとも９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有する。ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、たとえばＰＤ－１との結合によって、免疫系の適応アームの抑制に関与している膜貫通タンパク質として特徴づけられている。ＰＤ－Ｌ１は様々な種類の癌細胞によって過剰発現される。ＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞などの適応免疫系の細胞上で発現される受容体ＰＤ－１のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合はＰＤ－１を発現する免疫細胞の活性を抑制し、したがって、腫瘍細胞が免疫細胞（たとえばエフェクターＴ細胞）を発現するＰＤ－１を回避することを可能にする。
【0121】
本明細書中で使用する「ＰＤ－Ｌ１と結合する抗体」、「ＰＤ－Ｌ１を認識する抗体」、「抗ＰＤ－Ｌ１抗体」、「抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子」、「ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体」、「ＰＤ－Ｌ１抗体」などは、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインを含有する分子を含む。本発明のＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＰＤ－Ｌ１、たとえば、ヒトＰＤ－Ｌ１、マウスＰＤ－Ｌ１、ラットＰＤ－Ｌ１、カニクイザルＰＤ－Ｌ１と相互作用するまたはそれを認識する、たとえば結合する（たとえば特異的に結合する）その抗体を含む。
【0122】
本明細書中で使用する用語「ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体」とは、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合するように設計された分子を指す。
【0123】
本明細書中で使用する「第１のポリペプチド」とは、第２のポリペプチドと会合させる任意のポリペプチドである。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは界面で対面する。界面に加えて、第１のポリペプチドは、「結合ドメイン」（たとえば、抗体可変ドメイン、受容体結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、もしくは酵素ドメイン）、またはＣＨ２、ＣＨ１、およびＣＬドメインを含む抗体定常ドメイン（もしくはその部分）などの、１つまたは複数の追加のドメインを含み得る。通常、第１のポリペプチドは、抗体に由来する少なくとも１つのドメインを含む。このドメインは、好都合には抗体のＣＨ３ドメインなどの定常ドメインであり、第１のポリペプチドの界面を形成することができる。例示的な第１のポリペプチドとしては、抗体重鎖ポリペプチド、抗体定常ドメインを異種ポリペプチドの結合ドメインと組み合わせたキメラ、受容体ポリペプチド、リガンドポリペプチド、および抗体可変ドメインポリペプチド（たとえば二重特異性抗体）が挙げられる。
【0124】
界面に加えて、第２のポリペプチドは、「結合ドメイン」（たとえば、抗体可変ドメイン、受容体結合ドメイン、リガンド結合ドメイン、もしくは酵素ドメイン）、またはＣＨ２、ＣＨ１、およびＣＬドメインを含む抗体定常ドメイン（もしくはその部分）などの追加のドメインを含み得る。通常、第２のポリペプチドは、抗体に由来する少なくとも１つのドメインを含む。このドメインは、好都合には抗体のＣＨ３ドメイン定常領域であり、第２のポリペプチドの界面を形成することができる。例示的な第２のポリペプチドとしては、抗体重鎖ポリペプチド、抗体定常ドメインを異種ポリペプチドの結合ドメインと組み合わせたキメラ、および抗体可変ドメインポリペプチド（たとえば二重特異性抗体）が挙げられる。
【0125】
本明細書中で使用する用語「複合体」または「複合体形成した」とは、ペプチド結合ではない結合および／または力（たとえば、ファンデルワールス、疎水性、親水性の力）を通じて互いに相互作用する２つ以上の分子の会合を指す。一実施形態では、複合体はヘテロ多量体である。本明細書中で使用する用語「タンパク質複合体」または「ポリペプチド複合体」は、タンパク質複合体中にタンパク質とコンジュゲーションした非タンパク質実体を有する複合体を含むことが、理解されよう（たとえば、それだけには限定されないが毒素または検出剤などの化学的分子を含む）。
【0126】
本明細書中に記載したものに類似または等価な任意の材料および方法を本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい材料および方法を以下に記載する。
【0127】
材料および方法
抗体を産生するための様々な技法が記載されており、モノクローナル抗体を作製するための従来のハイブリドーマ方法、抗体（キメラ抗体、たとえばヒト化抗体を含む）を作製するための組換え技法、トランスジェニック動物中における抗体産生、および「完全ヒト」抗体を調製するための最近記載されたファージディスプレイ技術が挙げられる。
抗体を産生するための様々な技法が記載されており、モノクローナル抗体を作製するための従来のハイブリドーマ方法、抗体（キメラ抗体、たとえばヒト化抗体を含む）を作製するための組換え技法、トランスジェニック動物中における抗体産生、および「完全ヒト」抗体を調製するための最近記載されたファージディスプレイ技術が挙げられる。
【0128】
本明細書中で提供する抗体のうちの任意のものを作製する方法を、本明細書中で提供する。本発明の抗体は、当分野で知られている手順によって作製することができる。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解によって、上述の組換え方法（すなわち単一もしくは融合ポリペプチド）によって、または化学合成によって生成することができる。抗体のポリペプチド、特に約５０個までのアミノ酸のより短いポリペプチドは、化学合成によって好都合に作製される。化学合成の方法は当分野で知られており、市販されている。たとえば、抗体は、固相方法を用いた自動ポリペプチド合成器によって生成することができる。米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、および第６，３３１，４１５号も参照されたい。
【0129】
二重特異性抗体を調製するための任意の適切な方法を使用して、本明細書中で提供する二重特異性抗体を調製し得る（たとえば抗体の特長および構成成分の選択に応じて）。
【0130】
二重特異性抗体を作製する一手法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常領域配列と融合する。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域とのものである。一部の実施形態では、軽鎖結合の部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、融合体のうちの少なくとも１つ中に存在することができる。一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖融合体および所望する場合は免疫グロブリン軽鎖をコードしているポリヌクレオチドを別々の発現ベクター内に挿入してよく、適切な宿主生物内にコトランスフェクトしてよい。他の実施形態では、少なくとも２本のポリペプチド鎖の等比での発現が高収率をもたらす場合、または比が特に有意差をもたらさない場合は、２本または３本すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクター内に挿入し得る。
【0131】
一手法では、二重特異性抗体は、一方のアーム中に第１の結合特異性を有し、他方のアーム中にハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖の対（第２の結合特異性を提供する）を有する、ハイブリッド免疫グロブリン重鎖から構成される。二重特異性分子の半分にのみ免疫グロブリン軽鎖を有するこの不斉構造は、所望の二重特異性化合物を、望まない免疫グロブリン連鎖反応から分離することを容易にする。この手法はＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６９０号中に記載されている。
【0132】
別の手法では、二重特異性抗体は、１つのアーム中の第１のヒンジ領域中のアミノ酸修飾から構成されており、第１のヒンジ領域中の置換されたアミノ酸は、別のアーム中の第２のヒンジ領域中の対応するアミノ酸とは逆の電荷を有する。この手法は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５号）中に記載されている。
【0133】
別の手法では、所望のヘテロ多量体またはヘテロ二量体タンパク質（たとえば二重特異性抗体）の形成は、第１および第２のＦｃ鎖の間の界面を変更または操作設計することによって増強される。この手法では、二重特異性抗体はＣＨ３領域から構成されていてよく、ＣＨ３領域は、一緒に相互作用してＣＨ３界面を形成する第１のＣＨ３ポリペプチドおよび第２のＣＨ３ポリペプチドを含み、ＣＨ３界面内の１つまたは複数のアミノ酸はホモ二量体形成を不安定化し、ホモ二量体形成にとって静電気的に不利ではない。この手法は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９号（ＷＯ２０１１／１４３５４５号）中に記載されている。一部の実施形態では、二重特異性抗体の一方Ｆｃ鎖は、ヒンジ領域中の位置２２３および２２８（たとえば（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））ならびにヒトＩｇＧ２のＣＨ３領域中の位置４０９（たとえばＫ４０９Ｒ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができ、二重特異性抗体の他方のＦｃ鎖は、ヒンジ領域中の位置２２３、２２５、および２２８（たとえば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））ならびにヒトＩｇＧ２のＣＨ３領域中の位置３６８（たとえばＬ３６８Ｅ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができる。他の実施形態では、二重特異性抗体の一方Ｆｃ鎖は、ヒンジ領域中の位置２２３および２２８（たとえば（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））ならびにヒトＩｇＧ２のＣＨ３領域中の位置３６８（たとえばＬ３６８Ｅ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができ、二重特異性抗体の他方のＦｃ鎖は、ヒンジ領域中の位置２２３、２２５、および２２８（たとえば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））ならびにヒトＩｇＧ２のＣＨ３領域中の位置４０９（たとえばＫ４０９Ｒ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができる。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒンジ領域中の位置２２１および２２８（たとえば（Ｄ２２１ＲまたはＤ２２１Ｅ）および（Ｐ２２８ＲまたはＰ２２８Ｅ））ならびにヒトＩｇＧ１のＣＨ３領域中の位置４０９または３６８（たとえばＫ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができる。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒンジ領域中の位置２２８（たとえば（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））およびヒトＩｇＧ４のＣＨ３領域中の位置４０９または３６８（たとえばＲ４０９またはＬ３６８Ｅ（ＥＵ付番スキーム））にアミノ酸修飾を含むことができる。
【0134】
一部の実施形態では、二重特異性抗体はＦｃ鎖中にノブ－イン－ホール突然変異を有し得る。たとえば、一部の実施形態では、ノブ－イン－ホール突然変異を有する二重特異性抗体において、抗体Ｆｃドメインの第１のＦｃ鎖は「ノブ」を形成するための１つもしくは複数の突然変異を有しており、抗体Ｆｃドメインの第２のＦｃ鎖は「ホール」を形成するための１つもしくは複数の突然変異を有している（またはその逆）。例示的な抗体のノブ－イン－ホール操作設計は、米国特許第５，７３１，１６８号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００９０８９００４号、米国公開第２００９０１８２１２７号、ＭａｒｖｉｎおよびＺｈｕ、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｃｉａ（２００５）２６（６）：６４９～６５８、ならびにＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒａｃｏｌ．Ｓｉｎ．、２６：１～９中に記載されている。
【0135】
「ノブ」とは、第１のポリペプチド（たとえば第１のＦｃ鎖）の界面から突出しており、したがって隣接する第２のポリペプチド（たとえば第２のＦｃ鎖）中の埋め合わせをするホール中に配置してヘテロ二量体を安定化することができ、それによってホモ二量体形成よりもヘテロ二量体形成を支持する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。ノブは元の界面中に存在していてよく、または合成により導入してもよい（たとえば界面をコードしている核酸を変更することによって）。通常、第１のポリペプチドの界面をコードしている核酸は、ノブをコードするように変更されている。これを達成するために、第１のポリペプチド中の少なくとも１つの元のアミノ酸残基をコードしている核酸を、元のアミノ酸残基よりも長い側鎖体積を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードしている核酸で置き換える。ノブを形成するための特定のインポート残基は、一般的には天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくはアルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）から選択される。
【0136】
「ホール」とは、第２のポリペプチド（たとえば第２のＦｃ鎖）の界面からくぼんでおり、したがって隣接する第１のポリペプチド（たとえば第１のＦｃ鎖）中の対応するノブを収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。ホールは元の界面中に存在していてよく、または合成により導入してもよい（たとえば界面をコードしている核酸を変更することによって）。通常、第２のポリペプチドの界面をコードしている核酸は、ホールをコードするように変更されている。これを達成するために、第２のポリペプチド中の少なくとも１つの元のアミノ酸残基をコードしている核酸を、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードしているＤＮＡで置き換える。ホールを形成するための特定のインポート残基は、通常は天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）から選択される。
【0137】
本明細書中で使用する用語「界面」とは、典型的には、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの接触に関与する場合があるドメイン中に存在する任意のアミノ酸残基を指す。「元のアミノ酸」残基とは、「インポートアミノ酸」残基によって置き換えられるものであり、これは元の残基よりも小さいまたは大きい側鎖体積を有することができる。インポートアミノ酸残基は天然に存在するまたは天然に存在しないアミノ酸残基であり得るが、好ましくは前者である。「天然に存在する」アミノ酸残基とは、遺伝暗号によってコードされている残基である。「天然に存在しない」アミノ酸残基とは、遺伝暗号によってコードされていないが、ポリペプチド鎖中の隣接アミノ酸残基と共有結合することができる残基を意味する。天然に存在しないアミノ酸残基の例は、ノルロイシン、オルニチン、ノルバリン、ホモセリン、およびＥｌｌｍａｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．、２０２：３０１～３３６（１９９１）中に記載されているものなどの他のアミノ酸残基類似体である。
【0138】
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ＷＯ２０１６１６６６２９号中に提供される二重特異性抗体のうちの任意のものの特長または特徴のうちの任意のものを有し得る。
【0139】
任意選択の二重特異性抗体形式は、共有連結した二重特異性ヘテロ二量体ジアボディ構造に基づくＦｖ由来の戦略であり、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ（登録商標））タンパク質としても知られており、これは、たとえば、米国特許公開第２００７／０００４９０９号、第２００９／００６０９１０号、および第２０１０／０１７４０５３号中に記載されている。
【0140】
本発明の分子（すなわち結合ドメイン）をコードしている核酸配列が得られた後、分子を生成するためのベクターを当分野で周知の技法を使用して、組換えＤＮＡ技術によって生成させ得る。
【0141】
本発明の抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）結合ドメインをコードしているポリヌクレオチドは、当分野で知られている天然において会合しているまたは異種のプロモーター領域を含めた、抗体コード配列と作動可能に連結した発現制御ポリヌクレオチド配列を含み得る。発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換させるまたはそれにトランスフェクトすることができるベクター中の真核プロモーター系であってよいが、原核宿主のための制御配列も使用し得る。ベクターが適切な宿主細胞系内に取り込まれた後、宿主細胞を、ヌクレオチド配列を発現させるため、かつ所望に応じて抗体を収集および精製するために適した条件下で繁殖させる。真核細胞系としては、ＣＨＯ細胞系、様々なＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、形質転換Ｂ細胞、またはヒト胎児腎臓細胞系が挙げられる。
【0142】
一実施形態では、本発明の抗体をコードしているＤＮＡは、慣用の手順を使用して（たとえば抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子と特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）単離および配列決定する。単離した後、ＤＮＡを発現ベクター内に入れてよく、その後、これをそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないサルＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞内にトランスフェクトして、組換え宿主細胞中でのモノクローナル抗体の合成を得る。また、ＤＮＡは、たとえば対応する抗体の１つまたは複数の特性（たとえば結合親和性、免疫原性など）を改善させるために修飾してもよい。
【0143】
抗ＣＤ４７抗体
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体を本明細書中で提供する。
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体を本明細書中で提供する。
【0144】
一態様では、（ａ）配列番号１、３、７、８、もしくは９に示すＶＨ配列のＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１）、ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２）、およびＶＨ相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または（ｂ）配列番号２もしくは６に示すＶＬ配列のＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１）、ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２）、およびＶＬ相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ＣＤ４７抗体を提供する。
【0145】
別の態様では、表１に列挙したＶＨのうちの任意の１つおよび／またはＶＬ配列のうちの任意の１つを有する抗ＣＤ４７抗体を提供する。表１では、下線を引いた配列はＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字のものはＣｈｏｔｈｉａによるものである。一実施形態では、本発明は、ＶＨおよび／またはＶＬを含む抗体であって、（ａ）ＶＨは配列番号１、３、７、８、もしくは９を含む、および／または（ｂ）ＶＬは配列番号２もしくは６を含む抗体を提供する。
【0146】
【表1】
【0147】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号１の配列を含み、ＶＬは配列番号２の配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号３の配列を含み、ＶＬは配列番号２の配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号７の配列を含み、ＶＬは配列番号２の配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号９の配列を含み、ＶＬは配列番号２の配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号８の配列を含み、ＶＬは配列番号６の配列を含む。
【0148】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体は、様々な結合特異性を有する複数の様々な抗体と同じＶＬアミノ酸配列を有する。したがって、本明細書中で提供する様々な抗体において、抗体は、異なるＶＨ配列であるが同じＶＬ配列を有し得る。これらの抗体は同じＶＬ配列を有するが、異なるＶＨ配列を有することが原因で、これらは互いに異なる結合親和性および／または特異性を有する。一部の実施形態では、同じＶＬ配列を共有する本明細書中で提供する抗体は、様々な抗原と特異的に結合する。たとえば、同じアミノ酸配列を共有するＶＬを有する抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を本明細書中で提供する。複数の抗体によって共有される、本明細書中で提供するＶＬ配列は、本明細書中で「共通軽鎖」と呼ぶ。表１は、本明細書中で提供する抗体の一部である様々な共通軽鎖の配列情報を提供する。たとえば、「共通軽鎖１」ＶＬは、以下の様々な抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１抗体によって共有される：ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿４９７、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿親、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ０８＿親、ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５、ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿親、ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ａ０９＿親。別の例では、「共通軽鎖２」ＶＬは、以下の様々な抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１抗体によって共有される：ＣＤ４７＿Ｐ１４Ｄ０４＿親、ＰＤＬ１＿Ｄ０４Ｄ０９＿親ＶＬ。
【0149】
本発明はまた、ＣＤ４７に対する抗体のＣＤＲ部分も提供する。
【0150】
一態様では、表２に列挙したＶＨ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つおよび／またはＶＬ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つを有する抗ＣＤ４７抗体を提供する。一態様では、本発明は、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体であって、（ａ）（ｉ）配列番号１３、１４、１５、２２、２３、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３７、３８、もしくは３９を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１６、１７、２８、２９、３４、もしくは３５を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１８、２４、３０、３６、もしくは４０を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに／または（ｂ）（ｉ）配列番号１９もしくは５３を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０もしくは５４を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１もしくは５５を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体を提供する。
【0151】
【表2-1】
【0152】
【表2-2】
【0153】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体を本明細書中で提供し、ＶＨは、配列番号１、３、７、８、もしくは９の配列、または配列中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、および／あるいは、ＶＬは、配列番号２もしくは６の配列、または配列中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換を有するその変異体を含む。置換は保存的アミノ酸置換であってもよい。置換はＣＤＲ領域中でなくてもよい。
【0154】
本発明はまた、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体のｓｃＦｖも包含する。単鎖可変領域断片は、たとえば、それだけには限定されないが、短い連結ペプチドを使用することによって軽および／または重鎖可変領域を遺伝子融合させることによって作製される（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３～４２６、１９８８）。ジアボディまたはミニボディなどの単鎖抗体の他の形態も包含される。
【0155】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体はモノクローナル抗体である。抗ＣＤ４７抗体はヒト抗体またはヒト化抗体であってもよい。
【0156】
抗ＰＤ－Ｌ１抗体
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を本明細書中で提供する。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を本明細書中で提供する。
【0157】
一態様では、（ａ）配列番号４、５、１０、１１、または１２に示すＶＨ配列のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、およびＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに／または（ｂ）配列番号２または６に示すＶＬ配列のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を提供する。
【0158】
別の態様では、表３に列挙したＶＨのうちの任意の１つおよび／またはＶＬ配列のうちの任意の１つを有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体を提供する。表３では、下線を引いた配列はＫａｂａｔによるＣＤＲ配列であり、太字のものはＣｈｏｔｈｉａによるものである。一実施形態では、本発明は、ＶＨおよび／またはＶＬを含む抗体であって、（ａ）ＶＨは配列番号４、５、１０、１１、もしくは１２を含む、および／または（ｂ）ＶＬは配列番号２もしくは６を含む抗体を提供する。
【0159】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【0160】
【表3】
【0161】
本発明はまた、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体のＣＤＲ部分も提供する。
【0162】
一態様では、表４に列挙したＶＨ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つおよび／またはＶＬ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つを有する抗ＰＤ－Ｌ１抗体を提供する。一態様では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体であって、（ａ）（ｉ）配列番号４１、４２、４３、４７、４８、もしくは４９を含むＶＨ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４４、４５、５０、５１、５８、もしくは５９を含むＶＨ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号４６、５２、５６、５７、もしくは６０を含むＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびに／または（ｂ）（ｉ）配列番号１９もしくは５３を含むＶＬ ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２０もしくは５４を含むＶＬ ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２１もしくは５５を含むＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体を提供する。
【0163】
【表4-1】
【0164】
【表4-2】
【0165】
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を本明細書中で提供し、ＶＨは、配列番号４、５、１０、１１、もしくは１２の配列、または配列中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、および／あるいは、ＶＬは、配列番号２もしくは６の配列、または配列中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個のアミノ酸置換を有するその変異体を含む。置換は保存的アミノ酸置換であってもよい。置換はＣＤＲ領域中でなくてもよい。
【0166】
本発明はまた、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体のｓｃＦｖも包含する。ジアボディまたはミニボディなどの単鎖抗体の他の形態も包含される。
【0167】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体はモノクローナル抗体である。抗ＰＤ－Ｌ１抗体はヒト抗体またはヒト化抗体であってもよい。
【0168】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体
一部の実施形態では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供する。
一部の実施形態では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供する。
【0169】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、少なくとも第１の抗原結合部分（ＣＤ４７と特異的に結合する）および第２の抗原結合部分（ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する）を含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合部分は第１のＶＨを含み、第２の抗原結合部分は第２のＶＨを含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合部分は第１のＶＨおよび第１のＶＬを含み、第２の抗原結合部分は第２のＶＨおよび第２のＶＬを含む。一部の実施形態では、第１のＶＬおよび第２のＶＬのアミノ酸配列は同じである。
【0170】
本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体のうちの任意もの（たとえば第１の抗原結合部分として）および本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちの任意のもの（たとえば第２の抗原結合部分として）を含有し得る。
【0171】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体であって、第１の抗原結合部分がＶＨおよび／またはＶＬを含み、（ａ）ＶＨが配列番号１を含み、（ｂ）ＶＬが配列番号２を含み、ならびに、第２の抗原結合部分がＶＨおよび／またはＶＬを含み、（ａ）ＶＨが配列番号４を含み、（ｂ）ＶＬが配列番号２を含む、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を提供する。
【0172】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体であって、第１の抗原結合部分がＶＨおよび／またはＶＬを含み、（ａ）ＶＨが配列番号３を含み、（ｂ）ＶＬが配列番号２を含み、ならびに、第２の抗原結合部分がＶＨおよび／またはＶＬを含み、（ａ）ＶＨが配列番号４を含み、（ｂ）ＶＬが配列番号２を含む、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を提供する。
【0173】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体であって、第１の抗原結合部分が表２に列挙したＶＨ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つを含み、第２の抗原結合部分が表４に列挙したＶＨ ＣＤＲ配列のうちの任意の１つを含む、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を提供する。
【0174】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する第１の抗原結合部分およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２の抗原結合部分を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、二重特異性抗体は、表５に示す抗ＣＤ４７抗体のうちの任意のＶＨおよびＶＬまたはそのＣＤＲを含有し、二重特異性抗体は、表５に示す抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちの任意のＶＨおよびＶＬまたはそのＣＤＲを含有する。
【0175】
【表5】
【0176】
一部の実施形態では、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１と結合し、対応する抗原との結合について本明細書中に記載の抗体と競合する、たとえば、ＣＤ４７との結合についてＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿４９７、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿親、ＣＤ４７＿Ｐ１４Ｄ０４＿親、もしくはＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ０８＿親と競合する、またはＰＤ－Ｌ１との結合についてＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５、ＰＤＬ１＿Ｐ０４Ｄ０９＿１１３、ＰＤＬ１＿Ｐ０４Ｄ０９＿親、ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿親、もしくはＰＤＬ１＿Ｐ０６Ａ０９＿親と競合する抗体を本明細書中で提供する。
【0177】
本明細書中に記載の抗体のＣＤ４７またはＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性（ＫＤ）は、約０．００１ｎＭ～約６５００ｎＭであり得る。一部の実施形態では、結合親和性は、約６５００ｎＭ、６０００ｎＭ、５５００ｎＭ、４５００ｎＭ、４０００ｎＭ、３５００ｎＭ、３０００ｎＭ、２５００ｎＭ、２０００ｎＭ、１５００ｎＭ、１０００ｎＭ、７５０ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１９ｎＭ、１７ｎＭ、１６ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、８ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５．５ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００２ｎＭ、または０．００１ｎＭのうちの任意のものである。一部の実施形態では、結合親和性は、約６５００ｎＭ、６０００ｎＭ、５５００ｎＭ、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、３０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、９００ｎＭ、８００ｎＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０１ｎＭ、またはそれより低いｎＭのうちの任意のもの未満である。
【0178】
一部の実施形態では、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、ＣＤ４７よりもＰＤ－Ｌ１に対して高い親和性を有する（たとえば、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の第２の抗原結合部分の親和性が、ＣＤ４７に対する抗体の第１の抗原結合部分の親和性よりも高い）。理論に束縛されずに、ＣＤ４７よりもＰＤ－Ｌ１に対して高い親和性を有するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、抗体の抗ＣＤ４７抗体結合部分によって潜在的に引き起こされる潜在的な副作用または毒性を減らすために望ましい場合がある。様々な癌細胞上で発現されることに加えて、ＣＤ４７は広範囲の健康なヒト細胞（赤血球（ＲＢＣ）を含む）中で発現され、抗ＣＤ４７抗体と健康な細胞との結合が原因の、抗ＣＤ４７抗体からの顕著な望ましくない副作用の潜在性が存在する。比較的低い親和性の抗ＣＤ４７抗原結合部分を含有するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、そのような二重特異性抗体の、ＲＢＣなどの健康な細胞（ＣＤ４７タンパク質を発現するがＰＤ－Ｌ１タンパク質は発現しないもの）に対する比較的低い親和性、およびそのような二重特異性抗体の、癌細胞（しばしばＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１をどちらも発現する）に対する比較的高い親和性が原因で、健康な細胞よりも癌細胞と優先的に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ４７よりもＰＤ－Ｌ１に対して高い親和性を有する、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体において、抗体の抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、抗体の抗ＣＤ４７結合部分がＣＤ４７に対して有するよりも、ＰＤ－Ｌ１に対して少なくとも２×（すなわち２倍）、３×、５×、１０×、２０×、５０×、１００×、２００×、５００×、１０００×、２０００×、または５０００×高い親和性を有する。一部の実施形態では、ＣＤ４７よりもＰＤ－Ｌ１に対して高い親和性を有する、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体において、抗体の抗ＰＤ－Ｌ１結合部分は、およそ１０ｎＭ、５ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭ以下の、ＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性（ＫＤ）を有し、抗体の抗ＣＤ４７結合部分は、およそ１０００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２０ｎＭ、または１０ｎＭ以下の、ＣＤ４７に対する結合親和性（ＫＤ）を有し、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の抗ＰＤ－Ｌ１結合部分の親和性は、ＣＤ４７に対する抗体の抗ＣＤ４７結合部分の親和性よりも少なくとも２×、３×、５×、１０×、２０×、５０×、１００×、２００×、５００×、１０００×、２０００×、または５０００×高い（すなわちｎＭの値が小さい（より高い親和性はより低いｎＭ値によって示されるため））。
【0179】
一部の実施形態では、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の両方に対して同様の親和性を有する。
【0180】
本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、任意の適切な形式を有することができる。一部の実施形態では、本明細書中で提供する二重特異性抗体は完全長ヒト抗体を含む。一部の実施形態では、ヒト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は免疫学的に不活性なＦｃ鎖を含む。
【0181】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｓｕｕｒｓ，Ｆ．Ｖ．ら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２０１（２０１９）ページ１０３～１１９中に記載の形式を有することができる。
【0182】
二重特異性抗体は、ＶＨとＶＬの間に、Ｖ領域の鎖間対合は達成されるが鎖内対合は達成されないように短いリンカー（たとえば約３～１０個の残基）を用いてｓｃＦｖ断片を構築し、二価断片、すなわち２つの抗原結合部位を有する断片をもたらすことによって調製してもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片に由来することができる（たとえばＦ（ａｂ’）２二重特異性抗体）。ジアボディは、たとえば、ＥＰ４０４，０９７号、ＷＯ９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８、１９９３中により完全に記載されている。
【0183】
本発明は、Ｆｃ鎖もしくはドメイン、またはその一部分を含む二重特異性抗体を包含する。一部の実施形態では、Ｆｃ鎖またはその一部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ鎖の１つまたは複数の定常ドメイン（たとえばＣＨ２またはＣＨ３ドメイン）を含む。別の実施形態では、本発明は、Ｆｃ鎖またはその一部分を含む分子を包含し、Ｆｃ鎖またはその一部分は、匹敵する野生型Ｆｃ鎖またはその一部分と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾（たとえば置換）を含む。変異Ｆｃ鎖は当分野で周知であり、当分野で周知の結合活性またはエフェクター機能アッセイ、たとえば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ分析、またはＡＤＣＣのうちの任意のものにおいてアッセイして、変異Ｆｃ鎖を含む抗体の表現型を変更するために主に使用される。そのような変異Ｆｃ鎖またはその一部分は、Ｆｃ鎖またはその一部分を含む本発明の二重特異性抗体によって示される血漿半減期および安定性を延長させ得る。別の実施形態では、本発明は、当分野で知られている任意のＦｃ変異体の使用を包含する。
【0184】
一部の実施形態では、１つまたは複数の修飾をＦｃ鎖のアミノ酸に行って、Ｆｃ鎖、したがって本発明の二重特異性抗体分子の、１つまたは複数のＦｃγＲ受容体に対する親和性および結合力を低下させる。具体的な実施形態では、本発明は、変異Ｆｃ鎖またはその一部分を含む二重特異性抗体であって、変異Ｆｃ鎖が、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、１つのＦｃγＲとのみ結合し、ＦｃγＲがＦｃγＲＩＩＩＡである抗体を包含する。別の具体的な実施形態では、本発明は、変異Ｆｃ鎖またはその一部分を含む二重特異性抗体であって、変異Ｆｃ鎖が、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、１つのＦｃγＲとのみ結合し、ＦｃγＲがＦｃγＲＩＩＡである抗体を包含する。別の具体的な実施形態では、本発明は、変異Ｆｃ鎖またはその一部分を含む二重特異性抗体であって、変異Ｆｃ鎖が、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、１つのＦｃγＲとのみ結合し、ＦｃγＲがＦｃγＲＩＩＢである抗体を包含する。別の実施形態では、本発明は、変異Ｆｃ鎖を含む分子を包含し、変異体は、当業者に知られており本明細書中に記載されている方法を使用して測定して、Ｆｃ鎖を含まないまたは野生型Ｆｃ鎖を含む分子と比較して、ＡＤＣＣ活性（もしくは他のエフェクター機能）の減少および／またはＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）との結合の増加を与えるまたは媒介する。
【0185】
本発明はまた、２つ以上のＩｇＧアイソタイプ由来のドメインまたは領域を含むＦｃ鎖の使用も包含する。当分野で知られているように、Ｆｃ鎖のアミノ酸修飾は、Ｆｃ媒介性エフェクター機能および／または結合活性に大きな影響を与え得る。しかし、機能的特徴のこれらの変更は、選択したＩｇＧアイソタイプのコンテキストにおいて実装した場合に、さらに洗練および／または操作し得る。同様に、アイソタイプＦｃのネイティブ特徴は、１つまたは複数のアミノ酸修飾によって操作し得る。複数のＩｇＧアイソタイプ（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）は、そのヒンジおよび／またはＦｃ鎖アミノ酸配列中の相違が原因で、血清半減期、補体結合、ＦｃγＲ結合親和性、およびエフェクター機能活性（たとえば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ）を含めた異なる物理的および機能的特性を示す。
【0186】
一部の実施形態では、アミノ酸修飾およびＩｇＧ Ｆｃ鎖は、所望の特徴を有する二重特異性抗体を操作設計するために、そのそれぞれの、別々の結合および／またはエフェクター機能活性について独立して選択される。特定の実施形態では、アミノ酸修飾およびＩｇＧヒンジ／Ｆｃ鎖は、本明細書中に記載されているまたはＩｇＧ１のコンテキストにおいて当分野で知られているように、結合および／またはエフェクター機能活性について別々にアッセイされている。一実施形態では、アミノ酸修飾およびＩｇＧヒンジ／Ｆｃ鎖は、二重特異性抗体または他のＦｃ含有分子（たとえば、免疫グロブリン）のコンテキストにおいて、同様の機能性、たとえば、ＡＤＣＣ活性（もしくは他のエフェクター機能）の減少および／またはＦｃγＲＩＩＢとの結合の増加を示す。別の実施形態では、本発明は、新規特性を示す当分野で知られているアミノ酸修飾および選択したＩｇＧ領域の組合せを含む変異Ｆｃ鎖を包含し、特性は、修飾および／または領域を本明細書中に記載のように独立してアッセイした場合は検出可能でなかったものである。
【0187】
一部のそのような実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、第１のポリペプチド鎖上の第１のヘテロ二量体促進ドメインおよび第２のポリペプチド鎖上の第２のヘテロ二量体促進ドメインを含む。一緒になって、第１および第２のヘテロ二量体促進ドメインは、ヘテロ二量体化を駆動する、および／または二重特異性抗体を安定化する（たとえば、相補的ヘテロ二量体促進ドメイン上のノブとホールとの相互作用によって）、および／または二重特異性抗体を安定化させる役割を果たす。
【0188】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する二重特異性抗体のＦｃドメインは第１のＦｃ鎖および第２のＦｃ鎖を含み、第１および第２のＦｃ鎖のそれぞれは、野生型Ｆｃ鎖と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含んで、ノブまたはホールを形成する。一部の実施形態では、第１のＦｃ鎖がノブを含み、第２のＦｃ鎖がホールを含む。一部の実施形態では、第１のＦｃ鎖は、ノブまたはホールのどちらかを含むように修飾されたＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインを含み得る。一部の実施形態では、第１のＦｃ鎖は、突然変異Ｙ３４９Ｃおよび／またはＴ３６６Ｗを含んでノブを形成し、第２のＦｃ鎖は、突然変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、および／またはＹ４０７Ｖを含んでホールを形成する（付番はＥＵインデックスに従う）。一部の具体的な実施形態では、突然変異はエフェクター機能の低下をもたらす。
【0189】
前述のもののそれぞれの特定の実施形態において、第１のＦｃ鎖は配列番号６５の配列を含んでノブを形成し（ノブ突然変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ鎖）、第２のＦｃ鎖は配列番号６６の配列を含んでホールを形成する（ホール突然変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ鎖）。
【0190】
本明細書中で提供する抗ＣＤ４７ ＶＨを配列番号６５または配列番号６６のアミノ酸配列と遺伝子融合させて二重特異性抗体の第１の重鎖を形成してもよく、本明細書中で提供する抗ＰＤ－Ｌ１ ＶＨを配列番号６５または配列番号６６のアミノ酸配列と遺伝子融合させて二重特異性抗体の第２の重鎖を形成してもよく、一方が配列番号６５と遺伝子融合しており、他方が配列番号６６と遺伝子融合している。配列番号６５または配列番号６６のアミノ酸配列を含有する本明細書中で提供する抗ＣＤ４７または抗ＰＤ－Ｌ１重鎖は、配列番号６５または配列番号６６のＣ末端リシンを欠いていてもよい。言い換えれば、一部の状況においては、本明細書中で提供する抗体の重鎖のＣ末端リシンは抗体から切断されていてよく、Ｃ末端リシンを欠くそのような抗体は、本明細書中で提供する抗体重鎖の範囲内に含まれる。
【0191】
一部の実施形態では、表６Ａ中に提供される抗ＣＤ４７重鎖および抗ＰＤ－Ｌ１重鎖のアミノ酸配列を有するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を提供する。表６Ａ中の抗ＣＤ４７重鎖はどちらもＦｃ鎖中にホール突然変異を有しており、抗ＰＤ－Ｌ１重鎖はＦｃ鎖中にノブ突然変異を有する。一部の実施形態では、配列番号６１に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７重鎖と、配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１重鎖とを含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供する。ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を２コピーさらに含んでいてもよい。配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖は共通軽鎖であり、これは抗ＣＤ４７重鎖および抗ＰＤ－Ｌ１重鎖と対合することができる。一部の実施形態では、配列番号６３に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７重鎖と、配列番号６４に示すアミノ酸配列を含む抗ＰＤ－Ｌ１重鎖とを含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供する。ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、配列番号６２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を２コピーさらに含んでいてもよい。
【0192】
【表6-1】
【0193】
【表6-2】
【0194】
重鎖を有する抗体を含む本明細書中で提供する任意の実施形態において、重鎖中にＣ末端リシンを有さない抗体が実施形態の範囲内に含まれる。したがって、たとえば、配列番号６１に示すアミノ酸配列を有する重鎖を含む本明細書中で提供する抗体について、配列番号６１のＣ末端リシン以外の配列番号６１に示すアミノ酸配列を有する抗体も提供する。別の例では、配列番号６３に示すアミノ酸配列を有する重鎖を含む本明細書中で提供する抗体について、配列番号６３のＣ末端リシン以外の配列番号６３に示すアミノ酸配列を有する抗体も提供する。別の例では、配列番号６４に示すアミノ酸配列を有する重鎖を含む本明細書中で提供する抗体について、配列番号６４のＣ末端リシン以外の配列番号６４に示すアミノ酸配列を有する抗体も提供する。一部の実施形態では、配列番号６１に示すアミノ酸配列を有する第１の重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を有する第２の重鎖を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、重鎖のうちの一方もしくは両方がそれぞれの重鎖配列のＣ末端リシンを欠く、またはどちらも欠かない。一部の実施形態では、配列番号６３に示すアミノ酸配列を有する第１の重鎖および配列番号６４に示すアミノ酸配列を有する第２の重鎖を含むＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、重鎖のうちの一方もしくは両方がそれぞれの重鎖配列のＣ末端リシンを欠く、またはどちらも欠かない。
【0195】
一態様では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を本明細書中で提供し、二重特異性抗体は、ＣＤ４７に特異的な第１の重鎖、ＰＤ－Ｌ１に特異的な第２の重鎖、および共通軽鎖を含み、第１の重鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有し、第２の重鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有し、共通軽鎖は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有する。
【0196】
抗体を生成する、特徴づける、および修飾するためのポリヌクレオチドおよび方法
本発明はまた、抗体のポリペプチドおよび結合領域を含む、本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドも含む。本発明の分子をコードしているポリヌクレオチドを得て、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を、当分野で知られている任意の方法によって決定し得る。
本発明はまた、抗体のポリペプチドおよび結合領域を含む、本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドも含む。本発明の分子をコードしているポリヌクレオチドを得て、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を、当分野で知られている任意の方法によって決定し得る。
【0197】
本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドは、以下を含み得る：変異体のコード配列のみ、変異体のコード配列および機能的ポリペプチドなどの追加のコード配列、またはシグナルもしくは分泌配列、または前駆タンパク質配列、抗体のコード配列およびイントロンまたは抗体のコード配列の５’および／もしくは３’側の非コード配列などの非コード配列。用語「抗体をコードしているポリヌクレオチド」は、変異体の追加のコード配列を含むポリヌクレオチドを包含するが、追加のコードおよび／または非コード配列を含むポリヌクレオチドも包含する。特定の宿主細胞／発現系について最適化されているポリヌクレオチド配列は、所望のタンパク質のアミノ酸配列から容易に得ることができることが、当分野で知られている（ＧＥＮＥＡＲＴ（登録商標）ＡＧ、ドイツＲｅｇｅｎｓｂｕｒｇを参照）。
【0198】
一部の実施形態では、本明細書中の他の箇所（たとえば表１、２、３、４、または５のうちの任意のもの中）で提供されている抗ＣＤ４７または抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸配列のうちの任意のものをコードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを本明細書中で提供する。また、ポリヌクレオチドを含む関連するベクターおよび宿主細胞も本明細書中で提供する。
【0199】
一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号６７または６９に示すヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体の共通軽鎖のＶＬをコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号６８に示すヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号７０に示すヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体の重鎖をコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号７１または７３に示すヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体の共通軽鎖をコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号７２に示すヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体の重鎖をコードしているポリヌクレオチドを本明細書中で提供し、ポリヌクレオチドは配列番号７４に示すヌクレオチド配列を含む。また、配列番号６７～７４のいずれかに示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む、関連するベクターおよび宿主細胞も本明細書中で提供する。
【0200】
一部の実施形態では、表６Ｂに示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを本明細書中で提供する。
【0201】
【表7-1】
【0202】
【表7-2】
【0203】
【表7-3】
【0204】
任意のそのような配列に相補的なポリヌクレオチドも本発明によって包含される。ポリヌクレオチドは一本鎖（コードもしくはアンチセンス）または二本鎖であってよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成）またはＲＮＡ分子であってよい。ＲＮＡ分子としては、成熟および前駆体ｍＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）またはヘテロ核ｍＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）などの未成熟ｍＲＮＡならびに成熟ｍＲＮＡが挙げられる。追加のコードまたは非コード配列が、必ずしもでは必要ではないが、本発明のポリヌクレオチド内に存在していてよく、ポリヌクレオチドは、必ずしも必要ではないが、他の分子および／または支持物質と連結されていてよい。
【0205】
当業者には、遺伝暗号の縮重の結果、本明細書中で提供するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列が多く存在することが理解されよう。コドン使用頻度の相違が原因で変動するポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図される。
【0206】
一態様では、ＣＤ４７と特異的に結合する抗体の少なくともＶＨをコードしている単離核酸を本明細書中で提供し、核酸は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列を含む。また、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有するポリペプチドも、本明細書中で提供する。
【0207】
一態様では、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体の共通軽鎖の少なくともＶＬをコードしている単離核酸を本明細書中で提供し、核酸は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列を含む。また、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有するポリペプチドも、本明細書中で提供する。
【0208】
一態様では、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する抗体の少なくともＶＨをコードしている単離核酸を本明細書中で提供し、核酸は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列を含む。また、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有する、ＡＴＣＣに寄託されたプラスミドの挿入物の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列を有するポリペプチドも、本明細書中で提供する。
【0209】
一態様では、本発明は、本明細書中に記載するポリヌクレオチドのうちの任意のものを作製する方法を提供する。たとえば、本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え方法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は当分野で周知であり、本明細書中に詳述する必要はない。当業者は、本明細書中で提供する配列および市販のＤＮＡ合成器を使用して、所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【0210】
組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドを適切なベクター内に挿入することができ、立ち代って、ベクターを、本明細書中にさらに記述されているように、複製および増幅のために適切な宿主細胞内に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当分野で知られている任意の手段によって宿主細胞内に挿入し得る。細胞は、直接取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ接合、または電気穿孔によって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって、形質転換させる。導入された後、外因性ポリヌクレオチドは、非組込みベクター（プラスミドなど）として細胞内で維持されることも、または宿主細胞ゲノム内に組み込まれることもある。このようにして増幅されたポリヌクレオチドは、当分野内で周知の方法によって宿主細胞から単離することができる（たとえばＳａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）。
【0211】
あるいは、ＰＣＲがＤＮＡ配列の複製を可能にする。ＰＣＲ技術は当分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、第４，８００，１５９号、第４，７５４，０６５号、および第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４中に記載されている。
【0212】
ＲＮＡは、単離ＤＮＡを適切なベクター中で使用し、それを適切な宿主細胞内に挿入することによって得ることができる。細胞が複製され、ＤＮＡがＲＮＡへと転写される際に、たとえばＳａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、上記に記載されているように、当業者に周知の方法を使用して、ＲＮＡをその時に単離することができる。
【0213】
適切なクローニングベクターは、標準技法に従って構築し得る、または当分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択し得る。選択したクローニングベクターは使用を意図する宿主細胞に応じて変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製する能力を有する、特定の制限エンドヌクレアーゼに対して単一の標的を有し得る、および／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を保有し得るであろう。適切な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルス、たとえば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（たとえばｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらおよび多くの他のクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業供給業者から利用可能である。
【0214】
発現ベクターは、一般的に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築体である。発現ベクターは、エピソームとしてまたは染色体ＤＮＡの一体部分としてのいずれかで、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが暗示されている。適切な発現ベクターとしては、それだけには限定されないが、ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２号中に開示されている、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含めたウイルスベクター、コスミド、および発現ベクターが挙げられる。ベクターの構成成分としては、一般的に、それだけには限定されないが、以下のうちの１つまたは複数を挙げ得る：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、適切な転写制御要素（プロモーター、エンハンサー、およびターミネーターなど）。発現（すなわち翻訳）には、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、およびストップコドンなどの１つまたは複数の翻訳制御要素も通常は必要である。
【0215】
目的ポリヌクレオチドを含有するベクターは、電気穿孔、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を用いたトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション、および感染（たとえば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）を含めた、いくつかの適切な手段のうちの任意のものによって宿主細胞内に導入することができる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択肢は、多くの場合は宿主細胞の特長に依存する。
【0216】
異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を、目的の抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードしている遺伝子を発現する目的のために使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例としては、それだけには限定されないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、およびＣＨＯ細胞が挙げられる。ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。適切な非哺乳動物宿主細胞としては、原核生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）または枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）など）および酵母（出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、分裂酵母（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、またはケー・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）など）が挙げられる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現している細胞は、既知のスクリーニング方法によって同定することができる。
【0217】
本発明はまた、その特性に有意な影響を与えない機能的に等価な抗体ならびに増強または減少した活性および／または親和性を有する変異体を含めた、本明細書中で提供する抗体への修飾も包含する。たとえば、アミノ酸配列を突然変異させて、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に対して所望の結合親和性を有する抗体が得られ得る。修飾ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換を有するポリペプチド、機能的活性を大きく有害に変化させないアミノ酸の１つもしくは複数の欠失もしくは付加、またはポリペプチドのそのリガンドに対する親和性を成熟（増強）させるもの、あるいは化学的類似体の使用が挙げられる。
【0218】
アミノ酸配列挿入物としては、１個の残基から数百個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さのアミノおよび／またはカルボキシル末端融合体、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入物が挙げられる。末端挿入物の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体またはエピトープタグと融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、血液循環中の抗体の半減期を増加させる酵素またはポリペプチドの、抗体のＮまたはＣ末端との融合が挙げられる。
【0219】
置換変異体では、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去されており、異なる残基がその代わりに挿入される。置換突然変異誘発において最も興味深い部位としては超可変領域が挙げられるが、ＦＲの変更も企図される。保存的置換は、表７中に、見出し「保存的置換」の下で示されている。そのような置換が生物活性の変化をもたらす場合、表７中に「例示的な置換」と命名するまたはアミノ酸クラスに言及して以下にさらに記載するより実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングし得る。
【0220】
【表8】
【0221】
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域中のポリペプチド主鎖の、たとえばシートもしくはヘリックスコンホメーションとしての構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対するその効果が有意に異なる置換を選択することによって、達成される。天然に存在するアミノ酸残基は、共通側鎖の特性に基づいて群分けされる：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）電荷なしの極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性（負荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性（正荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）電荷なしの極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性（負荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性（正荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【0222】
非保存的置換は、これらのクラスのうちのメンバーを別のクラスと交換することによって行われる。
【0223】
抗体の適切なコンホメーションの維持に関与していない任意のシステイン残基も、一般的にセリンで置換して、分子の酸化安定性を改善させ、異常架橋連結防止し得る。逆に、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合は、その安定性を改善させるためにシステイン結合を抗体に付加し得る。
【0224】
アミノ酸修飾は、１つまたは複数のアミノ酸を変化または修飾することから、可変領域などの領域を完全に再設計することに及ぶことができる。可変領域中の変化は結合親和性および／または特異性を変更することができる。一部の実施形態では、１～５個を超えない保存的アミノ酸置換をＣＤＲドメイン内で行う。他の実施形態では、１～３個を超えない保存的アミノ酸置換をＣＤＲドメイン内で行う。さらに他の実施形態では、ＣＤＲドメインはＶＨ ＣＤＲ３および／またはＶＬ ＣＤＲ３である。
【0225】
修飾としては、グリコシル化および非グリコシル化ポリペプチド、ならびにたとえば様々な糖を用いたグリコシル化、アセチル化、およびリン酸化などの他の翻訳後修飾を有するポリペプチドも挙げられる。抗体は、その定常領域中の保存的位置でグリコシル化される（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、６５：１１１～１２８、１９９７、ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、ＴｉｂＴＥＣＨ、１５：２６～３２、１９９７）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３２：１３１１～１３１８、１９９６、ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２９：４１７５～４１８０、１９９０）ならびに糖タンパク質のコンホメーションおよび提示される三次元表面に影響を与える場合がある糖タンパク質の部分間の分子内相互作用（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、上記、ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７：４０９～４１６、１９９６）に影響を与える。オリゴ糖は、特異的認識構造に基づいて所定の糖タンパク質を特定の分子に標的化する役割も果たし得る。抗体のグリコシル化は抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を与えることも報告されている。特に、二分岐ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節性発現を有するＣＨＯ細胞は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告されている（Ｕｍａｎａら、Ｍａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１７：１７６～１８０、１９９９）。
【0226】
抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ連結またはＯ連結のどちらかである。Ｎ連結とは、炭水化物部分とアスパラギン残基の側鎖との付着を指す。トリペプチド配列のアスパラギン－Ｘ－セリン、アスパラギン－Ｘ－スレオニン、およびアスパラギン－Ｘ－システイン［式中、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である］が、炭水化物部分とアスパラギン側鎖との酵素的付着の認識配列である。したがって、これらのトリペプチド配列のいずれかがポリペプチド中に存在することで、潜在的なグリコシル化部位が作られる。Ｏ連結グリコシル化とは、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つと、最も一般的にはセリンまたはスレオニンであるが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリシンも使用し得るヒドロキシアミノ酸との付着を指す。
【0227】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、上述のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含有するようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成される（Ｎ連結グリコシル化部位用）。変更は、元の抗体の配列に１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基を付加するまたはそれによって置換することによっても行い得る（Ｏ連結グリコシル化部位用）。
【0228】
根底にあるヌクレオチド配列を変更せずに抗体のグリコシル化パターンも変更し得る。グリコシル化は、抗体を発現させるために使用する宿主細胞に大部分が依存する。組換え糖タンパク質、たとえば抗体の、潜在的な治療剤としての発現に使用する細胞種がネイティブ細胞であることは稀であるため、抗体のグリコシル化パターンの変動を予想することができる（たとえばＨｓｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７２：９０６２～９０７０、１９９７を参照）。
【0229】
宿主細胞の選択肢に加えて、抗体の組換え産生中にグリコシル化に影響を与える要因としては、成長様式、培地の配合、培養密度、酸素化、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを変更するために様々な方法が提案されており、オリゴ糖産生に関与する特定の酵素を導入するまたは過剰発現させることが挙げられる（米国特許第５，０４７，３３５号、第５，５１０，２６１号、および第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、または特定の種類のグリコシル化は、たとえば、エンドグリコシダーゼＨ（エンドＨ）、Ｎ－グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞を、特定の種類の多糖のプロセシングに欠陥があるように遺伝子操作することができる。これらおよび同様の技法が当分野で周知である。
【0230】
他の修飾方法は、当分野で知られているカップリング技法を使用することを含み、それだけには限定されないが、酵素的手段、酸化的置換、およびキレート化が挙げられる。修飾は、たとえば、免疫アッセイのための標識の付着に使用することができる。修飾ポリペプチドは当分野において確立された手順を使用して作製され、その一部が以下および実施例中に記載されている、当分野で知られている標準アッセイを使用してスクリーニングすることができる。
【0231】
本発明の一部の実施形態では、抗体は、ヒトＦｃガンマ受容体に対して増加した親和性を有するもの、免疫学的に不活性または部分的に不活性である、たとえば、補体媒介性溶解を始動させない、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を刺激しない、もしくはマクロファージを活性化させないもの、あるいは、補体媒介性溶解を始動させること、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を刺激すること、またはミクログリアを活性させることのうちの任意の１つまたは複数において低下した活性を有するもの（未修飾の抗体と比較して）などの、修飾された定常領域を含む。定常領域の様々な修飾を使用して、エフェクター機能の最適レベルおよび／または組合せを達成し得る。たとえば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８６：３１９～３２４、１９９５、Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５７：４９６３～９
１５７：４９６３～４９６９、１９９６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８～４１８４、２０００、Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３～２６２４、１９９９、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／またはＵＫ出願第９８０９９５１．８号に記載のように修飾される。さらに他の実施形態では、定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。一部の実施形態では、定常領域は、定常領域中のＮ－グリコシル化認識配列の一部であるグリコシル化されたアミノ酸残基または隣接残基を突然変異させることによって、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。たとえば、Ｎ－グリコシル化部位Ｎ２９７をＡ、Ｑ、Ｋ、またはＨへと突然変異させ得る。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによって炭水化物を除去することなど）、またはグリコシル化欠損宿主細胞中での発現によって脱グリコシル化させ得る。
１５７：４９６３～４９６９、１９９６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６４：４１７８～４１８４、２０００、Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９、およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９：２６１３～２６２４、１９９９、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号、および／またはＵＫ出願第９８０９９５１．８号に記載のように修飾される。さらに他の実施形態では、定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。一部の実施形態では、定常領域は、定常領域中のＮ－グリコシル化認識配列の一部であるグリコシル化されたアミノ酸残基または隣接残基を突然変異させることによって、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。たとえば、Ｎ－グリコシル化部位Ｎ２９７をＡ、Ｑ、Ｋ、またはＨへと突然変異させ得る。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４３：２５９５～２６０１、１９８９およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６３：５９～７６、１９９８を参照されたい。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について脱グリコシル化されている。定常領域は、Ｎ連結グリコシル化について、酵素的に（酵素ＰＮＧａｓｅによって炭水化物を除去することなど）、またはグリコシル化欠損宿主細胞中での発現によって脱グリコシル化させ得る。
【0232】
他の抗体修飾としては、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５８５７２号中に記載のように修飾された抗体が挙げられる。これらの抗体は、標的分子に向けられた結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域の全体または一部と実質的に相同的なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、標的の顕著な補体依存性溶解または細胞媒介性破壊を始動させずに、標的分子と結合することができる。一部の実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂと特異的に結合することができる。これらは、典型的には、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。この様式で修飾された抗体は、慢性抗体療法における使用において、慣用の抗体療法に対する炎症性および他の有害な反応を回避するために、特に適している。
【0233】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体のＦｃ鎖を、エフェクター機能を除去するために修飾し得る。たとえば、ＦｃγＲＩＩＩとの結合が原因のエフェクター機能を除去するために、ヒトＩｇＧ１のＦｃ鎖を、標準のプライマーダイレクトＰＣＲ突然変異誘発を使用して突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａを導入して修飾し、エフェクター機能ヌル表現型を提供し得る（Ｃａｎｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ（１９９１）１７３：１４８３～１４９１、Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６：６５９１～６０４）。
【0234】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する二重特異性抗体は、本発明の別のポリペプチド鎖上の対応システイン残基と相互作用して鎖間ジスルフィド結合を形成し得る、少なくとも１つのシステイン残基を含むように操作設計し得る。鎖間ジスルフィド結合は、二重特異性抗体を安定化し、組換え系における発現および回収を改善させ、安定かつ一貫した形成をもたらす、ならびに単離および／または精製生成物のｉｎ ｖｉｖｏの安定性を改善させる役割を果たし得る。システイン残基または複数の残基は、単一のアミノ酸として、またはより大きなアミノ酸配列、たとえばヒンジ領域の一部として、ポリペプチド鎖の任意の部分中に導入し得る。特定の態様では、少なくとも１つのシステイン残基は、ポリペプチド鎖のＣ末端で起こるように操作設計する。
【0235】
組成物、方法、およびキット
一部の実施形態では、本発明は、本明細書中に記載の、または本明細書中に記載の方法によって作製しその特徴を有する、本発明の抗体を含む医薬組成物を含めた、組成物を包含する。本明細書中で使用する医薬組成物は、ＣＤ４７と結合する１つもしくは複数の抗体、ＰＤ－Ｌ１と結合する１つもしくは複数の抗体、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と結合する１つもしくは複数の二重特異性抗体、ならびに／または１つもしくは複数のこれらの抗体をコードしている配列を含む１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含み得る。これらの組成物は、当分野で周知である緩衝剤を含めた薬学的に許容できる賦形剤などの適切な賦形剤をさらに含み得る。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書中に記載の、または本明細書中に記載の方法によって作製しその特徴を有する、本発明の抗体を含む医薬組成物を含めた、組成物を包含する。本明細書中で使用する医薬組成物は、ＣＤ４７と結合する１つもしくは複数の抗体、ＰＤ－Ｌ１と結合する１つもしくは複数の抗体、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１と結合する１つもしくは複数の二重特異性抗体、ならびに／または１つもしくは複数のこれらの抗体をコードしている配列を含む１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含み得る。これらの組成物は、当分野で周知である緩衝剤を含めた薬学的に許容できる賦形剤などの適切な賦形剤をさらに含み得る。
【0236】
本明細書中で提供する本発明は、治療上有効な量の本明細書中で提供する抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、または二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１抗体を対象に投与することを含む、対象において癌を処置、防止、または管理するための方法および組成物をさらに包含する。抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、およびＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、原発性腫瘍および癌細胞の転移の防止、阻害、成長低下、および／または回帰において特に有用であり得る。
【0237】
一態様では、本発明は、対象においてＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１の発現に関連する状態を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、対象においてＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１の発現に関連する状態を処置する方法は、それを必要としている対象に、有効量の、本明細書中に記載のそれぞれの抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、および／またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を含む組成物（たとえば医薬組成物）を投与することを含む。ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１の発現に関連する状態としては、それだけには限定されないが、異常なＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１の発現、変更されたまたは異常なＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１の発現、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１を発現する悪性細胞、ならびに増殖性障害（たとえば癌）が挙げられる。具体的な実施形態では、癌は、膀胱癌、乳癌、明細胞腎臓癌、頭部／頸部扁平細胞癌［頭頸部の扁平細胞癌（ＳＣＣＨＮ）］、肺扁平細胞癌、肺腺癌、悪性黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、三重陰性乳癌、尿路上皮癌、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄細胞白血病－１タンパク質（Ｍｃｌ－１）、脊髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、子宮内膜癌、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、結腸直腸癌、膠芽細胞腫、子宮癌、子宮頸癌、陰茎癌、または非黒色腫皮膚癌である。
【0238】
一態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／もしくはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体、または、治療において使用するための、そのような抗体を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、本発明はまた、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に関連する障害の処置において使用するための、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体も提供する。具体的な実施形態では、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に関連する障害は本明細書中に定義する癌である。
【0239】
本発明は、本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／もしくはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体、または、治療において使用するための医薬品の製造において使用するための、そのような抗体を含む医薬組成物をさらに提供する。一部の実施形態では、治療は、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に関連する障害の処置である。具体的な実施形態では、ＣＤ４７および／またはＰＤ－Ｌ１に関連する障害は癌である。
【0240】
特定の態様では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、癌細胞の成長を、抗体または二重特異性抗体の非存在下における癌細胞の成長よりも、少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、または少なくとも１０％阻害するまたは低下させる。
【0241】
特定の態様では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、抗体または二重特異性抗体の非存在下よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％良好に、細胞を死滅させる、または癌細胞の成長を阻害するもしくは低下させる。
【0242】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法および使用は、対象を、追加の形態の治療で処置するステップをさらに含む。一部の実施形態では、追加の形態の治療は追加の抗癌治療であり、それだけには限定されないが、化学療法、放射線照射、手術、ホルモン療法、および／または追加の免疫療法が挙げられる。
【0243】
本発明は、本発明の分子を、それだけには限定されないが、現在の標準および実験的な化学療法、生物療法、免疫療法、放射線療法、または手術を含めた、癌を処置または防止するために当業者に知られている他の治療と組み合わせてと投与することをさらに包含する。一部の態様では、本発明の分子は、治療上または予防上有効な量の１つまたは複数の薬剤、治療的抗体、または癌の処置および／もしくは防止について当業者に知られている他の薬剤と組み合わせて投与し得る。
【0244】
したがって、癌を処置するための方法および使用は、それを必要としている対象に、有効量の本発明の抗体または二重特異性抗体を、化学療法剤と組み合わせて投与することを含む。そのような組合せ処置は、別々に、順次に、または同時に投与し得る。適切な化学療法剤としては、それだけには限定されないが、ベバシズマブ、セツキシマブ、シロリムス、パニツムマブ、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、カペシタビン、チボザニブ、イリノテカン、オキサリプラチン、シスプラチン、トリフルリジン、チピラシル、ロイコボリン）、ゲムシタビン、および／または塩酸エルロチニブなどの少なくとも１つの追加の薬剤が挙げられる。
【0245】
本明細書中で提供する投与の投与量および頻度は、治療上有効および予防上有効に関して包含される。投与の量および頻度は、それぞれの患者に特異的な要因次第で、投与した特定の治療剤または予防剤、癌の重篤度および種類、投与経路、ならびに患者の年齢、体重、応答、および過去の病歴に応じて、さらに変動し得る。適切なレジメンは、そのような要因を考慮することによって、ならびにたとえば文献中に報告され、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（第５６版、２００２）中に推奨される投与量に従うことによって、当業者によって選択され得る。
【0246】
本発明の抗体または二重特異性抗体は、選択した投与様式に適切であるように配合された投与用の医薬組成物、および緩衝剤、界面活性剤、保存料、可溶化剤、等張化剤、安定化剤、担体などの薬学的に許容できる希釈剤または賦形剤の形態であり得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ、第１８版、１９９５は、従事者に一般的に知られている配合技法の概論を提供する。
【0247】
これらの医薬組成物は、癌を処置する一般的に意図される目的を達成する、当分野で知られている任意の手段によって投与し得る。投与経路は、本明細書中において、それだけには限定されないが、経食道、腫瘍内、経結腸内視鏡、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、および関節内の注射および輸液を含む投与様式を指すと定義される、非経口であり得る。本発明による分子（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体、関連医薬組成物）の投与および投薬の様式は、闘う疾患の種類、必要に応じてその段階、制御する抗原、存在する場合は同時発生的処置の種類、処置の頻度、所望する効果の性質、ならびに患者の体重、年齢、健康、食習慣、および性別に依存する。したがって、実際に用いる投薬レジメンは幅広く変動する場合があり、したがって、本明細書中に記載した投薬レジメンから逸脱する場合がある。
【0248】
本発明の抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の様々な配合物を投与に使用し得る。一部の実施形態では、抗体はニートで投与し得る。一部の実施形態では、抗体および薬学的に許容できる賦形剤は様々な配合物中であり得る。薬学的に許容できる賦形剤は当分野で知られており、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする比較的不活性な物質である。たとえば、賦形剤は、形もしくは稠度を与える、または希釈剤として作用することができる。適切な賦形剤としては、それだけには限定されないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、様々な容積モル浸透圧濃度のための塩、カプセル封入剤、緩衝剤、および皮膚浸透促進剤が挙げられる。賦形剤ならびに非経口および非経口でない薬物送達のための配合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５に記載されている。
【0249】
一部の実施形態では、これらの薬剤は、注射による投与（たとえば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）用に配合される。したがって、これらの薬剤は、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液などの薬学的に許容できるビヒクルと組み合わせることができる。具体的な投薬レジメン、すなわち、用量、タイミング、および反復は、具体的な個体およびその個体の病歴に依存する。
【0250】
本明細書中に記載の抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）は、注射によるもの（たとえば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）を含めた任意の適切な方法を使用して投与することができる。抗体、たとえばモノクローナル抗体または二重特異性抗体は、本明細書中に記載のように吸入を介しても投与される。一般的に、本抗体の投与では、投与量は処置する宿主および具体的な投与様式に依存する。一実施形態では、本発明の抗体の用量範囲は、約０．００１μｇ／ｋｇの体重～約２０，０００μｇ／ｋｇの体重である。用語「体重」は、患者を処置する場合に適応可能である。単離細胞を処置する場合は、本明細書中で使用する「体重」とは「全細胞体重」を指す。用語「全体重」を、単離細胞および患者の処置の両方に適用するために使用し得る。すべての濃度および処置レベルは、本出願中において「体重」または単に「ｋｇ」として表され、また、類似の「全細胞体重」および「全体重」濃度をカバーするとみなされる。しかし、当業者は、様々な投与量範囲、たとえば、０．０１μｇ／ｋｇの体重～２０，０００μｇ／ｋｇの体重、０．０２μｇ／ｋｇの体重～１５，０００μｇ／ｋｇの体重、０．０３μｇ／ｋｇの体重～１０，０００μｇ／ｋｇの体重、０．０４μｇ／ｋｇの体重～５，０００μｇ／ｋｇの体重、０．０５μｇ／ｋｇの体重～２，５００μｇ／ｋｇの体重、０．０６μｇ／ｋｇの体重～１，０００μｇ／ｋｇの体重、０．０７μｇ／ｋｇの体重～５００μｇ／ｋｇの体重、０．０８μｇ／ｋｇの体重～４００μｇ／ｋｇの体重、０．０９μｇ／ｋｇの体重～２００μｇ／ｋｇの体重、または０．１μｇ／ｋｇの体重～１００μｇ／ｋｇの体重の有用性を認識するであろう。さらに、当業者は、様々な投与量レベル、たとえば、０．０００１μｇ／ｋｇ、０．０００２μｇ／ｋｇ、０．０００３μｇ／ｋｇ、０．０００４μｇ／ｋｇ、０．００５μｇ／ｋｇ、０．０００７μｇ／ｋｇ、０．００１μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ、１．５μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、５．０μｇ／ｋｇ、１０．０μｇ／ｋｇ、１５．０μｇ／ｋｇ、３０．０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、７５μｇ／ｋｇ、８０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１２０μｇ／ｋｇ、１４０μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、１６０μｇ／ｋｇ、１８０μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２２５μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、２７５μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、３２５μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、３７５μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、４５０μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、５５０μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、８００μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１２μｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、および／または３０ｍｇ／ｋｇが役に立つことを認識するであろう。これらの投与量はすべて例示的であり、これらの点の間の任意の投与も、本発明において役立つことが予想される。上記の投与量範囲または投与量レベルのうちの任意のものを本発明の抗体に用い得る。数日間またはそれより長くにわたる繰り返し投与では、状態に応じて、症状の所望の抑制が起こるまで、または、たとえば腫瘍の成長／進行もしくは癌細胞の転移を阻害もしくは遅延させるために十分な治療レベルが達成されるまで、処置を持続させる。
【0251】
一般的に、本明細書中で提供する抗体の投与では、候補投与量を、１日１回、週に１回、隔週、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、１０週間毎、１２週間毎、または１２週間毎より長くに投与することができる。
【0252】
一部の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、１日１回、約１μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれより多くのうちの任意のものの範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの１日投与量を使用し得る。
【0253】
一部の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、週に１回、約１μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれより多くのうちの任意のものの範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの週１回の投与量を使用し得る。
【0254】
一部の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、２週間毎に、約１μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれより多くのうちの任意のものの範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの２週間毎の投与量を使用し得る。
【0255】
一部の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、３週間毎に、約１μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれより多くのうちの任意のものの範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの３週に１回の投与量を使用し得る。
【0256】
一部の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、１カ月毎または４週間毎に、約１μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまで、またはそれより多くのうちの任意のものの範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの月１回の投与量を使用し得る。
【0257】
他の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、１日１回、約０．０１ｍｇ～約１２００ｍｇまたはそれより多い範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの１日投与量を使用し得る。
【0258】
他の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、週に１回、約０．０１ｍｇ～約２０００ｍｇまたはそれより多い範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの週１回の投与量を使用し得る。
【0259】
他の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、２週間毎に、約０．０１ｍｇ～約２０００ｍｇまたはそれより多い範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの２週間毎の投与量を使用し得る。
【0260】
他の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、３週間毎に、約０．０１ｍｇ～約２５００ｍｇまたはそれより多い範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、または約２５００ｍｇの３週に１回の投与量を使用し得る。
【0261】
他の実施形態では、候補投与量は、上で言及した要因に応じて、４週間または１カ月毎に、約０．０１ｍｇ～約３０００ｍｇまたはそれより多い範囲の投与量で投与する。たとえば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、または約３０００ｍｇの月１回の投与量を使用し得る。
【0262】
従事者が達成を望む薬物動態学的崩壊のパターン次第では、他の投薬レジメンも有用であり得る。一実施形態では、本発明の抗体は、初期のプライム用量、次いでより高いおよび／または連続的な、実質的に一定した投与量で投与する。一部の実施形態では、週に１～４回の投薬が企図される。他の実施形態では、月に１回または隔月または３カ月に１回の投薬が企図される。この治療の進行は慣用技術およびアッセイによって容易にモニタリングされる。投薬レジメンは時間に伴って変動する場合がある。
【0263】
本発明の目的のために、抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の適切な投与量は、用いる抗体またはその組成物、処置する症状の種類および重篤度、薬剤を治療目的で投与するのかどうか、以前の治療、患者の病歴および薬剤に対する応答、投与した薬剤に対する患者のクリアランス速度、ならびに担当医の裁量に依存する。典型的には、臨床家は、所望の結果を達成する投与量に到達するまで抗体を投与する。用量および／または頻度は処置の経過中に変動する場合がある。半減期などの経験的考慮事項が、投与量の決定に一般的に寄与する。たとえば、抗体の半減期を延ばすため、および抗体が宿主の免疫系によって攻撃されることを防止するために、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合性のある抗体を使用し得る。投与の頻度は、治療の経過中に決定および調整してよく、必ずしもではないが、一般的に、症状の処置および／または抑制および／または軽快および／または遅延、たとえば、腫瘍成長の阻害または遅延などに基づく。あるいは、抗体の持続的連続放出配合物が適切であり得る。持続放出を達成するための様々な配合物および装置が当分野で知られている。
【0264】
一実施形態では、抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の投与量は、抗体の１回または複数回の投与を与えられた個体において経験的に決定し得る。個体には、抗体の増加する投与量を与える。有効性を評価するためには、疾患の指標に従うことができる。
【0265】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）は、疾患（たとえば癌）の処置のために抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療剤を以前に受けた対象に投与し得る。一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体を、疾患の処置のために抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療剤を以前に受けており、以前の抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療剤が対象において限られた有効性しかないまたは有効性をもたない（たとえば、対象の疾患が以前の抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１治療剤を用いた処置に耐性である）、対象に投与し得る。
【0266】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）は、ＰＤ－Ｌ１の発現の試験において陽性となる癌を有する対象に投与し得る。一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗体は、ＰＤ－Ｌ１の発現の試験において陽性とならない癌を有する対象に投与し得る。
【0267】
本明細書中で使用する「ＰＤ－Ｌ１の発現」とは、細胞表面上のＰＤ－Ｌ１タンパク質または細胞もしくは組織内のＰＤ－Ｌ１ ｍＲＮＡの、任意の検出可能な発現レベルを指す。ＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現は、診断的抗ＰＤ－Ｌ１抗体を用いて、腫瘍組織切片の免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイにおいてまたはフローサイトメトリーによって検出し得る。細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現は、ＰＥＴイメージングによって、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する結合剤（たとえば抗体）を使用しても検出し得る。ＰＤ－Ｌ１ ｍＲＮＡの発現を検出および測定するための技法としては、たとえば、ＲＴ－ＰＣＲおよびリアルタイム定量的ＲＴ－ＰＣＲが挙げられる。
【0268】
いくつかの手法が、腫瘍組織切片のＩＨＣアッセイにおいてＰＤ－Ｌ１の発現を定量するために記載されている。たとえば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら、ＰＮＡＳ、１０１（４９）、１７１７４～１７１７９（２００４）、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６６：３３８１～３３８５（２００６）、Ｇａｄｉｏｔ，Ｊ．ら、Ｃａｎｃｅｒ、１１７：２１９２～２２０１（２０１１）、Ｔａｕｂｅ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ、４、１２７ｒａ３７（２０１２）、およびＴｏｐｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．ら、Ｎｅｗ Ｅｎｇ．ＪＡｅｄ、３６６（２６）：２４４３～２４５４（２０１２）を参照されたい。
【0269】
一手法は、ＰＤ－Ｌ１の発現について陽性または陰性の単純なバイナリエンドポイントを用い、陽性結果は、細胞表面膜染色の組織学的証拠を示す腫瘍細胞の百分率の観点から定義される。腫瘍組織切片は、特定の百分率の腫瘍細胞がＰＤ－Ｌ１の発現について陽性である場合に、ＰＤ－Ｌ１の発現について陽性として数え得る。たとえば、腫瘍組織切片は、腫瘍細胞の少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、５０％、７５％、９０％、または９５％がＰＤ－Ｌ１の発現について陽性である場合に、ＰＤ－Ｌ１の発現について陽性として数え得る。
【0270】
別の手法では、腫瘍組織切片中のＰＤ－Ｌ１の発現は、主にリンパ球を含む腫瘍細胞中および浸潤性免疫細胞中において定量する。膜染色を示す腫瘍細胞および浸潤性免疫細胞の百分率を、＜５％、５～９％、その後は１０％の増分ずつ１００％までなどで、別々に定量し得る。腫瘍細胞では、ＰＤ－Ｌ１の発現は、それぞれ、スコアがたとえば１％、２％、または５％未満である場合に陰性として、およびスコアが１％、２％、または５％より高い場合に陽性として数え得る。浸潤性免疫細胞中のＰＤ－Ｌ１の発現は、膜染色細胞のパーセントを、なし（０）、軽度（スコア１、稀なリンパ球）、中等度（スコア２、リンパ組織球性凝集体による腫瘍の限局性浸潤）、または重篤（スコア３、びまん性浸潤）として等級付けされる浸潤の強度と乗算することによって決定される、調整炎症スコア（ＡＩＳ）と呼ばれる半定量的測定値として報告し得る。腫瘍組織切片は、ＡＩＳが５よりも高い場合に、免疫浸潤物によるＰＤ－Ｌ１の発現について陽性として数え得る。
【0271】
ＰＤ－Ｌ１ ｍＲＮＡの発現のレベルは、ユビキチンＣなどの定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいて頻繁に使用される１つまたは複数の参照遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルと比較し得る。
【0272】
一部の実施形態では、腫瘍内の悪性細胞および／または浸潤性免疫細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のレベルは、適切な対照によるＰＤ－Ｌ１の発現（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）のレベルとの比較に基づいて、「過剰発現されている」または「上昇している」と決定される。たとえば、対照ＰＤ－Ｌ１タンパク質またはｍＲＮＡの発現レベルは、同じ種類の非悪性細胞または一致した正常組織由来の切片において定量されたレベルであり得る。一部の実施形態では、腫瘍試料中におけるＰＤ－Ｌ１の発現は、試料中のＰＤ－Ｌ１タンパク質（および／またはＰＤ－Ｌ１ ｍＲＮＡ）が対照中におけるものよりも少なくとも１０％、２０％、または３０％高い場合に、上昇していると決定される。
【0273】
一部の実施形態では、癌におけるＰＤ－Ｌ１の発現は、診断的抗ＰＤ－Ｌ１抗体を使用して、患者から取り出した腫瘍試料の組織切片上の免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイにおいて検出する。典型的には、本明細書中で提供する抗体を用いた処置の前にＰＤ－Ｌ１の発現を決定するために腫瘍の試料を試験するが、処置の開始後に試験することもできる。
【0274】
腫瘍組織切片中におけるＰＤ－Ｌ１の発現のＩＨＣ検出のための診断的ｍＡｂとして有用な診断的抗ヒトＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの具体的な例は、ＷＯ２０１４／１０００７９号中に記載されている抗体２０Ｃ３および抗体２２Ｃ３である。例示的なＰＤ－Ｌ１ ＩＨＣ試験としては、ＰＤ－Ｌ１ ＩＨＣ ２２Ｃ３ ＰｈａｒｍＤｘ（Ｄａｃｏ）およびＶｅｎｔａｎａ ＰＤ－Ｌ１ ＳＰ２６３アッセイが挙げられる。
【0275】
ある特定の実施形態では、抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の投与は、腫瘍成長の阻害、腫瘍回帰、腫瘍のサイズの低下、腫瘍細胞数の低下、腫瘍成長の遅延、アブスコパル効果、腫瘍転移の阻害、経時的な転移性病変の低下、化学療法剤または細胞毒性剤の使用の低下、腫瘍量の低下、無進行生存の増加、全生存の増加、完全応答、部分応答、および安定疾患からなる群から選択される少なくとも１つの効果をもたらす。
【0276】
本発明における方法に従った抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の投与は、たとえば、レシピエントの生理的条件、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、および当業者に知られている他の要因に応じて、連続的または断続的であり得る。抗体の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であり得る、または一連の間隔を空けた用量であり得る。
【0277】
本発明に従って使用する抗体（たとえば、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体）の治療的配合物は、所望の度合の純度を有する抗体を、任意選択の薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５）と、凍結乾燥配合物または液剤の形態で混合することによって、貯蔵用に調製される。許容される担体、賦形剤、または安定化剤は、用いる投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤、塩化ナトリウムなどの塩、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（たとえばＺｎ－タンパク質複合体）、ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含み得る。
【0278】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、１つまたは複数の追加の治療剤の投与と組み合わせて投与し得る。追加の治療剤は、追加の抗癌剤を含んでいてもよい。これらとしては、それだけには限定されないが、ワクチン、ＣＡＲ－Ｔ細胞に基づく治療、放射線療法、サイトカイン治療、ＣＤ３二重特異性抗体、他の免疫抑制経路の阻害剤、血管形成の阻害剤、Ｔ細胞活性化剤、代謝経路の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アデノシン経路の阻害剤、それだけには限定されないがＩｎｌｙｔａ、ＡＬＫ阻害剤、およびスニチニブを含むチロシンキナーゼ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、後成的モディファイヤー、ＩＤＯ１阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、ＳＴＡＴ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、生物治療剤（それだけには限定されないが、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、他の成長因子受容体、ＣＤ４０、ＣＤ－４０Ｌ、ＣＴＬＡ－４、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ、ＴＩＧＩＴ、およびＩＣＯＳに対する抗体を含む）、免疫原性剤（たとえば、弱毒化癌細胞、腫瘍抗原、腫瘍由来の抗原または核酸をパルスした樹状細胞などの抗原提示細胞、免疫刺激サイトカイン（たとえば、ＩＬ－２、ＩＦＮα２、ＧＭ－ＣＳＦ）、およびそれだけには限定されないがＧＭ－ＣＳＦなどの免疫刺激サイトカインをコードしている遺伝子をトランスフェクトした細胞）などの生物治療剤および／または化学療法剤の投与が挙げられるが、それだけには限定されない。
【0279】
生物治療剤の例としては、治療的抗体、免疫調節剤、および治療的免疫細胞が挙げられる。
【0280】
治療的抗体は、様々な異なる抗原に対して特異性を有し得る。たとえば、治療的抗体は、抗体と抗原との結合が、抗原を発現する細胞の死を促進するように、腫瘍関連抗原に向けられていてよい。他の例では、治療的抗体は、抗体の結合が、抗原を発現する細胞の活性の下方調節を防止する（したがって抗原を発現する細胞の活性を促進する）ように、免疫細胞上の抗原（たとえばＰＤ－１）に向けられていてよい。一部の状況では、治療用抗体は複数の異なる機構を通じて機能し得る（たとえば、これは、ｉ）抗原を発現する細胞の死を促進すること、ｉｉ）抗原が、抗原を発現する細胞と接触している免疫細胞の活性の下方調節を引き起こすことを防止することの両方を行い得る）。
【0281】
治療的抗体は、たとえば、以下に列挙する抗原に向けられていてよい。一部の抗原では、抗原に向けられた例示的な抗体も以下に挙げられる（抗原の後の角括弧／括弧中）。以下の抗原は、本明細書中において「標的抗原」などとも呼び得る。本明細書中における治療的抗体に対する標的抗原としては、たとえば、４－１ＢＢ（たとえばウトミルマブ）、５Ｔ４、Ａ３３、アルファ－葉酸受容体１（たとえばミレベツキシマブ ソラブタンシン）、Ａｌｋ－１、ＢＣＭＡ［たとえばＰＦ－０６８６３１３５（ＵＳ９９６９８０９号を参照）］、ＢＴＮ１Ａ１（たとえばＷＯ２０１８２２２６８９号を参照）、ＣＡ－１２５（たとえばアバゴボマブ）、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４（たとえばモガムリズマブ）、ＣＣＲ５（たとえばレロンリマブ）、ＣＣＲ８、ＣＤ３［たとえば、ブリナツモマブ（ＣＤ３／ＣＤ１９二重特異性）、ＰＦ－０６６７１００８（ＣＤ３／Ｐ－カドヘリン二重特異性）、ＰＦ－０６８６３１３５（ＣＤ３／ＢＣＭＡ二重特異性）、ＣＤ１９（たとえば、ブリナツモマブ、ＭＯＲ２０８）、ＣＤ２０（たとえば、イブリツモマブチウキセタン、オビヌツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、ウブリツキシマブ）、ＣＤ２２（イノツズマブオゾガマイシン、モキセツムモマブパスドトクス）、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０（たとえばブレンツキシマブ ベドチン）、ＣＤ３３（たとえばゲムツズマブオゾガマイシン）、ＣＤ３８（たとえば、ダラツムマブ、イサツキシマブ）、ＣＤ４０、ＣＤ－４０Ｌ、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４７、ＣＤ５２（たとえばアレムツズマブ）、ＣＤ６３、ＣＤ７９（たとえばポラツズマブ ベドチン）、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ２７６／Ｂ７－Ｈ３（たとえばオムブルタマブ）、ＣＤＨ１７、ＣＥＡ、ＣｌｈＣＧ、ＣＴＬＡ－４（たとえば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、ＣＸＣＲ４、デスモグレイン４、ＤＬＬ３（たとえばロバルピツズマブ テシリン）、ＤＬＬ４、Ｅ－カドヘリン、ＥＤＡ、ＥＤＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ（たとえば、セツキシマブ、デパツキシズマブ マホドチン、ネシツムマブ、パニツムマブ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、エンドシアリン、ＥｐＣＡＭ（たとえばオポルツズマブ モナトクス）、ＦＡＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＦＬＴ３（たとえばＷＯ２０１８／２２０５８４号を参照）、ＧＤ２（たとえば、ジヌツキシマブ、３Ｆ８）、ＧＤ３、ＧＩＴＲ、ＧｌｏｂｏＨ、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＵＣＹ２Ｃ（たとえばＰＦ－０７０６２１１９）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ［たとえば、マルゲツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アド－トラスツズマブエムタンシン、トラスツズマブ デュオカルマジン、ＰＦ－０６８０４１０３（ＵＳ８８２８４０１号を参照）］、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＣＯＳ、ＩＬ－１０、ＩＴＧ－ＡｖＢ６、ＬＡＧ－３（たとえばレラトリマブ）、ルイス－Ｙ、ＬＧ、Ｌｙ－６、Ｍ－ＣＳＦ［たとえばＰＤ－０３６０３２４（ＵＳ７３２６４１４号を参照）］、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ７、ＭＵＣ１６、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ３、ネクチン－４（たとえばエンホルツマブ ベドチン）、ＯＸ４０［たとえばＰＦ－０４５１８６００（ＵＳ７９６０５１５号を参照）］、Ｐ－カドヘリン［たとえばＰＦ－０６６７１００８（ＷＯ２０１６／００１８１０号を参照）］、ＰＣＤＨＢ２、ＰＤ－１［たとえば、ＢＣＤ－１００、カムレリズマブ、セミプリマブ、ゲノリムズマブ（ｇｅｎｏｌｉｍｚｕｍａｂ、ＣＢＴ－５０１）、ＭＥＤＩ０６８０、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＲＮ８８８（ＷＯ２０１６／０９２４１９号を参照）、シンチリマブ、スパルタリズマブ、ＳＴＩ－Ａ１１１０、チスレリズマブ、ＴＳＲ－０４２］、ＰＤ－Ｌ１（たとえば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、またはＬＹ３３０００５４）、ＰＤＧＦＲＡ（たとえばオララツマブ）、形質細胞抗原、ポリＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７［たとえばＰＦ－０６６４７０２０（ＵＳ９４０９９９５号を参照）］、Ｒｏｒ１、ＳＡＳ、ＳＣＲｘ６、ＳＬＡＭＦ７（たとえばエロツズマブ）、ＳＨＨ、ＳＩＲＰａ（たとえば、ＥＤ９、Ｅｆｆｉ－ＤＥＭ）、ＳＴＥＡＰ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＮＦ－アルファ前駆体、ＴＲＯＰ－２（たとえばサシツズマブ ゴビテカン）、ＴＳＰＡＮ８、ＶＥＧＦ（たとえば、ベバシズマブ、ブロルシズマブ）、ＶＥＧＦＲ１（たとえばラニビズマブ）、ＶＥＧＦＲ２（たとえば、ラムシルマブ、ラニビズマブ）、Ｗｕｅ－１が挙げられる。
【0282】
本明細書中で提供する抗体と組み合わせて投与する治療的抗体は、任意の適切な形式を有し得る。たとえば、治療的抗体は、本明細書中に他の箇所で記載した任意の形式を有し得る。一部の実施形態では、治療用抗体は裸抗体であり得る。一部の実施形態では、治療用抗体は、薬物または他の薬剤と連結していてよい（「抗体－薬物コンジュゲート」（ＡＤＣ）としても知られる）。一部の実施形態では、特定の抗原に対する治療用抗体を多特異性抗体（たとえば二重特異性抗体）内に取り込ませ得る。
【0283】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）作用剤、免疫賦活性サイトカイン、および癌ワクチンと組み合わせて投与し得る。複数クラスのＰＲＲ分子が存在し、トール様受容体（ＴＬＲ）、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ヌクレオチド－結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、およびインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）タンパク質が挙げられる。他のＰＲＲとしては、たとえば、ＩＦＮ調節因子のＤＮＡ依存性活性化剤（ＤＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ＩＦＮ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ、ＤＡＩ）、および黒色腫中に非存在（Ａｂｓｅｎｔ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ）２（ＡＩＭ２）が挙げられる。
【0284】
一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、本明細書中で「ＴＬＲ作用剤」と呼ぶ、１つまたは複数のＴＬＲを活性化させる分子と組み合わせて投与し得る。ＴＬＲ作用剤としては、たとえば、低分子（たとえば約１０００ダルトン未満の分子量を有する有機分子）ならびに大分子（たとえばオリゴヌクレオチドおよびタンパク質）を挙げることができる。一部のＴＬＲ作用剤は単一種類のＴＬＲ（たとえばＴＬＲ３またはＴＬＲ９）に特異的である一方で、一部のＴＬＲ作用剤は２種類以上のＴＬＲ（たとえばＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方）を活性化させる。本明細書中で提供する例示的なＴＬＲ作用剤としては、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９の作用剤が挙げられる。例示的な低分子ＴＬＲ作用剤としては、たとえば、米国特許第４，６８９，３３８号、第４，９２９，６２４号、第５，２６６，５７５号、第５，２６８，３７６号、第５，３４６，９０５号、第５，３５２，７８４号、第５，３８９，６４０号、第５，４４６，１５３号、第５，４８２，９３６号、第５，７５６，７４７号、第６，１１０，９２９号、第６，１９４，４２５号、第６，３３１，５３９号、第６，３７６，６６９号、第６，４５１，８１０号、第６，５２５，０６４号、第６，５４１，４８５号、第６，５４５，０１６号、第６，５４５，０１７号、第６，５７３，２７３号、第６，６５６，９３８号、第６，６６０，７３５号、第６，６６０，７４７号、第６，６６４，２６０号、第６，６６４，２６４号、第６，６６４，２６５号、第６，６６７，３１２号、第６，６７０，３７２号、第６，６７７，３４７号、第６，６７７，３４８号、第６，６７７，３４９号、第６，６８３，０８８号、第６，７５６，３８２号、第６，７９７，７１８号、第６，８１８，６５０号、および第７，７０９１，２１４号、米国特許公開第２００４／００９１４９１号、第２００４／０１７６３６７号、および第２００６／０１００２２９号、ならびに国際公開ＷＯ２００５／１８５５１号、ＷＯ２００５／１８５５６号、ＷＯ２００５／２０９９９号、ＷＯ２００５／０３２４８４号、ＷＯ２００５／０４８９３３号、ＷＯ２００５／０４８９４５号、ＷＯ２００５／０５１３１７号、ＷＯ２００５／０５１３２４号、ＷＯ２００５／０６６１６９号、ＷＯ２００５／０６６１７０号、ＷＯ２００５／０６６１７２号、ＷＯ２００５／０７６７８３号、ＷＯ２００５／０７９１９５号、ＷＯ２００５／０９４５３１号、ＷＯ２００５／１２３０７９号、ＷＯ２００５／１２３０８０号、ＷＯ２００６／００９８２６号、ＷＯ２００６／００９８３２号、ＷＯ２００６／０２６７６０号、ＷＯ２００６／０２８４５１号、ＷＯ２００６／０２８５４５号、ＷＯ２００６／０２８９６２号、ＷＯ２００６／０２９１１５号、ＷＯ２００６／０３８９２３号、ＷＯ２００６／０６５２８０号、ＷＯ２００６／０７４００３号、ＷＯ２００６／０８３４４０号、ＷＯ２００６／０８６４４９号、ＷＯ２００６／０９１３９４号、ＷＯ２００６／０８６６３３号、ＷＯ２００６／０８６６３４号、ＷＯ２００６／０９１５６７号、ＷＯ２００６／０９１５６８号、ＷＯ２００６／０９１６４７号、ＷＯ２００６／０９３５１４号、およびＷＯ２００６／０９８８５２号中に開示されているものが挙げられる。低分子ＴＬＲ作用剤のさらなる例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号および６，０２８，０７６号中に記載されているものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号中に記載されているものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号中に記載されているものなど）、特定のベンズイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号中に記載されているものなど）、五員の窒素含有複素環と融合した４－アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号、第６，０２８，０７６号、および第６，３２９，３８１号、ならびにＷＯ０２／０８９０５号中に記載されているアデニン誘導体など）、特定の３－ベータ－Ｄ－リボフラノシルチアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン誘導体（米国公開第２００３／０１９９４６１号中に記載されているものなど）、ならびに、たとえば米国特許公開第２００５／０１３６０６５号中に記載されているものなどの特定の低分子免疫賦活化合物が挙げられる。例示的な大分子ＴＬＲ作用剤としては、オリゴヌクレオチド配列が挙げられる。一部のＴＬＲ作用性オリゴヌクレオチド配列はシトシン－グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、たとえば、米国特許第６，１９４，３８８号、第６，２０７，６４６号、第６，２３９，１１６号、第６，３３９，０６８号、および第６，４０６，７０５号中に記載されている。一部のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドとしては、たとえば米国特許第６，４２６，３３４号および第６，４７６，０００号中に記載されているものなどの合成免疫調節構造モチーフを挙げることができる。他のＴＬＲ作用性ヌクレオチド配列はＣｐＧ配列を欠いており、たとえば国際公開公報ＷＯ００／７５３０４号中に記載されている。さらに他のＴＬＲ作用性ヌクレオチド配列としては、たとえばＨｅｉｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第３０３巻、ページ１５２６～１５２９、２００４年３月５日中に記載されているものなどのグアノシンおよびウリジンに富んだ一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）が挙げられる。他のＴＬＲ作用剤としては、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）などの生体分子が挙げられ、たとえば、米国特許第６，１１３，９１８号、第６，３０３，３４７号、第６，５２５，０２８号、および第６，６４９，１７２号中に記載されている。ＴＬＲ作用剤としては、複数の異なる種類のＴＬＲ受容体を活性化させ得る、失活させた病原体またはその画分も挙げられる。例示的な病原体由来のＴＬＲ作用剤としては、ＢＣＧ、マイコバクテリウム・オブエンセ（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｏｂｕｅｎｓｅ）抽出物、タリモジン ラヘルパレプベク（Ｔ－Ｖｅｃ）（ＨＳＶ－１に由来）、およびＰｅｘａ－Ｖｅｃ（ワクシニアウイルスに由来）が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書中で提供する抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、ＳＰＭ－１０５（オートクレーブしたマイコバクテリウムに由来）、ＯＭ－１７４（脂質Ａ誘導体）、ＯｍｐＳ１（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）由来のポリン）、ＯｍｐＳ１（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）由来のポリン）、ＯｓｐＡ（ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）に由来）、ＭＡＬＰ－２（マイコプラズママクロファージ活性化リポペプチド－２ｋＤ）、ＳＴＦ（可溶性結核因子）、ＣＵ－Ｔ１２－９、Ｄｉｐｒｏｖｏｃｉｍ、ならびにＰＡＭ２ＣＳＫ４、ＰＡＭ３ＣＳＫ４、およびＰＡＭ３Ｃｙｓなどの細胞壁構成成分に由来するリポペプチド類と組み合わせて投与し得る。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ２作用剤の例としては、たとえば、ＳＰＭ－１０５（オートクレーブしたマイコバクテリウムに由来）、ＯＭ－１７４（脂質Ａ誘導体）、ＯｍｐＳ１（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）由来のポリン）、ＯｍｐＳ１（チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）由来のポリン）、ＯｓｐＡ（ボレリア・ブルグドルフェリに由来）、ＭＡＬＰ－２（マイコプラズママクロファージ活性化リポペプチド－２ｋＤ）、ＳＴＦ（可溶性結核因子）、ＣＵ－Ｔ１２－９、Ｄｉｐｒｏｖｏｃｉｍ、Ａｍｐｌｉｖａｎｔ、ならびにＰＡＭ２ＣＳＫ４、ＰＡＭ３ＣＳＫ４、およびＰＡＭ３Ｃｙｓなどの細胞壁構成成分に由来するリポペプチド類などの細菌リポタンパク質（たとえばジアシル化リポタンパク質）およびその誘導体が挙げられる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ３作用剤の例としては、合成ｄｓＲＮＡ、ポリイノシン酸－ポリシチジル酸［「ポリ（Ｉ：Ｃ）」］（たとえばＩｎｖｉｖｏＧｅｎから高分子量（ＨＭＷ）および低分子量（ＬＭＷ）の調製物として入手可能）、ポリアデニル酸－ポリウリジル酸［「ポリ（Ａ：Ｕ）」］（たとえばＩｎｖｉｖｏＧｅｎから入手可能）、ポリＩＣＬＣ（Ｌｅｖｙら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、第１３２巻、第４号、ページ４３４～４３９、１９７５を参照）、Ａｍｐｌｉｇｅｎ（Ｊａｓａｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ、第２７巻、第２５～２６号、ページ３４０１～３４０４、２００９を参照）、Ｈｉｌｔｏｎｏｌ、リンタトリモド、およびＲＧＣ１００（Ｎａｕｍａｎｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２０１３巻、論文ＩＤ２８３６４９を参照）などのＴＬＲ３リガンドが挙げられる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ４作用剤の例としては、たとえば、Ｂ：０１１１（Ｓｉｇｍａ）、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）、３ＤＭＰＬ（３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ）、ＧＬＡ－ＡＱ、Ｇ１００、ＡＳ１５、ＡＳＯ２、ＧＳＫ１５７２９３２Ａ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、英国）などの細菌リポ多糖（ＬＰＳ）およびその誘導体が挙げられる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ５作用剤の例としては、たとえば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から精製された細菌フラゲリン、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）から精製されたフラゲリン、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）から精製されたフラゲリン、および組換えフラゲリン（すべてＩｎｖｉｖｏＧｅｎから入手可能）、エントリモド（ＣＢＬＢ５０２、薬理学的に最適化されたフラゲリン誘導体）が挙げられる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ６作用剤の例としては、ＴＬＲ２およびＴＬＲ６はヘテロ二量体を形成することができるため、たとえば、上記提供したＴＬＲ２作用剤の多くが挙げられる。ＴＬＲ６はＴＬＲ４ともヘテロ二量体を形成することができ、ＴＬＲ６作用剤としては、上記提供した様々なＴＬＲ４作用剤を挙げることができる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ７作用剤の例としては、組換え一本鎖（「ｓｓ」）ＲＮＡ、イミキモド（Ｒ８３７）、ガルジキモド、およびレシキモド（Ｒ８４８）などのイミダゾキノリン化合物、ロキソリビン（７－アリル－７，８－ジヒドロ－８－オキソ－グアノシン）および関連化合物、７－チア－８－オキソグアノシン、７－デアザグアノシン、および関連グアノシン類似体、ＡＮＡ９７５（Ａｎａｄｙｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）および関連化合物、ＳＭ－３６０３２０（Ｓｕｍｉｍｏｔｏ）、３Ｍ－０１、３Ｍ－０３、３Ｍ－８５２、および３Ｍ－Ｓ－３４２４０（３Ｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＧＳＫ２２４５０３５（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、８－オキソアデニン分子）、ＡＺＤ８８４８（Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ、８－オキソアデニン分子）、ＭＥＤＩ９１９７（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ、以前は３Ｍ－０５２）、ｓｓＲＮＡ４０、ならびにＵＣ－１Ｖ１５０（Ｊｉｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ（２００６）１６：４５５９～４５６３、化合物４）などのアデノシン類似体が挙げられる。多くのＴＬＲ７作用剤はＴＬＲ８作用剤でもある。
【0285】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ８作用剤の例としては、組換え一本鎖ｓｓＲＮＡ、イミキモド（Ｒ８３７）、ガルジキモド、レシキモド（Ｒ８４８）、３Ｍ－０１、３Ｍ－０３、３Ｍ－８５２、および３Ｍ－Ｓ－３４２４０（３Ｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＧＳＫ２２４５０３５（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、８－オキソアデニン分子）、ＡＺＤ８８４８（Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ、８－オキソアデニン分子）、ＭＥＤＩ９１９７（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ、以前は３Ｍ－０５２）、ポリ－Ｇ１０、モトリモド、ならびに上記提供した様々なＴＬＲ７作用剤（既に注記したように、多くのＴＬＲ７作用剤はＴＬＲ８作用剤でもある）が挙げられる。本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＴＬＲ９作用剤の例としては、非メチル化ＣｐＧ含有ＤＮＡ、免疫賦活性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、たとえばＣｐＧ含有ＯＤＮ、たとえば、ＣｐＧ２４５５５、ＣｐＧ１０１０３、ＣｐＧ７９０９（ＰＦ－３５１２６７６／アガトリモド）、ＣｐＧ１０１８、ＡＺＤ１４１９、ＯＤＮ２２１６、ＭＧＮ１７０３、ＳＤ－１０１、１０１８ＩＳＳ、およびＣＭＰ－００１が挙げられる。ＴＬＲ９作用剤としては、合成シトシン－リン酸－２’－デオキシ－７－デアザグアノシンジヌクレオチド（ＣｐＲ）（Ｈｙｂｒｉｄｏｎ，Ｉｎｃ．）、ｄＳＬＩＭ－３０Ｌ１、および免疫グロブリン－ＤＮＡ複合体を含有するヌクレオチド配列も挙げられる。例示的なＴＬＲ９作用剤は、それぞれがすべての目的のために本明細書中に参考として組み込まれている、ＷＯ２００３／０１５７１１号、ＷＯ２００４／０１６８０５号、ＷＯ２００９／０２２２１５号、ＰＣＴ／ＵＳ９５／０１５７０号、ＰＣＴ／ＵＳ９７／１９７９１号、ならびに米国特許第８５５２１６５号、第６１９４３８８号、および第６２３９１１６号中に開示されている。
【0286】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＲＬＲ作用剤の例としては、たとえば、キャップのない５’三リン酸を有する短い二本鎖ＲＮＡ（ＲＩＧ－Ｉ作用剤）、ポリＩ：Ｃ（ＭＤＡ－５作用剤）、およびＢＯ－１１２（ＭＤＡ－Ａ作用剤）が挙げられる。
【0287】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＮＬＲ作用剤の例としては、たとえばリポソームムラミルトリペプチド／ミファムルチド（ＮＯＤ２作用剤）が挙げられる。
【0288】
ＣＬＲとしては、たとえば炭水化物および糖タンパク質を検出する様々なＰＲＲが挙げられる。ＣＬＲは膜貫通ＣＬＲおよび分泌ＣＬＲをどちらも含む。ＣＬＲの例としては、たとえば、ＤＥＣ－２０５／ＣＤ２０５、マクロファージマンノース受容体（ＭＭＲ）、デクチン－１、デクチン－２、ミンクル（ｍｉｎｃｌｅ）、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＮＧＲ－１、およびマンノース－結合レクチン（ＭＢＬ）が挙げられる。
【0289】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＣＬＲ作用剤の例としては、たとえば、ＭＤ画分（マイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）由来の精製した可溶性ベータ－グルカン抽出物）およびインプライムＰＧＧ（酵母由来のベータ１，３／１，６－グルカンＰＡＭＰ）が挙げられる。
【0290】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用なＳＴＩＮＧ作用剤の例としては、合成二本鎖ＤＮＡ、環状ジ－ＧＭＰ、環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）、ＭＫ－１４５４およびＡＤＵ－Ｓ１００（ＭＩＷ８１５）などの合成環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ならびにＰ０－４２４などの低分子などの様々な免疫賦活性核酸が挙げられる。
【0291】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用な免疫賦活性サイトカインの例としては、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－アルファ、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－２（たとえばデニロイキンジフィティトクス）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、およびＴＮＦ－アルファが挙げられる。
【0292】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用な癌ワクチンの例としては、たとえばシプリューセル－Ｔおよびタリモジン ラヘルパレプベク（Ｔ－ＶＥＣ）が挙げられる。
【0293】
本発明の処置方法、医薬品、および使用において有用な免疫細胞治療の例としては、たとえば腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）およびキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）が挙げられる。
【0294】
化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロホスファミドなどのアルキル化剤、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどのアジリジン、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールメラミンを含むエチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）、カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９およびＣＢＩ－ＴＭＩを含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン、スポンジスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソウレア、エネジイン抗生物質（たとえばカリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマ１ＩおよびカリチアマイシンファイＩ１、たとえばＡｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照、ダイネミシンＡを含むダイネミシン、クロドロネートなどのビスホスホネート、エスペラミシン、ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、ｐｅｇ化リポソームドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセートなどの葉酸類似体、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンなどのピリミジン類似体、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤、フォリン酸などの葉酸補充液、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート、デフォファミン、デメコルシン、ジアジコン、エルフォミチン、酢酸エリプチニウム、エポチロン、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン、メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２、２’、２’’－トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、たとえばパクリタキセルおよびドキセタキセル、クロラムブシル、ゲムシタビン、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸などのレチノイド、カペシタビン、ならびに上記のうちの任意のものの薬学的に許容できる塩、酸、または誘導体が挙げられる。また、たとえば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、たとえば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾール、およびアナストロゾールなどの、副腎中のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン、ＫＲＡＳ阻害剤、ＭＣＴ４阻害剤、ＭＡＴ２ａ阻害剤、スニチニブ、アキシチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤、クリゾチニブ、ロルラチニブなどのａｌｋ／ｃ－Ｍｅｔ／ＲＯＳ阻害剤、テムシロリムス、ゲダトリシブなどのｍＴＯＲ阻害剤、ボスチニブなどのｓｒｃ／ａｂｌ阻害剤、パルボシクリブ、ＰＦ－０６８７３６００などのサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤、ダコミチニブなどのｅｒｂ阻害剤、タラゾパリブなどのＰＡＲＰ阻害剤、グラスデギブ、ＰＦ－５２７４８５７などのＳＭＯ阻害剤、ＰＦ－０６７４７７７５などのＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ阻害剤、ＰＦ－０６８２１４９７などのＥＺＨ２阻害剤、ＰＦ－０６９３９９９９などのＰＲＭＴ５阻害剤、ＰＦ－０６９５２２２９などのＴＧＦＲβｒ１阻害剤、ならびに上記のうちの任意のものの薬学的に許容できる塩、酸、または誘導体も挙げられる。具体的な実施形態では、そのような追加の治療剤は、ベバシズマブ、セツキシマブ、シロリムス、パニツムマブ、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、カペシタビン、チボザニブ、イリノテカン、オキサリプラチン、シスプラチン、トリフルリジン、チピラシル、ロイコボリン、ゲムシタビン、レゴラフェニブ、または塩酸エルロチニブである。
【0295】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７、抗ＰＤ－Ｌ１、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体療法は、他の薬剤の処置と同時投与し得る、または数分間から数週間までの範囲の間隔によって他の薬剤の処置の前もしくは後に順次投与し得る。他の薬剤および／またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドを別々に投与する実施形態では、薬剤および本発明の組成物が、対象に対して有利に組み合わされた効果を依然として発揮することができるように、それぞれの送達間で長い期間が経過しないことを一般的に確実にするであろう。そのような事例では、両方のモダリティを互いに約１２～２４時間以内、より好ましくは互いに約６～１２時間以内に投与し得ることが企図される。しかし、一部の状況では、それぞれの投与の間に数日間（２、３、４、５、６、または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７、または８）が経過する、投与の期間の顕著な延長が望ましい場合がある。
【0296】
一部の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体療法組成物を、手術、放射線療法、化学療法、標的化治療、免疫療法、ホルモン療法、血管形成阻害、および緩和ケアからなる群から選択される従来の治療をさらに含む治療レジメンと組み合わせる。
【0297】
キット
本発明のさらなる態様は、本明細書中で上記開示した抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と、本明細書中に記載の本発明の方法のうちの任意のものに従った使用説明書とを含むキットである。一般的に、これらの指示は、上述した治療処置のための、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の投与の説明を含む。本キットは、本明細書中に開示した任意の医薬組成物を含む。医薬組成物および他の試薬は、たとえば液剤または粉末の形態などの任意の好都合な形態でキット中に存在し得る。
本発明のさらなる態様は、本明細書中で上記開示した抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と、本明細書中に記載の本発明の方法のうちの任意のものに従った使用説明書とを含むキットである。一般的に、これらの指示は、上述した治療処置のための、抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の投与の説明を含む。本キットは、本明細書中に開示した任意の医薬組成物を含む。医薬組成物および他の試薬は、たとえば液剤または粉末の形態などの任意の好都合な形態でキット中に存在し得る。
【0298】
別の態様では、キットは、癌の処置に有用な１つまたは複数の他の予防剤または治療剤を、１つまたは複数の容器中にさらに含む。一実施形態では、他の予防剤または治療剤は化学療法剤である。他の態様では、予防剤または治療剤は生物学的またはホルモン治療剤である。
【0299】
本発明の医薬組成物、予防剤、または治療剤の一部の態様は、好ましくは、ヒトにおける使用の前に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、細胞培養系中、およびげっ歯動物の動物モデル系などの動物モデル生物中で、所望の治療活性のために試験する。
【0300】
本発明の予防的および／または治療的プロトコルの毒性および有効性は、たとえばＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準の医薬的手順によって決定し得る。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表し得る。高い治療指数を示す予防剤および／または治療剤が好ましい。
【0301】
さらに、当業者に知られている任意のアッセイを使用して、癌を処置または防止するための本明細書中に開示した治療またはコンビナトリアル治療の予防的および／または治療的有用性を評価し得る。
【0302】
本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の使用に関する指示は、一般的に、意図する処置の投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（たとえば複数用量パッケージ）または部分単位用量であり得る。本発明のキット中に供給する指示は、典型的には標識または添付文書（たとえばキットに含まれる紙シート）上の書面の指示であるが、機械で読取り可能な指示（たとえば磁気または光学的記憶ディスク上に保持される指示）も許容される。
【0303】
本発明のキットは適切なパッケージング中に存在する。適切なパッケージングとしては、それぞれの医薬組成物および医薬組成物を対象に投与することにおいて使用するための他の含まれる試薬、たとえば緩衝剤、平衡塩類溶液などについて、それだけには限定されないが、バイアル、アンプル、チューブ、ボトル、瓶、ソフトパッケージング（たとえば密封したマイラーまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。また、吸入器、経鼻投与装置（たとえば噴霧器）、またはミニポンプなどの輸液装置などの特定の装置と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは無菌的なアクセスポートを有し得る（たとえば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内液剤バッグまたはバイアルであり得る）。容器も無菌的なアクセスポートを有し得る（たとえば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内液剤バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は抗ＣＤ４７抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体である。容器は、第２の医薬的に活性のある薬剤をさらに含み得る。
【0304】
通常、キットは、容器と容器上またはそれに関連付けられた標識または添付文書とを含む。
【0305】
米国仮特許出願第６２／９４９，１２０号（２０１９年１２月１７日に出願）および第６３／１１０，６９３号（２０２０年１１月６日に出願）の内容が、すべての目的のために本明細書中に参考として組み込まれている。
【0306】
生物学的受託
本発明の代表的な材料は、アメリカ培養細胞系統保存機関、米国バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ １０８０１、２０１１０－２２０９に、２０２０年１２月８日に受託した。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有するベクター「ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５重鎖」は、「ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５重鎖」と命名した抗ＣＤ４７重鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含み、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有するベクター「ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５重鎖」は、「ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５重鎖」と命名した抗ＰＤ－Ｌ１重鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含み、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有するベクター「共通軽鎖１完全軽鎖」は、「共通軽鎖１完全軽鎖」と命名した抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１共通軽鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含む。
本発明の代表的な材料は、アメリカ培養細胞系統保存機関、米国バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ １０８０１、２０１１０－２２０９に、２０２０年１２月８日に受託した。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１０を有するベクター「ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５重鎖」は、「ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿７５重鎖」と命名した抗ＣＤ４７重鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含み、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１１を有するベクター「ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５重鎖」は、「ＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿２４５重鎖」と命名した抗ＰＤ－Ｌ１重鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含み、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２６９１２を有するベクター「共通軽鎖１完全軽鎖」は、「共通軽鎖１完全軽鎖」と命名した抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１共通軽鎖をコードしているＤＮＡ挿入物を含む。
【0307】
受託は、特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約およびそれに従う規制（ブダペスト条約）の規定の下で行った。これは、受託日から３０年間の間、受託物の生存可能な培養物の維持を保証する。受託物はブダペスト条約の条件下でＡＴＣＣによって入手可能となり、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．およびＡＴＣＣとの間の合意に従い、これは、関連する米国特許の発行の際または任意の米国もしくは外国特許出願の公共への公開の際のいずれか早い方に、受託物の培養物の子孫の、公共への永久的かつ無制限の利用可能性を保証し、また、米国特許法第１２２条およびそれに関連する長官の規則（米国特許法施行規則１．１４を含み、８８６ ＯＧ ６３８に具体的に言及）に従って、米国特許商標庁長官によってその権利を有すると決定された者に子孫の利用可能性を保証するものである。
【0308】
本出願の譲受人は、受託されている材料の培養物が適切な条件下で培養された際に死滅または喪失または破壊された場合は、通知された際に材料を別の同じものと即座に交換することに同意している。受託された材料の利用可能性は、任意の政府の権限下で、その特許法に従って与えられた権利に違反して本発明を実施する許可として解釈されるべきでない。
【0309】
本発明を実施するための具体的な態様の以下の実施例は、例示目的のみで提供し、いかなる様式でも本発明の範囲を限定することを意図しない。
【実施例】
【0310】
（実施例１）
例示的な抗ＣＤ４７抗体
抗ＣＤ４７共通軽鎖（ＣＬＣ）抗体Ｐ１４Ｄ０４、Ｐ０１Ａ１１、Ｐ０１Ａ０８、およびその変異体に関する情報を以下に提供する。Ｐ１４Ｄ０４は配列番号６に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。Ｐ０１Ａ１１およびＰ０１Ａ０８は配列番号２に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。
例示的な抗ＣＤ４７抗体
抗ＣＤ４７共通軽鎖（ＣＬＣ）抗体Ｐ１４Ｄ０４、Ｐ０１Ａ１１、Ｐ０１Ａ０８、およびその変異体に関する情報を以下に提供する。Ｐ１４Ｄ０４は配列番号６に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。Ｐ０１Ａ１１およびＰ０１Ａ０８は配列番号２に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。
【0311】
【表9】
【0312】
【表10】
【0313】
以下の表１１Ａは、２つの追加の抗ＣＤ４７ ＣＬＣ抗体の特性を要約する。
【0314】
【表11】
【0315】
表１１Ｂは、親Ｐ０１Ａ１１抗体の変異体、ならびに変異体とヒトＣＤ４７（「ｈＣＤ４７」）およびカニクイザルＣＤ４７（「ｃｙＣＤ４７」）タンパク質との結合のＫＤデータを提供する。表１１Ｂ中のアミノ酸の付番は、ＣＤ４７＿Ｐ０１Ａ１１＿親ＶＨアミノ酸配列（配列番号７）を参照したものである。たとえば、「Ｙ２７Ｇ」とは配列番号７の位置２７の「Ｙ」残基を指し、Ｙ残基が「Ｇ」残基へと突然変異していることを示す。表１１Ｂに示すように、位置２７、３０、３１、５３、５４、５５、１００、１０５、１０８に突然変異を有するＰ０１Ａ１１の様々な変異体は、５０ｎＭ未満のＫＤでｈＣＤ４７と結合し、複数位置での突然変異を組み合わせることもできる。位置２７、３０、および３１はＣＤＲ１中にあり、位置５０、５２、５３、５４、および５５はＣＤＲ２中にあり、位置９９、１００、１０５、１０８、１１３、および１１４はＣＤＲ３中にある。
【0316】
【表12】
【0317】
（実施例２）
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体
抗ＰＤ－Ｌ１共通軽鎖（ＣＬＣ）抗体Ｐ０４Ｄ０９、Ｐ０６Ｂ０５、およびＰ０６Ａ０９、ならびにその変異体に関する情報を以下に提供する。Ｐ０４Ｄ０９は配列番号６に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。Ｐ０６Ｂ０５およびＰ０６Ａ０９は配列番号２に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体
抗ＰＤ－Ｌ１共通軽鎖（ＣＬＣ）抗体Ｐ０４Ｄ０９、Ｐ０６Ｂ０５、およびＰ０６Ａ０９、ならびにその変異体に関する情報を以下に提供する。Ｐ０４Ｄ０９は配列番号６に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。Ｐ０６Ｂ０５およびＰ０６Ａ０９は配列番号２に示す軽鎖アミノ酸配列を有する。
【0318】
【表13】
【0319】
【表14】
【0320】
２つの追加の抗ＰＤ－Ｌ１抗体、Ｐ０４Ｄ０９＿１１３およびＰ０６Ｂ０５＿２４５の特性を以下の表１５Ａ中に要約する。
【0321】
【表15】
【0322】
表１５Ｂは、親Ｐ０６Ｂ０５クローンのさらなる変異体、突然変異体タンパク質とヒトＰＤ－Ｌ１（「ｈＰＤ－Ｌ１」）、カニクイザルＰＤ－Ｌ１（「ｃｙＰＤ－Ｌ１」）、およびマウスＰＤ－Ｌ１（「ｍＰＤ－Ｌ１」）タンパク質との結合のＫＤデータを提供する。表１５Ｂ中のアミノ酸の付番はＰＤＬ１＿Ｐ０６Ｂ０５＿親ＶＨアミノ酸配列（配列番号１１）を参照したものである。たとえば、「Ｓ１０４Ａ」とは、配列番号１１の位置１０４の「Ｓ」残基を指し、「Ｓ」残基が「Ａ」残基へと突然変異していることを示す。表１５Ｂに示すように、位置１０３、１０４、１０５、１０７、１１２、１１３、６１、および６２に突然変異を有するＰ０６Ｂ０５の様々な変異体は、５０ｎＭ未満のＫＤでｈＰＤ－Ｌ１と結合し、複数位置での突然変異を組み合わせることもできる。位置５６、５７、６１、および６２はＣＤＲ２中にあり、位置１０３、１０４、１０５、１０７、１０９、１１２、および１１３はＣＤＲ３中にある。
【0323】
【表16】
【0324】
（実施例３）
例示的なＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の調製
様々なＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を、上述の特定の抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を二重特異性形式へと組み合わせることによって調製した。
例示的なＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の調製
様々なＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体を、上述の特定の抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１抗体を二重特異性形式へと組み合わせることによって調製した。
【0325】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体１（本明細書中で「ＢｓＡｂ１」とも呼ぶ）を、抗ＣＤ４７抗体Ｐ０１Ａ１１＿７５（ＶＨアミノ酸配列は配列番号１に示す）を抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ｐ０６Ｂ０５＿２４５（ＶＨアミノ酸配列は配列番号４に示す）と二重特異性抗体形式で組み合わせることによって調製した。これら２つの抗体は、どちらも同じ軽鎖ＶＬアミノ酸配列（配列番号２に示す）を有しており、したがって、抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１は、抗ＣＤ４７可変領域および抗ＰＤ－Ｌ１可変領域の両方について同じ軽鎖アミノ酸配列を有する（すなわち共通軽鎖）。ＢｓＡｂ１は、ノブ－イン－ホール突然変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを有する。ＩｇＧ１は、（先天性および適応チェックポイント遮断に加えて）抗腫瘍有効性を駆動する抗体の作用機構の一部としてＡＤＣＰおよびＡＤＣＣを含むロバストなエフェクター機能のために選択された。抗ＣＤ４７重鎖のアミノ酸配列、抗ＰＤ－Ｌ１重鎖、およびＢｓＡｂ１の共通軽鎖を以下の表１６に示す。「ノブ」または「ホール」構造のどちらかを生じるための、それぞれの鎖中のＦｃ鎖中の突然変異に下線が引いてある。
【0326】
ノブ抗ＰＤ－Ｌ１重鎖（「ＧＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨ」）（配列番号７６）のＣ末端への「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７５）リンカー、次いで６×ヒスチジンタグの付加以外はＢｓＡｂ１と同一であるＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体も調製した。この抗体は、ＢｓＡｂ１のタグ付けされていないバージョンと本質的に同じ、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性ならびに他の特性を有しており、本明細書中で提供するＢｓＡｂ１に関与する実験のほとんどにおいて使用した。
【0327】
【表17】
【0328】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体２（本明細書中で「ＢｓＡｂ２」とも呼ぶ）を、抗ＣＤ４７抗体Ｐ０１Ａ１１＿４９７（ＶＨアミノ酸配列は配列番号３に示す）を抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ｐ０６Ｂ０５＿２４５（ＶＨアミノ酸配列は配列番号４に示す）と組み合わせることによって調製した。これら２つの抗体は、どちらも同じ軽鎖ＶＬアミノ酸配列（配列番号２に示す）を有しており、したがって、ＢｓＡｂ２は、抗ＣＤ４７可変領域および抗ＰＤ－Ｌ１可変領域の両方について同じ軽鎖アミノ酸配列を有する（すなわち共通軽鎖）。ＢｓＡｂ２は、ノブ－イン－ホール突然変異を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを有する。抗ＣＤ４７重鎖のアミノ酸配列、抗ＰＤ－Ｌ１重鎖、およびＢｓＡｂ２の共通軽鎖を以下の表１７に示す。「ノブ」または「ホール」構造のどちらかを生じるためのＦｃ鎖中の突然変異に下線が引いてある。
【0329】
ノブ抗ＰＤ－Ｌ１重鎖（「ＧＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨ」）（配列番号７６）のＣ末端への「ＧＧＧＧＳ」（配列番号７５）リンカー、次いで６×ヒスチジンタグの付加以外はＢｓＡｂ２と同一であるＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体も調製した。この抗体は、ＢｓＡｂ２のタグ付けされていないバージョンと本質的に同じ、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１に対する結合親和性ならびに他の特性を有しており、本明細書中で提供するＢｓＡｂ２に関与する実験のほとんどにおいて使用した。
【0330】
【表18】
【0331】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２は、ＣＨＯ細胞に、３つの別々のポリペプチド、すなわち、それぞれの抗ＣＤ４７重鎖、抗ＰＤ－Ｌ１重鎖、および共通軽鎖をコードしている核酸配列を含有するポリヌクレオチドをトランスフェクトすることによって、それぞれ調製した。それぞれのＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体がこれらの細胞中で発現され、カラムクロマトグラフィーを介して精製した。したがって、注目すべきことに、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は標準のＩｇＧ ｍＡｂと同様の様式で産生および精製することができるため、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、二重特異性抗体の多くの他の種類および形式よりも産生は顕著に容易である。標準のＩｇＧ ｍＡｂと比較した本明細書中で提供する二重特異性抗体での主な相違は、標準のＩｇＧ ｍＡｂでは、宿主細胞に、２本のポリペプチド鎖［すなわちｉ）ｍＡｂ重鎖およびｉｉ）ｍＡｂ軽鎖］をコードしているポリヌクレオチドをトランスフェクトするが、本明細書中で提供するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂでは、宿主細胞に、３本のポリペプチド鎖［すなわち、ｉ）抗ＣＤ４７重鎖、ｉｉ）抗ＰＤ－Ｌ１重鎖、およびｉｉｉ）共通軽鎖］をコードしているポリヌクレオチドをトランスフェクトすることである。
【0332】
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、マウスＣＤ４７およびマウスＰＤ－Ｌ１タンパク質との結合について選択された抗体を使用して調製し、本明細書中で「ＢｓＡｂ３」と呼ぶ。
【0333】
（実施例４）
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１タンパク質に対するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の結合親和性
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１、ＢｓＡｂ２、およびＢｓＡｂ３（上記実施例３中に記載）を、ヒト、カニクイザル、およびマウスのＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１タンパク質に対する結合親和性について評価した。親和性を以下の表１８中に要約する。
ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１タンパク質に対するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の結合親和性
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１、ＢｓＡｂ２、およびＢｓＡｂ３（上記実施例３中に記載）を、ヒト、カニクイザル、およびマウスのＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１タンパク質に対する結合親和性について評価した。親和性を以下の表１８中に要約する。
【0334】
【表19】
【0335】
ＢｓＡｂ１、ＢｓＡｂ２、陽性対照抗体（抗ＣＤ４７抗体Ｐ０１Ａ１１＿７５）、および陰性対照抗体（抗ＰＤ－Ｌ１抗体Ｐ０６Ｂ０５＿２４５）と細胞表面上のヒトＣＤ４７との結合は、ヒトＣＤ４７を安定して過剰発現するように作製されたＣＨＯ細胞を使用したフローサイトメトリーによって評価した。生じたＥＣ５０値（すなわちＣＤ４７タンパク質の５０％に抗体が結合する濃度）は、ＢｓＡｂ１：１１．８ｎＭ、ＢｓＡｂ２：１０１．２ｎＭ、抗体Ｐ０１Ａ１１＿７５：０．９８ｎＭ、および抗体Ｐ０６Ｂ０５＿２４５：該当なし（Ｎ／Ａ）であった。
【0336】
ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２と細胞表面上のヒトＰＤ－Ｌ１との結合は、ヒトＰＤ－Ｌ１を異所的に過剰発現するように作製されたＣＨＯ細胞を使用したフローサイトメトリーによって評価した。生じたＥＣ５０値（すなわちＰＤ－Ｌ１タンパク質の５０％に抗体が結合する濃度）はＢｓＡｂ１：０．３８ｎＭおよびＢｓＡｂ２：０．２４ｎＭであった。
【0337】
（実施例５）
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と腫瘍細胞および赤血球との結合
抗ＣＤ４７単一特異性抗体と比較したＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の潜在的な利点は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体が、ＣＤ４７のみを発現する血液細胞（たとえば赤血球）と比較して腫瘍微小環境中の腫瘍細胞および／または免疫細胞（どちらもＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１を同時発現し得る）に対してより高い選択性を潜在的に有することである。腫瘍微小環境中の細胞に対して抗ＣＤ４７単一特異性抗体よりも高い選択性を潜在的に有することによって、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、抗ＣＤ４７単一特異性抗体と比較して低下した毒性を潜在的に有する。
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体と腫瘍細胞および赤血球との結合
抗ＣＤ４７単一特異性抗体と比較したＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の潜在的な利点は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体が、ＣＤ４７のみを発現する血液細胞（たとえば赤血球）と比較して腫瘍微小環境中の腫瘍細胞および／または免疫細胞（どちらもＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１を同時発現し得る）に対してより高い選択性を潜在的に有することである。腫瘍微小環境中の細胞に対して抗ＣＤ４７単一特異性抗体よりも高い選択性を潜在的に有することによって、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体は、抗ＣＤ４７単一特異性抗体と比較して低下した毒性を潜在的に有する。
【0338】
１：１０の比の腫瘍細胞（すなわちＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の発現をどちらも有するＨＴ１０８０細胞）と赤血球（ＲＢＣ）（ＣＤ４７の発現のみ）とからなる混合物中において、ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２とヒトＣＤ４７との結合を、単一特異性抗ＣＤ４７ ｍＡｂ ５Ｆ９［Ｌｉｕ，Ｊら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．、２０１５、１０（９）］および２Ａ１（米国公開第２０１４０１４０９８９号）とのそれと比較した。抗ＣＤ４７ ５Ｆ９および２Ａ１の腫瘍およびＲＢＣとの結合のＥＣ５０はどちらも０．１ｎＭ未満であり、選択性がない。対照的に、ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２はどちらも腫瘍細胞の１００％と＜０．１ｎＭで結合したが、ＲＢＣ結合のＥＣ５０は＞１０ｎＭであり、これは腫瘍細胞対ＲＢＣについて少なくとも１００倍の選択性を示唆している。
【0339】
（実施例６）
ＣＤ４７－ＳＩＲＰａおよびＰＤ－Ｌ１－ＰＤ－１相互作用に対するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の遮断活性
本実施例はＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の遮断能力を例示する。
ＣＤ４７－ＳＩＲＰａおよびＰＤ－Ｌ１－ＰＤ－１相互作用に対するＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の遮断活性
本実施例はＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の遮断能力を例示する。
【0340】
ＳＩＲＰａタンパク質とＣＨＯ細胞によって過剰発現されたヒトＣＤ４７（「ＣＨＯ－ｈＣＤ４７」）との結合に対するＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の影響を試験するための、細胞に基づくＳＩＲＰａ遮断ＩＣ５０アッセイを実施した。同様に、ＳＩＲＰαタンパク質とＣＨＯ細胞によって過剰発現されたマウスＣＤ４７（「ＣＨＯ－マウスＣＤ４７」）との結合に対するＢｓＡｂ３の影響を試験するための、細胞に基づくＳＩＲＰａ遮断ＩＣ５０アッセイを実施した。本アッセイの結果を以下の表１９に示す。
【0341】
さらに、ＰＤ－１タンパク質とＣＨＯ細胞によって過剰発現されたヒトＰＤ－Ｌ１（「ＣＨＯ－ｈＰＤ－Ｌ１」）との結合に対するＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の影響を試験するための、細胞に基づくＰＤ－１遮断ＩＣ５０アッセイを実施した。具体的には、ＰＤ－Ｌ１遮断活性では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用は、キット（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｊ１２５０）を介してＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ／ＣＨＯ－Ｋ１をＰＤ－１エフェクター細胞と同時培養した際にＴＣＲ媒介性ルミネセンスを阻害する。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用はＰＤ－１遮断ｍＡｂによって乱され、ＴＣＲの活性化はＮＦＡＴ経路の活性化を介してルミネセンスを誘導する。ＰＤ－１タンパク質とＣＨＯ細胞によって過剰発現されたマウスＰＤ－Ｌ１（「ＣＨＯ－マウスＰＤ－Ｌ１」）との結合に対する二重特異性ＢｓＡｂ３の影響を試験するための、同様の細胞に基づくＰＤ－１遮断ＩＣ５０アッセイも実施した。本アッセイの結果も以下の表１９に示す。
【0342】
【表20】
【0343】
表１９に示すように、ＢｓＡｂ１、ＢｓＡｂ２、およびＢｓＡｂ３のそれぞれは、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を遮断した。さらに、ＢｓＡｂ１、ＢｓＡｂ２、およびＢｓＡｂ３のそれぞれは、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断した。
【0344】
（実施例７）
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）増強活性
ＡＤＣＰアッセイ
抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性を試験するために、ヒトマクロファージを、２人のドナー由来のＰＢＭＣから単離した単球から分化させ、二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１の存在下で、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１をどちらも発現する腫瘍細胞（ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞、肺気管支粘表皮癌）と共に同時培養した。図１に示すように、ＢｓＡｂ１を用いた処置は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の発現をどちらも有するヒト標的細胞ＮＣＩ－Ｈ２９２のマクロファージ貪食を増強させる。さらに、図１に示すように、ＢｓＡｂ１は、腫瘍細胞の貪食を増強させることにおいて、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（Ｐ０１Ａ１１＿７５）または抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（Ｐ０６Ｂ０５＿２４５）のいずれかよりも有効である。たとえば、０．３２ｎＭの濃度で、ＢｓＡｂ１の全腫瘍細胞の貪食％は約６０％である一方で、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（Ｐ０１Ａ１１＿７５）および抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（Ｐ０６Ｂ０５＿２４５）の両方では、これは約３０％でしかない（図１）。
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）増強活性
ＡＤＣＰアッセイ
抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）活性を試験するために、ヒトマクロファージを、２人のドナー由来のＰＢＭＣから単離した単球から分化させ、二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１の存在下で、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１をどちらも発現する腫瘍細胞（ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞、肺気管支粘表皮癌）と共に同時培養した。図１に示すように、ＢｓＡｂ１を用いた処置は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の発現をどちらも有するヒト標的細胞ＮＣＩ－Ｈ２９２のマクロファージ貪食を増強させる。さらに、図１に示すように、ＢｓＡｂ１は、腫瘍細胞の貪食を増強させることにおいて、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（Ｐ０１Ａ１１＿７５）または抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（Ｐ０６Ｂ０５＿２４５）のいずれかよりも有効である。たとえば、０．３２ｎＭの濃度で、ＢｓＡｂ１の全腫瘍細胞の貪食％は約６０％である一方で、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（Ｐ０１Ａ１１＿７５）および抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（Ｐ０６Ｂ０５＿２４５）の両方では、これは約３０％でしかない（図１）。
【0345】
（実施例８）
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究
本実施例は、３つの同系マウス腫瘍モデル［ＣＴ２６－強度（ｈｏｔ）腫瘍モデル（マウス結腸癌細胞）、ＭＣ３８－中度（ｗａｒｍ）腫瘍モデル（マウス結腸癌細胞）、Ｂ１６Ｆ１０－軽度（ｃｏｌｄ）腫瘍モデル（マウス黒色腫細胞）］におけるＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗腫瘍有効性を例示する。
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究
本実施例は、３つの同系マウス腫瘍モデル［ＣＴ２６－強度（ｈｏｔ）腫瘍モデル（マウス結腸癌細胞）、ＭＣ３８－中度（ｗａｒｍ）腫瘍モデル（マウス結腸癌細胞）、Ｂ１６Ｆ１０－軽度（ｃｏｌｄ）腫瘍モデル（マウス黒色腫細胞）］におけるＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗腫瘍有効性を例示する。
【0346】
ＣＴ２６腫瘍モデルでは、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体ＢｓＡｂ３を用いた処置後の有効性および体重の変化を、単一特異性抗ｍＣＤ４７および単一特異性抗ｍＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの単独および組合せと比較した（図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃ）。さらに、ＢｓＡｂ３活性に対するＦｃ媒介性エフェクター機能の寄与を評価するために、ＢｓＡｂ３のＦｃヌルバージョンを調製して実験に含めた。３または４日間隔で投与した合計３回用量の１００μｇ（約５ｍｇ／ｋｇ）での腹腔内（ＩＰ）処置の後、ＢｓＡｂ３ ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の有効性は、抗ＣＤ４７または抗ＰＤ－Ｌ１単独よりも統計的に良好であった［図２Ａ、ＢｓＡｂ３（黒菱形）の処置が、試験したすべての抗体または抗体の組合せの中で最も小さい腫瘍体積をもたらした］。さらに、体重減少によって証明されるように抗ＣＤ４７ ｍＡｂはこの用量で許容されなかった一方で（図２Ｂ）、ＢｓＡｂ３は処置全体にわたって良好に許容された。［図２Ｂでは、抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白四角）および抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体と合わせた抗ＣＤ４７単一特異性抗体（白逆三角形）のデータ点は大部分が重複する。またｈ、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体（黒三角形）および二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ３（黒菱形）のデータ点は大部分が重複する。Ｆｃヌル二重特異性ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ３（白丸）のデータは図２Ｂ中には存在しない。］ＢｓＡｂ３を用いた処置は、抗ＣＤ４７および抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの組合せで達成されたものに類似の腫瘍成長阻害をもたらしたが、単一特異性抗体の組合せは＞１０％の体重減少を引き起こした。ＩｇＧエフェクター機能を有するおよび有さないＢｓＡｂ３の有効性の比較では、ｍＧ２ａ野生型と比較してｍＧ２ａＦｃヌルで低下した有効性が示された（図２Ａおよび図２Ｃ）。試験した化合物の中で、ｍＧ２ａ野生型エフェクター機能を有するＢｓＡｂ３を用いた処置（黒菱形）は最良の生存結果をもたらした（図２Ｃ）。図２Ｃに示すように、ｍＧ２ａ野生型エフェクター機能を有するＢｓＡｂ３で処置した動物（黒菱形）は、処置の２８日後に約７５％の生存を有していた。対照的に、抗ＰＤ－Ｌ１単一特異性抗体と合わせた抗ＣＤ４７単一特異性抗体で処置した動物（白逆三角形）は、処置の２８日後に約６５％の生存を有していた。ｍＧ２ａ Ｆｃヌルを有するＢｓＡｂ３で処置した動物（白丸）は、処置の２８日後に約２５％の生存を有していた。
【0347】
ＭＣ３８腫瘍モデルでは、様々な用量の二重特異性ＢｓＡｂ３を、腫瘍の成長を阻害することにおける有効性について評価した。ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスを、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３を用いて、週に２回を３週間、合計６用量、腹腔内処置した。このモデルでは、１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇの処置の観察された有効性は、それぞれ約２５．７％、５２．６％、および７５．８％の腫瘍成長阻害であった（すなわちアイソタイプ対照抗体と比較した）（図３Ａ）。これらの用量はすべて、体重減少なしで良好に許容された（図３Ｂ）。
【0348】
Ｂ１６Ｆ１９腫瘍モデルでは、２０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ３を抗腫瘍有効性について評価した。Ｂ１６Ｆ１９腫瘍を保有するマウスを、２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性ＢｓＡｂ３を用いて、週に３回を３週間、合計９用量、腹腔内処置した。このモデルでは、２０ｍｇ／ｋｇの処置の観察された有効性は約６８％の腫瘍成長阻害であった（すなわちアイソタイプ対照抗体と比較した）（図４Ａ）。この用量は、体重の実質的な減少なしで良好に許容された（図４Ｂ）。
【0349】
（実施例９）
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の作用機構の研究
本実験では、どの免疫細胞種がマウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗腫瘍有効性に必要かを決定するためにアッセイを行った。
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の作用機構の研究
本実験では、どの免疫細胞種がマウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の抗腫瘍有効性に必要かを決定するためにアッセイを行った。
【0350】
ＣＤ８ Ｔ細胞を枯渇させることが知られている抗体（抗ＣＤ８、抗体：２．４３）、ＣＤ４ Ｔ細胞（抗ＣＤ４、抗体：ＧＫ１．５）、ＮＫ細胞（抗ＮＫ１．１、抗体：ＰＫ１３６）、および腫瘍関連マクロファージ（抗ＣＳＦ１Ｒ）を、ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスに、マウスＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３（４０ｍｇ／ｋｇ、週に２回を３週間）と共に同時投与した。図５Ａ、５Ｃ、および５Ｄに示すように、データは、有効性が、ＣＤ８ Ｔ細胞単独の非存在下（図５Ａ）およびＣＤ８＋ＣＤ４ Ｔ細胞の組合せ（図５Ａ）では損なわれていたが、ＣＤ４ Ｔ細胞単独の非存在下（図５Ａ）、ＮＫ細胞の非存在下（図５Ｄ）、または腫瘍関連マクロファージの非存在下（図５Ｃ）においては損なわれていなかったことを示唆している。さらに、この研究を、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して古典的１型樹状細胞（ＤＣ１）の部分組（ＣＤ８α＋およびＣＤ１０３＋）を欠くＢＡＴＦ３－／－マウスにおいても行った（Ｈｉｌｄｎｅｒ，Ｋ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００８、３２２（５９０４）：ページ１０９７～１００。）。図５Ｂに示すように、有効性は、ｃＤＣ１の非存在下では失われていた。［図５Ｂでは、対照抗体で処置した野生型マウス（黒丸）、対照抗体で処置したＢＡＴＦ３－／－マウス（白四角）、およびＢｓＡｂ３で処置したＢＡＴＦ３－／－マウス（黒三角形）のデータ点が、特に２５日目に密に重複している。］
【0351】
（実施例１０）
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の薬力学的効果
本実験の目的は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏの薬力学的効果を理解することであった。
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体の薬力学的効果
本実験の目的は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体のｉｎ ｖｉｖｏの薬力学的効果を理解することであった。
【0352】
ＭＣ３８腫瘍を保有するマウスを、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性ＢｓＡｂ３を用いて、腫瘍移植後１１、１４、および１８日目に処置した。腫瘍移植の３週間後、腫瘍および脾臓をマウスから収穫し、様々な細胞種について分析した。表２０ａ～２０ｅに示すように、ＣＤ８＋ＣＤ１１ｃ＋ＤＣなどの一部の脾臓樹状細胞（ＤＣ）の部分組において用量依存的な増加が存在した（表２０ａ）。さらに、ＣＤ１１ｃ＋間のＤＥＣ２０５＋ＣＤ８＋ＣＤ１０３＋ＤＣの百分率は、脾臓中で有意に増加していた（表２０ｂ）。腫瘍に関しては、Ｔ細胞（Ｔｈｙ１．２＋）（表２０ｃ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（表２０ｄ）の増加はあったが、ＣＤ４＋Ｔ細胞（表２０ｅ）の増加はなく、これは、先天性および適応の免疫細胞の両方が、二重特異性ＢｓＡｂ３を用いて処置の後にモジュレートされたことを示唆している。
【0353】
【表21-1】
【0354】
【表21-2】
【0355】
（実施例１１）
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究
本実験の目的は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を試験することであった。
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１のｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究
本実験の目的は、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を試験することであった。
【0356】
ＮＳＧ免疫不全マウスを、２×１０６個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブヒト乳癌細胞を用いて右脇腹に皮下接種した。これらの細胞は、ＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１をどちらも内在的に過剰発現する。腫瘍が標的サイズに達した際、マウスを処置群へとランダム化した。処置はランダム化と同じ日に開始した。マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ１アイソタイプｍＡｂ（対照）、または１、５、もしくは１０ｍｇ／ｋｇのＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１またはＢｓＡｂ２を用いて、週に１回、６週間の間処置した。腫瘍サイズはカリパスを使用して二次元において様々な間隔で測定し、体積は以下の式を使用して立方ミリメートルで計算した：Ｖ＝０．５Ｌ×Ｗ２［式中、Ｌは腫瘍の最長直径であり、ＷはＬに垂直な直径である］。
【0357】
結果を図６に示す。図６に示すように、５または１０ｍｇ／ｋｇのｈｉｓタグ付けしたＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１またはＢｓＡｂ２を用いた処置は、アイソタイプ対照と比較してＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍成長を実質的に遅延させた。具体的には、ＢｓＡｂ１では、アイソタイプ抗体と比較した腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ１６．８％、６８．４％、および７８．７％であった。ＢｓＡｂ２では、アイソタイプ抗体と比較した腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ６．９％、６２．８％、および７４．１％であった。［図６では、対照アイソタイプ抗体（黒丸）、１ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（黒三角形）、および１ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（白丸）のデータ点は、一般的に互いに近いまたは重複する。同様に、５ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（白菱形）、１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１（白三角形）、５ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（黒菱形）、および１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ２（黒四角）のデータ点は、一般的に互いに近く、１０ｍｇ／ｋｇのＢｓＡｂ１が最も低い値を有する。］
【0358】
（実施例１２）
カニクイザルにおける抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の毒性研究
本実験の目的は、カニクイザルにおいてｈｉｓタグ付けしたＢｓＡｂ１およびｈｉｓタグ付けしたＢｓＡｂ２を用いた探索毒性研究（ＥＴＳ）を行うことであった。ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２は、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１部分に対して同様の結合親和性を有しており、ヒト赤血球および血小板と同様の親和性でカニクイザル赤血球および血小板と結合する。したがって、これらのデータは、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の毒性評価のための関連種としてのカニクイザルの使用を支持する。
カニクイザルにおける抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の毒性研究
本実験の目的は、カニクイザルにおいてｈｉｓタグ付けしたＢｓＡｂ１およびｈｉｓタグ付けしたＢｓＡｂ２を用いた探索毒性研究（ＥＴＳ）を行うことであった。ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２は、ヒトおよびカニクイザルのＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１部分に対して同様の結合親和性を有しており、ヒト赤血球および血小板と同様の親和性でカニクイザル赤血球および血小板と結合する。したがって、これらのデータは、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の毒性評価のための関連種としてのカニクイザルの使用を支持する。
【0359】
ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２のそれぞれについて、１匹のサルに１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与し、１匹のサルに３０ｍｇ／ｋｇの用量を投与し、３匹のサルに１００ｍｇ／ｋｇの用量を投与した。ｍＡｂは１および８日目に静脈内投与した。１５日目に、それぞれのサルからの試料を、様々な免疫細胞部分組およびサイトカインについて分析し、以下の表２１～２４に示す。表２１および２３は、様々な用量のＢｓＡｂ１またはＢｓＡｂ２をサルに投与した後の様々な免疫細胞部分組の活性化および／または増殖に関するデータを提供する。表２２および２４は、様々な用量のＢｓＡｂ１またはＢｓＡｂ２をサルに投与した後の様々なサイトカインの増加に関するデータを提供する。
【0360】
以下の表中で、ＮＣ＝変化なし、ＩＬ＝インターロイキン、ＩＦＮ＝インターフェロン、ＭＣＰ＝単球化学誘引物質タンパク質、ＩＰ＝インターフェロン誘導タンパク質である。比（たとえば「１／１」または「２／３」）は、処置群中のサルの合計数を超えるパラメータの変化を経験したサルの数を指す。たとえば、「２／３」は、処置中の３匹うち２匹のサルが関連パラメータの変化を有していたことを示す。括弧内に提供した値［たとえば「（４．９×）」］はベースラインと比較した変化の倍数を提供し、２つ以上のサルからのデータがある場合は括弧内に値の範囲を提供する［たとえば「（４．０×～９．２×）」］。
【0361】
【表22】
【0362】
【表23】
【0363】
【表24】
【0364】
【表25】
【0365】
表２１および２３に示すように、ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２を投与したカニクイザルにおいてＴ細胞の活性化および／または増殖ならびに単球の活性化の証拠が存在していた。さらに、表２２および２４に示すように、ＩＬ６、ＩＮＦｇ、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１０を含む単球／マクロファージ／ＤＣまたはＴ細胞関連サイトカインの緩和な一過的増加の証拠が存在していた。合わせて、このデータは、カニクイザルにおける抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２の投与での、薬理活性および免疫系の活性化を支持する。
【0366】
（実施例１３）
組合せ処置：ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＴＬＲ９作用剤
本実施例は、ＴＬＲ９作用剤と組み合わせた抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの治療活性を例示する。
組合せ処置：ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＴＬＲ９作用剤
本実施例は、ＴＬＲ９作用剤と組み合わせた抗ＣＤ４７／抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの治療活性を例示する。
【0367】
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３は上述されている。二重特異性ＢｓＡｂ３は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の１０ｍｇ／ｋｇの有効量未満の用量を週に２回、２週間投与した（４回の合計用量）。
【0368】
ＴＬＲ９作用剤はＣｐＧ２４５５５であり、これはクラスＢ ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）である。ＣｐＧ ＯＤＮは、特定の配列構成の非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）を含有する合成ＯＤＮである。ＣｐＧ２４５５５は、たとえば、すべての目的のために本明細書中に組み込まれている米国特許第８５５２１６５号中に記載されている。ＣｐＧ２４５５５は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中の５ｍｇ／ｋｇ、腫瘍内（ｉｔ）、１回用量で、腫瘍接種の１１日後に投薬した。
【0369】
６～８週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスはＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。すべての動物はＰｆｉｚｅｒの無病原体動物施設に収容し、実験は施設動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ、ＩＡＣＵＣ）指針に従ったプロトコルに従って実施した。
【0370】
ＭＣ３８結腸癌細胞系はアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から購入した。指数増殖期で増殖中の無病原体細胞を収穫して腫瘍接種に使用した。
【0371】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０．１ｍＬのＰＢＳ中の０．５×１０５個のＭＣ３８細胞を用いて、右脇腹に皮下接種した。腫瘍が標的サイズに達した際、マウスを処置群へとランダム化した。処置はランダム化と同じ日に開始した。腫瘍サイズはカリパスを使用して二次元において様々な間隔で測定し、体積は以下の式を使用して立方ミリメートルで計算した：Ｖ＝０．５Ｌ×Ｗ２［式中、Ｌは腫瘍の最長直径であり、ＷはＬに垂直な直径である］。体重も記録した。
【0372】
結果を図７に示す。図７に示すように、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３（白四角）およびＴＬＲ９作用剤（黒逆三角形）の処置はどちらも、アイソタイプ対照（黒丸）と比較してＭＣ３８結腸癌腫瘍成長を遅延させ、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３＋ＴＬＲ９作用剤（白三角形）の組合せは、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３およびＴＬＲ９の薬剤の個々よりも高い有効性を有していた。［図７では、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３（白四角）およびＴＬＲ９作用剤（黒逆三角形）のデータ点は大部分が重複する。］
【0373】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＴＬＲ９作用剤との組合せ処置で観察された有効性の増加は、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７／８、ＴＬＲ９、またはＳＴＩＮＧ作用剤の腫瘍内投与に応答した、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞中におけるＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の発現の増加を示したバルク腫瘍ＲＮＡシーケンシングデータと一致している（データ示さず）。
【0374】
（実施例１４）
組合せ処置：ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＣＤＫ２／４／６阻害剤
本実施例は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）２／４／６阻害剤と組み合わせたＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの治療活性を例示する。
組合せ処置：ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＣＤＫ２／４／６阻害剤
本実施例は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）２／４／６阻害剤と組み合わせたＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂの治療活性を例示する。
【0375】
マウス代用ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３は上述されている。二重特異性ＢｓＡｂ３は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の２０ｍｇ／ｋｇを週に３回、３週間投薬した。
【0376】
ＣＤＫ２／４／６阻害剤はＰＦ－０６８７３６００であった。ＰＦ－０６８７３６００、すなわち６－（ジフルオロメチル）－８－（（１Ｒ，２Ｒ）－２－ヒドロキシ－２－メチルシクロペンチル）－２－（１－（メチルスルホニル）ピペリジン－４－イルアミノ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オンは、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６の強力かつ選択的な阻害剤であり、以下の構造を有する。
【0377】
【化1】
【0378】
ＰＦ－０６８７３６００および薬学的に許容できるその塩は、２０１８年２月２２日に公開の国際公開ＷＯ２０１８／０３３８１５号中に開示されている。この参考文献の内容は、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている。
【0379】
６～８週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスはＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。すべての動物はＰｆｉｚｅｒの無病原体動物施設に収容し、実験は施設動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）指針に従ったプロトコルに従って実施した。
【0380】
Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞系はアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から購入した。指数増殖期で増殖中の無病原体細胞を収穫して腫瘍接種に使用した。
【0381】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０．１ｍＬのＰＢＳ中の０．５×１０５個のＢ１６Ｆ１０細胞を用いて、右脇腹に皮下接種した。腫瘍が標的サイズに達した際、マウスを処置群へとランダム化した。処置はランダム化と同じ日に開始した。腫瘍サイズはカリパスを使用して二次元において様々な間隔で測定し、体積は以下の式を使用して立方ミリメートルで計算した：Ｖ＝０．５Ｌ×Ｗ２［式中、Ｌは腫瘍の最長直径であり、ＷはＬに垂直な直径である］。体重も記録した。
【0382】
結果を図８に示す。図８に示すように、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ＢｓＡｂ３（黒三角形）およびＣＤＫ２／４／６阻害剤ＰＦ－０６８７３６００（白四角）の処置はどちらも、アイソタイプ対照（黒丸）と比較してＢ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍成長を遅延させ、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＰＦ－０６８７３６００（白菱形）との組合せは、ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂおよびＰＦ－０６８７３６００の薬剤の個々よりも高い有効性を有していた。
【0383】
ＣＤ４７／ＰＤ－Ｌ１二重特異性ｍＡｂとＣＤＫ２／４／６阻害剤との組合せ処置で観察された有効性の増加は、ＰＦ－０６８７３６００の投与に応答した、フローサイトメトリーによってＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞上のＣＤ４７およびＰＤ－Ｌ１の発現の増加を示したデータと一致している（データ示さず）。
【0384】
開示した教示は様々な応用、方法、キット、および組成物を参照して記載されているが、本明細書および以下の特許請求した発明の教示から逸脱せずに様々な変化および改変を行うことができることが理解されよう。前述の実施例は、開示した教示をより良好に例示するために提供し、本明細書中に提示する教示の範囲を制限することを意図しない。本教示をこれらの例示的な実施形態の観点から記載したが、当業者は、これらの例示的な実施形態の数々の変形および改変が必要以上の実験を行わずに可能であることを容易に理解するであろう。すべてのそのような変形および改変が本教示の範囲内にある。
【0385】
特許、特許出願、論文、教科書など、およびそれ中に引用されている参考文献を含む、本明細書中に引用したすべての参考文献は、既に組み込まれていない場合に限り、その全体が本明細書中に参考として組み込まれている。それだけには限定されないが定義した用語、用語の用法、記載した技法などを含めた、組み込まれた文献および同様の資料のうちの１つまたは複数が本出願とは異なるまたは矛盾する場合は、本出願が支配する。
【0386】
前述の説明および実施例は本発明の特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかし、前述の説明が文面上はいかに詳細であるように見えようとも、本発明を多数の方法で実施してよく、本発明は添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈されるべきであることが理解されたい。
【0387】
実施形態が言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を用いて本明細書中に記載されている場合はいつでも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる」に関して記載されるその他の類似の実施形態も提供されることを理解されよう。
【0388】
本発明の態様または実施形態がマーカッシュ群または他の代替物の群分けの観点から記載されている場合、本発明は、全体として列挙される群全体だけでなく、群のそれぞれのメンバー個々および主群のすべての可能な部分群、および群メンバーのうちの１つまたは複数が存在しない主群も包含する。本発明はまた、特許請求した発明中の群メンバーの任意の１つまたは複数の明確な排除も想定する。
【0389】
本明細書中に記載の処置の方法に言及する実施形態では、そのような実施形態は、その処置において使用するため、またはその処置において使用するための医薬品の製造のための更なる実施形態でもある。
【0390】
別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の技術者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含めて本明細書が支配する。本明細書および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記述した整数または整数群の包含を暗示するが、任意の他の整数または整数群の排除を暗示しないことを理解されたい。内容によりそうでないことが必要でない限りは、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。用語「たとえば（ｅ．ｇ．）」または「たとえば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」に続く任意の例は、網羅的または限定的であることを意味しない。複数の選択肢の列挙（たとえば「Ａ、Ｂ、またはＣ」）のコンテキストにおいて使用する場合の用語「または」は、内容により明らかにそうでないと指示されない限りは、選択肢のうちの任意の１つまたは複数を含むと解釈されるべきである。
【0391】
例示的な方法および材料を本明細書中に記載するが、本明細書中に記載のものに類似または等価な方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。材料、方法、および実施例は例示的のみであり、限定することを意図しない。
【受託番号】
【0392】
ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１２６９１０
ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１２６９１１
ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１２６９１２
ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１２６９１１
ＡＴＣＣ ＰＴＡ－１２６９１２
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3】
【図4】
【図5-1】
【図5-2】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】